CN114657185B - 一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针及其在大田软海绵酸检测中的应用 - Google Patents
一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针及其在大田软海绵酸检测中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN114657185B CN114657185B CN202210311161.7A CN202210311161A CN114657185B CN 114657185 B CN114657185 B CN 114657185B CN 202210311161 A CN202210311161 A CN 202210311161A CN 114657185 B CN114657185 B CN 114657185B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- aptamer
- gold
- solution
- nano
- magnetic nano
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 239000010931 gold Substances 0.000 title claims abstract description 85
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 85
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 80
- 108091023037 Aptamer Proteins 0.000 title claims abstract description 78
- 239000000523 sample Substances 0.000 title claims abstract description 39
- 229930195695 Halichondrin Natural products 0.000 title claims abstract description 17
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 239000002253 acid Substances 0.000 title claims abstract description 12
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 claims abstract description 15
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 15
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 claims abstract description 15
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 238000001499 laser induced fluorescence spectroscopy Methods 0.000 claims abstract description 9
- 229920005601 base polymer Polymers 0.000 claims abstract description 7
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims abstract description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 44
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 claims description 30
- 238000007885 magnetic separation Methods 0.000 claims description 24
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 21
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 21
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 20
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 20
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 claims description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 15
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 13
- 238000003760 magnetic stirring Methods 0.000 claims description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 10
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 9
- 239000002122 magnetic nanoparticle Substances 0.000 claims description 8
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 7
- NQXWGWZJXJUMQB-UHFFFAOYSA-K iron trichloride hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Cl-].Cl[Fe+]Cl NQXWGWZJXJUMQB-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 7
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 6
- 239000011259 mixed solution Substances 0.000 claims description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 6
- 238000001027 hydrothermal synthesis Methods 0.000 claims description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 5
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims description 5
