DE69219530T2

DE69219530T2 - Verfahren zur Herstellung von R(-)-Mandelsäure und deren Derivat

Info

Publication number: DE69219530T2
Application number: DE69219530T
Authority: DE
Inventors: Takakazu Endo; Koji Tamura
Original assignee: Nitto Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Mitsubishi Rayon Co Ltd
Priority date: 1991-06-26
Filing date: 1992-06-24
Publication date: 1997-09-18
Anticipated expiration: 2012-06-25
Also published as: DE69219530D1; EP0527553B1; US5296373A; EP0527553A1; JPH0595795A; JP2676568B2

Description

Erfindungsgebiet

Diese Erfindung betrifft R(-)-Mandelsäure und ihre Derivate. Insbesondere betrifft sie ein Verfahren zur Herstellung von R(-)-Mandelsäure der folgenden allgemeinen Formel (III) oder eines Derivats davon. Man führt das Verfahren aus, indem man einen zur Gattung Rhodococcus gehörenden Mikroorganismus verwendet, der in der Lage ist, eine asymmetrische Nitril- Hydrolyse des R,S-Mandelsäurenitrils der folgenden allgemeinen Formel (I) oder eines Derivats davon durchzuführen. Unter industriellen Gesichtspunkten sind Verbindungen mit einem Mandelsäuregerüst sehr wertvoll als Ausgangsstoffe zur Herstellung von Antibiotika der Cephem- Serie und einer Vielzahl von Medikamenten und Agrochemikalien.

