DE3855525T2

DE3855525T2 - Verwendung eines Protein gebundenen Polysaccharid Zur Herstellung eines Arzneimittels für die Behandlung von AIDS.

Info

Publication number: DE3855525T2
Application number: DE3855525T
Authority: DE
Inventors: Takao Furusho; Kunitaka Hirose; Junji Kakuchi; Kenichi Matsunaga; Shigeaki Muto; Koichi Niimura; Yoshiharu Oguchi; Minoru Oohara; Norifumi Sugita; Masaaki Takahashi; Chikao Yoshikumi
Original assignee: Kureha Corp
Current assignee: Kureha Corp
Priority date: 1987-06-18
Filing date: 1988-06-17
Publication date: 1997-04-10
Anticipated expiration: 2008-06-18
Also published as: AU599241B2; KR900007498B1; KR890000100A; AU1779488A; DE3855525D1; EP0295956A2; CA1332650C; EP0295956B1; US5089481A; EP0295956A3

Description

Die vorliegende Erfindung betrifft ein Protein-gebundenes Polysaccharid, das aus Meeresalgen, die zu den Klassen Phaeophyceae, Rhodophyceae und Chlorophyceae gehören, erhältlich ist, für die Verwendung bei der Behandlung von AIDS.
In den letzten Jahren ist eine neue Art einer scheinbar unheilbaren Erkrankung, nämlich AIDS (Acquired Immunodeficiency Syndrome) aufgetreten. Es besteht ein starker Bedarf an der Entwicklung von therapeutischen Mitteln gegen diese Erkrankung. Gegenwärtig ist ein Nudeinsäurederivat mit der Bezeichnung 3'-Azido-3'-desoxythymidin (AZT) das einzig verfügbare therapeutische Mittel gegen AIDS. Als Ursache für diese Erkrankung ist bereits von zahlreichen Forschern beschrieben worden, daß das menschliche Imunschw-chevirus (HIV), bei dem es sich um ein Retrovirus handelt, an einen menschlichen T4-Lymphozyten adsorbiert wird, wobei dieser Lymphozyt und nacheinander weitere Lymphozyten infiziert werden, bis schließlich das Immunsystem zerstört ist.
Die Erfinder der vorliegenden Anmeldung haben bereits viele Proteingebundene Polysaccharide aufgefunden, die als Mittel zur Modifizierung der biologischen Reaktion (Biological Response Modifier, BRM) für das Immunsystem dienen können. Z. B. haben sie die nachstehenden Polysaccharide mit einer Antikrebs-Aktivität in GB-A-1 331 513 vorgeschlagen.
Polysaccharide, die aus einem flüssigen Extrakt eines Myceliums eines Pilzes der Spezies Basidiomycetes oder aus einer Kulturbrühe dieser Spezies erhalten werden, wobei die Polysaccharide frei oder im wesentlichen frei von Verunreinigungen sind, die ursprünglich in dem flüssigen Extrakt oder in der Kulturbrühe vorhanden sind und wobei sie dadurch charakterisiert sind, daß sie einen wasserlöslichen amorphen Feststoff, der nicht hygroskopisch und nicht dialysierbar ist, darstellen; ein positives Ergebnis beim Test auf das Vorhandensein von Glucose nach Hydrolyse mit 1 N Schwefelsäure ergeben; negative Ergebnisse ergeben, wenn sie der Eisen(III)-chlorid-Reaktion zur Bestimmung des Vorhandenseins von Phenolen und der Fehling-Reaktion zur Bestimmung des Vorhandenseins von reduzierenden Zuckern unterworfen werden; positive Ergebnisse ergeben, wenn sie der Anisaldehyd-Schwefelsäure-Reaktion, der Molisch-Reaktion mit α- Naphthol, der Anthron-Schwefelsäure-Reaktion, der Tryptophan-Schwefelsäure-Reaktion, der Chomotropsäure-Schwefelsäure-Reaktion, der Anilin- Salzsäure-Reaktion, der Resorcin-Salzsäure-Reaktion, der Carbazol-Cystein-Schwefelsäure-Reaktion, der Tollens-Reaktion und der Thioglykol- Schwefelsäure-Reaktion unterworfen werden; nur einen Punkt an der Anodenseite zeigen, wenn sie einer Elektrophorese in einer 0,05 M Natriumboratlösung für 90 Minuten unter Verwendung einer Celluloseacetatmembran bei 20 bis 25 V/cm unterworfen werden; und keine antimikrobielle Wirkung gegenüber Bakterien, Pilzen und Hefen, wie Staphylococcus aureus, Eschenchia coli, Bacillus subtilis, Aspergillus niger und Candida albicans, zeigen.
EP-A-209 078 beschreibt ein Antikrebsmittel, das aus der Alge Chlorella extrahiert wird. Das Antikrebsmittel ist ein Glycoprotein mit einem mittleren Molekulargewicht von 4,5 × 10&sup4; Da, dessen Proteinkomponente aus einer α-Helix und einem Zufallsknäuel besteht und dessen Zuckerkomponente aus einem β-Polysaccharid besteht. Das Circulardichroismus-Spektrum weist einen positiven Peak bei 275 nm auf.
In J. Cancer Res. Clin. Oncol., Bd. 113 (1987), S. 413-416 wird ein wäßriger Extrakt der roten Meeresalge Schizymenia pacifica beschrieben, der reverse Transkriptase inhibiert. Das aktive Prinzip in dem Extrakt weist ein scheinbares Molekulargewicht von mehr als 100 000 Dalton auf. Die inhibitorische Aktivität des Extraktes geht nach Kochen bei 100ºC in 0,67 N HCl und nach Behandlung mit 100 mM NaIO&sub4; verloren. Die inhibitorische Aktivität geht jedoch nicht nach Pronase-Verdau verloren.
JP-A-57-011116 beschreibt ein karzinostatisches Mittel, das ein Glycoprotein enthält, das von Mikroalgen als aktiver Bestandteil abgetrennt wird. Das Glycoprotein weist ein Molekulargewicht von 121 000 Da, einen isoelektrischen Punkt von 8,6 pH, ein Glycosid/Protein-Verhältnis von etwa 1:1 und einen Protein-Helix-Gehalt von etwa 19 % auf.
EP-A-295 961 beschreibt ein Polysaccharid, das aus einem prokaryontischen oder eukaryontischen Organismus erhältlich ist. Das Polysaccharid kann nach einem Verfahren erhalten werden, das (i) die Extraktion eines prokaryontischen oder eukaryontischen Organismus mit einem wäßrigen Lösungsmittel und eine Reinigungsbehandlung des Extrakts oder (ii) eine Reinigungsbehandlung des Überstands einer Brühe, in der der Mikroorganismus kultiviert worden ist, umfaßt.
Die Erfinder der vorliegenden Anmeldung haben festgestellt, daß das Protein-gebundene Polysaccharid mit der Funktion eines BRM einen großen Einfluß auf das Immunsystem ausüben kann, und als Ergebnis vieler Studien haben sie festgestellt, daß eine Substanz, die aus Meeresalgen, die zu den Klassen Phaeophyceae, Rhodophyceae und Chlorophyceae gehören, extrahiert wird, eine inhibierende Aktivität gegen die Adsorption von HIV an aus dem Menschen stammende Lymphozyten hat und so wirkt, daß die Aktivität von reverser Transkriptase (Rtase), bei der es sich um ein Enzym handelt, das für die Proliferation von HIV essentiell ist, inhibiert wird.
Erfindungsgemäß wird die Verwendung eines Protein-gebundenen Polysaccharids bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von AIDS ermöglicht, wobei das Protein-gebundene Polysaccharid durch Extrahieren einer Meeresalge, die unter Nemacystus decipines, Kjellmaniella gyrate, Laminaria japonica, Undaria pinnatifida, Hizikia fusiforme, Porphyra tenera, Gelidium amansii, Gloiopeltis complanate, Gracilaria rerrucosa, Hemineura schmitziana, Ulva pertusa, Spirogyra arcta, Codium fragile und Acetabularia ryukyuensis ausgewählt ist, mit einem wäßrigen Lösungsmittel, welches Wasser oder eine wäßrige Lösung eines wasserlöslichen organischen Lösungsmittels, einer Säure, einer Base oder eines Salzes ist, für 20 Minuten bis 20 Stunden bei 4 bis 120ºC unter Verwendung eines 5- bis 200-fachen Überschusses an Extraktionslösung über die Alge, bezogen auf deren Trockengewicht, und durch Unterwerfen des Extrakts mindestens einer Reinigung, die unter Aussalzen, Dialyse, Ultrafiltration, Umkehrosmose, Gelfiltration und Fällung mittels eines organischen Lösungsmittels ausgewählt ist, erhältlich ist, und wobei das Protein-gebundene Polysaccharid folgende Eigenschaften besitzt:
