CN105682662A

CN105682662A - 雄激素受体减量调节剂及其用途

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Publication number: CN105682662A
Application number: CN201480026739.8A
Authority: CN
Inventors: 文森特·C·O·恩雅; 拉尔吉·K·戈迪亚; 普拉尼克·普鲁肖塔马查尔; 阿比吉特·戈德博尔; 安德鲁·基韦依尔-阿福尔; 塔达斯·瓦萨伊蒂斯
Original assignee: Thomas Jefferson University; University of Maryland at Baltimore; University of Maryland Eastern Shore
Current assignee: Thomas Jefferson University; University of Maryland at Baltimore; University of Maryland Eastern Shore
Priority date: 2013-03-14
Filing date: 2014-03-14
Publication date: 2016-06-15
Also published as: US9884067B2; EP2968370A1; JP2016514165A; US20150361126A1; SG11201507093WA; US9439912B2; CA2904170A1; MX2015012274A; BR112015023098A2; WO2014153215A8; IL240820A0; EP2968370A4; RU2015137617A; EP4066841A1; WO2014153215A1; KR20150127720A; US20160000808A1; AU2014236135A1

Abstract

本公开提供了新颖的甾族化合物的设计和合成，该甾族化合物引起雄激素受体(AR)(全长变体和剪接变体二者)的减量调节。该化合物是用于治疗所有形式的前列腺癌和取决于功能性AR的其他疾病的潜在试剂。

Description

雄激素受体减量调节剂及其用途

交叉引用

本申请要求于2013年3月14日提交的美国临时申请号61/782,383的权益，该申请通过引用并入本文。

关于联邦政府资助的研究的声明

在国立卫生研究院的合同号CA117991和CA129379下，在美国政府的支持下做出本发明。

发明背景

本公开提供了新颖的甾族化合物的设计和合成，所述甾族化合物引起雄激素受体(AR)(全长变体和剪接变体二者)的减量调节(down-regulation)。该化合物是用于治疗所有形式的前列腺癌以及取决于功能性AR的其他疾病的潜在试剂。

引人注目的实验室和临床证据强有力地表明，不可治愈的去势抵抗性前列腺癌(CRPC)仍旧取决于功能性雄激素受体(AR)、AR介导的过程以及前列腺内的细胞内雄激素的可用性。与早期前列腺癌(ESPC)不同，CRCP不响应于经典的AR拮抗剂[羟基氟他胺(1)或比卡鲁胺(2)；图1]或雄激素阻断治疗(促黄体生成激素-释放激素激动剂/拮抗剂)。因此，最近的策略已经集中于开发更有效的雄激素合成抑制剂AR拮抗剂。这些研究工作已经导致三种有效的CYP17抑制剂、醋酸阿比特龙(Zytiga，3a)、TAK-700(Orteronel，4)和VN/124-1(TOK-001或Galeterone，5)以及两种有效的AR拮抗剂：MDV3100(恩杂鲁胺，6)和ARN-509(7)的正在进行的临床评价/批准。图1中呈现出这些临床化合物的化学结构。

尽管Zytiga在多西他赛治疗后的CRPC的患者中具有实质的临床疗效，但是已经报道了对这种治疗的抗性。还报道了对MDV3100治疗的抗性。Zytiga或MDV3100治疗之后的AR信号传送的复原可能通过若干机制发生，其中突出的是在控制AR信号传送时切换转录程序。实际上，可能不能通过目前可行的治疗和临床开发中的一些有前景的试剂来抑制新的AR调节的转录程序。如果这样的话，AR(全长形式和截短形式)表达的实质性减量调节将是未来研究的有前景的策略。

本文中，我们报道了若干新颖的化合物，这些化合物表现出以低微摩尔浓度诱导AR(全长和截短的)切除的能力且具有改进的抗增殖(AP)活性。本研究扩展了AR降解/减量调节剂(down-regulator)(ARD)活性的最佳药效团需求及其调节AR的活性(即，AR失活)的能力的当前理解。

