CN1247594C

CN1247594C - 二环杂芳族化合物

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Publication number: CN1247594C
Application number: CNB018160670A
Authority: CN
Inventors: C·M·蒂默斯; W·F·J·卡斯坦斯
Original assignee: Akzo Nobel NV
Current assignee: Merck Sharp and Dohme BV
Priority date: 2000-09-22
Filing date: 2001-09-17
Publication date: 2006-03-29
Anticipated expiration: 2021-09-17
Also published as: HU229422B1; PT1322651E; AU1392902A; ES2299524T3; CZ2003828A3; DE60132607T2; SK3312003A3; RU2271360C2; IL154624A; PL207755B1; CA2422054A1; IS2531B; ZA200301588B; JP4977940B2; KR100860040B1; EP1322651A1; KR20030040483A; EP1886999A3; HK1054942A1; TWI290143B

Abstract

根据通式I的二环杂芳族化合物或其药学上可接受的盐，其中R¹是(3-8C)环烷基、(2-7C)杂环烷基、(6-14C)芳基或(4-13C)杂芳基；全都可选地被一个或多个取代基取代；R²是(1-4C)烷基、(2-4C)链烯基、(2-4C)炔基、(6-14C)芳基或(4-13C)杂芳基；R³是(1-8C)烷基、(3-8C)环烷基、(2-7C)杂环烷基、(6-14C)芳基或(4-13C)杂芳基；Y是CH或N；Z是NH₂或OH；A是S、N(H)、N(R⁴)、O或一条键；B是N(H)、O或一条键；X1-X2是C＝C、C(O)-NH、NH-C(O)、C(O)-O、O-C(O)、C＝N、N＝C、或S或O。本发明化合物可以用在控制生育的治疗中。

Description

二环杂芳族化合物

本发明涉及具有糖蛋白激素激动或拮抗活性的化合物，具体地说为具有促黄体激素(LH)激动活性的化合物。本发明进而涉及二环杂芳族衍生物、含有它们的药物组合物以及这些化合物在医学疗法中的用途，具体地说为节育的用途。

在各种机体功能中，包括代谢、温度调节和生殖过程，促性腺激素都发挥重要功能。垂体促性腺激素FSH例如在卵泡发育与成熟的刺激中扮演关键角色，而LH诱发排卵(Sharp，R.M.Clin.Endocrinol.33：787-807；Dorrington and Armstrong，Recent Prog.Horm.Res.35：301-342，1979)。目前，LH在临床上与FSH联合用于卵巢刺激，也就是体外受精(IVF)的卵巢过度刺激，还用于不孕不排卵妇女的排卵诱发(Insler，V.，Int.J.Fertility 33：85-97，1988；Navotand Rosenwaks，J.Vitro Fert.Embryo Transfer 5：3-13，1988)，以及用于男性性腺机能减退和男性不育。

促性腺激素作用于特定的生殖腺细胞类型，引发排卵和睾丸的分化与类固醇生成。这些垂体与胎盘激素的作用受特异性血浆膜受体的介导，后者是一大家族G-蛋白偶联受体的成员。它们由单一的多肽和七个跨膜结构域组成，能够与Gs蛋白发生相互作用，引起腺苷酸环化酶的激活。

用于治疗目的的促性腺激素可以从人尿来源中分离，纯度低(Morse等，Amer.J.Reproduct.Immunol.and Microbiology 17：143，1988)。作为替代选择，它们可以被制成重组促性腺激素。

关于其他治疗性蛋白质，有必要将促性腺激素通过皮下或肌内方式给药。不过将有利的是用能够通过例如口服或透皮途径给药的小分子激活受体。

本发明描述了这类小分子量激素类似物的制备，它们选择性地激活使性腺激素受体之一。这应当被视为本发明的主要优点之一。

因而，本发明在于根据通式I的二环杂芳族衍生物或其药学上可接受的盐，

式I

其中

R¹是(3-8C)环烷基、(2-7C)杂环烷基、(6-14C)芳基或(4-13C)杂芳基；优选地，R¹是(6-14C)芳基或(4-13C)杂芳基；

R²是(1-4C)烷基、(2-4C)链烯基、(2-4C)炔基、(6-14C)芳基或(4-13C)杂芳基；

R³是(1-8C)烷基、(3-8C)环烷基、(2-7C)杂环烷基、(6-14C)芳基或(4-13C)杂芳基；

Y是CH或N；

Z是NH₂或OH；

A是S、N(H)、N(R⁴)、O或一条键，

R⁴可以选自与R²所述相同的基团；

B是N(H)、O或一条键。

R¹中的环系可以可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自R⁵、NHR⁵、N(R⁴)R⁵、OR⁵和/或SR⁵，其中R⁵是(6-14C)芳基、(4-13C)杂芳基、(6-14C)芳基羰基、(2-7C)杂环烷基、(3-8C)环烷基、(6-14C)芳基磺酰基、(6-14C)芳基氨基羰基、(6-14C)芳氧基羰基、(6-14C)芳基氨基磺酰基、(6-14C)芳氧基磺酰基、(2-8C)链烯基、(2-8C)炔基、(2-7C)杂环烷基羰基、(2-8C)链烯基磺酰基、(2-8C)链烯氧基羰基、或(1-8C)烷基、(1-8C)烷基羰基、(1-8C)烷基磺酰基、(1-8C)(二)烷基氨基羰基、(1-8C)烷氧基羰基、(1-8C)(二)烷基氨基磺酰基或(1-8C)烷氧基磺酰基，其中的烷基可以可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自羟基、(1-8C)烷氧基、(2-7C)杂环烷基(1-8C)烷氧基、(3-8C)环烷基(1-8C)烷氧基、(6-14C)芳基(1-8C)烷氧基、(4-13)杂芳基(1-8C)烷氧基、(2-7C)杂环烷基、(3-8C)环烷基、(6-14C)芳基、(4-13C)杂芳基、(1-8C)烷氧基羰基、(6-14C)芳氧基羰基、(1-8C)烷基碳酰氧基、(6-14C)芳基碳酰氧基、(1-8C)烷基羰基、(6-14C)芳基羰基、胺、(1-8C)烷基氨基羰基、(6-14C)芳基氨基羰基、(1-8C)烷基碳酰氨基、(6-14C)芳基碳酰氨基、(6-14C)(二)芳基氨基、(二)[(1-3C)烷氧基(1-3C)烷基]氨基和/或(1-8C)(二)烷基氨基。优选地，R¹中的取代基选自NHR⁵或OR⁵。R⁵在R¹的任何取代基中优选地是(2-7C)杂环烷基羰基、(6-14C)芳基羰基、或(1-8C)烷基、(1-8C)烷基羰基或(1-8C)(二)烷基氨基羰基，其中的烷基可以可选地被(2-7C)杂环烷基、(4-13)杂芳基、(1-8C)烷氧基羰基、(1-8C)烷基氨基羰基、(1-8C)烷基碳酰氨基、(6-14C)芳基碳酰氨基、胺和/或(1-8C)(二)烷基氨基取代。在烷基上最优选的取代基是(2-7C)杂环烷基、(1-8C)(二)烷基氨基、胺和(1-8C)(二)烷基氨基羰基。

在R¹上最优选的是可选被上述取代基之一取代的苯基，优选地在间位取代。

在根据本发明的化合物中，X1-X2是C＝C、C(O)-NH、NH-C(O)、C(O)-O、O-C(O)、C＝N或N＝C。如果R⁵是(1-8C)烷基磺酰基、(6-14C)芳基磺酰基、(1-8C)(二)烷基氨基羰基、(6-14C)芳基氨基羰基、(1-8C)烷氧基羰基、(6-14C)芳氧基羰基、(1-8C)(二)烷基氨基磺酰基、(6-14C)芳基氨基磺酰基、(1-8C)烷氧基磺酰基、(2-7C)杂环烷基羰基、(2-8C)链烯基磺酰基、(2-8C)链烯氧基羰基或(6-14C)芳氧基磺酰基，那么X 1-X2还可以是S或O。

根据本发明的优选化合物是根据通式I的化合物，其中B是N(H)或一条键和/或Z是NH₂。在这些优选的化合物中，其中B是N(H)或一条键且Z是NH₂的那些是尤其优选的。更优选的是除了上述B和Z的定义以外还优选地由下述R¹所定义的化合物，即R¹是(6-14C)芳基或(4-13C)杂芳基，可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自N(R⁴)R⁵、NHR⁵、R⁵、OR⁵和/或SR⁵，优选地被NHR⁵或OR⁵取代。

在所有上述化合物中，Y所优选的是N，B所优选的是N(H)或一条键。如果B是一条键，那么R³优选地是(2-7C)杂环烷基。

进而，在所有上述化合物中，X1-X2优选地是C＝C、C＝N或N＝C，最优选为C＝C。如果R⁵是(1-8C)烷基磺酰基、(6-14C)芳基磺酰基、(1-8C)(二)烷基氨基羰基、(6-14C)芳基氨基羰基、(1-8C)烷氧基羰基、(6-14C)芳氧基羰基、(1-8C)(二)烷基氨基磺酰基、(6-14C)芳基氨基磺酰基、(1-8C)烷氧基磺酰基、(2-7C)杂环烷基羰基、(2-8C)链烯基磺酰基、(2-8C)链烯氧基羰基或(6-14C)芳氧基磺酰基，那么除了上述基团以外，X1-X2所优选的还可以是S。

最优选的是选自下组的化合物：叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-((N，N-二乙氨基)-碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(甲氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(烯丙氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(乙氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-((吗啉-4-基)-碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(1，2，3，6-四氢吡啶基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-((N，N-二甲氨基)-碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺。

从本发明中排除的是化合物5-羟基-2-甲基-4-(哌啶-1-基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯、5-羟基-2-甲基-4-(吗啉-4-基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯和5-羟基-2-甲基-4-(吡咯烷-1-基)-吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯。

所放弃的内容涉及Chem.Pharm.Bull.18(7)，1385-1393(1970)的公开内容。

用在式I定义中的术语(1-8C)烷基表示具有1-8个碳原子的直链或支链烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、叔丁基、己基和辛基。(1-6C)烷基是优选的，(1-3C)烷基是最优选的。

术语(2-8C)链烯基表示具有2-8个碳原子的直链或支链链烯基，例如乙烯基、2-丁烯基等。(1-6C)链烯基是优选的，(1-3C)链烯基是最优选的。

术语(2-8C)炔基表示具有2-8个碳原子的直链或支链炔基，例如乙炔基和丙炔基。最优选的是(2-4C)炔基。

术语(6-14C)芳基表示具有6-14个碳原子的芳族烃基，例如苯基、萘基、四氢萘基、茚基、蒽基，它可以可选地被一个或多个取代基取代，取代基例如——但不限于——羟基、卤素、硝基、三氟甲基、氰基、(1-8C)烷基碳酰氨基、(1-8C)烷基氨基羰基或(1-8C)(二)烷基氨基，烷基部分具有与前述定义相同的含义。更优选的是(6-10C)芳基。最优选的芳族烃基是苯基。

术语(3-8C)环烷基表示具有3-8个碳原子的环烷基，是环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基或环辛基。

术语(2-7C)杂环烷基表示具有2-7个碳原子、优选2-5个碳原子的杂环烷基，并且至少包括一个选自N、O或S的杂原子。优选的杂原子是N或O。含氮杂环烷基可以经由碳或氮原子连接。最优选的杂环烷基是哌啶、吗啉和吡咯烷。

术语(2-7C)杂环烷基羰基表示与羰基连接的、如前述定义的具有2-7个碳原子的杂环烷基。

术语(1-8C)烷氧基表示具有1-8个碳原子的烷氧基，烷基部分具有与前述定义相同的含义。(1-6C)烷氧基是优选的，(1-3C)烷氧基是最优选的。

术语(1-8C)烷氧基羰基表示这样的烷氧基羰基，它的烷基含有1-8个碳原子，并且具有与前述定义相同的含义。(1-6C)烷氧基羰基是优选的，(1-3C)烷氧基羰基是最优选的。

术语(2-8C)链烯氧基羰基表示这样的链烯氧基羰基，它的链烯基含有2-8个碳原子，并且具有与前述定义相同的含义。(2-6C)链烯氧基羰基是优选的，(2-3C)链烯氧基羰基是最优选的。

