KR100962587B1

KR100962587B1 - 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법, 상기 방법에 의해서제조된 발효물 및 이를 함유하는 약학 조성물, 화장품조성물 및 식품 조성물

Info

Publication number: KR100962587B1
Application number: KR1020070099512A
Authority: KR
Inventors: 박장서; 이은옥; 김진욱; 조석철; 국무창
Original assignee: 동국대학교 산학협력단; 주식회사 엘씨에스바이오텍
Priority date: 2007-10-02
Filing date: 2007-10-02
Publication date: 2010-06-11
Also published as: KR20090034241A

Abstract

누룩 및 유산균을 이용한 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법, 상기 방법에 의해서 제조된 발효물 및 이를 함유하는 화장품 조성물 및 식품 조성물이 제공된다.

본 발명에 따르면, 일상 생활에서 용이하게 섭취가능한 천연 식물성 소재나 생리활성이 강하여 한의학에서 사용되는 한약재를 누룩 및 유산균을 이용하여 발효시킴으로써 별도의 탄소원 첨가 없이도 유산균 발효 효율을 높일 수 있으며, 제조된 발효물은 안정성 및 안전성이 매우 뛰어나고 우수한 항노화, 항암, 항염, 면역 개선 등의 효능을 갖기 때문에 약학 조성물, 화장품 조성물 및 식품 조성물 등에 유용하게 포함될 수 있는, 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법, 상기 방법에 의해서 제조된 발효물 및 이를 함유하는 약학 조성물, 화장품 조성물 및 식품 조성물을 제공할 수 있다.

Description

천연 식물소재 및 한약재의 발효방법, 상기 방법에 의해서 제조된 발효물 및 이를 함유하는 약학 조성물, 화장품 조성물 및 식품 조성물 {A method for fermentation of natural plants and herbal medicines, a fermented product prepared therefrom and a paharmaceutical composition, a cosmetic compositon and a food composition comprising the product}

본 발명은 누룩 및 유산균을 이용한 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법, 상기 방법에 의해서 제조된 발효물 및 이를 함유하는 화장품 조성물 및 식품 조성물에 관한 것으로서, 더욱 구체적으로는 일상 생활에서 용이하게 섭취가능한 천연 식물성 소재나 생리활성이 강하여 한의학에서 사용되는 한약재를 누룩 및 유산균을 이용하여 발효시킴으로써 별도의 탄소원 첨가 없이도 유산균 발효 효율을 높일 수 있으며, 제조된 발효물은 안정성 및 안전성이 매우 뛰어나고 우수한 항노화, 항암, 항염, 면역 개선 등의 효능을 갖기 때문에 약학 조성물, 화장품 조성물 및 식품 조성물 등에 유용하게 포함될 수 있는, 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법, 상기 방법에 의해서 제조된 발효물 및 이를 함유하는 약학 조성물, 화장품 조성물 및 식품 조성물에 관한 것이다.

최근 고령화 사회의 도래로 웰빙 트랜드가 사회 전반에 뿌리내리고 있으며, 이는 식품, 화장품, 주거 환경 등의 모든 분야에서 천연 식물성 소재 및 전통적인 민간 요법으로 전래되는 한약재에 대한 관심을 증폭시켰다.

상대적으로 천연 식물소재의 제품화가 용이한 화장품 산업 분야에서 오래전부터 이를 원료로 사용한 시도들이 있어 왔으며, 기능식품 및 예방의학, 치료의학의 분야에서도 동양의 식물성 약재 (Herbal medicine)가 미국 및 유럽에서까지 허가 및 제품화되기 시작하면서, 천연 식물소재 및 한약재의 인체 유용성에 대한 관심이 증가하였다.

천연 식물소재 또는 한약재는 다양한 생리활성 물질과 항산화 물질을 함유하고 있어 항노화, 항암, 항염, 면역 기능 개선 등 다양한 효과를 보이지만, 추출된 이후에는 불안정하고 때론 자극적이어서, 인체에 독성을 띄는 경우도 종종 있다. 따라서, 최근에는 천연 추출물을 안정화시키거나, 독성을 줄이거나, 안정한 유도체로 전환시켜 효과를 높이려는 시도가 많이 진행되고 있으며, 그 일환으로 미생물이나 효소를 이용한 생물학적 전환 (Biological transformation) 방법이 개발되고 있으며, 대표적 방법으로 발효를 예로 들 수 있다.

발효는 미생물이 가지고 있는 효소를 이용하여 유기물을 분해시켜서 인간 생활에 유용하게 사용되는 물질을 제조하는 과정으로서, 인체에 유용한 물질을 만들어내는 대표적인 발효 미생물로는 유산균, 효모 등이 있고, 다양한 식품들이 발효 과정에 의해서 생산된다. 또한, 발효는 유용 물질을 만들어 내는 것 이외에도 발효에 관여하는 유산균이 장 내에서 면역 및 독소제거 (Detoxification)의 역할을 담당하기도 한다. 더 나아가, 장내 미생물에 의한 발효를 통해 섭취된 성분은 분해되어 인체 세포에 흡수가 용이한 저분자 물질로 전환되거나, 불안정하거나 불활성인 형태에서 활성 형태로 전환되어 흡수되기도 하며, 이러한 결과는 장내 미생물에 의한 생물전환의 중요성을 단적으로 보여주는 것이라 볼 수 있다.

따라서, 유산균 및 효모 등의 미생물 발효에 의해서 천연 식물소재 및 한약재의 효능을 극대화시키거나, 안전성 문제를 해결하기 위한 시도는 다양한 식품, 화장품, 약품 등의 개발에 있어서 중요한 의미를 갖는다 하겠다. 특히, 우수한 항암 효과, 항염증 효과, 항노화 효과, 면역력 증강 효과 등을 갖는 것으로 보고되는 김치나 된장 등의 한국전통식품에서 번식하는 미생물은 생물학적 활성이 뛰어난 것으로 보고되고 있어, 전통 발효 식품에서 분리한 미생물을 이용하려는 많은 연구가 진행되고 있다.

