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CN118139535A - 含有芝麻素类及麦角硫因或其盐的组合物 - Google Patents

含有芝麻素类及麦角硫因或其盐的组合物 Download PDF

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CN118139535A CN202280068478.0A CN202280068478A CN118139535A CN 118139535 A CN118139535 A CN 118139535A CN 202280068478 A CN202280068478 A CN 202280068478A CN 118139535 A CN118139535 A CN 118139535A
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Abstract

本发明的目的在于提供一种可有效抑制细胞衰老的组合物。本发明涉及一种组合物，其特征在于，含有1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐，芝麻素类的重量相对于麦角硫因或其盐的麦角硫因换算的重量的比率，即芝麻素类/麦角硫因为0.05～50。

Description

含有芝麻素类及麦角硫因或其盐的组合物
技术领域
本发明涉及一种含有1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐的组合物。此外，本发明涉及一种抑制细胞衰老的方法等。
背景技术
细胞衰老是指因基因损伤等原因，细胞的增殖不可逆地停止的状态。例如，对于人类等哺乳类的正常的体细胞，可分裂的次数有限，重复细胞分裂达到一定次数后，细胞分裂会不可逆地停止。
与细胞凋亡不同，发生细胞衰老的细胞(衰老细胞)不会自行死亡。因此，伴随年龄增加，衰老细胞在组织及器官中累积(非专利文献1)。衰老细胞不仅细胞周期停止，且其作为细胞的功能也降低。此外，就衰老细胞而言，由该细胞分泌的生理活性因子对周围的正常细胞带来妨碍，引起脏器的功能降低等，成为个体水平的衰老的原因。相反，报告称通过抑制衰老细胞的累积，寿命延长(非专利文献2)。由于衰老细胞所具有的这样的性质，对于抑制细胞衰老的关心高涨。
报告称芝麻素类为芝麻中所含的主要的木脂素化合物的一种，具有抗疲劳作用等(专利文献1)。麦角硫因为蘑菇等中所含的氨基酸，天然存在L体。关于麦角硫因，报告有免疫应答活性化细胞因子产生促进作用等生理作用(专利文献2)。
专利文献
专利文献1：国际公开第2008/126587号
专利文献2：日本特开2017-218431号公报
非专利文献
非专利文献1：Herbig U，Ferreira M，Condel L，Carey D，Sedivy JM.“CellularSenescence in Aging Primates.”Science.2006；311(5765)：1257-1257.
非专利文献2：Baker，Darren J.，et al.“Naturally occurring p16Ink4a-positive cells shorten healthy lifespan.”Nature 530.7589(2016)：184-189.
发明内容
然而，含有芝麻素类及麦角硫因的组合物对于细胞衰老的作用至今为止并无报告。
本发明的目的在于提供一种可有效抑制细胞衰老的组合物。
本发明者等为了解决上述课题进行深入研究，结果发现将芝麻素类的一种以上的化合物与麦角硫因或其盐组合使用时，可有效抑制细胞衰老。
本发明包含以下组合物等。
[1]一种组合物，其特征在于，含有1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐，
芝麻素类的重量相对于麦角硫因或其盐的麦角硫因换算的重量的比率，即芝麻素类/麦角硫因为0.05～50。
[2]根据上述[1]所述的组合物，其特征在于，芝麻素类为芝麻素及/或表芝麻素。
[3]根据上述[1]或[2]所述的组合物，其特征在于，为口服用组合物。
[4]根据上述[1]～[3]中任一项所述的组合物，其特征在于，为饮食品。
[5]根据上述[1]或[2]所述的组合物，其特征在于，为化妆料。
[6]根据上述[1]～[5]中任一项所述的组合物，其特征在于，用于抑制细胞衰老。
[7]根据上述[1]～[6]中任一项所述的组合物，其特征在于，为抗衰老用组合物。
[8]根据上述[1]～[7]中任一项所述的组合物，其特征在于，附有选自“抑制细胞衰老”、“抑制衰老细胞化”、“预防细胞衰老”、“不使衰老细胞产生”、“抑制衰老细胞的增加”、“抑制衰老细胞的累积”、“延迟细胞衰老”、“延迟细胞衰老的发展”、“抑制细胞衰老的诱导”、“增加年轻细胞的比率”、“延长健康寿命”、“健康长寿”、“细胞年轻”、“全身年轻”及“外观年轻”中的1种以上的标示。
