JP3045172B2 - Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキット - Google Patents
Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキットInfo
- Publication number
- JP3045172B2 JP3045172B2 JP2128150A JP12815090A JP3045172B2 JP 3045172 B2 JP3045172 B2 JP 3045172B2 JP 2128150 A JP2128150 A JP 2128150A JP 12815090 A JP12815090 A JP 12815090A JP 3045172 B2 JP3045172 B2 JP 3045172B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- receptor
- human
- solid support
- sample
- labeled
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明はヒトIL−６の化学的測定方法及びそのための
キットに関するものである。
キットに関するものである。
インターロイキン−６（BSF2/以下IL−６と略す）
は、種々の重要な生理活性を有し、広く細胞の増殖分化
に関与しているタンパク質である。さらにIL−６の異常
産生が種々の自己免疫疾患の病因因子である可能性が報
告されている（岸本、Blood,74,pl,1989年参照）。
は、種々の重要な生理活性を有し、広く細胞の増殖分化
に関与しているタンパク質である。さらにIL−６の異常
産生が種々の自己免疫疾患の病因因子である可能性が報
告されている（岸本、Blood,74,pl,1989年参照）。
生体内で多様な生理活性を強く発揮するIL−６の生理
的濃度を知ることは、各種疾患の新しい診断マーカーと
して期待されている。IL−６の生物活性測定法として
は、100fg/mlのIL−６が測定可能な高感度のものが報告
されている（T.Matsudaら、Eur.J.Immnunol.,18,p951,1
988年参照）。しかしながらこの方法は、多数の検体を
迅速、かつ簡単に測定することができないという欠点を
有する。一方、これまで報告されたIL−６の免疫化学的
測定では、組換え体（リコンビナント）IL−６を各種動
物に免疫して得た抗体を用いている。従って、血液中の
IL−６がα２−マクログロブリンと結合して存在してい
るという報告（T.Matsudaら、J.Immnunol.,142,p148）
にあるようにリコンビナントIL−６と異なる形状で存在
すると予想される生体試料中のIL−６の濃度を高い精度
で測定できない危険性がある。
的濃度を知ることは、各種疾患の新しい診断マーカーと
して期待されている。IL−６の生物活性測定法として
は、100fg/mlのIL−６が測定可能な高感度のものが報告
されている（T.Matsudaら、Eur.J.Immnunol.,18,p951,1
988年参照）。しかしながらこの方法は、多数の検体を
迅速、かつ簡単に測定することができないという欠点を
有する。一方、これまで報告されたIL−６の免疫化学的
測定では、組換え体（リコンビナント）IL−６を各種動
物に免疫して得た抗体を用いている。従って、血液中の
IL−６がα２−マクログロブリンと結合して存在してい
るという報告（T.Matsudaら、J.Immnunol.,142,p148）
にあるようにリコンビナントIL−６と異なる形状で存在
すると予想される生体試料中のIL−６の濃度を高い精度
で測定できない危険性がある。
従って本発明は、生物活性を有する限り、すなわちIL
−６レセプターと結合する性質を有する限り、いかなる
形状のIL−６にも適用できるIL−６の化学的測定法、及
びその方法に使用するためのキットを提供しようとする
ものである。
−６レセプターと結合する性質を有する限り、いかなる
形状のIL−６にも適用できるIL−６の化学的測定法、及
びその方法に使用するためのキットを提供しようとする
ものである。
本発明者らは前記の課題を解決すべく種々検討した結
果、IL−６レセプターを用いることにより、リコンビナ
ントIL−６を動物に免疫して得た抗体を用いずに、数百
pg/mlの濃度のヒトIL−６を測定することができるとい
う新しい知見を得、これに基いて本発明を完成した。
