KR101655554B1

KR101655554B1 - 택사 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 골질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물

Info

Publication number: KR101655554B1
Application number: KR1020140149524A
Authority: KR
Inventors: 손영진; 남상집; 김광진; 연정태; 이성태
Original assignee: 순천대학교 산학협력단
Priority date: 2014-10-30
Filing date: 2014-10-30
Publication date: 2016-09-08
Also published as: KR20160053091A

Abstract

본 발명은 택사(Alisma canaliculatum) 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 포함하는 골질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 식품 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 택사 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 화합물은 오랫동안 천연약재로 사용되어온 천연물에서 유래되어 부작용이 없으면서도, 파골세포의 형성 또는 분화 억제활성이 우수하므로 골밀도 감소에 의한 골질환의 예방 또는 치료에 있어 유용하게 사용될 수 있다.

Description

택사 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 화합물을 포함하는 골질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물{Pharmaceutical composition for prevention or treatment bone diseases comprising Alisma canaliculatum extract or fractions thereof, or compounds isolated from therefrom}

본 발명은 택사(Alisma canaliculatum) 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물을 유효성분으로 포함하는 골질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물 및 식품 조성물에 관한 것이다.

인체의 골 조직은 조골세포에 의한 골 재형성(Bone formation)과 파골세포에 의한 골 재흡수(Bone resorption) 과정과 같은 골의 리모델링(Bone remodeling)이 평생동안 끊임없이 반복되어 이루어진 역동적인 기관이다. 골 조직은 연골과 골격계를 구성하며 기계적 기능으로 지지와 근 부착의 역할을 하고, 생체기관 및 골수를 보호하는 기능을 하며, 칼슘과 인 이온의 항상성 유지를 위해 이들을 보존하는 기능을 담당한다. 이와 같은 기능을 하는 골 조직은 교원질, 당단백질과 같은 세포 기질과 조골세포, 파골세포 및 골세포 등 여러 종류의 세포들로 이루어진다. 이들 중 파골세포는 조혈모세포로부터 유래한 세포로서 노화된 골의 흡수를 담당하며, 조골세포는 골수 내 간질세포(bone marrow stromal cell)로부터 유래한 세포로서 골 형성에 주된 역할을 담당한다.

이 중 파골세포는 마우스의 RAW264.7 단핵구 세포가 RANKL(receptor activator of nuclear factor κB (RANK) ligand)에 의해 다핵 파골세포(multinucleated osteoclasts)로 분화된다. 이러한 분화 과정은 세포 외부의 RANKL이 RANK에 결합하여 미토겐 활성 단백질 키나아제(mitogen-activated protein kinase, MAPK)의 활성을 촉진하고, 이는 NF-κB라는 전사 인자가 핵 내로 들어가서 파골세포 분화와 관련된 TRAP(tartrate-resistant acid phosphatase), MMP-9(matrix metalloproteinase-9), c-Src 티로신 키나아제(tyrosine kinase) 등의 발현을 증가시킴으로써 가능한데, 이러한 과정으로 형성된 다핵 파골세포는 무기질 골(mineralized bone)을 흡수하는 역할을 한다. 또한, RANKL이 RANK에 결합하면 TRAF6(tumor necrosis factor receptor-associated factor 6)의 활성을 촉진시켜 MAPK, 또는 NF-κB, AP-1, NFATc1과 같은 전사인자들의 활성을 촉진시킨다(Lee ZH, Kim HH. Signal transduction by receptor activator of nuclear factor kappa B in osteoclasts. Biochem Biophys Res Commun. 2003 May 30, 305, 211-4). 따라서 RANKL에 의해 활성화되는 신호전달 경로의 차단은 골다공증을 비롯한 골질환의 치료를 위한 치료적 접근 방법 중의 하나로 인지되고 있다.

상기 골질환의 대표적인 예인 골다공증은 골형성과 골흡수의 평형이 깨져 골밀도가 약화되어 일어나는 질환으로, 현재 미국에서만 약 1000만명이 이미 골다공증 질환을 앓고 있으며, 1천 8백만명이 골다공증의 발생 위험에 놓여 있다. 또한, 국내에서의 경우에도 약 400만명이 골다공증에 걸려있거나 그 위험에 노출되어 있다. 이는 노령화 사회로 접어들면서 더욱 증가할 것으로 추정되어, 이로 인한 사회적 지출과 가족 구성원의 정신적, 경제적 지출이 증가할 것으로 예상된다.

상기와 같은 골질환을 치료하기 위해서는 파골세포와 조골세포의 균형을 조절하는 것이 필요하며, 따라서 이에 대한 치료제로는 크게 골흡수 억제제 및 골형성 자극제가 있다. 일반적으로 상기 골흡수 억제제 또는 골형성 자극제 등의 골질환 치료제는 환자에게 장기 투여하여야 하기 때문에 독성이 적어야 하며, 투여의 번거로움을 해결하기 위하여 경구투여가 가능한 것이 바람직하므로, 이에 대한 연구가 절실히 필요한 실정이다. 한편, 상기 골질환 치료제 중 조골세포를 활성화 시킴으로써 골형성을 촉진하는 골형성 자극제에 대한 연구가 보다 활발하게 진행되고 있으나, 골형성 자극제로 인한 골밀도 강화가 반드시 골절의 감소를 의미하지는 않는다. 한편 현재 사용되고 있는 파골세포의 활성을 억제하는 골질환 치료제로는 데노수맙(Denosumab; Prolia^™, Amgen^?) 등이 있으며 이외에도 다양한 약물들이 개발되고 있으나, 약물치료는 장기간 지속되어야 함을 고려할 때 아직 부작용 등이 충분히 검증되지 않았으며, 파골세포의 정확한 메커니즘은 아직까지 밝혀지지 않은 상태이다.

