JP4880816B2

JP4880816B2 - 皮膚老化防止剤

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Publication number: JP4880816B2
Application number: JP2000381813A
Authority: JP
Inventors: 勝由千葉; 俊郎曽根; 幸司宮▲崎▼; 智子花水; 扶岐子西坂; 幸子松本; 律男相山
Original assignee: Yakult Honsha Co Ltd
Current assignee: Yakult Honsha Co Ltd
Priority date: 2000-12-15
Filing date: 2000-12-15
Publication date: 2012-02-22
Anticipated expiration: 2020-12-15
Also published as: TWI287997B; US20040028643A1; JP2002179581A; KR100829846B1; BR0116098B1; EP1352640A1; WO2002047656A1; EP1352640A4; KR20030061847A; US8101211B2; BR0116098A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、老化防止剤に関し、さらに詳しくは、メラニン生成抑制作用、エラスターゼ阻害作用、ヒアルロニダーゼ阻害作用、活性酸素除去作用、およびラジカル捕捉型の抗酸化作用を有する特定の生薬抽出物を製剤に配合することにより、美白作用を有し、皮膚のハリや弾力を保持し、皮膚への保湿を高め、更に、抗炎症・抗アレルギー性作用を有することのできる皮膚の抗老化剤に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
（１）メラニン生成抑制については、従来より、美白用皮膚外用剤には、日焼け等により生じる皮膚の黒化や炎症、色素沈着により生じるシミ、ソバカス等の現象を防止するため、あるいは増加した色素沈着を緩和するために、アスコルビン酸、またはその誘導体、プラセンタエキス、コウジ酸類、グルタチオン、ハイドロキノン及びその誘導体（アルブチン）、植物抽出物等の美白剤が配合されてきた（Fragrance Journal,1990年6号p47-58）。
【０００３】
（２）また、エラスターゼは、皮膚のハリや弾力に関係しているエラスチンに特異的に作用するプロテアーゼである。これは、皮膚老化現象の中でも特に顕著な結果をもたらすエラスチンの減少に関与しており、また、紫外線はエラスターゼの働きを活性化するので、その結果、皮膚はハリや弾力を失うに至る。エラスターゼの作用は加齢によっても活発化して同様の結果を招くので、エラスターゼの過度の作用を抑制することができれば紫外線や加齢による皮膚老化の防止が可能になる。このような観点からエラスターゼ阻害作用を有する物質の探索が進められた結果、イジュ、ユーカリ、コミカンソウ等の抽出物が有効であることが確認されている（特開平９−９５４２０号公報，特開平９−８７１３７号公報，特開平９−８７１３６号公報）。
【０００４】
（３）また、結合組織内でのヒアルロン酸の機能は、細胞間隙に水を保持したり組織内にジェリー状のマトリックスを形成して細胞を保持したり、皮膚の潤滑性と柔軟性を保ち、外力（機械的障害）および細菌感染を防止していると考えられている。皮膚のヒアルロン酸は齢をとるにつれて減少し、その結果、小ジワやかさつきなどの老化をもたらすといわれている。従って、このヒアルロン酸を分解するヒアルロニダーゼの活性を抑制することは、皮膚に存在していたヒアルロン酸の安定にも寄与すると考えられ、皮膚の老化や、皮膚バリア機能低下の改善にも効果を示すと考えられている。更に、関節炎等の治療に用いられる製剤に使用されているヒアルロン酸や、皮膚機能の低下を改善する目的で皮膚に塗布した後の製剤のヒアルロン酸の安定性にも寄与すると考えられている。
【０００５】
また、ヒアルロニダーゼは炎症酵素（起炎酵素）としても知られ、活性抑制することは炎症を抑え、また、アレルギーにも抑制的に働くことが知られている。ヒアルロニダーゼの作用を阻害する物質はいくつか報告されており、生薬抽出物としてはシャクヤク、オウレン（特開平０１−１２８９３３号公報）、ジュ、ゲンノショウコ（特開平０２−１１５２０号公報）、ミムソプスエレンギ、ユウジェニアジャンボナラ、サカラインデイカ、鶏血藤、仙鶴草、タブノキ（特開平０６−８０５５３号公報）などにヒアルロニダーゼ阻害作用が確認されている。
【０００６】
