Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

JP2003513680A - 抗原にリンクされた免疫刺激配列を含有する免疫調節組成物および該組成物を使用する方法 - Google Patents

抗原にリンクされた免疫刺激配列を含有する免疫調節組成物および該組成物を使用する方法

Info

Publication number
JP2003513680A
JP2003513680A JP2001537981A JP2001537981A JP2003513680A JP 2003513680 A JP2003513680 A JP 2003513680A JP 2001537981 A JP2001537981 A JP 2001537981A JP 2001537981 A JP2001537981 A JP 2001537981A JP 2003513680 A JP2003513680 A JP 2003513680A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
antigen
individual
iss
complex
lymphocytes
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
JP2001537981A
Other languages
English (en)
Other versions
JP5543050B2 (ja
Inventor
タック，スティーブン
ネスト，ゲイリー バン
Original Assignee
ダイナバックス テクノロジーズ コーポレイション
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=26861419&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=JP2003513680(A) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by ダイナバックス テクノロジーズ コーポレイション filed Critical ダイナバックス テクノロジーズ コーポレイション
Publication of JP2003513680A publication Critical patent/JP2003513680A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP5543050B2 publication Critical patent/JP5543050B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/35—Allergens
    • A61K39/36—Allergens from pollen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/57—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the type of response, e.g. Th1, Th2
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6025—Nucleotides

