JP2002509532A - アルグラビン（ａｒｇｌａｂｉｎ）およびアルグラビン誘導体の薬学的組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 アルグラビンおよびアルグラビン誘導体を含む薬学的組成物について開示する。本組成物は、単位用量の形にすることができ、ヒトの癌を治療するのに有用である。アルグラビンまたはその誘導体を含む第一の化学療法剤と、第二の化学療法剤とを含む組成物およびキットも開示する。本組成物およびキットは、ヒト患者の癌を治療する上で有用である。また、本発明は、哺乳動物における腫瘍増殖を抑制する上で有用な、さまざまなアルグラビン誘導体を提供する。

Description

【発明の詳細な説明】 アルグラビン（arglabin）およびアルグラビン誘導体の薬学的組成物 発明の背景 癌は、米国における主要な死亡原因であり、世界中の人々を侵している。外科 手術、放射線療法、および化学療法が、最も広く用いられている治療方式である 。化学療法剤は、細胞の中に、細胞の増殖と複製を制限する状態を作り出す。プ リン合成、ピリミジン合成、リボヌクレオチドからデオキシリボヌクレオチドへ の変換、代謝拮抗物質、インターカレーション、またはクロスリンクによって、 DNA合成を阻害することができる。RNA合成は、例えば、拮抗物質によって阻害さ れることがある。タンパク質合成は、例えば、アスパラギンの脱アミノする薬剤 によって阻害できる。さらに、微小管の機能を阻害する薬剤を化学療法剤として 用いることができる。 化学療法剤は、典型的には、新生物、ならびに、骨髄、毛包、および腸管上皮 などの正常組織の急速に増殖する細胞にも影響を与える。食欲不振、悪心、嘔吐 、下痢、骨髄機能の抑制、および脱毛が、普通に、化学療法に伴う消極的な作用 の一部である。最小限の毒性をもつ効果的な抗腫瘍薬剤である化学療法剤を開発 することの利点は大きい。 発明の概要 アルグラビン、およびさまざまなアルグラビン誘導体は、他の化学療法剤の使 用によって一般的にもたらされるよりも副作用の少ない効果的な化学療法剤とし て機能できることが見出されている。 一つの局面において、本発明は、ヒトの癌を治療するのに適した単位投与量の 形になった薬学的組成物を特徴とする。本組成物は、本質的に、約40mgから約48 0mgのアルグラビンまたはその誘導体からなる。この組成物の単位投与量は、例 えば、約175mgから約315mg、または約240mgから280mgのアルグラビンまたはその 誘導体でありうる。アルグラビンまたはその誘導体は、癌を治療するための薬剤 の製造に用いることができる。本組成物は、癌を治療するための医薬品の製造に 用いることができる。この組成物は、例えば、乳癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、膵 臓癌、肺癌、肝癌、卵巣癌、膵臓癌、食道癌、白血病、およびリンパ腫など 、広範な種類の癌を治療するのに有用である。この組成物は、肺癌、肝癌、およ び卵巣癌を治療するのに特に有用である。 ジメチルアミノアルグラビンまたは薬学的に許容されるその塩は、薬学的組成 物として用いることのできる特に有用なアルグラビン誘導体である。ジメチルア ミノアルグラビンまたは薬学的に許容されるその塩は凍結乾燥することができる 。 本発明はまた、アルグラビンまたはその誘導体を含む第一の化学療法剤と、第 二の化学療法剤とを含む組成物を特徴とする。第二の化学療法剤は、アルグラビ ンまたはその誘導体ではない。この組成物は、ヒトにおける腫瘍増殖を抑制する のに有効である。特に有用なアルグラビン誘導体は、ジメチルアミノアルグラビ ンまたは薬学的に許容されるその塩である。第二の化学療法剤は、例えば、シク ロホスファミド、サルコライシン（sarcolysin）、もしくはメチルニトロソウレ アなどのアルキル化剤、メトトレキセートもしくはフルオロウラシルなどの代謝 拮抗剤、ビンブラスチンもしくはビンクリスチンなどのビンカアルカロイド、ル ビドマイシンなどの抗生物質、またはシスプラチンなどの白金錯体でもよい。2 種類またはそれ以上の化学療法剤を、アルグラビンまたはその誘導体とともに組 成物に入れることができる。この組成物は、癌を治療するための医薬品の製造に 用いることができる。 本発明はまた、哺乳動物において腫瘍増殖を抑制する化合物を特徴とする。こ れらの化合物は、以下の化学式I、II、III、IV、V、およびVIによって示される 群より選択される： 式中、RR₁は、NHCH₂PhまたはN(CH₂CH₂)₂Oであり、RR₂は、NHCH₂Ph、N(CH₂CH₂)₂O 、N(CH₃)₂、またはそれの薬学的に許容される塩であり、Xは、OHまたはClである 。これらのアルグラビン誘導体には、ジメチルアミノエポキシアルグラビン、ジ ブロモアルグラビン、アルグラビンクロロヒドリン、11,13ジヒドロアルグラビ ン、ベンジルアミノアルグラビン、モルホリン-アミノアルグラビン、ベンジル アミノエポキシアルグラビン、モルホリン-アミノエポキシアルグラビン、エポ キシアルグラビンクロロヒドリン、またはこれらの薬学的に許容される塩類が含 まれる。化学式I、II、III、IV、V、またはVIの化合物は、哺乳動物における腫 瘍増殖を腫瘍を抑制する医薬品の製造において用いることができる。 別途定義されないかぎり、本明細書で用いられる全ての技術用語および科学用 語は、本発明の属する技術分野における当業者によって一般的に理解されている 意味と同一の意味をもつ。方法と材料は、本明細書に記載されているものと同様 または同等のものを、本発明の実施またはテストにおいて用いることができるが 、適当な方法と材料については後述する。本明細書に記載されている刊行物、特 許出願、特許、およびその他の参考文献のすべては、その全体が、参照として本 明細書に組み入れられる。矛盾がある場合には、定義を含めて、本明細書の記述 が優先する。なお、材料、方法、および実施例は、例示のためのみのものであり 、制限的な意味をもたない。 本発明のこの他の特徴および利点は、以下の詳細な説明から、また、請求の範 囲から明らかになると思われる。 図面の簡単な説明 図1は、アルグラビン誘導体2から9までの合成を図示したものである。 図2は、アルグラビン誘導体10から13までの合成を図示したものである。 図3は、アルグラビン誘導体14a〜14d、15a〜15d、および16までの合成を図示 したものである。 図4は、化合物17から21までの構造を図示したものである。 図5は、塩酸ジメチルアミノアルグラビンの濃度を上昇させたときの、形質転 換細胞の生存率に対する効果を示したものである。 図6は、塩酸ジメチルアミノアルグラビンの濃度を上昇させたときの、形質転 換細胞の増殖に対する効果を示したものである。 図7は、塩酸ジメチルアミノアルグラビンの濃度を上昇させたときの、正常な 細胞の生存率に対する効果を示したものである。 図8は、ナフトール分解産物のスペクトル指数をプロットしたものである。図8 Aは薬物を入れない場合、図8Bは、薬物を入れた場合である。 好ましい態様の説明 本発明は、ヒトにおいて腫瘍増殖を抑制する新規の化合物を提供する。これら の化合物は、親化合物アルグラビン（図1）から合成することができるが、これ はアルテミシア・グラベラ（Artemisia glabella）から単離される。さまざまな アルグラビン誘導体を、ある範囲の化学法を用いて作り出すことができる。例え ば、3価置換されたオレフィン二重結合を過酢酸でエポキシ化することによって 、エポキシアルグラビンを製造することができる。エポキシアルグラビンをエー テル-アセトン塩酸溶液で処理するとジクロロヒドリンを製造することができる 。ジブロモアルグラビンは、アルグラビンをBr₂および四塩化炭素と反応させて 製造することができる。アルグラビンクロロヒドリンは、メタノール塩酸溶液と 反応させることによってアルグラビンから製造することができる。アルグラビン クロロヒドリンを過酢酸とクロロホルムでエポキシ化すると、クロマトグラフィ ーによって分離することのできるエポキシアルグラビンクロロヒドリンができる 。アルグラビンジオール、その異性体、およびジエン型は、アルグラビンを加水 分解して製造することができる。アルグラビンの1,10エピマーであるエピアルグ ラビンは、アルグラビンジオールをPOCl₃で処理して製造することができる。ベ ンジルアミノアルグラビンとベンジルアミノエポキシアルグラビンは、アルグラ ビンとエポキシアルグラビンをベンゼンアミンで処理して製造することができる 。ジメチルア ミノアルグラビンとジメチルアミノエポキシアルグラビンは、アルグラビンとエ ポキシアルグラビンをジメチルアミンで処理して製造することができる。モルホ リン-アミノアルグラビンとモルホリン-アミノエポキシアルグラビンは、アルグ ラビンをモルホリンでアミノ化して製造することができる。これらの化合物の薬 学的に許容される塩類を常法にしたがって製造することができ、抗腫瘍剤として 用いることができる。例えば、塩酸ジメチルアミノアルグラビンと塩酸ジメチル アミノエポキシアルグラビンは、塩酸化によって製造することができる。ジヒド ロアルグラビンは、アルグラビンをエタノールとH₂/Niで処理して製造すること ができる。上記のさまざまなアルグラビン誘導体は、図1から4に示されている。 本発明はまた、癌と診断されたヒト患者において腫瘍増殖を抑制する方法で、 アルグラビンまたはその誘導体を患者に投与することを含む方法に関する。本方 法は、一般的に、乳癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、膵臓癌、肺癌、肝癌、卵巣癌、 膵臓癌、食道癌、白血病、およびリンパ腫などの癌を治療するために用いること ができるが、肺癌、肝癌、および卵巣癌のような特定の種類の癌が、特に、この 治療法を実施しやすい。本化合物は、癌のタイプによって、および患者のさまざ まな指標に応じて、局所的、経口的、静脈内、腹腔内、胸膜内、鞘内、皮下、筋 肉内、鼻腔内、吸入、または坐剤によって投与することができる。例えば、腹腔 内への投与は、腹水をもつ患者に用いる場合がある。胸膜内投与は、一定の肺癌 患者に用いることができる。坐剤は、直腸癌患者に用いることができる。アルグ ラビンまたはその誘導体は、１日の用量で、約40mgから約480mg、好ましくは、 約175mgから約315mg、より好ましくは、約240mgから280mgを投与することができ る。典型的な投与量範囲は、約0.5mg/kgから約7mg/kgである。