- 238000009835 boiling Methods 0.000 claims description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 239000012488 sample solution Substances 0.000 claims description 4
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 claims description 4
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 claims description 4
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 4
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 3
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 3
- 230000005284 excitation Effects 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 claims description 3
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 3
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 claims description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 3
- 239000010453 quartz Substances 0.000 claims description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 3
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 238000001291 vacuum drying Methods 0.000 claims description 3
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 claims description 2
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 claims description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 claims description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims 2
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 abstract description 32
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 abstract description 5
- 239000011324 bead Substances 0.000 abstract description 3
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 abstract description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 abstract description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 abstract description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 abstract description 2
- 238000010206 sensitivity analysis Methods 0.000 abstract description 2
- 108091061980 Spherical nucleic acid Proteins 0.000 abstract 1
- QNDVLZJODHBUFM-WFXQOWMNSA-N okadaic acid Chemical compound C([C@H](O1)[C@H](C)/C=C/[C@H]2CC[C@@]3(CC[C@H]4O[C@@H](C([C@@H](O)[C@@H]4O3)=C)[C@@H](O)C[C@H](C)[C@@H]3[C@@H](CC[C@@]4(OCCCC4)O3)C)O2)C(C)=C[C@]21O[C@H](C[C@@](C)(O)C(O)=O)CC[C@H]2O QNDVLZJODHBUFM-WFXQOWMNSA-N 0.000 description 23
- VEFJHAYOIAAXEU-UHFFFAOYSA-N okadaic acid Natural products CC(CC(O)C1OC2CCC3(CCC(O3)C=CC(C)C4CC(=CC5(OC(CC(C)(O)C(=O)O)CCC5O)O4)C)OC2C(O)C1C)C6OC7(CCCCO7)CCC6C VEFJHAYOIAAXEU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 23
- 239000002086 nanomaterial Substances 0.000 description 8
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000001338 self-assembly Methods 0.000 description 6
- 125000003396 thiol group Chemical class [H]S* 0.000 description 5
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 4
- 239000004695 Polyether sulfone Substances 0.000 description 4
- 108091008104 nucleic acid aptamers Proteins 0.000 description 4
- 229920006393 polyether sulfone Polymers 0.000 description 4
- 206010012735 Diarrhoea Diseases 0.000 description 3
- 229910003771 Gold(I) chloride Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000008859 change Effects 0.000 description 3
- FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M gold monochloride Chemical compound [Cl-].[Au+] FDWREHZXQUYJFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 2