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

(57)【要約】 本発明は免疫調節組成物クラスを提供する。免疫調節組成物は、抗原に複合されるかまたは付着されるポリヌクレオチドを含有する、平均して１つまたは複数の免疫刺激配列（ＩＳＳ）から成る。複合の程度は免疫調節特性、例えば、Ｔｈ１関連抗体形成を含む抗原特異的抗体形成の程度に影響を与え、ひいてはこれらの種々様々な複合体クラスが、免疫応答の型および程度を調節するのに役立つ。本発明はまた、これらの組成物を使用して、免疫応答を調節する方法をも含む。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】 関連出願の引照 本出願は、１９９９年１１月１５日出願の米国仮出願６０／１６５，４６７号
の優先権を主張し、上記出願明細書の全体を参考のため本明細書中に引用する。
【０００２】 技術分野 本発明は免疫学、より具体的には、免疫応答を調節するために抗原に付着され
た免疫刺激（賦活）ポリヌクレオチド配列の使用に関する。
【０００３】 背景技術 種々異なる病状、例えばウィルス感染、癌およびアレルギー反応に見られる病
状を解消するための免疫応答は、宿主の健康全体にとって重要である。感染症、
癌またはアレルギー反応の解消成功は、免疫応答の型および大きさに依存する。
さらに免疫応答を導き出すのに抗原を使用する免疫化は、感染症、癌および／ま
たはアレルギー反応を効果的に解消する助けとなり得る。免疫応答を導き出すの
に用いられる抗原の型が、疾患によって異なるうえは、免疫系が上述の感染症お
よび疾患全てに対処するのを可能にする免疫化法を有することが望ましい。より
具体的には、免疫応答の示差調節を可能にする免疫化法を有することが望ましい
。一般的に免疫化は体液（抗体）反応を引き起こす傾向を有しているものの、体
液反応（例えばアナフィラキシー・ショック）から生じるおそれのある合併症を
回避するために、別の型の免疫応答、つまり細胞免疫応答を引き起こすことが好
ましい場合がある。
【０００４】 感染または他の攻撃に対して発生させられる免疫応答型は、一般的に、反応に
関わる一部のＴヘルパー（Ｔｈ）セルによって見分けることができる。Ｔｈ１部
分集合は、遅延型過敏症および細胞障害性Ｔリンパ球（ＣＴＬｓ）の活性化のよ
うな古典的な細胞媒介機能をもたらす。これに対してＴｈ２部分集合はＢ細胞活
性化のためのヘルパーとしてより効果的に機能する。抗原に対する免疫応答の型
は、一般的に抗原に応答する細胞によって産出されるサイトカインによって影響
される。Ｔｈ１細胞およびＴｈ２細胞によって分泌されるサイトカインの差異は
、これら２つの部分集合の異なる生物学的機能を反映すると考えられる。
【０００５】 Ｔｈ１部分集合はウィルス感染症、細胞内病原体、および腫瘍細胞に応答する
のに特に適している。なぜならばこのＴｈ１部分集合は、ＣＴＬを活性化するＩ
Ｌ−２およびＩＦＮ−γを分泌するからである。Ｔｈ２部分集合は、フリー・リ
ビング・バクテリアおよび蠕虫寄生体に応答するのにより適しており、アレルギ
ー反応を媒介する。それというのはＩＬ−４およびＩＬ−５はそれぞれ、ＩｇＥ
の産出および好酸球の活性化を引き起こすことが知られているからである。一般
的に、Ｔｈ１およびＴｈ２細胞は、互いに負に調節する区別可能なサイトカイン
を分泌する。例えば、ＩＬ−２は、免疫応答をＴｈ１に向かってシフトし、Ｔｈ
２応答の発生を阻害する。同様に、ＩＬ−１０、つまりＴｈ２サイトカインは免
疫応答をＴｈ２に向かってシフトし、Ｔｈ１応答の発生を阻害する。Ｔｈ１／Ｔ
ｈ２のバランスの変化は例えばアレルギー反応、あるいはＣＴＬ応答の増大を招
くおそれがある。
【０００６】 多くの感染病、例えば結核やマラリアの場合、Ｔｈ２型応答は感染に対して僅
かな予防値しか有さない。標的抗原に由来する小さなペプチドを使用した、提案
されたワクチン、および潜在的に感染性の未処理ウィルス粒子の使用を回避する
その他の目下使用されている抗原性物質が、治療効果を達成するのに必要な免疫
応答を常に導き出すとは限らない。ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）の治療効果
のあるワクチンがないことが、このような失敗の不幸な例である。タンパク質ベ
ースのワクチンがＴｈ２型免疫応答を引き起こすのが典型的である。Ｔｈ２型免
疫応答の特徴は、抗体を中和する高力価を有するが、しかし顕著な細胞性免疫を
有さないことである。
【０００７】 さらに、或る適応症、最も顕著には、ＩｇＥ抗体応答がアナフィラキシー・シ
ョックを引き起こすおそれのあるアレルギーに不適切な、抗体応答のいくつかの
型がある。一般的にアレルギー反応はまた、Ｔｈ２型免疫応答を伴う。アレルギ
ー喘息の応答を含むアレルギー応答は、前期応答、つまりアレルゲン暴露の数秒
から数分内に発生し、細胞顆粒消失という特徴を有する応答、および、後期応答
、つまり、４〜２４時間後に発生し、アレルゲン暴露部位内への好酸球の浸潤を
特徴とする応答により特徴付けられる。具体的には、初期のアレルギー応答中に
は、アレルゲンはＩｇＥ抗体と、好塩基球および肥満細胞上で架橋結合し、この
架橋結合は、顆粒消失を引き起こし、次いで、ヒスタミンおよび他の炎症媒体を
肥満細胞および好塩基球から放出する。後期応答中には、好酸球がアレルゲン暴
露部位内に潜入する（この部位で組織が損傷し、機能障害が生じる）。
【０００８】 アレルギー障害のための抗原免疫治療は、少量の、しかし量が徐々に増加する
抗原の皮下注射を伴う。このような免疫治療は、ＩｇＥによるアナフィラキシー
を引き起こすリスクを与え、アレルギー後期応答のサイトカインによる事象を効
果的には取り扱わない。今までのところは、このようなアプローチはある程度し
か成功していない。
【０００９】 免疫刺激配列または「ＩＳＳ」として一般的に知られている或るＤＮＡ配列の
投与は、Ｔｈ１関連のサイトカインの分泌によって示されるＴｈ１型の偏りを伴
う免疫応答を引き起こす。抗原を有する免疫刺激ポリヌクレオチドの投与は、投
与抗原に対するＴｈ１型免疫応答を生ぜしめる。Roman他(1997) Nature Med. 3:
849-854。例えば、特異的ＩｇＧ１およびＩｇＥ抗体と、ＩＬ−４およびＩＬ−
５を分泌するがしかしＩＦＮ−γを分泌しないＣＤ４+細胞とを産出することに
より応答させられる、生理食塩水またはアジュバント・ミョウバン中の大腸菌（
E. Coli）β−ガラクトシダーゼ（β−Ｇａｌ）を皮内注射されたマウスは、Ｔ
細胞が主としてＴｈ２部分集合から成ることを明示した。しかし、ＩｇＧ２ａ抗
体と、ＩＦＮ−γを分泌するがしかしＩＬ−４およびＩＬ−５を分泌しないＣＤ
４+細胞とを産出することにより応答させられる、β−Ｇａｌをコード化してＩ
ＳＳを含有する（生理食塩水中の）プラスミドＤＮＡで皮内注射（または歯状皮
膚スクラッチ・アプリケータを用いて）注入されたマウスは、Ｔ細胞が主として
Ｔｈ１部分集合から成ることを明示した。さらに、プラスミドＤＮＡで注射され
たマウスによって産出される特異的ＩｇＥ産出は６６〜７５％減じられた。Raz
他(1996)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:5141-5145。一般的に、裸のＤＮＡの
免疫化に対する応答の特徴は、抗原によって刺激されたＣＤ４+Ｔ細胞によるＩ
Ｌ−２、ＴＮＦαおよびＩＦＮ−γの産出である。この産出はＴｈ１型応答を示
す。このことは、特にＩｇＥ産出の低減により示されるアレルギーおよび喘息を
治療する上で特に重要である。Ｔｈ１型免疫応答を刺激する免疫刺激ポリヌクレ
オチドの能力は、バクテリア抗原、ウィルス抗原およびアレルゲンによって明示
されている（例えば国際公開第９８／５５４９５号パンフレット参照）。
【００１０】 抗原にＩＳＳをリンクすることは、ＩＳＳと抗原とを混和状態で共投与するの
に比べて、Ｔｈ１免疫応答を著しく向上させることが報告されている。例えば国
際公開第９８／１６２４７号、同第９８／５５４９５号の各パンフレットを参照
されたい。
【００１１】 ＩＳＳについて記載した他の参考文献には例えば次のものがある。Krieg他 (1
989) J. Immunol 143:2448-2451; Tokunaga他 (1992) Microbiol. Immunol. 36:
55-66; Kataoka他 (1992) Jpn. J. Cancer Res. 83:244-247; Yamamoto他 (1992
a) J. Immunol 148:5072-4076; Yamamoto他 (1992b) Microbiol. Immuno. 36:58
3-997; Mojcik他 (1993) Clin. Immuno. and Immunopathol. 67:130-136; Brand
a他 (1993) Biochem. Pharmacol. 45:2037-2043; Pisetsky他 (1994) Life Sci.
54(2):101-107; Yamamoto他 (1994a) Antisense Research and Development. 4
:119-122; Yamamoto (1994b) Jpn. J. Cancer Res. 85:775-779; Raz他 (1994)
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:9519-9523; Kimura他 (1994) J. Biochem. (To
kyo) 116:994; Krieg他 (1995) Nature 374: 546-549; Pisetsky他 (1995) Ann.
N.Y. Acad Sci. 772:152-163; Pisetsky他 (1996a) J. Immunol 156:421-423;
Pisetsky (1996b) Immunity 5:303-310; Zhao他 (1996) Biochem. Pharmacol 51
:173-182; Yi他 (1996) J. Immuno. 156: 558-564; Krieg (1996) Trends Micro
biol. 4(2) 73-76; Krieg他 (1996) Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 6: 133
-139; Klinman他 (1996) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 2879-2883; Raz他 (
1996); Sato他 (1996) Science 273:352-354; Stacey他 (1996) J. Immunol. 15
7:2116-2122; Ballas他 (1996) J. Immunol. 157:1840-1845; Branda他 (1996)
J. Lab. Clin. Med. 128:329-338; Sonehara他 (1996) J. Interferon and Cyto
kine Res. 16:799-803; Klinman他 (1997) J. Immunol. 158:3635-3539; Sparwa
sser他 (1997) Eur. J. Immunol. 27:1671-1679; Roman他 (1997); Carson他 (1
997) J. Exp. Med. 186:1621-1622; Chace他 (1997) Clin. Immunol. and Immun
opathol. 84:185-193; Chu他 (1997) J. Exp. Med. 186;1623-1631; Lipford他
(1997a) Eur. J. Immunol. 27: 2340-2344; Lipford (1997b) Eur. J. Immuno.
27:3420-3426; Weiner他 (1997) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:10833-10837;
Macfarlane他 (1997) Immunology 91:586-593; Schwartz他 (1997) J. Clin. I
nvest. 100:68-73; Stein他 (1997) Antisense Technology, Ch. 11 pp. 241-26
4, C. LichtensteinおよびW. Nellen編, IRL Press; Wooldridge (1997) Blood
89:2994-2998; Leclerc他 (1997) Cell. Immunol. 179:97-106; Kline他 (1997)
J. Invest. Med. 45(3):282A; Yi他 (1998a) J. Immunol. 160:12401245; Yi他
(1998b) J. Immuno. 160:4755-4761; Yi他 (1998c) J. Immunol. 160:5898-590
6; Yi他 (1998d) J. Immunol. 161:4493-4497; Krieg (1998) Applied Antisens
e Oligonucleotide Technology Ch. 24, pp. 431-448, C.A. SteinおよびA. M.
Krieg編、Wiley-Liss, Inc.; Krieg他 (1998a) Trends Microbiol. 6:23-27; Kr
ieg他 (1998b) J. Immuno. 161; 2428-2434; Krieg他 (1998c) proc. Natl. Aca
d. Sci. USA 95:12631-12636; Spiegelberg他 (1998) Allergy 53 (45S):93-97;
Horner他 (1998) Cell Immuno. 190:77-82; Jakob他 (1998) J. Immunol. 161:
3042-3049; Redford他 (1998) J. Immuno. 161:3930-3935; Weeratna他 (1998)
Antisense & Nucleic Acid Drug Development 8:351-356; McCluskie他 (1998)
J. Immunol. 161(9):4463-4466; Gramzinski他 (1998) Mol. Med 4:109-118; Li
u 81998) Blood 92:3730-3736; Moldoveanu他 (1998) Vaccine 16: 1216-1224;
Brazolot Milan他 (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:15553-15558; Briod
e他 (1998) J. Immunol. 161:7054-7962; Briode他 (1999) Int. Arch. Allergy
Immunol 118:453-456; Kovarik他 (1999) J. Immunol. 162:1611-1617; Spiege
lberg他 (1999) Pedatr. Pulmonol Suppl. 18:118-121; Martin-Orozco他 (1999
) Int. Immuno. 11:1111-1118; 欧州特許第468,520号明細書；国際公開第96/025
55号；国際公開第97/28259号；国際公開第98/16247号；国際公開第98/18810号；
国際公開第98/37919号；国際公開第98/40100号；国際公開第98/52581号；国際公
開第98/52962号；国際公開第98/55495号；国際公開第98/55609号；国際公開第99
/11275号パンフレット； Elkins他 (1999) J. Immuno. 162:2291-2298; 国際公
開第98/52962号；国際公開第99/51259号パンフレット；Van Uden他 (1999) J. A
llergy Clin. Immunol 104:902-910。また、Zimmermann他 (1998) J. Immuno. 1
60:3627-3630; Krieg他 (1999) Trends Microbiol. 7:64-65; 国際公開第99/334
88号；国際公開第99/33868号；国際公開第99/62923号パンフレット；および米国
特許第5,663,153号、同第5,723,335号および同第5,849,719号明細書を参照され
たい。また、Liang他 (1996) J. Clin. Invest. 98:1119-1129; Bohle他 (1999)
Eur. J. Immunol. 29:2344-2353および国際公開第99/56755号パンフレットも参
照されたい。
【００１２】 例えばウィルス感染症またはアレルギー状態において、抗体産出またはサイト
カイン産出のレベルが重要である場合、Ｔｈ１型免疫応答を調節する能力がある
ことが望ましい。本発明は、Ｔｈ１型応答へのＴｈ２型応答の示差調節組成物お
よび示差調節法を提供する。
【００１３】 ここに挙げた全ての刊行物全体を本明細書中に参考のため引用する。
【００１４】 発明の開示 本発明は、相異なる区別可能な生物学的特性を有するＩＳＳ抗原複合体クラス
（すなわち集団）の組成物を提供する。変化する構造的かつ機能的な特徴につい
て本明細書中に記載し、この特徴は全体的に見て、複合の変化する範囲、（特に
Ｔｈ１応答の観点における）免疫応答の平均調節機能のような変化する機能、抗
原に結合するために抗原特異的抗体と競合する平均能力、および（抗原がアレル
ゲンである場合）ヒスタミン放出を抑制する能力を包含する。種々の実施態様を
本明細書中に記載する。ＩＳＳは本明細書中に記載したようなあらゆる免疫刺激
配列であってよい。抗原はあらゆる抗原であってよく、その一例として、病原菌
、例えばＢ型肝炎ウィルス、ＨＩＶ、乳頭腫ウィルス、（インフルエンザ・ウィ
ルスのような）呼吸器ウィルス、マイコバクテリア、百日咳およびサルモネラ属
と関連するアレルゲンおよび抗原が挙げられる。抗原はまた、癌、例えば腫瘍抗
原と関連するあらゆる抗原であってもよい。
【００１５】 本発明はまた、これらの組成物を使用した方法、例えば免疫応答を調節する方
法、および、アレルギー状態を治療する方法を提供する。
【００１６】 従って１つの観点において本発明は、複合分子集団であって、該複合分子が、
抗原と、免疫刺激配列（ＩＳＳ）を含んで成るポリヌクレオチドとを含んで成り
、集団中の複合程度が、(ii)抗原に対する抗原特異的抗体の結合を５０％阻害す
るのに必要な抗原の濃度に対する、（ｉ）抗原に対する抗原特異的抗体の結合を
５０％阻害するのに必要なＩＳＳ−抗原複合体の濃度の比が、約３．５〜約６．
０であるようになっている、複合分子集団を提供する。いくつかの実施態様では
、前記集団の抗原がアレルゲンであり、集団中の複合程度が、(ii)抗原感作個体
からの好塩基球からの約４０％のヒスタミン放出に必要な抗原の濃度に対する、
（ｉ）抗原感作個体からの好塩基球からの約４０％のヒスタミン放出に必要なＩ
ＳＳ−抗原複合体の濃度の比が、約１０００を上回るようになっている。
【００１７】 或る観点において、本発明は、複合分子集団であって、該複合分子が、抗原と
、免疫刺激配列（ＩＳＳ）を含んで成るポリヌクレオチドとを含んで成り、集団
中の複合程度が、(ii)抗原に対する抗原特異的抗体の結合を５０％阻害するのに
必要な抗原の濃度に対する、（ｉ）抗原に対する抗原特異的抗体の結合を５０％
阻害するのに必要なＩＳＳ−抗原複合体の濃度の比が、約２．５〜約３．０であ
るようになっている、複合分子集団を提供する。いくつかの実施態様では、前記
集団の抗原がアレルゲンであり、集団中の複合程度が、(ii)抗原感作個体からの
好塩基球からの約４０％のヒスタミン放出に必要な抗原の濃度に対する、（ｉ）
抗原感作個体からの好塩基球からの約４０％のヒスタミン放出に必要なＩＳＳ−
抗原複合体の濃度の比が、約１００〜約２００であるようになっている。
【００１８】 別の観点において、本発明は、複合分子集団であって、該複合分子が、抗原と
、免疫刺激配列（ＩＳＳ）を含んで成るポリヌクレオチドとを含んで成り、抗原
とポリヌクレオチドとの複合の程度が、複合体集団を受容する個体における抗原
特異的抗体が、同一量のリンクされていないポリヌクレオチドおよび抗原、また
は同一量の抗原のみを受容する場合と比べて抑制されるようになっている、複合
分子集団を提供する。或る観点では、抗原特異的抗体の産出程度を減少させるこ
とができ、またある観点では、排除することができる。
【００１９】 別の観点では、本発明は、本発明の複合分子集団と、製薬上許容可能な賦形剤
とを含んで成る組成物を提供する。
【００２０】 別の観点では、本発明は、個体の免疫応答を調節する方法であって、該方法が
、前記個体の前記免疫応答を調節するのに充分な量の、本発明の複合分子集団を
含んで成る組成物を前記個体に投与することを含んで成る、個体の免疫応答を調
節する方法を提供する。或る観点では、前記調節が、Ｔｈ１関連サイトカインの
産出を刺激することを含んで成る。或る観点では、前記調節が、Ｔｈ２関連サイ
トカインの産出を減少させることを含んで成る。或る観点では、前記調節が、抗
原特異的抗体の産出を減少させることを含んで成る。
【００２１】 別の観点では、本発明は、個体のアレルギー状態を治療する方法であって、該
方法が、本発明の複合分子集団から成る組成物を、前記アレルギー状態を軽減す
るのに充分な量で前記個体に投与することを含んで成る、個体のアレルギー状態
を治療する方法を提供する。
【００２２】 別の観点では、本発明は、個体内で抗原によって刺激されたＩｇＥの産出を減
少させる方法であって、該方法が、前記抗原によって刺激されたＩｇＥを減少さ
せるのに充分な量で、本発明の複合分子集団を含んで成る組成物を前記個体に投
与することを含んで成る、個体内で抗原によって刺激されたＩｇＥの産出を減少
させる方法を提供する。
【００２３】 別の観点では、本発明は、個体のＩｇＥ関連障害を治療する方法であって、該
方法が、前記個体のＩｇＥの産出を減少させ前記障害を治療するのに充分な量で
、本発明の複合分子集団を含んで成る組成物を前記個体に投与することを含んで
成る、個体のＩｇＥ関連障害を治療する方法を提供する。
【００２４】 別の観点では、本発明は、個体内のＴｈ１リンパ球を刺激する方法であって、
該方法が、前記個体内のＴｈ１リンパ球を刺激するのに充分な量で、本発明の複
合分子集団を含んで成る組成物を前記個体に投与することを含んで成る、個体内
のＴｈ１リンパ球を刺激する方法を提供する。或る観点では、これらの個体内で
、Ｔｈ１関連サイトカインの産出を刺激する。
【００２５】 別の観点では、本発明は、個体内のＴｈ２リンパ球を抑制する方法であって、
該方法が、前記個体内のＴｈ２リンパ球を抑制するのに充分な量で、本発明の複
合分子集団を含んで成る組成物を前記個体に投与することを含んで成る、個体内
のＴｈ２リンパ球を抑制する方法を提供する。或る観点では、これらの個体にお
いて、Ｔｈ２関連サイトカインの産出を抑制する。
【００２６】 発明の実施の形態 われわれは、ポリヌクレオチド免疫刺激配列（ＩＳＳ）と抗原との複合の程度
が免疫応答を示差調節することを発見した。例えば具体的に述べるならば、われ
われは、より大きい程度の複合が、抗原特異的抗体の産出全体を抑制することに
なる一方、Ｔｈ１シフトを保つ（すなわちＴｈ１関連のサイトカインが放出され
る）ことを発見した。さらにわれわれは、より大きな程度の複合が、アレルギー
抗原使用時に、ヒスタミン放出抑制において著しく効果的であることを発見した
。
【００２７】 例において説明するように、ＩＳＳオリゴヌクレオチドの、ブタクサアレルゲ
ンＡｍｂ ａ １との異なる程度の複合は、興味深い驚くべき生物学的特性を有
する新しい分子クラスを形成する。これらのクラス全ては、マウスにおけるＩｇ
Ｇ２ａ抗体およびＩＦＮ−γサイトカインの応答によって測定されるように、Ｔ
ｈ２応答よりもむしろＴｈ１応答を引き起こす。Ａｍｂ ａ １と比べると、ブ
タクサアレルギーのヒト被験者からの好塩基球を使用したｉｎ ｖｉｔｒｏ検定
によって測定されたように、これらの分子はアレルゲン性を減小させた。
【００２８】 説明を簡単にして理解しやすくするために、とりわけ複合程度の異なる（ひい
ては１つまたは複数の免疫調節特性の異なる）ＩＳＳ抗原集団は、３つの一般的
なクラスに分けることができる。これらのクラスを本明細書中では「Ｌ」（低程
度複合）、「Ｍ」（中程度複合）、および「Ｈ」（高程度複合）と記す。抗原に
複合されたＩＳＳ分子の数は複合体の生物学的特性に影響を与える。低比率（「
Ｌ」）のＩＳＳ：タンパク質を含有する複合体は、強力なＴｈ１応答を引き起こ
し、（Ｔｈ１およびＴｈ２に関連する抗体の組み合わせ測定により測定される）
最高抗体応答を引き起こし、（抗原感作細胞におけるヒスタミン応答の範囲まで
測定される）そのアレルゲン性の減小率は最低である。中程度の比率（「Ｍ」）
のＩＳＳ：タンパク質を含有する複合体は、強力なＴｈ１応答を引き起こし、中
程度の抗体応答を引き起こし、そのアレルゲン性の減小率は中程度である。高比
率（「Ｈ」）のＩＳＳ：タンパク質を含有する複合体は、強力なＴｈ１応答を引
き起こし、極めて小さな抗体応答を引き起こし、そのアレルゲン性の減小率は最
高である。複合体の３つの全ての形は細胞障害性Ｔ細胞の活性を引き起こす。複
合体の３つの全ての形は種々異なる用途において有用となることができる。Ｌ形
複合体は、高い抗体応答とともにＴｈ１応答が所望されるような用途、例えば感
染症ワクチンにおいて極めて有用であることが予想できる。Ｈ形複合体は、高抗
体力価なしに強力なＴｈ１応答が所望されるような用途、例えばアレルギー免疫
療法または或る癌の治療に極めて有用であることが予想できる。Ｍ形複合体は、
Ｔｈ１細胞免疫応答と抗体応答との間のバランスが所望される用途に極めて有用
であることが予想できる。
【００２９】 一般的な技術 本発明の実施においては、特記しない限り分子生物学（組み換え技術を含む）
、微生物学、細胞生物学、生化学および免疫学のコンベンショナルな技術を採用
することになる。このような技術は当業者の技能の範囲内にある。このような技
術は「分子クローニング：実験室マニュアル(Molecular Cloning: A Laboratory
Manual)」第２版(Sambrook他,1989)；「オリゴヌクレオチド合成(Oligonucleot
ide Synthesis)」(M. J. Gait他, 1984)；「動物細胞培養(Animal Cell Culture
)」(R. I. Freshney編, 1987)；「実験免疫学ハンドブック(Handbook of Experi
mental Immunology)」(D. M. WeirおよびC. C. Blackwell編)；「哺乳類細胞の
ための遺伝子導入ベクター(Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells)」(J.
M. MillerおよびM. P. Calos編, 1987) ；「分子生物学の現行プロトコル(Curr
ent Protocols in Molecular Biology)」(F. M. Ausubel他編, 1987)；「ＰＣＲ
：ポリメラーゼ鎖反応(The Polymerase Chain Reaction)」(Mullis他編, 1994)
；「免疫学の現行プロトコル(Current Protocols in Immunology)」(J. E. Coli
gan他編, 1991)；「イムノアッセイ・ハンドブック(The Immunoassay Handbook)
」(David Wild編, Stockton Press NY, 1994)；および「免疫学的分析法(Method
s of Immunological Analysis)」(R. Masseyeff, W. H. AlbertおよびN. A. Sta
ines編, Weinheim: VCH Verlags gesellschaft mbH, 1993)のような文献に全体
的に説明されている。
【００３０】 定義 本明細書中に使用したように、単数形は、特記しない限り複数の意味を含む。
例えばＩＳＳは１つまたは複数のＩＳＳを含む。
【００３１】 本明細書中に使用した「ＩＳＳ」という用語は、ｉｎ ｖｉｔｒｏ、ｉｎ ｖ
ｉｖｏおよび／またはｅｘ ｖｉｖｏで測定される、測定可能な免疫応答をもた
らすポリヌクレオチド配列を意味する。測定可能な免疫応答は、抗原特異的抗体
産出、サイトカイン分泌、リンパ球集団、例えばＮＫ細胞、ＣＤ４+Ｔリンパ球
、ＣＤ８+Ｔリンパ球、Ｂリンパ球などの活性化または拡張を含むが、これに限
定されるものではない。ＩＳＳ配列はＴｈ１型応答を優先して活性化するのが好
ましい。本発明で使用するポリヌクレオチドは少なくとも１つのＩＳＳを含有す
る。本明細書で使用するように、「ＩＳＳ」はまた、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチ
ドを省略した用語でもある。
【００３２】 「複合分子集団」とは、ＩＳＳ抗原複合群（すなわち抗原にリンクまたは付着
されたＩＳＳ）のことである。本発明の目的のためには、このような集団が抗原
分子毎に付着された一定数のＩＳＳを必ずしも有する必要はなく、有していても
いなくてもよいことは明らかである。典型的には、所与の集団が（所与の集団内
の変化する複合程度に基づく）分子量の分布を有し、ひいては、抗原に複合され
た平均ＩＳＳ数を有することになる。本明細書に記載されたどの集団も、例えば
不完全な複合および／または精製により、自由抗原（すなわちＩＳＳにリンクさ
れていない抗原）および／または自由ＩＳＳ（すなわち抗原にリンクされていな
いＩＳＳ）を含有していてよいことは明らかである。本発明の目的のために、本
明細書中に記載した集団は複合分子を含有するが、しかし必ずしも含有する必要
はない。
【００３３】 所与のパラメータ（例えばＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの数または質量）の「
平均」とは、集団の構成部分の数で徐した集団全体に対応するそのパラメータの
合計を意味する。例えば、抗原に付着されたＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの平均
数は、複合分子集団中の１抗原分子あたりのＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの平均
数（すなわち抗原分子の総数で徐したＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの総数）を意
味する。後述するようにこの数は通常の場合、例えば分光法により測定される、
抗原に対するポリヌクレオチドの重量測定から導出される。
【００３４】 所与の集団の「中位」の数または重量とは、集団の半分がそれを上回り、集団
の半分がそれを下回るような数または重量を意味する。例えば１抗原分子当たり
のＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの中位数とは、集団中の複合分子の半分が１抗原
分子当たり、より少数のＩＳＳ含有ポリヌクレオチドを有しており、半分がより
多数のＩＳＳ含有ポリヌクレオチドを有していることを意味する。
【００３５】 本明細書中に交互に使用するように、「ポリヌクレオチド」および「オリゴヌ
クレオチド」という用語は、一本鎖ＤＮＡ（ｓｓＤＮＡ）、二本鎖ＤＮＡ（ｄｓ
ＤＮＡ）、一本鎖ＲＮＡ（ｓｓＲＮＡ）および二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、修
飾オリゴヌクレオチドおよびヌクレオシド、またはこれらの組み合わせを含む。
オリゴヌクレオチドは線形または環状に形成されていてよく、またはオリゴヌク
レオチドは線形区分および環状区分の両方を含有していてよい。オリゴヌクレオ
チドは、一般的にはリン酸エステル結合によってつなげられたヌクレオシドポリ
マーである。ヌクレオシドは、糖に結合されたプリン（アデニンまたはグアニン
またはその誘導体）またはピリミジン（チミン、シトシンまたはウラシル、また
はその誘導体）塩基から成る。ＤＮＡ中の４つのヌクレオシド単位（または塩基
）は、デオキシアデノシン、デオキシグアノシン、デオキシチミジンおよびデオ
キシシチジンと呼ばれる。ヌクレオチドはヌクレオシドのリン酸エステルである
。
【００３６】 本明細書中に使用した「免疫調節」または「免疫応答の調節」という語は、免
疫活性効果ならびに免疫抑制効果を含む。免疫活性効果は、細胞または体液の免
疫応答を直接的または間接的に向上させる効果を含むがこれに限定されるもので
はない。免疫活性効果は例えば、抗原特異的抗体の産出量の増大；リンパ球集団
、例えばＮＫ細胞、ＣＤ４+Ｔリンパ球、ＣＤ８+Ｔリンパ球、マクロファージ等
の活性化または増殖；例えばＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−
６、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−
αなどを含む免疫刺激サイトカインの合成の増大である。免疫抑制効果は、細胞
または体液の免疫応答を直接的または間接的に減小させる効果を含むがこれに限
定されるものではない。免疫抑制効果は例えば、ＩｇＥ産出量の減小のような抗
原特異的抗体の減小；リンパ球の活性、または、免疫寛容をもたらすような免疫
抑制活性を有する他の細胞集団の活性；および或る細胞機能に関する抑制効果を
有するサイトカインの合成の増大である。その一例はＩＦＮ−γであり、ＩＦＮ
−γは、ＩＬ−４によって誘導された、ＩｇＥおよびＩｇＧ１へのクラス・スイ
ッチをブロックすると考えられ、これにより、これらの抗体部分集合のレベルを
低下させる。
【００３７】 「複合体」という用語は、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドと抗原とがリンクされ
ている複合体を意味する。このような複合体リンケージは共有および／または非
共有リンケージを含む。
【００３８】 「複合の程度」は、所与の集団における平均複合度を意味する。本明細書中に
説明したように、複合の程度は、多数の構造的および／または機能的なパラメー
タのいずれか１つだけ、またはいずれかの組み合わせによって特徴付けられる。
【００３９】 「抗原」という用語は、抗体またはＴ細胞抗原受容体によって特異的に認識さ
れ結合される物質を意味する。抗原はペプチド、タンパク質、糖タンパク質、多
糖、複合炭水化物、糖、ガングリオシド、脂質およびリン脂質；これらの一部お
よびこれらの組み合わせを含むことができる。抗原は天然に見出されたものかま
たは合成物質であってよい。ＩＳＳと一緒に投与するのに適した抗原は、Ｂ細胞
またはＴ細胞の抗原特異的応答を引き出すことができるあらゆる分子をも含む。
抗原がその抗原に対して特異的な抗体応答を引き出すことが好ましい。「抗原」
の範囲には、ハプテンが含まれる。ハプテンは低分子量化合物であり、この化合
物はそれ自体は免疫原性ではないが、しかし、抗原決定基を含有する免疫原性分
子と複合されると、免疫原性にされるような化合物である。抗原性にされるため
には、小さな分子がハプテン化される必要のある場合がある。本発明の抗原はペ
プチド、脂質（例えばステロール、脂肪酸およびリン脂質）、ヘモフィルス・イ
ンフルエンザワクチンに使用されるような多糖類、ガングリオシドおよび糖タン
パク質を含むことが好ましい。
【００４０】 「アジュバント」とは、抗原のような免疫原性作用因子に添加される場合に、
混合物に暴露されると、受容宿主内の作用因子に対する免疫応答を非特異的に向
上させるかまたは増強する物質を意味する。
【００４１】 「ペプチド」という用語は、このペプチドがハプテンであろうとなかろうと、
生物学的応答、例えば抗体産出またはサイトカイン活性を生ぜしめるのに充分な
長さおよび組成を有するポリペプチドである。典型的には、ペプチドは長さにお
いて少なくとも６つのアミノ酸残基を有する。「ペプチド」という用語はさらに
、（天然または非天然に発生するものであろうとなかろうと）修飾アミノ酸を含
む。このような修飾は、リン酸化、グリコシル化、ペギル化、脂質化またはメチ
ル化を含むが、これに限定されるものではない。
【００４２】 「抗原ペプチド」は、精製された天然ペプチド、合成ペプチド、組み換えタン
パク質、粗タンパク質抽出物、弱毒化または不活性化ウィルス、細胞、微生物、
またはこのようなペプチドのフラグメントを含むことができる。従って「抗原ペ
プチド」または「抗原ポリペプチド」は１つまたは複数の抗原特性を呈するポリ