Hintergrund der Erfindung

Bekannte Verfahren zur Herstellung von R(-)-Mandelsäure und ihren Derivaten beinhalten: die racemische Auflösung von chemisch hergestellter R,S-Mandelsäure (racemische Modifikation) durch (1) fraktionierte Kristallisation, wie sie in JP-A-58-177933 beschrieben ist (der Ausdruck "JP-A", wie er hier verwendet wird, bedeutet "nicht geprüfte veröffentlichte japanische Patentanmeldung"); (2) Chromatographie, wie es in der europäischen Patentoffenlegungsschrift Nr. 0 098 707A beschrieben ist; und (3) die Umsetzung der racemischen Modifikation zu racemischen Estern, gefolgt von der racemischen Auflösung dieser durch enzymatische asymmetrische Hydrolyse, wie sie in K. Mori et al., Tetrahedron, 36, 91 - 96 (1980) beschrieben ist; und (4) die chemische asymmetrische Synthese unter Verwendung eines chiralen Reagenzes, wie es in D. A. Evans et al., J. Am. Chem. Soc., 107, 4346 - 4348 (1985) beschrieben ist. Biologische Verfahren hierfür beinhalten die asymmetrische Hydrolyse der oben erwähnten Ester, die in Verfahren (3) gebildet werden, und (5) die mikrobielle asymmetrische Reduktion von Benzoylameisensäure, wie sie in JP-A-57-198096 beschrieben ist; (6) die Hydrolyse von R(-)-Mandelsäurenitril und substituierten Derivaten davon, die mit Hilfe von D- Oxynitrilase asymmetrisch synthetisiert werden, wie es in den US-Patenten 4 859 784 und 5 008 192 beschrieben ist; und (7) die asymmetrische Hydrolyse von Mandelsäurenitril, Mandelsäureamid und deren substituierten Derivaten mit Mikroorganismen, die zu den Gattungen Alcaligenes, Pseudomonas, Rhodopseudomonas, Corynebacterium, Acinetobacter, Bacillus, Mycobacterium, Rhodococcus oder Candida gehören, wie es in der europäischen Patentoffenlegungsschrift Nr. 0 348 901A beschrieben ist.
Jede der Methoden zur Auflösung des Racemats (1) bis (3) erfordert jedoch ein kompliziertes Verfahren, wobei es in jedem Schritt zu einer Ausbeuteverringerung kommt. In Verfahren (4), das ein chirales Reagens als Katalysator einsetzt, ist ein teures chirales Reagens erforderlich, und es ist nahezu unmöglich, eine Produkt hoher optischer Reinheit zu erhalten.
Die oben erwähnten biologischen Verfahren haben ebenfalls manche Nachteile. In Verfahren (5) ist es nämlich schwierig, das Substrat für die asymmetrische Reduktion der Benzoylameisensäure zu synthetisieren. Es ist ferner schwierig, das NADH-Regenerationssystem aufrecht zu erhalten.
Bei dem D-Oxynitrilase-Verfahren (6) handelt es sich einzig um den grundlegenden Befund, daß eine optische aktive Substanz erhalten wird. Das Verfahren der asymmetrischen Hydrolyse (7) erfordert eine Nachbehandlung einer anderen optisch aktiven Substanz, die nach Vollendung der Hydrolyse zurückbleibt. Darüber hinaus enthält die oben erwähnte europäische Patentoffenlegungsschrift Nr. 0 348 901A kein besonderes Beispiel der Herstellung eines R(-)-Mandelsäure- Derivats aus einem substituierten Mandelsäurenitril-Derivat. Daher ist es nicht bekannt, ob man ein R(-)-Mandelsäure- Derivat hoher optischer Reinheit effizient erhalten kann oder nicht.
Wie zuvor beschrieben, leiden diese bekannten Verfahren an verschiedenen Nachteilen. Keines dieser bekannten Verfahren ist somit ein industriell vorteilhaftes Verfahren zur Herstellung von R(-)-Mandelsäure und deren Derivate.
Die vorliegende Erfinder haben ausgedehnte Untersuchungen durchgeführt, um ein Verfahren zur vorteilhaften Herstellung von R(-)-Mandelsäure in industriellem Maßstab zu etablieren. Im Ergebnis fanden die vorliegenden Erfinder, daß R,S- Mandelsäurenitril durch Dissoziationsgleichgewicht leicht zu Benzaldehyd und Cyanwasserstoff in einem nahezu neutralen oder einem basischen wäßrigen Medium racemisiert werden konnte, und daß R,S-Mandelsäurenitril oder Benzaldehyd und Cyanwasserstoff in Verbindung mit diesem Racemisierungssystem, zusammen mit einem zur asymmetrischen Hydrolyse von Mandelsäurenitril befähigtem Mikroorganismus direkt in R(-)-Mandelsäure umgewandelt werden konnten. Auf der Grundlage dieses Befunds offenbarten sie ein Verfahren zur Herstellung von R(-)-Mandelsäure durch Verwendung eines Mikroorganismus, der zu den Gattungen Pseudomonas, Alcaligenes, Acinetobacter oder Caseobacter gehört, wie es in der europäischen Patentoffenlegungsschrift Nr. 0 449 648A beschrieben ist, und ein weiteres Verfahren zur Herstellung von R(-)-Mandelsäure unter Verwendung eines Mikroorganismus, der zu den Gattungen Norcardia, Bacillus, Brevibacterium oder Aureobacterium gehört, wie es in der europäischen Patentoffenlegungsschrift Nr. 0 449 648A beschrieben ist. Daraufhin wandten sie die oben erwähnten Befunde auf substituierte Mandelsäurenitril-Derivat an und schlugen als Ergebnis ein Verfahren zur Herstellung von R(-)-Mandelsäure- Derivaten unter Verwendung eine Mikroorganismus vor, der zu den Gattungen Aureobacterium, Pseudomonas, Caseobacter, Alcaligenes, Acinetobacter, Brevibacterium oder Nocardia gehört, wie es in der europäischen Patentoffenlegungsschrift Nr. 0 449 648A beschrieben ist.
Die R-Stereoselektivitäten der von diesen Bakterien produzierten Hydrogenasen sind jedoch nicht immer zufriedenstellend und somit waren weitere Untersuchungen im Hinblick auf die Stereoselektivitäten erforderlich.

