DE69613369T2

DE69613369T2 - Chinazolin derivate

Info

Publication number: DE69613369T2
Application number: DE69613369T
Authority: DE
Inventors: John Barker
Original assignee: AstraZeneca AB
Current assignee: AstraZeneca AB
Priority date: 1995-04-27
Filing date: 1996-04-23
Publication date: 2002-05-23
Anticipated expiration: 2016-04-24
Also published as: WO1996033979A1; AU5343296A; JPH11504032A; DE69613369D1; EP0824527B1; EP0824527A1; GB9508537D0; US5942514A

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft Chinazolinderivate oder pharmazeutisch unbedenkliche Salze davon, die antiproliferative Wirkung wie Antikrebswirkung aufweisen und sich demgemäß zur Verwendung bei Methoden zur Behandlung des menschlichen oder tierischen Körpers eignen. Die Erfindung betrifft ferner Verfahren zur Herstellung der Chinazolinderivate, diese enthaltende pharmazeutische Zusammensetzungen und ihre Verwendung bei der Herstellung von Arzneimitteln zur Verwendung bei der Hervorrufung einer antiproliferativen Wirkung bei einem Warmblüter, wie dem Menschen.
Bei vielen der derzeitigen Behandlungsschemata für Zellproliferationskrankheiten wie Psoriasis und Krebs kommen Verbindungen zum Einsatz, die die DNA- Synthese inhibieren. Derartige Verbindungen sind zwar generell zelltoxisch, jedoch kann sich ihre toxische Wirkung auf schnellteilende Zellen wie Tumorzellen als vorteilhaft erweisen. Alternative Ansätze für antiproliferative Mittel, die ihre Wirkung nicht über die Inhibierung der DNA-Synthese, sondern über einen anderen Mechanismus entfalten, weisen potentiell erhöhte Wirkselektivität auf.
In neuerer Zeit wurde entdeckt, daß eine Zelle dadurch kanzerös werden kann, daß ein Teil ihrer DNA in ein Onkogen transformiert wird, d. h. ein Gen, das bei Aktivierung zur Bildung von malignen Tumorzellen führt (Bradshaw, Mutagenesis, 1986, 1, 91). Einige solche Onkogene führen zur Produktion von Peptiden, die Rezeptoren für Wachstumsfaktoren darstellen. Der Komplex aus Wachstumsfaktor und Rezeptor führt anschließend zu einem Anstieg der Zellproliferation. So ist beispielsweise bekannt, daß einige Onkogene Tyrosinkinase-Enzyme codieren und bestimmte Wachstumsfaktor-Rezeptoren auch Tyrosinkinase-Enzyme sind (Yarden et al. Ann. Rev. Biochem., 1988, 57, 443; Larsen et al., Ann. Reports in Med. Chem. 1989, Kap. 13).
Rezeptortyrosinkinasen sind bei der Übertragung von biochemischen Signalen, die die Zellvermehrung auslösen, von Bedeutung. Es handelt, sich dabei um große, die Zellmembran durchspannende Enzyme mit einer extrazellulären Bindungsdomäne für Wachstumsfaktoren wie epidermalen Wachstumsfakor (EGF) und einem intrazellulären Teil, der als Kinase zur Phosphorylierung von Tyrosin-Aminosäuren in Proteinen fungiert und somit die Zellproliferation beeinflußt. Es sind verschiedene Klassen von Rezeptortyrosinkinasen bekannt (Wilks, Advances in Cancer Research, 1993, 60, 43-73), die auf den Familien von Wachstumsfaktoren, die an verschiedene Rezeptortyrosinkinasen binden, basieren. Die Klassifizierung beinhaltet Klasse-I- Rezeptortyrosinkinasen, die die EGF-Familie der Rezeptortyrosinkinasen wie die EGF-, TGFCC-, NEU-, erbB- , Xmrk-, HER- und let23-Rezeptoren umfassen, Klasse-II- Rezeptortyrosinkinasen, die die Insulin-Familie der Rezeptortyrosinkinasen wie die Insulin-, IGFI- und IRR- Rezeptoren (IRR = Insulin Related Receptor) umfassen, und Klasse-III-Rezeptortyrosinkinasen, die die PDGF- Familie (PDGF = Platelet Derived Growth Factor) der Rezeptortyrosinkinasen wie die PDGFα-, PDGFβ- und CDF1- Rezeptoren (CDF1 = Colony Stimulating Factor 1) umfassen. Klasse-I-Kinasen wie die EGF-Familie der Rezeptortyrosinkinasen kommen bekanntlich häufig in geläufigen Krebserkrankungen des Menschen, wie Brustkrebs (Sainsbury et al., Brit. J. Cancer, 1988, 58, 458; Guerin et al., Oncogene Res., 1988, 3, 21, und Klijn et al., Breast Cancer Res. Treat., 1994, 29, 73), nicht-kleinzelligem Bronchialkarzinom (NSCLC) einschließlich Adenokarzinomen (Cerny et al., Brit. J. Cancer, 1986, 54, 265; Reubi et al., Int. J. Cancer, 1990, 45, 269; und Rusch et al., Cancer Research, 1993, 53, 2379) und Plattenepithel-Bronchialkarzinom (Hendler et al., Cancer Cells, 1989, 7, 347), Blasenkrebs (Neal et al., Lancet, 1985, 366), Speiseröhrenkrebs (Mukaida et al., Cancer, 1991, 68, 142), Gastrointestinalkrebserkrankungen wie Kolon-, Rektum- oder Magenkarzinom (Bolen et al., Oncogene Res., 1987, 1, 149), Prostatäkrebs (Visakorpi et al., Histochem. J., 1992, 24, 481), Leukämie (Konaka et al., Cell, 1984, 37, 1035) und Eierstock-, Lungen- oder Pankreaskrebs (Europäische Patentanmeldung 0400586), vor. Es ist zu erwarten, daß bei der Prüfung weiterer Humantumorgewebe auf die EGF-Familie der Rezeptortyrosinkinasen deren weite Verbreitung in weiteren Krebserkrankungen wie Schilddrüsen- und Gebärmutterkrebs bestätigt werden wird. Es ist auch bekannt, daß EGF-Typ- Tyrosinkinaseaktivität in normalen Zellen nur selten, in malignen Zellen jedoch häufiger festgestellt werden kann (Hunter, Cell, 1987, 50, 823). Wie erst kürzlich gezeigt wurde (W. J. Gullick, Brit. Med. Bull., 1991, 47, 87), werden EGF-Rezeptoren mit Tyrosinkinaseaktivität in vielen Krebeserkrankungen des Menschen wie Hirn-, Plattenepithelbronchial-, Blasen-, Magen-, Brust-, Kopf- und Hals-, Speiseröhren-, gynäkologischen und Schilddrüsentumoren überexprimiert.
Demgemäß hat man erkannt, daß ein Inhibitor von Rezeptortyrosinkinasen als selektiver Inhibitor des Wachstums von Säugetierkrebszellen wertvoll sein sollte (Yaish et al., Science, 1988, 242, 933). Gestützt wird diese Ansicht durch den Nachweis, daß Erbstatin, ein EGF-Rezeptortyrosinkinase-Inhibitor, bei athymischen Nacktmäusen das Wachstum eines transplantierten humanen Mammakarzinoms, das EGF-Rezeptortyrosinkinase exprimiert, spezifisch vermindert, aber auf das Wachstum eines anderen Karzinoms, das keine EGF- Rezeptortyrosinkinase exprimiert, keinen Einfluß hat (Toi et al., Eur. J. Cancer Clin. Oncol., 1990, 26, 722). Verschiedene Styrolderivate sollen ebenfalls tyrosinkinaseinhibierende Eigenschaften aufweisen (Europäische Patentanmeldungen 0211363, 0304493 und 0322738) und zur Verwendung als Antitumormittel geeignet sein. Die in-vivo-Inhibitionswirkung von zwei derartigen Styrolderivaten, bei denen es sich um EGF- Rezeptortyrosinkinase-Inhibitoren handelt, , wurde anhand des Wachstums von humanem Plattenepithelzellenkarzinom in Nacktmäusen nachgewiesen (Yoneda et al., Cancer Research, 1991, 51, 4430). Verschiedene bekannte Tyrosinkinase-Inhibitoren sind einem erst vor kurzem erschienenen Übersichtsartikel von T. R. Burke Jr. (Drugs of the Future, 1992, 17, 119) zu entnehmen.
Aus den europäischen Patentanmeldungen 0520722, 0566226 und 0635498 ist bekannt, daß bestimmte Chinazolinderivate, die in 4-Stellung einen Anilinosubstituenten tragen, Rezeptortyrosinkinase- Inhibitionswirkung besitzen. Außerdem ist aus der europäischen Patentanmeldung 0602851 bekannt, daß bestimmte Chinazolinderivate, die in 4-Stellung einen Heteroarylaminosubstituenten tragen, ebenfalls Rezeptortyrosinkinase-Inhibitionswirkung besitzen.
Weiterhin ist aus der internationalen Patentanmeldung WO 92/20642 bekannt, daß bestimmte Aryl- und Heteroarylverbindungen EGF- und/oder PDGF- Rezeptortyrosinkinase inhibieren. Zwar werden bestimmte Chinazolinderivate offenbart, aber es findet sich keinerlei Hinweis auf 4-Anilinochinazolinderivate.