한국전통식품에서 번식하는 미생물의 일종인 누룩은 우리나라에서 예로부터 술을 제조하는데 이용되어 왔다. 누룩은 술을 만드는 효소를 갖는 곰팡이를 곡류에 번식시킨 것인데, 누룩의 주된 역할은 쌀과 같은 전분질 원료를 당화시키는 것으로서, 원시시대에는 술을 만들기 위해서 타액의 아밀라제를 이용하였지만, 이후 곰팡이 균사를 입힌 누룩을 사용하거나 보리를 침지하여 싹을 나게 한 맥아를 사용하는 방법이 보급되었다. 현재의 누룩은 주균인 라이조푸스 (Rhyzopus), 우사미 (Usami) 및 오리재 (Oryzae) 등의 균을 배양하여 구연산과 당화력을 높인 것들이 널리 사용되고 있다.

종래의 천연 식물소재 및 한약재를 이용한 기술들은 대부분 단순 추출물, 초 임계 추출물, 다양한 용매를 사용한 추출물을 사용하는 것들이지만, 일부 이러한 천연 식물소재 및 한약재에 대해서 누룩 곰팡이 또는 유산균을 사용하여 발효 과정을 수행하는 기술들이 개시된 바도 있다. 예를 들어, 대한민국 공개특허공보 제2005-64688호는 건강음료를 제조하는데 있어서, 볏짚을 사용하여 누룩 곰팡이가 번식되도록 함으로써 콩을 발효시키고 추출하는 발명을 개시하고 있으며, 대한민국 공개특허공보 제2007-6960호에서는 녹두를 유산균으로 발효시킴으로써 제조되는 화장료 조성물을 개시하고 있다.

그러나, 천연 식물소재 및 한약재는 그 종류에 따라 다양한 성분들이 함유되어 있으며, 이 중에서 항균 성분이 많이 존재하는 소재 또는 미생물이 이용하기 용이한 형태의 탄소원을 많이 함유하고 있지 않은 소재의 경우에는 유산균을 접종하여 발효를 수행하여도 반응이 잘 수행되지 않는다. 이러한 문제의 해결을 위해서, 별도의 탄소원을 공급해 주거나, 정제 효소를 따로 사용하는 방법도 개발된 바 있으나, 여러 효소를 따로따로 첨가해야 하므로 공정이 복잡해지고, 경제적으로도 불리하다는 문제점이 있었다.

따라서, 본 발명이 해결하고자 하는 첫 번째 과제는, 누룩을 이용한 당화 단계 및 유산균에 의한 발효 단계를 효과적으로 연계시킴으로써, 별도의 탄소원 첨가 없이도 유산균 발효 효율을 극대화할 수 있는 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법을 제공하는 것이다.

본 발명이 해결하고자 하는 두 번째 과제는, 안정성 및 안전성이 매우 뛰어나고 우수한 항노화, 항암, 항염, 면역 개선 등의 효능을 갖는, 상기 방법에 의해서 제조된 발효물을 제공하는 것이다.

본 발명이 해결하고자 하는 세 번째 과제는, 상기 발효물을 함유하는 약학 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명이 해결하고자 하는 네 번째 과제는, 상기 발효물을 함유하는 화장품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명이 해결하고자 하는 다섯 번째 과제는, 상기 발효물을 함유하는 식품 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 상기 첫 번째 과제를 달성하기 위해서,

누룩을 이용한 당화 단계;

유산균 배양을 통한 발효 단계; 및

상기 배양 결과물로부터 상등액을 수득하는 단계

를 포함하는 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법을 제공한다.

본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 당화 단계는 천연 식물소재 및 한약재를 분쇄하는 단계, 누룩을 첨가하는 단계, 및 침지시키는 단계를 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 다른 실시예에 따르면, 상기 분쇄 단계의 분쇄물은 10㎛ 내지 1mm의 평균 입경을 가질 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 실시예에 따르면, 상기 천연 식물소재 및 한약재는 생강, 갈근, 감초, 녹차, 다시마, 당귀, 맥문동, 복분자, 산수유, 상백피, 오미자, 은행잎, 자초, 천문동, 치자, 캐모마일, 표고버섯, 감잎, 강낭콩, 계피, 고삼, 금은화, 도토리, 목단피, 포공영, 상황버섯, 석류, 송이버섯, 승마, 약쑥, 영지버섯, 오배자, 우엉, 율피, 황금, 황련, 황백, 괴화, 길경, 대나무, 도인, 옥죽, 백작약, 백지, 복령, 비파옆, 시호, 알로에, 익모초, 차전초, 창이자, 천궁, 천문동, 토사자, 하수오, 행인, 현미, 홍화, 감국, 결명자, 귀리, 녹두, 대추, 더덕, 단호박, 도인, 마치현, 모과, 목단피, 백리향, 산다화, 어성초, 연자육, 고본, 곽향, 대황, 방품, 백급, 백부자, 백지, 사상자, 가시오갈피, 감귤, 도인, 두충, 인삼, 홍삼, 천화분, 토마토, 파파야, 해송자, 행인, 겨우살이, 귀리, 녹용, 동충하초, 포도씨, 백강잠, 아가리쿠스버섯, 차가버섯, 연자육, 강황, 고추, 마늘, 구기자, 구아바, 구절초, 금송, 노근, 느릅나무, 두릅, 두충, 들깨, 루이보스, 마, 마황, 매실, 매화, 백급, 백리향, 병풀, 보골지, 보라지, 복분자, 비수리, 비자, 비파엽, 빈랑자, 산뽕나무, 산수유, 산초, 신선초, 아세로라, 아카시아, 약쑥, 올리 브잎, 와송, 우슬, 원지, 육두수, 은행잎, 자근, 자소엽, 죽순, 지구자, 지모, 지실, 지황, 차전초, 창이자, 창포, 천화분, 캐비어, 클로렐라, 스피루리나, 토사자, 파슬리, 포공영, 해송자, 행인, 함초, 호두, 회향 또는 그 혼합물일 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 실시예에 따르면, 상기 누룩의 첨가량은 상기 분쇄물 100 중량부에 대해서 1 내지 10 중량부일 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 실시예에 따르면, 상기 누룩의 첨가량은 상기 분쇄물 100 중량부에 대해서 2 내지 3 중량부일 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 실시예에 따르면, 상기 침지 단계는 20 내지 40℃의 온도에서 18 내지 30시간 동안 수행될 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 실시예에 따르면, 상기 침지 단계 이후의 결과물에 대해서 살균하는 단계를 더 포함할 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 실시예에 따르면, 상기 누룩을 제조하는데 사용된 균주는 거미줄곰팡이 (rhyzopus nigricans), 누룩곰팡이 (Aspergillus oryzae) 또는 그 혼합 균주일 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 실시예에 따르면, 상기 유산균은 락토바실러스 사케이 (Lactobacillus sakei B2-16), 락토바실러스 브레비스 (Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플렌타럼 (Lactobacillus plantarum P23), 락토코커스 락티스 (Lactococcus lactis A164), 바실러스 코아귤런스 (Bacillus coagulance) 또는 그 혼합 균주일 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 실시예에 따르면, 상기 유산균 배양을 통한 발 효 단계 시에는 효모균인 사카로마이세스 세레비지에 (Saccharomyces cerevisiae) 균주를 더 첨가할 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 실시예에 따르면, 상기 유산균 또는 효모균의 접종량은 접종 초기 균수가 10⁵ 내지 10⁸ cfu/g 또는 10⁵ 내지 10⁸ cfu/㎖일 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 실시예에 따르면, 상기 유산균은 김치 또는 된장으로부터 분리된 균주이며, 상기 효모균은 청주 제조시에 사용되는 균주일 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 실시예에 따르면, 상기 유산균 배양을 통한 발효 단계는 15 내지 40℃의 온도에서 18 내지 120 시간 동안 수행될 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 실시예에 따르면, 상기 상등액 수득 단계는 여과 또는 원심분리에 의해서 수행될 수 있다.

