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CN1969657A - 猪用中益合生素饲料添加剂 - Google Patents

猪用中益合生素饲料添加剂 Download PDF

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CN1969657A
CN1969657A CNA2005100574011A CN200510057401A CN1969657A CN 1969657 A CN1969657 A CN 1969657A CN A2005100574011 A CNA2005100574011 A CN A2005100574011A CN 200510057401 A CN200510057401 A CN 200510057401A CN 1969657 A CN1969657 A CN 1969657A
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acid bacteria
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曹国文
曾代勤
戴荣国
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Zhang Shixin
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Abstract

本发明涉及猪用中益合生素饲料添加剂及其制备方法，其组分为：25～40％的混合益生菌剂和60％－75％的中药协同剂，其特征在于：混合益生菌剂为蜡样芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌的混合物，中药协同剂为杜仲叶、黄芪和山楂饮片混合的提取物。混合益生菌剂为40％腊样芽孢杆菌+30％酵母菌+30％乳酸菌的混合物。中药协同粉剂为黄芪29％－40％、山楂29％－40％和杜仲叶29％－40％的饮片混合的提取物。制备方法为：分别制备混合盖生菌剂和中药协同剂，再将混合益生菌剂和中药协同剂按比例混合均匀，制成猪用中益合生素饲料添加剂。本发明具有以下优点：能提高养猪生产效率，降低饲养成本；能增强生猪的免疫力和抗应激能力，降低发病率，用药少或不用药，有利于环境保护。

Description

猪用中益合生素饲料添加剂
技术领域
本发明涉及饲料添加剂，具体涉及猪用中益合生素饲料添加剂及其制备方法。
背景技术
1907年，俄国的细菌学家Metchnicoff发现在牛奶中加入乳酸菌制成的酸奶对人有益，能帮助消化、治疗腹泻。从而引起了众多科学家对有益微生物研究的极大兴趣。1977年德国的鲁西(Volkoer Rusch)首先建立起第一个微生态学研究所，主要从事双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌等活菌制剂(生理性细菌)作生态调整疗法的研究与应用。日本人首先将人用的有益活菌制成用于治疗家畜腹泻和肠炎的商品(即益生素)出售。后来在应用中发现，这些有益活菌不仅可以防治疾病，而且可以提高动物的生产性能。与添加抗生素相比，使用效果相同，有时甚至更好，而且无任何毒副作用，不在体内残留，不产生耐药性。于是益生素得到广泛的推广应用。随后欧美也开始普及这类微生态制剂，现有产品已上百种，并在继续增长。