Die antiproliferative Wirkung eines 4-Anilinochinazolinderivats in vitro wurde von Fry et al., Science, 1994, 265, 1093, beschrieben. Hiernach soll die Verbindung 4-(3'-Bromanilino)'-6,7-dimethoxychinazolin einen hochwirksamen Inhibitor von EGF- Rezeptoortyrosinkinase darstellen.
Die in-vivo-Inhibitionswirkung eines 4,5- Dianilinophthalimidderivats, bei dem es sich um einen Inhibitor der EGF-Familie der Rezeptortyrosinkinasen handelt, wurde anhand des Wachstums von humanem Plattenepithelkarzinom A-431 oder humanem Ovarialkarzinom SKOV-3 in BALB/c-Nacktmäusen nachgewiesen (Buchdunger et al., Proc. Nat. Acad. Sci., 1994, 91, 2334).
Ferner ist aus der europäischen Patentanmeldung 0635507 bekannt, daß bestimmte tricyclische Verbindungen, die einen mit dem Benzoring eines Chinazolins anellierten 5- oder 6-gliedrigen Ring enthalten, Rezeptortyrosinkinase-Inhibitionswirkung aufweisen. Außerdem ist aus der europäischen Patentanmeldung 0635498 bekannt, daß bestimmte Chinazolinderivate mit einer Aminogruppe in 6-Stellung und einer Halogengruppe in 7-Stellung Rezeptortyrosinkinase-Inhibitionswirkung aufweisen.
Demgemäß gab es Hinweise darauf, daß Klasse-I- Rezeptortyrosinkinase-Inhibitoren für die Verwendung bei der Behandlung von verschiedenen Krebserkrankungen des Menschen geeignet sind.
Es ist auch zu erwarten, daß Inhibitoren von Rezeptortyrosinkinasen des EGF-Typs für die Verwendung bei der Behandlung von anderen Krankheiten mit übermäßiger Zellproliferation, wie Psoriasis (wobei man TGFα für den wichtigsten Wachstumsfaktor hält) und benigner Prostatahypertrophie (BPH), geeignet sind.
In diesen Druckschriften werden keine Chinazolinderivate beschrieben, die in 4-Stellung einen halogensubstituierten Anilinosubstituenten und außerdem in 6-Stellung einen Alkoxyalkylaminosubstituenten tragen. Es wurde nun gefunden, daß derartige Verbindungen starke antiproliferative Eigenschaften in vivo besitzen, die vermutlich auf ihre Klasse-I- Rezeptortyrosinkinase-Inhibitionswirkung zurückzuführen sind.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Chinazolinderivat der Formel I
worin n für 2 steht, R² jeweils unabhängig voneinander Fluor, Chlor oder Brom bedeutet
und R¹ für C&sub1;&submin;&sub4;-Alkoxy-C&sub2;&submin;&sub4;-alkylamino steht, oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz davon.
In der vorliegenden Beschreibung umfaßt der Begriff "Alkyl" sowohl geradkettige als auch verzweigtkettige Alkylgruppen, jedoch ist bei Bezugnahme auf einzelne Alkylgruppen wie "Propyl" ausschließlich die geradkettige Variante gemeint. Beispielsweise kann für den Fall, daß R¹ für eine C&sub1;&submin;&sub4;-Alkoxy-C&sub2;&submin;&sub4;- alkylaminogruppe steht, dieser generische Rest für 2-Methoxyethylamino, 2-Ethoxyethylamino, 2-Propoxyethylamino, 2-Isopropoxyethylamino, 2-Butoxyethylamino, 3-Methoxypropylamino, 3-Ethoxypropylamino, 2-Methoxypropylamino, 2-Ethoxypropylamino, 1-Methoxyprop-2- ylamino, 1-Ethoxyprop-2-ylamino, 2-Methoxy-2-methylpropylamino, 1-Methoxy-2-methylprop-2-ylamino und 4-Methoxybutylamino stehen.
Es versteht sich, daß im Rahmen der vorliegenden Erfindung, soweit bestimmte Verbindungen der Formel I aufgrund von einem oder mehreren Substituenten, die ein asymmetrisches Kohlenstoffatom enthalten, in optisch aktiven oder racemischen Formen existieren können, alle derartigen optisch aktiven oder racemischen Formen mit antiproliferativer Wirkung von der vorliegenden Erfindung umfaßt werden. Die Synthese von optisch aktiven Formen kann nach gut bekannten Standardmethoden der organischen Chemie erfolgen, beispielsweise durch Synthese aus optisch aktiven Edukten oder Trennung racemischer Formen.
Außerdem versteht sich, daß die erfindungsgemäßen Chinazolinderivate sowohl in solvatisierten als auch in unsolvatisierten Formen, wie beispielsweise hydratisierten Formen, existieren können. Es versteht sich, daß die Erfindung alle derartigen solvatisierten Formen mit antiproliferativer Wirkung umfaßt.
Als pharmazeutisch unbedenkliches Salz eines erfindungsgemäßen Chinazolinderivats eignet sich beispielsweise ein Mono- oder Bis-Säureadditionssalz eines ausreichend basischen erfindungsgemäßen Chinazolinderivats, beispielsweise ein Säureadditionssalz, zum Beispiel mit einer anorganischen oder organischen Säure, beispielsweise Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Trifluoressigsäure, Citronensäure, Maleinsäure, Weinsäure, Fumarsäure, Methansulfonsäure oder 4- Toluolsulfonsäure.
Besondere erfindungsgemäße Verbindungen sind beispielsweise Chinazolinderivate der Formel I oder pharmazeutisch unbedenkliche Salze davon, worin:
(a) n für 2 und R² jeweils unabhängig voneinander für Fluor, Chlor oder Brom steht und R¹ eine der oben oder in diesem, besondere erfindungsgemäße Verbindungen betreffenden Abschnitt angegebenen Bedeutungen besitzt; oder
(b) R¹ für 2-Methoxyethylamino, 2-Ethoxyethylamino, 3-Methoxypropylamino, 3-Ethoxypropylamino, 2-Methoxypropylamino, 1-Methoxyprop-2-ylamino oder 4-Methoxybutylamino steht und n und R² eine der oben oder in diesem, besondere erfindungsgemäße Verbindungen betreffenden Abschnitt angegebenen Bedeutungen besitzen.
Eine bevorzugte erfindungsgemäße Verbindung ist ein Chinazolinderivat der Formel I, worin (R²)n für 2',4'-Difluor, 2',4'-Dichlor, 3',4'-Difluor, 3',4'- Dichlor, 3'-Fluor-4'-chlor oder 3'-Chlor-4'-fluor steht und
R¹ für 2-Methoxyethylamino, 2-Ethoxyethylamino, 3-Methoxypropylamino oder 3-Ethoxypropylamino steht, oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Säureadditionssalz davon.
Eine weitere bevorzugte erfindungsgemäße Verbindung ist ein Chinazolinderivat der Formel I, worin (R²)n für 3',4'-Difluor oder 3'-Chlor-4'-fluor steht und
R¹ für 2-Methoxyethylamino oder 3-Methoxypropylamino steht,
oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Säureadditionssalz davon.
Eine ganz bestimmte bevorzugte erfindungsgemäße Verbindung ist das folgende Chinazolinderivat der Formel I:
4-(3'-Chlor-4'-fluoranilino)-6-(3-methoxypropylamino)- chinazolin
oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Säureadditionssalz davon.
Eine weitere ganz bestimmte bevorzugte erfindungsgemäße Verbindung ist das folgende Chinazolinderivat der Formel I:
4-(3',4'-Difluoranilino)-6-(2-methoxyethylamino)- chinazolin
oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Säureadditionssalz davon.
Eine weitere ganz bestimmt bevorzugte erfindungsgemäße Verbindung ist das folgende Chinazolinderivat der Formel I:
4-(3'-Chlor-4'-fluoranilino)-6-(2-methoxyethylamino)- chinazolin
oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Säureadditionssalz davon.
Eine weitere ganz bestimmte bevorzugte erfindungsgemäße Verbindung ist das folgende Chinazolinderivat der Formel I:
4-(2',4'-Difluoranilino)-6-(2-methoxyethylamino)- chinazolin
oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Säureadditionssalz davon.