極めて危険な症状 には、約20mg/kgまでのアルグラビンまたはその誘導体を投与することができる 。投与されると、これらの化合物は、抗腫瘍剤として作用して、腫瘍の増殖を阻 害するか、または腫瘍の退行を惹き起こすことができる。 特定の生化学的なメカニズムによる制約を受けることなく、これらの化合物は 、rasタンパク質などのタンパク質のファルネシル化を妨げることによって、癌 細胞を除去するか、癌細胞の増殖を阻害することができる。ras遺伝子は、結腸 直腸癌、外分泌膵臓癌、および骨髄白血病など、多くのタイプのヒト癌に関与す る癌 原遺伝子である（Barbacid，1987，Ann．Rev．Biochem．56:779）。ヒトの全腫 瘍のおよそ20%から30%が、ras癌原遺伝子の活性化に起因している可能性がある 。ras遺伝子は、rasp21といわれる（本明細書においては「ras」とも呼ぶ）21kD aのタンパク質の作用によって細胞を形質転換するマルチジーンファミリーを構 成している。rasは、GTPをGDPに加水分解するG調節タンパク質として機能する。 不活性化状態のとき、rasはGDPに結合する。増殖因子レセプターが活性化される と、rasはGDPをGTPと交換し、コンフォメーションを変化させる。GTPが結合した 状態で、野生型のrasは、活性化された増殖因子レセプターのシグナルを、下流 にあるマイトジェンエフェクターに結合させる。rasに内在するGTPase活性によ って、このタンパク質は、最後には不活性なGDP結合状態に戻る。腫瘍細胞にお いては、ras遺伝子の突然変異によって、調節機能が失われ、定常的に増殖刺激 シグナルが伝達されるようになって、癌遺伝子の活性化がもたらされる。 正常に機能するためにも、癌遺伝子として機能するためにも、rasは、rasの適 正な翻訳後プロセシングに依存するプロセスによって、原形質膜に局在しなけれ ばならない（Hancock，1989，Cell 57:1167）。rasの翻訳後プロセシングにおけ る最初の段階では、ファルネシルピロリン酸との反応によって、このタンパク質 の186位に位置するシステイン残基にファルネシル基が付着する。次に、特異的 なプロテアーゼの作用によって、このタンパク質のカルボキシル末端にある３つ のアミノ酸が切断される。さらに、カルボン酸末端が、メチル基によるアルキル 化によってメチルエステルに変換される。 rasの翻訳後修飾は、しばしば「CAAXボックス」と呼ばれるアミノ酸配列モチ ーフによって媒介される。この配列モチーフにおいて、Cはシステインを表し、A は脂肪族アミノ酸を表し、また、Xは、例えば、メチオニン、セリン、またはグ ルタミンなどの別のアミノ酸である。CAAXボックスの具体的な配列によって、こ のモチーフは、CAAXボックス配列のシステイン残基のアルキル化を触媒するファ ルネシルタンパク質トランスフェラーゼ、またはゲラニルゲラニルタンパク質ト ランスフェラーゼに対するシグナル配列として役立つ。rasをファルネシル化す るには、タンパク質分解処理、パルミトイル化、およびrasタンパク質が細胞膜 に強く結合することが必要である。 ファルネシル化しなければ、rasの癌遺伝子型は、癌遺伝子として細胞を形質 転換することができない。実際、ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼの インヒビターは、ソフトアガーの中で、rasによって形質転換された細胞の増殖 を遮断することが分かっている。したがって、ファルネシルタンパク質トランス フェラーゼインヒビター、および一般的なras活性のインヒビターは、多くのタ イプの癌に対する抗癌治療薬として有用であると考えられる（Gibbsら、1984，P roc．Natl．Acad．Sci．USA 81:5704-5708;Jungら、1994，Mol．Cell．Biol．14 :3707-3718;Predergastら、1994，Mol．Cell．Biol．14:4193-4202;Vogtら、199 5，J．Biol．Chem．270:660-664;およびMaronら、1995，J．Biol．Chem．270:22 263-22270）。 後述するように、アルグラビンおよびその誘導体は、タンパク質のファルネシ ル化を阻害すると考えられる。 別の態様において、約40mgから約480mg、好ましくは、約175mgから約315mg、 より好ましくは、約240mgから約280mgのアルグラビンまたはその誘導体を含む薬 学的組成物が、単位投与量の形で提供される。投与量は、１日分を2〜4回の用量 に分けることができる。これらの薬学的組成物の典型的な投与量は、約0.5mg/kg から約7mg/kgである。特別の状況では、約20mg/kgまでを投与することができる 。凍結乾燥させたジメチルアミノアルグラビン、および、塩酸ジメチルアミノア ルグラビンなど、薬学的に許容される凍結乾燥させた塩類が、薬学的組成物とし て、特に有用である。薬学的に許容される組成物内のアルグラビンまたはその誘 導体の至適濃度は、投与される化合物の好ましい投与量、用いられる化合物の化 学的特性、化合物賦形剤の処方、および投与経路など、多くの要素によってさま ざまでありうる。投与される薬学的組成物の至適投与量も、癌の転移のタイプと 程度、特定の患者の全身的な健康状態、および選択した化合物の相対的な生物学 的有効性などの変数に依存する。これらの組成物は、特に、肺癌、肝癌、および 卵巣癌の癌治療に用いることができるが、乳癌、直腸癌、結腸癌、胃癌、膵臓癌 、もしくは食道癌など、その他の癌も、本組成物によって有効に治療される。さ らに、白血病およびリンパ腫などの造血細胞癌もまた、有効に治療することがで きる。 本発明の化合物は、薬学的に許容される非毒性の賦形剤または担体と混合して 薬学的組成物に処方することができる。そのような化合物および組成物は、非経 口投与するためには、特に、生理緩衝溶液中の水溶液または懸濁液の形にして、 経口投与するためには、特に、錠剤もしくはカプセルの形にして、また、鼻腔内 投与するためには、特に、粉剤、点鼻剤、もしくはエアロゾルの形にして調製す ることができる。常法を用いて、この他の投与経路に用いるための組成物を必要 に応じて調製することができる。 本発明の化合物は、単位用量の形にして、便宜に応じて投与することができ、 また、薬学の技術分野において周知されている方法、例えば、レミントンの製薬 科学（Remingtonls Pharmaceutical Science）（Mack Pub．Co.，ペンシルバニ ア州イーストン（Easton））に記載されている方法によって調製することができ る。非経口投与用の処方剤は、一般的な賦形剤として、滅菌水もしくは食塩水、 ポリエチレングリコールなどのポリアルキレングリコール、植物由来の油脂、水 素添加したナフタレンなどを含むことがある。特に、生物親和性で、生物分解性 のラクチドポリマー、ラクチド/グリコリドコポリマー、またはポリオキシエチ レン-ポリオキシプロピレンコポリマーが、本発明の化合物のインビボでの放出 を調節するための賦形剤の例である。この他の非経口輸送に適したシステムには 、エチレン-ビニルアセテートコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、埋込み可能な輸 液システム、およびリポソームなどがある。吸入による投与を行うための処方剤 は、望ましい場合には、ラクトースなどの賦形剤を含むことができる。吸入用処 方剤は、例えば、ポリオキシエチレン-9-ラウリルエーテル、グリココール酸、 およびデオキシコール酸を含む水性溶液でもよく、あるいは、点鼻剤の形で投与 するための油性溶液でもよい。望ましければ、化合物を、鼻腔内に塗布するため のゲルとして処方することもできる。非経口投与用処方剤には、口内投与するた めのグリココール酸塩も含まれる。 本発明はまた、包装材料、および、その包装材料の中に入れられたアルグラビ ンまたはその誘導体を含む製品に関する。アルグラビンまたはその誘導体は、ヒ トにおける腫瘍の増殖を抑制するための治療に有効である。包装材料には、アル グラビンまたはその誘導体がヒトにおける腫瘍の増殖を抑制するため用いること ができる旨を表示したラベルまたは挿入紙が含まれる。ジメチルアミノアルグラ ビン、およびその薬学的に許容される塩類が、製品として用いるには特に有用な アルグラビン誘導体である。 別の態様において、本発明は、アルグラビン、またはその誘導体を含む第一の 化学療法剤と、第二の化学療法剤とを含む組成物およびキットに関する。第二の 化学療法剤は、アルグラビンまたはその誘導体ではない。これらの組成物は、ヒ トにおける腫瘍増殖を抑制するのに有効である。ジメチルアミノアルグラビンま たはその薬学的に許容される塩類が、特に有用なアルグラビン誘導体である。ア ルキル化剤、代謝拮抗剤、ビンカアルカロイド類、抗生物質、または白金配位複 合体など、さまざまな種類の化学療法剤を、この組成物に用いることができる。 例えば、ニトロジェンマスタードシクロホスファミドおよびサルコシンなどのア ルキル化剤を用いることができるが、メチルニトロソウレアのような別のアルキ ル化剤も適している。葉酸類似化合物メトトレキセート、または、フルオロウラ シルもしくは5-フルオロウラシルなどのピリミジン類似化合物などの代謝拮抗剤 も、ビンブラスチンまたはビンクリスチンなどのビンカアルカロイドと同じよう に用いることができる。ルビドマイシンなどの抗生物質も、シスプラチンなどの 白金配位複合体と同じく、適当な化学療法剤であるかもしれない。多数の化学療 法剤を、アルグラビンまたはその誘導体と組み合わせることができる。例えば、 ビンクリスチンとシクロホスファミド、またはビンクリスチンとビンブラスチン を、アルグラビンまたはその誘導体と組み合わせることができる。 本発明はまた、アルグラビンまたはその誘導体を含む第一の化学療法剤と、ヒ トの腫瘍増殖を抑制するのに有効な第二の化学療法剤とを含む組成物を一定量患 者に投与することによって、ヒト患者における腫瘍増殖を抑制する方法に関する 。第二の化学療法剤は、アルグラビンまたはその誘導体ではない。これらの組成 物により、増強された抗腫瘍効果が得られ、転移の発生を防止することができる 。特に、これらの組成物は、薬剤耐性の腫瘍を打ち負かすのに有用である。これ らの薬剤は、別々に投与してもよいし、混合して投与してもよい。化学療法剤を 投与する数時間前に、アルグラビンまたはその誘導体を投与することによって、 毒性を低下させることができる。