[9]一种抑制细胞衰老的方法，其特征在于，包含投用上述[1]～[8]中任一项所述的组合物。
[10]一种应用，其特征在于，将上述[1]～[8]中任一项所述的组合物用于抑制细胞衰老。
根据本发明，可提供一种可有效抑制细胞衰老的组合物。
附图说明
图1为表示对芝麻素及表芝麻素混合物及麦角硫因的细胞衰老抑制效果进行研究的结果的图表。
图2为表示对芝麻素及表芝麻素混合物及麦角硫因的细胞衰老抑制效果进行研究的结果的图表。
图3为表示对芝麻素及表芝麻素混合物及麦角硫因的酵母的寿命延长效果进行研究的结果的图表。
具体实施方式
本发明的组合物为含有1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐，芝麻素类的重量相对于麦角硫因或其盐的麦角硫因换算的重量的比率(芝麻素类/麦角硫因)为0.05～50。
在本发明中，芝麻素类为包括芝麻素及其类似物的化合物的总称。芝麻素为芝麻中所含的主要的木脂素化合物的一种。作为芝麻素类似物，除表芝麻素之外可列举例如日本特开平4-9331号公报中记载的二氧杂双环[3.3.0]辛烷衍生物。作为1种以上的芝麻素类，可单独使用这些化合物的1种，也可使用2种以上。作为芝麻素类的具体例，可例示芝麻素、表芝麻素、芝麻素酚、表芝麻素酚、芝麻酚、芝麻林素等，可单独或混合使用这些的立体异构体或外消旋体。在本发明中，作为1种以上的芝麻素类，优选芝麻素及/或表芝麻素，更优选芝麻素及表芝麻素。使用芝麻素及表芝麻素时，它们的比率并无特别限定，例如芝麻素：表芝麻素(重量比)优选为1:0.1～1:9，更优选为1:0.3～1:3，进一步优选为1:0.5～1:2。
本发明中使用的芝麻素类，不因其形态或制造方法等而有任何限制。例如，为芝麻素的情况下，可使用通过公知的方法(例如，日本特开平4-9331号公报中记载的方法)从芝麻油中提取的含有芝麻素的萃取物(称作芝麻素提取物或精制物)。此外，也可直接使用市售的芝麻油(液状)。然而，使用芝麻油时，由于有时芝麻油特有的风味在感官上评价不好，从而优选使用从芝麻油中提取的无味无臭的芝麻素提取物(或芝麻素精制物)。此外，使用芝麻油时，由于芝麻素含量低，若想调配优选量的芝麻素，则配方组合物的每单位投用量的体积变得过大，因此有时摄取时会产生不便。尤其，制剂化为用于口服投用时，制剂(片剂、胶囊剂等)变得过大，而在摄取时产生障碍。从而，从摄取量可为少量的观点出发，优选使用来自芝麻油的芝麻素提取物(或芝麻素精制物)。也可通过合成获得芝麻素类。作为其方法，例如，关于芝麻素、表芝麻素，可通过Beroza等的方法(J.Am.Chem.Soc.，78，1242(1956))来合成。
麦角硫因为含硫氨基酸的一种。在本发明中，麦角硫因优选为L-麦角硫因。
作为麦角硫因的盐，只要为药理学上允许的盐或饮食品中允许的盐即可，并无特别限定，可为酸性盐及碱性盐的任一种。作为酸性盐，例如可列举盐酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐等无机酸盐；乙酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、草酸盐、乳酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、丙酸盐等有机酸盐等。作为碱性盐，例如可列举钠盐、钾盐等碱金属盐；钙盐、镁盐等碱土金属盐等。
麦角硫因或其盐不因其形式或制造方法等而有任何限制。麦角硫因或其盐可使用化学合成品，也可使用从天然物中萃取及精制而得的麦角硫因或其盐。L-麦角硫因富含于耳科侧耳属菇类的金平菇(Golden/Yellow Oyster mushroom)(学名：Pleurotuscornucopiae var.citrinopileatus)中。L-麦角硫因还含于白蘑菇、小褐菇、波特贝勒(Portabella)蘑菇等双孢蘑菇(学名：Agaricus bisporus)；平菇(Grey Oyster Mushroom)(学名：Pleurotus ostreatus)；香菇(学名：Lentinula edodes)；舞茸(学名：GrifolaFrondosa)；灵芝(学名：Ganoderma lucidum)；猴头菇(学名：Hericium erinaceus)；柳松菇(学名：Agrocybe aegerita)；鸡油菇(学名：Cantharellus cibarius)；美味牛肝菌(学名：Boletus edulis)；羊肚菌(学名：Morchella esculenta)等菇中。从天然物中获得L-麦角硫因时，优选从金平菇中萃取等。麦角硫因或其盐也可通过微生物发酵来制造。麦角硫因或其盐也可分离而得。
在本发明的组合物中，芝麻素类的重量相对于麦角硫因或其盐的麦角硫因换算的重量的比率(芝麻素类/麦角硫因)为0.05～50。芝麻素类的重量相对于麦角硫因或其盐(麦角硫因换算)的比率(芝麻素类/麦角硫因)在上述范围内时，与单独使用芝麻素类或单独使用麦角硫因或其盐相比，可有效抑制细胞衰老。
由此，使用本发明的组合物时，即使为低用量也可发挥上述作用。服用量的少量化与服用的容易度相关，可获得容易持续摄取的组合物。
