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TW202404645A - Met bcl-xl抑制劑抗體-藥物結合物及其使用方法 - Google Patents

Met bcl-xl抑制劑抗體-藥物結合物及其使用方法 Download PDF

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麥可 孟拉得 格蘭德
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Abstract

本發明揭示結合至人類腫瘤學目標之抗Met抗體-藥物結合物。該等抗體-藥物結合物包含Bcl-xL抑制劑藥物部分及結合抗原目標，例如在腫瘤或其他癌細胞上表現之抗原的抗Met抗體或其抗原結合片段。本發明進一步係關於藉由投與本文所提供之抗體-藥物結合物用於治療癌症之方法及組合物。亦揭示包含Bcl-xL抑制劑藥物部分之連接子-藥物結合物及其製備方法。

Description

MET　BCL-XL抑制劑抗體-藥物結合物及其使用方法
本發明係關於包含BclxL抑制劑之抗體-藥物結合物(ADC)及結合抗原目標，例如腫瘤或其他癌細胞上表現之抗原的抗Met抗體或其抗原結合片段。本發明進一步係關於適用於治療及/或診斷表現目標抗原之癌症及/或適於藉由調節Bcl-xL表現及/或活性進行治療之方法及組合物，以及製造彼等組合物之方法。亦揭示包含Bcl-xL抑制劑藥物部分之連接子-藥物結合物及其製備方法。
細胞凋亡(計劃性細胞死亡)為一種組織穩態、發育及移除受損細胞所必需的進化上保守的路徑。細胞凋亡之失調導致人類疾病，包括惡性腫瘤、神經退化性病症、免疫系統之疾病及自體免疫疾病(Hanahan及Weinberg, Cell .2011年3月4日;144(5):646-74；Marsden及Strasser, Annu Rev Immunol. 2003;21:71-105；Vaux及Flavell, Curr Opin Immunol. 2000年12月;12(6):719-24)。細胞凋亡逃逸經識別為癌症之標誌，其參與腫瘤之形成以及持續增大以及對抗癌治療之抵抗(Hanahan及Weinberg, Cell .2000年1月7日;100(1):57-70)。
Bcl-2蛋白質家族包含細胞存活之關鍵調節因子，其可抑制(例如，Bcl-2、Bcl-xL、Mcl-1)或促進(例如，Bad、Bax)細胞凋亡(Gross等人, Genes Dev .1999年8月1日;13(15):1899-911；Youle及Strasser, Nat . Rev . Mol . Cell Biol .2008年1月;9(1):47-59)。
面對應力刺激，細胞存活抑或經歷細胞凋亡係取決於促進細胞死亡之Bcl-2家族成員與促進細胞存活之家族成員之間的配對程度。大多數情況下，此等相互作用涉及使促細胞凋亡家族成員之Bcl-2同源3 (BH3)域對接至促細胞存活成員表面上之溝槽中。Bcl-2同源(BH)域之存在限定Bcl-2家族之成員資格，該Bcl-2家族取決於蛋白質內存在之特定BH域而劃分成三個主要群組。諸如Bcl-2、Bcl-xL及Mcl-1之促細胞存活成員含有BH域1-4，而Bax及Bak (細胞凋亡期間之粒線體外膜滲透作用之促細胞凋亡效應子)含有BH域1-3 (Youle及Strasser, Nat . Rev . Mol . Cell Biol .2008年1月;9(1):47-59)。
Bcl-2家族之促細胞存活成員之過度表現為癌症之標誌，且已顯示，此等蛋白質在腫瘤形成、維持以及對抗癌療法之抗性中起重要作用(Czabotar等人, Nat . Rev . Mol . Cell Biol .2014年1月;15(1):49-63)。Bcl-xL (亦被稱為BCL2L1，來源於BCL2樣蛋白1)在癌症中頻繁擴增(Beroukhim等人, Nature2010年2月18日;463(7283):899-905)，且已顯示，在代表性癌細胞株小組(NCI-60)中，Bcl-xL之表現與對超過120種抗癌治療性分子之敏感度反向相關(Amundson等人, Cancer Res .2000年11月1日;60(21):6101-10)。
另外，使用轉殖基因之基因剔除小鼠模型及Bcl-2家族成員之轉殖基因過度表現的若干研究強調了此等蛋白質在免疫系統之疾病及自體免疫疾病中之重要性(其綜述參見Merino等人, Apoptosis 2009年4月;14(4):570-83. doi: 10.1007/s10495-008-0308-4.PMID: 19172396)。Bcl-xL在T細胞區室內之轉殖基因過度表現引起對由糖皮質激素、g輻射及CD3交聯所誘導之細胞凋亡之抵抗，此表明轉殖基因Bcl-xL過度表現可減少靜止及活化T細胞中之細胞凋亡(Droin等人, Biochim Biophys Acta2004年3月1日;1644(2-3):179-88；doi：10.1016/j.bbamcr.2003.10.011.PMID：14996502)。在患有免疫疾病之患者的樣品中，已觀測到抗細胞凋亡Bcl-2家族蛋白質之持久性表現或高表現(Pope等人, Nat Rev Immunol .2002年7月;2(7):527-35；doi：10.1038/nri846.PMID: 12094227)。特定言之，自類風濕性關節炎患者之關節分離之T細胞展現增加之Bcl-xL表現，且對自發性細胞凋亡具有抗性(Salmon等人, J Clin Invest .1997年2月1日;99(3):439-46；doi：10.1172/JCI119178.PMID: 9022077)。
上文所指示之結果促進了被稱為BH3模擬物之一類新藥物的發現及研發。此等分子能夠破壞Bcl-2家族中之促細胞凋亡成員與抗細胞凋亡成員之間的相互作用，且為細胞凋亡之強力誘導劑。此新類別藥物包括Bcl-2、Bcl-xL、Bcl-w及Mcl-1之抑制劑。最先出現的所描述BH3模擬物為ABT-737及ABT-263，其靶向Bcl-2、Bcl-xL及Bcl-w (Park等人, J . Med . Chem .2008年11月13日;51(21):6902-15；Roberts等人, J . Clin . Oncol .2012年2月10日;30(5):488-96)。此後，亦發現Bcl-2之選擇性抑制劑(ABT-199及S55746 - Souers等人, Nat Med .2013年2月;19(2):202-8；Casara等人, Oncotarget2018年4月13日;9(28):20075-20088)、Bcl-xL之選擇性抑制劑(A-1155463及A-1331852 - Tao等人, ACS Med Chem Lett .2014年8月26日;5(10):1088-93；Leverson等人, Sci Transl Med .2015年3月18日;7(279):279ra40)及Mcl-1之選擇性抑制劑(A-1210477、S63845、S64315、AMG-176及AZD-5991 - Leverson等人, Cell Death Dis .2015年1月15日;6:e1590.；Kotschy等人, Nature2016, 538, 477-482；Maragno等人, AACR2019, Poster #4482；Kotschy等人, WO 2015/097123；Caenepeel等人, Cancer Discov .2018年12月;8(12):1582-1597；Tron等人, Nat . Commun .2018年12月17日;9(1):5341)。選擇性Bcl-2抑制劑ABT-199目前經批准以組合療法形式用於治療患有CLL及AML之患者，而其他抑制劑仍處於臨床前或臨床研發階段。在臨床前模型中，ABT-263已在若干血液惡性腫瘤及實體腫瘤中顯示活性(Shoemaker等人, Clin . Cancer Res .2008年6月1日;14(11):3268-77；Ackler等人, Cancer Chemother . Pharmacol .2010年10月;66(5):869-80；Chen等人, Mol . Cancer Ther .2011年12月;10(12):2340-9)。在臨床研究中，ABT-263在淋巴惡性腫瘤中呈現目標抗腫瘤活性(Wilson等人, Lancet Oncol .2010年12月;11(12):1149-59；Roberts等人, J . Clin . Oncol .2012年2月10日;30(5):488-96)，且正在實體腫瘤中研究其與若干療法組合之活性。選擇性Bcl-xL抑制劑A-1155463或A-1331852在T-ALL (T細胞急性淋巴母細胞白血病)及不同類型之實體腫瘤之臨床前模型中展現活體內活性(Tao等人, ACS Med . Chem . Lett .2014年8月26日;5(10):1088-93；Leverson等人, Sci . Transl . Med .2015年3月18日;7(279):279ra40)。BH3模擬物之使用亦顯示在免疫系統疾病及自體免疫疾病之臨床前模型中具有益處。用ABT-737 (Bcl-2、Bcl-xL及Bcl-w抑制劑)進行處理引起對活體外淋巴細胞增殖之強力抑制。重要的是，在關節炎及狼瘡之動物模型中用ABT-737治療之小鼠顯示疾病嚴重程度之顯著降低(Bardwell等人, J Clin Invest .1997年2月1日;99(3):439-46.doi：10.1172/JCI119178.PMID: 9022077)。另外，已顯示，在對淋巴細胞具有高選擇性之皮膚移植之後，ABT-737預防活體外同種異體T細胞活化、增殖及細胞毒性，且抑制同種異體T細胞及B細胞反應(Cippa等人, Transpl . Int .2011年7月;24(7):722-32. doi：10.1111/j.1432-2277.2011.01272.x. 電子版2011年5月25日.PMID: 21615547)。因此，治療性靶向凋亡信號傳導途徑中之Bcl-xL或其上游及/或下游之蛋白質代表腫瘤學以及免疫及自體免疫疾病領域新療法開發的極具吸引力的方法。
MET (亦稱為c-MET)為包含50 kDa α-次單位及145 kDa β-次單位之受體酪胺酸激酶。MET之唯一已知配位體為肝細胞生長因子(HGF)，其亦稱為分散因子。HGF與MET之結合導致受體二聚化及β-次單位殘基Y1349及Y1356之自體磷酸化，從而活化下游信號傳導路徑，包括磷酸肌醇3-激酶(PI3K)-蛋白激酶B (Akt)路徑、信號轉導及轉錄活化因子(STAT)路徑、促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)路徑及活化B細胞核因子κ輕鏈強化子(NFκB)路徑。此最終使致有絲分裂、細胞增殖、細胞存活及細胞活動性增加。MET或HGF活性之失調可例如經由MET之過度表現、基因擴增、突變或替代性剪接，或經由HGF配位體誘導之自分泌/旁分泌環信號傳導發生。此類失調藉由促進癌症侵襲性、血管生成、癌轉移及腫瘤生長而在許多癌症中起作用，因此導致更具侵襲性的癌症表型及更差的預後。
已顯示，MET可過度表現於多種腫瘤類型中，包括胃癌及食道癌、膽管瘤、結腸癌、腎癌、神經膠母細胞瘤及肺癌(Recondo等人, 2020, Cancer Discovery Cancer Discov, 2020年7月;10(7):922-934)。
亦已知MET與涉及其他受體(諸如EGFR、VEGFR、TGF-β及HER3)之信號傳導路徑相互作用，且可在對針對彼等受體之治療的耐藥性中起作用。因此，MET抑制劑，諸如抗MET抗體及抗體-藥物結合物可與其他受體抑制劑組合在克服耐受性表型方面有效。
人類MET受體由907個胺基酸(殘基25-932)之胞外域組成。細胞外域可細分為SEMA域(殘基27-515)、富含半胱胺酸之叢蛋白信號蛋白整合素域(PSI域、殘基520-561)及由以下胺基酸序列界定之四個免疫球蛋白樣域。IPT1：AA 563-655。IPT2：AA 657-739。IPT3：AA 742-836。IPT4：AA 837-932。域定義描述於Gherardi等人, Proc Natl Acad Sci U S A.  100(21):12039-44 (2003)及Uniprot條目P08581中。SEMA域由摺疊成七葉片螺旋槳結構之七個β片(葉片)組成(Stamos J.等人, EMBO J. 23:2325-2335. (2004))。弗林蛋白酶裂解位點存在於位置307-308處，將SEMA域分為α及β鏈。SEMA-α域由構成葉片1-4之胺基酸殘基27-307編碼，且SEMA-β域由構成葉片5-7之胺基酸殘基308-515編碼。SEMA-α域含有HGF配位體β鏈之結合位點，而HGF α鏈之MET結合位點仍然難以捉摸(Merchant等人, Proc Natl Acad Sci U S A. 110(32):E2987-96 (2013))。一份報告聲稱MET ECD之IPT3及IPT4 域亦介導高親和力HGF結合(Basilico等人, J Biol Chem.  283(30):21267-21277 (2008))。
考慮到其在癌症生物學中之作用及在若干類型癌症中之過度表現，MET受體係癌症治療中之活躍靶點，且係開發抗Met治療抗體及抗體藥物結合物之有吸引力的靶點。
在一些實施例中，本發明部分地提供具有針對癌細胞之生物活性之新穎抗體-藥物結合物(ADC)化合物。該等化合物可減慢、抑制及/或逆轉哺乳動物中之腫瘤生長，及/或可適用於治療人類癌症患者。在一些實施例中，本發明更特定言之涉及能夠結合及殺滅癌細胞之ADC化合物。在一些實施例中，本文所揭示之ADC化合物包含使Bcl-xL抑制劑連接至全長抗Met抗體或抗原結合片段的連接子。在一些實施例中，ADC化合物亦能夠在結合之後內化至目標細胞中。
在一些實施例中，ADC化合物可由式(1)表示： Ab-(L-D) p (1) 其中Ab為抗Met抗體或其抗原結合片段； D為Bcl-xL抑制劑； L為將Ab共價連接至D之連接子；且 p為1至16之整數。在一些實施例中，Ab為靶向癌細胞之抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，對於式(1)之ADC化合物，D包含共價連接至連接子L的式(I')或式(II')之Bcl-xL抑制劑化合物： 或前述任一者之鏡像異構物、非鏡像異構物及/或醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1及R 2彼此獨立地表示選自由以下組成之群的基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經羥基或C 1-C 6烷氧基取代；C 3-C 6環烷基；三氟甲基；及直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基-雜環烷基，其中該雜環烷基視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代； 或R 1及R 2與攜帶其之碳原子一起形成C 3-C 6伸環烷基， R 3表示選自由以下組成之群的基團：氫；C 3-C 6環烷基；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；-X 1-NR aR b；-X 1-N +R aR bR c；-X 1-O-R c；-X 1-COOR c；-X 1-PO(OH) 2；-X 1-SO 2(OH)；-X 1-N 3及： ， R a及R b彼此獨立地表示選自由以下組成之群的基團：氫；雜環烷基；-SO 2-苯基，其中該苯基可經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經一個或兩個羥基取代；C 1-C 6伸烷基-SO 2OH；C 1-C 6伸烷基-SO 2O -；C 1-C 6伸烷基-COOH；C 1-C 6伸烷基-PO(OH) 2；C 1-C 6伸烷基-NR dR e；C 1-C 6伸烷基-N +R dR eR f；C 1-C 6伸烷基-苯基，其中該苯基可經C 1-C 6烷氧基取代；及以下基團： ， 或R a及R b與攜帶其之氮原子一起形成環B 1； 或R a、R b及R c與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， R c、R d、R e、R f彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， 或R d及R e與攜帶其之氮原子一起形成環B 2， 或R d、R e及R f與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， Het 1表示選自由以下組成之群的基團： ， Het 2表示選自由以下組成之群的基團： ， A 1為-NH-、-N(C 1-C 3烷基)、O、S或Se， A 2為N、CH或C(R 5)， G係選自由以下組成之群： -C(O)OR G3、-C(O)NR G1R G2、-C(O)R G2、-NR G1C(O)R G2、-NR G1C(O)NR G1R G2、-OC(O)NR G1R G2、-NR G1C(O)OR G3、-C(=NOR G1)NR G1R G2、-NR G1C(=NCN)NR G1R G2、-NR G1S(O) 2NR G1R G2、-S(O) 2R G3、-S(O) 2NR G1R G2、-NR G1S(O) 2R G2、-NR G1C(=NR G2)NR G1R G2、-C(=S)NR G1R G2、-C(=NR G1)NR G1R G2、視情況經羥基取代之-C 1-C 6烷基、鹵素、-NO 2及-CN，其中： -R G1及R G2在各次出現時各自獨立地選自由以下組成之群：氫、視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基、經羥基取代之C 1-C 6烷基、經C 1-C 6烷氧基取代之C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 3-C 6環烷基、苯基及-(CH 2) 1-4-苯基； -R G3係選自由以下組成之群：視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 3-C 6環烷基、苯基及-(CH 2) 1-4-苯基；或R G1及R G2與其各自所連接之原子一起組合形成C 3-C 8雜環烷基；或在替代方案中，G選自由以下組成之群： 其中R G4選自由以下組成之群：氫、視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基、經羥基取代之C 1-C 6烷基、經C 1-C 6烷氧基取代之C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基及C 3-C 6環烷基， 且R G5表示氫原子或視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基， R 4表示氫、氟、氯或溴原子、甲基、羥基或甲氧基， R 5表示選自由以下組成之群的基團：視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；鹵素；及-CN， R 6表示選自由以下組成之群的基團： 氫； 直鏈或分支鏈-C 1-C 6伸烷基-R 8基團； -C 2-C 6烯基； -X 2-O-R 7； ； -X 2-NSO 2-R 7； -C=C(R 9)-Y 1-O-R 7； C 3-C 6環烷基； C 3-C 6雜環烷基，其視情況經羥基取代； C 3-C 6伸環烷基-Y 2-R 7； C 3-C 6伸雜環烷基-Y 2-R 7基團，及 伸雜芳基-R 7基團，其視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代， R 7表示選自由以下組成之群的基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；(C 3-C 6)伸環烷基-R 8； ， 其中Cy表示C 3-C 8環烷基， R 8表示選自由以下組成之群的基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、-NR' aR' b；-NR' a-CO-OR' c；-NR' a-CO-R' c；-N +R' aR' bR' c；-O-R' c；-NH-X' 2-N +R' aR' bR' c；-O-X' 2-NR' aR' b；-X' 2-NR' aR' b；-NR' c-X' 2-N 3及 ， R 9表示選自由以下組成之群的基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、三氟甲基、羥基、鹵素及C 1-C 6烷氧基， R 10表示選自由以下組成之群的基團：氫、氟、氯、溴、-CF 3及甲基， R 11表示選自由以下組成之群的基團：氫、C 1-C 3伸烷基-R 8、-O-C 1-C 3伸烷基-R 8、-CO-NR hR i及-CH=CH-C 1-C 4伸烷基-NR hR i、-CH=CH-CHO、C 3-C 8伸環烷基-CH 2-R 8及C 3-C 8伸雜環烷基-CH 2-R 8， R 12及R 13彼此獨立地表示氫原子或甲基， R 14及R 15彼此獨立地表示氫或甲基，或R 14及R 15與攜帶其之碳原子一起形成環己基， R h及R i彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， X 1及X 2彼此獨立地表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基，其視情況經一個或兩個選自由以下組成之群的基團取代：三氟甲基、羥基、鹵素及C 1-C 6烷氧基， X' 2表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基， R' a及R' b彼此獨立地表示選自由以下組成之群的基團：氫；雜環烷基；-SO 2-苯基，其中該苯基可經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經一個或兩個羥基或C 1-C 6烷氧基取代；C 1-C 6伸烷基-SO 2OH；C 1-C 6伸烷基-SO 2O-；C 1-C 6伸烷基-COOH；C 1-C 6伸烷基-PO(OH) 2；C 1-C 6伸烷基-NR' dR' e；C 1-C 6伸烷基-N +R' dR' eR' f；C 1-C 6伸烷基-O-C 1-C 6伸烷基-OH；C 1-C 6伸烷基-苯基，其中該苯基可經羥基或C 1-C 6烷氧基取代；及以下基團： ， 或R' a及R' b與攜帶其之氮原子一起形成環B 3； 或R' a、R' b及R' c與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， R' c、R' d、R' e、R' f彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， 或R' d及R' e與攜帶其之氮原子一起形成環B 4； 或R' d、R' e及R' f與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， Y 1表示直鏈或分支鏈C 1-C 4伸烷基， Y 2表示鍵、-O-、-O-CH 2-、-O-CO-、-O-SO 2-、-CH 2-、-CH 2-O、-CH 2-CO-、-CH 2-SO 2-、-C 2H 5-、-CO-、-CO-O-、-CO-CH 2-、-CO-NH-CH 2-、-SO 2-、-SO 2-CH 2-、-NH-CO-或-NH-SO 2-， m=0、1或2， B 1、B 2、B 3及B 4彼此獨立地表示C 3-C 8雜環烷基，該基團可：(i)為單環或雙環基團，其中雙環基團包括稠合、橋接或螺環系統，(ii)除氮原子之外，亦可含有一個或兩個獨立地選自氧、硫及氮之雜原子，(iii)經一個或兩個選自由以下組成之群的基團取代：氟、溴、氯、直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、羥基、-NH 2、側氧基及哌啶基， 其中若存在，則R 3及R 8基團中之一者共價連接至連接子，且其中原子之價不因與其鍵結之一或多個取代基而超過；或 或前述任一者之鏡像異構物、非鏡像異構物及/或醫藥學上可接受之鹽，其中： n=0、1或2， ------表示單鍵或雙鍵， A 4及A 5彼此獨立地表示碳原子或氮原子， Z 1表示鍵、-N(R)-或-O-，其中R表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， R 1表示選自由以下組成之群的基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經羥基或C 1-C 6烷氧基取代；C 3-C 6環烷基；三氟甲基；及直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基-雜環烷基，其中該雜環烷基視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代； R 2表示氫或甲基； R 3表示選自由以下組成之群的基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 4烷基；-X 1-NR aR b；-X 1-N +R aR bR c；-X 1-O-R c；-X 1-COOR c；-X 1-PO(OH) 2；-X 1-SO 2(OH)；-X 1-N 3及： ， R a及R b彼此獨立地表示選自由以下組成之群的基團：氫；雜環烷基；-SO 2-苯基，其中該苯基可經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經一個或兩個羥基取代；C 1-C 6伸烷基-SO 2OH；C 1-C 6伸烷基-SO 2O -；C 1-C 6伸烷基-COOH；C 1-C 6伸烷基-PO(OH) 2；C 1-C 6伸烷基-NR dR e；C 1-C 6伸烷基-N +R dR eR f；C 1-C 6伸烷基-苯基，其中該苯基可經C 1-C 6烷氧基取代；及以下基團： 或R a及R b與攜帶其之氮原子一起形成環B 1； 或R a、R b及R c與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， R c、R d、R e、R f彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， 或R d及R e與攜帶其之氮原子一起形成環B 2， 或R d、R e及R f與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， Het 1表示選自由以下組成之群的基團： ， Het 2表示選自由以下組成之群的基團： ， A 1為-NH-、-N(C 1-C 3烷基)、O、S或Se， A 2為N、CH或C(R 5)， G係選自由以下組成之群： -C(O)OR G3、-C(O)NR G1R G2、-C(O)R G2、-NR G1C(O)R G2、-NR G1C(O)NR G1R G2、-OC(O)NR G1R G2、-NR G1C(O)OR G3、-C(=NOR G1)NR G1R G2、-NR G1C(=NCN)NR G1R G2、-NR G1S(O) 2NR G1R G2、-S(O) 2R G3、-S(O) 2NR G1R G2、-NR G1S(O) 2R G2、-NR G1C(=NR G2)NR G1R G2、-C(=S)NR G1R G2、-C(=NR G1)NR G1R G2、視情況經羥基取代之-C 1-C 6烷基、鹵素、-NO 2及-CN，其中： -R G1及R G2在各次出現時各自獨立地選自由以下組成之群：氫、視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基、經羥基取代之C 1-C 6烷基、經C 1-C 6烷氧基取代之C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 3-C 6環烷基、苯基及-(CH 2) 1-4-苯基； -R G3係選自由以下組成之群：視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基、C 3-C 6環烷基、苯基及-(CH 2) 1-4-苯基；或R G1及R G2與其各自所連接之原子一起組合形成C 3-C 8雜環烷基；或在替代方案中，G選自由以下組成之群： ， 其中R G4選自由以下組成之群：氫、視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基、經羥基取代之C 1-C 6烷基、經C 1-C 6烷氧基取代之C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基及C 3-C 6環烷基， 且R G5表示氫原子或視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基， R 4表示氫、氟、氯或溴原子、甲基、羥基或甲氧基， R 5表示選自由以下組成之群的基團：視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；鹵素；及-CN， R 6表示選自由以下組成之群的基團： 氫； 直鏈或分支鏈-C 1-C 6伸烷基-R 8基團； -C 2-C 6烯基； -X 2-O-R 7； ； -X 2-NSO 2-R 7； -C=C(R 9)-Y 1-O-R 7； C 3-C 6環烷基； C 3-C 6雜環烷基，其視情況經羥基取代； C 3-C 6伸環烷基-Y 2-R 7； C 3-C 6伸雜環烷基-Y 2-R 7基團，及 伸雜芳基-R 7基團，其視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代， R 7表示選自由以下組成之群的基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；(C 3-C 6)伸環烷基-R 8； ， 其中Cy表示C 3-C 8環烷基， R 8表示選自由以下組成之群的基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、-NR' aR' b；-NR' a-CO-OR' c；-NR' a-CO-R' c；-N +R' aR' bR' c；-O-R'c；-NH-X' 2-N +R' aR' bR' c；-O-X' 2-NR' aR' b,-X' 2-NR' aR' b、-NR' c-X' 2-N 3及 ， R 9表示選自由以下組成之群的基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、三氟甲基、羥基、鹵素及C 1-C 6烷氧基， R 10表示選自由以下組成之群的基團：氫、氟、氯、溴、-CF 3及甲基， R 11表示選自由以下組成之群的基團：氫、鹵素、C 1-C 3伸烷基-R 8、-O-C 1-C 3伸烷基-R 8、-CO-NR hR i及-CH=CH-C 1-C 4伸烷基-NR hR i、-CH=CH-CHO、C 3-C 8伸環烷基-CH 2-R 8及C 3-C 8伸雜環烷基-CH 2-R 8， R 12及R 13彼此獨立地表示氫原子或甲基， R 14及R 15彼此獨立地表示氫或甲基，或R 14及R 15與攜帶其之碳原子一起形成環己基， R h及R i彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， X 1表示視情況經一或兩個選自由三氟甲基、羥基、鹵素及C 1-C 6烷氧基組成之群的基團取代之直鏈或分支鏈C 1-C 4伸烷基， X 2表示視情況經一或兩個選自由三氟甲基、羥基、鹵素及C 1-C 6烷氧基組成之群的基團取代的直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基， X' 2表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基， R' a及R' b彼此獨立地表示選自由以下組成之群的基團：氫；雜環烷基；-SO 2-苯基，其中該苯基可經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經一個或兩個羥基或C 1-C 6烷氧基取代；C 1-C 6伸烷基-SO 2OH；C 1-C 6伸烷基-SO 2O -；C 1-C 6伸烷基-COOH；C 1-C 6伸烷基-PO(OH) 2；C 1-C 6伸烷基-NR' dR' e；C 1-C 6伸烷基-N +R' dR' eR' f；C 1-C 6伸烷基-O-C 1-C 6伸烷基-OH；C 1-C 6伸烷基-苯基，其中該苯基可經羥基或C 1-C 6烷氧基取代；及以下基團： 或R' a及R' b與攜帶其之氮原子一起形成環B 3； 或R' a、R' b及R' c與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， R' c、R' d、R' e、R' f彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， 或R' d及R' e與攜帶其之氮原子一起形成環B 4； 或R' d、R' e及R' f與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， Y 1表示直鏈或分支鏈C 1-C 4伸烷基， Y 2表示鍵、-O-、-O-CH 2-、-O-CO-、-O-SO 2-、-CH 2-、-CH 2-O、-CH 2-CO-、-CH 2-SO 2-、-C 2H 5-、-CO-、-CO-O-、-CO-CH 2-、-CO-NH-CH 2-、-SO 2-、-SO 2-CH 2-、-NH-CO-或-NH-SO 2-， m=0、1或2， B 1、B 2、B 3及B 4彼此獨立地表示C 3-C 8雜環烷基，該基團可：(i)為單環或雙環基團，其中雙環基團包括稠合、橋接或螺環系統，(ii)除氮原子之外，亦可含有一個或兩個獨立地選自氧、硫及氮之雜原子，(iii)經一個或兩個選自由以下組成之群的基團取代：氟、溴、氯、直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、羥基、-NH 2、側氧基及哌啶基， 其中若存在，則R 3、R 8及G基團中之一者共價連接至連接子，且其中原子之價不因與其鍵結之一或多個取代基而超過。
在一些實施例中，對於式(I)之ADC化合物，D包含共價連接至連接子L的式(I)或式(II)之Bcl-xL抑制劑化合物： ， 或前述任一者之鏡像異構物、非鏡像異構物及/或其與醫藥學上可接受之酸或鹼之加成鹽(亦即，醫藥學上可接受之鹽)，其中： R 1及R 2彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經羥基或C 1-C 6烷氧基取代；C 3-C 6環烷基；三氟甲基；直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基-雜環烷基，其中該雜環烷基視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代； 或R 1及R 2與攜帶其之碳原子一起形成C 3-C 6伸環烷基， R 3表示選自以下之基團：氫；C 3-C 6環烷基；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；-X 1-NR aR b；-X 1-N +R aR bR c；-X 1-O-R c；-X 1-COOR c；-X 1-PO(OH) 2；-X 1-SO 2(OH)；-X 1-N 3及： ， R a及R b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；雜環烷基；-SO 2-苯基，其中該苯基可經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經一個或兩個羥基取代；C 1-C 6伸烷基-SO 2OH；C 1-C 6伸烷基-SO 2O -；C 1-C 6伸烷基-COOH；C 1-C 6伸烷基-PO(OH) 2；C 1-C 6伸烷基-NR dR e；C 1-C 6伸烷基-N +R dR eR f；C 1-C 6伸烷基-苯基，其中該苯基可經C 1-C 6烷氧基取代； 以下基團： ， 或R a及R b與攜帶其之氮原子一起形成環B 1； 或R a、R b及R c與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， R c、R d、R e、R f彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， 或R d及R e與攜帶其之氮原子一起形成環B 2， 或R d、R e及R f與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， Het 1表示選自以下之基團： ， Het 2表示選自以下之基團： A 1為-NH-、-N(C 1-C 3烷基)、O、S或Se， A 2為N、CH或C(R 5)， G係選自由以下組成之群： -C(O)OR G3、-C(O)NR G1R G2、-C(O)R G2、-NR G1C(O)R G2、-NR G1C(O)NR G1R G2、-OC(O)NR G1R G2、-NR G1C(O)OR G3、-C(=NOR G1)NR G1R G2、-NR G1C(=NCN)NR G1R G2、-NR G1S(O) 2NR G1R G2、-S(O) 2R G3、-S(O) 2NR G1R G2、-NR G1S(O) 2R G2、-NR G1C(=NR G2)NR G1R G2、-C(=S)NR G1R G2、-C(=NR G1)NR G1R G2、視情況經羥基取代之C 1-C 6烷基、鹵素、-NO 2及-CN，其中： - R G1及R G2在各次出現時各自獨立地選自由以下組成之群：氫；C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；C 3-C 6環烷基；苯基；及-(CH 2) 1-4-苯基； - R G3係選自由以下組成之群：C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；C 3-C 6環烷基；苯基；及-(CH 2) 1-4-苯基；或 R G1及R G2與其各自所連接之原子一起組合形成C 3-C 8雜環烷基；或在替代方案中，G係選自由以下組成之群： ， 其中R G4係選自氫、視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基及C 3-C 6環烷基， R 4表示氫、氟、氯或溴原子、甲基、羥基或甲氧基， R 5表示選自以下之基團：C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；鹵素；或-CN， R 6表示選自以下之基團： 氫； -C 2-C 6烯基； -X 2-O-R 7； ； -X 2-NSO 2-R 7； -C=C(R 9)-Y 1-O-R 7； C 3-C 6環烷基； C 3-C 6雜環烷基，其視情況經羥基取代； C 3-C 6伸環烷基-Y 2-R 7； C 3-C 6伸雜環烷基-Y 2-R 7基團， 伸雜芳基-R 7基團，其視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代， R 7表示選自以下之基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；(C 3-C 6)伸環烷基-R 8；或： 其中Cy表示C 3-C 8環烷基， R 8表示選自以下之基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；-NR' aR' b；-NR' a-CO-OR' c；-NR' a-CO-R' c；-N +R' aR' bR' c；-O-R' c；-NH-X' 2-N +R' aR' bR' c；-O-X' 2-NR' aR' b；-X' 2-NR' aR' b；-NR' c-X' 2-N 3；及： ， R 9表示選自以下之基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、三氟甲基、羥基、鹵素、C 1-C 6烷氧基， R 10表示選自以下之基團：氫、氟、氯、溴、-CF 3及甲基， R 11表示選自以下之基團：氫、C 1-C 3伸烷基-R 8、-O-C 1-C 3伸烷基-R 8、-CO-NR hR i及-CH=CH-C 1-C 4伸烷基-NR hR i、-CH=CH-CHO、C 3-C 8伸環烷基-CH 2-R 8、C 3-C 8伸雜環烷基-CH 2-R 8， R 12及R 13彼此獨立地表示氫原子或甲基， R 14及R 15彼此獨立地表示氫或甲基，或R 14及R 15與攜帶其之碳原子一起形成環己基， R h及R i彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， X 1及X 2彼此獨立地表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基，其視情況經一或兩個選自以下之基團取代：三氟甲基、羥基、鹵素、C 1-C 6烷氧基， X' 2表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基， R' a及R' b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；雜環烷基；-SO 2-苯基，其中該苯基可經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經一個或兩個羥基或C 1-C 6烷氧基取代；C 1-C 6伸烷基-SO 2OH；C 1-C 6伸烷基-SO 2O -；C 1-C 6伸烷基-COOH；C 1-C 6伸烷基-PO(OH) 2；C 1-C 6伸烷基-NR' dR' e；C 1-C 6伸烷基-N +R' dR' eR' f；C 1-C 6伸烷基-O-C 1-C 6伸烷基-OH；C 1-C 6伸烷基-苯基，其中該苯基可經羥基或C 1-C 6烷氧基取代； 以下基團： 或R' a及R' b與攜帶其之氮原子一起形成環B 3； 或R' a、R' b及R' c與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， R' c、R' d、R' e、R' f彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， 或R' d及R' e與攜帶其之氮原子一起形成環B 4； 或R' d、R' e及R' f與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， Y 1表示直鏈或分支鏈C 1-C 4伸烷基， Y 2表示鍵、-O-、-O-CH 2-、-O-CO-、-O-SO 2-、-CH 2-、-CH 2-O、-CH 2-CO-、-CH 2-SO 2-、-C 2H 5-、-CO-、-CO-O-、-CO-CH 2-、-CO-NH-CH 2-、-SO 2-、-SO 2-CH 2-、-NH-CO-、-NH-SO 2-， m=0、1或2， p=1、2、3或4， B 1、B 2、B 3及B 4彼此獨立地表示C 3-C 8雜環烷基，該基團可：(i)為單環或雙環基團，其中雙環基團包括稠合、橋接或螺環系統，(ii)除氮原子之外，亦可含有一個或兩個獨立地選自氧、硫及氮之雜原子，(iii)經一個或兩個選自以下之基團取代：氟、溴、氯、直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、羥基、-NH 2、側氧基或哌啶基， 其中若存在，則R 3及R 8基團中之一者共價連接至連接子，且其中原子之價不因與其鍵結之一或多個取代基而超過；或 ， 或前述之鏡像異構物、非鏡像異構物及/或其與醫藥學上可接受之酸或鹼之加成鹽(亦即，醫藥學上可接受之鹽)，其中： n=0、1或2， ------表示單鍵或雙鍵， A 4及A 5彼此獨立地表示碳原子或氮原子， Z 1表示鍵、-N(R)-或-O-，其中R表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， R 1表示選自以下之基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經羥基或C 1-C 6烷氧基取代；C 3-C 6環烷基；三氟甲基；直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基-雜環烷基，其中該雜環烷基視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代； R 2表示氫或甲基； R 3表示選自以下之基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 4烷基；-X 1-NR aR b；-X 1-N +R aR bR c；-X 1-O-R c；-X 1-COOR c；-X 1-PO(OH) 2；-X 1-SO 2(OH)；-X 1-N 3；及： ， R a及R b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；雜環烷基；-SO 2-苯基，其中該苯基可經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經一個或兩個羥基取代；C 1-C 6伸烷基-SO 2OH；C 1-C 6伸烷基-SO 2O -；C 1-C 6伸烷基-COOH；C 1-C 6伸烷基-PO(OH) 2；C 1-C 6伸烷基-NR dR e；C 1-C 6伸烷基-N +R dR eR f；C 1-C 6伸烷基-苯基，其中該苯基可經C 1-C 6烷氧基取代； 以下基團： 或R a及R b與攜帶其之氮原子一起形成環B 1； 或R a、R b及R c與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， R c、R d、R e、R f彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， 或R d及R e與攜帶其之氮原子一起形成環B 2， 或R d、R e及R f與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， Het 1表示選自以下之基團： Het 2表示選自以下之基團： ，且 A 1為-NH-、-N(C 1-C 3烷基)、O、S或Se， A 2為N、CH或C(R 5)， G係選自由以下組成之群： -C(O)OR G3、-C(O)NR G1R G2、-C(O)R G2、-NR G1C(O)R G2、-NR G1C(O)NR G1R G2、-OC(O)NR G1R G2、-NR G1C(O)OR G3、-C(=NOR G1)NR G1R G2、-NR G1C(=NCN)NR G1R G2、-NR G1S(O) 2NR G1R G2、-S(O) 2R G3、-S(O) 2NR G1R G2、-NR G1S(O) 2R G2、-NR G1C(=NR G2)NR G1R G2、-C(=S)NR G1R G2、-C(=NR G1)NR G1R G2、視情況經羥基取代之C 1-C 6烷基、鹵素、-NO 2及-CN，其中： - R G1及R G2在各次出現時各自獨立地選自由以下組成之群：氫；C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；C 3-C 6環烷基；苯基；及-(CH 2) 1-4-苯基； - R G3係選自由以下組成之群：C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；C 3-C 6環烷基；苯基；及-(CH 2) 1-4-苯基；或 R G1及R G2與其各自所連接之原子一起組合形成C 3-C 8雜環烷基；或在替代方案中，G係選自由以下組成之群： 其中R G4係選自氫、視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基及C 3-C 6環烷基， R 4表示氫、氟、氯或溴原子、甲基、羥基或甲氧基， R 5表示選自以下之基團：C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；鹵素；或-CN， R 6表示選自以下之基團： 氫； -C 2-C 6烯基； -X 2-O-R 7； ； -X 2-NSO 2-R 7； -C=C(R 9)-Y 1-O-R 7； C 3-C 6環烷基； C 3-C 6雜環烷基，其視情況經羥基取代； C 3-C 6伸環烷基-Y 2-R 7； C 3-C 6伸雜環烷基-Y 2-R 7基團， 伸雜芳基-R 7基團，其視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代， R 7表示選自以下之基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；(C 3-C 6)伸環烷基-R 8；或： 其中Cy表示C 3-C 8環烷基， R 8表示選自以下之基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；-NR' aR' b；-NR' a-CO-OR' c；-NR' a-CO-R' c；-N +R' aR' bR' c；-O-R' c；-NH-X' 2-N +R' aR' bR' c；-O-X' 2-NR' aR' b；-X' 2-NR' aR' b；-NR' c-X' 2-N 3；及： ， R 9表示選自以下之基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、三氟甲基、羥基、鹵素、C 1-C 6烷氧基， R 10表示選自以下之基團：氫、氟、氯、溴、-CF 3及甲基， R 11表示選自以下之基團：氫、鹵素、C 1-C 3伸烷基-R 8、-O-C 1-C 3伸烷基-R 8、-CO-NR hR i及-CH=CH-C 1-C 4伸烷基-NR hR i、-CH=CH-CHO、C 3-C 8伸環烷基-CH 2-R 8、C 3-C 8伸雜環烷基-CH 2-R 8， R 12及R 13彼此獨立地表示氫原子或甲基， R 14及R 15彼此獨立地表示氫或甲基，或R 14及R 15與攜帶其之碳原子一起形成環己基， R h及R i彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， X 1表示視情況經選自以下之一或兩個基團取代之直鏈或分支鏈C 1-C 4伸烷基：三氟甲基、羥基、鹵素、C 1-C 6烷氧基， X 2表示視情況經選自以下之一或兩個基團取代之直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基：三氟甲基、羥基、鹵素、C 1-C 6烷氧基， X' 2表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基， R' a及R' b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；雜環烷基；-SO 2-苯基，其中該苯基可經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經一個或兩個羥基或C 1-C 6烷氧基取代；C 1-C 6伸烷基-SO 2OH；C 1-C 6伸烷基-SO 2O -；C 1-C 6伸烷基-COOH；C 1-C 6伸烷基-PO(OH) 2；C 1-C 6伸烷基-NR' dR' e；C 1-C 6伸烷基-N +R' dR' eR' f；C 1-C 6伸烷基-O-C 1-C 6伸烷基-OH；C 1-C 6伸烷基-苯基，其中該苯基可經羥基或C 1-C 6烷氧基取代； 以下基團： 或R' a及R' b與攜帶其之氮原子一起形成環B 3； 或R' a、R' b及R' c與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， R' c、R' d、R' e、R' f彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， 或R' d及R' e與攜帶其之氮原子一起形成環B 4； 或R' d、R' e及R' f與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， Y 1表示直鏈或分支鏈C 1-C 4伸烷基， Y 2表示鍵、-O-、-O-CH 2-、-O-CO-、-O-SO 2-、-CH 2-、-CH 2-O、-CH 2-CO-、-CH 2-SO 2-、-C 2H 5-、-CO-、-CO-O-、-CO-CH 2-、-CO-NH-CH 2-、-SO 2-、-SO 2-CH 2-、-NH-CO-、-NH-SO 2-， m=0、1或2， p=1、2、3或4， B 1、B 2、B 3及B 4彼此獨立地表示C 3-C 8雜環烷基，該基團可：(i)為單環或雙環基團，其中雙環基團包括稠合、橋接或螺環系統，(ii)除氮原子之外，亦可含有一個或兩個獨立地選自氧、硫及氮之雜原子，(iii)經一個或兩個選自以下之基團取代：氟、溴、氯、直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、羥基、-NH 2、側氧基或哌啶基， 其中若存在，則R 3及R 8基團中之一者共價連接至連接子，且其中原子之價不因與其鍵結之一或多個取代基而超過。
在一些實施例中，對於式(I)或式(II)，G係選自由以下組成之群： -C(O)OR G3、-C(O)NR G1R G2、-C(O)R G2、-NR G1C(O)R G2、-NR G1C(O)NR G1R G2、-OC(O)NR G1R G2、-NR G1C(O)OR G3、-C(=NOR G1)NR G1R G2、-NR G1C(=NCN)NR G1R G2、-NR G1S(O) 2NR G1R G2、-S(O) 2R G3、-S(O) 2NR G1R G2、-NR G1S(O) 2R G2、-NR G1C(=NR G2)NR G1R G2、-C(=S)NR G1R G2、-C(=NR G1)NR G1R G2、鹵素、-NO 2及-CN，其中： - R G1及R G2在各次出現時各自獨立地選自由以下組成之群：氫；C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；C 3-C 6環烷基；苯基；及-(CH 2) 1-4-苯基； - R G3係選自由以下組成之群：C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；C 3-C 6環烷基；苯基；及-(CH 2) 1-4-苯基；或 R G1及R G2與其各自所連接之原子一起組合形成C 3-C 8雜環烷基；或在替代方案中，G係選自由以下組成之群： 其中R G4係選自視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基及C 3-C 6環烷基。
在一些實施例中， p為1至8之整數。在一些實施例中， p為1至5之整數。在一些實施例中， p為2至4之整數。在一些實施例中， p為2。在一些實施例中， p為4。在一些實施例中， p係藉由液相層析-質譜法(LC-MS)來測定。
在一些實施例中，連接子(L)包含連接基團、至少一個間隔基團及至少一個可裂解基團。在一些情況下，可裂解基團包含焦磷酸酯基團及/或自我分解型基團。在特定實施例中，L包含連接基團；至少一個橋接間隔基團；及至少一個包含焦磷酸酯基團及/或自我分解型基團之可裂解基團。
在一些實施例中，抗體-藥物結合物包含連接子-藥物(或「連接子-有效負載」)部分-(L-D)，具有式(A)： ， 其中R 1為連接基團，L 1為橋接間隔基團，且E為可裂解基團。
在一些實施例中，可裂解基團包含焦磷酸酯基團。在一些實施例中，可裂解基團包含： 。
在一些實施例中，橋接間隔基團包含聚氧伸乙基(PEG)。在一些情況下，PEG基團可選自PEG1、PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG6、PEG7、PEG8、PEG9、PEG10、PEG11、PEG12、PEG13、PEG14及PEG15。在一些實施例中，橋接間隔基團可包含：-CO-CH 2-CH 2-PEG12-。在其他實施例中，橋接間隔基團包含丁醯基、戊醯基、己醯基、庚醯基或辛醯基。在一些實施例中，橋接間隔基團包含己醯基。
在一些實施例中，連接基團由至少一個選自順丁烯二醯亞胺基、硫醇基、環辛炔基及疊氮基之反應性基團形成。舉例而言，順丁烯二醯亞胺基可具有以下結構： 。
疊氮基可具有以下結構：-N=N +=N -。
環辛炔基可具有以下結構： ，且其中 為連接至抗體之鍵。
在一些情況下，環辛炔基具有以下結構： ，且其中 為連接至抗體之鍵。
在一些實施例中，連接基團具有包含 之式，且其中 為連接至抗體之鍵。
在一些實施例中，抗體藉由選自以下之連接基團接合至連接子(L)： ， 其中 為連至抗體之鍵，且其中 為連至橋接間隔基團之鍵。如本文所用，術語「接合」係指共價連接至或共價連接。
在一些實施例中，橋接間隔基團接合或共價連接至可裂解基團。
在一些實施例中，橋接間隔基團為-CO-CH 2-CH 2-PEG12-。
在一些實施例中，可裂解基團為-焦磷酸酯-CH 2-CH 2-NH 2-。
在一些實施例中，可裂解基團接合或共價連接至Bcl-xL抑制劑(D)。
在一些實施例中，連接子包含：連接基團、至少一個橋接間隔基團、肽基及至少一個可裂解基團。
在一些實施例中，抗體-藥物結合物包含連接子-藥物部分-(L-D)，具有式(B)： ， 其中R 1為連接基團，L 1為橋接間隔子，Lp為包含1至6個胺基酸殘基之肽基，E為可裂解基團，L 2為橋接間隔子，m為0或1；且D為Bcl-xL抑制劑。在一些情況下，m為1，且橋接間隔子包含： 。
在一些實施例中，至少一個橋接間隔子包含PEG基團。在一些情況下，PEG基團係選自PEG1、PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG6、PEG7、PEG8、PEG9、PEG10、PEG11、PEG12、PEG13、PEG14及PEG15。在一些情況下，至少一個橋接間隔子係選自*-C(O)-CH 2-CH 2-PEG1-**、*-C(O)-CH 2-PEG3-**、*-C(O)-CH 2-CH 2-PEG12**、*-NH-CH2-CH2-PEG1-**、聚羥烷基、*-C(O)-N(CH 3)-CH 2-CH 2-N(CH 3)-C(O)-**、*-C(O)-CH 2-CH 2-PEG12-NH-C(O)CH 2-CH 2-**，其中**指示將至少一個橋接間隔子直接或間接連接至連接基團之點，且*指示將至少一個橋接間隔子直接或間接連接至肽基之點。
在一些實施例中，L 1係選自*-C(O)-CH 2-CH 2-PEG1-**、*-C(O)-CH 2-PEG3-**、*-C(O)-CH 2-CH 2-PEG12**、*-NH-CH 2-CH 2-PEG1-**及聚羥烷基，其中**指示將L 1直接或間接連接至R 1之點，且*指示將L 1直接或間接連接至Lp之點。
在一些實施例中，m為1，且L 2為-C(O)-N(CH 3)-CH 2-CH 2-N(CH 3)-C(O)-。
在一些實施例中，肽基包含1至12個胺基酸殘基。在一些實施例中，肽基(Lp)包含1至10個胺基酸殘基。在一些實施例中，肽基(Lp)包含1至8個胺基酸殘基。在一些實施例中，肽基(Lp)包含1至6個胺基酸殘基。在一些實施例中，肽基包含1至4個胺基酸殘基。在一些實施例中，肽基包含1至3個胺基酸殘基。在一些實施例中，肽基包含1至2個胺基酸殘基。在一些情況下，胺基酸殘基選自甘胺酸(Gly)、L-纈胺酸(Val)、L-瓜胺酸(Cit)、L-磺基丙胺酸(磺基-Ala)、L-離胺酸(Lys)、L-異白胺酸(Ile)、L-苯丙胺酸(Phe)、L-甲硫胺酸(Met)、L-天冬醯胺酸(Asn)、L-脯胺酸(Pro)、L-丙胺酸(Ala)、L-白胺酸(Leu)、L-色胺酸(Trp)及L-酪胺酸(Tyr)。舉例而言，肽基可包含Val-Cit、Val-Ala、Val-Lys、磺基-Ala-Val-Ala、Gly-Gly-Gly及/或Gly-Gly-Phe-Gly (SEQ ID NO: 36)。在一些實施例中，肽基(Lp)包含1個連接至 基團之胺基酸殘基。在一些實施例中，肽基(Lp)包含以下基團： 。
在一些情況下，肽基包含選自以下之基團： 。
在一些實施例中，自我分解型基團包含對胺基苯甲基-胺基甲酸酯、對胺基苯甲基-銨、對胺基-(磺酸基)苯甲基-銨、對胺基-(磺酸基)苯甲基-胺基甲酸酯、對胺基-(烷氧基-PEG-烷基)苯甲基-胺基甲酸酯、對胺基-(聚羥基羧基四氫哌喃基)烷基-苯甲基-胺基甲酸酯或對胺基-(聚羥基羧基四氫哌喃基)烷基-苯甲基-銨。
在一些實施例中，m為1，且橋接間隔子包含 。
在一些實施例中，連接子-藥物部分-(L-D)由選自以下之化合物形成： 。
在一些實施例中，抗體-藥物結合物包含連接子-藥物基團-(L-D)，其包含選自以下之式： ， 及 且其中 為連接至抗體之鍵。
在一些實施例中，抗體-藥物結合物包含連接子藥物基團-(L-D)，其具有式(C)： ， 其中：R 1為連接基團，L 1為橋接間隔子；L p為包含1至6個胺基酸之肽基；D為Bcl-xL抑制劑；G 1-L 2-A為自我分解型間隔子；L 2為鍵、亞甲基、伸新戊基或C 2-C 3伸烯基；A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；L 3為間隔子部分；且R 2為親水性部分。
在一些實施例中，抗體-藥物結合物包含連接子藥物基團-(L-D)，其具有式(D)： ， 其中：R 1為連接基團；L 1為橋接間隔子；L p為包含1至6個胺基酸之肽基；A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；L 3為間隔子部分；且R 2為親水性部分。
在一些實施例中，L 1包含： 或*-CH(OH)CH(OH)CH(OH)CH(OH)-**，其中各n為1至12之整數，其中L 1之*指示直接或間接連接至Lp之點，且L 1之**指示直接或間接連接至R 1之點。
在一些實施例中，L 1為 ，且n為1至12之整數，其中L 1之*指示直接或間接連接至Lp之點，且L 1之**指示直接或間接連接至R 1之點。
在一些實施例中，L 1為 ，且n為1，其中L 1之*指示直接或間接連接至Lp之點，且L 1之**指示直接或間接連接至R 1之點。
在一些實施例中，L 1為 ，且n為12，其中L 1之*指示直接或間接連接至Lp之點，且L 1之**指示直接或間接連接至R 1之點。
在一些實施例中，L 1為 ，且n為1至12之整數，其中L 1之*指示直接或間接連接至Lp之點，且L 1之**指示直接或間接連接至R 1之點。
在一些實施例中，L 1包含 ，其中L 1之*指示直接或間接連接至Lp之點，且L 1之**指示直接或間接連接至R 1之點。
在一些實施例中，L 1包含以下之橋接間隔子： *-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)O(CH 2) mSSC(R 3) 2(CH 2) mC(=O)NR 3(CH 2) mNR 3C(=O)(CH 2) m-**；*-C(=O)O(CH 2) mC(=O)NH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mNH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mNH(CH 2) nC(=O)-**；*-C(=O)(CH 2) mX 1(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nX 1(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) mNHC(=O)(CH 2) n-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nNHC(=O)(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) mNHC(=O)(CH 2) nX 1(CH 2) n-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nNHC(=O)(CH 2) nX 1(CH 2) n-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nC(=O)NH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mC(R 3) 2-*或*-C(=O)(CH 2) mC(=O)NH(CH 2) m-**，其中L 1之*指示直接或間接連接至Lp之點，且L 1之**指示直接或間接連接至R 1之點，其中X 1為 ；且 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10；且 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30。
在一些實施例中，R 2為親水性部分，其包含聚乙二醇、聚伸烷二醇、多元醇、聚肌胺酸、糖、寡醣、多肽、經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基，或經1至2個獨立地選自以下之取代基取代之C 2-C 6烷基：-OC(=O)NHS(O) 2NHCH 2CH 2OCH 3、-NHC (=O)C 1-4伸烷基-P(O)(OCH 2CH 3) 2及-COOH基團。在一些實施例中，R 2為 ，其中n為1與6之間的整數， 。
在一些實施例中，親水性部分包含下式之聚乙二醇： ，其中R為H、-CH 3CH 2CH 2NHC(=O)OR a、-CH 2CH 2NHC(=O)R a或-CH 2CH 2C(=O)OR a，R'為OH、-OCH 3、CH 2CH 2NHC(=O)OR a、-CH 2CH 2NHC(=O)R a或-OCH 2CH 2C(=O)OR a，且m及n各自為2與25之間(例如3與25之間)的整數。
在一些實施例中，親水性部分包含 。
在一些實施例中，親水性部分包含例如具有以下部分之聚肌胺酸： ，其中n為3與25之間的整數；且R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。
在一些實施例中，L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中： W為-CH 2-、-CH 2O-、-CH 2N(R b)C(=O)O-、-NHC(=O)C(R b) 2NHC(=O)O-、-NHC(=O)C(R b) 2NH-、-NHC(=O)C(R b) 2NHC(=O)-、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-、-C(=O)N(X-R 2)-、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-、-C(=O)NR b-、-C(=O)NH-、-CH 2NR bC(=O)-、-CH 2NR bC(=O)NH-、-CH 2NR bC(=O)NR b-、-NHC(=O)-、-NHC(=O)O-、-NHC(=O)NH-、-OC(=O)NH-、-S(O) 2NH-、-NHS(O) 2-、-C(=O)-、-C(=O)O-或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基、C 3-C 8環烷基；且 X為鍵、三唑基或-CH 2-三唑基，其中X連接至R 2。
在一些實施例中，L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中： W為-CH 2-、-CH 2O-、-CH 2N(R b)C(=O)O-、-NHC(=O)C(R b) 2NHC(=O)O-、-NHC(=O)C(R b) 2NH-、-NHC(=O)C(R b) 2NHC(=O)-、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-、-C(=O)N(X-R 2)-、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-、-C(=O)NR b-、-C(=O)NH-、-CH 2NR bC(=O)-、-CH 2NR bC(=O)NH-、-CH 2NR bC(=O)NR b-、-NHC(=O)-、-NHC(=O)O-、-NHC(=O)NH-、-OC(=O)NH-、-S(O) 2NH-、-NHS(O) 2-、-C(=O)-、-C(=O)O-或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基；且 X為-CH 2-三唑基-C 1 - 4伸烷基-OC(O)NHS(O) 2NH-、-C 4 - 6伸環烷基-OC(O)NHS(O) 2NH-、-(CH 2CH 2O) n-C(O)NHS(O) 2NH-、-(CH 2CH 2O) n-C(O)NHS(O) 2NH-(CH 2CH 2O) n-、-CH 2-三唑基-C 1 - 4伸烷基-OC(O)NHS(O) 2NH-(CH 2CH 2O) n-或-C 4 - 6伸環烷基-OC(O)NHS(O) 2NH-(CH 2CH 2O) n-，其中各n獨立地為1、2或3且其中X連接至R 2。
在一些實施例中，連接基團由包含至少一個反應性基團之反應形成。在一些情況下，連接基團藉由使以下反應而形成：第一反應性基團，其連接至連接子；及第二反應性基團，其連接至抗體或為抗體之胺基酸殘基。
在一些實施例中，反應性基團中之至少一個包含： 硫醇， 順丁烯二醯亞胺， 鹵乙醯胺， 疊氮化物， 炔烴， 環辛烯， 三芳基膦， 氧雜降冰片二烯， 環辛炔， 二芳基四𠯤， 單芳基四𠯤， 降冰片烯， 醛， 羥胺， 肼， NH 2-NH-C(=O)-， 酮， 乙烯基碸， 氮丙啶， 胺基酸殘基， 、-ONH 2、-NH 2、 、-N 3、 、-SH、-SR 3、-SSR 4、-S(=O) 2(CH=CH 2)、-(CH 2) 2S(=O) 2(CH=CH 2)、-NHS(=O) 2(CH=CH 2)、-NHC(=O)CH 2Br、-NHC(=O)CH 2I、 、-C(O)NHNH 2、 ； 其中： 各R 3獨立地選自H及C 1 - 6烷基； 各R 4為2-吡啶基或4-吡啶基； 各R 5獨立地選自H、C 1-C 6烷基、F、Cl及-OH； 各R 6獨立地選自H、C 1-C 6烷基、F、Cl、-NH 2、-OCH 3、-OCH 2CH 3、-N(CH 3) 2、-CN、-NO 2及-OH； 各R 7獨立地選自H、C 1 - 6烷基、氟、經-C(=O)OH取代之苯甲氧基、經-C(=O)OH取代之苯甲基、經-C(=O)OH取代之C 1 - 4烷氧基及經-C(=O)OH取代之C 1 - 4烷基。
在一些實施例中，第一反應性基團及第二反應性基團包含： 硫醇及順丁烯二醯亞胺， 硫醇及鹵乙醯胺， 硫醇及乙烯基碸， 硫醇及氮丙啶， 疊氮化物及炔烴， 疊氮化物及環辛炔， 疊氮化物及環辛烯， 疊氮化物及三芳基膦， 疊氮化物及氧雜降冰片二烯， 二芳基四𠯤及環辛烯， 單芳基四𠯤及降冰片烯， 醛及羥胺， 醛及肼， 醛及NH 2-NH-C(=O)-， 酮及羥胺， 酮及肼， 酮及NH2-NH-C(=O)-， 羥胺及 ， 胺及 ，或 CoA或CoA類似物及絲胺酸殘基。
在一些實施例中，連接基團包含選自以下之基團： 醯胺； 二硫鍵， 其中： R 32為H、C 1 - 4烷基、苯基、嘧啶或吡啶； R 35為H、C 1 - 6烷基、苯基或經1至3個-OH基團取代之C 1 - 4烷基； 各R 7獨立地選自H、C 1 - 6烷基、氟、經-C(=O)OH取代之苯甲氧基、經-C(=O)OH取代之苯甲基、經-C(=O)OH取代之C 1 - 4烷氧基及經-C(=O)OH取代之C 1 - 4烷基； R 37獨立地選自H、苯基及吡啶； q為0、1、2或3； R 8為H或甲基；且 R 9為H、-CH 3或苯基。
在一些實施例中，肽基(Lp)包含1至6個胺基酸殘基。在一些實施例中，肽基(Lp)包含1至4個胺基酸殘基。在一些實施例中，肽基包含1至3個胺基酸殘基。在一些實施例中，肽基包含1至2個胺基酸殘基。在一些實施例中，胺基酸殘基選自甘胺酸(Gly)、L-纈胺酸(Val)、L-瓜胺酸(Cit)、L-磺基丙胺酸(磺基-Ala)、L-離胺酸(Lys)、L-異白胺酸(Ile)、L-苯丙胺酸(Phe)、L-甲硫胺酸(Met)、L-天冬醯胺酸(Asn)、L-脯胺酸(Pro)、L-丙胺酸(Ala)、L-白胺酸(Leu)、L-色胺酸(Trp)及L-酪胺酸(Tyr)。在一些實施例中，肽基包含Val-Cit、Phe-Lys、Val-Ala、Val-Lys、Leu-Cit、sulfo-Ala-Val-Cit、sulfo-Ala-Val-Ala、Gly-Gly-Gly及/或Gly-Gly-Phe-Gly (SEQ ID NO:36)。
在一些實施例中，Lp選自： 。
在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式之化合物或由下式之化合物形成： ，其中： R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑。在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式： ，其中： 為與抗體之鍵；且A、D及R如上文所定義。在一些實施例中，A為鍵或-OC(=O)-*；且R為-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。
在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式之化合物或由下式之化合物形成： ，其中： R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑。在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式： ，其中： 為與抗體之鍵；且A、D及R如上文所定義。在一些實施例中，A為鍵或-OC(=O)-*；且R為-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。
在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式之化合物或由下式之化合物形成： ，其中： R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑。在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式： ，其中： 為與抗體之鍵；且A、D及R如上文所定義。在一些實施例中，A為鍵或-OC(=O)-*；且R為-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。
在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式之化合物或由下式之化合物形成： ，其中： 各R獨立地選自H、-CH 3及-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑。在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式： ，其中： 為與抗體之鍵；且A、D及R如上文所定義。在一些實施例中，A為鍵或-OC(=O)-*；且R為-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。
在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式之化合物或由下式之化合物形成： ，其中： 各R獨立地選自H、-CH 3及-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑。在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式： ，其中： 為與抗體之鍵；且A、D及R如上文所定義。在一些實施例中，A為鍵或-OC(=O)-*；且R為-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。
在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式之化合物或由下式之化合物形成： ，其中： Xa為-CH 2-、-OCH 2-、-NHCH 2-或-NRCH 2-，且各R獨立地為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑。在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式： ，其中： 為與抗體之鍵；且Xa、A、D及R如上文所定義。在一些實施例中，Xa為-CH 2-或-NHCH 2-；A為鍵或-OC(=O)-*；且R為-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。
在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式之化合物或由下式之化合物形成： ，其中： R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑。在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式： ，其中： 為與抗體之鍵；且A、D及R如上文所定義。在一些實施例中，A為鍵或-OC(=O)-*；且R為-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。
在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式之化合物或由下式之化合物形成： ，其中： Xb為-CH 2-、-OCH 2-、-NHCH 2-或-NRCH 2-，且各R獨立地為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑。在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式： ，其中： 為與抗體之鍵；且Xb、A、D及R如上文所定義。在一些實施例中，A為鍵或-OC(=O)-*；且R為-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。
在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式之化合物或由下式之化合物形成： ，其中： A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑。在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式： ，其中： 為與抗體之鍵；且A及D如上文所定義。在一些實施例中，A為鍵或-OC(=O)-*。
在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式之化合物或由下式之化合物形成： ，其中： A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑。在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式： ，其中： 為與抗體之鍵；且A及D如上文所定義。在一些實施例中，A為鍵或-OC(=O)-*。
在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式之化合物或由下式之化合物形成： ，其中： A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑。在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式： ，其中： 為與抗體之鍵；且A及D如上文所定義。在一些實施例中，A為鍵或-OC(=O)-*。
在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式之化合物或由下式之化合物形成： ，其中： A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑。在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式： ，其中： 為與抗體之鍵；且A及D如上文所定義。在一些實施例中，A為鍵或-OC(=O)-*。
在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式之化合物或由下式之化合物形成： ，其中： A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑。在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式： ，其中： 為與抗體之鍵；且A及D如上文所定義。在一些實施例中，A為鍵或-OC(=O)-*。
在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式之化合物或由下式之化合物形成： ，其中： A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑。在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式： ，其中： 為與抗體之鍵；且A及D如上文所定義。在一些實施例中，A為鍵或-OC(=O)-*。
在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式之化合物或由下式之化合物形成： ，其中： A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑。在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式： ，其中： 為與抗體之鍵；且A及D如上文所定義。在一些實施例中，A為鍵或-OC(=O)-*。
在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式之化合物或由下式之化合物形成： ，其中： 各R獨立地為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑。在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式： ，其中： 為與抗體之鍵；且A、D及R如上文所定義。在一些實施例中，A為鍵或-OC(=O)-*；且R為-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。
在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式之化合物或由下式之化合物形成： ，其中： 各R獨立地為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑。在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式： ，其中： 為與抗體之鍵；且A、D及R如上文所定義。在一些實施例中，A為鍵或-OC(=O)-*；且R為-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。
在一些實施例中，連接子-藥物基團-(L-D)包含下式之化合物或由下式之化合物形成： ，其中： A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑。
在一些實施例中，A為一鍵。
在一些實施例中，A為-OC(=O)-*。
在一些實施例中，R為-CH 3。
在一些實施例中，R為-CH 2CH 2COOH。
在一些實施例中，抗體-藥物結合物包含連接子-藥物基團-(L-D)，其由選自以下之化合物形成： 。
在一些實施例中，抗體-藥物結合物包含連接子-藥物基團-(L-D)，其包含選自以下之式： ， 且其中 為連接至抗體之鍵。
在一些實施例中，Bcl-xL抑制劑(D)包含式(I)化合物： 或前述任一者之鏡像異構物、非鏡像異構物及/或醫藥學上可接受之鹽，其中變數係在上文針對式(I)所描述。在一些實施例中，R1為直鏈或分支鏈C1-6烷基且R2為H。
在一些實施例中，Bcl-xL抑制劑(D)包含式(II)化合物： ， 或前述任一者之鏡像異構物、非鏡像異構物及/或醫藥學上可接受之鹽，其中變數係在上文針對式(II)所描述。A1及A5均表示氮原子，R1為直鏈或分支鏈C1-6烷基；R2為H；n為1；且------表示單鍵。
在一些實施例中，Bcl-xL抑制劑(D)包含式(IA)或(IIA)化合物： 或前述任一者之鏡像異構物、非鏡像異構物及/或醫藥學上可接受之鹽，其中： Z 1表示鍵或-O-， R 3表示選自以下之基團：氫；C 3-C 6環烷基；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；-X 1-NR aR b；-X 1-N +R aR bR c；及-X 1-O-R c， R a及R b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；視情況經一或兩個羥基取代之直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；以及C 1-C 6伸烷基-SO 2O -， R c表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， Het 2表示選自以下之基團： A 1為-NH-、-N(C 1-C 3烷基)、O、S或Se， A 2為N、CH或C(R 5)， G係選自由以下組成之群： -C(O)OH、-C(O)OR G3、-C(O)NR G1R G2、-C(O)R G2、-NR G1C(O)R G2、-NR G1C(O)NR G1R G2、-OC(O)NR G1R G2、-NR G1C(O)OR G3、-C(=NOR G1)NR G1R G2、-NR G1C(=NCN)NR G1R G2、-NR G1S(O) 2NR G1R G2、-S(O) 2R G3、-S(O) 2NR G1R G2、-NR G1S(O) 2R G2、-NR G1C(=NR G2)NR G1R G2、-C(=S)NR G1R G2、-C(=NR G1)NR G1R G2、視情況經羥基取代之C 1-C 6烷基、鹵素、-NO 2及-CN，其中： - R G1及R G2在各次出現時各自獨立地選自由以下組成之群：氫及視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基； - R G3為視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基；或 R G1及R G2與其各自所連接之原子一起組合形成C 3-C 8雜環烷基； R 4表示氫、氟、氯或溴原子、甲基、羥基或甲氧基， R 5表示選自以下之基團：視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基；鹵素；或-CN， R 6表示選自以下之基團： -X 2-O-R 7；及 伸雜芳基-R 7基團，其視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代， R 7表示選自以下之基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；(C 3-C 6)伸環烷基-R 8；或： 其中Cy表示C 3-C 8環烷基， R 8表示選自以下之基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；-NR' aR' b；-NR' a-CO-OR' c；-NR' a-CO-R' c；-N +R' aR' bR' c；-O-R' c；-NH-X' 2-N +R' aR' bR' c；-O-X' 2-NR' aR' b；-X' 2-NR' aR' b；-NR' c-X' 2-N 3；及： ， R 10表示選自以下之基團：氫、氟、氯、溴、-CF 3及甲基， R 11表示選自以下之基團：氫、C 1-C 3伸烷基-R 8、-O-C 1-C 3伸烷基-R 8、-CO-NR hR i及-CH=CH-C 1-C 4伸烷基-NR hR i、-CH=CH-CHO、C 3-C 8伸環烷基-CH 2-R 8、C 3-C 8伸雜環烷基-CH 2-R 8， R 12及R 13彼此獨立地表示氫原子或甲基， R 14及R 15彼此獨立地表示氫或甲基，或R 14及R 15與攜帶其之碳原子一起形成環己基， R h及R i彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， X 1及X 2彼此獨立地表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基，其視情況經一或兩個選自以下之基團取代：三氟甲基、羥基、鹵素、C 1-C 6烷氧基， X' 2表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基， R' a及R' b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；雜環烷基；-SO 2-苯基，其中該苯基可經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經一個或兩個羥基或C 1-C 6烷氧基取代；C 1-C 6伸烷基-SO 2OH；C 1-C 6伸烷基-SO 2O -；C 1-C 6伸烷基-COOH；C 1-C 6伸烷基-PO(OH) 2；C 1-C 6伸烷基-NR' dR' e；C 1-C 6伸烷基-N +R' dR' eR' f；C 1-C 6伸烷基-O-C 1-C 6伸烷基-OH；C 1-C 6伸烷基-苯基，其中該苯基可經羥基或C 1-C 6烷氧基取代； 以下基團： 或R' a及R' b與攜帶其之氮原子一起形成環B 3； 或R' a、R' b及R' c與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， R' c、R' d、R' e、R' f彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， 或R' d及R' e與攜帶其之氮原子一起形成環B 4； 或R' d、R' e及R' f與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， m=0、1或2， p=1、2、3或4， B 3及B 4彼此獨立地表示C 3-C 8雜環烷基，該基團可：(i)為單環或雙環基團，其中雙環基團包括稠合、橋接或螺環系統，(ii)除氮原子之外，亦可含有一個或兩個獨立地選自氧、硫及氮之雜原子，(iii)經一個或兩個選自以下之基團取代：氟、溴、氯、直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、羥基、-NH 2、側氧基或哌啶基。
在一些實施例中，對於式(IA)或(IIA)，G係選自由以下組成之群：-C(O)OH、-C(O)OR G3、-C(O)NR G1R G2、-C(O)R G2、-NR G1C(O)R G2、-NR G1C(O)NR G1R G2、-OC(O)NR G1R G2、-NR G1C(O)OR G3、-C(=NOR G1)NR G1R G2、-NR G1C(=NCN)NR G1R G2、-NR G1S(O) 2NR G1R G2、-S(O) 2R G3、-S(O) 2NR G1R G2、-NR G1S(O) 2R G2、-NR G1C(=NR G2)NR G1R G2、-C(=S)NR G1R G2、-C(=NR G1)NR G1R G2、鹵素、-NO 2及-CN，其中： - R G1及R G2在各次出現時各自獨立地選自由以下組成之群：氫及視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基； - R G3為視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基；或 - R G1及R G2與其各自所連接之原子一起組合形成C 3-C 8雜環烷基。
在一些實施例中，對於式(I)、(II)、(IA)或(IIA)，R 7表示選自以下之基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；(C 3-C 6)伸環烷基-R 8；或： 其中Cy表示C 3-C 8環烷基。
在一些實施例中，對於式(I)、(II)、(IA)或(IIA)，R 7表示選自以下之基團： 。
在一些實施例中，Bcl-xL抑制劑(D)包含式(IB)、(IC)、(IIB)或(IIC)化合物： ， 或前述任一者之鏡像異構物、非鏡像異構物及/或醫藥學上可接受之鹽，其中： 對於式(IB)或(IC)，R 3表示選自以下之基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；-X 1-NR aR b；-X 1-N +R aR bR c；及-X 1-O-R c； 對於式(IIB)或(IIC)，Z 1表示鍵，且R 3表示氫；或Z 1表示-O-，且R 3表示-X 1-NR aR b， R a及R b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；視情況經一或兩個羥基取代之直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；以及C 1-C 6伸烷基-SO 2O -， R c表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基 R 6表示-X 2-O-R 7或視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代之伸雜芳基-R 7基團， R 7表示選自以下之基團： , R 8表示選自以下之基團：-NR' aR' b；-O-X' 2-NR' aR' b；及-X' 2-NR' aR' b， R 10表示氟， R 12及R 13彼此獨立地表示氫原子或甲基， R 14及R 15彼此獨立地表示氫或甲基， X 1及X 2彼此獨立地表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基，其視情況經一或兩個選自以下之基團取代：三氟甲基、羥基、鹵素、C 1-C 6烷氧基， X' 2表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基， R' a及R' b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；視情況經一或兩個羥基或C 1-C 6烷氧基取代之直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；C 1-C 6伸烷基-NR' dR' e； 或R' a及R' b與攜帶其之氮原子一起形成環B 3； R' d、R' e彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， B 3表示C 3-C 8雜環烷基，該基團可：(i)為單環或雙環基團，其中雙環基團包括稠合、橋接或螺環系統，(ii)除氮原子之外，亦可含有一或兩個獨立地選自氧及氮之雜原子，(iii)經一或兩個選自以下之基團取代：氟、溴、氯、直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、羥基及側氧基。
在一些實施例中，R 7表示以下基團： 。
在一些實施例中，R 7表示選自以下之基團： 。
在一些實施例中，對於式(I)、(IA)、(IB)、(IC)、(II)、(IIA)、(IIB)或(IIC)，R 8表示選自以下之基團： ， 其中 表示連至連接子之鍵。
在一些實施例中，B3表示選自以下之C3-C8雜環烷基：吡咯啶基、哌啶基、哌𠯤基、𠰌啉基、氮雜環庚烷基及2,8-二氮雜螺[4,5]癸基。
在一些實施例中，D表示藉由共價鍵連接至連接子L之Bcl-xL抑制劑，其中Bcl-xL抑制劑係選自表A1中之化合物： 表 A1 或前述任一者之鏡像異構物、非鏡像異構物及/或醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，D包含選自表A2中之式中之任一者的式，或前述任一者之鏡像異構物、非鏡像異構物及/或醫藥學上可接受之鹽。 表 A2 其中 表示連至連接子之鍵。
在一些實施例中，-(L-D)由選自表B之化合物或其鏡像異構物、非鏡像異構物及/或醫藥學上可接受之鹽形成。在一些實施例中，表B之化合物中之順丁烯二醯亞胺基 與抗體或其抗原結合片段(Ab)形成共價鍵以形成包含 部分之ADC式(1)化合物，其中*指示與Ab之連接點。對於表A1、表A2、表B及表1中之化合物，視其電子電荷而定，此等化合物可含有一種醫藥學上可接受之單價陰離子相對離子M 1 -。在一些實施例中，單價陰離子型相對離子M 1 -可選自溴離子、氯離子、碘離子、乙酸根、三氟乙酸根、苯甲酸根、甲磺酸根、甲苯磺酸根、三氟甲磺酸根、甲酸根或其類似離子。在一些實施例中，單價陰離子型相對離子M 1 -為三氟乙酸根或甲酸根。 表 B. 例示性連接子藥物基團
在一些實施例中，抗體-藥物結合物具有根據表1中所示之結構中之任一者的式。 表 1. 例示性 ADC 結構
ADC 名稱 ADC 結構
Ab L9C-P25
Ab L42C-P25
Ab 113C-MMAE
*Ab為本發明中所揭示之抗Met抗體(例如下表12中所列之抗體中之一者)。
上文所描繪之ADC亦可由下式表示：  Ab-(L-D) p(1)， 其中Ab表示共價連接至以上描繪之連接子-有效負載(L/P)之抗Met抗體或其抗原片段； p為1至16之整數。在一些實施例中， p為1至8之整數。在一些實施例中， p為1至5之整數。在一些實施例中， p為2至4之整數。在一些實施例中， p為2。在一些實施例中， p為4。在一些實施例中，p係藉由液相層析-質譜法(LC-MS)來測定。
如本文所用，「L/P」係指本文所揭示之連接子-有效負載、連接子-藥物或連接子-化合物，且術語「L#-P#」及「L#-C#」可互換使用以指代本文所揭示之特定連接子-藥物，同時除非另外指定，否則代碼「P#」及「C#」可互換使用以指代特定化合物。舉例而言，「L1-C1」及「L1-P1」兩者均指本文所揭示之相同連接子-有效負載結構，同時「C1」及「P1」指示本文所揭示之相同化合物，包括任何前述物質之鏡像異構物、非鏡像異構物、滯轉異構物、氘化衍生物及/或醫藥學上可接受之鹽。
在一些實施例中，本文亦提供包含抗體-藥物結合物(例如本文所描述之例示性抗體-藥物結合物中之任一者)之多個複本的組合物。在一些實施例中，組合物中之抗體-藥物結合物之平均 p為約2至約4。
在一些實施例中，本文亦提供包含抗體-藥物結合物(例如本文所描述之例示性抗體-藥物結合物中之任一者)或組合物(例如本文所描述之例示性組合物中之任一者)及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。
在一些實施例中，本文進一步提供用於所述ADC化合物及組合物，例如用於治療癌症之治療用途。在一些實施例中，本發明提供治療癌症(例如，表現由ADC之抗體或抗原結合片段靶向之MET抗原的癌症)之方法。在一些實施例中，本發明提供減少個體之癌細胞群體或減慢個體之癌細胞群體之擴增的方法。在一些實施例中，本發明提供判定患有或疑似患有癌症之個體是否會對用本文所揭示之ADC化合物或組合物之治療有反應的方法。
例示性實施例為治療患有或疑似患有癌症之個體之方法，其包含向個體投與治療有效量之抗體-藥物結合物、組合物或醫藥組合物(例如本文所揭示之例示性抗體-藥物結合物、組合物或醫藥組合物中之任一者)。在一些實施例中，癌症表現目標抗原MET。在一些實施例中，癌症為腫瘤或血液學癌症。在一些實施例中，癌症為黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌、胸腺瘤、多發性骨髓瘤、漿細胞骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性骨髓白血病、骨髓癌、慢性淋巴球性白血病、包括急性淋巴母細胞白血病之淋巴母細胞白血病、濾泡性淋巴瘤、T細胞或B細胞起源之淋巴惡性腫瘤、骨髓性白血病或骨髓瘤。在一些實施例中，癌症為肺癌、胰臟癌、胃部癌、腎癌或肝癌。
另一例示性實施例為減少或抑制個體之腫瘤生長之方法，其包含向個體投與治療有效量之抗體-藥物結合物、組合物或醫藥組合物(例如本文所揭示之例示性抗體-藥物結合物、組合物或醫藥組合物中之任一者)。在一些實施例中，腫瘤表現目標抗原MET。在一些實施例中，腫瘤為黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌或胸腺瘤。在一些實施例中，腫瘤為肺癌、胰臟癌、胃部癌、腎癌或肝癌。在一些實施例中，投與抗體-藥物結合物、組合物或醫藥組合物將腫瘤生長減少或抑制至少約10%、至少約20%、至少約30%至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%。
另一例示性實施例為減少個體之癌細胞群體或減慢個體之癌細胞群體之擴增的方法，其包含向個體投與治療有效量之抗體-藥物結合物、組合物或醫藥組合物(例如本文所揭示之例示性抗體-藥物結合物、組合物或醫藥組合物中之任一者)。在一些實施例中，癌細胞群體表現目標抗原MET。
在一些實施例中，癌細胞群體來自腫瘤或血液學癌症。在一些實施例中，癌細胞群體來自黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌、胸腺瘤、多發性骨髓瘤、漿細胞骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性骨髓白血病、骨髓癌、慢性淋巴球性白血病、包括急性淋巴母細胞白血病之淋巴母細胞白血病、濾泡性淋巴瘤、T細胞或B細胞起源之淋巴惡性腫瘤、骨髓性白血病或骨髓瘤。在一些實施例中，癌細胞群體來自肺癌、胰臟癌、胃部癌、腎癌或肝癌。在一些實施例中，投與抗體-藥物結合物、組合物或醫藥組合物將癌細胞群體減少至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%。在一些實施例中，投與抗體-藥物結合物、組合物或醫藥組合物將癌細胞群體之擴增減慢至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%。
另一例示性實施例為用於治療患有或疑似患有癌症之個體的抗體-藥物結合物、組合物或醫藥組合物(例如本文所揭示之例示性抗體-藥物結合物、組合物或醫藥組合物中之任一者)。在一些實施例中，癌症表現目標抗原MET。在一些實施例中，癌症為腫瘤或血液學癌症。在一些實施例中，癌症為黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌、胸腺瘤、多發性骨髓瘤、漿細胞骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性骨髓白血病、骨髓癌、慢性淋巴球性白血病、包括急性淋巴母細胞白血病之淋巴母細胞白血病、濾泡性淋巴瘤、T細胞或B細胞起源之淋巴惡性腫瘤、骨髓性白血病、骨髓瘤。在一些實施例中，癌症為肺癌、胰臟癌、胃部癌、腎癌或肝癌。
另一例示性實施例為抗體-藥物結合物、組合物或醫藥組合物(例如本文所揭示之例示性抗體-藥物結合物、組合物或醫藥組合物中之任一者)在治療患有或疑似患有癌症之個體中之用途。在一些實施例中，癌症表現目標抗原MET。在一些實施例中，癌症為腫瘤或血液學癌症。在一些實施例中，癌症為黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌、胸腺瘤、多發性骨髓瘤、漿細胞骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性骨髓白血病、骨髓癌、慢性淋巴球性白血病、包括急性淋巴母細胞白血病之淋巴母細胞白血病、濾泡性淋巴瘤、T細胞或B細胞起源之淋巴惡性腫瘤、骨髓性白血病或骨髓瘤。在一些實施例中，癌症為肺癌、胰臟癌、胃部癌、腎癌或肝癌。
另一例示性實施例為抗體-藥物結合物、組合物或醫藥組合物(例如本文所揭示之例示性抗體-藥物結合物、組合物或醫藥組合物中之任一者)在製造用以治療患有或疑似患有癌症之個體之藥物之方法中的用途。在一些實施例中，癌症表現目標抗原MET。在一些實施例中，癌症為腫瘤或血液學癌症。在一些實施例中，癌症為黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌、胸腺瘤、多發性骨髓瘤、漿細胞骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性骨髓白血病、骨髓癌、慢性淋巴球性白血病、包括急性淋巴母細胞白血病之淋巴母細胞白血病、濾泡性淋巴瘤、T細胞或B細胞起源之淋巴惡性腫瘤、骨髓性白血病或骨髓瘤。在一些實施例中，癌症為肺癌、胰臟癌、胃部癌、腎癌或肝癌。
另一例示性實施例為藉由提供來自個體之生物樣品；使樣品與抗體-藥物結合物接觸；及偵測樣品中抗體-藥物結合物與癌細胞之結合判定患有或疑似患有癌症之個體是否會對用抗體-藥物結合物、組合物或醫藥組合物(例如本文所揭示之例示性抗體-藥物結合物、組合物或醫藥組合物中之任一者)之治療有反應的方法。在一些實施例中，樣品中之癌細胞表現目標抗原。在一些實施例中，癌症表現目標抗原MET。在一些實施例中，癌症為腫瘤或血液學癌症。在一些實施例中，癌症為黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌、胸腺瘤、多發性骨髓瘤、漿細胞骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性骨髓白血病、骨髓癌、慢性淋巴球性白血病、包括急性淋巴母細胞白血病之淋巴母細胞白血病、濾泡性淋巴瘤、T細胞或B細胞起源之淋巴惡性腫瘤、骨髓性白血病或骨髓瘤。在一些實施例中，癌症為肺癌、胰臟癌、胃部癌、腎癌或肝癌。在一些實施例中，樣品組織切片樣品、血液樣品或骨髓樣品。
亦揭示製造所述ADC化合物及組合物之方法。例示性實施例為藉由在允許結合之條件下使抗體或抗原結合片段與接合或共價連接至Bcl-xL抑制劑之可裂解連接子反應來製備抗體-藥物結合物的方法。
相關申請
本申請案根據35 U.S.C. §119(e)主張2022年5月20日申請之美國臨時申請案第63/344,460號之申請日權益，該案之全部內容以引用的方式併入本文中。
結合附圖，參照以下詳細描述可更容易地理解所揭示之組合物及方法，該等附圖形成本發明之一部分。
在本文通篇，描述涉及組合物及使用該等組合物之方法。當本發明描述或主張與組合物相關聯之特徵或實施例時，此類特徵或實施例同樣適用於使用該組合物之方法。同樣，當本發明描述或主張與使用組合物之方法相關聯之特徵或實施例時，此類特徵或實施例同樣適用於該組合物。
當表示值之範圍時，其包括使用該範圍內之任何特定值之實施例。另外，對按範圍敍述之值的提及包括彼範圍內之各個值。所有範圍均包括其端點在內且可組合。當藉由在前面使用「約」，以近似值表示值時，應理解特定值形成另一實施例。除非上下文另外明確指示，否則提及特定數值至少包括該特定值。除非另外指示其使用之特定情形，否則使用「或」將意謂「及/或」。出於任何目的，本文中所引用之所有參考文獻均以引用之方式併入。在參考文獻與本說明書矛盾之情況下，將以本說明書為準。
除非本說明書之上下文另外指示，例如在無指示特異性連接點之符號存在下，否則當繪製結構或結構之片段時，其可獨立地使用或連接至ADC之其他組分，且其可以任何定向執行，例如其中抗體在任何適合的連接點處連接至諸如連接子-藥物之化學部分。然而，在指示之情況下，ADC之組分在給定式中所展示之定向上連接。舉例而言，若式(1)描述為Ab-(L-D) p且基團「-(L-D)」描述為 ，則式(1)之詳述結構為 。其不為 。
應瞭解，本文中為清楚起見而在單獨實施例之情形下描述的所揭示之組合物及方法之某些特徵亦可以單個實施例之組合形式提供。相反地，所揭示之組合物及方法為了簡便起見在單個實施例之情形下描述的各種特點亦可單獨或以任何子組合形式提供。
如在本申請案全篇中所用，抗體藥物結合物可以「目標抗原/抗體-連接子-有效負載」之一般形式使用命名慣例鑑別。僅舉例而言，若抗體藥物結合物稱為「目標X-L0-P0」，則此類結合物將包含結合目標X之抗體、指定為L0之連接子及指定為P0之有效負載。或者，若抗體藥物結合物稱為「抗目標X-L0-P0」，則此類結合物將包含結合目標X之抗體、指定為L0之連接子及指定為P0之有效負載。在另一替代方案中，若抗體藥物結合物稱為「AbX-L0-P0」，則此類結合物將包含指定為AbX之抗體、指定為L0之連接子及指定為P0之有效負載。包含非特異性同型對照抗體之對照抗體藥物結合物可參考作為「同型對照IgG1-L0-P0」或「IgG1-L0-P0」。
本文中給定之任何式亦意欲表示化合物之未經標記形式以及經同位素標記之形式。經同位素標記之化合物具有由本文中給定之式所描繪的結構，其例外之處在於一或多個原子經具有選定原子質量或質量數之原子置換。可併入本發明化合物中之同位素包括例如氫、碳、氮、氧、氟及氯之同位素，諸如 3H、 11C、 13C、 14C、 15N、 18F及 36Cl。因此應理解，本發明包括合併有任何前述同位素中之一或多者之化合物，該等同位素包括例如放射性同位素(諸如 3H及 14C)，或其中存在非放射性同位素(諸如 2H及 13C)之化合物。此類經同位素標記之化合物適用於代謝研究(使用 14C)；反應動力學研究(使用例如 2H或 3H)；偵測或成像技術，諸如正電子發射斷層掃描(PET)或單光子發射電腦斷層攝影術(SPECT)，包括藥物或受質組織分佈分析；或適用於患者之放射性治療。特定言之， 18F或經標記之化合物可對於PET或SPECT研究而言為尤其需要的。經同位素標記之化合物可通常藉由本領域中熟習此項技術者已知之習知技術製備，例如使用適當的經同位素標記之試劑代替先前所用未經標記之反應劑。 定義
在本說明書及申請專利範圍通篇使用與本說明書各態樣相關之多種術語。除非另外指示，否則此類術語將提供其在此項技術中之普通含義。其他具體定義的術語應以符合本文提供之定義的方式進行解釋。
除非上下文另外明確規定，否則如本文所使用，單數形式「一(a/an)」及「該(the)」包括複數形式。除非另外指出，否則將術語「包含」、「具有」、如「具有化學式(being of a chemical formula)」中之「具有(being of)」、「包括」及「含有」理解為開放術語(亦即意謂「包括(但不限於)」)。另外，只要「包含」或另一開放式術語用於一實施例中，應瞭解同一實施例可使用過渡術語「基本上由……組成」或閉合術語「由……組成」更嚴格主張。
術語「約」或「大約」當用於數值及範圍之情形下時係指近似或接近所列舉的值或範圍以使得可按預期執行實施例的值或範圍，正如熟習此項技術者自本文中所含教示內容顯而易知的那樣。在一些實施例中，約意謂數字量加或減20%、15%、10%、5%、1%、0.5%或0.1%。在一個實施例中，術語「約」係指多於或少於指定值之10%的值範圍。在另一實施例中，術語「約」係指多於或少於指定數值之5%的數值範圍。在另一實施例中，術語「約」係指多於或少於指定數值之1%的數值範圍。
術語「抗體-藥物結合物」、「抗體結合物」、「結合物」、「免疫結合物」及「ADC」可互換使用，且係指連接至一或多種抗體或抗原結合片段之一或多種治療化合物(例如Bcl-xL抑制劑)。在一些實施例中，ADC係由以下通式定義：Ab-(L-D) p (式1)，其中Ab=抗體或抗原結合片段(例如抗Met抗體或其抗原結合片段)，L=連接子部分，D=藥物部分(例如Bcl-xL抑制劑藥物部分)，且 p=每個抗體或抗原結合片段之藥物部分之數目。在包含Bcl-xL抑制劑藥物部分之ADC中，「 p」係指連接至抗體或抗原結合片段之Bcl-xL抑制劑化合物之數目。
術語「抗體」係以最廣泛之含義使用，意思指經由免疫球蛋白分子可變區內之至少一個抗原識別位點識別且特異性結合至目標，諸如蛋白質、多肽、碳水化合物、聚核苷酸、脂質或前述之組合的免疫球蛋白分子。抗體可為多株或單株、多鏈或單鏈或完整免疫球蛋白，且可衍生自天然來源或衍生自重組來源。「完整」抗體為通常包含藉由二硫鍵互連之至少兩個重(H)鏈及兩個輕(L)鏈的醣蛋白。各重鏈由重鏈可變區(在本文中縮寫為VH)及重鏈恆定區構成。重鏈恆定區包含三個域，CH1、CH2及CH3。各輕鏈由輕鏈可變區(本文中簡化為VL)及輕鏈恆定區構成。輕鏈恆定區由一個域CL構成。VH及VL區可進一步再分成高變區，稱為互補決定區(CDR)，穿插稱為構架區(FR)之更保守區。各VH及VL由自胺基端至羧基端按以下順序排列之三個CDR及四個FR組成：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重鏈及輕鏈之可變區含有與抗原相互作用之結合域。抗體之恆定區可調節免疫球蛋白與宿主組織或因子，包括免疫系統之各種細胞(例如效應細胞)及經典補體系統之第一組分(C1q)的結合。抗體可為單株抗體、人類抗體、人類化抗體、駱駝化抗體或嵌合抗體。抗體可具有任何同型(例如IgG、IgE、IgM、IgD、IgA及IgY)、類別(例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2)或子類。抗體可為完整抗體或其抗原結合片段。
在一些實施例中，本文所揭示之抗體或抗體片段包括經修飾或經工程改造之胺基酸殘基，例如一或多個半胱胺酸殘基，如用於與藥物部分之結合位點(Junutula JR等人: Nat Biotechnol 2008, 26:925-932)。在一個實施例中，本發明提供經修飾之抗體或抗體片段，其包含在本文中所描述之位置處用半胱胺酸進行之一或多個胺基酸之取代。用於半胱胺酸取代之位點位於抗體或抗體片段之恆定區中且因此適用於多種抗體或抗體片段，且位點經選擇以提供穩定及均質的結合物。經修飾之抗體或片段可具有一個、兩個或更多個半胱胺酸取代，且此等取代可與如本文所描述之其他修飾及結合方法組合使用。用於在抗體之特異性位置插入半胱胺酸之方法為此項技術中已知的，參見例如Lyons等人, (1990) Protein Eng., 3:703-708、WO 2011/005481、WO 2014/124316、WO 2015/138615。在某些實施例中，經修飾之抗體包含在選自以下之其恆定區內用半胱胺酸進行之一或多個胺基酸之取代：抗體之重鏈之位置117、119、121、124、139、152、153、155、157、164、169、171、174、189、191、195、197、205、207、246、258、269、274、286、288、290、292、293、320、322、326、333、334、335、337、344、355、360、375、382、390、392、398、400及422，且其中該等位置係根據EU系統編號。在一些實施例中，經修飾之抗體或抗體片段包含在其恆定區上用半胱胺酸取代一或多種胺基酸，該取代選自抗體或抗體片段之輕鏈的以下位置：107、108、109、114、129、142、143、145、152、154、156、159、161、165、168、169、170、182、183、197、199及203，其中該等位置係根據EU系統編號，且其中輕鏈為人類κ輕鏈。在某些實施例中，經修飾之抗體或其抗體片段包含在其恆定區內用半胱胺酸進行之兩個或更多個胺基酸之取代之組合，其中該等組合包含在抗體重鏈之位置375、抗體重鏈之位置152、抗體重鏈之位置360或抗體輕鏈之位置107處之取代，且其中該等位置係根據EU系統編號。在某些實施例中，經修飾之抗體或其抗體片段包含在其恆定區內用半胱胺酸進行之一個胺基酸之取代，其中該取代為抗體重鏈之位置375、抗體重鏈之位置152、抗體重鏈之位置360、抗體輕鏈之位置107、抗體輕鏈之位置165或抗體輕鏈之位置159，且其中該等位置係根據EU系統編號，且其中輕鏈為κ鏈。在特定實施例中，經修飾之抗體或其抗體片段包含在其恆定區內用半胱胺酸進行之兩個胺基酸之取代之組合，其中該等組合包含抗體重鏈之位置375及抗體重鏈之位置152處之取代，其中該等位置係根據EU系統編號。在特定實施例中，經修飾之抗體或其抗體片段包含在抗體重鏈之位置360處用半胱胺酸進行之一個胺基酸之取代，其中該等位置係根據EU系統編號。在其他特定實施例中，經修飾之抗體或其抗體片段包含在抗體輕鏈之位置107處用半胱胺酸進行之一個胺基酸之取代，且其中該等位置係根據EU系統編號，且其中輕鏈為κ鏈。
如本文所用，術語「抗體片段」或「抗原結合片段」或「功能性抗體片段」係指保持與抗原(例如MET)之抗原決定基特異性相互作用(例如藉由結合、空間位阻、穩定化/去穩定化、空間分佈)之能力的抗體之至少一部分。抗原結合片段亦可保持內化至抗原表現細胞中之能力。在一些實施例中，抗原結合片段亦保持免疫效應子活性。術語抗體、抗體片段、抗原結合片段及其類似術語意欲涵蓋在較大巨分子(諸如ADC)之情形下使用來自抗體之結合域。經顯示，全長抗體之片段可執行全長抗體之抗原結合功能。抗體片段之實例包括但不限於Fab、Fab'、F(ab')2、Fv片段、scFv抗體片段、二硫鍵聯之Fvs (sdFv)、由VH及CH1域組成之Fd片段、線性抗體、諸如sdAb之單域抗體(VL或VH)、駱駝科VHH域、由諸如二價片段之抗體片段形成的多特異性抗體(包含在鉸鏈區經二硫橋鍵聯之兩個Fab片段)，及經分離CDR或抗體之其他抗原決定基結合片段。抗原結合片段亦可併入單域抗體、最大抗體、微型抗體、奈米抗體、胞內抗體、雙功能抗體、三功能抗體、四功能抗體、雙特異性或多特異性抗體構築體、ADC、v-NAR及雙-scFv中(參見例如Holliger及Hudson (2005) Nat Biotechnol. 23(9):1126-36)。抗原結合片段亦可移植至基於多肽之骨架，諸如III型纖維結合蛋白(Fn3) (參見美國專利案第6,703,199號，其描述纖維結合蛋白多肽微型抗體)。術語「scFv」係指包含有包含輕鏈可變區之至少一個抗原結合片段及包含重鏈可變區之至少一個抗原結合片段的融合蛋白，其中輕鏈可變區及重鏈可變區例如經由合成連接子(例如短的可撓性多肽連接子)連續地連接，且能夠表現為單鏈多肽，且其中scFv保留其衍生自的完整抗體之特異性。除非指定，否則scFv可例如關於多肽之N端及C端末端具有任一順序之VL及VH可變區，scFv可包含VL-連接子-VH或可包含VH-連接子-VL。抗原結合片段係使用熟習此項技術者已知之習知技術獲得，且結合片段係以與完整抗體相同之方式進行效用(例如結合親和力、內化)篩檢。舉例而言，抗原結合片段可藉由裂解完整蛋白質，例如藉由蛋白酶或化學裂解來製備。
如本文所用之術語「互補決定區」或「CDR」係指在抗體可變區內之胺基酸序列，其賦予抗原特異性及結合親和力。舉例而言，通常，各重鏈可變區中存在三個CDR (例如HCDR1、HCDR2及HCDR3)且各輕鏈可變區中存在三個CDR (LCDR1、LCDR2及LCDR3)。給定CDR之精確胺基酸序列邊界可使用多個熟知流程中之任一個，包括以下由所述之方案測定：Kabat等人(1991) 「Sequences of Proteins of Immunological Interest」,第5版Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (「Kabat」編號方案)；Al-Lazikani等人(1997) J Mol Biol. 273(4):927-48 (「Chothia」編號方案)；ImMunoGenTics (IMGT)編號(Lefranc (2001) Nucleic Acids Res. 29(1):207-9；Lefranc等人(2003) Dev Comp Immunol. 27(1):55-77) (「IMGT」編號方案)；或其組合。在針對給定CDR區(例如HC CDR1、HC CDR2、HC CDR3、LC CDR1、LC CDR2或LC CDR3)的經組合之Kabat及Chothia編號流程中，在一些實施例中，CDR對應於定義為Kabat CDR之一部分的胺基酸殘基，連同定義為Chothia CDR之一部分的胺基酸殘基。如本文所用，根據「Chothia」編號方案定義之CDR有時亦稱為「高變環」。
在一些實施例中，根據Kabat，重鏈可變域(VH)中之CDR胺基酸殘基編號為31-35 (HCDR1) (例如位置35後之插入)、50-65 (HCDR2)及95-102 (HCDR3)；且輕鏈可變域(VL)中之CDR胺基酸殘基編號為24-34 (LCDR1) (例如位置27後之插入)、50-56 (LCDR2)及89-97 (LCDR3)。在一些實施例中，根據Chothia，VH中之CDR胺基酸編號為26-32 (HCDR1) (例如位置31後之插入)、52-56 (HCDR2)及95-102 (HCDR3)；且VL中之胺基酸殘基編號為26-32 (LCDR1) (例如位置30後之插入)、50-52 (LCDR2)及91-96 (LCDR3)。藉由組合Kabat及Chothia兩者之CDR定義，在一些實施例中，CDR包含以下或由以下組成，例如人類VH中之胺基酸殘基26-35 (HCDR1)、50-65 (HCDR2)及95-102 (HCDR3)以及人類VL中之胺基酸殘基24-34 (LCDR1)、50-56 (LCDR2)及89-97 (LCDR3)。在一些實施例中，根據IMGT，VH中之CDR胺基酸殘基編號為大約26-35 (CDR1)、51-57 (CDR2)及93-102 (CDR3)，且VL中之CDR胺基酸殘基編號為大約27-32 (CDR1)、50-52 (CDR2)及89-97 (CDR3)。在一些實施例中，根據IMGT，抗體之CDR區可使用程式IMGT/DomainGap Align測定。
如本文所使用，術語「單株抗體」係指自實質上均質之抗體群體獲得的抗體，亦即，除可能少量存在的可能天然存在之突變以外，構成該群體之各個抗體係相同的。單株抗體針對單一抗原性抗原決定基具有高度特異性。相比之下，習知(多株)抗體製劑通常包括針對不同抗原決定基(或對其具有特異性)之多種抗體。修飾語「單株」指示抗體之特徵為自實質上均質之抗體群體獲得，且不應理解為需要藉由任何特定方法產生該抗體。舉例而言，欲根據本發明使用之單株抗體可藉由Kohler等人(1975) Nature 256:495首先描述的融合瘤方法製得，或可藉由重組DNA方法(參見例如美國專利案第4,816,567號)製得。「單株抗體」亦可使用例如Clackson等人(1991) Nature 352:624-8及Marks等人(1991) J Mol Biol. 222:581-97中所述之技術自噬菌體抗體文庫分離。該術語亦包括具有單一分子組成之抗體分子之製劑。單株抗體組合物對於特定抗原決定基顯示單一結合特異性及親和力。
本文所描述之單株抗體可為非人類、人類或人類化的。該術語特定地包括「嵌合」抗體，其中重鏈及/或輕鏈中之一部分與衍生自具體物種或屬於具體抗體類別或子類之抗體中之相應序列相同或同源，同時該一或多個鏈之其餘部分與衍生自另一物種或屬於另一抗體類別或子類之抗體以及該等抗體之片段中之相應序列相同或同源，只要其特異性結合目標抗原及/或展現所需生物活性即可。
如本文所用，術語「人類抗體」係指由人類產生之抗體或具有由人類產生之抗體之胺基酸序列的抗體。該術語包括可變區中之構架與CDR區均衍生自人源序列的抗體。此外，若抗體含有恆定區，則恆定區亦衍生自該等人類序列，例如人類生殖系序列，或人類生殖系序列或抗體之突變型，其含有衍生自人類構架序列分析之共同構架序列，例如如Knappik等人((2000) J Mol Biol. 296(1):57-86)中所述。免疫球蛋白可變域，例如CDR之結構及位置可使用熟知編號流程，例如Kabat編號流程、Chothia編號流程或Kabat與Chothia之組合及/或ImMunoGenTics (IMGT)編號來定義。本發明之人類抗體可包括並非由人類序列編碼之胺基酸殘基(例如由活體外隨機或位點特異性突變誘發或藉由活體內體細胞突變引入之突變或促成穩定性或製造之保守取代)。然而，如本文所用，術語「人類抗體」並不意欲包括來源於另一哺乳動物物種(諸如小鼠)之生殖系的CDR序列已移植於人類構架序列上的抗體。
如本文所用，術語「重組人類抗體」係指藉由重組方式製備、表現、形成或分離之人類抗體，諸如自針對人類免疫球蛋白基因進行轉殖基因或轉殖染色體的動物(例如小鼠)或自其製備之融合瘤分離之抗體、自經轉型以表現人類抗體之宿主細胞、例如自轉染瘤分離之抗體、自重組、組合人類抗體文庫分離之抗體及藉由涉及所有或一部分人類免疫球蛋白基因、序列與其他DNA序列之剪接的任何其他方式製備、表現、形成或分離之抗體。此類重組人類抗體具有構架區及CDR區來源於人類生殖系免疫球蛋白序列之可變區。在一些實施例中，然而，此類重組人類抗體可經歷活體外突變誘發(或在使用人類Ig序列之動物轉殖基因時為活體內體細胞突變誘發)，且因此重組抗體之VH區及VL區的胺基酸序列為在源自及相關於人類生殖系VH及VL序列時可能不天然存在於活體內人類抗體生殖系譜系內的序列。
如本文所用，術語「嵌合抗體」係指免疫球蛋白分子之胺基酸序列衍生自兩種或更多種物種的抗體。在一些情況下，重鏈及輕鏈之可變區對應於衍生自具有所需特異性、親和力及活性之一種物種的抗體之可變區，而恆定區與衍生自另一物種(例如人類)之抗體同源，以使後一物種中之免疫反應減到最少。
如本文所使用之術語「人類化抗體」係指含有來自非人類(例如鼠)抗體以及人類抗體之序列之抗體形式。該等抗體為含有衍生自非人類免疫球蛋白之最小序列的一種類型之嵌合抗體。一般而言，人類化抗體將包含實質上所有至少一個且通常兩個可變域，其中所有或實質上所有高變環對應於非人類免疫球蛋白之該等區域且所有或實質上所有構架(FR)區係人類免疫球蛋白序列之該等區域。人類化抗體視情況亦將包含免疫球蛋白恆定區(Fc)之至少一部分，通常，人類免疫球蛋白之恆定區的至少一部分。人類化抗體可藉由Fv構架區中及/或所置換之非人類殘基內殘基之取代而進一步修飾，以改進及優化抗體特異性、親和力及/或活性。
如本文所用，術語「Fc區」係指包含抗體之恆定域之CH3、CH2及至少一部分鉸鏈區的多肽。視情況，Fc區可包括存在於一些抗體類別中之CH4域。Fc區可包含抗體恆定域之全部鉸鏈區。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含抗體之Fc區及CH1區。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含抗體之Fc區、CH3區。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含來自抗體之恆定域之Fc區、CH1區及κ/λ區。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段包含恆定區，例如重鏈恆定區及/或輕鏈恆定區。在一些實施例中，此類恆定區與野生型恆定區相比經修飾。亦即，多肽可包含對三個重鏈恆定域(CH1、CH2或CH3)中之一或多者及/或對輕鏈恆定區結構域(CL)的變化或修飾。例示性修飾包括一或多個域中之一或多個胺基酸的添加、缺失或取代。可包括此類變化以使效應功能、半衰期等最佳化。
關於抗體或抗原結合片段如本文所用之「內化性」係指能夠在結合於細胞後通過細胞之脂質雙層膜吸收進入內部隔室(亦即，「經內化」)，較佳進入細胞中之降解隔室的抗體或抗原結合片段。舉例而言，內化性抗MET抗體係在結合至細胞膜上之MET之後能夠吸收進入細胞中的抗體。在一些實施例中，本文所揭示之ADC中所用的抗體或抗原結合片段靶向細胞表面抗原(例如MET)，且為內化性抗體或內化性抗原結合片段(亦即ADC在抗原結合之後轉移通過細胞膜)。在一些實施例中，內化性抗體或抗原結合片段結合細胞表面上之受體。靶向細胞膜上之受體的內化性抗體或內化性抗原結合片段可以誘導受體介導之內飲作用。在一些實施例中，內化性抗體或內化性抗原結合片段經由受體介導之內吞作用吸收進入細胞中。
關於抗體或抗原結合片段如本文所用之「非內化性」係指在結合於細胞時保留在細胞表面處的抗體或抗原結合片段。在一些實施例中，本文所揭示之ADC中使用的抗體或抗原結合片段靶向細胞表面抗原，且為非內化性抗體或非內化性抗原結合片段(亦即，ADC在抗原結合之後保留在細胞表面處且不轉移通過細胞膜)。在一些實施例中，非內化性抗體或抗原結合片段結合非內化性受體或其他細胞表面抗原。
如本文所用之術語「MET」、「MET原致癌基因，受體酪胺酸激酶」、「cMet」或「c-Met」係指任何天然形式之人類MET蛋白質。該術語涵蓋全長人類MET (例如NCBI參考序列：NP_001120972.1；SEQ ID NO: 35)以及可由細胞加工產生之任何形式的人類MET。該術語亦涵蓋人類MET之功能變異體或片段，包括但不限於保持人類MET之一或多種生物功能之剪接變異體、對偶基因變異體及同功異型物(亦即除非上下文指示該術語僅用於指野生型蛋白質，否則涵蓋變異體及片段)。MET可自人類分離，或可以重組方式或藉由合成方法製造。
如本文所用之術語「抗MET抗體」或「與MET結合之抗體」係指與MET結合，例如特異性結合之任何形式的抗體或其抗原結合片段。該術語涵蓋單株抗體(包括全長單株抗體)、多株抗體及生物功能抗原結合片段，只要其與MET結合，例如特異性結合即可。WO2016/042412提供例示性MET結合序列，包括例示性抗MET抗體序列，且該案以引用之方式併入本文中。在一些實施例中，本文所揭示之ADC中使用的抗MET抗體係內化性抗體或內化性抗原結合片段。
如本文所用，術語「結合特異性」係指個別抗體或抗原結合片段與一種抗原決定子優先反應而非不同抗原決定子的能力。特異性程度指示抗體或片段優先結合於抗原決定子而非不同抗原決定子的程度。此外，如本文所用，術語「特異性」、「特異性結合」及「特異性結合」係指在蛋白及其他生物製劑之非均質群體中，抗體或抗原結合片段(例如抗MET抗體)與目標抗原(例如MET)之間的結合反應。可藉由在一組給定條件下比較同適當抗原之結合與同不相關抗原抗原混合物之結合來測試抗體之結合特異性。若抗體結合至適當抗原且親和力為與不相關抗原或抗原混合物之親和力的至少2倍、5倍、7倍、10倍或更多倍，則認為其具有特異性。「特異性抗體」或「目標特異性抗體」為僅結合目標抗原(例如MET)，但不與其他抗原結合(或展現最小結合)之抗體。在一些實施例中，特異性結合目標抗原(例如MET)之抗體或抗原結合片段的K D小於1×10 - 6M、小於1×10 - 7M、小於1×10 - 8M、小於1×10 - 9M、小於1×10 - 10M、小於1×10 - 11M、小於1×10 - 12M或小於1×10 - 13M。在一些實施例中，K D為1 pM至500 pM。在一些實施例中，K D在500 pM至1 µM、1 µM至100 nM或100 mM至10 nM之間。
如本文所用，術語「親和力」係指在單抗原位點處抗體與抗原之間的相互作用的強度。不受理論束縛，在各抗原結合位點內，在多個位點處抗體「臂」之可變區藉由弱非共價力與抗原相互作用；相互作用愈多，通常親和力愈強。抗體之結合親和力為抗原決定子與抗體組合位點之間作用的引力及斥力總和。
術語「k on」或「k a」係指抗體與抗原締合形成抗體/抗原複合物之締合速率常數。該速率可使用標準分析，諸如表面電漿共振、生物層干涉法或ELISA分析測定。
術語「k off」或「k d」係指抗體自抗體/抗原複合物解離之解離速率常數。該速率可使用標準分析，諸如表面電漿共振、生物層干涉法或ELISA分析測定。
術語「K D」係指具體抗體-抗原相互作用之平衡解離常數。K D由k a/k d計算。該速率可使用標準分析，諸如表面電漿共振、生物層干涉法或ELISA分析測定。
術語「抗原決定基」係指抗原中能夠經抗體(或抗原結合片段)識別且特異性結合之部分。抗原決定基決定子一般由分子之化學活性表面基團，諸如胺基酸或碳水化合物或糖側鏈組成，且可具有特定三維結構特徵以及荷質比特徵。當抗原為多肽時，抗原決定基可由連續胺基酸或藉由多肽之三級摺疊而並列之非連續胺基酸形成。抗原決定基可為「線性」或「構形」。構形抗原決定基與線性抗原決定基之區別在於，在變性溶劑存在下，與前者之結合消失，但與後者之結合未消失。抗體所結合之抗原決定基可以使用此項技術中已知之任何抗原決定基定位技術鑑別，包括X射線結晶學，藉由直接觀測抗原-抗體複合物，以及監測抗體與該抗原之片段或突變型變異之結合，或監測抗體及抗原之不同部分的溶劑可接近性鑑別抗原決定基。用於定位抗體抗原決定基之例示性策略包括但不限於基於陣列之寡肽掃描、受限蛋白水解、定點突變誘發、高通量突變誘發定位、氫-氘交換及質譜法(參見例如Gershoni等人(2007) 21:145-56；及Hager-Braun及Tomer (2005) Expert Rev Proteomics 2:745-56)。
亦可使用競爭性結合及抗原決定基分組確定共有一致或重疊抗原決定基之抗體。競爭性結合可以使用交叉阻斷分析，諸如「Antibodies, A Laboratory Manual」, Cold Spring Harbor Laboratory, Harlow及Lane (1988年第1版, 2014年第2版)中所描述之分析評估。在一些實施例中，當測試抗體或結合蛋白在交叉阻斷分析中將參考抗體或結合蛋白與目標抗原，諸如MET (例如包含選自表C-D中鑑定之彼等CDR及/或可變域的結合蛋白)之結合減少至少約50% (例如50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%、99.5%或更多，或其間之任何百分比)時，鑑定出競爭性結合，及/或反之亦然。在一些實施例中，競爭性結合可歸因於共用或類似(例如部分重疊)之抗原決定基，或由於其中抗體或結合蛋白在鄰近抗原決定基處結合之位阻(參見例如Tzartos, Methods in Molecular Biology (Morris編(1998) 第66卷, 第55-66頁))。在一些實施例中，可使用競爭性結合分選共用類似抗原決定基之結合蛋白群組。舉例而言，競爭結合之結合蛋白可「分組」為具有重疊或鄰近抗原決定基之結合蛋白群組，而不競爭之該等結合蛋白歸入不具有重疊或鄰近抗原決定基之獨立結合蛋白群組。
如本文所用，術語「多肽」、「肽」及「蛋白質」可互換使用指代胺基酸殘基之聚合物。該等術語涵蓋包含藉由肽鍵彼此接合之兩個或更多個胺基酸的胺基酸聚合物、其中一或多個胺基酸殘基為相應天然存在之胺基酸之人造化學模擬物的胺基酸聚合物以及天然存在之胺基酸聚合物及非天然存在之胺基酸聚合物。該等術語包括例如生物活性片段、實質上同源多肽、寡肽、均二聚體、雜二聚體、多肽變異體、經修飾多肽、衍生物、類似物、融合蛋白以及其他物質。該等術語亦包括天然肽、重組肽、合成肽或其組合。除非另外指示，否則特定多肽序列亦隱含地涵蓋其經保守修飾之變異體。
「重組」蛋白係指使用重組技術，例如藉由表現重組核酸而製成之蛋白質(例如抗體)。
「經分離」蛋白係指未伴隨有至少一些材料之蛋白質，該材料通常與其天然狀態相關。舉例而言，活生物體中存在之天然存在之聚核苷酸或多肽未分離，但分離自活生物體中之共存材料中之一些或全部分離的相同聚核苷酸或多肽經分離。該定義包括在此項技術中已知之多種生物體及/或宿主細胞中製造抗體。
如本文所用，「經分離抗體」為已自其來源環境之組分(按重量計)中之一或多種(例如大部分)，例如自融合瘤細胞培養物或用於其製造之不同細胞培養物之組分鑑別出且分離的抗體。在一些實施例中，執行分離以使得其充分移除組分，這可以其他方式干擾用於所需應用(例如用於治療用途)之抗體的適用性。用於製備經分離抗體之方法為此項技術中已知的，且包括但不限於蛋白A層析、陰離子交換層析、陽離子交換層析、病毒滯留過濾及超過濾。
如本文所用，術語「變異體」係指分別不同於參考核酸序列或胺基酸序列，但保留參考序列之一或多種生物特性的核酸序列或胺基酸序列。相對於參考序列，變異體可含有一或多個胺基酸取代、缺失及/或插入(或密碼子之相應取代、缺失及/或插入)。核酸變異體之變化可能不改變由參考核酸序列編碼之肽之胺基酸序列，或可導致胺基酸取代、添加、缺失、融合及/或截短。在一些實施例中，本文所揭示之核酸變異體編碼與由未修飾核酸編碼之胺基酸序列一致的胺基酸序列，或編碼保留未修飾胺基酸序列之一或多種功能特性的經修飾之胺基酸序列。肽變異體之序列之變化通常為有限的或保守的，以使得未經修飾之肽及變異體之序列整體上十分相似，且在許多區域中相同。在一些實施例中，肽變異體保留未修飾肽序列之一或多種功能特性。變異體及未經修飾之肽之胺基酸序列的不同之處可在於呈任何組合之一或多個取代、添加、缺失。
核酸或肽之變異體可為天然存在之變異體或不知道是否天然存在之變異體。核酸及肽之變異體可藉由突變誘發技術、藉由直接合成或藉由此項技術中已知之其他技術製成。變異體不一定需要物理操縱參考序列。只要與參考序列相比，序列含有不同核酸或胺基酸，則將其視為「變異體」，無論其如何合成。在一些實施例中，與參考序列相比，變異體具有高序列一致性(亦即，60%核酸或胺基酸序列一致性或更高)。在一些實施例中，肽變異體涵蓋具有胺基酸取代、缺失及/或插入之多肽，只要多肽具有與參考序列或與參考序列之相應鏈段(例如功能片段)至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的胺基酸序列一致性即可，例如亦保留參考序列之一或多種功能的彼等變異體。在一些實施例中，核酸變異體涵蓋具有胺基酸取代、缺失及/或插入之聚核苷酸，只要聚核苷酸具有與參考序列或與參考序列之相應鏈段(例如功能片段)至少60%、至少65%、至少70%、至少75%、至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%的核酸序列一致性即可。
術語「保守修飾之變異體」適用於胺基酸與核酸序列。對於核酸序列，經保守修飾之變異體係指編碼一致或基本上一致之胺基酸序列的彼等核酸。由於遺傳密碼之簡併性，多個功能上一致之核酸編碼任何既定蛋白質。舉例而言，密碼子GCA、GCC、GCG及GCU皆編碼胺基酸丙胺酸。因此，在丙胺酸由密碼子指定之每一位置上，密碼子可變成任一所述相應密碼子而不改變所編碼之多肽。此類核酸變異為「靜默變異」，其為一種經保守修飾之變異。本文中編碼多肽之每個核酸序列亦描述核酸之每種可能靜默變異。熟習此項技術者應認識到核酸中之各密碼子(除通常為甲硫胺酸之唯一密碼子之AUG及通常為色胺酸之唯一密碼子之TGG外)可經修飾以產生功能上一致之分子。因此，編碼多肽之核酸之各種靜默變異隱含於各所述序列中。對於多肽序列，經保守修飾之變異體包括使得胺基酸經化學上類似胺基酸取代的針對多肽序列之個別取代、缺失或添加。提供功能上類似之胺基酸之保守取代在此項技術中已熟知。
如本文所用，術語「保守序列修飾」係指不顯著影響或改變例如含有胺基酸序列之抗體或抗原結合片段之結合特徵的胺基酸修飾。此類保守修飾包括胺基酸取代、添加及缺失。修飾可藉由此項技術中已知之標準技術，諸如定點突變誘發及PCR介導之突變誘發引入至抗體或抗原結合片段中。保守胺基酸取代係胺基酸殘基經具有類似側鏈之胺基酸殘基置換之取代。此項技術中已定義具有類似側鏈之胺基酸殘基家族。此等家族包括具有鹼性側鏈(例如離胺酸、精胺酸、組胺酸)、酸性側鏈(例如天冬胺酸、麩胺酸)、不帶電極性側鏈(例如甘胺酸、天冬醯胺、麩醯胺酸、絲胺酸、蘇胺酸、酪胺酸、半胱胺酸、色胺酸)、非極性側鏈(例如丙胺酸、纈胺酸、白胺酸、異白胺酸、脯胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸)、β分支鏈側鏈(例如蘇胺酸、纈胺酸、異白胺酸)及芳族側鏈(例如酪胺酸、苯丙胺酸、色胺酸、組胺酸)之胺基酸。因此，在一些實施例中，抗體內之一或多個胺基酸殘基可經來自相同側鏈家族之其他胺基酸殘基置換，且經改變之抗體可使用本文所描述之功能分析加以測試。
如本文所用，術語「同源」或「一致性」係指兩個聚合分子之間，例如兩個核酸分子，諸如兩個DNA分子或兩個RNA分子之間或兩個多肽分子之間的次單元序列一致性。當兩個分子中之次單元位置被相同單體次單元佔據時；例如若兩個DNA分子中之每一者中之位置均被腺嘌呤佔據，則其在彼位置處為同源或一致的。兩個序列之間之同源性與匹配或同源位置之數目直接相關。舉例而言，若兩個序列中一半(例如長度長度為聚合物十個次單元中之五個位置)位置為匹配或同源的，則兩個序列為50%同源的；若90%之位置(例如9/10)為匹配或同源的，則兩個序列為90%同源的。
「序列一致性」之百分比可藉由經由比較窗比較兩個最佳比對序列來測定，其中與參考序列(其不包含添加或缺失)相比，比較窗中胺基酸序列之片段可包含添加或缺失(例如缺口或突出物)，以得到兩個序列之最佳比對。可藉由以下方式計算該百分比：測定兩個序列中出現一致胺基酸殘基之位置的數目，得到匹配位置數目；將匹配位置數目除以比較窗口中之總位置數目；以及將結果乘以100，得到序列一致性百分比。輸出為目標序列相對於查詢序列之一致性百分比。兩個序列之間的一致性百分比為該等序列共有之相同位置數目之函數，考慮到間隙之數目及各間隙之長度，需要引入該等間隙以便最佳比對兩個序列。一般而言，本文所揭示之蛋白質與其變異體，包括目標抗原(諸如MET)之變異體及抗體可變域之變異體(包括個別變異體CDR)之間之胺基酸一致性或同源性為本文中所描繪之序列的至少80%，例如至少85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%、幾乎100%或100%之一致性或同源性。
可使用數學演算法達成序列比較及測定兩個序列之間的一致性百分比。在一些實施例中，使用已併入GCG套裝軟體之GAP程式中的Needleman及Wunsch ((1970) J Mol Biol. 48:444-53)演算法，使用Blossum 62矩陣或PAM250矩陣以及間隙權數16、14、12、10、8、6或4及長度權數1、2、3、4、5或6測定兩個胺基酸序列之間的一致性百分比。在一些實施例中，使用GCG套裝軟體中之GAP程式，使用NWSgapdna.CMP矩陣以及間隙權數40、50、60、70或80及長度權數1、2、3、4、5或6測定兩個核苷酸序列之間的一致性百分比。一組例示性參數為Blossum 62計分矩陣，其中間隙罰分為12，間隙擴展罰分為4，且讀框轉移間隙罰分為5。亦可使用已併入ALIGN程式(2.0版)中之Meyers及Miller ((1989) CABIOS 4:11-17)之演算法，使用PAM120權數殘基表、間隙長度罰分12及間隙罰分4測定兩個胺基酸或核苷酸序列之間的一致性百分比。
術語「試劑」在本文中用於指代化合物、化合物之混合物、生物大分子、由生物材料製成之提取物或其兩者或更多者之組合。術語「治療劑」或「藥物」係指能夠調節生物過程及/或具有生物活性之試劑。如本文所描述之Bcl-xL抑制劑及包含其之ADC為例示性治療劑。
術語「化學治療劑」或「抗癌劑」在本文中用於指代有效治療癌症之所有試劑(不管作用機制如何)。抑制轉移或血管生成常常係化學治療劑之一種特性。化學治療劑包括抗體、生物分子及小分子，且涵蓋如本文所述之Bcl-xL抑制劑及包含其之ADC。化學治療劑可為細胞毒性劑或細胞生長抑制劑。術語「細胞生長抑制劑」係指抑制或遏止細胞生長及/或細胞繁殖之試劑。術語「細胞毒性劑」係指主要藉由干擾細胞之表現活性及/或功能引起細胞死亡之物質。
如本文所用，術語「B細胞淋巴瘤-超大」或「Bcl-xL」係指任何天然形式之人類Bcl-xL，Bcl-2蛋白質家族之抗細胞凋亡成員。該術語涵蓋全長人類Bcl-xL (例如UniProt參考序列：Q07817-1)，以及可由細胞加工產生之任何形式之人類Bcl-xL。該術語亦涵蓋人類Bcl-xL之功能變異體或片段，包括但不限於保持人類Bcl-xL之一或多種生物功能之剪接變異體、對偶基因變異體及同功異型物(亦即，除非上下文指示該術語僅用於指野生型蛋白質，否則涵蓋變異體及片段)。Bcl-xL可自人類分離，或可以重組方式或藉由合成方法產生。
如本文所用，術語「抑制(inhibit/inhibition/inhibiting)」意謂將生物活性或過程減少可量測之量，且可包括但不需要完全預防或抑制。在一些實施例中，「抑制」意謂減少Bcl-xL及/或其一或多種上游調節劑或下游目標之表現及/或活性。
如本文所用，術語「Bcl-xL抑制劑」係指能夠減少Bcl-xL及/或其一或多種上游調節劑或下游目標之表現及/或活性的試劑。例示性Bcl-xL調節劑(包括例示性Bcl-xL抑制劑)描述於以下各者中：WO2021/018858；WO2021/018857；WO2010/080503；WO2010/080478；WO2013/055897；WO2013/055895；WO2016/094509；WO2016/094517；WO2016/094505；Tao等人, ACS Medicinal Chemistry Letters(2014), 5(10), 1088-109；及Wang等人, ACS Medicinal Chemistry Letters(2020), 11(10), 1829−1836；WO 2021/018858及WO 2021/018857，其各自以引用之方式併入本文中，作為可包括為所揭示之ADC中之藥物部分的例示性Bcl-xL調節劑，包括例示性Bcl-xL抑制劑。
如本文所用，「Bcl-xL抑制劑藥物部分」、「Bcl-xL抑制劑」及其類似物係指提供Bcl-xL抑制劑化合物或經修飾以連接至ADC之化合物之結構的ADC或組合物之組分，其與初始化合物相比保留基本上相同、類似或增強的生物功能或活性。在一些實施例中，Bcl-xL抑制劑藥物部分為式(1)之ADC中之組分(D)。
如本文所用，術語「癌症」係指存在具有導致癌症之細胞的典型特徵(諸如不受控之增殖、永生性、轉移潛力、快速生長及增殖率及/或某些形態特點)之細胞。通常，癌細胞可呈腫瘤或腫塊形式，但該等細胞可單獨存在於個體內，或可在血流中作為獨立細胞循環，諸如白血病或淋巴瘤細胞。術語「癌症」包括所有類型之癌症及癌症轉移，包括血液學癌症、實體腫瘤、肉瘤、癌瘤以及其他實體及非實體腫瘤癌症。血液學癌症可包括B細胞惡性病、血液癌症(白血病)、漿細胞癌症(骨髓瘤，例如多發性骨髓瘤)或淋巴結癌症(淋巴瘤)。例示性B細胞惡性病包括慢性淋巴球性白血病(CLL)、濾泡性淋巴瘤、套細胞淋巴瘤及瀰漫性大B細胞淋巴瘤。白血病可包括急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓單核球性白血病(CMML)、急性單核球性白血病(AMoL)等。術語「急性淋巴母細胞白血病」及「急性淋巴球性白血病」可互換地使用以描述ALL。淋巴瘤可包括霍奇金氏淋巴瘤、非霍奇金氏淋巴瘤等。其他血液學癌症可包括骨髓發育不良症候群(MDS)。實體腫瘤可以包括癌瘤，諸如腺癌，例如乳癌、胰臟癌、前列腺癌、結腸癌或結腸直腸癌、肺癌、胃部癌、子宮頸癌、子宮內膜癌、卵巢癌、膽管癌、神經膠質瘤、黑色素瘤等。在一些實施例中，癌症為黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌、胸腺瘤、多發性骨髓瘤、漿細胞骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性骨髓白血病、骨髓癌、慢性淋巴球性白血病、包括急性淋巴母細胞白血病之淋巴母細胞白血病、濾泡性淋巴瘤、T細胞或B細胞起源之淋巴惡性腫瘤、骨髓性白血病或骨髓瘤。在一些實施例中，癌症為肺癌、胰臟癌、胃部癌、腎癌或肝癌。
如本文所用，術語「腫瘤」係指由過量細胞生長或增殖引起之任何組織腫塊，可為良性或惡性的，包括癌前病變。在一些實施例中，腫瘤為黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌或胸腺瘤。在一些實施例中，腫瘤為肺癌、胰臟癌、胃部癌、腎癌或肝癌。
術語「腫瘤細胞」及「癌細胞」可在本文中互換使用，且係指衍生自腫瘤或癌症之個別細胞或總細胞群體，包括非致瘤細胞及癌症幹細胞兩者。在僅僅指缺乏更新及分化能力以區分彼等細胞與癌症幹細胞之彼等細胞時，術語「腫瘤細胞」或「癌細胞」將由術語「非致瘤性」修飾。
如本文所用，術語「目標陰性」、「目標抗原陰性」或「抗原陰性」係指細胞或組織中不存在目標抗原表現。術語「目標陽性」、「目標抗原陽性」或「抗原陽性」係指存在目標抗原表現。舉例而言，不表現目標抗原之細胞或細胞株可以描述為目標陰性的，而表現目標抗原之細胞或細胞株可以描述為目標陽性的。
術語「個體」及「患者」在本文中可互換使用以指代需要治療之任何人類或非人類動物。非人類動物包括所有脊椎動物(例如哺乳動物及非哺乳動物)，諸如任何哺乳動物。哺乳動物之非限制性實例包括人類、黑猩猩、猿、猴、牛、馬、綿羊、山羊、豬、兔、狗、貓、大鼠、小鼠及天竺鼠。非哺乳動物之非限制性實例包括鳥類及魚類。在一些實施例中，個體為人類。
如本文所用，術語「需要治療之個體」係指將在生物學上、醫學上或生活品質上受益於治療(例如用本文所描述之例示性ADC化合物中之任何一或多種進行之治療)之個體。
如本文所用，「治療(treat/treating/treatment)」係指疾病、病症或病況之任何後果之任何好轉，諸如延長存活期、較低發病率及/或減輕由替代性治療模式引起之副作用。在一些實施例中，治療包含延遲或改善疾病、病症或病況(亦即，減慢或阻止或減少疾病或其至少一種臨床症狀之發展)。在一些實施例中，治療包含延遲、緩解或改善疾病、病症或病況之至少一種身體參數，包括患者可能無法辨別之身體參數。在一些實施例中，治療包含身體上(例如穩定化可辨別的症狀)、生理上(例如穩定化身體參數)或兩者調節疾病、病症或病況。在一些實施例中，治療包含向個體，例如患者投與所述ADC化合物或組合物以獲得本文中所列舉的治療益處。治療可為治癒、恢復、緩解、延遲、預防、減輕、改變、補救、改善、緩和、改良或影響疾病、病症或病況(例如癌症)、疾病、病症或病況(例如癌症)之症狀或向疾病、病症或病況(例如癌症)之傾向性。在一些實施例中，除治療患有疾病、病症或病況之個體之外，亦可預防性地提供本文所揭示之組合物以預防或降低罹患該疾病、病症或病況之可能性。
如本文所用，術語「預防(prevent/preventing/prevention)」疾病、病症或病況係指對該疾病、病症或病況之預防性治療；或延遲該疾病、病症或病況之發作或進展。
如本文所用，「醫藥組合物」係指除適用於向個體投與之至少一種其他(及視情況選用之超過一種其他)組分，諸如醫藥學上可接受之載劑、穩定劑、稀釋劑、分散劑、懸浮劑、增稠劑及/或賦形劑之外，組合物，例如ADC化合物或組合物之製劑。本文所提供之醫藥組合物呈諸如准許投與及隨後提供活性成分之預期生物活性及/或獲得治療效果之形式。本文所提供之醫藥組合物較佳不含有對將投與調配物之個體具有不可接受之毒性的額外組分。
如本文所用，可互換使用之術語「醫藥學上可接受之載劑」及「生理學上可接受之載劑」係指不對個體引起顯著刺激且不消除所投與ADC化合物或組合物及/或組合物中之任何額外治療劑之生物活性及特性的載劑或稀釋劑。醫藥學上可接受之載劑可增強或穩定組合物，或可用於促進組合物之製備。醫藥學上可接受之載劑可包括溶劑、分散介質、塗層、界面活性劑、抗氧化劑、防腐劑(例如抗細菌劑、抗真菌劑)、等張劑、吸收延遲劑、鹽、防腐劑、藥物穩定劑、黏合劑、賦形劑、崩解劑、潤滑劑、甜味劑、調味劑、染料及其類似物以及其組合，正如熟習此項技術者所已知(參見例如Remington's Pharmaceutical Sciences,第18版Mack Printing Company, 1990,第1289-1329頁)。除非任何習知載劑與活性成分不相容，否則考慮將其用於治療或醫藥組合物中。載劑可經選擇以使個體之不利副作用降至最低及/或使活性成分之降解降至最低。此等調配物中之任一者中亦可包括佐劑。
如本文所用，術語「賦形劑」係指添加至醫藥組合物中以進一步促進投與活性成分的惰性物質。用於非經腸投與之調配物可例如含有賦形劑，諸如無菌水或生理鹽水；聚伸烷二醇(諸如聚乙二醇)、植物油或氫化萘。其他例示性賦形劑包括但不限於碳酸氫鈣、磷酸鈣、多種糖及各種類型澱粉、纖維素衍生物、明膠、乙烯-乙酸乙烯酯共聚物顆粒及界面活性劑，包括例如聚山梨醇酯20。
如本文所用，術語「醫藥學上可接受之鹽」係指不消除本發明化合物之生物活性及特性，且不會對其所投與之個體引起顯著刺激之鹽。該等鹽之實例包括但不限於：(a)由無機酸形成之酸加成鹽，無機酸例如鹽酸、氫溴酸、硫酸、磷酸、硝酸及其類似酸；及由有機酸形成之鹽，有機酸例如乙酸、草酸、酒石酸、丁二酸、順丁烯二酸、反丁烯二酸、葡萄糖酸、檸檬酸、蘋果酸、抗壞血酸、苯甲酸、鞣酸、棕櫚酸、褐藻酸、聚麩胺酸、萘磺酸、甲磺酸、對甲苯磺酸、萘二磺酸、聚半乳糖醛酸及其類似酸；及(b)由基本陰離子形成之鹽，陰離子諸如氯離子、溴離子及碘離子。參見例如Haynes等人, 「Commentary:  Occurrence of Pharmaceutically Acceptable Anions and Cations in the Cambridge Structural Database」, J. Pharmaceutical Sciences,第94卷,第10號(2005)及Berge等人, 「Pharmaceutical Salts」, J. Pharmaceutical Sciences,第66卷,第1號(1977)，其以引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，視其電子電荷而定，本文所描述之抗體-藥物結合物(ADC)、連接子、有效負載及連接子-有效負載可含有單價陰離子型相對離子M 1 -。可使用任何適合之陰離子型相對離子。在某些實施例中，單價陰離子型相對離子為醫藥學上可接受之單價陰離子型相對離子。在某些實施例中，單價陰離子型相對離子M 1 -可選自溴離子、氯離子、碘離子、乙酸根、三氟乙酸根、苯甲酸根、甲磺酸根、甲苯磺酸根、三氟甲磺酸根、甲酸根或其類似離子。在一些實施例中，單價陰離子型相對離子M 1 -為三氟乙酸根或甲酸根。
如本文所用，術語「治療有效量」或「治療學上有效劑量」係指實現所需治療性結果(亦即，減少或抑制酶或蛋白質活性、改善症狀、緩解症狀或病況、延遲疾病進展、減小腫瘤尺寸、抑制腫瘤生長、預防轉移)之本文所描述之化合物，例如本文所描述之ADC化合物或組合物的量。在一些實施例中，治療有效量不誘導或引起非所要副作用。在一些實施例中，治療有效量誘發或引起副作用，但僅引起鑒於患者之病況治療臨床醫師可接受之副作用。在一些實施例中，治療有效量為能有效可偵測地殺滅、減少及/或抑制癌細胞之生長或擴散、腫瘤尺寸或數目及/或其他癌症之等級、階段、進展及/或嚴重程度之量度。該術語亦適用於將誘發目標細胞中之特定響應，例如減少、減慢或抑制細胞生長之劑量。治療有效量可藉由首先投與低劑量，且隨後遞增地增加該劑量直至達成所需效果來確定。治療有效量亦可視預期應用(活體外或活體內)、或所治療之個體及疾病病況(例如個體體重及年齡、疾病病況之嚴重程度)、投與方式及其類似物而變化，該等因素可容易地藉由一般熟習此項技術者確定。具體量可視例如特定醫藥組合物、個體及其年齡及現有健康情況或健康情況之風險、待追蹤之給藥方案、疾病之嚴重程度、其是否與其他試劑組合投與、投與時序、其所投與之組織及攜載於其中之物理遞送系統而變化。在癌症情況下，治療有效量之ADC可以減少癌細胞之數量、減小腫瘤尺寸、抑制(例如減慢或終止)腫瘤轉移、抑制(例如減慢或終止)腫瘤生長及/或減輕一或多種症狀。
如本文所用，術語「預防有效量」或「預防有效劑量」係指在必要劑量下及必要時間段期間有效獲得所需預防結果之本文所揭示之化合物，例如本文所描述之ADC化合物或組合物的量。通常，由於預防性劑量係在疾病之前或在疾病早期階段時用於個體，因此預防有效量將小於治療有效量。在一些實施例中，預防有效量可預防疾病症狀，包括與癌症相關之症狀發作。
術語「 p」或「藥物負載」或「藥物:抗體比率」或「藥物與抗體比率」或「DAR」係指每個抗體或抗原結合片段之藥物部分之數目，亦即藥物負載，或式(1)之ADC中每個抗體或抗原結合片段(Ab)之-L-D部分之數目。在包含Bcl-xL抑制劑藥物部分之ADC中，「 p」係指連接至抗體或抗原結合片段之Bcl-xL抑制劑化合物之數目。舉例而言，若兩種Bcl-xL抑制劑化合物連接至抗體或抗原結合片段，則 p= 2。在包含式(1)之ADC之多個複本的組合物中，「平均 p」係指每個抗體或抗原結合片段的-L-D部分之平均數目，亦稱為「平均藥物負載」。 抗體 - 藥物結合物
本發明之抗體-藥物結合物(ADC)化合物包括具有抗癌活性之化合物。特定言之，ADC化合物包括結合(亦即，藉由連接子共價連接)至藥物部分(例如Bcl-xL抑制劑)之抗體或抗原結合片段，其中藥物部分在不結合於抗體或抗原結合片段時具有細胞毒性或細胞生長抑制作用。在一些實施例中，藥物部分在不結合於抗體或抗原結合片段時能夠減少Bcl-xL及/或其一或多種上游調節劑或下游目標之表現及/或活性。不受理論束縛，在一些實施例中，藉由靶向Bcl-xL表現及/或活性，本文所揭示之ADC可提供有效抗癌劑。此外，不受理論束縛，藉由將藥物部分結合至結合與腫瘤細胞或癌症中之表現相關之抗原的抗體，與單獨投與時的藥物部分相比，ADC可提供提高之活性、較佳細胞毒性特異性及/或減少之脫靶殺滅。
因此，在一些實施例中，所選ADC之組分應(i)保持分離之抗體及藥物部分所展現的一或多種治療特性；(ii)維持抗體或抗原結合片段之特異性結合特性；(iii)使藥物負載及藥物與抗體比率最佳化；(iv)允許經由穩定連接至抗體或抗原結合片段遞送，例如胞內遞送藥物部分；(v)保持ADC作為完整結合物之穩定性，直至轉運或遞送至目標位點；(vi)使ADC在投與之前或之後之聚集減到最少；(vii)在藥物部分於細胞環境中經歷裂解或其他釋放機制之後實現治療效果，例如細胞毒性效果；(viii)展現類似於或優於分離之抗體及藥物部分的活體內抗癌治療功效；(ix)使藥物部分引起之脫靶殺滅降至最低；及/或(x)展現所需藥物動力學及藥效學特性、可調配性及毒理/免疫譜。此等特性中之各者可提供用於治療用途之經改善之ADC (Ab等人(2015) Mol Cancer Ther. 14:1605-13)。
本發明之ADC化合物可以將有效劑量之細胞毒性或細胞生長抑制劑選擇性遞送至癌細胞或腫瘤組織。在一些實施例中，ADC之細胞毒性及/或細胞生長抑制活性取決於細胞中之目標抗原表現。在一些實施例中，所揭示之ADC在殺滅表現目標抗原之癌細胞方面特別有效，同時使脫靶殺滅降至最低。在一些實施例中，所揭示之ADC不會對不表現目標抗原之癌細胞展現細胞毒性及/或細胞生長抑制效果。
在某些態樣中，本文提供ADC化合物，其包含抗Met抗體或其抗原結合片段(Ab)、Bcl-xL抑制劑藥物部分(D)及將Ab共價連接至D之連接子部分(L)。在一些實施例中，本文提供ADC化合物，其包含靶向癌細胞之抗體或其抗原結合片段(Ab)、Bcl-xL抑制劑藥物部分(D)及將Ab共價連接至D之連接子部分(L)。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段能夠例如以高特異性及高親和力結合至腫瘤相關抗原(例如，MET)。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段在結合時內化至目標細胞中，例如內化至細胞中之降解隔室中。在一些實施例中，ADC在結合至目標細胞後內化，經歷降解，且釋放Bcl-xL抑制劑藥物部分以殺死癌細胞。Bcl-xL抑制劑藥物部分可藉由酶促作用、水解、氧化或任何其他機制自ADC之抗體及/或連接子部分釋放。
例示性ADC具有式(1)：  Ab-(L-D) p (1) 其中Ab =抗Met抗體或抗原結合片段，L =連接子部分，D = Bcl-xL抑制劑藥物部分，且 p=每個抗體或抗原結合片段之Bcl-xL抑制劑藥物部分之數目。 A.  抗體
式(1)之抗體或抗原結合片段(Ab)在其範疇內包括特異性結合至細胞上之目標抗原的任何抗體或抗原結合片段。在一些實施例中，式(1)之抗體或抗原結合片段(Ab)在其範疇內包括特異性結合至癌細胞上之目標抗原的任何抗體或抗原結合片段。在一些實施例中，該細胞或該癌細胞表現MET。在一些實施例中，目標抗原MET具有以下胺基酸序列：  ＜NCBI參考序列：NP_001120972.1＞
抗體或抗原結合片段可結合至目標抗原，其中如藉由例如BIAcore ®分析所量測，解離常數(K D) ≤1 mM、≤100 nM或≤10 nM或其間之任何量。在一些實施例中，K D為1 pM至500 pM。在一些實施例中，K D在500 pM至1 µM、1 µM至100 nM或100 mM至10 nM之間。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段係包含兩條重鏈及兩條輕鏈之四鏈抗體(亦稱為免疫球蛋白或全長或完整抗體)。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段為免疫球蛋白之抗原結合片段。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段為保留結合目標癌症抗原及/或提供免疫球蛋白之至少一個功能之能力的免疫球蛋白之抗原結合片段。
在一些實施例中，抗體或抗原結合片段係內化性抗體或其內化性抗原結合片段。在一些實施例中，內化性抗體或其內化性抗原結合片段結合至細胞表面上表現之目標癌症抗原且在結合後進入細胞。在一些實施例中，在ADC進入及存在於表現目標癌症抗原之細胞中之後(亦即，ADC已經內化之後)，例如藉由裂解、藉由降解抗體或抗原結合片段或藉由任何其他適合釋放機制，自ADC之抗體或抗原結合片段釋放ADC之Bcl-xL抑制劑藥物部分。
在一些實施例中，抗體包含突變，該等抗體介導降低或無抗體依賴性細胞毒性(ADCC)或補體依賴性細胞毒性(CDC)。在一些實施例中，此等突變稱為Fc沉默(Fc Silencing/Fc Silent/Fc Silenced)突變。在一些實施例中，IgG1恆定區之胺基酸殘基L234及L235經取代為A234及A235 (亦稱為「LALA」)。在一些實施例中，IgG1恆定區之胺基酸殘基N297經取代為A297 (亦稱為「N297A」)。在一些實施例中，IgG1恆定區之胺基酸殘基D265及P329取代為A265及A329 (亦稱為「DAPA」)。亦可使用其他抗體Fc沉默突變。在一些實施例中，Fc沉默突變組合使用，例如D265A、N297A及P329A (亦稱為「DANAPA」)。
如本文所闡述，若對抗體進行修飾，則其進一步用該修飾來指定。舉例而言，若抗體中之所選胺基酸已變為半胱胺酸(例如根據抗體重鏈之EU編號的E152C、S375C，以促進與連接子-藥物部分的結合)，則將其指定為「CysMab」；或若抗體已經根據EU編號之IgG1恆定區之Fc沉默突變D265A、N297A及P329A修飾，則在抗體名稱中添加「DANAPA」。若抗體用於抗體藥物結合物中，則其使用以下格式命名：抗體名稱-連接子-有效負載。
在一些實施例中，本發明之抗體藥物結合物中之抗Met抗體為WO2016/042412專利申請案中所述之抗Met抗體9006及9338 (參見下表2至5)，該案以引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，本發明之抗體藥物結合物中之抗Met抗體為抗Met抗體8902 (參見下表2-5)。此抗體之可變域重鏈及輕鏈(VH及VL)胺基酸序列分別提供於SEQ ID NO: 37及38中，且對應核苷酸序列分別提供於SEQ ID NO: 49及50中(參見表2a)。全長重鏈及輕鏈胺基酸序列(HC及LC)分別可在SEQ ID NO: 45及46 (IgG1鏈)以及SEQ ID NO: 47及48 (IgG2鏈)中獲得。8902抗體之重鏈CDR (H-CDR1、H-CDR2及H-CDR3)及輕鏈CDR (L-CDR1、L-CDR-2及L-CDR3)之胺基酸序列分別展示於SEQ ID NO: 39、40及41以及SEQ ID NO: 42、43及44中。CDR序列係根據IMGT ®定義分配。  表2. mAb可變區之胺基酸序列(關於SEQ ID NO: 1至4，參見WO2016/042412專利申請案)
mAb IgG 鏈 SEQ ID NO 胺基酸序列
9006 VH 1 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNFRMNWVKQAPGQGLKWMGWINTYTGEPTYVDDLKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARKGIARAMDYWGQGTTVTVSS
9006 VL 2    DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLDSGNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFGASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDHSYPYTFGQGTKLEIK
9338 VH 3    QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGYINPSSGHIENNQKFKDRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRFAYWGQGTLVTVSS
9338 VL 4 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVSSGYLYWYQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQWSSYPFTFGSGTKLEIK
8902 VH 37 QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTDYGVSWIRQPPGKGLEWIGVIWGGGSTYHNSALKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAKTSYDGYYFDYWGQGTLVTVSS
8902 VL 38 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSINNMHWYQQKPGQAPRLLIYDTSKLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSFNPLTFGQGTKLEIK
表2a. 與8902抗體之可變域重鏈及輕鏈(VH及VL)胺基酸序列對應的核苷酸序列
mAb IgG 鏈 SEQ ID NO 核苷酸序列
8902 VH 49 caggtgcagctgcaggaatctggacctggcctcgtgaagccctcccagaccctgtctctgacctgcaccgtgtccggcttctccctgaccgattacggcgtgtcctggatcagacagccccctggcaagggcctggaatggatcggagtgatctggggcggaggctccacctaccacaactccgccctgaagtccagagtgaccatctccgtggacacctccaagaaccagttcagcctgaagctgtcctccgtgaccgccgctgataccgccgtgtactactgcgccaagacctcctacgacggctactacttcgactactggggccagggcaccctcgtgaccgtgtcatct
8902 VL 50 gagatcgtgctgacccagtctcctgccaccctgtctctgagccctggcgagagagctaccctgtcctgctccgcctcctcctccatcaacaacatgcactggtatcagcagaagcccggccaggcccccagactgctgatctacgacacctccaagctggcctccggcatccctgccagattctccggctctggctctggcaccgactttaccctgaccatctccagcctggaacccgaggacttcgccgtgtactactgccagcagtggtccttcaaccccctgacctttggccagggcaccaagctggaaatcaag
表3. mAb CDR之胺基酸序列(組合) (關於SEQ ID NO: 5至16，參見WO2016/042412專利申請案)
mAb IgG 鏈 SEQ ID NO 胺基酸序列
9006 HCDR1 5 GYTFTNFR
9006 HCDR2 6 INTYTGEP
9006 HCDR3 7 ARKGIARAMDY
9006 LCDR1 8 QSLLDSGNQKNY
9006 LCDR2 9 GAS
9006 LCDR3 10 QNDHSYPYT
9338 HCDR1 11 GYTFTSYW
9338 HCDR2 12 INPSSGHI
9338 HCDR3 13 ARGRFAY
9338 LCDR1 14 SSVSSGY
9338 LCDR2 15 STS
9338 LCDR3 16 HQWSSYPFT
8902 HCDR1 39 GFSLTDYG
8902 HCDR2 40 IWGGGST
8902 HCDR3 41 AKTSYDGYYFDY
8902 LCDR1 42 SSIN
8902 LCDR2 43 DTS
8902 LCDR3 44 QQWSFNPLT
表4. 全長mAb IgG1之胺基酸序列(關於SEQ ID NO: 17至20，參見WO2016/042412專利申請案)
mAb IgG 鏈 SEQ ID NO 胺基酸序列
9006 重鏈 17 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNFRMNWVKQAPGQGLKWMGWINTYTGEPTYVDDLKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARKGIARAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
9006 輕鏈 18 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLDSGNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFGASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDHSYPYTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
9338 重鏈 19 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGYINPSSGHIENNQKFKDRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPG
9338 輕鏈 20 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVSSGYLYWYQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQWSSYPFTFGSGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
8902 重鏈 45 QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTDYGVSWIRQPPGKGLEWIGVIWGGGSTYHNSALKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAKTSYDGYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
8902 輕鏈 46 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSINNMHWYQQKPGQAPRLLIYDTSKLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSFNPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
表5. 全長mAb IgG2之胺基酸序列
mAb IgG 鏈 SEQ ID NO 胺基酸序列
9006 重鏈 21 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNFRMNWVKQAPGQGLKWMGWINTYTGEPTYVDDLKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARKGIARAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
9006 輕鏈 22 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLDSGNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFGASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDHSYPTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
9338 重鏈 23 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGYINPSSGHIENNQKFKDRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPS NTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTC VVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQ DWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKN QVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLT VDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
9338 輕鏈 24 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVSSGYLYWYQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQWSSYPFTFGSGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
8902 重鏈 47 QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTDYGVSWIRQPPGKGLEWIGVIWGGGSTYHNSALKSRVTISVDTSKNQFSLKLSSVTAADTAVYYCAKTSYDGYYFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
8902 輕鏈 48 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSINNMHWYQQKPGQAPRLLIYDTSKLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCQQWSFNPLTFGQGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
在一些實施例中，本文所揭示之ADC之抗體或抗原結合片段可包含上表中所列之任一組重鏈及輕鏈可變域或來自上表中所列之任一組重鏈及輕鏈可變域的一組六個CDR。在一些實施例中，本文所揭示之ADC之抗體或抗原結合片段可包含經保守修飾及/或與上表中所列之序列同源的胺基酸序列，只要ADC保留結合於其目標癌症抗原(例如，其中K D小於1 × 10 - 8M)之能力，且保留本文所揭示之ADC之一或多種功能特性(例如內化、結合於抗原目標，例如在腫瘤或其他癌細胞上表現之抗原的能力等)即可。
在一些實施例中，本文所揭示之ADC之抗體或抗原結合片段進一步包含人類重鏈及輕鏈恆定域或其片段。舉例而言，所述ADC之抗體或抗原結合片段可包含人類IgG重鏈恆定域(諸如IgG1或IgG2)及人類κ或λ輕鏈恆定域。在一些實施例中，所述ADC之抗體或抗原結合片段包含人類免疫球蛋白G次型1 (IgG1)重鏈恆定域與人類Ig κ輕鏈恆定域。在一些實施例中，所述ADC之抗體或抗原結合片段包含人類免疫球蛋白G次型2 (IgG2)重鏈恆定域與人類Ig κ輕鏈恆定域。
在一些實施例中，抗Met抗體或其抗原結合片段包含VH鏈，該VH鏈包含以下胺基酸序列中之至少一者： HCDR1 SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:39； HCDR2 SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:40； HCDR3 SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:41； 及/或VL鏈，該VL鏈包含以下胺基酸序列中之至少一者： LCDR1 SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:42； LCDR2 SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:43； LCDR3 SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:44。
在一些實施例中，抗Met抗體或其抗原結合片段包含VH鏈，該VH鏈包含以下胺基酸序列中之至少一者： HCDR1 SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:11； HCDR2 SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:12； HCDR3 SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:13； 及/或VL鏈，該VL鏈包含以下胺基酸序列中之至少一者： LCDR1 SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:14； LCDR2 SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:15； LCDR3 SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:16。
在一些實施例中，抗Met抗體或其抗原結合片段包含至少兩個、三個、四個或五個選自由以下組成之群的CDR序列：HCDR1 SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:11、HCDR2 SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:12、HCDR3 SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:13、LCDR1 SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:14、LCDR2 SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:15及LCDR3 SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:16。
在一些實施例中，抗Met抗體或其抗原結合片段包含至少兩個、三個、四個或五個選自由以下組成之群的CDR序列：HCDR1 SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:39、HCDR2 SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:40、HCDR3 SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:41、LCDR1 SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:42、LCDR2 SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:43及LCDR3 SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:44。
在一些實施例中，抗Met抗體或其抗原結合片段包含如下三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR：由SEQ ID NO:5組成之重鏈CDR1 (HCDR1)、由SEQ ID NO:6組成之重鏈CDR2 (HCDR2)、由SEQ ID NO:7組成之重鏈CDR3 (HCDR3)；由SEQ ID NO:8組成之輕鏈CDR1 (LCDR1)、由SEQ ID NO:9組成之輕鏈CDR2 (LCDR2)及由SEQ ID NO:10組成之輕鏈CDR3 (LCDR3)。
在一些實施例中，抗Met抗體或其抗原結合片段包含如下三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR：由SEQ ID NO:11組成之重鏈CDR1 (HCDR1)、由SEQ ID NO:12組成之重鏈CDR2 (HCDR2)、由SEQ ID NO:13組成之重鏈CDR3 (HCDR3)；由SEQ ID NO:14組成之輕鏈CDR1 (LCDR1)、由SEQ ID NO:15組成之輕鏈CDR2 (LCDR2)及由SEQ ID NO:16組成之輕鏈CDR3 (LCDR3)。
在一些實施例中，抗Met抗體或其抗原結合片段包含如下三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR：由SEQ ID NO:39組成之重鏈CDR1 (HCDR1)、由SEQ ID NO:40組成之重鏈CDR2 (HCDR2)、由SEQ ID NO:41組成之重鏈CDR3 (HCDR3)；由SEQ ID NO:42組成之輕鏈CDR1 (LCDR1)、由SEQ ID NO:43組成之輕鏈CDR2 (LCDR2)及由SEQ ID NO:44組成之輕鏈CDR3 (LCDR3)。