これらの組成物は、いずれの経路によって投与 してもよい。 本発明はまた、化学療法剤によって患者を治療する際に、患者の免疫系を強化 するのに有効な量のアルグラビンまたはその誘導体を患者に投与することによっ て、ヒト患者において化学療法剤の免疫抑制効果を弱めるための方法に関する。 免疫系は、例えば、白血球、T-リンパ球、B-リンパ球、または免疫グロブリンの 総数を増加させることによって強化することができる。 本発明は、以下の実施例でさらに説明されているが、それによって、請求の範 囲に記載されている本発明の範囲を限定するものではない。 実施例 実施例１：アルグラビンの単離 ― テリハヨモギ（smooth wormwood）、アル テミシア・グラベラKar．et Kir．(Artemisia glabella Kar．et Kir.)は、カザ フスタンの乾燥したステップ高原で広く繁殖している多年性植物である。葉、芽 、花蕾、および茎を含む、A．グラベラの地上部は、植物の全生長段階を通じて 、アルグラビンなどのセスキテルペンラクトン類を含んでいる（表I）。 さまざまな溶剤を用いて、乾燥した植物体からセスキテルペンラクトンを抽出 した（表II）。開花期の植物体から、45〜50℃で、クロロホルムによって3回ラ クトンを抽出すると、より高い収量が得られることが分かった。 逆流式連続抽出装置、充填装置、および外部環境から切り離された3種類の容 器からなる抽出装置を抽出に用いた。溶剤を入れた容器にはフィルターと、蒸発 装置および濃縮装置をもつ蒸留装置が付いており、緩衝能力がある。乾燥剤を入 れた容器は、乾燥装置、サイクロン、冷却装置、通気装置、および加熱装置から なる。冷却水を入れた容器には、通気性のソルトパンが付いている。この抽出装 置は、脱臭装置、排水タンク、および抽出物回収装置を備えている。 アルテミシア・グラベラKar．et Kir．(Artemisia glabella Kar．et Kir.)を 乾燥させた材料約7.7kgを、抽出装置に入れて、抽出力ラムに通しながら、絶え ず溶剤と混合させた。溶剤は、乾燥植物材料が動く方向とは反対の方向に動き、 徐々に抽出物質で飽和するようになる。飽和した溶剤は、流出させると、まず、 植物材料の断片を除去するために濾過してから蒸発させた。濾過された植物断片 は、再抽出するために抽出装置の中を再循環させた。蒸発させた蒸気を濃縮装置 に送り込んだ。濃縮装置から純粋な溶剤を回収し、抽出装置に再循環させた。濃 縮装置内の凝集表面は、通気装置から吹き込んでくる外気によって、予め水を 冷却しているソルトパンからポンプで送られてくる水によって冷却した。空気に よるソルトパン内の気化冷却によって、水は、外気の温度よりもかなり低い温度 に冷却することができる。 溶剤から精製された抽出物質は、タール状になっている。この処理過程で、約 7%の植物材料（539グラム）を回収した。 タールを溶解するために絶えず撹拌しながら、このタール状物質に2倍容量（ 約1.08L）の60℃エタノールを加えて、さらに精製した。約70℃に温めた蒸留水 を、アルコールと水の比率が2：1になるように加えた。タール-アルコール-水溶 液を30分間入念に撹拌してから、約24時間、または沈殿が形成されるまで室温に 放置した。真空下でセラミックフィルターで、水アルコール溶液を濾過した。濾 過後残った沈殿物を用いて、この手順を繰り返した。 濾液を回転蒸発させると、68〜70%のアルコールを含む水との共沸混合物の形 でアルコールが減圧蒸留された。アルコールを蒸留した後、この水溶液から約28 6グラムの精製タールを得た。 精製タールは、溶離剤としてベンゼンを用い、KCKシリカゲルカラムにかけて 、圧力によって各成分に分離した。ベンゼン画分を回収して、薄層クロマトグラ フィー（TLC）（シルフォル（silufol）、ベンゼン-エタノール、9：1）を用い てアルグラビンを分析した。アルグラビンを含む画分を蒸留してベンゼンを除去 した。この段階のアルグラビンは黄色を呈する。収率約11.7%で、約33gのアルグ ラビンが産生された。 産物とヘキサン（w/v）の比が1：10になるように、ヘキサンに溶解して加熱す ることによって、アルグラビンを再結晶させた。アルグラビンを溶液に溶かした 後、この産物を減圧濾過した。濾液を室温において、アルグラビンの結晶を分離 した。この工程で、約21gのアルグラビンを回収した。アルグラビンは、1(R)，1 0(S)-エポキシ-5(S)，6(S)，7(S)-グアイア-3(4)，11(13)-ジエン-6,12-オリド という構造をもつ。アルグラビンの立体化学構造をX線解析によって決定した。 ペンテンおよびヘプタン環とヘプタンおよびγ-ラクトン環が結合して、結晶 学的には別々のアルグラビン分子になるのはトランソイド（transoid）である。 ねじれ角度は、それぞれ、O₃C₁C₅H₅では、-142(1)と-136(2)°、また、H₆C₆C₇H₇ で は、-167(2)と-159(3)°である。ペンテン環は、1α-エンベロープ型のコンホメ ーション（ΔC¹ _s=2.9および1.5°）を受容し、ヘプタン環は、7α,1，10β鎖（ ΔC⁷ _s=2.7および4.7°）である。C-10原子の横のメチル基は、エクアトリアルな α方向になっている。γ-ラクトン環のコンホメーションは、7α-エンベロープ 型と6β,7α-半イス型の中間であったが、後者の方により近かった（ΔＣ¹² ₂=2. 0および6.1°）。 アルグラビンのNMRスペクトルをCDC1中のVarian HA-100D装置に記録した。化 学シフトは、受容されたシグナルTMCからδ値を0とする。1.34ppm（エポキシド のメチル基）と1.94ppm（二重結合のメチル基）のところに、2つの3プロトン1重 項がある。1プロトンの2重項が、J＝10Hzをもつ2.95ppmのところ（C位のプロト ン）に記録されていた。1プロトンの3重項が、J＝10Hzをもつ3/97ppm（ラクトン プロトン）の中心とともに検出された。2つの1プロトン2重項が、J＝3Hzをもつ5 .42ppmと、J＝3Hzをもつ6.1ppmのところ（ラクトン環のエキソメチレン）で得ら れ、また、1プロトンシグナルが5.56のところ（ビニルプロトン）で得られた。 単離化合物、および関連するセスキテルペンラクトンのアルボレセン（Arboresc ien）とルダルチン（ludartine）のNMRスペクトラムに基づいて、アルグラビン の構造（図1）を確認した。 アルグラビンの特徴の概要：無色、融点約100〜102℃（ヘキサン）； 実施例2：アルグラビン誘導体 ― 本明細書を読む人の助けとなるよう、以下 のさまざまな化合物の後ろに番号を付けて、図に示した化合物との同一性を確認 するのが容易になるようにしてある。 アルグラビンのエポキシド基とオレフィン基に作用する試薬を用いて、アルグ ラビンを誘導した。過酢酸による、アルグラビン1の三置換オレフィン二重結合 のエポキシド化（図1）は、高い収量と95%の立体選択性をもって進行し、3β,4 β-エポキシアルグラビン2(1(10)，3(4)-ジエポキシ-グアイ-11(13)-エン-6,12- オリ ドを形成する。エチルエーテルを用いたシリカゲルカラムクロマトグラフィーを 用いて、約65%の収率で、エポキシアルグラビン2を回収した。IRおよびNMRのス ペクトラムを用いて、エポキシアルグラビン2の構造を確認した。 エポキシアルグラビン2の特徴の概要：融点149〜151℃（Et₂O-CH₂Cl₂）； エポキシアルグラビン2をエーテルアセトン塩酸溶液で処理すると、ジクロロ ヒドリン3および4を生成する（図1）。両エポキシ基の開裂が、60%および95%の 位置選択性で得られるのが観察された。ジクロロヒドリン3および4を水で希釈し て、NaHCO₃で洗浄して、Et₂O-iPr₂Oを1：1の比で用いたシリカゲルクロマトグラ フィーによって精製した。IRおよびNMRのスペクトルデータを用いて構造を決定 した。 ジクロロヒドリン3および4の特徴の概要：3（60%）融点190〜191℃； 水性アセトン中のN-ブロモサクシンイミドによる臭素処理と相互作用によって 、別の誘導体が作出され、三置換された二重結合上で可動的なブロモヒドリンの 形成と、エキソメチレン基の部分的な臭素化が起きた。アルグラビン1をBr₂と四 塩化炭素によって0℃で処理したところ、3,4ジブロモアルグラビン5ができた。 アルグラビン1を、メタノール塩酸溶液で処理したところ、クロマトグラフィ ーによって分離できる、クロロヒドリン6/7の混合物が、約6：1の割合で高収率 をも って得られた（図1）。同時に、マイケル型の反応によって、エキソメチレン二 重結合への塩酸成分の部分的な付着が観察された。存在量の多い位置異性体（re gioisomer）6を、クロロホルム中の過酢酸によってエポキシ化すると、クロマト グラフィーによって分離することができるエポキシアルグラビンクロロヒドリン 異性体8/9の混合物が、1：1の割合で生じた。未知のクロロヒドリン6〜9の構造 を、成分分析とスペクトラム分析に基づいて、X線によるエポキシド8の結果を考 慮しながら確認した。 約550mgのアルグラビン1を、約15mlのアセトニトリル、および1滴のHBF₄で1.5 時間還流すると、主要な産物としてジオール10が生じ、低収率ながら、異性体11 とジエン12ができた（図2）。反応を中和して、水で希釈し、クロロホルムで抽 出してから、カラムクロマトグラフィー（10、石油-エチルエーテル2：1；11、 石油エチルエーテル1：1；12、石油エチルエーテル1：3）によって精製した。 ジオール10、異性体11、およびジエン12の特徴の概要：10 融点184〜185℃（ エチルエーテル）； ピリジン中120mgのジオール10の冷却溶液（約0℃）に、約0.1mlのPOCl₃を加え て、アルグラビンの1,10-エピマーであるエピアルグラビン13を合成した（図2） 。約-5℃で24時間撹拌した後、反応液をエチルエタノールで抽出して、反応液 を精製した（worked up）。5% HClと水で洗浄した後、石油エチルエタノールか ら残留物を結晶化して、40mgの1,10-エピアルグラビン13を得た。 1,10-エピアルグラビン13の特徴の概要：融点193〜194℃（EtOH）； アルコール媒体中のベンゼンアミン、ジメチルアミン、およびモルホリンによ る、アルグラビン1とエポキシアルグラビン2との間の相互作用は、これらの分子 の活性化された二重結合に対するマイケル反応として、化学選択的に（chemosel ectively）進行し、56〜85%の対応する誘導体14a-dおよび15a-dが生じる（図3） 。