이에 본 발명자들은 인체에 부작용을 유발하지 않으면서 골질환의 예방 및 치료에 유용한 천연물질을 찾고자 예의 노력한 결과, 택사 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리한 화합물이 독성을 나타내지 않으면서 파골세포의 분화를 현저히 억제하는 활성을 가짐으로써 골밀도의 감소에 의한 골질환의 예방 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 택사 추출물, 이의 분획물, 이로부터 분리한 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것이다.

[화학식 1]

본 발명의 다른 목적은 택사 추출물, 이의 분획물, 또는 이로부터 분리한 상기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 골질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것이다.

상기 목적을 달성하기 위한 하나의 양태로서, 본 발명은 택사(Alisma canaliculatum) 추출물, 이의 분획물, 이로부터 분리한 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

[화학식 1]

구체적으로, 본 발명의 골질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물은 택사 추출물, 이의 분획물, 이로부터 분리한 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함할 수 있다.

본 발명에서 용어, "택사(Alisma canaliculatum)"는 정수성 수생식물로 원줄기가 없고 뿌리줄기가 짧아 덩이뿌리를 형성하며, 수염뿌리가 많다. 못 언저리나 논 같은 습지에 살며, 우리나라 전국 각지에서 자라나 드물게 분포하며 한방에서는 덩이뿌리를 말려 약재로 사용한다. 약리 작용으로는 염증성 폐질환(한국공개특허 제2014-0013792호), 고지혈증 또는 동맥경화증(한국공개특허 제2013-0127088호), 폐기종 및 폐고혈압(한국공개특허 제2013-0030620호) 등이 알려져 있다.

본 발명에서 용어, "택사 추출물"은 택사를 추출하여 수득한 추출물을 의미한다. 상기 택사 추출물은 택사 분쇄물을 건조 중량의 약 2 내지 20배, 바람직하게는 약 3 내지 5배에 달하는 부피의 물, 메탄올, 에탄올 및 부탄올 등과 같은 탄소수 1(C₁) 내지 4(C₄)의 저급 알콜의 극성 용매 또는 이들의 약 1:0.1 내지 1:10의 혼합비를 갖는 혼합용매를 용출 용매로써 사용하고, 추출 온도는 20 내지 100℃, 바람직하게는 실온에서, 추출 기간은 약 12시간 내지 10일, 바람직하게는 5일 동안 열수 추출, 냉침 추출, 환류 냉각 추출 또는 초음파 추출 등의 추출방법을 사용하여 추출할 수 있으나, 골질환의 예방 또는 치료 활성이 있는 물질을 추출하는 방법이라면 제한없이 이용될 수 있다. 바람직하게는 냉침추출로 1회 내지 5회 연속 추출하여 감압여과하고, 그 여과추출물을 진공회전농축기로 20 내지 100℃, 바람직하게는 실온에서 감압 농축하여 물, 저급 알콜 또는 이들의 혼합용매에 가용한 택사 조추출물을 수득한 결과물이 될 수 있으나, 본 발명의 골질환의 예방 또는 치료 활성을 나타낼 수 있는 한, 이에 제한되지는 않고, 추출액, 추출액의 희석액 또는 농축액, 추출액을 건조하여 얻어지는 건조물, 또는 이들 조정제물 또는 정제물을 모두 포함할 수 있다. 상기 택사 추출물은 천연, 잡종, 변종식물의 다양한 기관으로부터 추출될 수 있고, 예를 들어, 뿌리, 근경, 지상부, 줄기, 잎, 열매 등으로부터 추출 가능하며, 특히 택사의 근경으로부터 추출될 수 있다.

본 발명에서 용어, "분획물"은 다양한 구성성분을 포함하는 혼합물로부터 특정 성분 또는 특정 그룹을 분리하는 분획방법에 의하여 얻어진 결과물을 의미한다. 본 발명의 택사 분획물은 택사 추출물을 현탁한 후, 물, 메탄올, 에탄올 등의 극성 용매 또는 헥산, 에틸아세테이트와 같은 비극성 용매를 사용하여 분획함으로써 극성 용매 분획물과 비극성 용매 분획물을 각각 수득할 수 있다. 구체적으로, 택사 조추출물을 증류수 등에 현탁한 후, 현탁액의 약 1 내지 100배, 바람직하게는 약 1 내지 5배 부피의 물, 탄소수 1(C₁) 내지 4(C₄)의 알코올, 클로로포름, 에틸아세테이트, 헥산, 부탄올 또는 이들의 혼합용매와 같은 극성 또는 비극성 용매를 가하여 1회 내지 10회, 바람직하게는 2회 내지 5회에 걸쳐 극성 또는 비극성 용매 가용층을 추출, 분리하여 수득할 수 있다.

본 발명의 일 실시예에서는 상기 얻어진 택사 에탄올 조추출물(100 g)에 증류수를 가하여 현탁한 후 동량의 에틸아세테이트를 가하여 에틸아세테이트 층과 물 층으로 분리하였고, 이를 여과, 감압농축하여 에틸아세테이트 분획물(18.0 g)을 수득하였다.

