CN106749542B - 一种夫替瑞林的合成方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种夫替瑞林的合成方法包括以下步骤：制备树脂Fmoc‑Pro‑2‑Chlorotrityl Resin；制备肽树脂：Pyr‑His(trt)‑Trp(boc)‑Ser(tbu)‑Tyr(tbu)‑Gly‑Leu‑Arg(pbf)‑Pro‑2CTC Resin；制备全保护肽链片段：Pyr‑His(trt)‑Trp(boc)‑Ser(tbu)‑Tyr(tbu)‑Gly‑Leu‑Arg(pbf)‑Pro‑OH；制备全保护夫替瑞林；切除侧链得到夫替瑞林；粗肽纯化。本发明通过对工艺路线的深入研究，优化合成路线和条件，得到的合成方法操作简易，反应条件温和，工艺温和，生产成本低，收率高。
Description
技术领域
本发明属于多肽药物制备领域，涉及一种夫替瑞林的合成方法。
背景技术
夫替瑞林(Fertirelina)是一种黄体生成激素释放因子，多肽序列为Glp-His-Trp-Ser-Tyr-Gly-Leu-Arg-Pro-NHEt，其结构式如下所示：
现有夫替瑞林的合成方法中存在反应条件苛刻，成本高，收率低等缺陷。
发明内容
本发明为了克服现有技术的至少一个不足，提供一种新的夫替瑞林的合成方法，以实现反应条件温和，工艺简单，成本低，收率高的目的。
为了实现上述目的，本发明采取下述技术方案来实现：
一种夫替瑞林的合成方法，具体包括以下步骤：
步骤a，制备树脂：Fmoc-Pro-2-Chlorotrityl Resin，以二氯甲烷为溶剂，加入Fmoc-Pro-OH溶解和2-氯三苯甲基氯树脂(2-Chlorotrityl Chloride Resin，缩写2-CTCResin)，加入有机碱N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)，反应得到Fmoc-Pro-2-ChlorotritylResin，其中2-Chlorotrityl Chloride Resin的替代度0.3-1.1mmol/g。
步骤b，制备肽树脂：Pyr-His(trt)-Trp(boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Gly-Leu-Arg(pbf)-Pro-2CTC Resin；以Fmoc-Pro-2-Chlorotrityl Resin为起始，采用固相法依次偶联具有保护基团的氨基酸，合成肽树脂。
步骤c，制备全保护肽链片段：Pyr-His(trt)-Trp(boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Gly-Leu-Arg(pbf)-Pro-OH；将步骤b得到的肽树脂加入切肽试剂，得到全保护肽链片段。
步骤d，制备全保护夫替瑞林：对全保护肽链片段的C端进行乙胺化得到全保护夫替瑞林。
步骤e，切除侧链得到夫替瑞林：在全保护夫替瑞林中加入冰切割试剂低温保持10-20min后，加热至25℃反应2-3h，得到夫替瑞林粗品，其中切割试剂为三氟乙酸(TFA)：三异丙基硅烷(Tris)：巯基丙酸(MPA)：苯酚：H2O＝90:4:3:2:1。
本发明中裂解反应初期，瞬间大量放热，温度迅速上升，高温容易使多肽变性同时产生很多副反应，增加实验的危险性。本发明选择加入冰切割试剂并低温保持，利于安全稳定的进行实验，并降低副反应。
本发明中切割试剂综合考虑夫替瑞林的结构，促进不同保护基团的裂解，捕获被裂解的基团，同时阻止复杂环境下的副反应。
步骤f，粗肽纯化。
进一步，所述步骤a中，室温反应2-4小时，抽干后进行多次洗涤，然后加入无水甲醇封闭树脂上未连接Fmoc-Pro-OH的活性基团。