果、IL−６レセプターを用いることにより、リコンビナ
ントIL−６を動物に免疫して得た抗体を用いずに、数百
pg/mlの濃度のヒトIL−６を測定することができるとい
う新しい知見を得、これに基いて本発明を完成した。
従って本発明は、ヒトIL−６レセプターを固定した固
体支持体を標識されたヒトIL−６及び分析検体と接触せ
しめ、そして該ヒトIL−６レセプターを介して固体支持
体に結合した標識されたヒトIL−６の量又は固体支持体
に結合しなかった標識されたIL−６の量を測定し、この
測定値に基いて検体中のIL−６の存否又は量を決定する
ことを特徴とする検体中のIL−６の検出又は測定方法を
提供する。
体支持体を標識されたヒトIL−６及び分析検体と接触せ
しめ、そして該ヒトIL−６レセプターを介して固体支持
体に結合した標識されたヒトIL−６の量又は固体支持体
に結合しなかった標識されたIL−６の量を測定し、この
測定値に基いて検体中のIL−６の存否又は量を決定する
ことを特徴とする検体中のIL−６の検出又は測定方法を
提供する。
本発明はさらに、ヒトIL−６レセプターを固定した固
体支持体を分析検体と接触せしめることにより該分析検
体中のヒトIL−６を該IL−６レセプターを介して固体支
持体に結合せしめ、そして固体支持体に結合したIL−６
を測定することを特徴とするヒトIL−６の検出又は測定
方法を提供する。
体支持体を分析検体と接触せしめることにより該分析検
体中のヒトIL−６を該IL−６レセプターを介して固体支
持体に結合せしめ、そして固体支持体に結合したIL−６
を測定することを特徴とするヒトIL−６の検出又は測定
方法を提供する。
本発明はまた、前記第一の方法を実施するためのキッ
トであって、ヒトIL−６レセプターを固定した固体支持
体及び標識されたヒトIL−６を含むことを特徴とするキ
ットを提供する。
トであって、ヒトIL−６レセプターを固定した固体支持
体及び標識されたヒトIL−６を含むことを特徴とするキ
ットを提供する。
本発明はさらに、前記第二の方法を実施するためのキ
ットであって、ヒトIL−６レセプターを固定した固体支
持体及び抗ヒトIL−６抗体を含むことを特徴とするキッ
トを提供する。
ットであって、ヒトIL−６レセプターを固定した固体支
持体及び抗ヒトIL−６抗体を含むことを特徴とするキッ
トを提供する。
1. IL−６の化学的測定法 IL−６の化学的測定法は、ヒト血清、尿、その他例え
ば関節液等中に含まれるIL−６の生理的濃度、ヒト細胞
を培養したときの培養上清中のIL−６濃度を正確かつ迅
速に測定することを目的としている。
ば関節液等中に含まれるIL−６の生理的濃度、ヒト細胞
を培養したときの培養上清中のIL−６濃度を正確かつ迅
速に測定することを目的としている。
本発明の測定方法には、固体支持体に固定されたIL−
６レセプターと、IL−６との特異的結合反応を用いる種
々の方法が含まれる。その第一の態様においては、固体
支持体に固定されたIL−６レセプターに、標識されたIL
−６と分析検体中のIL−６とを競争的に結合せしめ、固
体支持体にIL−６レセプターを介して結合した標識化IL
−６の量又は結合しないで反応溶液中に残った標識化IL
−６の量を測定し、この測定値に基いて検体中のIL−６
の量（又は濃度）を決定する。第二の態様によれば、固
体支持体に固定されたIL−６レセプターに分析検体中の
IL−６を結合せしめ、この結合したIL−６の量を常法に
より測定する。
６レセプターと、IL−６との特異的結合反応を用いる種
々の方法が含まれる。その第一の態様においては、固体
支持体に固定されたIL−６レセプターに、標識されたIL
−６と分析検体中のIL−６とを競争的に結合せしめ、固
体支持体にIL−６レセプターを介して結合した標識化IL
−６の量又は結合しないで反応溶液中に残った標識化IL
−６の量を測定し、この測定値に基いて検体中のIL−６
の量（又は濃度）を決定する。第二の態様によれば、固
体支持体に固定されたIL−６レセプターに分析検体中の
IL−６を結合せしめ、この結合したIL−６の量を常法に
より測定する。
いずれの態様においても、まずIL−６レセプターを固
体支持体に固定する。この固体支持体としては、マイク
ロタイタープレート、各種のビーズ状の例えばポリスチ
レン、ポリプロピレン等のプラスチック製、金属セラミ
ックス等の無機物質製等の免疫測定法において常用され
ている支持体を用いることができる。IL−６レセプター
の固体支持体への固定に際しては、IL−６レセプターを
直接固定してもよいし、IL−６レセプターと結合する物
