HUT70179A - Process for producing retroinverted tetrapeptides and pharmaceutical compositions containing them as active component - Google Patents
Process for producing retroinverted tetrapeptides and pharmaceutical compositions containing them as active component Download PDFInfo
- Publication number
- HUT70179A HUT70179A HU9402952A HU9402952A HUT70179A HU T70179 A HUT70179 A HU T70179A HU 9402952 A HU9402952 A HU 9402952A HU 9402952 A HU9402952 A HU 9402952A HU T70179 A HUT70179 A HU T70179A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- mmol
- solution
- pro
- mixture
- tetrapeptide
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 5
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 claims description 9
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 claims description 6
- 125000004066 1-hydroxyethyl group Chemical group [H]OC([H])([*])C([H])([H])[H] 0.000 claims description 5
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 claims description 5
- 206010044248 Toxic shock syndrome Diseases 0.000 claims description 5
- 231100000650 Toxic shock syndrome Toxicity 0.000 claims description 5
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 4
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 claims description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 125000003974 3-carbamimidamidopropyl group Chemical group C(N)(=N)NCCC* 0.000 claims description 2
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 claims description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 2
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 claims description 2
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 claims 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 66
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 57
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 38
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 35
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 35
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 33
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 26
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 24
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 22
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 19
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 19
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 17
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 14
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N methanoic acid Natural products OC=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 11
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 10
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 10
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 9
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 9
- KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N Palladium Chemical compound [Pd] KDLHZDBZIXYQEI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000047 product Substances 0.000 description 8
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 1-Hydroxybenzotriazole Chemical compound C1=CC=C2N(O)N=NC2=C1 ASOKPJOREAFHNY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 4-(3-methoxyphenyl)aniline Chemical compound COC1=CC=CC(C=2C=CC(N)=CC=2)=C1 OSWFIVFLDKOXQC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 6
- 102100032752 C-reactive protein Human genes 0.000 description 6
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 6
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 6
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 6
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 6
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 6
- 235000019253 formic acid Nutrition 0.000 description 6
- 229910000343 potassium bisulfate Inorganic materials 0.000 description 6
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 6
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 6
- RMVRSNDYEFQCLF-UHFFFAOYSA-N thiophenol Chemical compound SC1=CC=CC=C1 RMVRSNDYEFQCLF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- -1 trifluoroacetoxy Chemical group 0.000 description 6
- 238000005160 1H NMR spectroscopy Methods 0.000 description 5
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 5
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 5
- 210000000683 abdominal cavity Anatomy 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 5
- 125000004427 diamine group Chemical group 0.000 description 5
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 5
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 5
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- JTNCEQNHURODLX-UHFFFAOYSA-N 2-phenylethanimidamide Chemical compound NC(=N)CC1=CC=CC=C1 JTNCEQNHURODLX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 4
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 4
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000012044 organic layer Substances 0.000 description 4
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- JXGVXCZADZNAMJ-NSHDSACASA-N (2s)-1-phenylmethoxycarbonylpyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCCN1C(=O)OCC1=CC=CC=C1 JXGVXCZADZNAMJ-NSHDSACASA-N 0.000 description 3
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N Acetic anhydride Chemical compound CC(=O)OC(C)=O WFDIJRYMOXRFFG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N Benzene Chemical compound C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N Diisopropyl ether Chemical compound CC(C)OC(C)C ZAFNJMIOTHYJRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical class [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003187 abdominal effect Effects 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 229910052796 boron Inorganic materials 0.000 description 3
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 3
- BJDCWCLMFKKGEE-CMDXXVQNSA-N chembl252518 Chemical compound C([C@@](OO1)(C)O2)C[C@H]3[C@H](C)CC[C@@H]4[C@@]31[C@@H]2O[C@H](O)[C@@H]4C BJDCWCLMFKKGEE-CMDXXVQNSA-N 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N diisopropylamine Chemical compound CC(C)NC(C)C UAOMVDZJSHZZME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 3
- 210000003630 histaminocyte Anatomy 0.000 description 3
- NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N hydroxybenzotriazole Substances O=C1C=CC=C2NNN=C12 NPZTUJOABDZTLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 3
- 239000012948 isocyanate Substances 0.000 description 3
- 150000002513 isocyanates Chemical class 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 239000010414 supernatant solution Substances 0.000 description 3
- LEIMLDGFXIOXMT-UHFFFAOYSA-N trimethylsilyl cyanide Chemical compound C[Si](C)(C)C#N LEIMLDGFXIOXMT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- JIMLDJNLXLMGLX-JTQLQIEISA-N (2s)-5-amino-5-oxo-2-(phenylmethoxycarbonylamino)pentanoic acid Chemical compound NC(=O)CC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OCC1=CC=CC=C1 JIMLDJNLXLMGLX-JTQLQIEISA-N 0.000 description 2
- DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N Acetamide Chemical compound CC(N)=O DLFVBJFMPXGRIB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KZMGYPLQYOPHEL-UHFFFAOYSA-N Boron trifluoride etherate Chemical compound FB(F)F.CCOCC KZMGYPLQYOPHEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010074051 C-Reactive Protein Proteins 0.000 description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 2
- 238000008157 ELISA kit Methods 0.000 description 2
- 241000222732 Leishmania major Species 0.000 description 2
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000005481 NMR spectroscopy Methods 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M Superoxide Chemical class [O-][O] OUUQCZGPVNCOIJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- SORGEQQSQGNZFI-UHFFFAOYSA-N [azido(phenoxy)phosphoryl]oxybenzene Chemical compound C=1C=CC=CC=1OP(=O)(N=[N+]=[N-])OC1=CC=CC=C1 SORGEQQSQGNZFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 2
- 125000001584 benzyloxycarbonyl group Chemical group C(=O)(OCC1=CC=CC=C1)* 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000009903 catalytic hydrogenation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 2
- 230000018276 interleukin-1 production Effects 0.000 description 2
- 230000000724 leishmaniacidal effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M potassium bisulfate Chemical compound [K+].OS([O-])(=O)=O CHKVPAROMQMJNQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 2
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- XJJBXZIKXFOMLP-ZETCQYMHSA-N tert-butyl (2s)-pyrrolidine-2-carboxylate Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)[C@@H]1CCCN1 XJJBXZIKXFOMLP-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 2
- CQXDYHPBXDZWBA-UHFFFAOYSA-N tert-butyl 2,2,2-trichloroethanimidate Chemical compound CC(C)(C)OC(=N)C(Cl)(Cl)Cl CQXDYHPBXDZWBA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- AQRLNPVMDITEJU-UHFFFAOYSA-N triethylsilane Chemical compound CC[SiH](CC)CC AQRLNPVMDITEJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- MYOAIKMOWHPBQS-NDEPHWFRSA-N (2s)-5-oxo-2-(phenylmethoxycarbonylamino)-5-(tritylamino)pentanoic acid Chemical compound C([C@@H](C(=O)O)NC(=O)OCC=1C=CC=CC=1)CC(=O)NC(C=1C=CC=CC=1)(C=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 MYOAIKMOWHPBQS-NDEPHWFRSA-N 0.000 description 1
- MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 1-methyl-1H-imidazole Chemical compound CN1C=CN=C1 MCTWTZJPVLRJOU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NKOTXYPTXKUCDL-UHFFFAOYSA-N 4-(trifluoromethyl)pyrimidin-2-amine Chemical compound NC1=NC=CC(C(F)(F)F)=N1 NKOTXYPTXKUCDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 241000255581 Drosophila <fruit fly, genus> Species 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N IDUR Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(I)=C1 XQFRJNBWHJMXHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N L-arginine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCCN=C(N)N ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 125000000729 N-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 1
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 150000003868 ammonium compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000012062 aqueous buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000012455 biphasic mixture Substances 0.000 description 1
- 230000036765 blood level Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 125000001721 carboxyacetyl group Chemical group 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- SXPWTBGAZSPLHA-UHFFFAOYSA-M cetalkonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SXPWTBGAZSPLHA-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229960000228 cetalkonium chloride Drugs 0.000 description 1
- IJOOHPMOJXWVHK-UHFFFAOYSA-N chlorotrimethylsilane Chemical compound C[Si](C)(C)Cl IJOOHPMOJXWVHK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GKIRPKYJQBWNGO-OCEACIFDSA-N clomifene Chemical compound C1=CC(OCCN(CC)CC)=CC=C1C(\C=1C=CC=CC=1)=C(\Cl)C1=CC=CC=C1 GKIRPKYJQBWNGO-OCEACIFDSA-N 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000013256 coordination polymer Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010511 deprotection reaction Methods 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 229940043279 diisopropylamine Drugs 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000002270 exclusion chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000003136 immunomodifying effect Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 125000002346 iodo group Chemical group I* 0.000 description 1
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- RTWNYYOXLSILQN-UHFFFAOYSA-N methanediamine Chemical group NCN RTWNYYOXLSILQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N n-[4-(1,3-benzoxazol-2-yl)phenyl]-4-nitrobenzenesulfonamide Chemical class C1=CC([N+](=O)[O-])=CC=C1S(=O)(=O)NC1=CC=C(C=2OC3=CC=CC=C3N=2)C=C1 SYSQUGFVNFXIIT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 238000012856 packing Methods 0.000 description 1
- 229910052763 palladium Inorganic materials 0.000 description 1
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 1
- UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N phenylmethyl ester of formic acid Natural products O=COCC1=CC=CC=C1 UYWQUFXKFGHYNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 239000012857 radioactive material Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- HBEJJYHFTZDAHZ-QMMMGPOBSA-N tert-butyl (2s)-2-amino-4-methylpentanoate Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(=O)OC(C)(C)C HBEJJYHFTZDAHZ-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 150000003512 tertiary amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 150000003587 threonine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- SIOVKLKJSOKLIF-HJWRWDBZSA-N trimethylsilyl (1z)-n-trimethylsilylethanimidate Chemical compound C[Si](C)(C)OC(/C)=N\[Si](C)(C)C SIOVKLKJSOKLIF-HJWRWDBZSA-N 0.000 description 1
- 125000000026 trimethylsilyl group Chemical group [H]C([H])([H])[Si]([*])(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- UCPYLLCMEDAXFR-UHFFFAOYSA-N triphosgene Chemical compound ClC(Cl)(Cl)OC(=O)OC(Cl)(Cl)Cl UCPYLLCMEDAXFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002221 trityl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1C([*])(C1=C(C(=C(C(=C1[H])[H])[H])[H])[H])C1=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
- C07K5/0212—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -N-C-N-C(=0)-, e.g. retro-inverso peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
A találmány retroinvertált tetrapeptidekre, azokat hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítményekre, valamint ezeknek a hatóanyagoknak és gyógyszerkészítményeknek az alkalmazására vonatkozik. A találmány szerinti hatóanyagok C-reaktiv proteinfragmentumok részben módosított és retroinvertált tetrapeptid analogonjai. A C-reaktiv proteinfragmentumok jelölésére a CK? rövidítést használjuk.