또한 본 발명의 분획물은 추가로 통상의 분획 공정을 수행하여 수득한 것일 수도 있다(Harborne J.B. Plant Pathology, 1998, 3rd Ed. p6-7). 예컨대, 본 발명에 따른 택사 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획물, 다양한 크로마토그래피 (크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등으로 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 활성분획물도 본 발명의 택사 분획물에 포함된다. 상기 활성분획물은 분획물로부터 보다 높은 생리활성 등을 가지는 분획을 분리한 것으로, 활성분획 또는 유효분획물이라고도 한다.

또한, 상기 계통분획과 같은 통상의 분획과정을 통해 수득한 여러 성분이 혼합되어 있는 분획물 가운데 농도구배 컬럼 크로마토그래피 등을 통하여 구체적인 활성 성분을 분리할 수 있다. 상기 컬럼 크로마토그래피는 실리카겔, 세파덱스, LH-20, ODS 겔, RP-18, 폴리아미드, 도요펄(Toyopearl) 및 XAD 수지로 이루어진 군으로부터 선택된 충진제를 이용하는 컬럼 크로마토그래피를 수행하여 화합물을 분리 및 정제할 수 있고, 컬럼 크로마토그래피는 필요에 따라 적절한 충진제를 선택하여 수차례 실시할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 크로마토그래피를 사용함에 있어 용출용매, 용출 속도 및 용출시간은 당업계에서 일반적으로 사용하는 용매, 속도 또는 시간을 적용할 수 있다.

상기 택사 추출물 또는 이의 분획물로부터 분리된 화합물은 트라이터펜계 화합물로서, 대표적인 예로 알리솔(alisol) A, B, C와 그 아세테이트 및 당류 등을 들 수 있다. 본 발명의 택사로부터 상기 트라이터펜계 화합물들을 분리하는 방법은 당업계에 공지된 방법에 의해 분리가능하다. 보다 구체적으로는, 상기에서 수득되는 분획물로부터 알리솔 A 24-아세테이트(Alisol A 24-acetate, 화합물 1이라 명명함)를 수득할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 상기 화합물들은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용할 수 있으며, 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의해 형성된 산 부가염이 유용하다. 산 부가염은 염산, 질산, 인산, 황산, 브롬화수소산, 요드화수소산, 아질산 또는 아인산과 같은 무기산류와 지방족 모노 및 디카르복실레이트, 페닐-치환된 알카노에이트, 하이드록시 알카노에이트 및 알칸디오에이트, 방향족 산류, 지방족 및 방향족 설폰산류와 같은 무독성 유기산으로부터 얻는다. 이러한 약학적으로 무독한 염류로는 설페이트, 피로설페이트, 바이설페이트, 설파이트, 바이설파이트, 니트레이트, 포스페이트, 모노하이드로겐 포스페이트, 디하이드로겐 포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 플루오라이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포메이트, 이소부티레이트, 카프레이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 석시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말리에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥산-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로 벤조에이트, 하이드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 테레프탈레이트, 벤젠설포네이트, 톨루엔설포네이트, 클로로벤젠설포네이트, 크실렌설포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, β-하이드록시부티레이트, 글리콜레이트, 말레이트, 타트레이트, 메탄설포네이트, 프로판설포네이트, 나프탈렌-1-설포네이트, 나프탈렌-2-설포네이트 또는 만델레이트를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 산 부가염은 통상의 방법, 예를 들면, 상기 화합물들을 과량의 산 수용액 중에 용해시키고, 이 염을 수혼화성 유기 용매, 예를 들면 메탄올, 에탄올, 아세톤 또는 아세토니트릴을 사용하여 침전시켜서 제조할 수 있다.

또한, 본 발명의 상기 화합물들은 염기를 사용하여 약학적으로 허용 가능한 금속염의 형태로 만들어 사용할 수 있다. 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염은 예를 들면 화합물을 과량의 알칼리 금속 수산화물 또는 알칼리 토금속 수산화물 용액 중에 용해하고, 비용해 화합물 염을 여과하고, 여액을 증발, 건조시켜 얻을 수 있다. 이때, 금속염으로는 나트륨, 칼륨 또는 칼슘염을 제조하는 것이 제약상 적합하다. 또한, 이에 대응하는 은염은 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 염을 적당한 은염(예, 질산은)과 반응시켜 얻을 수 있다.

본 발명에 따른 택사 추출물, 이의 분획물, 이로부터 분리한 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 파골세포 분화관련 인자로 알려진 NFATc1(Nuclear factor of activated T-cells, cytoplasmic 1), TRAP(Tartrate-resistant acid phosphatase), DC-STAMP(dendritic cell-specific transmembrane protein) 및/또는 카텝신 K(cathepsin K) 유전자 또는 단백질의 발현 또는 활성을 억제함으로써 골밀도 감소에 의한 골질환의 예방 또는 치료용도로 사용될 수 있다.