术语(1-8C)烷氧基磺酰基表示这样的烷氧基磺酰基，它的烷基含有1-8个碳原子，并且具有与前述定义相同的含义。(1-6C)烷氧基磺酰基是优选的，(1-3C)烷氧基磺酰基是最优选的。

术语(1-8C)(二)烷基氨基表示具有1-8个碳原子的(二)烷基氨基，烷基部分具有与前述定义相同的含义。更优选的是(1-6C)(二)烷基氨基。

术语二[(1-3C)烷氧基(1-3C)烷基]氨基表示(二)[烷氧基烷基]氨基，它的烷基和烷氧基部分都具有1-3个碳原子，并且具有与前述定义相同的含义。

术语(6-14C)(二)芳基氨基表示具有6-14个碳原子的(二)芳基氨基，芳基部分具有与前述相同的含义。更优选的是(6-10C)(二)芳基氨基。最优选的(二)芳基氨基是(二)苯基氨基。

术语(1-8C)烷硫基表示具有1-8个碳原子的烷硫基，烷基部分具有与前述相同的含义。最优选的是(1-4C)烷硫基。

术语(6-14C)芳氧基羰基表示这样的芳氧基羰基，它的芳基含有6-14个碳原子，更优选6-10个碳原子，并且具有与前述相同的含义。最优选的是苯氧基羰基。

术语(6-14C)芳氧基磺酰基表示这样的芳氧基磺酰基，它的芳基含有6-14个碳原子，更优选6-10个碳原子，并且具有与前述相同的含义。最优选的是苯氧基磺酰基。

术语(6-14C)芳基(1-8C)烷基表示具有7-22个碳原子的芳基烷基，其中的烷基是如前述所定义的(1-8C)烷基，芳基是如前述所定义的(6-14C)芳基。更优选的是(6-10C)芳基(1-4C)烷基。苯基(1-4C)烷基、例如苄基是最优选的芳基烷基。

术语(4-13C)杂芳基表示取代或未取代的芳族基团，具有4-13个、优选4-9个碳原子，至少包括一个选自N、O和/或S的杂原子，例如咪唑基、噻吩基、苯并噻吩基、喹啉基、四氢喹啉基、异喹啉基、四氢异喹啉基、吲哚基、吖啶醇基、呋喃基或吡啶基。杂芳基上的取代基可以选自关于芳基所列举的取代基。优选的杂芳基是噻吩基、呋喃基、吡啶基和嘧啶基。含氮杂芳基可以经由碳或氮原子连接。

术语卤素表示氟、氯、溴或碘。

术语(2-7C)杂环烷基(1-8C)烷氧基表示与(1-8C)烷氧基连接的、如前述所定义的含有2-7个碳原子的杂环烷基，烷氧基部分具有与前述相同的含义。更优选的是(2-5C)杂环烷基(1-4C)烷氧基。

术语(3-8C)环烷基(1-8C)烷氧基表示与(1-8C)烷氧基连接的、如前述所定义的含有3-8个碳原子的环烷基，烷氧基部分具有与前述相同的含义。更优选的是(3-6C)环烷基(1-4C)烷氧基。

术语(6-14C)芳基(1-8C)烷氧基表示与(1-8C)烷氧基连接的、如前述所定义的含有6-14个碳原子的芳基，烷氧基部分具有与前述相同的含义。更优选的是(6-10C)芳基(1-4C)烷氧基，苯基(1-4C)烷氧基是最优选的。(4-13C)杂芳基(1-8C)烷氧基是(6-14C)芳基(1-8C)烷氧基的类似物，在杂芳基环中至少包括一个选自N、O和S的杂原子。更优选的是(4-9C)杂芳基(1-4C)烷氧基。

术语(1-8C)烷基羰基表示这样的烷基羰基，它的烷基含有1-8个碳原子，并且具有与前述定义相同的含义。更优选的是(1-6C)烷基羰基，(1-4C)烷基羰基是最优选的。

术语(6-14C)芳基羰基表示这样的芳基羰基，它的芳基含有6-14个碳原子，并且具有与前述定义相同的含义。更优选的是(6-10C)芳基羰基，苯基羰基是最优选的。

术语(1-8C)烷基磺酰基表示这样的烷基磺酰基，它的烷基含有1-8个碳原子，并且具有与前述定义相同的含义。更优选的是(1-6C)烷基磺酰基，(1-4C)烷基磺酰基是最优选的。

术语(2-8C)链烯基磺酰基表示这样的链烯基磺酰基，它的链烯基含有2-8个碳原子，并且具有与前述定义相同的含义。更优选的是(2-6C)链烯基磺酰基，(2-4C)链烯基磺酰基是最优选的。

术语(6-14C)芳基磺酰基表示这样的芳基磺酰基，它的芳基含有6-14个碳原子，并且具有与前述定义相同的含义。更优选的是(6-10C)芳基磺酰基，苯基磺酰基是最优选的。

术语(1-8C)烷基碳酰氧基表示这样的烷基碳酰氧基，它的烷基含有1-8个碳原子，并且具有与前述定义相同的含义。更优选的是(1-6C)烷基碳酰氧基，最优选的是(1-4C)烷基碳酰氧基。

术语(6-14C)芳基碳酰氧基表示这样的芳基碳酰氧基，它的芳基含有6-14个碳原子，并且具有与前述定义相同的含义。更优选的是(6-10C)芳基碳酰氧基，苯基碳酰氧基是最优选的。

术语(1-8C)(二)烷基氨基羰基表示这样的(二)烷基氨基羰基，它的烷基含有1-8个碳原子，并且具有与前述定义相同的含义。更优选的是(1-6C)(二)烷基氨基羰基，(1-4C)(二)烷基氨基羰基是最优选的。

术语(6-14C)(二)芳基氨基羰基表示这样的(二)芳基氨基羰基，它的芳基含有6-14个碳原子，并且具有与前述定义相同的含义。更优选的是(6-10C)(二)芳基氨基羰基，(二)苯基氨基羰基是最优选的。

术语(1-8C)(二)烷基氨基磺酰基表示这样的(二)烷基氨基磺酰基，它的烷基含有1-8个碳原子，并且具有与前述定义相同的含义。更优选的是(1-6C)(二)烷基氨基磺酰基，(1-4C)(二)烷基氨基磺酰基是最优选的。

术语(6-14C)(二)芳基氨基磺酰基表示这样的(二)芳基氨基磺酰基，它的芳基含有6-14个碳原子，并且具有与前述定义相同的含义。更优选的是(6-10C)(二)芳基氨基磺酰基，(二)苯基氨基磺酰基是最优选的。

术语(1-8C)烷基碳酰氨基表示这样的烷基碳酰氨基，它的烷基含有1-8个碳原子，并且具有与前述定义相同的含义。更优选的是(1-6C)烷基碳酰氨基，(1-4C)烷基碳酰氨基是最优选的。

术语(6-14C)芳基碳酰氨基表示这样的芳基碳酰氨基，它的芳基含有6-14个碳原子，并且具有与前述定义相同的含义。更优选的是(6-10C)芳基碳酰氨基，苯基碳酰氨基是最优选的。

术语(2-7C)杂环烷氧基表示与氧原子连接的、如前述所定义的含有2-7个碳原子的杂环烷基。最优选的是(2-5C)杂环烷氧基。

术语(3-8C)环烷氧基表示与氧原子连接的、如前述所定义的含有3-8个碳原子的环烷基。

术语(6-14C)芳氧基表示与氧原子连接的、如前述所定义的含有6-14个碳原子的芳基。更优选的是(6-10C)芳氧基，苯氧基是最优选的。(4-13C)杂芳氧基是(6-14C)芳氧基的类似物，在杂芳基环中至少包括一个选自N、O和S的杂原子。更优选的是(4-9C)杂芳氧基。

已经显示上述式I化合物能够与LH受体结合，显示激动LH的活性。

本发明进一步在于药物组合物，包含具有通式I的二环杂芳族衍生物或其盐。

因而，根据本发明的化合物可以用于治疗。本发明的进一方面在于具有通式I的二环杂芳族化合物在制备节育药物中的用途。优选地，本发明化合物用于激活LH受体。

本发明的二环杂芳族衍生物可以具有一个或多个手性碳原子。因此可以获得手性纯的化合物或非对映体和/或对映体的混合物。用于获得手性纯化合物的方法是本领域熟知的，例如结晶或色谱。

关于治疗用途，式I化合物的盐是其中抗衡离子是药学上可接受的那些。不过，根据式I的碱的酸加成盐例如也可以用于制备或纯化药学上可接受的化合物。所有的盐无论是药学上可接受的与否，都包括在本

发明的范围内。

酸加成盐的实例包括得自无机酸和有机酸的那些，无机酸例如盐酸、磷酸、硫酸，优选盐酸，有机酸例如柠檬酸、酒石酸、乙酸、乳酸、马来酸、丙二酸、富马酸、乙醇酸、琥珀酸等。

适合于式I化合物或其药学上可接受的盐——也称活性成分——的给药途径是肌内注射、皮下注射、静脉内注射或腹膜内注射、口服和鼻内给药。优选地，化合物可以口服给药。活性成分或其药物组合物的精确剂量和给药方案将有必要取决于所要达到的治疗效果(不育的治疗；避孕)，并且可以因特定化合物、给药途径和接受药物治疗的个体年龄与状况而异。

一般而言，肠胃外给药比更多依赖于吸附的其他给药方法需要更低的剂量。不过，人用剂量优选地含有0.0001-25mg每kg体重。所需剂量可以是单一剂量或多个亚剂量，在全天内按适当间隔给药，或者在女性受治疗者的情况下，在整个月经周期中按适当日期间隔给药。剂量以及给药方案可以存在性别差异。

在体外或来自体内应用中，例如IVF应用，本发明化合物是在培养基中使用的，浓度大约0.01-5μg/ml。

本发明因而还涉及药物组合物，包含与药学上可接受的助剂和可选的其他治疗剂混合的根据式I的二环杂芳族化合物。在可与组合物的其他成分相容和对其接受者无害的意义上，助剂必须是“可接受的”。药物组合物包括适合于口服、直肠、鼻、局部(包括透皮、颊和舌下)、阴道或肠胃外(包括皮下、肌内、静脉内和真皮内)给药的那些。组合物可以通过药学领域熟知的任意方法加以制备，例如利用Gennaro等，Remington’s Pharmaceutical Sciences(第18版，MackPublishing Co.，1990，尤其参见第8部分：PharmaceuticalPreparations and Their Manufacture)所述方法。

这类方法包括使活性成分与任意助剂缔合的步骤。助剂也称辅助成分，包括本领域常用的那些(Gennaro，出处同上)，例如填充剂、粘合剂、稀释剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、矫味剂和湿润剂。

适合于口服给药的药物组合物可以是离散的剂量单位，例如丸剂、片剂或胶囊剂，或者是粉剂或颗粒剂，或者是溶液或悬液。活性成分还可以是大丸剂或糊剂。组合物可以进一步被加工成用于直肠给药的栓剂或灌肠剂。

关于肠胃外给药，适合的组合物包括水性和非水性无菌注射剂。组合物可以存在于单位剂量或多剂量容器中，例如密封的小瓶和安瓿，并且可以贮存在冷冻干燥(冻干)条件下，仅需在使用前加入无菌的液体载体，例如水。

适合于通过鼻吸入给药的组合物或制剂包括微细的粉剂或雾剂，这可以借助计量剂量的压力气雾剂、雾化器或吹入器生成。

本发明的二环杂芳族衍生物还可以以可植入的药具形式给药，它由活性材料的核心组成，包以释放速率调节性的膜。这类植入物是供皮下或局部应用的，将按大约恒定的速率释放活性成分，历经相当长的时间阶段，例如从数周至数年。用于制备可植入药具的方法本身是本领域已知的，例如欧洲专利0,303,306(AKZO N.V.)所述。