(a) positive Ergebnisse, wenn es einer Reaktion mit α-Naphthol- Schwefelsäure, Indol-Schwefelsäure, Anthron-Schwefelsäure oder Phenol- Schwefelsäure unterworfen wird, und, nach Hydrolyse durch HCl, wenn es dem Lowry-Fol in-Verfahren oder der Ninhydrin-Reaktion unterworfen wird;
(b) Elementaranalyse 20 bis 55 % Kohlenstoff, 3 bis 9 % Wasserstoff und mehr als 0 % bis weniger als 16 % Stickstoff;
(c) pH von 6,0 bis 7,5;
(d) die Zuckerkomponente enthält mindestens zwei Arten von Sacchariden, die unter Glucose, Glucuronsäure, Xylose und Mannose ausgewählt sind, und die Proteinkomponente enthält mindestens drei Arten von Aminosäuren, die unter Asparaginsäure, Lysin, Leucin, Glutaminsäure und Glycin ausgewählt sind;
(e) das Infrarotabsorptionsspektrum weist bei 3600 bis 3200 cm-¹ und bei 1700 bis 1600 cm&supmin;¹ Maxima auf;
(f) ein Molekulargewicht von 10³ bis 2 × 10&sup5; nach Bestimmung mittels Gelfiltrationschromatographie; und
(g) löslich in Wasser und wäßrigen Lösungen, die wasserlösliche Alkohole, Säuren oder Basen enthalten, jedoch unlöslich in Chloroform, Benzol und Ether.
Das erfindungsgemäße Protein-gebundene Polysaccharid wird nachstehend als die vorliegende Substanz bezeichnet.
Meeresalgen werden grob in drei Klassen eingeteilt: Phaeophyceae, Rhodophyceae und Chlorophyceae. Die Klassifikation der in der vorliegenden Erfindung in Betracht gezogenen Algen entspricht Y. Yamada und S. Segawa, "An Illustrated Book of the Japanese Marine Algae" (veröffentlicht von Hoikusha am 1. Juni 1971) und dem "Supplement" (veröffentlicht am 1. Juli 1977) sowie T. Yamade et al., "Iwanami Encyclopedia Biologica", 3. Aufl. (veröffentlicht von Iwanami Shoten am 10. März 1983). Die Algen, aus denen die vorliegende Substanz extrahiert werden kann, gehören zu den Gattungen Nemacystus, Kjellmaniella, Laminaria, Undaria, Hizikia, Porphyra, Gelidium, Gloiopeltis, Gracilaria, Hemineura, Ulva, Spirogyra, Codium und Acetabularia.
Das wäßrige Lösungsmittel, das für die Extraktion verwendet wird, ist Wasser oder eine wäßrige Lösung eines wasserlöslichen organischen Lösungsmittels, einer Säure, einer Base oder eines Salzes. Eine derartige Lösung enthält typischerweise eine kleine Menge, z. B. nicht mehr als etwa 10 Gew.-%, des organischen Lösungsmittels, der Säure, der Base oder des wasserlöslichen Salzes. Die erfindungsgemäße Extraktion wird nach einem Verfahren durchgeführt, das unter Wasser-Extraktion, organisches Lösungsmittel-Extraktion, Säurelösung-Extraktion, Basenlösung-Extraktion, Salzlösung-Extraktion und Kombinationen davon ausgewählt ist. Die organischen Lösungsmittel, die bei der vorstehenden Extraktion verwendet werden können, umfassen Methanol, Ethanol und Isopropylalkohol. Die Säuren, die bei der vorstehenden Extraktion verwendet werden können, umfassen Salzsäure, Schwefelsäure und Essigsäure. Als Base kann wäßriger Ammoniak, Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid oder Natriumcarbonat verwendet werden. Als Salz können Natriumchlorid oder Kaliumchlorid verwendet werden.
Die Reinigung soll niedermolekulare Substanzen durch Anwendung mindestens einer Behandlung, die unter Aussalzen, Dialyse, Ultrafiltration, Umkehrosmose, Gelfiltration und Fällung unter Verwendung eines organischen Lösungsmittels ausgewählt ist, entfernen. In technologischer Hinsicht ist es bevorzugt, eine Ultrafiltration, eine Umkehrosmose oder eine Kombination davon durchzuführen, wobei es sich um Membrantrennungsverfahren unter Druck handelt. In einigen Fällen kann eine derartige Behandlung nach Aussalzen durchgeführt werden.
Die Mittel, die für das Aussalzen verwendet werden können, umfassen Ammoniumsulfat, Kochsalz (Natriumchlorid), Kaliumchlorid und Bariumcarbonat, wobei unter diesen Mitteln Ammoniumsulfat bevorzugt ist. Nach dieser Aussalzbehandlung ist es erforderlich, eine Dialyse, eine Ultrafiltration, eine Gelfutration, eine Umkehrosmose oder eine Kombination davon durchzuführen.
Die Dialyse wird üblicherweise unter Verwendung einer semipermeablen Membran, wie Cellophan oder Kollodionmembran, durchgeführt.
Die Gelfiltration wird unter Verwendung einer Säule durchgeführt, die mit einem Adsorbens, wie Dextran oder Polyacrylamidgel, gepackt ist. Ein Füllstoff, der z. B. unter den Warenbezeichnungen Cephadex oder Biogel im Handel erhältlich ist, wird üblicherweise verwendet.
Ultrafiltration und Umkehrosmose sind beides Verfahren zur Fraktionierung unter Verwendung einer Membran unter Druck. Die Ultrafiltration wird üblicherweise unter einem Druck von 0,5 bis 5 kg/cm² durchgeführt, und die Umkehrosmose wird üblicherweise unter einem Druck von 20 bis 35 kg/cm² durchgeführt.
Die Fällung unter Verwendung eines organischen Lösungsmittels wird üblicherweise durchgeführt, indem z. B. Methanol, Ethanol, Isopropanol oder Aceton verwendet wird. Gegebenenfalls kann eine Ionenaustauschbehandlung mit diesen Schritten kombiniert werden.
Nach der/den Reinigungsbehandlung(en) wird das Produkt durch Sprühtrocknen, Gefriertrocknen oder andere Maßnahmen dehydratisiert und zu einem handelsüblichen Produkt verarbeitet.
Die vorliegende Substanz wird vorzugsweise weiter mit einer wäßrigen alkalischen Lösung behandelt, und als Ergebnis wird die antivirale Wirkung dieser Substanz überraschenderweise erhöht. Eine derartige Behandlung mit einer wäßrigen alkalischen Lösung wird z. B. durchgeführt, indem die vorliegende Substanz in einer 0,01 bis 5 N und vorzugsweise 0,1 bis 2 N alkalischen Lösung in einer Menge vom 5- bis 200-fachen des Ausgangsmaterials (auf Trockenbasis) bei einer Temperatur von 40 bis 250ºC, vorzugsweise von 60 bis 200ºC und insbesondere von 100 bis 150ºC für 5 Minuten bis 2 Stunden und vorzugsweise für 10 Minuten bis 1 Stunde behandelt wird. Anschließend wird die behandelte Lösung neutralisiert und einer Reinigungsbehandlung unterzogen. Die Reinigungsbehandlung wird durchgeführt, indem Aussalzen, Dialyse, Ultrafiltration, Umkehrosmose, Gelfiltration, Fällung unter Verwendung eines organischen Lösungsmittels oder eine Kombination davon angewandt wird. Die Bedingungen, die bei derartigen Reinigungsbehandlungen anzuwenden sind, entsprechen denen, die vorstehend beschrieben wurden. Nach diesem Reinigungsschritt wird das Produkt durch Sprühtrocknen, Gefriertrocknen oder andere Maßnahmen dehydratisiert.
Die vorliegende Substanz, die auf die vorstehend beschriebene Weise erhältlich ist, ergibt positive Ergebnisse, wenn sie der Q-Naphthol- Schwefelsäure-Reaktion, der Indol-Schwefelsäure-Reaktion, der Anthron- Schwefelsäure-Reaktion oder der Phenol-Schwefelsäure-Reaktion unterworfen wird; und wenn sie dem Lowry-Folin-Verfahren oder der Ninhydrin-Reaktion nach Hydrolyse mit Salzsäure unterworfen wird (Protein-gebundenes Polysaccharid).
Die Elementaranalyse der vorliegenden Substanz zeigt 20 bis 55 % Kohlenstoff, 3 bis 9% Wasserstoff und mehr als 0 % bis weniger als 16% Stickstoff. Der pH war 6,0 bis 7,5.
Die vorliegende Substanz enthält als Zuckerkomponente mindestens zwei Arten von Sacchariden, die unter Glucose, Glucuronsäure, Xylose und Mannose ausgewählt sind, und sie enthält in ihrer Proteinkomponente mindestens drei Arten von Aminosäuren, die unter Asparaginsäure, Lysin, Leucin, Glutaminsäure und Glycin ausgewählt sind.