进一步，所述步骤a中，多次洗涤，分别采用DMF洗两次，然后用DCM洗两次，最后用无水甲醇洗两次，接着加入无水甲醇搅拌或震荡反应1-3小时封闭树脂上未连接Fmoc-Pro-OH的活性基团，抽干，得到Fmoc-Pro-2-Chlorotrityl Resin。
本发明中步骤a的洗涤，首先采用溶解性最好的DMF，溶解上一步反应残留物附着在树脂上的反应物，但是DMF不易挥发，不易抽净。
DCM也是很好的溶解性，和DMF互溶，溶解性比较好，易挥发也易抽净。在本步骤中，DCM和DMF的顺序可以互换，影响较小，但是优选DMF在前。
无水甲醇需要放在最后，其互溶性好，溶解性也好，可以收缩树脂会使树脂体积大大减小，也顺应了下一步用无水甲醇封闭树脂多余活性基团的反应。
其中无水甲醇既能洗涤又会收缩树脂，使树脂体积变小节省试剂用量，但如果最先用无水甲醇洗涤不利于树脂彻底洗涤，在树脂体积变小的时候上一步反应残留的物质易被包裹，不利于彻底清洗。
体积小、干燥的树脂适合保存。而DMF和DCM都会让树脂溶胀，体积变大。如果不用无水甲醇洗，在下一步反应时有DMF或者DCM残留，需要用更多的无水甲醇试剂封闭、收缩。
其次，顺应了下一步用无水甲醇封闭树脂多余活性基团的反应：用无水甲醇封闭氯树脂未连接脯氨酸的活性基团，这里既有洗涤作用，又能把试剂实现较好的过渡。
优选的，所述步骤a中2-Chlorotrityl Chloride Resin的替代度为0.4-0.7mmol/g。
替代度太高在会增加有机合成中氨基酸偶联的困难，增多杂质，延长生产周期，降低收率。替代度太低合成偶联容易，但制备需要用到大量的昂贵的树脂和试剂，也延长整体实验时间，增加了成本，降低了效率。因此综合考虑上述因素，本发明优选的步骤a中2-Chlorotrityl Chloride Resin的替代度为0.4-0.7mmol/g。
进一步，所述步骤b中肽树脂的制备方法为：
(1)取树脂Fmoc-Pro-2-Chlorotrityl Resin，浸泡在二氯甲烷中20-40min，抽干，用DMF洗涤三遍，抽干；
(2)加入脱帽试剂，反应两次，去除Fmoc保护基团；洗涤至少6次，洗涤顺序：二甲基甲酰胺(DMF)，无水甲醇，DMF，二氯甲烷(DCM)+DMF，DMF，DMF，抽干；以DMF为溶剂，加入Fmoc-Arg(pbf)-OH及N,N-二异丙基碳二亚胺(DIC)和1-羟基苯并三唑(HOBT)的组合或者N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)和缩合剂的组合，其中缩合剂选自2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)，O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸(TBTU)、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PYBOP)、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸(TBTU)和1-羟基苯并三唑(HOBT)的混合物、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PYBOP)和1-羟基苯并三唑(HOBT)的混合物中的一种；偶联1-3小时，茚三酮检测反应进程；偶联结束后抽掉反应液，用DMF洗涤3遍；重复(2)上述步骤直至完成最后一个氨基酸焦谷氨酸PGlu；DMF洗三遍，DCM洗三遍，无水甲醇洗三遍,无水甲醇每次5-10min，洗涤后干燥得到肽树脂。
此步骤中，之所以设计洗涤至少6次，洗涤顺序：二甲基甲酰胺(DMF)，无水甲醇，DMF，二氯甲烷(DCM)+DMF，DMF，是申请人在发明试验中不断观察，思考，实践得到：
DMF溶解性最好，可以溶解并带走大量反应残留物，因此首先使用。