Zur Herstellung eines Chinazolinderivats der Formel I oder eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes davon kann man sich jedes Verfahrens bedienen, das bekanntlich zur Herstellung von chemisch verwandten Verbindungen geeignet ist. Als Verfahren eignen sich beispielsweise diejenigen gemäß den europäischen Patentanmeldungen 0520722, 0566226, 0602851, 0635498 und 0635507. Derartige Verfahren bilden ein weiteres Merkmal der Erfindung, wenn sie zur Herstellung eines Chinazolinderivats der Formel I oder eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes davon angewandt werden, und werden anhand der folgenden repräsentativen Beispiele erläutert, in welchen n, R² und R¹ eine der oben für ein Chinazolinderivat der Formel I angegebenen Bedeutungen aufweisen, sofern nicht anders vermerkt. Die benötigten Edukte sind nach Standardmethoden der organischen Chemie erhältlich. Die Herstellung derartiger Edukte wird in den beigefügten Beispielen beschrieben. Alternativ dazu sind die benötigten Edukte in Anlehnung an die erläuterten Methoden nach Verfahrensweisen erhältlich, die zum üblichen Fachwissen des organischen Chemikers gehören.
(a) Umsetzung eines Chinazolins der Formel II
worin Z für eine austauschbare Gruppe steht, mit einem Anilin der Formel III
zweckmäßigerweise in Gegenwart einer geeigneten Base. Als austauschbare Gruppe Z eignet sich beispielsweise eine Halogen-, Alkoxy-, Aryloxy- oder Sulfonyloxygruppe, zum Beispiel eine Chlor-, Brom-, Methoxy-, Phenoxy-, Methansulfonyloxy- oder Toluol-4- sulfonyloxygruppe.
Als Base eignet sich beispielsweise eine organische Aminbase, wie beispielsweise Pyridin, 2,6- Lutidin, Collidin, 4-Dimethylaminopyridin, Triethylamin, Morpholin, N-Methylmorpholin oder Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-en, oder beispielsweise ein Alkali- oder Erdalkalicarbonat oder -hydroxid, zum Beispiel Natriumcarbonat, Kaliumcarbonat, Calciumcarbonat, Natriumhydroxid oder Kaliumhydroxid.
Als Base kommt außerdem beispielsweise ein Alkali- oder Erdalkaliamid, beispielsweise Natriumamid oder Natriumbis(trimethylsilyl)amid, in Betracht.
Die Umsetzung erfolgt vorzugsweise in Gegenwart eines geeigneten inerten Lösungsmittels oder Verdünnungsmittels, beispielsweise einem Alkanol oder Ester, wie Methanol, Ethanol, Isopropanol oder Essigsäureethylester, einem halogenierten Lösungsmittel, wie Methylenchlorid, Chloroform oder Tetrachlorkohlenstoff, einem Ether, wie Tetrahydrofuran oder 1,4-Dioxan, einem aromatischen Lösungsmittel, wie Toluol, oder einem dipolar aprotischen Lösungsmittel, wie N,N-Dimethylformamid, N,N-Dimethylacetamid, N- Methylpyrrolidin-2-on oder Dimethylsulfoxid. Die Umsetzung erfolgt zweckmäßigerweise bei einer Temperatur im Bereich von beispielsweise 10 bis 150ºC, vorzugsweise im Bereich von 20 bis 80ºC.
Bei diesem Verfahren kann das Chinazolinderivat der Formel I in Form der freien Base oder auch in Form eines Salzes mit der Säure der Formel H-Z, worin Z die oben angegebene Bedeutung besitzt, erhalten werden. Will man aus dem Salz die freie Base erhalten, so kann man das Salz nach einer herkömmlichen Methode mit einer geeigneten Base gemäß obiger Definition behandeln.
(b) Alkylierung eines Chinazolinderivats der Formel I, worin R¹ für Amino steht, zweckmäßigerweise in Gegenwart einer geeigneten Base gemäß obiger Definition.
Als Alkylierungsmittel eignen sich beispielsweise alle in der Technik für die Alkylierung von Amino zu Alkoxyalkylamino bekannten Reagenzien, beispielsweise ein alkoxysubstituiertes Alkylhalogenid, zum Beispiel ein C&sub1;&submin;&sub4;-alkoxysubstituiertes C&sub2;&submin;&sub4;- Alkylchlorid, -bromid oder -iodid, in Gegenwart einer geeigneten Base gemäß obiger Definition in einem geeigneten inerten Lösungsmittel oder Verdünnungsmittel gemäß obiger Definition und bei einer Temperatur im Bereich von beispielsweise 10 bis 140ºC, zweckmäßigerweise bei oder nahe 80ºC.
(c) Reduktive Aminierung eines alkoxysubstituierten Aldehyds mit einer Verbindung der Formel I, worin R¹ für Amino steht.
Die Reduktion kann nach einer der vielen für eine derartige Transformation bekannten Methoden durchgeführt werden. Beispielsweise kann man ein Hydrid-Reduktionsmittel verwenden, zum Beispiel ein Alkaliborhydrid oder -cyanoborhydrid, wie Natriumborhydrid oder Natriumcyanoborhydrid, oder ein Alkalialuminiumhydrid, wie Lithiumaluminiumhydrid. Die Umsetzung kann in Gegenwart eines geeigneten inerten Lösungsmittels oder Verdünnungsmittels, beispielsweise einem C&sub1;&submin;&sub4;-Alkohol, wie Methanol oder Ethanol, bei Einsatz eines Alkaliborhydrids oder -cyanoborhydrids, oder einem inerten Ether, wie Diethylether oder Tetrahydrofuran, bei Einsatz eines Alkalialuminiumhydrids, erfolgen.
Die Umsetzung erfolgt zweckmäßigerweise bei einer Temperatur im Bereich von beispielsweise -10 bis 110ºC, zweckmäßigerweise bei oder nahe Raumtemperatur.
(d) Alkylierung einer Verbindung der Formel I, worin R¹ für eine hydroxysubstituierte Alkylaminogruppe steht, zweckmäßigerweise in Gegenwart einer geeigneten Base gemäß obiger Definition.
Als Alkylierungsmittel eignen sich beispielsweise alle in der Technik für die Alkylierung einer hydroxysubstituierten Alkylaminogruppe zu einer alkoxysubstituierten Alkylaminogruppe bekannten Reagenzien, beispielsweise ein C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylchlorid, -bromid oder -iodid, in Gegenwart einer geeigneten Base gemäß obiger Definition in einem geeigneten inerten Lösungsmittel oder Verdünnungsmittel gemäß obiger Definition und bei einer Temperatur im Bereich von beispielsweise 10 bis 150ºC, zweckmäßigerweise bei oder nahe 80ºC.
(e) Reduktion einer Verbindung der Formel I, worin R¹ für eine alkoxysubstituierte Alkanoamidogruppe steht.
Die Reduktion kann nach einer der vielen für eine derartige Transformation bekannten Methoden durchgeführt werden. Beispielsweise kann man ein Hydrid-Reduktionsmittel verwenden, zum Beispiel ein Alkalialuminiumhydrid, wie Lithiumaluminiumhydrid. Die Umsetzung kann in Gegenwart eines geeigneten inerten Lösungsmittels oder Verdünnungsmittels, beispielsweise einem inerten Ether, wie Diethylether oder Tetrahydrofuran, erfolgen.
Die Umsetzung erfolgt zweckmäßigerweise bei einer Temperatur im Bereich von beispielsweise -10 bis 100ºC, zweckmäßigerweise bei oder nahe 60%.
Ist ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz eines Chinazolinderivats der Formel I gewünscht, beispielsweise ein Mono- oder Bis-Säureadditionssalz eines Chinazolinderivats der Formel I, so ist dieses beispielsweise durch Umsetzung der Verbindung mit beispielsweise einer geeigneten Säure nach einer herkömmlichen Methode erhältlich.
Wie oben bereits angegeben, besitzen die in der vorliegenden Erfindung definierten Chinazolinderivate antiproliferative Wirkung, die vermutlich auf die Klasse-I-Rezeptortyrosinkinase-Inhibitionswirkung der Verbindungen zurückzuführen ist. Diese Eigenschaften können beispielsweise nach einer oder mehreren der nachfolgend geschilderten Methoden beurteilt werden:
(a) In-vitro-Assay, bei dem die Fähigkeit einer Testverbindung zur Inhibierung des Enzyms EGF-Rezeptortyrosinkinase bestimmt wird. Rezeptortyrosinkinase wurde aus A-431-Zellen (aus humanem Vulvakarzinom) nach den nachfolgend beschriebenen Methoden, die an die Methoden gemäß Carpenter et al., J. Biol. Chem., 1979, 254, 4884, Cohen et al., J. Biol. Chem., 1982, 257, 1523 und Braun et al., J. Biol. Chem., 1984, 259, 2051, angelehnt sind, in teilgereinigter Form erhalten.