본 발명은 상기 두 번째 과제를 달성하기 위해서,

상기 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법에 의해서 제조된 발효물을 제공한다.

본 발명은 상기 세 번째 과제를 달성하기 위해서,

상기 발효물을 함유하는 약학 조성물을 제공한다.

본 발명은 상기 네 번째 과제를 달성하기 위해서,

상기 발효물을 함유하는 화장품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 다섯 번째 과제를 달성하기 위해서,

상기 발효물을 함유하는 식품 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명을 더욱 상세하게 설명하기로 한다.

본 발명은 천연 식물소재 또는 한약재의 다양한 생리활성을 더욱 안정적이고, 독성이 적으며, 효과적으로 이용하기 위해서, 이러한 천연 식물소재 또는 한약재에 대한 생물학적 전환 방법으로서 발효과정을 이용하고자 하였으며, 누룩을 이용한 당화 단계 및 유산균에 의한 발효 단계를 효과적으로 연계시킴으로써, 별도의 탄소원 첨가 없이도 유산균 발효 효율을 극대화하고자 하였다.

천연 식물소재 또는 한약재에 대한 생물학적 전환 방법으로서, 가장 경제적이면서도 그 안전성이 검증된 방법은 발효방법이다. 그러나, 미생물을 이용한 발효과정을 원활하게 수행하기 위해서는 해당 미생물이 잘 성장할 수 있는 조건을 마련해 주어야 하지만, 대부분의 천연 식물소재 및 한약재는 이러한 환경을 제공해 주기가 어렵다. 이는 미생물이 잘 성장하기 위해서는 탄소원으로서 이용하기 쉬운 형태의 포도당이 존재하여야 하지만, 대부분의 천연 식물소재 및 한약재에는 이러한 형태의 탄소원이 많이 존재하지 않기 때문이다. 따라서, 우수한 생리활성을 갖는 것으로 알려진 여러 천연 식물소재 또는 한약재에 발효 미생물을 배양해서는 원하는 생물학적 전환을 유도해 내기가 어렵다.

본 발명에서는 이러한 문제점을 해결하기 위해서 누룩 (또는 곡자)과 유산균을 사용하였다. 일반적으로 누룩이라 하면, 술을 만드는 효소를 갖는 곰팡이를 쌀과 같은 곡류에 번식시킨 것을 의미하며, 누룩의 주된 역할은 곡류에 존재하는 전 분질 원료를 당화시키는 것이다. 따라서, 이러한 누룩의 당화 작용에 의한 결과물을 유산균의 성장 영양분으로 이용함으로써 효과적이면서도 편리한 방법으로 천연 식물소재 및 한약재에 대한 발효를 수행할 수 있게 되는 것이다.

구체적으로, 본 발명에 따른 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법은, 누룩을 이용한 당화 단계; 유산균 배양을 통한 발효 단계; 및 상기 배양 결과물로부터 상등액을 수득하는 단계를 포함하며, 특히 상기 당화 단계는 천연 식물소재 및 한약재를 분쇄하는 단계, 누룩을 첨가하는 단계, 및 침지시키는 단계를 포함할 수 있다.

도 1에는 본 발명에 따른 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법에 대한 공정도를 개략적으로 도시하였으며, 이하 도 1을 참조하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하기로 한다.

먼저, 분쇄 단계는 누룩에 의한 당화 과정이 더욱 용이하게 진행될 수 있도록 하기 위한 것으로서, 분쇄 단계로부터 얻어진 분쇄물은 10㎛ 내지 1mm의 평균 입경을 가질 수 있다.

