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CN114755351A - 果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法 - Google Patents

果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法 Download PDF

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CN114755351A CN202210671623.6A CN202210671623A CN114755351A CN 114755351 A CN114755351 A CN 114755351A CN 202210671623 A CN202210671623 A CN 202210671623A CN 114755351 A CN114755351 A CN 114755351A
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何敏恒
梁志森
罗浩
马盛龙
吴芷欣
覃天福
霍玟希
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Guangzhou Examination Detection Authentication Group Co ltd
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Abstract

本发明提供了一种婴幼儿食品或乳制品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法，包括如下步骤：将婴幼儿食品样品或乳制品样品与水混合，制备样品溶液；将所述样品溶液、蔗糖酶溶液与β‑半乳糖苷酶溶液混合，进行第一次酶解，然后第一次灭酶，制备第一溶液；其中，所述β‑半乳糖苷酶溶液的酶活力为500U/mL~600U/mL；将硼氢化钾的氢氧化钠溶液与所述第一溶液混合，制备第二溶液；将所述第二溶液中的所述硼氢化钾去除，再与果聚糖酶溶液混合，进行第二次酶解，然后第二次灭酶，制备待测溶液；将所述待测溶液进行离子色谱检测，获得果糖的含量
Figure 502942DEST_PATH_IMAGE002
与葡萄糖的含量
Figure 45919DEST_PATH_IMAGE004
，通过
Figure 338360DEST_PATH_IMAGE006
计算获得果聚糖平均聚合度。

Description

果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法
技术领域
本发明涉及检测技术领域，特别是涉及一种果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法。
背景技术
在食品行业高速发展的背景下，营养强化剂被大量使用，出现了很多把功能性碳水化合物的成分添加至如婴幼儿配方食品、巴士杀菌乳、灭菌乳、饮料等食品中的现象，此类碳水化合物又作为膳食纤维单体成份，用来改善和增强相关食品中的营养组成，并降低热量。
果聚糖是一类功能性碳水化合物，作为膳食纤维的重要组成部份，同时也是一种重要的益生元。果聚糖一般是2个~59个果糖基与1个葡萄糖残基的聚合物。低聚果糖的平均聚合度为4，常见的低聚果糖包括蔗果三糖、蔗果四糖、蔗果五糖以及蔗果六糖等；菊粉的平均聚合度为10；多聚果糖平均聚合度为23，是一类化合物的总称。在当前食品类别繁多，食品多样化的发展的背景下，企业大多选用低聚半乳糖、低聚果糖、菊粉、多聚果糖、聚葡萄糖、棉子糖、水苏糖等功能性糖作为产品卖点，还有部份企业选择添加一种以上的果聚糖，例如低聚果糖、菊粉以及多聚果糖，以增加碳化合物的多样性，从而更有利于机体的肠道内有益菌的生长。
根据GB 14880-2012《食品安全国家标准 食品营养强化剂使用标准》中规定，婴幼儿配方、婴幼儿谷物辅助食品等食品中可添加低聚果糖与多聚果糖。卫生部公告规定菊粉可用于各类食品中，但不包括婴幼儿食品。传统的检验方法只针对乳及乳制品、婴幼儿配方食品、固体饮料等食品中单独添加的低聚果糖、多聚果糖或菊粉的含量测定，而无法对混合添加的果聚糖进行检测或分析，从而无法满足生产和监管的检测需求。同时，对于食品中添加的果聚糖，一般作为辅料添加使用，添加量较低，对检测方法灵敏度要求高，并且对于食品基质样品的前处理步骤则更为复杂繁琐，应用于实际样品的检测难度大。不同品种的食品基质复杂多样，可能对待测物的影响较大，导致报道的检测方法在实际样品中可能失效。