Das Infrarotabsorptionsspektrum der vorliegenden Substanz zeigt Absorptionen der Hydroxylgruppe in der Region von 3600 bis 3200 cm&supmin;¹ und Absorptionen, die einer Amidgruppe zugeschrieben werden können, in der Region von 1700 bis 1600 cm&supmin;¹ (Protein-gebundenes Polysaccharid).
Die vorliegende Substanz ist in wäßrigen Lösungsmitteln löslich und in organischen Lösungsmitteln unlöslich. Die vorstehend erwähnten "wäßrigen Lösungsmittel" umfassen Wasser und wäßrige, wasserlösliche Alkohole, Säuren und Basen, und die "organischen Lösungsmittel" umfassen Chloroform, Benzol und Ether.
Die vorliegende Substanz hat eine weiße, grüne oder braune Farbe, und ihr Molekulargewicht beträgt 10³ bis 2 × 10&sup5; bei Bestimung durch Gelfiltrationschromatographie.
In einem Test zur akuten Toxizität der vorliegenden Substanz, bei dem die vorliegende Substanz in einer Dosis von 1000 mg/kg an Ratten des Donryu-Stamms verabreicht wurde, die 4 bis 5 Wochen alt waren und 100 bis 150 g wogen, waren alle Raten nach der 7-tägigen Beobachtungszeit nach der Verabreichung am Leben.
Die vorliegende Substanz ist ein sicheres Material, das eine überaus geringe Toxizität aufweist und fast keine schädlichen Nebenwirkungen hervorruft.
Es ist bekannt, daß im allgemeinen ein Virus an die Zielzelle adsorbiert wird und die Nudeinsäure des Virus in die Zelle injiziert und in das Genom der Zelle integriert wird und daß das Virus nach diesem Prozeß repliziert wird. Im Fall von Retroviren ist vor der Integration in das Zellgenom ein Prozeß der Transkription von RNA, wobei es sich um die Nudeinsäure, die aus dem Virus stamt, handelt, in DNA durch die Einwirkung einer reversen Transkriptase erforderlich.
Die vorliegende Substanz inhibiert die Adsorption von HIV (Human Immunodeficiency Virus) an humane Lymphozyten und die nachfolgende Infektion damit. Sie inhibiert auch die Aktivität der reversen Transkriptase. Diese Wirkungen der vorliegenden Substanz sind experimentell bestimt worden. Wenn z. B. die Wirkung der vorliegenden Substanz nach einem Verfahren untersucht wurde, bei dem HIV mit einem Algenextrakt in einer Konzentration von 50 bis 1000 µg/ml bei 0ºC für 2 Stunden behandelt, anschließend gewaschen und auf eine MT-4-Zelle zur Infektion mit HIV aufgebracht wurde und nach 3-tägiger Kultur die HIV-Antigen-positiven Zellen gezählt wurden, dann wurde festgestellt, daß die Vorbehandlung mit der vorliegenden Substanz zu einem Verschwinden im wesentlichen aller HIV-Antigen-positiven Zellen führte, was eine starke inhibierende Aktivität der vorliegenden Substanz gegenüber einer Adsorption von HIV an menschliche Lymphozyten zeigt. Wenn der Einfluß der vorliegenden Substanz auf die reverse Transkriptase-Aktivität unter Verwendung vollständiger Messenger- RNA aus Rattenleber als Matrize untersucht wurde, dann war auch eine starke Inhibition der reversen Transkriptase-Aktivität bei Zugabe von 50 bis 1000 µg/ml der vorliegenden Substanz sichtbar.
Diese experimentellen Ergebnisse belegen die Tatsache, daß die vorliegende Substanz eine inhibierende Aktivität gegen eine HIV-Infektion hat und wirksam gegen AIDS ist.
AZT, das bereits als anti-AIDS-Arzneimittel Verwendung findet, führt zu Nebenwirkungen, die schädlich für die normale Zellteilung sind, während die vorliegende Substanz ein sicheres Material ist, das eine überaus geringe akute Toxizität zeigt und sich als ein anti-AIDS-Mittel eignet, da die vorliegende Substanz eine inhibierende Aktivität gegen eine HIV- Infektion zeigt.
Bei der Verwendung der vorliegenden Substanz als anti-AIDS-Arzneimittel kann es in einer beliebigen Form der Zubereitung dargereicht werden. Es wird also eine pharmazeutische Zusammensetzung für die Verwendung bei der Behandlung von AIDS bereitgestellt, die einen pharmazeutisch verträglichen Träger oder ein Verdünnungsmittel und als aktiven Bestandteil die vorliegende Substanz umfaßt. Das Arzneimittel kann auch auf verschiedenen Wegen verabreicht werden. Ferner kann die vorliegende Substanz in Kombination mit bekannten anti-AIDS-Arzneimitteln, wie AZT, ohne Verringerung ihrer normalen Wirksamkeit verwendet werden. Eine derartige kombinierte Verwendung ist in der Tat eine wirksame Maßnahme zur Behandlung von AIDS.
Wenn die vorliegende Substanz oral verabreicht wird, dann wird sie z. B. in Form von Tabletten, Körnern, Pulvern oder Kapseln gebracht, die in ihrer Zusammensetzung ein Adjuvans oder Adjuvantien enthalten können, die normalerweise bei der Herstellung von Pharmazeutika verwendet werden, wie ein Bindemittel, eine Indusion, einen Exzipienten, ein Gleitmittel, ein Sprengmittel oder ein Netzmittel. Wenn die vorliegende Substanz als flüssiges Präparat für die orale Verabreichung angewandt wird, dann kann das Präparat die Form einer Flüssigkeit zur inneren Verwendung, eines Schüttelgemisches, einer Suspension, einer Emulsion oder eines Sirups annehmen. Es kann die Form eines trockenen Produkts annehmen, das bei Verwendung in eine Flüssigkeit umgewandelt wird. Diesen flüssigen Zubereitungen können die üblicherweise verwendeten Additive und Konservierungsstoffe enthalten. Im Fall der Injektion kann die Zusammensetzung Additive, wie Stabilisatoren, Puffer, Konservierungsstoffe oder isotonische Mitfel, enthalten, und sie kann in Form einer Einheitsdosisampulle oder in Mehrfachdosisbehältern angeboten werden. Die Zusammensetzung kann die Form einer wäßrigen Lösung, Suspension oder Emulsion in einem ölartigen oder wäßrigen Vehikel annehmen. Der aktive Bestandteil (die vorliegende Substanz) derartiger Präparate kann ein Pulver sein, das bei Verwendung in einem geeigneten Vehikel, wie pyrogenfreiem sterilisiertem Wasser, wieder aufgelöst wird.
Die vorliegende Substanz wird an Mensch oder Tiere oral oder parenteral verabreicht. Die orale Verabreichung umfaßt die sublinguale Verabreichung. Die parenterale Verabreichung umfaßt die Injektion, wie die subkutane, intramuskuläre oder intravenöse Injektion, und die Eintröpfelung. Die Dosierung der vorliegenden Substanz variiert abhängig davon, ob das Individuum ein Mensch oder ein Tier ist, und abhängig von Faktoren, wie dem Alter, individuellen Unterschieden und dem Zustand der Erkrankung, üblicherweise beträgt jedoch für den Fall, daß das Individuum ein Mensch ist, die orale Dosis der vorliegenden Substanz 0,1 bis 1000 mg und vorzugsweise 1 bis 100 mg pro kg Körpergewicht und Tag, und diese Menge der Substanz wird in 1 bis 3 Portionen gegeben.
Die vorliegende Substanz ist ein Material mit überaus geringer akuter Toxizität und hoher Sicherheit, und sie weist eine inhibierende Aktivität gegen die Adsorption von HIV an menschliche Lymphozyten sowie die Funktion der Inhibition der Aktivität von reverser Transkriptase auf. Ferner ist die vorliegende Substanz ein Material, das sich zur Behandlung von retroviralen Infektionskrankheiten, wie insbesondere AIDS, eignet.
Die vorliegende Erfindung wird ausführlicher durch die nachstehenden Beispiele erläutert; es ist jedoch darauf hinzuweisen, daß der Schutzumfang der vorliegenden Erfindung nicht durch diese Beispiele beschränkt wird.

