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CN109069570A - 抗lag3抗体和抗原结合片段 - Google Patents

抗lag3抗体和抗原结合片段 Download PDF

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CN109069570A
CN109069570A CN201680081987.1A CN201680081987A CN109069570A CN 109069570 A CN109069570 A CN 109069570A CN 201680081987 A CN201680081987 A CN 201680081987A CN 109069570 A CN109069570 A CN 109069570A
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antibody
antigen
adi
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amino acid
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R.D.W.马勒菲特
L.费亚达特-迪尔曼
L.梁
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Merck Sharp and Dohme LLC
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Schering Corp
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Abstract

本发明包括特异性结合人或食蟹猴LAG3的抗体及其抗原结合片段，以及其免疫球蛋白链和编码其的多核苷酸，连同包含此类抗体或片段的注射装置。包括此类抗体和片段的疫苗以及包含所述抗体和片段(例如，包括抗PD1抗体)的组合物包括在本发明中。还提供了使用此类组合物治疗或预防癌症或感染的方法。另外，用于重组表达所述抗体和片段的方法是本发明的一部分。

Description

抗LAG3抗体和抗原结合片段
本申请要求2015年12月16日提交的美国临时专利申请号62/268,070的权益；所述申请以其整体通过引用并入本文。
本申请含有已经以ASCII格式电子提交且在此以其整体通过引用并入的序列表。所述ASCII拷贝，在2015年12月16日创建，名为24270_seqlist，且大小为44千字节。
发明领域
本发明涉及抗LAG3抗体，以及本发明的抗体在治疗疾病诸如癌症和感染中的用途。
发明背景
LAG3 (CD223)是在活化的T细胞(Huard等人，Immunogenetics 39: 213–217, 1994)、NK细胞(Triebel等人，J Exp Med 171: 1393–1405, 1990)、B细胞(Kisielow等人，Eur JImmunol 35: 2081–2088, 2005)和浆细胞样树突细胞(Workman等人，J Immunol 182:1885–1891, 2009)上表达的细胞表面分子，其在这些淋巴细胞亚群的功能中发挥重要作用。此外，认为LAG3和其主要配体II类MHC之间的相互相用在调节树突状细胞功能中发挥作用(Andreae等人 J Immunol 168: 3874–3880, 2002)。近期的临床前研究已证明LAG-3在CD8 T细胞耗竭中的作用(Blackburn等人 Nat Immunol 10: 29–37, 2009)。
如同慢性病毒感染，肿瘤抗原特异性CD4+和CD8+ T细胞展现受损的效应子功能和耗竭的表型，其特征在于促炎细胞因子的产生减少和对抗原再刺激的低反应性。这由细胞外源性机制(诸如调节T细胞(Treg))和细胞内源性机制(诸如在耗竭的肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)上上调的抑制性分子)介导。这些抑制性机制代表了对有效抗肿瘤免疫的强大的障碍。
LAG3在耐受的TIL上表达，表明其促进肿瘤介导的免疫抑制。LAG3的抑制可以导致抗原特异性T细胞的活化增强，由此可以获得治疗益处。本领域需要拮抗LAG3活性的高效治疗性抗体，其可用于产生对肿瘤的强烈免疫应答。
发明概述
本发明提供了特异性结合人LAG3的抗体或其抗原结合片段(例如抗体)，其包含：(a)包含SEQ ID NO: 3或4中所述的氨基酸序列的免疫球蛋白链的VL结构域的CDR1、CDR2和CDR3；和/或(b) 包含SEQ ID NO: 1或2中所述的氨基酸序列的免疫球蛋白链的VH结构域的CDR1、CDR2和CDR3。例如，在本发明的一个实施方案中，所述抗体或片段包含轻链可变结构域和/或重链可变结构域，所述轻链可变结构域包含：包含氨基酸序列：8的CDR-L1；包含氨基酸序列：9的CDR-L2；和包含氨基酸序列：10的CDR-L3；所述重链可变结构域包含：包含氨基酸序列：5的CDR-H1；包含氨基酸序列：6的CDR-H2；和包含氨基酸序列：7的CDR-H3。在本发明的一个实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含轻链可变结构域和/或轻链可变结构域，所述轻链可变结构域包含：包含氨基酸序列：14的CDR-L1；包含氨基酸序列：15的CDR-L2；和包含氨基酸序列：16的CDR-L3；所述重链可变结构域包含：包含氨基酸序列：11的CDR-H1；包含氨基酸序列：12的CDR-H2；和包含氨基酸序列：13的CDR-H3。
本发明还提供了特异性结合人LAG3的抗体或其抗原结合片段(例如，抗体)，其包含轻链免疫球蛋白、重链免疫球蛋白或轻链和重链免疫球蛋白两者，其选自：包含与SEQ IDNO: 3中所述的氨基酸序列具有至少90％ (例如，95％、96％、97％、98％、99％或100％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列的轻链免疫球蛋白，和/或包含与SEQ ID NO: 1中所述的氨基酸序列具有至少90％ (例如，95％、96％、97％、98％、99％或100％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列的重链免疫球蛋白。在本发明的一个实施方案中，所述抗体或抗原结合片段含有包含与SEQ ID NO: 4中所述的氨基酸序列具有至少90％ (例如，95％、96％、97％、98％、99％或100％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列的轻链免疫球蛋白，和/或包含与SEQ IDNO: 2中所述的氨基酸序列具有至少90％ (例如，95％、96％、97％、98％、99％或100％)氨基酸序列同一性的氨基酸序列的重链免疫球蛋白。在本发明的一个实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含：含有包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的免疫球蛋白的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3且与SEQ ID NO: 3中所述的氨基酸序列具有至少90％ (例如，95％、96％、97％、98％、99％或100％)氨基酸序列同一性的轻链免疫球蛋白；和/或含有包含SEQ IDNO: 1的氨基酸序列的免疫球蛋白的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3且与SEQ ID NO: 1中所述的氨基酸序列具有至少90％ (例如，95％、96％、97％、98％、99％或100％)氨基酸序列同一性的重链免疫球蛋白。在本发明的一个实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含：含有包含SEQ ID NO: 4的氨基酸序列的免疫球蛋白的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3且与SEQ ID NO: 4中所述的氨基酸序列具有至少90％ (例如，95％、96％、97％、98％、99％或100％)氨基酸序列同一性的轻链免疫球蛋白；和/或含有包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的免疫球蛋白的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3且与SEQ ID NO: 2中所述的氨基酸序列具有至少90％ (例如，95％、96％、97％、98％、99％或100％)氨基酸序列同一性的重链免疫球蛋白。在本发明的一个实施方案中，所述抗体或抗原结合片段含有包含SEQ ID NO: 3中所述的氨基酸序列的轻链免疫球蛋白；和/或包含SEQ ID NO: 1中所述的氨基酸序列的重链免疫球蛋白。在本发明的一个实施方案中，所述抗体或抗原结合片段含有包含SEQ ID NO: 4中所述的氨基酸序列的轻链免疫球蛋白；和/或包含SEQ ID NO: 2中所述的氨基酸序列的重链免疫球蛋白。在本发明的一个实施方案中，所述抗LAG3抗体或其抗原结合片段含有包含SEQ ID NO: 22中所述的氨基酸序列的轻链免疫球蛋白；和包含SEQ ID NO: 21中所述的氨基酸序列的重链免疫球蛋白。在本发明的一个实施方案中，所述抗LAG3抗体或其抗原结合片段含有包含SEQID NO: 24中所述的氨基酸序列的轻链免疫球蛋白；和包含SEQ ID NO: 23中所述的氨基酸序列的重链免疫球蛋白。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段由工程改造的酵母N-连接的聚糖或CHO N-连接的聚糖糖基化。
本发明还提供了包含选自SEQ ID NO: 1-16和21-24的成员的氨基酸序列的多肽；以及编码此类多肽的多核苷酸、包含所述多核苷酸的载体以及包含所述多肽、抗体、抗原结合片段、载体或多核苷酸中任一种的宿主细胞。
本发明还提供了组合物或试剂盒，其包含本发明的抗体、抗原结合片段、多肽、多核苷酸或载体和任选地，药学上可接受的载体或稀释剂；其任选地与另外的治疗剂组合。例如，在本发明的一个实施方案中，另外的治疗剂是选自以下的成员：抗癌治疗剂、免疫调节受体的抑制剂、止吐剂、MTOR (雷帕霉素的哺乳动物靶标)抑制剂、细胞毒性剂、铂试剂、EGFR抑制剂、VEGF抑制剂、微管稳定剂、紫杉烷、CD20抑制剂、CD52抑制剂、CD30抑制剂、RANK(核因子κ-B的受体活化剂)抑制剂、RANKL (核因子κ-B配体的受体活化剂)抑制剂、ERK抑制剂、MAP激酶抑制剂、AKT抑制剂、MEK抑制剂、PI3K抑制剂、HER1抑制剂、HER2抑制剂、HER3抑制剂、HER4抑制剂、Bcl2抑制剂、CD22抑制剂、CD79b抑制剂、ErbB2抑制剂、法呢基蛋白转移酶抑制剂、抗PD1抗体或其抗原结合片段、派姆单抗、尼鲁单抗、CT-011、抗CTLA4抗体或其抗原结合片段、抗TIM3抗体或其抗原结合片段、抗CS1抗体或其抗原结合片段、依洛珠单抗、抗KIR2DL1/2/3抗体或其抗原结合片段、利瑞鲁单抗、抗CD137抗体或其抗原结合片段、乌鲁单抗(urelumab)、抗GITR抗体或其抗原结合片段、TRX518、抗PD-L1抗体或其抗原结合片段、BMS-936559、MSB0010718C、MPDL3280A、抗PD-L2抗体或其抗原结合片段、抗ILT1抗体或其抗原结合片段、抗CEACAM1抗体或其抗原结合片段、抗ILT2抗体或其抗原结合片段、抗ILT3抗体或其抗原结合片段、抗ILT4抗体或其抗原结合片段、抗ILT5抗体或其抗原结合片段、抗ILT6抗体或其抗原结合片段、抗ILT7抗体或其抗原结合片段、抗ILT8抗体或其抗原结合片段、抗CD40抗体或其抗原结合片段、抗OX40抗体或其抗原结合片段、抗CD137抗体或其抗原结合片段、抗KIR2DL1抗体或其抗原结合片段、抗KIR2DL2/3抗体或其抗原结合片段、抗KIR2DL4抗体或其抗原结合片段、抗KIR2DL5A抗体或其抗原结合片段、抗KIR2DL5B抗体或其抗原结合片段、抗KIR3DL1抗体或其抗原结合片段、抗 KIR3DL2抗体或其抗原结合片段、抗KIR3DL3抗体或其抗原结合片段、抗NKG2A抗体或其抗原结合片段、抗NKG2C抗体或其抗原结合片段、抗NKG2E抗体或其抗原结合片段、IL-10、抗IL10、抗TSLP、PEG化的IL-10、13-顺式-视黄酸、3-[5-(甲基磺酰基哌啶甲基)-吲哚基]-喹诺酮、4-羟基他莫昔芬、5-脱氧尿苷、5'-脱氧-5-氟尿苷、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、7-羟基星形孢菌素、A-443654、醋酸阿比特龙、abraxane、ABT-578、阿考比芬、ADS-100380、阿柏西普、ALT-110、六甲蜜胺、阿米福汀、氨鲁米特、氨柔比星、安吖啶、阿那格雷、阿那曲唑、血管生成抑制因子、AP-23573、ARQ-197、阿佐昔芬、AS-252424、AS-605240、天门冬酰胺酶、AT-9263、ATI3387、阿曲生坦、阿昔替尼、AZD1152、卡介苗(BCG)疫苗、巴他布林、BC-210、BGJ398、besodutox、贝伐珠单抗、比卡鲁胺、Bio111、BIO140、BKM120、博来霉素、BMS-214662、BMS-247550、BMS-275291、BMS-310705、硼替佐米、布舍瑞林、白消安、骨化三醇、喜树碱、卡纽替尼、卡培他滨、卡铂、卡莫司汀、CC8490、CEA疫苗、西地尼布、CG-1521、CG-781、查米多星、苯丁酸氮芥、氯毒素、西仑吉肽、西咪替丁、顺铂、克拉屈滨、氯膦酸盐、cobimetnib、COL-3、CP-724714、环磷酰胺、环丙孕酮、乙酸环丙孕酮、阿糖胞苷、胞嘧啶阿糖胞苷、达拉菲尼、达卡巴嗪、达西司他、更生霉素、dalotuzumab、达鲁舍替、达沙替尼、道诺霉素、地卡塔尼(decatanib)、鱼藤素、地尼白介素、脱氧助间型霉素、缩酚酸肽、二芳基丙腈、二乙基己烯雌酚、diftitox、DNE03、多西他赛、多韦替尼、多柔比星、屈洛昔芬、艾特咔林、钇-90标记的艾多替德、艾多替德、EKB-569、EMD121974、encorafenib、内皮抑素、恩杂鲁胺、恩扎妥林、表柔比星、埃博霉素B、ERA-923、爱必妥、厄洛替尼、雌二醇、雌氮芥、依托泊苷、依维莫司、依西美坦、ficlatuzumab、非那雄胺、夫拉平度、氟尿苷、氟达拉滨、氟氢可的松、氟甲睾酮、氟他胺、FOLFOX方案、氟维司群、galeterone、ganetespib、吉非替尼、吉西他滨、吉马替康、吡喃葡萄糖基脂质A、戈舍瑞林、乙酸戈舍瑞林、棉酚、GSK461364、GSK690693、HMR-3339、己酸羟孕酮、羟基脲、IC87114、伊达比星、idoxyfene、异环磷酰胺、IM862、伊马替尼、咪喹莫特、IMC-1C11、INCB24360、INC280、INO1001、干扰素、白介素-2、白介素-12、伊匹单抗、伊立替康、JNJ-16241199、酮康唑、KRX-0402、拉帕替尼、拉索昔芬、LEE011、来曲唑、亚叶酸、亮丙瑞林、醋酸亮丙瑞林、左旋咪唑、脂质体包覆的紫杉醇、洛莫司汀、氯那法尼、硫蒽酮、LY292223、LY292696、LY293646、LY293684、LY294002、LY3009120、LY317615、马立马司他、氮芥、甲羟孕酮乙酸酯、甲地孕酮乙酸酯、MEK162、美法仑、巯基嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、光神霉素、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、陶扎色替、MLN8054、热杀死的奥布分枝杆菌(Mycobacterium obuense)的混悬液、natitoclax、癌立消(neovastat)、来那替尼、neuradiab、尼洛替尼、尼鲁米特、诺拉曲塞、NVP-BEZ235、奥利美生、奥曲肽、奥法木单抗、奥戈伏单抗、ornatuzumab、orteronel、奥沙利铂、紫杉醇、帕博西尼、帕米膦酸盐、帕尼单抗、帕唑帕尼、PD0325901、PD184352、PEG-干扰素、培美曲塞、喷司他丁、哌立福新、苯丙氨酸氮芥、PI-103、pictilisib、PIK-75、哌喷昔芬、PKI-166、普卡霉素、PLX8394、聚-ICLC、卟菲尔钠、泼尼松、丙卡巴肼、孕酮、PSK、PX-866、R-763、雷洛昔芬、雷替曲塞、雷佐生、地磷莫司、利妥昔单抗、罗米地新、RTA744、鲁比替康、scriptaid、Sdx102、塞利西利、司美替尼、司马沙尼(semaxanib)、SF1126、西罗莫司、SN36093、索拉非尼、螺内酯、角鲨胺、SR13668、链脲菌素、SU6668、辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanalide hydroxamic acid)、舒尼替尼、合成的雌激素、他仑帕奈、塔利拉维(talimogene laherparepvec)、他莫昔芬、替莫唑胺、坦罗莫司、替尼泊苷、替米利芬、睾酮、粉防己碱、TGX-221、沙利度胺、6-硫鸟嘌呤、噻替派、替西木单抗、替吡法尼、替沃扎尼(tivozanib)、TKI-258、TLK286、TNFα、拓朴替康、柠檬酸托瑞米芬、曲贝替定、曲美替尼、曲妥珠单抗、维甲酸、曲古抑菌素A、曲西立滨磷酸盐单水合物、双羟萘酸曲普瑞林、TSE-424、尿嘧啶氮芥、丙戊酸、戊柔比星、凡德他尼、瓦他拉尼、VEGF捕获物、威罗菲尼、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、vitaxin、vitespan、伏立诺他(vorinostat)、VX-745、渥曼青霉素、Xr311、zanolimumab、ZK186619、ZK-304709、ZM336372、ZSTK474、Z-100、卡索匹坦、奈妥吡坦、帕洛诺司琼、阿瑞匹坦、苯海拉明、羟嗪、甲氧氯普胺、劳拉西泮、阿普唑仑、卤吡醇、氟哌利多、屈大麻酚、地塞米松、甲基强的松龙、丙氯拉嗪、格拉司琼、昂丹司琼、多拉司琼、托烷司琼、GCSF、PEG-GCSF、促红细胞生成素、阿法依泊汀、阿法达贝泊汀、布鲁顿氏酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、前列腺特异性抗原疫苗、阿扎胞苷、甲磺酸艾日布林、甲磺酸乐伐替尼、epacadostat、抗4-1BB激动剂抗体或抗原结合片段、克唑替尼、CSF1受体激酶抑制剂、恩替诺特、birinapant和尼拉帕尼。在本发明的一个实施方案中，另外的治疗剂是派姆单抗。
本发明还提供了疫苗，其包含抗原和药学上可接受的载体与任何本发明的抗LAG3抗体或片段或组合物的组合。
本发明还提供了容器或注射装置，其包含本发明的抗LAG3抗体、抗原结合片段、组合物、多肽、多核苷酸、载体或疫苗；任选地，其中所述容器或装置包括药学上可接受的载体或稀释剂。
本发明还提供了拮抗有此需要的人患者中的LAG3的方法，其包括向受试者施用有效量的本发明的抗LAG3抗体或抗原结合片段。
本发明还提供了治疗受试者中的癌症或感染性疾病的方法，其包括向受试者施用有效量的抗体或其抗原结合片段，任选地与另外的治疗剂(例如，本文所述的那些中的任一种，例如派姆单抗)、治疗程序或疫苗的组合。例如，在本发明的一个实施方案中，所述癌症是转移性癌症、实体瘤、血液癌症、白血病、淋巴瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤、肾癌、白血病、肾移行细胞癌、膀胱癌、Wilm氏癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、骨癌、肺癌、非小细胞肺癌、胃癌、结肠直肠癌、宫颈癌、滑膜肉瘤、头颈癌、鳞状细胞癌、多发性骨髓瘤、肾细胞癌、视网膜母细胞瘤、肝母细胞瘤、肝细胞癌、黑素瘤、肾横纹肌样瘤、尤因氏肉瘤、软骨肉瘤、脑癌、胶质母细胞瘤、脑膜瘤、垂体腺瘤、前庭神经鞘瘤、原始性神经外胚层肿瘤、成神经管细胞瘤、星形细胞瘤、间变性星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、室管膜瘤、脉络丛乳头状瘤、真性红细胞增多症、血小板增多症、特发性骨髓纤维化、软组织肉瘤、甲状腺癌、子宫内膜癌、类癌或肝癌、乳腺癌或胃癌。
本发明还提供了将本发明的抗LAG3抗体或抗原结合片段、组合物、多肽、疫苗、载体或多核苷酸施用于受试者的方法，其包括使用注射装置将所述抗体、片段、多肽、疫苗或多核苷酸注入受试者体内；且任选地，还将另外的治疗剂(例如，本文所述的那些中的任一种)或治疗程序施用于受试者。
本发明还提供了产生本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段或多肽的方法，其包括：a. 在有利于表达多核苷酸的条件下，在培养基中培养包含编码所述多肽或抗体或抗原结合片段的免疫球蛋白链的多核苷酸的宿主细胞(例如中国仓鼠卵巢细胞)；和b. 任选地，从宿主细胞和/或培养基回收所述抗体、抗原结合片段或多肽。作为这种方法的产物的特异性结合人LAG3的任何抗体或其抗原结合片段或多肽是本发明的一部分。
本发明还提供了检测样品中的LAG3肽或其片段的存在的方法，其包括使所述样品与本发明的抗LAG3抗体或抗原结合片段接触，并检测所述抗体或片段和肽之间的复合物的存在；其中检测到所述复合物表明LAG3肽的存在。
附图简述
图1. 在中国仓鼠卵巢细胞中(CHO N-连接的聚糖)和在工程改造的酵母细胞中(工程改造的酵母N-连接的聚糖)产生的单克隆抗体的优势N-连接的聚糖：正方形：N-乙酰基葡糖胺(GlcNac)；圆形：甘露糖(Man)；菱形：半乳糖(Gal)；三角形：岩藻糖(Fuc)。
图2：ADI-12126和ADI-12152氨基酸和核苷酸序列。
详述
本发明包括包含完全人免疫球蛋白链氨基酸序列的抗LAG3抗体。使用酵母表面展示系统从人免疫球蛋白文库分离此类抗体。此类抗体的用途包括刺激免疫系统，其可用于治疗癌症或感染性疾病。
缩写
在本发明的详述和实施例各处，将使用以下缩写：
ADCC 抗体依赖性细胞毒性
CDC 补体依赖性细胞毒性
CDR 免疫球蛋白可变区中的互补决定区，使用Kabat编号系统定义
CHO 中国仓鼠卵巢
ELISA 酶联免疫吸附测定
FR 抗体骨架区：排除CDR区的免疫球蛋白可变区
HRP 辣根过氧化酶
IC50 导致50%抑制的浓度
IgG 免疫球蛋白G
Kabat 通过Elvin A. Kabat ((1991) Sequences of Proteins of
Immunological Interest，第5版Public Health Service, National
Institutes of Health, Bethesda, Md.)开创的免疫球蛋白比对和编号系统
mAb或Mab或MAb 单克隆抗体
PCR 聚合酶链式反应
V区 不同抗体之间序列可变的IgG链的区段。其延伸至轻链中的Kabat残基
109和重链中的Kabat残基113
VH 免疫球蛋白重链可变区
VK或VL 免疫球蛋白κ轻链可变区。
定义
为了可更容易理解本发明，在下文中具体地定义某些技术和科学术语。除非在本文件中别处具体地定义，否则本文所使用的所有其它技术和科学术语均具有本发明所属领域的本领域普通技术人员通常所理解的含义。
除非上下文另外清楚地规定，否则如本文所用，包括随附权利要求，词语单数形式诸如“一个/种(a)”、“一个/种(an)”和“该(the)”包括其对应的复数个对象。
LAG3
关于本发明的抗体和抗原结合片段结合的多肽，术语“LAG3”是指人和食蟹猴，例如食蟹猴(Macaca fascicularis)或猕猴(Macaca mulatta) LAG3以及其片段，诸如其缺乏信号肽的成熟片段。
在本发明的一个实施方案中，人LAG3(淋巴细胞活化基因-3)的氨基酸序列包含氨基酸序列：
(SEQ ID NO: 61)；还参见Uniprot登录号P18627。
在本发明的一个实施方案中，小鼠LAG3的氨基酸序列包含氨基酸序列：
(SEQ ID NO: 62)；还参见Uniprot登录号Q61790。
在本发明的一个实施方案中，食蟹猴LAG3的氨基酸序列包含氨基酸序列：
(SEQ ID NO: 63)；还参见NCBI参考编号XP_005570011.1。
人、小鼠和食蟹猴LAG3的成熟序列，即去除信号肽后的序列，包含SEQ ID NO: 61、62或63的氨基酸1-28。
抗LAG3抗体及其抗原结合片段
本发明提供了特异性结合LAG3的抗体或其抗原结合片段(例如ADI-12126或ADI-12152)和此类抗体或片段的用途。在本发明的一个实施方案中，所述抗体或片段是抗体。
本发明包括“拮抗剂”抗LAG3抗体及其抗原结合片段及其使用方法，例如人拮抗剂抗LAG3抗体和片段。拮抗剂抗LAG3抗体或其抗原结合片段拮抗LAG3 (例如人LAG3)的活性，诸如通过抑制LAG3与II类MHC分子的结合；与II类MHC分子竞争LAG3结合；或者当细胞或受试者与所述抗体或片段接触时，产生与LAG3拮抗相关的生物学表型，诸如刺激IL-2的抗原特异性T细胞产生。
本发明提供了仅包含人免疫球蛋白链序列的人抗LAG3抗体和抗原结合片段分子。此类人分子不是直接衍生自人受试者的身体。相反，所述分子可以衍生自例如具有包含人免疫球蛋白基因的细胞的酵母文库，所述细胞进而产生人抗体和抗原结合片段。参见例如,Xu等人 Prot. Eng. Design & Selection 26(10): 663-70 (2013)。
ADI-12126和ADI-12152分离自在工程改造的酵母菌株表面展示的完全人抗体文库。针对如下选择ADI-12126和ADI-12152：通过细胞ELISA (表达人或食蟹猴LAG3的CHO细胞)和Biacore的结合，以及功能测定中的活性：Daudi细胞中(阻断测定)的II类MHC结合和具有IL-2读数的工程改造的3A9测定。随后将ADI-12126和ADI-12152亲和力成熟以获得期望的亲和力。
本发明包括抗LAG3抗体(例如，ADI-12126或ADI-12152)和其使用方法。如本文所用，术语“抗体”是指展现所需生物活性的抗体的任何形式。因此，其以最广泛意义使用，且具体涵盖，但不限于，单克隆抗体(包括全长单克隆抗体)、多克隆抗体(其中此类抗体或其抗原结合片段中的一个或多个包含本文所述的ADI-12126和/或ADI-12152或其变体)、多特异性抗体(例如双特异性抗体)、双互补位抗体、完全人类抗体、嵌合抗体和骆驼化单结构域抗体。
本发明包括抗LAG3抗原结合片段(例如，ADI-12126和ADI-12152的抗LAG3抗原结合片段)以及其使用方法。如本文所用，除非另外指明，否则“抗体片段”或“抗原结合片段”是指抗体的抗原结合片段，即保留特异性结合全长抗体所结合的抗原的能力的抗体片段，例如保留一个或多个CDR区的片段。抗原结合片段的实例包括，但不限于，Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双抗体(diabodies)；单链抗体分子，例如sc-Fv；由抗体片段形成的纳米抗体和多特异性抗体。
本发明包括抗LAG3 Fab片段(例如，ADI-12126和ADI-12152的抗LAG3 Fab片段)和其使用方法。“Fab片段”包含一条轻链以及一条重链的CH1和可变区。Fab分子的重链无法与另一重链分子形成二硫键。“Fab片段”可以是抗体的木瓜蛋白酶切割的产物。
本发明包括抗LAG3抗体(例如，ADI-12126或ADI-12152)和其包含Fc区的抗原结合片段以及其使用方法。“Fc”区含有两个包含抗体的CH1和CH2结构域的重链片段(例如，CH1和CH2和CH3)。两个重链片段通过两个或更多个二硫键和CH3结构域的疏水性相互作用保持在一起。
本发明包括抗LAG3 Fab'片段(例如，ADI-12126和ADI-12152的抗LAG3 Fab'片段)和其使用方法。“Fab'片段”含有一条轻链和一条重链的含有VH结构域和CH1结构域以及还有CH1和CH2结构域之间的区域的一部分或片段，使得在两个Fab'片段的两条重链之间可形成链间二硫键以形成F(ab')2分子。
本发明包括抗LAG3 F(ab')2片段(例如，ADI-12126和ADI-12152的抗LAG3 F(ab')2片段)和其使用方法。“F(ab')2片段”含有两条轻链和含有CH1结构域和CH2结构域之间的一部分恒定区的两条重链，使得在两条重链之间形成链间二硫键。因此，F(ab')2片段由通过两条重链之间的二硫键保持在一起的两个Fab'片段构成。“F(ab')2片段”可以是抗体的胃蛋白酶切割的产物。
本发明包括抗LAG3 Fv片段(例如，ADI-12126和ADI-12152的抗LAG3 Fv片段)和其使用方法。“Fv区”包含来自重链和轻链二者的可变区，但缺乏恒定区。
本发明包括抗LAG3 scFv片段(例如，ADI-12126和ADI-12152的抗LAG3 scFv片段)和其使用方法。术语“单链Fv”或“scFv”抗体是指包含抗体的VH和VL结构域的抗体片段，其中这些结构域存在于单一多肽链中。通常，Fv多肽在VH与VL结构域之间进一步包含多肽接头，其使得scFv能够形成用于抗原结合的所需结构。关于scFv的综述，参见Pluckthun (1994)The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg和Moore编辑，Springer-Verlag，New York，第269-315页。还参见国际专利申请公开号WO 88/01649和美国专利号4,946,778和5,260,203。
本发明包括抗LAG3结构域抗体(例如，衍生自ADI-12126和/或ADI-12152的序列，例如3个HCDR和/或3个LCDR)和其使用方法。“结构域抗体”是仅含有重链的可变区或轻链的可变区的免疫功能免疫球蛋白片段。在一些情况下，两个或更多个VH区用肽接头共价连接，以产生二价结构域抗体。二价结构域抗体的两个VH区可靶向相同或不同的抗原。在本发明的一个实施方案中，所述结构域抗体是单一结构域抗体或纳米抗体。在本发明的一个实施方案中，结构域抗体是包含3个ADI-12126 HCDR或3个ADI-12126 LCDR或3个ADI-12152HCDR或3个ADI-12152 LCDR或其任何变体的纳米抗体。
本发明包括抗LAG3二价抗体(例如，ADI-12126或ADI-12152)和其使用方法。“二价抗体”包含两个抗原结合位点。在一些情况下，两个结合位点具有相同抗原特异性。然而，二价抗体可以是双特异性的(例如，对于LAG3和另一种抗原具有亲和力)。
本发明包括对LAG3和另一抗原诸如具有结合特异性的双特异性抗体和抗原结合片段，和其使用方法。双特异性抗体是人工杂合抗体，其具有两个不同重/轻链对和两个不同结合位点，例如，ADI-12126或ADI-12152的1条重链和1条轻链连同对不同于其它重链和轻链对的那些的抗原具有特异性的另一抗体的1条重链和1条轻链。双特异性抗体可通过包括杂交瘤的融合或Fab'片段的连接的多种方法产生。参见例如Songsivilai, 等人,(1990) Clin. Exp. Immunol. 79: 315-321，Kostelny, 等人, (1992) J Immunol. 148:1547- 1553。另外，双特异性抗体可形成为“双抗体”(Holliger, 等人, (1993) PNAS USA90: 6444-6448)或为“Janusins” (Traunecker, 等人, (1991) EMBO J. 10: 3655-3659和Traunecker, 等人, (1992) Int. J. Cancer Suppl. 7: 51-52)。
双互补位抗体是对同一抗原上的不同表位具有结合特异性的抗体。本发明包括双互补位抗体，其具有ADI-12126或ADI-12152的1条重链和1条轻链连同对不同于其它重链和轻链对的那些的LAG3表位具有特异性的另一抗体的1条重链和1条轻链。
本发明包括包含ADI-12126的1条重链和1条轻链和ADI-12152的1条重链和1条轻链的抗LAG3抗体及其抗原结合片段；以及包含具有ADI-12126的3个CDR-H和3个CDR-L的1条重链和1条轻链连同具有ADI-12152的3个CDR-H和3个CDR-L的1条重链和1条轻链的抗LAG3抗体及其抗原结合片段。
本发明包括抗LAG3骆驼化单结构域抗体(例如，ADI-12126和ADI-12152的抗LAG3骆驼化单结构域抗体)和其使用方法。在某些实施方案中，本文中的抗体还包括骆驼化单结构域抗体。参见例如Muyldermans等人(2001) Trends Biochem. Sci. 26: 230；Reichmann等人(1999) J. Immunol. Methods 231: 25；WO 94/04678；WO 94/25591；美国专利号6,005,079)。在一个实施方案中，本发明提供包含两个VH结构域的单结构域抗体，其具有修饰，使得形成单结构域抗体。
本发明包括抗LAG3双抗体(例如，ADI-12126和ADI-12152的抗LAG3双抗体)和其使用方法。如本文所用，术语“双抗体”是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，所述片段包含连接至同一多肽链中(VH-VL或VL-VH)的轻链可变结构域(VL)的重链可变结构域(VH)。通过使用过短以使得同一链上的两个结构域之间不能配对的接头，迫使结构域与另一条链的互补结构域配对，且产生两个抗原结合位点。双抗体更充分地描述于例如EP 404,097；WO 93/11161；和Holliger等人(1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448中。关于工程改造的抗体变体的综述，一般参见Holliger和Hudson (2005) Nat. Biotechnol. 23:1126-1136。
通常，当活性基于摩尔表示时，以一定方式修饰的本发明的抗体(例如，ADI-12126或ADI-12152)或抗原结合片段保留其LAG3结合活性的至少10% (当与亲本抗体相比时)。优选地，本发明的抗体或抗原结合片段保留亲本抗体的LAG3结合亲和力的至少20%、50%、70%、80%、90%、95%或100%或更多。还意欲本发明的抗体或抗原结合片段可包括不实质上改变其生物活性的保守或非保守氨基酸取代(称为抗体的“保守变体”或“功能保守变体”)。
本发明包括分离的抗LAG3抗体(例如，ADI-12126或ADI-12152)及其抗原结合片段及其使用方法以及其分离的多肽免疫球蛋白链和编码此类多肽的分离的多核苷酸和包含此类多核苷酸的分离的载体。“分离的”抗体或其抗原结合片段、多肽、多核苷酸和载体至少部分地不含有来自产生它们的细胞或细胞培养物的其它生物分子。此类生物分子包括核酸、蛋白、脂质、碳水化合物或其它材料诸如细胞碎片和生长培养基。分离的抗体或抗原结合片段还可以至少部分地不含有表达系统组分诸如来自宿主细胞的生物分子或其生长培养基的生物分子。通常，术语“分离的”不意图指此类生物分子的完全不存在，或水、缓冲剂或盐的不存在，或包括抗体或片段的药物制剂的组分。
本发明包括单克隆抗LAG3抗体(例如，ADI-12126或ADI-12152)和其抗原结合片段以及包含多个分离单克隆抗体的单克隆组合物。如本文所用，术语“单克隆抗体”是指实质上均质抗体的群体，即除可少量存在的可能天然发生的突变以外，构成该群体的抗体分子是氨基酸序列相同的。组合物中的“多种”此类单克隆抗体和片段是指相同(即，如上所述，在氨基酸序列方面，除了可少量存在的可能天然发生的突变)抗体和片段的浓度高于在自然界中通常存在的，例如在宿主生物体(诸如小鼠或人)的血液中。相比之下，常规(多克隆)抗体制备物通常包括在其可变结构域、尤其其CDR中具有不同氨基酸序列的许多不同抗体，其通常对不同表位是特异性的。修饰语“单克隆”指示抗体的特征为获得自实质上均质的抗体群体，且不应理解为需要通过任何特定方法产生所述抗体。例如，待根据本发明使用的单克隆抗体可通过Kohler等人(1975) Nature 256: 495首先描述的杂交瘤方法制备，或可通过重组DNA方法(参见例如美国专利号4,816,567)制备。“单克隆抗体”也可使用例如Clackson等人(1991) Nature 352: 624-628和Marks等人(1991) J. Mol. Biol. 222:581-597中描述的技术分离自噬菌体抗体文库。还参见 Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116: 731。
本发明包括抗LAG3嵌合抗体(例如衍生自或基于ADI-12126或ADI-12152)和其使用方法。如本文所用，“嵌合抗体”是具有来自第一抗体的可变结构域和来自第二抗体的恒定结构域的抗体，其中所述第一和第二抗体来自不同物种。(美国专利号4,816,567；和Morrison等人，(1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855)。在本发明的一个实施方案中，可变结构域获得自人抗体(“亲本抗体”)，且恒定结构域序列获得自非人抗体(例如小鼠、大鼠、狗、猴、大猩猩、马抗体)。
本发明包括抗LAG3完全人抗体(例如ADI-12126或ADI-12152)及其抗原结合片段及其使用方法。术语“完全人抗体或其抗原结合片段”或“人抗体或其抗原结合片段”是指仅包含已分离自非人来源的人免疫球蛋白蛋白序列的抗体或其抗原结合片段。如果在小鼠、小鼠细胞或衍生自小鼠细胞的杂交瘤中产生，则完全人抗体可以含有鼠碳水化合物链。“小鼠抗体”是指仅包含小鼠免疫球蛋白序列的抗体。或者，如果在大鼠、大鼠细胞或衍生自大鼠细胞的杂交瘤中产生，则完全人抗体可以含有大鼠碳水化合物链。类似地，“大鼠抗体”是指仅包含大鼠免疫球蛋白序列的抗体。在本发明的一个实施方案中，完全人抗LAG3抗体或其抗原结合片段是分离自转基因动物，例如小鼠(例如，HUMAB小鼠，参见例如美国专利号5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425；5,661,016；5,770,429；5,789,650；5,814,318；5,874,299和5,877,397；和Harding,等人, (1995) Ann.NY Acad.Sci.764: 536 546；或XENOMOUSE，参见例如，Green等人, 1999, J. Immunol. Methods 231: 11-23)的产物，所述转基因动物已被遗传修饰以具有完全人免疫球蛋白基因；或分离自噬菌体或病毒的产物，所述噬菌体或病毒表达抗LAG3完全人抗体或其抗原结合片段的免疫球蛋白链。
通常，基本抗体结构单元包含四聚体。每个四聚体包括两个相同的多肽链对，每对具有一个“轻”链(约25 kDa)和一个“重”链(约50-70 kDa)。每条链的氨基端部分包括主要负责抗原识别的约100-110个或更多个氨基酸的可变区。重链的羧基端部分可以限定主要负责效应子功能的恒定区。通常，将人轻链分类为κ和λ轻链。此外，通常将人重链分类为 μ、δ、γ、α或ε，并将抗体的同种型分别定义为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链内，可变区和恒定区由约12个或更多个氨基酸的“J”区域连接，其中重链还包括约10个更多氨基酸的“D”区域。通常参见Fundamental Immunology第7章(Paul, W., 编, 第2版Raven Press,N.Y. (1989)。