发明概述

在一方面，本公开提供了一种式I的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：R₁和R₂中的每一个独立地是氢、烷氧基或CN；R₃是氢或卤素；并且其中R₁、R₂、R₃中的至少一个不是氢。

在某些情况下，R₁或R₂可以是CN。在其他情况下，R₁可以是烷氧基。例如，R₁可以是甲氧基。在另外的情况下，R₃可以是卤素。例如，R₃可以是氯。

在另一方面，本公开提供了一种式II的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：R₄是-CNHR₁₀或-C＝NR₁₀；R₁₀是烷基或芳基，任选地被一个或更多个R₁₁取代基取代；并且R₁₁是卤素、烷氧基或CN。

在某些情况下，R₄可以是-CNHR₁₀。在其他情况下，R₄可以是-C＝NR₁₀。在某些实例中，R₁₀可以是烷基。在其他实例中，R₁₀可以是芳基。在另外的实例中，R₁₀可以是被一个或更多个烷氧基基团取代的芳基。

在又另一方面，本公开提供了一种式II的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：R₅是杂芳基、芳烷基、环烯基、烷氧基烷基，任选地被一个或更多个R₁₂取代基取代；R₁₂是-(CH₂)_n-CO₂H，其中n是0、1、2或3；并且条件是R₅不是咪唑。

在某些情况下，R₅可以是杂芳基。在某些实例中，R₅可以是吡啶基。例如，R₅可以是3-吡啶基。在其他实例中，R₅可以是三唑。在其他情况下，R₅可以是芳烷基。在又其他情况下，R₅可以是环烯基。在另外的情况下，R₅可以是烷氧基烷基。在某些实例中，R₁₂可以是-CO₂H或-CH₂CO₂H。

在另外的方面，本公开提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含本公开的一种或更多种化合物或药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。

在一方面，本公开提供了一种治疗需要其的受试者的癌症、疾病或状况的方法，所述方法包括：向受试者施用有效量的本公开内容的化合物、药学上可接受的盐或组合物。

在某些情况下，该方法还可以包括向受试者施用有效量的抗雄激素、CYP17抑制剂、促黄体生成激素-释放激素激动剂、用于防止雄激素产生的药物、雌激素、或化学治疗药物。在某些情况下，化合物、药学上可接受的盐或组合物与激素治疗、化学治疗、放射治疗、免疫治疗或外科手术联合地施用。在另外的情况下，癌症、疾病或状况可以选自前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、泌尿生殖器癌或前列腺增生。

在另一方面，本公开提供了一种用于抑制需要其的受试者的雄激素受体活性的方法，所述方法包括：向受试者施用有效量的本公开的化合物、药学上可接受的盐或组合物。

在又另一方面，本公开提供了一种用于抑制细胞中的雄激素受体活性的方法，所述方法包括使细胞与有效量的本公开的化合物、药学上可接受的盐或组合物接触，并且从而抑制细胞中的雄激素受体活性。