此外，由于婴幼儿食品或乳制品中含有较多的乳糖：婴幼儿配方奶粉的乳糖含量约为40%~55%，乳粉的乳糖含量一般大于20%，液体乳的乳糖约为4%，而乳糖的酶解分解产物为半乳糖和葡萄糖，其中葡萄糖的含量会直接干扰果聚糖酶解产生的果糖和葡萄糖的比值，从而导致果聚糖平均聚合度的计算结果与实际值的偏差较大。
发明内容
基于此，本发明提供了一种婴幼儿食品或乳制品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法，其能快速获得样品中被混合使用的果聚糖的平均聚合度，果聚糖平均聚合度的计算结果与实际值较为接近，并且回收率指标满足方法学要求。
本发明通过如下技术方案实现。
一种婴幼儿食品或乳制品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法，包括如下步骤：
将婴幼儿食品样品或乳制品样品与水混合，制备样品溶液；
将所述样品溶液、蔗糖酶溶液与β-半乳糖苷酶溶液混合，进行第一次酶解，然后第一次灭酶，制备第一溶液；其中，所述β-半乳糖苷酶溶液的酶活力为500U/mL~600U/mL；
将硼氢化钾的氢氧化钠溶液与所述第一溶液混合，制备第二溶液；
将所述第二溶液中的所述硼氢化钾去除，再与果聚糖酶溶液混合，进行第二次酶解，然后第二次灭酶，制备待测溶液；
将所述待测溶液进行离子色谱检测，获得果糖的含量
Figure 962141DEST_PATH_IMAGE002
与葡萄糖的含量
Figure 942735DEST_PATH_IMAGE004
，通过
Figure 515799DEST_PATH_IMAGE006
计算获得果聚糖平均聚合度。
在其中一个实施例中，第一次酶解的条件包括：在40℃的温度下以100r/min的转速振荡50min~70min；
第二次酶解的条件包括：在40℃的温度下以100r/min的转速振荡35min~55min。
在其中一个实施例中，第一次灭酶的条件包括：于沸水中加热12min~18min；和/或
第二次灭酶的条件包括：于沸水中加热12min~18min。
在其中一个实施例中，将婴幼儿食品样品或乳制品样品与水混合后还包括如下步骤：
用乙酸调节溶液pH至4.5±0.1，制备样品溶液。
在其中一个实施例中，所述蔗糖酶溶液的酶活力为4.5U/mL。
在其中一个实施例中，所述果聚糖酶溶液的酶活力为50U/mL。
在其中一个实施例中，将所述第二溶液中的硼氢化钾去除包括如下步骤：
将所述第二溶液与0.5mol/L的乙酸水溶液混合。
在其中一个实施例中，离子色谱检测的条件包括：淋洗液A为0.15mol/L的氢氧化钠，淋洗液B为0.15mol/L的氢氧化钠与1.0mol/L的乙酸钠的混合溶液，淋洗液C为水。
在其中一个实施例中，离子色谱检测的条件还包括：采用梯度淋洗；所述梯度淋洗的程序包括：0min~14min，淋洗液A的体积百分数为20%，淋洗液C的体积百分数为80%；14min~14.1min，淋洗液A的体积百分数由20%变化至0%，淋洗液C的体积百分数由80%变化至0%，淋洗液B的体积百分数由0%变化至100%；14.1min~17min，淋洗液B的体积百分数保持为100%；17min~17.1min，淋洗液B的体积百分数由100%变化至0%，淋洗液C的体积百分数由0%变化至100%；17.1min~20min，淋洗液C的体积百分数保持为100%；20min~20.1min，淋洗液A的体积百分数从0%变化至20%，淋洗液C的体积百分数从100%变化至80%；20.1min~30min，淋洗液A的体积百分数保持为20%，淋洗液C的体积百分数保持为80%。
在其中一个实施例中，离子色谱检测的条件还包括：流速为1mL/min~1.2mL/min；柱温为28℃~32℃；进样量为10μL；采用阴离子分析柱。
与现有技术相比较，本发明的婴幼儿食品或乳制品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法具有如下有益效果：