（４）活性酸素除去剤としては、ＳＯＤ作用を有するものがあり、活性酸素（Ｏ_２ ⁻）が原因となる各種の病気、例えば、血流障害による病気（心筋梗塞、脳卒中、高血圧、生理痛、肩こり、神経痛、腰痛、二日酔い等）、成人病・内科疾患（癌、腎炎、肝炎、糖尿病等）、美容・皮膚病（しみ、そばかす、肌荒れ、冷え症、便秘、しわ、アトピー性皮膚炎等）等の治療、改良等に広く利用されるもので、食品、食品添加物、化粧品、医薬等の分野に於いて利用可能である。
【０００７】
具体的には、ＳＯＤの種々の特性を利用した化粧料（例えば、特公昭５９−１０３２４号公報、特開昭５５−８７７１２号公報等）や、安定なＳＯＤ活性を有する胎盤または肝臓抽出液およびそれを配合することを特徴とする外用剤組成物（特開昭６１−２７７６２６号公報）が知られている。更に、植物抽出物としては、サンペンズ、ジッコピ、インチンコウ、ヤシャジツ、カイカ、ヤコウトウ、ケツメイシ、ボウイ、センソウ、セキショウブ、キンオウシ、イチイヨウ（特開平８−２８３１７２号公報）や、ハイビスカス，アロエ，ダイオウ，黄精，ウワウルシ，延命草，サンシシ，楊梅皮，葛根，サイコ，センキュウ，ソウジュツ，薄荷葉，ブクリョウ，甘草，シャクヤク，辛夷，半夏，当帰，桂皮，十薬，黄連，牡丹皮，ゲンチアナ，五倍子，センブリ，ゲンノショウコ，麻黄，黄柏，杏仁，乾姜，タイソウ，オウゴン，陳皮，ウコン，忍冬，キョウジツ，地黄，ガーリック，セイジ，オレガノ，ローズマリー，ローレル，セロリ，タイム，タラゴン，オニオン，ナッツメグ，メース，クローブ，わさび，サボリ，バジル，唐辛子，豆茶，紅茶，緑茶，柿の葉，コーヒー，すぎな，ハチク，よもぎ，クマササ，クコ，ヤブソテツ，シイタケ，イチョウ（特開平６−２４９３７号公報）、或いは、オウゴン、イチョウ、ケイケットウ、サンザシ、マイカイカ、ユキノシタ、メリッサ、ゲンノショウコ、ボタンピ、パセリ、トルメンチラ、羅漢果、ヤシャジツ及びジコッピ等のフラボノイドを含む植物抽出物（特願平１０−３０７６８０号公報）などが知られている。
【０００８】
（５）抗酸化剤は、ヒトの皮膚の上にはその皮膚を保護するために、皮脂が分泌されており、この皮脂が紫外線などにより酸化され過酸化脂質となり、皮膚に対して刺激となる。また、この過酸化脂質は、細胞の膜を攻撃し障害を与えたりその他の種々の悪影響を与え、これらの障害がさらにヒトの皮膚の老化に関与すると言われている。そこで、この過酸化脂質の生成を抑制することは皮膚の状態の悪化を防止するのみならず生体の老化の予防に対しても有効であると考えられている。
【０００９】
具体的なものとしては、各種植物抽出物としては、カバノキのバーチ（学名：Betula platyphylla）抽出物（特開平１０−４６１４３号公報）や、ハイビスカス，アロエ，ダイオウ，黄精，ウワウルシ，延命草，楊梅皮，葛根，センキュウ，ソウジュツ，薄荷葉，甘草，シャクヤク，ヨクイニン，辛夷，桂皮，十薬，黄連，牡丹皮，ゲンチアナ，五倍子，センブリ，ゲンノショウコ，黄柏，乾姜，オウゴン，猪苓，ガーリック，セイジ，オレガノ，ローズマリー，ローレル，セロリ，タイム，タラゴン，ナッツメグ，メース，クローブ，わさび，サボリ，バジル，唐辛子，豆茶，紅茶，緑茶，柿の葉，コーヒー，すぎな，ハチク，よもぎ，アマチャズル，クマササ，クコ，ヤブソテツ，シイタケからなる各植物より水若しくは低級アルコールまたは低級アルコール水溶液により抽出された各種植物抽出物（特開平６−２４９３７号公報）が報告されている。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
しかしながら、（１）メラニン生成については、これらの美白剤を配合した皮膚外用剤では、美白剤の効果が十分でなかったり、メラニンの生成を抑制する効果はあるものの、安全性に問題を残すものがあったり、製剤中で変質するなどして所期の薬効が得られない場合も多く、その改善が望まれていた。
【００１１】
（２）エラスターゼ活性阻害については、エラスターゼの過度の作用を抑制することができれば皮膚老化の防止が可能となる。しかしながら、従来報告されているエラスターゼ阻害物質は安定性、効果、使用感の点で、必ずしも満足できるものではなかった。
【００１２】
（３）ヒアルロニダーゼ活性阻害については、抗炎症あるいは抗アレルギー活性を有する化粧品原料についても種々探索されているが、安全かつ有望なものは未だ得られていない。人の肌に対する安全性の面から天然物で、多年、人が食したりして、安全性の面で保証されており、しかもヒアルロニダーゼ阻害作用が強く、更に皮膚に対する他の効果も合わせもつ物質が望まれていた。
【００１３】
（４）活性酸素除去物質として、生体内の酵素であるス−パ−オキオシドディスムタ−ゼ（ＳＯＤ）があるが、その精製が困難で熱に不安定で失活し易いため著しく高価なものである。このため、ＳＯＤと同様に活性酸素消去作用を示し安定性が高く安価に得られるＳＯＤの代用物質（ＳＯＤ様活性物質）の出現が望まれている。
【００１４】