본 발명이 적용될 수 있는 천연 식물소재 및 한약재로는, 인체에 유용한 다양한 생리활성을 갖는 여러 가지 물질들을 예로 들 수 있으며, 이에 제한되는 것은 아니지만, 생강, 갈근, 감초, 녹차, 다시마, 당귀, 맥문동, 복분자, 산수유, 상백피, 오미자, 은행잎, 자초, 천문동, 치자, 캐모마일, 표고버섯, 감잎, 강낭콩, 계피, 고삼, 금은화, 도토리, 목단피, 포공영, 상황버섯, 석류, 송이버섯, 승마, 약쑥, 영지버섯, 오배자, 우엉, 율피, 황금, 황련, 황백, 괴화, 길경, 대나무, 도인, 옥죽, 백작약, 백지, 복령, 비파옆, 시호, 알로에, 익모초, 차전초, 창이자, 천궁, 천문동, 토사자, 하수오, 행인, 현미, 홍화, 감국, 결명자, 귀리, 녹두, 대추, 더덕, 단호박, 도인, 마치현, 모과, 목단피, 백리향, 산다화, 어성초, 연자육, 고본, 곽향, 대황, 방품, 백급, 백부자, 백지, 사상자, 가시오갈피, 감귤, 도인, 두충, 인삼, 홍삼, 천화분, 토마토, 파파야, 해송자, 행인, 겨우살이, 귀리, 녹용, 동충하초, 포도씨, 백강잠, 아가리쿠스버섯, 차가버섯, 연자육, 강황, 고추, 마늘, 구기자, 구아바, 구절초, 금송, 노근, 느릅나무, 두릅, 두충, 들깨, 루이보스, 마, 마황, 매실, 매화, 백급, 백리향, 병풀, 보골지, 보라지, 복분자, 비수리, 비자, 비파엽, 빈랑자, 산뽕나무, 산수유, 산초, 신선초, 아세로라, 아카시아, 약쑥, 올리브잎, 와송, 우슬, 원지, 육두수, 은행잎, 자근, 자소엽, 죽순, 지구자, 지모, 지실, 지황, 차전초, 창이자, 창포, 천화분, 캐비어, 클로렐라, 스피루리나, 토사자, 파슬리, 포공영, 해송자, 행인, 함초, 호두, 회향 또는 그 혼합물을 예로 들 수 있다.

한편, 누룩을 제조하기 위한 원료 곡물로는, 밀 또는 쌀에 밀가루를 입힌 것을 원부재료로 하고, 여기에 녹두, 찹쌀 또는 보리 등이 함께 사용되기도 한다. 또한, 효모원으로는 도꼬마리, 보릿짚, 벗 짚, 뽕나무, 쑥, 상주, 연꽃, 솔대 잎 여뀌의 어린 잎, 솔잎 등이 있다. 원료 곡물의 증자 여부는 볶은 것, 낀 것, 살짝 찐 것, 날 밀 등이 있으며, 원료의 입도는 12할부터 미분까지 가능하다. 주원료의 종류에는 뽕나무 잎, 쑥, 수유를 달인 즙, 복숭아씨 분말, 살구씨 분말, 참외 분말 등이 있다.

당화 과정을 위해서 첨가되는 누룩의 첨가량은 상기 분쇄물 100 중량부를 기준으로 1 내지 10 중량부, 바람직하게는 2 내지 3 중량부일 수 있다. 누룩의 첨가량이 10 중량부를 초과하는 경우에는 곰팡이 냄새 발생 등의 염려가 있고, 1 중량부 미만인 경우에는 당화가 충분히 일어나지 않아 이후의 유산균 발효효율이 떨어지는 문제점이 있어서 바람직하지 않다.

누룩 곰팡이는 일반적으로 그 색상에 따라 황국균, 흑국균 또는 홍국균 등으로 분류되며, 크게 떡 누룩 (병국) 또는 흩임 누룩 (신국)으로 분류되기도 한다. 병국에 서식하는 곰팡이로는 내부까지 기어드는 발효형으로서, 거미줄곰팡이 (rhyzopus nigricans), 효모, 털곰팡이 등이 있고, 신국에 서식하는 곰팡이로는 표면에만 번식하는 호흡형으로서, 누룩곰팡이 (Aspergillus oryzae) 등이 있다.

본 발명에서 누룩 제조에는, 상기 떡 누룩 또는 흩임 누룩 등이 고루 사용될 수 있지만, 특히 거미줄곰팡이 (rhyzopus nigricans), 누룩곰팡이 (Aspergillus oryzae) 또는 그 혼합 균주가 사용되는 것이 바람직하다.

누룩 첨가 후의 침지 단계는 20 내지 40℃의 온도에서 18 내지 30시간 동안 수행되는 것이 바람직하며, 이는 이는 누룩 곰팡이 유래 효소의 활성을 나타내는 최적의 온도이기 때문이다. 이 온도에서 누룩 곰팡이에 의해 생성되는 유기산은 코지산, 글루콘산등이 있고, 유발되는 효소는 아밀라제, 말타제, 인베르타제, 셀룰라제, 이눌리나제 및 단백질 분해효소등이 있다.

또한, 상기 침지 단계 이후에는 후속 유산균 배양을 통한 발효 단계로부터 얻어진 발효물의 순도를 높이기 위해서, 살균 단계가 더 수행될 수도 있으며, 이러 한 살균 단계는 예를 들어 121℃, 1.5 기압의 조건에서 20분 내지 40분 동안 열처리함으로써 수행될 수 있다.

다음으로, 상기와 같이 당화 단계가 완료되면, 유산균 배양을 통한 발효 단계가 수행된다.

본 발명에서 사용가능한 유산균으로는, 이에 제한되는 것은 아니지만, 락토바실러스 사케이 (Lactobacillus sakei B2-16), 락토바실러스 브레비스 (Lactobacillus brevis ), 락토바실러스 플렌타럼 (Lactobacillus plantarum P23), 락토코커스 락티스 (Lactococcus lactis A164), 바실러스 코아귤런스 (Bacillus coagulance) 또는 그 혼합 균주를 예로 들 수 있으며, 여기에는 효모균인 사카로마이세스 세레비지에 (Saccharomyces cerevisiae) 균주를 더 첨가해 줄 수도 있다.

상기 유산균 또는 효모균의 접종량은 접종 초기 균수가 10⁵ 내지 10⁸ cfu/g 또는 10⁵ 내지 10⁸ cfu/㎖인 것이 바람직한데, 접종 초기 균수가 10⁵ cfu/g 또는 10⁵ cfu/㎖ 미만인 경우에는 발효시간이 길어지는 문제점이 있고, 10⁸ cfu/g 또는 10⁸ cfu/㎖를 초과하는 때에는 효과의 증가가 크지 않음에도 접종량이 과도한 문제가 있다.