在一些實施例中，抗Met抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:1之重鏈可變區胺基酸序列及SEQ ID NO:2之輕鏈可變區胺基酸序列。在一些實施例中，抗Met抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:1之重鏈可變區胺基酸序列及SEQ ID NO:2之輕鏈可變區胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，抗Met抗體或其抗原結合片段具有與SEQ ID NO:1至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之重鏈可變區胺基酸序列及/或與SEQ ID NO:2至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之輕鏈可變區胺基酸序列。
在一些實施例中，抗Met抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:3之重鏈可變區胺基酸序列及SEQ ID NO:4之輕鏈可變區胺基酸序列。在一些實施例中，抗Met抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:3之重鏈可變區胺基酸序列及SEQ ID NO:4之輕鏈可變區胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，抗Met抗體或其抗原結合片段具有與SEQ ID NO:3至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之重鏈可變區胺基酸序列及/或與SEQ ID NO:4至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之輕鏈可變區胺基酸序列。
在一些實施例中，抗Met抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:37之重鏈可變區胺基酸序列及SEQ ID NO:38之輕鏈可變區胺基酸序列。在一些實施例中，抗Met抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:37之重鏈可變區胺基酸序列及SEQ ID NO:38之輕鏈可變區胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，抗Met抗體或其抗原結合片段具有與SEQ ID NO:37至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之重鏈可變區胺基酸序列及/或與SEQ ID NO:38至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之輕鏈可變區胺基酸序列。
在一些實施例中，抗Met抗體包含SEQ ID NO:17之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:17至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:18之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:18至少95%一致之序列。在一些實施例中，抗Met抗體包含SEQ ID NO:17之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:18之輕鏈胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，抗Met抗體具有與SEQ ID NO:17至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO:18至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施例中，抗Met抗體包含SEQ ID NO:19之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:19至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:20之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:20至少95%一致之序列。在一些實施例中，抗Met抗體包含SEQ ID NO:19之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:20之輕鏈胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，抗Met抗體具有與SEQ ID NO:19至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO:20至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施例中，抗Met抗體包含SEQ ID NO:45之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:45至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:46之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:46至少95%一致之序列。在一些實施例中，抗Met抗體包含SEQ ID NO:45之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:46之輕鏈胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，抗Met抗體具有與SEQ ID NO:45至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO:46至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施例中，抗Met抗體包含SEQ ID NO:21之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:21至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:22之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:22至少95%一致之序列。在一些實施例中，抗Met抗體包含SEQ ID NO:21之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:22之輕鏈胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，抗Met抗體具有與SEQ ID NO:21至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO:22至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施例中，抗Met抗體包含SEQ ID NO:23之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:23至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:24之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:24至少95%一致之序列。在一些實施例中，抗Met抗體包含SEQ ID NO:23之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:24之輕鏈胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，抗Met抗體具有與SEQ ID NO:23至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO:24至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施例中，抗Met抗體包含SEQ ID NO:47之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:47至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:48之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:48至少95%一致之序列。在一些實施例中，抗Met抗體包含SEQ ID NO:47之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:48之輕鏈胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，抗Met抗體具有與SEQ ID NO:47至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO:48至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施例中，本文所揭示之ADC的抗Met抗體或抗原結合片段為抗Met雙特異性結合分子。
如本文所用，雙特異性結合分子可為雙可變域抗體，亦即其中抗體之兩個臂包含兩個不同可變域，或可呈抗體片段形式，諸如雙特異性Fab片段或雙特異性scFv。若想要在單一多肽鏈上產生二價或多價抗體或若想要產生雙特異性抗體，則此係有用的。例如，可產生特異性結合於人類MET及另一分子之雙特異性或多價抗體。
在一些實施例中，抗Met雙特異性結合分子為表6中所描述之雙特異性抗體。  表6：全長雙特異性9006*9338 KiH IgG1之胺基酸序列(異型：G1m3)  臼包杵(KiH)突變及電荷對突變如下包括於本發明雙特異性序列9006*9338 IgG1中：  HC2：K147E、K213E帶電對(Regula等人, Protein Engineering Design and Selection2018 31(7-8))  HC1：T366W (杵)  HC2：T366S、L368A、Y407V ( 臼)  LC2：E123K、Q124K (Regula等人, Protein Engineering Design and Selection2018 31(7-8))
mAb IgG 鏈 SEQ ID NO 胺基酸序列
9006 重鏈 25 QVQLVQSGSELKKPGASVKVSCKASGYTFTNFRMNWVKQAPGQGLKWMGWINTYTGEPTYVDDLKGRFVFSLDTSVSTAYLQISSLKAEDTAVYYCARKGIARAMDYWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
9006 輕鏈 26 DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLDSGNQKNYLAWYQQKPGQPPKLLIFGASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNDHSYPYTFGQGTKLEIKASVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
9338 重鏈 27 QVQLVQSGAEVKKPGSSVKVSCKASGYTFTSYWMHWVRQAPGQGLEWMGYINPSSGHIENNQKFKDRVTITADKSTSTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGRFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVEDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDERVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
9338 輕鏈 28 EIVLTQSPATLSLSPGERATLSCSASSSVSSGYLYWYQQKPGQAPRLLIYSTSNLASGIPARFSGSGSGTDFTLTISSLEPEDFAVYYCHQWSSYPFTFGSGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDKKLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
在一些實施例中，雙特異性結合分子具有第一抗Met抗體9006及第二抗Met抗體9338或其抗原結合部分之結合特異性。
在一些實施例中，雙特異性結合分子具有第一抗Met抗體9006及第二抗Met抗體8902或其抗原結合部分之結合特異性。
在一些實施例中，雙特異性結合分子具有第一抗Met抗體9338及第二抗Met抗體8902或其抗原結合部分之結合特異性。
在一些實施例中，雙特異性結合分子具有第一抗Met抗體9006及第二抗體或其抗原結合部分之結合特異性。
在一些實施例中，雙特異性結合分子具有第一抗Met抗體9338及第二抗體或其抗原結合部分之結合特異性。
在一些實施例中，雙特異性結合分子具有第一抗Met抗體8902及第二抗體或其抗原結合部分之結合特異性。
在一些實施例中，雙特異性結合分子包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3分別包含SEQ ID NO:5、6、7、8、9及10之胺基酸序列之抗體的抗原結合部分；及HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3分別包含SEQ ID NO:11、12、13、14、15及16之胺基酸序列之抗體的抗原結合部分。
在一些實施例中，雙特異性結合分子包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3分別包含SEQ ID NO:5、6、7、8、9及10之胺基酸序列之抗體的抗原結合部分；及HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3分別包含SEQ ID NO:39、40、41、42、43及44之胺基酸序列之抗體的抗原結合部分。
在一些實施例中，雙特異性結合分子包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3分別包含SEQ ID NO:11、12、13、14、15及16之胺基酸序列之抗體的抗原結合部分；及HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3分別包含SEQ ID NO:39、40、41、42、43及44之胺基酸序列之抗體的抗原結合部分。
在一些實施例中，雙特異性結合分子包含：具有包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之重鏈可變域(VH)及包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列之輕鏈可變域(VL)的第一抗體之抗原結合部分，以及具有包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之重鏈可變域(VH)及包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列之輕鏈可變域(VL)的第二抗體之抗原結合部分。
在一些實施例中，雙特異性結合分子包含：具有包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之重鏈可變域(VH)及包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列之輕鏈可變域(VL)的第一抗體之抗原結合部分，以及具有包含SEQ ID NO:37之胺基酸序列之重鏈可變域(VH)及包含SEQ ID NO:38之胺基酸序列之輕鏈可變域(VL)的第二抗體之抗原結合部分。
在一些實施例中，雙特異性結合分子包含：具有包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之重鏈可變域(VH)及包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列之輕鏈可變域(VL)的第一抗體之抗原結合部分，以及具有包含SEQ ID NO:37之胺基酸序列之重鏈可變域(VH)及包含SEQ ID NO:38之胺基酸序列之輕鏈可變域(VL)的第二抗體之抗原結合部分。
在一些實施例中，雙特異性結合分子包含具有SEQ ID NO:25之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:25至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:26之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:26至少95%一致之序列的第一抗體之抗原結合部分，以及具有SEQ ID NO:27之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:27至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:28之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:28至少95%一致之序列的第二抗體之抗原結合部分。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第一抗體包含SEQ ID NO:25之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:26之輕鏈胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第一抗體具有與SEQ ID NO:25至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO:26至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的輕鏈胺基酸序列。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第二抗體包含SEQ ID NO:27之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:28之輕鏈胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第二抗體具有與SEQ ID NO:27至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO:28至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施例中，雙特異性結合分子包含具有SEQ ID NO:17之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:17至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:18之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:18至少95%一致之序列的第一抗體之抗原結合部分，以及具有SEQ ID NO:45之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:45至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:46之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:46至少95%一致之序列的第二抗體之抗原結合部分。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第一抗體包含SEQ ID NO:17之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:18之輕鏈胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第一抗體具有與SEQ ID NO:17至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO:18至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的輕鏈胺基酸序列。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第二抗體包含SEQ ID NO:45之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:46之輕鏈胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第二抗體具有與SEQ ID NO:45至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO:46至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施例中，雙特異性結合分子包含具有SEQ ID NO:19之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:19至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:20之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:20至少95%一致之序列的第一抗體之抗原結合部分，以及具有SEQ ID NO:45之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:45至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:46之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:46至少95%一致之序列的第二抗體之抗原結合部分。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第一抗體包含SEQ ID NO:19之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:20之輕鏈胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第一抗體具有與SEQ ID NO:19至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO:18至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的輕鏈胺基酸序列。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第二抗體包含SEQ ID NO:45之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:46之輕鏈胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第二抗體具有與SEQ ID NO:45至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO:46至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施例中，雙特異性結合分子包含具有SEQ ID NO:21之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:21至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:22之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:22至少95%一致之序列的第一抗體之抗原結合部分，以及具有SEQ ID NO:23之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:23至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:24之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:24至少95%一致之序列的第二抗體之抗原結合部分。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第一抗體包含SEQ ID NO:21之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:22之輕鏈胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第一抗體具有與SEQ ID NO:21至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO:22至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的輕鏈胺基酸序列。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第二抗體包含SEQ ID NO:23之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:24之輕鏈胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第二抗體具有與SEQ ID NO:23至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO:24至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施例中，雙特異性結合分子包含具有SEQ ID NO:21之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:21至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:22之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:22至少95%一致之序列的第一抗體之抗原結合部分，以及具有SEQ ID NO:47之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:47至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:48之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:48至少95%一致之序列的第二抗體之抗原結合部分。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第一抗體包含SEQ ID NO:21之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:22之輕鏈胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第一抗體具有與SEQ ID NO:21至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO:22至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的輕鏈胺基酸序列。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第二抗體包含SEQ ID NO:47之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:48之輕鏈胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第二抗體具有與SEQ ID NO:47至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO:48至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之輕鏈胺基酸序列。
在一些實施例中，雙特異性結合分子包含具有SEQ ID NO:23之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:23至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:24之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:24至少95%一致之序列的第一抗體之抗原結合部分，以及具有SEQ ID NO:47之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:47至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:48之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:48至少95%一致之序列的第二抗體之抗原結合部分。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第一抗體包含SEQ ID NO:23之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:24之輕鏈胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第一抗體具有與SEQ ID NO:23至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO:24至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致的輕鏈胺基酸序列。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第二抗體包含SEQ ID NO:47之重鏈胺基酸序列及SEQ ID NO:48之輕鏈胺基酸序列，或與所揭示之序列至少95%一致的序列。在一些實施例中，雙特異性結合分子之第二抗體具有與SEQ ID NO:47至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之重鏈胺基酸序列及與SEQ ID NO:48至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之輕鏈胺基酸序列。
若殘基佔據多肽結構中之類似位置，則兩個或更多個多肽中之殘基稱為「相對應」。兩個或更多個多肽中之類似位置可藉由基於胺基酸序列或結構類似性比對多肽序列來確定。熟習此項技術者理解可能有必要在任一序列中引入間隙以產生令人滿意的比對。
在一些實施例中，胺基酸取代具有單一殘基。插入之數量級通常為約1至約20個胺基酸殘基，但顯著更大之插入可為容許的，只要保持生物功能(例如結合至目標抗原)即可。缺失通常在約1至約20個胺基酸殘基之範圍內，但在一些情況下，缺失可能要大得多。取代、缺失、插入或其任何組合可用於獲得最終衍生物或變異體。一般而言，對數個胺基酸進行此等變化以使該分子，特別是抗原結合蛋白之免疫原性及特異性之改變降至最低。然而，在某些情況下，更大的變化可為容許的。保守取代可根據以下如表7所描繪之圖表進行。 表 7原始殘基          例示性取代 Ala                  Ser Arg                  Lys Asn                 Gln、His Asp                 Glu Cys                  Ser Gln                  Asn Glu                  Asp Gly                  Pro His                  Asn、Gln Ile                   Leu、Val Leu                  Ile、Val Lys                  Arg、Gln、Glu Met                  Leu、Ile Phe                  Met、Leu、Tyr Ser                  Thr Thr                  Ser Trp                  Tyr Tyr                  Trp、Phe Val                  Ile、Leu
在ADC中使用變異抗體序列之一些實施例中，儘管亦可視需要選擇變異體以修飾抗原結合蛋白之特徵，但變異體通常展現相同定性生物活性，且將引發相同免疫反應。替代地，該變異體可以設計成使得抗原結合蛋白之生物活性改變。舉例而言，可以改變或移除醣基化位點。
各種抗體可以用於本文所使用之ADC以靶向癌細胞。如下文所示，本文所揭示之ADC中的連接子-有效負載在靶向不同腫瘤抗原之抗體存在下意外地有效。在癌細胞而非健康細胞上表現、或在癌細胞上表現量高於健康細胞之適合抗原，以及針對該等抗原之抗體係此項技術中已知的。針對彼等抗原目標之其他抗體可由熟習此項技術者製備。此等抗體可與本文所揭示之連接子及Bcl-xL抑制劑有效負載一起使用。在一些實施例中，靶向MET之抗體或抗原結合片段提供了特別改善之藥物:抗體比率、聚集水平、穩定性(亦即，活體外及活體內穩定性)、腫瘤靶向(亦即，細胞毒性、效力)、最小化的脫靶殺滅及/或治療功效。改善之治療功效可在活體外或活體內量測，且可包括減慢之腫瘤生長速率及/或減小之腫瘤體積。
在一些實施例中，使用針對不同抗原目標之相同目標或抗體之替代抗體，且提供上文所描述之有利功能特性(例如經改善之穩定性、經改善之腫瘤靶向、經改善之治療功效等)中之至少一些。 連接子
在一些實施例中，ADC中之連接子在細胞外以一種足以在治療上有效之方式穩定。在一些實施例中，連接子在細胞外部穩定以使得ADC在存在於胞外條件中時(例如在轉運或遞送至細胞中之前)保持完整。在ADC之情形下使用之術語「完整」意謂抗體或抗原結合片段保持連接至藥物部分(例如Bcl-xL抑制劑)。
如本文所用，在連接子或包含連接子之ADC之情形下，「穩定」意謂當ADC存在於胞外條件中時，ADC樣品中之不超過20%、不超過約15%、不超過約10%、不超過約5%、不超過約3%或不超過約1% (或其間任何百分比)之連接子經裂解(或在總體ADC在其他方面不完整之情況下)。在一些實施例中，相比於替代性連接子及/或具有替代性連接子及/或Bcl-xL抑制劑有效負載之ADC，本文所揭示之連接子及/或ADC為穩定的。在一些實施例中，本文所揭示之ADC可以保持完整超過約48小時、超過60小時、超過約72小時、超過約84小時或超過約96小時。
可例如藉由在血漿中包括ADC達預先確定之時間段(例如2、4、6、8、16、24、48或72小時)且隨後定量血漿中存在之游離藥物部分之量來確定連接子在細胞外是否穩定。穩定性可使ADC之定位時間能夠靶向癌細胞且防止藥物部分過早釋放，否則可能因無差別地損害正常及癌症組織而降低ADC之治療指數。在一些實施例中，連接子在目標細胞外穩定，且一旦在細胞內部即自ADC釋放藥物部分，以使得藥物可結合於其目標。因此，有效連接子將：(i)維持抗體或抗原結合片段之特異性結合特性；(ii)允許經由穩定連接至抗體或抗原結合片段遞送，例如胞內遞送藥物部分；(iii)保持穩定及完整，直至ADC經轉運或遞送至其目標位點；以及(iv)在裂解或替代性釋放機制之後實現藥物部分之治療效果，例如細胞毒性效果。
連接子可能影響ADC之物理-化學特性。由於許多細胞毒性劑本質上係疏水性的，故將其連接至具有額外疏水性部分之抗體可能引起聚集。ADC聚集體係不溶性的且通常限制藥物負載達到抗體上，由此可能不利地影響ADC之效力。一般而言，生物製品之蛋白質聚集體亦與免疫原性增加相關聯。如下文所示，本文所揭示之連接子使ADC具有較低聚集量及所需量之藥物負載。
連接子可為「可裂解的」或「不可裂解的」(Ducry及Stump (2010) Bioconjugate Chem. 21:5-13)。可裂解連接子經設計以在經歷某些環境因素時，例如在內化至目標細胞中時釋放藥物部分(例如Bcl-xL抑制劑)，而不可裂解連接子一般依賴於抗體或抗原結合片段自身之降解。
如本文所用，術語「烷基」係指僅由碳原子及氫原子組成，不含不飽和度之直鏈或分支鏈烴鏈基團。如本文所用，術語「C 1-C 6烷基」係指僅由碳原子及氫原子組成、不含有不飽和、具有一個至六個碳原子且藉由單鍵連接至分子之其餘部分的直鏈或分支鏈烴鏈基團。「C 1-C 6烷基」之非限制性實例包括甲基(C 1烷基)、乙基(C 2烷基)、1-甲基乙基(C 3烷基)、正丙基(C 3烷基)、異丙基(C 3烷基)、正丁基(C 4烷基)、異丁基(C 4烷基)、二級丁基(C 4烷基)、三級丁基(C 4烷基)、正戊基(C 5烷基)、異戊基(C 5烷基)、新戊基(C 5烷基)及己基(C 6烷基)。
如本文所用，術語「烯基」係指僅由碳原子及氫原子組成，含有至少一個雙鍵之直鏈或分支鏈烴鏈基團。如本文所用，術語「C 2-C 6烯基」係指僅由碳原子及氫原子組成、含有至少一個雙鍵、具有二個至六個碳原子、經單鍵連接至分子之其餘部分的直鏈或分支鏈烴鏈基團。「C 2-C 6烯基」之非限制性實例包括乙烯基(C 2烯基)、丙-1-烯基(C 3烯基)、丁-1-烯基(C 4烯基)、戊-1-烯基(C 5烯基)、戊-4-烯基(C 5烯基)、戊-1,4-二烯基(C 5烯基)、己-1-烯基(C 6烯基)、己-2-烯基(C 6烯基)、己-3-烯基(C 6烯基)、己-1-,4-二烯基(C 6烯基)、己-1-,5-二烯基(C 6烯基)及己-2-,4-二烯基(C 6烯基)。如本文所用，術語「C 2-C 3烯基」係指僅由碳原子及氫原子組成、含有至少一個雙鍵、具有兩個至三個碳原子、藉由單鍵連接至分子之其餘部分的直鏈或分支鏈烴鏈基團。「C 2-C 3烯基」之非限制性實例包括乙烯基(C 2烯基)及丙-1-烯基(C 3烯基)。
如本文所用，術語「伸烷基」係指僅由碳原子及氫原子組成且不含不飽和度之二價直鏈或分支鏈烴鏈基團。如本文所用，術語「C 1-C 6伸烷基」係指僅由碳原子及氫原子組成、不含不飽和度、具有一個至六個碳原子的二價直鏈或分支鏈烴鏈基團。「C 1-C 6伸烷基」之非限制性實例包括亞甲基(C 1伸烷基)、伸乙基(C 2伸烷基)、1-甲基伸乙基(C 3伸烷基)、伸正丙基(C 3伸烷基)、伸異丙基(C 3伸烷基)、伸正丁基(C 4伸烷基)、異丁烯(C 4伸烷基)、伸二級丁基(C 4伸烷基)、伸三級丁基(C 4伸烷基)、伸正戊基(C 5伸烷基)、伸異戊基(C 5伸烷基)、伸新戊基(C 5伸烷基)及伸己基(C 6伸烷基)。
如本文所用，術語「伸烯基」係指僅由碳原子及氫原子組成且含有至少一個雙鍵之二價直鏈或分支鏈烴鏈基團。如本文所用，術語「C 2-C 6伸烯基」係指僅由碳原子及氫原子組成、含有至少一個雙鍵且具有二個至六個碳原子的二價直鏈或分支鏈烴鏈基團基團。「C 2-C 6伸烯基」之非限制性實例包括伸乙烯基(C 2伸烯基)、伸丙-1-烯基(C 3伸烯基)、伸丁-1-烯基(C 4伸烯基)、伸戊-1-烯基(C 5伸烯基)、伸戊-4-烯基(C 5伸烯基)、伸戊-1,4-二烯基(C 5伸烯基)、伸己-1-烯基(C 6伸烯基)、伸己-2-烯基(C 6伸烯基)、伸己-3-烯基(C 6伸烯基)、伸己-1-,4-二烯基(C 6伸烯基)、伸己-1-,5-二烯基(C 6伸烯基)及伸己-2-,4-二烯基(C 6伸烯基)。如本文所用，術語「C 2-C 6伸烯基」係指僅由碳原子及氫原子組成、含有至少一個雙鍵且具有二至三個碳原子之二價直鏈或分支鏈烴鏈基團。「C 2-C 3伸烯基」之非限制性實例包括伸乙烯基(C 2伸烯基)及伸丙-1-烯基(C 3伸烯基)。
如本文所用，術語「環烷基」或「C 3-C 8環烷基」係指飽和、單環、稠合雙環、稠合三環或橋接多環環系統。稠合雙環或橋接多環系統之非限制性實例包括雙環[1.1.1]戊烷、雙環[2.1.1]己烷、雙環[2.2.1]庚烷、雙環[3.1.1]庚烷、雙環[3.2.1]辛烷、雙環[2.2.2]辛烷及金剛烷基。單環C 3-C 8環烷基之非限制性實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基及環辛基。
如本文所用，術語「芳基」係指苯基、萘基、聯苯基或茚基。
如本文所用，術語「雜芳基」係指任何由5至10個環成員構成之單環基或雙環基團，其具有至少一個芳族部分且含有1至4個選自氧、硫及氮(包括四級氮)之雜原子。
如本文所用，術語「環烷基」係指任何含有3至10個環成員之單環或雙環非芳族碳環基，其可包括稠環、橋環或螺環系統。稠合雙環或橋接環系統之非限制性實例包括雙環[1.1.1]戊烷、雙環[2.1.1]己烷、雙環[2.2.1]庚烷、雙環[3.1.1]庚烷、雙環[3.2.1]辛烷及雙環[2.2.2]辛烷。單環C 3-C 8環烷基之非限制性實例包括環丙基、環丁基、環戊基、環己基、環庚基及環辛基。
術語「雜環烷基」意謂任何由3至10個環成員構成且含有1至3個選自氧、硫、SO、SO 2及氮之雜原子的單環或雙環非芳族碳環基，應理解，雙環基團可為稠合或螺類型。C 3-C 8雜環烷基係指具有3至8個環碳原子之雜環烷基。雜環烷基可具有4至10個環成員。
術語伸雜芳基、伸環烷基、伸雜環烷基意謂二價雜芳基、環烷基及雜環烷基。
如本文所用，術語「鹵烷基」係指經一或多個鹵基代替氫沿烴鏈取代之直鏈或分支鏈烷基鏈。適用於鹵烷基中之取代之鹵基的實例包括氟、溴、氯及碘。鹵烷基可包括經多種鹵基代替氫在烷基鏈中進行之取代，其中該等鹵基可在烷基鏈中連接至同一碳或連接至另一碳。
如本文所用，烷基、烯基、炔基、烷氧基、胺基、芳基、雜芳基、環烷基及雜環烷基可視情況經1至4個選自以下之基團取代：視情況經取代之直鏈或分支鏈(C 1-C 6)烷基、視情況經取代之直鏈或分支鏈(C 2-C 6)烯基、視情況經取代之直鏈或分支鏈(C 2-C 6)炔基、視情況經取代之直鏈或分支鏈(C 1-C 6)烷氧基、視情況經取代之(C 1-C 6)烷基-S-、羥基、側氧基(或適當時N-氧化物)、硝基、氰基、-C(O)-OR 0'、-O-C(O)-R 0'、-C(O)-NR 0'R 0''、-NR 0'R 0''、-(C=NR 0')-OR 0''、直鏈或分支鏈(C 1-C 6)鹵烷基、三氟甲氧基或鹵素，其中R 0'及R 0''各自獨立地為氫原子或視情況經取代之直鏈或分支鏈(C 1-C 6)烷基，且其中直鏈或分支鏈(C 1-C 6)烷基之碳原子中之一或多者視情況經氘化。
如本文所用，術語「聚氧伸乙基」、「聚乙二醇」或「PEG」係指由(OCH 2CH 2)基團構成之直鏈、分支鏈或星形構型。在某些實施例中，聚伸乙基或PEG基團為-(OCH 2CH 2) t*-，其中t為1-40或4-40，且其中「-」指示指向之自我分解型間隔子之末端，且「*-」指示連接至末端基團R'之點，其中R'為OH、OCH 3或OCH 2CH 2C(=O)OH。在其他實施例中，聚伸乙基或PEG基團為-(CH 2CH 2O) t*-，其中t為1-40或4-40，且其中「-」指示指向自我分解型間隔子之末端，且「*-」指示連接至末端基團R''之點，其中R''為H、CH 3或CH 2CH 2C(=O)OH。舉例而言，如本文所用之術語「PEG12」意謂t為12。
如本文所用，術語「聚伸烷二醇」係指由(O(CH 2) m) n基團構成之直鏈、分支鏈或星形構型。在某些實施例中，聚伸乙基或PEG基團為-(O(CH 2) m) t*-，其中m為1-10，t為1-40或4-40，且其中「-」指示指向之自我分解型間隔子之末端，且「*-」指示連接至末端基團R'之點，其中R'為OH、OCH 3或OCH 2CH 2C(=O)OH。在其他實施例中，聚伸乙基或PEG基團為-((CH 2) mO) t*-，其中m為1-10，t為1-40或4-40，且其中「-」指示指向自我分解型間隔子之末端，且「*-」指示連接至末端基團R''之點，其中R''為H、CH 3或CH 2CH 2C(=O)OH。
如本文所用，術語「反應性基團」為能夠與抗體、抗體片段之官能基或連接至抗體或抗體片段之另一反應性基團形成共價鍵的官能基。此類官能基之非限制性實例包括本文所提供之表8之反應性基團。
如本文所用，術語「連接基團」或「偶合基團」係指將橋接間隔子連接至抗體或其片段之二價部分。連接或偶合基團為由反應物基團與抗體或其片段上之官能基之間的反應形成之二價部分。此類二價部分之非限制性實例包括本文所提供之表8及表9中給出之二價化學部分。
如本文所用，術語「橋接間隔子」係指共價連接在一起以形成二價部分之一或多種連接子組分，該二價部分將二價肽間隔子連接至反應性基團，將二價肽空間連接至偶合基團，或將連接基團連接至至少一個可裂解基團。在某些實施例中，「橋接間隔子」包含經由醯胺鍵連接至二價肽間隔子之N端的羧基。
如本文所用，術語「間隔子部分」係指共價連接在一起以形成將自我分解型間隔子連接至親水性部分之部分的一或多種連接子組分。
如本文所用，術語「二價肽間隔子」係指包含共價連接在一起以形成將橋接間隔子連接至自我分解型間隔子之部分的一或多個胺基酸殘基的二價連接子。一或多個胺基酸殘基可為選自以下之胺基酸的殘基：丙胺酸(Ala)、半胱胺酸(Cys)、天冬胺酸(Asp)、麩胺酸(Glu)、苯丙胺酸(Phe)、甘胺酸(Gly)、組胺酸(His)、異白胺酸(Ile)、離胺酸(Lys)、白胺酸(Leu)、甲硫胺酸(Met)、天冬醯胺酸(Asn)、脯胺酸(Pro)、麩醯胺酸(Gln)、精胺酸(Arg)、絲胺酸(Ser)、蘇胺酸(Thr)、纈胺酸(Val)、色胺酸(Trp)、酪胺酸(Tyr)、瓜胺酸(Cit)、正纈胺酸(Nva)、正白胺酸(Nle)、硒半胱胺酸(Sec)、吡咯離胺酸(Pyl)、高絲胺酸、高半胱胺酸及去甲基吡咯離胺酸。
在某些實施例中，「二價肽間隔子」為2至四個胺基酸殘基之組合，其中各殘基獨立地選自選自以下之胺基酸的殘基：丙胺酸(Ala)、半胱胺酸(Cys)、天冬胺酸(Asp)、麩胺酸(Glu)、苯丙胺酸(Phe)、甘胺酸(Gly)、組胺酸(His)、異白胺酸(Ile)、離胺酸(Lys)、白胺酸(Leu)、甲硫胺酸(Met)、天冬醯胺酸(Asn)、脯胺酸(Pro)、麩醯胺酸(Gln)、精胺酸(Arg)、絲胺酸(Ser)、蘇胺酸(Thr)、纈胺酸(Val)、色胺酸(Trp)、酪胺酸(Tyr)、瓜胺酸(Cit)、正纈胺酸(Nva)、正白胺酸(Nle)、硒半胱胺酸(Sec)、吡咯離胺酸(Pyl)、高絲胺酸、高半胱胺酸及去甲基吡咯離胺酸，例如-ValCit*；-CitVal*；-AlaAla*；-AlaCit*；-CitAla*；-AsnCit*；-CitAsn*；-CitCit*；-ValGlu*；-GluVal*；-SerCit*；-CitSer*；-LysCit*；-CitLys*；-AspCit*；-CitAsp*；-AlaVal*；-ValAla*；-PheAla*；-AlaPhe*；-PheLys*；-LysPhe*；-ValLys*；-LysVal*；-AlaLys*；-LysAla*；-PheCit*；-CitPhe*；-LeuCit*；-CitLeu*；-IleCit*；-CitIle*；-PheArg*；-ArgPhe*；-CitTrp*；-TrpCit*；-PhePheLys*；-LysPhePhe*；-DPhePheLys*；-DLysPhePhe*；-GlyPheLys*；-LysPheGly*；-GlyPheLeuGly- [SEQ ID NO:29]；-GlyLeuPheGly- [SEQ ID NO:30]；-AlaLeuAlaLeu- [SEQ ID NO:31]、-GlyGlyGly*；-GlyGlyGlyGly- [SEQ ID NO:32]；-GlyPheValGly- [SEQ ID NO:33]；及-GlyValPheGly- [SEQ ID NO:34]，其中「-」指示連接至橋接間隔子之點，且「*」指示連接至自我分解型間隔子之點。
如本文所用，術語「連接子組分」係指作為連接子之一部分的化學部分。連接子組分之實例包括：伸烷基：-(CH 2) n-，其可為直鏈或分支鏈(其中在此情況下，n為1-18)；伸烯基；伸炔基；烯基；炔基；乙二醇單元：-OCH 2CH 2-或-CH 2CH 2O-；聚乙二醇單元：(-CH 2CH 2O-) x(其中在此情況下，x為2-20)；-O-；-S-；羰基：-C(=O)；酯：C(=O)-O或O-C(=O)；碳酸根：-OC(=O)O-；胺：-NH-；三級胺；醯胺：-C(=O)-NH-、-NH-C(=O)-或-C(=O)N(C 1- 6烷基)；胺基甲酸酯：-OC(=O)NH-或-NHC(=O)O；脲：-NHC(=O)NH；磺醯胺：-S(O) 2NH-或-NHS(O) 2；醚：-CH 2O-或-OCH 2；經一或多個獨立地選自以下之基團取代之伸烷基：羧基、磺酸根、羥基、胺、胺基酸、醣、磷酸根及膦酸根)；經一或多個獨立地選自以下之基團取代之伸烯基：羧基、磺酸根、羥基、胺、胺基酸、醣、磷酸根及膦酸根)；經一或多個獨立地選自以下之基團取代之伸炔基：羧基、磺酸根、羥基、胺、胺基酸、醣、磷酸根及膦酸根)；C 1-C 10伸烷基，其中一或多個亞甲基經一或多個-S-、-NH-或-O-部分置換；具有兩個可用連接點之環系統，諸如選自以下之二價環：苯基(包括1,2-、1,3-及1,4-二取代之苯基)、C 5-C 6雜芳基、C 3-C 8環烷基(包括1,1-二取代之環丙基、環丁基、環戊基、或環己基，及1,4-二取代之環己基)及C 4-C 8雜環烷基；選自以下之胺基酸之殘基：丙胺酸(Ala)、半胱胺酸(Cys)、天冬胺酸(Asp)、麩胺酸(Glu)、苯丙胺酸(Phe)、甘胺酸(Gly)、組胺酸(His)、異白胺酸(Ile)、離胺酸(Lys)、白胺酸(Leu)、甲硫胺酸(Met)、天冬醯胺(Asn)、脯胺酸(Pro)、麩醯胺酸(Gln)、精胺酸(Arg)、絲胺酸(Ser)、蘇胺酸(Thr)、纈胺酸(Val)、色胺酸(Trp)、酪胺酸(Tyr)、瓜胺酸(Cit)、正纈胺酸(Nva)、正白胺酸(Nle)、硒半胱胺酸(Sec)、吡咯離胺酸(Pyl)、高絲胺酸、高半胱胺酸及去甲基吡咯離胺酸；2個或更多個胺基酸殘基之組合，其中各殘基獨立地選自選自以下之胺基酸之殘基：丙胺酸(Ala)、半胱胺酸(Cys)、天冬胺酸(Asp)、麩胺酸(Glu)、苯丙胺酸(Phe)、甘胺酸(Gly)、組胺酸(His)、異白胺酸(Ile)、離胺酸(Lys)、白胺酸(Leu)、甲硫胺酸(Met)、天冬醯胺(Asn)、脯胺酸(Pro)、麩醯胺酸(Gln)、精胺酸(Arg)、絲胺酸(Ser)、蘇胺酸(Thr)、纈胺酸(Val)、色胺酸(Trp)、酪胺酸(Tyr)、瓜胺酸(Cit)、正纈胺酸(Nva)、正白胺酸(Nle)、硒半胱胺酸(Sec)、吡咯離胺酸(Pyl)、高絲胺酸、高半胱胺酸及去甲基吡咯離胺酸，例如Val-Cit；Cit-Val；Ala-Ala；Ala-Cit；Cit-Ala；Asn-Cit；Cit-Asn；Cit-Cit；Val-Glu；Glu-Val；Ser-Cit；Cit-Ser；Lys-Cit；Cit-Lys；Asp-Cit；Cit-Asp；Ala-Val；Val-Ala；Phe-Lys；Lys-Phe；Val-Lys；Lys-Val；Ala-Lys；Lys-Ala；Phe-Cit；Cit-Phe；Leu-Cit；Cit-Leu；Ile-Cit；Cit-Ile；Phe-Arg；Arg-Phe；Cit-Trp；及Trp-Cit；及自我分解型間隔子，其中該自我分解型間隔子包含一或多個保護(觸發)基團，其對酸誘導之裂解、肽酶誘導之裂解、酯酶誘導之裂解、糖苷酶誘導之裂解、磷酸二酯酶誘導之裂解、磷酸酶誘導之裂解、蛋白酶誘導之裂解、脂肪酶誘導之裂解或二硫鍵裂解敏感。
該等自我分解型間隔子之非限制性實例包括： ，其中：  PG為保護(觸發)基團； X a為O、NH或S； X b為O、NH、NCH 3或S； X c為O或NH； Y a為CH 2、CH 2O或CH 2NH； Y b為CH 2、O或NH； Y c為鍵、CH 2 、O或NH，且 LG為脫離基，諸如本發明之連接子-藥物基團之藥物部分(D)。 此類自我分解型間隔子之額外非限制性實例描述於Angew. Chem. Int. Ed. 2015, 54, 7492 - 7509中。
另外，連接子組分可為易於由兩個反應性基團之間的反應形成之化學部分。此類化學部分之非限制性實例在表8中給出。 表 8
反應性基團 1 (RG1) 反應性基團2 (RG2) 化學部分
硫醇 硫醇 -S-S-
硫醇 順丁烯二醯亞胺
硫醇 鹵乙醯胺
疊氮化物 炔烴
疊氮化物 三芳基膦
疊氮化物 環辛炔
疊氮化物 氧雜降冰片二烯
三芳基膦 疊氮化物
氧雜降冰片二烯 疊氮化物
炔烴 疊氮化物
環辛炔 疊氮化物
環辛烯 二芳基四𠯤
二芳基四𠯤 環辛烯
單芳基四𠯤 降冰片烯
降冰片烯 單芳基四𠯤
醛 羥胺
醛 醯肼
醛 NH 2-NH-C(=O)-
酮 羥胺
酮 醯肼
酮 NH 2-NH-C(=O)-
羥胺 醛
羥胺 酮
醯肼 醛
醯肼 酮
NH 2-NH-C(=O)- 醛
NH 2-NH-C(=O)- 酮
鹵乙醯胺 硫醇
順丁烯二醯亞胺 硫醇
乙烯基碸 硫醇
硫醇 乙烯基碸
氮丙啶 硫醇
硫醇 氮丙啶
羥胺
羥胺
-NH 2、 醯胺
-NH 2, 醯胺
CoA或CoA類似物 絲胺酸殘基
吡啶基二硫醇 硫醇 二硫鍵
其中：表8中之R 32為H、C 1 - 4烷基、苯基、嘧啶或吡啶；表8中之R 35為H、C 1 - 6烷基、苯基或經1至3個-OH基團取代之C 1 - 4烷基；表8中之各R 7獨立地選自H、C 1 - 6烷基、氟、經-C(=O)OH取代之苯甲氧基、經-C(=O)OH取代之苯甲基、經-C(=O)OH取代之C 1 -4烷氧基及經-C(=O)OH取代之C 1 - 4烷基；表8中之R 37獨立地選自H、苯基及吡啶；表8中之q為0、1、2或3；表8中之R 8及R 13為H或甲基；且表8中之R 9及R 14為H、-CH 3或苯基；表8中之R為H或任何適合之取代基；且表8中之R 50為H。
另外，連接子組分可為下表9中所列之基團。 表 9.
各R 7獨立地選自H、C 1 -6烷基、氟、經-C(=O)OH取代之苯甲氧基、經-C(=O)OH取代之苯甲基、經-C(=O)OH取代之C 1 -4烷氧基及經-C(=O)OH取代之C 1 -4烷基； 各R 12獨立地選自H及C 1 -6烷基 R 8為H或甲基； R 9為H、-CH 3或苯基； 各R 25獨立地選自H或C 1 -4烷基； 各R 18獨立地選自C 1-C 6烷基、經疊氮基取代之C 1-C 6烷基及經1至5個羥基取代之C 1-C 6烷基； q為0、1、2或3； l為1、2、3、4、5或6； R 26為 R 32獨立地選自H、C 1 -4烷基、苯基、嘧啶及吡啶； R 33獨立地選自 ； R 34獨立地選自H、C 1 -4烷基及C 1 -6鹵烷基，且 R aa為胺基酸側鏈。
如本文所用，當說明化合物之部分結構時，波浪線( )指示部分結構與分子之其餘部分的連接點。
如本文所用，術語「自我分解型間隔子」及「自我分解型基團」係指包含一或多個觸發基團(TG)之部分，該等觸發基團藉由酸誘導之裂解、肽酶誘導之裂解、酯酶誘導之裂解、醣苷酶誘導之裂解、磷酸二酯酶誘導之裂解、磷酸酶誘導之裂解、蛋白酶誘導之裂解、脂肪酶誘導之裂解或二硫鍵裂解活化，且在活化之後移除保護基，由此產生引起在時間上依序釋放脫離基的分解反應之級聯。反應之該級聯可為但不限於1,4-消除反應、1,6-消除反應或1,8-消除反應。
自我分解型間隔子或基團之非限制性實例包括： ，其中此類基團可視情況經取代，且 其中： TG為觸發基團； X a為O、NH或S； X b為O、NH、NCH 3或S； X c為O或NH； Y a為CH 2、CH 2O或CH 2NH； Y b為CH 2、O或NH； Y c為鍵、CH 2、O或NH，且 LG為脫離基，諸如本發明之連接子-藥物基團之藥物部分(D)。 自我分解型間隔子之額外非限制性實例描述於Angew. Chem. Int. Ed. 2015, 54, 7492 - 7509中。 在某一實施例中，自我分解型間隔子為具有以下結構之部分： ，其中Lp為酶促可裂解二價肽間隔子，且A、D、L 3及R 2如本文所定義。 在較佳實施例中，自我分解型間隔子為具有以下結構之部分： ，其中Lp為酶促可裂解二價肽間隔子，且D、L 3及R 2如本文所定義。在一些實施例中，D為含有四級銨化三級胺之Bcl-xL抑制劑。 在其他較佳實施例中，自我分解型間隔子為具有以下結構之部分： ，其中Lp為酶促可裂解二價肽間隔子，且D、L 3及R 2如本文所定義。 如本文所用，術語「親水性部分」係指具有親水性特性之部分，其在藥物部分(D)連接至本發明之連接子基團時提高藥物部分(D)之水溶性。此類親水性基團之實例包括但不限於聚乙二醇、聚伸烷基二醇、糖、寡醣、多肽、經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基。 藥物部分
在一些實施例中，中間物(其為連接部分之前驅體)與藥物部分(例如Bcl-xL抑制劑)在適當條件下反應。在一些實施例中，在藥物及/或中間物或連接子上使用反應性基團。藥物與中間物或衍生藥物(藥物加連接子)之間的反應產物隨後在促進藥物及中間物或衍生藥物與抗體或抗原結合片段之結合的條件下與抗體或抗原結合片段反應。替代地，中間物或連接子可首先與抗體或抗原結合片段或衍生抗體或抗原結合片段反應，且隨後與該藥物或衍生藥物反應。
多種不同反應可用於將藥物部分及/或連接子部分共價連接至抗體或抗原結合片段。此通常係藉由使抗體或抗原結合片段之一或多個胺基酸殘基，包括離胺酸之胺基、麩胺酸及天冬胺酸之游離羧酸基、半胱胺酸之硫氫基及芳族胺基酸之各種部分反應來實現。舉例而言，非特異性共價連接可以使用碳化二亞胺反應物進行以將藥物部分上之羧基(或胺基)連接至抗體或抗原結合片段上之胺基(或羧基)。另外，亦可使用雙官能試劑，諸如二醛或醯亞胺酯將藥物部分上之胺基連接至抗體或抗原結合片段上之胺基。希夫鹼(Schiff base)反應亦可用於連接藥物(例如Bcl-xL抑制劑)與結合劑。此方法涉及含有二醇或羥基之藥物的過碘酸鹽氧化，由此形成隨後與結合劑反應的醛。連接係經由與結合劑之胺基形成希夫鹼而發生。亦可使用異硫氰酸酯作為偶合劑，用於將藥物共價連接至結合劑。其他技術係熟習此項技術者所知的且在本發明之範疇內。可使用此項技術中已知之多種化學物質產生且連接至抗體或抗原結合片段之藥物部分之實例包括Bcl-xL抑制劑，例如本文所描述及例示之Bcl-xL抑制劑。
適合之藥物部分可包含式(I)、(IA)、(IB)、(IC)、(II)、(IIA)、(IIB)或(IIC)之化合物或其鏡像異構物、非鏡像異構物及/或與醫藥學上可接受之酸或鹼的加成鹽。另外，藥物部分可包含本文所描述之Bcl-xL抑制劑(D)之任何化合物。
在一些實施例中，藥物部分(D)包含選自表A2之式。
在一些實施例中，藥物部分(D)包含此項技術中已知之Bcl-xL抑制劑，例如ABT-737及ABT-263。
在一些實施例中，藥物部分(D)包含選自以下之Bcl-xL抑制劑： 。
在一些實施例中，連接子-藥物(或「連接子-有效負載」)部分-(L-D)可包含表B中之化合物或前述任一者之鏡像異構物、非鏡像異構物、氘化衍生物及/或醫藥學上可接受之鹽。 藥物負載
藥物負載係由p表示，且在本文中亦稱為藥物與抗體比率(DAR)。藥物負載可在每個抗體或抗原結合片段1至16個藥物部分之範圍內。在一些實施例中， p為1至16之整數。在一些實施例中， p為1至16、1至15、1至14、1至13、1至12、1至11、1至10、1至9、1至8、1至7、1至6、1至5、1至4、1至3或1至2之整數。在一些實施例中， p為2至10、2至9、2至8、2至7、2至6、2至5、2至4或2至3之整數。在一些實施例中， p為1至16之整數。在一些實施例中， p為1至8之整數。在一些實施例中， p為1至5之整數。在一些實施例中， p為2至4之整數。在一些實施例中， p為1、2、3、4、5、6、7或8。在一些實施例中， p為2。在一些實施例中， p為4。
藥物負載可受抗體或抗原結合片段上連接位點之數目的限制。在一些實施例中，ADC之連接子部分(L)經由抗體或抗原結合片段上之一或多個胺基酸殘基上之化學活性基團連接至抗體或抗原結合片段。舉例而言，連接子可經由游離胺基、亞胺基、羥基、硫醇或羧基連接至抗體或抗原結合片段(例如N端或C端、一或多個離胺酸殘基之ε胺基、一或多個麩胺酸或天冬胺酸殘基之游離羧酸基、或一或多個半胱胺酸殘基之硫氫基)。與連接子連接之位點可為抗體或抗原結合片段之胺基酸序列中之天然殘基，或其可例如藉由DNA重組技術(例如藉由將半胱胺酸殘基引入胺基酸序列中)或藉由蛋白質生物化學(例如藉由還原、pH調節或水解)引入抗體或抗原結合片段中。
在一些實施例中，可結合至抗體或抗原結合片段之藥物部分的數目受游離半胱胺酸殘基之數目限制。舉例而言，在連接係半胱胺酸硫醇基之情況下，抗體可具有僅一個或數個半胱胺酸硫醇基，或可具有僅一個或數個具有足夠反應性之硫醇基，藉由該等硫醇基可連接連接子。一般而言，抗體不含有許多可連接至藥物部分的游離及反應性半胱胺酸硫氫基。實際上，抗體中之大部分半胱胺酸硫醇殘基參與鏈間或鏈內二硫鍵。因此，在一些實施例中，結合至半胱胺酸可能需要至少部分還原抗體。連接子-毒素與抗體之過量連接可藉由還原可用於形成二硫鍵之半胱胺酸殘基使抗體不穩定。因此，最佳的藥物:抗體比率應當增加ADC之效力(藉由增加每個抗體連接之藥物部分之數目)，同時不會使抗體或抗原結合片段不穩定。在一些實施例中，最佳比率可為2、4、6或8。在一些實施例中，最佳比率可為2或4。
在一些實施例中，使抗體或抗原結合片段在結合之前暴露於還原條件，以便產生一或多個游離半胱胺酸殘基。在一些實施例中，抗體可在部分或總體還原條件下用還原劑，諸如二硫蘇糖醇(DTT)或參(2-羧基乙基)膦(TCEP)還原，以產生反應性半胱胺酸硫醇基。可經由用受限莫耳當量之TCEP進行部分還原來生成未經配對之半胱胺酸，該受限莫耳當量之TCEP可還原連接輕鏈及重鏈(一對/個H-L配對)及鉸鏈區中之兩個重鏈(在人類IgG1之情況下，兩對/個H-H配對)的鏈間二硫鍵，但使鏈內二硫鍵完整(Stefano等人(2013) Methods Mol Biol. 1045:145-71)。在實施例中，藉由例如採用工作電極施加交替的還原及氧化電壓，以電化學方式還原抗體內之二硫鍵。此方法可允許將二硫鍵還原與分析裝置(例如電化學偵測裝置、NMR光譜儀或質譜儀)或化學分離裝置(例如液體層析儀(例如HPLC)或電泳裝置(參見例如US 2014/0069822))之在線偶合。在一些實施例中，抗體經受變性條件以顯露諸如半胱胺酸之胺基酸殘基上之反應性親核基團。
ADC之藥物負載可藉由不同方式控制，例如：(i)限制藥物-連接子中間物或連接子試劑相對於抗體之莫耳過量；(ii)限制結合反應時間或溫度；(iii)用於半胱胺酸硫醇修飾之部分或限制性還原條件；及/或(iv)利用重組技術工程改造抗體之胺基酸序列以修飾半胱胺酸殘基之數目及位置，由此控制連接子-藥物連接之數目及/或位置。
在一些實施例中，將游離半胱胺酸殘基引入抗體或抗原結合片段之胺基酸序列中。舉例而言，可製備出半胱胺酸工程改造之抗體，其中親本抗體之一或多個胺基酸經半胱胺酸胺基酸置換。任何形式之抗體均可經如此工程改造，亦即突變。舉例而言，親本Fab抗體片段可經工程改造以形成經半胱胺酸工程改造之Fab，稱為「ThioFab」。類似地，親本單株抗體可經工程改造以形成「ThioMab」。單位點突變在ThioFab中產生單一工程改造之半胱胺酸殘基，而歸因於IgG抗體之二聚體性質，單位點突變在ThioMab中產生兩個工程改造之半胱胺酸殘基。編碼親本多肽之胺基酸序列變異體之DNA可藉由此項技術中已知之各種方法來製備(參見例如WO 2006/034488中所述之方法)。此等方法包括但不限於藉由先前製備之編碼該多肽之DNA的定點(或寡核苷酸介導之)突變誘發、PCR突變誘發及卡匣突變誘發製備。重組抗體變異體亦可藉由限制性片段操縱或藉由重疊延伸PCR，利用合成寡核苷酸構築。式(1)之ADC包括但不限於具有1、2、3或4個經工程改造之半胱胺酸胺基酸之抗體(Lyon等人(2012) Methods Enzymol. 502:123-38)。在一些實施例中，一或多個游離半胱胺酸殘基已存在於抗體或抗原結合片段中，無需使用工程改造，在此情況下，可使用現有游離半胱胺酸殘基將抗體或抗原結合片段結合至藥物部分。
在超過一個親核性基團與藥物-連接子中間物或連接子部分試劑反應，隨後與藥物部分試劑反應之情況下，在包含抗體或抗原結合片段及連接子部分之多個複本的反應混合物中，隨後所得產物可為ADC化合物之混合物，其具有一或多個藥物部分連接至該混合物中抗體或抗原結合片段之各複本的分佈。在一些實施例中，由結合反應得到之ADC之混合物中的藥物負載在每個抗體或抗原結合片段連接1至16個藥物部分之範圍內。每個抗體或抗原結合片段之藥物部分之平均數目(亦即，平均藥物負載或平均p)可以藉由此項技術中已知之任何習知方法，例如藉由質譜分析(例如液相層析-質譜法(LC-MS))及/或高效液相層析(例如HIC-HPLC)計算。在一些實施例中，每個抗體或抗原結合片段之藥物部分之平均數目係藉由液相層析-質譜法(LC-MS)測定。在一些實施例中，每個抗體或抗原結合片段之藥物部分之平均數目為約1.5至約3.5、約2.5至約4.5、約3.5至約5.5、約4.5至約6.5、約5.5至約7.5、約6.5至約8.5或約7.5至約9.5。在一些實施例中，每個抗體或抗原結合片段之藥物部分之平均數目為約2至約4、約3至約5、約4至約6、約5至約7、約6至約8、約7至約9、約2至約8或約4至約8。
在一些實施例中，每個抗體或抗原結合片段之藥物部分之平均數目為約2。在一些實施例中，每個抗體或抗原結合片段之藥物部分之平均數目為約1.5、約1.6、約1.7、約1.8、約1.9、約2、約2.1、約2.2、約2.3、約2.4或約2.5。在一些實施例中，每個抗體或抗原結合片段之藥物部分之平均數目為2。
在一些實施例中，每個抗體或抗原結合片段之藥物部分之平均數目為約4。在一些實施例中，每個抗體或抗原結合片段之藥物部分之平均數目為約3.5、約3.6、約3.7、約3.8、約3.9、約4、約4.1、約4.2、約4.3、約4.4或約4.5。在一些實施例中，每個抗體或抗原結合片段之藥物部分之平均數目為4。
在一些實施例中，如關於每個抗體或抗原結合片段之藥物部分之平均數目所使用之術語「約」意謂加或減20%、15%、10%、5%或1%。在一個實施例中，術語「約」係指多於或少於指定值之10%的值範圍。在另一實施例中，術語「約」係指多於或少於指定數值之5%的數值範圍。在另一實施例中，術語「約」係指多於或少於指定數值之1%的數值範圍。
個別ADC化合物或「物種」可在混合物中藉由質譜分析鑑別且藉由UPLC或HPLC，例如疏水性相互作用層析(HIC-HPLC)分離。在一些實施例中，具有單一負載值的均質或接近均質之ADC產物可例如藉由電泳或層析法自結合混合物分離。
在一些實施例中，較高藥物負載(例如p ＞ 16)可能引起某些抗體-藥物結合物之聚集、不可溶性、毒性或細胞滲透性損失。較高的藥物負載亦可不利地影響某些ADC之藥物動力學(例如清除率)。在一些實施例中，較低藥物負載(例如p ＜ 2)可能降低某些ADC針對表現目標之細胞之效力。在一些實施例中，本發明之ADC之藥物負載在約2至約16；約2至約10；約2至約8；約2至約6；約2至約5；約3至約5；約2至約4；或約4至約8之範圍內。
在一些實施例中，例如使用抗體或抗原結合片段上之鏈內二硫基之部分還原來達成約2之藥物負載及/或平均藥物負載，且提供有益特性。在一些實施例中，例如使用抗體或抗原結合片段上之鏈內二硫基之部分還原來達成約4、或約6、或約8之藥物負載及/或平均藥物負載，且提供有益特性。在一些實施例中，小於約2之藥物負載及/或平均藥物負載可能產生不可接受地高水準的未結合之抗體物種，該物種可與ADC競爭結合至目標抗原及/或提供降低之治療功效。在一些實施例中，大於約16之藥物負載及/或平均藥物負載可能產生不可接受地高水準之產物異質性及/或ADC聚集。大於約16之藥物負載及/或平均藥物負載亦可能因使抗體或抗原結合片段穩定所需之一或多個化學鍵的損失而影響ADC之穩定性。
本發明包括製造所述ADC之方法。簡言之，ADC包含作為該抗體或抗原結合片段之抗體或抗原結合片段、藥物部分(例如Bcl-xL抑制劑)及接合藥物部分及抗體或抗原結合片段之連接子。在一些實施例中，ADC可使用具有用於共價連接至藥物部分及抗體或抗原結合片段之反應性官能基的連接子製備。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段經官能化以製備可與連接子或藥物-連接子中間物反應之官能基。舉例而言，在一些實施例中，抗體或抗原結合片段之半胱胺酸硫醇可與連接子或藥物-連接子中間物之反應性官能基形成鍵以製得ADC。在一些實施例中，抗體或抗原結合片段利用用含有BCN (N-[(1R,8S,9s)-雙環[6.1.0]壬-4-炔-9-基甲氧基羰基]-1,8-二胺-3,6-二㗁辛烷)部分之胺特異性官能化之細菌轉麩醯胺酸酶(BTG)反應性麩胺醯胺製備。在一些實施例中，例如如本文中所述及例示，執行連接子或藥物-連接子中間物與抗體或抗原結合片段之BCN部分之定點結合。ADC之產生可藉由熟習此項技術者已知之技術實現。
在一些實施例中，ADC藉由以依序方式使抗體或抗原結合片段與連接子及藥物部分(例如Bcl-xL抑制劑)接觸產生，以使得抗體或抗原結合片段首先共價連接至連接子，且隨後預先形成之抗體-連接子中間物與藥物部分反應。抗體-連接子中間物在接觸藥物部分之前可經歷或可不經歷純化步驟。在其他實施例中，ADC係藉由使抗體或抗原結合片段與連接子-藥物化合物接觸來製造，該連接子-藥物化合物係由連接子與藥物部分反應預先形成。預先形成之連接子-藥物化合物在接觸抗體或抗原結合片段之前可經歷或可不經歷純化步驟。在其他實施例中，抗體或抗原結合片段接觸一種反應混合物中之連接子及藥物部分，由此允許在抗體或抗原結合片段與連接子之間及連接子與藥物部分之間同時形成共價鍵。此製造ADC之方法可以包括一反應，其中抗體或抗原結合片段在將連接子添加至反應混合物中之前接觸抗體或抗原結合片段，且反之亦然。在一些實施例中，ADC係藉由使抗體或抗原結合片段與接合至藥物部分，諸如Bcl-xL抑制劑之連接子在允許結合之條件下反應而產生。
根據上文所述之方法製備的ADC可經歷純化步驟。該純化步驟可涉及此項技術中已知用於純化蛋白質之任何生物化學方法，或其任何方法組合。此等方法包括但不限於切向流過濾(TFF)、親和層析法、離子交換層析法、基於電荷或等電點之任何層析法、混合模式層析法(例如CHT (陶瓷羥基磷灰石))、疏水性相互作用層析法、尺寸排阻層析法、透析、過濾、選擇性沈澱或其任何組合。 治療用途及組合物
本文揭示使用本文所描述之組合物，例如所揭示之ADC化合物及組合物治療個體之病症，例如癌症之方法。組合物，例如ADC可單獨或與至少一種額外非活性劑及/或活性劑，例如至少一種額外治療劑組合投與，且可以任何醫藥學上可接受之調配物、劑量及給藥方案投與。可針對毒性以及功效指標評估治療功效且相應地進行調整。功效量度包括但不限於在活體外或活體內觀察到的細胞生長抑制及/或細胞毒性效果、腫瘤體積減小、腫瘤生長抑制作用及/或長時間存活期。
已知確定ADC是否對細胞發揮細胞生長抑制及/或細胞毒性效果之方法。舉例而言，ADC之細胞毒性或細胞生長抑制活性可藉由以下量測，例如將表現ADC之目標抗原之哺乳動物細胞暴露在細胞培養基中；將細胞培養約6小時至約6天之時段；及量測細胞存活率(例如使用CellTiter-Glo® (CTG)或MTT細胞活力分析)。基於細胞之活體外分析亦可用於量測ADC之存活率(增殖)、細胞毒性及對細胞凋亡之誘導(凋亡蛋白酶活化)。
為測定細胞毒性，可量測壞死或細胞凋亡(計劃性細胞死亡)。壞死通常伴隨著質膜之滲透率增加、細胞膨脹及質膜破裂。細胞凋亡可例如藉由量測DNA斷裂來定量。用於定量活體外測定DNA斷裂之市售光學量測方法係可用的。包括TUNEL (其偵測經斷裂之DNA中經標記核苷酸之併入)及基於ELISA之分析之該等分析之實例描述於Biochemica (1999) 2:34-7 (Roche Molecular Biochemicals)中。
細胞凋亡亦可藉由量測細胞之形態變化來測定。舉例而言，如同壞死一樣，質膜完整性之損失可藉由量測對某些染料(例如螢光染料，諸如吖啶橙或溴化乙錠)之吸收來測定。用於量測凋亡細胞數目之方法已由Duke及Cohen, Current Protocols in Immunology (Coligan等人, 編(1992) 第3.17.1-3.17.16頁)描述。細胞亦可用DNA染料(例如吖啶橙、溴化乙錠或碘化丙錠)標記且觀察細胞沿內部核膜之染色體凝聚及邊聚情況。在一些實施例中，細胞凋亡亦可藉由針對凋亡蛋白酶活性篩選進行測定。在一些實施例中，可使用Caspase-Glo®分析來量測凋亡蛋白酶-3及凋亡蛋白酶-7之活性。在一些實施例中，分析在針對凋亡蛋白酶活性、螢光素酶活性及細胞溶解最佳化之試劑中提供致發光凋亡蛋白酶-3/7受質。在一些實施例中，以「添加-混合-量測」格式添加Caspase-Glo® 3/7試劑可引起細胞溶解，隨後引起受質之凋亡蛋白酶裂解且產生由螢光素酶產生之「輝光型」發光信號。在一些實施例中，螢光可與存在之凋亡蛋白酶活性之量成比例，且可以充當細胞凋亡之指標。可經量測以測定細胞凋亡之其他形態變化包括例如細胞質凝聚、膜囊胞形成增加及細胞收縮。測定對癌細胞之此等作用中之任一者指示，ADC適用於治療癌症。
細胞存活率可例如藉由測定細胞中諸如中性紅、錐蟲藍、結晶紫或ALAMAR™藍之染料之吸收來量測(參見例如Page等人(1993) Intl J Oncology 3:473-6)。在此類分析中，在含有染料之培養基中培育細胞，洗滌細胞，且以分光光度法量測剩餘染料，其反映細胞對染料之吸收。
細胞存活率亦可例如藉由定量作為具代謝活性之細胞之指標的ATP來量測。在一些實施例中，所製備之ADC或Bcl-xL抑制劑化合物之活體外效力及/或細胞存活率可使用如本文所提供之實例中所述之CellTiter-Glo® (CTG)細胞存活率分析進行評定。在一些實施例中，在此分析中，將單一試劑(CellTiter-Glo®試劑)直接添加至在補充有血清之培養基中培養的細胞中。添加試劑引起細胞溶解且產生與所存在之ATP的量成正比例之發光信號。ATP之量與存在於培養物中之細胞之數目成正比。
細胞存活率亦可例如藉由量測四唑鎓鹽之減少來量測。在一些實施例中，所製備之ADC或Bcl-xL抑制劑化合物之活體外效力及/或細胞存活率可使用如本文所提供之實例中所述之MTT細胞存活率分析進行評定。在一些實施例中，在此分析中，藉由具代謝活性之細胞，部分地藉由去氫酶之作用使黃色四唑鎓MTT (3-(4,5-二甲基噻唑基-2)-2,5-二苯基四唑溴化物)還原以產生還原等效物，諸如NADH及NADPH。所得胞內紫甲月朁(formazan)可隨後經溶解，且藉由分光光度方式定量。
在某些態樣中，本發明提供藉由破壞Bcl-xL及/或其一或多種上游調節劑或下游目標之表現及/或活性使癌細胞或組織之生長得到殺滅、抑制或調節的方法。該方法可用於其中破壞Bcl-xL表現及/或活性提供治療益處之任何個體。可受益於破壞Bcl-xL表現及/或活性之個體包括但不限於患有癌症，諸如腫瘤或血液學癌症或處於患該癌症之風險下的個體。在一些實施例中，癌症為黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌、胸腺瘤、多發性骨髓瘤、漿細胞骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性骨髓白血病、骨髓癌、慢性淋巴球性白血病、包括急性淋巴母細胞白血病之淋巴母細胞白血病、濾泡性淋巴瘤、T細胞或B細胞起源之淋巴惡性腫瘤、骨髓性白血病或骨髓瘤。在一些實施例中，癌症為肺癌、胰臟癌、胃部癌、腎癌或肝癌。
在一些實施例中，所揭示之ADC可在表現MET之任何細胞或組織(諸如表現MET之癌細胞或組織)中投與。例示性實施例包括一種殺死表現MET之癌細胞或組織的方法。該方法可用於表現MET之任何細胞或組織，諸如癌細胞或轉移性病變。表現MET之癌症之非限制性實例包括黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌、胸腺瘤、多發性骨髓瘤、漿細胞骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性骨髓白血病、骨髓癌、慢性淋巴球性白血病、包括急性淋巴母細胞白血病之淋巴母細胞白血病、濾泡性淋巴瘤、T細胞或B細胞起源之淋巴惡性腫瘤、骨髓性白血病或骨髓瘤。表現MET之細胞之非限制性實例包括來自黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌、胸腺瘤、多發性骨髓瘤、漿細胞骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性骨髓白血病、骨髓癌、慢性淋巴球性白血病、包括急性淋巴母細胞白血病之淋巴母細胞白血病、濾泡性淋巴瘤、T細胞或B細胞起源之淋巴惡性腫瘤、骨髓性白血病或骨髓瘤之癌細胞群體，及包含編碼MET或其部分之重組核酸的細胞。
例示性方法包括使細胞與有效量(亦即足以殺死細胞之量)之如本文所描述之ADC接觸的步驟。該方法可用於例如活體外、活體內、離體或原位培養物中之細胞上。舉例而言，表現MET之細胞(例如，腫瘤或轉移性病灶之活檢收集之細胞；來自所確立癌細胞株之細胞；或重組細胞)可在培養基中活體外培養，且接觸步驟可受將ADC添加至培養基影響。該方法將殺死表現MET之細胞，尤其包括表現MET之癌細胞。或者，可藉由任何適合投與途徑(例如靜脈內、皮下或與腫瘤組織直接地接觸)將ADC向個體投與以獲得活體內作用。
所揭示之ADC治療性組合物的活體內作用可以在適合動物模型中評價。舉例而言，可使用異種癌症模型，其中將癌症外植體或所繼代之異種移植組織引入諸如裸小鼠或SCID小鼠之免疫受損動物中(Klein等人(1997) Nature Med. 3:402-8)。可使用量測對腫瘤形成、腫瘤消退或轉移之抑制作用的分析及類似分析量測功效。
亦可使用評估藉由諸如細胞凋亡之機制促進腫瘤死亡之活體內分析。在一些實施例中，可以檢查來自用治療性組合物治療之腫瘤攜帶小鼠的異種移植物中細胞凋亡病灶之存在且與未治療之對照異種移植物攜帶小鼠相比較。在經治療小鼠之該中發現細胞凋亡病灶之範圍提供關於該組合物治療功效之指示。
本文進一步提供治療病症，例如癌症之方法。本文所描述之組合物，例如本文所揭示之ADC可出於治療目的向非人類哺乳動物或人類個體投與。治療方法包括向患有或疑似患有癌症之個體投與治療有效量之包含Bcl-xL抑制劑的組合物，例如ADC，其中抑制劑連接至結合於(1)在癌細胞上表現，(2)可易於結合，及/或(3)相較於非癌細胞定位於或主要表現在癌細胞表面上得抗原之目標抗體。
例示性實施例為治療患有或疑似患有癌症之個體之方法，其包含向個體投與治療有效量之本文所揭示之組合物，例如ADC、組合物或醫藥組合物(例如本文所揭示之例示性ADC、組合物或醫藥組合物中之任一者)。在一些實施例中，癌症表現目標抗原。在一些實施例中，癌症為腫瘤或血液學癌症。在一些實施例中，癌症為黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌、胸腺瘤、多發性骨髓瘤、漿細胞骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性骨髓白血病、骨髓癌、慢性淋巴球性白血病、包括急性淋巴母細胞白血病之淋巴母細胞白血病、濾泡性淋巴瘤、T細胞或B細胞起源之淋巴惡性腫瘤、骨髓性白血病或骨髓瘤。在一些實施例中，癌症為肺癌、胰臟癌、胃部癌、腎癌或肝癌。
另一例示性實施例為一種向表現MET之細胞遞送Bcl-xL抑制劑的方法，其包含將Bcl-xL抑制劑與免疫特異性結合於MET抗原決定基之抗體結合且使細胞暴露於ADC。本發明之ADC適用的表現MET之例示性癌細胞包括來自以下各者之細胞：黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌、胸腺瘤、多發性骨髓瘤、漿細胞骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性骨髓白血病、骨髓癌、慢性淋巴球性白血病、包括急性淋巴母細胞白血病之淋巴母細胞白血病、濾泡性淋巴瘤、T細胞或B細胞起源之淋巴惡性腫瘤、骨髓性白血病或骨髓瘤。
在某些態樣中，本發明進一步提供減少或抑制腫瘤(例如表現MET之腫瘤)之生長的方法，其包含投與治療有效量之ADC或包含ADC之組合物。在一些實施例中，該治療足以減少或抑制患者之腫瘤的生長、減少轉移性病變之數量或尺寸、減小腫瘤負荷、減小原發腫瘤負荷、降低侵襲性、延長存活時間及/或維持或改善生活品質。在一些實施例中，腫瘤為對單獨投與時的ADC之抗體或抗原結合片段(例如抗MET抗體)具有耐藥性或難以用其治療，及/或腫瘤為對單獨投與時的Bcl-xL抑制劑藥物部分具有耐藥性或難以用其治療。
例示性實施例為減少或抑制個體之腫瘤之生長的方法，其包含向個體投與治療有效量之ADC、組合物或醫藥組合物(例如本文所揭示之例示性ADC、組合物或醫藥組合物中之任一者)。在一些實施例中，腫瘤表現目標抗原。在一些實施例中，腫瘤為黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌或胸腺瘤。在一些實施例中，腫瘤為肺癌、胰臟癌、胃部癌、腎癌或肝癌。在一些實施例中，與在治療不存在的情況下之生長相比，投與ADC、組合物或醫藥組合物將腫瘤之生長減少或抑制至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%。
另一例示性實施例為延遲或減慢個體之腫瘤之生長的方法，其包含向個體投與治療有效量之ADC、組合物或醫藥組合物(例如本文所揭示之例示性ADC、組合物或醫藥組合物中之任一者)。在一些實施例中，腫瘤表現目標抗原。在一些實施例中，腫瘤為黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌或胸腺瘤。在一些實施例中，腫瘤為肺癌、胰臟癌、胃部癌、腎癌或肝癌。在一些實施例中，與在治療不存在的情況下之生長相比，投與ADC、組合物或醫藥組合物將腫瘤之生長延遲或減慢至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%。
在某些態樣中，本發明進一步提供減少癌細胞群體(例如表現MET之癌細胞群體)或減慢癌細胞群體之擴增的方法，其包含投與治療有效量之ADC或包含ADC之組合物。
例示性實施例為減少個體之癌細胞群體或減慢個體之癌細胞群體之擴增的方法，其包含向個體投與治療有效量之ADC、組合物或醫藥組合物(例如本文所揭示之例示性ADC、組合物或醫藥組合物中之任一者)。在一些實施例中，癌細胞群體表現目標抗原。在一些實施例中，癌細胞群體來自腫瘤或血液學癌症。在一些實施例中，癌細胞群體來自黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌、胸腺瘤、多發性骨髓瘤、漿細胞骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性骨髓白血病、骨髓癌、慢性淋巴球性白血病、包括急性淋巴母細胞白血病之淋巴母細胞白血病、濾泡性淋巴瘤、T細胞或B細胞起源之淋巴惡性腫瘤、骨髓性白血病或骨髓瘤。在一些實施例中，癌細胞群體來自肺癌、胰臟癌、胃部癌、腎癌或肝癌。在一些實施例中，與在治療不存在的情況下之群體相比，投與ADC、組合物或醫藥組合物將癌細胞群體減少至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%。在一些實施例中，與在治療不存在的情況下之擴增相比，投與ADC、組合物或醫藥組合物將癌細胞群體之擴增減慢至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%。
本文亦提供判定患有或疑似患有癌症之個體是否會對用所揭示之ADC及組合物進行之治療有反應的方法。例示性實施例為判定患有或疑似患有癌症之個體是否會對用ADC、組合物或醫藥組合物(例如本文所揭示之例示性ADC、組合物或醫藥組合物中之任一者)進行之治療有反應的方法，該方法藉由提供來自個體之生物樣品；使樣品與ADC接觸；及偵測ADC與樣品中之癌細胞之結合。在一些實施例中，樣品組織切片樣品、血液樣品或骨髓樣品。在一些實施例中，該方法包含提供來自個體之生物樣品；使樣品與ADC接觸；及偵測樣品中之癌細胞死亡之一或多種標記物(例如一或多種細胞凋亡標記物之表現增加、培養物中之癌細胞群體之擴增減少等)。
本文進一步提供所揭示之ADC及組合物的治療用途。例示性實施例為用於治療患有或疑似患有癌症(例如表現MET之癌症)之個體的ADC、組合物或醫藥組合物(例如本文所揭示之例示性ADC、組合物或醫藥組合物中之任一者)。另一例示性實施例為使用ADC、組合物或醫藥組合物(例如本文所揭示之例示性ADC、組合物或醫藥組合物中之任一者)治療患有或疑似患有癌症(例如表現MET之癌症)之個體。另一例示性實施例為ADC、組合物或醫藥組合物(例如本文所揭示之例示性ADC、組合物或醫藥組合物中之任一者)之用途，其用於製造供治療患有或疑似患有癌症(例如表現MET之癌症)之個體用之藥劑的方法中。用於鑑定患有表現目標抗原(例如，MET)之癌症之個體的方法為此項技術中已知的，且可用於鑑定適合用所揭示之ADC化合物或組合物治療的患者。
另外，本發明之ADC可向表現ADC能夠與其結合之抗原之非人類哺乳動物投與以用於獸醫學目的或作為人類疾病之動物模型。就後者而言，該等動物模型可用於評估所揭示之ADC之治療功效(例如測投與劑量及時程)。
用於實踐前述方法之治療性組合物可以調配成包含適合於所需遞送方法的醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。例示性實施例為包含本發明之ADC及醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物，例如適用於所選投與方式，例如靜脈內投與之醫藥組合物。醫藥組合物亦可包含適用於治療或預防例如癌症一或多種額外非活性劑及/或治療劑(例如標準護理劑等)。醫藥組合物亦可包含一或多種載劑、賦形劑及/或穩定劑組分及其類似物。調配此類醫藥組合物之方法及適合之調配物為此項技術中已知的(參見例如「Remington's Pharmaceutical Sciences」, Mack Publishing Co., Easton, PA)。
適合之載劑包括在與治療性組合物組合時保持治療性組合物之抗腫瘤功能且一般不與患者免疫系統反應之任何材料。醫藥學上可接受之載劑包括生理上相容之任何及所有溶劑、分散介質、塗層、抗細菌劑及抗真菌劑、等張劑及吸收延遲劑及其類似物。醫藥學上可接受之載劑之實例包括水、生理鹽水、磷酸鹽緩衝生理生理鹽水、右旋糖、甘油、乙醇、甲磺酸鹽及其類似物以及其組合中之一或多者。在許多情況下，該組合物中包括等張劑，例如糖；多元醇，諸如甘露糖醇、山梨糖醇；或氯化鈉。醫藥學上可接受之載劑可進一步包含極少量輔助物質，諸如濕潤劑或乳化劑、防腐劑或緩衝劑，由此可增加ADC之保存期限或有效性。
本發明之醫藥組合物可藉由此項技術中已知之多種方法投與。投與途徑及/或模式可視所需結果而變化。在一些實施例中，治療性調配物經溶解且經由能夠將治療性組合物遞送至癌症部位之任何途徑投與。可能有效之投與途徑包括但不限於非經腸(例如靜脈內、皮下)、腹膜內、肌肉內、腫瘤內、皮內、器官內、原位及其類似途徑。在一些實施例中，投與為靜脈內、皮下、腹膜內或肌肉內。醫藥學上可接受之載劑應適用於投與途徑，例如靜脈內或皮下投與(例如藉由注射或輸注)。視投與途徑而定，可將活性化合物(亦即ADC)及/或任何額外治療劑塗佈在材料中以保護化合物免受可能使化合物失活之酸作用及其他天然條件影響。投與可為全身或局部的。
本文所揭示之治療性組合物可在製造及儲存條件下無菌且穩定，且可呈各種形式。此等形式包括例如液體、半固體及固體劑型，諸如液體溶液(例如可注射溶液及可輸注溶液)、分散液或懸浮液、錠劑、丸劑、粉劑、脂質體及栓劑。形式視預期投與模式及治療應用而定。在一些實施例中，所揭示之ADC可以併入適合於非經腸投與之醫藥組合物中。可注射溶液可以由在弗林特(flint)或琥珀色小瓶、安瓿或預填充注射器、或其他已知之遞送或儲存裝置中之液體或凍乾劑型構成。在一些實施例中，ADC或醫藥組合物中之一或多種係以乾燥經滅菌凍乾粉末或無水濃縮物形式供應於氣密密封式容器中且可復原(例如用水或生理鹽水)至適當濃度以向個體投與。
通常，治療有效量或奏效量之所揭示之組合物，例如所揭示之ADC用於本發明之醫藥組合物中。組合物，例如包含ADC之組合物可藉由此項技術中已知之習知方法調配成醫藥學上可接受之劑型。使用前述方法治療癌症之劑量及投與方案將隨該方法及目標癌症而變化，且一般將視此項技術中所瞭解之多種其他因素而定。
可調整單獨或與至少一種額外非活性及/或活性治療劑組合的本文所揭示之組合物，例如包含ADC之組合物之劑量方案以提供最佳所需反應(例如治療反應)。舉例而言，可一次性投與一種或兩種藥劑之單次快速注射，可在預定時間段內投與數個分次劑量，或一種或兩種藥劑之劑量可如由治療情況之緊急狀態指示按比例增加或減少。在一些實施例中，治療涉及經由可接受之投與途徑單次快速注射或重複投與ADC製劑。在一些實施例中，每日、每週、每月或其間任何時間段向患者投與ADC。對於任何特定個體，特定劑量方案可根據個體之需求及治療臨床醫師之專業判斷隨時間調整。非經腸組合物可以單位劑型形式調配以易於投與且使劑量均一。如本文所用之單位劑型係指適合作為用於待治療之動物個體之單位劑量的物理離散單位；各單元含有經計算以與所要求之醫藥載劑結合產生所需治療作用的預定量之活性化合物。
包含ADC及/或任何額外治療劑之組合物之劑量值可基於活性化合物之獨特特徵及待達成之特定治療效果進行選擇。醫師或獸醫可以比達成所要治療效果所需水準更低之水準開始醫藥組合物中所採用的ADC之劑量且逐漸增加劑量直至達成所要效果。一般而言，有效劑量之用於治療癌症之本發明之組合物可視許多不同因素而變化，包括投與方式、目標部位、患者生理狀態、患者為人類或動物、所投與之其他藥物及治療為預防性或治療性的。所選劑量濃度亦可視多種藥物動力學因素而定，包括所採用之本發明之特定組合物或其酯、鹽或醯胺之活性、投與途徑、投與時間、所採用之特定化合物之排泄速率、治療持續時間、與所採用之特定組合物組合使用之其他藥物、化合物及/或材料、所治療之患者之年齡、性別、體重、病況、一般健康及先前病史及類似因素。可滴定治療劑量以使安全性及功效最佳化。
本文所提供之化合物之毒性及治療功效可藉由標準的醫藥學程序在細胞培養物或動物模型中測定。舉例而言，可測定LD50、ED50、EC50及IC50，且可按治療指數計算毒性與治療效果之間之劑量比率(LD50/ED50)。自活體內分析獲得之資料可用於估計或調配一系列用於人類的劑量。舉例而言，本文所揭示之組合物及方法最初可在異種癌症模型中評估。
在一些實施例中，在單一情況下投與ADC或包含ADC之組合物。在其他實施例中，在多種情況下投與ADC或包含ADC之組合物。單次劑量間的時間間隔可為例如每日、每週、每月或每年。基於量測患者中所投與試劑(例如ADC)之血液含量，時間間隔亦可為不規則的，以維持試劑之相對一致血漿濃度。ADC或包含ADC之組合物之投與劑量及頻率亦可視治療為預防性或治療性的而變化。在預防性應用中，可經長時間段以相對不頻繁之間隔投與相對低之劑量。一些患者在其餘生中持續接受治療。在治療性應用中，有時需要在相對較短時間間隔下之相對較高劑量，直至疾病之進展降低或終止，及較佳直至患者展現出疾病之一或多種症狀的部分或完全改善。其後，可向患者投與較低，例如防治性方案。
以上治療方法可以與多種額外手術、化學療法或放射療法方案中之任一組合。在一些實施例中，本文所揭示之ADC或組合物與一或多種額外治療劑(例如一或多種化學治療劑：一或多種標準護理劑)一起共調配及/或共投與以用於所治療之特定病況。
亦提供用於本文所描述之治療性及/或診斷性應用中之套組。該等套組可包含載劑、封裝或經分隔以接收一或多個容器(諸如小瓶、管及其類似物)之容器，各容器包含待用於本文所揭示之方法之各別要素中之一種。標籤可存在於容器上以指示套組內之ADC或組合物用於特定療法或非治療性應用，諸如預後、預防性、診斷性或實驗室應用。標籤亦可指示關於活體內或活體外用途，諸如本文所描述之用途的指導。在插頁或標籤上亦可包括指導及或其他資訊，該插頁或標籤係包括在套組中或之上。標籤可位於容器之上或與容器相聯。當將形成標籤之字母、數字或其他字符模製或蝕刻至容器自身中時，標籤可在容器上。當標籤存在於亦固持容器之貯器或載體其內時，標籤可例如以封裝插頁形式與容器相關。標籤可指示套組內之ADC或組合物係用於診斷或治療病況，諸如本文所描述之癌症。
在一些實施例中，套組包含ADC或包含ADC之組合物。在一些實施例中，套組進一步包含一或多種額外組分，包括但不限於使用說明書；其他試劑，例如治療劑(例如標準護理劑)；用於製備ADC之裝置、容器或其他材料以用於投與；醫藥學上可接受之載劑及用於向個體投與ADC之裝置、容器或其他材料。使用說明書可包括治療性應用之指南，該指南包括例如患有或疑似患有癌症之患者中之建議劑量及/或投與模式。在一些實施例中，套組包含ADC及ADC之使用說明書以用於治療、預防及/或診斷癌症。
眾所周知，升高的Bcl-xL表現與對放射療法及化學療法之抵抗相關。作為治療癌症之單藥療法可能不夠有效的抗體-藥物結合物(ADC)可與其他治療劑(包括非靶向和靶向治療劑)或放射療法(包括放射性配位體療法)組合投與以提供治療益處。不希望受理論束縛，咸信本文所描述之ADC使腫瘤細胞對用其他治療劑(包括腫瘤細胞可能已產生抗性之標準照護化學治療劑)及/或放射療法治療敏感。在一些實施例中，本文所描述之抗體藥物結合物以有效使腫瘤細胞敏感之量向患有癌症之個體投與。如本文所用，術語「使......敏感」意謂用ADC治療增加用其他治療劑及/或放射療法治療針對腫瘤細胞之效力或功效。 組合療法
在一些實施例中，本發明提供治療方法，其中本文所揭示之抗體-藥物結合物與一或多種(例如1或2種)額外治療劑組合投與。例示性組合搭配物揭示於本文中。
在某些實施例中，本文所描述之組合包含PD-1抑制劑。在一些實施例中，PD-1抑制劑係選自PDR001 (Novartis)、納武單抗(Nivolumab) (Bristol-Myers Squibb)、派姆單抗(Pembrolizumab) (Merck & Co)、皮立珠單抗(Pidilizumab) (CureTech)、MEDI0680 (Medimmune)、REGN2810 (Regeneron)、TSR-042 (Tesaro)、PF-06801591 (Pfizer)、BGB-A317 (Beigene)、BGB-108 (Beigene)、INCSHR1210 (Incyte)或AMP-224 (Amplimmune)。在一些實施例中，PD-1抑制劑為PDR001。PDR001亦稱為斯巴達珠單抗(Spartalizumab)。
在某些實施例中，本文所描述之組合包含LAG-3抑制劑。在一些實施例中，LAG-3抑制劑係選自LAG525 (Novartis)、BMS-986016 (Bristol-Myers Squibb)或TSR-033 (Tesaro)。
在某些實施例中，本文所描述之組合包含TIM-3抑制劑。在一些實施例中，TIM-3抑制劑為MBG453 (Novartis)、TSR-022 (Tesaro)、LY-3321367 (Eli Lily)、Sym23 (Symphogen)、BGB-A425 (Beigene)、INCAGN-2390 (Agenus)、BMS-986258 (BMS)、RO-7121661 (Roche)或LY-3415244 (Eli Lilly)
在某些實施例中，本文所描述之組合包含PDL1抑制劑。在一個實施例中，PDL1抑制劑選自FAZ053 (Novartis)、阿特珠單抗(atezolizumab) (Genentech)、德瓦魯單抗(durvalumab) (Astra Zeneca)或阿維魯單抗(avelumab) (Pfizer)。
在某些實施例中，本文所描述之組合包含GITR促效劑。在一些實施例中，GITR促效劑為GWN323 (NVS)、BMS-986156、MK-4166或MK-1248 (Merck)、TRX518 (Leap Therapeutics)、INCAGN1876 (Incyte/Agenus)、AMG 228 (Amgen)或INBRX-110 (Inhibrx)。
在一些實施例中，本文所描述之組合包含IAP抑制劑。在一些實施例中，IAP抑制劑包含LCL161或國際申請公開案第WO 2008/016893號中所揭示之化合物。
在一實施例中，組合包含mTOR抑制劑(例如，RAD001) (亦稱為依維莫司(everolimus))。
在一實施例中，組合包含HDAC抑制劑，例如LBH589。LBH589亦稱為帕比諾他(panobinostat)。
在一實施例中，組合包含IL-17抑制劑，例如，CJM112。
在某些實施例中，本文所描述之組合包含雌激素受體(ER)拮抗劑。在一些實施例中，雌激素受體拮抗劑與PD-1抑制劑、CDK4/6抑制劑或兩者組合使用。在一些實施例中，組合用於治療ER陽性(ER+)癌症或乳癌(例如，ER+乳癌)。
在一些實施例中，雌激素受體拮抗劑為選擇性雌激素受體降解劑(SERD)。SERD為結合至受體且導致例如受體降解或下調之雌激素受體拮抗劑(Boer K.等人, (2017) Therapeutic Advances in Medical Oncology9(7): 465-479)。ER為對於人類生殖系統之例如生長、發育及生理重要的激素活化轉錄因子。ER藉由例如激素雌激素(17β雌二醇)活化。ER表現及信號傳導牽涉到癌症(例如，乳癌)，例如，ER陽性(ER+)乳癌。在一些實施例中，SERD係選自LSZ102、氟維司群(fulvestrant)、布萊恩司群(brilanestrant)或艾拉司群(elacestrant)。
在一些實施例中，SERD包含國際申請公開案第WO 2014/130310號中揭示之化合物，該文獻以全文引用之方式併入本文中。
在一些實施例中，SERD包含LSZ102。LSZ102具有化學名稱：(E)-3-(4-((2-(2-(1,1-二氟乙基)-4-氟苯基)-6-羥基苯并[b]噻吩-3-基)氧基)苯基)丙烯酸。在一些實施例中，SERD包含氟維司群(CAS登記號：129453-61-8)或國際申請公開案第WO 2001/051056號中揭示之化合物，該文獻以全文引用之方式併入本文中。在一些實施例中，SERD包含艾拉司群(CAS登記號：722533-56-4)或美國專利第7,612,114號中揭示之化合物，該文獻以全文引用之方式併入。艾拉司群亦稱為RAD1901、ER-306323或(6R)-6-{2-[乙基({4-[2-(乙基胺基)乙基]苯基}甲基)胺基]-4-甲氧基苯基}-5,6,7,8-四氫萘-2-醇。艾拉司群為經口生物可用的非類固醇組合選擇性雌激素受體調節劑(SERM)及SERD。亦例如在Garner F等人, (2015) Anticancer Drugs26(9):948-56中揭示艾拉司群。在一些實施例中，SERD為布萊恩司群(CAS登記號：1365888-06-7)或國際申請公開案第WO 2015/136017號中揭示之化合物，該文獻以全文引用之方式併入。
在一些實施例中，SERD係選自RU 58668、GW7604、AZD9496、巴多昔芬(bazedoxifene)、哌噴昔芬(pipendoxifene)、阿佐昔芬(arzoxifene)、OP-1074或阿考比芬(acolbifene)，例如如McDonell等人(2015) Journal of Medicinal Chemistry58(12) 4883-4887所揭示。
其他例示性雌激素受體拮抗劑揭示於例如WO 2011/156518、WO 2011/159769、WO 2012/037410、WO 2012/037411及US 2012/0071535中，該等文獻全部以全文引用之方式併入本文中。
在某些實施例中，本文所描述之組合包含細胞週期素依賴性激酶4或6 (CDK4/6)之抑制劑。在一些實施例中，CDK4/6抑制劑與PD-1抑制劑、雌激素受體(ER)拮抗劑或兩者組合使用。在一些實施例中，組合用於治療ER陽性(ER+)癌症或乳癌(例如，ER+乳癌)。在一些實施例中，CDK4/6抑制劑選自瑞博西尼(ribociclib)、玻瑪西尼(abemaciclib) (Eli Lilly)或帕博西尼(palbociclib)。
在一些實施例中，CDK4/6抑制劑包含瑞博西尼(CAS登記號：1211441-98-3)或美國專利第8,415,355號及第8,685,980號中揭示之化合物，該等文獻以全文引用之方式併入。
在一些實施例中，CDK4/6抑制劑包含國際申請公開案第WO 2010/020675號及美國專利第8,415,355號及第8,685,980號中揭示之化合物，該等文獻以全文引用之方式併入。
在一些實施例中，CDK4/6抑制劑包含瑞博西尼(CAS登記號：1211441-98-3)。瑞博西尼亦稱為LEE011、KISQALI®或7-環戊基-N,N-二甲基-2-((5-(哌𠯤-1-基)吡啶-2-基)胺基)-7H-吡咯并[2,3-d]嘧啶-6-甲醯胺。
在一些實施例中，CDK4/6抑制劑包含玻瑪西尼(CAS登記號：1231929-97-7)。玻瑪西尼亦稱為LY835219或N-[5-[(4-乙基-1-哌𠯤基)甲基]-2-吡啶基]-5-氟-4-[4-氟-2-甲基-1-(1-甲基乙基)-1H-苯并咪唑-6-基]-2-胺基嘧啶。玻瑪西尼為對CDK4及CDK6具選擇性之CDK抑制劑，且揭示於例如Torres-Guzman R等人(2017) Oncotarget10.18632/oncotarget.17778中。
在一些實施例中，CDK4/6抑制劑包含帕博西尼(CAS登記號：571190-30-2)。帕博西尼亦稱為PD-0332991、IBRANCE®或6-乙醯基-8-環戊基-5-甲基-2-{[5-(1-哌𠯤基)-2-吡啶基]胺基}吡啶并[2,3-d]嘧啶-7(8H)-酮。帕博西尼以11 nM之IC50抑制CDK4且以16 nM之IC50抑制CDK6，且揭示於例如Finn等人(2009) Breast Cancer Research11(5):R77中。
在某些實施例中，本文所描述之組合包含趨化因子(C-X-C模體)受體2 (CXCR2)之抑制劑。在一些實施例中，CXCR2抑制劑係選自6-氯-3-((3,4-二側氧基-2-(戊-3-基胺基)環丁-1-烯-1-基)胺基)-2-羥基-N-甲氧基-N-甲基苯磺醯胺、達尼利辛(danirixin)、瑞帕利辛(reparixin)或納瓦利辛(navarixin)。
在一些實施例中，CSF-1/1R結合劑係選自巨噬細胞群落刺激因子(M-CSF)抑制劑，例如，針對M-CSF之單株抗體或Fab (例如，MCS110)、CSF-1R酪胺酸激酶抑制劑(例如，4-((2-(((1R,2R)-2-羥基環己基)胺基)苯并[d]噻唑-6-基)氧基)-N-甲基吡啶甲醯胺或BLZ945)、受體酪胺酸激酶抑制劑(RTK) (例如，吡昔替尼(pexidartinib))或靶向CSF-1R之抗體(例如，依麻特珠單抗(emactuzumab)或FPA008)。在一些實施例中，CSF-1/1R抑制劑為BLZ945。在一些實施例中，CSF-1/1R結合劑為MCS110。在其他實施例中，CSF-1/1R結合劑為吡昔替尼。
在某些實施例中，本文所描述之組合包含c-MET抑制劑。c-MET (一種在多種腫瘤細胞類型中過表現或突變之受體酪胺酸激酶)在腫瘤細胞增殖、存活、侵襲、轉移及腫瘤血管生成中起關鍵作用。c-MET之抑制可誘導過表現c-MET蛋白或表現經組成性活化之c-MET蛋白的腫瘤細胞中之細胞死亡。在一些實施例中，c-MET抑制劑係選自卡普替尼(capmatinib) (INC280)、JNJ-3887605、AMG 337、LY2801653、MSC2156119J、克卓替尼(crizotinib)、提瓦替尼(tivantinib)、薩沃替尼(savolitinib)或格瓦替尼(golvatinib)。
在某些實施例中，本文所描述之組合包含轉型生長因子β (亦稱為TGF-β、TGFβ、TGFb或TGF-β，在本文中可互換使用)抑制劑。在一些實施例中，TGF-β抑制劑係選自夫蘇木單抗(fresolimumab)或XOMA 089。
在某些實施例中，本文所描述之組合包含腺苷A2a受體(A2aR)拮抗劑(例如，A2aR路徑之抑制劑，例如，腺苷抑制劑，例如，A2aR或CD-73之抑制劑)。在一些實施例中，A2aR拮抗劑與PD-1抑制劑以及CXCR2抑制劑、CSF-1/1R結合劑、LAG-3抑制劑、GITR促效劑、c-MET抑制劑或IDO抑制劑中之一或多者(例如，兩者、三者、四者、五者或全部)組合使用。在一些實施例中，組合用於治療胰臟癌、大腸直腸癌、胃部癌或黑色素瘤(例如，頑抗性黑色素瘤)。在一些實施例中，A2aR拮抗劑係選自PBF509 (NIR178) (Palobiofarma/Novartis)、CPI444/V81444 (Corvus/Genentech)、AZD4635/HTL-1071 (AstraZeneca/Heptares)、韋帕迪蘭(Vipadenant) (Redox/Juno)、GBV-2034 (Globavir)、AB928 (Arcus Biosciences)、茶鹼(Theophylline)、伊曲茶鹼(Istradefylline) (Kyowa Hakko Kogyo)、托紮耐特(Tozadenant)/SYN-115 (Acorda)、KW-6356 (Kyowa Hakko Kogyo)、ST-4206 (Leadiant Biosciences)或普雷迪南(Preladenant)/SCH 420814 (Merck/Schering)。不希望受理論束縛，咸信在一些實施例中，A2aR之抑制導致IL-1b上調。
在某些實施例中，本文所描述之組合包含吲哚胺2,3-雙加氧酶(IDO)及/或色胺酸2,3-雙加氧酶(TDO)之抑制劑。在一些實施例中，IDO抑制劑與PD-1抑制劑以及TGF-β抑制劑、A2aR拮抗劑、CSF-1/1R結合劑、c-MET抑制劑或GITR促效劑中之一或多者(例如，兩者、三者、四者或全部)組合使用。在一些實施例中，組合用於治療胰臟癌、大腸直腸癌、胃部癌或黑色素瘤(例如，頑抗性黑色素瘤)。在一些實施例中，IDO抑制劑係選自(4E)-4-[(3-氯-4-氟苯胺基)-亞硝基亞甲基]-1,2,5-㗁二唑-3-胺(亦稱為艾帕斯塔(epacadostat)或INCB24360)、吲哚莫德(indoximod) (NLG8189)、(1-甲基-D-色胺酸)、α-環己基-5H-咪唑并[5,1-a]異吲哚-5-乙醇(亦稱為NLG919)、吲哚莫德、BMS-986205 (先前為F001287)。
在某些實施例中，本文所描述之組合包含半乳糖凝集素(例如，半乳糖凝集素-1或半乳糖凝集素-3)抑制劑。在一些實施例中，組合包含半乳糖凝集素-1抑制劑及半乳糖凝集素-3抑制劑。在一些實施例中，組合包含靶向半乳糖凝集素-1及半乳糖凝集素-3兩者之雙特異性抑制劑(例如，雙特異性抗體分子)。在一些實施例中，半乳糖凝集素抑制劑與一或多種本文所描述之治療劑組合使用。在一些實施例中，半乳糖凝集素抑制劑係選自抗半乳糖凝集素抗體分子、GR-MD-02 (Galectin Therapeutics)、半乳糖凝集素-3C (Mandal Med)、Anginex或OTX-008 (OncoEthix, Merck)。
在一些實施例中，本文所描述之組合包含MAP激酶路徑之抑制劑，包括ERK抑制劑、MEK抑制劑及RAF抑制劑。
在一些實施例中，本文所描述之組合包含MEK抑制劑。在一些實施例中，MEK抑制劑係選自曲美替尼(Trametinib)、司美替尼(selumetinib)、AS703026、BIX 02189、BIX 02188、CI-1040、PD0325901、PD98059、U0126、XL-518、G-38963或G02443714。
在一些實施例中，MEK抑制劑為曲美替尼。曲美替尼亦稱為JTP-74057、TMT212、N-(3-{3-環丙基-5-[(2-氟-4-碘苯基)胺基]-6,8-二甲基-2,4,7-三側氧基-3,4,6,7-四氫吡啶并[4,3-d]嘧啶-1(2H)-基}苯基)乙醯胺或Mekinist (CAS號871700-17-3)。
在一些實施例中，MEK抑制劑包含司美替尼，其具有化學名稱：(5-[(4-溴-2-氯苯基)胺基]-4-氟-N-(2-羥基乙氧基)-1-甲基-1H-苯并咪唑-6-甲醯胺。司美替尼亦稱為AZD6244或ARRY 142886，例如，如PCT公開案第WO2003077914號中所描述。
在一些實施例中，MEK抑制劑包含AS703026、BIX 02189或BIX 02188。
在一些實施例中，MEK抑制劑包含2-[(2-氯-4-碘苯基)胺基]-N-(環丙基甲氧基)-3,4-二氟-苯甲醯胺(亦稱為CI-1040或PD184352)，例如，如PCT公開案第WO2000035436號中所描述)。
在一些實施例中，MEK抑制劑包含N-[(2R)-2,3-二羥基丙氧基]-3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)胺基]-苯甲醯胺(亦稱為PD0325901)，例如，如PCT公開案第WO2002006213號中所描述。
在一些實施例中，MEK抑制劑包含2'-胺基-3'-甲氧基黃酮(亦稱為PD98059)，其可獲自Biaffin GmbH & Co., KG, Germany。
在一些實施例中，MEK抑制劑包含2,3-雙[胺基[(2-胺基苯基)硫基]亞甲基]-丁二腈(亦稱為U0126)，例如，如美國專利第2,779,780號中所描述。
在一些實施例中，MEK抑制劑包含XL-518 (亦稱為GDC-0973)，其具有CAS編號1029872-29-4且可購自ACC Corp。
在一些實施例中，MEK抑制劑包含G-38963。
在一些實施例中，MEK抑制劑包含G02443714 (亦稱為AS703206)
MEK抑制劑之其他實例揭示於WO 2013/019906、WO 03/077914、WO 2005/121142、WO 2007/04415、WO 2008/024725及WO 2009/085983中，其內容以引用之方式併入本文中。MEK抑制劑之其他實例包括但不限於2,3-雙[胺基[(2-胺基苯基)硫基]亞甲基]-丁二腈(亦稱為U0126且描述於美國專利第2,779,780號中)；(3S,4R,5Z,8S,9S,11E)-14-(乙基胺基)-8,9,16-三羥基-3,4-二甲基-3,4,9,19-四氫-1H-2-苯并氧雜環十四烷-1,7(8H)-二酮] (亦稱為E6201，描述於PCT公開案第WO2003076424號中)；維羅非尼(vemurafenib) (PLX-4032，CAS 918504-65-1)；(R)-3-(2,3-二羥基丙基)-6-氟-5-(2-氟-4-碘苯基胺基)-8-甲基吡啶并[2,3-d]嘧啶-4,7(3H,8H)-二酮(TAK-733，CAS 1035555-63-5)；皮馬瑟替(pimasertib)(AS-703026，CAS 1204531-26-9)；2-(2-氟-4-碘苯基胺基)-N-(2-羥基乙氧基)-1,5-二甲基-6-側氧基-1,6-二氫吡啶-3-甲醯胺(AZD 8330)；及3,4-二氟-2-[(2-氟-4-碘苯基)胺基]-N-(2-羥基乙氧基)-5-[(3-側氧基-[1,2]氧氮雜環己烷-2-基)甲基]苯甲醯胺(CH 4987655或Ro 4987655)。
在一些實施例中，本文所描述之組合包含RAF抑制劑。
RAF抑制劑包括但不限於維羅非尼(或Zelboraf®、PLX-4032、CAS 918504-65-1)、GDC-0879、PLX-4720 (購自Symansis)、達拉非尼(Dabrafenib) (或GSK2118436)、LGX 818、CEP-32496、UI-152、RAF 265、瑞戈非尼(Regorafenib) (BAY 73-4506)、CCT239065或索拉非尼(或甲苯磺酸索拉非尼或Nexavar®)。
在一些實施例中，RAF抑制劑為達拉非尼。
在一些實施例中，RAF抑制劑為LXH254。
在一些實施例中，本文所描述之組合包含ERK抑制劑。
ERK抑制劑包括但不限於LTT462、優立替尼(ulixertinib) (BVD-523)、LY3214996、GDC-0994、KO-947及MK-8353。
在一些實施例中，ERK抑制劑為LTT462。LTT462為4-(3-胺基-6-((1S,3S,4S)-3-氟-4-羥基-環己基)吡𠯤-2-基)-N-((S)-1-(3-溴-5-氟苯基)-2-(甲胺基)-乙基)-2-氟苯甲醯胺且為以下結構之化合物：
LTT462之製備描述於PCT專利申請公開案WO2015/066188中。LTT462為細胞外信號調節激酶1及2 (ERK 1/2)之抑制劑。
在一些實施例中，本文所描述之組合包含紫杉烷、長春花生物鹼、MEK抑制劑、ERK抑制劑或RAF抑制劑。
在一些實施例中，本文所描述之組合包含至少兩種獨立地選自MEK抑制劑、ERK抑制劑及RAF抑制劑之抑制劑。
在一些實施例中，本文所描述之組合包含抗有絲分裂藥物。在一些實施例中，抗有絲分裂藥物為單甲基奧瑞他汀E，或包含單甲基奧瑞他汀E之抗體-藥物結合物。
在一些實施例中，本文所描述之組合包含紫杉烷。
紫杉烷包括但不限於多西他賽(docetaxel)、紫杉醇或卡巴他賽(cabazitaxel)。在一些實施例中，紫杉烷為多西他賽(docetaxel)。
在一些實施例中，本文所描述之組合包含長春花生物鹼。
長春花生物鹼包括但不限於長春新鹼、長春鹼及環氧長春鹼。
在一些實施例中，本文所描述之組合包含拓樸異構酶抑制劑。
拓樸異構酶抑制劑包括但不限於拓朴替康(topotecan)、伊立替康(irinotecan)、喜樹鹼、二氟替康(diflomotecan)、片螺素(lamellarin) D、玫瑰樹鹼、依託泊苷(etoposide) (VP-16)、替尼泊苷(teniposide)、小紅莓(doxorubicin)、道諾黴素(daunorubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、安吖啶、金黃三羧酸及HU-331。
在一個實施例中，本文所描述之組合包括介白素-1β (IL-1β)抑制劑。在一些實施例中，IL-1β抑制劑係選自康納單抗(canakinumab)、吉伏珠單抗(gevokizumab)、阿那白滯素(Anakinra)或利納西普(Rilonacept)。
在某些實施例中，本文所描述之組合包含IL-15/IL-15RA複合物。在一些實施例中，IL-15/IL-15Ra複合物係選自NIZ985 (Novartis)、ATL-803 (Altor)或CYP0150 (Cytune)。
在某些實施例中，本文所描述之組合包含小鼠雙微體2同源物(MDM2)抑制劑。MDM2之人類同源物亦稱為HDM2。在一些實施例中，本文所描述之MDM2抑制劑亦稱為HDM2抑制劑。在一些實施例中，MDM2抑制劑係選自HDM201或CGM097。
在一實施例中，MDM2抑制劑包含(S)-1-(4-氯苯基)-7-異丙氧基-6-甲氧基-2-(4-(甲基(((1r,4S)-4-(4-甲基-3-側氧基哌𠯤-1-基)環己基)甲基)胺基)苯基)-1,2-二氫異喹啉-3(4H)-酮(亦稱為CGM097)或PCT公開案第WO 2011/076786號中揭示之化合物以治療病症(例如，本文所描述之病症)。在一個實施例中，本文所揭示之治療劑與CGM097組合使用。
在一些實施例中，本文所描述之組合包含低甲基化劑(HMA)。在一些實施例中，HMA選自地西他濱(decitabine)或阿紮胞苷(azacitidine)。
在一些實施例中，本文所描述之組合包含糖皮質激素。在一些實施例中，糖皮質激素為地塞米松。
在一些實施例中，本文所描述之組合包含天冬醯胺酶。
在一些實施例中，本文所描述之組合包含核苷類似物。在一些實施例中，核苷類似物為吉西他濱。
在一些實施例中，本文所描述之組合包含抗EGFR單株抗體或EGFR抑制劑。
在一些實施例中，本文所描述之組合包含表皮生長因子受體酪胺酸激酶抑制劑(EGFR-酪胺酸激酶抑制劑)。在一些實施例中，EGFR-酪胺酸激酶抑制劑為奧希替尼(osimertinib)。
在一些實施例中，本文所描述之組合包含VEGFR抑制劑。
在某些實施例中，本文所描述之組合包含作用於Bcl2家族之任何促存活蛋白質之抑制劑。在一些實施例中，本文所描述之組合包含Mcl-1抑制劑。在一些實施例中，Mcl-1抑制劑選自A-1210477、S63845、S64315、AMG-176及AZD-5991。在某些實施例中，本文所描述之組合包含Bcl-2抑制劑。在一些實施例中，Bcl-2抑制劑為維奈托克(venetoclax) (亦稱為ABT-199)： (維奈托克)。
在一個實施例中，Bcl-2抑制劑選自WO 2013/110890及WO 2015/011400中所描述之化合物。在一些實施例中，Bcl-2抑制劑包含納維克拉斯(navitoclax) (ABT-263)、ABT-737、BP1002、SPC2996、APG-1252、甲磺酸奧巴克拉(obatoclax mesylate) (GX15-070MS)、PNT2258、Zn-d5、BGB-11417或奧利默森(oblimersen) (G3139)。在一些實施例中，Bcl-2抑制劑為N-(4-羥苯基)-3-[6-[(3S)-3-(N-𠰌啉基甲基)-3,4-二氫-1H-異喹啉-2-羰基]-1,3-苯并二氧雜環戊烯-5-基]-N-苯基-5,6,7,8-四氫吲-1-甲醯胺，化合物A1： (化合物A1)。
在一些實施例中，Bcl-2抑制劑為(S)-5-(5-氯-2-(3-(N-𠰌啉基甲基)-1,2,3,4-四氫異喹啉-2-羰基)苯基)-N-(5-氰基-1,2-二甲基-1H-吡咯-3-基)-N-(4-羥基苯基)-1,2-二甲基-1H-吡咯-3-甲醯胺)，化合物A2： (化合物A2)。
在一些實施例中，本文所描述之組合包含第二抗體-藥物結合物，其中Ab為如本文所揭示之抗Met抗體。
在一個實施例中，本文所揭示之抗體-藥物結合物或組合適用於治療活體內癌症。舉例而言，組合可用於抑制癌性腫瘤之生長。該組合亦可與以下中之一或多者組合使用：標準照護治療(例如，用於癌症或感染性病症)、疫苗(例如，治療性癌症疫苗)、細胞療法、激素療法(例如，使用抗雌激素或抗雄激素)、放射療法、手術或任何其他治療劑或模式，以治療本文之病症。舉例而言，為實現免疫之抗原特異性增強，該組合可與所關注之抗原一起投與。本文所揭示之組合可以任一次序或同時投與。 額外實施例
本發明提供連接子-藥物基團、抗體-藥物結合物、連接子基團及結合方法之以下額外實施例。 連接子 - 藥物基團
在一些實施例中，本發明之連接子-藥物基團可為具有式(A')之結構之化合物或其醫藥學上可接受之鹽： 式(A') 其中： R 1為反應性基團； L 1為橋接間隔子； Lp為二價肽間隔子； G-L 2-A為自我分解型間隔子； R 2為親水性部分； L 2為鍵、亞甲基、伸新戊基或C 2-C 3伸烯基； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點； L 3為間隔子部分；且 D為藥物部分，其在例如自本文所揭示之抗體藥物結合物或免疫結合物釋放時能夠抑制Bcl-xL蛋白之活性。
本發明之連接子-藥物基團之某些態樣及實例提供於所列舉的實施例之以下清單中。應認識到在各實施例中指定之特徵可與其他指定特徵組合以提供本發明之其他實施例。 實施例 1.式(A')化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1為反應性基團； L 1為橋接間隔子； Lp為包含二至四個胺基酸殘基之二價肽間隔子； G-L 2-A為自我分解型間隔子； R 2為親水性部分； L 2為鍵、亞甲基、伸新戊基或C 2-C 3伸烯基； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點； L 3為間隔子部分；且 D為如本文所定義之藥物部分，例如Bcl-xL抑制劑。 實施例 2.式(A')化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1為反應性基團； L 1為橋接間隔子； Lp為包含二至四個胺基酸殘基之二價肽間隔子； 基團選自： ，其中 之*指示與D (例如與該藥物部分之N或O)之連接點， 之***指示與Lp之連接點； R 2為親水性部分； L 2為鍵、亞甲基、伸新戊基或C 2-C 3伸烯基； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點； L 3為間隔子部分；且 D為如本文所定義之藥物部分，例如Bcl-xL抑制劑。 實施例 3.式(A')之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有式(B')之結構： 式(B') 其中： R 1為反應性基團； L 1為橋接間隔子； Lp為包含二至四個胺基酸殘基之二價肽間隔子； R 2為親水性部分； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點； L 3為間隔子部分；且 D為如本文所定義之藥物部分，且包含N，其中D經由A至藥物部分之N之直接鍵連接至A。 實施例 4.式(A')或如實施例1至3中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1為 、-ONH 2、-NH 2、 、-N 3、 、-SH、-SR 3、-SSR 4、-S(=O) 2(CH=CH 2)、-(CH 2) 2S(=O) 2(CH=CH 2)、-NHS(=O) 2(CH=CH 2)、-NHC(=O)CH 2Br、-NHC(=O)CH 2I、 、-C(O)NHNH 2、 ； L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**； *-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**； *-C(=O)(CH 2) m-**； *-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-**； *-C(=O)O(CH 2) mSSC(R 3) 2(CH 2) mC(=O)NR 3(CH 2) mNR 3C(=O)(CH 2) m-**； *-C(=O)O(CH 2) mC(=O)NH(CH 2) m-**； *-C(=O)(CH 2) mNH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mNH(CH 2) nC(=O)-**； *-C(=O)(CH 2) mX 1(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nX 1(CH 2) n-**； *-C(=O)(CH 2) mNHC(=O)(CH 2) n-**； *-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nNHC(=O)(CH 2) n-**； *-C(=O)(CH 2) mNHC(=O)(CH 2) nX 1(CH 2) n-**； *-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nNHC(=O)(CH 2) nX 1(CH 2) n-**； *-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nC(=O)NH(CH 2) m-**； *-C(=O)(CH 2) mC(R 3) 2-**；或 *-C(=O)(CH 2) mC(=O)NH(CH 2) m-**， 其中L 1之*指示與Lp之連接點，且L 1之**指示與R 1之連接點； R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽或經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基； 各R 3獨立地選自H及C 1-6烷基； R 4為2-吡啶基或4-吡啶基； 各R 5獨立地選自H、C 1-C 6烷基、F、Cl及-OH； 各R 6獨立地選自H、C 1-C 6烷基、F、Cl、-NH 2、-OCH 3、-OCH 2CH 3、-N(CH 3) 2、-CN、-NO 2及-OH； 各R 7獨立地選自H、C 1-6烷基、氟、經-C(=O)OH取代之苯甲氧基、經-C(=O)OH取代之苯甲基、經-C(=O)OH取代之C 1-4烷氧基及經-C(=O)OH取代之C 1-4烷基； X 1為 ； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為二價肽間隔子，其包含選自以下之胺基酸殘基：甘胺酸、纈胺酸、瓜胺酸、離胺酸、異白胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、天冬醯胺酸、脯胺酸、丙胺酸、白胺酸、色胺酸及酪胺酸； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(R b)C(=O)O-**、-NHC(=O)C(R b) 2NHC(=O)O-**、-NHC(=O)C(R b) 2NH-**、-NHC(=O)C(R b) 2NHC(=O)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**、-NHC(=O)NH-**、-OC(=O)NH-**、-S(O) 2NH-**、-NHS(O) 2-**、-C(=O)-、-C(=O)O-**或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵、三唑基或***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點；且 L 3之*指示與R 2之連接點； 且 D為如本文所定義之藥物部分，且包含N或O，其中D經由A至藥物部分之N或O之直接鍵連接至A。 實施例 5.式(A')或如實施例1至4中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1為 、-ONH 2、 ； L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；或*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-，其中L 1之*指示與Lp之連接點，且L 1之**指示與R 1之連接點； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為選自以下之二價肽間隔子： (ValCit)、 (PheLys)、 (ValAla)、 (ValLys)及 (LeuCit)，其中Lp之*指示與L 1之連接點且Lp之**指示與G之-NH-基團之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(R b)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NH-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**、-NHC(=O)NH-**、-OC(=O)NH-**、-S(O) 2NH-**、-NHS(O) 2-**、-C(=O)-、-C(=O)O-**或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵、三唑基或***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點； R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽、經1至3個 或 取代之C 2-C 6烷基； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為如本文所定義之藥物部分，且包含N或O，其中D經由A至藥物部分之N或O之直接鍵連接至A。 實施例 6.式(A')或如實施例1至5中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1為 ； L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；或*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-，其中L 1之*指示與Lp之連接點，且L 1之**指示與R 1之連接點； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為選自以下之二價肽間隔子： (ValCit)，其中Lp之*指示與L 1之連接點且Lp之**指示與G之-NH-基團之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(R b)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**、-NHC(=O)NH-**、-OC(=O)NH-**、-S(O) 2NH-**、-NHS(O) 2-**、-C(=O)-、-C(=O)O-**或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵、三唑基或***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點； R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽、經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點； 且 D為如本文所定義之藥物部分，且包含N或O，其中D經由A至藥物部分之N或O之直接鍵連接至A。 實施例 7.式(A')或如實施例1至6中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1為 ； L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；或*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-，其中L 1之*指示與Lp之連接點且L 1之**指示與R 1之連接點； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為選自以下之二價肽間隔子： (ValCit)，其中Lp之*指示與L 1之連接點且Lp之**指示與G之-NH-基團之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(R b)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**或-NHC(=O)NH-**，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵、三唑基或***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點； R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽、經1至3個 取代之C 2-C 6烷基； A為鍵或-OC(=O)*，其中*指示與D之連接點； 且 D為如本文所定義之藥物部分，且包含N或O，其中D經由A至藥物部分之N或O之直接鍵連接至A。 實施例 8.式(A')或如實施例1至7中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1為 ； L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；或*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-，其中L 1之*指示與Lp之連接點且L 1之**指示與R 1之連接點； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為選自以下之二價肽間隔子： (ValCit)，其中Lp之*指示與L 1之連接點且Lp之**指示與G之-NH-基團之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(R b)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**或-C(=O)N(X-R 2)-**，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點； R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽或經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基； A為鍵或-OC(=O)*，其中*指示與D之連接點； 且 D為如本文所定義之藥物部分，且包含N或O，其中D經由A至藥物部分之N或O之直接鍵連接至A。 實施例 9.式(A')或如實施例1至8中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 1為選自表8之反應性基團。 實施例 10.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1為 、-ONH 2、-NH 2、 、-N 3、 、-SH、-SR 3、-SSR 4、-S(=O) 2(CH=CH 2)、-(CH 2) 2S(=O) 2(CH=CH 2)、-NHS(=O) 2(CH=CH 2)、-NHC(=O)CH 2Br、-NHC(=O)CH 2I、 、-C(O)NHNH 2、 。 實施例 11.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1為 、-ONH 2、-NH 2、 、-N 3、 、-SH、-SR 3、-SSR 4、-S(=O) 2(CH=CH 2)、-(CH 2) 2S(=O) 2(CH=CH 2)、-NHS(=O) 2(CH=CH 2)、-NHC(=O)CH 2Br、-NHC(=O)CH 2I、 、-C(O)NHNH 2、 。 實施例 12.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1為 。 實施例 13.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1為 。 實施例 14.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中：R 1為 。 實施例 15.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中R 1為-ONH 2。 實施例 16.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中：R 1為 或 。 實施例 17.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1為 。 實施例 18.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有以下結構： ，其中 R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。 實施例 19.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有以下結構： ，其中 R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。 實施例 20.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有以下結構： ，其中 R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。 實施例 21.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有以下結構： ，其中 各R獨立地選自H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。 實施例 22.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有以下結構： ，其中 各R獨立地選自H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。 實施例 23.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有以下結構： ，其中 Xa為-CH 2-、-OCH 2-、-NHCH 2-或-NRCH 2-，且各R獨立地為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。 實施例 24.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有以下結構： ，其中 R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。 實施例 25.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有以下結構： ，其中 Xb為-CH 2-、-OCH 2-、-NHCH 2-或-NRCH 2-，且各R獨立地為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。 實施例 26.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有以下結構： 。 實施例 27.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有以下結構： 。 實施例 28.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有以下結構： 。 實施例 29.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有以下結構： 。 實施例 30.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有以下結構： 。 實施例 31.式(A')或如實施例1至9中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有以下結構： ，其中n為2與24之間的整數。 實施例 32.如實施例1至9中任一項之式(A')化合物或其醫藥學上可接受之鹽，其具有表B中之化合物之結構。 實施例 33.一種具有式(C')之結構之式(A')之連接子-藥物基團的連接子， 式(C') 其中 L 1為橋接間隔子； Lp為二價肽間隔子； G-L 2-A為自我分解型間隔子； R 2為親水性部分； L 2為鍵、亞甲基、伸新戊基或C 2-C 3伸烯基； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點， 且 L 3為間隔子部分。 實施例 34.如實施例33之連接子，其中： L 1為橋接間隔子； Lp為包含二至四個胺基酸殘基之二價肽間隔子； G-L 2-A為自我分解型間隔子； R 2為親水性部分； L 2為鍵、亞甲基、伸新戊基或C 2-C 3伸烯基； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點， 且 L 3為間隔子部分。 實施例 35.如實施例33或34之連接子，其中： L 1為橋接間隔子； Lp為包含二至四個胺基酸殘基之二價肽間隔子； 基團選自： ，其中 之*指示與D (例如與該藥物部分之N或O)之連接點， 之***指示與Lp之連接點； R 2為親水性部分； L 2為鍵、亞甲基、伸新戊基或C 2-C 3伸烯基； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點， 且 L 3為間隔子部分。 實施例 36.如實施例33至35中任一項之連接子，其中： L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)O(CH 2) mSSC(R 3) 2(CH 2) mC(=O)NR 3(CH 2) mNR 3C(=O)(CH 2) m-**；*-C(=O)O(CH 2) mC(=O)NH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mNH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mNH(CH 2) nC(=O)-**；*-C(=O)(CH 2) mX 1(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nX 1(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) mNHC(=O)(CH 2) n-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nNHC(=O)(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) mNHC(=O)(CH 2) nX 1(CH 2) n-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nNHC(=O)(CH 2) nX 1(CH 2) n-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nC(=O)NH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mC(R 3) 2-**或*-C(=O)(CH 2) mC(=O)NH(CH 2) m-**，其中L 1之*指示與Lp之連接點。 R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽或經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基； 各R 3獨立地選自H及C 1-6烷基； X 1為 ； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為二價肽間隔子，其包含選自以下之胺基酸殘基：甘胺酸、纈胺酸、瓜胺酸、離胺酸、異白胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、天冬醯胺酸、脯胺酸、丙胺酸、白胺酸、色胺酸及酪胺酸； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(R b)C(=O)O-**、-NHC(=O)C(R b) 2NHC(=O)O-**、-NHC(=O)C(R b) 2NH-**、-NHC(=O)C(R b) 2NHC(=O)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**、-NHC(=O)NH-**、-OC(=O)NH-**、-S(O) 2NH-**、-NHS(O) 2-**、-C(=O)-、-C(=O)O-**或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵、三唑基或***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點。 實施例 37.如實施例33至36中任一項之連接子，其中： L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；或*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-，其中L 1之*指示與Lp之連接點。 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為選自以下之二價肽間隔子： (ValCit)、 (PheLys)、 (ValAla)、 (ValLys)及 (LeuCit)，其中Lp之*指示與L 1之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(R b)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NH-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**、-NHC(=O)NH-**、-OC(=O)NH-**、-S(O) 2NH-**、-NHS(O) 2-**、-C(=O)-、-C(=O)O-**或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵、三唑基或***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點； R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽或經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基； 且 A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點。 實施例 38.如實施例33至37中任一項之連接子，其中： L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；或*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-，其中L 1之*指示與Lp之連接點； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為選自以下之二價肽間隔子： (ValCit)，其中Lp之*指示與L 1之連接點且Lp之**指示與G之-NH-基團之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH2N(Rb)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**、-NHC(=O)NH-**、-OC(=O)NH-**、-S(O) 2NH-**、-NHS(O) 2-**、-C(=O)-、-C(=O)O-**或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵、三唑基或***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點； R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽或經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基； 且 A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點。 實施例 39.如實施例33至38中任一項之連接子，其中： L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；或*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-，其中L 1之*指示與Lp之連接點； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為選自以下之二價肽間隔子： (ValCit)，其中Lp之*指示與L 1之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH2N(Rb)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**或-NHC(=O)NH-**，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵、三唑基或***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點； R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽或經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基； 且 A為鍵或-OC(=O)*，其中*指示與D之連接點。 實施例 40.如實施例33至39中任一項之連接子，其中： L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；或*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-，其中L 1之*指示與Lp之連接點； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為選自以下之二價肽間隔子： (ValCit)，其中Lp之*指示與L 1之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH2N(Rb)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**或-C(=O)N(X-R 2)-**，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點； R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽或經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基； 且 A為鍵或-OC(=O)*，其中*指示與D之連接點。 實施例 41.具有式(D')之結構之式(C')之連接子， 式(D') 其中 L 1為橋接間隔子； Lp為二價肽間隔子； R 2為親水性部分； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點， 且 L 3為間隔子部分。 實施例 42.如實施例41之連接子，其中： L 1為橋接間隔子； Lp為包含二至四個胺基酸殘基之二價肽間隔子； R 2為親水性部分； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點， 且 L 3為間隔子部分。 實施例 43.如實施例41或42之連接子，其中： L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)O(CH 2) mSSC(R 3) 2(CH 2) mC(=O)NR 3(CH 2) mNR 3C(=O)(CH 2) m-**；*-C(=O)O(CH 2) mC(=O)NH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mNH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mNH(CH 2) nC(=O)-**；*-C(=O)(CH 2) mX 1(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nX 1(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) mNHC(=O)(CH 2) n-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nNHC(=O)(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) mNHC(=O)(CH 2) nX 1(CH 2) n-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nNHC(=O)(CH 2) nX 1(CH 2) n-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nC(=O)NH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mC(R 3) 2-**或*-C(=O)(CH 2) mC(=O)NH(CH 2) m-**，其中L 1之*指示與Lp之連接點； R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽或經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基； 各R 3獨立地選自H及C 1-6烷基； X 1為 ； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為二價肽間隔子，其包含選自以下之胺基酸殘基：甘胺酸、纈胺酸、瓜胺酸、離胺酸、異白胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、天冬醯胺酸、脯胺酸、丙胺酸、白胺酸、色胺酸及酪胺酸； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH2N(Rb)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**、-NHC(=O)NH-**、-OC(=O)NH-**、-S(O) 2NH-**、-NHS(O) 2-**、-C(=O)-、-C(=O)O-**或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵、三唑基或***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點。 實施例 44.如實施例41至43中任一項之連接子，其中： L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；或*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-，其中L 1之*指示與Lp之連接點； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為選自以下之二價肽間隔子： (ValCit)、 (PheLys)、 (ValAla)、 (ValLys)及 (LeuCit)，其中Lp之*指示與L 1之連接點且Lp之**指示與G之-NH-基團之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH2N(Rb)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**、-NHC(=O)NH-**、-OC(=O)NH-**、-S(O) 2NH-**、-NHS(O) 2-**、-C(=O)-、-C(=O)O-**或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵、三唑基或***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點； R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽或經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基； 且 A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點。 實施例 45.如實施例41至44中任一項之連接子，其中： L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；或*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-，其中L 1之*指示與Lp之連接點； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為選自以下之二價肽間隔子： (ValCit)，其中Lp之*指示與L 1之連接點且Lp之**指示與G之-NH-基團之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(Rb)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**、-NHC(=O)NH-**、-OC(=O)NH-**、-S(O) 2NH-**、-NHS(O) 2-**、-C(=O)-、-C(=O)O-**或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵、三唑基或***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點； R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽或經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基； 且 A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點。 實施例 46.如實施例41至45中任一項之連接子，其中： L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；或*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-，其中L 1之*指示與Lp之連接點； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為選自以下之二價肽間隔子： (ValCit)，其中Lp之*指示與L 1之連接點且Lp之**指示與G之-NH-基團之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(Rb)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**或-NHC(=O)NH-**，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵、三唑基或***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點； R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽或經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基； 且 A為鍵或-OC(=O)*，其中*指示與D之連接點。 實施例 47.如實施例41至46中任一項之連接子，其中： L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；或*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-，其中L 1之*指示與Lp之連接點； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為選自以下之二價肽間隔子： (ValCit)，其中Lp之*指示與L 1之連接點且Lp之**指示與G之-NH-基團之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(Rb)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**或-C(=O)N(X-R 2)-**，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點； R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽或經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基； 且 A為鍵或-OC(=O)*，其中*指示與D之連接點。 實施例 48.如實施例33至47中任一項之連接子，其具有以下結構： ，其中 R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。 實施例 49.如實施例33至47中任一項之連接子，其具有以下結構： ，其中 R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。 實施例 50.如實施例33至47中任一項之連接子，其具有以下結構： ，其中 R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。 實施例 51.如實施例33至47中任一項之連接子，其具有以下結構： ，其中 各R獨立地選自H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。 實施例 52.如實施例37至47中任一項之連接子，其具有以下結構： ，其中 各R獨立地選自H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。 實施例 53.如實施例33至47中任一項之連接子，其具有以下結構： ，其中 Xa為-CH 2-、-OCH 2-、-NHCH 2-或-NRCH 2-，且各R獨立地為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。 實施例 54.如實施例33至47中任一項之連接子，其具有以下結構： ，其中 R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。 實施例 55.如實施例33至47中任一項之連接子，其具有以下結構： ，其中 Xb為-CH 2-、-OCH 2-、-NHCH 2-或-NRCH 2-，且各R獨立地為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH。 實施例 56.如實施例33至47中任一項之連接子，其具有以下結構： 。 實施例 57.如實施例33至47中任一項之連接子，其具有以下結構： 。 實施例 58.如實施例37至47中任一項之連接子，其具有以下結構： 。 實施例 59.如實施例33至47中任一項之連接子，其具有以下結構： 實施例 60.如實施例33至47中任一項之連接子，其具有以下結構： 。 實施例 61.如實施例33至47中任一項之連接子，其具有以下結構： ，其中n為2與24之間的整數。 出於說明之目的，本文中描繪之通用反應流程提供合成本發明化合物以及關鍵中間物之潛在途徑。關於個別反應步驟之更詳細描述，參見下文實例部分。儘管特定起始材料及試劑描述於流程中且在下文論述，但可容易用其他起始材料及試劑取代以提供多種衍生物及/或反應條件。另外，藉由下述方法製備的許多化合物可根據本發明使用熟習此項技術者熟知的習知化學方法進一步修飾。 藉助於實例，式(B')化合物之通用合成在以下展示於流程1中。 流程 1 本發明之抗體藥物結合物本發明提供抗體藥物結合物，在本文中亦稱為免疫結合物，其包含有包含一或多個親水性部分之連接子。 本發明之抗體藥物結合物具有式(E')之結構： 式(E') 其中： Ab為抗Met抗體或其抗原結合片段； R 100為偶合基團； L 1為橋接間隔子； Lp為二價肽間隔子； G-L 2-A為自我分解型間隔子； R 2為親水性部分； L 2為鍵、亞甲基、伸新戊基或C 2-C 3伸烯基； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點； L 3為間隔子部分； D為如本文所定義之藥物部分，例如BclxL抑制劑，且可包含N，其中D可經由A至藥物部分之N的直接鍵連接至A， 且 y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 本發明之抗體藥物結合物之某些態樣及實例提供於所列舉的實施例之以下清單中。應認識到在各實施例中指定之特徵可與其他指定特徵組合以提供本發明之其他實施例。 實施例 62.式(E')免疫結合物，其中： Ab為抗Met抗體或其抗原結合片段； R 100為偶合基團； L 1為橋接間隔子； Lp為包含二至四個胺基酸殘基之二價肽間隔子； G-L 2-A為自我分解型間隔子； R 2為親水性部分； L 2為鍵、亞甲基、伸新戊基或C 2-C 3伸烯基； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點； L 3為間隔子部分； D為如本文所定義之藥物部分，其中D經由A至D (例如藥物部分之N)之直接鍵連接至A， 且 y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 63.式(E')或如實施例62之免疫結合物，其中： Ab為抗Met抗體或其抗原結合片段； R 100為偶合基團； L 1為橋接間隔子； Lp為包含二至四個胺基酸殘基之二價肽間隔子； 基團選自： ，其中 之*指示與D (例如與該藥物部分之N或O)之連接點， 之***指示與Lp之連接點； R 2為親水性部分； L 2為鍵、亞甲基、伸新戊基或C 2-C 3伸烯基； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點； L 3為間隔子部分； D為如本文所定義之藥物部分，且包含N，其中D經由A至藥物部分之N之直接鍵連接至A， 且 y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 64.式(E')或如實施例62至63中任一項之免疫結合物，其具有式(F')之結構， 式(F') 其中： Ab為抗Met抗體或其抗原結合片段； R 100為偶合基團； L 1為橋接間隔子； Lp為包含二至四個胺基酸殘基之二價肽間隔子； R 2為親水性部分； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點； L 3為間隔子部分； D為如本文所定義之藥物部分，且包含N，其中D經由A至藥物部分之N之直接鍵連接至A， 且 y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 65.式(D')或如實施例62至64中任一項之免疫結合物，其中： Ab為抗Met抗體或其抗原結合片段； R 100為 、-S-、-C(=O)-、-ON=***、-NHC(=O)CH 2-***、-S(=O) 2CH 2CH 2-***、-(CH 2) 2S(=O) 2CH 2CH 2-***、-NHS(=O) 2CH 2CH 2-***、-NHC(=O)CH 2CH 2-***、-CH 2NHCH 2CH 2-***、-NHCH 2CH 2-***、 ，其中R 100之***指示與Ab之連接點； L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)O(CH 2) mSSC(R 3) 2(CH 2) mC(=O)NR 3(CH 2) mNR 3C(=O)(CH 2) m-**；*-C(=O)O(CH 2) mC(=O)NH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mNH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mNH(CH 2) nC(=O)-**；*-C(=O)(CH 2) mX 1(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nX 1(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) mNHC(=O)(CH 2) n-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nNHC(=O)(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) mNHC(=O)(CH 2) nX 1(CH 2) n-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nNHC(=O)(CH 2) nX 1(CH 2) n-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nC(=O)NH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mC(R 3) 2-**或*-C(=O)(CH 2) mC(=O)NH(CH 2) m-**，其中L 1之*指示與Lp之連接點，且L 1之**指示與R 100之連接點； R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽或經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基； 各R 3獨立地選自H及C 1-6烷基； R 4為2-吡啶基或4-吡啶基； 各R 5獨立地選自H、C 1-C 6烷基、F、Cl及-OH； 各R 6獨立地選自H、C 1-C 6烷基、F、Cl、-NH 2、-OCH 3、-OCH 2CH 3、-N(CH 3) 2、-CN、-NO 2及-OH； 各R 7獨立地選自H、C 1-6烷基、氟、經-C(=O)OH取代之苯甲氧基、經-C(=O)OH取代之苯甲基、經-C(=O)OH取代之C 1-4烷氧基及經-C(=O)OH取代之C 1-4烷基； X 1為 ； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為二價肽間隔子，其包含選自以下之胺基酸殘基：纈胺酸、瓜胺酸、離胺酸、異白胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、天冬醯胺酸、脯胺酸、丙胺酸、白胺酸、色胺酸及酪胺酸； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(Rb)C(=O)O-**、-NHC(=O)C(R b) 2NHC(=O)O-**、-NHC(=O)C(R b) 2NH-**、-NHC(=O)C(R b) 2NHC(=O)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**、-NHC(=O)NH-**、-OC(=O)NH-**、-S(O) 2NH-**、-NHS(O) 2-**、-C(=O)-、-C(=O)O-**或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵、三唑基或***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點； D為如本文所定義之藥物部分，且包含N，其中D經由A至藥物部分之N之直接鍵連接至A， 且 y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 66.式(D')或如實施例62至65中任一項之免疫結合物，其中： Ab為抗Met抗體或其抗原結合片段； R 100為 ，其中R 100之***指示與Ab之連接點； L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；或*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-，其中L 1之*指示與Lp之連接點，且L 1之**指示與R 100之連接點； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為選自以下之二價肽間隔子： (ValCit)、 (PheLys)、 (ValAla)、 (ValLys)及 (LeuCit)，其中Lp之*指示與L 1之連接點且Lp之**指示與G之-NH-基團之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(Rb)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NH-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**、-NHC(=O)NH-**、-OC(=O)NH-**、-S(O) 2NH-**、-NHS(O) 2-**、-C(=O)-、-C(=O)O-**或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵、三唑基或***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點； R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽或經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點； D為如本文所定義之藥物部分，且包含N或O，其中D經由A至藥物部分之N或O之直接鍵連接至A， 且 y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 67.式(E')或如實施例62至66中任一項之免疫結合物，其中： Ab為抗Met抗體或其抗原結合片段； R 100為 ，其中R 100之***指示與Ab之連接點； L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；或*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-，其中L 1之*指示與Lp之連接點，且L 1之**指示與R 100之連接點； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為選自以下之二價肽間隔子： (ValCit)，其中Lp之*指示與L 1之連接點且Lp之**指示與G之-NH-基團之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(Rb)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**、-NHC(=O)NH-**、-OC(=O)NH-**、-S(O) 2NH-**、-NHS(O) 2-**、-C(=O)-、-C(=O)O-**或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵、三唑基或***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點； R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽或經1至3個 或 基團取代之C 2-C 6烷基； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點； D為如本文所定義之藥物部分，且包含N或O，其中D經由A至藥物部分之N或O之直接鍵連接至A， 且 y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 68.式(E')或如實施例62至67中任一項之免疫結合物，其中： Ab為抗Met抗體或其抗原結合片段； R 100為 ，其中R 100之***指示與Ab之連接點； L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；或*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-，其中L 1之*指示與Lp之連接點，且L 1之**指示與R 100之連接點； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為選自以下之二價肽間隔子： (ValCit)，其中Lp之*指示與L 1之連接點且Lp之**指示與G之-NH-基團之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(Rb)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**或-NHC(=O)NH-**，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵、三唑基或***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點； R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽或經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基； A為鍵或-OC(=O)*，其中*指示與D之連接點； D為如本文所定義之藥物部分，且包含N或O，其中D經由A至藥物部分之N或O之直接鍵連接至A， 且 y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 69.式(E')或如實施例62至68中任一項之免疫結合物，其中： Ab為抗Met抗體或其抗原結合片段； R 100為 ，其中R 100之***指示與Ab之連接點； L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；或*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-，其中L 1之*指示與Lp之連接點，且L 1之**指示與R 100之連接點； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各t獨立地選自2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； Lp為選自以下之二價肽間隔子： (ValCit)，其中Lp之*指示與L 1之連接點且Lp之**指示與G之-NH-基團之連接點； L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(Rb)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**或-C(=O)N(X-R 2)-**，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點； R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽或經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基； A為鍵或-OC(=O)*，其中*指示與D之連接點； D為如本文所定義之藥物部分，且包含N或O，其中D經由A至藥物部分之N或O之直接鍵連接至A， 且 y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 70.式(E')或如實施例62至65中任一項之免疫結合物，其中 R 100為 、-S-、-C(=O)-、-ON=***、-NHC(=O)CH 2-***、-S(=O) 2CH 2CH 2-***、-(CH 2) 2S(=O) 2CH 2CH 2-***、-NHS(=O) 2CH 2CH 2-***、-NHC(=O)CH 2CH 2-***、-CH 2NHCH 2CH 2-***、-NHCH 2CH 2-***、 ，其中R 100之***指示與Ab之連接點。 實施例 71.式(E')或如實施例60至63中任一項之免疫結合物，其中 R 100為 ，其中R 100之***指示與Ab之連接點。 實施例 72.式(E')或如實施例62至65中任一項之免疫結合物，其中 R 100為 ，其中R 100之***指示與Ab之連接點。 實施例 73.式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其具有以下結構： ，其中 R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH，且y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 74.式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其具有以下結構： ，其中 R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH，且y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 75.式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其具有以下結構： ，其中 R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH，且y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 76.式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其具有以下結構： ，其中 各R獨立地選自H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH，且y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 77.式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其具有以下結構： ，其中 各R獨立地選自H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH，且y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 78.