Beispiel 1

100 g trockene Nemacystus decipines aus der Gattung Nemacystus der Familie Spermatochnaceae der Ordnung Chordariales der Phaeophyceae wurden in feine Schnitzel gebrochen, in einen 3 Liter fassenden Tank aus rostfreiem Stahl gegeben, mit 2000 ml Wasser versetzt und gerührt, während die Temperatur bei 90 bis 95ºC gehalten wurde. Die Extraktion wurde für etwa 3 Stunden durchgeführt, und anschließend wurde die erhaltene Lösung auf Raumtemperatur gekühlt.
Die Extraktaufschlämmung wurde zentrifugiert, um sie in Extraktlösung und Rückstand zu trennen. Der Rückstand wurde weiter mit 2000 ml 0,4 N NaOH bei 90 bis 95ºC für 3 Stunden extrahiert, auf Raumtemperatur gekühlt, mit 2 N HCl auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt und zentrifugiert, um eine Trennung in Extraktlösung und Rückstand durchzuführen.
Die Extraktlösungen wurden vereinigt, in einer Vakuumkonzentrationsanlage auf 400 ml eingeengt, unter Anwendung eines Ultrafilters entsalzt und dann durch Gefriertrocknen getrocknet, wobei man 21 g eines trockenen Produkts (A) erhielt.