質、例えばIL−６レセプターに対する抗体をまず固定
し、それからIL−６レセプターを結合させてもよい。IL
−６レセプターやIL−６レセプターに対する抗体の固定
は常法に従って行うことができる。例えば、PBS溶液に
これらの蛋白質を例えば２μg/mlの濃度で溶解し、プレ
ートのウエルに100μずつ加え、一晩静置しておけば
よい。
体支持体に固定する。この固体支持体としては、マイク
ロタイタープレート、各種のビーズ状の例えばポリスチ
レン、ポリプロピレン等のプラスチック製、金属セラミ
ックス等の無機物質製等の免疫測定法において常用され
ている支持体を用いることができる。IL−６レセプター
の固体支持体への固定に際しては、IL−６レセプターを
直接固定してもよいし、IL−６レセプターと結合する物
質、例えばIL−６レセプターに対する抗体をまず固定
し、それからIL−６レセプターを結合させてもよい。IL
−６レセプターやIL−６レセプターに対する抗体の固定
は常法に従って行うことができる。例えば、PBS溶液に
これらの蛋白質を例えば２μg/mlの濃度で溶解し、プレ
ートのウエルに100μずつ加え、一晩静置しておけば
よい。
次に、前記第一の態様によればこの固定されたIL−６
レセプターに、分析検体と標識されたIL−６とを一定の
割合で混合したものを接触せしめる。IL−６の標識とし
ては、125I,35S等が例示できる。分析検体中のIL−６と
標識されたIL−６は競争的にIL−６レセプターに結合す
るので、IL−６レセプターに結合した標識化IL−６の量
又は結合しなかった標識化IL−６の量を測定することに
より、分析検体中のIL−６濃度を測定するのが本発明の
特徴である。上記標識IL−６の測定方法としては、125I
標識IL−６の場合は、一定時間のIL−６とIL−６レセプ
ターの結合反応後に支持体を通常の溶液で洗浄し、支持
体の放射能をγカウンターで測定することが例示でき
る。35S標識IL−６の場合も同様に測定することができ
る。
レセプターに、分析検体と標識されたIL−６とを一定の
割合で混合したものを接触せしめる。IL−６の標識とし
ては、125I,35S等が例示できる。分析検体中のIL−６と
標識されたIL−６は競争的にIL−６レセプターに結合す
るので、IL−６レセプターに結合した標識化IL−６の量
又は結合しなかった標識化IL−６の量を測定することに
より、分析検体中のIL−６濃度を測定するのが本発明の
特徴である。上記標識IL−６の測定方法としては、125I
標識IL−６の場合は、一定時間のIL−６とIL−６レセプ
ターの結合反応後に支持体を通常の溶液で洗浄し、支持
体の放射能をγカウンターで測定することが例示でき
る。35S標識IL−６の場合も同様に測定することができ
る。
第二の態様においては、IL−６レセプターを固定した
固体支持体を分析検体と共にインキュベートし、検体中
に存在するIL−６を固体支持体上のIL−６レセプターに
結合させる。次に固体支持体に結合したIL−６の量を常
法に従って測定する。この測定は種々の方法により行う
ことができる。例えばIL−６に対するウサギ由来抗体
を、固体支持体に結合したIL−６に結合せしめ、次に、
ウサギイムノグロブリンに対するヒツジ由来抗体であっ
て標識されているものを、固体支持体に結合したウサギ
由来抗体IL−６抗体と結合せしめる。ヒツジ由来抗体を
標識する物質としては、例えばアルカリホスファター
ゼ、西洋ワサビパーオキシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシ
ダーゼ等の酵素、ビチオン等を用いることができ、これ
らの標識の検出のためには標識の種類に応じて既知の検
出方法を用いることができる。これらの標識物質をその
検出方法としては、例えば免疫測定法において知られて
いる任意の手段を用いることができる。
固体支持体を分析検体と共にインキュベートし、検体中
に存在するIL−６を固体支持体上のIL−６レセプターに
結合させる。次に固体支持体に結合したIL−６の量を常
法に従って測定する。この測定は種々の方法により行う
ことができる。例えばIL−６に対するウサギ由来抗体
を、固体支持体に結合したIL−６に結合せしめ、次に、
ウサギイムノグロブリンに対するヒツジ由来抗体であっ
て標識されているものを、固体支持体に結合したウサギ
由来抗体IL−６抗体と結合せしめる。ヒツジ由来抗体を
標識する物質としては、例えばアルカリホスファター