상기 유산균들은 한국 전통식품인 김치 또는 된장 등으로부터 용이하게 분리 가능하며, 상기 효모균 역시 청주 제조시에 사용되는 균주를 사용할 수 있다.

한편, 유산균 배양을 통한 발효 단계는, 최적의 유산균 발효 조건을 고려할 때에, 15 내지 40℃의 온도에서 18 내지 120 시간 동안 수행될 수 있다.

마지막으로, 유산균 배양을 통한 발효 결과물로부터 상등액을 수득하는 단계가 수행되며, 이는 여과 또는 원심분리 등의 다양한 방법에 의해서 수행될 수 있다.

본 발명의 두 번째 과제는 상기 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법에 의해서 제조된 발효물을 제공하는 것이며, 본 발명에 따른 발효물은 하기 실시예에서 서술하는 바와 같이, 콜라겐 합성 촉진 효과, 피부 미백 효과, 항산화 효과 등이 우수하여, 피부 노화 방지 및 개선, 피부 턴오버 보조, 피부 손상 방지 및 개선, 항산화, 항염증 등의 효과를 갖는 다양한 약학 조성물, 화장품 조성물 또는 식품 조성물 등에 유효성분으로 함유될 수 있다.

따라서, 본 발명의 세 번째, 네 번째 및 다섯 번째 과제는 상기 발효물을 함유하는 약학 조성물, 화장품 조성물 및 식품 조성물을 제공하는 것이며, 본 발명에 따른 조성물들은, 본 발명이 목적으로 하는 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분 등을 함유할 수도 있으며, 예를 들어 물성 개선을 위하여 향료, 색소, 살균제, 산화방지제, 방부제, 보습제, 점증제, 무기염류, 유화제, 합성 고분자 물질 등의 첨가제를 더 포함할 수도 있을 뿐만 아니라, 수용성 비타민, 유용성 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당 및 해초 엑기스 등의 보조 성분을 더 포함할 수도 있다. 상기 성분들은 제형 또는 사용 목적에 따라서 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있으며, 그 첨가량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 선택될 수 있지만, 조성물 총중량에 대하여 0.01~5 중량%, 바람직하게는 0.01∼3 중량%일 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 조성물의 제형 역시 용액, 유화물, 점성형 혼합물, 타블렛, 분말 등의 다양한 형태일 수 있으며, 이는 단순 음용, 주사 투여, 스프레이 방식 또는 스퀴즈 방식 등의 다양한 방법으로 투여될 수 있다.

이하, 실시예 및 평가예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 그러나, 이들 실시예 및 평가예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예 및 평가예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진 자에 있어서 자명할 것이다.

실시예 1. 본 발명에 따른 천연 식물소재 또는 한약재 발효물의 제조

갈근 100g을 30℃ 이하의 냉수로 약 30분 정도 세척하고 분쇄기로 분쇄한 다 음, 분쇄물이 고형분 기준으로 3 중량%가 되도록 물을 첨가한 후, 누룩을 첨가하고 상온에서 24시간 동안 침지시켰다. 누룩은 밀끼울과 물을 각 5:1의 비율로 섞어 잘 버무린 후 배양한 거미줄곰팡이 (rhyzopus nigricans), 누룩곰팡이 (Aspergillus oryzae) 또는 그 혼합 균주를 접종하고 25℃에서 30℃의 범위에서 3∼5일간 배양하여 사용하였다. 이때, 누룩의 첨가량은 분쇄물 100 중량부에 대해서 2.5 중량부가 되도록 하였다. 침지 후, 침지 결과물을 121℃에서 30분간 열처리하여 살균하였다. 이어서, 미리 배양된 유산균 Lactobacillus plantarum P23을 10⁷ cfu/㎖의 농도가 되도록 첨가한 다음, 37 ℃에서 3∼5일간 배양하고, 연속식 원심분리기를 이용하여 상등액을 채취하였다.

실시예 2 내지 32. 본 발명에 따른 천연 식물소재 또는 한약재 발효물의 제조

갈근 대신에, 각각 감초(실시예 2), 녹차(실시예 3), 다시마(실시예 4), 당귀(실시예 5), 맥문동(실시예 6), 복분자(실시예 7), 산수유(실시예 8), 생강(실시예 9), 상백피(실시예 10), 오미자(실시예 11), 은행잎(실시예 12), 자초(실시예 13), 천문동(실시예 14), 치자(실시예 15), 캐모마일(실시예 16), 표고버섯(실시예 17), 상황버섯(실시예 18), 홍삼(실시예 19), 석류(실시예 20), 약쑥(실시예 21), 하수오(실시예 22), 사상자(실시예 23), 행인(실시예 24), 알로에(실시예 25), 더덕(실시예 26), 마치현(실시예 27), 어성초(실시예 28), 천궁(실시예 29), 포공영 (실시예 30), 가시오가피(실시예 31), 두충(실시예 32)을 사용하였다는 점을 제외하고는, 상기 실시예 1과 동일한 방법에 의해서 실시예 2 내지 32에 따른 발효물들을 제조하였다.

비교예 1 내지 32. 종래기술에 따른 천연 식물소재 또는 한약재 발효물의 제조

누룩을 이용한 당화단계를 수행하지 않고 직접 유산균 배양을 통한 발효단계를 수행하였다는 점을 제외하고는, 실시예 1과 동일한 방법으로 발효물을 수득하였다.

평가예 1. 발효 효율 평가

상기 실시예 1 내지 32와 비교예 1 내지 32에 따른 발효물의 발효 정도를 비교하기 위한 척도로서 pH를 사용하였다. 유산균의 경우 균체의 성장에 비례하여 pH가 감소하는 경향을 보이므로 pH가 떨어진 정도를 비교하여 발효효율을 나타내었으며 그 결과를 하기 표 1에 도시하였다. 표 1을 참조하면, 발효효율(pH 감소율%)이란 비교예와 비교할 때에 실시예에서 추가로 감소한 pH를 백분율로 나타낸 것이다. 예를 들어, 갈근에 대한 실시예 1의 경우, 비교예 1과 비교할 때에 pH가 15%정도 추가로 감소하였다.