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 238000010804 cDNA synthesis Methods 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 2
- ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N hexan-1-ol Chemical compound CCCCCCO ZSIAUFGUXNUGDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013110 organic ligand Substances 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 208000004998 Abdominal Pain Diseases 0.000 description 1
- 241000237519 Bivalvia Species 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 241000199914 Dinophyceae Species 0.000 description 1
- 208000018522 Gastrointestinal disease Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000237536 Mytilus edulis Species 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 241000237502 Ostreidae Species 0.000 description 1
- 239000004721 Polyphenylene oxide Substances 0.000 description 1
- 208000004891 Shellfish Poisoning Diseases 0.000 description 1
- 206010047700 Vomiting Diseases 0.000 description 1
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 235000020639 clam Nutrition 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 150000002343 gold Chemical class 0.000 description 1
- 150000002344 gold compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 210000000514 hepatopancreas Anatomy 0.000 description 1
- 125000001165 hydrophobic group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N iron(II,III) oxide Inorganic materials O=[Fe]O[Fe]O[Fe]=O SZVJSHCCFOBDDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000003578 marine toxin Substances 0.000 description 1
- 235000020638 mussel Nutrition 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 235000020636 oyster Nutrition 0.000 description 1
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000238 shellfish toxin Substances 0.000 description 1
- 238000004729 solvothermal method Methods 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- -1 thiol small molecule Chemical class 0.000 description 1
- 230000008673 vomiting Effects 0.000 description 1
- 238000003260 vortexing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
- C12N15/115—Aptamers, i.e. nucleic acids binding a target molecule specifically and with high affinity without hybridising therewith ; Nucleic acids binding to non-nucleic acids, e.g. aptamers
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N21/00—Investigating or analysing materials by the use of optical means, i.e. using sub-millimetre waves, infrared, visible or ultraviolet light
- G01N21/62—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light
- G01N21/63—Systems in which the material investigated is excited whereby it emits light or causes a change in wavelength of the incident light optically excited
- G01N21/64—Fluorescence; Phosphorescence
- G01N21/6402—Atomic fluorescence; Laser induced fluorescence
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N27/00—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means
- G01N27/26—Investigating or analysing materials by the use of electric, electrochemical, or magnetic means by investigating electrochemical variables; by using electrolysis or electrophoresis
- G01N27/416—Systems
- G01N27/447—Systems using electrophoresis