アミノメチル残基がα配位にあることが、スペクトルによって明らかになった 。 ジメチルアミノアルグラビン14bの合成：アルグラビン1を、0.21Lのアルコー ルと混合して、アルグラビンが完全に溶解するまで40℃に加熱した。フィルター 濾過した後、ジメチルアミンの33%溶液（0.023L）を撹拌しながら1滴ずつ加えた 。この混合液を室温で24時間放置した。TLCを用いて、シルフォル（silufol）プ レート上で、反応を観察した。活性化反応が完了した後、混合液を52℃に加熱し て、アルコールを減圧蒸留した。残留した溶媒に約0.63Lのクロロホルムを加え て、30分間撹拌した。この混合液を分離用ロートに注入し、クロロホルムがロー トの下位部分に見えるところを回収した。水層にたいして、さらに２回、クロロ ホルム抽出を繰り返した。硫酸マグネシウムを用いて、回収したクロロホルムを 乾燥させた。クロロホルム-硫酸マグネシウムの混合液を30分間撹拌してから、 減圧濾過して、クロロホルムを除去した。約22gのジメチルアミノアルグラビン1 4bが生成した。 ジメチルアミノアルグラビン14bは、まず、5倍容量（w/v）のクロロホルムに 溶解してから、約3倍容量（w/v）のKCKシリカゲルと混合した。溶媒を蒸発させ た後、乾燥した物質を、付加生成物と吸着剤が1：22の比率でできているKCKシリ カゲルカラム上でクロマトグラフィーによって分離した。このカラムを、石油ジ エーテルとエチルエーテルの混合液（1：1、1：2）によって溶出した。約14〜17 mlの画分を回収して、TLCで観察した。クロロホルムおよびエーテル（1：1）に よる画分から、ジメチルアミノアルグラビン14bを再結晶させた。 ジメチルアミノアルグラビン14bの特徴の概要：融点94.5〜95.5℃； ジメチルアミノアルグラビン14bを0.22Lのアルコールで溶解して、40℃に加熱 して、塩酸ジメチルアミノアルグラビン14dを生成させた。減圧濾過した後、0.2 kgの塩化ナトリウムと、数滴の濃縮硫酸を加えて、塩化水素ガスを生成した。反 応をTLCで観察した。反応が完了したら、混合液を52℃に熱し、エタノールを減 圧蒸留した。残留したタールに、約0.9Lのエチル酢酸を、激しく撹拌しながら加 えた。その結果できた沈殿で、約21gの塩酸ジメチルアミノアルグラビン14dが得 られた。 約0.1Lのクロロホルムを加えて塩酸ジメチルアミノアルグラビン14dを溶解し てから、クロロホルムを除去するために蒸留した。残留したタールを、激しく撹 拌しながら、0.83Lのエチル酢酸と混合した。この混合液を冷却して、生成物が 確実に、完全に沈殿するようにした。この結果できた沈殿物を減圧濾過して、す べての溶媒を除去した。最終産物を無水物（anhydrone）になるまで減圧乾燥し 、2gの乾燥物質に対して100mlの水という割合で、無熱性の蒸留水に溶解した。 塩酸ジメチルアミノアルグラビン14dの収量は約20gであった（この段階での見積 量の95%）。 塩酸ジメチルアミノアルグラビン14dの特徴の概要：融点203〜204℃（エタノ ー ルエーテル）； アルグラビン１をエタノールとH₂/Niで処理して、11,13ジヒドロアルグラビン 16を生成させた。実施例３：凍結乾燥 ― 塩酸ジメチルアミノアルグラビンの水溶液を綿ガーゼ の栓、または、ガーゼを8枚重ねたものに通してから、滅菌したミリポア（Milli pore）フォルターを通して濾過して、滅菌したガラス瓶の中に入れた。この溶液 を真空ポンプで測定用ビュレットの中に吸いだし、2mlのバイアルまたはアンプ ルに等量ずつ分注した。溶液を入れたバイアルまたはアンプルは、KC-30凍結乾 燥機、またはLS-45凍結乾燥機で乾燥させる前に、滅菌した棚に-40℃で24時間保 存した。この調合期間後、乾燥処理を開始した。温度を-40℃に2時間維持した後 、徐々に約50℃に上昇させた（プラスマイナス約５℃）。約50℃への変化は、約 12時間から13時間かけて起きるようにした。最終温度は、+60℃を超えなかった 。乾燥時間は、全部合わせると24時間であった。この後、乾燥した化合物の入っ たバイアルに直ちに蓋をして回転させた。アンプルは密封した。各バイアルまた はアンプルには、約0.04gの調製物が入っていた。 バイアルまたはアンプルフィルター滅菌されていないバイアルまたはアンプル は、1.2気圧、120℃で20分間オートクレーブして滅菌した。 または、調製した塩酸ジメチルアミノアルグラビン水溶液を、綿ガーゼ栓また は8枚重ねのガーゼで濾過した。約200mlの溶液を500ml瓶に注入し、綿ガーゼ栓 または8枚重ねのガーゼで蓋をして、油紙で包んだ。水溶液の入った瓶を、1.2気 圧、120℃で30分間オートクレーブして滅菌した。滅菌した溶液を室温に冷却し た。滅菌技術を用いて、10mlバイアル瓶に2mlの溶液を注入した。そして、この バ イアルを上記のようにして凍結乾燥した。凍結乾燥後、各バイアル瓶には、約0. 04gの調製物が入っていた。 この化合物の収量は17gであり、この段階での材料の88.2%に等しく、天然の乾 燥材料全部の0.22%であった。凍結乾燥された物質は、白みがかったわら色をし ており、苦味があった。この調製物が本物であることを、融点を測定し、IR-ス ペクトル、質量スペクトル、およびNMRスペクトルの記録を取って確認した。調 製物の品質を、調製物1mgを0.2mlの水で希釈して検査した。濃縮硫酸中で飽和さ せたバニリン溶液を1滴加えると、混合液が紫色に変わり、テルペンが存在する ことを示した。凍結乾燥した物質は、3年間保存することができる。実施例４：この他のセスキテルペンラクトン類の単離 化合物17から21の構造を図4に示す。グラベリン17も、アルテミシア・グラベラ Kar．et Kir．(Artemisia glabella Kar．et Kir.)から単離した。乾燥した生の 材料からの収率は、約0.016%であった。グラベリンの構造を、IR-スペクトル、U N-スペクトル、NMRスペクトル、C13 NMRスペクトル、質量スペクトル、および化 学的遷移によって決定した。 グラベリンの特徴の概要：融点130〜131℃（石油ジエーテル）；[α]²⁰ _D+90.9 °（SO，17，クロロホルム）。 収率45%で、α-サウトニン（sautonine）の選択的脱水によって、3-ケト-ユー デスム（eudesm）-1(2)，4(5)，11(13)-トリエン-6,12-オリド(1)18を調製した が、これは、20種以上のヨモギから製造することができる。この構造を、IR-ス ペクトル、UV-スペクトル、およびNMRスペクトルによって決定した。 18の特徴の概要：融点145〜147℃（メタノール）；[α]¹⁸ _D-10.4°（1，12を もつ；クロロホルム）。 アノビン19は、アキレス・ノビリスL．(Achilles nobilis L.)から抽出した。 アノビン19の2α,3α-エポキシ-4α，10α-ジオキシ-5,7α(H),6β(H)-グアイ-1 1(13)-エン-6,12-オリド構造を、IR-スペクトル、NMRスペクトル、質量スペクト ル、および化学的遷移によって確認した。 トリフルオリドホウ素（trifluoride boron）のエーテレート（etherate）に よる異性体化によって、エスタフィアチン（estafiatine）など、利用可能なテ ルペ ンラクトンを異性体化し、その後リクロロベンゾイル酸によってエポキシ化して 、エポキシエスタフィアトン20（epoxy estafiaton）を製造した。3-ケト-10α( 14)-エポキシ-1,5,7α(H)4,6β(H)-グアイ-11(13)-エン-6,12-オリド構造を、IR -スペクトル、NMRスペクトル、および質量スペクトルによって決定した。 ガイラルジオ・グランジフロラ（Gaillardio grandiflora）の地上部をクロロ ホルムで抽出してから、クロマトグラフィーによってシリカゲルカラム上で分離 して、ガイグラニン21を製造した。ガイグラニン21の構造を、IR-スペクトル、U V-スペクトル、NMRスペクトル、およびCesy-スペクトルによって決定した。実施例５：アルグラビン、およびその誘導体のインビトロ活性 ―細胞の生存率― 形質転換細胞、および正常細胞の初代培養を、さまざまな濃度の塩酸ジメチルア ミノアルグラビンとともにインキュベートして、細胞の生存率に及ぼす効果を測 定した。 マウスの肥満細胞腫（P-815）、および骨髄腫（Z-P3X63Ag8.653およびPai）の 細胞系、ならびにヒト赤白血病（K-562）細胞系を使用した。コラゲナーゼを用 いて、マウスの肝臓から正常なマウス肝細胞を単離した。ガラスホモジナイザー を用いて、マウス脾細胞を単離した。骨髄を洗浄して、骨髄細胞を得た。例えば 、シアーズ（Shears，S.B.）とカーク（Kirk，C.J.）、(1984)，Biochem．J．21 9:375〜382を参照のこと。 細胞を、10%ウシ胎仔血清、100mMのL-グルタミン、および50μg/mlのゲンタマ イシンを添加したRPMI-1640培地の中で、5% CO₂下、37℃で培養した。各ウェル 当り50,000細胞の密度で、細胞を24穴プレートに接種して、ほぼ集密状態になる まで、ほぼ2日間増殖させてから、同じ密度で、96穴プレートに移した。形質転 換細胞系を、1.5μg/mlから100μg/mlの濃度範囲の塩酸ジメチルアミノアルグラ ビンとともにインキュベートした。トリパンブルー分別によって、細胞の生存率 を測定した。図5に示すように、X-653細胞およびK-562細胞については6μg/mlで 、また、P-815細胞については12μg/mlで、生存率が半分に低下した。12μg/ml の濃度で、K-562細胞とX-653細胞の約25%は生き残り、約25μg/mlの濃度で、同 じ割合のP-815細胞が生き残った。最高濃度の塩酸ジメチルアミノアルグラビン では、すべての形質転換細胞の生存率がさらに低下した。 倍地中で³Hチミジンを18時間インキュベートして、形質転換細胞の増殖を測定 した。所定の時間が経過したところで、³Hチミジンの取り込み量を計測して、増 殖を測定した。チミジンの取り込みによって、DNA合成速度を量的に測定値が提 供されるが、これは、一般的には細胞分裂速度と直接に比例する。図6は、X-653 細胞とP-815細胞の増殖が、それぞれ、6μg/mlと12μg/mlの濃度で効果的に阻害 された。 正常細胞の初代培養細胞を、10μg/mlから2560μg/mlの濃度範囲の塩酸ジメチ ルアミノアルグラビンと共に18時間インキュベートした。