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CN102316733B - 杂环化合物和使用方法 - Google Patents

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CN102316733B CN200980156732.7A CN200980156732A CN102316733B CN 102316733 B CN102316733 B CN 102316733B CN 200980156732 A CN200980156732 A CN 200980156732A CN 102316733 B CN102316733 B CN 102316733B
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Abstract

一方面，本发明提供了具有式I的化合物；
Figure DDA0000083236150000011
其中变量X1a、X1b、X1d、X1c、Q、A、R1、B、L、E和下标m与n具有如本文描述的含义。另一方面，本发明提供了包含具有式I的化合物的药物组合物，以及使用具有式I的化合物治疗特征是Bcl-2抗凋亡蛋白(例如抗凋亡Bcl-xL蛋白)的表达或过表达的疾病和病症(例如癌症、血小板增多症等)的方法。

Description

杂环化合物和使用方法
相关申请的交叉引用
本申请对2008年12月19日提交的美国临时申请号61/139,492主张权益，其内容作为参考特此全文并入。
发明背景
凋亡现在被认可为对所有活着的物种的组织动态平衡必不可少的生物过程。尤其在哺乳动物中，已经显示了其对早期胚胎发育的调节。稍后在生命中，细胞死亡是通过其来除去潜在的危险细胞(例如携带癌性缺陷的细胞)的默认机制。已经揭示了数种凋亡途径，而其中最重要的之一涉及Bcl-2蛋白家族，它们是凋亡的线粒体(也称“内在”)途径的关键调节者。参见Danial，N.N.和Korsmeyer，S.J.Cell(2004)116，205-219。该蛋白家族的特征是结构性同源结构域BH1、BH2、BH3和BH4。取决于每个蛋白包含多少同源结构域及其生物活性(即其是否具有促或抗凋亡功能)，Bcl-2蛋白家族可以进一步分类成三个亚族。
第一亚组包含具有全部4个同源结构域(即BH1、BH2、BH3和BH4)的蛋白。其一般作用是抗凋亡，即阻止细胞开始细胞死亡过程。蛋白例如Bcl-2、Bcl-w、Bcl-xL、Mcl-1和Bfl-1/A1是该第一亚组的成员。属于第二亚组的蛋白包含BH1、BH2和BH3三个同源结构域，而且具有促凋亡作用。该第二亚组的两个主要的代表性蛋白是Bax和Bak。最后，第三亚组由仅包含BH3域的蛋白组成，而且该亚组的成员通常被称作“唯BH3蛋白”。其对细胞的生物作用是促凋亡。Bim、Bid、Bad、Bik、Noxa、Hrk、Bmf和Puma是该第三蛋白亚族的实例。Bcl-2家族蛋白调节细胞死亡的确切机制仍然不完全是已知的，而且理解该机制是科学团体的一个研究热点区域。在Bcl-2家族蛋白调节细胞死亡的一个假说中，取决于其调节功能，唯BH3蛋白被进一步分类成“激活剂”(例如Bim和Bid)或“敏化剂”(例如Bad、Bik、Noxa、Hrk、Bmf和Puma)蛋白。
组织动态平衡的关键是细胞中三个蛋白亚组中的相互作用达到微妙平衡。最近的研究试图阐明Bcl-2家族蛋白的促凋亡和抗凋亡亚组相互作用让细胞经历程序化细胞死亡的机制。在细胞中，接受到胞内或胞外信号后，唯BH3蛋白发生转译后或转录激活。唯BH3蛋白是凋亡级联的主要诱导者，该级联包括细胞线粒体膜上促凋亡蛋白Bax和Bak的激活作为其中一步。已固定在线粒体膜上或向线粒体膜迁移的Bax和/或Bak激活时，Bax和/或Bak寡聚化，引起线粒体外膜透化(MOMP)，细胞色素C释放，和效应物半胱天冬酶的下游激活，最后引起细胞凋亡。一些研究者假定某些唯BH3蛋白(例如Puma、Bim、Bid)是“激活剂”，因为这些蛋白直接啮合促凋亡蛋白Bax和Bak开始MOMP，而其它唯BH3蛋白(例如Bad、Bik和Noxa)是“敏化剂”，其通过与抗凋亡蛋白(例如Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w、Mcl-1)结合，置换并“释放”“激活剂”唯BH3蛋白，间接诱导Bax和Bak寡聚化，“激活剂”唯BH3蛋白随后与促凋亡蛋白(例如Bax、Bak)结合并激活它们来诱导细胞死亡。其它研究者提出，抗凋亡蛋白直接啮合并隔绝Bax和Bak，而且所有的唯BH3蛋白通过与抗凋亡蛋白(例如Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w、Mcl-1)结合引起Bax和Bak的释放，调节了这一相互作用。参见Adams，J.M.和Cory S.Oncogene(2007)26，1324-1337；Willis，S.N.等Science(2007)315，856-859。尽管抗和促凋亡Bcl-2家族蛋白调节凋亡的确切相互作用仍然有待讨论，有大量科学证据显示，抑制唯BH3蛋白与抗凋亡Bcl-2家族蛋白的结合的化合物，在细胞中促进凋亡。
在许多重大疾病的病理学中涉及失调的凋亡途径，例如，神经退行性病症(凋亡上调)例如阿尔茨海默病；和增生性疾病(凋亡下调)例如癌症、自体免疫性疾病和促血栓形成病症。
一方面，癌性恶性肿瘤的发作中涉及到凋亡下调(而且更特别地，Bcl-2蛋白家族)，这一牵涉显示了靶向该仍难以捉摸的疾病的新途径。研究显示，例如，抗凋亡蛋白Bcl-2和Bcl-xL在许多癌细胞类型中过表达。参见Zhang J.Y.，Nature Reviews/Drug Discovery，(2002)1，101；Kirkin，V.等Biochimica et Biophysica Acta(2004)1644，229-249；和Amundson，S.A.等CancerResearch(2000)60，6101-6110。这一失调的后果是改变过的细胞的存活，而它们在正常条件下会经历凋亡。与未经调节的增生相关的这些缺陷的重复，被认为是癌性演化的起点。此外，研究显示，在患病动物中表达时，唯BH3蛋白可以充当肿瘤抑制剂。
这些发现和许多其它发现使得靶向癌症的药物探索中出现新的对策成为可能：如果可模拟唯BH3蛋白效果的小分子能够进入细胞并压制抗凋亡蛋白的过表达，那么它可能能够重启凋亡进程。这一对策可以具有可减轻药物抗性问题的优点，药物抗性通常是凋亡失调(异常存活)的后果。
研究者也已证明，血小板也包含必要的凋亡体系(例如，Bax、Bak、Bcl-xL、Bcl-2、细胞色素c、半胱天冬酶-9、半胱天冬酶-3和APAF-1)，通过内在凋亡途径来执行程序化细胞死亡。尽管血小板的循环生产是正常生理过程，许多疾病被血小板的过量或不良激活引起或加剧。以上提示了能够在血小板中抑制抗凋亡蛋白和在哺乳动物中降低血小板数量的治疗剂，可能可用于治疗促血栓形成病症，以及特征是血小板的过量或不良激活的疾病。
Abbott Laboratories公司已开发了一类小分子唯BH3蛋白模拟物，即ABT-737和ABT-263，它们与包括Bcl-2、Bcl-w和Bcl-xL的抗凋亡Bcl-2蛋白亚群强有力地结合，但与Mcl-1和A1仅弱结合，而且显示出基于机制的细胞毒性。这些化合物在动物研究中被测试并在某些异种移植模型中作为单一试剂证明了细胞毒性活性，而且在联合使用时增强了许多化疗剂对其它异种移植模型的效果。参见Tse，C.等Cancer Res(2008)68，3421-3428；和van Delft，M.F.等Cancer Cell(2006)10，389-399。这些体内研究提出，对治疗涉及失调的凋亡途径的疾病，抗凋亡Bcl-2家族蛋白的抑制剂的潜在用途。
抗凋亡Bcl-2家族蛋白成员的自然表达水平在不同细胞类型中变化。例如，在幼血小板中，Bcl-xL蛋白高度表达而且在调节血小板的细胞死亡(寿命)中担任重要角色。同样地，在某些癌细胞类型中，癌细胞的存活归因于一种或多种抗凋亡Bcl-2蛋白家族成员的过表达引起的凋亡途径失调。考虑到Bcl-2蛋白家族在癌性和正常(即非癌性)细胞两者中调节凋亡的重要角色，以及认识到的Bcl-2家族蛋白表达在细胞类型间的变化性，拥有选择性靶向并优选地结合一类或一亚群抗凋亡Bcl-2蛋白(例如，在某些癌症类型中过表达的抗凋亡Bcl-2家族成员)的小分子抑制剂是有利的。此类选择性化合物还可以在临床应用中赋予某些优点，提供：例如，选择给药方案的灵活度，在正常细胞中目标毒性反应的减轻，等等(例如，在Bcl-2缺陷小鼠中观察到淋巴细胞减少)。参见Nakayama，K.等PNAS(1994)91，3700-3704。
考虑到以上各点，对可以选择性抑制一类或一亚群抗凋亡Bcl-2蛋白(例如Bcl-xL抗凋亡蛋白)活性的小分子治疗剂，领域中存在需求。本发明至少满足了这一需求。
发明概述
一方面，本发明提供了具有式I的化合物
或其药学上可接受的盐。在式I中，Q选自-C(O)-、-CH2-、-CH(Ra)-和-C(Ra)2-，其中Ra是C1-4烷基或C1-4卤代烷基。R1如果存在的话，独立地是选自卤素、＝O、C1-6烷基、C1-6杂烷基、C2-6烯基、C2-6炔基和C1-6卤代烷基的一员。X1a、X1b和X1c各自独立地选自C(H)、C(R2)和N，其中X1a、X1b和X1c中的至少一个是C(H)或C(R2)。R2独立地选自-ORb、-NRbRc、-SRb、-C(O)ORc、-C(O)NRbRc、-NRbC(O)Rd、-S(O)2Rd、-S(O)Rd、-S(O)2NRbRc、-Rd、卤素、-CN和-NO2，其中Rb和Rc各自独立地选自氢、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4卤代烷基，或者任选地Rb和Rc，与它们各自相连的原子一起，组合形成一个3-到7-元的杂环，其包含1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点；而且Rd选自C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C1-4卤代烷基。在式I中，X1d不存在或选自-O-、-NH-、-N(C1-4烷基)-和-N(C(O)C1-4烷基)-，下标m是1到2的整数，而且下标n是1到3的整数；其中如果X1d存在，则下标n是2或3。在式I中，A是选自以下的一员：
Figure BDA0000083236130000061
其中R3如果存在的话，独立地选自-NReRf、-ORe、-CN、-NO2、卤素、-C(O)ORe、-C(O)NReRf、-NReC(O)Rf、-NReS(O)2Rg、-NReS(O)Rg、-S(O)2Rg、-S(O)Rg和-Rg。Re和Rf每次出现时各自独立地选自氢、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4卤代烷基和-(CH2)1-4苯基，或者Re和Rf、或Re和Rg，与它们各自相连的原子一起，任选地组合形成一个3-到7-元的杂环，其包含1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点；而且Rg选自C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C1-4卤代烷基。在式I中，B是选自以下的一员：
Figure BDA0000083236130000071
其中Y是N、C(H)或C(R4a)；X2是-N(H)-、-N(C1-3烷基)-、O或S。R4a如果存在的话，独立地选自C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、卤素和-CN；R4b独立地选自-C(O)ORj、-C(O)NRhRi、-C(O)Ri、-NRhC(O)Ri、-NRhC(O)NRhRi、-OC(O)NRhRi、-NRhC(O)ORj、-C(＝NORh)NRhRi、-NRhC(＝NCN)NRhRi、-NRhS(O)2NRhRi、-S(O)2Rj、-S(O)2NRhRi、-N(Rh)S(O)2Ri、-NRhC(＝NRi)NRhRi、-C(＝S)NRhRi、-C(＝NRh)NRhRi、卤素、-NO2和-CN，其中Rh和Ri每次出现时各自独立地选自氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C1-6卤代烷基、苯基和-(CH2)1-4-苯基。Rj选自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6卤代烷基、C3-7环烷基、苯基和-(CH2)1-4苯基。Rh和Ri、或Rh和Rj，与它们各自相连的原子一起任选地组合形成一个3-到7-元的杂环，其包含1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点；或者作为替代，R4b选自以下：
Figure BDA0000083236130000081
其中Rk选自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基和C1-6卤代烷基。对于式I中的B基团，基团a1代表B基团与式I中的氮原子的连接点，而a2代表B基团与式I中的L基团的连接点。在式I中，L不存在或是选自C6-10亚芳基-C1-6杂亚烷基、C5-9杂亚芳基-C1-6杂亚烷基、C1-6杂亚烷基、C1-6亚烷基、C1-6卤代亚烷基、C2-6亚烯基、C2-6亚炔基、-NH-、-S-和-O-的接头，其中L基团的亚烷基、亚烯基、亚炔基或杂亚烷基部分被0到4个选自卤素、-Rm和＝O的R5a取代基取代，而且L基团的芳香族部分被0到4个选自卤素、-ORn、-NRnRo、-Rn、-NO2和CN的R5b取代基取代；其中Rm选自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6杂烷基、C3-6杂环烷基-C1-6烷基、C3-7杂环烷基-C1-6杂环烷基和C1-6卤代烷基。连接在L的相同或不同原子上的任选地任意两个R5a取代基，可以组合形成一个5-到7-元的碳环或一个5-到7-元的杂环，其包含1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点；而且其中Rn和Ro每次出现时，独立地选自氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基和C1-6卤代烷基，而且其中任选地Rn和Ro，与它们各自相连的原子一起，组合形成一个3-到7-元的杂环，其包含1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点。在式I中，E是氢或卤素；或者作为替代，E选自苯基、C5-6杂芳基、C3-7杂环烷基和C3-7环烷基，而且任选地与E稠合的是1或2个环，其独立地选自3-到7-元的碳环、3-到7-元的杂环、苯环、和5-到6-元的杂芳环，其中E和各个任选地与E稠合的环独立地被0到5个R6取代基取代，R6取代基选自卤素、-NRpRq、-SRp、-ORp、-C(O)ORp、-C(O)NRpRq、-C(O)Rp、-NRpC(O)Rq、-OC(O)Rr、-NRpC(O)NRpRq、-OC(O)NRpRq、-NRpC(O)ORr、-C(＝NORp)NRpRq、-NRpC(＝N-CN)NRpRq、-NRpS(O)2NRpRq、-S(O)2Rr、-S(O)2NRpRq、-Rr、-Rs、-NO2、-N3、＝O、-CN、-Z1-NRpRq、-Z1-SRp、-Z1-ORp、-Z1-C(O)ORp、-Z1-C(O)NRpRq、-Z1-C(O)Rp、-Z1-NRpC(O)Rq、-Z1-OC(O)Rr、-Z1-NRpC(O)NRpRq、-Z1-OC(O)NRpRq、-Z1-NRpC(O)ORr、-Z1-C(＝NORp)NRpRq、-Z1-NRpC(＝N-CN)NRpRq、-Z1-NRpS(O)2NRpRq、-Z1-S(O)2Rr、-Z1-S(O)2NRpRq、-Z1-NO2、-Z1-N3、-Z1-Rs和-Z1-CN；其中Z1选自C1-6亚烷基、C2-6亚烯基、C2-6亚炔基、C1-6杂亚烷基、C3-7杂环烷基和C3-7环烷基；Rp和Rq各自独立地选自氢、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基、C3-7杂环烷基、苯基和-(CH2)1-4-苯基；而且Rr选自C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10环烷基、C3-10杂环烷基、苯基和-(CH2)1-4-苯基。任选地在各个R6取代基内，Rp和Rq、或Rp和Rr，与它们各自相连的原子一起，任选地组合形成一个3-到7-元的杂环，其任选地包含1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点；Rs选自苯基、C5-6杂芳基、C3-7杂环烷基、C3-7环烷基，而且任选地与Rs稠合的是1或2个环，其各自独立地选自5-到7-元的碳环、5-到7-元的杂环、苯环、和5-到6-元的杂芳环，而且其中Rs和各个任选地与Rs稠合的环各自独立地被0到5个R7取代基取代，R7取代基选自卤素、-NRtRu、-SRt、-ORt、-C(O)ORt、-C(O)NRtRu、-C(O)Rt、-NRtC(O)Rv、-OC(O)Rv、-NRtC(O)NRtRu、-OC(O)NRtRr、-NRtC(O)ORv、-C(＝NORt)NRtRu、-NRtC(＝N-CN)NRtRu、-NRtS(O)2NRtRu、-S(O)2Rv、-S(O)2NRtRu、-Rv、-NO2、-N3、＝O、-CN、-Z2-NRtRu、-Z2-SRt、-Z2-ORt、-Z2-C(O)ORt、-Z2-C(O)NRtRu、-Z2-C(O)Rv、-Z2-NRtC(O)Ru、-Z2-OC(O)Rv、-Z2-NRtC(O)NRtRu、-Z2-OC(O)NRtRu、-Z2-NRtC(O)ORv、-Z2-C(＝NORt)NRtRu、-Z2-NRtC(＝N-CN)NRtRu、-Z2-NRtS(O)2NRtRu、-Z2-S(O)2Rv、-Z2-S(O)2NRtRu、-Z2-NO2、-Z2-N3和-Z2-CN。Z2选自C1-6亚烷基、C2-6亚烯基、C2-6亚炔基、C1-6杂亚烷基，Rt和Ru各自独立地选自氢、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-(CH2)1-4-苯基、C3-7环烷基和C3-7杂环烷基；Rv选自C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-(CH2)1-4-苯基、C3-7环烷基和C3-7杂环烷基；而且在各个R7取代基内，Rt和Ru、或Rt和Rv，与它们各自相连的原子一起，任选地组合形成一个3-到7-元的杂环，其含有1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点。
另一方面，本发明提供了包含具有式I的化合物的药物组合物，以及使用具有式I的化合物治疗特征是Bcl-2抗凋亡蛋白(例如抗凋亡Bcl-xL蛋白)的表达或过表达的疾病和病症(例如癌症、血小板增多症等)的方法。
附图描述
图1显示了本发明化合物的某些子式，即子式IV-a、IV-b、IV-c、IV-d、IV-e、IV-f、IV-g、IV-h、IV-i、IV-k、IV-m、IV-n、IV-o和IV-p。
图2A、图2B、图2C、图2D和图2E显示了具有式I的化合物的E基团的某些实施方式。
发明详细描述
I.定义
除非另外规定，本文使用的术语“烷基”，单独地或作为另一个取代基的一部分，指具有指定数目碳原子(即C1-8指一到八个碳)的直链或带支链的烃基。烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、叔丁基、异丁基、仲丁基、正戊基、正己基、正庚基、正辛基等。术语“烯基”指具有一个或多个双键的不饱和烷基，而且包括单-和多-卤化变体。类似地，术语“炔基”指具有一个或多个三键的不饱和烷基，而且包括单-和多-卤化变体。此类不饱和烷基的实例包括乙烯基、2-丙烯基、巴豆基、2-异戊烯基、2-(丁二烯基)、2，4-戊二烯基、3-(1，4-戊二烯基)、乙炔基、1-和3-丙炔基、3-丁炔基，和更高碳数的同系物和异构体。术语“环烷基”、“碳环形的”和“碳环”可互换使用，而且单独地或作为另一个取代基的一部分使用时，指具有指定数目环原子(例如，C3-6环烷基)的烃环，而且是完全饱和的或在环顶点之间具有不超过一个双键。本文使用的“环烷基”、“碳环形的”或“碳环”也指双环的、多环的和螺环的烃环，例如，双环[2.2.1]庚烷、蒎烷、双环[2.2.2]辛烷、金刚烷、降冰片烯、螺环的C5-12链烷等。“环烷基”、“碳环形的”或“碳环”环可以通过环碳原子与分子的剩余部分相连，或者，如果这样规定的话，作为替代，“环烷基”、“碳环形的”或“碳环”环可以与分子的剩余部分稠合。与例如苯环稠合的“环烷基”、“碳环形的”或“碳环”环的非限制性实例，包括1，2，3，4-四氢萘、2，3-二氢-1H-茚、(Z)-6，9-二氢-5H-苯并[7]轮烯等。
除非另外规定，术语“杂烷基”，单独地或与另一个术语组合，指稳定的直链或带支链的烃基，其由所示数目的碳原子和一到三个选自O、N、Si和S的杂原子组成，而且其中的氮和硫原子可以任选地被氧化，而且氮杂原子可以任选地季铵化。杂原子O、N和S可以放置在杂烷基的任意内部位置。杂原子Si可以放置在杂烷基的任意位置，包括烷基与分子的剩余部分相连的位置。“杂烷基”可以包含最多三个不饱和单元(例如双键和三键)，而且也包括单-和多-卤化变体，或其组合。“杂烷基”的实例包括-CH2-CH2-O-CH3、-CH2-CH2-O-CF3、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-CH2-N(CH3)-CH3、-CH2-S-CH2-CH3、-S(O)-CH3、-CH2-CH2-S(O)2-CH3、-CH＝CH-O-CH3、-Si(CH3)3、-CH2-CH＝N-OCH3和-CH＝CH＝N(CH3)-CH3。同样地，对“杂烷基”，最多可以有两个杂原子是连续的，例如-CH2-NH-OCH3和-CH2-O-Si(CH3)3。
术语“杂环烷基”、“杂环的”和“杂环”可互换使用，而且当单独地或作为另一个取代基的一部分使用时，指包含一到五个选自N、O和S的杂原子的环烷基，其中的氮和硫原子任选地被氧化，而且氮原子任选地季铵化。本领域技术人员将了解，对于具有指定数目碳原子的“杂环烷基”、“杂环的”和“杂环”(例如“C3-7杂环烷基”)，至少一个且最多可能五个(如果可行的话)指定的碳被杂原子代替。例如，“C3杂环烷基”包括，在其它可能中，环氧乙烷基，其具有两个碳原子加一个氧原子作为环原子。除非另外规定，“杂环烷基”、“杂环的”和“杂环”环可以是单环、双环、螺环或多环的环系统。“杂环烷基”、“杂环的”和“杂环”基团的非限制性实例包括吡咯烷、哌啶、咪唑烷、吡唑烷、丁内酰胺、戊内酰胺、咪唑啉酮、乙内酰脲、二氧戊环、邻苯二甲酰亚胺、哌啶、嘧啶-2，4(1H，3H)-二酮、嘧啶-4-酮、嘧啶-2-酮、1，4-二氧杂环己烷、吗啉、硫代吗啉、硫代吗啉-S-氧化物、硫代吗啉-S，S-氧化物、哌嗪、吡喃、吡啶酮、3-吡咯啉、噻喃、吡喃酮、四氢呋喃、四氢噻吩、奎宁环、莨菪烷等。“杂环烷基”、“杂环的”或“杂环”基团可以通过环上的碳、杂原子与分子的剩余部分相连，或者，如果这样规定的话，“杂环烷基”、“杂环的”或“杂环”基团可以与分子的剩余部分稠合。与例如苯环稠合的“杂环烷基”、“杂环的”或“杂环”环的非限制性实例，包括异色满、2，3-二氢苯并呋喃、(Z)-4，5-二氢-1H-苯并[b]氮杂卓等。除非另外规定，“杂环烷基”、“杂环的”和“杂环”环包括其单-和多-卤化变体。
术语“亚烷基”单独地或作为另一个取代基的一部分，指衍生自链烷或卤代链烷的二价基，以-CH2CH2CH2CH2-和-CF2CF2-为例。典型地，烷基(或亚烷基)基团将含有1到24个碳原子，本发明中优选含有10个或更少的碳原子的那些基团。“亚烯基”和“亚炔基”分别指含有双键或三键的不饱和形式的“亚烷基”，包括单和多卤化变体。
术语“杂亚烷基”单独地或作为另一个取代基的一部分，指衍生自杂烷基的二价基，以-O-CH2-CH2-CH2-CH2-O-、-O-CH2、-CH2-O-、-CH2-CH2-S-CH2CH2-和-CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-、-O-CH2-CH＝CH-、-CH2-CH＝C(H)CH2-O-CH2-、-O-CH2-CH≡CH-、-S-CH2-C≡C-、-CF2-O-为例。对杂亚烷基，杂原子还可以占据任一个或同时两个链末端(例如，亚烷氧基、亚烷二氧基、亚烷基氨基、亚烷基二氨基等)。本文使用的术语“杂亚烷基”也指单-和多-卤化变体。
术语“烷氧基”、“烷基氨基”和“烷基硫代”(或硫代烷氧基)按照它们的常规意义使用，而且分别指通过氧原子、氨基或硫原子与分子的剩余部分相连的那些烷基。此外，对于二烷基氨基，烷基部分可以是相同的或不同的，而且还可以与其各自相连的氮原子组合形成一个3-7原子的环。因此，描述为-NRiRii的基团包括哌啶基、吡咯烷基、吗啉基、吖丁啶基等。
除非另外规定，术语“卤代”或“卤素”，单独地或作为另一个取代基的一部分，指氟、氯、溴或碘原子。此外，术语例如“卤代烷基”包括单卤代烷基和多卤代烷基。例如，术语“C1-4卤代烷基”包括三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、4-氯丁基、3-溴丙基等。
除非另外规定，术语“芳基”指多不饱和的典型芳香族的烃基，它可以是单环或稠合在一起的多环(最多三环)。术语“杂芳基”指包含一到五个选自N、O和S的杂原子的芳基(或环)，其中的氮和硫原子任选地被氧化，而且氮原子任选地季铵化。杂芳基可以通过杂原子与分子的剩余部分相连。芳基的非限制性实例包括苯基、萘基和联苯基，而杂芳基的非限制性实例包括吡啶基、哒嗪基、吡嗪基、嘧啶基、三嗪基、喹啉基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、酞嗪基、苯并三嗪基、嘌呤基、苯并咪唑基、苯并吡唑基、苯并三唑基、苯并异噁唑基、异苯并呋喃基、异吲哚基、吲嗪基、苯并三嗪基、噻吩并吡啶基、噻吩并嘧啶基、吡唑并嘧啶基、咪唑并吡啶基、苯并噻唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、异噻唑基、吡唑基、吲唑基、蝶啶基、咪唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、噻二唑基、吡咯基、噻唑基、呋喃基、噻吩基等。各个以上记录的芳基和杂芳基环系统的任选的取代基，可以选自但不限于下面进一步描述的可接受的取代基集团。
本文使用的术语“亚芳基”一般指为二价基的任意芳基。对一个更加具体的实例，“亚苯基”指二价的苯环基。术语“1，2-亚芳基”、“1，3-亚芳基”或“1，4-亚芳基”指特定亚芳基的几何异构体，其中连在芳基上的两个基团如式中描述般在芳基周围分别位于邻位、间位或对位几何联系。
本文使用的术语“杂亚芳基”一般指为二价基的任意杂芳基。对一个更加具体的实例，“亚吡啶基”指二价的吡啶环基。
本领域技术人员将了解，对于具有指定数目碳原子的术语“杂芳基”和“杂亚芳基”(例如，“C5-6杂芳基”或“C5-9杂亚芳基”)，其至少一个且可行时最多五个指定碳原子被杂原子代替。例如，C5杂芳基可以是吡咯基，或者，作为另一个实例，在其它可能中，是噻唑基。
本文使用的组合术语“亚芳基-杂亚烷基”一般指由彼此共价连接的芳基和杂烷基组成的二价基，而且其中芳基和烷基各自包含可与另一个基团相连的额外的基中心。亚芳基-杂亚烷基的实例包括但不限于：
Figure BDA0000083236130000161
类似地，术语“杂亚芳基-杂亚烷基”指由彼此共价连接的杂芳基和杂烷基组成的二价基，而且其中杂芳基和杂烷基各自包含与另一个基团相连的额外的基中心。杂亚芳基-杂亚烷基的实例包括但不限于
Figure BDA0000083236130000162
以上术语(例如“烷基”、“芳基”和“杂芳基”)在一些实施方式中，将包括所指基的取代和未取代形式。每种类型的基的优选取代基在下面提供。
烷基(包括经常被称作亚烷基、烯基、炔基、杂烷基、杂环烷基和环烷基的那些基团)的取代基可以是各种基团，包括但不限于-卤素、-OR′、-NR′R″、-SR′、-SiR′R″R′″、-OC(O)R′、-C(O)R′、-CO2R′、-CONR′R″、-OC(O)NR′R″、-NR″C(O)R′、-NR″′C(O)NR′R″、-NR″C(O)2R′、-NHC(NH2)＝NH、-NR′C(NH2)＝NH、-NHC(NH2)＝NR′、-NR′″C(NR′R″)＝N-CN、-NR′″C(NR′R″)＝NOR′、-NHC(NH2)＝NR′、-S(O)R′、-S(O)2R′、-S(O)2NR′R″、-NR′S(O)2R″、-NR′″S(O)2NR′R″、-CN、＝O、＝S、＝N-OH和-NO2，数量范围从0到(2m′+1)，其中m′是此类基中碳原子的总数目。R′、R″和R′″各自独立地指基团包括例如氢、未取代的C1-6烷基、未取代的杂烷基、未取代的芳基、被1-3个卤素取代的芳基、未取代的C1-6烷基、C1-6烷氧基或C1-6硫代烷氧基、或未取代的芳基-C1-4烷基、未取代的杂芳基、取代的杂芳基，等等。当R′和R″与相同氮原子相连时，它们可以与该氮原子组合形成一个3-、4-、5-、6-或7-元的环。例如，-NR′R″包括1-吡咯烷基和4-吗啉基。烷基(包括杂烷基、亚烷基)的其它取代基，包括例如＝O、＝NR′、＝N-OR′、＝N-CN、＝NH，其中R′包括如上面描述的取代基。
类似地，芳基和杂芳基的取代基是多样的，而且一般选自基团包括但不限于-卤素、-OR′、-OC(O)R′、-NR′R″、-SR′、-R′、-CN、-NO2、-CO2R′、-CONR′R″、-C(O)R′、-OC(O)NR′R″、-NR″C(O)R′、-NR″C(O)2R′、-NR′C(O)NR″R′″、-NHC(NH2)＝NH、-NR′C(NH2)＝NH、-NHC(NH2)＝NR′、-S(O)R′、-S(O)2R′、-S(O)2NR′R″、-NR′S(O)2R″、-N3、全氟-C1-4烷氧基、和全氟-C1-4烷基，数量范围从0到芳环系统上开放价的总数目；而且其中R′、R″和R′″可以独立地选自氢、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C3-6环烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、未取代的芳基和杂芳基、(未取代的芳基)-C1-4烷基和未取代的芳氧基-C1-4烷基。其它合适的取代基包括通过1-4碳原子的亚烷基连接到环原子上的各个以上芳基取代基。
本文使用的在本文描述的任意化学结构中与单键、双键或三键相交的波浪线代表单键、双键或三键与分子的剩余部分的连接点。
本文使用的“本发明的化合物”指具有式I的化合物或其任意具体实施方式；或具有式I的化合物或其实施方式的任意立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物或药学上可接受的盐或前药。
为了描述取代基(例如R10)可以与本申请中表明的化学结构相连的次数，取代基(例如R10)被写在括号中，而且可能出现的数目被记录为下标范围。例如，“-(R10)0-4”指R10基团可以不存在，或可以存在，最多出现四次。
本文使用的术语“杂原子”包括氧(O)、氮(N)、硫(S)和硅(Si)。
II.化合物
一方面，本发明提供了具有式I的化合物
Figure BDA0000083236130000182
或其药学上可接受的盐。在式I中，Q选自-C(O)-、-CH2-、-CH(Ra)-和-C(Ra)2-，其中Ra是C1-4烷基或C1-4卤代烷基。R1如果存在的话，独立地是选自卤素、＝O、C1-6烷基、C1-6杂烷基、C2-6烯基、C2-6炔基和C1-6卤代烷基的一员。X1a、X1b和X1c各自独立地选自C(H)、C(R2)和N，其中X1a、X1b和X1c中的至少一个是C(H)或C(R2)。R2独立地选自-ORb、-NRbRc、-SRb、-C(O)ORc、-C(O)NRbRc、-NRbC(O)Rd、-S(O)2Rd、-S(O)Rd、-S(O)2NRbRc、-Rd、卤素、-CN和-NO2，其中Rb和Rc各自独立地选自氢、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4卤代烷基，或者任选地Rb和Rc，与它们各自相连的原子一起，组合形成一个3-到7-元的杂环，其包含1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点；而且Rd选自C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C1-4卤代烷基。在式I中，X1d不存在或选自-O-、-NH-、-N(C1-4烷基)-和-N(C(O)C1-4烷基)-，下标m是1到2的整数，而且下标n是1到3的整数；其中如果X1d存在，则下标n是2或3。在式I中，A是选自以下的一员：
Figure BDA0000083236130000191
其中R3如果存在的话，独立地选自-NReRf、-ORe、-CN、-NO2、卤素、-C(O)ORe、-C(O)NReRf、-NReC(O)Rf、-NReS(O)2Rg、-NReS(O)Rg、-S(O)2Rg、-S(O)Rg和-Rg。Re和Rf每次出现时各自独立地选自氢、C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、C1-4卤代烷基和-(CH2)1-4苯基，或者Re和Rf、或Re和Rg，与它们各自相连的原子一起，任选地组合形成一个3-到7-元的杂环，其包含1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点；而且Rg选自C1-4烷基、C2-4烯基、C2-4炔基和C1-4卤代烷基。在式I中，B是选自以下的一员：
Figure BDA0000083236130000201
其中Y是N、C(H)或C(R4a)；X2是-N(H)-、-N(C1-3烷基)-、O或S。R4a如果存在的话，独立地选自C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C2-4烯基、C2-4炔基、卤素和-CN；R4b独立地选自-C(O)ORj、-C(O)NRhRi、-C(O)Ri、-NRhC(O)Ri、-NRhC(O)NRhRi、-OC(O)NRhRi、-NRhC(O)ORj、-C(＝NORh)NRhRi、-NRhC(＝NCN)NRhRi、-NRhS(O)2NRhRi、-S(O)2Rj、-S(O)2NRhRi、-N(Rh)S(O)2Ri、-NRhC(＝NRi)NRhRi、-C(＝S)NRhRi、-C(＝NRh)NRhRi、卤素、-NO2和-CN，其中Rh和Ri每次出现时各自独立地选自氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-6环烷基、C1-6卤代烷基、苯基和-(CH2)1-4-苯基。Rj选自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6卤代烷基、C3-7环烷基、苯基和-(CH2)1-4苯基。Rh和Ri、或Rh和Rj，与它们各自相连的原子一起任选地组合形成一个3-到7-元的杂环，其包含1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点；或者作为替代，R4b选自：
其中Rk选自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基和C1-6卤代烷基。在某些实施方式中，R4b选自：
其中Rk选自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基和C1-6卤代烷基。对于式I中的B基团，基团a1代表B基团与式I中的氮原子的连接点，而a2代表B基团与式I中的L基团的连接点。在式I中，L不存在或是选自C6-10亚芳基-C1-6杂亚烷基、C5-9杂亚芳基-C1-6杂亚烷基、C1-6杂亚烷基、C1-6亚烷基、C1-6卤代亚烷基、C2-6亚烯基、C2-6亚炔基、-NH-、-S-和-O-的接头，其中L基团的亚烷基、亚烯基、亚炔基或杂亚烷基部分被0到4个选自卤素、-Rm和＝O的R5a取代基取代，而且L基团的芳香族部分被0到4个选自卤素、-ORn、-NRnRo、-Rn、-NO2和CN的R5b取代基取代；其中Rm选自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6杂烷基、C3-6杂环烷基-C1-6烷基、C3-7杂环烷基-C1-6杂环烷基和C1-6卤代烷基。连接在L的相同或不同原子上的任选地任意两个R5a取代基，可以组合形成一个5-到7-元的碳环或一个5-到7-元的杂环，该杂环包含1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点；而且其中Rn和Ro每次出现时，独立地选自氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基和C1-6卤代烷基，而且其中任选地Rn和Ro，与它们各自相连的原子一起，组合形成一个3-到7-元的杂环，其包含1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点。在式I中，E是氢或卤素；或者作为替代，E选自苯基、C5-6杂芳基、C3-7杂环烷基和C3-7环烷基，而且任选地与E稠合的是1或2个环，其独立地选自5-到7-元的碳环、5-到7-元的杂环、苯环、和5-到6-元的杂芳环，其中E和各个任选地与E稠合的环独立地被0到5个R6取代基取代，R6取代基选自卤素、-NRpRq、-SRp、-ORp、-C(O)ORp、-C(O)NRpRq、-C(O)Rp、-NRpC(O)Rq、-OC(O)Rr、-NRpC(O)NRpRq、-OC(O)NRpRq、-NRpC(O)ORr、-C(＝NORp)NRpRq、-NRpC(＝N-CN)NRpRq、-NRpS(O)2NRpRq、-S(O)2Rr、-S(O)2NRpRq、-Rr、-Rs、-NO2、-N3、＝O、-CN、-Z1-NRpRq、-Z1-SRp、-Z1-ORp、-Z1-C(O)ORp、-Z1-C(O)NRpRq、-Z1-C(O)Rp、-Z1-NRpC(O)Rq、-Z1-OC(O)Rr、-Z1-NRpC(O)NRpRq、-Z1-OC(O)NRpRq、-Z1-NRpC(O)ORr、-Z1-C(＝NORp)NRpRq、-Z1-NRpC(＝N-CN)NRpRq、-Z1-NRpS(O)2NRpRq、-Z1-S(O)2Rr、-Z1-S(O)2NRpRq、-Z1-NO2、-Z1-N3、-Z1-Rs和-Z1-CN；其中Z1选自C1-6亚烷基、C2-6亚烯基、C2-6亚炔基和C1-6杂亚烷基；Rp和Rq各自独立地选自氢、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基、C3-7杂环烷基、苯基和-(CH2)1-4-苯基；而且Rr选自C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10环烷基、C3-10杂环烷基、苯基和-(CH2)1-4-苯基。任选地在各个R6取代基内，Rp和Rq、或Rp和Rr，与它们各自相连的原子一起，任选地组合形成一个3-到7-元的杂环，其任选地包含1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点；Rs选自苯基、C5-6杂芳基、C3-7杂环烷基、C3-7环烷基，而且任选地与Rs稠合的是1或2个环，其各自独立地选自5-到7-元的碳环、5-到7-元的杂环、苯环、和5-到6-元的杂芳环，而且其中Rs和各个任选地与Rs稠合的环各自独立地被0到5个R7取代基取代，R7取代基选自卤素、-NRtRu、-SRt、-ORt、-C(O)ORt、-C(O)NRtRu、-C(O)Rt、-NRtC(O)Rv、-OC(O)Rv、-NRtC(O)NRtRu、-OC(O)NRtRr、-NRtC(O)ORv、-C(＝NORt)NRtRu、-NRtC(＝N-CN)NRtRu、-NRtS(O)2NRtRu、-S(O)2Rv、-S(O)2NRtRu、-Rv、-NO2、-N3、＝O、-CN、-Z2-NRtRu、-Z2-SRt、-Z2-ORt、-Z2-C(O)ORt、-Z2-C(O)NRtRu、-Z2-C(O)Rv、-Z2-NRtC(O)Ru、-Z2-OC(O)Rv、-Z2-NRtC(O)NRtRu、-Z2-OC(O)NRtRu、-Z2-NRtC(O)ORv、-Z2-C(＝NORt)NRtRu、-Z2-NRtC(＝N-CN)NRtRu、-Z2-NRtS(O)2NRtRu、-Z2-S(O)2Rv、-Z2-S(O)2NRtRu、-Z2-NO2、-Z2-N3和-Z2-CN。Z2选自C1-6亚烷基、C2-6亚烯基、C2-6亚炔基、C1-6杂亚烷基，Rt和Ru各自独立地选自氢、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-(CH2)1-4-苯基、C3-7环烷基和C3-7杂环烷基；Rv选自C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-(CH2)1-4-苯基、C3-7环烷基和C3-7杂环烷基；而且在各个R7取代基内，Rt和Ru、或Rt和Rv，与它们各自相连的原子一起，任选地组合形成一个3-到7-元的杂环，其含有1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点。
在第一个实施方式中，在具有式I的化合物中，A是
Figure BDA0000083236130000241
在第二个实施方式中，在具有式I的化合物中或其第一个实施方式内，化合物具有式I-a
Figure BDA0000083236130000242
在第二个实施方式内，R1是卤素、C1-6烷基、C1-6杂烷基或＝O。下标n是整数2或3；而且下标m是1到2的整数。A是
Figure BDA0000083236130000251
而且在该第二个实施方式内，B是选自以下的一员：
Figure BDA0000083236130000252
其中R4b选自以下
Figure BDA0000083236130000253
在第三个实施方式中，在具有式I的化合物中或其第一个实施方式内，化合物具有式I-a
其中R1是卤素、C1-6烷基、C1-6杂烷基或＝O；下标n是2到3的整数；而且下标m是1到2的整数。在该第三个实施方式中，A是
而且B是选自以下的一员：
Figure BDA0000083236130000263
其中R4b选自-C(O)ORj、-C(O)NRhRi、-C(O)Ri、-NRhC(O)Ri、-NRhC(O)NRhRi、-OC(O)NRhRi、-NRhC(O)ORj、-C(＝NORh)NRhRi、-NRhC(＝NCN)NRhRi、-NRhS(O)2NRhRi、-S(O)2Rj、-S(O)2NRhRi、-N(Rh)S(O)2Ri、-NRhC(＝NRi)NRhRi、-C(＝S)NRhRi、-C(＝NRh)NRhRi、-Rj、卤素、-NO2、和-CN。
在第四个实施方式中，在具有式I的化合物的第二和第三个实施方式的某些方面内，下标n是2而且下标m是1。
在第五个实施方式中，在具有式I的化合物的第二个实施方式的某些方面内，R1不存在；而且B是
Figure BDA0000083236130000271
其中R4a如果存在的话选自卤素和C1-4烷基；其中下标n是2而且下标m是1。
在第六个实施方式中，在具有式I的化合物的第二个实施方式的某些方面内，R1不存在；而且B是
其中下标n是2而且下标m是1。
在第七个实施方式中，在具有式I的化合物或其第一、第二或第三个实施方式内，本发明的化合物具有的式选自
在第八个实施方式中，在本发明化合物的第一、第二、第三、第四、第五、第六或第七个实施方式的某些方面内，L不存在，或者是被任意取代的基团，选自被任意取代的C6-10亚芳基-C1-6杂亚烷基和C5-9杂亚芳基-C1-6杂亚烷基。
在第九个实施方式中在具有式I的化合物的第八个实施方式的某些方面内，L选自以下
Figure BDA0000083236130000281
在第十个实施方式中，在具有式I的化合物的第一、第二、第三、第四、第五、第六或第七个实施方式的某些方面内，L是被任意取代的基团，选自被任意取代的C1-6杂亚烷基、C1-6亚烷基、C2-6亚烯基和C2-6亚炔基。
在第十一个实施方式中，在具有式I的化合物的第十个实施方式的某些方面内，L选自被任意取代的C1-4亚烷氧基、C2-4亚烯氧基、C2-4亚炔氧基和C1-4亚烷基，其中L被0到4个Rm基团取代，而且其中位于L的相同或不同原子上的任意两个Rm基团任选地组合形成一个5-到7-元的碳环或一个5-到7-元的杂环，该杂环包含1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点。
在第十二个实施方式中，在具有式I的化合物的第十个实施方式的某些方面内，L选自
Figure BDA0000083236130000291
在第十三个实施方式中，在具有式I的化合物的第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一或第十二个实施方式的某些方面内，E是氢。
在第十四个实施方式中，和在具有式I的化合物的第二、第三、第四、第五、第六、第七、第八、第九、第十、第十一、第十二或第十三个实施方式的某些方面内，E选自苯基、C5-6杂芳基和C3-7杂环烷基，而且任选地与E稠合的是一个环，独立地选自5-到7-元的碳环、5-到7-元的杂环、苯环、和5-到6-元的杂芳环，其中E和任选地与其稠合的环一共被总计1到3个R6取代基取代，其中的一个R6取代基是-NRpRq、-Z1-NRpRq、-Rs、或-Z1-Rs。
在第十五个实施方式中，在具有式I的化合物的第十四个实施方式的某些方面内，所述的一个R6取代基是-NRpRq或-Z1-NRpRq。
在第十六个实施方式中，在式I的第十五个实施方式的某些方面内，1或2个R6取代基选自氟和氯。
在第十七个实施方式中，在具有式I的化合物的第十四个实施方式的某些方面内，所述的一个R6取代基是Rs或-Z1-Rs，其中Rs具有的式选自：
Figure BDA0000083236130000301
在第十八个实施方式中，在具有式I的化合物的第十四、第十五、第十六或第十七个实施方式的某些方面内，Z1选自：
Figure BDA0000083236130000311
在第十九个实施方式中，在具有式I的化合物的第四、第十、第十一或第十二个实施方式的某些方面内，化合物具有的式选自：
Figure BDA0000083236130000312
其中R4b选自：
Figure BDA0000083236130000313
而且E是苯基，而且被1到3个R6取代基取代。
在第二十个实施方式中，在具有式I的化合物的第十九个实施方式的某些方面内，R4b是-C(O)OH。
在第二十一个实施方式中，在具有式I的化合物的第一、第二、第三、第四、第七或第十九个实施方式的某些方面内，E是-苯基，其中苯基在间位或对位位置被任意取代的Rs基团取代，Rs基团具有的式选自：
Figure BDA0000083236130000321
在第二十二个实施方式中，在具有式I的化合物的第十七或第二十一个实施方式的某些方面内，R7如果存在的话，至少一个选自-NRtRu和-Z2-NRtRu。
在第二十三个实施方式中，在具有式I的化合物的第二十二个实施方式的某些方面内，Z2选自C1-4亚烷基、C2-4亚烯基、C2-4亚炔基和C1-4杂亚烷基。
在第二十四个实施方式中，在具有式I的化合物的第二十三个实施方式的某些方面内，Z2选自以下
在第二十五个实施方式中，对具有式I的化合物，化合物具有的式选自图1中阐述的组。
在第二十六个实施方式中，对具有式I的化合物，化合物具有的式选自图1中的式IV-a、IV-b、IV-c、IV-e和IV-i。
在第二十七个实施方式中，在具有式I的化合物中或其第一、第二、第三、第七或第十九个实施方式的某些方面内，E选自图2-A、图2-B、图2-C、图2-D或图2-E阐述的组。
在第二十八个实施方式中，具有式I的化合物选自表1(在下)中阐述的组。
表1
Figure BDA0000083236130000331
Figure BDA0000083236130000341
Figure BDA0000083236130000351
Figure BDA0000083236130000361
Figure BDA0000083236130000371
Figure BDA0000083236130000381
Figure BDA0000083236130000391
Figure BDA0000083236130000401
Figure BDA0000083236130000411
Figure BDA0000083236130000421
Figure BDA0000083236130000431
Figure BDA0000083236130000441
Figure BDA0000083236130000451
Figure BDA0000083236130000461
Figure BDA0000083236130000471
Figure BDA0000083236130000481
Figure BDA0000083236130000491
Figure BDA0000083236130000501
Figure BDA0000083236130000511
Figure BDA0000083236130000521
Figure BDA0000083236130000531
Figure BDA0000083236130000541
Figure BDA0000083236130000551
Figure BDA0000083236130000561
Figure BDA0000083236130000571
Figure BDA0000083236130000581
Figure BDA0000083236130000601
Figure BDA0000083236130000611
Figure BDA0000083236130000621
Figure BDA0000083236130000631
Figure BDA0000083236130000641
Figure BDA0000083236130000651
Figure BDA0000083236130000701
Figure BDA0000083236130000711
Figure BDA0000083236130000721
Figure BDA0000083236130000741
一般合成程序
本发明化合物可以通过本领域已知的合成方法制备，为了说明性的目的，下面描述了其中的一些。N-Boc-8-羟基羰基-1，2，3，4-四氢异喹啉具有CAS注册号878798-87-9，可从ASW MedChem Products Inc，New Brunswick，New Jersey商业得到，或可以通过遵循如HelveticaChimica Acta，68(1985)1828-1834中描述的修饰程序制备，如下面方案1中所示。
方案1
Figure BDA0000083236130000751
如上面方案1中所示，含有四氢异喹啉核心的式I化合物，可以从四氢异喹啉(i)在路易斯酸例如AlCl3存在下用例如Br2溴化产生溴化物化合物ii开始制备，接着硝化形成5-溴-8-硝基异喹啉(iii)。用保护基团(P)例如苄基、甲苯磺酰基、三甲基甲硅烷基乙氧基甲基(SEM)或2-三甲基甲硅烷基乙基磺酰基(SES)基团取代异喹啉环的氮原子，接着使用氢化物试剂例如NaBH3CN还原得到的吡啶环，可以提供四氢异喹啉化合物v。脱溴和v上硝基的还原，可以使用温和氢化条件例如H2、Pd/C完成，提供氨基化合物vi。vi在Sandmeyer条件例如，HNO2、CuCN下处理，可以提供腈vii，其在醇溶剂(R-OH，例如甲醇、乙醇)中酸水解(HCl水溶液)，可以提供酯viii。用来除去化合物viii上的保护基团(P)的条件，将取决于保护基团的性质。例如，氢化条件(例如，H2、Pt2O)可以用来除去苄基保护基团；金属还原条件(Na、萘)可以用来除去甲苯磺酰基基团；而脱甲硅烷基条件(例如CsF)可以用来除去SES或SEM基团，以提供仲胺ix。ix用Boc酐再保护，接着在碱性条件(例如LiOH)下水解酯(-CO2R)基团，可以提供四氢异喹啉核心的酸x。
含有四氢吡啶并嘧啶核心的式I化合物可以如下面方案2中所示般制备。
方案2
Figure BDA0000083236130000761
在方案2中，β-酮酯xii与醋酸甲脒缩合，提供羟基嘧啶xiii。xiii中的羟基向氯代基团的转化，可以使用POCl3完成，以提供氯化物xiv。氯化物xiv通过在Pd(0)催化剂(例如Pd(PPh3)4)存在下与Zn(CN)2反应，可以进一步转化成对应的腈xv。腈产物xv的水解可以在酸性条件下(例如，HCl/MeOH)完成，以提供酯xvi，其可以在碱性条件下(例如NaOH、MeOH)水解，以提供酸xvii。
含有苯并氮杂卓核心的式I化合物，可以使用如下面方案3中描述的修饰程序制备(参见Tetrahedron Letters，(1980)，1393；J Chem SocPerkin Trans I，(1973)，782)。
方案3
Figure BDA0000083236130000771
溴苯甲醛xviii可以用3-羟基丙胺在还原胺化条件下处理，以提供胺xix，其可以在Friedel-Crafts烷化条件(例如AlCl3)下环化，以提供苯并氮杂卓xx。xx上的仲胺氮原子用BOC酐保护，可以提供xxi。溴化物xxi在锂-卤素交换条件下处理，并用CO2淬灭xxi的锂阴离子，可以提供所需苯并氮杂卓产物xxii
含有苯并氧氮杂卓、苯并二氮杂卓、或苯并硫氮杂卓核心的式I化合物，可以如下面方案4中描述般制备。
方案4
Figure BDA0000083236130000781
在方案4中，酯xxiii，其中的R基团是甲基或乙基，可以通过用六亚甲基四胺和多聚磷酸处理，甲酰化以提供醛xxiv。在方案4中，符号“A”代表亲核基团，例如NH2、SH、OH、NRH(其中R是烷基、酰基等)。xxiv使用2-氯乙基氨基甲酸叔丁酯烷化，将提供xxv。化合物xxv可以用甲醇HCl处理，得到去除Boc基团的xxvi。xxvi在还原剂(例如NaBH4)存在下分子内环化，可以提供化合物xxvii，其用Boc酐进一步再保护，提供N-Boc化合物xxviii。酯基团的水解可以提供酸化合物xxix。
如方案5中所示，使用一些标准的氨基酸偶合条件，例如，1-O-苯并三唑-N，N，N′，N′-四甲基-脲阳离子-六氟-磷酸盐和二乙基异丙胺，在DMF中，四氢异喹啉酸核心xi可以进一步与合适的芳基胺(Ar-NH2)偶合，以提供酰胺xxx。异喹啉氮原子可以在酸性条件下(例如，4N甲醇HCl)去保护，以提供游离仲胺xxxi。
方案5
Figure BDA0000083236130000791
可以用来将化合物xxxi(和相关化合物例如xvii、xxii和xxix)转化成具有式I的化合物的进一步合成转换，在实施例部分中详细描述。
III.组合物
除了一种或多种上面提供的化合物(或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、或药学上可接受的盐或前药)，在人和动物中调节Bcl-2蛋白家族活性的组合物将典型地包含药物载体或稀释剂。在一个实施方式中，本发明提供的药物组合物包含具有式I的化合物和至少一种药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂。
本文使用的术语“组合物”将包含：以指定量包含指定成分的产品，以及直接或间接地由指定成分以指定量组合得到的任意产品。“药学上可接受的”是指载体、稀释剂或赋形剂必须与制剂的其它成分相容，而且对其接受者无害。