甲醇可以使树脂收缩，体积变小，减少树脂表面附着物，树脂体积缩小也减少洗涤所需要的试剂数量。但是之后的偶联反应时如果有无水甲醇残留会容易参与反应形成副产物。所以只能放在前面使用，不能用在后面洗涤。
树脂洗涤时一缩一胀可以在较少的试剂用量下达到更好的洗涤效果，也节省试剂。
DMF对树脂有适当的溶胀性，介于甲醇和DCM之间，使树脂温和的溶胀开，便于洗涤。
DCM有较好的溶解性和很强的溶胀性，使树脂充分进一步溶胀开，便于很好的洗涤树脂，充分溶胀开的状态也利于后面的偶联反应。
树脂溶胀开后在偶联反应中更有利于进行，所以需要DCM再次将树脂充分溶胀开。
后面用溶解性最好的DMF洗涤，进一步保证清洗彻底，避免残留物进入影响下一步反应产生副反应。
进一步，步骤b中每一步氨基酸为树脂摩尔量的1.3-4倍，N,N-二异丙基碳二亚胺为树脂摩尔量的2.6-24倍，缩合剂为树脂摩尔量的1.3-4倍。
进一步，步骤b中脱帽试剂为体积分数20％的哌啶(DBLK)/DMF。
进一步，步骤b中加入脱帽试剂后第一次反应10min，第二次反应5min。
申请人发现一次反应只能去除大部分的FMOC保护基团。需要再次加新的脱帽试剂，二次反应达到相对完全的去除程度。而一次加入过多脱帽试剂也难以达到相对完全的去除程度，二次反应后去除效果最佳。
进一步，步骤c中，将步骤b得到的肽树脂加入切肽试剂体积分数2％的三氟乙酸/DCM混合溶液；-20到0℃下加入肽树脂，震荡/搅拌，保持低温10-20min；然后升温至25℃，反应2-3小时；抽滤，收集滤液，加有机碱调节pH至中性，减压蒸馏获得全保护肽链片段。
进一步，步骤d中，全保护肽链片段溶于DMF中，加六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷和乙胺盐酸盐；加入有机碱调节pH为8-9，搅拌反应2-6小时；乙胺化结束后加入饱和柠檬酸水溶液析出白色固体，抽干，干燥，得全保护夫替瑞林，其中乙胺盐酸盐的加入量为全保护肽链片段摩尔量的1.2-2倍。
进一步，步骤f中将夫替瑞林粗品溶于水中，用0.45μm微孔过滤板过滤；滤液通过C18制备柱上样制备，洗脱，收集目标峰肽溶液；高纯度肽溶液通过反相柱转盐，成转醋酸盐形式；溶液减压旋蒸浓缩，浓缩液通过低温冷冻机干燥为粉末状夫替瑞林。
其中本发明中用到的所有甲醇均为无水甲醇。
本发明具有如下技术效果：
本发明通过对工艺路线的深入研究，优化合成路线和条件，得到的合成方法操作简易，反应条件温和，工艺温和，生产成本低，收率高。
为让本发明的上述和其它目的、特征和优点能更明显易懂，下文特举较佳实施例，作详细说明如下。
具体实施方式
实施例1
夫替瑞林的合成方法：
1.制树脂：Fmoc-Pro-2-Chlorotrityl Resin。
反应器中加入50ml有机溶剂DCM，加入4.5g Fmoc-Pro-OH溶解，加入10g 2-Chlorotrityl Chloride Resin(2-CTC Resin)，浸泡，搅拌或震荡使其充分溶胀；加入10ml有机碱N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)室温下反应3小时，抽掉。
洗涤：分别采用DMF*2+DCM*2+甲醇*2进行洗涤，加入60ml甲醇搅拌或震荡反应2小时封闭树脂上未连接Fmoc-Pro-OH的活性基团。抽干，得到Fmoc-Pro-2-ChlorotritylResin。
紫外法检测树脂替代度0.6mmol/g。
2.制备肽树脂：Pyr-His(trt)-Trp(boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Gly-Leu-Arg(pbf)-Pro-2CTC Resin。
以连接好的树脂Fmoc-Pro-2-Chlorotrityl Resin为起始。