ゼ、西洋ワサビパーオキシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシ
ダーゼ等の酵素、ビチオン等を用いることができ、これ
らの標識の検出のためには標識の種類に応じて既知の検
出方法を用いることができる。これらの標識物質をその
検出方法としては、例えば免疫測定法において知られて
いる任意の手段を用いることができる。
2. IL−６レセプター IL−６レセプターは、生体内でIL−６と特異的に結合
し、IL−６のシグナル伝達に関与する細胞膜上のタンパ
ク質である。本発明に適当なIL−６レセプターは、ヒト
由来の細胞等から生化学的方法で精製してもよいし、遺
伝子工学的に製作することもできる。該タンパク質は、
IL−６との結合に寄与するアミノ酸配列部分以外のアミ
ノ酸配列部分が置換、欠損、挿入により変化を受けたも
のであってもよい。このようなIL−６レセプターとし
て、細胞膜から離脱した可溶性IL−６レセプター、すな
わちIL−６レセプター細胞外部分が例示できる。なお、
IL−６レセプターについては特願平１−9774号明細書に
そのアミノ酸一次構造、DNA等が詳細に開示されてお
り、さらにその具体的な製造方法についても特願平１−
271862号明細書に詳細に開示されている。
し、IL−６のシグナル伝達に関与する細胞膜上のタンパ
ク質である。本発明に適当なIL−６レセプターは、ヒト
由来の細胞等から生化学的方法で精製してもよいし、遺
伝子工学的に製作することもできる。該タンパク質は、
IL−６との結合に寄与するアミノ酸配列部分以外のアミ
ノ酸配列部分が置換、欠損、挿入により変化を受けたも
のであってもよい。このようなIL−６レセプターとし
て、細胞膜から離脱した可溶性IL−６レセプター、すな
わちIL−６レセプター細胞外部分が例示できる。なお、
IL−６レセプターについては特願平１−9774号明細書に
そのアミノ酸一次構造、DNA等が詳細に開示されてお
り、さらにその具体的な製造方法についても特願平１−
271862号明細書に詳細に開示されている。
3. 測定キット 本発明の第一の態様の方法を実施するためのキットは
適当な方法でIL−６が固定された固体支持体及び標識さ
れたIL−６を含む。このキットはさらに検体稀釈用緩衝
液等を含むことができる。
適当な方法でIL−６が固定された固体支持体及び標識さ
れたIL−６を含む。このキットはさらに検体稀釈用緩衝
液等を含むことができる。
また、第二の態様の方法を実施するためのキットは適
当な方法でIL−６が固定された固体支持体及びウサギ、
ラット等の動物由来の抗IL−６抗体を含む。このキット
はさらに、該動物抗体に対する第二の抗体であって標識
されたものを含むことができる。しかしながらこの第二
抗体はユニバーサルな標識抗体として別途入手すること
が容易であるから、キットに含める必要はない。このキ
ットにさらに、検体の稀釈用等の緩衝液、標識を検出す
るための試薬等を含むことができる。
当な方法でIL−６が固定された固体支持体及びウサギ、
ラット等の動物由来の抗IL−６抗体を含む。このキット
はさらに、該動物抗体に対する第二の抗体であって標識
されたものを含むことができる。しかしながらこの第二
抗体はユニバーサルな標識抗体として別途入手すること
が容易であるから、キットに含める必要はない。このキ
ットにさらに、検体の稀釈用等の緩衝液、標識を検出す
るための試薬等を含むことができる。
以下本発明をさらに詳細に説明するために実施例を示
すが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。
すが、本発明はこれら実施例に限定されるものではな
い。
実施例1. ビーズを用いたヒトIL−６の化学的測定法 抗マウスイムノグロブリン抗体の結合した、TBS緩衝
液に懸濁されたSPAビーズ（アマーシャム）500mgに、マ
ウス由来抗ヒトIL−６レセプター・モノクローナル抗体
であるMT18（Y.Hirataら、J.Immunol.,143,p2900,1989
年参照）を20μｇ加えて、２℃で一晩回転させた。翌
日、PBSで洗浄して未結合のMT18を除去した後、ビーズ
を10mlのPBSに懸濁した。次に、20μｇの可溶性IL−６
レセプター（平成１年特願第271865号参照）を加え、２
℃で４時間放置した。続いて、アッセイ用の緩衝液（PB
S/0.1％BSA）でビーズを洗い、未結合の可溶性IL−６レ
セプターを除去した後、10mlの同緩衝液に懸濁した。50
μの125I−IL−６（30000cpm）、50μの濃度既知の
IL−６溶液、100μの上記の処理をしたビーズ、100μ