ペプチドの全てまたは一部を意味する。それゆえ例えば、「Ａｍｂ ａ １抗原
ポリペプチド」または「Ａｍｂ ａ １ポリペプチド抗原」は、それが配列全体
であろうと、配列部分であろうと、かつ／または、抗原特性を呈する（すなわち
抗体またはＴ細胞受容体に特異的に結合する）修飾配列であろうと、Ａｍｂ ａ
１から成るアミノ酸配列である。
【００４３】 「運搬分子」または「運搬手段」は特定部位への、および／または特定のタイ
ミングに関するＩＳＳおよび／または抗原の運搬を容易にし、可能にし、かつ／
または向上させる化学的部分である。運搬手段は付加的に免疫応答を刺激しても
しなくてもよい。
【００４４】 「抗原に対するアレルギー応答」とは、一般的に好酸球および／または抗原特
異的ＩｇＥおよびこれにより生じた作用の発生によって特徴付けられる免疫応答
を意味する。当業者には良く知られているように、ＩｇＥは肥満細胞および好塩
基球上でＩｇＥ受容体に結合する。ＩｇＥによって認識された抗原に後で暴露さ
れると、抗原は肥満細胞および好塩基球上でＩｇＥと架橋結合し、これによりこ
れらの細胞の顆粒消失を引き起こす。この顆粒消失はヒスタミン放出を含むが、
これに限定されるものではない。「抗原に対するアレルギー反応」「アレルギー
」および「アレルギー状態」という語が、本発明のいくつかの方法の用途に同等
に適切であることは明らかであり、またこのことを意図している。さらに、本発
明の方法が、アレルギー反応を予防し、事前のアレルギー状態を治療するのに同
等に相応しい方法を含むことは明らかであり、またこのことを意図している。
【００４５】 本明細書中に使用したように、「アレルゲン」という用語は、抗原または分子
の抗原部分、通常はタンパク質を意味する。タンパク質は被験者に暴露されると
、アレルギー反応を引き出す。典型的には、被験者は例えば膨疹紅斑テストによ
り指示されたアレルゲンに対するアレルギーを有している。分子に対する暴露時
に被験者のうちの僅かしかアレルギー（例えばＩｇＥ）免疫反応を呈しなくても
、その分子はアレルゲンであるといわれる。多数の単独のアレルゲンが当業者に
知られている。これらのアレルゲンは本明細書中に提供した表１に示すものを含
むが、これに限定されるものではない。
【００４６】 「脱感作」という用語は、被検体が感作を明示しているアレルゲン用量を増加
する投与プロセスを意味する。脱感作に使用されるアレルゲン例は当業者によく
知られている。例えばFornadley(1998) Otolaryngol. Clin. North Am. 31:111-
127を参照されたい。
【００４７】 「抗原特異的免疫療法」とは、抗原を伴い、免疫応答の抗原特異的調節を発生
させるあらゆる形の免疫療法を意味する。アレルギーに照らして、抗原特異的免
疫療法は脱感作療法を含むが、これに限定されるものではない。
【００４８】 「個体」とは、脊椎動物、好ましくは哺乳動物、より好ましくはヒトである。
哺乳動物はヒト、霊長類、家畜、狩猟動物、齧歯動物およびペットを含むが、こ
れらに限定されるものではない。
【００４９】 物質の「有効量」または「充分な量」とは、臨床結果を含む、有益なまたは所
望の結果をもたらすのに充分な量のことであり、従って「有効量」は、それが適
用されている状況に依存する。抗原に対する免疫応答を調節する組成物の投与に
照らして、ＩＳＳ抗原複合体から成る組成物の有効量は、抗原だけを投与する場
合に得られる免疫応答と比較して、このような調節を達成するのに充分な量を意
味する。有効量は１回でまたは複数回にわたって投与することができる。
【００５０】 本明細書中に使用した「共投与」は、免疫応答を調節するために、少なくとも
２つの異なる物質を充分に接近した時間内に投与することを意味する。好ましく
は共投与は、少なくとも２つの物質を同時に投与することを意味する。
【００５１】 Ｔｈ１応答のような免疫応答の「刺激」は、応答の増大を意味する。この応答
の増大は、応答を引き出しかつ／または向上させることから生じることができる
。
【００５２】 「アレルギー関連障害」とは、抗原特異的なＩｇＥ免疫応答の作用から生じる
障害を意味する。このような作用は、低血圧およびショックを含むが、これに限
定されるものではない。アナフィラキシーは、アレルギー関連障害の一例である
。この障害発生中、血液循環内に放出されたヒスタミンが血管拡張を招き、毛細
血管の透過率を増大させ、その結果血液循環から血漿の著しい損失を伴う。アナ
フィラキシーの発生は、身体全体にわたって関連作用を蒙る全身性のものと、特
異的な標的組織または器官に限定された反応を伴う局所性のものとがあり得る。
【００５３】 ＩｇＥ関連障害は、持続性の有無を問わずＩｇＥレベルの上昇によって部分的
に特徴付けられる生理的状態を意味する。ＩｇＥ関連障害は、アレルギーおよび
アレルギー反応、（後述の）アレルギー関連障害、喘息、鼻炎、結膜炎、蕁麻疹
、ショック、膜翅類毒針アレルギーおよび薬物アレルギー、および寄生虫感染症
を含むが、これらに限定されるものではない。この用語はまた、前記障害の関連
兆候をも含む。一般的にこのような障害におけるＩｇＥは抗原特異的である。
【００５４】 本明細書中に使用したように、また当業者によく理解されているように、「治
療」は、臨床結果を含む、有益なまたは所望の結果を得るためのアプローチであ
る。本発明の目的では、有益なまたは所望の臨床結果は、検出可能または検出不
能を問わず、１つまたは複数の症状の緩和または改善、疾患程度の減小、疾患の
安定化（つまり悪化のない）状態、疾患の広がりの予防、疾患進行の遅延または
減速、疾患状態の緩和または軽減、および（部分的、全体的を問わず）寛解を含
むが、これらに限定されるものではない。「治療」はまた、治療を受けない場合
に見込まれる生存時間と比較して生存時間を延長することをも意味する。
【００５５】 疾患または障害の「軽減」は、障害を治療しない場合と比較して、疾患または
障害の状態の程度および／または不所望な臨床的症状が減少させられること、お
よび／または、進行の時間的経過が遅くなるかまたは延長されることを意味する
。特にアレルギーに照らして、当業者によって良く理解されているように、軽減
は、アレルゲンに対する免疫応答を調節すると生じることができる。さらに、軽
減は一用量の投与によっては生じるとは限らず、連続用量を投与するとしばしば
生じる。従って、応答または障害を軽減するのに充分な量を、一回でまたは複数
回にわたって投与することができる。
【００５６】 ＩＳＳ抗原複合体または抗原によって「引き出された」「抗体の力価」または
「抗体量」は、複合体または抗原の投与後の或る時点で測定された所与の抗体量
を意味する。
【００５７】 「Ｔｈ１関連抗体」は、Ｔｈ１免疫応答と関連して産出されかつ／または増大
させられる抗体のことである。例えば、ＩｇＧ２ａはマウス中のＴｈ１関連抗体
である。本発明の目的に対応して、Ｔｈ１関連抗体の測定は、１つまたは複数の
このような抗体の測定であってよい。例えばヒトにおいては、Ｔｈ１関連抗体の
測定は、ＩｇＧ１および／またはＩｇＧ３の測定を伴ってもよい。
【００５８】 「Ｔｈ２関連抗体」は、Ｔｈ２免疫応答と関連して産出されかつ／または増大
させられる抗体のことである。例えば、ＩｇＧ１はマウス中のＴｈ２関連抗体で
ある。本発明の目的に対応して、Ｔｈ２関連抗体の測定は、１つまたは複数のこ
のような抗体の測定であってよい。例えばヒトにおいては、Ｔｈ２関連抗体の測
定は、ＩｇＧ２および／またはＩｇＧ４の測定を伴ってもよい。
【００５９】 サイトカイン産出、抗体産出またはヒスタミン放出のような機能または活性を
「抑制」または「阻害」することは、当該状態またはパラメータ以外のその他の
点では同一の条件のものと比較して、あるいは、別の状態と比較して、その機能
または活性を低減することを意味する。例えば、ヒスタミン放出を抑制する複合
集団は、例えば抗原のみによって引き起こされるヒスタミン放出と比較して、ヒ
スタミン放出を低減する。別の例を挙げるならば、抗体産出を抑制する複合集団
は、例えば、抗原のみによって産出される抗体の程度および／またはレベルと比
較して、抗体の程度および／またはレベルを低減する。
【００６０】 本発明の組成物 様々な構造特性かつ免疫調整特性を有する複合集団 概ね本発明および本明細書中に記載した複合分子のクラス、または集団は、以
下のような多数の構造的および／または機能的特性のいずれかによって、区別お
よび／または規定することができる： （ａ） 抗原に付着またはリンクされたＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの平均数
； （ｂ） 抗原に付着またはリンクされたＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの中位数 （ｃ） 抗原の平均質量に対するＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの平均質量の比
； （ｄ） 抗原の中位質量に対するＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの中位質量の比
； （ｅ） (ii)抗原に対する抗原特異的抗体を阻害するのに必要な抗原濃度に対
する、(i)抗原に対する抗原特異的抗体の結合を同一程度に阻害するのに必要な
ＩＳＳ抗原複合体濃度の比（後述するように、これらの比は通常の場合、５０％
の阻害率で算出されるが、これに限定されるものではない）； （ｆ） アレルゲンである抗原に関して、(ii)抗原感作された個体からの好塩
基球からのヒスタミン放出に必要な抗原濃度に対する、(i)抗原感作された個体
からの好塩基球からの同一程度のヒスタミン放出に必要なＩＳＳ抗原複合体濃度
の比（後述するように、これらの比は通常の場合、４０％のヒスタミン放出率で
算出されるが、これに限定されるものではない）； （ｇ） (ii)抗原により引き出されたＴｈ１関連抗体とＴｈ２関連抗体との和
に対する、(i)ＩＳＳ抗原複合体により引き出されたＴｈ１関連抗体とＴｈ２関
連抗体との和の比； （ｈ） (ii)ＩＳＳ抗原複合体により引き出されたＴｈ２関連抗体に対する、
(i)ＩＳＳ抗原複合体により引き出されたＴｈ１関連抗体の比； （ｉ） 抗原単独の場合と比較して異なるサイトカイン産出プロフィル （ｊ） 「本発明の実施の形態」において上述したような、抗原特異的抗体産
出を抑制する程度。
【００６１】 本明細書中に記載したこれらのクラスおよび実施例の全ては、上に挙げた特性
の１つ、２つ以上、または組み合わせによって説明し規定することができる。従
って本発明は、複合分子集団を提供し、該複合分子は、抗原と、免疫刺激配列（
ＩＳＳ）を含んで成る１つまたは複数のポリヌクレオチドとを含んで成り、前記
集団は、ここに記載した特性のうちの１つまたは複数を、単独または組み合わせ
て有している。（比を含む）特性は、本明細書中に記載した標準的な技術を使用
して測定されてよく、これらの特性がいずれも、脊椎動物や哺乳動物、例えばマ
ウスおよび／またはヒトのようなｉｎ ｖｉｖｏ系を含む種々の系において測定
されてよいことは明らかである。
【００６２】 上述の内容に従って、例えば、Ａｍｂ ａ １とＩＳＳ含有２２−ｍｅｒポリ
ヌクレオチド（５’−ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴＧＡ−３’，
ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ；１）との複合体に関連する観察に基づいて、「Ｈ」クラス
は以下の特性のいずれか単独で、またはいずれかの組み合わせで規定される： （ａ） １抗原分子当たり、最小５．５個、より好ましくは６個の平均ＩＳＳ
含有ポリヌクレオチド； （ｂ） (i)ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの平均質量と、(ii)抗原の平均質量
との比が、(i)約３５あるいは最小約３５：(ii)約４０、(i)約４０あるいは最小
約４０：(ii)約４０、または、(i)約４５あるいは最小約４５：(ii)約４０であ
る； （ｃ） (ii)抗原に対する抗原特異的抗体の結合を５０％阻害するのに必要な
抗原濃度に対する、(i)抗原に対する抗原特異的抗体の結合を５０％阻害するの
に必要なＩＳＳ抗原複合体濃度の比が約３．５〜約６．０以上（例えば７．０，
８．０，９．０，１０，０，１５，２０，２５，３０，３５，４０，４５，５０
またはこれ以上であるが、これらに限定されるものではない）であるか、あるい
は、最小でほぼ以下の数値のいずれかである：３．５，４．０，４．５，５．０
，５．５，６．０，６．５，７．０，８．０，９．０，１０，１５，２０，２５
（範囲として表現するならば、上限は前記数値のいずれかであってよい）； （ｄ） 抗原がアレルゲンである実施例に関して、(ii)抗原感作された個体か
らの好塩基球からの４０％のヒスタミン放出に必要な抗原濃度に対する、(i)抗
原感作された個体からの好塩基球からの４０％のヒスタミン放出に必要なＩＳＳ
抗原複合体濃度の比が、約３００を上回り、好ましくは約５００を上回り、好ま
しくは約７５０を上回り、より好ましくは約１０００を上回り、より好ましくは
約１２５０を上回り、より好ましくは約１４００を上回り、より好ましくは約１
５００を上回る（例えば７５０，１０００，１２５０，１５００，１７５０，２
０００，２２５０，２５００，２７５０，３０００，３５００，４０００，４５
００，５０００，５５００，６０００を含むいずれかの数値が上限である）； （ｅ） (ii)（投与された抗原の単位質量で見た場合の）抗原によって引き出
されたＴｈ１およびＴｈ２関連総抗体に対する、(i)（投与された複合体の１単
位質量当たりで引き出された抗体で見た場合の）ＩＳＳ抗原複合体によって引き
出されたＴｈ１およびＴｈ２関連総抗体の力価比は、ほぼ以下のいずれかの数値
であるか、あるいはほぼ以下のいずれかの数値未満である：１０，７，５，４，
３．５，３．０；２．５，２．０，１．５，１．０，０．７５，０．５，０．４
，０．３，０．２，０．１。
【００６３】 （ｆ） (ii)（投与された複合体量と比較して１０倍の、投与された抗原の単
位質量で見た場合の）抗原によって引き出されたＴｈ１およびＴｈ２関連総抗体
に対する、(i)（投与された複合体の１単位質量当たりで引き出された抗体で見
た場合の）ＩＳＳ抗原複合体によって引き出されたＴｈ１およびＴｈ２関連総抗
体の力価比は、ほぼ以下のいずれかの数値であるか、あるいはほぼ以下のいずれ
かの数値未満である：１．０，０．７，０．６，０．５，０．４，０．３５；０
．３；０．２５，０．２，０．１５，０．１１，０．０７５，０．０５，０．０
４，０．０３，０．０２，０．０１； （ｇ） (ii)（投与された複合体量と比較して、投与された抗原の単位質量で
見た場合の）抗原によって引き出されたＴｈ１関連抗体の力価に対する、(i)（
投与された複合体の１単位質量当たりで引き出された抗体で見た場合の）ＩＳＳ
抗原複合体によって引き出されたＴｈ１関連抗体の力価の比は、ほぼ以下のいず
れかの数値であるか、あるいはほぼ以下のいずれかの数値未満である：６０，５
５，５０，４５，４０，３５，３０，２５，２０，１５，１０，５； （ｈ） (ii)ＩＳＳ抗原複合体により引き出されたＴｈ２関連抗体の力価に対
する、(i)（投与された複合体の１単位質量当たりで引き出された抗体で見た場
合の）ＩＳＳ抗原複合体により引き出されたＴｈ１関連抗体の力価の比は、ほぼ
以下のいずれかの数値であるか、あるいはほぼ以下のいずれかの数値を上回る：
４．０，４．５，５．０，５．５，６．０，６．５，７．０，７．５，８．０，
８．５，９．０，９．５，１０。範囲として表現するならば、上限は前記数値を
含むあらゆる数値であってよく、１５，２０，２５，３０，４０，５０，６０，
７５，８０，９０，１００のような他の数値であってもよい。
【００６４】 （ｉ） 同量のリンクされていないＩＳＳ含有ポリヌクレオチドおよび抗原を
投与した場合と比較して、または、同量の抗原を単独で投与した場合と比較して
、（Ｔｈ１関連抗体および／またはＴｈ２関連抗体の産出を含む）抗原特異的抗
体の産出が抑制される。
【００６５】 「Ｍ」クラスは以下の特性のいずれか単独で、またはいずれかの組み合わせで
規定される： （ａ） １抗原分子当たり、約３個〜約５個の平均ＩＳＳ含有ポリヌクレオチ
ド； （ｂ） (i)ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの平均質量と、(ii)抗原の平均質量
との比が、(i)約２０：(ii)約４０、(i)約２５：(ii)約４０、または、(i)約３
０：(ii)約４０である； （ｃ） (ii)抗原に対する抗原特異的抗体の結合を５０％阻害するのに必要な
抗原濃度に対する、(i)抗原に対する抗原特異的抗体の結合を５０％阻害するの
に必要なＩＳＳ抗原複合体濃度の比が約２．５〜約３．０であるか、あるいは、
約３．２５である； （ｄ） 抗原がアレルゲンである実施例に関して、(ii)抗原感作された個体か
らの好塩基球からの４０％のヒスタミン放出に必要な抗原濃度に対する、(i)抗
原感作された個体からの好塩基球からの４０％のヒスタミン放出に必要なＩＳＳ
抗原複合体濃度の比が、約１００〜約２００、あるいは約１００、あるいは約７
５〜約２５０である； （ｅ） (ii)（投与された抗原の単位質量で見た場合の）抗原によって引き出
されたＴｈ１およびＴｈ２関連総抗体に対する、(i)（投与された複合体の１単
位質量当たりで引き出された抗体で見た場合の）ＩＳＳ抗原複合体によって引き
出されたＴｈ１およびＴｈ２関連総抗体の力価比は、約１３、あるいは約１０〜
１００または約１２〜約１００（または或る実施例では約１２〜約５０）である
； （ｆ） (ii)（投与された複合体量と比較して１０倍の、投与された抗原の単
位質量で見た場合の）抗原によって引き出されたＴｈ１およびＴｈ２関連総抗体
に対する、(i)（投与された複合体の１単位質量当たりで引き出された抗体で見
た場合の）ＩＳＳ抗原複合体によって引き出されたＴｈ１およびＴｈ２関連総抗
体の力価比は、約１．３、あるいは約１．０〜約１０または約１．２０〜約１０
（または或る実施例では約１．２〜約５．０）である； （ｇ） (ii)（投与された複合体量と比較して、投与された抗原の単位質量で
見た場合の）抗原によって引き出されたＴｈ１関連抗体の力価に対する、(i)（
投与された複合体の１単位質量当たりで引き出された抗体で見た場合の）ＩＳＳ
抗原複合体によって引き出されたＴｈ１関連抗体の力価の比は、約７０〜約５０
０である； （ｈ） (ii)ＩＳＳ抗原複合体により引き出されたＴｈ２関連抗体の力価に対
する、(i)（投与された複合体の１単位質量当たりで引き出された抗体で見た場
合の）ＩＳＳ抗原複合体により引き出されたＴｈ１関連抗体の力価の比は、約２
〜約４である。
【００６６】 「Ｌ」クラスは以下の特性のいずれか単独で、またはいずれかの組み合わせで
規定される： （ａ） １抗原分子当たり、約３個未満の平均ＩＳＳ含有ポリヌクレオチド； （ｂ） (i)ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドの平均質量と、(ii)抗原の平均質量
との比が、(i)約１５：(ii)約４０、あるいは(i)約１５未満：(ii)約４０（或る
実施例では、(i)約１０：(ii)約４０あるいは(i)約１０未満：(ii)約４０である
； （ｃ） (ii)抗原に対する抗原特異的抗体の結合を５０％阻害するのに必要な
抗原濃度に対する、(i)抗原に対する抗原特異的抗体の結合を５０％阻害するの
に必要なＩＳＳ抗原複合体濃度の比が約２未満であるか、あるいは、約２．０で
ある； （ｄ） 抗原がアレルゲンである実施例に関して、(ii)抗原感作された個体か
らの好塩基球からの４０％のヒスタミン放出に必要な抗原濃度に対する、(i)抗
原感作された個体からの好塩基球からの４０％のヒスタミン放出に必要なＩＳＳ
抗原複合体濃度の比が、約７５未満、あるいは約７５（他の実施例では約６０未
満あるいは約６０）〜約２００、あるいは約７５（他の実施例では約６０未満あ
るいは約６０）〜約１００である； （ｅ） (ii)（投与された抗原の単位質量で見た場合の）抗原によって引き出
されたＴｈ１およびＴｈ２関連総抗体に対する、(i)（投与された複合体の１単
位質量当たりで引き出された抗体で見た場合の）ＩＳＳ抗原複合体によって引き
出されたＴｈ１およびＴｈ２関連総抗体の力価比は、約１５０、あるいはほぼ以
下のいずれかの数値を上回る：１００，１５０，２００，２５０，３００，３５
０，４００，４５０，５００，５５０，６６０，６５０，７００，７５０，８０
０。範囲として表現するならば、上限は前記数値を含むあらゆる数値であってよ
い。
【００６７】 （ｆ） (ii)（投与された複合体量と比較して１０倍の、投与された抗原の単
位質量で見た場合の）抗原によって引き出されたＴｈ１およびＴｈ２関連総抗体
に対する、(i)（投与された複合体の１単位質量当たりで引き出された抗体で見
た場合の）ＩＳＳ抗原複合体によって引き出されたＴｈ１およびＴｈ２関連総抗
体の力価比は、ほぼ以下のいずれかの数値であるか、あるいはほぼ以下のいずれ
かの数値を上回る：１０，１２，１５，２０，２５，３０，３５，４０，４５，
５０，５５，６０，６５，７０，７５，８０； （ｇ） (ii)抗原によって引き出されたＴｈ１関連抗体の力価に対する、(i)
（投与された複合体の１単位質量当たりで引き出された抗体で見た場合の）ＩＳ
Ｓ抗原複合体によって引き出されたＴｈ１関連抗体の力価の比は、約５００以上
、例えば約５００以上、約６００以上、約７００以上、約８００以上、約９００
以上、約１０００以上である。範囲として表現するならば、上限は、例えば６０
０，７００，８００，９００，１０００，１２５０，１５００，１７５０，２０
００，２５００，３０００，３５００，４０００，４５００，５０００を含むあ
らゆる数であってよい。
【００６８】 （ｈ） (ii)ＩＳＳ抗原複合体により引き出されたＴｈ２関連抗体の力価に対
する、(i)（投与された複合体の１単位質量当たりで引き出された抗体で見た場
合の）ＩＳＳ抗原複合体により引き出されたＴｈ１関連抗体の力価の比は、ほぼ
以下のいずれかの数値であるか、あるいはほぼ以下のいずれかの数値未満である
：２．０，１．５，１．２５。
【００６９】 本明細書中の説明から明らかなように、多数の複合体集団のうちのいずれかを
産出することができ、「Ｌ」、「Ｍ」および「Ｈ」の分類は、複合体集団のクラ
スの一例に過ぎない。複合程度を変化させ、制御する能力、ひいては免疫応答の
調節型を制御する能力は、上述の例示集団に加えて他の集団にまで及ぶ。測定可
能な構造的かつ機能的な特性が判っているなら、多数の集団のうちのいずれかを
生成することは、当業者であれば十分可能である。従って、本発明はまた、以下
の事項のうちのいずれか（単独または組み合わせで）によって特徴付けられる複
合体集団をも含む： （ａ） (ii)抗原に対する抗原特異的抗体の結合を５０％阻害するのに必要な
抗原濃度に対する、(i)抗原に対する抗原特異的抗体の結合を５０％阻害するの
に必要なＩＳＳ抗原複合体濃度の比が約１．５，２．０，２．２５，３．０，３
．２５，３．５，３．７５，４．０，４．２５，４．５０，４．７５，５．０，
５．２５，５．５，５．７５，６．０，６．５，７．０，７．５，８．０，８．
５，９．０，９．５，１０．０のいずれかを上回る。範囲として表現するならば
、上限は前記数値を含むいずれの数値であってもよい（例えば複合体集団は、約
２．０を上回ってよく、約２．０超〜約５．５未満であってよく、また、約２．
０超〜２０．０未満であってよい）。
【００７０】 （ｂ） (ii)抗原に対する抗原特異的抗体の結合を５０％阻害するのに必要な
抗原濃度に対する、(i)抗原に対する抗原特異的抗体の結合を５０％阻害するの
に必要なＩＳＳ抗原複合体濃度の比が約１．５，２．０，２．２５，３．０，３
．２５，３．５，３．７５，４．０，４．２５，４．５０，４．７５，５．０，
５．２５，５．５，５．７５，６．０，６．５，７．０，７．５，８．０，８．
５，９．０，９．５，１０．０のいずれかを下回る。範囲として表現するならば
、下限は上述のいずれかの数値ならびにゼロであってよい（例えば複合体集団は
、約５．０未満でよく、あるいは約５．０未満かつ２．０超であってよい）。
【００７１】 （ｃ） 抗原がアレルゲンである場合、(ii)抗原感作された個体からの好塩基
球からの４０％のヒスタミン放出に必要な抗原濃度に対する、(i)抗原感作され
た個体からの好塩基球からの４０％のヒスタミン放出に必要なＩＳＳ抗原複合体
濃度の比が、最小でほぼ以下の数値のいずれかである：２，５，１０，１５，２
０，２５，３０，３５，４０，４５，５０，６０，７５，８０，９０，９５，１
００，１２０，１３０，１４０，１５０，１７５，２００，２２５，２５０，２
７５，３００，３５０，４００，４５０，５００，５５０，６００，６５０，７
００，７５０，８００，８５０，９００，９５０，１０００，１１００，１２０
０，１５００，１７５０，２０００，２２５０，２５００，２７５０，３０００
，３２５０，３７５０，４０００，４２５０，４５００，４７５０，５０００。
範囲として表現するならば、上限は、上述の数値を含むいずれの数値であっても
よい。あるいは、この比は以下のほぼいずれかの数値を下回っていてよい：２，
５，１０，１５，２０，２５，３０，３５，４０，４５，５０，６０，７５，８
０，９０，９５，１００，１２０，１３０，１４０，１５０，１７５，２００，
２２５，２５０，２７５，３００，３５０，４００，４５０，５００，５５０，
６００，６５０，７００，７５０，８００，８５０，９００，９５０，１０００
，１１００，１２００，１５００，１７５０，２０００，２２５０，２５００，
２７５０，３０００，３２５０，３７５０，４０００，４２５０，４５００，４
７５０，５０００。範囲として表現するならば、下限は上述のいずれかの数値な
らびにゼロであってよい。
【００７２】 （ｄ）抗体の１単位質量当たりで引き出された抗体力価（より具体的には、Ｔ
ｈ１およびＴｈ２関連ＩｇＧ力価の和のようなＩｇＧ力価）に対する、ＩＳＳ抗
原複合体の１単位質量あたりで引き出された抗体力価（より具体的には、Ｔｈ１
およびＴｈ２関連ＩｇＧ力価の和のようなＩｇＧ力価）の比が、以下のほぼいず
れかの数値を少なくとも上回る：０．１，０．２，０．３，０．４，０．５，０
．７５，１，１．５，２，２．５，３，４，５，６，７，８，９，１０，１５，
２５，５０，７５，１００，１２５，１５０，１７５，２００，２５０，３００
，３５０，４００，４５０，５００，５５０，６００，６５０，７００，７５０
，８００，８５０，９００，１０００，１２５０，１５００，２０００，２２５
０，２５００，２７５０，３０００。範囲として表現するならば、下限はゼロま
たは上述の数値のいずれかであってよい。あるいは、この比は、以下のほぼいず
れかの数値を下回ってよい：０．１，０．２，０．３，０．４，０．５，０．７
５，１，１．５，２，２．５，３，４，５，６，７，８，９，１０，１５，２５
，５０，７５，１００，１２５，１５０，１７５，２００，２５０，３００，３
５０，４００，４５０，５００，５５０，６００，６５０，７００，７５０，８
００，８５０，９００，１０００，１２５０，１５００，２０００，２２５０，
２５００，２７５０，３０００。範囲として表現するならば、下限はゼロまたは
上述の数値のいずれかであってよい。
【００７３】 （ｅ） 複合体（１単位質量当たり）によって引き出されたＴｈ２関連抗体に
対する、複合体によって引き出されたＴｈ１関連抗体の比は、以下のほぼいずれ
かの数値を下回る：２０，１５，１２，１０，７，５，４．５，４．２５，４．
０，３．７５，３．５，３．２５，３．０，２．５，２．０，１．５，１．２５
，１．０，０．５。範囲として表現するならば、下限はゼロを含む上述の数値の
いずれかであってよい。あるいは、この比は以下のいずれかの数値を上回ってい
てよい：０．５，０．７５，１．０，１．２５，１．５，２．０，２．５，３．
０，３．２５，３．５，４．０，４．５，５．０。範囲として表現するならば、
上限は上述の数値のいずれかであってよい。
【００７４】 （ｆ） 抗原（１単位質量当たり）によって引き出されたＴｈ１関連抗体力価
に対する、複合体によって引き出されたＴｈ１関連抗体力価の比は、以下のほぼ
いずれかの数値を下回る：５０００，４５００，４０００，３５００，３０００
，２５００，２０００，１５００，１０００，９００，８００，７００，６００
，５００，４００，３００，２００，１５０，１００，５０，７５，６０，５０
，４０，４５，３０，３５，２５，２０，１４，１０，５。範囲として表現する
ならば、下限はゼロまたは上述の数値のいずれかであってよい。あるいは、この
比は以下のいずれかの数値を上回っていてよい：１０，２０，５０，６０，７５
，１００，１５０，２００，２５０，３００，３５０，４００，４５０，５００
，７５０，８００，１０００，１２５０，１５００，１７５０，２０００，２２
５０，２５００，３０００，３５００，４０００，４５００，５０００。範囲と
して表現するならば、上限は上述の数値のいずれかであってよい。
【００７５】 複合の程度は多数の方法で制御することができる。これらの方法の全ては、本
明細書中にも記載した、当業者に良く知られた化学的技術を用いる。複合程度を
制御する１つの方法は、抗原におけるリンケージ部位に関連してＩＳＳの当量を
変えることである。すなわち、リンケージ部位の一定量または一定数が、ＩＳＳ
の特定量と反応させられる。例えばマレイミド活性化Ａｍｂ ａ １に基づく、
ここに例示するＩＳＳ−Ａｍｂ ａ Ｉ複合体に関しては、５’チオＩＳＳ４モ
ル当量、５’チオＩＳＳ７モル当量、および５’チオＩＳＳ１７モル当量と、Ａ
ｍｂ ａ １１モル当量との反応が、それぞれ「Ｌ」、「Ｍ」および「Ｈ」集団
を生ぜしめた。複合程度を制御する別の方法は、ＩＳＳとの反応を飽和させ、抗
原における有効リンケージ部位量を変化させることである。リンケージ部位は、
例えば、所望の数のリンケージ部位を与えたいくらかのリンケージ分を選択する
（例えばアミノ基を介してではなく、炭水化物を介してリンクすることを選択す
る）ことによって制御でき、あるいは、所望の平均数のリンケージ部位が活性化
されるようにリンケージ活性化反応を制御することによって制御できる。
【００７６】 一般的に云って、所与の抗原は、抗原ＩＳＳリンケージの性質に応じて、最大
数の潜在的リンケージ部位を有している。複合程度は、ＩＳＳをリンクするのに
使用されるこのようなリンケージ部位の数によって制御することができる。従っ
て本発明は、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドに付着されたリンケージ部位の総数の
平均百分率が、最小で以下の数値のほぼいずれか：５％，１０％，２０％，３０
％，３３％，４０％，４５％，５０％，５５％，６０％，６５％，７０％，７５
％，８０％，８２％，８５％，８８％，９０％，９２％，９５％，９７％，９８
％であるような実施例をも含む。あるいは、本発明は、ＩＳＳ含有ポリヌクレオ
チドに付着されたリンケージ部位の総数の平均百分率が、以下のほぼいずれかの
数値：１０％，２０％，３０％，３３％，４０％，４５％，５０％，５５％，６
０％，６５％，７０％，７５％，８０％，８２％，８５％，８８％，９０％，９
２％，９５％，９７％，９８％を下回るような実施例をも含む。リンケージ部位
総数は、付着形態によって突き止められる。例えば抗原が（リシンにおけるよう
な）遊離アミノ基を介してＩＳＳ含有ポリヌクレオチドにリンクされている場合
、リンケージ部位総数はリシンの数である。抗原が、スフルヒドリル基を介して
（例えばシステインを介して）リンクされている場合、リンケージ部位総数はス
フルヒドリル基の総数である。抗原が炭水化物分を介してリンクされている場合
、リンケージ部位の総数は炭水化物分の総数である。これらの実施例のいずれに
関しても、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドに付着されたリンケージ部位の平均百分
率は、上述の免疫調節特性のいずれかによって単独または組み合わせで達成する
ことができる。
【００７７】 ＩＳＳ抗原複合体クラスの特徴付け 本発明の複合集団は、上述のものを含む多数の方法のいずれかによって識別し
、かつ／または特徴付けることができる。例えば構造の点から見ると、複合程度
は以下のものによって説明することができる：抗原分子に対するＩＳＳの平均数
、あるいは中位数；（ｂ）抗原中の総リンケージ部位に対するＩＳＳの比；（ｃ
）抗原の（平均であれ中位であれ）質量に対する、ＩＳＳの（平均であれ中位で
あれ）質量の比；（ｄ）抗原中のＴ細胞エピトープに対するＩＳＳの比；（ｅ）
抗原中のＢ細胞エピトープに対するＩＳＳの比。一例として免疫調節を含む機能
の点から見ると、本発明の複合体集団は、（ａ）抗原特異的抗体応答度、例えば
ＩｇＧ応答度；（ｂ）Ｔｈ２関連抗体に対するＴｈ１関連抗体の比；（ｃ）ヒス
タミン放出の抑制度；（ｄ）抗原に結合するための抗原特異的抗体との競合度；
（ｅ）Ｔｈ２関連免疫応答の抑制度；（ｆ）インターフェロンのようなＴｈ１関
連サイトカインの分泌；（ｇ）ＩＬ−４および／またはＩＬ−５のようなＴｈ２
関連サイトカインの分泌。
【００７８】 構造的特徴付け ＩＳＳ抗原複合の程度は、当業者に良く知られたあらゆる数のタンパク質・核
酸測定法を使用して、突き止めることができる。例えば、複合の反応生成物を分
析するのには、抗原および／またはタンパク質特異的検出法（例えば抗原特異的
抗体および／またはクーマシー・ブルー染色）および核酸特異的検出法（例えば
検出可能に標識付けされたＤＮＡプローブとのハイブリッド形成）が用いられて
よい。適切な定量基準を用いれば、抗体に対するポリヌクレオチド量が突き止め
られる。
【００７９】 ポリペプチドに結合されたオリゴヌクレオチド量は、複合体のサイズまたは分
子量を測定することによって突き止めることもできる。複合体のサイズは、一例
としてドデシル硫酸ナトリウム・ポリアクリルアミド電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧ
Ｅ）分析およびゲルろ過クロマトグラフィ（ＳＥＣ）とを含む、当業者には良く
知られた方法を使用して突き止めることができる。
【００８０】 ＩＳＳ抗原複合体複合体は、サイズ測定および／または分離法と、核酸および
タンパク質検出法とを組み合わせて分析することができる。例えば、ＳＥＣを用
いて複合体反応生成物を分画した後、それぞれの画分のタンパク質および核酸含
量を、それぞれ２８０ｎｍおよび２６０ｎｍの画分吸収度によって突き止めるこ
とができる。こうして、複合体と、核酸およびタンパク質との両サイズ検出分析
の結果を、複合体の構造の特徴付けと組み合わせることができる。それぞれの複
合体画分中のタンパク質の量に対するポリヌクレオチドの量の比は、１抗原分子
当たりのＩＳＳ分子の平均数を示す。
【００８１】 機能的特徴付け ＩＳＳ抗原複合体の投与に応答して発生した抗体の抗原特異性、抗体クラスお
よび／またはサブクラスを突き止めるために、当業者に知られた種々の方法を用
いることができる。例えば、種々のＩＳＳ抗原複合体に応答して産出された抗体
の量、特異性および／または型を検出して測定するのに、標準的なＥＬＩＳＡフ
ォーマット検定が用いられてよい。この検定では、例えば、抗原が基質に付着さ
れ、ＩＳＳ抗原複合体から採取された血清とともに保温される。次いで、基質結
合抗原に付着された抗原特異的抗体の量が、抗体特異的試薬、例えばＩｇＧａ１
、ＩｇＧａ２、ＩｇＧａ３、ＩｇＧａ４などに特異的な抗体を用いて突き止めら
れる。抗原に対する抗原特異的抗体の結合を阻害するのに必要なＩＳＳ抗原複合
体の濃度を突き止めるのに、当業者によく知られた方法、例えば本明細書中に記
載したような競合的ＥＬＩＳＡ検定が用いられてよい。
【００８２】 ＩＳＳ抗原複合体に応答する、抗原感作された個体からの好塩基球からのヒス
タミン放出量を測定するのに、当業者に良く知られた方法を用いることができる
。例えば本明細書中に説明するように、アレルギー性抗体の血液から採取した白
血球を、ＩＳＳ抗原複合体の濃度および／または調製を変化させながら処理した
後、細胞培養液上澄み中に放出されたヒスタミン量を検出することができる。
【００８３】 ＩＳＳ抗原複合体の投与に応答して発生させられたサイトカイン産出プロフィ
ルを突き止めるのに、当業者に良く知られた方法を用いることができる。例えば
、ｉｎ ｖｉｔｒｏでＩＳＳ複合体で処理された細胞の上澄みがサイトカインの
存在に関連して分析される。ＩＳＳ抗原複合体に暴露されたリンパ球によって産
出されたサイトカインの型および量は、標準的なＥＬＩＳＡフォーマット検定を
用いて測定されてよい。ＩＳＳ抗原複合体に応答して産出されたサイトカインプ