A-431-Zellen wurden unter Verwendung von Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DMEM) mit 5% foetalem Kalbsserum (FCS) bis zur Konfluenz gezüchtet. Die erhaltenen Zellen wurden in hypotonischem Borat/EDTA-Puffer bei pH 10,1 homogenisiert. Das Homogenisat wurde bei 0-4ºC 10 Minuten bei 400 g zentrifugiert. Der Überstand wurde bei 0-4ºC 30 Minuten bei 25.000 g zentrifugiert. Das pelletierte Material wurde in 30 mM Hepes-Puffer bei pH 7,4 mit 5% Glycerin, 4 mM Benzamidin und 1% Triton X-100 suspendiert, bei 0-4ºC 1 Stunde gerührt und erneut bei 0-4ºC 1 Stunde bei 100.000 g zentrifugiert. Der solubilisierte Rezeptortyrosinkinase enthaltende Überstand wurde in flüssigem Stickstoff aufbewahrt.
Für Testzwecke wurden 40 ul der so erhaltenen Enzymlösung zu einer Mischung aus 400 ul einer Mischung von 150 mM Hepes-Puffer bei pH 7,4, 500 uM Natriumorthovanadat, 0,1% Triton X-100, 10% Glycerin, 200 ul Wasser und 80 ul 25 mM DTT und 80 ul einer Mischung aus 12,5 mM Manganchlorid, 125 mM Magnesiumchlorid und destilliertem Wasser gegeben, was die Testenzymlösung ergab.
Jede Testverbindung wurde in einer Konzentration von 50 mM in Dimethylsulfoxid (DMSO) gelöst, wonach die Lösung mit 40 mM Hepes-Puffer mit 0,1% Triton X-100, 10% Glycerin und 10% DMSO zu einer Lösung mit einer Konzentration von 500 uM verdünnt wurde. Diese Lösung wurde mit dem gleichen Volumen einer Lösung von epidermalem Wachstumsfaktor (EGF; 20 ug/ml) vermischt.
[γ-³²P]ATP (3000 Ci/mM, 250 uCi) wurde mit einer Lösung von ATP (100 uM) in destilliertem Wasser auf ein Volumen von 2 ml verdünnt und mit dem gleichen Volumen einer Lösung von 4 mg/ml des Peptids Arg-Arg-Leu-Ile- Glu-Asp-Ala-Glu-Tyr-Ala-Ala-Arg-Gly in einer Mischung aus 40 mM Hepes-Puffer bei pH 7,4, 0,1%- Triton X-100 und 10% Glycerin versetzt.
Die Lösung (5 ul) aus Testverbindung und EGF- Mischung wurde der Testenzymlösung (10 ul) zugesetzt, wonach die Mischung 30 Minuten bei 0-4ºC inkubiert wurde. Nach Zusatz der ATP/Peptid-Mischung (10 ul) wurde 10 Minuten bei 25ºC inkubiert. Dann wurde die Phosphorylierungsreaktion durch Zusatz von 5%iger Trichloressigsäure (40 ul) und Rinderserumalbumin (BSA; 1 mg/ml, 5 ul) beendet. Die Mischung wurde bei 4ºC 30 Minuten stehengelassen und dann zentrifugiert. Ein Aliquot (40 ul) des Überstands wurde auf einen Streifen Phosphocellulosepapier Whatman p 81 aufgebracht. Der Streifen wurde in 75 mM Phosphorsäure (4 · 10 ml) gewaschen und trockengetupft. Die im Filterpapier vorhandene Radioaktivität wurde mit einem Flüssigkeitsszintillationszähler (Sequenz A) gemessen. Die Reaktionssequenz wurde in Abwesenheit von EGF (Sequenz B) und nochmals in Abwesenheit der Testverbindung (Sequenz C) wiederholt.
Die Rezeptortyrosinkinase-Inhibierung wurde folgendermaßen berechnet:
Dann wurde der Inhibierungsgrad über einen Bereich von Testverbindungskonzentrationen bestimmt, was einen IC&sub5;&sub0;-Wert ergab.
(b) In-vitro-Assay, bei dem die Fähigkeit einer Testverbindung zur Inhibierung des EGF-stimulierten Wachstums der humanen Nasopharyngealkrebs-Zellinie KB bestimmt wird.
In Vertiefungen eingebrachte KB-Zellen (Dichte von 1 · 10&sup4; - 1,5 · 10&sup4; Zellen pro Vertiefung) wurden in DMEM mit 5% FCS (aktivkohlegereinigt) 24 Stunden gezüchtet. Das Zellwachstum wurde nach 3 Tagen Inkubation anhand des Ausmaßes des Metabolismus von MTT-Tetrazolium-Farbstoff unter Lieferung einer bläulichen Farbe bestimmt. Danach wurde das Zellwachstum in Gegenwart von EGF bzw. in Gegenwart von EGF (10 ng/ml) und einer Testverbindung über einen Bereich von Konzentrationen bestimmt. Daraus konnte dann ein IC&sub5;&sub0;-Wert berechnet werden.
(c) In-vivo-Assay an einer Gruppe von athymischen Nacktmäusen (Stamm ONU : Alpk), bei dem die Fähigkeit einer (üblicherweise oral als in der Kugelmühle zerkleinerte Suspension in 0,5% Polysorbat verabreichte) Testverbindung zur Inhibierung des Wachstums von Xenografts der humanen Vulvaepithelzellenkarzinom-Zellinie A-431 bestimmt wird.
A-431-Zellen wurden in DMEM mit 5% FCS und 2 mM Glutamin in Kultur gehalten. Frisch kultivierte Zellen wurden durch Trypsinierung geerntet und subkutan (10 Millionen Zellen/0,1 ml/Maus) in beide Flanken einer Anzahl von Donor-Nacktmäusen injiziert. Wenn genügend Tumormaterial zur Verfügung stand (nach etwa 9 bis 14 Tagen) wurden Fragmente des Tumormaterials in die Flanken von Empfänger-Nacktmäusen transplantiert (Testtag 0). Im allgemeinen wurden am siebten Tag nach der Transplantation (Testtag 7) Gruppen von 7 bis 10 Mäusen mit Tumoren ähnlicher Größe ausgewählt, und es wurde mit der Verabreichung der Testverbindung begonnen. Die Testverbindung wurde über einen Zeitraum von insgesamt 13 Tagen (Testtage 7 bis 19 einschließlich) einmal täglich verabreicht. Bei einigen Studien wurde die Gabe der Testverbindung über den Testtag 19 hinaus fortgesetzt, beispielsweise bis zum Testtag 26. In jedem Fall wurden die Tiere am darauffolgenden Testtag getötet und aus Messungen von Tumorlänge und -breite das Endtumorvolumen berechnet. Die Ergebnisse wurden als prozentuale Inhibierung des Tumorvolumens gegenüber unbehandelten Kontrollen berechnet.
Wenngleich die pharmakologischen Eigenschaften der Verbindungen der Formel I wie erwartet mit Strukturänderungen variieren, kann die Wirkung von Verbindungen der Formel I im allgemeinen bei den folgenden Konzentrationen oder Dosen bei einem oder mehreren der obigen Tests (a), (b) und (c) demonstriert werden:
Test (a): IC&sub5;&sub0; im Bereich von z. B. 0,01-1 uM;
Test (b): IC&sub5;&sub0; im Bereich von z. B. 0,05-1 uM;
Test (c): 20 bis 90% Inhibierung des Tumorvolumens bei einer Tagesdosis im Bereich von z. B. 50 bis 200 mg/kg.
So sind beispielsweise die in den beigefügten Beispielen beschriebenen Verbindungen bei den Tests (a) und (b) in ungefähr den folgenden Konzentrationen oder Dosen wirksam.
Einen weiteren Gegenstand der Erfindung bildet eine pharmazeutische Zusammensetzung, die ein Chinazolinderivat der Formel I oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz davon gemäß obiger Definition in Abmischung mit einem pharmazeutisch unbedenklichen Verdünnungsmittel oder Träger enthält.
Die Zusammensetzung kann in geeigneter Form für die orale Verabreichung, beispielsweise als Tablette oder Kapsel, für die parenterate Injektion (einschließlich intravenöser, subkutaner, intramuskulärer, intravaskulärer Injektion oder Infusion) als sterile Lösung, Suspension oder Emulsion, für die topische Verabreichung als Salbe oder Creme oder für die rektale Verabreichung als Suppositorium vorliegen.
Die obigen Zusammensetzungen werden im allgemeinen nach herkömmlichen Methoden unter Verwendung üblicher Trägerstoffe hergestellt.
Das Chinazolinderivat wird einem Warmblüter normalerweise in einer Einzeldosis im Bereich von 5- 10000 mg pro Quadratmeter Körperfläche, d. h. ungefähr 0,1-200 mg/kg, verabreicht, was normalerweise eine therapeutisch wirksame Dosis liefert. Eine Einzeldosisform wie eine Tablette oder Kapsel enthält üblicherweise zum Beispiel 1-250 mg Wirkstoff. Vorzugsweise verwendet man eine Tagesdosis von 1- 100 mg/kg. Die Tagesdosis wird jedoch je nach dem behandelten Wirt, dem speziellen Verabreichungsweg und der Schwere der zu behandelnden Erkrankung variiert. Dementsprechend kann die optimale Dosis von dem einen bestimmten Patienten behandelnden Arzt bestimmt werden.
Einen weiteren Gegenstand der vorliegenden Erfindung bildet ein Chinazolinderivat der Formel I oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz davon gemäß obiger Definition zur Verwendung bei einer Methode zur Behandlung des menschlichen oder tierischen Körpers mittels Therapie.