免疫球蛋白可根据其重链的恒定结构域的氨基酸序列而分成不同类别。存在至少五个主要类别的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，且这些中的几种可进一步分成亚类(同种型)，例如IgG-1、IgG-2、IgG-3和IgG-4；IgA-1和IgA-2。本发明包含抗体的这些类别或亚类中任一种的抗LAG3抗体和抗原结合片段。
在一个实施方案中，所述抗LAG3抗体或抗原结合片段包含重链恒定区，例如人类恒定区，诸如γ1、γ2、γ3或γ4人重链恒定区或其变体。在另一个实施方案中，所述抗LAG3抗体或抗原结合片段包含轻链恒定区，例如人轻链恒定区，诸如λ或κ人轻链区或其变体。例如且不限于，人重链恒定区可以是γ4，且人轻链恒定区可以是κ。在一个替代实施方案中，抗体的Fc区为具有Ser228Pro突变的γ4 (Schuurman, J 等人, Mol. Immunol. 38: 1-8,2001)。
在一些实施方案中，不同恒定结构域可附接至衍生自本文提供的CDR的VL和VH区。例如，如果本发明的抗体(或片段)的特定意欲用途需要改变效应子功能，则可使用除人IgG1外的重链恒定结构域，或可利用杂合IgG1/IgG4。
虽然人IgG1抗体提供长半衰期和效应子功能，诸如补体活化和抗体依赖性细胞毒性，但此类活性可能不是抗体的所有用途所需的。在此类情况下，可使用例如人IgG4恒定结构域。本发明包括包含IgG4恒定结构域的抗LAG3抗体和其抗原结合片段，例如拮抗剂人抗LAG3抗体和片段，和其使用方法。在一个实施方案中，IgG4恒定结构域可在对应于EU系统中的位置228和KABAT系统中的位置241的位置不同于天然人IgG4恒定结构域(Swiss-Prot登录号P01861.1)，其中天然Ser108被Pro置换，以防止Cys106和Cys109 (对应于EU系统中的位置Cys 226和Cys 229和KABAT系统中的位置Cys 239和Cys 242)之间可干扰适当链内二硫键形成的潜在链间二硫键形成。参见Angal等人(1993) Mol. Imunol. 30: 105。在其它情况下，可使用已修饰以增加半衰期或降低效应子功能的修饰的IgG1恒定结构域。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体(例如，ADI-12126或ADI-12152)包含具有两条轻链和两条重链(包括恒定区)的完整四聚体结构。
各轻链/重链对的可变区形成抗体结合位点。因此，通常，完整抗体具有两个结合位点。除了在双特异性抗体中，两个结合位点通常是相同的。
通常，重链和轻链两者的可变结构域包含三个高变区，也称为互补决定区(CDR)，其位于相对保守骨架区(FR)内。所述CDR通常通过所述骨架区定向，使得能够结合特异的表位。通常，从N端至C端，轻链和重链可变结构域都包含FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。氨基酸分配至各结构域通常根据以下的定义：Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, 等人；National Institutes of Health, Bethesda, Md. ；第5版；NIH公开号91-3242 (1991)；Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32: 1-75；Kabat, 等人,(1977) J. Biol. Chem. 252: 6609-6616；Chothia, 等人, (1987) J Mol. Biol. 196:901-917或Chothia, 等人, (1989) Nature 342: 878-883。
如本文所用，术语“高变区”或“互补决定区”或“CDR”是指负责抗原结合的抗体或其抗原结合片段的氨基酸残基。CDR包括轻链可变结构域中的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，和重链可变结构域中的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3。参见Kabat et al. (1991) Sequences ofProteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, NationalInstitutes of Health, Bethesda, Md.; Johnson et al.(2001) Nucleic Acids Res.2001; 29(1): 205–206(通过序列定义抗体的CDR区)；还参见Chothia and Lesk (1987)J. Mol. Biol. 196: 901-917; Chothia et al. Nature 342, 877 (1989)，和Tramontano et al. J. Mol. Biol. 215, 175 (1990) (通过结构定义抗体的CDR区)；还参见Macallum et al. J Mol Biol. 1996 Oct. 11; 262(5): 732-45。如本文所用，术语“骨架”或“FR”残基是指除在本文中定义为CDR残基的CDR残基以外的那些可变结构域残基。
“分离的核酸分子”或“分离的多核苷酸”(例如，DNA或RNA)也不与在自然界中发现该分离的多核苷酸的多核苷酸缔合，或连接至其在自然界中不连接的多核苷酸。出于本发明的目的，应理解“包含特定核苷酸序列的多核苷酸”不涵盖完整染色体。除指定序列之外，“包含”指定核酸序列的分离的核酸分子可包括多达十种或甚至多达二十种或更多种其它蛋白的编码序列或其部分或片段，或可包括控制所述核酸序列的编码区域的表达的可操作连接的调节序列，和/或可包括载体序列。如下所讨论，本发明包括编码本文所述的任何免疫球蛋白链的分离的多核苷酸。
短语“控制序列”是指可操作连接的编码序列在特定宿主生物体中的表达所必需的DNA序列。适合于原核生物的控制序列例如包括启动子、任选操纵子序列和核糖体结合位点。已知真核细胞使用启动子、多腺苷酸化信号和增强子。
当核酸或多核苷酸与另一个核酸序列处于功能关联时，所述核酸或多核苷酸是“可操作连接的”。例如，如果其表达为参与多肽分泌的前蛋白，则前序列或分泌前导序列的DNA与所述多肽的DNA可操作连接；如果其影响序列的转录，则启动子或增强子与编码序列可操作连接；或如果其被定位为促进翻译，则核糖体结合位点与编码序列可操作连接。通常，但不总是，“可操作连接的”意指，所连接的DNA序列是连续的，且在分泌前导序列的情况下，是连续的且在阅读相中。然而，增强子不必须是连续的。连接通过在方便的限制性位点处的连接来实现。如果此类位点不存在，则根据常规实践使用合成的寡核苷酸适体或接头。
如本文所用，表述“细胞”和“细胞系”可互换使用且所有此类名称均包括子代。因此，词语“转化体”和“转化细胞”包括原代对象细胞和来源于其的培养物，而无论转移次数。还应理解，由于有意或无意突变，不是所有子代都具有准确相同的DNA内含物。包括具有与最初转化细胞中所筛选相同的功能或生物活性的突变子代。在预期不同名称的情况下，其从上下文来看将是清楚的。
如本文所用，“聚合酶链式反应”或“PCR”是指其中特定核酸序列、RNA和/或DNA如例如美国专利号4,683,195中所述扩增的程序或技术。通常，来自目标区域的末端或更远的序列信息用于设计寡核苷酸引物。这些引物在序列方面与待扩增的模板的相对链相同或相似。两个引物的5'末端核苷酸可以与扩增的材料的末端重合。PCR可用于扩增特定RNA序列、来自总基因组DNA的特定DNA序列以及从总细胞RNA、噬菌体或质粒序列转录的cDNA等。通常参见Mullis等人(1987) Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 51: 263; Erlich,编, (1989) PCR TECHNOLOGY (Stockton Press, N.Y.)。如本文所用，PCR被认为是用于扩增核酸测试样品的核酸聚合酶反应方法的一种、但不是唯一的实例，所述核酸聚合酶反应方法包括使用作为引物的已知核酸和核酸聚合酶以扩增或生成特定的核酸片段。
如本文所用，“种系序列”是指未重排的免疫球蛋白DNA序列的序列。可使用未重排的免疫球蛋白序列的任何合适来源。人类种系序列可获得自例如美国国立卫生研究院(theUnited States National Institutes of Health)的美国国立关节炎和肌肉骨骼和皮肤病研究所(the National Institute of Arthritis and Musculoskeletal and SkinDiseases)的网站上的JOINSOLVER种系数据库。小鼠种系序列可例如如在Giudicelli等人(2005) Nucleic Acids Res. 33: D256-D261中所述获得。
示例性抗LAG3抗体的物理和功能特性
本发明提供了抗LAG3抗体和其抗原结合片段，和所述抗体或其抗原结合片段用于治疗或预防疾病的方法。在一个实施方案中，本发明提供了人抗LAG3抗体及其抗原结合片段以及所述抗体或其抗原结合片段在治疗或预防疾病中的使用方法。在一个实施方案中，本发明提供了拮抗性抗LAG3抗体以及所述抗体或其抗原结合片段在治疗或预防疾病中的使用方法。
本发明的“抗LAG3”抗体或其抗原结合片段包括任何抗体或其抗原结合片段，其包含ADI-12126或ADI-12152的一个或多个CDR (例如，3个HCDR和3个LCDR)，任何可变区，任何重链免疫球蛋白链或任何轻免疫球蛋白链，或其变体；其特异性结合LAG3。例如，本发明还包括抗LAG3抗体和抗原结合片段，其包括本文所述的轻链和重链或此类链的变体的任何组合。抗LAG3抗体和抗原结合片段包括具有本文所述的免疫球蛋白链的任何一个或多个CDR(例如，CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)或此类CDR的一种或多种变体的那些；其特异性结合LAG3。本发明的一个具体实施方案包括仅包含ADI-12126或仅包含ADI-12152免疫球蛋白重和轻免疫球蛋白链和/或仅包含ADI-12126或仅包含ADI-12152 LCDR和HCDR的抗LAG3抗体和片段。这些抗体和片段连同它们的用途(例如，如本文所述)一起是本发明的一部分。
本发明还包括结合LAG3中与本文讨论的抗体和片段结合的相同的表位的任何抗体或其抗原结合片段；以及交叉阻断(部分或完全)本文讨论的抗体或片段或由本文讨论的抗体或片段交叉阻断(部分或完全) LAG3结合的任何抗体或抗原结合片段；以及其任何变体。
本文讨论的交叉阻断抗体及其抗原结合片段可以基于其在结合测定中(例如，生物层干涉测量法(BLI；例如FORTEBIO OCTET结合测定；Pall ForteBio Corp; Menlo Park,CA)、表面等离子共振(SPR)、BIACore、ELISA，流式细胞术)中阻断任何本文具体记载的抗LAG3抗体或片段(例如ADI-12126或ADI-12152)结合LAG3的能力来鉴定。例如，在本发明的一个实施方案中，当使用BLI时，光纤探针的尖端用配体(例如，LAG3)包被并且充当生物传感器，其中抗LAG3抗体或抗原结合片段与LAG3的结合改变从与LAG3结合的探针层和内部参考层反射的白光的干涉模式。移位表明抗原/抗体或片段结合。在本发明的一个实施方案中，将LAG3包被的尖端浸入含有抗体或抗原结合片段的分析物的溶液中，例如，在96孔或384孔板的孔中。在本发明的一个实施方案中，在读取期间摇动板以产生轨道流动。为了读取测定，白光指向纤维的长度。如上所提及，从参考层反射的光与尖端的含有LAG3的固定表面之间的干涉产生了返回光纤的独特光模式。当分子结合固定的传感器表面时，该模式与结合程度成比例地变化。例如，可以使用这样的测定，其中LAG3蛋白固定在BLI探针或板上，参照抗LAG3抗体或片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)结合LAG3 (例如，在饱和浓度下)，并添加测试抗LAG3抗体或片段。然后测定测试抗体与参照抗体竞争LAG3结合的能力。在BLI形式中，监测LAG3复合物的光干扰以确定测试抗体是否有效地与参考抗体竞争，例如，监测随时间光波长移位的纳米数，其中移位表明测试抗体的额外结合和缺乏交叉阻断。在本发明的一个实施方案中，在BLI形式中，如果未观察到测试抗体的额外结合，则定性地认为交叉阻断已在抗体之间发生。在本发明的一个实施方案中，作为对照，证实参考抗体与其自身的交叉阻断；其中如果参考抗体可以交叉阻断自身与LAG3结合，则确定测定正确地进行。测试抗体抑制例如抗LAG3抗体或片段与LAG3的结合的能力表明，测试抗体可以交叉阻断抗LAG3结合LAG3，并且因此在一些情况下，可以与抗LAG3结合LAG3上的相同表位。如上所述，与本发明的任何抗LAG3抗体或片段结合相同表位的抗体和片段也形成本发明的一部分。在本发明的一个实施方案中，BLI以夹心形式进行，其中参考抗LAG3抗体或抗原结合片段固定至探针，且然后与LAG3结合。然后测试测试抗LAG3抗体或抗原结合片段阻断参考抗体或片段的结合的能力。本发明的范围包括这种用于鉴定交叉阻断本发明的抗LAG3抗体或抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)结合LAG3的抗体或抗原结合片段的方法；以及使用这种方法鉴定的任何交叉阻断抗体或片段。
本发明的范围包括特异性结合LAG3的抗LAG3抗体及其抗原结合片段，其具有来自SEQ ID NO: 2和4的免疫球蛋白轻链的CDR的任何组合(例如，3个CDR-L)和/或具有来自SEQID NO: 1和3的免疫球蛋白重链的CDR的任何组合(例如，3个CDR-H)；其中CDR如Kabat和Chothia所定义(参见上文)。
具有其所示CDR的抗体ADI-12126和ADI-12152的免疫球蛋白链如下所述。“ADI-12126”抗体或其抗原结合片段包含：
- ADI-12126的轻链和重链免疫球蛋白；或
- ADI-12126的轻链和重链可变区；或
- ADI- 12126的CDR (CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3 (CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)。
“ADI-12152”抗体或其抗原结合片段包含：
- ADI-12152的轻链和重链免疫球蛋白；或
- ADI-12152的轻链和重链可变区；或
- ADI-12152的CDR (CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3 (CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)。
术语“ADI-12126”包括包含重链的此类抗体和抗原结合片段，所述重链包含SEQID NO: 1或21的氨基酸序列，其中X1是Q或E；X2是M、G、L、S、T、Y、V或A；和/或其中X3是M或L。ADI-12126和ADI-12152抗体及其抗原结合片段是本发明的一部分。亲本ADI-12126抗体重链具有等位基因Q1/M115/M57，即其中X1是Q，X2是M且X3是M。
可以使用格式(亲本残基)(位置编号)(突变残基)指示突变。因此，例如，Q1E是指位置1处的Q突变为E。此外，Q1是指位置1处的亲本等位基因-Q。位置1、115和57处的残基分别对应于下面SEQ ID NO: 21中的X1、X2和X3。
抗LAG3抗体ADI-12126
ADI-12126重链：
(SEQ ID NO: 21；其中X1是Q或E；X2是M、G、L、S、T、Y、V或A；且X3是M或L)。
ADI-12126重链可变区：
(SEQ ID NO: 1；其中X1是Q或E；X2是G、L、S、T、Y、V或A；且X3是M或L)
CDR-H1: GYTFTGYYMH (SEQ ID NO: 5)
CDR-H2: WINANSGX2TNYAQKFQG (SEQ ID NO: 6；其中X2是M、G、L、S、T、Y、V或A)
CDR-H3: DIYDSSDQLNV (SEQ ID NO: 7)。
在本发明的一个实施方案中，所述重链包括N端信号序列，例如，其包含氨基酸序列：MEWSWVFLFFLSVTTGVHS (SEQ ID NO: 65)。
ADI-12126轻链：
ADI-12126轻链可变区：
在本发明的一个实施方案中，所述轻链包括N端信号序列，例如，其包含氨基酸序列：MSVPTQVLGLLLLWLTDARC (SEQ ID NO: 64)。
本发明包括以下抗LAG3抗体和抗原结合片段：
· ADI-12126重链(Q1、M57、M115 IgG4 S228P) (SEQ ID NO: 1或21，其中X1=Q、X2=M和X3=M)和ADI-12126轻链κ；
· ADI-12126重链(Q1E、M57G、M115L IgG4 S228P) (SEQ ID NO: 1或21，其中X1=E、X2= G和X3=L)和ADI-12126轻链κ；
· ADI-12126重链(Q1E、M57S、M115L IgG4 S228P) (SEQ ID NO: 1或21，其中X1=E、X2=S和X3=L)和ADI-12126轻链κ；
· ADI-12126重链(Q1E、M57T、M115L IgG4 S228P) (SEQ ID NO: 1或21，其中X1=E、X2=T和X3=L)和ADI-12126轻链κ；
· ADI-12126重链(Q1E、M57Y、M115L IgG4 S228P) (SEQ ID NO: 1或21，其中X1=E、X2=Y和X3=L)和ADI-12126轻链κ；
· ADI-12126重链(Q1E、M57V、M115L IgG4 S228P) (SEQ ID NO: 1或21，其中X1=E、X2=V和X3=L)和ADI-12126轻链κ；
· ADI-12126重链(Q1E、M57A、M115L IgG4 S228P) (SEQ ID NO: 1或21，其中X1=E、X2=A和X3=L)和ADI-12126轻链κ；或
· ADI-12126重链(Q1E、M57、M115L IgG4 S228P) (SEQ ID NO: 1或21，其中X1=E、X2=M和X3=L)和ADI-12126轻链κ。
抗LAG3抗体ADI-12152
ADI-12152重链：
(SEQ ID NO: 23；其中X1是Q或E且X2是M或L)。
例如，
ADI-12152重链：
ADI-12152重链可变区：
(SEQ ID NO: 3；其中X1是Q或E且X2是M或L)
例如，
ADI-12152重链可变区：
在本发明的一个实施方案中，所述重链包括N端信号序列，例如，其包含氨基酸序列：MEWSWVFLFFLSVTTGVHS (SEQ ID NO: 65)。
ADI-12152轻链：
ADI-12152轻链可变区：
在本发明的一个实施方案中，所述轻链包括N端信号序列，例如，其包含氨基酸序列：MSVPTQVLGLLLLWLTDARC (SEQ ID NO: 64)。
多肽、诸如ADI-12126或ADI-12152免疫球蛋白链的“变体”是指包含当通过BLAST算法进行比较时与本文所述的参考氨基酸序列至少约70-99.9％ (例如，70、72、74、75、76、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5、99.9%)相同或类似的氨基酸序列的多肽；其中选择所述算法的参数以产生在各个参考序列的整个长度上在各个序列之间的最大匹配(例如，预期阈值：10；字长：3；在查询范围内的最大匹配：0；BLOSUM 62矩阵；间隙成本：存在11，延伸1；条件性组成评分矩阵调节)。本发明的抗LAG3抗体及其抗原结合片段可以包含此类变体免疫球蛋白链。
多核苷酸的“变体”是指包含当通过BLAST算法进行比较时与本文所述的参考氨基酸序列至少约70-99.9% (例如，80-99、85-99、90-99、95-99、70、72、74、75、76、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、99.5或99.9%)相同的核苷酸序列的多核苷酸；其中选择所述算法的参数以产生在各个参考序列的整个长度上在各个序列之间的最大匹配(例如，预期阈值：10；字长：28；在查询范围内的最大匹配：0；匹配/错配评分：1，-2；缺口成本：线性)。本发明的抗LAG3抗体及其抗原结合片段可以包含由此类变体多核苷酸编码的免疫球蛋白链。
另外，变体可以是与ADI-12126或ADI-12152的重或轻免疫球蛋白链或CDR具有序列同一性或同源性或包含除了一个或多个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个)突变、诸如例如错义突变(例如，保守取代)、无义突变、缺失或插入之外的本文所述的氨基酸序列的多肽。本发明的抗LAG3抗体及其抗原结合片段可以包含此类变体免疫球蛋白链或CDR。
如本文所讨论，本发明包括抗LAG3抗体及其抗原结合片段，其包括骨架序列的一种或多种变体(例如，FR-L1、FR-L2、FR-L3、FR-L4、FR-H1、FR-H2、FR-H3和/或FR-H4中的任何一种或多种)，CDR (例如，1、2或3个变体CDR-L和/或1、2或3个变体CDR-H)和/或免疫球蛋白链(例如，1或2个变体VL和/或1或2个变体VH)，其序列在本文中具体记载。此类抗体和抗原结合片段本身可以被称为变体。包括一个或多个变体FR、CDR-L、CDR-H和/或免疫球蛋白链的简单多肽链本身也是本发明的一部分。编码此类变体多肽链的多核苷酸也是本发明的一部分。
本发明包括抗LAG3抗体和抗原结合片段，其中CDR与ADI-12126或ADI-12152 VH和VL的CDR相同，但与骨架和/或免疫球蛋白恒定结构域中存在的此类VH和VL具有差异。例如，本发明提供了抗LAG3抗体及其抗原结合片段，其包含本文所述的ADI-12126或ADI-12152VH和/或VL链的变体，其包含所述SEQ ID NO: 1或2的VH和SEQ ID NO: 3或4的VL的CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，但包含与所述SEQ ID NO: 1或2的VH和SEQ IDNO: 3或4的VL的70％或更多(例如，80％、85％、90％、95％、97％或99％)的总体氨基酸序列同一性或相似性。
ADI-12126和ADI-12152抗体及其抗原结合片段的保守修饰的变体是本发明的一部分。“保守修饰变体”或“保守取代”是指其中多肽中的一个或多个氨基酸被具有类似特征(例如电荷、侧链大小、疏水性/亲水性、主链构象和刚性等)的其它氨基酸取代。可频繁进行此类变化，而不显著破坏抗体或片段的生物活性。本领域技术人员认识到，通常，多肽的非必需区域中的单一氨基酸取代基本上不改变生物活性(参见例如 Watson等人(1987)Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co.，第224页(第4版))。另外，结构或功能相似氨基酸的取代不太可能显著破坏生物活性。本文讨论的本发明的变体抗LAG3抗体或抗原结合片段包含一个或多个CDR(例如，1、2或3个变体CDR-L和/或1、2或3个变体CDR-H)；骨架区(例如，FR1、FR2、FR3和/或FR4中的任何一个或多个)；和/或具有一个或多个保守取代的免疫球蛋白链。例如，此类抗体和片段可以包含本文公开的氨基酸序列，例如SEQ ID NO: 1-16；其中此类氨基酸序列可以包含其1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、15、20或更多个保守氨基酸取代。示例性保守取代记载于表1中。
表1. 示例性保守氨基酸取代
初始残基 保守取代
Ala (A) Gly；Ser
Arg (R) Lys；His
Asn (N) Gln；His
Asp (D) Glu；Asn
Cys (C) Ser；Ala
Gln (Q) Asn
Glu (E) Asp；Gln
Gly (G) Ala
His (H) Asn；Gln
Ile (I) Leu；Val
Leu (L) Ile；Val
Lys (K) Arg；His
Met (M) Leu；Ile；Tyr
Phe (F) Tyr；Met；Leu
Pro (P) Ala
Ser (S) Thr
Thr (T) Ser
初始残基 保守取代
Trp (W) Tyr；Phe
Tyr (Y) Trp；Phe
Val (V) Ile；Leu
ADI-12126和ADI-12152抗体及其抗原结合片段的功能保守的变体也是本发明的一部分。ADI-12126和ADI-12152抗体及其抗原结合片段(如本文所讨论)的任何变体可以是“功能保守的变体”。在一些情况下，此类功能保守的变体也可以表征为保守修饰的变体。如本文所用，“功能保守的变体”是指ADI-12126和ADI-12152抗体或其抗原结合片段的变体，其中一个或多个氨基酸残基已被改变而不显著改变所述抗体或片段的一种或多种功能特性。在本发明的一个实施方案中，本发明的功能保守变体ADI-12126和ADI-12152抗体及其抗原结合片段包含免疫球蛋白链的变体和/或本文所述的任何那些的CDR的变体，例如，SEQID NO: 1-16中的任一种；其表现出以下功能特性中的一种或多种：
· 结合人LAG3，KD为约18 pM至约25 pM(例如，通过Kinexa测定)，例如，约25 pM、18pM、21 pM或22 pM；
· 结合食蟹猴LAG3，KD为约43 pM至约367 pM(例如，通过Kinexa测定)，例如，约43pM、126 pM、367 pM或48 pM。
序列同一性是指当最佳比对两个序列时两个多肽的氨基酸在等效位置相同的程度。序列相似性包括相同的残基和不同的、生物化学相关的氨基酸。上文讨论了共享相似特性并且可以互换的生物化学相关的氨基酸。
以下参考文献涉及经常用于序列分析的BLAST算法：BLAST ALGORITHMS:Altschul等人 (2005) FEBS J. 272(20): 5101-5109；Altschul, S.F.,等人, (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410；Gish, W.,等人, (1993) Nature Genet. 3: 266-272；Madden, T.L.,等人, (1996) Meth. Enzymol. 266: 131-141；Altschul, S.F.,等人,(1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402；Zhang, J.,等人, (1997) Genome Res. 7:649-656；Wootton, J.C.,等人, (1993) Comput. Chem. 17: 149-163；Hancock, J.M.等人, (1994) Comput. Appl. Biosci. 10: 67-70；ALIGNMENT SCORING SYSTEMS:Dayhoff, M.O.,等人, "A model of evolutionary change in proteins." in Atlas ofProtein Sequence and Structure, (1978) 第5卷，增刊3. M.O. Dayhoff (编辑), 第345-352页, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC；Schwartz, R.M.,等人, "Matrices for detecting distant relationships." in Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) 第5卷，增刊3." M.O. Dayhoff (编辑), 第353-358页, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC；Altschul, S.F., (1991) J. Mol. Biol. 219:555-565；States, D.J.,等人, (1991) Methods 3: 66-70；Henikoff, S.,等人, (1992)Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 10915-10919；Altschul, S.F.,等人, (1993) J.Mol. Evol. 36: 290-300；ALIGNMENT STATISTICS: Karlin, S.,等人, (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 2264-2268；Karlin, S.,等人, (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 5873-5877；Dembo, A.,等人, (1994) Ann. Prob. 22: 2022-2039；和Altschul, S.F. "Evaluating the statistical significance of multiple distinctlocal alignments." Theoretical and Computational Methods in Genome Research(S. Suhai,编辑), (1997) 第1-14页, Plenum, New York。
本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂抗体)可以包含本文公开的免疫球蛋白链的互补决定区(CDR)中的一个、两个、三个、四个、五个或六个(其中，CDR中的1个、2个、3个、4个、5个或6个任选地是本文所述的那些的变体)。一个、两个、三个、四个、五个或六个CDR可以独立地选自本文公开的各种免疫球蛋白链的CDR序列。或者，所有CDR都可以选自ADI-12126；或者所有CDR都可以选自ADI-12152。
本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段可以包含至少一个抗体重链可变(VH)结构域，其包含ADI-12126 VH (例如，SEQ ID NO: 1)的CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中的一个或多个(例如3个)；例如，其中CDR分别包含SEQ ID NO: 5 (或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个点突变和/或点缺失的变体)、6 (或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个点突变和/或点缺失的变体)和7 (或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个点突变和/或点缺失的变体)中所述的氨基酸序列。
本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段可以包含至少一个抗体轻链可变(VL)结构域，其包含ADI-12126 VL (例如，SEQ ID NO: 3)的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的一个或多个(例如3个)；例如，其中CDR分别包含SEQ ID NO: 8 (或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个点突变和/或点缺失的变体)、9 (或其具有1、2、3、4、5、6或7个点突变和/或点缺失的变体)和10(或其具有1、2、3、4、5、6、7、8或9个点突变和/或点缺失的变体)中所述的氨基酸序列。
本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段可以包含至少一个抗体重链可变(VH)结构域，其包含ADI-12152 VH (例如，SEQ ID NO: 2)的CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中的一个或多个(例如3个)；例如，其中CDR分别包含SEQ ID NO: 11 (或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个点突变和/或点缺失的变体)、12 (或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个点突变和/或点缺失的变体)和13(或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个点突变和/或点缺失的变体)中所述的氨基酸序列。
本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段可以包含至少一个抗体轻链可变(VL)结构域，其包含ADI-12152 VL (例如，SEQ ID NO: 4)的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的一个或多个(例如3个)；例如，其中CDR分别包含SEQ ID NO: 14 (或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个点突变和/或点缺失的变体)、15 (或其具有1、2、3、4、5、6或7个点突变和/或点缺失的变体)和16 (或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个点突变和/或点缺失的变体)中所述的氨基酸序列。
本发明提供了抗LAG3抗体或其抗原结合片段，其包含：
· ADI-12126 CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及ADI-12126 CDR-L1、CDR-L2和CDRL3；或
· ADI-12152 CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3；以及ADI-12152 CDR-L1、CDR-L2和CDRL3；
其中，任选地，所述CDR中的1个、2个、3个、4个、5个或6个是本文所述的那些的变体。
本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段可以包含重链可变(VH)结构域，其包含ADI-12126 VH (例如，SEQ ID NO: 1)的CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中的一个或多个(例如3个)；例如，其中CDR分别包含SEQ ID NO: 5 (或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个点突变和/或点缺失的变体)、6 (或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个点突变和/或点缺失的变体)和7 (或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个点突变和/或点缺失的变体)中所述的氨基酸序列；以及轻链可变(VL)结构域，其包含ADI-12126 VL (例如，SEQ ID NO: 3)的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的一个或多个(例如3个)；例如，其中CDR分别包含SEQ ID NO: 8 (或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个点突变和/或点缺失的变体)、9 (或其具有1、2、3、4、5、6、7个点突变和/或点缺失的变体)和10 (或其具有1、2、3、4、5、6、7、8或9个点突变和/或点缺失的变体)中所述的氨基酸序列。
本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段可以包含重链可变(VH)结构域，其包含ADI-12152 VH (例如，SEQ ID NO: 2)的CDR-H1、CDR-H2或CDR-H3中的一个或多个(例如3个)；例如，其中CDR分别包含SEQ ID NO: 11 (或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个点突变和/或点缺失的变体)、12 (或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个点突变和/或点缺失的变体)和13 (或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个点突变和/或点缺失的变体)中所述的氨基酸序列；以及轻链可变(VL)结构域，其包含ADI-12152 VL (例如，SEQ ID NO: 4)的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的一个或多个(例如3个)；例如，其中CDR分别包含SEQ ID NO: 14 (或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个点突变和/或点缺失的变体)、15 (或其具有1、2、3、4、5、6或7个点突变和/或点缺失的变体)和16 (或其具有1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个点突变和/或点缺失的变体)中所述的氨基酸序列。
本发明提供了抗LAG3抗体或其抗原结合片段或免疫球蛋白多肽，其包含：
· ADI-12126 VH免疫球蛋白结构域和/或ADI-12126 VL免疫球蛋白结构域；或
· ADI-12152 VH免疫球蛋白结构域和/或ADI-12152 VL免疫球蛋白结构域；
其中，任选地，VL和/或VH是本文所述的VL或VH的变体(例如，SEQ ID NO: 1-4)。
本发明进一步提供了包含ADI-12126的VL结构域的抗LAG3抗体或其抗原结合片段，其中所述VL结构域包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列或其变体。
本发明进一步提供了包含ADI-12126的VH结构域的抗LAG3抗体或其抗原结合片段，其中所述VH结构域包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列；或其变体。
本发明进一步提供了包含ADI-12152的VL结构域的抗LAG3抗体或其抗原结合片段，其中所述VL结构域包含SEQ ID NO: 4的氨基酸序列或其变体。
本发明进一步提供了包含ADI-12152的VH结构域的抗LAG3抗体或其抗原结合片段，其中所述VH结构域包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列；或其变体。
本发明进一步提供了抗LAG3抗体或其抗原结合片段，其包含ADI-12126的VL结构域，其中所述VL结构域包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列或其变体；和ADI-12126的VH结构域，其中所述VH结构域包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列；或其变体。
本发明进一步提供了抗LAG3抗体或其抗原结合片段，其包含ADI-12152的VL结构域，其中所述VL结构域包含SEQ ID NO: 4的氨基酸序列或其变体；和ADI-12152的VH结构域，其中所述VH结构域包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列；或其变体。
本发明还提供了包含SEQ ID NO: 1中所述的氨基酸序列或其变体的多肽；或编码这种多肽的任何多核苷酸。