(1)取10g树脂Fmoc-Pro-2-Chlorotrityl Resin，浸泡在100ml有机溶剂DCM中30min，辅以搅拌使其充分溶胀。抽干，用DMF洗涤三遍，抽掉。
(2)加入100ml脱帽试剂：20％DBLK+DMF，分别反应两次，第一次10min，第二次5min以去除Fmoc保护基团。然后洗涤6遍，具体洗涤顺序：DMF+甲醇+DMF+(DCM+DMF)+DMF+DMF，抽干。以DMF为溶剂，加入9.7g Fmoc-Arg(pbf)-OH，10ml DIPEA和TBTU(4.8g)+HOBT(2g)，常温下偶联2小时，茚三酮检测反应进程，偶联结束后抽掉反应液，用DMF洗涤3遍。
(3)加入100ml脱帽试剂：20％DBLK+DMF，分别反应两次，第一次10min，第二次5min以去除Fmoc保护基团。然后洗涤6遍，具体洗涤顺序：DMF+甲醇+DMF+(DCM+DMF)+DMF+DMF，抽干。以DMF为溶剂，加入5.3g Fmoc-Leu-OH，10ml DIPEA和TBTU(4.8g)+HOBT(2g)常温下偶联2小时，茚三酮检测反应进程，偶联结束后抽掉反应液，用DMF洗涤3遍。
(4)加入100ml脱帽试剂：20％DBLK+DMF，分别反应两次，第一次10min，第二次5min以去除Fmoc保护基团。然后洗涤6遍，具体洗涤顺序：DMF+甲醇+DMF+(DCM+DMF)+DMF+DMF，抽干。以DMF为溶剂，加入4.5g Fmoc-Gly-OH，5ml DIC和2g HOBT，29度下偶联2小时，茚三酮检测反应进程，偶联结束后抽掉反应液，用DMF洗涤3遍。
(5)加入100ml脱帽试剂：20％DBLK+DMF，分别反应两次，第一次10min，第二次5min以去除Fmoc保护基团。然后洗涤6遍，具体洗涤顺序：DMF+甲醇+DMF+(DCM+DMF)+DMF+DMF，抽干。以DMF为溶剂，加入6.9g Fmoc-Tyr(tbu)-OH，5ml DIC和2g HOBT，29度下偶联2小时，茚三酮检测反应进程，偶联结束后抽掉反应液，用DMF洗涤3遍。
(6)加入100ml脱帽试剂：20％DBLK+DMF，分别反应两次，第一次10min，第二次5min以去除Fmoc保护基团。然后洗涤6遍，具体洗涤顺序：DMF+甲醇+DMF+(DCM+DMF)+DMF+DMF，抽干。以DMF为溶剂，加入5.7g Fmoc-Ser(tbu)-OH，5ml DIC和2g HOBT，29度下偶联2小时，茚三酮检测反应进程，偶联结束后抽掉反应液，用DMF洗涤3遍。
(7)加入120ml脱帽试剂：20％DBLK+DMF，分别反应两次，第一次10min，第二次5min以去除Fmoc保护基团。然后洗涤6遍，具体洗涤顺序：DMF+甲醇+DMF+(DCM+DMF)+DMF+DMF，抽干。以DMF为溶剂，加入7.9g Fmoc-Trp(boc)-OH，5ml DIC和2g HOBT，29度下偶联2小时，茚三酮检测反应进程，偶联结束后抽掉反应液，用DMF洗涤3遍。
(8)加入120ml脱帽试剂：20％DBLK+DMF，分别反应两次，第一次10min，第二次5min以去除Fmoc保护基团。然后洗涤6遍，具体洗涤顺序：DMF+甲醇+DMF+(DCM+DMF)+DMF+DMF，抽干。以DMF为溶剂，加入9.3g Fmoc-His(trt)-OH，5ml DIC和2g HOBT，29度下偶联2小时，茚三酮检测反应进程，偶联结束后抽掉反应液，用DMF洗涤3遍。
(9)加入120ml脱帽试剂：20％DBLK+DMF，分别反应两次，第一次10min，第二次5min以去除Fmoc保护基团。然后洗涤6遍，具体洗涤顺序：DMF+甲醇+DMF+(DCM+DMF)+DMF+DMF，抽干。以DMF为溶剂，加入2g H-Pyr-OH，5ml DIC和2g HOBT，29度下偶联2小时，茚三酮检测反应进程，偶联结束后抽掉反应液。用DMF洗涤3遍，DCM洗3遍，甲醇洗3遍,其中甲醇每次8min，完成洗涤和树脂收缩。干燥得到肽树脂。