Es wurde nun gefunden, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen antiproliferative Eigenschaften wie Antikrebseigenschaften besitzen, die vermutlich auf die Klasse-I-Rezeptortyrosinkinase- Inhibitionswirkung der Verbindungen zurückzuführen sind. Demgemäß ist zu erwarten, daß die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Verwendung bei der Behandlung von Krankheiten oder medizinischen Zuständen, die allein oder teilweise durch Klasse-I- Rezeptortyrosinkinasen vermittelt werden, geeignet sind, d. h. die Verbindungen können zur Hervorrufung einer Klasse-I-Rezeptortyrosinkinase-Inhibitionswirkung bei einem Warmblüter, der einer derartigen Behandlung bedarf, verwendet werden. Somit eignen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Verwendung bei der durch Inhibierung von Klasse-I-Rezeptortyrosinkinasen gekennzeichneten Behandlung der Proliferation von malignen Zellen, d. h. die Verbindungen können zur Hervorrufung einer antiproliferativen Wirkung, die allein oder teilweise durch die Inhibierung von Klasse- I-Rezeptortyrosinkinasen vermittelt wird, verwendet werden. Demgemäß ist zu erwarten, daß sich die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Verwendung bei der Behandlung von Psoriasis und/oder Krebs eignen, indem sie eine antiproliferative Wirkung liefern, insbesondere bei der Behandlung von Klasse-I-Rezeptortyrosinkinase-empfindlichen Krebserkrankungen wie Brust-, Lungen-, Kolon-, Rektum-, Magen-, Prostata-, Blasen-, Pankreas- und Eierstockkrebserkrankungen.
Gegenstand der Erfindung ist demgemäß die Verwendung eines Chinazolinderivats der Formel I oder eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes davon gemäß obiger Definition bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Verwendung bei der Hervorrufung einer antiproliferativen Wirkung bei einem Warmblüter, wie dem Menschen.
Wie oben bereits bemerkt, wird die Größe der für die therapeutische oder prophylaktische Behandlung einer bestimmten proliferativen Krankheit notwendigen Dosis je nach dem behandelten Wirt, dem Verabreichungsweg und der Schwere der zu behandelnden Erkrankung variiert. Vorgesehen ist eine Einzeldosis im Bereich von beispielsweise 1-200 mg/kg, vorzugsweise 1- 100 mg/kg.
Die vorstehend definierte antiproliferative Behandlung kann als alleinige Therapie angewandt werden oder neben dem erfindungsgemäßen Chinazolinderivat auch noch eine oder mehrere Antitumorsubstanzen umfassen, beispielsweise diejenigen, die beispielsweise unter Mitose-Inhibitoren, beispielsweise Vinblastin, Vindesin und Vinorelbin; Tubulinzerlegungsinhibitoren wie Taxol; Alkylierungsmitteln, beispielsweise cis-Platin, Carboplatin und Cyclophosphamid; Antimetaboliten, beispielsweise 5-Fluoruracil, Tegafur, Methotrexat, Cytosinarabinosid und Hydroxyharrstoff oder beispielsweise einer der bevorzugten Antimetaboliten gemäß der europäischen Patentanmeldung 239362, wie N-{5-[N-(3,4-Dihydro-2-methyl-4-oxochinazolin-6-yl- methyl)-N-methylamino]2-thenoyl}-L-glutaminsäure; interkalierenden Antibiotika, beispielsweise Adriamycin, Mitomycin und Bleomycin; Enzymen, beispielsweise Asparaginase; Topoisomerase-Inhibitoren, beispielsweise Etoposid und Camptothecin; die biologische Reaktion modifizierenden Mitteln, beispielsweise Interferon; und Antihormonen, beispielsweise Antiöstrogenen, wie Tamoxifen, oder beispielsweise Antiandrogenen, wie 4'-Cyano-3-(4- fluorphenylsulfonyl)-2-hydroxy-2-methyl-3' (trifluormethyl)-propionanilid, ausgewählt sind. Für eine derartige Kombinationsbehandlung werden die Einzelkomponenten der Behandlung gleichzeitig, hintereinander oder getrennt dosiert. Gegenstand der Erfindung ist demgemäß ein pharmazeutisches Produkt, enthaltend ein Chinazolinderivat der Formel I gemäß obiger Definition und eine zusätzliche Antitumorsubstanz gemäß obiger Definition, zur Kombinationsbehandlung von Krebs.
Wie oben bereits erwähnt, stellt das in der vorliegenden Erfindung definierte Chinazolinderivat ein wirksames Antikrebsmittel dar, wobei diese Eigenschaft vermutlich auf seine Klasse-I-Rezeptortyrosinkinase- Inhibitionswirkung zurückzuführen ist. Es ist zu erwarten, daß ein derartiges erfindungsgemäßes Chinazolinderivat ein breites Spektrum von Antikrebseigenschaften aufweist, da Klasse-I-Rezeptortyrosinkinasen an vielen geläufigen Krebserkrankungen des Menschen beteiligt sind, wie Leukämie und Brust-, Lungen-, Kolon-, Rektal-, Magen-, Prostata-, Blasen-, Pankreas- und Eierstockkrebs. Somit ist, zu erwarten, daß ein erfindungsgemäßes Chinazolinderivat Antikrebswirkung gegenüber diesen Krebserkrankungen besitzt. Außerdem ist zu erwarten, daß ein erfindungsgemäßes Chinazolinderivat gegenüber einer Reihe von Leukämien, malignen Lymphomen und soliden Tumoren wie Karzinomen und Sarkomen in Geweben wie Leber, Niere, Prostata und Pankreas wirksam ist.
Darüber hinaus ist zu erwarten, daß ein erfindungsgemäßes Chinazolinderivat gegenüber anderen Krankheiten mit übermäßiger Zellproliferation, wie Psoriasis, benigner Prostatahypertrophie (BPH) und Atherosklerose, wirksam ist.
Es ist außerdem zu erwarten, daß ein erfindungsgemäßes Chinazolinderivat für die Verwendung bei der Behandlung weiterer Störungen des Zellwachstums mit anomaler Zellsignalübertragung über Rezeptortyrosinkinase-Enzyme einschließlich bislang nicht identifizierter Rezeptortyrosinkinase-Enzyme geeignet ist. Dazu gehören beispielsweise Entzündungen, Angiogenese, vaskuläre Restenose, immunologische Störungen, Pankreatitis, Nierenleiden und Blastocytenreifung und -implantation.
Die Erfindung wird nun anhand der folgenden Beispiele erläutert, in denen, sofern nicht anders vermerkt:
(i) Eindampfungen am Rotationsverdampfer im Vakuum durchgeführt wurden und Aufarbeitungsmethoden nach Abfiltrieren von restlichen Feststoffen, wie Trocknungsmitteln, durchgeführt wurden; als Trocknungsmittel für organische Lösungen diente Magnesiumsulfat, sofern nicht anders vermerkt;
(ii) alle Arbeiten bei Raumtemperatur, d. h. im Bereich von 18 bis 25ºC, und unter einem Inertgas, wie Argon, durchgeführt wurden;
(iii) Säulenchromatographie (nach der Flash- Methode) und Mitteldruck-Flüssigkeitschromatographie (MPLC) an Merck Kieselgel (Art. 9385) oder Merck Lichroprep RP-18 (Art. 9303) Reversed Phase Kieselgel von E. Merck, Darmstadt, Deutschland, vorgenommen wurden;
(iv) Ausbeuten nur zur Erläuterung angegeben sind und nicht unbedingt das erzielbare Maximum darstellen;
(v) Schmelzpunkte auf einem automatischen Schmelzpunktmeßgerät Mettler SP62, einer Ölbadapparatur oder einer Koffler-Heizbank bestimmt wurden;
(vi) die Strukturen der Endprodukte der Formel I durch kernmagnetische Resonanz (NMR; im allgemeinen Protonen-NMR) und Massenspektren bestätigt wurden; chemische Verschiebungen bei der Protonen-NMR wurden auf der Delta-Skala gemessen, wobei die Signalmultiplizitäten folgendermaßen angegeben sind: s: Singulett, d: Dublett, t: Triplett, m: Multiplett; sofern nicht anders vermerkt, wurden Endprodukte der Formel I für die Bestimmung von NMR-Werlen in CD&sub3;SOCD&sub3; gelöst;
(vii) Zwischenprodukte nicht generell vollständig charakterisiert wurden und die Reinheit mittels Dünnschichtchromatographie (TLC), Infrarot- (IR-) oder NMR-Analyse abgeschätzt wurde;
(viii) die folgenden Abkürzungen verwendet wurden:
DMF N,N-Dimethylformamid
THF Tetrahydrofuran
DMA N,N-Dimethylacetamid.