在一方面中，本发明提供了一种用于合成式I的化合物或药学上可接受的盐的方法，所述方法包括以下步骤：

a.允许式A的化合物与式D的苯并咪唑在对合成式Ia的化合物有效的条件下反应；和

b.使式Ia的化合物脱甲酰化且水解；

其中X可以是卤素；R₁和R₂中的每一个可以独立地是氢、烷氧基或CN；R₃可以是氢或卤素；并且其中R₁、R₂、R₃中的至少一个可以不是氢。

在某些情况下，式Ia的化合物用Pd催化剂来脱甲酰化。

在另一方面，本公开提供了一种用于合成式II的化合物或药学上可接受的盐的方法，所述方法包括以下步骤：

a.允许式B的化合物与取代的胺R₁₀NH₂在对合成式IIa的化合物有效的条件下反应；和

b.还原式IIa的化合物；

其中R₁₀可以是烷基或芳基，任选地被一个或更多个R₁₁取代基取代；并且R₁₁可以是卤素、烷氧基或CN。

在某些情况下，式IIa的化合物可以被NaBH₄还原。

在又另一方面，本公开提供了一种用于合成式III的化合物或药学上可接受的盐的方法，所述方法包括：

允许式C的化合物与酰化剂R₅C(O)Y在对合成式III的化合物有效的条件下反应；其中R₅可以是杂芳基、芳烷基、环烯基、烷氧基烷基，任选地被一个或更多个R₁₂取代基取代；并且R₁₂可以是-(CH₂)_n-CO₂H，其中n是0、1、2或3，条件是R₅不是咪唑。

在某些情况下，酰化剂R₅C(O)Y可以是活性酯。在其他情况下，Y可以是-OC(O)R₅。在另外的情况下，Y可以是R₅。

通过引用的并入

本说明书中提到的所有出版物、专利和专利申请通过引用并入本文，其程度如同每个单独出版物、专利或专利申请被具体和单独地指明通过引用并入的相同程度。

附图简述

本发明的新颖的特征与所附权利要求书中的特殊性一起被陈述。本发明的特征和优势的更好的理解将通过参考陈述其中利用本发明的原理的说明性实施方案的以下详细说明来获得，并且在附图中：

图1示出了氟他胺(1)、比卡鲁胺(2)、醋酸阿比特龙(Zytiga，3a)、阿比特龙醇(3b)、TAK-700(Orteronel，4)、VN/124-1(TOK-001或Galeterone，5)、MDV3100(恩杂鲁胺，6)和ARN-509(7)的化学结构。

图2示出了双氢睾酮(DHT，8)、美曲勃龙(R1881，9)、氟维司群(10)和GW5638(11)的化学结构。

图3提供了5(帽形，绿色)在活性部位hAR中的结合模式的立体图。

图4总结了化合物对AR的双氢睾酮(DHT)刺激的转录的效果。

图5A示出了使化合物2、3b、5、6和36结合至LNCaP细胞中的AR的[3H]R1881的竞争性抑制；图5B示出了使化合物5、16、36、43和47结合至LNCaP细胞中的AR的[3H]R1881的竞争性抑制。

图6A-E示出了化合物对LNCaP和CWR22rv1前列腺癌细胞中的阻抑AR表达的不同效果。

图7总结了在用15μM的每种化合物处理24h之后，化合物5、32、36、47和48对：i)细胞活力(蓝色)；ii)DHT诱导的AR反式激活(绿色)；以及iii)AR蛋白质表达的效果。

图8A提供了47(帽形，砖红色)在AR的活性部位中的结合模式的立体图；图8B提供了36(帽形，基色)在AR的活性部位中的结合模式的立体图。

图9是用于合成C-17苯并咪唑化合物的合成方案。

图10是用于合成C-16取代的化合物的合成方案。

图11是用于合成C-3改性的化合物的合成方案。

详细描述

设计策略

采用结构活性分析，制备一系列新颖的C-3、C-16和C-17Galeterone类似物并且针对它们对雄激素受体(AR)的调节的效果来评价。

基于化合物5结合至AR配体结合域(LBD)以诱导AR降解，检查结合至ARLBD的甾类配体双氢睾酮(DHT，8)和美曲勃龙(R1881，9)的晶体结构(图2)的公布数据。在LBD的一个末端上与Arg752和Gln711的氢键相互作用(在甾核的C-3位的极性功能)和在LBD的另一个末端上的至Asn705和Thr877的氢键(在甾类支架(steroidscaffold)的C-17位的极性功能)可以构成最重要的配体亲和力的识别元素。此外，现有研究已描述了螺旋-12在可能诱导各种核受体中的拮抗的构象变化中的关键作用。已假设，推动螺旋-12进入开放构象中是导致雌激素受体α(ERα)和其他核受体的拮抗的机制。实际上，与已知ERα减量调节剂例如氟维司群(10)和GW5638(11)(图2)配合的ERα结构中的螺旋-12的扭曲对于它们的受体降解活性可能是关键的。在使化合物5结合至AR的LBD之后，5的大体积C-17苯并咪唑(BzIm)基团可以引起螺旋-12的扭曲以诱导AR降解。允许小分子和受体之间的附加的相互作用的改性可以呈现出对设计具有潜在临床用途的新的AR减量调节剂起关键决定因素。此外，考虑5的合成改性，因为获得的基本的化学变化和物理变化可能影响分子形状、键角和分配系数。不同的取代基可以具有不同的疏水作用、大小和可能影响配体与其靶受体的相互作用的电子效应。这些理性考量为与如以下描述的C-17、C-16和C-3相连的部分的系统改性提供了动力。