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5308—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for analytes not provided for elsewhere, e.g. nucleic acids, uric acid, worms, mites
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2310/00—Structure or type of the nucleic acid
- C12N2310/10—Type of nucleic acid
- C12N2310/16—Aptamers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Electrochemistry (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明公开了一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针及其在大田软海绵酸检测（OA）中的应用。所述的金磁纳米探针是由表面有序排列着核酸序列的纳米金球形核酸与纳米磁珠结合组成；所述的核酸序列为5’端带有腺嘌呤碱基聚合链的适配体与5’端带有荧光标记的DNA互补链形成。所述的金磁纳米探针由于表面修饰高密度负载由有序排列适配体，特异识别效率高、目标物分离简便，可与大田软海绵酸反应释放出荧光标记的DNA互补链，应用激光诱导荧光检测，从而实现痕量OA高灵敏分析。
Description
技术领域
本发明涉及分析化学技术领域，特别是涉及一种核酸适配体有序排列的金磁纳米探针及其在大田软海绵酸检测中的应用。
背景技术
大田软海绵酸（Okadaic acid，OA）是一种热稳定的脂溶性的聚醚类海洋毒素，是腹泻性贝类毒素中最主要的一种，其分子式是C44H88O13，分子量为805.02。OA 最初由鳍藻属和原甲藻属等藻类产生，经食物链传递给牡蛎、蛤蜊、贻贝等贝类，在其消化腺中积累。OA对这些贝类没有毒性危害，但当人们食用了这些含毒贝类后，就会引发胃肠道紊乱，出现等腹泻、腹痛、恶心、呕吐等症状，被称为腹泻性贝类中毒。因此，建立新型快速灵敏的OA 检测方法不仅有助于保护人们的饮食安全，还有利于保证水产行业的健康发展。
适配体作为一种分析工具，比其它分子识别元件具有更多的优势。有别于抗体这种经典的生物识别分子需要通过长期的动物免疫来制备，适配体是一种从人工合成的寡核苷酸文库中筛选获得的单链 DNA或RNA。而在纳米材料表面进行生物分子或者有机配体的连接，可以提高纳米材料的稳定性，使纳米材料具备更多的功能，甚至构建复杂的纳米结构体系，在实际应用中具有重要意义。适配体相对容易合成、成本较低且可以用不同的标记物进行标记，包括电化学活性分子和荧光基团。因此，以适配体为识别元件设计的传感器，可用于复杂环境中高灵敏、高选择性地检测目标分析物。
将DNA分子修饰至具有丰富物理和化学性质的无机纳米粒子表面，可形成DNA－无机纳米粒子复合物。一方面，借助DNA可准确识别特定目标分子的能力，这种DNA功能化纳米粒子在纳米分析化学和纳米药学等领域具有重要应用前景。另一方面，以DNA功能化无机纳米粒子作为基本构建单元，利用DNA分子的程序化组装能力，有望精确构筑具有特定功能与应用的无机纳米超结构。
为实现离散型纳米粒子超结构的程序化可控组装，精确控制结合在纳米粒子表面的单链DNA数目（“DNA价态”）十分关键。在纳米金-DNA 自组装中，常通过“两步法”对DNA 自组装进行优化，即用巯基小分子（如巯基己醇MCH）对DNA自组装的金进行封闭。然而，传统的金-巯基自组装方法并不能够对DNA 在纳米金表面上的密度和构型进行有序排列，并且常有适配体倒伏现象出现，这也是之前研究者在研究DNA在纳米金表面反应活性时得到的结论不一的重要原因之一。因此，为了在纳米材料表面进行生物分子或者有机配体的连接，提高纳米材料的稳定性，使纳米材料具备更多的功能，甚至构建复杂的纳米结构体系，很有必要开发一种基于有序排列的磁化纳米金探针用于大田软海绵酸OA的检测。
发明内容
本发明公开了一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针及其在大田软海绵酸检测中的应用。所述的金磁纳米探针溶剂热法形成表面修饰PEI的Fe3O4为载体，并高密度负载由有序排列适配体表面修饰的金纳米粒子。具体的，所述的金磁纳米探针是由表面有序排列着核酸序列的纳米金颗粒与纳米磁珠结合组成；所述的核酸序列为5’端带有腺嘌呤碱基（A）聚合链的适配体DNA链与5’端带有荧光标记基团的的DNA互补链杂交形成；所制备的适配体有序排列的金磁纳米颗粒具有分离简便、结合效率高的特征，能够对适配体进行定向排列，从而避免了适配体倒伏现象，提高对大田软海绵酸OA的高效特异识别分离。通过金磁纳米探针与大田软海绵酸（OA）反应释放出荧光标记的DNA互补链，应用激光诱导荧光检测，实现痕量OA的高灵敏分析。
为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
本发明首先提供了一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针，所述的金磁纳米探针是由有序排列适配体修饰的纳米金颗粒与磁性纳米颗粒结合组成；所述的有序排列适配体为5’端带有腺嘌呤碱基聚合链的适配体DNA链与5’端带有荧光标记基团的DNA互补链杂交形成。
进一步的，上述的5’端带有腺嘌呤碱基聚合链的适配体DNA链的序列为5'-AAAAAAAAAAAAAAAAAAAATTTTTCCACCAACGAGAGTCAGAAAACCATGGTGGG-3'；上述的5’端带有荧光标记基团的DNA互补链的序列为5'-FAM-GGTTTTCTGAC-3'；上述的磁性纳米颗粒为表面修饰聚乙烯亚胺（PEI）的Fe3O4球形磁性纳米颗粒PEI-Fe3O4，所述的PEI的分子量为10000。
进一步的，上述的一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针的制备方法包括以下步骤：
（1）PEI-四氧化三铁纳米颗粒的制备：
称取0.68g六水合三氯化铁（FeCl3·6H2O）溶于12mL乙二醇（(CH2OH)2）中，随后在磁力搅拌（60℃）下向其中加入溶于4 mL乙二醇中的0.5g聚乙烯亚胺（PEI），再加入1.8g乙酸钠（CH3COONa），继续搅拌10mins，将所得溶液转移到反应釜中，置于220℃烘箱内，反应2小时，制备得到PEI-四氧化三铁纳米颗粒；
（2）纳米金颗粒（AuNPs）的制备：
在250mL的三颈烧瓶中加入98mL的二次水和2mL 50mmol/L的氯金酸（AuCl4H）溶液，充分搅匀后将三颈烧瓶放置于110℃的油浴锅中煮沸5mins后持续磁力搅拌，迅速加入10mL浓度为38.8mmoL/L的柠檬酸钠（C6H5Na3O7）溶液，当溶液的颜色在1min内迅速由淡黄色转变为酒红色后继续沸腾回流20mins后移去油浴锅停止加热，在磁力搅拌下冷却至室温，并使用0.22μm的滤膜进行过滤，得到AuNPs液体，制备完成的纳米金液体避光保存于4℃的冰箱内；
（3）表面有序排列适配体的纳米金颗粒（Apt@ AuNPs）的制备：