Beispiel 1

Eine gerührte Mischung aus 3- Methoxypropionaldehyddimethylacetal (9,4 g) und Wasser (40 ml) wurde mit konzentrierter Salzsäure (0,42 ml) versetzt und die erhaltene Mischung 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Dann wurde die Mischung durch Zugabe einer gesättigten wäßrigen Natriumhydrogencarbonatlösung neutralisiert. Die so erhaltene Mischung wurde zu einer gerührten Mischung aus 6-Amino-4-(3'-chlor-4'-fluoranilino)chinazolinhydrochlorid (3 g), Eisessig (0,6 ml) und Ethanol (400 ml) gegeben. Nach Zusatz von Natriumcyanoborhydrid (1,7 g) wurde die Mischung 16 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nach Eindampfen der Mischung wurde der Rückstand zwischen Methylenchlorid und gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung verteilt. Die organische Phase wurde mit gesättigter Kochsalzlösung gewaschen, getrocknet (MgSO&sub4;) und eingedampft. Nach säulenchromatographischer Reinigung des Rückstands mit einem Gemisch aus Methylenchlorid und Methanol im Verhältnis 100 : 3 als Elutionsmittel wurde 4-(3'-Chlor- 4'-fluoranilino)-6-(3-methoxypropylamino)chinazolin (0,72 g, 19%), Fp. 176-177ºC, erhalten;
NMR-Spektrum: 1,9 (m, 2H), 3,22 (m, 2H), 3,29 (s, 3H), 3,5 (t, 2H), 6,14 (t, 1H), 7,13 (d, 1H), 7,41 (t, 1H), 7,52 (d, 1H), 7,82 (m, 1H), 8,13 (m, 2H), 8,36 (s, 1H), 9,4 (breites s, 1H);
Elementaranalyse: Gefunden: C 59,6; H 4,9; N 15,3;
Berechnet für C&sub1;&sub8;H&sub1;&sub8;ClFN&sub4;O: C 59,9; H 5,0; N 15,5%.
Das als Edukt verwendete 6-Amino-4-(3'-chlor- 4'-fluoranilino)chinazolin wurde folgendermaßen erhalten:
Eine gerührte Mischung aus 4-Chlor-6- nitrochinazolin (Europäische Patentanmeldung 0566226, Beispiel 8; 5 g), THF (10 ml) und DMF (10 ml) wurde mit 3'-Chlor-4'-fluoranilin (3,6 g) versetzt. Die erhaltene Mischung wurde 5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Der Niederschlag wurde isoliert und zwischen Wasser und einem Gemisch aus Methylenchlorid und Methanol im Verhältnis 9 : 1 verteilt. Die wäßrige Phase wurde durch Zugabe von gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung neutralisiert und erneut mit Methylenchlorid extrahiert. Die organischen Phasen wurden vereinigt und eingedampft. Der Rückstand wurde unter einem Gemisch aus Ethanol und Wasser im Verhältnis 9 : 1 verrieben. Der anfallende Feststoff wurde isoliert und getrocknet. So wurde 9:-(3'-Chlor-4'- fluoranilino)-6-nitrochinazolin (2,5 g) erhalten.
Eine Mischung aus einem Teil (2,3 g) des so erhaltenen Materials, Katalysator (Palladium auf Kohle, 10%; 0,4 g), Ethanol (25 ml) und DMF (25 ml) wurde unter Wasserstoff 2 Stunden gerührt. Die Mischung wurde filtriert und das Filtrat eingedampft. Der Rückstand wurde unter einem Gemisch aus Ethanol und Wasser im Verhältnis 4 : 1 verrieben. Der anfallende Feststoff wurde isoliert und getrocknet. So wurde 6-Amino-4-(3'- chlor-4'-fluoranilino)chinazolin (0,35 g, 17%) erhalten;
NMR-Spektrum: 5,6 (breites s, 2H), 7,27 (m, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,41 (t, 1H), 7,55 (d, 1H), 7,8 (m, 1H), 8,19 (m, 1H), 8,38 (s, 1H), 9,53 (breites s, 1H);
Elementaranalyse: Gefunden: C 58,1; H 3,6: N 19,0;
Berechnet für C&sub1;&sub4;H&sub1;&sub0;ClFN&sub4;: C 58,2; H 3,5: N 19,4%.