在本发明中，芝麻素类的重量相对于麦角硫因或其盐的麦角硫因换算的重量的比率(芝麻素类/麦角硫因)优选为0.1以上，更优选为0.15以上，此外，优选为20以下，更优选为16以下，进一步优选为15以下。在一种方式中，芝麻素类的重量相对于麦角硫因或其盐的麦角硫因换算的重量的比率(芝麻素类/麦角硫因)优选为0.1～20，更优选为0.15～16，进一步优选为0.15～15。以上述比率含有芝麻素类及麦角硫因或其盐的组合物可有效抑制细胞衰老。组合物中的芝麻素类及麦角硫因或其盐的重量的比率优选为上述。
所谓细胞衰老，是指细胞的增殖不可逆地停止的状态。个体的衰老的因素涉及许多方面，已发现在老龄的动物中，伴随年龄增加，发生细胞衰老的细胞(衰老细胞)增加，此外，若对人类的初代培养细胞进行继代培养，终会迎来分裂极限，而成为衰老细胞。一般认为衰老细胞分泌的生理活性因子，会对周围的正常细胞带来不良影响。衰老细胞其作为细胞的功能降低。抑制细胞衰老，对预防或改善起因于细胞衰老或衰老细胞的增加的状态或疾病有效。作为起因于细胞衰老或衰老细胞的增加的状态或疾病，例如可列举细胞的功能降低、脏器的功能降低、全身的功能降低、癌、慢性炎症等。通过在对象中抑制细胞衰老来抑制衰老细胞的增加(累积)，期待可获得维持细胞的功能、维持脏器的功能、维持全身的功能等效果。此外，期待可获得癌、慢性炎症等状态或疾病的预防或改善效果。
本发明中的细胞衰老抑制效果可通过公知的细胞衰老标记来确认。作为细胞衰老标记，例如可列举p16-INK4A(p16)。p16使细胞周期在G1期停止，诱导细胞衰老。因此，p16的表达上升促进细胞衰老。在一种方式中，作为本发明的组合物，优选抑制p16的表达的物质。在一种方式中，本发明的组合物可用于抑制p16的表达。
如后述实施例所示，使用芝麻素类及麦角硫因时，作为细胞衰老的指标的p16的表达得到有效抑制。组合芝麻素类及麦角硫因时的p16的表达抑制效果，为比由单独使用芝麻素类或单独使用麦角硫因或其盐的效果预测的效果(相加效果)更优异的协同效果。芝麻素类增强基于麦角硫因或其盐的p16的表达抑制作用。
从而，一种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐的组合可作为抑制细胞衰老的有效成分使用。在一种方式中，本发明的组合物可用于抑制细胞衰老。
此外，如后述实施例所示，芝麻素类及麦角硫因的组合在酵母中表现分裂寿命延长作用。分裂寿命的延长可延长个体的寿命。从而，含有芝麻素类及麦角硫因或其盐的组合物表现预防或改善个体的衰老的作用(抗衰老作用)。本说明书中，抗衰老是指个体的衰老的预防或改善。
芝麻素类及麦角硫因或其盐含于天然物或饮食品中，为有食用经验的化合物。因此从安全性的观点出发，一般认为芝麻素类及麦角硫因或其盐例如即使每日摄取也少有问题。根据本发明，可提供含有安全性高的物质作为有效成分，具有抑制细胞衰老的作用的组合物。本发明的组合物也可为含有一种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐作为有效成分的细胞衰老抑制用组合物。
在人类等哺乳动物中，通常伴随年龄增加，代谢等降低，从而推测伴随年龄增加，衰老细胞的去除速度变慢。一般认为抑制细胞衰老，例如在中老年者中对于抑制衰老细胞的增加特别有效。中老年者包含高龄者。
在人类等的对象中，通过抑制细胞衰老，可抑制对象的衰老细胞的增加。在一种方式中，本发明的组合物可用于细胞的功能降低、脏器的功能降低、全身的功能降低等状态或疾病的预防或改善。在一种方式中，本发明的组合物通过抑制细胞衰老，可用于预防或改善伴随年龄增加的脏器的功能降低、伴随年龄增加的全身的功能降低等。伴随年龄增加的脏器的功能降低、伴随年龄增加的全身的功能降低为机体的个体衰老的症状的一例。此外，报告称通过抑制衰老细胞的累积，寿命延长(上述非专利文献2)。本发明的组合物对于预防或改善个体衰老有用，可作为抗衰老用组合物使用。个体优选为人类。本发明的组合物也可为含有一种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐作为有效成分的抗衰老用组合物。在一种方式中，本发明的组合物可优选作为通过细胞衰老抑制来用于预防或改善衰老的抗衰老用组合物使用。本发明的组合物也可为通过细胞衰老抑制的抗衰老用组合物。通过抑制细胞衰老来预防或改善个体的衰老，也可期待寿命延长效果。本发明的组合物例如对于健康寿命延长也有用。
本说明书中预防包含：防止发病、延迟发病、降低发病率、降低发病的风险等。状态或疾病的改善包含：从状态或疾病中恢复、减轻状态或疾病的症状、使状态或疾病的症状好转、延缓、防止状态或疾病的发展等。
本发明的组合物可适用于治疗性用途(医疗用途)或非治疗性用途(非医疗用途)的任一种。所谓非治疗性，是指不包含医疗行为，即人类的手术、治疗或诊断的概念。
本发明的组合物，例如可制成饮食品、化妆料、医药品、医药部外品、饲料等形态。就本发明的组合物而言，其自身可为用于抑制细胞衰老的饮食品、化妆料、医药品、医药部外品、饲料等，也可为调配于这些中而使用的材料或制剂等。