为了使用本发明的化合物供患者的治疗性治疗(包括预防性治疗)，它通常依照标准制药实践被配制为药物组合物。典型的药物组合物通过让本发明的化合物与载体、稀释剂或赋形剂混合来制备。合适的载体、稀释剂和赋形剂是本领域技术人员熟知的，而且包括材料例如碳水化合物、蜡、水可溶的和/或可膨胀的聚合物、亲水或疏水材料、明胶、油、溶剂、水等。使用的特定载体、稀释剂或赋形剂将取决于本发明化合物被应用的方式和目的。溶剂一般基于本领域技术人员认可为对哺乳动物施用安全(GRAS)的溶剂而选择。一般而言，安全的溶剂是无毒的水性溶剂，例如水和其它可溶于水或易与水混合的无毒溶剂。合适的水性溶剂包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如PEG 400、PEG 300等)及其混合物。制剂还可以包含一种或多种缓冲液、稳定剂、表面活性剂、润湿剂、润滑剂、乳化剂、悬浮剂、防腐剂、抗氧化剂、不透明剂、助流剂、加工助剂、着色剂、甜味剂、香味剂、调味剂和其它已知添加剂，以提供优质表现的药物(即本发明化合物或其药物组合物)或帮助制造药物产品(即药剂)。
制剂可以使用常规溶解和混合程序制备。例如，整批原料药(即本发明的化合物或该化合物的稳定形式(例如，与环糊精衍生物或其它已知络合剂络合))在一种或多种上面描述的赋形剂存在下在合适的溶剂中溶解。本发明的化合物典型地配制到药物剂型中，以提供药物的可容易控制的剂量，且使患者能够遵守规定的方案。
供应用的药物组合物(或制剂)，可以用各种方式包装，取决于用来施用药物的方法。一般地，供分配的物品包含容器，其中存放有处于适当形式的药物制剂。合适的容器是本领域技术人员熟知的，而且包括材料例如瓶子(塑料的和玻璃的)、小袋、安瓿、塑料袋、金属圆柱体等。容器还可以包含防干扰组合来防止对包装内容物的轻率接近。另外，容器的上面放有标签，其描述了容器的内容物。标签还可以包含适当的警告。
本发明化合物的药物组合物可以被制备供各种施用路线和类型。例如，具有所需程度纯度的本发明化合物(例如，具有式I的化合物)，可以以冻干的制剂、磨碎的粉末或水溶液形式，任选地与药学上可接受的稀释剂、载体、赋形剂或稳定剂(参见Remington：The Science andPractice of Pharmacy：Remington the Science and Practice of Pharmacy(2005)第21版，Lippincott Williams&Wilkins，Philidelphia，PA)混合。组合物可以通过在环境温度下、在适当的pH和在所需程度的纯度，与生理学上可接受的载体(即载体在使用的剂量和浓度对接受者是无毒的)混合来制备。制剂的pH主要取决于特定用途和化合物的浓度，但范围可以从约3到约8。醋酸盐缓冲液中pH为5的制剂是一个合适的实施方式。
供本文使用的本发明的化合物(例如，具有式I的化合物)优选地是无菌的。特别地，用于体内施用的组合物或制剂必须是无菌的。此类灭菌通过穿过无菌的滤膜过滤而轻易地完成。
本发明化合物通常可以作为固体组合物、冻干的制剂或作为水溶液贮存。
本发明的药物组合物将以一种方式配制、分剂和施用，即量、浓度、时间表、进程、运载体和施用路线与医疗实践规范一致。关于这点要考虑的因素包括治疗的特定病症、治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床状况、病症的起因、药剂的递送位点、施用方法、施用日程安排、和医生已知的其它因素。要施用的化合物的“治疗有效量”将受此类考虑控制，而且是预防、改善或治疗可表征为Bcl-xL蛋白的表达或过表达的疾病所必需的最低量。此类量优选地低于对宿主有毒的量。
作为一般命题，肠胃外施用的本发明的抑制剂化合物的初始药学上的有效量，每剂范围将是约0.01-100mg/kg，即约0.1到20mg/kg患者体重/天，使用的化合物的典型初始范围是0.3到15mg/kg/天。
可接受的稀释剂、载体、赋形剂和稳定剂，在使用的剂量和浓度对接受者是无毒的，而且包括缓冲液例如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂包括抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(例如十八烷基二甲基苄基氯化铵；氯化六烃季铵；苯扎氯铵、苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；尼泊金烷基酯例如尼泊金甲酯或丙酯；儿茶酚；间苯二酚；环己醇；3-戊醇；和间甲酚)；低分子量(低于约10个残基)多肽；蛋白，例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水聚合物例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合剂例如EDTA；糖例如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；形成盐的抗衡离子例如钠；金属络合物(例如Zn-蛋白络合物)；和/或非离子的表面活性剂，例如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。本发明的活性药物成分(例如具有式I的化合物)还可以被装入微胶囊中，其通过例如凝聚技术或界面聚合制备，分别例如，羟甲基纤维素或明胶-微胶囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊；装入胶体药物递送系统中，例如脂质体、白蛋白微球、微乳剂、纳米颗粒和纳米胶囊；或装入粗乳剂中。此类技术在Remington：The Science and Practice ofPharmacy：Remington the Science and Practice of Pharmacy(2005)第21版，Lippincott Williams&Wilkins，Philidelphia，PA中公开。
可以制备本发明化合物(例如具有式I的化合物)的持续释放组合物。持续释放组合物的合适实例，包括包含具有式I的化合物的固体疏水聚合物的半透性基质，其中基质为成形物品形式，例如薄膜或微胶囊。持续释放基质的实例包括聚酯、水凝胶(例如，聚(2-羟乙基-甲基丙烯酸酯)或聚乙烯醇))、聚乳酸(美国专利号3,773,919)、L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸酯共聚物、不可降解的乙烯-醋酸乙烯、可降解的乳酸-乙醇酸共聚物例如LUPRON DEPOTTM(可注射的微球，由乳酸-乙醇酸共聚物和醋酸亮丙瑞林组成)和聚-D-(-)-3-羟基丁酸。
药物组合物包括适合本文详述的施用路线的那些。组合物可以方便地以单位剂型存在，而且可以通过任何制药领域熟知的方法制备。技术和配方一般在Remington：The Science and Practice of Pharmacy：Remington the Science and Practice of Pharmacy(2005)第21版，Lippincott Williams&Wilkins，Philidelphia，PA中找到。此类方法包括活性成分与由一种或多种辅助成分组成的载体达到组合的步骤。一般而言，通过让活性成分与液体载体、精细固体载体、或两者一起均匀充分地达到组合来制备制剂，然后如果有必要的话，为产品塑形。
本发明化合物(例如具有式I的化合物)的适合口服施用的药物组合物，可以被制成离散单位，例如药丸、胶囊、扁囊剂或片剂，各包含预定量的本发明化合物。
可以通过在合适的机器中压制任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合的处于自由流动形式(例如粉末或颗粒)的活性成分，来制备压制的片剂。可以通过在合适的机器中模制被惰性液体稀释剂润湿的粉末活性成分的混合物，来制造模制的片剂。片剂可以任选地被包衣或刻痕，而且任选地被配制，以便提供活性成分从中的缓慢或控制释放。
片剂、糖锭、锭剂、水或油悬浮液、分散性粉末或颗粒、乳剂、硬或软胶囊例如明胶胶囊、糖浆、或酏剂，可以被制备供口服使用。本发明化合物(例如具有式I的化合物)的将供口服使用的制剂，可以依照任何领域中已知的制造药物组合物的方法制备，而且此类组合物可以包含一种或多种辅剂，包括甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂，目的是提供适口的制剂。包含与适合制造片剂的无毒的药学上可接受的赋形剂混合的活性成分的片剂，是可接受的。这些赋形剂可以是例如惰性稀释剂，例如碳酸钙或碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；成粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉、明胶或阿拉伯胶；和润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。片剂可以不包衣，或可以通过已知技术包衣，包括微囊化，以延迟在胃肠道中的崩解和吸附，并因此在较长时期内提供持续作用。例如，可以使用延时材料例如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯，单独地或和蜡一起。
为治疗眼睛或其它外部组织例如口腔和皮肤，制剂优选地作为局部软膏或乳膏应用，其包含的活性成分量为例如0.075到20％w/w。当配制到软膏中时，活性成分可以和石蜡的或易与水混合的软膏基质一起使用。或者，活性成分可以用水包油乳膏基质配制到乳膏中。
如果需要的话，乳膏基质的水相可以包含多元醇，即含有两个或更多个羟基的醇，例如丙二醇、丁1，3-二醇、甘露醇、山梨糖醇、甘油、和聚乙二醇(包括PEG 400)、及其混合物。局部制剂可以希望包含化合物，其增强活性成分通过皮肤或其它影响区域的吸收或渗透。此类真皮渗透增强剂的实例包括二甲基亚砜和相关类似物。
本发明乳剂的油相可以由已知成分以已知方式组成。虽然该相可以仅包含乳化剂，希望它包含至少一种乳化剂和脂肪或油、或者脂肪和油的混合物。优选地，亲水乳化剂与亲脂的乳化剂一起被包含，后者充当稳定剂。它还优选地包括油和脂肪。乳化剂加或不加稳定剂，一起组成了所谓的乳化的蜡，而且蜡与油和脂肪一起组成了所谓的乳化的软膏基质，它形成了乳膏制剂的油性分散相。适合在本发明的制剂中使用的乳化剂和乳剂稳定剂，包括
Figure BDA0000083236130000851
60、
Figure BDA0000083236130000852
80、十六十八醇、苯甲醇、肉豆蔻醇、单硬脂酸甘油酯和十二烷基硫酸钠。
本发明化合物(例如具有式I的化合物)的水性悬浮液，包含与适合制造水性悬浮液的赋形剂混合的活性材料。此类赋形剂包括悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠、交联羧甲纤维素、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纤维素、羟丙甲基纤维素、海藻酸钠、聚乙烯吡咯烷酮、黄蓍胶和阿拉伯胶，和分散剂或润湿剂，例如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)、亚烷基氧化物和脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)、环氧乙烷和长链脂肪醇的缩合产物(例如十七乙烯氧基鲸蜡醇)、环氧乙烷与源自脂肪酸和己糖醇酐的部分酯的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨聚糖单油酸酯)。水性悬浮液还可以包含一种或多种防腐剂例如对羟基苯甲酸乙酯或正丙酯、一种或多种着色剂、一种或多种调味剂、和一种或多种甜味剂例如蔗糖或糖精。
本发明化合物(例如具有式I的化合物)的药物组合物可以处于无菌的可注射制剂形式，例如无菌的可注射的水性或油质悬浮液。该悬浮液可以依照已知技术配制，使用上面已提及的那些合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂。无菌的可注射的组合物还可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌的可注射的溶液或悬浮液，例如在1，3-丁二醇中的溶液，或者配制为冻干的粉末。可以使用的可接受的运载体和溶剂中有水、Ringer′s溶液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌的不挥发性油可以常规地用作溶剂或悬浮介质。为了这一目的可以使用任何淡的不挥发性油，包括合成的单-或二甘油酯。另外，脂肪酸例如油酸也可以用在血管注射剂的制备中。
可以与载体材料组合生产单一剂型的活性成分的量，将取决于治疗的宿主和施用的特定模式而变化。例如，要对人口服施用的随时间释放的组合物，可以包含与适当且便利量的载体材料混合的大约1到1000mg的活性材料，其可以占总组合物的约5到约95％(重量比)。药物组合物可以被制备成为施用提供可容易测量的量。例如，要静脉内输液的水溶液可以包含每毫升溶液约3到500μg的活性成分，目的是可以出现以速度约30mL/hr输液合适的体积。
适合肠胃外施用的组合物包括水性和非水性的无菌注射溶液，其可以包含抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂、以及让制剂与预期接受者的血液等渗的溶质；以及水性和非水性的无菌悬浮液，其可以包含悬浮剂和增稠剂。
适合对眼睛局部施用的组合物还包括滴眼液，其中活性成分在合适的载体特别是活性成分的水性溶剂中溶解或悬浮。在此类制剂中活性成分优选地以浓度约0.5到20％w/w存在，例如约0.5到10％w/w，例如约1.5％w/w。
适合在口中局部施用的组合物，包括在调味基质(通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄蓍胶)中包含活性成分的锭剂；在惰性基质(例如明胶和甘油、或蔗糖和阿拉伯胶)中包含活性成分的糖果锭剂；和在合适的液体载体中包含活性成分的漱口剂。
供直肠施用的组合物可以作为栓剂存在，其具有的合适基质包括例如可可脂或水杨酸盐。
适合肺内或鼻施用的组合物，具有的颗粒大小范围是例如0.1到500微米(包括颗粒大小范围在0.1和500微米之间，微米增量例如0.5、1、30微米、35微米等)，它通过经鼻通道快速吸入或经口吸入来施用，以便到达肺泡囊。合适的制剂包括活性成分的水性或油性溶液。适合气溶胶或干粉施用的制剂可以依照常规方法制备，而且可以和其它治疗剂一起递送，例如迄今在如下面描述的病症的治疗或预防中使用的化合物。
适合阴道施用的组合物可以作为阴道栓剂、卫生棉条、乳膏、凝胶、糊剂、泡沫或喷雾制剂存在，其除了活性成分还包含例如本领域已知适当的载体。
药物组合物可以包装在单位剂量或多剂量容器例如密封的安瓿和小瓶中，而且可以在冷冻干燥(冻干)条件下贮存，仅需在使用前立即加入无菌的液体载体例如水供注射。临时制成的注射溶液和悬浮液由先前描述的种类的无菌粉末、颗粒和片剂制备。优选的单位剂量制剂是那些包含活性成分的每日剂量或单位每日亚剂量，如本文上面详述的，或其适当部分的。
本发明进一步提供兽用组合物，其包含至少一种如上定义的活性成分(例如，具有式I的化合物)和兽用载体。兽用载体是对施用组合物的目的有用的材料，而且可以是固体、液体或气体材料，它是惰性的或兽用领域可接受的，而且与活性成分相容。这些兽用组合物可以肠胃外、口服或通过任何其它所需路线施用。
IV.使用方法
本发明化合物(即具有式I的化合物)(或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、或药学上可接受的盐、或前药)与抗凋亡Bcl-2家族蛋白(而且在某些方面，具体地是抗凋亡Bcl-xL蛋白)结合并抑制其活性；而且因此可用于治疗疾病、病症和/或病症包括但不限于特征是抗凋亡Bcl-2家族蛋白成员的表达或过表达的那些疾病，而且在某些实施方式中，特征是Bcl-xL蛋白的表达或过表达的那些疾病。因此，本发明的某个方面包括在患者中治疗可表征为抗凋亡Bcl-2蛋白家族成员的表达或过表达的疾病或病症的方法。在该方面内，在某些实施方式中，疾病或病症是癌症。本发明化合物可以选择性地与抗凋亡Bcl-2蛋白亚组例如Bcl-xL结合，超过Bcl-2、Bcl-w或Mcl-1蛋白。在某些实施方式中，本发明化合物对结合Bcl-xL蛋白显示超过Bcl-2蛋白至少2倍、10倍、20倍、50倍、100倍、1000倍、10000倍、20000倍、或30000倍的选择性。在某些实施方式中，本发明化合物对结合Bcl-xL蛋白显示超过Mcl-1蛋白至少2倍、10倍、20倍、50倍、100倍、1000倍、10000倍、20000倍、或30000倍的选择性。在某些实施方式中，本发明化合物对结合Bcl-xL蛋白显示超过Bcl-w蛋白至少2倍、10倍、20倍、50倍、100倍、1000倍、10000倍、20000倍、或30000倍的选择性。在一个实施方式中，方法包含对需要其的患者施用治疗有效量的本发明的化合物，例如具有式I的化合物(或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、或药学上可接受的盐或前药)。在另一个实施方式中，本发明提供了在患者中治疗特征是抗凋亡Bcl-xL蛋白的表达或过表达的疾病和病症的方法，所述方法包含对患者施用治疗有效量的具有式I的化合物或其药物组合物。一方面，供治疗在其期间抗凋亡Bcl-xL蛋白表达或过表达的疾病和病症的所述组合物，包含赋形剂和治疗有效量的具有式I的化合物。
本发明中还提供了本发明化合物，例如具有式I(或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、或药学上可接受的盐、或前药)，在制备药剂供在患有此类病症的患者中治疗本文描述的疾病和病症中的用途。
本发明化合物可以通过适合要治疗的病症的任何路线施用。合适的路线包括口服、肠胃外(包括皮下、肌肉内、静脉内、动脉内、真皮内、鞘内和硬膜外)、透皮、直肠、鼻、局部(包括口腔和舌下)、阴道、腹膜内、肺内和鼻内。对局部免疫抑制治疗，化合物可以通过损害内施用来施用，包括在移植前用抑制剂灌注或接触移植物。将意识到，优选的路线可随例如接受者的病症而变化。当化合物口服施用时，使用药学上可接受的载体或赋形剂，它可以被配制为药丸、胶囊、片剂等。当化合物肠胃外施用时，它可以用药学上可接受的肠胃外运载体配制，而且处于单位剂量可注射形式，如下面详述的。
治疗人类患者的剂量范围可以是约10mg到约1000mg的式I化合物。典型剂量可以是约100mg到约300mg的化合物。剂量可以每日一次(QID)、每日两次(BID)或更频繁地施用，取决于药代动力学和药效学性质，包括特定化合物的吸收、分布、代谢和排泄。另外，毒性因素可以影响剂量和施用方案。口服施用时，对规定的时间段，药丸、胶囊或片剂可以每日摄入，或不那么频繁。方案可以重复若干个治疗循环。
在另一个实施方式中，本发明提供了包含药学上可接受的赋形剂和治疗有效量的具有式I的化合物的组合物，供治疗异常细胞生长和/或凋亡失调的疾病或病症，例如癌症、间皮瘤、膀胱癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内黑色素瘤、卵巢癌、乳腺癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、骨癌、卵巢癌、子宫颈癌、结肠癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、胃肠的(胃的、结肠直肠的、和十二指肠的)、慢性淋巴细胞白血病、食道癌、小肠癌、内分泌系统的癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、睾丸癌、肝细胞癌(肝和胆管)、原发性或继发性中枢神经系统肿瘤、原发性或继发性脑肿瘤、淋巴肉芽肿病、慢性或急性白血病、慢性粒细胞白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、成淋巴细胞白血病、滤泡性淋巴瘤、T细胞或B细胞源淋巴恶性肿瘤、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、口腔癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、小细胞肺癌、肾和输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、脊柱轴肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、肾上腺皮质癌、胆囊癌、脾脏癌、胆管癌、纤维肉瘤、成神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤或其组合。
在另一个实施方式中，本发明提供了在患者中治疗间皮瘤、膀胱癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内黑色素瘤、卵巢癌、乳腺癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、骨癌、卵巢癌、子宫颈癌、结肠癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、胃肠的(胃的、结肠直肠的、和十二指肠的)、慢性淋巴细胞白血病、食道癌、小肠癌、内分泌系统的癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、睾丸癌、肝细胞癌(肝和胆管)、原发性或继发性中枢神经系统肿瘤、原发性或继发性脑肿瘤、淋巴肉芽肿病、慢性或急性白血病、慢性粒细胞白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、成淋巴细胞白血病、滤泡性淋巴瘤、T细胞或B细胞源淋巴恶性肿瘤、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、口腔癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、小细胞肺癌、肾和输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、脊柱轴肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、肾上腺皮质癌、胆囊癌、脾脏癌、胆管癌、纤维肉瘤、成神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤或一种或多种以上癌症的组合的方法，所述方法包含对其施用治疗有效量的具有式I的化合物。
在又一个实施方式中，本发明提供了在哺乳动物中治疗自体免疫性疾病的方法，包含对其施用治疗可接受量的具有式I的化合物。Bcl-2蛋白在免疫和自体免疫性疾病中的牵涉，在Puck，J.M.等(2003)，Current Allergy and Asthma Reports，3，378-384；Shimazaki，K.等(2000)，British Journal of Haematology，110(3)，584-90；Rengan，R.等(2000)，Blood，95(4)，1283-92；和Holzelova，E.等(2004)，NewEngland Journal of Medicine，351(14)，1409-1418中描述。
自体免疫病症包括获得性免疫缺陷疾病综合症(AIDS)、自体免疫性淋巴增生综合症、溶血性贫血、炎症性疾病、和血小板减少症、器官移植相关的急性或慢性免疫疾病、Addison′s病、过敏性疾病、脱发、斑秃、动脉粥样硬化疾病/动脉硬化、动脉粥样硬化、关节炎(包括骨关节炎、青少年慢性关节炎、化脓性关节炎、莱姆关节炎、银屑病关节炎和反应性关节炎)、自体免疫性大疱疾病、无β脂蛋白血症、获得性免疫缺陷相关疾病、器官移植相关的急性免疫疾病、获得性手足发绀、急性和慢性寄生或感染过程、急性胰腺炎、急性肾衰竭、急性风湿性发热、急性横贯性脊髓炎、腺癌、空异位搏动、成人(急性)呼吸窘迫综合症、AIDS痴呆复合症、酒精性肝硬化、酒精诱导的肝损伤、酒精诱导的肝炎、过敏性结膜炎、过敏性接触性皮炎、过敏性鼻炎、过敏和哮喘、同种异体移植排斥、α-1-抗胰蛋白酶缺陷、阿尔茨海默病、肌萎缩性侧索硬化症、贫血、心绞痛、强直性脊柱炎相关的肺病、前角细胞变性、抗体介导的细胞毒性、抗磷脂综合症、抗受体超敏反应、主动脉及外周动脉瘤、主动脉夹层、动脉高血压、动脉硬化、动静脉瘘、关节病、衰弱、哮喘、共济失调、特异反应性过敏、心房颤动(持续性或阵发性)、心房扑动、房室传导阻滞、萎缩性自体免疫性甲状腺机能减退、自体免疫性溶血性贫血、自体免疫性肝炎、1型自体免疫性肝炎(典型自体免疫性或狼疮样肝炎)、自体免疫介导的低血糖、自体免疫性嗜中性白血球减少症、自体免疫性血小板减少症、自体免疫性甲状腺疾病、B细胞淋巴瘤、骨移植排斥、骨髓移植(BMT)排斥、闭塞性细支气管炎、束支传导阻滞、烧伤、恶病质、心律失常、心脏顿抑综合症、心脏肿瘤、心肌病、心肺旁路炎症反应、软骨移植排斥、小脑皮质变性、小脑障碍、紊乱性或多源性房性心动过速、化疗相关病症、衣原体、胆汁淤积、慢性酒精中毒、慢性活动性肝炎、慢性疲劳综合症、器官移植相关的慢性免疫疾病、慢性嗜酸细胞性肺炎、慢性炎症性病理、慢性粘膜皮肤念珠菌病、慢性阻塞性肺病(COPD)、慢性水杨酸盐中毒、结肠直肠的常见变异性免疫缺陷(常见变异型低丙种球蛋白血症)、结膜炎、结缔组织疾病相关的间质性肺病、接触性皮炎、Coombs阳性溶血性贫血、肺源性心脏病、Creutzfeldt-Jakob病、原因不明的自体免疫性肝炎、隐原性纤维化肺泡炎、培养阴性的脓毒症、囊性纤维化、细胞因子治疗相关的病症、节段性肠炎、拳击员痴呆、脱髓鞘疾病、登革出血热、皮炎、皮炎硬皮病、皮肤病、皮肌炎/多肌炎相关的肺病、糖尿病、糖尿病性动脉硬化疾病、糖尿病、弥散性路易体病、扩张性心肌病、扩张性充血性心肌病、盘状红斑狼疮、基底神经节的病症、弥漫性血管内凝血、中年的唐氏综合症、药物诱导的间质性肺病、药物诱导性肝炎、被阻滞CNS多巴胺受体的药物诱导的药物诱导性运动障碍、药物过敏性、湿疹、脑脊髓炎、心内膜炎、内分泌病、肠病性滑膜炎、会厌炎、Epstein-Barr病毒感染、红斑性肢痛病、锥体束外和小脑障碍、家族性噬血细胞性淋巴组织细胞增生症、胎儿胸腺的植入排斥、Friedreich′s共济失调、功能性外周动脉病症、女性不孕、纤维化、纤维化肺病、真菌性脓毒症、气性坏疽、胃溃疡、巨细胞性动脉炎、肾小球性肾炎、血管球性肾炎、肺出血肾炎综合症、甲状腺肿性自体免疫甲状腺低能症(桥本氏甲状腺炎)、痛风性关节炎、任意器官或组织的移植排斥、移植物抗宿主病、革兰氏阴性的脓毒症、革兰氏阳性的脓毒症、胞内生物引起的肉芽肿、B组链球菌(GBS)感染、Grave′s病、含铁血黄素沉积病相关的肺病、毛细胞白血病、毛细胞白血病、Hallerrorden-Spatz病、桥本氏甲状腺炎、枯草热、心脏移植排斥、血色素沉着症、造血系统恶性肿瘤(白血病和淋巴瘤)、溶血性贫血、溶血性尿毒症综合症/溶血栓的血小板减少性紫癜、出血、过敏性紫癜、甲肝、乙肝、丙肝、HIV感染/HIV神经病变、淋巴肉芽肿病、甲状旁腺机能减退、亨廷顿舞蹈病、运动机能亢进性运动障碍、超敏反应、超敏性肺炎、甲状腺机能亢进、运动机能减退性运动障碍、下丘脑-垂体-肾上腺轴评估、特发性Addison′s病、特发性白细胞减少症、特发性肺纤维化、特发性血小板减少症、特应性肝病、婴儿型脊髓性肌萎缩、感染性疾病、主动脉炎症、炎症性肠病、胰岛素依赖性糖尿病、间质性肺炎、虹膜睫状体炎/葡萄膜炎/视神经炎、缺血-再灌注损伤、缺血性中风、青少年恶性贫血、青少年类风湿性关节炎、青少年脊髓性肌萎缩、Kaposi′s肉瘤、川崎病、肾脏移植排斥、军团菌、利什曼病、麻风、皮质脊髓系统的损害、线性IgA疾病、脂血症、肝脏移植排斥、莱姆病、淋巴水肿、淋巴细胞浸润性肺病、疟疾、特发性或NOS男性不育症、恶性组织细胞增生症、恶性黑色素瘤、脑膜炎、脑膜炎球菌血症、肾脏的微观血管炎、周期性偏头痛、线粒体多系统障碍、混合性结缔组织疾病、混合性结缔组织疾病相关的肺病、单克隆丙种球蛋白病、多发性骨髓瘤、多系统变性(Mencel Dejerine-ThomasShi-Drager和Machado-Joseph)、肌痛性脑炎/肌痛性脑脊髓炎、重症肌无力、肾脏的微观血管炎、胞内鸟型分枝杆菌、结核分枝杆菌、骨髓增生异常综合症、心肌梗塞、心肌缺血病症、鼻咽癌、新生儿慢性肺病、肾炎、肾病、肾病综合症、神经退行性疾病、神经原性肌萎缩I、中性粒细胞减少性发热、非酒精性脂肪性肝炎、腹主动脉及其支脉的闭塞、闭塞性动脉病症、器官移植排斥、睾丸炎/附睾炎、睾丸炎/输精管结扎术逆转程序、器官肿大、骨关节病、骨质疏松症、卵巢衰竭、胰脏移植排斥、寄生虫病、甲状旁腺移植排斥、帕金森病、盆腔炎、寻常性天疱疮、落叶型天疱疮、类天疱疮、常年性鼻炎、心包疾病、外周动脉粥样硬化疾病、外周血管病症、腹膜炎、恶性贫血、晶状体原的葡萄膜炎、卡氏肺孢子虫肺炎、肺炎、POEMS综合症(多神经病变、器官肿大、内分泌病、单克隆丙种球蛋白病、和皮肤变化综合症)、灌注后综合症、泵后综合症、MI后心切开术综合症、感染后间质性肺病、卵巢功能早衰、原发性胆汁性肝硬化、原发性硬化性肝炎、原发性黏液水肿、原发性肺动脉高压、原发性硬化性胆管炎、原发性血管炎、进行性核上性麻痹、银屑病、银屑病1型、银屑病2型、银屑病性关节病、结缔组织疾病继发的肺动脉高压、结节性多动脉炎的肺表现、炎症后间质性肺病、放射性纤维化、放射治疗、雷诺氏现象和疾病、植烷酸贮积症、有规律的狭窄QRS心动过速、Reiter′s病、NOS肾脏疾病、肾血管性高血压、再灌注损伤、限制性心肌病、类风湿性关节炎相关的间质性肺病、类风湿性脊椎炎、结节病、Schmidt′s综合症、硬皮病、老年性舞蹈病、路易体型老年性痴呆、脓毒症综合症、脓毒症性休克、血清阴性的关节病、休克、镰状细胞贫血、
Figure BDA0000083236130000961
病相关的肺病、
Figure BDA0000083236130000962
综合症、皮肤同种异体移植排斥、皮肤变化综合症、小肠移植排斥、精子自体免疫、多发性硬化(所有亚型)、脊髓性共济失调、脊髓小脑变性、脊椎关节病、偶发的多腺缺陷I型、偶发的多腺缺陷II型、Still′s病、链球菌肌炎、中风、小脑的结构损害、亚急性硬化性全脑炎、交感性眼炎、晕厥、心血管系统的梅毒、全身性过敏反应、全身炎症反应综合症、全身发作性青少年类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮、全身性红斑狼疮相关的肺病、系统性硬化、系统性硬化相关的间质性肺病、T细胞或FAB ALL、多发性大动脉炎/动脉炎、毛细管扩张、Th2型和Thl型介导的疾病、血栓闭寒性脉管炎、血小板减少症、甲状腺炎、中毒、中毒性休克综合症、移植、外伤/出血、2型自体免疫性肝炎(抗LKM抗体肝炎)、伴有黑棘皮病的B型胰岛素抗性、III型超敏反应、IV型超敏、溃疡性结肠炎性关节病、溃疡性结肠炎、不稳定性心绞痛、尿毒症、尿脓毒症、荨麻疹、葡萄膜炎、心脏瓣膜疾病、静脉曲张、血管炎、血管炎性弥漫性肺病、静脉疾病、静脉血栓形成、心室纤颤、白癜风急性肝疾病、病毒和真菌感染、病毒性脑炎/无菌性脑膜炎、病毒相关的噬血细胞综合症、Wegener′s肉芽肿病、Wemicke-Korsakoff综合症、肝豆状核变性、任意器官或组织的异种移植排斥、耶尔森菌和沙门氏菌相关的关节病等。
在一个实施方式中，本发明化合物(例如具有式I的化合物)，或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、或药学上可接受的盐、前药，被用作抗癌剂，或在治疗癌症的联合治疗中被用作辅助药剂。本领域普通技术人员能够容易地测定候选化合物单独地或在组合中是否为任意特定细胞类型治疗癌症。在这一实施方式的某些方面内，本发明化合物被用来辅助对癌症治疗的其它治疗，包括常规手术、放射治疗和化疗。
此类治疗可以包括一种或多种以下类别的抗癌剂：烷化剂、血管生成抑制剂、抗体、抗代谢物、抗有丝分裂剂、抗增殖剂、aurora激酶抑制剂、凋亡促进剂(例如，Bcl-xL、Bcl-w和BfI-1抑制剂)、死亡受体途径的激活剂、Bcr-Abl激酶抑制剂、BiTE(双特异性T细胞啮合者)抗体、生物反应调节剂、细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂、细胞周期抑制剂、环氧酶-2抑制剂、双可变域结合蛋白(DVDs)、白血病病毒致癌基因同源体(ErbB2)受体抑制剂、生长因子抑制剂、热激蛋白(HSP)-90抑制剂、组蛋白去乙酰酶(HDAC)抑制剂、激素治疗、免疫药剂、插入凋亡蛋白抑制剂(IAPs)的抗生素、激酶抑制剂、靶向哺乳动物的雷帕霉素抑制剂、微RNA的有丝分裂原激活的胞外信号-调节激酶抑制剂、多价结合蛋白、非甾族的抗炎症药物(NSAIDs)、聚ADP(二磷酸腺苷)-核糖聚合酶(PARP)抑制剂、铂化疗剂、polo样激酶(Plk)抑制剂、蛋白酶体抑制剂、嘌呤类似物、嘧啶类似物、受体酪氨酸激酶抑制剂、类视黄醇/deltoids植物生物碱、小分子抑制性核糖核酸(siRNAs)、拓扑异构酶抑制剂其组合等。
BiTE抗体是通过同时结合两种细胞来引导T细胞攻击癌细胞的双特异性抗体。然后T细胞攻击目标癌细胞。BiTE抗体的实例包括阿德木单抗(Micromet MT201)、blinatumomab(Micromet MT 103)等。不受限于理论，T-细胞引起目标癌细胞凋亡的一种机制是通过胞吐溶细胞的颗粒成分包括穿孔素和颗粒酶B。在这方面，Bcl-2已显示削弱穿孔素和颗粒酶B两者的凋亡诱导。这些数据指出，当靶向癌细胞时，抑制Bcl-2可以增强T细胞引起的细胞毒性效应(V.R.Sutton，D.L.Vaux和J.A.Trapani(1997)J.of Immunology.158(12)：5783)。
SiRNA是含有内源RNA碱基或化学修饰的核苷酸的分子。修饰不破坏细胞活性，但赋予增强的稳定性和/或增强的细胞效能。化学修饰的实例包括硫代磷酸基团、2′-脱氧核苷酸、包含2′-OCH3的核糖核苷酸、2′-F-核糖核苷酸、2′-甲氧基乙基核糖核苷酸、其组合等。siRNA可以具有不同的长度(例如10-200bps)和结构(例如，发卡、单/双链、凸出、缺口/间隙、错配)，而且在细胞中加工，以提供活性基因的沉默。双链siRNA(dsRNA)可以在各链上具有相同数目的核苷酸(平末端)或不对称末端(突起)。1-2个核苷酸的突起可以存在于正义和/或反义链上，和存在于指定链的5′-和/或3′-末端。例如，靶向Mcl-1的siRNA显示在多肿瘤细胞系中增强ABT-263(即N-(4-(4-((2-(4-氯苯基)-5，5-二甲基-1-环己-1-烯-1-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰)-4-(((1R)-3-(吗啉-4-基)-1-((苯硫基)甲基)丙基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯磺酰胺)或ABT-737(即N-(4-(4-((4′-氯(1，1′-联苯基)-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰)-4-(((1R)-3-(二甲基氨基)-1-((苯硫基)甲基)丙基)氨基)-3-硝基苯磺酰胺)的活性(Tse等(2008)Cancer Research.68(9)：3421及其中的参考文献)。
多价结合蛋白是包含两个或更多个抗原结合位点的结合蛋白。多价结合蛋白被设计为具有三个或更多个抗原结合位点，而且一般不是天然存在的抗体。术语“多特异性结合蛋白”指能够结合两个或更多个相关或不相关的靶点的结合蛋白。双可变域(DVD)结合蛋白是四价或多价的结合蛋白，结合蛋白包含两个或更多个抗原结合位点。此类DVD可以是单特异性的(即能够结合一种抗原)或多特异性的(即能够结合两种或更多种抗原)。包含两个重链DVD多肽和两个轻链DVD多肽的DVD结合蛋白，被称作DVD Ig′s。DVD Ig的每一半包含一个重链DVD多肽、一个轻链DVD多肽、和两个抗原结合位点。各结合位点包含一个重链可变域和一个轻链可变域，每个抗原结合位点含有抗原结合中涉及的总计6个CDRs。
烷化剂包括六甲蜜胺、AMD-473、AP-5280、apaziquone、苯达莫司汀、brostallicin、白消安、卡波醌、卡莫司汀(BCNU)、苯丁酸氮芥、
Figure BDA0000083236130001001
(拉莫司汀、VNP 40101M)、环磷酰胺、达卡巴嗪、雌莫司汀、福莫司汀、葡磷酰胺、异环磷酰胺、KW-2170、洛莫司汀(CCNU)、马磷酰胺、美法仑、二溴甘露醇、二溴卫矛醇、尼莫司汀、氮芥N-氧化物、雷莫司汀、替莫唑胺、噻替派、
Figure BDA0000083236130001002
(苯达莫司汀)、曲奥舒凡、曲磷胺等。
血管生成抑制剂包括内皮特异性受体酪氨酸激酶(Tie-2)抑制剂、表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂、胰岛素生长因子-2受体(IGFR-2)抑制剂、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)抑制剂、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)抑制剂、血小板源生长因子受体(PDGFR)抑制剂、凝血酶敏感蛋白类似物、血管内皮生长因子受体酪氨酸激酶(VEGFR)抑制剂等。
抗代谢物包括
Figure BDA0000083236130001003
(培美曲塞二钠，LY231514，MTA)、5-阿扎胞苷、
Figure BDA0000083236130001004
(卡培他滨)、卡莫氟、
Figure BDA0000083236130001005
(克拉屈滨)、克罗拉滨、阿糖胞苷、阿糖胞苷ocfosfate、阿拉伯糖苷胞嘧啶、地西他滨、去铁胺、去氧氟尿苷、依氟鸟氨酸、EICAR(5-乙炔基-1-β-D-呋喃核糖基咪唑-4-甲酰胺)、依诺他滨、乙炔基胞苷、氟达拉滨、5-氟尿嘧啶单独或与甲酰四氢叶酸组合、
Figure BDA0000083236130001011
(吉西他滨)、羟基脲、(美法仑)、巯基嘌呤、6-巯基嘌呤核苷、甲氨蝶呤、霉酚酸、奈拉滨、诺拉曲塞、ocfosfate、培利曲索、喷司他丁、雷替曲塞、利巴韦林、triapine、三甲曲沙、S-1、噻唑呋林、替加氟、TS-1、阿糖腺苷、UFT等。
Aurora激酶抑制剂包括AZD-1152、MLN-8054、VX-680等。
Bcl-2家族蛋白抑制剂包括AT-101((-)棉酚)、
Figure BDA0000083236130001013
(G3139或oblimersen(靶向Bcl-2的反义寡核苷酸))、IPI-194、IPI-565、N-(4-(4-((4′-氯(1，1′-联苯基)-2-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰)-4-(((1R)-3-(二甲基氨基)-1-((苯硫基)甲基)丙基)氨基)-3-硝基苯磺酰胺)(ABT-737)、N-(4-(4-((2-(4-氯苯基)-5，5-二甲基-1-环己-1-烯-1-基)甲基)哌嗪-1-基)苯甲酰)-4-(((1R)-3-(吗啉-4-基)-1-((苯硫基)甲基)丙基)氨基)-3-((三氟甲基)磺酰基)苯磺酰胺(ABT-263)、GX-070(obatoclax)等。
Bcr-Abl激酶抑制剂包括(BMS-354825)、
Figure BDA0000083236130001015
(伊马替尼)等。
CDK抑制剂包括AZD-5438、BMI-1040、BMS-032、BMS-387、CVT-2584、夫拉平度、GPC-286199、MCS-5A、PD0332991、PHA-690509、seliciclib(CYC-202、R-roscovitine)、ZK-304709等。
COX-2抑制剂包括ABT-963、
Figure BDA0000083236130001021
(依他昔布)、(伐地昔布)、BMS347070、
Figure BDA0000083236130001023
(塞来昔布)、COX-189(罗美昔布)、CT-3、
Figure BDA0000083236130001024
(德拉昔布)、JTE-522、4-甲基-2-(3，4-二甲基苯基)-1-(4-氨磺酰基苯基-1H-吡咯)、MK-663(依他昔布)、NS-398、帕瑞昔布、RS-57067、SC-58125、SD-8381、SVT-2016、S-2474、T-614、
Figure BDA0000083236130001025
(罗非昔布)等。
EGFR抑制剂包括ABX-EGF、抗EGFR免疫脂质体、EGF-疫苗、EMD-7200、(西妥昔单抗)、HR3、IgA抗体、
Figure BDA0000083236130001027
(吉非替尼)、(埃罗替尼或OSI-774)、TP-38、EGFR融合蛋白、
Figure BDA0000083236130001029
(拉帕替尼)等。
ErbB2受体抑制剂包括CP-724-714、CI-1033(卡奈替尼)、(曲妥珠单抗)、
Figure BDA00000832361300010211
(拉帕替尼)、
Figure BDA00000832361300010212
(2C4，petuzumab)、TAK-165、GW-572016(ionafarnib)、GW-282974、EKB-569、PI-166、dHER2(HER2疫苗)、APC-8024(HER-2疫苗)、抗HER/2neu双特异性抗体、B7.her2IgG3、AS HER2三功能性双特异性抗体、mAB AR-209、mAB 2B-1等。
组蛋白去乙酰酶抑制剂包括缩酚酸肽、LAQ-824、MS-275、trapoxin、辛二酰苯胺异羟肟酸(SAHA)、TSA、丙戊酸等。
HSP-90抑制剂包括17-AAG-nab、17-AAG、CNF-101、CNF-1010、CNF-2024、17-DMAG、格尔德霉素、IPI-504、KOS-953、
Figure BDA0000083236130001031
(对HSP-90的人重组抗体)、NCS-683664、PU24FC1、PU-3、根赤壳菌素、SNX-2112、STA-9090VER49009等。
死亡受体途径的激活剂包括TRAIL，靶向死亡受体(例如DR4和DR5)的抗体或其它药剂，例如Apomab、conatumumab、ETR2-ST01、GDC0145、来沙木单抗、HGS-1029、LBY-135、PRO-1762和曲妥珠单抗。
MEK抑制剂包括ARRY-142886、ARRY-438162PD-325901、PD-98059等。
mTOR抑制剂包括AP-23573、CCI-779、依维莫司、RAD-001、雷帕霉素、temsirolimus等。
非甾族的抗炎症药物包括
Figure BDA0000083236130001032
(双水杨酯)、
Figure BDA0000083236130001033
(二氟尼柳)、
Figure BDA0000083236130001034
(布洛芬)、(酮洛芬)、(萘丁美酮)、
Figure BDA0000083236130001037
(吡罗昔康)、布洛芬乳膏、(萘普生)和(萘普生)、
Figure BDA00000832361300010310
(双氯芬酸)、
Figure BDA00000832361300010311
(吲哚美辛)、
Figure BDA00000832361300010312
(舒林酸)、
Figure BDA00000832361300010313
(托美汀)、
Figure BDA00000832361300010314
(依托度酸)、
Figure BDA00000832361300010315
(酮咯酸)、
Figure BDA00000832361300010316
(奥沙普秦)等。
PDGFR抑制剂包括C-451、CP-673、CP-868596等。
铂化疗剂包括顺铂、(奥沙利铂)、依铂、洛铂、奈达铂、
Figure BDA00000832361300010318
(卡铂)、沙铂、吡铂等。
Polo样激酶抑制剂包括BI-2536等。
凝血酶敏感蛋白类似物包括ABT-510、ABT-567、ABT-898、TSP-1等。
VEGFR抑制剂包括
Figure BDA0000083236130001041
(贝伐单抗)、ABT-869、AEE-788、ANGIOZYMETM(抑制血管生成的核酶(Ribozyme Pharmaceuticals(Boulder，CO.)和Chiron(Emeryville，CA))、阿西替尼(AG-13736)、AZD-2171、CP-547,632、IM-862、MACUGEN(培加他尼)、
Figure BDA0000083236130001042
(索拉非尼、BAY43-9006)、帕唑帕尼(GW-786034)、伐他拉尼(PTK-787、ZK-222584)、
Figure BDA0000083236130001043
(舒尼替尼、SU-11248)、VEGF陷阱、ZACTIMATM(凡德他尼、ZD-6474)等。
抗生素包括插入了的抗生素阿柔比星、放线菌素D、氨柔比星、annamycin、阿霉素、(博来霉素)、柔红霉素、或
Figure BDA0000083236130001046
(阿霉素脂质体)、依沙芦星、表柔比星、加柔比星、
Figure BDA0000083236130001047
(伊达比星)、丝裂霉素C、奈莫柔比星、新制癌菌素、培洛霉素、吡柔比星、蝴蝶霉素、stimalamer、链佐星、
Figure BDA0000083236130001048
(戊柔比星)、净司他丁等。
拓扑异构酶抑制剂包括阿柔比星、9-氨基喜树碱、氨萘非特、安吖啶、becatecarin、贝洛替康、BN-80915、
Figure BDA0000083236130001049
(伊立替康盐酸盐)、喜树碱、
Figure BDA00000832361300010410
(右旋丙亚胺)、二氟替康、edotecarin、或
Figure BDA00000832361300010412
(表柔比星)、依托泊苷、依沙替康、10-羟基喜树碱、吉马替康、勒托替康、米托蒽醌、orathecin、吡柔比星、匹杉琼、卢比替康、索布佐生、SN-38、tafluposide、拓扑替康等。
抗体包括
Figure BDA0000083236130001051
(贝伐单抗)、CD40特异性抗体、chTNT-1/B、狄诺塞麦、
Figure BDA0000083236130001052
(西妥昔单抗)、
Figure BDA0000083236130001053
(扎木单抗)、IGF1R特异性抗体、林妥珠单抗、
Figure BDA0000083236130001054
(依决洛单抗)、
Figure BDA0000083236130001055
(WX G250)、
Figure BDA0000083236130001056
(利妥昔单抗)、ticilimumab、曲妥珠单抗等。
激素治疗包括
Figure BDA0000083236130001057
(阿那曲唑)、
Figure BDA0000083236130001058
(依西美坦)、阿佐昔芬、(比卡鲁胺)、
Figure BDA00000832361300010510
(西曲瑞克)、地加瑞克、地洛瑞林、
Figure BDA00000832361300010511
(曲洛司坦)、地塞米松、
Figure BDA00000832361300010512
(氟他胺)、
Figure BDA00000832361300010513
(雷洛昔芬)、AFEMATM(法倔唑)、
Figure BDA00000832361300010514
(托瑞米芬)、
Figure BDA00000832361300010515
(氟维司群)、
Figure BDA00000832361300010516
(来曲唑)、福美坦、糖皮质激素、
Figure BDA00000832361300010517
(度骨化醇)、
Figure BDA00000832361300010518
(碳酸司维拉姆)、拉索昔芬、醋酸亮丙瑞林、
Figure BDA00000832361300010519
(甲地孕酮)、
Figure BDA00000832361300010520
(米非司酮)、NILANDRONTM(尼鲁米特)、(柠檬酸三苯氧胺)、PLENAXISTM(阿巴瑞克)、泼尼松、
Figure BDA00000832361300010522
(非那雄胺)、rilostane、
Figure BDA00000832361300010523
(布舍瑞林)、
Figure BDA00000832361300010524
(促黄体激素释放激素(LHRH))、(组氨瑞林植入物)、
Figure BDA00000832361300010526
(曲洛司坦或modrastane)、
Figure BDA00000832361300010527
(fosrelin、戈舍瑞林)等。
Deltoids和类视黄醇包括西奥骨化醇(EB1089、CB1093)、来沙骨化醇(KH1060)、芬维A胺、
Figure BDA0000083236130001061
(阿利维A酸)、(维甲酸脂质体)、
Figure BDA0000083236130001063
(蓓萨罗丁)、LGD-1550等。
PARP抑制剂包括ABT-888、奥拉帕尼、KU-59436、AZD-2281、AG-014699、BSI-201、BGP-15、INO-1001、ONO-2231等。
植物生物碱包括但不限于长春新碱、长春碱、长春地辛、长春瑞滨等。
蛋白酶体抑制剂包括(硼替佐米)、MG132、NPI-0052、PR-171等。
免疫药剂的实例包括干扰素和其它免疫增强剂。干扰素包括干扰素α、干扰素α-2a、干扰素α-2b、干扰素β、干扰素γ-1a、
Figure BDA0000083236130001065
(干扰素γ-1b)、或干扰素γ-n1、其组合等。其它药剂包括(IFN-α)、BAM-002(氧化的谷胱甘肽)、(他索纳明)、(托西莫单抗)、
Figure BDA0000083236130001069
(阿仑单抗)、CTLA4(细胞毒性的淋巴细胞抗原4)、达卡巴嗪、地尼白介素、依帕珠单抗、
Figure BDA00000832361300010610
(来格司亭)、香菇多糖、白细胞α干扰素、咪喹莫特、MDX-010(抗CTLA-4)、黑色素瘤疫苗、米妥莫单抗、莫拉司亭、MYLOTARGTM(吉妥单抗)、
Figure BDA00000832361300010611
(非格司亭)、OncoVAC-CL、
Figure BDA00000832361300010612
(奥戈伏单抗)、pemtumomab(Y-muHMFG1)、
Figure BDA00000832361300010613
(sipuleucel-T)、沙格司亭、裂裥多糖、替西白介素、
Figure BDA00000832361300010614
(卡介苗)、乌苯美司、
Figure BDA00000832361300010615
(免疫治疗剂，Lorus Pharmaceuticals)、Z-100(Maruyama的特异物质(SSM))、WF-10(十氧化四氯(TCDO))、
Figure BDA0000083236130001071
(阿地白介素)、
Figure BDA0000083236130001072
(胸腺法新)、
Figure BDA0000083236130001073
(达珠单抗)、
Figure BDA0000083236130001074
(90Y-替伊莫单抗)等。
生物反应调节剂是调整活体的防御机制或生物反应，例如组织细胞的存活、生长或分化，以引导它们具有抗肿瘤活性的药剂，而且包括云芝多糖、香菇多糖、西佐喃、溶链菌PF-3512676(CpG-8954)、乌苯美司等。
嘧啶类似物包括阿糖胞苷(ara C或阿拉伯糖苷C)、阿拉伯糖苷胞嘧啶、去氧氟尿苷、(氟达拉滨)、5-FU(5-氟尿嘧啶)、氟尿苷、
Figure BDA0000083236130001076
(吉西他滨)、
Figure BDA0000083236130001077
(雷替曲塞)、TROXATYLTM(三乙酰基尿苷曲沙他滨)等。
嘌呤类似物包括
Figure BDA0000083236130001078
(硫鸟嘌呤)和
Figure BDA0000083236130001079
(巯基嘌呤)。
抗有丝分裂剂包括巴他布林、埃博霉素D(KOS-862)、N-(2-((4-羟基苯基)氨基)吡啶-3-基)-4-甲氧基苯磺酰胺、伊沙匹隆(BMS247550)、紫杉醇、
Figure BDA00000832361300010710
(多西紫杉醇)、PNU100940(109881)、patupilone、XRP-9881(larotaxel)、长春氟宁、ZK-EPO(合成的埃博霉素)等。
本发明的化合物还可以用作增强放射治疗功效的辐射敏化剂。放射治疗的实例包括体外束放射治疗、远距放射治疗、近距放射治疗和密封/非密封源放射治疗等。
此外，具有式I的化合物可以与其它化疗剂组合，例如ABRAXANETM(ABI-007)、ABT-100(法尼基转移酶抑制剂)、
Figure BDA0000083236130001081
(Ad5CMV-p53疫苗)、
Figure BDA0000083236130001082
或
Figure BDA0000083236130001083
(洛伐他汀)、
Figure BDA0000083236130001084
(聚I：聚C12U，合成RNA)、
Figure BDA0000083236130001085
(依昔舒林)、
Figure BDA0000083236130001086
(帕米膦酸)、arglabin、L-天冬酰胺酶、阿他美坦(1-甲基-3，17-二酮-雄甾-1，4-二烯)、
Figure BDA0000083236130001087
(他扎罗汀)、AVE-8062(考布他汀衍生物)BEC2(米妥莫单抗)、恶病质素或cachexin(肿瘤坏死因子)、canvaxin(疫苗)、
Figure BDA0000083236130001088
(癌症疫苗)、(西莫白介素)、
Figure BDA00000832361300010810
(组胺二盐酸盐)、
Figure BDA00000832361300010811
(人乳头瘤病毒疫苗)、
Figure BDA00000832361300010812
(C：
Figure BDA00000832361300010813
(环磷酰胺)；H：
Figure BDA00000832361300010814
(羟基阿霉素)；O：长春新碱
Figure BDA00000832361300010815
P：泼尼松)、CYPATTM(醋酸环丙孕酮)、考布他汀A4P、DAB(389)EGF(白喉毒素的催化和转运结构域通过His-Ala联结者与人表皮生长因子稠合)或TransMID-107RTM(白喉毒素)、达卡巴嗪、放线菌素d、5，6-二甲基呫吨酮-4-乙酸(DMXAA)、恩尿嘧啶、EVIZONTM(角鲨胺乳酸盐)、
Figure BDA00000832361300010816
(T4N5脂质体洗液)、盘皮海绵内酯、DX-8951f(甲磺酸依沙替康)、恩扎妥林、EPO906(埃博霉素B)、
Figure BDA00000832361300010817
(四价的人乳头瘤病毒(6、11、16、18型)重组疫苗)、
Figure BDA00000832361300010819
GMK(神经节苷脂结合疫苗)、
Figure BDA00000832361300010820
(前列腺癌疫苗)、卤夫酮、组氨瑞林、羟基脲、伊班膦酸、IGN-101、IL-13-PE38、IL-13-PE38QQR(cintredekinbesudotox)、IL-13-假单胞菌外毒素、干扰素-α、干扰素-γ、JUNOVANTM或MEPACTTM(米伐木肽)、lonafarnib、5，10-亚甲基四氢叶酸、米替福新(十六烷胆碱磷酸)、
Figure BDA0000083236130001091
(AE-941)、
Figure BDA0000083236130001092
(葡糖醛酸三甲曲沙)、
Figure BDA0000083236130001093
(喷司他丁)、(一种核糖核酸酶)、
Figure BDA0000083236130001095