中国于20世纪70年代末，开始研究饲用和治疗用的微生态制剂，当时(1980)四川农业大学的何明清教授等主要致力于畜禽下痢的研究，针对服用抗生素导致的二重感染，耐药菌增多等问题，率先筛选到无病原性大肠杆菌SY-30菌株，制成活菌制剂，在预防仔猪黄痢中收到良好的效果。同年，江苏农学院的方定一教授用NY-10(大肠杆菌+乳酸杆菌)预防仔猪黄痢也取得了明显的效果。随后陆续研制出的调痢生、健复生、菌痢康、痢速康等微生态制剂。随着生物兽药的研究与应用，研究者发现，这些生物兽药不但具有防病治病的效果，而且还有增加动物采食量和促进生长、提高增重的作用。
为了更好地发挥乳酸菌的有益作用，人们不断地寻找和研究协同剂，以求能提高乳酸菌在产品中的数量和生存率，延长其作用时间，使乳酸菌能以更多的数量到达畜禽体内，刺激肠道内源性及外源性乳酸菌的定植和生长，增强乳酸菌的代谢活性等。研究表明，中草药作为畜禽饲料添加剂，不仅可以提高动物的生产性能，还能促进乳酸杆菌和双岐杆菌增殖，而且毒、副作用极小。
中草药或微生态制剂作为“绿色”饲料添加剂开发并在畜禽养殖业中推广应用，对生产无公害畜禽产品，促进“绿色”养殖业的发展将起到了积极的作用。而两者在饲料添加剂中协同配合的效果如何？目前还未见报道。因此，我们在研究畜禽微生物饲料添加剂的基础上，进行了中药协同剂与益生素配合在饲料添加剂中的作用的研究，并获得了显著成效。
发明内容
本发明的目的是提供一种猪用中益合生素饲料添加剂，既能显著促进畜禽肠道中有益菌的增殖，抑制有害菌的生长，又能促进畜禽的生长，还能降低饲料的消耗；稳定性好，安全、无毒副作用、无残留、无污染。特别适合于生猪的饲养，也适合于其它畜禽的饲养。并提供这种猪用中益合生素饲料添加剂的制备方法。
本发明所述的猪用中益合生素饲料添加剂，其组分为：25～40％的混合益生菌剂和60％-75％的中药协同剂，其特征在于：混合益生菌剂为蜡样芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌的混合物，中药协同剂为杜仲叶、黄芪和山楂饮片混合的提取物。
所述的猪用中益合生素饲料添加剂，其特征在于：混合益生菌剂为40％腊样芽孢杆菌+30％酵母菌+30％乳酸菌的混合物，混合益生菌粉剂中含活菌数50亿/g。
所述的猪用中益合生素饲料添加剂，其特征在于：中药协同剂为黄芪29％-40％、山楂29％-40％和杜仲叶29％-40％的饮片混合的提取物。
所述的猪用中益合生素饲料添加剂的制备方法，其步骤为：分别制备混合益生菌剂和中药协同剂；将25～40％的混合益生菌剂和60％-75％的中药协同剂混合，制成猪用中益合生素饲料添加剂；
(1)混合益生菌剂的制备；
①乳酸菌的制备：
菌种为冻干保存的嗜酸乳杆菌；
乳酸菌培养基为：酵母膏10克、蛋白胨10克、葡萄糖6克、(NH4)2SO4200毫克、MgSO4.7H2O200毫克、K2HPO4.3H2O1克，蒸馏水1升；
第一步，扩大种子菌，：取斜面上菌种一铂金耳接种入装有乳酸菌培养基的试管内，37℃恒温静置培养20h，得到一级种子菌，取出冰箱保存，待用；
第二步，将一级种子菌按乳酸菌培养基的4-6％的比例，接种到乳酸菌培养基内，得到二级种子菌；
第三步，制备生产用的乳酸菌培养基，按乳酸菌培养基的成份比例称取各成分加水溶解，倒入30L的微生物发酵罐内，加水至1.8万ml，于115℃蒸气灭菌30分钟；
第四步，接种：待生产用的乳酸菌种培养基冷至37℃左右，在火焰控制下按培养基体积的6-8％的比例加入二级种子菌，搅拌均匀；
第五步，培养乳酸菌，关闭所有通气阀，37℃恒温培养22h；
第六步，离心脱水：从生物发酵罐内取出培养液，冰箱暂存，待培养液冷却后于3000r/min离心20min，去掉上清液，用20％牛乳汁将菌泥洗出，1万ml培养液加入300ml左右20％的牛乳汁作为保护剂，将其与含有明胶的包被液混合均匀，均质包被，冻干，研磨或低温粉碎，测定活菌数，密封包装，阴凉干燥处保存备用；
②腊样芽孢杆菌的制备