本发明还提供了包含SEQ ID NO: 2中所述的氨基酸序列或其变体的多肽；或编码这种多肽的任何多核苷酸。
本发明还提供了包含SEQ ID NO: 3中所述的氨基酸序列或其变体的多肽；或编码这种多肽的任何多核苷酸。
本发明还提供了包含SEQ ID NO: 4中所述的氨基酸序列或其变体的多肽；或编码这种多肽的任何多核苷酸。
本发明还提供了包含SEQ ID NO: 1的VH结构域的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的多肽(例如人免疫球蛋白链)；或编码这种多肽的任何多核苷酸。任选地，此类CDR中的1个、2个或3个是本文所述的序列的变体。在本发明的一个实施方案中，CDR分别包含SEQ ID NO: 5-7中所述的氨基酸序列。
本发明还提供了包含SEQ ID NO: 2的VH结构域的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的多肽(例如人免疫球蛋白链)；或编码这种多肽的任何多核苷酸。任选地，此类CDR中的1个、2个或3个是本文所述的序列的变体。在本发明的一个实施方案中，CDR分别包含SEQ ID NO: 11-13中所述的氨基酸序列。
本发明还提供了包含SEQ ID NO: 3的VL结构域的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的多肽(例如人免疫球蛋白链)；或编码这种多肽的任何多核苷酸。任选地，此类CDR中的1个、2个或3个是本文所述的序列的变体。在本发明的一个实施方案中，CDR分别包含SEQ ID NO: 8-10中所述的氨基酸序列。
本发明还提供了包含SEQ ID NO: 4的VL结构域的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的多肽(例如人免疫球蛋白链)；或编码这种多肽的任何多核苷酸。任选地，此类CDR中的1个、2个或3个是本文所述的序列的变体。在本发明的一个实施方案中，CDR分别包含SEQ ID NO: 14-16中所述的氨基酸序列。
本发明包括本发明的ADI-12126和ADI-12152抗LAG3抗体及其抗原结合片段的晶体组合物。
多核苷酸
本发明进一步包括编码本文公开的抗LAG3抗体及其抗原结合片段的任何多肽或免疫球蛋白链(包括本文具体记载的氨基酸链的变体)的多核苷酸。例如，本发明包括SEQ IDNO: 17-20和47中所述的多核苷酸及其变体(例如，包含与此类核苷酸序列(如上所讨论)具有至少70％、80％、90％、95％或99％BLAST序列同一性的核苷酸序列)；和编码其中所述的氨基酸(例如SEQ ID NO: 1-4中)的多核苷酸。本发明的范围还包括与任何此类多核苷酸杂交的变体多核苷酸。
在本发明的一个实施方案中，ADI-12126重链由包含以下核苷酸序列的多核苷酸编码：
在本发明的一个实施方案中，ADI-12126重链由包含以下核苷酸序列的多核苷酸编码：
在本发明的一个实施方案中，ADI-12126轻链由包含以下核苷酸序列的多核苷酸编码：
在本发明的一个实施方案中，ADI-12152重链由包含以下核苷酸序列的多核苷酸编码：
在本发明的一个实施方案中，ADI-12152轻链由包含以下核苷酸序列的多核苷酸编码：
此外，本发明包括抗LAG3抗体及其抗原结合片段，其包含免疫球蛋白重链和轻链(例如，其可变区)和/或由本文所述的多核苷酸编码的重链和轻链CDR。
例如，本发明包括抗LAG3抗体及其抗原结合片段，其包含由包含SEQ ID NO: 17、19或47中所述的核苷酸序列(或编码其可变结构域)的多核苷酸编码的重链免疫球蛋白和由SEQ ID NO: 18或20中所述的核苷酸序列(或编码其可变结构域)编码的轻链免疫球蛋白。
本发明还提供了包含SEQ ID NO: 17中所述的核苷酸序列的多核苷酸；或其变体。
本发明还提供了包含SEQ ID NO: 18中所述的核苷酸序列的多核苷酸；或其变体。
本发明还提供了包含SEQ ID NO: 19中所述的核苷酸序列的多核苷酸；或其变体。
本发明还提供了包含SEQ ID NO: 20中所述的核苷酸序列的多核苷酸；或其变体。
本发明还提供了包含SEQ ID NO: 47中所述的核苷酸序列的多核苷酸；或其变体。
本文所述的变体多核苷酸包括那些多核苷酸，其在低、中等或高严格度条件下与本文所述的多核苷酸或编码本文所述的多肽的多核苷酸杂交，且编码抗LAG3抗体或其抗原结合片段的免疫球蛋白链，所述抗LAG3抗体或其抗原结合片段的免疫球蛋白链维持特异性结合LAG3 (人类和/或食蟹猴，例如食蟹猕猴或猕猴)的能力。当第一多核苷酸分子的单链形式可在适当温度和溶液离子强度条件下与第二多核苷酸分子退火时，第一多核苷酸分子与第二多核苷酸分子“可杂交”(参见Sambrook等人，同上)。温度和离子强度的条件决定杂交的“严格度”。典型的低严格度杂交条件包括55℃、5X SSC、0.1% SDS和无甲酰胺；或30%甲酰胺、5X SSC、0.5% SDS、在42℃下。典型中等严格度杂交条件为40%甲酰胺、5X或6X SSC和0.1% SDS、在42℃下。高严格度杂交条件为50%甲酰胺、5X或6X SSC、在42℃下或任选地在更高温度(例如57℃、59℃、60℃、62℃、63℃、65℃或68℃)下。通常，SSC为0.15M NaCl和0.015M柠檬酸钠。杂交要求两个多核苷酸含有互补序列，但是，取决于杂交的严格度，碱基之间的错配是可能的。用于杂交多核苷酸的适当严格度取决于多核苷酸的长度和互补程度、本领域中众所周知的变量。两个核苷酸序列之间的相似性或同源性程度越大，核酸可杂交的严格度越高。对于长度超过100个核苷酸的杂交物，已推导出用于计算熔融温度的方程(参见Sambrook等人，同上，9.50-9.51)。对于与更短多核苷酸、例如寡核苷酸的杂交，错配位置变得更重要，且寡核苷酸长度决定其特异性(参见Sambrook等人，同上，11.7-11.8)。
在本发明的另一个实施方案中，编码本文所述的抗LAG3抗体或抗原结合片段的免疫球蛋白多肽链的多核苷酸，例如DNA，形成本发明的一部分。在一个实施方案中，所述多核苷酸编码至少一个免疫球蛋白多肽轻链可变(VL)结构域和至少一个免疫球蛋白多肽重链可变(VH)结构域，其中所述VL结构域包含分别具有SEQ ID NO: 8-10或分别14-16中所述的氨基酸序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；且所述VH结构域包含分别具有SEQ ID NO: 5-7或分别SEQ ID NO: 11-13中所述的氨基酸序列的 CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3。在一个实施方案中，所述核酸编码ADI-12126或ADI-12152轻链可变区和/或ADI-12126或ADI-12152重链可变区序列。在本发明的一些实施方案中，所述多核苷酸在单个多核苷酸分子上编码轻链和重链两者，并且在本发明的其它实施方案中，在分开的多核苷酸分子上，例如，在分开或常见宿主细胞中，编码所述轻链和重链。在另一个实施方案中，所述多核苷酸进一步编码信号序列。
在本发明的一个实施方案中，所述多核苷酸编码分别包含SEQ ID NO: 8-10的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的ADI-12126免疫球蛋白轻链可变(VL)结构域。此类多核苷酸的变体也是本发明的一部分。
在本发明的一个实施方案中，所述多核苷酸编码分别包含SEQ ID NO: 14-16的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3的ADI-12152免疫球蛋白轻链可变(VL)结构域。此类多核苷酸的变体也是本发明的一部分。
在本发明的一个实施方案中，所述多核苷酸编码分别包含SEQ ID NO: 5-7的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的ADI-12126免疫球蛋白重链可变(VH)结构域。此类多核苷酸的变体也是本发明的一部分。
在本发明的一个实施方案中，所述多核苷酸编码分别包含SEQ ID NO: 11-13的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3的ADI-12152免疫球蛋白重链可变(VH)结构域。此类多核苷酸的变体也是本发明的一部分。
在本发明的一个实施方案中，所述多核苷酸编码SEQ ID NO: 3的免疫球蛋白轻链可变(VL)结构域。此类多核苷酸的变体也是本发明的一部分。
在本发明的一个实施方案中，所述多核苷酸编码SEQ ID NO: 4的免疫球蛋白轻链可变(VL)结构域。此类多核苷酸的变体也是本发明的一部分。
在本发明的一个实施方案中，所述多核苷酸编码SEQ ID NO: 1的免疫球蛋白重链可变(VH)结构域。此类多核苷酸的变体也是本发明的一部分。
在本发明的一个实施方案中，所述多核苷酸编码SEQ ID NO: 2的免疫球蛋白重链可变(VH)结构域。此类多核苷酸的变体也是本发明的一部分。
本发明还提供了载体，例如表达载体，诸如质粒，其包含本发明的多核苷酸(本文所述的序列及其变体，例如SEQ ID NO: 17-20或47)，其中所述多核苷酸可以可操作连接至控制序列(诸如启动子)，当用载体转染宿主细胞时，所述控制序列(诸如启动子)被宿主细胞识别。还提供了宿主细胞，其包含本发明的多核苷酸(例如，整合至宿主细胞的基因组(例如染色体)中，或在宿主细胞中异位)或载体。如下所讨论，用于产生本文公开的抗体或其抗原结合片段或多肽的方法是本发明的一部分。
结合亲和力
通过实例的方式，且非限制，本文公开的抗LAG3抗体及其抗原结合片段结合LAG3，例如，KD值为至少约100 nM (1x10-7 M)；至少约10nM；或者至少约1nM。在进一步实施方案中，所述抗体具有至少约200 pM (2x10-10 M)、100 pM、50 pM、20 pM、10 pM、5pM或甚至2 pM的KD值。例如，KD为约2.77 X 10-12 M、1.47 X 10-11 M、1.47 X 10-09 M或9.03 X 10-11 M；或更高的亲和力。在本发明的一个实施方案中，KD在KinExA测定或类似的动力学排除测定中测量。参见例如Darling等人. Assay and Drug Dev. Tech. 2(6): 647-657 (2004)。
制备抗体及其抗原结合片段的方法
本文公开的抗LAG3抗体也可以重组产生(例如，在大肠杆菌/T7表达系统中)。在该实施方案中，编码本发明的抗LAG3抗体免疫球蛋白分子(例如VH或VL，例如，SEQ ID NO: 1-4或21-24中的任何一种或多种)的核酸可插入基于pET的质粒中并在大肠杆菌/T7系统中表达。例如，本发明包括用于在宿主细胞(例如细菌宿主细胞，诸如大肠杆菌，诸如BL21或BL21DE3)中表达抗体或其抗原结合片段或其免疫球蛋白链的方法，其包括在还包括编码可操作连接至T7启动子的免疫球蛋白链的多核苷酸的细胞中表达T7 RNA聚合酶。例如，在本发明的一个实施方案中，细菌宿主细胞，诸如大肠杆菌，包括编码可操作连接至lac启动子的T7 RNA聚合酶基因的多核苷酸，且聚合酶和链的表达通过宿主细胞与IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)一起孵育来诱导。
存在几种产生重组抗体的本领域中已知的方法。重组产生抗体的方法的一个实例公开于美国专利号4,816,567中。
转化可通过任何已知用于将多核苷酸引入宿主细胞中的方法。用于将异源多核苷酸引入哺乳动物细胞的方法是本领域中众所周知的，且包括葡聚糖介导的转染、磷酸钙沉淀、凝聚胺介导的转染、原生质体融合、电穿孔、多核苷酸封装在脂质体中、基因枪注射和DNA直接显微注射至核中。另外，核酸分子可通过病毒载体引入哺乳动物细胞中。细胞转化方法是本领域中众所周知的。参见例如美国专利号4,399,216；4,912,040；4,740,461和4,959,455。
因此，本发明包括用于制备本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI- 12152)或其免疫球蛋白链的重组方法，其包括：
(i) 引入编码抗体或片段的一个或多个免疫球蛋白链(例如ADI-12126或ADI-12152的重链免疫球蛋白；例如，SEQ ID NO: 1或3，和/或例如ADI-12126或ADI-12152的轻链免疫球蛋白；例如，SEQ ID NO: 2或4，例如)的多核苷酸，其中所述多核苷酸在载体中和/或与启动子可操作连接；
(ii) 在有利于表达所述多核苷酸的条件下培养宿主细胞(例如CHO或毕赤酵母或巴斯德毕赤酵母)，且，
(iii) 任选地从宿主细胞和/或其中宿主细胞生长的培养基分离抗体或片段或链。
在本发明的一个实施方案中，由宿主细胞表达的多肽、抗体或抗原结合片段从宿主细胞分泌至培养基中。在本发明的一个实施方案中，分泌的多肽或免疫球蛋白链用分泌信号序列表达，所述分泌信号序列指导表达的产物从细胞分泌。在本发明的一个实施方案中，这种方法包括例如通过转化或转染将所述多核苷酸或载体引入宿主细胞中。
当制备包含多于一条免疫球蛋白链的抗体或抗原结合片段，例如包含两条重免疫球蛋白链和两条轻免疫球蛋白链的抗体时，在单一宿主细胞中共表达链导致，如果分泌此类链，则所述链例如在细胞中或细胞表面上或细胞外缔合，以形成所述抗体或抗原结合片段分子。此类方法是本发明的一部分。本发明的方法包括其中仅表达重免疫球蛋白链或仅表达轻免疫球蛋白链的方法。此类链可例如用作表达包括这种链的抗体或抗原结合片段的中间体。本发明还包括包含重链免疫球蛋白和轻链免疫球蛋白的抗LAG3抗体及其抗原结合片段，其为此类生产方法，以及任选地，本文所述的纯化方法的产物。
抗LAG3抗体也可以通过美国专利号6,331,415中所述的任何方法合成。
真核和原核宿主细胞(包括哺乳动物细胞，作为用于表达本文公开的抗LAG3抗体或片段或免疫球蛋白链的宿主)是本领域众所周知的，且包括许多可从美国典型培养物保藏中心(ATCC)得到的永生化的细胞系。这些尤其包括中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、NSO、SP2细胞、HeLa细胞、幼仓鼠肾(BHK)细胞、猴肾细胞(COS)、人肝细胞癌细胞(例如，Hep G2)、A549细胞、3T3细胞、HEK-293细胞和许多其它细胞系。哺乳动物宿主细胞包括人、小鼠、大鼠、狗、猴、猪、山羊、牛、马和仓鼠细胞。通过确定哪些细胞系具有高表达水平，选择特别优选的细胞系。可以使用的其它细胞系是昆虫细胞系(例如，草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)或粉纹夜蛾(Trichoplusia ni))、两栖动物细胞、细菌细胞、植物细胞和真菌细胞。真菌细胞包括酵母和丝状真菌细胞，包括，例如，巴氏毕赤酵母(Pichia pastoris)、芬兰毕赤酵母(Pichia finlandica)、喜海藻糖毕赤酵母(Pichia trehalophila)、Pichia koclamae、膜醭毕赤酵母(Pichia membranaefaciens)、微小毕赤酵母(Pichia minuta) (Ogataea minuta, Pichia lindneri)、仙人掌毕赤酵母(Pichia opuntiae)、耐热毕赤酵母(Pichia thermotolerans)、柳毕赤酵母(Pichia salictaria)、栎毕赤酵母(Pichia guercuum)、皮杰普氏毕赤酵母(Pichia pijperi)、具柄毕赤酵母(Pichia stiptis)、甲醇毕赤酵母(Pichia methanolica)、毕赤酵母属种(Pichia sp.)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、酵母属种(Saccharomyces sp.)、多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、克鲁维酵母属种(Kluyveromyces sp.)、乳酸克鲁维酵母(Kluyveromyces lactis)、白色念珠菌(Candida albicans)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)、黑曲霉(Aspergillus niger)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、里氏木霉(Trichoderma reesei)、拉氏金孢菌(Chrysosporium lucknowense)、镰孢菌属种(Fusarium sp.)、禾谷镰孢菌(Fusarium gramineum)、镰孢霉(Fusarium venenatum)、小立碗藓(Physcomitrella patens)和粗糙链孢霉(Neurospora crassa)、毕赤酵母属种(Pichia sp.)、任何酵母属种(Saccharomyces sp.)、多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)、任何克鲁维酵母属种(Kluyveromyces sp.)、白色念珠菌(Candida albicans)、任何曲霉菌属种(Aspergillus sp.)、里氏木霉(Trichoderma reesei)、拉氏金孢菌(Chrysosporium lucknowense)、任何镰孢菌属种(Fusarium sp.)、解脂耶氏酵母(Yarrowia lipolytica)和粗糙链孢霉(Neurospora crassa)。
此外，使用许多已知技术，可以增强本发明的抗体及其抗原结合片段和免疫球蛋白链(或来自其的其它部分)从生产细胞系的表达。例如，谷氨酰胺合成酶基因表达系统(GS系统)是用于增强在特定条件下的表达的常见方案。与欧洲专利号0 216 846、0 256 055和0 323 997和欧洲专利申请号89303964.4关联地完整地或部分地讨论了GS系统。因此，在本发明的一个实施方案中，所述哺乳动物宿主细胞(例如，CHO)缺乏谷氨酰胺合成酶基因，并在没有谷氨酰胺存在下在培养基中生长，然而，其中，编码免疫球蛋白链的多核苷酸包含谷氨酰胺合成酶基因，其补充宿主细胞中该基因的缺乏。
本发明包括用于纯化本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段的方法，其包括将包含所述抗体或片段的样品(例如，培养基、细胞裂解物或细胞裂解物级分，例如，裂解物的可溶性级分)引入纯化介质，和从不结合所述介质的所述样品的流通级分收集纯化的抗体或片段；或者，丢弃所述流通级分并从所述介质洗脱结合的抗体或片段和收集所述洗脱液。在本发明的一个实施方案中，所述介质是在所述样品所应用的柱中。在本发明的一个实施方案中，在宿主细胞中重组表达抗体或片段之后进行所述纯化方法，例如，其中首先裂解所述宿主细胞，并任选地在介质上纯化之前纯化裂解物的不溶物；或其中宿主细胞将抗体或片段分泌进培养基中并将所述介质或其级分应用于纯化介质。在本发明的一个实施方案中，所述纯化介质是阳离子交换介质、阴离子交换介质、疏水交换介质、大小交换色谱柱和/或亲和纯化介质(例如，蛋白-A、蛋白-G、蛋白-A/G、蛋白-L))。
通常，在特点细胞系或转基因动物中产生的糖蛋白将具有在所述细胞系或转基因动物中产生的糖蛋白所特有的糖基化模式。因此，抗体的特定糖基化模式将取决于用于产生所述抗体的特定细胞系或转基因动物。然而，由本文提供的核酸分子编码或包含本文提供的氨基酸序列的所有抗体均构成本发明，其不依赖于抗体可具有的糖基化模式。类似地，在具体实施方案中，具有仅包含未岩藻糖基化的N-聚糖的糖基化模式的抗体可以是有利的，因为这些抗体已经被显示通常在体外和在体内表现出比它们的岩藻糖基化的相应物更有效的效力(参见例如，Shinkawa等人, J. Biol. Chem. 278: 3466-3473 (2003)；美国专利号6,946,292和7,214,775)。这些具有未岩藻糖基化的N-聚糖的抗体不可能是免疫原性的，因为它们的碳水化合物结构是存在于人血清IgG中的群体的正常组分。
本发明包括包含N-连接的聚糖的抗LAG3抗体及其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)，所述N-连接的聚糖通常添加至在中国仓鼠卵巢细胞中产生的免疫球蛋白(CHO N-连接的聚糖)或添加至工程改造的酵母细胞(工程改造的酵母N-连接的聚糖)，例如，巴斯德毕赤酵母。例如，在本发明的一个实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含在图1中所示的“工程改造的酵母N-连接的聚糖”或“CHO N-连接的聚糖”中的一种或多种(例如，G0和/或G0-F和/或G1和/或G1-F和/或和/或G2-F和/或Man5)。在本发明的一个实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含工程改造的酵母N-连接的聚糖，即，G0和/或G1和/或G2，任选地，还包括Man5。在本发明的一个实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含CHO N-连接的聚糖，即，G0-F、G1-F和G2-F，任选地，还包括G0和/或G1和/或G2和/或Man5。在本发明的一个实施方案中，在所述抗体或抗原结合片段免疫球蛋白链上的所有N-连接的聚糖的约80%至约95%(例如，约80-90%、约85%、约90%或约95%)是工程改造的酵母N-连接的聚糖或CHON-连接的聚糖。参见Nett等人. Yeast. 28 (3): 237-252 (2011); Hamilton等人.Science. 313 (5792): 1441-1443 (2006); Hamilton等人. Curr Opin Biotechnol. 18(5): 387-392 (2007)。例如，在本发明的一个实施方案中，工程改造的酵母细胞是GFI5.0或YGLY8316或在美国专利号7,795,002或Zha等人. Methods Mol Biol. 988: 31-43(2013)中所述的菌株。也参见国际专利申请公开号WO2013/066765。
本发明包括多克隆抗LAG3抗体和其抗原结合片段，例如包含多种抗LAG3抗体和片段的组合物，其包括一种或多种本发明的抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)，和其使用方法。多克隆抗体是在一种或多种其它不相同抗体中或存在的情况下产生的抗体。通常，多克隆抗体由不同B淋巴细胞集合，例如用目标免疫原处理的动物的B淋巴细胞产生，所述B淋巴细胞产生不同抗体的群体，但其均针对免疫原。通常，多克隆抗体直接从免疫动物、例如脾、血清或腹水获得。
本发明进一步包括本文公开的抗体的抗LAG3抗原结合片段。抗体片段包括F(ab)2片段，其可通过经由例如胃蛋白酶对IgG进行酶促切割来产生。Fab片段可通过例如用二硫苏糖醇或巯基乙胺还原F(ab)2来产生。Fab片段是通过二硫键附接至VH-CH1链的VL-CL链。F(ab)2片段是两个Fab片段，其进而通过两个二硫桥连接。F(ab)2分子的Fab部分包括Fc区的一部分，二硫键位于其之间。FV片段是VL或VH区。
Fc区的抗体工程改造
本文公开的抗LAG3抗体和其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)也可工程改造以在Fc区内包括修饰，通常改变抗体的一种或多种功能特性，诸如血清半衰期、补体结合、Fc受体结合和/或效应子功能(例如抗原依赖性细胞毒性)。此外，所述抗体和其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)可被化学修饰(例如一种或多种化学部分可附接至抗体)或被修饰以改变其糖基化，再次改变抗体或片段的一种或多种功能特性。这些实施方案各自进一步详细描述于下文中。Fc区中的残基的编号是Kabat EU索引的编号。具有本文讨论的修饰(例如，Fc修饰)和/或改变的任何此类抗LAG3抗体或其抗原结合片段是本发明的一部分。
本文公开的抗LAG3抗体和其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)也包括具有修饰(或阻断)的Fc区以提供改变的效应子功能的抗体和片段。参见例如美国专利号5,624,821；WO2003/086310；WO2005/120571；WO2006/0057702。此类修饰可用于增强或抑制免疫系统的各种反应，其具有诊断和疗法中的可能有益作用。Fc区的改变包括氨基酸变化(取代、缺失和插入)、糖基化或去糖基化和添加多个Fc。Fc的改变也可改变治疗抗体中抗体的半衰期，实现不太频繁的给药且因此增加便利性且物质使用减少。参见Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116: 731第734-35页。
在一个实施方案中，所述抗LAG3抗体或抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)是在重链恒定区的铰链区中对应于位置228的位置包含丝氨酸至脯氨酸突变(S228P；EU索引)的IgG4同种型抗体或片段。已报导该突变消除铰链区中重链间二硫桥的异质性(Angal等人，同上；位置241基于Kabat编号系统)。
在本发明的一个实施方案中，CH1的铰链区被修饰，使得铰链区中的半胱氨酸残基的数目增加或减少。该方法进一步描述于美国专利号5,677,425中。CH1的铰链区中半胱氨酸残基的数目被改变，例如以促进轻链和重链的组装或增加或降低抗体的稳定性。
在另一个实施方案中，抗LAG3抗体或抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)的Fc铰链区被突变，以缩短抗体或片段的生物半衰期。更具体地，将一个或多个氨基酸突变引入Fc铰链片段的CH2-CH3结构域界面区，使得抗体或片段具有相对于天然Fc-铰链结构域SpA结合受损的葡萄球菌蛋白A(SpA)结合。此方法进一步详细描述于美国专利号6,165,745中。
在另一个实施方案中，抗LAG3抗体或抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)被修饰以增加其生物半衰期。各种方法为可能的。例如，可引入以下突变中的一种或多种：T252L、T254S、T256F，如美国专利号6,277,375中所述。或者，为了增加生物半衰期，抗体可在CH1或CL区内改变以含有结合取自IgG的Fc区的CH2结构域的两个环的表位的拯救受体，如美国专利号5,869,046和6,121,022中所述。
在还有其它实施方案中，Fc区通过将至少一个氨基酸残基用不同氨基酸残基置换以改变抗LAG3抗体或抗原结合片段的效应子功能。例如，选自氨基酸残基234、235、236、237、297、318、320和322的一个或多个氨基酸可被不同氨基酸残基置换，使得抗体具有改变的对效应子配体的亲和力，但保留亲本抗体的抗原结合能力。亲和力改变的效应子配体可以是例如Fc受体或补体的C1组分。该方法进一步详细描述于美国专利号5,624,821和5,648,260中。
在另一个实例中，选自氨基酸残基329、331和322的一个或多个氨基酸可被不同氨基酸残基置换，使得所述抗LAG3抗体或抗原结合片段具有改变的C1q结合和/或降低或消除的补体依赖性细胞毒性(CDC)。该方法进一步详细描述于美国专利号6,194,551中。
在另一个实例中，氨基酸位置123和239内的一个或多个氨基酸残基被改变，由此改变抗LAG3抗体或其抗原结合片段固定补体的能力。该方法进一步描述于PCT公开WO 94/29351中。
在又另一个实例中，Fc区通过在以下位置修饰一个或多个氨基酸而被修饰以降低所述抗LAG3抗体或抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)介导抗体依赖性细胞毒性(ADCC)的能力和/或降低抗体或片段对Fcγ受体的亲和力：238、239、243、248、249、252、254、255、256、258、264、265、267、268、269、270、272、276、278、280、283、285、286、289、290、292、293、294、295、296、298、301、303、305、307、309、312、315、320、322、324、326、327、329、330、331、333、334、335、337、338、340、360、373、376、378、382、388、389、398、414、416、419、430、434、435、437、438或439。该方法进一步描述于PCT公开WO00/42072中。此外，已定位人IgG1上对FcγR1、FcγRII、FcγRIII和FcRn的结合位点且已描述具有提高结合的变体(参见Shields等人(2001) J. Biol. Chem. 276: 6591-6604)。
在本发明的一个实施方案中，Fc区通过修饰残基243和264而被修饰以降低所述抗LAG3抗体或抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)介导效应子功能的能力和/或增加抗炎特性。在一个实施方案中，抗体或片段的Fc区通过将位置243和264的残基改变成丙氨酸来修饰。在一个实施方案中，Fc区通过修饰残基243、264、267和328而被修饰以降低抗体或片段介导效应子功能的能力和/或增加抗炎特性。
在又另一个实施方案中，所述抗LAG3抗体或抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)包含特定糖基化模式。例如，可制备无糖基化抗体或片段(即抗体缺乏糖基化)且此类抗体和片段是本发明的一部分。抗体或片段的糖基化模式可被改变，以例如增加抗体或片段对LAG3抗原的亲和力或亲合力。此类修饰可通过例如改变抗体或片段序列内的一个或多个糖基化位点来实现。例如，可进行一个或多个氨基酸取代，其导致去除一个或多个可变区骨架糖基化位点，由此消除该位点的糖基化。此类无糖基化可增加抗体或片段对抗原的亲和力或亲合力。参见例如美国专利号5,714,350和6,350,861。
本文公开的抗LAG3抗体和抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)可进一步包括在低级真核生物宿主细胞、特别是真菌宿主细胞诸如酵母(诸如，巴斯德毕赤酵母)和丝状真菌中产生的抗体和抗原结合片段，其已被遗传工程改造以产生具有哺乳动物或人类样糖基化模式的糖蛋白(参见例如Choi等人(2003) Proc. Natl. Acad. Sci. 100: 5022-5027；Hamilton等人，(2003) Science 301: 1244-1246；Hamilton等人，(2006) Science313: 1441-1443)。这些遗传修饰的宿主细胞相对于当前使用的哺乳动物细胞系的一个特定优势是能够控制在细胞中产生的糖蛋白的糖基化概况，使得可产生其中特定N-聚糖结构占优势的糖蛋白的组合物(参见例如美国专利号7,029,872和美国专利号7,449,308)。这些遗传修饰的宿主细胞已用于产生主要具有特定N-聚糖结构的抗体(参见例如Li等人(2006)Nat. Biotechnol. 24: 210-215)。
在具体实施方案中，本文公开的抗LAG3抗体和其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)进一步包括在低级真核宿主细胞中产生的抗体和其抗原结合片段且其包含岩藻糖基化和未岩藻糖基化的杂合和复合N-聚糖，包括二等分和多天线物质，包括，但不限于，N-聚糖，诸如GlcNAc(1-4)Man3GlcNAc2；Gal(1-4)GlcNAc(1-4)Man3GlcNAc2；NANA(1-4)Gal(1-4)GlcNAc(1-4)Man3GlcNAc2。
在具体实施方案中，本文提供的抗LAG3抗体和其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)可包含具有至少一个选自以下的杂合N-聚糖的抗体或片段：GlcNAcMan5GlcNAc2；GalGlcNAcMan5GlcNAc2；和NANAGalGlcNAcMan5GlcNAc2。在具体方面，杂合N-聚糖是组合物中的主要N-聚糖物质。在进一步方面，杂合N-聚糖是特定的N-聚糖种类，其占组合物中的杂合N-聚糖的约30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、97%、98%、99%或100％。
在具体实施方案中，本文提供的抗LAG3抗体和其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)包含具有至少一个选自以下的复合N-聚糖的抗体和片段：GlcNAcMan3GlcNAc2；GalGlcNAcMan3GlcNAc2；NANAGalGlcNAcMan3GlcNAc2；GlcNAc2Man3GlcNAc2；GalGlcNAc2Man3GlcNAc2；Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2；NANAGal2GlcNAc2Man3GlcNAc2；和NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2。在具体方面，复合N-聚糖是组合物中的主要N-聚糖物质。在其它方面，复合N-聚糖是特定N-聚糖物质，其占组合物中的复合N-聚糖的约30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%、97%、98%、99%或100%。
在具体实施方案中，抗LAG3抗体和抗原结合片段N-聚糖被岩藻糖基化。通常，岩藻糖呈N-聚糖的还原末端与GlcNAc的α1,3-键、N-聚糖的还原末端与GlcNAc的α1,6-键、N-聚糖的非还原末端与Gal的α1,2-键、N-聚糖的非还原末端与GlcNac的α1,3-键或N-聚糖的非还原末端与GlcNac的α1,4-键。
因此，在以上糖蛋白组合物的具体方面，糖型呈α1,3-键或α1,6-键岩藻糖，以产生选自以下的糖型：Man5GlcNAc2(Fuc)、GlcNAcMan5GlcNAc2(Fuc)、Man3GlcNAc2(Fuc)、GlcNAcMan3GlcNAc2(Fuc)、GlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc)、GalGlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc)、Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc)、NANAGal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc)和NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc)；呈α1,3-键或α1,4-键岩藻糖，以产生选自以下的糖型：GlcNAc(Fuc)Man5GlcNAc2、GlcNAc(Fuc)Man3GlcNAc2、GlcNAc2(Fuc1-2)Man3GlcNAc2、GalGlcNAc2(Fuc1-2)Man3GlcNAc2、Gal2GlcNAc2(Fuc1-2)Man3GlcNAc2、NANAGal2GlcNAc2(Fuc1-2)Man3GlcNAc2和NANA2Gal2GlcNAc2(Fuc1-2)Man3GlcNAc2；或呈α1,2-键岩藻糖，以产生选自以下的糖型：Gal(Fuc)GlcNAc2Man3GlcNAc2、Gal2(Fuc1-2)GlcNAc2Man3GlcNAc2、NANAGal2(Fuc1-2)GlcNAc2Man3GlcNAc2和NANA2Gal2(Fuc1-2)GlcNAc2Man3GlcNAc2。
在其它方面，所述抗LAG3抗体或其抗原结合片段包含高甘露糖N-聚糖，包括，但不限于，Man8GlcNAc2、Man7GlcNAc2、Man6GlcNAc2、Man5GlcNAc2、Man4GlcNAc2或由Man3GlcNAc2 N-聚糖结构组成的N-聚糖。
在上述其它方面，复合N-聚糖进一步包括岩藻糖基化和未岩藻糖基化二等分和多天线物质。
在本发明的一个实施方案中，抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)包含免疫球蛋白Fc结构域，其包含含有唾液酸(例如，末端2,3-唾液酸或末端2,6-唾液酸)的聚糖(例如，N-乙酰神经氨酸)。在本发明的一个实施方案中，Fc上的聚糖是5、10、20、50、90％或更多的唾液酸化种类。在本发明的一个实施方案中，所述Fc包含位置297、264和/或243的突变。
如本文所用，术语“N-聚糖”和“糖型”可互换使用且是指N-连接的寡糖，例如通过天冬酰胺-N-乙酰基葡糖胺键附接至多肽的天冬酰胺残基的N-连接的寡糖。N-连接的糖蛋白含有在蛋白中连接至天冬酰胺残基的酰胺氮的N-乙酰基葡糖胺残基。在糖蛋白上发现的主要糖为葡萄糖、半乳糖、甘露糖、岩藻糖、N-乙酰基半乳糖胺(GalNAc)、N-乙酰基葡糖胺(GlcNAc)和唾液酸(例如N-乙酰基-神经氨酸(NANA))。对于N-连接的糖蛋白，糖基团的处理与翻译同时在ER的内腔中发生，并在翻译后在高尔基体中继续。
N-聚糖具有Man3GlcNAc2的常用五糖核心(“Man”是指甘露糖；“Glc”是指葡萄糖；且“NAc”是指N-乙酰基；GlcNAc是指N-乙酰基葡糖胺)。通常，N-聚糖结构以非还原末端在左边且还原性末端在右边来呈现。N-聚糖的还原性末端为附接至蛋白上包含糖基化位点的Asn残基的末端。N-聚糖在包含添加至Man3GlcNAc2 (“Man3”)核心结构(其也称为“三甘露糖核心”、“五糖核心”或“寡甘露糖”核心)的周围糖(例如GlcNAc、半乳糖、岩藻糖和唾液酸)的分枝(天线)数目方面不同。N-聚糖根据其分枝组分(例如高甘露糖、复合型或杂合型)分类。“高甘露糖”型N-聚糖具有五个或更多个甘露糖残基。“复合”型N-聚糖通常具有至少一个附接至“三甘露糖”核心的1,3甘露糖臂的GlcNAc和至少一个附接至“三甘露糖”核心的1,6甘露糖臂的GlcNAc。复合N-聚糖也可具有任选地被唾液酸或衍生物(例如“NANA”或“NeuAc”，其中“Neu”是指神经氨酸且“Ac”是指乙酰基)修饰的半乳糖(“Gal”)或N-乙酰基半乳糖胺(“GalNAc”)残基。复合N-聚糖也可具有包含“二等分”GlcNAc和核心岩藻糖(“Fuc”)的链内取代。复合N-聚糖也可在“三甘露糖核心”上具有多个天线，经常被称为“多天线聚糖”。“杂合”N-聚糖在三甘露糖核心的1,3甘露糖臂的末端上具有至少一个GlcNAc并在三甘露糖核心的1,6甘露糖臂上具有零或多个甘露糖。各种N-聚糖也称为“糖型”。
关于复合N-聚糖，术语“G-2”、“G-1”、“G0”、“G1”、“G2”、“A1”和“A2”意指以下。“G-2”是指可表征为Man3GlcNAc2的N-聚糖结构；术语“G-1”是指可表征为GlcNAcMan3GlcNAc2的N-聚糖结构；术语“G0”是指可表征为GlcNAc2Man3GlcNAc2的N-聚糖结构；术语“G1”是指可表征为GalGlcNAc2Man3GlcNAc2的N-聚糖结构；术语“G2”是指可表征为Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2的N-聚糖结构；术语“A1”是指可表征为NANAGal2GlcNAc2Man3GlcNAc2的N-聚糖结构；且术语“A2”是指可表征为NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2的N-聚糖结构。除非另外指明，否则术语“G-2”、“G-1”、“G0”、“G1”、“G2”、“A1”和“A2”是指缺乏在N-聚糖的还原末端附接至GlcNAc残基的岩藻糖的N-聚糖物质。当术语包括“F”时，“F”指示N-聚糖物质在N-聚糖的还原末端的GlcNAc残基上含有岩藻糖残基。例如，G0F、G1F、G2F、A1F和A2F均指示N-聚糖进一步包括在N-聚糖的还原末端附接至GlcNAc残基的岩藻糖残基。低级真核生物诸如酵母和丝状真菌通常不产生生产岩藻糖的N-聚糖。