トリパンブルー分別に よって、細胞の生存率を測定した。図7は、塩酸ジメチルアミノアルグラビンの 濃度を上昇させると、正常細胞の生存率が低下するが、形質転換細胞に較べると 、正常細胞を殺すには、かなりの高濃度が必要であることを示している。320μg /mlの濃度では、脾臓細胞の数は、対照よりも50%少なかった。640μg/mlと1280 μg/mlの濃度では、それぞれ、40%と10%の脾臓細胞がまだ生きていた。これらと 同じ濃度で、それぞれ約50%と25%の肝細胞がまだ生きていた。骨髄細胞の方が、 塩酸ジメチルアミノアルグラビンに対する感受性は高かった。160μg/mlの濃度 で、約50%の骨髄細胞しか生き残らなかった。濃度を320μg/mlに上げると、生存 率は、約25%に落ちた。 タンパク質のプレニル化 ― 60μMの塩酸ジメチルアミノアルグラビン存在 下で、マウス骨髄細胞であるPai細胞を培養した。この細胞を、600×gで10分間 遠心分離して回収し、その後、PBSで2回洗浄した。対照用細胞は、薬剤なしで培 養した。氷上で30分間、溶解用緩衝液（50mMトリス、pH7.4，25mM EDTA，0.05% Tween，0.01M NaCl）の中で細胞を可溶化した。4℃で5分間ホモジナイズして細 胞溶解物を作製し、12,000×gで10分間遠心分離して沈殿させた。上清を回収し た。トリクロロ酢酸でタンパク質を沈殿させた後、エタノールとエチルエーテル で連続して洗浄した。イソプレノイドとタンパク質の間の結合の選択的ナフトー ル切断を、エプスタイン（Epstein，W.W.）ら、（1991）Proc．Natl．Acad．Sci ．USA 88:9668-9670の述べるところにしたがって実施した。一般的には、カリウ ムナフトキシド（potassuim naphthoxide）とナフトールの4：1の混合物5mgを、 約10mgの沈殿したタンパク質に加えた。50μlのジメチルホルムアミドを加えた 後 、試験官にアルゴンガスを入れて蓋をし、8〜15時間100℃に加熱した。反応産物 をヘキサンで抽出して、0.4×15cmの逆相Nova-Pac C₁₈カラムを用いて、HPLC（W aters System）による分析を行った。アセトニトリル中20%の水によって、1.0ml /分の流量でカラムを溶出した。ナフトール切断産物は、0.01Aユニットの実際の 屈折によって、360nmで検出した（図8）。対照では（図8A）、4.5分のところで ファルネシルシステイン誘導体が溶出し、6分のところで、ゲラニルゲラニルシ ステイン誘導体が溶出した。ゲラニルゲラニルのファルネシルシステインに対す るモル比は6であった。 細胞のプレニル化に対する塩酸ジメチルアミノアルグラビンの影響が、図8Bに 示されている。60μMの塩酸ジメチルアミノアルグラビンを用いると、クロマト グラムには、ファルネシルシステイン誘導体に相当するピークが見られなかった が、ゲラニルゲラニルシステイン誘導体のピークは、対照と同じように現れた。 このことは、塩酸ジメチルアミノアルグラビンは、ゲラニルゲラニル化に対して 有意な影響を与えることなしに、タンパク質のファルネシル化を妨げることを示 している。実施例６：アルグラビン、およびその誘導体のインビボ活性 全体として、このファミリーのタンパク質は毒性が低く、治療用量を超える用 量でも許容される。従来からの毒理学的方法を用いて、ジメチルスルホキシド（ DMSO）中2%の塩酸ジメチルアミノアルグラビン溶液をマウス（体重20〜22g）と ラット（体重120〜130g）に腹腔内注射してLD₅₀を測定した。LD₅₀は、マウスで1 90〜220mg/kg、また、ラットでは280〜310mg/kgであった。動物の剖検では、内 臓の多血性、すなわち、腸間膜と腸の血管拡張が明らかに見られた。 ラットとウサギでは、1回分の用量によっては、肝臓、腎臓、心臓血管系、呼 吸、または末端神経系の機能が損なわれることはなかった。血圧も変わらなかっ た。さらに、発熱性、アレルギー性、催奇性、または胚傷害性効果は、動物では 見られなかった。 5日間から20日間にわたって毎日、ラット、モルモット、またはマウスに腹腔 内投与を行い、また、ウサギには静脈内投与を行って、アルグラビンおよびその 誘導体の最大許容用量（MTD）を決定した。一般的には、検査したすべての化合 物に ついて、MTDは、約20mg/kgから約50mg/kgまでの範囲に及んだ。例えば、DMSO溶 液中の塩酸ジメチルアミノアルグラビンの最大用量は、ウサギの20mg/kgから、 マウスの30mg/kg、モルモットの45mg/kg、ラットの50mg/kgという範囲に及んだ 。塩酸ジメチルアミノアルグラビンの2%水溶液の腹腔内投与を期間延長して毎日 続けると、血液血清および肝臓組織において、解糖における可逆的な変化と組織 の呼吸作用とが観察され、ホルモンバランスの変化と、尿中のタンパク質量の増 加が観察された。 ラットにおける腫瘍増殖阻害 ― マウスとラットにヒトの腫瘍を移植した（ 肉腫M-1；プリスリンパ肉腫；ワーカー癌肉腫（carcinosarcoma of worker）； ゲレン（Geren）癌腫；肉腫45；肉腫180；肉腫37；肝臓腺胞癌（Alveolar Cance r of liver）PC-1；エールリッヒの固形腺癌（solid adenocarcinoma of Ehrlic h）；乳癌（PMK）；リンパ球白血病P-388；リンパ様白血病L-1210；ルビドマイ シン、プロスピジン（prospidine）、およびロイコエフィジン（leukoeffdine） に耐性のプリスリンパ肉腫の変異株；ならびにサルコリシン、5-フルオロウラシ ル、プロスピジン（prospidine）、およびルビドマイシンに耐性の肉腫45の変異 株）。マウスに移植してから24時間後に処理を開始し、ラットでは、測定可能な 腫瘍節が検出された時から処理を開始した。対照用の動物は10〜15匹の群より成 っていた。化合物の抗腫瘍活性を評価するために、処理を終了した後、腫瘍増殖 阻害の割合を測定した。結果は、t検定を用いて統計的に解析した。組織学的に は、腫瘍の退縮は、ジストロフィー、腫瘍細胞の壊死、腫瘍組織への血液供給の 阻害、および結合組織による置換などを伴っていた。 表IIIとIVは、アルグラビン、およびそのさまざまな誘導体の、薬剤非耐性腫 瘍と薬剤耐性腫瘍の両方に対する腫瘍増殖阻害活性の割合を要約したものである 。比較のために、表IIIには、抗腫瘍活性のあることが知られている化合物のコ ルヒチンに対する腫瘍増殖阻害の割合も含まれている。C3-C4二重結合上でアル グラビンをエポキシド化しても、抗腫瘍活性は上昇した。ジメチルアミノアルグ ラビンと塩酸ジメチルアミノアルグラビンが、広範な腫瘍に対して効果的であっ た。塩酸ジメチルアミノアルグラビンの長所の一つは、水溶性であることである 。 組合せ療法 ― 動物実験の結果、塩酸ジメチルアミノアルグラビン、およびそ の他の抗腫瘍剤による最も合理的な治療計画を設計することが可能になった。 塩酸ジメチルアミノアルグラビン、シスプラチン、およびメトトレキセートを 組み合わせて治療したラットの60%で、プロスピジンとルビドマイシンに対する 腫瘍の耐性が完全に消失するのが観察された。さらに、この組合せによって、肉 腫-45のメトトレキセートに対する、肉腫-45の5-フルオロウラシルに対する、ま た、プリスリンパ肉腫のルビドマイシンに対する交差耐性を克服することができ た。この治療によって死んだ動物は見られなかった。 サルコリシン投与後のロイコフェジン（leukofedin）耐性プリスリンパ肉腫が 二次的に感受性になると同時に、60%のラットで腫瘍が完全に消失するのが観察 された。塩酸ジメチルアミノアルグラビンとサルコリシンを組み合わせると、最 大許容用量（MTD）の半分で、DNA合成の阻害が起きた（合成阻害指数94.1〜97.1 %）。この組合せでは、血液細胞量の減少は起きなかった。 塩酸ジメチルアミノアルグラビンとメチルニトロソウレアを組み合わせて、こ の2つの薬剤の投与間隔を2、4、または24時間にして投与した。メチルニトロソ ウレアを投与する2時間前に、塩酸ジメチルアミノアルグラビンを投与するのが 最適であると判定された。肉腫-45のプロスピジンに対する、肉腫-45の5-フルオ ロウラシルに対する、プリスリンパ肉腫のルビドマイシンに対する、またプリス リンパ肉腫のプロスピジンに対する交差耐性は、塩酸ジメチルアミノアルグラビ ンとメチルニトロソウレアとを組み合せることで克服された。有害な薬剤反応な しに、ラットで約60%の腫瘍が消失した。塩酸ジメチルアミノアルグラビンを投 与する前にメチルニトロソウレアを投与すると、抗腫瘍活性が低下し、毒性が強 くなった。 組織学的には、塩酸ジメチルアミノアルグラビンとメチルニトロソウレアを組 み合わせて治療した後に、明確な構造をもたない小さな核濃縮多型細胞が見られ る数は、対照群に較べて少なかった。メチルニトロソウレアを投与する2時間前 に塩酸ジメチルアミノアルグラビンを投与すると、毒性が低下することが分かっ た。 同じ結果が、ゲレン癌腫、およびワーカー肉腫に対して、ビンクリスチンとビ ンブラスチンの混合液を投与する2時間前に、塩酸ジメチルアミノアルグラビン を投与したときに見られた。 塩酸ジメチルアミノアルグラビンによって、非耐性腫瘍および薬剤耐性腫瘍を もつ動物の生存期間が少し長くなった。塩酸ジメチルアミノアルグラビンと、そ の他の抗腫瘍剤との組合せによって、生存期間はさらに延びた。例えば、塩酸ジ メチルアミノアルグラビンとビンクリスチンを組み合わせると、メチルニトロソ ウレア耐性腫瘍をもつ動物の生存期間が114%長くなった。塩酸ジメチルアミノア ルグラビンとシスプラチンの組み合せでは、MTDの半量で、メトトレキセート耐 性L1210をもつ動物の生存期間が117%長くなった。塩酸ジメチルアミノアルグラ ビン、ビンクリスチン、およびシクロホスファミドの3種類を組み合わせて、MTD の半量を投与すると、塩酸ジメチルアミノアルグラビンとビンクリスチン、また は塩酸ジメチルアミノアルグラビンとシクロホスファミドを組み合わせたときよ りも良好な効果が見られた。3種類の組み合わせによって、生存期間は209%長く なった。塩酸ジメチルアミノアルグラビン、ビンクリスチン、シクロホスファミ ド、およびシスプラチンの4種類を組み合わせると、3種類の組み合わせよりも効 果が減少した。これは、抗腫瘍剤の毒性が上昇するためであろう。 