Zusammenfassung der Erfindung

Die vorliegenden Erfinder haben ferner versucht, einen Mikroorganismus zu finden, der eine ausgezeichnete Fähigkeit zur asymmetrischen Hydrolyse von Mandelsäurenitril und deren Derivaten aufweist. Im Ergebnis haben sie erfolgreich entdeckt, daß man eine extrem hohe R-Stereoselektivität erzielen kann, indem man einen Mikroorganismus, der zur Gattung Rhodococcus gehört, verwendet, und auf diese Weise die vorliegende Erfindung zum Abschluß gebracht.
Dementsprechend stellt die vorliegende Erfindung ein Verfahren bereit zur Herstellung einer überwiegenden Menge einer durch die folgende allgemeine Formel (III) dargestellten R(-)-Mandelsäure, oder eines Derivats davon, direkt aus einem durch die folgende allgemeine Formel (I) dargestellten R,S- Mandelsäurenitril, oder einem Derivat davon, oder aus einem durch die folgende allgemeine Formel (II) dargestellten Benzaldehyd, oder einem Derivat davon, mit Cyanwasserstoff, durch das Behandeln von einem durch die allgemeine Formel (I) dargestellten R,S-Mandelsäurenitrils, oder einem Derivat davon, oder von einer Mischung aus einem Benzaldehyd, der allgemeinen Formel (II), oder einem Derivat davon, mit Cyanwasserstoff, unter Verwendung eines zur Gattung Rhodococcus gehörenden Mikroorganismus, der behandelt werden kann, und der in der Lage ist, die Nitril-Gruppe in einem durch die allgemeine Formel (I) dargestellten R,S- Mandelsäurenitril, oder in einem Derivat davon, in einem im wesentlichen neutralen oder in einem basischen wäßrigen Medium stereoselektiv zu hydrolysieren:
worin X, das sich in der o-, m- oder p-Position befindet, aus einem Wasserstoffatom, einem Halogenatom, einer Hydroxy- Gruppe, einer Alkyl-Gruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, einer Alkoxy-Gruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, einer Thioalkyl-Gruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, einer Amino- Gruppe, einer Nitro-Gruppe, einer Mercapto-Gruppe, einer Phenyl-Gruppe und einer Phenoxy-Gruppe ausgewählt wird.