A CRP vérszintje általában nagyon alacsony, de gyulladásos folyamat következtében a CRP-koncentrációérték akár kétezerszeresére is emelkedhet [J.J. Morley és I. Kushner: Am. N.Y. Acad. Sci., 389. 406-418 (1989)]. A szakirodalom szerint [F.A. Robey és munkatársai: J. Bioi. Chem., 262. 15· 7055-7057 (19θ7)] három CRP-tetrapeptid-szekvencia nagyon hasonlít a tuftszinéra. A vegyi utón szintetizált tetrapeptidek a tapasztalatok szerint szuperoxidok termelésére serkentik a falósejtként működő leukocitákat, a monoéitákat pedig l-interleukin-termelésre ösztönzik a tuftszinhez minőségi és mennyiségi szempontból egyaránt hasonló módon· A proteázoknak a tuftszinhez hasonlóan a 3 CRP-tetrapeptidet is gyorsan asszimilálniuk kellene in vivő körülmények között, és igy olyan peptid anyagcseretermékeknek kellene keletkezniük, amelyek versenyképesen tudnák gátolni a parenterális peptidek biológiai hatását vagy hatásait.
Meglepetéssel tapasztaltuk, hogy az említett CRP-tetrapeptid-fragmentumok részben módosított és N-terminálisan retroinvertált analogonjai jelentős stabilitást mutatnak enzimes bontással szemben, ugyanakkor rendelkeznek a szakirodalom által (255 190· sz. európai közrebocsátási irat) a tuftszinnel kapcsolatban ismertetett immunrendszer-módosító aktivitással. Ezekkel az analogonokkal kapcsolatosan elsősorban mégis azt emeljük ki, hogy szerkezetüktől és az alkalmazott dózistól függően képesek meghatározni
- 5 - .....
* különböző biológiai hatásokat, elsősorban mérgezéses sokk kezelésekor·
A találmány tehát olyan retroinvertált tetrapeptidekre vonatkozik, amelyek (I) általános képletében
- R jelentése hidrogénatom vagy a treonin-oldalláncnak megfelelő csoport;
- Rj- jelentése az arginin-, a leucin- vagy a glutamin-olcLalláncnak megfelelő csoport; és
- R£ jelentése hidrogénatom vagy anyagcsere révén lebontható acilcsoport;
azzal a megkötéssel, hogy ha R^ az arginin-oldalláncnak megfelelő csoport, R nem lehet a treonin-oldalláncnak megfelelő csoport ·
A találmány tárgyát képezik továbbá a (I) általános képletíi retroinvertált tetrapeptidek diasztereoizomer formái, továbbá gyógyászati szempontból elfogadható sói, észterei és amidjai is·
Részletesebben kifejtve, a találmány a gGly-(R,S)mLys-Pro-Arg, a gThr-(R,S)mLys-Pro-Leu és a gThr-(R,S)mIys-Pro-Gln szekvenciája retroinvertált tetrapeptidekre, azok diasztereoizomer formáira, valamint gyógyászati szempontból elfogadható sóira, észtereire és amidjaira vonatkozik, (A g és az m betűjelzések arra utalnak, hogy az adott aminosavho» - az említés sorrendjében geminális diamin, illetve malőnilesöpört kapcsolódik.
A találmány szerinti retroinvertált tetrapeptideket ismert eljárásokkal elő lehet állítani. Az ezen a területen járatos szakemberek a retroinvertálásra kerülő aminosavak jellegétől függően ki tudják választani a megfelelő eljárást.
így például abban az esetben, ha a geminális diaminból leszármaztatható csoport 1,1-diamino-metán-csöpört (gGly), a retro invertált tetrapeptidet úgy lehet előállítani, hogy c-ml^s(Z) Meldrum-sav-származékot - azaz 5-(4-benzil-oxi-karbonil)-2,2-dimetil-l,3-dioxán-4,6-diont - H-Gly-NI^-vel reagáltatunk szilanizálószer, például N,O-bisz(trimetil-szilil)-acetamid (TSMAc), trimetil-szilil-klorid (TMS-G1) vagy trimetil-szilil-cianid (TMSCN) jelenlétében [M.J.O. Anteunis és Chr. Becu: Bull. Soc. Chim. Béig., 96. 119-159 (1986)]· Az igy keletkezett HO-(R,S)mLys(Z)-Gly-NH2 pszeudopeptid - Z jelentése benzil-oxi-karbonil-csoport - malonil-maradékának második csoportját ezt követően t-butil-prolináttal kondenzáltatjuk diciklohexil-karbodiimid (DOG) és l-hidroxi-benztriazol (HOBT) jelenlétében. Az igy létrejött [(R,S)mI<ys(Z)-Gly-NH2]-Pro-H pszeudopeptid prolinbeli karboxilcsoportját először DGC-vel és N-hidroxi-szukcinimiddel (HOSu) aktiváljuk, majd védőcsoporttal nem rendelkező argininnel reagáltatjuk [Gottlieb, P. és munkatársai: Ann. N.Y. Acad. Sci., 419. 12 (1983)]» hogy megkapjuk az [(R,S)mLys(Z)-Gly-NH2]-Pro-Arg-OH retroinvertált tetrapeptidet, amelyet ezután ismétléssel végrehajtott kiszoritásos kromatograf álással (RP-DG) lehet tisztítani. Ezzel a megoldással - amennyiben szükséges - a diasztereoizomereket is szét lehet választani. A tisztított terméket palládium jelenlétében hangyasavval katalitikusán hidrogénezzük a megmaradt védőcsoportok eltávolítása céljából, majd a hidrogénezett terméket [II-bisz(trifluor-acetoxi)-jód]-benzollal (TIB) kezeljük, hogy a glicinkarboxamid a gGly N-terminális maradékává alakuljon át. Végül ioncserélő kromatográfiás módszerrel végrehajtott tisztítással acetát formájában nyerjük ki a végterméket ·
Abban az esetben, ha a geminális diamin-maradék treoninból le származtatható csoport, a retroinvertált tetrapeptid szintézisének első műveleteként egy C-terminális dipeptidet reagáltatunk olyan, N-terminálisan retroinvertált dipeptiddel, amelyet például a 21349 A/90. sz. olasz szabadalmi bejelentés szerint lehet előállítani. (Az első művelethez kiindulási anyagként alkalmazott C-terminális dipeptidet Z-Pro-OH és H-Y-OtBu kondenzáltat ásával lehet előállítani, ahol Y jelentése Leu vagy Gin aminosav, a (I) általános képlet értelmezésével összhangban. A C-terminális dipeptid adott esetben megfelelően védett is lehet, amikor is a benzil-oxi-karbonil-csoport eltávolítása katalitikus hidrogénezéssel történik.)
Előzetesen szilanizált Η-Thr(tBu)-OH karboxilcsoport aktiválására alkalmas anyag jelenlétében MNP-COOH-val végrehajtott acilezésével kapott MNP-Thr(tBu)-OH bifenil-foszfor-azidos (DPPA) kezelésével azidot állítunk elő, amelyből melegítés hatására a megfelelő izocianát keletkezik. Ebből az izocianátból katalitikus mennyiségű amin, célszerűen valamilyen tercier amin - például trietil-amin - vagy diizopropil-amin jelenlétében tiofenollal fenil-tio-karbonil-származékot ^INP-gThr (tBu)-PTQ) képezünk, amelynek aminocsoportját ezt követőleg - például hig nátrium-hidroxid-oldattal végzett kezeléssel - védőcsoport-mentesitjük. Az igy létrejövő MNP-gThr(tBu)-H-t c-mlys(Boc)-cal kondenzáltatva MNP-gThr(tBu)-(R,S)mLys(Boc) N-terminális pszeudopeptidet kapunk, amelyet DCC/HOBT elegy jelenlétében H-Pro-Y-OtBu-val kondenzáltatunk (Y jelentése a már megadott). így (I) általános képletű védett retroinvertált tetrapeptidet kapunk, amely R helyén 1-hidroxi-etil-csoportot tartalmaz. Savas kezeléssel eltávolítjuk a geminális diamin-molekularészen levők kivételével az összes védőcsoportot. Ha szükséges, az RP-DC módszerrel végzett tisztítás során szét lehet választani a két diasztereoizomert.
- 6 Az MNP-csöpörtót el lehet távolítani katalitikus hidrogénezéssel, amelyet például palládiumszivacson hajtunk végre ammóniumr-fcrmiát alkalmazásával. A retroinvertált tetrapeptidet végül erre a célra megfelelő kromatográfiás módszerekkel tisztítjuk·
A következőkben előállítási példákat közlünk néhány, a találmány tárgyát képező retroinvertált tetrapeptidre anélkül, hogy az o]talmi kört bármilyen vonatkozásban korlátoznánk.
A védett fragmentumokból és a retroinvertált tetrapeptidből származó aminosavak nagyteljesítményű folyadékkromatográfiás módszerrel végzett elemzését (HPLC-elemzését) a következő kísérleti körülmények között hajtottuk végre:
- az oszlop töltete: Lichrosorb RP-18;
- térfogatsebesség: 1,5 ml/min;
- detektor: Merek L-4200 UV-VIS (250 vagy 254 nm);
- az A) eluálószer összetétele: 90 v% viz, 9,9 v% metil-cianid és 0,1 v% trifluor-ecetsav (TFA);
- a B) eluálószer összetétele: 0,1 v% trifluor-ecetsavat tartalmazó metil-cianid;
- a C) eluálószer összetétele: 0,1 v% trifluor-ecetsavat tartalmazó viz;
- gradiensek:
— (I): 20 percig 0-40 B) eluálószert tartalmazó
A) eluálószer, majd 10 percig 80 v% B) eluálószert tartalmazó A) eluálószer;
— (II): 20 percig 37-&O vfc B) eluálószert tartalmazó A) eluálószer;
— (III): 20 percig 0-50 v% A) eluálószert tartalmazó C) eluálószer, 5 percig C) eluálószer mellett 50-100 v% A) eluálószert tartalmazó elegy, majd • · · · · percig 0-40 v% B) eluálószert tartalmazó A) eluálószer;
— (IV): 8 percig 10-40 v% A) eluálószert tartalmazó C) eluálószer, 2 percig C) eluálószer mellett 40-100 v%
A) eluálószert tartalmazó elegy, majd 20 percig 0-40 v% B) eluálószert tartalmazó A) eluálószer.