塩酸ジメチルアミノアルグラビンだけの効果と、他の薬剤と組み合わせたとき の効果を、プリスリンパ肉腫の薬剤耐性転移モデルで調べた。1次的な薬剤耐性 リンパ節の中では、鼠蹊部リンパ節における転移が最も感受性が高かった。これ らは、10%の症例では発生しなかった。塩酸ジメチルアミノアルグラビンのみで は、生存期間は対照群の128%であった。塩酸ジメチルアミノアルグラビンとビン クリスチンを組み合わせると、30%のラットで腫瘍が崩壊して、腫瘍増殖の阻害 が起きた。鼠蹊部リンパ節に新たな転移は見られず、生存期間が174%延びた。 塩酸ジメチルアミノアルグラビンとメトトレキセートを組み合わせると、プロ スピジン耐性のプリスリンパ肉腫をもつ動物の生存期間が300%長くなった。この 組み合わせによって、転移頻度は8倍低くなった。 1次的な薬剤耐性腫瘍、およびそれらの転移に対する塩酸ジメチルアミノアル グラビンの作用機作として可能なものを明らかにするために、塩酸ジメチルアミ ノアルグラビンとサルコリシンを、単独、または組み合わせて、肉腫45を治療す る ために使用し、DNA合成阻害を調べた。薬剤非耐性肉腫45の場合には、サルコシ ル、およびサルコシルと塩酸ジメチルアミノアルグラビンの組み合わせについて 有益な結果が観察された。薬剤耐性肉腫45の場合には、塩酸ジメチルアミノアル グラビン単独が、非常に効果的であった（DNA阻害指数99%）。さらに、その後5 日間、および10日間にわたって毎日投与した24時間後に、DNA阻害が上昇した。 このことは、塩酸ジメチルアミノアルグラビンの反復投与の方が、MTDを一度に 投与するよりも、抗腫瘍効果が蓄積することを示していた。 塩酸ジメチルアミノアルグラビン単独による治療、および、別の細胞増殖抑止 剤との組み合わせによる治療を行った後、転移をもつ1次的なプロスピジン耐性 腫瘍をもつラットの免疫について調べた。塩酸ジメチルアミノアルグラビンによ って動物の腫瘍を治療すると、サルコリシンおよびシスプラチンで治療した後に 見られる免疫低下が改善されるのが観察された。塩酸ジメチルアミノアルグラビ ンを、サルコリシンまたはシスプラチンと組み合わせて、特に、細胞増殖抑止剤 を投与する2時間前に塩酸ジメチルアミノアルグラビンを投与すると、免疫学的 指数が上昇した。これらの結果は、塩酸ジメチルアミノアルグラビンが、細胞増 殖抑止剤の免疫抑制効果を和らげて、身体の免疫バランスを正常化したことを示 唆していた。これらのデータは、塩酸ジメチルアミノアルグラビンが、単独で、 または組み合わせることによって、細胞毒性を低下させ、薬剤耐性腫瘍に対する 有効性を強化したことを示している。 免疫系の調節 ― 塩酸ジメチルアミノアルグラビンの効果を、無処理マウス または免疫低下マウスにおいて測定した。200mg/kgのシクロホスファミドを投与 して、マウスを免疫抑制した。シクロホスファミドを注射すると、主にリンパ球 減少に関連する、かなりの白血球減少が起きた。動物の液性免疫はかなり抑制さ れ、程度は低いものの、細胞媒介性免疫も抑制された。2%塩酸ジメチルアミノア ルグラビン溶液を、50mg/kgおよび100mg/kgという2種類の用量で、白い雑種マウ スに腹腔内注射した。薬剤投与の前後に、血球凝集試験および遅延型過敏反応を 測定した。塩酸ジメチルアミノアルグラビンを1回だけ50mg/kgの用量で投与して も、血球凝集濃度または遅延型過敏反応は変化しないと判定された。100mg/kgを 投与すると、血球凝集濃度が僅かに低下した。 10から50mg/kgの塩酸ジメチルアミノアルグラビンを、反復して腹腔内に注射 して、5日から10日間にわたって投与し、投与期間を引き延ばした場合の効果を 測定した。10mg/kgおよび20mg/kgという低い用量によって、5日目から10日目ま でに血球凝集濃度が上昇した。30mg/kgなど、より高い用量を投与すると、10日 目までに、血球凝集試験の指数が減少するという結果が出た。5日目には、遅延 型過敏反への効果は見られなかったが、10日目までには上昇していた。 無処理のマウスでは、10mg/kgを注射すると、リンパ球の絶対数が増加するた め、白血球の総数が増加した。好中球の相対数は、僅かに減少した。投与量を20 mg/kgに増加させても、白血球数の全体的な増加は起きなかった。ニトロブルー テトラゾリウムアッセイ法を用いて、好中球の機能を評価した。10mg/kgでは、 好中球の数が減少したが、好中球の活性に変化はなかった。投与量を20mg/kgに 増加させると、ニトロブルーテトラゾリウム陽性の好中球の減少が見られたが、 これは、機能の低下を示していた。 10mg/kgおよび20mg/kgの塩酸ジメチルアミノアルグラビンを10日間毎日、無処 理マウスの腹腔内に投与すると、Tリンパ球、Bリンパ球、およびナチュラルキラ ー細胞に劇的な変化をもたらした。10mg/kgでは、ナチュラルキラー細胞とTリン パ球の増加によって、白血球の全体的な計数は増加したが、Bリンパ球は安定し たままであった。Tリンパ球数の増加は、Tヘルパー亜群の量が増加した結果であ ることが分かった。Tサプレッサー亜群の量は変化していなかった。投与量が多 い方（20mg/kg）では、Bリンパ球数が減少し、Tリンパ球も、程度は低いながら 減少していたが、全体の白血球数は変わらなかった。ナチュラルキラー細胞の数 は増加していた。ニトロブルーテトラゾリウムアッセイでも低下していた。 全体として、免疫系に対する塩酸ジメチルアミノアルグラビンの効果は、投与 量に依存した。低用量（10mg/kg）では、塩酸ジメチルアミノアルグラビンによ って、Tリンパ球、Bリンパ球、およびナチュラルキラー細胞の量が増加した。T リンパ球の増加は、Tリンパ球のTヘルパー亜群の量の増加を伴っていた。塩酸ジ メチルアミノアルグラビンが高い方の用量（20mg/kg）では、Tリンパ球とBリン パ球の数は減少したが、ナチュラルキラー細胞などの別の一定の細胞集団が増加 した。 免疫低下マウスに、塩酸ジメチルアミノアルグラビン10mg/kgを10日間注射す ると、マウスの白血球減少とリンパ球減少が軽減するのが観察された。治療10日 目までは、免疫抑制動物におけるリンパ球の総数は、無処理動物から得られる値 と変わらなかった。Tリンパ球数の増加は、僅かながら、Tヘルパー亜群とTサプ レッサー亜群の増加を伴っていた。Bリンパ球の数は、完全には、正常値に回復 されなかった。 さらに別の免疫学的データを、ラットの「オーガスト（August）」系統で、体 重140〜160gの、プリスリンパ肉腫をもつラットかもたないラットから得た。塩 酸ジメチルアミノアルグラビンで治療する前、治療中（5日間および10日間）、 治療後5日目に、自発的な赤血球のロゼット形成、ニトロブルーテトラゾリウム アッセイ、遅延型過敏反応、および血球凝集という4つの指標を調べた。凍結乾 燥した塩酸ジメチルアミノアルグラビンの2%水溶液約50mg/kgを、10日間毎日、 腹腔内注射した。結果を表Vにまとめた。まとめて言うと、無処理のラットでは 、凍結乾燥した塩酸ジメチルアミノアルグラビンは遅延型過敏反応を刺激したが 、その他の調査した指標を低下させた。プリスリンパ肉腫をもつラットでは、す べての調査指標が上昇して、免疫系が刺激された。凍結乾燥した塩酸ジメチルア ミノアルグラビンの長所は、5-フルオロウラシルやサルコリシンなどの細胞増殖 抑止剤の免疫抑制効果を改善する点である。 薬理動態 ― 雌雄両方の任意交配ラット30匹を用いて、塩酸ジメチルアミノ アルグラビンの薬理動態データを実験的に集めた。ラットの体重は200〜220グラ ムであった。すべての薬理動態データの解析では、ガスクロマトグラフィーおよ びFARMモデル化プログラムが用いられた。2mg/kgの塩酸ジメチルアミノアルグラ ビンを静脈内に入れると、1時間で、血清中の最大量である30μg/mlを示した。 塩酸ジメチルアミノアルグラビンは、血液から末梢組織に至まで、生物の体内に 速やかに行き渡った。外見的な分布容量が大きかったことから、これは、細胞膜 および組織障壁を通り抜けられることを示していた。投与してから最初の1時間 は、薬剤の最高濃度が、肺と脾臓に集積していた。肺と脾臓における最高濃度は 、それぞれ、149.4と159μg/gであった。投与後3時間以内は、肝臓と骨格筋にお ける濃度は、それぞれ、228.6と176.4μg/gであった。調製剤が肝臓に蓄積して 、他の器官に較べて長期間保持されることが分かった。塩酸ジメチルアミノアル グラビンは、血脳関門を貫通できた。脳組織における濃度は、1時間後、23.9μg /gになり、24時間で15.6μg/gに安定した。 塩酸ジメチルアミノアルグラビンは、非常にゆっくりと排出された。生物学的 半減期は、ラットで約46.8時間で、平均滞留期間は約67時間であった。腎臓から の排出は緩慢に進行した。腎臓での濃度は、3時間後に最大になった。24時間後 までに、腎臓での最高濃度56.6μg/gになった。末梢組織から血液への調製物の 輸送速度は低く、全クリアランスは、0.05ml/分であった。 塩酸ジメチルアミノアルグラビンに関する臨床データ 末期癌（III〜IV）を患う51人の患者に対して、塩酸ジメチルアミノアルグラ ビンの１回目の臨床試験を行った。１回目の臨床試験では、20.7%の患者が肺癌 、17%が肝臓癌、17%が胃癌、9.4%が直腸癌、5.7%が卵巣癌、5.7%が食道癌で、残 りは、唾液腺癌、リンパ肉腫、乳癌、または大腸癌に罹っていた。患者集団の67 .9%は男性で、32.1%は女性であった。一般的に、水溶液に再構成された塩酸ジメ チルアミノアルグラビンを静脈から患者に投与した。腹水をもつ患者については 、塩酸ジメチルアミノアルグラビンを腹腔内に投与した。胸膜炎に罹っている患 者には、胸膜内投与を行った。試験を進める前に、非常に少量の用量を患者に投 与して、アレルギー反応の兆候がないかを観察した。まず、１回分の投与量とし て、80 mgの化合物を毎日投与した後、徐々に最大量にまで増量していった。30〜35日後 、用量は、1日当り480mgに増えていた。このような高用量になると、患者は、悪 心と嘔吐を訴えた。典型的な症例では、1日の用量は、約240〜280mgにすべきだ と判断された。治療過程全体で投与量の合計は、典型的には、塩酸ジメチルアミ ノアルグラビン5〜6gであったが、20gという高投与量もあった。化合物を投与し た直後、患者は、すぐに消える苦味を訴えた。付加的な治療コースを行った患者 もあった。１回目の臨床試験から得られたデータを表VIにまとめた。治療前の患 者の症状を、1から3の目安で評価したが、1は寝たきり、2は活動がかなり制限さ れる、3は全活動性を維持していることを表していた。