菌种于盐水或冻干保存在4℃的冰箱内；
腊样芽孢杆菌培养基：酵母膏10克、蛋白胨10克、葡萄糖6克、(NH4)2SO4200毫克、MgSO4.7H2O200毫克、K2HPO4.3H2O10克，蒸馏水1升；
第一步，扩大种子菌，吸取0.05ml种菌液接种到40ml的腊样芽孢杆菌培养基中，37℃摇床培养20h，镜检无杂菌，得到一级种子茵，备用；
第二步，取一级种子菌培养物按腊样芽孢杆菌培养基体积的4％的比例接种入腊样芽孢杆菌培养基内，37℃摇床培养20h，备用；
第三步，制备生产用的腊样芽孢杆菌培养基，按腊样芽孢杆菌培养基的成分比例配制1.8万ml的腊样芽孢杆菌培养基，倒入30L的发酵罐内，115℃蒸气灭菌30分钟，冷却至37℃左右，在火焰控制下接入二级种子菌1000ml；37℃通气供氧培养，观察PH值和DO值的变化，取样镜检芽孢形成情况，当芽孢形成达到95％(27小时左右)即可收获；
第四步，取出菌液，按菌液重量加入10％絮凝剂沉淀过夜，去上清液，取菌泥加入少量糠粉混合均匀，装入磁盘，置于40℃鼓风干燥箱内烘干，粉碎，计活菌数，密封包装，阴凉干燥处避光保存；
③酵母菌的制备：
以酿酒酵母为菌种，冻干，置冰箱冷藏保存；
YEPD培养基：酵母抽提物10克、蛋白胨20克、葡萄糖20克，蒸馏水1升。(固体加20g琼脂)；
第一步，扩大种子菌，取菌种一支，用YEPD液体培养基1-2ml稀释，接种于50mlYEPD液体培养基内，置于30℃～37℃恒温培养箱内静置培养24h。再将此50ml种子菌接种于1000mlYEPD培养基30℃～37°静置培养24h，待用；
第二步，按YEPD培养基的成分比例制备1.8万ml的YEPD培养基，加入到30L发酵罐内，115℃蒸气30min高压蒸汽灭菌，待培养基冷却到30℃在火焰保护加入1000ml种子菌。30℃恒温培养30h。
第三步，取出菌液，于离心机内3500r/min离心20min，或者加入10％的絮凝剂沉淀；收集菌泥，冷冻干燥或添加菌泥重量的1-2倍糠粉于50℃左右烘干。研磨或低温粉碎，计活菌数，包装密封，阴凉干燥处避光保存备用；
④制备混合益生菌剂，取40％重量的腊样芽孢杆菌+30％重量的酵母菌+30％重量的乳酸菌，混合匀即得到混合益生菌(含活菌数50亿/g)，密闭包装，阴凉干燥处避光保存，待用；
(2)中药协同剂的制备
①称重配料，按上述重量比例称取黄芪、山楂、杜仲叶中草药饮片；
②粉碎混合，将称取的中草药饮片粉碎成粗粉并混合均匀；
③水煎提取，将混合均匀的中草药粗粉装入“中草药多功能提取罐”中，加入中草药粗粉重量5倍的自来水，通入蒸气煎煮1小时，滤出煎煮提取液，再向中药提取罐内加5倍自来水，通气煎煮1小时，滤出煎煮提取液，如此再重复提取1次，弃药渣；
④浓缩煎煮提取液，合并三次煎煮提取液，通入蒸气，常压浓缩煎煮提取液，至原药量(即未提取中药原药)的1-1.5倍时，倒出浓缩液；
⑤沉淀，当浓缩液温度降至60℃-70℃时，徐徐在浓缩液里按10％-15％的比例加入含1％的壳聚糖溶液，搅拌均匀后静置24小时，去沉淀，得到浓缩的煎煮提取液，存贮备用；
⑥喷雾干燥浓缩的 煎煮提取液，将去沉淀后的煎煮提取液加热，再加入浓缩液重量的10％的糊精，搅拌溶解，进行喷雾干燥，“喷雾干燥器”的进口温度控制在180℃-185℃、出口温度控制在70℃-80℃。喷雾干燥后，将回收的干燥药粉密封包装，即得中药协同剂；
(3)猪用中益合生素饲料添加剂的制备
①按重量25～40％的混合益生菌剂和60％-75％的中药协同剂配料；②混合均匀；③密闭包装，避光保存。
也可将上述制成的益生菌与中药益生协同剂粉按比例混合均匀，制成中益合生素饲料添加剂的颗粒剂，以便于质量控制、保存、运输和使用。
选择体重相近的45日龄长白×荣昌断奶仔猪50头，公母各半，随机分为5个组，每组两个重复。试验期为两个阶段，共60d。各组日粮组合见表1。