（５）抗酸化剤としては、従来用いられていた抗酸化剤のうち、ＢＨＴ，ＢＨＡ等を配合した化粧料や皮膚外用剤は接触皮膚炎を起こしやすく、安全性の点で懸念される。一方、没食子酸誘導体やビタミンＥ類は抗酸化活性が十分でなく、油脂含有製品の酸敗を効果的に防止することができず、またこれらを配合した皮膚外用剤において、特に皮膚脂質の過酸化に起因する皮膚の老化防止を期待する場合、充分な効果が得られなかった。
【００１５】
更に、美白作用については、近年、メラニンを合成するメラノサイトに対する直接的な抑制作用とともに、メラノサイト周辺の細胞から放出されるメラノサイト刺激物質（ＭＳＨ、エンドセリン、ＮＯ、ヒスタミンやＰＧＥ２等）の生成量を抑制させる作用も重要な因子となっている。そのため、これら刺激物質をケラチノサイトから放出させないようにするためには、抗炎症的な作用は美白作用を助ける効果があると考えられる。
【００１６】
また、一般的な美白剤であるアスコルビン酸誘導体やアルブチンはそのもの自身に抗酸化作用があり、活性酸素・フリーラジカルをクエンチングする作用が、美白作用のメカニズムの一部となっていることが考えられる。これらのことから、老化防止素材としては、美白、抗酸化と抗炎症等それぞれの作用を併せ持つ生薬抽出物ほど、より効果的であるにもかかわらず、今までに、これら複数の作用を持つ生薬抽出物の探索はされていなかった。
【００１７】
本発明者らは鋭意研究の結果、これらの問題を解決するものとして天然物由来物質、特に安全性の高い香辛料や生薬類など可食性の台湾産の薬用植物抽出物について、メラニン生成抑制、ヒアルロニダーゼ活性阻害、エラスターゼ活性阻害、ＳＯＤ様活性、およびＤＰＰＨラジカル捕捉作用を調べた。その結果、高いメラニン生成抑制作用を持つ美白剤、抗ヒアルロニダーゼ活性作用を持つ抗炎症・抗アレルギー剤、紫外線や加齢による真皮エラスチンの変性を防御する抗しわ作用を有している抗炎症剤である抗エラスターゼ活性、また、ＳＯＤ様活性作用を有する活性酸素除去剤およびラジカル捕捉性を有する抗酸化剤を見出し、本発明を完成した。
【００１８】
更に、老化防止素材として、美白、抗酸化、抗炎症それぞれの作用を合わせ持つ複数の強力な活性を有する生薬抽出物を見出し、本発明を完成した。特に、化粧料は毎日連用されるものであるため、これに配合する有効成分としては、作用が穏和で連用により充分な効果を現わし、しかも連用による副作用のないものが望まれる。かかる観点からは、天然物由来物質、特に薬用生薬の抽出物が好ましいものであると考え、本発明を完成した。
【００１９】
即ち、本発明は、美白作用を有し、皮膚のハリや弾力を保持し、皮膚への保湿を高め、更に、抗炎症・抗アレルギー性作用を有することのできる皮膚の老化防止剤を得ることを目的とする。
【００２０】
【課題を解決するための手段】
請求項１に記載された発明に係る皮膚老化防止剤は、水丁香（Ludwigia octovalvis）の植物抽出物を配合し、スーパーオキサイドアニオン消去効果及びＤＰＰＨラジカル捕捉作用による抗酸化効果を有するものである。
【００２６】
請求項２に記載された発明に係る皮膚外用剤は、請求項１に記載の皮膚老化防止剤を配合するものである。
【００２７】
請求項３に記載された発明に係る皮膚外用剤は、請求項２に記載の皮膚外用剤が化粧料であるものである。
【００２８】
【発明の実施の形態】
本発明に用いられる生薬は、次の表１〜表３に示す生薬名、科名、カタカナ表記、学名を有するものであり、その植物体の各種部位（全草、花、頭花、花穂、雌花穂、果穂、腺体、葉、枝、枝葉、根茎、根皮、根、種子など）をそのままあるいは粉砕後、溶媒で抽出してもちいればよい。
【００２９】
本発明の生薬抽出物の製造法としては、通常使われる方法であれば、特に規定しないが、例えば以下の方法が使用できる。即ち、生薬原末を細砕し抽出溶媒（水、アルコール類、有機溶媒あるいはそれらの混合物）を５〜１０倍量加え、室温で１週間以上放置してから濾過して得られた濾液を凍結乾燥にて乾固したものを各生薬抽出物とする。或いは、生薬原末に抽出溶媒（水、あるいは有機溶媒）を加えて一定時間温浸、あるいは溶媒の還流温度下で加温後してから濾過して得られた濾液を濃縮乾固する。
【００３０】
具体的な抽出溶媒としては、水性溶媒（例えば水、酸性または塩基性の水性溶媒等）、アルコール類（例えば、メタノール、無水エタノール、エタノールなどの低級アルコール、あるいはプロピレングリコール、1,3-ブチレングリコールなどの多価アルコール等）、アセトンなどのケトン類、ジエチルエーテル、ジオキサン、アセトニトリル、酢酸エチルエステルなどのエステル類、キシレン、ベンゼン、クロロホルムなどの有機溶媒を、単独であるいは２種類以上の混液を任意に組み合わせて使用することができる。特に、水、メタノール、エタノール、５０％エタノールが好ましい。また、各々の溶媒抽出物が組み合わされて状態でも使用できる。
【００３１】
【表１】