本发明通过依次采用蔗糖酶溶液与β-半乳糖苷酶溶液对样品进行前处理，去除婴幼儿食品或乳制品样品中的干扰组分，通过限定β-半乳糖苷酶溶液的酶活力为500U/mL，进一步保证了果聚糖的酶解不受干扰，以降低果聚糖平均聚合度的计算结果与实际值的偏差程度。同时，本发明基于离子色谱测定法，通过准确地检测出果聚糖的酶解产物的含量，从而计算出果聚糖的平均聚合度，可解决样品中被混合使用的果聚糖的平均聚合度，解决果聚糖总量的定量问题，并且加标回收率指标满足方法学的要求。
进一步地，本发明的婴幼儿食品或乳制品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法建立了完整的检测方法，基于专一性酶解技术，适合大批量样品同时进行检测，前处理步骤简单便捷，能够提高效率。
附图说明
图1为本发明提供的果聚糖酶解原理；
图2为本发明提供的果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法流程图；
图3为本发明提供的离子色谱标准图谱；
图4为本发明提供的β-半乳糖苷酶使用量对结果的影响试验图。
具体实施方式
为了便于理解本发明，下面将参照相关附图对本发明进行更全面的描述。附图中给出了本发明的较佳实施方式。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施方式。相反地，提供这些实施方式的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。
此外，术语“第一”、“第二”仅用于描述目的，而不能理解为指示或暗示相对重要性或者隐含指明所指示的技术特征的数量。由此，限定有“第一”、“第二”的特征可以明示或者隐含地包括至少一个该特征。在发明的描述中，“多个”的含义是至少两个，例如两个，三个等，除非另有明确具体的限定。在本发明的描述中，“若干”的含义是至少一个，例如一个，两个等，除非另有明确具体的限定。
本发明中的词语“优选地”、“更优选地”等是指，在某些情况下可提供某些有益效果的本发明实施方案。然而，在相同的情况下或其他情况下，其他实施方案也可能是优选的。此外，对一个或多个优选实施方案的表述并不暗示其他实施方案不可用，也并非旨在将其他实施方案排除在本发明的范围之外。
当本文中公开一个数值范围时，上述范围视为连续，且包括该范围的最小值及最大值，以及这种最小值与最大值之间的每一个值。进一步地，当范围是指整数时，包括该范围的最小值与最大值之间的每一个整数。此外，当提供多个范围描述特征或特性时，可以合并该范围。换言之，除非另有指明，否则本文中所公开之所有范围应理解为包括其中所归入的任何及所有的子范围。
除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施方式的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和／或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。
本发明提供了一种婴幼儿食品或乳制品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法，包括如下步骤：
将婴幼儿食品样品或乳制品样品与水混合，制备样品溶液；
将样品溶液、蔗糖酶溶液与β-半乳糖苷酶溶液混合，进行第一次酶解，然后第一次灭酶，制备第一溶液；其中，β-半乳糖苷酶溶液的酶活力为500U/mL~600U/mL；
将硼氢化钾的氢氧化钠溶液与第一溶液混合，制备第二溶液；
将第二溶液中的硼氢化钾去除，再与果聚糖酶溶液混合，进行第二次酶解，然后第二次灭酶，制备待测溶液；
将待测溶液进行离子色谱检测，获得果糖的含量
Figure 16182DEST_PATH_IMAGE002
与葡萄糖的含量
Figure 813237DEST_PATH_IMAGE004
，通过
Figure 890914DEST_PATH_IMAGE006
计算获得果聚糖平均聚合度。
婴幼儿配方食品或乳制品中含有高含量的乳糖，存在前处理复杂、基质干扰大以及糖类化合物结构相似等问题，导致检测果聚糖平均聚合度的难度大。果聚糖，由α-果糖以β-1,2糖苷键连接，在其末端接一个葡萄糖残基而形成，分子式为
Figure 657882DEST_PATH_IMAGE008
（n=2～59），酶解产物为果糖和葡萄糖。因此，主要的前处理过程是去解干扰物，保证果聚糖的酶解不受干扰，具体的检测原理如图1所示。