表1  试验分组及日粮组合
组别     日粮组合
1组2组3组4组对照组     基础料+0.1％畜禽用益生素基础料+0.2％畜禽用益生素基础料+中药协同剂0.3％(相当于原药1％)基础料+中益合生素0.4(含25％益生素、中药协同剂75％)基础料
各组不同日粮组合对猪生长性能的影响见表2。
表2  不同组合及用量对猪生长性能的影响
  处理     1组      2组     3组     4组      对照组
始重(kg)     7.14±0.28      7.13±0.28     7.17±0.26     7.12±0.37      7.18±0.27
ADG(kg/d)   7-20kg20-40kg     0.3030.554      0.329a0.590     0.2980.574     0.341aa0.612a      0.279b0.549b
F/G   7-20kg20-40kg     1.962.86      2.012.81     1.912.85     1.842.75      2.102.91
注：横行间各数据标不同字母表示差异显著(P＜0.05)或(P＜0.01)
从表2可以看出，7～20kg阶段，日增重：益生素1、2组分别比对照组提高8.6％和17.92％(P＜0.05)；中药协同剂组与协同剂+益生素组分别比对照组提高6.81％和22.22％(P＜0.01)；协同剂+益生素组又比益生素1、2组提高12.54％(P＜0.05)和3.64％。饲料报酬：益生素1、2组分别比对照组提高6.67％和5.29％；中药协同剂组与协同剂+益生素组分别比对照组提高9.05％和12.38％；而协同剂+益生素组比益生素1、2组分别提高6.12％和8.46％。
20～40kg阶段，日增重：益生素1、2组分别比对照组提高0.91％和7.46％；中药协同剂组与协同剂+益生素组分别比对照组提高4.55％和11.47％(P＜0.05)；协同剂+益生素组又比益生素1、2组提高10.56％和3.73％。饲料报酬：益生素1、2组分别比对照组提高1.72％和3.44％；中药协同剂组与协同剂+益生素组分别比对照组提高2.06％和5.50％；而协同剂+益生素组比益生素1、2组分别提高3.85％和2.14％。
益生素与中益合生素(益生素+中药协同剂)对试验猪肠道大肠杆菌、乳酸菌和双歧杆菌的影响测定，结果见表3。
表3  益生素与益生素+协同剂对大肠杆菌、乳酸菌和双歧杆菌的影响
  菌类检测数(头)                              粪便含菌数/个.g-1
        益生素组       中益合生素组         对照组
   大肠杆菌4双歧杆菌4乳酸杆菌4         2.50×1062.58×1092.91×1010        2.10×106a6.58×1010a4.96×1010a        5.65×108b3.71×108b2.53×108b
注：横行间各数据标不同字母表示差异显著(P＜0.05)
从上表可以看出，益生素组与中益合生素组直肠粪便中的大肠杆菌数低于对照组，而双歧杆菌、乳酸杆菌数试验组均高于对照组，尤以中+益组最为显著。表明投喂益生素尤其是当益生素与协同剂配合使用后，可以明显促进双歧杆菌和乳酸杆菌等有益菌的增殖从而提高有益菌在肠道中的数量，并使有害菌大肠杆菌受到抑制而数量明显降低。肠道益生菌数量的增加，可激活肠道消化与免疫功能，促进猪只的消化与吸收，并抑制有害菌的繁殖，减少肠道疾病的发生，从而起到保健促长的作用。