【００３２】
【表２】

【００３３】
【表３】

【００３４】
本発明により得られた皮膚外用剤はそのまま使用してよく、また、本発明の効果を妨げない範囲で公知の化粧料成分、例えば水、アルコール類、油成分、界面活性剤、防腐剤、香料、色素、保湿剤、増粘剤、水溶性高分子、酸化防止剤、キレート剤、ｐＨ調整剤、発泡剤、（顔料、紫外線吸収・散乱剤、粉体、）ビタミン類、アミノ酸類、抗菌剤、海藻抽出物、各種薬剤、添加剤等を配合することができる。
【００３５】
具体的には、油分としては、マカデミアナッツ油、ヒマシ油、オリーブ油、カカオ油、椿油、ヤシ油、木ロウ、ホホバ油、グレープシード油、アボガド油等の植物油脂類、ミンク油、卵黄油等の動物油脂類、蜜ロウ、鯨ロウ、ラノリン、カルナウバロウ、キャンデリラロウ等のロウ類、流動パラフィン、スクワラン、マイクロクリスタリンワックス、セレシンワックス、パラフィンワックス、ワセリン等の炭化水素類、カプリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、ベヘニン酸、ラノリン脂肪酸、リノール酸、リノレン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、オレイン酸、イソステアリン酸等の天然および合成脂肪酸類、セタノール、ステアリルアルコール、ヘキシルデカノール、オクチルドデカノール、ラウリルアルコール、カプリルアルコール、ミリスチルアルコール、セチルアルコール、コレステロール、フィトステロール等の天然および合成高級アルコール類、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸オクチルドデシル、オレイン酸オクチルドデシル、コレステロールオレート等のエステル類等を例示することができる。
【００３６】
界面活性剤としては、モノラウリン酸ソルビタン、モノパルミチン酸ソルビタン、セスキオレイン酸ソルビタン、トリオレイン酸ソルビタン、モノラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタン、モノステアリン酸ポリオキセチレンソルビタン、ポリエチレングリコールモノオレート、ポリエチレングリコールアルキレート、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリグリコールジエーテル、ラウロイルジエタノールアマイド、脂肪酸イソプロパノールアマイド、マルチトールヒドロキシ脂肪酸エーテル、アルキル化多糖、アルキルグルコシド、シュガーエステル等の非イオン性活性剤、親油型グリセリンモノステアレート、自己乳化型グリセリンモノステアレート、ポリグリセリンモノステアレート、ポリグリセリンアルキレート、ソルビタンモノオレート、ポリエチレングリコールモノステアレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレート、ポリオキシエチレンセチルエーテル、ポリオキシエチレン化ステロール、ポリオキシエチレン化ラノリン、ポリオキシエチレン化蜜ロウ、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等のノニオン界面活性剤、ステアリン酸ナトリウム、パルミチン酸カリウム、セチル硫酸ナトリウム、ラウリルリン酸ナトリウム、パルミチン酸トリエタノールアミン、ポリオキシエチレンラウリルリン酸ナトリウム、Ｎ−アシルグルタミン酸ナトリウム、パルミチン酸ナトリウム、ラウリン酸ナトリウム、ラウリル酸ナトリウム、ラウリル硫酸カリウム、アルキル硫酸トリエタノールアミンエーテル、ロート油、リニアドデシルベンゼン硫酸、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油マレイン酸、アシルメチルタウリ等のアニオン界面活性剤、塩化ステアリルジメチルベンジルアンモニウム、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、ステアリルトリメチルアンモニウムクロライド、塩化ベンザルコニウム、ラウリルアミンオキサイド等のカチオン界面活性剤、塩酸アルキルアミノエチルグリシン液、レシチン等の両性界面活性剤等を例示することができる。
【００３７】
防腐剤としては、安息香酸塩、サリチル酸塩、ソルビン酸塩、デヒドロ酢酸塩、パラオキシ安息香酸エステル、 2,4,4'-トリクロロ-2'-ヒドロキシジフェニルエーテル、 3,4,4'-トリクロロカルバニリド、塩化ベンザルコニウム、ヒノキチオール、レゾルシン、エタノール等を例示することができる。
【００３８】
保湿剤としては、グリセリン、エリスリトール、キシリトール、マルチトールグリセリン、プロピレングリコール、1,3-ブチレングリコール、ソルビトール、ポリグリセリン、ポリエチレングリコール、ジプロピレングリコール、1,2-ペンタンジオール、イソプレングリコール等の多価アルコール類、アミノ酸、乳酸ナトリウム、ピロリドンカルボン酸ナトリウム等のＮＭＦ成分、キシログルカン、クインスシード、カラギーナン、ペクチン、マンナン、カードラン、ガラクタン、デルマタン硫酸、グリコーゲン、ケラタン硫酸、コンドロイチン、ムコイチン硫酸、ケラト硫酸、ローカストビーンガム、サクシノグルカン、カロニン酸、ヒアルロン酸、ヘパラン硫酸、ヒアルロン酸ナトリウム、コラーゲン、ムコ多糖類、コンドロイチン硫酸等の水溶性高分子物質、ジメチルポリシロキサン、メチフェニルシロキサン等のシリコーン類、乳酸菌・ビフィズス菌等の培養上清等を例示することができる。
【００３９】
増粘剤としては、アルギン酸ナトリウム、キサンタンガム、硅酸アルミニウム、マルメロ種子抽出物、アラビアガム、ヒドロキシエチルグアガム、カルボキシメチルグアガム、グアガム、デキストラン、トラガントガム、デンプン、キチン、キトサン、カルボキシメチルキチン、寒天等の天然高分子物質、セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、メチルヒドロキシプロピルセルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、可溶性デンプン、カチオン化セルロース等の半合成高分子物質、カルボキシビニルポリマー、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ビニルアルコール・酢酸ビニル共重合体等の合成高分子物質等を例示することができる。