C-17改性：为了探索5的C-17苯并咪唑部分的结构活性关系(SAR)，设计并合成了产生化合物16-22的具有不同的环氮原子、提高的脂肪族/芳族疏水性以及芳族取代基的类似物，如在图9中概述的。

C-16改性：设计并合成了5的与大体积的脂肪族基团和芳族基团相连的若干C-16取代的类似物(化合物25、28和31)(图10)。

C-3改性：5与人雄激素受体(hAR)配体结合域的分子对接示出，C-3羟基基团与Arg-752和Phe764形成多个氢键(图3)。精氨酸是含有带阳电荷的胍基的极性亲水氨基酸。基于任何取代基在增强与Arg752的相互作用的C-3处都可以提高AR减量调节活性的假设，设计并合成了各种C-3改性的化合物(33-49，图11)。

化合物和药学上可接受的盐

在一方面，本公开提供了一种式I的化合物：

或其药学上可接受的盐，

其中R₁和R₂中的每一个独立地是氢、烷氧基或CN；R₃是氢或卤素；并且其中R₁、R₂、R₃中的至少一个不是氢。

在某些情况下，R₁可以是CN。在其他情况下，R₂可以是CN。在又其他情况下，R₁可以是烷氧基(例如，甲氧基)。在又其他情况下，R₃可以是卤素(例如，氯)。

式I的示例性化合物包括但不限于：

在另一方面，本公开提供了一种式II的化合物：

或其药学上可接受的盐，

其中R₄是-CNHR₁₀或-C＝NR₁₀；R₁₀是烷基或芳基，任选地被一个或更多个R₁₁取代基取代；并且R₁₁是卤素、烷氧基或CN。

在某些情况下，R₄可以是-CNHR₁₀。在其他情况下，R₄可以是-C＝NR₁₀。在某些实例中，R₁₀可以是烷基(例如，异戊基)。在其他实例中，R₁₀可以是芳基(例如，苯基)。在另外的实例中，R₁₀可以被一个或更多个烷氧基基团(例如，二甲氧基)进一步取代。

式II的示例性化合物包括但不限于：

在又另一方面，本公开提供了一种式III的化合物：

或其药学上可接受的盐，

其中R₅是杂芳基、芳烷基、环烯基、烷氧基烷基，任选地被一个或更多个R₁₂取代基取代；R₁₂是-(CH₂)_n-CO₂H，其中n是0、1、2或3；条件是R₅不是咪唑。

在某些情况下，R₅可以是杂芳基。在某些实例中，R₅可以是吡啶基(例如，1-吡啶基、2-吡啶基、3-吡啶基)。在其他实例中，R₅可以是三唑。在其他情况下，R₅可以是芳烷基(例如，苄基)。在又其他情况下，R₅可以是环烯基(例如，环己烯基)。在另外的情况下，R₅可以是烷氧基烷基(比如，甲氧基甲基)。在各种实例中，R₁₂可以是-CO₂H或-CH₂CO₂H。

式III的示例性化合物包括但不限于：

反应方案

本文公开的化合物和药学上可接受的盐可以通过以下描述的路线来制备。本文使用的材料是商购的或者通过本领域中一般已知的合成方法来制备。这些方案不限于为了说明性目的所列出的化合物或所采用的任何特定取代基。编号不一定对应于权利要求书或其他表格中的编号。