(黑色素瘤疫苗治疗)、
Figure BDA0000083236130001096
(IL-2疫苗)、ORATHECINTM(卢比替康)、(基于抗体的细胞药物)、
Figure BDA0000083236130001098
MAb(鼠单克隆抗体)、紫杉醇、PANDIMEXTM(来自人参的苷元皂甙，包含20(S)原人参萜二醇(aPPD)和20(S)原人参萜三醇(aPPT))、帕尼单抗、
Figure BDA0000083236130001099
-VF(调查研究的癌症疫苗)、培门冬酶、PEG干扰素A、苯妥帝尔、丙卡巴肼、瑞马司他、
Figure BDA00000832361300010910
(catumaxomab)、
Figure BDA00000832361300010911
(来那度胺)、RSR13(乙丙昔罗)、
Figure BDA00000832361300010912
LA(兰瑞肽)、
Figure BDA00000832361300010913
(阿曲汀)、星孢菌素(链霉菌星形孢子)、talabostat(PT100)、
Figure BDA00000832361300010914
(蓓萨罗丁)、
Figure BDA00000832361300010915
(DHA-紫杉醇)、
Figure BDA00000832361300010916
(canfosfamide、TLK286)、temilifene、
Figure BDA00000832361300010917
(替莫唑胺)、替米利芬、沙立度胺、
Figure BDA00000832361300010918
(STn-KLH)、thymitaq(2-氨基-3，4-二氢-6-甲基-4-氧-5-(4-吡啶基硫代)喹唑啉二盐酸盐)、TNFERADETM(adenovector：包含肿瘤坏死因子-α基因的DNA载体)、
Figure BDA00000832361300010919
或
Figure BDA00000832361300010920
(波生坦)、维甲酸(Retin-A)、粉防己碱、(三氧化二砷)、ukrain(来自白屈菜植物的生物碱衍生物)、vitaxin(抗αvβ3抗体)、(莫特沙芬钆)、XINLAYTM(阿曲生坦)、XYOTAXTM(聚谷氨酸紫杉醇)、
Figure BDA00000832361300010924
(曲贝替定)、ZD-6126、
Figure BDA00000832361300010925
(右雷佐生)、
Figure BDA00000832361300010926
(唑来膦酸)、佐柔比星等。
联合治疗可以作为同时的或相继的方案施用。相继施用时，组合可以在两次或多次施用中施用。联合施用包括共施用，使用分开的制剂或单一药物制剂，和以任一次序连续施用，其中优选地存在两种(或全部)活性剂同时发挥其生物活性的时间段。
因此，在另一个实施方式中，本发明提供了在患者中供治疗在其期间抗凋亡Bcl-xL蛋白表达或过表达的疾病的组合物，所述组合物包含赋形剂和治疗有效量的具有式I的化合物，以及治疗有效量的一种额外治疗剂或超过一种额外治疗剂。
在另一个实施方式中，本发明提供了在患者中治疗在其期间抗凋亡Bcl-xL蛋白表达或过表达的疾病的方法，所述方法包含对患者施用治疗有效量的具有式I的化合物和治疗有效量的一种额外治疗剂或超过一种额外治疗剂。
在另一个实施方式中，本发明提供了在患者中治疗间皮瘤、膀胱癌、胰腺癌、皮肤癌、头或颈癌、皮肤或眼内黑色素瘤、卵巢癌、乳腺癌、子宫癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、骨癌、卵巢癌、子宫颈癌、结肠癌、直肠癌、肛门区癌、胃癌、胃肠的(胃的、结肠直肠的、和十二指肠的)、慢性淋巴细胞白血病、食道癌、小肠癌、内分泌系统的癌症、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、睾丸癌、肝细胞癌(肝和胆管)、原发性或继发性中枢神经系统肿瘤、原发性或继发性脑肿瘤、淋巴肉芽肿病、慢性或急性白血病、慢性粒细胞白血病、淋巴细胞性淋巴瘤、成淋巴细胞白血病、滤泡性淋巴瘤、T细胞或B细胞源淋巴恶性肿瘤、黑色素瘤、多发性骨髓瘤、口腔癌、卵巢癌、非小细胞肺癌、前列腺癌、小细胞肺癌、肾和输尿管癌、肾细胞癌、肾盂癌、中枢神经系统肿瘤、原发性中枢神经系统淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、脊柱轴肿瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、肾上腺皮质癌、胆囊癌、脾脏癌、胆管癌、纤维肉瘤、成神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤、或一种或多种以上癌症的组合的方法，所述方法包含对其施用治疗有效量的具有式I的化合物，或其药物组合物，以及依托泊苷长春新碱CHOP、利妥昔单抗、雷帕霉素、R-CHOP或硼替佐米中的一种或超过一种。
对于任意以上共施用的药剂，合适的剂量是目前使用的剂量，而且因为新发现的药剂和其它化疗剂或治疗的联合作用(协同作用)，还可以降低剂量。
联合治疗可以提供“协同作用”和证明是“协同的”，即活性成分一起使用时达到的效果大于分开使用化合物得到的效果的总和。当活性成分如下使用时，可以获得协同效应：(1)共配制且在组合的单位剂量制剂中同时施用或递送；(2)作为分开的制剂交替或平行递送；或(3)通过一些其它方案。在交替治疗中递送时，当化合物相继施用或递送时可以获得协同效应，例如通过在分开的注射器中的不同注射，分开的药丸或胶囊，或在分开的输液中。一般而言，在交替治疗期间，各活性成分的有效剂量是相继(即连续)施用的，而在联合治疗中，两种或更多种活性成分的有效剂量是一起施用的。
在又一个实施方式中，本发明提供了在患者中治疗由血小板的过量或不良激活而引起、加剧或导致的疾病或病症的方法，包含对其施用具有式I的化合物或其药物组合物。
由血小板的过量或不良激活而引起或加剧的疾病，包括但不限于原发性血小板增多症、真性红细胞增多症、M7急性骨髓性白血病、再狭窄、心血管疾病、围手术期的抗血小板治疗、器械相关的血栓及其相关并发症等。在原发性血小板增多症中，血小板的牵涉在Seminars in Hematology(2005)，42(4)，230-238和New Eng.J.Med.，2005，353：1，33-45中报道。在真性红细胞增多症中，血小板的牵涉在Seminars in Thrombosis and Hemostatis(2006)，32(3)，267-275中报道。在再狭窄中，血小板的牵涉在Journal of Clinical Pathology(2006)，59(3)，232-239中报道。在心血管疾病中，血小板的牵涉在InternationalJournal of Clinical Practice(2003)，57(10)，898-905中报道。在围手术期的抗血小板治疗中，血小板的牵涉在Journal of ThrombosisThrombolysis中报道。由升高的血小板水平导致的疾病或病症，包括出血、血栓或其它血栓栓塞并发症、其它血液疾病或病症的起始或恶化，例如“粘性血小板”综合症。
在一个实施方式中，本发明提供了通过对其施用具有式I的化合物，在患者中减少血小板数量并治疗特征为血小板的过量或不良激活的促血栓形成病症和疾病的方法。
在另一个实施方式中，本发明提供了在患者中治疗原发性血小板增多症的方法，包含对其施用具有式I的化合物。在这一实施方式的某些方面内，在一个实施方式中，本发明提供了在患者中减少血小板数量并治疗原发性血小板增多症的方法。
在另一个实施方式中，本发明提供了在患者中治疗真性红细胞增多症的方法，包含对其施用抑制Bcl-xL家族蛋白成员活性的具有式I的化合物。在这一实施方式的某些方面内，在一个实施方式中，本发明提供了在患者中减少血小板数量并治疗真性红细胞增多症的方法。
在某些方面，本申请提供了如本文描述的化合物(例如，具有式I的化合物)或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、或药学上可接受的盐、前药的用途，供治疗疾病或病症。示例的疾病或病症包括，例如，上面讨论的由血小板的过量或不良激活而引起、加剧或导致的任意疾病或病症，上面讨论的任意癌症，或上面讨论的任意自体免疫性疾病。在提供的用途的某些实施方式中，化合物(例如，具有式I的化合物)或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、或药学上可接受的盐、前药，是单独使用的。在其它实施方式中，化合物(例如，具有式I的化合物)或其立体异构体、几何异构体、互变异构体、溶剂化物、代谢物、或药学上可接受的盐、前药，是如上面讨论般作为联合治疗的一部分使用的。
在某些方面，在本发明的各个上面描述的方法中使用的化合物或药物组合物，是选自表1的化合物，或包含选自表1的化合物的药物组合物。
以下实施例被提供以说明本发明，但不应当以任何方式被解释为限制本发明。
V.实施例
在下面描述的实施例中，除非另外指定，所有温度以摄氏度陈述。试剂从商业供应者例如Aldrich Chemical Company，Lancaster，TCI或Maybridge处购买，而且除非另外指定，其使用无需进一步纯化。下面阐述的反应一般在正压的氮气或氩气下完成或者用干燥的管(除非另外规定)在无水溶剂中完成，而且反应烧瓶典型地配备了橡胶隔断，底物和试剂通过注射器引入。玻璃仪器是烤箱干燥和/或热干燥的。用含有硅胶柱的Biotage系统(制造商：Dyax Corporation)、或二氧化硅SEP柱(Waters)、或含有硅胶柱的ISCO色谱系统(制造商：Teledyne ISCO)、或一般遵循W.C.Still描述的技术(参见Still，W.C.；Kahn，M.；Mitra，A.J.Org.Chem.1978，43(14)，2923-2925)手工使用玻璃柱，执行柱色谱。1H NMR谱用Varian UNITY或Inova(500MHz)、Varian UNITY(400MHz)、或Varian UNITY plus或Mercury(300MHz)、或在300或400MHz操作的类似仪器来记录。化学位移记录为δ值(ppm)，低场相对于TMS内标。1H NMR谱在含氘的CDCl3、d6-DMSO、CH3OD或d6-丙酮溶液(以ppm记录)中获得。多样性以通常方式记录，而且当记录峰多样性时，使用以下缩写：s(单峰)、d(双峰)、t(三峰)、m(多峰)、br(宽带)、dd(双重双峰)、dt(双重三峰)。当给出时，耦合常数以赫兹(Hz)记录。在可能时，反应混合物中的产物形成可以通过LC/MS监测，用联接了6140四极质谱仪的Agilent 1200Series LC，使用Supelco Ascentis Express C18柱，1.4分钟内线性梯度5％-95％乙腈/水(各流动相中含0.1％三氟乙酸)并在95％保持0.3分钟；或PE SCIEX API 150EX，使用PHENOMENEX DNYC monolithicC18柱，5分钟内线性梯度5％-95％乙腈/水(各流动相中含0.1％三氟乙酸)并在95％保持1分钟；或类似系统执行。或者，分析性LC-MS用Finnigan Navigator质谱仪和Agilent 1100HPLC系统执行，跑Xcalibur 1.2和Open-Access 1.3软件。质谱仪在阳性APCI电离条件下操作。HPLC系统包含Agilent Quatemary泵、脱气装置、柱间隔、自动进样器和二极管-排列检测器，带有Sedere Sedex 75蒸发光散射检测器。使用的柱是PHENOMENEX LUNA COMBI-HTS C8(2)5μm
Figure BDA0000083236130001151
(2.1mmx30mm)。TFA方法(方法A)：使用10-100％梯度的乙腈(溶剂1)和含0.1％三氟乙酸的水(溶剂2)，流速2mL/min(0-0.1min10％溶剂1，0.1-2.6min 10-100％溶剂1，2.6-2.9min 100-10％溶剂1，2.9-3.0min 100-10％溶剂1)。铵方法(方法B)：使用10-100％梯度的乙腈(溶剂1)和含10mM NH4OAc的水(溶剂2)，流速1.5mL/min(0-0.1min 10％溶剂1，0.1-3.1min 10-100％溶剂1，3.1-3.9min 100-10％溶剂1，3.9-4.0min 100-10％溶剂1)。
GC-MS质谱分析用Finnigan SSQ7000GC/MS质谱仪，使用不同技术包括电喷雾电离(ESI)和大气压化学电离(APCI)，按照对个体化合物的说明执行。精确质量测量用FINNIGAN FTMS NEWSTAR T70质谱仪执行。如果精确质量测量在精确单一同位素质量的5.0ppm相对质量误差(RME)之内，那么化合物被测定为与化学式“一致”。
对某些化合物执行预制备反相HPLC，用自动化Gilson HPLC系统来完成，使用SymmetryPrep Shield RP18预制备柱，250mmx21.20mm i.d.，10um，流速25mL/min；＝214、245nm；流动相A，含0.1％TFA的H2O；流动相B，CH3CN；40分钟内，B的线性梯度0-70％。
所有用来描述使用的试剂、反应条件或仪器的缩写，与Journal ofOrganic Chemistry(一种美国化学学会会刊)每年出版的“List ofstandard abbreviations and acronyms”中阐述的定义一致。本文使用的以下缩写具有如下含义：rt＝室温，DMAP＝2，6-二甲基氨基吡啶；EDCI、DCM＝二氯甲烷，THF＝四氢呋喃，TEA＝三乙胺，EtOAc＝乙酸乙酯，TFA＝三氟乙酸，LC/MS＝液相色谱/质谱，APCI＝大气压化学电离，DCI＝解吸化学电离，MS＝质谱，MeOH＝甲醇，DMA＝N，N-二甲基乙酰胺，EtOH＝乙醇，Hex＝己烷，NBS＝N-溴代琥珀酰亚胺，NIS＝N-碘代琥珀酰亚胺，SEMCl＝2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯，DME＝二甲氧基乙烷，DBAD＝偶氮二甲酸二苄酯，DMF＝N，N-二甲基甲酰胺，DCE＝二氯乙烷，Et3N＝三乙胺。
实施例1
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(1)的合成：
Figure BDA0000083236130001161
步骤1：8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(1A)的制备。
Figure BDA0000083236130001171
向2-(叔丁氧基羰基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-8-羧酸(6.8g，24.5mmol)和苯并[d]噻唑-2-胺(5.52g，36.8mmol)在DCM(80mL)中的溶液中，加入EDCI(9.4g，49.04mmol)和DMAP(6g，49mmol)。混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物用DCM(400mL)稀释，用5％HCl水溶液、水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，减压浓缩，以提供8.5g所需产物8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(1A)：1H NMR(300MHz，CDCl3)δppm 7.83(1H，m)，7.48(1H，d)，7.34(4H，m)，7.19(1H，t)，4.91(2H，m)，3.67(2H，t)，2.92(2H，t)，1.47(9H，m)。MS(ESI(+))：m/z 410(M+H)。
步骤2：N-(苯并[d]噻唑-2-基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-8-甲酰胺二盐酸盐(1B)的制备。
Figure BDA0000083236130001181
向8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-羧酸叔丁酯(1A)(8.5g，20.75mmol)在DCM(80mL)中的溶液中，加入含2N HCl的乙醚(80mL)。反应混合物在室温下搅拌过夜，减压浓缩，以提供所需产物N-(苯并[d]噻唑-2-基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-8-甲酰胺二盐酸盐(1B)：LC/MS(APCI)：m/z 309.9(M+H)。
步骤3：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸甲酯(1C)的制备。
向N-(苯并[d]噻唑-2-基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-8-甲酰胺二盐酸盐(1B)(5.3g，13.86mmol)和2-氯噻唑-4-羧酸甲酯(2.5g，14mmol)在DMA(60mL)中的溶液中，加入Cs2CO3(25g，70mmol)。反应混合物在50℃搅拌过夜。反应混合物冷却至室温，用5％HCl酸化，用DCM萃取，用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，减压浓缩。粗材料通过柱色谱用硅胶纯化，用含5％MeOH的DCM洗脱，以提供4.2g(67％)所需产物2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸甲酯(1C)：LC/MS(APCI)：m/z 451.0(M+H)。
步骤4：题示化合物1的制备：
题示化合物2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(1)通过以下程序制备：向2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸甲酯(1C)(180mg，4mmol)在THF(4mL)和MeOH(2mL)中的溶液中，加入2NNaOH(2mL)。反应混合物在50℃搅拌4小时，缓慢加入5％HCl水溶液中和。然后过滤沉淀，干燥，在DMSO/MeOH(1∶1)中溶解，通过柱色谱用硅胶纯化，以提供所需产物2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(1)：1H NMR(300MHz，DMSO-D6)δppm 7.99(1H，d)，7.76(1H，d)，7.69(1H，dd)，7.52(1H，s)，7.38(4H，m)，4.91(2H，s)，3.75(2H，t)，3.05(2H，t)。MS(ESI(+))：m/z 437(M+H)。
实施例2
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-苯氧基丙基)噻唑-4-羧酸(2)的合成：
Figure BDA0000083236130001201
步骤1：3-溴-6-氯-2-氧己酸乙酯(2A)的制备。
Figure BDA0000083236130001202
向含6-氯-2-氧己酸乙酯(2.9g，15mmol)的四氯化碳(30mL)中加入溴(0.85mL，16.5mmol)，在室温下搅拌1小时。反应混合物用EtOAc稀释，用Na2S2O3溶液、水、盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。粗材料通过柱色谱用硅胶纯化，用含0到10％EtOAc的己烷梯度洗脱，以提供所需产物3-溴-6-氯-2-氧己酸乙酯(2A)，产率95％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 5.25(1H，dd)，4.29(2H，q)，3.71(2H，t)，2.16(1H，m)，1.91(1H，m)，1.29(3H，t)。
步骤2：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-氯丙基)噻唑-4-羧酸乙酯(2B)的制备。
向含N-(苯并[d]噻唑-2-基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-8-甲酰胺二盐酸盐(1B)(11.5g，30mmol)的DMF(125mL)，加入TEA(16.7mL，120mmol)，在室温下搅拌15分钟。加入二(1H-咪唑-1-基)甲硫酮(6.53g，33mmol)，反应混合物在室温下搅拌1小时。加入含7N氨水的MeOH(171mL，1.2mol)，混合物在室温下搅拌过夜。浓缩反应混合物，以除去氨水、TEA和MeOH。向浓缩液中加入3-溴-6-氯-2-氧己酸乙酯(2A)(11.4g，42mmol)的EtOH(40mL)溶液。反应混合物在氮气中在50℃加热4.5小时。加入额外的含3-溴-6-氯-2-氧己酸乙酯(2A)(0.815g，3mmol)的EtOH(3mL)，继续加热1.5小时。反应混合物减压浓缩除去EtOH，然后用EtOAc萃取。合并的有机萃取液用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。浓缩液通过柱色谱用硅胶纯化，用含30到50％EtOAc的己烷梯度洗脱，以提供所需产物2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-氯丙基)噻唑-4-羧酸乙酯(2B)，产率69％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm12.89(1H，s)，8.04(1H，d)，7.79(1H，d)，7.67(1H，d)，7.42(4H，m)，4.83(2H，s)，4.19(2H，q)，3.72(2H，t)，3.64(2H，t)，3.13(2H，m)，3.04(2H，t)，2.00(2H，m)，1.21(3H，t)。
步骤3：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-碘丙基)噻唑-4-羧酸乙酯(2C)的制备。
Figure BDA0000083236130001211
向含2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-氯丙基)噻唑-4-羧酸乙酯(2B)(9.3g，17.2mmol)的乙腈(125mL)，加入碘化钠(25.8g，172mmol)。反应混合物用氮气吹扫两次。然后反应混合物在90℃加热5小时，冷却至室温，减压浓缩。浓缩液用EtOAc稀释，用水、盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。粗材料在Et2O中浆化，过滤，用额外的Et2O洗涤，减压干燥，以提供所需产物2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-碘丙基)噻唑-4-羧酸乙酯(2C)，产率93％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.89(1H，s)，8.04(1H，d)，7.79(1H，d)，7.66(1H，d)，7.43(4H，m)，4.83(2H，s)，4.19(2H，q)，3.72(2H，t)，3.26(2H，t)，3.06(4H，m)，2.03(2H，m)，1.21(3H，t)。
步骤4：题示化合物2的制备：
题示化合物2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-苯氧基丙基)噻唑-4-羧酸(2)通过以下程序制备：向含苯酚(22.6mg，0.24mmol)的DMF(2mL)加入NaH(60％油分散剂)(24mg，0.6mmol)。在室温下搅拌5分钟后，加入2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-碘丙基)噻唑-4-羧酸乙酯(2C)(127mg，0.2mmol)，继续搅拌1小时。反应混合物用1N HCl酸化，过滤沉淀，用水洗涤。沉淀在Et2O中浆化，过滤，用额外的Et2O洗涤。得到的固体通过柱色谱用硅胶纯化，用含0到2％MeOH的DCM梯度洗脱。向DMF(1mL)中的纯化材料中，加入NaOH(4N水溶液)(0.5mL，2mmol)，在50℃加热5小时，冷却至室温，用1NHCl酸化。过滤沉淀，用水洗涤，在Et2O中浆化，过滤，用Et2O洗涤，在真空烤箱中干燥，以提供所需产物2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-苯氧基丙基)噻唑-4-羧酸(2)，产率37％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.89(s，1H)，12.49(1H，s)，8.04(1H，d)，7.79(1H，d)，7.67(1H，d)，7.44(4H，m)，7.25(2H，m)，6.88(3H，m)，4.82(2H，s)，3.96(2H，t)，3.72(2H，t)，3.17(2H，m)，3.03(2H，t)，2.00(2H，m)。MS(ESI(+))：m/z 571(M+H)。
实施例3
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(吡啶-4-基硫代)丙基)噻唑-4-羧酸(3)的合成：
Figure BDA0000083236130001231
题示化合物2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(吡啶-4-基硫代)丙基)噻唑-4-羧酸(3)通过以下程序制备：题示化合物通过在实施例2的步骤4用吡啶-4-硫醇代替苯酚制备。所需产物沉淀后，固体通过HPLC纯化(预制备反相HPLC用自动化Gilson HPLC系统执行，使用SymmetryPrep Shield RP18预制备柱，250mmx21.20mm i.d.，10um，流速25mL/min；λ＝214、245nm；流动相A，含0.1％TFA的H2O；流动相B，CH3CN；40分钟内，B的线性梯度0-90％)，以提供2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(吡啶-4-基硫代)丙基)噻唑-4-羧酸(3)，产率30％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.81(1H，s)，8.48(2H，d)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.67(1H，d)，7.59(2H，m)，7.41(4H，m)，4.83(2H，s)，3.73(2H，t)，3.18(4H，m)，3.03(2H，t)，1.95(2H，m)。MS(ESI(+))：m/z 588(M+H)。
实施例4
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(叔丁氧基羰基氨基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(4)的合成：
Figure BDA0000083236130001241
题示化合物2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(叔丁氧基羰基氨基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(4)通过以下程序制备：题示化合物通过在实施例2的步骤4用4-羟基苯基氨基甲酸叔丁酯代替苯酚制备。因为烷化或水解步骤加入1N HCl不产生可过滤的固体，用EtOAc萃取反应混合物。合并的萃取液用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。各步骤按照实施例2中纯化，最终固体加一次额外的MeOH洗涤，提供所需化合物2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(叔丁氧基羰基氨基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(4)，产率58％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.87(1H，s)，12.52(1H，s)，9.08(1H，s)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.67(1H，d)，7.45(2H，m)，7.35(4H，m)，6.80(2H，m)，4.83(2H，s)，3.91(2H，t)，3.72(2H，t)，3.15(2H，m)，3.03(2H，t)，1.97(2H，m)，1.45(9H，s)。MS(ESI(+))：m/z 686(M+H)。
实施例5
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(3-(叔丁氧基羰基氨基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(5)的合成：
Figure BDA0000083236130001251
题示化合物2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(3-(叔丁氧基羰基氨基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(5)通过以下程序制备：题示化合物通过在实施例2的步骤4用3-羟基苯基氨基甲酸叔丁酯代替苯酚制备。酯水解前未分离中间体烷化产物。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 12.81(1H，s)，9.24(1H，s)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.67(1H，d)，7.46(2H，m)，7.36(2H，m)，7.09(2H，m)，6.97(1H，d)，6.50(1H，dd)，4.84(2H，s)，3.91(2H，t)，3.72(2H，t)，3.16(2H，m)，3.03(2H，t)，1.99(2H，m)，1.45(9H，s)。MS(ESI(+))：m/z 686(M+H)。
实施例6
5-(3-(4-氨基苯氧基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(6)的合成：
Figure BDA0000083236130001261
题示化合物5-(3-(4-氨基苯氧基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(6)通过以下程序制备：向含2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(叔丁氧基羰基氨基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(4)(20mg，0.029mmol)的MeOH(1mL)，加入TFA(1mL，13mmol)，在室温下搅拌2小时。反应混合物通过HPLC纯化(预制备反相HPLC用自动化Gilson HPLC系统执行，使用SymmetryPrep Shield RP18预制备柱，250mmx21.20mm i.d.，10um，流速25mL/min；λ＝214、245nm；流动相A，含0.1％TFA的H2O；流动相B，CH3CN；40分钟内，B的线性梯度0-70％)，以提供所需产物5-(3-(4-氨基苯氧基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸，产率48％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 12.77(1H，s)，9.04(1H，s)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.67(1H，d)，7.47(2H，m)，7.37(2H，m)，7.09(2H，d)，6.92(2H，m)，4.83(2H，s)，3.95(2H，t)，3.72(2H，t)，3.17(2H，m)，3.03(2H，t)，1.99(2H，m)。MS(ESI(+))：m/z 586(M+H)。
实施例7
5-(3-(1H-吡唑-1-基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(7)的合成：
题示化合物5-(3-(1H-吡唑-1-基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(7)通过以下程序制备：题示化合物通过在实施例2的步骤4用1H-吡唑代替苯酚制备。酯水解前未分离中间体烷化产物。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 12.85(1H，s)，12.55(1H，s)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.68(2H，m)，7.47(2H，m)，7.37(3H，m)，6.19(1H，t)，4.83(2H，s)，4.12(2H，t)，3.73(2H，t)，3.04(2H，t)，2.99(2H，m)，2.05(2H，m)。MS(ESI(+))：m/z 545(M+H)。
实施例8
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(异喹啉-6-氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(8)的合成：
Figure BDA0000083236130001281
步骤1：2-氨基-5-碘噻唑-4-羧酸甲酯(8A)的制备：
Figure BDA0000083236130001282
向2-氨基噻唑-4-羧酸甲酯(5.6g，35.4mmol)在DCM(60mL)中的溶液中，加入NIS(9.56g，42.5mmol)。混合物在室温下搅拌24小时，然后用EtOAc(200mL)稀释，用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，减压浓缩，以提供9.5g(94％)所需产物2-氨基-5-碘噻唑-4-羧酸甲酯(8A)：LC/MS(APCI)：m/z 284.9(M+H)。
步骤2：2-氯-5-碘噻唑-4-羧酸甲酯(8B)的制备：
向2-氨基-5-碘噻唑-4-羧酸甲酯(8A)(9g，31.7mmol)在乙腈(60mL)中的溶液中，加入CuCl(4.75g，48mmol)，接着加入亚硝酸叔丁酯(6.19g，60mmol)。混合物在室温下搅拌2小时。然后向搅拌混合物中缓慢加入NH4Cl以淬灭反应。用EtOAc萃取混合物，合并的萃取液用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，减压浓缩。粗材料通过柱色谱用硅胶纯化，用含5％EtOAc的己烷洗脱，以提供7.5g(78％)所需产物2-氯-5-碘噻唑-4-羧酸甲酯(8B)：LC/MS(APCI)：m/z 304.0(M+H)。
步骤3：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-碘噻唑-4-羧酸甲酯(8C)的制备：
Figure BDA0000083236130001291
向N-(苯并[d]噻唑-2-基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-8-甲酰胺二盐酸盐(1B)(2g，5.23mmol)和2-氯-5-碘噻唑-4-羧酸甲酯(8B)(1.66g，5.23mmol)在DMA(10mL)中的溶液中，加入Cs2CO3(8.52g，26.2mmol)。反应混合物在60℃搅拌过夜，冷却至室温，用5％HCl酸化，用DCM萃取，用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，减压浓缩。粗材料通过柱色谱用硅胶纯化，用含5％MeOH的DCM洗脱，以提供2.0g(65％)所需产物2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-碘噻唑-4-羧酸甲酯(8C)：LC/MS(APCI)：m/z 577.0(M+H)
步骤4：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-羟基丙-1-炔基)噻唑-4-羧酸甲酯(8D)的制备。
Figure BDA0000083236130001301
向2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-碘噻唑-4-羧酸甲酯(8C)(1.2g，2.03mmol)和丙-2-炔-1-醇(336mg，6mmol)在THF(20mL)中的溶液中，加入Pd(Ph3P)4(231mg，0.2mmol)、CuI(76mg，0.121mmol)、DIEA(520mg，4mmol)。混合物在室温下在氮气中搅拌过夜。混合物然后用DCM(400mL)稀释，用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，减压浓缩。粗材料通过柱色谱用硅胶柱纯化，用含5％MeOH的DCM洗脱，以提供0.76g(73％)所需产物2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-羟基丙-1-炔基)噻唑-4-羧酸甲酯(8D)：LC/MS(APCI)：m/z505.1(M+H)
步骤5：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-34-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-羟丙基)噻唑-4-羧酸甲酯(8E)的制备。
向2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-羟基丙-1-炔基)噻唑-4-羧酸甲酯(8D)(1.2g，2.31mmol)在EtOAc(20mL)中的溶液中，加入PtO2(120mg，0.53mmol)。混合物在室温下在氢气球下搅拌过夜。这一时段后过滤混合物，浓缩滤液，以提供所需产物2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-羟丙基)噻唑-4-羧酸甲酯(8E)：LC/MS(APCI)：m/z509.2(M+H)。
步骤6：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(甲苯磺酰氧基)丙基)噻唑-4-羧酸甲酯(8F)的制备。
Figure BDA0000083236130001311
向2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-羟丙基)噻唑-4-羧酸甲酯(0.5g，0.96mmol)在DCM(10mL)中的溶液中，加入TsCl(182mg，1mmol)、TEA(97mg，1mmol)和催化量的DMAP。混合物在室温下搅拌4小时。混合物用EtOAc稀释，用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，减压浓缩，以提供所需产物2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(甲苯磺酰氧基)丙基)噻唑-4-羧酸甲酯(8F)，其使用无需进一步纯化。LC/MS(APCI)：m/z 663.0(M+H)
步骤7：题示化合物8的制备：
Figure BDA0000083236130001321
题示化合物2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(异喹啉-6-氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(8)通过以下程序制备：向2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(甲苯磺酰氧基)丙基)噻唑-4-羧酸甲酯(8F)(133mg，0.2mmol)和5-羟基异喹啉(45mg，0.3mmol)在DMA(3mL)中的溶液中，加入Cs2CO3(50mg，0.3mmol)。混合物在室温下搅拌过夜，用2N NaOH(4mL)稀释，在50℃搅拌4小时。反应混合物用5％HCl中和，过滤沉淀并干燥。残余物然后在DMSO/MeOH(1∶1)中溶解，通过柱色谱用硅胶纯化，以提供所需产物2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(异喹啉-6-氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(8)：1H NMR(300MHz，DMSO-D6)δppm 9.16(1H，s)，8.34(1H，d)，7.94(1H，d)，7.85(1H，d)，7.71(4H，m)，7.38(8H，m)，4.88(2H，s)，4.14(2H，t)，3.71(2H，t)，3.00(2H，t)，2.27(1H，m)，2.09(2H，m)。LC/MS(APCI)：m/z 622.2(M+H)。
实施例9
5-(3-(3-氨基苯氧基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(9)的合成：
Figure BDA0000083236130001331
题示化合物9按照实施例6中阐述的程序制备，但用化合物5代替实施例6中的化合物4：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.89(1H，s)，8.03(1H，m)，7.79(1H，d)，7.67(1H，m)，7.42(4H，m)，7.02(1H，m)，6.33(3H，m)，4.83(2H，s)，3.90(2H，t)，3.72(2H，t)，3.16(2H，m)，3.03(2H，t)，1.98(2H，m)；MS(ESI(+))：m/z 586(M+H)。
实施例10
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(吡啶-4-氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(10)的合成：
Figure BDA0000083236130001332
化合物10一般如实施例2中描述般制备，在实施例2的步骤4中用4-羟基吡啶代替苯酚。酯水解前未分离中间体烷化产物：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 12.89(1H，s)，12.55(1H，s)，8.66(1H，m)，8.44(1H，d)，8.04(1H，m)，7.79(1H，d)，7.68(1H，d)，7.43(5H，m)，7.01(1H，d)，4.82(2H，s)，4.29(2H，m)，3.74(2H，m)，3.19(2H，m)，3.04(2H，m)，2.08(2H，m)；MS(ESI(+))：m/z 572(M+H)。
实施例11
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(3-(二甲基氨基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(11)的合成：
Figure BDA0000083236130001341
化合物11一般如实施例2中描述般制备，在实施例2的步骤4用3-(二甲基氨基)苯酚代替苯酚，调整是：因烷化步骤添加1N HCl不产生可过滤的固体，用EtOAc(3x25mL)萃取反应混合物。合并的萃取液用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。然后程序按实施例2的步骤4继续：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 7.93(1H，d)，7.71(2H，m)，7.37(3H，m)，7.26(1H，t)，7.02(1H，t)，6.28(1H，m)，6.19(2H，m)，4.90(2H，s)，3.93(2H，t)，3.70(2H，m)，3.17(2H，m)，3.02(2H，m)，2.83(6H，s)，1.96(2H，m)；MS(ESI(+))：m/z 614(M+H)。
实施例12
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(喹啉-5-氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(12)的合成：
化合物12使用如实施例8中描述的相同程序制备，在实施例8的步骤7中用4-羟基喹啉代替5-羟基异喹啉：1H NMR(300MHz，DMSO-D6)δppm 12.88(1H，s)，8.85(1H，d)，8.32(1H，dd)，8.04(1H，d)，7.78(1H，d)，7.52(HH，m)，7.19(1H，d)，4.82(2H，s)，4.20(2H，t)，3.71(2H，t)，3.02(1H，m)，2.17(2H，m)。MS(ESI(+))：m/z 622(M+H)。
实施例13
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(喹啉-8-氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(13)的合成：
Figure BDA0000083236130001352
化合物13使用如实施例8中描述的相同程序制备，在实施例8的步骤7中用8-羟基喹啉代替5-羟基异喹啉：1H NMR(300MHz，DMSO-D6)δppm 8.93(1H，d)，8.63(1H，d)，8.04(1H，d)，7.79(1H，d)，7.53(12H，m)，7.08(1H，d)，4.82(2H，s)，4.22(2H，t)，3.70(2H，m)，3.31(2H，t)，3.03(2H，m)，2.17(2H，m)。MS(ESI(+))：m/z 622(M+H)。
实施例14
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-羟基丙-1-炔基)噻唑-4-羧酸(14)的合成：
化合物14使用如实施例8的步骤7中描述的相同的水解和纯化程序，由化合物8D制备：1H NMR(300MHz，DMSO-D6)δppm 12.91(1H，s)，8.04(1H，d)，7.80(1H，d)，7.52(5H，m)，4.90(2H，s)，4.30(2H，m)，3.74(2H，t)，3.06(2H，t)；MS(ESI(+))：m/z 491(M+H)。
实施例15
5-(3-(1H-苯并[d]咪唑-1-基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(15)的合成：
化合物15通过在实施例2的步骤4用苯并咪唑代替苯酚制备。酯水解前未分离中间体烷化产物：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 7.99(1H，d)，7.75(1H，d)，7.69(1H，dd)，7.62(1H，m)，7.56(1H，m)，7.39(5H，m)，7.19(2H，m)，4.85(2H，s)，4.27(2H，t)，3.72(2H，t)，3.04(4H，m)，2.09(2H，m)。MS(ESI(+))：m/z 595(M+H)。
实施例16
5-(3-(1H-咪唑-1-基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(16)的合成：
Figure BDA0000083236130001372
化合物16一般如实施例2中描述般制备，在实施例2的步骤4中用咪唑代替苯酚。酯水解前未分离中间体烷化产物：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.90(1H，s)，12.53(1H，s)，8.03(1H，m)，7.86(1H，s)，7.79(1H，d)，7.67(1H，m)，7.41(4H，m)，7.26(1H，s)，6.99(1H，s)，4.83(2H，s)，4.01(2H，t)，3.73(2H，t)，3.02(4H，m)，2.01(2H，t)。MS(ESI(+))：m/z 545(M+H)。
实施例17
5-(3-(1H-吡咯并[2，3-b]吡啶-1-基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(17)的合成：
Figure BDA0000083236130001381
化合物17通过在实施例2的步骤4用7-吖吲哚代替苯酚制备。酯水解前未分离中间体烷化产物：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.87(1H，s)，12.54(1H，s)，8.20(1H，dd)，8.03(1H，m)，7.92(1H，dd)，7.79(1H，d)，7.67(1H，m)，7.54(1H，d)，7.44(4H，m)，7.03(1H，dd)，6.43(1H，d)，4.81(2H，s)，4.29(2H，t)，3.72(2H，t)，3.03(4H，m)，2.10(2H，m)。MS(ESI(+))：m/z 595(M+H)。
实施例18
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(吡咯烷-1-基)丙基)噻唑-4-羧酸(18)的合成：
Figure BDA0000083236130001391
化合物18一般如实施例2中描述般制备，在实施例2的步骤4中用吡咯烷代替苯酚。酯水解前未分离中间体烷化产物。所需产物沉淀后，固体通过HPLC纯化(预制备反相HPLC用自动化Gilson HPLC系统执行，使用SymmetryPrep Shield RP18预制备柱，250mmx21.20mm i.d.，10um，流速25mL/min；λ＝214、245nm；流动相A，含0.1％TFA的H2O；流动相B，CH3CN；40分钟内，B的线性梯度0-70％)，以提供化合物18，产率18％：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.90(1H，s)，12.66(1H，s)，9.33(1H，s)，8.04(1H，d)，7.80(1H，d)，7.68(1H，d)，7.42(4H，m)，4.83(2H，s)，3.76(2H，t)，3.53(2H，m)，3.10(6H，m)，2.96(2H，m)，1.93(4H，m)，1.82(2H，m)；MS(ESI(+))：m/z 548(M+H)。
实施例19
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-吗啉基丙基)噻唑-4-羧酸(19)的合成：
化合物19一般如实施例2中描述般制备，在实施例2的步骤4中用吗啉代替苯酚。酯水解前未分离中间体烷化产物。所需产物沉淀后，固体通过HPLC纯化(预制备反相HPLC用自动化Gilson HPLC系统执行，使用SymmetryPrep Shield RP18预制备柱，250mmx21.20mm i.d.，10um，流速25mL/min；λ＝214、245nm；流动相A，含0.1％TFA的H2O；流动相B，CH3CN；40分钟内，B的线性梯度0-70％)，以提供化合物19，产率5％。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.90(1H，s)，9.49(1H，s)，8.04(1H，d)，7.80(1H，d)，7.68(1H，d)，7.42(4H，m)，4.83(2H，s)，3.92(2H，m)，3.76(2H，t)，3.62(2H，m)，3.07(10H，m)，1.95(2H，m)；LCMS(APCI)：m/z 564(M+H)。
实施例20
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(哌啶-1-基)丙基)噻唑-4-羧酸(20)的合成：
Figure BDA0000083236130001401
题示化合物20一般如实施例2中描述般制备，在实施例2的步骤4中用哌啶代替苯酚。酯水解前未分离中间体烷化产物。所需产物沉淀后，固体通过HPLC纯化(预制备反相HPLC用自动化GilsonHPLC系统执行，使用SymmetryPrep Shield RP18预制备柱，250mmx21.20mm i.d.，10um，流速25mL/min；λ＝214、245nm；流动相A，含0.1％TFA的H2O；流动相B，CH3CN；40分钟内，B的线性梯度0-70％)，以提供化合物20，产率17％：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.90(1H，s)，8.85(1H，s)，8.04(1H，d)，7.80(1H，m)，7.68(1H，d)，7.43(4H，m)，4.83(2H，s)，3.76(2H，t)，3.05(7H，m)，2.82(2H，m)，1.93(2H，m)，1.77(2H，m)，1.60(3H，m)，1.34(2H，m)。MS(ESI(+))：m/z 562(M+H)。
实施例21
5-(3-(4-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯氧基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(21)的合成：
Figure BDA0000083236130001411
步骤1：5-氨基-1-(4-溴苯基)-1H-吡唑-4-羧酸(21A)的制备：
Figure BDA0000083236130001412
2-氰基-3-乙氧基丙烯酸(Z)-乙酯(2.099g，12.41mmol)、4-溴苯基肼盐酸盐(2.76g，12.41mmol)和Na2CO3(0.789g，7.44mmol)在EtOH(30mL)中的混合物，回流5h，轻微浓缩。通过过滤收集沉淀，用乙醚洗涤，干燥，以提供酯。酯在THF(5mL)和MeOH(25mL)中溶解。加入154mL 10％NaOH。得到的混合物在50℃搅拌过夜，浓缩。加入少量水，得到的溶液用HCl中和到pH 6。收集白色沉淀，用水洗涤，干燥，以提供化合物21A：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)ppm 12.09(1H，s)，7.72(2H，d)，7.52(2H，d)，6.35(2H，s)。
步骤2：1-(4-溴苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(21B)的制备：
向1，3，5-三嗪(0.575g，7.09mmol)和化合物21A(2g，7.09mmol)在DMSO(30mL)中的溶液中，加入醚合三氟化硼(1.078mL，8.51mmol)。得到的混合物在120℃加热20h，冷却，用EtOAc稀释，用1％NaOH和盐水洗涤。有机层用Na2SO4干燥，浓缩。残余物用少量EtOAc研磨，收集沉淀，以提供所需产物：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 9.47(1H，s)，9.16(1H，s)，8.68(1H，s)，8.22(2H，d)，7.80(2H，d)。
步骤3：1-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(21C)的制备：
Figure BDA0000083236130001422