【００４０】
酸化防止剤としては、ジブチルヒドロキシトルエン、ブチルヒドロキシアニソール、没食子酸プロピル、アスコルビン酸等を、キレート剤としては、エデト酸二ナトリウム、エチレンジアミン四酢酸塩、ピロリン酸塩、ヘキサメタリン酸塩、クエン酸、酒石酸、グルコン酸等を、ｐＨ調整剤としては、水酸化ナトリウム、トリエタノールアミン、クエン酸、クエン酸ナトリウム、ホウ酸、ホウ砂、リン酸水素カリウム等をそれぞれ例示することができる。
【００４１】
紫外線吸収・散乱剤としては、パラアミノ安息香酸系紫外線吸収剤、アントラニル酸系紫外線吸収剤、サリチル酸系紫外線吸収剤、桂皮酸系紫外線吸収剤、ベンゾフェノン系紫外線吸収剤、糖系紫外線吸収剤、3-(4'-メチルベンジリデン)-d-カンファー、 3-ベンジリデン-d,1-カンファー、ウロカニン酸、ウロカニン酸エチルエステル、 2-フェニル-5-メチルベンゾキサゾール、2,2'-ヒドロキシ-5-メチルフェニルベンゾトリアゾール、2-(2'-ヒドロキシ-5'-t-オクチルフェニル)ベンゾトリアゾール、 2-(2'-ヒドロキシ-5'-メチルフェニルベンゾトリアゾール、ジベンザラジン、ジアニソイルメタン、4-メトキシ-4'-t-ブチルジベンゾイルメタン、 5-(3,3-ジメチル-2-ノルボルニリデン)-3-ペンタン-2-オン、2-ヒドロキシ-4-メトキシベンゾフェノン、オクチルジメチルパラアミノベンゾエート、エチルヘキシルパラメトキシサイナメート、酸化チタン、カオリン、タルク等を例示することができる。
【００４２】
ビタミン類としては、ビタミンＡ及びその誘導体、ビタミンＢ_６塩酸塩、ビタミンＢ_６トリパルミテート、ビタミンＢ_６ジオクタノエート、ビタミンＢ_２及びその誘導体、ビタミンＢ_１２、ビタミンＢ_１５及びその誘導体等のビタミンＢ類、アスコルビン酸、アスコルビン酸硫酸エステル及びその塩、アスコルビン酸リン酸エステル及びその塩、アスコルビン酸ジパルミテート類、アスコルビン酸グルコシド、アシルアスコルビン酸グルコシド、α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、ビタミンＥアセテート等のビタミンＥ類、ビタミンＤ類、ビタミンＨ、パントテン酸、パンテチン、ビタミンＦ、ビタミンＫ、ビタミンＰ、ビタミンＵ、カルニチン、フェルラ酸、γ−オリザノール、α−リポ酸、オロット酸およびそれらの誘導体等を例示することができる。
【００４３】
アミノ酸類としては、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、セリン、トレオニン、フェニルアラニン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、タウリン、トリプトファン、シスチン、システイン、メチオニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、アスパラギン酸、グルタミン酸、アルギニン、ヒスチジン、リジンおよびそれらの誘導体等を例示することができる。
【００４４】
抗菌剤としては、安息香酸、サリチル酸、ソルビン酸、パラオキシ安息香酸アルキルエステル、ヘキサクロロフェン等を例示することができる。
【００４５】
海藻抽出物としては、褐藻、紅藻、緑藻、藍藻等からの抽出液があり、具体的にはコンブ、マコンブ、ワカメ、ヒジキ、テングサ、サンゴモ、パルマリア、ツノマタ、ノリ、アオサ、アナアオサ、アスコフィラム、ヒバマタ、モズク、オキナワモズク、ヒマンタリア、等からの抽出物を例示することができる。
【００４６】
各種薬剤としては、ニコチン酸アミド、ニコチン酸ベンジル、γ−オリザノール、アラントイン、グリチルリチン酸（塩）、グリチルレチン酸及びその誘導体、ヒノキチオール、ビサボロール、ユーカルプトーン、チモール、イノシトール、サイコサポニン、ニンジンサポニン、ヘチマサポニン、ムクロジサポニン等のサポニン類、パントテニルエチルエーテル、エチニルエストラジオール、トラネキサム酸、アルブチン、セファランチン、プラセンタエキス等を例示することができる。
【００４７】
本発明の生薬抽出物の配合量は特に規定されず、例えば抽出物の作用の強さ（ＩＣ_５０値）や剤形に合わせて適宜設定すればよいが、外用剤の全量に対して、抽出物固形分換算で0.0001〜30重量％、特に0.001〜10％とするのが好ましい。
【００４８】
本発明の皮膚外用剤を含む化粧品、医薬品、医薬部外品等は、常法により製造することができ、化粧水、乳液、保湿クリーム、クレンジングクリーム、マッサージクリーム、洗顔クリーム、パック、美容液等の基礎化粧品、シャンプーやリンス等の頭髪用製品、入浴剤等の浴用化粧品、ファンデーション等のメーキャップ化粧品、日焼け止め等の特殊化粧品等、種々の形態とすることができる。
【００４９】
【実施例】
次に実験例及び実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれらになんら制約されるものではない。
【００５０】
実験例１生薬抽出物の調製方法（南嶺蕘花の抽出物の調製）
南嶺蕘花の282.3ｇに1.8Lの100%メタノールを加え、室温で１週間抽出を行ったのち濾過し、得られた濾液を蒸発乾固したとき、乾燥重量は21.49ｇ（収率7.6%）であった。
【００５１】
以下、同様な方法で92品目の生薬について、約300gの生薬バルクに1〜10Lの100%メタノールを加えて抽出して各抽出物を得た。各抽出物の100%メタノール収率を表４〜表６示す。また、乾固物を0.5%に調製した時のpHと、50%エタノール溶液中での固形物濃度0.5%における溶解状態と色調、および312nmにおける吸光度の値も表４〜表６に示した。
【００５２】
【表４】