Az ioncseréléses tisztításokhoz IKB UVICORD S II tipusu detektorral, 226 nm-es szűrővel, 0,1 cm/min papirtovábbitási sebességgel működő Pharmacia regisztrálószerkezettel és Pharmacia 200 tipusu frakciógyüjtő szedővel felszerelt FPLC-be rende zést (Pharmacia) használtunk.
A különböző retroinvertált peptidekre vonatkozóan az aminosavakat, az ammmónium-vegyületeket, valamint ezek mennyiségi arányait - mint a geminális diamin-maradékra jellemző adatokat - a Beckman cég SYSTEM GOLD tipusu automatikus aminosavelemző készülékével határoztuk meg, miután az egyes peptideket 6 M sósavoldattal 110 °C-on 22 óra hosszat hidrolizáltuk.
A példákban az egyes vegyületek elnevezése mellett zárójelben feltüntetett betűje les kódszámok belföldi azonosítási kódok.
1. PÉLDA
H-gGly-(P,S)mhy3-Pro-Arg-OH-2AcOH (ITF 1127) előállítása
A) 200 ml tetrahidrofuránban szuszpendáltunk 3,52 g (30 mmol) H-Gly-NI^HCl-t, majd az így keletkezett szuszpenziót először 19,6 ml (80 mmol) TMSAc-dal, utána 2,54 ml (20 mmol) TMS-C1dal adalékoltuk. Fél óra eltelte után beadagoltunk 6,98 g (20 mmol) c-mLys-t, és az így kapott reakcióelegyet a környezet hőmérsékletén 3 óra hosszat kevertettük. Az oldószert vákuumban elpárologtattuk, a maradékot felvettük 200 ml vízzel, majd a vizes elegy pH-ját 0,1 N sósavoldattal beállítottuk 3-ra· A beállított • · · pH-ju elegyet a környezet hőmérsékletén 1 órán keresztül kevertettük, majd a keletkezett csapadékot kiszűrtük, vízzel mostuk és forró etanolban feloldottuk. Az oldat lehűlése után kivált csapadékot kiszűrtük, clietil-éterrel mostuk és megszáritottuk. Ilyen módon 51 %-os hozammal 5,8 g (R,S)mLys(Z)-Gly-NH2~t kaptunk.
- HPLC [(I) gradiens, 254 nm]: a retenciós idő 15,5 min;
- tisztaság: 98 m%; és
- olvadáspont: 161 °C (bomlás közben olvad).
Az ^H-NMR-spektrum adatai megerősítették, hogy a kívánt szerkezetű vegyületet állítottuk elő.
B) 15 ml dimetil-formamidban feloldottunk 5,65 g (10 mmol)
A) pont szerinti terméket, a keletkezett oldatot jeges fürdőben lehatottuk, majd egymás után hozzáadtunk 1,45 g (10,5 mmol) 1-hidroxi-benztriazolt és 1,96 g (9,5 mmol) diciklohexil-karbodiimidet. Az igy kapott elegyet 50 percig kevertettük, majd szűrtük, és a szürletet hozzáadtuk 10 ml dimetil-formamidos oldathoz, amely 2,49 g (12 mmol) HC1 ’H-Pro-OtBu-t és 1,67 ml (12 mmol) trietil-amint tartalmazott. Az elegyet 5 órán át kevertettük, majd az oldószert csökkentett nyomáson elpárologtattuk. A maradékot felvettük 50 ml etil-acetattal, és a szerves fázist először 2 m%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldattal, majd 5 m%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül vízzel semlegesre mostuk, ezután nátrium-szulfáton megszáritottuk. így 82 %-os hozammal 4,2 g hig, olajszerű anyagot kaptunk, amelyet feloldottunk 16 ml mennyiségű, dimetil-kloridot és trifluor-ecetsavat 1:1 térfogatarányban tartalmazó elegyben, és az igy keletkezett elegyet 1 órán keresztül kevertettük. Az oldószert vákuumban elpárologtattuk, és a maradékot etil-acetáttal és dietil-éterrel eldörzsöltük. Ilyen módon 79 %os hozammal, 5»6 g mennyiségben, fehér szinü szilárd anyag forrná jában állítottunk ölő [(R,S)mI<ys(Z)-Gly-NH2]-Pro-0H-t.
- HPLO [(I) gradiens, 254 nm]: a retenciós idő 14,6 és 15,7 min (két diasztereoizomer); és
- tisztaság: 97 m%.
Az ^I-NMR-spektrum adatai megerősítették, hogy a kívánt szerkezetű vegyületet állítottuk elő.
C) 50 ml tetrahidrofuránban feloldottunk 3,56 g-ot (7,5 mmolt) a B) szerint előállított termékből, majd az igy keletkezett oldathoz hozzáadtunk 0,95 g (3,25 mmol) N-hidroxi-szukcinimidet, majd - -10 °C-ra való lehűtés után - 1,54 g (7,5 mmol) diciklohexil-karbodiimidet· A reakcióelegyet 4 óra hosszat kevertettük a környezet hőmérsékletén, majd szűrtük, és a szürletet hozzáadtuk egy olyan oldathoz, amely 125 ml mennyiségű, dimetil-formamidot és vizet 7:5 térfogatarányban tartalmazó elegyet, továbbá 1,74 g (10 mmol) H-Arg-OH-t és 0,74 g (10 mmol) kálium-kloridot tartalmazott. A reakcióelegyet 90 percen át a környezet hőmérsékletén kevertettük, majd az oldószert vákuumban ledesztilláltuk. A maradékot dietil-éterrel néhányszor mostuk, majd megszáritottűk. A visszamaradt anyagot 30 ml 0,16 v%-os vizes trifluor-ecetsav-oldatban feloldottuk, és az igy kapott oldatot RP-DC módszerrel három részletben tisztítottuk. Kíinden tisztítási lépésben 10 ml oldatot töltöttünk 2,7 ml/min térfogat sebességgel egy olyan 21,4 χ 500 mm-es Dynamax (3000 χ 10~^θ m, C^q) oszlopra, amelyet előzőleg 0,1 v% trifluor-ecetsavat tartalmazó vizes oldattal kiegyensúlyoztunk. A tisztítandó oldat beadagolásának befejezése után az oszlopot 0,1 v% trifluor-ecetsavat tartalmazó, ugyancsak 2,7 ml/min tériogatsebességgel bevezetett 50 mM vizes benzil-dimetil-hexadecil-ammónium-kloriddal eluál-
tűk. Mintegy egyórás eluálást követően 2,7 ml-es frakciókat gyűjtöttünk össze, amelyeket HPLC módszerrel [(I) gradiens] elemeztünk. A szennyezéseket tartalmazó frakciókat eltávolitottuk, mig a többi frakcióból három csoportot alkottunk: az (mLys(Z)-Gly-NH2]-Pro-Arg-0H A- és B-izomerét külön-külön tartalmazó két csoportot, valamint az A- és a B-izomert együttesen tartalmazó csoportot. A három kromatográfálás befejeztével a frakciókat három csoportban liofilizálva 1,9 g A-izomert, 0,45 g izomerelegyet és 1,8 g B-izomert kaptunk összesen 89 %-os hozammal:
- HPLC [(I) gradiens, 220 nm]: a retenciós idő 15,6 min (A-izomer, 96 m%-os tisztaság); 14,7 min (B-izomer, 93 m%os tisztaság), 4 m% A-izomer; és
- FAB-MS: m/z = 619 atomi tömegegység, [M+H]+; m/z = 485 atomi tömegegység, [M-Z+H]+ (a két izomer spektruma azonos ).
D) 5 ml 85 m%-os hangyasavban feloldottunk 0,51 g-ot (0,5 mmolt) a C) szerinti izomerelégyből, majd az igy keletkezett oldathoz hozzáadtunk mintegy 0,1 g mennyiségű, frissen készített palládiumszivacsot. Az igy kapott elegyet 90 percen át kevertettük lassú ütemben a környezet hőmérsékletén, majd kiszűrtük a katalizátort. A szürletből az oldószert vákuumban ledesztilláltuk, a maradékot vízzel felvettük és liofilizáltuk. Az igy kapott szilárd anyagot feloldottuk 5 ml mennyiségű, dimetil-formamidot és vizet 5:1 térfogatarányban tartalmazó elegyben, és a keletkezett oldathoz hozzáadtunk 0,45 g (1 mmol) TIB-et. A reakcióelegyet sötétben, a környezet hőmérsékletén 16 órán át kevertettük, majd az oldószert vákuumban ledesztilláltuk. A maradékot feloldottuk vízben, a keletkezett vizes elegyet dietil-éterrel mostuk, majd liofilizáltuk. Az igy kapott szilárd anyagot feloldottuk 6-os pH-ju • · • « · ·
-11- .........— vízben, majd a keletkezett oldatot 1 ml/min tériogatsebességgel bevezettük egy olyan, 6 x 200 mm-es oszlopba, amelynek CM-52-es karboxi-metil-cellulóz töltetét előzőleg 6-os pH-ju 15 ammónium-acetát-oldattal hoztunk egyensúlyba. Az oszlop terhelésének befejezése után 0,15 mM-150 mM ammónium-acetát-oldattal 6 órán keresztül lineáris gradiens szerint eluáltunk, miközben a térfogatsebességet 1 ml/min, a pH-t pedig 6-os értéken tartottuk. Ezt követően 3 ml-es frakciókat gyűjtöttünk össze, amelyeket HPLC módszerrel [(III) gradiens] elemeztünk. A cim szerinti terméket (ITF 1127) tartalmazó frakciókat liofilizáltuk. A kapott szilárd anyagot abszolút etanolban feloldottuk, majd a keletkezett oldatból dietil-éter beadagolásával 0,085 g (30 %) terméket csaptunk ki :
- HPLC [(III) gradiens]: a retenciós idő 8,8 min (A-izomer) és 10,2 min (B-izomer); a tisztaság 99 m%-os; és
- FAB-MS: m/z = 457 atomi tömegegység, [M+H]+.