可以理解地，果聚糖，由α-果糖以β-1,2糖苷键连接，在其末端接一个葡萄糖残基而形成。以酶水解果聚糖产生的果糖、葡萄糖进行平均聚合度计算，果糖产生的量与葡萄产生的量的比值即为DP，1分子果聚糖（GFn）完全酶水解产生1分子葡萄糖和n分子果糖，聚合度为n（n=2～59）。
平均聚合度DP=
Figure 137405DEST_PATH_IMAGE006
；其中，XF为酶解产生的果糖的含量，单位为mg/kg；
Figure 948104DEST_PATH_IMAGE004
为酶解产生的葡萄糖的含量，单位为mg/kg。
在本发明中，前处理过程包括：
利用β-半乳糖苷酶将乳糖、乳果糖以及低聚半乳糖酶解成葡萄糖、半乳糖、果糖，蔗糖酶将蔗糖酶解成果糖、葡萄糖；
酶解后的单糖（葡萄糖、果糖、半乳糖）经硼氢化钾还原成相应的糖醇去除；
过量的硼氢化钾通过乙酸中和去除。
更具体地，请结合图2，婴幼儿食品或乳制品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法包括如下步骤：
将婴幼儿食品样品或乳制品样品与水混合，制备样品溶液；
将样品溶液、蔗糖酶溶液与β-半乳糖苷酶溶液混合，进行第一次酶解，然后沸水浴15min将酶灭活，中止酶解反应，制备第一溶液；其中，β-半乳糖苷酶溶液的酶活力为500U/mL~600U/mL；
将硼氢化钾的氢氧化钠溶液与第一溶液混合，将单糖还原成糖醇，除去干扰，制备第二溶液；
用乙酸中和多余的硼氢化钠，将第二溶液中的硼氢化钾去除，同时提供合适的pH范围用于酶解果聚糖，再与果聚糖酶溶液混合，进行第二次酶解，然后沸水浴15min将酶灭活，中止酶解反应，制备待测溶液；
将待测溶液定容，过滤，进行离子色谱检测，获得果糖的含量
Figure 513077DEST_PATH_IMAGE002
与葡萄糖的含量
Figure 959102DEST_PATH_IMAGE009
，通过
Figure 152186DEST_PATH_IMAGE006
计算获得果聚糖平均聚合度。
可以理解地，在本发明中，β-半乳糖苷酶溶液的酶活力包括但不限于500U/mL、501U/mL、502 U/mL、503 U/mL、504 U/mL、505 U/mL、506 U/mL、507 U/mL、508 U/mL、509 U/mL、510 U/mL、511 U/mL、512 U/mL、513 U/mL、514 U/mL、515 U/mL、516 U/mL、517 U/mL、518U/mL、519 U/mL、520 U/mL、530 U/mL、540 U/mL、550 U/mL、560 U/mL、570 U/mL、580 U/mL、590 U/mL、600U/mL。优选地，β-半乳糖苷酶溶液的酶活力为500U/mL。
在一个具体的示例中，β-半乳糖苷酶溶液的制备包括如下步骤：将β-半乳糖苷酶与磷酸盐缓冲溶液混合。
更具体地，磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.08mol/L~0.12mol/L，pH为6.0。更为具体地，β-半乳糖苷酶的制备包括如下步骤：称取活性约为1000 U的β-半乳糖苷酶溶于2.0 mL磷酸盐缓冲溶液（0.1 mol/L，pH 6.0）中，成酶活为500 U/mL的β-半乳糖苷酶溶液，临用前配制。
在一个具体的示例中，第一次酶解的条件包括：在40℃的温度下以100r/min的转速振荡50min~70min。
优选地，第一次酶解的条件包括：在40℃的温度下以100r/min的转速振荡60min。
在一个具体的示例中，第二次酶解的条件包括：在40℃的温度下以 100 r/min的转速振荡35min~55min。
优选地，第二次酶解的条件包括：在40℃的温度下以100r/min的转速振荡40min。
在一个具体的示例中，第一次灭酶的条件包括：于沸水中加热12min~18min。
可以理解地，在本发明中，第一次灭酶指的是让蔗糖酶与β-半乳糖苷酶失活。优选地，第一次灭酶的条件包括：经沸水浴15min。
在一个具体的示例中，第二次灭酶的条件包括：于沸水中加热12min~18min。
可以理解地，在本发明中，第二次灭酶指的是让果聚糖酶失活。优选地，第二次灭酶的条件包括：经沸水浴15min。
在一个具体的示例中，将婴幼儿食品样品或乳制品样品与水混合后还包括如下步骤：
用乙酸调节溶液pH至4.5±0.1，制备样品溶液。
在一个具体的示例中，蔗糖酶溶液的酶活力为4U/mL~5U/mL。