化合物21B(500mg，1.817mmol)、4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-双(1，3，2-二氧硼戊环)(508mg，1.999mmol)、PdCl2(dppf)-CH2Cl2加合物(74.2mg，0.091mmol)和乙酸钾(535mg，5.45mmol)在DMSO(15mL)中的混合物用氮气吹扫，然后在80℃加热过夜。反应用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤。有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩。粗材料通过柱色谱用硅胶纯化，用含0到20％EtOAc的DCM洗脱，以提供所需产物21C：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 9.49(1H，s)，9.20(1H，s)，8.70(1H，s)，8.33(2H，d)，7.90(2H，d)，1.33(12H，s)。
步骤4：4-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯酚(21D)的制备：
Figure BDA0000083236130001431
向化合物21C(100mg，0.31mmol)的THF(5mL)溶液中，加入NaOH(0.248mL，0.621mmol)和过氧化氢(0.048mL，0.466mmol)。混合物在0℃搅拌30分钟。减压浓缩反应混合物，浓缩液在8mL水中溶解。水溶液用稀释的HCl酸化。收集白色沉淀，用水洗涤，干燥，以提供所需产物21D：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 9.75(1H，s)，9.44(1H，s)，9.09(1H，s)，8.59(1H，s)，7.82-7.99(2H，m)，6.83-7.05(2H，m)。
步骤5：题示化合物21的制备：
Figure BDA0000083236130001432
向化合物21D(106mg，0.498mmol)的DMF(5mL)溶液中，加入氢化钠(56.9mg，1.423mmol)。得到的混合物在室温下搅拌30分钟，加入化合物2C(300mg，0.474mmol)。反应混合物搅拌1小时，加入10％氢氧化钠(1.897mL，4.74mmol)、THF(5mL)和MeOH(3mL)。得到的混合物在70℃搅拌过夜，冷却，过滤。滤液用HCl酸化到pH4。收集沉淀，干燥，以提供所需产物：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 12.85(1H，s)，9.45(1H，s)，9.10(1H，s)，8.61(1H，s)，7.98-8.06(3H，m)，7.78(1H，d)，7.67(1H，d)，7.42-7.50(2H，m)，7.32-7.40(2H，m)，7.09-7.16(2H，m)，4.84(2H，s)，4.06(2H，t)，3.73(2H，t)，3.14-3.24(2H，m)，3.03(2H，t)，1.98-2.12(2H，m)；LCMS(APCI)：m/z 687(M+H)。
实施例22
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(2-((1S，4S)-1，7，7-三甲基双环[2.2.1]庚烷-2-氧基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(22)的合成：
Figure BDA0000083236130001441
题示化合物22一般如实施例2中描述般制备，在实施例2的步骤4中用2-((1S，4S)-1，7，7-三甲基双环[2.2.1]庚烷-2-氧基)苯酚代替苯酚。酯水解前未分离中间体烷化产物。最终产物经历一次额外的MeOH洗涤，提供所需化合物22，产率76％：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 7.85(1H，d)，7.76(1H，dd)，7.64(1H，d)，7.33(3H，m)，7.20(1H，m)，6.84(4H，m)，4.93(2H，s)，4.04(1H，m)，3.91(2H，t)，3.69(2H，t)，3.18(2H，m)，3.00(2H，t)，1.96(2H，m)，1.76(2H，m)，1.62(2H，m)，1.47(1H，m)，1.07(2H，m)，1.04(3H，s)，0.93(3H，s)，0.77(3H，s)；MS(ESI(+))：m/z 723(M+H)。
实施例23
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(2-(4-(吡啶-2-基)哌嗪-1-基)苯并[d]噻唑-6-氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(23)的合成：
Figure BDA0000083236130001451
题示化合物23一般如实施例2中描述般制备，在实施例2的步骤4中用2-(4-(吡啶-2-基)哌嗪-1-基)苯并[d]噻唑-6-醇代替苯酚。酯水解前未分离烷化中间体。用1N HCl沉淀后，最终产物通过柱色谱用硅胶进一步纯化，用含0到10％MeOH的CH2Cl2梯度洗脱，以提供题示化合物23，产率39％：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.87(1H，s)，8.12(1H，dd)，8.03(1H，m)，7.72(3H，m)，7.41(6H，m)，7.08(1H，d)，6.88(1H，dd)，6.79(1H，dd)，4.83(2H，s)，3.98(2H，m)，3.75(6H，d)，3.69(4H，m)，3.19(2H，m)，3.03(2H，t)，2.01(2H，m)；MS(ESI(+))：m/z 789(M+H)。
实施例24
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(1-苯基环戊基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(24)的合成：
Figure BDA0000083236130001461
题示化合物24一般如实施例2中描述般制备，在实施例2的步骤4中用4-(1-苯基环戊基)苯酚代替苯酚。酯水解前未分离烷化中间体。最终产物经历一次额外的MeOH洗涤，提供所需化合物24，产率67％：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.87(1H，s)，12.56(1H，s)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.67(1H，m)，7.42(5H，m)，7.16(6H，m)，6.77(2H，m)，4.82(2H，s)，3.91(2H，t)，3.72(2H，m)，3.14(2H，m)，3.01(2H，m)，2.20(4H，m)，1.96(2H，m)，1.59(4H，m)。MS(ESI(+))：m/z 715(M+H)。
实施例25
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(1-氰基-1，2-二氢环丁并苯-4-氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(25)的合成：
Figure BDA0000083236130001471
题示化合物25通过在实施例2的步骤4用4-羟基-1，2-二氢环丁并苯-1-腈代替苯酚制备。未分离烷化中间体。酯水解在环境温度下执行，最终产物经历一次额外的MeOH洗涤，以提供所需产物25，产率50％：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.89(1H，s)，12.55(1H，s)，8.03(1H，m)，7.79(1H，d)，7.67(1H，d)，7.42(4H，m)，7.16(1H，d)，6.82(2H，m)，4.83(2H，s)，4.44(1H，m)，3.95(2H，t)，3.72(2H，t)，3.58(1H，dd)，3.37(1H，m)，3.16(2H，m)，3.03(2H，t)，1.99(2H，m)；MS(ESI(+))：m/z 622(M+H)。
实施例26
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(1-氰基环丁基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(26)的合成：
Figure BDA0000083236130001481
题示化合物26一般如实施例2中描述般制备，在实施例2的步骤4中用1-(4-羟基苯基)环丁腈代替苯酚。未分离烷化中间体。酯水解在环境温度下执行，最终产物经历一次额外的MeOH洗涤，以提供所需产物26，产率45％：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.72(1H，s)，8.02(1H，m)，7.78(1H，d)，7.67(1H，m)，7.41(6H，m)，6.95(2H，m)，4.84(2H，s)，3.99(2H，t)，3.72(2H，t)，3.17(2H，m)，3.03(2H，t)，2.69(2H，m)，2.56(2H，m)，2.23(2H，m)，1.97(2H，m)；MS(ESI(+))：m/z 650(M+H)。
实施例27
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(1，2，3，5，6，7-六氢吡啶并[3，2，1-ij]喹啉-8-氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(27)的合成：
题示化合物27一般如实施例2中描述般制备，在实施例2的步骤4中用1，2，3，5，6，7-六氢吡啶并[3，2，1-ij]喹啉-8-醇代替苯酚。酯水解前未分离烷化中间体。用1N HCl沉淀后，最终产物通过柱色谱用硅胶进一步纯化，用含0到12％MeOH的CH2Cl2梯度洗脱，以提供化合物27，产率20％：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.90(1H，s)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.67(1H，d)，7.43(4H，m)，6.61(1H，d)，6.09(1H，d)，4.82(2H，s)，3.86(2H，t)，3.72(2H，t)，3.17(2H，t)，3.00(6H，m)，2.58(4H，m)，1.96(2H，m)，1.81(4H，m)；MS(ESI(+))：m/z 666(M+H)。
实施例28
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(2-(((5，6-二甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-1-基)甲基)(丙基)氨基)乙基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(28)的合成：
Figure BDA0000083236130001491
题示化合物28一般如实施例2中描述般制备，在实施例2的步骤4中用4-(2-(((5，6-二甲氧基-1，2，3，4-四氢萘-1-基)甲基)(丙基)氨基)乙基)苯酚HCl代替苯酚。酯水解前未分离烷化中间体。所需产物沉淀后，固体通过HPLC纯化(预制备反相HPLC用自动化Gilson HPLC系统执行，使用SymmetryPrep Shield RP18预制备柱，250mmx21.20mm i.d.，10um，流速25mL/min；λ＝214、245nm；流动相A，含0.1％TFA的H2O；流动相B，CH3CN；40分钟内，B的线性梯度0-90％)，以提供题示化合物，产率7％：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 12.87(1H，s)，8.91(1H，s)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.67(1H，d)，7.47(2H，m)，7.36(2H，m)，7.25(1H，d)，7.18(1H，d)，6.97(1H，m)，6.89(3H，m)，4.83(2H，s)，3.96(2H，m)，3.77(3H，d)，3.72(2H，t)，3.67(3H，d)，3.26(6H，m)，3.16(3H，m)，3.03(2H，t)，2.91(2H，m)，2.72(1H，m)，2.58(1H，m)，1.99(2H，m)，1.74(6H，m)，0.94(3H，m)。MS(ESI(+))：m/z 860(M+H)。
实施例29
5-(3-(4-(4-(苯并[d]噻唑-2-基)哌嗪-1-基)-2-甲基苯氧基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(29)的合成：
题示化合物29一般如实施例2中描述般制备，在实施例2的步骤4中用4-(4-(苯并[d]噻唑-2-基)哌嗪-1-基)-2-甲基苯酚2HCl代替苯酚。酯水解前未分离烷化中间体。沉淀所需产物后，固体通过HPLC纯化(预制备反相HPLC用自动化Gilson HPLC系统执行，使用SymmetryPrep Shield RP18预制备柱，250mmx21.20mm i.d.，10um，流速25mL/min；λ＝214、245nm；流动相A，含0.1％TFA的H2O；流动相B，CH3CN；40分钟内，B的线性梯度0-90％)，以提供题示化合物29，产率12％：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 12.87(1H，s)，8.03(1H，d)，7.78(2H，t)，7.66(1H，d)，7.47(2H，m)，7.44(1H，m)，7.36(2H，m)，7.29(1H，m)，7.08(1H，m)，6.94(1H，d)，6.54(1H，d)，6.43(1H，dd)，4.82(2H，s)，3.99(2H，t)，3.72(2H，t)，3.68(4H，m)，3.21(6H，m)，3.02(2H，t)，2.03(3H，s)，2.00(2H，m)；MS(ESI(+))：m/z 802(M+H)。
实施例30
(E)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(3-(2-氰基乙烯基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(30)的合成：
Figure BDA0000083236130001511
题示化合物30一般如实施例2中描述般制备，在实施例2的步骤4中用(E)-3-(2-(1，2，4-噁二唑-3-基)乙烯基)苯酚代替苯酚。除了所需烷化以外，NaH与噁二唑基部分反应，导致形成了氰基部分来替代噁二唑基部分。这一中间体未在酯水解前分离，酯水解在环境温度下执行。所需产物沉淀后，固体通过HPLC纯化(预制备反相HPLC用自动化Gilson HPLC系统执行，使用SymmetryPrep Shield RP18预制备柱，250mmx21.20mm i.d.，10um，流速25mL/min；λ＝214、245nm；流动相A，含0.1％TFA的H2O；流动相B，CH3CN；40分钟内，B的线性梯度0-90％)，以提供题示化合物30，产率14％：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 12.87(1H，s)，12.55(1H，s)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.67(1H，d)，7.58(1H，d)，7.47(2H，m)，7.37(2H，m)，7.30(1H，d)，7.22(1H，m)，7.18(1H，d)，7.00(1H，dd)，6.47(1H，d)，4.82(2H，s)，4.01(2H，t)，3.72(2H，t)，3.18(2H，m)，3.03(2H，t)，2.01(2H，m)。MS(ESI(+))：m/z 622(M+H)。
实施例31
5-(3-(4-(5-氨基-4-氰基-1H-吡唑-3-基)苯氧基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(31)的合成：
Figure BDA0000083236130001521
步骤1：4-(苄氧基)苯甲酰氯(31A)的制备：
Figure BDA0000083236130001522
4-(苄氧基)苯甲酸(4.73g，20.72mmol)在CH2Cl2(50mL)中悬浮。悬浮液冷却到0℃。向该悬浮液中加入乙二酰氯(3.63mL，41.4mmol)，接着滴加N，N-二甲基甲酰胺(0.24mL，3.11mmol)。反应搅拌16小时。反应混合物减压浓缩，用甲苯稀释，减压浓缩。分离的固体直接用于下一反应，无需进一步纯化。
步骤2：2-(4-(苄氧基)苯甲酰)丙二腈(31B)的制备：
Figure BDA0000083236130001531
NaH(1.657g，60％，41.4mmol)在THF(10mL)中悬浮。在0℃在10分钟内向该悬浮液中滴加含丙二腈(1.368g，20.71mmol)的THF(10mL)。悬浮液搅拌另外20分钟。向该溶液中分批加入含化合物31A(5.11g，20.71mmol)的THF(40mL)。然后，溶液升温至室温，搅拌30分钟。用浓HCl将溶剂的pH调到1。反应混合物浓缩，在水和EtOAc之间分离。用额外的EtOAc萃取水层。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，减压浓缩。残余物用1∶1Hex/EtOAc(50mL)研磨，得到固体，其通过过滤收集，以提供3.7g所需产物31B：1H NMR(DMSO-d6)：δ7.60-7.63(m，2H)，7.32-7.47(m，5H)，7.03-7.07(m，2H)，5.16(s，2H)。MS(DCI(+))：m/z 294(M+NH4)。
步骤3：2-((4-(苄氧基)苯基)(甲氧基)亚甲基)丙二腈(31C)的制备：
Figure BDA0000083236130001541
化合物31B(3.7g，13.39mmol)在1，4-二氧杂环己烷(30mL)和水(5mL)中溶解。向该溶液中分批加入碳酸氢钠(9.0g，107mmol)，以控制气体形成。向得到的悬浮液中加入硫酸二甲酯(8.96mL，94mmol)。反应加热回流2小时。反应混合物浓缩，在水和EtOAc之间分离。用额外的EtOAc萃取水层。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，减压浓缩。残余物通过快速柱色谱用硅胶纯化，用7∶3/己烷∶EtOAc洗脱，以提供3.1g所需产物：1H NMR(DMSO-d6)：δ7.64-7.68(m，2H)，7.34-7.69(m，5H)，7.22-7.26(m，2H)，5.22(s，2H)，3.92(s，3H)。MS(DCI(+))：m/z 308(M+NH4)。
步骤4：5-氨基-3-(4-(苄氧基)苯基)-1H-吡唑-4-腈(31D)的制备：
Figure BDA0000083236130001542
化合物31C(3.1g，10.68mmol)在EtOH(20mL)中溶解。向该溶液中加入水合肼(0.622mL，12.81mmol)。反应加热回流2小时。除去溶剂，残余物溶解到EtOAc中。然后用水、盐水洗涤它，用MgSO4干燥，减压浓缩，以提供2.72g所需产物：1H NMR(DMSO-d6)：δ12.64和11.99(s，1H)，7.71-7.74(m，2H)，7.32-7.48(m，5H)，7.09-7.10(br，2H)，6.38(s，2H)，5.15(s，2H)。MS(DCI(+))：m/z 291(M+H)。
步骤5：5-氨基-3-(4-(苄氧基)苯基)-4-氰基-1H-吡唑-1-羧酸叔丁酯(31E)的制备：
Figure BDA0000083236130001551
在室温下向化合物31D(1.6g，5.51mmol)和二碳酸二叔丁酯(1.44g，6.61mmol)在THF(15mL)中的混合物，加入N，N-二甲基吡啶-4-胺(0.808g，6.61mmol)。反应混合物搅拌1小时。除去溶剂，残余物通过快速柱色谱用硅胶纯化，用5∶1/己烷∶EtOAc洗脱，以提供2.03g所需产物：1H NMR(DMSO-d6)：δ7.78(d，J＝8.9Hz，2H)，7.68(s，2H)，7.32-7.48(m，5H)，7.15(d，J＝8.9Hz，2H)，5.17(s，2H)，1.59(s，9H)。MS(DCI(+))：m/z 391(M+H)。
步骤6：5-氨基-4-氰基-3-(4-羟基苯基)-1H-吡唑-1-羧酸叔丁酯(31F)的制备：
化合物31E(1.3g，3.33mmol)和Pd/C(0.071g)在EtOH(15mL)中的混合物在室温下用氢气球氢化6小时。除去溶剂，残余物通过快速柱色谱用硅胶纯化，用1∶1/己烷∶EtOAc洗脱，以提供0.85g所需产物31F：1H NMR(DMSO-d6)：δ9.88(s，1H)，7.67(d，J＝8.9Hz，2H)，7.64(s，2H)，6.87(d，J＝8.9Hz，2H)，1.59(s，9H)。MS(DCI(+))：m/z 301(M+H)。
步骤7：题示化合物31的制备：
在0℃向含化合物31F(0.132g，0.44mmol)的DMF(4mL)加入60％氢化钠(0.048g，1.2mmol)。溶液搅拌10分钟。向该溶液中加入化合物2C。溶液在室温下搅拌2小时。溶液用浓HCl(0.5mL)稀释，在60℃加热30分钟。混合物用DMSO(5mL)和MeOH(9mL)稀释。滤去固体。滤液然后通过预制备HPLC纯化，以提供12mg所需产物：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.03(d，J＝7.98Hz，1H)，7.79(d，J＝7.98Hz，1H)，7.67-7.71(m，4H)，7.33-7.49(m，5H)，7.00(d，J＝8.59Hz，2H)，4.84(s，2H)，4.03(t，J＝5.98Hz，2H)，3.71-3.74(m，2H)，3.17-3.20(m，2H)，3.01-3.05(m，2H)，2.02(m，2H)。MS(ESI(+))：677(M+H)。
实施例32
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-氰基-3-(4-羟基苯基)-1H-吡唑-5-基氨基)丙基)噻唑-4-羧酸(32)的合成：
题示化合物32作为化合物31的合成的副产物分离：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.02(d，J＝7.67Hz，1H)，7.79(d，J＝7.98Hz，1H)，7.67(d，J＝7.67Hz，1H)，7.59-7.61(m，2H)，7.33-7.49(m，5H)，6.80-6.82(m，2H)，4.84(s，2H)，4.03(t，J＝5.98Hz，2H)，3.93-3.95(m，2H)，3.71-3.74(m，2H)，3.02-3.08(m，4H)，1.94-1.98(m，2H)。MS(ESI(+))：677(M+H)。
实施例33
5-(3-(4-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯氧基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(33)的合成：
Figure BDA0000083236130001571
步骤1：5-氨基-1-(3-溴苯基)-1H-吡唑-4-羧酸(33A)的制备：
Figure BDA0000083236130001572
化合物33A使用实施例21的步骤1中描述的相同程序制备，用3-溴苯基肼盐酸盐代替4-溴苯基肼盐酸盐：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 12.13(1H，s)，7.74(1H，t)，7.70(1H，s)，7.57-7.62(2H，m)，7.49(1H，t)，6.41(2H，s)。
步骤2：1-(3-溴苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(33B)的制备：
化合物33B使用实施例21的步骤2中描述的相同程序制备，用化合物33A代替化合物21A：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm9.49(1H，s)，9.20(1H，s)，8.71(1H，s)，8.51(1H，t)，8.25-8.30(1H，m)，7.55-7.63(2H，m)。
步骤3：1-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(33C)的制备：
Figure BDA0000083236130001582
题示化合物33C使用实施例21的步骤3中描述的相同程序制备，用化合物33B代替化合物21B：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm9.48(1H，s)，9.18(1H，s)，8.68(1H，s)，8.47(1H，d)，8.36-8.40(1H，m)，7.68-7.71(1H，m)，7.64(1H，t)，1.34(12H，s)。
步骤4：3-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯酚(33D)的制备：
Figure BDA0000083236130001583
题示化合物33D使用实施例21的步骤4中描述的相同程序制备，用化合物33C代替化合物21C：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm9.86(1H，s)，9.46(1H，s)，9.16(1H，s)，8.64(1H，s)，7.72(1H，t)，7.67-7.70(1H，m)，7.38(1H，t)，6.80(1H，dd)。
步骤5：题示化合物33的制备：
题示化合物33使用实施例21的步骤5中描述的相同程序制备，用化合物33D代替化合物21D：1H NMR(500MHz，DMSO-D6)δppm12.89(1H，s)，12.53(1H，s)，9.46(1H，s)，9.15(1H，s)，8.64(1H，s)，8.02(1H，d)，7.76-7.84(3H，m)，7.66(1H，d)，7.33-7.49(5H，m)，6.93-6.97(1H，m)，4.82(2H，s)，4.09(2H，t)，3.72(2H，t)，3.18-3.26(2H，m)，3.02(2H，t)，2.01-2.13(2H，m)；LCMS(APCI)：m/z 687(M+H)。
实施例34
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(4-(羟甲基)苯基)噻唑-4-羧酸(34)的合成：
Figure BDA0000083236130001591
步骤1：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸乙酯(34A)的制备：
化合物34A用与实施例1的步骤3的合成类似的方式制备，用2-氯噻唑-4-羧酸乙酯代替2-氯噻唑-4-羧酸甲酯：MS(ESI(+))：465(M+H)。
步骤2：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-溴噻唑-4-羧酸乙酯(34B)的制备：
Figure BDA0000083236130001602
向含化合物34A的乙腈，加入1.05当量的NBS。反应混合物在室温下搅拌2小时。除去溶剂，残余物通过柱色谱用硅胶纯化，用3∶2己烷/EtOAc洗脱，以提供所需产物：MS(ESI(+))：544(M+H)。
步骤3：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-溴噻唑-4-羧酸乙酯(34C)的制备：
在室温下向化合物34B(0.815g，1.5mmol)和SEMCl(0.318mL，1.8mmol)在THF(6mL)中的混合物中，加入TEA(0.65mL，4.5mmol)。反应混合物搅拌20分钟，减压浓缩，通过柱色谱用硅胶纯化，用3∶1/己烷∶EtOAc洗脱，以提供0.95g所需产物，为两种不可分离的异构体的混合物：MS(ESI(+))：m/z 657(M+H)。
步骤4：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(4-(羟甲基)苯基)噻唑-4-羧酸乙酯(34D)的制备：
Figure BDA0000083236130001612
化合物34C(0.135g，0.2mmol)、4-(羟甲基)苯基硼酸(0.033g，0.22mmol)、Pd(PPh3)4(0.012g，0.01mmol)和CsF(0.091g，0.6mmol)在DME(2mL)和MeOH(1mL)中的混合物，在微波条件下加热(110℃，20分钟)。浓缩反应混合物，在水和EtOAc之间分离。用额外的EtOAc萃取水层。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，减压浓缩。残余物通过快速柱色谱用硅胶纯化，用1∶1/己烷∶EtOAc洗脱，以提供0.085g所需产物34D，它也是两种位置异构体的混合物。MS(ESI(+))：m/z 701(M+H)。
步骤5：题示化合物34的制备：
向含化合物34D(0.14g)的1，4-二氧杂环己烷(2mL)中，加入含4NHCl的1，4-二氧杂环己烷(2mL)和MeOH(0.5mL)。溶液在室温下搅拌1小时，减压浓缩，加入在1，4-二氧杂环己烷(2mL)中的1.0N LiOH(2mL)。溶液在60℃搅拌1小时，减压浓缩，通过预制备HPLC纯化，以提供所需产物34：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.02(d，J＝7.98Hz，1H)，7.79(d，J＝7.98Hz，1H)，7.69(d，J＝7.36Hz，1H)，7.29-7.49(m，8H)，4.90(s，2H)，4.50(s，2H)，3.78(t，J＝5.98Hz，2H)，3.98(t，J＝5.98Hz，2H)；MS(ESI(+))：m/z 543(M+H)。
实施例35
5-(4-((4-(5-氨基-4-氰基-1H-吡唑-3-基)苯氧基)甲基)苯基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(35)的合成：
步骤1：5-(4-((4-(5-氨基-1-(叔丁氧基羰基)-4-氰基-1H-吡唑-3-基)苯氧基)甲基)苯基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸乙酯(35A)的制备：
Figure BDA0000083236130001631
化合物34D(0.14g，0.2mmol)、PPh3(0.079g，0.3mmol)和化合物31F(0.066g，0.022mmol)的混合物在THF(3mL)中溶解。溶液冷却到0℃。向该溶液中加入DBAD。反应混合物在室温下搅拌2小时。除去溶剂，残余物通过快速柱色谱用硅胶纯化，用2∶1/己烷∶EtOAc洗脱，以提供0.13g题示化合物，为两种不可分离的异构体的混合物。MS(ESI(+))：m/z 982(M+NH4-H2O)。
步骤2：题示化合物35的制备：
题示化合物35用与实施例34的合成类似的方式制备，用化合物35A代替化合物34D：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.02(d，J＝7.67Hz，1H)，7.79(d，J＝8.29Hz，1H)，7.68-7.74(m，3H)，7.37-7.49(m，9H)，7.12(d，J＝8.59Hz，2H)，4.90(s，2H)，5.16(s，2H)，4.91(s，2H)，3.79(t，J＝5.98Hz，2H)，3.08(t，J＝5.83Hz，2H)。MS(ESI(+))：m/z 725(M+H)。
实施例36
5-(3-(3-(5-氨基-4-氰基-1H-吡唑-3-基)苯氧基)丙-1-炔基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(36)的合成：
步骤1：5-氨基-4-氰基-3-(3-羟基苯基)-1H-吡唑-1-羧酸叔丁酯(36A)的制备：
Figure BDA0000083236130001642
化合物36A用与化合物31F的合成类似的方式制备，用3-(苄氧基)苯甲酸代替4-(苄氧基)苯甲酸：1H NMR(DMSO-d6)：δ9.70(s，1H)，7.68(s，2H)，7.25-7.32(m，3H)，6.86-6.89(m，1H)，1.60(s，9H)。MS(ESI(+))：m/z 322(M+Na)。
步骤2：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-羟基丙-1-炔基)噻唑-4-羧酸乙酯(36B)的制备：
Figure BDA0000083236130001651
化合物34C(0.38g，0.564mmol)、丙-2-炔-1-醇(0.047g，0.846mmol)、CuI(0.011g，0.056mmol)、Et3N(1.57mL，11mmol)和Pd(PPh3)2Cl2(0.02g，0.028mmol)在DMF(2mL)中的混合物，在90℃加热2小时。冷却后，用CH2Cl2稀释反应混合物。滤去固体。浓缩滤液。残余物通过快速柱色谱用硅胶纯化，用3∶2/己烷∶EtOAc洗脱，以提供0.19g所需产物36B，为两种不可分离的异构体的混合物：MS(ESI(+))：m/z 649(M+H)。
步骤3：5-(3-(3-(5-氨基-1-(叔丁氧基羰基)-4-氰基-1H-吡唑-3-基)苯氧基)丙-1-炔基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸乙酯(36C)的制备：
Figure BDA0000083236130001652
化合物36C用与化合物35A的合成类似的方式制备，分别用化合物36B和化合物36A代替化合物34D和化合物31F，为两种不可分离的异构体的混合物：MS(ESI(+))：m/z 932(M+H)。
步骤4：题示化合物36的制备：
题示化合物36用与化合物34的合成类似的方式制备，在实施例34的步骤5中用化合物36C代替化合物34D：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.03(d，J＝7.93Hz，1H)，7.79(d，J＝7.93Hz，1H)，7.66-7.68(m，1H)，7.35-7.48(m，8H)，5.08(s，2H)，4.91(s，2H)，3.70-3.73(m，2H)，3.46-3.49(m，2H)，3.05-3.07(m，2H)。MS(ESI(+))：m/z 670(M-H)。
实施例37
5-(4-((3-(5-氨基-4-氰基-1H-吡唑-3-基)苯氧基)甲基)苯基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(37)的合成：
Figure BDA0000083236130001661
步骤1：5-(4-((3-(5-氨基-1-(叔丁氧基羰基)-4-氰基-1H-吡唑-3-基)苯氧基)甲基)苯基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸乙酯(37A)的制备：
Figure BDA0000083236130001671
题示化合物37A用与化合物35A的合成类似的方式制备，用化合物36A代替化合物31F，得到两种不可分离的异构体的混合物：MS(ESI(+))：m/z 984(M+H)。
步骤2：题示化合物37的制备：
题示化合物37用与化合物34的合成类似的方式制备，用化合物37A代替化合物34D：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.02(d，J＝7.36Hz，1H)，7.78(d，J＝7.98Hz，1H)，7.33-7.49(m，11H)，7.05-7.08(m，1H)，5.15(s，2H)，4.91(s，2H)，3.78(t，J＝6.14Hz，2H)，3.08(t，J＝5.83Hz，2H)。MS(ESI(+))：m/z 725(M+H)。
实施例38
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-羟丙基)噻唑-4-羧酸(38)的合成：
Figure BDA0000083236130001672
步骤1：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸甲酯(38A)的制备：
Figure BDA0000083236130001681
向2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸甲酯(14g，31.1mmol)在THF(150mL)中的溶液中，加入TEA(6.3g，62.1mmol)和2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基甲基氯(7.77g，46.6mmol)。混合物在室温下搅拌4h。混合物用EtOAc(400mL)稀释，用3％HCl、水和盐水洗涤。蒸发溶剂，得到18.2g产物。LC/MS(APCI)：m/z 580.9(M+H)。
步骤2：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸叔丁酯(38B)的制备：
Figure BDA0000083236130001682
向2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸甲酯(38A)(14g，24.1mmol)在乙酸叔丁酯(200mL)中的搅拌溶液中，在真空条件下加入2mL THF中的t-BuOK(2M)。在真空条件下3x2mL t-BuOK加入到搅拌溶液中以驱动反应完成。混合物然后酸化至中性，用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，减压浓缩。粗材料通过柱色谱用硅胶纯化，用含5％EtOAc的己烷洗脱，以提供3.5g所需产物38B：1H NMR(300MHz，CDCl3)δppm 8.29(1H，m)，7.71(1H，d)，7.62(2H，m)，7.49(2H，t)，7.34(3H，m)，6.02(2H，s)，5.20(2H，s)，4.02(2H，m)，3.71(3H，m)，3.08(2H，m)，1.59(9H，t)，0.97(2H，m)，-0.09(9H，m)。MS(ESI(+))：m/z 623.0(M+H)。
步骤3：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-碘噻唑-4-羧酸叔丁酯(38C)的制备：
Figure BDA0000083236130001691
向2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸叔丁酯(38B)(2.2g，3.53mmol)在DCM(30mL)中的溶液中，加入NIS(0.795g，3.53mmol)。混合物在室温下搅拌过夜。混合物然后用EtOAc(300mL)稀释，用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，减压浓缩。粗材料通过柱色谱用硅胶纯化，用含5％EtOAc的己烷洗脱，以提供2.6g所需产物。LC/MS(APCI)：m/z 749.2(M+H)。
步骤4：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-羟基丙-1-炔基)噻唑-4-羧酸叔丁酯(38D)的制备：
Figure BDA0000083236130001701
向2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-碘噻唑-4-羧酸叔丁酯(38C)(2.5g，3.34mmol)和丙-2-炔-1-醇(562mg，10mmol)在THF(20mL)中的溶液中，加入Pd(Ph3P)4(193mg，0.167mmol)、CuI(64mg，0.334mmol)、DIEA(863mg，6.7mmol)。混合物在室温下在氮气中搅拌过夜。混合物然后用DCM(400mL)稀释，用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，减压浓缩。粗材料通过柱色谱用硅胶柱纯化，用含5％MeOH的DCM洗脱，以提供2.0g(88％)所需产物：1H NMR(300MHz，CDCl3)δppm8.31(1H，m)，7.72(1H，d)，7.59(1H，m)，7.49(1H，d)，7.34(3H，m)，6.01(2H，s)，5.18(2H，s)，4.53(2H，d)，4.00(2H，t)，3.74(2H，t)，3.07(2H，t)，1.61(9H，s)，0.98(2H，t)，0.01(9H，m)。MS(ESI(+))：m/z 677(M+H)。
步骤5：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-羟丙基)噻唑-4-羧酸叔丁酯(38E)的制备：
Figure BDA0000083236130001711
向2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-羟基丙-1-炔基)噻唑-4-羧酸甲酯(38D)(2.0g，3.96mmol)在EtOAc(20mL)中的溶液中，加入PtO2(240mg，1.1mmol)。混合物在室温下在氢气(气球)下搅拌过夜。然后过滤混合物，减压浓缩滤液，以提供所需产物38E：1H NMR(300MHz，CDCl3)δppm 8.30(1H，m)，7.71(1H，d)，7.59(1H，m)，7.49(1H，m)，7.35(3H，m)，6.00(2H，s)，5.14(2H，s)，3.95(2H，m)，3.75(2H，t)，3.63(2H，m)，3.17(2H，t)，3.07(2H，t)，2.40(1H，t)，1.89(2H，m)，1.58(9H，d)，0.98(2H，t)，0.01(9H，m)。MS(ESI(+))：m/z 681(M+H)。
步骤6：题示化合物38的制备：
Figure BDA0000083236130001712
向2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-羟丙基)噻唑-4-羧酸叔丁酯(38E)(68mg，0.1mmol)在DCM(2mL)中的溶液中，加入2mL含2NHCl的乙醚。混合物在室温下搅拌过夜。向混合物中加入MeOH(0.5mL)以溶解固体。混合物在室温下搅拌另外2小时。减压浓缩反应混合物，以提供所需产物，为HCl盐：1H NMR(300MHz，DMSO-D6)δppm 8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.67(1H，d)，7.41(5H，m)，4.83(2H，s)，3.73(4H，t)，3.50(2H，t)，3.41(2H，t)，3.04(4H，t)，1.69(2H，m)。MS(ESI(+))：m/z 495(M+H)。
实施例39
5-(3-(3-(5-氨基-4-氰基-1H-吡唑-3-基)苯氧基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(39)的合成：
步骤1：5-(3-(3-(5-氨基-1-(叔丁氧基羰基)-4-氰基-1H-吡唑-3-基)苯氧基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸叔丁酯(39A)的制备：
Figure BDA0000083236130001722
题示化合物39A用与化合物35A的合成类似的方式制备，分别用化合物38E和化合物36A代替化合物34D和化合物31F，为两种不可分离的异构体的混合物：MS(ESI(+))：934(M+H)。
步骤2：题示化合物39的制备：
题示化合物39用与实施例34的步骤5中描述的程序类似的方式制备，用化合物39A代替化合物34D：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.03(d，J＝7.98Hz，1H)，7.79(d，J＝7.67Hz，1H)，7.65-7.67(m，2H)，7.32-7.49(m，6H)，6.94-6.96(m，1H)，4.84(s，2H)，4.01(t，J＝6.14Hz，2H)，3.70-3.73(m，4H)，3.19(t，J＝7.52Hz，2H)，3.01-3.03(m，2H)，2.01-2.05(m，2H)。MS(ESI(+))：m/z 677(M+H)。
实施例40
5-(3-(4-(5-氨基-4-氰基-1H-吡唑-3-基)苯氧基)丙-1-炔基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(40)的合成：
Figure BDA0000083236130001731
步骤1：5-(3-(4-(5-氨基-1-(叔丁氧基羰基)-4-氰基-1H-吡唑-3-基)苯氧基)丙-1-炔基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基(叔丁氧基羰基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸乙酯(40A)的制备：
Figure BDA0000083236130001741
化合物40A用与实施例35的步骤1中描述的合成类似的方式制备，用化合物36B代替化合物34D，为两种不可分离的异构体的混合物：MS(ESI(+))：m/z 932(M+H)。
步骤2：题示化合物40的制备：
题示化合物40用与化合物34的合成类似的方式制备，用化合物40A代替化合物34D：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.03(d，J＝7.98Hz，1H)，7.60-7.80(m，5H)，7.34-7.50(m，6H)，7.32-7.49(m，6H)，7.12(d，J＝8.9Hz，2H)，5.10(s，2H)，4.91(s，2H)，3.73-3.75(m，2H)，3.05-3.07(m，2H)。MS(ESI(+))：m/z 673(M+H)。
实施例41
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(吡啶-3-基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(41)的合成：
步骤1：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-碘苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸叔丁酯(41A)的制备：
Figure BDA0000083236130001751
向2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-羟丙基)噻唑-4-羧酸叔丁酯(92mg，0.135mmol)、三苯基膦(35.4mg，0.135mmol)和4-碘苯酚(29.7mg，0.135mmol)在THF(2mL)中的溶液中，加入DBAD(32mg，0.135mmol)。混合物在室温下搅拌4小时。LC/MS显示预期产物为单峰。混合物用EtOAc稀释，用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，减压浓缩。粗材料通过柱色谱用硅胶纯化，用含3％EtOAc的己烷洗脱，以提供110mg(92％)所需产物：1H NMR(300MHz，CDCl3)δppm 8.30(1H，m)，7.72(1H，d)，7.54(4H，m)，7.34(3H，m)，6.67(2H，d)，6.00(2H，s)，5.14(2H，s)，3.96(4H，m)，3.75(2H，t)，3.22(2H，t)，3.06(2H，t)，2.13(2H，m)，1.59(9H，s)，0.97(2H，t)，0.01(9H，m)。MS(ESI(+))：m/z 833(M+H)。
步骤2：题示化合物41的制备：
向2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-碘苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸叔丁酯(20mg，0.023mmol)和吡啶-3-硼酸(41A)(2.83mg，0.23mmol)在DME/MeOH(2∶1，3mL)中的混合物中，加入Pd(Ph3P)4(1.37mg，0.115umol)和CsF(12mg，0.069mmol)。混合物在100℃在微波加热(Smith合成器)下搅拌30分钟。混合物用EtOAc(200mL)稀释，用水、盐水洗涤，用Na2SO4干燥，减压浓缩。粗材料通过柱色谱纯化，用含5％EtOAc的己烷洗脱，以提供17mg(90％)产物，其立即使用实施例38中描述的相同程序去保护，以提供题示化合物41：1H NMR(300MHz，DMSO-D6)δppm 9.15(1H，s)，8.77(1H，d)，8.71(1H，d)，8.02(1H，d)，7.98(1H，m)，7.80(2H，d)，7.67(1H，d)，7.41(5H，m)，7.10(2H，d)，4.84(2H，m)，4.07(2H，m)，3.73(2H，m)，3.21(4H，m)，3.04(2H，t)，2.06(2H，m)。MS(ESI(+))：m/z 648(M+H)。
实施例42
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(4-苯氧基丁基)噻唑-4-羧酸(42A)的合成：
Figure BDA0000083236130001761
步骤1：3-溴-7-氯-2-氧庚酸乙酯(42A)的制备：
Figure BDA0000083236130001771
题示化合物42A通过在实施例2的步骤1用7-氯-2-氧庚酸乙酯代替6-氯-2-氧己酸乙酯制备：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm5.18(1H，dd)，4.29(2H，q)，3.66(2H，t)，2.03(1H，m)，1.90(1H，m)，1.78(2H，m)，1.63(1H，m)，1.48(1H，m)，1.29(3H，t)。
步骤2：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(4-氯丁基)噻唑-4-羧酸乙酯(42B)的制备：
Figure BDA0000083236130001772
题示化合物42B通过在实施例2的步骤2用化合物42A代替化合物2A制备：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.88(1H，s)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.66(1H，d)，7.42(4H，m)，4.82(2H，s)，4.19(2H，q)，3.72(2H，t)，3.63(2H，t)，3.03(4H，m)，1.70(4H，m)，1.20(3H，t)。
步骤3：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(4-碘丁基)噻唑-4-羧酸乙酯(42C)的制备：
Figure BDA0000083236130001781
题示化合物42C通过在实施例2的步骤3用化合物42B代替化合物2B制备：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.89(1H，s)，8.04(1H，d)，7.79(1H，d)，7.66(1H，d)，7.41(4H，m)，4.82(2H，s)，4.19(2H，q)，3.72(2H，t)，3.27(2H，t)，3.03(4H，m)，1.77(2H，m)，1.63(2H，m)，1.20(3H，t)。
步骤4：题示化合物42的制备：
题示化合物42通过在实施例2的步骤4用化合物42C代替化合物2C制备：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 12.86(1H，s)，8.02(1H，d)，7.78(1H，d)，7.66(1H，d)，7.46(2H，m)，7.36(2H，m)，7.23(2H，t)，6.88(3H，m)，4.81(2H，s)，3.94(2H，t)，3.72(2H，t)，3.09(2H，m)，3.02(2H，t)，1.70(4H，m)。MS(ESI(+))：m/z 585(M+H)。
实施例43
5-(4-(4-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯氧基)丁基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(43)的合成：
Figure BDA0000083236130001791
题示化合物43使用实施例21中描述的相同程序制备，用化合物42C代替化合物2C：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 12.87(1H，s)，9.45(1H，s)，9.10(1H，s)，8.61(1H，s)，7.92-8.10(3H，m)，7.78(1H，d)，7.67(1H，d)，7.42-7.48(2H，m)，7.31-7.41(2H，m)，7.07-7.16(2H，m)，4.83(2H，s)，4.05(2H，t)，3.73(2H，t)，3.12(2H，t)，3.03(2H，t)，1.68-1.83(4H，m)。LCMS(APCI)703(M+H)。
实施例44
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(4-(异丙基氨基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(44)的合成：
步骤1：5-氨基-1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑-4-羧酸乙酯(44A)的制备
Figure BDA0000083236130001801
2-氰基-3-乙氧基丙烯酸(Z)-乙酯(9.64g，57.0mmol)、4-甲氧基苯基肼盐酸盐(9.95g，57.0mmol)和Na2CO3(6.04g，57.0mmol)在EtOH(480mL)中的混合物回流5h并在室温下搅拌过夜。滤去不溶的材料，浓缩滤液，固体沉淀。收集沉淀，用MeOH洗涤，并用水广泛洗涤。干燥浅色固体，以提供所需产物：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 7.65(1H，s)，7.42(2H，d)，7.07(2H，d)，6.15(2H，s)，4.14-4.26(2H，m)，3.81(3H，s)，1.27(3H，t)。
步骤2：1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4(3aH)-酮(44B)的制备：
Figure BDA0000083236130001802
化合物44A(7g，26.8mmol)和甲酰胺(64.1mL，1607mmol)的混合物在180℃加热过夜并冷却。收集沉淀，用水洗涤，干燥，以提供所需产物：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 12.35(1H，s)，8.28(1H，s)，8.15(1H，s)，7.85-7.93(2H，m)，7.09-7.14(2H，m)，3.82(3H，s)。