Hasonló módon eljárva 3θ %-os hozammal 0,425 g-ot állítottunk elő az A-izomerből (ITF 1357)· ^H-NMR (200 MHz; dimetil-szulfoxid):
t (1H; NHG) 8,25; cL (1H; NH-R) 7,20; m (1H; CKP) 4,30; m (4H; *G;<<R; ξ^Ρ) 3,93 + 3,64; m (JH; Γκ) 3,61 + 3,37; t (2H; ÍR) 3,04; t (2H; εΚ) 2,74; m (6H; £P; TP; £K) 2,09 + 1,79; s (6H; CH^COOH) 1,75; m (8H; ÍK; TK; pR; TR) 1,70 + 1,18.
Az A-izomer előállításakor alkalmazott módszert követve 32 %-os hozammal 0,45 g B-izomert (ITF 1358), továbbá 0,1 g izomerelegyet (ITF 1127) állítottunk elő í
- HPLC [(III) gradiens]: a retenciós idő 10,2 min; 96 m%- os tisztaság A-izomer-tartalom mellett;
- FAB-MS: m/z = 457 atomi tömegegység, [M+H]+; és
- Sl-NMR (200 MHz; dimetil-szulfoxid):
t (1H; NGH) 8,30; d (0,4 H; NHR) 7,57; d (0,6 H; NHR) 7,47; m (1H; CJ») 4,4?; m (3H;kG;kR) 3,97 + 5,82; m (4H; <fP; ΓΚ) 3,65 + 5,55; m (2H; TR) 3,06; m (2H; gK) 2,72; s (6H; CH^COO) 1,76; m (14 Η; /8,TP; £,Γ, <ΓΚ; ^3,VR) 1,21 + 1,15.
2. PÉLDA
H-gThr-(R,S)mLys-Pro-Leu-OH*AcOH (ITF 1192) előállítása
A) 125 ml metilén-kloridot és 3,71 g (12,3 mmol) bisz(triklór-metil)-karbonátot tartalmazó oldatot 0 °C-ra hütöttünk, majd hozzádtunk 80 ml metilén-kloridban feloldva 5,96 ml (75 mmol) l-metil-imidazolt. Öt perc elteltével 80 ml metilén-kloridban feloldva 5,63 g (25 mmol) MNP-OH-t, újabb öt perc elmúltával pedig előzőleg 11,3 (50 mmol) trimetil-szilil-cianiddal szilanizált, 5,26 g (30 mmol) mennyiségű Η-Thr(tBu)-OH-t, valamint 200 ml metilén-kloridot adagoltunk be. Tiz perccel később a reakcióelegyet pH = 3,5-re savanyított vizes pufferoldattal mostuk, majd megszáritottuk, ezután pedig szárazra pároltuk. A maradékot felvettük 300 ml 5 m%-os nátrium-karbonát-oldattal, és az igy keletkezett elegyet metilén-kloriddal mostuk. A vizes fázishoz a továbbiakban 200 ml etil-acetátot öntöttünk, és a pHértéket 5,7-re állítottuk be. A szerves fázist elkülönítettük és megszáritottuk, majd az oldószert ledesztilláltuk. Ilyen módon 68 %-os hozammal 6,5 g mennyiségű, olajszerü anyagot kaptunk, amelyre vonatkozóan a következőket állapítottuk meg:
- HPLC [(I) gradiens, 254 nm]: a retenciós idő 25,1 min; és
- a tisztaság 88 %-os.
• ·· 'ί ·*’. .*· ··· ··· • · · •· ·♦
Β) 50 ml vízmentes toluolban feloldottunk 5,2 g-ot (13,6 mmolt) az A) pont szerint előállított vegyületből, majd az igy keletkezett oldathoz 0 °C-on hozzáadtunk 3,22 ml (14,9 mmol) DPPA-t és 2,09 ml (14,9 mmol) TEA-t. A reakcióelegyet 4 óra elteltével előzőleg 0 °C-ra hütött telitett nátrium-hidrogén-karbonáttal háromszor, majd ugyancsak előzőleg 0 °C-ra hütött telitett nátrium-klorid-oldattal egyszer mostuk, majd megszáritottuk. Az azidot tartalmazó oldatot 80 °C-ra melegítettük és ezen a hőmérsékleten tartottuk 40 percen keresztül. A keletkezett izocianáthoz a környezet hőmérsékletén 1,39 ml (13,6 mmol) tiofenolt és katalitikus mennyiségű (191 /Ul, 1,36 mmol) TEA-t adtunk. Az elegyet egy éjszakán át állni hagytuk, majd etil-acetáttal és vízzel kezeltük. A szerves fázist először 2 m%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldattal, majd 5 m%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül vízzel semlegesre mostuk, nátrium-szulfáttal megszáritottuk és szárazra pároltuk. A visszamaradt olaj szerű anyagot petroléterrel eldörzsöltük. Ilyen módon 71,2 %-os hozammal 4,7 g MNP-gThr(tBu)-PCT-t állítottunk elő, amelynek elemzési adatai a következők:
- HPLC [(II) gradiens, 254 nm]: a retenciós idő 14,9 min? és
- tisztaság: 95 m%.
C) 26 ml 1 M nátrium-hidroxid-oldat és 877 ml viz 0 °C-on tartott elegyéhez lassú ütemben hozzáadtunk egy olyan oldatot, amely 64 ml tetrahidrofuránban feloldva 4,7 g (9,6 mmol) B) pont szerinti vegyületet tartalmazott. Az adagolás befejezésétől számított 5 perc elteltével a reakcióelegyet 26 ml 1 M sósavoldattal semlegesítettük, majd a tetrahidrofuránt ledesztilláltuk. Ezután beadagoltunk 80 ml kloroformot, és a kapott kétfázisú elegy pH-ját 1 M nátrium-hidroxid-oldattal beállítottuk 9,0-re. A szerves fá- 14 ’*·· ·· ·· • · * · · ·. ·♦· ··· ♦· ·.· · • · ··
zist elkülönítettük, majd a vizes fázist kloroformmal háromszor extraháltuk, miközben a pH-értéket minden extrahálás után beállítottuk 9,0-re. A szerves fázisokat összegyűjtöttük, majd az egyesített szerves fázist szárazra pároltuk. A maradékot dietil-éterben újra szuszpendáltuk. A keletkezett szuszpenzióhoz 50 ml vizet adtunk, és az igy keletkezett elegy pH-ját 1 M sósavoldattal beállítottuk 5,5-re. (A sósavadagolást addig folytattuk, amíg a pH-érték nem stabilizálódott.) A vizes fázist elválasztottuk és a kezelést kétszer megismételtük. Az összegyűjtött vizes fázisok liofilizálásával 85 %-os hozammal 2,8 g MNP-gThr(tBu)-H»HCl-t kaptunk, amelynek elemzési adatai a következők:
- HPLC [(I) gradiens, 254- nm)]: a retenciós idő 16,45 min? és
- tisztaság: 99,9 n%.
D) 120 ml tetrahidrofuránban feloldottunk 2,4 g (8 mmol) c-mLys(Boc)-ot, valamint 2,6 g-ot (6,6 mmolt) a C) pont szerint előállított vegyületből. A keletkezett oldathoz lassú ütemben hozzáadtunk 4,6 ml (20 mmol) N,O-bisz(trimetil-szilil)-acetamidot. Húsz óra elteltével a reakcióelegyet bepároltuk, és a bepárlási maradékot felvettük vízzel. A vizes elegy pH-ját etil-acetát jelenlétében 1 M sósavoldattal 5,5-re állítottuk be. A vizes fázist etil-acetáttal háromszor extraháltuk, a szerves fázisokat összegyűjtésük után megszorítottuk, majd kis térfogatra bepároltuk. Diizopropil-éter hozzáadása után 85 %-os hozammal, 5,4 g mennyiségben nyertük ki az MNP-gThr(tBu)-(R,S)mLys(Boc)-OH-t, amelynek elemzési adatai a következők:
- HPLC [(II) gradiens, 25O nm]: a retenciós idő 9»9 min és
10,2 min (két diasztereoizomer); és
- tisztaság: 93 m%.
»·«
- 15 Ε) 5θ ml metilén-kloridban feloldottunk 2,4 g (10 mmol) Z-Pro-OH-t és 2,7 g (12 mmol) H-Leu-OtBu«HCl-t. A keletkezett oldathoz hozzáadtunk először 3 ml (22 mmol) TEA-t, majd 4,4 g (10 mmol) BOP-ot és 1,35 g (10 mmol) 1-hidroxi-benztriazolt. Öt óra elteltével a reakcióelegyet telitett nátrium-klorid-oldattal egyszer mostuk, majd szárazra pároltuk. A bepárlási maradékot megosztottuk etil-acetát és viz között. A szerves fázist 2 m%-os kálium-hidrogén-szulf át-oldattal, 5 m%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd vízzel semlegesre mostuk, nátrium-szulfáton megszáritottuk és szárazra pároltuk. A bepárlási maradékot feloldottuk diizopropil-éterben» és a keletkezett oldatból petroléterrel 92,7 %-os hozammal 3*8 g mennyiségű Z-Pro-Leu-OtBu-t nyertünk ki, amelynek elemzési adatai a következők:
- HPLC [(I) gradiens, 23O nm]: a retenciós idő 28,6 min; és
- a tisztaság: 100 %-os.
F) 70 ml metanolban feloldottunk 1,5 g-ot (3»5 mmolt) az
E) pont szerint előállított dipeptidből. A keletkezett oldathoz nitrogénatmoszférában hozzáadtunk 100 mg szénhordozós palládiumkatalizátort, majd - igen lassú ütemben - 2,9 ml (18 mmol) trietil-szilánt. Három óra elteltével a reakcióelegyet szűrtük, és a szürletet bepároltuk. Ilyen módon 100 %-os hozammal 1 g H-Pro-Leu-OtBu-t kaptunk, amelynek elemzési adatai a következők:
- HPLC [(I) gradiens, 23O nm]: a retenciós idő 15»9 min; és
- a tisztaság 93 m%-os.