因而，根据本发明的化合物可以用于与天然LH相同的临床目的，优点在于它们显示改变了的稳定性，并且可以通过不同的方式给药。

由式(I-a)代表的其中B＝NH的本发明化合物一般可以按照本领域已知的式(II)酸与式(III)胺的缩合作用加以制备。

上述反应是这样进行的，在室温下，在适合的溶剂中，例如非质子传递溶剂，例如N，N-二甲基甲酰胺(DMF)或二氯甲烷，使用一种偶联剂，例如O-(苯并三唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)或溴代三吡咯烷基鏻六氟磷酸盐(PyBrOP)，和一种叔胺碱，例如N，N-二异丙基乙胺(DiPEA)。

同样，由式(I-b)代表的其中B＝O的式(I)化合物可以以与上述关于式(I-a)化合物相同的方式加以制备，从通式(II)酸和式(IV)醇开始。

由式(I-c)代表的其中B是一条键的式(I)化合物可通过适当的有机金属试剂与式(V)衍生物在非质子传递溶剂、例如THF中的反应加以制备。有关的取代反应可以参见文献：S.V.Frye，M.C.Johnson，N.L.Valvano，J.Org.Chem.56：3750，1991。利用关于式(I-a)酰胺制备所述条件，可以从式(II)酸和N-甲氧基-N-甲基胺合成式(V)的Weinreb酰胺。

适合于制备中间体酸(II)的方法是本领域已知的碱介导的通式(VI)乙基酯的皂化作用。皂化作用发生的条件是在碱的存在下，例如氢氧化锂、氢氧化钾或氢氧化钠，在含水二噁烷中，在高温下(40℃至回流)，继之以酸处理。

式(VII)二环内酰胺是可用于制备对应亚胺(VIII)的原料。在典型的实验中，在高温下(60℃至回流)，在适当的溶剂中，例如1，4-二噁烷，使用磷酰氯将内酰胺转化为对应的氯代亚胺。在适合的催化剂的存在下，在乙醇中，用还原剂处理，例如氢，可以分离所需的通式(VIII)亚胺。有关的还原作用已经有文献报道，例如参见：E.Bisagni，C.Landras，S.Thirot和C.Huel，Tetrahedron 52：10427，1996。

通式(VII)二环内酰胺可以这样制备，在偶联剂的作用下，例如TBTU/DiPEA，(IX)型酸与氨基丙二酸二乙酯缩合，再在碱性条件下，中间体酰胺在乙醇中环化。芳构化作用和伴随的去乙氧羰基化作用得到(VII)型二环。在可供替代的程序中，可以使用甘氨酸乙酯代替氨基丙二酸二乙酯。例如参见：M.Blanco，M.G.Lorenzo，I.Perillo，C.B.Schapira，J.Heterocycl.Chem.33：361，1996。中间体酰胺的环化作用还可以通过氯化锡(IV)进行。氯化锡(IV)在有关系统上进行环闭合的用途已有报道：A.C.Veronese，R.Callegari，C.F.Morelli，Tetrahedron 51：12277，1995。

在非亲核性碱的影响下，例如碳酸钾或叔丁醇钾，在非质子传递溶剂中，将式(IX)酸用溴乙酸乙酯处理，可以得到通式(X)的芳族内酯。有关结构已经有文献描述：C.Bhakta，Indian J.Chem.Sect.B.25：189，1986。

在碱性条件下，将式(XI)乙烯基衍生物用丙二酸二乙酯处理，引起共轭加成作用。中间体加合物可以通过氯化锡(IV)介导的反应和处理被环化为式(XII)二环。作为替代选择，在这种程序中可以使用丙二酸叔丁基乙基酯代替丙二酸二乙酯。

在高温下，在适当的溶剂中，例如二甲苯，用适合的氧化剂、例如DDQ或钯催化剂处理，发生式(XII)衍生物的芳构化作用，得到通式(XIII)的喹唑啉或喹啉。另见：K.Kobayashi，T.Uneda，K.Takada，H.Tanaka，T.Kitamura，O.Morikawa，H.Konishi，J.Org.Chem.62：664，1997。

在另一种方法中，在适合的非质子传递溶剂中，例如THF，在低温下(-78℃)，使用一种强碱，例如六甲基二硅烷基氨基化锂(LiHMDS)或二异丙氨基化锂(LDA)去质子化通式(XIV)甲基吡啶/嘧啶的甲基。然后使阴离子与3-乙氧基丙烯酸乙酯反应。共轭加成后，环化为通式(XIII)喹啉或喹唑啉，参见：K.Kobayashi，K.Takada，H.Tanaka，T.Uneda，T.Kitamura，Chem.Lett.：25，1996；K.Kobayashi，T.Uneda，K.Takada，H.Tanaka，T.Ki tamura，O.Morikawa，H.Konishi，J.Org.Chem.62：664，1997。

在碱性条件下，将通式(XV)氯化物用(N-烷基)β-丙氨酸乙酯(XVI)处理，得到通式(XVII)二环。有关的转化作用已经描述在：P.Y.Boamah，N.Haider，G.Heinisch，Arch.Pharm.(Weinheim)323：2O7，1990。

在高温下，使用披钯碳，可以将其中R⁶＝H的式(XVII)化合物氧化为式(XVIII)衍生物。例如参见：M.Onda，K.Kawakami，Chem.Pharm.Bull.20：1484，1972。使用DDQ，可以将其中R⁶＝H或烷基的式(XVII)化合物转化为式(XVIII)亚胺，这描述在：H.Ishii，Chem.Pharm.Bull.26：864，1978；J.I.DeGraw，P.H.Christie，W.T.Colwell，F.M.Sirotnak，J.Med.Chem.35：320，1992。

作为替代选择，式(XVIII)亚胺可以从对应的式(XIX)内酰胺以与它们的式(VIII)区域异构类似物相似的方式(参见上文)加以制备，也就是使用POCl₃转化为氯代亚胺，随后使用氢和适当的催化剂进行脱卤作用。

式(XIX)内酰胺可以通过在适合的碱的存在下式(XX)氨基吡啶/嘧啶与丙二酸氯乙酯的酰化作用加以制备。随后在碱(乙醇钠的乙醇溶液)或氯化锡(IV)的作用下，中间体无环丙二酰胺的环闭合作用得到(XIX)型二环内酰胺。相似的转化作用已经有文献报道，例如参见：A.C.Veronese，R.Callegari，C.F.Morelli，Tetrahedron 51：12277，1995；W.Stadlbauer，S.Prattes，W.Fiala，J.Heterocycl.Chem.35：627，1998。

根据式(XX)氨基吡啶/嘧啶的取代模式，式(XIX)内酰胺可以这样制备，通过氯化锡(IV)介导的丙二酸二乙酯的偶联，继之以在高温下在适合溶剂中(例如240℃，二苯醚)的环化作用。

以相似的方式，(XXII)型内酯可以通过式(XXI)内酰胺与丙二酸氯乙酯的O-酰化作用和随后的环化作用加以制备。

通式(XXIII)呋喃并吡啶/嘧啶可以这样获得，在丙酮中，使用碳酸钾进行(XXI)型内酰胺的选择性O-烷基化作用，随后在乙醇钠的乙醇溶液的影响下进行环闭合作用。

通式(XXIV)噻吩并吡啶/嘧啶可以这样获得，在强碱的影响下，将氯化物(XV)用巯基乙酸乙酯处理。在典型的实验中，使1当量氯化物(XV)与1.5当量巯基乙酸乙酯和2当量叔丁醇钾在THF中反应。在这些条件下，无环硫化物经历自发的环化作用，生成通式(XXIV)噻吩并吡啶/嘧啶。如果R¹是被吸电子基团、例如硝基取代的(杂)芳基，那么上述环化作用经由两步程序完成，牵涉中间体硫醚的分离，继之以在甲苯/EtOH中，在回流温度下，用叔碱处理，例如DIPEA，以进行噻吩环的生成。

通式(IX)吡啶/嘧啶羧酸酯可以这样获得，在水与有机助溶剂的混合物中，例如1，4-二噁烷或甲醇，在高温下(40℃至回流)，使用强碱，例如氢氧化锂或氢氧化钾，进行式(XXV)烷氧基羰基吡啶/嘧啶的皂化作用，继之以酸处理。如果W＝CO₂烷基，那么R⁷优选地是苄基，以便能够进行苄基酯官能的选择性氢解作用，同时取代基W保持不受影响。

式(XXV)化合物能够通过在一氧化碳和适当醇(R⁷OH，XXVI)的存在下的钯催化的氯化物(XV)的烷氧基羰基化作用加以制备。相似的转化作用已经出现在文献中，例如参见：Y.Bessard，R.Crettaz，Heterocycles 51：2589，1999。

钯催化的氯化物(XV)与乙烯基三丁基锡或四乙烯基锡的反应得到通式(XI)乙烯基吡啶/嘧啶。这种类型的转化作用已经广泛有文献报道，例如参见：L.L.Gundersen，A.K.Bakkestuen，A.J.Aasen，H.OeVeras，F.Rise，Tetrahedron 50：9743，1994；F.Guillier，F.Nivoliers，A.Godard，F.Marsais，G.Queguiner，J.Heterocycl.Chem.36：1157，1999。

根据通式(XV)氯化物的取代模式，通式(XI)乙烯基吡啶/嘧啶还可以这样制备，将氯化物用亚甲基三苯基磷烷取代，继之以与(低聚)甲醛反应。

类似地，在钯催化剂的存在下，在非质子传递溶剂中，例如THF，将通式(XV)氯化物用三甲基铝处理，得到通式(XIV)甲基吡啶/嘧啶。有关的合成已经公开在：Q.Lu，I.Mangalagiu，T.Benneche andK.Undheim，Acta Chem.Sc.51：302，1997。

由式(XXI-a)代表的其中Y＝N的式(XXI)化合物可以经由若干文献方法制备。

例如，其中R¹＝(6-14C)芳基或(4-13C)杂芳基的式(XXI-a)衍生物可以通过其中W是如前述所定义的乙基酯(XXVII)与醛(XXVIII)和化合物(XXIX)的缩合作用加以合成，化合物(XXIX)可以是异硫脲(XXIX-a)、异脲(XXIX-b)、单取代的胍(XXIX-c)、二取代的胍(XXIX-d)或脒(XXIX-e)。

在典型的实验中，将组分(XXVII)、(XXVIII)和(XXIXa-e)悬浮在适当的溶剂中，例如乙醇、甲醇、N，N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、四氢呋喃或吡啶，加入一种碱，例如碳酸钾、乙酸钠、甲醇钠或乙醇钠。反应发生在高温下(70℃至回流)。例如参见：S.Kambe，K.Saito and H.Kishi，Synthesis：287，1979；A.M.Abd-Elfattah，S.M.Hussain and A.M.El-Reedy，Tetrahedron 39：3197，1983；S.M.Hussain，A.A.El-Barbary and S.A.Mansour，J.Heterocycl.Chem.22：169，1985。在W＝C(O)OEt的情况下，芳构化作用发生于氧化剂的加入之后，例如DDQ或氧。有关的环化作用还可以在固体载体上进行，例如Merrifield树脂，并使用适当的连接剂，例如参见A.L.Mrzinzik and E.R.Felder，J.Org.Chem.63：723，1998；T.Masquelin，D.Sprenger，R.Baer，F.Gerberand Y.Mercadal，Helv.Chim.Acta 81：646，1998。

由式(XX-a)代表的其中Y＝N的通式(XX)化合物可以经由相似的缩合策略制备，使用丙二腈。

作为替代选择，通式(XX)化合物可以这样获得，使用氨水和适当的有机助溶剂，例如1，4-二噁烷，进行式(XV)氯化物的氨解作用。这种转化作用还可以利用氯化铵和叔胺碱、例如DiPEA在非质子传递溶剂、例如DMF中完成。

通式(XV)氯化物可以这样合成，在适当的溶剂中，例如1，4-二噁烷，在高温下(60℃至回流)，进行本领域已知的内酰胺(XXI)与POCl₃的反应。

其中Y＝N且R¹不是(6-14C)芳基或(4-13C)杂芳基的式(XV)衍生物可以经由式(XXX)衍生物中的Cl被各种亲核试剂的单取代作用加以制备。有关的取代反应可以在文献中找到，例如S.Kohra，Y.Tominagaand A.Hosomi，J.Heterocycl.Chem.25：959，1988；A.A.Santilli，D.H.Kim and S.V.Wanser，J.Heterocycl.Chem.8：445，1971；J.Clark，M.S.Shannet，D.Korakas and G.Varvounis，J.Heterocycl.Chem.30：1065，1993；S.Tumkevicius，Liebigs Ann.Org.Bioorg.Chem.9：1703，1995。