【００５３】
【表５】

【００５４】
【表６】

【００５５】
実験例２メラニン生成抑制および細胞毒性試験
大日本製薬（株）より購入したＢ１６マウスメラノーマ細胞（Ｂ１６−Ｆ１細胞、ATCC No. CRL-6323）を用いて96 well plate法で測定した。本細胞（１×10^４）を各wellに播種し、10％ＦＣＳ、１％抗生物質溶液含有D-MEMで24時間培養後（37℃、５％ＣＯ_２）、培地を被検物質とテオフィリン（0.5mM）とを添加したD-MEMに交換し、さらに３日間培養した。なお、被検物質の溶媒（エタノール）は、終濃度が１％となるように培地に添加した。メラニン生成抑制活性は、遠心分離で得られた培養上清に等量のHEPES buffer（pH 6.8）/エタノール（9:1）を加え、マイクロプレートリーダーEL-340（BIO-TEK INSTRUMENT）にて475nm−660nmの吸光度を測定し、細胞外メラニン量を評価した。結果を次の表７に示す。
【００５６】
【表７】

【００５７】
その結果、表７から明らかなように、試験濃度0.001%での抑制率が20%以上の値を示した生薬抽出物が２６品目見出され、とりわけ、苦職、蓖葉燈籠草、南嶺蕘花、釘地蜈蚣、魚針草、菊花木、台湾馬兜鈴、咸豊草、山芥菜、馬蹄金、牛乳榕、石上柏、紅花鼠尾草、戟葉紫花地丁の14品目はＩＣ_５０値（コントロールの細胞メラニン量を半分にする被験物質濃度）が、いづれも10μg/ml以下であり、陽性対照物質として設置したアルブチンやコウジ酸よりも強い作用が認められた（表７）。これら活性を示した生薬抽出物は細胞への毒性も低く、試験濃度0.001%での細胞毒性は認められなかった。
【００５８】
実験例３エラスターゼ阻害試験
合成基質 Methoxysuccinyl-Ala-Ala-Ala-Pro-p-nitroanilide（8.0mM,25μl）を5μg/mlのヒト好中球由来エラスターゼ含有 0.1M Hepes緩衝液（pH 7.4, 0.5MＮａＣｌ含有）25μl および被験試料 50μl と共に37℃で30分間反応させ、その後分解生成物である 4-nitroaniline 生成量をマイクロプレートリーダーEL-340（BIO-TEK INSTRUMENT）にて405nmの吸光度を測定した。また、酵素阻害率を以下の式に従って算出した。結果を次の表８に示す。
阻害率（%）=（A−B）／ A×100
A；試料未添加のときの吸光度、B；試料添加のときの吸光度
【００５９】
【表８】