关于多天线N-聚糖，术语“多天线N-聚糖”是指在构成N-聚糖的1,6臂或1,3臂的非还原末端的甘露糖残基上进一步包含GlcNAc残基或在构成N-聚糖的1,6臂和1,3臂的非还原末端的各甘露糖残基上包含GlcNAc残基的N-聚糖。因此，多天线N-聚糖可通过式GlcNAc(2-4)Man3GlcNAc2、Gal(1-4)GlcNAc(2-4)Man3GlcNAc2或NANA(1-4)Gal(1-4)GlcNAc(2-4)Man3GlcNAc2表征。术语“1-4”是指1、2、3或4个残基。
关于二等分N-聚糖，术语“二等分N-聚糖”是指其中GlcNAc残基在N-聚糖的还原末端连接至甘露糖残基的N-聚糖。二等分N-聚糖可通过式GlcNAc3Man3GlcNAc2表征，其中各甘露糖残基在其非还原末端连接至GlcNAc残基。相比之下，当多天线N-聚糖被表征为GlcNAc3Man3GlcNAc2时，该式指示两个GlcNAc残基在N-聚糖的两个臂之一的还原末端连接至甘露糖残基，且一个GlcNAc残基在N-聚糖的另一个臂的非还原末端连接至甘露糖残基。
抗体物理特性
本文公开的抗LAG3抗体和其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)可在轻链或重链免疫球蛋白可变区中进一步含有一个或多个糖基化位点。此类糖基化位点可导致增加的抗体或片段的免疫原性，或由于改变的抗原结合而改变抗体的pK(Marshall等人.(1972) Annu Rev Biochem 41: 673-702；Gala和Morrison (2004) J Immunol 172:5489-94；Wallick等人(1988) J Exp Med 168: 1099-109；Spiro (2002) Glycobiology12: 43R-56R；Parekh等人(1985) Nature 316: 452-7；Mimura等人(2000) Mol Immunol37: 697-706)。已知糖基化在含有N-X-S/T序列的基序进行。
各抗LAG3抗体或抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)将具有特征性熔融温度，其中较高熔融温度指示更大的体内整体稳定性(Krishnamurthy R和Manning MC(2002) Curr Pharm Biotechnol 3: 361-71)。通常，TM1(初始解折叠温度)可超过60℃、超过65℃或超过70℃。抗体或片段的熔点可使用差示扫描量热法(Chen等人(2003) Pharm Res 20: 1952-60；Ghirlando等人(1999) Immunol Lett 68: 47-52)或圆二色性(Murray等人(2002) J. Chromatogr Sci 40: 343-9)测量。
在另一个实施方案中，选择不迅速降解的抗LAG3抗体或抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)。可使用毛细管电泳(CE)和MALDI-MS测量抗体或片段的降解(AlexanderAJ和Hughes DE (1995) Anal Chem 67: 3626-32)。
在另一个实施方案中，选择具有最小聚集作用的抗LAG3抗体和其抗原结合片段，所述聚集作用可导致不必要免疫反应的触发和/或改变或不利的药代动力学特性。通常，聚集度为25%或更少、20%或更少、15%或更少、10%或更少或5%或更少的抗体和片段是可接受的。聚集可通过几种技术、包括尺寸排阻柱(SEC)、高效液相色谱(HPLC)和光散射来测量。
抗体缀合物
本文公开的抗LAG3抗体和其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)也可缀合至化学部分。此类缀合的抗体和片段是本发明的一部分。化学部分可尤其为聚合物、多肽、放射性核素或细胞毒性因子。在具体实施方案中，化学部分是增加抗体或片段在个体体内的半衰期的聚合物。合适的聚合物包括，但不限于，亲水性聚合物，其包括，但不限于，聚乙二醇(PEG)(例如分子量为2kDa、5kDa、10kDa、12kDa、20kDa、30kDa或40kDa的PEG)、葡聚糖和单甲氧基聚乙二醇(mPEG)。Lee等人(1999) (Bioconj. Chem. 10: 973-981)公开PEG缀合的单链抗体。Wen等人(2001) (Bioconj. Chem. 12: 545-553)公开了用附接至放射金属螯合剂(二乙烯三胺五乙酸(DTPA))的PEG缀合抗体。
本文公开的抗LAG3抗体和其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)也可用标记缀合，所述标记诸如99Tc、90Y、111In、32P、14C、125I、3H、131I、11C、15O、13N、18F、35S、51Cr、57To、226Ra、钌、60Co、59Fe、57Se、152Eu、67CU、217Ci、211At、212Pb、47Sc、109Pd、234Th和40K、157Gd、55Mn、52Tr和56Fe。
本文公开的抗LAG3抗体和其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)也可聚乙二醇化，例如以增加其生物(例如血清)半衰期。为了将抗体或片段聚乙二醇化，通常使抗体或片段与聚乙二醇(PEG)的反应形式，诸如PEG的反应性酯或醛衍生物在其中一个或多个PEG基团变得附接至抗体或抗体片段的条件下反应。在具体实施方案中，聚乙二醇化经由与反应性PEG分子(或类似反应性水溶性聚合物)的酰化反应或烷基化反应进行。如本文所用，术语“聚乙二醇”意欲涵盖已用于衍生其它蛋白的任一种PEG形式，诸如单(C1-C10)烷氧基-或芳氧基-聚乙二醇或聚乙二醇-马来酰亚胺。在某些实施方案中，待聚乙二醇化的抗体或片段是无糖基化的抗体或片段。用于聚乙二醇化蛋白的方法是本领域中已知的，且可应用于本发明的抗体。参见例如EP 0 154 316和EP 0 401 384。
本文公开的抗LAG3抗体和其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)也可与荧光或化学发光标记缀合，所述标记包括荧光团，诸如稀土螯合物、荧光素和其衍生物、若丹明和其衍生物、异硫氰酸酯、藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白、邻苯二甲醛、荧光胺、152Eu、丹磺酰基、伞酮、荧光素、鲁米那标记、异鲁米那标记、芳族吖啶酯标记、咪唑标记、吖啶盐标记、草酸酯标记、水母素标记、2,3-二氢酞嗪二酮、生物素/抗生素蛋白、旋转标记和稳定自由基。
本发明的抗LAG3抗体和其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)也可缀合至细胞毒性因子，诸如白喉毒素、绿脓假单胞菌外毒素A链、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲素A链、α-八叠球菌、油桐(Aleurites fordii)蛋白和化合物(例如脂肪酸)、香石竹毒蛋白、美洲商陆(Phytoiacca americana)蛋白PAPI、PAPII和PAP-S、苦瓜(momordica charantia)抑制剂、麻风树毒蛋白、巴豆毒素、肥皂草(saponaria officinalis)抑制剂、有丝分裂素(mitogellin)、局限曲菌素、酚霉素和伊诺霉素(enomycin)。
可采用本领域中已知的用于将所述抗LAG3抗体和其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)缀合至各种部分的任何方法，包括由Hunter等人(1962) Nature 144:945；David等人(1974) Biochemistry 13: 1014；Pain等人(1981) J. Immunol. Meth.40: 219；和Nygren, J., (1982) Histochem. and Cytochem. 30: 407描述的方法。用于缀合抗体和片段的方法是本领域中常规和非常众所周知的。
治疗用途
进一步提供了通过施用可有效用于此类治疗或预防的，有效量的本文公开的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152))，来治疗或预防需要这种治疗的受试者(例如人受试者)中的癌症的方法。
在本发明的一个实施方案中，这种受试者患有癌症(例如实体瘤，其除了肿瘤细胞以外还包括表达LAG3的肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)，诸如T细胞)，或针对其进行治疗。在本发明的一个实施方案中，所述癌症是骨肉瘤、横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤、肾癌、白血病、肾移行细胞癌、膀胱癌、Wilm氏癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌(例如，其特征在于BRCA1和/或BRCA2中的突变)、前列腺癌、骨癌、肺癌(例如非小细胞肺癌)、胃癌、结肠直肠癌、宫颈癌、滑膜肉瘤、头颈癌、鳞状细胞癌、多发性骨髓瘤、肾细胞癌、视网膜母细胞瘤、肝母细胞瘤、肝细胞癌、黑素瘤、肾横纹肌样瘤、尤因氏肉瘤、软骨肉瘤、脑癌、胶质母细胞瘤、脑膜瘤、垂体腺瘤、前庭神经鞘瘤、原始性神经外胚层肿瘤、成神经管细胞瘤、星形细胞瘤、间变性星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、室管膜瘤、脉络丛乳头状瘤、真性红细胞增多症、血小板增多症、特发性骨髓纤维化、软组织肉瘤、甲状腺癌、子宫内膜癌、类癌或肝癌、乳腺癌或胃癌。在本发明的一个实施方案中，癌症是转移性癌症，例如上述种类的转移性癌症。
本发明还提供了通过向受试者施用可有效用于这种治疗或预防的有效量的本文公开的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)来治疗或预防受试者中的感染性疾病的方法。在本发明的一个实施方案中，所述感染性疾病是病毒感染。在本发明的一个实施方案中，所述感染性疾病是细菌感染。在本发明的一个实施方案中，所述感染性疾病是寄生虫感染。在本发明的一个实施方案中，所述感染性疾病是真菌感染。
本发明包括通过施用治疗有效量的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)，任选地与本文所讨论的另外的治疗剂或治疗程序中的任一种的组合，来治疗本文所讨论的癌症或感染性疾病中任一种的方法，以及包括这种抗体或片段与这种另外的治疗剂的组合的组合物。
在本发明的一个实施方案中，所述病毒感染是选自以下病毒的病毒感染：人免疫缺陷病毒(HIV)、埃博拉病毒、肝炎病毒(甲型、乙型或丙型)、疱疹病毒(例如，VZV、HSV-I、HAV-6、HSV-II和CMV、爱泼斯坦-巴尔病毒)、腺病毒、流感病毒、黄病毒、艾柯病毒、鼻病毒、柯萨奇病毒、冠状病毒、呼吸道合胞体病毒、腮腺炎病毒、轮状病毒、麻疹病毒、风疹病毒、细小病毒、牛痘病毒、HTLV病毒、登革热病毒、乳头状瘤病毒、软疣病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒、JC病毒或虫媒病毒性脑炎病毒。
在本发明的一个实施方案中，所述细菌感染是选自以下细菌的细菌感染：衣原体属(Chlamydia)、立克次氏体属细菌、分枝杆菌属(mycobacteria)、葡萄球菌属(staphylococci)、链球菌属(streptococci)、肺炎球菌属(pneumonococci)、脑膜炎球菌(meningococci)和淋球菌(gonococci)、克雷伯氏菌属(klebsiella)、变形菌属(proteus)、沙雷氏菌属(serratia)、假单胞菌属(pseudomonas)、军团杆菌属(Legionella)、白喉棒杆菌(Corynebacterium diphtheriae)、沙门氏菌属(Salmonella)、芽胞杆菌(bacilli)、霍乱弧菌(Vibrio cholerae)、破伤风梭菌(Clostridium tetan)、肉毒梭状芽孢杆菌(Clostridium botulinum)、炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthricis)、鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)、麻风分枝杆菌(Mycobacterium leprae)、弥漫型麻风分枝杆菌(Mycobacterium lepromatosis)和Borriella。
在本发明的一个实施方案中，所述真菌感染是选自以下真菌的真菌感染：念珠菌属(Candida) (白色念珠菌(Candida albicans)、克鲁斯氏念珠菌(Candida krusei)、光滑念珠菌(Candida glabrata)、热带念珠菌(Candida tropicalis)等)、新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、曲霉菌属(Aspergillus) (烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、黑曲霉(Aspergillus niger)等)、毛霉菌目(Mucorales)属(毛霉属(mucor)、犁头霉属(absidia)、根霉属(rhizopus))、申克孢子丝菌(Sporothrix schenkii)、皮炎芽生菌(Blastomyces dermatitidis)、巴西副球孢子菌(Paracoccidioides brasiliensis)、粗球孢子菌(Coccidioides immitis)和荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)。
在本发明的一个实施方案中，所述寄生虫感染是选自以下寄生虫的寄生虫感染：溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)、结肠小袋纤毛虫(Balantidium coli)、福氏耐格里原虫(Naegleria fowleri)、棘阿米巴属(Acanthamoeba)、篮氏贾第鞭毛虫(Giardia lambia)、隐孢子虫属(Cryptosporidium)、卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)、间日疟原虫(Plasmodium vivax)、微小巴贝虫(Babesia microti)、布鲁斯锥虫(Trypanosoma brucei)、克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)、杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)、巴西日本圆线虫(Nippostrongylus brasiliensis)。
另外，本发明提供在个体(例如人类)中防止或抑制LAG3结合II类MHC、增强抗原特异性T细胞活化或刺激白介素-2的T细胞产生的方法，例如其中所述个体患有癌症或感染性疾病(例如如本文中所讨论)，所述方法包括向个体施用有效量的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-1215)，其任选地与另一治疗剂(例如，派姆单抗或尼鲁单抗)组合。
本发明的范围提供了本文公开的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)在制备用于治疗受试者中的癌症或感染性疾病的药物中的用途；以及本文公开的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)用于治疗或预防受试者中的癌症或感染疾病的用途。
本发明包括用于治疗或预防骨肉瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防横纹肌肉瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防神经母细胞瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防肾癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防白血病的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防肾移行细胞癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防膀胱癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防Wilm氏癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防卵巢癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防胰腺癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防乳腺癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。在本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防乳腺癌的方法包括施用有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段与蒽环霉素(例如多柔比星和/或表柔比星)和/或紫杉烷(例如，紫杉醇和/或多西紫杉醇)的组合。任选地，蒽环霉素和紫杉烷与5-氟尿嘧啶(5-FU)、环磷酰胺和卡铂组合。在本发明的一个实施方案中，其中乳腺癌是HER2阳性，抗LAG3抗体或片段与曲妥珠单抗组合施用，任选地与紫杉烷和/或帕妥珠单抗组合施用。
本发明包括用于治疗或预防前列腺癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防骨癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防肺癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。在本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防肺癌的方法包括施用有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段与贝伐单抗和/或西妥昔单抗的组合。
本发明包括用于治疗或预防非小细胞肺癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。在本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防非小细胞肺癌的方法包括施用有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段与顺铂、卡铂、紫杉醇、白蛋白结合的紫杉醇、多西他赛、吉西他滨、长春瑞滨、伊立替康、依托泊苷、长春碱和/或培美曲塞的组合。
本发明包括用于治疗或预防胃癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防结肠直肠癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。在本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防结肠直肠癌的方法包括施用有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段与5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他滨、伊立替康和/或奥沙利铂(例如，FOLFOX、FOLFIRI、FOLFOXIRI或CapeOx)的组合。
本发明包括用于治疗或预防宫颈癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防滑膜肉瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防头颈癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防鳞状细胞癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防多发性骨髓瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防肾细胞癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防视网膜母细胞瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防肝母细胞瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防肝细胞癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防黑素瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防肾横纹肌样瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防尤因氏肉瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防软骨肉瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防脑癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防胶质母细胞瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。在本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防多形性胶质母细胞瘤的方法包括施用有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段与替莫唑胺的组合。
本发明包括用于治疗或预防脑膜瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防垂体腺瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防前庭神经鞘瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防原始性神经外胚层肿瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防成神经管细胞瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防星形细胞瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防间变性星形细胞瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。在本发明的一个实施方案中，用于治疗或预防难治性间变性星形细胞瘤的方法包括施用有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段与替莫唑胺的组合。
本发明包括用于治疗或预防少突神经胶质瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防室管膜瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防脉络丛乳头状瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防真性红细胞增多症的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防血小板增多症的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防特发性骨髓纤维化的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防软组织肉瘤的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防甲状腺癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防子宫内膜癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防类癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防肝癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防乳腺癌(例如，其特征在于BRCA1和/或BRCA2中的突变)的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防胃癌的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)(任选地，与派姆单抗或尼鲁单抗组合)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的人免疫缺陷病毒(HIV)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向受试者施用抗病毒治疗剂，诸如蛋白酶抑制剂、核苷/核苷酸逆转录酶抑制剂、非核苷逆转录酶抑制剂、进入抑制剂、融合抑制剂或整合酶抑制剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的Bundibugyo病毒(BDBV)、苏丹病毒(SUDV)、Taï Forest病毒(TAFV)和/或埃博拉病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向受试者施用抗病毒治疗剂，诸如一种或多种特异性结合BDBV、SUDV、TAFV或埃博拉病毒的抗体或核苷RNA聚合酶抑制剂；或疫苗。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的甲型肝炎病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的乙型肝炎病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的丙型肝炎病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂、诸如干扰素和/或利巴韦林。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的疱疹病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的水疱性口炎病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的单纯疱疹病毒-I的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的HAV-6病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的单纯疱疹病毒-II的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的巨细胞病毒(CMV)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的爱泼斯坦-巴尔病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的腺病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的流感病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的黄病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的艾柯病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的鼻病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的柯萨奇病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的冠状病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的呼吸道合胞体病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的腮腺炎病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的轮状病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的麻疹病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的风疹病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的细小病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的牛痘病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的人嗜T-淋巴细胞病毒(HTLV)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的登革热病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的乳头状瘤病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的软疣病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的脊髓灰质炎病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的狂犬病病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的约翰.坎宁安病毒(JC病毒)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的虫媒病毒性脑炎病毒的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗病毒治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的砂眼衣原体(Chlamydia trachomatis)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的立克次氏体属细菌的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的分枝杆菌属的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的葡萄球菌属的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的链球菌属的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的肺炎球菌属的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的脑膜炎球菌属的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的淋球菌属的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的克雷伯氏菌属的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的变形菌属(例如，普通变形菌(P. vulgaris)、奇异变形菌(P. mirabilis)或彭氏变形菌(P. penneri))的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的沙雷氏菌属的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的假单胞菌属的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的军团杆菌属的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的白喉棒杆菌(Corynebacterium diphtheriae)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的沙门氏菌属(例如，乍得沙门氏菌(Salmonella bongori)或肠沙门氏菌(Salmonella enterica))的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的芽胞杆菌属的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的霍乱弧菌(Vibrio cholerae)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的破伤风梭菌(Clostridium tetan)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的肉毒梭状芽孢杆菌(Clostridium botulinum)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的炭疽芽孢杆菌(Bacillus anthricis)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的鼠疫耶尔森氏菌(Yersinia pestis)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的钩端螺旋体属(Leptospira)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的疏螺旋体属(Borrelia)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗细菌抗生素。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的白色念珠菌(Candida albicans)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗真菌治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的克鲁斯氏念珠菌(Candida krusei)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗真菌治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的光滑念珠菌(Candida glabrata)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗真菌治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的热带念珠菌(Candida tropicalis)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗真菌治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗真菌治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的烟曲霉(Aspergillus fumigatus)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗真菌治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的黑曲霉(Aspergillus niger)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗真菌治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的毛霉(Mucorales mucor)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗真菌治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的犁头霉(Mucorales absidia)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗真菌治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的根霉(Mucorales rhizopus)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗真菌治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的申克孢子丝菌(Sporothrix schenkii)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗真菌治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的皮炎芽生菌(Blastomyces dermatitidis)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗真菌治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的巴西副球孢子菌(Paracoccidioides brasiliensis)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗真菌治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的粗球孢子菌(Coccidioides immitis)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗真菌治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的荚膜组织胞浆菌(Histoplasma capsulatum)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。任选地，向所述受试者施用抗真菌治疗剂。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的结肠小袋纤毛虫(Balantidium coli)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的福氏耐格里原虫(Naegleria fowleri)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的棘阿米巴属种(Acanthamoeba sp.)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的篮氏贾第鞭毛虫(Giardia lambia)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的隐孢子虫属属种(Cryptosporidium sp.)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的卡氏肺孢子虫(Pneumocystis carinii)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的间日疟原虫(Plasmodium vivax)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的微小巴贝虫(Babesia microti)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的布鲁斯锥虫(Trypanosoma brucei)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。