평가예 2. 세포 독성 검사

피부세포 (Fibroblast)를 96웰 플레이트에 접종한 후, 실시예 1 내지 32에 따른 발효물을 농도별로 첨가한 배지를 넣고 1 내지 2일간 배양하였다. 배지를 제거한 후, MTT 용액을 첨가하고 2∼3시간 반응시킨 후, MTT용액을 제거하고 DMSO를 첨가한 다음, 포마존 크리스탈을 혼합해 주었다. 흡광도를 측정하여 세포 사멸 정도(독성농도)를 비교하였으며, 실시예 1 내지 32에서 사용한 천연식물 또는 한약재의 추출물과 비교할 때에, 동일한 세포사멸을 나타내는데 첨가되는 발효물의 농도를 배수로 표현한 결과를 하기 표 1에 나타내었다. 예를 들어, 갈근에 대한 실시예 1의 경우 갈근 추출물 자체와 비교할 때에 동일한 세포사멸을 나타내는데 첨가되는 농도가 3배 정도로 나타났으므로 본 발명에 따른 발효물의 경우 세포 독성이 현저히 감소한 것을 알 수 있다.

평가예 3. 발효물의 미백 효과

하기의 3가지 방법에 의해서 실시예 1 내지 32에 따른 발효물의 미백효과를 평가하였으며, 그 결과를 하기 표 1에 나타내었다. 발효물의 미백효과는 하기의 멜라닌 종양세포에서의 멜라닌 합성저해효과 및 타이로시네이즈 발현억제효과를 종합하여 - (미백효과 없슴), + (약간의 미백효과를 보임), ++ (미백효과가 우수함), +++ (미백효과가 매우 우수함)으로 표시하였으며, 이중 미백효과가 가장 우수한 실시예 17에 대한 각각의 결과를 도 2 및 3에 도시하였다.

1) 멜라닌 종양 세포에서의 멜라닌 합성 저해 효과

실시예 1 내지 32에 따른 발효물들의 멜라닌 종양 세포에서 멜라닌 합성 저해 효과를 알아보기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.

먼저, 마우스 유래 악성 멜라닌 종양 세포주 B16F1 (KCLB 8007)를 페니실린 (100 IU/mL), 스트렙토마이신 (100 g/mL), 10% FBS (fetal bovine serum)를 함유하는 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지에 넣고 37℃를 유지하며 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기 내에서 배양하였다. 수득된 멜라닌 종양 세포를 24웰 플레이트 (well plate)에 1 × 10⁴ 세포/웰 (cells/well)에 접종 (seeding)하여 1일 배양하였다. 배양 후 배지를 제거한 다음, 멜라닌 합성을 유도시키기 위하여, alpha-MSH (melanocyte stimulating hormone; 멜라노사이트 자극 호르몬)을 비처리군을 제외하고 50 nM을 첨가하여 멜라닌 합성을 유도하였고, 동시에 상기 실시예 1 내지 32를 통해 얻어진 발효물을 각각 0.1%, 0.5%, 1% 및 코직산 (양성대조군) 800 μM를 가한 DMEM 배지를 첨가하여 3일간 배양하였다. 각 처리군에 의한 멜라닌 종양세포가 분비한 합성된 멜라닌 양을 육안으로 확인하고 그 변화를 디지털 카메라로 촬영하였으며, 각 처리군의 세포를 수거하여 10% DMSO (Dimethyl sulfoxide)와 1N NaOH 100 ㎕를 각각 첨가하여 멜라닌을 용해하였고, 405nm에서의 흡광도를 측정하여 멜라닌 량을 측정하였으며 실시예 17에 대한 결과를 도 2에 도시하였다.

2) 타이로시네이즈 발현 저해효과

실시예 1 내지 3에 따른 발효물의 타이로시네이즈 발현 저해 효과를 알아보 기 위하여 하기와 같은 실험을 수행하였다.

먼저, 마우스 유래 악성 멜라닌 종양 세포주 B16F1 (KCLB 8007)를 페니실린 (100 IU/mL), 스트렙토마이신 (100 g/mL Hyclone), 10% FBS (fetal bovine serum Hyclone)를 함유하는 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium Hyclone) 배지에 넣고 37℃를 유지하며 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기 내에서 배양하였다. 수득된 멜라닌 종양 세포를 6웰 플레이트에 1 × 10⁵ 세포/웰 (cells/well)에 접종 (seeding)하여 1일 배양하였다. 배양 후 배지를 제거한 다음, 멜라닌 합성을 유도시키기 위하여, alpha-MSH (melanocyte stimulating hormone; 멜라노사이트 자극 호르몬)을 비처리군을 제외하고 50 nM을 첨가하여 멜라닌 합성을 유도하였고, 동시에 유산균 파쇄 용해물을 각각 0.5%, 1% 가한 DMEM 배지를 첨가하여 1일간 배양하였다. 각 처리군의 세포를 수거한 후, SDS cell lysis buffer (2% SDS 첨가)로 세포를 용해시켜 용해물 (lysates)을 획득하고, 브래드-포드법 (Brad-ford)으로 총 단백질양을 정량하여 각 처리군의 총 단백질양을 보정하여, 웨스턴 시료를 제조하였다. 준비한 시료는 10% SDS PAGE에서 크기에 따라 단백질이 분리되었고, 이 후 PVDF 막 (membrane)으로 옮겨진 단백질은 항타이로시네이즈 항체를 1차 항체로 사용하여 엑스레이 필름에서 가시화되었다. 실시예 17에 의한 발효물에 대한 엑스레이 사진을 도 3에 도시하였다. 도 3을 참조하면, 본 발명에 따른 표고버섯 발효물의 경우 밴드가 보이지 않는다. 따라서, 타이로시네이즈가 생성되지 않는다는 것을 알 수 있으며, 이는 본 발명에 따른 발효물이 타이로시네이즈의 발현 저해효과가 우수하다는 것을 의미한다.