【００６０】
表８に示す通り、0.025%濃度で20%以上の阻害活性が認められた生薬は14品目見出され、とりわけ、羅氏塩膚木、小葉葡萄、菊花木、三葉葡萄は、陽性対照物質であるＥＬＨＩＢＩＮ（大豆抽出物、ペンタファーム社製）よりもＩＣ_５０値が低く、強いエラスターゼ阻害作用が認められた。
【００６１】
実験例４ヒアルロニダーゼ阻害試験
検体 100μlをヒアルロニダーゼ(type IV-S from bovine testis、500 NF unit/ml) 50μl／0.1Ｍ酢酸緩衝液（pH 4.0)に加え、37℃、20分間インキュベートし、続いて酵素活性化剤Compound48/80の0.1mg/mlを100μlを加え、さらに37℃、20分間インキュベートした。これにヒアルロン酸（from rooster comb、0.5mg/ml）250μlを加え37℃、40分間反応させたあと、0.4N ＮａＯＨ 100μlで反応を停止させた。続いて、N-アセチルヘキソサミン量の定量を行う為に、酵素反応液に0.8M ホウ酸カリウム 120μlを加え、100℃、３分間加熱後、室温まで冷却したあと、30μlを取り出し、1% p-ジメチルアミノベンズアルデヒド酢酸 180μlを加え、37℃、20分間反応させた。室温まで冷却した後、OD 585nmをマイクロプレートリーダーEL-340（BIO-TEK INSTRUMENT）にてＯＤ562nmを測定した。そして、以下の式に従って阻害率（％）を算出した。結果を次の表９に示す。
ヒアルロニダーゼ阻害率（％）＝（Ａ−Ｂ）／Ａ ×100
A；試料未添加のときの吸光度、B；試料添加のときの吸光度
【００６２】
【表９】

【００６３】
その結果、0.02％濃度で検討し、小葉葡萄、菊花木の２品目でいずれも４０％以上の高い阻害活性が認められ、とりわけ、小葉葡萄は、陽性対照物質であるグリチルリチンよりもＩＣ_５０値が低く、強い阻害活性が認められた。
【００６４】
実験例５ＳＯＤ様活性試験
ニトロブルーテトラゾリウム（ＮＢＴ）還元法を原理とするＳＯＤテストワコー（和光純薬）を用いて96ウエルマイクロプレートで測定した。
【００６５】
【表１０】

【００６６】
0.24ＭのNBTと0.4Ｍキサンチンを含む発色試薬95μｌに検体10μｌを添加し、更に酵素液（キサンチンオキシダーゼ）95μｌを加え37℃、30分間インキュベーションした。その後、反応停止液（69mＭドデシル硫酸ナトリウム）100μｌにて酵素反応を停止させ、マイクロプレートリーダーEL-340（BIO-TEK INSTRUMENT）にてＯＤ562nmを測定した。酵素のかわりに精製水を加えたサンプルをブランクとし、検体のかわりに溶媒を加えたサンプルをコントロールとして、以下の算出式によってスーパーオキサイドアニオン（Ｏ^２−）消去率を算出した。
【００６７】
結果を表１０に示す。
Ｏ^２−消去率（％）＝（Ａ−Ｂ）／Ａ ×100
Ａ：コントロールの吸光度Ｂ：試料添加のときの吸光度
ＩＣ_５０値はＯ^２−消去率が50％を示した時の検体濃度で表した。
【００６８】
その結果、0.025%濃度で30%以上のSOD様活性が認められた生薬は57品目見出され、とりわけ、羅氏塩膚木は、陽性対照物質であるアセンヤクよりもＩＣ_５０値が低く、強いSOD様活性が認められた。
【００６９】
実験例６ DPPHラジカル捕捉作用
(1) 0.2Ｍ酢酸バッファー（pH5.5） 50μＬ
(2) 250μM DPPH／エタノール 100μＬ
(3) サンプル／50%エタノール 100μＬ
【００７０】
(1) 〜(3) を９６穴マルチマイクロプレート（NUNC製）に入れ、30℃で30分間のインキュベーション後に、マイクロプレートリーダーEL-340（BIO-TEK INSTRUMENT）で515nmの波長で吸光度を測定した。活性の程度は、以下の式より求めた DPPH Radical Scavenging (%)で表した。結果を次の表１１に示す。
DPPH Radical Scavenging (%) ＝（Ａ−Ｂ）／Ａ×100
Ａ；試料未添加のときの吸光度Ｂ；試料添加のときの吸光度
ＩＣ_５０値＝DPPH Radical Scavengingが50％を示す被験物質濃度
【００７１】
【表１１】