由式(XXI-b)代表的其中Y＝CH、A＝S且W＝CN的通式(XXI)吡啶可以这样获得，将通式(XXXI)α，β-不饱和二腈先后用二硫化碳和烷基碘R²-I烷基化，得到通式(XXXII)化合物，如P.Milart，Tetrahedron 54：15643-15656，1998所述。式(XXXII)化合物在酸性条件下的环化作用得到通式(XXI-b)吡啶，如K.Peseke，Z.Chem.29：442-443(1989)所述。

由式(XXI-c)代表的其中A是一条键、Y＝CH且W是如前述所定义的通式(XXI)化合物可以这样制备，在氧的存在下，在适合的溶剂中，例如二甲基亚砜，使用强碱，例如叔丁醇钾，进行通式(XXXIII)不饱和酮与其中W是如前述所定义的通式(XXXIV)酰胺的反应。有关的环化作用已经描述在：R.Jain，F.Roschangar，M.A.Ciufolini，Tetrahedron Lett.36：3307，1995。

测定促性腺激素受体结合的方法以及测定促性腺激素生物活性的体外与体内测定法是熟知的。一般而言，使被表达的受体与供试化合物接触，测量结合或功能性反应的刺激或抑制。

为了测量功能性反应，在适合的宿主细胞中表达编码LH受体基因的分离DNA，优选人的受体。这样一种细胞可能是中国仓鼠卵巢细胞，但是其他细胞也是适合的。优选地，细胞是哺乳动物来源的(Jia等，Mol.Endocrin.，5：759-776，1991)。

构建表达重组LH的细胞系的方法是本领域熟知的(Sambrook等，Molecular Cloning：a Laboratory Manual，Cold Spring HarborLaboratory Press，Cold Spring Harbor，最新版)。受体的表达是通过编码所需蛋白质的DNA的表达而实现的。位点定向诱变、附加序列的连接反应、PCR和适合表达系统的构建的技术迄今都是本领域熟知的。编码所需蛋白质的DNA的一部分或全部可以利用标准固相技术合成构建，优选地包括有利于连接反应的限制位点。可以向DNA编码序列提供适合于所包括的编码序列的转录和转译的控制元件。众所周知，表达系统现在与各种宿主是相容的，包括原核生物宿主，例如细菌，和真核生物宿主，例如酵母、植物细胞、昆虫细胞、哺乳动物细胞、鸟类细胞等。

然后使表达受体的细胞与供试化合物接触，观察结合或功能性反应的刺激或抑制。

作为替代选择，含有被表达的受体的分离细胞膜可以用于测量化合物的结合。

关于结合的测量，可以使用放射或荧光标记的化合物。作为参照化合物，可以使用人重组LH。在替代选择中，还可以进行竞争结合测定。

另一种测定法牵涉通过测定受体介导的cAMP蓄积刺激作用筛选LH受体激动剂化合物。因而，这样一种方法牵涉受体在宿主细胞表面上的表达和使该细胞暴露于供试化合物。然后测量cAMP的量。cAMP的水平将减少或增加，取决于供试化合物对受体结合的抑制或刺激效果。

除了直接测量被暴露细胞中的例如cAMP水平以外，还可以使用这样的细胞系，除了用编码DNA的受体转染以外，还用编码报道基因的第二种DNA转染，这种基因的表达响应于cAMP的水平。这类报道基因可能是cAMP可诱导的或者可能是以这样一种方式构建的，使它们与新的cAMP响应元件连接。一般而言，报道基因表达可能受任意响应元件的控制，这些元件的反应改变cAMP的水平。适合的报道基因例如是LacZ、碱性磷酸酶、萤火虫荧光素酶和绿色荧光蛋白。这类反式激活测定法的原理是本领域熟知的，例如描述在Stratowa，Ch，Himmler，A andCzernilofsky，A.P.(1995)Curr.Opin.Biotechnol.6：574。

关于选择活性化合物，在10^-5M下试验必须导致活性比使用LH作为参照时的最大活性高20％。另一种标准可以是EC₅₀值必须＜10^-5M，优选＜10^-7M。

技术人员将认识到，所需的EC₅₀值取决于所试验的化合物。例如，EC₅₀小于10^-5M的化合物一般被视为药物选择的候选对象。优选地，该数值低于10^-7M，更优选10^-8M。不过，具有更高EC₅₀但是对特定受体是选择性的化合物可能甚至是更好的候选对象。

筛选LH受体激动化合物还可以利用小鼠莱迪希细胞生物测定法进行(Van Damme，M.，Robersen，D.and Diczfalusy，E.(1974).Acta Endocrinol.77：655-671；Mannaerts，B.，Kloosterboer，H.and Schuurs，A.(1987).Neuroendocrinology ofreproduction；R.Rolland等编，Elsevier Science PublishersB.V.，49-58)。在这种测定法中，可以在从雄性小鼠分离的莱迪希细胞中测量对LH受体介导的睾酮产生的刺激作用。

为了测量LH受体激动化合物的体内活性，可以研究对未成熟小鼠的排卵诱发作用。在这种测定法中，可以将未成熟雌性小鼠用尿FSH引发(prime)，大约48小时后用LH激动化合物处理。在LH激动剂处理后杀死动物，可以通过显微镜检查评估输卵管中的卵子数量。

本发明的化合物可以在临床上应用于现在使用LH或hCG的范畴。这些包括性腺机能减退男性或女性受治疗者中的LH替代、中期给药诱发排卵(排卵诱发(OI))或受控制的黄体过度刺激(COH)或刺激。

下列实施例阐述本发明，决不应当被解释为限制发明的范围。

实施例

实施例1

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(甲氧基碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

(a)5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-6-羟基-嘧啶

将硫酸S-甲基异硫脲(139mg)、3-甲氧基苯甲醛(243μl)、氰基乙酸乙酯(112μl)与碳酸钾(145mg)在绝对乙醇(2ml)中的混合物在60℃下搅拌5小时。将反应混合物在冰浴中冷却至0℃，过滤，将残余物在水(H₂O)中加热直至得到澄清的溶液。将该溶液用2N HCl水溶液酸化至pH2，在冰浴中冷却至0℃。过滤收集所得晶体，在真空中干燥。

收率：186mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝274.2

TLC：R_f＝0.50，硅胶，二氯甲烷(CH₂Cl₂)/甲醇(CH₃OH)＝9/1(v/v)

(b)6-氯-5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-嘧啶

向搅拌着的5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-6-羟基-嘧啶(实施例1a，305mg)的无水1，4-二噁烷(1ml)溶液加入磷酰氯(0.75ml)。加入一滴N，N-二甲基苯胺。在80℃下3小时后，将混合物在冰浴中冷却至0℃，缓慢加入碎冰。放热反应停止后，加入H₂O(3ml)。过滤收集固体，在真空中干燥。

收率：244mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝292.2

TLC：R_f＝0.86，硅胶，CH₂Cl₂

(c)5-氨基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯

向搅拌着的2-巯基乙酸乙酯(92μl)与6-氯-5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-嘧啶(实施例1b，244mg)的无水四氢呋喃(THF)(4ml)溶液加入叔丁醇钾(150mg)。1小时后，将混合物在冰浴中冷却至0℃，用H₂O(10ml)稀释。过滤收集固体，在真空中干燥。

收率：260mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝376.2

TLC：R_f＝0.44，硅胶，CH₂Cl₂

(d)5-氨基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸

将5-氨基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯(实施例1c，9.27g)溶于1，4-二噁烷(270ml)与H₂O(30ml)的混合物。加入氢氧化锂(10g)，将混合物在80℃下搅拌48小时。通过蒸发从混合物中除去1，4-二噁烷，将残余物溶于H₂O。向剩余溶液加入3N HCl水溶液酸化至pH2。滤出所得沉淀，用H₂O洗涤。通过与1，4-二噁烷、再与二乙醚共蒸发除去沉淀中的痕量水，在50℃真空中干燥过夜。

收率：8.45g

MS-ESI：[M+H]⁺＝348.0

TLC：R_f＝0.2，硅胶，CH₂Cl₂/CH₃OH 9/1(v/v)

(e)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

将5-氨基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸(实施例1d，7.0g)溶于无水CH₂Cl₂(100ml)。加入苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(TBTU)(8.0g)、N，N-二异丙基乙胺(DIPEA)(6.6ml)和叔丁胺(4.0ml)，将混合物在室温下搅拌5卟时。将反应混合物用5％NaHCO₃水溶液(2*100ml)和1M HCl水溶液(2*100ml)洗涤。将有机层干燥(MgSO₄)，在真空中浓缩。标题化合物经过硅胶色谱纯化，用庚烷(hept)/乙酸乙酯(EtOAc)＝1/0至3/2(v/v)作为洗脱剂。

收率：6.5g

MS-ESI：[M+H]⁺＝403.0

HPLC：R_t＝33.56min，柱子3μm Luna C-18(2)100*2.0mm，流速0.25ml/min，烘箱温度40℃，检测210nm+254nm，洗脱剂H₂O/乙腈(CH₃CN)/CH₃OH＝在50min内从70/28.5/1.5至0/95/5(v/v)

(f)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羟基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

将叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例1e，1.8g)溶于无水CH₂Cl₂(30ml)，将所得溶液冷却至0℃。滴加三溴化硼(1.28ml)的无水CH₂Cl₂(30ml)溶液，将混合物在室温下搅拌过夜。向反应混合物滴加饱和NaHCO₃水溶液，直至放热反应停止。然后，通过蒸发从混合物中除去CH₂Cl₂，加入大量EtOAc。将有机层用饱和NaHCO₃水溶液洗涤，干燥(MgSO₄)，在真空中浓缩。

收率：1.3g

MS-ESI：[M+H]⁺＝389.2

HPLC：R_t＝17.44min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂H₂O/CH₃CN/CH₃OH＝在50min内从90/9.5/0.5至0/95/5(v/v)

(g)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(甲氧基碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

将叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羟基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例1f，100mg)溶于无水CH₂Cl₂(5ml)。加入DIPEA(500μl)和氯甲酸甲酯(199μl)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用H₂O洗涤。将有机层干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。标题化合物经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，CH₃CN/H₂O＝在30min内从10/90至90/10(v/v)梯度洗脱。然后将标题化合物从1，4-二噁烷与H₂O的混合物中冷冻干燥。

收率：93mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝447.4

HPLC：R_t＝17.56min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂H₂O/CH₃CN＝在25min内从40/60至0/100(v/v)

实施例2

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(烯丙氧基碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

按照实施例1g所述方法进行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羟基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例1f，100mg)与氯甲酸烯丙酯(274μl)的反应。标题化合物经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，CH₃CN/H₂O＝在30min内从10/90至90/10(v/v)梯度洗脱。然后将标题化合物从1，4-二噁烷与H₂O的混合物中冷冻干燥。

收率：102mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝473.4

HPLC：R_t＝19.82min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂H₂O/CH₃CN＝在25min内从40/60至0/100(v/v)

实施例3

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(苄氧基碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

按照实施例1g所述方法进行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羟基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例1f，100mg)与氯甲酸苄基酯(368μl)的反应。标题化合物经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，CH₃CN/H₂O＝在30min内从10/90至90/10(v/v)梯度洗脱。然后将标题化合物从1，4-二噁烷与H₂O的混合物中冷冻干燥。

收率：112mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝523.2

HPLC：R_t＝22.22min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂H₂O/CH₃CN＝在25min内从40/60至0/100(v/v)

实施例4

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(对硝基-苄氧基碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

按照实施例1g所述方法进行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羟基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例1f，100mg)与氯甲酸对硝基苄基酯(554mg)的反应。标题化合物经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，CH₃CN/H₂O＝在30min内从10/90至90/10(v/v)梯度洗脱。然后将标题化合物从1，4-二噁烷与H₂O的混合物中冷冻干燥。

收率：47mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝568.4

HPLC：R_t＝21.45min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂H₂O/CH₃CN＝在25min内从40/60至0/100(v/v)