ロフィルは、標準的なサイトカイン・バイオアッセイを用いて突き止めることも
できる。このバイオアッセイは、細胞生存が特定サイトカイン（例えばＩＬ−２
）の存在に依存するアッセイ、および、特定サイトカイン（例えばインターフェ
ロン）がウィルス複製を阻害するアッセイを含むが、これらに限定されるもので
はない。
【００８４】 複合体投与後の、または抗原単独投与と比較した抗原特異的抗体の抑制程度に
よって、複合体のクラスを特徴付けることができる。
【００８５】 抗体応答、好ましくは抗原特異的抗体応答、特にＩｇＧ応答の程度によって、
複合体のクラスを特徴付けることもできる。上述のように、(ii)抗原単独に応答
して産出されたＩｇＧ抗体に対する(i)複合体に応答して産出されたＩｇＧ抗体
の比によってクラスを特徴付けることができる。このような特徴付けおよび実施
例に関しては、その比は （ｉ） (ii)抗原によって引き出されたＴｈ１関連抗体およびＴ２関連抗体の
和に対する、(i)ＩＳＳ抗原複合体によって引き出されたＴｈ１関連抗体および
Ｔ２関連抗体の和； （ｉｉ） (ii)抗原によって引き出されたＴｈ１関連抗体に対する、(i)ＩＳ
Ｓ抗原複合体によって引き出された（１つまたは複数の）Ｔｈ１関連抗体； （ｉｉｉ） (ii)抗原によって引き出されたＴｈ２関連抗体に対する、(i)Ｉ
ＳＳ抗原複合体によって引き出された（１つまたは複数の）Ｔｈ２関連抗体 であってよい。
【００８６】 Ｔｈ１関連抗体は、Ｔｈ１応答と関連する抗体である。マウスにおいては例え
ば、ＩｇＧ２ａがＴｈ１応答と関連する。人においては、ＩｇＧ１および／また
はＩｇＧ３抗体が、Ｔｈ１応答と関連すると考えられる。例えばWidhe他(1998)
Scand. J. Immunol. 47:575-581およびde Martino他(1999) Ann. Allergy Asthm
a Immunol. 83:160-164を参照されたい。同様に、Ｔｈ２関連抗体は、Ｔｈ２応
答と関連する抗体である。マウスにおいては、ＩｇＧ１がＴｈ２応答と関連する
。人においては、ＩｇＧ２および／またはＩｇＧ４抗体が、Ｔｈ２応答と関連す
ると考えられる（Widhe他(1998)およびde Martino他(1999)）。ヒトおよびマウ
ス双方において、ＩｇＥがＴｈ２応答と関連する。このような特徴付けおよび実
施例に関して、同一の抗体または抗体産出レベルを、抗原だけで引き出される場
合と比較すれば、抗体の１つまたは複数の型を評価できることが明らかである。
【００８７】 このような比を算出するための１つの方法は、抗原の１単位質量当たり産出さ
れた（１つまたは複数の）当該抗体の量に対して、複合体の１単位質量当たり産
出された（１つまたは複数の）同一抗体の量を見ることである。複合体の単位質
量は、複合体の抗原成分の質量、複合体のポリヌクレオチド成分の質量および／
または複合体の質量で見てよい。複合体が総分子量１００を有していて、抗原成
分が８０を占め、ＩＳＳ成分が２０を占めるとすると、抗体産出レベルを産出し
比較することを目的として、単位質量は１００，８０または２０のうちのいずれ
かであってよい。実施例は、複合体（Ａｍｂ ａ １）の抗原成分の質量が、抗
体産出レベルを算出して抗原単独の場合と比較するためのベースとして役立つよ
うな算出法を提供する。
【００８８】 さらに、複合体によって産出された抗体と、抗原によって産出された抗体との
比を算出する上で、複合体質量と抗原質量とは、１：１であってもなくてもよい
。例えばいくつかの実施例では、複合体単位質量によって産出された抗体が、２
，３，４，５，６，７，８，１０，１５，２０，２５，３０または４０倍の抗原
質量によって産出された抗体と比較される。例えば、Ａｍｂ ａ １の場合、複
合体１μｇ（抗原量によって測定；従って複合体中の抗原が１μｇ）によって産
出された抗体が、１０μｇのＡｍｂ ａ １によって産出された抗体と比較され
る。
【００８９】 ＩＳＳ 本発明によれば、免疫調節ポリヌクレオチドは少なくとも１つのＩＳＳを含有
しており、複数のＩＳＳを含有することができる。これらのＩＳＳはポリヌクレ
オチド中で隣接することができ、または、ポリヌクレオチド中で付加的なヌクレ
オチド塩基によって隔離することもできる。
【００９０】 ＩＳＳは、この分野において説明されてきており、免疫応答の種々の様相、例
えばサイトカイン分泌、抗体産出、ＮＫ細胞活性化およびＴ細胞増殖を示す標準
的な検定を用いて、容易に識別することができる。例えば国際公開第９７／２８
２５９号；同第９８／１６２４７号；同第９９／１１２７５号、の各パンフレッ
ト；Krieg他(1995) Nature 374:546-549;Yamamoto他(1992a);Ballas他(1996);Kl
inman他(1997);Sato他(1996);Pisetsky(1996a);Shimada他(1986)Jpn. J. Cancer
Res. 77:808-816;Cowdery他(1996) J. Immunol. 156:4570-4575;Roman他(1997)
;およびLipford他(1997a)を参照されたい。
【００９１】 ＩＳＳは、６つを上回る長さの塩基または塩基対を有していてよく、概ね配列
５’−シトシン，グアニン−３’から成り、より具体的には配列５’−プリン，
プリン，Ｃ，Ｇ，ピリミジン，ピリミジン−３’（例えば５’−ＡＡＣＧＴＴ−
３’）から成り、好ましくは１５個を上回る長さの塩基または塩基対、より好ま
しくは２０個を上回る長さの塩基または塩基対から成る。ＩＳＳはまた、配列５
’−プリン，プリン，Ｃ，Ｇ，ピリミジン，ピリミジン，Ｃ，Ｃ−３’から成る
。下記のポリヌクレオチド配列に示すように、ＩＳＳは配列５’−Ｔ，Ｃ，Ｇ−
３’から成ってもよい。
【００９２】 いくつかの実施例の場合、ＩＳＳは、以下の配列のいずれかから成ってよい： ＧＡＣＧＣＴＣＣ；ＧＡＣＧＴＣＣＣ；ＧＡＣＧＴＴＣＣ；ＧＡＣＧＣＣＣＣ； ＡＧＣＧＴＴＣＣ；ＡＧＣＧＣＴＣＣ；ＡＧＣＧＴＣＣＣ；ＡＧＣＧＣＣＣＣ； ＡＡＣＧＴＣＣＣ；ＡＡＣＧＣＣＣＣ；ＡＡＣＧＴＴＣＣ；ＡＡＣＧＣＴＣＣ； ＧＧＣＧＴＴＣＣ；ＧＧＣＧＣＴＣＣ；ＧＧＣＧＴＣＣＣ；ＧＧＣＧＣＣＣＣ； ＧＡＣＧＣＴＣＧ；ＧＡＣＧＴＣＣＧ；ＧＡＣＧＣＣＣＧ；ＧＡＣＧＴＴＣＧ； ＡＧＣＧＣＴＣＧ；ＡＧＣＧＴＴＣＧ；ＡＧＣＧＴＣＣＧ；ＡＧＣＧＣＣＣＧ； ＡＡＣＧＴＣＣＧ；ＡＡＣＧＣＣＣＧ；ＡＡＣＧＴＴＣＧ；ＡＡＣＧＣＴＣＧ； ＧＧＣＧＴＴＣＧ；ＧＧＣＧＣＴＣＧ；ＧＧＣＧＴＣＣＧ；ＧＧＣＧＣＣＣＧ。
【００９３】 いくつかの実施例の場合、ＩＳＳは、以下の配列のいずれかから成ってよい： ＧＡＣＧＣＴ；ＧＡＣＧＴＣ；ＧＡＣＧＴＴ；ＧＡＣＧＣＣ；ＧＡＣＧＣＵ； ＧＡＣＧＵＣ；ＧＡＣＧＵＵ；ＧＡＣＧＵＴ；ＧＡＣＧＴＵ；ＡＧＣＧＴＴ； ＡＧＣＧＣＴ；ＡＧＣＧＴＣ；ＡＧＣＧＣＣ；ＡＧＣＧＵＵ；ＡＧＣＧＣＵ； ＡＧＣＧＵＣ；ＡＧＣＧＵＴ；ＡＧＣＧＴＵ；ＡＡＣＧＴＣ；ＡＡＣＧＣＣ； ＡＡＣＧＴＴ；ＡＡＣＧＣＴ；ＡＡＣＧＵＣ；ＡＡＣＧＵＵ；ＡＡＣＧＣＵ； ＡＡＣＧＵＴ；ＡＡＣＧＴＵ；ＧＧＣＧＴＴ；ＧＧＣＧＣＴ；ＧＧＣＧＴＣ； ＧＧＣＧＣＣ；ＧＧＣＧＵＵ；ＧＧＣＧＣＵ；ＧＧＣＧＵＣ；ＧＧＣＧＵＴ； ＧＧＣＧＴＵ。
【００９４】 いくつかの実施例の場合、免疫調節ポリヌクレオチドは配列５’−ＴＧＡＣＴ
ＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴＧＡ−３’（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１）から成
る。ＩＳＳは以下の配列のいずれかから成る。 ５’−ＴＧＡＣＣＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＧＡＧＡＴＧＡ−３’（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：２）； ５’−ＴＣＡＴＣＴＣＧＡＡＣＧＴＴＣＣＡＣＡＧＴＣＡ−３’（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：３）； ５’−ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＣＡＧＡＴＧＡ−３’（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：４）； ５’−ＴＣＣＡＴＡＡＣＧＴＴＣＧＣＣＴＡＡＣＧＴＴＣＧＴＣ−３’（ＳＥＱ
ＩＤ ＮＯ：５）； ５’−ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡＢＧＴＴＣＣＡＧＡＴＧＡ−３’（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：６）、Ｂは５−ブロモシトシン； ５’−ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡＢＧＴＴＣＧＡＧＡＴＧＡ−３’（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：７）、Ｂは５−ブロモシトシン；および ５’−ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡＢＧＴＴＢＧＡＧＡＴＧＡ−３’（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：８）、Ｂは５−ブロモシトシン。
【００９５】 ＩＳＳおよび／またはＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは修飾形を含有していてよ
い。ＩＳＳの修飾形は当業者によく知られているものを含む。その一例としては
、３’ＯＨまたは５’ＯＨ基の修飾形、ヌクレオチド塩基の修飾形、糖成分の修
飾形およびリン酸基の修飾形が挙げられる。このような種々の修飾形を後述する
。
【００９６】 ＩＳＳは一本鎖または二本鎖ＤＮＡ、ならびに、二本鎖ＲＮＡまたは他の修飾
ポリヌクレオチドであってよい。ＩＳＳは１つまたは複数のパリンドローム域を
含んでいてもいなくてもよい。パリンドローム域は、上述の六量体モチーフ内に
存在してよく、またはこのモチーフを越えて延びていてよい。ＩＳＳは、付加的
なフランキング配列を有していてよい。これらの配列のいくつかを本明細書中に
記載する。ＩＳＳは自然発生的な塩基または非自然発生的な修飾塩基を含有して
いてよく、また、修飾された糖、リン酸および／または末端を含有していてよい
。例えばリン酸修飾形は、ホスホン酸メチル、ホスホロチオエート、ホスホルア
ミデート（架橋または非架橋）、ホスホトリエステルおよびホスホロジチオエー
トを含むが、これらに限定されるものではなく、また、これらの組み合わせて用
いることもできる。他の非リン酸リンケージを使用することもできる。本発明の
オリゴヌクレオチドは、ホスホロチオエート・バックボーンから成るのが好まし
い。この分野で良く知られた糖修飾形、例えば２’−アルコキシ−ＲＮＡ類似体
、２’−アミノ−ＲＮＡ類似体、および２’−アミノ−ＲＮＡ類似体および２’
−アルコキシ−またはアミノ−ＲＮＡ／ＤＮＡキメラおよび本明細書中に記載し
た他のものを製造して、リン酸修飾形と組み合わせることもできる。塩基修飾形
の例としては、ＩＳＳのシトシン（例えば５−ブロモシトシン、５−クロロシト
シン、５−フロロシトシン、５−ヨードシトシン）のＣ−５および／またはＣ−
５への電子吸引分を添加することが挙げられる。
【００９７】 ＩＳＳは当業者に良く知られた技術および核酸合成装置を用いて合成すること
ができる。このような技術は、酵素法、化学法、およびより大きなオリゴヌクレ
オチド配列の分解を含むが、これらに限定されるものではない。例えばAusubel
他(1987);およびSambrook他(1989)を参照されたい。酵素的に集合させる場合に
は、個々の単位は例えば、Ｔ４ ＤＮＡまたはＲＮＡリガーゼと連結反応させる
ことができる。米国特許第５，１２４，２４６号明細書を参照されたい。オリゴ
ヌクレオチド分解は、米国特許第４，６５０，６７５号明細書に例示されている
ように、ヌクレアーゼへのオリゴヌクレオチドの暴露により達成することができ
る。
【００９８】 ＩＳＳはコンベンショナルなポリヌクレオチド隔離手順を用いて隔離すること
もできる。このような手順は、共有ヌクレオチド配列を検出するための、ゲノム
またはｃＤＮＡライブラリへのプローブのハイブリッド形成、共有構造要素を検
出するための発現ライブラリの抗体スクリーニング、および、ポリメラーゼ鎖反
応による特定の未処理配列の合成を含むが、これらに限定されるものではない。
【００９９】 環状ＩＳＳは、組換え法によって隔離し、合成することができ、または化学的
に合成することができる。環状ＩＳＳを隔離または組換え法により得る場合には
、ＩＳＳはプラスミドとなることが好ましい。小さな環状オリゴヌクレオチドの
化学合成は、文献に記載された方法を用いて実施することができる。例えば、Ga
o他(1995) Nucleic Acids Res. 23:2025-2029;およびWang他(1994) Nucleic Aci
ds Res. 22:2326-2333を参照されたい。
【０１００】 オリゴヌクレオチドおよび修飾オリゴヌクレオチドを製造するための技術は、
当業者に知られている。リン酸ジエステルリンケージを含有する自然発生ＤＮＡ
またはＲＮＡは概ね、適切なヌクレオシド・ホスホルアミダイトを、３’−末端
で個体支持体に付着された成長オリゴヌクレオチドの５’−ヒドロキシ基に順次
カップリングし、次いで、中間亜リン酸トリエステルを酸化させてリン酸トリエ
ステルにすることにより合成される。所望のオリゴヌクレオチド配列が合成され
ると、オリゴヌクレオチドは支持体から取り出され、リン酸トリエステル基は保
護解除されることによりリン酸ジエステルとなり、ヌクレオシド塩基は、水性ア
ンモニアまたは他の塩基を用いて保護解除される。例えばBeaucage(1993)「オリ
ゴデオキシリボヌクレオチド合成 (Oligodeoxyribonucleotide Synthesis)」（
オリゴヌクレオチドおよび類似体、合成および特性のプロトコル(Protocols for
Oliogonucleotides and Analogs, Synthesis and Properties)）(Agrawal編)Hu
mana Press, Totowa, NJ; Warner(1984) DNA 3:401および米国特許第４，４５８
，０６６号明細書を参照されたい。
【０１０１】 ＩＳＳはリン酸修飾オリゴヌクレオチドを含有することもできる。修飾リン酸
リンケージまたは非リン酸リンケージを含有するポリヌクレオチドの合成も当業
者に良く知られている。概観については、Matteucci(1997) 「オリゴヌクレオチ
ド類似体：概要(Oligonucleotide Analogs: an Overview)」（治療薬としてのオ
リゴヌクレオチド(Oligonucleotides as Therapeutic Agents)）, (D.J. Chadwi
ck and G. Cardew) John Wiley and Sons, New York N.Y.を参照されたい。本発
明のオリゴヌクレオチド中の糖または糖類似分に付着することができるリン酸誘
導体（または修飾リン酸基）は、モノリン酸塩、２リン酸塩、３リン酸塩、ホス
ホン酸アルキル、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなどであってよい
。上述のリン酸類似物の調整、ヌクレオチド、修飾ヌクレオチドおよびオリゴヌ
クレオチド自体への類似物の取り込みも良く知られており、ここにその詳細を記
載する必要はない。Peyrottes他(1996) Nucleic Acids Res. 24:1841-1848; Cha
turvedi他(1996) Nucleic Acids Res. 24:2318-2323;およびSchultz他(1996) Nu
cleic Acids Res. 24:2966-2973。例えばホスホロチオエート・オリゴヌクレオ
チドの合成は、自然発生オリゴヌクレオチドに関する上述の合成と似ている。異
なる点は酸化ステップのかわりにこの場合硫黄処理ステップが生じることである
(Zon(1983)「オリゴヌクレオシド・ホスホロチエート(Oligonucleoside Phospho
rothioates)」(（オリゴヌクレオチドおよび類似体、合成および特性のプロトコ
ル(Protocols for Oliogonucleotides and Analogs, Synthesis and Properties
)）(Agrawal編)Humana Press,第165〜190頁))。同様に、他のリン酸類似物の合
成、例えばリン酸トリエステル（Miller他(1971)JACS 93:6657-6665）、非架橋
ホスホルアミデート（Jager他(1988)Biochem. 27:7247-7246）、Ｎ３’〜Ｐ５’
ホスホルアミデート（Nelson他(1996)JOC 62:7278-7287）およびホスホロジチオ
エート（米国特許第５，４５３，４９６号明細書）も記載されている。他の非リ
ン酸ベースの修飾オリゴヌクレオチドを使用することもできる（Stirchak他(198
9)Nucleic Acids Res. 17:6129-6141）。ホスホロチオエートをバックボーンと
するオリゴヌクレオチドは、リン酸ジエステルをバックボーンとするオリゴヌク
レオチドよりも大きな免疫原性を有することができ、宿主内への注入後、分解に
対して大きな耐性を有すると考えられる。Braun他(1988)J. Immuno. 141:2084-2
089;およびLatimer他(1995)Mol. Immunol. 32:1057-1064。
【０１０２】 本発明で使用するＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは、（唯一または主な糖成分と
してリボースを含有する）リボヌクレオチド、（主要な糖成分としてデオキシリ
ボースを含有する）デオキシリボヌクレオチドから成っていてよい。または当業
者に知られているように、修飾された糖または糖類似体をＩＳＳ中に取り込むこ
ともできる。このように、リボースおよびデオキシリボースに加えて、糖分はペ
ントース、デオキシペントース、ヘキソース、デオキシヘキソース、グルコース
、アラビノース、キシロース、リキソースおよび糖「類似」シクロペンチル基で
あってよい。糖はピラノシル形またはフラノシル形であってよい。ＩＳＳの場合
、糖分は好ましくは、リボース、デオキシリボース、アラビノースまたは２’−
０−アルキルリボースのフラノシドであり、糖はαまたはβアノマー異性体の各
複素環塩基に付着されていてよい。糖修飾形は、２’−アルコキシ−ＲＮＡ類似
体、２’−アミノ−ＲＮＡ類似体および２’−アルコキシ−またはアミノ−ＲＮ
Ａ／ＤＮＡキメラを含むが、これらに限定されるものではない。これらの糖また
は糖類似体、および、このような糖または糖類似体が複素環塩基（核酸塩基）自
体に付着されているそれぞれの「ヌクレオシド」の調製は公知であり、ここで説
明する必要はない。ただし特定例にこのような調整が関わる場合を除く。糖の修
飾形はＩＳＳ調製に際して製造し、リン酸修飾形と組み合わせることもできる。
【０１０３】 ＩＳＳ中に取り込まれた複素環塩基または核酸塩基は、自然発生的な主要プリ
ンおよびピリミジン塩基（つまり上述のように、ウラシル、チミン、シトシン、
アデニンおよびグアニン）であってよく、また、前記主要塩基の自然発生的また
は合成修飾形であってもよい。
【０１０４】 種々の複素環塩基および種々の糖分（および糖類似体）とから成る多数の「合
成」非天然ヌクレオシドがこの分野で利用可能であること、また、本発明の他の
基準を満たす限りは、ＩＳＳが自然発生核酸の５つの主要塩基成分以外の１つま
たは数個の複素環塩基を含んでよいことは、当業者にとっては明らかである。し
かしながら好ましくは、ＩＳＳ中の複素環塩基は、ウラシル−５−イル、シトシ
ン−５−イル、アデニン−７−イル、アデニン−８−イル、グアニン−７−イル
、グアニン−８−イル、４−アミノピロロ［２．３−ｄ］ピリミジン−５−イル
、２−アミノ−４−オキソピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−５−イル、２−ア
ミノ−４−オキソピロロ［２．３−ｄ］ピリミジン−３−イルの基を含むが、こ
れらに限定されるものではない。これらの基では、プリンは９位置を介して、ピ
リミジンは１位置を介して、ピロロピリミジンは７位置を介して、ピラゾロピリ
ミジンは１位置を介して、ＩＳＳの糖分に付着される。
【０１０５】 ＩＳＳは、例えば共通に所有される米国特許出願第０９／３２４，１９１号明
細書および国際公開第９９／６２９２３号パンフレットに記載されたような、少
なくとも１つの修飾塩基から成っていてよい。本明細書中に使用したように、「
修飾塩基」とは「塩基類似体」と同義であり、例えば「修飾シトシン」とは「シ
トシン類似体」と同義である。同様に、「修飾」ヌクレオシドまたはヌクレオチ
ドは、本明細書中においてはヌクレオシドまたはヌクレオチド「類似体」と同義
のものとして定義する。塩基修飾形の例は、ＩＳＳのシトシンのＣ−５および／
またはＣ−６に電子吸引分を添加することを含むが、これに限定されるものでは
ない。電子吸引分がハロゲンであることが好ましい。このような修飾シトシンは
、アザシトシン、５−ブロモシトシン、ブロモウラシル、５−クロロシトシン、
塩素化シトシン、シクロシトシン、シトシン・アラビノシド、５−フルオロシト
シン、フルオロピリミジン、フルオロウラシル、５，６−ジヒドロシトシン、５
−ヨードシトシン、ヒドロキシ尿素、ヨードウラシル、５−ニトロシトシン、ウ
ラシルおよび他のピリミジン類似体または修飾ピリミジンを含むが、これらに限
定されるものではない。
【０１０６】 塩基修飾ヌクレオシドの調製、および該塩基修飾ヌクレオシドを前駆体として
使用した修飾オリゴヌクレオチドの合成は、例えば米国特許第４，９１０，３０
０、同第４，９４８，８８２号および同５，０９３，２３２号の各明細書に記載
されている。これらの塩基修飾ヌクレオシドは、化学合成によってオリゴヌクレ
オチドの末端または内部位置に取り込むことができるように構成されている。オ
リゴヌクレオチドの末端または内部位置に存在するこのような塩基修飾ヌクレオ
シドは、ペプチドまたは他の抗原の付着部位として役立つことができる。これら
の糖分において修飾されたヌクレオシドもまた（例えば米国特許第４，８４９，
５１３号、同第５，０１５，７３３号、同第５，１１８，８００号、同第５，１
１８，８０２号の各明細書を含むが、これに限定されるものではない）既に説明
されており、同様に使用することができる。
【０１０７】 いくつかの実施例の場合、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは、以下の数値のほぼ
いずれかの（塩基または塩基対）長さを下回る：１０，０００；５，０００；２
５００；２０００；１５００；１２５０；１０００；７５０；５００；３００；
２５０；２００；２００；１７５；１５０；１２５；１００；７５；５０；２５
；１０。いくつかの実施例の場合、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは、以下の数値
のほぼいずれかの（塩基または塩基対）長さを上回る：８；１０；１５；２０；
２５；３０；４０；５０；６０；７５；１００；１２５；１５０；１７５；２０
０；２５０；３００；３５０；４００；５００；７５０；１０００；２０００；
５０００；７５００；１００００；２００００；５００００。
【０１０８】 抗原 本発明の複合集団においては、あらゆる抗原を使用することができる。
【０１０９】 いくつかの実施例の場合、抗原はアレルゲンである。組換え抗原の例を表１に
示す。多くのアレルゲンの調製は当業者に良く知られており、その一例としては
、ブタクサ花粉アレルゲン抗原Ｅ（Ａｍｂ ａＩ）集団(Rafnar他(1991)J. Biol
. Chem. 266:1229-1236)、主要なチリダニ・アレルゲンＤｅｒ ｐＩおよびＤｅ
ｒ ＰＩＩ（Chua他(1988)J. Exp. Med. 167:175-182; Chua他(1990) Int. Arch
. Allergy Appl. Immunol. 91: 124-129）、白樺花粉Ｂｅｔ ｖｌ(Breiteneder
他(1989)EMBO J. 8:1935-1938)、家ネコ・アレルゲンＦｅｌ ｄ Ｉ（Rogers他
(1993)Mol. Immunol. 30:559-568)、および樹木花粉からのタンパク質抗原(Elsa
yed他(1991)Scand. J. Clin. Lab. Invest. Suppl. 204:17-31)の調製が挙げら
れる。表に示すように、樹木からのアレルゲン、例えば樺、杜松、スギは良く知
られている。ｉｎ ｖｉｖｏ投与のために花粉からタンパク質抗原を調整するこ
とが報告されている。表１が示すように、いくつかの実施例の場合、アレルゲン
は、ピーナッツ・アレルゲンのような食物アレルゲン、例えばＡｒａ ｂ Ｉで
あり、またいくつかの実施例の場合、アレルゲンはライ麦アレルゲン、例えばＬ
ｏｌ ｐ Ｉのような草アレルゲンである。表１は、使用可能なアレルゲンのリ
ストを示す。 表１ 組換えアレルゲン
【０１１０】
【表１】
【０１１１】
【表２】
【０１１２】
【表３】
【０１１３】
【表４】
【０１１４】 いくつかの態様では、抗原は病原菌から得られる。病原菌は例えば、原生動物
性、細菌性、真菌性（単細胞および多細胞のものを含む）、およびウィルス性病
原菌である。適切のウィルス性抗原の例を本明細書において説明する。これらの
例は当業者に良く知られている。細菌はヘモフィルス属インフルエンザ菌、マイ
コバクテリウム結核菌および百日咳菌を含む。原生動物病原菌は、マラリア・プ
ラスモジウム、リーシュマニア種、トリパノソーム種および住血吸虫種を含む。
真菌は、カンジダ・アルビカンスを含む。
【０１１５】 いくつかの態様では抗原はウィルス抗原である。ウィルスポリペプチド抗原は
、コアタンパク質、例えば、（膜固着（ＭＡ）タンパク質、コア・キャプシド（
ＣＡ）タンパク質およびヌクレキャプシド（ＮＣ）タンパク質を含むが、これら
に限定されるものではない）ＨＩＶ ｇａｇタンパク質、ＨＩＶポリメラーゼ、
インフルエンザウィルス・マトリックス（Ｍ）タンパク質およびインフルエンザ
ウィルス・ヌクレオキャプシド（ＮＰ）を含むが、これらに限定されるものでは
ない。インフルエンザワクチン接種に関して論じている参考文献の一例としては
、ScherleおよびGerhard (1988) Proc. Natl Acad. Sci. USA 85:4446-4450; Sc
herleおよびGerhard (1986) J. Exp. Med. 164:1114-1128;Granoff他 (1993) Va
ccine 11:S46-51; Kodihalli他 (1997) J. Virol. 71:3391-3396; Ahmeida他 (1
993) Vaccine 11:1302-1309; Chen他 (1999) Vaccine 17:653-659; Govorkovaお
よびSmirnov (1997) Acta Virol. (1997) 41:251-257; Koide他 (1995) Vaccine
13:3-5; Mbawuik他 (1994) Vaccine 12:1340-1348; Tamura他 (1994) Vaccine
12:310-316; Tamura他 (1992) Eur. J. Immunol. 22:477-481; Hirabayashi他 (
1990) Vaccine 8:595-599が挙げられる。抗原ポリペプチドの他の例は群または
亜群特異抗原である。これらの抗原は多くの病原菌に関して知られている。これ
らの病原菌は、アデノウィルス、単純ヘルペスウィルス、乳頭腫ウィルス、呼吸
器合胞体ウィルスおよびポックスウィルスを含むが、これらに限定されるもので
はない。
【０１１６】 多くの抗原ペプチドおよびタンパク質が知られており、この分野に利用可能で
あり、コンベンショナルな技術を用いて他の抗原ペプチドおよびタンパク質を識
別することができる。腫瘍形成に対する免疫化に関して、免疫調節ペプチドは、
（生存しているかまたは照射を受けた）腫瘍細胞、腫瘍細胞抽出物、または腫瘍
抗原のタンパク質サブユニット、例えばＨｅｒ−２／ｎｅｕ、Ｍａｒｔ １、癌
胎児性抗原（ＣＥＡ）、ガングリオシド、ヒト乳脂粒（ＨＭＦＧ）、ムチン（Ｍ
ＵＣＩ）、ＭＡＧＥ抗原、ＢＡＧＥ抗原、ＧＡＧＥ抗原、ｇｐ１００、前立腺特
異抗原（ＰＳＡ）、およびチロシナーゼを含んでいてよい。免疫をベースとした
避妊用ワクチンは、ＩＳＳと一緒に投与された精子タンパク質を含むことによっ
て形成することができる。Lea他 (1996) Biochim. Biophys. Acta 1307:263。
【０１１７】 抗原として本発明に使用するには、弱毒化および不活性化ウィルスが適してい
る。これらのウィルスの調製は当業者に良く知られており、多くが商業的に入手
可能である（例えばPhysicians' Desk Reference (1998),第５２版 Medical Eco
nomics Company Inc.参照）。例えばＩＰＯＬ（登録商標）（pasteur Merieux C
onnaught）およびＯＲＩＭＵＮＥ（登録商標）(Lederle Laboratories)として、
ポリオ・ウィルスが利用可能であり、ＶＡＱＴＡ（登録商標）(Merck)として、
肝炎ウィルスが利用可能であり、ＡＴＴＥＮＵＶＡＸ（登録商標）(Merck)とし
て、麻疹ウィルスが利用可能であり、ＭＵＭＰＳＶＡＸ（登録商標）(Merck)と
して、流行性耳下腺炎ウィルスが利用可能であり、ＭＥＲＵＶＡＸ（登録商標）
ＩＩ(Merck)として、風疹ウィルスが利用可能である。加えて、ＨＩＶ−１，Ｈ
ＩＶ−２、単純ヘルペスウィルス、Ｂ型肝炎ウィルス、ロタウィルス、ヒトまた
はヒト以外の乳頭腫ウィルス、およびスロー脳ウィルスがペプチド抗原を提供す
ることができる。
【０１１８】 いくつかの実施例の場合、抗原はウィルスベクター、例えば痘疹、アデノウィ
ルスおよびカナリア痘ウィルスから成る。
【０１１９】 抗原は、当業者に知られている精製技術を用いてそれらの源から隔離するか、
または組換え法を用いて製造するのがより便利である。
【０１２０】 抗原ペプチドは、精製された天然ペプチド、合成ペプチド、組換えタンパク質
、粗タンパク質抽出物、弱毒化および不活性化ウィルス、細胞、微生物、または
このようなペプチドのフラグメントを含むことができる。免疫調節ペプチドは天
然であるか、または、化学的または酵素的に合成されてよい。当業者に知られた
どの化学合成法も適している。中程度サイズのペプチドを構成するのには、溶液
相ペプチド合成を使用することができ、または、ペプチドを科学的に構成するに
は、固相合成を採用することができる。Atherton他 (1981) Hoppe Seylers Z. P
hysiol. Chem.」 362:833-839。アミノ酸をカップリングしてペプチドを製造す
るのに、タンパク質分解酵素を利用することもできる。Kullmann(1987) 「酵素
ペプチド合成(Enzymatic Peptide Synthesis)」, CRC Press, Inc.。あるいは、
細胞の生化学機構を用いることにより、または生物源からの隔離により、ペプチ
ドを得ることができる。ペプチドを製造するのに、組換えＤＮＡ技術を採用する
ことができる。Hames (1987) 「転写および翻訳：実践アプローチ(Transcriptio
n and Translation: A Paractical Approach)」, IRL Press。アフィニティ・ク
ロマトグラフィのような標準的な技術を用いて、ペプチドを隔離することもでき
る。
【０１２１】 好ましくは抗原は、ペプチド、脂質（例えばステロール、脂肪酸およびリン脂
質）、Ｈインフルエンザ・ワクチンで使用されたような多糖、ガングリオシドお
よび糖タンパク質である。これらは、化学法および酵素法を用いた隔離および合
成を含む、いくつかの方法を介して得ることができる。多くのステロール、脂肪
酸およびリン脂質に用いられるような或る事例では、分子の抗原部分が商業的に
入手可能である。
【０１２２】 対象組成物およびこれらの組成物を用いる方法に役立つウィルス抗原の例は、
ＨＩＶ抗原包膜糖タンパク質から誘導された抗原を含むが、これに限定されるも
のではない。これらの糖タンパク質はｇｐ１６０、ｇｐ１２０およびｇｐ４１を
含むが、これらに限定されるものではない。ＨＩＶ遺伝子および抗原のための多
数の配列が知られている。例えばロスアラモス国立研究所ＨＩＶ配列データベー
スは、ＨＩＶのヌクレオチドおよびアミノ酸配列を収集し、管理し、注釈付けを
行う。このデータベースはインターネットを介して、http://hiv-web.lanl.gov/
でアクセス可能である。年一回の刊行物では、「ヒト・レトロウィルスおよびエ
イズの概要(Human Retroviruses and AIDS Compendium)」（例えば1998年版）を
参照されたい。
【０１２３】 病原菌から誘導される抗原は、当業者に知られた方法を用いて、例えば天然の
ウィルスまたは細菌の抽出物から、病原菌で感染された細胞から、精製されたポ
リペプチドから、組換え生産されたポリペプチドから、かつ／または合成ペプチ
ドとして得ることができる。
【０１２４】 ＩＳＳ−抗原の複合 本明細書中に記載した組成物において、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは抗原と
複合されている。ＩＳＳ部分は、共有相互作用および／または非共有相互作用を
含む種々の方法で、複合体の抗原部分とカップリングすることができる。
【０１２５】 各部分のリンクはＩＳＳの３’または５’末端で、または、ＩＳＳの内部位置
における適宜に修飾された塩基で行われる。抗原がペプチドであり、かつ適宜な
反応基（たとえばＮ−ヒドロキシスクシニミド・エステル）を含有する場合、こ
の抗原を、シトシン残基のＮ4アミノ基と直接的に反応させることができる。Ｉ
ＳＳ中のシトシン残基の数および位置に応じて、１つまたは複数の残基において
特異的なカップリングを達成することができる。
【０１２６】 あるいは、当業者に知られているような修飾オリゴヌクレシドを、ＩＳＳ中の
末端または内部位置に取り込むことができる。これらのオリゴヌクレオシドは、
ブロックされた官能基を含有していてよい。これらの官能基はブロック解除され
ると、当該抗原に存在し得るまたは付着され得る種々の官能基と反応可能である
。
【０１２７】 抗原がペプチドの場合、複合体のこの部分は、固体支持体化学を介して、ＩＳ
Ｓの３’末端に付着させることができる。例えば、ＩＳＳは、支持体上で予め合
成されているポリペプチド部分に添加することができる。Haralambidis他 (1990
a) Nucleic Acids Res. 18:493-499;およびHaralambidis他 (1990b) Nucleic Ac
ids Res. 18:501-505。あるいは、ＩＳＳは、３’末端から延びる劈開可能なリ
ンカーを介して固体支持体に結合されるように、合成することができる。支持体
からＩＳＳが化学的に劈開されると、オリゴヌクレオチドの３’末端に、末端チ
オール基が残される(Zuckermann他(1987) Nucleic Acids Res. 15:5305-5321;Co
rey 他(1987) Science 238:1401-1403)か、または、オリゴヌクレオチドの３’
末端に、末端アミノ基が残される(Nelson他 (1989) Nucleic Acids Res. 17:178
1-1794)。ペプチドのアミノ基へのアミノ修飾ＩＳＳの複合は、Benoit他 (1987)
Neuromethods 6:43-72に記載のように行うことができる。ペプチドのカルボキ
シル基へのチオール修飾ＩＳＳの複合は、Sinha(1991), pp185-210, 「オリゴヌ
クレオチド類似体：実践アプローチ(Oligonucleotide Analogues: A Practical
Approach)」IRL Pressに記載のように行うことができる。ペプチドのシステイン
残基のチオール側鎖に、付加されたマレイミドを担持するオリゴヌクレオチドを
カップリングすることも既に説明されている。Tung他 (1991) Bioconjug. Chem.
2:464-465。