Beispiel 2

100 g trockene Kjellmaniella gyrate aus der Gattung Kjellmaniella der Familie Laminariaceae der Ordnung Laminariales der Phaeophyceae wurden in feine Schnitzel gebrochen, in einen 3 Liter fassenden Tank aus rostfreiem Stahl gegeben, mit 2000 ml Wasser versetzt und bei einer Temperatur, die bei 90 bis 95ºC gehalten wurde, gerührt. Die Extraktion wurde für etwa 3 Stunden durchgeführt, und anschließend wurde die erhaltene Lösung auf Raumtemperatur gekühlt.
Die Extraktaufschlämmung wurde zentrifugiert, um sie in Extraktlösung und Rückstand zu trennen. Der Rückstand wurde weiter mit 2000 ml 0,4 N NaOH bei 90 bis 95ºC für 3 Stunden extrahiert, auf Raumtemperatur gekuhlt, mit 2 N HCl auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt und zentrifugiert, um eine Trennung in Extraktlösung und Rückstand durchzuführen.
Die Extraktlösungen wurden vereinigt, in einer Vakuumkonzentrationsanlage auf 400 ml eingeengt, unter Verwendung eines Ultrafilters entsalzt und dann durch Gefriertrocknen getrocknet, wobei man 23 g eines trockenen Produkts (B) erhielt.

Beispiel 3

100 g trockene Laminaria japonica aus der Gattung Laminaria der Familie Laminariaceae der Ordnung Laminariales der Phaeophyceae wurden in feine Schnitzel gebrochen, in einen 3 Liter fassenden Tank aus rostfreiem Stahl gefüllt, mit 2000 ml Wasser versetzt und bei einer Temperatur, die bei 90 bis 95ºC gehalten wurde, gerührt. Die Extraktion wurde für 3 Stunden durchgeführt, gefolgt von Abkühlen auf Raumtemperatur.
Die Extraktaufschlämmung wurde zentrifugiert, um sie in Extraktlösung und Rückstand zu trennen. Der Rückstand wurde weiter mit 2000 ml 0,4 N NaOH bei 90 bis 95ec für 3 Stunden extrahiert, und die erhaltene Lösung wurde auf Raumtemperatur gekühlt, mit 2 N HCl auf einen pH-Wert von 7, eingestellt und anschließend zentrifugiert, um eine Trennung in Extraktlösung und Rückstand durchzuführen.
Die Extraktlösungen wurden vereinigt, in einer Vakuumkonzentrationsanlage auf 400 ml eingeengt, unter Verwendung eines Ultrafilters entsalzt und durch Gefriertrocknen getrocknet, wobei man 20 g eines trockenen Produkts (C) erhielt.

Beispiel 4

100 g trockene Undaria pinnatifida aus der Gattung Undaria der Familie Laminariaceae der Ordnung Laminariales der Phaeophyceae wurden in feine Schnitzel gebrochen, in einen 3 Liter fassenden Tank aus rostfreiem Stahl gefüllt, mit 2000 ml Wasser versetzt und gerührt, während die Temperatur bei 90 bis 95ºC gehalten wurde. Die Extraktion wurde für etwa 3 Stunden durchgeführt, und anschließend wurde die erhaltene Lösung auf Raumtemperatur abgekühlt.
Die Extraktaufschlämmung wurde zentrifugiert, um sie in Extraktlösung und Rückstand zu trennen. Der Rückstand wurde weiter mit 2000 ml 0,4 N NaOH bei 90 bis 95ºC für 3 Stunden extrahiert, und die erhaltene Lösung wurde auf Raumtemperatur gekühlt, mit 2 N HCl auf einen pH-Wert von 7, eingestellt und anschließend zentrifugiert, um eine Trennung in Extraktlösung und Rückstand durchzuführen.
Die Extraktlösungen wurden vereinigt, in einer Vakuumkonzentrationsanlage auf 400 ml eingeengt, unter Verwendung eines Ultrafilters entsalzt und durch Gefriertrocknen getrocknet, wobei man 18 g eines trockenen Produkts (D) erhielt.

Beispiel 5

100 g trockene Hizikia fusiforme aus der Gattung Hizikia der Familie Sargassaceae der Ordnung Fucales der Phaeophyceae wurden in feine Schnitzel gebrochen, in einen 3 Liter fassenden Tank aus rostfreiem Stahl gegeben, mit 2000 ml Wasser versetzt und gerührt, während die Temperatur bei 90 bis 95ºC gehalten wurde. Die Extraktion wurde für etwa 3 Stunden durchgeführt, und anschließend wurde die erhaltene Lösung auf Raumtemperatur gekühlt.
Die Extraktaufschlämmung wurde zentrifugiert, um sie in Extraktlösung und Rückstand zu trennen.
Die Extraktlösungen wurden in einer Vakuumkonzentrationsanlage auf 400 ml eingeengt und durch Gefriertrocknen getrocknet, wobei man 20 g eines trockenen Produkts (E-1) erhielt.

Beispiel 6

100 g der gleichen Alge Hizikia fusiforme, wie sie in Beispiel 5 verwendet wurden, wurden in feine Schnitzel gebrochen, in einen 3 Liter fassenden Tank aus rostfreiem Stahl gefüllt, mit 2000 ml Wasser versetzt und bei einer Temperatur, die bei 90 bis 95ºC gehalten wurde, gerührt. Die Extraktion wurde für etwa 3 Stunden durchgeführt, und anschließend wurde die erhaltene Lösung auf Raumtemperatur gekühlt.
Die Extraktaufschlämung wurde zentrifugiert, um sie in Extraktlösung und Rückstand zu trennen. Der Rückstand wurde weiter mit 2000 ml 0,4 N NaOH bei 90 bis 95ºC für 3 Stunden extrahiert, auf Raumtemperatur gekühlt, mit 2 N HCl auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt und zentrifugiert, um eine Trennung in Extraktlösung und Rückstand durchzuführen.
Die Extraktlösungen wurden vereinigt, in einer Vakuumkonzentrationsanlage auf 400 ml eingeengt, durch einen Ultrafilter entsalzt und anschließend durch Gefriertrocknen getrocknet, wobei man 25 g eines trockenen Produkts (E-2) erhielt.

Beispiel 7

20 g des in Beispiel 5 erhaltenen Extrakts von Hizikia fusiforme wurden in 1 N NaOH-Lösung gelöst und einer Wärmebehandlung bei 120ºC für 20 Minuten unterworfen. Nach Abkühlen auf Raumtemperatur wurde die behandelte Lösung mit 2 N HCl auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt, unter Verwendung eines Ultrafilters entsalzt und durch Gefriertrocknen getrocknet, wobei man 19 g eines alkalisch behandelten Produkts (E-3) erhielt.

Beispiel 8

100 g trockene Porphyra tenera der Familie Bangiaceae der Ordnung Bangiales der Rhodophyceae wurden in feine Schnitzel gebrochen, in einen 3 Liter fassenden Tank aus rostfreiem Stahl gegeben, mit 2000 ml destilliertem Wasser versetzt und gerührt, während die Temperatur bei 90 bis 95ºC gehalten wurde. Nach etwa 3 Stunden Extraktion wurde die erhaltene Lösung auf Raumtemperatur gekühlt.
Die Extraktaufschlämmung wurde zentrifugiert, um sie in Extraktlösung und Rückstand zu trennen, und der Rückstand wurde weiter mit 2000 ml 0,4 N NaOH bei 90 bis 95ºC für 3 Stunden extrahiert, und die erhaltene Lösung wurde auf Raumtemperatur gekühlt, mit 2 N HCl auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt und dann zentrifugiert, um eine Trennung in Extraktlösung und Rückstand durchzuführen.
Die Extraktlösungen wurden vereinigt, unter verringertem Druck eingeengt, durch Ultrafiltration entsalzt und durch Gefriertrocknen getrocknet, wobei man 30 g eines trockenen Produkts (F) erhielt.