Detaillierte Beschreibung der Erfindung

Wie zuvor beschrieben, wurde die vorliegende Erfindung abgeschlossen, indem man die oben erwähnten Befunde der vorliegenden Erfinder (d.h. den Befund, daß R,S- Mandelsäurenitril durch ein Dissoziationsgleichgewicht mit Benzaldehyd und Cyanwasserstoff in einem im wesentlichen neutralen oder einem basischen wäßrigen Medium leicht racemisiert werden kann und den Befund, daß R,S- Mandelsäurenitril in Verbindung mit dem zuvor beschriebenen Racemisierungssystem zusammen mit einem zur R- stereoselektiven Hydrolyse von Mandelsäurenitril befähigten Mikroorganismus direkt zu R(-)-Mandelsäure umgewandelt werden kann) auf R,S-Mandelsäurenitril-Derivate der allgemeinen Formel (I) weiter angewendet hat und indem man einen Mikroorganismus einsetzt, der eine extrem hohe R- Stereoselektivität aufweist, wie der zuvor erwähnte Mikroorganismus.
Der Ausdruck "überwiegende Menge" wie er hier verwendet wird, bedeutet, daß das R,S-Mandelsäurenitril der allgemeinen Formel (I), von dem man ausgeht, und dessen Derivate oder eine Mischung aus Benzaldehyd der allgemeinen Formel (II) und dessen Derivate mit Cyanwasserstoff direkt in die anvisierte R(-)-Mandelsäure der allgemeinen Formel (III) und deren Derivate in einem Verhältnis von "50 % oder mehr" umgewandelt werden kann.
-Der erfindungsgemäß zu verwendende Mikroorganismus ist ein Mikroorganismus, der zur Gattung Rhodococcus gehört. Man kann Rhodococcus sp. HT29-7 (FERM BP-3857) als spezifisches Beispiel dafür anführen. Dieser Stamm wurde erstmals von den vorliegenden Erfindern aus dem Erdboden isoliert und beim Fermentation Research Institut, Agency of Industrial Science and Technology, 1- 3, Higashi 1-chome, Tsukuba-shi, Ibaraki, Japan unter der oben erwähnten Zugangsnummer deponiert. Dieser Stamm hat die folgenden bakteriologischen Eigenschaften. Stamm HT29-7:
Gemäß diesen bakteriologischen Eigenschaften wurde der Stamm HT29-7 als Bakterium identifiziert, das nach Bergeys Manual of Systematic Bacteriology von 1986 zur Gattung Rhodococcus gehört.
Beispiele von Verbindungen der oben erwähnten allgemeinen Formel (I) umfassen Mandelsäurenitril und Chlormandelsäurenitril, Brommandelsäurenitril, Fluormandelsäurenitril, Hydroxymandelsäurenitril, Methylmandelsäurenitril, Ethylmandelsäurenitril, Isopropylmandelsaurenitril, Methoxymandelsäurenitril, Methylthiomandelsäurenitril, Mercaptomandelsäurenitril, Aminomandelsäurenitril, Nitromandelsäurenitril, Phenylmandelsäurenitril und Phenoxymandelsäurenitril, die jeweils einen Substituenten in der o-, m- oder p-Position aufweisen.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel (II) umfassen einen Benzaldehyd, der den oben erwähnten Verbindungen entspricht, sowie dessen Derivate.
Der erfindungsgemäß zu verwendende Mikroorganismus kann in einem gewöhnlich bei dieser Technik eingesetzten Medium inkubiert werden, das 0,5 bis 20 % Kohlenstoff-Quellen (beispielsweise Glycerin, Glucose, Saccharose) und 0,5 bis 10 % Stickstoff-Quellen (beispielsweise Casaminosäuren, Fleischextrakt, Hefenextrakt) enthält, welche von den Mikroorganismen genützt werden können, und Mineralsalze (beispielsweise Magnesiumchlorid, Calciumchlorid, Magnesiumsulfat, Eisenchlorid, Zinksulfat), die für das Wachstum des Mikroorganismus essentiell sind.