实施例5

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(苯氧基碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

按照实施例1g所述方法进行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羟基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例1f，100mg)与氯甲酸苯基酯(324μl)的反应。标题化合物经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，CH₃CN/H₂O＝在30min内从10/90至90/10(v/v)梯度洗脱。然后将标题化合物从1，4-二噁烷与H₂O的混合物中冷冻干燥。

收率：89mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝509.4

HPLC：R_t＝21.12min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂H₂O/CH₃CN＝在25min内从40/60至0/100(v/v)

实施例6

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(对硝基-苯氧基碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

按照实施例1g所述方法进行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羟基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例1f，100mg)与氯甲酸对硝基苯基酯(207mg)的反应。在减压下蒸发溶剂，得到粗的标题化合物。

收率：569mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝554.6

TLC：R_f＝0.5，硅胶，hept/EtOAc＝3/2(v/v)

实施例7

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-((N，N-二乙氨基)-碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

将叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羟基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例1f，10Omg)溶于无水CH₂Cl₂(5ml)，加入几滴N，N-二甲基甲酰胺(DMF)。加入二乙基氨基甲酰氯(68mg)和DIPEA(217μl)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用H₂O洗涤。将有机层干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。标题化合物经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，CH₃CN/H₂O＝在30min内从10/90至90/10(v/v)梯度洗脱。然后将标题化合物从1，4-二噁烷与H₂O的混合物中冷冻干燥。

收率：75mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝488.4

TLC：R_f＝0.6，硅胶，hept/EtOAc＝1/1(v/v)

实施例8

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(1，2，3，6-四氢吡啶基碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

将叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(对硝基-苯氧基碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例6，142mg)溶于CH₂Cl₂。加入1，2，3，6-四氢吡啶(117μl)和DIPEA(224μl)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用CH₂Cl₂稀释，用H₂O洗涤。在减压下浓缩有机层。标题化合物经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，CH₃CN/H₂O＝在45min内从20/80至100/0(v/v)梯度洗脱。然后将标题化合物从1，4-二噁烷与H₂O的混合物中冷冻干燥。

收率：76mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝498.2

HPLC：R_t＝13.90min，柱子5μm Luna C-18(2)150*4.60mm，流速1ml/min，检测210nm，洗脱剂H₂O/CH₃CN＝在15min内从40/60至0/100(v/v)

实施例9

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(对甲苯磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

(a)5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-6-羟基-嘧啶

将硫酸S-甲基异硫脲(69.0g)、3-硝基苯甲醛(75.0g)、氰基乙酸乙酯(56.0ml)与碳酸钾(72.5g)在绝对EtOH(1500ml)中的混合物在60℃下搅拌16小时。将反应混合物在冰浴中冷却至0℃。滤出所得沉淀，用绝对EtOH洗涤，溶于热水(100℃)。将该溶液冷却至室温，用2N HCl酸化至pH2，在冰浴中冷却至0℃。滤出所得沉淀，用冰水洗涤。通过与1，4-二噁烷共蒸发除去沉淀中残留的水。

收率：54.0g

MS-ESI：[M+H]⁺＝289.0

TLC：R_f＝0.3，硅胶，DCM/MeOH＝9/1(v/v)

(b)6-氯-5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-嘧啶

向搅拌着的5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-6-羟基-嘧啶(实施例9a，25.0g)的无水1，4-二噁烷(300ml)溶液加入POCl₃(100ml)。在90℃下3小时后，将混合物冷却至室温，在减压下浓缩。将残余物溶于1，4-二噁烷(100ml)，将所得溶液冷却至0℃。小心地加入冰水。滤出所得沉淀，用水洗涤。通过与1，4-二噁烷共蒸发除去沉淀中残留的水。

收率：26.0g

MS-ESI：[M+H]⁺＝307.0

TLC：R_f＝0.5，硅胶，庚烷/EtOAc＝3/2(v/v)

(c)乙基5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-6-(乙氧羰基甲硫基)-嘧啶

向搅拌着的2-巯基乙酸乙酯(9.3ml)与6-氯-5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-嘧啶(实施例9b，26.0g)的EtOH(250ml)与DCM(250ml)溶液加入DIPEA(15.7ml)。在室温下1小时后，向混合物加入0.1N HCl水溶液(500ml)，然后用DCM萃取(3*500ml)，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。

收率：28.0g

MS-ESI：[M+H]⁺＝390.4

TLC：R_f＝0.5，硅胶，庚烷/EtOAc＝3/2(v/v)

(d)5-氨基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯

将乙基5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-6-(乙氧羰基甲硫基)-嘧啶(实施例9c，28.0g)与DIPEA(30ml)在甲苯(150ml)与EtOH(150ml)中的混合物在回流温度下(100℃)搅拌16小时。然后将混合物冷却至室温，在减压下浓缩。通过与甲苯共蒸发除去残留的DIPEA。

收率：28.0g

MS-ESI：[M+H]⁺＝391.2

TLC：R_f＝0.6，硅胶，庚烷/EtOAc＝3/2(v/v)

(e)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

将5-氨基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯(实施例9d，780mg)溶于1，4-二噁烷(10ml)。加入乙醇(10ml)和氯化锡(II)(1.1g)，将反应混合物在90℃下搅拌过夜。在真空中浓缩反应混合物后，将残余物再次溶于EtOAc(50ml)，用4M NaOH水溶液(10ml)洗涤，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。利用实施例1d所述方法将所得衍生物5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯(558mg)中的乙酯基皂化为对应的酸(430mg)，随后与叔丁胺(200μl)反应，生成对应的叔丁酰胺(按照实施例1e)。标题化合物经过硅胶色谱纯化，用hept/EtOAc＝3/1(v/v)作为洗脱剂。

收率：391mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝388.0

TLC：R_f＝0.43，硅胶，hept/EtOAc＝3/2(v/v)

(f)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(对甲苯磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

将叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例9e，100mg)溶于无水吡啶(5ml)。加入对甲苯磺酰氯(70mg)，将混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用CH₂Cl₂稀释，用0.1M HCl水溶液洗涤。将有机层干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。标题化合物经过硅胶色谱纯化，用hept/EtOAc＝3/2(v/v)作为洗脱剂。

收率：63mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝542.4

HPLC：R_t＝23.46min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂磷酸盐缓冲液50mM pH2.1/H₂O/CH₃CN/CH₃OH＝在50min内从10/72/17/1至10/18/68/4(v/v)

实施例10

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(乙烯基磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

将叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例9e，2.5g)溶于CH₂Cl₂(25ml)与吡啶(25ml)的混合物。如Bull.Chem.Soc.Jpn.39，1937-1941(1966)所述制备2-溴-乙磺酰氯。滴加2-溴-乙磺酰氯(2g)的CH₂Cl₂(5ml)溶液，将混合物在室温下搅拌2小时。将反应混合物用CH₂Cl₂稀释，用饱和NaHCO₃水溶液洗涤。将有机层干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。标题化合物经过硅胶色谱纯化，用hept/EtOAc＝3/2(v/v)作为洗脱剂。

收率：1.4g

MS-ESI：[M+H]⁺＝478.6

TLC：R_f＝0.80，硅胶，hept/EtOAc＝3/2(v/v)

实施例11

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-哌啶子基乙磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

将叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(乙烯基磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例10，87mg)溶于无水THF(5ml)。加入哌啶(181μl)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用CH₂Cl₂稀释，用饱和NaHCO₃水溶液洗涤。将有机层干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。标题化合物首先经过硅胶色谱纯化，用hept/EtOAc＝3/2(v/v)作为洗脱剂，然后经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，CH₃CN/0.1％三氟乙酸(TFA)水溶液＝在30min内从10/90至90/10(v/v)梯度洗脱。然后将标题化合物从1，4-二噁烷与0.1％TFA水溶液的混合物中冷冻干燥。

收率：89mg(TFA盐)

MS-ESI：[M+H]⁺＝563.4

HPLC：R_t＝18.4min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂H₂O/CH₃CN＝在25min内从60/40至0/100(v/v)

实施例12

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-(硫代吗啉-4-基)-乙磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

按照实施例11所述方法进行硫代吗啉(184μl)与叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(乙烯基磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例10，87mg)的反应。标题化合物首先经过硅胶色谱纯化，用hept/EtOAc＝3/2(v/v)作为洗脱剂，然后经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，CH₃CN/0.1％TFA水溶液＝在30min内从10/90至90/10(v/v)梯度洗脱。然后将标题化合物从1，4-二噁烷与0.1％TFA水溶液的混合物中冷冻干燥。

收率：120mg(TFA盐)

MS-ESI：[M+H]⁺＝581.2

HPLC：R_t＝17.2min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂H₂O/CH₃CN＝在25min内从60/40至0/100(v/v)

实施例13

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-(双-(2-甲氧基乙基)-氨基)-乙磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

按照实施例11所述方法进行双-(2-甲氧基乙基)胺(244mg)与叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(乙烯基磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例10，87mg)的反应。标题化合物首先经过硅胶色谱纯化，用hept/EtOAc＝3/2(v/v)作为洗脱剂，然后经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，CH₃CN/0.1％TFA水溶液＝在30min内从10/90至90/10(v/v)梯度洗脱。然后将标题化合物从1，4-二噁烷与0.1％TFA水溶液的混合物中冷冻干燥。

收率：60mg(TFA盐)

MS-ESI：[M+H]⁺＝611.4

HPLC：R_t＝17.9min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂H₂O/CH₃CN＝在25min内从60/40至0/100(v/v)

实施例14

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-(N-甲基哌嗪基)-乙磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

按照实施例儿所述方法进行N-甲基哌嗪(184μl)与叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(乙烯基磺酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例10，87mg)的反应。标题化合物首先经过硅胶色谱纯化，用hept/EtOAc＝3/2(v/v)作为洗脱剂，然后经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，CH₃CN/0.1％TFA水溶液＝在30min内从10/90至90/10(v/v)梯度洗脱。然后将标题化合物从1，4-二噁烷与0.1％TFA水溶液的混合物中冷冻干燥。

收率：85mg(TFA盐)

MS-ESI：[M+H]⁺＝578.4

HPLC：R_t＝16.1min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂H₂O/CH₃CN＝在25min内从60/40至0/100(v/v)

实施例15

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(甲氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

将叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例9e，100mg)溶于无水CH₂Cl₂(5ml)。加入氯甲酸甲酯(199μl)和DIPEA(500μl)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用H₂O洗涤。将有机层干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。标题化合物经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，CH₃CN/10％CH₃CN水溶液＝在30min内从10/90至90/10(v/v)梯度洗脱。然后将标题化合物从1，4-二噁烷与H₂O的混合物中冷冻干燥。

收率：80mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝446.2

HPLC：R_t＝20.44min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂磷酸盐缓冲液50mM pH2.1/H₂O/CH₃CN＝在20min内从10/72/18至10/18/72(v/v)

实施例16

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(烯丙氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

利用实施例15所述方法进行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例9e，100mg)与氯甲酸烯丙酯(274μl)的反应。标题化合物经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，CH₃CN/10％CH₃CN水溶液＝在30min内从10/90至90/10(v/v)梯度洗脱。然后将标题化合物从1，4-二噁烷与H₂O的混合物中冷冻干燥。

收率：66mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝472.2

HPLC：R_t＝22.37min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂磷酸盐缓冲液50mM pH2.1/H₂O/CH₃CN＝在20min内从10/72/18至10/18/72(v/v)

实施例17

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(苄氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

利用实施例15所述方法进行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例9e，100mg)与氯甲酸苄基酯(368μl)的反应。标题化合物经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，CH₃CN/10％CH₃CN水溶液＝在30min内从10/90至90/10(v/v)梯度洗脱。然后将标题化合物从1，4-二噁烷与H₂O的混合物中冷冻干燥。

收率：112mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝522.4

HPLC：R_t＝24.10min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂磷酸盐缓冲液50mM pH2.1/H₂O/CH₃CN＝在20min内从10/72/18至10/18/72(v/v)

实施例18

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(乙氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

利用实施例15所述方法进行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例9e，100mg)与氯甲酸乙酯(247μl)的反应。标题化合物经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，CH₃CN/10％CH₃CN水溶液＝在30min内从10/90至90/10(v/v)梯度洗脱。然后将标题化合物从1，4-二噁烷与H₂O的混合物中冷冻干燥。