式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其具有以下結構： ，其中 Xa為-CH 2-、-OCH 2-、-NHCH 2-或-NRCH 2-，且各R獨立地為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH，且y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 79.式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其具有以下結構： ，其中 R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH，且y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 80.式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其具有以下結構： ，其中 Xb為-CH 2-、-OCH 2-、-NHCH 2-或-NRCH 2-，且各R獨立地為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH，且y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 81.式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其具有以下結構： ，其中y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 82.式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其具有以下結構： ，其中y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 83.式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其具有以下結構： ，其中y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 84.式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其具有以下結構： ，其中y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 85.式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其具有以下結構： ，其中y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 實施例 86.式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其具有以下結構： ，其中y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16。 本發明之連接子藥物基團、連接子及抗體藥物結合物之某些態樣及實例提供於額外所列舉的實施例之以下清單中。應認識到在各實施例中指定之特徵可與其他指定特徵組合以提供本發明之其他實施例。 實施例 87.式(A')或如實施例1至2中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至40中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至63中任一項之免疫結合物，其中： G為 ，其中G之*指示與L 2之連接點，且G之**指示與L 3之連接點，且G之***指示與Lp之連接點。 實施例 88.式(A')或如實施例1至2中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至40中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至63中任一項之免疫結合物，其中： G為 ，其中G之*指示與L 2之連接點，且G之**指示與L 3之連接點，且G之***指示與Lp之連接點。 實施例 89.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其中： L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)O(CH 2) mSSC(R 3) 2(CH 2) mC(=O)NR 3(CH 2) mNR 3C(=O)(CH 2) m-**；*-C(=O)O(CH 2) mC(=O)NH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mNH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mNH(CH 2) nC(=O)-**；*-C(=O)(CH 2) mX 1(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nX 1(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) mNHC(=O)(CH 2) n-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nNHC(=O)(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) mNHC(=O)(CH 2) nX 1(CH 2) n-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nNHC(=O)(CH 2) nX 1(CH 2) n-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nC(=O)NH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mC(R 3) 2-**或*-C(=O)(CH 2) mC(=O)NH(CH 2) m-**，其中L 1之*指示與Lp之連接點，且L 1之**指示與R 1之連接點(若存在)，或L 1之**指示與R 100之連接點(若存在)。 實施例 90.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其中： L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) mNH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mNH(CH 2) nC(=O)-**；*-C(=O)(CH 2) mNHC(=O)(CH 2) n-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nNHC(=O)(CH 2) n-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nC(=O)NH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mC(R 3) 2-**或*-C(=O)(CH 2) mC(=O)NH(CH 2) m-**，其中L 1之*指示與Lp之連接點，且L 1之**指示與R 1之連接點(若存在)，或L 1之**指示與R 100之連接點(若存在)。 實施例 91.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其中： L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**；*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) mNH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mNH(CH 2) nC(=O)-**；或*-C(=O)(CH 2) mNHC(=O)(CH 2) n-**，其中L 1之*指示與Lp之連接點，且L 1之**指示與R 1之連接點(若存在)，或L 1之**指示與R 100之連接點(若存在)。 實施例 92.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其中： L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(=O)(CH 2) m-**或*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-**，其中L 1之*指示與Lp之連接點，且L 1之**指示與R 1之連接點(若存在)，或L 1之**指示與R 100之連接點(若存在)。 實施例 93.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其中L 1為*-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**，其中L 1之*指示與Lp之連接點，且L 1之**指示與R 1之連接點(若存在)，或L 1之**指示與R 100之連接點(若存在)。 實施例 94.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其中L 1為*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**，其中L 1之*指示與Lp之連接點，且L 1之**指示與R 1之連接點(若存在)，或L 1之**指示與R 100之連接點(若存在)。 實施例 95.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項之免疫結合物，其中L 1為*-C(=O)(CH 2) m-**，其中L 1之*指示與Lp之連接點，且L 1之**指示與R 1之連接點(若存在)，或L 1之**指示與R 100之連接點(若存在)。 實施例 96.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例32至46中任一項之連接子及式(E')或如實施例60至70中任一項之免疫結合物，其中L 1為*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-**，其中L 1之*指示與Lp之連接點，且L 1之**指示與R 1之連接點(若存在)，或L 1之**指示與R 100之連接點(若存在)。 實施例 97.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例84至93中任一項之免疫結合物，其中Lp為酶可裂解二價肽間隔子。 實施例 98.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例32至46中任一項之連接子及式(E')或如實施例60至70中任一項、或如實施例87至97中任一項之免疫結合物，其中Lp為二價肽間隔子，其包含選自以下之胺基酸殘基：甘胺酸、纈胺酸、瓜胺酸、離胺酸、異白胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、天冬醯胺酸、脯胺酸、丙胺酸、白胺酸、色胺酸及酪胺酸。 實施例 99.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至98中任一項之免疫結合物，其中Lp為包含二至四個胺基酸殘基之二價肽間隔子。 實施例 100.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至99中任一項之免疫結合物，其中Lp為二價肽間隔子，其包含二至四個各自獨立地選自以下之胺基酸殘基：甘胺酸、纈胺酸、瓜胺酸、離胺酸、異白胺酸、苯丙胺酸、甲硫胺酸、天冬醯胺酸、脯胺酸、丙胺酸、白胺酸、色胺酸及酪胺酸。 實施例 101.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至100中任一項之免疫結合物，其中： Lp為選自以下之二價肽間隔子： (ValCit)、 (PheLys)、 (ValAla)、 (ValLys)及 (LeuCit)，其中Lp之*指示與L 1之連接點，且Lp之**指示與式(B')之-NH-基團之連接點或Lp之**指示與式(A')之G之連接點。 實施例 102.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至101中任一項之免疫結合物，其中： Lp為 (ValCit)，其中Lp之*指示與L 1之連接點，且Lp之**指示與式(B')之-NH-基團之連接點或Lp之**指示與式(A')之G之連接點。 實施例 103.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至101中任一項之免疫結合物，其中： Lp為 (PheLys)，其中Lp之*指示與L 1之連接點，且Lp之**指示與式(B')之-NH-基團之連接點或Lp之**指示與式(A')之G之連接點。 實施例 104.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至101中任一項之免疫結合物，其中： Lp為 (ValAla)，其中Lp之*指示與L 1之連接點，且Lp之**指示與式(B')之-NH-基團之連接點或Lp之**指示與式(A')之G之連接點。 實施例 105.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至101中任一項之免疫結合物，其中： Lp為 (ValLys)，其中Lp之*指示與L 1之連接點，且Lp之**指示與式(B')之-NH-基團之連接點或Lp之**指示與式(A')之G之連接點。 實施例 106.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至101中任一項之免疫結合物，其中： Lp為 (LeuCit)，其中Lp之*指示與L 1之連接點，且Lp之**指示與式(B')之-NH-基團之連接點或Lp之**指示與式(A')之G之連接點。 實施例 107.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至106中任一項之免疫結合物，其中L 2為鍵、亞甲基或C 2-C 3伸烯基。 實施例 108.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至107中任一項之免疫結合物，其中L 2為鍵或亞甲基。 實施例 109.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至108中任一項之免疫結合物，其中L 2為鍵。 實施例 110.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至108中任一項之免疫結合物，其中L 2為亞甲基。 實施例 111.式(A')或如實施例1至30中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至85中任一項、或如實施例87至110中任一項之免疫結合物，其中： A為鍵、-OC(=O)-、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基。 實施例 112.式(A')或如實施例1至32中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至61中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至86中任一項、或如實施例87至111中任一項之免疫結合物，其中A為鍵或-OC(=O)。 實施例 113.式(A')或如實施例1至32中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至61中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至86中任一項、或如實施例87至112中任一項之免疫結合物，其中A為鍵。 實施例 114.式(A')或如實施例1至32中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至61中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至86中任一項、或如實施例87至112中任一項之免疫結合物，其中A為-OC(=O)。 實施例 115.式(A')或如實施例1至32中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至61中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至86中任一項、或如實施例87至110中任一項之免疫結合物，其中： A為 。 實施例 116.式(A')或如實施例1至32中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至61中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至85中任一項、或如實施例86至110中任一項之免疫結合物，其中： A為-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-，其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基。 實施例 117.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至49中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至116中任一項之免疫結合物，其中： L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(R b)C(=O)O-**、-NHC(=O)C(R b) 2NHC(=O)O-**、-NHC(=O)C(R b) 2NH-**、-NHC(=O)C(R b) 2NHC(=O)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**、-NHC(=O)NH-**、-OC(=O)NH-**、-S(O) 2NH-**、-NHS(O) 2-**、-C(=O)-、-C(=O)O-**或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵、三唑基或***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點。 實施例 118.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至117中任一項之免疫結合物，其中： L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(R b)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NH-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**、-NHC(=O)NH-**、-OC(=O)NH-**、-S(O) 2NH-**、-NHS(O) 2-**、-C(=O)-、-C(=O)O-**或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵； 且 L 3之*指示與R 2之連接點。 實施例 119.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至118中任一項之免疫結合物，其中： L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(R b)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NH-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**、-NHC(=O)NH-**、-OC(=O)NH-**、-S(O) 2NH-**、-NHS(O) 2-**、-C(=O)-、-C(=O)O-**或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為三唑基，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點。 實施例 120.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至118中任一項之免疫結合物，其中： L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(R b)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NH-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-**、-C(=O)NR b-**、-C(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)-**、-CH 2NR bC(=O)NH-**、-CH 2NR bC(=O)NR b-**、-NHC(=O)-**、-NHC(=O)O-**、-NHC(=O)NH-**、-OC(=O)NH-**、-S(O) 2NH-**、-NHS(O) 2-**、-C(=O)-、-C(=O)O-**或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點。 實施例 121.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至118中任一項之免疫結合物，其中： L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(R b)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵、三唑基或***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點。 實施例 122.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至118中任一項之免疫結合物，其中： L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(R b)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為鍵； 且 L 3之*指示與R 2之連接點。 實施例 123.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例83至118中任一項之免疫結合物，其中： L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(R b)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為三唑基，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點。 實施例 124.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至118中任一項之免疫結合物，其中： L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中 W為-CH 2O-**、-CH 2N(R b)C(=O)O-**、-NHC(=O)CH 2NHC(=O)O-**、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-**、-C(=O)N(X-R 2)-**，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基或C 3-C 8環烷基，且其中W之**指示與X之連接點； X為***-CH 2-三唑基-*，其中X之***指示與W之連接點且X之*指示與R 2之連接點； 且 L 3之*指示與R 2之連接點。 實施例 125.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例86至124中任一項之免疫結合物，其中：R 2為選自以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、糖、寡醣、多肽或經1至3個 基團取代之C 2-C 6烷基。 實施例 126.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至125中任一項之免疫結合物，其中R 2為糖。 實施例 127.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至125中任一項之免疫結合物，其中R 2為寡醣。 實施例 128.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至125中任一項之免疫結合物，其中R 2為多肽。 實施例 129.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至125中任一項之免疫結合物，其中R 2為聚伸烷二醇。 實施例 130.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至125中任一項之免疫結合物，其中R 2為具有結構-(O(CH 2) m) tR'之聚伸烷二醇，其中R'為OH、OCH 3或OCH 2CH 2C(=O)OH，m為1-10且t為4-40。 實施例 131.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至125中任一項之免疫結合物，其中R 2為具有結構-((CH 2) mO) tR''-之聚伸烷二醇，其中R''為H、CH 3或CH 2CH 2C(=O)OH，m為1-10且t為4-40。 實施例 132.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至125中任一項之免疫結合物，其中R 2為聚乙二醇。 實施例 133.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至125中任一項之免疫結合物，其中R 2為具有結構-(OCH 2CH 2) tR'之聚乙二醇，其中R'為OH、OCH 3或OCH 2CH 2C(=O)OH且t為4-40。 實施例 134.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至125中任一項之免疫結合物，其中R 2為具有結構-(CH 2CH 2O) tR''-之聚乙二醇，其中R''為H、CH 3或CH 2CH 2C(=O)OH且t為4-40。 實施例 135.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至125中任一項之免疫結合物，其中： R 2為 ，其中R 2之*指示與X或L 3之連接點。 實施例 136.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至125中任一項之免疫結合物，其中： R 2為 ，其中R 2之*指示與X或L 3之連接點。 實施例 137.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至125中任一項之免疫結合物，其中： R 2為 ，其中R 2之*指示與X或L 3之連接點。 實施例 138.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至125中任一項之免疫結合物，其中： R 2為 ，其中R 2之*指示與X或L 3之連接點。 實施例 139.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至138中任一項之免疫結合物，其中： X 1為 。 實施例 140.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至138中任一項之免疫結合物，其中： X 1為 。 實施例 141.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至140中任一項之免疫結合物，其中： 各m獨立地選自1、2、3、4及5。 實施例 142.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至140中任一項之免疫結合物，其中： 各m獨立地選自1、2及3。 實施例 143.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至142中任一項之免疫結合物，其中： 各n獨立地選自1、2、3、4及5。 實施例 144.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至142中任一項之免疫結合物，其中： 各n獨立地選自1、2及3。 實施例 145.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至144中任一項之免疫結合物，其中： 各t獨立地選自2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30。 實施例 146.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至144中任一項之免疫結合物，其中： 各t獨立地選自4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25。 實施例 147.式(A')或如實施例1至17中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(C')或如實施例33至47中任一項之連接子及式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至144中任一項之免疫結合物，其中： 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17及18。 實施例 148.式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至147中任一項之免疫結合物，其中y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或14。 實施例 149.式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至147中任一項之免疫結合物，其中y為1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12。 實施例 150.式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至147中任一項之免疫結合物，其中y為1、2、3、4、5、6、7、8、9或10。 實施例 151.式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至147中任一項之免疫結合物，其中y為1、2、3、4、5、6、7或8。 實施例 152.式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至147中任一項之免疫結合物，其中y為1、2、3、4、5或6。 實施例 153.式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至147中任一項之免疫結合物，其中y為1、2、3或4。 實施例 154.式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至147中任一項之免疫結合物，其中y為1或2。 實施例 155.式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至147中任一項之免疫結合物，其中y為2。 實施例 156.式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至147中任一項之免疫結合物，其中y為4。 實施例 157.式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至147中任一項之免疫結合物，其中y為6。 實施例 158.式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至147中任一項之免疫結合物，其中y為8。 實施例 159.式(A')或如實施例1至31中任一項之化合物或其醫藥學上可接受之鹽、式(E')或如實施例62至72中任一項、或如實施例87至158中任一項之免疫結合物，其中在自免疫結合物釋放時，D為Bcl-xL抑制劑。 其他連接子基團
適用於製造本文所揭示之Bcl-xL抑制劑之ADC或免疫結合物的連接子基團之其他實例包括諸如以下之國際申請公開案中所揭示之彼等：WO2018200812、WO2017214456、WO2017214458、WO2017214462、WO2017214233、WO2017214282、WO2017214301、WO2017214322、WO2017214335、WO2017214339、WO2016094509、WO2016094517及WO2016094505，其中之各者之內容以其全文引用之方式併入。
舉例而言，本文所揭示之Bcl-xL抑制劑之免疫結合物可具有選自以下之連接子-有效負載(「-L-D」)結構： ， 其中： Lc為連接子組分，且各Lc獨立地選自如本文所揭示之連接子組分； x為選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19及20之整數； y為選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19及20之整數； p為選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10之整數； D為本文所揭示之Bcl-xL抑制劑； 且各裂解元件(C E)獨立地選自自我分解型間隔子及對選自以下之裂解敏感之基團：酸誘導之裂解、肽酶誘導之裂解、酯酶誘導之裂解、醣苷酶誘導之裂解、磷酸二酯酶誘導之裂解、磷酸酶誘導之裂解、蛋白酶誘導之裂解、脂肪酶誘導之裂解或二硫鍵裂解。
在一些實施例中，L具有選自以下之結構，或L包含選自以下之結構組分： 。
在一些實施例中，Lc為連接子組分，且各Lc獨立地選自 。
在一些實施例中，連接子L包含選自以下之連接子組分：  -**C(=O)O(CH 2) mNR 11C(=O)(CH 2) m-； -**C(=O)O(CH 2) mNR 11C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-； -**C(=O)O(CH 2) mNR 11C(=O)X 1aX 2aC(=O)(CH 2) m-； -**C(=O)OC(R 12) 2(CH 2) mNR 11C(=O)X 1aX 2aC(=O)(CH 2) m-； -**C(=O)O(CH 2) mNR 11C(=O)X 1aX 2aC(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-； -**C(=O)O(CH 2) mNR 11C(=O)X 1aX 2aC(=O)(CH 2) mO(CH 2) mC(=O)-； -**C(=O)O(CH 2) mNR 11C(=O)X 4C(=O)NR 11(CH 2) mNR 11C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-； -**C(=O)O(CH 2) mNR 11C(=O)X 5C(=O)(CH 2) mNR 11C(=O)(CH 2) m-； -**C(=O)X 4C(=O)NR 11(CH 2) mNR 11C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-； -**C(=O)(CH 2) mNR 11C(=O)X 1aX 2aC(=O)(CH 2) m-； -**C(=O)O(CH 2) mX 6C(=O)X 1aX 2aC(=O)(CH 2) m-； -**C(=O)(CH 2) mNR 11C(=O)((CH 2) mO) n(CH 2) m- -**C(=O)O(CH 2) mX 6C(=O)(CH 2) m-； -**C(=O)O(CH 2) mX 6C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-； -**C(=O)O(CH 2) mX 6C(=O)X 1aX 2aC(=O)(CH 2) m-； -**C(=O)O(CH 2) mX 6C(=O)X 1aX 2aC(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-； -**C(=O)O(CH 2) mX 6C(=O)X 1aX 2aC(=O)(CH 2) mO(CH 2) mC(=O)-； -**C(=O)O(CH 2) mX 6C(=O)X 4C(=O)NR 11(CH 2) mNR 11C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-； -**C(=O)X 4C(=O)X 6(CH 2) mNR 11C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-； -**C(=O)(CH 2) mX 6C(=O)X 1aX 2aC(=O)(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)X 5C(=O)(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)X 5C(=O)(CH 2) mNR 11C(=O)(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)X 5C(=O)(CH 2) mX 3(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)X 5C(=O)((CH 2) mO) n(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)X 5C(=O)((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C (=O)(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)X 5C(=O)((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)(CH 2) mX 3(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O))X 5C(=O)((CH 2) mO) n(CH 2) mX 3(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)X 5C(=O)(CH 2) mNR 11C(=O) ((CH 2) mO) n(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)X 5C(=O)(CH 2) mNR 11C(=O) ((CH 2) mO) n(CH 2) mX 3(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)X 5(CH 2) mX 3(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)X 5((CH 2) mO) n(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)X 5((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)X 5((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C (=O)(CH 2) mX 3(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)X 5((CH 2) mO) n(CH 2) mX 3(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)X 5(CH 2) mNR 11((CH 2) mO) n(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)X 5C(=O)(CH 2) mNR 11((CH 2) mO) n(CH 2) mX 3(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)X 5(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)X 5C(=O)((CH 2) mO) n(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)X 5(CH 2) mX 3(CH 2) m-；-**C(=O)O(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) m-；-**C(=O)O(CH 2) mNR 11(CH 2) m-； -**C(=O)O(CH 2) mNR 11(CH 2) mC(=O)X 2aX 1aC(=O)-； -**C(=O)O(CH 2) mX 3(CH 2) m-；-**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mX 3(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)(CH 2) m-；-**C(=O)O(CH 2) mNR 11C(=O(CH 2) mX 3(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mNR 11C(=O)(CH 2) mX 3(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) nX 3(CH 2) m-；-**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mX 3(CH 2) m-； -**C(=O)O((CH 2) mO) n(CH 2) mC(=O)NR 11(CH 2) m-；-**C(=O)O(CH 2) mC(R 12) 2-； -**C(=O)OCH 2) mC(R 12) 2SS(CH 2) mNR 11C(=O)(CH 2) m-及 -**C(=O)O(CH 2) mC(=O)NR 11(CH 2) m-，其中：**指示與藥物部分(D)之連接點，且另一端可連接至R 100，亦即如本文所述之偶合基團； 其中： X 1a為 ，其中*指示與X 2a之連接點； X 2a選自 ；其中*指示與X 1a之連接點； X 3為 ； X 4為-O(CH 2) nSSC(R 12) 2(CH 2) n-或-(CH 2) nC(R 12) 2SS(CH 2) nO-； X 5為 ，其中**指示朝向藥物部分之定向； X 6為 ，其中**指示朝向藥物部分之定向； 各R 11獨立地選自H及C 1 - 6烷基； 各R 12獨立地選自H及C 1 - 6烷基； 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10，且 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17及18。 結合方法
本發明提供將本發明之連接子-藥物基團結合至抗體或抗體片段以製造包含具有一或多個親水性部分之連接子之抗體藥物結合物的多種方法。
用於形成式(E')之抗體藥物結合物之通用反應流程展示於以下流程2中： 流程 2 其中：RG 2為與相容性R 1基團反應以形成相應R 100基團之反應性基團(此類基團在表8及表9中說明)。D、R 1、L 1、Lp、L 2、L 3、R 2、A、G、Ab、y及R 100如本文所定義。
流程3進一步說明用於形成式(E')之抗體藥物結合物之此通用方法，其中抗體包含與R 1基團(如本文所定義)反應以經由R 100基團(如本文所定義)將連接子-藥物基團共價連接至抗體之反應性基團(RG 2)。出於說明之目的，僅流程3展示具有四個RG 2基團之抗體。 流程 3 。
在一個態樣中，連接子-藥物基團經由抗體中之經修飾之半胱胺酸殘基結合於抗體(參見例如WO2014/124316)。流程4說明用於形成式(E')之抗體藥物結合物之此方法，其中由抗體中經工程改造之半胱胺酸殘基產生之游離硫醇基與R 1基團(其中R 1為順丁烯二醯亞胺)反應以經由R 100基團(其中R 100為丁二醯亞胺環)將連接子-藥物基團共價連接至抗體。出於說明之目的，僅流程4展示具有四個游離硫醇基之抗體。 流程 4
在另一態樣中，連接子-藥物基團經由抗體中之離胺酸殘基結合於抗體。流程5說明用於形成式(E')之抗體藥物結合物之此方法，其中來自抗體中之半胱胺酸殘基的游離胺基與R 1基團(其中R 1為NHS酯、五氟苯基或四氟苯基)反應以經由R 100基團(其中R 100為醯胺)將連接子-藥物基團共價連接至抗體。出於說明之目的，僅流程5展示具有四個胺基之抗體。 流程 5
在另一態樣中，連接子-藥物基團藉由在抗體之天然存在之二硫橋鍵處形成肟橋結合於抗體。肟橋藉由以下形成：首先藉由使抗體之鏈間二硫橋鍵還原且使用1,3-二鹵丙酮(例如，1,3-二氯丙酮)再橋接而形成酮橋。與包含羥基胺之連接子-藥物基團之後續反應進而形成肟鍵聯(肟橋)，其將連接子-藥物基團連接至抗體(參見例如WO2014/083505)。流程6說明用於形成式(E')之抗體藥物結合物之此方法。 流程 6 。
用於形成式(F')之抗體藥物結合物之通用反應流程展示於以下流程7中： 流程 7 其中：RG 2為與相容性R 1基團反應以形成相應R 100基團之反應性基團(此類基團在表8及表9中說明)。D、R 1、L 1、Lp、Ab、y及R 100如本文所定義。
流程8進一步說明用於形成式(F')之抗體藥物結合物之此通用方法，其中抗體包含與R 1基團(如本文所定義)反應以經由R 100基團(如本文所定義)將連接子-藥物基團共價連接至抗體之反應性基團(RG 2)。出於說明之目的，僅流程8展示具有四個RG 2基團之抗體。 流程 8 。
在一個態樣中，連接子-藥物基團經由抗體中之經修飾之半胱胺酸殘基結合於抗體(參見例如WO2014/124316)。流程9說明用於形成式(F')之抗體藥物結合物之此方法，其中由抗體中經工程改造之半胱胺酸殘基產生之游離硫醇基與R 1基團(其中R 1為順丁烯二醯亞胺)反應以經由R 100基團(其中R 100為丁二醯亞胺環)將連接子-藥物基團共價連接至抗體。出於說明之目的，僅流程9展示具有四個游離硫醇基之抗體。 流程 9
在另一態樣中，連接子-藥物基團經由抗體中之離胺酸殘基結合於抗體。流程10說明用於形成式(F')之抗體藥物結合物之此方法，其中來自抗體中之半胱胺酸殘基的游離胺基與R 1基團(其中R 1為NHS酯、五氟苯基或四氟苯基)反應以經由R 100基團(其中R 100為醯胺)將連接子-藥物基團共價連接至抗體。出於說明之目的，僅流程10展示具有四個胺基之抗體。 流程 10
在另一態樣中，連接子-藥物基團藉由在抗體之天然存在之二硫橋鍵處形成肟橋結合於抗體。肟橋藉由以下形成：首先藉由使抗體之鏈間二硫橋鍵還原且使用1,3-二鹵丙酮(例如，1,3-二氯丙酮)再橋接而形成酮橋。與包含羥基胺之連接子-藥物基團之後續反應進而形成肟鍵聯(肟橋)，其將連接子-藥物基團連接至抗體(參見例如WO2014/083505)。流程11說明用於形成式(F')之抗體藥物結合物之此方法。 流程 11 。
亦提供針對用於評估本發明之抗體結合物的分析方法之一些態樣的方案。該等分析方法及結果可表明結合物具有有利特性，例如將使其更易於製造、更易於向患投與者、更有效及/或對患者潛在更安全之特性。一個實例為藉由尺寸排阻層析(SEC)測定分子尺寸，其中相對於樣品中存在之高分子量污染物(例如二聚體、多聚體或聚集抗體)或低分子量污染物(例如抗體片段、降解產物或個別抗體鏈)之量測定樣品中所需抗體物質之量。一般而言，歸因於例如聚集體對抗體樣品之其他特性(諸如但不限於清除率、免疫原性及毒性)之影響，需要具有較高量單體及較低量例如聚集抗體。另一實例為藉由疏水性相互作用層析(HIC)測定疏水性，其中相對於一組具有已知特性之標準抗體評估樣品之疏水性。一般而言，歸因於疏水性對抗體樣品之其他特性(諸如但不限於聚集、隨時間推移之聚集、對表面之黏著性、肝毒性、清除率及藥物動力學暴露)之影響，需要具有低疏水性。參見Damle, N.K., Nat Biotechnol. 2008；26(8):884-885；Singh, S.K., Pharm Res. 2015；32(11):3541-71。當藉由疏水性相互作用層析量測時，較高疏水性指數評分(亦即由HIC管柱進行之溶離較快)反映結合物之較低疏水性。如以下實例中所示，大部分所測試之抗體結合物顯示大於0.8之疏水性指數。在一些實施例中，提供如藉由疏水性相互作用層析所測定，疏水性指數為0.8或更大之抗體結合物。 實例
以下實例提供本發明之說明性實施例。一般熟習此項技術者將認識到，可在不改變本發明之精神或範疇之情況下進行大量潤飾及變更。此類潤飾及變更涵蓋於本發明之範疇內。所提供之實例不以任何方式限制本發明。 實例 1. Bcl-xL 有效負載 之 合成及表徵
使用此實例中所述之例示性方法合成例示性有效負載。所有獲自商業來源之試劑均不經進一步純化即使用。無水溶劑獲自商業來源且未經進一步乾燥即使用。
管柱層析 ：自動化急驟管柱層析係在ISCO CombiFlash ®Rf 200或CombiFlash ®Rf+ Lumen TM上使用RediSep ®Rf正相二氧化矽閃蒸管柱(35-70µm，60 Å)、RediSep Rf Gold ®正相二氧化矽高效能管柱(20-40µm，60 Å)、RediSep ®Rf逆相C18管柱(40-63 µm，60 Å)或RediSep Rf Gold ®逆相C18高效能管柱(20-40 µm，100 Å)進行。
TLC：使用塗佈有Merck Type 60 F 254矽膠之5×10 cm板進行薄層層析。
微波反應：用CEM Discover ®SP或用Anton Paar Monowave微波反應器來進行微波加熱。
NMR：在Bruker Avance III 500 MHz光譜儀、Bruker Avance III 400 MHz光譜儀或Bruker DPX-400光譜儀上使用DMSO- d 6 或CDCl 3作為溶劑進行 1H-NMR量測。 1H NMR資料呈δ值形式，以百萬分率(ppm)給出，使用溶劑之殘餘峰(對於DMSO-d 6，2.50 ppm；及對於CDCl 3，7.26 ppm)作為內標。分裂圖案稱為：s (單峰)、d (二重峰)、t (三重峰)、q (四重峰)、quint (五重峰)、sept (七重峰)、m (多重峰)、br s (寬單峰)、dd (雙二重峰)、td (三重二重峰)、dt (二重三重峰)、ddd (雙雙二重峰)。
分析型 LC-MS ：某些本發明化合物藉由在以正或負離子電噴霧電離模式操作之具有Agilent 6140四極桿LC/MS之Agilent HP1200上之高效液相層析-質譜分析(HPLC-MS)表徵。分子量掃描範圍為100至1350。平行UV偵測在210 nm及254 nm下進行。樣品在5 µL迴路注射下以ACN或THF/H 2O (1:1)中之1 mM溶液形式供應。在兩個儀器上進行LCMS分析，其中之一者用鹼性溶離劑操作，且另一者用酸性溶離劑操作。
鹼性LCMS：Gemini-NX，3 μm，C18，50 mm×3.00 mm內徑管柱，在23℃下，以1 mL min -1流動速率，使用5 mM碳酸氫銨(溶劑A)及乙腈(溶劑B)，且梯度自100%溶劑A開始且在100%溶劑B處結束，歷經各種/特定持續時間。
酸性LCMS：KINATEX XB-C18-100A，2.6 μm，50 mm*2.1 mm管柱，在40℃下，以1 mL min -1流動速率，使用0.02% v/v甲酸水溶液(溶劑A)及0.02% v/v含甲酸之乙腈(溶劑B)，且梯度自100%溶劑A開始且在100%溶劑B處結束，歷經各種/特定持續時間。
本發明之某些其他化合物藉由根據如下特定命名之方法之HPLC-MS表徵。對於所有此等方法，藉由二極體陣列偵測器，在230、254及270 nm下進行UV偵測。樣品注射體積為1 µL。使用HPLC級溶劑，藉由定義以下移動相之流動速率及混合百分比來進行梯度溶離： 溶劑A： 10 mM甲酸銨水溶液+ 0.04% (v/v)甲酸 溶劑B： 乙腈+ 5.3% (v/v)溶劑A + 0.04% (v/v)甲酸。
此等指定方法之滯留時間(RT)以分鐘為單位進行報告。電離以正模式、負模式或正負切換模式記錄。以下為個別方法之具體細節。
LCMS-V-B 方法：使用連接至具有ESI-APCI多模式源之Agilent MSD 6140單四極桿的Agilent 1200 SL系列儀器(方法LCMS-V-B1及LCMS-V-B2)，或使用連接至具有ESI噴流源之Agilent TOF 6230的Agilent 1290 Infinity II系列儀器(方法LCMS-V-B1)；管柱：Thermo Accucore 2.6 μm，C18，50 mm × 2.1 mm，在55℃下。方法LCMS-V-B1及LCMS-V-B2之梯度細節展示於下表C中： 表C
時間 (min) LCMS-V-B1 LCMS-V-B2 流速 (mL/min)
溶劑 A (%) 溶劑 B (%) 溶劑 A (%) 溶劑 B (%)
0 95 5 60 40 1.1
0.12 95 5 60 40 1.3
1.30 5 95 2 98 1.3
1.35 5 95 2 98 1.6
1.85 5 95 2 98 1.6
1.90 5 95 2 98 1.3
1.95 95 5 95 5 1.3
LCMS-V-C 方法：使用連接至具有ESI-APCI多模式源之Agilent MSD 6140單四極桿的Agilent 1200 SL系列儀器；管柱：Agilent Zorbax Eclipse plus 3.5 μm，C18(2)，30 mm × 2.1 mm，在35℃下。方法LCMS-V-C之梯度細節展示於下表D中： 表D
時間 (min) 溶劑 A (%) 溶劑 B (%) 流速 (mL/min)
0 95 5 1
0.25 95 5 1
2.50 95 5 1
2.55 5 95 1.7
3.60 5 95 1.7
3.65 5 95 1
3.70 95 5 1
3.75 95 5 1
製備型 HPLC：在Armen Spot液相層析或Teledyne EZ系統上利用以下條件藉由高效液相層析(HPLC)來純化本發明之某些化合物：Gemini-NX® 10 µM C18，250 mm×50 mm內徑管柱，以118 mL min -1之流動速率運行，用UV二極體陣列偵測(210-400 nm)，使用25 mM NH 4HCO 3水溶液及MeCN或含0.1% TFA之水及MeCN作為溶離劑。
本發明之某些其他化合物藉由根據如下具體指定方法之HPLC來純化：
HPLC-V-A 方法：此等在Waters FractionLynx MS自動純化系統上進行，該系統具有來自Phenomenex之Gemini ®5 µm C18(2), 100 mm×20 mm內徑管柱，以20 cm 3min -1之流動速率運行，使用UV二極體陣列偵測(210-400 nm)及質量定向收集。質譜儀為Waters Micromass ZQ2000光譜儀，在正離子或負離子電噴霧電離模式下操作，分子量掃描範圍為150至1000。
方法HPLC-V-A1 (pH 4)：溶劑A：10 mM乙酸銨水溶液 + 0.08% (v/v)甲酸；溶劑B：乙腈 + 5% (v/v)溶劑A + 0.08% (v/v)甲酸
方法HPLC-V-A2 (pH 9)：溶劑A：10 mM乙酸銨水溶液 + 0.08% (v/v)濃氨水；溶劑B：乙腈 + 5% (v/v)溶劑A + 0.08% (v/v)濃氨水
HPLC-V-B 方法：在AccQPrep HP125 (Teledyne ISCO)系統上進行，該系統具有來自Phenomenex之Gemini® NX 5 µm C18(2)、150 mm×21.2 mm內徑管柱，以20 cm 3min -1之流動速率運行，使用UV (214及254 nm)及ELS偵測。
方法HPLC-V-B1 (pH 4：溶劑A：水 + 0.08% (v/v)甲酸；溶劑B：乙腈+ 0.08% (v/v)甲酸。
方法HPLC-V-B2 (pH 9)：溶劑A：水+ 0.08% (v/v)濃氨水；溶劑B：乙腈+ 0.08% (v/v)濃氨水。
方法HPLC-V-B3 (中性)：溶劑A：水；溶劑B：乙腈。
分析型 GC-MS：在Agilent 6850氣相層析儀及Agilent 5975C質譜儀上，使用具有0.25 µm HP-5MS塗層之15 m×0.25 mm管柱及作為載氣之氦氣進行組合氣相層析及低解析度質譜分析(GC-MS)。離子源：EI +, 70 eV, 230℃，四極桿：150℃，界面：300℃。
高解析度 MS：在配備有正離子模式之噴流電噴霧離子源的Agilent 6230飛行時間質譜儀上獲取高解析度質譜。使用Agilent 1290 Infinity HPLC系統，以流動速率1.5 ml/min將0.5 μl注射液導入質譜儀(含5 mM甲酸銨之水及乙腈梯度程式)。噴流參數：乾燥氣體(N 2)流速及溫度：分別為8.0 l/min及325℃；噴霧器氣體(N 2)壓力：30 psi；毛細管電壓：3000 V；保護氣體流速及溫度：325℃及10.0 l/min；TOFMS參數：碎裂器電壓：100 V；撇渣器電位：60 V；OCT 1 RF Vpp：750 V。全掃描質譜在105至1700之m/z範圍內以995.6 ms/譜之獲取速率獲取，且藉由Agilent MassHunter B.04.00軟體處理。
化學命名 ：使用 MarvinSketch或 JChem for Excel(JChem版本16.6.13 - 18.22.3)內之ChemAxon之『結構至名稱』(s2n)功能，或用Biovia® Draw 4.2所提供之化學物質命名功能，來生成IUPAC較佳名稱。 縮寫Ahx                       6-己酸單體 Boc                       三級丁氧基羰基 Boc 2O                   二碳酸二-三級丁酯 AgOTf 三氟甲烷磺酸銀 tBuOH                   三級丁醇 cc.或conc.              濃 CyOH                    環己醇 dba                       (1 E,4 E)-1,5-二苯基戊-1,4-二烯-3-酮，二亞苄基丙酮 DCM                     二氯甲烷 DEA                      二乙醇胺 DIAD                    偶氮二甲酸二異丙酯 DIBAL-H               氫化二異丁基鋁 DIPA N-異丙基丙-2-胺，二異丙胺 DIPEA N-乙基-N-異丙基-丙-2-胺，二異丙基乙胺 DMAP                   4-二甲胺基吡啶 ee.                        鏡像異構物過量 eq.                        當量 EtO 2二乙醚 EtOAc                   乙酸乙酯 HF×Pyr                 氟化氫吡啶 hs 智人LDA                      二異丙胺基鋰 MeCN                    乙腈 MeOH                   甲醇 MTBE                    甲基三級丁基醚 NMP N-甲基-2-吡咯啶酮 Pd(AtaPhos) 2Cl 2雙(二-三級丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯化鈀(II) PPh 3三苯膦 rt                          室溫 RT                        滯留時間(以分鐘為單位) on                         隔夜 Pd\C                      鈀/碳 TBAF                    氟化四丁銨 TBAOH                 氫氧化四丁銨 TBDPS-Cl              三級丁基-氯-二苯基-矽烷 TBSCl                   三級丁基-氯-二甲基-矽烷 TEA N,N-二乙基乙胺 TFA                      2,2,2-三氟乙酸 pTSA                    4-甲基苯磺酸 THF                      四氫呋喃 TIPSCl                  氯(三異丙基)矽烷 TMP-MgCl             氯化2,2,6,6-四甲基哌啶基鎂氯化鋰錯合物溶液 DIAD                    偶氮二甲酸二異丙酯 Xantphos               4,5-雙(二苯膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃 BrettPhos               2-(二環己基膦基)-3,6-二甲氧基-2',4',6'-三異丙基-1,1'-聯苯 JosiPhos                (2 R)-1-[(1 R)-1-(二環己基膦基)乙基]-2-(二苯膦基)二茂鐵 JosiPhos Pd G3       {( R)-1-[( Sp)-2-(二環己基膦基)二茂鐵基]乙基二三級丁基膦}[2-(2'-胺基-1,1'-聯苯基)]甲烷磺酸鈀(II) Xantphos Pd G3      [(4,5-雙(二苯膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃)-2-(2'-胺基-1,1'-聯苯基)]甲烷磺酸鈀(II) BINAP 2,2'-雙(二苯膦基)-1,1'-聯萘 rac-BINAP Pd G3 [(2,2'-雙(二苯膦基)-1,1'-聯萘)-2-(2'-胺基-1,1'-聯苯基)]甲烷磺酸鈀(II) Pd(dppf)Cl 2.CH 2Cl 2[1,1'-雙(二苯膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II) Pd 2(dba) 3參(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0) Pd(PPh 3) 2Cl 2雙(三苯膦)氯化鈀 Pd(AtaPhos) 2Cl 2雙(二-三級丁基(4-二甲基胺基苯基)膦)二氯化鈀(II) 指定的通用程序
以下為在後續製備部分中以名稱提及之代表性實驗程序。 Sonogashira 通用程序
將1當量芳基鹵化物、2當量乙炔、0.05當量Pd(PPh 3) 2Cl 2、0.05當量CuI及DIPA (1 mL/mmol)於THF (5 mL/mmol)中之混合物保持在60℃下。在達到適當轉化之後，減壓移除揮發物，粗中間物使用庚烷/EtOAc作為溶離劑經由急驟層析法純化。 用 HFIP 通用程序脫除保護基
將含受質之HFIP (10 mL/mmol)保持在100-120℃下壓力瓶中。在達到適當轉化之後，減壓移除揮發物，粗中間物使用庚烷/EtOAc作為溶離劑經由急驟層析法純化。 脫除保護基及水解通用程序
在60℃下攪拌1當量基質及100當量HF×Pyr於MeCN (15 mL/mmol)中之混合物。在達到適當轉化之後，減壓移除揮發物，將殘餘物懸浮於THF-水之1:1混合物(30 mL/mmol)中，添加150當量LiOH×H 2O，且在室溫下攪拌混合物。在達到適當轉化之後，減壓移除揮發物；使用DCM及MeOH (含有1.2% NH 3)作為溶離劑經由急驟管柱層析純化粗產物。在一些替代程序中，THF-水之1:1混合物經1,4-二㗁烷-水之1:1混合物替換。 烷基化通用程序
將1當量苯酚/胺基甲酸酯、1-2當量烷基碘/溴及2-3當量Cs 2CO 3於丙酮(5 mL/mmol)中之混合物在室溫下攪拌(對於苯酚)及在55℃下攪拌(對於胺基甲酸酯)。在達到適當轉化之後，減壓移除揮發物，經由急驟層析(例如使用庚烷/EtOAc作為溶離劑)或逆相急驟管柱層析純化粗中間物。 用甲苯磺酸酯通用程序進行烷基化
烘乾的小瓶配備有塗佈 PTFE之磁性攪拌棒，且向其中裝入1當量甲苯磺酸酯，且將5當量適當胺懸浮於MeCN (5 mL/mmol)中。接著，使反應混合物升溫至50℃，且在該溫度下攪拌，直至不再觀察到進一步轉化。反應混合物用DCM稀釋，接著注射至經DCM預處理之矽膠管柱上。接著，使用DCM及MeOH (1.2% NH 3)作為溶離劑，經由急驟層析對其進行純化。 布赫瓦爾德通用程序 I
將1當量氯-基質、2當量 1,3- 苯并噻唑 -2- 胺、0.1當量Pd 2(dba) 3、0.2當量XantPhos及3當量DIPEA於CyOH (5 mL/mmol)中之混合物保持在140℃下。在達到適當轉化之後，反應混合物用DCM (10 mL/mmol)稀釋，注入至經預處理之矽膠管柱上，且經由急驟層析(例如使用庚烷/EtOAc作為溶離劑)純化。 布赫瓦爾德通用程序 II
在回流下攪拌氯化合物、2當量 1,3-苯并噻唑 -2- 胺、10 mol% JosiPhos Pd (G3)及3當量DIPE懸浮於1,4-二㗁烷(5 mL/mmol)中之混合物，直至不再觀測到進一步轉化。將矽藻土添加至反應混合物中，且減壓移除揮發物。接著，使用庚烷-EtOAc或DCM-MeOH (1.2% NH 3)作為溶離劑經由急驟層析在120 g矽膠管柱上對其進行純化。 布赫瓦爾德通用程序 III
將1當量噻唑胺、1.2至1.5當量(Z)-N-(6-氯-4-甲基-嗒𠯤-3-基)-3-(2-三甲基矽基乙氧基甲基)-1,3-苯并噻唑-2-亞胺、3當量Cs 2CO 3、0.1當量Pd 2(dba) 3、0.2當量XantPhos及3當量DIPEA於1,4-二㗁烷(5 mL/mmol)中之混合物保持在回流下。在達到適當轉化之後，減壓移除揮發物，經由急驟管柱層析純化粗中間物。 光延通用程序 I
向1當量脂族醇、1當量胺基甲酸酯/苯酚及1當量三苯膦於甲苯(5 mL/mmol)中之混合物中添加1當量偶氮二甲酸二-三級丁酯。將混合物在50℃下(對於胺基甲酸酯)及在室溫下(對於苯酚)攪拌。在達到適當轉化之後，減壓移除揮發物，粗中間物使用庚烷/EtOAc作為溶離劑經由急驟層析法純化。 光延通用程序 II
向1.0-1.5當量脂族醇、1當量胺基甲酸酯/苯酚及1至2當量三苯膦於THF或甲苯(5 mL/mmol)中之混合物中一次性添加1-3當量 偶氮二甲酸二 - 三級丁酯 / 偶氮二甲酸二異丙酯。必要時，將混合物在室溫或50℃下(對於胺基甲酸酯)及在室溫下(對於苯酚)攪拌。在達到適當轉化之後，減壓移除揮發物，經由急驟管柱層析純化粗中間物。 四級鹽脫除保護基通用程序
向適當四級鹽之THF (5 mL/mmol)溶液中添加3當量TBAF，且接著在室溫下攪拌，直至不再觀測到進一步轉化。將反應混合物減壓蒸發至乾燥。向1當量去矽基之四級鹽於無水MeCN (15 mL/mmol)中之懸浮液中添加100當量HF×Pyr，且接著在60℃下攪拌。在達到適當轉化之後，減壓移除揮發物，將殘餘物懸浮於THF-水之1:1混合物(30 mL/mmol)中，添加150當量LiOH×H 2O，且在室溫下攪拌混合物。在達到適當轉化之後，減壓移除揮發物。使用DCM及MeOH (含有1.2% NH 3)作為溶離劑，經由急驟層析純化粗產物。 丙炔胺製備通用程序
烘乾的小瓶配備有塗佈 PTFE之磁性攪拌棒，向其中裝入2當量PPh 3及2當量咪唑，接著添加DCM (5 mL/mmol)。向所得混合物中逐份添加2當量碘，接著在室溫下攪拌15 min。向所得混合物中添加溶解於DCM中之1當量適當醇，且在室溫下攪拌，直至不再觀測到進一步轉化。向所生成之碘化合物中添加20當量適當胺，且接著在室溫下攪拌30 min，同時觀測到完全轉化。將矽藻土添加至反應混合物中，且減壓移除揮發物。接著，使用DCM及MeOH (1.2% NH 3)溶離劑，經由急驟層析對其進行純化。 銀催化的丙炔胺製備通用程序
24 ml小瓶配備有攪拌棒，且裝入1當量2-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫-5H-吡啶并[2,3-c]-嗒𠯤-8-基]-5-[3-(4-乙炔基-2-氟-苯氧基)丙基]噻唑-4-甲酸、20當量多聚甲醛/丙酮及20當量適當胺，在80℃下在20 mol%甲苯磺酸銀存在下於無水乙醇(5 ml/mmol)中攪拌，直至不再觀測到進一步轉化。將矽藻土添加至反應混合物中，且減壓移除揮發物。接著，使用DCM及MeOH (1.2% NH 3)作為溶離劑，經由急驟層析對其進行純化。 水解通用程序
將適當甲酯懸浮於THF-水之1:1混合物(5 mL/mmol)中，且添加10當量LiOH × H 2O，且在50℃下攪拌混合物。在達到適當轉化之後，減壓移除揮發物；使用DCM及MeOH (含有1.2% NH 3)作為溶離劑經由急驟管柱層析純化粗產物。 胺取代及水解 通用程序 I
向含來自 製備 12 及 13中之任一者之產物的乙腈及 N-甲基-2-吡咯啶酮之1:1混合物(10 ml/mmol)中添加適當胺(3-10當量)，且在50℃下攪拌反應混合物2-24 h。在藉由管柱層析(矽膠，使用DCM及MeOH作為溶離劑)純化取代產物之後，將產物溶解於THF (10 ml/mmol)及水(2 ml/mmol)中，且添加LiOH×H 2O (3-5當量)。接著，在20-40℃下攪拌反應混合物1-4 h。藉由製備型HPLC (使用乙腈及5mM NH 4HCO 3水溶液作為溶離劑)純化水解產物，得到所需產物。 胺取代及水解 通用程序 II
向含來自 製備 14_01之產物的乙腈及N-甲基-2-吡咯啶酮之1:1混合物(10 ml/mmol)中添加適當胺(3-10當量)，且將混合物在50℃下攪拌2-24 h。在室溫下添加含70% HF之吡啶(50-100當量)之後，將混合物攪拌4-18 h。在藉由管柱層析(矽膠，使用DCM及MeOH作為溶離劑)純化取代產物之後，將產物溶解於THF (8 ml/mmol)及水(2 ml/mmol)中，且添加LiOH×H 2O (5當量)，且在20-40℃下攪拌1-4 h。藉由製備型HPLC (使用乙腈及5 mM NH 4HCO 3水溶液作為溶離劑)純化水解產物，得到所需產物。 胺取代及水解 通用程序 III
向含來自 製備 13或 製備 16之產物的乙腈(13 ml/mmol)中添加胺(3當量)及Na 2CO 3(12當量)，且將反應混合物在120℃下在微波反應器中攪拌1.5-3 h。在添加KOH (3當量)之後，將反應混合物在120℃下攪拌0.75-1 h。藉由製備型HPLC或HILIC層析(使用乙腈及5mM NH 4HCO 3水溶液作為溶離劑)純化水解產物，得到所需產物。 烷基化、脫除保護基及水解通用程序
將三級胺(1當量)及烷基化劑(10當量)於乙腈(3 mL/mmol)中之混合物在室溫下攪拌。在達到適當轉化之後，減壓移除揮發物，且經由逆相急驟管柱層析純化，另外視需要，將殘餘物直接溶解於乙腈(3 mL/mmol)中，添加HF×Pyr (100當量)，且將混合物在60℃下攪拌。在達到適當轉化之後，減壓移除揮發物，將殘餘物懸浮於1:1之1,4-二㗁烷-水混合物(10 mL/mmol)中，添加LiOH×H 2O (150當量)，且將混合物在60℃下攪拌。在達到向所需產物之適當轉化之後，減壓移除揮發物，且經由逆相急驟管柱層析純化粗產物。 製備 1a ： 2-( 三級丁氧羰基胺基 )-5-[3-(2- 氟 -4- 碘 - 苯氧基 ) 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯 步驟 A ： 2-( 三級丁氧羰基胺基 )-5- 碘 - 噻唑 -4- 甲酸甲酯
將50.00 g 2-(三級丁氧羰基胺基)噻唑-4-甲酸甲酯(193.55 mmol，1當量)懸浮於600 mL無水MeCN中。添加52.25 g N-碘丁二醯亞胺(232.30 mmol，)，且在室溫下攪拌所得混合物隔夜。反應混合物用飽和鹽水稀釋，接著其用EtOAc萃取。合併之有機層用1 M Na 2S 2O 3萃取，接著用鹽水再次萃取。接著經Na 2SO 4乾燥，過濾，且減壓濃縮濾液。使用庚烷作為溶離劑經由急驟層析純化粗產物，得到60 g所需產物(156 mmol，80%產率)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 12.03/11.06 (br s), 3.78 (s, 3H), 1.47 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 153.8, 82.5, 77.7, 52.3, 28.3; HRMS-ESI (m/z): C 10H 14IN 2O 4S之[M+H] +計算值：384.9713；實驗值384.9708。 步驟 B ： 2-( 三級丁氧羰基胺基 )-5-(3- 羥基丙 -1- 炔基 ) 噻唑 -4- 甲酸甲酯
500 mL經烘乾單頸圓底燒瓶配備有塗佈PTFE之磁力攪拌棒，且裝配回流冷凝器。向其中裝入9.6 g步驟A之產物(25 mmol，1當量)、2.80 g丙-2-炔-1-醇(2.91 mL，50 mmol，2當量)及36.10 g DIPA (50 mL，356.8 mmol，14.27當量)，接著添加125 mL無水THF，且用氬氣沖洗系統。在惰性氛圍下攪拌5分鐘之後，添加549 mg Pd(PPh 3) 2Cl 2(1.25 mmol，0.05當量)及238 mg CuI (1.25 mmol，0.05當量)。接著，使所得混合物升溫至60℃，且在該溫度下攪拌，直至不再觀測到進一步轉化。將矽藻土添加至反應混合物中，且減壓移除揮發物。接著，其使用庚烷及EtOAc作為溶離劑經由急驟層析純化，得到7.30 g呈黃色固體狀之所需產物(23 mmol，93%產率)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 12.1 (br s, 1H), 5.45 (t, 1H), 4.36 (d, 2H), 3.79 (s, 3H), 1.48 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.1 (br s, 1H), 5.45 (t, 1H), 4.36 (d, 2H), 3.79 (s, 3H), 1.48 (s, 9H); HRMS-ESI (m/z): C 13H 17N 2O 5S之[M+H] +計算值：313.0852，實驗值313.0866。 步驟 C ： 2-( 三級丁氧羰基胺基 )-5-(3- 羥丙基 ) 噻唑 -4- 甲酸甲酯
向配備有塗佈 PTFE之磁性攪拌棒之1 L經烘乾壓力瓶裝入44.75 g 步驟 B之產物(143.3 mmol，1當量)、含7.62 Pd/C (7.17 mmol，0.05當量)之340 mL乙醇，且接著使用氫化系統置於氮氣氛圍下。此後，將其用4巴H 2氣體填充，且在室溫下攪拌隔夜。觀測到完全轉化，但僅形成烯烴產物。在經由矽藻土墊過濾催化劑之後，用5 mol%新催化劑重複整個程序。攪拌所得混合物隔夜，以實現完全轉化。將矽藻土添加至反應混合物中，且減壓移除揮發物。接著，其使用庚烷及EtOAc作為溶離劑經由急驟層析純化，得到31.9 g呈淡黃色晶體狀之所需產物(101 mmol，70.4%產率)。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 11.61 (br s, 1H), 4.54 (t, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.43 (m, 2H), 3.09 (t, 2H), 1.74 (m, 2H), 1.46 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 162.8, 143.1, 135.4, 60.3, 51.9, 34.5, 28.3, 23.4; HRMS-ESI (m/z): C 13H 21N 2O 5S之[M+H] +計算值：317.1165，實驗值317.1164 (M+H)。 步驟 D ： 2-( 三級丁氧羰基胺基 )-5-[3-(2- 氟 -4- 碘 - 苯氧基 ) 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
向配備有塗佈 PTFE之磁性攪拌棒之250 mL經烘乾單頸圓底燒瓶中裝入3.40 g 2-氟-4-碘-苯酚(14 mmol，1當量)、5.00 g 步驟 C之產物(16 mmol，1.1當量)及溶解於71 mL無水甲苯中之4.10 g PPh 3(16 mmol，1.1當量)。在氮氣氛圍下攪拌5 min之後，一次性添加3.10 mL DIAD (3.20 g，16 mmol，1.1當量)，同時反應混合物升溫。接著，將反應混合物加熱至50℃，且在該溫度下攪拌30 min，此時反應物達到完全轉化。將反應混合物直接注射至經預處理之矽膠管柱上，且接著使用庚烷及EtOAc作為溶離劑經由急驟層析純化。自MeOH結晶粗產物，得到4.64 g所需產物(9.24 mmol，66%產率)。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 11.64 (br s, 1H), 7.59 (dd, 1H), 7.45 (dd, 1H), 6.98 (t, 1H), 4.06 (t, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.22 (t, 2H), 2.06 (m, 2H), 1.46 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 134, 124.9, 117.6, 68.2, 51.9, 30.5, 28.3, 23.2; HRMS-ESI (m/z): C 19H 23N 2O 5FSI之[M+H] +計算值：537.0350；實驗值537.0348。 製備 1c ： 2-( 三級丁氧羰基胺基 )-5-[3-[4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
250 mL經烘乾單頸圓底燒瓶配備有塗佈 PTFE之磁性攪拌棒，且裝配回流冷凝器。向其中裝入5.36 g 製備物 1a(10 mmol，1當量)、1.66 g N , N-二甲基丙-2-炔-1-胺(20 mmol，2當量)及20 mL DIPA (142.7 mmol，14.27當量)，接著添加50 mL無水THF，且用氬氣沖洗系統。在惰性氛圍下攪拌5分鐘之後，添加220 mg Pd(PPh 3) 2Cl 2(0.5 mmol，0.05當量)及95 CuI (0.5 mmol，0.05當量)。接著，使所得混合物升溫至60℃，且在該溫度下攪拌，直至不再觀測到進一步轉化。將矽藻土添加至反應混合物中，且減壓移除揮發物。接著，其使用DCM及MeOH (1.2% NH 3)作為溶離劑經由急驟層析純化，得到4.5 g所需產物(7.8 mmol，78%產率)。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 11.66 (s, 1H), 7.29 (dd, 1H), 7.19 (m, 1H), 7.12 (t, 1H), 4.09 (t, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.44 (s, 2H), 3.23 (t, 2H), 2.24 (s, 6H), 2.07 (m, 2H), 1.45 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 162.8, 147.3, 129, 119.2, 115.4, 84.3, 68, 51.9, 48.1, 44.2, 30.6, 28.3, 23.2; HRMS-ESI (m/z): C 24H 31FN 3O 5S之[M+H] +計算值：492.1962；實驗值492.1956 (M+H)。 製備 2a ： 3-(3,6- 二氯 -5- 甲基 - 嗒 𠯤 -4- 基 ) 丙 -1- 醇 步驟 A ： [( 戊 -4- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ] 苯
向經烘乾燒瓶中添加含4-戊炔-1-醇(11.1 mL，119 mmol，1當量)之THF (100 mL)，且使溶液冷卻至0℃。逐份添加氫化鈉(60%分散液；7.13 g，178 mmol，1.5當量)，且在0℃下攪拌混合物30 min，隨後逐滴添加苯甲基溴(15.6 mL，131 mmol，1.1當量)。使混合物升溫至環境溫度且攪拌16 h，接著冷卻至0℃，用飽和氯化銨水溶液(30 mL)淬滅，且用水(30 mL)稀釋。混合物用乙酸乙酯(2×150 mL)萃取，且經合併之有機萃取物依次用經稀釋之氫氧化銨水溶液(150 mL)及鹽水(100 mL)洗滌，乾燥(硫酸鎂)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，330 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-10%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到呈黃色液體狀之所需產物(19.5 g，112 mmol，94%)。LC/MS (C 12H 14O) 175 [M+H] +; RT 1.28 (LCMS-V-B1)。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 7.37 - 7.32 (m, 4H), 7.31 - 7.27 (m, 1H), 4.52 (s, 2H), 3.58 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.32 (td, J = 7.1, 2.6 Hz, 2H), 1.95 (t, J = 2.7 Hz, 1H), 1.83 (tt, J = 7.1, 6.2 Hz, 2H)。 步驟 B ： [( 己 -4- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ] 苯
向經烘乾燒瓶中添加步驟A之產物(19.5 g，112 mmol，1當量)及四氫呋喃(200 mL)，且使溶液冷卻至-78℃。在30 min內逐滴添加正丁基鋰(66.9 mL，135 mmol，1.2當量)，且攪拌反應物1 h，接著逐滴添加碘甲烷(10.5 mL，168 mmol，1.5當量)，且使混合物在1 h內升溫至0℃。反應物藉由添加飽和氯化銨水溶液(40 mL)淬滅，用水(40 mL)稀釋，用乙酸乙酯(3×100 mL)萃取，且合併之有機萃取物依次用2M硫代硫酸鈉水溶液(200 mL)及鹽水(200 mL)洗滌，乾燥(硫酸鎂)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，330 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-10%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到呈黃色液體狀之所需產物(19.2 g，0.1 mol，91%)。LC/MS (C 13H 16O) 189 [M+H] +; RT 1.34 (LCMS-V-B1)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.41 - 7.23 (m, 5H), 4.46 (s, 2H), 3.48 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.23 - 2.14 (m, 2H), 1.72 (s, 3H), 1.70 - 1.65 (m, 2H)。 步驟 C ： 4-[3-( 苯甲氧基 ) 丙基 ]-3,6- 二氯 -5- 甲基嗒 𠯤
將3,6-二氯-1,2,4,5-四𠯤(5 g，33.1 mmol，1當量)及步驟B之產物(7.48 g，39.8 mmol，1.2當量)於四氫呋喃(30 mL)中之溶液在160℃下在密封燒瓶中加熱19 h。將反應物冷卻至環境溫度，接著真空濃縮 。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，220 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-30%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到呈橙色油狀之所需產物(7.32 g，23.5 mmol，71%)。LC/MS (C 15H 16Cl 2N 2O) 311 [M+H] +; RT 1.35 (LCMS-V-B1)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.45 - 7.18 (m, 5H), 4.48 (s, 2H), 3.53 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.96 - 2.83 (m, 2H), 2.42 (s, 3H), 1.88 - 1.69 (m, 2H)。 步驟 D ： 3-(3,6- 二氯 -5- 甲基嗒 𠯤 -4- 基 ) 丙 -1- 醇
向步驟C之產物(7.32 g，23.5 mmol，1當量)於二氯甲烷(100 mL)中之冷卻溶液中逐滴添加三氯化硼溶液(1 M於二氯甲烷中；58.8 mL，58.8 mmol，2.5當量)，且將混合物在環境溫度下攪拌1 h。反應物藉由添加甲醇淬滅且真空濃縮。將殘餘物分配於二氯甲烷(100 mL)與碳酸氫鈉飽和水溶液(150 mL)之間，且有機相用鹽水(150 mL)洗滌，乾燥(硫酸鎂)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，80 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-80%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到呈黃色油狀之所需產物(4.19 g，19 mmol，81%)。LC/MS (C 8H 10Cl 2N 2O) 221 [M+H] +; RT 0.84 (LCMS-V-B1)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.67 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 3.49 (td, J = 6.0, 5.1 Hz, 2H), 2.91 - 2.80 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 1.72 - 1.59 (m, 2H)。 製備 2ab ： 3,6- 二氯 -4-(3- 碘丙基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤
在將含PPh 3(59.3 g，2當量)、咪唑(15.4 g，2當量)及碘(57.4 g，2當量)之560 mL DCM攪拌15分鐘之後，添加25.0 g 製備物 2a(113 mmol)且攪拌2 h。使用庚烷及EtOAc作為溶離劑經由急驟層析純化產物，得到34.7 g所需產物(92%)。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 3.41 (t, 2H), 2.89 (m, 2H), 2.43 (s, 3H), 1.97 (m, 2H); 13C NMR (125 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 157.7, 156.8, 141.5, 140.2, 31.4, 31.1, 16.7, 7.8; C 8H 9Cl 2IN 2之HRMS (ESI) [M] +計算值：330.9266，實驗值330.9255。 製備 3a ： 2-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3 -c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-5-[3-(2- 氟 -4- 碘 - 苯氧基 ) 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯 步驟 A ： 2-{[( 三級丁氧基 ) 羰基 ][3-(3,6- 二氯 -5- 甲基嗒 𠯤 -4- 基 ) 丙基 ] 胺基 }-5-[3-(2- 氟 -4- 碘苯氧基 ) 丙基 ]-1,3- 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 光延通用程序 I，以作為適當胺基甲酸酯之4.85 g 製備物 1a(9.04 mmol，1當量)及作為適當醇之2 g 製備物 2a(9.04 mmol，1當量)為起始物，得到4.6 g所需產物(69%產率)。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.56 (dd, 1H), 7.44 (dm, 1H), 7.08 (m, 2H), 6.96 (t, 1H), 4.05 (t, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.21 (t, 2H), 2.82 (m, 2H), 2.4 (s, 3H), 2.06 (m, 2H), 1.88 (m, 2H), 1.48 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 162.7, 157.6, 156.7, 156.5/153.2, 152.2, 147, 142.1, 139.8, 134, 124.9, 117.6, 84, 82.4, 68.1, 52.1, 46.1, 30.4, 28.1, 27.5, 25.8, 23.1, 16.4; HRMS-ESI (m/z): C 27H 31Cl 2FIN 4O 5S之[M+H] +計算值：739.0415，實驗值739.0395。 步驟 B ： 2-[3-(3,6- 二氯 -5- 甲基 - 嗒 𠯤 -4- 基 ) 丙基胺基 ]-5-[3-(2- 氟 -4- 碘 - 苯氧基 ) 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 用 HFIP 脫除保護基之通用程序，以作為適當胺基甲酸酯之 步驟 A之產物為起始物，得到3.70 g所需產物(97%產率)。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.71 (t, 1 H), 7.59 (dd, 1 H), 7.44 (dm, 1 H), 6.96 (t, 1 H), 4.03 (t, 2 H), 3.7 (s, 3 H), 3.29 (m, 2 H), 3.11 (t, 2 H), 2.84 (m, 2 H), 2.39 (s, 3 H), 2 (m, 2 H), 1.76 (m, 2 H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 164.6, 163, 152.3, 147.1, 134.1, 124.8, 117.6, 82.4, 68.1, 51.9, 44, 30.7, 28, 26.9, 23.3, 16.4; HRMS-ESI (m/z): C 22H 23Cl 2FIN 4O 3S之[M+H] +計算值：638.9891，實驗值638.9888。 步驟 C ： 2-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-5-[3-(2- 氟 -4- 碘 - 苯氧基 ) 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
將3 g 步驟 B之產物(4.69 mmol，1當量)及1.81 g碳酸銫(9.3853 mmol，2當量)之懸浮液在80℃下在25 mL無水1,4-二㗁烷中攪拌3 h以達到完全轉化。反應混合物直接蒸發至矽藻土，且接著使用DCM-MeOH作為溶離劑藉由急驟層析純化，得到2.67 g標題化合物(94%產率)。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 7.57 (dd, 1H), 7.43 (dm, 1H), 6.97 (t, 1H), 4.23 (t, 2 H), 4.08 (t, 2 H), 3.77 (s, 3 H), 3.22 (t, 2 H), 2.86 (t, 2 H), 2.29 (s, 3 H), 2.08 (m, 2 H), 2.03 (m, 2 H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 163.1, 155.4, 152.2, 151.6, 151.2, 147, 142.5, 136, 134.8, 134, 128.9, 124.9, 117.6, 82.3, 68.4, 51.9, 46.3, 30.7, 24.2, 23, 19.7, 15.7; HRMS-ESI (m/z): C 22H 22ClFIN 4O 3S之[M+H] +計算值：603.0124，實驗值603.0108。 製備 3c ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3 -c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-(4- 乙炔基 -2- 氟 - 苯氧基 ) 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸 步驟 A ： 2-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-5-[3-[2- 氟 -4-(2- 三甲基矽基乙炔基 ) 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
250 mL經烘乾單頸圓底燒瓶配備有塗佈PTFE之磁性攪拌棒，且裝配回流冷凝器。向其中裝入5 g 製備物 3a(8.29 mmol，1當量)、2.34 mL 乙炔基 ( 三甲基 ) 矽烷(16.58 mmol，2當量)及10 mL DIPEA，接著添加40 mL無水THF，且用氬氣沖洗系統。在惰性氛圍下攪拌5分鐘之後，添加182 mg Pd(PPh 3) 2Cl 2(0.41 mmol，0.05當量)及79 mg (0.41 mmol，0.05當量)。接著，使所得混合物升溫至60℃且在該溫度下攪拌2小時以達到完全轉化。將矽藻土添加至反應混合物中，且減壓移除揮發物。接著，其使用庚烷-EtOAc作為溶離劑經由急驟層析純化，得到4.26 g所需產物(89%產率)。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 7.31 (dd, 1H), 7.23 (dn, 1H), 7.13 (t, 1H), 4.25 (t, 2H), 4.12 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.24 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.1 (m, 2H), 2.03 (m, 2H), 0.21 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 163.0, 155.3, 151.7, 151.3, 136.1, 129.4, 129.0, 119.4, 115.3, 104.6, 93.7, 68.2, 51.9, 46.3, 30.7, 24.1, 23.0, 19.7, 15.7, 0.4; HRMS-ESI (m/z): C 27H 30ClFN 4O 3SSi之[M+H] +計算值：573.1553，實驗值573.1549。 步驟 B ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-(2- 三甲基矽基乙炔基 ) 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
向具有塗佈 PTFE之磁性攪拌棒之100 mL經烘乾單頸圓底燒瓶中裝入4.25 g 步驟 A之產物(7.4 mmol，1.0當量)、2.23 g 1,3-苯并噻唑-2-胺(14.8 mmol，2.0當量)及3.87 mL DIPEA (2.87 mg，22.2 mmol，3.0當量)，接著添加40 mL環己醇，且用氬氣沖洗系統。在惰性氛圍下攪拌5分鐘之後，添加679 mg Pd 2(dba) 3(0.74 mmol，0.10當量)及858 mg XantPhos (1.48 mmol，0.20當量)。接著，使所得混合物升溫至140℃且在該溫度下攪拌30 min以達到完全轉化。反應混合物用DCM稀釋且直接注射至經預處理之矽膠管柱上，且接著其使用庚烷及EtOAc作為溶離劑經由急驟層析純化。將純溶離份合併且減壓濃縮，得到3.90 g所需產物(77%產率)。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 12.27/10.91 (brs, 1H), 8.1-7.1 (brm, 4H), 7.34 (dd, 1H), 7.24 (dm, 1H), 7.16 (t, 1H), 4.25 (t, 2H), 4.15 (t, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.28 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 0.19 (s, 9H); HRMS-ESI (m/z): C 34H 36FN 6O 3S 2Si之[M+H] +計算值：687.2038，實驗值687.2020。 步驟 C ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-(4- 乙炔基 -2- 氟 - 苯氧基 ) 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
10 mL經烘乾單頸圓底燒瓶配備有塗佈 PTFE之磁性攪拌棒，且裝配回流冷凝器。向其中裝入溶解於2.5 mL THF/H 2O (4:1)中之343 mg 步驟 B之產物(0.5 mmol，1.0當量)。接著，添加105 mg LiOH×H 2O (2.50 mmol，5.0當量)，且將所得混合物加熱至60℃且在此溫度下攪拌4 h。反應達到完全轉化。將矽藻土凝膠添加至反應混合物，且減壓移除揮發物。接著，其使用DCM及MeOH (1.2% NH 3)作為溶離劑經由急驟層析純化，得到200 mg標題化合物(66%產率)。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 7.88 (d, 1H), 7.49 (br., 1H), 7.37 (t, 1H), 7.36 (dd, 1H), 7.25 (dm, 1H), 7.19 (t, 1H), 7.16 (t, 1H), 4.27 (t, 2H), 4.15 (t, 2H), 4.11 (s, 1H), 3.27 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.14 (m, 2H), 2.04 (m, 2H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 164.2, 151.5, 147.9, 129.4, 126.5, 122.5, 122.3, 119.5, 115.5, 114.5, 82.9, 80.5, 68.5, 46.2, 31.0, 23.9, 23.1, 20.3, 12.9; HRMS-ESI (m/z): C 30H 26FN 6O 3S 2之[M+H] +計算值：601.1486，實驗值601.1498。 製備 3d ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3 -c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-(3- 羥基丙 -1- 炔基 ) 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯 步驟 A ： 5-[3-[4-[3-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 薗頭通用程序，以4.00 g 製備物 3a(6.63 mmol，1.0當量)及作為適當炔烴之2.26 g 三級丁基 - 二甲基 - 丙 - 2 - 炔氧基 - 矽烷(13.27 mmol，2當量)為起始物，得到2.80 g所需產物(65%產率)。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 7.27 (dd, 1H), 7.19 (dd, 1H), 7.14 (t, 1H), 4.51 (s, 1H), 4.25 (m, 2H), 4.12 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.24 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.3 (s, 3H), 2.1 (五重峰, 2H), 2.03 (m, 2H), 0.88 (s, 9H), 0.12 (s, 6H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 163.0, 128.9, 119.1, 115.5, 68.3, 52.1, 51.9, 46.3, 30.7, 26.2, 24.2, 23.0, 19.7, 15.7, -4.6; HRMS-ESI (m/z): C 31H 39ClFN 4O 4SSi之[M+H]+計算值：645.2128，實驗值645.2120。 步驟 B ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 布赫瓦爾德通用程序 II，以2.8 g 步驟 A之產物(4.34 mmol，1.0當量)及1.30 g 1 , 3 - 苯并噻唑 - 2 - 胺(8.67 mmol，2.0當量)為起始物，得到2.1 g所需產物(64%產率)。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 12.25/10.91 (brs 1H), 7.88 (br, 1H), 7.51 (br, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.29 (dd, 1H), 7.2 (t, 1H), 7.2 (dd, 1H), 7.17 (t, 1H), 4.49 (s, 2H), 4.25 (t, 2H), 4.14 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.27 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.13 (qn, 2H), 2.04 (qn, 2H), 0.87 (s, 9H), 0.1 (s, 6H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 163.2, 155.7, 151.6, 148.5, 147.6, 141.5, 128.9, 127.6, 126.5, 122.5, 122.3, 119.1, 116.9, 115.5, 114.8, 88.2, 84, 68.4, 52.1, 51.9, 46.4, 31, 26.2, 24, 23.1, 20.4, 12.9, -4.6; HRMS-ESI (m/z): C 38H 44FN 6O 4S 2Si之[M+H]+計算值：759.2613，實驗值759.2609。 步驟 C ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-(3- 羥基丙 -1- 炔基 ) 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
100 mL經烘乾單頸圓底燒瓶配備有塗佈PTFE之磁性攪拌棒，且裝配回流冷凝器。向其中裝入溶解於15 mL THF中之2.10 g 步驟 B之產物(2.76 mmol，1.0當量)。接著經由注射器在2分鐘時段內逐滴添加3.32 mL TBAF (3.32 mmol，1.2當量，1 M於THF中)，且在該溫度下攪拌30 min。反應混合物用飽和NH 4Cl中止，接著直接蒸發至矽藻土，且其使用庚烷-EtOAc作為溶離劑經由急驟層析純化，得到1.6 g所需產物(90%產率)。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 11.14 (brs, 1H), 7.83 (brd, 1H), 7.49 (brs, 1H), 7.36 (m, 1H), 7.24 (dd, 1H), 7.19 (m, 1H), 7.18 (dm, 1H), 7.15 (t, 1H), 5.08 (t, 1H), 4.28 (m, 2H), 4.27 (d, 2H), 4.17 (t, 2H), 3.8 (s, 3H), 3.29 (m, 2H), 2.89 (m, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.15 (m, 2H), 2.07 (m, 2H); HRMS-ESI (m/z): C 32H 30FN 6O 4S 2之[M+H]+計算值：645.1748，實驗值645.1738。 製備 3f ： 2-{3-[(1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -5 H,6 H,7 H,8 H- 吡啶并 [2,3 -c] 嗒 𠯤 -8- 基 }-1,3- 噻唑 -4- 甲酸乙酯 步驟 A ： 2-[( 己 -4- 炔 -1- 基 ) 胺基 ]-1,3- 噻唑 -4- 甲酸乙酯
向2-溴-1,3-噻唑-4-甲酸乙酯(1.17 g，4.97 mmol，1當量)於乙腈(16 mL)中之溶液中添加己-4-炔-1-胺(725 mg，7.46 mmol，1.5當量)及三乙胺(1.04 mL，7.46 mmol，1.5當量)，且將混合物在150℃下在微波照射下加熱4 h。將反應物分配於乙酸乙酯與鹽水之間，且有機相經乾燥(硫酸鎂)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，40 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-60%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到呈米色固體狀之所需產物(741 mg，2.94 mmol，59%)。LC/MS (C 12H 16N 2O 2S) 253 [M+H] +; RT 2.32 (LCMS-V-C)。 步驟 B ： 2-{3- 氯 -4- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 }-1,3- 噻唑 -4- 甲酸乙酯
向3,6-二氯-1,2,4,5-四𠯤(443 mg，2.94 mmol，1當量)於四氫呋喃(15 mL)中之溶液中添加步驟A之產物(741 mg，2.94 mmol，1當量)且將混合物在110℃下在密封管中加熱隔夜。真空濃縮反應物，且殘餘物用甲醇濕磨，過濾且真空乾燥，得到呈米色固體狀之所需產物(607 mg，1.79 mmol，61%)。LC/MS (C 14H 15ClN 4O 2S) 339 [M+H] +; RT 2.41 (LCMS-V-C)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.06 (s, 1H), 4.38 - 4.25 (m, 4H), 2.92 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.14 - 2.01(m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。 步驟 C ： 2-{3-[(1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 }-1,3- 噻唑 -4- 甲酸乙酯
向經烘乾微波小瓶中添加步驟B之產物(607 mg，1.79 mmol，1當量)、2-胺基苯并噻唑(404 mg，2.69 mmol，1.5當量)、XantPhos (207 mg，0.36 mmol，0.2當量)、碳酸銫(1.17 g，3.58 mmol，2當量)及1,4-二㗁烷(36 mL)，且對容器抽真空且用氮氣沖洗，接著添加三(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0) (164 mg，0.18 mmol，0.1當量)，且向混合物中鼓泡通入氮氣(10 min)，接著在微波照射下在150℃下加熱4小時。反應物用乙酸乙酯稀釋且經由矽藻土過濾，接著用鹽水洗滌，乾燥(硫酸鎂)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，24 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-100%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到固體，該固體用二乙醚濕磨，過濾且真空乾燥，得到呈黃色固體狀之所需產物(329 mg，0.73 mmol，41%)。LC/MS (C 21H 20N 6O 2S 2) 453 [M+H] +; RT 2.73 (LCMS-V-C)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.99 (br s + s, 2H), 7.65 (br s, 1H), 7.43 - 7.31 (m, 1H), 7.28 - 7.15 (m, 1H), 4.35 - 4.25 (m, 4H), 2.96 - 2.85 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.15 - 2.00 (m, 2H), 1.32 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。 製備 3g ： 5-(3- 羥丙基 )-2-(4- 甲基 -3-{[(2 Z)-3-{[2-( 三甲基矽基 ) 乙氧基 ] 甲基 }-2,3- 二氫 -1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 }-5 H,6 H,7 H,8 H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸乙酯 步驟 A ： 2-(4- 甲基 -3-{[(2Z)-3-{[2-( 三甲基矽基 ) 乙氧基 ] 甲基 }-2,3- 二氫 -1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 }-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸乙酯
向來自 製備 3f之產物(11.7 g，25.8 mmol，1當量)於二甲基甲醯胺(700 mL)中之溶液中添加 N , N-二異丙基乙胺(13.5 mL，77.4 mmol，3當量)。5 min後，將混合物冷卻至0℃且添加4-(二甲胺基)吡啶(630 mg，5.16 mmol，0.2當量)及2-(三甲基矽基)乙氧基甲基氯(13.6 mL，77.4 mmol，3當量)，且將混合物在環境溫度下攪拌隔夜。真空濃縮反應物，接著將其分配於二氯甲烷與鹽水之間，且有機相經乾燥(硫酸鎂)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，330 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-40%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到呈黃色固體狀之所需產物(9.61 g，16.5 mmol，64%)。LC/MS (C 27H 34N 6O 3SiS 2) 583 [M+H] +; RT 2.90 (LCMS-V-C). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.99 (s, 1H), 7.82 (dd, J = 7.7, 1.1 Hz, 1H), 7.49 - 7.38 (m, 2H), 7.28 - 7.19 (m, 1H), 5.86 (s, 2H), 4.38 - 4.23 (m, 4H), 3.77 - 3.67 (m, 2H), 2.89 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.13 - 2.01 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.91 (dd, J = 8.5, 7.4 Hz, 2H), -0.11 (s, 9H)。 步驟 B ： 5- 溴 -2-(4- 甲基 -3-{[(2Z)-3-{[2-( 三甲基矽基 ) 乙氧基 ] 甲基 }-2,3- 二氫 -1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 }-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸乙酯
向步驟A之產物(9.61 g，16.5 mmol，1當量)於二氯甲烷(400 mL)中之溶液中添加 N-溴丁二醯亞胺(3.52 g，19.8 mmol，1.2當量)，且在環境溫度下攪拌混合物隔夜。將反應物分配於二氯甲烷與水之間，且有機相用鹽水洗滌，乾燥(PTFE相分離器)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，220 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-40%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到呈黃色固體狀之所需產物(9.66 g，14.6 mmol，89%)。LC/MS (C 27H 33BrN 6O 3SiS 2) 663 [M+H] +; RT 3.13 (LCMS-V-C)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.84 (dd, J = 7.5, 1.1 Hz, 1H), 7.59 - 7.38 (m, 2H), 7.24 (ddd, J = 8.3, 6.7, 1.7 Hz, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.37 - 4.23 (m, 4H), 3.72 (dd, J = 8.5, 7.4 Hz, 2H), 2.87 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.13 - 2.00 (m, 2H), 1.32 (t, 3H), 0.95 - 0.81 (m, 2H), -0.12 (s, 9H)。 步驟 C ： 5-[(1E)-3-[( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ] 丙 -1- 烯 -1- 基 ]-2-(4- 甲基 -3-{[(2Z)-3-{[2-( 三甲基矽基 ) 乙氧基 ] 甲基 }-2,3- 二氫 -1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 }-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸乙酯
向經烘乾密封燒瓶中添加步驟B之產物(9.66 g，14.6 mmol，1當量)、( E)-3-(三級丁基二甲基矽基氧基)丙烯-1-基-酸頻哪醇酯(5.74 mL, 17.5 mmol，1.2當量)、碳酸鉀(6.05 g，43.8 mmol，3當量)、[1,1'-雙(二苯基膦基)二茂鐵]二氯化鈀(II) (1.19 g，1.46 mmol，0.1當量)、四氫呋喃(360 mL)及水(120 mL)，且將混合物用氮氣鼓泡(10 min)，接著在120℃下加熱2 h。將反應物分配於乙酸乙酯與水之間，且將有機層用鹽水洗滌，乾燥(硫酸鎂)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，220 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-30%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到呈黃色固體狀之所需產物(6.46 g，8.58 mmol，59%)。LC/MS (C 36H 52N 6O 4Si 2S 2) 753 [M+H] +; RT 1.62 (LCMS-V-B2)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.80 (dd, J = 7.6, 1.0 Hz, 1H), 7.51 - 7.38 (m, 3H), 7.24 (ddd, J = 8.3, 6.8, 1.8 Hz, 1H), 6.28 (dt, J = 16.0, 4.3 Hz, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.37 (dd, J = 4.4, 2.1 Hz, 2H), 4.35 - 4.25 (m, 4H), 3.72 (dd, J = 8.5, 7.4 Hz, 2H), 2.88 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.09 - 1.99 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.93 (s, 9H), 0.92 - 0.83 (m, 2H), 0.11 ( (s, 6H), -0.11 (s, 9H)。 步驟 D ： 5-{3-[( 三級丁基二甲基矽基 ) 氧基 ] 丙基 }-2-(4- 甲基 -3-{[(2Z)-3-{[2-( 三甲基矽基 ) 乙氧基 ] 甲基 }-2,3- 二氫 -1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 }-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸乙酯
在氮氣氛圍下向步驟C之產物(6.46 g，8.58 mmol，1當量)於乙酸乙酯(300 mL)中之溶液中添加氧化鉑(IV) (390 mg，1.72 mmol，0.2當量)。將容器抽真空且回填氮氣(×3)，接著抽真空，置放在氫氣氛圍下，且在環境溫度下振盪3天。反應物經由矽藻土過濾，用乙酸乙酯溶離且真空濃縮，得到呈棕色膠狀之所需產物(6.72 g，8.9 mmol，＞100%)。LC/MS (C 36H 54N 6O 4Si 2S 2) 755 [M+H] +; RT 1.67 (LCMS-V-B2)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.76 (d, 1H), 7.48 - 7.35 (m, 2H), 7.24 (ddd, J = 8.2, 6.5, 1.9 Hz, 1H), 5.84 (s, 2H), 4.33 - 4.22 (m, 4H), 3.76 - 3.62 (m, 4H), 3.15 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.87 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.10 - 1.98 (m, 3H), 1.91 - 1.79 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.95 - 0.85 (m, 11H), 0.06 (s, 6H), -0.12 (s, 9H)。 步驟 E ： 5-(3- 羥丙基 )-2-(4- 甲基 -3-{[(2Z)-3-{[2-( 三甲基矽基 ) 乙氧基 ] 甲基 }-2,3- 二氫 -1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 }-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸乙酯
向步驟D之產物(6.72 g，8.9 mmol，1當量)於1,4-二㗁烷(400 mL)中之溶液中添加鹽酸(4M於二㗁烷中；67 mL，267 mmol，30當量)，且在環境溫度下攪拌混合物1 h。使反應物冷卻至0℃且用1N氫氧化鈉水溶液(300 mL)中和，接著分配於乙酸乙酯與水之間，且有機相經乾燥(硫酸鎂)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，120 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-80%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到固體，該固體用二乙醚濕磨，過濾且真空乾燥，得到呈白色固體狀之所需產物(3.87 g，6.04 mmol，68%)。LC/MS (C 30H 40N 6O 4SiS 2) 641 [M+H] +; RT 2.80 (LCMS-V-C)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.83 (dd, J = 7.6, 1.1 Hz, 1H), 7.48 - 7.37 (m, 2H), 7.23 (ddd, J = 8.3, 6.7, 1.8 Hz, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.56 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 4.33 - 4.22 (m, 4H), 3.72 (dd, J = 8.6, 7.3 Hz, 2H), 3.48 (td, J = 6.3, 5.1 Hz, 2H), 3.17 - 3.08 (m, 2H), 2.88 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.11 - 1.99 (m, 2H), 1.87 - 1.75 (m, 2H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.96 - 0.86 (m, 2H), -0.11 (s, 9H)。 製備 4c ： N -[3-(3- 氟 -4- 羥基 - 苯基 ) 丙 -2- 炔基 ]- N- 甲基 - 胺基甲酸三級丁酯
使用 薗頭通用程序，以作為適當苯酚之10.00 g 2-氟-4-碘-苯酚(42.0 mmol，1當量)及作為炔烴之10.67 g N-甲基- N-丙-2-炔基-胺基甲酸三級丁酯(63.1 mmol，1.5當量)為起始物，得到10.8 g (92%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 10.32 (s, 1 H), 7.22 (brd, 1H), 7.08 (dm, 1H), 6.92 (dd, 1H), 4.21 (s, 2H), 2.85 (s, 3H), 1.41 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 150.8, 146.4, 129.0, 119.6, 118.4, 113.2, 84.4, 82.7, 38.5, 33.8, 28.5; HRMS-ESI (m/z): C 11H 11FNO 3之[M-C 4H 8+H] +計算值：224.0717，實驗值224.0720。 製備 7 ：三級丁基 - 二苯基 -[2-[[3,5- 二甲基 -7-[[5- 甲基 -4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧雜硼戊環 (dioxaborolan) -2- 基 ) 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙氧基 ] 矽烷 步驟 A ： 3- 溴 -5,7- 二甲基金剛烷 -1- 甲酸
將含鐵(6.7 g，120 mmol)之溴(30.7 mL，600 mmol，5當量)在0℃下攪拌1 h後，添加3,5-二甲基金剛烷-1-甲酸(25 g，1當量)，且在室溫下攪拌反應混合物2天。在添加EtOAc之後，在0℃下用飽和硫代硫酸鈉溶液謹慎地處理反應混合物，且攪拌15 min。在經由矽藻土墊過濾且用EtOAc沖洗之後，分離有機相，用飽和硫代硫酸鈉溶液及鹽水洗滌，乾燥，濃縮，得到所需產物(34.28 g，74.6%)，其不經進一步純化即使用。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 12.33 (br., 1H), 2.21 (s, 2H), 1.96/1.91 (d+d, 4H), 1.50/1.43 (d+d, 4H), 1.21/1.14 (dm+dm, 2H), 0.86 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 176.8, 66.8, 54.0, 48.7, 48.5, 45.7, 43.3, 35.5, 29.4; HRMS-ESI (m/z): C 13H 18BrO 2之[M-H]-計算值：285.0496；實驗值285.0498。 步驟 B ： 3- 溴 -5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 - 甲醇
向含步驟A之產物(34.3 g，119 mmol)之THF (77.6 mL)中緩慢添加BH3-THF於THF (358 mL，3當量)中之1 M溶液，且攪拌反應混合物18 h。在添加甲醇且攪拌30 min之後，藉由管柱層析(矽膠，庚烷及MTBE作為溶離劑)純化，得到所需產物(16.19 g，49.6%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 4.51 (t, 1H), 3.05 (d, 2H), 1.91 (s, 2H), 1.91 (s, 4H), 1.19/1.09 (d+d, 2H), 1.19/1.05 (d+d, 4H), 0.85 (s, 6H) 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 70.4, 68.9, 54.9, 49.8, 49.3, 43.8, 41.4, 35.7, 29.7; HRMS-ESI (m/z): C 13H 21O之[M-Br]-計算值：193.1598，實驗值：193.1589。 步驟 C ： 1-[3- 溴 -5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ] 吡唑
向含步驟B之產物(16.19 g，59.26 mmol)及1 H-吡唑(4.841 g，1.2 當量)之甲苯(178 mL)中一次性添加(氰基亞甲基)三丁基磷烷(18.64 mL，1.2當量)，且將反應混合物在90℃下攪拌2 h。藉由管柱層析(矽膠，庚烷及MTBE作為溶離劑)純化，得到所需產物(17.88 g，93%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.63 (d, 1H), 7.43 (d, 1H), 6.23 (t, 1H), 3.90 (s, 2H), 1.92-1.02 (m, 12H), 0.83 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 139.0, 131.8, 105.2, 67.7, 61.4, 54.4/48.8/44.6, 50.4, 35.7, 29.6; HRMS-ESI (m/z): C 16H 23BrN 2之[M]+計算值：322.1045，實驗值：322.1014。 步驟 D ： 5- 甲基 -1-[[-3- 溴 -5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ] 吡唑
在-78℃下向步驟C之產物(17.88 g，55.3 mmol)於THF (277 mL)中之溶液中添加丁基鋰(2.5 M於THF中，66 mL，3當量)，接著在1 h之後，添加碘甲烷(17.2 mL，5當量)。在10 min之後，反應混合物用NH 4Cl飽和溶液淬滅，用EtOAc萃取，且合併之有機層經乾燥且濃縮，得到所需產物(18.7 g，100%)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.31 (d, 1H), 6.00 (d, 1H), 3.79 (s, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.01 (s, 2H), 1.89/1.85 (d+d, 4H), 1.23/1.15 (d+d, 4H), 1.16/1.05 (d+d, 2H), 0.83 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 139.2, 138.0, 105.2, 67.8, 57.8, 54.4, 50.6, 48.8, 44.8, 41.5, 35.7, 29.6, 11.8; HRMS-ESI (m/z): C 17H 26BrN 2之[M+H]+計算值：337.1279，實驗值：337.1289。 步驟 E ： 2-[[-3,5- 二甲基 -7-[(5- 甲基吡唑 -1- 基 ) 甲基 ]-1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙醇
將步驟D之產物(18.7 g，55.3 mmol)、乙二醇(123 mL，40當量)及DIPEA (48.2 mL，5當量)之混合物在120℃下攪拌6 h。在將反應混合物用水稀釋且用EtOAc萃取之後，合併之有機層經乾燥且濃縮，得到所需產物(18.5 g，105%)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.29 (d, 1H), 5.99 (d, 1H), 4.45 (t, 1H), 3.78 (s, 2H), 3.39 (q, 2H), 3.32 (t, 2H), 2.23 (s, 3H), 1.34 (s, 2H), 1.27/1.21 (d+d, 4H), 1.13/1.07 (d+d, 4H), 1.04/0.97 (d+d, 2H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 139.0, 137.8, 105.1, 74.0, 62.1, 61.5, 58.5, 50.1, 47.0, 46.1, 43.3, 39.7, 33.5, 30.2, 11.9; HRMS-ESI (m/z): C 19H 31N 2O 2之[M+H]+計算值：319.2386，實驗值：319.2387。 步驟 F ：三級丁基 - 二苯基 -[2-[[-3,5- 二甲基 -7-[(5- 甲基吡唑 -1- 基 ) 甲基 ]-1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙氧基 ] 矽烷
向步驟E之產物(17.6 g，55.3 mmol)及咪唑(5.65 g，1.5當量)於DCM (150 ml)中之混合物中添加三級丁基-氯-二苯基-矽烷(18.6 g，1.2當量)，且將反應混合物攪拌1 h。藉由管柱層析(矽膠，庚烷及MTBE作為溶離劑)純化，得到所需產物(27.0 g，87.8%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.72-7.34 (m, 10H), 7.29 (d, 1H), 5.99 (br., 1H), 3.78 (s, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.44 (t, 2H), 2.21 (s, 3H), 1.33 (s, 2H), 1.26/1.18 (d+d, 4H), 1.12/1.06 (d+d, 4H), 1.03/0.96 (d+d, 2H), 0.98 (s, 9H), 0.82 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 139.0, 137.8, 105.1, 74.2, 64.4, 61.7, 58.5, 50.0, 46.9, 46.0, 43.4, 39.6, 33.5, 30.1, 27.1, 19.3, 11.9; HRMS-ESI (m/z): C 35H 49N 2O 2Si之[M+H]+計算值：557.3563，實驗值：557.3564。 步驟 G ：三級丁基 - 二苯基 -[2-[[3-[(4- 碘 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ) 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙氧基 ] 矽烷
向步驟F之產物(27.0 g，48.56 mmol)於DMF (243 mL)中之溶液中添加N-碘丁二醯亞胺(13.6 g，1.25當量)，且攪拌反應混合物2 h。在用水稀釋之後，混合物用DCM萃取。合併之有機層用硫代硫酸鈉飽和溶液及鹽水洗滌，乾燥且濃縮，得到所需產物(30.1 g，90%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.68-7.37 (m, 10H), 7.45 (s, 1H), 3.89 (s, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.44 (t, 2H), 2.23 (s, 3H), 1.30 (s, 2H), 1.26/1.17 (d+d, 4H), 1.12/1.05 (d+d, 4H), 1.00/0.96 (d+d, 2H), 0.98 (s, 9H), 0.82 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 142.5, 140.8, 133.7, 64.4, 61.7, 60.3, 59.9, 49.9, 46.8, 45.9, 43.2, 39.7, 33.5, 30.1, 27.1, 19.3, 12.2; HRMS-ESI (m/z): C 35H 48IN 2O 2Si之[M+H]+計算值：683.2530，實驗值：683.2533。 步驟 H ：三級丁基 - 二苯基 -[2-[[3,5- 二甲基 -7-[[5- 甲基 -4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧雜硼雜環戊 -2- 基 ) 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙氧基 ] 矽烷
在0℃下向含步驟G之產物(17.5 g，25.6 mmol)之THF (128 mL)中添加氯(異丙基)鎂-LiCl (1.3 M於THF中，24 mL，1.2當量)，攪拌40 min，用2-異丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環(15.7 mL，3當量)處理，且將反應混合物攪拌10 min。在用NH 4Cl飽和溶液稀釋且用EtOAc萃取之後，將合併之有機相濃縮，且藉由管柱層析(矽膠，庚烷及MTBE作為溶離劑)純化，得到所需產物(15.2 g，86.9%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.65 (dm, 4H), 7.47 (s, 1H), 7.45 (tm, 2H), 7.40 (tm, 4H), 3.80 (s, 2H), 3.66 (t, 2 H), 3.44 (t, 2H), 2.35 (s, 3H), 1.35-0.94 (m, 12H), 1.24 (s, 12H), 0.97 (s, 9H), 0.83 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 146.9, 144.3, 135.6, 130.2, 128.2, 104.7, 83.0, 74.2, 64.4, 61.7, 58.4, 30.1, 27.1, 25.2, 19.3, 12.0; HRMS-ESI (m/z): C 41H 60BN 2O 4Si之[M+H]+計算值：683.4415，實驗值：683.4423。 製備 8 ：三級丁基 -[3-[3,5- 二甲基 -7-[[5- 甲基 -4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧雜硼戊環 -2- 基 ) 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-1- 金剛烷基 ] 丙氧基 ]- 二苯基 - 矽烷 步驟 A ： 1-[[3- 烯丙基 -5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑
向含 製備 7之步驟D之產物(15.66 g，46.43 mmol)及AgOTf (597 mg，0.05當量)之THF (232 mL)中，添加烯丙基-Mg-Cl於THF (46.4 mL，2當量)中之2 M溶液，且攪拌反應混合物0.5 h。在用NH 4Cl飽和溶液淬滅且用EtOAc萃取之後，合併之有機相經濃縮且藉由管柱層析(矽膠，庚烷及MTBE作為溶離劑)來純化，得到所需產物(11.32 g，81.7%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.27 (d, 1H), 5.98 (m, 1H), 5.76 (m, 1H), 5.01/4.96 (dm+dm, 2H), 3.73 (s, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.83 (d, 2H), 1.15-0.93 (m, 12H), 0.78 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 139.0, 137.7, 135.0, 117.7, 105.0, 59.0, 47.8, 44.2, 35.0, 31.8, 30.6, 11.9; HRMS-ESI (m/z): C 20H 31N 2之[M+H]+計算值：299.2487，實驗值：299.2485。 步驟 B ： 3-[3,5- 二甲基 -7-[(5- 甲基吡唑 -1- 基 ) 甲基 ]-1- 金剛烷基 ] 丙 -1- 醇
向含步驟A之產物(10.2 g，34.17 mmol)之THF (85 mL)中添加BH 3-THF於THF中之1 M溶液(85.4 mL，2當量)，且攪拌反應混合物1 h。在0℃下用10 M NaOH溶液(24 mL，7當量)及33%過氧化氫溶液(73 mL，25登錄)處理之後，將反應物在室溫下攪拌1小時。接著，其用HCl水溶液淬滅，用EtOAc萃取，且藉由管柱層析(矽膠，庚烷及MTBE作為溶離劑)純化，得到所需產物(9.75 g，90%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.28 (d, 1H), 5.98 (m, 1H), 4.33 (t, 1H), 3.73 (s, 2H), 3.32 (m, 2H), 2.22 (brs, 3H), 1.32 (m, 2H), 1.12-0.92 (m, 12H), 1.06 (m, 2H), 0.78 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 137.7, 105.0, 62.1, 59.1, 39.7, 30.7, 26.5, 11.9, HRMS-ESI (m/z): C 20H 33N 2O之[M+H]+計算值：317.2593，實驗值：317.2590 步驟 C ：三級丁基 -[3-[3,5- 二甲基 -7-[(5- 甲基吡唑 -1- 基 ) 甲基 ]-1- 金剛烷基 ] 丙氧基 ]- 二苯基 - 矽烷
向步驟B之產物(9.75 g，30.8 mmol)及咪唑(3.1 g，1.5當量)於DCM (92 ml)中之混合物中添加三級丁基-氯-二苯基-矽烷(9.45 mL，1.2當量)，且將反應混合物攪拌1 h。藉由管柱層析(矽膠，庚烷及MTBE作為溶離劑)純化，得到所需產物(12.5 g，73%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.63-7.39 (m, 10H), 7.27 (d, 1H), 5.98 (d, 1H), 3.72 (s, 2H), 3.59 (t, 2H), 2.21 (s, 3H), 1.42 (m, 2H), 1.1-0.92 (br., 12H), 1.09 (m, 2H), 0.98 (s, 9H), 0.77 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 137.7, 105.0, 64.8, 59.1, 39.3, 38.0, 34.2, 31.8, 30.6, 27.2, 26.1, 19.2, 11.9; HRMS-ESI (m/z): C 36H 51N 2OSi之[M+H]+計算值：555.3771，實驗值：555.3770。 步驟 D ：三級丁基 -[3-[3-[(4- 碘 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ) 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 丙氧基 ]- 二苯基 - 矽烷
向含步驟C之產物(12.5 g，22.54 mmol)之DMF (112 mL)中添加N-碘丁二醯亞胺(6.34 g，1.25當量)，且攪拌反應混合物2 h。在用硫代硫酸鈉飽和溶液淬滅且用DCM萃取之後，合併之有機相用飽和硫代硫酸鈉及鹽水洗滌，乾燥且蒸發，得到所需產物(16.3 g，105%)。LC/MS (C 36H 50IN 2OSi) 681 [M+H] +。 步驟 E ：三級丁基 -[3-[3,5- 二甲基 -7-[[5- 甲基 -4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧雜硼戊環 -2- 基 ) 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-1- 金剛烷基 ] 丙氧基 ]- 二苯基 - 矽烷
在0℃下向含步驟D之產物(16.25 g，23.9 mmol)之THF (119 mL)中添加氯(異丙基)鎂-LiCl (1.3 M於THF中，22 mL，1.2當量)，將混合物攪拌40 min，用2-異丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環(14.6 mL，3當量)處理，且攪拌10分鐘。在用NH 4Cl飽和溶液稀釋且用EtOAc萃取之後，合併之有機相經濃縮且藉由管柱層析(矽膠，庚烷及MTBE作為溶離劑)來純化，得到所需產物(11.4 g，70%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.59 (d, 4H), 7.46 (s, 1H), 7.45 (t, 2H), 7.43 (t, 4H), 3.74 (s, 2H), 3.59 (t, 2H), 2.35 (s, 3H), 1.41 (qn, 2H), 1.24 (s, 12H), 1.09 (m, 2H), 1.08 (s, 4H), 1.05 (s, 2H), 0.98 (s, 9H), 0.98 (s, 2H), 0.94 (s, 4H), 0.78 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 146.9, 144.2, 135.5, 133.8, 130.3, 128.3, 104.6, 83.0, 64.7, 64.7, 59.0, 50.6, 48.2, 46.5, 44.1, 39.2, 37.9, 31.8, 30.7, 27.2, 26.1, 25.2, 19.2, 12.0; HRMS-ESI (m/z): C 42H 62BN 2O 3Si之[M+H] +計算值：681.4623，實驗值：681.4631。 製備 10 ： 3- 溴 -6-[3-(3,6- 二氯 -5- 甲基 - 嗒 𠯤 -4-l) 丙基胺基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯 步驟 A ： 6-[ 雙 ( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ]-3- 溴 - 吡啶 -2- 甲酸甲酯
在0℃下向含6-胺基-3-溴-吡啶-2-甲酸甲酯(25.0 g，108.2 mmol)及DMAP (1.3 g，0.1當量)之DCM (541 mL)中添加Boc 2O (59.0 g，2.5當量)，且將反應混合物攪拌2.5 h。在添加飽和NaHCO 3溶液且用DCM萃取之後，合併之有機相經乾燥且濃縮，得到所需產物(45.0 g，72.3%)。LC/MS (C 17H 23BrN 2O 6Na) 453 [M+Na] +。 步驟 B ： 3- 溴 -6-( 三級丁氧羰基胺基 ) 吡啶 -2- 甲酸甲酯
在0℃下向含步驟A之產物(42.7 g，74.34 mmol)之DCM (370 mL)中添加TFA (17.1 mL，3當量)，且將反應混合物攪拌18 h。在用飽和NaHCO 3溶液及鹽水洗滌之後，合併之有機相經乾燥，濃縮，且藉由管柱層析(矽膠，庚烷及EtOAc作為溶離劑)純化，得到所需產物(28.3 g，115.2%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 10.29 (s, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.88 (d, 1H), 3.87 (s, 3H), 1.46 (s, 9H) 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 165.6, 153.1, 151.8/148.3, 143.5, 116.3, 109.2, 53.2, 28.4. LC/MS (C 12H 15BrN 2O 4Na) 353 [M+Na] +。 步驟 C ： 3- 溴 -6-[ 三級丁氧羰基 -[3-(3,6- 二氯 -5- 甲基 - 嗒 𠯤 -4- 基 ) 丙基 ] 胺基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
向含步驟B之產物(10.0 g，30.1967 mmol)之丙酮(150 mL)中添加Cs 2CO 3(29.5 g，3當量)及3,6-二氯-4-(3-碘丙基)-5-甲基-嗒𠯤(製備2ab，9.9 g，1當量)，且將反應混合物攪拌18 h。在用水稀釋且用EtOAc萃取之後，合併之有機相用鹽水洗滌，乾燥且濃縮，得到所需產物(17.5 g，108%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 8.13 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 3.91 (t, 2H), 3.89 (s, 3H), 2.79 (m, 2H), 2.38 (s, 3H), 1.82 (m, 2H), 1.46 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 165.3, 157.6, 156.6, 153.2, 152.9, 147.2, 143.1, 142.2, 139.7, 122.6, 111.8, 82.2, 53.3, 46.4, 28.1, 27.7, 26.5, 16.3; HRMS-ESI (m/z): C 20H 23BrCl 2N 4NaO 4之[M+Na] +計算值：555.0177，實驗值：555.0172。 步驟 D ： 3- 溴 -6-[3-(3,6- 二氯 -5- 甲基 - 嗒 𠯤 -4-l) 丙基胺基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
將含步驟C之產物(17.5 g，32.7 mmol)之1,1,1,3,3,3-六氟異丙醇(330 mL)在110℃下攪拌18 h。藉由管柱層析(矽膠，庚烷及EtOAc作為溶離劑)純化，得到所需產物(9.9 g，70%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.63 (d, 1H), 7.22 (t, 1H), 6.57 (d, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.30 (m, 2H), 2.83 (m, 2H), 2.37 (s, 3H), 1.74 (m, 2H) 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 166.5, 141.5, 112.6, 52.9, 40.9, 28.0, 27.0, 16.4. 製備 11 ： 3- 溴 -6-[3-(3,6- 二氯 -5- 甲基 - 嗒 𠯤 -4- 基 ) 丙基胺基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲 酯 步驟 A ： 3- 溴 -6-[3-(3,6- 二氯 -5- 甲基 - 嗒 𠯤 -4- 基 ) 丙基胺基 ] 吡啶 -2- 甲酸
將來自 製備 10之產物(35.39 g，81.52 mmol)及LiOH×H 2O (13.68 g，4當量)於1,4-二㗁烷(408 mL)及水(82 mL)中之混合物在60℃下攪拌1 h。在用1 M HCl溶液淬滅且用EtOAc萃取之後，合併之有機相經乾燥，濃縮且藉由急驟層析(矽膠，使用DCM及MeOH作為溶離劑)純化，得到所需產物(27.74 g，81%)。LC/MS (C 14H 14BrCl 2N 4O 2) 421 [M+H] +。 步驟 B ： 3- 溴 -6-[3-(3,6- 二氯 -5- 甲基 - 嗒 𠯤 -4- 基 ) 丙基胺基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ( 4- 甲氧基苯基 ) 甲 酯
向含步驟A之產物(27.7 g，65.9 mmol)、(4-甲氧基苯基)甲醇(16.4 mL，2當量)及PPh 3(34.6 g，2當量)之甲苯(660 mL)及THF (20 ml)中逐滴添加偶氮二甲酸二異丙酯(26 mL，2當量)，且將反應混合物在50℃下攪拌1 h。藉由急驟層析(矽膠，使用庚烷及EtOAc作為溶離劑)純化，得到所需產物(23.65 g，66.4%)。 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.62 (d, 1H), 7.37 (dn, 2H), 7.21 (t, 1H), 6.91 (dm, 2H), 6.56 (d, 1H), 5.25 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.30 (q, 2H), 2.81 (m, 2H), 2.33 (s, 3H), 1.73 (m, 2H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 165.9, 159.7, 157.6, 157.5, 156.8, 148.0, 142.7, 141.5, 139.7, 130.6, 127.8, 114.3, 112.6, 101.6, 67.0, 55.6, 40.9, 28.0, 27.1, 16.4; HRMS-ESI (m/z): C 22H 22BrCl 2N 4O 3之[M+H] +計算值：539.0252，實驗值：539.0246。 製備 12 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-[2-( 對甲苯磺醯基氧基 ) 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯 步驟 A ： 6-[3-(3,6- 二氯 -5- 甲基 - 嗒 𠯤 -4- 基 ) 丙基胺基 ]-3-[5- 甲基 -1-[[3-[2-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ] 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
將來自 製備 10之產物(15.0 g，34.55 mmol)、來自 製備 7之產物(30.7 g，1.3當量)、Cs 2CO 3(33.8 g，3.0當量)及Pd(AtaPhos) 2Cl 2(1.53 g，0.1當量)於1,4-二㗁烷(207 mL)及H 2O (34.5 mL)中之混合物在80℃下攪拌1.5 h。藉由管柱層析(矽膠，庚烷及EtOAc作為溶離劑)純化，得到所需產物(18.5 g，58%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.69-7.37 (m, 10H), 7.32 (d, 1H), 7.23 (s, 1H), 6.98 (t, 1H), 6.63 (d, 1H), 3.82 (s, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.58 (s, 3H), 3.46 (t, 2H), 3.35 (m, 2H), 2.86 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.78 (m, 2H), 1.35 (s, 2H), 1.27/1.2 (m+m, 4H), 1.15/1.09 (m+m, 4H), 1.05/0.97 (m+m, 2H), 0.97 (s, 9H), 0.84 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z): C 50H 63Cl 2N 6O 4Si之[M+H] +計算值：909.4057，實驗值：909.4053。 步驟 B ： 6-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-3-[5- 甲基 -1-[[3-[2-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ] 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
將步驟A之產物(18.5 g，20.3 mmol)、Cs 2CO 3(13.2 g，2當量)、DIPEA (7.1 mL，2當量)及Pd(Ataphos) 2Cl 2(900 mg，0.1當量)於1,4-二㗁烷(102 mL)中之混合物在110℃下攪拌18 h。在過濾及濃縮之後，殘餘物用DCM溶解，用水洗滌且藉由管柱層析(矽膠，DCM及EtOAc作為溶離劑)純化，得到所需產物(12.6 g，71%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.85 (d, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.66 (dm, 4H), 7.47-7.36 (m, 6H), 7.38 (s, 1H), 3.97 (t, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.68 (t, 2H), 3.66 (s, 3H), 3.47 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 1.99 (br., 2H), 1.38 (s, 2H), 1.32-0.96 (br., 10H), 0.98 (s, 9H), 0.85 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 139.9, 137.6, 120.5, 64.4, 61.7, 58.9, 52.3, 46.0, 43.4, 30.2, 27.1, 24.6, 21.0, 15.5, 10.9; HRMS-ESI (m/z): C 50H 62ClN 6O 4Si之[M+H] +計算值：873.4290，實驗值：873.4291。 步驟 C ： 6-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-3-[1-[[3-(2- 羥基乙氧基 )-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
在0℃下向含步驟B之產物(8.46 g，9.68 mmol)之THF (95 mL)中添加TBAF於THF (10.6 mL，1.1當量)中之1 M溶液，且將反應混合物攪拌2 h。在用飽和NH 4Cl溶液淬滅且用EtOAc萃取之後，合併之有機相用鹽水洗滌，乾燥，且藉由管柱層析(矽膠，DCM及MeOH作為溶離劑)純化，得到所需產物(5.38 g，88%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.86 (d, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.38 (s, 1H), 4.46 (t, 1H), 3.97 (t, 2H), 3.87 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.40 (m, 2H), 3.35 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.30 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.99 (m, 2H), 1.42-0.95 (m, 12H), 0.87 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z): C 34H 44ClN 6O 4之[M+H] +計算值：635.3113，實驗值：635.3112。 步驟 D ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-(2- 羥基乙氧基 )-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
在130℃下使用 布赫瓦爾德通用程序 I1 h，以3.7 g來自步驟C之產物(5.78 mmol)及1.74 g 1,3-苯并噻唑-2-胺(2當量)為起始物，得到3.1 g所需產物(72%產率)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.96 (d, 1H), 7.82 (br., 1H), 7.70 (d, 1H), 7.50 (br., 1H), 7.38 (s, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.17 (t, 1H), 4.46 (br., 1H), 4.00 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.40 (brt., 2H), 3.35 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 2.03-1.94 (m, 2H), 1.42-0.96 (m, 12H), 0.87 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 139.8, 137.5, 126.4, 122.4, 122.1, 119.0, 62.1, 61.5, 59.0, 52.6, 45.4, 30.2, 24.3, 21.7, 12.6, 10.9; HRMS-ESI (m/z): C 41H 49N 8O 4S之[M+H] +計算值：749.3597，實驗值：749.3595。 步驟 E ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-[2-( 對甲苯磺醯基氧基 ) 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
向含來自步驟D之產物(3.85 g，5.14 mmol)及三乙胺(2.15 mL，3當量)之DCM (50 mL)中添加4-甲基苯磺酸對甲苯磺醯酯(2.51 g，1.5當量)，且攪拌反應混合物1 h。藉由管柱層析(矽膠，庚烷及EtOAc作為溶離劑)純化，得到所需產物(3.2 g，69%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.96 (d, 1H), 7.81 (br., 1H), 7.77 (d, 2H), 7.70 (d, 1H), 7.50 (br., 1H), 7.46 (d, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.17 (t, 1H), 4.06 (t, 2H), 4.00 (t, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.49 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.99 (m, 2H), 1.32-0.93 (m, 12H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 139.8, 137.6, 130.6, 128.1, 126.4, 122.4, 122.1, 119, 71.5, 58.8, 58.4, 52.6, 45.4, 30.1, 24.3, 21.7, 21.6, 12.6, 10.9; HRMS-ESI (m/z): C 48H 55N 8O 6S 2之[M+H] +計算值：903.3686，實驗值：903.3685。 製備 13 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-[3-( 對甲苯磺醯基氧基 ) 丙基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯 步驟 A ： 3-[1-[[3-[3-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[3-(3,6- 二氯 -5- 甲基 - 嗒 𠯤 -4- 基 ) 丙基胺基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
將來自 製備 11之產物(3.67 g，6.79 mmol)、來自 製備 8之產物(5.09 g，1.1當量)、Pd(AtaPhos) 2Cl 2(301 mg，0.1當量)及Cs 2CO 3(6.64 g，3當量)於1,4-二㗁烷(41 mL)及H 2O (6.8 mL)中之混合物在80℃下攪拌18 h。藉由管柱層析(矽膠，庚烷及EtOAc作為溶離劑)純化，得到所需產物(4.43 g，64%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.62-7.38 (m, 10H), 7.32 (d, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.10 (m, 2H), 6.98 (t, 1H), 6.83 (m, 2H), 6.63 (d, 1H), 4.98 (s, 2H), 3.74 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.58 (t, 2H), 3.35 (m, 2H), 2.84 (m, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.77 (m, 2H), 1.43 (m, 2H), 1.18-0.85 (m, 12H), 1.09 (t, 2H), 0.97 (s, 9H), 0.77 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z): C 58H 71Cl 2N 6O 4Si之[M+H] +計算值：1013.4683，實驗值：1013.4683； 步驟 B ： 3-[1-[[3-[3-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ) 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
將來自步驟A之產物(4.43 g，4.37 mmol)、Cs 2CO 3(2.84 g，2當量)、DIPEA (1.5 mL，2當量)及Pd(Ataphos) 2Cl 2(193 mg，0.1當量)於1,4-二㗁烷(22 mL)中之混合物在110℃下攪拌18 h。在用水淬滅且用EtOAc萃取之後，合併之有機相經乾燥，濃縮且藉由管柱層析(矽膠，DCM及EtOAc作為溶離劑)純化，得到所需產物(2.83 g，66%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.84 (d, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.59 (d, 4H), 7.44 (t, 2H), 7.42 (t, 4H), 7.38 (s, 1H), 7.14 (d, 2H), 6.87 (d, 2H), 5.07 (s, 2H), 3.96 (t, 2H), 3.78 (s, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.59 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.97 (qn, 2H), 1.43 (qn, 2H), 1.12 (s, 4H), 1.10 (s, 2H), 1.09 (t, 2H), 0.97 (s, 9H), 0.95 (s, 2H), 0.94/0.91 (d+d, 4H), 0.78 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 166.9, 159.6, 156.3, 153.6, 150.8, 147.7, 140.1, 137.5, 137.3, 136.0, 135.5, 133.8, 130.3, 130.1, 129.1, 128.3, 127.6, 123.1, 120.5, 115.5, 114.3, 66.8, 64.8, 64.8, 59.6, 55.6, 50.5, 48.1, 46.4, 46.0, 44.2, 39.3, 38.1, 31.7, 30.6, 27.2, 26.1, 24.6, 21.0, 19.3, 15.5, 10.9; HRMS-ESI (m/z): C 58H 70ClN 6O 4Si之[M+H] +計算值：977.4916，實驗值：977.4915。 步驟 C ： 6-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-3-[1-[[3-(3- 羥丙基 )-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
在0℃下向含步驟B之產物(2.83 g，2.89 mmol)之THF (95 mL)中添加TBAF於THF (3.2 mL，1.1當量)中之1 M溶液，且將反應混合物攪拌2 h。在用飽和NH 4Cl溶液淬滅且用EtOAc萃取之後，合併之有機相用鹽水洗滌，乾燥，濃縮，且藉由管柱層析(矽膠，DCM及MeOH作為溶離劑)純化，得到所需產物(2.21 g，103%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.85 (d, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.17 (d, 2H), 6.90 (d, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.34 (t, 1H), 3.96 (t, 2H), 3.79 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.32 (q, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.98 (qn, 2H), 1.34 (qn, 2H), 1.13 (s, 2H), 1.13 (s, 4H), 1.06 (t, 2H), 0.99/0.95 (d+d, 4H), 0.97 (s, 2H), 0.78 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 166.9, 159.7, 156.4, 153.6, 150.8, 147.7, 140.2, 137.5, 137.3, 136.0, 130.2, 129.1, 127.6, 123.1, 120.4, 115.5, 114.3, 66.8, 66.8, 62.1, 59.7, 55.6, 50.6, 48.2, 46.5, 46.0, 44.3, 39.7, 38.1, 31.8, 30.6, 26.5, 24.6, 21.0, 15.5, 10.9; HRMS-ESI (m/z): C 42H 52ClN 6O 4之[M+H] +計算值：739.3739，實驗值：739.3739。 步驟 D ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-(3- 羥丙基 )-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
將步驟C之產物(1.71 g，2.31 mmol)、1,3-苯并噻唑-2-胺(695 mg，2當量)、Pd 2dba 3(212 mg，0.1當量)、XantPhos (268 mg，0.2當量)及DIPEA (1.2 mL，3當量)於環己醇(14 mL)中之混合物在130℃下攪拌1 h。藉由管柱層析(矽膠，庚烷、DCM及MeCN作為溶離劑)純化，得到所需產物(1.25 g，63%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 12.08/10.87 (brs/brs, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.81 (br, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.50 (br, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.18 (d, 2H), 7.17 (t, 1H), 6.90 (d, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.34 (t, 1H), 3.99 (t, 2H), 3.79 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.33 (q, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.98 (qn, 2H), 1.34 (qn, 2H), 1.14 (s, 4H), 1.14 (s, 2H), 1.07 (t, 2H), 1.00/0.95 (d+d, 2H), 0.99/0.95 (d+d, 4H), 0.79 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 140.0, 137.6, 130.2, 126.4, 122.4, 122.0, 119.0, 114.3, 66.7, 62.1, 59.6, 55.6, 50.6, 48.2, 46.5, 45.4, 44.3, 39.7, 30.6, 26.5, 24.3, 21.7, 12.6, 11.0; HRMS-ESI (m/z): C 49H 57N 8O 4S之[M+H] +計算值：853.4223，實驗值：853.4229。 步驟 E ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-[3-( 對甲苯磺醯基氧基 ) 丙基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
向含步驟D之產物(1.25 g，1.47 mmol)及三乙胺(0.61 mL，3當量)之DCM (15 mL)中添加4-甲基苯磺酸對甲苯磺醯酯(717 mg，1.5當量)，且攪拌反應混合物1 h。藉由管柱層析(矽膠，庚烷及EtOAc作為溶離劑)純化，得到800 mg (54%)所需產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.95 (d, 1H), 7.88 (brs, 1H), 7.77 (m, 2H), 7.68 (d, 1H), 7.62 (brs, 1H), 7.47 (m, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.35 (brs, 1H), 7.17 (brs, 1H), 7.10 (m, 2H), 6.90 (m, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.00 (m, 2H), 3.98 (t, 2H), 3.77 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 2.85 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.45 (m, 2H), 1.17-0.8 (m, 12H), 0.98 (m, 2H), 0.77 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z): C 56H 63N 8O 6S 2之[M+H] +計算值：1007.4312，實驗值：1007.4318。 製備 15 ： 2-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-5-[3-(2- 氟 -4- 碘 - 苯氧基 ) 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸乙酯 步驟 A ： 2-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-5-[3-(2- 氟 -4- 碘 - 苯氧基 ) 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
將 製備 3a之產物(35.39 g，81.52 mmol)及LiOH×H 2O (4當量)於1,4-二㗁烷(408 mL)及水(82 mL)中之混合物在60℃下攪拌1 h。在用1 M HCl溶液淬滅且用EtOAc萃取之後，合併之有機相經乾燥，濃縮且藉由急驟層析(矽膠，使用DCM及MeOH作為溶離劑)純化，得到所需產物(27.7 g，81%)。 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.56 (dd, 1H), 7.43 (brd., 1H), 6.96 (t, 1H), 4.18 (t, 2H), 4.05 (t, 2H), 3.28 (t, 2H), 2.84 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.07 (m, 2H), 1.97 (m, 2H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 166.4, 154.8, 152.1, 151.8, 151.1, 147.1, 143.9, 135.7, 134.0, 133.8, 129.0, 124.9, 117.6, 82.3, 68.8, 46.3, 31.0, 24.0, 22.5, 19.8, 15.7; HRMS-ESI (m/z): C 21H 20ClFIN 4O 3S之[M+H] +計算值：588.9973，實驗值：588.9969。 步驟 B ： 2-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-5-[3-(2- 氟 -4- 碘 - 苯氧基 ) 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸乙酯
向含步驟A之產物(27.7 g，65.9 mmol)、乙醇(2當量)及PPh 3(2當量)於甲苯(660 mL)及THF (20 ml)中之混合物中逐滴添加偶氮二甲酸二異丙酯(2當量)，且將反應物在50℃下攪拌1 h。藉由急驟層析(矽膠，使用庚烷及EtOAc作為溶離劑)純化，得到所需產物(23.65 g，66.4%)。 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.59 (dd, 1H), 7.44 (dm, 1H), 6.98 (t, 1H), 4.29 (m, 2H), 4.25 (q, 2H), 4.08 (t, 2H), 3.24 (t, 2H), 2.89 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.09 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.28 (t, 3H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 162.6, 155.4, 152.2, 151.7, 151.3, 147.0, 134.0, 124.9, 117.6, 82.4, 68.3, 60.7, 46.3, 30.8, 24.1, 23.1, 19.7, 15.7, 14.6; HRMS-ESI (m/z): C 23H 24ClFIN 4O 3S之[M+H] +計算值：617.0286，實驗值：617.0282。 製備 16 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-[2-( 對甲苯磺醯基氧基 ) 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯 步驟 A ： 3-[1-[[3-[2-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ) 吡啶 -2- 甲酸
將1.5 g (1.72 mmol) 製備 12 ， 步驟 B 之產物、290mg (4當量)LiOH於17 mL THF及水之4:1混合物中之混合物在60℃下攪拌以達到完全轉化。在藉由添加1M HCl水溶液淬滅反應物之後，用EtOAc萃取混合物且將有機相乾燥，濃縮且藉由管柱層析(矽膠，使用DCM及MeOH作為溶離劑)純化，得到1.23 g (83%)所需產物。 1 H NMR(500 MHz, dmso-d6) δ ppm 13.11 (s, 1H), 7.80 (d, 1H), 7.66 (d, 4H), 7.65 (d, 1H), 7.44 (t, 2H), 7.41 (s, 1H), 7.40 (t, 4H), 3.99 (t, 2H), 3.86 (s, 2H), 3.68 (t, 2H), 3.47 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 1.99 (qn, 2H), 1.39 (s, 2H), 1.27/1.22 (d+d, 4H), 1.17/1.12 (d+d, 4H), 1.05/0.99 (d+d, 2H), 0.98 (s, 9H), 0.85 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 168.5, 156.5, 153.2, 150.7, 148.9, 139.8, 137.7, 137.3, 136.0, 135.6, 133.8, 130.2, 129.0, 128.3, 122.1, 119.9, 115.7, 74.3, 64.4, 61.7, 59.0, 50.1, 46.9, 46.0, 46.0, 43.4, 39.7, 33.6, 30.2, 27.1, 24.6, 21.0, 19.2, 15.5, 11.1; HRMS-ESI(m/z): C 49H 60ClN 6O 4Si之[M+H] +計算值：859.4134，實驗值：859.4130。 步驟 B ： 3-[1-[[3-[2-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ) 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
向含1.23 g (1.43 mmol) 步驟 A之產物、0.35 mL (2當量) (4-甲氧基苯基)甲醇、748 mg (2當量) PPh 3之7 mL甲苯中逐滴添加0.56 mL (2當量) DIAD，且在50℃下攪拌混合物直至完全轉化。藉由管柱層析(矽膠，使用DCM及EtOAc作為溶離劑)純化產物，得到1.11 g (79%)所需產物。 1 H NMR(500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.84 (d, 1H), 7.67 (d, 1H), 7.65 (d, 4H), 7.44 (t, 2H), 7.41 (s, 1H), 7.40 (t, 4H), 7.15 (d, 2H), 6.87 (d, 2H), 5.07 (s, 2H), 3.96 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.66 (t, 2H), 3.45 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.97 (qn, 2H), 1.38 (s, 2H), 1.25/1.18 (d+d, 4H), 1.18/1.12 (d+d, 4H), 1.01/0.93 (d+d, 2H), 0.97 (s, 9H), 0.82 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 166.8, 159.7, 156.3, 153.6, 150.8, 147.7, 140.1, 137.6, 137.3, 136.0, 135.6, 133.8, 130.2, 130.2, 129.1, 128.2, 127.7, 123.0, 120.4, 115.6, 114.3, 74.2, 66.8, 64.4, 61.7, 59.3, 55.6, 49.9, 46.8, 46.0, 46.0, 43.3, 39.7, 33.6, 30.1, 27.1, 24.6, 21.0, 19.3, 15.5, 10.8; HRMS-ESI(m/z): C 57H 68ClN 6O 5Si之[M+H] +計算值：979.4709，實驗值：979.4710。 步驟 C ： 6-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-3-[1-[[3-(2- 羥基乙氧基 )-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
向含45.4 g (46.3 mmol) 步驟 B之產物的470 mL THF中添加51 mL (1.1當量) TBAF於THF中之1 M溶液且將混合物攪拌2 h。用NH 4Cl飽和溶液淬滅之後，用EtOAc萃取混合物且將有機相乾燥且藉由管柱層析(矽膠，使用DCM及MeOH作為溶離劑)純化，得到21.6 g (63%)所需產物。 1 H NMR(500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.85 (d, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.18 (d, 2H), 6.90 (d, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.45 (t, 1H), 3.96 (t, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.40 (q, 2H), 3.33 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.98 (qn, 2H), 1.39 (s, 2H), 1.27/1.21 (d+d, 4H), 1.18/1.12 (d+d, 4H), 1.03/0.94 (d+d, 2H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 166.8, 159.7, 156.3, 153.6, 150.8, 147.8, 140.2, 137.6, 137.3, 136, 130.2, 129.1, 127.7, 123.0, 120.4, 115.6, 114.3, 74.0, 66.8, 62.2, 61.5, 59.0, 55.6, 50.0, 46.9, 46.0, 46.0, 43.3, 39.7, 33.5, 30.1, 24.6, 21.0, 15.5, 10.9; HRMS-ESI(m/z): C 41H 50ClN 6O 5之[M+H] +計算值：741.3531，實驗值：741.3530。 步驟 D ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-(2- 羥基乙氧基 )-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
將7.1 g (9.6 mmol) 步驟 C之產物、2.8 g (19 mmol) 1,3-苯并噻唑-2-胺、4.8 mL (28 mmol) N -乙基- N -異丙基-丙-2-胺、861 mg (0.94 mmol) Pd 2(dba) 3及1.1 g (1.9 mmol) XantPhos於66 mL環己醇中之混合物在130℃下攪拌2小時。產物藉由管柱層析(矽膠，使用DCM及MeOH作為溶離劑)純化，得到5.71 g (63%)所需產物。 1 H NMR(500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.95 (d, 1H), 7.81 (brd, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.49 (brs, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.35 (m, 1H), 7.19 (m, 2H), 7.16 (m, 1H), 6.91 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.46 (t, 1H), 3.99 (m, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.40 (m, 2H), 3.34 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.99 (m, 2H), 1.45-0.9 (m, 12H), 0.84 (s, 6H); HRMS-ESI(m/z): C 48H 55N 8O 5S之[M+H] +計算值：855.4016，實驗值：855.4011。 步驟 E ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-[2-( 對甲苯磺醯基氧基 ) 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
向含5.0 g (5.8 mmol) 步驟 D 之產物的50 mL二氯甲烷中添加2.5 mL (3.1當量) N , N-二乙基乙胺及2.9 g (1.5當量) 4-甲基苯磺酸對甲苯磺醯酯，接著將混合物攪拌18 h。藉由管柱層析(矽膠，使用DCM及EtOAc作為溶離劑)純化產物，得到2.95 g (50%)所需產物。 1 H NMR(500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.95 (d, 1H), 7.81 (brs, 1H), 7.76 (m, 2H), 7.45 (brs, 1H), 7.45 (m, 2H), 7.40 (s, 1H), 7.35 (m, 1H), 7.18 (m, 2H), 7.17 (m, 1H), 6.97 (d, 1H), 6.90 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.05 (m, 2H), 4.00 (m, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.47 (m, 2H), 2.85 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.87-1.34 (m, 12H), 0.81 (s, 6H); HRMS-ESI(m/z): C 55H 61N 8O 7S 2之[M+Na] +計算值：1009.4105，實驗值：1009.4102。 製備 17 ：三級丁基 -[2-[[3-[[5- 甲基 -4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧雜硼戊環 -2- 基 ) 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙氧基 ]- 二苯基 - 矽烷 步驟 A ： (3- 溴 -1- 金剛烷基 ) 甲醇
向含3-溴金剛烷-1-甲酸(10.0 g，38.6 mmol)之THF (25 mL)中緩慢添加BH3-THF於THF (115 mL，3當量)中之1 M溶液，且將混合物攪拌48 h。在添加甲醇且攪拌30 min之後，藉由管柱層析(矽膠，庚烷及MTBE作為溶離劑)純化，得到所需產物(8.37 g，88%)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 4.50 (t, 1H), 3.02 (d, 2H), 2.28/2.21 (dm+dm, 4H), 2.11 (m, 2H), 2.07 (s, 2H), 1.66/1.56 (dm+dm, 2H), 1.48/1.39 (dm+dm, 4H); 13 C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 70.9, 69.3, 51.3, 49.0, 40.6, 37.3, 35.1, 32.3。 步驟 B ： 1-[(3- 溴 -1- 金剛烷基 ) 甲基 ] 吡唑
向含 步驟 A之產物(8.37 g，34.1 mmol)、1 H-吡唑(2.79 g，1.2當量)之甲苯(100 mL)中添加(氰基亞甲基)三丁基磷烷(10.7 mL，1.2當量)，且在90℃下攪拌反應混合物2 h。藉由管柱層析(矽膠，庚烷及MTBE作為溶離劑)純化，得到所需產物(8.50 g，84%)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.63 (dd, 1H), 7.43 (dd, 1H), 6.23 (t, 1H), 3.87 (s, 2H), 2.24/2.13 (m+m, 4H), 2.10 (m, 2H), 2.07 (s, 2H), 1.63/1.50 (m+m, 2H), 1.47/1.43 (m+m, 4H); 13 C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 138.9, 131.7, 105.1, 68.0, 61.8, 51.8, 48.5, 39.8, 38.3, 34.6, 32.1; HRMS-ESI(m/z): C 14H 20BrN 2之[M+H] +計算值：295.0810，實驗值：295.0804。 步驟 C ： 1-[(3- 溴 -1- 金剛烷基 ) 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑
在-78℃下向含 步驟 B之產物(1.70 g，5.76 mmol)之THF (30 mL)中添加丁基鋰(2.5 M於THF中，12 mL，5當量)。在1 h之後，將碘甲烷(7.2 mL，5當量)添加至混合物中。在10 min之後，反應混合物用NH 4Cl飽和溶液淬滅，用EtOAc萃取，且合併之有機層經乾燥且濃縮，得到所需產物(2.0 g，112%)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。 1 H NMR(400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.31 (d, 1H), 6.01 (d, 1H), 3.76 (s, 2H), 2.25/2.15 (d+d, 4H), 2.24 (s, 3H), 2.16 (s, 2H), 2.10 (m, 2H), 1.63/1.52 (d+d, 2H), 1.52/1.49 (d+d, 4H); 13 C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 139.2, 138.0, 105.2, 68.2, 58.3, 52.1, 48.5, 40.5, 38.4, 34.5, 32.2, 11.8; HRMS-ESI(m/z): C 15H 22BrN 2之[M+H] +計算值：309.0966，實驗值：309.0962。 步驟 D ： 2-[[3-[(5- 甲基吡唑 -1- 基 ) 甲基 ]-1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙醇
將 步驟 C之產物(2.00 g，6.47 mmol)、乙二醇(14.4 mL，40當量)及DIPEA (5.6 mL，5當量)之混合物在120℃下攪拌6 h。在用水稀釋且用EtOAc萃取之後，合併之有機相藉由管柱層析(矽膠，庚烷及MTBE作為溶離劑)來純化，得到所需產物(1.62 g，86.6%)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.28 (d, 1H), 5.99 (m, 1H), 4.46 (t, 1H), 3.75 (s, 2H), 3.40 (m, 2H), 3.32 (m, 2H), 2.23 (brs, 3H), 2.13 (m, 2H), 1.61/1.52 (m+m, 4H), 1.47/1.43 (m+m, 2H), 1.45 (s, 2H), 1.44-1.35 (m, 4H); 13 C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 137.8, 105.1, 61.8, 61.5, 59.0, 44.6, 40.8, 39.6, 35.7, 30.0, 11.9; HRMS-ESI(m/z): C 17H 27N 2O 2之[M+H] +計算值：291.2073，實驗值：291.2069。 步驟 E ：三級丁基 -[2-[[3-[(5- 甲基吡唑 -1- 基 ) 甲基 ]-1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙氧基 ]- 二苯基 - 矽烷
向含 步驟 D之產物(6.52 g，22.5 mmol)及咪唑(2.29 g，1.5當量)之DCM (67 ml)中添加三級丁基-氯-二苯基-矽烷(6.9 mL，1.2當量)，且攪拌反應混合物1 h。藉由管柱層析(矽膠，庚烷及MTBE作為溶離劑)純化，得到所需產物(11.0 g，92.7%)。 LC/MS(C 33H 45N 2O 2Si) 529 [M+H] +。 步驟 F ：三級丁基 -[2-[[3-[(4- 碘 -5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ) 甲基 ]-1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙氧基 ]- 二苯基 - 矽烷
向含 步驟 E之產物(11.0 g，20.8 mmol)之DMF (105 mL)中添加N-碘丁二醯亞胺(5.85 g，1.25當量)，且攪拌反應混合物3 h。在反應混合物用水稀釋且用DCM萃取之後，合併之有機相用飽和硫代硫酸鈉及鹽水洗滌，乾燥且蒸發，得到所需產物(11.0 g，81%)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.70-7.36 (m, 10H), 7.44 (s, 1H), 3.86 (s, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.45 (t, 2H), 2.24 (s, 3H), 2.12 (m, 2H), 1.66-1.32 (m, 12H), 0.98 (s, 9H) 13 C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 142.4, 140.9, 64.4, 61.4, 60.4, 60.3, 30.0, 27.1, 12.2; HRMS-ESI(m/z): C 33H 44IN 2O 2Si之[M+H] +計算值：655.2217，實驗值：655.2217。 步驟 G ：三級丁基 -[2-[[3-[[5- 甲基 -4-(4,4,5,5- 四甲基 -1,3,2- 二氧雜硼戊環 -2- 基 ) 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙氧基 ]- 二苯基 - 矽烷
在0℃下向含 步驟 F之產物(11.0 g，16.8 mmol)之THF (84 mL)中添加氯(異丙基)鎂-LiCl (1.3 M於THF中，17 mL，1.2當量)，且將反應混合物攪拌40 min，用2-異丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧雜硼戊環(10.3 mL，3當量)處理，且攪拌10 min。在用NH 4Cl飽和溶液稀釋且用EtOAc萃取之後，將合併之有機相濃縮且藉由管柱層析(矽膠，庚烷及MTBE作為溶離劑)純化，得到所需產物(9.0 g，82%)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.66 (d, 4H), 7.47 (s, 1H), 7.45 (t, 2H), 7.40 (t, 4H), 3.77 (s, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.44 (t, 2H), 2.36 (s, 3H), 2.11 (br, 2H), 1.60/1.48 (d+d, 4H), 1.44 (d, 2H), 1.44 (s, 2H), 1.40 (d, 4H), 1.23 (s, 12H), 0.97 (s, 9H); 13 C NMR(100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 146.9, 144.2, 133.8, 130.2, 128.3, 125.7, 104.6, 83.0, 72.5, 64.4, 61.4, 58.9, 44.6, 40.7, 39.6, 38.7, 35.6, 30.0, 27.1, 25.2, 19.3, 12.1; HRMS-ESI(m/z): C 39H 56BN 2O 4Si之[M+H] +計算值：655.4102，實驗值：655.4108。 製備 18 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[5- 甲基 -1-[[3-[2-( 對甲苯磺醯基氧基 ) 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ] 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯 步驟 A ： 3-[1-[[3-[2-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[3-(3,6- 二氯 -5- 甲基 - 嗒 𠯤 -4- 基 ) 丙基胺基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
將 製備 11之產物(3.67 g，6.79 mmol)、 製備 17之產物(4.89 g，1.1當量)、Pd(AtaPhos) 2Cl 2(301 mg，0.1當量)及Cs 2CO 3(6.64 g，3當量)於1,4-二㗁烷(41 mL)及H 2O (6.8 mL)中之混合物在80℃下攪拌12 h。藉由管柱層析(矽膠，庚烷及EtOAc作為溶離劑)純化，得到所需產物(3.0 g，45%)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.69-7.37 (m, 10H), 7.31 (d, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.12 (m, 2H), 6.98 (t, 1H), 6.83 (m, 2H), 6.62 (d, 1H), 4.99 (s, 2H), 3.76 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.66 (t, 2H), 3.45 (t, 2H), 3.35 (m, 2H), 2.85 (m, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.12 (m, 2H), 2.02 (s, 3H), 1.77 (m, 2H), 1.65-1.33 (m, 12H), 0.97 (s, 9H); HRMS-ESI(m/z): C 55H 65Cl 2N 6O 5Si之[M+H] +計算值：987.4163，實驗值：987.4158。 步驟 B ： 3-[1-[[3-[2-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ) 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
將 步驟 A之產物(3.00 g，3.00 mmol)、Cs 2CO 3(1.95 g，2當量)、DIPEA (1.0 mL，2當量)及Pd(Ataphos) 2Cl 2(212 mg，0.1當量)於1,4-二㗁烷(15 mL)中之混合物在110℃下攪拌18 h。藉由管柱層析(矽膠，DCM及MeOH作為溶離劑)純化，得到所需產物(1.74 g，60%)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.84 (d, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.68-7.37 (m, 10H), 7.36 (s, 1H), 7.16 (m, 2H), 6.87 (m, 2H), 5.08 (s, 2H), 3.96 (m, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.67 (t, 2H), 3.46 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.65-1.37 (m, 12H), 0.97 (s, 9H); HRMS-ESI(m/z): C 55H 64ClN 6O 5Si之[M+H] +計算值：951.4396，實驗值：951.4397。 步驟 C ： 6-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-3-[1-[[3-(2- 羥基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
在0℃下，向含 步驟 B之產物(1.73 g，1.82 mmol)之THF (20 mL)中添加TBAF於THF (2.0 mL，1.1當量)中之1 M溶液，且攪拌反應混合物2 h。藉由管柱層析(矽膠，DCM及MeOH作為溶離劑)純化，得到所需產物(1.06 g，82%)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.85 (d, 1H), 7.71 (d, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.19 (m, 2H), 6.90 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.47 (t, 1H), 3.96 (m, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.40 (m, 2H), 3.34 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.14 (m, 2H), 2.10 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.67-1.36 (m, 12H); HRMS-ESI(m/z): C 39H 46ClN 6O 5之[M+H] +計算值：713.3218，實驗值：713.3217。 步驟 D ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-(2- 羥基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
將 步驟 C之產物(1.00 g，1.40 mmol)、1,3-苯并噻唑-2-胺(421 mg，2當量)、Pd 2dba 3(128 mg，0.1當量)、XantPhos (162 mg，0.2當量)及DIPEA (0.72 mL，3當量)於環己醇(10 mL)中之混合物在130℃下攪拌1 h。藉由管柱層析(矽膠，庚烷，接著DCM及MeOH作為溶離劑)純化，得到所需產物(600 mg，53%)。 1 H NMR(400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 12.18/10.84 (brs/brs, 1H), 7.94 (d, 1H), 7.83 (br, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.57 (br, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.35 (brt, 1H), 7.20 (d, 2H), 7.17 (brt, 1H), 6.91 (d, 2H), 5.11 (s, 2H), 4.47 (brt, 1H), 4.00 (t, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.41 (brq, 2H), 3.35 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.14 (m, 2H), 2.12 (s, 3H), 1.99 (qn, 2H), 1.62/1.53 (d+d, 4H), 1.53 (s, 2H), 1.49/1.44 (d+d, 2H), 1.44 (s, 4H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 139.9, 137.6, 130.1, 126.4, 122.4, 122.0, 118.9, 114.2, 66.7, 61.9, 61.5, 59.5, 55.6, 45.4, 44.7, 40.8, 39.5, 35.6, 30.1, 24.3, 21.7, 12.6, 10.8; HRMS-ESI(m/z): C 46H 51N 8O 5S之[M+H] +計算值：827.3703，實驗值：827.3709。 步驟 E ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[5- 甲基 -1-[[3-[2-( 對甲苯磺醯基氧基 ) 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ] 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯 向含 步驟 D之產物(600 mg，0.726 mmol)及 N , N-二乙基乙胺(0.31 mL，3當量)之二氯甲烷(7 mL)中添加4-甲基苯磺酸對甲苯磺醯酯(357 mg，1.5當量)，且攪拌反應混合物18 h。藉由急驟層析(矽膠，使用DCM及MeOH作為溶離劑)純化，得到354 mg (50%)所需產物。 1 H NMR(500 MHz, dmso-d6) δ ppm 12.22/10.85 (brs/brs, 1H), 7.94 (d, 1H), 7.81 (br, 1H), 7.77 (d, 2H), 7.70 (d, 1H), 7.52 (br, 1H), 7.45 (d, 2H), 7.37 (s, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.19 (d, 2H), 7.17 (t, 1H), 6.89 (d, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.05 (t, 2 H), 4.00 (t, 2H), 3.79 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.49 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.11 (m, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.99 (qn, 2H), 1.55-1.36 (m, 12H); 13 C NMR(500 MHz, dmso-d6) δ ppm 139.9, 137.6, 130.5, 130.3, 128.1, 126.4, 122.4, 122.0, 118.9, 114.2, 71.4, 66.8, 59.4, 58.2, 55.6, 45.4, 30.0, 24.2, 21.6, 21.6, 12.6, 10.9; HRMS-ESI(m/z): C 53H 57N 8O 7S 2之[M+H] +計算值：981.3792，實驗值：981.3795。 製備 1b_01 ： 2-( 三級丁氧羰基胺基 )-5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
500 mL經烘乾單頸圓底燒瓶配備有塗佈PTFE之磁力攪拌棒，且裝配回流冷凝器。向其中裝入13.41 g 製備物 1a(25 mmol，1當量)、8.46 g N - 甲基 - N - 丙 - 2 - 炔基 - 胺基甲酸三級丁酯(50 mmol，2當量)及50 mL DIPA (36.10 g，50 mL，356.8 mmol，14.27當量)，接著添加125 mL無水THF，且用氬氣沖洗系統。在惰性氛圍下攪拌5分鐘之後，添加549 mg Pd(PPh 3) 2Cl 2(1.25 mmol，0.05當量)及238 mg CuI (1.25 mmol，0.05當量)。接著，使所得混合物升溫至60℃，且在該溫度下攪拌，直至不再觀測到進一步轉化。將矽藻土添加至反應混合物中，且減壓移除揮發物。接著，使用庚烷及EtOAc作為溶離劑經由急驟管柱層析純化，得到10.5 g (18.2 mmol，73%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 11.65 (br s, 1H), 7.31 (br d, 1H), 7.21 (br d, 1H), 7.14 (t, 1H), 4.23 (s, 2H), 4.10 (t, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.23 (t, 2H), 2.86 (s, 3H), 2.07 (m, 2H), 1.46/1.41 (s, 18H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 129.1, 119.2, 115.4, 68.1, 51.9, 38.6, 33.8, 30.5, 23.2; HRMS-ESI (m/z): C 28H 37FN 3O 7S之[M+H] +計算值：578.2331，實驗值578.2331。 製備 2a_01 ： 5-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基 -4-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基 - 戊 -1- 醇 步驟 A ：苯甲酸戊 -4- 烯酯
將30.00 g 戊 - 4 - 烯 - 1 - 醇(0.35 mol，1當量)及58.5 mL N , N - 二乙基乙胺(0.42 mol，1.2當量)混合於200 mL DCM中，接著冷卻至0℃。在惰性氛圍下，在0℃下經由滴液漏斗將48.5 mL 苯甲醯氯(0.42 mol，1.2當量)添加至混合物中。在添加後，將混合物在0℃下再攪拌30 min，接著在室溫下攪拌隔夜。將混合物用100 mL DCM稀釋，接著分別用水、1 M NaOH、1 M HCl、鹽水洗滌有機相。有機相經MgSO 4乾燥，過濾，濃縮，且使用庚烷及EtOAc作為溶離劑經由急驟管柱層析純化，得到63.19 g呈無色液體狀之所需產物(95%)。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 7.97 (dd, 2H), 7.66 (t, 1H), 7.53 (t, 2H), 5.91-5.81 (m, 1H), 5.09-4.97 (m, 2H), 4.27 (t, 2H), 2.17 (q, 2H), 1.81 (qv, 2H); 13C NMR (125 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 166.2, 138.2, 133.8, 130.3, 129.6, 129.2, 115.8, 64.5, 30.1, 27.8; GC-MS-EI (m/z): C 12H 14O 2之[M] +計算值：190.1，實驗值190。 步驟 B ：苯甲酸 4,5- 二羥基戊酯
將42.22 g 步驟 A之產物(0.26 mol，1.0當量)、50.40 g 水合 4 - 甲基 - 4 - 氧負離子基 - 𠰌 啉 - 4 - 鎓(0.37 mol，1.7當量)混合於360 mL 2 - 甲基丙 - 2 - 醇及40 mL水中，接著添加6.57 g 四側氧基鋨(2.5 w%於 2 - 甲基丙 - 2 - 醇中，0.64 mmol，0.002當量)，且將混合物在60℃下攪拌24 h。觀測到完全轉化。將混合物冷卻至室溫，且添加1 M Na 2S 2O 3，接著在室溫下再攪拌10 min。添加DCM，且分離有機相，分別用水、鹽水洗滌。溶液經MgSO 4乾燥，過濾，濃縮，且使用庚烷及EtOAc作為溶離劑經由急驟管柱層析純化，得到36.9 g (63%)呈白色固體狀之所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 7.99-7.50 (m, 5H), 4.50 (m, 2H), 4.28 (m, 2H), 3.45 (m, 1H), 3.30-3.24 (m+m, 2H), 1.85-1.72 (m+m, 2H), 1.59-1.33 (m+m, 2H); 13C NMR (125 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 166.2, 133.8-129.1, 71.2, 66.3, 65.5, 30.3, 25.2; HRMS-ESI (m/z): C 12H 16NaO 4之[M+Na] +計算值：247.0941，實驗值247.0941。 步驟 C ：苯甲酸 5-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基 -4- 羥基 - 戊酯 ]
將24.86 g 步驟 B之產物(0.11 mol，1當量)及15.09 g 咪唑(0.22 mol，2當量)混合於120 mL N , N - 二甲基甲醯胺中，接著在惰性氛圍下冷卻至-20℃。經30 min之時段以緩慢速率添加含16.71 g 三級丁基 - 氯 - 二甲基 - 矽烷(0.11 mol，1當量)之40 mL N , N - 二甲基甲醯胺，用10 mL DCM負載，接著使其升溫至室溫，且進一步攪拌隔夜。觀測到完全轉化。用濃NH 4Cl淬滅，接著蒸發大部分揮發物。將EtOAc及水添加至殘餘物中，將有機相分離，接著用水及鹽水洗滌，經MgSO 4乾燥，過濾，濃縮，且使用庚烷及EtOAc作為溶離劑經由急驟管柱層析純化，得到33.71 g (90%)呈無色油狀之所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 7.95 (m, 2H), 7.66 (m, 1H), 7.52 (m, 2H), 4.58 (d, 1H), 4.29 (m, 2H), 3.51-3.35 (dd+dd, 2H), 3.48 (m, 1H), 1.86-1.74 (m+m, 2H), 1.67-1.34 (m+m, 2H), 0.83 (s, 9H), 0.01 (s, 6H); 13C NMR (125 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 166.2, 133.7, 130.4, 129.5, 129.2, 70.6, 67.7, 65.3, 30.2, 26.3, 24.9, -4.9。 步驟 D ：苯甲酸 [5-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基 -4-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基 - 戊酯 ]
將33.51 g 步驟 C之產物(0.10 mol，1當量)、16.85 g咪唑(0.25 mol，2.5當量)及1.21 g N , N - 二甲基吡啶 - 4 - 胺(0.01，0.1當量)混合於230 mL N , N - 二甲基甲醯胺中，接著以緩慢速率添加38 mL 三級丁基 - 氯 - 二苯基 - 矽烷(0.15 mol，1.5當量)，用20 mL N , N - 二甲基甲醯胺負載，接著在50℃下攪拌隔夜。觀測到完全轉化。將混合物冷卻至室溫，用濃NH 4Cl淬滅，接著蒸發大部分揮發物。將EtOAc及水添加至殘餘物中，將有機相分離，接著用水及鹽水洗滌，經MgSO 4乾燥，過濾，濃縮，且使用庚烷及EtOAc作為溶離劑經由急驟管柱層析純化，得到56.43 g (99%)呈無色稠油狀之所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 7.91-7.37 (m, 15H), 4.17 (m, 2 H), 3.76 (m, 1 H), 3.45 (m, 2H), 1.72 (m, 2H), 1.66-1.57 (m+m, 2H), 0.99 (s, 9H), 0.74 (s, 9H), -0.12/-0.16 (s+s, 6H); 13C NMR (125 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 166.1, 136.0-128.0, 73.3, 66.0, 65.1, 30.3, 27.3, 26.1, 24.0, -5.1; HRMS-ESI (m/z): C 34H 48NaO 4Si 2之[M+Na] +計算值：599.2983，實驗值599.2981。 步驟 E ： 5-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基 -4-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基 - 戊 -1- 醇
將46.10 g步 驟 D之產物(0.08 mol，1當量)溶解於227 mL MeOH及117 mL THF中，接著緩慢添加含12.79 g NaOH (0.32 mol，4.0當量)之85 mL水，同時用冰使混合物冷卻。在添加之後，在室溫下攪拌混合物，直至觀測到完全轉化(約4 h)。添加EtOAc及水，接著分離，且將有機相用鹽水洗滌，經MgSO 4乾燥，過濾，濃縮，且使用庚烷及EtOAc作為溶離劑經由急驟管柱層析純化，得到29.32 g呈無色油狀之所需產物(78%)。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 7.65-7.37 (m, 10H), 4.34 (t, 1H), 3.71 (m, 1H), 3.42 (m, 2H), 3.26 (m, 2H), 1.52 (m, 2H), 1.42 (m, 2H), 0.99 (s, 9H), 0.77 (s, 9H), -0.13 (s, 6H); 13C NMR (125 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 135.8, 135.8, 134.3, 134.0, 130.3, 130.2, 128.2, 128.0, 74.0, 66.4, 61.4, 30.4, 28.3, 27.3, 26.2, -5.1; HRMS-ESI (m/z): C 27H 44NaO 3Si 2之[M+Na] +計算值：495.2721，實驗值495.2706。 製備 3a_01 ： 5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[[5-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基 -4-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基 - 戊基 ] 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯 步驟 A ： 2-[ 三級丁氧基羰基 -[5-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基 -4-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基 - 戊基 ] 胺基 ]-5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧基羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 光延通用程序 II，以作為適當胺基甲酸酯之 製備物 1b _ 01及作為適當醇之 製備物 2a _ 01為起始物，獲得2.5 g (61%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.60-7.33 (m, 10H), 7.28 (dd, 1H), 7.17 (m, 1H), 7.1 (t, 1H), 4.22 (s, 2H), 4.09 (t, 2H), 3.94 (m, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.67 (m, 1H), 3.38 (m, 2H), 3.22 (t, 2H), 2.85 (s, 3H), 2.07 (m, 2H), 1.65 (m, 2H), 1.48 (m, 2H), 1.45/1.40 (s+s, 18H), 0.93 (s, 9H), 0.71 (s, 9H), -0.17/-0.22 (s+s, 6H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 147.4, 129, 119.3, 115.4, 85.1, 82.3, 73.3, 68.1, 65.6, 51.9, 46.5, 38.4, 33.8, 30.5, 30.5, 28.5/28, 27.2, 26.0, 23.1, 23.0, -5.3; HRMS-ESI (m/z): C 55H 79FN 3O 9SSi 2之[M+H] +計算值：1032.5054，實驗值1032.5060。 步驟 B ： 5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧基羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[[5-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基 -4-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基 - 戊基 ] 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 用 HFIP 脫除保護基之通用程序，以作為適當胺基甲酸酯的來自 步驟 A之產物為起始物，獲得1.2 g (53%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.68-7.35 (m, 10H), 7.56 (t, 1H), 7.30 (d, 1H), 7.20 (d, 1H), 7.11 (t, 1H), 4.22 (br., 2H), 4.07 (t, 2H), 3.70 (m, 1H), 3.68 (s, 3H), 3.42/3.38 (dd+dd, 2H), 3.11 (t, 2H), 3.04 (brq., 2H), 2.86 (br., 3H), 1.99 (五重峰, 2H), 1.54 (m, 2H), 1.53/1.45 (m+m, 2H), 1.41 (s, 9H), 0.97 (s, 9H), 0.74 (s, 9H), -0.14/-0.18 (s+s, 6H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 164.6, 163.0, 154.9, 151.4, 147.5, 136.9, 136.0, 129.1, 119.3, 115.4, 114.8, 85.2, 82.3, 79.8, 73.6, 68.0, 66.2, 51.7, 44.7, 38.5, 33.8, 31.1, 30.6, 28.5, 27.2, 26.2, 24.3, 23.3, 19.4, 18.3, -5.2; HRMS-ESI (m/z): C 50H 71FN 3O 7SSi 2之[M+H] +計算值：932.4530，實驗值932.4526。 製備 3e_01 ： 5-(3- 氯丙基 )-2-( 甲胺基 ) 噻唑 -4- 甲酸乙酯
將2.25 g 甲硫脲(25.0 mmol，1當量)於100 mL乙醇中之懸浮液冷卻至0℃，且接著在此溫度下逐滴添加7.46 g 3 - 溴 - 6 - 氯 - 2 - 側氧基 - 己酸乙酯(27.5 mmol，1.1當量)。在0℃下攪拌15 min之後，添加7 mL TEA (5.06 g，50 mmol，2當量)。在室溫下攪拌所得混合物隔夜。觀測到完全轉化。真空移除揮發物，接著將所得殘餘物分配在EtOAc與水之間。分離各層，接著將有機層用水洗滌，隨後用鹽水洗滌。合併之有機層經Na 2SO 4乾燥，過濾，且減壓濃縮濾液。接著，其使用庚烷及EtOAc作為溶離劑經由急驟管柱層析純化，得到5 g (76%)所需產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.55 (q, 1H), 4.21 (q, 2H), 3.65 (t, 2H), 3.09 (m, 2H), 2.78 (d, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.26 (t, 3H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 165.6, 162.5, 137.4, 135.5, 60.5, 45.0, 34.1, 31.2, 24.4, 14.7; HRMS-ESI (m/z): C 10H 16ClN 2O 2S之[M+H] +計算值：263.0616，實驗值263.0615。 製備 3h_01 ： 5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[2-(2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環 -4- 基 ) 乙胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯 步驟 A ： 2-[ 三級丁氧基羰基 -[2-(2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環 -4- 基 ) 乙基 ] 胺基 ]-5-[3-(2- 氟 -4- 碘 - 苯氧基 ) 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 光延通用程序 II，以2.68 g 製備物 1a(5 mmol，1當量)及作為適當醇之1.46 g 2 -( 2 , 2 - 二甲基 - 1 , 3 - 二氧戊環 - 4 - 基 ) 乙醇(1.42 mL，10 mmol，2當量)為起始物，獲得2.8 g (84%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.57 (dd, 1H), 7.44 (dm, 1H), 6.96 (t, 1H), 4.12/4.02 (m+m, 2H), 4.07 (m, 1H), 4.05 (t, 2H), 4.02/3.54 (dd+dd, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.21 (t, 2H), 2.06 (m, 2H), 1.86/1.82 (m+m, 2H), 1.51 (s, 9H), 1.29 (s, 3H), 1.22 (s, 3H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 134.0, 124.9, 117.6, 73.8, 68.9, 68.1, 52.0, 44.0, 32.2, 30.5, 28.1, 27.3, 25.9, 23.1; HRMS-ESI (m/z): C 26H 35FIN 2O 7S之[M+H] +計算值：665.1188，實驗值665.1175。 步驟 B ： 2-[2-(2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環 -4- 基 ) 乙胺基 ]-5-[3-(2- 氟 -4- 碘 - 苯氧基 ) 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 用 HFIP 脫除保護基之通用程序，以作為適當胺基甲酸酯之2.5 g 步驟 A之產物(3.80 mmol)為起始物，獲得1.6 g (75%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.6 (t, 1H), 7.59 (dd, 1H), 7.45 (dm, 1H), 6.97 (dd, 1H), 4.10 (m, 1H), 4.03 (t, 2H), 4.01/3.48 (dd+dd, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.27/3.19 (m+m, 2H), 3.11 (t, 2H), 1.99 (m, 2H), 1.76/1.72 (m+m, 2H), 1.31 (s, 3H), 1.25 (s, 3 H); HRMS-ESI (m/z): C 21H 27FIN 2O 5S之[M+H] +計算值：565.0663，實驗值565.0642。 步驟 C ： 5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧基羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[2-(2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環 -4- 基 ) 乙胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 薗頭通用程序，以400 mg 步驟 B之產物(0.71 mmol，1當量)及作為適當炔烴之240 mg N - 甲基 - N - 丙 - 2 - 炔基 - 胺基甲酸三級丁酯(1.42 mmol，2當量)為起始物，獲得300 mg (70%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.60 (t, 1H), 7.31 (brd, 1H), 7.21 (dd, 1H), 7.13 (t, 1H), 4.23 (brs, 2H), 4.09 (m, 1H), 4.07 (t, 2H), 4.00/3.48 (dd+dd, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.27/3.19 (m+m, 2H), 3.12 (t, 2H), 2.86 (brs, 3H), 2.00 (m, 2H), 1.74 (m, 2H), 1.41 (s, 9H), 1.31 (s, 3H), 1.25 (s, 3H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 164.5, 136.9, 136.4, 129.1, 119.3, 115.4, 85.2, 82.3, 73.8, 69.0, 68.0, 51.7, 41.4, 38.4, 33.8, 33.2, 30.6, 28.5, 27.3, 26.1, 23.3; HRMS-ESI (m/z): C 30H 41FN 3O 7S之[M+H] +計算值：606.2644，實驗值606.2650。 製備 3n_01 ： 5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[3-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基丙胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯 步驟 A ： 2-[ 三級丁氧基羰基 -[3-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基丙基 ] 胺基 ]-5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧基羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 光延通用程序 II，以作為適當胺基甲酸酯之577 mg 製備物 1b _ 01(1 mmol，1當量)及作為適當醇之380 mg 3 -[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基丙 - 1 - 醇(2 mmol，2當量)為起始物，獲得600 mg (80%)所需產物。 步驟 B ： 5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧基羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[3-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基丙胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 用 HFIP 脫除保護基之通用程序，以作為適當胺基甲酸酯的來自 步驟 A之產物為起始物，獲得310 mg (47%)所需產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.50 (t, 1H), 7.30 (d, 1H), 7.20 (d, 1H), 7.11 (t, 1H), 4.21 (bs, 2H), 4.05 (t, 2H), 3.62 (t, 2H), 3.67 (s, 3H), 3.19 (q, 2H), 3.10 (t, 2H), 2.84 (brs, 3H), 2.04-1.94 (m, 2H), 1.74-1.63 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 0.84 (s, 9H), 0.00 (s, 6H)。 製備 4a_01 ： N -(6- 氯 -4- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 )-3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞胺 步驟 A ： N-(6- 氯 -4- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 胺
2 L經烘乾單頸圓底燒瓶配備有塗佈PTFE之磁性攪拌棒，且裝配回流冷凝器。向其中裝入34.0 g 6 - 氯 - 4 - 甲基 - 嗒 𠯤 - 3 - 胺(237 mmol，1當量)、34 mL 2 - 氯 - 1 , 3 - 苯并噻唑(44.2 g，260 mmol，1.1當量)、124 mL DIPEA (91.8 g，710 mmol，3當量)及137 g Cs 2CO 3(710 mmol，3當量)，接著添加1 L DMF，且用氬氣沖洗系統。在惰性氛圍下攪拌5分鐘之後，添加2.01 g Pd 2(dba) 3(5.9 mmol，0.025當量)及6.85 g XantPhos (11.8 mmol，0.05當量)。接著，使所得混合物升溫至75℃且在該溫度下攪拌4小時以達到完全轉化。使反應混合物冷卻至室溫，接著倒入3 L水中，同時劇烈攪拌。30分鐘後，藉由過濾移除沈澱產物，且接著將其用水洗滌2次(2×2 L)。產物在高真空下乾燥隔夜。乾燥粗產物在1 L庚烷:Et 2O (3:2)中攪拌30分鐘，接著濾出，得到64.5 g (98%)呈綠色粉末狀之所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 11.96 (brs, 1H), 7.86 (d, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.51 (d, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.21 (t, 1H), 2.37 (s, 3H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 130.3, 129.5, 126.6, 122.8, 122.3, 17.2; HRMS-ESI (m/z): C 12H 10ClN 4S之[M+H] +計算值：277.0309，實驗值277.0305。 步驟 B ： N-(6- 氯 -4- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 )-3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞胺
向配備有塗佈PTFE之磁性攪拌棒的2 L經烘乾單頸圓底燒瓶中裝入含64.5 g 步驟 A之產物(236 mmol，1當量)、123 mL DIPEA (9.16 g，708 mmol，3當量)、14.43 g N , N - 二甲基吡啶 - 4 - 胺(11.81 mmol，0.05當量)之1 L無水DCM，在N 2下冷卻至0℃。且在劇烈機械攪拌期間，經5 min時段將46.00 mL 2 -( 氯甲氧基 ) 乙基 - 三甲基 - 矽烷(43.32 g，259 mmol，1.1當量)逐滴添加至混合物中。將其在0℃下攪拌30分鐘，此時反應物達到完全轉化。將24.5 mL水添加至反應混合物中，接著將矽藻土添加至反應混合物中且在減壓下移除揮發物。使用庚烷及EtOAc作為溶離劑經由急驟管柱層析純化，得到46.62 g (48%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.85 (dm, 1H), 7.72 (q, 1H), 7.53 (dm, 1H), 7.47 (m, 1H), 7.29 (m, 1H), 5.89 (s, 2H), 3.70 (m, 2H), 2.39 (d, 3H), 0.90 (m, 2H), -0.12 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d6) δ ppm 159.5, 158.5, 150.0, 138.1, 137.4, 129.5, 127.4, 125.5, 123.8, 123.2, 112.4, 73.0, 66.8, 17.7, 17.1, -1.0; HRMS-ESI (m/z): C 18H 24ClN 4OSSi之[M+H] +計算值：407.1123，實驗值407.1120。 製備 5a_01 ： 5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[[4-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基 -5-( 對甲苯磺醯基氧基 ) 戊基 ]-[5- 甲基 -6-[( Z)-[3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 -3- 基 ] 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯 步驟 A ： 5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧基羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[[5-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基 -4-[ 三級丁基 ( 二苯基矽基 ] 氧基 - 戊基 ]-[5- 甲基 -6-[(Z)-[3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 -3- 基 ] 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 布赫瓦爾德通用程序 III，以12 g 製備物 3a _ 01(13 mmol)及作為適當鹵化物之6.30 g 製備物 4a _ 01(15.6 mmol)為起始物，得到14 g (83%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.85-7.23 (m, 14H), 7.58 (s, 1H), 7.31 (t, 1H), 7.19 (m, 1H), 7.14 (t, 1H), 5.86 (s, 2H), 4.37 (t, 2H), 4.20 (s, 2H), 4.15 (t, 2H), 3.73 (s, 3H), 3.71 (t, 2H), 3.67 (m, 1H), 3.39 (m, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.83 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 2.12 (m, 2H), 1.72 (m, 2H), 1.52 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 0.90 (t, 2H), 0.89 (s, 9H), 0.69 (s, 9H), -0.14 (s, 9H), -0.19/-0.23 (s+s, 6H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 147.5, 129.1, 119.3, 117.5, 115.4, 73.4, 72.3, 68.4, 66.8, 65.8, 51.8, 46.6, 38.5, 33.8, 31.0, 30.5, 28.5, 27.1, 26.1, 23.0, 22.6, 17.9, 17.8, -1.0, -5.3; HRMS-ESI (m/z): C 68H 93FN 7O 8S 2Si 3之[M+H] +計算值：1302.5813，實驗值1302.5819。 步驟 B ： 5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧基羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[[4-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基 -5- 羥基 - 戊基 ]-[5- 甲基 -6-[(Z)-[3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 -3- 基 ] 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
100 mL經烘乾單頸圓底燒瓶配備有塗佈PTFE之磁性攪拌棒，且裝配回流冷凝器。向其中裝入1.40 g 步驟 A之產物(1.1 mmol，1當量)及12 mg樟腦磺酸(0.054 mmol，0.05當量)、5 mL DCM及1 mL MeOH。將所得混合物在室溫下攪拌隔夜，以達到完全轉化。將反應混合物直接濃縮至矽藻土上，接著使用庚烷及EtOAc作為溶離劑藉由急驟管柱層析純化，得到700 mg (55%)呈黃色固體狀之所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.85-7.14 (m, 14H), 7.56 (s, 1H), 7.32 (dd, 1H), 7.20 (m, 1H), 7.15 (t, 1H), 5.86 (s, 2H), 4.56 (t, 1H), 4.33 (m, 2H), 4.20 (s, 2H), 4.15 (t, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.72 (t, 2H), 3.65 (m, 1H), 3.27 (t, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.83 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 1.73/1.64 (m+m, 2H), 1.52 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 0.90 (t, 2H), 0.86 (s, 9H), -0.13 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 154.9, 147.6, 129.1, 119.4, 117.5, 115.4, 82.4, 73.7, 72.9, 68.4, 66.8, 64.5, 51.9, 46.8, 38.5, 33.8, 31.0, 30.6, 28.5, 27.2, 23.1, 22.5, 17.9, 17.8, -1.0; HRMS-ESI (m/z): C 62H 79FN 7O 8S 2Si 2之[M+H] +計算值：1188.4949，實驗值1188.4938。 步驟 C ： 5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧基羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[[4-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基 -5-( 對甲苯磺醯基氧基 ) 戊基 ]-[5- 甲基 -6-[(Z)-[3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 -3- 基 ] 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
100 mL經烘乾單頸圓底燒瓶配備有塗佈 PTFE之磁性攪拌棒，向其中裝入700 mg 步驟 B之產物(0.58 mmol，1當量)及907 mg 氯化 N , N - 二甲基 - 1 -( 對甲苯磺醯基 ) 吡啶 - 1 - 鎓 - 4 - 胺(2.9 mmol，5當量，參見例如 Tetrahedron Lett .2016, 57, 4620)，將其溶解於35 mL DCM中且在室溫下攪拌隔夜。反應物達到完全轉化。將反應混合物直接濃縮至矽藻土上，且接著使用庚烷及EtOAc作為溶離劑藉由急驟管柱層析純化，得到450 mg (56%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.88-7.23 (m, 14H), 7.58 (m, 2H), 7.53 (s, 1H), 7.31 (m, 2H), 7.31 (dd, 1H), 7.19 (m, 1H), 7.15 (t, 1H), 5.86 (s, 2H), 4.20 (s, 2H), 4.16 (t, 2H), 4.15 (t, 2H), 3.92 (m, 2H), 3.84 (m, 1H), 3.72 (t, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.27 (t, 2H), 2.83 (s, 3H), 2.41 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 1.47 (m, 2H), 1.47 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 0.91 (t, 2H), 0.86 (s, 9H), -0.13 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 147.5, 145.3, 130.4, 129.1, 128.0, 119.3, 117.4, 115.5, 72.9, 72.6, 70.4, 68.4, 66.8, 51.8, 46.2, 38.6, 33.8, 31.0, 30.1, 28.5, 27.0, 23.1, 22.4, 21.5, 17.8, 17.8, -1.0; HRMS-ESI (m/z): C 69H 85FN 7O 10S 3Si 2之[M+H] +計算值：1342.5037，實驗值1342.5039。 製備 5g_01 ： 5-(3- 碘丙基 )-2-[ 甲基 -[5- 甲基 -6-[( Z)-[3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 -3- 基 ] 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸乙酯 步驟 A ： 5-(3- 氯丙基 )-2-[ 甲基 -[5- 甲基 -6-[(Z)-[3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 -3- 基 ] 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸乙酯
使用 布赫瓦爾德通用程序 III，以3.15 g 製備物 3e _ 01(12 mmol，1.2當量)及作為適當鹵化物之4.07 g 製備物 4a _ 01(10 mmol，1當量)為起始物，獲得2.6 g (41%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.84 (d, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.45 (d, 1H), 7.43 (tm, 1H), 7.25 (tm, 1H), 5.85 (s, 2H), 4.30 (q, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.71 (t, 2H), 3.71 (t, 2H), 3.22 (t, 2H), 2.48 (s, 3H), 2.10 (quin, 2H), 1.31 (t, 3H), 0.92 (t, 2H), -0.11 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 162.6, 157.4, 156.8, 155.1, 151.7, 140.5, 137.6, 137.1, 135.3, 125.6, 123.5, 123.2, 123.1, 117.6, 111.9, 72.9, 66.7, 60.7, 45.3, 35.4, 34.4, 24.3, 18.0, 17.8, 14.7, -1.0; HRMS-ESI (m/z): C 28H 38ClN 6O 3S 2Si之[M+H] +計算值：633.1899，實驗值633.1891。 步驟 B ： 5-(3- 碘丙基 )-2-[ 甲基 -[5- 甲基 -6-[(Z)-[3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 -3- 基 ] 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸乙酯
100 mL單頸圓底燒瓶配備有塗佈 PTFE之磁性攪拌棒，且裝配回流冷凝器。向其中裝入2.6 g 步驟 A之產物(4.10 mmol，1當量)、1.23 g NaI (8.2 mmol，2當量)及20 mL無水丙酮。使反應混合物升溫至60℃，且在該溫度下攪拌3天，此時反應物達到完全轉化。藉由添加水來稀釋反應混合物，接著藉由過濾收集所沈澱之產物，用水洗滌，且接著在高真空下乾燥，得到2.5 g (84%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ 7.82 (d, 1H), 7.61 (s, 1H), 7.47-7.39 (m, 1H), 7.47-7.39 (m, 1H), 7.23 (t, 1H), 5.83 (s, 2H), 4.29 (q, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.71 (t, 2H), 3.33 (t, 2H), 3.16 (t, 2H), 2.42 (s, 3H), 2.13 (五重峰, 2H), 1.33 (t, 3H), 0.91 (t, 2H), -0.12 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 162.6, 157.3, 156.7, 155.1, 151.6, 140.2, 137.6, 137.1, 135.2, 127.1, 125.4, 123.4, 123.2, 117.5, 111.9, 72.8, 66.7, 60.7, 35.2, 35.2, 27.6, 17.8, 17.8, 14.8, 7.8, -1.0; HRMS-ESI (m/z): C 28H 38I N 6O 3S 2Si之[M+H] +計算值：725.1255，實驗值725.1248。 製備 5j_01 ： 5-(3-{2- 氟 -4-[3-( 甲胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 ] 苯氧基 } 丙基 )-2-[ 甲基 (5- 甲基 -6-{[(2 Z)-3-{[2-( 三甲基矽基 ) 乙氧基 ] 甲基 }-2,3- 二氫 -1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 } 嗒 𠯤 -3- 基 ) 胺基 ]-1,3- 噻唑 -4- 甲酸乙酯 步驟 A ： 5-{3-[4-(3-{[( 三級丁氧基 ) 羰基 ]( 甲基 ) 胺基 } 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ] 丙基 }-2-[ 甲基 (5- 甲基 -6-{[(2Z)-3-{[2-( 三甲基矽基 ) 乙氧基 ] 甲基 }-2,3- 二氫 -1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 } 嗒 𠯤 -3- 基 ) 胺基 ]-1,3- 噻唑 -4- 甲酸乙酯
向含 製備 5g _ 01之產物(1.75 g，2.41 mmol，1當量)之二甲基甲醯胺(50 mL)中添加含 製備 6a _ 01之產物(877 mg，3.14 mmol，1.3當量)之二甲基甲醯胺(10 mL)及碳酸銫(2.36 g，7.24 mmol，3當量)，且將混合物在80℃下加熱16 h。將反應物真空濃縮，接著分配於乙酸乙酯與鹽水之間，且有機相經乾燥(硫酸鎂)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，40 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-50%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到呈黃色油狀之所需產物(1.75 g，2 mmol，83%)。LC/MS (C 43H 54FN 7O 6SiS 2) 876 [M+H] +; RT 1.46 (LCMS-V-B2)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.83 (dd, 1H), 7.65 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 7.49 - 7.39 (m, 2H), 7.35 - 7.28 (m, 1H), 7.27 - 7.12 (m, 3H), 5.86 (s, 2H), 4.25 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.19 (s, 2H), 4.14 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.76 - 3.68 (m, 2H), 3.26 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.84 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.19 - 2.05 (m, 1H), 1.41 (s, 9H), 1.30 (t, 3H), 0.97 - 0.88 (m, 2H), -0.12 (s, 9H)。 步驟 B ： 5-(3-{2- 氟 -4-[3-( 甲胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 ] 苯氧基 } 丙基 )-2-[ 甲基 (5- 甲基 -6-{[(2Z)-3-{[2-( 三甲基矽基 ) 乙氧基 ] 甲基 }-2,3- 二氫 -1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 } 嗒 𠯤 -3- 基 ) 胺基 ]-1,3- 噻唑 -4- 甲酸乙酯
將三氟乙酸(20 mL)添加至步驟A之產物(1.5 g，1.71 mmol，1當量)於二氯甲烷(60 mL)中之攪拌溶液中，且將混合物在環境溫度下攪拌5 h。反應物用二氯甲烷稀釋，冷卻至0℃且藉由添加2N氫氧化鈉水溶液鹼化。有機相經乾燥(硫酸鎂)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，40 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-10%甲醇/二氯甲烷之梯度溶離，得到呈黃色膠狀之所需產物(329 mg，0.42 mmol，25%)。LC/MS (C 38H 46FN 7O 4SiS 2) 776 [M+H] +; RT 2.58 (LCMS-V-C). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.84 (dd, 1H), 7.67 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.49 - 7.40 (m, 2H), 7.31 - 7.22 (m, 2H), 7.21 - 7.11 (m, 2H), 5.86 (s, 2H), 4.26 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.15 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.76 - 3.67 (m, 2H), 3.45 (s, 2H), 3.33 - 3.22 (m, 2H), 2.46 (d, J = 1.0 Hz, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.18 - 2.06 (m, 2H), 1.29 (t, J = 7.1 Hz, 3H), 0.97 - 0.88 (m, 2H), -0.11 (s, 9H)。 製備 6a_01 ： N-[3-(3- 氟 -4- 羥基 - 苯基 ) 丙 -2- 炔基 ]- N- 甲基 - 胺基甲酸三級丁酯
使用 薗頭通用程序，以作為適當苯酚之10.00 g 2-氟-4-碘-苯酚(42.0 mmol，1當量)及作為炔反應物之10.67 g N-甲基- N-丙-2-炔基-胺基甲酸三級丁酯(63.1 mmol，1.5當量)為起始物，得到10.8 g (92%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 10.32 (s, 1 H), 7.22 (brd, 1H), 7.08 (dm, 1H), 6.92 (dd, 1H), 4.21 (s, 2H), 2.85 (s, 3H), 1.41 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 150.8, 146.4, 129.0, 119.6, 118.4, 113.2, 84.4, 82.7, 38.5, 33.8, 28.5; HRMS-ESI (m/z): C 11H 11FNO 3之[M-C 4H 8+H] +計算值：224.0717，實驗值224.0720。 製備 6b_01 ： 4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯酚
使用 薗頭通用程序，以作為適當苯酚之10.00 g 2-氟-4-碘-苯酚(42.0 mmol，1當量)及作為炔反應物之5.24 g N , N-二甲基丙-2-炔-1-胺(63 mmol，1.5當量)為起始物，得到7.30 g (90%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.20 (dd, 1H), 7.07 (dm, 1H), 6.91 (m, 1H), 3.39 (m, 2H), 2.21 (m, 3H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 150.9, 146.2, 128.9, 119.5, 118.4, 113.6, 84.5, 84.2, 48.2, 44.3; HRMS-ESI (m/z): C 11H 13FNO之[M+H] +計算值：194.0976，實驗值194.0981。 製備 6f_01 ： 4-[3-( 二甲胺基 ) 丁 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯酚 步驟 A ： 4-(3- 氟 -4- 三異丙基矽氧基 - 苯基 ) 丁 -3- 炔 -2- 醇
500 mL經烘乾單頸圓底燒瓶配備有塗佈PTFE之磁力攪拌棒。向其中裝入4.76 g 2 - 氟 - 4 - 碘 - 苯酚(20 mmol，1當量)及3.96 g K 2CO 3 (40 mmol，2當量)，接著添加100 mL無水MeCN。向所得混合物中逐滴添加5.13 mL TIPSCl(4.62 g，24 mmol，1.2當量)，接著在室溫下劇烈攪拌。將所得混合物在室溫下攪拌30 min，此時反應物達到完全轉化。經由矽藻土墊過濾反應混合物以移除固體顆粒，接著向濾液中添加3.10 mL 丁 - 3 - 炔 - 2 - 醇(2.81 g，40 mmol，2當量)及20 mL DIPA，且經由進氣口將其置於氮氣氛圍下。在添加702 mg Pd(PPh 3) 2Cl 2(1 mmol，0.05當量)及190 mg CuI (1 mmol，0.05當量)之後，將所得混合物在室溫下攪拌30 min，此時反應物達到完全轉化。將矽藻土添加至反應混合物中，且減壓移除揮發物。接著，使用庚烷及EtOAc作為溶離劑經由急驟管柱層析純化，得到6.2 g (92%)呈黃色油狀之所需產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.26 (dd, 1H), 7.12 (dm, 1H), 6.98 (t, 1H), 5.44 (d, 1H), 4.55 (m, 1H), 1.36 (d, 3H), 1.24 (sp, 1H), 1.05 (d, 18H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 153.2, 144.1, 128.8, 122.3, 119.6, 116.5, 93.4, 81.4, 57.1, 25.0, 18.0, 12.5; HRMS-ESI (m/z): C 19H 30FO 2Si之[M+H] +計算值：337.1994，實驗值337.1994。 步驟 B ： 4-(3- 氟 -4- 三異丙基矽氧基 - 苯基 )-N,N- 二甲基 - 丁 -3- 炔 -2- 胺
使用 用原位生成之碘進行烷基化之通用程序，以作為適當醇之644 mg 步驟 A之產物(2 mmol，1當量)及5 mL N -甲基甲胺(10 mmol，5當量，於MeOH中之2 M溶液)為起始物，獲得360 mg (50%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.28 (dd, 1H), 7.14 (dm, 1H), 6.97 (t, 1H), 3.67 (q, 1H), 2.19 (s, 6H), 1.27 (d, 3H), 1.25 (m, 3H), 1.05 (d, 18H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 153.1, 144.0, 129.0, 122.3, 119.8, 116.6, 88.2, 84.1, 52.3, 41.3, 20.1, 18.0, 12.5; HRMS-ESI (m/z): C 21H 35FNOSi之[M+H] +計算值：364.2466，實驗值364.2470。 步驟 C ： 4-[3-( 二甲胺基 ) 丁 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯酚
向配備有塗佈 PTFE之磁性攪拌棒的4 mL經烘乾小瓶中裝入200 mg溶解於3.0 mL無水THF中的 步驟 B之產物(0.55 mmol，1當量)，且接著在室溫下逐滴添加660 μL TBAF (1 M於THF中，0.66 mmol，1.1當量)。將所得混合物在室溫下攪拌15 min，此時反應物達到完全轉化。藉由添加200 μL濃NH 4Cl淬滅反應混合物，接著將矽藻土添加至反應混合物中，且減壓移除揮發物。接著，其使用DCM及MeOH (1.2% NH 3)作為溶離劑經由急驟管柱層析純化，得到80 mg (70%)所需產物。 製備 13_01 ： 3- 溴 -6-( 甲胺基 ) 吡啶 -2- 甲酸甲酯 步驟 A ： 6-[ 雙 ( 三級丁氧基羰基 ) 胺基 ]-3- 溴 - 吡啶 -2- 甲酸甲酯
在0℃下向含6-胺基-3-溴-吡啶-2-甲酸甲酯(25.0 g，108.2 mmol)及DMAP (1.3 g，0.1當量)之DCM (541 mL)中添加Boc 2O (59.0 g，2.5當量)，且攪拌反應混合物2.5 h。在添加NaHCO 3飽和溶液且用DCM萃取之後，合併之有機相經乾燥且濃縮，得到所需產物(45.0 g，72.3%)。LC/MS (C 17H 23BrN 2O 6Na) 453 [M+H] +。 步驟 B ： 3- 溴 -6-( 三級丁氧羰基胺基 ) 吡啶 -2- 甲酸甲酯
在0℃下向含步驟A之產物(42.7 g，74.34 mmol)之DCM (370 mL)中添加TFA (17.1 mL，3當量)，且攪拌反應混合物18 h。在用NaHCO 3飽和溶液及鹽水洗滌之後，合併之有機相經乾燥，濃縮且藉由管柱層析(矽膠，庚烷及EtOAc作為溶離劑)來純化，得到所需產物(28.3 g，115.2%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 10.29 (s, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.88 (d, 1H), 3.87 (s, 3H), 1.46 (s, 9H) 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 165.6, 153.1, 151.8/148.3, 143.5, 116.3, 109.2, 53.2, 28.4. LC/MS (C 12H 15BrN 2O 4Na) 353 [M+H] +. 步驟 C ： 3- 溴 -6-[ 三級丁氧基羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
向含步驟B之產物(2.96 g，8.93 mmol)之丙酮(45 mL)中添加Cs 2CO 3(8.7 g，3當量)及碘甲烷(0.67 mL，1.2當量)，且攪拌反應混合物3 h。在用水稀釋且用EtOAc萃取之後，合併之有機相用鹽水洗滌，乾燥且濃縮，得到所需產物(3.5 g，112%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 8.13 (d, 1H), 7.78 (d, 1H), 3.90 (s, 3H), 3.27 (s, 3H), 1.47 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 165.5, 153.6, 153.6, 147.5, 142.8, 122.5, 111.3, 82.0, 53.3, 34.3, 28.2; HRMS-ESI (m/z): C 13H 18BrN 2O 4之[M+H] +計算值：345.0450，實驗值：345.0429。 步驟 D ： 3- 溴 -6-( 甲胺基 ) 吡啶 -2- 甲酸甲酯
將含步驟C之產物(3.0 g，8.9 mmol)之1,1,1,3,3,3-六氟異丙醇(90 mL)在100℃下攪拌18 h。藉由管柱層析(矽膠，庚烷及EtOAc作為溶離劑)純化，得到所需產物(2.1 g，96%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.63 (d, 1H), 7.04 (q, 1H), 6.53 (d, 1H), 3.83 (s, 3H), 2.73 (d, 3H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 166.6, 158.2, 148.2, 141.3, 112.1, 101.3, 52.9, 28.3; HRMS-ESI (m/z): C 8H 9BrN 2O 2之[M] +計算值：243.9847，實驗值：243.9843。 製備 14_01 ： 3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-[2-( 對甲苯磺醯基氧基 ) 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[ 甲基 -[5- 甲基 -6-[(Z)-[3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 -3- 基 ] 胺基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯 步驟 A ： 3-[1-[[3-[2-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-( 甲胺基 ) 吡啶 -2- 甲酸甲酯
將 製備 13 _ 01之產物(2.07 g，8.45 mmol)、 製備 7之產物(6.9 g，1.2當量)、Cs 2CO 3(8.26 g，3當量)及Pd(AtaPhos) 2Cl 2(374 mg，0.1當量)於1,4-二㗁烷(51 mL)及水(8.5 mL)中之混合物在80℃下攪拌1 h。藉由管柱層析(矽膠，庚烷及EtOAc作為溶離劑)純化，得到所需產物(4.5 g，74%)。 1 H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.66 (dm, 4H), 7.47-7.38 (m, 6H), 7.31 (d, 1H), 7.23 (s, 1H), 6.78 (q, 1H), 6.59 (d, 1H), 3.82 (s, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.58 (s, 3H), 3.46 (t, 2H), 2.77 (d, 3H), 2.06 (s, 3H), 1.35 (s, 2H), 1.27/1.20 (d+d, 4H), 1.14/1.09 (d+d, 4H), 1.05/0.97 (d+d, 2H), 0.98 (s, 9H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 140.1, 137.4, 135.6, 130.2/128.3, 109.8, 74.2, 64.4, 61.7, 58.9, 52.2, 50.0, 46.9, 46.0, 43.4, 39.8, 33.5, 30.1, 28.4, 27.1, 10.8; HRMS-ESI (m/z): C 43H 57N 4O 4Si之[M+H] +計算值：721.4149，實驗值：721.4148。 步驟 B ： 3-[1-[[3-[2-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[ 甲基 -[5- 甲基 -6-[(Z)-[3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 -3- 基 ] 胺基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
使用 布赫瓦爾德通用程序 III，以步驟A之產物為起始物，在回流下18 h，獲得4.7 g (86%)所需產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.78 (dm, 1H), 7.69-7.36 (m, 10H), 7.63 (q, 1H), 7.63 (d, 1H), 7.47 (dm, 1H), 7.44 (m, 1H), 7.35 (s, 1H), 7.31 (d, 1H), 7.24 (m, 1H), 5.86 (s, 2H), 3.86 (s, 2H), 3.72 (m, 2H), 3.67 (t, 2H), 3.64 (s, 3H), 3.61 (s, 3H), 3.46 (t, 2H), 2.36 (d, 3H), 2.13 (s, 3H), 1.40-0.94 (m, 12H), 0.97 (s, 9H), 0.92 (m, 2H), 0.85 (s, 6H), -0.11 (s, 9H); HRMS-ESI (m/z): C 61H 79N 8O 5SSi 2之[M+H] +計算值：1091.5433，實驗值：1091.5426。 步驟 C ： 3-[1-[[3-(2- 羥基乙氧基 )-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[ 甲基 -[5- 甲基 -6-[(Z)-[3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 -3- 基 ] 胺基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
在0℃下向含步驟B之產物(1.0 g，0.916 mmol)之THF (9 mL)中添加TBAF於THF (1.0 mL，1.1當量)中之1 M溶液，且將反應混合物攪拌1 h。在用飽和NH 4Cl溶液淬滅且用EtOAc萃取之後，合併之有機相經乾燥，濃縮，且藉由管柱層析(矽膠，DCM及MeOH作為溶離劑)純化，得到所需產物(752 mg，96%)。 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm  7.79 (dm, 1H), 7.66 (d, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.47 (dm, 1H), 7.43 (m, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.33 (d, 1H), 7.25 (m, 1H), 5.87 (s, 2H), 4.46 (t, 1H), 3.86 (s, 2H), 3.73 (m, 2H), 3.68 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.40 (m, 2H), 3.35 (t, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 1.42-0.96 (m, 12H), 0.92 (m, 2H), 0.86 (s, 6H), -0.10 (s, 9H); HRMS-ESI (m/z): C 45H 61N 8O 5SSi之[M+H] +計算值：853.4255，實驗值：853.4256。 步驟 D ： 3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-[2-( 對甲苯磺醯基氧基 ) 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[ 甲基 -[5- 甲基 -6-[(Z)-[3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 -3- 基 ] 胺基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
向含來自步驟C之產物(752 mg，0.88 mmol)及三乙胺(0.5 mL，4當量)之DCM (4.4 mL)中添加4-甲基苯磺酸對甲苯磺醯酯(575.4 mg，1.76 mmol，2當量)，且將反應混合物攪拌1 h。藉由管柱層析(矽膠，庚烷及EtOAc作為溶離劑)純化，得到所需產物(722 mg，81%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.79 (dm, 1H), 7.76 (dm, 2H), 7.68 (d, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.47 (m, 1H), 7.46 (dm, 2H), 7.43 (td, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.33 (d, 1H), 7.25 (td, 1H), 5.87 (s, 2H), 4.06 (m, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.73 (t, 2H), 3.66 (s, 3H), 3.62 (s, 3H), 3.48 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.37 (s, 3H), 2.13 (s, 3H), 1.31-0.94 (m, 12H), 0.92 (t, 2H), 0.83 (s, 6H), -0.10 (s, 9H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 141.2, 137.5, 130.6, 128.1, 127.2, 123.4, 123.4, 123.1, 114.7, 112.0, 72.9, 71.5, 66.7, 58.8, 58.4, 52.6, 36.6, 30.1, 21.6, 17.8, 17.4, 10.8, -0.9; HRMS-ESI (m/z): C 52H 67N 8O 7S 2Si之[M+H] +計算值：1007.4343，實驗值：1007.4344。 製備 P1 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3 -c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 丙炔 胺 製備通用程序，以 製備 物 3d及作為適當胺之二甲基胺為起始物。接著進行以適當甲酯為起始物之 水解通用程序，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 34H 35FN 7O 3S 2之[M+H] +計算值：672.2221，實驗值672.2205。 製備 P2 ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-5-[3-[4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸 步驟 A ： 5-[3-[4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[ 甲基 -[5- 甲基 -6-[(Z)-[3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 -3- 基 ] 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸乙酯
使用 烷基化通用程序，以 製備物 5g _ 01及作為適當苯酚之 製備物 6b _ 01為起始物，得到所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.84 (d, 1H), 7.67 (s, 1H), 7.47 (d, 1H), 7.44 (t, 1H), 7.33 (dd, 1H), 7.25 (t, 1H), 7.22 (dd, 1H), 7.16 (t, 1H), 5.86 (s, 2H), 4.26 (q, 2H), 4.15 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.72 (t, 2H), 3.49 (brs, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.46 (s, 3H), 2.27 (s, 6H), 2.13 (qn, 2H), 1.29 (t, 3H), 0.92 (t, 2H), -0.11 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 129.0, 127.2, 123.5, 123.2, 119.2, 117.7, 115.5, 111.9, 72.8, 68.5, 66.7, 60.7, 48.2, 44.0, 35.3, 31.1, 23.2, 17.9, 17.8, 14.6, -0.9; HRMS-ESI (m/z): C 39H 49FN 7O 4S 2Si之[M+H] +計算值：790.3035，實驗值790.3023。 步驟 B ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-5-[3-[4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 脫除保護基及水解通用程序，以作為適當乙酯之 步驟 A之產物為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 31H 31FN 7O 3S 2之[M+H] +計算值：632.1908，實驗值632.1913。 製備 P3 ： 2-{3-[(1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -5 H,6 H,7 H,8 H- 吡啶并 [2,3 -c] 嗒 𠯤 -8- 基 }-5-(3-{2- 氟 -4-[3-( 甲胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 ] 苯氧基 } 丙基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸 步驟 A ： 5-{3-[4-(3-{[( 三級丁氧基 ) 羰基 ]( 甲基 ) 胺基 } 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ] 丙基 }-2-(4- 甲基 -3-{[(2Z)-3-{[2-( 三甲基矽基 ) 乙氧基 ] 甲基 }-2,3- 二氫 -1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 }-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸乙酯
向 製備 3g之產物(500 mg，0.78 mmol，1當量)於甲苯(15 mL)中之溶液中添加 製備 4c之產物(327 mg，1.17 mmol，1.5當量)，隨後添加三苯膦(307 mg，1.17 mmol，1.5當量)及偶氮二甲酸二異丙酯(230 µL，1.17 mmol，1.5當量)，且在回流下加熱混合物隔夜。將反應物分配於二氯甲烷與水之間，且有機相經乾燥(PTFE相分離器)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，24 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-50%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到呈灰白色發泡體狀之所需產物(715 mg，0.79 mmol，＞100%)。LC/MS (C 45H 56FN 7O 6SiS 2) 902 [M+H] +; RT 1.46 (LCMS-V-B2)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.82 (dt, J = 7.6, 0.9 Hz, 1H), 7.48 - 7.37 (m, 2H), 7.33 (d, J = 11.6 Hz, 1H), 7.28 - 7.13 (m, 3H), 5.84 (s, 2H), 4.32 - 4.17 (m, 6H), 4.15 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.72 (dd, J = 8.5, 7.4 Hz, 2H), 3.27 (d, J = 15.4 Hz, 2H), 2.93 - 2.75 (m, 5H), 2.36 (s, 3H), 2.19 - 2.10 (m, 2H), 2.10 - 1.98 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 1.28 (t, 3H), 0.96 - 0.89 (m, 2H), -0.11 (s, 9H). 步驟 B ： 2-{3-[(1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 }-5-(3-{2- 氟 -4-[3-( 甲胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 ] 苯氧基 } 丙基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸乙酯
向步驟A之產物(1.67 g，1.85 mmol，1當量)於乙腈(17 mL)中之溶液中添加氟化氫-吡啶(3.22 mL，37 mmol，20當量)，且在60℃下加熱混合物2 h。將反應物分配於3:1二氯甲烷/異丙醇與2N氫氧化鈉水溶液之間，且有機相用鹽水洗滌，乾燥(PTFE相分離器)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，80 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-7%甲醇/二氯甲烷之梯度溶離，得到呈黃色固體狀之所需產物(1.02 g，1.52 mmol，82%)。LC/MS (C 34H 34FN 7O 3S 2) 672 [M+H] +; RT 2.06 (LCMS-V-C)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.89 (dd, J = 7.8, 1.2 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.38 (ddd, J = 8.2, 7.3, 1.2 Hz, 1H), 7.32 - 7.25 (m, 1H), 7.23 - 7.12 (m, 3H), 4.32 - 4.21 (m, 4H), 4.15 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.45 (s, 2H), 3.32 - 3.23 (m, 2H), 2.89 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.20 - 2.10 (m, 2H), 2.09 - 1.97 (m, 2H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。 步驟 C ： 2-{3-[(1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 }-5-(3-{2- 氟 -4-[3-( 甲胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 ] 苯氧基 } 丙基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸
向步驟B之產物(1.02 g，1.52 mmol，1當量)於1,4-二㗁烷(50 mL)中之溶液中添加單水合氫氧化鋰(637 mg，15.2 mmol，10當量)，且在110℃下加熱混合物隔夜。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，80 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-70% 0.7N甲醇氨/二氯甲烷之梯度溶離，得到固體，該固體用乙腈濕磨，過濾且真空乾燥，得到呈黃色固體狀之所需產物(657 mg，1.02 mmol，67%)。HRMS-ESI (m/z) C 32H 31FN 7O 3S 2之[M+H] +計算值：644.1914，實驗值644.1930。 製備 P4 ： 3-[[5-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]-[4- 羧基 -5-[3-[2- 氟 -4-[3-( 甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -2- 基 ] 胺基 ]-2- 羥基 - 戊基 ]- 二甲基 - 銨基 ] 丙烷 -1- 磺酸酯 步驟 A ： 5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧基羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[[4-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基 -5-( 二甲胺基 ) 戊基 ]-[5- 甲基 -6-[(Z)-[3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 -3- 基 ] 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 用甲苯磺酸酯進行烷基化之通用程序，以 製備物 5a _ 01及作為適當胺之 N - 甲基甲胺為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI (m/z):C 64H 84FN 8O 7S 2Si 2之[M+H] +計算值：1215.5421，實驗值1215.5389。 步驟 B ： 3-[[5-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]-[4- 羧基 -5-[3-[2- 氟 -4-[3-( 甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -2- 基 ] 胺基 ]-2- 羥基 - 戊基 ]- 二甲基 - 銨基 ] 丙烷 -1- 磺酸酯
將 步驟 A之產物懸浮於MeCN (5 mL/mmol)中，接著添加 氧硫雜環戊烷 2 , 2 - 二氧化物(10當量)且在60℃下攪拌隔夜(觀測到完全轉化)。將反應混合物濃縮。使用 四級鹽脫除保護基通用程序將含有 3 -[[ 5 -[[ 5 -[ 3 -[ 4 -[ 3 -[ 三級丁氧羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 - 1 - 炔基 ]- 2 - 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]- 4 - 甲氧羰基 - 噻唑 - 2 - 基 ]-[ 5 - 甲基 - 6 -[( Z )-[ 3 -( 2 - 三甲基矽基乙氧基甲基 )- 1 , 3 - 苯并噻唑 - 2 - 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 - 3 - 基 ] 胺基 ]- 2 -[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基 - 戊基 ]- 二甲基 - 銨基 ] 丙烷 - 1 - 磺酸酯(LC-MS-ESI (m/z): C 67H 90FN 8O 10S 3Si 2之[M+H] +計算值：1337.5，實驗值1337.6)之粗混合物直接轉移至下一反應，得到所需產物。 HRMS-ESI (m/z):C 39H 48FN 8O 7S 3之[M+H] +計算值：855.2787，實驗值855.2786。 製備 P5 ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]-[4- 羥基 -5-( 三甲銨基 ) 戊基 ] 胺基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-( 甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸酯 步驟 A ： 5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧基羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[[4-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基 -5-( 二甲胺基 ) 戊基 ]-[5- 甲基 -6-[(Z)-[3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 -3- 基 ] 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 用甲苯磺酸酯進行烷基化之通用程序，以 製備物 5a _ 01及作為適當胺之 N - 甲基甲胺為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 64H 84FN 8O 7S 2Si 2之[M+H] +計算值：1215.5421，實驗值1215.5389。 步驟 B ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]-[4- 羥基 -5-( 三甲銨基 ) 戊基 ] 胺基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-( 甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸酯
將 步驟 A之產物溶解於 乙腈(4 mL/mmol)及 N , N - 二甲基甲醯胺(1 mL/mmol)之混合物中，接著添加 碘甲烷(5當量)且在室溫下攪拌，直至觀測到完全轉化(約1 h)。將反應混合物濃縮。使用 四級鹽脫除保護基通用程序，將含有 [ 5 -[[ 5 -[ 3 -[ 4 -[ 3 -[ 三級丁氧羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 - 1 - 炔基 ]- 2 - 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]- 4 - 甲氧羰基 - 噻唑 - 2 - 基 ]-[ 5 - 甲基 - 6 -[( Z )-[ 3 -( 2 - 三甲基矽基乙氧基甲基 )- 1 , 3 - 苯并噻唑 - 2 - 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 - 3 - 基 ] 胺基 ]- 2 -[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基 - 戊基 ]- 三甲基 - 銨(LC-MS-ESI (m/z): C 65H 86FN 8O 7S 2Si 2之[M] +計算值：1229.6，實驗值1229.4)之粗混合物轉移至下一反應，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 37H 44FN 8O 4S 2之[M+H] +計算值：747.2905，實驗值747.2900。 製備 P6 ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]-[3-( 二甲胺基 ) 丙基 ] 胺基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-( 甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸 步驟 A ： 2-[ 三級丁氧羰基 -[3-( 二甲胺基 ) 丙基 ] 胺基 ]-5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 光延通用程序 II，以 製備物 1b _ 01及 3 -( 二甲胺基 ) 丙 - 1 - 醇為起始物，產生1.40 g所需產物(定量，樣品含有約35 n/n% DIAD-2H)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 7.30 (dd, 1H), 7.21 (dm, 1H), 7.13 (t, 1H), 4.23 (s, 2H), 4.10 (t, 2H), 4.01 (t, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.22 (t, 2H), 2.86 (s, 3H), 2.24 (t, 2H), 2.12 (s, 6H), 2.08 (m, 2H), 1.74 (m, 2H), 1.51/1.41 (s, 18H); HRMS-ESI (m/z): C 33H 48FN 4O 7S之[M+H] +計算值：663.3228，實驗值663.3218。 步驟 B ： 5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧基羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[3-( 二甲胺基 ) 丙胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 用 HFIP 脫除保護基之通用程序，以來自 步驟 A之產物為起始物，產生0.95 g (80%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 7.57 (t, 1H), 7.31 (d, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.13 (t, 1H), 4.23 (br., 2H), 4.07 (t, 2H), 3.69 (s, 3H), 3.17 (q, 2H), 3.12 (t, 2H), 2.86 (br., 3H), 2.24 (t, 2H), 2.11 (s, 6H), 2.00 (五重峰, 2H), 1.63 (m, 2H), 1.41 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 129.1, 119.3, 115.4, 68, 57.0, 51.7, 45.6, 42.8, 38.6, 33.8, 30.6, 28.5, 27.0, 23.3; HRMS-ESI (m/z): C 28H 40FN 4O 5S之[M+H] +計算值：563.2703，實驗值563.2694。 步驟 C ： 5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧基羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[3-( 二甲胺基 ) 丙基 -[5- 甲基 -6-[(Z)-[3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 -3- 基 ] 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 布赫瓦爾德通用程序 III，以來自 步驟 B之產物及 製備物 4a _ 01為起始物，產生0.79 g (51%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 7.84 (d, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.46 (dd, 1H), 7.43 (td, 1H), 7.31 (brd., 1H), 7.25 (td, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.16 (t, 1H), 5.86 (s, 2H), 4.35 (t, 2H), 4.20 (br., 2H), 4.15 (t, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.72 (t, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.84 (br., 3H), 2.45 (s, 3H), 2.32 (t, 2H), 2.18 (s, 6H), 2.13 (m, 2H), 1.86 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 0.92 (t, 2H), -0.11 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 129.1, 127.2, 123.4, 123.2, 119.3, 117.6, 115.4, 111.9, 72.8, 68.4, 66.7, 56.4, 51.9, 45.7, 45.5, 38.5, 33.8, 31.0, 28.5, 25.0, 23.1, 17.9, 17.8, -1.0; HRMS-ESI (m/z): C 46H 62FN 8O 6S 2Si之[M+H] +計算值：933.3987，實驗值933.3990。 步驟 D ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]-[3-( 二甲胺基 ) 丙基 ] 胺基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-( 甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 脫除保護基及水解通用程序，接著以 步驟 C之產物為起始物經由逆相製備型層析(C18，含0.1% TFA之水:MeCN)再純化，獲得所需產物之TFA鹽。HRMS-ESI (m/z): C 34H 39FN 8O 3S 2之[M+2H] 2+計算值：345.1280，實驗值345.1265。 製備 P7: 2-({6-[(1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 }( 甲基 ) 胺基 )-5-(3-{2- 氟 -4-[3-( 甲胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 ] 苯氧基 } 丙基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸 步驟 A ： 2-({6-[(1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 }( 甲基 ) 胺基 )-5-(3-{2- 氟 -4-[3-( 甲胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 ] 苯氧基 } 丙基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸乙酯
將三氟乙酸(20 mL)添加至 製備 5j _ 01步驟A之產物(1.5 g，1.71 mmol，1當量)於二氯甲烷(60 mL)中之攪拌溶液中，且將混合物在環境溫度下攪拌隔夜。將反應物用二氯甲烷稀釋，冷卻至0℃，接著藉由添加2N氫氧化鈉水溶液而鹼化，且有機相經乾燥(硫酸鎂)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，40 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-10%甲醇/二氯甲烷之梯度溶離，得到呈黃色固體狀之所需產物(361 mg，0.56 mmol，33%)。LC/MS (C 32H 32FN 7O 3S 2) 646 [M+H] +; RT 1.98 (LCMS-V-C)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.91 (d, 1H), 7.68 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.53 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.39 (ddd, J = 8.2, 7.2, 1.3 Hz, 1H), 7.32 - 7.11 (m, 4H), 4.25 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.15 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.46 (s, 2H), 3.27 (t, J = 7.7 Hz, 2H), 2.47 (d, J = 1.0 Hz, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.19 - 2.07 (m, 2H), 2.23 (s, 1H), 1.30 (t, J = 7.1 Hz, 3H)。 步驟 B ： 2-({6-[(1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 }( 甲基 ) 胺基 )-5-(3-{2- 氟 -4-[3-( 甲胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 ] 苯氧基 } 丙基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸
向步驟B之產物(361 mg，0.56 mmol，1當量)於1,4-二㗁烷(15 mL)中之溶液中添加單水合氫氧化鋰(352 mg，8.39 mmol，15當量)，且將混合物在100℃下加熱隔夜。將反應物冷卻至環境溫度，且真空濃縮。將殘餘物用水濕磨，過濾，用水洗滌，接著用二乙醚洗滌，且真空乾燥，得到呈黃色固體狀之所需產物(286 mg，0.46 mmol，83%) [呈鋰鹽形式]。HRMS-ESI (m/z) C 30H 29FN 7O 3S 2之[M+H] +計算值：618.1752，實驗值618.1767。 製備 P8 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3 -c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-(4- 甲基哌 𠯤 -1- 基 ) 丁 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸 步驟 A ： 2-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-5-[3-[2- 氟 -4-[3-(4- 甲基哌 𠯤 -1- 基 ) 丁 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
24 mL經烘乾小瓶配備有塗佈PTFE之磁性攪拌棒，且向其中裝入溶解於2.5 mL無水THF中之250 mg 1-甲基哌𠯤(2.5 mmol，5.0當量)。接著經由注射器在5分鐘時段內逐滴添加133 mg 3-溴丁-1-炔(1.0 mmol，2.0當量)，且在該溫度下攪拌30 min。向所得混合物中添加301 mg 製備物 3a(0.50 mmol，1.0當量)、18.15 mg Pd(PPh 3) 2Cl 2(0.025 mmol，0.05當量)及4.76 CuI (0.025 mmol，0.05當量)，接著將其加熱至60℃且在該溫度下攪拌2 h。反應達到完全轉化。將矽藻土添加至反應混合物中，且減壓移除揮發物。接著，其使用DCM及MeOH (1.2% NH 3)作為溶離劑經由急驟層析純化，得到300 mg (95%產率)所需產物。 步驟 B ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-(4- 甲基哌 𠯤 -1- 基 ) 丁 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 布赫瓦爾德通用程序 II，以300 mg 步驟 A之產物(0.47 mmol，1.0當量)及140 mg 1,3-苯并噻唑-2-胺(0.94 mmol，2.0當量)為起始物，得到150 mg (42%)所需產物。 步驟 C ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-(4- 甲基哌 𠯤 -1- 基 ) 丁 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 水解通用程序，以作為適當甲酯之 步驟 B之產物為起始物，獲得所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 7.87 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.36 (t, 1H), 7.26 (dd, 1H), 7.2 (t, 1H), 7.16 (dd, 1H), 7.13 (t, 1H), 4.27 (t, 2H), 4.12 (t, 2H), 3.65 (q, 1H), 3.27 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.62-2.21 (brm, 8H), 2.14 (s, 3H), 2.13 (qn, 2H), 2.04 (qn, 2H), 1.33 (s, 3H), 1.25 (d, 3H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 164.3, 155.4, 151.5, 151.4, 148.6, 147.2, 145.1, 140.2, 136.3, 130.2, 129.0, 129.0, 127.6, 126.5, 122.5, 122.3, 119.2, 116.4, 115.5, 115.4, 88.4, 84.1, 68.5, 51.7, 46.3, 46.1, 31, 23.9, 23.0, 20.3, 19.6, 12.9; HRMS-ESI (m/z) C 37H 40FN 8O 3S 2之[M+H] +計算值：727.2649，實驗值727.2630 製備 P9 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3 -c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-(3- 吡咯啶 -1- 基丙 -1- 炔基 ) 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸 步驟 A ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-(3- 吡咯啶 -1- 基丙 -1- 炔基 ) 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 丙炔 胺 製備通用程序，以作為適當丙炔醇之258 mg 製備物 3d(0.40 mmol，1當量)及吡咯啶(20當量，670 mg)為起始物，得到120 mg所需產物(43%)。 步驟 B ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-(3- 吡咯啶 -1- 基丙 -1- 炔基 ) 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 水解通用程序，以作為適當甲酯之 步驟 A之產物為起始物，獲得所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.88 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.37 (t, 1H), 7.29 (dd, 1H), 7.2 (dd, 1H), 7.19 (t, 1H), 7.14 (t, 1H), 4.27 (t, 2H), 4.14 (t, 2H), 3.52 (s, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.52 (t, 4H), 2.34 (s, 3H), 2.13 (qn, 2H), 2.04 (qn, 2H), 1.69 (t, 4H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 151.5, 151.4, 148.6, 147.3, 145.1, 140.1, 136.7, 130.2, 129.0, 129.0, 127.5, 126.5, 122.5, 122.3, 119.2, 116.5, 115.5, 115.4, 85.9, 83.3, 68.6, 52.3, 46.3, 43.3, 31.1, 23.8, 23.8, 23.0, 20.4, 12.9; HRMS-ESI (m/z): C 35H 35FN 7O 3S 2之[M+H] +計算值：684.2221，實驗值684.2209。 製備 P10 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3 -c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-(4- 甲基哌 𠯤 -1- 基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸 步驟 A ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-(4- 甲基哌 𠯤 -1- 基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 丙炔 胺 製備 通用程序，以作為適當丙炔醇之100 mg 製備物 3d(0.155 mmol，1當量)及1-甲基哌𠯤(310.7 mg，20當量)為起始物，得到150 mg所需產物(79%)。 步驟 B ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-(4- 甲基哌 𠯤 -1- 基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 水解通用程序，以作為適當甲酯之 步驟 A之產物為起始物，獲得所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 36H 38FN 8O 3S 2之[M+H]+計算值：713.2486，實驗值713.2474。 製備 P11 ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-5-[3-[4-[3-( 二甲胺基 ) 丁 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸 步驟 A ： 5-[3-[4-[3-( 二甲胺基 ) 丁 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[ 甲基 -[5- 甲基 -6-[(Z)-[3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 -3- 基 ] 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸乙酯
使用 烷基化通用程序，以 製備物 5g _ 01及作為適當苯酚之 製備物 6f _ 01為起始物，得到所需產物。 步驟 B ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-5-[3-[4-[3-( 二甲胺基 ) 丁 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 脫除保護基及水解通用程序，以作為適當乙酯之 步驟 A之產物為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 32H 33FN 7O 3S 2之[M+H] +計算值：646.2065，實驗值646.2057。 製備 P12 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3 -c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[2-( 二甲胺基 ) 乙胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸 步驟 A ： 5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧羰基 -[2-( 二甲胺基 ) 乙基 ] 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 薗頭通用程序，以1.00 g 製備物 3a(1.66 mmol，1當量)及作為適當炔之413 mg N -[ 2 -( 二甲胺基 ) 乙基 ]- N - 丙 - 2 - 炔基 - 胺基甲酸三級丁酯(1.83 mmol，1.1當量)為起始物，分離出呈黃色固體狀之所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 7.30 (d, 1H), 7.21 (d, 1H), 7.15 (t, 1H), 4.27 (brt, 2H), 4.26 (t, 2H), 4.12 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.47 (brt, 2H), 3.26 (t, 2H), 2.89 (t, 2H), 2.82 (brs, 2H), 2.45 (brs, 6H), 2.32 (s, 3H), 2.11 (qn, 2H), 2.04 (qn, 2H), 1.43 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 163.1, 155.4, 151.8, 151.4, 151.4, 147.5, 142.4, 136.2, 135, 129.1, 129.1, 119.2, 115.5, 114.8, 82.3, 80.3, 68.3, 56.3, 52.0, 46.4, 46.4, 44.6, 43.1, 30.7, 28.5, 24.2, 23, 19.7, 15.7; HRMS-ESI (m/z): C 34H 43ClFN 6O 5S之[M+H] +計算值：701.2683，實驗值701.2678。 步驟 B ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧羰基 -[2-( 二甲胺基 ) 乙基 ] 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 布赫瓦爾德通用程序 II，以 步驟 A之產物及 1 , 3 - 苯并噻唑 - 2 - 胺為起始物，得到所需產物。LC-MS-ESI (m/z): C 41H 48FN 8O 5S 2之[M+H] +計算值：815.3，實驗值815.4。 步驟 C ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[2-( 二甲胺基 ) 乙胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 脫除保護及水解通用程序，隨後以 步驟 B之產物為起始物經由逆相製備型層析(C18，含25 mM NH 4HCO 3之水:MeCN)再純化，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 35H 38FN 8O 3S 2之[M+H] +計算值：701.2487，實驗值701.2483。 製備 P13 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3 -c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[ 乙基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 銀催化之丙炔 胺 製備 通用程序，以 製備物 3c、作為醛之多聚甲醛及作為適當二級胺之 N-甲基乙胺為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 34H 35FN 7O 3S 2之[M+H] +計算值：672.2221，實驗值672.2206。 製備 P14 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3 -c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-( 二乙胺基 ) 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 銀催化之丙炔 胺 製備 通用程序，以 製備物 3c、作為醛之多聚甲醛及作為適當二級胺之二乙胺為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 35H 37FN 7O 3S 2之[M+H] +計算值：686.2377，實驗值686.2386。 製備 P15 ： 2-{3-[(1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 }-5-(3-{4-[3-(4,4- 二氟哌啶 -1- 基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 ]-2- 氟苯氧基 } 丙基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸 步驟 A ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-(4,4- 二氟 -1- 哌啶基 ) 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 丙炔 胺 製備 通用程序，以作為適當丙炔醇之100 mg 製備物 3d(0.155 mmol，1當量)及4,4-二氟哌啶(20當量)為起始物，得到120 mg所需產物(72%)。 步驟 B ： 2-{3-[(1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 }-5-(3-{4-[3-(4,4- 二氟哌啶 -1- 基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 ]-2- 氟苯氧基 } 丙基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸
使用 水解通用程序，以作為適當甲酯之 步驟 A之產物為起始物，獲得所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 36H 35F 3N 7O 3S 2之[M+H] +計算值734.2189，實驗值734.2185。 製備 P16 ： 2-{3-[(1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -6-[2-( 甲胺基 ) 乙氧基 ]-5 H,6 H,7 H,8 H- 吡啶并 [2,3 -c] 嗒 𠯤 -8- 基 }-5-(3-{4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 ]-2- 氟苯氧基 } 丙基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸 步驟 A ： 4- 甲基 𠰌 啉 -3- 酮
使2-(甲胺基)乙醇(5.32 mL，66.6 mmol，1當量)於乙醇(100 mL)及35%氫氧化鈉水溶液(6.25 mL)中之溶液冷卻至15-20℃，且添加氯乙醯氯(13.3 mL，166 mmol，2.5當量)及35%氫氧化鈉水溶液(22 mL)，同時歷經1 h劇烈攪拌。攪拌混合物20 min，接著用鹽酸水溶液中和，且用二氯甲烷(3 × 100 mL)萃取。合併之有機萃取物用水洗滌，乾燥(PTFE相分離器)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，80 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-100%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到呈無色油狀之所需產物(4.4 g，38.2 mmol，58%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.00 (s, 2H), 3.84 - 3.78 (m, 2H), 3.36 - 3.29 (m, 2H), 2.86 (s, 3H)。 步驟 B ： 2-( 丁 -2- 炔 -1- 基 )-4- 甲基 𠰌 啉 -3- 酮
向冷卻至-78℃之二異丙胺(6.45 mL，45.9 mmol，1.2當量)於四氫呋喃(130 mL)中之溶液中逐滴添加正丁基鋰(2.06M於己烷中；20.4 mL，42 mmol，1.1當量)。在1分鐘之後，逐滴添加步驟A之產物(4.4 g，38.2 mmol，1當量)於四氫呋喃(30 mL)中之溶液。在15分鐘之後，逐滴添加1-溴-2-丁炔(4.02 mL，45.9 mmol，1.2當量)於四氫呋喃(15 mL)中之溶液，且在-78℃下攪拌混合物1 h，接著升溫至環境溫度。添加氯化銨飽和水溶液，且混合物用乙酸乙酯(×3)萃取，且合併之有機萃取物經乾燥(硫酸鎂)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，80 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-100%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到呈黃色油狀之所需產物(5.15 g，30.8 mmol，81%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.09 (dd, J = 7.6, 3.5 Hz, 1H), 4.01 - 3.94 (m, 1H), 3.76 (ddd, J = 11.9, 10.0, 3.6 Hz, 1H), 3.52 - 3.41 (m, 1H), 3.26 - 3.18 (m, 1H), 2.86 (s, 3H), 2.67 - 2.58 (m, 1H), 2.57 - 2.44 (m, 1H), 1.73 (t, J = 2.6 Hz, 3H)。 步驟 C ： 2-[2-( 甲胺基 ) 乙氧基 ] 己 -4- 炔酸
向步驟B之產物(3.25 g，19.4 mmol，1當量)於甲醇(110 mL)中之溶液中添加1M氫氧化鋰水溶液(60.3 mL，60.3 mmol，3.1當量)且將混合物在回流下加熱隔夜。真空濃縮反應物，得到呈橙色膠狀之所需產物(5.15 g，27.8 mmol，100%)，其無需進一步表徵即直接用於後續步驟中。 步驟 D ： 2-[2-({[(9H- 茀 -9- 基 ) 甲氧基 ] 羰基 }( 甲基 ) 胺基 ) 乙氧基 ] 己 -4- 炔酸
在0℃下向步驟C之產物(5.15 g，27.8 mmol，1當量)於1,4-二㗁烷(45 mL)及水(160 mL)中之溶液中添加碳酸鉀(15.4 g，111 mmol，4當量)，接著添加氯甲酸9 H-茀-9-基-甲酯(7.19 g，27.8 mmol，1當量)，且將混合物升溫至環境溫度且攪拌2小時。將反應物分配於水與乙酸乙酯之間，且水相用鹽酸水溶液酸化至pH 2-3且用乙酸乙酯(3×300 mL)萃取。將合併之有機萃取物用鹽水洗滌，乾燥(硫酸鎂)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，120 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-20%甲醇/二氯甲烷之梯度溶離，得到呈深黃色膠狀之所需產物(7.06 g，17.3 mmol，62%)。LC/MS (C 24H 25NO 5) 408 [M+H] +; RT 0.74 (LCMS-V-B2)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.90 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 7.65 (dd, J = 7.5, 1.1 Hz, 2H), 7.42 (td, J = 7.4, 3.0 Hz, 2H), 7.34 (td, J = 7.4, 1.3 Hz, 2H), 4.43 - 4.22 (m, 3H), 3.50 - 3.42 (m, 1H), 3.39 - 3.28 (m, 1H), 3.26 - 3.15 (m, 3H), 2.90 - 2.82 (m, 3H), 2.51 - 2.44 (m, 2H), 1.71 (dt, J = 13.8, 2.5 Hz, 3H)。 步驟 E ： N-{2-[(1- 羥基己 -4- 炔 -2- 基 ) 氧基 ] 乙基 }-N- 甲基胺基甲酸 (9H- 茀 -9- 基 ) 甲酯
使步驟D之產物(7.06 g，17.33 mmol，1當量)於四氫呋喃(120 mL)中之溶液冷卻至-10℃，接著逐滴添加含三乙胺(2.65 mL，19.1 mmol，1.1當量)及氯甲酸異丁酯(2.7 mL，20.8 mmol，1.2當量)之THF (40 mL)。藉由過濾移除沈澱物，且使溶液冷卻至-10℃。逐滴添加含硼氫化鈉(2.62 g，69.3 mmol，4當量)之水(40 mL)，且在-10℃下攪拌混合物1 h。使用1N鹽酸水溶液將溶液之pH調節至pH 5，且接著使用碳酸氫鈉飽和水溶液將其調節至pH 10。分離各層，且有機相依次用水(100 mL)及鹽水(50 mL)洗滌，乾燥(硫酸鎂)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，80 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-100%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到呈無色膠狀之所需產物(4.64 g，11.8 mmol，68%)。LC/MS (C 24H 27NO 4) 394 [M+H] +; RT 0.77 (LCMS-V-B2)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.90 (d, J = 7.5 Hz, 2H), 7.65 (dt, J = 7.4, 0.9 Hz, 2H), 7.43 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 7.35 (td, J = 7.4, 1.2 Hz, 2H), 4.68 - 4.60 (m, 1H), 4.39 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 4.34 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 4.28 (t, J = 6.4 Hz, 1H), 3.60 - 3.51 (m, 1H), 3.46 - 3.36 (m, 2H), 3.34 - 3.28 (m, 2H), 3.19 (dd, J = 16.6, 5.5 Hz, 2H), 2.84 (d, J = 10.8 Hz, 3H), 2.38 - 2.15 (m, 2H), 1.71 (t, J = 2.5 Hz, 3H)。 步驟 F ： N-[2-({1-[( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ] 己 -4- 炔 -2- 基 } 氧基 ) 乙基 ]-N- 甲基胺基甲酸 (9H- 茀 -9- 基 ) 甲酯
向步驟E之產物(4.64 g，11.8 mmol，1當量)及咪唑(1.56 mL，23.6 mmol，2當量)於二氯甲烷(200 mL)中之冷卻溶液中逐滴添加三級丁基(氯)二苯基矽烷(6.13 mL，23.6 mmol，2當量)，且使混合物升溫至環境溫度且攪拌隔夜。反應物用2M氯化銨水溶液淬滅，且混合物用二氯甲烷(3×200 mL)萃取。合併之有機萃取物用鹽水洗滌，乾燥(PTFE相分離器)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，120 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-25%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到呈無色膠狀之所需產物(5.86 g，9.27 mmol，79%)。LC/MS (C 40H 45NO 4Si) 632 [M+H] +; RT 1.38 (LCMS-V-B2)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.87 (dd, J = 20.0, 7.5 Hz, 2H), 7.67 - 7.56 (m, 6H), 7.53 - 7.39 (m, 7H), 7.39 - 7.22 (m, 3H), 4.38 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 4.31 (s, 1H), 4.24 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 3.73 - 3.61 (m, 1H), 3.60 - 3.44 (m, 2H), 3.34 - 3.29 (m, 2H), 3.29 - 3.18 (m, 1H), 3.16 - 3.06 (m, 1H), 2.81 (d, J = 14.1 Hz, 3H), 2.43 - 2.26 (m, 2H), 1.69 (t, J = 2.4 Hz, 3H), 0.98 (s, 9H)。 步驟 G ： N-[2-({1-[( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ]-3-(3,6- 二氯 -5- 甲基嗒 𠯤 -4- 基 ) 丙 -2- 基 } 氧基 ) 乙基 ]-N- 甲基胺基甲酸 (9H- 茀 -9- 基 ) 甲酯
將步驟F之產物(5.86 g，9.27 mmol，1當量)及3,6-二氯-1,2,4,5-四𠯤(5.6 g，37.1 mmol，4當量)於甲苯(130 mL)中之溶液在150℃下在密封燒瓶中加熱隔夜。真空濃縮反應物，且藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，120 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-30%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到呈粉紅色泡沫狀之所需產物(2.99 g，3.97 mmol，43%)。 LC/MS (C 42H 45Cl 2N 3O 4Si) 754 [M+H] +; RT 1.37 (LCMS-V-B2)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.90 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 7.4 Hz, 1H), 7.68 - 7.59 (m, 5H), 7.57 - 7.50 (m, 1H), 7.47 - 7.41 (m, 6H), 7.45 - 7.37 (m, 1H), 7.36 - 7.28 (m, 2H), 7.23 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 4.30 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 4.27 - 4.11 (m, 2H), 3.81 - 3.60 (m, 3H), 3.55 - 3.45 (m 1H), 3.20 - 2.98 (m, 4H), 2.89 - 2.77 (m, 1H), 2.58 (d, J = 23.0 Hz, 3H), 2.39 (d, J = 13.1 Hz, 3H), 1.01 (s, 9H)。 步驟 H ： 4-{3-[( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ]-2-[2-( 甲胺基 ) 乙氧基 ] 丙基 }-3,6- 二氯 -5- 甲基嗒 𠯤
將步驟G之產物(2.79 g，3.7 mmol，1當量)及二乙胺(0.77 mL，7.39 mmol，2當量)於乙腈(60 mL)中之溶液在環境溫度下攪拌隔夜。添加水且用乙酸乙酯(3×70 mL)萃取混合物。將合併之有機萃取物用鹽水(100 mL)洗滌，乾燥(硫酸鎂)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，40 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-16%甲醇/二氯甲烷之梯度溶離，得到呈橙色/粉紅色膠狀之所需產物(1.9 g，3.57 mmol，96%)。LC/MS (C 27H 35Cl 2N 3O 2Si) 532 [M+H] +; RT 0.84 (LCMS-V-B2)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.69 - 7.62 (m, 4H), 7.54 - 7.41 (m, 6H), 3.83 - 3.60 (m, 3H), 3.42 - 3.36 (m, 1H), 3.16 - 2.97 (m, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.39 - 2.23 (m, 2H), 2.06 (s, 3H), 1.02 (s, 9H)。 步驟 I ： N-[2-({1-[( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ]-3-(3,6- 二氯 -5- 甲基嗒 𠯤 -4- 基 ) 丙 -2- 基 } 氧基 ) 乙基 ]-N- 甲基胺基甲酸三級丁酯
向步驟H之產物(1.9 g，3.57 mmol，1當量)於二氯甲烷(100 mL)中之溶液中添加二碳酸二-三級丁酯(1.53 mL，7.14 mmol，2當量)，隨後添加三乙胺(1.99 mL，14.3 mmol，4當量)，且在環境溫度下攪拌混合物4 h。將反應物分配於二氯甲烷與水之間，且將水相酸化至pH 4，且用二氯甲烷(3×80 mL)萃取。合併之有機萃取物用鹽水洗滌，乾燥(PTFE相分離器)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，40 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-25%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到呈無色膠狀之所需產物(1.83 g，2.9 mmol，81%)。LC/MS (C 32H 43Cl 2N 3O 4Si) 532 [M-Boc+H] +; RT 1.33 (LCMS-V-B2)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.69 - 7.62 (m, 4H), 7.54 - 7.41 (m, 6H), 3.76 (qd, J = 10.7, 4.7 Hz, 2H), 3.66 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 3.44 (q, J = 7.9, 6.3 Hz, 1H), 3.20 - 3.10 (m, 3H), 3.04 (dd, J = 14.0, 4.1 Hz, 2H), 2.58 (s, 3H), 2.44 (s, 3H), 1.31 (d, J = 22.6 Hz, 9H), 1.02 (s, 9H)。 步驟 J ： N-(2-{[1-(3,6- 二氯 -5- 甲基嗒 𠯤 -4- 基 )-3- 羥基丙 -2- 基 ] 氧基 } 乙基 )-N- 甲基胺基甲酸三級丁酯
使步驟I之產物(1.83 g，2.9 mmol，1當量)於四氫呋喃(75 mL)中之溶液冷卻至0℃，隨後添加氟化四丁基銨(1M於四氫呋喃中；2.9 mL，2.9 mmol，1當量)且在0℃下攪拌30 min，接著在環境溫度下攪拌1 h。將反應物分配於二氯甲烷與水之間，且水相用二氯甲烷萃取(×2)。合併之有機萃取物用鹽水洗滌，乾燥(PTFE相分離器)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，24 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-100%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到呈淡橙色膠狀之所需產物(0.73 g，1.86 mmol，64%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.93 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 3.62 - 3.44 (m, 4H), 3.23 (dt, J = 9.6, 6.0 Hz, 1H), 3.11 (d, J = 23.9 Hz, 2H), 3.02 (dd, J = 6.5, 2.0 Hz, 2H), 2.60 (d, J = 8.1 Hz, 3H), 2.45 (s, 3H), 1.35 (d, J = 13.0 Hz, 9H)。 步驟 K ： 2-{[( 三級丁氧基 ) 羰基 ][2-(2-{[( 三級丁氧基 ) 羰基 ]( 甲基 ) 胺基 } 乙氧基 )-3-(3,6- 二氯 -5- 甲基嗒 𠯤 -4- 基 ) 丙基 ] 胺基 }-5-(3-{4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 ]-2- 氟苯氧基 } 丙基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸甲酯
向步驟J之產物(125 mg，0.32 mmol，1當量)於甲苯(20 mL)中之溶液中添加 製備 1c之產物(171 mg，0.35 mmol，1.1當量)、偶氮二甲酸二-三級丁酯(146 mg，0.63 mmol，2當量)及三苯膦(166 mg，0.63 mmol，2當量)，且在50℃下攪拌混合物1 h。將反應物分配於二氯甲烷與水之間，且水相用二氯甲烷萃取(×2)，且合併之有機萃取物用鹽水洗滌，乾燥(硫酸鎂)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，12 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-100%乙酸乙酯/異庚烷之梯度溶離，得到呈淡黃色膠狀之所需產物(282 mg，0.32 mmol，102%)。LC/MS (C 40H 53Cl 2FN 6O 8S) 867 [M+H] +; RT 0.97 (LCMS-V-B2)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.30 (dd, 1H), 7.23 - 7.17 (m, 1H), 7.12 (t, 1H), 4.29 (dd, J = 13.9, 5.7 Hz, 1H), 4.10 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.96 - 3.87 (m, 1H), 3.74 (s, 3H), 3.61 - 3.48 (m, 1H), 3.42 (s, 3H), 3.32 (s, 2H), 3.25 (dt, J = 7.1, 3.9 Hz, 3H), 3.16 - 2.99 (m, 2H), 2.97 - 2.89 (m, 1H), 2.58 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.23 (s, 6H), 2.10 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 1.52 (s, 9H), 1.31 (d, J = 39.6 Hz, 9H)。 步驟 L ： 2-{[2-(2-{[( 三級丁氧基 ) 羰基 ]( 甲基 ) 胺基 } 乙氧基 )-3-(3,6- 二氯 -5- 甲基嗒 𠯤 -4- 基 ) 丙基 ] 胺基 }-5-(3-{4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 ]-2- 氟苯氧基 } 丙基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸甲酯
將步驟K之產物(275 mg，0.32 mmol，1當量)於1,1,1,3,3,3-六氟-2-丙醇(2.5 mL，23.7 mmol，74.7當量)中之溶液在微波照射下在100℃下加熱60 min。將反應物真空濃縮，且藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，12 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-7%甲醇/二氯甲烷之梯度溶離，得到呈白色固體狀之所需產物(154 mg，0.2 mmol，63%)。LC/MS (C 35H 45Cl 2FN 6O 6S) 767 [M+H] +; RT 0.70 (LCMS-V-B2)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.83 (br s, 1H), 7.30 (dd, J = 11.9, 2.0 Hz, 1H), 7.24 - 7.17 (m, 1H), 7.12 (t, J = 8.7 Hz, 1H), 4.08 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.82 (dt, J = 9.0, 4.5 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 3.60 - 3.49 (m, 1H), 3.46 - 3.39 (m, 4H), 3.33 (s, 2H), 3.29 - 3.18 (m, 1H), 3.14 (t, 2H), 3.10 - 3.02 (m, 2H), 2.98 (dd, J = 13.9, 3.8 Hz, 1H), 2.64 - 2.53 (m, 2H), 2.44 (s, 3H), 2.23 (s, 6H), 2.07 - 1.95 (m, 2H), 1.32 (d, J = 30.8 Hz, 9H)。 步驟 M ： 2-[6-(2-{[( 三級丁氧基 ) 羰基 ]( 甲基 ) 胺基 } 乙氧基 )-3- 氯 -4- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-(3-{4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 ]-2- 氟苯氧基 } 丙基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸甲酯
向步驟L之產物(154 mg，0.2 mmol，1當量)於1,4-二㗁烷(14 mL)中之溶液中添加碳酸銫(131 mg，0.4 mmol，2當量)、 N , N-二異丙基乙胺(0.07 mL，0.4 mmol，2當量)及雙(二=三級丁基(4-二甲胺基苯基)膦)二氯化鈀(II) (14.2 mg，0.02 mmol，0.1當量)，且在80℃下加熱混合物45 min。將反應物分配於二氯甲烷與水之間，且水相用二氯甲烷萃取(×2)。將合併之有機萃取物用鹽水洗滌，乾燥(硫酸鎂)且真空濃縮。藉由自動急驟管柱層析(CombiFlash Rf，12 g RediSep™矽膠濾筒)純化，用0-8%甲醇/二氯甲烷之梯度溶離，得到呈奶白色固體狀之所需產物(136 mg，0.19 mmol，93%)。LC/MS (C 35H 44ClFN 6O 6S) 731 [M+H] +; RT 0.75 (LCMS-V-B2)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.31 (dt, J = 12.0, 1.9 Hz, 1H), 7.25 - 7.19 (m, 1H), 7.14 (t, 1H), 4.86 (dd, 1H), 4.25 (s, 1H), 4.13 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.93 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.56 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 3.42 (s, 3H), 3.32 (s, 2H), 3.30 - 3.23 (m, 2H), 3.21 - 3.09 (m, 2H), 3.08 - 3.00 (m, 1H), 2.58 - 2.52 (m, 1H), 2.34 (s, 3H), 2.23 (s, 6H), 2.12 (p, J = 6.7 Hz, 2H), 1.27 (d, J = 28.5 Hz, 9H)。 步驟 N ： 2-{3-[(1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-6-(2-{[( 三級丁氧基 ) 羰基 ]( 甲基 ) 胺基 } 乙氧基 )-4- 甲基 -5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 }-5-(3-{4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 ]-2- 氟苯氧基 } 丙基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸甲酯
向步驟M之產物(136 mg，0.19 mmol，1當量)於環己醇(4.5 mL)中之溶液中添加2-胺基苯并噻唑(55.7 mg，0.37 mmol，2當量)及 N , N-二異丙基乙基胺(0.1 mL，0.56 mmol，3當量)，且向混合物中鼓泡通入氮氣(10 min)。添加Xantphos (21.5 mg，0.04 mmol，0.2當量)及三(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0) (17 mg，0.02 mmol，0.1當量)，且在微波照射下在140℃下加熱混合物1 h。將反應物分配於二氯甲烷與水之間，且水相用二氯甲烷(3×40 mL)萃取。合併之有機萃取物用鹽水洗滌，乾燥(PTFE相分離器)且真空濃縮。藉由逆相自動急驟層析(CombiFlash Rf，C18 15.5g Gold RediSep管柱)純化，用5-95%乙腈/水之梯度溶離，得到呈黃色固體狀之所需產物(70.8 mg，0.08 mmol，45%)。LC/MS (C 42H 49FN 8O 6S 2) 845 [M+H] +; RT 0.86 (LCMS-V-B2)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.52 (br s, 1H), 7.88 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.37 (ddd, J = 8.2, 7.3, 1.3 Hz, 1H), 7.31 (dd, J = 11.9, 1.9 Hz, 1H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 4.80 (dd, 1H), 4.22 (s, 1H), 4.15 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 3.94 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.56 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.44 - 3.37 (m, 1H), 3.31 (s, 2H), 3.28 (d, 1H), 3.24 - 3.14 (m, 2H), 3.12 - 2.97 (m, 2H), 2.58 (d, J = 12.3 Hz, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.19 (s, 6H), 2.14 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 1.27 (d, 9H)。 步驟 O ： 2-{3-[(1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -6-[2-( 甲胺基 ) 乙氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 }-5-(3-{4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 ]-2- 氟苯氧基 } 丙基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸甲酯
向步驟N之產物(70.8 mg，0.08 mmol，1當量)於二氯甲烷(5 mL)中之溶液中緩慢添加三氟乙酸(1 mL)，且在環境溫度下攪拌混合物1 h。將反應物分配於二氯甲烷與碳酸氫鈉飽和水溶液之間，且水相用二氯甲烷(3×30 mL)萃取。合併之有機萃取物用鹽水洗滌，乾燥(PTFE相分離器)且真空濃縮，得到呈鮮黃色固體狀之所需產物(59.8 mg，0.08 mmol，96%)。LC/MS (C 37H 41FN 8O 4S 2) 745 [M+H] +; RT 1.07 (LCMS-V-B1)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.88 (dd, J = 7.8, 1.2 Hz, 1H), 7.49 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.37 (ddd, J = 8.2, 7.2, 1.3 Hz, 1H), 7.32 (dd, J = 11.9, 1.9 Hz, 1H), 7.24 - 7.12 (m, 3H), 4.79 - 4.69 (m, 1H), 4.26 - 4.19 (m, 1H), 4.15 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 4.03 (dd, J = 13.5, 2.4 Hz, 1H), 3.78 (s, 3H), 3.60 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.39 (s, 2H), 3.32 - 3.27 (m, 2H), 3.15 (d, J = 14.6 Hz, 1H), 3.08 - 2.99 (m, 1H), 2.70 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 2.38 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.22 (s, 6H), 2.17 - 2.08 (m, 2H)。 步驟 P ： 2-{3-[(1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -6-[2-( 甲胺基 ) 乙氧基 ]-5H,6H,7H,8H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 }-5-(3-{4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 ]-2- 氟苯氧基 } 丙基 )-1,3- 噻唑 -4- 甲酸
向步驟O之產物(59.8 mg，0.08 mmol，1當量)於1,4-二㗁烷(2 mL)中之溶液中添加1M氫氧化鋰水溶液(0.24 mL，0.24 mmol，3當量)，且在50℃下加熱混合物2 h。藉由過濾收集固體且真空乾燥，得到呈鮮黃色固體狀之呈鋰鹽形式之所需產物(43 mg，0.06 mmol，73%)。HRMS-ESI (m/z) C 36H 40FN 8O 4S 2之[M+H] +計算值：731.2598，實驗值731.2623。 製備 P17 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3 -c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-(3- 哌 𠯤 -1- 基丙 -1- 炔基 ) 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸 步驟 A ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-(4- 三級丁氧羰基哌 𠯤 -1- 基 ) 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 銀催化之丙炔 胺 製備 通用程序，以 製備物 3c、作為醛之多聚甲醛及作為適當二級胺之哌𠯤-1-甲酸三級丁酯為起始物，得到所需產物。 步驟 B ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-(3- 哌 𠯤 -1- 基丙 -1- 炔基 ) 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
將 步驟 A之產物(207 mg，0.25 mmol)及HF×Pyr (2.5 mmol，10當量)於乙腈(4.3 mL)中之混合物在60℃下攪拌2.5 h。使用DCM及MeOH (NH 3)作為溶離劑，經由24 g矽膠管柱急驟層析純化產物，得到143 mg (79%)所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 35H 36FN 8O 3S 2之[M+H] +計算值：699.2330，實驗值699.2322。 製備 P18 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3 -c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-(1- 哌啶基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸 步驟 A ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-(1- 哌啶基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 丙炔 胺 製備 通用程序，以作為適當丙炔醇之100 mg 製備物 3d(0.155 mmol，1當量)及哌啶(264.2 mg，20當量)為起始物，得到55 mg所需產物(50%)。 步驟 B ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-(1- 哌啶基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 水解通用程序，以作為適當甲酯之 步驟 A之產物為起始物，獲得所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 36H 37FN 7O 3S 2之[M+H] +計算值：698.2377，實驗值698.2373。 製備 P19 ： 6-{3-[(1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8(5 H)- 基 }-3-(1-{[3-(2-{[(3 S)-3,4- 二羥丁基 ] 胺基 } 乙氧基 )-5,7- 二甲基金剛烷 -1- 基 ] 甲基 }-5- 甲基 -1 H- 吡唑 -4- 基 ) 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序，以 製備物 12及作為適當胺之2-[(4 S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基]乙胺為起始物，得到具有二羥基保護之胺的化合物。用10% HCl溶液水解(rt，1 h)，且藉由製備型HPLC (使用乙腈及5mM NH 4HCO 3水溶液作為溶離劑)純化，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 44H 55N 9O 5之[M+H] +計算值：822.4125，實驗值：822.4120。 製備 P20 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-[2-(4- 甲基哌 𠯤 -1- 基 ) 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 12及作為適當胺之1-甲基哌𠯤為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 45H 58N 10O 3S之[M+2H] 2+計算值：409.2207，實驗值：409.2208。 製備 P21 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 12及作為適當胺之吡咯啶為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 44H 54N 9O 3S之[M+H] +計算值：788,4070，實驗值：788.4068。 製備 P22 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-(4- 羥基丁胺基 ) 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 12及作為適當胺之4-胺基丁-1-醇為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 44H 56N 9O 4S之[M+H] +計算值：806.4176，實驗值：806.4174。 製備 P23 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-[[3- 羥基 -2-( 羥甲基 ) 丙基 ] 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺取代及水解通用程序 I，以 製備物 12及作為適當胺之(2,2-二甲基-1,3-二㗁烷-5-基)甲胺為起始物，得到具有二羥基保護之胺的化合物。用10% HCl溶液水解(rt，1 h)，且藉由製備型HPLC (使用乙腈及5mM NH 4HCO 3水溶液作為溶離劑)純化，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 44H 56N 9O 5S之[M+H] +計算值：822,4125，實驗值：822.4099。 製備 P24 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-[[2- 羥基 -1-( 羥甲基 ) 乙基 ] 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 12及作為適當胺之2-胺基丙烷-1,3-二醇為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 43H 54N 9O 5S之[M+H] +計算值：808.3969，實驗值：808.3965。 製備 P25: 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-(3- 羥丙胺基 ) 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 12及作為適當胺之3-胺基丙-1-醇為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 43H 54N 9O 4S之[M+H] +計算值：792.4019，實驗值：792.4012。 製備 P26 ： 6-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-3-[1-[[3-[2-(3- 羥丙胺基 ) 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 II，以 製備物 14_ 01及作為適當胺之3-胺基丙烷-1-醇為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 41H 52N 9O 4S之[M+H] +計算值：766.3863，實驗值：766.3860。 製備 P27 ： 6-{3-[(1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8(5 H)- 基 }-3-[1-({3-[2-( 二甲胺基 ) 乙氧基 ]-5,7- 二甲基金剛烷 -1- 基 } 甲基 )-5- 甲基 -1 H- 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 12及作為適當胺之二甲胺為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 42H 52N 9O 3S之[M+H] +計算值：762.3914，實驗值：762.3912。 製備 P28 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸 步驟 A ： 4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯酚
使用 薗頭通用程序，以10.0 g 4-碘苯酚(45.45 mmol)及4.91 g (1.3當量) N , N -二甲基丙-2-炔-1-胺為起始物，得到3.29 g (41%)所需產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 9.83  (brs, 1H), 7.25 (d, 2H), 6.74 (d,2H), 3.44 (s, 2H), 2.26 (s, 6H); LC/MS (C 11H 14NO) 176[M+H] +。 步驟 B ： 2-( 三級丁氧羰基胺基 )-5-[3-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
向含 製備 1a 步驟 C之產物(77.0 g，243.7 mmol)、咪唑(33.14 g，2當量)及DMAP (1.49 g，0.05當量)之DMF (973 mL)中逐滴添加三級丁基(氯)二苯基矽烷(93.5 mL，1.5當量)，且在室溫下攪拌反應混合物16 h。在移除揮發物之後，藉由管柱層析(矽膠，使用庚烷及EtOAc作為溶離劑)純化，得到13.56 g (99%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 11.63 (s, 1H), 7.60 (d, 4H), 7.45 (t, 2H), 7.42 (t, 4H), 3.74 (s, 3H), 3.67 (t, 2H), 3.20 (t, 2H), 1.87 (qn, 2H), 1.47 (s, 9H), 0.99 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 162.8, 156.0, 142.6, 135.6, 135.5, 133.5, 130.3, 128.3, 81.8, 62.9, 51.9, 34.0, 28.3, 27.1, 23.2, 19.2; HRMS-ESI (m/z): C 29H 39N 2O 5SSi之[M+H] +計算值：555.2349，實驗值：555.2336。 步驟 C ： 2-[ 三級丁氧羰基 -[3-(3,6- 二氯 -5- 甲基 - 嗒 𠯤 -4- 基 ) 丙基 ] 胺基 ]-5-[3-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 烷基化通用程序，以34.95 g (63 mmol) 步驟 B之產物及作為適當碘化合物之25.0 g (1.2當量) 3,6-二氯-4-(3-碘丙基)-5-甲基-嗒𠯤為起始物，得到51.0 g (定量產率)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 7.63-7.37 (m, 10H), 4.09 (t, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.67 (t, 2H), 3.20 (t, 2H), 2.82 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 1.87 (m, 2H), 1.87 (m, 2H), 1.50 (s, 9H), 0.97 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 62.9, 52.0, 46.1, 33.9, 28.1, 27.5, 27.1, 25.9, 23.8, 16.4; HRMS-ESI (m/z): C 37H 47C l2N 4O 5SSi之[M+H] +計算值：757.2413，實驗值：757.2395。 步驟 D ： 5-[3-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基丙基 ]-2-[3-(3,6- 二氯 -5- 甲基 - 嗒 𠯤 -4- 基 ) 丙基胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 用 HFIP 脫除保護基之通用程序，以51.70 g 步驟 C之產物(68 mmol)為起始物，得到36.32 g (81%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 7.71 (t, 1H), 7.63-7.37 (m, 10H), 3.69 (s, 3H), 3.67 (t, 2H), 3.30 (m, 2H), 3.10 (t, 2H), 2.85 (m, 2H), 2.83 (s, 3H), 1.79 (m, 2H), 1.78 (m, 2H), 0.98 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 62.9, 51.7, 44.1, 34.2, 28.0, 27.1, 27.0, 23.4, 16.4; HRMS-ESI (m/z): C 32H 39Cl 2N 4O 3SSi之[M+H] +計算值：657.1889，實驗值：657.1875。 步驟 E ： 5-[3-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基丙基 ]-2-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸甲酯
將36.0 g (54.7 mmol) 步驟 D之產物及35.7 g (2當量) Cs 2CO 3於1,4-二㗁烷(383 mL)中之混合物在90℃下攪拌18 h。在用水稀釋之後，過濾出沈澱固體，用二乙醚洗滌且乾燥，得到34.0 g (99%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 7.61 (d, 4H), 7.43 (t, 2H), 7.42 (t, 4H), 4.26 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.70 (t, 2H), 3.23 (t, 2H), 2.90 (t, 2H), 2.33 (s, 3H), 2.04 (qn, 2H), 1.90 (qn, 2H), 1.00 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 163.1, 155.3, 151.8, 151.4, 143.2, 136.2, 135.5, 134.7, 133.6, 130.3, 129.0, 128.3, 63.1, 51.9, 46.3, 34.1, 27.1, 24.2, 23.1, 19.8, 19.2, 15.7; HRMS-ESI (m/z): C 32H 38ClN 4O 3SSi之[M+H] +計算值：621.2122，實驗值：621.2097。 步驟 F ： 2-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-5-(3- 羥丙基 ) 噻唑 -4- 甲酸甲酯
將23.36 g (37.6 mmol) 步驟 E之產物及45 mL (1.2當量) 1 M TBAF於THF (5 mL/mmol)中之溶液之混合物在室溫下攪拌2 h。在移除揮發物之後，藉由管柱層析(矽膠，使用EtOAc及MeOH/NH 3作為溶離劑)純化，得到12.88 g (89%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 4.54 (br., 1H), 4.25 (m, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.45 (t, 2H), 3.11 (m, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.04 (m, 2H), 1.77 (m, 2H); 13C NMR (125 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 163.1, 155.2, 151.2, 143.8, 136.1, 134.5, 129.0, 60.5, 52.0, 46.3, 34.6, 24.2, 23.2, 19.7, 15.7; HRMS-ESI (m/z): C 16H 20ClN 4O 3S之[M+H] +計算值：383.0945，實驗值：383.0937。 步驟 G ： 2-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-5-[3-[4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 光延通用程序 I，以0.65 g (1.2當量) 步驟 F之產物及含250 mg (1.43 mmol) 4-[3-(二甲胺基)丙-1-炔基]苯酚之THF (9 mL/mmol)為起始物，得到0.28 g (37%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 7.34 (d, 2H), 6.91 (d, 2H), 4.26 (t, 2H), 4.03 (t, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.40 (s, 2H), 3.25 (t, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.22 (s, 6H), 2.08 (qn, 2H), 2.03 (qn, 2H); 13C NMR (125 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 163.1, 158.9, 155.3, 151.7, 151.3, 142.7, 136.2, 134.9, 133.3, 129.0, 115.2, 115.0, 85.2, 84.1, 67.1, 52.0, 48.3, 46.3, 44.3, 30.8, 24.1, 23.1, 19.7, 15.7; HRMS-ESI (m/z): C 27H 31ClN 5O 3S之[M+H] +計算值：540.1836，實驗值：540.1834。 步驟 H ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 布赫瓦爾德通用程序 I，以0.27 g 步驟 G之產物(0.5 mmol)為起始物，得到0.29 g (89%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO- d 6 ) δ ppm 7.83 (dm, 1H), 7.50 (dm, 1H), 7.36 (m, 1H), 7.35 (m, 2H), 7.18 (m, 1H), 6.94 (m, 2H), 4.28 (m, 2H), 4.09 (t, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.39 (s, 2H), 3.29 (t, 2H), 2.88 (t, 2H), 2.35 (s, 3H), 2.23 (s, 6H), 2.13 (m, 2H), 2.07 (m, 2H); HRMS-ESI (m/z): C 34H 36N 7O 3S 2之[M+H] +計算值：654.2321，實驗值：654.2322。 步驟 I ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
向含 步驟 H之產物(280 mg，0.43 mmol)之THF與水之1:1混合物(10 mL/mmol)中添加90 mg (5當量) LiOH×H 2O，且在50℃下攪拌反應混合物18 h。在移除揮發物之後，藉由逆相製備型層析(C18，含0.1% TFA之水及MeCN作為溶離劑)純化，得到132 mg (48%)所需化合物。HRMS-ESI (m/z): C 33H 34N 7O 3S 2之[M+H] +計算值：640.2165，實驗值：640.2160。 製備 P29 ： 6-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-3-[1-[[3-[2-(3- 甲氧基丙胺基 ) 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 II，以 製備物 14_ 01及作為適當胺之3-甲氧基丙-1-胺為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 42H 54N 9O 4S之[M+H] +計算值：780.4019，實驗值：780.4019。 製備 P30 ： 6-[{6-[(1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 }( 甲基 ) 胺基 ]-3-[1-({3-[2-( 二甲胺基 ) 乙氧基 ]-5,7- 二甲基金剛烷 -1- 基 } 甲基 )-5- 甲基 -1 H- 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 II，以 製備物 14_ 01及作為適當胺之二甲胺為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 40H 50N 9O 3S之[M+H] +計算值：736.3757，實驗值：736.3751。 製備 P31 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 哌 𠯤 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 12及作為適當胺之哌𠯤為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 44H 55N 10O 3S之[M+H] +計算值：803.4179，實驗值：803.4177。 製備 P32 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-(4- 異丙基哌 𠯤 -1- 基 ) 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 12及作為適當胺之1-異丙基哌𠯤為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 47H 61N 10O 3S之[M+H] +計算值：845.4649，實驗值：845.4646。 製備 P33 ： 3-[1-[[3-[2-( 氮雜環庚烷 -1- 基 ) 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 12及作為適當胺之氮雜環庚烷為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 46H 58N 9O 3S之[M+H] +計算值：816.4383，實驗值：816.4379。 製備 P34 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[[(3 S)-3,4- 二羥丁基 ]- 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸 步驟 A ： 4- 甲基苯磺酸 2-[(4S)-2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環 -4- 基 ] 乙酯
在0℃下向含1.0 g (6.8 mmol) 2-[(4 S)-2,2-二甲基-1,3-二氧雜環戊-4-基]乙醇及3.8 mL (4當量)三乙胺之34 mL DCM中添加4.5 g (2當量) 4-甲基苯磺酸對甲苯磺醯酯。攪拌反應混合物直至不再觀測到進一步轉化，濃縮且用二異丙基醚處理。接著，過濾出所沈澱之鹽酸鹽，且濃縮母液且經由急驟層析(矽膠，使用庚烷及EtOAc作為溶離劑)純化，得到1.6 g (81%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.79 (dm, 2H), 7.49 (dm, 2H), 4.08 (m, 2H), 4.00 (m, 1H), 3.91/3.44 (dd+dd, 2H), 2.42 (s, 3H), 1.83/1.77 (m+m, 2H), 1.24/1.20 (s+s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 132.7, 132.7, 130.7, 128.1, 108.6, 72.3, 68.7, 68.4, 32.9, 27.2/25.9, 21.6; HRMS-ESI (m/z): C14H21O5S之[M+H] +計算值：301.1110，實驗值：301.1107。 步驟 B ： N-[2-[(4S)-2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環 -4- 基 ] 乙基 ] 丙 -2- 炔 -1- 胺
將步驟A之產物(7.6 g，25.3 mmol)、丙-2-炔-1-胺(16 mL，10當量)及DIPEA (13.22 mL，3當量)於127 mL MeCN中之混合物在50℃下攪拌16 h。在濃縮，溶解於DCM中且用濃NaHCO 3溶液及鹽水萃取之後，合併之有機層經乾燥且濃縮，得到5.0 g (107%)所需產物，其不經任何進一步純化即使用。 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 4.07 (m, 1H), 3.98/3.43 (dd+t, 2H), 3.28 (m, 2H), 3.05 (t, 1H), 2.62/2.55 (m+m, 2H), 2.23 (brs, 1H), 1.63/1.59 (m+m, 2H), 1.30 (s, 3H), 1.25 (s, 3H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 108.2, 83.4, 74.6, 74.1, 69.2, 45.1, 37.8, 33.6, 27.3, 26.2; HRMS (EI) (m/z): C 10H 17NO 2之[M] +計算值：183.1259，實驗值：183.1260。 步驟 C ： N-[2-[(4S)-2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環 -4- 基 ] 乙基 ]-N- 甲基 - 丙 -2- 炔 -1- 胺
在0℃下向含步驟B之產物(500 mg，2.73 mmol)之 N , N-二甲基甲醯胺(14 mL)中逐份添加氫化鈉(120 mg，1.1當量)。在0℃下攪拌0.5 h之後，混合物用碘甲烷(0.17 mL，1當量)處理且在室溫下攪拌18 h。在用NH 4Cl飽和溶液及水淬滅之後，混合物用Et 2O萃取。合併之有機相經乾燥且濃縮，得到所需產物(362 mg，67%)。GC/MS (C 11H 19NO 2) 197 [M +]。 步驟 D ： 2-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-5-[3-[4-[3-[2-[(4S)-2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環 -4- 基 ] 乙基 - 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸乙酯
使用 薗頭通用程序，以0.548 g (0.89 mmol) 製備 15之產物及作為適當炔烴之350 mg (2當量)步驟C之產物為起始物，得到510 mg (82%)所需產物。LC/MS (C 34H 42ClFN 5O 5S) 686 [M+H] +。 步驟 E ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[2-[(4S)-2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環 -4- 基 ] 乙基 - 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸乙酯
使用 布赫瓦爾德通用程序 I，以510 mg (0.52 mmol) 步驟 D之產物及234 mg (3當量) 1 , 3 - 苯并噻唑 - 2 - 胺為起始物，得到200 mg (48%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.88 (dm, 1H), 7.49 (brd, 1H), 7.37 (m, 1H), 7.3 (dd, 1H), 7.20 (dm, 1H), 7.19 (m, 1H), 7.16 (t, 1H), 4.26 (m, 2H), 4.25 (q, 2H), 4.14 (t, 2H), 4.04 (m, 1H), 3.98/3.45 (dd+dd, 2H), 3.46 (s, 2H), 3.28 (m, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.45/2.39 (m+m, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.63 (m, 2H), 1.29 (t, 3H), 1.29 (s, 3H), 1.24 (s, 3H); HRMS (ESI) (m/z): C 41H 47FN 7O 5S 2之[M+H] +計算值：800.3064，實驗值：800.3064。 步驟 F ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[[(3S)-3,4- 二羥丁基 ]- 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
將200 mg (0.25 mmol) 步驟 E之產物及53 mg LiOH×H 2O (5當量)於5 mL THF/水(1:1)中之混合物在60℃下攪拌18 h。反應混合物用0.125 mL (6當量)在0℃下之濃鹽酸(pH = 2-3)處理，且在室溫下攪拌，接著在60℃下攪拌0.5 h。在濃縮反應混合物以移除THF且凍乾之後，將固體溶解於6 N NH 3於MeOH中之溶液中且藉由逆相層析(使用5 mM NH 4HCO 3及MeCN作為溶離劑)純化，得到47 mg (25%)所需產物。HRMS (ESI) (m/z): C 36H 39FN 7O 5S 2之[M+H] +計算值：732.2438，實驗值：732.2441。 製備 P35 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-[2- 羥乙基 ( 甲基 ) 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 12及作為適當胺之2-(甲胺基)乙醇為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 43H 54N 9O 4S之[M+H] +計算值：792.4019，實驗值：792.4019。 製備 P36 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-[3- 甲氧基丙基 ( 甲基 ) 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 12及作為適當胺之3-甲氧基-N-甲基-丙-1-胺為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 45H 58N 9O 4S之[M+H] +計算值：820.4332，實驗值：820.4328。 製備 P37 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-[4- 羥丁基 ( 甲基 ) 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 12及作為適當胺之4-(甲胺基)丁-1-醇為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 45H 58N 9O 4S之[M+H] +計算值：820.4332，實驗值：820.4339。 製備 P38 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-[2-(1- 哌啶基 ) 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 12及作為適當胺之哌啶為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 45H 56N 9O 3S之[M+H] +計算值：802.4227，實驗值：802.4223。 製備 P39 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 𠰌 啉基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 12及作為適當胺之𠰌啉為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 44H 54N 9O 4S之[M+H] +計算值：804.4019，實驗值：804.4012。 製備 P40 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[3-(3- 羥丙胺基 ) 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 13及作為適當胺之3-胺基丙-1-醇為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 44H 56N 9O 3S之[M+H] +計算值：790.4227，實驗值：790.4220。 製備 P41 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(3- 吡咯啶 -1- 基丙基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 13及作為適當胺之吡咯啶為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 45H 56N 9O 2S之[M+H] +計算值：786.4278，實驗值：786.4273。 製備 P42 ： 3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[4- 甲基 -3-[(5- 甲基 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 步驟 A ： 3-[1-[[3-(2- 羥基乙氧基 )-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[4- 甲基 -3-[(5- 甲基 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
以140 mg (0.22 mmol)來自 製備 12步驟C之產物及54.3 mg (1.5當量) 5-甲基-1,3-苯并噻唑-2-胺為起始物，在130℃下使用 布赫瓦爾德通用程序 I1.5 h，得到126 mg (75%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 12.08/10.89 (brs/brs, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.67 (br, 1H), 7.38 (s, 1H), 7.30 (br, 1H), 7.00 (d, 1H), 4.46 (brs, 1H), 4.00 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.41 (t, 2H), 3.35 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.39 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.98 (qn, 2H), 1.39 (s, 2H), 1.30/1.25 (d+d, 4H), 1.18/1.12 (d+d, 4H), 1.08/1.02 (d+d, 2H), 0.87 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 139.8, 137.5, 123.6, 121.6, 119.0, 62.1, 61.5, 59.0, 52.7, 50.1, 47.0, 46.0, 45.4, 43.3, 30.2, 24.3, 21.7, 21.6, 12.6, 10.9; HRMS-ESI (m/z): C 42H 51N 8O 4S之[M+H] +計算值：763.3760，實驗值：763.3754。 步驟 B ： 3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-[2-( 對甲苯磺醯基氧基 ) 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[4- 甲基 -3-[(5- 甲基 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
向含步驟A之產物(119 mg，0.16 mmol)及三乙胺(0.066 mL，3當量)之DCM (2 mL)中添加4-甲基苯磺酸對甲苯磺醯酯(76 mg，1.5當量)，且攪拌反應混合物1 h。藉由管柱層析(矽膠，DCM及EtOAc作為溶離劑)純化，得到所需產物(93 mg，65%)。 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 12.17/10.83 (brs/brs, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.77 (d, 2H), 7.7 (d, 1H), 7.69 (br, 1H), 7.46 (d, 2H), 7.42 (br, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.00 (d, 1H), 4.07 (t, 2H), 4 (t, 2H), 3.96 (s, 3H), 3.85 (s, 2H), 3.49 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.99 (qn, 2H), 1.29 (s, 2H), 1.17/1.1 (d+d, 4H), 1.12/1.1 (d+d, 4H), 1.02/0.97 (d+d, 2H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 139.8, 137.6, 130.6, 128.1, 123.6, 119.0, 71.5, 58.8, 58.4, 52.7, 49.9, 46.6, 45.9, 45.4, 43.0, 30.1, 24.3, 21.6, 21.6, 21.6, 12.6, 10.9; HRMS-ESI (m/z): C 49H 57N 8O 6S 2之[M+H] +計算值：917.3842，實驗值：917.3840。 步驟 C ： 3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[4- 甲基 -3-[(5- 甲基 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以步驟B之產物及吡咯啶作為適當胺起始，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 45H 56N 9O 3S之[M+H] +計算值：802.4227，實驗值：802.4220。 製備 P43 ： 3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[3-[(5- 甲氧基 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 步驟 A ： 3-[1-[[3-(2- 羥基乙氧基 )-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[3-[(5- 甲氧基 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
使用 布赫瓦爾德通用程序 I ，以140 mg (0.22 mmol) 製備 12 步驟 C之產物及60 mg (1.5當量) 5-甲基-1,3-苯并噻唑-2-胺起始在130℃下2.5 h，得到129 mg (75%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.95 (d, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.67 (br., 1H), 7.38 (s, 1H), 7.02 (br., 1H), 6.80 (dd, 1H), 4.46 (br., 1H), 4.00 (t, 2H), 3.88 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.70 (s, 3H), 3.41 (t, 2H), 3.35 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.16 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.39 (s, 2H), 1.30/1.25 (d+d, 4H), 1.18/1.12 (d+d, 4H), 1.08/1 (d+d, 2H), 0.87 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 139.8, 137.5, 122.6, 119.0, 110.5, 62.1, 61.5, 58.9, 55.8, 52.6, 50.1, 47.0, 46.0, 45.4, 43.3, 30.2, 24.3, 21.7, 12.6, 10.9; HRMS-ESI (m/z): C 42H 51N 8O 5S之[M+H] +計算值：779.3703，實驗值：779.3687。 步驟 B ： 3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-[2-( 對 - 甲苯磺醯基氧基 ) 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[3-[(5- 甲氧基 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸甲酯
向步驟A之產物(122 mg，0.16 mmol)及三乙胺(0.066 mL，3當量)於DCM (2 mL)中添加4-甲基苯磺酸對-甲苯磺醯酯(77 mg，1.5當量)，且攪拌反應混合物1 h。藉由管柱層析(矽膠，DCM及EtOAc作為溶離劑)純化，得到所需產物(79 mg，54%)。 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 12.17/10.83 (brs/brs, 1H), 7.95 (d, 1H), 7.77 (d, 2H), 7.72 (d, 1H), 7.67 (brd, 1H), 7.46 (d, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.02 (br, 1H), 6.80 (d, 1H), 4.07 (t, 2H), 4.00 (t, 2H), 3.86 (s, 2H), 3.80 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.49 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.41 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.99 (qn, 2H), 1.29 (s, 2H), 1.17/1.1 (d+d, 4H), 1.12/1.10 (d+d, 4H), 1.02/0.97 (d+d, 2H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 139.9, 137.6, 130.6, 128.1, 119.0, 110.6, 71.5, 58.8, 58.4, 55.9, 52.6, 49.9, 46.6, 45.9, 45.8, 43.0, 30.1, 24.3, 21.6, 21.6, 12.7, 10.9; HRMS-ESI (m/z): C 49H 57N 8O 7S 2之[M+H] +計算值：933.3792，實驗值：933.3794。 步驟 C ： 3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[3-[(5- 甲氧基 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以步驟B之產物及作為適當胺之吡咯啶為起始物，得到所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 45H 57N 9O 4S之[M+H] +計算值：818.4176，實驗值：818.4172。 製備 P44 ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]-(3,4- 二羥丁基 ) 胺基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-( 甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸 步驟 A ： 5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧基羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[2-(2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環 -4- 基 ) 乙基 -[5- 甲基 -6-[(Z)-[3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 -3- 基 ] 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 布赫瓦爾德通用程序 III，以350 mg 製備物 3h _ 01(0.57 mmol，1當量)及作為適當鹵化物之235 mg 製備物 4a _ 01(0.57 mmol，1當量)為起始物，獲得490 mg (87%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.84 (d, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.47 (d, 1H), 7.44 (td, 1H), 7.32 (brd., 1H), 7.25 (td, 1H), 7.22 (d, 1H), 7.16 (t, 1H), 5.86 (s, 2H), 4.49/4.33 (m+m, 2H), 4.20 (br., 2H), 4.17 (m, 1H), 4.15 (t, 2H), 4.04/3.63 (dd+dd, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.72 (t, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.84 (br., 3H), 2.45 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 1.75 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 1.37/1.24 (s+s, 6H), 0.92 (t, 2H), -0.11 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 129.1, 127.2, 123.5, 123.2, 119.3, 117.5, 115.5, 112.0, 108.6, 73.7, 72.8, 68.9, 68.4, 66.7, 51.9, 44.4, 38.5, 33.8, 30.9, 28.5, 27.3/26.0, 23.3, 23.1, 17.9, 17.8, -1.0; HRMS-ESI (m/z): C 48H 63FN 7O 8S 2Si之[M+H] +計算值：976.3927，實驗值976.3916。 步驟 B ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]-(3,4- 二羥丁基 ) 胺基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-( 甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 脫除保護基及水解通用程序，以作為適當甲酯之步驟A之產物為起始物，獲得所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 33H 35FN 7O 5S 2之[M+H] +計算值：692.2120，實驗值692.2114。 製備 P45 ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]-(3- 羥丙基 ) 胺基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-( 甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸 步驟 A ： 5-[3-[4-[3-[ 三級丁氧基羰基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[3-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基丙基 -[5- 甲基 -6-[(Z)-[3-(2- 三甲基矽基乙氧基甲基 )-1,3- 苯并噻唑 -2- 亞基 ] 胺基 ] 嗒 𠯤 -3- 基 ] 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸甲酯
使用 布赫瓦爾德通用程序 II，以300 mg 製備物 3n _ 01(0.46 mmol，1當量)及作為適當鹵化物之187 mg 製備物 4a _ 01(0.46 mmol，1當量)為起始物，獲得395 mg (83%)所需產物。 1H NMR (500 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 7.82 (dd, 1H), 7.60 (s, 1H), 7.44 (m, 1H), 7.44 (dd, 1H), 7.31 (dd, 1H), 7.24 (m, 1H), 7.20 (m, 1H), 7.15 (t, 1H), 5.84 (s, 2H), 4.39 (t, 2H), 4.20 (s, 2H), 4.14 (t, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.70 (t, 2H), 3.70 (t, 2H), 3.25 (t, 2H), 2.84 (s, 3H), 2.42 (s, 3H), 2.11 (m, 2H), 1.91 (m, 2H), 1.40 (s, 9H), 0.91 (t, 2H), 0.85 (s, 9H), 0.01 (s, 6H), -0.12 (s, 9H); 13C NMR (125 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 162.2, 147.5, 137.6, 129.1, 127.2, 123.4, 123.2, 119.3, 117.5, 115.4, 112.0, 79.7, 72.8, 68.4, 66.7, 60.5, 51.9, 44.6, 38.1, 33.8, 30.9, 30.4, 28.6, 26.3, 23.1, 17.9, 17.8, -0.9, -5.0; HRMS-ESI (m/z): C 50H 71FN 7O 7S 2Si 2之[M+H] +計算值：1020.4373，實驗值1020.4365。 步驟 B ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]-(3- 羥丙基 ) 胺基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-( 甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 脫除保護基及水解通用程序，以作為適當甲酯之 步驟 A之產物為起始物，獲得所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 32H 33FN 7O 4S 2之[M+H] +計算值：662.2014，實驗值662.2016。 製備 P46 ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]-(4,5- 二羥戊基 ) 胺基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-( 甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 脫除保護基及水解通用程序，以作為適當甲酯之 製備 5a _ 01 步驟 A之產物為起始物，獲得所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 34H 37FN 7O 5S 2之[M+H] +計算值：706.2276，實驗值706.2274。 製備 P47 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-( 羧甲基胺基 ) 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 III，以 製備物 16及作為適當胺之2-胺基乙酸甲酯，氯化氫(1:1)為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 42H 50N 9O 5S之[M+H] +計算值：792.3656，實驗值：792.3651。 製備 P48 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-[ 羧甲基 ( 甲基 ) 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 III，以 製備物 16及作為適當胺之2-(甲胺基)乙酸甲酯，氯化氫(1:1)為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 43H 52N 9O 5S之[M+H] +計算值：806.3812，實驗值：806.3807。 製備 P49 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[3-[2- 羥乙基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 13及作為適當胺之2-(甲胺基)乙醇為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 44H 56N 9O 3S之[M+H] +計算值：790.4227，實驗值：790.4227。 製備 P50 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[3-[3- 甲氧基丙基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 13及作為適當胺之3-甲氧基- N-甲基-丙-1-胺為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 46H 60N 9O 3S之[M+H] +計算值：818.4540，實驗值：818.4537。 製備 P51 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[3-(3- 甲氧基丙胺基 ) 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 13及作為適當胺之3-甲氧基丙-1-胺為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 45H 58N 9O 3S之[M+H] +計算值：804.4383，實驗值：804.4380。 製備 P52 ： 3-[1-[[3-[3-( 氮雜環庚烷 -1- 基 ) 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 13及作為適當胺之氮雜環庚烷為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 47H 60N 9O 2S之[M+H] +計算值：814.4591，實驗值：814.4588。 製備 P53 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[3-( 羧甲基胺基 ) 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 III，以 製備物 13及作為適當胺之2-胺基乙酸甲酯，氯化氫(1:1)為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 43H 52N 9O 4S之[M+H] +計算值：790.3863，實驗值：790.3855。 製備 P54 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[3-(2- 羧乙基胺基 ) 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 III，以 製備物 13及作為適當胺之3-胺基丙酸甲酯為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 44H 54N 9O 4S之[M+H] +計算值：804.4019，實驗值：804.4015。 製備 P55 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[3-[ 羧甲基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 III，以 製備物 13及作為適當胺之2-(甲胺基)乙酸甲酯，氯化氫(1:1)為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 44H 54N 9O 4S之[M+H] +計算值：804.4019，實驗值：804.4014。 製備 P56 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[3-[2- 羧乙基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 III，以 製備物 13及作為適當胺之3-(甲胺基)丙酸乙酯，氯化氫(1:1)為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 45H 56N 9O 4S之[M+H] +計算值：818.4176，實驗值：818.4167。 製備 P57 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-[3- 羧基丙基 ( 甲基 ) 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 III，以 製備物 16及作為適當胺之4-(甲胺基)丁酸甲酯，氯化氫(1:1)為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 45H 56N 9O 5S之[M+H] +計算值：834.4125，實驗值：834.4115。 製備 P58 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[3-[3- 羧基丙基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 III，以 製備物 13及作為適當胺之4-(甲胺基)丁酸甲酯，氯化氫(1:1)為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 46H 58N 9O 4S之[M+H] +計算值：832.4332，實驗值：832.4324。 製備 P59 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-(3- 羥丙胺基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸 步驟 A ： 3-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基 -N- 丙 -2- 炔基 - 丙 -1- 胺
在50℃下攪拌0.70 mL (3.0 mmol) 3-溴丙氧基-三級丁基-二甲基-矽烷、1.9 mL (10當量)丙炔胺及1.6 mL (3當量) DIPEA於乙腈(15 mL)中之混合物，直至不再觀測到進一步轉化。濃縮反應混合物，用DCM稀釋，且用飽和NaHCO 3及鹽水萃取。合併之有機層經乾燥且濃縮，得到呈定量產率之所需產物。 1 H NMR(500 MHz, dmso-d6) δ ppm 3.62 (t, 2H), 3.27 (d, 2H), 3.02 (t, 1H), 2.59 (t, 2H), 2.19 (brs, 1H), 1.57 (m, 2H), 0.86 (s, 9H), 0.02 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 73.9, 61.5, 45.2, 37.9, 32.7, 26.3, -4.8; HRMS (EI)(m/z): C 11H 22NOSi之[M-CH 3] +計算值：212.1471，實驗值：212.1467。 步驟 B ： 5-[3-[4-[3-[3-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基丙胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸乙酯
使用 薗頭通用程序，以1.0 g (1.64 mmol) 製備 15之產物及作為適當炔烴之737 mg (2當量)步驟A之產物為起始物，得到1.16 g (96%)所需產物。 1 H NMR(500 MHz, dmso-d6) δ ppm 45.2 (t, 2H), 7.24 (dd, 1H), 7.17 (dd, 1H), 7.14 (t, 1H), 4.27 (br., 2H), 4.25 (q, 2H), 4.12 (t, 2H), 3.65 (t, 2H), 3.6 (s, 2H), 3.25 (t, 2H), 2.89 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.11 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.63 (m, 2H), 1.28 (t, 3H), 0.84 (s, 9H), 0.02 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 128.8, 119.1, 115.4, 68.3, 61.3, 60.7, 46.3, 45.2, 38.4, 32.4, 30.8, 26.3, 24.2, 23.1, 19.7, 15.7, 14.6, -4.8; HRMS-ESI(m/z): C 35H 48ClFN 5O 4SSi之[M+H] +計算值：716.2869，實驗值：716.2868。 步驟 C ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[3-[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基丙胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸乙酯
使用 布赫瓦爾德通用程序 I，以1.16 g (1.57 mmol) 步驟 B之產物及730 mg (2當量) 1 , 3 - 苯并噻唑 - 2 - 胺為起始物，得到598 mg (45%)所需產物。 1 H NMR(500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.87 (d, 1H), 7.49 (d, 1H), 7.37 (td, 1H), 7.25 (dd, 1H), 7.19 (t, 1H), 7.17 (t, 1H), 7.17 (m, 1H), 4.26 (br., 2H), 4.25 (q, 2H), 4.14 (t, 2H), 3.63 (t, 2H), 3.57 (s, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.69 (t, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.13 (m, 2H), 2.04 (m, 2H), 1.61 (m, 2H), 1.28 (t, 3H), 0.84 (s, 9H), 0.02 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 128.9, 126.5, 122.5, 122.3, 119.1, 116.3, 115.5, 68.4, 61.3, 60.6, 46.3, 45.2, 38.4, 32.4, 31.1, 26.3, 23.9, 23.2, 20.3, 14.6, 12.9, -4.9; HRMS-ESI(m/z): C 42H 53FN 7O 4S 2Si之[M+H] +計算值：830.3354，實驗值：830.3347。 步驟 D ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-(3- 羥丙胺基 ) 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
在60℃下攪拌590 mg (0.71 mmol) 步驟 C之產物及298 mg LiOH×H 2O (10當量)於7 mL THF/水(1:1)中之混合物，直至不再觀測到進一步轉化。反應混合物用0.71 mL (12當量)在0℃下之濃鹽酸(pH = 2-3)處理且攪拌，直至不再觀測到進一步轉化。在濃縮反應混合物以移除THF且凍乾之後，將固體溶解於6N NH 3於MeOH中之溶液中且藉由逆相層析(使用25 mM NH 4HCO 3及MeCN作為溶離劑純化，得到100 mg (21%)所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 34H 35FN 7O 4S 2之[M+H] +計算值：688.2176，實驗值：688.2179。 製備 P60 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-[[(3S)-3,4- 二羥丁基 ] 胺基 ] 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
向含 製備 18之產物(0.066 mmol)之乙腈(30 ml/mmol)中添加2-[(4S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基]乙胺，氯化氫(1:1) (3當量)且將反應混合物在60℃下攪拌48 h。在添加KOH溶液(5當量)之後，將反應混合物在60℃下攪拌1 h。在添加HCl溶液(10當量)之後，將反應混合物在60℃下攪拌1 h。藉由製備型HPLC (使用乙腈及5mM NH 4HCO 3水溶液作為溶離劑)純化產物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 42H 52N 9O 5S之[M+H] +計算值：794.3812，實驗值：794.3807。 製備 P61 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[5- 甲基 -1-[[3-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ] 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 18及作為適當胺之吡咯啶為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 42H 50N 9O 3S之[M+H] +計算值：760.3757，實驗值：760.3753。 製備 P62 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-[3- 羥丙基 ( 甲基 ) 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 16及作為適當胺之3-(甲胺基)丙-1-醇為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 44H 56N 9O 4S之[M+2H] 2+計算值：403.7127，實驗值：403.7126。 製備 P63 ： 3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[3-[(5- 氟 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 步驟 A ： 6-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-[2-( 對甲苯磺醯基氧基 ) 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
向含260 mg (0.35 mmol) 製備物 16 步驟 C 之2 mL二氯甲烷中添加0.5 mL (10當量) N , N-二乙基乙胺及457 mg (4當量) 4-甲基苯磺酸對甲苯磺醯酯，接著將混合物攪拌0.5 h。藉由管柱層析(矽膠，使用DCM及EtOAc作為溶離劑)純化產物，得到259 mg (85%)所需產物。 1 H NMR(500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.85 (d, 1H), 7.76 (d, 2H), 7.71 (d, 1H), 7.45 (d, 2H), 7.40 (s, 1H), 7.16 (d, 2H), 6.89 (d, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.05 (t, 2H), 3.96 (t, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.46 (t, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.98 (qn, 2H), 1.29 (s, 2H), 1.13/1.11 (d+d, 4H), 1.11/1.06 (d+d, 4H), 0.98/0.90 (d+d, 2H), 0.81 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 140.1, 137.7, 130.6, 130.2, 128.2, 120.5, 114.3, 71.4, 66.8, 58.9, 58.4, 55.6, 49.8, 46.5, 46.0, 45.8, 42.9, 30.0, 24.6, 21.6, 21.0, 15.5, 10.8; HRMS-ESI(m/z): C 48H 56ClN 6O 7S之[M+H] +計算值：895.3620，實驗值：895.3619。 步驟 B ： 6-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
向含259 mg (0.29 mmol) 步驟 A之產物的3 mL乙腈中添加吡咯啶(3當量)，且將反應混合物在55℃下攪拌18 h。藉由管柱層析(矽膠，使用DCM及MeOH作為溶離劑)純化產物，得到221 mg (98%)所需產物。 1 H NMR(500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.85 (d, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.18 (m, 2H), 6.91 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 3.96 (m, 2H), 3.86 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.60-2.90 (brs, 6H), 3.59 (brt, 2H), 2.87 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 2.10-1.70 (brs, 4H), 1.98 (m, 2H), 1.48-0.94 (m, 12H), 0.86 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 140.1, 137.7, 130.2, 120.5, 114.3, 66.8, 58.9, 56.9, 55.6, 46.0, 30.0, 24.6, 21.0, 15.5, 10.9; HRMS-ESI(m/z): C 45H 57ClN 7O 4之[M+H] +計算值：794.4161，實驗值：794.4160。 步驟 C ： 3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[3-[(5- 氟 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
將0.22 g (0.28 mmol) 步驟 B之產物、93.5 mg (2當量) 5-氟-1,3-苯并噻唑-2-胺、25 mg (0.1當量) Pd 2(dba) 3、32 mg (0.2當量) XantPhos及0.14 mL (3當量) DIPEA於2 mL丁-2-醇中之混合物在100℃下在微波反應器中保持1 h。藉由管柱層析(使用DCM/MeOH作為溶離劑)純化產物，得到偶合產物，將其在50℃下用含3當量KOH之2 mL乙腈處理18 h。藉由製備型HPLC層析(使用乙腈及5mM NH 4HCO 3水溶液作為溶離劑)純化水解產物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 44H 53FN 9O 3S之[M+H] +計算值：806.3976，實驗值：806.3971。 製備 P64 ： 3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[4- 甲基 -3-[(6- 甲基 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 步驟 A ： 3-[1-[[3-(2- 羥基乙氧基 )-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[4- 甲基 -3-[(6- 甲基 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
將250 mg (0.34 mmol) 製備物 16 步驟 C 、112 mg (2當量) 6-甲基-1,3-苯并噻唑-2-胺、31 mg (0.1當量) Pd 2(dba) 3、39 mg (0.2當量) XantPhos及0.17 mL (3當量) DIPEA於2.5 mL環己醇中之混合物保持於130℃下2 h。藉由管柱層析(使用DCM/MeOH作為溶離劑)純化產物，得到206 mg (71%)所需產物。 1 H NMR(300 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.93 (d, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.62 (brs, 1H), 7.45 (brs, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.19 (m, 2H), 7.16 (brd, 1H), 6.91 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.45 (brs, 1H), 3.99 (m, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.40 (t, 2H), 3.34 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.37 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.43-0.9 (m, 12H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (300 MHz, dmso-d6) δ ppm 140.0, 137.6, 130.2, 127.5, 121.7, 118.9, 114.3, 66.7, 62.1, 61.5, 59.0, 55.6, 45.4, 30.1, 24.2, 21.7, 21.4, 12.6, 10.9; HRMS-ESI(m/z): C 49H 57N 8O 5S之[M+H] +計算值：869.4173，實驗值：869.4167。 步驟 B ： 3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-[2-( 對甲苯磺醯基氧基 ) 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[4- 甲基 -3-[(6- 甲基 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
向含203 mg (0.23 mmol) 步驟 A之產物之2 mL二氯甲烷中添加0.16 mL (5當量) N , N-二乙基乙胺及150 mg (2當量) 4-甲基苯磺酸對甲苯磺醯酯，接著將混合物攪拌18 h。藉由管柱層析(矽膠，使用DCM及EtOAc作為溶離劑)純化產物，得到84 mg (38%)所需產物。 1 H NMR(500 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.74 (br., 1H), 7.94 (d, 1H), 7.76 (dm, 2H), 7.69 (d, 1H), 7.61 (br., 1H), 7.45 (dm, 2H), 7.44 (br., 1H), 7.40 (s, 1H), 7.18 (dm, 2H), 7.17 (brd., 1H), 6.90 (dm, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.05 (t, 2H), 3.99 (t, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.47 (t, 2H), 2.84 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.37 (brs., 3H), 2.31 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.35-0.87 (m, 12H), 0.81 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 140.0, 137.7, 130.6, 130.1, 128.1, 127.5, 121.8, 118.9, 114.3, 71.5, 66.7, 58.9, 58.4, 55.6, 45.4, 30.0, 24.3, 21.6, 21.6, 21.4, 12.5, 10.9; HRMS-ESI(m/z): C 56H 63N 8O 7S 2之[M+H] +計算值：1023.4261，實驗值：1023.4265。 步驟 C ： 3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[4- 甲基 -3-[(6- 甲基 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
向含84 mg (0.082 mmol) 步驟 B之產物的1 mL乙腈中添加吡咯啶(3當量)，且將反應混合物在55℃下攪拌18 h。在用5當量KOH處理後，將混合物在55℃下攪拌1 h且藉由製備型HPLC層析(使用乙腈及5mM NH 4HCO 3水溶液作為溶離劑)純化產物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 45H 56N 9O 3S之[M+H] +計算值：802.4227，實驗值：802.4227。 製備 P65 ： 3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[3-[(6- 氟 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 步驟 A ： 6-[3-[(6- 氟 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-(2- 羥基乙氧基 )-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
將250 mg (0.34 mmol) 製備物 16 步驟 C 、114 mg (2當量) 6-氟-1,3-苯并噻唑-2-胺、31 mg (0.1當量) Pd 2(dba) 3、39 mg (0.2當量) XantPhos及0.17 mL (3當量) DIPEA於2.5 mL環己醇中之混合物保持於130℃下2 h。藉由管柱層析(使用DCM/MeOH作為溶離劑)純化產物，得到158 mg (55%)所需產物。 1 H NMR(500 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.87 (brs, 1H), 7.94 (d, 1H), 7.77 (brd, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.57 (brs, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.20 (m, 1H), 7.19 (m, 2H), 6.91 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.45 (brs, 1H), 3.99 (m, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.40 (t, 2H), 3.34 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.31 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.43-0.91 (m, 12H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 140.0, 137.7, 130.2, 118.9, 114.3, 114.0, 108.4, 66.7, 62.1, 61.5, 59.0, 55.6, 45.4, 30.1, 24.3, 21.6, 12.5, 10.9; HRMS-ESI(m/z): C 48H 54FN 8O 5S之[M+H] +計算值：873.3922，實驗值：873.3917。 步驟 B ： 3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-[2-( 對甲苯磺醯基氧基 ) 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[3-[(6- 氟 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
向含158 mg (0.23 mmol) 步驟 A之產物之2 mL二氯甲烷中添加0.125 mL (5當量) N , N-二乙基乙胺及117 mg (2當量) 4-甲基苯磺酸對甲苯磺醯酯，接著將混合物攪拌18 h。藉由管柱層析(矽膠，使用DCM及EtOAc作為溶離劑)純化產物，得到71 mg (41%)所需產物。 1 H NMR(500 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.88 (brs, 1H), 7.94 (d, 1H), 7.77 (br., 1H), 7.76 (dm, 2H), 7.69 (d, 1H), 7.59 (br., 1H), 7.45 (dm, 2H), 7.40 (s, 1H), 7.21 (t, 1H), 7.17 (dm, 2H), 6.90 (dm, 2H), 5.09 (s, 2H), 4.05 (t, 2H), 4.00 (m, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.47 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.35-0.87 (m, 12H), 0.81 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 140.0, 137.7, 130.6, 130.1, 128.1, 118.9, 114.3, 114.0, 108.4, 71.5, 66.7, 58.9, 58.4, 55.6, 45.4, 30.0, 24.3, 21.6, 21.6, 12.5, 10.9; HRMS-ESI(m/z): C 55H 60FN 8O 7S 2之[M+H] +計算值：1027.4010，實驗值：1027.4003。 步驟 C ： 3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[3-[(6- 氟 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
向含71 mg (0.069 mmol) 步驟 B之產物的1 mL乙腈中添加吡咯啶(3當量)，且將反應混合物在55℃下攪拌18 h。在用5當量KOH處理後，將混合物在55℃下攪拌1 h且藉由製備型HPLC層析(使用乙腈及5 mM NH 4HCO 3水溶液作為溶離劑)純化產物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 44H 53FN 9O 3S之[M+H] +計算值：806.3976，實驗值：806.3969。 製備 P66 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[3-( 二甲胺基 ) 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 13及作為適當胺之 N- 甲基甲胺為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 43H 54N 9O 2S之[M+H] +計算值：760.4121，實驗值：760.4114。 製備 P67 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[5- 甲基 -1-[[3-[2-(4- 甲基哌 𠯤 -1- 基 ) 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ] 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 18及作為適當胺之1-甲基哌𠯤為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 43H 53N 10O 3S之[M+H] +計算值：789.4022，實驗值：789.4014。 製備 P68 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[3-[3- 羥丙基 ( 甲基 ) 胺基 ] 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 13及作為適當胺之3-(甲胺基)丙-1-醇為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 45H 58N 9O 3S之[M+H] +計算值：804.4383，實驗值：804.4375。 製備 P69 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[3-[[(3S)-3,4- 二羥丁基 ] 胺基 ] 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
向含 製備 13之產物(0.074 mmol)之2 mL乙腈中添加2-[(4S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基]乙胺，氯化氫(1:1) (4當量)且將反應混合物在60℃下攪拌18 h。在添加KOH溶液(5當量)之後，將反應混合物在60℃下攪拌1 h。在添加HCl溶液(10當量)之後，將反應混合物在60℃下攪拌0.5 h。藉由製備型HPLC層析(使用乙腈及5mM NH 4HCO 3水溶液作為溶離劑)純化產物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 45H 58N 9O 4S之[M+H] +計算值：820.4332，實驗值：820.4323。 製備 P70 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-[2- 羧乙基 ( 甲基 ) 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 III，以 製備物 16及作為適當胺之3-(甲胺基)丙酸乙酯，氯化氫(1:1)為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 44H 54N 9O 5S之[M+H] +計算值：820.3968，實驗值：820.3962。 製備 P71 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-(2- 羧乙基胺基 ) 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 III，以 製備物 16及作為適當胺之3-胺基丙酸甲酯為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 43H 52N 9O 5S之[M+H] +計算值：806.3812，實驗值：806.3793。 製備 P72 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[3-(4- 羥基丁胺基 ) 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 13及作為適當胺之4-胺基丁-1-醇為起始物，得到所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 45H 58N 9O 3S之[M+H] +計算值：804.4383，實驗值：804.4383。 製備 P73 ： [6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-2- 吡啶基 ] 甲醇 步驟 A ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
使用無水解步驟之 胺 取代及水解通用程序 I，以 製備物 16及作為適當胺之吡咯啶為起始物，得到190 mg所需產物。 1 H NMR(500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.95 (d, 1H), 7.81 (d, 1H), 7.68 (d, 1H), 7.50 (brd., 1H), 7.39 (s, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.19 (dm, 2H), 7.16 (t, 1H), 6.91 (dm, 2H), 5.10 (s, 2H), 3.99 (t, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.41 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.46 (t, 2H), 2.41 (br., 4H), 2.32 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.62 (m, 4H), 1.40 (s, 2H), 1.28/1.22 (d+d, 4H), 1.19/1.13 (d+d, 4H), 1.03/0.94 (d+d, 2H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 140.0, 137.7, 130.2, 126.4, 122.4, 122.1, 118.9, 114.3, 66.7, 59.5, 59.0, 56.6, 55.6, 54.5, 50.0, 46.9, 46.0, 45.4, 43.2, 30.1, 24.3, 23.6, 21.7, 12.6, 10.9; HRMS-ESI(m/z): C 52H 62N 9O 4S之[M+H] +計算值：908.4645，實驗值：908.4633。 步驟 B ： [6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-2- 吡啶基 ] 甲醇
向含190 mg (0.21 mmol) 步驟 A之產物之4.2 mL四氫呋喃中添加24 mg (3當量) LiAlH 4，且將混合物攪拌40 min。在用含0.1% TFA之MeOH淬滅且過濾之後，經由製備型HPLC (MeCN及0.1% TFA溶液作為溶離劑)純化產物，得到110 mg (67%)所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 44H 56N 9O 2S之[M+H] +計算值：774.4277，實驗值：774.4269。 製備 P74 ： [6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-2- 吡啶基 ]- 吡咯啶 -1- 基 - 甲酮
在0℃下向含50 mg (0.063 mmol) P21、9.37 mg (2.1當量)吡咯啶及0.032 mL (3當量) DIPEA之0.5 mL DMF中添加36 mg (1.5當量) HATU，接著將混合物在室溫下攪拌18 h。在將反應混合物倒入水中之後，濾出沈澱固體，用水洗滌且乾燥。藉由管柱層析(胺基管柱，使用DCM及MeOH作為溶離劑)純化產物，得到29 mg (65%)所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 48H 61N 10O 2S之[M+H] +計算值：841.4699，實驗值：841.4698。 製備 P75 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] -N- 異丙基 - 吡啶 -2- 甲醯胺
在0℃下向含50 mg (0.063 mmol) P21、9.37 mg (2當量)丙-2-胺及0.032 mL (3當量) DIPEA之0.5 mL DMF中添加36 mg (1.5當量) HATU，接著將混合物在室溫下攪拌18 h。在將反應混合物倒入水中之後，濾出沈澱固體，用水洗滌且乾燥。藉由管柱層析(胺基管柱，使用DCM及MeOH作為溶離劑)純化產物，得到34 mg (76%)所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 47H 61N 10O 2S之[M+H] +計算值：829.4699，實驗值：829.4694。 製備 P76 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲醯胺
向含50 mg (0.063 mmol) P21及18 mg (1.3當量)三級丁氧羰基碳酸三級丁酯之0.5 mL二㗁烷中添加0.006 mL吡啶，接著將混合物攪拌10分鐘。在用6.5 mg (1.3當量) NH 4HCO 3處理混合物後，將反應物攪拌5天。藉由管柱層析(胺基管柱，使用DCM及MeOH作為溶離劑)純化產物，得到17 mg (47%)所需產物。 HRMS-ESI(m/z): C 44H 55N 10O 2S之[M+H] +計算值：787.4230，實驗值：787.4226。 實例 2. 有效負載前驅體之合成及表徵
「PMB經保護之有效負載」亦稱為出於製備連接子/有效負載之目的考慮之有效負載的前驅體。 製備 前驅體 A ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-[2-( 對甲苯磺醯基氧基 ) 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯 步驟 A ： 3-[1-[[3-[2-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[3-(3,6- 二氯 -5- 甲基 - 嗒 𠯤 -4- 基 ) 丙基胺基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
將來自 製備 11之產物(9.78 g，18.1 mmol)、來自 製備 7之產物(13.6 g，1.1當量)、Pd(AtaPhos) 2Cl 2(801 mg，0.1當量)及Cs 2CO 3(17.7 g，3當量)於1,4-二㗁烷(109 mL)及H 2O (18 mL)中之混合物在80℃下攪拌8 h。在用鹽水淬滅冷卻之反應物之後，用EtOAc萃取混合物且合併之有機層經乾燥且濃縮，得到所需產物(21.9 g，119%)，其不經進一步純化即用於下一步驟中。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.68-7.35 (m, 10H), 7.31 (d, 1H), 7.27 (s, 1H), 7.11 (dm, 2H), 6.98 (t, 1H), 6.83 (dm, 2H), 6.62 (d, 1H), 4.99 (s, 2H), 3.80 (s, 2H), 3.70 (s, 3H), 3.65 (t, 2H), 3.44 (t, 2H), 3.34 (q, 2H), 2.84 (m, 2H), 2.34 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.77 (m, 2H), 1.38-0.89 (m, 12H), 0.97 (s, 9H), 0.82 (s, 6H); 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 140.4, 137.6, 130.1, 114.2, 110.3, 66.3, 64.4, 61.7, 59.0, 55.5, 40.9, 30.1, 28.1, 27.3, 27.1, 16.4, 10.8; HRMS-ESI (m/z): C 57H 69Cl 2N 6O 5Si之[M+H] +計算值：1015.4475，實驗值：1015.4474。 步驟 B ： 3-[1-[[3-[2-[ 三級丁基 ( 二苯基 ) 矽基 ] 氧基乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ) 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
將來自步驟A之產物(21.9 g，21.6 mmol)、Cs 2CO 3(14 g，2當量)、DIPEA (7.5 mL，2當量)及Pd(Ataphos) 2Cl 2(954 mg，0.1當量)於1,4-二㗁烷(108 mL)中之混合物在110℃下攪拌18 h。在用水淬滅且用EtOAc萃取之後，合併之有機相經乾燥，濃縮且藉由管柱層析(矽膠，DCM及EtOAc作為溶離劑)純化，得到所需產物(8.4 g，40%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.84 (d, 1H), 7.67 (d, 1H), 7.65 (d, 4H), 7.44 (t, 2H), 7.41 (s, 1H), 7.40 (t, 4H), 7.15 (d, 2H), 6.87 (d, 2H), 5.07 (s, 2H), 3.96 (t, 2H), 3.83 (s, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.66 (t, 2H), 3.45 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.97 (qn, 2H), 1.38 (s, 2H), 1.25/1.18 (d+d, 4H), 1.18/1.12 (d+d, 4H), 1.01/0.93 (d+d, 2H), 0.97 (s, 9H), 0.82 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 166.8, 159.7, 156.3, 153.6, 150.8, 147.7, 140.1, 137.6, 137.3, 136.0, 135.6, 133.8, 130.2, 130.2, 129.1, 128.2, 127.7, 123.0, 120.4, 115.6, 114.3, 74.2, 66.8, 64.4, 61.7, 59.3, 55.6, 49.9, 46.8, 46.0, 46.0, 43.3, 39.7, 33.6, 30.1, 27.1, 24.6, 21.0, 19.3, 15.5, 10.8; HRMS-ESI (m/z): C 57H 68ClN 6O 5Si之[M+H] +計算值：979.4709，實驗值：979.4710。 步驟 C ： 6-(3- 氯 -4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 )-3-[1-[[3-(2- 羥基乙氧基 )-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
在0℃下向含步驟B之產物(8.4 g，8.6 mmol)之THF (86 mL)中添加1 M TBAF於THF (9.4 mL，1.1當量)中之溶液且將反應混合物在室溫下攪拌1.5 h。在用NH 4Cl飽和溶液淬滅且用EtOAc萃取之後，合併之有機相用鹽水洗滌，乾燥，濃縮且藉由管柱層析(矽膠，DCM及MeOH作為溶離劑)純化，得到所需產物(4.7 g，74%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.85 (d, 1H), 7.70 (d, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.18 (d, 2H), 6.90 (d, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.45 (t, 1H), 3.96 (t, 2H), 3.84 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.40 (q, 2H), 3.33 (t, 2H), 2.86 (t, 2H), 2.29 (s, 3H), 2.09 (s, 3H), 1.98 (qn, 2H), 1.39 (s, 2H), 1.27/1.21 (d+d, 4H), 1.18/1.12 (d+d, 4H), 1.03/0.94 (d+d, 2H), 0.84 (s, 6H); 13C NMR (100 MHz, DMSO-d 6) δ ppm 166.8, 159.7, 156.3, 153.6, 150.8, 147.8, 140.2, 137.6, 137.3, 136.0, 130.2, 129.1, 127.7, 123.0, 120.4, 115.6, 114.3, 74.0, 66.8, 62.2, 61.5, 59.0, 55.6, 50.0, 46.9, 46.0, 46.0, 43.3, 39.7, 33.5, 30.1, 24.6, 21.0, 15.5, 10.9; HRMS-ESI (m/z): C 41H 50ClN 6O 5之[M+H] +計算值：741.3531，實驗值：741.3530。 步驟 D ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-(2- 羥基乙氧基 )-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
將步驟C之產物(4.7 g，6.3 mmol)、1,3-苯并噻唑-2-胺(1.9 g，2當量)、Pd 2dba 3(580 mg，0.1當量)、XantPhos (730 mg，0.2當量)及DIPEA (3.3 mL，3當量)於環己醇(38 mL)中之混合物在130℃下攪拌2 h。藉由管柱層析(矽膠，庚烷、EtOAc及MeCN作為溶離劑)純化，得到所需產物(3.83 g，71%)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.95 (d, 1H), 7.81 (brd, 1H), 7.69 (d, 1H), 7.49 (brs, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.35 (m, 1H), 7.19 (m, 2H), 7.16 (m, 1H), 6.91 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.46 (t, 1H), 3.99 (m, 2H), 3.85 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.40 (m, 2H), 3.34 (t, 2H), 2.85 (t, 2H), 2.32 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.99 (m, 2H), 1.45-0.9 (m, 12H), 0.84 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z): C 48H 55N 8O 5S之[M+H] +計算值：855.4016，實驗值：855.4011。 步驟 E ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-[2-( 對甲苯磺醯基氧基 ) 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
向含來自步驟D之產物(3.83 g，4.48 mmol)及三乙胺(1.87 mL，3當量)之DCM (45 mL)中添加4-甲基苯磺酸對甲苯磺醯酯(2.19 g，1.5當量)，且攪拌反應混合物2 h。藉由管柱層析(矽膠，庚烷及EtOAc作為溶離劑)純化，得到2.5 g (55%)所需產物。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d 6): δ ppm 7.95 (d, 1H), 7.81 (brs, 1H), 7.76 (m, 2H), 7.45 (brs, 1H), 7.45 (m, 2H), 7.40 (s, 1H), 7.35 (m, 1H), 7.18 (m, 2H), 7.17 (m, 1H), 6.97 (d, 1H), 6.90 (m, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.05 (m, 2H), 4.00 (m, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.47 (m, 2H), 2.85 (m, 2H), 2.40 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 1.98 (m, 2H), 1.87-1.34 (m, 12H), 0.81 (s, 6H); HRMS-ESI (m/z): C 55H 61N 8O 7S 2之[M+H] +計算值：1009.4104，實驗值：1009.4102。 胺取代程序 III
向含 製備前驅體 A之產物之乙腈及 N-甲基-2-吡咯啶酮之1:1混合物(10 mL/mmol)中添加適當胺(3-10當量)且將反應混合物在50℃下攪拌2-24 h。在藉由製備型逆相層析法純化產物之後，獲得所需產物。 P37 之前驅體： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-[4- 羥丁基 ( 甲基 ) 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
使用 胺取代程序 III及作為適當胺之4-(甲胺基)丁-1-醇，獲得所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 53H 66N 9O 5S之[M+H] +計算值：940.4907，實驗值940.4906。 P36 之前驅體： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-[3- 甲氧基丙基 ( 甲基 ) 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
使用 胺取代程序 III及作為適當胺之3-甲氧基- N-甲基-丙-1-胺，獲得所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 53H 66N 9O 5S之[M+H] +計算值：940.4907，實驗值940.4904. P35 之前驅體： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-[2- 羥乙基 ( 甲基 ) 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
使用 胺取代程序 III及作為適當胺之2-(甲胺基)乙醇，獲得所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 51H 62N 9O 5S之[M+H] +計算值：912.4594，實驗值912.4592。 P27 之前驅體： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-( 二甲胺基 ) 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
使用 胺取代程序 III及作為適當胺之二甲胺，獲得所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 50H 60N 9O 4S之[M+H] +計算值：882.4489，實驗值882.4490。 P21 之前驅體： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3,5- 二甲基 -7-(2- 吡咯啶 -1- 基乙氧基 )-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
使用 胺取代程序 III及作為適當胺之吡咯啶，獲得所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 52H 62N 9O 4S之[M+2H] 2+計算值：454.7362，實驗值454.7365。 P25 之前驅體： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-(3- 羥丙胺基 ) 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
使用 胺取代程序 III及作為適當胺之3-胺基丙-1-醇，獲得所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 51H 62N 9O 5S之[M+H] +計算值：912.4591，實驗值912.4581。 P19 之前驅體： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5 H- 吡啶并 [2,3- c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-[2-[(4S)-2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環 -4- 基 ] 乙基胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 (4- 甲氧基苯基 ) 甲酯
使用 胺取代程序 III及作為適當胺之2-[(4S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基]乙胺，獲得所需產物。HRMS-ESI (m/z): C 55H 68N 9O 6S之[M+H] +計算值：982.5013，實驗值982.5000。 實例 3. 連接子、連接子 - 有效負載及其前驅體之合成及表徵
例示性連接子、連接子-有效負載及其前驅體使用此實例中所述之例示性方法合成。 縮寫：CuI                 碘化銅(I) DMA               二甲基乙醯胺 DCC                二環己基碳化二亞胺 DCM               二氯甲烷 DEA                N-乙基乙胺 DFA                二氟乙酸 DIPEA：         N,N-二異丙基乙胺 DMF：            二甲基甲醯胺 DMSO：          二甲亞碸 DTT                二硫蘇糖醇 EDC: N-乙基, N'-二甲胺基-丙基碳化二亞胺 EEDQ              2-乙氧基-2H-喹啉-1-甲酸乙酯 ESI                 電噴霧電離 FA                  甲酸 Fmoc：            茀基甲氧羰基 Fmoc-Cit-OH   (2S)-2-(9H-茀-9-基甲氧基羰基胺基)-5-脲基-戊酸 HBTU：             (2-(1 H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲基六氟磷酸鹽 HOAt：           1-羥基-7-氮雜苯并三唑 HPLC              高效液相層析 HRMS             高解析度質譜 LC-MS            液相層析質譜 L/P                  連接子-有效負載 MgSO 4硫酸鎂 MMAE：         (2S)-N-[(1S)-1-[[(1S,2R)-4-[(2S)-2-[(1R,2R)-3-[[(1R,2S)-2-羥基-1-甲基-2-苯基-乙基]胺基]-1-甲氧基-2-甲基-3-側氧基-丙基]吡咯啶-1-基]-2-甲氧基-1-[(1S)-1-甲基丙基]-4-側氧基-丁基]-甲基-胺甲醯基]-2-甲基-丙基]-3-甲基-2-(甲胺基)丁醯胺(MMAE) Na 2SO 4硫酸鈉 NH 4Cl             氯化銨 NMP               N-甲基吡咯啶酮 Pd(PPh 3) 2Cl 2二氯-三(三苯基膦)鈀 PBr 3三溴膦Pt/C 10%          鉑/碳10% RT                  室溫 SOCl 2亞硫醯氯 THF                四氫呋喃 TBAF              四丁基氟化銨 TBAI               四丁基碘化銨 TFA                三氟乙酸 Tris                 參(羥甲基)胺基甲烷 TSTU：           [二甲胺基-(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基-亞甲基]-二甲基-銨； TFB                四氟硼酸鹽 化學命名
IUPAC首選名稱係使用由Biovia® Draw 2018(版本18.1 .NET)提供之化學命名功能生成。 材料、方法及通用程序
所有獲自商業來源之試劑均不經進一步純化即使用。無水溶劑獲自商業來源且未經進一步乾燥即使用。急驟層析在具有預裝填矽膠濾筒(Macherey-Nagel Chromabond Flash)之CombiFlash Rf (Teledyne ISCO)上進行。使用塗佈有Merck Type 60 F254矽膠之5×10 cm板進行薄層層析。微波加熱在CEM Discover®儀器中進行。
在400 MHz Bruker Avance或500 MHz Avance Neo光譜儀上使用DMSO- d 6 或CDCl 3作為溶劑進行 1H-NMR量測。 1H NMR資料呈化學位移值形式，以百萬分率(ppm)給出，使用溶劑之殘餘峰(對於DMSO- d 6 為2.50 ppm及對於CDCl 3為7.26 ppm)作為內標。分裂圖案稱為：s (單峰)、d (二重峰)、t (三重峰)、q (四重峰)、quint (五重峰)、m (多重峰)、br s (寬單峰)、br t(寬三重峰)、dd (二重峰之二重峰)、td (二重峰之三重峰)、dt (三重峰之二重峰)、ddd (二重峰之二重峰之二重峰)。IR量測在配備有ATR Golden Gate裝置(SPECAC)之Bruker Tensor 27上進行。HRMS量測在LTQ OrbiTrap Velos Pro質譜儀(ThermoFisher Scientific)上進行。將樣品以大約0.01至0.05 mg/mL之範圍內的濃度溶解於CH 3CN/H 2O (2/1:v/v)中，且藉由以0.1 mL/min之流速注射2 µL引入來源中。ESI電離參數如下：3.5 kV及350℃轉移離子毛細管。所有光譜均在正離子模式下採集，其中分辨力為30,000或60,000，使用鎖定質量。
HRMS量測在LTQ OrbiTrap Velos Pro質譜儀(ThermoFisher Scientific GmbH, Bremen, Germany)上進行。將樣品以大約0.01至0.05 mg/mL之範圍內的濃度溶解於CH 3CN/H 2O (2/1:v/v)中，且藉由以0.1 mL/min之流速注射2 µL引入來源中。ESI電離參數如下：3.5 kV及350℃轉移離子毛細管。所有光譜均在正離子模式下採集，其中分辨力為30 000或60 000，使用鎖定質量。 UPLC®-MS ：
UPLC®-MS資料使用具有以下參數(表10)之儀器採集： 表10. UPLC®-MS參數
儀器 具有二極體陣列UV偵測器「PDA」及「ZQ偵測器2」質量裝置及MassLinks軟體之Waters Aquity A級。
ZQ偵測器2 MS掃描0.15至6 min及100至2372 Da
PDA偵測器  190至400 nm
管柱  Aquity UPLC ®BEH管柱C18，1.7 µm，130 Å，2.1×50 mm 在40℃及0.6 mL/min之流速下使用之管柱
溶劑A 水+0.02% TFA
溶劑B 乙腈+0.02% TFA
梯度 在5 min內2% B至100% B，隨後用100% B洗滌0.3 min，且在2% B下平衡0.5 min以用於下一次注射(總梯度6 min)。
製備型 HPLC ：
製備型HPLC (「Prep-HPLC」)資料使用具有以下參數(表11)之儀器採集： 表11. 製備型HPLC參數
儀器 具有以下尺寸(流速)之管柱Waters X-Bridge 5或10 µm：19 × 50 mm (12 ml/min)、19 × 100 mm (12 ml/min)、30 × 100 mm (30-50 ml/min)、30 × 250 mm (30-50 ml/min)、50 × 250 mm (80-150 ml/min)； 最大為100巴且最大流速為250 ml/min之Interchim Puriflash 4100，或最大250巴且最大流速為250 ml/min之Interchim Puriflash 4250； 梯度中可能同時使用4種溶劑之四級溶劑泵
UV 在200 nm與400 nm之間用於收集之2種波長
管柱 Waters XBridge 10µm
收集 8 ml或32 ml管
使用三種製備型HPLC方法： a. TFA方法：溶劑：A=水+ 0.05 % TFA，B=乙腈+ 0.05 % TFA，在15至30 CV中梯度為5至100% B b. NH 4HCO 3方法：溶劑：A=水+ 0.02 M NH 4HCO 3，B=乙腈/水80/20 + 0.02 M NH 4HCO 3，在15至30 CV中梯度為5至100% B c. 中性方法：溶劑：A=水，B=乙腈，在15至30 CV中梯度為5至100% B
將含有純化合物之所有溶離份合倂，且直接冷凍乾燥，得到呈非晶形粉末狀之化合物。 方法 A 步驟 1 ： (2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-N-[4-( 羥甲基 ) 苯基 ]-5- 脲基 - 戊醯胺
向3-[2-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)乙氧基]丙酸(855 mg，4.01 mmol)於THF (42 mL)中之溶液中添加 N , N '-二環己基甲烷二亞胺(1.05 g，5.08 mmol)及1-羥基吡咯啶-2,5-二酮(510 mg，4.43 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌20 h。藉由過濾移除沈澱物且將濾液添加至(2S)-2-[[(2S)-2-胺基-3-甲基-丁醯基]胺基]-N-[4-(羥甲基)苯基]-5-脲基-戊醯胺(1.27 g，3.35 mmol)於DMF (42 mL)中之溶液中。將反應混合物在室溫下攪拌20小時，用二乙醚(250 mL)稀釋。藉由過濾回收固體，得到(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)乙氧基]丙醯基胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-N-[4-(羥甲基)苯基]-5-脲基-戊醯胺(1.81 g)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 9.87 (s, 1H), 8.05 (d, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.53 (d, 2H), 7.21 (d, 2H), 7.00 (s, 2H), 5.95 (t, 1H), 5.39 (s, 2H), 5.07 (t, 1H), 4.41 (d, 2H), 4.34-4.40 (m, 1H), 4.18-4.22 (m, 1H), 3.42-3.65 (m, 4H), 2.88-3.02 (m, 2H), 2.73 (s, 2H), 2.28-2.45 (m, 2H), 1.91-1.99 (m, 1H), 1.53-1.75 (m, 2H), 1.30-1.147 (m, 2H), 0.85 (d, 3H), 0.81 (d, 3H). 13C NMR (125 MHz, dmso-d6): δ 171.05, 170.83, 170.32, 170.09, 158.82, 137.49, 137.37, 134.50, 126.88, 118.81, 66.66, 66.53, 62.57, 57.49, 53.06, 36.74, 35.76, 30.51, 29.31, 26.79, 25.20, 19.16, 18.07. MS (ESI) m/z [M + H] += 575.2。 步驟 2 ： (2S)-N-[4-( 溴甲基 ) 苯基 ]-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯胺
在0℃下在氬氣下向(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)乙氧基]丙醯基胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-N-[4-(羥甲基)苯基]-5-脲基-戊醯胺(37.2 mg，65 µmol)於THF (1 mL)中之溶液中逐滴添加三溴化磷(45 µL, 97 mmol)。將反應物在0℃下攪拌1 h且在室溫下攪拌2 h。反應進程之後為UPLC-MS：等分試樣用大量過量𠰌啉/乙腈處理，隨後形成相應𠰌啉加合物。反應物用THF (3 mL)稀釋，藉由添加2滴NaHCO 3飽和溶液淬滅，在室溫下攪拌5 min，經硫酸鎂乾燥且過濾。含有粗(2S)-N-[4-(溴甲基)苯基]-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)乙氧基]丙醯基胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯胺(45 mg)之殘餘物直接用於下一步驟。MS (ESI) m/z [M + H] += 662.62 (𠰌啉加合物)。 步驟 3 ： 連接子引入之通用程序
向有效負載(19.6 µmol)於DMF (30 mL/mmol)中之懸浮液中添加步驟2之產物(1.2當量)於THF (50 mL/mmol)中之溶液及DIPEA (3當量)。在室溫下攪拌反應物2 h。粗產物使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於Xbridge®管柱上且使用TFA方法純化，得到所需化合物。 製備 L9A-P27 ： 2-[[(5R,7S)-3-[[4-[6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-2- 羧基 -3- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 二甲基 - 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P27，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M-CF 3CO 2] +=1318.6557 (δ=0.2 ppm) 製備 L9A-P30 ： 2-[[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-2- 羧基 -3- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 二甲基 - 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P30，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M-CF 3CO 2] +=1292.6386 (δ=-0.9 ppm)。 製備 L9A-P33 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 氮雜環庚烷 -1- 鎓 -1- 基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P33，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M-CF 3CO 2] +，實驗值= 1372.7019 (δ = -0.3 ppm)。 製備 L9A-P32 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[4-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]-4- 異丙基 - 哌 𠯤 -4- 鎓 -1- 基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P32，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M-CF 3CO 2] +=1401.7287 (δ = -0.1 ppm)。 製備 L9A-P38 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 哌啶 -1- 鎓 -1- 基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P38，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M-CF 3CO 2] +=1358.6803 (δ = -4.7 ppm)。 製備 L9A-P39 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[4-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 𠰌 啉 -4- 鎓 -4- 基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸酯 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P39，獲得所需產物。 HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1360.6634 (δ = -1.9 ppm)。 製備 L9A-P41 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[3-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 吡咯啶 -1- 鎓 -1- 基 ] 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P41，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M-CF 3CO 2] +，實驗值= 1342.6844 (δ = -5.5 ppm)。 製備 L9A-P42 ： 3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 吡咯啶 -1- 鎓 -1- 基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[4- 甲基 -3-[(5- 甲基 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P42，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M-CF 3CO 2] +，實驗值= 1358.6807 (δ = -4.4ppm)。 方法 B 步驟 1 ：
向對甲氧基苯甲基(PMB)保護之有效負載(11.3 µmol)於DMF (0.4 mL)中之懸浮液中添加(2S)-N-[4-(溴甲基)苯基]-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)乙氧基]丙醯基胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯胺(12.4 mg，13.6 µmol)於THF (0.2 mL)中之溶液及DIPEA (9.8 µL, 56.7 µmol)。在室溫下攪拌反應物4 h。粗產物使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於Xbridge®管柱上且使用TFA方法純化，得到預期化合物，其直接用於 步驟 2。 步驟 2 ：
向 步驟 1之產物於DCM (3.2 mL)中之懸浮液中添加TFA (320 µL，4.18 mmol)。在室溫下攪拌反應物1小時。蒸發溶劑且將殘餘物溶解於DMF (500 µL)中。此粗溶液使用C18逆相製備型HPLC藉由在Xbridge®管柱上直接沈積反應混合物且使用TFA方法純化，得到所需產物。 製備 L9A-P35 ： 2-[[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-2- 羧基 -3- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]-(2- 羥乙基 )- 甲基 - 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 B及作為適當PMB保護之有效負載的 P35 之前驅體，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M-CF 3CO 2] +，實驗值= 1318.6531 (δ = -1.7 ppm)。 製備 L9A-P36 ： 2-[[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-2- 羧基 -3- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]-(3- 甲氧基丙基 )- 甲基 - 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 B及作為適當PMB保護之有效負載的 P36 之前驅體，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M-CF 3CO 2] +，實驗值= 1376.6930 (δ = -3.1 ppm)。 製備 L9A-P37 ： 2-[[(5SR,7RS)-3-[[4-[6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-2- 羧基 -3- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]-(4- 羥丁基 )- 甲基 - 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 B及作為適當PMB保護之有效負載的 P37 之前驅體，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M-CF 3CO 2] +，實驗值= 1376.6918 (δ= -3.9 ppm)。 方法 C 製備 L9C-P19 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[[(3S)-3,4- 二羥丁基 ]-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 ] 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 步驟 1 ： (4- 硝基苯基 ) 碳酸 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲 酯
向(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)乙氧基]丙醯基胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-N-[4-(羥甲基)苯基]-5-脲基-戊醯胺(來自 方法 A， 步驟 1) (580 mg; 1.0 mmol )於無水DMF中之溶液中添加DIPEA (0.5 mL；3.025 mmol；3當量)及雙(4-硝基苯基)碳酸酯(615 mg；2.02 mmol；2當量)。在室溫下攪拌反應混合物68 h。用二乙醚(15 mL)稀釋反應混合物且過濾固體，得到標題化合物(589 mg；79%)。 1 HNMR (dmso- d 6): 0.82 ( d, 3H, J= 6.8 Hz), 0.85 ( d, 3H, J= 6.8 Hz), 1.47-1.33 ( m, 2H), 1.74-1.54 ( m, 2H), 1.92 -2.00 ( m, 1H), 2.32-2.45 ( m, 2H), 2.90-3.06 ( m, 2H), 3.49-3.46 ( m, 2H), 3.60-3.52 ( m, 4H), 4.21 ( dd, 1H, J= 8.7及6.8 Hz), 4.39 ( m, 1H), 5.24 ( s, 2H), 5.39 ( s, 2H), 5.96 ( t, 1H, J= 5.6 Hz), 7.00 ( s, 2H), 7.41 ( d, 2H, J= 8.8 Hz), 7.57 ( dd, 2H, J= 6.8及2.4Hz), 7.65 ( d, 2H, J= 8.4 Hz), 7.83 ( d, 1H, J= 8.8 Hz), 8.10 ( d, 1H, J= 7.6 Hz), 8.31 ( dd, 2H, J= 6.8及2.4 Hz), 10.03 ( s, 1H)。LCMS正模式740.14偵測值(M+H +)。 步驟 2 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[[(3S)-3,4- 二羥丁基 ]-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 ] 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 。
向 P19(15 mg，0.016 mmol)於DMF (0.5 mL)中之懸浮液中添加DIPEA (14 µL, 0.0801 mmol)及 步驟 1之碳酸鹽(14.2 mg，0.0192 mmol)，且將混合物在室溫下攪拌18 h。粗產物使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於Xbridge®管柱上且使用TFA方法純化，得到標題化合物(6.9 mg，產率30%)。 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm  (m, 2 H), (m, 4 H), (m, 10 H), (m, 2 H), 9.98 (s), 8.08 (d), 7.9 (d, 1 H), 7.82 (d), 7.8 (大, 1 H), 7.79 (大NC, 1 H), 7.6 (m, 2 H), 7.49 (大NC, 1 H), 7.43 (br s, 1 H), 7.37 (t, 1 H), 7.28 (d, 2 H), 7.19 (t, 1 H), 7 (s, 2 H), 5.97 (br s), 5.42 (大), 4.99 (s, 2 H), 4.38 (m, 1 H), 4.22 (t, 1 H), 4.03 (t, 2 H), 3.86 (m, 2 H), 3.57/3.46/3.28/3.21 (m, 6 H), 3.53 (m, 2 H), 3.42 (m, 2 H), 3.38 (m, 1 H), 3.01/2.94 (2m, 2 H), 2.89 (t, 2 H), 2.43/2.32 (2m, 2 H), 2.37 (s, 3 H), 2.2 (s, 3 H), 2.03 (m, 2 H), 1.95 (m, 1 H), 1.7/1.38 (2m, 2 H), 0.84 (m, 6 H), 0.84 (m, 6 H). 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 137.6, 135.5, 128.7, 126.8, 122.7, 122.1, 119.1, 118.4, 69.7, 66.9, 66.2, 58.9, 58.4, 58.3, 53.7, 50.5/47.1/43.5, 48.3/46, 46, 39, 36.9, 36.6, 32.8, 30.9, 30.5, 30, 27.7, 24.4, 21.3, 19.8, 13.5, 10.8. HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1422.6688 (δ = 1.6 ppm)。 製備 L9C-P22 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 -(4- 羥丁基 ) 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P22，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值=1406.6728 (δ=1.0 ppm)。 製備 L9C-P23 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 -[3- 羥基 -2-( 羥甲基 ) 丙基 ] 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P23，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1422.6670 (δ = 0.5 ppm)。 製備 L9C-P24 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 -[2- 羥基 -1-( 羥甲基 ) 乙基 ] 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P24，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1408.6518 (δ = 0.8 ppm)。 製備 L9C-P25 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 -(3- 羥丙基 ) 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P25，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值=1366.6396 (δ=-0.4 ppm)。 製備 L9C-P26 ： 6-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 -(3- 羥丙基 ) 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P26，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值=1366.6396 (δ=-0.4 ppm)。 製備 L9C-P29 ： 6-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 -(3- 甲氧基丙基 ) 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P29，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值=1380.6575 (δ = 1.2 ppm)。 製備 L9C-P31 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[4-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P31，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1403.6694 (δ = 1.7 ppm)。 製備 L9C-P40 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 -(3- 羥丙基 ) 胺基 ] 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P40，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1390.6775 (δ = 0.7 ppm)。 製備 L9A-P43 ： 3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 吡咯啶 -1- 鎓 -1- 基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[3-[(5- 甲氧基 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P43，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M-CF 3CO 2] +，實驗值= 1374.6754 (δ = -4.5 ppm)。 方法 D 製備 L9A-P20 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[4-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]-4- 甲基 - 哌 𠯤 -4- 鎓 -1- 基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ;2,2,2- 三氟乙酸 步驟 1 ： (2S)-N-[4-( 氯甲基 ) 苯基 ]-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯胺
將SOCl 2(102 µL, 1.39 mmol)於THF (8 ml)中之溶液製備為溶液A。將(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)乙氧基]丙醯基胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-N-[4-(羥甲基)苯基]-5-脲基-戊醯胺(來自 方法 A ，步驟 1) (100 mg，0.174 mmol)於THF (4 ml)中之溶液製備為溶液B。接著每10分鐘添加500 µl溶液A至溶液B中。在樣品中添加𠰌啉後，藉由UPLC-MS追蹤反應。反應完成後，在室溫下減壓蒸發混合物且直接用於下一步驟中(105 mg，0.177 mmol)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.00 (s, 1H), 8.10 (d, 1H), 7.85 (d, 1H), 7.60 (d, 2H), 7.35 (d, 2H), 7.00 (s, 2H), 6.05 (m, 1H), 5.25 (m, 2H), 4.70 (s, 2H), 4.40 (m, 1H), 4.20 (m, 1H), 3.65-3.40 (m, 6H), 3.00 (2m, 2H), 2.4/2.3 (2m, 2H), 2.00 (m, 1H), 1.7/1.6 (2m, 2H), 1.40 (2m, 2H), 0.80 (2d, 6H). IR: (ν cm -1) 3288, 1703, 1643.  HR-ESI+: [M+H] += ，實驗值593.2499 (δ = 2.4 ppm)。 步驟 2 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[4-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]-4- 甲基 - 哌 𠯤 -4- 鎓 -1- 基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ;2,2,2- 三氟乙酸
向 P20(15 mg，14.4 µmol)於DMF (0.5 mL)中之溶液中添加 步驟 1之產物(14.6 mg，17.2 µmol)及DIPEA (8 µL，43.1 µmol)之溶液。在80℃下攪拌反應物18 h。粗產物使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於管柱上且使用TFA方法純化，得到標題化合物(19.0 mg，產率96%)。HRMS (ESI) [M] +，實驗值= 1373.6974 (δ = -0.1 ppm)。 製備 L9A-P21 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 吡咯啶 -1- 鎓 -1- 基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 D及作為適當有效負載之 P21，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M] +，實驗值= 1344.6688 (δ = -1.7 ppm)。 製備 L9A-P2 ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 - 二甲基 - 銨基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸酯 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P2，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +=1188.4561 (δ=0.6 ppm)。 製備 L9A-P1 ： 3-[4-[3-[2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 二甲基 - 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P1，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +=1232.4802 (δ= -1.1 ppm)。 製備 L9A-P10 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[4-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]-4- 甲基 - 哌 𠯤 -4- 鎓 -1- 基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸酯 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P10，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1269.5176 (δ = 3.4 ppm)。 製備 L9A-P9 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 吡咯啶 -1- 鎓 -1- 基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸酯 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P9，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1240.4887 (δ =1.6 ppm)。 製備 L9A-P15 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]-4,4- 二氟 - 哌啶 -1- 鎓 -1- 基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸酯 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P15，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1290.4831 (δ = -0.3 ppm)。 製備 L9A-P18 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 哌啶 -1- 鎓 -1- 基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸酯 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P18，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1254.4990 (δ = -1.8 ppm)。 製備 L9A-P28 ： 3-[4-[3-[2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ] 苯基 ] 丙 -2- 炔基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 二甲基 - 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P28，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M-CF 3CO 2] +=1196.4827 (δ=1.9 ppm)。 製備 L9C-P16 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-6-[2-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 - 甲基 - 胺基 ] 乙氧基 ]-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P16，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1331.5131 (δ = -0.4 ppm)。 製備 L9C-P12 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[2-( 二甲胺基 ) 乙基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 ] 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P12，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1301.5034 (δ = -0.3 ppm)。 製備 L9C-P44 ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]-(3,4- 二羥丁基 ) 胺基 ]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 - 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P44，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1262.4527 (δ =-0.1 ppm)。 製備 L9C-P45 ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]-(3- 羥丙基 ) 胺基 ]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 - 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P45，在基於NH 4HCO 3方法(製備型HPLC，通用程序)之純化步驟之後獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1262.4527 (δ = 0.4 ppm)。 製備 L9C-P46 ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]-(4,5- 二羥戊基 ) 胺基 ]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 - 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P46，在基於NH 4HCO 3方法(製備型HPLC，通用程序)之純化步驟之後獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] += 1324.4903 (δ=-1.7 ppm)。 製備 L9C-P17 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[4-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 ] 哌 𠯤 -1- 基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P17，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1299.4880 (δ =0.5 ppm)。 製備 L9A-P11 ： [3-[4-[3-[2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ]-1- 甲基 - 丙 -2- 炔基 ]-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 二甲基 - 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P11，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1202.4722 (δ = 0.5 ppm)。 製備 L9A-P8 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[4-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]-4- 甲基 - 哌 𠯤 -4- 鎓 -1- 基 ] 丁 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 D及作為適當有效負載之 P8，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1 284.5343 (δ = -1.9 ppm)。 製備 L9A-P14 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 - 二乙基 - 銨基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸酯
使用 方法 D及作為適當有效負載之 P14，在基於NH 4HCO 3方法(製備型HPLC，通用程序)之純化步驟之後獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1242.5021 (δ = -0.2ppm)。 製備 L9A-P13 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 - 乙基 - 甲基 - 銨基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸酯
使用 方法 D及作為適當有效負載之 P13，在基於NH 4HCO 3方法(製備型HPLC，通用程序)之純化步驟之後獲得所需產物。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1228.4855 (δ = -1.0 ppm)。 製備 L9A-P34 ： 3-[4-[3-[2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 -[(3S)-3,4- 二羥丁基 ]-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 甲基 - 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸
使用 方法 D及作為適當有效負載之 P34，獲得所需產物。HRMS (ESI) [M-CF 3CO 2] +，實驗值= 1288.5086 (δ = 0.6 ppm)。 方法 F 製備 L13A-P2 ： [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2- 疊氮基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 -[3-[4-[3-[2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 ]- 二甲基 - 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸鹽 步驟 1 ： (2S)-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2- 疊氮基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-N-[(1S)-2-[4-( 羥甲基 ) 苯胺基 ]-1- 甲基 -2- 側氧基 - 乙基 ]-3- 甲基 - 丁醯胺
向(2S)-2-胺基-N-[(1S)-2-[4-(羥甲基)苯胺基]-1-甲基-2-側氧基-乙基]-3-甲基-丁醯胺(900 mg，3.07 µmol)於DMF (10 mL)中之懸浮液中依次添加3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(2.00 g，3.07 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液、呈粉末狀之EDC (650 mg，3.38 mmol)及DIPEA (1.00 mL, 6.14 mmol)。在室溫下攪拌反應物16小時。粗產物使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於Xbridge®管柱上且使用NH 4HCO 3方法純化，得到所需產物(1.64 g，1.78 mmol)。IR: (ν cm -1) 3600-3200, 3287, 2106, 1668, 1630, 1100。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 9.82 (m, 1H), 8.14 (d, 1H), 7.87 (d, 1H), 7.54 (d, 2H), 7.23 (d, 2H), 5.08 (t, 1H), 4.43 (d, 2H), 4.39 (m, 1H), 4.20 (m, 1H), 3.65-3.44 (m, 48H), 3.39 (t, 2H), 2.5-2.3 (m, 2H), 1.97 (m, 1H), 1.31 (d, 3H), 0.87/0.84 (2d, 6H)。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值：919.5234 (δ = 3.4 ppm)。 步驟 2 ： (2S)-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2- 疊氮基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-N-[(1S)-2-[4-( 溴甲基 ) 苯胺基 ]-1- 甲基 -2- 側氧基 - 乙基 ]-3- 甲基 - 丁醯胺
在0℃下向 步驟 1之產物(72 mg，7.83 µmol)於THF (5 mL)中之溶液中添加PBr 3於THF (157 µL，157 µmol)中之1M溶液，且將反應混合物在0℃下攪拌1 h，且在室溫下攪拌1 h。反應混合物用AcOEt (5 mL)稀釋，用NaHCO 3飽和水溶液(0.5 mL)處理，經MgSO 4乾燥且不經進一步處理即用於下一步驟中。IR: (ν cm -1) 3700-3100, 1658, 2106。HRMS (ESI) [M+H] +實驗值：981.4390 (δ = 1.3 ppm)。 步驟 3 ： [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2- 疊氮基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 -[3-[4-[3-[2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 ]- 二甲基 - 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸鹽
向 步驟 2之產物(21 mg，2.09 µmol)於DMF (2 mL)中之溶液中依次添加呈粉末狀之2-[[6-(1,3-苯并噻唑-2-基胺基)-5-甲基-嗒𠯤-3-基]-甲基-胺基]-5-[3-[4-[3-(二甲胺基)丙-1-炔基]-2-氟-苯氧基]丙基]噻唑-4-甲酸( P2) (11.0 mg，1.74 µmol)及DIPEA (8.6 µL, 5.22 µmol)。在室溫下攪拌反應物8 h。粗產物使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於Xbridge®管柱上且使用TFA方法純化，得到所需產物(15 mg，0.91 mmol)。IR: (ν cm -1) 3400-3150, 2235, 2105, 1667。 1H NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.90 (dl, 1H), 7.76 (d, 2H), 7.68 (s, 1H), 7.58 (dd, 1H), 7.51 (m, 1H), 7.51 (d, 2H), 7.41 (m, 1H), 7.38 (t, 1H), 7.25 (m, 1H), 7.20 (t, 1H), 4.55 (s, 2H), 4.42 (s, 2H), 4.39 (m, 1H), 4.21 (m, 1H), 4.19 (t, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.60 (m, 4H), 3.54/3.50 (m+m, 44H), 3.38 (t, 2H), 3.29 (m, 2H), 3.05 (s, 6H), 2.47 (s, 3H), 2.46/2.38 (m+m, 1+1H), 2.16 (五重峰, 2H), 1.96 (m, 1H), 1.32 (d, 3H), 0.88/0.84 (d+d, 3+3H). 13C NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm 133.9, 129.7, 126.4, 122.6, 122.1, 120.0, 119.3, 118.1, 115.3, 70.5/70.1, 70.1/67.5, 68.7, 66.2, 57.8, 53.7, 50.6, 49.7, 49.5, 36.4, 35.3, 31.0, 30.9, 23.3, 19.5/18.6, 18.4, 17.7. 19F NMR (500 MHz, dmso-d6) δ ppm -133.8.  HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值：1532.6964 (δ = 0.6 ppm)。 方法 G 製備 L19C-P7 ： 5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[2-[2-(2- 疊氮基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙醯基 ] 胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 - 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸 步驟 1 ： (4- 硝基苯基 ) 碳酸 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 )-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲 酯
向N-[(1S)-1-[[(1S)-2-[4-(羥甲基)苯胺基]-1-甲基-2-側氧基-乙基]胺甲醯基]-2-甲基-丙基]胺基甲酸9H-茀-9-基甲酯(5.0 g，9.7 mmol)於THF (20 mL)及DCM (10 mL)中之溶液中依次添加氯甲酸對硝基苯基酯(4.1 g，20.1 mmol)及吡啶(1.65 mL，20.4 mmol)。在室溫下攪拌反應物15 h。添加10%檸檬酸水溶液且用AcOEt萃取反應混合物兩次。有機層用鹽水洗滌且經MgSO 4乾燥。在真空中蒸發之後，將固體溶解於最少量之AcOEt中，且添加乙醚以沈澱所需化合物(5.6 g，8.22 mmol)。IR: (ν cm -1) 3350-3200, 1760;1690;1670;1630, 1523;1290。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.07 (m, 1 H), 8.31 (d, 2 H), 8.19 (d, 1 H), 7.89 (d, 2 H), 7.74 (t, 2 H), 7.64 (d, 2 H), 7.57 (d, 2 H), 7.41 (m, 2 H), 7.41 (d, 2 H), 7.4 (m, 1 H), 7.32 (t, 2 H), 5.24 (s, 2 H), 4.43 (m, 1 H), 4.36-4.19 (m, 3 H), 3.92 (dd, 1 H), 2 (m, 1 H), 1.32 (d, 3 H), 0.9/0.87 (2d, 6 H). 步驟 2 ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 )-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 - 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
向2-[[6-(1,3-苯并噻唑-2-基胺基)-5-甲基-嗒𠯤-3-基]-甲基-胺基]-5-[3-[2-氟-4-[3-(甲胺基)丙-1-炔基]苯氧基]丙基]噻唑-4-甲酸 ( P7 )(366.0 mg，559 mmol)於DMF (10 mL)中之溶液中依次添加 步驟 1之產物(378 mg，556 mmol)及DIPEA (368 µL，2.22 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物16 h且接著蒸發至乾燥。藉由矽膠層析(甲醇/DCM之梯度)純化粗產物，得到所需化合物(15.6 mg，9.64 mmol)。 步驟 3 ： 5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2- 胺基 -3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 - 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸
向 步驟 2之產物(424 mg，366 mmol)於DMF (4 mL)中之溶液中添加哌啶(90 µL，914 mmol)且將反應混合物在室溫下攪拌1 h。在蒸發至乾燥之後，粗產物藉由矽膠層析(含有2% NH 4OH之甲醇/DCM之梯度)純化，得到所需化合物。IR: (ν cm -1) 3270, 3100-2400, 1680, 1520. 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.58/10.2 (2*s, 1 H), 8.55/8.28 (2*s, 1 H), 7.9 (d, 1 H), 7.65 (s, 1 H), 7.62 (d, 2 H), 7.52 (d, 1 H), 7.39 (m, 1 H), 7.35-7 (m, 3 H), 7.32 (d, 2 H), 7.2 (m, 1 H), 5.05 (s, 2 H), 4.48 (m, 1 H), 4.26 (s, 2 H), 4.15 (t, 2 H), 3.71 (s, 3 H), 3.3 (t, 2 H), 3.03 (d, 1 H), 2.9 (s, 3 H), 2.45 (s, 3 H), 2.11 (五重峰, 2 H), 1.91 (m, 1 H), 1.4-0.7 (br s, 2 H), 1.32 (d, 3 H), 0.88/0.78 (2*d, 6 H). 19F NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm -134。 步驟 4 ： 5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[2-[2-(2- 疊氮基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙醯基 ] 胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 - 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸
向2-[2-[2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙酸(58 mg，249 µmol)於DMF (1 mL)中之溶液中依次添加TSTU (77 mg，255 µmol)及DIPEA (190 µL, 1.12 mmol)，且將反應混合物在室溫下攪拌2 h。在添加含 步驟 3之產物(84 mg，89.6 mmol)之DMF (1.5 mL)之後，將反應混合物在室溫下攪拌2 h。使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於Xbridge®管柱上且使用NH 4HCO 3純化粗產物，得到所需化合物(64 mg，55.5 mmol)。IR: (ν cm -1) 3700-2700, 2104, 1693/1656, 1227/1127。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 9.76 (s, 1H), 8.16 (dl, 1H), 7.83 (d, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.56 (d, 2H), 7.51 (d, 1H), 7.36 (d, 1H), 7.35 (t, 1H), 7.29 (d, 2H), 7.24-7.08 (m, 3H), 7.18 (t, 1H), 5.04 (s, 2H), 4.44 (hept, 1H), 4.28 (dd, 1H), 4.26 (s, 2H), 4.16 (t, 2H), 3.94 (s, 2H), 3.75 (s, 3H), 3.58 (m, 10H), 3.35 (t, 2H), 3.27 (t, 2H), 2.91 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 2.13 (五重峰, 2H), 2.05 (m, 1H), 1.32 (d, 3H), 0.89/0.84 (2d, 6H). 19F NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm -133.9。HRMS ESI [M+H] +，實驗值1152.4207 (δ = 1.5 ppm)。 製備 L23C-P7 ： 5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[2-[2-(2- 疊氮基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙醯基 ] 胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 - 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸
根據 方法 G，藉由將N-[(1S)-1-[[(1S)-2-[4-(羥甲基)苯胺基]-1-甲基-2-側氧基-乙基]胺甲醯基]-2-甲基-丙基]胺基甲酸9H-茀-9-基甲酯替換為N-[(1S)-1-[[(1S)-1-[[4-(羥甲基)苯基]胺甲醯基]-4-脲基-丁基]胺甲醯基]-2-甲基-丙基]胺基甲酸9H-茀-9-基甲酯而獲得產物。IR: (ν cm -1) 3687-3060, 2104, 極寬- 1656, 1606, 1515, 754及725。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.90 (d, 1 H), 7.70 (br s, 1 H), 7.60 (d, 2 H), 7.50 (m, 2 H), 7.40 (t, 1 H), 7.30 (d+m, 3 H), 7.20 (t, 1 H), 7.15 (dd, 1 H), 5.45 (m, 2 H), 4.40 (m, 1 H), 4.30 (m, 1 H), 4.25 (s, 2 H), 4.15 (t, 2 H), 3.95 (s, 2 H), 3.80 (s, 3 H), 3.60/3.30 (2m, 12 H), 3.30 (m, 2 H), 3.00 (2m, 2 H), 2.90 (s, 3 H), 2.45 (s, 3 H), 2.15 (五重峰, 2 H), 2.00 (m, 1 H), 1.70/1.60 (2m, 2 H), 1.45/1.4 (2m, 2 H), 0.90/0.80 (2d, 6 H)。 19F NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm -134.2。HRMS ESI [M+H] +實驗值1238.4675 (δ =  0.4 ppm)。 製備 L110C-P7 ： 5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2- 疊氮基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 - 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ] 噻唑 -4- 甲酸
根據 方法 G，藉由將N-[(1S)-1-[[(1S)-2-[4-(羥甲基)苯胺基]-1-甲基-2-側氧基-乙基]胺甲醯基]-2-甲基-丙基]胺基甲酸9H-茀-9-基甲酯替換為N-[(1S)-1-[[(1S)-1-[[4-(羥甲基)苯基]胺甲醯基]-4-脲基-丁基]胺甲醯基]-2-甲基-丙基]胺基甲酸9H-茀-9-基甲酯且將2-[2-[2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙酸替換為3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸而獲得產物。IR: (ν cm -1) 3560-3063, 2100, 極寬- 1651, 1608, 1514, 756及725。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.9 (d, 1 H), 7.7 (br s, 1 H), 7.6 (d, 2 H), 7.5 (m, 1 H), 7.4 (t, 1 H), 7.4-7.1 (m, 3 H), 7.3 (d, 2 H), 7.2 (t, 1 H), 5.4 (m, 2 H), 4.4 (m, 1 H), 4.3 (s, 2 H), 4.25 (m, 1 H), 4.15 (t, 2 H), 3.8 (s, 3 H), 3.65-3.4 (m, 50 H), 3.3 (m, 2 H), 3 (2m, 2 H), 2.9 (s, 3 H), 2.45 (s, 3 H), 2.4 (m, 2 H), 2.1 (五重峰, 2 H), 2 (m, 1 H), 1.7/1.6 (2m, 2 H), 1.4 (2m, 2 H), 0.85 (2d, 6 H). 19F NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm -134.4。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值1648.7209 (δ = 1.4 ppm)。 方法 H 製備 L27C-P3 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯亞胺醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ]-2- 磺基 - 苯基 ] 甲氧羰基 - 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸 步驟 1 ： 2-( 羥甲基 )-5- 硝基 - 苯磺酸鈉
向5-硝基-2-[(E)-2-(4-硝基-2-磺基-苯基)乙烯基]苯磺酸鈉(25.0 g; 52.7 mmol)於水(336 mL)中之溶液中引入臭氧流後維持1.5 h。反應完成後，將混合物用氬氣吹掃30分鐘以便移除過量臭氧。隨後，添加碳酸鈉(39.1 g；7當量)及硼氫化鈉(3.99 g；2當量)且在室溫下攪拌橙色溶液16 h。濃縮反應混合物，得到呈固體之所需化合物(39.9 g；sup 100%) (含有殘餘痕量之硼鹽)。 1H NMR (dmso): δ 4.99 ( d, 2H, J= 3.6 Hz), 5.36 ( t, 1H, J= 5.6 Hz), 7.83 ( d, 1H, J= 8.4 Hz), 8.21 ( d, 1H, J= 8.4 Hz), 8.45 ( s, 1H)。 步驟 2 ： 5- 胺基 -2-( 羥甲基 ) 苯磺酸鈉
將2-(羥甲基)-5-硝基-苯磺酸鈉(26.9 g; 105 mmol)溶解於水(403 mL)中。接著，用氬氣沖洗反應混合物。添加10%鈀/碳(2.65 g，10% wt.)，接著用氬氣且接著用氫氣沖洗黑色懸浮液。在室溫下在氫氣氛圍下攪拌反應混合物3.5天。在經Celite ®過濾且用水及甲醇洗滌之後，將濾液濃縮至乾燥且用甲苯共蒸發3次。使用乙酸乙酯/甲醇(90/10至70/30)作為溶離劑藉由矽膠管柱層析純化，得到所需化合物(14.29 g；60%)。 1H NMR (dmso): δ 4.52 ( d, 2H, J= 5.2 Hz), 4.95 ( t, 1H, J= 5.2 Hz), 5.04 ( s, 2H), 6.42 ( d, 1H, J= 7.6 Hz), 6.93 ( d, 1H, J= 7.6 Hz), 7.03 ( s, 1H)。 步驟 3 ： 5-[[(2S)-2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 )-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ]-2-( 羥甲基 ) 苯磺酸鈉
向Fmoc-L-Cit-OH (882 mg; 2.22 mmol)於二甲基甲醯胺(32.5 mL)中之溶液中添加 步驟 2之產物(500 mg; 2.22 mmol)、HBTU (1.01 g; 2.66 mmol)及DIPEA (917 µL; 5.55 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌16小時，接著濃縮至乾燥且與水(2×100 mL)共蒸發。使用乙腈/水2/8至8/2作為溶離劑藉由C18管柱層析純化粗物質，得到所需化合物(1.0 g；63%)。 1H NMR (dmso): δ 1.25-1.28 ( m, 15H, DIPEA),1.36-1.72 ( m, 4H), 2.92-3.03 ( m, 2H), 3.11-3.18 ( m, 2H, DIPEA), 3.5-3.65 ( m, 2H, DIPEA), 4.30-4.12 ( m, 4H), 4.74 ( d,2H, J= 4.4 Hz), 5.05 ( t, 1H, J= 5.6 Hz), 5.37 ( s, 2H), 5.97 ( t, 1H, J= 4.8 Hz), 7.34-7.42 ( m, 4H), 7.62-7.90 ( m, 7H), 8.15 ( s, 1H), 10.05 ( s, 1H)。 步驟 4 ： 5-[[(2S)-2- 胺基 -5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ]-2-( 羥甲基 ) 苯磺酸鈉
向 步驟 3之產物(11.2 g；15.73 mmol)於DMF (224 mL)中之溶液中添加哌啶(3.1 mL；2當量)。在室溫下攪拌反應混合物3小時，接著添加水(400 mL)。用乙酸乙酯(2×300 mL)及二氯甲烷(300 mL)萃取水層。向水層中添加碳酸鈉(5.01 g；3當量)且在室溫下攪拌混合物3 h。混合物經凍乾以便得到呈經鈉鹽污染之固體狀之所需化合物(6.01 g；估計為100%)。 1H NMR (dmso): δ 1.55-1.64 ( m, 4H), 2.99-3.01 ( m, 2H), 3.58 ( m, 1H), 4.75 ( s, 2H), 5.06 ( s, 1H), 5.38 ( s, 2H), 5.98 ( t, 1H, J= 5.6 Hz), 7.38 ( d, 1H, J= 8.4 Hz), 7.72 ( dd, 1H, J= 8.4 & 2.4 Hz), 7.86 ( d, 1H, J= 2.4 Hz,), 10.17 ( s, 1H)。 步驟 5 ： 5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 )-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ]-2-( 羥甲基 ) 苯磺酸鈉
向 步驟 4之產物(6.01 g，15.73 mmol)於二甲基甲醯胺(150 mL)中之溶液中添加Fmoc-L-Val-OSu (6.85 g，1當量)。在室溫下攪拌溶液3小時，接著將反應混合物用飽和碳酸氫鈉(100 mL)及水(100 mL)稀釋且濃縮至乾燥。使用乙酸乙酯/甲醇90/10至50/50作為溶離劑在矽膠上純化殘餘物，得到所需化合物(4.44 g，48%)。 1H NMR (dmso): 0.85-0.90 ( m, 6H), 1.31-1.76 ( m, 4H), 1.95-2.06 ( m, 1H), 2.91-3.05 ( m, 2H), 3.95 ( t, 1H, J= 8.4 Hz), 4.24-4.35 ( m, 3H), 4.37-4.45 ( m, 1H), 4.76 ( d, 2H, J= 6 Hz), 5.07 ( t, 1H, J= 6.4 Hz,), 5.40 ( s, 2H), 6.03 ( t, 1H, J= 5.6 Hz), 7.32-7.46 ( m, 6H), 7.67 ( d, 1H, J= 8 Hz), 7.76 ( t, 2H, J= 7.2 Hz), 7.88-7.91 ( m, 3H), 8.12 ( d, 1H, J= 7.6 Hz), 10.08 ( s, 1H). 13C NMR (dmso): 18.25, 19.24, 26.70, 29.56, 30.45, 39.50, 46.67, 53.17, 60.01, 60.96, 65.66, 117.85, 119.15, 120.05, 125.36, 127.06, 127.62, 128.09, 134.39, 136.79, 140.67, 143.89, 145.34, 156.08, 158.82, 170.37, 171.16。LCMS (2-100 ACN/H 2O+0.1% AF): 93.85 %滯留時間=8.4 min，正模式：682.15偵測值(MH +)，負模式：680.17偵測值(MH -)。 步驟 6 ：苯磺酸 5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 )-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ]-2-[(4- 硝基苯氧基 ) 羰基氧基甲基 ] 酯
向 步驟 5之產物(450 mg，0.64 mmol)於DMF (6 mL)中之溶液中添加DIPEA (1.34 mL，7.67 mmol)及雙(4-硝基苯基)碳酸酯(778 mg，2.56 mmol)。在室溫下攪拌溶液2 h且添加雙(4-硝基苯基)碳酸酯(390 mg，1.28 mmol)。在1 h之後，在減壓下濃縮溶液且藉由矽膠層析(甲醇及乙酸/二氯甲烷之梯度)純化殘餘物，得到所需化合物(523 mg)。 步驟 7 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 )-3- 甲基 - 丁醯亞胺醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ]-2- 磺基 - 苯基 ] 甲氧羰基 - 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
向2-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫-5H-吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8-基]-5-[3-[2-氟-4-[3-(甲胺基)丙-1-炔基]苯氧基]丙基]噻唑-4-甲酸(P3) (70 mg，109 µmol)於DMF (550µL)中之溶液中依次添加DIPEA (0.19 mL, 1.39 mmol)、 步驟 6之產物(111 mg，131 µmol)及DIEPA (95 µL, 544 µmol)。在室溫下攪拌溶液15 h且濃縮，得到所需化合物，其不經任何進一步處理即使用。 步驟 8 ： 5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2- 胺基 -3- 甲基 - 丁醯亞胺醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ]-2- 磺基 - 苯基 ] 甲氧羰基 - 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ]-2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 噻唑 -4- 甲酸
向 步驟 7之產物(147 mg，109 µmol)於二㗁烷(1.1 mL)中之溶液中添加LiOHxH 2O (13.7 mg，326 µmol)於水(1.1 mL)中之溶液。在室溫下攪拌溶液12小時。添加1 M HCl水溶液直至pH 7為止。將反應混合物蒸發至乾燥且在DCM中濕磨殘餘物。沈澱物用水及EtOH洗滌，得到所需化合物(120 mg)。 步驟 9 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯亞胺醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ]-2- 磺基 - 苯基 ] 甲氧羰基 - 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
向 步驟 8之產物(120 mg，109 µL)之溶液中依次添加3-[2-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)乙氧基]丙酸(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯(37.8 mg，122 µmol)及DIPEA (38.5 µL, 221 µmol)。在室溫下攪拌溶液1.5 h。粗產物使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於Xbridge®管柱上且使用TFA方法純化，得到所需化合物(9 mg)。HRMS (ESI) [M+H] +1322.3831 (δ=-3.3 ppm)。 方法 I 製備 L27A-P1 ： 3-[4-[3-[2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯亞胺醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ]-2- 磺基 - 苯基 ] 甲基 ]- 二甲基 - 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸鹽 步驟 1 ： 2-( 氯甲基 )-5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 )-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯磺酸
在1 h內向5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-茀-9-基甲氧基羰基胺基)-3-甲基-丁醯基]胺基]-5-脲基-戊醯基]胺基]-2-(羥甲基)苯磺酸酯(300 mg，426 µmol)於NMP (6 mL)中之溶液中添加SOCl 2(31 µL, 426 µmol)於NMP (1 mL)中之溶液7次。在室溫下攪拌反應混合物1 h。產物使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於Oasis管柱上且使用TFA方法純化，得到所需產物(225 mg)。IR: (ν cm -1) 3600-2200, 1657, 1250-1100。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.15/8.1/7.42/6 (s+2d+m, 4 H), 7.9 (m, 3 H), 7.75 (m, 3 H), 7.42/7.31 (2m, 5 H), 5.23 (s, 2 H), 4.4 (m, 1 H), 4.3-4.2 (m, 3 H), 3.95 (dd, 1 H), 3 (m, 2 H), 2 (m, 1 H), 1.7/1.6 (2m, 2 H), 1.48/1.37 (2m, 2 H), 0.88 (2d, 6 H)。HRMS (ESI) [M+H] +700.2199 (δ= -0.5 ppm)。 步驟 2 ： 3-[4-[3-[2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 )-3- 甲基 - 丁醯亞胺醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ]-2- 磺基 - 苯基 ] 甲基 ]- 二甲基 - 銨 ; 氯化物
向 步驟 1之產物(55.7 mg，68.4 µmol)於NMP (0.9 mL)中之溶液中依次添加2-[3-(1,3-苯并噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫-5H-吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8-基]-5-[3-[4-[3-(二甲胺基)丙-1-炔基]-2-氟-苯氧基]丙基]噻唑-4-甲酸(P1) (30 mg，45.6 µmol)、DIEPA (63.6 µL, 365 µmol)及TBAI (13 mg，36.5 µmol)。在60℃下攪拌反應混合物6 h。所需化合物直接用作 步驟 3中之溶液。 步驟 3 ： [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2- 胺基 -3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ]-2- 磺基 - 苯基 ] 甲基 -[3-[4-[3-[2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 ]- 二甲基 - 銨
向 步驟 2之產物(26.5 µmol)之NMP溶液中添加二乙胺(21.9 µL，212 µmol)。在室溫下攪拌反應混合物24 h。粗產物使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於Oasis管柱上且使用NH 4HCO 3方法純化，得到所需產物(18 mg)。 步驟 4 ： 3-[4-[3-[2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯亞胺醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ]-2- 磺基 - 苯基 ] 甲基 ]- 二甲基 - 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸鹽
向 步驟 3之產物(20 mg，18.2 µmol)於DMF (900 µL)中之溶液中依次添加3-[2-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)乙氧基]丙酸(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯(8.5 mg，27.3 µmol)及DIPEA (9.5 µL, 54.5 µmol)。在室溫下攪拌溶液1.5 h。粗產物使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於Xbridge®管柱上且使用NH 4HCO 3方法純化，得到標題化合物(15.7 mg)。HRMS (ESI) [M+H] +1294.4278 δ= 1 ppm。 方法 J 製備 L21A-P2 ： 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 -[[2-[2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6- 羧基 -3,4,5- 三羥基 - 四氫哌喃 -2- 基 ] 乙基 ]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 二甲基 - 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸鹽 步驟 1 ： 三級丁基 - [(2- 碘 -4- 硝基 - 苯基 ) 甲氧基 ]- 二甲基 - 矽烷
向(2-碘-4-硝基-苯基)甲醇(172 g，61.64 mmol)於二氯甲烷(300 mL)中之溶液中添加咪唑(5.04 g，73.97 mmol)。在將混合物冷卻至0℃之後，在15 min內逐滴添加三級丁基 -氯-二甲基-矽烷(TBDMSCl) (11.15 g，73.97 mmol)於二氯甲烷(300 mL)中之溶液。在室溫下攪拌16 h之後，反應混合物用甲醇(20 mL)淬滅且濃縮至乾燥。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/環己烷之梯度)純化粗產物，得到所需產物(19.65 g)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 8.57 (s, 1H), 8.31 (d, 1H), 7.66 (d, 1H), 4.67 (s, 2H), 0.92 (s, 9H), 0.14 (s, 6H). 步驟 2 ： (2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5- 三乙醯氧基 -6-[2-[2-[[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基甲基 ]-5- 硝基 - 苯基 ] 乙炔基 ] 四氫哌喃 -2- 甲酸甲酯
向 步驟 1之產物(3.0 g，7.63 mmol)於DMF (55 mL)中之溶液中依次添加(2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5-三乙醯氧基-6-乙炔基-四氫哌喃-2-甲酸甲酯(3.39 g，9.92 mmol)、DIPEA (5.80 mL, 35.09 mmol)、碘化銅(145 mg，0.763 mmol)及二氯-雙-(三苯基膦)鈀(II) (535 mg，0.763 mmol)。溶液用氬氣沖洗且在室溫下攪拌16 h。在用水(300 mL)稀釋之後，水層用乙酸乙酯(2×300 mL)萃取。合併之有機層用水(2×300 mL)洗滌，乾燥，過濾且濃縮至乾燥。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/環己烷之梯度)純化粗產物，得到所需產物(4.01 g)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 8.32 (dd, 1H), 8.19 (d, 1H), 7.75 (d, 1H), 5.45 (t, 1H), 5.16 (t, 1H), 5.02-5.07 (m, 2H), 4.82 (s, 2H), 4.55 (d, 1H), 3.65 (s, 3H), 1.98-2.07 (m, 9H), 0.92 (m,9H), 0.14 (s, 6H)。 步驟 3 ： (2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5- 三乙醯氧基 -6-[2-[2-( 羥甲基 )-5- 硝基 - 苯基 ] 乙炔基 ] 四氫哌喃 -2- 甲酸甲酯
向 步驟 2之產物(4.01 g，6.60 mmol)於THF (48 mL)及水(48 mL)中之溶液中添加乙酸(193 mL，3.36 mol)。將溶液在室溫下攪拌2天，接著用水(300 mL)稀釋。用二氯甲烷(2×300 mL)萃取水層。合併之有機層用水(2×300 mL)及碳酸氫鈉飽和水溶液(400 mL)洗滌，乾燥，過濾且濃縮至乾燥。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/環己烷之梯度)純化粗產物，得到所需產物(2.67 g)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 8.29 ( dd, 1H), 8.15 ( d, 1H), 7.79 ( d, 1H), 5.68 ( t, 1H), 5.45 ( t, 1H), 5.16 ( t, 1H), 5.02-5.07 ( m, 2H), 4.62 ( d, 2H), 4.55 ( d, 1H), 3.65 ( s, 3H), 1.98-2.07 ( m, 9H)。 步驟 4 ： (2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5- 三乙醯氧基 -6-[2-[5- 胺基 -2-( 羥甲基 ) 苯基 ] 乙基 ] 四氫哌喃 -2- 甲酸甲酯
將 步驟 3之產物(2.67 g，5.41 mmol)於THF (59 mL)中之溶液用氬氣吹掃。添加5%乾燥鉑/碳(1.34 g，50% w/ w)後，反應混合物依次用氬氣及H 2沖洗，接著在室溫下在H 2氛圍(1 atm)下攪拌2天。反應混合物經由矽藻土墊過濾，用乙酸乙酯/甲醇9/1之溶液(500 mL)洗滌，且濃縮至乾燥。重複所有順序(包括添加5%乾燥鉑/碳(1.34 g，50% w/ w)、在H 2(1 atm)下在室溫下攪拌16 h及經由Celite®墊過濾)以允許完全轉化。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/環己烷之梯度)純化粗產物，得到所需產物(1.12 g)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 6.93 (d, 1H). 6.67-6.33 (m, 2H), 5.30 (t, 1H), 4.96 (t, 1H), 4.88 (s, 2H), 4.81 (t, 1H), 4.61 (t, 1H), 4.39 (d, 1H), 4.29-4.24 (m, 2H), 3.78-3.72 (m, 1H), 3.65 (s, 3H), 2.65-2.54 (m, 2H), 2.07-1.98 (m, 9H), 1.79-1.68 (m, 1H), 1.63-1.52 (m, 1H)。 步驟 5 ： (2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5- 三乙醯氧基 -6-[2-[5-[[(2S)-2-( 三級丁氧羰基胺基 )-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ]-2-( 羥甲基 ) 苯基 ] 乙基 ] 四氫哌喃 -2- 甲酸甲酯
向 步驟 4之產物(1.00 g，2.14 mmol)於DMF (21 mL)中之溶液中依次添加(2S)-2-(三級丁氧羰基胺基)-5-脲基-戊酸(Boc-Cit-OH) (589 mg，2.14 mmol)、DIPEA (707 µl, 4.28 mmol)及HBTU (1.22 g，3.21 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物72 h。在用水(100 mL)稀釋且濃縮之後，藉由矽膠層析(甲醇/二氯甲烷之梯度)純化粗產物，得到所需產物(1.05 g)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 9.82 (s, 1H), 7.35-7.42 (m, 2H), 7.24 (d, 1H), 6.95 (d, 1H), 5.94 (t, 1H), 5.37 (s, 2H), 5.30 (t, 1H), 4.91-4.99 (m, 2H), 4.79 (t, 1H), 4.36-4.42 (m, 3H), 4.01-4.08 (m, 1H), 3.76 (t, 1H), 3.65 (s, 3H), 2.95-3.04 (m, 2H), 2.54-2.65 (m, 2H), 1.98-2.07 (m, 9H), 1.68-1.79 (m, 1H), 1.49-1.63 (m, 3H), 1.30-1.42 (m, 11H)。 步驟 6 ： (2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5- 三乙醯氧基 -6-[2-[5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 )-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ]-2-( 羥甲基 ) 苯基 ] 乙基 ] 四氫哌喃 -2- 甲酸甲酯
在0℃下向 步驟 5之產物(950 mg，1.31 mmol)於二氯甲烷(7.5 mL)中之溶液中添加三氟乙酸(1.9 mL，25.6 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物3小時。將反應混合物濃縮至乾燥且與甲苯(2×50 mL)共蒸發，得到粗化合物。向此粗物質於DMF (13 mL)中之溶液中依次添加(2S)-2-(9H-茀-9-基甲氧基羰基胺基)-3-甲基-丁酸(Fmoc-Val-OH) (467 mg，1.38 mmol)、DIPEA (867 µl, 5.24 mmol)及HBTU (845 mg，2.23 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物16小時。添加飽和碳酸氫鈉水溶液(20 mL)且將混合物在室溫下攪拌1 h，用水(100 mL)稀釋且濃縮至乾燥。藉由矽膠層析(甲醇/二氯甲烷之梯度)且接著藉由逆相C18層析使用中性方法純化粗產物，得到所需產物(680 mg)。LC-MS : MS (ESI) m/z [M+H] += 946.3。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 9.90 (s, 1H). 8.07 (d, 2H), 7.89 (d, 2H), 7.74 (t, 2H), 7.44-7.38 (m, 3H), 7.36-7.28 (m, 3H), 7.24 (d, 1H), 5.94 (t, 1H), 5.37 (s, 2H), 5.30 (t, 1H), 4.99-4.92 (m, 2H), 4.79 (t, 1H), 4.42-4.36 (m, 4H), 4.32-4.19 (m, 3H), 3.94-3.90 (m, 1H), 3.76 (t, 1H), 3.65 (s, 3H), 2.99-2.94 (m, 2H), 2.65-2.54 (m, 2H), 2.07-1.98 (m, 10H), 1.70-1.55 (m, 4H), 1.46-1.36 (m, 2H), 0.89-0.84 (m, 6H). 13C NMR (100 MHz, dmso-d6): δ 171.19, 170.33, 169.58, 169.45, 169.27, 167.77, 158.81, 156.12, 143.89, 143.76, 140.69, 139.48, 137.54, 134.88, 128.44, 127.62, 127.06, 125.35, 120.08, 119.42, 116.65, 75.78, 74.61, 72.65, 71.20, 69.49, 65.68, 60.49, 60.10, 53.14, 52.40, 46.68, 32.32, 30.43, 29.54, 27.19, 26.77, 20.39, 20.34, 20.24, 19.22, 18.25。 步驟 7 ： (2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5- 三乙醯氧基 -6-[2-[2-( 溴甲基 )-5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 )-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 乙基 ] 四氫哌喃 -2- 甲酸甲酯
向 步驟 6之產物(154 mg，0.163 mmol)於THF (8.2 mL)中之溶液中依次添加三苯膦(85.4 mg，0.326 mmol)及1-溴吡咯啶-2,5-二酮(58.0 mg，0.326 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物2 h。在5 h之後，將三苯膦(85.4 mg，0.326 mmol)及1-溴吡咯啶-2,5-二酮(58.0 mg，0.326 mmol)添加至混合物中且在室溫下攪拌反應物15 h。由此獲得之粗產物用於下一步驟中。UPLC-MS : MS (ESI) m/z [M+OMe-Br+H] += 960.7。 步驟 8 ： 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 - 二甲基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 )-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ]-2-[2-[(2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5- 三乙醯氧基 -6- 甲氧羰基 - 四氫哌喃 -2- 基 ] 乙基 ] 苯基 ] 甲基 ] 銨 ; 溴化物
向 步驟 7之產物(207.63 mg，206 µmol)於DMF (5 mL)中之溶液中依次添加2-[[6-(1,3-苯并噻唑-2-基胺基)-5-甲基-嗒𠯤-3-基]-甲基-胺基]-5-[3-[4-[3-(二甲胺基)丙-1-炔基]-2-氟-苯氧基]丙基]噻唑-4-甲酸( P2 )(100 mg，158 µmol)及DIPEA (135 µL, 792 µmol)。在室溫下攪拌反應混合物4 h。粗產物經濃縮且不經進一步處理即用於下一步驟中(246 mg)。 步驟 9 ： 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 - 二甲基 -[[2-[2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6- 羧基 -3,4,5- 三羥基 - 四氫哌喃 -2- 基 ] 乙基 ]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2- 胺基 -3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸鹽 ;2,2,2- 三氟乙酸
向 步驟 8之產物(246 mg，158 µmol)於二㗁烷(2.0 mL)中之溶液中添加單水合氫氧化鋰(39.7 mg，946 µmol)於水(2 ml)中之溶液。反應完成後，添加1 M HCl水溶液直至pH為6-7為止。粗產物使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於Xbridge®管柱上且使用TFA方法純化，得到預期化合物(68 mg)。 步驟 10 ： 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 - 二甲基 -[[2-[2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6- 羧基 -3,4,5- 三羥基 - 四氫哌喃 -2- 基 ] 乙基 ]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸鹽
向 步驟 9之產物(30 mg，21.0 µmol)於DMF (1.2 mL)中之溶液中依次添加3-[2-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)乙氧基]丙酸(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯(12.8 mg，41.3 µmol)於DMF (500 µL)中之溶液及DIPEA (18.3 µL, 105 µmol)。在室溫下攪拌反應混合物3 h。粗產物使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於Xbridge®管柱上且使用TFA方法純化，得到標題化合物(6.5 mg)。HRMS (ESI) [M-CF3COO] +實驗值= 1392.5197 (δ= 0.7 ppm)。 製備 L106A-P2 ： 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 -[[2-[2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6- 羧基 -3,4,5- 三羥基 - 四氫哌喃 -2- 基 ] 乙基 ]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 二甲基 - 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸鹽 步驟 1 ： (3S,4R,5S,6S)-3,4,5- 三乙醯氧基 -6-[2-[2-( 溴甲基 )-5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 )-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 乙基 ] 四氫哌喃 -2- 甲酸甲酯
向(3S,4R,5S,6S)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[2-[5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H-茀-9-基甲氧基羰基胺基)-3-甲基-丁醯基]胺基]丙醯基]胺基]-2-(羥甲基)苯基]乙基]四氫哌喃-2-甲酸甲酯( 製備 L106C - P7，步驟16) (255 mg，297 µmol)於THF (14 mL)中之溶液中依次添加三苯膦(234 mg，890 µmol)及N-溴丁二醯亞胺(158 mg，890 µmol)。在室溫下攪拌反應混合物15 h。反應混合物不經任何處理即用於下一步驟中。 步驟 2 ： 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 - 二甲基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 )-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ]-2-[2-[(2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5- 三乙醯氧基 -6- 甲氧羰基 - 四氫哌喃 -2- 基 ] 乙基 ] 苯基 ] 甲基 ] 銨 ; 溴化物
向 步驟 1之產物(297 µmol)於THF中之懸浮液中依次添加2-[[6-(1,3-苯并噻唑-2-基胺基)-5-甲基-嗒𠯤-3-基]-甲基-胺基]-5-[3-[4-[3-(二甲胺基)丙-1-炔基]-2-氟-苯氧基]丙基]噻唑-4-甲酸( P2) (140 mg，222 µmol)於DMF (3 mL)中之溶液及DIPEA (116 µL, 665 µmol)。在室溫下攪拌反應物60 h。將反應混合物蒸發至乾燥且不經處理即用於下一步驟中。 步驟 3 ： 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 - 二甲基 -[[2-[2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6- 羧基 -3,4,5- 三羥基 - 四氫哌喃 -2- 基 ] 乙基 ]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2- 胺基 -3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸鹽 ;2,2,2- 三氟乙酸
向 步驟 2之產物(222 µmol)於二㗁烷(2 mL)中之溶液中添加LiOH.H 2O (218 mg，5.20 mmol)於水(2 mL)中之溶液。在室溫下攪拌溶液2 h。添加1 M HCl水溶液直至pH 6-7為止。將反應混合物蒸發至乾燥且粗產物使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於Xbridge®管柱上且使用TFA方法純化，得到預期化合物(112 mg)。IR: (ν cm -1) 3500-2500, 2237, 1667, 1197/1180/1130。 1H NMR (400/500 MHz, dmso-d6) δ ppm 12.55 (m), 10.35 (s), 8.65 (d), 8.1 (大), 7.89 (d, 1 H), 7.67 (s, 1 H), 7.66 (dd, 1 H), 7.53 (df, 1 H), 7.48 (m, 1 H), 7.4 (m, 1 H), 7.38 (m, 1 H), 7.27 (m, 1 H), 7.24 (t, 1 H), 7.2 (dd, 1 H), 7.19 (m, 1 H), 5.3-4.7 (ml), 4.64/4.54 (2d, 2 H), 4.51 (br s, 2 H), 4.5 (m, 1 H), 4.2 (t, 2 H), 3.78 (s, 3 H), 3.6 (m, 1 H), 3.5 (d, 1 H), 3.32 (t, 1 H), 3.28 (t, 1 H), 3.11 (t, 1 H), 3.1-2.9 (m, 4 H), 3.02 (br s, 6 H), 2.98 (m, 1 H), 2.48 (s, 3 H), 2.2-1.5 (m, 5 H), 1.38 (d, 3 H), 0.98 (d, 6 H)。 步驟 4 ： 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 - 二甲基 -[[2-[2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6- 羧基 -3,4,5- 三羥基 - 四氫哌喃 -2- 基 ] 乙基 ]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 銨 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
向呈溶解狀態之 步驟 3之產物(60 mg，44.8 µmol)於DMF (2.25 mL)中之溶液中依次添加3-[2-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)乙氧基]丙酸(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯(20.9 mg，67.2 µmol)及DIPEA (23.4 µL, 134 µmol)。將溶液在室溫下攪拌3 h。粗產物使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於Xbridge®管柱上且使用TFA方法純化，得到所需產物(28.5 mg)。IR: (ν cm -1) 3600-3100, 2800-2200, 2234, 1705+1687+1614, 1537。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 12.5 (m, 2H), 10.5/8.20/7.90 (s+2d, 3H), 7.80 (d, 1H), 7.68 (2s, 2H), 7.60-7.40 (m, 4H), 7.40 (m, 2H), 7.20 (2t, 2H), 7.00 (s, 2H), 5.20-5.00 (m, 3H), 4.62/4.53 (2d, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.38 (t, 1H), 4.20 (t, 4H), 3.80(s, 3H), 3.60-3.00 (m, 10H), 3.02 (2s, 6H), 2.81 (m, 2H), 2.45 (s, 3H), 2.42/2.30 (2t, 4H), 2.15 (m, 2H), 2.00 (m, 1H), 1.95 (m, 2H), 1.30 (d, 3H), 0.89/0.82 (2d, 6H). HRMS (ESI) [M-CF 3CO 2] +=1306.4715 (δ=0.6 ppm)。 製備 L106C-P7 ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-5-[3-[4-[3-[[2-[2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6- 羧基 -3,4,5- 三羥基 - 四氫哌喃 -2- 基 ] 乙基 ]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 - 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸 步驟 1 ： 2- 碘 -4- 硝基 - 苯甲酸
向2-胺基-4-硝基-苯甲酸(10.0 g，54.90 mmol)於乙腈(280 mL)中之溶液中添加對甲苯磺酸單水合物(32.0 g，168.2 mmol)。在室溫下攪拌混合物15 min，接著在15 min內逐滴添加含有亞硝酸鈉(8.00 g，115.9 mmol)及碘化鉀(24.0 g，144.6 mmol)於水(140 mL)中之溶液。攪拌反應混合物19 h。反應完成後，混合物用硫代硫酸鈉(13.02 g，82.36 mmol)淬滅且用3 M氯化氫水溶液(25 mL)酸化。用乙酸乙酯(2×250 mL)萃取水層，且合併之有機層用1 M氯化氫水溶液(100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，且濃縮至乾燥。將所得殘餘物溶解於二氯甲烷(1 L)中且用1 M HCl水溶液(100 mL)洗滌。有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮，得到所需產物(15.0 g)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 13.8 (br s, 1H), 8.64 (s, 1H), 8.27 (d, 1H), 7.86 (d, 1H)。 步驟 2 ： (2- 碘 -4- 硝基 - 苯基 ) 甲醇
向 步驟 1之產物(5.0 g，17.06 mmol)於THF (70 mL)中之溶液中添加1 M硼烷於THF (85 mL，85 mmol)中之溶液。在65℃下攪拌反應混合物4 h。使反應混合物冷卻至室溫且藉由添加甲醇(200 mL)淬滅。在室溫下攪拌混合物30 min且濃縮至乾燥。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/環己烷之梯度)純化粗產物，得到所需產物(3.38 g)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 8.54 (d, 1H), 8.29 (dd, 1H), 7.70 (d, 1H), 5.82 (t, 1H), 4.47 (d, 2H)。 步驟 3 ： (4- 胺基 -2- 碘 - 苯基 ) 甲醇
向 步驟 2之產物(3.70 g，13.26 mmol)於乙醇(100 mL)及水(25 mL)中之溶液中依次添加鐵(3.70 g，66.25 mmol)及氯化銨(800 mg，14.96 mmol)。在80℃下攪拌反應混合物3 h。反應混合物經Celite®過濾，用乙醇洗滌且濃縮至乾燥。將所得殘餘物溶於乙酸乙酯(100 mL)中，且用碳酸氫鈉飽和溶液(100 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至乾燥，得到所需產物(2.48 g)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 7.02-7.10 (m, 2H), 6.57 (d, 1H), 5.16 (s, 2H), 4.97 (t, 1H), 4.28 (d, 2H)。 步驟 4 ： 4-[[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基甲基 ]-3- 碘 - 苯胺
向 步驟 3之產物(3.51 g，13.37 mmol)於二氯甲烷(150 mL)中之溶液中添加咪唑(0.95 g，13.95 mmol)。將混合物冷卻至0℃且在15分鐘內逐滴添加三級丁基 -氯-二甲基-矽烷(2.40 mL, 13.85 mmol)於二氯甲烷(150 mL)中之溶液。在室溫下攪拌16 h之後，反應混合物用甲醇(20 mL)淬滅且濃縮。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/環己烷之梯度)純化粗產物，得到所需產物(3.64 g，75%)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 7.05 (s, 1H), 7.03 (d, 1H), 6.55 (d, 1H), 5.24 (s, 2H), 4.46 (s, 2H), 0.88 (s, 9H), 0.06 (s, 6H)。 步驟 5 ： (2S)-2-[[(2S)-2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 )-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙酸
向(2S)-2-胺基丙酸(3.22 g，36.09 mmol)於水(90 mL)中之溶液中依次添加碳酸鈉(7.29 g，68.74 mmol)及(2S)-2-(9H-茀-9-基甲氧基羰基胺基)-3-甲基-丁酸(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯(15.0 g，34.37 mmol)於二甲氧基乙烷(90 mL)中之溶液。在室溫下攪拌反應混合物16 h。在用1 M鹽酸水溶液酸化反應物直至pH=1之後，用乙酸乙酯(3×500 mL)萃取水層。將合併之有機層乾燥，濃縮，且用二乙醚(50 mL)濕磨，得到所需產物(11.25 g)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ 12.48 (s, 1H), 8.21 (d, 1H), 7.89 (d, 2H), 7.72-7.79 (m, 2H), 7.28-7.46 (m, 5H), 4.15-4.32 (m, 4H), 3.90 (t, 1H), 1.90-2.02 (m, 1H), 1.28 (d, 3H), 0.86-0.90 (m, 6H)。 步驟 6 ： N-[(1S)-1-[[(1S)-2-[4-[[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基甲基 ]-3- 碘 - 苯胺基 ]-1- 甲基 -2- 側氧基 - 乙基 ] 胺甲醯基 ]-2- 甲基 - 丙基 ] 胺基甲酸 9H- 茀 -9- 基甲酯
向 步驟 5之產物(1.50 g，3.65 mmol)於二氯甲烷(18 mL)及甲醇(18 mL)中之溶液中依次添加 步驟 4之產物(1.33 g，3.65 mmol)及2-乙氧基-2H-喹啉-1-甲酸乙酯(EEDQ) (1.36 g，5.48 mmol)。在室溫下攪拌懸浮液16 h。在濃縮之後，藉由矽膠層析(乙酸乙酯/環己烷之梯度)且接著藉由C18層析(甲醇/水之梯度)純化粗產物，得到所需產物(1.18 g)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 10.05 (s, 1H). 8.16-8.24 (m, 2H), 7.88 (d, 2H), 7.71-7.77 (m, 2H), 7.55 (d, 1H), 7.37-7.48 (m, 3H), 7.27-7.37 (m, 3H), 4.56 (s, 2H), 4.38 (t, 1H), 4.18-4.33 (m, 3H), 3.91 (t, 1H), 2.08-2.20 (m, 1H), 1.30 (d, 3H), 0.83-0.95 (m, 15H), 0.06 (s, 6H)。 步驟 7 ： (3R,4S,5R,6R)-3,4,5- 三苯甲氧基 -6-( 苯甲氧基甲基 ) 四氫哌喃 -2- 酮
將(3R,4S,5R,6R)-3,4,5-三苯甲氧基-6-(苯甲氧基甲基)四氫哌喃-2-醇(30.0 g，55.49 mmol)於DMSO (120 mL)中之懸浮液在室溫下攪拌30 min且在室溫下經15 min用乙酸酐(90 mL)逐滴處理。將溶液攪拌16 h，冷卻至0℃，且用1 M氯化氫水溶液(100 mL)處理。在室溫下攪拌反應混合物20 min且蒸發乙酸。用水(200 mL)及乙酸乙酯(200 mL)稀釋所得殘餘物。水層用乙酸乙酯(2×200 mL)萃取且合併之有機層用水(2×500 mL)及飽和碳酸氫鈉溶液(2×500 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮，且藉由矽膠層析(乙酸乙酯/環己烷之梯度)純化，得到所需產物(25.05 g)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 7.19-7.39 (m, 20H), 4.85 (d, 1H), 4.57-4.72 (m, 5H), 4.46-4.56 (m, 3H), 4.36 (d, 1H), 3.98-4.05 (m, 1H), 3.84-3.92 (m, 1H), 3.65-3.76 (m, 2H). 步驟 8 ： (3R,4S,5R,6R)-3,4,5- 三苯甲氧基 -6-( 苯甲氧基甲基 )-2-(2- 三甲基矽基乙炔基 ) 四氫哌喃 -2- 醇
在-78℃下在20分鐘內向三甲基矽基乙炔(24 mL，168.6 mmol)於THF (325 mL)中之溶液中添加2.5 M丁基鋰於己烷溶液(59.41 mL，148.5 mmol)。溶液在-78℃下攪拌45 min且在0℃下攪拌45 min。使反應混合物冷卻至-78℃且經45 min逐滴添加 步驟 7之產物(25.0 g，46.41 mmol)於THF (325 mL)中之溶液。將反應混合物在此溫度下攪拌4 h且用水(200 mL)淬滅。用乙酸乙酯(2×200 mL)萃取水層。合併之有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至乾燥，得到比率為4/6的呈兩種非鏡像異構物之混合物形式之所需產物(29.56 g)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 7.13-7.43 (m, 20H), 4.87-4.99 (m, 1H), 4.65-4.83 (m, 4H), 3.43-3.57 (m, 3H), 3.70-3.85 (m, 2H), 3.55-3.68 (m, 3H), 3.43-3.53 (m, 2H), 0.11-0.22 (m, 9H)。 步驟 9 ：三甲基 -[2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-3,4,5- 三苯甲氧基 -6-( 苯甲氧基甲基 ) 四氫哌喃 -2- 基 ] 乙炔基 ] 矽烷
在-15℃下在20 min內向 步驟 8之產物(29.56 g，46.42 mmol)於乙腈(83 mL)及二氯甲烷(193 mL)中之溶液中添加三乙基矽烷(44.98 mL，278.5 mmol)於乙腈/二氯甲烷之混合物(37 mL/18 mL)中之溶液，且在30 min內向其中添加三氟化硼合二乙醚(23.53 mL，185.7 mmol)於乙腈(37 mL)中之溶液。將溶液在相同溫度下攪拌5 h且用水(500 mL)稀釋。用乙酸乙酯(2×500 mL)萃取水層。合併之有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且濃縮至乾燥，得到所需產物(28.82 g)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 7.10-7.44 (m, 20H), 4.93 (d, 1H), 4.67-4.86 (m, 4H), 4.43-4.57 (m, 3H), 4.16-4.28 (m, 1H), 3.42-3.68 (m, 6H), 0.15 (s, 9H)。 步驟 10 ： (2R,3R,4R,5S,6S)-3,4,5- 三苯甲氧基 -2-( 苯甲氧基甲基 )-6- 乙炔基 - 四氫哌喃
向 步驟 9之產物(28.80 g，46.39 mmol)於甲醇(1.12 L)及二氯甲烷(240 mL)中之溶液中添加1 M氫氧化鈉水溶液(80 mL)。將溶液在室溫下攪拌1小時，用1 M氯化氫水溶液酸化至pH=1，且用水(500 mL)稀釋。蒸發甲醇，且用乙酸乙酯(2×1 L)萃取水層。合併之有機層經硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮且藉由矽膠層析(乙酸乙酯/環己烷之梯度)純化，得到所需產物(20.00 g)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 3.42-3.67 (m, 7H), 4.17 (d, 1H), 4.44-4.56 (m, 3H), 4.67-4.86 (m, 4H), 4.90 (d, 1H), 7.15-7.40 (m, 20H)。 步驟 11 ： (2S,3R,4R,5S,6R)-2- 乙炔基 -6-( 羥甲基 ) 四氫哌喃 -3,4,5- 三醇
在室溫下經5 min向 步驟 10之產物(20.00 g，36.45 mmol)於乙硫醇(400 mL)中之溶液中逐滴添加三氟化硼合二乙醚(147.8 mL，1166 mmol)。將溶液在室溫下攪拌16 h，冷卻至0℃，裝備含有次氯酸鈉飽和水溶液之氣體阱，且在0℃下在1 h內藉由碳酸氫鈉飽和水溶液(500 mL)逐滴處理。在濃縮至乾燥之後，藉由矽膠層析(甲醇/二氯甲烷之梯度)純化粗產物，得到所需產物(4.05 g)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 5.28 (d, 1H), 4.99 (d, 1H), 4.91 (d, 1H), 4.52 (t, 1H), 3.77 (d, 1H), 3.60-3.69 (m, 1H), 3.35-3.43 (m, 1H), 3.32 (s, 1H), 2.97-3.13 (m, 4H)。 步驟 12 ： (2S,3S,4R,5R,6S)-6- 乙炔基 -3,4,5- 三羥基 - 四氫哌喃 -2- 甲酸甲酯
向 步驟 11之產物(4.05 g，21.52 mmol)於碳酸氫鈉飽和水溶液(81 mL)及THF (81 mL)中之溶液中添加(2,2,6,6-四甲基哌啶-1-基)氧基(TEMPO) (168 mg，1.08 mmol)。將懸浮液冷卻至0℃且在30 min內逐份添加1,3-二溴-5,5-二甲基-咪唑啶-2,4-二酮(12.31 g，43.04 mmol)。將反應混合物在0℃下攪拌4 h且藉由添加甲醇(40 mL)淬滅。在此溫度下攪拌30分鐘之後，添加碳酸鉀飽和水溶液(10 mL)及二氯甲烷(100 mL)。在用水(2×200 mL)萃取有機層之後，合併之水層用3M氯化氫水溶液酸化直至pH=1且濃縮至乾燥。將殘餘物溶解於甲醇(100 mL)及3M鹽酸水溶液(20 mL)中。將混合物濃縮且與甲醇(4×100 mL)共蒸發若干次。藉由矽膠層析(甲醇/二氯甲烷鈰顯影劑之梯度)純化粗產物，得到所需產物(3.00 g)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 5.46 (d, 1H), 5.32 (d, 1H), 5.18 (d, 1H), 3.93-4.00 (m, 1H), 3.75 (dd, 1H), 3.65 (s, 3H), 3.40-3.44 (m, 1H), 3.31 (s, 1H), 3.09-3.19 (m, 2H). 步驟 13 ： (2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5- 三乙醯氧基 -6- 乙炔基 - 四氫哌喃 -2- 甲酸甲酯
向 步驟 12之產物(3.00 g，13.88 mmol)於DMF (37.5 mL)及吡啶(12.5 mL)中之溶液中添加 N , N-二甲基吡啶-4-胺(DMAP) (84.8 mg，0.693 mmol)。使反應混合物冷卻至0℃且經5 min用乙酸酐(20.0 mL，213 mmol)逐滴處理。將溶液在室溫下攪拌3 h且用1 M氯化氫水溶液(200 mL)稀釋。用乙酸乙酯(2×200 mL)萃取水層。合併之有機層用1M氯化氫水溶液(2×200 mL)及碳酸鉀飽和水溶液(200 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮且藉由矽膠層析(乙酸乙酯/環己烷鈰顯影劑之梯度)純化，得到所需產物(4.60 g)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 5.33 (t, 1H), 4.93-5.01 (m, 2H), 4.70 (d, 1H), 4.44 (d, 1H), 3.67 (s, 1H), 3.64 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.94-2.01 (m, 6H)。 步驟 14 ： (2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5- 三乙醯氧基 -6-[2-[2-[[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基甲基 ]-5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 )-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 乙炔基 ] 四氫哌喃 -2- 甲酸甲酯
向 步驟 13之產物(496 mg，1.45 mmol)於DMF (7.3 mL)中之溶液中依次添加 步驟 6之產物(730 mg，0.966 mmol)、DIPEA (738 µL，4.47 mmol)、碘化銅(18.4 mg，96.6 mmol)及二氯-雙-(三苯基膦)鈀(II) (67.8 mg，96.6 mmol)。溶液用氬氣沖洗且在室溫下攪拌16 h。在用水(100 mL)稀釋之後，水層用乙酸乙酯(2×100 mL)萃取。合併之有機層用水(2×200 mL)及氯化銨飽和水溶液(2×200 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮且藉由矽膠層析(乙酸乙酯/環己烷之梯度)純化，得到所需產物(782 mg)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 10.09 (s, 1H). 8.20 (d, 1H), 7.89 (d, 2H), 7.70-7.78 (m, 3H), 7.55 (d, 1H), 7.32-7.46 (m, 4H), 7.27-7.32 (m, 2H), 5.41 (t, 1H), 4.96-5.14 (m, 3H), 4.67 (s, 2H), 4.51 (d, 1H), 4.36-4.44 (m, 1H), 4.16-4.32 (m, 3H), 3.88-3.95 (m, 1H), 3.64 (s, 3H), 1.94-2.07 (m, 10H), 1.30 (d, 3H), 0.84-0.93 (m, 15H), 0.08 (s, 6H)。 步驟 15 ： (3S,4R,5S,6S)-3,4,5- 三乙醯氧基 -6-[2-[2-[[ 三級丁基 ( 二甲基 ) 矽基 ] 氧基甲基 ]-5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 )-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 乙基 ] 四氫哌喃 -2- 甲酸甲酯
將 步驟 14之產物(750 mg，0.773 mmol)於THF (15 mL)中之溶液用氬氣沖洗，用乾燥鉑5%/碳(75 mg，50% w/ w)處理，依次用氬氣及H 2沖洗，且在H 2氛圍(1 atm)下在室溫下攪拌16 h。反應混合物經由Celite®墊過濾，用THF洗滌，且濃縮至乾燥。完整順序(包括添加乾燥鉑5%/碳(75 mg，50% w/ w)，在H 2氛圍(1 atm)下在室溫下攪拌16 h，及經由Celite®墊過濾)再進行4次。藉由矽膠層析(乙酸乙酯/環己烷之梯度)純化粗產物，得到所需產物(470 mg)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 9.90 (s, 1H), 8.16 (d, 1H), 7.89 (d, 2H), 7.70-7.78 (m, 2H), 7.37-7.49 (m, 4H), 7.27-7.32 (m, 3H), 7.23 (d, 1H), 5.29 (t, 1H), 4.95 (t, 1H), 4.78 (t, 1H), 4.60 (s, 2H), 4.34-4.44 (m, 2H), 4.16-4.32 (m, 3H), 3.88-3.95 (m, 1H), 3.72-3.79 (m, 1H), 3.64 (s, 3H), 2.69-2.78 (m, 1H), 2.50-2.60 (m, 1H), 1.92-2.03 (m, 10H), 1.55-1.75 (m, 2H), 1.30 (d, 3H), 0.84-0.93 (m, 15H), 0.05 (s, 6H)。 步驟 16 ： (3S,4R,5S,6S)-3,4,5- 三乙醯氧基 -6-[2-[5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 )-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ]-2-( 羥甲基 ) 苯基 ] 乙基 ] 四氫哌喃 -2- 甲酸甲酯
向 步驟 15之產物(470 mg，0.483 mmol)於THF (540 µL)及水(540 µL)中之溶液中添加乙酸(1.6 mL，28.28 mmol)。將溶液在室溫下攪拌16 h且用水(100 mL)稀釋。用乙酸乙酯(2×100 mL)萃取水層。合併之有機層用水(2×200 mL)及碳酸氫鈉飽和水溶液(200 mL)洗滌，經硫酸鈉乾燥，過濾，濃縮且藉由矽膠層析(乙酸乙酯/環己烷之梯度)純化，得到所需產物(354 mg)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 9.87 (s, 1H), 8.16 (d, 1H), 7.89 (d, 2H), 7.70-7.78 (m, 2H), 7.37-7.50 (m, 4H), 7.27-7.37 (m, 3H), 7.25 (d, 1H), 5.29 (t, 1H), 4.91-4.98 (m, 2H), 4.78 (t, 1H), 4.34-4.44 (m, 4H), 4.16-4.32 (m, 3H), 3.88-3.95 (m, 1H), 3.72-3.79 (m, 1H), 3.64 (s, 3H), 2.64-2.73 (m, 1H), 2.50-2.60 (m, 1H), 1.92-2.03 (m, 10H), 1.69-1.79 (m, 1H), 1.52-1.65 (m, 1H), 1.30 (d, 3H), 0.84-0.93 (m, 6H)。 步驟 17 ： (3S,4R,5S,6S)-3,4,5- 三乙醯氧基 -6-[2-[5-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 )-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ]-2-[(4- 硝基苯氧基 ) 羰基氧基甲基 ] 苯基 ] 乙基 ] 四氫哌喃 -2- 甲酸甲酯
向 步驟 16之產物(310 mg，0.361 mmol)於THF (7.75 mL)中之溶液中依次添加吡啶(146 µL，1.80 mmol)及氯甲酸4-硝基苯基酯(182 mg，0.901 mmol)。將懸浮液在室溫下攪拌16小時，濃縮，且藉由矽膠層析(乙酸乙酯/二氯甲烷之梯度)純化，得到所需產物(257 mg)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6): δ 10.04 (s, 1H), 8.31 (d, 2H), 8.20 (d, 1H), 7.89 (d, 2H), 7.66-7.78 (m, 2H), 7.56 (d, 2H), 7.28-7.52 (m, 8H), 5.31 (t, 1H), 5.25 (s, 2H), 4.96 (t, 1H), 4.79 (t, 1H), 4.40 (d, 2H), 4.16-4.32 (m, 3H), 3.88-3.95 (m, 1H), 3.74-3.83 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 2.74-2.84 (m, 1H), 2.60-2.71 (m, 1H), 1.90-2.03 (m, 10H), 1.72-1.83 (m, 1H), 1.58-1.71 (m, 1H), 1.30 (d, 3H), 0.82-0.94 (m, 6H). LC-MS: MS (ESI) m/z [M+Na] + =1047.6。 步驟 18 ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-[ 甲基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2- 胺基 -3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ]-2-[2-[(2S,3S,4R,5S,6S)-3,4,5- 三乙醯氧基 -6- 甲氧羰基 - 四氫哌喃 -2- 基 ] 乙基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 ] 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
向 步驟 17之產物(130 mg，127 µmol)於DMF (1.5 mL)中之溶液中依次添加2-[[6-(1,3-苯并噻唑-2-基胺基)-5-甲基-嗒𠯤-3-基]-甲基-胺基]-5-[3-[2-氟-4-[3-(甲胺基)丙-1-炔基]苯氧基]丙基]噻唑-4-甲酸 ( P7 )(101 mg，168 µmol)於DMF (1.5 mL)中之溶液及DIPEA (83 µL, 502 µmol)。將反應混合物在室溫下攪拌4 h。粗產物使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於Xbridge®管柱上且使用NH 4HCO 3方法純化，得到所需產物(80 mg)。 步驟 19 ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-[ 甲基 -[[2-[2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6- 羧基 -3,4,5- 三羥基 - 四氫哌喃 -2- 基 ] 乙基 ]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2- 胺基 -3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 ] 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
向 步驟 18之產物(80 mg，62.4 µmol)於DMF (2.0 mL)中之溶液中添加含單水合氫氧化鋰(31.5 mg，750 µmol)之水(500 µL)。在室溫下攪拌反應混合物2 h。粗產物使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於Xbridge®管柱上且使用NH 4HCO 3方法純化，得到所需產物(25 mg)。 步驟 20 ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-5-[3-[2- 氟 -4-[3-[ 甲基 -[[2-[2-[(2S,3R,4R,5S,6S)-6- 羧基 -3,4,5- 三羥基 - 四氫哌喃 -2- 基 ] 乙基 ]-4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 ] 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ] 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
向 步驟 19之產物(25mg，21.9µmol)於DMF (1mL)中之溶液中依次添加3-[2-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)乙氧基]丙酸(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯(11.1 mg，32.9 µmol)及DIPEA (5.4 µL, 32.9 µmol)。在室溫下攪拌溶液1 h。粗產物使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於Xbridge®管柱上且使用TFA方法純化，得到所需產物(5 mg)。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1336.4453 (δ = 0.3ppm)。 製備 L108A-P2 ： 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 -[[4-[(2S,3R,4S,5S,6S)-6- 羧基 -3,4,5- 三羥基 - 四氫哌喃 -2- 基 ] 氧基 -3-[3-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ] 丙醯基胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 二甲基 - 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸鹽 步驟 1 ： 2-[(6- 氯 -5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 )- 甲基 - 胺基 ]-5-(3- 氯丙基 ) 噻唑 -4- 甲酸乙酯
在0℃下經0.5h時段向冷卻至0℃之5-(3-氯丙基)-2-(甲胺基)噻唑-4-甲酸乙酯(來自 製備 3e _ 01，15.44 g，58.5 mmol)於THF (600 mL)中之溶液中逐份添加NaH (60%於油中) (2.8 g，70.6 mmol)。在0℃下攪拌懸浮液0.5 h。接著在0℃下向此懸浮液中逐滴添加呈溶液狀態之3,6-二氯-4-甲基-嗒𠯤(23.0 g，141 mmol)於THF (200 mL)中之溶液。將反應混合物在室溫下攪拌15 h，冷卻至0℃且接著緩慢添加水(25 mL)。用AcOEt萃取水層3次且經MgSO 4乾燥有機層。粗產物藉由矽膠層析(AcOEt/石油醚之梯度)純化，得到所需產物(7.0 g，18.0 mmol)。IR: (ν cm -1) 3450, 1698, 1203。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.81 (s, 1 H), 4.3 (四重峰, 2 H), 3.78 (s, 3 H), 3.31 (t, 2 H), 3.2 (m, 2 H), 2.4 (s, 3 H), 2.12 (五重峰, 2 H), 1.31 (t, 3 H)。 步驟 2 ： 2-[(6- 氯 -5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 )- 甲基 - 胺基 ]-5-(3- 碘丙基 ) 噻唑 -4- 甲酸乙酯
向 步驟 1之產物(7.0 g，18.0 mmol)於丙酮(120 mL)中之溶液中添加碘化鈉(27 g，178 mmol)且將懸浮液在回流(60℃)下加熱15 h。在將反應混合物冷卻至室溫之後，將沈澱物過濾，用丙酮洗滌且將濾液蒸發至乾燥。所得黃色固體用乙醚濕磨，過濾且在35℃下經五氧化二磷(P 2O 5)乾燥48 h，得到呈棕色固體狀之所需產物(7.6 g，15.8 mmol)。IR: (ν cm -1) 1703, 1591。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.82 (df, 1 H), 7.28 (dd, 1 H), 7.2 (dd, 1 H), 7.13 (t, 1 H), 4.26 (q, 2 H), 4.12 (t, 2 H), 3.77 (s, 3 H), 3.41 (s, 2 H), 3.26 (t, 2 H), 2.42 (s, 3 H), 2.22 (s, 6 H), 2.11 (m, 2 H), 1.29 (t, 3 H)。 步驟 3 ： 2-[(6- 氯 -5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 )- 甲基 - 胺基 ]-5-[3-[4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸乙酯
向 步驟 2之產物(3.5 g，7.28 mmol)於THF (400 mL)中之溶液中依次添加4-[3-(二甲胺基)丙-1-炔基]-2-氟-苯酚(來自 製備 6b _ 01，1.74 g，8.74 mmol)於THF (100 mL)中之溶液及碳酸銫(Cs 2CO 3) (4.73 g，8.74 mmol)。在回流(70℃)下加熱反應混合物15 h。將反應混合物冷卻至室溫，倒入水(100 mL)中且用AcOEt萃取3次。有機層用鹽水洗滌，經MgSO 4乾燥且蒸發至乾燥。藉由矽膠層析(甲醇/DCM之梯度)純化粗產物，得到所需產物(2.40 g，4.39 mmol)。IR: (ν cm -1) 1698, 1H NMR (400/500 MHz, dmso-d6) δ ppm 7.8 (s, 1 H), 4.3 (四重峰, 2 H), 3.8 (s, 3 H), 3.7 (t, 2 H), 3.2 (m, 2 H), 2.4 (s, 3 H), 2.1 (五重峰, 2 H), 1.3 (t, 3 H)。 步驟 4 ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-5-[3-[4-[3-( 二甲胺基 ) 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸乙酯
向 步驟 3之產物(961 mg，1.76 mmol)及1,3-苯并噻唑-2-胺(317 mg，2.11 mmol)於NMP (10 mL)中之氬氣飽和溶液中依次添加4,5-雙(二苯基膦基)-9,9-二甲基二苯并哌喃(Xantphos) (509 mg，0.88 mmol)及參(二苯亞甲基丙酮)二鈀(0) (Pd 2(dba) 3) (12.9 mg，0.044 mmol)。反應混合物再次用氬氣飽和15 min，添加DIEPA (1 mL，5.28 mmol)且在150℃下攪拌反應混合物15 h。將反應混合物冷卻至室溫，添加水且用DCM萃取水相若干次。收集有機相，用鹽水洗滌，經MgSO 4乾燥且蒸發至乾燥。藉由矽膠層析(甲醇/DCM之梯度)純化粗產物，得到所需化合物(540 mg，0.818 mmol)。 IR: (ν cm -1) 3700-2300, 1706。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 11.55 (m, 1 H), 7.91 (d, 1 H), 7.68 (s, 1 H), 7.53 (d, 1 H), 7.39 (m, 1 H), 7.3 (dd, 1 H), 7.26-7.13 (m, 3 H), 4.26 (q, 2 H), 4.15 (t, 2 H), 3.77 (s, 3 H), 3.4 (s, 2 H), 3.27 (m, 2 H), 2.46 (s, 3 H), 2.21 (s, 6 H)。 步驟 5 ： 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 -[[3-[3-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 ) 丙醯基胺基 ]-4-[(2S,3R,4S,5S,6S)-3,4,5- 三乙醯氧基 -6- 甲氧羰基 - 四氫哌喃 -2- 基 ] 氧基 - 苯基 ] 甲基 ]- 二甲基 - 銨
向 步驟 4之產物(75 mg，0.119 mmol)於DMF (2 mL)中之溶液中添加DIPEA (40 µL，0.237 mmol)及(2S,3S,4S,5R,6S)-3,4,5-三乙醯氧基-6-[4-(溴甲基)-2-[3-(9H-茀-9-基甲氧基羰基胺基)丙醯基胺基]苯氧基]四氫哌喃-2-甲酸甲酯(WO2017096311A1，128 mg，0.158 mmol)且在室溫下攪拌反應物2 h。粗產物使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於Xbridge®管柱上且使用TFA方法純化，得到所需化合物(88 mg，51%產率)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 8.9/8.2/7.35 (2s+m, 3 H), 7.9-7.2 (m, 11 H), 7.88 (d, 2 H), 7.68 (d, 2 H), 7.4/7.3 (2t, 4 H), 5.7 (d, 1 H), 5.52 (t, 1 H), 5.21 (t, 1 H), 5.1 (t, 1 H), 4.78 (d, 1 H), 4.52/4.4 (2s, 4 H), 4.3-4.15 (m, 7 H), 3.78 (s, 3 H), 3.62 (s, 3 H), 3.3 (m, 4 H), 3.08 (s, 6 H), 2.55 (m, 2 H), 2.48 (s, 3 H), 2.15 (m, 2 H), 2.01 (3s, 9 H), 1.3 (t, 3 H). LCMS m/z = 660。 步驟 6 ： [3-(3- 胺基丙醯基胺基 )-4-[(2S,3R,4S,5S,6S)-6- 羧基 -3,4,5- 三羥基 - 四氫哌喃 -2- 基 ] 氧基 - 苯基 ] 甲基 -[3-[4-[3-[2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 ]- 二甲基 - 銨
向 步驟 5之產物(85 mg，0.06 mmol)於MeOH (4 mL)中之溶液中添加LiOH二水合物(64 mg，1.53 mmol)且在室溫下攪拌反應物5 h。粗產物藉由Porapack®使用NH 3/MeOH 7N作為溶離劑來純化，得到所需化合物(55 mg，91%產率)。 步驟 7 ： 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 -[[4-[(2S,3R,4S,5S,6S)-6- 羧基 -3,4,5- 三羥基 - 四氫哌喃 -2- 基 ] 氧基 -3-[3-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ] 丙醯基胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 二甲基 - 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸鹽
向 步驟 6之產物(50mg，0.05 mmol)於DMF (6 mL)中之溶液中依次添加DIPEA (30 µL，0.179 mmol)及3-[2-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)乙氧基]丙酸(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯(28 mg，0.09 mmol)。在室溫下攪拌溶液1.5 h。粗產物使用C18逆相製備型HPLC藉由將反應混合物直接沈積於Xbridge®管柱上且使用TFA方法純化，得到所需產物(15 mg，20%產率)。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 8.4 (br s, 1 H), 7.9 (m, 1 H), 7.7 (br s, 1 H), 7.6 (dd, 1 H), 7.5 (dl, 1 H), 7.45 (dl, 1 H), 7.4 (td, 1 H), 7.25 (m, 3 H), 7.2 (t, 1 H), 7 (s, 2 H), 5 (d, 1 H), 4.55/4.4 (2 br s, 4 H), 4.2 (t, 2 H), 4 (d, 1 H), 3.8 (s, 3 H), 3.55 (2t, 4 H), 3.45 (m, 2 H), 3.45/3.4 (2m, 3 H), 3.35 (m, 2 H), 3.3 (t, 2 H), 3.1 (br s, 6 H), 2.6 (t, 2 H), 2.45 (s, 3 H), 2.15 (t, 2 H), 2.15 (五重峰, 2 H)。 19F NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm -133.8。HRMS (ESI) [M-CF 3CO 2] +，實驗值= 1195.3690 (δ = 2.5 ppm) 製備 L107C-P7 ： 2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-[3-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 丙醯基胺基 ] 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 - 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
根據 方法 G，藉由將2-[2-[2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙酸替換為3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-疊氮基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸來合成產物。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 12.55 (br s, 1 H), 11.5-10.8 (d, 1 H), 9.92 (s, 1 H), 8.16 (d, 1 H), 7.99 (t, 1 H), 7.9 (d, 1 H), 7.86 (d, 1 H), 7.67 (br s, 1 H), 7.64 (diffus, 1 H), 7.58 (d, 2 H), 7.38/7.2 (2m, 3 H), 7.35 (m, 1 H), 7.32 (d, 2 H), 7.15 (t, 1 H), 7 (s, 2 H), 5.03 (s, 2 H), 4.39 (五重峰, 1 H), 4.28 (s, 2 H), 4.2 (dd, 1 H), 4.15 (t, 2 H), 3.77 (s, 3 H), 3.59 (t, 4 H), 3.5 (m, 44 H), 3.36 (t, 2 H), 3.28 (t, 2 H), 3.14 (四重峰, 2 H), 2.9 (s, 3 H), 2.49 (s, 3 H), 2.45/2.33 (2t, 4 H), 2.13 (五重峰, 2 H), 1.96 (oct, 1 H), 1.3 (d, 3 H), 0.87/0.83 (2d, 6 H)。HRMS (ESI) [M+H] +實驗值= 1 687.7071 (δ = 0)。 製備 L107A-P2 ： 3-[4-[3-[2-[[6-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基 - 嗒 𠯤 -3- 基 ]- 甲基 - 胺基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-[3-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 丙醯基胺基 ] 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ] 丙醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 二甲基 - 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 A獲得所需產物。(2S)-2-胺基-N-[(1S)-2-[4-(羥甲基)苯胺基]-1-甲基-2-側氧基-乙基]-3-甲基-丁醯胺及3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[3-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)丙醯基胺基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]丙酸(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯用於 步驟 1，且 P2用作 步驟 3中之適當有效負載。 1H NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 10.2 (s), 8.23 (d), 7.99 (t), 7.89 (大, 1 H), 7.85 (d), 7.76 (d, 2 H), 7.67 (s, 1 H), 7.56 (d, 1 H), 7.5 (d, 2 H), 7.4 (t, 1 H), 7.38 (m, 2 H), 7.24 (t, 1 H), 7.2 (t, 1 H), 6.99 (s, 2 H), 4.55 (s, 2 H), 4.41 (s, 2 H), 4.39 (m, 1 H), 4.2 (m, 1 H), 4.19 (m, 2 H), 3.77 (s, 3 H), 3.65-3.33 (m, 24 H), 3.59 (m, 2 H), 3.29 (t, 2 H), 3.14 (四重峰, 2 H), 3.05 (s, 6 H), 2.46 (s, 3 H), 2.39 (m, 2 H), 2.33 (t, 2 H), 2.15 (m, 2 H), 1.96 (m, 1 H), 1.32 (d, 3 H), 0.89/0.84 (2d, 6 H). 13C NMR (400 MHz, dmso-d6) δ ppm 134.7, 134.2, 126, 122.9, 122.2, 119.8, 119.7, 119.4, 118.3, 115.5, 70.4/69.2/67.2, 69, 66.8, 58.1, 53.9, 49.9, 49.9/40.4, 39, 36.4, 35.4, 34.6, 34.6, 31.1, 31.1, 23.6, 20.1, 18.2, 18.1。HRMS (ESI) [M+H] +，實驗值= 1 657.7339 (δ = 0.4)。 製備 L9C-P59 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 -(3- 羥丙基 ) 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P59，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M+H] +，實驗值= 1288.4656 (δ = -4.5 ppm)。 製備 L9C-P3 ： 2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-5-[3-[4-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 - 甲基 - 胺基 ] 丙 -1- 炔基 ]-2- 氟 - 苯氧基 ] 丙基 ] 噻唑 -4- 甲酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P3，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M+H] +，實驗值= 1244.4473 (δ = 1.7 ppm)。 製備 L9C-P60 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[[(3S)-3,4- 二羥丁基 ]-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 ] 胺基 ] 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P60，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M+H] +，實驗值= 1394.6300 (δ = -3.6 ppm)。 製備 L9A-P61 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 吡咯啶 -1- 鎓 -1- 基 ] 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P61，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +，實驗值= 1316.6347 (δ = -3.8 ppm)。 製備 L9A-P62 ： 2-[[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-2- 羧基 -3- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]-(3- 羥丙基 )- 甲基 - 銨 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 B及作為適當有效負載之 P62，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +實驗值= 1362.6748 (δ = -5.0 ppm)。 製備 L9A-P63 ： 3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 吡咯啶 -1- 鎓 -1- 基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[3-[(5- 氟 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P63，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +實驗值= 1362.6585 (δ = -2.3 ppm)。 製備 L9A-P64 ： 3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 吡咯啶 -1- 鎓 -1- 基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[4- 甲基 -3-[(6- 甲基 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P64，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +實驗值= 1358.6809 (δ = -4.3 ppm)。 製備 L9A-P65 ： 3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 吡咯啶 -1- 鎓 -1- 基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-6-[3-[(6- 氟 -1,3- 苯并噻唑 -2- 基 ) 胺基 ]-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P65，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +實驗值= 1362.6557 (δ = -4.3 ppm)。 製備 L9A-P66 ： 3-[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-2- 羧基 -3- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 丙基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 二甲基 - 銨 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P66，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +實驗值= 1316.6703 (δ = -4.4 ppm)。 製備 L9A-P67 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[2-[4-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]-4- 甲基 - 哌 𠯤 -4- 鎓 -1- 基 ] 乙氧基 ]-1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P67，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +實驗值= 1345.6582 (δ = -6.0 ppm)。 製備 L9A-P68 ： 3-[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-2- 羧基 -3- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 丙基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]-(3- 羥丙基 )- 甲基 - 銨 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P68，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +，實驗值= 1360.6941 (δ = -6.0 ppm)。 製備 L9C-P69 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[3-[[(3S)-3,4- 二羥丁基 ]-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 ] 胺基 ] 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P69，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M+H] +實驗值= 1420.6913 (δ = 3.0 ppm)。 製備 L9A-P48 ： 2-[[(5SR,7RS)-3-[[4-[6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-2- 羧基 -3- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙基 -( 羧甲基 )-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 甲基 - 銨 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P48，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +實驗值= 1362.6399 (δ = -3.9 ppm)。 製備 L9A-P70 ： 2-[[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-2- 羧基 -3- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙基 -(2- 羧乙基 )-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 甲基 - 銨 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P70，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +實驗值= 1376.6548 (δ = -4.4 ppm)。 製備 L9C-P71 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[2- 羧乙基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 ] 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P71，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M+H] +實驗值= 1406.6280 (δ = -5.0 ppm)。 製備 L9C-P72 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 -(4- 羥丁基 ) 胺基 ] 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P72，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M+H] +計算值 = 1404.6927 製備 L9A-P49 ： 3-[(5SR,7RS)-3-[[4-[6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-2- 羧基 -3- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 丙基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]-(2- 羥乙基 )- 甲基 - 銨 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P49，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +實驗值= 1346.6794 (δ = -5.4 ppm)。 製備 L9C-P51 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[3-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 -(3- 甲氧基丙基 ) 胺基 ] 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P51，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M+H] +實驗值= 1404.6889 (δ = -2.3 ppm)。 製備 L9A-P50 ： 3-[(5SR,7RS)-3-[[4-[6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-2- 羧基 -3- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 丙基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]-(3- 甲氧基丙基 )- 甲基 - 銨 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P50，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +實驗值= 1374.7111 (δ = -5.0 ppm)。 製備 L9A-P52 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5RS,7SR)-3-[3-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 氮雜環庚烷 -1- 鎓 -1- 基 ] 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P52，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +實驗值= 1370.7281 (δ = 3.7 ppm)。 製備 L9C-P53 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[3-[ 羧甲基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 ] 胺基 ] 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P53，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M+H] +實驗值= 1390.6301 (δ = -7.2 ppm)。 製備 L9A-P55 ： 3-[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-2- 羧基 -3- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 丙基 -( 羧甲基 )-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 甲基 - 銨 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P55，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +實驗值= 1360.6561 (δ = -7.2 ppm)。 製備 L9C-P54 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[3-[2- 羧乙基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 ] 胺基 ] 丙基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P54，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M+H] +實驗值= 1404.6464 (δ = -6.7 ppm)。 製備 L9C-P47 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[(5SR,7RS)-3-[2-[ 羧甲基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲氧羰基 ] 胺基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲酸
使用 方法 C及作為適當有效負載之 P47，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M+H] +，實驗值= 1392.6186 (δ = -0.6 ppm)。 製備 L9A-P56 ： 3-[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-2- 羧基 -3- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 丙基 -(2- 羧乙基 )-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 甲基 - 銨 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P56，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +實驗值= 1374.6740 (δ = -5.5 ppm)。 製備 L9A-P58 ： 3-[(5RS,7SR)-3-[[4-[6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-2- 羧基 -3- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 丙基 -(3- 羧基丙基 )-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 甲基 - 銨 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P58，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +實驗值= 1388.6891 (δ = -5.9 ppm)。 製備 L9A-P57 ： 2-[[(5SR,7RS)-3-[[4-[6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-2- 羧基 -3- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙基 -(3- 羧基丙基 )-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 甲基 - 銨 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 A及作為適當有效負載之 P57，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +實驗值= 1390.6692 (δ = -5.3 ppm)。 製備 L9A-P73 ： (2S)-N-[4-[[1-[2-[[3-[[4-[6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-2-( 羥甲基 )-3- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙基 ] 吡咯啶 -1- 鎓 -1- 基 ] 甲基 ] 苯基 ]-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯胺 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 B及作為適當有效負載之 P73，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +實驗值= 1330.6754 (δ=-12.3 ppm)。 製備 L9A-P74 ： (2S)-N-[4-[[1-[2-[[3-[[4-[6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-2-( 吡咯啶 -1- 羰基 )-3- 吡啶基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -1- 基 ] 甲基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 氧基 ] 乙基 ] 吡咯啶 -1- 鎓 -1- 基 ] 甲基 ] 苯基 ]-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯胺 ;2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 B及作為適當有效負載之 P74，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +實驗值= 1397.7343 (δ=0.2 ppm)。 製備 L9A-P75 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 吡咯啶 -1- 鎓 -1- 基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ]-N- 異丙基 - 吡啶 -2- 甲醯胺 ;2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 B及作為適當有效負載之 P75，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +實驗值= 1385.7328 (δ = -0.8 ppm)。 製備 L9A-P76 ： 6-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-3-[1-[[3-[2-[1-[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲基 ] 吡咯啶 -1- 鎓 -1- 基 ] 乙氧基 ]-5,7- 二甲基 -1- 金剛烷基 ] 甲基 ]-5- 甲基 - 吡唑 -4- 基 ] 吡啶 -2- 甲醯胺 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽
使用 方法 B及作為適當有效負載之 P76，獲得所需產物。 HRMS (ESI)[M] +實驗值= 1343.6874 (δ=0.3 ppm)。 製備 L112A-P1 ： 3-[4-[3-[2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ]-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 丙基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 二甲基 - 銨 ; 2,2,2- 三氟乙酸鹽 步驟 A ： N-[(1S)-1-[[(1S)-1-[[4-( 羥甲基 )-3-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 丙基 ] 苯基 ] 胺甲醯基 ]-4- 脲基 - 丁基 ] 胺甲醯基 ]-2- 甲基 - 丙基 ] 胺基甲酸 9H- 茀 -9- 基甲酯
根據 WO2020 / 236817A2 ， 製備 L26 - P1中所述之實驗程序，使用2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2-甲氧基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基] ethoxy]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙氧基]乙醇作為起始材料合成標題化合物。 1 H NMR(400 MHz, dmso-d6): δ 9.88 (s, 1H), 8.07 (d, 1H), 7.89 (d, 2H), 7.72-7.76 (m, 2H), 7.37-7.45 (m, 5H), 7.30-7.34 (m, 2H), 7.25 (d, 1H), 5.95 (t, 1H), 5.38 (s, 2H), 4.95 (t, 1H), 4.45 (d, 2H), 4.38-4.42 (m, 1H), 4.20-4.32 (m, 3H), 3.90-3.94 (m,1H), 3.45-3.55 (m, 94H), 3.38-3.43 (m, 4H), 3.23 (s, 3H), 2.89-3.03 (m, 2H), 2.56-2.62 (m, 2H), 1.94-2.04 (m, 1H), 1.54-1.76 (m, 4H), 1.29-1.49 (m, 2H), 0.84-0.89 (m, 6H)。 UPLC-MS:MS (ESI)m/z [M/2 + Na] +，實驗值= 888。 步驟 B ： N-[(1S)-1-[[(1S)-1-[[4-( 氯甲基 )-3-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 丙基 ] 苯基 ] 胺甲醯基 ]-4- 脲基 - 丁基 ] 胺甲醯基 ]-2- 甲基 - 丙基 ] 胺基甲酸 9H- 茀 -9- 基甲酯
每10 min向含 步驟 A之產物(50 mg，0.0288 mmol)之THF (0.7 mL)中添加等量亞硫醯氯(0.35 M溶液於THF中)，直至不再觀測到起始材料。濃縮混合物，且粗產物不經進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 C ： N-[(1S)-1-[[(1S)-1-[[4-( 碘甲基 )-3-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 丙基 ] 苯基 ] 胺甲醯基 ]-4- 脲基 - 丁基 ] 胺甲醯基 ]-2- 甲基 - 丙基 ] 胺基甲酸 9H- 茀 -9- 基甲酯
在將 步驟 B之產物(44 mg，0.025 mmol)及碘化鈉(2當量)於丁-2-酮(30 mL/mmol)中之混合物攪拌5 h之後，濃縮反應物且粗產物不經進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 D ： 3-[4-[3-[2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-(9H- 茀 -9- 基甲氧基羰基胺基 )-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ]-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 丙基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 二甲基 - 銨
在攪拌有效負載 P1(15 mg，0.023 mmol)、 步驟 C之產物(46.18 mg，0.025 mmol)及DIPEA (5當量)於DMF (0.7 mL)中之混合物44 h之後，粗產物經濃縮且不經進一步純化即用於下一步驟中。 步驟 E ： [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2- 胺基 -3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ]-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 丙基 ] 苯基 ] 甲基 -[3-[4-[3-[2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 ]- 二甲基 - 銨
在攪拌 步驟 D之產物(54 mg，0.023 mmol)及 N-乙基乙胺(10當量)於DMF (0.7 mL)中之混合物1 h之後，粗產物藉由製備型HPLC純化，得到所需化合物(22 mg)。 UPLC-MS:MS (ESI) m/z [(M+2)/2]，實驗值= 1075。 步驟 F ： 3-[4-[3-[2-[3-(1,3- 苯并噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫 -5H- 吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8- 基 ]-4- 羧基 - 噻唑 -5- 基 ] 丙氧基 ]-3- 氟 - 苯基 ] 丙 -2- 炔基 -[[4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ]-2-[3-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-[2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 乙氧基 ] 丙基 ] 苯基 ] 甲基 ]- 二甲基 - 銨 ;2,2,2- 三氟乙酸鹽
在攪拌 步驟 E之產物(22 mg，0.0097 mmol)、DIEA (2當量)及3-[2-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)乙氧基]丙酸(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)酯(1.1當量)於DMF (0.3 mL)中之混合物15 h之後，使用製備型HPLC且使用TFA方法純化粗產物，得到 L112A - P1(5.5 mg)。 HR-ESI+:m/z [M-CF3COO]+，實驗值= 2344。 製備 L113C-MMAE ( 連接子 L113C - 單甲基奧瑞他汀 E ) 及其表徵 ： N-[(1S)-1-[[(1S)-1-[[(1S,2R)-4-[(2S)-2-[(1R,2R)-3-[[(1R,2S)-2- 羥基 -1- 甲基 -2- 苯基 - 乙基 ] 胺基 ]-1- 甲氧基 -2- 甲基 -3- 側氧基 - 丙基 ] 吡咯啶 -1- 基 ]-2- 甲氧基 -1-[(1S)-1- 甲基丙基 ]-4- 側氧基 - 丁基 ]- 甲基 - 胺甲醯基 ]-2- 甲基 - 丙基 ] 胺甲醯基 ]-2- 甲基 - 丙基 ]-N- 甲基 - 胺基甲酸 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲酯 步驟 1 ： 合成 (2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-N-[4-( 羥甲基 ) 苯基 ]-5- 脲基 - 戊醯胺
向3-[2-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)乙氧基]丙酸(855 mg，4.01 mmol)於THF (42 mL)中之溶液中添加 N , N '-二環己基甲烷二亞胺(1.05 g，5.08 mmol)及1-羥基吡咯啶-2,5-二酮(510 mg，4.43 mmol)。將反應混合物在室溫下攪拌20 h。藉由過濾移除沈澱物且將濾液添加至(2S)-2-[[(2S)-2-胺基-3-甲基-丁醯基]胺基]-N-[4-(羥甲基)苯基]-5-脲基-戊醯胺(1.27 g，3.35 mmol)於DMF (42 mL)中之溶液中。將反應混合物在室溫下攪拌20小時，用二乙醚(250 mL)稀釋。藉由過濾回收固體，得到(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)乙氧基]丙醯基胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-N-[4-(羥甲基)苯基]-5-脲基-戊醯胺(1.81 g)。 1H NMR (400 MHz, DMSO- d 6 ): δ 9.87 (s, 1H), 8.05 (d, 1H), 7.82 (d, 1H), 7.53 (d, 2H), 7.21 (d, 2H), 7.00 (s, 2H), 5.95 (t, 1H), 5.39 (s, 2H), 5.07 (t, 1H), 4.41 (d, 2H), 4.34-4.40 (m, 1H), 4.18-4.22 (m, 1H), 3.42-3.65 (m, 4H), 2.88-3.02 (m, 2H), 2.73 (s, 2H), 2.28-2.45 (m, 2H), 1.91-1.99 (m, 1H), 1.53-1.75 (m, 2H), 1.30-1.147 (m, 2H), 0.85 (d, 3H), 0.81 (d, 3H). 13C NMR (125 MHz, DMSO- d 6 ): δ 171.05, 170.83, 170.32, 170.09, 158.82, 137.49, 137.37, 134.50, 126.88, 118.81, 66.66, 66.53, 62.57, 57.49, 53.06, 36.74, 35.76, 30.51, 29.31, 26.79, 25.20, 19.16, 18.07. MS (ESI) m/z [M + H] += 575.2。 步驟 2 ： (4- 硝基苯基 ) 胺基甲酸 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲酯
向(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5-二側氧基吡咯-1-基)乙氧基]丙醯基胺基]-3-甲基-丁醯基]胺基]-N-[4-(羥甲基)苯基]-5-脲基-戊醯胺(來自 步驟 1) (580 mg，1.0 mmol)於無水DMF中之溶液中添加DIPEA (0.5 mL, 3.025 mmol，3當量)及雙(4-硝基苯基)碳酸酯(615 mg，2.02 mmol，2當量)。在室溫下攪拌反應混合物68 h。接著用二乙醚(15 mL)稀釋反應介質且過濾固體，得到標題化合物(589 mg，79%)。 1H NMR (DMSO- d 6): 0.82 ( d, 3H, J= 6.8 Hz), 0.85 ( d, 3H, J= 6.8 Hz), 1.47-1.33 ( m, 2H), 1.74-1.54 ( m, 2H), 1.92 -2.00 ( m, 1H), 2.32-2.45 ( m, 2H), 2.90-3.06 ( m, 2H), 3.49-3.46 ( m, 2H), 3.60-3.52 ( m, 4H), 4.21 ( dd, 1H, J= 8.7及6.8 Hz), 4.39 ( m, 1H), 5.24 ( s, 2H), 5.39 ( s, 2H), 5.96 ( t, 1H, J= 5.6 Hz), 7.00 ( s, 2H), 7.41 ( d, 2H, J= 8.8 Hz), 7.57 ( dd, 2H, J= 6.8及2.4Hz), 7.65 ( d, 2H, J= 8.4 Hz), 7.83 ( d, 1H, J= 8.8 Hz), 8.10 ( d, 1H, J= 7.6 Hz), 8.31 ( dd, 2H, J= 6.8及2.4 Hz), 10.03 ( s, 1H)。LC-MS  m/z [M+H] += 740.14偵測值。 步驟 3 ： N-[(1S)-1-[[(1S)-1-[[(1S,2R)-4-[(2S)-2-[(1R,2R)-3-[[(1R,2S)-2- 羥基 -1- 甲基 -2- 苯基 - 乙基 ] 胺基 ]-1- 甲氧基 -2- 甲基 -3- 側氧基 - 丙基 ] 吡咯啶 -1- 基 ]-2- 甲氧基 -1-[(1S)-1- 甲基丙基 ]-4- 側氧基 - 丁基 ]- 甲基 - 胺甲醯基 ]-2- 甲基 - 丙基 ] 胺甲醯基 ]-2- 甲基 - 丙基 ]-N- 甲基 - 胺基甲酸 [4-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[3-[2-(2,5- 二側氧基吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ] 丙醯基胺基 ]-3- 甲基 - 丁醯基 ] 胺基 ]-5- 脲基 - 戊醯基 ] 胺基 ] 苯基 ] 甲酯
向單甲基奧瑞他汀E (由Interchim提供之MMAE) (25 mg，0.0348 mmol)於無水DMF (0.35 mL)中之溶液中添加DIPEA (24 µL，0.0247 mmol)及 步驟 2之產物(51 mg，0.0696 mmol)。在室溫下攪拌反應混合物18小時。藉由C18逆相製備型HPLC，藉由將反應混合物直接沈積於Xbridge管柱上且使用TFA方法純化粗產物，得到標題化合物(18 mg，產率39%)。HRMS (ESI) m/z [M+H] += 1318.76。 實例 4. 額外連接子、連接子 - 有效負載及其前驅體之合成及表徵。
例示性連接子、連接子-有效負載及其前驅體使用此實例中所述之例示性方法合成。 合成 2-( 溴甲基 )-4- 硝基苯甲酸
在室溫下向2-甲基-4-硝基苯甲酸(300 g，1.5371 mol)於CCl 4(3000 mL)中之攪拌溶液中添加NBS (300.93 g，1.6908 mol)及AIBN (37.86 g，0.2305 mol)。在80℃下攪拌反應混合物16 h。藉由TLC分析監測反應混合物。反應混合物用飽和NaHCO 3溶液(2 L)稀釋且用乙酸乙酯(2×2 L)萃取。將合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥且在減壓下濃縮。使用2-3%乙酸乙酯/石油醚作為溶離劑，藉由矽膠管柱層析純化粗化合物且獲得2-(溴甲基)-4-硝基苯甲酸。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 8.35 (d, J=2.0 Hz, 1H), 8.20 (q, J=8.8, 2.4 Hz, 1H), 8.12 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.00 (s, 3H). 合成 4- 硝基 -2-(( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ) 苯甲酸
在室溫下向2-(溴甲基)-4-硝基苯甲酸(250 g，0.9122 mol)於MeCN (5000 mL)中之混合物中添加丙-2-炔-1-醇(255.68 g，265.50 mL, 4.5609 mol，d=0.963 g/mL)及Cs 2CO 3(743.03 g，2.2805 mol) 。將所得混合物加熱至80℃後維持16 h。反應混合物經由矽藻土墊過濾，用乙酸乙酯(2 L)洗滌。減壓濃縮濾液。向獲得之粗化合物中添加飽和NaHCO 3溶液(1 L)且藉由使用2N HCl (2 L)將水層酸化至pH 2。過濾後，真空乾燥，獲得4-硝基-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲酸。 1H NMR (400 MHz, DMSO): δ 13.61 (brs, 1H), 8.37 (d, J=2.4 Hz, 1H), 8.23 (dd, J=2.4, 8.4 Hz, 1H), 8.10 (d, J=8.8 Hz, 1H), 4.95 (s, 2H), 4.37 (d, J=2.4 Hz, 2H), 3.52 (t, J=2.4 Hz, 1H) 合成 4- 硝基 -2-(( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ) 苯甲酸甲酯
在0℃下向4-硝基-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲酸(130 g，0.5527 mol)於MeOH (1300 mL)中之攪拌溶液中緩慢添加SOCl 2(526.08 g，320.78 mL, 4.4219 mol，d=1.64 g/mL)。在70℃下攪拌反應物4 h。在減壓下蒸發反應溶劑。將所得殘餘物溶解於乙酸乙酯(1000 mL)中且用飽和NaHCO 3(600 mL)、水(500 mL)及鹽水溶液(500 mL)洗滌。分離之有機層經硫酸鈉乾燥，過濾且在減壓下蒸發，得到4-硝基-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲酸甲酯。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 8.56 (t, J=0.8 Hz, 1H), 8.18 - 8.09 (m, 2H), 5.03 (s, 2H), 4.35 (d, J=2.4 Hz, 2H), 3.96 (s, 3H), 2.49 (t, J=2.4 Hz, 1H)。 合成 4- 胺基 -2-(( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ) 苯甲酸甲酯
在室溫下向4-硝基-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲酸甲酯(110 g，0.4414 mol)於EtOH (1100 mL)及H 2O (550 mL)之混合物中之溶液中添加Fe粉(197.21 g，3.5310 mol)及NH 4Cl (188.88 g，3.5310 mol)。所得混合物在80℃下加熱16 h。將反應混合物冷卻至室溫且經由celite®過濾，且用乙酸乙酯(2 L)洗滌。在減壓下濃縮濾液直至一半體積。向殘餘物中添加乙酸乙酯(1.5 L)且分離兩個層，且用乙酸乙酯(2 L)萃取水層。合併之有機層經無水硫酸鈉乾燥，且在減壓下濃縮，以獲得粗產物。藉由SiO 2管柱層析(15-20%乙酸乙酯/石油醚)純化，得到4-胺基-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲酸甲酯。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 7.67 (d, J=8.8 Hz, 1H), 6.78 (t, J=1.6 Hz, 1H), 6.48 (q, J=8.4, 2.4 Hz, 1H), 4.79 (s, 2H), 4.25 (d, J=2.4 Hz, 2H), 3.70 (d, J=4.0 Hz, 3H), 3.42 (t, J=2.4 Hz, 1H)。 合成 (4- 胺基 -2-(( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ) 苯基 ) 甲醇
在0℃下向THF (1000 mL)之攪拌溶液中緩慢添加LiAlH4 (1 M於THF中) (21.23 g，798.2 mmol，798.2 mL)。在0℃下緩慢添加4-胺基-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲酸甲酯(70 g，319.3 mmol)於THF (800 mL)中之溶液。在室溫下攪拌反應物4 h。將反應混合物冷卻至0℃，接著非常緩慢地添加水(22 mL)，接著添加20% NaOH (22 mL)及水(66 mL)。在0℃下攪拌反應混合物30 min。添加無水硫酸鈉以吸收過量水。經由celite®過濾混合物。濾餅用乙酸乙酯(1000 mL)及10% MeOH/DCM(500 mL)洗滌。減壓濃縮濾液。所得粗化合物藉由SiO 2管柱層析(35-40%乙酸乙酯/石油醚作為溶離劑)純化，得到(4-胺基-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)甲醇。 1H NMR (400 MHz, CDCl 3): δ 6.98 (d, J=8.0 Hz, 1H), 6.56 (d, J=2.4 Hz, 1H), 6.43 (dd, J=2.4, 8.0 Hz, 1H), 4.98 (s, 2H), 4.64 (t, J=5.2 Hz, 1H), 4.47 (s, 2H), 4.34 (d, J=5.6 Hz, 2H), 4.15 (d, J=2.4 Hz, 2H), 3.46 (t, J=2.4 Hz, 1H)。 合成 (S)-(1-((4-( 羥甲基 )-3-(( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ) 苯基 ) 胺基 )-1- 側氧基 -5- 脲基戊 -2- 基 ) 胺基甲酸 (9H- 茀 -9- 基 ) 甲酯
向(4-胺基-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)甲醇(1.92 g，10.04 mmol，1.0當量)、(S)-(1-胺基-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(3.99 g，10.04 mmol，1.0當量)及(1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸鹽(4.20 g，11.04 mmol，1.1當量)於DMF (10 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(2.62 mL, 15.06 mmol，1.5當量)。在環境溫度下攪拌1 h之後，將混合物倒入水(200 mL)中。濾出所得固體，用水沖洗且真空乾燥，且獲得(S)-(1-((4-(羥甲基)-3-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯。LCMS: MH +=571.5; Rt=0.93 min (2 min酸性法)。 合成 (S)-2- 胺基 -N-(4-( 羥甲基 )-3-(( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ) 苯基 )-5- 脲基戊醯胺
向(S)-(1-((4-(羥甲基)-3-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(6.08 g，10.65 mmol，1.0當量)中添加二甲胺(2 M於THF中，21.31 mL, 42.62 mmol，4當量)。在環境溫度下攪拌1.5小時後，自形成之膠狀殘餘物中傾析出上清液。用乙醚(3×50 mL)濕磨殘餘物且濾出所得固體，用乙醚洗滌，且真空乾燥。獲得(S)-2-胺基-N-(4-(羥甲基)-3-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)-5-脲基戊醯胺。LCMS: MH +349.3; Rt=0.42 min (2 min酸性法)。 合成 ((S)-1-(((S)-1-((4-( 羥甲基 )-3-(( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ) 苯基 ) 胺基 )-1- 側氧基 -5- 脲基戊 -2- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯
向(S)-2-胺基-N-(4-(羥甲基)-3-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)-5-脲基戊醯胺(3.50 g，10.04 mmol，1.0當量)、(三級丁氧羰基)-L-纈胺酸(2.62 g，12.05 mmol，1.2當量)及(1-[雙(二甲胺基)亞甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化物六氟磷酸鹽(4.58 g，12.05 mmol，1.2當量)於DMF (10 mL)中之溶液中添加N,N-二異丙基乙胺(3.50 mL, 20.08 mmol，2.0當量)。在環境溫度下攪拌2 h之後，將混合物倒入水(200 mL)中且用EtOAc (3×100 mL)萃取所得懸浮液。合併之有機層經硫酸鈉乾燥，且在真空下濃縮。在藉由ISCO SiO 2層析(0-20%甲醇/二氯甲烷)純化之後，獲得((S)-1-(((S)-1-((4-(羥甲基)-3-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸三級丁酯。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.00 (s, 1H), 7.96 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.55 (dq, J = 4.9, 2.2 Hz, 2H, 芳基), 7.32 (d, J = 8.9 Hz, 1H, 芳基), 6.76 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 5.95 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.38 (s, 2H), 5.01 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.54 (s, 2H), 4.45 (dd, J = 25.2, 5.3 Hz, 3H), 4.20 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.83 (dd, J = 8.9, 6.7 Hz, 1H), 3.49 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 2.97 (dh, J = 26.0, 6.5 Hz, 2H), 1.96 (h, J = 6.6 Hz, 1H), 1.74 - 1.50 (m, 2H), 1.39 (m, 11H), 0.84 (dd, J = 16.2, 6.7 Hz, 6H)。LCMS: M+Na 570.5; Rt=0.79 min (2 min酸性法)。 合成 ((S)-1-(((S)-1-((4-( 氯甲基 )-3-(( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ) 苯基 ) 胺基 )-1- 側氧基 -5- 脲基戊 -2- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯
在0℃下向((S)-1-(((S)-1-((4-(羥甲基)-3-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸三級丁酯(2.00公克，3.65 mmol，1.0當量)於乙腈(13.3 mL)中之溶液中添加亞硫醯氯(0.53 mL, 7.30 mmol，2.0當量)。在冰浴中攪拌一小時之後，用水(40 mL)稀釋溶液且所得白色沈澱物藉由過濾收集，風乾且在高真空中乾燥，得到((S)-1-(((S)-1-((4-(氯甲基)-3-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸三級丁酯。LCMS: M+Na 588.5; Rt=2.17 min (5 min酸性法)。 合成 2-((( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 甲基 )-5- 硝基苯甲酸
向6-硝基異苯并呋喃-1(3H)-酮(90 g，502.43 mmol，1.00當量)於MeOH (1000 mL)及KOH (28.19 g，502.43 mmol，1.00當量)於H 2O (150 mL)中之溶液中添加含KOH (28.19 g，502.43 mmol，1.00當量)之H 2O (150 mL)。在25℃下攪拌棕色混合物1.5 h。在減壓下濃縮棕色混合物，得到殘餘物且溶解於DCM (2000 mL)中。向混合物中添加三級丁基二苯基氯矽烷(296.91 g，1.08 mol，277.49 mL，2.15當量)及咪唑(171.03 g，2.51 mol，5.00當量)且在25℃下攪拌12 h。在減壓下濃縮混合物，得到殘餘物。藉由矽膠層析(石油醚/乙酸乙酯=1/0、1/1)純化殘餘物，且獲得呈白色固體狀之2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-5-硝基苯甲酸。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4)  δ ppm 1.13 (s, 9 H) 5.26 (s, 2 H) 7.34 - 7.48 (m, 6 H) 7.68 (br d, J=8 Hz, 4 H) 8.24 (br d, J=8 Hz, 1 H) 8.46 (br d, J=8 Hz, 1 H) 8.74 (s, 1 H)。 合成 (2-((( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 甲基 )-5- 硝基苯基 ) 甲醇
向2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-5-硝基苯甲酸(41 g，94.14 mmol，1當量)於THF (205 mL)中之混合物中添加BH 3.THF (1 M, 470.68 mL, 5當量)。在60℃下攪拌黃色混合物2 h。向混合物中添加MeOH (400 mL)，且在減壓下濃縮，得到殘餘物。接著添加H 2O (200mL)及DCM (300mL)，用DCM (3 ×200 mL)萃取，用鹽水(300mL)洗滌，經無水MgSO 4乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。藉由矽膠層析(石油醚/乙酸乙酯=1/0、1/1)純化殘餘物。獲得呈白色固體狀之(2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-5-硝基苯基)甲醇。 1H NMR (400 MHz, 甲醇-d4)   δ ppm 1.10 (s, 9 H) 4.58 (s, 2 H) 4.89 (s, 2 H) 7.32 - 7.51 (m, 6 H) 7.68 (dd, J=8, 1.38 Hz, 4 H) 7.76 (d, J=8 Hz, 1 H) 8.15 (dd, J=8 2.26 Hz, 1 H) 8.30 (d, J=2 Hz, 1 H)。 合成 2-((( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 甲基 )-5- 硝基苯甲醛
向(2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-5-硝基苯基)甲醇(34 g，80.65 mmol，1當量)於DCM (450 mL)中之溶液中添加MnO 2(56.09 g，645.22 mmol，8當量)。在25℃下攪拌黑色混合物36 h。向混合物中添加MeOH (400 mL)，且在減壓下濃縮，得到殘餘物。接著添加H 2O (200mL)及DCM (300mL)，用DCM (3×200 mL)萃取，用鹽水(300mL)洗滌，經無水MgSO 4乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由矽膠層析(CH 2Cl 2=100%)純化。獲得呈白色固體狀之2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-5-硝基苯甲醛。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d)  δ ppm 1.14 (s, 9 H) 5.26 (s, 2 H) 7.34 - 7.53 (m, 6 H) 7.60 - 7.73 (m, 4 H) 8.13 (d, J=8Hz, 1 H) 8.48 (dd, J=8, 2.51 Hz, 1 H) 8.67 (d, J=2 Hz, 1 H) 10.16 (s, 1 H)。 合成 N-(2-((( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 甲基 )-5- 硝基苯甲基 ) 丙 -2- 炔 -1- 胺
向2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-5-硝基苯甲醛(12.6 g，30.03 mmol，1當量)於DCM (130 mL)中之溶液中添加丙-2-炔-1-胺(4.14 g，75.08 mmol，4.81 mL, 2.5當量)及MgSO 4(36.15 g，300.33 mmol，10當量)，接著將懸浮液混合物在25℃下攪拌24小時。取少量反應溶液，且用NaBH 4處理，TLC展示形成一個新點。將反應混合物過濾且減壓濃縮以得到殘餘物。獲得呈黃色固體之(E)-N-[[2-[[三級丁基(二苯基)矽基]氧基甲基]-5-硝基-苯基]甲基]丙-2-炔-1-亞胺。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d)  δ ppm 1.11 (s, 9 H) 2.48 (t, J=2.38 Hz, 1 H) 4.52 (t, J=2.13 Hz, 2 H) 5.09 (s, 2 H) 7.35 - 7.49 (m, 6 H) 7.63 - 7.72 (m, 4 H) 7.79 (d, J=8.53 Hz, 1 H) 8.25 (dd, J=8.53, 2.51 Hz, 1 H) 8.68 (d, J=2.26 Hz, 1 H) 8.84 (t, J=1.88 Hz, 1 H)。
將(E)-N-[[2-[[三級丁基(二苯基)矽基]氧基甲基]-5-硝基-苯基]甲基]丙-2-炔-1-亞胺(12 g，26.28 mmol，1當量)溶解於MeOH (100 mL)及THF (50 mL)中，接著添加NaBH 4(1.49 g，39.42 mmol，1.5當量)且將黃色混合物在-20℃下攪拌2小時。LCMS顯示偵測到所需化合物。藉由在-20℃下添加MeOH (200 mL)淬滅反應混合物，且接著在減壓下濃縮，得到殘餘物。將殘餘物溶解於EtOAc (500 mL)中，用鹽水(150 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由急驟矽膠層析(0-10%乙酸乙酯/石油醚梯度溶離劑)純化。獲得呈淡黃色油狀之N-(2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-5-硝基苯甲基)丙-2-炔-1-胺。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ ppm 1.12 (s, 9 H) 2.13 (t, J=2.38 Hz, 1 H) 3.33 (d, J=2.51 Hz, 2 H) 3.80 (s, 2 H) 4.93 (s, 2 H) 7.36 - 7.49 (m, 6 H) 7.69 (dd, J=7.91, 1.38 Hz, 4 H) 7.77 (d, J=8.53 Hz, 1 H) 8.16 (dd, J=8.41, 2.38 Hz, 1 H) 8.24 (d, J=2.26 Hz, 1 H)。 合成 (2-((( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 甲基 )-5- 硝基苯甲基 )( 丙 -2- 炔 -1- 基 ) 胺基甲酸 (9H- 茀 -9- 基 ) 甲酯
向N-(2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-5-硝基苯甲基)丙-2-炔-1-胺(9 g，19.62 mmol，1當量)及Fmoc-OSu (7.28 g，21.59 mmol，1.1當量)於二㗁烷(90 mL)中之溶液中添加飽和NaHCO 3(90 mL)且將白色懸浮液在20℃下攪拌12 h。反應混合物用H 2O (150 mL)稀釋且用EtOAc (150 mL×2)萃取。合併之有機層用鹽水(200 mL)洗滌，經無水Na 2SO 4乾燥，過濾且減壓濃縮，得到殘餘物。殘餘物藉由急驟矽膠層析(0-30%乙酸乙酯/石油醚溶離劑)純化。獲得呈白色固體狀之(2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-5-硝基苯甲基)(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(7.7 g，11.08 mmol，56.48%產率，98%純度)。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ ppm 1.12 (s, 9 H) 2.17 (br d, J=14.31 Hz, 1 H) 3.87 - 4.97 (m, 9 H) 6.98 - 8.28 (m, 21 H)。 合成 (5- 胺基 -2-((( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 )( 丙 -2- 炔 -1- 基 ) 胺基甲酸 (9H- 茀 -9- 基 ) 甲酯
向(2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-5-硝基苯甲基)(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(5.0 g，7.34 mmol，1.0當量)於10% AcOH/CH 2Cl 2(100 mL)中之冰浴冷卻溶液中添加Zn (7.20 g，110 mmol，15當量)。移除冰浴，且攪拌所得混合物2小時，此時將其經由矽藻土墊過濾。在真空中移除揮發物且將殘餘物溶解於EtOAc中，用NaHCO 3(飽和)、NaCl (飽和)洗滌，經MgSO 4乾燥，過濾，濃縮且在ISCO SiO 2層析(0-75% EtOAc/庚烷)之後，獲得(5-胺基-2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)苯甲基)(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯。LCMS:   MH +=651.6; Rt=3.77 min (5 min酸性法)。 合成 (5-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-((( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 )( 丙 -2- 炔 -1- 基 ) 胺基甲酸 (9H- 茀 -9- 基 ) 甲酯
向含(5-胺基-2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)苯甲基)(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(2.99 g，4.59 mmol，1.0當量)及(S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊酸(1.72 g，4.59 mmol，1.0當量)之CH 2Cl 2(40 mL)中添加2-乙氧基喹啉-1(2H)-甲酸乙酯(2.27 g，9.18 mmol，2.0當量)。在攪拌10 min之後，添加MeOH (1 mL)且溶液變得均質。將反應物攪拌16 h，在真空中移除揮發物，且在藉由ISCO SiO 2層析(0-15% MeOH/CH2Cl2)純化之後，獲得(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)苯甲基)(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯。LCMS: MH +=1008.8; Rt=3.77 min (5 min酸性法)。 合成 (5-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-((( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 )( 丙 -2- 炔 -1- 基 ) 胺基甲酸丙 -2- 炔 -1- 基酯
向(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)苯甲基)(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(1.60 g，1.588 mmol，1.0當量)中添加含2M二甲胺之MeOH (30 mL, 60 mmol，37當量)及THF (10 mL)。在靜置3 h之後，真空移除揮發物且用Et 2O濕磨殘餘物以移除FMOC脫除保護基副產物。向所得固體中添加CH 2Cl 2(16 mL)及吡啶(4 mL)，且向非均質溶液中添加氯甲酸炔丙酯(155℃，1.588 mmol，1.0℃)。在攪拌30分鐘之後，再添加氯甲酸炔丙酯(155 µL，1.588 mmol，1.0當量)。再攪拌20 min之後，添加MeOH (1 mL)以淬滅剩餘氯甲酸酯且真空移除揮發物。在藉由ISCO SiO 2層析(0-15% MeOH/CH 2Cl 2)純化後，獲得(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)苯甲基)(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯。LCMS:   MH+=867.8; Rt=3.40 min (5 min酸性法)。 合成 (5-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-( 羥甲基 ) 苯甲基 )( 丙 -2- 炔 -1- 基 ) 胺基甲酸丙 -2- 炔 -1- 基酯
向(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)苯甲基)(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(984 mg，1.135 mmol，1.0當量)於THF (7.5 mL)中之溶液中添加含1.0 M TBAF之THF (2.27 mL, 2.27 mmol，2.0當量)。在靜置6 h之後，在真空中移除揮發物，殘餘物藉由ISCO SiO 2層析(0-40% MeOH/CH2Cl2)純化且獲得(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(羥甲基)苯甲基)(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯。LCMS:   MH +=629.6; Rt=1.74min (5 min酸性法)。 合成 (5-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-( 氯甲基 ) 苯甲基 )( 丙 -2- 炔 -1- 基 ) 胺基甲酸丙 -2- 炔 -1- 基酯
向含(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(羥甲基)苯甲基)(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(205 mg，0.326 mmol，1.0當量)之CH 2Cl 2(10 mL)中添加吡啶(158 µL, 1.96 mmol，5當量)。在0℃冰浴及亞硫醯氯(71 µL，0.98 mmol，3當量)中冷卻非均質混合物。在冰浴中攪拌3小時之後，直接藉由ISCO SiO 2層析(0-30% MeOH/CH 2Cl 2)純化反應物且獲得(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(氯甲基)苯甲基)(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯。LCMS: MH +=647.6; Rt=2.54 min (5 min酸性法)。 合成 2-( 羥甲基 )-N- 甲基 -5- 硝基苯甲醯胺
在25℃下向6-硝基異苯并呋喃-1(3H)-酮(500 g，2.79 mol)於MeOH (1500 mL)中之攪拌懸浮液中添加MeNH 2(3.00 kg，29.94 mol，600 mL, 31.0%純度)且攪拌1 h。固體經過濾且用水洗滌兩次(600 mL)且在高真空中乾燥，得到殘餘物。獲得呈白色固體狀之產物2-(羥甲基)-N-甲基-5-硝基苯甲醯胺。LCMS: Rt = 0.537 min, MS m/z = 193.2。1H NMR: 400 MHz DMSO  δ 8.57 (br d, J = 4.4 Hz, 1H), 8.31 (dd, J = 2.4, 8.6 Hz, 1H), 8.21 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.54 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.72 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 2.78 (d, J = 4.4 Hz, 3H)。 合成 (2-(( 甲胺基 ) 甲基 )-4- 硝基苯基 ) 甲醇
將2-(羥甲基)-N-甲基-5-硝基苯甲醯胺(560 g，2.66 mol)於THF (5000 mL)中之溶液冷卻至0℃，接著在60 min內逐滴添加BH 3-Me 2S (506 g，6.66 mol) (2.0 M於THF中)且加熱至70℃後維持5 h。LCMS展示起始材料耗盡。完成後，在0℃下將含4M HCl (1200 mL)之甲醇添加至反應混合物中且在65℃下加熱8 h。將反應混合物冷卻至0℃，且固體經過濾且濃縮減壓。獲得呈白色固體狀之產物(2-((甲胺基)甲基)-4-硝基苯基)甲醇(520 g)。LCMS: Rt = 0.742 min, MS m/z = 197.1 [M+H] +。 1H NMR: 400 MHz DMSO  δ 9.25 (br s, 2H), 8.37 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.14 (dd, J = 2.4, 8.5 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 5.72 (br s, 1H), 4.65 (s, 2H), 4.15 (br s, 2H), 2.55 - 2.45 (m, 3H) 合成 1-(2-((( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 甲基 )-5- 硝基苯基 )-N- 甲基甲胺
向冷卻至0℃之(2-((甲胺基)甲基)-4-硝基苯基)甲醇(520 g，2.65 mol)及咪唑(721 g，10.6 mol)於DCM (2600 mL)中之溶液中逐滴添加TBDPS-CL (1.09 kg，3.98 mol，1.02 L)且攪拌2 h。將混合物倒入冰冷水(1000 mL)中且用乙酸乙酯萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且在真空中蒸發，得到粗產物。藉由矽膠層析純化粗產物，用乙酸乙酯:石油醚(10/1至1)溶離，得到殘餘物。獲得呈黃色液體狀之產物1-(2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-5-硝基苯基)-N-甲基甲胺。LCMS: 產物: Rt = 0.910 min, MS m/z = 435.2 [M+H] +。 1H NMR: 400 MHz CDCl3 δ 8.23 (d, J=2.4 Hz, 1H), 8.15 (dd, J=2.4, 8.4 Hz, 1H), 7.76 (d, J=8.4 Hz, 1H), 7.71 - 7.66 (m, 4H), 7.50 - 7.37 (m, 6H), 4.88 (s, 2H), 3.65 (s, 2H), 2.39 (s, 3H), 1.12 (s, 9H) 合成 (2-((( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 甲基 )-5- 硝基苯甲基 )( 甲基 ) 胺基甲酸 (9H- 茀 -9- 基 ) 甲酯
向1-(2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-5-硝基苯基)-N-甲基甲胺(400 g，920.3 mmol)於THF (4000 mL)中之溶液中添加Fmoc-OSu (341.5 g，1.01 mol)及Et 3N (186.2 g，1.84 mol，256.2 mL)，將混合物在25℃下攪拌1 h。將混合物倒入水(1600 mL)中且用乙酸乙酯(1000 mL×2)萃取。合併之有機層用鹽水洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾且在真空中蒸發，得到粗產物。粗產物藉由矽膠層析純化，用石油醚:乙酸乙酯(1/0至1/1)溶離，得到呈白色固體狀之(2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-5-硝基苯甲基)(甲基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯。LCMS: Rt = 0.931 min, MS m/z = 657.2 [M+H] +。 1H NMR: EW16000-26-P1A, 400 MHz CDCl3 δ 8.21 - 7.96 (m, 1H), 7.87 - 7.68 (m, 3H), 7.68 - 7.62 (m, 4H), 7.62 - 7.47 (m, 2H), 7.47 - 7.28 (m, 9H), 7.26 - 7.05 (m, 2H), 4.81 (br s, 1H), 4.62 - 4.37 (m, 4H), 4.31 - 4.19 (m, 1H), 4.08 - 3.95 (m, 1H), 2.87 (br d, J = 5.2 Hz, 3H), 1.12 (s, 9H)。 合成 (5- 胺基 -2-((( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 )( 甲基 ) 胺基甲酸 (9H- 茀 -9- 基 ) 甲酯
將(2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-5-硝基苯甲基)(甲基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(3.0 g，4.57 mmol，1.0當量)於MeOH (90 mL)及EtOAc (30 mL)中之溶液脫氣且經由三通旋塞閥吹掃至N 2氣球。重複脫氣/N 2吹掃2次之後，添加deGussa型10% Pd/C (0.486 g，0.457 mmol，0.1當量)。將所得混合物脫氣且經由三通旋塞閥吹掃至2 H 2氣球。重複脫氣/H 2吹掃2次之後，將反應物在H 2氣球壓力下攪拌4小時。將反應物脫氣且吹掃至N 2中，經由矽藻土墊過濾，進一步用MeOH溶離。在真空中移除揮發物且在高真空下泵送之後，獲得(5-胺基-2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯。LCMS: MH +=627.7; Rt=1.59 min (2 min酸性法)。 合成 (5-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-((( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 )( 甲基 ) 胺基甲酸 (9H- 茀 -9- 基 ) 甲酯
向含(5-胺基-2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(2.86 g，4.56 mmol，1.0當量)及(S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊酸(1.71 g，4.56 mmol，1.0當量)之2:1 CH 2Cl 2/MeOH (60 mL)中添加2-乙氧基喹啉-1(2H)-甲酸乙酯(2.256 g，9.12 mmol，2.0當量)。將均質溶液攪拌16小時，此時添加額外(S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊酸(0.340 g，0.2當量)及2-乙氧基喹啉-1(2H)-甲酸乙酯(0.452 g，0.4當量)以驅動反應完成。再攪拌5小時之後，在真空中移除揮發物且在藉由ISCO SiO 2層析(0-5% MeOH/CH 2Cl 2)純化之後，獲得(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯。LCMS: MH +=984.1; Rt=1.54 min (2 min酸性法)。 合成 (5-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-((( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 )( 甲基 ) 胺基甲酸丙 -2- 炔 -1- 基酯
向含(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(2.05 g，2.085 mmol，1.0當量)之THF (10 mL)中添加含2.0 M二甲胺之MeOH (10.42 mL，20.85 mmol，10當量)。在攪拌16小時之後，在真空中移除揮發物。將殘餘物溶解於CH 2Cl 2(20 mL)中且添加DIEA (0.533 mL，4.17 mmol，2當量)及氯甲酸炔丙酯(0.264 mL，2.71 mmol，1.3當量)。在室溫下攪拌16小時之後，反應物用CH 2Cl 2(20 mL)稀釋，用NaHCO 3(飽和)、NaCl (飽和)洗滌，經MgSO 4乾燥，過濾，濃縮且藉由ISCO SiO 2層析(0-15% MeOH/CH 2Cl 2)純化，得到(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯。LCMS:   MH +=843.8; Rt=1.35 min (2 min酸性法)。 合成 (5-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-( 羥甲基 ) 苯甲基 )( 甲基 ) 胺基甲酸丙 -2- 炔 -1- 基酯
向(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(1.6 g，1.90 mmol，1.0當量)於THF (10.0 mL)中之0℃溶液中添加含1.0 M TBAF之THF (3.80 mL, 3.80 mmol，2.0當量)。在升溫至室溫且攪拌16 h之後，在真空中移除揮發物，將殘餘物溶解於EtOAc中，用NaHCO 3(飽和)、NaCl (飽和)洗滌，經MgSO 4乾燥，過濾，濃縮且藉由ISCO SiO 2層析(0-30% MeOH/CH2Cl2)純化殘餘物，得到(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(羥甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯。LCMS:   MH +=605.7; Rt=0.81 min (2 min酸性法)。 合成 (5-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-( 氯甲基 ) 苯甲基 )( 甲基 ) 胺基甲酸丙 -2- 炔 -1- 基酯
向含(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(羥甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(350 mg，0.579 mmol，1.0當量)之CH 2Cl 2(10 mL)中添加吡啶(0.278 mL, 3.47 mmol，6當量)。在0℃冰浴及亞硫醯氯(0.126 mL，1.73 mmol，3當量)中冷卻非均質混合物。在冰浴中攪拌3 h之後，藉由ISCO SiO 2層析(0-30% MeOH/CH 2Cl 2)純化反應物且獲得(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(氯甲基)苯甲基)(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯。LCMS: MH +=623.7; Rt=2.19 min (5 min酸性法)。 合成 (5-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-( 羥甲基 ) 苯甲基 )( 甲基 ) 胺基甲酸 (9H- 茀 -9- 基 ) 甲酯
向溶解於THF (20 mL)中之(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(2.6 g，2.64 mmol，1.0當量)中添加乙酸(0.757 mL，13.22 mmol，5.0當量)及含1.0 M TBAF之THF (2.91 mL，2.91 mmol，1.1當量)。將溶液攪拌72小時，此時在真空中移除揮發物。在藉由ISCO SiO 2層析(0-30% MeOH/CH 2Cl 2)純化之後，獲得(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(羥甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯。LCMS: MH +=745.5; Rt=1.07 min (2 min酸性法)。 合成 (5-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-( 氯甲基 ) 苯甲基 )( 甲基 ) 胺基甲酸 (9H- 茀 -9- 基 ) 甲酯
向含(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(羥甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(1.0公克，1.342 mmol)之THF (20 mL)中添加NaHCO 3(677 mg，8.05 mmol) (6當量)，接著在冰水浴中冷卻至0℃，接著緩慢添加亞硫醯氯(0.245 mL，3.36 mmol) (2.5當量)。將混合物在0℃下攪拌15 min，接著在室溫下攪拌1 h。將反應物分配於EtOAc與NaHCO 3(飽和)之間，分離，用NaCl (飽和)洗滌，經MgSO 4乾燥且真空移除揮發物。藉由ISCO SiO 2層析(0-30% iPrOH/CH 2Cl 2)純化殘餘物，獲得(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(氯甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯。LCMS: MH +=763.2; Rt=1.18 min (2 min酸性法)。 通用程序 1 合成 (5-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-((((4- 硝基苯氧基 ) 羰基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 )( 甲基 ) 胺基甲酸丙 -2- 炔 -1- 基酯
將(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(羥甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(249 mg，0.412 mmol)及雙(4-硝基苯基)碳酸酯(356 mg，1.24 mmol，3.0當量)於DMF (2 mL)中之溶液渦旋直至均勻且飽和16小時。溶液用DMSO (6 mL)稀釋且藉由RP-HPLC ISCO gold層析(10-100% MeCN/H 2O，無改質劑)純化。凍乾後，獲得(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯。LC/MS MH +=770.7, Rt=2.45 min (5 min酸性法)。 合成 ((S)-1-(((S)-1-((4-( 羥甲基 ) 苯基 ) 胺基 )-1- 側氧基 -5- 脲基戊 -2- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯
向(4-胺基苯基)甲醇(450.0 mg，3.65 mmol)及(S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊酸(1368.0 mg，3.65 mmol，1.0當量)於DCM (4.0 mL)中之懸浮液中添加EEDQ (2259.0 mg，9.13 mmol，2.5當量)。將混合物在室溫下攪拌16小時，其後藉由ISCO SiO 2層析(0-30% MeOH/CH 2Cl 2)純化反應物且獲得((S)-1-(((S)-1-((4-(羥甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸三級丁酯。LC/MS MH +=480.6, Rt=0.75 min (2 min酸性法)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.97 (s, 1H), 7.96 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.60 - 7.48 (m, 2H), 7.29 - 7.19 (m, 2H), 6.76 (d, J = 8.9 Hz, 1H), 5.96 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.40 (s, 2H), 5.09 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.43 (d, J = 5.7 Hz, 3H), 3.83 (dd, J = 8.9, 6.7 Hz, 1H), 2.98 (dp, J = 30.3, 6.6 Hz, 2H), 1.95 (p, J = 6.7 Hz, 1H), 1.80 - 1.54 (m, 2H), 1.38 (s, 11H), 0.84 (dd, J = 15.9, 6.8 Hz, 6H). 合成 ((S)-1-(((S)-1-((4-( 氯甲基 ) 苯基 ) 胺基 )-1- 側氧基 -5- 脲基戊 -2- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯
向含((S)-1-(((S)-1-((4-(羥甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸三級丁酯(500.0 mg，1.043 mmol)之DCM (20.0 mL)中添加吡啶(0.506 mL, 6.26 mmol，6.0當量)。在0℃冰浴中冷卻非均勻混合物且添加亞硫醯氯(0.228 mL，3.13 mmol，3當量)。在冰浴中攪拌4小時之後，使混合物在15分鐘內升溫至室溫。反應物藉由ISCO SiO2層析(0-30% MeOH/CH2Cl2)純化，且獲得((S)-1-(((S)-1-((4-(氯甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸三級丁酯。LC/MS MH +=498.1, Rt=2.02 min (5 min酸性法)。 合成 (5-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-((((4- 硝基苯氧基 ) 羰基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 )( 甲基 ) 胺基甲酸 (9H- 茀 -9- 基 ) 甲酯
遵循 通用程序 1，用(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(羥甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(100.0 mg，0.134 mmol)獲得(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯。LC/MS MH +=910.5, Rt=1.24 min (2 min酸性法)。 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.19 (s, 1H), 8.26 (s, 2H), 8.00 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 7.93 - 7.58 (m, 4H), 7.42 (td, J = 33.3, 32.9, 13.8 Hz, 9H), 7.14 (s, 1H), 6.72 (d, J = 9.0 Hz, 1H), 6.01 (s, 1H), 5.27 (d, J = 23.7 Hz, 2H), 4.58 (s, 2H), 4.48 - 4.13 (m, 4H), 3.89 - 3.78 (m, 1H), 2.92 (t, J = 35.0 Hz, 5H), 2.00 - 1.86 (m, 1H), 1.54 (s, 3H), 1.37 (m, 11H, incl. Boc), 0.82 (dd, J = 15.4, 6.7 Hz, 6H). 合成 ((S)-1-(((S)-1-((4-( 羥甲基 )-3-(( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ) 苯基 ) 胺基 )-1- 側氧基 -5- 脲基戊 -2- 基 ) 胺基 )-3- 甲基 -1- 側氧基丁 -2- 基 ) 胺基甲酸 (9H- 茀 -9- 基 ) 甲酯
向(S)-2-胺基-N-(4-(羥甲基)-3-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)-5-脲基戊醯胺(3.64 g，10.45 mmol)、(S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁酸(3.55 g，10.54 mmol，1.0當量)及1-((二甲胺基)(二甲基亞胺基)甲基)-1H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶3-氧化物六氟磷酸鹽(V) (3.97 g，10.54 mmol，1.0當量)於DMF (10.0 mL)中之溶液中添加DIPEA (3.64 mL, 20.90 mmol，2.0當量)。在室溫下攪拌混合物45分鐘。用100 mL水稀釋，攪拌5 min 且過濾沈澱物，將其在真空中乾燥。乾燥後，獲得((S)-1-(((S)-1-((4-(羥甲基)-3-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯。LC/MS MH +=670.3, Rt=0.96 min (2 min酸性法)。 合成 ((S)-3- 甲基 -1-(((S)-1-((4-((((4- 硝基苯氧基 ) 羰基 ) 氧基 ) 甲基 )-3-(( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ) 苯基 ) 胺基 )-1- 側氧基 -5- 脲基戊 -2- 基 ) 胺基 )-1- 側氧基丁 -2- 基 ) 胺基甲酸 (9H- 茀 -9- 基 ) 甲酯
遵循 通用程序 1，用((S)-1-(((S)-1-((4-(羥甲基)-3-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(200.0 mg，0.299 mmol)獲得((S)-3-甲基-1-(((S)-1-((4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)-3-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯。LC/MS MH += 835.7, Rt=1.19 min (2 min酸性法)。 合成 ((R)-3- 甲基 -1-(((R)-1-((4-((((4- 硝基苯氧基 ) 羰基 ) 氧基 ) 甲基 )-3-(( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ) 苯基 ) 胺基 )-1- 側氧基 -5- 脲基戊 -2- 基 ) 胺基 )-1- 側氧基丁 -2- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯
遵循 通用程序 1，用((S)-1-(((S)-1-((4-(羥甲基)-3-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸三級丁酯(200.0 mg，0.365 mmol)獲得((R)-3-甲基-1-(((R)-1-((4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)-3-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸三級丁酯。LC/MS MH +=713.6, Rt=1.08 min (2 min酸性法)。 合成 5-((S)-2-((S)-2-((((9H- 茀 -9- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-( 羥甲基 ) 苯甲基 ( 甲基 ) 胺基甲酸丙 -2- 炔 -1- 基酯
在0℃下向5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(羥甲基)苯甲基(甲基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(48.0 mg，0.079 mmol)於DCM (1.0 mL)中之溶液中添加TFA (0.2 mL)。在此溫度下攪拌混合物1小時。隨後在真空中移除溶劑。將殘餘物溶解於DMF (1.0 mL)中，接著添加DIPEA (0.138 mL, 0.794 mmol，10當量)及(2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)碳酸(9H-茀-9-基)甲酯(40.2 mg，0.119 mmol，1.5當量)。將混合物在室溫下攪拌18小時。藉由RP-HPLC ISCO gold層析(0-100% MeCN/H2O，無改質劑)純化反應物。凍乾後，獲得5-((S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(羥甲基)苯甲基(甲基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯。LC/MS MH +=727.3, Rt=2.28 min (5 min酸性法)。1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.01 (s, 1H), 8.09 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.89 (d, 2H), 7.74 (t, J = 8.2 Hz, 2H), 7.62 (s, 1H), 7.45 - 7.36 (m, 3H), 7.35 - 7.15 (m, 4H), 5.95 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 5.36 (s, 2H), 5.03 (s, 1H), 4.70 (d, J = 14.8 Hz, 2H), 4.54 - 4.36 (m, 5H), 4.35 - 4.19 (m, 3H), 3.96 - 3.87 (m, 1H), 3.50 (d, J = 26.0 Hz, 1H), 2.97 (dp, J = 20.1, 6.6 Hz, 2H), 2.82 (s, 3H), 1.98 (q, J = 6.8 Hz, 1H), 1.73 - 1.50 (m, 2H), 1.51 - 1.30 (m, 2H), 0.86 (dd, J = 10.2, 6.7 Hz, 6H)。 合成 5-((S)-2-((S)-2-((((9H- 茀 -9- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-((((4- 硝基苯氧基 ) 羰基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 ( 甲基 ) 胺基甲酸丙 -2- 炔 -1- 基酯
遵循 通用程序 1，用5-((S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(羥甲基)苯甲基(甲基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(77.6 mg，0.107 mmol)獲得5-((S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯甲基(甲基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯。LC/MS MH += 892.4, Rt=1.14 min (2 min酸性法)。 合成 5-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-((((4- 硝基苯氧基 ) 羰基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 ( 丙 -2- 炔 -1- 基 ) 胺基甲酸丙 -2- 炔 -1- 基酯
遵循 通用程序 1，用5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(羥甲基)苯甲基(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(250.0 mg，0.398 mmol)獲得5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯甲基(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯。LC/MS MH += 794.9, Rt=1.07 min (2 min酸性法)。 合成 2-((( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 甲基 )-5- 硝基苯甲基 ( 丙 -2- 炔 -1- 基 ) 胺基甲酸丙 -2- 炔 -1- 基酯
向N-(2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-5-硝基苯甲基)丙-2-炔-1-胺(1.348 g，2.94 mmol)於DCM (10.0 mL)中之溶液中添加吡啶(2.0 mL)，接著添加氯甲酸丙-2-炔-1-基酯(0.574 mL, 5.88 mmol，2.0當量)，且將混合物在室溫下攪拌30 min。反應物用MeOH淬滅，用CH 2Cl 2(20 mL)稀釋，接著用水、NaCl (飽和)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮且藉由ISCO SiO 2層析(0-50% EtOAc/庚烷)純化，獲得2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-5-硝基苯甲基(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯。LC/MS MH += 541.6, Rt=1.47 min (2 min酸性法)。 1H NMR (400 MHz, 氯仿-d) δ 8.18 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 1H, Ar), 8.10 (d, J = 2.3 Hz, 1H, Ar), 7.72 - 7.63 (m, 4H, Ph), 7.54 - 7.35 (m, 7H, Ph + Ar), 4.86 (s, 2H), 4.80 - 4.53 (m, 4H), 4.02 (d, J = 22.3 Hz, 2H), 2.76 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 2.17 (t, J = 2.4 Hz, 1H), 1.13 (d, J = 3.1 Hz, 9H)。 合成 5- 胺基 -2-((( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 ( 丙 -2- 炔 -1- 基 ) 胺基甲酸丙 -2- 炔 -1- 基酯
在0℃下向2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)-5-硝基苯甲基(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(1.66 g，2.07 mmol)於DCM (9.0 mL)及AcOH (1.0 mL)中之溶液中添加鋅(3.01 g，46.1 mmol，15.0當量)，且將混合物在此溫度下攪拌40 min。反應物經由矽藻土過濾且用DCM沖洗。濾液用NaHCO 3(飽和)、水及NaCl (飽和)洗滌，經Na 2SO 4乾燥，過濾，濃縮且藉由ISCO SiO 2層析(0-100% EtOAc/庚烷)純化，獲得5-胺基-2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)苯甲基(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯。LC/MS M+Na= 533.2, Rt=1.35 min (2 min酸性法)。 合成 5-((S)-2-((S)-2-((((9H- 茀 -9- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-((( 三級丁基二苯基矽基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 ( 丙 -2- 炔 -1- 基 ) 胺基甲酸丙 -2- 炔 -1- 基酯
將5-胺基-2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)苯甲基(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(1.19 g，2.33 mmol)及(S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊酸(1.157 g，2.33 mmol，1.0當量)懸浮於DCM (10.0 mL)及MeOH (5.0 mL)中，添加EEDQ (0.691 g，2.80 mmol，1.2當量)且在室溫下攪拌3小時。在真空中移除溶劑，將殘餘物溶解於DMSO (3.0 mL)中且藉由RPHPLC ISCO gold層析(0-100% MeCN/H2O，0.05% TFA改質劑)純化。凍乾後，獲得5-((S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)苯甲基(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯。LC/MS M+H= 990.0, Rt=1.47 min (2 min酸性法)。 合成 5-((S)-2-((S)-2-((((9H- 茀 -9- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-( 羥甲基 ) 苯甲基 ( 丙 -2- 炔 -1- 基 ) 胺基甲酸丙 -2- 炔 -1- 基酯
向5-((S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((三級丁基二苯基矽基)氧基)甲基)苯甲基(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(732.0 mg，0.740 mmol)於THF (5.0 mL)中之溶液中添加乙酸(0.127 mL, 2.220 mmol，3.0當量)及含1.0 M TBAF之THF (1.48 mL, 1.480 mmol，2.0當量)。在室溫下攪拌混合物20小時。LCMS指示剩餘一些起始材料。添加含1.0 M TBAF之THF (0.75 mL，0.750 mmol，1.0當量)且在室溫下攪拌20小時。在真空中移除溶劑，藉由ISCO SiO 2層析(0-50% MeOH/CH 2Cl 2)純化材料且獲得5-((S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(羥甲基)苯甲基(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯。LC/MS M+H= 751.6, Rt=0.99 min (2 min酸性法)。 合成 5-((S)-2-((S)-2-((((9H- 茀 -9- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-((((4- 硝基苯氧基 ) 羰基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 ( 丙 -2- 炔 -1- 基 ) 胺基甲酸丙 -2- 炔 -1- 基酯
遵循 通用程序 1，用5-((S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(羥甲基)苯甲基(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(556.0 mg，0.740 mmol)獲得5-((S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯甲基(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯。LC/MS M+H= 916.8, Rt=1.16 min (2 min酸性法)。 合成 (S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )-N-(4-( 羥甲基 ) 苯基 )-5- 脲基戊醯胺
遵循下文所述之 通用程序 4，用((S)-1-(((S)-1-((4-(羥甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸三級丁酯(2.00 g，4.17 mmol)獲得(S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-N-(4-(羥甲基)苯基)-5-脲基戊醯胺。LC/MS M+H= 380.6, Rt=0.40 min (2 min酸性法)。 合成 (S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-N-(4-( 羥甲基 ) 苯基 )-5- 脲基戊醯胺
遵循下文所述之 通用程序 5，用3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(100.0 mg，0.322 mmol)及(S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-N-(4-(羥甲基)苯基)-5-脲基戊醯胺(175.0 mg，0.355 mmol，1.1當量)獲得(S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-N-(4-(羥甲基)苯基)-5-脲基戊醯胺。LC/MS M+H= 575.4, Rt=0.61 min (2 min鹼性法)。 合成 (4- 硝基苯基 ) 碳酸 4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲酯
遵循 通用程序 1，用(S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-N-(4-(羥甲基)苯基)-5-脲基戊醯胺(126.0 mg，0.219 mmol)獲得(4-硝基苯基)碳酸4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲酯。LC/MS M+H= 575.4, Rt=0.61 min (2 min鹼性法)。 合成 ((S)-3- 甲基 -1-(((S)-1-((4-((((4- 硝基苯氧基 ) 羰基 ) 氧基 ) 甲基 ) 苯基 ) 胺基 )-1- 側氧基 -5- 脲基戊 -2- 基 ) 胺基 )-1- 側氧基丁 -2- 基 ) 胺基甲酸三級丁酯
遵循 通用程序 1，用((S)-1-(((S)-1-((4-(羥甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸三級丁酯(200.0 mg，0.417 mmol)獲得((S)-3-甲基-1-(((S)-1-((4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸三級丁酯。LC/MS M+H= 645.5, Rt=1.02 min (2 min酸性法)。 通用程序 2 合成 2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-2- 羧基吡啶 -3- 基 )-5- 甲基 -1H- 吡唑 -1- 基 ) 甲基 )-5,7- 二甲基金剛烷 -1- 基 ) 氧基 )-N-(4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 甲胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基乙 -1- 銨
向6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-(二甲胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸(25 mg，0.033 mmol)、(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(氯甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(25 mg，0.033 mmol，1.0當量)及TBAI (12 mg，0.033 mmol，1.0當量)於DMSO (1 mL)中之懸浮液中添加DIPEA (0.03 mL, 0.164 mmol，5.0當量)且在室溫下攪拌16小時。添加含2.0 M二甲胺之THF (0.164 mL，0.328 mmol，10當量)。在靜置1.5小時之後，溶液藉由RP-HPLC ISCO gold層析(10-100% MeCN/H2O，0.1% TFA改質劑)純化。凍乾後，獲得2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲胺基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基乙-1-銨。HRMS: M+= 1266.3000; Rt=1.85 min (5 min酸性法)。 通用程序 3 合成 2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-2- 羧基吡啶 -3- 基 )-5- 甲基 -1H- 吡唑 - 1- 基 ) 甲基 )-5,7- 二甲基金剛烷 -1- 基 ) 氧基 )-N-(4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(80- 羧基 -2- 甲基 -3- 側氧基 - 6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78- 二十五氧雜 -2- 氮雜八十烷基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基乙 -1- 銨
向2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲胺基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基乙-1-銨(42 mg，0.027 mmol)及79-((2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基)-79-側氧基-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-二十五氧雜七十九烷酸(42 mg，0.032 mmol，1.2當量)於DMF (0.5 mL)中之溶液中添加DIPEA (0.023 mL, 0.133 mmol，5.0當量)且在室溫下攪拌5小時。添加DMSO (2 mL)且溶液藉由RP-HPLC ISCO gold層析(10-100% MeCN/H2O，0.1% TFA改質劑)純化。凍乾後，獲得2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(80-羧基-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十烷基)苯甲基)-N,N-二甲基乙-1-銨。HRMS: M+= 2465.7800; Rt=2.15 min (5 min酸性法)。 通用程序 4 合成 N-(4-((S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(80- 羧基 -2- 甲基 -3- 側氧基 -6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45, 48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78- 二十五氧雜 -2- 氮雜八十烷基 ) 苯甲基 )-2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-2- 羧基吡啶 -3- 基 )-5- 甲基 -1H- 吡唑 -1- 基 ) 甲基 )-5,7- 二甲基金剛烷 -1- 基 ) 氧基 )-N,N- 二甲基乙 -1- 銨
在0℃下在冰浴中向2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(80-羧基-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十烷基)苯甲基)-N,N-二甲基乙-1-銨(28 mg，0.011 mmol)於CH 2Cl 2(0.75 mL)中之溶液中添加三氟乙酸(0.25 mL)。在冰浴中攪拌混合物1小時，此時在真空中移除揮發物。添加DMSO (1.5 mL)且溶液藉由RP-HPLC ISCO gold層析(10-100% MeCN/H2O，0.1% TFA改質劑)純化。凍乾後，獲得N-(4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(80-羧基-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十烷基)苯甲基)-2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)-N,N-二甲基乙-1-銨。HRMS: M+= 2367.3101; Rt=1.86 min (5 min酸性法)。對於此通用程序，在一些情況下，胺按原樣取用而無需RP-HPLC純化。 通用程序 5 合成 2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-2- 羧基吡啶 -3- 基 )-5- 甲基 -1H- 吡唑 -1- 基 ) 甲基 )-5,7- 二甲基金剛烷 -1- 基 ) 氧基 )-N-(2-(80- 羧基 -2- 甲基 -3- 側氧基 - 6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78- 二十五氧雜 -2- 氮雜八十烷基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基乙 -1- 銨 (L11A-P27)
向N-(4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(80-羧基-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33, 36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十烷基)苯甲基)-2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)-N,N-二甲基乙-1-銨(10.0 mg，0.004 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(1.4 mg，0.005 mmol，1.2當量)於DMF (0.5 mL)中之溶液中添加DIPEA (6.7 µL, 0.039 mmol，10.0當量)。在室溫下攪拌混合物3.5小時。添加DMSO (1.5 mL)且溶液藉由RP-HPLC ISCO gold層析(10-100% MeCN/H2O，0.1% TFA改質劑)純化。凍乾後，獲得2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)-N-(2-(80-羧基-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十烷基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-N,N-二甲基乙-1-銨。HRMS: M += 2562.3401; Rt=2.04 min (5 min酸性法)。 合成 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-2-(((4- 甲氧基苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 ) 吡啶 -3- 基 )-5- 甲基 -1H- 吡唑 -1- 基 ) 甲基 )-5,7- 二甲基金剛烷 -1- 基 ) 氧基 ) 乙基 )-1-(4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 甲胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 吡咯啶 -1- 鎓
遵循 通用程序 2，用6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-3-(1-(((1r,3R,5S,7s)-3,5-二甲基-7-(2-(吡咯啶-1-基)乙氧基)金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸4-甲氧基苯甲酯(30.0 mg，0.033 mmol)及(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(氯甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(25.2 mg，0.033 mmol，1.0當量)獲得1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲胺基)甲基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: M += 1412.7600; Rt=2.22 min (5 min酸性法)。 合成 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-2-(((4- 甲氧基苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 ) 吡啶 -3- 基 )-5- 甲基 -1H- 吡唑 -1- 基 ) 甲基 )-5,7- 二甲基金剛烷 -1- 基 ) 氧基 ) 乙基 )-1-(4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(80- 羧基 -2- 甲基 -3- 側氧基 -6,9,12,15,18,21,24,27,30,33, 36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78- 二十五氧雜 -2- 氮雜八十烷基 ) 苯甲基 ) 吡咯啶 -1- 鎓
遵循 通用程序 3，用1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲胺基)甲基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(42.0 mg，0.026 mmol)及79-((2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基)-79-側氧基-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-二十五氧雜七十九烷酸(40.4 mg，0.031 mmol，1.2當量)獲得1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(80-羧基-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45, 48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十烷基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: M += 2613.4199; Rt=2.38 min (5 min酸性法)。 合成 1-(4-((S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(80- 羧基 -2- 甲基 -3- 側氧基 -6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42, 45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78- 二十五氧雜 -2- 氮雜八十烷基 ) 苯甲基 )-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-2- 羧基吡啶 -3- 基 )-5- 甲基 -1H- 吡唑 -1- 基 ) 甲基 )-5,7- 二甲基金剛烷 -1- 基 ) 氧基 ) 乙基 ) 吡咯啶 -1- 鎓
遵循 通用程序 4，用1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(80-羧基-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十烷基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(68.0 mg，0.26 mmol)獲得1-(4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(80-羧基-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42, 45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十烷基)苯甲基)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: M += 2393.3301; Rt=1.85 min (5 min酸性法)。 合成 1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-2- 羧基吡啶 -3- 基 )-5- 甲基 -1H- 吡唑 -1- 基 ) 甲基 )-5,7- 二甲基金剛烷 -1- 基 ) 氧基 ) 乙基 )-1-(2-(80- 羧基 -2- 甲基 -3- 側氧基 - 6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78- 二十五氧雜 -2- 氮雜八十烷基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 吡咯啶 -1- 鎓 (L11A-P21)
遵循 通用程序 5，用1-(4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(80-羧基-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十烷基)苯甲基)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)吡咯啶-1-鎓(26.1 mg，0.011 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(5.1 mg，0.016 mmol，1.5當量)獲得1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(2-(80-羧基-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36, 39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十烷基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: M += 2588.3899; Rt=2.05 min (5 min酸性法)。 通用程序 6 合成 3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨
向2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-5-(3-(4-(3-(二甲胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸(75.0 mg，0.114 mmol)及((S)-1-(((S)-1-((4-(氯甲基)-3-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸三級丁酯(103.0 mg，0.182 mmol，1.6當量)於DMSO (2.0 ml)中之懸浮液中添加TBAI (67.4 mg，0.182 mmol，1.6當量)及DIPEA (0.16 mL, 0.912 mmol，9.0當量)。混合物變為溶液且在室溫下攪拌2小時。此後，溶液藉由RP-HPLC ISCO gold層析(10-70% MeCN/H2O，0.1% TFA改質劑)純化。凍乾後，獲得3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。LCMS: M += 1187.6; Rt=0.93 min (2 min酸性法)。 通用程序 7 合成 N-(2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 )-3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨
在將含有3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(50.0 mg，0.042 mmol)、25-疊氮基-2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷(34.5 mg，0.084 mmol，2.0當量)、(R)-2-((S)-1,2-二羥乙基)-4-羥基-5-側氧基-2,5-二氫呋喃-3-醇酸鈉(12.5 mg，0.63 mmol，1.5當量)及五水合硫酸銅(II) (2.1 mg，0.008 mmol，0.2當量)之燒瓶密封且抽空/用N 2吹掃3×之後，經由注射器添加三級丁醇(5.0 mL)及水(0.5 mL)。將混合物在室溫下攪拌2小時。添加DMSO (1 mL)且溶液藉由RP-HPLC ISCO gold層析(0-100% MeCN/H2O，0.1% TFA改質劑)純化。凍乾後，獲得N-(2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。HRMS: M += 1596.7531; Rt=1.18 min (2 min酸性法)。對於此通用程序，在一些情況下，使用DMF或DMSO替代三級丁醇。 合成 N-(2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 )-3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨
遵循 通用程序 4，用N-(2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(30.0 mg，0.019 mmol)獲得N-(2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。LCMS: M += 1497.2; Rt=1.94 min (5 min酸性法)。 合成 N-(2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 甲基 )-4-((R)-2-((R)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 )-3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨 (L8A-P1)
遵循 通用程序 5，用N-(2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(24.0 mg，0.016 mmol)獲得N-(2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)-4-((R)-2-((R)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。HRMS: M += 1691.7500; Rt=4.35 min (5 min酸性法)。 合成 3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨
遵循 通用程序 7，用3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(50.0 mg，0.042 mmol)及1-疊氮基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十七烷-27-酸(39.4 mg，0.084 mmol，2.0當量)獲得3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。LCMS: 1/2M += 828.1; Rt=0.71 min (2 min酸性法)。 通用程序 8 合成 3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(2-(((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨 (L7A-P1)
將3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(32.2 mg，0.019 mmol)於DCM/TFA (3:1, 2.6 mL)中之溶液冷卻至0℃且在此溫度下攪拌1小時。在減壓下蒸發混合物以產生粗去Boc中間物之後，將粗物質溶解於DMF (0.5 mL)中且接著添加3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(12.1 mg，0.039 mmol，2.0當量)及DIPEA (0.1 mL, 0.584 mmol，30.0當量)。在室溫下攪拌混合物30分鐘。溶液藉由RP-HPLC ISCO gold層析(0-100% MeCN/H2O，0.1% TFA改質劑)純化。凍乾後，獲得3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(2-(((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。HRMS: M += 1749.7400; Rt=2.51 min (5 min酸性法)。 合成 N-(4-((S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 )-3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨
遵循 通用程序 4，用3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(263.0 mg，0.221 mmol)獲得N-(4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲基)-3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。HRMS: M += 1087.2700; Rt=1.85 min (5 min酸性法)。 合成 3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨
遵循 通用程序 5，用N-(4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲基)-3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(77.0 mg，0.050 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(23.2 mg，0.075 mmol，1.5當量)獲得3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。HRMS: M += 1282.4800; Rt=2.15 min (5 min酸性法)。 合成 3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(2-(((1-(74- 羧基 - 3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72- 二十四氧雜七十四烷基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨 (L109A-P1)
遵循 通用程序 7，用3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(51.8 mg，0.037 mmol)及1-疊氮基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72-二十四氧雜七十五烷-75-酸(87.0 mg，0.074 mmol，2.0當量)獲得3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(2-(((1-(74-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72-二十四氧雜七十四烷基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。HRMS: M += 2453.8899; Rt=2.17 min (5 min酸性法)。 合成 3-(4-(3-(2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨
遵循 通用程序 6，用2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-5-(3-(4-(3-(二甲胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸(50.0 mg，0.079 mmol)及((S)-1-(((S)-1-((4-(氯甲基)-3-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸三級丁酯(71.7 mg，0.127 mmol，1.6當量)獲得3-(4-(3-(2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。LCMS: M += 1162.2; Rt=0.94 min (2 min鹼性法)。 合成 3-(4-(3-(2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨
遵循 通用程序 7，用3-(4-(3-(2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(40.0 mg，0.034 mmol)及1-疊氮基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十七烷-27-酸(25.8 mg，0.055 mmol，1.6當量)獲得3-(4-(3-(2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。LCMS: M/2 += 815.4; Rt=0.99 min (2 min酸性法)。 合成 3-(4-(3-(2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(2-(((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨 (L7A-P2)
遵循 通用程序 8，用3-(4-(3-(2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(37.0 mg，0.023 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(10.6 mg，0.034 mmol，1.5當量)獲得3-(4-(3-(2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(2-(((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。LCMS: M -= 1722.9; Rt=0.91 min (2 min酸性法)。 合成 3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 甲基 (( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨
遵循 通用程序 6，用2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-5-(3-(4-(3-(二甲胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸(118.0 mg，0.170 mmol)及5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(氯甲基)苯甲基(甲基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(127.0 mg，0.204 mmol，1.2當量)獲得3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。HRMS: M += 1244.5100; Rt=2.42 min (5 min酸性法)。 合成 3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 甲基 (( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨
遵循 通用程序 8，用3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(65.0 mg，0.052 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(32.4 mg，0.104 mmol，2.0當量)獲得3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。LCMS: M += 1341.1; Rt=2.20 min (5 min酸性法)。 合成 3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(2-(((((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨 (L3A-P1)
遵循 通用程序 7，用3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(65.0 mg，0.049 mmol)及1-疊氮基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十七烷-27-酸(45.4 mg，0.097 mmol，2.0當量)獲得3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(2-(((((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)(甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。HRMS: M += 1806.7700; Rt=2.05 min (5 min酸性法)。 合成 N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 )-3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨
遵循 通用程序 7，用3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(36.0 mg，0.029 mmol)及25-疊氮基-2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷(23.7 mg，0.058 mmol，2.0當量)獲得N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)(甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。HRMS: M += 1653.7500; Rt=2.29 min (5 min酸性法)。 合成 N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 )-3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨 (L4A-P1)
遵循 通用程序 8，用N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)(甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(19.6 mg，0.012 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(7.4 mg，0.024 mmol，2.0當量)獲得N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)(甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。HRMS: M += 1748.7600; Rt=2.15 min (5 min酸性法)。 合成 3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 丙 -2- 炔 -1- 基 (( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨
遵循 通用程序 6，用2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-5-(3-(4-(3-(二甲胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸(50.0 mg，0.076 mmol)及5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(氯甲基)苯甲基(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(73.8 mg，0.114 mmol，1.5當量)獲得3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。LCMS: M += 1269.2; Rt=2.24 min (5 min鹼性法)。 合成 3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 丙 -2- 炔 -1- 基 (( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨
遵循 通用程序 8，用3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(45.9 mg，0.036 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基酯(22.3 mg，0.072 mmol，2.0當量)獲得3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。HRMS: M += 1363.5100; Rt=2.26 min (5 min酸性法)。 合成 N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 )-3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨 (L1A-P1)
遵循 通用程序 7，用3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(21.9 mg，0.016 mmol)及1-疊氮基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六烷(51.0 mg，0.120 mmol，7.5當量)獲得N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。HRMS: M += 2181.9800; Rt=2.31 min (5 min酸性法)。 合成 3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(2-(((((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨 (L10A-P1)
遵循 通用程序 7，用3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(20.0 mg，0.015 mmol)及1-疊氮基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十七烷-27-酸(51.4 mg，0.110 mmol，7.5當量)獲得3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(2-(((((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。HRMS: M += 2298.0100; Rt=2.44 min (5 min酸性法)。 合成 2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-5-(3-(4-(3-((4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 丙 -2- 炔 -1- 基 (( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 二甲基銨基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 ) 噻唑 -4- 甲酸酯
遵循 通用程序 6，用2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-5-(3-(4-(3-(二甲胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸(50.0 mg，0.079 mmol)及5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(氯甲基)苯甲基(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(61.5 mg，0.095 mmol，1.2當量)獲得2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-5-(3-(4-(3-((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)二甲基銨基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸酯。LCMS: M += 1243.2; Rt=2.27 min (5 min酸性法)。 合成 3-(4-(3-(2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(((((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨
遵循 通用程序 7，用3-(4-(3-(2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(21.8 mg，0.018 mmol)及1-疊氮基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十七烷-27-酸(32.8 mg，0.070 mmol，4.0當量)獲得3-(4-(3-(2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。HRMS: M += 2176.8301; Rt=2.25 min (5 min酸性法)。 合成 3-(4-(3-(2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(2-(((((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨 (L10A-P2)
遵循 通用程序 8，用3-(4-(3-(2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(17.8 mg，0.008 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(10.2 mg，0.033 mmol，4.0當量)獲得3-(4-(3-(2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(2-(((((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。HRMS: M += 2271.8186; Rt=2.12 min (5 min酸性法)。 合成 N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 )-3-(4-(3-(2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨
遵循 通用程序 7，用3-(4-(3-(2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(22.6 mg，0.018 mmol)及25-疊氮基-2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷(29.8 mg，0.073 mmol，4.0當量)獲得N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-3-(4-(3-(2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。LCMS: M/2 += 1032.3; Rt=2.25 min (5 min酸性法)。 合成 N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 )-3-(4-(3-(2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨 (L1A-P2)
遵循 通用程序 8，用N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-3-(4-(3-(2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(23.0 mg，0.011 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(10.4 mg，0.033 mmol，3.0當量)獲得N-(2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-3-(4-(3-(2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。HRMS: M += 2155.8176; Rt=2.23 min (5 min酸性法)。 合成 3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨
遵循 通用程序 6，用2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-5-(3-(4-(3-(二甲胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸(21.5 mg，0.033 mmol)及((S)-1-(((S)-1-((4-(氯甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸三級丁酯(21.2 mg，0.042 mmol，1.3當量)獲得3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。LCMS: M += 1119.3; Rt=2.15 min (5 min酸性法)。 合成 3-(4-(3-(2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨 (L9A-P1)
遵循 通用程序 8，用3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(36.6 mg，0.033 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(20.3 mg，0.065 mmol，2.0當量)獲得3-(4-(3-(2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。HRMS: M += 1214.4700; Rt=2.10 min (5 min酸性法)。 合成 3-(4-(3-(2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨
遵循 通用程序 6，用2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-5-(3-(4-(3-(二甲胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸(25.0 mg，0.040 mmol)及((S)-1-(((S)-1-((4-(氯甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-3-甲基-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸三級丁酯(25.6 mg，0.051 mmol，1.3當量)獲得3-(4-(3-(2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。LCMS: M += 1094.1; Rt=2.14 min (5 min酸性法)。 合成 3-(4-(3-(2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-4- 羧基噻唑 -5- 基 ) 丙氧基 )-3- 氟苯基 )-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 )-N,N- 二甲基丙 -2- 炔 -1- 銨 (L9A-P2)
遵循 通用程序 8，用3-(4-(3-(2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨(31.6 mg，0.029 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(26.9 mg，0.087 mmol，3.0當量)獲得3-(4-(3-(2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-4-羧基噻唑-5-基)丙氧基)-3-氟苯基)-N-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)-N,N-二甲基丙-2-炔-1-銨。HRMS: M += 1188.4500; Rt=2.07 min (5 min酸性法)。 通用程序 9 合成 6-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 甲胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )(3- 羥丙基 ) 胺基 ) 乙氧基 )-5,7- 二甲基金剛烷 -1- 基 ) 甲基 )-5- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 吡啶甲酸 4- 甲氧基苯甲酯
向6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((3-羥丙基)胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸4-甲氧基苯甲酯(30.0 mg，0.033 mmol)及(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(35.9 mg，0.039 mmol，1.2當量)於DMF (1.0 mL)中之溶液中添加DIPEA (0.03 mL, 0.164 mmol，5.0當量)，且將混合物在室溫下攪拌16小時。在形成胺基甲酸酯之後，添加含2M二甲胺之THF (0.164 mL，0.329 mmol，1.0當量)且攪拌混合物1.5小時。添加DMSO (2.0 mL)且溶液藉由RP-HPLC ISCO gold層析(10-100% MeCN/H2O，0.1% TFA改質劑)純化。凍乾後，獲得6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(3-羥丙基)胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸4-甲氧基苯甲酯。HRMS: M += 1460.7500; Rt=2.31 min (5 min酸性法)。 合成 1-(2-((((2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-2-(((4- 甲氧基苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 ) 吡啶 -3- 基 )-5- 甲基 -1H- 吡唑 -1- 基 ) 甲基 )-5,7- 二甲基金剛烷 -1- 基 ) 氧基 ) 乙基 )(3- 羥丙基 ) 胺甲醯基 ) 氧基 ) 甲基 )-5-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯基 )-2- 甲基 -3- 側氧基 -6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78- 二十五氧雜 -2- 氮雜八十一烷 -81- 酸
遵循 通用程序 3，用6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(3-羥丙基)胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸4-甲氧基苯甲酯(32.0 mg，0.022 mmol)及79-((2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基)-79-側氧基-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-二十五氧雜七十九烷酸(43.3 mg，0.033 mmol，1.5當量)獲得1-(2-((((2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)(3-羥丙基)胺甲醯基)氧基)甲基)-5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯基)-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十一烷-81-酸。HRMS: M-H+2Na= 2705.3601; Rt=2.63 min (5 min酸性法)。 合成 3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(80- 羧基 -2- 甲基 -3- 側氧基 -6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78- 二十五氧雜 -2- 氮雜八十烷基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )(3- 羥丙基 ) 胺基 ) 乙氧基 )-5,7- 二甲基金剛烷 -1- 基 ) 甲基 )-5- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-6-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 ) 吡啶甲酸
遵循 通用程序 4，用1-(2-((((2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)(3-羥丙基)胺甲醯基)氧基)甲基)-5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯基)-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36, 39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十一烷-81-酸(35.1 mg，0.013 mmol)獲得3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(80-羧基-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十烷基)苯甲基)氧基)羰基)(3-羥丙基)胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)吡啶甲酸。HRMS: M-H+2Na= 2485.2700; Rt=2.02 min (5 min酸性法)。 合成 6-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((2-(80- 羧基 -2- 甲基 -3- 側氧基 -6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78- 二十五氧雜 -2- 氮雜八十烷基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )(3- 羥丙基 ) 胺基 ) 乙氧基 )-5,7- 二甲基金剛烷 -1- 基 ) 甲基 )-5- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 吡啶甲酸 (L11C-P25)
遵循 通用程序 5，用3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(80-羧基-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十烷基)苯甲基)氧基)羰基)(3-羥丙基)胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)吡啶甲酸(17.3 mg，0.007 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(2.6 mg，0.009 mmol，1.2當量)獲得6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((2-(80-羧基-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十烷基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(3-羥丙基)胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸。HRMS: M+H= 2636.3701; Rt=1.73 min (5 min酸性法)。 合成 6-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 甲胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )(2-((S)-2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環 -4- 基 ) 乙基 ) 胺基 ) 乙氧基 )-5,7- 二甲基金剛烷 -1- 基 ) 甲基 )-5- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 吡啶甲酸
遵循 通用程序 9，用6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((2-((S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)乙基)胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸(24.0 mg，0.028 mmol)及(5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(27.9 mg，0.031 mmol，1.1當量)獲得6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(2-((S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)乙基)胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸。HRMS: M+H= 1410.7300; Rt=2.24 min (5 min酸性法)。 合成 6-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(80- 羧基 -2- 甲基 -3- 側氧基 -6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78- 二十五氧雜 -2- 氮雜八十烷基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )(2-((S)-2,2- 二甲基 -1,3- 二氧戊環 -4- 基 ) 乙基 ) 胺基 ) 乙氧基 )-5,7- 二甲基金剛烷 -1- 基 ) 甲基 )-5- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 吡啶甲酸
遵循 通用程序 3，用6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(2-((S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)乙基)胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸(19.0 mg，0.012 mmol)及79-((2,5-二側氧基吡咯啶-1-基)氧基)-79-側氧基-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-二十五氧雜七十九烷酸(24.6 mg，0.019 mmol，1.5當量)獲得6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(80-羧基-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十烷基)苯甲基)氧基)羰基)(2-((S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)乙基)胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸。HRMS: M-H+2Na = 2655.3701; Rt=2.59 min (5 min酸性法)。 合成 3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(80- 羧基 -2- 甲基 -3- 側氧基 -6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78- 二十五氧雜 -2- 氮雜八十烷基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )((S)-3,4- 二羥丁基 ) 胺基 ) 乙氧基 )-5,7- 二甲基金剛烷 -1- 基 ) 甲基 )-5- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 )-6-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 ) 吡啶甲酸
遵循 通用程序 4，用6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(80-羧基-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42, 45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十烷基)苯甲基)氧基)羰基)(2-((S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊環-4-基)乙基)胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸(28.4 mg，0.011 mmol)獲得3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(80-羧基-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十烷基)苯甲基)氧基)羰基)((S)-3,4-二羥丁基)胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)吡啶甲酸。HRMS: M+H = 2471.3301; Rt=1.97 min (5 min酸性法)。 合成 6-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((2-(80- 羧基 -2- 甲基 -3- 側氧基 -6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78- 二十五氧雜 -2- 氮雜八十烷基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )((S)-3,4- 二羥丁基 ) 胺基 ) 乙氧基 )-5,7- 二甲基金剛烷 -1- 基 ) 甲基 )-5- 甲基 -1H- 吡唑 -4- 基 ) 吡啶甲酸 (L11C-P19)
遵循 通用程序 5，用3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(80-羧基-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十烷基)苯甲基)氧基)羰基)((S)-3,4-二羥丁基)胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)吡啶甲酸(35.6 mg，0.014 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(10.7 mg，0.034 mmol，2.5當量)獲得6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-3-(1-(((1S,3s,5R,7S)-3-(2-((((2-(80-羧基-2-甲基-3-側氧基-6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十五氧雜-2-氮雜八十烷基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)((S)-3,4-二羥丁基)胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸。HRMS: M+H = 2666.3701; Rt=2.19 min (5 min酸性法)。 合成 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 )-2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸
遵循 通用程序 9，用2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-5-(3-(2-氟-4-(3-(甲胺基)丙-1-炔-1-基)苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸(40.0 mg，0.062 mmol)及((S)-3-甲基-1-(((S)-1-((4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)-3-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸(9H-茀-9-基)甲酯(57.1 mg，0.068 mmol，1.1當量)獲得5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸。LCMS: M+H = 1117.8; Rt=0.84 min (2 min酸性法)。 合成 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 )-2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸
遵循 通用程序 7，用5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸(18.2 mg，0.016 mmol)及1-疊氮基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十七烷-27-酸(9.1 mg，0.020 mmol，1.2當量)獲得5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸。LCMS: M/2+H = 793.1; Rt=1.17 min (2 min酸性法)。 合成 2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 ) 噻唑 -4- 甲酸 (L7C-P3)
遵循 通用程序 5，用5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸(10.5 mg，0.007 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(2.5 mg，0.08 mmol，1.2當量)獲得2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸。LCMS: M/2+H = 891.2; Rt=2.56 min (5 min酸性法)。 通用程序 10 合成 2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )(3-( 二甲胺基 ) 丙基 ) 胺基 )-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 ) 噻唑 -4- 甲酸
向2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(3-(二甲胺基)丙基)胺基)-5-(3-(2-氟-4-(3-(甲胺基)丙-1-炔-1-基)苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸(30.0 mg，0.039 mmol)及((R)-3-甲基-1-(((R)-1-((4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)-3-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸三級丁酯(36.5 mg，0.051 mmol，1.3當量)於DMF (1.0 mL)中之溶液中添加DIPEA (0.034 mL, 0.197 mmol，5.0當量)。將混合物在室溫下攪拌2小時。添加DMSO (1.0 mL)且溶液藉由RP-HPLC ISCO gold層析(0-100% MeCN/H2O，0.1% TFA改質劑)純化。凍乾後，獲得2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(3-(二甲胺基)丙基)胺基)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸。HRMS: M+H = 1262.5100; Rt=2.47 min (5 min酸性法)。 合成 2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )(3-( 二甲胺基 ) 丙基 ) 胺基 )-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((R)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 ) 噻唑 -4- 甲酸
遵循 通用程序 8，用2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(3-(二甲胺基)丙基)胺基)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸(40.0 mg，0.032 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(11.8 mg，0.038 mmol，1.2當量)獲得2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(3-(二甲胺基)丙基)胺基)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((R)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸。HRMS: M+H = 1357.5262; Rt=1.16 min (2 min酸性法)。 合成 2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )(3-( 二甲胺基 ) 丙基 ) 胺基 )-5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 ) 噻唑 -4- 甲酸 (L7C-P6)
遵循 通用程序 7，用2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(3-(二甲胺基)丙基)胺基)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((R)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸(10.0 mg，0.008 mmol)及1-疊氮基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十七烷-27-酸(6.9 mg，0.015 mmol，2.0當量)獲得2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(3-(二甲胺基)丙基)胺基)-5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸。HRMS: M+H = 1824.7700; Rt=2.19 min (5 min酸性法)。 合成 2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 ) 噻唑 -4- 甲酸
遵循 通用程序 10，用2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-5-(3-(2-氟-4-(3-(甲胺基)丙-1-炔-1-基)苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸(50.0 mg，0.081 mmol)及((S)-3-甲基-1-(((S)-1-((4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)-3-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸三級丁酯(57.7 mg，0.081 mmol，1.0當量)獲得2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸。LCMS: M+H = 1192.2; Rt=0.88 min (2 min鹼性法)。 合成 2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 ) 噻唑 -4- 甲酸
遵循 通用程序 7，用2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸(38.0 mg，0.032 mmol)及1-疊氮基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十七烷-27-酸(23.9 mg，0.051 mmol，1.6當量)獲得2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸。LCMS: M/2+H = 830.6; Rt=0.73 min (2 min鹼性法)。 合成 2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 )-5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 ) 噻唑 -4- 甲酸 (L7C-P7)
遵循 通用程序 8，用2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸(25.0 mg，0.015 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(7.0 mg，0.023 mmol，1.5當量)獲得2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸。LCMS: M/2+H = 877.9; Rt=1.07 min (2 min酸性法)。 合成 5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 )-2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 噻唑 -4- 甲酸
遵循 通用程序 7，用2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基氧基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸(45.0 mg，0.038 mmol)及25-疊氮基-2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷(21.7 mg，0.053 mmol，1.4當量)獲得5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)噻唑-4-甲酸。LCMS: M/2+H = 800.9; Rt=1.14 min (2 min酸性法)。 合成 5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 )-2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )( 甲基 ) 胺基 ) 噻唑 -4- 甲酸 (L8C-P7)
遵循 通用程序 8，用5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)噻唑-4-甲酸(49.0 mg，0.031 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(14.3 mg，0.046 mmol，1.5當量)獲得5-(3-(4-(3-((((2-(((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(甲基)胺基)噻唑-4-甲酸。LCMS: M/2+H = 848.6; Rt=1.08 min (2 min酸性法)。 合成 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 甲基 (( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 )-2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸
遵循 通用程序 9，用5-((S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯甲基(甲基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(72.0 mg，0.081 mmol)及2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-5-(3-(2-氟-4-(3-(甲胺基)丙-1-炔-1-基)苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸(52.0 mg，0.081 mmol，1.0當量)獲得5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸。LCMS: M+H = 1174.3; Rt=1.12 min (2 min酸性法)。 合成 5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 )-2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸
遵循 通用程序 7，用5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸(22.0 mg，0.019 mmol)及25-疊氮基-2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷(23.0 mg，0.056 mmol，3.0當量)獲得5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)(甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸。HRMS: M+H = 1583.8199; Rt=2.30 min (5 min酸性法)。 合成 5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 )-2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸 (L8C-P3)
遵循 通用程序 5，用5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)(甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸(12.3 mg，0.008 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(4.8 mg，0.016 mmol，2.0當量)獲得5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)(甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸。HRMS: M+H = 1778.6500; Rt=2.67 min (5 min酸性法)。 合成 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(((((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 )-2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸
遵循 通用程序 7，用5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸(20.0 mg，0.017 mmol)及1-疊氮基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十七烷-27-酸(23.9 mg，0.051 mmol，3.0當量)獲得5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)(甲基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸。HRMS: M+H = 1641.8900; Rt=2.24 min (5 min酸性法)。 合成 2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 ) 噻唑 -4- 甲酸 (L3C-P3)
遵循 通用程序 5，用5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)(甲基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸(5.5 mg，0.003 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(2.1 mg，0.007 mmol，2.0當量)獲得2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)(甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸。HRMS: M+H = 1837.6300; Rt=2.61 min (5 min酸性法)。 合成 5-((5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 甲基 (( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 )-4- 羧基噻唑 -2- 基 )(6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 ) 胺基 )-2- 羥基 -N,N- 二甲基 -N-(3- 磺丙基 ) 戊 -1- 銨
遵循 通用程序 9，用(5-((S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯甲基)(甲基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(30.0 mg，0.034 mmol)及5-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羧基-5-(3-(2-氟-4-(3-(甲胺基)丙-1-炔-1-基)苯氧基)丙基)噻唑-2-基)胺基)-2-羥基-N,N-二甲基-N-(3-磺丙基)戊-1-銨(28.8 mg，0.034 mmol，1.0當量)獲得5-((5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-4-羧基噻唑-2-基)(6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)胺基)-2-羥基-N,N-二甲基-N-(3-磺丙基)戊-1-銨。LCMS: M+H = 1387.1; Rt=0.98 min (2 min酸性法)。 合成 5-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )(4- 羧基 -5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 甲基 (( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 ) 噻唑 -2- 基 ) 胺基 )-2- 羥基 -N,N- 二甲基 -N-(3- 磺丙基 ) 戊 -1- 銨
遵循 通用程序 5，用5-((5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-4-羧基噻唑-2-基)(6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)胺基)-2-羥基-N,N-二甲基-N-(3-磺丙基)戊-1-銨(35.6 mg，0.026 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(12.0 mg，0.039 mmol，1.5當量)獲得5-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羧基-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-2-基)胺基)-2-羥基-N,N-二甲基-N-(3-磺丙基)戊-1-銨。LCMS: M/2+H = 791.2; Rt=1.01 min (2 min酸性法)。 合成 5-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )(4- 羧基 -5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 ) 噻唑 -2- 基 ) 胺基 )-2- 羥基 -N,N- 二甲基 -N-(3- 磺丙基 ) 戊 -1- 銨 (L3C-P4)
遵循 通用程序 7，用5-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羧基-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-2-基)胺基)-2-羥基-N,N-二甲基-N-(3-磺丙基)戊-1-銨(23.0 mg，0.015 mmol)及1-疊氮基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十七烷-27-酸(20.4 mg，0.044 mmol，3.0當量)獲得5-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羧基-5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)(甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-2-基)胺基)-2-羥基-N,N-二甲基-N-(3-磺丙基)戊-1-銨。HRMS: M+H = 2047.8101; Rt=2.24 min (5 min酸性法)。 合成 2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )(4- 羥基 -5-( 三甲銨基 ) 戊基 ) 胺基 )-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 甲基 (( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 ) 噻唑 -4- 甲酸酯
遵循 通用程序 10，用2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羥基-5-(三甲銨基)戊基)胺基)-5-(3-(2-氟-4-(3-(甲胺基)丙-1-炔-1-基)苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸酯(40.0 mg，0.054 mmol)及5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯甲基(甲基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(41.2 mg，0.054 mmol，1.0當量)獲得2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羥基-5-(三甲銨基)戊基)胺基)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸酯。LCMS: M+H = 1378.1; Rt=1.11 min (2 min酸性法)。 合成 2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )(4- 羥基 -5-( 三甲銨基 ) 戊基 ) 胺基 )-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(((((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 ) 噻唑 -4- 甲酸酯
遵循 通用程序 7，用2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羥基-5-(三甲銨基)戊基)胺基)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸酯(67.0 mg，0.049 mmol)及1-疊氮基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十七烷-27-酸(34.1 mg，0.073 mmol，1.5當量)獲得2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羥基-5-(三甲銨基)戊基)胺基)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)(甲基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸酯。LCMS: M/2+H = 923.6; Rt=1.06 min (2 min酸性法)。 合成 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(((((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 )-2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )(4- 羥基 -5-( 三甲銨基 ) 戊基 ) 胺基 ) 噻唑 -4- 甲酸酯
遵循 通用程序 4，用2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羥基-5-(三甲銨基)戊基)胺基)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)(甲基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸酯(53.7 mg，0.029 mmol)獲得5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)(甲基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羥基-5-(三甲銨基)戊基)胺基)噻唑-4-甲酸酯。LCMS: M/2+H = 873.5; Rt=1.03 min (2 min酸性法)。 合成 5-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )(4- 羧基 -5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 ) 噻唑 -2- 基 ) 胺基 )-2- 羥基 -N,N,N- 三甲基戊 -1- 銨 (L3C-P5)
遵循 通用程序 5，用5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)(甲基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羥基-5-(三甲銨基)戊基)胺基)噻唑-4-甲酸酯(50.8 mg，0.029 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(13.6 mg，0.044 mmol，1.5當量)獲得5-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羧基-5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)(甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-2-基)胺基)-2-羥基-N,N,N-三甲基戊-1-銨。HRMS: M+H = 1939.8199; Rt=2.17 min (5 min酸性法)。 合成 2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 丙 -2- 炔 -1- 基 (( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 ) 噻唑 -4- 甲酸
遵循 通用程序 10，用5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯甲基(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(49.3 mg，0.062 mmol)及2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-5-(3-(2-氟-4-(3-(甲胺基)丙-1-炔-1-基)苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸(40.0 mg，0.062 mmol，1.0當量)獲得2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸。LCMS: M+H = 1297.0; Rt=1.28 min (2 min酸性法)。 合成 5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 )-2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸
遵循 通用程序 7，用2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸(49.0 mg，0.038 mmol)及25-疊氮基-2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷(34.0 mg，0.083 mmol，2.2當量)獲得5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸。LCMS: M/2+H = 1059.4; Rt=1.16 min (2 min酸性法)。 合成 5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 )-2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸
遵循 通用程序 4，用5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸(80.0 mg，0.038 mmol)獲得5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸。LCMS: M/2+H = 1009.2; Rt=1.14 min (2 min酸性法)。 合成 5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )((1-(2,5,8,11,14,17,20,23- 八氧雜二十五烷 -25- 基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 )-2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸 (L1C-P3)
遵循 通用程序 5，用5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸(76.0 mg，0.038 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(23.4 mg，0.075 mmol，2.0當量)獲得5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)((1-(2,5,8,11,14,17,20,23-八氧雜二十五烷-25-基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸。HRMS: M+H = 2211.9700; Rt=2.56 min (5 min酸性法)。 合成 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((((9H- 茀 -9- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 丙 -2- 炔 -1- 基 (( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 )-2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸
遵循 通用程序 10，用5-((S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯甲基(丙-2-炔-1-基)胺基甲酸丙-2-炔-1-基酯(56.9 mg，0.062 mmol)及2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-5-(3-(2-氟-4-(3-(甲胺基)丙-1-炔-1-基)苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸(40.0 mg，0.062 mmol，1.0當量)獲得5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸。LCMS: M+H = 1422.6; Rt=1.33 min (2 min酸性法)。 合成 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(( 丙 -2- 炔 -1- 基 (( 丙 -2- 炔 -1- 基氧基 ) 羰基 ) 胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 )-2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸
將5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((((9H-茀-9-基)甲氧基)羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸(88.0 mg，0.062 mmol)於2.0 M二甲胺/THF (3.1 mL, 6.20 mmol，100.0當量)中之溶液在室溫下攪拌80 min。真空移除溶劑，在DMSO (1.0 mL)中稀釋殘餘物，且藉由RP-HPLC ISCO gold層析(0-100% MeCN/H2O，0.05% TFA改質劑)純化。凍乾後，獲得5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸。LCMS: M+H = 1199.2; Rt=1.06 min (2 min酸性法)。 合成 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 )-2-(((((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲基 ) 胺基 ) 甲基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 )-2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 ) 噻唑 -4- 甲酸
遵循 通用程序 7，用5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((丙-2-炔-1-基((丙-2-炔-1-基氧基)羰基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸(20.8 mg，0.017 mmol)及1-疊氮基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十七烷-27-酸(17.9 mg，0.038 mmol，2.2當量)獲得5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸。LCMS: M/2+H = 1068.2; Rt=0.99 min (2 min酸性法)。 合成 2-(3-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-4- 甲基 -6,7- 二氫吡啶并 [2,3-c] 嗒 𠯤 -8(5H)- 基 )-5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 )((1-(26- 羧基 -3,6,9,12,15,18,21,24- 八氧雜二十六基 )-1H-1,2,3- 三唑 -4- 基 ) 甲基 ) 胺基 ) 甲基 )-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 ) 噻唑 -4- 甲酸 (L10C-P3)
遵循 通用程序 5，用5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(((((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)噻唑-4-甲酸(36.3 mg，0.017 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(5.3 mg，0.017 mmol，1.0當量)獲得2-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-5-(3-(4-(3-((((2-(((((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲氧基)羰基)((1-(26-羧基-3,6,9,12,15,18,21,24-八氧雜二十六基)-1H-1,2,3-三唑-4-基)甲基)胺基)甲基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸。HRMS: M+H = 2327.9800; Rt=2.45 min (5 min酸性法)。 合成 5-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )(4- 羧基 -5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 ) 噻唑 -2- 基 ) 胺基 )-2- 羥基 -N,N- 二甲基 -N-(3- 磺丙基 ) 戊 -1- 銨 (L9C-P4)
遵循 通用程序 10，用(4-硝基苯基)碳酸4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲酯(20.0 mg，0.027 mmol)及5-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羧基-5-(3-(2-氟-4-(3-(甲胺基)丙-1-炔-1-基)苯氧基)丙基)噻唑-2-基)胺基)-2-羥基-N,N-二甲基-N-(3-磺丙基)戊-1-銨(23.1 mg，0.027 mmol，1.0當量)獲得5-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羧基-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-2-基)胺基)-2-羥基-N,N-二甲基-N-(3-磺丙基)戊-1-銨。HRMS: M+H = 1455.5300; Rt=2.31 min (5 min酸性法)。 合成 2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )(4- 羥基 -5-( 三甲銨基 ) 戊基 ) 胺基 )-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(( 三級丁氧羰基 ) 胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 ) 噻唑 -4- 甲酸酯
遵循 通用程序 10，用2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羥基-5-(三甲銨基)戊基)胺基)-5-(3-(2-氟-4-(3-(甲胺基)丙-1-炔-1-基)苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸酯(40.0 mg，0.054 mmol)及((S)-3-甲基-1-(((S)-1-((4-((((4-硝基苯氧基)羰基)氧基)甲基)苯基)胺基)-1-側氧基-5-脲基戊-2-基)胺基)-1-側氧基丁-2-基)胺基甲酸三級丁酯(34.5 mg，0.054 mmol，1.0當量)獲得2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羥基-5-(三甲銨基)戊基)胺基)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸酯。LCMS: M+H = 1253.8; Rt=1.11 min (2 min酸性法)。 合成 5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2- 胺基 -3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 )-2-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )(4- 羥基 -5-( 三甲銨基 ) 戊基 ) 胺基 ) 噻唑 -4- 甲酸酯
遵循 通用程序 4，用2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羥基-5-(三甲銨基)戊基)胺基)-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-4-甲酸酯(64.8 mg，0.052 mmol)獲得5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羥基-5-(三甲銨基)戊基)胺基)噻唑-4-甲酸酯。LCMS: M/2+H = 576.6; Rt=0.99 min (2 min酸性法)。 合成 5-((6-( 苯并 [d] 噻唑 -2- 基胺基 )-5- 甲基嗒 𠯤 -3- 基 )(4- 羧基 -5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5- 二側氧基 -2,5- 二氫 -1H- 吡咯 -1- 基 ) 乙氧基 ) 丙醯胺基 )-3- 甲基丁醯胺基 )-5- 脲基戊醯胺基 ) 苯甲基 ) 氧基 ) 羰基 )( 甲基 ) 胺基 ) 丙 -1- 炔 -1- 基 )-2- 氟苯氧基 ) 丙基 ) 噻唑 -2- 基 ) 胺基 )-2- 羥基 -N,N,N- 三甲基戊 -1- 銨 (L9C-P5)
遵循 通用程序 5，用5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)-2-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羥基-5-(三甲銨基)戊基)胺基)噻唑-4-甲酸酯(59.0 mg，0.051 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(19.1 mg，0.061 mmol，1.2當量)獲得5-((6-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-5-甲基嗒𠯤-3-基)(4-羧基-5-(3-(4-(3-((((4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(甲基)胺基)丙-1-炔-1-基)-2-氟苯氧基)丙基)噻唑-2-基)胺基)-2-羥基-N,N,N-三甲基戊-1-銨。HRMS: M+H = 1347.5300; Rt=2.23 min (5 min酸性法)。 合成1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(75-甲基-74-側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35, 38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-二十四烷氧雜-75-氮雜七十六烷-76-基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓
遵循 通用程序 3，用1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲胺基)甲基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(40 mg，0.028 mmol)及2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-二十四氧雜七十四烷-74-酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(51.5 mg，0.042 mmol，1.5當量)獲得1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(75-甲基-74-側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-二十四烷氧雜-75-氮雜七十六烷-76-基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: M += 2511.4099; Rt=2.44 min (5 min酸性法)。  合成1-(4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(75-甲基-74-側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50, 53,56,59,62,65,68,71-二十四烷氧雜-75-氮雜七十六烷-76-基)苯甲基)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)吡咯啶-1-鎓
遵循 通用程序 4，用1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(75-甲基-74-側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-二十四烷氧雜-75-氮雜七十六烷-76-基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(50 mg，0.0199 mmol)獲得1-(4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(75-甲基-74-側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41, 44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-二十四烷氧雜-75-氮雜七十六烷-76-基)苯甲基)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: M += 2291.3101; Rt=1.93 min (5 min酸性法)。  合成1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(75-甲基-74-側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-二十四烷氧雜-75-氮雜七十六烷-76-基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(L30A-P21)
遵循 通用程序 5，用1-(4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(75-甲基-74-側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-二十四烷氧雜-75-氮雜七十六烷-76-基)苯甲基)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)吡咯啶-1-鎓(37 mg，0.015 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(11.4 mg，0.0367 mmol，2.5當量)獲得1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(75-甲基-74-側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71-二十四烷氧雜-75-氮雜七十六烷-76-基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: M += 2486.3301; Rt=2.14 min (5 min酸性法)。  合成1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,44,44-十五甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42-十四側氧基-43-氧雜-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-十三氮雜四十五烷基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓
遵循 通用程序 3，用1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲胺基)甲基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(35 mg，0.021 mmol)及3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,42,42-十四甲基-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40-十三側氧基-41-氧雜-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-十二氮雜四十三烷酸(21.9 mg，0.021 mmol，1.0當量)獲得1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,44,44-十五甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42-十四側氧基-43-氧雜-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-十三氮雜四十五烷基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: [(M+)+H+] +2/2=1211.6500; Rt=2.31 min (5 min酸性法)。  合成1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(2-(41-羧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-十三甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39-十三側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-十三氮雜四十一烷基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(L35A-P21)
遵循 通用程序 4，用1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,44,44-十五甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42-十四側氧基-43-氧雜-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-十三氮雜四十五烷基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(24 mg，0.0095 mmol)，且接著取用粗產物且遵循 通用程序 5，用3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(5.9 mg，0.019 mmol，2當量)獲得1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(2-(41-羧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-十三甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39-十三側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-十三氮雜四十一烷基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: M += 2340.1699; Rt=1.87 min (5 min酸性法)。  合成1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,62,62-二十一甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60-二十側氧基-61-氧雜-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-十九氮雜六十三烷基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓
遵循 通用程序 3，用1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲胺基)甲基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(47 mg，0.0286 mmol)及3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,60,60-二十甲基-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58-十九側氧基-59-氧雜-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54-十八氮雜六十一烷酸(41.6 mg，0.0286 mmol，1.0當量)獲得1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,62,62-二十一甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60-二十側氧基-61-氧雜-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-十九氮雜六十三烷基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: M += 2487.5400; Rt=2.26 min (5 min酸性法)。  合成1-(4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(59-羧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-十九甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57-十九側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-十九氮雜五十九烷基)苯甲基)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)吡咯啶-1-鎓
遵循 通用程序 4，用1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,62,62-二十一甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60-二十側氧基-61-氧雜-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-十九氮雜六十三烷基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(46 mg，0.0155 mmol)獲得1-(4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(59-羧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-十九甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57-十九側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-十九氮雜五十九烷基)苯甲基)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: M += 2571.3401; Rt=1.60 min (5 min酸性法)。  合成1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(2-(59-羧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-十九甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57-十九側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-十九氮雜五十九烷基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(L36A-P21)
遵循 通用程序 5，用1-(4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(59-羧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-十九甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57-十九側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-十九氮雜五十九烷基)苯甲基)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)吡咯啶-1-鎓(17.0 mg，0.0055 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(2.4 mg，0.0076 mmol，1.4當量)獲得1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(2-(59-羧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-十九甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57-十九側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56-十九氮雜五十九烷基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: M += 2766.3899; Rt=1.82 min (5 min酸性法)。  合成1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74,80,80-二十七甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54, 57,60,63,66,69,72,75,78-二十六側氧基-79-氧雜-2,5,8,11,14,17,20,23, 26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-二十五氮雜八十一烷基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓
遵循 通用程序 3，用1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲胺基)甲基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(40 mg，0.028 mmol)及3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42, 45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,78,78-二十六甲基-4,7,10,13,16,19,22, 25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-二十五側氧基-77-氧雜-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63, 66,69,72-二十四氮雜七十九烷酸(58.5 mg，0.031 mmol，1.1當量)獲得1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74,80,80-二十七甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54, 57,60,63,66,69,72,75,78-二十六側氧基-79-氧雜-2,5,8,11,14,17,20,23, 26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-二十五氮雜八十一烷基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: M += 3273.7500; Rt=2.24 min (5 min酸性法)。  合成1-(4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(77-羧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-二十五甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48, 51,54,57,60,63,66,69,72,75-二十五側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26, 29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-二十五氮雜七十七烷基)苯甲基)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)吡咯啶-1-鎓
遵循 通用程序 4，用1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74,80,80-二十七甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48, 51,54,57,60,63,66,69,72,75,78-二十六側氧基-79-氧雜-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-二十五氮雜八十一烷基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(20 mg，0.0063 mmol)獲得1-(4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(77-羧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-二十五甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57, 60,63,66,69,72,75-二十五側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38, 41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-二十五氮雜七十七烷基)苯甲基)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: M += 2997.6001; Rt=1.65 min (5 min酸性法)。  合成1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(2-(77-羧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-二十五甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51, 54,57,60,63,66,69,72,75-二十五側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32, 35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-二十五氮雜七十七烷基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(L37A-P21)
遵循 通用程序 5，用1-(4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(77-羧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35, 38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-二十五甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57,60,63,66,69,72,75-二十五側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38,41,44, 47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-二十五氮雜七十七烷基)苯甲基)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)吡咯啶-1-鎓(35 mg，0.011 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(4.7 mg，0.015 mmol，1.4當量)獲得1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(2-(77-羧基-2,5,8,11,14,17,20, 23,26,29,32,35,38,41,44,47,50,53,56,59,62,65,68,71,74-二十五甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48,51,54,57, 60,63,66,69,72,75-二十五側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38, 41,44,47, 50,53,56,59,62,65,68,71,74-二十五氮雜七十七烷基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: M += 3192.6399; Rt=1.86 min (5 min酸性法)。  合成1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-十三甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39-十三側氧基-2,5,8,11,14, 17,20,23,26,29,32,35,38-十三氮雜四十烷基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓
遵循 通用程序 3，用1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲胺基)甲基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(70 mg，0.043 mmol)及3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-十二甲基-4,7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37-十二側氧基-3,6,9,12,15,18,21,24, 27,30,33,36-十二氮雜三十八烷酸(38.9 mg，0.043 mmol，1.0當量)獲得1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-十三甲基-3,6,9,12,15,18,21, 24,27,30,33,36,39-十三側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-十三氮雜四十烷基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: M += 2307.2300; Rt=2.20 min (5 min酸性法)。  合成1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-十三甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39-十三側氧基-2,5,8,11,14,17,20, 23,26,29,32,35,38-十三氮雜四十烷基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(L38A-P21)
遵循 通用程序 4，用1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-十三甲基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39-十三側氧基-2,5,8,11,14,17,20, 23,26,29,32,35,38-十三氮雜四十烷基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(67 mg，0.029 mmol)，且接著取用粗反應產物且遵循 通用程序 5，用3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(13.5 mg，0.044 mmol，1.5當量)獲得1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-十三甲基-3,6,9,12,15,18,21, 24,27,30,33,36,39-十三側氧基-2,5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-十三氮雜四十烷基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: M += 2282.2500; Rt=1.89 min (5 min酸性法)。  合成1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(78-羧基-2-甲基-3-側氧基-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37, 40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-二十四烷氧雜-2,4-二氮雜七十八烷基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓
將1-胺基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42, 45,48,51,54,57,60,63,66,69,72-二十四氧雜七十五烷-75-酸(67 mg，0.059 mmol，1.28當量)、雙(4-硝基苯基)碳酸酯(17 mg，0.057 mmol，1.25當量)及DIPEA (48 µL, 0.28 mmol，6.0當量)於DMF (1 mL)中之混合物在室溫下攪拌1 h，此時添加1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲胺基)甲基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(65 mg，0.046 mmol，1.0當量)及額外DIEA (80 µL, 0.46 mmol，10當量)。在攪拌1小時之後，溶液用DMSO (2.5 mL)稀釋且藉由RP-HPLC純化。凍乾後，獲得1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(78-羧基-2-甲基-3-側氧基-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-二十四烷氧雜-2,4-二氮雜七十八烷基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: M += 2584.4399; Rt=2.39 min (5 min酸性法)。  合成1-(4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(78-羧基-2-甲基-3-側氧基-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40, 43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-二十四烷氧雜-2,4-二氮雜七十八烷基)苯甲基)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)吡咯啶-1-鎓
遵循 通用程序 4，用1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(78-羧基-2-甲基-3-側氧基-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-二十四烷氧雜-2,4-二氮雜七十八烷基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(58 mg，0.021 mmol)獲得1-(4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(78-羧基-2-甲基-3-側氧基-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34, 37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-二十四烷氧雜-2,4-二氮雜七十八烷基)苯甲基)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: [(M+)+H+)] +2/2= 1183.1700; Rt=1.88 min (5 min酸性法)。  合成1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(2-(78-羧基-2-甲基-3-側氧基-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-二十四烷氧雜-2,4-二氮雜七十八烷基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(L42A-P21)
遵循 通用程序 5，用1-(4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(78-羧基-2-甲基-3-側氧基-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-二十四烷氧雜-2,4-二氮雜七十八烷基)苯甲基)-1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)吡咯啶-1-鎓(61 mg，0.024 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(10.2 mg，0.033 mmol，1.4當量)獲得1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-羧基吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(2-(78-羧基-2-甲基-3-側氧基-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37, 40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-二十四烷氧雜-2,4-二氮雜七十八烷基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓。HRMS: M += 2559.3701; Rt=2.07 min (5 min酸性法)。  合成1-(2-((((2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)(3-羥丙基)胺甲醯基)氧基)甲基)-5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯基)-2-甲基-3-側氧基-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-二十四烷氧雜-2,4-二氮雜七十九烷-79-酸
將1-胺基-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36,39,42,45,48, 51,54,57,60,63,66,69,72-二十四氧雜七十五烷-75-酸(45.9 mg，0.040 mmol，1.3當量)、雙(4-硝基苯基)碳酸酯(12 mg，0.0394 mmol，1.28當量)及DIPEA (32 µL, 0.184 mmol，6.0當量)於DMF (1 mL)中之混合物在室溫下攪拌1 h，此時添加1-(2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)-1-(4-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-((甲胺基)甲基)苯甲基)吡咯啶-1-鎓(50 mg，0.0308 mmol，1.0當量)及額外DIEA (53.7 µL, 0.308 mmol，10當量)。在攪拌1小時之後，溶液用DMSO (2.5 mL)稀釋且藉由RP-HPLC純化。凍乾後，獲得1-(2-((((2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)(3-羥丙基)胺甲醯基)氧基)甲基)-5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯基)-2-甲基-3-側氧基-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58, 61,64,67,70,73,76-二十四烷氧雜-2,4-二氮雜七十九烷-79-酸。HRMS: (M+2H+) +2/2= 1316.7200; Rt=2.64 min (5 min酸性法)。  合成3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(78-羧基-2-甲基-3-側氧基-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-二十四烷氧雜-2,4-二氮雜七十八烷基)苯甲基)氧基)羰基)(3-羥丙基)胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)吡啶甲酸
遵循 通用程序 4，用1-(2-((((2-(((1s,3r,5R,7S)-3-((4-(6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-2-(((4-甲氧基苯甲基)氧基)羰基)吡啶-3-基)-5-甲基-1H-吡唑-1-基)甲基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)氧基)乙基)(3-羥丙基)胺甲醯基)氧基)甲基)-5-((S)-2-((S)-2-((三級丁氧羰基)胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯基)-2-甲基-3-側氧基-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52, 55,58,61,64,67,70,73,76-二十四烷氧雜-2,4-二氮雜七十九烷-79-酸(39 mg，0.014 mmol)獲得3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(78-羧基-2-甲基-3-側氧基-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-二十四烷氧雜-2,4-二氮雜七十八烷基)苯甲基)氧基)羰基)(3-羥丙基)胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)吡啶甲酸。修改通用程序4以減去一級羥基上形成之少量TFA酯。在濃縮TFA/CH2Cl2後，將殘餘物溶解於DMSO (1 mL)中，添加DIEA (125 µL，50當量)，隨後添加MeOH (1 mL)。靜置1小時後，減去酯且純化溶液。HRMS: MH += 2412.3101; Rt=2.03 min (5 min酸性法)。  合成6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((2-(78-羧基-2-甲基-3-側氧基-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-二十四烷氧雜-2,4-二氮雜七十八烷基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(3-羥丙基)胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸(L42C-P25)
遵循 通用程序 5，用3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((4-((S)-2-((S)-2-胺基-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)-2-(78-羧基-2-甲基-3-側氧基-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-二十四烷氧雜-2,4-二氮雜七十八烷基)苯甲基)氧基)羰基)(3-羥丙基)胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)-6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)吡啶甲酸(26 mg，0.010 mmol)及3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙酸2,5-二側氧基吡咯啶-1-基酯(4.0 mg，0.013 mmol，1.25當量)獲得6-(3-(苯并[d]噻唑-2-基胺基)-4-甲基-6,7-二氫吡啶并[2,3-c]嗒𠯤-8(5H)-基)-3-(1-(((1r,3s,5R,7S)-3-(2-((((2-(78-羧基-2-甲基-3-側氧基-7,10,13,16,19,22,25,28,31,34,37,40,43,46,49,52,55,58,61,64,67,70,73,76-二十四烷氧雜-2,4-二氮雜七十八烷基)-4-((S)-2-((S)-2-(3-(2-(2,5-二側氧基-2,5-二氫-1H-吡咯-1-基)乙氧基)丙醯胺基)-3-甲基丁醯胺基)-5-脲基戊醯胺基)苯甲基)氧基)羰基)(3-羥丙基)胺基)乙氧基)-5,7-二甲基金剛烷-1-基)甲基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基)吡啶甲酸。HRMS: MH += 2607.3601; Rt=2.27 min (5 min酸性法)。
以下化合物係使用與針對L38A-P21所描述類似之程序製備：  L39A-P21 HRMS: M+= 2708.3999; Rt=1.85 min (5 min酸性法)。  L40A-P21 HRMS: M += 3134.6201; Rt=1.81 min (5 min酸性法)。
以下化合物可使用與上文所描述類似之程序製備： L11A-P1 、 L11A-P21 、 L11A-P27 、 L11C-P19 、 L11C-P25 、 L30A-P1 、 L30C-P19 、 L30A-P21 、 L30C-P25 、 L30A-P27 、 L35A-P1 、 L35C-P19 、 L35A-P21 、 L35C-P25 、 L35A-P27 、 L36A-P1 、 L36C-P19 、 L36A-P21 、 L36C-P25 、 L36A-P27 、 L37A-P1 、 L37C-P19 、 L37A-P21 、 L37C-P25 、 L37A-P27 、 L38A-P1 、 L38C-P19 、 L38A-P21 、 L38C-P25 、 L38A-P27 、 L39A-P1 、 L39C-P19 、 L39A-P21 、 L39C-P25 、 L39A-P27 、 L40A-P1 、 L40C-P19 、 L40A-P21 、 L40C-P25 、 L40A-P27 、 L42A-P1 、 L42C-P19 、 L42A-P21 、 L42A-P27 、 L67A-P1 、 L67C-P19 、 L67A-P21 、 L67C-P25 、 L67A-P27 、 L100A-P1 、 L100C-P19 、 L100A-P21 、 L100C-P25 、 L100A-P27 、 L103A-P1 、 L103C-P19 、 L 103A-P21 、 L103C-P25 、 L103A-P27 、 L111A-P1 、 L111C-P19 、 L111A-P21 、 L111C-P25 及 L111A-P2 。化合物之結構顯示於表B中。 實例 5. Bcl - xL 抑制劑 ADC 之 合成及表徵
例示性抗體-藥物結合物(ADC)使用下文所述之例示性方法合成。 縮寫：Ab         抗體 ADC       抗體-藥物結合物 CV         管柱體積 DAR       藥物-抗體比率 DFA       二氟乙酸 ESI        電噴霧電離 FA         甲酸 LC-MS    液相層析質譜 L/P         連接子-有效負載 mAb       單株抗體 PBS        磷酸鹽緩衝鹽水 PES        聚醚碸 PLRP-s   聚合逆相管柱 rmp        還原可修飾蛋白 SEC        尺寸排阻層析法 Tris        參(羥甲基)胺基甲烷 UPLC     超高效液相層析 ADC BclXL 之結合及分析型表徵 1. 抗體規格
例示性抗體-藥物結合物(ADC)使用下文所述之例示性方法合成。用於製備例示性ADC之所有抗體分別由表12中所概述之縮寫來定義。 表12：用於合成例示性ADC之抗體
抗體縮寫 抗體 突變 *(工程化半胱胺酸) 序列來源
Ab Ma MET_9006_IgG1 E153C S376C WO2016/042412
Ab Mb MET_9338_ IgG1 E149C S372C WO2016/042412
Ab Mc MET_9006_IgG2 E153C S372C WO2016/042412
Ab Md MET_9338_IgG2 E149C S368C WO2016/042412
Ab Me MET_9006x9338_IgG1 E153C S376C (HC1) E149C S372C (HC2)  WO2016/042412考慮到該序列亦包括額外突變1+1 CrossMabVH-VL±**，如表6中所述
Ab F 抗雞溶菌酶MOR DANAPA_IgG1 E163C S386C Fc靜默 WO2012/041800
Ab G 抗雞溶菌酶MOR_IgG1 E163C S386C    
Ab Mf MET_8902_IgG1 E153C S376C   
Ab Mg MET_8902_IgG2 E153C S372C   
*2個工程化半胱胺酸，亦即E152C及S375C (對應於根據EU編號系統編號之野生型(未修飾) IgG1重鏈恆定域中之152及375的胺基酸位置，來自WO2015138615之參考序列)在所有測試抗體中均為保守的。此等取代之精確位置報導於上表中。 ** KiH及帶電對突變。
例示性ADC係使用位點特異性結合來合成。抗體Ma、Mb、Mc、Md、Me及Ab F具有併入重鏈內部之半胱胺酸突變且用於使用方法M1或M2經由順丁烯二醯亞胺基來結合連接子-有效負載(圖1)。對於Ab G、Ab Mf及Ab Mg進行相同的抗體突變及L/P結合。 2. 結合
例示性ADC係使用以下三個連接子-有效負載合成：L9C-P25及L42C-P25及L113C-MMAE。 特異性半胱胺酸結合之通用抗體製備 ：
在5 mg抗體範圍內進行結合。藉由在Biorad尺寸之拋棄式管柱中混合30分鐘，抗體以10 mg Ab與1 ml樹脂/PBS之比率結合在rmp蛋白A樹脂(GE Healthcare)上。為了使反應性半胱胺酸去阻斷，添加半胱胺酸鹽酸鹽單水合物至終濃度為20 mM。將混合物在室溫下攪拌30分鐘，然後在真空歧管上用5×50 CV之PBS洗滌樹脂。接著將樹脂再懸浮於等體積的含有250 nM CuCl 2之PBS中，且培育1.5 h。接著使用結合方法M1或M2或M3來連接該連接子-有效負載。 結合方法 M1 ：
附著於蛋白A之再氧化抗體在真空歧管上用5×50 CV PBS洗滌，且再懸浮於等樹脂體積之PBS中。向混合物中添加10倍莫耳過量之20 mM連接子-有效負載溶液及等體積之DMF。在室溫下培育反應物2 h。為監測結合，取出20 µl樹脂漿液，離心，且在移除上清液後，樹脂用40 µl抗體溶離緩衝液(Thermo Fisher Scientific)溶離，且藉由PRLP-s進行分析。藉由在真空歧管上用5×50 CV PBS洗滌樹脂而消除過量連接子-有效負載後，用抗體溶離緩衝液自蛋白A溶離ADC，且藉由在PBS 1× pH 7.4 (Sigma Life Science，P3813，10PAK)中透析(Thermo Fisher，88254)而進行緩衝液交換1小時。藉由方法M1之例示性ADC係藉由SEC管柱HiLoad ®26/600 Superdex ®200 prep級用含20% DMA之PBS純化。 結合方法 M2 ：
附著於蛋白A之再氧化抗體在真空歧管上用5×50 CV PBS洗滌，且再懸浮於等樹脂體積之PBS中。向混合物中添加10倍莫耳過量之20 mM連接子-有效負載溶液及等體積之DMF。在室溫下培育反應物2 h。為監測結合，取出20 µl樹脂漿液，離心且在移除上清液後，樹脂用40 µl抗體溶離緩衝液(Thermo Fisher Scientific)溶離，且藉由PRLP-s進行分析。藉由在真空歧管上用5×50 CV PBS洗滌樹脂而消除過量連接子-有效負載後，用抗體溶離緩衝液自蛋白A溶離ADC。 結合方法 M3 ： 附著於蛋白A之再氧化抗體在真空歧管上用5×50 CV PBS洗滌，且再懸浮於等樹脂體積之PBS中。向混合物中添加10倍莫耳過量之20 mM連接子-有效負載溶液及等體積之DMF。在室溫下培育反應物2 h。為監測結合，取出20 µl樹脂漿液，離心，且在移除上清液後，樹脂用40 µl抗體溶離緩衝液(Thermo Fisher Scientific)溶離，且藉由PRLP-s進行分析。藉由在真空歧管上用5×50 CV PBS洗滌樹脂而消除過量連接子-有效負載後，用抗體溶離緩衝液自蛋白A溶離ADC，且藉由在PBS 1× pH 7.4 (Sigma Life Science，P3813，10PAK)中透析(Thermo Fisher，88254)而進行緩衝液交換1小時。藉由此方法之例示性ADC係藉由SEC管柱HiLoad ®26/600 Superdex ®200 prep級用100% PBS純化。
用方法M1或M2合成之所有例示性ADC均藉由在PBS 1× pH 7.4 (Sigma Life Science，P3813，10PAK)中透析(Thermo Fisher，88254)進行緩衝液交換，使用Vivaspin 20，50KD，PES (Sartorius Stedim，VS2031)濃縮，經由0.2μm無菌PES過濾器，25mm (Whatmann，G896-2502)無菌過濾且儲存於4℃下。藉由方法M3之所有例示性ADC均直接使用Vivaspin 20，50KD，PES (Sartorius Stedim，VS2031)濃縮，經由0.2μm無菌PES過濾器，25mm (Whatmann，G896-2502)無菌過濾且儲存於4℃下。所有ADC均由分析型尺寸排阻層析法Superdex 200 Increase 5/150 GL (GE Healthcare, 28990945)表徵以測定單體百分比及LC-MS以用於DAR測定。
為監測結合，使用逆相層析法，其使用Agilent PLRP-S管柱4000A 5 μm，4.6×50 mm管柱(緩衝液A為水、0.1% TFA，緩衝液B為乙腈、0.1% TFA，管柱保持在80℃，流速1.5 ml/min)。 3. 表徵 LC - MS 通用方法
例示性ADC之藥物-抗體比率(DAR)係使用以下方法藉由液相層析-質譜(LC-MS)來測定： •  LC - IV ( 80 % 相 A ( 水 / 0 . 1 % FA ) ， 20 % 相 B ( 乙腈 / 0 . 1 % FA )) ：將ADC負載至Bioresolve RP mAb Polyphenyl，管柱450A，2.7µm，2.1*150mm (Waters, Saint- Quentin-en-Yvelines, France, 186008946)上。對於完整與減少條件中之分析，在20% B下以0.6 mL/min之流率進行去鹽步驟1.5 min。溶離步驟以20% B下1.5 min至50% B下16.5 min之梯度以0.6 ml/min之流率進行。洗滌步驟設定為在100% B下16.8 min至18.8 min，流動速率為0.6 ml/min。最後，在20% B下在19.2 min以0.6 mL/min之流動速率(總運行時間=21 min)使用調節步驟1.8 min。
對於此方法，移動相A係用Mili-Q®系統獲得之超純水，且流動相B係補充有0.1% FA (Fisher Chemical：A117-50-50ML)之MS級乙腈(Biosolve, Dieuze, France，0001204101BS)。管柱溫度設定為80℃。通用MS方法針對所有合成ADC進行最佳化以確定平均DAR (表13)。
LC-MS分析使用配備有Xevo G2 XS Q-TOF ESI質譜儀(Waters, Manchester, UK)之Waters UPLC H級Bio層析系統進行。在完整條件下藉由去糖基化步驟使用PNGase F酶(New England Biolabs®，P0705L)對ADC進行分析，或者在使用5 mM (最終濃度)二硫蘇糖醇DTT (Thermo Scientific, Rockford, IL，20291)還原後對ADC進行分析。隨後，使用上述LC-IV分析經處理之ADC (表B)。使用UNIFI ™採集軟體(Waters, Manchester, UK)採集分析物之電噴霧-電離飛行時間質譜。接著，使用MassLynx™軟體之最大熵(MaxEnt1)方法對所提取強度對比m/z光譜進行去卷積以視處理而測定各完整抗體物種或各還原抗體片段之質量。最後，藉由對未結合及結合之給定物種(mAb或相關片段)之積分MS (總離子流)峰面積求和，自去卷積光譜中測定DAR。對於DAR測定，藉由去卷積光譜之強度峰值計算所鑑定之各物種的百分比。所獲得之百分比乘以所附著藥物之數目。求和結果產生完整ADC*2之最終平均DAR值之估計。 尺寸排阻層析法
藉由量測結合物之單體百分比，進行尺寸排阻層析法(SEC)以對各ADC進行品質控制。該分析係在分析型管柱Superdex 200 Increase 5/150 GL (GE Healthcare, 28990945)上，在100% PBS pH 7.4 (Sigma Life Science, P3813, 10PAK)之等度條件下，以0.45 ml/min流速進行12分鐘。結合物樣品之聚集體溶離份%係基於280 nm處之峰面積吸光度進行定量。其計算係基於280 nm之高分子量溶離劑之間的比率除以高分子量及單體溶離劑之相同波長下的峰面積吸光度之和乘以100。 4. 結果
例示性ADC之表徵概述於表13中(偶合、LC-MS方法、DAR、聚集狀態、ADC穩定性及產率)。使用上述LC-MS方法測定平均DAR值，且在ADC品質控制期間及穩定性研究(在37℃下在PBS緩衝液中培育168 h)之後藉由尺寸排阻層析法(SEC)來量測聚集體百分比。  表13：ADC分析型表徵及偶合方法
ADC 偶合方法 LC-MS 方法 DAR (LC-MS) % Agg (SEC) Stab w1 +37 ℃ % Agg (SEC) 產率 %
Ab Ma - L9C-P25 M2 LC-IV 3.5 3 6 80
Ab Mb - L9C-P25 M2 LC-IV 3.2 5 4 64
Ab Mc - L9C-P25 M1 LC-IV 3.6 2 2 47
Ab Mc - L113C-MMAE M1 LC-IV 3.3 1 3 41
Ab Md - L9C-P25 M1 LC-IV 3.4 2 1 34
Ab Md - L113C-MMAE  M1 LC-IV 3.2 1 2 48
Ab F - L9C-P25 M1 LC-IV 3.5 1 2 38
Ab Mc - L42C-P25 M1 LC-IV 3.6 3 6 58
Ab F - L42C-P25 M1 LC-IV 3.7 1 5 70
Ab Me - L9C-P25 M1 LC-IV 3.2 5 7 24
Ab Ma - L42C-P25 M3 LC-IV 3.3 1 1 70
Ab Mb- L42C-P25 M3 LC-IV 3.1 2 3 56
Ab Mf - L42C-P25 M3 LC-IV 3.5 1 1 77
Ab Mc - L42C-P25 M3 LC-IV 3.6 2 8 43
Ab Md- L42C-P25 M3 LC-IV 3.7 5 5 28
Ab Mg - L42C-P25 M3 LC-IV 3.5 4 4 40
Ab G - L42C-P25 M3 LC-IV 3.4 2 2 55
以下ADC Ab Mb - L42C-P25、Ab Md - L42C-P25及Ab Ma - L42C-P25係使用上文所述之程序製備。額外例示性ADC Ab Ma - L42C-P25、Ab Mb - L42C-P25、Ab Mf - L42C-P25、Ab Mc - L42C-P25、Ab Md - L42C-P25、Ab Mg - L42-P25、Ab G - L42-P25係使用上文所述之程序製備。 實例 6. 抗 MET - Bcl - xLi ADC 在各種細胞株中之活體外評估 抗 MET 裸抗體及抗 MET - Bcl - xLi ADC 在 H1650 細胞株中之活體外活性 ( 3D ， CTG 120h ) ：
將H1650細胞在補充有10%熱不活化胎牛血清、青黴素(100 IU/ml)、鏈黴素(100 μg/ml)及L-麩醯胺酸(2 mM)之RPMI中培養。在37℃下在含有5% CO 2之加濕氛圍中培養細胞。將細胞接種於96微孔圓底盤(96微孔低附著盤，Costar參考號7007；75 µL/孔，125000個細胞/mL)中，且暴露於mAb或ADC 120 h (連續稀釋；各9個濃度，重複)。在37℃/5% CO 2下培育5天之後，藉由使用CellTiterGlo以75 μL試劑/孔定量細胞ATP水平來評估mAb或ADC對細胞存活率之影響。一式兩份地測試所有條件。在多用途盤讀取器上定量螢光。使用標準四參數曲線擬合計算IC 50。IC 50定義為CTG信號減少至對照組量測值之50%時的化合物濃度。進行兩個獨立實驗(N1及N2)。對於所有測試之抗體及ADC，各實驗之IC 50資料及算術平均值示於表14中。對於一些抗體及ADC，曲線示於圖2中。NT=未測試；ND=未測定。 抗 MET 裸抗體及抗 MET - Bcl - xLi ADC 在 EBC - 1 、 SNU - 5 及 LOUNH - 91 中之活體外活性 ( CTG 120h ) ：
細胞株在上述培養基中在37℃下在含有5% CO 2之加濕氛圍中培養。細胞接種於96孔透明底盤(96孔透明底，白色，Corning參考號3903)中且暴露於mAb或ADC 120 h (連續稀釋；各9個濃度，一式三份)。在37℃/5% CO 2下培育5天之後，藉由使用CellTiter- Glo試劑(Promega參考號：G7571)以75 μL試劑/孔定量細胞ATP水平來評估mAb或ADC對細胞存活率之影響。所有條件進行重複三次測試。在多用途盤讀取器上定量螢光。使用標準四參數曲線擬合計算IC 50。IC 50定義為CTG信號減少至對照組量測值之50%時的化合物濃度。進行兩個獨立實驗(N1及N2)。對於所有測試之抗體及ADC，各實驗之IC 50資料及算術平均值示於表14中。對於一些抗體及ADC，曲線示於圖2中。 培養基：•  EBC-1 (JCRB) ：EMEM (ATCC編號30-2003 )、10% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810)、1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630) •  SNU-5 (ATCC)：IMDM (ATCC編號30-2005 )、20% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810)、1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630) •  LOUNH-91 (DSMZ)：RPMI 1640 + Glutamax (Gibco編號61870)、20% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810)、1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630) 接種條件 ：•  EBC-1：96孔盤中75 µL/孔，60000個細胞/mL，持續120h •  SNU-5：96孔盤中75 µL/孔，60000個細胞/mL，持續120h •  LOUNH-91：96孔盤中75 µL/孔，65000個細胞/mL，持續120h
如表14中所示，在MET擴增之細胞株EBC-1及SNU-5中，作為單一藥劑或混合的裸抗MET抗體誘導存活率之強烈劑量依賴性降低，其中IgG2形式比IgG1更有效。在此等相同細胞株中，抗MET ADC一般比對應裸抗體略微更有效。在細胞株H1650 3D (無MET擴增)及LOUNH-91 (低MET擴增)中，作為單一藥劑或混合的抗MET裸抗體無活性，而對應ADC會導致此等細胞之存活率的強烈劑量依賴性降低。  表14：抗MET裸抗體及抗MET-Bcl-xLi ADC在H1650 (3D，CTG 120h)及EBC-1、SNU-5及LOUNH-91 (2D，CTG 120h)細胞株中之活體外活性
細胞株 SNU-5 EBC-1 H1650 3D LOUNH91
癌症類型 胃 肺 肺 肺
RNAseq MET (log2 (FPKM+0.1, CCLE) 9.22 9.43 5.62 6.61
MET 擴增 (CCLE) 是 是 否 低
P25 n=1  (IC 50nM) 10600 20.80 1.47 6.43
P25 n=2  (IC 50nM) 10800 65.90 1.66 7.71
P25 平均值 (IC 50 nM) 10700 43.35 1.57 7.07
IgG1 Ab F n=1 (IC 50nM) ＞ 30 ＞ 100 ＞ 100 ＞ 300
IgG1 Ab F n=2  (IC 50nM) ＞ 30 ＞ 100 ＞ 100 ＞ 300
IgG1 Ab F 平均值 (IC 50 nM) ＞ 30 ＞ 100 ＞ 100 ＞ 300
IgG1 ADC Ab F - L42C-P25 n=1  (IC 50nM) ＞ 30 ＞ 30 42.90 226.00
IgG1 ADC Ab F - L42C-P25 n=2   (IC 50nM) ＞ 30 ＞ 30 50.05 253.00
IgG1 ADC Ab F - L42C-P25 平均值 (IC 50 nM) ＞ 30 ＞ 30 46.48 239.50
IgG1 Ab Ma n=1  (IC 50nM) 0.58 ＞100 ＞ 300 ＞ 300
IgG1 Ab Ma n=2 (IC 50nM) 0.89 ＞100 ＞ 300 ＞ 300
IgG1 Ab Ma 平均值 (IC 50 nM) 0.74 ＞100 ＞ 300 ＞ 300
IgG1 Ab Mb n=1  (IC 50nM) ＞100 ＞100 ＞ 300 ＞ 300
IgG1 Ab Mb n=2  (IC 50nM) ＞100 ＞100 ＞ 300 ＞ 300
IgG1 Ab Mb 平均值 (IC 50 nM) ＞100 ＞100 ＞ 300 ＞ 300
IgG1 Mab混合物Ab Ma + Ab Mb n=1        (IC 50nM) 0.54 1.93 ＞ 300 ＞ 300
IgG1 Mab混合物Ab Ma + Ab Mb n=2        (IC 50nM) 0.54 1.79 ＞ 300 ＞ 300
IgG1 Mab 混合物 Ab Ma + Ab Mb 平均值 (IC 50 nM) 0.54 1.86 ＞ 300 ＞ 300
IgG1 Ab Me n=1 (IC 50nM) 1.07 0.80 ＞ 300 NT
IgG1 Ab Me n=2       (IC 50nM) 0.93 0.58 ＞ 300 NT
IgG1 Ab Me 平均值 (IC 50 nM) 1.00 0.69 ＞ 300 NT
IgG2 Ab Mc n=1 (IC 50nM) 0.13 0.10 ＞ 300 ＞ 300
IgG2 Ab Mc n=2  (IC 50nM) 0.14 0.13 ＞ 300 ＞ 300
IgG2 Ab Mc 平均值 (IC 50 nM) 0.13 0.12 ＞ 300 ＞ 300
IgG2 Ab Md n=1 (IC 50nM) 不分散 0.12 NT NT
IgG2 Ab Md n=2  (IC 50nM) 29.10 0.13 NT NT
IgG2 Ab Md 平均值 (IC 50 nM) 29.10 0.13 NT NT
IgG2 Mab混合物Ab Mc  +  Ab Md n=1 (IC 50nM) 0.01 0.22 NT NT
IgG2 Mab混合物Ab Mc  +  Ab Md  n=2 (IC 50nM) 0.17 0.23 NT NT
IgG2 Mab 混合物 Ab Mc  +  Ab Md 平均值 (IC 50 nM) 0.09 0.23 NT NT
IgG1 ADC Ab Ma - L9C-P25 n=1        (IC 50nM) 0.23 0.75 0.33 8.81
IgG1 ADC Ab Ma - L9C-P25 n=2       (IC 50nM) 0.45 0.67 0.45 4.51
IgG1 ADC Ab Ma - L9C-P25 平均值 (IC 50 nM) 0.34 0.71 0.39 6.66
IgG1 ADC Ab Mb - L9C-P25 n=1 (IC 50nM) ＞100 0.33 0.68 0.47
IgG1 ADC Ab Mb - L9C-P25 n=2       (IC 50nM) ＞100 0.38 1.60 0.20
IgG1 ADC Ab Mb - L9C-P25 平均值 (IC 50 nM) ＞100 0.36 1.14 0.34
IgG1 ADC混合物Ab Ma - L9C-P25  + ADC Ab Mb - L9C-P25 n=1        (IC 50nM) 0.40 0.27 0.15 0.30
IgG1 ADC混合物Ab Ma - L9C-P25  + ADC Ab Mb - L9C-P25 n=2     (IC 50nM) 0.55 0.23 0.19 0.20
IgG1 ADC 混合物 Ab Ma - L9C-P25  + ADC Ab Mb - L9C-P25 (IC 50 nM) 0.48 0.25 0.17 0.25
IgG1 ADC Ab Me - L9C-P25 n=1 (IC 50nM) 0.34 0.16 0.56 NT
IgG1 ADC Ab Me - L9C-P25 n=2       (IC 50nM) 0.54 0.14 0.30 NT
IgG1 ADC Ab Me - L9C-P25 平均值 (IC 50 nM) 0.44 0.15 0.43 NT
IgG2 ADC Ab Mc - L9C-P25 n=1  (IC 50nM) 0.09 0.09 0.67 27.50
IgG2 ADC Ab Mc - L9C-P25   n=2      (IC 50nM) 0.07 0.11 0.63 13.70
IgG2 ADC Ab Mc - L9C-P25 平均值 (IC 50 nM) 0.08 0.10 0.65 20.60
IgG2 ADC  Ab Mc - L42C-P25  n=1      (IC 50nM) 0.10 0.14 0.54 21.10
IgG2 ADC Ab Mc - L42C-P25 n=2      (IC 50nM) 0.11 0.13 0.62 9.01
IgG2 ADC Ab Mc - L42C-P25 平均值 (IC 50 nM) 0.11 0.14 0.58 15.06
IgG2 ADC Ab Md - L9C-P25 n=1        (IC 50nM) 4.12 0.10 NT NT
IgG2 ADC Ab Md - L9C-P25 n=2       (IC 50nM) 0.92 0.10 NT NT
IgG2 ADC Ab Md - L9C-P25 平均值 (IC 50 nM) 2.52 0.10 NT NT
IgG2 ADC混合物Ab Mc - L9C-P25 + ADC Ab Md - L9C-P25 n=1  (IC 50nM) 0.10 0.15 NT NT
IgG2 ADC混合物Ab Mc - L9C-P25 + ADC Ab Md - L9C-P25 n=2  (IC 50nM) 0.16 0.14 NT NT
IgG2 ADC 混合物 Ab Mc - L9C-P25 + ADC Ab Md - L9C-P25 平均值 (IC 50nM) 0.13 0.15 NT NT
NT=未測試；ND=未測定。
如圖2中所示，Ab Mc及ADC Ab Mc - L9C-P25及Ab Mc - L42C-P25均誘導MET擴增之細胞株EBC-1及SNU-5之存活率之劑量依賴性降低；其中ADC略微更有效。在H1650 3D (無MET擴增)及LOUNH-91 (低MET擴增)細胞株中，Ab Mc無活性，而Ab Mc-L9C-P25及Ab Mc-L42C-P25誘導此等細胞株之存活率之強烈劑量依賴性降低。 實例 7. ADC Ab Mc - L9C - P25 IC50 作為 單一藥劑或與紫杉醇或 ADC Ab Md L113C - MMAE 組合在肺癌細胞株中之活體外活性 ( CTG 120h )
細胞株在上述培養基中在37℃下在含有5% CO 2之加濕氛圍中培養。細胞接種於96孔透明底盤(96孔透明底，白色，Corning參考號3903)中且暴露於作為單一藥劑或與紫杉醇1:1組合之mAb、mAb混合物、ADC或ADC混合物。當1:1組合時，組合搭配物(紫杉醇)及mAb、mAb混合物、ADC或ADC混合物均經連續稀釋(各9個濃度，一式三份)。在37℃/5% CO 2下培育5天之後，藉由使用CellTiter- Glo試劑(Promega參考號：G7571)以75 μL試劑/孔定量細胞ATP水平來評估對細胞存活率之影響。所有條件進行重複三次測試。在多用途盤讀取器上定量螢光。使用標準四參數曲線擬合計算IC 50。IC 50定義為CTG信號減少至對照組量測值之50%時的化合物濃度。進行兩個獨立實驗(N1及N2)。各實驗之IC 50資料及算術平均值示於表15中。
如表15中所示，ADC Ab Mc-L9C-P25不誘導無MET擴增或具有低水平MET擴增之此等肺癌細胞株之存活率的劑量依賴性降低。太平洋紫杉醇及ADC Ab Md L113C-MMAE在除NCI-H1838之外的所有細胞株中均誘導細胞存活率之劑量依賴性降低(具有可量測IC 50)。當紫杉醇或ADC Ab Md L113C-MMAE與ADC Ab Mc-L9C-P25組合時，在除了HCC366、NCI-H1975及HCC4006之外的所有細胞株中均觀測到IC 50顯著改良。
裸抗MET抗體Ab Mc及Ab Md顯示在此等細胞株中在至多300nM下作為單一藥劑或在1:1比率混合物中無活性。
細胞株 ( 肺 ) 培養基
HCC827  (ATCC) RPMI 1640 + Glutamax (Gibco編號61870)、0.5 % FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810) 1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630)
NCI-H441  (ATCC) RPMI 1640 + Glutamax (Gibco編號61870)、10% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810) 1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630)
HCC78  (DSMZ) RPMI 1640 + Glutamax (Gibco編號61870)、10% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810) 1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630)
NCI-H1838  (ATCC) RPMI 1640 + Glutamax (Gibco編號61870)、10% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810) 1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630)
NCI-H1975 (ATCC) RPMI 1640 + Glutamax  (Gibco編號61870)、10% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810) 1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630)
HCC4006  (ATCC) RPMI 1640 + Glutamax (Gibco編號61870)、10% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810) 1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630)
CALU1  (ATCC) McCoy's 5A + Glutamax (Gibco編號36600)、10% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810) 1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630)
LU65     (JCRB) RPMI 1640 + Glutamax (Gibco編號61870)、10% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810) 1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630)
HCC366  (DSMZ) RPMI 1640 + Glutamax (Gibco編號61870)、10% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810) 1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630)
細胞株 ( 肺 ) 接種條件
HCC827  (ATCC) 96孔盤中75 µL/孔，125000個細胞/mL，持續120h
NCI-H441  (ATCC) 96孔盤中75 µL/孔，60000個細胞/mL，持續120h
HCC78  (DSMZ) 96孔盤中75 µL/孔，60000個細胞/mL，持續120h
NCI-H1838  (ATCC) 96孔盤中75 µL/孔，125000個細胞/mL，持續120h
NCI-H1975 (ATCC) 96孔盤中75 µL/孔，30000個細胞/mL，持續120h
HCC4006  (ATCC) 96孔盤中75 µL/孔，120000個細胞/mL，持續120h
CALU1  (ATCC) 96孔盤中75 µL/孔，120000個細胞/mL，持續120h
LU65      (JCRB) 96孔盤中75 µL/孔，240000個細胞/mL，持續120h
HCC366  (DSMZ) 96孔盤中75 µL/孔，100000個細胞/mL，持續120h
表15：抗MET-Bcl-xLi ADC作為單一藥劑或與紫杉醇或抗MET-MMAE ADC組合在肺癌細胞株中之活體外活性(CTG 120h)
肺癌細胞株 NCI-H441 NCI-H1838 HCC827 HCC78 HCC366 HCC4006 LU65 CALU1 NCI-H1975
RNAseq MET (Log FPKM+0.1) 8.206 6.675 6.666 6.439 6.414 6.095 6.02 6.01 5.971
MET 擴增 (CCLE) 低 否 否 否 否 否 否 否 低
ADC Ab Mc - L9C-P25 IC 50  (nM)  n1 ＞300 ＞300 ＞300 ＞300 ＞ 300 ＞ 300 ＞300 ＞300 ＞ 300
ADC Ab Mc - L9C-P25 IC 50  (nM)  n2 ＞300 ＞300 ＞300 ＞300 ＞ 300 ＞ 300 ＞300 ＞300 ＞ 300
ADC Ab Mc - L9C-P25 IC 50  (nM)平均值 ＞300 ＞300 ＞300 ＞300 ＞ 300 ＞ 300 ＞300 ＞300 ＞ 300
ADC Ab Md L113C-MMAE IC 50  (nM)  n1 1.9 ＞300 0.53 4.33 34.7 4.22 86.6 98.8 1.79
ADC Ab Md L113C-MMAE IC 50  (nM)  n2 1.54 ＞300 0.36 6.33 25.1 NT 35.8 31.3 NT
ADC Ab Md L113C-MMAE IC 50 (nM)平均值 1.72 ＞300 0.45 5.33 29.9 4.22 61.2 65.05 1.79
Mix ADC  Ab Mc - L9C-P25 +  Ab Md L113C-MMAE IC 50  (nM)  n1 0.18 1.27 0.06 0.97 32.4 1.59 4.89 2.99 2.55
Mix ADC  Ab Mc - L9C-P25 + Ab Md L113C-MMAE IC 50  (nM) n2 0.12 1.52 0.06 0.75 22 NT 3.16 3.77 NT
Mix ADC  Ab Mc - L9C-P25 + Ab Md L113C-MMAE IC 50(nM)平均值 0.15 1.40 0.06 0.86 27.2 1.59 4.03 3.38 2.55
P25   IC 50  (nM)  n1 1010 41.4 57.4 3220 14.9 7460 5610 1.78 9030
P25   IC 50  (nM)  n2 1030 26.7 158 1310 43.8 ＞10000 ＞10000 14.6 ＞10000
P25  IC 50  (nM)平均值 1020 34.05 107.7 2265 29.35 7460 ＞10000 14.6 9030
MMAE   IC 50  (nM)     n1 0.4 88.2 1.46 0.54 0.53 0.12 0.7 0.64 0.25
MMAE   IC 50  (nM)     n2 0.36 32 1.15 0.6 0.76 0.26 0.96 1.37 NT
MMAE   IC 50  (nM)   平均值 0.38 60.1 1.305 0.57 0.645 0.19 0.83 1.01 0.25
P25 + MMAE   IC 50  (nM)  n1 0.34 1.25 0.4 0.37 0.42 0.11 0.39 0.17 0.23
P25 + MMAE   IC 50 (nM) n2 0.26 1.45 0.37 0.47 0.48 0.21 0.43 0.5 NT
P25 + MMAE   IC 50  (nM)平均值 0.30 1.35 0.385 0.42 0.45 0.16 0.41 0.335 0.23
紫杉醇IC 50  (nM) n1 9.20 ＞300 4.11 2.52 4.00 5.90 32.40 13.70 3.34
紫杉醇IC 50  (nM) n2 3.75 ＞300 6.42 4.29 10.90 3.42 27.00 37.40 1.72
紫杉醇IC 50  (nM)平均值 6.48 ＞300 5.27 3.41 7.45 4.66 29.70 25.55 2.53
Ab Mc - L9C-P25 + 紫杉醇IgG2  IC 50  (nM) n1 1.76 0.64 0.13 0.20 4.18 0.68 7.00 3.24 1.31
Ab Mc - L9C-P25 + 紫杉醇IgG2  IC 50  (nM) n2 0.50 1.19 0.27 0.27 11.50 5.12 5.17 9.28 NT
Ab Mc - L9C-P25 + 紫杉醇IgG2 IC 50(nM)平均值 1.13 0.92 0.20 0.24 7.84 2.90 6.09 6.26 1.31
P25 + 紫杉醇IC 50  (nM) n1 2.54 3.14 1.86 0.68 2.25 1.04 3.27 0.94 1.36
P25 +  紫杉醇IC 50  (nM) n2 1.56 3.85 1.58 0.94 4.01 2.03 5.92 1.92 0.35
P25 + 紫杉醇IC 50  (nM) 平均值 2.05 3.50 1.72 0.81 3.13 1.54 4.60 1.43 0.86
NT=未測試；ND=未測定。 實例 8. ADC Ab Mc - L42C - P25 作為 單一藥劑或與紫杉醇組合在 HCC78 肺癌細胞株中之活體外活性 ( CTG 120h ) ：
HCC78肺癌細胞株在上述培養基中在37℃下在含有5% CO 2之加濕氛圍中培養。細胞接種於96孔透明底盤(96孔透明底，白色，Corning參考號3903)中且暴露於作為單一藥劑或與紫杉醇1:1組合之mAb或ADC。當1:1組合時，紫杉醇及mAb或ADC均經連續稀釋(各9個濃度，一式三份)。在37℃/5% CO 2下培育5天之後，藉由使用CellTiter- Glo試劑(Promega參考號：G7571)以75 μL試劑/孔定量細胞ATP水平來評估對細胞存活率之影響。所有條件進行重複三次測試。在多用途盤讀取器上定量螢光。使用標準四參數曲線擬合計算IC 50。IC 50定義為CTG信號減少至對照組量測值之50%時的化合物濃度。進行兩個獨立實驗(N1及N2)。各實驗之存活率曲線及IC50資料示於圖3中。 培養基 ：RPMI 1640 + Glutamax (Gibco編號61870)、10% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810)、1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630) 培養條件 ：96孔盤中75 µL/孔，60000個細胞/mL，持續120h。
如圖3中所示，有效負載P25誘導HCC-78細胞株之存活率的劑量依賴性降低，而抗METADC Ab Mc-L42C-P25及同型對照ADC Ab F-L42C-P25並非如此。單獨的紫杉醇誘導此細胞株之存活率的劑量依賴性降低，且其活性在與有效負載P25或抗MET ADC Ab Mc-L42C-P25組合時顯著提高，但在與同型對照ADC Ab F-L42C-P25組合時未顯著提高。當與有效負載P25或抗MET ADC Ab Mc-L42C-P25組合時，在IC50及對活力之最大影響上均可見紫杉醇活性的提高，其中組合達成100%存活率降低，而單獨的紫杉醇僅達成80%。裸抗體Ab Mc及Ab F已顯示在此細胞株中在至多300nM下無活性。 實例 9. 評估抗 MET 抗體 Ab Mc 及抗 MET - Bcl - xLi ADC ( Ab Mc - L42C - P25 ) 與 紫杉醇或曲美替尼在肺或胃癌細胞株中之活體外組合活性
細胞在在組織培養恆溫箱中在5% CO 2、37℃下在對於其生長最佳之培養基中培養。在接種當天，使用0.25%胰蛋白酶自組織培養燒瓶中取出細胞。使用細胞計數器(Vi-Cell XR Cell Viability Analyzer, Beckman Coulter)測定細胞存活率及細胞密度。存活率高於85%之細胞在384 Perkin Elmer白色盤參考號6007680中對於EBC-1、SNU-5、HCC-78及H1650分別以1000、3000、750及1000個細胞/孔之密度接種於20 μL標準生長培養基中。
紫杉醇及曲美替尼在DMSO中以2000X製備。以先前確定之細胞增殖IC 50為中心，對各化合物進行9次連續稀釋。抗MET抗體或抗MET-Bcl-xLi ADC在20 µl標準生長培養基中以2X製備。對各ADC進行9次連續稀釋。通過將連續稀釋之抗體或ADC與連續稀釋之各搭配物化合物組合來產生劑量矩陣。使用聲學轉移裝置(Echo550，Beckman Coulter)將20 nL之各稀釋液添加至細胞中，產生如圖4、圖5、圖6及圖7中所示之最終濃度。出於標準化目的，亦測試呈單一藥劑或混合物形式之各化合物。在重複分析盤中測試各處理。
盤在37℃下培育隔夜或在組織培養恆溫箱中培育4天。使用Promega CellTiter-Glo®增殖分析來評估抗體或ADC及搭配物化合物抑制細胞增殖及存活之能力。盤在室溫下培育10分鐘以使發光信號穩定，隨後使用多模式盤讀取器(Pherastar, BMG)讀取。接種後當天(第0天讀數)及處理後4天(第4天讀數)獲取未處理細胞之發光計數。將未處理細胞之第4天讀數與第0天讀數進行比較。將在培育期內具有至少一個細胞倍增之分析視為有效的。為了評估藥物治療之效果，使用來自含有未處理細胞(100%存活率)之孔中之發光計數來使經處理樣品標準化。抑制百分比及生長抑制計算為在4天生長之後對未處理細胞之相對反應。使用S形反應模型擬合兩個標準化資料集，且將組合效應(SS)量測為Loewe劑量加和模型之活性總和，如Lehar等人 Nature Biotechnology(2009), 27(7), 659-666中所述。結果示於圖4a、圖4b、圖5a、圖5b、圖6及圖7中。
如圖4a及圖4b (EBC1)中所示，裸抗體及ADC均誘導EBC-1細胞株之存活率之劑量依賴性降低，其中ADC比mAb略微更有效。與紫杉醇或曲美替尼組合時未觀測到顯著協同作用，且無法確定(ND)此等矩陣之協同評分(SS)。
如圖5a及圖5b (SNU-5)中所示，裸抗體及ADC均誘導SNU-5細胞株之存活率之劑量依賴性降低，其中ADC比mAb略微更有效。與紫杉醇或曲美替尼組合時觀測到顯著協同作用，其中相比於mAb，ADC之SS (協同評分)更高。
如圖6 (HCC-78)中所示，ADC 誘導HCC-78細胞株之存活率之劑量依賴性降低，且與紫杉醇組合時顯示出強烈協同作用，但與曲美替尼組合時僅顯示出輕微協同作用。裸抗體在此細胞株中顯示為無活性且未在此研究中進行測試。
如圖7 (H1650 2D)中所示，ADC不誘導在此等2D生長條件下生長之H1650細胞株之存活率的劑量依賴性降低。與紫杉醇或曲美替尼組合時觀測到強烈協同作用。裸抗體在此細胞株中顯示為無活性且未在此研究中進行測試。 實例 10. 抗 MET - Bcl - xLi ADC ( Ab Mc - L9C - P25 ) 作為單一藥劑或與紫杉醇、曲美替尼或吉西他濱組合在胰臟癌細胞株中之活體外活性 ( CTG 120h ) ：
細胞株在上述培養基中在37℃下在含有5% CO 2之加濕氛圍中培養。細胞接種於96孔透明底盤(96孔透明底，白色，Corning參考號3903)中且暴露於作為單一藥劑或與紫杉醇、曲美替尼或吉西他濱1:1組合之mAb或ADC。當1:1組合時，組合搭配物(紫杉醇、曲美替尼或吉西他濱)及mAb或ADC均經連續稀釋(各9個濃度，一式三份)。在37℃/5% CO 2下培育5天之後，藉由使用CellTiter- Glo試劑(Promega參考號：G7571)以75 μL試劑/孔定量細胞ATP水平來評估對細胞存活率之影響。所有條件進行重複三次測試。在多用途盤讀取器上定量螢光。使用標準四參數曲線擬合計算IC 50。IC 50定義為CTG信號減少至對照組量測值之50%時的化合物濃度。進行兩個獨立實驗(N1及N2)。各實驗之IC 50資料及算術平均值示於表16中。
細胞株 ( 胰臟癌 ) 培養基
Panc 10.05 (ATCC) RPMI 1640 + Glutamax  (Gibco編號61870)、15% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810) 1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630)、10 µg/mL胰島素(Gibco編號25030)
AsPC-1 (SIGMA) RPMI 1640 + Glutamax  (Gibco編號61870)、10% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810) 1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630)
Hs766T (ATCC) DMEM高葡萄糖(Gibco編號41965)、10% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810) 1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630)
KP-4 (JCRB) RPMI 1640 + Glutamax  (Gibco編號61870)、10% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810) 1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630)
細胞株 ( 胰臟癌 ) 接種條件
Panc 10.05 (ATCC) 96孔盤中75 µL/孔，240000個細胞/mL，持續120h
AsPC-1 (SIGMA) 96孔盤中75 µL/孔，50000個細胞/mL，持續120h
Hs766T (ATCC) 96孔盤中75 µL/孔，200000個細胞/mL，持續120h
KP-4 (JCRB) 96孔盤中75 µL/孔，125000個細胞/mL，持續120h
如表16中所示，作為單一藥劑之抗MET ADC Ab Mc-L9C-P25不誘導此等胰臟癌細胞之存活率的劑量依賴性降低。紫杉醇、曲美替尼及吉西他濱誘導細胞存活率之劑量依賴性降低，其中大部分細胞株具有可量測IC 50。當紫杉醇、曲美替尼或吉西他濱與抗MET-Bcl-xLi ADC Ab Mc-L9C-P25組合時，在若干細胞株中觀測到IC 50之顯著改良。  表16：抗MET-Bcl-xLi ADC (Ab Mc-L9C-P25)作為單一藥劑或與紫杉醇、曲美替尼或吉西他濱組合在胰臟癌細胞株中之活體外活性(CTG 120h)：
細胞株 ( 胰臟 ) Panc 10.05 AsPC-1 Hs766T KP-4 BxPC-3
RNAseq MET (log2 (FPKM+0.1, CCLE) 6.27 7.27 6.21 6.46 6.466.91
MET 擴增 (CCLE) 否 否 否 否 否
IC 50(nM) IC 50(nM) IC 50(nM) IC 50(nM) IC 50(nM)
P25  n1 61.60 368.00 1900.00 14700.00 20800.00
P25  n2 85.30 121.00 1370.00 19200.00 22800.00
P25  平均值 73.45 244.50 1635.00 16950.00 21800.00
P25 + 紫杉醇 n1 1.72 2.58 5.98 0.26 0.44
P25 + 紫杉醇 n2 3.65 2.96 4.89 1.89 0.63
P25 + 紫杉醇    平均值 2.69 2.77 5.44 1.08 0.54
P25 + 曲美替尼    n1 20.10 2.69 1.93 96.50 2.77
P25 + 曲美替尼   n2 8.47 2.48 1.19 78.20 2.40
P25 + 曲美替尼    平均值 14.29 2.59 1.56 87.35 2.59
P25 + 吉西他濱    n1 20.50 16.50 13.10 10.90 11.50
P25 + 吉西他濱   n2 23.80 14.40 18.60 10.80 12.70
P25 + 吉西他濱    平均值 22.15 15.45 15.85 10.85 12.10
Ab Mc - L9C-P25 n=1 ＞ 300 ＞ 300 ＞ 300 ＞ 300 ＞ 300
Ab Mc - L9C-P25 n=2 ＞ 300 ＞ 300 ＞ 300 ＞ 300 ＞ 300
Ab Mc - L9C-P25 平均值 ＞ 300 ＞ 300 ＞ 300 ＞ 300 ＞ 300
紫杉醇      n1 5.65 12.40 ＞300 0.47 0.60
紫杉醇      n2 10.20 8.06 ＞30000 4.19 1.25
紫杉醇          平均值 7.93 10.23 ＞30000 2.33 0.93
Ab Mc - L9C-P25 + 紫杉醇     n=1 2.69 1.42 18.20 0.40 0.13
Ab Mc - L9C-P25 + 紫杉醇     n=2 2.83 0.79 16.10 2.76 0.25
Ab Mc - L9C-P25 + 紫杉醇     平均值 2.76 1.11 17.15 1.58 0.19
曲美替尼     n1 32.40 9.01 2.53 620.00 8.21
曲美替尼      n2 82.60 10.60 3.10 2710.00 15.20
曲美替尼      平均值 57.50 9.81 2.82 1665.00 11.71
Ab Mc - L9C-P25 + 曲美替尼     n=1 9.47 2.43 7.13 ＞ 300 2.16
Ab Mc - L9C-P25 + 曲美替尼   n=2 9.20 1.81 3.11 182.00 2.43
Ab Mc - L9C-P25 + 曲美替尼    平均值 9.34 2.12 5.12 182.00 2.30
吉西他濱     n1 58.80 406.00 ＞30000 9.74 10.70
吉西他濱    n2 77.90 75.20 ＞30000 12.00 15.30
吉西他濱       平均值 68.35 240.60 ＞30000 10.87 13.00
Ab Mc - L9C-P25 + 吉西他濱     n=1 43.10 36.40 36.80 10.90 11.90
Ab Mc - L9C-P25 + 吉西他濱    n=2 56.70 16.30 36.60 13.30 14.30
Ab Mc - L9C-P25 + 吉西他濱    平均值 49.90 26.35 36.70 12.10 13.10
實例 11. cMET - Bcl - xL 抑制劑 - ADC 針對 小鼠 cMet 擴增之 EBC1 肺鱗狀細胞癌模型之活體內功效
在靜脈內(IV)投與之後，在cMet擴增之EBC1肺鱗狀細胞癌模型中測定磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中調配之靶向Bcl-xL cMet之ADC的活體內治療效果。 材料及方法 測試以下ADC：
Ab F- L9C-P25
Ab Mc
Ab Mc - L9C-P25
獲自JCRB之EBC1細胞在補充有10% FBS之MEM (最小必需培養基)中培養。將細胞再懸浮於50%基質膠(BD Biosciences)中且將含有4.8×10 6個細胞之0.1 ml皮下接種至Charles River提供之雌性SCID小鼠的右側腹中。在腫瘤達到適當體積時，使用Easy stat軟體將小鼠隨機分組，6隻動物/組。Ab F- L9C-P25、Ab Mc及Ab Mc - L9C-P25在PBS中以30 mg/kg及/或10 mg/kg靜脈內注射一次。一週三次監測小鼠體重，且使用電子測徑規來量測腫瘤尺寸。藉由量測最小及最大腫瘤直徑，使用式：(最小直徑) 2(最大直徑)/2來估算腫瘤體積。在研究中仍存在至少一半對照動物的最後一天(第11天，亦稱為D11)，使用下式計算腫瘤生長抑制： 其中Dx下之DTV (δ腫瘤體積)，經計算為Dx下之TV-隨機分組下之TV。 在第一次量測到腫瘤體積超過2000 mm 3時或在動物健康惡化之第一次跡象時處死小鼠。
根據以下準則評定完全消退之評估： 完全消退 (%) ：100 × A/B 其中A及B分別對應於維持完全消退(mCR)之動物數目及該組之動物數目。 mCR符合最佳反應(腫瘤體積變化之最小百分比)＜ -95%及最佳平均反應(隨機分組與第11天之間腫瘤體積變化之最小百分比)＜ -40%的準則。
經Servier研究機構(IdRS)倫理委員會批准後，所有實驗均按照2018年生效的法國法規進行。根據機構指南維持SCID小鼠。 結果
抗cMet ADC對EBC1異種移植物之功效繪示於圖8及表17中。在腫瘤細胞接種(中值大小：123.36 mm 3)後6天開始治療。Ab F- L9C-P25、Ab Mc及Ab Mc - L9C-P25以30 mg/kg及/或10 mg/kg靜脈內投與一次。 表 17 ：在用以30 mg/kg及/或10 mg/kg靜脈內投與一次之Ab F- L9C-P25、Ab Mc及Ab Mc - L9C-P25治療之後的EBC1腫瘤生長抑制(n=6)。
治療 劑量 (mg/kg) / 時程 %TGI (d11) % CR
Ab F- L9C-P25 30一次，IV -17.97 0
Ab Mc 30一次，IV 62.82 0
Ab Mc - L9C-P25 10一次，IV 116.73 100
Ab Mc - L9C-P25 30一次，IV 117.01 100
在治療後11天之後，對於非靶向ADC (Ab F-L9C-P25)未觀測到活性且對於30 mg/kg之裸抗cMet抗體Ab Mc觀測到有限的腫瘤生長抑制(TGI) (%TGI %分別=-17.97%及62.82%)。靶向cMet之ADC (Ab Mc-L9C-P25)在以10 mg/kg或30 mg/kg治療之所有動物中均誘導完全消退(TGI分別=116.73%及117.01%，相比於對照組之p≤0.001)。未觀測到臨床上相關之體重損失或因治療所致之其他臨床徵象(圖9)。 實例 12 ： 抗 MET 裸抗體及抗 MET - Bcl - xLi ADC 在 H1650 細胞株 ( 3D ， CTG 120h ) 、 EBC - 1 及 SNU - 5 細胞株 ( CTG 120h ) 中之活體外活性 ：
將H1650細胞在補充有10%熱不活化胎牛血清、青黴素(100 IU/ml)、鏈黴素(100 μg/ml)及L-麩醯胺酸(2 mM)之RPMI中培養。在37℃下在含有5% CO 2之加濕氛圍中培養細胞。將細胞接種於96微孔圓底盤(96微孔低附著盤，Costar參考號7007；75 µL/孔，125000個細胞/mL)中，且暴露於mAb或ADC 120 h (連續稀釋；各9個濃度，重複)。在37℃/5% CO 2下培育5天之後，藉由使用CellTiter-Glo試劑(Promega參考號：G7571)以75 μL試劑/孔定量細胞ATP水平來評估mAb或ADC對細胞存活率之影響。一式兩份地測試所有條件。在多用途盤讀取器上定量螢光。使用標準四參數曲線擬合計算IC50。IC50定義為CTG信號減少至對照組量測值之50%時的化合物濃度。進行兩個獨立實驗(N1及N2)。
EBC - 1 及 SNU - 5細胞株在上述培養基中在37℃下在含有5% CO 2之加濕氛圍中培養。細胞接種於96孔透明底盤(96孔透明底，白色，Corning參考號3903)中且暴露於mAb或ADC 120 h (連續稀釋；各9個濃度，一式三份)。在37℃/5% CO 2下培育5天之後，藉由使用CellTiter-Glo試劑(Promega參考號：G7571)以75 μL試劑/孔定量細胞ATP水平來評估mAb或ADC對細胞存活率之影響。所有條件進行重複三次測試。在多用途盤讀取器上定量螢光。使用標準四參數曲線擬合計算IC 50。IC 50定義為CTG信號減少至對照組量測值之50%時的化合物濃度。進行兩個獨立實驗(N1及N2)。
培養基： EBC-1(JCRB)：EMEM (ATCC編號30-2003)、10% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810)、1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630) SNU-5(ATCC)：IMDM (ATCC編號30-2005)、20% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810)、1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630) H1650(ATCC)：RPMI 1640、10% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810)、1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)及2 mM L-glutamine (Gibco編號61870)。
接種條件： EBC-1：96孔盤中75 µL/孔，60000個細胞/mL，持續120h SNU-5：96孔盤中75 µL/孔，60000個細胞/mL，持續120h H1650(ATCC)：96微孔圓底盤中75 µL/孔，125000個細胞/mL，持續120h
結果展示於表18及圖10A-C中。 表 18 ： IgG1 及 IgG2 抗 MET 裸抗體及抗 MET - Bcl - xL ADC 於 EBC - 1 、 SNU - 5 及 H1650 ( 3D ) 細胞株中之活體外活性 ( CTG 120h )
所測試化合物 EBC1 SNU5 H1650 3D
  N1 IC50 (nM) N2 IC50  (nM) 平均IC50 (nM) N1 IC50 (nM) N2 IC50  (nM) 平均IC50 (nM) N1 IC50 (nM) N2 IC50  (nM) 平均IC50 (nM)
P25 (Bcl-xL有效負載) 12.80 12.40 12.60 5510.00 ＞30000 5510.00 8.28 5.90 7.09
Ab G (同型對照) ＞30 ＞30 ＞30 ＞100 ＞100 ＞100 ＞300 ＞100 ＞300
Ab Ma ＞30 ＞30 ＞30 16.00 ＞100 ＞100 ＞300 ＞100 ＞300
Ab Mb ＞30 ＞30 ＞30 ＞100 ＞100 ＞100 ＞300 ＞100 ＞300
Ab Mf ＞30 ＞30 ＞30 ＞100 ＞100 ＞100 ＞300 ＞100 ＞300
Ab Mc 0.17 0.25 0.21 0.05 0.14 0.10 ＞300 ＞100 ＞300
Ab Md 0.17 0.15 0.16 17.40 21.20 19.30 ＞300 ＞100 ＞300
Ab Mg 0.09 0.12 0.11 0.19 0.18 0.19 ＞300 ＞100 ＞300
ADC Ab G-L42C-P25 ＞30 ＞30 ＞30 ＞100 ＞100 ＞100 86.90 72.10 79.50
ADC Ab Ma-L42C-P25 4.84 20.30 12.57 0.42 0.90 0.66 0.22 0.22 0.22
ADC Ab Mb-L42C-P25 0.39 0.34 0.37 ＞100 ＞100 ＞100 0.32 0.76 0.54
ADC Ab Mf-L42C-P25 0.21 0.19 0.20 ＞100 ＞100 ＞100 0.14 0.09 0.12
ADC Ab Mc-L42C-P25 0.16 0.16 0.16 0.06 0.13 0.10 0.53 0.49 0.51
ADC Ab Md-L42C-P25 0.06 0.06 0.06 0.17 0.30 0.24 0.28 0.38 0.33
ADC Ab Mg-L42C-P25 0.09 0.09 0.09 0.05 0.09 0.07 0.38 0.35 0.37
如表18中所示，在MET擴增之細胞株EBC-1及SNU-5中，裸抗MET抗體誘導細胞存活率之劑量依賴性降低，且相比於對應IgG1抗體(Ma、Mb、Mf)，IgG2抗體(Mc、Md、Mg)存在明顯優越性。用此等相同抗體產生之Bcl-xL ADC一般比相應裸抗體更有效(參見表18及圖10A及圖10B)且IgG2 ADC亦比相應IgG1 ADC更有效。
在MET非擴增細胞株H1650 (3D)中，抗MET裸抗體在IgG1或IgG2形式下均無活性，而相應的ADC誘導此細胞株之存活率之強烈劑量依賴性降低(參見圖10C)。另外，在此細胞株中，所有抗MET-Bcl-xL ADC在IgG1或IgG2形式下均展示類似活性。 實例 13 ： 抗 MET 裸抗體及抗 MET - Bcl - xLi ADC 與紫杉醇之組合在 HCC78 細胞株中之活體外活性 ( CTG 120h ) ：
HCC78肺癌細胞株在上述培養基中在37℃下在含有5% CO 2之加濕氛圍中培養。細胞接種於96孔透明底盤(96孔透明底，白色，Corning參考號3903)中且暴露於作為單一藥劑或與紫杉醇1:1組合之mAb或ADC。當1:1組合時，紫杉醇及mAb或ADC均經連續稀釋(各9個濃度，一式三份)。在37℃/5% CO 2下培育5天之後，藉由使用CellTiter-Glo試劑(Promega參考號：G7571)以75 μL試劑/孔定量細胞ATP水平來評估對細胞存活率之影響。所有條件進行重複三次測試。在多用途盤讀取器上定量螢光。使用標準四參數曲線擬合計算IC50。IC50定義為CTG信號減少至對照組量測值之50%時的化合物濃度。進行兩個獨立實驗(N1及N2)。
培養基：  RPMI 1640 + Glutamax (Gibco編號61870)、10% FBS (Dutscher編號S1810-500批號S18367S1810)、1%青黴素-鏈黴素(Gibco編號15140)、1% Hepes (Gibco編號15630)。
接種條件：  96孔盤中75 µL/孔，60000個細胞/mL，持續120h。 表 19 ： IgG1 及 IgG2 抗 MET 裸抗體及抗 MET - Bcl - xL ADC 與紫杉醇之組合在 HCC78 細胞株中之活體外活性 ( CTG 120h ) ：
所測試化合物 HCC78細胞株
  N1 IC50  (nM) N2 IC50 (nM) 平均IC50 (nM)
紫杉醇 6.04 6.84 6.44
Ab G ＞300 ＞300 ＞300
Ab Ma ＞300 ＞300 ＞300
Ab Mb ＞300 ＞300 ＞300
Ab Mf ＞300 ＞300 ＞300
Ab Mc ＞300 ＞300 ＞300
Ab Md ＞300 ＞300 ＞300
Ab Mg ＞300 ＞300 ＞300
Ab G-L42C-P25 + 紫杉醇(1:1) 4.80 5.27 5.04
Ab Ma-L42C-P25 + 紫杉醇(1:1) 0.41 0.79 0.60
Ab Mb-L42C-P25 + 紫杉醇(1:1) 0.35 0.58 0.47
Ab Mf-L42C-P25 + 紫杉醇(1:1) 0.45 0.62 0.54
Ab Mc-L42C-P25 + 紫杉醇(1:1) 0.44 0.64 0.54
Ab Md-L42C-P25 + 紫杉醇(1:1) 0.44 0.53 0.49
Ab Mg-L42C-P25 + 紫杉醇(1:1) 0.54 0.87 0.71
如表19及圖11中所指示，在MET非擴增細胞株HCC78中，抗MET裸抗體及Bcl-xL-ADC作為單一藥劑未顯示活性或顯示弱活性(IC50＞300 nM)。紫杉醇在此細胞株中作為單一藥劑顯示活性(IC50=6,44nM)，且其活性在與抗MET-Bcl-xL ADC組合時顯著提高(約10×) (IC50=0.47至0.71nM)，但在與同型對照ADC AbG-L42C-P25組合時未顯著提高。此等資料表明，與作為單一藥劑之抗MET裸抗體、Bcl-xL-ADC及紫杉醇相比，紫杉醇及抗MET-Bcl-xL ADC之組合具有強大優勢。 實例 14 ： 抗 MET ADC 在擴增之 EBC1 肺鱗狀癌人類細胞模型中之活體內功效
以下為用於測定與在磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中調配之對應裸抗MET mAb相比，4種靶向Met蛋白質之Bcl-xL ADC在靜脈內(IV)投與之後在Met擴增之EBC-1肺鱗狀癌人類細胞株中之活體內治療效果的程序。 材料及方法
Ab G - L42C-P25
Ab Mg
Ab Mc
Ab Mg - L42C-P25
Ab Mc - L42C-P25
Ab Mf - L42C-P25
Ab Ma - L42C-P25
獲自JCRB細胞庫之EBC-1細胞在補充有10% SVF、1%青黴素-鏈黴素及1% HEPES之EMEM中培養。將細胞再懸浮於50% Matrigel® (Corning®)中且將含有5×10 6個細胞之0.1 ml皮下接種至Charles River提供之雌性SCID小鼠的右側腹中。
在腫瘤達到適當體積(100-200 mm3)時，使用Easy stat軟體將小鼠隨機分組，6隻動物/組。Ab Mg、Ab Mc抗體及Ab G-L42C-P25 (同型對照/非靶向ADC)以3 mg/kg靜脈內注射一次。Ab Mg - L42C-P25 (3及6 mg/kg)、Ab Mc - L42C-P25 (3及6 mg/kg)、Ab Mf - L42C-P25 (3 mg/kg)及Ab Ma - L42C-P25 (3 mg/kg)在PBS中靜脈內注射一次。一週3次監測小鼠體重，且使用電子測徑規來量測腫瘤尺寸。藉由量測最小及最大腫瘤直徑，使用式：(最小直徑) 2(最大直徑)/2來估算腫瘤體積。在研究中仍存在至少一半對照動物的最後一天(d25)，使用下式計算腫瘤生長抑制：
其中Dx下之DTV (δ腫瘤體積)，經計算為Dx下之TV-隨機分組下之TV。
在第一次量測到腫瘤體積超過2000 mm 3時或在動物健康惡化之第一次跡象時處死小鼠。經Servier研究機構(IdRS)倫理委員會批准後，所有實驗均按照2018年生效的法國法規進行。根據機構指南維持SCID小鼠。 結果
攜有Bcl-xL有效負載及抗Met mAb之抗Met ADC對EBC1異種移植物之功效繪示於圖12中。在腫瘤細胞接種後7天開始治療(平均尺寸：160 mm3)。所有測試化合物均以3 mg/kg靜脈內注射一次。對於Ab Mg-L42C-P25及Ab Mc-L42C-P25，以6 mg/kg向另一組靜脈內給藥一次。
在第25天，由3 mg/kg之Ab Mf - L42C-P25、Ab Mg - L42C-P25、Ab Ma - L42C-P25或Ab Mc - L42C-P25誘導之腫瘤生長抑制(%TGI)大於對應裸抗體(TGI分別=112%對40%及112%對29.8%，p＜0.001)及非靶向ADC (Ab G-L42C-P25) (TGI=-27.6%；p＜0.001)，如圖12及表20中所描繪。各以3 mg/kg給藥一次之Ab Mf - L42C-P25、Ab Mg - L42C-P25、Ab Ma - L42C-P25及Ab Mc - L42C-P25產生至少直至第74天之長效完全反應。以6 mg/kg給藥，Ab Mg-L42C-P25及Ab Mc-L42C-P25誘導完全腫瘤消退，直至對應於第107天之實驗結束未觀測到復發。
未觀測到臨床上相關之體重減輕或因治療所致之其他臨床徵象(圖13)。
此資料顯示抗MET-Bcl-xL ADC相比於其對應裸抗體之明顯優良活性，因為在3 mg/kg下，裸抗MET抗體僅誘導弱腫瘤生長延遲，而相同劑量下之ADC誘導持久的完全消退。
TGI % (d25)
Ab G - L42C - P25 3mg/kg -27.6
Ab Mc 3mg/kg 29.8
Ab Mg 3mg/kg 40.1
Ab Mc - L42C-P25 3mg/kg 112.2
Ab Mg - L42C-P25 3mg/kg 112.2
Ab Ma - L42C-P253mg/kg 112.3
Ab Mf - L42C-P253mg/kg 111.9
Ab Mc - L42C-P25 6mg/kg 112.3
Ab Mg - L42C-P25 6mg/kg 112.5
表 20 ：在用Ab Mg、Ab Mc、Ab G - L42C - P25、Ab Mg - L42C-P25、Ab Mc - L42C-P25、Ab Mf - L42C-P25及Ab Ma - L42C-P25 (靜脈內投與一次)治療後第25天計算之EBC1腫瘤生長抑制。 實例 15 ： 抗 MET ADC 與紫杉醇之組合在 Met 非擴增 NCI - H1650 肺腺癌人類細胞模型中之活體內功效
以下為用於測定靶向Met蛋白質之Bcl-xL ADC作為單一藥劑或與紫杉醇組合之活體內治療效果的程序。將其活性與在磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中調配之對應裸抗MET mAb或Ab G-L42C-P25 (非靶向ADC)在靜脈內(IV)投與之後的Met非擴增NCI-H1650肺腺癌人類細胞株中進行比較。 材料及方法
Ab F - L42C-P25
Ab Mc
Ab Mc - L42C-P25
獲自ATCC之NCI-H1650細胞在補充有10% SBS、1%青黴素-鏈黴素及1% HEPES之RPMI中培養。將細胞再懸浮於50% Matrigel® (Corning®)中且將含有10×10 6個細胞之0.1 ml皮下接種至Charles River提供之雌性SCID小鼠的右側腹中。  在腫瘤達到適當體積(100-200 mm3)時，使用Easy stat軟體對小鼠進行隨機分組，6隻動物/組(對於用作為單一藥劑及與12.5 mg/kg紫杉醇組合之30 mg/kg Ab Mc-L42C-P25治療之組，為4隻動物/組)。Ab Mc裸抗體及Ab F-L42C-P25 (同型對照Fc靜默/非靶向ADC)在第0天及第14天作為單一藥劑或與12.5 mg/kg紫杉醇(P-9600；LC Laboratories®)組合以30 mg/kg靜脈內注射兩次，該紫杉醇在第1天、第8天及第15天靜脈內注射3次。Ab Mc-L42C-P25 (10及30 mg/kg)在第0天及第14天作為單一藥劑或與12.5 mg/kg紫杉醇組合在PBS中靜脈內注射兩次，該紫杉醇在第1天、第8天及第15天靜脈內注射3次。
一週3次監測小鼠體重，且使用電子測徑規來量測腫瘤尺寸。藉由量測最小及最大腫瘤直徑，使用式：(最小直徑) 2(最大直徑)/2來估算腫瘤體積。在研究中仍存在至少一半對照動物的最後一天(d18)，使用下式計算腫瘤生長抑制：
其中Dx下之DTV (δ腫瘤體積)，經計算為Dx下之TV-隨機分組下之TV。
在第一次量測到腫瘤體積超過2000 mm 3時或在動物健康惡化之第一次跡象時處死小鼠。經Servier研究機構(IdRS)倫理委員會批准後，所有實驗均按照2018年生效的法國法規進行。根據機構指南維持SCID小鼠。 結果
作為單一藥劑或與紫杉醇組合的攜有Bcl-xL有效負載之抗MET ADC對H1650異種移植物之功效繪示於圖14中。在腫瘤細胞接種後13天開始治療(平均尺寸：131 mm3)。
在第18天，由與12.5 mg/kg紫杉醇(在第1天、第8天及第15天治療)組合之30 mg/kg Ab Mc-L42C-P25 (在第0天及第14天治療)誘導之腫瘤生長抑制(%TGI)大於與紫杉醇組合之Ab Mc抗體(相同劑量，相同治療時程)或作為單一藥劑之紫杉醇(分別地，TGI=102%對11.5%或-14.4%；p＜0.01及p＜0.005)，如圖15及表21中所描繪。即使以10 mg/kg治療，相比於與紫杉醇組合之Ab Mc裸抗體(相同劑量，相同治療時程) (TGI=66.6%對11.5%)，與12.5 mg/kg紫杉醇(在第1天、第8天及第15天治療)組合之Ab Mc-L42C-P25 (在第0天及第14天治療)仍誘導更好的腫瘤消退。
未觀測到臨床上相關之體重減輕或因治療所致之其他臨床徵象(圖13)。
此資料清楚地展示紫杉醇與抗Met-Bcl-xL ADC之組合與單獨的紫杉醇相比之優越性。
TGI % (d18)
紫杉醇12.5mg/Kg -14.4
Ab F-L42C-P25 0.3
Ab F - L42C-P25 30mg/kg + 紫杉醇12.5mg/kg 40.2
Ab Mc裸抗體30mg/kg + 紫杉醇12.5mg/kg 11.5
Ab Mc - L42C-P25 10mg/kg -23.9
Ab Mc - L42C-P25- 30mg/kg 25.5
Ab Mc - L42C-P25 10mg/kg + 紫杉醇12.5mg/kg 66.6
Ab Mc - L42C-P25 30mg/kg + 紫杉醇12.5mg/kg 102.4
表 21 ：在用作為單一藥劑(在第0天及第14天治療兩次)或與12.5 mg/kg紫杉醇(在第1天、第8天及第15天靜脈內注射3次)組合之Ab Mc裸抗體(30mg/kg)、Ab F-L42C-P25 (30mg/kg)、Ab Mc-L42C-P25 (10及30 mg/kg)靜脈內治療後第18天計算之H1650腫瘤生長抑制。 實例 16 ： 抗 MET ADC 與奧希替尼之組合在 Met 非擴增 NCI - H1650 肺腺癌人類細胞模型中之活體內功效
以下為用於測定靶向Met蛋白質之不同Bcl-xL ADC作為單一藥劑或與奧希替尼組合之活體內治療效果的程序。將其活性與在磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)中調配之對應裸抗MET mAb或Ab G-L42C-P25 (同型對照/非靶向ADC)在靜脈內(IV)投與之後的Met非擴增NCI-H1650肺腺癌人類細胞株中進行比較。 材料及方法
Ab G - L42C-P25
Ab Mg
Ab Mc
Ab Md
Ab Mg - L42C-P25
Ab Mc - L42C-P25
Ab Md - L42C-P25
Ab Mf - L42C-P25
Ab Ma - L42C-P25
Ab Mb - L42C-P25
獲自ATCC之NCI-H1650細胞在補充有10% SBS、1%青黴素-鏈黴素及1% HEPES之RPMI中培養。將細胞再懸浮於50% Matrigel® (Corning®)中且將含有10×10 6個細胞之0.1 ml皮下接種至JANVIER labs提供之雌性SCID小鼠的右側腹中。  在腫瘤達到適當體積(100-200 mm3)時，使用Easy stat軟體將小鼠隨機分組，6隻動物/組。Ab Mg、Ab Mc、Ab Md裸抗體及Ab G-L42C-P25 (同型對照/非靶向ADC)在第1天與奧希替尼(1J644；Interchim®)組合以30 mg/kg靜脈內注射一次，奧希替尼在第1、2、3、4、7、8、9天以15 mg/kg經口(口服)投與。Ab Mg - L42C-P25、Ab Mc - L42C-P25、Ab Md - L42C-P25、Ab Mf - L42C-P25、Ab Ma - L42C-P25及Ab Mb - L42C-P25在第1天與奧希替尼組合以30 mg/kg靜脈內注射一次，奧希替尼在第1、2、3、4、7、8、9天以15 mg/kg經口(口服)投與。
一週3次監測小鼠體重，且使用電子測徑規來量測腫瘤尺寸。藉由量測最小及最大腫瘤直徑，使用式：(最小直徑) 2(最大直徑)/2來估算腫瘤體積。在研究中仍存在至少一半對照動物的最後一天(d25)，使用下式計算腫瘤生長抑制：
其中Dx下之DTV (δ腫瘤體積)，經計算為Dx下之TV-隨機分組下之TV。
在第一次量測到腫瘤體積超過2000 mm 3時或在動物健康惡化之第一次跡象時處死小鼠。經Servier研究機構(IdRS)倫理委員會批准後，所有實驗均按照2018年生效的法國法規進行。根據機構指南維持SCID小鼠。 結果
與奧希替尼組合的攜有Bcl-xL有效負載之抗MET ADC對H1650異種移植物之功效繪示於圖16中。在腫瘤細胞接種後14天開始治療(平均尺寸：123 mm 3)。
在第25天，由與15 mg/kg奧希替尼(在第1、2、3、4、7、8、9天治療)組合以30mg/kg投與(第1天)之Ab Mc - L42C-P25、Ab Ma - L42C-P25、Ab Mg - L42C-P25、Ab Mf - L42C-P25、Ab Md - L42C-P25或Ab Mb - L42C-P25誘導之腫瘤生長抑制(%TGI)大於與奧希替尼組合之對應裸抗MET抗體Ab Mc、Ab Mg及Ab Md (相同劑量，相同治療時程) (分別地，TGI=108至110% (對於ADC)對83.8；86；69.4% (對於對應裸抗體))，如圖16及表22中所描繪。在此模型中測試之6種ADC之間未觀測到顯著差異；其均引起快速腫瘤消退，接著自第25天開始緩慢復發。
未觀測到臨床上相關之體重減輕或因治療所致之其他臨床徵象(圖17)。
此資料清楚地展示奧希替尼與抗Met-Bcl-xL ADC之組合與單獨的奧希替尼相比之優越性。
TGI % (d25)
奧希替尼15 mg/kg 86.3
Ab G - L42C-P25 30mg/kg + 奧希替尼15mg/kg Ab G-L42C-P25 97.1
Ab Mc裸抗體30mg/kg + 奧希替尼15mg/kg 83.8
Ab Mg裸抗體30mg/kg + 奧希替尼15mg/kg 86.0
Ab Md裸抗體30mg/kg + 奧希替尼15mg/kg 69.4
Ab Mc - L42C-P25 30mg/kg + 奧希替尼15mg/kg 110.1
Ab Ma - L42C-P25 30mg/kg + 奧希替尼15mg/kg 109.9
Ab Mg - L42C-P25 30mg/kg + 奧希替尼15mg/kg 108.1
Ab Mf - L42C-P25-S221309 30mg/kg + 奧希替尼15mg/kg 109.7
Ab Md - L42C-P25 30mg/kg + 奧希替尼15mg/kg 109.7
Ab Mb - L42C-P25 30mg/kg + 奧希替尼15mg/kg 110.0
表 22 ：在用第1天30 mg/kg之Ab Mg、Ab Mc、Ab Md裸抗體、Ab G - L42C-P25、Ab Mg - L42C-P25、Ab Mc - L42C-P25、Ab Md - L42C-P25、Ab Mf - L42C-P25、Ab Ma - L42C-P25及Ab Mb - L42C-P25與奧希替尼之組合靜脈內治療後第25天計算之H1650腫瘤生長抑制，奧希替尼在第1、2、3、4、7、8、9天以15 mg/kg經口給與。
圖1展示位點特異性半胱胺酸結合之流程。
圖2展示IgG2抗MET裸抗體及抗MET-Bcl-xLi ADC在EBC-1、SNU-5及LOUNH-91 (2D，CTG 120h)及H1650 (3D，CTG 120h)細胞株中之活體外活性。
圖3展示作為單一藥劑或與紫杉醇組合之ADC Ab Mc-L42C-P25在HCC78肺癌細胞株中之存活率曲線及IC50資料。
圖4a展示由裸抗MET Ab或與紫杉醇組合之抗MET-Bcl-xLi ADC在EBC-1細胞株中得到的抑制、生長抑制及Loewe過量矩陣。
圖4b展示由裸抗MET Ab或與曲美替尼組合之抗MET-Bcl-xLi ADC在EBC-1細胞株中得到的抑制、生長抑制及Loewe過量矩陣。
圖5a展示由裸抗MET Ab或與紫杉醇組合之抗MET-Bcl-xLi ADC在SNU-5細胞株中得到的抑制、生長抑制及Loewe過量矩陣。
圖5b展示由裸抗MET Ab或與曲美替尼組合之抗MET-Bcl-xLi ADC在SNU-5細胞株中得到的抑制、生長抑制及Loewe過量矩陣。
圖6展示由與紫杉醇或曲美替尼組合之抗MET-Bcl-xLi ADC在HCC-78細胞株中得到的抑制、生長抑制及Loewe過量矩陣。
圖7展示由與紫杉醇或曲美替尼組合之抗MET-Bcl-xLi ADC在H1650 2D細胞株中得到的抑制、生長抑制及Loewe過量矩陣。
圖8展示在用靜脈內投與一次之30 mg/kg及/或10 mg/kg之Ab F- L9C-P25、Ab Mc及Ab Mc - L9C-P25治療後EBC1移植雌性SCID小鼠之腫瘤體積(mm 3) (n=6)。
圖9展示在用靜脈內投與一次之30 mg/kg及/或10 mg/kg之Ab F- L9C-P25、Ab Mc及Ab Mc - L9C-P25治療後EBC1移植雌性SCID小鼠之體重減輕百分比(n=6)。
圖10A展示IgG1及IgG2抗MET裸抗體及抗MET-Bcl-xL ADC在EBC-1細胞株中之活體外活性(CTG 120h)。
圖10B展示IgG1及IgG2抗MET裸抗體及抗MET-Bcl-xL ADC在SNU-5細胞株中之活體外活性(CTG 120h)。
圖10C展示IgG1及IgG2抗MET裸抗體及抗MET-Bcl-xL ADC在H1650 (3D)細胞株中之活體外活性(CTG 120h)。
圖11展示IgG1及IgG2抗MET裸抗體及抗MET-Bcl-xL ADC與紫杉醇之組合在HCC78細胞株中之活體外活性(CTG 120h)。
圖12展示在用Ab Mg、Ab Mc、Ab G - L42C - P25、Ab Mg - L42C-P25、Ab Mc - L42C-P25、Ab Mf - L42C-P25及Ab Ma - L42C-P25 (3或6 mg/kg，靜脈內投與一次，n=6)治療後EBC1移植雌性SCID小鼠之平均腫瘤體積(mm 3)+/-SEM。
圖13展示在用Ab Mg、Ab Mc、Ab G - L42C - P25、Ab Mg - L42C-P25、Ab Mc - L42C-P25、Ab Mf - L42C-P25及Ab Ma - L42C-P25 (3或6 mg/kg，靜脈內投與一次，n=6)治療後EBC1移植雌性SCID小鼠之體重減輕的平均值+/-SEM%。
圖14展示在用作為單一藥劑(在第0天及第14天治療兩次)或與在第1天、第8天及第15天靜脈內注射3次之12.5 mg/kg紫杉醇組合之Ab Mc裸抗體(30 mg/kg)、Ab F - L42C-P25 (30 mg/kg)、Ab Mc - L42C-P25 (10及30 mg/kg)靜脈內治療後，H1650移植雌性SCID小鼠之腫瘤體積(mm 3) (n=6；除了用作為單一藥劑及與12.5 mg/kg紫杉醇組合之30 mg/kg Ab Mc-L42C-P25治療之組，其中n=4)。
圖15展示在用作為單一藥劑(在第0天及第14天治療兩次)或與在第1天、第8天及第15天靜脈內注射3次之12.5 mg/kg紫杉醇組合之Ab Mc裸抗體(30 mg/kg)、Ab F - L42C-P25 (30 mg/kg)、Ab Mc - L42C-P25 (10及30 mg/kg)靜脈內治療後，H1650移植雌性SCID小鼠之體重減輕的平均值+/-SEM% (n=6；除了用作為單一藥劑及與12.5 mg/kg紫杉醇組合之30 mg/kg Ab Mc-L42C-P25治療之組，其中n=4)。
圖16展示在用第1天30 mg/kg之Ab Mg、Ab Mc、Ab Md裸抗體、Ab G - L42C-P25、Ab Mg - L42C-P25、Ab Mc - L42C-P25、Ab Md - L42C-P25、Ab Mf - L42C-P25、Ab Ma - L42C-P25及Ab Mb - L42C-P25與奧希替尼之組合靜脈內治療後，H1650移植雌性SCID小鼠之腫瘤體積(mm 3)，奧希替尼在第1、2、3、4、7、8、9天以15 mg/kg經口給與。
圖17展示在用第1天30 mg/kg之Ab Mg、Ab Mc、Ab Md裸抗體、Ab G - L42C-P25、Ab Mg - L42C-P25、Ab Mc - L42C-P25、Ab Md - L42C-P25、Ab Mf - L42C-P25、Ab Ma - L42C-P25及Ab Mb - L42C-P25與奧希替尼之組合靜脈內治療後，H1650移植雌性SCID小鼠之體重減輕的平均值+/-SEM%，奧希替尼在第1、2、3、4、7、8、9天以15 mg/kg經口給與。

Claims (122)

  1. 一種式(1)之抗體-藥物結合物： Ab-(L-D) p (1) 其中Ab為抗Met抗體或其抗原結合片段； L為將Ab共價連接至D之連接子； p為1至16之整數；且 D為共價連接至該連接子L之式(I)或式(II)之Bcl-xL抑制劑化合物： ， 或前述任一者之鏡像異構物、非鏡像異構物及/或醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1及R 2彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經羥基或C 1-C 6烷氧基取代；C 3-C 6環烷基；三氟甲基；直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基-雜環烷基，其中該雜環烷基視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代； 或R 1及R 2與攜帶其之碳原子一起形成C 3-C 6伸環烷基， R 3表示選自以下之基團：氫；C 3-C 6環烷基；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；-X 1-NR aR b；-X 1-N +R aR bR c；-X 1-O-R c；-X 1-COOR c；-X 1-PO(OH) 2；-X 1-SO 2(OH)；-X 1-N 3及： ， R a及R b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；雜環烷基；-SO 2-苯基，其中該苯基可經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經一個或兩個羥基取代；C 1-C 6伸烷基-SO 2OH；C 1-C 6伸烷基-SO 2O -；C 1-C 6伸烷基-COOH；C 1-C 6伸烷基-PO(OH) 2；C 1-C 6伸烷基-NR dR e；C 1-C 6伸烷基-N +R dR eR f；C 1-C 6伸烷基-苯基，其中該苯基可經C 1-C 6烷氧基取代； 以下基團： 或R a及R b與攜帶其之氮原子一起形成環B 1； 或R a、R b及R c與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， R c、R d、R e、R f彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， 或R d及R e與攜帶其之氮原子一起形成環B 2， 或R d、R e及R f與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， Het 1表示選自以下之基團： Het 2表示選自以下之基團： A 1為-NH-、-N(C 1-C 3烷基)、O、S或Se， A 2為N、CH或C(R 5)， G係選自由以下組成之群： -C(O)OR G3、-C(O)NR G1R G2、-C(O)R G2、-NR G1C(O)R G2、-NR G1C(O)NR G1R G2、-OC(O)NR G1R G2、-NR G1C(O)OR G3、-C(=NOR G1)NR G1R G2、-NR G1C(=NCN)NR G1R G2、-NR G1S(O) 2N R G1R G2、-S(O) 2R G3、-S(O) 2NR G1R G2、-NR G1S(O) 2R G2、-NR G1C(=NR G2)NR G1R G2、-C(=S)NR G1R G2、-C(=NR G1)NR G1R G2、視情況經羥基取代之C 1-C 6烷基、鹵素、-NO 2及-CN，其中： R G1及R G2在各次出現時各自獨立地選自由以下組成之群：氫；C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；C 3-C 6環烷基；苯基；及-(CH 2) 1-4-苯基； R G3係選自由以下組成之群：C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；C 3-C 6環烷基；苯基；及-(CH 2) 1 - 4-苯基；或 R G1及R G2與其各自所連接之原子一起組合形成C 3-C 8雜環烷基；或在替代中，G係選自由以下組成之群： 其中R G4係選自氫、視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基及C 3-C 6環烷基， R 4表示氫、氟、氯或溴原子、甲基、羥基或甲氧基， R 5表示選自以下之基團：C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；鹵素；或-CN， R 6表示選自以下之基團： 氫； -C 2-C 6烯基； -X 2-O-R 7； ； -X 2-NSO 2-R 7； -C=C(R 9)-Y 1-O-R 7； C 3-C 6環烷基； C 3-C 6雜環烷基，其視情況經羥基取代； C 3-C 6伸環烷基-Y 2-R 7； C 3-C 6伸雜環烷基-Y 2-R 7基團， 伸雜芳基-R 7基團，其視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代， R 7表示選自以下之基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；(C 3-C 6)伸環烷基-R 8；或： 其中Cy表示C 3-C 8環烷基， R 8表示選自以下之基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；-NR' aR' b；-NR' a-CO-OR' c；-NR' a-CO-R' c；-N +R' aR' bR' c；-O-R' c；-NH-X' 2-N +R' aR' bR' c；-O-X' 2-NR' aR' b；-X' 2-NR' aR' b；-NR' c-X' 2-N 3；及： ， R 9表示選自以下之基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、三氟甲基、羥基、鹵素、C 1-C 6烷氧基， R 10表示選自以下之基團：氫、氟、氯、溴、-CF 3及甲基， R 11表示選自以下之基團：氫、C 1-C 3伸烷基-R 8、-O-C 1-C 3伸烷基-R 8、-CO-NR hR i及-CH=CH-C 1-C 4伸烷基-NR hR i、-CH=CH-CHO、C 3-C 8伸環烷基-CH 2-R 8、C 3-C 8伸雜環烷基-CH 2-R 8， R 12及R 13彼此獨立地表示氫原子或甲基， R 14及R 15彼此獨立地表示氫或甲基，或R 14及R 15與攜帶其之碳原子一起形成環己基， R h及R i彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， X 1及X 2彼此獨立地表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基，其視情況經一或兩個選自以下之基團取代：三氟甲基、羥基、鹵素、C 1-C 6烷氧基， X' 2表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基， R' a及R' b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；雜環烷基；-SO 2-苯基，其中該苯基可經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經一個或兩個羥基或C 1-C 6烷氧基取代；C 1-C 6伸烷基-SO 2OH；C 1-C 6伸烷基-SO 2O -；C 1-C 6伸烷基-COOH；C 1-C 6伸烷基-PO(OH) 2；C 1-C 6伸烷基-NR' dR' e；C 1-C 6伸烷基-N +R' dR' eR' f； C 1-C 6伸烷基-O-C 1-C 6伸烷基-OH；C 1-C 6伸烷基-苯基，其中該苯基可經羥基或C 1-C 6烷氧基取代； 以下基團： 或R' a及R' b與攜帶其之氮原子一起形成環B 3； 或R' a、R' b及R' c與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， R' c、R' d、R' e、R' f彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， 或R' d及R' e與攜帶其之氮原子一起形成環B 4； 或R' d、R' e及R' f與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， Y 1表示直鏈或分支鏈C 1-C 4伸烷基， Y 2表示鍵、-O-、-O-CH 2-、-O-CO-、-O-SO 2-、-CH 2-、-CH 2-O、-CH 2-CO-、-CH 2-SO 2-、-C 2H 5-、-CO-、-CO-O-、-CO-CH 2-、-CO-NH-CH 2-、-SO 2-、-SO 2-CH 2-、-NH-CO-、-NH-SO 2-， m=0、1或2， p=1、2、3或4， B 1、B 2、B 3及B 4彼此獨立地表示C 3-C 8雜環烷基，該基團可：(i)為單環或雙環基團，其中雙環基團包括稠合、橋接或螺環系統，(ii)除氮原子之外，亦可含有一個或兩個獨立地選自氧、硫及氮之雜原子，(iii)經一個或兩個選自以下之基團取代：氟、溴、氯、直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、羥基、-NH 2、側氧基(oxo)或哌啶基， 其中該R 3及R 8基團(若存在)中之一者共價連接至該連接子，且其中原子之價不因與其鍵結之一或多個取代基而超過；或 ， 或前述任一者之鏡像異構物、非鏡像異構物及/或醫藥學上可接受之鹽，其中： n=0、1或2， ------表示單鍵或雙鍵， A 4及A 5彼此獨立地表示碳原子或氮原子， Z 1表示鍵、-N(R)-或-O-，其中R表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， R 1表示選自以下之基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經羥基或C 1-C 6烷氧基取代；C 3-C 6環烷基；三氟甲基；直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基-雜環烷基，其中該雜環烷基視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代； R 2表示氫或甲基； R 3表示選自以下之基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 4烷基；-X 1-NR aR b；-X 1-N +R aR bR c；-X 1-O-R c；-X 1-COOR c；-X 1-PO(OH) 2；-X 1-SO 2(OH)；-X 1-N 3；及： ， R a及R b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；雜環烷基；-SO 2-苯基，其中該苯基可經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經一個或兩個羥基取代；C 1-C 6伸烷基-SO 2OH；C 1-C 6伸烷基-SO 2O -；C 1-C 6伸烷基-COOH；C 1-C 6伸烷基-PO(OH) 2；C 1-C 6伸烷基-NR dR e；C 1-C 6伸烷基-N +R dR eR f；C 1-C 6伸烷基-苯基，其中該苯基可經C 1-C 6烷氧基取代； 以下基團： 或R a及R b與攜帶其之氮原子一起形成環B 1； 或R a、R b及R c與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， R c、R d、R e、R f彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， 或R d及R e與攜帶其之氮原子一起形成環B 2， 或R d、R e及R f與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， Het 1表示選自以下之基團： Het 2表示選自以下之基團： A 1為-NH-、-N(C 1-C 3烷基)、O、S或Se， A 2為N、CH或C(R 5)， G係選自由以下組成之群： -C(O)OR G3、-C(O)NR G1R G2、-C(O)R G2、-NR G1C(O)R G2、-NR G1C(O)NR G1R G2、-OC(O)NR G1R G2、-NR G1C(O)OR G3、-C(=NOR G1)NR G1R G2、-NR G1C(=NCN)NR G1R G2、-NR G1S(O) 2N R G1R G2、-S(O) 2R G3、-S(O) 2NR G1R G2、-NR G1S(O) 2R G2、-NR G1C(=NR G2)NR G1R G2、-C(=S)NR G1R G2、-C(=NR G1)NR G1R G2、視情況經羥基取代之C 1-C 6烷基、鹵素、-NO 2及-CN，其中： R G1及R G2在各次出現時各自獨立地選自由以下組成之群：氫；C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；C 3-C 6環烷基；苯基；及-(CH 2) 1 - 4-苯基； R G3係選自由以下組成之群：C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；C 3-C 6環烷基；苯基；及-(CH 2) 1 - 4-苯基；或 R G1及R G2與其各自所連接之原子一起組合形成C 3-C 8雜環烷基；或在替代中，G係選自由以下組成之群： 其中R G4係選自氫、視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基及C 3-C 6環烷基， R 4表示氫、氟、氯或溴原子、甲基、羥基或甲氧基， R 5表示選自以下之基團：C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；鹵素；或-CN， R 6表示選自以下之基團： 氫； -C 2-C 6烯基； -X 2-O-R 7； ； -X 2-NSO 2-R 7； -C=C(R 9)-Y 1-O-R 7； C 3-C 6環烷基； C 3-C 6雜環烷基，其視情況經羥基取代； C 3-C 6伸環烷基-Y 2-R 7； C 3-C 6伸雜環烷基-Y 2-R 7基團， 伸雜芳基-R 7基團，其視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代， R 7表示選自以下之基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；(C 3-C 6)伸環烷基-R 8；或： 其中Cy表示C 3-C 8環烷基， R 8表示選自以下之基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；-NR' aR' b；-NR' a-CO-OR' c；-NR' a-CO-R' c；-N +R' aR' bR' c；-O-R' c；-NH-X' 2-N +R' aR' bR' c；-O-X' 2-NR' aR' b；-X' 2-NR' aR' b；-NR' c-X' 2-N 3；及： ， R 9表示選自以下之基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、三氟甲基、羥基、鹵素、C 1-C 6烷氧基， R 10表示選自以下之基團：氫、氟、氯、溴、-CF 3及甲基， R 11表示選自以下之基團：氫、鹵素、C 1-C 3伸烷基-R 8、-O-C 1-C 3伸烷基-R 8、-CO-NR hR i及-CH=CH-C 1-C 4伸烷基-NR hR i、-CH=CH-CHO、C 3-C 8伸環烷基-CH 2-R 8、C 3-C 8伸雜環烷基-CH 2-R 8， R 12及R 13彼此獨立地表示氫原子或甲基， R 14及R 15彼此獨立地表示氫或甲基，或R 14及R 15與攜帶其之碳原子一起形成環己基， R h及R i彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， X 1表示視情況經一或兩個選自以下之基團取代之直鏈或分支鏈C 1-C 4伸烷基：三氟甲基、羥基、鹵素、C 1-C 6烷氧基， X 2表示視情況經一或兩個選自以下之基團取代之直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基：三氟甲基、羥基、鹵素、C 1-C 6烷氧基， X' 2表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基， R' a及R' b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；雜環烷基；-SO 2-苯基，其中該苯基可經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經一個或兩個羥基或C 1-C 6烷氧基取代；C 1-C 6伸烷基-SO 2OH；C 1-C 6伸烷基-SO 2O -；C 1-C 6伸烷基-COOH；C 1-C 6伸烷基-PO(OH) 2；C 1-C 6伸烷基-NR' dR' e；C 1-C 6伸烷基-N +R' dR' eR' f；C 1-C 6伸烷基-O-C 1-C 6伸烷基-OH；C 1-C 6伸烷基-苯基，其中該苯基可經羥基或C 1-C 6烷氧基取代； 以下基團： 或R' a及R' b與攜帶其之氮原子一起形成環B 3； 或R' a、R' b及R' c與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， R' c、R' d、R' e、R' f彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， 或R' d及R' e與攜帶其之氮原子一起形成環B 4； 或R' d、R' e及R' f與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， Y 1表示直鏈或分支鏈C 1-C 4伸烷基， Y 2表示鍵、-O-、-O-CH 2-、-O-CO-、-O-SO 2-、-CH 2-、-CH 2-O、-CH 2-CO-、-CH 2-SO 2-、-C 2H 5-、-CO-、-CO-O-、-CO-CH 2-、-CO-NH-CH 2-、-SO 2-、-SO 2-CH 2-、-NH-CO-、-NH-SO 2-， m=0、1或2， p=1、2、3或4， B 1、B 2、B 3及B 4彼此獨立地表示C 3-C 8雜環烷基，該基團可：(i)為單環或雙環基團，其中雙環基團包括稠合、橋接或螺環系統，(ii)除氮原子之外，亦可含有一個或兩個獨立地選自氧、硫及氮之雜原子，(iii)經一個或兩個選自以下之基團取代：氟、溴、氯、直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、羥基、-NH 2、側氧基或哌啶基， 其中該R 3及R 8基團(若存在)中之一者共價連接至該連接子，且其中原子之價不因與其鍵結之一或多個取代基而超過， 且其中該抗Met抗體或其抗原結合片段包含VH鏈，該VH鏈包含至少一個以下胺基酸序列： HCDR1 SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:39； HCDR2 SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:12或SEQ ID NO:40； HCDR3 SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:13或SEQ ID NO:41； 及/或VL鏈，該VL鏈包含至少一個以下胺基酸序列： LCDR1 SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:14或SEQ ID NO:42； LCDR2 SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:15或SEQ ID NO:43； LCDR3 SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:44。
  2. 如請求項1之抗體-藥物結合物，其中該抗Met抗體或其抗原結合片段包含VH鏈，該VH鏈包含至少一個以下胺基酸序列： HCDR1 SEQ ID NO:5或SEQ ID NO:11； HCDR2 SEQ ID NO:6或SEQ ID NO:12； HCDR3 SEQ ID NO:7或SEQ ID NO:13； 及/或VL鏈，該VL鏈包含至少一個以下胺基酸序列： LCDR1 SEQ ID NO:8或SEQ ID NO:14； LCDR2 SEQ ID NO:9或SEQ ID NO:15； LCDR3 SEQ ID NO:10或SEQ ID NO:16。
  3. 如請求項1或2之抗體-藥物結合物，其中 p為1至6，或2至4之整數，或 p為2或4；或 p係藉由液體層析-質譜法(LC-MS)測定。
  4. 如請求項1、2或3之抗體-藥物結合物，其中L包含： 連接基團； 至少一個橋接間隔基團；及 至少一個可裂解基團，視情況至少一個包含焦磷酸酯基團及/或自我分解型(self-immolative)基團之可裂解基團。
  5. 如請求項4之抗體-藥物結合物，其中-(L-D)具有式(A)： ， 其中： R 1為連接基團； L 1為橋接間隔基團； E為可裂解基團。
  6. 如請求項4或5之抗體-藥物結合物，其中該可裂解基團包含焦磷酸酯基團或該可裂解基團包含 。
  7. 如請求項4或5之抗體-藥物結合物，其中該橋接間隔基團包含： (i)聚氧乙烯(PEG)基團； (ii) PEG基團，其選自PEG1、PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG6、PEG7、PEG8、PEG9、PEG10、PEG11、PEG12、PEG13、PEG14及PEG15； (iii) -CO-CH 2-CH 2-PEG12-基團； (iv)丁醯基、戊醯基、己醯基、庚醯基或辛醯基；或 (v)己醯基。
  8. 如請求項7之抗體-藥物結合物，其中(i)該連接基團係由至少一個選自順丁烯二醯亞胺基、硫醇基、環辛炔基及疊氮基之反應性基團形成；視情況其中： a)該順丁烯二醯亞胺基具有以下結構： ； b)該疊氮基具有以下結構：-N=N +=N -； c)該環辛炔基具有以下結構： 或 ，且其中 為連至該抗體之鍵；或 d)該環辛炔基具有以下結構： ，且 其中 為連至該抗體之鍵；或 (ii)該連接基團具有包含以下之式： ，且 其中 為連至該抗體之鍵。
  9. 如請求項8之抗體-藥物結合物，其中該抗體藉由選自以下之連接基團接合至該連接子(L)： ， 其中 為連至該抗體之鍵，且其中 為連至該橋接間隔基團之鍵。
  10. 如請求項9之抗體-藥物結合物，其中該橋接間隔基團為-CO-CH 2-CH 2-PEG12-。
  11. 如請求項9或10之抗體-藥物結合物，其中該橋接間隔基團接合至可裂解基團；視情況該可裂解基團為-焦磷酸酯-CH 2-CH 2-NH 2-。
  12. 如請求項9至11中任一項之抗體-藥物結合物，其中該可裂解基團接合至該Bcl-xL抑制劑(D)。
  13. 如請求項1至4中任一項之抗體-藥物結合物，其中該連接子包含： 連接基團， 至少一個橋接間隔基團， 肽基，及 至少一個可裂解基團。
  14. 如請求項13之抗體-藥物結合物，其中-(L-D)具有式(B)： ， 其中： R 1為連接基團； L 1為橋接間隔子； Lp為包含1至6個胺基酸殘基之肽基，或Lp包含基團 ； E為可裂解基團 L 2為橋接間隔子； m為0或1；且 D為Bcl-xL抑制劑。
  15. 如請求項13或14之抗體-藥物結合物，其中(i)該連接基團係由至少一個包含順丁烯二醯亞胺基、硫醇基、環辛炔基及/或疊氮基之反應性基團形成，視情況其中： a)該順丁烯二醯亞胺基具有以下結構： ； b)該疊氮基具有以下結構：-N=N +=N -；或 c)該環辛炔基具有以下結構： 或 ，且其中 為連至該抗體之鍵；或 (ii)該連接基團具有包含以下之式： ，且 其中 為連至該抗體之鍵。
  16. 如請求項13至15中任一項之抗體-藥物結合物，其中： (i)至少一個橋接間隔子包含PEG基團，視情況該PEG基團係選自PEG1、PEG2、PEG3、PEG4、PEG5、PEG6、PEG7、PEG8、PEG9、PEG10、PEG11、PEG12、PEG13、PEG14及PEG15；或 (ii)至少一個橋接間隔子係選自*-C(O)-CH 2-CH 2-PEG1-**、*-C(O)-CH 2-PEG3-**、*-C(O)-CH 2-CH 2-PEG12**、*-NH-CH 2-CH 2-PEG1-**、聚羥烷基、*-C(O)-N(CH 3)-CH 2-CH 2-N(CH 3)-C(O)-**及*-C(O)-CH 2-CH 2-PEG12-NH-C(O)CH 2-CH 2-**，其中**指示將該至少一個橋接間隔子直接或間接連接至該連接基團之點，且*指示將該至少一個橋接間隔子直接或間接連接至該肽基之點。
  17. 如請求項13至16中任一項之抗體-藥物結合物，其中L 1係選自*-C(O)-CH 2-CH 2-PEG1-**、*-C(O)-CH 2-PEG3-**、*-C(O)-CH 2-CH 2-PEG12**、*-NH-CH 2-CH 2-PEG1-**及聚羥烷基，其中**指示將L 1直接或間接連接至R 1之點，且*指示將L 1直接或間接連接至Lp之點。
  18. 如請求項13至17中任一項之抗體-藥物結合物，其中m為1且L 2為-C(O)-N(CH 3)-CH 2-CH 2-N(CH 3)-C(O)-。
  19. 如請求項13至18中任一項之抗體-藥物結合物，其中 (i)該肽基包含1至6、1至4、1至3或1至2個胺基酸殘基，視情況該等胺基酸殘基係選自甘胺酸(Gly)、L-纈胺酸(Val)、L-瓜胺酸(Cit)、L-半胱胺酸(磺基-Ala)、L-離胺酸(Lys)、L-異白胺酸(Ile)、L-苯丙胺酸(Phe)、L-甲硫胺酸(Met)、L-天冬醯胺酸(Asn)、L-脯胺酸(Pro)、L-丙胺酸(Ala)、L-白胺酸(Leu)、L-色胺酸(Trp)及L-酪胺酸(Tyr)； (ii)該肽基包含Val-Cit、Val-Ala、Val-Lys、磺基-Ala-Val-Ala、Gly-Gly-Gly及/或Gly-Gly-Phe-Gly (SEQ ID NO:36)；或 (iii)該肽基係選自： 。
  20. 如請求項13至19中任一項之抗體-藥物結合物，其中(i)該可裂解基團包含焦磷酸酯及/或自我分解型基團；(ii)該可裂解基團包含自我分解型基團；或(iii)該可裂解基團包含自我分解型基團，該自我分解型基團包含對-胺基苯甲基-胺基甲酸酯、對-胺基苯甲基-銨、對-胺基-(磺基)苯甲基-銨、對-胺基-(磺基)苯甲基-胺基甲酸酯、對-胺基-(烷氧基-PEG-烷基)苯甲基-胺基甲酸酯、對-胺基-(聚羥基羧基四氫哌喃基)烷基-苯甲基-胺基甲酸酯或對-胺基-(聚羥基羧基四氫哌喃基)烷基-苯甲基-銨。
  21. 如請求項14至20中任一項之抗體-藥物結合物，其中m為0或1或m為1且該橋接間隔子包含 。
  22. 如請求項14至21中任一項之抗體-藥物結合物，其中-(L-D)由選自以下之化合物形成： 。
  23. 如請求項14至22中任一項之抗體-藥物結合物，其中-(L-D)包含選自以下之式： ， 且 其中 為連至該抗體之鍵。
  24. 如請求項1、2或3之抗體-藥物結合物，其中-(L-D)具有式(C)： ， 其中： R 1為連接基團； L 1為橋接間隔子； L p為包含1至6個胺基酸之肽基； D為Bcl-xL抑制劑； G 1-L 2-A為自我分解型間隔子； L 2為鍵、亞甲基、伸新戊基或C 2-C 3伸烯基； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點； L 3為間隔子部分；且 R 2為親水性部分。
  25. 如請求項24之抗體-藥物結合物或其醫藥學上可接受之鹽，其中-(L-D)具有式(D)： 其中： R 1為連接基團； L 1為橋接間隔子； L p為包含1至6個胺基酸之肽基； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點； L 3為間隔子部分；且 R 2為親水性部分。
  26. 如請求項24或25之抗體-藥物結合物，其中： (1)  L 1包含： *-CH(OH)CH(OH)CH(OH)CH(OH)-**， 其中各n為1至12之整數，其中L 1之*指示直接或間接連接至Lp之點，且L 1之**指示直接或間接連接至R 1之點； (2) L 1為 ，且n為1至12之整數或n為1或n為12，其中L 1之*指示直接或間接連接至Lp之點，且L 1之**指示直接或間接連接至R 1之點； (3) L 1為 ，且n為1至12之整數，其中L 1之*指示直接或間接連接至Lp之點，且L 1之**指示直接或間接連接至R 1之點； (4)  L 1包含 ，其中L 1之*指示直接或間接連接至Lp之點，且L 1之**指示直接或間接連接至R 1之點；或 (5)  L 1為橋接間隔子，其包含： *-C(=O)(CH 2) mO(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) n-**； *-C(=O)(CH 2) m-**；*-C(=O)NH((CH 2) mO) t(CH 2) n-**；*-C(= O)O(CH 2) mSSC(R 3) 2(CH 2) mC(=O)NR 3(CH 2) mNR 3C(=O)(CH 2) m-**；*-C(=O)O(CH 2) mC(=O)NH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mNH(CH 2) m-**；*-C(=O)(CH 2) mNH(CH 2) nC(=O)-**；*-C(=O)(CH 2) mX 1(CH 2) m-**；*-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nX 1(CH 2) n-**； *-C(=O)(CH 2) mNHC(=O)(CH 2) n-**； *-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nNHC(=O)(CH 2) n-**； *-C(=O)(CH 2) mNHC(=O)(CH 2) nX 1(CH 2) n-**； *-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nNHC(=O)(CH 2) nX 1(CH 2) n-**； *-C(=O)((CH 2) mO) t(CH 2) nC(=O)NH(CH 2) m-**； *-C(=O)(CH 2) mC(R 3) 2-**或*-C(=O)(CH 2) mC(=O)NH(CH 2) m-**，其中L 1之*指示直接或間接連接至Lp之點，且L 1之**指示直接或間接連接至R 1之點； X 1為 ；且 各m獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10； 各n獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9及10；且 各t獨立地選自1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29及30； 且各R 3獨立地選自H及C 1-C 6烷基。
  27. 如請求項24至26中任一項之抗體-藥物結合物，其中R 2為包含以下之親水性部分：聚乙二醇、聚伸烷二醇、多元醇、聚肌胺酸、糖、寡醣、多肽、經1至3個 取代之C 2-C 6烷基，或經1至2個獨立地選自-OC(=O)NHS(O) 2NHCH 2CH 2OCH 3、-NHC(=O)C 1 - 4伸烷基-P(O)(OCH 2CH 3) 2及-COOH基團之取代基取代之C 2-C 6烷基。
  28. 如請求項24至27中任一項之抗體-藥物結合物，其中R 2為 (其中n為1與6之間的整數)、 。
  29. 如請求項24或25之抗體-藥物結合物，其中該親水性部分包含： (i)具有以下部分之聚肌胺酸： ，其中n為3與25之間的整數；且R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH；或 (ii)下式之聚乙二醇： ，其中R為H、-CH 3、CH 2CH 2NHC(=O)OR a、-CH 2CH 2NHC(=O)R a或-CH 2CH 2C(=O)OR a，R'為OH、-OCH 3、-CH 2CH 2NHC(=O)OR a、-CH 2CH 2NHC(=O)R a或-OCH 2CH 2C(=O)OR a，其中R a為H，或視情況經OH或C 1 - 4烷氧基取代之C 1 - 4烷基，且m及n各獨立地為2與25之間的整數。
  30. 如請求項24至28中任一項之抗體-藥物結合物，其中該親水性部分包含 。
  31. 如請求項24至30中任一項之抗體-藥物結合物，其中： (i) L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中： W為-CH 2-、-CH 2O-、-CH 2N(R b)C(=O)O-、 -NHC(=O)C(R b) 2NHC(=O)O-、-NHC(=O)C(R b) 2NH-、 -NHC(=O)C(R b) 2NHC(=O)-、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-、-C(=O)N(X-R 2)-、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-、-C(=O)NR b-、-C(=O)NH-、-CH 2N R bC(=O)-、-CH 2NR bC(=O)NH-、-CH 2NR bC(=O)NR b-、-NHC(=O)-、-NHC(=O)O-、-NHC(=O)NH-、-OC(=O)NH-、-S(O) 2NH-、-NHS(O) 2-、-C(=O)-、-C(=O)O-或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基；且 X為鍵、三唑基或-CH 2-三唑基， 其中X連接至R 2；或 (ii) L 3為具有結構 之間隔子部分， 其中： W為-CH 2-、-CH 2O-、-CH 2N(R b)C(=O)O-、 -NHC(=O)C(R b) 2NHC(=O)O-、-NHC(=O)C(R b) 2NH-、 -NHC(=O)C(R b) 2NHC(=O)-、-CH 2N(X-R 2)C(=O)O-、 -C(=O)N(X-R 2)-、-CH 2N(X-R 2)C(=O)-、-C(=O)NR b-、-C(=O)NH-、-CH 2NR bC(=O)-、-CH 2NR bC(=O)NH-、-CH 2NR bC(=O)NR b-、-NHC(=O)-、-NHC(=O)O-、-NHC(=O)NH-、-OC(=O)NH-、-S(O) 2NH-、-NHS(O) 2-、-C(=O)-、-C(=O)O-或-NH-，其中各R b獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基；且 X為-CH 2-三唑基-C 1 - 4伸烷基-OC(O)NHS(O) 2NH-、-C 4 - 6伸環烷基-OC(O)NHS(O) 2NH-、-(CH 2CH 2O) n-C(O)NHS(O) 2NH-、-(CH 2CH 2O) n-C(O)NHS(O) 2NH-(CH 2CH 2O) n-、-CH 2-三唑基-C 1 - 4伸烷基-OC(O)NHS(O) 2NH-(CH 2CH 2O) n-、-C 4 - 6伸環烷基-OC(O)NHS (O) 2NH-(CH 2CH 2O) n-，其中各n獨立地為1、2或3， 其中X連接至R 2。
  32. 如請求項4至31中任一項之抗體-藥物結合物，其中該連接基團係藉由包含至少一個反應性基團之反應形成。
  33. 如請求項4至32中任一項之抗體-藥物結合物，其中該連接基團藉由以下反應而形成： 第一反應性基團，其連接至該連接子，及 第二反應性基團，其連接至該抗體或該抗體之胺基酸殘基，其中視情況， (i)該等反應性基團中之至少一者包含： 硫醇， 順丁烯二醯亞胺， 鹵乙醯胺， 疊氮化物， 炔， 環辛烯， 三芳基膦， 氧雜降冰片二烯(oxanorbornadiene)， 環辛炔， 二芳基四𠯤， 單芳基四𠯤， 降冰片烯(norbornene)， 醛， 羥胺， 肼， NH 2-NH-C(=O)-， 酮， 乙烯基碸， 氮丙啶， 胺基酸殘基， 、-ONH 2、-NH 2、 、-SH、-SR 3、-SSR 4、-S(=O) 2(CH=CH 2)、-(CH 2) 2S(=O) 2(CH=CH 2)、 -NHS(=O) 2(CH=CH 2)、-NHC(=O)CH 2Br、-NHC(=O)CH 2I、 、-C(O)NHNH 2、 ； 其中： 各R 3獨立地選自H及C 1-6烷基； 各R 4為2-吡啶基或4-吡啶基； 各R 5獨立地選自H、C 1-C 6烷基、F、Cl及-OH； 各R 6獨立地選自H、C 1-C 6烷基、F、Cl、-NH 2、-OCH 3、-OCH 2CH 3、-N(CH 3) 2、-CN、-NO 2及-OH； 各R 7獨立地選自H、C 1-6烷基、氟、經-C(=O)OH取代之苯甲氧基、經-C(=O)OH取代之苯甲基、經-C(=O)OH取代之C 1-4烷氧基，及經-C(=O)OH取代之C 1-4烷基；及/或 (ii)該第一反應性基團及該第二反應性基團包含： 硫醇及順丁烯二醯亞胺， 硫醇及鹵乙醯胺， 硫醇及乙烯基碸， 硫醇及氮丙啶， 疊氮化物及炔， 疊氮化物及環辛炔， 疊氮化物及環辛烯， 疊氮化物及三芳基膦， 疊氮化物及氧雜降冰片二烯， 二芳基四𠯤及環辛烯， 單芳基四𠯤及降冰片烯， 醛及羥胺， 醛及肼， 醛及NH 2-NH-C(=O)-， 酮及羥胺， 酮及肼， 酮及NH 2-NH-C(=O)-， 羥胺及 ， 胺及 ，或 CoA或CoA類似物及絲胺酸殘基。
  34. 如請求項4至33中任一項之抗體-藥物結合物，其中該連接基團包含選自以下之基團： 醯胺； 二硫鍵， 其中： R 32為H、C 1-4烷基、苯基、嘧啶或吡啶； R 35為H、C 1 - 6烷基、苯基，或經1至3個-OH基團取代之C 1 - 4烷基； 各R 7獨立地選自H、C 1 - 6烷基、氟、經-C(=O)OH取代之苯甲氧基、經-C(=O)OH取代之苯甲基、經-C(=O)OH取代之C 1 - 4烷氧基，及經-C(=O)OH取代之C 1 - 4烷基； R 37獨立地選自H、苯基及吡啶； q為0、1、2或3； R 8為H或甲基；且 R 9為H、-CH 3或苯基。
  35. 如請求項24至34中任一項之抗體-藥物結合物，其中該肽基包含1至4，或1至3，或1至2個胺基酸殘基，視情況該等胺基酸殘基係選自甘胺酸(Gly)、L-纈胺酸(Val)、L-瓜胺酸(Cit)、L-半胱胺酸(磺基-Ala)、L-離胺酸(Lys)、L-異白胺酸(Ile)、L-苯丙胺酸(Phe)、L-甲硫胺酸(Met)、L-天冬醯胺酸(Asn)、L-脯胺酸(Pro)、L-丙胺酸(Ala)、L-白胺酸(Leu)、L-色胺酸(Trp)及L-酪胺酸(Tyr)。
  36. 如請求項24至34中任一項之抗體-藥物結合物，其中該肽基包含Val-Cit、Phe-Lys、Val-Ala、Val-Lys、Leu-Cit、磺基-Ala-Val-Cit、磺基-Ala-Val-Ala、Gly-Gly-Gly及/或Gly-Gly-Phe-Gly (SEQ ID NO: 36)。
  37. 如請求項24至36中任一項之抗體-藥物結合物，其中Lp係選自： 。
  38. 如請求項24至37中任一項之抗體-藥物結合物，其中： -(L-D)包含下式化合物或由下式化合物形成： (1) ，其中： R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑； (2) ，其中： R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑； (3) ，其中： R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑； (4) ，其中： 各R獨立地選自H、-CH 3及-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑； (5) ， 其中： 各R獨立地選自H、-CH 3及-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑； (6) ，其中： Xa為-CH 2-、-OCH 2-、-NHCH 2-或-NRCH 2-，且各R獨立地為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑； (7) ，其中： R為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑； (8) ，其中： Xb為-CH 2-、-OCH 2-、-NHCH 2-或-NRCH 2-，且各R獨立地為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑； (9) ，其中： A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑； (10) ，其中： A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑； (11) ，其中： A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑； (12) ，其中： A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑； (13) ，其中： A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑； (14) ，其中： A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑； (15) ，其中： A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑；或 (16) ，其中： 各R獨立地為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑，或 (17) ，其中： 各R獨立地為H、-CH 3或-CH 2CH 2C(=O)OH； A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點； n為2與24之間的整數；且 D為Bcl-xL抑制劑，或 (18) ，其中： A為鍵、-OC(=O)-*、 、-OC(=O)N(CH 3)CH 2CH 2N(CH 3)C(=O)-*或-OC(=O)N(CH 3)C(R a) 2C(R a) 2N(CH 3)C(=O)-*， 其中各R a獨立地選自H、C 1-C 6烷基及C 3-C 8環烷基，且A之*指示與D之連接點；且 D為Bcl-xL抑制劑。
  39. 如請求項24至38中任一項之抗體-藥物結合物，其中A為鍵及/或R為-CH 3或-CH 2CH 2COOH。
  40. 如請求項24至38中任一項之抗體-藥物結合物，其中A為-OC(=O)-*及/或R為-CH 3或-CH 2CH 2COOH。
  41. 如請求項24至40中任一項之抗體-藥物結合物，其中-(L-D)由選自以下之化合物形成： 。
  42. 如請求項1至41中任一項之抗體-藥物結合物，其中D包含式(I)化合物： ， 或前述任一者之鏡像異構物、非鏡像異構物及/或醫藥學上可接受之鹽，其中： R 1及R 2彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經羥基或C 1-C 6烷氧基取代；C 3-C 6環烷基；三氟甲基；直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基-雜環烷基，其中該雜環烷基視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代； 或R 1及R 2與攜帶其之碳原子一起形成C 3-C 6伸環烷基， R 3表示選自以下之基團：氫；C 3-C 6環烷基；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；-X 1-NR aR b；-X 1-N +R aR bR c；-X 1-O-R c；-X 1-COOR c；-X 1-PO(OH) 2；-X 1-SO 2(OH)；-X 1-N 3及： ， R a及R b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；雜環烷基；-SO 2-苯基，其中該苯基可經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經一個或兩個羥基取代；C 1-C 6伸烷基-SO 2OH；C 1-C 6伸烷基-SO 2O -；C 1-C 6伸烷基-COOH；C 1-C 6伸烷基-PO(OH) 2；C 1-C 6伸烷基-NR dR e；C 1-C 6伸烷基-N +R dR eR f；C 1-C 6伸烷基-苯基，其中該苯基可經C 1-C 6烷氧基取代； 以下基團： 或R a及R b與攜帶其之氮原子一起形成環B 1； 或R a、R b及R c與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， R c、R d、R e、R f彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， 或R d及R e與攜帶其之氮原子一起形成環B 2， 或R d、R e及R f與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， Het 1表示選自以下之基團： Het 2表示選自以下之基團： A 1為-NH-、-N(C 1-C 3烷基)、O、S或Se， A 2為N、CH或C(R 5)， G係選自由以下組成之群： -C(O)OR G3、-C(O)NR G1R G2、-C(O)R G2、-NR G1C(O)R G2、-NR G1C(O)NR G1R G2、-OC(O)NR G1R G2、-NR G1C(O)OR G3、-C(=NOR G1)NR G1R G2、-NR G1C(=NCN)NR G1R G2、-NR G1S(O) 2NR G1R G2、-S(O) 2R G3、-S(O) 2NR G1R G2、-NR G1S(O) 2R G2、-NR G1C(=NR G2)NR G1R G2、-C(=S)NR G1R G2、-C(=NR G1)NR G1R G2、視情況經羥基取代之C 1-C 6烷基、鹵素、-NO 2及-CN，其中： R G1及R G2在各次出現時各自獨立地選自由以下組成之群：氫；C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；C 3-C 6環烷基；苯基；及-(CH 2) 1 - 4-苯基； R G3係選自由以下組成之群：C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；C 3-C 6環烷基；苯基；及-(CH 2) 1 - 4-苯基；或 R G1及R G2與其各自所連接之原子一起組合形成C 3-C 8雜環烷基；或在替代中，G係選自由以下組成之群： 其中R G4係選自氫、視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基及C 3-C 6環烷基， R 4表示氫、氟、氯或溴原子、甲基、羥基或甲氧基， R 5表示選自以下之基團：C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；鹵素；或-CN， R 6表示選自以下之基團： 氫； -C 2-C 6烯基； -X 2-O-R 7； ； -X 2-NSO 2-R 7； -C=C(R 9)-Y 1-O-R 7； C 3-C 6環烷基； C 3-C 6雜環烷基，其視情況經羥基取代； C 3-C 6伸環烷基-Y 2-R 7； C 3-C 6伸雜環烷基-Y 2-R 7基團， 伸雜芳基-R 7基團，其視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代， R 7表示選自以下之基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；(C 3-C 6)伸環烷基-R 8；或： 其中Cy表示C 3-C 8環烷基， R 8表示選自以下之基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；-NR' aR' b；-NR' a-CO-OR' c；-NR' a-CO-R' c；-N +R' aR' bR' c；-O-R' c；-NH-X' 2-N +R' aR' bR' c；-O-X' 2-NR' aR' b；-X' 2-NR' aR' b；-NR' c-X' 2-N 3；及： ， R 9表示選自以下之基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、三氟甲基、羥基、鹵素、C 1-C 6烷氧基， R 10表示選自以下之基團：氫、氟、氯、溴、-CF 3及甲基， R 11表示選自以下之基團：氫、C 1-C 3伸烷基-R 8、-O-C 1-C 3伸烷基-R 8、-CO-NR hR i及-CH=CH-C 1-C 4伸烷基-NR hR i、-CH=CH-CHO、C 3-C 8伸環烷基-CH 2-R 8、C 3-C 8伸雜環烷基-CH 2-R 8， R 12及R 13彼此獨立地表示氫原子或甲基， R 14及R 15彼此獨立地表示氫或甲基，或R 14及R 15與攜帶其之碳原子一起形成環己基， R h及R i彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， X 1及X 2彼此獨立地表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基，其視情況經一或兩個選自以下之基團取代：三氟甲基、羥基、鹵素、C 1-C 6烷氧基， X' 2表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基， R' a及R' b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；雜環烷基；-SO 2-苯基，其中該苯基可經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經一個或兩個羥基或C 1-C 6烷氧基取代；C 1-C 6伸烷基-SO 2OH；C 1-C 6伸烷基-SO 2O -；C 1-C 6伸烷基-COOH；C 1-C 6伸烷基-PO(OH) 2；C 1-C 6伸烷基-NR' dR' e；C 1-C 6伸烷基-N +R' dR' eR' f；C 1-C 6伸烷基-O-C 1-C 6伸烷基-OH；C 1-C 6伸烷基-苯基，其中該苯基可經羥基或C 1-C 6烷氧基取代； 以下基團： 或R' a及R' b與攜帶其之氮原子一起形成環B 3； 或R' a、R' b及R' c與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， R' c、R' d、R' e、R' f彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， 或R' d及R' e與攜帶其之氮原子一起形成環B 4； 或R' d、R' e及R' f與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， Y 1表示直鏈或分支鏈C 1-C 4伸烷基， Y 2表示鍵、-O-、-O-CH 2-、-O-CO-、-O-SO 2-、-CH 2-、-CH 2-O、-CH 2-CO-、-CH 2-SO 2-、-C 2H 5-、-CO-、-CO-O-、-CO-CH 2-、-CO-NH-CH 2-、-SO 2-、-SO 2-CH 2-、-NH-CO-、-NH-SO 2-， m=0、1或2， p=1、2、3或4， B 1、B 2、B 3及B 4彼此獨立地表示C 3-C 8雜環烷基，該基團可：(i)為單環或雙環基團，其中雙環基團包括稠合、橋接或螺環系統，(ii)除氮原子之外，亦可含有一個或兩個獨立地選自氧、硫及氮之雜原子，(iii)經一個或兩個選自以下之基團取代：氟、溴、氯、直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、羥基、-NH 2、側氧基或哌啶基， 其中該R 3及R 8基團(若存在)中之一者共價連接至該連接子，且其中原子之價不因與其鍵結之一或多個取代基而超過。
  43. 如請求項42之抗體-藥物結合物，其中R 1為直鏈或分支鏈C 1 - 6烷基且R 2為H。
  44. 如請求項1至41中任一項之抗體-藥物結合物，其中D包含式(II)化合物： ， 或前述任一者之鏡像異構物、非鏡像異構物及/或醫藥學上可接受之鹽，其中： n=0、1或2， ------表示單鍵或雙鍵， A 4及A 5彼此獨立地表示碳原子或氮原子， Z 1表示鍵、-N(R)-或-O-，其中R表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， R 1表示選自以下之基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經羥基或C 1-C 6烷氧基取代；C 3-C 6環烷基；三氟甲基；直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基-雜環烷基，其中該雜環烷基視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代； R 2表示氫或甲基； R 3表示選自以下之基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 4烷基；-X 1-NR aR b；-X 1-N +R aR bR c；-X 1-O-R c；-X 1-COOR c；-X 1-PO(OH) 2；-X 1-SO 2(OH)；-X 1-N 3；及： ， R a及R b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；雜環烷基；-SO 2-苯基，其中該苯基可經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經一個或兩個羥基取代；C 1-C 6伸烷基-SO 2OH；C 1-C 6伸烷基-SO 2O -；C 1-C 6伸烷基-COOH；C 1-C 6伸烷基-PO(OH) 2；C 1-C 6伸烷基-NR dR e；C 1-C 6伸烷基-N +R dR eR f；C 1-C 6伸烷基-苯基，其中該苯基可經C 1-C 6烷氧基取代； 以下基團： 或R a及R b與攜帶其之氮原子一起形成環B 1； 或R a、R b及R c與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， R c、R d、R e、R f彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， 或R d及R e與攜帶其之氮原子一起形成環B 2， 或R d、R e及R f與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， Het 1表示選自以下之基團： Het 2表示選自以下之基團： A 1為-NH-、-N(C 1-C 3烷基)、O、S或Se， A 2為N、CH或C(R 5)， G係選自由以下組成之群： -C(O)OR G3、-C(O)NR G1R G2、-C(O)R G2、-NR G1C(O)R G2、-NR G1C(O)NR G1R G2、-OC(O)NR G1R G2、-NR G1C(O)OR G3、-C(=NOR G1)NR G1R G2、-NR G1C(=NCN)NR G1R G2、-NR G1S(O) 2NR G1R G2、-S(O) 2R G3、-S(O) 2NR G1R G2、-NR G1S(O) 2R G2、-NR G1C(=NR G2)NR G1R G2、-C(=S)NR G1R G2、-C(=NR G1)NR G1R G2、視情況經羥基取代之C 1-C 6烷基、鹵素、-NO 2及-CN，其中： R G1及R G2在各次出現時各自獨立地選自由以下組成之群：氫；C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；C 3-C 6環烷基；苯基；及-(CH 2) 1 - 4-苯基； R G3係選自由以下組成之群：C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；C 3-C 6環烷基；苯基；及-(CH 2) 1 - 4-苯基；或 R G1及R G2與其各自所連接之原子一起組合形成C 3-C 8雜環烷基；或在替代中，G係選自由以下組成之群： 其中R G4係選自氫、視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基及C 3-C 6環烷基， R 4表示氫、氟、氯或溴原子、甲基、羥基或甲氧基， R 5表示選自以下之基團：C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；鹵素；或-CN， R 6表示選自以下之基團： 氫； -C 2-C 6烯基； -X 2-O-R 7； ； -X 2-NSO 2-R 7； -C=C(R 9)-Y 1-O-R 7； C 3-C 6環烷基； C 3-C 6雜環烷基，其視情況經羥基取代； C 3-C 6伸環烷基-Y 2-R 7； C 3-C 6伸雜環烷基-Y 2-R 7基團， 伸雜芳基-R 7基團，其視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代， R 7表示選自以下之基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；(C 3-C 6)伸環烷基-R 8；或： 其中Cy表示C 3-C 8環烷基， R 8表示選自以下之基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；-NR' aR' b；-NR' a-CO-OR' c；-NR' a-CO-R' c；-N +R' aR' bR' c；-O-R' c；-NH-X' 2-N +R' aR' bR' c；-O-X' 2-NR' aR' b；-X' 2-NR' aR' b；-NR' c-X' 2-N 3；及： ， R 9表示選自以下之基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、三氟甲基、羥基、鹵素、C 1-C 6烷氧基， R 10表示選自以下之基團：氫、氟、氯、溴、-CF 3及甲基， R 11表示選自以下之基團：氫、鹵素、C 1-C 3伸烷基-R 8、-O-C 1-C 3伸烷基-R 8、-CO-NR hR i及-CH=CH-C 1-C 4伸烷基-NR hR i、-CH=CH-CHO、C 3-C 8伸環烷基-CH 2-R 8、C 3-C 8伸雜環烷基-CH 2-R 8， R 12及R 13彼此獨立地表示氫原子或甲基， R 14及R 15彼此獨立地表示氫或甲基，或R 14及R 15與攜帶其之碳原子一起形成環己基， R h及R i彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， X 1表示視情況經選自以下之一或兩個基團取代之直鏈或分支鏈C 1-C 4伸烷基：三氟甲基、羥基、鹵素、C 1-C 6烷氧基， X 2表示視情況經選自以下之一或兩個基團取代之直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基：三氟甲基、羥基、鹵素、C 1-C 6烷氧基， X' 2表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基， R' a及R' b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；雜環烷基；-SO 2-苯基，其中該苯基可經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經一個或兩個羥基或C 1-C 6烷氧基取代；C 1-C 6伸烷基-SO 2OH；C 1-C 6伸烷基-SO 2O -；C 1-C 6伸烷基-COOH；C 1-C 6伸烷基-PO(OH) 2；C 1-C 6伸烷基-NR' dR' e；C 1-C 6伸烷基-N +R' dR' eR' f；C 1-C 6伸烷基-O-C 1-C 6伸烷基-OH；C 1-C 6伸烷基-苯基，其中該苯基可經羥基或C 1-C 6烷氧基取代； 以下基團： 或R' a及R' b與攜帶其之氮原子一起形成環B 3； 或R' a、R' b及R' c與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， R' c、R' d、R' e、R' f彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， 或R' d及R' e與攜帶其之氮原子一起形成環B 4； 或R' d、R' e及R' f與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， Y 1表示直鏈或分支鏈C 1-C 4伸烷基， Y 2表示鍵、-O-、-O-CH 2-、-O-CO-、-O-SO 2-、-CH 2-、-CH 2-O、-CH 2-CO-、-CH 2-SO 2-、-C 2H 5-、-CO-、-CO-O-、-CO-CH 2-、-CO-NH-CH 2-、-SO 2-、-SO 2-CH 2-、-NH-CO-、-NH-SO 2-， m=0、1或2， p=1、2、3或4， B 1、B 2、B 3及B 4彼此獨立地表示C 3-C 8雜環烷基，該基團可：(i)為單環或雙環基團，其中雙環基團包括稠合、橋接或螺環系統，(ii)除氮原子之外，亦可含有一個或兩個獨立地選自氧、硫及氮之雜原子，(iii)經一個或兩個選自以下之基團取代：氟、溴、氯、直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、羥基、-NH 2、側氧基或哌啶基， 其中該R 3及R 8基團(若存在)中之一者共價連接至該連接子，且其中原子之價不因與其鍵結之一或多個取代基而超過。
  45. 如請求項44之抗體-藥物結合物，其中A 1及A 5均表示氮原子，R 1為直鏈或分支鏈C 1 - 6烷基；R 2為H；n為1；且------表示單鍵。
  46. 如請求項1至45中任一項之抗體-藥物結合物，其中G係選自由以下組成之群：-C(O)OR G3、-C(O)NR G1R G2、-C(O)R G2、-NR G1C(O)R G2、-NR G1C(O)NR G1R G2、-OC(O)NR G1R G2、-NR G1C(O)OR G3、-C(=NOR G1)NR G1R G2、-NR G1C(=NCN)NR G1R G2、-NR G1S(O) 2NR G1R G2、-S(O) 2R G3、-S(O) 2NR G1R G2、-NR G1S(O) 2R G2、-NR G1C(=NR G2)NR G1R G2、-C(=S)NR G1R G2、-C(=NR G1)NR G1R G2、鹵素、-NO 2及-CN，其中： R G1及R G2在各次出現時各自獨立地選自由以下組成之群：氫；C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；C 3-C 6環烷基；苯基；及-(CH 2) 1 - 4-苯基； R G3係選自由以下組成之群：C 1-C 6烷基，其視情況經1至3個鹵素原子取代；C 2-C 6烯基；C 2-C 6炔基；C 3-C 6環烷基；苯基；及-(CH 2) 1 - 4-苯基；或 R G1及R G2與其各自所連接之原子一起組合形成C 3-C 8雜環烷基；或在替代中，G係選自由以下組成之群： 其中R G4係選自視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基、C 2-C 6烯基、C 2-C 6炔基及C 3-C 6環烷基。
  47. 如請求項1至41中任一項之抗體-藥物結合物，其中D包含式(IA)或(IIA)化合物： 或 或前述任一者之鏡像異構物、非鏡像異構物及/或醫藥學上可接受之鹽，其中： Z 1表示鍵或-O-， R 3表示選自以下之基團：氫；C 3-C 6環烷基；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；-X 1-NR aR b；-X 1-N +R aR bR c；及-X 1-O-R c， R a及R b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；視情況經一或兩個羥基取代之直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；以及C 1-C 6伸烷基-SO 2O -， R c表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， Het 2表示選自以下之基團： A 1為-NH-、-N(C 1-C 3烷基)、O、S或Se， A 2為N、CH或C(R 5)， G係選自由以下組成之群： -C(O)OH、-C(O)OR G3、-C(O)NR G1R G2、-C(O)R G2、-NR G1C(O)R G2、-NR G1C(O)NR G1R G2、-OC(O)NR G1R G2、-NR G1C(O)OR G3、-C(=NOR G1)NR G1R G2、-NR G1C(=NCN)NR G1R G2、-NR G1S(O) 2NR G1R G2、-S(O) 2R G3、-S(O) 2NR G1R G2、-NR G1S(O) 2R G2、-NR G1C(=NR G2)NR G1R G2、-C(=S)NR G1R G2、-C(=NR G1)NR G1R G2、視情況經羥基取代之C 1-C 6烷基、鹵素、-NO 2及-CN，其中： R G1及R G2在各次出現時各自獨立地選自由以下組成之群：氫及視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基； R G3為視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基；或 R G1及R G2與其各自所連接之原子一起組合形成C 3-C 8雜環烷基； R 4表示氫、氟、氯或溴原子、甲基、羥基或甲氧基， R 5表示選自以下之基團：視情況經1至3個鹵素原子取代之C 1-C 6烷基；鹵素；或-CN， R 6表示選自以下之基團： -X 2-O-R 7；及 伸雜芳基-R 7基團，其視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代， R 7表示選自以下之基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；(C 3-C 6)伸環烷基-R 8；或： 其中Cy表示C 3-C 8環烷基， R 8表示選自以下之基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；-NR' aR' b；-NR' a-CO-OR' c；-NR' a-CO-R' c；-N +R' aR' bR' c；-O-R' c；-NH-X' 2-N +R' aR' bR' c；-O-X' 2-NR' aR' b；-X' 2-NR' aR' b；-NR' c-X' 2-N 3；及： ， R 10表示選自以下之基團：氫、氟、氯、溴、-CF 3及甲基， R 11表示選自以下之基團：氫、C 1-C 3伸烷基-R 8、-O-C 1-C 3伸烷基-R 8、-CO-NR hR i及-CH=CH-C 1-C 4伸烷基-NR hR i、-CH=CH-CHO、C 3-C 8伸環烷基-CH 2-R 8、C 3-C 8伸雜環烷基-CH 2-R 8， R 12及R 13彼此獨立地表示氫原子或甲基， R 14及R 15彼此獨立地表示氫或甲基，或R 14及R 15與攜帶其之碳原子一起形成環己基， R h及R i彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， X 1及X 2彼此獨立地表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基，其視情況經一或兩個選自以下之基團取代：三氟甲基、羥基、鹵素、C 1-C 6烷氧基， X' 2表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基， R' a及R' b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；雜環烷基；-SO 2-苯基，其中該苯基可經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基，其視情況經一個或兩個羥基或C 1-C 6烷氧基取代；C 1-C 6伸烷基-SO 2OH；C 1-C 6伸烷基-SO 2O -；C 1-C 6伸烷基-COOH；C 1-C 6伸烷基-PO(OH) 2；C 1-C 6伸烷基-NR' dR' e；C 1-C 6伸烷基-N +R' dR' eR' f；C 1-C 6伸烷基-O-C 1-C 6伸烷基-OH；C 1-C 6伸烷基-苯基，其中該苯基可經羥基或C 1-C 6烷氧基取代； 以下基團： 或R' a及R' b與攜帶其之氮原子一起形成環B 3； 或R' a、R' b及R' c與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， R' c、R' d、R' e、R' f彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， 或R' d及R' e與攜帶其之氮原子一起形成環B 4； 或R' d、R' e及R' f與攜帶其之氮原子一起形成橋接C 3-C 8雜環烷基， m=0、1或2， p=1、2、3或4， B 3及B 4彼此獨立地表示C 3-C 8雜環烷基，該基團可：(i)為單環或雙環基團，其中雙環基團包括稠合、橋接或螺環系統，(ii)除氮原子之外，亦可含有一個或兩個獨立地選自氧、硫及氮之雜原子，(iii)經一個或兩個選自以下之基團取代：氟、溴、氯、直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、羥基、-NH 2、側氧基或哌啶基。
  48. 如請求項47之抗體-藥物結合物，其中G係選自由以下組成之群：-C(O)OH、-C(O)OR G3、-C(O)NR G1R G2、-C(O)R G2、-NR G1C(O)R G2、-NR G1C(O)NR G1R G2、-OC(O)NR G1R G2、-NR G1C(O)OR G3、-C(=NOR G1)NR G1R G2、-NR G1C(=NCN)NR G1R G2、-NR G1S(O) 2NR G1R G2、-S(O) 2R G3、-S(O) 2NR G1R G2、-NR G1S(O) 2R G2、-NR G1C(=NR G2)NR G1R G2、-C(=S)NR G1R G2、-C(=NR G1)NR G1R G2、鹵素、-NO 2及-CN。
  49. 如請求項1至48中任一項之抗體-藥物結合物，其中 R 7表示選自以下之基團：直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；(C 3-C 6)伸環烷基-R 8；或： 其中Cy表示C 3-C 8環烷基。
  50. 如請求項1至48中任一項之抗體-藥物結合物，其中 R 7表示選自以下之基團： 。
  51. 如請求項1至41中任一項之抗體-藥物結合物，其中D包含式(IB)、(IC)、(IIB)或(IIC)化合物： ， 或前述任一者之鏡像異構物、非鏡像異構物及/或醫藥學上可接受之鹽，其中： 對於式(IB)或(IC)，R 3表示選自以下之基團：氫；直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；-X 1-NR aR b；-X 1-N +R aR bR c；及-X 1-O-R c； 對於式(IIB)或(IIC)，Z 1表示鍵，且R 3表示氫；或Z 1表示-O-，且R 3表示-X 1-NR aR b， R a及R b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；視情況經一或兩個羥基取代之直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；以及C 1-C 6伸烷基-SO 2O -， R c表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基 R 6表示-X 2-O-R 7，或視情況經直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基取代之伸雜芳基-R 7基團， R 7表示選自以下之基團： ， R 8表示選自以下之基團：-NR' aR' b；-O-X' 2-NR' aR' b；及-X' 2-NR' aR' b， R 10表示氟， R 12及R 13彼此獨立地表示氫原子或甲基， R 14及R 15彼此獨立地表示氫或甲基， X 1及X 2彼此獨立地表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基，其視情況經一或兩個選自以下之基團取代：三氟甲基、羥基、鹵素、C 1-C 6烷氧基， X' 2表示直鏈或分支鏈C 1-C 6伸烷基， R' a及R' b彼此獨立地表示選自以下之基團：氫；視情況經一或兩個羥基或C 1-C 6烷氧基取代之直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基；C 1-C 6伸烷基-NR' dR' e； 或R' a及R' b與攜帶其之氮原子一起形成環B 3， R' d、R' e彼此獨立地表示氫或直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基， B 3表示C 3-C 8雜環烷基，該基團可：(i)為單環或雙環基團，其中雙環基團包括稠合、橋接或螺環系統，(ii)除氮原子之外，亦可含有一或兩個獨立地選自氧及氮之雜原子，(iii)經一或兩個選自以下之基團取代：氟、溴、氯、直鏈或分支鏈C 1-C 6烷基、羥基及側氧基。
  52. 如請求項1至51中任一項之抗體-藥物結合物，其中R 7表示以下基團： 。
  53. 如請求項1至51中任一項之抗體-藥物結合物，其中R 7表示選自以下之基團： 。
  54. 如請求項42至53中任一項之抗體-藥物結合物，其中R 8表示選自以下之基團： ， 其中 表示連至該連接子之鍵。
  55. 如請求項42至54中任一項之抗體-藥物結合物，其中B 3表示選自以下之C 3-C 8雜環烷基：吡咯啶基、哌啶基、哌𠯤基、𠰌啉基、氮雜環庚烷基及4,4-二氟哌啶-1-基。
  56. 如請求項1至41中任一項之抗體-藥物結合物，其中D表示連接至L之以下之任一者： 或前述任一者之鏡像異構物、非鏡像異構物及/或醫藥學上可接受之鹽。
  57. 如請求項1至41中任一項之抗體-藥物結合物，其中D包含由選自表A2中之式表示之基團。
  58. 如請求項1至41中任一項之抗體-藥物結合物，其中-(L-D)由表B中之化合物或前述任一者之鏡像異構物、非鏡像異構物及/或醫藥學上可接受之鹽形成。
  59. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中：該抗MET抗體或其抗原結合片段包含至少兩個、三個、四個或五個選自由以下組成之群的CDR序列：HCDR1 SEQ ID NO: 5或SEQ ID NO: 11或SEQ ID NO: 39；HCDR2 SEQ ID NO: 6或SEQ ID NO: 12或SEQ ID NO: 40；HCDR3 SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 13或SEQ ID NO: 41；LCDR1 SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 14或SEQ ID NO: 42；LCDR2 SEQ ID NO: 9或SEQ ID NO: 15或SEQ ID NO: 43；及LCDR3 SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 16或SEQ ID NO: 44。
  60. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中：該抗MET抗體或其抗原結合片段包含至少兩個、三個、四個或五個選自由以下組成之群的CDR序列：HCDR1 SEQ ID NO: 5或SEQ ID NO: 11、HCDR2 SEQ ID NO: 6或SEQ ID NO: 12、HCDR3 SEQ ID NO: 7或SEQ ID NO: 13、LCDR1 SEQ ID NO: 8或SEQ ID NO: 14、LCDR2 SEQ ID NO: 9或SEQ ID NO: 15及LCDR3 SEQ ID NO: 10或SEQ ID NO: 16。
  61. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中：該抗Met抗體或其抗原結合片段包含如下三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR：由SEQ ID NO:5組成之重鏈CDR1 (HCDR1)、由SEQ ID NO:6組成之重鏈CDR2 (HCDR2)、由SEQ ID NO:7組成之重鏈CDR3 (HCDR3)；由SEQ ID NO:8組成之輕鏈CDR1 (LCDR1)、由SEQ ID NO:9組成之輕鏈CDR2 (LCDR2)及由SEQ ID NO:10組成之輕鏈CDR3 (LCDR3)。
  62. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中：該抗Met抗體或其抗原結合片段包含如下三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR：由SEQ ID NO:11組成之重鏈CDR1 (HCDR1)、由SEQ ID NO:12組成之重鏈CDR2 (HCDR2)、由SEQ ID NO:13組成之重鏈CDR3 (HCDR3)；由SEQ ID NO:14組成之輕鏈CDR1 (LCDR1)、由SEQ ID NO:15組成之輕鏈CDR2 (LCDR2)及由SEQ ID NO:16組成之輕鏈CDR3 (LCDR3)。
  63. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中：該抗Met抗體或其抗原結合片段包含如下三個重鏈CDR及三個輕鏈CDR：由SEQ ID NO:39組成之重鏈CDR1 (HCDR1)、由SEQ ID NO:40組成之重鏈CDR2 (HCDR2)、由SEQ ID NO:41組成之重鏈CDR3 (HCDR3)；由SEQ ID NO:42組成之輕鏈CDR1 (LCDR1)、由SEQ ID NO:43組成之輕鏈CDR2 (LCDR2)及由SEQ ID NO:44組成之輕鏈CDR3 (LCDR3)。
  64. 如請求項2至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中：該抗Met抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:1之重鏈可變區胺基酸序列及SEQ ID NO:2之輕鏈可變區胺基酸序列。
  65. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中：該抗Met抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:3之重鏈可變區胺基酸序列及SEQ ID NO:4之輕鏈可變區胺基酸序列。
  66. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中：該抗Met抗體或其抗原結合片段包含SEQ ID NO:37之重鏈可變區胺基酸序列及SEQ ID NO:38之輕鏈可變區胺基酸序列。
  67. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中：該抗Met抗體包含SEQ ID NO:17之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:17至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:18之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:18至少95%一致之序列。
  68. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中：該抗Met抗體包含SEQ ID NO:19之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:19至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:20之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:20至少95%一致之序列。
  69. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中：該抗Met抗體包含SEQ ID NO:21之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:21至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:22之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:22至少95%一致之序列。
  70. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中：該抗Met抗體包含SEQ ID NO:23之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:23至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:24之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:24至少95%一致之序列。
  71. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中：該抗Met抗體包含SEQ ID NO:45之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:45至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:46之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:46至少95%一致之序列。
  72. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中：該抗Met抗體包含SEQ ID NO:47之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:47至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:48之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:48至少95%一致之序列。
  73. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中： 該抗Met抗體或抗原結合片段為具有第一抗Met抗體9006及第二抗Met抗體9338或其抗原結合部分之結合特異性的雙特異性結合分子。
  74. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中： 該抗Met抗體或抗原結合片段為具有第一抗Met抗體9006及第二抗Met抗體8902或其抗原結合部分之結合特異性的雙特異性結合分子。
  75. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中： 該抗Met抗體或抗原結合片段為具有第一抗Met抗體9338及第二抗Met抗體8902或其抗原結合部分之結合特異性的雙特異性結合分子。
  76. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中： 該抗Met抗體或抗原結合片段為具有第一抗Met抗體9006及第二抗Met抗體之抗原結合部分或其抗原結合部分之結合特異性的雙特異性結合分子。
  77. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗Met抗體或抗原結合片段為具有第一抗Met抗體9338及第二抗體之抗原結合部分或其抗原結合部分之結合特異性的雙特異性結合分子。
  78. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗Met抗體或抗原結合片段為具有第一抗Met抗體8902及第二抗體之抗原結合部分或其抗原結合部分之結合特異性的雙特異性結合分子。
  79. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗Met抗體或抗原結合片段為雙特異性結合分子，其中該雙特異性結合分子包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3分別包含SEQ ID NO:5、6、7、8、9及10之胺基酸序列之抗體的抗原結合部分；及HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3分別包含SEQ ID NO:11、12、13、14、15及16之胺基酸序列之抗體的抗原結合部分。
  80. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗Met抗體或抗原結合片段為雙特異性結合分子，其中該雙特異性結合分子包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3分別包含SEQ ID NO:5、6、7、8、9及10之胺基酸序列之抗體的抗原結合部分；及HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3分別包含SEQ ID NO:39、40、41、42、43及44之胺基酸序列之抗體的抗原結合部分。
  81. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗Met抗體或抗原結合片段為雙特異性結合分子，其中該雙特異性結合分子包含HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3分別包含SEQ ID NO:11、12、13、14、15及16之胺基酸序列之抗體的抗原結合部分；及HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2及LCDR3分別包含SEQ ID NO:39、40、41、42、43及44之胺基酸序列之抗體的抗原結合部分。
  82. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗Met抗體或抗原結合片段為雙特異性結合分子，其中雙特異性結合分子包含：具有包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之重鏈可變域(VH)及包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列之輕鏈可變域(VL)的第一抗體之抗原結合部分，以及具有包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之重鏈可變域(VH)及包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列之輕鏈可變域(VL)的第二抗體之抗原結合部分。
  83. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗Met抗體或抗原結合片段為雙特異性結合分子，其中雙特異性結合分子包含：具有包含SEQ ID NO:1之胺基酸序列之重鏈可變域(VH)及包含SEQ ID NO:2之胺基酸序列之輕鏈可變域(VL)的第一抗體之抗原結合部分，以及具有包含SEQ ID NO:37之胺基酸序列之重鏈可變域(VH)及包含SEQ ID NO:38之胺基酸序列之輕鏈可變域(VL)的第二抗體之抗原結合部分。
  84. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗Met抗體或抗原結合片段為雙特異性結合分子，其中雙特異性結合分子包含：具有包含SEQ ID NO:3之胺基酸序列之重鏈可變域(VH)及包含SEQ ID NO:4之胺基酸序列之輕鏈可變域(VL)的第一抗體之抗原結合部分，以及具有包含SEQ ID NO:37之胺基酸序列之重鏈可變域(VH)及包含SEQ ID NO:38之胺基酸序列之輕鏈可變域(VL)的第二抗體之抗原結合部分。
  85. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗Met抗體或抗原結合片段為雙特異性結合分子，其中雙特異性結合分子包含具有SEQ ID NO:25之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:25至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:26之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:26至少95%一致之序列的第一抗體，以及具有SEQ ID NO:27之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:27至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:28之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:28至少95%一致之序列的第二抗體之抗原結合部分。
  86. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗Met抗體或抗原結合片段為雙特異性結合分子，其中雙特異性結合分子包含具有SEQ ID NO:17之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:17至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:18之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:18至少95%一致之序列的第一抗體，以及具有SEQ ID NO:45之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:45至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:46之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:46至少95%一致之序列的第二抗體之抗原結合部分。
  87. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗Met抗體或抗原結合片段為雙特異性結合分子，其中雙特異性結合分子包含具有SEQ ID NO:19之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:19至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:20之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:20至少95%一致之序列的第一抗體，以及具有SEQ ID NO:45之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:45至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:46之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:46至少95%一致之序列的第二抗體之抗原結合部分。
  88. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗Met抗體或抗原結合片段為雙特異性結合分子，其中雙特異性結合分子包含具有SEQ ID NO:21之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:21至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:22之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:22至少95%一致之序列的第一抗體，以及具有SEQ ID NO:23之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:23至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:24之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:24至少95%一致之序列的第二抗體之抗原結合部分。
  89. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗Met抗體或抗原結合片段為雙特異性結合分子，其中雙特異性結合分子包含具有SEQ ID NO:21之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:21至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:22之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:22至少95%一致之序列的第一抗體，以及具有SEQ ID NO:47之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:47至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:48之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:48至少95%一致之序列的第二抗體之抗原結合部分。
  90. 如請求項1至58中任一項之抗體-藥物結合物，其中該抗Met抗體或抗原結合片段為雙特異性結合分子，其中雙特異性結合分子包含具有SEQ ID NO:23之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:23至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:24之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:24至少95%一致之序列的第一抗體，以及具有SEQ ID NO:47之重鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:47至少95%一致之序列，及SEQ ID NO:48之輕鏈胺基酸序列或與SEQ ID NO:48至少95%一致之序列的第二抗體之抗原結合部分。
  91. 一種組合物，其包含如請求項1至90中任一項之抗體-藥物結合物之多個複本，其中該組合物中之該抗體-藥物結合物之平均 p為約2至約16，例如約2至約8，例如約2至約4。
  92. 一種醫藥組合物，其包含如請求項1至90中任一項之抗體-藥物結合物或如請求項91之組合物及醫藥學上可接受之載劑。
  93. 一種治療患有或疑似患有癌症之個體之方法，其包含向該個體投與治療有效量之如請求項1至90中任一項之抗體-藥物結合物、如請求項91之組合物或如請求項92之醫藥組合物。
  94. 如請求項93之方法，其中該癌症表現MET。
  95. 如請求項93或94之方法，其中該癌症為腫瘤或血液學癌症，視情況，其中該癌症為黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌、胸腺瘤、多發性骨髓瘤、漿細胞骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性骨髓白血病、骨髓癌、慢性淋巴球性白血病、包括急性淋巴母細胞白血病之淋巴母細胞白血病、濾泡性淋巴瘤、T細胞或B細胞起源之淋巴惡性腫瘤、骨髓性白血病或骨髓瘤。
  96. 一種減少或抑制個體之腫瘤生長之方法，其包含向該個體投與治療有效量之如請求項1至90中任一項之抗體-藥物結合物、如請求項91之組合物或如請求項92之醫藥組合物。
  97. 如請求項96之方法，其中該腫瘤表現MET。
  98. 如請求項96或97之方法，其中該腫瘤為黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌或胸腺瘤。
  99. 一種減少或抑制個體之血液學癌症之方法，其包含向該個體投與治療有效量之如請求項1至90中任一項之抗體-藥物結合物、如請求項91之組合物或如請求項92之醫藥組合物。
  100. 如請求項99之方法，其中該血液學癌症表現MET。
  101. 如請求項99或100之方法，其中該血液學癌症為慢性淋巴球性白血病(CLL)、濾泡性淋巴瘤、套細胞淋巴瘤、瀰漫性大B細胞淋巴瘤、急性淋巴母細胞白血病(ALL)、急性骨髓白血病(AML)、慢性淋巴球性白血病(CLL)、慢性骨髓性白血病(CML)、慢性骨髓單核球性白血病(CMML)、急性單核球性白血病(AMoL)、霍奇金氏淋巴瘤(Hodgkin's lymphoma)、非霍奇金氏淋巴瘤，或骨髓發育不良症候群(MDS)。
  102. 如請求項96至101中任一項之方法，其中投與該抗體-藥物結合物、組合物或醫藥組合物使該腫瘤或血液學癌症之生長減少或抑制至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%。
  103. 一種減少個體之癌細胞群體或減慢個體之癌細胞群體擴增的方法，其包含向該個體投與治療有效量之如請求項1至90中任一項之抗體-藥物結合物、如請求項91之組合物或如請求項92之醫藥組合物。
  104. 如請求項103之方法，其中該癌細胞群體表現MET。
  105. 如請求項103或104之方法，其中該癌細胞群體來自腫瘤或血液學癌症，視情況，其中該癌細胞群體來自黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌、胸腺瘤、多發性骨髓瘤、漿細胞骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性骨髓白血病、骨髓癌、慢性淋巴球性白血病、包括急性淋巴母細胞白血病之淋巴母細胞白血病、濾泡性淋巴瘤、T細胞或B細胞起源之淋巴惡性腫瘤、骨髓性白血病，或骨髓瘤。
  106. 如請求項103至105中任一項之方法，其中投與該抗體-藥物結合物、組合物或醫藥組合物將該癌細胞群體減少或將該癌細胞群體擴增減慢至少約10%、至少約20%、至少約30%、至少約40%、至少約50%、至少約60%、至少約70%、至少約80%、至少約90%、至少約95%或至少約99%。
  107. 如請求項93至106中任一項之方法，其中該抗體-藥物結合物以單藥療法投與。
  108. 如請求項93至106中任一項之方法，其中該抗體-藥物結合物對另一治療劑或放射療法輔助投與。
  109. 如請求項108之方法，其中該抗體-藥物結合物係以有效使腫瘤細胞對一或多種另外治療劑及/或放射療法敏感之量投與。
  110. 如請求項93至106中任一項之方法，其進一步包含向有需要個體投與至少一種另外治療劑。
  111. 如請求項110之方法，其中該一種另外治療劑為Bcl-2抑制劑、Mcl-1抑制劑、紫杉烷、長春花生物鹼、MEK抑制劑、ERK抑制劑、拓樸異構酶抑制劑、核苷類似物、抗有絲分裂藥物、RAF抑制劑、c-MET抑制劑或EGFR-酪胺酸激酶抑制劑。
  112. 如請求項110之方法，其中該一種另外治療劑係選自維奈托克(venetoclax)、化合物A2、長春新鹼(vincristine)、拓朴替康(topotecan)、多西他賽(docetaxel)、紫杉醇(paclitaxel)、LTT463、曲美替尼(trametinib)、吉西他濱(gemcitabine)、單甲基奧瑞他汀E (monomethyl auristatin E)、包含單甲基奧瑞他汀E之抗體-藥物結合物、LXH254及奧希替尼(osimertinib)。
  113. 如請求項112之方法，其中該一種另外治療劑為包含單甲基奧瑞他汀E之抗體-藥物結合物。
  114. 如請求項113之方法，其中該一種另外治療劑由以下結構表示： ，其中Ab為抗MET抗體。
  115. 如請求項110之方法，其中該一種另外治療劑為如請求項1至90中任一項之第二抗體-藥物結合物。
  116. 一種抑制表現Bcl-xL之細胞中之Bcl-xL活性的方法，其包含使該細胞與能夠結合該細胞的如請求項1至90中任一項之抗體-藥物結合物在該抗體藥物結合物結合該細胞之條件下接觸。
  117. 一種確定患有或疑似患有癌症之個體是否會對用如請求項1至90中任一項之抗體-藥物結合物、如請求項91之組合物或如請求項92之醫藥組合物之治療有反應的方法，其包含提供來自該個體之生物樣品；使該樣品與該抗體-藥物結合物接觸；及偵測該樣品中該抗體-藥物結合物與癌細胞之結合。
  118. 如請求項117之方法，其中該樣品中之癌細胞表現MET。
  119. 如請求項117或請求項118之方法，其中該癌症表現MET。
  120. 如請求項117至119中任一項之方法，其中該癌症為腫瘤或血液學癌症，視情況，其中該癌症為黑色素瘤、葡萄膜黑色素瘤、包括乳頭狀腎細胞癌之腎癌、甲狀腺癌、間皮瘤、肝細胞癌、包括非小細胞肺癌及小細胞肺癌之肺癌、包括胃癌之胃部癌、胰臟癌、大腸直腸癌、食道癌、膽管癌、包括口腔癌之頭頸癌、子宮頸癌及子宮頸內癌、膀胱癌及尿道上皮癌、子宮癌、卵巢癌、乳癌、前列腺癌、肉瘤、睾丸癌、神經膠母細胞瘤、腎上腺皮質癌、腦癌、脾癌、胸腺瘤、多發性骨髓瘤、漿細胞骨髓瘤、白血病、淋巴瘤、急性骨髓白血病、骨髓癌、慢性淋巴球性白血病、包括急性淋巴母細胞白血病之淋巴母細胞白血病、濾泡性淋巴瘤、T細胞或B細胞起源之淋巴惡性腫瘤、骨髓性白血病，或骨髓瘤。
  121. 如請求項117至120中任一項之方法，其中該樣品為組織切片(biopsy)樣品、血液樣品或骨髓樣品。
  122. 一種產生如請求項1至90中任一項之抗體-藥物結合物之方法，其包含使抗Met抗體或抗原結合片段與接合至Bcl-xL抑制劑之可裂解連接子在允許結合之條件下反應。
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