본 발명에서 용어, "골질환"은 골밀도가 감소되어 일어날 수 있는 모든 질환을 포함하는 것으로, 구체적으로는 골다공증(osteoporosis), 골연화증(osteomalacia), 골형성 부전증(osteogenesis imperfecta), 골화석증(osteopetrosis), 골경화증(osteosclerosis), 파제트병(Paget's disease), 무형성 골질환(adynamic bone disease), 대사성 골질환(metabolic bone disease), 구루병(rickets) 등을 포함할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서 용어, "예방"은 상기 조성물의 투여로 골질환의 발병을 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 의미하며, "치료"는 상기 조성물에 의해 골질환에 의한 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미한다.

본 발명의 택사 추출물, 이의 분획물, 이로부터 분리한 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 포함하는 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형체 또는 희석제를 추가로 포함할 수 있다. 이때, 상기 조성물에 포함되는 택사 추출물, 이의 분획물, 이로부터 분리한 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염의 함량은 특별히 이에 제한되지 않으나, 조성물 총 중량에 대하여 0.001 중량% 내지 99 중량%로, 바람직하게는 0.01 중량% 내지 50 중량%를 포함할 수 있다.

상기 약학적 조성물은 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결 건조제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용될 수 있다. 경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테로 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.

또 하나의 양태로서, 본 발명은 상기 약학적 조성물을 골질환의 의심 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 골질환의 예방 또는 치료방법을 제공한다.

본 발명에서 상기 골질환의 의심 개체는 상기 질환이 발병하였거나 발병할 수 있는 인간을 포함한 모든 동물을 의미하며, 본 발명의 약학적 조성물을 골질환의 의심 개체에 투여함으로써, 개체를 효율적으로 치료할 수 있다. 상기 약학적 조성물 및 골질환에 대해서는 상기에서 설명한 바와 같다.

본 발명에서 용어, "투여"는 어떠한 적절한 방법으로 골질환의 의심 개체에게 본 발명의 약학적 조성물을 도입하는 것을 의미하며, 투여 경로는 목적 조직에 도달할 수 있는 한 경구 또는 비경구의 다양한 경로를 통하여 투여될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여할 수 있다.

본 발명에서 용어, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효 용량 수준은 개체 종류 및 중증도, 연령, 성별, 질병의 종류, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있다. 그리고 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기 요소를 모두 고려하여 부작용없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 골질환을 목적으로 하는 개체이면 특별히 한정되지 않고, 어떠한 것이든 적용가능하다. 예를 들면, 원숭이, 개, 고양이, 토끼, 모르모트, 랫트, 마우스, 소, 양, 돼지, 염소 등과 같은 비인간동물, 인간, 조류 및 어류 등 어느 것이나 사용할 수 있으며, 상기 약학적 조성물은 비 경구, 피하, 복강 내, 폐 내 및 비강 내로 투여될 수 있고, 국부적 치료를 위해, 필요하다면 병변 내 투여를 포함하는 적합한 방법에 의하여 투여될 수 있다. 본 발명의 상기 약학적 조성물의 바람직한 투여량은 개체의 상태 및 체중, 질병의 정도, 약물형태, 투여경로 및 기간에 따라 다르지만, 당업자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 예를 들어, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁내 경막 또는 뇌혈관 내 주사에 의해 투여될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

적합한 총 1일 사용량은 올바른 의학적 판단범위 내에서 처치의에 의해 결정될 수 있으며, 일반적으로 0.001 내지 1000 mg/kg의 양, 바람직하게는 0.05 내지 200 mg/kg, 보다 바람직하게는 0.1 내지 100 mg/kg의 양을 일일 1회 내지 수회로 나누어 투여할 수 있다.

또 다른 양태로서, 본 발명은 택사 추출물, 이의 분획물, 또는 이로부터 분리한 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 골질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

[화학식 1]

상기 택사, 이의 추출물, 분획물, 화학식 1의 화합물 및 골질환에 대해서는 상기에서 설명한 바와 같다.

본 발명에서의 용어, "개선"은 택사 추출물, 이의 분획물, 또는 이로부터 분리한 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 조성물을 이용하여 예방 또는 치료되는 골질환과 같은 질환의 의심 및 발병 개체의 증상이 호전되거나 이롭게 되는 모든 행위를 말한다.

구체적으로, 본 발명의 택사 추출물, 이의 분획물, 또는 이로부터 분리한 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 골질환의 예방 또는 개선을 목적으로 식품 조성물에 첨가할 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 환제, 분말, 과립, 침제, 정제, 캡슐 또는 액제 등의 형태를 포함할 수 있으며, 본 발명의 택사 추출물 또는 이의 분획물을 첨가할 수 있는 식품의 종류에는 별다른 제한이 없으며, 예를 들어 각종 음료, 껌, 차, 비타민 복합제, 건강보조 식품류 등이 있다.

상기 식품 조성물에는 택사 추출물, 이의 분획물, 또는 이로부터 분리한 화합물 이외에도 다른 성분을 추가할 수 있으며, 그 종류는 특별히 제한되지 않는다. 예를 들어, 통상의 식품과 같이 여러 가지 생약 추출물, 식품학적으로 허용가능한 식품보조첨가제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있으며, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에서 용어, "식품보조첨가제"란 식품에 보조적으로 첨가될 수 있는 구성요소를 의미하며, 각 제형의 건강기능식품을 제조하는데 첨가되는 것으로서 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다. 식품보조첨가제의 예로는 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 충진제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등이 포함되지만, 상기 예들에 의해 본 발명의 식품보조첨가제의 종류가 제한되는 것은 아니다.