收率：74mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝460.4

HPLC：R_t＝21.77min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂磷酸盐缓冲液50mM pH2.1/H₂O/CH₃CN＝在20min内从10/72/18至10/18/72(v/v)

实施例19

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(苯氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

利用实施例15所述方法进行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例9e，100mg)与氯甲酸苯基酯(324μl)的反应。标题化合物经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，CH₃CN/10％CH₃CN水溶液＝在30min内从10/90至90/10(v/v)梯度洗脱。然后将标题化合物从1，4-二噁烷与H₂O的混合物中冷冻干燥。

收率：47mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝508.4

HPLC：R_t＝23.25min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂磷酸盐缓冲液50mM pH2.1/H₂O/CH₃CN＝在20min内从10/72/18至10/18/72(v/v)

实施例20

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(对硝基苯氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

将叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例9e，1g)溶于无水CH₂Cl₂(10ml)。随后，滴加氯甲酸对硝基苯基酯(520mg)的无水CH₂Cl₂(10ml)溶液，将反应混合物在室温下搅拌。1小时后，将反应混合物用H₂O洗涤。将有机层干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。

收率：1.42g

MS-ESI：[M+H]⁺＝553.6

TLC：R_f＝0.7，硅胶，hept/EtOAc＝3/2(v/v)

实施例21

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-((吗啉-4-基)-碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

将叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(对硝基苯氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例20，142mg)溶于无水CH₂Cl₂(5ml)。加入吗啉(112μl)和DIPEA(225μl)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。将反应混合物用CH₂Cl₂稀释，用H₂O哦哦洗涤。在减压下浓缩有机层。标题化合物经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，H₂O/CH₃CN＝在45min内从80/20至0/100(v/v)梯度洗脱。然后将标题化合物从1，4-二噁烷与H₂O的混合物中冷冻干燥。

收率：22mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝501.2

HPLC：R_t＝8.62min，柱子Luna C-18(见实施例8)，洗脱剂H₂O/CH₃CN＝在15min内从40/60至0/100(v/v)

实施例22

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(邻茴香氨基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

按照实施例21所述方法进行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(对硝基苯氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例20，142mg)与邻茴香胺(159mg)的脲偶联。标题化合物经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，H₂O/CH₃CN＝在45min内从80/20至0/100(v/v)梯度洗脱。然后将标题化合物从1，4-二噁烷与H₂O的混合物中冷冻干燥。

收率：18mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝537.2

HPLC：R_t＝12.94min，柱子Luna C-18(见实施例8)，洗脱剂H₂O/CH₃CN＝在15min内从40/60至0/100(v/v)

实施例23

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(1，2，3，6-四氢吡啶基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

按照实施例21所述方法进行叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(对硝基苯氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例20，142mg)与1，2，3，6-四氢吡啶(118μl)的脲偶联。标题化合物经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，H₂O/CH₃CN＝在45min内从80/20至0/100(v/v)梯度洗脱。然后将标题化合物从1，4-二噁烷与H₂O的混合物中冷冻干燥。

收率：18mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝497.2

HPLC：R_t＝11.19min，柱子Luna C-18(见实施例8)，洗脱剂H₂O/CH₃CN＝在15min内从40/60至0/100(v/v)

实施例24

叔丁基5-羟基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-酰胺

(a)2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-6-甲基-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸乙酯

将硫酸S-甲基异硫脲(13.9g)、3-甲氧基苯甲醛(7.5g)、乙酰乙酸乙酯(6.5g)与碳酸氢钠(21g)在DMF(200ml)中的混合物在70℃下搅拌18小时。将反应混合物冷却至室温，用二乙醚稀释，用H₂O和饱和NaCl水溶液洗涤。标题化合物经过硅胶色谱纯化，用hept/EtOAc＝3/2(v/v)作为洗脱剂。

收率：7.3g

MS-ESI：[M+H]⁺＝321.0

TLC：R_f＝0.2，硅胶，hept/EtOAc＝3/1(v/v)

(b)2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-6-甲基嘧啶-5-羧酸乙酯

将2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-6-甲基-1，4-二氢嘧啶-5-羧酸乙酯(实施例24a，7.65g)溶于甲苯(200ml)与CH₂Cl₂(100ml)的混合物。加入2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(5.45g)，将反应混合物在室温下搅拌15分钟。加入0.2M NaOH水溶液(250ml)。分离有机层，用H₂O(2*250ml)和饱和NaCl水溶液(2*250ml)洗涤，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。标题化合物经过硅胶色谱纯化，用hept/EtOAc＝4/1(v/v)作为洗脱剂。

收率：4.0g

MS-ESI：[M+H]⁺＝319.2

TLC：R_f＝0.4，硅胶，hept/EtOAc＝3/1(v/v)

(c)5-羟基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-羧酸乙酯向冷却至-78℃的新鲜制备的LDA的无水THF溶液(1ml)加入2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-6-甲基嘧啶-5-羧酸乙酯(实施例24b，318mg)的无水THF(2ml)溶液。将混合物在-78℃下搅拌30分钟，加入3-乙氧基丙烯酸酯(217μl)。然后将混合物在-78℃下搅拌，3小时后达到室温。向反应混合物加入0.1M HCl水溶液(20ml)，随后用EtOAc(25ml)萃取。将有机层用水(25ml)和饱和NaCl水溶液(25ml)洗涤，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。标题化合物经过硅胶色谱纯化，用hept/EtOAc＝3/1(v/v)作为洗脱剂，再从CH₃OH中重结晶。

收率：38mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝371.2

TLC：R_f＝0.6，硅胶，hept/EtOAc＝2/3(v/v)

(d)叔丁基5-羟基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-酰胺

将5-羟基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-羧酸乙酯(实施例24c，38mg)溶于1，4-二噁烷(4ml)与1M KOH水溶液(0.5ml)的混合物。将混合物回流48小时，然后冷却至室温，加入0.1M HCl水溶液(15ml)酸化。混合物用CH₂Cl₂(15ml)萃取。将有机层干燥(MgSO₄)，在减压下蒸发，得到5-羟基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-喹唑啉-6-羧酸。将后者溶于DMF(2ml)。加入叔丁胺(53μl)和TBTU(96mg)，将混合物在室温下搅拌3小时。加入EtOAc(15ml)，将有机层用饱和NaHCO₃水溶液(15ml)和饱和NaCl水溶液(15ml)洗涤，干燥(MgSO₄)，在减压下蒸发。标题化合物首先经过硅胶色谱纯化，用hept/EtOAc＝7/3(v/v)作为洗脱剂，然后经过HPLC纯化，10％CH₃CN水溶液/CH₃CN/0.1％TFA水溶液＝在30min内从57/40/3至7/90/3(v/v)梯度洗脱。将标题化合物从水与1，4-二噁烷的混合物中冷冻干燥。

收率：25mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝398.2

HPLC：R_t＝9.75min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂磷酸盐缓冲液50mM pH2/H₂O/CH₃CN/CH₃OH＝在15min内从5/35/57/3至5/10/81/4(v/v)

实施例25

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-酰胺

(a)5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-6-乙烯基-嘧啶

将6-氯-5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-嘧啶(实施例1b，1.46g)悬浮在1，4-二噁烷(10ml)中。加入四(三苯膦)钯(O)(350mg)，混合物用氮气氛冲洗。加入四乙烯基锡(1.26ml)，将混合物回流5小时。然后将反应混合物倒在EtOAc(100ml)与H₂O(100ml)的混合物中。将有机层用饱和NaCl水溶液洗涤，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。标题化合物经过硅胶色谱纯化，用hept/CH₂Cl₂＝1/0至1/3(v/v)洗脱。

收率：1.05g

MS-ESI：[M+H]⁺＝284.2

TLC：R_f＝0.4，硅胶，hept/CH₂Cl₂＝1/2(v/v)

(b)5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-6-(1，1-双-(乙氧羰基)丙-3-基)嘧啶

将5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-6-乙烯基-嘧啶(实施例25a)溶于乙醇(2ml)与甲苯(2ml)的混合物。加入碳酸钾(690mg)和丙二酸二乙酯(272μl)，将混合物在室温下搅拌4小时。然后将反应混合物倒在0.5M HCl水溶液(25ml)与EtOAc(50ml)的混合物中。将有机层用H₂O(50ml)和饱和NaCl水溶液(50ml)洗涤，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。标题化合物经过硅胶色谱纯化，用甲苯/EtOAc＝100/0至95/5(v/v)作为洗脱剂。

收率：344mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝444.2

TLC：R_f＝0.3，硅胶，甲苯/EtOAc＝95/5(v/v)

(c)5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-7，8-二氢喹唑啉-6-羧酸乙酯

将5-氰基-4-(3-甲氧基苯基)-2-甲硫基-6-(1，1-双-(乙氧羰基)丙-3-基)嘧啶(实施例25b，81mg)溶于无水CH₂Cl₂(1ml)。滴加1M氯化锡(IV)的CH₂Cl₂溶液(1ml)，将混合物在室温下搅拌14、时。然后向反应混合物加入H₂O(10ml)和EtOAc(10ml)。将有机层用H₂O(10ml)和饱和NaCl水溶液(10ml)洗涤，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。标题化合物经过硅胶色谱纯化，用hept/EtOAc＝1/0至3/2(v/v)作为洗脱剂。

收率：24mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝372.2

TLC：R_f＝0.5，硅胶，hept/EtOAc＝3/1(v/v)

(d)5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-羧酸乙酯

将5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-7，8-二氢喹唑啉-6-羧酸乙酯(实施例25c，22mg)溶于CH₂Cl₂(1ml)。加入0.06M 2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌的CH₂Cl₂溶液(1.2ml)，将混合物在室温下搅拌15分钟。在减压下浓缩反应混合物。标题化合物经过硅胶色谱纯化，用甲苯/EtOAc＝95/5(v/v)作为洗脱剂。

收率：20mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝370.0

TLC：R_f＝0.3，硅胶，hept/EtOAc＝1/3(v/v)

(e)5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-羧酸

将5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-羧酸乙酯(实施例25d，490mg)溶于15ml 1，4-二噁烷，加入2M KOH水溶液(3ml)。将混合物在回流下加热5小时，在70℃下加热76小时。将混合物冷却至室温，加入0.5M HCl水溶液。混合物用CH₂Cl₂萃取(2*50ml)，合并有机层，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩，得到粗的标题化合物。

收率：406mg(粗)

MS-ESI：[M+H]⁺＝342.2

TLC：R_f＝0.0，硅胶，hept/EtOAc＝2/3(v/v)

(f)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-酰胺

向1.8M 5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-羧酸的DMF溶液(1.8ml)加入TBTU(173mg)和叔丁胺(95μl)。将反应混合物搅拌2小时，然后倒入EtOAc(25ml)与饱和NaHCO₃水溶液(50ml)的混合物中。分离有机相，用0.5M HCl水溶液(50ml)和盐水(50ml)洗涤，继之以干燥(MgSO₄)和在减压下浓缩。标题化合物经过硅胶色谱纯化，使用hept/EtOAc＝1/0至2/3(v/v)作为洗脱剂。将标题化合物从含有1.5当量HCl的二噁烷与水的混合物中冷冻干燥。

收率：44mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝397.2

HPLC：R_t＝21.52min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂磷酸盐缓冲液50mM pH2/H₂O/CH₃CN＝在20min内从10/70/20至10/10/80(v/v)

实施例26

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-(吡咯烷-1-基)-乙氧基)-苯基)-喹唑啉-6-酰胺

(a)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羟基苯基)-喹唑啉-6-酰胺

将叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-甲氧基苯基)-喹唑啉-6-酰胺(实施例25f，1.5g)的无水CH₂Cl₂溶液冷却至0℃。滴加BBr₃(1.1ml)的CH₂Cl₂(25ml)溶液，加入完全后，将混合物在室温下搅拌3小时。混合物用CH₂Cl₂稀释，小心地加入饱和NaHCO₃水溶液(200ml)。将混合物剧烈搅拌1.5小时，直至全部固体溶解。含水层用CH₂Cl₂萃取两次。将第一份有机层用饱和NaHCO₃水溶液和盐水洗涤。合并有机层，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。标题化合物经过硅胶色谱纯化，用hept/EtOAc＝1/0至1/1(v/v)作为洗脱剂。