可以立即地，蔗糖酶溶液的酶活力包括但不限于4 U/mL、4.1 U/mL、4.2 U/mL、4.3U/mL、4.4 U/mL、4.5 U/mL、4.6 U/mL、4.7 U/mL、4.8 U/mL、4.9 U/mL、5 U/mL。优选地，蔗糖酶溶液的酶活力为4.5 U/mL。
在一个具体的示例中，蔗糖酶溶液的制备包括如下步骤：将蔗糖酶与马来酸钠缓冲溶液混合。
更具体地，马来酸钠缓冲溶液的浓度为90 mmol/L~110 mmol/L，pH为6.5。更为具体地，蔗糖酶溶液的制备包括如下步骤：将300U蔗糖酶溶解于66mL马来酸钠缓冲溶液(100mmol/L，pH6.5）中。
在一个具体的示例中，果聚糖酶溶液的酶活力为40U/mL~60U/mL。
可以理解地，在本发明中，果聚糖酶溶液的酶活力包括但不限于40 U/mL、41 U/mL、42 U/mL、43 U/mL、44 U/mL、45 U/mL、46 U/mL、47 U/mL、48 U/mL、49 U/mL、50 U/mL、51U/mL、52 U/mL、53 U/mL、54 U/mL、55 U/mL、56 U/mL、57 U/mL、58 U/mL、59 U/mL、60 U/mL。优选地，果聚糖酶溶液的酶活力为50 U/mL。
在一个具体的示例中，果聚糖酶溶液的制备包括如下步骤：将果聚糖酶与乙酸钠缓冲溶液混合。
更具体地，乙酸钠缓冲溶液的浓度为0.15mol/L~0.25 mol/L，pH为4.5。更为具体地，果聚糖酶溶液的制备包括如下步骤：移取2000U果聚糖酶使用乙酸钠缓冲溶液（0.2mol/L，pH4.5）稀释40倍，成酶活为50 U/mL的果聚糖酶溶液。
在一个具体的示例中，将第二溶液中的硼氢化钾去除包括如下步骤：
将第二溶液与0.4mol/L~0.6mol/L的乙酸水溶液混合。
可以理解地，在本发明中，乙酸水溶液的浓度包括但不限于0.4mol/L、0.41 mol/L、0.42 mol/L、0.43 mol/L、0.44 mol/L、0.45 mol/L、0.46 mol/L、0.47 mol/L、0.48 mol/L、0.49 mol/L、0.5 mol/L、0.51 mol/L、0.52 mol/L、0.53 mol/L、0.54 mol/L、0.55 mol/L、0.56 mol/L、0.57 mol/L、0.58 mol/L、0.59 mol/L、0.6 mol/L。
在一个具体的示例中，乙酸水溶液的制备包括如下步骤：吸取1.5mL冰乙酸，用水稀释至50mL。
在一个具体的示例中，硼氢化钾的氢氧化钠溶液的制备包括如下步骤：称取0.150g硼氢化钠溶解于10mL 0.1 mol/L NaOH溶液中。
在一个具体的示例中，离子色谱检测的条件包括：淋洗液A为0.1mol/L~0.2mol/L的氢氧化钠，淋洗液B为0.1mol/L~0.2mol/L的氢氧化钠与0.5mol/L~1.5mol/L的乙酸钠的混合溶液，淋洗液C为水。
更具体地，淋洗液A为0.15mol/L的氢氧化钠，淋洗液B为0.15mol/L的氢氧化钠与1mol/L的乙酸钠的混合溶液，淋洗液C为超纯水。
在一个具体的示例中，离子色谱检测的条件还包括：采用梯度淋洗；梯度淋洗的程序包括：0min~14min，淋洗液A的体积百分数为20%，淋洗液C的体积百分数为80%；14min~14.1min，淋洗液A的体积百分数由20%变化至0%，淋洗液C的体积百分数由80%变化至0%；14.1min~17min，淋洗液A的体积百分数保持为0%，淋洗液C的体积百分数保持为0%；17min~17.1min，淋洗液A的体积百分数保持为0%，淋洗液C的体积百分数从0%变化至100%；17.1min~20min，淋洗液A的体积百分数保持为0%，淋洗液C的体积百分数保持为100%；20min~20.1min，淋洗液A的体积百分数从0%变化至20%，淋洗液C的体积百分数从100%变化至80%；20.1min~30min，淋洗液A的体积百分数保持为20%，淋洗液C的体积百分数保持为80%。
在一个具体的示例中，离子色谱检测的条件还包括：流速为1mL/min~1.4mL/min；柱温为28℃~32℃；进样量为8μL~12μL；采用阴离子分析柱。
优选地，离子色谱检测的条件还包括：流速为1.2mL/min；柱温为30℃；进样量为10μL；采用阴离子分析柱。
更具体地，高相阴离子分析柱为IonPac PA1（250 mm ×4 mm，Thermo公司）。