本发明的组合物，作为一个例子，可以剂的方式提供，但不限定于本方式。可将该剂直接作为组合物提供，或作为含有该剂的组合物提供。在一种方式中，细胞衰老抑制用组合物也可称作细胞衰老抑制剂。抗衰老用组合物也可称作抗衰老剂。
本发明的组合物为口服用组合物或非口服用组合物的任一种均可。在一种方式中，本发明的组合物优选为口服用组合物。作为口服用组合物，可列举饮食品、口服用的医药品、医药部外品、饲料，优选为饮食品或口服用医药品，更优选为饮食品。
在另一种方式中，本发明的组合物可作为皮肤外用剂(皮肤外用组合物)使用。皮肤外用剂包括化妆料、医药品、医药部外品等，优选为化妆料。
本发明的组合物，只要不损害本发明的效果，除1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐外，还可含有任意的添加剂、任意的成分。这些添加剂及成分可根据组合物的形态等进行选择，可使用一般的可用于饮食品、化妆料、医药品、医药部外品、饲料等中的添加剂及成分。将本发明的组合物制成饮食品、化妆料、医药品、医药部外品、饲料等时，其制造方法并无特别限定，可通过一般的方法来制造。在一种方式中，本发明的组合物可由1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐构成。
例如将本发明的组合物制成饮食品时，可向1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐中调配饮食品中可使用的成分(例如，食品材料，根据需要使用的食品添加物等)制成各种饮食品。饮食品并无特别限定，例如可列举一般性的饮食品、健康食品、健康辅助食品、健康饮料、功能性标示食品、特定保健用食品、患者用饮食品等。上述健康食品、健康辅助食品、功能性标示食品、特定保健用食品等可以例如细粒剂、片剂、颗粒剂、粉剂、胶囊剂、咀嚼剂、干糖浆剂、糖浆剂、液剂、饮料、饮用剂、流食等的各种制剂方式使用。
将本发明的组合物制成化妆料时，可向1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐中调配可用于化妆料的成分(例如，化妆料所允许的载体、添加剂等)制成各种化妆料。化妆料的制品形态并无特别限定，例如，可列举化妆水、美容液、面膜、乳液、乳霜、防晒品等护肤化妆料等。
将本发明的组合物制成医药品或医药部外品时，例如，可向1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐中调配药理学允许的载体，根据需要而添加的添加剂等，制备各种剂型的医药品或医药部外品。这样的载体、添加剂等，为可用于医药品或医药部外品的药理学上允许的物质即可，例如，可列举赋形剂、结合剂、崩解剂、润滑剂、抗氧化剂、着色剂等的1种或2种以上。作为医药品或医药部外品的投用(摄取)方式，可列举口服或非口服(经皮、经粘膜、经肠、注射等)投用的方式。在一种方式中，将本发明的组合物制成医药品或医药部外品时，优选制成口服用医药品或医药部外品。作为用于口服投用的剂型，可列举液剂、片剂、粉剂、细粒剂、颗粒剂、糖衣片剂、胶囊剂、悬浊液、乳剂、咀嚼剂等。
在另一种方式中，医药品或医药部外品优选制成皮肤外用剂。皮肤外用剂的剂型等并无特别限定，例如可制成溶液、乳液、乳霜、凝胶、粉末、气雾式药剂、喷雾、胶囊及片剂等任意的形态。
医药品也可为非人类动物用医药。
将本发明的组合物制成饲料时，将1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐调配于饲料中即可。饲料也包括饲料添加剂。作为饲料，例如可列举用于牛、猪、鸡、羊、马等的家畜用饲料；用于兔子、大鼠、小鼠等的小动物用饲料；用于狗、猫、小鸟等的宠物食品等。
本发明的组合物中所含的芝麻素类的含量并无特别限定，可根据其形态等进行设定。本发明的组合物中的芝麻素类的总含量，例如，在该组合物中优选0.001重量％以上，更优选0.01重量％以上，进一步优选0.05重量％以上，此外，优选10重量％以下，更优选5重量％以下。在一种方式中，芝麻素类的总含量，在本发明的组合物中优选0.001～10重量％，更优选0.01～5重量％，进一步优选0.05～5重量％。上述总含量，在含有2种以上的芝麻素类的化合物时，为它们的合计含量。芝麻素类的含量可使用高效液相色谱法(HPLC)法等公知的方法进行测定。
本发明的组合物中所含的麦角硫因或其盐的含量并无特别限定，可根据其形态等进行设定。
本发明的组合物中的麦角硫因或其盐的含量，以麦角硫因换算计，例如，在该组合物中优选0.001重量％以上，更优选0.01重量％以上，进一步优选0.05重量％以上，此外，优选10重量％以下，更优选5重量％以下。在一种方式中，麦角硫因或其盐的含量，以麦角硫因换算计，在本发明的组合物中优选0.001～10重量％，更优选0.01～5重量％，进一步优选0.05～5重量％。麦角硫因或其盐的含量可使用HPLC法等公知的方法进行测定。麦角硫因或其盐的麦角硫因换算的量或与此类似的表达，在使用麦角硫因时，表示其量，在使用麦角硫因的盐时，表示在该盐的摩尔数上乘以麦角硫因的分子量所得的值。