평가예 4. 발효물의 콜라겐 합성 촉진 효과(항노화 효능)

실시예 1 내지 32에 따른 발효물의 항노화 효과를 측정하기 위하여 발효물들의 사람 섬유아세포에서의 프로콜라겐 합성 촉진 효과를 알아보았다.

먼저, 사람 섬유아세포 (normal human fibroblast)를 페니실린 (100 IU/mL), 스트렙토마이신 (100 g/mL), 10% FBS (fetal bovine serum)를 함유하는 DMEM (Dulbecco's Modified Eagle's Medium) 배지를 넣고 37℃를 유지하며 5% 이산화탄소를 포함하는 배양기 내에서 배양하였다. 수득된 섬유아세포를 6-웰 플레이트에 각 웰당 3× 10⁵ 개로 분주한 다음 세포배양조건에서 24시간 배양하였다. 배양 후 배지를 제거한 다음 0.05, 0.1, 0.2% 농도의 상기 실시예 1 내지 32 및 비교예 1 내지 32에서 수득된 각 발효물들 및 5, 10, 20 nM의 비타민C (양성대조군)를 무혈청 (serum-free) 배지 (DMEM)에서 24시간 동안 배양하였다. 각 처리군의 배양액을 수거하여 단백질 전기영동을 하였다. 이후, PVDF 막으로 옮겨진 단백질은 항-프로콜라겐 타입 항체 (anti-procollagen type1 antibody)를 1차 항체로 사용하여 엑스레이 필름에서 가시화되었으며, 상기에서 가시화한 콜라젠 밴드의 덴시티를 정량화한 후 이를 상호 비교하여 표 1의 항노화 효능란에 - (항노화효과 없슴), + (약간의 항노화효과를 보임), ++ (항노화효과가 우수함), +++ (항노화효과가 매우 우수함)으로 표시하였다. 한편, 본 발명의 실시예 1 내지 17에 대한 상기 엑스레이 사 진을 도 4 내지 6에 도시하였다.

평가예 5. 발효물의 항산화 효과

실시예 1 내지 32에 따른 항산화 효과를 측정하기 위하여 수퍼옥시드 디스뮤타제 (Superoxide dismutase:SOD) 유사 활성을 측정하였다.

먼저, 유산균 파쇄 용해물을 0.083, 0.83, 8.3%의 농도로 준비하고, 양성 대조군으로 사용할 SOD (Sigma, S-2515)를 0.1, 1, 10 U (unit)/ml의 농도로 준비하였다. SOD 활성도를 측정하기 위해 SOD assay kit (Dojindo molecular technologies, INC.)를 사용하였다. SOD는 유해한 활성산소(O² ^-)를 무해한 과산화수소 (Hydrogen peroxide)로 전환시키는 대표적인 항산화 효소인데, kit에 포함되어 있는 잔틴 옥시다제 (xanthine oxidase)가 작용하여 활성 산소가 만들어졌을 때, 시료가 보유하는 SOD 활성도가 높을수록 만들어진 활성 산소가 WST-1이라는 기질을 WSH-1 formazan으로 변화시키지 않기 때문에 색의 변화가 없게 된다. 반면에, SOD 활성도가 없으면, 만들어진 활성산소에 의해 WSH-1이 WSH-1 formazan으로 쉽게 변화하기 때문에 색의 변화가 커지게 된다.

색 변화 관찰에 의해서 측정한 SOD 유사 활성도 결과를 항산화 효능으로서 하기 표 1에 나타내었으며, -(항산화효과 없슴), + (약간의 항산화효과를 보임), ++ (항산화효과가 우수함), +++ (항산화효과가 매우 우수함)으로 표시하였다. 한편, 실시예 1 내지 17의 발효물에 대한 SOD 유사 활성도 결과를 도 7 및 8에 도시 하였다.

이하, 하기 조성에 따라서, 각각 비누형, 로션형, 크림형, 팩형, 미용액형의 제제들을 제조하였다.

제조예 1. 비누형

실시예 1의 발효물 1.00

유지 75.00

수산화나트륨 5.00

향료 10.00

정제수 잔량

(단위: 중량%)

제조예 2. 로션형

실시예 1의 발효물 3.00

L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염 1.00

수용성 콜라겐 (1% 수용액) 1.00

시트르산나트륨 0.10

시트르산 0.05

감초 엑기스 0.20

1,3-부틸렌글리콜 3.00

정제수 잔량

(단위: 중량%)

제조예 3. 크림형

실시예 1의 발효물 1.00

폴리에틸렌글리콜모노스테아레이트 2.00

자기유화형 모노스테아르산글리세린 5.00

세틸알코올 4.00

스쿠알렌 6.00

트리2-에틸헥산글리세릴 6.00

스핑고당지질 1.00

1.3-부틸렌글리콜 7.00

정제수 잔량

(단위: 중량%)

제조예 4. 팩형

실시예 1의 발효물 5.00

폴리비닐알코올 13.00

L-아스코르빈산-2-인산마그네슘염 1.00

라우로일히드록시프롤린 1.00

수용성 콜라겐 (1% 수용액) 2.00

1,3-부틸렌글리콜 3.00

에탄올 5.00

정제수 잔량

(단위: 중량%)

제조예 5. 미용액형

실시예 1의 발효물 2.00

히드록시에틸렌셀룰로오스 (2% 수용액) 12.00

크산탄검 (2% 수용액) 2.00

1,3-부틸렌글리콜 6.00

진한 글리세린 4.00

히알루론산나트륨 (1% 수용액) 5.00

정제수 잔량

본 발명에 따라서 제조된 천연 식물소재 및 한약재 발효물은 안정성 및 안전성이 매우 뛰어나고 우수한 항노화, 항암, 항염, 면역 개선 등의 효능을 갖기 때문에 제약산업, 미용산업 및 식품산업 등과 같은 다양한 분야에 폭넓게 적용될 수 있다.

도 1은 본 발명에 따른 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법에 대한 공정도를 개략적으로 도시한 도면이다.

도 2는 실시예 17에 의한 발효물의 멜라닌 합성저해효과를 도시한 그래프이다.