G) 15 ml metilén-kloridban feloldottunk 1,1 g-ot (1,9 mmolt) a D) pont szerint előállított pszeudopeptidből, majd a keletkezett oldathoz hozzáadtunk 200 ml dimetil-for mamidban feloldott, 320 mg (2,3 mmol) mennyiségű 1-hidroxi-benztriazolt. A keletkezett elegyet 0 °C-ra hütöttük, majd beadagoltunk 392 mg (1,9 mmol) * «
DCCI-t. Negyed óra elteltével az elegyet beleszürtük egy lombikba, amely 5^0 mg-ot (1,9 mmolt) tartalmazott az E) pont szerint előállított C-terminális dipeptidből. A keletkezett elegyet egy éjszakán keresztül állni hagytuk, majd ledesztilláltuk az oldószert, A maradékot megosztottuk etil-acetát és viz között. A szerves fázist 2 m%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldattal, majd 5 m%os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül vízzel semlegesre mostuk, ezután nátrium-szulfáttal megszáritottuk. A szerves fázist ezután bepároltuk, és a bepárlási maradékot diizopropil-éterrel eldörzsöltük. Ilyen módon 77 %-os hozammal 12,3 g MNP-gThr(tBu)-(B,S)mIys(Boc)-Pro-Leu-OtBu-t állítottunk elő, amelynek elemzési adatai a következők:
- HPLC [izokratikus, 65 v% B) eluálószer, 230 nm és 254 nm]í a retenciós idő 8,2 és 8,6 min; és
- a tisztaság 100 %-os.
H) A G) pont szerint előállított vegyület 1,4 g-ját (1,3 mmol-ját) jeges fürdőben 8 percig kezeltük 5 ml koncentrált sósavval, majd a reakcióelegyet szárazra pároltuk. A maradékot felvettük vízzel, és a vizes elegyet liofilizáltuk. Ilyen módon 910 mg nyersterméket kaptunk, amelyet BP-DC módszerrel Dynamax-oszlopon (3000 x 10”^θ m, C18, 12 ^um, 21 x 250 mm) tisztítottunk. A kiszorításhoz 2,7 ml/min térfogatsebességgel olyan, 50 jnM benzil-dimetil-dodecil-ammónium-bromid-oldatot (BDDA-Br-oldatot) alkalmaztunk, amelynek elkészítéséhez oldószerként 90 v% vizet, 9,9 v% acetonitrilt és 0,1 v% trifluor-ecetsavat tartalmazó elegyet használtunk fel. így három MNP-gThr-mLys-Pro-Leu-OH-frakciót kaptunk: 320 mg A-izomert, 320 mg B-izomert és 160 mg diasztereoizomer elegyet. Az elemzési adatok a következők:
- HPLC [(I) gradiens, 250 nm]: a retenciós idő 16,1 min és min; és
- a tisztaság 99,9 m%-os·
I) A H) pont szerint előállított A-izomerből 515 mg-ot (0,4 mmolt) feloldottunk 15 ml metanolban. A keletkezett oldathoz hozzáadtunk hangyasawal aktivált palládiumszivacsot, valamint 5 ml mennyiségű hangyasavban feloldva 120 mg ammónium-formiátot · Két óra elteltével a katalizátort kiszűrtük, és az oldószer ledesztillálása után a maradékot felvettük vízzel. A vizes fázist dietil-éterrel mostuk, majd liofilizáltuk. Az igy kapott nyersterméket ioncseréléssel tisztítottuk 16 x 200 mm-es Pharmacia XK16-os oszlopon (S-Sepharose Fást Flow) A) eluálószerként 6,0-os pH-értékü, 0,015 M ammónium-acetát-oldatot, B) eluálószerként pedig ugyancsak 6,0-os pH-értékü, 0,5 M ammónium-acetát-oldatot használva· Az eluálást 5 ml/min térfogatsebességgel hajtottuk végre lineáris gradiens alkalmazása mellett - miközben a B) eluálószer koncentrációját az A) eluálószerben a 0-25 v% tartományban változtattuk 30 percig, majd izokratikusan 40 percig.
Az összegyűjtött frakciókat két percenként elemeztük, és a cím szerinti vegyületet tartalmazókat liofilizáltuk. A liofilizált anyag elemzési adatai a következők voltak:
- HPLC [(III) gradiens, 250 nm]: a retenciós idő 12,8 min;
- a tisztaság 97 m%;
- aminosav-összetétel: Pro(l) 1,0; Leu(l) 1,0; NH^(2) 1,9;
- ’hl-NMR (200 MHz; ^-DMSO; 50 °C) az A-izomerre (ITF 1452): d (1H; NH- T) 7,79; d (1H; NH-L) 6,93; π (2H; Coí-P, o
Cx- T) 4,51 + 4,21; q (1H; C ^-L) 5,84; m (1H; C<T-P) o
5,74; m (5H; C <T2P; C/3-gT; C<K-mK) 5,65 + 5,37í m (2H;
• * — ΛΟ C8-mK) 2,75; m (4H; Οβ ,CT-P) 2,19 + 1,74; m (9Η;
C£, CT , C<T-mK; C/3,Cr-L) 1,73 + 1,13; d (JH; Cr_gT) 1,06; d (3H; θΛ) 0,88; d (JH; C cT2L) 0,87.
Az A-izomer előállításához alkalmazott eljárással előállítottuk a B-izomert (ITF 1443) is, amelyre vonatkozóan a következő elemzési adatokat közöljük:
^H-NMR (200 MHz; ^-DMSO; 30 °C)s d (O,9H; NAH-gT) 8,13; d (0,lfi; Λ-gT) 8,03; d (O,1H;
N®H-L) 7,45; d (0,9H; N^H-L) 7,36’, m (2H; C^-P, Cy-T) 4,37 + o
+ 4,24; m (1H; Cx-L) 3,86; m (JH; C Γ-P; C2-T) 3,56 + 3,38; o m (1H; 3,16; m (2H; Cé-mK) 2,76; m (13H; C£ ,ΟΤ'-Ρ;
C β ,CT ,C<T-mK; C/3 ,0Γ-1) 2,23 + 1,15; d (3H; CT-gT) 1,03; d (6H; Cf-L) 0,88.
3. PÉLDA
H-gThr-(R,S)mLys-Pro-Gln-OH.AoOH (ITP 1193) előállítása
A) 5,6 g (20 mmol) Z-Gln-OH-t feloldottunk 60 ml jégecetben, majd az igy keletkezett oldathoz hozzáadtunk 10,4 g (40 mmol) Trt-OH-t (a Trt jelentése: tritil) , 3,77 ml (40 mmol) ecetsavanhidridet, továbbá kénsavat. A reakcióelegyet felmelegitettük 50 °C-ra és ezen a hőmérsékleten tartottuk másfél óra hosszat, majd lehütöttük a környezet hőmérsékletére és vízzel kezeltük. A keletkezett csapadékot kiszűrtük, vízben szuszpendáltuk, és a vizes szuszpenziót etil-acetattal háromszor extraháltuk. A szerves fázisokat összegyűjtöttük, majd megszorítottuk. Bepárlást követően n-hexán beadagolásával 77 %-os hozammal 8,12 g Z-Gln(Trt)-OH-t csaptunk ki, amelynek elemzési adatai a következők:
- HPLC [(II) gradiens, 23O nm]: a retenciós idő 11,3 min; és
- 19 - a tisztaság: 100 %-os·
B) 50 ml metilén-kloridban feloldottunk 4 g-ot (7,6 mmolt) az A) pont szerint előállított termékből, majd az igy keletkezett oldathoz hozzáadtunk 153 /Ul bór-trifluor-éterátot és 4,2 g (15»5 mmol) t-butil-2,2,2-triklór-acetimidátot (TBTA). Tiz perc eltelte után a reakcióelegyet először telített vizes nátrium-hidrogén-karbonát-oldattál, majd vízzel mostuk, megszáritottuk, ezt követően szárazra pároltuk. A bepárlási maradékot feloldottuk 60 ml metanolban, majd viz beadagolásával 81 %-os hozammal 5,5 g Z-Gln(Trt)-OtBu-t csaptunk ki, amelynek elemzési adatai a következők:
- HPLC [(II) gradiens, 25O nm]: a retenciós idő 17,7 min; és
- a tisztaság 100 %-os.
C) 200 ml metanolban feloldottunk 2,5 g-ot (4,5 mmolt) a B) pont szerint előállított vegyületből, a keletkezett oldatot nitrogénnel telítettük, majd hozzáadtunk hangyasavval aktivált palládiumszivacsot és ammónium-formiát-oldatot (200 mg-ot 5 ml-ben). A katalizátort 5 óra elteltével kiszűrtük, és a metanolos oldatot szárazra pároltuk. A bepárlási maradékot felvettük etil-acetáttal, és az etil-acetátos elegyet egyszer mostuk 5 m%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, majd a mosást addig folytattuk vízzel, amíg az elegy kémhatása semleges nem lett. A szerves oldatot megszáritottuk és kis térfogatra bepároltuk. A töményitett oldatot 0 °C-ra hütöttük és 1 ekvivalens mennyiségű (1,08 ml) 4 M etil-acetátos sósavoldattal kezeltük. Ezt követőleg petroléter beadagolásával 100 %-os hozammal 2 g HC1»H-Gln(Trt)-OtBu-t csaptunk ki, amelynek elemzési adatai a következők:
- HPLC [(II) gradiens, 250 nm]: a retenciós idő 7,4 min; és
- a tisztaság 100 %-os.
··· «te
D) 15 ml metilén-kloridban feloldottunk 1,15 g (4,6 mmol) Z-Pro-OH-t, majd az igy keletkezett oldathoz hozzáadtunk 250 /U1 dimetil-formamidban feloldva 0,7 g (5,5 mmol) l-hidroxi-benztriazolt. Az igy kapott oldatot jeges fürdőbe helyeztük, majd beadagoltunk 0,95 g (4,6 mmol) DCCI-t. A reakcióelegyet 15 perc elteltével beleszürtük egy olyan lombikba, amely 2 g-ot (4,1 mmolt) tartalmazott a C) pont szerint előállított termékből, majd 5θ /U1 (4,1 mmol) ΤΞΑ-val semlegesítettük. Az oldószert 18 óra elteltével ledesztilláltuk, és a maradékot megosztottuk etil-acetát és viz között. A szerves fázist először 2 n$-os kálium-hidrogén-szulfát-oldattal, majd 5 m%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül vízzel semlegesre mostuk, ezt követően nátrium-szulfáttal megszáritottuk. A szerves oldatot bepároltuk kis térfogatra, majd a töményitett oldatból 95 %-os hozammal 2,6 g Z-Pro-Gln(Trt)-0tBu-t csaptunk ki n-hexánnal. Az elemzési adatok a következők:
- HPLC [(II) gradiens, 23O nm]: a retenciós idő 16,8 min; és
- a tisztaság 100 %-os.