本发明的组合物，可根据其形态或剂型以自身公知的各种方法摄取或投用。在一种方式中，本发明的组合物优选口服摄取(口服投用)。在另一种方式中，将本发明的组合物制成皮肤外用剂时，可适用于皮肤。
本发明的组合物的投用量(也可称作摄取量)并无特别限定。本发明的组合物的投用量，例如只要为可获得细胞衰老抑制效果或抗衰老效果的量即可，根据投用方式、投用方法、对象的体重等适当设定即可。
在一种方式中，以人类(成人)为对象通过摄取或投用本发明的组合物时，芝麻素类的总投用量，每1天，优选为0.5mg以上，更优选为1mg以上，进一步优选为3mg以上，此外，优选为200mg以下，更优选为100mg以下，进一步优选为80mg以下。在一种方式中，芝麻素类的总投用量，若为人类(成人)，则每1天，优选为0.5～200mg，更优选为1～100mg，进一步优选为3～80mg。在一种方式中，作为芝麻素及表芝麻素的总投用量，每1天，使人类(成人)通过口服摄取或向其投用优选为0.5～200mg，更优选为1～100mg，进一步优选为3～80mg的芝麻素及/或表芝麻素。上述总投用量，在使用2种以上的芝麻素类的化合物时，为它们的合计量。上述投用量可为每60kg体重的投用量。
在一种方式中，以人类(成人)为对象通过摄取或投用本发明的组合物时，麦角硫因或其盐的投用量，每1天，以麦角硫因换算计优选为2mg以上，更优选为5mg以上，此外，优选为50mg以下，更优选为25mg以下，进一步优选为20mg以下。在一种方式中，以人类(成人)为对象进行摄取或投用时，麦角硫因或其盐的投用量，以麦角硫因换算计，每1天优选为2～50mg，更优选为2～25mg，进一步优选为5～25mg，特别优选为5～20mg。在一种方式中，优选使人类口服摄取或对其投用每1天上述量的芝麻素类及麦角硫因或其盐。此外，优选1日1次以上，例如1日1次或分数次(例如2～3次)摄取或投用上述量。上述投用量可为每60kg体重的投用量。
在人类中，以获得细胞衰老抑制效果或抗衰老效果为目的使用本发明的组合物时，优选将芝麻素类及麦角硫因或其盐的投用量设为上述范围。
在一种方式中，本发明的组合物可用于使人类摄取或对其投用每1天上述量的芝麻素类及麦角硫因或其盐。
就本发明的组合物而言，芝麻素类的总含量成人每1天的摄取量优选为0.5～200mg，更优选为1～100mg，进一步优选为3～80mg。
就本发明的组合物而言，麦角硫因或其盐的含量成人每1天的摄取量以麦角硫因换算计优选为2～50mg，更优选为2～25mg，进一步优选为5～25mg，特别优选为5～20mg。
本发明的组合物优选持续摄取或投用。在一种方式中，本发明的组合物，优选持续1周以上，更优选持续4周以上，进一步优选持续8周以上，特别优选持续12周以上，进行摄取或投用。
摄取或投用本发明的组合物的对象(也可称作投用对象)并无特别限定。优选为人类或非人类哺乳动物，更优选为人类。
在一种方式中，作为投用对象，可列举需要或希望抑制细胞衰老的对象，需要或希望预防或改善个体的衰老症状的对象等。作为这样的对象，例如，可列举中老年者等。在一种方式中，本发明的组合物适合作为中老年者用的细胞衰老抑制用组合物或抗衰老用组合物使用。中老年者，例如可为40岁以上的人类。在一种方式中，中老年者中，作为对象优选高龄者。高龄者例如可为60岁以上或65岁以上的人类。本发明的组合物，例如也可以通过抑制细胞衰老而可期待预防或改善的状态或疾病的预防等为目的，来对健康者使用。
作为细胞衰老抑制的对象的细胞的种类并无特别限定，例如，可列举成纤维细胞、上皮细胞、表皮细胞、基底细胞、干细胞、脂肪细胞、神经细胞、肌细胞、骨骼肌细胞、平滑肌细胞、肌成纤维细胞、肌卫星细胞、卫星细胞、成骨细胞、肝细胞、肝星状细胞、肾细胞、间质细胞、血液细胞、免疫系细胞、内皮细胞、血管内皮细胞、周皮细胞、晶状体细胞、视网膜细胞等。在一种方式中，本发明的组合物优选用于抑制成纤维细胞的细胞衰老。成纤维细胞为在几乎所有脏器中，对组织的支撑、结构的形成所必须的细胞。
本发明的组合物上也可附有选自例如“抑制细胞衰老”、“抑制衰老细胞化”、“预防细胞衰老”、“不使衰老细胞产生”、“抑制衰老细胞的增加”、“抑制衰老细胞的累积”、“延迟细胞衰老”、“延迟细胞衰老的发展”、“抑制细胞衰老的诱导”、“增加年轻细胞的比率”、“延长健康寿命”、“健康长寿”、“细胞年轻”、“全身年轻”及“外观年轻”中的1种或2种以上的功能的标示等。
在本发明的一种方式中，本发明的组合物优选为附有上述标示的饮食品或皮肤外用剂，更优选为饮食品或化妆料，进一步优选为饮食品。此外，上述标示也可为用于获得上述功能而使用的含义的标示。上述标示可附在组合物本身上，也可附在组合物的容器或包装上。
本发明还包含以下方法。
一种抑制细胞衰老的方法，其特征在于，投用1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐。