本发明和现有单用益生素添加剂相比具有以下优点：能提高养猪生产效率，降低饲养成本；能增强生猪的免疫力和抗应激能力，降低发病率，用药少或不用药，有利于人身健康和环境保护；适合现代化工业生产，产品质量稳定。
具体实施方式
实施例一：
一、中药协同剂的制备
(1)称重配料，称取中草药饮片黄芪30Kg、杜仲叶30Kg、山楂40Kg为原料；
(2)粉碎混合，将称取的中草药饮片粉碎成粗粉并混合均匀；
(3)水煎提取，将混合均匀的中草药粗粉装入“中草药多功能提取罐”中，加入中草药粗粉重量5倍的自来水，通入蒸气煎煮1小时，滤出煎煮提取液，再向中药提取罐内加5倍自来水，通气煎煮1小时，滤出煎煮提取液，如此再重复提取1次，弃药渣；
(4)浓缩 煎煮提取液，合并三次煎煮液，通入蒸汽，常压浓缩提取液量至原药量的1-1.5倍时，倒出浓缩液；
(5)沉淀，当浓缩液温度降至60℃-70℃时，徐徐在浓缩液里按10％-15％的比例加入含1％的壳聚糖溶液，搅拌均匀后静置24小时，去沉淀，得到浓缩的煎煮提取液，存贮备用；
(6)喷雾干燥煎煮提取液，将去沉淀后的煎煮提取液加热，再加入浓缩液重量的5％-15％的糊精，搅拌溶解，进行 喷雾干燥，“喷雾干燥器”的进口温度控制在180℃-185℃、出口温度控制在70℃-80℃。喷雾干燥后，将回收的干燥药粉密封包装，即得中药益生协同剂备用。
二、混合益生菌剂的制备
1、乳酸菌的制备：
菌种为冻干保存的嗜酸乳杆菌；
乳酸菌培养基：酵母膏10克、蛋白胨10克、葡萄糖6克、(NH4)2SO4200毫克、MgSO4.7H2O200毫克、K2HPO4.3H2O1克，蒸馏水1升。
①、扩大种子菌：取斜面上菌种一铂金耳接种入装有培养基的试管。37℃恒温静置培养20h，得到一级种子菌，取出待用，冰箱保存；
②二级种子菌：将一级种子菌按乳酸菌培养基体积4-6％的比例接种到乳酸菌培养基内；
③生产用的乳酸菌培养基的制备：按上述乳酸菌培养基的成分比例称取各成分加水溶解。倒入30L微生物发酵罐内，加水至1.8万ml。于115℃蒸气灭菌30分钟；
④接种：待培养基冷至37℃左右，在火焰控制下加入二级种子菌菌种，按生产用的乳酸菌培养基6-8％的比例接种，搅拌均匀；
⑤培养：关闭所有通气阀，37℃恒温培养22h。
⑥离心：从生物发酵罐内取出培养液，冰箱暂存；待培养液冷却后于3000r/min离心20min，去掉上清液，用20％牛乳汁将菌泥洗出。在1万ml培养液加入300ml左右20％的牛乳汁作为保护剂。将其与包被液混合均匀，均质包被，冻干，研磨或低温粉碎，测定活菌数，密封包装，阴凉干燥处保存；
2、腊样芽孢杆菌的制备
菌种于盐水或冻干保存4℃冰箱；
腊样芽孢杆菌培养基：酵母膏10克、蛋白胨10克、葡萄糖6克、(NH4)2SO4200毫克、MgSO4.7H2O200毫克、K2HPO4.3H2O10克，蒸馏水1升。
①扩大种子菌，吸取0.05ml菌液接种40ml腊样芽孢杆菌培养基，37℃摇床培养20h，镜检无杂菌，得到一级种子菌，备用；
②二级种子菌：取一级种子菌，按腊样芽孢杆菌培养基的4％比例接种入培养基内，37℃摇床培养20h，得到二级种子菌，备用；
③按以上所述比例制备生产用的腊样芽孢杆菌培养基1.8万ml，置于30L发酵罐内，115℃蒸气灭菌30分钟，冷却至37℃左右，在火焰控制下接入二级种子菌1000ml。37℃通气供氧培养，观察PH值和DO值的变化，取样镜检芽孢形成情况，当芽孢形成达到95％(27小时左右)即可收获；
④取出菌液，按菌液重量加入10％絮凝剂沉淀过夜，去上清液，取菌泥加入少量糠粉混合均匀，装入磁盘，置于40℃鼓风干燥箱内烘干，粉碎，计活菌数，密封包装，阴凉干燥处避光保存；
3、酵母菌的制备
菌种：酿酒酵母，冻干，置冰箱冷藏保存；
YEPD培养基：酵母抽提物10克、蛋白胨20克、葡萄糖20克，蒸馏水1升。(固体加20g琼脂)；