のアッセイ用緩衝液を混合し、そして125I−IL−６結
合によりSPAビーズより生じた光をβ−シンチレーショ
ンカウンターで測定した。
液に懸濁されたSPAビーズ（アマーシャム）500mgに、マ
ウス由来抗ヒトIL−６レセプター・モノクローナル抗体
であるMT18（Y.Hirataら、J.Immunol.,143,p2900,1989
年参照）を20μｇ加えて、２℃で一晩回転させた。翌
日、PBSで洗浄して未結合のMT18を除去した後、ビーズ
を10mlのPBSに懸濁した。次に、20μｇの可溶性IL−６
レセプター（平成１年特願第271865号参照）を加え、２
℃で４時間放置した。続いて、アッセイ用の緩衝液（PB
S/0.1％BSA）でビーズを洗い、未結合の可溶性IL−６レ
セプターを除去した後、10mlの同緩衝液に懸濁した。50
μの125I−IL−６（30000cpm）、50μの濃度既知の
IL−６溶液、100μの上記の処理をしたビーズ、100μ
のアッセイ用緩衝液を混合し、そして125I−IL−６結
合によりSPAビーズより生じた光をβ−シンチレーショ
ンカウンターで測定した。
第１図は、検体中のIL−６濃度の増加に伴い、結合し
た125I−IL−６が減少すること、すなわち、本方法によ
り検体中のIL−６濃度が測定できることを示す。
た125I−IL−６が減少すること、すなわち、本方法によ
り検体中のIL−６濃度が測定できることを示す。
実施例2. プレートを用いたヒトIL−６の化学的測定法
（抗IL−６抗体を使わない方法） １μg/mlの上記MT18抗体を含むPBSを96穴のマイクロ
タイタープレートに１ウエルあたり100μ加え、１晩
４℃で放置した。洗浄後、100μの１％BSAを加え、２
時間室温で放置した。BPS/0.05％Tween20により洗浄
後、IL−６レセプターを分泌しているCHO細胞の培養上
清を加え、２時間室温で放置した。PBS/0.05％Tween20
により洗浄後、50μの125I−IL−６（30000cpm）、及
び50μの濃度既知のIL−６溶液を混合したものを各ウ
エルに加え、２時間室温で放置した。PBS/0.05％Tween2
0により洗浄後、各ウエルの放射能をγ−カウンターで
測定した。
（抗IL−６抗体を使わない方法） １μg/mlの上記MT18抗体を含むPBSを96穴のマイクロ
タイタープレートに１ウエルあたり100μ加え、１晩
４℃で放置した。洗浄後、100μの１％BSAを加え、２
時間室温で放置した。BPS/0.05％Tween20により洗浄
後、IL−６レセプターを分泌しているCHO細胞の培養上
清を加え、２時間室温で放置した。PBS/0.05％Tween20
により洗浄後、50μの125I−IL−６（30000cpm）、及
び50μの濃度既知のIL−６溶液を混合したものを各ウ
エルに加え、２時間室温で放置した。PBS/0.05％Tween2
0により洗浄後、各ウエルの放射能をγ−カウンターで
測定した。
第２図は、検体中のIL−６濃度の増加に伴い、プレー
トの残存放射能が減少すること、すなわち、本方法によ
り検体中のIL−６濃度が測定できることを示す。
トの残存放射能が減少すること、すなわち、本方法によ
り検体中のIL−６濃度が測定できることを示す。
実施例3. プレートを用いたヒトIL−６の化学的測定法
（抗IL−６抗体を使う方法） ２μg/mlの上記MT18抗体を含むPBSを96穴のマイクロ
タイタープレートに１ウエルあたり100μ加え、１晩
４℃で放置た。PBS/0.05％Tween20により洗浄後、100μ
の１％BSAを加え、２時間室温で放置した。PBS/0.05
％Tween20により洗浄後、IL−６レセプターを分泌して
いるCHO細胞の培養上清を加え、２時間室温で放置し
た。PBS/0.05％Tween20により洗浄後、濃度既知のIL−
６溶液を加え、２時間室温で放置した。洗浄後、５μg/
mlのウサギ由来抗IL−６ポリクローナル抗体を１ウエル
あたり100μ加え、２時間室温で放置した。PBS/0.05
％Tween20により洗浄後、1000倍稀釈したアルカリフォ
スフォターゼ結合ヒツジ由来抗ウサギイムノグロブリン
抗体（コスモバイオ）を１ウエルあたり100μ加え、
２時間室温で放置した。洗浄後、1mg/mlのアルカリフォ
スフォターゼ基質（コスモバイオ）を１ウエルあたり10
0μ加え、37℃で約30分間放置した後、405nmの発色を
測定した。
（抗IL−６抗体を使う方法） ２μg/mlの上記MT18抗体を含むPBSを96穴のマイクロ