通过向对象投用1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐，可在对象中有效抑制细胞衰老。此外，在对象中，可获得抗衰老效果。在上述方法中，芝麻素类的重量相对于麦角硫因或其盐的麦角硫因换算的重量的比率(芝麻素类/麦角硫因)优选为0.05～50。
本发明还包含以下应用。
一种应用，其特征在于，将1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐用于抑制细胞衰老。
在一种方式中，1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐，通过抑制细胞衰老，可优选用于预防或改善个体的衰老。在上述应用中，芝麻素类的重量相对于麦角硫因或其盐的麦角硫因换算的重量的比率(芝麻素类/麦角硫因)优选为0.05～50。
上述方法及应用可为治疗性的方法或应用，也可为非治疗性的方法或应用。
在上述方法及应用中，1种以上的芝麻素类、麦角硫因或其盐及它们的优选方式与上述本发明的组合物相同。1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐的重量的比率的优选范围也与本发明的组合物的情况相同。在上述方法及应用中，优选1日1次以上，例如，1日1次～数次(例如2～3次)向对象投用(使其摄取)1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐。作为投用方法，优选口服投用(摄取)。上述应用优选为人类或非人类哺乳动物，更优选为人类中的应用。
上述方法及应用中，只要使用可获得所期望的作用的量(也可称作有效量)的1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐即可。芝麻素类、麦角硫因或其盐的优选投用量或投用对象等与上述本发明的组合物相同。芝麻素类及麦角硫因或其盐优选使用含有这些的组合物投用。优选使用以上述比率含有一种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐的组合物(上述本发明的组合物)。
本发明还包含一种抑制细胞衰老的方法，其特征在于，包含投用上述本发明的组合物。本发明还包含一种应用，其特征在于，将本发明的组合物用于抑制细胞衰老。
在上述方法及应用中，只要分别准备芝麻素类(或含有其的组合物)与麦角硫因或其盐(或含有其的组合物)，并基本同时投用，或投用一方后，在其效力持续期间投用另一方，即可获得本发明所意图的基于1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐的效果(细胞衰老抑制效果或抗衰老效果)。因此，含有芝麻素类或含有其的组合物及麦角硫因或其盐或含有其的组合物的药剂盒等也包含在本发明的范围内。
本发明还包含用于制造细胞衰老抑制用组合物或抗衰老用组合物的1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐的应用。细胞衰老抑制用组合物、抗衰老用组合物及其优选方式等与上述本发明的组合物相同。
本发明还包含一种应用，其为用于制造细胞衰老抑制用组合物或抗衰老用组合物的1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐的应用，上述组合物中的芝麻素类的重量相对于麦角硫因或其盐的麦角硫因换算的重量的比率(芝麻素类/麦角硫因)为0.05～50。
在本说明书中，通过下限值和上限值来表示的数值范围，即“下限值～上限值”包含下限值及上限值。例如，由“1～2”来表示的范围是指1以上2以下，且包含1及2。在本说明书中，上限及下限可为基于任意组合的范围。
另外，本说明书中记载的学术文献及专利文献均作为参照纳入本说明书。
实施例
以下，基于实施例对本发明进行更具体地说明。另外，本发明不限定于这些实施例。
下述实验中使用的麦角硫因为L-麦角硫因。芝麻素及表芝麻素混合物使用芝麻素：表芝麻素(重量比)为1：1的芝麻素及表芝麻素的混合物。
＜实施例1～2：芝麻素及表芝麻素混合物及麦角硫因对细胞衰老的作用的评价实验＞
使用TIG-3细胞(人类肺成纤维细胞)，测定该细胞中的p16-INK4A(p16)的表达量。实施例1～2、参考例1及比较例1～4中使用的培养基为添加10％牛胎儿血清的Eagle最小必需培养基。H2O2处理中使用的添加H2O2(200μM)的培养基，在上述培养基中添加H2O2来制备。添加H2O2(200μM)的培养基，不含芝麻素类及麦角硫因。
在实施例1及2中，为了调查对细胞衰老的作用，以含有芝麻素类及麦角硫因的培养基培养细胞后，以添加H2O2的培养基对该细胞进行处理。然后，以含有芝麻素类及麦角硫因的培养基培养细胞。