步骤3：4-氯-1-(4-甲氧基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶(44C)的制备：
Figure BDA0000083236130001811
化合物44B(2g，8.26mmol)和磷酰氯(11.51mL，124mmol)的混合物在100℃加热2h并冷却。反应混合物缓慢倒到冰上。收集沉淀，用水洗涤，干燥，以提供所需产物。MS(APCI)：m/z 261(M+H)。
步骤4：4-(4-(异丙基氨基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯酚(44D)的制备：
Figure BDA0000083236130001812
向化合物44C(388mg，1.48mmol)和丙-2-胺(0.14mL，1.63mmol)在THF(10mL)中的混合物中，加入TEA(0.456mL，3.27mmol)。得到的混合物在30℃搅拌过夜，用EtOAc稀释。有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，减压浓缩，干燥。向粗材料中加入含三甲基碘硅烷(1.0mL，7.06mmol)的环丁砜(5mL)。反应混合物在80℃加热过夜。将反应缓慢倒入冰-水(5mL)中。收集沉淀，用水洗涤，通过反相HPLC纯化(流动相：含0％-50％乙腈的0.1％TFA水溶液，40分钟内)，以提供题示化合物：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 9.68(1H，s，br)，8.55(1H，s，br)，8.39(1H，s)，8.35(1H，s)，7.82(2H，d)，6.88-6.94(2H，m)，4.34-4.46(1H，m)，1.28(6H，d)
步骤5：题示化合物44的制备：
题示化合物44使用实施例21的步骤5中描述的相同程序制备，用化合物44D代替化合物21D：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm12.87(1H，s)，8.45(1H，s)，8.39(1H，s)，8.34(1H，s)，8.01(1H，d)，7.98(2H，d)，7.79(1H，d)，7.65-7.73(2H，m)，7.43-7.49(2H，m)，7.32-7.41(2H，m)，7.07(2H，d)，4.84(2H，s)，4.09-4.20(1H，m)，4.04(2H，t)，3.73(2H，t)，3.20(2H，t)，3.03(2H，t)，2.00-2.08(2H，m)，1.28(3H，s)，1.27(3H，s)。LCMS(APCI)：m/z 746(M+H)。
实施例45
5-((4-(5-氨基-4-氰基-1H-吡唑-3-基)苯氧基)甲基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(45)的合成：
Figure BDA0000083236130001821
步骤1：N-(苯并[d]噻唑-2-基)-2-(4-氯-5-甲酰噻唑-2-基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-8-甲酰胺(45A)的制备：
Figure BDA0000083236130001822
化合物1B(3.82g，10mmol)、2，4-二氯噻唑-5-甲醛(1.82g，10mmol)和Cs2CO3(9.77g，30mmol)在DMA(30mL)中的混合物，在60℃加热8小时，冷却至室温，然后倒入水(500mL)中。通过过滤收集固体，在真空烤箱中干燥过夜(60℃)，以提供4.2g所需产物(45A)：1HNMR(DMSO-d6)：δ12.66(s，1H)，9.69(s，1H)，8.00(d，J＝7.82Hz，1H)，7.77(d，J＝8.06Hz，1H)，7.73(d，J＝7.58Hz，1H)，7.40-7.49(m，3H)，7.33-7.36(m，1H)，5.04(s，2H)，3.82(t，J＝5.92Hz，2H)，3.11(t，J＝6.16Hz，2H)。MS(ESI(+))：m/z 455(M+H)。
步骤2：(E)-2-(4-氯-5-甲酰噻唑-2-基)-N-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基)-1，2，3，4-四氢异喹啉-8-甲酰胺(45B)的制备：
Figure BDA0000083236130001831
化合物45B用与化合物34C的合成类似的方式制备，在实施例34的步骤3中用化合物45A代替化合物34B。通过用1∶4己烷∶EtOAc研磨两种异构体的混合物，分离化合物45B，为白色固体。另一种异构体从母液中分离：1H NMR(DMSO-d6)：δ9.71(s，1H)，8.24(d，J＝7.82Hz，1H)，7.92(d，J＝7.58Hz，1H)，7.70(d，J＝8.06Hz，1H)，7.53-7.56(m，1H)，7.36-7.46(m，3H)，6.01(s，2H)，5.35(s，2H)，3.85(t，J＝5.92Hz，2H)，3.72-3.75(m，2H)，3.11(t，J＝6.04Hz，2H)。MS(ESI(+))：m/z 585(M+H)。
步骤3：5-甲酰-2-(8-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(E)-甲酯(45C)：
Figure BDA0000083236130001841
在250mL SS耐压瓶中，含化合物45B(4.6g，7.86mmol)的MeOH(50mL)加入到Pd-dppf(0.288g，0.393mmol)和NEt3(2.191mL，15.72mmol)中。混合物用CO(60psi)加压，并在100℃搅拌7h。滤去固体，然后浓缩滤液。残余物通过快速柱色谱用硅胶纯化，用3∶1/己烷∶EtOAc洗脱，以提供4.45g所需产物45C：1H NMR(DMSO-d6)：δ10.16(s，1H)，8.27(d，J＝6.74Hz，1H)，7.96(d，J＝7.14Hz，1H)，7.72(d，J＝8.33Hz，1H)，7.53-7.56(m，1H)，7.37-7.42(m，3H)，6.01(s，2H)，5.32(s，2H)，3.85-3.88(m，5H)，3.66-3.71(m，2H)，3.09(t，J＝5.95Hz，2H)，0.85-0.91(m，2H)，-0.19(s，9H)。MS(ESI(+))：m/z 609(M+H)。
步骤4：5-(羟甲基)-2-(8-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(E)-甲酯(45D)的制备：
Figure BDA0000083236130001851
向在MeOH(50mL)和THF(20mL)中的化合物45C(2.08g，3.42mmol)，加入NaBH4(0.259g，6.83mmol)。反应混合物在70℃加热2小时。除去溶剂，残余物在EtOAc和水之间分离。分离有机层，用额外的EtOAc萃取水层。合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，减压浓缩。粗材料通过柱色谱用硅胶纯化，用1∶1/己烷∶EtOAc洗脱，以提供1.86g所需产物：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.24-8.26(m，1H)，7.94(d，J＝7.67Hz，1H)，7.70(d，J＝8.20Hz，1H)，7.52-7.56(m，1H)，7.34-7.42(m，3H)，6.00(s，2H)，5.77(t，J＝5.52Hz，1H)，5.13(s，2H)，4.83(d，J＝5.52Hz，2H)，3.67-3.75(m，7H)，3.03(t，J＝5.98Hz，2H)，0.87-0.91(m，2H)，-0.18(s，9H)。MS(ESI(+))：m/z 611(M+H)。
步骤5：5-((4-(5-氨基-1-(叔丁氧基羰基)-4-氰基-1H-吡唑-3-基)苯氧基)甲基)-2-(8-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(E)-甲酯(45E)的制备：
Figure BDA0000083236130001861
化合物45E用与化合物35A的合成类似的方式制备，在实施例35的步骤1中用化合物45D代替化合物34D：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.24(dd，J＝7.52，1.38Hz，1H)，7.94(d，J＝7.67Hz，1H)，7.70(d，J＝7.98Hz，1H)，7.67(s，2H)，7.53-7.57(m，1H)，7.34-7.43(m，3H)，7.10-7.14(m，2H)，6.00(s，2H)，5.57(s，2H)，5.17(s，2H)，3.81(s，3H)，3.76(t，J＝5.98Hz，2H)，3.66-3.70(m，2H)，3.04(t，J＝6.14Hz，2H)，0.85-0.89(m，2H)，-0.20(s，9H)。MS(ESI(+))：m/z 892(M+NH4-H2O)。
步骤6：题示化合物45的制备：
题示化合物45用与化合物34的合成类似的方式制备，用化合物45E代替化合物34D：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.02(d，J＝7.67Hz，1H)，7.78(d，J＝7.98Hz，1H)，7.59-7.71(m，3H)，7.33-7.48(m，4H)，7.05(d，J＝7.59Hz，1H)，6.83(d，J＝7.67Hz，1H)，5.54(s，2H)，4.77-4.86(m，4H)，3.74(t，J＝5.68Hz，2H)，3.04(t，J＝5.83Hz，2H)。MS(ESI(+))：m/z 647(M-H)。
实施例46
5-[3-(5-氨基-4-氰基-1H-吡唑-3-基)-苯氧基甲基]-2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-噻唑-4-羧酸(46)的合成：
Figure BDA0000083236130001871
步骤1：5-((3-(5-氨基-1-(叔丁氧基羰基)-4-氰基-1H-吡唑-3-基)苯氧基)甲基)-2-(8-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(E)-甲酯(46A)的制备：
Figure BDA0000083236130001872
题示化合物(46A)用与化合物35A的合成类似的方式制备，在实施例35的步骤1中分别用化合物45D和化合物36A代替化合物34D和化合物31F：LCMS(ESI(+))：m/z 892(M+NH4-H2O)。
步骤2：题示化合物46的制备：
题示化合物46用与化合物34的合成类似的方式制备，在实施例34的步骤5中用化合物46A代替化合物34D：1H NMR(DMSO-d6)：δ12.83(s，1H)，7.96(d，J＝7.93Hz，1H)，7.72(d，J＝7.93Hz，1H)，7.61(d，J＝7.32Hz，1H)，7.27-7.42(m，7H)，6.95(d，J＝7.93Hz，1H)，5.47(s，2H)，4.72-4.81(m，4H)，3.74(t，J＝5.68Hz，2H)，2.98(t，J＝5.65Hz，2H)。MS(ESI(+))：m/z 649(M+H)。
实施例47
5-{3-[4-(5-氨基-4-氰基-噻吩-3-基)-苯氧基]-丙基}-2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-噻唑-4-羧酸(47)的合成：
Figure BDA0000083236130001881
步骤1：2-(1-(4-(苄氧基)苯基)亚乙基)丙二腈(47A)的制备：
Figure BDA0000083236130001882
六甲基二硅氮烷(2.50mL，1.937g，12.0mmol)以保持内部温度低于74℃的速度，加入到含1-(4-(苄氧基)苯基)乙酮(2.263g，10mmol)的乙酸(6mL)中。添加完成后，向溶液中加入含丙二腈(1.32g，20mmol)的乙酸(6mL)。反应在90℃加热12小时。冷却后，将反应倒入冰/水中，用EtOAc萃取，干燥，减压浓缩，得到粗产物。固体用1∶9EtOAc/己烷研磨，以提供2.74g所需产物。1H NMR(DMSO-d6)：δ7.72-7.75(m，2H)，7.35-7.49(m，5H)，7.18-7.21(d，2H)，5.22(s，2H)，2.61(s，3H)。MS(ESI(+))：m/z 291(M+NH4)。
步骤2：2-氨基-4-(4-(苄氧基)苯基)噻吩-3-腈(47B)的制备：
Figure BDA0000083236130001891
向化合物47A(2.74g，9.99mmol)和硫(0.374g，11.99mmol)在THF(20mL)中的混合物中，加入碳酸氢钠(0.839g，9.99mmol)。反应混合物加热回流2小时，减压浓缩。残余物在EtOAc和水之间分离。分离有机层，用额外的EtOAc萃取水层。合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，减压浓缩。残余物通过柱色谱用硅胶纯化，用3∶1/己烷∶EtOAc洗脱，以提供2.42g所需产物：1H NMR(DMSO-d6)：δ7.33-7.48(m，7H)，7.19(s，2H)，7.07(d，J＝8.73Hz，2H)，6.42(s，1H)，5.14(s，2H)。MS(ESI(+))：m/z 307(M+H)。
步骤3：2-氨基-4-(4-羟基苯基)噻吩-3-腈(47C)的制备：
在室温下向含化合物47B(1.1g，3.59mmol)的DCM(80mL)中，加入含1.0M BBr3(36mL，36mmol)的DCM。加入时形成沉淀，在室温下搅拌2小时后逐渐消失。除去溶剂，残余物在水和EtOAc之间分离。分离有机层。用EtOAc萃取水层。合并的有机层用盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤，减压浓缩。粗材料通过柱色谱用硅胶纯化，用3∶2/己烷∶EtOAc洗脱，以提供0.65g所需产物47C：1H NMR(DMSO-d6)：δ9.58(s，1H)，7.35(d，J＝8.73Hz，2H)，7.15(s，2H)，6.80(d，J＝8.73Hz，2H)，6.34(s，1H)；MS(ESI(+))：m/z 217(M+H)。
步骤4：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-碘噻唑-4-羧酸甲酯(47D)的制备：
Figure BDA0000083236130001901
化合物47D用与化合物34C的合成类似的方式制备，在实施例34的步骤3中用化合物8C代替化合物34B：APCI(+)/LC/MS：707(M+H)。
步骤5：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-羟基丙-1-炔基)噻唑-4-羧酸甲酯(47E)的制备：
Figure BDA0000083236130001902
化合物47E用与化合物36B的合成类似的方式制备，在实施例34的步骤2中用化合物47D代替化合物34C：LCMS(APCI)：m/z 635(M+H)。
步骤6：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-羟丙基)噻唑-4-羧酸甲酯(47F)的制备：
题示化合物(47F)用与化合物8E的合成类似的方式制备，用化合物47E代替化合物8D：LC/MS(APCI)：m/z 639(M+H)。
步骤7：5-(3-(4-(5-氨基-4-氰基噻吩-3-基)苯氧基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸甲酯(47G)的制备。
Figure BDA0000083236130001912
化合物47G用与化合物35A的合成类似的方式制备，分别用化合物47F和化合物47C代替化合物34B和化合物31F：MS(ESI(+))：m/z 838(M+H)。
步骤8：题示化合物47H的制备：
题示化合物47H用与化合物34的合成类似的方式制备，用化合物47G代替化合物34D：1H NMR(DMSO-d6)：S 7.95(d，J＝7.98Hz，1H)，7.72(d，J＝7.67Hz，1H)，7.60(d，J＝6.75Hz，1H)，7.26-7.44(m，6H)，6.87-6.90(m，2H)，6.32(s，1H)，4.77(s，2H)，3.94(t，J＝6.14Hz，2H)，3.64-3.67(m，2H)，3.10-3.13(m，2H)，2.96(t，J＝5.83Hz，2H)，1.93-1.96(m，2H)。MS(ESI(+))：m/z 693(M+H)。
实施例48
5-(3-(4-(1H-吡唑-1-基)苯氧基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(48)的合成：
Figure BDA0000083236130001921
题示化合物48通过在实施例2的步骤4用4-(1H-吡唑-1-基)苯酚代替苯酚制备。酯水解前未分离烷化中间体。所需产物沉淀后，固体通过HPLC纯化(预制备反相HPLC用自动化Gilson HPLC系统执行，使用SymmetryPrep Shield RP18预制备柱，250mmx21.20mm i.d.，10um，流速25mL/min；λ＝214、245nm；流动相A，含0.1％TFA的H2O；流动相B，CH3CN；40分钟内，B的线性梯度0-90％)，以提供题示化合物48，产率29％：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm12.89(1H，s)，8.35(1H，d)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.69(4H，m)，7.42(4H，m)，7.02(2H，m)，6.49(1H，m)，4.84(2H，s)，4.02(2H，t)，3.72(2H，t)，3.19(2H，t)，3.03(2H，t)，2.02(2H，m)。MS(ESI(+))：m/z 637(M+H)。
实施例49
5-(2-(4-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯氧基)乙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(49)的合成：
Figure BDA0000083236130001931
步骤1：N-(苯并[d]噻唑-2-基)-2-氨基硫代甲酰基-1，2，3，4-四氢异喹啉-8-甲酰胺(49A)的制备：
Figure BDA0000083236130001932
向化合物1B(3.25g，8.50mmol)在DMF(50mL)中的混合物中，加入TEA(4.71mL，34.0mmol)。得到的混合物搅拌10分钟，加入二(1H-咪唑-1-基)甲硫酮(1.818g，10.20mmol)。反应混合物在室温下搅拌30分钟。加入氨水(7N，MeOH中)(48.6mL，340mmol)，得到的混合物搅拌过夜。浓缩反应混合物，以除去氨水和MeOH。DMF溶液直接用于下一步骤无需进一步纯化。LCMS(APCI)：m/z 369(M+H)。
步骤2：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基)噻唑-4-羧酸乙酯(49B)的制备：
Figure BDA0000083236130001941
向3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)丙醛(1g，5.31mmol)和2，2-二氯乙酸乙酯(0.651mL，5.31mmol)在Et2O(4mL)中的溶液中，在0°滴加含乙醇钠(0.397g，5.84mmol)的EtOH(4mL)。反应混合物在0℃搅拌1.5h，用Et2O稀释。得到的混合物用盐水洗涤，有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物在真空中干燥，在EtOH(8mL)中溶解。向得到的溶液中加入含实施例49A(1当量)的DMF。反应混合物在50℃加热8小时，减压浓缩。残余物在DCM中溶解，通过柱色谱用硅胶纯化，用含0％到17％EtOAc的己烷洗脱，然后用含0％到15％EtOAc的DCM洗脱，以提供所需产物49B：LCMS(APCI)：m/z 623(M+H)。
步骤3：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基)噻唑-4-羧酸乙酯(49C1)；和5-(2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)乙基)-2-(8-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(Z)-乙酯(49C2)的制备：
Figure BDA0000083236130001951
向实施例49B(365mg，0.586mmol)和(2-(氯甲氧基)乙基)三甲基硅烷(0.109mL，0.615mmol)在DMF(5mL)中的混合物中，滴加TEA(0.163mL，1.172mmol)。反应混合物在室温下搅拌10分钟。所需产物作为两种位置异构体(49C1和49C2)存在。反应用EtOAc稀释，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，减压浓缩。粗材料在下一步骤中使用，无需进一步纯化。
步骤4：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(2-羟乙基)噻唑-4-羧酸乙酯(49D1)；和5-(2-羟乙基)-2-(8-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(Z)-乙酯(49D2)的制备
向实施例49C1和49C2(400mg，0.531mmol)在DCM(2mL)中的溶液中，加入MeOH(50mL)。滴加含1％HCl的MeOH(3.87mL，1.062mmol)。反应混合物在室温下搅拌5小时，用EtOAc(250mL)稀释，用50％NaCl洗涤。有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物在DCM中溶解，通过柱色谱用硅胶纯化，用含0％到25％EtOAc的DCM梯度洗脱，以提供所需化合物49D1和49D2：LCMS(APCI)：m/z 639(M+H)。
步骤5：5-(2-(4-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯氧基)乙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸乙酯(49E1)；和5-(2-(4-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯氧基)乙基)-2-(8-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(Z)-乙酯(49E2)的制备
Figure BDA0000083236130001961
通过加热，化合物21D(27.8mg，0.131mmol)在THF(1.5mL)中溶解。溶液冷却至室温，然后加入化合物49D1和49D2(55.7mg，0.087mmol)和三苯基膦(11.43mg，0.044mmol)，接着添加(E)-偶氮二甲酸二叔丁酯(10.04mg，0.044mmol)。反应混合物搅拌3小时。反应混合物用EtOAc稀释，用2％NaOH、5％HCl和水洗涤。有机层用Na2SO4干燥，减压浓缩。残余物通过柱色谱用硅胶纯化，用含0到25％EtOAc的DCM梯度洗脱，以提供所需化合物49E1和49E2：LCMS(APCI)：m/z 834(M+H)。
步骤6：5-(2-(4-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯氧基)乙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(49)的制备：
Figure BDA0000083236130001971
向化合物49E1和化合物49E2(100mg，0.120mmol)在DCM(5mL)中的溶液中，加入含2N HCl的乙醚(0.60mL，1.20mmol)。反应搅拌15分钟，减压浓缩。向粗材料中加入含10％NaOH(0.17mL，0.427mmol)和水(5mL)的THF(5mL)和MeOH(5mL)，加热到50℃2小时。冷却反应混合物并过滤。滤液用HCl酸化，通过过滤收集沉淀，用水洗涤，干燥，以提供所需产物49：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 12.87(1H，s)，9.44(1H，s)，9.09(1H，s)，8.60(1H，s)，7.97-8.02(3H，m)，7.77(1H，d)，7.66(1H，d)，7.28-7.47(4H，m)，7.13-7.17(2H，m)，4.84(2H，s)，4.23(2H，t)，3.75(2H，t)，3.53(2H，t)，3.04(2H，t)。LCMS(APCI)：m/z 675(M+H)。
实施例50
5-(2-(3-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯氧基)乙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(50)的合成：
Figure BDA0000083236130001981
步骤1：5-(2-(3-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯氧基)乙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸乙酯(50A1)；和5-(2-(3-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯氧基)乙基)-2-(8-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(Z)-乙酯(50A2)的制备：
化合物50A1和50A2使用与实施例49的步骤5中描述的相同程序制备，用化合物33D代替化合物21D：LCMS(APCI)：m/z 834(M+H)。
步骤2：5-(2-(3-(1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯氧基)乙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(50)的制备：
化合物50使用与实施例49的步骤5中描述的相同程序制备，用化合物50A1和化合物50A2代替化合物49E1和化合物49E2：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 12.84(1H，s)，9.44(1H，s)，9.14(1H，s)，8.62(1H，s)，8.01(1H，d)，7.76-7.84(3H，m)，7.66(1H，d)，7.32-7.50(5H，m)，6.98(1H，dd)，4.84(2H，s)，4.25(2H，t)，3.73(2H，t)，3.54(2H，t)，3.03(2H，t)。LCMS(APCI)：m/z 675(M+H)。
实施例51
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-{3-[4-(4-氰基-噻吩-3-基)-苯氧基]-丙基}-噻唑-4-羧酸(51)的合成：
Figure BDA0000083236130001991
步骤1：4-(4-羟基苯基)噻吩-3-腈(51A)的制备：
Figure BDA0000083236130002001
化合物51A用与化合物34D的合成类似的方式制备，分别用4-溴噻吩-3-腈和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯酚代替化合物34C和4-(羟甲基)苯基硼酸：1H NMR(DMSO-d6)：δ9.68(s，1H)，8.62(d，J＝3.38Hz，1H)，7.73(d，J＝3.07Hz，1H)，7.44(d，J＝8.59Hz，2H)，6.86(d，J＝8.59Hz，2H)。MS(ESI(+))：m/z 200(M-H)。
步骤2：题示化合物51的制备：
在0℃向含化合物51A(0.095g，0.015mmol)的DMF(4mL)中，加入60％氢化钠(0.036g，0.9mmol)。溶液搅拌10分钟。向该溶液中加入化合物2C。溶液在室温下搅拌2小时。用MeOH(1mL)淬灭反应。加入浓HCl(0.5mL)，溶液通过针筒过滤器过滤。然后滤液通过预制备HPLC纯化，以提供所需产物51：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.57(d，J＝3.38Hz，1H)，7.95(d，J＝7.98Hz，1H)，7.71-7.72(m，2H)，7.60(d，J＝7.36Hz，1H)，7.45-7.48(m，2H)，7.26-7.41(m，4H)，6.95-6.97(m，2H)，4.77(s，2H)，3.97(t，J＝6.29Hz，2H)，3.66(t，J＝5.98Hz，2H)，3.11-3.14(m，2H)，2.96(t，J＝5.98Hz，2H)，1.93-2.00(m，2H)；MS(ESI(+))：m/z 678(M+H)。
实施例52
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(52)的合成：
Figure BDA0000083236130002011
步骤1：6-氯-N4-异丙基嘧啶-4，5-二胺(52A)的制备：
Figure BDA0000083236130002012
4，6-二氯嘧啶-5-胺(492mg，3mmol)、丙-2-胺(284μl，3.3mmol)和Et3N(836μl，6mmol)结合并加热回流。混合物回流5天，每天加入额外的异丙胺(0.77mL，9mmol)。反应混合物冷却至室温，浓缩，在水中浆化，过滤，用额外的水冲洗，减压干燥，以提供题示化合物52A，为黄褐色固体：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 7.72(1H，s)，6.53(1H，d)，5.02(2H，s)，4.20(1H，八峰)，1.18(6H，d)。
步骤2：6-氯-9-异丙基-9H-嘌呤(52B)的制备：
Figure BDA0000083236130002013
化合物52A(268mg，1.44mmol)、原甲酸三乙酯(2.4ml，14.36mmol)和对甲苯磺酸(27.3mg，0.144mmol)结合，在115℃加热过夜。冷却至室温时出现沉淀。通过过滤收集沉淀，用二乙醚冲洗，减压干燥，以产出题示化合物52B：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 8.81(1H，s)，8.78(1H，s)，4.89(1H，m)，1.58(6H，d)。
步骤3：9-异丙基-6-(4-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)苯基)-9H-嘌呤(52C)的制备：
Figure BDA0000083236130002021
含化合物52B(165mg，0.84mmol)的甲苯(5ml)用4-(四氢-2H-吡喃-2-氧基)苯基硼酸(280mg，1.26mmol)、四(三苯基膦)钯(0)(48.6mg，0.042mmol)和碳酸钠(2N水溶液)(1.26ml，2.52mmol)连续处理。用氮气吹扫反应容器，加热回流过夜。反应混合物冷却至室温，用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。浓缩液通过柱色谱用硅胶纯化，用含0到5％MeOH的CH2Cl2梯度洗脱：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 8.92(1H，s)，8.83(2H，m)，8.74(1H，s)，7.22(2H，m)，5.63(1H，t)，4.92(1H，七峰)，3.79(1H，ddd)，3.60(1H，m)，1.82(4H，m)，1.60(6H，d)，1.55(2H，m)。
步骤4：4-(9-异丙基-9H-嘌呤-6-基)苯酚(52D)的制备：
Figure BDA0000083236130002022
含化合物52C(149mg，0.44mmol)的二氧杂环己烷(3ml)用HCl(4N，二氧杂环己烷中)(0.55ml，2.2mmol)处理，在环境温度下搅拌1小时。浓缩反应混合物，干燥，得到浅灰色固体52D，产率94％：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 10.16(1H，s)，8.90(1H，s)，8.76(1H，m)，8.73(2H，m)，6.97(2H，m)，4.91(1H，七峰)，1.60(6H，d)。
步骤5：题示化合物52的制备：
题示化合物52通过在实施例2的步骤4用化合物52D代替苯酚制备。烷化中间体通过柱色谱用硅胶纯化，用含0到60％EtOAc的CH2Cl2梯度洗脱。剩下的程序按照实施例2的步骤4：1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 12.89(1H，s)，8.89(1H，s)，8.81(2H，d)，8.72(1H，s)，8.00(1H，d)，7.77(1H，d)，7.65(1H，d)，7.45(2H，m)，7.35(2H，m)，7.11(2H，d)，4.90(1H，m)，4.83(2H，s)，4.09(2H，m)，3.71(2H，m)，3.20(2H，m)，3.02(2H，m)，2.04(2H，m)，1.59(6H，d)。MS(ESI(+))m/e 731(M+H)。
实施例53
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(5，6-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-3-基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(53)的合成：
题示化合物53通过在实施例2的步骤4用4-(5，6-二氢咪唑并[2，1-b]噻唑-3-基)苯酚HBr代替苯酚制备。烷化中间体通过柱色谱用硅胶纯化，用含5到60％EtOAc的己烷梯度洗脱。程序按照实施例2的步骤4中描述的，除了酯水解在环境温度下执行：1H MR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.89(1H，s)，12.57(1H，s)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.68(1H，d)，7.42(6H，m)，7.03(2H，d)，6.75(1H，s)，4.83(2H，s)，4.39(2H，m)，4.23(2H，m)，4.04(2H，t)，3.73(2H，t)，3.19(2H，t)，3.03(2H，t)，2.03(2H，m)。MS(ESI(+))m/e 695(M+H)。
实施例54
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(4-(3-(二甲基氨基)丙基氨基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(54)的合成：
步骤1：4-(4-(3-(二甲基氨基)丙基氨基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯酚(54A)的制备：
Figure BDA0000083236130002051
题示化合物54A使用与实施例44的步骤4中描述的相同程序制备，用二甲基氨基丙胺代替异丙胺：1H NMR(500MHz，DMSO-D6)δppm 9.54(1H，s)，8.63(1H，t)，8.36(1H，s)，8.31(1H，s)，7.85(2H，d)，6.92(2H，d)，3.60(2H，q)，3.12-3.18(2H，m)，2.80(6H，s)，1.95-2.03(2H，m)。
步骤2：题示化合物54的制备：
向化合物54A(160mg，0.512mmol)在DMF(5ml)中的溶液中，加入氢化钠(102mg，2.56mmol)(60％)。反应混合物搅拌10min，加入实施例2C(194mg，0.307mmol)。得到的混合物搅拌1小时，加入甲醇(3ml)、10％NaOH(3ml)和水(1ml)。得到的混合物搅拌过夜，用TFA酸化，浓缩。残余物在DMSO-甲醇混合物中溶解，通过反相HPLC纯化(流动相：含0％-55％乙腈的0.1％TFA水溶液，60min内)，以提供题示化合物：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 12.84(1H，s)，9.34(1H，s)，8.53(1H，t)，8.36(1H，s)，8.32(1H，s)，7.96-8.03(3H，m)，7.78(1H，d)，7.67(1H，d)，7.42-7.49(2H，m)，7.32-7.41(2H，m)，7.05-7.10(2H，m)，4.84(2H，s)，4.04(2H，t)，3.73(2H，t)，3.60(2H，q)，3.12-3.26(4H，m)，3.03(2H，t)，2.80(6H，s)，1.93-2.08(4H，m)。LCMS(APCI)m/e 789(M+H)。
实施例55
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(2-(苄氧基)乙基)噻唑-4-羧酸(55)的合成：
Figure BDA0000083236130002061
步骤1：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(2-(苄氧基)乙基)噻唑-4-羧酸乙酯(55A)的制备：
Figure BDA0000083236130002062
化合物55A使用与实施例49的步骤2描述的相同顺序制备，用3-(苄氧基)丙醛代替3-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基)丙醛：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 12.88(1H，s)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.66(1H，d)，7.43-7.51(2H，m)，7.33-7.41(2H，m)，7.26-7.30(4H，m)，7.16-7.23(1H，m)，4.82(2H，s)，4.46(2H，s)，4.17(2H，q)，3.73(2H，t)，3.61(2H，t)，3.26-3.30(2H，m)，3.04(2H，t)，1.18(3H，t)；LCMS(APCI)m/e 599(M+H)。
步骤2：题示化合物55的制备：
在THF(3ml)和MeOH(3ml)中的化合物55A(138mg，0.230mmol)，用10％氢氧化钠(0.46ml，1.152mmol)处理1天。浓缩反应混合物，用浓HCl酸化。通过过滤收集沉淀，干燥，以提供题示化合物：1H NMR(500MHz，DMSO-D6)δppm 12.89(2H，s)，8.03(1H，d)，7.80(1H，d)，7.67(1H，d)，7.42-7.51(2H，m)，7.33-7.42(2H，m)，7.25-7.31(4H，m)，7.17-7.21(1H，m)，4.82(2H，s)，4.46(2H，s)，3.74(2H，t)，3.60(2H，t)，3.28-3.35(2H，m)，3.03(2H，t)；LCMS(APCI)m/e 571。
实施例56
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-{3-[4-(3-氰基-吡啶-2-基)-苯氧基]-丙基}-噻唑-4-羧酸(56)的合成
Figure BDA0000083236130002071
步骤1：2-(4-羟基苯基)烟腈(56A)的制备：
化合物56A用与化合物34D的合成类似的方式制备，分别用2-氯烟腈和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯酚代替化合物34C和4-(羟甲基)苯基硼酸：ESI(+)/LC/MS：197(M+H)+。
步骤2：题示化合物56的制备：
题示化合物56用与化合物51的合成类似的方式制备，在实施例51的步骤2中用化合物56A代替化合物51A：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.86(dd，J＝4.76，1.69Hz，1H)，8.34(dd，J＝7.82，1.69Hz，1H)，8.01(d，J＝7.67Hz，1H)，7.82(d，J＝8.9Hz，2H)，7.77(d，J＝7.98Hz，1H)，7.66(d，J＝7.36Hz，1H)，7.32-7.53(m，5H)，7.07(d，J＝8.9Hz，2H)，4.83(s，2H)，4.07(t，J＝6.14Hz，2H)，3.70-3.73(m，2H)，3.18-3.22(m，2H)，3.01-3.03(m，2H)，2.00-2.08(m，2H)。ESI(+)/MS：673(M+H)+。
实施例57
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(6-(3-(二甲基氨基)丙-1-炔基)吡啶-3-氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(57)的合成：
步骤1：2-氯-5-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲氧基)吡啶(57A)的制备：
题示化合物57A使用与实施例49的步骤3中描述的相同程序制备，用6-氯吡啶-3-醇代替化合物49B：LCMS(APCI)m/e 260(M+H)。
步骤2：N，N-二甲基-3-(5-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲氧基)吡啶-2-基)丙-2-炔-1-胺(57B)的制备：
Figure BDA0000083236130002091
向化合物57A(154mg，0.593mmol)、N，N-二甲基丙-2-炔-1-胺(0.190ml，1.778mmol)、(PPh3)2PdCl2(62.4mg，0.089mmol)、TEA(0.413ml，2.96mmol)在DMF(3ml)中的混合物中，加入碘化亚铜(I)(11.29mg，0.059mmol)。得到的混合物在Smith微波合成器中在150℃加热30min，通过快速色谱纯化，以提供所需化合物57B；LCMS(APCI)m/e 307。
步骤3：6-(3-(二甲基氨基)丙-1-炔基)吡啶-3-醇(57C)的制备：
Figure BDA0000083236130002092
含化合物57B(40mg，0.131mmol)的MeOH(3ml)用含2N盐酸的乙醚(0.1ml，0.200mmol)处理1h，浓缩混合物，以提供题示化合物57C。LCMS(APCI)m/e 177(M+H)。
步骤4：题示化合物(57)的制备：
Figure BDA0000083236130002101
题示化合物57使用实施例54的步骤2中描述的相同程序制备，用化合物57C代替化合物54A：1H NMR(500MHz，DMSO-D6)δppm12.90(1H，s)，10.25(1H，s)，8.28(1H，d)，8.04(1H，d)，7.79(1H，d)，7.67(1H，d)，7.58(1H，d)，7.43-7.50(2H，m)，7.34-7.43(3H，m)，4.83(2H，s)，4.34(2H，s)，4.10(2H，t)，3.69-3.76(2H，m)，3.16-3.24(2H，m)，3.03(2H，t)，2.73(6H，s)，1.98-2.07(2H，m)；LCMS(APCI)m/e 654(M+H)。
实施例58
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-{3-[4-(2-氰基-吡啶-3-基)-苯氧基]-丙基}-噻唑-4-羧酸(58)的合成：
Figure BDA0000083236130002102
步骤1：3-(4-羟基苯基)吡啶腈(58A)的制备
Figure BDA0000083236130002111
题示化合物58A用与化合物34D的合成类似的方式制备，分别用3-氯吡啶腈和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯酚代替化合物34C和4-(羟甲基)苯基硼酸。ESI(+)/LC/MS：197(M+H)+。
步骤2：题示化合物58的制备：
题示化合物58用与化合物51的合成类似的方式制备，在实施例51的步骤2中用化合物58A代替化合物51A：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.84(dd，J＝4.6，1.53Hz，1H)，7.98(dd，J＝7.98，1.53Hz，1H)，7.95(d，J＝7.67Hz，1H)，7.27-7.7(m，9H)，7.01-7.03(m，2H)，4.77(s，2H)，4.01(t，J＝6.29Hz，2H)，3.66(t，J＝5.98Hz，2H)，3.12-3.16(m，2H)，2.97(t，J＝5.98Hz，2H)，1.95-2.02(m，2H)。ESI(+)/MS：673(M+H)+。
实施例59
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-[3-(4-吗啉-4-基-苯氧基)-丙基]-噻唑-4-羧酸(59)的合成：
题示化合物用与化合物51的合成类似的方式制备，在实施例51的步骤2中用4-吗啉基苯酚代替化合物51A：1H NMR(DMSO-d6)：δ7.96(d，J＝7.67Hz，1H)，7.72(d，J＝7.98Hz，1H)，7.60(d，J＝7.06Hz，1H)，7.27-7.42(m，4H)，6.88(d，J＝8.9Hz，2H)，6.75-6.79(m，2H)，4.76(s，2H)，3.85(t，J＝6.29Hz，2H)，3.64-3.68(m，6H)，3.07-3.11(m，2H)，2.95-2.98(m，6H)，1.87-1.94(m，2H)。ESI(+)/MS：656(M+H)+。
实施例60
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-[5-(4-氰基-噻吩-3-基)-2-羟基-苄基]-噻唑-4-羧酸(60)的合成：
Figure BDA0000083236130002121
步骤1：5-(5-(4-氰基噻吩-3-基)-2-羟基苄基)-2-(8-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(E)-甲酯(60A)的制备：
Figure BDA0000083236130002122
题示化合物60A用与化合物35A的合成类似的方式制备，分别用化合物45D和化合物51A代替化合物34D和化合物31F：ESI(+)/LC/MS：892(M+NH4-H2O)+：1H NMR(DMSO-d6)：δ9.99(s，1H)，8.58(s，1H)，8.21(d，J＝6.71Hz，1H)，7.92(d，J＝7.32Hz，1H)，7.66-7.68(m，2H)，7.52-7.55(m，1H)，7.32-7.41(m，5H)，6.92(d，J＝8.24Hz，1H)，5.97(s，2H)，5.08(s，2H)，4.35(s，2H)，3.78(s，3H)，3.64-3.68(m，2H)，2.98(t，J＝5.8Hz，2H)，0.84-0.87(m，2H)，-0.22(s，9H)。ESI(+)/MS：794(M+H)+。
步骤2：题示化合物60的制备：
题示化合物60用与化合物34的合成类似的方式制备，用化合物60A代替化合物34D：1H NMR(DMSO-d6)：δ9.92(s，1H)，8.55(d，J＝3.07Hz，1H)，8.00(d，J＝7.98Hz，1H)，7.77(d，J＝8.29Hz，1H)，7.63-7.66(m，2H)，7.29-7.48(m，6H)，6.90(d，J＝8.29Hz，1H)，4.79(s，2H)，4.34(s，2H)，3.66(d，J＝5.98Hz，2H)，2.99(t，J＝5.83Hz，2H)。ESI(+)/MS：650(M+H)+。
实施例61
5-{3-[4-(4-乙酰基-哌嗪-1-基)-苯氧基]-丙基}-2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-噻唑-4-羧酸(61)的合成：
Figure BDA0000083236130002141
题示化合物61用与化合物51的合成类似的方式制备，在实施例51的步骤2中用1-(4-(4-羟基苯基)哌嗪-1-基)乙酮代替化合物51A：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.02(d，J＝7.36Hz，1H)，7.78(d，J＝8.29Hz，1H)，7.66(d，J＝7.06Hz，1H)，7.33-7.49(m，4H)，6.90-6.92(m，2H)，6.80-6.82(m，2H)，4.82(s，2H)，3.90(t，J＝6.29Hz，2H)，3.71(t，J＝6.29Hz，2H)，3.53-3.56(m，2H)，3.13-3.17(m，2H)，3.02(t，J＝5.37Hz，4H)，2.94-2.96(m，2H)，2.02(s，3H)，1.92-1.99(m，2H)。ESI(+)/MS：697(M+H)+。
实施例62
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-((4-苯基哌嗪-1-基)甲基)噻唑-4-羧酸(62A)的合成：
Figure BDA0000083236130002142
步骤1：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-((4-苯基哌嗪-1-基)甲基)噻唑-4-羧酸甲酯(62A)的制备：
向化合物45C(55mg，0.090mmol)在DCE(3.5ml)中的溶液中，加入1-苯基哌嗪(14.57mg，0.090mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(28.7mg，0.136mmol)。反应搅拌2天，浓缩。残余物用甲醇研磨，收集白色沉淀，得到题示化合物：LCMS(APCI)m/e 756(M+H)。
步骤2：题示化合物62的制备：
Figure BDA0000083236130002152
含化合物62A(50mg，0.066mmol)的DCM(3.5ml)用含2N盐酸的乙醚(3.31ml，6.62mmol)处理30min。浓缩反应，残余物在THF(3ml)和甲醇(3ml)中溶解。加入NaOH(10％水溶液，1ml)。得到的混合物搅拌过夜，浓缩。残余物通过反相HPLC纯化(流动相：含0％-70％乙腈的0.1％TFA水溶液，40min内)，以提供题示化合物：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 12.91(1H，s)，8.02(1H，d)，7.78(1H，d)，7.70(1H，d)，7.44-7.50(2H，m)，7.41(1H，t)，7.35(1H，t)，7.20-7.27(2H，m)，6.96(2H，d)，6.84(1H，t)，4.89(2H，s)，4.73(2H，s)，3.82(2H，t)，3.45(8H，s)，3.07(2H，t)。LCMS(APCI)m/e 611(M+H)。
实施例63
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-((4-苯基哌啶-1-基)甲基)噻唑-4-羧酸(63)的合成：
Figure BDA0000083236130002161
步骤1：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-((4-苯基哌啶-1-基)甲基)噻唑-4-羧酸甲酯(63A)的制备：
Figure BDA0000083236130002162
化合物使用与实施例62的步骤1中描述的相同程序制备，用4-苯基哌啶代替1-苯基哌嗪。LCMS(APCI)m/e 755(M+H)。
步骤2：题示化合物63的制备：
题示化合物63使用与实施例62的步骤2中描述的相同程序制备，用化合物63A代替化合物62A：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 12.94(1H，s)，9.32(1H，s)，8.03(1H，d)，7.78(1H，d)，7.71(1H，d)，7.45-7.50(2H，m)，7.41(1H，t)，7.29-7.38(3H，m)，7.21(3H，t)，4.89(2H，s)，4.76(2H，s)，3.83(2H，t)，3.48-3.59(2H，m)，3.11-3.21(2H，m)，3.07(2H，t)，2.78-2.90(1H，m)，1.76-2.02(4H，m)。LCMS(APCI)m/e 610(M+H)。
实施例64
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-[3-(4-哌嗪-1-基-苯氧基)-丙基]-噻唑-4-羧酸(64)的合成：
在二氧杂环己烷(2mL)和MeOH(2mL)中的化合物61(25mg)，用1.0N LiOH(2mL)处理。反应混合物加热回流，直到通过TLC监测，化合物61耗尽。除去溶剂，残余物用预制备HPLC纯化，得到题示化合物64，为TFA盐：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.56(s，2H)，7.96(d，J＝7.67Hz，1H)，7.72(d，J＝7.98Hz，1H)，7.60(d，J＝7.36Hz，1H)，7.27-7.43(m，4H)，6.92-6.95(m，2H)，6.75-6.77(m，2H)，4.76(s，2H)，3.84(t，J＝6.14Hz，2H)，3.65(t，J＝5.98Hz，2H)，3.07-3.14(m，8H)，2.96(t，J＝5.98Hz，2H)，1.86-1.94(m，2H)。ESI(+)/MS：655(M+H)+。
实施例65
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-{3-[4-(5-溴-噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-基)-苯氧基]-丙基}-噻唑-4-羧酸(65)的合成：
Figure BDA0000083236130002181
步骤1：7-溴-4-氯噻吩并[3，2-d]嘧啶(65A)的制备：
Figure BDA0000083236130002182
7-溴噻吩并[3，2-d]嘧啶-4(3H)-酮(0.9g，3.89mmol)在POCl3中加热回流2小时，减压除去过量的POCl3。残余物在水和EtOAc之间分离。分离有机层，用额外的EtOAc萃取水层。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩，得到0.91g化合物65A：1H NMR(DMSO-d6)：δ9.15(s，1H)，8.78(s，1H)。ESI(+)/MS：248(M-H)+。