【０１２８】 複合体のペプチド部分は、合成中にオリゴヌクレオチド中に取り込まれたアミ
ン、チオールまたはカルボキシル基を介して、ＩＳＳの５’末端に付着すること
ができる。好ましくは、オリゴヌクレオチドが固体支持体に固定されている間、
保護されたアミン、チオールから成るか、または一方の末端にカルボキシルを、
かつ他方の末端にホスホアミダイトを有するリンキング基が５’−ヒドロキシル
に共有付着される。Agrawal他 (1986) Nucleic Acids Res. 14:6227-6245; Conn
olly (1985) Nucleic Acids Res. 13:4485-4502; Kremsky他(1987) Nucleic Aci
ds Res. 15:2891-2909; Connolly (1987) Nucleic Acids Res. 15:3131-3139; B
ischoff他(1987) Anal. Biochem. 164:336-344; Blanks他(1988) Nucleic Acids
Res. 16:10283-10299;および米国特許第４，８４９，５１３号、同第５，０１
５，７３３号、第５，１１８，８００号および同第５，１１８，８０２号の各明
細書。保護解除に続いて、アミン、チオールおよびカルボキシル官能価は、オリ
ゴヌクレオチドをペプチドに共有付着するのに使用することができる。Benoit他
(1987);およびSinha他 (1991)。
【０１２９】 非共有相互作用、例えばイオン結合、疎水性相互作用、水素結合および／また
はファン・デル・ワールス誘引を介して、ＩＳＳ抗原複合体を形成することもで
きる。
【０１３０】 非共有リンク複合体は、ビオチン−ストレプトアビジン複合体のような非共有
相互作用を含んでよい。例えばＩＳＳの修飾塩基にビオチニル基を付着すること
ができる。Roget 他(1989) Nucleic Acids Res. 17:7643-7651。ペプチド部分に
ストレプトアビジン分を取り込むことにより、ストレプトアビジン複合ペプチド
と、ビオチニル化オリゴヌクレオチドとの非共有結合複合体を形成することが可
能になる。
【０１３１】 非共有的な関連は、電荷アミノ酸のような、ＩＳＳおよび抗原中の残基に関わ
るイオン相互作用によって、または、オリゴヌクレオチドおよび抗原双方と相互
作用可能な荷電残基から成るリンカー部分を使用することによって発生すること
ができる。例えば、非共有複合は、一般的に負に荷電されたＩＳＳと、ペプチド
の正に荷電されたアミノ酸残基、例えばポリリシン、ポリアルギニンおよびポリ
ヒスチジン残基との間に発生することができる。
【０１３２】 ＩＳＳと抗原との間の非共有複合は、天然リガンドとしてＤＮＡと相互作用す
る分子のＤＮＡ結合モチーフを介して発生することができる。例えば、このよう
なＤＮＡ結合モチーフは、転写因子および抗ＤＥＮＡ抗体内に見出すことができ
る。
【０１３３】 脂質へのＩＳＳのリンケージは、標準的な方法を用いて形成することができる
。これらの方法は、オリゴヌクレオチド−リン脂質複合体(Yanagawa他(1988) Nu
cleic Acids Symp. Ser 19:189-192)、オリゴヌクレオチド−脂肪酸複合体(Grab
arek他 (1990) Anal. Biochem. 185:131-135;およびStaros他 (1986) Anal. bio
chem. 156:220-222)、オリゴヌクレオチド−ステロール複合体の合成を含むが、
これらに限定されるものではない。Boujrad他(1993) Proc. Natl. Acad. Sci. U
SA 90:5528-5731。
【０１３４】 オリゴ糖へのオリゴヌクレオチドのリンケージは、標準的な公知の方法を使用
して形成することができる。これらの方法は、オリゴヌクレオチド−オリゴ糖複
合体の合成を含むが、これに限定されるものではない。この場合オリゴ糖は免疫
グロブリン分である。O'Shannessy他 (1985) J. Applied Biochem. 7:347-355。
【０１３５】 ペプチドまたは抗原への環状ＩＳＳのリンケージはいくつかの方法で形成する
ことができる。組換え法または化学法を用いて環状ＩＳＳが合成される場合、修
飾ヌクレオシドが適切である。Ruth (1991) 「オリゴヌクレオチドおよび類似体
：実践アプローチ(Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach) p
p.255-282, IRL Press。抗原または他のペプチドに環状ＩＳＳを結合するのに、
標準リンク技術を使用することができる。組換え法または化学法を用いて環状Ｉ
ＳＳが隔離され、または合成される場合、抗原または他のペプチド内に取り込ま
れた反応基（例えばカルベン、ラジカル）を化学的に活性化するかまたは光活性
化することによって、リンケージを形成することができる。
【０１３６】 オリゴヌクレオチドにペプチドおよび他の分子を付着するための付加的な方法
を、米国特許第５，３９１，７２３号明細書；Kessler (1992) 「核酸のための
非放射性標識付け法(Nonradioactive labeling methods for nucleic acids)」
(Kricka) 「非同位体ＤＮＡプローブ技術(Nonistopic DNA Probe Techniques)」
, Academic Press; Geoghegan (1992) Bioconjug. Chem. 3: 138-146。
【０１３７】 複合集団を含んで成る組成物およびキット 本発明はまた、キットおよび組成物、例えば、本明細書に記載した複合集団の
いずれかを含んで成る製剤を提供する。
【０１３８】 本発明のキットは、適切なパッケージ内の、本明細書中に記載された複合体集
団のいずれかを含んで成る。本発明のキットは任意には、その使用のための指示
（例えば、本明細書中に記載した方法のいずれかのための指示）および／または
他の適切な構成部分を含有していてよい。
【０１３９】 （例えば感染症、癌およびアレルギーと関連して）免疫調節を必要とする個体
への投与に特に役立つ本発明の組成物は概ね、免疫応答を調節するのに充分な量
の、本明細書中に記載した複合体集団のいずれかを含んで成っている。
【０１４０】 一般的に見て本発明の組成物はまた、製薬上許容可能な賦形剤を含んで成り、
種々の配合で存在してよい。当業者に良く知られているように、製薬上許容可能
な賦形剤は比較的不活性な物質である。この物質は薬理学的に有効な物質の投与
を容易にする。例えば、賦形剤は形状またはコンシステンシーを与えることがで
き、稀釈剤として作用することができる。適切な賦形剤は、安定剤、湿潤剤およ
び乳化剤、浸透圧を変化させるための塩、カプセル化剤、バッファおよび皮膚浸
透エンハンサーを含むが、これらに限定されるものではない。腸管外および非腸
管外薬物分配のための賦形剤ならびに製剤が、Remington's Pharmaceutical Sci
ences 第１９版 Mack Pulishing (1995)に示されている。
【０１４１】 他の配合物は、当業者に良く知られた適切なドラッグ・デリバリー形を含む。
このようなドラッグ・デリバリー形は、リポソームのようなキャリアを含むが、
これに限定されるものではない。Mahato他 (1997) Pharm. Res. 14:853-859。リ
ポソーム調製剤は、シトフェクチン、多重ラメラ小胞、単ラメラ小胞を含むが、
これに限定されるものではない。
【０１４２】 一般的に、これらの組成物は注射による投与（腹膜内、静脈内、皮下、筋内な
ど）のために処方される。従ってこれらの組成物は好ましくは、製薬上許容可能
なビヒクル、例えば生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液などと組み合
わされる。特定の処方計画、つまり用量、タイミングおよび頻度は、特定の個体
および個体の病歴に依存することになる。
【０１４３】 他の配合物は、当業者に良く知られた適切なドラッグ・デリバリー形を含む。
このドラッグ・デリバリー形は、リポソームのようなキャリアを含むが、これに
限定されるものではない。Mahato他 (1997) Pharm. Res. 14:853-859。リポソー
ム調製剤は、シトフェクチン、二重膜小胞、単ラメラ小胞を含むが、これに限定
されるものではない。
【０１４４】 いくつかの実施例の場合、２つ以上の抗原が組成物中に存在していてよい。こ
のような組成物は、少なくとも１つ、少なくとも２つ、少なくとも３つ、少なく
とも４つ、少なくとも５つの異なる抗原を含有してよい。この分野ではこのよう
にしばしば表現されるこの「カクテル」は、例えば２つ以上のアレルゲンに対し
てアレルギー性を有する個体を治療する上で特に役立つことができる。
【０１４５】 本発明は、製薬上許容可能な賦形剤および複合分子集団とを含んで成る、アレ
ルギー免疫療法で用いるための製剤を含む。前記複合分子は、アレルゲンである
抗原と、１つまたは複数のＩＳＳ含有ポリヌクレオチドとを含んで成る。前記集
団は、抗原によって引き起こされたヒスタミン放出と比較して、抗原に対して抗
原感作された個体からの好塩基球からのヒスタミン放出を抑制する。ヒスタミン
放出の抑制程度は、本明細書中に記載した程度であってよい。いくつかの実施例
の場合、抗原はＡｍｂ ａ １である。
【０１４６】 一般的に、これらの組成物の投与効率は、本明細書中に記載した免疫応答、ま
たは他の臨床パラメータにおける変化を測定することにより調整される。
【０１４７】 本発明は、本明細書中に記載したＩＳＳ抗原複合体集団と、アジュバントとか
ら成る組成物を提供する。ＩＳＳ−抗原とアジュバントとの関連物質は、アジュ
バントなしでＩＳＳ抗原が共投与された場合と比較して、免疫応答を向上させる
のに効果的である。
【０１４８】 このような組成物中では、アジュバントはＩＳＳ抗原と関連した状態で維持さ
れ、これにより、ＩＳＳ抗原に対して標的細胞を補充して活性化する。ＩＳＳ抗
原複合体のターゲットは、抗原提示細胞（ＡＰＣｓ）、例えばマクロファージ、
樹状細胞、および／またはリンパ球、リンパ構造、例えばリンパ節および／また
は脾臓、および非リンパ構造、特に樹状細胞が見出される構造、例えば皮膚、肺
および／または胃腸管を含むが、これらに限定されるものではない。
【０１４９】 いくつかの実施例の場合、本発明は、本明細書中に記載したＩＳＳ−抗原複合
体集団とアジュバントとから成る組成物を提供する。これによりＩＳＳ／抗原／
アジュバントが投与される。好ましくは、免疫原性組成物は、イムノゲンに対す
る免疫応答を増強するのに充分な量のアジュバントを含有する。アジュバントは
当業者に良く知られており、水中油型エマルジョン、油中水型エマルジョン、ミ
ョウバン（アルミニウム塩）、リポソームおよび微粒子を含むが、これらに限定
されるものではない。微粒子は、ポリスチレン、澱粉、ポリホスファゼンおよび
ポリラクチド／ポリグリコシドを含むが、これらに限定されるものではない。他
の適宜なアジュバントはまた、ＭＦ５９、ＤＥＴＯＸ（登録商標）（Ｒｉｂｉ）
、スクアレン混合物（ＳＡＦ−１）、ムラミール・ペプチド、サポニン誘導体、
マイコバクテリア細胞壁調製物、モノホスホリル脂質Ａ、ミコール酸誘導体、非
イオン性ブロックコポリマー界面活性剤、Ｑｕｉｌ Ａ、コレラ毒素Ｂサブユニ
ット、ポリホスファゼンおよび誘導体、および免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭｓ）
、例えばTakahashi他(1990) Nature 344:873-875によって記載された複合体、な
らびに、脂質ベースのアジュバントおよび本明細書中に記載したその他のものを
含むが、これらに限定されるものではない。獣医学の用途のために、また、動物
中の抗体を産出するために、（完全および不完全双方の）フロインド・アジュバ
ントのマイトジェン化合物を使用することができる。いくつかの実施例の場合、
ＩＳＳ抗原複合体は、共有および／または非共有相互作用を介してアジュバント
と関連させることができる。このような非共有相互作用の例は、本明細書中に記
載した微粒子へのＩＳＳおよび抗原の吸着を含むが、これに限定されるものでは
ない。
【０１５０】 本明細書中に記載したＩＳＳ抗原集団は、１つまたは複数の免疫調節機能との
関連において投与することができる。従って本発明は、ＩＳＳ抗原複合体集団と
、免疫調節促進因子とを含んで成る組成物を提供する。本明細書中に使用したよ
うに、「免疫調節促進因子」という用語は、ＩＳＳの免疫調節しやすさを支援し
かつ／または向上させる分子を意味する。免疫調節促進因子の例としては、共刺
激分子、例えばサイトカインおよび／またはアジュバントが挙げられる。ＩＳＳ
とＩＳＳ促進因子複合体中の促進因子分子との関連は、高アフィニティ相互作用
および／または低アフィニティ相互作用を含む、非共有相互作用を介して形成す
ることができる。ＩＳＳと、ＩＳＳ促進因子複合体中の促進因子とをカップリン
グすることができる非共有相互作用の例としては、イオン結合、疎水性相互作用
、水素結合およびファン・デル・ワールス誘引が挙げられるが、これらに限定さ
れるものではない。
【０１５１】 免疫調節促進因子は、共刺激分子（例えばサイトカイン、ケモカイン、ターゲ
ティングタンパク質リガンド、導入活性化因子、ペプチド、および修飾アミノ酸
から成るペプチド）およびアジュバント（例えばミョウバン、脂質エマルジョン
、およびポリラクチド／ポリグリコリド微粒子）を含むが、これらに限定される
ものではない。
【０１５２】 ＩＳＳと一緒に投与するのに適して免疫調節サイトカインペプチドの中には、
インターロイキン（例えばＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３など）、インターフェ
ロン（例えばＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ―γ）、エリスロポエチン、コロ
ニー刺激因子（例えばＧ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ）およびＴＮＦ−
αがある。好ましくはＩＳＳオリゴヌクレオチドと併せて使用するための免疫刺
激ペプチドは、Ｔｈ１型免疫応答を刺激するペプチド、例えばＩＬ−１２（Blis
s他 (1996) J. Immunol. 156: 887-894）、ＩＬ−１８、ＴＮＦ−α、βおよび
γ、および／または、形質転換成長因子（ＴＧＦ）−αである。
【０１５３】 ＩＳＳと一緒に投与されるペプチドは、タンパク質が特異的受容体に結合する
媒体となるアミノ酸配列、または、特異的な細胞型または組織へのターゲティン
グの媒体となるアミノ酸配列を含むこともできる。一例としては、抗体または抗
体フラグメント、ヒト成長ホルモンのようなペプチドホルモン、および酵素が挙
げられる。免疫調節ペプチドはまた、ペプチドホルモン、ペプチド神経伝達物質
およびペプチド成長因子を含む。Ｂ７（ＣＤ８０）のような共刺激分子、転写因
子のようなトランス活性化タンパク質、マクロファージ化学走化性タンパク質（
ＭＣＰ）および他の化学誘引物質、または化学走化性ペプチドも、ＩＳＳと一緒
に投与するのに役立つペプチドである。
【０１５４】 本発明はまた、コロイド分散系、例えばミクロスフェア、ビーズ、高分子複合
体、ナノカプセル、および脂質ベース系、例えば水中油型エマルジョン、ミセル
、混合されたミセルおよびリポソームと共に、ＩＳＳ抗原複合体から成る組成物
を提供する。コロイド分散系は、ＩＳＳ含有組成物の効果的なカプセル化を可能
にする。
【０１５５】 カプセル化組成物はさらに、多種多様の成分のうちのいずれかから成る。これ
らの成分の一例としては、ミョウバン、脂質、リン脂質、脂質膜構造（ＬＭＳ）
、ポリエチレン・グリコール（ＰＥＧ）および他のポリマー、例えばポリペプチ
ド、糖ペプチドおよび多糖が挙げられる。
【０１５６】 カプセル化成分に適したポリペプチドは当業者に公知のもののいずれかを含み
、脂肪酸結合タンパク質を含むが、これに限定されるものではない。修飾ポリペ
プチドは、種々の修飾形を含有する。これらの修飾形は、グリコシル化、リン酸
化、ミリスチル化、硫酸化およびヒドロキシル化を含むが、これらに限定される
ものではない。本明細書中に使用したように、適切なポリペプチドは、ＩＳＳ含
有組成物を保護することによりその免疫調節活性を維持することになるペプチド
である。結合タンパク質の一例としては、アルブミン、例えばウシ血清アルブミ
ン（ＢＳＡ）およびエンドウアルブミンが挙げられる。
【０１５７】 他の適切なポリマーは、製薬分野で知られたものであったよく、自然発生ポリ
マー、例えばデキストラン、ヒドロキシエチル澱粉および多糖、および合成ポリ
マーを含むが、これらに限定されるものではない。自然発生ポリマーの一例とし
ては、タンパク質、グリコペプチド、多糖、デキストランおよび脂質が上げられ
る。付加的なポリマーは合成ポリマーであってよい。本発明における使用に適し
た合成ポリマーの一例としては、ポリアルキルグリコール（ＰＡＧ）、例えばＰ
ＥＧ、ポリオキシエチル化ポリオール、例えばポリオキシエチル化グリセロール
（ＰＯＧ）、ポリトリメチレングリコール（ＰＴＧ）、ポリプロピレングリコー
ル（ＰＰＧ）、ポリヒドロキシエチルメタクリレート、ポリビニルアルコール（
ＰＶＡ）、ポリアクリル酸、ポリエチルオキサゾリン、ポリアクリルアミド、ポ
リビニルピロリドン（ＰＶＰ）、ポリアミノ酸、ポリウレタンおよびポリホスフ
ァゼンが挙げられる。合成ポリマーはまた、直鎖状または分枝状であってよく、
置換されていてもされていなくてもよく、ホモポリマー、コポリマー、または２
つ以上の異なる合成モノマーから成るブロック・コポリマーであってよい。
【０１５８】 本発明のカプセル化組成物中に使用するためのＰＥＧは、化学品供給業者から
購入されるか、または、当業者によく知られた技術を用いて合成される。
【０１５９】 「ＬＭＳ」という用語は、本明細書中に使用するように、ラメラ脂質粒子を意
味し、この場合、極性脂質の極性頭基は、界面の水相と対面することにより、膜
構造を形成するように配置される。ＬＭＳの一例としては、リポソーム、ミセル
、コクリート（すなわち一般的には円筒形リポソーム）、マイクロエマルジョン
、単ラメラ小胞、多重ラメラ小胞などが挙げられる。
【０１６０】 本発明の好ましいコロイド分散系はリポソームである。リポソームでカプセル
化された抗原で免疫化されたマウスにおいて、リポソームは、抗原に対してＴｈ
１型免疫応答を向上させるように思われた。Aramaki他 (1995) Vaccine 13: 180
9-1814。本明細書中に使用するように、「リポソーム」または「脂質小胞」は、
少なくとも１つ、可能な限り２つ以上の二重層脂質膜によって結合された小胞で
ある。リポソームは、リン酸脂質、糖脂質、脂質、ステロイド、例えばコレステ
ロール、関連分子、またはこれらの組み合わせから、当業者によく知られた技術
によって人工的に製造される。これらの技術の一例としては、音波処理、抽出、
または脂質デタージェント複合体からの洗浄剤の除去が挙げられる。リポソーム
はまた任意には、付加的な成分、例えば組織標的成分から成っていてもよい。「
脂質膜」または「脂質二重層」は、専ら脂質のみから成る必要はなく、付加的に
適切な他の成分を含有していてよい。これらの成分は、例えばコレステロールお
よびその他のステロイド、脂質可溶性化学物質、あらゆる長さのタンパク質、お
よび、膜の全体的な構造が疎水性コアをサンドイッチする２つの親水性表面から
成るシートである場合には、その他の両親媒性分子を含むが、これらに限定され
るものではない。膜構造の一般的な議論に関しては、Kendrew著 The Enchcloped
ia of Molecular Biology (1994)を参照されたい。適切な脂質に関しては、例え
ばLasic (1993) 「リポソーム：物理学から応用まで（Liposomes: from Physics
to Applications）」 Elesevier, Amsterdamを参照されたい。ＩＳＳ含有組成
物を含有するリポソームの調製プロセスは、当業者によく知られている。脂質小
胞は、当業者によく知られている適切な技術によって調製することができる。こ
れらの方法の一例としては、マイクロカプセル化、マイクロ流動化、ＬＬＣ法、
エタノール注入、フレオン注入、「バブル」法、デタージェント透析法、水和、
音波処理および逆相蒸発が挙げられる。Watwe (1995) Curr. Sci. 68: 715-724
に概説が記載されている。これらの技術を組み合わせることにより、最も望まし
い属性を小胞に施すことができる。
【０１６１】 本発明は、組織または細胞を標的とした成分を含有するＬＭＳの使用を含む。
このようなターゲティング成分は、損傷していない動物、器官、細胞培養への投
与時に、他の組織または細胞部位に優先して、或る組織または細胞における蓄積
を向上させるＬＭＳ成分である。ターゲティング成分は概ね、リポソーム外側か
らアクセス可能であり、従って、外面に結合されるか、または外側の脂質二重層
内に挿入されることが好ましい。ターゲティング成分は、特にペプチド、大きな
ペプチドの一領域、細胞表面分子またはマーカーに対して特異的な抗体、または
これらの抗原結合フラグメント、核酸、炭水化物、複合炭水化物の一領域、特殊
脂質、または小分子、例えば薬物、ホルモン、または前述の分子のいずれかに付
着されたハプテンであってよい。細胞型特異的な細胞表面マーカーに対する特異
性を有する抗体は、当業者に知られており、当業者に知られた方法によって容易
に調製される。
【０１６２】 ＬＭＤは、治療を施そうとするあらゆる細胞型を標的とすることができる。こ
のような細胞型は、例えば、免疫応答を調節し、かつ／または免疫応答に関与す
ることができる細胞型である。このような標的細胞および器官は、ＡＰＣ、例え
ばマクロファージ、樹状細胞およびリンパ球、リンパ構造、例えばリンパ節およ
び脾臓、および、非リンパ構造、特に樹状細胞が見出される構造を含むが、これ
らに限定されるものではない。
【０１６３】 本発明のＬＭＳ組成物は付加的に界面活性剤から成っていてよい。界面活性剤
は、陽イオン性、陰イオン性、両親媒性、または非イオン性である。界面活性剤
の好ましいクラスは、非イオン性界面活性剤であり、特に好ましくは水溶性界面
活性剤である。
【０１６４】 投与および免疫応答の評価 ＩＳＳ含有ポリヌクレオチド抗原複合体は、他の薬剤および／または免疫原性
物質および／または免疫刺激物質と組み合わせて投与することができ、これらの
製薬上許容可能なキャリアと組み合わせることができる。ＩＳＳ含有ポリヌクレ
オチドは、上述のポリヌクレオチドのいずれかであってよい。ＳＥＱ ＩＤ Ｎ
Ｏ：１で示したように、好ましくは、投与されるＩＳＳ含有ポリヌクレオチドは
、配列５’−Ｔ，Ｃ，Ｇ−３’から成る。好ましくは、投与されるＩＳＳ含有ポ
リヌクレオチドは、式５’プリン，プリン，Ｃ，Ｇ，ピリミジン，ピリミジン，
Ｃ，Ｇ−３’から成り；より好ましくは、５’−Ａ，Ａ，Ｃ，Ｇ，Ｔ，Ｔ，Ｃ，
Ｇ−３’から成る。別の好ましい実施例は、ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１を用いる。
【０１６５】 全ての免疫原性組成物と共に、特定のＩＳＳ−抗原配合物の投与の免疫学的に
有効な量および方法は、どのような状態が治療されることになっているのか、そ
の個体に応じて、また、当業者には明らかな他の要因に応じて変動する可能性が
ある。考慮されるべき要因は、抗原性、ＩＳＳ抗原複合体がアジュバントまたは
運搬分子に複合または共有付着されることになるか否かということ、投与経路、
および、投与されるべき免疫化用量数を含む。このような要因は、この分野では
よく知られており、必要以上の実験なしに、免疫学者の技術で充分に見極めるこ
とができる。適切な用量範囲は、抗原に対する免疫応答の所望の調節を可能にす
る範囲である。一般的に云えば、ＩＳＳ抗原複合体の用量範囲は、例えば、以下
の数値のほぼいずれかから成ってよい：０１．〜１００μｇ、０１．〜５０μｇ
、０１．〜２５μｇ、０１．〜１０μｇ、１〜５００μｇ、１００〜４００μｇ
、２００〜３００μｇ、１〜１００μｇ、１００〜２００μｇ、３００〜４００
μｇ、４００〜５００μｇ。あるいは、用量は以下の数値のほぼいずれかから成
ってよい：０．１μｇ、０．２５μｇ、０．５μｇ、１．０μｇ、２．０μｇ、
５．０μｇ、１０μｇ、２５μｇ、５０μｇ、７５μｇ、１００μｇ。従って用
量範囲は以下のほぼいずれかの下限を有していてよい：０．１μｇ、０．２５μ
ｇ、０．５μｇ、１．０μｇ。また用量範囲は以下のほぼいずれかの上限を有し
ていてよい：２５μｇ、５０μｇ、１００μｇ。これらの組成物において、抗原
に対するＩＳＳ含有ポリヌクレオチドのモル比は変化することができる。患者毎
に与えられる絶対量は、薬理学的特性、例えば生体利用効率、クリアランス比お
よび投与経路に依存する。
【０１６６】 特定のＩＳＳ−抗原配合物の投与の有効量および方法は、個々の患者、疾患の
段階、および当業者には明らかな別の要因に応じて変化することが可能である。
特定の用途に役立つ投与経路は、当業者に明らかである。投与経路の一例として
は局所、皮膚、経皮、経粘膜、表皮、腸管外、胃腸、および鼻−咽頭、および、
経気管支および経肺胞を含む肺が挙げられる。適切な用量範囲は、血中濃度で測
定して約１〜１０μＭの組織濃度を達成するのに充分なＩＳＳ含有組成物を提供
する範囲である。患者毎に与えられる絶対量は、薬理学的特性、例えば生体利用
効率、クリアランス比および投与経路に依存する。
【０１６７】 本明細書中に記載したように、ＡＰＣおよび高濃度のＡＰＣを有する組織は、
ＩＳＳおよび抗原含有組成物の好ましい標的である。従ってＩＳＳと抗原とを含
有する組成物を、ＡＰＣが比較的高濃度で存在する哺乳類の皮膚および／または
粘膜に投与することが望ましい。
【０１６８】 本発明は、例えば生理学的に許容可能なインプラント、軟膏、クリーム、リン
スおよびゲルを含む局所塗布に適したＩＳＳ−抗原含有組成物を提供する。例え
ば、内部にデリバリーシステムを拡散された包帯剤または包帯によって、または
、デリバリーシステムを切開部または開放創内に直接的に投与することにより、
局所投与が行われる。内部にＩＳＳ／抗原含有組成物が拡散されたクリーム、リ
ンス、ゲルまたは軟膏は、局所用軟膏または傷を充填する薬剤として使用するの
に適している。
【０１６９】 皮膚投与の好ましい経路は、侵襲性が最も少ない投与である。これらの手段の
なかで好ましいのは、経皮伝達、表皮投与および皮下注射である。これらの手段
のうち、皮内にあると見込まれるより高濃度のＡＰＣにとっては、表皮投与が好
ましい。
【０１７０】 経皮投与は、ＩＳＳ／抗原含有組成物が皮膚に浸透し、血流に入ることを可能
にするクリーム、リンス、ゲルなどを塗布することにより達成される。経皮投与
に適した組成物の一例としては、製薬上許容可能な懸濁液、オイル、クリームお
よび軟膏が挙げられる。これらは、皮膚に直接的に塗布されるか、または経皮手
段（いわゆる「パッチ」）として保護キャリア内に取り込まれる。適切なクリー
ム、軟膏などの例は、例えば、Physicians' Desk Referenceに見出すことができ
る。
【０１７１】 経皮伝達に関しては、イオントフォレーゼが適切な方法である。イオントフォ
レーゼ伝達は、商業的に入手可能なパッチを使用して達成することができる。こ
のパッチはその産出物を数日以上にわたって、傷のない皮膚を通して連続的に供
給する。このような方法を用いることによって、比較的高濃度の製薬組成物のコ
ントロールされた伝達が可能になり、組み合わせた薬剤の導入が可能になり、ま
た吸収プロモータの同時使用が可能になる。
【０１７２】 この方法に用いるためのパッチ製品の一例は、カリフォルニア州ロサンゼルス
在、General Medical Companyの製品ＬＥＣＴＲＯ ＰＡＴＣＨ（登録商標）で
ある。この製品はリザーバ電極を中性ｐＨに電子的に維持し、種々異なる濃度の
用量を提供することにより連続的および／または周期的に投与するように適合さ
せることができる。パッチの調製および使用は、ＬＥＣＴＲＯ ＰＡＴＣＨ製品
に添付の、製造者の印刷された指示書に従って行わなければならない；これらの
指示を参考のため本明細書中に引用する。他の密封性のパッチシステムも適切で
ある。
【０１７３】 経皮伝達に関して、低周波超音波供給もまた適切な方法である。Mitragotri (
1995) Science 269:850-853。低周波超音波周波数（約１ＭＨｚ）の適用により
、高分子量組成物を含む治療用組成物の、コントロールされた全体的な供給が可
能になる。
【０１７４】 表皮性投与は主として、刺激物に対する免疫応答を誘発するのに充分に、表皮
の最外層を機械的または化学的に刺激することを伴う。具体的には、この刺激は
、ＡＰＣを刺激部位に引き付けるのに充分でなければならない。
【０１７５】 機械的な刺激手段は例えば、極めて小さな直径を有する短い多数の尖叉を採用
する。このような尖叉は、皮膚を刺激して刺激部位にＡＰＣを引き付けることに
より、尖叉端部から移行したＩＳＳ／抗原含有組成物を取り込むのに使用するこ
とができる。例えばフランス国リヨン在、Pasteur Merieuxによって製造された
ＭＯＮＯ−ＶＡＣＣ旧ツベルクリンテストは、ＩＳＳ／抗原含有組成物を導入す
るのに適した機器を含有する。
【０１７６】 （ペンシルベニア州スウィフトウォーター在、Connaught Laboratories, Inc.
によって米国に流通している）この機器は、一方の端部に注射器プランジャを、
他方の端部に尖叉ディスクを有するプラスチック容器から形成されている。この
尖叉ディスクは、小さな直径を有する多数の尖叉を支持している。尖叉は表皮細
胞の最外層をちょうど引っかくことになるような長さを有している。ＭＯＮＯ−
ＶＡＣＣキットの各尖叉には、旧ツベルクリンがコーティングされており；本発
明では、各ニードルに、ＩＳＳ／抗原含有製薬組成物がコーティングされる。こ
の機器は、機器製品に添付された製造者の指示に従って使用することが好ましい
。この実施例にやはり使用可能な同様の機器は、アレルギーテストを実施するの
に現在使用されている機器である。
【０１７７】 表皮の最も外側の細胞を刺激する化学薬品を使用し、こうしてこの部位にＡＰ
Ｃを引き付けるのに充分な免疫応答を誘発させることにより、ＩＳＳの表皮投与
への別の適切なアプローチが得られる。その一例が、登録商標ＮＡＩＲとしてNo
xema Corporationによって販売されている、商業的に入手可能な局所用脱毛クリ
ーム中で使用されるサリチル酸のようなケラチン分解剤である。このようなアプ
ローチは、粘膜における上皮投与を達成するのにも用いることができる。（例え
ば、ＭＯＮＯ−ＶＡＣＣ型尖叉に化学的刺激物がコーティングされた場合にも発
生するように）機械的な刺激物と共に化学的刺激物を適用することができる。Ｉ
ＳＳはキャリヤ中に懸濁することができる。キャリヤはまた、化学的刺激物を含
有するか、または一緒に共投与される。ＩＳＳ／抗原含有組成物を投与するため
の別の供給方法では、非脂質ポリマー、例えば合成ポリカチオンアミノポリマー
が利用される。Leff (1997) Bioworld 86:1-2。
【０１７８】 腸管外投与経路の一例としては、電気的な注入（イオントホレーゼ）または直
接的な注入、例えば中心静脈、静脈内、筋内、腹膜内、皮内注射が挙げられる。
【０１７９】 腸管外投与に適した組成物は、製薬上許容可能な滅菌等張液を含むが、これに
限定されるものではない。このような等張液は、ＩＳＳ含有組成物を注射するた
めの生理食塩水およびリン酸緩衝生理食塩水を含むが、これらに限定されるもの
ではない。
【０１８０】 胃腸投与経路は、摂取および直腸を含むが、これらに限定されるものではない
。本発明は、胃腸投与に適したＩＳＳ／抗原含有組成物を含む。このような胃腸
投与の一例としては、摂取および直腸投与用の座薬のための、製薬上許容可能な
粉末、錠剤または液体が上げられる。鼻−咽頭投与経路および肺投与経路の一例
としては、吸入、経気管支および経肺胞経路が挙げられる。本発明は、吸入によ
る投与に適したＩＳＳ／抗原含有組成物を含む。このような投与の一例としては
、種々のタイプの吸入用エアロゾル、ならびにデリバリーシステムのための粉末
形状が上げられる。ＩＳＳ／抗原含有組成物の吸入による投与に適した機器は、
噴霧器および気化器を含むが、これらに限定されるものではない。粉末の吸入供
給に使用するのに適した種々の機器の中には、粉末を充填された噴霧器および気
化器がある。
【０１８１】 注射、局所塗布、噴霧器および気化器に適した機器を製造する方法は、当業者
によく知られており、詳細な説明はしない。
【０１８２】 引き出された免疫応答を調節するのに、供給経路を選択することができる。例
えば、インフルエンザウィルス・ベクターを筋内または表皮（遺伝子銃）経路を
介して投与した場合、ＩｇＧ力価とＣＴＬ活性とは同一であったが、しかし、筋
肉接種が主にＩｇＧ２ａを産出したのに対し、表皮経路は主にＩｇＧ１を産出し
た。Pertmaer他 (1996) J. Virol. 70: 6119-6125。従って当業者は、本発明の
免疫調節オリゴヌクレオチドの種々異なる投与経路によって引き出された免疫原
性の僅かな差を利用することができる。
【０１８３】 上述の組成物および投与方法は説明のための一例であり、本発明のＩＳＳ／抗
原含有組成物の投与方法を限定するものではない。種々の組成物および機器を製
造する方法は当業者の能力内にあるものなので、ここでの詳しい説明は省く。
【０１８４】 ＩＳＳ／抗原含有組成物に対する免疫応答の（定性的かつ定量的双方の）分析
は、当業者によく知られた方法によって行うことができる。この方法の一例とし
ては、抗原特異的抗体の産出量の測定（特異的抗体のサブクラスの測定を含む）
、ＣＤ４+Ｔ細胞またはＮＫ細胞のようなリンパ球の特異的集団の活性化、ＩＦ
Ｎγ、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０またはＩＬ−１２のようなサ
イトカインの産出量の測定、および／またはヒスタミン放出量の測定が挙げられ
る。特異的抗体応答を測定する方法は、酵素結合イムノソルベント検定（ＥＬＩ
ＺＡ）を含み、当業者によく知られている。例えば、蛍光細胞分析分離装置（Ｆ
ＡＣＳ）を用いて、ＣＤ４+Ｔ細胞のような特異型リンパ球の数を測定すること
ができる。例えば、Raz (1994) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:9519-9523に記
載されたように、細胞毒性検定を行うことができる。サイトカインの血清濃度は
、例えばＥＬＩＳＡによって測定することができる。イムノゲンに対する免疫応
答を評価するためのこれらの検定およびその他の検定は、当業者によく知られて
いる。例えば、Selected Methods in Cellular Immunology (1980) Mishellおよ
びSchigi編 W.H.Freeman and Co.を参照されたい。
【０１８５】 Ｔｈ１型応答が刺激される、すなわち引き出されかつ／または増大されること
が好ましい。本発明によれば、Ｔｈ１型免疫応答の刺激は、ｉｎ ｖｉｖｏまた
はｅｘ ｖｉｖｏで、ＩＳＳなしで処理された細胞と比較して、ＩＳＳを伴って
処理された細胞からのサイトカイン産出量を測定することによって見極めること
ができる。細胞のサイトカイン産出量を測定する方法は、本明細書中に記載した
方法および当業者に知られている方法を含む。ＩＳＳ治療に応答して産出された
型のサイトカインは、細胞による、Ｔｈ１型またはＴｈ２型付勢免疫応答を示す
。本明細書中に使用するように、「Ｔｈ１型付勢」サイトカイン産出という用語
は、刺激の不存在におけるサイトカイン産出量と比較して、刺激因子の存在にお
いてＴｈ１型免疫応答と関連する、サイトカインの測定可能な産出量の増大を意
味する。このようなＴｈ１型付勢サイトカインの一例としては、ＩＬ−２、ＩＬ
−１２およびＩＦＮ−γが挙げられる。対照的に、「Ｔｈ２型付勢サイトカイン
」は、Ｔｈ２型免疫応答と関連するサイトカインを意味し、ＩＬ−４、ＩＬ−５
およびＩＬ−１３を含むが、これに限定されるものではない。ＩＳＳ活性を見極
めるのに役立つ細胞は、免疫系の細胞、宿主および／または細胞株から隔離され
た一次細胞、好ましくはＡＰＣおよびリンパ球、より好ましくはマクロファージ
およびＴ細胞を含む。
【０１８６】 Ｔｈ１免疫応答の刺激は、ＩＳＳ／抗原含有組成物で治療された宿主中で測定
することもでき、当業者によく知られた方法により見極めることができる。この
ような見極めは、以下のものを含むが、これに限定されるものではない：（１）