以下结合具体实施例对本发明的婴幼儿食品或乳制品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法做进一步详细的说明。以下实施例中所用的原料，如无特别说明，均为市售产品。
实施例1
本实施例提供一种婴幼儿配方奶粉中平均聚合度的离子色谱测定方法，具体如下：
一、试剂的配制
β-半乳糖苷酶液（500 U/mL）：称取活性约为1000 U的β-半乳糖苷酶溶于2.0 mL磷酸盐缓冲溶液（0.1 mol/L，pH 6.0）中，成酶活为500 U/mL的β-半乳糖苷酶溶液，临用前配制。
蔗糖酶溶液（4.5U/mL）：将300U蔗糖酶溶解于66mL马来酸钠缓冲溶液(100mmol/L，pH6.5）中。
硼氢化钾-氢氧化钠溶液（15mg/mL）：称取0.150g硼氢化钠溶解于10mL 0.1 mol/LNaOH溶液中。
果聚糖酶液（50U/mL）：移取2000U果聚糖酶使用乙酸钠缓冲溶液（0.2 mol/L，pH4.5）稀释40倍，成酶活为50 U/mL的果聚糖酶溶液。
乙酸溶液（0.5mol/L）：吸取1.5mL冰乙酸，用水稀释至50mL。
二、离子色谱条件
阴离子分析柱为IonPac PA1（250 mm ×4 mm，Thermo公司）；
淋洗液：A为0.15 mol/L NaOH溶液, B为0.15 mol/L NaOH+1.0 mol/L乙酸钠混合溶液，C为超纯水；淋洗梯度程序：0min~14min，淋洗液A的体积百分数为20%，淋洗液C的体积百分数为80%；14min~14.1min，淋洗液A的体积百分数由20%变化至0%，淋洗液C的体积百分数由80%变化至0%，淋洗液B的体积百分数由0%变化至100%；14.1min~17min，淋洗液B的体积百分数保持为100%；17min~17.1min，淋洗液B的体积百分数由100%变化至0%，淋洗液C的体积百分数由0%变化至100%；17.1min~20min，淋洗液C的体积百分数保持为100%；20min~20.1min，淋洗液A的体积百分数从0%变化至20%，淋洗液C的体积百分数从100%变化至80%；20.1min~30min，淋洗液A的体积百分数保持为20%，淋洗液C的体积百分数保持为80%；流速：1.20 mL /min；柱温30℃；进样量10.0 μL。
三、测定步骤
第一步，称取样品置于烧杯中，加温水溶解，用乙酸调节pH至4.5±0.1，并转移至容量瓶中定容。
第二步，移取200μL的样品试液，于样液中再加入200μL蔗糖酶液以及200μL β-半乳糖苷酶液，置于40℃振荡水浴中，100r/min振荡酶解1h，取出后冷却至室温。再经沸水浴15min灭酶。
第三步，于样液中再加入0.50mL硼氢化钾-氢氧化钠溶液，置于40℃振荡水浴中，100r/min振荡0.5h，取出，冷却至室温。
第四步，于样液中再加入1.00mL乙酸溶液，静置于15min。
第五步，于样液中再加入1.00mL果聚糖酶溶液，置于40℃振荡水浴中酶解45min，再经沸水浴15min灭酶，冷却至室温，定容至10mL。过滤，待上机测试。
第六步，使用上述离子色谱方法对样品中酶解产物进行定性与定量检测，通过酶解产生的果糖与葡萄糖的含量之比，计算总果聚糖的平均聚合度。
标准图谱如图3所示，果聚糖的酶解产物为葡萄糖、果糖。葡萄糖参考出峰时间为8.0min，果糖参考出峰时间为9.9min。
以峰面积外标法进行定量，果糖、葡萄糖在0.25-25mg/L范围内，线性相关系数>0.999。
四、婴幼儿配方奶粉回收率测定
称取婴幼儿配方奶粉样品约2.5g置于烧杯中，添加一定量的果聚糖（添加水平为3%）进行加标回收实验，按照上述一至三所述方法进行回收率实验，并重复测定3次。经酶解去除杂质干扰物，使用果聚糖酶将样品中果聚糖酶解成果糖和葡萄糖，再以离子色谱检测果聚糖产生的果糖与葡萄糖的比例，以计算平均聚合度。五组不同果聚糖添加类型、比例以及相对应的结果如表1所示。
Figure 291043DEST_PATH_IMAGE011
实施例2
本实施例提供一种液体乳样品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法，其中试剂的配制、离子色谱条件与测定步骤均与实施例1一致，不同在于本实施例的样品为液体乳样品：
称取液体乳样品约2.5g置于烧杯中，添加一定量的果聚糖（添加水平为3 %）进行加标回收实验，按实施例1中一至三所述的方法进行回收率实验，并重复测定3次。经酶解去除杂质干扰物，使用果聚糖酶将样品中果聚糖酶解成果糖和葡萄糖，再以离子色谱检测果聚糖产生的果糖与葡萄糖的比例，以计算平均聚合度。五组不同果聚糖添加类型、比例以及相对应的结果如表2所示。