【００７２】
その結果、0.002%濃度で30%以上のDPPHラジカル捕捉作用が認められた生薬は32品目見出され、とりわけ、菊花木は、陽性対照物質であるアスコルビン酸よりもＩＣ_５０値が低く、強いDPPHラジカル捕捉作用が認められた。
【００７３】
まとめ複数の作用を合わせ持つ生薬抽出物
上記のメラニン生成抑制、エラスターゼ阻害活性、ヒアルロニダーゼ阻害活性、SOD様作用、DPPHラジカル捕捉作用をすべて併せ持つ生薬抽出物としては、菊花木が該当した。メラニン生成抑制、エラスターゼ阻害活性、SOD様作用、DPPHラジカル捕捉作用を併せ持つ生薬抽出物としては、南嶺蕘花、胡枝子、細葉水丁香、釘地蜈蚣が該当した。メラニン生成抑制、ヒアルロニダーゼ阻害活性、SOD様作用、DPPHラジカル捕捉作用を併せ持つ生薬抽出物としては、小葉葡萄が該当した。このように、単独の生薬で美白−抗炎症−抗酸化、美白―抗酸化、美白−抗炎症、抗酸化−抗炎症の各作用を併せ持つものが多く認められた。
【００７４】
抗老化剤に配合する生薬抽出物として、これら複数の作用を有する生薬を利用することは、少ない生薬数で多面的で効率的な作用が期待でき、また、それぞれの効果が相加相乗的に影響し、より抗老化作用を高めた処方が可能となる。
【００７５】
以下に種々の剤型の本発明による抗老化剤の配合例を典型的な実施例として説明する。
【００７６】
実施例１化粧水
表１２に示す組成の化粧水を、生薬抽出物の菊花木、羅氏塩膚木、小葉葡萄、および南嶺蕘花の抽出物を用いて製造した。
【００７７】
【表１２】

【００７８】
実施例２乳液
表１３に示す組成の乳液を生薬抽出物の菊花木、羅氏塩膚木、小葉葡萄、および南嶺蕘花の抽出物を用いて製造した。
【００７９】
【表１３】

【００８０】
実施例３クリーム
表１４に示す組成のクリームを生薬抽出物の菊花木、羅氏塩膚木、小葉葡萄、および南嶺蕘花の抽出物を用いて製造した。
【００８１】
以上のように、各々の処方例によって得られた皮膚外用組成物例１〜１５は、それぞれ優れたメラニン生成抑制、エラスターゼ阻害活性、ヒアルロニダーゼ阻害活性、ＳＯＤ様作用、並びにＤＰＰＨラジカル捕捉作用を有していた。これら皮膚外用剤は、日焼け後の色素沈着・しみ・そばかす・肝斑等の淡色化、美白に優れた効果を有する共に、エラスターゼ阻害活性による皮膚のハリ・弾力を回復・維持することで、皮膚の老化を防止し、若々しい肌の状態を維持する効果を有するものである。
【００８２】
【表１４】

【００８３】
また、本発明の皮膚外用剤は抗酸化作用も有しており、これらを適宜用いることにより、安全性に優れ、酸化に対して安定な化粧品等を製造することができ、皮膚の皮脂成分の酸化防止や皮膚の酸化傷害、皮膚の老化にも有効性を発揮し、皮膚を保護することができる。これら生薬抽出物配合の皮膚外用剤は、ヒト皮膚に外用した時の使用感に優れ、美容や医療において極めて有用なものである。
【００８４】
今回、見出された美白作用、抗炎症作用、および抗酸化作用を有する生薬抽出物は、それぞれに単独で強い活性を持つとともに、複数の作用を合わせ持った抽出物でもあり、抗老化素材として皮膚外用剤に有用であり、且つ安全性が高く長期連続使用が可能なものである。
【００８５】
【発明の効果】
本発明は以上説明した通り、美白作用を有し、皮膚のハリや弾力を保持し、皮膚への保湿を高め、更に、抗炎症・抗アレルギー性作用を有することのできる皮膚老化防止剤を得ることができるという効果がある。

Claims

水丁香（Ludwigia octovalvis）の植物抽出物を配合し、スーパーオキサイドアニオン消去効果及びＤＰＰＨラジカル捕捉作用による抗酸化効果を有することを特徴とする皮膚老化防止剤。
請求項１に記載の皮膚老化防止剤を配合することを特徴とする皮膚外用剤。
皮膚外用剤が化粧料であることを特徴とする請求項２に記載の皮膚外用剤。