E) A C) pontban leirt módon hidrogéneztünk hangyasavval palládiumszivacs jelenlétében 100 ml metanolban 2,4 g -ot (5,5 mmolt) a D) pont szerint előállított termékből. A reakcióelegyből kiszűrtük a katalizátort, majd a szűrlétből ledesztilláltuk a metanolt. A visszamaradt anyagot etil-acetáttal felvettük, és az etil-acetátos elegyet 5 m%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal egyszer mostuk, megszáritottuk, majd bepároltuk. A koncentrált szerves fázist 0 °C-on 875 /hl 4 M etil-acetátos sósavoldattal kezeltük, majd petroléter beadagolásával 100 %-o® hozammal 2 g mennyiségű HCl*H-Pro-Gln(Trt)-0tBu-t nyertünk ki. Az elemzési adatok a következők:
····
- HPLC [(II) gradiens, 230 nm]: a retenciós idő 7,8 minj és
- a tisztaság 100 %-os.
F) 15 ml metilén-kloridban feloldottunk 1,58 g-ot (2,26 mmolt) a 2· példa D) pontja szerinti pszeudopeptidből, ég az igy keletkezett oldathoz 200 ,ul dimetil-formamidban feloldva hozzáad· tünk J82 mg (2,82 mmol) l-hidroxi-benztriazolt· Az elegyet 0 °Cra hütöttük, majd beadagoltunk 466 mg (2,26 mmol) DCCI-t. Negyed óra elteltével az előzőek szerint elkészített elegyet közvetlenül be leszűrtük egy olyan lombikba, amely 1,31 g-ot (2,26 mmolt) tartalmazott az E) pont szerint előállított dipeptidből. A kapott elegyet semlegesítettük 318 /U1 (2,26 mmol) TEA-val, és egy éjszakán keresztül állni hagytuk. Az oldószer ledesztillálása után visszamaradt anyagot etil-acetát és viz között megosztottuk. A szerves fázist először 2 m%-os kálium-hidrogén-szulfát-oldattal, majd 5 m^-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül vízzel semlegesre mostuk, majd nátrium-szulfáttal megszakítottuk. A szerves fázist szárazra pároltuk, és a bepárlási maradékot felvettük 15 ml mennyiségű, etil-acetátot és n-hexánt 1:1 térfogatarányban tartalmazó eleggyel, majd n-hexán beadagolásával 92 %-os hozammal 2,3 g MNP-gThr(tBu)-(R,S)mLys(Boc)-Pro-Gln(Trt)-OtBu-rt csaptunk ki, amelynek elemzési adatai a következők:
- HPLC [(II) gradiens, 23O nm]: a retenciós idő 21,5 min és 22,0 min (két diasztereoizomer); és
- a tisztaság 92,5 m%-os.
G) Az F) pont szerint előállított, retroinvertált tetrapeptidből 2,13 g-ot (1,87 mmolt) a környezet hőmérsékletén feloldottunk 40 ml mennyiségű, metilén-kloridot és trifluor-ecetsavat 1:1 térfogatarányban tartalmazó elegyben. Az oldószert másfél óra ···· • .·· ···. .· • *· ··: :··. ··· ’ ·* ·· ··
- 22 elteltével ledesztilláltuk, és dietil-éter beadagolásával nyersterméket csaptunk ki 1,416 g (95 %) mennyiségben. Az elemzési adatok a következők:
- HPLC [(I) gradiens, 2J0 nm]: a retenciós idő 12,4 min;
- a tisztaság 91,5 m%-os|
- az aminosav-összetétel: Pro(l) 1,0; Gln(l) 1,0; NH^(3) 2,9í és
- a peptidtartalom: 92,7 m%.
A védett, retroinvert ált tetrapeptidet KP-DC módszerrel Dynamax-oszlopon (5θΟΟ x 10 m, C 18, 12 /Um, 21,4 x J00 mm) tisztítottuk. Kiszoritóközegként 2,7 ml/min térfogatsebességgel 0,1 m% trifluor-ecetsavat tartalmazó 50 mM vizes BDDA-Br-oldatot használtunk fel. így 81 %-os hozammal 1,04 g terméket állítottunk elő, amelynek elemzési adatai a következők:
- HPLC [(I) gradiens, 250 nm]: a retenciós idő 12,4 min; és
- a tisztaság 100 %-os.
Abban az esetben, ha a B) eluálószer mennyiségét az A) eluálószerben 20 perc alatt 0 v%-ról fokozatosan 20 v%-ra növeltük, a két diasztereoizomerre 17,5 min és 17,8 min retenciós időket határoztunk meg 100 %-os tisztaság mellett.
H) 15 ml 5-as pH-ju 0,25 M vizes ammónium-f ormiát-oldatban feloldottunk 875 mg-ot (1,1 mmolt) a G) pont szerint előállított védett, retroinvertált tetrapeptidből, majd az igy keletkezett oldatot hozzáadtuk 5,0-as pH-ju, 0,5 M ammónium-f ormi át-oldattal aktivált palládiumszivacshoz. Az igy keletkezett reakcióelegyet 60 °C-on negyed órán át állni hagytuk, hogy a reakció lejátszódjék. Ezt a kezelést a reakcióhőmérséklet 70 °C-ra emelésével négyszer megismételtük, amikor is a HPLC-elemzés szerint eltűnt a kiindulási anyag. Ezt követőleg a katalizátort kiszűrtük, a vi-
- 25 zes fázist etil-acetáttal mostuk, majd liofilizáltuk. A nyersterméket ioncseréléses módszerrel tisztítottuk CM-Sephadex C-25tel töltött, 26 x 500 mm-es Pharmacia XK26-OS oszlopon. Eluálószerként A) 6,0 pH-ju, 0,015 M ammónium-acetát-oldatot és B) 6,0 pH-ju, 0,5 M ammónium-acetát-oldatot használtunk fel. Az eluálást úgy végeztük, hogy a 4 ml/min térfogatsebességgel oszlopra vezetett eluálófoly adókban a B) eluálószer mennyiségét a 560 perces eluálási idő alatt lineáris gradiens szerint 0 vígról 100 v%-ra növeltük. A 5,7 ml-ként összegyűjtött frakciók közül azokat liofilizáltuk, amelyek a cim szerinti vegyületet tartalmazták, amelynek elemzési adatai a következők:
- HPLC [(IV) gradiens, 25O nm]: a retenciós idő 6,5 min és
7,7 min (két diasztereoizomer 1:1 arányú elegye);
- tisztaság: 99 m%;
- aminosav-összetétel: Pro(l) 1,0; Gln(l) 1,0; NH^(5) 2,9;
peptidtartalom: 966 /Umol (515 mg);
- hozam: 88 %; és
- ^H-NMR (200 MHz; dimeti 1-szulf oxid):
d (0,5H; ΝΉΤ) 8,26; d (0,5H; NHT) 7,99; d (0,5H; NHQ) 7,49; s (1H; N Q) 7,51; d (0,5H; NxQ) 7,04; s (1H; N<*Q) 6,67; m (1H; T) 4,51; m (1H; C^P) 4,22; m (2H; Co<Q;
C^P) 5,θ5 + 5,70; m (5H; C£T; C<xK; C í’p) 5,64 + 5,54;
m (2H; CgK) 2,74; m (8H; C£>P; C/3K; CP θ C € Q) 2,17 + + 1,66; s (6H CH^COOH) 1,85; m (6H; C^P; C Γ e C 5κ)
1,64 + 1,12; t (5H; C^T) 1,04.
A találmány szerinti vegyületek közül néhányat kiválasztottunk biológiai aktivitásuk vizsgálata céljából. A következőkben ezeket a biológiai vizsgálatokat ismertetjük.
• · · · • · • · · « • ·
- 24 Rágcsáló-lépsejtek serkentése in vitro IFN-T -termelésre
BALB/C egerek lépéből lépsejteket nyertünk ki egysejszuszpenzió formájában. Az igy kapott szplenocitákból 5 borjumagzatszérumot (FOS) (HyClone, ST, Utah, Amerikai Egyesült Államok) tartalmazó RPMI 1640-es tápközeg (Flow Láb., Hertz, Egyesült Királyság) ismét szuszpenziót készítettünk, amelyben a sejtek vég7 koncentrációja 10 /ml volt. Az igy kapott szuszpenziót a megadott koncentrációban alkalmazott tesztvegyületek jelenlétében 96-lyuku lemezeken inkubáltuk 37 °C-on 24 óra hosszat. Az inkubálás befejezése után a felüluszó oldatot összegyűjtöttük, 22 /um-es szűrőn átszűrtük, majd addig tartottuk -80 °C-on, amíg kereskedelmi forgalomban levő ELISA-készlettel (Genzyme, Boston, MA, Amerikai Egyesült Államok) el nem végeztük a vizsgálatot.
Az eredményeket az 1. táblázat tartalmazza.
1. táblázat
Dózis (/Ug/ml)
Egység/ml (stimulációs index)
1. kísérlet 2. kísérlet 3, kísérlet
| 0 (kontroll) | 51 | 51 | 41 | |||
| 0,1 | 55 | (1,1) | 57 | (1,8) | 60 | (1,5) |
| 1,0 | 60 | (1,9) | 52 | (1,7) | 60 | (1,5) |
| 10,0 | 49 | (1,6) | 60 | (1,9) | 68 | (1,7) |
Ha a kontrollal - vagyis a kezeletlen sejtekkel - kapott eredményeket (egység/ml és stimulációs index) összehasonlítjuk a többi hasonló eredménnyel, megállapíthatjuk, hogy a találmány szerinti vegyületek dózisfüggően képesek serkenteni a rágcsálók lépsejtjeinek (szplenocitáinak) IFN-T-termelését. A találmány
- 25 szerinti vegyületek közül az egyik leghatásosabb vegyület az 1. példa szerinti: már 1,0 /Ug/ml dózisban alkalmazva is ténylegesen megduplázza a szóban forgó citokin mennyiségét.