Figure 218679DEST_PATH_IMAGE013
实施例3
本实施例提供一种乳粉样品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法，其中试剂的配制、离子色谱条件与测定步骤均与实施例1一致，不同在于本实施例的样品为乳粉样品：
称取乳粉样品约2.5g置于烧杯中，添加一定量的果聚糖（添加水平为3 %）进行加标回收实验，按实施例1中一至三所述的方法进行回收率实验，并重复测定3次。经酶解去除杂质干扰物，使用果聚糖酶将样品中果聚糖酶解成果糖和葡萄糖，再以离子色谱检测果聚糖产生的果糖与葡萄糖的比例，以计算平均聚合度。五组不同果聚糖添加类型、比例以及相对应的结果如表3所示。
Figure 530712DEST_PATH_IMAGE015
实施例4
本实施例考察了β-半乳糖苷酶使用量对结果的影响，具体如下：
称取乳粉基质质控样品（果聚糖含量的特征值：12.3 g/kg，其中乳糖含量约45 %）约2.5 g置于烧杯中，除了β-半乳糖苷酶溶液浓度，其他条件均按实施例1中一至三所述的方法进行试验，并重复测定2次。考察了200 U/mL、400 U/mL、500 U/mL、600 U/mL、700 U/mL浓度β-半乳糖苷酶溶液使用量各200 μL对结果的影响。结果见表4及图4。
Figure 984827DEST_PATH_IMAGE017
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，便于具体和详细地理解本发明的技术方案，但并不能因此而理解为对发明专利保护范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。应当理解，本领域技术人员在本发明提供的技术方案的基础上，通过合乎逻辑的分析、推理或者有限的试验得到的技术方案，均在本发明所附权利要求的保护范围内。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求的内容为准，说明书及附图可以用于解释权利要求的内容。

Claims (10)

1.一种婴幼儿食品或乳制品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法，其特征在于，包括如下步骤：
将婴幼儿食品样品或乳制品样品与水混合，制备样品溶液；
将所述样品溶液、蔗糖酶溶液与β-半乳糖苷酶溶液混合，进行第一次酶解，然后第一次灭酶，制备第一溶液；其中，所述β-半乳糖苷酶溶液的酶活力为500U/mL~600U/mL；
将硼氢化钾的氢氧化钠溶液与所述第一溶液混合，制备第二溶液；
将所述第二溶液中的所述硼氢化钾去除，再与果聚糖酶溶液混合，进行第二次酶解，然后第二次灭酶，制备待测溶液；
将所述待测溶液进行离子色谱检测，获得果糖的含量
Figure 42632DEST_PATH_IMAGE002
与葡萄糖的含量
Figure 21346DEST_PATH_IMAGE004
，通过
Figure 74753DEST_PATH_IMAGE006
计算获得果聚糖平均聚合度。
2.根据权利要求1所述的婴幼儿食品或乳制品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法，其特征在于，第一次酶解的条件包括：在40℃的温度下以100r/min的转速振荡50min~70min；
第二次酶解的条件包括：40℃的温度下以100r/min的转速振荡35min~55min。
3.根据权利要求1所述的婴幼儿食品或乳制品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法，其特征在于，第一次灭酶的条件包括：于沸水中加热12min~18min；
第二次灭酶的条件包括：于沸水中加热12min~18min。
4.根据权利要求1所述的婴幼儿食品或乳制品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法，其特征在于，将婴幼儿食品样品或乳制品样品与水混合后还包括如下步骤：
用乙酸调节溶液pH至4.5±0.1，制备样品溶液。