①、扩大种子菌：取斜面上菌种一铂金耳接种入装有培养基的试管。37℃恒温静置培养20h，得到一级种子菌，取出待用，冰箱保存；
②二级种子菌：将一级种子菌按乳酸菌培养基体积4-6％的比例接种到乳酸菌培养基内；
③生产用的乳酸菌培养基的制备：按上述乳酸菌培养基的成分比例称取各成分加水溶解。倒入30L微生物发酵罐内，加水至1.8万ml。于115℃蒸气灭菌30分钟；
④接种：待培养基冷至37℃左右，在火焰控制下加入二级种子菌菌种，按生产用的乳酸菌培养基6-8％的比例接种，搅拌均匀；
⑤培养：关闭所有通气阀，37℃恒温培养22h。
⑥离心：从生物发酵罐内取出培养液，冰箱暂存；待培养液冷却后于3000r/min离心20min，去掉上清液，用20％牛乳汁将菌泥洗出。在1万ml培养液加入300ml左右20％的牛乳汁作为保护剂。将其与包被液混合均匀，均质包被，冻干，研磨或低温粉碎，测定活菌数，密封包装，阴凉干燥处保存；
三、中益合生素饲料添加剂的制备
(1)称重配料，称取中药协同剂75％、益生菌25％为原料；
(2)混合均匀；
(3)密闭包装，避光保存。
实施例二：
中药协同剂和混合益生菌剂的制备方法与实施例一相同，
(1)称重配料，称取中药协同剂70％、混合益生菌剂30％为原料；
(2)混合均匀；
(3)密闭包装，避光保存
实施例三：
三、中益合生素的制备
中药协同剂和混合益生菌剂的制备方法与实施例一相同
(1)称重配料，称取中药协同剂60％、混合益生菌剂40％为原料；
(2)混合均匀；
(3)密闭包装，避光保存。

Claims (4)

1.猪用中益合生素饲料添加剂，其组分为：25～40％的混合益生菌剂和60％-75％的中药协同剂，其特征在于：混合益生菌剂为蜡样芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌的混合物，中药协同剂为杜仲叶、黄芪和山楂饮片混合的提取物。
2.根据权利要求1所述的猪用中益合生素饲料添加剂，其特征在于：混合益生菌剂为40％样芽孢杆菌+30％酵母菌+30％乳酸菌的混合物。
3.根据权利要求1或2所述的猪用中益合生素饲料添加剂，其特征在于：中药协同剂为黄芪29％-40％、山楂29％-40％和杜仲叶29％-40％的饮片混合的提取物。
4.如权利要求1的猪用中益合生素饲料添加剂的制备方法，其步骤为：分别制备混合盖生菌剂和中药协同剂，再将25～40％的混合益生菌剂和60％-75％的中药协同剂混合均匀，制成猪用中益合生素饲料添加剂；
(1)混合益生菌剂的制备；
①乳酸菌的制备：
菌种为冻干保存的嗜酸乳杆菌；
乳酸菌培养基为：酵母膏10克、蛋白胨10克、葡萄糖6克、(NH4)2SO4200毫克、MgSO4.7H2O200毫克、K2HPO4.3H2O1克，蒸馏水1升；
第一步，扩大种子菌，：取斜面上菌种一铂金耳接种入装有乳酸菌培养基的试管内，37℃恒温静置培养20h，得到一级种子菌，取出冰箱保存，待用；
第二步，将一级种子菌按乳酸菌培养基的4-6％的比例，接种到乳酸菌培养基内，得到二级种子菌；
第三步，制备生产用的乳酸菌培养基，按乳酸菌培养基的成份比例称取各成分加水溶解，倒入30L的微生物发酵罐内，加水至1.8万ml，于115℃蒸气灭菌30分钟；
第四步，接种：待生产用的乳酸菌种培养基冷至37℃左右，在火焰控制下加入二级种子菌，按乳酸菌种培养基体积的6-8％的比例接种，搅拌均匀；
第五步，培养乳酸菌，关闭所有通气阀，37℃恒温培养22h；
第六步，离心脱水：从生物发酵罐内取出培养液，冰箱暂存，待培养液冷却后于3000r/min离心20min，去掉上清液，用20％牛乳汁将菌泥洗出，1万ml培养液加入300ml左右20％的牛乳汁作为保护剂，将其与含有明胶的包被液混合均匀，均质包被，冻干，研磨或低温粉碎，测定活菌数，密封包装，阴凉干燥处保存备用；