Es ist bevorzugt, zu dem Medium Nitrile (beispielsweise Zimtsäurenitril, Benzylcyanid, Isobutyronitril, β- Phenylpropionitril, Benzonitril, 2-Cyanopyridin, 3- Cyanopyridin, 4-Cyanopyridin, 1-Cyclohexenylacetonitril, &epsi;- Caprolactam, &epsi;-Butyronitril, o-Aminobenzonitril) oder Amide (beispielsweise Isobutylamid, Phenylacetamid, 4- Pyridylcarbonsäureamid) in solch einer Konzentration zuzugeben, daß der Wachstum des Mikroorganismus während des frühen oder mittleren Stadiums der Inkubation nicht in größerem Ausmaß inhibiert wird, da man dadurch die enzymatische Aktivität weiter erhöhen kann.
Man kann die Inkubation bei einem pH-Wert des Mediums von 4 bis 10 (vorzugsweise von 6 bis 9) und bei einer Temperatur von 5 bis 50ºC (vorzugsweise von 25 bis 40ºC) unter aeroben Bedingungen über angenähert 1 bis 14 Tage (vorzugsweise 3 bis 7 Tage) ausführen.
Die Hydrolyse kann man auf die folgende Weise ausführen. Zellen oder behandelte Zellen (beispielsweise gemahlene Zellen, rohe oder gereinigte Enzyme, immobilisierte Zellen, immobilisierte Enzyme) des Mikroorganismus, die nach dem oben erwähnten Verfahren inkubiert wurden, werden in einem wäßrigen Medium wie Wasser oder einer Pufferlösung suspendiert. Dann mischt man die erhaltene Suspension mit dem R,S-Mandelsäurenitril der allgemeinen Formel (I) und dessen Derivaten oder mit einer Mischung aus Benzaldehyd der allgemeinen Formel (II) oder dessen Derivaten und Cyanwasserstoff. Wie zuvor beschrieben, ist es erfindungsgemäß erforderlich, das Reaktionssystem die Reaktion hindurch in einem im wesentlichen neutralen oder in einem basischen Zustand zu halten, um das Mandelsäurenitril und dessen Derivate zu racemisieren. Daher stellt man den pH- Wert des Reaktionssystems auf 6 bis 11 (vorzugsweise auf 7 bis 9) ein.
In der Reaktionsmischung kann der Gehalt des Mandelsäurenitrils und eines Derivats davon von 0,1 bis 10 Gew.-% (vorzugsweise von 0,2 bis 5,0 Gew.-%) reichen, kann der Gehalt des Benzaldehyds und eines Derivats davon von 0,1 bis 10 Gew.-% (vorzugsweise von 0,2 bis 5,0 Gew.-%) reichen und kann der Gehalt des Cyanwasserstoffs von 0,1 bis 2,0 Gew.-% (vorzugsweise von 0,1 bis 0,5 Gew.-%) reichen. Auf die Substrate bezogen, kann man den Mikroorganismus in einem Verhältnis von 0,01 bis 5,0 % Trockengewicht (vorzugsweise von 0,1 bis 2 % Trockengewicht) verwenden. Die Reaktionstemperatur kann von 0 bis 50ºC, vorzugsweise von 10 bis 30ºC reichen. Man kann die Reaktion 0,1 bis 100 Stunden (vorzugsweise 5 bis 30 Stunden) ausführen.
Die so erhaltene R(-)-Mandelsäure und deren Derivate werden dann wie folgt behandelt. Die Zellen werden aus der Reaktionsmischung durch ein bekanntes Verfahren, wie Zentrifugieren entfernt und dann granulare Bestandteile, Proteine und Polysaccharid-Komponenten gegebenenfalls, beispielsweise durch Ultrafiltration, zusätzlich entfernt. Dann behandelt man gegebenenfalls den Rückstand mit Aktivkohle und konzentriert unter reduziertem Druck oder extrahiert mit einem organischen Lösungsmittel unter sauren Bedingungen. Nach wiederholter Rekristallisation aus beispielsweise Benzol erhält man das Zielprodukt als Kristalle hoher Reinheit.
Erfindungsgemäß kann man R,S-Mandelsaurenitril racemischer Modifikation und dessen Derivate oder Benzaldehyd und dessen Derivate mit Cyanwasserstoff direkt zu R(-)-Mandelsäure und deren Derivate bei einem Verhältnis von etwa 80 bis 100 % und einer optischen Reinheit von nahezu von 100 % e.e. umwandeln, ohne eine optische Auflösung vorzunehmen. Damit ist das erfindungsgemäße Verfahren zur Herstellung von R(-)- Mandelsäure und deren Derivaten bekannten Verfahren hinsichtlich Betriebsweise und Kosten hochgradig überlegen.
Die folgenden Beispiele werden angeführt, um die vorliegende Erfindung detaillierter zu erläutern, aber nicht, um diese darauf zu begrenzen.