收率：930mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝383.4

TLC：R_f＝0.3，硅胶，hept/EtOAc＝2/3(v/v)

(b)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-(吡咯烷-1-基)-乙氧基)-苯基)-喹唑啉-6-酰胺

将K₂CO₃(1.0g)、盐酸1-(2-氯乙基)吡咯烷(66mg)与叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-羟基苯基)-喹唑啉-6-酰胺(实施例26a，121mg)在丙酮中的混合物在回流下加热过夜。将混合物冷却至室温，过滤除去固体，在减压下浓缩滤液。将残余物溶于EtOAc，用水和盐水洗涤。将有机相干燥(MgSO₄)，在真空中浓缩。标题化合物经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，10％CH₃CN水溶液/CH₃CN/0.1％TFA水溶液＝在30min内从72/25/3至27/70/3(v/v/v)梯度洗脱。将标题化合物从水、TFA与CH₃CN的混合物中冷冻干燥。

收率：42mg(TFA盐)

MS-ESI：[M+H]⁺＝480.4

HPLC：R_t＝12.93min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂磷酸盐缓冲液50mM pH2.1/H₂O/CH₃CN＝在20min内从10/70/20至10/10/80(v/v)

实施例27

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-喹唑啉-6-酰胺

(a)5-氰基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-6-[(三苯基亚膦基)-甲基]-嘧啶

在-78℃下，向无水溴化甲基三苯基鏻(29.5g)的二甲氧基乙烷(400ml)悬液加入1.6M正丁基锂的己烷溶液。将混合物在-78℃下搅拌1小时，加入6-氯-5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-嘧啶(实施例9b，10.1g)的二甲氧基乙烷(100ml)溶液，除去冷却浴。1小时后，反应完全，加入水(15ml)。过滤除去固体，继之以浓缩反应混合物，得到深色残余物，与乙酸乙酯搅拌，得到悬液。过滤，用水和盐水洗涤残余物，用MgSO₄干燥有机层，继之以在真空中浓缩。标题化合物经过硅胶色谱纯化，用hept/EtOAc＝4/1至1/1(v/v)作为洗脱剂。

收率：7.04g

MS-ESI：[M+H]⁺＝299.2

TLC：R_f＝0.4，硅胶，hept/EtOAc＝3/2(v/v)

(b)5-氰基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-6-乙烯基-嘧啶

将5-氰基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-6-[(三苯基亚膦基)-甲基]-嘧啶(实施例27a，7.04g)的THF(64ml)溶液用60℃的甲醛水溶液(37wt％，3.55ml)处理1小时。混合物冷却至室温后，将其用EtOAc(100ml)稀释，用水洗涤(2*50ml)，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。标题化合物经过硅胶色谱纯化，用hept/EtOAc＝9/1至3/2(v/v)作为洗脱剂。

收率：1.42g

MS-ESI：[M+H]⁺＝547.2

TLC：R_f＝0.6，硅胶，hept/EtOAc＝3/2(v/v)

(c)(2-(5-氰基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-嘧啶-6-基)-乙基)-丙二酸叔丁基乙基酯

将碳酸钾(1.88g)和丙二酸叔丁基乙基酯悬浮在EtOH(82ml)中，缓慢加入5-氰基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-6-乙烯基-嘧啶(实施例27b，2.71g)的甲苯/CH₂Cl₂(33ml)溶液(约1.5小时)。加入完全后，将混合物搅拌额外40分钟。将混合物用EtOAc稀释，用水(2x)和盐水洗涤。将有机层干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。标题化合物经过硅胶色谱纯化，用hept/CH₂Cl₂＝1/1(v/v)作为洗脱剂。

收率：1.42g

MS-ESI：[M+H]⁺＝487.2

TLC：R_f＝0.5，硅胶，hept/EtOAc＝3/2(v/v)

(d)5-氨基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-7，8-二氢喹唑啉-6-羧酸乙酯

将(2-(5-氰基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-嘧啶-6-基)-乙基)-丙二酸叔丁基乙基酯(实施例27c，1.40g)的CH₂Cl₂(15ml)溶液冷却至0℃。滴加SnCl₄溶液(1M CH₂Cl₂溶液，11.5ml)，除去冰浴，将溶液在室温下搅拌额外30分钟。加入水(64ml)和EtOAc(64ml)，将混合物剧烈搅拌，直至全部固体溶解。将有机相用水和盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩，得到标题化合物，为粗产物。

收率：1.19g(粗)

MS-ESI：[M+H]⁺＝387.2

TLC：R_f＝0.5，硅胶，hept/EtOAc＝3/2(v/v)

(e)5-氨基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-喹唑啉-6-羧酸乙酯

将粗5-氨基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-7，8-二氢喹唑啉-6-羧酸乙酯(实施例27d，1.19g)的CH₂Cl₂(31ml)溶液冷却至0℃。滴加DDQ(1.14g)的甲苯(31ml)溶液，除去冰浴，将溶液在室温下搅拌额外30分钟。将混合物用CH₂Cl₂(约100ml)稀释，用饱和NaHCO₃水溶液(3*100ml)和盐水(2*50ml)洗涤。合并含水层，用CH₂Cl₂反萃取。合并有机层，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。标题化合物经过硅胶色谱纯化，用hept/EtOAc＝9/1至3/2(v/v)作为洗脱剂。

收率：735mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝385.2

TLC：R_f＝0.5，硅胶，hept/EtOAc＝3/2(v/v)

(f)5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-喹唑啉-6-羧酸乙酯

向5-氨基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-喹唑啉-6-羧酸乙酯(实施例27e，1.54g)与SnCl₂·2H₂O(4.52g)在1，4-二噁烷(35ml)中的混合物加入EtOH(35ml)和浓HCl水溶液(690μl)。将反应混合物在90℃下搅拌5小时。冷却至室温和在减压下浓缩后，将残余物悬浮在EtOAc(35ml)中。向混合物加入2M NaOH至pH10，加入THF和盐水。将所得混合物搅拌40分钟，然后分离有机层，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。标题化合物经过硅胶色谱纯化，用hept/EtOAc＝9/1至3/2(v/v)作为洗脱剂。

收率：818mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝355.2

TLC：R_f＝0.3，硅胶，hept/EtOAc＝3/2(v/v)

(g)5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-喹唑啉-6-羧酸

将5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-喹唑啉-6-羧酸乙酯(实施例27f，658mg)的1，4-二噁烷溶液用70℃的KOH水溶液(2M，4.2ml)处理18小时。反应混合物冷却至室温后，将其用4N HCl酸化至pH1。混合物用CH₂Cl₂萃取(3x)。合并有机层，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩，得到粗标题化合物。

收率：215mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝327.2

TLC：R_f＝0，硅胶，hept/EtOAc＝3/2(v/v)

(h)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-喹唑啉-6-酰胺

按照实施例1e所述程序进行5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-喹唑啉-6-羧酸(实施例27g，192mg)向对应叔丁酰胺的转化。标题化合物经过硅胶色谱纯化，用hept/EtOAc＝9/1至3/2(v/v)作为洗脱剂。

收率：243mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝382.2

HPLC：R_t＝6.57min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂H₂O/CH₃CN＝在20min内从45/55至0/100(v/v)

实施例28

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-(吗啉-4-基)-乙酰氨基)-苯基)-喹唑啉-6-酰胺

(a)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-溴乙酰氨基)-苯基)-喹唑啉-6-酰胺

向叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-氨基苯基)-喹唑啉-6-酰胺(实施例27h，791mg)的CH₂Cl₂(60ml)悬液加入DIPEA(1.08ml)，继之以缓慢加入溴乙酰氯(242μl)的CH₂Cl₂(20ml)溶液。在室温下40分钟后，将反应混合物用饱和NHCO₃水溶液洗涤(3x)，继之以干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。粗标题化合物用于下一步时无需进一步纯化。

收率：1.20g(粗)

MS-ESI：[M+H]⁺＝504.2

TLC：R_f＝0.4，硅胶，hept/EtOAc＝3/2(v/v)

(b)叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-(吗啉-4-基)-乙酰氨基)-苯基)-喹唑啉-6-酰胺

向叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-溴乙酰氨基)-苯基)-喹唑啉-6-酰胺(实施例28a，88mg)的乙腈溶液加入吗啉(148μl)，将混合物搅拌18小时。此后加入CH₂Cl₂(15ml)，将混合物用饱和NaHCO₃水溶液洗涤。将有机层干燥(MgSO₄)，在真空中浓缩。标题化合物经过硅胶色谱纯化，使用CH₂Cl₂/MeOH＝1/0至9/1(v/v)作为洗脱剂。将标题化合物从含有1.5当量HCl的乙腈与水的混合物中冷冻干燥。

收率：82mg(HCl盐)

MS-ESI：[M+H]⁺＝509.2

HPLC：R_t＝13.00min，柱子Luna C-18(见实施例1e)，洗脱剂H₂O/CH₃CN＝在20min内从75/25至0/100(v/v)

实施例29

叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-((N-(叔丁基)-甘氨酰)-氨基)-苯基)-喹唑啉-6-酰胺

按照实施例28b所述方法进行叔丁胺(275μl)与叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(2-溴乙酰氨基)-苯基)-喹唑啉-6-酰胺(实施例28a，130mg)的反应。标题化合物首先经过硅胶色谱纯化，用hept/EtOAc＝3/2(v/v)作为洗脱剂，然后经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，CH₃CN/0.1％TFA水溶液＝在30min内从10/90至90/10(v/v)梯度洗脱。将标题化合物从1，4-二噁烷与HCl水溶液的混合物中冷冻干燥。

收率：28mg(HCl盐)

MS-ESI：[M+H]⁺＝495.4

实施例30

5-氨基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-7-羟基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯

(a)6-氨基-5-氰基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)嘧啶

将6-氯-5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-甲硫基-嘧啶(实施例9b，10.0g)的溶液用氢氧化铵(28％NH₃水溶液，15ml)处理，将混合物搅拌过夜。过滤收集所生成的晶体，用水洗涤。将产物在50℃真空下干燥，得到标题化合物。

收率：8.9g

MS-ESI：[M+H]⁺＝288.2

TLC：R_f＝0.3，硅胶，hept/EtOAc＝3/2(v/v)

(b)2-(氨基-[6-氨基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-嘧啶-5-基]-亚甲基)丙二酸二乙酯

向6-氨基-5-氰基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)嘧啶(实施例30a，5.74g)的1，2-二氯丙烷(200ml)悬液加入丙二酸二乙酯(9.1ml)。将混合物冷却至0℃，滴加SnCl₄(14ml)的1，2-二氯丙烷(50ml)溶液。加入完全后，将悬液在回流下加热18小时。使混合物冷却至室温，有固体沉降后，小心地滗出1，2-二氯丙烷。将所得固体与EtOAc(300ml)和水(300ml)搅拌，直至溶解完全。将有机层用水(500ml)和盐水(500ml)洗涤，干燥(MgSO₄)，在真空中浓缩。标题化合物经过硅胶色谱纯化，使用hept/EtOAc＝1/0至3/2(v/v)作为洗脱剂。

收率：3.78g

MS-ESI：[M+H]⁺＝448.4

TLC：R_f＝0.2，硅胶，hept/EtOAc＝3/2(v/v)

(c)5-氨基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-7-羟基-吡啶并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯

将2-(氨基-[6-氨基-2-甲硫基-4-(3-硝基苯基)-嘧啶-5-基]-亚甲基)丙二酸二乙酯(实施例30b，1.34g)的二苯醚(30ml)悬液在氮气流下加热至240℃达2小时。混合物冷却至室温后，加入庚烷(200ml)，过滤收集固体。标题化合物经过硅胶色谱纯化，使用CH₂Cl₂/丙酮＝1/0至4/1(v/v)作为洗脱剂。

收率：590mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝402.4

TLC：R_f＝0.3，硅胶，CH₂Cl₂/丙酮＝9/1(v/v)

实施例31

叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-((硫代吗啉-4-基)-碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