抗原負荷前後に測定されたＩＬ−４またはＩＬ−５のレベル減少；または、Ｉ
ＳＳなしで治療されて一回目の抗原投与を受けた、または一回目および二回目以
降の投与（負荷）を受けた対照と比べた場合の、ＩＳＳ／抗原含有組成物で治療
された宿主中のＩＬ−４またはＩＬ−５のより低いレベル（または、ＩＬ−４ま
たはＩＬ−５が存在しない場合もある）の検出；（２）抗原負荷前後に測定され
たＩＬ−１２、ＩＬ−１８および／またはＩＦＮ（α、βまたはγ）のレベル増
大；または、ＩＳＳなしで治療されて一回目の抗原投与を受けた、または一回目
および二回目以降の投与を受けた対照と比べた場合の、ＩＳＳ／抗原含有組成物
で治療された宿主中のＩＬ−１２またはＩＬ−１８および／またはＩＦＮ（α、
βまたはγ）のより高いレベルの検出；（３）ＩＳＳなしで治療された対照と比
較した場合の、ＩＳＳ／抗原で治療された宿主中の「Ｔｈ１型付勢」抗体産出量
；および／または（４）抗原負荷前後に測定された抗原特異的ＩｇＥのレベル減
少；または、ＩＳＳなしで治療されて一回目の抗原投与を受けた、または一回目
および二回目以降の投与を受けた対照と比べた場合の、ＩＳＳ／抗原含有組成物
で治療された宿主中の抗原特異的ＩｇＥのより低い（または、ＩｇＥが存在しな
い場合もある）レベルの検出。種々様々なこのような検出は、本明細書中に記載
した方法を用いて、ｉｎ ｖｉｔｒｏまたはｅｘ ｖｉｖｏで、ＡＰＣおよび／
またはリンパ球、好ましくはマクロファージおよび／またはＴ細胞によりサイト
カインを測定することによって行うことができる。これらの検出のいくつかは、
本明細書中に記載した、または当業者によく知られている方法を用いて、抗原特
異的抗体のクラスおよび／またはサブクラスを測定することにより行うことがで
きる。
【０１８７】 ＩＳＳ／抗原治療に応答して産出された抗原特異的抗体のクラスおよび／また
はサブクラスは、細胞による、Ｔｈ１型またはＴｈ２型付勢免疫応答を示す。本
明細書中に使用するように、「Ｔｈ１型付勢」抗体産出という用語は、Ｔｈ１型
免疫応答と関連する抗体（Ｔｈ１関連抗体）の産出量の測定可能な増大を意味す
る。１つまたは複数のＴｈ１関連抗体が測定されてよい。このようなＴｈ１型付
勢抗体の一例としては、ヒトＩｇＧ１および／またはＩｇＧ３（例えばWidhe他
(1998) Scand. J. Immunol. 47:575-581およびde Martino他 (1999) Ann. Aller
gy Asthma Immunol 83:160-164参照）およびネズミＩｇＧ２ａが挙げられる。対
照的に、「Ｔｈ２型付勢抗体」は、Ｔｈ２型免疫応答と関連した抗体を意味し、
ヒトＩｇＧ２、ＩｇＧ４および／またはＩｇＥ（例えば、Widhe他 (1998)および
de Martino他 (1999)参照）、およびネズミＩｇＧ１および／またはＩｇＥを含
むが、これらの限定されるものではない。
【０１８８】 ＩＳＳ投与の結果として発生するＴｈ１型付勢サイトカイン誘導は、向上され
た細胞免疫応答を引き起こす。このような応答は例えば、ＮＫ細胞、細胞障害性
キラー細胞、Ｔｈ１ヘルパーおよび記憶細胞によって行われる。これらの応答は
、ウィルス、真菌、原生動物寄生虫、細菌、アレルギー疾患および喘息、ならび
に腫瘍に対する予防または治療のためのワクチン接種の使用に、特に有益である
。
【０１８９】 いくつかの実施例の場合、Ｔｈ２応答が抑制される。Ｔｈ２応答の抑制は、例
えば、ＩＬ−４およびＩＬ−５のようなＴｈ２関連サイトカインのレベルの減少
、ならびにＩｇＥ減少およびアレルゲンに応答したヒスタミン放出の減少によっ
て見極めることができる。
【０１９０】 発明の方法 本発明はまた、免疫応答を調節する方法を含む。この方法は、免疫応答の所望
の調節が達成されるように複合体の集団（典型的にはこの集団と、製薬上許容可
能な賦形剤とを含んで成る組成物である）を投与することを含んで成る。複合体
の投与および免疫応答の評価については上述の通りである。
【０１９１】 いくつかの実施例の場合、本発明は、個体内の免疫応答を調節する方法を提供
する。この方法は、免疫応答を調節するのに充分な量で、本明細書中に記載した
いずれかの集団から成る組成物を個体に投与することを含んで成る。一般的に、
例えば疾患状態または疾患が発生するおそれのために、個体はこのような調節を
必要としているか、または必要とすることになる。これらの状態の一例としては
、アレルギー、癌、感染症（例えばウィルスまたは細菌感染）が挙げられる。
【０１９２】 いくつかの実施例の場合、免疫調節は、（１つまたは複数の）Ｔｈ１関連サイ
トカイン、例えばインターフェロン−γを刺激することを含んで成る。いくつか
の実施例では、免疫調節は、Ｔｈ２関連サイトカイン、例えばＩＬ−４および／
またはＩＬ−５の産出を抑制することを含んで成る。これらのパラメータは、当
業者にとって標準的な上述の方法を用いて測定される。
【０１９３】 いくつかの実施例の場合、１つまたは複数のＴｈ１関連サイトカインが産出さ
れるのに対し、抗原特異的抗体は抑制される。これらのパラメータは、当業者に
とって標準的な上述の方法を用いて測定される。
【０１９４】 或る実施例の場合、免疫調節は、（１つまたは複数の）Ｔｈ１関連サイトカイ
ン、例えばインターフェロン−γを刺激し、抗原特異的抗体の産出を抑制するこ
とを含んで成る。Ｔｈ１関連抗体産出およびＴｈ１およびＴｈ２の関連抗体の組
み合わせの産出を含む、種々の複合体集団に応じた抗原特異的抗体産出の抑制度
は上述の通りであり、これらの方法に当てはまる。
【０１９５】 いくつかの実施例の場合、免疫調節はヒスタミン放出を抑制することを含んで
成る。種々の複合体集団に応じたヒスタミン放出の抑制度は、上述の通りであり
、これらの方法に当てはまる。
【０１９６】 例２〜４が伝えるように、本発明はまた、個体中の抗体形成、好ましくは抗原
特異的抗体形成の抑制方法を提供する。この場合、Ｔｈ１関連サイトカインの産
出の刺激が、ＨクラスのＩＳＳ−抗原複合体の集団を個体に投与することを含ん
で成り、これにより、Ｔｈ１関連サイトカインが刺激される一方、抗体形成が抑
制される。これらのパラメータは、当業者にとって標準的な上述の方法を用いて
測定される。
【０１９７】 いくつかの実施例の場合、本発明は、個体のアレルギー状態を治療する方法を
提供する。この方法は、一般的に抗原に対する免疫応答を調節することによって
、抗原がアレルゲンであるような本明細書中に記載した集団のいずれか（一般的
には記載の組成物と製薬上許容可能な賦形剤とから成る組成を有する）を、アレ
ルギー状態を改善しまたは軽減するのに充分な量で投与することを含んで成る。
軽減は例えば、アレルギーに関連する１つまたは複数の症状の緩和によって見極
めることができる。
【０１９８】 本発明はまた、抗原、特にアレルゲンのアレルゲン性を低減する方法を提供す
る。この方法は、抗原単独の場合に比べて（すなわち抗原がＩＳＳにリンクされ
ていない）アレルゲン性が低減されるように、アレルゲンをＩＳＳ含有ポリヌク
レオチドに複合することから成る。いくつかの実施例の場合、本発明は、抗原、
特にアレルゲンのアレルゲン性を低減する方法を提供する。この方法は、ＩＳＳ
含有ポリヌクレオチドにアレルゲンを複合することを含んで成り、抗原に対して
低い平均数のＩＳＳを有する複合分子集団と比較して、アレルゲン性が低減され
るように、ＩＳＳの平均数が設定される。（Ｔｈ１型およびＴｈ２型応答を含む
）免疫応答の種々の面における調節は、上述のように測定される。
【０１９９】 いくつかの実施例の場合、本発明は、抗原特異的ＣＴＬの活性を発生させる一
方、抗原特異的抗体の産出を抑制するための方法を提供する。
【０２００】 本発明はまた、本明細書中に記載した技術および／またはステップのいずれか
から成る複合体クラスを製造する方法を提供する。
【０２０１】 以下に例を示すが、これらの例が本発明を限定するものではない。
【０２０２】 実施例 例１ ＡＩＣ−Ｌ、ＡＩＣ−ＭまたはＡＩＣ−Ｈの調製 ＡＩＣ−Ｌ、ＡＩＣ−ＭおよびＡＩＣ−Ｈは、ブタクサ・アレルゲンＡｍｂ
ａ １とＩＳＳ含有ポリヌクレオチドＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１とから成る共有複
合体である。複合体の３つのクラス全ては、同じＩＳＳ含有ポリヌクレオチドか
ら調製され、同じヘテロ二官能価リンカーを採用する。Ａｍｂ ａ １に複合さ
れたオリゴヌクレオチドの数は、クラスによって異なる。Ａｍｂ ａ １に結合
されたオリゴヌクレオチドの数は、複合体のサイズまたは分子量を測定すること
によって見極めることができる（図１２および１３参照）。ＡＩＣ−Ｌは１Ａｍ
ｂ ａ １分子当たり２〜３個のオリゴヌクレオチド平均数を含有し、ＡＩＣ−
Ｍは３．５〜４．５個の平均数を、ＡＩＣ−Ｈは５．５個を上回る平均数を含有
している。ＡＩＣのこれら３つのクラスは、後述のような異なる生物学的特性を
有している。
【０２０３】 ５’チオＩＳＳオリゴヌクレオチドの調製および単離 トリカルボキシエチルホスフィン（ＴＣＥＰ）を、周囲温度に到達させ、１０
ｍＭ ＮａＰＯ4／１４１ｍＭ ＮａＣｌ／ｐＨ７．２中に溶解させた。５’ジ
スルフィドＩＳＳオリゴヌクレオチドを周囲温度に到達させ、同じ緩衝液中に溶
解し、４０℃で２時間、ＴＣＥＰ溶液で処理した。この材料を直接、隔離ステッ
プに移した。
【０２０４】 予めパックされた２つの脱塩カラムを直列につなぎ、１０ｍＭ ＮａＰＯ4／
１４１ｍＭ ＮａＣｌ／ｐＨ７．２緩衝液と釣り合わせた。５’ジスルフィドＩ
ＳＳオリゴヌクレオチド還元混合物をカラムに装てんし、５’チオＩＳＳオリゴ
ヌクレオチドを無勾配溶離した。
【０２０５】 マレイミド活性化Ａｍｂ ａ １の調製および単離 Ｎ−エチル・マレイミド（ＮＥＭ）を周囲温度に到達させ、ジメチル・スルホ
キシド（ＤＭＳＯ）中に攪拌しながら溶解した。Ａｍｂ ａ １を溶かし、２０
℃で２時間、ＮＥＭ溶液で処理した。スルホスクシニミジル−４−（Ｎ−マレイ
ミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ｓＳＭＣＣ）を周囲温度
に到達させ、ＤＭＳＯ中に溶解した。ＮＥＭブロックＡｍｂ ａ １を２０℃で
２．５時間、ｓＳＭＣＣで処理した。この材料を直接、隔離ステップに移した。
予めパックされた２つの脱塩カラムを直列につなぎ、１０ｍＭ ＮａＰＯ4／１
４１ｍＭ ＮａＣｌ／ｐＨ７．２緩衝液と釣り合わせた。Ａｍｂ ａ １活性化
混合物をカラムに装てんし、マレイミド活性化Ａｍｂ ａ １を無勾配溶離した
。
【０２０６】 ＡＩＣ−Ｌ、ＡＩＣ−ＭまたはＡＩＣ−Ｈの調製および単離 ４モル当量の５’チオＩＳＳオリゴヌクレオチドと、１モル当量のマレイミド
活性化Ａｍｂ ａ １とから成る混合物を保温することにより、粗ＡＩＣ−Ｌ複
合体を調製した。同様にして、ただし、５’チオＩＳＳオリゴヌクレオチドをそ
れぞれ７モル当量および１７モル当量添加することにより、粗ＡＩＣ−Ｍおよび
粗ＡＩＣ−Ｈを調製した。予めパックされたゲルろ過カラムを、１０ｍＭ Ｎａ
ＰＯ4／１４１ｍＭ ＮａＣｌ／ｐＨ７．２緩衝液と釣り合わせ、粗ＡＩＣ−Ｌ
、粗ＡＩＣ−Ｍおよび粗ＡＩＣ−Ｈをカラムに装てんした。ＡＩＣを１０ｍＭ
ＮａＰＯ4／１４１ｍＭ ＮａＣｌ／ｐＨ７．２緩衝液で無勾配溶離した。
【０２０７】 例２ マウス中のＡＩＣ−Ｈ、ＡＩＣ−ＭおよびＡＩＣ−Ｌの免疫原性 １０匹のＢＡＬＢ／ｃマウスから成る群を、尾の皮内において、１μｇのＡＩ
Ｃ（Ｈ，Ｍ，Ｌ）で免疫化した。対照マウスに１０μｇのＡｍｂ ａ １の同一
注射を施した。第１回および第２回免疫化２週間後にマウスから血液を採取し、
血清を調製し、Ａｍｂ ａ １特異的ＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａをＥＬＩＳＡに
よって測定した。マウスの系の場合、ＩｇＧ１応答は、Ｔｈ２型免疫応答と関連
するのに対し、ＩｇＧ２ａ応答はＴｈ１型応答と関連する。
【０２０８】 いくつかの実験では、マウスを第２回免疫化４週間後に殺し、脾臓を採集し、
脾臓細胞培養を調製した。これらの培養をＡｍｂ ａ １で４日間、ｉｎ ｖｉ
ｔｒｏで刺激し、Ａｍｂ ａ １に応答して培地中に分泌されたＩＦＮγおよび
ＩＬ−５をＥＬＩＳＡによって測定した。ＩＦＮγはＴｈ１細胞の産出物である
のに対し、ＩＬ−５はＴｈ２細胞の産出物である。
【０２０９】 ＡＩＣ−Ｌ、ＡＩＣ−ＭおよびＡｍｂ ａ １の免疫原性の比較 ＡＩＣ−Ｌ、ＡＩＣ−ＭおよびＡｍｂ ａ １の抗体応答を表２に示す（平均
力価±標準偏差）。ＡＩＣ−Ｍは第１回免疫化後、極めて低いＩｇＧ１応答と、
比較的高いＩｇＧ２ａ応答を引き起こした。第２回免疫化後、ＩｇＧ２ａ応答が
ＩｇＧ１応答よりもなおも約５倍高いのに伴って、ＩｇＧ１応答およびＩｇＧ２
ａ応答は双方とも増大した。ＡＩＣ−Ｌは、第１回および第２回免疫化後のＡＩ
Ｃ−Ｍよりも高いＩｇＧ１応答およびＩｇＧ２ａ応答を引き起こした。ＡＩＣ−
Ｌによる抗体応答もまた、ＩｇＧ１応答よりもＩｇＧ２ａ応答に向かってより重
く重み付けされた。ＩｇＧ２ａ＞ＩｇＧ１を示す、ＡＩＣ−ＭおよびＡＩＣ−Ｌ
に対する抗体応答は、Ｔｈ１型免疫応答を示唆している。対照的に、修飾されて
いないＡｍｂ ａ １は、第１回および第２回免疫化後に高いＩｇＧ１応答と低
いＩｇＧ２ａ応答とを引き起こした。このような型の抗体応答は、Ｔｈ２型免疫
応答を示唆している。従ってＡｍｂ ａ １のＡＩＣ−Ｌ修飾形およびＡＩＣ−
Ｍ修飾形は、Ｔｈ２型抗原(Ａｍｂ ａ １)の免疫応答を、Ｔｈ１プロフィルに
向かってシフトする。ＡＩＣ−Ｌは、ＡＩＣ−Ｍよりも高い総抗体応答を発生さ
せると考えられた。
【０２１０】
【表５】
【０２１１】 ＡＩＣ−Ｌ、ＡＩＣ−ＭおよびＡｍｂ ａ １の免疫原性の比較 ＡＩＣ−Ｌ、ＡＩＣ−ＭおよびＡｍｂ ａ １に対する抗体応答を明示する第
２の実験を表３に示す（平均力価±標準偏差）。この実験の結果は上述の実験と
類似しているが、同一ではない。ＩｇＧ１応答は全体的にこの実験において、上
述の実験よりも高かった。その他の点では結論は同じである。Ａｍｂ ａ １の
ＡＩＣ−ＬおよびＡＩＣ−Ｍ双方の修飾形は、Ｔｈ２型抗原(Ａｍｂ ａ １)の
免疫応答を、Ｔｈ１プロフィルに向かってシフトする。ＡＩＣ−Ｌは、ＡＩＣ−
Ｍよりも高い総抗体応答を発生させると考えられる。
【０２１２】
【表６】
【０２１３】 ＡＩＣ−Ｍ、ＡＩＣ−ＨおよびＡｍｂ ａ １の免疫原性の比較 ＡＩＣ−Ｍ、ＡＩＣ−ＨおよびＡｍｂ ａ １に対する抗体応答を表４に示す
（平均力価±標準偏差）。ＡＩＣ−Ｍは前の実験と類似の抗体応答を発生させ、
ＩｇＧ２ａ力価はＩｇＧ１力価よりも大きい。ＡＩＣ−Ｈは、第１回および第２
回双方の免疫化後、ＡＩＣ−Ｍよりも低いＩｇＧ１およびＩｇＧ２ａを引き起こ
す。ＡＩＣ−Ｈによる抗体応答もまた、ＩｇＧ１応答よりもＩｇＧ２ａ応答に向
かってより重く重み付けされる。修飾されていないＡｍｂ ａ １はやはり、第
１回および第２回免疫化後に高いＩｇＧ１応答と低いＩｇＧ２ａ応答とを引き起
こした。従って、Ａｍｂ ａ １のＡＩＣ−Ｈ修飾形およびＡＩＣ−Ｍ修飾形は
、Ｔｈ２型抗原(Ａｍｂ ａ １)の免疫応答を、Ｔｈ１プロフィルに向かってシ
フトする。ＡＩＣ−Ｈは、ＡＩＣ−Ｍよりも高い総抗体応答を発生させると考え
られる。
【０２１４】
【表７】
【０２１５】 ＡＩＣ−Ｍ、ＡＩＣ−ＨおよびＡｍｂ ａ １の免疫原性の比較 （表５に要約；平均力価±標準偏差）この実験は、表４に要約した結果を再現
し、１つの付加的なＡＩＣ−Ｈロットを含む。この実験はＡＩＣ−ＭおよびＡＩ
Ｃ−Ｈが同様のＴｈ１応答を発生させ、ＡＩＣ−ＨがＡＩＣ−Ｍよりも低い抗体
応答を発生させることを確証する。
【０２１６】
【表８】
【０２１７】 ＡＩＣ−Ｌ、ＡＩＣ−ＭおよびＡＩＣ−Ｈによる免疫化に対する抗原特異的抗
体を、Ａｍｂ ａ １による免疫化に対する応答と比較して、図４，７および１
４にも示す。これらの結果は、ＡＩＣ−Ｈによる免疫化が、ＡＩＣ−ＭまたはＡ
ＩＣ−Ｌによる免疫化よりも低い抗原特異的抗体応答をもたらすことを示す。
【０２１８】 ＡＩＣ−Ｈによる免疫応答におけるＴｈ２からＴｈ１へのシフト マウスに第０週に、Ｔｈ２応答を発生させるミョウバン中のＡｍｂ ａ １を
初回投与した。第１５週に、これらのマウスにＡｍｂ ａ １またはＡＩＣ−Ｈ
（ロットＢＫ ５）をそれぞれ１０μｇずつ、２週間の間隔を置いて三回注射し
て治療した（図１〜３参照、注射を矢印で示す）。Ａｍｂ ａ １に対して特異
的なＩｇＧ１、ＩｇＥおよびＩｇＧ２ａをＥＬＩＳＡによって測定し、結果を図
１〜３にそれぞれ示す。
【０２１９】 ＡＩＣ−Ｈ治療は、Ｔｈ２型応答からＴｈ１型応答へのシフトをもたらす。こ
のシフトは、産出されたＡｍｂ ａ １特異的ＩｇＧ１およびＩｇＥの量が減小
することと、産出されたＡｍｂ ａ １特異的ＩｇＧ２ａの量が増大することに
より示唆される。対照的に、修飾されていないＡｍｂ ａ １による治療は、よ
り高いＩｇＧａおよびＩｇＥ応答と、より低いＩｇＧ２ａとをもたらした。
【０２２０】 例３ ＡＩＣ−ＭおよびＡＩＣ−Ｈで免疫化され、Ａｍｂ ａ １単独では免
疫化されていないマウスにＴｈ１関連サイトカインが引き起こされる。
【０２２１】 ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＡｍｂ ａ １露出に対する脾臓のサイトカイン応
答を表６に示す（平均力価±標準偏差）。ＡＩＣ−ＭおよびＡＩＣ−Ｈによる免
疫化は、Ａｍｂ ａ １に応答する高レベルのＩＦＮγおよび低レベルのＩＬ−
５を分泌する記憶脾臓細胞を確立した。このことはＴｈ１応答を示唆する。対照
的に、修飾されていないＡｍｂ ａ １による免疫化は、低レベルのＩＦＮγお
よび高レベルのＩＬ−５を分泌する記憶脾臓細胞を確立した。このことはＴｈ２
応答を示唆する。
【０２２２】 従ってＡＩＣ−ＭおよびＡＩＣ−Ｈの双方はＴｈ１応答を確立することができ
る。ＡＩＣ−Ｍはより低い抗体応答を発生させるが、しかしＡＩＣ−Ｍに対する
サイトカイン応答と類似している。
【０２２３】
【表９】
【０２２４】 表７（平均力価±標準偏差）のデータは、マウスがＡＩＣ−Ｍおよび２つの異
なるロットのＡＩＣ−Ｈで免疫化されている場合に、ＩＦＮ−γ（Ｔｈ１サイト
カイン）産出を引き起こした状態を示す。対照的に、Ａｍｂ ａ １による免疫
化は、ＩＦＮ−γを殆ど産出しなかった。マウスがＡＩＣ−ＭおよびＡＩＣ−Ｈ
で免疫化されている場合には、ＩＬ−５（Ｔｈ２サイトカイン）の産出は殆どま
たは全く観察されなかった。Ａｍｂ ａ １免疫化は高レベルのＩＬ−５産出を
引き起こした。これらのデータは、ＡＩＣ−ＭおよびＡＩＣ−Ｈによるマウスの
免疫化が、サイトカイン・プロフィルをシフトするのに際して、強力なＴｈ１型
付勢を反映するのに効果的であることを示す。
【０２２５】
【表１０】
【０２２６】 図５，６，８，９および１５は、ＡＩＣ−Ｌ、ＡＩＣ−Ｍ、ＡＩＣ−Ｈおよび
Ａｍｂ ａ １の投与に応答する、ＩＬ−５およびＩＦＮ−γの産出を示す。こ
れらのデータは、ＡＩＣ−Ｌ、ＡＩＣ−Ｍ、ＡＩＣ−ＨがＴｈ１型サイトカイン
・プロフィルを効果的に引き起こしていることを示す。
【０２２７】 例４ この検定では、ブタクサアレルギーのヒト被験者の血液から、末梢血単核細胞
（ＰＢＭＣｓ）を調製した。これらの細胞を５μｇ／ｍｌのＡｍｂ ａ １、Ａ
ＩＣ−ＭまたはＡＩＣ−Ｈと共に２ ｘ １０6／ｍｌで６日間培養した。上澄
みを収穫し、上澄みのＩＦＮ−γ含量をＥＬＩＳＡによって測定した。いくつか
の細胞を第６日に、２．５μｇ／ｍｌのフィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）およ
び１０ｎｇ／ｍｌのホルボール・１２−ミリステート・１３−アセテート（ＰＭ
Ａ）で２４時間、再刺激した。その後、上澄み液を収穫して、上澄みのＩＬ−４
およびＩＬ−５含量をＥＬＩＳＡによって測定した。ブタクサアレルギーを有す
る被験者からのＰＢＭＣのサイトカイン応答を表８に示す（平均力価±標準偏差
）。ＡＩＣ−ＨおよびＡＩＣ−Ｍの双方は、ブタクサに対してアレルギー性を有
する個体からの細胞中のＴｈ１型サイトカイン応答を刺激することができる。対
照的に、Ａｍｂ ａ １は、これらの細胞からＴｈ２型サイトカイン応答、すな
わち僅かなＩＦＮ―γおよび高レベルのＩＬ−４およびＩＬ−５を発生させた。
これらのデータは、ＡＩＣ−ＭおよびＡＩＣ−Ｈが、アレルギー性の個体からの
ＰＢＭＣｓ中のサイトカイン・プロフィルをシフトする上で、Ｔｈ１型応答付勢
を反映するのに効果的であることを示す。
【０２２８】
【表１１】
【０２２９】 例５ ＡＩＣ−Ｈ、ＡＩＣ−Ｍ、ＡＩＣ−Ｌが、ブタクサアレルギーのヒト被験
者の好塩基球からの異なるヒスタミン放出誘発程度を呈する。
【０２３０】 ＡＩＣのアレルゲン性を、ｉｎ ｖｉｖｏでのヒスタミン放出検定を用いてＡ
ｍｂ ａ １と比較した。このテストは抗原のｉｎ ｖｉｖｏアレルゲン性を予
測する。この検定では、ブタクサアレルギー患者の血液から、白血球を調製した
。これらの白血球を０．０００１〜１．０μｇ／ｍｌの範囲のＡｍｂ ａ １ま
たはＡＩＣ−Ｌ、ＡＩＣ−Ｍ、ＡＩＣ−Ｈ濃度で、４５分間保温した。次いで細
胞を遠心分離によりペレット化し、専用自動アナライザシステムを使用して、ヒ
スタミン含量に関して上澄みを蛍光分析した。８％ＨＣｌＯ4で細胞を溶解する
ことにより、１００％のヒスタミン放出を測定する。ＡＩＣ−ＬロットＢＫ１１
、ＡＩＣ−ＭロットＢＫ１０、ＡＩＣ−ＨロットＢＫ８の結果を表９に示す（平
均力価±標準偏差（Ｓ．Ｄ．）として要約を付けた）。これらの結果をＨＲ40に
照らして表現する。ＨＲ40はヒト細胞から４０％のヒスタミン放出を引き起こす
のに必要なサンプル濃度（Ａｍｂ ａ １またはＡＩＣ（μｇ／ｍｌ））として
規定される。これらの結果は、全てのＡＩＣクラスの、アレルギー患者の好塩基
球からヒスタミン放出を引き起こすための能力が著しく低いことを示す。ＡＩＣ
−ＬのＨＲ40値は平均するとＡｍｂ ａ １よりも６２倍高く、ＡＩＣ−ＭのＨ
Ｒ40値は平均するとＡｍｂ ａ １よりも１３２倍高く、ＡＩＣ−ＨのＨＲ40値
は平均するとＡｍｂ ａ １よりも１４１７倍高い（例えば、ヒスタミン放出を
引き起こすのに、Ａｍｂ ａ １よりも６２倍多い、１３２倍多い、または１４
１７倍を超えて多いＡＩＣが必要となる）。アレルゲンによって引き起こされる
ヒスタミン放出を、図１０および１１に示す。
【０２３１】 これらのデータは、ＡＩＣ種が天然Ａｍｂ ａ １アレルゲンよりも、ｉｎ
ｖｉｖｏで、著しく低いアレルゲン性を有さなければならないことを予測する。
アレルゲン性の低減は、アレルゲンに結合されたＩＳＳオリゴヌクレオチドの数
に関連する。従って、ＡＩＣ−ＬはＡＩＣ形の最大アレルゲン性を有し、ＡＩＣ
−Ｍは中間アレルゲン性を有し、ＡＩＣ−Ｈは最小アレルゲン性を有する。
【０２３２】
【表１２】
【０２３３】 免疫化マウスにおいてＡＩＣ−Ｌ、ＡＩＣ−Ｍ、ＡＩＣ−Ｈ複合体が示す互い
に異なる免疫調節特性を表９に要約する。これらのデータは、ＩＳＳ複合体がＡ
ｍｂ ａ １（抗原単独）とは、Ｔｈ１型応答に向かって免疫応答を付勢する能
力で異なっていることを明示している。ＡＩＣ−Ｌは、高い抗体産出と、Ｔｈ１
極性に向かう中程度のシフトと、中程度のヒスタミン放出抑制とを引き起こす。
対照的に、ＡＩＣ−Ｍは、それよりも僅かに低い抗体産出と、ＩＦＮ−γの高い
産出と、免疫化後早期に発生する、Ｔｈ１極性に向かう強度のシフトと、より強
いヒスタミン放出抑制とを引き起こす。さらに対照的に、ＡＩＣ−Ｈは、低い抗
体産出と、これら３つの組成物のうちでは最も高いＩＦＮ−γ産出と、免疫化後
遅れて発生するＴｈ１極性に向かう強度のシフトと、最強のヒスタミン放出抑制
とを引き起こす。
【０２３４】
【表１３】
【０２３５】 表１１は、いくつかの実験中の異なる時点で複合物に応答して発生した、Ｔｈ
２抗体に対する、Ａｍｂ ａ １特異的Ｔｈ１抗体の比の要約である。
【０２３６】
【表１４】
【０２３７】 例６ ＡＩＣ複合体集団がＣＴＬ活性を引き起こす 種々異なるクラスの抗原ＩＳＳ複合体を、マウスの細胞障害性Ｔリンパ球（Ｃ
ＴＬ）活性を引き起こす能力に関してテストした。
【０２３８】 ＯＩＣ−Ｌ ＩＳＳ、ＯＩＣ−Ｍ ＩＳＳ、ＯＩＣ−Ｈ ＩＳＳは抗原オボア
ルブミン（ＯＶＡ）と、ＩＳＳ含有ポリヌクレオチドＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１と
から成る複合体である。ＯＩＣ−Ｍ対照Ａは、ＯＶＡと非ＩＳＳポリヌクレオチ
ド５’−ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡＧＧＴＴＡＧＡＧＡＴＧＡ−３’（ＳＥＱ ＩＤ
ＮＯ：９）とから成る共有複合体である。ＯＩＣ−Ｍ対照Ｂは、ＯＶＡと非Ｉ
ＳＳポリヌクレオチド５’−ＴＧＡＣＴＧＴＧＡＡＣＣＴＴＡＧＡＧＡＴＧＡ−
３’（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０）とから成る共有複合体である。これらの複合
体を、本質的に例１に記載したように調製した。
【０２３９】 マウスを１０μｇのＯＶＡ複合体またはＯＶＡ抗原単独で２回（２週間の間隔
を置いて）、皮内において免疫化した。第二回免疫化の４週間後に、脾臓を収穫
し、ＯＶＡ特異的な細胞長が異性Ｔリンパ球活性に関して検定した。簡略に述べ
ると、脾臓をワイヤスクリーンを通して解離し、細胞培地中に再懸濁させ、カウ
ントした。各脾臓からの細胞の一部を、抗原提示細胞（ＡＰＣｓ）として作用す
るように、Ｈ−２ｂマウスによって認識されるＯＶＡ ＣＴＬエピトープ（ＳＩ
ＩＮＦＥＫＬ，ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）に特異的なペプチドで処理した。こ
れらの細胞をペプチド（１μｇ／ｍｌ）と共に１時間、３７℃で、７％ＣＯ2で
保温し、次いで洗浄して、フラットな底部を有する２４ウェル組織培養プレート
内に、１ ｘ １０6個の細胞／ウェルの濃度で平板培養した。平板培養のため
の細胞培地に、ＩＬ−２源としてＲａｔ Ｔ−Ｓｔｉｍを追加し、これらのエフ
ェクター細胞を３７℃で、７％ＣＯ2で７日間保温した。細胞を３日目に搬送し
、洗浄し、５日目に再培養した。７日目に、ＥＬ−４標的細胞を（ＳＩＩＮＦＥ
ＫＬ（ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１１）ペプチドで）ペプチドパルスし、洗浄した。
７日目にエフェクター細胞をカウントし、種々のエフェクター：標的比（４０：
１、１０：１、２．５：１）を達成するように、標的細胞と一緒に平板培養し、
３７℃で、７％ＣＯ2で４時間保温した。各ウェルからの上澄みを捕集し、細胞
破壊の指標として、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）に関して検定し、％溶解率を算出
した。
【０２４０】 このような実験から生じたＣＴＬ結果を図１６に示す。全てのクラス（Ｈ，Ｍ
およびＬ）の抗原−ＩＳＳ複合体は、抗原単独または非ＩＳＳポリヌクレオチド
と複合された抗原よりも、マウスにおいて大きなＣＴＬ活性を引き起こした。
【０２４１】 例７ ＡＩＣ複合体集団は、抗原に結合するために抗原特異的抗体と競合する
、種々異なる程度の能力を呈する。
【０２４２】 競合ＥＬＩＳＡを実施することにより、種々異なるＡｍｂ ａ １複合体集団
がＡｍｂ ａ １に結合するためにＡｍｂ ａ １特異的ＩｇＥと競合する能力
を比較した。
【０２４３】 ９６個ウェルプレートに、コーティング緩衝液（０．１Ｍ Ｎａ2ＰＨＯ4、ｐ
Ｈ９．０）中１．０μｇ／ｍｌのＡｍｂ ａ １を、１００μｌ／ウェルで一晩
、４℃で塗布した。プレート・ウォッシャを使用して、プレートを洗浄緩衝液（
１ Ｘ ＰＢＳ／０．０５％ Ｔｗｅｅｎ ２０）で６回洗浄した。２００μｌ
のブロック緩衝液を添加し、プレートを約１時間またはそれ以上、室温で保温し
た。次いで洗浄緩衝液でプレートを６回洗浄した。Ａｍｂ ａ １および複合体
の連続稀釈を９６ウェルプレートで調製した。以下のものを、抗原塗布プレート
に添加した：（ａ）１００μｌ稀釈緩衝液を全ての空いたウェルへ；（ｂ）Ａｍ
ｂ ａ １または複合体および血清と一緒に予め保温された各サンプル１００μ
ｌを重複して、適切なウェルへ。プレートを３０分間室温で保温し、次いで洗浄
緩衝液で６回洗浄した。抗体検出のために、ヤギの抗ヒトＩｇＥビオチン複合抗
体１００μｌ／ウェルを、希釈緩衝液中１：５０で、全てのウェルに添加し、次
いで、室温で１時間保温した。プレートを６回洗浄緩衝液で洗浄した。１００μ
ｌ／ウェルのストレプトアビジン−ホースラディッシュ・ペルオキシダーゼ（Ｈ
ＲＰ）（稀釈緩衝液中１：５０，０００）を全てのウェルに添加し、次いで室温
で１時間保温した。プレートを６回洗浄緩衝液中で洗浄し、現像した。この実施
例の場合、現像時間はほぼ２２分であった。プレートを４５ｎｍにおいて読み取
り、６５０ｎｍにおいて減算した（ＥｍａｘおよびＳＯＦＴｍａｘ Ｐｒｏ）（
ソフトウェア・バージョン２．６．１、分子用デバイス(Molecular Devices)）
。Ａｍｂ ａ １、ＡＩＣ−ＭおよびＡＩＣ−Ｈに関して、５０％阻害における
ｎｇ／ｍｌはそれぞれ４０，１２０および１９０であった（ＡＩＣ−Ｈは２つの
ロットでテストし、同一値を得た）。５０％阻害に対応する、Ａｍｂ ａ １に
対するＡＩＣ−Ｍの比は３であった。５０％阻害に対応する、Ａｍｂ ａ １に
対するＡＩＨ−Ｈの比は４．７５であった。
【０２４４】 本発明をわかりやすく明白にするために、その詳細について図面および例によ
って説明してきたが、これらに変化や変更を加えることが可能であることは当業
者には明らかである。従って上記記載事項および例は、本発明の範囲を限定する
ものとして解釈されるべきではなく、本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲に
よって示される。
【配列表】
【図面の簡単な説明】
【図１】 ＡＩＣ−Ｈ（すなわち高程度の複合、Ａｍｂ ａ １およびＩＳＳ）を受容し
たマウスの抗Ａｍｂ ａ １ ＩｇＧ１産出値を示すグラフである。中黒三角形
はＡＩＣ−Ｈを、中黒四角形はＡｍｂ ａ １を示す。簡略に説明すると、第０
週において、Ｔｈ２応答を生ぜしめるミョウバン中のＡｍｂ ａ １でマウスを
準備する。開始１５週間後、マウスをＡｍｂ ａ １またはＡＩＣ−Ｈ(ロット
５)で、２週間の間隔を置いて３回注射した（１０μｇずつ；矢印で示す）。例
の項目で説明するように、ＩｇＧ１をＥＬＩＳＡを使用して測定した。
【図２】 ＡＩＣ−Ｈ複合集団を受容したマウスにおける抗Ａｍｂ ａ １ ＩｇＥ産出
値を示すグラフである。中黒三角形はＡＩＣ−Ｈを、中黒四角形はＡｍｂ ａ
１を示す。図１に関する凡例に記載したように実験を行った。ＩｇＥをＥＬＩＳ
Ａを使用して測定した。
【図３】 ＡＩＣ−Ｈ複合集団を受容したマウスにおける抗Ａｍｂ ａ １ ＩｇＧ２ａ
産出値を示すグラフである。中黒三角形はＡＩＣ−Ｈを、中黒四角形はＡｍｂ
ａ １を示す。図１に関する凡例に記載したように実験を行った。例の項目で説
明するように、ＩｇＥをＥＬＩＳＡを使用して測定した。
【図４】 ＡＩＣ−Ｈ（ロットＢＫ５およびＢＫ９）、ＡＩＣ−Ｍ（ロットＢＫ１０およ
びＢＫ１２）およびＡＩＣ−Ｌ（ロットＢＫ１１）を受容したマウスの第１回免
疫化２週間後の、Ａｍｂ ａ １に対する抗Ａｍｂ ａ １ ＩｇＧ１（左の棒
）およびＩｇＧ２ａ(右の棒)の産出値を示す棒グラフである。
【図５】 Ａｍｂ ａ １の受容と比較した、ＡＩＣ−Ｈ（ロットＢＫ５およびＢＫ９）
受容後のマウスにおける第２回免疫化４週間後のＩＬ−５産出値を示す棒グラフ
である。
【図６】 Ａｍｂ ａ １の受容と比較した、ＡＩＣ−Ｈ（ロットＢＫ５およびＢＫ９）
を受容したマウスにおける第２回免疫化４週間後のインターフェロンγの産出値
を示す棒グラフである。
【図７】 負荷前にＡｍｂ ａ １による免疫化を２ラウンド受けたマウスと比較した、
負荷前にＡＩＣ−Ｈ（ロットＢＫ５およびＢＫ９）による免疫化を２ラウンド受
けたマウスにおけるＡｍｂ ａ １負荷２週間後のＡｍｂ ａ １特異的ＩｇＧ
１（左の棒）およびＡｍｂ ａ １特異的ＩｇＧ２ａ（右の棒）の産出値を示す
棒グラフである。
【図８】 負荷前にＡｍｂ ａ １による免疫化を２ラウンド受けたマウスと比較した、
負荷前にＡＩＣ−Ｈ（ロットＢＫ９）による免疫化を２ラウンド受けたマウスに
おけるＡｍｂ ａ １負荷４週間後のＩＬ−５産出値を示す棒グラフである。
【図９】 負荷前にＡｍｂ ａ １による免疫化を２ラウンド受けたマウスと比較した、
負荷前にＡＩＣ−Ｈ（ロットＢＫ９）による免疫化を２ラウンド受けたマウスに
おけるＡｍｂ ａ １負荷４週間後のインターフェロンγ産出値を示す棒グラフ
である。
【図１０】 Ａｍｂ ａ １（中黒ダイヤ形）、ＡＩＣ−Ｌ（中黒四角形）、ＡＩＣ−Ｍ（
中黒三角形）またはＡＩＣ−Ｈ（中黒円）による刺激から、アレルギー患者（「
ＪＭＷ」）から隔離された好塩基球のヒスタミン放出レベルを比較するグラフで
ある。
【図１１】 Ａｍｂ ａ １（中黒ダイヤ形）、ＡＩＣ−Ｌ（中黒四角形）、ＡＩＣ−Ｍ（
中黒三角形）またはＡＩＣ−Ｈ（中黒円）による刺激から、アレルギー患者（「
ＪＦ」）から隔離された好塩基球のヒスタミン放出レベルを比較するグラフであ
る。
【図１２】 （Ａ）および（Ｂ）は、ゲルをクーマシー・ブルー（Ａ）または銀（Ｂ）で染
色したＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳動実験（ＰＡＧＥ）のハーフトーン複
製である。ＡＩＣ−Ｌ、ＡＩＣ−ＭまたはＡＩＣ−Ｈはそれぞれ標識Ｌ，Ｍ，Ｈ
を付せられる。
【図１３】 ＡＩＣ−Ｌ、ＡＩＣ−ＭおよびＡＩＣ−Ｈのゲルろ過クロマトグラフィ分離を
示すグラフである。
【図１４】 ＡＩＣ−Ｈ、ＡＩＣ−ＭおよびＡＩＣ−Ｌを受容したマウスの第２回免疫化２
週間後の、Ａｍｂ ａ １に対する抗Ａｍｂ ａ １ ＩｇＧ１（左の棒）およ
びＩｇＧ２ａ(右の棒)の産出値を示す棒グラフである。
【図１５】 Ａｍｂ ａ １を受容したマウスと比較して、ＡＩＣ−Ｈ、ＡＩＣ−Ｍおよび
ＡＩＣ−Ｌを受容したマウスの第２回免疫化４週間後のＩＬ−５（左の棒）およ
びインターフェロンγ（右の棒）の産出値を示す棒グラフである。
【図１６】 抗原のみ、つまりアボアルブミン（ＯＶＡ、中黒ダイヤ形）を受容したマウス
と比較した、種々の複合体クラスを受容するマウスからの抗原特異的ＣＴＬを示
すグラフである。結果は次の複合体より示す：ＯＩＣ−Ｈ ＩＳＳ（白抜き四角
形）、ＯＩＣ−Ｍ ＩＳＳ（中黒三角形）、ＯＩＣ−Ｌ ＩＳＳ（中黒円）、Ｏ
ＩＣ−ＭコントロールＡ（Ｘ）、ＯＩＣ−ＭコントロールＢ（白抜き円）。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 39/12 Ａ６１Ｋ 39/145 39/145 39/21 39/21 39/29 39/29 39/36 39/36 48/00 48/00 Ａ６１Ｐ 31/12 Ａ６１Ｐ 31/12 31/16 31/16 31/18 31/18 31/20 31/20 35/00 35/00 Ｃ０７Ｋ 14/415 Ｃ０７Ｋ 14/415 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ， ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，Ｇ Ｍ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ， ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ， ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，Ｂ Ｚ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ， ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，Ｊ Ｐ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ， ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ， ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 バン ネスト，ゲイリー アメリカ合衆国，カリフォルニア 94553， マーティンズ，スカイライン ドライブ 639 Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA80 CA20 4C084 AA13 NA14 ZB262 ZB332 4C085 AA03 BB04 CC22 4H045 AA10 AA11 AA30 BA54 CA30 DA86 EA22