タイタープレートに１ウエルあたり100μ加え、１晩
４℃で放置た。PBS/0.05％Tween20により洗浄後、100μ
の１％BSAを加え、２時間室温で放置した。PBS/0.05
％Tween20により洗浄後、IL−６レセプターを分泌して
いるCHO細胞の培養上清を加え、２時間室温で放置し
た。PBS/0.05％Tween20により洗浄後、濃度既知のIL−
６溶液を加え、２時間室温で放置した。洗浄後、５μg/
mlのウサギ由来抗IL−６ポリクローナル抗体を１ウエル
あたり100μ加え、２時間室温で放置した。PBS/0.05
％Tween20により洗浄後、1000倍稀釈したアルカリフォ
スフォターゼ結合ヒツジ由来抗ウサギイムノグロブリン
抗体（コスモバイオ）を１ウエルあたり100μ加え、
２時間室温で放置した。洗浄後、1mg/mlのアルカリフォ
スフォターゼ基質（コスモバイオ）を１ウエルあたり10
0μ加え、37℃で約30分間放置した後、405nmの発色を
測定した。
第３図は、検体中のIL−６濃度の増加に伴い、強く発
色すること、すなわち、本方法により検体中のIL−６濃
度が測定できることを示す。
色すること、すなわち、本方法により検体中のIL−６濃
度が測定できることを示す。
本発明で提供されるIL−６の化学的測定法は、生物活
性を有する限り、すなわちIL−６レセプターと結合する
性質を有する限り、いかなる形状のIL−６をも高感度で
迅速に、しかも多検体を同時に測定することを可能にし
た。この方法は、各疾患でのIL−６の生理的濃度を調べ
たり、IL−６の疾患における役割を解明したり、他の薬
剤の効果を調べるのに有用である。さらにこの方法は、
IL−６とIL−６レセプターの結合を阻害する物質を、高
感度で迅速に探索することに用いることも可能であり、
IL−６の阻害剤開発にも有用である。
性を有する限り、すなわちIL−６レセプターと結合する
性質を有する限り、いかなる形状のIL−６をも高感度で
迅速に、しかも多検体を同時に測定することを可能にし
た。この方法は、各疾患でのIL−６の生理的濃度を調べ
たり、IL−６の疾患における役割を解明したり、他の薬
剤の効果を調べるのに有用である。さらにこの方法は、
IL−６とIL−６レセプターの結合を阻害する物質を、高
感度で迅速に探索することに用いることも可能であり、
IL−６の阻害剤開発にも有用である。
第１図は、IL−６を含まない検体を実施例１に示す方法
で測定したときにSPAビーズに結合した125I−IL−６量
を100として、大腸菌由来リコンビナントIL−６を各種
濃度で含む検体を同方法で測定したときのSPAビーズに
結合した125I−IL−６量を示す。 第２図は、IL−６を含まない検体を実施例２に示す方法
で測定したときにプレートに残存した125I−IL−６量を
100として、大腸菌由来リコンビナントIL−６を各種濃
度で含む検体を同方法で測定したときのプレートに残存
した125I−IL−６量を示す。 第３図は、大腸菌由来リコンビナントIL−６を各種濃度
で含む検体を実施例３に示す方法で測定したときの、プ
レートの発色を示す。
で測定したときにSPAビーズに結合した125I−IL−６量
を100として、大腸菌由来リコンビナントIL−６を各種
濃度で含む検体を同方法で測定したときのSPAビーズに
結合した125I−IL−６量を示す。 第２図は、IL−６を含まない検体を実施例２に示す方法
で測定したときにプレートに残存した125I−IL−６量を
100として、大腸菌由来リコンビナントIL−６を各種濃
度で含む検体を同方法で測定したときのプレートに残存
した125I−IL−６量を示す。 第３図は、大腸菌由来リコンビナントIL−６を各種濃度
で含む検体を実施例３に示す方法で測定したときの、プ
レートの発色を示す。
フロントページの続き (56)参考文献 特開 平１−3198（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−108959（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−40858（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−103465（ＪＰ，Ａ) Ｓａｅｎｃｅ Ｖｏｌ．241，Ｎｏ. 5867（1988）Ｐ．825−828 Ｊ ＣＬＩＮ ＩＮＶＥＳＴ，Ｖｏ ｌ．84，Ｎｏ．６（1989）Ｐ．2008− 2011 (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/53 G01N 33/566