Beispiel 2

Eine gerührte Mischung aus 2-Methoxy- acetaldehyddimethylacetal (12,6 g) und Wasser (59 ml) wurde mit konzentrierter Salzsäure (0,84 ml) versetzt und die erhaltene Lösung 2 Stunden auf 40ºC erhitzt. Dann wurde die Lösung auf Raumtemperatur abgekühlt und durch Zugabe von gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung auf einen pH-Wert von 8 eingestellt. Die so erhaltene Mischung wurde zu einer gerührten Suspension von 6-Amino-4-(3',4'-difluoranilino)- chinazolin-hydrochlorid (6,4 g) in einer Mischung aus Eisessig (1,26 g) und Ethanol (750 ml) gegeben. Nach Zusatz von Natriumcyanoborhydrid (2,64 g) wurde die Mischung 16 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nach Eindampfen der Mischung wurde der Rückstand zwischen Methylenchlorid und Wasser verteilt. Die organische Phase wurde getrocknet (MgSO&sub4;) und eingedampft. Nach säulenchromatographischer Reinigung des Rückstands mit zunehmend polarer werdenden Gemischen aus Methylenchlorid und Methanol als Elutionsmittel wurde 4-(3'4'-Difluoranilino)-6-(2-methoxyethylamino)- chinazolin (5,2 g, 69%), Fp. 150-153ºC, erhalten;
NMR-Spektrum: (CD&sub3;SOCD&sub3; + CD&sub3;CO&sub2;D) 3,33 (s, 3H), 3,43 (t, 2H), 3,63 (t, 2H), 7,5 (m, 5H), 7,96 (m, 1H), 8,56 (s, 1H)
Elementaranalyse: Gefunden: C 61,1; H 4,9; N 16,5;
Berechnet für C&sub1;&sub7;H&sub1;&sub6;F&sub2;N&sub4;O 0,2H&sub2;O: C 61,1; H 4,95; N 16,8%.
Das als Edukt verwendete 6-Amino-4-(3',4'- difluoranilino)chinazolin-hyrochlorid wurde folgendermaßen erhalten:
Eine gerührte Mischung aus 4-Chlor-6- nitrochinazolin (44 g), Triethylamin (29,2 ml) und Methylenchlorid (400 ml) wurde mit 3',4'-Difluoranilin (27 g) versetzt. Die erhaltene Mischung wurde 16 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Der Niederschlag wurde isoliert, mit Methylenchlorid und Aceton gewaschen und getrocknet. So wurde 4-(3',4'- Difluoranilino)-6-nitrochinazolin-hydrochlorid (61,3 g, 82%) erhalten.
Eine Mischung aus einem Teil (30 g) des so erhaltenen Materials, Katalysator (Palladium auf Kohle, 10%; 3 g), Ethanol (350 ml) und DMA (700 ml) wurde unter Wasserstoff 9 Stunden gerührt. Die Mischung wurde filtriert und das Filtrat eingedampft. Der Rückstand wurde nacheinander mit DMA, Ethanol und Diethylether gewaschen und getrocknet. So wurde 6-Amino-4-(3',4'- difluoranilino)chinazolin-hydrochlorid (12,8 g, 40%), Fp. 235-238ºC, erhalten;
NMR-Spektrum: 7,45 (m, 1H), 7,56 (m, 3H), 7,77 (d, 1H), 7,91 (m, 1H), 8,72 (s, 1H), 11,1 (breites s, 1H);
Elementaranalyse: Gefunden: C 54,5; H 3,5; N 18,1;
Berechnet für C&sub1;&sub4;H&sub1;&sub0;F&sub2;N&sub4;HCl: C 54,5; H 3,6; N 18,1%.

Beispiel 3

Nach einer analogen Verfahrensweise zur reduktiven Aminierung wie in Beispiel 1 wurde 6-Amino- 4-(3'-chlor-4'-fluoranilino)chinazolin-hydrochlorid mit 2-Methoxyacetaldehyddimethylacetal umgesetzt, was 4- (3'-Chlor-4'-fluranilino)-6-(2-methoxyethylamino)- chinazolin in 8% Ausbeute, Fp. 152-154ºC, ergab;
NMR-Spektrum: 3,32 (s, 3H), 3,4 (t, 2H), 3,62 (t, 2H), 6,25 (t, 1H), 7,2 (d, 1H), 7,34 (m, 1H), 7,43 (t, 1H), 7,55 (d, 2H), 7,82 (m, 1H), 8,13 (m, 1H), 8,41 (s, 1H), 9,5 (s, 1H);
Elementaranalyse: Gefunden: C 57,9; H 4,8; N 15,3;
Berechnet für C&sub1;&sub7;K&sub1;&sub6;ClFN&sub4;O 0,33 H&sub2;O 0,1 EtOAc: C 57,7; H 4,8; N 15,5%.

Beispiel 4

Nach einer analogen Verfahrensweise zur reduktiven Aminierung wie in Beispiel 1 wurde 6-Amino- 4-(2',4'-difluoranilino)chinazolin mit. 2-Methoxyacetaldehyddimethylacetal umgesetzt, was 4-(2',4'- Difluoranilino)-6-(2-methoxyethylamino)chinazolin in 28% Ausbeute, Fp. 175-176ºC, ergab;
NMR-Spektrum: 3,31 (s, 3H), 3,38 (t, 2H), 3,61 (t, 2H), 6,19 (t, 1H), 7,07-7,18 (m, 2H), 7,27-7,38 (m, 2H), 7,48-7,6 (m, 2H), 8,2 (s, 1H), 9,3 (breites s, 1H);
Elementaranalyse: Gefunden: C 61,7; H 4,9; N 16,9;
Berechnet für C&sub1;&sub7;H&sub1;&sub6;F&sub2;N&sub4;O: C 61,8; H 4,9; N 17,0%.
Das als Edukt verwendete 6-Amino-4-(2',4'- difluoranilino)chinazolin wurde folgendermaßen erhalten:
Eine Mischung aus 2',4'-Difluoranilin (3,3 ml), 4-Chlor-6-nitrochinazolin (6 g) und Isopropanol (150 ml) wurde unter Rühren 3 Stunden zum Rückfluß erhitzt. Nach dem Abkühlen der Mischung auf Raumtemperatur wurde der Niederschlag isoliert, mit Isopropanol und Aceton gewaschen und getrocknet. So wurde 4-(2',4'- Difluoranilino)-6-nitrochinazolin-hydrochlorid (8,5 g) erhalten.
Eine Mischung aus dem so erhaltenen Material, Katalysator (Palladium auf Kohle, 10%; 4 g), Ethanol (1500 ml) und Trifluoressigsäure (8,4 ml) wurde unter Wasserstoff 3 Stunden gerührt. Die Mischung wurde filtriert und das Filtrat eingedampft. Der Rückstand wurde unter konzentrierter wäßriger Ammoniumhydroxidlösung verrieben und der anfallende Feststoff mit Essigsäureethylester extrahiert. Die organische Lösung wurde getrocknet (MgSO&sub4;) und eingedampft. So wurde 6- Amino-4-(2',4'-difluoranilino)chinazolin (5,5 g), Fp. 232-234ºC, erhalten;
NMR-Spektrum: 5,6 (m, 2H), 7,13 (m, 1H), 7,26 (m, 2H), 7,33 (m, 1H), 7,53 (m, 1H), 7,57 (m, 1H), 8,2 (s, 1H), 9,25 (breites s, 1H).