详细而言，向分别以下述表1中记载的浓度添加有芝麻素及表芝麻素混合物(SE)及麦角硫因的培养基中，播种4.0×104cells/well的TIG-3细胞至6well中，并于37℃、CO2(5％)的条件培养24小时。表1中示出培养基中的芝麻素类(芝麻素及表芝麻素混合物(SE))相对于麦角硫因的重量比(SE/麦角硫因)。培养24小时后，去除添加有芝麻素及表芝麻素混合物及麦角硫因的培养基，以添加H2O2(200μM)的培养基对孔中的细胞进行2小时处理。然后，再次将添加H2O2(200μM)的培养基更换为以表1所示浓度添加有芝麻素及表芝麻素混合物及麦角硫因的培养基，培养6天。以500μL QIAzol Lysis Reagent(QIAGEN公司)回收6well中培养的细胞。添加100μM氯仿(Nacalai Tesque株式会社)，回收上层200μL后，添加200μL异丙醇(Nacalai Tesque株式会社)进行离心(12000g，10min，4℃)。然后去除上清液，向球团中添加500μL 70％ EtOH(Nacalai Tesque株式会社)，进行离心(7500g，5min，4℃)。去除上清液，以20μL DNase RNase Free水(invitrogen)进行溶解，以NanoDrop进行测定。将10μL的RNA样本与10μL的调整的RT master mix(Applied Biosystems、High-CapacitycDNA Reverse Transcription Kit with RNase Inhibitor)混合，通过热循环仪(AppliedBiosystems)使其反应，用DNase RNase Free水对合成的cDNA 20μL进行1/10稀释。将调整的15μL Master mix(Takara，TB Green(注册商标)Premix Ex TaqTMII(Tli RNaseH Plus))及5μL cDNA样本混合，通过Real-Time PCR system(Applied Biosystems、StepOnePlus-01)测定p16。求p16表达量的平均(n＝6)。所得结果示于图1(实施例1)及图2(实施例2)。显著差异检验通过Student’s t-test(vs H2O2处理)来实施(＊：p＜0.05)。
＜参考例1：无处理组的细胞衰老的评价试验＞
为了调查对细胞衰老的作用，向不含芝麻素及表芝麻素混合物及麦角硫因的培养基中，播种1.0×105cells/well的TIG-3细胞至6well中，并于37℃、CO2(5％)的条件培养24小时。培养24小时后，不以添加H2O2(200μM)的培养基处理2小时，此外不更换添加有芝麻素及表芝麻素混合物及麦角硫因的培养基，进一步培养2天。即，在参考例1中，将TIG-3细胞用不含芝麻素类及麦角硫因的培养基培养24小时后，以该培养基进一步培养2天。在参考例1中，未以添加H2O2(200μM)的培养基实施处理。其他与实施例1同样，测定p16。所得结果示于图1及图2。
＜比较例1：H2O2处理组的细胞衰老的评价试验＞
为了调查对细胞衰老的作用，向不含芝麻素及表芝麻素混合物及麦角硫因的培养基中，播种4.0×104cells/well的TIG-3细胞至6well中，并于37℃、CO2(5％)的条件培养24小时。培养24小时后，以添加H2O2(200μM)的培养基对孔中的细胞处理2小时。然后不更换添加有芝麻素及表芝麻素混合物及麦角硫因的培养基，培养6天。即，在比较例1中，以上述添加H2O2(200μM)的培养基进行处理后，将添加H2O2(200μM)的培养基更换为不含芝麻素类及麦角硫因的培养基，进一步培养6天。其他与实施例1同样，测定p16。所得结果示于图1及图2。
＜比较例2～4：基于芝麻素及表芝麻素混合物或麦角硫因的细胞衰老的评价试验＞
为了调查对细胞衰老的作用，向分别以下述表1中记载的浓度添加有芝麻素及表芝麻素混合物或麦角硫因的培养基中，播种4.0×104cells/well的TIG-3细胞至6well中，并于37℃、CO2(5％)的条件培养24小时。培养24小时后，去除添加有芝麻素及表芝麻素混合物或麦角硫因的培养基，以添加H2O2(200μM)的培养基对孔中的细胞进行2小时处理。然后，再次将添加H2O2(200μM)的培养基更换为以表1所示浓度添加有芝麻素及表芝麻素混合物或麦角硫因的培养基，培养6天。其他与实施例1同样，测定p16。
所得结果示于图1(比较例2及3)及图2(比较例2及4)。
表1中的“H2O2(μM)”为添加H2O2(200μM)的培养基中的H2O2浓度。
[表1]
＜结果＞
图1及图2为表示对芝麻素及表芝麻素混合物及麦角硫因的细胞衰老抑制效果进行研究的结果的图表。图1及图2中所示结果(相对值)，以将参考例1的p16的表达量作为1时的实施例及比较例中的p16的表达量的相对值进行表示。详细而言，用实施例的p16的表达量(n＝6的平均值)除以参考例1的p16的表达量(n＝6的平均值)(实施例的p16表达量/参考例1的p16表达量)求相对值。关于比较例也同样，用比较例的p16的表达量(n＝6的平均值)除以参考例1的p16的表达量(n＝6的平均值)求相对值。