5.根据权利要求1所述的婴幼儿食品或乳制品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法，其特征在于，所述蔗糖酶溶液的酶活力为4U/mL~5U/mL。
6.根据权利要求1所述的婴幼儿食品或乳制品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法，其特征在于，所述果聚糖酶溶液的酶活力为40U/mL~60U/mL。
7.根据权利要求1所述的婴幼儿食品或乳制品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法，其特征在于，将所述第二溶液中的硼氢化钾去除包括如下步骤：
将所述第二溶液与0.5mol/L的乙酸水溶液混合。
8.根据权利要求1~7任一项所述的婴幼儿食品或乳制品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法，其特征在于，离子色谱检测的条件包括：淋洗液A为0.15mol/L的氢氧化钠，淋洗液B为0.15mol/L的氢氧化钠与1.0mol/L的乙酸钠的混合溶液，淋洗液C为水。
9.根据权利要求8所述的婴幼儿食品或乳制品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法，其特征在于，离子色谱检测的条件还包括：采用梯度淋洗；所述梯度淋洗的程序包括：0min~14min，淋洗液A的体积百分数为20%，淋洗液C的体积百分数为80%；14min~14.1min，淋洗液A的体积百分数由20%变化至0%，淋洗液C的体积百分数由80%变化至0%，淋洗液B的体积百分数由0%变化至100%；14.1min~17min，淋洗液B的体积百分数保持为100%；17min~17.1min，淋洗液B的体积百分数由100%变化至0%，淋洗液C的体积百分数由0%变化至100%；17.1min~20min，淋洗液C的体积百分数保持为100%；20min~20.1min，淋洗液A的体积百分数从0%变化至20%，淋洗液C的体积百分数从100%变化至80%；20.1min~30min，淋洗液A的体积百分数保持为20%，淋洗液C的体积百分数保持为80%。
10.根据权利要求8所述的婴幼儿食品或乳制品中果聚糖平均聚合度的离子色谱测定方法，其特征在于，离子色谱检测的条件还包括：流速为1mL/min~1.2mL/min；柱温为28℃~30℃；进样量为10μL；采用阴离子分析柱。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106706813A (zh) * 2017-02-07 2017-05-24 中检科（北京）测试技术有限公司 婴幼儿食品及奶粉中多聚果糖含量的离子色谱法测定方法
CN107449840A (zh) * 2017-07-13 2017-12-08 宁波市食品检验检测研究院 一种配方奶/乳粉中低聚果糖总量的检测方法
JP2018163003A (ja) * 2017-03-24 2018-10-18 日立化成株式会社 分離材、カラム、及び分離材の製造方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN106706813A (zh) * 2017-02-07 2017-05-24 中检科（北京）测试技术有限公司 婴幼儿食品及奶粉中多聚果糖含量的离子色谱法测定方法
JP2018163003A (ja) * 2017-03-24 2018-10-18 日立化成株式会社 分離材、カラム、及び分離材の製造方法
CN107449840A (zh) * 2017-07-13 2017-12-08 宁波市食品检验检测研究院 一种配方奶/乳粉中低聚果糖总量的检测方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SCOTT HARRISON等: "Analysis of high-molecular-weight fructan polymers in crude plant extracts by high-resolution LC-MS", 《ANAL BIOANAL CHEM》 *
黄伟乾等: "酶水解-阴离子色谱法联用测定婴幼儿配方奶粉中果聚糖的总含量及平均聚合度", 《食品安全质量检测学报》 *

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