Beispiel 5

Eine Mischung aus 4-(3'-Chlor-4'-fluoranilino)- 6-(2-isopropoxyacetamido)chinazolin (2,6 g), Lithiumaluminiumhydrid (1 M in Diethylether, 26 ml) und THF (200 ml) wurde gerührt und 1 Stunde zum Rückfluß erhitzt. Nach dem Abkühlen auf Raumtemperatur wurde die Mischung zur Zerstörung des Reduktionsmittelüberschusses nacheinander mit Eisessig und Methanol versetzt. Dann wurde die Mischung eingedampft und der Rückstand zwischen Methylenchlorid und 2 N wäßriger Natriumhydroxidlösung verteilt. Die organische Phase wurde getrocknet und eingedampft. Nach säulenchromatographischer Reinigung des Rückstands mit einem Gemisch aus Methylenchlorid und Methanol im Verhältnis 100 : 3 als Elutionsmittel wurde 4-(3'-Chlor- 4'-fluoranilino)-6-(2-isopropoxyethylamino)chinazolin (0,6 g), Fp. 179-181ºC, erhalten;
NMR-Spektrum: 1,1 (d, 6H), 3,35 (m, 2H), 3,6 (m, 3H), 6,2 (t, 1H), 7,2 (d, 1H), 7,3 (m, 1H), 7,4 (m, 1H), 7,55 (d, 1H), 7,8 (m, 1H), 8,1 (m, 1H), 8,4 (s, 1H), 9,5 (s, 1H);
Elementaranalyse: Gefunden: C 60,8; H 5,2; N 14,8;
Berechnet für C&sub1;&sub9;H&sub2;&sub0;ClFN&sub4;O: C 6 0,9; H 5,4; N 14,9%.
Das als Edukt verwendete 4-(3'-Chlor-4'- fluoranilino)-6-(2-isopropoxyacetamido)chinazolin wurde folgendermaßen erhalten:
Eine Mischung aus 2-Isopropoxyessigsäure (4,1 g), N,N'-Dicyclohexylcarbodiimid (3,5 g) und Methylenchlorid (75 ml) wurde bei Raumtemperatur 30 Minuten gerührt. Die erhaltene Mischung wurde filtriert, und das Filtrat wurde zu einer gerührten Lösung von 6-Amino-4(3'-Chlor-4'-fluoranilino)- chinazolin (4,2 g) in DMA (75 ml) gegeben. Die Mischung wurde bei Raumtemperatur 16 Stunden gerührt und dann eingedampft. Der Rückstand wurde mit zunehmend polarer werdenden Gemischen aus Methylenchlorid und Methanol als Elutionsmittel säulenchromatographisch gereinigt. Die so erhaltene Substanz wurde unter Diethylether verrieben. So wurde 4-(3'-Chlor-4'-fluoranilino)-6-(2- isopropoxyacetamido)chinazolin (3,65 g), Fp. 163-166ºC, erhalten;
NMR-Spektrum: 1,2 (d, 6H), 3,7 (m, 1H), 4,1 (s, 2H), 7,4 (t, 1H), 7,8 (m, 2H), 8,0 (m, ZH), 8,1 (m, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,65 (d, 1H), 9,8 (breites s, 1H), 9,9 (breites s, 1H).
Die im unmittelbar vorhergehenden Text als Edukt verwendete 2-Isopropoxyessigsäure wurde folgendermaßen erhalten:
Eine gerührte Mischung aus Isopropanol (500 ml), Rhodium(II)-acetat (0,3 g) und Methylenchlorid (500 ml) wurde innerhalb von 15 Minuten mit Diazoessigsäureethylester (30 g) versetzt. Die Mischung wurde 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt und dann eingedampft. Der Rückstand wurde mit Isohexan als Elutionsmittel säulenchromatographisch gereinigt. So wurde 2-Isopropoxyessigsäureethylester (10 g) erhalten.
Eine Mischung aus dem so erhaltenen Material, 5 N wäßriger Natriumhydroxidlösung (20 ml) und Methanol (50 ml) wurde bei Raumtemperatur 2 Stunden gerührt. Der nach dem Eindampfen der Mischung verbleibende Rückstand wurde durch Zugabe von konzentrierter Salzsäure angesäuert und mit Methylenchlorid extrahiert. Nach Eindampfen der organischen Phase wurde 2-Isopropoxyessigsäure (4,1 g) erhalten.

Beispiel 6

Im folgenden werden repräsentative pharmazeutische Dosierungsformen, die die Verbindung der Formel I oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz davon (im folgenden Verbindung X) enthalten, für die therapeutische oder prophylaktische Anwendung beim Menschen erläutert:

(a) Tablette I mg/Tablette

Verbindung X 100
Lactose Ph. Eur. 182,75
Croscarmellose-Natrium 12,0
Maisstärkepaste (5% w/v Paste) 2,25
Magnesiumstearat 3,0

(b) Tablette II mg/Tablette

Verbindung X 50
Lactose Ph. Eur. 223,75
Croscarmellose-Natrium 6,0
Maisstärke 15,0
Polyvinylpyrrolidon 2,25
Magnesiumstearat 3,0

(c) Tablette III mg/Tablette

Verbindung X 1,0
Lactose Ph. Eur. 93,25
Croscarmellose-Natrium 4,0
Maisstärkepaste (5% w/v Paste) 0,75
Magnesiumstearat 1,0

(d) Kapsel mg/Kapsel

Verbindung · 10
Lactose Ph. Eur. 488,5
Magnesiumstearat 1,5

(e) Injektion I (50 mg/ml)

Verbindung · 5,0% w/v
1 M Natriumhydroxidlösung 5,0% w/v
0,1 M Salzsäure 1,5
(zur Einstellung eines pH- Werts von 7,6)
Polyethylenglykol 400 4, 5% w/v
Wasser für Injektionszwecke ad 100%

(f) Injektion II (10 mg/ml)

Verbindung · 1, 0% w/v
Natriumphosphat BP 3,6% w/v
0,1 M Natriumhydroxidlösung 15,0% v/v Wasser für Injektionszwecke ad 100%

(g) Injektion III (1 mg/ml, auf pH 6 gepuffert)

Verbindung · 0,1% w/v
Natriumphosphat BP 2,26% w/v
Citronensäure 0,38% w/v
Polyethylenglykol 400 3,5% w/v Wasser für Injektionszwecke ad 100%

Anmerkung

Die obigen Formulierungen können nach in der Pharmazie gut bekannten herkömmlichen Methoden erhalten werden. Die Tabletten (a) bis (c) können mit herkömmlichen Mitteln magensaftresistent überzogen werden, beispielsweise mit einem Überzug von Celluloseacetatphthalat.

Claims

1. Chinazolinderivat der Formel I

worin n für 2 steht, R² jeweils unabhängig voneinander Fluor, Chlor oder Brom bedeutet und R¹ für C&sub1;&submin;&sub4;-Alkoxy-C&sub2;&submin;&sub4;-alkylamino steht, oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz davon.

2. Chinazolinderivat der Formel I nach Anspruch 1, worin (R²)n für 2',4'-Difluor, 2',4'-Dichlor, 3',4'-Difluor, 3',4'-Dichlor, 3'-Fluor-4'-chlor oder 3'-chlor-4'-fluor steht und

R¹ für 2-Methoxyethylamino, 2-Ethoxyethylamino, 3-Methoxypropylamino oder 3-Ethoxypropylamino steht, oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Säureadditionssalz davon.

3. Chinazolinderivat der Formel I nach Anspruch 1, worin (R²)n für 3',4'-Difluor oder 3'-Chlor-4'-fluor steht und

R¹(3'-Chlor 2-Methoxyethylamino oder 3-Methoxypropylamino)- stehinazolin

oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Säureadditionssalz davon handelt.

4. Chinazolinderivat der Formel I nach Anspruch 1, bei dem es sich um:

4-(3'-Chlor-4'-fluoranilino)-6-(3-methoxypropylamino)- chinazolin

oder ein pharmazeutisch unbedenkliches, Säureadditionssalz davon handelt.

5. Chinazolinderivat der Formel I nach Anspruch 1, bei dem es sich um:

4-(3',4'-Difluoranilino)-6-(2-methoxyethylamino)- chinazolin

oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Säureadditionssalz davon handelt.

6. Chinazolinderivat der Formel I nach Anspruch 1, bei dem es sich um:

4-(3'-Chlor-4'-fluoranilino)-6-(2-methoxyethylamino)- chinazolin

oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Säureadditionssalz davon handelt.

7. Chinazolinderivat der Formel I nach Anspruch 1, bei dem es sich um:

4-(2',4'-Difluoranilino)-6-(2-methoxyethylamino)- chinazolin

oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Säureadditionssalz davon handelt.

8. Verfahren zur Herstellung eines Chinazolinderivats der Formel I oder eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes davon nach einem der Ansprüche 1 bis 7, bei dem man:

(a) ein Chinazolin der Formel II

worin Z für eine austauschbare Gruppe steht, mit einem Anilin der Formel III

umsetzt;

(b) ein Chinazolinderivat der Formel I, worin R¹ für Amino steht, alkyliert;

(c) einen alkoxysubstituierten Aledhyd mit einer Verbindung der Formel I, worin R¹ für Amino steht, reduktiv aminiert;

(d) eine Verbindung der Formel I, worin R¹ für eine hydroxysubstituierte Alkylaminogruppe steht, alkyliert oder

(e) eine Verbindung der Formel I, worin R¹ für eine alkoxysubstituierte Alkanoamidogruppe steht, reduziert;

und gegebenenfalls zur Herstellung eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes eines Chinazolinderivats der Formel I die Verbindung nach einem an sich bekannten Verfahren mit einer geeigneten Säure umsetzt.

9. Pharmazeutische Zusammensetzung, enthaltend ein Chinazolinderivat der Formel I oder ein pharmazeutisch unbedenkliches Salz davon nach einem der Ansprüche 1 bis 7 in Abmischung mit einem pharmazeutisch unbedenklichen Verdünnungsmittel oder Träger.

10. Verwendung eines Chinazolinderivats der Formel I oder eines pharmazeutisch unbedenklichen Salzes davon nach einem der Ansprüche 1 bis 7 bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Verwendung bei der Hervorrufung einer antiproliferativen Wirkung bei einem Warmblüter.