상기 천연 탄수화물의 예는 포도당, 과당 등의 단당류; 말토스, 수크로스 등의 이당류; 및 덱스트린, 시클로덱스트린 등의 다당류와, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이 있으며, 상기한 것 이외의 향미제로서 천연 향미제(타우마틴 등), 스테비아 추출물(레바우디오시드 Ａ, 글리시르히진 등) 및 합성 향미제(사카린, 아스파르탐 등)를 유리하게 사용할 수 있다.

본 발명의 식품 조성물에는 건강기능성 식품이 포함될 수 있다. 본 발명에서 사용된 용어 "건강기능성 식품"이란 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 정제, 캅셀, 분말, 과립, 액상 및 환 등의 형태로 제조 및 가공한 식품을 말한다. 여기서 기능성이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻는 것을 의미한다. 본 발명의 건강기능성 식품은 당업계에서 통상적으로 사용되는 방법에 의하여 제조가능하며, 상기 제조시에는 당업계에서 통상적으로 첨가하는 원료 및 성분을 첨가하여 제조할 수 있다. 또한 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기 복용 시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있고, 휴대성이 뛰어날 수 있다.

유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품의 제조 시에 본 발명의 택사 추출물 또는 이의 분획물은 원료 조성물 중 1 내지 50 중량%, 바람직하게는 5 내지 10 중량%의 양으로 첨가될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능성 식품을 모두 포함한다.

또 다른 양태로서, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 골질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

[화학식 1]

또 다른 양태로서, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 골질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

[화학식 1]

본 발명의 택사 추출물, 이의 분획물 또는 이로부터 분리된 화합물은 오랫동안 천연약재로 사용되어온 천연물에서 유래되어 부작용이 없으면서도, 파골세포의 형성 또는 분화 억제활성이 우수하므로 골밀도 감소에 의한 골질환의 예방 또는 치료에 있어 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 택사 추출물의 처리 농도별 TRAP 염색 결과를 나타낸 사진(A), TRAP 양성 세포 수를 나타낸 그래프(B), 및 세포생존율(세포독성)을 나타낸 그래프(C)이다.
도 2a는 택사 추출물의 에틸아세테이트 분획물의 처리 농도별 TRAP 염색 결과를 나타낸 사진이다.
도 2b는 택사 추출물의 에틸아세테이트 분획물(3 μg/ml)의 TRAP 염색 결과를 나타낸 사진이다. TRAP 활성이 가장 현저히 억제된 9번 분획물에서 화합물을 분리하였다.
도 2c는 택사 추출물의 에틸아세테이트 분획물의 세포 독성을 나타낸 그래프이다.
도 3은 택사로부터 분리된 화합물(Alisol A 24-acetate) 처리 농도별 TRAP 염색 결과를 나타낸 사진(A), TRAP 양성 세포 수를 나타낸 그래프(B), 및 세포생존율(세포독성)을 나타낸 그래프(C)이다.
도 4는 택사 추출물 처리기간에 따른 파골세포 분화 관련 인자(NFATc1, TRAP, DC-STAMP, Cathepsin K)의 mRNA 발현 수준을 RT-PCR로 확인한 그래프이다.
도 5는 택사로부터 분리된 화합물(Alisol A 24-acetate)의 처리기간에 따른 파골세포 분화 관련 인자(NFATc1, TRAP, DC-STAMP, Cathepsin K)의 mRNA 발현 수준을 RT-PCR로 확인한 그래프이다.
도 6은 택사로부터 분리된 화합물(Alisol A 24-acetate)의 처리기간에 따른 파골세포 분화 관련 인자(NFATc1)의 단백질 발현 수준을 웨스턴블롯으로 확인한 도이다.
실험의 정량적인 결과는 평균값과 표준편차로 표시하였다. 통계적인 차이는 Student's t-test를 이용하여 분석하였고 p 값이 0.05 이하인 경우 통계적으로 유의한 것으로 간주하여 별표(*)로 표시하였다(P values *＜0.05, **＜0.01, ***＜0.001).

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.

실험재료

재조합 마우스 RANKL(receptor activator of nuclear factor-κB ligand)과 M-CSF(macrophage-colony stimulating factor)은 R&D Systems (MN)에서 구입하였고, 세포 배양배지, 우태아혈청(FBS), 및 페니실린/스트렙토마이신은 Invitrogen Life Technologies (NY)에서 구입하였다. CCK-8 어세이 키트는 Dojindo Molecular Technologies (ML)로부터 구입하였고, 역전사 및 실시간 PCR(real-time PCR) master mix에 사용되는 모든 시약은 Enzynomics (KR)사의 것이다. NFATc1 단일클론항체 및 액틴 다클론항체는 SantaCruz Biotechnology (CA, USA)로부터 구입하였다.

제조예 1: 택사 추출물, 분획물 및 활성분획물의 제조

택사(습중량 1.2kg)의 건조된 근경(뿌리줄기)을 분쇄하였고, 5일간 실온에서 에탄올 4.0 L로 추출하였다.

수득한 에탄올 추출물 100 g을 진공농축(감압농축)하였고, 그 이후 에틸아세테이트 및 물(1:1)을 분획용매로 하여 분획하였다. 이 중, 에틸아세테이트(EtOAc) 층을 진공농축하여 18.0g의 에틸아세테이트 가용 분획물을 수득하였다.