各取10μL 100μmol/L的5’端带有腺嘌呤碱基聚合链的适配体DNA链及5’端带有荧光标记基团的DNA互补链加入同一离心管中，置于摇床中37℃孵育1h，加入1.5 mL步骤（2）得到的纳米金液体，室温下漩涡振荡2 min后，于4℃下混匀反应16 h，使核酸适配体5’端修饰的腺嘌呤碱基链与纳米金胶充分自组装；之后加入60μL 2.0 mol/L NaCl溶液，4℃下陈化24 h；之后以10000 r/min离心分离30 min，二次水洗涤沉淀3次，所得沉淀重新分散在缓冲液A（由10 mmol/L NaH2PO4、10 mmol/L Na2HPO4、500 mmol/L NaCl组成）中，得到表面修饰有序排列适配体的纳米金颗粒（Apt@ AuNPs）溶液；
（4）适配体有序排列的金磁纳米探针（Apt@AuNPs@Fe3O4）制备：
在步骤（1）制得的PEI-Fe3O4颗粒中，加入适量步骤（3）得到的Apt@AuNPs储备溶液，在混匀器震荡后进行磁分离，溶剂会由红色转为透明，重复加入适量Apt@AuNPs储备溶液并进行磁分离，直至溶剂保持红色且不再变色，得到适配体有序排列的金磁纳米探针（Apt@AuNPs@Fe3O4）；其中，所述的PEI-Fe3O4颗粒使用量为0.48mg；其中，所述的Apt@AuNPs溶液使用量总共为600-900μL。
本发明还提供了上述一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针在检测大田软海绵酸中的应用。
本发明还提供了一种大田软海绵酸的检测方法，其特征在于：使用上述的基于适配体有序排列的金磁纳米探针。
进一步的，上述的一种大田软海绵酸的检测方法包括如下步骤：向基于适配体有序排列的金磁纳米探针中加入待测浓度大田软海绵酸样品溶液，在室温条件下竞争反应60mins后经毛细管电泳-激光诱导荧光联用检测平台分离检测待测样品溶液中的大田软海绵酸。
进一步的，上述的毛细管电泳-激光诱导荧光检测条件为：激发波长为497nm，发射波长为512nm，色谱柱规格为100μm×500mm的石英毛细管，总流速：0.2mL/min，进样量：0.06-0.1μL。
本发明的显著优点在于：
1、本发明以具有多个氨基基团的聚乙烯亚胺作为氨基来源，得到富含氨基基团的Fe3O4以作为有效磁分离的载体，并结合纳米金与聚腺嘌呤表面较强的结合力制得表面有序排列适配体的纳米金颗粒；如图1所示，本发明所述的金磁纳米探针是由表面有序排列着核酸序列的纳米金颗粒与纳米磁珠结合组成，DNA在纳米金表面可有效结合和自组装有序性，通过纳米金与聚腺嘌呤自组装，实现对纳米金表面的饱和覆盖，从而抑制DNA在纳米金表面的非特异性吸附，解决传统使用巯基小分子进行取代的时间长，对环境不友好等问题，通过调控即实现可编程的纳米金复合物，为构筑具有特定功能与应用的无机纳米超结构提供了支撑。
2、本发明通过纳米金与聚腺嘌呤进行自组装，无需引入巯基基团，降低了适配体的合成成本，并且有效提高了适配体的利用效率，避免了传统巯基适配体使用前需要活化的繁琐步骤，提高了生物纳米界面反应活性，具有很好的经济效益。
附图说明
图1是表面有序排列适配体的纳米金颗粒的示意图。
图2是核酸适配体表面有序排列和无序排列修饰的金磁纳米探针的作用效果对比。
图3是大田软海绵酸OA的激光诱导荧光谱图。
图4是有序排列适配体磁分离传感体系的抗干扰作用。
具体实施方式
为了使本发明所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本发明所述的技术方案做进一步的说明，但是本发明不仅限于此。
本发明中涉及的PEI的分子量为10000。
本发明中涉及的5’端带有腺嘌呤碱基（A）聚合链的适配体DNA链的序列为：
5'-AAAAAAAAAAAAAAAAAAAATTTTTCCACCAACGAGAGTCAGAAAACCATGGTGGG-3'。
本发明中涉及的5’端带有巯基的适配体DNA链的序列为：
5'-SH-TTTTTCCACCAACGAGAGTCAGAAAACCATGGTGGG-3'。
本发明中涉及的5’端带有荧光标记基团的互补DNA链的序列为：
5'-FAM-GGTTTTCTGAC-3'。
实施例1
一种适配体有序排列的金磁纳米探针（Apt@AuNPs@Fe3O4）的制备方法，具体步骤如下：
（1）PEI-四氧化三铁纳米颗粒的制备：
称取0.68g六水合三氯化铁（FeCl3·6H2O）溶于12mL乙二醇（(CH2OH)2）中，制得A溶液；称取0.5g聚乙烯亚胺（PEI）溶于4 mL乙二醇中，制得B溶液；在磁力搅拌下（60℃），将B溶液缓慢加入至A溶液中，向混合溶液中加入1.8g乙酸钠（CH3COONa），继续搅拌10mins，制得溶液C；将所得溶液C转移到水热反应釜中进行反应，水热反应釜置于烘箱内以温度为220℃加热2小时；待反应釜自然冷却到室温以后，依次用去离子水和无水乙醇各超声清洗固相 3次，进行磁分离后，在真空干燥箱中60℃烘干，得到PEI-四氧化三铁纳米颗粒。
（2）纳米金颗粒（AuNPs）的制备：
向250mL的三颈烧瓶中加入98mL的二次水和2mL 50mmol/L的氯金酸（AuCl4H）溶液，充分搅匀后将三颈烧瓶放置于110℃的油浴锅中加热5min并持续磁力搅拌，待瓶中液体沸腾后迅速向其中加入10mL浓度为38.8mmoL/L的柠檬酸钠（C6H5Na3O7）溶液，当混合溶液的颜色在1min内迅速由淡黄色转变为酒红色后继续沸腾回流20mins后移去油浴锅停止加热，在磁力搅拌下冷却至室温，再使用0.22μm的PES滤膜进行过滤，得到AuNPs液体。制备完成的纳米金颗粒液体避光保存于4℃的冰箱内。
（3）表面有序排列适配体的纳米金颗粒（Apt@ AuNPs）的制备：
各取10μL 100μmol/L的5’端带腺嘌呤碱基（A）聚合链的适配体DNA链及5’端带有荧光标记基团的DNA互补链加入同一离心管中，置于摇床中37℃孵育1h，随后向其中加入1.5 mL步骤（2）得到的纳米金颗粒液体（纳米金颗粒的最终浓度为10.0 nmol/L），室温下漩涡振荡2 min后，于4℃下混匀反应16 h，使核酸适配体5’端修饰的腺嘌呤A碱基链与纳米金颗粒充分自组装；之后加入60μL 2.0 mol/L 的NaCl溶液，4℃下陈化24 h；之后10000 r/min离心分离30 min，将所得沉淀用二次水洗涤3次后重新分散在1.5 mL缓冲液A（由10mmol/L NaH2PO4、10 mmol/L Na2HPO4、500 mmol/L NaCl组成）中，得到表面修饰有序排列适配体的纳米金颗粒（Apt@ AuNPs）溶液。
（4）适配体有序排列的金磁纳米探针（Apt@AuNPs@Fe3O4）的制备：
取0.48mg步骤（1）制得的PEI-Fe3O4颗粒，向其中加入适量步骤（3）得到的Apt@AuNPs溶液，在混匀器上震荡后进行磁分离，可观察到溶剂会由红色逐渐转为透明，重复加入适量Apt@AuNPs溶液并进行磁分离，直至磁分离后的溶剂保持红色且不再发生变化，随后去除溶剂，所得固相即为适配体有序排列的金磁纳米探针（Apt@AuNPs@Fe3O4）；其中，所述的Apt@AuNPs溶液使用量总共为800μL。
实施例2
一种适配体无序排列的金磁纳米探针的制备方法，具体步骤如下：
（1）PEI-四氧化三铁纳米颗粒的制备：
称取0.68g六水合三氯化铁（FeCl3·6H2O）溶于12mL乙二醇（(CH2OH)2）中，制得A溶液；称取0.5g聚乙烯亚胺（PEI）溶于4 mL乙二醇中，制得B溶液；在磁力搅拌下（60℃），将B溶液缓慢加入至A溶液中，向混合溶液中加入1.8g乙酸钠（CH3COONa），继续搅拌10mins，制得溶液C；将所得溶液C转移到水热反应釜中进行反应，水热反应釜置于烘箱内以温度为220℃加热2小时；待反应釜自然冷却到室温以后，依次用去离子水和无水乙醇各超声清洗固相 3次，进行磁分离后，在真空干燥箱中60℃烘干，得到PEI-四氧化三铁纳米颗粒。