本发明包括用于治疗或预防受试者中的巴西日本圆线虫(Nippostrongylus brasiliensis)的感染的方法，其包括将有效量的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI12126或ADI-12152)施用于有需要的受试者，诸如人。
“受试者”是哺乳动物，诸如例如人、狗、猫、马、牛、小鼠、大鼠、猴(例如，食蟹猴，例如食蟹猴(Macaca fascicularis)或猕猴(Macaca mulatta))或兔。
在具体实施方案中，本文公开的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)可以单独使用，或与其它另外治疗剂和/或治疗操作组合使用，用于治疗或预防需要这种治疗或预防的受试者中的任何疾病诸如癌症，例如，如本文所讨论。组合物或试剂盒，例如，包含药学上可接受的载体、包含与其它治疗剂组合的此类抗体和片段的药物组合物也是本发明的一部分。
在具体实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)可以与抗癌治疗剂或免疫调节性药物诸如免疫调节性受体抑制剂(例如，特异性结合所述受体的抗体或其抗原结合片段)组合使用。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与一种或多种抑制剂(例如，小有机分子或抗体或其抗原结合片段)组合，所述抑制剂诸如：MTOR (雷帕霉素的哺乳动物靶标)抑制剂、细胞毒性剂、铂试剂、BRAF抑制剂、CDK4/6抑制剂、EGFR抑制剂、VEGF抑制剂、微管稳定剂、紫杉烷、CD20抑制剂、CD52抑制剂、CD30抑制剂、RANK (核因子κ-B的受体活化剂)抑制剂、RANKL (核因子κ-B配体的受体活化剂)抑制剂、ERK抑制剂、MAP激酶抑制剂、AKT抑制剂、MEK抑制剂、PI3K抑制剂、HER1抑制剂、HER2抑制剂、HER3抑制剂、HER4抑制剂、Bcl2抑制剂、CD22抑制剂、CD79b抑制剂、ErbB2抑制剂或法呢基蛋白转移酶抑制剂。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与以下中的一种或多种组合：抗PD1(例如，派姆单抗、尼鲁单抗、CT-011)、抗-PDL1、抗-CTLA4、抗-TIM3、抗-CS1、(例如，依洛珠单抗)、抗-KIR2DL1/2/3 (例如，利瑞鲁单抗)、抗-CD27、抗-CD137 (例如，乌鲁单抗(urelumab))、抗-GITR (例如，TRX518)、抗-PD-L1 (例如，BMS-936559、MSB0010718C或MPDL3280A)、抗-PD-L2、抗-ILT1、抗-ILT2、抗CEACAM1、抗-ILT3、抗-ILT4、抗-ILT5、抗-ILT6、抗-ILT7、抗-ILT8、抗-CD40、抗-OX40、抗-CD137、抗-KIR2DL1、抗-KIR2DL2/3、抗-KIR2DL4、抗-KIR2DL5A、抗-KIR2DL5B、抗-KIR3DL1、抗-KIR3DL2、抗-KIR3DL3、抗-NKG2A、抗-NKG2C、抗-NKG2E或这样的靶标的任何小有机分子抑制剂；IL-10、抗-IL10、抗-TSLP (胸腺间质淋巴细胞生成素)或PEG化的IL-10。
在本发明的一个实施方案中，在PEG化的IL-10分子上的聚乙二醇(PEG)部分的分子量是约12,000道尔顿或约20,000道尔顿。在本发明的一个实施方案中，聚乙二醇化的IL-10 (例如，聚乙二醇化的人IL-10)包含一个或多个聚乙二醇分子，所述聚乙二醇分子通过接头(例如，C2-12烷基诸如--CH2CH2CH2--)共价地连接至IL-10的单个亚基的单个氨基酸残基，其中所述氨基酸残基是N-端氨基酸残基的α氨基或赖氨酸残基的ε氨基。在本发明的一个实施方案中，聚乙二醇化的IL-10是：(PEG)b-L-NH-IL-10；其中b是1-9且L是共价地连接至IL-10的单个氨基酸残基的氮(N)的C2-12烷基接头部分。在本发明的一个实施方案中，聚乙二醇化的IL-10的IL-10具有下式：[X--O(CH2CH2O)n]b-L-NH-IL-10，其中X是H或C1-4烷基；n是20-2300；b是1-9；且L是共价地连接至在一个IL-10亚基的氨基端处的α氨基的氮(N)的C1-11烷基接头部分；前提条件是，当b大于1时，n的总和不超过2300。参见US7,052,686。
在本发明的一个实施方案中，所述抗IL-10抗体或其抗原结合片段(例如，人抗体)包含下述的CDR：
(参见US7,662,379)。
在本发明的一个实施方案中，所述抗TSLP抗体或其抗原结合片段(例如，人抗体)包含下述的CDR：
(参见WO2008/76321)。
在本发明的一个实施方案中，所述抗CD27抗体或其抗原结合片段(例如，人抗体)包含下述的CDR：
(参见WO2012/04367)。
因此，本发明包括组合物，其包含与派姆单抗组合的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)；以及用于治疗或预防受试者中的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用与派姆单抗(例如，以200 mg每3周1次施用派姆单抗)组合的有效量的所述抗LAG3抗体或其抗原结合片段。任选地，还与另一种其它治疗剂组合地施用于受试者。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与派姆单抗抗体组合，所述派姆单抗抗体包含含有以下氨基酸序列的免疫球蛋白重链(或其CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)：
和含有以下氨基酸序列的免疫球蛋白轻链(或其CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3)：
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗体组合，所述抗体包含含有以下氨基酸序列的免疫球蛋白重链(或其CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)：
；
和含有以下氨基酸序列的免疫球蛋白轻链(或其CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3)：
(SEQ ID NO: 46)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与以下中的任何一种或多种组合：13-顺式-视黄酸、3-[5-(甲基磺酰基哌啶甲基)-吲哚基]-喹诺酮、4-羟基他莫昔芬、5-脱氧尿苷、5'-脱氧-5-氟尿苷、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、7-羟基星形孢菌素、A-443654、醋酸阿比特龙、abraxane、ABT-578、阿考比芬、ADS-100380、阿柏西普、ALT-110、六甲蜜胺、阿米福汀、氨鲁米特、氨柔比星、安吖啶、阿那格雷、阿那曲唑、血管生成抑制因子、AP-23573、ARQ-197、阿佐昔芬、AS-252424、AS-605240、天门冬酰胺酶、ATI3387、AT-9263、阿曲生坦、阿昔替尼、AZD1152、卡介苗(BCG)疫苗、巴他布林、BC-210、besodutox、贝伐珠单抗、BGJ398、比卡鲁胺、Bio111、BIO140、BKM120、博来霉素、BMS-214662、BMS-247550、BMS-275291、BMS-310705、硼替佐米、布舍瑞林、白消安、骨化三醇、喜树碱、卡纽替尼、卡培他滨、卡铂、卡莫司汀、CC8490、CEA (重组牛痘-癌胚抗原疫苗)、西地尼布、CG-1521、CG-781、查米多星、苯丁酸氮芥、氯毒素、西仑吉肽、西咪替丁、顺铂、克拉屈滨、氯膦酸盐、cobimetnib、COL-3、CP-724714、环磷酰胺、环丙孕酮、乙酸环丙孕酮、阿糖胞苷、胞嘧啶阿糖胞苷、达拉菲尼、达卡巴嗪、达西司他、更生霉素、dalotuzumab、达鲁舍替、达沙替尼、道诺霉素、地卡塔尼(decatanib)、鱼藤素、地尼白介素、脱氧助间型霉素、缩酚酸肽、二芳基丙腈、二乙基己烯雌酚、diftitox、DNE03、多西他赛、多韦替尼、多柔比星、屈洛昔芬、艾特咔林、钇-90标记的艾多替德、艾多替德、EKB-569、EMD121974、encorafenib、内皮抑素、恩杂鲁胺、恩扎妥林、表柔比星、埃博霉素B、ERA-923、爱必妥、厄洛替尼、雌二醇、雌氮芥、依托泊苷、依维莫司、依西美坦、ficlatuzumab、非那雄胺、夫拉平度、氟尿苷、氟达拉滨、氟氢可的松、氟甲睾酮、氟他胺、FOLFOX方案、氟维司群、galeterone、ganetespib、吉非替尼、吉西他滨、吉马替康、吡喃葡萄糖基脂质A、戈舍瑞林、乙酸戈舍瑞林、棉酚、GSK461364、GSK690693、HMR-3339、己酸羟孕酮、羟基脲、IC87114、伊达比星、idoxyfene、异环磷酰胺、IM862、伊马替尼、IMC-1C11、咪喹莫特、INC280、INCB24360、INO1001、干扰素、白介素-2、白介素-12、伊匹单抗、伊立替康、JNJ-16241199、酮康唑、KRX-0402、拉帕替尼、拉索昔芬、LEE011、来曲唑、亚叶酸、亮丙瑞林、醋酸亮丙瑞林、左旋咪唑、脂质体包覆的紫杉醇、洛莫司汀、氯那法尼、硫蒽酮、LY292223、LY292696、LY293646、LY293684、LY294002、LY317615、LY3009120、马立马司他、氮芥、甲羟孕酮乙酸酯、甲地孕酮乙酸酯、MEK162、美法仑、巯基嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、光神霉素、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、热杀死的奥布分枝杆菌(Mycobacterium obuense)的混悬液、陶扎色替、MLN8054、natitoclax、新伐司他(neovastat)、来那替尼、neuradiab、尼洛替尼、尼鲁米特、诺拉曲塞、NVP-BEZ235、奥利美生、奥曲肽、奥法木单抗、奥戈伏单抗、ornatuzumab、orteronel、奥沙利铂、紫杉醇、帕博西尼、帕米膦酸盐、帕尼单抗、帕唑帕尼、PD0325901、PD184352、PEG-干扰素、培美曲塞、喷司他丁、哌立福新、苯丙氨酸氮芥、PI-103、pictilisib、PIK-75、哌喷昔芬、PKI-166、普卡霉素、聚-ICLC、卟菲尔钠、泼尼松、丙卡巴肼、孕酮、PSK蛋白结合的多糖(源自担子菌纲杂色革盖菌(Basidiomycete coriolus versicolor))、PLX8394、PX-866、R-763、雷洛昔芬、雷替曲塞、雷佐生、地磷莫司、利妥昔单抗、罗米地新、RTA744、鲁比替康、scriptaid、Sdx102、塞利西利、司美替尼、司马沙尼(semaxanib)、SF1126、西罗莫司、SN36093、索拉非尼、螺内酯、角鲨胺、SR13668、链脲菌素、SU6668、辛二酰苯胺异羟肟酸(suberoylanalide hydroxamic acid)、舒尼替尼、合成的雌激素、他仑帕奈、塔利拉维(talimogene laherparepvec)、他莫昔芬、替莫唑胺、坦罗莫司、替尼泊苷、替米利芬、睾酮、粉防己碱、TGX-221、沙利度胺、6-硫鸟嘌呤、噻替派、替西木单抗、替吡法尼、替沃扎尼(tivozanib)、TKI-258、TLK286、TNFα(肿瘤坏死因子α)、拓朴替康、柠檬酸托瑞米芬、曲贝替定、曲美替尼、曲妥珠单抗、维甲酸、曲古抑菌素A、曲西立滨磷酸盐单水合物、双羟萘酸曲普瑞林、TSE-424、尿嘧啶氮芥、丙戊酸、戊柔比星、凡德他尼、瓦他拉尼、VEGF捕获物、威罗菲尼、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、vitaxin、vitespan、伏立诺他(vorinostat)、VX-745、渥曼青霉素、Xr311、结核杆菌(Bacillus tuberculosis)的Z-100热水提取物、扎木单抗、ZK186619、ZK-304709、ZM336372或ZSTK474。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与一种或多种止吐药组合，所述止吐药包括，但不限于：卡索匹坦(GlaxoSmithKline)、奈妥吡坦(Netupitant) (MGI-Helsinn)和其它NK-1受体拮抗剂、帕洛诺司琼(由MGI Pharma作为Aloxi销售)、阿瑞匹坦(由Merck and Co.作为Emend销售；Rahway, NJ)、苯海拉明(由Pfizer作为Benadryl®销售；New York, NY)、安泰乐(由Pfizer作为Atarax®销售；New York, NY)、甲氧氯普胺(由AH Robins Co.作为Reglan®销售；Richmond, VA)、劳拉西泮(由Wyeth作为Ativan®销售；Madison, NJ)、阿普唑仑(由Pfizer作为Xanax®销售；New York, NY)、氟哌啶醇(由Ortho-McNeil作为Haldol®销售；Raritan, NJ)、氟哌利多(Inapsine®)、屈大麻酚(由Solvay Pharmaceuticals, Inc.作为Marinol®销售；Marietta,GA)、地塞米松(由Merck and Co.作为Decadron®销售；Rahway,NJ)、甲基泼尼龙(由Pfizer作为Medrol®销售；New York, NY)；丙氯拉嗪(由Glaxosmithkline作为Compazine®销售；Research Triangle Park, NC)、格拉司琼(由Hoffmann-La Roche Inc.作为Kytril®销售；Nutley, NJ)、昂丹司琼(由Glaxosmithkline作为Zofran®销售；Research Triangle Park, NC)、多拉司琼(由Sanofi-Aventis作为Anzemet®销售；New York, NY)、托烷司琼(由Novartis作为Navoban®销售；EastHanover, NJ)。
癌症治疗的其它副作用包括红和白血细胞缺乏。因此，在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与治疗或预防这种缺乏的药剂(例如，非格司亭、PEG-非格司亭、促红细胞生成素、阿法依泊汀(epoetinalfa)或阿法达贝泊汀(darbepoetin alfa))组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与疫苗组合。在本发明的一个实施方案中，所述疫苗是抗癌疫苗、肽疫苗或DNA疫苗。例如，在本发明的一个实施方案中，所述疫苗是肿瘤细胞(例如，照射的肿瘤细胞)或树突细胞(例如，用肿瘤肽脉冲处理的树突细胞)。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与治疗程序组合施用。治疗程序是由医师或临床医师在治疗受试者中进行的一个或多个步骤，其意图减轻治疗的受试者中的一种或多种症状(例如，癌症和/或传染性疾病的一种或多种症状)，无论是通过诱导此类症状的消退或消除，还是通过抑制此类症状(例如，癌症症状诸如肿瘤生长或转移)的进展，达到任何临床上可测量的程度。
在本发明的一个实施方案中，治疗程序是抗癌辐射疗法。例如，在本发明的一个实施方案中，所述辐射疗法是外线束疗法(EBT)：一种用于将高能X-射线束递送至肿瘤位置的方法。所述束在患者外产生(例如，由直线加速器)且靶向肿瘤部位。这些X-射线可以破坏癌细胞，且小心的治疗计划允许豁免周围的正常组织。在患者体内没有放置放射源。在本发明的一个实施方案中，所述辐射疗法是质子束疗法：一类用质子而不是X-射线轰击患病组织的适形疗法。在本发明的一个实施方案中，所述辐射疗法是适形外线束辐射疗法：一种使用高级技术根据个体的身体结构定制辐射疗法的操作。
在本发明的一个实施方案中，所述辐射疗法是短距离放射治疗：将放射性物质暂时放置在体内，经常用于向一个区域提供额外剂量—或增强剂量—的辐射。
在本发明的一个实施方案中，与本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)组合施用的外科手术是外科手术肿瘤切除术。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与MTOR (雷帕霉素的哺乳动物靶标)抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与细胞毒性剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与铂试剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与EGFR抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与VEGF抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与微管稳定剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与紫杉烷、CD20抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与CD52抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与CD30抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与RANK (核因子κ-B的受体活化剂)抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与RANKL (核因子κ-B配体的受体活化剂)抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与BRAF抑制剂组合，例如用于治疗黑素瘤。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与CDK4/6抑制剂组合，例如用于治疗黑素瘤。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与ERK抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与MAP激酶抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与AKT抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与MEK抑制剂组合，例如用于治疗黑素瘤。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与PI3K抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与HER1抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与HER2抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与HER3抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与HER4抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与Bcl2抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与CD22抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与CD79b抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与ErbB2抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与法呢基蛋白转移酶抑制剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗PD1组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与尼鲁单抗组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与CT-011组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗PDL1组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗CTLA4组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗TIM3组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗CS1组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与依洛珠单抗组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗KIR2DL1/2/3组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与利瑞鲁单抗组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗CD137抗体或其抗原结合片段(例如，激动剂抗CD137抗体或片段)组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与乌鲁单抗组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗GITR组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与TRX518组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗PD-L1组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与BMS-936559组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与MSB0010718C组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与MPDL3280A组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗PD-L2组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗ILT1组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗ILT2组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗CEACAM1组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗ILT3组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗ILT4组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗ILT5组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗ILT6组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗ILT7组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗ILT8组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗CD40组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗OX40组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗CD137组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗KIR2DL1组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗KIR2DL2/3组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗KIR2DL4组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗KIR2DL5A组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗KIR2DL5B组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗KIR3DL1组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗KIR3DL2组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗KIR3DL3组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗NKG2A组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗NKG2C组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗NKG2E组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与IL-10组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗IL10组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与抗TSLP (胸腺基质淋巴细胞生成素)组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与PEG化的IL-10组合。在本发明的一个实施方案中，将PEG化的IL-10以最高达20微克/kg (例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20微克/kg)的剂量施用于受试者。例如，每天最高达20微克/kg，例如最高达四个(例如，1、2、3或4个) 28天循环 - 例如，20微克/kg/天，持续四个28天循环。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与13-顺式-视黄酸组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与3-[5-(甲基磺酰基哌啶甲基)-吲哚基]-喹诺酮组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与4-羟基他莫昔芬组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与5-脱氧尿苷组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与5'-脱氧-5-氟尿苷组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与5-氟尿嘧啶组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与6-巯基嘌呤组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与7-羟基星形孢菌素组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与A-443654组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与醋酸阿比特龙组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与abraxane组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与ABT-578组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与阿考比芬组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与ADS-100380组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与ALT-110组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与六甲蜜胺组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与阿米福汀组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与氨鲁米特组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与氨柔比星组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与安吖啶组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与阿那格雷组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与阿那曲唑组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与血管生成抑制因子组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与AP-23573组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与ARQ-197组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与阿佐昔芬组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与AS-252424组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与AS-605240组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与天门冬酰胺酶组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与AT-9263组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与阿曲生坦组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与阿昔替尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与AZD1152组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin, BCG)疫苗组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与巴他布林组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与BC-210组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与besodutox组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与贝伐珠单抗组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与比卡鲁胺组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与Bio111组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与BIO140组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与博来霉素组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与BMS-214662组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与BMS-247550组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与BMS-275291组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与BMS-310705组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与硼替佐米组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与布舍瑞林组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与白消安组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与骨化三醇组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与喜树碱组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与卡纽替尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与卡培他滨组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与卡铂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与卡莫司汀组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与CC8490组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与CEA (重组牛痘-癌胚抗原疫苗)组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与西地尼布组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与CG-1521组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与CG-781组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与查米多星组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与苯丁酸氮芥组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与氯毒素组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与西仑吉肽组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与西咪替丁组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与顺铂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与克拉屈滨组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与氯膦酸盐组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与COL-3组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与CP-724714组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与环磷酰胺组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与环丙孕酮组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与乙酸环丙孕酮组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与阿糖胞苷组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与胞嘧啶阿糖胞苷组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与达卡巴嗪组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与达西司他组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与更生霉素组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与dalotuzumab组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与达鲁舍替组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与达沙替尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与道诺霉素组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与地卡塔尼(decatanib)组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与鱼藤素组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与地尼白介素组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与脱氧助间型霉素组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与缩酚酸肽组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与二芳基丙腈组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与二乙基己烯雌酚组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与diftitox组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与多西他赛组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与多韦替尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与多柔比星组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与屈洛昔芬组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与艾特咔林组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与钇-90标记的艾多替德组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与艾多替德组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与EKB-569组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与EMD121974组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与内皮抑素组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与恩杂鲁胺组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与恩扎妥林组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与表柔比星组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与埃博霉素B组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与ERA-923组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与西妥昔单抗组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与厄洛替尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与雌二醇组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与雌氮芥组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与依托泊苷组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与依维莫司组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与依西美坦组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与ficlatuzumab组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与非那雄胺组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与夫拉平度组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与氟尿苷组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与氟达拉滨组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与氟氢可的松组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与氟甲睾酮组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与氟他胺组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与FOLFOX方案组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与氟维司群组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与galeterone组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与吉非替尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与吉西他滨组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与吉马替康组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与吡喃葡萄糖基脂质A组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与戈舍瑞林组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与乙酸戈舍瑞林组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与棉酚组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与GSK461364组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与GSK690693组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与HMR-3339组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与己酸羟孕酮组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与羟基脲组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与IC87114组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与伊达比星组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与idoxyfene组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与异环磷酰胺组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与IM862组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与伊马替尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与咪喹莫特组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与IMC-1C11组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与INCB24360组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与INO1001组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与干扰素组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与白介素-2 (IL-2)组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与白介素-12 (IL-12)组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与伊匹单抗组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与伊立替康组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与JNJ-16241199组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与酮康唑组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与KRX-0402组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与拉帕替尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与拉索昔芬组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与来曲唑组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与亚叶酸组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与亮丙瑞林组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与醋酸亮丙瑞林组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与左旋咪唑组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与脂质体包覆的紫杉醇组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与洛莫司汀组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与氯那法尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与硫蒽酮组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与LY292223组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与LY292696组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与LY293646组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与LY293684组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与LY294002组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与LY317615组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与马立马司他组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与氮芥组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与甲羟孕酮乙酸酯组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与甲地孕酮乙酸酯组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与美法仑组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与巯基嘌呤组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与美司钠组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与甲氨蝶呤组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与光神霉素组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与丝裂霉素组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与米托坦组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与米托蒽醌组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与陶扎色替组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与热杀死的奥布分枝杆菌(Mycobacterium obuense)的混悬液组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与MLN8054组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与癌立消(neovastat)组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与来那替尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与neuradiab组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与尼洛替尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与尼鲁米特组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与诺拉曲塞组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与NVP-BEZ235组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与奥利美生组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与奥曲肽组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与奥法木单抗组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与奥戈伏单抗组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与orteronel组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与奥沙利铂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与紫杉醇组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与帕博西尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与帕米膦酸盐组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与帕尼单抗组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与帕唑帕尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与PD0325901组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与PD184352组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与PEG-干扰素组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与培美曲塞组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与喷司他丁组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与哌立福新组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与苯丙氨酸氮芥组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与PI-103组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与pictilisib组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与PIK-75组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与哌喷昔芬组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与PKI-166组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与普卡霉素组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与聚-ICLC组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与卟菲尔钠组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与醋泼尼松组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与丙卡巴肼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与孕酮组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与PSK蛋白结合的多糖(衍生自担子菌纲杂色革盖菌(Basidiomycete coriolus versicolor))组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与PX-866组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与R-763组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与雷洛昔芬组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与雷替曲塞组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与雷佐生组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与地磷莫司组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与利妥昔单抗组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与罗米地新组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与RTA744组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与鲁比替康组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与scriptaid组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与Sdx102组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与塞利西利组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与司美替尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与司马沙尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与SF1126组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与西罗莫司组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与SN36093组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与索拉非尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与螺内酯组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与角鲨胺组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与SR13668组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与链脲菌素组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与SU6668组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与辛二酰苯胺异羟肟酸组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与舒尼替尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与合成的雌激素组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与他仑帕奈组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与塔利拉维(talimogene laherparepvec)组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与他莫昔芬组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与替莫唑胺组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与坦罗莫司组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与替尼泊苷组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与替米利芬组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与睾酮组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与粉防己碱组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与TGX-221组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与沙利度胺组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与6-硫鸟嘌呤组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与噻替派组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与替西木单抗组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与替吡法尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与替沃扎尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与TKI-258组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与TLK286组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与拓朴替康组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与柠檬酸托瑞米芬组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与曲贝替定组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与曲妥珠单抗组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与维甲酸组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与曲古抑菌素A组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与曲西立滨磷酸盐单水合物组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与双羟萘酸曲普瑞林组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与TSE-424组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与肿瘤坏死因子α (TNFα)组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与尿嘧啶氮芥组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与丙戊酸组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与戊柔比星组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与凡德他尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与瓦他拉尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与VEGF捕获物组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与长春碱组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与长春新碱组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与长春地辛组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与长春瑞滨组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与vitaxin组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与vitespan组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与伏立诺他组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与VX-745组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与渥曼青霉素组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与Xr311组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与zanolimumab组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与结核芽孢杆菌的Z-100热水提取物组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与ZK186619组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与ZK-304709组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与ZM336372组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与ZSTK474组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与卡索匹坦组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与奈妥吡坦组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与NK-1受体拮抗剂组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与帕洛诺司琼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与阿瑞匹坦组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与苯海拉明组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与羟嗪组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与甲氧氯普胺组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与劳拉西泮组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与阿普唑仑组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与卤吡醇组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与氟哌利多组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与屈大麻酚组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与地塞米松组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与甲基强的松龙组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与丙氯拉嗪组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与格拉司琼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与昂丹司琼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与多拉司琼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与托烷司琼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与非格司亭组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与PEG-非格司亭组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与促红细胞生成素组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与阿法依泊汀组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与阿法达贝泊汀组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与达拉菲尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与曲美替尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与威罗菲尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与考比替尼组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与LY3009120组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与DNE03组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与ATI13387组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与ganetespib组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与encorafenib组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与MEK162组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与BKM120组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与LEE011组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与BGJ398组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与INC280组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与PLX8394组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与ornatuzumab组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与natitoclax组合。
在本发明的一个实施方案中，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，拮抗剂人抗体)(例如，ADI-12126或ADI-12152)与阿柏西普组合。
术语“与……组合”指示，可以将所述组分本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与另一种药剂诸如派姆单抗或尼鲁单抗一起配制成单一组合物(例如，用于同时递送)，或单独配制成两种或更多种组合物(例如，试剂盒)。每种组分可以与其它组分同时或在施用其它组分时不同的时间施用于受试者；例如，可以经给定时间段的间隔，非同时地(例如，单独地或依次地)给予每次施用。此外，可以将单独组分通过相同或不同的途径施用于受试者(例如，其中胃肠外地施用抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如ADI-12126A)，且口服施用紫杉醇)。
测定和实验和诊断用途
本发明包括用于在本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)和LAG3 (例如，人LAG3)之间形成复合物的任何方法，其包括在适合于结合和复合物形成的条件下使所述LAG3多肽与抗LAG3抗体或片段接触。
本文公开的抗LAG3抗体和其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)可用作亲和力纯化试剂。在该过程中，抗LAG3抗体和其抗原结合片段使用本领域中众所周知的方法固定在固相诸如sephadex、玻璃或琼脂糖树脂或滤纸上。使固定抗体或片段与待纯化的含有LAG3蛋白(或其片段)的样品接触，且此后将支持物用合适溶剂洗涤，其将去除除结合固定的抗体或片段的LAG3蛋白外的样品中实质上所有物质。最终，将支持物用洗脱结合的LAG3的溶剂(例如蛋白A)洗涤。此类固定抗体和片段以及其与LAG3的复合物形成本发明的一部分。
本发明提供了用于使用本发明的抗LAG3抗体及其抗原结合片段来确定特定受试者在抗体或片段存在的情况下具有或可能具有的T细胞活化程度的方法。例如，本发明的实施方案包括方法，所述方法包括：