Beispiel 1

(1) Inkubation des Mikroorganismus und Herstellung einer Zellsuspension:

Man inkubierte Rhodococcus sp. HT29-7 in dem folgenden Medium A bei 30ºC 72 h lang und inkubierte die so erhaltenen Zellen 96 h weiter in dem Medium B bei 30ºC.

i) Medien

(Medium A)

Glycerin 20 g
Hefeextrakt 6 g
Monokaliumphosphat 6,8 g
Dikaliumphosphat 7,1 g
Natriumsulfat 2,8 g
Magnesiumchlorid 0,4 g
Calciumchlorid 0,04 g
Magnesiumsulfat 0,03 g
Eisenchlorid 0,006 g
Zinksulfat 0,003 g
destilliertes Wasser 1000 ml
pH 7,5

(Medium B)

0,02 % (Gewicht/Volumen) 1-Cyclohexenylacetonitril wurden zusätzlich zum obigen Medium A gegeben.
Die Zellen wurden aus der erhaltenen Inkubationsbrühe abgetrennt und mit einer 50 mM Phosphatpufferlösung (pH 8,0) gewaschen. Als nächstes suspendierte man die Zellen in 100 ml der gleichen Phosphatpufferlösung, um eine Zellsuspension herzustellen (OD&sub6;&sub3;&sub0; = 28,3; 1,13 % Trockengewicht).

(2) Asymmetrische Hydrolyse des Mandelsäurenitrils:

Zu der oben erhaltenen Zellsuspension gab man kontinuierlich mit einer Mikro-Testrohrpumpe bei einer Flußrate von 5,35 mmol/h Mandelsäurenitril und führte die Reaktion bei 30ºC aus. Nach der Zugabe von Mandelsäurenitril über eine Stunde bildeten sich R(-)-Mandelsäure und Ammoniak im wesentlichen quantitativ, bezogen auf das aufgebrauchte Mandelsäurenitril.
Die Reaktion wurde insgesamt 4 h unter den oben erwähnten Bedingungen durchgeführt. Wie eine flüssigchromatographische Analyse mit einer ODS-Säule ergab, hatten sich 4 h nach Start der Reaktion 3,4 % (Gewicht/Volumen) Ammonium-R(-)-mandelat aus 2,8 g des Ausgangsmaterials Mandelsäurenitril angereichert (Umsatzausbeute: 94,1 %). Nach Beendigung der Reaktion entfernte man die Zellen aus der Reaktionsmischung und behandelte die so erhaltene Reaktionsmischung mit einer Säure, so daß sich ein pH-Wert von 2 ergab. Dann extrahierte man die wäßrige Phase mit Ethylacetat, um die Mandelsäure zu isolieren. Man trocknete die so erhaltene Mandelsäure-Lösung über Natriumsulfat-Anhydrid. Dann destillierte man das organische Lösungsmittel ab, um auf diese Weise Rohkristalle zu formen. Man kristallisierte die Kristalle aus einer Lösungsmittelmischung aus Benzol/Ethylacetat (7:1 per Volumen) weiter um und erhielt 2,8 g Kristalle in Form eines weißen Pulvers. Diese Kristalle und R(-)-Mandelsäure als Standard wurden jeweils zu einer wäßrigen 1,0%igen Lösung (Gewicht/Volumen) unter Verwendung von destilliertem Wasser formuliert. Als nächstes maß man die spezifische Rotation einer jeden wäßrigen Lösung mit einem Meßgerät für die optische Drehung und bestimmte die optische Reinheit mittels Hochleistungsflüssigchromatographie mit einer optischen Auflösungssäule (MCI GEL CRS10W). Die so erhaltenen analytischen Daten sind in Tabelle 1 nachstehend gezeigt. Tabelle 1

Beispiel 2

(1) Inkubation des Mikroorganismus und Herstellung einer Zellsuspension:

Unter den gleichen Bedingungen, wie in Beispiel 1 beschrieben, inkubierte man Rhodococcus sp. HT29-7 und stellte dann eine Zellsuspension (OD&sub6;&sub3;&sub0; = 12, 0,48 % Trockengewicht) mit 50 mM Phosphatpufferlösung des phs 8,0 her.