（2）纳米金颗粒（AuNPs）的制备：
向250mL的三颈烧瓶中加入98mL的二次水和2mL 50mmol/L的氯金酸（AuCl4H）溶液，充分搅匀后将三颈烧瓶放置于110℃的油浴锅中加热5min并持续磁力搅拌，待瓶中液体沸腾后迅速向其中加入10mL浓度为38.8mmoL/L的柠檬酸钠（C6H5Na3O7）溶液，当混合溶液的颜色在1min内迅速由淡黄色转变为酒红色后继续沸腾回流20mins后移去油浴锅停止加热，在磁力搅拌下冷却至室温，再使用0.22μm的PES滤膜进行过滤，得到AuNPs液体。制备完成的纳米金颗粒液体避光保存于4℃的冰箱内。
（3）表面无序排列适配体的纳米金颗粒的制备：
各取10μL 100μmol/L的5’端带疏基的适配体DNA链及5’端带有荧光标记基团的互补DNA链加入同一离心管中，置于摇床中37℃孵育1h，随后向其中加入1.5 mL步骤（2）得到的纳米金颗粒液体（纳米金颗粒的最终浓度为10.0 nmol/L），室温下漩涡振荡2 min后，于4℃下混匀反应16 h；之后加入60μL 2.0 mol/L 的NaCl溶液，4℃下陈化24 h；之后10000 r/min离心分离30 min，将所得沉淀用二次水洗涤3次后重新分散在1.5 mL缓冲液A（由10mmol/L NaH2PO4、10 mmol/L Na2HPO4、500 mmol/L NaCl组成）中，得到表面修饰无序排列适配体的纳米金颗粒溶液。
（4）适配体无序排列的金磁纳米探针的制备：
取0.48mg步骤（1）制得的PEI-Fe3O4颗粒，向其中加入适量步骤（3）得到的表面修饰无序排列适配体的纳米金颗粒溶液，在混匀器上震荡后进行磁分离，可观察到溶剂会由红色逐渐转为透明，重复加入适量表面修饰无序排列适配体的纳米金颗粒并进行磁分离，直至磁分离后的溶剂保持红色且不再发生变化，随后去除溶剂，所得固相即为适配体无序排列的金磁纳米探针；其中，所述的表面修饰无序排列适配体的纳米金颗粒溶液使用量总共为800μL。
实施例3
有序/无序排列适配体磁分离传感体系定量检测大田软海绵酸OA：分别选用实施例1和实施例2中制备得到的0.48mg金磁纳米探针，向其中加入40μL不同浓度的大田软海绵酸（OA）溶液，在室温下竞争反应60mins后磁分离收集上清液，每个样品检测三次，取平均值；荧光测量条件为：毛细管电色谱-激光诱导荧光（LIF）联用检测平台，激发波长为497nm，发射波长为512nm，色谱柱规格为100μm×500mm的石英毛细管，流动相：pH =7.5的PBS缓冲液，流速：0.2mL/min，检测样品体积：0.06-0.1μL，所述PBS缓冲液由10 mmol/L NaH2PO4、10mmol/L Na2HPO4、500 mmol/L NaCl组成。
图2是核酸适配体表面有序排列和无序排列修饰的金磁纳米探针的作用效果对比。由图2可见，在相同荧光测量条件下，有序排列适配体磁分离传感体系对OA的荧光响应强度峰面积达到577216（uV.s），明显高于无序排列适配体磁分离传感体系，是无序排列适配体的1.5倍左右，这说明了基于有序排列的适配体充分在纳米金颗粒外围伸展，呈现有序分布，更有利于特异性识别捕获目标物。
图3是核酸适配体表面有序排列修饰的金磁纳米探针对OA的激光诱导荧光谱图。由图3可见，在有序适配体排列条件下，磁分离传感体系荧光响应强度随着OA浓度的增加而增加，具有良好的线性范围（R2=0.99219），线性方程y=166650x+3159，按照3倍标准差方法计算出检测限为0.01ng/mL。而在相同荧光测量条件下，无序适配体磁分离传感体系对OA的检测限为0.05 ng/mL。说明，在有序适配体排列条件下，磁分离传感体系检测性能好。
图4是有序排列适配体磁分离传感体系的抗干扰作用。由图4可见，有序排列适配体磁分离传感体系特异性良好，在其他毒素的浓度是大田软海绵酸OA浓度20倍的情况下，对OA的荧光响应依然较高，对0.5 ng/mL的OA的荧光强度识别保持在546941-577216（uV.s）之间，而其他毒素在浓度为10ng/mL的识别荧光强度范围只有4936-21796（uV.s），显示了有序排列适配体磁分离传感体系良好的抗干扰作用。
以上所述仅为本发明的较佳实施例，凡依本发明申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本发明的涵盖范围。
SEQUENCE LISTING
<110> 福州大学
<120> 一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针及其在大田软海绵酸检测中的应用
<130>
<160> 3
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 56
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
aaaaaaaaaa aaaaaaaaaa tttttccacc aacgagagtc agaaaaccat ggtggg 56
<210> 2
<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
tttttccacc aacgagagtc agaaaaccat ggtggg 36
<210> 3
<211> 11
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
ggttttctga c 11
Claims (1)
1.一种大田软海绵酸的检测方法，其特征在于：使用基于适配体有序排列的金磁纳米探针；
所述的金磁纳米探针是由有序排列适配体修饰的纳米金颗粒与磁性纳米颗粒结合组成；所述的有序排列适配体由5’端带有腺嘌呤碱基聚合链的适配体DNA链与5’端带有荧光标记基团的DNA互补链杂交形成；
所述的5’端带有腺嘌呤碱基聚合链的适配体DNA链的序列为5'-AAAAAAAAAAAAAAAAAAAATTTTTCCACCAACGAGAGTCAGAAAACCATGGTGGG-3'；所述的5’端带有荧光标记基团的DNA互补链的序列为5'-FAM-GGTTTTCTGAC-3'；所述的磁性纳米颗粒为表面修饰聚乙烯亚胺PEI的Fe3O4球形磁性纳米颗粒PEI-Fe3O4，所述的聚乙烯亚胺的分子量为10000；
所述的金磁纳米探针的制备方法包括以下步骤：
（1）PEI-四氧化三铁磁性纳米颗粒的制备：
称取0.68g六水合三氯化铁溶于12mL乙二醇中，制得溶液A；称取0.5g聚乙烯亚胺溶于4mL乙二醇中，制得溶液B；在60℃磁力搅拌下，将B溶液缓慢加入至A溶液中，向混合溶液中加入1.8g乙酸钠，继续搅拌10min，制得溶液C；将所得溶液C转移到水热反应釜中进行反应，置于220℃烘箱内反应2小时；待反应釜自然冷却到室温以后，依次用去离子水和无水乙醇超声清洗固相，进行磁分离后，在真空干燥箱中60℃烘干，得到PEI-四氧化三铁纳米颗粒PEI-Fe3O4；
（2）纳米金颗粒的制备：
在250mL的三颈烧瓶中加入98mL的二次水和2mL 50mmol/L的氯金酸溶液，充分搅匀后将三颈烧瓶放置于110℃的油浴锅中煮沸5min后持续磁力搅拌；待瓶中液体沸腾后迅速加入10mL浓度为38.8mmoL/L的柠檬酸钠溶液，当混合溶液的颜色在1min内迅速由淡黄色转变为酒红色后继续沸腾回流20min后移去油浴锅停止加热，磁力搅拌下冷却至室温，并使用0.22μm的滤膜进行过滤，得到纳米金颗粒液体；