治療結果は、0から3を目 安に測定した。ここで、0は改善が見られない、1は顕著ではないか、または1ヶ 月よりも短い期間改善した、2はかなり改善した（腫瘍サイズの25〜50%の縮小） 、3は急激な改善が見られた（腫瘍サイズの50〜100%の縮小）ことを示す。 まとめて言うと、約30%の患者にかなりの改善があった。肝臓癌患者の55.6%は 、塩酸ジメチルアミノアルグラビンによる治療の後、かなり改善された。肺癌と 卵巣癌の患者は、特によく塩酸ジメチルアミノアルグラビンに反応し、64%の肺 癌患者と66%の卵巣癌患者はかなり改善した。塩酸ジメチルアミノアルグラビン は、ほとんど毒性がなく、造血作用を抑制しなかった。試験期間中、胃腸管、ま たは毛穴の消極的な反応は記録されなかった。 原発性肝臓細胞癌患者では、凍結乾燥した塩酸ジメチルアミノアルグラビンで 治療したところ、２人の患者で、50%を越える肝臓の縮小が起こり、もう１人で は約50%縮小した。患者から、精神状態と食欲が改善されたとの報告があった。 右下肋部の痛みが消失した。 ロゼット形成と貧食作用の常法を用いて、患者の免疫状態を評価した。これら の指標を、治療前、治療中、および治療後に調べた。指から血液サンプルを採取 した。この患者グループに関する平均免疫値を解析すると、治療に対する陽性の 反応が明らかになった。治療3〜5日目に、Tリンパ球の数が57%から40.1%に減少 し、Tヘルパーリンパ球の数が50%から37.3%に減少し、好中球の接着性が42%から 28.5%に減少した。未分化のリンパ球が、21.5%から42.2%に増加した。Tヘルパー リンパ球のTサプレッサーリンパ球に対する割合が一般的に変化したのは、Tサプ レッサーリンパ球が増加したためである。Bリンパ球の総数および貪食活性は安 定したままであった。リンパ球の総数は、9.4×10⁹/Lまで増加し、リンパ球の総 数も同じように増加した。すべての免疫グロブリンタイプのレベルが上昇した。 治療20日目までに、すべての指標が正常に戻った。患者によっては、14日目ま でに指標が正常に戻った。治療後30日目に解析を行った患者では、Tリンパ球数 の増加と、好中球の接着性の増加が有意に観察された。 塩酸ジメチルアミノアルグラビンの製造が3〜6ヶ月遅延したために、１回目の 臨床試験を中止した。２回目の臨床試験では、さまざまなところに局在する第IV 期癌に罹った72人の患者（61.1%が男性、38.9%が女性）に塩酸ジメチルアミノア ルグラビンを投与した。患者の中では、25%が胃癌に、16.7%が肝臓癌に、18.1% が肺癌に罹っており、残りの40.2%は、食道癌、乳癌、卵巣癌、膵臓癌、脳腫瘍 、またはリンパ肉腫に罹っていた。状態の悪い患者は、肝臓（25%）、腹膜後腔 リンパ 節（25%）、腹水（22.2%）、および滲出性胸膜炎部（11.1%）に転移があった。 これらの患者の中には、１回目の臨床実験で塩酸ジメチルアミノアルグラビンに よる治療を受けたことのある者がいた。２回目の臨床試験の結果を表VIIにまと めた。 固形の腫瘍において、抗腫瘍細胞増殖抑止剤として塩酸ジメチルアミノアルグ ラビンを使用することには多くの利点がある。この調製剤は、副作用がなく、造 血作用を抑制せず、免疫系の機能状態を正常化し、また、アレルギー効果をもた ない。瘍細胞増殖抑止剤としては、肝臓の原発性癌と、多漿膜炎を併発するその 他の固形癌に対して、特に効率的である。61.1%の症例で腫瘍の部分的退縮が観 察され、31.9%の症例で経過が安定した。再発が見られたのは、7.0%だけであっ た。患者の88.9%（72人中64人）が治療に反応したが、11.1%では反応が見られな かった（72人中８人）。 以下は、塩酸ジメチルアミノアルグラビンの単独化学療法を受けた患者から選 ばれた患者の症例記録の要約である。 患者M、55才、症例番号305は、胸郭および腹部の皮膚に多数の結節があり、摘 出された胸の部位に潰瘍ができ、また、右胸が硬化したために入院した。以前、 乳癌のために、サハリンスクがんセンター（Sakhalinsk Oncology Center）に入 院して、根治的な乳房切除を行った。手術後、シクロホスファミドとメトトレキ セートによる多剤化学療法を6コース受けた。 病気が再発したため対症治療を勧められた。治療前には、腹部と胸郭の皮膚に 、0.5〜1cmに及ぶ多数の転移性結節があった。胸郭の左側には、約10×12cmの 潰瘍表面が出現していた。右胸は、浸潤性の転移物によって変形していた。下肢 には浮腫が現れていた。 治療前の血液分析によって、以下のパラメータが分かっていた。Hb-89、ESR-6 mm/hy、L-3.3、Er-3.8ml、juv.ne-4、seg．ne-78、mon-1。この患者は、塩酸ジ メチルアミノアルグラビン治療を5コース受け、全投与量は6.0〜7.3gになった。 化学治療の後に血液分析を再度行ったところ、以下のパラメータが明らかになっ た。Hb-122、ESR-20mm/h、L-10.9、Er-3.8ml、eos-1、stab ne-3、seg，ne-64、 lym-34、mon-2。 治療の過程で、潰瘍は上皮化し、転移性結節は消失し、右胸の浸潤は50%減少 した。下肢の浮腫も消失した。 生後4ヶ月の患者、症例番号N2225、肝臓癌の完治が見られた。この幼い患者は 、極めて深刻な症状で、肝臓の胎生期癌と診断されて、カラガンダ癌治療センタ ー（Karaganda Cancer Treatment Center）の外科に入院していた。皮膚の外皮 は、黄色だった。この患者は、苦しそうに呼吸していた。心音ははっきりしてい てリズミカルだった。1分間あたりPs-150だった。舌は湿っていてきれいだった 。腹部は膨張していた。肝臓は腫脹していて、腸骨上部の朝顔型の部位の下位の 縁である、滑らかな表面で硬化していた。 肝臓の超音波断層撮影（UST）によって、肝臓が腫脹して、腹腔全部を占めて いることが示された。その構造は、親水性の縁を5〜6cmまでもっている不同構造 の病巣であるために不同で、肝臓癌であることを示していた。 治療前の血液分析によって、以下のパラメータが明らかになった。Hb-84、ESR -4mm/h、L-10.9、Er-3.3ml、eos-1、juv，ne-55、stab ne-45、seg，ne-14、lym -30、mon-5。UST制御下で、肝臓の穿開を行った。腫瘍細胞のむき出しの核を、 変性した肝細胞のバックグランドに対して観察した。この患者は、胎生期肝臓癌 と診断された。 塩酸ジメチルアミノアルグラビン治療コースを、1日の投与量を120mg IVから 始めた。この治療コースの全投与量は2040mgであった。治療の過程で、かなりの 改善が見られた。肝臓のサイズが減少したために、腹部が対称的になり、小さく なった。 USTによって、中央肋骨線に沿って4cmのところで、肝臓が肋骨弓の下から突き 出していて、輪郭が一様で、親水性の縁をもつ不同構造の中心のせいで、構造が 不同であり、また、高エコー源性をもつ病巣の直径が2.0〜2.5cmであることが示 された。結論：病巣変化をもつ腫瘍である。 治療の後で血液分析を再度行ったところ、以下のパラメータが明らかになった 。Hb-177、ESR-4mm/h、er.-4.0ml、Z-9.8、eos-3、seg．ne-28、lym-53、mon-6 。この子供は、良好な状態に解放された。2週間後、治療コースを繰り返したが 、これは、患者に十分許容された。 1997年の初めの状態としては、この赤ん坊の状態は良好である。この子の母親 は、再発の兆候を報告していない。腹部の触診では、肝臓は滑らかで、肋骨弓の 縁の下2cmのところから突き出しているのが分かった。この赤ん坊は治癒したと 考えられる。 患者A、27才、症例番号543は、脳腫瘍があると診断された。神経外科医は、患 者の状態が悪いために、手術の可能性はないと判断した。この患者は非常に弱っ ており、アキネティコリジッド（akineticorigid）症候群型の運動緩徐を示して いた。左右の眼球突出が報告されていた。塩酸ジメチルアミノアルグラビン治療 の初回コースの後、症状が安定して、頭痛を訴えなくなった。2回目のコースの 後には、症状が安定した。頭痛を訴えなくなり、食欲のある状態が保たれた。こ の症例によって、この化合物が血脳関門を通り抜けることができることに関する 実験的な発見を確認された。 カルノフスキー（Karnofsky）の指標、1997（表VIII）にしたがって、塩酸ジ メチルアミノアルグラビンのみによる治療の効率性を評価した。塩酸ジメチルア ミノアルグラビン治療の副作用は報告されなかった。末梢血の平均指標を表IXに 示す。 免疫系の指標は、ロゼット形成法と貧食作用法を用いて測定した。塩酸ジメチ ルアミノアルグラビンを服用した57人の患者を調べた。免疫状態を評価するため に、各患者について、細胞性免疫と液性免疫の11の指標を測定した。以下の指標 を、0.05mlの末梢血で測定した。Tリンパ球とBリンパ球の絶対量と相対量、未分 化の「ゼロ」細胞、好中球の接着活性と食細胞活性、ヘモグラム、血清免疫グロ ブリン量である。治療前、治療の2、5、および14日目、ならびに治療後に指標を 測定した。表Xは、治療前と治療後の結果をまとめたものである。 治療2日目または5日目では、Tリンパ球とTヘルパーリンパ球の割合がかなり減 少した。未分化「ゼロ」細胞の量は増加した。この未分化細胞集団は、Bリンパ 球、Tリンパ球、およびナチュラルキラー細胞の、成熟したものと未分化のもの とか らなっていた。ヘモグラムに有意な変化は見られなかった。 治療が6日目から10日目になると、ほとんどすべての指標が最初の値に戻った 。2週間で、Tリンパ球とそのTヘルパー集団の割合が増加したことが記録された が、Bリンパ球の数は減少した。この時には、血清免疫グロブリンの量に変化は 記録されなかった。 治療後、統計的には有意でない、Tリンパ球の内容量の割合の上昇が見られた 。Tリンパ球の絶対数と、好中球の食細胞作用を促進するTヘルパーリンパ球の数 が増えた。Bリンパ球の数が増加し、また、免疫グロブリンA、M、およびGの量も 増加した。未分化細胞の数は減少した。 末梢血中のリンパ球の総数が上昇した。腫瘍は、血液細胞中の変化を量的にも 質的にももたらすことができるので、塩酸ジメチルアミノアルグラビン治療の後 に、これらのパラメータをチェックした。血液細胞の質的（形態学的）組成に変 化は見られなかったが、好中球数が減少して、リンパ球数が増加するなどの量的 変化はいくらか見られた。このことは、腫瘍によって起こる、リンパ傷害性減少 効果を示唆している。免疫学的指標は、ほとんどの症例で、臨床的な所見と相関 していた。 免疫指標の平均値は、退縮解析法によって評価された。相対的な単位で表され る平均強度（相関）のような統合された指標を用いて、免疫系の機能的な状態を 評価した。免疫系の指標強度が治療中に増加することは、免疫系が治療に反応為 たことを示している。 これらのデータの相関性解析によって、治療中は、真の結合パラメータの全体 量が増加したこと（r>0.7の結合数が増加して、ネガティブな結合数が減少した ）が示されている。 免疫因子間、すなわち、リンパ球因子と好中球因子の間の相互関係の数が増加 した。 このように、統計測定法の異なった方法によって解析された統計的データは、 塩酸ジメチルアミノアルグラビンが、いくつかの免疫因子を刺激して、免疫系の 機能状態を改善する薬剤としての活性があることを示している。これは、この調 製剤の免疫刺激効果を示している。 他の態様 本発明は、その詳細な説明とともに説明されている一方で、前記の説明は、例 示の目的でなされたものであり、添付の請求の範囲によって明示されている本発 明の範囲を制限するものではないと理解されるべきである。他の局面、利点、お よび改変も、以下の請求の範囲に含まれる。