Claims (5)
- 【請求項１】ヒトIL−６レセプターを固定した固体支持
体を標識されたヒトIL−６及び分析検体と接触せしめ、
そして該ヒトIL−６レセプターを介して固体支持体に結
合した標識されたヒトIL−６の量又は固体支持体に結合
しなかった標識されたIL−６の量を測定し、この測定値
に基いて検体中のIL−６の存否又は量を決定することを
特徴とする検体中のIL−６の検出又は測定方法。 - 【請求項２】ヒトIL−６レセプターを固定した固体支持
体を分析検体と接触せしめることにより該分析検体中の
ヒトIL−６を該IL−６レセプターを介して固体支持体に
結合せしめ、そして固体支持体に結合したIL−６を測定
することを特徴とするヒトIL−６の検出又は測定法。 - 【請求項３】固体支持体に結合したIL−６の測定を抗IL
−６抗体を用いて行うことを特徴とする請求項２に記載
の方法。 - 【請求項４】請求項１に記載の方法を実施するためのキ
ットであって、ヒトIL−６レセプターを固定した固体支
持体及び標識されたヒトIL−６を含むことを特徴とする
キット。 - 【請求項５】請求項２又は３に記載の方法を実施するた
めのキットであって、ヒトIL−６レセプターを固定した
固体支持体及び抗ヒトIL−６抗体を含むことを特徴とす
るキット。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2128150A JP3045172B2 (ja) | 1990-05-19 | 1990-05-19 | Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキット |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2128150A JP3045172B2 (ja) | 1990-05-19 | 1990-05-19 | Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキット |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0424556A JPH0424556A (ja) | 1992-01-28 |
| JP3045172B2 true JP3045172B2 (ja) | 2000-05-29 |
Family
ID=14977625
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2128150A Expired - Lifetime JP3045172B2 (ja) | 1990-05-19 | 1990-05-19 | Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキット |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3045172B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| PL182089B1 (en) * | 1994-10-21 | 2001-11-30 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Pharmaceutic compositions for treating diseases caused by production of il-6 |
-
1990
- 1990-05-19 JP JP2128150A patent/JP3045172B2/ja not_active Expired - Lifetime
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| Ｊ ＣＬＩＮ ＩＮＶＥＳＴ，Ｖｏｌ．８４，Ｎｏ．６（１９８９）Ｐ．２００８−２０１１ |
| Ｓａｅｎｃｅ Ｖｏｌ．２４１，Ｎｏ．５８６７（１９８８）Ｐ．８２５−８２８ |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0424556A (ja) | 1992-01-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Rosenquist et al. | Serum CrossLaps One Step ELISA. First application of monoclonal antibodies for measurement in serum of bone-related degradation products from C-terminal telopeptides of type I collagen | |