在一方面，本公开提供了一种用于合成式I的化合物的方法，所述方法为通过允许式A的化合物与式D的苯并咪唑在对合成式Ia的化合物有效的条件下反应：

其中X可以是卤素；R₁和R₂中的每一个可以独立地是氢、烷氧基或CN；R₃可以是氢或卤素；并且其中R₁、R₂、R₃中的至少一个不是氢。式A的化合物可以与苯并咪唑在碱性条件下反应。然后，可以使式Ia的化合物脱甲酰化并且水解以提供式I的化合物。在某些实例中，脱甲酰化可以在催化剂的存在下进行。例如，催化剂可以是Pd催化剂(例如，10％钯碳)。在某些实例中，水解可以在含水的碱的存在下进行。

在另一方面，本公开提供了一种用于合成式II的化合物的方法，所述方法为通过允许式B的化合物与取代的胺R₁₀NH₂在对合成式IIa的化合物有效的条件下反应：

其中R₁₀可以是烷基或芳基，任选地被一个或更多个R₁₁取代基取代；并且R₁₁可以是卤素、烷氧基或CN。然后，可以使式IIa的化合物还原以提供式II的化合物。在某些情况下，然后，式IIa的化合物可以被还原剂(例如，NaBH₄)还原。

在另一方面，本公开提供了一种用于合成式III的化合物的方法，所述方法为通过允许式C的化合物与酰化剂R₅C(O)Y在对合成式III的化合物有效的条件下反应：

其中R₅可以是杂芳基、芳烷基、环烯基、烷氧基烷基，任选地被一个或更多个R₁₂取代基取代；并且R₁₂可以是-(CH₂)_n-CO₂H，其中n是0、1、2或3；条件是R₅不是咪唑。在某些情况下，酰化剂R₅-C(O)Y可以是活性酯(例如，Y＝DMAP)。在其他情况下，酰化剂R₅C(O)Y可以是酸酐(例如，Y＝-OC(O)R₅)。在又其他情况下，Y可以是R₅(例如，R₅＝三唑)。

组合物和方法

本公开还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含药学上可接受的载体和上面讨论的化合物或盐的一种或更多种。本文描述的合适的药学上可接受的载体，例如媒介物、佐剂、赋形剂和稀释剂，对本领域技术人员是熟知的并且对公众是容易地可得的。载体的选择将在某种程度上由特定的组合物和用于施用该组合物的特定的方法来决定。因此，存在本发明的药物组合物的多种多样的合适制剂。

本公开还涉及通过向由此需要的受试者施用有效量的根据本公开的化合物或盐来治疗疾病或状况，例如，癌症或其他泌尿生殖器疾病和状况，包括，而不限于，乳腺癌、前列腺癌、其他泌尿生殖器癌、前列腺增生或其他雄激素相关的疾病或状况的方法。术语“治疗”被常规使用，例如，为了战胜、缓解、降低、减轻、改善等与前列腺疾病相关的症状的一种或更多种的目的而管理或护理受试者。可以被治疗的前列腺疾病的实例包括，例如前列腺增生(BPH)和前列腺癌(例如，前列腺腺癌)治疗可以是预防性的或治疗性的。“预防性的”指的是细胞紊乱的发作的任何程度的抑制，包括完全抑制，例如在预期很快表现出细胞紊乱的患者中。“治疗性的”指的是对哺乳动物(例如，人类)的紊乱的任何程度的抑制或任何程度的有益作用，例如，抑制肿瘤的生长或转移。

本领域技术人员将认识到，向动物例如诸如哺乳动物之类的人类施用本公开的化合物或盐的合适方法是已知的。尽管多于一条路线可以用于施用特定的组合物，但是特定的路线可以比另一路线提供更多中间体和更有效的结果。