(i) 在抗LAG3抗体或片段存在的情况下，使来自受试者的T细胞(例如，CD4+ T细胞)接触例如，浓度为500 pg/ml或更高，例如约10 ng/ml或100 ng/ml的超抗原(例如，葡萄球菌超抗原中的任何一种或多种，诸如SEA、SEB (葡萄球菌肠毒素B)、SEC2、SEC3、SED、SEH和/或TSST；和/或链球菌超抗原中的任何一种或多种，诸如SPE-A、SPE-C、SPE-H和/或SMEZ-2)接触(任选地，T细胞与超抗原(例如，SEB)和抗体或片段预孵育约48或72小时)和
(ii) 测定所述T细胞的细胞因子(例如TNF-α、GM-CSF、IFN-γ和/或IL-2)的产生水平；其中所述细胞因子的产生水平表明在所述抗体或片段存在的情况下的T细胞活化的水平。
具有在超抗原和抗LAG3抗体或片段存在的情况下比在所述抗体或片段不存在的情况下表现出更高细胞因子产生的T细胞的受试者被认为是接受所述抗体或片段作为疗法的优异候选者，例如用于治疗癌症或感染。在本发明的一个实施方案中，选择此类优异候选者用于接受所述抗体或片段。在本发明的一个实施方案中，向此类优异候选者施用有效量的抗体或片段。在本发明的一个实施方案中，所述方法包括从受试者的血液中分离T细胞的步骤(在上述步骤(i)之前)。在本发明的一个实施方案中，使T细胞与本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段和派姆单抗接触。
进一步提供了用于产生可用于例如进行Western印迹和本文中讨论的其它免疫测定的二级抗体的抗原。具体而言，公开了包含本文公开的抗LAG3抗体或片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)的可变区和/或CDR序列且可用于产生用于特异性检测例如在治疗背景下抗体存在的抗独特型抗体的多肽。
本发明包括使用本发明的抗LAG3抗体及其抗原结合片段(例如ADI-12126或ADI-12152)的基于细胞的ELISA方法。在本发明的一个实施方案中，所述方法包括以下步骤：
(i) 使待测试LAG3的存在的固定至固体表面(例如，微量滴定板)的细胞(例如，取自肿瘤的细胞或组织，例如其包括怀疑表达LAG3的淋巴细胞)与本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段接触，
(ii) 任选地洗涤混合物以除去未结合的抗LAG3抗体或片段，
(iii) 使所述抗LAG3抗体或片段与结合抗LAG3抗体或片段的标记的二抗或其抗原结合片段接触，
(iv) 任选地洗涤复合物以除去未结合的抗体或片段；和
(v) 检测所述二抗或片段上标记的存在；
其中所述标记的检测表明细胞含有LAG3。例如，本发明包括用于鉴定肿瘤样品中的LAG3+细胞的此类基于细胞的ELISA方法。
本发明包括ELISA测定法(酶联免疫吸附测定法)，其并入固定的本文公开的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)的使用。例如，此类方法包括以下步骤：
(a) 用抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)包被基板(例如微量滴定板孔的表面，例如塑料板)；
(b) 将待测试LAG3的存在的样品施加至基板(例如取自肿瘤的细胞，例如，其包括怀疑表达LAG3的淋巴细胞)；
(c) 洗涤该板，使得去除样品中未结合的物质；
(d) 施加也对LAG3抗原特异性的可检测标记的抗体(例如酶联抗体)；
(e) 洗涤该基板，使得去除未结合的标记抗体；
(f) 如果标记的抗体是酶联的，则施加通过酶转化成荧光信号的化学物质；以及
(g) 检测标记抗体的存在。
检测与基板缔合的标记指示LAG3蛋白的存在。也可以使用ELISA方法鉴定肿瘤样品中的LAG3+细胞。
在另一个实施方案中，标记的抗体或其抗原结合片段用过氧化酶标记，所述过氧化酶与ABTS (例如2,2'-联氮-双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸))或3,3',5,5'-四甲基联苯胺反应，以产生可检测的颜色变化。或者，标记的抗体或片段用可检测的放射性同位素(例如3H)标记，所述放射性同位素可通过闪烁计数器在闪烁体存在的情况下检测。
本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)可用于Western印迹或免疫-蛋白印迹程序中。此类程序形成本发明的一部分且包括例如：
(1) 提供包含待测试LAG3的存在的样品的膜或其它固体基板(任选地所述方法包括以下步骤：使用本领域中已知的方法(例如半干印迹法或罐印迹法)从待测试LAG3的存在的样品(例如从样品中蛋白的PAGE或SDS-PAGE电泳分离)转移蛋白至膜或其它固体基板上)；和使待测试结合的LAG3或其片段的存在的膜或其它固体基板与本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段接触。
此类膜可采取例如硝酸纤维素或基于乙烯基的(例如聚偏二氟乙烯(PVDF))膜的形式，待在非变性PAGE (聚丙烯酰胺凝胶电泳)凝胶或SDS-PAGE (十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳)凝胶中测试LAG3的存在的蛋白已转移至该膜(例如在凝胶中电泳分离后)。在膜与抗LAG3抗体或片段接触前，该膜任选地用例如脱脂奶粉等封闭以便结合膜上的非特异性蛋白结合位点。
(2) 任选地，将膜洗涤一次或多次以去除未结合的抗LAG3抗体或片段和其它未结合的物质；和
(3) 检测结合的抗LAG3抗体或片段。
结合的抗体或片段的检测指示LAG3蛋白存在于膜或基板上和样品中。结合的抗体或片段的检测可通过抗体或片段与可检测标记的二级抗体(一种抗免疫球蛋白抗体)结合，且然后检测二级抗体标记的存在。
本文公开的抗LAG3抗体和其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)也可用于免疫组织化学。此类方法形成本发明的一部分且包含例如：
(1) 使待测试LAG3蛋白的存在的细胞或组织(例如，包含TIL和肿瘤细胞(例如，黑色素瘤肿瘤))与本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段接触；和
(2) 检测细胞或组织上或细胞或组织中的抗体或片段。
如果抗体或片段本身被可检测标记，则其可直接检测。或者，抗体或片段可由可检测标记的二级抗体结合，其中然后检测所述标记。检测可以通过目视检查，例如在显微镜下进行。
本文公开的抗LAG3抗体和其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)也可用于体内肿瘤成像。此类方法可包括将可检测标记、例如放射性标记的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(如本文所讨论)注射至待测试与LAG3表达相关的肿瘤或其它肿瘤或细胞(例如其例如在肿瘤浸润性淋巴细胞(TIL)上表达LAG3)的存在的患者体内，随后对患者身体进行成像，例如核成像，以检测例如包含结合肿瘤或与肿瘤相关的高浓度抗体或片段的病灶上标记的抗体或片段的存在。病灶的检测指示LAG3 (例如，肿瘤中的LAG3+ TIL)的存在。
成像技术包括SPECT成像(单光子发射计算机断层摄影术)或PET成像(正电子发射断层摄影术)。标记包括例如碘-123 (123I)和锝-99m (99mTc)，例如结合SPECT成像或11C、13N、15O或18F，例如结合PET成像或铟-111(参见例如Gordon等人，(2005) InternationalRev. Neurobiol. 67: 385-440)。
本发明提供了用于确定受试者中的肿瘤是否对用本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段治疗敏感的方法，其包括确定LAG3是否在肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中或在肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)上表达，并且，如果鉴定所述表达，则确定所述肿瘤对所述治疗敏感。可以使用本文所述的任何方法，例如ELISA或体内成像，确定TIL表达LAG3。在本发明的一个实施方案中，所述方法包括在进行LAG3表达的测定之前获得所述肿瘤组织样品的步骤。例如，在本发明的一个实施方案中，通过外科手术，例如通过活组织检查，例如针活组织检查或部分肿瘤切除术，来获得样品。在本发明的一个实施方案中，通过使TIL与所述抗体或片段接触并检测与肿瘤组织或片段结合的抗体或片段的存在来确定LAG3表达。
药物组合物和施用
为了制备抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)的药物组合物或无菌组合物，可以将所述抗体或其抗原结合片段与药学上可接受的载体或赋形剂混合。参见，例如，Remington's Pharmaceutical Sciences and U.S. Pharmacopeia: NationalFormulary, Mack Publishing Company, Easton, PA (1984)。此类组合物是本发明的一部分。
本发明的范围包括干燥的(例如，冷冻干燥的)包含抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)的组合物或其药物组合物，所述药物组合物包括药学上可接受的载体，但是基本上缺乏水。
可以通过与可接受的载体、赋形剂或稳定剂混合以例如冻干的粉剂、浆、水溶液或混悬液的形式制备治疗剂和诊断剂的制剂(参见，例如，Hardman, 等人(2001) Goodmanand Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, NewYork, NY; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy,Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, NY; Avis, 等人(编) (1993)Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY;Lieberman, 等人(编) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, MarcelDekker, NY; Lieberman, 等人(编) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: DisperseSystems, Marcel Dekker, NY; Weiner和Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity andSafety, Marcel Dekker, Inc., New York, NY)。
单独或与另一治疗剂组合施用的所述抗体或片段组合物的毒性和治疗功效可通过标准药物程序在细胞培养物或实验动物中测定，例如测定LD50 (群体的50%致死的剂量)和ED50 (群体的50%中有效的剂量)。毒性和治疗作用之间的剂量比率为治疗指数(LD50/ED50)。在具体方面，表现出高治疗指数的抗体是合乎需要的。从这些细胞培养物测定和动物研究获得的数据可用于配制用于人类的剂量范围。此类化合物的剂量优选在循环浓度的范围内，其包括几乎没有或无毒性的ED50。剂量可根据所采用的剂型和施用途径而在该范围内变化。
在另一个实施方案中，根据Physicians' Desk Reference 2003 (ThomsonHealthcare；第57版(2002年11月1日))，向所述个体使用与本文公开的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)组合的向个体施用的另一治疗剂。
施用的模式可以变化。施用途径包括口服、直肠、透粘膜、肠、胃肠外；肌肉内、皮下、真皮内、骨髓内、鞘内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内、眼内、吸入、吹入法、局部、皮肤、透皮或动脉内。
本发明提供了用于施用抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如ADI-12126或ADI-12152)的方法，其包括将所述抗体或片段引入受试者体内。例如，所述方法包括用注射器的针刺入受试者的身体并将所述抗体或片段注射至受试者体内，例如注射至受试者的静脉、动脉、肿瘤、肌肉组织或皮下组织中。
本发明提供了容器(例如，塑料或玻璃小瓶，例如具有帽或色谱柱、中空粗针或注射器圆筒)，其包含本文所述的抗体或抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)、多肽或多核苷酸中的任一种，或其包含药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明还提供了注射装置，其包含本文所述的抗LAG3抗体或抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)、多肽或多核苷酸中的任一种，或其药物组合物。注射装置是经由胃肠外途径(例如，肌肉内、皮下或静脉内)将物质引入患者体内的装置。例如，注射装置可以是注射器(例如，预填充了药物组合物，诸如自动注射器)，其例如包括用于容纳待注射的流体(例如，包含所述抗体或片段或其药物组合物)的筒或桶，用于刺穿皮肤和/或血管以注射所述流体的针头；和用于将所述流体推出所述筒并穿过所述针头腔的柱塞。在本发明的一个实施方案中，包含本发明的抗LAG3抗体或抗原结合片段或其药物组合物的注射装置是静脉内(IV)注射装置。这种装置包括在插管或套针/针头中的所述抗体或片段或其药物组合物，所述插管或套针/针头可以连接至管，所述管可以连接至用于容纳流体(例如，盐水；或含乳酸盐的林格溶液，其包含NaCl、乳酸钠、KCl、CaCl2且任选地包括葡萄糖)的袋或蓄池，所述流体通过所述插管或套针/针头引入患者体内。在本发明的一个实施方案中，一旦将所述套针和插管插入受试者的静脉中并将所述套针从插入的插管取出，可以将所述抗体或片段或其药物组合物引入所述装置中。例如，可以将IV装置插入周围静脉(例如，在手或臂中)；上腔静脉或下腔静脉，或在心脏的右心房内(例如，中枢IV)；或插入锁骨下、颈内静脉或股静脉，且，例如，朝向心脏前进直到它到达上腔静脉或右心房(例如，中央静脉系)。在本发明的一个实施方案中，注射装置是自动注射器；喷射注射器或外部输液泵。喷射注射器使用液体的高压狭窄喷射，其穿透表皮以将所述抗体或片段或其药物组合物引入患者的身体。外部输液泵是将所述抗体或片段或其药物组合物以受控的量递送进患者的身体的医疗装置。外部输液泵可以由电或机械提供动力。不同的泵以不同的方式操作，例如，注射泵将流体容纳在注射器的蓄池中，且可移动的活塞控制流体递送，弹性体泵将流体容纳在有弹性的囊蓄池中，且来自所述囊的弹性壁的压力驱动流体递送。在蠕动泵中，一组滚子沿着柔性管道的长度向下挤压，从而向前推动流体。在多通道泵中，可以以多个速率从多个蓄池递送流体。
或者，可以局部而非全身性方式，例如经由直接注射抗体或片段至肿瘤，例如具有LAG3+ TIL的肿瘤，来施用所述抗LAG3抗体或抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)。此外，可在靶向药物递送系统中，例如在用靶向例如肿瘤，例如LAG3+肿瘤(例如通过免疫病理学表征)的组织特异性抗体包被的脂质体中施用所述抗体或片段。将脂质体靶向至患病组织且通过患病组织选择性吸收。此类方法和脂质体是本发明的一部分。
“治疗(Treat)”或“治疗(treating)”是指将本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)施用于具有疾病的一种或多种症状的受试者(例如人)，所述抗LAG3抗体和抗原结合片段对所述疾病是有效的，例如，在具有癌症或传染性疾病、或者被怀疑具有癌症或传染性疾病的受试者的治疗中，所述药剂对所述癌症或传染性疾病具有治疗活性。通常，以会减轻治疗的受试者或群体中的一种或多种症状(例如，癌症或传染性疾病的一种或多种症状)的“有效量”或“有效剂量”施用所述抗体或片段，无论是通过诱导此类症状的消退或消除，还是通过抑制此类症状(例如，癌症症状诸如肿瘤生长或转移)的进展，达到任何临床上可测量的程度。所述抗体或片段的有效量可以随诸如以下的因素变化：患者的疾病阶段、年龄和重量，和药物在受试者中引起期望的应答的能力。
本文公开的抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)可通过连续输注或通过施用的剂量，例如每日、每周1-7次、每周、每两周、每个月、每两个月、每季、每半年、每年等提供。可例如静脉内、皮下、局部、经口、经鼻、经直肠、肌肉内、颅内、脊椎内或通过吸入提供剂量。本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段的有效剂量为约0.01 mg/kg(体重)至约100 mg/kg(体重)，例如，用于治疗或预防癌症或感染性疾病。
适当剂量的确定由临床医师做出，例如，使用本领域已知或疑似影响治疗的参数或因素。通常，在确定剂量时，所述剂量开始于稍微小于最适剂量的量，并且它在此后增加小增量，直到与任何负面副作用相比达到期望的或最适的效果。重要的诊断措施包括例如炎症的症状的诊断措施或产生的炎症性细胞因子的水平的诊断措施。通常，合乎需要的是，要使用的生物剂源自与治疗的靶向动物相同的物种，由此使对所述药剂的任何免疫应答最小化。在人受试者的情况下，例如，嵌合抗体、人源化抗体和全人抗体可能是合乎需要的。在选择抗LAG3抗体或片段适当剂量中的指导是可得到的(参见，例如，Wawrzynczak (1996)Antibody Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina (编)(1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, NewYork, NY; Bach (编) (1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy inAutoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY; Baert等人(2003) New Engl.J. Med. 348: 601-608; Milgrom等人(1999) New Engl. J. Med. 341: 1966-1973;Slamon等人(2001) New Engl. J. Med. 344: 783-792; Beniaminovitz等人(2000) NewEngl. J. Med. 342: 613-619; Ghosh等人(2003) New Engl. J. Med. 348: 24-32;Lipsky等人(2000) New Engl. J. Med. 343: 1594-1602)。
疾病症状是否已经减轻，可以通过医师或其他熟练的健康护理提供者通常使用的任何临床测量来评价，以评价该症状的严重程度或进展状态。尽管本发明的一个实施方案(例如，治疗方法或制品)可能不会有效地减轻每个受试者中的靶疾病症状，但其应当减轻统计上显著数目的受试者中的靶疾病症状，如通过本领域已知的任何统计检验来确定，诸如Student't-检验、chi2-检验、根据Mann和Whitney的U-检验、Kruskal-Wallis检验(H-检验)、Jonckheere-Terpstra-检验和Wilcoxon-检验。
试剂盒
进一步提供包含一种或多种组分的试剂盒，所述一种或多种组分包括，但不限于，如本文中所讨论的抗LAG3抗体或抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)与一种或多种包括但不限于如本文中所讨论的另外的治疗剂的其它组分组合。抗体或片段和/或治疗剂可配制为纯组合物或与药学上可接受的载体组合于药物组合物中。
在一个实施方案中，所述试剂盒包括一个容器中(例如无菌玻璃或塑料小瓶中)的本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)或其药物组合物和另一容器中(例如无菌玻璃或塑料小瓶中)的另外的治疗剂。
在另一个实施方案中，所述试剂盒包含本发明的组合，其在单一常用容器中包括本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)或其药物组合物，任选地与一种或多种治疗剂组合，任选地一起配制于药物组合物中。
如果试剂盒包括用于向个体肠胃外施用的药物组合物，则所述试剂盒可包括用于进行此类施用的装置。例如，所述试剂盒可包括如上文所讨论的一种或多种皮下针或其它注射装置。因此，本发明包括试剂盒，其包含注射装置和本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段，例如，其中所述注射装置包括所述抗体或片段或其中所述抗体或片段在分开的容器中。
所述试剂盒可包括包装插页，其包括关于试剂盒中的药物组合物和剂型的信息。通常，此类信息帮助患者和医师有效且安全地使用封装的药物组合物和剂型。例如，以下关于本发明的组合的信息可供应于该插页中：药代动力学、药效动力学、临床研究、功效参数、适应症和用法、禁忌症、警告信息、注意事项、不良反应、过剂量、适当剂量和施用、如何供应、适当储存条件、参考文献、制造商/经销商信息和专利信息。
检测试剂盒和治疗试剂盒
为了方便起见，本发明的抗LAG3抗体或其抗原结合片段(例如，ADI-12126或ADI-12152)可提供于试剂盒中，即预定量的试剂与用于进行诊断或检测测定的说明书的包装组合。在抗体或片段用酶标记的情况下，试剂盒将包括酶所需的底物和辅因子(例如提供可检测发色团或荧光团的底物前体)。另外，可包括其它添加剂，诸如稳定剂、缓冲剂(例如阻断缓冲液或裂解缓冲液)等等。各种试剂的相对量可广泛变化以提供实质上优化测定灵敏度的溶液中试剂的浓度。具体地，试剂可作为干燥粉末提供，其通常冻干，包括赋形剂，其在溶解后，将提供具有适当浓度的试剂溶液。
还提供诊断或检测试剂和包含一种或多种此类试剂的试剂盒，其用于多种检测测定中，包括例如免疫测定，诸如ELISA (夹心型或竞争形式)。试剂盒的组分可预附接至固体支持物，或可以当使用试剂盒时施加至固体支持物的表面。在本发明的一些实施方案中，信号产生装置可与本发明的抗体或片段预缔合，或在使用前可能需要组合一种或多种组分，例如缓冲剂、抗体-酶缀合物、酶底物等。试剂盒也可包括额外试剂，例如用于减少与固相表面的非特异性结合的封闭试剂、洗涤试剂、酶底物等。固相表面可呈管、珠粒、微量滴定板、微球体或适合于固定蛋白、肽或多肽的其它材料的形式。在具体方面，催化化学发光或发色产物形成或化学发光或发色底物的减少的酶是信号产生装置的组分。此类酶是本领域中众所周知的。试剂盒可包含任一本文所述的捕获试剂和检测试剂。任选地，试剂盒也可包含用于进行本发明的方法的说明书。
还提供了试剂盒，其包含包装在容器诸如小瓶或瓶中的抗LAG3抗体或其抗原结合片段，且进一步包含附接至容器或与容器一起包装的标签，所述标签描述容器的内含物且提供适应症和/或关于使用容器内含物治疗如本文所述的一种或多种疾病状态的说明书。
在一个方面，试剂盒用于治疗癌症且包含抗LAG3抗体或其抗原结合片段和另一治疗剂或疫苗。试剂盒可任选地进一步包括用于肠胃外，例如静脉内施用的注射器。在另一个方面，试剂盒包含抗LAG3抗体或其抗原结合片段和描述抗体或片段与疫苗或其它治疗剂的使用的附接至容器或与容器一起包装的标签。在又一个方面，试剂盒包含疫苗或其它治疗剂和描述疫苗或其它治疗剂与抗LAG3抗体或片段的使用的附接至容器或与容器一起包装的标签。在某些实施方案中，抗LAG3抗体和疫苗或其它治疗剂在分开小瓶中或一起组合在相同药物组合物中。
如上文在组合疗法章节中所讨论，两种治疗剂的同时施用不要求药剂同时或通过相同途径施用，只要药剂发挥其治疗作用的时间段存在重叠。涵盖同时或依次施用，如在不同日或周施用。
也可制备包含本文公开的抗体、肽、抗原结合片段或多核苷酸中的至少一种和关于使用组合物作为检测试剂或治疗剂的说明书的本文公开的治疗和检测试剂盒。用于此类试剂盒中的容器通常可包含至少一个小瓶、试管、烧瓶、瓶、注射器或其它适合容器，其中可放置检测和/或治疗组合物中的一种或多种，且优选适当等分。在还提供第二治疗剂的情况下，试剂盒也可含有第二不同容器，其中可放置该第二检测和/或治疗组合物。或者，多种化合物可制备成单一药物组合物，且可包装在单一容器装置诸如小瓶、烧瓶、注射器、瓶或其它适合单一容器中。本文公开的试剂盒通常还将包括用于以严密封闭形式包含小瓶用于商业销售的装置，诸如例如其中保持期望小瓶的注塑或吹塑塑料容器。在放射性标记、发色、荧光生成或其它类型的可检测标记或检测装置包括在试剂盒内的情况下，标记试剂可提供于与检测或治疗组合物本身相同的容器中，或者可选地置于其中可放置且适当等分该第二组合物的第二不同容器装置中。或者，检测试剂和标记可制备于单一容器装置中，并且在大多数情况下，试剂盒也通常包括用于以严密封闭形式包含小瓶用于商业销售和/或便于包装和递送的装置。
还提供了用于进行本文所述的检测或监测方法的装置或设备。此类设备可包括其中可输入样品的腔室或管、任选地包括阀或泵以引导样品流过装置的流体处理系统、任选将血浆或血清与血液分开的过滤器、用于添加捕获试剂或检测试剂的混合腔室和任选检测结合捕获试剂免疫复合物的可检测标记的量的检测装置。样品流可以是被动的(例如通过毛细管、流体静力学或一旦施加样品就不需要进一步操纵装置的其它力)或主动的(例如通过施加经由机械泵、电渗泵、离心力或增加气压所产生的力)或通过主动力和被动力的组合。
在进一步实施方案中，还提供处理器、计算机可读存储器和存储在计算机可读存储器上且经调整以在处理器上执行以进行本文所述的任一方法的例行程序。合适计算系统、环境和/或配置的实例包括个人计算机、服务器计算机、手持式或膝上型装置、多处理器系统、基于微处理器的系统、机顶盒、可编程的消费性电子产品、网络PC、小型计算机、大型计算机、包括以上系统或装置中任一种的分布式计算环境或本领域中已知的任何其它系统。
一般方法
分子生物学中的标准方法描述于：Sambrook, Fritsch和Maniatis (1982 & 1989第2版，2001第3版) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring HarborLaboratory Press, Cold Spring Harbor, NY；Sambrook和Russell (2001) Molecular Cloning, 第3版, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY；Wu (1993) Recombinant DNA, 第217卷, Academic Press, San Diego, CA) 。标准方法还出现于Ausbel, 等人(2001) Current Protocols in Molecular Biology, 第1-4卷,John Wiley and Sons, Inc. New York, NY，其描述细菌细胞中的克隆和DNA诱变(第1卷)、哺乳动物细胞和酵母中的克隆(第2卷)、糖缀合物和蛋白表达(第3卷)和生物信息(第4卷)。
描述了用于蛋白纯化的方法，包括免疫沉淀、色谱法、电泳、离心和结晶(Coligan等人(2000) Current Protocols in Protein Science,第1卷, John Wiley and Sons,Inc., New York)。描述了化学分析、化学修饰、翻译后修饰、融合蛋白的产生、蛋白的糖基化(参见例如Coligan等人(2000) Current Protocols in ProteinScience，第2卷 ，JohnWiley and Sons, Inc., New York；Ausubel等人(2001) Current Protocols in Molecular Biology，第3卷 ，John Wiley and Sons,Inc., NY, NY，第16.0.5-16.22.17页；Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis,MO；第45-89页；Amersham Pharmacia Biotech(2001) BioDirectory, Piscataway, N.J.，第384-391页)。描述了多克隆和单克隆抗体的产生、纯化和片段化(Coligan等人(2001)Current Protcols in Immunology，第1卷，John Wiley and Sons, Inc., New York；Harlow和Lane(1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor, NY；Harlow和Lane，同上)。用于表征配体/受体相互作用的标准技术是可得的(参见例如Coligan等人(2001) Current Protocols in Immunology，第4卷 ，John Wiley, Inc., New York)。
可制备单克隆、多克隆和人源化抗体(参见例如Sheperd和Dean(编辑) (2000)Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, New York, NY；Kontermann和Dubel(编辑) (2001) Antibody Engineering, Springer-Verlag, New York；Harlow和Lane(1988)Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, ColdSpring Harbor, NY，第139-243页；Carpenter等人(2000) J. Immunol. 165：6205；He等人(1998) J. Immunol. 160：1029；Tang等人(1999) J. Biol. Chem. 274: 27371-27378；Baca等人(1997) J. Biol. Chem. 272: 10678-10684；Chothia等人(1989) Nature 342:877-883；Foote和Winter (1992) J. Mol. Biol. 224: 487-499；美国专利号6,329,511)。
人源化的一种替代方案是使用在噬菌体上展示的人类抗体文库或在转基因小鼠中人类抗体文库(Vaughan等人(1996) Nature Biotechnol. 14: 309-314；Barbas (1995)Nature Medicine 1: 837-839；Mendez等人(1997) Nature Genetics 15: 146-156；Hoogenboom和Chames (2000) Immunol. Today 21: 371-377；Barbas等人(2001) Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, ColdSpring Harbor, New York；Kay等人(1996) Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press, San Diego, CA；de Bruin等人(1999) Nature Biotechnol. 17: 397-399)。
描述了单链抗体和双抗体(参见例如Malecki等人(2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99: 213-218; Conrath等人(2001) J. Biol. Chem. 276: 7346-7350;Desmyter等人(2001) J. Biol. Chem. 276: 26285-26290; Hudson和Kortt (1999) J. Immunol. Methods 231: 177-189；和美国专利号4,946,778)。提供了双特异性抗体(参见例如Mack, 等人(1995) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92: 7021-7025；Carter (2001)J. Immunol. Methods 248: 7-15；Volkel, 等人(2001) Protein Engineering 14: 815-823；Segal, 等人(2001) J. Immunol. Methods 248: 1-6；Brennan, 等人 (1985)Science 229: 81-83；Raso, 等人(1997) J. Biol. Chem. 272: 27623；Morrison (1985)Science 229: 1202-1207；Traunecker, 等人(1991) EMBO J. 10: 3655-3659；和美国专利号5,932,448、5,532,210和6,129,914)。
还提供了双特异性抗体(参见例如Azzoni等人(1998) J. Immunol. 161: 3493；Kita等人(1999) J. Immunol. 162: 6901；Merchant等人(2000) J. Biol. Chem. 74:9115；Pandey等人(2000) J. Biol. Chem. 275: 38633；Zheng等人(2001) J. Biol Chem.276: 12999；Propst等人(2000) J. Immunol. 165: 2214；Long (1999) Ann. Rev. Immunol. 17: 875)。
抗原的纯化不是抗体产生所必需的。动物可用携带目标抗原的细胞免疫。然后可以从免疫的动物分离脾细胞，且脾细胞可与骨髓瘤细胞系融合以产生杂交瘤(参见例如Meyaard等人(1997)Immunity 7: 283-290；Wright等人(2000) Immunity13: 233-242；Preston等人，同上；Kaithamana等人(1999) J. Immunol. 163: 5157-5164)。
抗体可缀合至例如小药物分子、酶、脂质体、聚乙二醇(PEG)。抗体可用于治疗、诊断、试剂盒或其它目的，且包括偶联至例如染料、放射性同位素、酶或金属(例如胶态金)的抗体(参见例如Le Doussal等人(1991) J. Immunol. 146: 169-175；Gibellini等人(1998) J. Immunol. 160: 3891-3898；Hsing和Bishop (1999) J. Immunol. 162: 2804-2811；Everts等人(2002) J. Immunol. 168: 883-889)。
用于流式细胞术的方法，包括荧光活化的细胞分选(FACS)，是可得的(参见例如Owens, 等人 (1994) Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ; Givan (2001) Flow Cytometry, 第2版 ；Wiley-Liss, Hoboken, NJ; Shapiro (2003) Practical Flow Cytometry, JohnWiley and Sons, Hoboken, NJ)。适用于修饰核酸(包括核酸引物和探针、多肽和抗体)以用作例如诊断试剂的荧光试剂是可得的(Molecular Probes (2003) Catalogue,Molecular Probes, Inc., Eugene, OR; Sigma-Aldrich (2003) Catalogue, St.Louis, MO)。
描述了免疫系统的组织学的标准方法(参见例如Muller-Harmelink (编辑)(1986) Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlag, New York,NY；Hiatt等人(2000) Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams, andWilkins, Phila, PA；Louis等人(2002) Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, New York, NY)。
用于测定例如抗原片段、前导序列、蛋白折叠、功能结构域、糖基化位点和序列比对的软件包和数据库是可得的(参见例如GenBank, Vector NTI® Suite (Informax,Inc, Bethesda, MD)；GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA)；DeCypher® (TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada)；Menne, 等人(2000)Bioinformatics 16: 741-742；Menne, 等人(2000) Bioinformatics Applications Note16: 741-742；Wren, 等人 (2002) Comput. Methods Programs Biomed. 68: 177-181；von Heijne (1983) Eur. J. Biochem. 133: 17-21；von Heijne (1986) Nucleic Acids Res. 14: 4683-4690)。
实施例
这些实施例意图举例说明本发明而不是本发明的限制。在实施例中阐述的组合物和方法形成本发明的一部分。
实施例1：本发明的抗体的亲和力测量。
使用基于细胞的动力学排除测定法(KinExA)测定抗LAG3抗体对人和食蟹猴LAG3的亲和力。基于细胞的KinExA可用于测量分子对细胞表面上的结合配偶体的亲和力(Rathanaswami等人Analylitical Biochemistry 373(1): 52-60 (2008); Xie等人 J.Immunol. Methods 304 (1-2): 1-14 (2005))。在这种情况下，用人或食蟹猴LAG3蛋白稳定转染BaF/3细胞。将转染的细胞或亲本BaF/3对照细胞系在37℃、120 RPM、5% CO2下，在含有10％ FBS、10 ng / ml IL-3、5 µg / ml嘌呤霉素的1X RPMI 1640培养基中生长至1.7 x106至3.2 x 106个细胞/ml的密度。将细胞浓缩，在细胞培养基中与15 pM或150 pM抗体混合，并在室温下孵育24至48小时，同时以20至30 RPM旋转。细胞以2 x 107个细胞/ml (亲本BaF/3或食蟹猴LAG3转染子)或1 X 107个细胞/ml (人LAG3转染子)的最高浓度存在，并以2倍系列稀释18份。将细胞沉淀，并使用KinExA 3200仪器(Sapidyne, Idaho, USA)测量上清液中的游离抗体。该仪器将游离抗体与已经用山羊F(ab')2抗人Fcγ(JacksonImmunoResearch Laboratories, Pennsylvania, USA)包被的聚甲基丙烯酸甲酯珠(Sapidyne)结合。将珠粒上的抗体用1.5 µg / ml Alexa Fluor® 647缀合的山羊抗人(Fab')2 (Jackson ImmunoResearch Laboratories)标记，洗涤并且都使用KinExA™ 3200读取荧光信号。来自15 pM和150 pM浓度的各抗体的数据使用KinExA™ Pro n-CurveAnalysis软件4.0.11版(Sapidyne)同时拟合。