Rágcsálók hasüregi falósejtjeinek (makrof ág jajnak) serkentése IL-1-termelésre
Hasüreg! rágcsáló-falósejteket nyertünk ki olyan módon, hogy BALB/O egerek hasüregébe hidrolizált keményitőoldatot (BDH Chemicals, Poole, Dorset, Egyesült Királyság) fecskendeztünk három nappal az állatok megölése előtt. Ezt követően a hasüregi sejteket összegyűjtöttük olyan módon, hogy a hasüreget kimostuk 10 m% FCS-t tartalmazó RPMI 1640-es oldattal. A kinyert sejteket ugyang abban az oldatban ujraszuszpendálva 10 sejt/ml koncentrációjú szuszpenziót állítottunk elő, amelyet 96-lyuku lemezeken inkubáltunk 57 °C-on 96 órán keresztül a vizsgált vegyületek jelenlétében. Az inkubálás befejezése után a felüluszó oldatokat összegyűjtöttük és citokinadagoláshoz használtuk őket erre a célra megfelelő, kereskedelmi forgalomban levő ELISA-készlet (Genzyme, Boston, MA, Amerikai Egyesült Államok) segítségével.
Az eredményeket a 2. táblázat tartalmazza.
2. táblázat
| Dózis (/Ug/ml) | Egység/ml (stimulációs index) | ||
| 1. kísérlet 2. kísérlet | 5. kísérlet | ||
| 0 (kontroll) | 15 | 15 | 15 |
| 0,01 | 6 (0,4) | 90 (6,0) | 150 (10,0) |
| 0,1 | 2 (0,1) | 60 (4,0) | 160 (10,7) |
| 1,0 | 2 (0,1) | 47 (5,1) | 155 (10,5) |
| 10,0 | 2 (0,1) | 50 (3,?) | 140 ( 9,3) |
- 26 • ·
Ha az egység/ml-ben, valamint a stimulációs indexre vonatkozóan kapott eredményeket összehasonlítjuk a kontroli-eredményekkel, megállapíthatjuk, hogy a vizsgált vegyületek serkentő hatása figyelemre méltó; mindenekelőtt a 3· példa szerinti vegyületé, amely valamennyi alkalmazott dózisban mintegy tízszeresére növelje (9,3 4 IS< 10,7) az IL-1-termelést.
Rágcsálók hasüregi sejtjeinek serkentése nitrogén(II)-oxid termelésére
A hasüreg! sejteket az előző vizsgálatnál ismertetett módon nyertük ki, majd a vizsgált vegyületek és 30 /Ug/ml lipopoliszacharid jelenlétében 37 °C-on 96 óra hosszat inkubáltuk őket. Az inkubálás befejezése után a felüluszó oldatokat összegyűjtöttük, majd Palmer R.M.J. és munkatársai módszerével [Natúré, 327» 524 (1987)] kemilumineszcenciás méréssel meghatároztuk a nitrogén (II )-oxid-tartalmat .
Az eredményeket a 3» táblázat tartalmazza,
3. táblázat nmol/ml (stimulációs index)
| Dózis (/Ug/ml) | 1. kísérlet | 2. kísérlet | 3» kísérlet |
| 0 (kontroll) | 20 | 20 | 20 |
| 0,01 | 43 (2,2) | 85 (4,3) | 50 (2,5) |
| 0,1 | 59 (3,0) | 61 (3,1) | 60 (3,0) |
| 1,0 | 77 (3,9) | 66 (5,3) | 66 (3,3) |
| 10,0 | 57 (2,9) | 79 (4,0) | 85 (4,4) |
• · ·
- 27 Ha a nmol/ml-ben, valamint a stimulációs indexre vonatkozóan kapott eredményeket összehasonlítjuk a kontroli-eredményekkel, azt tapasztaljuk, hogy a találmány szerinti vegyületek valamenynyi alkalmazott dózisban serkentik a nitrogén(II)-oxid-termelést. Kiemelkedően nagy stimulációs csúcs jelentkezik a 2. példa szerinti vegyület esetében már 0,01 /Ug/ml koncentráció alkalmazása esetén is (IS = 4,3).
A találmány szerinti vegyületek hatásának vizsgálata a rágcsálók hasüregi falósejtjeinek leishmanicid aktivitására
A már leirt módon összegyűjtött hasüregi falósejteket 96lyuku, lapos fenéklemezekre (Nunc, Roskiled, Dánia) helyeztük.
A sejtek koncentrációja a lemezen 10/100 /U1 volt. A sejteket 24 óra hosszat inkubáltuk 37 °C-on. Az inkubálás befejezése után a lyukakra nem tapadt sejteket elkülönítésük után kidobtuk, míg a lyukakra tapadó sejteket a tápközeggel háromszor mostuk, és 24 órán át a vizsgált vegyületekkel együtt inkubáltuk. A sejteket ezt követően 24 órás inkubálás alatt Leishmania major promasztigótákkal fertőztük. (A Leishmania major PVL49 törzset Dr. Neal R.A. - London School of Hygiene and Tropical Medicina, London, Egyesült Királyság - küldte.) A fertőzés befejezése után minden egyes lyukba beleöntöttünk 100 /U1 0,01 m%-os RPMI 1640es nátrium-dodecil-szulfát-oldatot, és a lemezeken levő anyagot 30 percen keresztül inkubáltuk 37 °C-on. Ezután beadagoltunk 3θ m^ FCS-t tartalmazó Schneider-tápközeget (Schneider Drosophila médium, Gibco Láb., Grand Island, New York, Amerikai Egyesült Államok). Ezt követően minden lyukba beadagoltunk /UCi-nek megfelelő mennyiségű Aí-timidint, majd az inkubálast 37 °C-on 72 óra hosszat tovább folytattuk. Az élő paraziták ál• · · · • · • · · · • · · ί
tál a hasüregi falósejtekbe beépített radioaktív anyag mennyiségét - amely összefüggésben van a fertőzöttség fokával, következésképpen a sejtek leishmanicid aktivitásával - úgy határoztuk meg, hogy sejtgyüjtő készülékkel összegyűjtöttük a sejteket, majd folyadékszcintillációe β-beütésszámláló berendezéssel mértük a radioaktivitást.
Az eredményeket a 4. táblázat tartalmazza.
4. táblázat
| Dózis (/g/ml) | X XX cpm (a fertőzöttség %-os csökkenése) | |
| 1. kísérlet | 2. kísérlet 3. kísérlet | |
| 0 (kontroll) | 18 273 | 18 273 18 273 |
| 0,1 | 5 096 (72) | 17 568 (4) 18 826 (-3) |
| 1,0 | 3 783 (79) | 11 991 (34) 8 377 (54) |
| 10,0 | 4 292 (77) | 10 582 (42) 7 842 (57) |
| a beütesek szama | percenként | |
| XX | ||
| a kezelt | ; sejtekre mért | beütésszám |
| 100 - -------- | ------------- x 100 |
a kontroli-sejtekre mért beütésszám
A 4. táblázatban látható eredmények azt mutatják, hogy a találmány szerinti vegyületek képesek a fertőzöttség mértékének csökkentésére. Leghatásosabbnak az 1. példa szerinti vegyület bizonyult, amely a vizsgálat során alkalmazott legkisebb dózisban is képes volt 70 ?5-nál nagyobb mértékben csökkenteni a fertőzöttséget.
A mérgezéses sokk elleni in vivő védőhatás vizsgálata
Csoportonként hat 20-25 g-os BALB/C egér hasüregébe LPS-t • · · · · « • ·
- 29 (SIGMA-lipopoliszacharidőt) juttattunk 50 mg/kg testtömeg mennyiségben· A kontroli-csoportba tartozók kivételével minden egér szervezetébe juttattunk egy találmány szerinti vegyületet fiziológiás oldatban feloldva, növekvő dózisokban, 0,5 ml végtérfogattal a 0, percben (vagyis az LPS-sel együtt) vagy 50 perccel az LPS beadagolását követően. Az egereket nyolc napon át figyeltük, hogy megállapítsuk a kísérletet túlélő egerek százalékos arányát. Az egerenként 6,2 /Ug, valamint 0,62 ^ug mennyiségben alkalmazott, 1. példa szerinti vegyület mintegy 65 %-os túlélési arányt biztosított, míg abban az esetben, ha az 1. példa szerinti vegyület B-izomerét alkalmaztuk, 6,25 /Ug/egér dózis mellett mintegy 80 %, 62,5 /Ug/egér dózis mellett pedig 75 % volt a túlélő egerek aránya.
Amint már említettük, a találmány szerinti vegyületek eredményesen alkalmazhatók gyógyításra és megelőzésére minden olyan kóros és nemkóros állapot fennállása esetén, amelynél kívánatos az immunválasz erősítése vagy helyre állítása. Ebből következik, hogy a találmány szerinti vegyűleteket alkalmazni lehet például baktériumos fertőzések - főleg mérgezéses sokk - esetén, vírusos fertőzések - például herpesz - esetén, parazita-fertőzöttség esetén, az AIDS-nek tulajdonítható fertőzések esetén, kórmegelőzés céljából fiataloknál és idősebbeknél egyaránt, súlyos égési sérülést szenvedettek kezelésére, dialíziskor, daganatos betegek kezelésére és szervátültetésnél. Mindezeken túlmenően a találmány szerinti vegyűleteket hatásjavító adalékként is lehet használni vakcinákban.
A találmány tárgyát képezi az uj vegyületeknek mint immunrendszer-serkentő szereknek az alkalmazása is, valamint ennek az alkalmazásnak valamennyi ipari vonatkozása, beleértve a talál« ♦ • · · V · • · ·« · « *
- 30 mány szerinti vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyszerkészítményeket is.
A tervezett gyógykezelésekhez a (I) általános képletű vegyületeket megfelelően formált gyógyszerkészítmények alakjában lehet bejuttatni a beteg szervezetébe, a szakirodalmi ismeretekkel összhangban [v.ö. például: Eemington’s Pharmaceutical Sciences Handbook, Mack Pub. Co., XVII. kiadás, N.Y. Amerikai Egyesült Államok]. Az adagolás természetesen több tényezőtől függ, igy a kezelendő betegség súlyosságától és a kezelt beteg állapotától, például a súlyától, a korától és a nemétől.