Beispiel 9

100 g trockene Gelidium amansii aus der Familie Gelidiaceae der Ordnung Gelidiales der Rhodophyceae wurden in feine Schnitzel gebrochen, in einen 3 Liter fassenden Tank aus rostfreiem Stahl gegeben, mit 2000 ml destilliertem Wasser versetzt und gerührt, während die Temperatur bei 90 bis 95ºC gehalten wurde. Die Extraktion wurde für etwa 3 Stunden durchgefuhrt, und anschließend wurde die erhaltene Lösung auf Raumtemperatur abgekühlt.
Die Extraktaufschlämmung wurde zentrifugiert, um sie in Extraktlösung und Rückstand zu trennen. Der Rückstand wurde weiter mit 2000 ml 0,4 N NaOH bei 90 bis 95ºC für 3 Stunden extrahiert, und der Extrakt wurde auf Raumtemperatur gekühlt, auf einen pH-Wert von 7,0 mit 2 N HCl eingestellt und durch Zentrifugation in Extraktlösung und Rückstand getrennt.
Die Extraktlösungen wurden vereinigt, unter verringertem Druck eingeengt, durch Ultrafiltration entsalzt und durch Gefriertrocknen getrocknet, wobei man 25 g eines trockenen Produkts (G) erhielt.

Beispiel 10

100 g trockene Gloiopeltis complanate aus der Familie der Endocladiaceae der Ordnung Cryptonemiales der Rhodophyceae wurden in feine Schnitzel gebrochen, in einen 3 Liter fassenden Tank aus rostfreiem Stahl gegeben, mit 2000 ml destilliertem Wasser versetzt und gerührt, während die Temperatur bei 90 bis 95ºC gehalten wurde. Die Extraktion wurde für etwa 3 Stunden durchgeführt, und anschließend wurde die erhaltene Lösung auf Raumtemperatur abgekühlt.
Die Extraktaufschlämmung wurde zentrifugiert, um sie in Extraktlösung und Rückstand zu trennen. Der Rückstand wurde weiter mit 2000 ml 0,4 N NaOH bei 90 bis 95ºC für 3 Stunden extrahiert, und der Extrakt wurde auf Raumtemperatur gekühlt, auf einen pH-Wert von 7,0 mit 2 N HCl eingestellt und durch Zentrifugation in Extraktlösung und Rückstand getrennt.
Die Extraktlösungen wurden vereinigt, unter verringertem Druck eingeengt, durch Ultrafiltration entsalzt und durch Gefriertrocknen getrocknet, wobei man 27 g eines trockenen Produkts (H) erhielt.

Beispiel 11

100 g trockene Gracilaria rerrucosa aus der Gattung Gracilaria der Familie Gracilariceae der Ordnung Gigartinales der Rhodophyceae wurden in feine Schnitzel gebrochen, in einen 3 Liter fassenden Tank aus rostfreiem Stahl gegeben, mit 2000 ml destilliertem Wasser versetzt, wobei die Temperatur bei 90 bis 95ºC gehalten wurde. Die Extraktion wurde für etwa 3 Stunden durchgeführt, und anschließend wurde die erhaltene Lösung auf Raumtemperatur abgekühlt.
Die Extraktaufschlämmung wurde durch Zentrifugation in Extraktlösung und Rückstand getrennt, und der Rückstand wurde weiter mit 2000 ml 0,4 N NaOH bei 90 bis 95ºC für 3 Stunden extrahiert, und der Extrakt wurde auf Raumtemperatur gekühlt, auf einen pH-Wert von 7,0 mit 2 N HCl eingestellt und durch Zentrifugation in Extraktlösung und Rückstand getrennt.
Die Extraktlösungen wurden vereinigt, unter verringertem Druck eingeengt, durch Ultrafiltration entsalzt und durch Gefriertrocknen getrocknet, wobei man 23 g eines trockenen Produkts (1) erhielt.

Beispiel 12

100 g Hemineura schmitziana aus der Gattung Hemineura der Familie Delesseriaceae der Ordnung Ceramiales der Rhodophyceae wurden zu feinen Schnitzeln zerstoßen, in einen 3 Liter fassenden Tank aus rostfreiem Stahl gegeben, mit 2000 ml destilliertem Wasser versetzt und gerührt, wobei die Temperatur bei 90 bis 95ºC gehalten wurde. Die Extraktion wurde für etwa 3 Stunden durchgeführt, und anschließend wurde die erhaltene Lösung auf Raumtemperatur gekühlt.
Die Extraktaufschlämmung wurde durch Zentrifugation in Extraktlösung und Rückstand getrennt, und der Rückstand wurde weiter mit 2000 ml 0,4 N NaOH bei 90 bis 95ºC für 3 Stunden extrahiert, anschließend auf Raumtemperatur gekühlt, mit 2 N HCl auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt und durch Zentrifugation in Extraktlösung und Rückstand getrennt.
Die Extraktlösungen wurden vereinigt, unter verringertem Druck eingeengt, durch Ultrafiltration entsalzt und durch Gefriertrocknen getrocknet, wobei man 22 g eines trockenen Produkts (J) erhielt.

Beispiel 13

100 g Pulver von Ulva pertusa aus der Familie Ulvaceae der Ordnung Ulvales der Chlorophyceae wurden in einen 3 Liter fassenden Tank aus rostfreiem Stahl gegeben, mit 1000 ml Wasser versetzt und gerührt, während die Temperatur bei 90 bis 95ºC gehalten wurde. Die Extraktion wurde für etwa 3 Stunden durchgeführt, und anschließend wurde die erhaltene Lösung auf Raumtemperatur abgekühlt.
Die Extraktaufschlämmung wurde durch Zentrifugation in Extraktlösung und Rückstand getrennt. Der Rückstand wurde weiter mit 1000 ml 0,4 N NaOH bei 90 bis 95ºC für 3 Stunden extrahiert, und der Extrakt wurde auf Raumtemperatur abgekühlt, mit 2 N HCl auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt und durch Zentrifugation in Extraktlösung und Rückstand getrennt.
Die Extraktlösungen wurden vereinigt, in einer Vakuumkonzentrationsanlage auf 400 ml eingeengt, durch Ultrafiltration entsalzt und durch Gefriertrocknen getrocknet, wobei man 18 g eines trockenen Produkts (L) erhielt.