（3）表面有序排列适配体的纳米金颗粒的制备：
各取10μL 100μmol/L 5’端带有腺嘌呤碱基聚合链的适配体DNA链及5’端带有荧光标记基团的DNA互补链加入同一离心管中，置于摇床中37℃孵育1h，随后向其中加入1.5mL步骤（2）得到的纳米金颗粒液体，室温下漩涡振荡2min后，于4℃下混匀反应16h；之后加入60μL 2.0mol/L NaCl溶液，4℃下陈化24h；之后以10000r/min离心分离30min，所得沉淀用二次水洗涤3次后重新分散在1.5mL缓冲液A中，得到表面有序排列适配体的纳米金颗粒溶液；其中，所述的缓冲液A由10mmol/L NaH2PO4、10mmol/L Na2HPO4、500mmol/L NaCl组成；
（4）适配体有序排列的金磁纳米探针的制备：
在0.48mg步骤（1）制得的PEI-Fe3O4颗粒中，加入600-900μL步骤（3）得到的表面有序排列适配体的纳米金颗粒溶液，在混匀器上混合均匀后进行磁分离，得到适配体有序排列的金磁纳米探针；
所述检测方法包括如下步骤：向基于适配体有序排列的金磁纳米探针中加入待测浓度大田软海绵酸样品溶液，室温下竞争反应60min后磁分离收集上清液，经毛细管电泳-激光诱导荧光联用检测平台分离检测待测样品溶液中的大田软海绵酸；
所述的毛细管电泳-激光诱导荧光检测条件为：激发波长为497nm，发射波长为512nm，色谱柱规格为100μm×500mm的石英毛细管，总流速：0.2mL/min，进样量：0.06-0.1μL，流动相：pH =7.5的PBS缓冲液；所述PBS缓冲液由10mmol/L NaH2PO4、10mmol/L Na2HPO4、500mmol/L NaCl组成。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210311161.7A CN114657185B (zh) | 2022-03-28 | 2022-03-28 | 一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针及其在大田软海绵酸检测中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202210311161.7A CN114657185B (zh) | 2022-03-28 | 2022-03-28 | 一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针及其在大田软海绵酸检测中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN114657185A CN114657185A (zh) | 2022-06-24 |
| CN114657185B true CN114657185B (zh) | 2023-11-10 |
Family
ID=82033818
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202210311161.7A Active CN114657185B (zh) | 2022-03-28 | 2022-03-28 | 一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针及其在大田软海绵酸检测中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN114657185B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115990355B (zh) * | 2022-10-13 | 2024-07-09 | 福州大学 | 一种核酸适配体有序功能化的亲和整体柱及其制备方法 |
| CN115369153B (zh) * | 2022-10-25 | 2023-03-10 | 中国医学科学院北京协和医院 | 一种Smad4基因检测生物传感器及制备方法 |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104630230A (zh) * | 2015-01-06 | 2015-05-20 | 江南大学 | 一组特异识别大田软海绵酸的核酸适配体 |
| CN106102781A (zh) * | 2013-08-29 | 2016-11-09 | 英联邦高等教育系统天普大学 | 用于hiv感染的rna指导的治疗的方法和组合物 |
| CN107841527A (zh) * | 2017-11-07 | 2018-03-27 | 天津科技大学 | 一种利用核酸适配体和磁性材料检测凝血酶的荧光检测方法 |
| CN108883201A (zh) * | 2016-01-25 | 2018-11-23 | 切除生物治疗公司 | Rna指导的治疗hiv感染的方法和组合物 |
| CN109813701A (zh) * | 2019-04-10 | 2019-05-28 | 徐州医科大学附属医院 | 一种快速无标签表面增强拉曼散射检测金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的方法 |
| CN110702665A (zh) * | 2019-11-14 | 2020-01-17 | 济南大学 | 一种纸基耦合增强拉曼传感器制备及其在大田软海绵酸检测中的应用 |
| CN113670887A (zh) * | 2021-09-28 | 2021-11-19 | 福州大学 | 一种基于核酸适配体的荧光分子探针检测汞离子的方法 |
| KR102351301B1 (ko) * | 2020-08-18 | 2022-01-14 | 홍익대학교세종캠퍼스산학협력단 | 비스페놀 A 검출용 Fe3O4-PEI 나노복합소재의 제조방법, Fe3O4-PEI 나노복합소재 센서 전극의 제조방법 및 비스페놀 A 검출방법 |
-
2022
- 2022-03-28 CN CN202210311161.7A patent/CN114657185B/zh active Active
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106102781A (zh) * | 2013-08-29 | 2016-11-09 | 英联邦高等教育系统天普大学 | 用于hiv感染的rna指导的治疗的方法和组合物 |
| CN104630230A (zh) * | 2015-01-06 | 2015-05-20 | 江南大学 | 一组特异识别大田软海绵酸的核酸适配体 |
| CN108883201A (zh) * | 2016-01-25 | 2018-11-23 | 切除生物治疗公司 | Rna指导的治疗hiv感染的方法和组合物 |
| CN107841527A (zh) * | 2017-11-07 | 2018-03-27 | 天津科技大学 | 一种利用核酸适配体和磁性材料检测凝血酶的荧光检测方法 |
| CN109813701A (zh) * | 2019-04-10 | 2019-05-28 | 徐州医科大学附属医院 | 一种快速无标签表面增强拉曼散射检测金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌的方法 |