(2) Asymmetrische Hydrolyse verschiedener Substrate:

Man gab verschiedene Mandelsäurenitril-Derivate oder Cyanwasserstoff und Benzaldehyd-Derivate, wie sie in Tabelle 2 aufgeführt sind, zu jeweils 10 ml der oben erwähnten Zellsuspension in einer in Tabelle 2 genauer angegebenen Konzentration und führte dann die Reaktion bei 30ºC 17 h lang unter Schütteln aus.
Nach Beendigung der Reaktion entfernte man die Zellen durch Zentrifugieren aus der Reaktionsmischung und bestimmte die Reaktionsausbeute und die optische Reinheit des erhaltenen Produkts durch Hochleistungsflüssigchromatographie sowohl mit einer ODS- als auch mit einer optischen Auflösungssäule (MCI GEL CRS10W) gemäß demselben Verfahren, wie es in Beispiel 1 beschreiben ist. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 nachstehend gezeigt. Tabelle 2

Claims

1. Verfahren zur Herstellung einer überwiegenden Menge einer durch die folgende allgemeine Formel (III) dargestellten R(-)-Mandelsäure, oder eines Derivats davon, direkt aus einem durch die folgende allgemeine Formel (I) dargestellten R,S-Mandelsäurenitril, oder einem Derivat davon, oder aus einem durch die folgende allgemeine Formel (II) dargestellten Benzaldehyd, oder einem Derivat davon, mit Cyanwasserstoff, durch das Behandeln von (A) einem durch die allgemeine Formel (I) dargestellten R,S-Mandelsäurenitril, oder einem Derivat davon, oder (B) von einer Mischung aus einem Benzaldehyd der allgemeinen Formel (II), oder einem Derivat davon, mit Cyanwasserstoff, unter Verwendung eines zur Gattung Rhodococcus gehörenden Mikroorganismus, der in der Lage ist, die Nitril-Gruppe in einem durch die allgemeine Formel (I) dargestellten R,S-Mandelsäurenitril, oder in einem Derivat davon, in einem im wesentlichen neutralen oder in einem basischen wäßrigen Medium stereoselektiv zu hydrolysieren:

worin X, das sich in der o-, m- oder p-Position befindet, ausgewählt wird aus der Gruppe, bestehend aus einem Wasserstoffatom, einem Halogenatom, einer Hydroxy- Gruppe, einer Alkyl-Gruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, einer Alkoxy-Gruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, einer Thioalkyl-Gruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, einer Amino-Gruppe, einer Nitro- Gruppe, einer Mercapto-Gruppe, einer Phenyl-Gruppe und einer Phenoxy-Gruppe.

2. Verfahren zur Herstellung von R(-)-Mandelsäure gemäß Anspruch 1, worin R(-)-Mandelsäure oder ein Derivat davon in einer Umsatzausbeute von mindestens 50 % gebildet werden.

3. Verfahren zur Herstellung von R(-)-Mandelsäure gemäß Anspruch 1, worin R(-)-Mandelsäure oder ein Derivat davon in einer Umsatzausbeute von 80 bis 100 % gebildet werden.

4. Verfahren zur Herstellung von R(-)-Mandelsäure gemäß Anspruch 1, 2 oder 3, worin das R,S-Mandelsäurenitril ausgewählt wird aus der Gruppe bestehend aus Mandelsäurenitril, Chlormandelsäurenitril, Brommandelsäurenitril, Fluormandelsäurenitril, Hydroxymandelsäurenitril, Methylmandelsäurenitril, Ethylmandelsäurenitril, Isopropylmandelsäurenitril, Methoxmandelsäurenitril, Methylthiomandelsäurenitril, Mercaptomandelsäurenitril, Aminomandelsäurenitril, Nitromandelsäurenitril, Phenylmandelsäurenitril und Phenoxymandelsyurenitril, die jeweils einen Substituenten in der o-, m- oder p-Position aufweisen.

5. Verfahren zur Herstellung von R(-)-Mandelsäure gemäß Anspruch 1, 2, 3 oder 4, worin der pH-Wert des besagten wäßrigen Mediums von 6 bis 11 beträgt.

6. Verfahren gemäß einem der vorangehenden Ansprüche, worin der Mikroorganismus die R-stereoselektiven Eigenschaften von Rhodococcus sp. HT29-7 (FERM BP-3857) aufweist.