Beispiel 14

100 g Pulver von Spirogyra arcta aus der Ordnung Zygnematales der Chlorophyceae wurden in einen 3 Liter fassenden Tank aus rostfreiem Stahl gegeben, mit 1000 ml Wasser versetzt und gerührt, während die Temperatur bei 90 bis 95ºC gehalten wurde. Nach etwa 3 Stunden Extraktion wurde die erhaltene Lösung auf Raumtemperatur abgekühlt.
Die Extraktaufschlämmung wurde durch Zentrifugation in Extraktlösung und Rückstand getrennt. Der Rückstand wurde weiter mit 1000 ml 0,4 N NaOH bei 90 bis 95ºC für 3 Stunden extrahiert, und der Extrakt wurde auf Raumtemperatur abgekühlt, mit 2 N HCl auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt und durch Zentrifugation in Extraktlösung und Rückstand getrennt.
Die Extraktlösungen wurden vereinigt, in einer Vakuumkonzentrationsanlage auf 400 ml eingeengt, durch Ultrafiltration entsalzt und durch Gefriertrocknen getrocknet, wobei man 15 g eines trockenen Produkts (M) erhielt.

Beispiel 15

100 g Pulver von Codium fragile der Ordnung Codiales der Chlorophyceae wurden in einen 3 Liter fassenden Tank aus rostfreiem Stahl gegeben, mit 2000 ml Wasser versetzt und gerührt, während die Temperatur bei 90 bis 95ºC gehalten wurde. Die Extraktion wurde für etwa 3 Stunden durchgeführt, und anschließend wurde die erhaltene Lösung auf Raumtemperatur abgekühlt.
Die Extraktaufschlämmung wurde durch Zentrifugation in Extraktlösung und Rückstand getrennt. Der Rückstand wurde weiter mit 2000 ml 0,4 N NaOH bei 90 bis 95ºC für 3 Stunden extrahiert, auf Raumtemperatur abgekühlt, mit 2 N HCl auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt und durch Zentrifugation in Extraktlösung und Rückstand getrennt.
Die Extraktlösungen wurden vereinigt, in einer Vakuumkonzentrationsanlage auf 400 ml eingeengt, durch Ultrafiltration entsalzt und durch Gefriertrocknen getrocknet, wobei man 17 g eines trockenen Produkts (N) erhielt.

Beispiel 16

100 g Pulver von Acetabularia ryukyuensis wurden in einen 3 Liter fassenden Tank aus rostfreiem Stahl gegeben, mit 2000 ml Wasser versetzt und gerührt, während die Temperatur bei 90 bis 95ºC gehalten wurde. Die Extraktion wurde für etwa 3 Stunden durchgeführt, und anschließend wurde die erhaltene Lösung auf Raumtemperatur abgekühlt.
Die Extraktaufschlämmung wurde durch Zentrifugation in Extraktlösung und Rückstand getrennt. Der Rückstand wurde weiter mit 2000 ml 0,4 N NaOH bei 90 bis 95ºC für 3 Stunden extrahiert, auf Raumtemperatur abgekühlt, mit 2 N HCl auf einen pH-Wert von 7,0 eingestellt und durch Zentrifugation in Extraktlösung und Rückstand getrennt.
Die Extraktlösungen wurden vereinigt, in einer Vakuumkonzentrationsanlage auf 400 ml eingeengt, durch Ultrafiltration entsalzt und durch Gefriertrocknen getrocknet, wobei man 19 g eines trockenen Produkts (0) erhielt.
Die physikochemischen Eigenschaften der vorliegenden Substanz, die aus Meeresalgen extrahiert wurde, sind in Tabelle 1 gezeigt. In der Tabelle zeigt das positive Ergebnis der Phenol-Schwefelsäure-Farbreaktion das Vorhandensein von Saccharid, und das positive Ergebnis der Lowry- Folin-Farbreaktion zeigt das Vorhandensein einer Peptidbindung. Im Hinblick auf das Molekulargewicht ist festzustellen, daß die Molekulargewichtsverteilung der Fraktion, die reich an der vorliegenden Substanz war, durch ein Gelfiltrationsverfahren bestimmt wurde und in der Tabelle angegeben ist.

Beispiel 17

Die inhibierende Wirkung der vorliegenden Substanz, die in den Beispielen 1-16 erhalten wurde, gegenüber reverser Transkriptase, die speziell in Retroviren enthalten ist, wurde nach dem folgenden Verfahren bestimmt.
10 mg von jeder der vorliegenden Substanzen in Form der gefriergetrockneten Produkte (A) bis (J) und (L) bis (0) wurden in 10 ml sterilisiertem destilliertem Wasser gelöst (Konzentration: 1 mg/ml).
1 µl 20 mM DTT (Dithiothreit, hergestellt von Sigma Co., Ltd.), 5 µl einer 5-fach konzentrierten Enzymreaktionslösung (enthaltend 250 mM Tris- HCl (pH-Wert: 8,3), 250 mM KCl und 40 mM MgCl&sub2;), 1 µl 3d NTP-Lösung (enthaltend 1 mM dATP, 1 mM GTP und 1 mM dTTP, hergestellt von Sigma Co., Ltd.), 2 µl an 100 µg/ml Oligomer (dt)&sub1;&sub2;&submin;&sub1;&sub8; (hergestellt von PL Biochemicals Co., Ltd.), 1 µl Messenger-RNA (abgeleitet aus normaler Rattenleber; 1 µg/µl), 0,5 µl RNase-Inhibitor (16 Einheiten/pl, hergestellt von Takara Shuzo Kabushiki Kaisha) und 1 µl an [α-³²P)-dCTP (bis zu 800 Ci/mMol, 10 µCi/µl, hergestellt von Amersham Japan Co., Ltd.) wurden in ein 1,5 ml fassendes Eppendorf-Röhrchen gegeben, und das Eppendorf-Röhrchen wurde in ein Wasserbad bei 37ºC gebracht.
5 Minuten später wurden jeweils 12,5 µl der zuvor hergestellten Lösungen der vorliegenden Substanzen (Konzentration: 1 mg/ml) in die Reaktionsröhrchen gegeben, gefolgt von einer weiteren Zugabe an 1 µl reverse Transkriptase (7 Einheiten/µl, abgeleitet aus Rous-assoziiertem Virus, hergestellt von Takara Shuzo Kabushiki Kaisha), so daß die Menge der schließlich erhaltenen Reaktionslösung 25 pl betrug, und das Gemisch wurde bei 37ºC umgesetzt.
Eine Stunde später wurden Blätter von 2 cm × 2 cm von DEAE-Papier (hergestellt von Toyo Roshi Kabushiki Kaisha) mit 5 µl der Reaktionslösung getränkt und an der Luft getrocknet. Jedes Blatt wurde in 10 ml einer 0,5 M wäßrigen Lösung von Na&sub2;HPO&sub4; getaucht, und nicht für die DNA- Synthese verbrauchtes [α-³²P]-dCTP, das auf dem Filterpapier zurückgeblieben war, wurde unter Schütteln ausgewaschen. (Dieser Schritt wurde 5 mal in Intervallen von 5 Minuten durchgeführt).
Anschließend wurde jedes der DEAE-Papierblätter in ein Glasfläschchen gegeben, das 10 ml eines flüssigen Szintillations-Cocktails (hergestellt von Amersham Japan Co., Ltd.) enthielt, und die Radioaktivität jedes Blattes wurde für 1 Minute (cpm) durch einen Szintillationszähler (hergestellt von Aroka Co., Ltd.) gemessen.
Die Rate der Inhibition der reversen Transkriptase-Aktivität (%) wurden nach folgender Formel bestimmt:
Rate der Hemmung der reversen Transkriptase-Aktivität (%) = Co - Cs/Co × 100
Co: Radioaktivität des Blattes, wenn die vorliegende Substanz nicht zugegeben wurde
Cs: Radioaktivität des Blattes, wenn die vorliegende Substanz zugegeben wurde.
Die Raten der Inhibition der reversen Transkriptase-Aktivität (Rtase-Aktivität) der untersuchten Substanzen sind in Tabelle 1 gezeigt.