| JP6861771B2 (ja) | 腎疾患のためのマーカー | |
| US20200309770A1 (en) | Chemiluminescence immunoassay kit for adiponectin, and preparation method and use thereof | |
| JPH07151757A (ja) | 非競合結合検定方法 | |
| US5814461A (en) | Method for the determination of anti-TSH receptor autoantibodies | |
| JP2011502244A (ja) | Ｅｄｔａ耐性ｓ１００ａ１２複合体（ｅｒａｃ） | |
| JPH03229153A (ja) | リュウマチ病の診断に有用な特異的抗体または抗原の存在を検出する方法およびそれに用いられるテストキット | |
| KR101168292B1 (ko) | 단클론 항체, 하이브리도마, 단백질 ｐｔｘ3 측정을 위한 개량 방법 및 상기 측정용 키트 | |
| US20100240076A1 (en) | Immunoassay involving mutant antigens to reduce unspecific binding | |
| JP3045172B2 (ja) | Ｉｌ―６レセプターを利用したヒトｉｌ―６の化学的測定法及びそのためのキット | |
| US20030166031A1 (en) | Assay for anti-INGAP antibodies | |
| JP2968910B2 (ja) | １α，２５（ＯＨ）２ビタミンＤ３に対する抗体及びその用途 | |
| JPH0326787B2 (ja) | ||
| JP2001302699A (ja) | ヒトｋｇｆｒに対する抗体 | |
| JP2884628B2 (ja) | ヒトｉｌ―６の免疫化学的測定法及びそのためのキット | |
| JP3212597B2 (ja) | ヒトｉｌ―６レセプターの免疫化学的測定法及び測定用キット | |
| JPH0666796A (ja) | 抗糖化ヘモグロビンモノクローナル抗体及び糖化ヘモグロビンの測定方法 | |
| JP4210787B2 (ja) | 雌性ホルモン検出試薬用ペプチド | |
| WO1991019982A1 (en) | Determination of polypeptides and proteins in solutions and biological fluids | |
| JPH0792456B2 (ja) | カテコ−ルアミン酸性代謝物の酵素標識体 | |
| JPH11326322A (ja) | イヌインスリン測定用キットおよびそれを用いたイヌインスリン測定方法 | |
| JP2021073435A (ja) | 試料に含まれるペリオスチン測定の感度の改善方法 | |
| WO2011031986A1 (en) | Assays for soluble il-15 receptor alpha | |
| JPS6353511B2 (ja) | ||
| JPH06281654A (ja) | ヘモグロビンの測定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090317 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20090317 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20100317 Year of fee payment: 10 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110317 Year of fee payment: 11 |
|
| EXPY | Cancellation because of completion of term | ||
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20110317 Year of fee payment: 11 |