Claims (6)
- Szabadalmi igénypontok1. Retroinvertált tetrapeptidek - szabad sav, valamint farmakológia! szempontból elfogadható sók, észterek és amidok formájában, továbbá mindezek minden lehetséges diasztereoizomer alakjában amelyek (I) általános képletében- R jelentése hidrogénatom vagy a treonin-oldalláncnak megfelelő csoport;- R^ jelentése az arginin-, a leucin- vagy a glutamin-oldalláncnak megfelelő csoport; és- Rg jelentése hidrogénatom vagy anyagcsere révén lebontható acilcsoport;azzal a megkötéssel, hogy ha R^ az arginin-oldalláncnak megfelelő csoport, R nem lehet a treonin-oldalláncnak megfelelő csoport.
- 2. Az 1. igénypont szerinti retroinvertált tetrapeptidek közül a gGly-(R,S)mLys-Pro-Arg és annak valamennyi tiszta diasztereoizomer formája.
- 3. Az 1. igénypont szerinti retroinvertált tetrapeptidek közül a gThr-(R,S)mLys-Pro-Leu és annak valamennyi tiszta diasztereoizomer formája.
- 4. Az 1. igénypont szerinti retroinvertált tetrapeptidek közül a gThr-(R,S)mLys-Pro-Gln és annak valamennyi tiszta diasztereoizomer formája.
- 5. Az 1. igénypont szerinti retroinvertált tetrapeptidek alkalmazása hatóanyagként az immunrendszer működésének módosítására, valamint a mérgezéses sokk megelőzésére és kezelésére.• · · * • · · · · • < 4 « · · ·
- 6. Gyógyszerkészítmények, azzal jellemezve, hogy az immunrendszer működésének módosításához, valamint a mérgezéses sokk megelőzéséhez és kezeléséhez elegendő mennyiséget tartalmaznak - adott esetben farmakológiai szempontból elfogadható segédanyagok) mellett - legalább egy 1. igénypont szerinti retroinvertált tetrapeptidből.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ITMI920939A IT1254883B (it) | 1992-04-16 | 1992-04-16 | Tetrapeptidi parzialmente modificati e retroinvertiti, analoghi di frammenti della proteina c-reattiva. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9402952D0 HU9402952D0 (en) | 1995-02-28 |
| HUT70179A true HUT70179A (en) | 1995-09-28 |
Family
ID=11362983
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9402952A HUT70179A (en) | 1992-04-16 | 1993-04-02 | Process for producing retroinverted tetrapeptides and pharmaceutical compositions containing them as active component |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5521159A (hu) |
| EP (1) | EP0636140B1 (hu) |
| JP (1) | JP3036844B2 (hu) |
| KR (1) | KR100255526B1 (hu) |
| CN (1) | CN1039124C (hu) |
| AT (1) | ATE157987T1 (hu) |
| AU (1) | AU667096B2 (hu) |
| CA (1) | CA2118136C (hu) |
| DE (1) | DE69313842T2 (hu) |
| ES (1) | ES2109487T3 (hu) |
| FI (1) | FI944224A0 (hu) |
| HU (1) | HUT70179A (hu) |
| IT (1) | IT1254883B (hu) |
| NO (1) | NO943903L (hu) |
| NZ (1) | NZ251697A (hu) |
| TW (1) | TW242145B (hu) |
| WO (1) | WO1993021208A1 (hu) |
| ZA (1) | ZA932614B (hu) |
Families Citing this family (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1254883B (it) * | 1992-04-16 | 1995-10-11 | Italfarmaco Spa | Tetrapeptidi parzialmente modificati e retroinvertiti, analoghi di frammenti della proteina c-reattiva. |
| IT1271486B (it) * | 1993-10-12 | 1997-05-28 | Italfarmaco Spa | Oligopeptidi immunomodulatori derivati di frammenti della proteina c- reattiva |
| HUP0105437A3 (en) | 1999-01-02 | 2003-03-28 | Aventis Pharma Gmbh | Novel malonic acid derivatives, processes for their preparation, their use and pharmaceutical compositions containing them |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0253190B1 (en) * | 1986-07-16 | 1992-12-30 | ENIRICERCHE S.p.A. | Partially retro-inverted tuftsin analogues, method for the preparation thereof and pharmaceutical compositions containing them |
| IT1254883B (it) * | 1992-04-16 | 1995-10-11 | Italfarmaco Spa | Tetrapeptidi parzialmente modificati e retroinvertiti, analoghi di frammenti della proteina c-reattiva. |
-
1992
- 1992-04-16 IT ITMI920939A patent/IT1254883B/it active IP Right Grant
-
1993
- 1993-04-02 EP EP93908898A patent/EP0636140B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1993-04-02 US US08/307,580 patent/US5521159A/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-04-02 AU AU39514/93A patent/AU667096B2/en not_active Ceased
- 1993-04-02 AT AT93908898T patent/ATE157987T1/de active
- 1993-04-02 WO PCT/EP1993/000825 patent/WO1993021208A1/en active IP Right Grant
- 1993-04-02 ES ES93908898T patent/ES2109487T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1993-04-02 DE DE69313842T patent/DE69313842T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1993-04-02 CA CA002118136A patent/CA2118136C/en not_active Expired - Fee Related
- 1993-04-02 JP JP05517942A patent/JP3036844B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1993-04-02 HU HU9402952A patent/HUT70179A/hu unknown
- 1993-04-02 NZ NZ251697A patent/NZ251697A/en unknown
- 1993-04-02 KR KR1019940703644A patent/KR100255526B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1993-04-14 ZA ZA932614A patent/ZA932614B/xx unknown
- 1993-04-14 TW TW082102851A patent/TW242145B/zh active
- 1993-04-14 CN CN93104449A patent/CN1039124C/zh not_active Expired - Fee Related
-
1994
- 1994-09-13 FI FI944224A patent/FI944224A0/fi not_active Application Discontinuation
- 1994-10-14 NO NO943903A patent/NO943903L/no unknown
-
1996
- 1996-02-28 US US08/608,317 patent/US5578575A/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| ITMI920939A0 (it) | 1992-04-16 |
| US5578575A (en) | 1996-11-26 |
| NZ251697A (en) | 1995-10-26 |
| HU9402952D0 (en) | 1995-02-28 |
| IT1254883B (it) | 1995-10-11 |
| ITMI920939A1 (it) | 1993-10-16 |
| CN1078476A (zh) | 1993-11-17 |
| NO943903L (no) | 1994-12-15 |
| US5521159A (en) | 1996-05-28 |
| ZA932614B (en) | 1993-10-26 |
| AU667096B2 (en) | 1996-03-07 |
| DE69313842T2 (de) | 1998-04-09 |
| CN1039124C (zh) | 1998-07-15 |
| JPH07505640A (ja) | 1995-06-22 |
| DE69313842D1 (de) | 1997-10-16 |
| FI944224A (fi) | 1994-09-13 |
| EP0636140B1 (en) | 1997-09-10 |
| EP0636140A1 (en) | 1995-02-01 |
| ATE157987T1 (de) | 1997-09-15 |
| ES2109487T3 (es) | 1998-01-16 |
| CA2118136A1 (en) | 1993-10-28 |
| AU3951493A (en) | 1993-11-18 |
| FI944224A0 (fi) | 1994-09-13 |
| WO1993021208A1 (en) | 1993-10-28 |
| JP3036844B2 (ja) | 2000-04-24 |
| NO943903D0 (no) | 1994-10-14 |
| KR100255526B1 (ko) | 2000-05-01 |
| TW242145B (hu) | 1995-03-01 |
| CA2118136C (en) | 2002-03-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3266311B2 (ja) | 新規ポリペプチドおよびこれを用いる抗ｈｉｖ剤 | |
| FI94350B (fi) | Menetelmä T-soluavustaja-aktiivisuutta omaavien peptidien valmistamiseksi | |
| JPH10330397A (ja) | サイトカイン調節剤およびサイトカインレベルの変化に関連する病状および状態における使用方法 | |
| US7220725B2 (en) | Pharmaceutical composition comprising an analgesic peptide and method for treating pain | |
| CH637111A5 (fr) | Composes polypeptidiques a activite thymique ou antagoniste et leurs procedes de synthese. | |
| AU2001280052A1 (en) | Pharmaceutical composition comprising an analgesic peptide | |
| EP2046813A2 (de) | Proteinbindende methotrexat-derivate und diese enthaltende arzneimittel | |
| DE69431603T2 (de) | Oligopeptide hergeleitet von fragmenten des c-reaktiven proteins | |
| HUT70179A (en) | Process for producing retroinverted tetrapeptides and pharmaceutical compositions containing them as active component | |
| DE3687369T2 (de) | Tripeptidverbindungen mit hypotensiver wirksamkeit. | |
| EP0382251B1 (en) | New adamantyl comprising tripeptides, derivatives and hydrochlorides thereof, their preparation and use | |
| AU639595B2 (en) | Novel oligopeptides exhibiting selective inhibiting effect upon the proliferation of hemopoietic cells, pharmaceutical composition comprising the same and process for the preparation of the novel oligopeptides and compositions | |
| AU671118B2 (en) | Tachykinin antagonist tricyclic compounds, preparation of same and pharmaceutical compositions containing such compounds | |
| US4018754A (en) | Novel polypeptides having ACTH-like action | |
| DE68913936T2 (de) | Retro-Inverso-Thrymopentin-Analoge, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung für die Zubereitung von pharmazeutischen Zusammensetzungen. | |
| WO2024037263A1 (zh) | 一种体内低毒性的抑制金葡菌毒素产生的合成肽及其应用 | |
| CA2127553C (en) | Peptides with organo-protective activity, process for their preparation and their use in the therapy | |
| JPH0672152B2 (ja) | チモシンα１―フラグメント及び該化合物を含有する免疫調節剤 | |
| JP3117985B2 (ja) | 細菌性ショック治療剤 | |
| DE4340111A1 (de) | Tumor-Nekrose-Faktor-alpha inaktivierende Peptide | |
| JPH03271300A (ja) | 新規ペプチド |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DFC4 | Cancellation of temporary protection due to refusal |