Beispiel 18

Die inhibierende Aktivität der vorliegenden Substanzen gegen die Adsorption von HIV (AIDS-Virus) an menschliche Lymphozyten wurden nach dem folgenden Verfahren bestimmt. (Alle Schritte wurden unter aseptischen Bedingungen durchgeführt).
1 ml einer Suspension von HIV-1 (Human Immunodeficiency Virus) und 1 ml einer wäßrigen Lösung der vorliegenden Substanz (800 µg/ml) wurden in ein Teströhrchen gegeben, und das Teströhrchen wurde ruhig in Eis gebracht. 2 Stunden später wurde 1 ml Virussuspension aus dem Teströhrchen als Probe entnommen, und das Virus wurde an den Zellstamm MT-4, der von humanen Lymphozyten abgeleitet ist (Jpn. J. Cancer Res. (Gann), Bd. 28 (1982), S. 219-229) mit einer Multiplizität der Infektion (MOI) = 2 adsorbiert. Nach Zentrifugation bei 2000 U/min für 10 Minuten wurde der Überstand entfernt, und die MT-4-Zellen als Bodensatz wurden in RPMI 1640 mit einem Gehalt an 20 % FCS (Gibco Laboratories, NY) gebracht, so daß die Zellkonzentration 2 × 10&sup5; Zellen/ml betrug.
Anteile von 100 µl der MT-4-Zellsuspension wurden auf Platten mit 96 Vertiefungen pipettiert und unter Bedingungen von 5 % CO&sub2; und 37ºC kultiviert. Am dritten Tag der Kultur wurden die Anzahl der HIV-1-adsorbierten Zellen und die Anzahl der nicht-adsorbierten Zellen unter Anwendung der indirekten Fluoreszenzantikörpertechnik berechnet.
Die Rate der Inhibition der HIV-1-Adsorption (%) wurde aus der folgenden Formel berechnet:
Rate der Inhibition der HIV-1-Adsorption (%) = Zellen mit HIV-1-Adsorption/Zellen mit HIV-1-Adsorption + Zellen ohne HIV-1-Adsorption × 100
Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 gezeigt.

Herstellungsbeispiel

330 mg der vorliegenden Substanz aus Beispiel 1 wurden in Hartkapseln Nr. D unter Verwendung einer mit Druck arbeitenden automatischen Abfüllanlage gefüllt, um Kapseln herzustellen, die die vorliegende Substanz enthalten. Tabelle 1 Tabelle 1 (Forts.) Tabelle 1 (Forts.) Tabelle 1 (Forts.)

Claims

1. Verwendung eines Protein-gebundenen Polysaccharids bei der Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung von Aids, wobei das Protein-gebundene Polysaccharid folgende Eigenschaften besitzt:

(a) positive Ergebnisse, wenn es einer Reaktion mit α-Naphthol-Schwefelsäure, Indol-Schwefelsäure, Anthron- Schwefelsäure oder Phenol-Schwefelsäure unterworfen wird und, nach Hydrolyse durch HCl, wenn es dem Lowry-Folin-Verfahren oder der Ninhydrin-Reaktion unterworfen wird;

(b) Elementaranalyse: 20 bis 55 % Kohlenstoff, 3 bis 9 % Wasserstoff und mehr als 0 % bis weniger als 16 % Stickstoff;

(c) pH von 6,0 bis 7,5;

(d) die Zuckerkomponente enthält mindestens zwei Arten von Sacchariden, die unter Glucose, Glucuronsäure, Xylose und Mannose ausgewählt sind, und die Proteinkomponente enthält mindestens drei Arten von Aminosäuren, die unter Asparaginsäure, Lysin, Leucin, Glutaminsäure und Glycin ausgewählt sind;

(e) das Infrarotabsorptionsspektrum weist bei 3600 bis 3200 cm&supmin;¹ und bei 1700 bis 1600 cm&supmin;¹ Maxima auf;

(f) ein Molekulargewicht von 10³ bis 2 × 10&sup5; nach Bestimmung mittels Gelfiltrationschromatographie; und

(g) löslich in Wasser und wäßrigen Lösungen, die wasserlösliche Alkohole, Säuren oder Basen enthalten, jedoch unlöslich in Chloroform, Benzol und Ether;

und das Protein-gebundene Polysaccharid erhältlich ist durch Extrahieren einer Meeresalge, die ausgewählt ist unter Nemacystus decipines, Kjellmaniella gyrate, Laminaria japonica, Undaria pinnatifida, Hizikia fusiforme, Porphyra tenera, Gelidium amansii, Gloiopeltis complanate, Gracilaria rerrucosa, Hemineura schmitziana, Ulva pertusa, Spirogyra arcta, Codium fragile und Acetabularia ryukyuensis, mit einem wäßrigen Lösungsmittel, welches Wasser oder eine wäßrige Lösung eines wasserlöslichen organischen Lösungsmittels, einer Säure, einer Base oder eines Salzes ist, für 20 Minuten bis 20 Stunden bei 4 bis 120 ºC unter Verwendung eines 5- bis 200-fachen Überschusses an Extraktionslösung über die Alge, bezogen auf deren Trockengewicht, und durch Unterwerfen des Extrakts mindestens einer Reinigung, die ausgewählt ist unter Aussalzen, Dialyse, Ultrafiltration, reverser Osmose, Gelfiltration und Fällung mittels eines organischen Lösungsmittels.

2. Verwendung gemäß Anspruch 1, wobei die wäßrige Losung eine wäßrige Ammoniak-, Natriumhydroxid-, Kaliumhydroxid- oder Natriumcarbonatlösung ist.

3. Verwendung gemäß Anspruch 1 oder 2, wobei das Proteingebundene Polysaccharid durch weitere Behandlung des gereinigten Materials mit einem 5- bis 200-fachen Überschuß einer 0,01 bis 5 N wäßrigen alkalischen Lösung 5 Minuten bis 2 Stunden bei 40 bis 250 ºC und durch Unterwerfung des resultierenden Materials einer zweiten Reinigung erhalten werden kann.