步骤2：4-(7-溴噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基)苯酚(65B)的制备：
Figure BDA0000083236130002191
题示化合物使用如化合物34D的合成描述的类似条件制备，分别用化合物65A和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯酚代替化合物34C和4-(羟甲基)苯基硼酸：1H NMR(DMSO-d6)：δ9.27(s，1H)，8.73(s，1H)，8.08-8.10(m，2H)，7.01-7.03(m，2H)；ESI(-)/MS：308(M-H)-。
步骤3：题示化合物65的制备：
Figure BDA0000083236130002192
题示化合物65用与化合物51的合成类似的方式制备，用化合物65B代替化合物51A：1H NMR(DMSO-d6)：δ9.29(s，1H)，8.73(s，1H)，8.13(d，J＝8.59Hz，2H)，7.99(d，J＝7.98Hz，1H)，7.76(d，J＝7.98Hz，1H)，7.66(d，J＝7.06Hz，1H)，7.31-7.47(m，4H)，7.17(J＝8.9Hz，2H)，4.82(s，2H)，4.11(t，J＝6.14Hz，2H)，3.71-3.74(m，2H)，3.19-3.22(m，2H)，3.02(t，J＝5.37Hz，2H)，2.05-2.07(m，2H)。ESI(+)/MS：527(M+H)+。
实施例66
5-(3-(4-(1H-咪唑-1-基)苯氧基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(66)的合成：
题示化合物66通过在实施例2的步骤4用4-(1H-咪唑-1-基)苯酚代替苯酚制备。酯水解前未分离烷化中间体。所需产物沉淀后，固体通过HPLC纯化(预制备反相HPLC用自动化Gilson HPLC系统执行，使用SymmetryPrep Shield RP18预制备柱，250mmx21.20mm i.d.，10um，流速25mL/min；λ＝214、245nm；流动相A，含0.1％TFA的H2O；流动相B，CH3CN；40分钟内，B的线性梯度20-90％)，以提供题示化合物，产率45％：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm12.88(1H，s)，12.52(1H，s)，9.34(1H，s)，8.10(1H，d)，8.02(1H，m)，7.78(2H，m)，7.66(3H，m)，7.42(4H，m)，7.13(2H，m)，4.83(2H，s)，4.07(2H，t)，3.73(2H，t)，3.20(2H，m)，3.03(2H，t)，2.04(2H，m)；MS(ESI(+))m/e 637(M+H)。
实施例67
5-(3-(4-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯氧基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(67)的合成：
Figure BDA0000083236130002211
题示化合物通过在实施例2的步骤4用4-(1H-1，2，4-三唑-1-基)苯酚代替苯酚制备。酯水解前未分离烷化中间体。所需产物沉淀后，固体通过HPLC纯化(预制备反相HPLC用自动化Gilson HPLC系统执行，使用SymmetryPrep Shield RP18预制备柱，250mmx21.20mmi.d.，10um，流速25mL/min；λ＝214、245nm；流动相A，含0.1％TFA的H2O；流动相B，CH3CN；40分钟内，B的线性梯度20-90％)，以提供题示化合物67，产率43％：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm12.88(1H，s)，9.14(1H，s)，8.17(1H，s)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.72(2H，m)，7.66(1H，d)，7.42(5H，m)，7.07(2H，m)，4.83(2H，s)，4.04(2H，t)，3.72(2H，t)，3.19(2H，m)，3.03(2H，t)，2.02(2H，m)。MS(ESI(+))m/e 638(M+H)。
实施例68
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(4-甲基-4H-1，2，4-三唑-3-基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(68)的合成：
Figure BDA0000083236130002221
题示化合物68通过在实施例2的步骤4用4-(4-甲基-4H-1，2，4-三唑-3-基)苯酚代替苯酚制备。酯水解前未分离烷化中间体。所需产物沉淀后，固体通过HPLC纯化(预制备反相HPLC用自动化GilsonHPLC系统执行，使用SymmetryPrep Shield RP18预制备柱，250mmx21.20mm i.d.，10um，流速25mL/min；λ＝214、245nm；流动相A，含0.1％TFA的H2O；流动相B，CH3CN；40分钟内，B的线性梯度20-90％)，以提供题示化合物68，产率56％：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.89(1H，s)，8.73(1H，s)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.66(3H，m)，7.42(4H，m)，7.09(2H，m)，4.83(2H，s)，4.07(2H，t)，3.73(5H，m)，3.20(2H，m)，3.03(2H，t)，2.04(2H，m)。MS(ESI(+))m/e 652(M+H)。
实施例69
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-{3-[4-(4-异丙基氨基-噻吩并[3，2-d]嘧啶-7-基)-苯氧基]-丙基}-噻唑-4-羧酸(69)的合成：
Figure BDA0000083236130002231
步骤1：7-溴-N-异丙基噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-胺(69A)的制备：
Figure BDA0000083236130002232
化合物65A(0.125g，0.5mmol)和丙-2-胺(0.148g，2.5mmol)在乙醇(10mL)中的混合物加热回流15小时。除去溶剂，残余物通过快速柱色谱用硅胶纯化，用1∶1EtOAc/己烷洗脱，得到0.13g题示化合物：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.50(s，1H)，8.28(s，1H)，7.87(d，J＝7.46Hz，1H)，4.40-4.51(m，1H)，1.23(d，J＝6.78Hz，6H)。ESI(+)/MS：273(M-H)+。
步骤2：4-(4-(异丙基氨基)噻吩并[3，2-d]嘧啶-7-基)苯酚(69B)的制备：
Figure BDA0000083236130002233
题示化合物69B用与化合物34D的合成类似的方式制备，分别用化合物69A和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯酚代替化合物34C和4-(羟甲基)苯基硼酸：1H NMR(DMSO-d6)：δ9.49(s，1H)，8.50(s，1H)，8.10(s，1H)，7.88-7.91(m，2H)，7.57(d，J＝7.67Hz，1H)，6.83-6.86(m，2H)，4.44-4.53(m，1H)，1.25(d，J＝6.75Hz，6H)。ESI(+)/MS：286(M-H)+。
步骤3：题示化合物69的制备：
题示化合物69用与化合物51的合成类似的方式制备，用化合物69B代替化合物51A：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.59(s，1H)，8.25(s，1H)，8.00(d，J＝7.67Hz，1H)，7.66-7.79(m，4H)，7.32-7.48(m，4H)，7.03(d，J＝8.59Hz，2H)，4.84(s，2H)，4.41-4.47(m，1H)，4.05(t，J＝6.14Hz，2H)，3.72-3.75(m，2H)，3.19-3.22(m，2H)，3.03(t，J＝5.98Hz，2H)，2.00-2.08(m，2H)，1.28(d，J＝6.44Hz，6H)。ESI(+)/MS：762(M+H)+。
实施例70
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-[2-(3-硝基-苯磺酰基氨基)-乙基]-噻唑-4-羧酸(70)的合成：
Figure BDA0000083236130002241
步骤1：5-(2-(3-硝基苯基磺酰胺基)乙基)-2-(8-(2-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基)乙酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(E)-乙酯(70A)的制备：
Figure BDA0000083236130002251
题示化合物70A用与化合物35A的合成类似的方式制备，分别用化合物49D和3-硝基苯磺酰胺代替化合物34D和化合物31F：ESI(+)/LC/MS：823(M+H)+。
步骤2：题示化合物70的制备：
题示化合物70用与化合物51的合成类似的方式制备，用化合物70A代替化合物51A：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.39-8.44(m，2H)，8.11-8.15(m，2H)，8.04(d，J＝7.98Hz，1H)，7.78-7.84(m，2H)，7.68(d，J＝7.36Hz，1H)，7.34-7.50(m，4H)，6.90(d，J＝8.29Hz，1H)，4.79(s，2H)，3.69(d，J＝5.98Hz，2H)，3.06-3.10(m，4H)，3.03(t，J＝5.98Hz，2H)。ESI(+)/MS：665(M+H)+。
实施例71
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-(2-苯基-吖丁啶-1-基甲基)-噻唑-4-羧酸(71)的合成：
Figure BDA0000083236130002252
步骤1：5-((2-苯基吖丁啶-1-基)甲基)-2-(8-(2-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基)乙酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(E)-甲酯(71A)的制备：
Figure BDA0000083236130002261
题示化合物71A用与化合物62A的合成类似的方式制备，用2-苯基吖丁啶代替苯基哌嗪：ESI(+)/LC/MS：726(M+H)+。
步骤2：题示化合物71的制备：
题示化合物用与化合物51的合成类似的方式制备，用化合物71A代替化合物51A：1H NMR(DMSO-d6)：δ12.89(s，1H)，8.04(d，J＝7.36Hz，1H)，7.80(d，J＝7.98Hz，1H)，7.70(d，J＝7.37Hz，1H)，7.34-7.54(m，9H)，5.47(br，1H)，4.70-4.95(m，4H)，4.40(br，s，1H)，3.88(br，1H)，3.76(d，J＝5.83Hz，2H)，2.60-2.8(br，s，2H)。ESI(+)/MS：582(M+H)+。
实施例72
5-(4-(1H-咪唑-1-基)丁基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(72)的合成：
Figure BDA0000083236130002271
题示化合物72通过在实施例2的步骤4用化合物42C代替化合物2C且用咪唑代替苯酚制备。酯水解前未分离烷化中间体。所需产物沉淀后，固体通过HPLC纯化(预制备反相HPLC用自动化GilsonHPLC系统执行，使用SymmetryPrep Shield RP18预制备柱，250mmx21.20mm i.d.，10um，流速25mL/min；λ＝214、245nm；流动相A，含0.1％TFA的H2O；流动相B，CH3CN；40分钟内，B的线性梯度20-90％)，以提供题示化合物，产率34％：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.91(1H，s)，12.55(1H，s)，9.06(1H，s)，8.04(1H，d)，7.77(2H，m)，7.66(2H，m)，7.43(4H，m)，4.82(2H，s)，4.19(2H，t)，3.73(2H，t)，3.05(4H，m)，1.83(2H，m)，1.53(2H，m)。MS(ESI(+))m/e 559(M+H)。
实施例73
5-(3-(4-(1H-吡唑-4-基)苯氧基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(73)的合成：
Figure BDA0000083236130002281
步骤1：5-(3-(4-(1H-吡唑-4-基)苯氧基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸叔丁酯(73A)的制备：
Figure BDA0000083236130002282
化合物41A(90mg，0.102mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑(29.7mg，0.153mmol)、Na2CO3(108μl，0.102mmol)(1M)和(Ph3P)2Cl2Pd(7.15mg，10.19μmol)在EtOH-DME-H2O(7∶3∶2，4ml)中的混合物，在Smith微波合成器中在120℃加热30min，然后浓缩。残余物通过快速色谱纯化，得到化合物73A。LCMS(APCI)m/e 824(M+H)。
步骤2：题示化合物73的制备：
含化合物73A(30mg)的DCM(1ml)用含HCl 2N的乙醚(5ml)处理2天。收集沉淀并干燥，得到题示化合物73：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 8.09(2H，s)，8.02(1H，d)，7.79(1H，d)，7.68(1H，d)，7.51(2H，d)，7.44-7.48(2H，m)，7.33-7.42(2H，m)，6.91(2H，d)，4.87(2H，s)，3.99(2H，t)，3.75(2H，t)，3.19(2H，t)，3.04(2H，t)；LCMS(APCI)m/e 637(M+H)。
实施例74
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-{3-[4-(3-二甲基氨基-丙-1-炔基)-苯氧基]-丙基}-噻唑-4-羧酸(74)的合成
Figure BDA0000083236130002291
步骤1：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(3-(二甲基氨基)丙-1-炔基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(74)的制备：
Figure BDA0000083236130002292
向4-碘苯酚(750mg，3.41mmol)、N，N-二甲基丙-2-炔-1-胺(1.090ml，10.23mmol)、(PPh3)4Pd(192mg，0.166mmol)、TEA(1.425ml，10.23mmol)在DMF(12ml)中的混合物中，加入碘化亚铜(I)(97mg，0.511mmol)。得到的混合物在Smith微波合成器中在100℃加热25min，然后浓缩。残余物通过反相HPLC纯化(流动相：含0％-30％乙腈的0.1％TFA水溶液，30min内)，以提供该化合物，为TFA盐：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 10.06(1H，s)，7.35(2H，d)，6.80(2H，d)，4.25(2H，s)，2.85(6H，s)。
步骤2：题示化合物74的制备：
题示化合物74使用实施例54描述的相同程序制备，在实施例54的步骤2中用化合物74A代替化合物54A：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 12.86(1H，s)，10.19(1H，s)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.67(1H，d)，7.33-7.50(6H，m)，6.95(2H，d)，4.83(2H，s)，4.29(2H，s)，4.02(2H，t)，3.72(2H，t)，3.11-3.21(2H，m)，3.03(2H，t)，2.87(6H，s)，1.96-2.07(2H，m)；LCMS(APCI)m/e 652(M+H)。
实施例75
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-{3-[4-(2-二甲基氨基-乙氧基)-苯氧基]-丙基}-噻唑-4-羧酸(75)的合成：
Figure BDA0000083236130002301
步骤1：2-(4-(苄氧基)苯氧基)-N，N-二甲基乙胺(75A)的制备：
化合物75A用与化合物35A的合成类似的方式制备，分别用2-(二甲基氨基)乙醇和4-(苄氧基)苯酚代替化合物34D和化合物31F：1H NMR(DMSO-d6)：δ7.31-7.44(m，5H)，6.84-6.94(m，4H)，5.03(s，2H)，3.94-3.98(m，2H)，2.57(d，J＝5.93Hz，2H)，2.19(s，6H)。ESI(+)/MS：272(M+H)+。
步骤2：4-(2-(二甲基氨基)乙氧基)苯酚(75B)的制备：
Figure BDA0000083236130002312
化合物75B用与化合物31F的合成类似的方式制备，用化合物75A代替化合物31E：1H NMR(DMSO-d6)：S 8.86(s，1H)，6.72-6.76(m，2H)，6.64-6.68(m，2H)，3.92(d，J＝5.83Hz，2H)，2.56(d，J＝5.83Hz，2H)，2.19(s，6H)。ESI(+)/MS：182(M+H)+。
步骤3：题示化合物75的制备：
用与化合物51的合成类似的方式，将题示化合物75制备为TFA盐，用化合物75B代替化合物51A：1H NMR(DMSO-d6)：δ12.85(s，1H)，9.58(s，1H)，8.03(d，J＝7.67Hz，1H)，7.79(d，J＝7.67Hz，1H)，7.67(d，J＝7.06Hz，1H)，7.33-7.50(m，4H)，6.86-6.93(m 4H)，4.83(s，2H)，4.21-4.24(m，2H)，3.92(t，J＝6.29Hz，2H)，3.73(t，J＝5.98Hz，2H)，3.15-3.18(m，2H)，3.03(t，J＝5.98Hz，2H)，2.85(s，6H)，1.94-2.01(m，2H)。ESI(+)/MS：658(M+H)+。
实施例76
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(2-苯氧基乙基)噻唑-4-羧酸(76)的合成：
化合物49D(51mg，0.08mmol)、苯酚(11mg，0.12mmol)和三苯基膦(31mg，0.12mmol)与THF(2ml)结合，在环境温度下搅拌20分钟。加入偶氮二甲酸二叔丁酯(21mg，0.092mmol)，继续搅拌过夜。反应混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。浓缩液通过柱色谱用硅胶纯化，用含10-50％EtOAc的己烷梯度洗脱。得到的材料在二氧杂环己烷(2ml)中溶解，用HCl(4N，二氧杂环己烷中)(0.4ml，1.6mmol)处理，在70℃加热数小时。反应混合物冷却至室温并浓缩。浓缩液在二氧杂环己烷(2ml)中溶解，用NaOH(4N水溶液)(0.2ml，0.8mmol)处理，在50℃加热四小时。反应混合物冷却至室温，用1N HCl(水溶液)处理以诱导产物沉淀。过滤固体，用水冲洗，在Et2O中浆化，过滤，用Et2O冲洗，在1∶1DMSO/MeOH中浆化，过滤，用MeOH冲洗，以提供题示化合物，为白色固体。1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.88(1H，s)，12.66(1H，s)，8.04(1H，d)，7.80(1H，d)，7.66(1H，d)，7.43(4H，m)，7.22(2H，m)，6.90(3H，m)，4.83(2H，s)，4.13(2H，t)，3.73(2H，t)，3.47(2H，t)，3.03(2H，t)。MS(ESI(+))m/e 557(M+H)。
实施例77
5-(3-(4-(2-氨基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)苯氧基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(77)的合成：
Figure BDA0000083236130002331
步骤1：乙酸4-(2-(N-乙酰基乙酰胺基)-1H-苯并[d]咪唑-1-基)苯酯(77A)的制备：
Figure BDA0000083236130002332
4-(2-氨基-1H-苯并[d]咪唑-1-基)苯酚(0.113g，0.5mmol)在二氯甲烷(2ml)和THF(1ml)的混合物中，用乙酸酐(0.47ml，5mmol)和DMAP(0.031g，0.25mmol)处理，在环境温度下搅拌3小时。反应混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩，以提供所需产物：LCMS m/e 352(M+H)。
步骤2：N-(1-(4-羟基苯基)-1H-苯并[d]咪唑-2-基)乙酰胺(77B)的制备：
Figure BDA0000083236130002341
含化合物77A(176mg，0.5mmol)的MeOH(4ml)用K2CO3(69.1mg，0.5mmol)处理，在环境温度下搅拌约40分钟。浓缩反应混合物，以除去MeOH，用EtOAc稀释，用1N HCl溶液酸化到pH 5。将混合物倒入分液漏斗中，分离各层。用EtOAc(2x40mL)萃取水层。合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤，浓缩，以提供题示化合物77B，为灰白色固体，产率67％：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 10.26(1H，s)，9.84(1H，s)，7.63(1H，m)，7.20(5H，m)，6.93(2H，m)，1.94(3H，s)。
步骤3：题示化合物77的制备：
含化合物77B(32mg，0.12mmol)的DMF(1ml)用NaH(60％油分散剂)(12mg，0.3mmol)处理。在环境温度下搅拌5分钟后，加入化合物2C(63mg，0.1mmol)，继续搅拌1小时。加入额外的NaH(60％油分散剂)(12mg，0.3mmol)，混合物在环境温度下搅拌过夜。加入NaOH(4N水溶液)(0.25ml，1mmol)，混合物在环境温度下搅拌4小时。加入HCl(4N，二氧杂环己烷中)(2.5ml，10mmol)，混合物在70℃加热数小时。当通过LCMS显示反应完成时，浓缩反应混合物，加入1N HCl以诱导产物的任何进一步沉淀。过滤固体，用水冲洗。固体在Et2O中浆化，过滤，用额外的Et2O冲洗。固体在1∶1DMSO/MeOH中溶解，通过针筒过滤器过滤除去未溶解的盐和杂质，通过HPLC纯化(预制备反相HPLC用自动化Gilson HPLC系统执行，使用SymmetryPrep Shield RP18预制备柱，250mmx21.20mm i.d.，10um，流速25mL/min；λ＝214、245nm；流动相A，含0.1％TFA的H2O；流动相B，CH3CN；40分钟内，B的线性梯度20-90％)，以提供题示化合物77，产率31％，为灰白色固体：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.90(1H，s)，12.83(1H，s)，8.44(2H，s)，8.02(1H，d)，7.79(1H，d)，7.68(1H，d)，7.41(8H，m)，7.17(3H，m)，6.93(1H，d)，4.84(2H，s)，4.10(2H，t)，3.74(2H，t)，3.23(2H，m)，3.04(2H，t)，2.07(2H，m)。MS(ESI(+))m/e 702(M+H)。
实施例78
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-(3-{4-[4-(3-吡咯烷-1-基-丙基氨基)-噻吩并[3，2-d]嘧啶-7-基]-苯氧基}-丙基)-噻唑-4-羧酸(78)的合成：
Figure BDA0000083236130002351
步骤1：7-溴-N-(3-(吡咯烷-1-基)丙基)噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-胺(78A)的制备：
Figure BDA0000083236130002361
化合物78A用与化合物69A的合成类似的方式制备，用3-(吡咯烷-1-基)丙-1-胺代替丙-2-胺：APCI(+)LC/MS：342(M+H)+。
步骤2：4-(4-(3-(吡咯烷-1-基)丙基氨基)噻吩并[3，2-d]嘧啶-7-基)苯酚(78B)的制备：
Figure BDA0000083236130002362
化合物78B用与化合物34D的合成类似的方式制备，分别用化合物77A和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯酚代替化合物34C和4-(羟甲基)苯基硼酸：1H NMR(DMSO-d6)：δ9.53(s，1H)，8.54(s，1H)，8.14(s，1H)，7.96(d，J＝5.68Hz，1H)，7.88-7.92(m，2H)，6.84-6.87(m，2H)，3.58-3.63(m，2H)，3.15-3.19(m，2H)，1.99-2.09(m，2H)，1.91-1.93(m，4H)。ESI(+)/MS：355(M+H)+。
步骤3：题示化合物78的制备：
Figure BDA0000083236130002363
用与化合物51的合成类似的方式，将题示化合物78制备为TFA盐，用化合物78B代替化合物51A：1H NMR(DMSO-d6)：δ12.82(s，1H)，9.53(s，1H)，8.52(s，1H)，8.22(s，1H)，8.03-8.07(m，1H)，8.01(d，J＝7.98Hz，1H)，7.69(d，J＝8.59Hz，1H)，7.79(d，J＝7.98Hz，1H)，7.67(d，J＝7.36Hz，1H)，7.32-7.49(m，4H)，7.01(d，J＝8.9Hz，2H)，4.84(s，2H)，4.04(t，J＝6.29Hz，2H)，3.73(t，J＝5.83Hz，2H)，3.18-3.24(m，4H)，3.01-3.05(m，4H)，1.78-2.07(m，6H)。ESI(+)/MS：831(M+H)+。
实施例79
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-(3-{4-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-噻吩并[3，2-d]嘧啶-7-基]-苯氧基}-丙基)-噻唑-4-羧酸(79)的合成：
Figure BDA0000083236130002371
步骤1：7-溴-4-(4-甲基哌嗪-1-基)噻吩并[3，2-d]嘧啶(79A)的制备：
Figure BDA0000083236130002372
化合物79A用与实施例69的步骤1中描述的合成类似的方式制备，用1-甲基哌嗪代替丙-2-胺：ESI(+)LC/MS：314(M+H)+。
步骤2：4-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)噻吩并[3，2-d]嘧啶-7-基)苯酚(79B)的制备：
Figure BDA0000083236130002381
化合物79B用与化合物34D的合成类似的方式制备，分别用化合物79A和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯酚代替化合物34C和4-(羟甲基)苯基硼酸：1H NMR(DMSO-d6)：δ9.56(s，1H)，8.63(s，1H)，8.28(s，1H)，7.85-7.89(m，2H)，6.84-6.88(m，2H)，4.06(br，4H)，2.91(br，4H)，2.53(s，3H)。ESI(+)/MS：327(M+H)+。
步骤3：题示化合物79的制备：
用与化合物51的合成类似的方式，将题示化合物79制备为TFA盐，用化合物79B代替化合物51A：1H NMR(DMSO-d6)：δ12.86(s，1H)，9.98(s，1H)，8.69(s，1H)，8.40(s，1H)，8.01(d，J＝7.36Hz，1H)，7.69(d，J＝8.9Hz，2H)，7.79(d，J＝7.98Hz，1H)，7.67(d，J＝7.36Hz，1H)，7.32-7.49(m，4H)，7.02(d，J＝8.9Hz，2H)，4.78-4.84(m，4H)，4.05(t，J＝6.29Hz，2H)，3.73(t，J＝6.14Hz，2H)，3.57(br，6H)，3.18-3.22(m，2H)，3.03(t，J＝5.83Hz，2H)，2.87(s，3H)，2.00-2.09(m，2H)。ESI(+)/MS：803(M+H)+。
实施例80
5-(3-(4-((1S，2S，5R，9S)-9-氨基双环[3.3.1]壬烷-2-基)苯氧基)丙基)-2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)噻唑-4-羧酸(80)的合成：
Figure BDA0000083236130002391
步骤1：(1S，2S，5R，9S)-2-(4-羟基苯基)双环[3.3.1]壬烷-9-基氨基甲酸叔丁酯(80A)的制备：
Figure BDA0000083236130002392
含4-((1S，2S，5R，9S)-9-氨基双环[3.3.1]壬烷-2-基)苯酚HCl盐(92mg，0.344mmol)的THF(2ml)，用二碳酸二叔丁酯(0.088ml，0.38mmol)和Et3N(0.19ml，1.37mmol)处理，在环境温度下搅拌三小时。反应混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。浓缩液通过柱色谱用硅胶纯化，用含0到5％MeOH的CH2Cl2梯度洗脱：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 9.09(1H，s)，7.01(2H，m)，6.68(2H，m)，3.53(1H，m)，3.01(1H，m)，2.09(3H，m)，1.69(10H，m)，1.42(9H，s)。
步骤2：题示化合物80的制备：
Figure BDA0000083236130002393
含(1S，2S，5R，9S)-2-(4-羟基苯基)双环[3.3.1]壬烷-9-基氨基甲酸叔丁酯80A(40.5mg，0.11mmol)的DMF(1ml)，用NaH(12mg，0.3mmol)处理。在环境温度下搅拌5分钟后，加入化合物2C(63mg，0.1mmol)，继续搅拌1.5小时。加入HCl(4N HCl，二氧杂环己烷中)(2.5ml，10mmol)，混合物在室温下搅拌过夜，然后在60℃搅拌6小时。反应混合物冷却至室温并浓缩。残余物用1N HCl浆化，过滤，用水冲洗，在Et2O中浆化，过滤，用额外的Et2O冲洗。固体通过柱色谱用硅胶纯化，使用含0到5％MeOH的CH2Cl2梯度。固体在二氧杂环己烷(2ml)中溶解，用NaOH(4N水溶液)(0.25mL，1mmol)处理，在室温下搅拌过夜。反应混合物用1N HCl酸化，以诱导产物沉淀。过滤固体，用水冲洗，在Et2O中浆化，过滤，用额外的Et2O冲洗。固体通过HPLC纯化(预制备反相HPLC用自动化Gilson HPLC系统执行，使用SymmetryPrep Shield RP18预制备柱，250mmx21.20mm i.d.，10um，流速25mL/min；λ＝214、245nm；流动相A，含0.1％TFA的H2O；流动相B，CH3CN；40分钟内，B的线性梯度20-90％)，以提供题示化合物80，产率7％，为灰白色固体：1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 12.85(1H，s)，12.50(1H，s)，8.03(1H，d)，7.97(2H，d)，7.67(1H，d)，7.47(2H，m)，7.37(2H，m)，7.13(2H，d)，6.88(2H，m)，4.83(2H，s)，3.95(2H，t)，3.72(2H，t)，3.17(2H，m)，3.02(2H，m)，2.19(2H，m)，1.98(5H，m)，1.80(5H，m)，1.59(2H，m)，1.40(3H，m)。MS(ESI(+))m/e 708(M+H)。
实施例81
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-[3-(4-嘧啶-2-基-苯氧基)-丙基]-噻唑-4-羧酸(81)的合成：
步骤1：4-(嘧啶-2-基)苯酚(81A)的制备：
Figure BDA0000083236130002412
化合物81A用与化合物34D的合成类似的方式制备，分别用2-溴嘧啶和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯酚代替化合物34C和4-(羟甲基)苯基硼酸：1H NMR(DMSO-d6)：δ9.92(s，1H)，8.80(d，J＝4.6Hz，2H)，8.22-8.26(m，2H)，7.31(t，J＝4.6Hz，1H)，6.89-6.89(m，2H)。
步骤2：题示化合物81的制备：
用与化合物51的合成类似的方式，将题示化合物81制备为TFA盐，用化合物81A代替化合物51A：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.83(d，J＝4.88Hz，2H)，8.32(d，J＝8.85Hz，2H)，8.03(d，J＝4.88Hz，1H)，7.79(d，J＝8.85Hz，1H)，7.67(d，J＝7.63Hz，1H)，7.34-7.49(m，5H)，7.04(d，J＝8.85Hz，2H)，4.84(s，2H)，4.07(t，J＝6.26Hz，2H)，3.72(t，J＝5.95Hz，2H)，3.18-3.12(m，2H)，3.03(t，J＝5.64Hz，2H)，2.01-2.07(m，2H)。ESI(+)/MS：649(M+H)+。
实施例82
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-{3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯氧基]-丙基}-噻唑-4-羧酸(82)的合成：
Figure BDA0000083236130002421
步骤1：4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯酚(82A)的制备：
Figure BDA0000083236130002422
化合物82A用与化合物62A的合成类似的方式制备，分别用多聚甲醛和4-(哌嗪-1-基)苯酚代替化合物42C和苯基哌嗪：1H NMR(DMSO-d6)：δ6.74-6.78(m，2H)，6.61-6.65(m，2H)，2.93-2.95(m，4H)，2.41-2.44(m，4H)，2.22(s，3H)。ESI(+)/MS：193(M+H)+。
步骤2：题示化合物82的制备：
用与化合物51的合成类似的方式，将题示化合物82制备为TFA盐，用化合物82A代替化合物51A：1H NMR(DMSO-d6)：δ12.90(s，1H)，9.58(s，1H)，8.04(d，J＝7.63Hz，2H)，7.80(d，J＝7.93Hz，2H)，7.67(d，J＝7.63Hz，1H)，7.35-7.50(m，4H)，6.90-6.92(m，2H)，6.82-6.85(m，2H)，4.83(s，2H)，3.91(t，J＝6.26Hz，2H)，3.14-3.17(m，2H)，3.03(t，J＝5.95Hz，2H)，2.82-2.86(m，5H)，1.94-2.00(m，2H)。ESI(+)/MS：669(M+H)+。
实施例83
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(1-(2-吗啉基乙基)-1H-吡唑-4-基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(83)的合成：
步骤1：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(1-(2-吗啉基乙基)-1H-吡唑-4-基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸叔丁酯(83A)的制备：
Figure BDA0000083236130002432
化合物83A使用实施例73的步骤1中描述的相同程序制备，用4-(2-(4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑-1-基)乙基)吗啉代替4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)-1H-吡唑：LCMS(APCI)m/e 936(M+H)。
步骤2：题示化合物83的制备：
题示化合物83使用实施例73的步骤2中描述的相同程序制备，用化合物83A代替化合物73A：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm12.87(1H，s)，8.12(1H，s)，8.02(1H，d)，7.89(1H，s)，7.79(1H，d)，7.67(1H，d)，7.33-7.50(6H，m)，6.91(2H，d)，4.84(2H，s)，4.52(2H，t)，3.98(2H，t)，3.77-3.93(2H，m)，3.73(2H，t)，3.51-3.65(2H，m)，3.40-3.50(2H，m)，3.13-3.25(6H，m)，3.03(2H，t)，1.95-2.07(2H，m)；LCMS(APCI)751(M+H)。
实施例84
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(4-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基氨基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(84)的合成：
步骤1：4-(4-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基氨基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯酚(84A)的制备：
Figure BDA0000083236130002451
题示化合物84A使用实施例44的步骤4中描述的相同程序制备，用3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙-1-胺代替异丙胺；LCMS(APCI)m/e 368(M+H)。
步骤2：题示化合物84的制备：
题示化合物84使用实施例54的步骤2中描述的相同程序制备，用化合物84A代替化合物54A。1H NMR(500MHz，吡啶-D5)δppm8.69(1H，s)，8.44-8.50(1H，m)，8.41(2H，d)，8.31(1H，s)，7.95(1H，d)，7.89(1H，d)，7.78(1H，dd)，7.43(1H，t)，7.25-7.31(3H，m)，7.14(2H，d)，5.15(2H，s)，4.09(2H，t)，3.76-3.84(4H，m)，3.48(2H，t)，2.90(2H，t)，2.71(8H，dd)，2.61(2H，t)，2.38(3H，s)，2.14-2.23(2H，m)，1.93-2.00(2H，m)。
实施例85
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(5-甲基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1H-吡唑-1-基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(85)的合成：
Figure BDA0000083236130002461
步骤1：4-(5-甲基-4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)-1H-吡唑-1-基)苯酚(85A)的制备：
Figure BDA0000083236130002462
向1-(4-甲氧基苯基)-3-甲基-1H-吡唑-4-甲醛(232mg，1.073mmol)在DCE(3.5ml)中的溶液中，加入1-甲基哌嗪(0.119ml，1.073mmol)和三乙酰氧基硼氢化钠(455mg，2.146mmol)。反应搅拌过夜，用乙酸乙酯稀释，用盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩。残余物在环丁砜(5ml)中用三甲基碘硅烷(1.327ml，9.32mmol)在80℃处理过夜，冷却。反应混合物用甲醇稀释，通过反相HPLC纯化(流动相：含0％-30％乙腈的0.1％TFA水溶液，30min内)，以提供题示化合物，为TFA盐；LCMS(APCI)m/e 287(M+H)。
步骤2：题示化合物85的制备：
题示化合物85使用实施例54的步骤2中描述的相同程序制备，用化合物85A代替化合物54A：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm12.87(1H，s)，8.02(1H，d)，7.79(1H，d)，7.67(1H，d)，7.57(1H，d)，7.43-7.51(2H，m)，7.33-7.41(4H，m)，7.01-7.07(2H，m)，4.84(2H，s)，4.04(2H，t)，3.97(2H，s)，3.68-3.79(4H，m)，3.46-3.53(2H，m)，3.12-3.26(7H，m)，3.04(4H，t)，2.76(2H，s)，2.25(3H，s)。
实施例86
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-{3-[4-(3-氰基-吡嗪-2-基)-苯氧基]-丙基}-噻唑-4-羧酸(86)的合成：
Figure BDA0000083236130002471
步骤1：3-(4-羟基苯基)吡嗪-2-腈(86A)的制备：
化合物86A用与化合物34D的合成类似的方式制备，分别用3-氯吡嗪-2-腈和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯酚代替化合物34C和4-(羟甲基)苯基硼酸：1H NMR(DMSO-d6)：δ10.14(s，1H)，8.95(d，J＝2.45Hz，1H)，8.73(d，J＝2.45Hz，1H)，7.83-7.85(m，2H)，6.95-6.99(m，2H)。ESI(+)/MS：211(M+H)+。
步骤2：题示化合物86的制备：
用与化合物51的合成类似的方式，将题示化合物86制备为TFA盐，用化合物86A代替化合物51A：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.96(d，J＝2.45Hz，1H)，8.76(d，J＝2.45Hz，1H)，8.02(d，J＝7.98Hz，2H)，7.90-7.93(d，J＝7.98Hz，2H)，7.78(d，J＝7.98Hz，1H)，7.67(d J＝7.67Hz，1H)，7.33-7.49(m，4H)，7.11-7.15(m，2H)，4.84(s，2H)，4.1(t，J＝6.29Hz，2H)，3.70-3.74(m，2H)，3.19-3.23(m，2H)，3.03(t，J＝5.83Hz，2H)，2.02-2.09(m，2H)。ESI(+)/MS：674(M+H)+。
实施例87
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-{3-[3-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯氧基]-丙基}-噻唑-4-羧酸(87)的合成：
Figure BDA0000083236130002481
步骤1：3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯酚(87A)的制备：
Figure BDA0000083236130002482
化合物87A用与化合物62A的合成类似的方式制备，分别用多聚甲醛和3-(哌嗪-1-基)苯酚代替化合物45C和苯基哌嗪：1H NMR(DMSO-d6)：δ9.07(s，1H)，6.94-6.98(m，1H)，6.36(d，J＝8.13，2.4Hz，2H)，8.28-8.29(m，1H)，6.18-6.21(m，1H)，3.04-3.07(m，4H)，2.41-2.43(m，4H)，2.21(s，3H)。ESI(+)/MS：193(M+H)+。
步骤2：题示化合物87的制备：
用与化合物51的合成类似的方式，将题示化合物87制备为TFA盐，用化合物87A代替化合物51A：1H NMR(DMSO-d6)：δ12.85(s，1H)，9.65(s，1H)，8.03(d，J＝7.67Hz，1H)，7.79(d，J＝7.98Hz，2H)，7.67(d，J＝7.67Hz，1H)，7.34-7.50(m，4H)，7.12(t，J＝8.13Hz，1H)，6.54(dd，J＝8.13，2.3Hz，1H)，6.50(t，J＝2.15Hz，1H)，6.42(dd，J＝8.29，2.15Hz，1H)，4.83(s，2H)，3.96(t，J＝6.29Hz，2H)，3.73(t，J＝5.83Hz，2H)，3.10-3.18(m，5H)，3.03(t，J＝5.98Hz，2H)，2.90-2.98(m，2H)，2.85(s，3H)，1.95-2.02(m，2H)。ESI(+)/MS：669(M+H)+。
实施例88
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-{3-[4-(2-吗啉-4-基-乙氧基)-苯氧基]-丙基}-噻唑-4-羧酸(88)的合成：
Figure BDA0000083236130002491
步骤1：4-(2-(4-(苄氧基)苯氧基)乙基)吗啉(88A)的制备：
Figure BDA0000083236130002501
化合物88A用与化合物35A的合成类似的方式制备，分别用2-吗啉基乙醇和4-(苄氧基)苯酚代替化合物34B和化合物31F：ESI(+)LC/MS：314(M+H)+。
步骤2：4-(2-吗啉基乙氧基)苯酚(88B)的制备：
Figure BDA0000083236130002502
化合物88B用与化合物31F的合成类似的方式制备，用化合物88A代替化合物31E：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.84(s，1H)，6.72-6.75(m，2H)，6.64-6.67(m，2H)，3.96(d，J＝5.83Hz，2H)，3.55-3.58(m4H)，2.63(d，J＝5.83Hz，2H)，2.42-2.46(m，4H)。ESI(+)/MS：224(M+H)+。
步骤3：题示化合物88的制备：
用与化合物51的合成类似的方式，将题示化合物88制备为TFA盐，用化合物88B代替化合物51A：1H NMR(DMSO-d6)：δ12.86(s，1H)，9.96(s，1H)，8.03(d，J＝7.98Hz，1H)，7.79(d，J＝7.98Hz，2H)，7.67(d，J＝7.36Hz，1H)，6.86-6.94(m，4H)，4.83(s，2H)，4.25-4.27(m，2H)，3.91-4.02(m，4H)，3.73(t，J＝5.98Hz，2H)，3.14-3.22(m，4H)，3.03(t，J＝5.98Hz，2H)，1.94-2.01(m，2H)。ESI(+)/MS：700(M+H)+。
实施例89
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-{3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基甲基)-苯氧基]-丙基}-噻唑-4-羧酸(89)的合成：
Figure BDA0000083236130002511
步骤1：4-((4-甲基哌嗪-1-基)甲基)苯酚(89A)的制备
Figure BDA0000083236130002512
化合物89A用与化合物62A的合成类似的方式制备，分别用4-羟基苯甲醛和1-甲基哌嗪代替化合物45C和苯基哌嗪：ESI(+)/MS：207(M+H)+。
步骤2：题示化合物89的制备：
用与化合物51的合成类似的方式，将题示化合物89制备为TFA盐，用化合物89A代替化合物51A：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.03(d，J＝7.67Hz，1H)，7.79(d，J＝7.98Hz，1H)，7.67(d，J＝7.06Hz，1H)，7.34-7.50(m，4H)，7.28(d，J＝8.59Hz，2H)，6.93(d，J＝8.59Hz，2H)，4.83(s，2H)，3.98(d，J＝6.29Hz，2H)，3.16-3.19(m，4H)，3.03(t，J＝5.83Hz，2H)，2.76(s，3H)，1.97-2.03(m，2H)。ESI(+)/MS：683(M+H)+。
实施例90
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-(3-{4-[5-(2-二甲基氨基-乙氧基)-吡啶-2-基]-苯氧基}-丙基)-噻唑-4-羧酸(90)的合成：
Figure BDA0000083236130002521
步骤1：2-(6-氯吡啶-3-氧基)-N，N-二甲基乙胺(90A)的制备：
Figure BDA0000083236130002522
化合物90用与化合物35A的合成类似的方式制备，分别用2-(二甲基氨基)乙醇和6-氯吡啶-3-醇代替化合物34C和化合物31F。
步骤2：4-(5-(2-(二甲基氨基)乙氧基)吡啶-2-基)苯酚(90B)：
Figure BDA0000083236130002523
化合物90B用与化合物34D的合成类似的方式制备，分别用化合物90A和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯酚代替化合物34C和4-(羟甲基)苯基硼酸：1H NMR(DMSO-d6)：δ9.56(s，1H)，8.29(d，J＝2.76Hz，1H)，7.83(d，J＝8.59Hz，2H)，7.74(d，J＝8.59Hz，2H)，7.41(dd，J＝8.59，2.76Hz，2H)，6.82(d，J＝8.29Hz，2H)，4.14(t，J＝5.68Hz，2H)，2.64(t，J＝5.68Hz，2H)，2.22(s，6H)。ESI(+)/MS：258(M+H)+。
步骤3：题示化合物90的制备：
用与化合物51的合成类似的方式，将题示化合物90制备为TFA盐，用化合物90B代替化合物51A：1H NMR(DMSO-d6)：δ9.60(s，1H)，8.09(d，J＝2.76Hz，1H)，8.02(d，J＝7.37Hz，1H)，7.93(d，J＝8.9Hz，2H)，7.85(d，J＝8.9Hz，1H)，7.79(d，J＝8.29Hz，1H)，7.67(d，J＝7.67Hz，1H)，7.33-7.51(m，5H)，6.99(d，J＝8.9Hz，2H)，4.84(s，2H)，4.42-4.45(m，2H)，4.04(d，J＝6.29Hz，2H)，3.83(d，J＝5.83Hz，1H)，3.55(br，2H)，3.16-3.21(m，2H)，3.03(t，J＝5.83Hz，2H)，2.89(s，6H)，1.99-2.07(m，2H)。ESI(+)/MS：735(M+H)+。
实施例91
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-((1-(4-羟基苯基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-4-基)(3-(4-甲基哌嗪-1-基)丙基)氨基)丙基)噻唑-4-羧酸(91)的合成：
Figure BDA0000083236130002541
向化合物84A(50mg，0.136mmol)在DMF(5ml)中的溶液中，加入氢化钠(27.2mg，0.680mmol)(60％)。反应混合物搅拌10min，加入化合物2C(77mg，0.122mmol)。得到的混合物搅拌1小时，加入甲醇(3ml)、10％NaOH和水(1ml)。混合物搅拌过夜，用TFA酸化，浓缩。残余物在DMSO-甲醇混合物中溶解，通过反相HPLC纯化(流动相：含0％-60％乙腈的0.1％TFA水溶液，60min内)，以提供题示化合物91，为TFA盐：1H NMR(500MHz，吡啶-D5)δppm 8.62(1H，s)，8.41(1H，s)，8.35(2H，d)，7.94(1H，d)，7.89(1H，d)，7.77-7.81(1H，m)，7.43(1H，t)，7.24-7.33(5H，m)，5.15(2H，s)，3.93-4.01(2H，m)，3.87(2H，d)，3.81(2H，t)，3.45(2H，t)，2.92(2H，t)，2.79-2.85(4H，m)，2.62-2.69(4H，m)，2.42-2.47(5H，m)，2.18-2.28(2H，m)，1.89-1.98(2H，m)；LCMS(APCI)m/e 844(M+H)。
实施例92
6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(4-(4-(3-(二甲基氨基)丙基氨基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯氧基)丙基)吡啶甲酸(92)的合成：
Figure BDA0000083236130002551
步骤1：6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(4-(4-(3-(二甲基氨基)丙基氨基)-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-1-基)苯氧基)丙基)吡啶甲酸叔丁酯(92A)的制备：