| CN110702665A (zh) * | 2019-11-14 | 2020-01-17 | 济南大学 | 一种纸基耦合增强拉曼传感器制备及其在大田软海绵酸检测中的应用 |
| KR102351301B1 (ko) * | 2020-08-18 | 2022-01-14 | 홍익대학교세종캠퍼스산학협력단 | 비스페놀 A 검출용 Fe3O4-PEI 나노복합소재의 제조방법, Fe3O4-PEI 나노복합소재 센서 전극의 제조방법 및 비스페놀 A 검출방법 |
| CN113670887A (zh) * | 2021-09-28 | 2021-11-19 | 福州大学 | 一种基于核酸适配体的荧光分子探针检测汞离子的方法 |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| Engineering robust aptamers with high affinity by key fragments evolution and terminal fixation;Sai Wang 等;Analytical Chemistry;第94卷(第47期);16282-16289 * |
| Probing Cellular Molecules with PolyA-based Engineered Aptamer Nanobeacon;Lizhen Chen 等;ACS Applied Materials & Interfaces;1-23 * |
| Sensitive detection of the okadaic acid marine toxin in shellfish by Au@Pt NPs/horseradish peroxidase dual catalysis immunoassay;Yinqi Tian 等;Anal. Methods;第14卷;1261-1267 * |
| 吕菊波 等.基于磁性辅助的杂交链反应放大检测三磷酸腺苷.化学通报.2018,第81卷(第1期),59-76. * |
| 陈佳琦 等.一种高灵敏检测贝类中大田软海绵酸的可抛式核酸适配体传感器.分析化学.2019,第4卷(第6期),869-875. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN114657185A (zh) | 2022-06-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN114657185B (zh) | 一种基于适配体有序排列的金磁纳米探针及其在大田软海绵酸检测中的应用 | |
| US9709559B2 (en) | Multianalyte molecular analysis using application-specific random particle arrays | |
| Fu et al. | Current status and challenges of ion imprinting | |
| US8486720B2 (en) | Arrays of magnetic particles | |
| CN106442436B (zh) | 用于检测水中痕量4-硝基苯酚的磁性量子点印迹材料、制备方法及用途 | |
| EP3043905B1 (en) | New diagnostic assay using particles with magnetic properties | |
| CN104568905A (zh) | 基于sers微流平台的三维码生物检测芯片及制备、检测方法 | |
| CN102721680B (zh) | 一种高灵敏检测t-DNA的SERS液相芯片方法 | |
| CN102866139B (zh) | 基于表面等离子体增强能量转移生物传感器的构建方法 | |
| Zhang et al. | A molecularly imprinted fluorescence sensor for sensitive detection of tetracycline using nitrogen-doped carbon dots-embedded zinc-based metal-organic frameworks as signal-amplifying tags | |
| Zhong et al. | Expanding the scope of chemiluminescence in bioanalysis with functional nanomaterials | |
| Hussain et al. | A review on structural aspects and applications of PAMAM dendrimers in analytical chemistry: Frontiers from separation sciences to chemical sensor technologies | |
| Wei et al. | Self-assembled electroactive MOF–magnetic dispersible aptasensor enables ultrasensitive microcystin-LR detection in eutrophic water | |
| CN116482067A (zh) | 一种基于多层有机金属框架-纳米金介导的适配体功能化磁纳米探针及其制备方法 | |
| Galkin et al. | Modern magnetic immunoassay: Biophysical and biochemical aspects | |
| Lak et al. | Cooperative dynamics of DNA-grafted magnetic nanoparticles optimize magnetic biosensing and coupling to DNA origami | |
| Nie et al. | Amplification of fluorescence detection of DNA based on magnetic separation | |
| Xia et al. | Development of ochratoxin a aptasensor based on Au nanoparticles@ g-C3N4 | |
| CN114214391A (zh) | Au/Fe3O4复合的磁纳米马达材料、制备方法及应用 | |
| CN101603085B (zh) | 一种磁性dna荧光探针及其制备方法 | |
| Üzek et al. | Applications of Molecularly Imprinted Polymers/Fluorescence-Based (Nano) Sensors | |
| CN102565411A (zh) | 示踪磁性纳米颗粒的新方法 | |
| CN112461818A (zh) | 一种具有多光信号通道的金纳米团簇 | |
| KR20110004961A (ko) | 초상자성나노입자를 이용한 타겟물질의 표지 및 검출방법 | |
| CN112461819B (zh) | 一种具有多光信号通道的金纳米团簇的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant |