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CN101987868B - Glp-1类似物的衍生物或其可药用盐和用途 - Google Patents

Glp-1类似物的衍生物或其可药用盐和用途 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种含有氨基酸序列为通式(I)的GLP-1类似物的衍生物或其可药用盐。本发明提供的GLP-1类似物的衍生物具有人GLP-1的功能，并且与人GLP-1相比在体内具有更长时间的半衰期。本发明提供的GLP-1类似物的衍生物或其可药用盐或含有GLP-1类似物的衍生物或其可药用盐的药物组合物可在治疗非胰岛素依赖性糖尿病、胰岛素依赖性糖尿病、肥胖症中广泛应用。X1-X2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X10-Ser-X12-X13-X14-Glu-X16-X17-Ala-X19-X20-X21-Phe-Ile-X24-Trp-Leu-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-X34-X35-X36-X37-X38-X39-Lys(I)。

Description

GLP-1类似物的衍生物或其可药用盐和用途
技术领域
本发明涉及人胰高血糖素样肽-1(GLP-1)类似物的衍生物或其可药用盐，本发明提供的GLP-1类似物的衍生物具有人GLP-1的功能，并且与人GLP-1相比在体内具有更长时间的半衰期。本发明还涉及GLP-1类似物的衍生物或其可药用盐或含有GLP-1类似物的衍生物或其可药用盐的药物组合物用于治疗非胰岛素依赖性糖尿病、胰岛素依赖性糖尿病、肥胖症的用途。
背景技术
糖尿病是一种全球性流行病，是由于体内胰岛素绝对或相对不足而导致的葡萄糖、蛋白质、脂质代谢紊乱的综合症(陈睿杰.糖尿病治疗药物的研究现状.广东药学院学报，2001，7(2)：131-133)，根据发病机理可分为I型和II型糖尿病(Type 2 diabetes mellitus，T2DM，下同)。在所有确诊的糖尿病患者中，90-95％病人患有T2DM，并且病人往往伴随着肥胖、体能活动不足(physical inactivity)、年龄偏大、家族糖尿病史、葡萄糖代谢损伤以及有家族糖尿病史等。T2DM也是一种进行性疾病(progressive disease)。2000年，世界卫生组织统计数据估计全球约有1.71亿人患有糖尿病；2005年，美国疾病控制和预防中心(Centersfor Disease对照and Prevention)估计约有0.208亿美国人患有糖尿病，约占美国人口的7％；2006年据国际糖尿病联盟统计，全球糖尿病患病人数约为2.46亿(约占全球总人口的5.9％)并且46％的患者年龄在40-59岁之间。研究表明，正常人和T2DM患者对葡萄糖反应有着非常重要的区别。正常人在饭后对血糖升高的反应属于早期胰岛素反应(earlyinsulin response)。
T2DM特征是胰岛素抑制和胰腺β-细胞功能损伤，导致胰岛素缺乏和高血糖(Ferrannini E.Insulin resistance versus insulin deficiency innon-insulin-dependent diabetes mellitus：problems and prospects.EndocrRev.1998，19(4)：477-490)。T2DM病人一般会出现饭后以及空腹高血糖(空腹血糖＞125mg/dL)，而高血糖主要是由于胰腺β-细胞不能分泌足够的胰岛素来补偿周边组织中的胰岛素抑制造成的(Weyer C.，Bogardus C.，Mott DM.，et al.The natural history of insulin secretorydysfunction and insulin resistance in the pathogenesis of type 2 diabetesmellitus.J.Clin.Invest.1999，104(6)：787-794)。
T2DM的主要危险因素是肥胖，它对人类健康具有非常大的危害。患者患上心血管疾病和非正常死亡的危险会变大，同时T2DM往往与其它一些高危险性疾病如高血压、血脂障碍和肥胖等同时存在；60％的T2DM病人伴随着微血管并发症者包括视网膜病(retinopathy)和神经病变(neuropathy)以及与T2DM有关的心血管病状(cardiovascularmorbidities)如冠状动脉心脏病、心肌梗塞和休克等。在美国，心血管疾病(cardiovascular disease，CVD)是导致发病和死亡的主要因素，而II型糖尿病是大血管(macrovascular)并发症如动脉粥样硬化(atherosclerosis)、心肌梗塞(myocardial infarction)、休克和外周血管病的发生的主要危险因素(major risk factor)。患糖尿病的成人发生心脏病和休克导致死亡的机率是非糖尿病人的2-4倍，此外，接近65％的糖尿病人死于心脏病和休克。
除了对患者生理和身体的伤害之外，T2DM还会给社会造成很大的经济负担，据统计，在美国每年用于治疗糖尿病并发症的费用大约229亿美元，每年用于T2DM及其并发症的总费用接近571亿美元，不列入预算的花费总额超过80亿美元。
T2DM治疗药物向来是人们关注的焦点，从早期的磺酰类、双胍类口服降糖药物到近期的胰岛素增敏剂和α-糖苷酶抑制剂，从动物胰岛素到人胰岛素及各种新剂型的开发，从单纯的增加胰岛素出发的药物治疗机理到作用于更早产生胰岛素的新途径。体重增加是这类口服或注射降糖药用药后常见的不良反应，这一点可能降低依从性，并且可能增加发生心血管病的风险。因此开发安全性高，病人顺从性好，不良反应低的新型T2DM治疗药物成为众多研究机构和制药企业争相研制的热点。
早在100多年前，Moore就提出十二指肠能分泌刺激胰腺分泌的“化学兴奋剂”，并试图注射肠道提取物来治疗糖尿病。随后发现肠道分泌的体液因子能增强胰腺的内分泌功能，无论静脉还是口服葡萄糖所引发的胰岛素分泌，约50％源于肠道所产生的肽类的刺激作用，为此Zunz和Labarre提出“肠降血糖素(incretin)”的概念。至今已分离出2种肠降血糖素，即葡萄糖依赖性胰岛素释放肽(glucose-dependent insulinotropicpolypeptide，GIP)和胰高血糖素样肽-1(glucagon-like peptide-1，GLP-1)。GIP和GLP-1都是在营养吸收时由特定的肠神经分泌细胞分泌，其中GIP由十二指肠和邻近空肠K细胞(proximal jejunal K cells)分泌，GLP-1则在L细胞中合成且主要存在于远端小肠和结肠中(Drucker DJ.Enhancing incretin action for the treatment of type 2 diabetes.DiabetesCare.2003，26(10)：2929-2940)。
GLP-1在血浆中以GLP-1(7-37)和GLP-1(7-36)酰胺两种生物活性形式存在，这两个多肽仅有一个氨基酸差异，而且它们的生物作用和体内半衰期是相同的(Drucker DJ.Enhancing incretin action for thetreatment of type 2 diabetes.Diabetes Care.2003，26(10)：2929-2940)。
通常所说的GLP-1是对GLP-1(7-37)和GLP-1(7-36)酰胺的统称。GIP和GLP-1在胃肠道释放出来时会很快被体内的二肽基肽酶-IV(dipeptidyl peptidase-IV，DPP-IV)降解为没有活性的形式，从而使GIP和GLP-1在体内的半衰期非常低(GIP体内半衰期约5-7分钟，GLP-1体内半衰期约2分钟)(Drucker DJ.Enhancing incretin action forthe treatment of type 2 diabetes.Diabetes Care.2003，26(10)：2929-2940)。研究表明，大多数降解过程发生在GIP和GLP-1进入含有DPP-IV的血管时发生，少量没有被降解的GLP-1和GIP会进入胰腺并跟其结合位点结合而刺激β-细胞释放胰岛素。与磺酰脲(sulfonylureas)通过直接促进功能β-细胞释放胰岛素机制不同，肠促胰岛素效应大部分都是葡萄糖依赖型。此外，一些动物和人体体外试验表明GLP-1还具有α-细胞抑制和降低胰高血糖素过度分泌(glucagon hypersecretion)等作用。
虽然T2DM患者体内血浆GIP水平是正常但其肠促胰岛素作用显著下降或丧失，而GLP-1在T2DM患者体内水平则是降低，因此研究基于GLP-1的药物更有助于治疗T2DM。虽然饭后几分钟内GLP-1(7-37)和GLP-1(7-36)酰胺水平均会提高，GLP-1(7-36)酰胺含量更多些，因此内分泌和神经信号传递的双重作用可能在被消化的食物从消化道下端进入小肠和结肠前已经大大提高了GLP-1的分泌。空腹状态下血浆中GLP-1水平是很低的(约5-10pmol/L)，而在进食后其水平迅速增加(达到15-50pmol/L)。在DPP-IV和肾清除双重作用下，体内循环的GLP-1水平迅速降低，而其它的酶如人体中性肽链内切酶24.11(human neutralendopeptidase 24·11)等是否也对GLP-1活性的丧失起决定性的作用的研究工作正在进行中。由于GLP-1在2位氨基酸是丙氨酸是DPP-IV的良好的底物，更容易降解为无活性的肽段。实际上，体内DPP-IV才是肠促胰岛素活性丧失的主要原因，实验表明DPP-IV基因被沉默的小鼠体内GLP-1水平显著提高，增加了胰岛素的分泌。正是在DPP-IV作用下，体内完整且具有生物活性的GLP-1仅仅为血浆GLP-1总含量的10-20％(Deacon CF，Nauck MA，Toft-Nielsen M，et al.Both subcutaneously andintravenously administered glucagon-like peptide 1 are rapidly degradedfrom the NH2-terminus in type 2-diabetic patients and in healthy subjects.Diabetes.1995，44(9)：1126-1131)。
GLP-1和GIP通过与结构完全不同的G-蛋白偶联受体(G-protein-coupled receptors，GPCRs)结合而发挥各自作用。GIP受体大部分是由胰岛β-细胞表达，少部分在脂肪组织和中枢神经系统表达。与此相反，GLP-1受体则主要是在胰岛α-和β-细胞以及周缘组织包括中枢和周围神经系统、脑、肾、肺和胃肠道等中表达。两个肠促胰岛素在β-细胞中的激活会导致cAMP和胞内钙水平的迅速增加，从而导致其以葡萄糖依赖方式向胞外分泌，持续的肠促胰岛素受体信号传递跟蛋白激酶A相关，会导致基因转录、增加胰岛素的生物合成并且刺激β-细胞的增殖(Gallwitz B.Glucagon-like peptide-1-based therapies forthe treatment of type 2 diabetes mellitus.Treat Endocrinol.2005，4(6)：361-370)。GLP-1和GIP受体的激活也可以抑制啮齿目动物和人类胰岛中β-细胞凋亡同时增加其存活率(Li Y，Hansotia T，Yusta B，et al.Glucagon-like peptide-1 receptor signaling modulates beta cell apoptosis.JBiol Chem.2003，278(1)：471-478)。与GLP-1受体表达相一致的是GLP-1也可以抑制胰高血糖素分泌、胃排空和食物摄入，同时通过神经机制(neural mechanism)增强对葡萄糖的降解。需要注意的是，跟其它胰岛素分泌反应相同，GLP-1对葡萄糖分泌的作用是胰高血糖素依赖性，而由于低血糖作用而引起反调节释放(counter-regulatory releaseof glucagon)的胰高血糖素作用即使在GLP-1药理学浓度下仍然得到了完全保留。
内源性GLP-1和GIP对于葡萄糖体内平衡中发挥的重要生理学作用已经在受体拮抗剂或基因敲除小鼠中进行了深入研究。急性GLP-1或GIP的拮抗作用减少了啮齿目动物体内胰岛素的分泌并且增加了血浆葡萄糖含量。同样，GIP或GLP-1受体失活突变小鼠同样有缺陷型葡萄糖刺激胰岛素分泌和损伤性葡萄糖耐受性。GLP-1还具有空腹血糖调节功能，因为GLP-1作用的急性拮抗或遗传破坏会导致啮齿目动物空腹葡萄糖水平的提高；同时，GLP-1是人体内葡萄糖控制的基础，对拮抗Exendin(9-39)的研究表明GLP-1作用被破坏后会造成缺陷性葡萄糖刺激胰岛素分泌(defective glucose-stimulated insulin secretion)、减少葡萄糖清除率、增加胰高血糖素水平和加快胃排空作用。此外，GLP-1的生理作用(Deacon CF.Therapeutic strategies based onglucagon-like peptide 1.Diabetes.2004，53(9)：2181-2189)还包括：(1)帮助组织血糖吸收，介导葡萄糖依赖型胰岛素分泌；(2)抑制餐后胰高血糖素分泌，降低肝糖释放；(3)调节胃排空，防止食物在肠道吸收时葡萄糖的过度循环；(4)抑制食物摄入(如食欲)。此外动物试验还表明GLP-1的一个生理学作用是稳定体内胰腺β-细胞数量。
因为GLP-1和GIP在控制血糖等多方面具有良好作用，特别是其不产生低血糖和延缓胃排空控制体重的特点引起了众多科学家的兴趣。人们开始尝试研究基于GLP-1和GIP药物用于治疗T2DM。众所周知，T2DM病人缺乏或丧失了肠促胰岛素效应，其中一个原因是T2DM病人体内GIP的肠促胰岛素作用大大减弱；同时，T2DM患者体内GLP-1水平很低，且因饮食刺激产生的的GLP-1水平显著减少(Toft-Nielsen MB，Damholt MB，Madsbad S，et al.Determinants of theimpaired secretion of glucagon-like peptide-1 in type 2 diabetic patients.JClin Endocrinol Metab.2001，86(8)：3717-3723)。因为T2DM患者体内GLP-1作用得到了部分保留，旨在增强T2DM患者体内肠促胰岛素效应的药物研究方向之一就是GLP-1增效剂。
GLP-1类似物与内源性GLP或GIP一样，可以以葡萄糖依赖型的方式刺激体内胰岛素的分泌，同时抑制胰高血糖素的体内释放。此外GLP-1类似物对以下症状具有作用：(1)低血糖。与其它促分泌药物不同，GLP-1类似物由于以一种葡萄糖依赖方式促进体内胰岛素分泌，因此其降血糖作用具有自限性，在大剂量时一般不会引起严重的低血糖。尽管有文献报告GLP-1可以将血糖降低到正常水平以下，但该效应短暂，而且被认为是GLP-1促胰岛素分泌作用的自然结果。由于胰岛素的灭活需要一定时间，因此当因血糖浓度降低，GLP-1的刺激作用减弱而没有新胰岛素分泌的时候，原有的胰岛素仍在起作用。总之，GLP-1可以使血糖暂时降低到正常水平之下，但不会引起严重和持久的低血糖。(2)对饱食和体重的作用。除了直接降低血糖之外，GLP-1还可以降低食物的摄入量，这在啮齿类动物和人身上都得到了验证。这样可以通过降低体重间接控制血糖水平。GLP-1还有潜在的抑制胃泌素和进食刺激的胃酸分泌的作用，这些效果表明GLP-1可能还具有预防消化道溃疡的作用。GLP-1的作用机制使其不但可以成为理想的2型糖尿病，还可以成为肥胖型糖尿病患者的治疗药物。GLP-1可以增强病人的饱食感、减少食物摄入和保持体重或减肥；(3)维持β-细胞健康。一些研究提示GLP-1可以预防由糖耐量异常到糖尿病的转化，还有一些文献报告了GLP-1类化合物对实验动物胰岛β细胞的生长和增殖具有直接的作用，而且有实验发现GLP-1可以促进胰腺干细胞向功能性β细胞的分化。这些结果暗示GLP-1具有保护胰岛及延缓糖尿病进展的功能，可以保持β-细胞的形态和功能，同时减少其凋亡；(4)对餐后高血糖的作用。这一现象代表了T2DM治疗的一种新方向。由于一些口服药物和外源胰岛素不能抑制或减少T2DM患者胰高血糖素的过高分泌，GLP-1类似物可以可能通过直接抑制胰高血糖素释放或因促进胰岛素分泌而产生的旁分泌抑制作用而对胰高血糖素高分泌产生影响。通过这两个机制可以有效减少餐后高血糖现象；同时，保持β-细胞功能也可能对长期控制餐后高血糖有作用。
同时GLP-1类似物是通过皮下注射服用，不需要计算碳水化全物的量来估计最佳的药物用量，也不需要对血糖进行自行监测，使这类药物的使用比胰岛素更加方便。
天然GLP-1多种功效的证实为2型糖尿病的治疗带来了新希望，但是，人体天然的GLP-1很不稳定，可被二肽基肽酶IV(DPP-IV)降解，半衰期仅为1～2分钟。若采用天然GLP-1来降低血糖，需持续静脉输注或持续皮下注射，临床可行性较差。面对这种情况，人们不断探索，希望能找到延长GLP-1作用时间的方法。因此开发长效的GLP-1类似物或其衍生物，成为医药界关注的重要领域。
Exenatide是合成的Exendin-4，由礼来公司和Amylin公司合作开发，商品名FDA和EMEA已经批准其上市，用于治疗T2DM。它在序列上与哺乳动物GLP-1有50％同源性且其与GLP-1受体亲和位点跟GLP-1相似(Drucker DJ，Nauck MA.The incretin system：glucagon-like peptide-1 receptor agonists and dipeptidyl peptidase-4inhibitors in type 2 diabetes.Lancet.2006，368(9548)：1696-1705)，由蜥蜴特有的基因编码；与GLP-1相比，Exenatide将GLP-1第2位丙氨酸替换成甘氨酸，有效的抑制了DPP-IV酶解，在体内半衰其约60-90分钟(Kolterman OG，Kim DD，Shen L，et al.Pharmacokinetics，pharmacodynamics，and safety of exenatide in patients with type 2 diabetesmelllitus.Am Health Syst Pharm.2005，62(2)：173-181)，单次皮下注射后Exenatide在体内浓度持续增加，2小时左右可以在血浆中达到最大浓度，可维持4-6小时(Nielsen LL，Baron AD.Pharmacology of exenatide(synthetic exendin-4)for the treatment of type 2 diabetes.Curr OpinInvestig Drugs.2003，4(4)：401-05)。需要注意的是Exenatide的代谢不发生在肝脏中，而主要经肾小球过滤后经蛋白酶降解。
Exenatide具有特殊的葡萄糖调节活性，包括葡萄糖依赖型增强胰岛素分泌作用、葡萄糖依赖型抑制不正确过高胰高血糖素分泌作用、减缓胃排空和减少食物摄入等作用。对体内和体外糖尿病模型研究还发现，Exenatide还具有储存第一阶段(first-phase)胰岛素分泌、促进β-细胞增殖和胰岛素从其前体细胞再生的作用。
为了达到较好的血糖控制，每天需要两次注射Exenatide，这给病人带来了很大的不便。再者Exenatide还具有轻微至中等反胃(约40％病人会有此反应)、腹泻和呕吐(少于15％的病人会有这两种反应)；Exenatide治疗的病人中约50％会产生抗体，虽然这些抗体不会影响药效或引起其它临床作用。最近又发现6例服用Byetta后发生出血或坏死性胰腺炎症状。
CJC-1131是ConjuChem Biotechnologies Inc开发的一种肽酶抑制型GLP-1类似物，将GLP-1序列中2位的Ala替换成了D-Ala，用以增强抵抗DPPIV酶解的能力，其结构中包含一个具有反应活性链接剂(reactivelinker)以便于其通过共价(非可逆)方式结合到血清白蛋白上(Kim JG，Baggio LL，Bridon DP，et al.Development and characterization of aglucagon-like peptide-1 albumin conjugate：the ability to activate theglucagon-like peptide 1 receptor in vivo.Diabetes.2003，52(3)：751-759)，产生的GLP-1-血清白蛋白复合物保留了GLP-1的活性，同时增加了对DPP-IV酶解稳定性，延长了体内作用时间，其血浆清除半衰期约20天。
已经进行的一项研究发现，CJC-1131-血清白蛋白复合物与用人类重组胰腺GLP-1受体转染的中国仓鼠卵巢细胞结合时Ki约为12nM(GLP-1的Ki为5.2nM)；同时该复合物活化cAMP的EC50为11-13nM，EC50与GLP-1相似。现有文献表明，该结合分子可以降低血糖正常和高血糖小鼠餐后血糖浓度，而且试验表明CJC-1131的这一活性作用于GLP-1某一功能性受体上，同时在小鼠中CJC-1131还具有减缓胃排空和抑制食物摄入等作用。
CJC-1131已经完成了部分II期临床试验。2005年9月，ConjuChem对已有的试验结果分析后认为CJC-1131可能不适合慢性剂量策略(chronic dosing regimens)，因而暂停了CJC-1131的临床研究。目前CJC-1131临床试验仍未重新启动。
Albugon(albumin-GLP-1)是由葛兰素史克在Human GenomeSciences Inc授权下开发的一种长效T2DM治疗药物，它是GLP-1(带增加对DDP-IV抗性的突变)和白蛋白的融合体。它在猴子体内的半衰期为3天。其基本的研发思路是将重组GLP-1与血清白蛋白偶联后形成的一个复合物，这样便显著增加了其体内半衰期。服用Albugon后有效降低了小鼠血糖水平、增加了胰岛素分泌、减缓了胃排空和减少食物摄入等作用(Baggio LL，Huang Q，Brown TJ，et al.A RecombinantHuman Glucagon-Like Peptide(GLP)-1-Albumin Protein(Albugon)Mimics Peptidergic Activation of GLP-1 Receptor-Dependent PathwaysCoupled With Satiety，Gastrointestinal Motility，and Glucose Homeostasis.Diabetes.2004，53(9)：2492-2500)。目前Albugon正在进行III期临床试验。
WO9808871公开了一种在GLP-1(7-37)的基础上进行脂肪酸修饰的GLP-1衍生物，使得GLP-1在体内的半衰期得到大大增强。WO9943705公开了一种在GLP-1的N端进行化学修饰的衍生物，但是有文献报道在N端的氨基酸进行修饰会造成整个GLP-1衍生物的活性大大降低(J.Med.Chem.2000，43，1664 1669)。另外CN200680006362、CN200680006474、WO2007113205、CN200480004658、CN200810152147、WO2006097538等专利也公开了一系列经化学修饰或氨基酸替换得到的GLP-1类似物或其衍生物，其中最具有代表性的是诺和诺德公司开发的liraglutide，已经完成了III期临床。Liraglutide是一种GLP-1衍生物，其结构中含有序列与人源GLP-1具有97％同源性的GLP-1类似物，该类似物与棕榈酸共价连接构成了Liraglutide[，Liraglutide结构中的棕榈酸以非共价形式连接到血清白蛋白上，这一结构特征决定了它会缓慢的从注射位点释放，在不改变其GLP-1活性基础上延长了体内循环半衰期；同时结构中的棕榈酸会形成一定空间位阻，从而防止DPP-IV的降解作用，减少了肾脏清除作用。由于具有以上特性，Liraglutide在通过皮下注射之后在人体内的半衰期约10-14小时，理论上可以一天给药一次，每天剂量为0.6-1.8mg。2009年4月23日，诺和诺德宣布EMEA下属的人用药物委员会(CHMP，Committee forMedicinal products for Human Use)对Liraglutide评价积极，并且建议批准其上市。诺和诺德期待欧盟委员会可以在两个月以内批准其上市申请。
发明内容
本发明的目的在于提供一种活性更高、体内半衰期更长的GLP-1类似物的衍生物，本发明提供的GLP-1类似物的衍生物具有人GLP-1的功能，并且与人GLP-1相比有着较长的体内半衰期。
本发明的另一目的在于提供一种含上述GLP-1类似物的衍生物或其可药用盐的药物组合物，用于治疗胰岛素依赖性糖尿病、非胰岛素依赖性糖尿病和肥胖病。
本发明的目的是通过以下技术方案来达到的。本发明提供一种含有氨基酸序列通式为(I)的GLP-1类似物的衍生物或其可药用盐，
X1-X2-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-X10-Ser-X12-X13-X14-Glu-X16-X1 7-Ala-X19-X20-X21-Phe-Ile-X24-Trp-Leu-X27-X28-X29-X30-X31-X32-X33-X34-X35-X36-X37-X38-X39-Lys
(I)
其中所述GLP-1类似物的衍生物具有一个结构通式为R1(CH2)n-CO-的亲脂性取代基，R1选自CH3-或者HOOC-，n为8-25之间的整数，X1、X2、X10、X12、X13、X14、X16、X17、X19、X20、X21、X24、X27、X28、X29、X30、X31、X32、X33、X34、X35、X36、X37、X38、X39各自独立的选自任意天然的氨基酸或非天然氨基酸或由其组成的肽段。
所述的GLP-1类似物是指以人GLP-1(7-37)肽为母体，包括GLP-1(7-36)酰胺和GLP-1(7-37)，进行部分氨基酸的替换或在C端的延伸得到新的GLP-1肽，该GLP-1肽具备人GLP-1的功能。
所述的衍生物是指利用亲脂性取代基对GLP-1类似物的氨基酸残基进行化学修饰，典型的修饰方式为形成酰胺或酯，优选的修饰方式为形成酰胺。
本发明的一个优选的实施方案是结构通式为R1(CH2)n-CO-的亲脂性取代基和GLP-1类似物的氨基酸残基的氨基通过酰胺键的方式连接，其中R1选自CH3-或者HOOC-，n为8-25之间的整数。
本方案的另一优选的实施方案是结构通式为R1(CH2)n-CO-的亲脂性取代基和GLP-1类似物C端Lys的ε氨基通过酰胺键的方式连接，其中R1选自CH3-或者HOOC-，n为8-25之间的整数。
本发明的另一优选的实施方案是结构通式为R1(CH2)n-CO-的亲脂性取代基和GLP-1类似物C端Lys的α氨基通过酰胺键的方式连接，其中R1选自CH3-或者HOOC-，n为8-25之间的整数，优选14。
本发明的另一优选的实施方案是GLP-1类似物的氨基酸序列中X1选自L-His、D-His；X2选自Ala、D-Ala、Gly、Val、Leu、Ile、Iys、Aib；X10选自Val、Leu；X12选自Ser、Lys、Arg；X13选自Tyr、Gln；X14选自Leu、Met；X16选自Gly、Glu、Aib；X17选自Gln、Glu、Lys、Arg；X19选自Ala、Val；X20选自Lys、Glu、Arg；X21选自Glu、Leu；X24选自Val、Lys；X27选自Val、Lys；X28选自Lys、Glu、Asn、Arg；X29选自Gly、Aib；X30选自Arg、Gly、Lys；X31选自Gly、Ala、Glu、Pro、Lys；X32选自Lys、Ser；X33选自Lys、Ser；X34选自Gly、Ala、Sar；X35选自Gly、Ala、Sar；X36选自Pro、Gly；X37选自Pro、Gly；X38选自Pro、Gly；X39选自Ser、Tyr。
更进一步的优选的实施方案是GLP-1类似物的氨基酸序列选自SEQ ID NO 1-120.
本发明的另一优选的实施方案是结构通式为R1(CH2)n-CO-的亲脂性取代基与选自SEQ ID No：1-120的GLP-1类似物的氨基酸残基的氨基通过酰胺键的方式连接，其中R1选自CH3-或者HOOC-，n为8-25之间的整数。
更进一步优选的实施方案是结构通式为R1(CH2)n-CO-的亲脂性取代基与选自SEQ ID No：1-120的GLP-1类似物的C端Lys的ε氨基通过酰胺键的方式连接，其中R1选自CH3-或者HOOC-，n为8-25之间的整数。
更进一步优选的实施方案是结构通式为R1(CH2)n-CO-的亲脂性取代基与选自SEQ ID No：1-120的GLP-1类似物的C端Lys的α氨基通过酰胺键的方式连接，其中R1选自CH3-或者HOOC-，n为8-25之间的整数，优选n为8、10、12、14、16、18、20或22，进一步优选n为14。
本发明的另一优选的实施方案是结构通式为R1(CH2)n-CO-的亲脂性取代基与选自SEQ ID No：1-20的GLP-1类似物的C端Lys的α氨基通过酰胺键的方式连接，其中R1选自CH3-或者HOOC-，n为8-25之间的整数，优选n为8、10、12、14、16、18、20或22，进一步优选n为14。
本发明的另一优选的实施方案是结构通式为R1(CH2)n-CO-的亲脂性取代基与选自SEQ ID No：1-4的GLP-1类似物的C端Lys的α氨基通过酰胺键的方式连接，其中R1选自CH3-，n为14。
本发明提供的GLP-1类似物的衍生物属于两性化合物，所属领域技术人员通过公知技术可使用酸性或碱性化合物与之反应成盐，通常采用的形成酸加成盐的酸为：
盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸、对甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、对溴苯基磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸、乙酸；盐包括硫酸盐、焦硫酸盐、三氟乙酸盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、盐酸盐、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐、辛二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、苯乙酸盐、苯丙酸盐、苯丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、甘醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、奈-1-磺酸盐、奈-2-磺酸盐、扁桃酸盐等，优选三氟乙酸盐。碱性物质也可以和GLP-1类似物的衍生物成盐，这些碱性物质包括铵，碱金属或碱土金属的氢氧化物，以及碳酸盐、碳酸氢盐，典型的有氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、碳酸钠、碳酸钾等。
根据本发明含有GLP-1衍生物的药物组合物可以通过胃肠外给药的方式用于治疗需要这种治疗的病人。胃肠外给药途径可选择皮下注射、肌肉注射或静脉注射。本发明的GLP-1衍生物还可以选择透皮途径给药，如经贴剂头皮给药，可选择离子透入贴剂；或经透粘膜途径给药。
本发明提供的GLP-1衍生物的组合物可以使用制药工业常规的技术制备，这些技术包括适当的溶解和混合各组分以得到所需的最终组合物。比如将GLP-1衍生物溶解于一定量的水中，其中水的量稍小于所制备的组合物的最终体积。按需要加入等渗剂、防腐剂、表面活性剂和缓冲剂，等渗剂例如氯化钠、甘露醇、甘油、丙二醇、糖或糖醇。防腐剂例如苯酚、邻甲酚、对甲酚、间甲酚、甲基对羟基苯甲酸酯、苄醇。适宜的缓冲剂如乙酸钠、碳酸钠、甘氨酸、组氨酸、赖氨酸、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、磷酸钠，表面活性剂如泊络沙姆、泊络沙姆-188、泊络沙姆-407、吐温-80、吐温-20。并在需要时用酸如盐酸、或碱如氢氧化钠水溶液调节溶液的PH值，最后用水调节溶液体积得到所需的组分浓度。除上述成分外，本发明提供的药物组合物还包括足够量的碱性氨基酸或具有相同作用的碱性试剂用以减少组合物在贮存过程中形成的聚集体，比如赖氨酸、组氨酸、精氨酸、咪唑。
本发明提供的GLP-1类似物的衍生物采用手工合成的方法，树脂为HM A-AM resin，所用的氨基酸衍生物的α氨基由Fmoc(芴甲酰羰基)保护，半胱氨酸侧链巯基、谷胺酰胺侧链氨基、组氨酸侧链咪唑基由Trt(三苯甲基)保护、精氨酸侧链胍基由Pbf(2，2，4，6，7-五甲基二氢化苯并呋喃-5-磺酰基)保护，色氨酸侧链吲哚基、赖氨酸侧链氨基由Boc(叔丁氧羰基)保护，苏氨酸侧链羟基、酪氨酸侧链苯酚基、丝氨酸侧链羟基由tBu(叔丁基)保护。将所要合成促红细胞生成素模拟肽衍生物单体肽肽链的C末端氨基酸的羧基以共价键的结构同高分子的不溶性树脂(rink amind resin)相连，然后以此结合在固相载体上的氨基酸作为氨基组份经过20％六氢吡啶/DMF溶液脱去氨基保护基，然后和过量的氨基酸衍生物反应，接长肽链。重复(缩合→洗涤→去保护→洗涤→下一轮缩合)操作，达到所要合成的肽链长度，最后用三氟乙酸∶水∶乙二硫醇、三异丙基硅烷＝92.5∶2.5∶2.5∶2.5混合溶液将肽链从树脂上裂解下来，经乙醚沉降得到GLP-1类似物的衍生物粗品，单体肽粗品使用C18反相制备柱分离纯化，即得所要的GLP-1类似物的衍生物。其中缩合和去保护反应步骤的中间控制采取的是茚三酮检测的方法，即当树脂肽链上有游离的氨基时，经茚三酮试剂检测会显蓝色，没有游离氨基时不显色(茚三酮试剂本身为黄色)。因此在进行缩合反应完毕后，通过茚三酮检测，如果显黄色(茚三酮试剂本身的颜色)，则说明本步偶合完毕可以进行下一个氨基酸的偶合前的脱保护操作，如果显蓝色，则证明肽链上还有些游离氨基，需进一步的重复偶合或改变现有的缩合剂直至树脂肽经茚三酮检测为黄色。
具体实施方式
为了更详细地说明本发明，给出下列实例。但本发明的范围并非限定于此。
实施例1 HS-20001的固相合成方法
(1)固相合成树脂的干燥及溶胀
称量真空干燥24小时的Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM树脂(0.4mmol/g)50g(20mmol)置于2L鼓泡瓶中，加入500mL N，N-二甲基甲酰胺(DMF)溶胀树脂30分钟，抽掉DMF溶液；
(2)Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM树脂脱除4-甲基三苯甲基(Mtt)保护基
用200mL DCM洗涤树脂，重复一次，加入1200mL1％TFA/DCM(TFA约8倍过量)脱除Mtt保护基，反应时间30分钟，用200mL 5％N，N-二异丙基乙胺(DIEA)/DMF和DMF交叉洗涤3次，DMF洗涤三次。
(3)棕榈酸的缩合
称量棕榈酸和3-(二乙氧基磷酰氧基)-1，2，3-苯并三嗪-4-酮(DEPBT)各50mmol，加入400mLDMF溶解，再加入100mmol DIEA室温下搅拌反应3分钟，将上述溶液加入到树脂中，37度水浴下通入N2反应2小时。反应结束后抽掉反应液，依次用DMF、异丙醇(IPA)和DMF洗涤树脂。
(4)Fmoc-Lys(N-ε-棕榈酸)-HMPA-AM树脂脱除9-芴甲氧羰基(Fmoc)保护基
向装有Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM树脂的鼓泡瓶中加入200mL20％哌啶/DMF溶液，反应5分钟后抽出，再加入200mL 20％哌啶/DMF溶液室温反应20分钟。反应结束后用DMF 200mL洗涤树脂四次。
(5)HS-20001肽链部分的固相合成
①缩合Fmoc-Ser(tBu)-OH
称量50mmol Fmoc-Ser(tBu)-OH，加入125mL 0.4M 1-羟基苯并三氮唑(HOBt)/DMF溶解，再加入125mL 0.4M N，N′-二异丙基碳二亚胺(DIC)/DCM室温下活化反应10分钟；将上述溶液加入到树脂中，室温下通入N2反应，采用茚三酮检测中控反应进行程度。反应结束后抽掉反应液，依次用DMF、IPA和DMF洗涤树脂。
②肽链的延长
按照HS-20001肽链部分从氨基端(N-端)到羧基端(C-端)的顺序(His-(D)-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Nle-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Gln-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser)，氨基酸和缩合试剂的用量和Fmoc-Ser(tBu)-OH相同，保护氨基酸分别是Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Nle-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-D-Ala-OH和Fmoc-His(Trt)-OH，重复缩合和脱保护两步反应，合成HS-20001树脂肽。
③HS-20001树脂肽的后处理
将②所得到的HS-20001树脂肽依次用DMF、IPA和DMF洗涤树脂，用无水乙醚洗涤两次后真空干燥，得HS-20001树脂肽。
④HS-20001粗品肽的制备
取干燥后的HS-20001树脂肽，加入新鲜配制的10mL/(g树脂肽)的三氟乙酸(TFA)∶三异丙基硅烷(TIS)∶水＝95∶2.5∶2.5(体积比)的裂解液，室温下反应4小时。反应结束后过滤，用TFA洗涤树脂二次，收集并合并滤液，旋转蒸发至原体积的1/3，搅拌下加入到大量冰无水乙醚析出HS-20001，离心后真空干燥得白色HS-2000l粗品。
⑤HS-20001的反相液相色谱制备
取HS-20001粗品10g溶于一定量水中，后经0.45μm膜过滤后用反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行分离，流动相为A 0.1％TFA/H2O，B0.1％TFA/乙腈，
其中，色谱柱为Denali C-18柱(粒径8.3μm，5×30cm)，柱温45度，检测波长220nm，流速120mL/min。收集产物峰，减压浓缩除去大部分乙腈后冻干得HS-20001成品2.25g，纯度98.5％，收率22.5％。
实施例2 HS-20002的固相合成方法
(1)固相合成树脂的干燥及溶胀
称量真空干燥24小时的Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM树脂(0.4mmol/g)50g(20mmol)置于2L鼓泡瓶中，加入500mL DMF溶胀树脂30分钟，抽掉DMF溶液；
(2)Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM树脂脱除Mtt保护基
用200mL DCM洗涤树脂，重复一次，加入1200mL1％TFA/DCM(TFA约8倍过量)脱除Mtt保护基，反应时间30分钟，用200mL 5％DIEA/DMF和DMF交叉洗涤3次，DMF洗涤三次。
(3)棕榈酸的缩合
称量棕榈酸和DEPBT各50mmol，加入400mLDMF溶解，再加入100mmol DIEA室温下搅拌反应3分钟，将上述溶液加入到树脂中，37度水浴下通入N2反应2小时。反应结束后抽掉反应液，依次用DMF、IPA和DMF洗涤树脂。
(4)Fmoc-Lys(N-ε-棕榈酸)-HMPA-AM树脂脱除Fmoc保护基
向装有Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM树脂的鼓泡瓶中加入200mL20％哌啶/DMF溶液，反应5分钟后抽出，再加入200mL 20％哌啶/DMF溶液室温反应20分钟。反应结束后用DMF 200mL洗涤树脂四次。
(5)HS-20002肽链部分的固相合成
①缩合Fmoc-Ser(tBu)-OH
称量50mmol Fmoc-Ser(tBu)-OH，加入125mL 0.4M HOBt/DMF溶解，再加入125mL 0.4M DIC/DCM室温下活化反应10分钟；将上述溶液加入到树脂中，室温下通入N2反应，采用茚三酮检测中控反应进行程度。反应结束后抽掉反应液，依次用DMF、IPA和DMF洗涤树脂。
②肽链的延长
按照HS-20002肽链部分从氨基端(N-端)到羧基端(C-端)的顺序(His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Lys-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser)，氨基酸和缩合试剂的用量和Fmoc-Ser(tBu)-OH相同，保护氨基酸分别是Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Met-OH、Fmoc-Gln(Trt)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH和Fmoc-His(Trt)-OH，重复缩合和脱保护两步反应，合成HS-20002树脂肽。
③HS-20002树脂肽的后处理
将②所得到的HS-20002树脂肽依次用DMF、IPA和DMF洗涤树脂，用无水乙醚洗涤两次后真空干燥，得HS-20002树脂肽。
④HS-20002粗品肽的制备
取干燥后的HS-20002树脂肽，加入新鲜配制的10mL/(g树脂肽)的TFA∶TIS∶水∶1，2-乙二硫醇(EDT)＝94∶1∶2.5∶2.5(体积比)的裂解液，室温下反应4小时。反应结束后过滤，用TFA洗涤树脂二次，收集并合并滤液，旋转蒸发至原体积的1/3，搅拌下加入到大量冰无水乙醚析出HS-20002，离心后真空干燥得白色HS-20002粗品。
⑤HS-20002的反相液相色谱制备
取HS-20002粗品10g溶于一定量的水中，后经0.45μm膜过滤后用反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行分离，流动相为A0.1％TFA/H2O，B0.1％TFA/乙腈，其中，色谱柱为Denali C-18柱(粒径8.3μm，5×30cm)，柱温45度，检测波长220nm，流速120mL/min。收集产物峰，减压浓缩除去大部分乙腈后冻干得HS-20002成品2.1g，纯度98.％，收率20.5％。
实施例3 HS-20003的固相合成方法
(1)固相合成树脂的干燥及溶胀
称量真空干燥24小时的Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM树脂(0.4mmol/g)50g(20mmol)置于2L鼓泡瓶中，加入500mLDMF溶胀树脂30分钟，抽掉DMF溶液；
(2)Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM树脂脱除Fmoc保护基
向装有Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM树脂的鼓泡瓶中加入200mL20％哌啶/DMF溶液，反应5分钟后抽出，再加入200mL 20％哌啶/DMF溶液室温反应20分钟。反应结束后用DMF 200mL洗涤树脂四次。
(3)棕榈酸的缩合
称量棕榈酸和DEPBT各50mmol，加入400mLDMF溶解，再加入100mmol DIEA室温下搅拌反应3分钟，将上述溶液加入到树脂中，37度水浴下通入N2反应2小时。反应结束后抽掉反应液，依次用DMF、IPA和DMF洗涤树脂。
(4)棕榈酸-Lys(Mtt)-HMPA-AM树脂脱除Mtt保护基
用200mL DCM洗涤树脂，重复一次，加入1200mL1％TFA/DCM(TFA约8倍过量)脱除Mtt保护基，反应时间30分钟，用200mL 5％DIEA/DMF和DMF交叉洗涤3次，DMF洗涤三次。
(5)HS-20003肽链部分的固相合成
①缩合Fmoc-Ser(tBu)-OH
称量Fmoc-Ser(tBu)-OH和DEPBT各50mmol，加入一定量DMF溶解，再加入100mmol DIEA室温下活化3分钟，将上述溶液加入到树脂中，室温下通入N2反应，采用茚三酮检测中控反应进行程度。反应结束后抽掉反应液，依次用DMF、IPA和DMF洗涤树脂。
②肽链的延长
按照HS-20003肽链部分从氨基端(N-端)到羧基端(C-端)的顺序(His-(D)-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser)，氨基酸和缩合试剂的用量和Fmoc-Ser(tBu)-OH相同，保护氨基酸分别是Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-D-Ala-OH和Fmoc-His(Trt)-OH，重复缩合和脱保护两步反应，合成HS-20003树脂肽。
③HS-20003树脂肽的后处理
将②所得到的HS-20003树脂肽依次用DMF、IPA和DMF洗涤树脂，用无水乙醚洗涤两次后真空干燥，得HS-20003树脂肽。
④HS-20003粗品肽的制备
取干燥后的HS-20003树脂肽，加入新鲜配制的10mL/(g树脂肽)的TFA∶TIS∶水＝95∶2.5∶2.5(体积比)的裂解液，室温下反应4小时。反应结束后过滤，用TFA洗涤树脂二次，收集并合并滤液，旋转蒸发至原体积的1/3，搅拌下加入到大量冰无水乙醚析出HS-20003，离心后真空干燥得白色HS-20003粗品。
⑤HS-20003的反相液相色谱制备
取HS-20003粗品10g溶于一定量的20％乙酸/水中搅拌不少于4小时，后经0.45μm膜过滤后用反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行分离，流动相为A 0.1％TFA/H2O，B 0.1％TFA/乙腈，其中，色谱柱为DenaliC-18柱(粒径8.3μm，5×30cm)，柱温45度，检测波长220nm，流速120mL/min。收集产物峰，减压浓缩除去大部分乙腈后冻干得HS-20003成品2.5g，纯度98.5％，收率25％。
实施例4 HS-20004的固相合成方法
(1)固相合成树脂的干燥及溶胀
称量真空干燥24小时的Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM树脂(0.4mmol/g)50g(20mmol)置于2L鼓泡瓶中，加入500mL DMF溶胀树脂30分钟，抽掉DMF溶液；
(2)Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM树脂脱除Fmoc保护基
向装有Fmoc-Lys(Mtt)-HMPA-AM树脂的鼓泡瓶中加入200mL20％哌啶/DMF溶液，反应5分钟后抽出，再加入200mL 20％哌啶/DMF溶液室温反应20分钟。反应结束后用DMF 200mL洗涤树脂四次。
(3)棕榈酸的缩合
称量棕榈酸和DEPBT各50mmol，加入400mLDMF溶解，再加入100mmol DIEA室温下搅拌反应3分钟，将上述溶液加入到树脂中，37度水浴下通入N2反应2小时。反应结束后抽掉反应液，依次用DMF、IPA和DMF洗涤树脂。
(4)棕榈酸-Lys(Mtt)-HMPA-AM树脂脱除Mtt保护基
用200mL DCM洗涤树脂，重复一次，加入1200mL1％TFA/DCM(TFA约8倍过量)脱除Mtt保护基，反应时间30分钟，用200mL 5％DIEA/DMF和DMF交叉洗涤3次，DMF洗涤三次。
(5)HS-20004肽链部分的固相合成
①缩合Fmoc-Ser(tBu)-OH
称量Fmoc-Ser(tBu)-OH和DEPBT各50mmol，加入一定量DMF溶解，再加入100mmol DIEA室温下活化3分钟，将上述溶液加入到树脂中，室温下通入N2反应，采用茚三酮检测中控反应进行程度。反应结束后抽掉反应液，依次用DMF、IPA和DMF洗涤树脂。
②肽链的延长
按照HS-20004肽链部分从氨基端(N-端)到羧基端(C-端)的顺序(His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser)，氨基酸和缩合试剂的用量和Fmoc-Ser(tBu)-OH相同，保护氨基酸分别是Fmoc-Ser(tBu)-OH、Fmoc-Pro-OH、Fmoc-Ala-OH、Fmoc-Gly-OH、Fmoc-Arg(Pbf)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc-Trp(Boc)-OH、Fmoc-Ile-OH、Fmoc-Phe-OH、Fmoc-Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Lys(Boc)-OH、Fmoc-Tyr(tBu)-OH、Fmoc-Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Aib-OH和Fmoc-His(Trt)-OH，重复缩合和脱保护两步反应，合成HS-20004树脂肽。
③HS-20004树脂肽的后处理
将②所得到的HS-20004树脂肽依次用DMF、IPA和DMF洗涤树脂，用无水乙醚洗涤两次后真空干燥，得HS-20004树脂肽。
④HS-20004粗品肽的制备
取干燥后的HS-20004树脂肽，加入新鲜配制的10mL/(g树脂肽)的TFA∶TIS∶水＝95∶2.5∶2.5(体积比)的裂解液，室温下反应4小时。反应结束后过滤，用TFA洗涤树脂二次，收集并合并滤液，旋转蒸发至原体积的1/3，搅拌下加入到大量冰无水乙醚析出HS-20004，离心后真空干燥得白色HS-20004粗品。
⑤HS-20004的反相液相色谱制备
取HS-20004粗品10g溶于一定量的20％乙酸/水中搅拌不少于4小时，后经0.45μm膜过滤后用反相高效液相色谱(RP-HPLC)进行分离，流动相为A0.1％TFA/H2O，B0.1％TFA/乙腈，梯度如下：
其中，色谱柱为Denali C-18柱(粒径8.3μm，5×30cm)，柱温45度，检测波长220nm，流速120mL/min。收集产物峰，减压浓缩除去大部分乙腈后冻干得HS-20004成品2.25g，纯度98.5％，收率22.5％。
试验例一：检测化合物对胰高血糖素样肽1受体(GLP1R)的激动活性
GLP1R是与Gs蛋白偶联的受体，当受体与激动剂结合会导致细胞内cAMP浓度升高。本实验在HEK293细胞中共转染GLP1R和cAMP反应元件调控的荧光素酶报告基因质粒，当化合物与受体结合并激活受体时，荧光素酶表达就会增加。通过对荧光素酶活性的检测即可获知化合物对GLP1R的激活状况。
受试药物：
  编号   分子量   质量(mg)   DMS0(ul)   终浓度(mM)
  利拉鲁肽   3751.25   2   53.31556   10
  HS-20001   4564.26   2   43.81871   10
  HS-20002   4554.25   2   43.91502   10
  HS-20003   4445.05   2   44.99387   10
  HS-20004   4459.05   2   44.8526   10
实验步骤：
1.将稳定转染GLP1R和pCRE-Luc质粒的HEK293细胞以4万个/孔/100μl的密度种入96孔板，在37℃孵育24小时。
2.加入一定浓度梯度的化合物(每个浓度为3复孔)或阳性药，在37℃孵育5小时。溶剂DMSO为阴性对照。
3.每孔取出50μl培养基，加入50μl荧光素酶底物，振荡10分钟。
4.取出80μl反应液加入到白色的96孔板中，在Invision酶标仪上检测。
实验结果：同阳性化合物利拉鲁肽(liraglutide)相比，本发明化合物HS-20001与其活性相当，而HS20002、HS20003、HS20004显示了更好的激动活性。
表1.系列化合物合物EC50值列表：
  化合物   EC50(nM)   95％可信限(nM)   最大反应率(％)
利拉鲁肽 0.014707   9.726e-012至2.223e-011 96.84616
HS-20001 0.013552   7.6757e-012至2.3963e-011 98.11013
HS-20002 0.0014145   1.2036e-012至1.6623e-012 87.99447
  HS-20003   0.00071876   4.9657e-013至   87.86082
  1.0404e-012
HS-20004 0.00037259   2.1453e-013至6.4710e-013 90.81368
试验例二、体内活性测试
将2型糖尿病db/db小鼠根据随机血糖和体重分为6组，每组8只，分别皮下单次注射生理盐水、3或10μg/kg HS系列新化合物(利拉鲁肽、20001、20002、20003、20004)。于给药后不同时间测定小鼠随机血糖。
受试动物为db/db小鼠，引种于美国Jackson公司，由中国科学院上海药物研究所保种和繁殖，合格证号：SCXK(沪)2008-0017，体重：35-50g，性别：雄性46只、雌性49只，经SPF级动物房饲养，温度：22-24℃，湿度：45-80％，光照：150-300Lx，12小时昼夜交替。
受试药物为HS-20001、HS-20002、HS-20003、HS-20004、利拉鲁肽(liraglutide，诺和诺德公司开发，作为阳性对照)。
配制方法：取2mg/瓶的化合物1瓶，用双蒸水完全溶解，配成2mg/ml的无色透明溶液，然后用生理盐水(氯化钠注射液，安徽双鹤药业有限责任公司，批号：0807286C)稀释至0.6、2μg/ml。血糖测定使用罗氏优越型血糖仪ACCU-
Figure G2009101655599D00221
Advantage
剂量设置与组别
试验1组：
空白对照组：生理盐水
利拉鲁肽组：3μg/kg
HS-20001组：3μg/kg
HS-20002组：3μg/kg
HS-20003组：3μg/kg
HS-20004组：3μg/kg
试验2组：
空白对照组：生理盐水
利拉鲁肽组：10μg/kg
HS-20001组：10μg/kg
HS-20002组：10μg/kg
HS-20003组：10μg/kg
HS-20004组：10μg/kg
给药途径和容积：单次皮下注射给药，给药容积为5ml/kg。
试验方法
2型糖尿病db/db小鼠的筛选、分组和给药
试验1组：
95只db/db小鼠(雄性46只、雌性49只)，断奶后单笼饲养，喂以高脂饲料。db/db小鼠满7周龄后预测随机和空腹血糖，挑选发病的48只db/db小鼠，根据随机血糖、空腹血糖和体重将小鼠分为6组。分别为模型对照组、利拉鲁肽-3μg/kg、HS-20001-3μg/kg、HS-20002-3μg/kg、HS-20003-3μg/kg、HS-20004-3μg/kg组。
试验2组：
db/db小鼠预测随机血糖，挑选发病的48只db/db小鼠，根据随机血糖、和体重将小鼠分为6组。分别为模型对照组、利拉鲁肽-10μg/kg、HS-20001-10μg/kg HS-20002-10μg/kg、HS-20003-10μg/kg、HS-20004-10μg/kg组。
每组小鼠8只，雌雄各半。各组动物分别单次皮下注射给予受试物或溶剂对照，于给药后1、2、4、8h及24h测定随机血糖，并计算血糖下降率
血糖下降率＝(对照组血糖-给药组血糖)/对照组血糖×100％
试验结果
试验1：低剂量新化合物单次给药对db/db小鼠随机血糖的影响
结果见表2、3。db/db小鼠单次皮下注射3μg/kg HS-20002或20004后1h时，随机血糖值比空白对照组明显下降(P＜0.05)，下降率分别为24.51％和15.00％；给药后2h和4h时，随机血糖值保持较低的水平，与空白对照组相比，差异明显(P＜0.05)，至给药后8h，随机血糖与对照组无显著差别。小鼠皮下注射3μg/kg HS-20003后1小时，随机血糖值比空白对照组明显下降(P＜0.05)，达17.33％，给药2、4和8h时，随机血糖与对照组无显著差别。db/db小鼠单次皮下注射3μg/kg HS-20001后，随机血糖值与空白对照组相比有所下降，但没有显著性差异。利拉鲁肽组小鼠给药后，随机血糖值未见明显下降。
表2：新化合物单次给药后当天对db/db小鼠随机血糖的影响(mmol/L，X±s，n＝8)
Figure G2009101655599D00241
*P＜0.05，**P＜0.01，与空白对照组相比
表3：新化合物单次给药后当天db/db小鼠随机血糖下降率(％，n＝8)
试验2：高剂量新化合物单次给药对db/db小鼠随机血糖的影响
结果见表4、5。db/db小鼠单次皮下注射10μg/kg HS-20002后1h时，随机血糖值比空白对照组明显下降(P＜0.01)，给药后2、4和8h时，随机血糖值保持较低的水平，其中给药后4小时最为明显，其降幅达40.67％，与空白对照组相比，差异明显(P＜0.001)，至给药后24h，随机血糖与对照组相比，仍明显较低。小鼠皮下注射10μg/kg HS-20003后1小时，随机血糖值比空白对照组明显下降(P＜0.01)，达23.62％，给药2、4和8h时，随机血糖仍保持在较低的水平，至给药后24h与对照组无显著差别。db/db小鼠单次皮下注射10μg/kg HS-20001后2h时，随机血糖值与空白对照组相比明显下降，给药后4和8h时血糖仍保持在较低的水平，至给药后24h，随机血糖与空白对照组相比，没有显著性差异。HS-20004-10μg/kg组小鼠给药后1h时随机血糖即明显下降，其降幅达36.20％，此后的2、4和8h时，血糖仍保持在较低的水平，给药后24h，随机血糖与空白对照组相比，没有显著性差异。利拉鲁肽组小鼠给药后，随机血糖值未见明显下降。
表4：新化合物单次给药后当天对db/db小鼠随机血糖的影响(mmol/L，±s，n＝8)
Figure G2009101655599D00251
*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001与空白对照组相比
表5：新化合物单次给药后当天db/db小鼠随机血糖下降率(％，n＝8)
Figure G2009101655599D00261
试验结论：
系列化合物单次皮下注射后可明显降低db/db小鼠的随机血糖，HS-20002、20003、20004在剂量为3μg/kg时即可表现出明显的降低随机血糖作用。其中HS-20002和20004表现出较好的降随机血糖作用，单次皮下注射后的降血糖作用维持时间与剂量相关，3μg/kg的HS-20002和20004的降随机血糖作用可维持4小时以上，而剂量为10μg/kg时，HS-20001、20002、20003、20004的降随机血糖作用均可维持8小时以上。
序列表
<110>江苏豪森医药集团有限公司
<120>GLP-1类似物的衍生物或其可药用盐和用途
<130>890086CG
<160>120
<170>PatentIn version 3.2
<210>1
<211>42
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(2)..(2)
<223>Xaa代表D型Ala
<400>1
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Asn Leu Glu
1               5                   10                  15
Glu Glu Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Gln Gly Gly
            20                  25                  30
Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
        35                  40
<210>2
<211>40
<212>PRT
<213>人工序列
<400>2
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser
            20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
        35                  40
<210>3
<211>40
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(2)..(2)
<223>Xaa代表D型Ala
<400>3
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Pro Ser
            20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
        35                  40
<210>4
<211>40
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(2)..(2)
<223>Xaa代表Aib
<400>4
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Glu Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Arg Gly Gly Pro Ser
            20                  25                  30
Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser Lys
        35                  40
<210>5
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>5
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>6
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>6
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>7
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>7
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>8
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>8
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>9
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<400>9
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>10
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>10
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>11
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>11
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>12
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>12
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>13
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>13
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>14
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<400>14
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Met Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>15
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>15
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Met Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>16
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>16
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>17
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>17
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>18
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>18
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>19
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>19
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>20
<21l>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<400>20
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>21
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>21
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>22
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>22
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>23
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>23
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>24
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>24
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>25
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>25
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>26
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<400>26
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Met Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
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<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>27
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Met Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
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<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>28
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>29
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>29
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>30
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>30
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>31
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>31
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>32
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<400>32
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>33
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>33
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>34
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>34
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>35
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>35
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>36
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>36
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>37
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>37
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>38
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<400>38
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Met Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>39
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>39
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Met Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>40
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>40
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>41
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>41
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>42
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>42
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>43
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>43
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>44
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<400>44
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>45
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>45
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>46
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>46
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>47
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>47
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>48
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>48
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>49
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>49
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>50
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<400>50
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Met Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>51
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>51
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Met Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>52
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>52
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>53
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>53
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>54
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>54
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>55
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>55
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>56
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<400>56
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>57
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>57
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>58
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>58
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>59
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>59
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
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<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>60
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Tyr Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
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<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>61
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Tyr Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>62
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>62
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Tyr Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>63
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>63
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Tyr Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>64
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>64
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1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>65
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>65
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ser Gln Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>66
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>66
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ser Gln Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
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<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>67
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ser Gln Met Glu Gly
1               5                   10                  15
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            20                  25                  30
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        35
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<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>68
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1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
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<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>69
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>70
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>70
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ser Tyr Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>71
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>71
His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ser Tyr Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>72
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>72
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1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
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<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>73
His Lys Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
       35
<210>74
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>74
His Lys Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>75
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>75
His Leu Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>76
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<400>76
His Leu Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>77
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>77
His Lys Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>78
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>78
His Lys Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>79
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>79
His Ile Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>80
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>80
His Ile Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>81
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>81
His Ile Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>82
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<400>82
His Leu Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Met Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>83
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(2)..(2)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>83
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Ser Tyr Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>84
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>84
His Lys Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Met Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>85
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>85
His Ile Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>86
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>86
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>87
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>87
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>88
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>88
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>89
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<400>89
His Leu Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>90
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>90
His Lys Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>91
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>91
His Lys Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>92
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>92
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>93
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>93
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>94
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>94
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>95
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<400>95
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Met Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>96
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>96
His Ile Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Gln Met Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>97
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>97
His Ile Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>98
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>98
His Lys Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>99
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>99
His Lys Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>100
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>100
His Ile Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>101
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<400>101
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>102
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>102
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>103
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>103
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Met Glu G1y
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>104
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>104
His Ile Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>105
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>105
His Lys Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>106
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>106
His Ile Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>107
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<400>107
His Lys Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Met Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>108
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>108
His Val Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Tyr Met Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro SerLys
        35
<210>109
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>109
His Lys Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>110
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>110
His Ile Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Leu Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>111
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>111
His Lys Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>112
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(2)..(2)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>112
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Leu Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>113
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<400>113
His Lys Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>114
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(2)..(2)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>114
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Leu Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>115
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>115
His Ile Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>116
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(2)..(2)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>116
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Met Glu Gly
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>117
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<400>117
His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>118
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(2)..(2)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>118
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Met Glu Glu
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>119
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<400>119
His Lys Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Met Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
Gly Gly Pro Pro Pro Ser Lys
        35
<210>120
<211>39
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<221>misc_feature
<222>(2)..(2)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(16)..(16)
<223>Xaa代表Aib
<220>
<221>misc_feature
<222>(34)..(34)
<223>Xaa代表Sar
<400>120
His Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Lys Gln Met Glu Xaa
1               5                   10                  15
Gln Ala Ala Glu Phe Ile Val Trp Leu Val Lys Gly Arg Gly Lys Lys
            20                  25                  30
G1y Xaa Pro Pro Pro Ser Lys
        35

Claims (8)

1.一种GLP-1类似物或其可药用盐：
其特征在于所述GLP-1类似物具有一个结构通式为R1(CH2)n-CO-的亲脂性取代基，R1选自CH3-或者HOOC-，n为8-25之间的整数，并且结构通式为R1(CH2)n-CO-的亲脂性取代基和下述氨基酸序列的C端Lys的α氨基或ε氨基通过酰胺键的方式连接，
His-Aib-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Glu-Glu-Ala-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-Lys。
2.根据权利要求1所述的GLP-1类似物或其可药用盐，其特征在于R1选自CH3-，n选自整数8、10、12、14、16、18、20或22。
3.根据权利要求2所述的GLP-1类似物或其可药用盐，其特征在于R1选自CH3-，n选自整数14。
4.根据权利要求1所述的GLP-1类似物或其可药用盐，其特征在于R1选自HOOC-，n选自整数14、16、18、20或22。
5.根据权利要求4所述的GLP-1类似物或其可药用盐，其特征在于R1选自HOOC-，n选自整数14。
6.一种药物组合物，包含：
(1)治疗量的如权利要求1-5所述的GLP-1类似物或其可药用盐，和
(2)药学可接受的赋形剂或药物载体。
7.根据权利要求1-5任一项所述的GLP-1的类似物或其可药用盐在制备用于治疗非胰岛素依赖性糖尿病的药物中的用途。
8.根据权利要求1-5任一项所述的GLP-1的类似物或其可药用盐在制备用于治疗胰岛素依赖性糖尿病的药物中的用途。
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