Figure BDA0000083236130002552
向化合物54A(100mg，0.320mmol)在DMF(5ml)中的溶液中，加入氢化钠(60％，38.4mg，0.960mmol)。反应搅拌10min，加入化合物96D(168mg，0.256mmol)。得到的混合物搅拌1小时，通过反相HPLC纯化(流动相：含0％-70％乙腈的0.1％TFA水溶液，70min内)，以提供题示化合物92A，为TFA盐。LCMS(APCI)m/e 839(M+H)。
步骤2：题示化合物92的制备：
化合物92A(90mg，0.107mmol)和三乙基硅烷(37.4mg，0.322mmol)在DCM(1ml)中，用TFA(3ml，38.9mmol)处理4h。浓缩混合物，残余物通过反相HPLC纯化(流动相：含0％-60％乙腈的0.1％TFA水溶液，70min内)，以提供题示化合物，为TFA盐：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 12.82(1H，s)，9.37(1H，s)，8.55(1H，t)，8.34(1H，d)，8.03(1H，d)，7.96-8.01(2H，m)，7.79(1H，d)，7.55-7.63(2H，m)，7.44-7.50(2H，m)，7.39-7.43(1H，m)，7.35(2H，t)，7.05-7.09(2H，m)，6.97(1H，d)，4.93(2H，s)，3.99(2H，q)，3.87(2H，t)，3.43-3.70(2H，m)，3.12-3.18(2H，m)，2.99(2H，t)，2.82-2.87(2H，m)，2.80(6H，s)，1.91-2.05(4H，m)。LCMS(APCI)783(M+H)。
实施例93
2-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-5-{3-[2-氟-4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯氧基]-丙基}-噻唑-4-羧酸(93)的合成：
Figure BDA0000083236130002561
步骤1：1-(苄氧基)-4-溴-2-氟苯(93A)的制备：
Figure BDA0000083236130002562
4-溴-2-氟苯酚(2.557g，13.39mmol)和(溴甲基)苯(1.590ml，13.39mmol)在DMF(20ml)中用K2CO3(3.70g，26.8mmol)处理过夜。然后反应用乙酸乙酯稀释，用水洗涤。有机层用Na2SO4干燥，浓缩，以提供题示化合物。LCMS(APCI)m/e 282(M+H)。
步骤2：1-(4-(苄氧基)-3-氟苯基)-4-甲基哌嗪(93B)的制备：
向烤箱干燥的小瓶中充填t-BuONa(360mg，3.75mmol)、Pd2(dba)3(51.5mg，0.056mmol)和(S)-BINAP(105mg，0.169mmol)。加入甲苯(5ml)、实施例93A(527mg，1.875mmol)和1-甲基哌嗪(416μl，3.75mmol)。得到的混合物用氮气吹扫，密封小瓶，在80℃加热过夜。浓缩反应，残余物通过反相HPLC纯化(流动相：含0％-50％乙腈的0.1％TFA水溶液，40min内)，以提供题示化合物，为TFA盐：LCMS(APCI)m/e 301(M+H)。
步骤3：2-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯酚(93C)的制备：
Figure BDA0000083236130002572
含化合物93B(230mg，0.766mmol)的MeOH(5ml)用10％Pd/C(48mg，0.045mmol)在H2环境下处理过夜。通过硅藻土过滤除去不可溶的材料，浓缩滤液。残余物通过反相HPLC纯化(流动相：含0％-30％乙腈的0.1％TFA水溶液，30min内)，以提供题示化合物，为TFA盐：LCMS(APCI)m/e 211(M+H)。
步骤4：题示化合物93的制备：
题示化合物92使用实施例54的步骤2中描述的相同程序制备，用化合物93代替化合物54A：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm12.85(1H，s)，9.64(1H，s)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.67(1H，d)，7.43-7.51(2H，m)，7.33-7.42(2H，m)，7.03(1H，t)，6.92(1H，dd)，6.70(1H，dd)，4.83(2H，s)，3.98(2H，t)，3.72(2H，t)，3.40-3.55(2H，m)，3.33-3.39(2H，m)，3.09-3.20(4H，m)，3.03(2H，t)，2.85-2.95(2H，m)，2.84(3H，s)，1.93-2.02(2H，m)。LCMS(APCI)m/e 687(M+H)。
实施例94
6-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-3-{3-[4-(4-甲基-哌嗪-1-基)-苯氧基]-丙基}-吡啶-2-羧酸(94)的合成：
步骤1：3-溴-6-氯吡啶甲酸叔丁酯(94A)的制备：
Figure BDA0000083236130002582
甲苯磺酰基氯(7.7g，40.4mmol)在0℃加入到2-氯-5-溴吡啶甲酸(4g，17mmol)和吡啶(9.2mL，114mmol)在33mL t-BuOH中的溶液中。然后反应在室温下搅拌12小时。然后加入NaHCO3(饱和)，用乙酸乙酯萃取混合物(3次)。合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥。蒸发有机溶剂，提供所需化合物94A，其在下一步骤中使用，无需进一步纯化：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 8.27(1H，d)，7.63(1H，d)，1.57(9H，s)。
步骤2：6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-溴吡啶甲酸叔丁酯(94B)的制备：
反应开始前，Cs2CO3(4.1g，12.6mmol)和
Figure BDA0000083236130002592
筛在高度真空下在150℃干燥6到10小时。冷却至室温后，化合物94A(0.736g，2.53mmol)和化合物1B(1.62g，3mmol)转移到反应容器中，用氮气吹扫环境。然后加入12mL无水DMA，反应在120℃搅拌12小时。冷却的反应混合物然后用乙酸乙酯和10％柠檬酸稀释。有机相用柠檬酸洗涤三次，用水和盐水洗涤一次，用Na2SO4干燥。浓缩，提供橙色薄膜/泡沫。用Flash Master纯化(SiO2，乙酸乙酯/石油醚0∶100到40∶60)，提供白色固体(1.15g，产率80％)：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm12.84(1H，s)，8.03(1H，d)，7.77(2H，m)，7.58(1H，d)，7.40(4H，m)，6.86(1H，d)，4.92(2H，s)，3.78(2H，t)，3.01(2H，t)，1.34(9H，s)。
步骤3：3-溴-6-(8-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸(Z)-叔丁酯(94C)的制备：
Figure BDA0000083236130002601
化合物94B(350mg，0.62mmol)在THF中溶解。连续加入NEt3(127μL，0.91mmol)和SEMCl(135μL，0.74mmol)。反应在室温下搅拌1小时。然后浓缩。残余物溶解到乙酸乙酯和水中。水层用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥。浓缩后，残余物通过快速色谱使用flash master纯化：SiO2，乙酸乙酯/石油醚0∶100到30∶70。获得淡黄色泡沫固体94B，为两种不可分离的异构体的混合物(276mg，64％)。
步骤4：3-(2-(1，3-二氧戊环-2-基)乙基)-6-(8-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸(Z)-叔丁酯(94D)的制备：
化合物94C(2.97g，4.27mmol)、二环己基(2′，6′-二甲氧基联苯基-2-基)膦(0.35g，0.854mmol)和乙酸钯(0.096g，0.427mmol)在THF(20mL)中的混合物，在室温下搅拌5min。在室温下向该溶液中滴加0.5M(2-(1，3-二氧戊环-2-基)乙基)溴化锌(II)(17.08mL，8.54mmol)。反应搅拌过夜。向溶液中加入2′，6′-二甲氧基联苯基-2-基)膦(170mg)、乙酸钯(42mg)和(2-(1，3-二氧戊环-2-基)乙基)溴化锌(II)(15mL)。得到的混合物搅拌另外6小时，浓缩。残余物加载到硅胶柱上，用7∶3/己烷∶EtOAc洗脱，以提供2.75g所需产物94D，是两种异构体的混合物。APCI(+)LC/MS：717(M+H)+。
步骤5：3-(3-氧丙基)-6-(8-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸(Z)-叔丁酯(94E)的制备：
Figure BDA0000083236130002611
化合物94D(1.47g)在THF(30mL)中溶解。向该溶液中加入5％HCl(10mL)。反应混合物在48℃加热90min。冷却至室温后，用饱和NaHCO3溶液淬灭反应混合物，直到不再释放CO2。溶液在真空中浓缩。残余物在EtOAc中重溶解，用水(100mL)处理。分离有机层，用额外的EtOAc萃取水层(三次)。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，在真空中浓缩。残余物使用快速柱色谱用硅胶纯化，用7∶3/Hex∶EtOAc洗脱，得到1.10g题示化合物94E(80％)：APCI(+)LC/MS：673(M+H)+。
步骤6：3-(3-羟丙基)-6-(8-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸(Z)-叔丁酯(94F)的制备：
Figure BDA0000083236130002621
化合物94E(0.91g，1.351mmol)在THF(30mL)和甲醇(5mL)中用NaBH4(0.102g，2.7mmol)处理。反应混合物加热回流1小时。在真空中除去溶剂。残余物在EtOAc中重溶解，用水处理。分离有机层，用额外的EtOAc萃取水层。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。残余物通过快速色谱纯化，得到0.75g题示化合物94F(82％)：APCI(+)LC/MS：675(M+H)+。
步骤7：6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基)丙基)吡啶甲酸叔丁酯(94G)的制备：
Figure BDA0000083236130002622
题示化合物94G用与化合物35A的合成类似的方式制备，分别用化合物94F和化合物82A代替化合物34D和化合物31F：ESI(+)LC/MS：849(M+H2O-NH4)+。
步骤7：题示化合物94的制备：
含化合物94G(0.012g)的二氧杂环己烷(2mL)用在二氧杂环己烷(2mL)和甲醇(0.5mL)中的4N HCl处理。溶液在60℃搅拌6小时。除去溶剂，残余物通过预制备HPLC纯化，得到题示化合物94，为TFA盐：1H NMR(DMSO-d6)：δ12.85(d，J＝7.02Hz，1H)，9.70(d，J＝9.46Hz，1H)，8.04(d，J＝7.63Hz，1H)，7.79(d，J＝7.93Hz，1H)，7.60(d，J＝7.63Hz，1H)，7.55(d，J＝8.85Hz，1H)，7.34-7.50(m，4H)，6.96(d，J＝8.54Hz，1H)，6.90-6.93(m，2H)，6.81-6.84(m，2H)，4.92(s，2H)，3.85-3.87(m，4H)，3.62-3.64(m，2H)，3.12-3.18(m，2H)，2.98(t，J＝5.8Hz，2H)，2.79-2.86(m，7H)，1.86-1.93(m，2H)，1.26-1.28(m，2H)。ESI(+)LC/MS：663(M+H)+。
实施例95
6-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-3-(3-{4-[5-(2-二甲基氨基-乙氧基)-吡啶-2-基]-苯氧基}-丙基)-吡啶-2-羧酸(95)的合成：
Figure BDA0000083236130002631
步骤1：6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(4-(5-(2-(二甲基氨基)乙氧基)吡啶-2-基)苯氧基)丙基)吡啶甲酸叔丁酯(95A)的制备：
化合物95A用与化合物35A的合成类似的方式制备，分别用化合物94F和化合物90B代替化合物34D和化合物31F：ESI(+)LC/MS：915(M+H2O-NH4)+。
步骤2：题示化合物95的制备：
题示化合物95用与实施例94的合成类似的方式制备，用化合物95A代替化合物94G：1H NMR(DMSO-d6)：δ12.80(s，1H)，9.69(s，1H)，8.39(d，J＝3.07Hz，1H)，8.03(d，J＝7.67Hz，1H)，7.93(d，J＝8.59Hz，2H)，7.86(d，J＝8.59Hz，1H)，7.79(d，J＝7.98Hz，1H)，7.33-7.61(m，7H)，6.96-7.00(m，1H)，4.93(s，2H)，4.43-4.45(m，2H)，3.99(d，J＝6.6Hz，2H)，3.69(d，J＝5.98Hz，2H)，2.98(t，J＝5.83Hz，2H)，2.82-2.89(m，8H)，1.93-2.01(m，2H)。ESI(+)/MS：729(M+H)+。
实施例96
6-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-3-[3-(4-嘧啶-2-基-苯氧基)-丙基]-吡啶-2-羧酸(96)的合成：
Figure BDA0000083236130002651
步骤1：3-(2-(1，3-二氧戊环-2-基)乙基)-6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸叔丁酯(96A)的制备：
Figure BDA0000083236130002652
化合物94B(8.0g，14.15mmol)、二环己基(2′，6′-二甲氧基联苯基-2-基)膦(1.162g，2.83mmol)和乙酸钯(0.318g，1.415mmol)在THF(60mL)中的混合物，在室温下搅拌5min。在室温下通过额外的漏斗向该溶液中滴加0.5M(2-(1，3-二氧戊环-2-基)乙基)溴化锌(II)(56.6mL，28.3mmol)。反应搅拌过夜。除去溶剂，残余物加载到二氧化硅柱上，用7∶3/己烷∶EtOAc洗脱，得到7.58g所需产物96A：APCI(+)LC/MS：587(M+H)+。
步骤2：6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-氧丙基)吡啶甲酸叔丁酯(96B)的制备：
Figure BDA0000083236130002661
化合物96A(7.58g)在THF(120mL)中溶解。向该溶液中加入5％HCl水溶液(100mL)。反应混合物在48℃加热90min。冷却至室温后，用饱和NaHCO3溶液淬灭反应混合物，直到不再释放CO2。溶液在真空中浓缩。残余物在EtOAc中重溶解，用水(500mL)处理。分离有机层，用额外的EtOAc萃取水层(三次)。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，在真空中浓缩。残余物使用快速柱色谱用硅胶纯化，用7∶3/Hex∶EtOAc洗脱，得到5.5g题示化合物96B(78％)：APCI(+)LC/MS：543(M+H)+。
步骤3：6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-34-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-羟丙基)吡啶甲酸叔丁酯(96C)的制备：
Figure BDA0000083236130002662
化合物96B(5.5g，10.14mmol)在THF(100mL)和甲醇(20mL)中用NaBH4(0.767g，20.28mmol)处理。反应混合物加热回流1小时。在真空中除去溶剂。残余物在EtOAc中重溶解，用水处理。分离有机层，用额外的EtOAc萃取水层。合并的有机层用盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。残余物通过快速色谱纯化，得到5.13g题示化合物96C(93％)：APCI(+)LC/MS：545(M+H)+。
步骤4：6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-碘丙基)吡啶甲酸叔丁酯(96D)的制备：
化合物96D用与化合物98A的合成类似的方式制备，用化合物96C代替化合物94F；APCI(+)LC/MS：655(M+H)+。
步骤5：题示化合物96的制备：
用与化合物51的合成类似的方式，将题示化合物96制备为TFA盐，用化合物96D代替化合物51A：ESI(+)/MS：643(M+H)+；1H NMR(DMSO-d6)：δ12.84(s，1H)，8.863(d，J＝4.48，2H)，8.32(d，J＝8.85Hz，2H)，8.03(d，J＝7.93Hz，1H)，7.79(d，J＝7.93Hz，1H)，7.57-7.61(m，2H)，7.46-7.49(m，1H)，7.34-7.37(m，3H)，7.03(d，J＝9.15Hz，2H)，6.98(d，J＝8.54Hz，1H)，4.93(s，2H)，4.01-4.04(m，2H)，3.87(d，J＝5.95Hz，2H)，2.99(d，J＝5.65Hz，2H)，2.83-2.86(m，2H)，1.95-2.01(m，2H)。ESI(+)/MS：643(M+H)+。
实施例97
6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(4-(3-(二甲基氨基)丙-1-炔基)-2-氟苯氧基)丙基)吡啶甲酸(97)的合成：
步骤1：6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(4-溴-2-氟苯氧基)丙基)吡啶甲酸叔丁酯(97A1)；和3-(3-(4-溴-2-氟苯氧基)丙基)-6-(8-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸(Z)-叔丁酯(97A2)的制备：
Figure BDA0000083236130002682
向化合物94F(110mg，0.163mmol)、4-溴-2-氟苯酚(62.3mg，0.326mmol)和三苯基膦(64.1mg，0.244mmol)在THF(3ml)中的溶液中，加入(E)-偶氮二甲酸二叔丁酯(56.3mg，0.244mmol)。反应搅拌2h，加入水(0.5ml)。浓缩混合物，残余物通过快速色谱纯化，用DCM洗脱，以提供化合物97A1和化合物97A2；LCMS(APCI)m/e 848(M+H)。
步骤2：3-(3-(4-(3-(二甲基氨基)丙-1-炔基)-2-氟苯氧基)丙基)-6-(8-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸(Z)-叔丁酯(97B1)；和6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(4-(3-(二甲基氨基)丙-1-炔基)-2-氟苯氧基)丙基)吡啶甲酸叔丁酯(97B2)的制备
Figure BDA0000083236130002691
向化合物97A1和化合物97A2(90mg，0.106mmol)、N，N-二甲基丙-2-炔-1-胺(0.034ml，0.318mmol)、(PPh3)2PdCl2(22.35mg，0.032mmol)、TEA(0.074ml，0.531mmol)在DMF(2ml)中的混合物中，加入碘化亚铜(I)(2.022mg，0.01mmol)。得到的混合物在100℃在油浴中加热过夜，通过反相HPLC纯化(流动相：含10％-95％乙腈的0.1％TFA水溶液，60min内)，以提供化合物97B1和97B2，为TFA盐：LCMS(APCI)m/e 850(M+H)。
步骤3：题示化合物97的制备：
含化合物97B1和化合物97B2(60mg，0.071mmol)的DCM(2ml)用含2N盐酸的乙醚(0.15ml，0.423mmol)处理2h，浓缩反应混合物。残余物在THF(2mL)和MeOH(2mL)中用10％氢氧化钠(256μl，0.639mmol)在70℃处理过夜并浓缩。残余物通过反相HPLC纯化(流动相：含0％-70％乙腈的0.1％TFA水溶液，60min内)，以提供题示化合物97，为TFA盐：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 12.79(1H，s)，10.17(1H，s)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.53-7.63(2H，m)，7.45-7.50(1H，m)，7.39-7.44(2H，m)，7.28-7.38(3H，m)，7.17(1H，t)，6.96(1H，d)，4.93(2H，s)，4.30(2H，s)，4.06(2H，t)，3.87(2H，t)，2.99(2H，t)，2.78-2.90(8H，m)，1.91-2.05(2H，m)；LCMS(APCI)m/e 664(M+H)。
实施例98
6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯氧基)丙基)吡啶甲酸(98)的合成：
Figure BDA0000083236130002701
步骤1：6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-碘丙基)吡啶甲酸叔丁酯(98A1)；和3-(3-碘丙基)-6-(8-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸(Z)-叔丁酯(98A2)的制备
Figure BDA0000083236130002702
化合物94F(874mg，1.3mmol)在二乙醚(6.5ml)和乙腈(2.2ml)中，用咪唑(203mg，2.98mmol)、三苯基膦(509mg，1.94mmol)和碘(493mg，1.94mmol)连续处理。在各次加入之间搅拌反应混合物五分钟，让加入的试剂完全溶解。当全部试剂都已加入时，反应混合物在环境温度下搅拌45分钟，用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。浓缩液通过柱色谱用硅胶纯化，用含5到30％EtOAc的己烷梯度洗脱，提供所需化合物，产率89％，为灰白色固体：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 8.12(1H，dd)，7.95(1H，d)，7.70(1H，d)，7.54(2H，m)，7.37(3H，m)，6.90(1H，d)，5.98(2H，s)，5.20(2H，s)，3.82(2H，t)，3.68(2H，m)，3.23(2H，t)，2.98(2H，t)，2.61(2H，dd)，1.97(2H，m)，1.45(9H，s)，0.88(2H，m)，-0.19(9H，s)。
步骤2：6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯氧基)丙基)吡啶甲酸叔丁酯(98B1)；和3-(3-(4-(4-甲基哌嗪-1-羰基)苯氧基)丙基)-6-(8-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸(Z)-叔丁酯(98B2)的制备
Figure BDA0000083236130002711
(4-羟基苯基)(4-甲基哌嗪-1-基)甲酮(66.1mg，0.3mmol)在DMF(2ml)中用NaH(24mg，0.6mmol)处理。在环境温度下搅拌15分钟后，加入化合物98A1和98A2(157mg，0.2mmol)，继续搅拌3小时。反应混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。浓缩液通过柱色谱用硅胶纯化，用含0到5％MeOH的CH2Cl2梯度洗脱，提供97.5mg(产率56％)所需产物98B1和98B2：LCMS m/e877(M+H)。
步骤3：题示化合物98的制备：
化合物98B1和化合物98B2用三乙基硅烷(0.177ml，1.1mmol)和TFA(1.5ml，19.5mmol)连续处理。加入最低量的二氯甲烷(0.1ml)，以让反应混合物均质。反应混合物在环境温度下搅拌6小时。材料通过HPLC纯化(预制备反相HPLC用自动化Gilson HPLC系统执行，使用SymmetryPrep Shield RP18预制备柱，250mmx21.20mm i.d.，10um，流速25mL/min；λ＝214、245nm；流动相A，含0.1％TFA的H2O；流动相B，CH3CN；40分钟内，B的线性梯度10-70％)，以提供题示化合物98，产率63％，为灰白色固体：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.84(1H，s)，9.70(1H，s)，8.04(1H，d)，7.79(1H，d)，7.59(2H，t)，7.41(6H，m)，6.97(3H，m)，4.93(2H，s)，4.18(2H，m)，3.99(2H，t)，3.87(2H，t)，3.24(4H，m)，3.08(2H，m)，2.99(2H，t)，2.82(5H，m)，1.96(2H，m)。MS(ESI(+))m/e 691(M+H)。
实施例99
6-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-3-(3-羟基-丙基)-吡啶-2-羧酸(99)的合成：
Figure BDA0000083236130002731
向化合物84A(60mg，0.163mmol)在DMF(5ml)中的溶液中，加入氢化钠(32.7mg，0.816mmol)(60％)。反应搅拌10min，加入化合物96D(107mg，0.163mmol)。得到的混合物搅拌3小时，通过反相HPLC纯化(流动相：含0％-50％乙腈的0.1％TFA水溶液，70min内)，以提供题示化合物99：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 12.81(1H，s)，8.04(1H，dd)，7.79(1H，d)，7.60(1H，d)，7.53(1H，d)，7.45-7.50(1H，m)，7.39-7.43(1H，m)，7.32-7.38(2H，m)，6.95(1H，d)，4.92(2H，s)，3.86(2H，t)，3.37(2H，t)，2.99(2H，t)，2.63-2.70(2H，m)，1.58-1.69(2H，m)。LCMS(APCI)489(M+H)。
实施例100
6-[8-(苯并噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢-1H-异喹啉-2-基]-3-{3-[4-(3-二甲基氨基-丙基)-2-氟-苯氧基]-丙基}-吡啶-2-羧酸(100)的合成：
Figure BDA0000083236130002741
步骤1：6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(4-(3-(二甲基氨基)丙基)-2-氟苯氧基)丙基)吡啶甲酸叔丁酯(100A1)；和3-(3-(4-(3-(二甲基氨基)丙基)-2-氟苯氧基)丙基)-6-(8-(3-((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)苯并[d]噻唑-2(3H)-亚基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸(Z)-叔丁酯(100A2)的制备
化合物97B1和97B2(25mg，0.029mmol)在MeOH(5ml)中用氧化铂(IV)(5.34mg，0.024mmol)处理过夜。通过硅藻土滤去不溶的材料，浓缩滤液，以提供化合物100A1和100A2：LCMS(APCI)m/e 854(M+H)。
步骤2：题示化合物100的制备：
在DCM(0.5ml)和MeOH(0.5ml)中的化合物99(20mg，0.023mmol)，用含2N HCl的乙醚(5ml)处理。得到的混合物在室温下搅拌3天，浓缩。残余物通过反相HPLC纯化(流动相：含0％-70％乙腈的0.1％TFA水溶液，60min内)，以提供题示化合物100，为TFA盐：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 12.82(1H，s)，9.34(1H，s)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.60(1H，d)，7.56(1H，d)，7.45-7.51(1H，m)，7.39-7.43(1H，m)，7.33-7.38(2H，m)，7.01-7.11(2H，m)，6.92-6.97(2H，m)，4.93(2H，s)，3.94-4.01(2H，m)，3.87(2H，t)，2.95-3.04(4H，m)，2.79-2.85(2H，m)，2.76(3H，s)，2.75(3H，s)，2.52-2.58(2H，m)，1.84-1.98(4H，m)。LCMS(APCI)m/e668(M+H)。
实施例101
6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(2-氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基)丙基)吡啶甲酸(101)的合成：
Figure BDA0000083236130002751
题示化合物101使用实施例54的步骤2中描述的相同程序制备，分别用化合物93和化合物96D代替化合物54A和化合物2C：1H NMR(400MHz，DMSO-D6)δppm 12.80(1H，s)，9.61(1H，s)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.60(1H，d)，7.55(1H，d)，7.44-7.51(1H，m)，7.39-7.43(1H，m)，7.33-7.38(2H，m)，7.02(1H，t)，6.90-6.98(2H，m)，6.70(1H，dd)，4.93(2H，s)，3.93(2H，t)，3.86(2H，t)，3.67-3.75(2H，m)，3.26-3.37(2H，m)，3.06-3.20(2H，m)，2.99(2H，t)，2.76-2.93(7H，m)，1.86-1.99(2H，m)；LCMS(APCI)m/e 681(M+H)。
实施例102
6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(4-(2-(二甲基氨基)乙基)苯氧基)丙基)吡啶甲酸(102)的合成：
Figure BDA0000083236130002761
4-(2-(二甲基氨基)乙基)苯酚盐酸(60.5mg，0.300mmol)在DMF(2ml)中用Et3N(84μl，0.60mmol)处理，搅拌10分钟，然后用NaH(24.0mg，0.60mmol)处理。搅拌15分钟后，反应混合物用化合物98A1和98A2(157mg，0.2mmol)处理，并搅拌5小时。该时段后反应混合物用EtOAc稀释，用水和盐水洗涤，干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。浓缩液通过柱色谱用硅胶纯化，用含0到6％MeOH的CH2Cl2梯度洗脱。经色谱的材料用三乙基硅烷(220μl，1.377mmol)和TFA(1mL，12.98mmol)连续处理。滴加二氯甲烷(0.3mL)直到反应混合物变得均质。反应混合物在环境温度下在N2下搅拌6小时。该时段后，蒸发溶剂，化合物通过HPLC纯化(预制备反相HPLC用自动化Waters HPLC系统执行，使用SunFire C18预制备柱，250mmx50mm i.d.，10um，流速25mL/min；λ＝214、245nm；流动相A，含0.1％TFA的H2O；流动相B，CH3CN；30分钟内，B的线性梯度0-70％)，以提供产物，为淡黄色固体，产率10％：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δppm 12.84(1H，s)，9.29(1H，s)，8.04(1H，d)，7.79(1H，d)，7.61(1H，m)，7.56(1H，d)，7.48(1H，m)，7.42(1H，m)，7.36(2H，m)，7.17(2H，m)，6.96(1H，d)，6.88(2H，m)，4.92(2H，s)，3.89(4H，m)，3.24(4H，m)，2.98(2H，m)，2.87(2H，m)，2.81(6H，d)，1.93(2H，m)。MS(ESI(+))m/e 636(M+H)。
实施例103
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(3-(二甲基氨基)丙基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(103)的合成：
Figure BDA0000083236130002771
步骤1：3-(4-(苄氧基)-3-氟苯基)-N，N-二甲基丙-2-炔-1-胺(103A)的制备：
Figure BDA0000083236130002772
题示化合物103A使用实施例97步骤2中描述的相同程序制备，用化合物93A代替化合物97A：LCMS(APCI)284(M+H)。
步骤2：4-(3-(二甲基氨基)丙基)-2-氟苯酚(103B)的制备：
Figure BDA0000083236130002781
题示化合物103B使用实施例93的步骤3中描述的相同程序制备，用化合物103A代替化合物93B：LCMS(APCI)198(M+H)。
步骤3：题示化合物103的制备：
题示化合物103使用实施例54的步骤2中描述的相同程序制备，用化合物103B代替化合物54A。题示化合物103作为TFA盐获得：1H NMR(500MHz，DMSO-D6)δppm 12.90(2H，br，s)，9.43(1H，s)，8.04(1H，d)，7.80(1H，d)，7.67(1H，d)，7.43-7.50(2H，m)，7.34-7.42(2H，m)，7.02-7.10(2H，m)，6.94(1H，d)，4.83(2H，s)，4.02(2H，t)，3.68-3.76(2H，m)，3.14-3.20(2H，m)，2.96-3.06(4H，m)，2.76(3H，s)，2.75(3H，s)，2.51-2.58(2H，m)，1.97-2.04(2H，m)，1.84-1.91(2H，m)。LCMS(APCI)674(M+H)。
实施例104
6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(4-(1-甲基哌啶-4-基氨基)苯氧基)丙基)吡啶甲酸(104)的合成
Figure BDA0000083236130002791
步骤1：4-(1-甲基哌啶-4-基氨基)苯酚(104A)的制备：
Figure BDA0000083236130002792
化合物104A用与化合物62A的合成类似的方式制备，分别用4-氨基苯酚和1-甲基哌啶-4-酮代替1-苯基哌嗪和化合物45C：ESI(+)/LC/MS：207(M+H)+。
步骤2：6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(4-(1-甲基哌啶-4-基氨基)苯氧基)丙基)吡啶甲酸叔丁酯(104B)的制备：
Figure BDA0000083236130002793
用与实施例51的步骤2的合成类似的方式，将化合物104B制备为TFA盐，分别用化合物104A和化合物96D代替化合物51A和化合物2C：APCI(+)/LC/MS：733(M+H)+。
步骤3：题示化合物104的制备：
题示化合物104用与化合物94的合成类似的方式制备，用化合物104B代替化合物94G：1H NMR(DMSO-d6)：δ12.84(s，1H)，9.40(s，1H)，8.04(d，J＝7.63Hz，1H)，7.79(d，J＝8.24Hz，1H)，7.60(d，J＝7.32Hz，1H)，7.55(d，J＝8.85Hz，1H)，7.34-7.49(m，4H)，6.96(d，J＝8.85Hz，1H)，6.60-6.79(m，1H)，4.92(s，2H)，3.81-3.88(m，4H)，2.97-3.00(m，4H)，2.74-2.80(m，4H)，2.10-2.13(m，2H)，1.87-1.92(m，4H)ESI(+)/MS：677(M+H)+。
实施例105
6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(3-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基)丙基)吡啶甲酸(105)的合成：
Figure BDA0000083236130002802
化合物87A(0.032g，0.017mmol)在DMF(3mL)中在0℃用60％氢化钠(0.018g，0.46mmol)处理。溶液搅拌10min。向该溶液中加入化合物96D(0.10g，0.15mmol)。溶液在室温下搅拌2小时。反应然后在60℃加热4小时。然后用甲醇(1mL)淬灭。加入浓HCl(0.5mL)，溶液通过针筒过滤器过滤。滤液然后通过预制备HPLC纯化，得到题示化合物105，为TFA盐：1H NMR(DMSO-d6)：δ12.85(s，1H)，9.61(s，1H)，8.04(d，J＝7.63Hz，1H)，7.79(d，J＝7.93Hz，1H)，7.60(d，J＝7.32Hz，1H)，7.55(d，J＝8.85Hz，1H)，7.34-7.49(m，4H)，7.13(t，J＝8.24Hz，1H)，6.97(d，J＝8.24Hz，1H)，6.55(dd，J＝8.39，1.98Hz，1H)，6.50(s，1H)，6.42(d，J＝8.24，2.14Hz，1H)，4.93(s，2H)，3.82-3.92(m，6H)，3.09-3.13(m，2H)，2.99(t，J＝5.64Hz，1H)，2.90-2.94(m，2H)，2.79-2.85(m，4H)，1.89-1.95(m，2H)ESI(+)/MS：663(M+H)+。
实施例106
6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯氧基)丙基)吡啶甲酸(106)的合成：
Figure BDA0000083236130002811
步骤1：1-(2-(4-(苄氧基)苯氧基)乙基)吡咯烷(106A)的制备：
Figure BDA0000083236130002812
化合物106A用与化合物35A的合成类似的方式制备，分别用2-(吡咯烷-1-基)乙醇和4-(苄氧基)苯酚代替化合物34D和化合物31F：DCI(+)MS：298(M+H)+。
步骤2：4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯酚(106B)的制备：
化合物106B用与化合物31F的合成类似的方式制备，用化合物106A代替化合物31E：1H NMR(DMSO-d6)：δ8.88(s，1H)，6.72-6.75(m，2H)，6.64-6.67(m，2H)，3.94(d，J＝6.1Hz，2H)，2.72(d，J＝5.95Hz，2H)，2.48-2.51(m，4H)，1.65-1.68(m，4H)ESI(+)/MS：208(M+H)+。
步骤3：题示化合物106的制备：
Figure BDA0000083236130002822
题示化合物106用与化合物105的合成类似的方式制备，用化合物106B代替化合物87C：1H NMR(DMSO-d6)：δ12.84(s，1H)，9.68(s，1H)，8.04(d，J＝7.93Hz，1H)，7.79(d，J＝8.24Hz，1H)，7.60(d，J＝7.32Hz，1H)，7.56(d，J＝8.54Hz，1H)，7.34-7.50(m，4H)，6.86-6.97(m，6H)，4.92(s，2H)，4.19-4.21(m，2H)，3.86-3.89(m，6H)，3.08-3.13(m，4H)，2.98(t，J＝5.8Hz，1H)，2.79-2.82(m，2H)，1.87-2.05(m，6H)ESI(+)/MS：678(M+H)+。
实施例107
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(3-(二甲基氨基)丙基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(107)的合成：
步骤1：4-(3-(二甲基氨基)丙基)苯酚(107A)的制备：
Figure BDA0000083236130002832
化合物107A使用实施例100的步骤1中描述的相同程序制备，用化合物74A代替化合物97B1和化合物97B2：LCMS(APCI)180(M+H)。
步骤2：题示化合物107的制备：
题示化合物107使用实施例54的步骤2中描述的相同程序制备，用化合物107A代替化合物54A。题示化合物107作为TFA盐获得：1H NMR(500MHz，DMSO-D6)δppm 12.90(2H，br，s)，9.41(1H，s)，8.04(1H，d)，7.80(1H，d)，7.67(1H，d)，7.44-7.50(2H，m)，7.34-7.41(2H，m)，7.10(2H，d)，6.84(2H，d)，4.83(2H，s)，3.94(2H，t)，3.72(2H，t)，3.17(2H，t)，2.96-3.06(4H，m)，2.76(3H，s)，2.75(3H，s)，2.51-2.56(2H，m)，1.96-2.02(2H，m)，1.83-1.90(2H，m)；LCMS(APCI)656(M+H)。
实施例108
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(2，5-二氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(108)的合成：
Figure BDA0000083236130002841
步骤1：1-(苄氧基)-4-溴-2，5-二氟苯(108A)的制备：
Figure BDA0000083236130002842
化合物108A使用实施例93的步骤1中描述的相同程序制备，用4-溴-2，5-二氟苯酚代替4-溴-2-氟苯酚。
步骤2：1-(4-(苄氧基)-2，5-二氟苯基)-4-甲基哌嗪(108B)的制备：
Figure BDA0000083236130002843
化合物108B使用实施例93的步骤2中描述的相同程序制备，用化合物108A代替化合物93A：LCMS(APCI)319(M+H)。
步骤3：2，5-二氟-4-(4-甲基哌嗪-1-基)苯酚(108C)的制备：
Figure BDA0000083236130002851
化合物108C使用实施例93的步骤3中描述的相同程序制备，用化合物108B代替化合物93B：LCMS(APCI)229(M+H)。
步骤4：题示化合物108的制备：
题示化合物108使用实施例54的步骤2中描述的相同程序制备，用化合物108C代替化合物54A。题示化合物108作为TFA盐获得：1H NMR(500MHz，DMSO-D6)δppm 12.89(2H，s)，9.64(1H，s)，8.03(1H，d)，7.79(1H，d)，7.67(1H，d)，7.43-7.50(2H，m)，7.33-7.41(2H，m)，7.05-7.16(2H，m)，4.83(2H，s)，4.02(2H，t)，3.72(2H，t)，3.45-3.56(2H，m)，3.34-3.48(2H，m)，3.11-3.24(4H，m)，3.03(2H，t)，2.87-2.98(2H，m)，2.85(3H，d)，1.94-2.03(2H，m)。LCMS(APCI)705(M+H)。
实施例109
6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(2-氯吡啶-4-氧基)丙基)吡啶甲酸叔丁酯(109)的合成：
Figure BDA0000083236130002861
步骤1：6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(2-氯吡啶-4-氧基)丙基)吡啶甲酸叔丁酯(109A)的制备：
用与化合物51的合成类似的方式，将化合物109A制备为TFA盐，分别用化合物96D和2-氯吡啶-4-醇代替化合物51A和化合物2C：APCI(+)/LC/MS：657(M+H)+。
步骤2：题示化合物109B的制备：
题示化合物109用与化合物94的合成类似的方式制备，用化合物109A代替化合物94G：1H NMR(DMSO-d6)：δ12.85(s，1H)，8.17(d，J＝5.8Hz，1H)，8.04(d，J＝7.93Hz，1H)，7.79(d，J＝8.24Hz，1H)，7.60(d，J＝7.32Hz，1H)，7.56(d，J＝8.85Hz，1H)，7.34-7.49(m，4H)，7.09(d，J＝2.44Hz，1H)，6.94-6.97(m，2H)，4.93(s，2H)，4.06(t，J＝6.26Hz，2H)，3.87(t，J＝5.95Hz，2H)，2.98(t，J＝5.8Hz，2H)，2.78-2.82(m，2H)，1.92-1.98(m，2H)；ESI(+)/MS：600(M+H)+。
实施例110
步骤1：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-((6-(3-吗啉基丙氧基)萘-2-基)乙炔基)噻唑-4-羧酸(110)：
步骤1：6-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)萘-2-醇(110A)的制备：
Figure BDA0000083236130002872
向6-溴萘-2-醇(3.8g，17.04mmol)、乙炔基三甲基硅烷(7.08ml，51.1mmol)、(PPh3)2PdCl2(1.79g，2.56mmol)、TEA(12ml，85mmol)在THF(12ml)中的混合物，加入碘化亚铜(I)(0.324g，1.70mmol)。得到的混合物在油浴中在70℃加热过夜并冷却。向混合物中加入硅胶(40g)，得到的混合物真空干燥。将胶粉装载到硅胶柱上，用DCM洗脱，以提供化合物110A。
步骤2：6-乙炔基萘-2-醇(110B)的制备：
Figure BDA0000083236130002873
化合物110A(770mg，3.20mmol)在MeOH(5ml)和THF(10ml)中用K2CO3(885mg，6.41mmol)在室温下处理3h。反应用乙酸乙酯稀释，用水洗涤。浓缩有机层，残余物通过快速色谱纯化，用DCM洗脱，以提供化合物110B。
步骤3：4-(3-(6-乙炔基萘-2-氧基)丙基)吗啉(110C)的制备：
Figure BDA0000083236130002881
向化合物110B(57mg，0.34mmol)、3-吗啉基丙-1-醇(98mg，0.68mmol)和三苯基膦(133mg，0.508mmol)在THF(1.5ml)中的混合物，加入(E)-偶氮二甲酸二叔丁酯(117mg，0.508mmol)。反应混合物搅拌1h，滤去不溶的材料。浓缩滤液，残余物通过反相HPLC纯化(梯度：含0-55％乙腈的0.1％TFA水溶液/40min)，以提供化合物110C：LCMS(APCI)296(M+H)。
步骤4：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-((6-(3-吗啉基丙氧基)萘-2-基)乙炔基)噻唑-4-羧酸甲酯(110D)的制备：
Figure BDA0000083236130002882
向化合物47D(200mg，0.283mmol)、化合物110C、(PPh3)2PdCl2(49.7mg，0.071mmol)、TEA(0.394ml，2.83mmol)在DMF(5ml)中的混合物，加入碘化亚铜(I)(5.40mg，0.028mmol)。得到的混合物在油浴中在120℃加热5h。浓缩反应混合物，通过RPHPLC纯化，用含10-95％乙腈的0.1％TFA水溶液在70min内洗脱，以提供化合物110D：LCMS(APCI)875(M+H)。
步骤5：题示化合物110的制备：
题示化合物110使用实施例97的步骤3中描述的相同程序制备，用化合物110D代替化合物97B1和化合物97B2。题示化合物110作为TFA盐获得：1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 12.88-13.12(s，br，1H)，12.94(s，1H)，9.64-9.69(bs，1H)，8.04-8.06(m，2H)，7.88(d，J＝9.0Hz，1H)，7.83(d，J＝8.8Hz，1H)，7.78-7.83(m，1H)，7.69-7.72(m，1H)，7.46-7.52(m，3H)，7.43(t，J＝7.6Hz，1H)，7.35-7.38(m，2H)，7.22(dd，J＝8.9，2.4Hz，1H)，4.94-4.95(bs，2H)，4.21(t，J＝5.9Hz，2H)，3.98-4.06(m，2H)，3.78-3.81(m，2H)，3.62-3.68(m，2H)，3.48-3.54(m，2H)，3.01-3.15(m，6H)，2.17-2.24(m，2H)；LCMS(APCI)；730(M+H)。
实施例111
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(2-(6-(3-吗啉基丙氧基)萘-2-基)乙基)噻唑-4-羧酸(111)的合成：
步骤1：2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(2-(6-(3-吗啉基丙氧基)萘-2-基)乙基)噻唑-4-羧酸(111A)的制备：
Figure BDA0000083236130002902
题示化合物111A使用实施例100的步骤1中描述的相同程序制备，用化合物110D代替化合物97B1和化合物97B2：LCMS(APCI)879(M+H)。
步骤2：题示化合物111的制备：
题示化合物111使用实施例97的步骤3中描述的相同程序制备，用化合物111A代替化合物97B1和化合物97B2。题示化合物111作为TFA盐获得：1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm 12.87-12.94(s，br，1H)，12.27-12.80(s，br，1H)，9.65-9.71(s，br，1H)，8.05(d，J＝7.7Hz，1H)，7.80(d，J＝7.8Hz，1H)，7.74(d，J＝9.2Hz，1H)，7.72(d，J＝8.5Hz，1H)，7.67(d，J＝6.7Hz，1H)，7.63-7.64(m，1H)，7.46-7.50(m，1H)，7.43-7.46(m，1H)，7.34-7.42(m，3H)，7.28(d，J＝2.6Hz，1H)，7.12(dd，J＝8.9，2.5Hz，1H)，4.81(s，2H)，4.16(t，J＝5.8Hz，2H)，4.01(d，J＝12.2Hz，2H)，3.71(t，J＝6.0Hz，2H)，3.65(t，J＝12.1Hz，2H)，3.50(d，J＝11.9Hz，2H)，3.07-3.16(m，2H)，2.96-3.04(m，3H)，2.15-2.22(m，2H)。LCMS(APCI)734(M+H)。
实施例112
6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(4-(5-(2-(二甲基氨基)乙氧基)嘧啶-2-基)苯氧基)丙基)吡啶甲酸(112)的合成：
Figure BDA0000083236130002911
步骤1：2-氯嘧啶-5-醇(112A)的制备：
Figure BDA0000083236130002912
在室温下，含2-氯-5-甲氧基嘧啶(0.46g，3.18mmol)的二氯甲烷(10mL)用1.0N三溴化硼(16mL，16mmol)处理。溶液搅拌过夜。该时段后，反应在饱和NaHCO3和DCM之间分离。用额外的DCM萃取水层。合并的有机层干燥(MgSO4)，过滤，浓缩。残余物通过快速柱色谱用硅胶纯化，得到0.26g化合物112A(62％)：1H NMR(DMSO-d6)：δ10.03(s，1H)，8.30(s，2H)，ESI(-)/MS：129(M-H)-。
步骤2：2-(2-氯嘧啶-5-氧基)-N，N-二甲基乙胺(112B)的制备：
Figure BDA0000083236130002921
化合物112B用与实施例35的步骤1的合成类似的方式制备，分别用2-(二甲基氨基)乙醇和化合物112A代替化合物34D和化合物31F：ESI(+)MS：201(M+H)+。
步骤3：4-(5-(2-(二甲基氨基)乙氧基)嘧啶-2-基)苯酚(112C)的制备：
Figure BDA0000083236130002922
化合物112C用与化合物34D的合成类似的方式制备，分别用化合物112B和4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧硼戊环-2-基)苯酚代替化合物34C和4-(羟甲基)苯基硼酸：1H NMR(DMSO-d6)：δ9.80(s，1H)，8.56(s，2H)，8.12-8.15(m，1H)，6.83-6.86(m，2H)，4.23(t，J＝5.8Hz，2H)，2.65(t，J＝5.65Hz，2H)，2.22(s，6H)；ESI(+)/MS：259(M+H)+。
步骤4：6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(4-(5-(2-(二甲基氨基)乙氧基)嘧啶-2-基)苯氧基)丙基)吡啶甲酸(112D)的制备：
Figure BDA0000083236130002931
题示化合物112D用与化合物105的合成类似的方式制备，用化合物112C代替化合物87A：1H NMR(DMSO-d6)：δ12.84(s，1H)，9.70(s，1H)，8.64(s，2H)，8.23(d，J＝8.85Hz，2H)，8.04(d，J＝7.93Hz，1H)，7.79(d，J＝8.24Hz，1H)，7.57-7.61(m，2H)，7.34-7.49(m，4H)，7.02(t，J＝8.85Hz，2H)，6.97(d，J＝8.85Hz，1H)，4.93(s，2H)，4.52-4.54(m，2H)，4.01(t，J＝6.41Hz，2H)，3.87(t，J＝5.95Hz，2H)，2.95(t，J＝5.8Hz，2H)，2.82-2.85(m，2H)，1.95-2.00(m，2H)；ESI(+)/MS：730(M+H)+。
实施例113
6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-(3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)苯氧基)丙基)吡啶甲酸(113)的合成：