제조예 2: 택사 활성분획물로부터 화합물의 분리

상기 제조예 1에서 수득한 에틸아세테이트 가용 분획물 18.0 g을 100% 클로로포름(CH₂Cl₂)에서부터 100% 메탄올(MeOH)까지 용매의 극성을 점차 증가시키도록 구배한 실리카겔(0.04-0.063 mm) 컬럼 크로마토그래피에 투과시켰다.

상기 분획물을 2% CH₂Cl₂ 을 포함한 메탄올로 용출시킨 후, 물(H₂O) 내의 85% 아세토나이트릴의 등용매 시스템(isocratic solvent system)를 사용하여 RP-HPLC [Phenomenex Luna RP-C18(2), 5 μm, 250 x 10 mm, 2.5 mL/min]로 정제한 결과, 하기 화학식 1의 구조를 가지는 Alisol A 24-acetate(7.0 mg, t_R 14 min)를 수득하였다.

[화학식 1]

상기 화합물의 구조는 하기 NMR 결과를 통해 확인하였다.

¹H NMR (CDCl₃,700MHz):δH 4.65 (1H, s, H-24), 3.89 (2H, overlapped, H-11 and H-23), 2.81 (2H, dd, J = 13.8, 5.9 Hz H-12), 2.68 (1H, m H-20), 2.35 (2H, ddd, J = 15.5, 9.6, 3.3 Hz, H-2), 2.25 (1H, m, Ha-1), 2.20 (3H, s,-COCH₃), 2.15 (1H, m, Hb-1), 2.16 (2H, m, H-16), 2.10 (1H, m, H-5), 2.02 (2H, m, H-7), 1.89 (1H, m, H-15a), 1.74 (1H, d, J = 10.8 Hz, H-9), 1.45 (1H, m, H-6a), 1.39 (1H, m, H-6b), 1.38 (2H, m, H-22), 1.36 (1H, m, H-15b), 1.30 (3H, s, H-27), 1.16 (3H, s, H-26), 1.15 (3H, s, H-30), 1.07 (3H, d, J = 11.0 Hz, H-21), 1.06 (3H, s, H-28), 1.00 (3H, s, H-18), 0.99 (3H, s, H-19), 0.98 (3H, s, H-29). ;

¹³CNMR(175MHz,CDCl₃):δC 220.5 (qC, C-3), 171.5 (-COCH₃), 138.3 (qC, C-13), 135.5 (qC, C-17), 78.6 (CH, C-24), 73.9 (qC, C-25), 70.0 (CH, C-11), 69.0 (CH, C-23), 57.0 (qC, C-14), 49.6 (CH,C-9), 48.5 (CH,C-5), 47.0 (qC,C-4), 40.5 (qC,C-8), 39.7 (CH₂,C-22),36.9 (qC,C-10), 34.5 (CH₂,C-12), 34.3 (CH₂,C-7), 33.8 (CH₂,C-2), 30.9 (CH₂,C-1), 30.5 (CH₂,C-15), 29.6 (CH₃,C-28), 29.1 (CH₂,C-16), 27.9 (CH,C-20), 27.5 (CH₃,C-26), 26.6 (CH₃,C-27), 25.7 (CH₃,C-19), 24.1 (CH₃,C-30), 23.2 (CH₃,C-18), 20.1 (-COCH₃), 20.1 (CH₃,C-29), 20.1 (CH₃,C-21), 20.0 (CH₂,C-6); LCMSm/z:515[M-H₂O+H]⁺,497[M-2H₂O+H]⁺

실시예: 파골세포의 배양 및 분화

5-6주령 마우스의 넙다리뼈와 정강뼈를 분리하고 뼈속질 공간을 1cc 주사기로 수세하여 골수세포를 얻었다. 분리된 골수세포는 10% FBS, 항생제, M-CSF (30 ng/㎖)가 포함된 α-minimum essential medium (α-MEM)배지에서 하루동안 배양하였다. 비부착성 골수세포를 M-CSF (30 ng/ml) 내의 페트리디쉬 내에서 3일간 배양하였고, 부착된 세포를 포식세포(bone marrow macrophage, BMM)로 사용하였다.

파골세포의 형성을 위해 상기 포식세포는 M-CSF (30 ng/㎖)와 RANKL (10 ng/㎖)을 첨가하여 4일간 배양하였다. 이 때, 상기 제조예 1 및 2에서 제조한 택사 추출물, 이의 분획물 및 이로부터 분리한 화합물을 각 농도별로 처리하여 함께 배양하였다.

배양 배지는 3일마다 갈아주었고, 파골세포의 형성 여부는 TRAP 염색에 의해 측정하였다. TRAP(tartarate resistance acid phosphatase) 용액(Sigma Aldrich,USA)으로 염색하였고, 붉은색으로 염색된 세포는 파골세포로 간주하였다.

실험예 1: 택사 추출물, 분획물 및 이로부터 분리된 화합물의 세포독성 평가

골수유래 포식세포를 96-웰 플레이트에 1×10⁴ 세포/웰의 밀도로 씨딩(seeding)한 후 M-CSF (30 ng/ml)의 존재 하에, 상기 제조예 1 및 2에서 제조 또는 분리한 택사 추출물, 분획물 및 화합물을 농도별로 처리한 후, 3일간 배양하였다. 3일 후, 10% CCK-8 시약을 포함한 α-MEM 배지에서 상기 포식세포를 3시간동안 추가로 배양하였고, ELISA reader (Molecular Devices, CA, USA)를 이용하여 450 nm에서 흡광도를 확인하였다.

그 결과, 상기 제조예 1 및 2에서 제조 또는 분리한 택사 추출물, 분획물 및 화합물 모두 실험한 농도에서 세포독성을 나타내지 않음을 확인하였다(도 1의 C, 도 2c, 도 3의 C). 이러한 결과는 추후에 확인할 파골세포 형성 억제활성이 포식세포 상에서의 독성 효과 때문이 아니라, 택사 추출물, 분획물 및 화합물에 의한 파골세포의 억제활성임을 보여주는 것이다.

실험예 2: 택사 추출물, 분획물 및 이로부터 분리된 화합물의 파골세포 형성 억제활성 분석

실험예 2-1: TRAP 억제활성 분석

상기 실시예의 세포를 3.7% 포르말린으로 5분간 고정시키고, 10분간 0.1% Triton X-100으로 처리하여 세포막의 투과성이 높아지면 다핵 파골세포의 경우, TRAP 용액의 처리에 의해 붉게 염색되는데, 이 때 붉게 염색된 파골세포 중 3개 이상의 핵을 갖는 것만 파골세포로 인정하였다.

그 결과, RANKL에 의하여 유도된 대조군은 확연하게 많은 수의 붉게 염색된 파골세포가 형성된 것을 관찰할 수 있었던 반면, 상기 제조예 1 및 2에서 제조한 택사 추출물, 이의 분획물 및 이로부터 분리한 화합물을 각 농도별로 처리한 실험군에서는 농도(용량) 의존적으로 TRAP 활성도를 억제하면서 붉게 염색된 파골세포 수를 현저하게 감소시키는 것을 확인하였다. 특히, 10 및 30 μM의 alisol A 24-acetate를 처리하였을 경우에는 파골세포로의 분화를 완전히 억제하였다(도 1의 A, B, 도 2a, 도 2b, 도 3의 A, B).

이는 택사 추출물, 이의 분획물 및 이로부터 분리한 화합물이 RANKL-유도 파골세포 형성을 억제함을 시사하는 것이다.

실험예 2-2: 파골세포 분화관련 유전자 발현 억제활성 (RT-PCR)

파골세포의 분화 과정에 관여하는 전사인자들의 mRNA 발현 양상을 확인하기 위하여 이에 대한 RT-PCR을 수행하였다. 구체적으로 파골세포 분화에 있어서의 파골세포-특이적 유전자로서 NFATc1, TRAP, DC-STAMP 및 cathepsin K의 mRNA 발현 수준을 대조군(DMSO)과 비교하였다.

구체적으로, 프라이머3 디자인 프로그램(Primer3 design program)을 사용하여 하기 표 1의 각 프라이머를 선별하였다. TRIzol 시약을 사용하여 상기 실시예 1의 세포로부터 총 RNA를 추출하였다. 0.5μg의 총 RNA, 1μM의 oligo-dT18 프라이머 및 M-MLV cDNA 합성키트(Enzynomics, KR)를 사용하여 cDNA를 합성하였다. 이후, TOPrealTM qPCR 2X PreMIX (Enzynomics, KR)를 가지고, Stratagene Mx3000P Real-Time PCR system을 통해 SYBR green-기반 QPCR를 수행하였다. 이후, 중합효소를 95℃에서 10분간 활성화시킨 후, 94℃에서 30초(변성), 60℃에서 30초(어닐링), 72℃에서 30초(증폭)로 40 사이클(cycle)을 반응시켰고, 95℃에서 1분, 55℃에서 30초, 95℃에서 30초에서의 PCR 산물 온도-해리 곡선(용융 곡선이라고도 함)을 생성하였다. 대조군(내부 표준)으로는 Glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase(GAPDH)을 사용하였다. 모든 반응은 3회 반복 실시하였으며, 데이터는 2- ^ΔΔCT 방법에 의해 분석하였다.

타겟 유전자	Forward (5'-3')	Reverse (5'-3')
NFATc1	GGGTCAGTGTGACCGAAGAT (서열번호 1)	GGAAGTCAGAAGTGGGTGGA (서열번호 2)
TRAP	GATGACTTTGCCAGTCAGCA (서열번호 3)	ACATAGCCCACACCGTTCTC (서열번호 4)
Cathepsin K	GGCCAACTCAAGAAGAAAAC (서열번호 5)	GTGCTTGCTTCCCTTCTGG (서열번호 6)
DC-STAMP	CCAAGGAGTCGTCCATGATT (서열번호 7)	GGCTGCTTTGATCGTTTCTC (서열번호 8)
GAPDH	ACCACAGTCCATGCCATCAC (서열번호 9)	TCCACCACCCTGTTGCTGTA (서열번호 10)

그 결과, 대조군에 비하여 택사 추출물 및 이로부터 분리한 화합물을 처리하여 배양한 세포에서 파골세포의 분화에 중요한 인자로 알려진 NFATc1과 같은 전사인자의 mRNA 발현을 유의적으로 억제시킴을 확인하였다(도 4). 또한, 파골세포의 분화마커로 알려진 TRAP, 융합(fusion)과 연관된 인자인 DC-STAMP, 및 골 흡수와 연관된 인자인 cathepsin K를 포함하는 파골세포-관련 분자 또한 발현을 감소시킴을 확인하였다(도 4).