【手続補正書】 【提出日】平成１１年１１月１日（１９９９．１１．１） 【補正内容】 請求の範囲 1．ヒトの癌を治療するのに適した単位投与形態にある薬学的組成物で、約40m gから約480mgのアルグラビンまたはその誘導体から本質的に成る薬学的組成物。 2．ヒトの癌が、乳癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、膵臓癌、肺癌、肝癌、卵巣癌 、白血病、リンパ腫、膵臓癌、および食道癌からなる群より選択される、請求項 1記載の組成物。 3．ヒトの癌が、肺癌、肝癌、および卵巣癌からなる群より選択される、請求 項2記載の組成物。 4．誘導体が、ジメチルアミノアルグラビンまたはその薬学的に許容される塩 である、請求項1記載の組成物。 5．ジメチルアミノアルグラビンまたはその薬学的に許容される塩が凍結乾燥 されている、請求項4記載の組成物。 6．単位投与形態が、約175mgから約315mgのアルグラビンまたはその誘導体で ある、請求項1記載の組成物。 7．単位投与形態が、約240mgから約280mgのアルグラビンまたはその誘導体で ある、請求項6記載の組成物。 8．癌を治療するための医薬品の製造における、請求項1記載の薬学的組成物の 使用。 9．癌を治療するための医薬品の製造における、アルグラビンまたはその誘導 体の使用。 10．アルグラビンまたはその誘導体を含む第一の化学療法剤と、第二の化学療 法剤とを含む組成物において、ヒトにおける腫瘍増殖を抑制するのに有効な組成 物。 11．第二の化学療法剤が、アルキル化剤、代謝拮抗剤、ビンカアルカロイド、 抗生物質および白金配位複合体からなる群より選択される、請求項10記載の組成 物。 12．アルキル化剤が、シクロホスファミド、サルコライシン（sarcolysin）、 またはメチルニトロソウレアである、請求項11記載の組成物。 13．代謝拮抗剤が、メトトレキセートまたはフルオロウラシルである、請求項 11記載の組成物。 14．ビンカアルカロイドが、ビンブラスチンまたはビンクリスチンである、請 求項11記載の組成物。 15．化学療法剤が、シクロホスファミドをさらに含む、請求項14記載の組成物 。 16．抗生物質がルビドマイシンである、請求項11記載の組成物。 17．白金配位複合体がシスプラチンである、請求項11記載の組成物。 18．誘導体が、ジメチルアミノアルグラビンまたはその薬学的に許容される塩 である、請求項10記載の組成物。 19．癌を治療するための医薬品の製造における、請求項10記載の組成物の使用 。 20．哺乳動物における腫瘍増殖を抑制する化合物において、以下の化学式I、I I、III、IV、V、およびVIで表される群より選択される化合物： 式中、NRR₁ は、NHCH₂PhまたはN(CH₂CH₂)₂Oであり、NRR₂ は、NHCH₂Ph、N(CH₂CH₂)₂ O、N(CH₃)₂、またはその薬学的に許容される塩であり、Xは、OHまたはClである 。 21．ジメチルアミノエポキシアルグラビンまたはその薬学的に許容される塩を 含む、請求項20記載の化合物。 22．ジブロモアルグラビンである、請求項20記載の化合物。 23．アルグラビンクロロヒドリンである、請求項20記載の化合物。 24．11,13ジヒドロアルグラビンである、請求項20記載の化合物。 25．ベンジルアミノアルグラビンである、請求項20記載の化合物。 26．モルホリン-アミノアルグラビンである、請求項20記載の化合物。 27．ベンジルアミノエポキシアルグラビンである、請求項20記載の化合物。 28．モルホリン-アミノエポキシアルグラビンである、請求項20記載の化合物 。 29．エポキシアルグラビンクロロヒドリンである、請求項20記載の化合物。 【図２】【図３】【図４】【図５】【図６】【図７】【図８】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ０７Ｄ 493/14 Ｃ０７Ｄ 493/14 (31)優先権主張番号 ０８／９３４，２２８ (32)優先日 平成９年９月19日(1997．9．19) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ０８／９３４，２２９ (32)優先日 平成９年９月19日(1997．9．19) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (31)優先権主張番号 ０８／９３４，４７１ (32)優先日 平成９年９月19日(1997．9．19) (33)優先権主張国 米国（ＵＳ） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ， ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，Ｌ Ｓ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ， ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，Ｅ Ｅ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＧＷ，ＨＵ ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，Ｍ Ｄ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ， ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＺ，Ｖ Ｎ，ＹＵ，ＺＷ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 1．ヒトの癌を治療するのに適した単位投与形態にある薬学的組成物で、約40m gから約480mgのアルグラビンまたはその誘導体から本質的に成る薬学的組成物。 2．ヒトの癌が、乳癌、結腸癌、直腸癌、胃癌、膵臓癌、肺癌、肝癌、卵巣癌 、白血病、リンパ腫、膵臓癌、および食道癌からなる群より選択される、請求項 1記載の組成物。 3．ヒトの癌が、肺癌、肝癌、および卵巣癌からなる群より選択される、請求 項2記載の組成物。 4．誘導体が、ジメチルアミノアルグラビンまたはその薬学的に許容される塩 である、請求項1記載の組成物。 5．ジメチルアミノアルグラビンまたはその薬学的に許容される塩が凍結乾燥 されている、請求項4記載の組成物。 6．単位投与形態が、約175mgから約315mgのアルグラビンまたはその誘導体で ある、請求項1記載の組成物。 7．単位投与形態が、約240mgから約280mgのアルグラビンまたはその誘導体で ある、請求項6記載の組成物。 8．癌を治療するための医薬品の製造における、請求項1記載の薬学的組成物の 使用。 9．癌を治療するための医薬品の製造における、アルグラビンまたはその誘導 体の使用。 10．アルグラビンまたはその誘導体を含む第一の化学療法剤と、第二の化学療 法剤とを含む組成物において、ヒトにおける腫瘍増殖を抑制するのに有効な組成 物。 11．第二の化学療法剤が、アルキル化剤、代謝拮抗剤、ビンカアルカロイド、 抗生物質および白金配位複合体からなる群より選択される、請求項10記載の組成 物。 12．アルキル化剤が、シクロホスファミド、サルコライシン（sarcolysin）、 またはメチルニトロソウレアである、請求項11記載の組成物。 13．代謝拮抗剤が、メトトレキセートまたはフルオロウラシルである、請求項 11記載の組成物。 14．ビンカアルカロイドが、ビンブラスチンまたはビンクリスチンである、請 求項11記載の組成物。 15．化学療法剤が、シクロホスファミドをさらに含む、請求項14記載の組成物 。 16．抗生物質がルビドマイシンである、請求項11記載の組成物。 17．白金配位複合体がシスプラチンである、請求項11記載の組成物。 18．誘導体が、ジメチルアミノアルグラビンまたはその薬学的に許容される塩 である、請求項10記載の組成物。 19．癌を治療するための医薬品の製造における、請求項10記載の組成物の使用 。 20．哺乳動物における腫瘍増殖を抑制する化合物において、以下の化学式Ｉ、 II、III、IV、V、およびVIで表される群より選択される化合物： 式中、RR₁は、NHCH₂PhまたはN(CH₂CH₂)₂Oであり、RR₂は、NHCH₂Ph、N(CH₂CH₂)₂O 、N(CH₃)₂、またはその薬学的に許容される塩であり、Xは、OHまたはClである。 21．ジメチルアミノエポキシアルグラビンまたはその薬学的に許容される塩を 含む、請求項20記載の化合物。 22．ジブロモアルグラビンである、請求項20記載の化合物。 23．アルグラビンクロロヒドリンである、請求項20記載の化合物。 24．11,13ジヒドロアルグラビンである、請求項20記載の化合物。 25．ベンジルアミノアルグラビンである、請求項20記載の化合物。 26．モルホリン-アミノアルグラビンである、請求項20記載の化合物。 27．ベンジルアミノエポキシアルグラビンである、請求項20記載の化合物。 28．モルホリン-アミノエポキシアルグラビンである、請求項20記載の化合物 。 29．エポキシアルグラビンクロロヒドリンである、請求項20記載の化合物。