步骤1：2-(3-(苄氧基)苯氧基)-N，N-二甲基乙胺(113A)的制备：
化合物113A用与实施例35的步骤1的合成类似的方式制备，分别用2-(二甲基氨基)乙醇和3-(苄氧基)苯酚代替化合物34D和化合物31F：DCI(+)MS：272(M+H)+。
步骤2：3-(2-(二甲基氨基)乙氧基)苯酚(113B)的制备：
Figure BDA0000083236130002942
化合物113B用与化合物31F的合成类似的方式制备，用化合物113A代替化合物31E：1H NMR(DMSO-d6)：δ9.34(s，1H)，7.03(t，J＝8.03Hz，1H)，6.30-6.36(m，3H)，3.96(d，J＝5.95Hz，2H)，2.58(d，J＝5.8Hz，2H)，2.20(s，2H)ESI(+)/MS：182(M+H)+。
步骤3：题示化合物113的制备：
题示化合物113用与化合物105的合成类似的方式制备，用化合物113C代替化合物87A：1H NMR(DMSO-d6)：δ12.85(s，1H)，9.59(s，1H)，8.64(s，2H)，8.04(d，J＝7.63Hz，1H)，7.80(d，J＝8.24Hz，1H)，7.61(d，J＝7.32Hz，1H)，7.56(d，J＝8.54Hz，1H)，7.34-7.49(m，4H)，7.19(t，J＝8.09Hz，1H)，6.96(d，J＝8.85Hz，1H)，4.93(s，2H)，4.27-4.29(m，2H)，3.92(t，J＝6.56Hz，2H)，3.87(t，J＝5.95Hz，2H)，2.99(t，J＝5.8Hz，2H)，2.79-2.82(m，2H)，1.91-1.97(m，2H)；ESI(+)/MS：652(M+H)+。
实施例114
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(114)的合成：
Figure BDA0000083236130002951
用与化合物51的合成类似的方式，将题示化合物114制备为TFA盐，用化合物106B代替化合物51A：1H NMR(DMSO-d6)：δ12.90(s，1H)，9.75(s，1H)，8.04(d，J＝7.93Hz，1H)，7.80(d，J＝7.93Hz，1H)，7.68(d，J＝7.32Hz，2H)，7.35-7.50(m，4H)，6.86-6.93(m，4H)，4.83(s，2H)，4.19-4.21(m，2H)，3.92(d，J＝6.26Hz，2H)，3.72(d，J＝5.95Hz，1H)，3.55(br，4H)，3.10-3.18(m，4H)，3.03(t，J＝5.8Hz，2H)，1.85-2.02(m，6H)。ESI(+)/MS：684(M+H)+。
实施例115
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(2，5-二氟-4-(2-吗啉基乙基氨基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(115)的合成：
Figure BDA0000083236130002961
题示化合物115使用实施例108描述的相同程序制备，用2-吗啉基乙胺代替1-甲基哌嗪。题示化合物作为TFA盐获得：1H NMR(500MHz，吡啶-D5)δppm 8.05(1H，d)，7.98(1H，d)，7.85(1H，d)，7.50(1H，t)，7.26-7.38(3H，m)，7.12(1H，dd)，6.81(1H，dd)，5.20(2H，s)，4.11(2H，t)，3.83(1H，s)，3.79(2H，t)，3.65-3.73(4H，m)，3.52-3.59(2H，m)，3.21(2H，t)，2.88(2H，t)，2.58(2H，t)，2.42(4H，br，s)，2.18-2.27(2H，m)。LCMS(APCI)735(M+H)。
实施例116
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(3-(二甲基氨基)丙-1-炔基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(116)的合成：
Figure BDA0000083236130002962
题示化合物116使用实施例97的步骤3描述的相同程序制备，用化合物47F代替化合物94F。题示化合物作为TFA盐获得：1H NMR(500MHz，DMSO-D6)δppm 12.90(1H，s)，10.12(1H，s)，8.04(1H，d)，7.80(1H，d)，7.67(1H，d)，7.34-7.50(5H，m)，7.31(1H，d)，7.18(1H，t)，4.83(2H，s)，4.30(2H，s)，4.10(2H，t)，3.72(2H，t)，3.12-3.23(2H，m)，3.03(2H，t)，2.87(6H，s)，1.97-2.09(2H，m)；LCMS(APCI)670(M+H)。
实施例117
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(3-(二甲基氨基)丙-1-炔基)-3-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(117)的合成：
Figure BDA0000083236130002971
题示化合物117使用实施例97中描述的相同程序制备，分别用4-溴-3-氟苯酚和化合物47F代替4-溴-2-氟苯酚和化合物94F。题示化合物作为TFA盐获得：1H NMR(500MHZ，DMSO-D6)δppm 12.91(1H，s)，10.13(1H，s)，8.04(1H，d)，7.80(1H，d)，7.68(1H，d)，7.44-7.51(3H，m)，7.34-7.42(2H，m)，7.03(1H，dd)，6.77-6.82(1H，m)，4.83(2H，s)，4.32(2H，s)，4.08(2H，t)，3.72(2H，t)，3.15-3.24(2H，m)，3.03(2H，t)，2.86(6H，s)，1.98-2.08(2H，m)。LCMS(APCI)670(M+H)。
实施例118
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(4-(3-(二甲基氨基)丙-1-炔基)-2，5-二氟苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(118)的合成：
Figure BDA0000083236130002981
题示化合物118使用实施例97中描述的相同程序制备，分别用4-溴-2，5-二氟苯酚和化合物47F代替4-溴-2-氟苯酚和化合物94F。题示化合物118作为TFA盐获得：1H NMR(500MHz，DMSO-D6)δppm12.90(1H，s)，10.19(1H，s)，8.04(1H，d)，7.80(1H，d)，7.67(1H，d)，7.53(1H，dd)，7.43-7.50(2H，m)，7.34-7.42(2H，m)，7.26(1H，dd)，4.83(2H，s)，4.35(2H，s)，4.12(2H，t)，3.72(2H，t)，3.12-3.21(2H，m)，3.03(2H，t)，2.87(6H，s)，1.96-2.10(2H，m)；LCMS(APCI)688(M+H)。
实施例119
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-(3-(2-氯-4-(3-(二甲基氨基)丙-1-炔基)苯氧基)丙基)噻唑-4-羧酸(119)的合成：
Figure BDA0000083236130002982
题示化合物(119)使用实施例97描述的相同程序制备，分别用4-溴-2-氯苯酚和化合物47F代替4-溴-2-氟苯酚和化合物94F。题示化合物119作为TFA盐获得：1H NMR(500MHz，DMSO-D6)δppm12.90(1H，s)，10.09(1H，s)，8.04(1H，d)，7.80(1H，d)，7.67(1H，d)，7.62(1H，d)，7.44-7.50(3H，m)，7.35-7.41(2H，m)，7.15(1H，d)，4.83(2H，s)，4.30(2H，s)，4.11(2H，t)，3.72(2H，t)，3.17-3.23(2H，m)，3.03(2H，t)，2.88(6H，s)，2.00-2.10(2H，m)；LCMS(APCI)686(M+H)。
实施例120
6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸(120)的合成：
步骤1：6-氟吡啶甲酸叔丁酯(120A)的制备
Figure BDA0000083236130002992
在0℃将甲苯磺酰基氯(915mg，4.8mmol)加入到2-氟-吡啶甲酸(254mg，2mmol)和吡啶(1.08mL，13.4mmol)在3.6mL t-BuOH中的溶液中。反应然后在室温下搅拌12小时。然后加入NaHCO3水溶液，混合物用乙酸乙酯萃取(3次)。合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥。粗制的化合物通过快速色谱使用SiO2纯化(石油醚/EtOAc 100∶0到90∶10)。获得产物120A，为白色固体(m＝326mg，83％)：1HNMR(ppm，CDCl3)1.6(s，9H)，7.05-7.11(m，1H)，7.85-7.93(m，2H)。
步骤2：6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)吡啶甲酸叔丁酯(120B)的制备：
Figure BDA0000083236130003001
反应开始前，Cs2CO3(831mg，2.55mmol)和500mg
Figure BDA0000083236130003002
筛在高度真空下在150℃干燥6小时。一旦冷却，将化合物120A(100mg，0.51mmol)和化合物1B(327mg，0.61mmol)转移到反应容器中，用氮气吹扫环境。然后加入1.5mL无水DMA，反应在90℃搅拌3小时，然后在100℃搅拌2小时。冷却的反应混合物然后用乙酸乙酯和10％柠檬酸稀释。有机相用柠檬酸洗涤三次，用水和盐水洗涤一次，用Na2SO4干燥。浓缩有机相，提供橙色薄膜/泡沫。这一残余物通过快速色谱使用SiO2纯化(AcOEt/石油醚0∶100到40∶60)，以提供白色固体(72mg，产率29％)：1HNMR(ppm，CDCl3)1.54(s，9H)，3.01(t，J＝5.85Hz，2H)，4.05(t，J＝6Hz，2H)，5.04(s，2H)，6.92(dd，J＝8.55和0.63Hz，1H)，7.09-7.29(m，5H)，7.34(dd，J＝7.32和0.63Hz，1H)，7.60-7.51(m，2H)，7.81(d，J＝9Hz，1H)。
步骤3：题示化合物120的制备：
化合物1B(71mg，0.15mmol)在2mL EtOH中溶解。然后加入两毫升水，接着是2mL浓HCl。反应在室温下搅拌72小时，直到LCMS指出完全转化。氮气冒泡穿过混合物，以除去HCl和EtOH；白色固体沉淀。通过过滤收集它，用水和少量Et2O冲洗，在真空中干燥，以提供产物，为白色固体(42mg，67％)：1HNMR(ppm，DMSO)2.98(t，J＝6.15Hz，2H)，3.92(t，J＝6.06Hz，2H)，4.95(s，2H)，7.02(d，J＝8.5Hz，1H)，7.27(d，J＝7.3Hz，7.31-7.49(m，4H)，758(d，J＝7.5Hz，1H)，7.66-7.71(m，1H)，7.77(d，J＝8.0Hz，1H)，8.02(d，J＝7.9Hz)；LCMS m/z 431.0(M+1)。
实施例121
6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-苯氧基丙基)吡啶甲酸(121)的合成：
Figure BDA0000083236130003011
步骤1：2-溴-5-氯苯甲酸叔丁酯(121A)的制备：
Figure BDA0000083236130003012
在0℃向2-氯-5-溴吡啶甲酸(4g，17mmol)和吡啶(9.2mL，114mmol)在33mL t-BuOH中的溶液中，加入甲苯磺酰基氯(7.7g，40.4mmol)。然后反应在室温下搅拌12小时。然后加入
Figure BDA0000083236130003021
用乙酸乙酯(3次)萃取混合物。合并的有机相用盐水洗涤，用Na2SO4干燥。浓缩，提供所需化合物121A(定量)。其在下一步骤中使用，无需进一步纯化：1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.85(d，1H)，7.26(d，1H)，1.63(s，9H)。
步骤2：6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-溴吡啶甲酸叔丁酯(121B)的制备：
Figure BDA0000083236130003022
反应开始前，Cs2CO3(4.1g，12.6mmol)和
Figure BDA0000083236130003023
筛在高度真空下在150℃干燥6到10小时。一旦冷却，将化合物121A(0.736g，2.53mmol)和化合物1B(1.62g，3mmol)转移到反应容器中，用氮气吹扫环境。然后加入12mL无水DMA，反应在120℃搅拌12小时。冷却的反应混合物然后用乙酸乙酯和10％柠檬酸稀释。有机相用柠檬酸洗涤三次，用水和盐水洗涤一次，用Na2SO4干燥。浓缩有机相，提供橙色薄膜/泡沫。用Flash Master纯化(SiO2，乙酸乙酯/石油醚0∶100到40∶60)，提供产物121B，为白色固体(1.15g，产率80％)：1H NMR(300MHz，CDCl3)δ7.86(m，1H)，7.71(d，1H)，7.60(d，1H)，7.50(m，1H)，7.42-7.22(m，5H)，6.67(d，1H)，4.99(s，2H)，3.95(t，2H)，3.01(t，2H)，1.56(s，9H)。
步骤3：6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-溴吡啶甲酸叔丁酯(121C)的制备：
Figure BDA0000083236130003031
化合物121B(350mg，0.62mmol)在THF中溶解。连续加入NEt3(127μL，0.91mmol)和SEMCl(135μL，0.74mmol)。反应在室温下搅拌1小时。然后浓缩。残余物溶解到乙酸乙酯和水中。水层用乙酸乙酯萃取三次。合并的有机层用盐水洗涤，用Na2SO4干燥。浓缩后，残余物通过快速色谱使用flash master纯化：SiO2，乙酸乙酯/石油醚0∶100到30∶70。获得淡黄色泡沫固体化合物121C(276mg，64％)。NMR显示两种N-SEM产物：1H NMR(300MHz，CDCl3)，异构体的混合物(1∶0.6)δ8.28(d，1H)，7.86(d，1H)，7.71(d，1H)，7.62-7.42(m，5H)，7.38-7.26(m，5H)，6.80(d，1H)，6.55(d，0.6H)，5.98(s，2H)，5.53(s，1H)，5.19(s，2H)，4.67(s，1H)，4.00(t，2H)，3.93(t，1H)，3.75(t，2H)，3.61(t，1H)，3.02(m，3H)，1.61(s，9H)，1.53(s，5H)，0.98(t，2H)，0.82(t，1H)，-0.09(s，9H)。
步骤4：6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-苯氧基丙-1-炔基)吡啶甲酸叔丁酯(121D)的合成
Figure BDA0000083236130003041
向预干燥的Cs2CO3(378mg，1.16mmol)加入化合物121C(180mg，0.26mmol)、2-二环己基膦-2′，4′，6′-三-异-丙基-1，1′-联苯基(18mg，0.04mmol)和双(乙腈)二氯化钯(II)(3.2mg，0.012mmol)。用氮气吹扫环境，加入丙腈(3.0mL)后，混合物在室温下搅拌10min.，之后加入苯基炔丙基醚(205mg，1.54mmol)。混合物在105℃加热1hr，冷却至室温，浓缩，用饱和NH4Cl稀释，用EtOAc(3x)萃取。有机相用盐水(1x)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤，浓缩。粗材料通过快速柱色谱用硅胶纯化，使用PE∶EtOAc 100∶0-85∶15梯度，得到产物(90mg，47％)：1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.28(d，1H)，7.69(d，1H)，7.57(m，2H)，7.47(t，1H)，7.38-7.26(m，5H)，6.99(m，3H)，6.82(d，1H)，5.98(s，2H)，5.24(s，2H)，4.92(s，2H)，4.07(t，2H)，3.74(t，2H)，3.02(t，2H)，1.60(s，9H)，0.97(t，2H)，-0.09(s，9H)。
步骤5：6-(8-(苯并[d]噻唑-2-基((2-(三甲基甲硅烷基)乙氧基)甲基)氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-3-(3-苯氧基丙基)吡啶甲酸叔丁酯(121E)的制备：
Figure BDA0000083236130003042
将PtO2(4.8mg，0.020mmol)加入到化合物2D(60mg，0.080mmol)在EtOAc(2.0mL)中的溶液中，混合物在H2环境下搅拌2小时。过滤混合物，用EtOAc洗涤，浓缩，得到产物121D(55mg，92％)：1H NMR(300MHz，CDCl3)δ8.26(d，1H)，7.69(d，1H)，7.57(d，1H)，7.48(t，1H)，7.40-7.23(m，6H)，6.97-6.82(m，4H)，5.97(s，2H)，5.20(s，2H)，4.03(t，2H)，3.96(t，2H)，3.75(t，2H)，3.04(t，2H)，2.88(t，2H)，2.06(m，2H)，1.62(s，9H)，0.97(t，2H)，-0.09(s，9H)。
步骤5：题示化合物121的制备：
Figure BDA0000083236130003051
化合物121E(55mg，0.073mmol)在1mL EtOH中溶解。加入水(1mL)，接着是1mL浓HCl。反应在50℃搅拌12小时。通过过滤收集沉淀的固体，用水冲洗。固体通过预制备HPLC纯化，得到白色固体：1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2.09(t，2H)，3.06(t，2H)，3.21(t，2H)，3.91(t，2H)，3.97(t，2H)，5.21(s，2H)，6.87-6.94(m，4H)，7.25-7.42(m，5H)，7.46-7.50(m，2H)，7.56(m，1H)，8.01(m，1H)；LCMS m/z 565.7(M+1)。
实施例122
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)嘧啶-4-羧酸(122)的合成：
Figure BDA0000083236130003061
化合物1B(309mg，1mmol)、2-氯嘧啶-4-羧酸(134.5mg，1mmol)、碳酸铯(975mg，3mmol)在2ml DMSO中的混合物加热到60℃6h。将产物倒入水中，它从溶液中沉淀出来，通过过滤收集。粗材料经色谱(SiO2，含20％甲醇的二氯甲烷)，提供37，为白色粉末：LCMS(纯度97％)；保留时间＝8.70min，432.0[M+H]；1HNMR(300MHz，DMSO)：8.60(1H，d)，8.25(1H，d)，7.80(1H，m)，7.60(1H，d)，7.45(1H，d)，7.1-7.2(2H，m)，7.0(1H，t)，6.75(1H，d)，5.25(2H，s)，3.95(2H，t)，2.85(2H，t)。
实施例123
2-(8-(苯并[d]噻唑-2-基氨基甲酰基)-3，4-二氢异喹啉-2(1H)-基)-5-氯嘧啶-4-羧酸(123)的合成。
化合物1B(309mg，1mmol)、5-氯-2-甲烷磺酰基-嘧啶-4-羧酸(236mg，1mmol)和碳酸铯(975mg，3mmol)在2ml DMSO中的混合物加热到60℃6h。通过加入到水中，产物从溶液中沉淀出来，通过过滤收集。粗材料经色谱(SiO2，含20％甲醇的二氯甲烷)，提供题示化合物123，为白色粉末：LCMS(纯度96％)：m/z 465.9[M+H]。
实施例124
本发明化合物与F-Bak对Bcl-2家族蛋白(Bcl-xL)结合位点的竞争的测量，使用时间分辨荧光共振能量传递(TR-FRET)结合测试：
测试化合物从50μM(2x起始浓度；10％DMSO)开始，在DMSO中连续稀释，并转移10μL到384孔板中。然后向各孔中加入10μL蛋白/探针/抗体混合物，终浓度在表2中列出。
表2
样本然后用振荡器混合1分钟，然后在室温下孵育另外2小时。各测试板分别包含探针/抗体和蛋白/抗体/探针混合物作为负和正对照。荧光用ENVISION(Perkin Elmer)测量，使用340/35nm感光滤片以及520/525(F-Bak)和495/510nm(Tb标记的抗his抗体)发射滤片。解离常数(Ki)使用Wang′s公式(参见Wang，Z.X.An exact mathematicalexpression for describing competitive binding of two different ligands to aprotein molecule.FEBS Lett.1995360：111-114)测定。TR-FRET测试可以在不同浓度的人血清(HS)或胎牛血清(FBS)存在下执行。
作为比较，使用TR-FRET结合测试，本发明化合物对其它Bcl-2家族蛋白结合位点(例如，Bcl-2、Mcl-1)的竞争的测量，通过在TR-FRET测试中用其它GST标记的蛋白代替GST-Bcl-xL来完成，例如，室内制备的GST-Bcl-2、GST-Mcl-1。
对表1中阐述的本发明的代表性化合物，TR-FRET测试结果(Ki，单位微摩尔)在下面按它们在表1中出现的顺序提供：0.077、0.0002、0.0002、0.0003、0.001、0.0002、0.007、0.00006、0.00007、0.0001、0.0001、0.0003、0.0007、0.006、0.003、0.006、0.004、0.004、0.009、0.003、0.00005、0.019、0.002、0.007、0.0003、0.003、0.001、0.001、0.023、0.0004、0.0001、0.017、0.0003、0.004、0.004、0.005、0.004、0.005、0.0002、0.0004、0.0001、0.002、0.005、0.00007、0.001、0.001、0.0001、0.00005、0.012、0.002、0.0003、0.00005、0.00005、0.00005、0.0006、0.00005、0.00007(w/1％HS)、0.0005、0.0003、0.176、0.0003、0.13、0.248、0.00005、0.00007、0.0001、0.00005、0.0002、0.0005、0.040、0.174、0.003、0.00008、0.00005、0.00005、0.008、0.007、0.00005、0.0001、0.0005、0.00005、0.00005、0.00005、0.00005、0.00005、0.00007、0.00005、0.00005、0.0001、0.00005、0.0007、0.00005、0.00005、0.002、0.00005、0.0001、0.00005、0.010、0.125、0.0005、0.0007、NA、NA、NA、0.15、0.0662、0.197、0.66、NA、NA、NA、0.0106、0.0189、0.00018、NA、0.0006、0.00015、0.00004、0.000004、0.003、0.000006(w/1％HS)、0.00001、0.00004、0.00002、0.00005、NA、0.0006、NA、NA、NA、0.002、0.0002、0.000023、NA、0.0003、0.001、0.0002、0.00007、0.00002、NA、0.000487、0.000088、NA、NA、NA、NA、＞0.66和NA。本文使用的缩写“NA”指该化合物的数据未得到。
在一个实施方式中，本发明化合物选择性抑制Bcl-2家族蛋白Bcl-xL超过其它Bcl-2家族蛋白，例如Bcl-2和Mcl-1。作为比较，使用TR-FRET结合测试，某些本发明化合物(即表1中的化合物52、58、64、70、74、76、81、82、84、88、93、94、97和100)与F-Bak对Bcl-2结合位点的竞争的测量，数据(Ki，单位微摩尔)分别是0.13、0.31、0.09、0.5、0.06、0.35、0.11、0.12、0.14、0.3、0.155、0.572、0.272和0.219。
实施例125
本发明化合物与Bim26-mer对Bcl-2家族蛋白结合位点的竞争的测量，使用Alpha Screen Bcl-xL结合测试：
BH3蛋白ALPHASCREENTM测试被用来识别活性小分子Bcl-2家族蛋白筛选，例如Bcl-xL、hmMcl-1筛选。为了测定精确估计的IC50，化合物在起始浓度、100μM和/或1μM常规测试，而且在11个稀释内连续3倍滴定。
测试使用ALPHASCREENTM技术，其依赖水凝胶包衣的受体和供体珠，它们具有分别与蛋白(例如GST-hmMcl-1、GST-Bcl-xL或GST-生物素)和肽(生物素-Bak、生物素-Bim)共轭的功能性基团。当蛋白和肽相互作用时，珠变得极为接近。供体珠包含光敏剂，其在680nm激发下将氧气转化成O2的激发形式。能量从单态氧转换，并与受体珠上的化学发光剂反应，引起在520-620nm的光发射。当本发明化合物加入到反应中时，依靠抑制受体和供体珠的接近，可以降低荧光强度。用这一信息计算各化合物的IC50。
材料
GST-Bcl-xL、GST-hmMcl-1和生物素化的GST蛋白是室内制备的，而且作为储备溶液在-80℃贮存。生物素化的Bak和生物素化的Bim肽从Auspep购买，而且作为100％DMSO中的500μM储备溶液在-80℃贮存。ALPHASCREENTM GST(谷胱甘肽-S-转移酶)检测试剂盒从Perkin Elmer Lifesciences(Cat#6760603R)获得。Proxiplates白色384孔平底板从Interpath Services，Melboume(Cat#784075)购买。覆盖板的密封材料从Prescience，Melbourne(Cat#784075)购买。DMSO从AnalaR购买。384深孔板和聚丙烯50μL V形底聚丙烯化合物板从Matrical购买。
化合物的制备
本发明化合物在执行测试前一天用100％DMSO制备成10mM储液。12μL 100％DMSO和6μL 10mM化合物(即3.333mM，终100μM)加入到聚丙烯50μL V形底化合物板的第1和12列中。为达到终化合物浓度1μM，在分开的matrical板中，向一个孔中加入28μL 100％DMSO和2μL 10mM化合物，混合该孔，取2μL这一溶液加入到38μL100％DMSO中。将20μL这一溶液加入到测试matrical板中。测试板中包含数种对照化合物。对于对照孔，向各板适当的孔加入15μL仅100％DMSO。化合物板然后使用MiniTrak连续2倍稀释。一旦滴定完成，立即用箔密封物覆盖化合物板，以防止蒸发。
缓冲液的制备
测试和珠缓冲液是新鲜制备的。各个滴定的化合物板一式二份测试。以下体积足够跑12个Proxiplates(Bclxl、hmMcl和对抗测试一式二份各跑4个测试板)
测试缓冲液
Figure BDA0000083236130003111
珠缓冲液
Figure BDA0000083236130003121
蛋白和肽的制备；和测试的执行
1.使用测试和珠缓冲液来制备受体和供体溶液。ALPHASCREENTM珠是光敏的，因此在暗室中制备。每1mL缓冲液中加入2.5μL珠。
2.加入的蛋白或肽体积使用以下公式计算：
C 1 C 2 × V 1 × 2 = V 2
C1＝蛋白/肽的终浓度
C2＝蛋白/肽的储液浓度
V1＝受体/供体溶液的总体积
V2＝向受体/供体溶液加入的蛋白/肽储液体积
3.测试成分被制备成分开的受体和供体溶液。受体溶液包含受体珠和靶向蛋白，而供体溶液包含供体珠和生物素化的肽。
hmMcl-1
Figure BDA0000083236130003131
Bcl-xL
Figure BDA0000083236130003132
对抗-GST
Figure BDA0000083236130003141
4.配制溶液后，让其留在室温下孵育30分钟，让珠与蛋白和肽结合。
5.将50μL Bcl-xL溶液、50μL hmMcl-1溶液和50μL生物素化的-GST加入到测试板上分开的深孔中。将对照50μL测试/珠缓冲液加入分开的孔板中(无蛋白)。
6.将50μL Bim溶液和50μL Bak溶液加入到分开的深孔板中。
7.从化合物板转移0.3μL样本到各测试板中。
8.在室温下孵育30分钟，然后加入5μL供体溶液。加入供体溶液后，轻柔地拍打板，并用粘合薄膜独立密封。
9.板然后装载到Envision 2103读板器上供分析。
数据分析
％抑制使用以下公式计算：
Figure BDA0000083236130003151
x＝化合物处理后获得的RFU
μ-＝由负对照(无蛋白对照)获得的RFU
μ+＝由正对照(DMSO运载体对照)获得的RFU
IC50值通过以上数据的非线性最小二乘方拟合获得，例如，对xLfit3公式205：y＝A+((B-A)/(1+((C/x)ΛD)))。
通过测定各测试板的Z质因子，监控测试结果的质量，Z质数＝＞0.5时结果被认为是可靠的(Zhang等，J Biomol Screening，4：67-73，1999)。
本发明的示例化合物，即表1中的化合物针对Bcl-xL蛋白的Alphascreen结果(IC50，单位微摩尔)，在下面按它们在表1中出现的顺序提供：0.10、0.001、0.001、0.0008、0.002、0.002、0.025、0.0005、0.0008、0.001、0.002、0.004、0.010、0.020、0.010、0.010、0.020、0.006、NA、0.008、0.0003、0.050、0.001、0.027、0.0009、0.005、0.007、0.008、0.117、0.0003、0.0003、0.050、NA、0.005、0.010、NA、NA、0.005、NA、NA、0.0007、0.007、NA、NA、0.004、NA、NA、0.0003、0.080、0.010、0.006、NA、NA、NA、NA、NA、NA、NA、NA、NA、NA、1.6、0.574、NA、NA、NA、NA、NA、NA、0.26、0.57、NA、NA、NA、0.0001、0.086、0.034、NA、NA、NA、NA、NA、NA、NA、NA、NA、NA、NA、NA、NA、NA、NA、NA、NA、NA、NA、NA、0.14、NA、NA、NA、0.865、7.5、4、0.31、0.124、0.0776、0.598、19、0.030、0.003、0.136、0.041、0.0009、NA、NA、NA、0.0002、0.0002、0.017、0.0004、0.0003、0.00014、0.0004、NA、0.0924、0.0106、0.34、NA、NA、0.020、0.0009、0.0012、0.0011、0.0022、0.0096、0.00045、NA、NA、NA、3.8、NA、NA、NA、NA、NA、NA、NA和NA。本文使用的缩写“NA”指该化合物的数据未得到。
实施例126
细胞存活测试：
综述：
本发明化合物的功效也可以在基于细胞的灭杀测试中使用各种细胞系和小鼠肿瘤模型测定。例如，它们对细胞存活的活性可以用一组培养的致瘤和非致瘤的细胞系，以及原代小鼠或人细胞群落来评估。在一组示例的条件中，5,000-20,000个细胞在37℃和10％CO2在适当的生长培养基(例如，在pre-B Eμ-Myc小鼠肿瘤情况下，100μLDulbecco′s改良的Eagle′s培养基，补充了10％胎牛血清、天冬酰胺酶和2-巯基乙醇)中在96孔板中培养。用1nM-100μM化合物孵育数小时到数天后，可以监测细胞存活和细胞总数，以识别在EC50＜10μM致死的那些。细胞存活可以通过细胞排除碘化丙啶的能力测定(10μg/mL，通过免疫荧光分析，发射波长660-675nm，使用流式细胞仪(BD FACScan)，或通过用CELL
Figure BDA0000083236130003171
孵育后发光检测。或者，可以使用高通量比色测试，例如
Figure BDA0000083236130003172
96水性非放射性细胞增殖测试(Promega)。通过凋亡的细胞死亡，通过用50μM半胱天冬酶抑制剂例如zVAD-fmk预孵育细胞来确认。
a.Mcl-1-1-小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)的细胞存活测试：
在细胞通过下游Bax/Bak途径经历凋亡前，在正常细胞中，Bcl-xL和Mcl-1抗凋亡蛋白都需要中和，参见Chen，L.等MoI.Cell(2005)17，393-403；Willis，S.N.等Genes Dev.(2005)19，1294-1305。仅靶向Bcl-xL的化合物不应当影响正常细胞，但可以杀死某些癌细胞，如果这些癌细胞的存活更多地依赖Bcl-xL而较少地依赖其它抗凋亡蛋白例如Mcl-1。为反映这点，本发明化合物对野生型(wt)小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)、Bax/Bak双敲除(BB DKO)MEF、表达Noxa的MEF、和表达Bad的MEF的存活，测试其效果。Noxa特异性中和Mcl-1。因此，表达Noxa的MEF反映了依赖Bcl-xL存活的癌细胞类型，而且对靶向Bcl-xL的化合物的灭杀，应当比MEF敏感得多，MEF中Bcl-xL和Mcl-1都是保护性的。
在这一测试中，使用Mcl-1(-/-)细胞来确认BH3模拟小分子存在下的细胞凋亡主要是由于Bcl-xL失活。这一失活使得Bax/Bak不受拘束，并引起凋亡。CELLTITER-GLO发光细胞存活测试是基于存在的ATP的定量来测定培养中的存活细胞数量的均相方法。ATP量与代谢活性细胞的存在相关，使得细胞裂解后存在的ATP量与测量的荧光量成比例。
材料
Mcl-1(-/-)小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)是室内制备的附着细胞系。MEF在Iwaki 75cm2组织培养烧瓶(cat#3123-075)中生长，使用FMA培养基，其组成如下：
·89％DME Kelso
·10％热灭活的胎牛血清(FCS)(Hyclone cat#SH30396.03)
·1％10mM天冬酰胺(Fluka cat#11149)
·275μl 1∶2000稀释的2-巯基乙醇加入到终500ml体积的FMA中(Sigma cat#M7522；在MT-PBS中稀释)
FMA在4℃贮存，在37℃使用。MEF在FMA培养基中培养，用MT-PBS和胰蛋白酶收获。对MEF细胞存活测试，细胞分别用10％FCS-FMA和1％FCS-FMA接种到板中。
1％FCS-FMA组成如下：
·98％DME Kelso
·1％热灭活的胎牛血清(FCS)(Hyclone cat#SH30396.03)
·1％10mM天冬酰胺(Fluka cat#11149)
·275μl 1∶2000稀释的2-巯基乙醇加入到终500ml体积中(Sigmacat#M7522；在MT-PBS中稀释)
测试使用白色平透明底Greiner 384孔组织培养级(Interpath#781098)板执行。化合物在Matrical 384孔25μl V形底板(cat#MP101-2-PP)中配制，用来自Beckman Coulter(cat#538619)的铝箔密封，在12℃贮存过夜。化合物的制备和滴定在AnalaR级DMSO(Merck cat#1.02952.2500)中执行。细胞存活检测测试使用CELLTITRE-GLOTM，它是可从Promega(cat#G7572)商业得到的，在-20℃贮存，在37℃使用。
可在这一测试中使用的自动化系统包括：1)Multidrop-MULTIDROP 384(ThermoLabsystems)分配器被用来无菌地分配细胞到测试板中；2)MiniTrak-来自Perkin Elmer的MiniTrak系统被用来滴定化合物板；3)Zymark-带100nL pintool头的Zymark ScicloneALH3000系统被用来向细胞添加化合物；4)EnVision-EnVision读板器被用来通过荧光的检测而测量存活。
本发明化合物在100％DMSO中被制备成10mM溶液，并在-20℃贮存。化合物解冻至室温并分配到384孔Matrical板中。向板中加入标准对照化合物作为对照，例如32.3mM依托泊苷。
板可以用箔密封物密封，并在12℃贮存过夜。化合物板留在室温下解冻，而且化合物用MiniTrak在100％DMSO中1∶3滴定(参见下面方法部分-第3天)。
方法
1.第一天-细胞裂解
吸走培养基，Mcl-1(-/-)细胞用10ml温暖的MT-PBS洗涤。吸走MT-PBS，加入1ml胰蛋白酶。T75烧瓶在37℃孵育直到细胞变得分离。将4ml 10％FCS FMA培养基加入到胰蛋白酶处理的细胞中，整个体积转移到50ml离心管中，在250g离心3分钟。吸走上清液，细胞团在10ml 10％FCS FMA中重悬。3ml这一细胞悬浮液加入到包含17ml 10％FCS FMA培养基的洁净的75cm2烧瓶中，从而执行3∶10裂解。剩下的细胞悬浮液用来执行1∶50裂解，到另一个75cm2烧瓶中供进一步培养。
2.第二天-接种测试板并设立化合物板
细胞按照方法步骤1收获，细胞团在3ml 10％FCS FMA中重悬。细胞数量通过在Neubauer血球计数器中计数来测定，计算稀释以达到1x104细胞ml-1的密度(500细胞/孔，50μl培养基中)。分开的稀释分别在50ml 10％FCS FMA和50ml 1％FCS FMA溶液中制备。
每化合物板设立四块测试板。两块384孔板包含10％FCS FMA中的Mcl-1(-/-)细胞，而其它两块板包含1％FCS FMA中的Mcl-1(-/-)细胞。
使用Multidrop将25μl细胞无菌地分配到测试板的所有384孔中。板以未堆叠的层的状态室温下放置大约30分钟(最小化边际效应)，然后单层放置在37℃培养箱中。将板孵育过夜。
3.第三天-滴定化合物板并处理细胞
化合物板通过使用100％DMSO执行3倍11个点稀释系列用MiniTrak滴定。滴定化合物后，使用Zymark Sciclone Pintool将100nl化合物加入到细胞板中。这是1∶250稀释的化合物，所以化合物的最高终浓度是40μM。板然后回到37℃培养箱，孵育过夜。
4.第四天-存活分析
依照制造商的说明书，通过让CELLTITRE-GLOTM底物与CELLTITRE-GLOTM缓冲液重组，配制CELLTITRE-GLOTM溶液，并且使用后贮存在-80℃。板从培养箱中移走，平衡到室温15分钟。使用Multidrop向测试板的各孔加入25μl稀释的CELLTITRE-GLOTM。板用板振荡器混合15分钟，之后用Envision使用荧光程序读板。
数据分析
％抑制使用以下公式计算：
Figure BDA0000083236130003211
x＝样本化合物处理后获得的CPS
μ-＝由负对照获得的CPS
μ+＝由正对照获得的CPS
IC50值通过数据的非线性最小二乘方拟合获得，数据使用例如4-参数逻辑拟合(XLFit4eqn#205；y＝A+((B-A)/(1+((C/x)ΛD)))。
通过测定各测试板的Z’因子，监控测试结果的质量，Z’≥0.5时结果被认为是健康的(Zhang等，J Biomol Screening，4：67-73，1999)。
本发明的某些化合物，即表1中的化合物58、64、74、81、82、84、88、94、97和100的MEF Mcl-1-/-KO细胞存活结果(即EC50，单位微摩尔，而且测试在10％胎牛血清存在下执行)，分别是1.3、0.31、0.007、0.010、0.030、0.022、0.028、0.448、0.026和0.399。
b.血小板的细胞存活测试
富血小板血浆(PRP)和本发明化合物一起在37℃孵育大约4小时。孵育后，血小板平衡至室温20分钟，然后加入等体积的CELLTITER-GLOTM试剂(Promega Corporation)。样本混合两分钟，然后让其在室温下平衡另外10分钟。由样本产生的荧光使用LJL Analyst读板器来定量。数据分析使用GRAPHPAD PRISM 4.0执行。本发明的某些化合物，即表1中的化合物54、74、75、78、79、86、87、88、90、95、96和97的血小板存活结果(即EC50，单位微摩尔)，分别是0.132、0.021、0.009、0.003、0.003、0.010、0.003、0.003、0.003、0.003、0.354和0.003。
c.人肿瘤细胞系NCI-H146的细胞存活
NCI-H146(ATCC，Manassas，VA)人小细胞肺癌细胞在总体积100μL补充了10％人血清(Invitrogen，Carlsbad，CA)的组织培养基中以50,000细胞/孔接种到96孔组织培养板中，用感兴趣的化合物从10μM到0.020μL的2倍连续稀释处理。各浓度一式二份测试，至少独立测试3次。化合物处理48小时后存活细胞的数量，依照制造商的推荐(Promega Corp.，Madison，WI)，使用CELLTITER
Figure BDA0000083236130003221
水性非放射性细胞增殖MTS测试测定。本发明的某些化合物，即表1中的化合物74、82、84、93和97的NCI-H146细胞存活结果(即EC50，单位微摩尔)，分别是0.71、2.5、0.61、3.2和2.4。

Claims (26)

1.具有式IV-a的化合物
或其药学上可接受的盐，其中
R2不存在；
A是
Figure FDA00003171733300012
其中R3不存在；
B是选自以下的一员：
Figure FDA00003171733300013
和
Figure FDA00003171733300014
其中Y是C(H)；X2是O或S；R4a不存在；R4b选自以下：
Figure FDA00003171733300015
和
Figure FDA00003171733300016
其中Rk是C1-6烷基；a1表示B基团与式IV-a中的氮原子的连接点，而a2表示B基团与式IV-a中的L基团的连接点；
L不存在或是选自C6-10亚芳基-C1-6杂亚烷基、C5-9杂亚芳基-C1-6杂亚烷基、C1-6杂亚烷基、C1-6亚烷基、C1-6卤代亚烷基、C2-4亚烯氧基、C2-4亚炔氧基、C2-6亚烯基、C2-6亚炔基、-NH-、-S-和-O-的接头，其中L基团的亚烷基、亚烯基、亚炔基或杂亚烷基部分被0到4个选自卤素、-Rm和=O的R5a取代基取代，而且L基团的芳香族部分被0到4个选自卤素、-ORn、-NRnRo、-Rn、-NO2和CN的R5b取代基取代；其中Rm选自C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C1-6杂烷基、C3-6杂环烷基-C1-6烷基、C3-7杂环烷基-C1-6杂环烷基和C1-6卤代烷基，而且连接在L的相同或不同原子上的任选地任意两个R5a取代基，可以组合形成一个5-到7-元的碳环或一个5-到7-元的杂环，该杂环包含1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点；而且其中Rn和Ro每次出现时，独立地选自氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基和C1-6卤代烷基，而且其中任选地Rn和Ro，与它们各自相连的原子一起，组合形成一个3-到7-元的杂环，其包含1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点；
E是氢或卤素；或者作为替代，E选自苯基、C5-6杂芳基、C3-7杂环烷基和C3-7环烷基，而且任选地与E稠合的是1或2个环，其独立地选自3-到7-元的碳环、3-到7-元的杂环、苯环、和5-到6-元的杂芳环，其中E和各个任选地与E稠合的环独立地被0到5个R6取代基取代，R6取代基选自卤素、-NRpRq、-SRp、-ORp、-C(O)ORp、-C(O)NRpRq、-C(O)Rp、-NRpC(O)Rq、-OC(O)Rr、-NRpC(O)NRpRq、-OC(O)NRpRq、-NRpC(O)ORr、-C(=NORp)NRpRq、-NRpC(=N-CN)NRpRq、-NRpS(O)2NRpRq、-S(O)2Rr、-S(O)2NRpRq、-Rr、-Rs、-NO2、-N3、=O、-CN、-Z1-NRpRq、-Z1-SRp、-Z1-ORp、-Z1-C(O)ORp、-Z1-C(O)NRpRq、-Z1-C(O)Rp、-Z1-NRpC(O)Rq、-Z1-OC(O)Rr、-Z1-NRpC(O)NRpRq、-Z1-OC(O)NRpRq、-Z1-NRpC(O)ORr、-Z1-C(=NORp)NRpRq、-Z1-NRpC(=N-CN)NRpRq、-Z1-NRpS(O)2NRpRq、-Z1-S(O)2Rr、-Z1-S(O)2NRpRq、-Z1-NO2、-Z1-N3、-Z1-Rs和-Z1-CN；其中Z1选自C1-6亚烷基、C2-6亚烯基、C2-6亚炔基、C1-6杂亚烷基、C3-7杂环烷基和C3-7环烷基；Rp和Rq各自独立地选自氢、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-7环烷基、C3-7杂环烷基、苯基和-(CH2)1-4-苯基；Rr选自C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C3-10环烷基、C3-10杂环烷基、苯基和-(CH2)1-4-苯基；任选地在各个R6取代基内，Rp和Rq、或Rp和Rr，与它们各自相连的原子一起，任选地组合形成一个3-到7-元的杂环，其任选地包含1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点；Rs选自苯基、C5-6杂芳基、C3-7杂环烷基、C3-7环烷基，而且任选地与Rs稠合的是1或2个环，其各自独立地选自5-到7-元的碳环、5-到7-元的杂环、苯环、和5-到6-元的杂芳环，而且其中Rs和各个任选地与Rs稠合的环各自独立地被0到5个R7取代基取代，R7取代基选自卤素、-NRtRu、-SRt、-ORt、-C(O)ORt、-C(O)NRtRu、-C(O)Rt、-NRtC(O)Rv、-OC(O)Rv、-NRtC(O)NRtRu、-OC(O)NRtRr、-NRtC(O)ORv、-C(=NORt)NRtRu、-NRtC(=N-CN)NRtRu、-NRtS(O)2NRtRu、-S(O)2Rv、-S(O)2NRtRu、-Rv、-NO2、-N3、=O、-CN、-Z2-NRtRu、-Z2-SRt、-Z2-ORt、-Z2-C(O)ORt、-Z2-C(O)NRtRu、-Z2-C(O)Rv、-Z2-NRtC(O)Ru、-Z2-OC(O)Rv、-Z2-NRtC(O)NRtRu、-Z2-OC(O)NRtRu、-Z2-NRtC(O)ORv、-Z2-C(=NORt)NRtRu、-Z2-NRtC(=N-CN)NRtRu、-Z2-NRtS(O)2NRtRu、-Z2-S(O)2Rv、-Z2-S(O)2NRtRu、-Z2-NO2、-Z2-N3和-Z2-CN；其中Z2选自C1-6亚烷基、C2-6亚烯基、C2-6亚炔基、C1-6杂亚烷基，Rt和Ru各自独立地选自氢、C1-6烷基、C1-6卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-(CH2)1-4-苯基、C3-7环烷基和C3-7杂环烷基；Rv选自C1-4烷基、C1-4卤代烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、-(CH2)1-4-苯基、C3-7环烷基和C3-7杂环烷基；而且在各个R7取代基内，Rt和Ru、或Rt和Rv，与它们各自相连的原子一起，任选地组合形成一个3-到7-元的杂环，其含有1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点；
其中每个杂烷基和杂亚烷基包含1-3个选自N、O和S的杂原子，且每个杂环烷基、杂环亚烷基、杂芳基、杂亚芳基和杂芳环包含1-5个选自N、O和S的杂原子。
2.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中B是
3.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中B是
Figure FDA00003171733300042
4.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中该化合物具有选自的式
Figure FDA00003171733300043
和
Figure FDA00003171733300044
5.如权利要求1、2、3或4所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中L不存在，或者是被任意取代的基团，其选自被任意取代的C6-10亚芳基-C1-6杂亚烷基和C5-9杂亚芳基-C1-6杂亚烷基。
6.如权利要求5所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中L选自
Figure FDA00003171733300051
和
Figure FDA00003171733300052
7.如权利要求1、2、3或4所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中L是被任意取代的基团，其选自被任意取代的C1-6杂亚烷基、C1-6亚烷基、C2-6亚烯基和C2-6亚炔基。
8.如权利要求1、2、3或4所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中L选自被任意取代的C1-4亚烷氧基、C2-4亚烯氧基、C2-4亚炔氧基和C1-4亚烷基，其中L被0到4个Rm基团取代，其中位于L的相同或不同原子上的任意两个Rm基团任选地组合形成一个5-到7-元的碳环或一个5-到7-元的杂环，该杂环包含1到2个选自N、O和S的杂原子作为环顶点。
9.如权利要求1、2、3或4所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中L选自
Figure FDA00003171733300061
10.如权利要求1、2、3或4所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中E是氢。
11.如权利要求1、2、3或4所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中E选自苯基、C5-6杂芳基和C3-7杂环烷基，而且任选地与E稠合的是一个环，独立地选自5-到7-元的碳环、5-到7-元的杂环、苯环、和5-到6-元的杂芳环，其中E和任选地与其稠合的环一共被总计1到3个R6取代基取代，其中的一个R6取代基是-NRpRq、--Z1-NRpRq、-Rs、或-Z1-Rs。
12.如权利要求11所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中的所述一个R6取代基是-NRpRq或-Z1-NRpRq。
13.如权利要求12所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中的1或2个R6取代基选自氟和氯。
14.如权利要求11所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中的所述一个R6取代基是Rs或-Z1-Rs，其中Rs具有的式选自：
Figure FDA00003171733300071
15.如权利要求11所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z1选自：
Figure FDA00003171733300072
16.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中该化合物具有的式选自：
其中E是苯基，而且被1到3个R6取代基取代。
17.如权利要求16所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R4b是-C(O)OH。
18.如权利要求1、2、3或4所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中E是-苯基，其中该苯基在间位或对位位置被任意取代的Rs基团取代，Rs基团具有的式选自：
Figure FDA00003171733300082
19.如权利要求18所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中R7如果存在的话，至少一个选自-NRtRu和-Z2-NRtRu。
20.如权利要求19所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z2选自C1-4亚烷基、C2-4亚烯基、C2-4亚炔基和C1-4杂亚烷基。
21.如权利要求20所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中Z2选自
Figure FDA00003171733300091
22.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中E选自：
Figure FDA00003171733300092
Figure FDA00003171733300101
Figure FDA00003171733300111
Figure FDA00003171733300121
23.如权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自：
Figure FDA00003171733300122
Figure FDA00003171733300141
Figure FDA00003171733300151
Figure FDA00003171733300161
Figure FDA00003171733300171
Figure FDA00003171733300181
Figure FDA00003171733300191
Figure FDA00003171733300201
24.药物组合物，包含如权利要求1-23任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐和至少一种药学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂。
25.如权利要求1-23任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗疾病或病症的药物中的用途，其中所述疾病或病症选自原发性血小板增多症、真性红细胞增多症、再狭窄和器械相关的血栓。
26.如权利要求1-23任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗小细胞肺癌的药物中的用途。
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