如图1及图2所示，相对于对照组(参考例1)，通过比较例1所涉及的200μM的H2O2处理，p16增加2倍左右。此外，由图1可知，在比较例2、3所涉及的芝麻素及表芝麻素混合物(1μM)或麦角硫因(0.1μM)处理中，分别相对于比较例1所涉及的H2O2处理组，p16的表达量无显著变化。另一方面，通过基于实施例1所涉及的含有芝麻素及表芝麻素混合物(1μM)及麦角硫因(0.1μM)的组合物(相对于麦角硫因的芝麻素类的重量比为15.5)的处理，p16的表达得到显著抑制。接着，如图2所示，在比较例2所涉及的芝麻素及表芝麻素混合物(1μM)中，相对于比较例1所涉及的H2O2处理组，p16的表达量并无显著变化，在比较例4所涉及的麦角硫因(10μM)处理中，p16的表达得到显著抑制。在实施例2所涉及的基于含有芝麻素及表芝麻素混合物(1μM)及麦角硫因(10μM)的组合物(相对于麦角硫因的芝麻素类的重量比为0.155)的处理中，p16的表达得到显著抑制，且抑制水平比麦角硫因单独处理(比较例4)高。由实施例及比较例的结果认为由于芝麻素类，基于麦角硫因的细胞衰老抑制作用得到增强。
由以上确认，通过含有芝麻素及表芝麻素混合物和麦角硫因的组合物，p16的表达得到协同性抑制。即，含有芝麻素类和麦角硫因的组合物表现出基于含有两者的协同性细胞衰老抑制效果，因此即使为低用量也可发挥效果。
＜实施例3：基于芝麻素及表芝麻素混合物及麦角硫因的寿命延长效果的确认试验＞
使用酵母，研究芝麻素及表芝麻素混合物及麦角硫因的寿命延长效果。由于酵母K6001不会分裂子酵母，因此通过对从母细胞生出的子细胞数进行计数，可测定母细胞的分裂寿命。本试验中，以YPGalactose液体培养基(2％半乳糖、1％酵母提取物、2％蛋白胨)将酵母K6001培养至静止期，回收一部分酵母，用水清洗2次。将清洗后的酵母播种至含有芝麻素及表芝麻素混合物(10μM)及麦角硫因(10μM)的YPGlucose琼脂培养基(2％半乳糖、1％酵母提取物、2％蛋白胨)，并于30℃下培养2日后，以显微镜对子细胞进行计数。培养基中所含的芝麻素类相对于麦角硫因的重量比(芝麻素及表芝麻素混合物/麦角硫因)为1.55。
作为对照，除了未将芝麻素及表芝麻素混合物及麦角硫因添加至培养基中以外，以与上述相同的方法培养酵母，以显微镜对子细胞进行计数。
＜结果＞
图3为表示对芝麻素及表芝麻素混合物及麦角硫因的酵母的寿命延长效果进行研究的结果的图表。图3的图表的横轴表示从1个母细胞中生出的子细胞的代(数)。纵轴的分裂细胞(％)表示相对于母细胞的总数(100％)生出横轴所示的代的子细胞的母细胞的比率(％)(参考文献：Jarolim，et al.“A novel assay for replicative lifespan inSaccharomyces cerevisiae.”FEMS yeast research 5.2(2004)：169-177)。例如，从母细胞生出5个子细胞(代1～5)时，该母细胞(分裂细胞)，分别在代1～5中计数。图3中，黑圆点(●)为对照，白圆点(○)为以含有芝麻素及表芝麻素混合物(SE)及麦角硫因的培养基进行培养的酵母。
如图3所示，与对照相比，由于芝麻素及表芝麻素混合物及麦角硫因的处理，子酵母的数增加，对于酵母表现出分裂寿命延长效果。由以上，确认含有芝麻素类和麦角硫因的组合物，发挥基于含有两者的寿命延长效果。

Claims (10)

1.一种组合物，其特征在于，含有1种以上的芝麻素类及麦角硫因或其盐，
芝麻素类的重量相对于麦角硫因或其盐的麦角硫因换算的重量的比率，即芝麻素类/麦角硫因为0.05～50。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，芝麻素类为芝麻素及/或表芝麻素。
3.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，为口服用组合物。
4.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，为饮食品。
5.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，为化妆料。
6.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，用于抑制细胞衰老。
7.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，为抗衰老用组合物。
8.根据权利要求1或2所述的组合物，其特征在于，附有选自“抑制细胞衰老”、“抑制衰老细胞化”、“预防细胞衰老”、“不使衰老细胞产生”、“抑制衰老细胞的增加”、“抑制衰老细胞的累积”、“延迟细胞衰老”、“延迟细胞衰老的发展”、“抑制细胞衰老的诱导”、“增加年轻细胞的比率”、“延长健康寿命”、“健康长寿”、“细胞年轻”、“全身年轻”及“外观年轻”中的1种以上的标示。
9.一种抑制细胞衰老的方法，其特征在于，包含投用权利要求1或2所述的组合物。
10.一种应用，其特征在于，将权利要求1或2所述的组合物用于抑制细胞衰老。
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