②腊样芽孢杆菌的制备
菌种于盐水或冻干保存在4℃的冰箱内；
腊样芽孢杆菌培养基：酵母膏10克、蛋白胨10克、葡萄糖6克、(NH4)2SO4200毫克、MgSO4.7H2O200毫克、K2HPO4.3H2O10克，蒸馏水1升；
第一步，扩大种子菌，吸取0.05ml种菌液接种到40ml的腊样芽孢杆菌培养基中，37℃摇床培养20h，镜检无杂菌，得到一级种子茵，备用；
第二步，取一级种子菌培养物按腊样芽孢杆菌培养基体积的4％的比例接种入腊样芽孢杆菌培养基内，37℃摇床培养20h，备用；
第三步，制备生产用的腊样芽孢杆菌培养基，按腊样芽孢杆菌培养基的成分比例配制1.8万ml的腊样芽孢杆菌培养基，倒入30L的发酵罐内，115℃蒸气灭菌30分钟，冷却至37℃左右，在火焰控制下接入二级种子菌1000ml；37℃通气供氧培养，观察PH值和DO值的变化，取样镜检芽孢形成情况，当芽孢形成达到95％(27小时左右)即可收获；
第四步，取出菌液，按菌液重量加入10％絮凝剂沉淀过夜，去上清液，取菌泥加入少量糠粉混合均匀，装入磁盘，置于40℃鼓风干燥箱内烘干，粉碎，计活菌数，密封包装，阴凉干燥处避光保存；
③酵母菌的制备：
以酿酒酵母为菌种，冻干，置冰箱冷藏保存；
YEPD培养基：酵母抽提物10克、蛋白胨20克、葡萄糖20克，蒸馏水1升。(固体加20g琼脂)；
第一步，扩大种子菌，取菌种一支，用YEPD液体培养基1-2ml稀释，接种于50mlYEPD液体培养基内，置于30℃～37℃恒温培养箱内静置培养24h。再将此50ml种子菌接种于1000mlYEPD培养基30℃～37°静置培养24h，待用；
第二步，按YEPD培养基的成分比例制备1.8万ml的YEPD培养基，加入到30L发酵罐内，115℃蒸气30min高压蒸汽灭菌，待培养基冷却到30℃在火焰保护加入1000ml种子菌。30℃恒温培养30h。
第三步，取出菌液，于离心机内3500r/min离心20min，或者加入10％的絮凝剂沉淀；收集菌泥，冷冻干燥或添加菌泥重量的1-2倍糠粉于50℃左右烘干。研磨或低温粉碎，计活菌数，包装密封，阴凉干燥处避光保存备用；
④制备混合益生菌剂，取40％重量的腊样芽孢杆菌+30％重量的酵母菌+30％重量的乳酸菌，混合匀即得到混合益生菌(含活菌数50亿/g)，密闭包装，阴凉干燥处避光保存，待用；
(2)中药协同剂的制备
①称重配料，按上述重量比例称取黄芪、山楂、杜仲叶中草药饮片；
②粉碎混合，将称取的中草药饮片粉碎成粗粉并混合均匀；
③水煎提取，将混合均匀的中草药粗粉装入“中草药多功能提取罐”中，加入中草药粗粉重量5倍的自来水，通入蒸气煎煮1小时，滤出煎煮提取液，再向中药提取罐内加5倍自来水，通气煎煮1小时，滤出煎煮提取液，如此再重复提取1次，弃药渣；
④浓缩煎煮提取液，合并三次煎煮提取液，通入蒸气，常压浓缩煎煮提取液，至原药量(即未提取中药原药)的1-1.5倍时，倒出浓缩液；
⑤沉淀，当浓缩液温度降至60℃-70℃时，徐徐在浓缩液里按10％-15％的比例加入含1％的壳聚糖溶液，搅拌均匀后静置24小时，去沉淀，得到浓缩的煎煮提取液，存贮备用；
⑥喷雾干燥浓缩的 煎煮提取液，将去沉淀后的煎煮提取液加热，再加入浓缩液重量的10％的糊精，搅拌溶解，进行喷雾干燥，“喷雾干燥器”的进口温度控制在180℃-185℃、出口温度控制在70℃-80℃。喷雾干燥后，将回收的干燥药粉密封包装，即得中药协同剂；
(3)猪用中益合生素饲料添加剂的制备
①按重量25～40％的混合益生菌剂和60％-75％的中药协同剂配料；
②混合均匀；
③密闭包装，避光保存。
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