表1. 基于细胞的Kinexa KD测定
(a) 人LAG3亲和力测量(pM)
(b) 食蟹猴LAG3亲和力测量(pM)
通过表面等离子共振、使用Biacore T200系统(Biacore, GE Healthcare,Piscataway, NJ)测量使用人LAG3- His标记的重组蛋白的小鼠抗人LAG3 ADI-12126变体的动力学结合活性。约4000RU片段特异性的山羊抗小鼠IgG Fcγ(JacksonImmunoResearch目录号115-006-071, 批号81313)经由胺偶联化学法固定至Series S CM4传感器芯片(目录号BR-1005-34)上。将人抗人LAG3克隆以1μg/mL注射在固定的抗人表面上，捕获水平为40RU。使用HBS-EP+缓冲液(BR-1006-69)作为运行缓冲液，流速为30μL/min。
将范围为0.15nM至18.8nM的不同浓度的人LAG3-His蛋白以40μL/min的流速注射在抗体表面上。在每次注射循环后，使用一次6秒注射10mM甘氨酸pH 1.5溶液、随后以60μL/min的流速注射12.5mM NaOH溶液，再生系列S CM4芯片表面。
使用减去背景的结合传感图，分析缔合(k a)和解离(k d)的速率常数和平衡解离常数 K D。所得数据集用1: 1朗缪尔结合模型(Langmuir Binding Model)，使用Biacore T200评估软件(版本2.0)拟合。表3概述ADI-12126抗体对重组人LAG3的亲和力。
表3. ADI-12126变体的Biacore亲和力测量
Biacore亲和力(pM)
实施例2：Jurkat细胞活化测定
在含有10％透析的FBS的RPMI培养基中制备Raji细胞悬浮液(2 X 105个细胞/ml)。将Raji细胞与120 ng/ml SED毒素在37℃孵育箱中孵育30分钟。同时，将Jurkat细胞的细胞悬液(8 X 106个细胞/ml (表达人LAG3的克隆G10或表达食蟹猴LAG3的Mid合并物))与抗LAG3或对照抗体的对数倍数滴定液(在10 ug/ml开始)孵育。将SED (葡萄球菌肠毒素D)负载的Raji细胞添加至与抗体孵育的细胞，在37℃孵育箱中进行24小时(即，将Raji和Jurkat细胞在37℃下一起孵育24小时)。收集上清液并使用IL2 V plex试剂盒或来自MSD的10 plex(使用与检测抗体缀合的电化学发光标记的夹心免疫测定法(MSD =中尺度装置))进行分析。
表4. 在抗LAG3抗体存在的情况下，Jurkat细胞的IL-12诱导
实施例3：在正常小鼠中IV给药后ADI-12126 Q1E M57G M115L的药代动力学、稳定性和部署。
ADI-12126 Q1E M57G M115L是一种人源化IgG4/κ单克隆抗体，其结合免疫检查点受体淋巴细胞活化基因-3 (LAG-3)，并阻断与其配体主要组织相容性复合物(MHC) II的相互作用。
概述
在正常雌性C57Bl/6小鼠中表征ADI-12126 Q1E M57G M115L单克隆抗体的药代动力学、稳定性、蛋白相互作用和生物分布。在3mg/kg的单次静脉内剂量后，表征稳定性、蛋白相互作用和生物分布最长达7天。
ADI-12126 Q1E M57G M115L在小鼠中表现出可接受的PK。估计的清除率(Cl)为1.76 (ml/天/kg)。Cmax被计算为82.2 µg/mL，其中AUC0-inf为1710 (天·µg/mL)。平衡时的分布容积(Vss)为66.6 (mL/kg)。
ADI-12126 Q1E M57G M115L在循环中是稳定的，在整个研究中没有可检测到的高分子量复合物形成或全身分解代谢的证据。
ADI-12126 Q1E M57G M115L组织与血液的比率在所有收集的时间点<0.53，表明缺乏组织摄取或积累，具有正常内源免疫球蛋白分子典型的器官部署模式。
材料和方法
表5. 材料列表
材料 供应商 目录号/参考
具有Ultracel-10膜的Amicon® Ultra-15离心过滤单元 EMD Millipore UFC901008
ACQUITY UPLC BEH200保护柱 Waters 186006850
ACQUITY UPLC BEH200柱 Waters 186006852
BupH™硼酸盐缓冲包 Thermo Scientific 28384
含有0.78 mg乙二胺四乙酸二钠的CAPIJECT®微管 Terumo Medical T-MQK
Costar 96孔圆底测定板，黑色聚苯乙烯 Corning Incorporated 3792
Cryolys®冷却系统 Bertin Technologies EQ05068-200-RD000.0
Dulbecco氏磷酸盐缓冲盐水 Mediatech 21-031-CV
染料去除柱和树脂 Thermo Scientific 22858
DyLight™ 650 N-羟基琥珀酰亚胺酯 Thermo Scientific 62265, 62266
Falcon离心管 Becton Dickinson 352098
凝胶过滤标准 Bio-Rad 151-1901
Halt™蛋白酶抑制剂一次性使用混合物 Thermo Scientific 78430, 78245
基质储存管；1.4 mL，空白聚丙烯，圆底，无菌 Thermo Scientific 4248
PreCellys® 24 Lyzer / 均质器 Bertin Technologies EQ03119.200.RD000.0
表5. 材料列表
材料 供应商 目录号/参考
PreCellys®裂解试剂盒/组织匀浆CK混合物 Bertin Technologies 03961-1-009
Roche蛋白酶抑制剂混合物 Roche 1-697-498
SecurityGuard™滤筒 Phenomenex AJ0-4488
微量离心管，聚丙烯 Corning Incorporated 430915
Millex-GV注射器过滤器单元 EMD Millipore SLGV033RS
基质储存管；1.4 mL，空白聚丙烯，圆底，无菌 Thermo Scientific 4248
Halt蛋白酶抑制剂混合物 Thermo Scientific 1-697-498
Slide-A-Lyzer™透析滤筒，10K MWCO, 3 mL Thermo Scientific 66380
EDTA = 乙二胺四乙酸；MWCO = 分子量截止值；no. = 编号。
DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L的制备
使用DyLight™ 650标记试剂盒来将N-羟基琥珀酰亚胺酯荧光染料(在652nm处激发和在672nm处发射)与ADI-12126 Q1E M57G M115L缀合。在标记前，使用10千道尔顿(kD)分子量截止Slide-A-Lizer™透析盒，将ADI-12126 Q1E M57G M115L缓冲液交换至50mM硼酸钠、100mM氯化钠缓冲液，pH 8.5。反应混合物含有1.2 mg ADI- 12126 Q1E M57G M115L，最终体积为0.5 mL。通过将ADI-12126 Q1E M57G与染料组合来引发反应，并在室温(RT)下避光持续1小时。使用填充至离心柱中的纯化树脂除去未缀合的染料。当必要时，通过具有10kD截止膜的Amicon®超离心过滤装置进一步浓缩样品。使用0.22-µm Durapore®聚偏二氟乙烯(PVDF)膜过滤标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L。使用NanoDrop™装置(ThermoScientific)来表征标记的试剂，用于测定蛋白浓度和作为染料与蛋白，摩尔与摩尔比的标记程度(DOL)。通过大小排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)评价和证实DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L的纯度和完整性。
ADI-12126 Q1E M57G M115L给药溶液的制备
在制备给药溶液前，将DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L在4℃下避光储存。表示为DyLight™ 650与ADI-12126 Q1E M57G M115L的摩尔比的标记程度(DOL)为2.04。使用动物的体重平均值(18.6克)制备给药溶液。
通过在无菌Falcon聚丙烯管中将0.456mL DyLight™ 650-标记的ADI- 12126Q1E M57G M115L (5.7 mg/mL)稀释于2.597mL Dulbecco氏磷酸盐缓冲盐水(DPBS)中来制备给药溶液。给药溶液的最终浓度为0.93 mg/mL。无菌Lo-Dose™ U-100胰岛素注射器用给药溶液预先填充，并在4℃下避光储存，直至给药时。
表6. 测试动物
物种 小鼠
品系 C57Bl/6
性别 雌性
来源 The Jackson Laboratory
使用的动物数量 21
实验开始时动物的周龄 10周
研究中涉及动物护理和使用的程序由Merck研究实验室的机构动物护理和使用委员会审查并批准。
在研究期间，动物的护理和使用根据实验动物护理的评估和认证协会(AAALAC)、动物福利法案、美国兽医协会(AVMA)关于安乐死的安乐死小组和实验动物研究所(ILAR)实验动物护理和使用指南的指导中概述的原则进行。
研究设计/方案 - 动物模型
在第0天，向一组21只正常雌性C57Bl/6小鼠施用单次3 mg/kg (100 µL) IV剂量的DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L。
在给药前，加热灯将动物预热几分钟。将动物置于丙烯酸动物限制器中，然后在1分钟内将总剂量体积施用于侧尾静脉中。
表7. 组命名、剂量水平和给药时间表
1给药体积为每只小鼠100μL；
IV =静脉内；No. = 编号；ROA =施用途径。
血液样品的收集和处理
通过二氧化碳吸入使动物安乐死，并经由末端心脏穿刺从动物收集全血。在2和6小时以及第1、2、3、5和7天取血液样品用于处理和分析。将收集的血液(每个样品~500 µL)转移至乙二胺四乙酸二钾CapiJect微量收集管(TerumoMedical Corporation, Somerset, NJ)中并置于冰上。将100μL血液的等分试样移液至Matrix聚丙烯管(Thermo FisherScientific)中。通过以6000 × g离心6分钟，从全血的剩余部分获得血浆。移取分离的血浆(~200μL)并转移至聚丙烯小瓶中。将血浆样品储存在-80℃直至分析。
器官的收集和处理
在2小时、第1天和第2天收集肝、肾、脾、肺和回肠用于分析。将器官称重并置于2 mL含有匀浆珠的PreCellys®组织匀浆管中。将含有Halt™蛋白酶抑制剂混合物的裂解物缓冲液添加至每个管中。根据制造商的说明，使用PreCellys® 24仪器(Bertin Technologies)将器官制备物均质化。
测定方法 – 血浆样品的大小排阻高效液相色谱分析
将血浆样品添加至配备有保护柱的Acquity UPLC BEH200大小排阻色谱中。使用配备有集成紫外线(UV)(Agilent Technologies Inc.)和荧光检测器(HamamatsuCorporation)的Agilent 1200高效液相色谱(HPLC)系统。在分析血浆样品前，使用分子量标记(Bio-Rad)评价柱性能。大小排阻程序由在流动相中以0.35mL/分钟的流速用DPBS的8分钟等度运行组成。该程序在室温下进行。通过分别在646和674nm的激发和发射波长下的荧光强度来光学分析流出物。收集SEC-HPLC数据并用Agilent ChemStation软件(AgilentTechnologies, Inc.)，版本2进行分析。
血液、血浆和裂解液样品的荧光强度的分析
使用Modulus™微孔板多模式读数器(Turner BioSystems)来测量血液、血浆、肝、肾、肺、脾和回肠裂解物样品中的荧光强度。微孔板读数器配备有荧光滤光片，其特征在于分别为625nm和660-720nm的激发和发射波长。
对于药代动力学，在2和6小时以及第1、2、3、5和7天的血浆中，测量荧光强度。对于组织分布，在2小时和第2和5天的全血和组织裂解物样品中，测量荧光强度。制备三种荧光强度校准曲线(血液、血浆和肝脏裂解物)以表征样品。使用血液校准曲线来表征血液、肺裂解物和脾裂解物样品。使用血浆校准曲线来表征血浆和回肠裂解物样品。使用肝脏校准曲线来表征肝脏和肾脏裂解物样品。将组织裂解物样品用组织裂解缓冲液(含有0.1％TritonX100的1X DPBS)稀释至1: 10最终稀释度(w/v)，总体积为150μL。随后，将它们转移至低荧光背景、96孔、聚苯乙烯板中，用于在Modulus™微孔板多模式读数器中进行分析。一组相应的空白组织裂解物提供了背景校正。
数据分析
使用Microsoft Excel，2010中的线性回归分析拟合荧光强度数据。将来自每个时间点的2只动物的数据与平均值一起单独绘制。浓度被计算为每克湿组织的微克当量。使用组织和血液中的DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L的浓度计算组织与血液的比率。
使用非房室分析(NCA)测定各个血浆样品中的ADI-12126 Q1E M57G M115L的浓度-时间数据。使用Phoenix® WinNonlin软件(Certara)估计或计算所有药代动力学(PK)参数。对NCA使用模型201 (IV输入推注)。将所有浓度数据和PK参数四舍五入为3位有效数字。
结果
DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L在小鼠中的药代动力学
ADI-12126 Q1E M57G M115L在小鼠中表现出足够的PK。估计的清除率(Cl)为1.76(ml/天/kg)。Cmax被计算为82.2 µg/mL，其中AUC0-inf为1710 (天·µg/mL)。平衡时的分布体积(Vss)为66.6 (mL/kg)。
表8. 通过非房室分析的DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L的PK参数
使用Phoenix® WinNonlin(Certara)估计或计算所有PK参数。将所有浓度数据和PK参数四舍五入为3位有效数字。
AUC0-inf = 零至无限时间的曲线下面积；Cl= 清除率；Cmax = 观察到的最大浓度；IV =静脉内；NCA =非房室分析；PK =药代动力学；Vss =平衡时的分布容积。
DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L的系统稳定性和蛋白相互作用
使用荧光SEC-HPLC来评估DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L在血浆中的稳定性和蛋白相互作用。所有测试的样品都显示没有或最小量的高分子量(HMW)复合物形成。没有降低的信号、蛋白相互作用或分解代谢的DyLight™ 650-标记的ADI-12126Q1E M57G M115L的证据。主色谱峰对应于完整的单体IgG，并且由于药物清除，完整IgG峰的总量随时间降低。
通过SEC-HPLC的DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L的稳定性和蛋白相互作用
使用荧光大小排阻高效液相色谱来评估DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57GM115L在给药的动物中的血浆中的稳定性和蛋白相互作用。从动物收集血浆样品用于分析，在单次静脉内3mg/kg剂量的DyLight™ 650标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L后2和6小时以及第1、2、3、5和7天采样。
ADI-12126 Q1E M57G M115L在循环中是稳定的，在整个研究中没有可检测到的高分子量复合物形成或全身分解代谢的证据。
DyLight™ 650标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L的组织分布
在2小时和第2天和第5天评估DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L在肝、肾、肺、脾和回肠中的组织分布。组织与血液比> 1.0将表明阳性组织摄取。计算的组织血液比对于所有测试的组织和时间点均<0.53，表明具有正常内源免疫球蛋白分子典型的器官部署模式的阴性ADI-12126 Q1E M57G M115L器官摄取或积累。
表9. DL650-人x [LAG3_H] mAb (ADI-12126 Q1E M57G M115L) IgG4的平均组织 与血液比
<i>时间 (天)</i> <i>肝</i> <i>肾</i> <i>肺</i> <i>脾</i> <i>回肠</i> <i>血浆</i> <i>WB</i>
2小时 0.23 0.23 0.17 0.37 0.07 2.09 1.0
2天 0.32 0.25 0.17 0.52 0.09 1.94 1.0
5天 0.34 0.23 0.19 0.41 0.08 2.18 1.0
DL650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L DOL= 2.04。
实施例4：ADI-12126 Q1E M57G M115L在人和食蟹猴血浆中的稳定性、回收率和蛋白相互作用的表征
ADI-12126 Q1E M57G M115L是一种人源化IgG4/κ单克隆抗体，其结合免疫检查点受体淋巴细胞活化基因-3 (LAG-3)，并阻断与其配体主要组织相容性复合物(MHC) II的相互作用。
概述
该研究描述了在37℃孵育最长达14天后，ADI-12126 Q1E M57G M115L在人和食蟹猴血浆中的稳定性、回收率和潜在的蛋白相互作用。
DyLight™ 650- ADI-12126 Q1E M57G M115L在孵育14天时在人和食蟹猴血浆中稳定性为90.6％和90.3％。DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G在孵育14天时在人和食蟹猴血浆中的回收率为&gt; 89％。因此，在14天的时间过程中，在两种生物基质中仅观察到最低水平的高分子量复合物和荧光部分损失。
材料和方法
血浆来源
从Bioreclamation Inc.获得含有乙二胺四乙酸二钾的合并的人和食蟹猴血浆。将血浆在干冰上运输至Merck Research Laboratories (Palo Alto, CA, USA)并在-80℃下储存，直至使用。
DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L的制备
如前文在药代动力学、稳定性和部署研究中所述，标记ADI-12126 Q1E M57G M115L。通过大小排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)评价和证实该研究中使用的DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L的纯度和完整性。标记程度(DOL)为3.1。
DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L在血浆中的稳定性、回收率和相互作用的评价
将DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L (最终浓度为200μg/mL)与含有乙二胺四乙酸二钾的纯净、合并的人或食蟹猴血浆在37℃下孵育。
在与DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L孵育0、2小时和1、2、4、7、10和14天后收集血浆的等份试样(100μL)，快速冷冻，并储存在-80℃直至使用。将各样品在DPBS中1: 10稀释(最终浓度为20 µg/mL DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57GM115L)，并通过大小排阻高效液相色谱(SEC-HPLC)进行分析。
大小排阻高效液相色谱
将样品施加至Acquity UPLC Protein BEH SEC柱(200A, 1.7 um, 4.6 mm X 150 mm)上。使用配备有二极管阵列检测器、紫外-可见(UV-Vis)光谱(Agilent TechnologiesInc.)和荧光检测器(Hamamatsu Photonics K.K)的Agilent 1260高效液相色谱(HPLC)系统分离样品。
大小排阻程序是以DPBS作为流动相在室温下的8分钟等度运行，流速为0.35mL/分钟。通过分别在646和674nm的激发和发射下的总荧光强度来光学监测流出物。使用AgilentChemStation软件V2 (Agilent Technologies Inc.)进行数据收集和分析。在分析实验样品前运行分子量标记以评价柱性能。
数据分析
将通过SEC-HPLC检测的主峰和所有其它可检测的峰面积整合。DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L的稳定性被计算为每个色谱图中的完整单体IgG峰面积相对于总荧光面积的百分比。DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L的回收率被计算为每个连续时间点的完整单体IgG峰相对于初始孵育时间点(时间0)的百分比。
结果
DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L在来自人和食蟹猴的血浆中的稳定性、回收率和相互作用
DyLight™ 650- ADI-12126 Q1E M57G M115L在孵育14天时在人和食蟹猴血浆中稳定性为90.6％和90.3％。DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G在孵育14天时在人和食蟹猴血浆中的回收率为&gt; 89％。因此，在14天的时间过程中，在所有两种生物基质中仅观察到最低水平的高分子量复合物和荧光部分的损失。
表10. DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L在人和食蟹猴血浆中的稳定性和回收率
将DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L在纯净、合并的人或食蟹猴血浆中在37℃下孵育最长达14天。
1DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L的稳定性被计算为每个色谱图中的完整单体IgG峰面积相对于总荧光面积的百分比。
2DyLight™ 650-标记的ADI-12126 Q1E M57G M115L的回收率被计算为每个连续时间点的完整单体IgG峰相对于初始孵育时间点(时间0)的百分比。
本文中引用的所有参考文献均通过引用并入，其程度如同各个别出版物、数据库条目(例如Genbank序列或GeneID条目)、专利申请或专利具体且个别地指示通过引用并入一样。申请人遵循37 C.F.R. §1.57(b)(1)通过引用并入的这个陈述意欲涉及各个和每一个别出版物、数据库条目(例如Genbank序列或GeneID条目)、专利申请或专利，其中各自均遵照37 C.F.R. §1.57(b)(2)明确鉴定，即使此类引用不直接接近通过引用并入的专用表述。通过引用并入的专用表述(如果存在)包括于本说明书内不会以任何方式弱化该通过引用并入的一般陈述。本文中参考文献的引用不意欲承认该参考文献为相关现有技术，也不构成对于这些出版物或文献的内容或日期的任何承认。
本发明的范围不受本文描述的具体实施方案所限制。实际上，除了本文所述的那些之外，由前述描述和附图，本发明的各种修改对本领域技术人员而言将变得显而易见。此类修改意欲落在所附权利要求的范围内。
前述书面说明书被认为足以能够使本领域技术人员实施本发明。除了本文所示和所述的那些之外，由前述描述，本发明的各种修改对本领域技术人员而言将变得显而易见且落在所附权利要求的范围内。

Claims (24)

1.特异性结合人LAG3的抗体或其抗原结合片段，其包含：
(a) 包含SEQ ID NO: 3或4中所述的氨基酸序列的免疫球蛋白链的VL结构域的CDR1、CDR2和CDR3；和/或
(b) 包含SEQ ID NO: 1或2中所述的氨基酸序列的免疫球蛋白链的VH结构域的CDR1、CDR2和CDR3。
2.权利要求1的抗体或片段，其包含：
(1) 轻链可变结构域，其包含：
包含氨基酸序列：8的CDR-L1；
包含氨基酸序列：9的CDR-L2；和
包含氨基酸序列：10的CDR-L3；和
重链可变结构域，其包含：
包含氨基酸序列：5的CDR-H1；
包含氨基酸序列：6的CDR-H2；和
包含氨基酸序列：7的CDR-H3；或
(2) 轻链可变结构域，其包含：
包含氨基酸序列：14的CDR-L1；
包含氨基酸序列：15的CDR-L2；和
包含氨基酸序列：16的CDR-L3；和
重链可变结构域，其包含：
包含氨基酸序列：11的CDR-H1；
包含氨基酸序列：12的CDR-H2；和
包含氨基酸序列：13的CDR-H3。
3.特异性结合人LAG3的抗体或其抗原结合片段，其包含选自以下的轻链免疫球蛋白和重链免疫球蛋白：
(1) 包含与SEQ ID NO: 3中所述的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的氨基酸序列的轻链免疫球蛋白，和
包含与SEQ ID NO: 1中所述的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的氨基酸序列的重链免疫球蛋白；或
(2) 包含与SEQ ID NO: 4中所述的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的氨基酸序列的轻链免疫球蛋白，和
包含与SEQ ID NO: 2中所述的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性的氨基酸序列的重链免疫球蛋白。
4.权利要求3的抗体或抗原结合片段，其包含：
(1) 轻链免疫球蛋白，其含有包含SEQ ID NO: 3的氨基酸序列的免疫球蛋白的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，且与SEQ ID NO: 3中所述的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性；和
重链免疫球蛋白，其含有包含SEQ ID NO: 1的氨基酸序列的免疫球蛋白的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，且与SEQ ID NO:1中所述的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性；或
(2) 轻链免疫球蛋白，其含有包含SEQ ID NO: 4的氨基酸序列的免疫球蛋白的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，且与SEQ ID NO: 4中所述的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性；和
重链免疫球蛋白，其含有包含SEQ ID NO: 2的氨基酸序列的免疫球蛋白的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3且与SEQ ID NO: 2中所述的氨基酸序列具有至少90％氨基酸序列同一性。
5.权利要求3-4中任一项的抗体或抗原结合片段，其中所述序列同一性为至少95％、96％、97％、98％、99％或100％。
6.权利要求5的抗体或抗原结合片段，其包含：
(1) 包含SEQ ID NO: 3中所述的氨基酸序列的轻链免疫球蛋白；和
包含SEQ ID NO: 1中所述的氨基酸序列的重链免疫球蛋白；或
(2) 包含SEQ ID NO: 4中所述的氨基酸序列的轻链免疫球蛋白；和
包含SEQ ID NO: 2中所述的氨基酸序列的重链免疫球蛋白；或
(3) 包含SEQ ID NO: 22中所述的氨基酸序列的轻链免疫球蛋白；和
包含SEQ ID NO: 21中所述的氨基酸序列的重链免疫球蛋白；或
(4) 包含SEQ ID NO: 24中所述的氨基酸序列的轻链免疫球蛋白；和
包含SEQ ID NO: 23中所述的氨基酸序列的重链免疫球蛋白。
7.权利要求1-8中任一项的抗体或片段，其由工程改造的酵母N-连接的聚糖或CHO N-连接的聚糖糖基化。
8.权利要求1-7中任一项的抗体或片段，其为抗体。
9.多肽，其包含与选自SEQ ID NO: 1-16和21-24的氨基酸序列具有至少80％序列同一性的氨基酸序列。
10.多核苷酸，其编码权利要求9的多肽。
11.载体，其包含权利要求10的多核苷酸。
12.宿主细胞，其包含权利要求1-11中任一项的抗体、片段、多肽、多核苷酸或载体。
13.组合物或试剂盒，其包含权利要求1-11中任一项的抗体、抗原结合片段、多肽、多核苷酸或载体，和任选地，药学上可接受的载体或稀释剂；其任选地与另外的治疗剂组合。
14.疫苗，其包含抗原和药学上可接受的载体与权利要求1-8或13中任一项的抗体或片段或组合物或试剂盒的组合。
15.容器或注射装置，其包含权利要求1-11、13或14中任一项的抗体、抗原结合片段、组合物、多肽、多核苷酸、载体或疫苗；任选地，其中所述容器或装置包括药学上可接受的载体或稀释剂。
16.权利要求13的组合物或试剂盒，其中所述另外的治疗剂是选自以下的成员：疫苗、抗癌治疗剂、免疫调节受体的抑制剂、止吐剂、MTOR (雷帕霉素的哺乳动物靶标)抑制剂、细胞毒性剂、铂试剂、EGFR抑制剂、VEGF抑制剂、微管稳定剂、紫杉烷、CD20抑制剂、CD52抑制剂、CD30抑制剂、RANK (核因子κ-B的受体活化剂)抑制剂、RANKL (核因子κ-B配体的受体活化剂)抑制剂、ERK抑制剂、MAP激酶抑制剂、AKT抑制剂、MEK抑制剂、PI3K抑制剂、HER1抑制剂、HER2抑制剂、HER3抑制剂、HER4抑制剂、Bcl2抑制剂、CD22抑制剂、CD79b抑制剂、ErbB2抑制剂、法呢基蛋白转移酶抑制剂、抗PD1抗体或其抗原结合片段、派姆单抗、尼鲁单抗、CT-011、抗CTLA4抗体或其抗原结合片段、抗TIM3抗体或其抗原结合片段、抗CS1抗体或其抗原结合片段、依洛珠单抗、抗KIR2DL1/2/3抗体或其抗原结合片段、利瑞鲁单抗、抗CD137抗体或其抗原结合片段、乌鲁单抗、抗GITR抗体或其抗原结合片段、TRX518、抗PD-L1抗体或其抗原结合片段、BMS-936559、MSB0010718C、MPDL3280A、抗PD-L2抗体或其抗原结合片段、抗ILT1抗体或其抗原结合片段、抗ILT2抗体或其抗原结合片段、抗CEACAM1抗体或其抗原结合片段、抗ILT3抗体或其抗原结合片段、抗ILT4抗体或其抗原结合片段、抗ILT5抗体或其抗原结合片段、抗ILT6抗体或其抗原结合片段、抗ILT7抗体或其抗原结合片段、抗ILT8抗体或其抗原结合片段、抗CD40抗体或其抗原结合片段、抗OX40抗体或其抗原结合片段、抗CD137抗体或其抗原结合片段、抗KIR2DL1抗体或其抗原结合片段、抗KIR2DL2/3抗体或其抗原结合片段、抗KIR2DL4抗体或其抗原结合片段、抗KIR2DL5A抗体或其抗原结合片段、抗KIR2DL5B抗体或其抗原结合片段、抗KIR3DL1抗体或其抗原结合片段、抗 KIR3DL2抗体或其抗原结合片段、抗KIR3DL3抗体或其抗原结合片段、抗NKG2A抗体或其抗原结合片段、抗NKG2C抗体或其抗原结合片段、抗NKG2E抗体或其抗原结合片段、IL-10、抗IL10、抗TSLP、PEG化的IL-10、13-顺式-视黄酸、3-[5-(甲基磺酰基哌啶甲基)-吲哚基]-喹诺酮、4-羟基他莫昔芬、5-脱氧尿苷、5'-脱氧-5-氟尿苷、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、7-羟基星形孢菌素、A-443654、醋酸阿比特龙、abraxane、ABT-578、阿考比芬、ADS-100380、阿柏西普、ALT-110、六甲蜜胺、阿米福汀、氨鲁米特、氨柔比星、安吖啶、阿那格雷、阿那曲唑、血管生成抑制因子、AP-23573、ARQ-197、阿佐昔芬、AS-252424、AS-605240、天门冬酰胺酶、AT-9263、ATI3387、阿曲生坦、阿昔替尼、AZD1152、卡介苗(BCG)疫苗、巴他布林、BC-210、BGJ398、besodutox、贝伐珠单抗、比卡鲁胺、Bio111、BIO140、BKM120、博来霉素、BMS-214662、BMS-247550、BMS-275291、BMS-310705、硼替佐米、布舍瑞林、白消安、骨化三醇、喜树碱、卡纽替尼、卡培他滨、卡铂、卡莫司汀、CC8490、CEA疫苗、西地尼布、CG-1521、CG-781、查米多星、苯丁酸氮芥、氯毒素、西仑吉肽、西咪替丁、顺铂、克拉屈滨、氯膦酸盐、cobimetnib、COL-3、CP-724714、环磷酰胺、环丙孕酮、乙酸环丙孕酮、阿糖胞苷、胞嘧啶阿糖胞苷、达拉菲尼、达卡巴嗪、达西司他、更生霉素、dalotuzumab、达鲁舍替、达沙替尼、道诺霉素、地卡塔尼、鱼藤素、地尼白介素、脱氧助间型霉素、缩酚酸肽、二芳基丙腈、二乙基己烯雌酚、diftitox、DNE03、多西他赛、多韦替尼、多柔比星、屈洛昔芬、艾特咔林、钇-90标记的艾多替德、艾多替德、EKB-569、EMD121974、encorafenib、内皮抑素、恩杂鲁胺、恩扎妥林、表柔比星、埃博霉素B、ERA-923、爱必妥、厄洛替尼、雌二醇、雌氮芥、依托泊苷、依维莫司、依西美坦、ficlatuzumab、非那雄胺、夫拉平度、氟尿苷、氟达拉滨、氟氢可的松、氟甲睾酮、氟他胺、FOLFOX方案、氟维司群、galeterone、ganetespib、吉非替尼、吉西他滨、吉马替康、吡喃葡萄糖基脂质A、戈舍瑞林、乙酸戈舍瑞林、棉酚、GSK461364、GSK690693、HMR-3339、己酸羟孕酮、羟基脲、IC87114、伊达比星、idoxyfene、异环磷酰胺、IM862、伊马替尼、咪喹莫特、IMC-1C11、INCB24360、INC280、INO1001、干扰素、白介素-2、白介素-12、伊匹单抗、伊立替康、JNJ-16241199、酮康唑、KRX-0402、拉帕替尼、拉索昔芬、LEE011、来曲唑、亚叶酸、亮丙瑞林、醋酸亮丙瑞林、左旋咪唑、脂质体包覆的紫杉醇、洛莫司汀、氯那法尼、硫蒽酮、LY292223、LY292696、LY293646、LY293684、LY294002、LY3009120、LY317615、马立马司他、氮芥、甲羟孕酮乙酸酯、甲地孕酮乙酸酯、MEK162、美法仑、巯基嘌呤、美司钠、甲氨蝶呤、光神霉素、丝裂霉素、米托坦、米托蒽醌、陶扎色替、MLN8054、热杀死的奥布分枝杆菌的混悬液、natitoclax、癌立消、来那替尼、neuradiab、尼洛替尼、尼鲁米特、诺拉曲塞、NVP-BEZ235、奥利美生、奥曲肽、奥法木单抗、奥戈伏单抗、ornatuzumab、orteronel、奥沙利铂、紫杉醇、帕博西尼、帕米膦酸盐、帕尼单抗、帕唑帕尼、PD0325901、PD184352、PEG-干扰素、培美曲塞、喷司他丁、哌立福新、苯丙氨酸氮芥、PI-103、pictilisib、PIK-75、哌喷昔芬、PKI-166、普卡霉素、PLX8394、聚-ICLC、卟菲尔钠、泼尼松、丙卡巴肼、孕酮、PSK、PX-866、R-763、雷洛昔芬、雷替曲塞、雷佐生、地磷莫司、利妥昔单抗、罗米地新、RTA744、鲁比替康、scriptaid、Sdx102、塞利西利、司美替尼、司马沙尼、SF1126、西罗莫司、SN36093、索拉非尼、螺内酯、角鲨胺、SR13668、链脲菌素、SU6668、辛二酰苯胺异羟肟酸、舒尼替尼、合成的雌激素、他仑帕奈、塔利拉维、他莫昔芬、替莫唑胺、坦罗莫司、替尼泊苷、替米利芬、睾酮、粉防己碱、TGX-221、沙利度胺、6-硫鸟嘌呤、噻替派、替西木单抗、替吡法尼、替沃扎尼、TKI-258、TLK286、TNFα、拓朴替康、柠檬酸托瑞米芬、曲贝替定、曲美替尼、曲妥珠单抗、维甲酸、曲古抑菌素A、曲西立滨磷酸盐单水合物、双羟萘酸曲普瑞林、TSE-424、尿嘧啶氮芥、丙戊酸、戊柔比星、凡德他尼、瓦他拉尼、VEGF捕获物、威罗菲尼、长春碱、长春新碱、长春地辛、长春瑞滨、vitaxin、vitespan、伏立诺他、VX-745、渥曼青霉素、Xr311、zanolimumab、ZK186619、ZK-304709、ZM336372、ZSTK474、Z-100、卡索匹坦、奈妥吡坦、帕洛诺司琼、阿瑞匹坦、苯海拉明、羟嗪、甲氧氯普胺、劳拉西泮、阿普唑仑、卤吡醇、氟哌利多、屈大麻酚、地塞米松、甲基强的松龙、丙氯拉嗪、格拉司琼、昂丹司琼、多拉司琼、托烷司琼、GCSF、PEG-GCSF、促红细胞生成素、阿法依泊汀、阿法达贝泊汀、布鲁顿氏酪氨酸激酶(BTK)抑制剂、前列腺特异性抗原疫苗、阿扎胞苷、甲磺酸艾日布林、甲磺酸乐伐替尼、epacadostat、抗4-1BB激动剂抗体或抗原结合片段、克唑替尼、CSF1受体激酶抑制剂、恩替诺特、birinapant和尼拉帕尼。
17.用于拮抗有此需要的人患者中的LAG3的方法，其包括向受试者施用有效量的权利要求1-8中任一项的抗体或片段。
18.治疗受试者中的癌症或感染性疾病的方法，其包括向所述受试者施用有效量的权利要求1-8中任一项的抗体或抗原结合片段，任选地与治疗程序和/或另外的治疗剂组合。
19.权利要求18的方法，其中所述癌症是选自以下的成员：转移性癌症、实体瘤、血液癌症、白血病、淋巴瘤、骨肉瘤、横纹肌肉瘤、神经母细胞瘤、肾癌、白血病、肾移行细胞癌、膀胱癌、Wilm氏癌、卵巢癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、骨癌、肺癌、非小细胞肺癌、胃癌、结肠直肠癌、宫颈癌、滑膜肉瘤、头颈癌、鳞状细胞癌、多发性骨髓瘤、肾细胞癌、视网膜母细胞瘤、肝母细胞瘤、肝细胞癌、黑素瘤、肾横纹肌样瘤、尤因氏肉瘤、软骨肉瘤、脑癌、胶质母细胞瘤、脑膜瘤、垂体腺瘤、前庭神经鞘瘤、原始性神经外胚层肿瘤、成神经管细胞瘤、星形细胞瘤、间变性星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、室管膜瘤、脉络丛乳头状瘤、真性红细胞增多症、血小板增多症、特发性骨髓纤维化、软组织肉瘤、甲状腺癌、子宫内膜癌、类癌或肝癌、乳腺癌和胃癌。
20.将权利要求1-8中任一项的抗体或抗原结合片段施用于受试者的方法，其包括使用注射装置将所述抗体或片段注入所述受试者体内；且任选地，还将另外的治疗剂或治疗程序施用于所述受试者。
21.产生根据权利要求1-9中任一项所述的抗体或其抗原结合片段或多肽的方法，其包括：
a. 在有利于表达多核苷酸的条件下，在培养基中培养包含编码所述多肽或抗体或抗原结合片段的免疫球蛋白链的多核苷酸的宿主细胞；和
b. 任选地，从所述宿主细胞和/或培养基回收所述抗体、抗原结合片段或多肽。
22.权利要求21的方法，其中所述宿主细胞是中国仓鼠卵巢细胞。
23.特异性结合LAG3的抗体或其抗原结合片段或多肽，其为权利要求21-22中任一项的方法的产物。
24.用于在权利要求1-8中任一项的抗体或其抗原结合片段和LAG3多肽之间形成复合物的方法，其包括在有利于所述抗体或片段和LAG3多肽的结合的条件下使所述抗体或片段与LAG3多肽接触。
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