3.制备全保护肽链片段：Pyr-His(trt)-Trp(boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Gly-Leu-Arg(pbf)-Pro-OH。
配置2％的三氟乙酸(TFA)DCM混合溶液。-10℃下加入肽树脂，震荡，保持低温15min。升温至25度，反应2.5小时。抽滤，收集滤液，加少量有机碱：N,N-二异丙基乙胺调解pH至中性，减压旋蒸获得全保护片段PGluP-9。
4.制备全保护夫替瑞林。
将3中制得全保护片段PGluP-9溶于适量DMF中，加入PYBOP和乙胺盐酸盐。加入有机碱:N,N-二异丙基乙胺调节pH＝8.5。搅拌反应5小时.HPLC跟踪反应进程。乙胺化结束后加入饱和柠檬酸水溶液析出白色固体，抽干，干燥，得全保护夫替瑞林。
5.切除侧链得夫替瑞林粗品。
玻璃容器中加入冰切割试剂(三氟乙酸TFA：三异丙基硅烷Tris：巯基丙酸mpa：苯酚：H2O＝90：4:3:2:1)低温保持15min。加热至25度左右反应2.5h。反应结束后。加入冰无水乙醚沉淀，离心/过滤收集沉淀，再用常温无水乙醚洗涤5遍，真空干燥，得到夫替瑞林粗品。HPLC检测纯度。称重6.94g。
6.粗肽纯化
将6.94g夫替瑞林粗品溶于水中，用0.45μm微孔过滤板过滤。滤液通过C18制备柱上样制备，洗脱，收集目标峰肽溶液。高纯度肽溶液转盐成醋酸盐形式。溶液减压旋蒸浓缩，浓缩液通过低温冷冻机干燥为粉末状夫替瑞林2.19g，纯度99.6％，收率31.6％。
本发明虽然已以较佳实施例公开如上，但其并不是用来限定本发明，任何本领域技术人员在不脱离本发明的精神和范围内，都可以利用上述揭示的方法和技术内容对本发明技术方案做出可能的变动和修改，因此，凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所做的任何简单修改、等同变化及修饰，均属于本发明技术方案的保护。
Claims (10)
1.一种夫替瑞林的合成方法，其特征在于，所述合成方法具体包括以下步骤：
步骤a，制备树脂：Fmoc-Pro-2-Chlorotrityl Resin，以二氯甲烷为溶剂，加入Fmoc-Pro-OH溶解和2-Chlorotrityl Chloride Resin，加入有机碱N,N-二异丙基乙胺(DIPEA)反应，然后分别采用DMF*2+DCM*2+甲醇*2进行洗涤，得到Fmoc-Pro-2-Chlorotrityl Resin，其中2-Chlorotrityl Chloride Resin的替代度0.3-1.1mmol/g；
步骤b，制备肽树脂：Pyr-His(trt)-Trp(boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Gly-Leu-Arg(pbf)-Pro-2CTC Resin；以Fmoc-Pro-2-Chlorotrityl Resin为起始，将树脂Fmoc-Pro-2-Chlorotrityl Resin浸泡在有机溶剂DCM中，辅以搅拌使其充分溶胀。抽干，用DMF洗涤三遍，抽掉；加入脱帽试剂：20％DBLK+DMF，分别反应两次；然后洗涤6遍，具体洗涤顺序：DMF+甲醇+DMF+(DCM+DMF)+DMF+DMF，抽干；以DMF为溶剂，加入DIPEA和TBTU+HOBT，或DIC和HOBT，采用固相合成法逐一偶联具有保护基团的氨基酸，最后合成肽树脂；
步骤c，制备全保护肽链片段：Pyr-His(trt)-Trp(boc)-Ser(tbu)-Tyr(tbu)-Gly-Leu-Arg(pbf)-Pro-OH，配置三氟乙酸(TFA)DCM混合溶液，将步骤b得到的肽树脂加入切肽试剂，加少量有机碱：N,N-二异丙基乙胺调解pH至中性，得到全保护肽链片段；