도 3은 실시예 17에 의한 발효물의 타이로시네이즈 발현억제효과를 확인할 수 있는 엑스레이 사진이다.

도 4은 본 발명의 실시예 1 내지 5에 따른 발효물의 콜라젠 합성 효과를 확인할 수 있는 엑스레이 사진이다.

도 5는 본 발명의 실시예 6 내지 11에 따른 발효물의 콜라젠 합성 효과를 확인할 수 있는 엑스레이 사진이다.

도 6는 본 발명의 실시예 12 내지 17에 따른 발효물의 콜라젠 합성 효과를 확인할 수 있는 엑스레이 사진이다.

도 7은 실시예 1 내지 8에 따른 발효물에 대한 SOD 유사 활성도 결과 그래프이다.

도 8은 실시예 9 내지 17에 따른 발효물에 대한 SOD 유사 활성도 결과 그래프이다.

Claims

누룩을 이용한 당화 단계;

유산균 배양을 통한 발효 단계; 및

상기 배양 결과물로부터 상등액을 수득하는 단계를 포함하되, 상기 당화 단계는 천연 식물소재 및 한약재를 분쇄하는 단계, 누룩을 첨가하는 단계, 및 20 내지 40℃의 온도에서 18 내지 30시간 동안 침지시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법.
삭제
제1항에 있어서, 상기 분쇄 단계의 분쇄물은 10㎛ 내지 1mm의 평균 입경을 갖는 것을 특징으로 하는 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법.
제1항에 있어서, 상기 천연 식물소재 및 한약재는 생강, 갈근, 감초, 녹차, 다시마, 당귀, 맥문동, 복분자, 산수유, 상백피, 오미자, 은행잎, 자초, 천문동, 치자, 캐모마일, 표고버섯, 감잎, 강낭콩, 계피, 고삼, 금은화, 도토리, 목단피, 포공영, 상황버섯, 석류, 송이버섯, 승마, 약쑥, 영지버섯, 오배자, 우엉, 율피, 황금, 황련, 황백, 괴화, 길경, 대나무, 도인, 옥죽, 백작약, 백지, 복령, 비파옆, 시호, 알로에, 익모초, 차전초, 창이자, 천궁, 천문동, 토사자, 하수오, 행인, 현미, 홍화, 감국, 결명자, 귀리, 녹두, 대추, 더덕, 단호박, 도인, 마치현, 모과, 목단피, 백리향, 산다화, 어성초, 연자육, 고본, 곽향, 대황, 방품, 백급, 백부자, 백지, 사상자, 가시오갈피, 감귤, 도인, 두충, 인삼, 홍삼, 천화분, 토마토, 파파야, 해송자, 행인, 겨우살이, 귀리, 녹용, 동충하초, 포도씨, 백강잠, 아가리쿠스버섯, 차가버섯, 연자육, 강황, 고추, 마늘, 구기자, 구아바, 구절초, 금송, 노근, 느릅나무, 두릅, 두충, 들깨, 루이보스, 마, 마황, 매실, 매화, 백급, 백리향, 병풀, 보골지, 보라지, 복분자, 비수리, 비자, 비파엽, 빈랑자, 산뽕나무, 산수유, 산초, 신선초, 아세로라, 아카시아, 약쑥, 올리브잎, 와송, 우슬, 원지, 육두수, 은행잎, 자근, 자소엽, 죽순, 지구자, 지모, 지실, 지황, 차전초, 창이자, 창포, 천화분, 캐비어, 클로렐라, 스피루리나, 토사자, 파슬리, 포공영, 해송자, 행인, 함초, 호두 및 회향으로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법.
제1항에 있어서, 상기 누룩의 첨가량은 상기 분쇄물 100 중량부에 대해서 1 내지 10 중량부인 것을 특징으로 하는 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법.
제1항에 있어서, 상기 누룩의 첨가량은 상기 분쇄물 100 중량부에 대해서 2 내지 3 중량부인 것을 특징으로 하는 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법.
삭제
제1항에 있어서, 상기 침지 단계 이후의 결과물에 대해서 살균하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법.
제1항에 있어서, 상기 누룩을 제조하는데 사용된 균주는 거미줄곰팡이 (rhyzopus nigricans), 누룩곰팡이 (Aspergillus oryzae) 또는 그 혼합 균주인 것을 특징으로 하는 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법.
제1항에 있어서, 상기 유산균은 락토바실러스 사케이 (Lactobacillus sakei B2-16), 락토바실러스 브레비스 (Lactobacillus brevis), 락토바실러스 플렌타럼 (Lactobacillus plantarum P23), 락토코커스 락티스 (Lactococcus lactis A164) 및바실러스 코아귤런스 (Bacillus coagulance)로 구성되는 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상인 것을 특징으로 하는 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법.
제1항에 있어서, 상기 유산균 배양을 통한 발효 단계 시에는 효모균인 사카로마이세스 세레비지에 (Saccharomyces cerevisiae) 균주를 더 첨가하는 것을 특징으로 하는 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법.
제11항에 있어서, 상기 유산균 또는 효모균의 접종량은 접종 초기 균수가 10⁵ 내지 10⁸ cfu/g 또는 10⁵ 내지 10⁸ cfu/㎖인 것을 특징으로 하는 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법.
제11항에 있어서, 상기 유산균은 김치 또는 된장으로부터 분리된 균주인 것을 특징으로 하는 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법.
제1항에 있어서, 상기 유산균 배양을 통한 발효 단계는 15 내지 40℃의 온도에서 18 내지 120 시간 동안 수행되는 것을 특징으로 하는 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법.
제1항에 있어서, 상기 상등액 수득 단계는 여과 또는 원심분리에 의해서 수행되는 것을 특징으로 하는 천연 식물소재 및 한약재의 발효방법.
제1항, 제3항 내지 제6항 및 제8항 내지 제15항 중의 어느 한 항에 따른 방법에 의해서 제조된 발효물.
제16항에 따른 발효물을 함유하는 약학 조성물.
제16항에 따른 발효물을 함유하는 화장품 조성물.
제16항에 따른 발효물을 함유하는 식품 조성물.