(a)5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-苯基-6-羟基-嘧啶

将盐酸苄脒(16.4g)、3-硝基苯甲醛(15.1g)、氰基乙酸乙酯(11.2ml)与碳酸钾(16.6g)在绝对EtOH(250ml)中的混合物在60℃下搅拌8小时。将反应混合物在冰浴中冷却至0℃。滤出所得沉淀，用绝对EtOH洗涤，在水中加热(100℃)，直至得到澄清溶液。将溶液冷却至50℃，加入2N HCl水溶液酸化至pH2，在冰浴中冷却至0℃。滤出所得沉淀，用冰水洗涤。通过与1，4-二噁烷其蒸发除去残留的水。

收率：15.0g

MS-ESI：[M+H]⁺＝319.2

TLC：R_f＝0.3，硅胶，DCM/MeOH＝9/1(v/v)

(b)6-氯-5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-苯基-嘧啶

向搅拌着的5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-苯基-6-羟基-嘧啶(实施例31a，15.0g)与二甲基苯胺(0.5ml)的无水1，4-二噁烷p.a.(200ml)溶液加入POCl₃(50ml)。在90℃下3小时后，滤出温热的混合物，在减压下浓缩滤液。将残余物溶于1，4-二噁烷，加入冰水。滤出所得沉淀，用水洗涤。通过与1，4-二噁烷共蒸发除去残留的水。

收率：15.8g

MS-ESI：[M+H]⁺＝337.4

TLC：R_f＝0.8，硅胶，庚烷/EtOAc＝3/2(v/v)

(c)乙基5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-苯基-6-(乙氧羰基甲硫基)-嘧啶

在氮气氛下，向搅拌着的2-巯基乙酸乙酯(5.15ml)与6-氯-5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-苯基-嘧啶(实施例31b，15.8g)的EtOH(125ml)与DCM(125ml)溶液加入DIPEA(8.71ml)。在室温下2小时后，将混合物用DCM稀释直至完全溶解，用0.5N HCl水溶液洗涤，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。

收率：19.7g

MS-ESI：[M+H]⁺＝421.2

TLC：R_f＝0.7，硅胶，庚烷/EtOAc＝3/2(v/v)

(d)5-氨基-4-(3-硝基苯基)-2-苯基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯

向搅拌着的乙基5-氰基-4-(3-硝基苯基)-2-苯基-6-(乙氧羰基甲硫基)-嘧啶(实施例31c，19.7g)的绝对EtOH(100ml)与甲苯p.a.(100ml)溶液加入DIPEA(20.0ml)。在100℃下48小时后，将混合物冷却至0℃。滤出所得沉淀，用冷EtOH洗涤，在40℃真空中干燥。

收率：17.0g

MS-ESI：[M+H]⁺＝421.2

TLC：R_f＝0.5，硅胶，庚烷/EtOAc＝3/2(v/v)

(e)5-氨基-4-(3-氨基苯基)-2-苯基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯

向5-氨基-4-(3-硝基苯基)-2-苯基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯(实施例31d，16.6g)的1，4-二噁烷p.a.(250ml)溶液加入氯化锡(II)(23.0g)的绝对EtOH(250ml)溶液。加入37％HCl水溶液(6.9ml)，将混合物在回流(90℃)下加热16小时。使混合物冷却至室温，在减压下浓缩。将残余物悬浮在EtOAc(500ml)中。加入4N NaOH至pH10-11。向混合物加入饱和NaCl水溶液稀释。分离有机层，干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。

收率：17.0g

MS-ESI：[M+H]⁺＝421.2

TLC：R_f＝0.5，硅胶，庚烷/EtOAc＝3/2(v/v)

(f)5-氨基-4-(3-氨基苯基)-2-苯基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸

向5-氨基-4-(3-氨基苯基)-2-苯基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸乙酯(实施例31e，17.0g)的1，4-二噁烷(210ml)与水(80ml)溶液加入氢氧化钾(20.0g)。在90℃下16小时后，将混合物冷却至0℃。滤出所得沉淀，悬浮在水(300ml)中，冷却至0℃。向混合物加入2N柠檬酸水溶液酸化至pH3，在0℃下搅拌，2小时后达到室温。滤出所得沉淀，用水洗涤，在40℃真空中干燥。

收率：13.3g

MS-ESI：[M+H]⁺＝363.0

TLC：R_f＝0.2，硅胶，DCM/MeOH＝95/5(v/v)

(g)叔丁基5-氨基-4-(3-氨基苯基)-2-苯基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

在氮气氛下，向5-氨基-4-(3-氨基苯基)-2-苯基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-羧酸(实施例31f，13.3g)在DCM(250ml)与DMF(50ml)中的混合物加入DIPEA(15.3ml)、叔丁胺(9.3ml)和TBTU(14.1g)。在室温下3小时后，将混合物用DCM稀释，用饱和NaHCO₃水溶液、0.1NHCl水溶液和饱和NaCl水溶液洗涤。将有机层干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。粗产物经过硅胶色谱纯化，使用庚烷/EtOAc＝3/7至1/1(v/v)作为洗脱剂。

收率：14.7g

MS-ESI：[M+H]⁺＝418.4

TLC：R_f＝0.4，硅胶，庚烷/EtOAc＝3/2(v/v)

(h)叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-(对硝基苯氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

将叔丁基5-氨基-4-(3-氨基苯基)-2-苯基-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例31g，2.0g)溶于无水CH₂Cl₂(20ml)。随后，滴加氯甲酸对硝基苯基酯(520mg)的无水CH₂Cl₂(10ml)溶液，将反应混合物在室温下搅拌。3小时后，反应混合物用H₂O洗涤。将有机层干燥(MgSO₄)，在减压下浓缩。

收率：2.9g

MS-ESI：[M+H]⁺＝583.2

TLC：R_f＝0.6，硅胶，庚烷/EtOAc＝1/1(v/v)

(i)叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-((硫代吗啉-4-基)-碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

向叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-(对硝基苯氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例31h，150mg)的二氯甲烷(5ml)溶液加入硫代吗啉(300μl)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。随后，将反应混合物用CH₂Cl₂稀释，用H₂O洗涤。在减压下浓缩有机层。标题化合物经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，H₂O/CH₃CN＝在45min内从80/20至0/100(v/v)梯度洗脱。将标题化合物从1，4-二噁烷与H₂O的混合物中冷冻干燥。

收率：89mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝547.2

HPLC：R_t＝11.71min，柱子Luna C-18(2)，3μm，100×2.0mm，检测UV＝210nm，烘箱温度＝40℃，流速＝0.25ml/min，洗脱剂磷酸盐缓冲液50mM pH2.1/水/ACN＝10/30/60至10/5/85(v/v/v)，运行时间＝20min

实施例32

叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-((N，N-二甲氨基)-碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

向N，N-二异丙基乙胺(DIPEA，0.50ml)与叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-(对硝基苯氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例31h，250mg)的二氯甲烷(5ml)溶液加入盐酸二甲胺(150mg)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。随后，将反应混合物用CH₂Cl₂稀释，用H₂O洗涤。在减压下浓缩有机层。标题化合物经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，H₂O/CH₃CN＝在45min内从80/20至0/100(v/v)梯度洗脱。将标题化合物从1，4-二噁烷与H₂O的混合物中冷冻干燥。

收率：75mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝489.2

HPLC：R_t＝19.58min，柱子Luna C-18(2)，3μm，100×2.0mm，检测UV＝210nm，烘箱温度＝40℃，流速＝0.25ml/min，洗脱剂磷酸盐缓冲液50mM pH2.1/水/ACN＝10/60/30至10/5/85(v/v/v)，运行时间＝20min

实施例33

叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-((吗啉-4-基)-碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺

向叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-(对硝基苯氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺(实施例31h，150mg)的二氯甲烷(5ml)溶液加入吗啉(250mg)，将反应混合物在室温下搅拌过夜。随后，将反应混合物用CH₂Cl₂稀释，用H₂O洗涤。在减压下浓缩有机层。标题化合物经过HPLC纯化，使用Luna C-18柱，H₂O/CH₃CN＝在45min内从80/20至0/100(v/v)梯度洗脱。将标题化合物从1，4-二噁烷与H₂O的混合物中冷冻干燥。

收率：63mg

MS-ESI：[M+H]⁺＝489.2

HPLC：R_t＝19.39min，柱子Luna C-18(2)，3μm，100×2.0mm，检测UV＝210nm，烘箱温度＝40℃，流速＝0.25ml/min，洗脱剂磷酸盐缓冲液50mM pH2.1/水/ACN＝10/60/30至10/5/85(v/v/v)，运行时间＝20min

实施例34

CHO-LH与CHO-FSH体外生物活性

在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中试验化合物的LH激动活性，该细胞是用人LH受体稳定转染和用指示萤火虫荧光素酶报道基因表达的cAMP响应元件(CRE)/启动子共转染的。配体与Gs偶联的LH受体的结合将导致cAMP增加，这继而将诱导荧光素酶报道基因构建体的反式激活增加。荧光素酶信号是用发光计数器量化的。关于供试化合物，计算EC₅₀值(导致半数最大(50％)刺激作用的供试化合物浓度)。为此，使用软件程序GraphPad PRISM 3.0版(GraphPad software Inc.，SanDiego)。结果表明，实施例9、11、12、13、14、25和27化合物的EC₅₀值在10^-6与10^-7M之间。实施例1、2、3、4、5、17、22、26、28、29、31和33化合物显示10^-7与10^-8M之间的EC₅₀值，而实施例7、15、16、18、21、23和32化合物的EC₅₀值低于10^-8M。

Claims

1、根据通式I的二环杂芳族化合物或其药学上可接受的盐，

其中

R¹是苯基，可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自NHR⁵、OR⁵、氨基和硝基；

R²是(1-4C)烷基或苯基；

R³是(1-8C)烷基；

R⁵是(6-14C)芳基羰基、(2-7C)杂环烷基羰基、(2-8C)链烯基磺酰基、(2-8C)链烯氧基羰基、(6-14C)芳基磺酰基、(6-14C)芳基氨基羰基、(6-14C)芳氧基羰基、(1-8C)烷基、(1-8C)烷基羰基、(1-8C)烷基磺酰基、(1-8C)(二)烷基氨基羰基、(1-8C)烷氧基羰基，其中的烷基可以可选地被一个或多个取代基取代，取代基选自羟基、(2-7C)杂环烷基、(6-14C)芳基、(二)[(1-3C)烷氧基(1-3C)烷基]氨基和/或(1-8C)(二)烷基氨基；

Y是N；

Z是NH₂或OH；

A是S或一条键；

B是N(H)；

X1-X2是C＝C，或者如果R⁵是(1-8C)烷基磺酰基、(6-14C)芳基磺酰基、(1-8C)(二)烷基氨基羰基、(6-14C)芳基氨基羰基、(1-8C)烷氧基羰基、(2-7C)杂环烷基羰基、(2-8C)链烯基磺酰基或(2-8C)链烯氧基羰基，那么X1-X2还可以是S。

2、根据权利要求1的化合物，其中Z是NH₂。

3、根据权利要求2的化合物，其中R⁵是(6-14C)芳基羰基、(2-7C)杂环烷基羰基、或(1-8C)烷基、(1-8C)烷基羰基、(1-8C)(二)烷基氨基羰基，其中的烷基可以可选地被(2-7C)杂环烷基、和/或(1-8C)(二)烷基氨基取代。

4、根据权利要求1的化合物，其中R¹是在间位上被取代的苯基。

5、根据权利要求1的化合物，选自叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-((N，N-二乙氨基)-碳酰氧基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(甲氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(烯丙氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(乙氧基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-((吗啉-4-基)-碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺、叔丁基5-氨基-2-甲硫基-4-(3-(1，2，3，6-四氢吡啶基碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺或叔丁基5-氨基-2-苯基-4-(3-((N，N-二甲氨基)-碳酰氨基)-苯基)-噻吩并[2，3-d]嘧啶-6-酰胺。

6、药物组合物，包含与药学上可接受的助剂混合的根据权利要求1-5任意一项的二环杂芳族化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。

7、根据权利要求1-5任意一项的二环杂芳族衍生物或其药学上可接受的盐或溶剂化物在制备节育药物中的用途。