실험예 2-3: 파골세포 분화관련 단백질 발현 억제활성 (웨스턴 블롯)

파골세포의 분화 과정에 관여하는 핵심적인 분화 마커 중 NFATc1의 단백질 발현 양상을 확인하기 위하여 이에 대한 웨스턴 블롯 분석을 수행하였다.

구체적으로 상기 실시예에서 배양한 세포는 용해 버퍼(50 mM tris-Cl, 150 mM NaCl, 5 mM EDTA, 1% Triton X-100, 1 mM sodium fluoride, 1 mM sodium vanadate, 1% deoxycholate, and 1:1000 protease inhibitors)를 이용하여 용해하였고, 세포 용해물(cell lysate)을 SDS-PAGE로 분리하였다. 분리된 단백질은 PVDF 막 (polyvinylidene difluoride membrane, Millipore)으로 옮기고 항체를 이용하여 단백질 발현 정도를 확인하였다. 상기 막을 TBST (10mM Tris-HCl pH 7.5, 150mM NaCl 및 0.1% Tween 20)로 세척하였고, 실온에서 1시간동안 블로킹 버퍼(5% nonfat milk in TBST) 내에서 배양하였다. 그 후 상기 막을 anti-NFATc1 (1:500) and anti-actin (1:1000)과 밤새(overnight) 배양시켰고, 3번의 세척을 마친 후 상기 막을 겨자무과산화효소(horseradish peroxidase)에 컨쥬게이트 시킨 2차 항체와 함께 실온에서 2시간동안 배양하였고, 30분동안 3번 세척하였다. LAS-3000 luminescent image analyzer (Fuji Photo Film Co., Ltd., Japan)를 사용하여 화학발광에 의해 특정 밴드를 시각화하였다.

그 결과, NFATc1 단백질의 발현은 RANKL로 인해 현저히 증가하였으나, Alisol A 24-acetate 화합물의 처리에 의해 현저히 감소하였음을 확인하였다(도 6). 이는 상기 화합물을 비롯하여, 이를 포함하는 택사 추출물, 이의 분획물 또한 NFATc1의 단백질 발현을 억제시키고, 나아가 파골세포 형성을 억제시킴을 시사하는 것이다.

이상의 결과를 통해 본 발명에 따른 택사 추출물, 이의 분획물 및 이로부터 분리된 화합물이 파골세포 형성 또는 분화의 억제 활성을 보유함을 확인하였다.

이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며, 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위의 의미 및 범위, 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.

<110> Industry-Academy Cooperation Corps of Sunchon National University <120> Pharmaceutical composition for prevention or treatment bone diseases comprising Alisma canaliculatum extract or fractions thereof, or compounds isolated from therefrom <130> KPA141113-KR <160> 10 <170> KopatentIn 2.0 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> NFATc1 forward primer <400> 1 gggtcagtgt gaccgaagat 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> NFATc1 reverse primer <400> 2 ggaagtcaga agtgggtgga 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TRAP forward primer <400> 3 gatgactttg ccagtcagca 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TRAP reverse primer <400> 4 acatagccca caccgttctc 20 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Cathepsin K forward primer <400> 5 ggccaactca agaagaaaac 20 <210> 6 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Cathepsin K reverse primer <400> 6 gtgcttgctt cccttctgg 19 <210> 7 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DC-STAMP forward primer <400> 7 gtgcttgctt cccttctgg 19 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> DC-STAMP reverse primer <400> 8 ggctgctttg atcgtttctc 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH forward primer <400> 9 accacagtcc atgccatcac 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> GAPDH reverse primer <400> 10 tccaccaccc tgttgctgta 20

Claims

택사(Alisma canaliculatum) 추출물로부터 분리한 하기 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 골연화증(osteomalacia), 골형성 부전증(osteogenesis imperfecta), 골화석증(osteopetrosis), 골경화증(osteosclerosis), 파제트병(Paget's disease), 무형성 골질환(adynamic bone disease), 대사성 골질환(metabolic bone disease) 및 구루병(rickets)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 골질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
[화학식 1]
제1항에 있어서, 상기 추출물은 물, 탄소수 1(C₁) 내지 4(C₄)의 알코올 또는 이들의 혼합용매를 사용하여 추출한 것인 조성물.
제1항에 있어서, 상기 추출물은 에탄올로 추출한 것인 조성물.
삭제
삭제
삭제
제1항에 있어서, 상기 택사 추출물로부터 분리한 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 파골세포의 분화를 억제하는 것인 조성물.
제1항에 있어서, 상기 택사 추출물로부터 분리한 화학식 1로 표시되는 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 NFATc1(Nuclear factor of activated T-cells, cytoplasmic 1), TRAP(Tartrate-resistant acid phosphatase), DC-STAMP(dendritic cell-specific transmembrane protein) 및 카텝신 K(cathepsin K)의 발현을 감소시키는 것을 특징으로 하는 조성물.
삭제
택사 추출물로부터 분리한 하기 화학식 1로 표시되는 화합물을 유효성분으로 포함하는 골연화증, 골형성 부전증, 골화석증, 골경화증, 파제트병, 무형성 골질환, 대사성 골질환 및 구루병으로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나 이상의 골질환의 개선용 식품 조성물.
[화학식 1]
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