Claims (42)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 複合分子集団であって、該複合分子が、抗原と、免疫刺激配
    列（ＩＳＳ）を含んで成るポリヌクレオチドとを含んで成り、集団中の複合程度
    が、(ii)抗原に対する抗原特異的抗体の結合を５０％阻害するのに必要な抗原の
    濃度に対する、（ｉ）抗原に対する抗原特異的抗体の結合を５０％阻害するのに
    必要なＩＳＳ−抗原複合体の濃度の比が、約３．５〜約６．０であるようになっ
    ていることを特徴とする、複合分子集団。
  2. 【請求項２】 複合分子集団であって、該複合分子が、抗原と、免疫刺激配
    列（ＩＳＳ）を含んで成るポリヌクレオチドとを含んで成り、抗原がアレルゲン
    であり、集団中の複合程度が、(ii)抗原感作個体からの好塩基球からの約４０％
    のヒスタミン放出に必要な抗原の濃度に対する、（ｉ）抗原感作個体からの好塩
    基球からの約４０％のヒスタミン放出に必要なＩＳＳ−抗原複合体の濃度の比が
    、約１０００を上回るようになっていることを特徴とする、複合分子集団。
  3. 【請求項３】 アレルゲンがＡｍｂ ａ １である、請求項２記載の集団。
  4. 【請求項４】 複合分子集団であって、該複合分子が、抗原と、免疫刺激配
    列（ＩＳＳ）を含んで成るポリヌクレオチドとを含んで成り、集団中の複合程度
    が、(ii)抗原に対する抗原特異的抗体の結合を５０％阻害するのに必要な抗原の
    濃度に対する、（ｉ）抗原に対する抗原特異的抗体の結合を５０％阻害するのに
    必要なＩＳＳ−抗原複合体の濃度の比が、約２．５〜約３．０であるようになっ
    ていることを特徴とする、複合分子集団。
  5. 【請求項５】 複合分子集団であって、該複合分子が、抗原と、免疫刺激配
    列（ＩＳＳ）を含んで成るポリヌクレオチドとを含んで成り、抗原がアレルゲン
    であり、集団中の複合程度が、(ii)抗原感作個体からの好塩基球からの約４０％
    のヒスタミン放出に必要な抗原の濃度に対する、（ｉ）抗原感作個体からの好塩
    基球からの約４０％のヒスタミン放出に必要なＩＳＳ−抗原複合体の濃度の比が
    、約１００〜約２００であるようになっていることを特徴とする、複合分子集団
    。
  6. 【請求項６】 アレルゲンがＡｍｂ ａ １である、請求項５記載の集団。
  7. 【請求項７】 製薬上許容可能な賦形剤に配合された請求項１記載の集団を
    有することを特徴とする、組成物。
  8. 【請求項８】 製薬上許容可能な賦形剤に配合された請求項２記載の集団を
    有することを特徴とする、組成物。
  9. 【請求項９】 製薬上許容可能な賦形剤に配合された請求項４記載の集団を
    有することを特徴とする、組成物。
  10. 【請求項１０】 製薬上許容可能な賦形剤に配合された請求項５記載の集団
    を有することを特徴とする、組成物。
  11. 【請求項１１】 個体の免疫応答を調節する方法であって、該方法が、前記
    免疫応答を調節するのに充分な量の、請求項７記載の組成物を前記個体に投与す
    ることを含んで成る、個体の免疫応答を調節する方法。
  12. 【請求項１２】 前記調節が、Ｔｈ１関連サイトカインの産出を刺激するこ
    とを含んで成る、請求項１１記載の方法。
  13. 【請求項１３】 前記調節が、Ｔｈ２関連サイトカインの産出を減少させる
    ことを含んで成る、請求項１１記載の方法。
  14. 【請求項１４】 前記調節が、抗原特異的抗体の産出を抑制することを含ん
    で成る、請求項１１記載の方法。
  15. 【請求項１５】 個体の免疫応答を調節する方法であって、該方法が、前記
    免疫応答を調節するのに充分な量の、請求項８記載の組成物を前記個体に投与す
    ることを含んで成る、個体の免疫応答を調節する方法。
  16. 【請求項１６】 前記調節が、Ｔｈ１関連サイトカインの産出を刺激するこ
    とを含んで成る、請求項１５記載の方法。
  17. 【請求項１７】 前記調節が、Ｔｈ２関連サイトカインの産出を減少させる
    ことを含んで成る、請求項１５記載の方法。
  18. 【請求項１８】 前記調節が、抗原特異的抗体の産出を抑制することを含ん
    で成る、請求項１１記載の方法。
  19. 【請求項１９】 個体の免疫応答を調節する方法であって、該方法が、前記
    免疫応答を調節するのに充分な量の、請求項９記載の組成物を前記個体に投与す
    ることを含んで成る、個体の免疫応答を調節する方法。
  20. 【請求項２０】 前記調節が、Ｔｈ１関連サイトカインの産出を刺激するこ
    とを含んで成る、請求項１９記載の方法。
  21. 【請求項２１】 前記調節が、Ｔｈ２関連サイトカインの産出を減少させる
    ことを含んで成る、請求項１９記載の方法。
  22. 【請求項２２】 個体の免疫応答を調節する方法であって、該方法が、前記
    免疫応答を調節するのに充分な量の、請求項１０記載の組成物を前記個体に投与
    することを含んで成る、個体の免疫応答を調節する方法。
  23. 【請求項２３】 前記調節が、Ｔｈ１関連サイトカインの産出を刺激するこ
    とを含んで成る、請求項２２記載の方法。
  24. 【請求項２４】 前記調節が、Ｔｈ２関連サイトカインの産出を減少させる
    ことを含んで成る、請求項２２記載の方法。
  25. 【請求項２５】 個体のアレルギー状態を治療する方法であって、該方法が
    、請求項２記載の集団と製薬上許容可能な賦形剤とを含んで成る組成物を、前記
    アレルギー状態を軽減するのに充分な量で投与することを含んで成る、個体のア
    レルギー状態を治療する方法。
  26. 【請求項２６】 Ｔｈ１関連サイトカインの産出を刺激する、請求項２５記
    載の方法。
  27. 【請求項２７】 個体内で抗原によって刺激されたＩｇＥの産出を減少させ
    る方法であって、該方法が、前記個体内で前記抗原によって刺激されたＩｇＥを
    減少させるのに充分な量で、請求項８記載の組成物を投与することを含んで成る
    、個体内で抗原によって刺激されたＩｇＥの産出を減少させる方法。
  28. 【請求項２８】 個体内で抗原によって刺激されたＩｇＥの産出を減少させ
    る方法であって、該方法が、前記個体内で前記抗原によって刺激されたＩｇＥを
    減少させるのに充分な量で、請求項１０記載の組成物を投与することを含んで成
    る、個体内で抗原によって刺激されたＩｇＥの産出を減少させる方法。
  29. 【請求項２９】 個体のＩｇＥ関連障害を治療する方法であって、該方法が
    、前記個体のＩｇＥの産出を減少させ前記障害を治療するのに充分な量で、請求
    項８記載の組成物を投与することを含んで成る、個体のＩｇＥ関連障害を治療す
    る方法。
  30. 【請求項３０】 個体のＩｇＥ関連障害を治療する方法であって、該方法が
    、前記個体のＩｇＥの産出を減少させ前記障害を治療するのに充分な量で、請求
    項１０記載の組成物を投与することを含んで成る、個体のＩｇＥ関連障害を治療
    する方法。
  31. 【請求項３１】 個体内のＴｈ１リンパ球を刺激する方法であって、該方法
    が、前記個体内のＴｈ１リンパ球を刺激するのに充分な量で、請求項７記載の組
    成物を投与することを含んで成る、個体内のＴｈ１リンパ球を刺激する方法。
  32. 【請求項３２】 Ｔｈ１関連サイトカインの産出を刺激する、請求項３１記
    載の方法。
  33. 【請求項３３】 個体内のＴｈ１リンパ球を刺激する方法であって、該方法
    が、前記個体内のＴｈ１リンパ球を刺激するのに充分な量で、請求項８記載の組
    成物を投与することを含んで成る、個体内のＴｈ１リンパ球を刺激する方法。
  34. 【請求項３４】 個体内のＴｈ１リンパ球を刺激する方法であって、該方法
    が、前記個体内のＴｈ１リンパ球を刺激するのに充分な量で、請求項９記載の組
    成物を投与することを含んで成る、個体内のＴｈ１リンパ球を刺激する方法。
  35. 【請求項３５】 Ｔｈ１関連サイトカインの産出を刺激する、請求項３４記
    載の方法。
  36. 【請求項３６】 個体内のＴｈ１リンパ球を刺激する方法であって、該方法
    が、前記個体内のＴｈ１リンパ球を刺激するのに充分な量で、請求項１０記載の
    組成物を投与することを含んで成る、個体内のＴｈ１リンパ球を刺激する方法。
  37. 【請求項３７】 個体内のＴｈ２リンパ球を抑制する方法であって、該方法
    が、前記個体内のＴｈ２リンパ球を抑制するのに充分な量で、請求項７記載の組
    成物を投与することを含んで成る、個体内のＴｈ２リンパ球を抑制する方法。
  38. 【請求項３８】 Ｔｈ２関連サイトカインの産出を抑制する、請求項３７記
    載の方法。
  39. 【請求項３９】 個体内のＴｈ２リンパ球を抑制する方法であって、該方法
    が、前記個体内のＴｈ２リンパ球を抑制するのに充分な量で、請求項８記載の組
    成物を投与することを含んで成る、個体内のＴｈ２リンパ球を抑制する方法。
  40. 【請求項４０】 個体内のＴｈ２リンパ球を抑制する方法であって、該方法
    が、前記個体内のＴｈ２リンパ球を抑制するのに充分な量で、請求項９記載の組
    成物を投与することを含んで成る、個体内のＴｈ２リンパ球を抑制する方法。
  41. 【請求項４１】 Ｔｈ２関連サイトカインの産出を抑制する、請求項４０記
    載の方法。
  42. 【請求項４２】 個体内のＴｈ２リンパ球を抑制する方法であって、該方法
    が、前記個体内のＴｈ２リンパ球を抑制するのに充分な量で、請求項１０記載の
    組成物を投与することを含んで成る、個体内のＴｈ２リンパ球を抑制する方法。
JP2001537981A 1999-11-15 2000-11-15 抗原にリンクされた免疫刺激配列を含有する免疫調節組成物および該組成物を使用する方法 Expired - Fee Related JP5543050B2 (ja)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US16546799P 1999-11-15 1999-11-15
US60/165,467 1999-11-15
US09/713,136 US7223398B1 (en) 1999-11-15 2000-11-14 Immunomodulatory compositions containing an immunostimulatory sequence linked to antigen and methods of use thereof
US09/713,136 2000-11-14
PCT/US2000/031385 WO2001035991A2 (en) 1999-11-15 2000-11-15 Immunomodulatory compositions containing an immunostimulatory sequence linked to antigen and methods of use thereof