步骤d，制备全保护夫替瑞林：加入PYBOP和乙胺盐酸盐，加入有机碱:N,N-二异丙基乙胺调节pH反应，对全保护肽链片段的C端进行乙胺化得到全保护夫替瑞林；
步骤e，切除侧链得到夫替瑞林：在全保护夫替瑞林中加入冰切割试剂低温保持10-20min后，加热至25℃反应2-3h，得到夫替瑞林粗品，其中切割试剂为三氟乙酸：三异丙基硅烷：巯基丙酸：苯酚：H2O＝90:4:3:2:1；
步骤f，粗肽纯化。
2.根据权利要求1所述的夫替瑞林的合成方法，其特征在于，所述步骤a中，室温反应2-4小时，抽干后进行多次洗涤，然后加入无水甲醇封闭树脂上未连接Fmoc-Pro-OH的活性基团。
3.根据权利要求2所述的夫替瑞林的合成方法，其特征在于，所述步骤a中，多次洗涤，分别采用DMF洗两次，然后用DCM洗两次，最后用无水甲醇洗两次，接着加入无水甲醇搅拌或震荡反应1-3小时封闭树脂上未连接Fmoc-Pro-OH的活性基团；抽干，得到Fmoc-Pro-2-Chlorotrityl Resin。
4.根据权利要求1所述的夫替瑞林的合成方法，其特征在于，所述步骤a中2-Chlorotrityl Chloride Resin的替代度为0.4-0.7mmol/g。
5.根据权利要求1所述的夫替瑞林的合成方法，其特征在于，所述步骤b中肽树脂的制备方法为：
(1)取树脂Fmoc-Pro-2-Chlorotrityl Resin，浸泡在二氯甲烷中20-40min，抽干，用DMF洗涤三遍，抽干；
(2)加入脱帽试剂，反应两次，去除Fmoc保护基团；洗涤至少6次，洗涤顺序：DMF，无水甲醇，DMF，DCM+DMF，DMF，DMF，抽干；以DMF为溶剂，加入Fmoc-Arg(pbf)-OH，及1-羟基苯并三唑和N,N-二异丙基碳二亚胺组合或N,N-二异丙基乙胺和缩合剂组合，其中缩合剂为O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸和1-羟基苯并三唑混合物；偶联1-3小时，茚三酮检测反应进程，偶联结束后抽掉反应液，用DMF洗涤3遍；重复(2)上述步骤直至完成最后一个氨基酸焦谷氨酸PGlu；DMF洗三遍，DCM洗三遍，无水甲醇洗三遍,无水甲醇每次5-10min，洗涤后干燥得到肽树脂。
6.根据权利要求5所述的夫替瑞林的合成方法，其特征在于，步骤b中每一步氨基酸为树脂摩尔量的1.3-4倍，N,N-二异丙基乙胺为树脂摩尔量的2.6-24倍，缩合剂为树脂摩尔量的1.3-4倍。
7.根据权利要求5所述的夫替瑞林的合成方法，其特征在于，步骤b中加入脱帽试剂后第一次反应10min，第二次反应5min。
8.根据权利要求1所述的夫替瑞林的合成方法，其特征在于，步骤c中，将步骤b得到的肽树脂加入切肽试剂体积分数2％的三氟乙酸/DCM混合溶液；-20到0℃下加入肽树脂，震荡/搅拌，保持低温10-20min；然后升温至25℃，反应2-3小时；抽滤，收集滤液，加有机碱调节pH至中性，减压蒸馏获得全保护肽链片段。
9.根据权利要求1所述的夫替瑞林的合成方法，其特征在于，步骤d中，全保护肽链片段溶于DMF中，加六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷和乙胺盐酸盐；加入有机碱调节pH为8-9，搅拌反应2-6小时；乙胺化结束后加入饱和柠檬酸水溶液析出白色固体，抽干，干燥，得全保护夫替瑞林，其中乙胺盐酸盐的加入量为全保护肽链片段摩尔量的1.2-2倍。
10.根据权利要求1所述的夫替瑞林的合成方法，其特征在于，步骤f中将夫替瑞林粗品溶于水中，用0.45μm微孔过滤板过滤；滤液通过C18制备柱上样制备，洗脱，收集目标峰肽溶液；高纯度肽溶液通过反相柱转盐，成醋酸盐形式；溶液减压旋蒸浓缩，浓缩液通过低温冷冻机干燥为粉末状夫替瑞林。
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