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JP2003513680A true JP2003513680A (ja) 2003-04-15
JP5543050B2 JP5543050B2 (ja) 2014-07-09

Family

ID=26861419

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP2001537981A Expired - Fee Related JP5543050B2 (ja) 1999-11-15 2000-11-15 抗原にリンクされた免疫刺激配列を含有する免疫調節組成物および該組成物を使用する方法

Country Status (8)

Country Link
US (2) US7223398B1 (ja)
EP (1) EP1229933B2 (ja)
JP (1) JP5543050B2 (ja)
AT (1) ATE357930T1 (ja)
AU (1) AU779957B2 (ja)
CA (1) CA2391507C (ja)
DE (1) DE60034140T3 (ja)
WO (1) WO2001035991A2 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008531722A (ja) * 2005-03-04 2008-08-14 ダイナバックス テクノロジーズ コーポレイション 構造的に安定なコンジュゲート分子を含む組成物

Families Citing this family (53)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20030109469A1 (en) * 1993-08-26 2003-06-12 Carson Dennis A. Recombinant gene expression vectors and methods for use of same to enhance the immune response of a host to an antigen
US6207646B1 (en) * 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
US7935675B1 (en) 1994-07-15 2011-05-03 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
ES2241042T3 (es) 1996-10-11 2005-10-16 The Regents Of The University Of California Conjugados de polinucleotido inmunoestimulador/ molecula inmunomoduladora.
US6406705B1 (en) 1997-03-10 2002-06-18 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CpG dinucleotide as an adjuvant
EP1674574A1 (en) * 1998-05-14 2006-06-28 Coley Pharmaceutical GmbH Methods for Regulating Hematopoiesis using CpG-Oligonucleotides
DE69932717T2 (de) 1998-05-22 2007-08-09 Ottawa Health Research Institute, Ottawa Methoden und produkte zur induzierung mukosaler immunität
JP5084984B2 (ja) 1999-02-17 2012-11-28 シーエスエル、リミテッド 免疫原複合体およびそれに関する方法
EP1204425B1 (en) 1999-08-19 2009-01-07 Dynavax Technologies Corporation Methods of modulating an immune response using immunostimulatory sequences and compositions for use therein
US7223398B1 (en) * 1999-11-15 2007-05-29 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory compositions containing an immunostimulatory sequence linked to antigen and methods of use thereof
US7585847B2 (en) 2000-02-03 2009-09-08 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Immunostimulatory nucleic acids for the treatment of asthma and allergy
US20030129251A1 (en) 2000-03-10 2003-07-10 Gary Van Nest Biodegradable immunomodulatory formulations and methods for use thereof
US7129222B2 (en) 2000-03-10 2006-10-31 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory formulations and methods for use thereof
AUPQ761200A0 (en) * 2000-05-19 2000-06-15 Hunter Immunology Limited Compositions and methods for treatment of mucosal infections
ATE471374T1 (de) 2000-12-27 2010-07-15 Dynavax Tech Corp Immunomodulatorische polynukleotide und verfahren zur deren verwendung
US20030199466A1 (en) * 2001-06-21 2003-10-23 Fearon Karen L. Chimeric immunomodulatory compounds and methods of using the same - ll
US8481043B2 (en) * 2001-06-22 2013-07-09 Cpex Pharmaceuticals, Inc. Nasal immunization
JP4607452B2 (ja) 2001-08-07 2011-01-05 ダイナバックス テクノロジーズ コーポレイション 免疫調節性組成物、製剤およびその使用方法
CA2457485C (en) 2001-08-17 2012-08-14 Arthur M. Krieg Combination motif immune stimulatory oligonucleotides with improved activity
ES2335979T3 (es) 2001-09-14 2010-04-07 Cytos Biotechnology Ag Empaquetamiento de cpg inmunoestimuladores en particulas similares a virus: metodo de preparacion y su uso.
US20040053880A1 (en) 2002-07-03 2004-03-18 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
US7807803B2 (en) 2002-07-03 2010-10-05 Coley Pharmaceutical Group, Inc. Nucleic acid compositions for stimulating immune responses
CN100471486C (zh) * 2002-08-12 2009-03-25 戴纳伐克斯技术股份有限公司 免疫调节组合物,其制备方法和使用方法
SI2241325T1 (sl) 2002-10-29 2012-05-31 Coley Pharm Group Inc Uporaba CPG oligonukleotidov pri zdravljenju okužbe z virusom hepatitisa C
CA2502015A1 (en) 2002-12-11 2004-06-24 Coley Pharmaceutical Group, Inc. 5' cpg nucleic acids and methods of use
US8158768B2 (en) 2002-12-23 2012-04-17 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory sequence oligonucleotides and methods of using the same
DK1575977T3 (da) 2002-12-23 2009-11-09 Dynavax Tech Corp Oligonukleotider med Immunstimulatorisk sekvens og fremgangsmåder til anvendelse af disse
AU2003302743B2 (en) 2002-12-23 2008-09-04 Dynavax Technologies Corporation Branched immunomodulatory compounds and methods of using the same
WO2004074454A2 (en) 2003-02-20 2004-09-02 University Of Connecticut Health Center Methods and compositions for the treatment of cancer and infectious disease using alpha (2) macroglobulin-antigenic molecule complexes
CN101193646A (zh) * 2005-04-08 2008-06-04 科勒制药集团公司 治疗传染病加剧性哮喘的方法
SI2380584T1 (sl) * 2005-07-01 2014-04-30 Index Pharmaceuticals Ab Imunostimulatorni postopek
PL2179737T3 (pl) * 2005-07-01 2014-01-31 Index Pharmaceuticals Ab Sposób do modulowania wrażliwości na steroidy
AU2006306805A1 (en) * 2005-10-28 2007-05-03 Index Pharmaceuticals Ab Composition and method for the prevention, treatment and/or alleviation of an inflammatory disease
CA2636139A1 (en) 2005-12-14 2007-06-21 Cytos Biotechnology Ag Immunostimulatory nucleic acid packaged particles for the treatment of hypersensitivity
KR101552227B1 (ko) 2006-06-12 2015-09-10 사이토스 바이오테크놀로지 아게 올리고뉴클레오티드를 ｒｎａ 박테리오파지의 바이러스-유사 입자로 패키징하는 방법
KR101251707B1 (ko) 2006-09-27 2013-04-11 콜리 파마슈티칼 게엠베하 면역 자극 활성이 증강된 소수성 Ｔ 유사체를 함유하는 ＣｐＧ 올리고뉴클레오티드 유사체
EP2185195A2 (en) 2007-08-16 2010-05-19 Tripep Ab Immunogen platform
WO2009099643A1 (en) * 2008-02-07 2009-08-13 The J. David Gladstone Institutes Use of sirt1 activators or inhibitors to modulate an immune response
WO2009130588A2 (en) * 2008-04-22 2009-10-29 Tripep Ab Immunogen platform
MX343908B (es) 2009-08-26 2016-11-28 Selecta Biosciences Inc * Composiciones que inducen la ayuda de las células t.
WO2011150264A2 (en) 2010-05-26 2011-12-01 Selecta Biosciences, Inc. Synthetic nanocarrier combination vaccines
EA201390660A1 (ru) 2010-11-05 2013-11-29 Селекта Байосайенсиз, Инк. Модифицированные никотиновые соединения и связанные способы
EA201490381A1 (ru) 2011-07-29 2014-06-30 Селекта Байосайенсиз, Инк. Синтетические наноносители, которые стимулируют формирование гуморального иммунного ответа и иммунного ответа, опосредованного цитотоксическими т-лимфоцитами (ctl)
CN105188744A (zh) 2013-03-14 2015-12-23 哈佛大学的校长及成员们 基于纳米颗粒的组合物
CA2919268C (en) 2013-07-25 2023-09-05 Exicure, Inc. Spherical nucleic acid-based constructs as immunostimulatory agents for prophylactic and therapeutic use
EP3110401A4 (en) 2014-02-25 2017-10-25 Merck Sharp & Dohme Corp. Lipid nanoparticle vaccine adjuvants and antigen delivery systems
EP3508198A1 (en) 2014-06-04 2019-07-10 Exicure, Inc. Multivalent delivery of immune modulators by liposomal spherical nucleic acids for prophylactic or therapeutic applications
CA2953507A1 (en) 2014-06-25 2015-12-30 Selecta Biosciences, Inc. Methods and compositions for treatment with synthetic nanocarriers and immune checkpoint inhibitors
EP3220895B1 (en) 2014-11-21 2022-08-31 Northwestern University The sequence-specific cellular uptake of spherical nucleic acid nanoparticle conjugates
WO2018039629A2 (en) 2016-08-25 2018-03-01 Northwestern University Micellar spherical nucleic acids from thermoresponsive, traceless templates
EP3295956A1 (en) 2016-09-20 2018-03-21 Biomay Ag Polypeptide construct comprising fragments of allergens
US11696954B2 (en) 2017-04-28 2023-07-11 Exicure Operating Company Synthesis of spherical nucleic acids using lipophilic moieties
WO2021151100A1 (en) 2020-01-24 2021-07-29 Aim Immunotech Inc. Methods, compositions, and vaccines for treating a virus infection

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998016247A1 (en) * 1996-10-11 1998-04-23 The Regents Of The University Of California Immunostimulatory polynucleotide/immunomodulatory molecule conjugates

Family Cites Families (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4458066A (en) 1980-02-29 1984-07-03 University Patents, Inc. Process for preparing polynucleotides
US4948882A (en) 1983-02-22 1990-08-14 Syngene, Inc. Single-stranded labelled oligonucleotides, reactive monomers and methods of synthesis
US4650675A (en) 1983-08-18 1987-03-17 The Children's Medical Center Corporation Oligonucleotide conjugates
US4849513A (en) 1983-12-20 1989-07-18 California Institute Of Technology Deoxyribonucleoside phosphoramidites in which an aliphatic amino group is attached to the sugar ring and their use for the preparation of oligonucleotides containing aliphatic amino groups
US5118800A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology Oligonucleotides possessing a primary amino group in the terminal nucleotide
US5118802A (en) 1983-12-20 1992-06-02 California Institute Of Technology DNA-reporter conjugates linked via the 2' or 5'-primary amino group of the 5'-terminal nucleoside
US5015733A (en) 1983-12-20 1991-05-14 California Institute Of Technology Nucleosides possessing blocked aliphatic amino groups
US4910300A (en) 1985-12-11 1990-03-20 Chiron Corporation Method for making nucleic acid probes
US5093232A (en) 1985-12-11 1992-03-03 Chiron Corporation Nucleic acid probes
US5124246A (en) 1987-10-15 1992-06-23 Chiron Corporation Nucleic acid multimers and amplified nucleic acid hybridization assays using same
US5278302A (en) 1988-05-26 1994-01-11 University Patents, Inc. Polynucleotide phosphorodithioates
US5391723A (en) 1989-05-31 1995-02-21 Neorx Corporation Oligonucleotide conjugates
EP0468520A3 (en) 1990-07-27 1992-07-01 Mitsui Toatsu Chemicals, Inc. Immunostimulatory remedies containing palindromic dna sequences
EP0714308A4 (en) 1993-08-26 1998-07-29 Univ California METHOD, COMPOSITIONS AND DEVICES FOR THE DELIVERY OF NAKED POLYNUCLEOTIDES THAT ENCODE BIOLOGICALLY ACTIVE PEPTIDES
US20030109469A1 (en) * 1993-08-26 2003-06-12 Carson Dennis A. Recombinant gene expression vectors and methods for use of same to enhance the immune response of a host to an antigen
US5849719A (en) * 1993-08-26 1998-12-15 The Regents Of The University Of California Method for treating allergic lung disease
US5985847A (en) * 1993-08-26 1999-11-16 The Regents Of The University Of California Devices for administration of naked polynucleotides which encode biologically active peptides
US5830877A (en) * 1993-08-26 1998-11-03 The Regents Of The University Of California Method, compositions and devices for administration of naked polynucleotides which encode antigens and immunostimulatory
US5804566A (en) * 1993-08-26 1998-09-08 The Regents Of The University Of California Methods and devices for immunizing a host through administration of naked polynucleotides with encode allergenic peptides
US5679647A (en) * 1993-08-26 1997-10-21 The Regents Of The University Of California Methods and devices for immunizing a host against tumor-associated antigens through administration of naked polynucleotides which encode tumor-associated antigenic peptides
WO1995026204A1 (en) 1994-03-25 1995-10-05 Isis Pharmaceuticals, Inc. Immune stimulation by phosphorothioate oligonucleotide analogs
US6207646B1 (en) 1994-07-15 2001-03-27 University Of Iowa Research Foundation Immunostimulatory nucleic acid molecules
EP1167378B1 (en) 1994-07-15 2011-05-11 University of Iowa Research Foundation Immunomodulatory oligonucleotides
US6323201B1 (en) * 1994-12-29 2001-11-27 The Regents Of The University Of California Compounds for inhibition of ceramide-mediated signal transduction
US5843943A (en) * 1994-12-29 1998-12-01 The Regents Of The University Of California Compounds for inhibition of ceramide-mediated signal transduction
WO1997028259A1 (en) 1996-01-30 1997-08-07 The Regents Of The University Of California Gene expression vectors which generate an antigen specific immune response and methods of using the same
US6214806B1 (en) 1997-02-28 2001-04-10 University Of Iowa Research Foundation Use of nucleic acids containing unmethylated CPC dinucleotide in the treatment of LPS-associated disorders
DE69841122D1 (de) 1997-03-10 2009-10-15 Coley Pharm Gmbh Verwendung von nicht-methyliertem CpG Dinukleotid in Kombination mit Aluminium als Adjuvantien
EP0983289A4 (en) 1997-05-19 2001-04-25 Merck & Co Inc OLIGONUCLEOTIDE ADJUVANT
US6339068B1 (en) 1997-05-20 2002-01-15 University Of Iowa Research Foundation Vectors and methods for immunization or therapeutic protocols
AU755322B2 (en) * 1997-06-06 2002-12-12 Dynavax Technologies Corporation Inhibitors of DNA immunostimulatory sequence activity
US6589940B1 (en) * 1997-06-06 2003-07-08 Dynavax Technologies Corporation Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
US20040006034A1 (en) * 1998-06-05 2004-01-08 Eyal Raz Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
DE69837094T2 (de) 1997-09-05 2007-08-30 The Regents Of The University Of California, Oakland Verwendung von immunerregenden oligonukleotiden zur vorbeugung oder behandlung von asthma
GB9727262D0 (en) 1997-12-24 1998-02-25 Smithkline Beecham Biolog Vaccine
AU760549B2 (en) 1998-04-03 2003-05-15 University Of Iowa Research Foundation, The Methods and products for stimulating the immune system using immunotherapeutic oligonucleotides and cytokines
JP2002513763A (ja) 1998-05-06 2002-05-14 ユニバーシティ オブ アイオワ リサーチ ファウンデーション Ｃｐｇオリゴヌクレオチドを使用して寄生生物感染および関連する疾患を予防および処置するための方法
US6562798B1 (en) 1998-06-05 2003-05-13 Dynavax Technologies Corp. Immunostimulatory oligonucleotides with modified bases and methods of use thereof
CA2343052A1 (en) * 1998-09-18 2000-03-30 Dynavax Technologies Corporation Methods of treating ige-associated disorders and compositions for use therein
WO2000021556A1 (en) 1998-10-09 2000-04-20 Dynavax Technologies Corporation Anti hiv compositions comprising immunostimulatory polynucleotides and hiv antigens
US6930101B1 (en) 1999-05-17 2005-08-16 The Regents Of The University Of California Thiazolopyrimidines useful as TNFα inhibitors
US7223398B1 (en) * 1999-11-15 2007-05-29 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory compositions containing an immunostimulatory sequence linked to antigen and methods of use thereof
US6552006B2 (en) 2000-01-31 2003-04-22 The Regents Of The University Of California Immunomodulatory polynucleotides in treatment of an infection by an intracellular pathogen
EP1259264A4 (en) 2000-02-23 2005-08-31 Univ California METHOD FOR THE TREATMENT OF INFLAMMATORY ENDURANCE AND OTHER FORMS OF GASTROINTESTINAL DEFICIENCY
US20020107212A1 (en) * 2000-03-10 2002-08-08 Nest Gary Van Methods of reducing papillomavirus infection using immunomodulatory polynucleotide sequences
US20020098199A1 (en) * 2000-03-10 2002-07-25 Gary Van Nest Methods of suppressing hepatitis virus infection using immunomodulatory polynucleotide sequences
US20030129251A1 (en) * 2000-03-10 2003-07-10 Gary Van Nest Biodegradable immunomodulatory formulations and methods for use thereof
US20020028784A1 (en) * 2000-03-10 2002-03-07 Nest Gary Van Methods of preventing and treating viral infections using immunomodulatory polynucleotide sequences
US7157437B2 (en) * 2000-03-10 2007-01-02 Dynavax Technologies Corporation Methods of ameliorating symptoms of herpes infection using immunomodulatory polynucleotide sequences
US7129222B2 (en) * 2000-03-10 2006-10-31 Dynavax Technologies Corporation Immunomodulatory formulations and methods for use thereof
US20010046967A1 (en) * 2000-03-10 2001-11-29 Gary Van Nest Methods of preventing and treating respiratory viral infection using immunomodulatory polynucleotide
WO2001072123A1 (en) 2000-03-28 2001-10-04 The Regents Of The University Of California Methods for increasing a cytotoxic t lymphocyte response in vivo

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1998016247A1 (en) * 1996-10-11 1998-04-23 The Regents Of The University Of California Immunostimulatory polynucleotide/immunomodulatory molecule conjugates

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2008531722A (ja) * 2005-03-04 2008-08-14 ダイナバックス テクノロジーズ コーポレイション 構造的に安定なコンジュゲート分子を含む組成物
USRE45196E1 (en) 2005-03-04 2014-10-14 Dynavax Technologies Corporation Compositions comprising structurally stable conjugate molecules

Also Published As

Publication number Publication date
WO2001035991A2 (en) 2001-05-25
US7628990B2 (en) 2009-12-08
AU779957B2 (en) 2005-02-24
EP1229933B2 (en) 2015-06-17
DE60034140D1 (de) 2007-05-10
US20070190073A1 (en) 2007-08-16
DE60034140T3 (de) 2015-09-03
US7223398B1 (en) 2007-05-29
WO2001035991A3 (en) 2001-11-22
EP1229933A2 (en) 2002-08-14
CA2391507A1 (en) 2001-05-25
AU1612101A (en) 2001-05-30
CA2391507C (en) 2010-08-10
ATE357930T1 (de) 2007-04-15
EP1229933B1 (en) 2007-03-28
DE60034140T2 (de) 2007-12-13
JP5543050B2 (ja) 2014-07-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP5543050B2 (ja) 抗原にリンクされた免疫刺激配列を含有する免疫調節組成物および該組成物を使用する方法
KR100881923B1 (ko) 면역자극 폴리뉴클레오티드 및 그것의 사용 방법
US7183111B2 (en) Immunomodulatory formulations and methods for use thereof
JP4607452B2 (ja) 免疫調節性組成物、製剤およびその使用方法
US6589940B1 (en) Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
US20040006034A1 (en) Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof
JP2003507341A (ja) 免疫刺激配列およびそれを使用するための組成物を用いて免疫応答を調節するための方法およびそれを使用するための組成物
AU2001245628A1 (en) Immunomodulatory formulations and methods for use thereof
JP2002517156A (ja) 免疫刺激オリゴヌクレオチド、その組成物およびその使用方法
AU2002231336A1 (en) Immunomodulatory polynucleotides and methods of using the same
AU2002326561A1 (en) Immunomodulatory compositions, formulations, and methods for use thereof
AU2001245631A1 (en) Biodegradable immunomodulatory formulations and methods for use thereof
WO2001068144A2 (en) Biodegradable immunomodulatory formulations and methods for use thereof
AU2001281267A1 (en) Immunomodulatory oligonnucleotide formulations and methods for use thereof
WO2003015816A1 (en) Immunomodulatory oligonucleotide formulations and methods for use thereof
AU2002301218B2 (en) Immunostimulatory oligonucleotides, compositions thereof and methods of use thereof

Legal Events

Date Code Title Description
A621 Written request for application examination

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621

Effective date: 20070927

A131 Notification of reasons for refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131

Effective date: 20100824

A601 Written request for extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A601

Effective date: 20101122

A602 Written permission of extension of time

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A602

Effective date: 20101130

A521 Request for written amendment filed

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523

Effective date: 20110224

A02 Decision of refusal

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02

Effective date: 20110405

A61 First payment of annual fees (during grant procedure)

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A61

Effective date: 20140508

R150 Certificate of patent or registration of utility model

Ref document number: 5543050

Country of ref document: JP

Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R150

LAPS Cancellation because of no payment of annual fees