适于口服的制剂可以由以下组成：(a)液体溶液，例如溶解于稀释剂例如水或盐水中的有效量的本公开的一种或更多种化合物或盐，(b)胶囊、小袋(sachet)或片剂，各自含有预定量的活性成分，如固体或颗粒，(c)合适的液体中的悬浮物，以及(d)合适的乳剂。

片剂形式可以包括乳糖、甘露醇、玉米淀粉、马铃薯淀粉、微晶纤维素、阿拉伯胶、明胶、胶态二氧化硅、交联羧甲基纤维素钠、滑石、硬脂酸镁、硬脂酸和其他赋形剂、着色剂、稀释剂、缓冲剂、润湿剂、防腐剂、调味剂、以及药学上可接受的且相容的载体中的一种或更多种。锭剂形式可以包括：调味剂、通常为蔗糖和阿拉伯胶或黄芪胶中的活性成分、以及包括惰性碱例如明胶和甘油或蔗糖中的活性成分的锭、以及阿拉伯胶乳剂、凝胶以及含有除活性成分之外的例如本领域中已知的载体的类似物。

本公开的化合物或盐可以单独地或与其他合适组分组合地制成经由吸入被施用的气溶胶制剂。这些气溶胶制剂可以放入加压的可接受的推进剂中，例如二氯二氟甲烷、氢氟碳(例如，HFC134a和/或227)、氮气及类似物。

适于肠胃外施用的制剂包括可以包含抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂以及使得制剂与预期的接受者的血液等张的溶质的水性和非水性溶液、等张无菌注射溶液；以及可包含悬浮剂、增溶剂、增稠剂、稳定剂和防腐剂的水性或非水性的无菌悬浮液。制剂可以呈现于单一剂量或多剂量密封容器中，诸如安剖瓶和小瓶，并且可以储存在冷冻干燥条件中，仅需要在临使用之前加入无菌液体载体例如水用于注射。即时注射溶液和悬浮液可以由之前描述的种类的无菌粉剂、粒剂和片剂制备。

在本发明的上下文中，向动物、特别是人类施用的剂量应当在合理的时间范围内足以影响动物的治疗反应。具体剂量水平和给药的频率可以不同，这取决于多种因素，包括具体活性化合物的活性、其代谢稳定性和作用时长、排泄率、施用的模式和时间、受试者的年龄、体重、健康状况、性别、饮食等，以及例如前列腺癌或前列腺增生的严重性。任何有效量的化合物都可以被施用，例如，每天施用从约1mg至约500mg，每天施用约50mg至约150mg，等等。在本发明的一个实施方案中，用于内部施用的合适剂量是每天施用体重的0.01mg/kg至100mg/kg，例如每天施用体重的0.01mg/kg至35mg/kg或每天施用体重的0.05mg/kg至5mg/kg。用于局部施用的药物组合物中的化合物的合适的浓度是0.05％至15％(按重量计)、优选地是0.02％至5％、并且更优选地是0.1％至3％。本公开的化合物或盐可以通过包括以下的任何有效途径以任何形式以这样的剂量被施用：例如，口服的、肠胃外的、肠内的、腹膜内的、局部的、经皮的(例如，使用任何标准贴剂)、眼睛的、鼻的、局部的，非口服的例如气溶胶、喷雾、吸入、皮下的、静脉内的、肌肉内的、颊的、舌下的、直肠的、阴道的、动脉内的以及鞘内的，等等。

如以上讨论的，本公开的化合物或盐可以单独地施用或与任何活性成分或非活性成分例如与药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂组合地施用。本公开的化合物或盐也可以用于与其他癌症治疗和药物联合。例如，本公开的化合物或盐可以用作已知的癌症治疗的一部分与已知的癌症治疗联合，所述癌症治疗例如激素治疗、化学治疗、放射治疗、免疫治疗和/或外科手术。在本发明的一个实施方案中，上述的化合物或盐的一种或更多种用于与一种或更多种已知的且可用的药物或其他化合物组合。用于与治疗以上讨论的癌症或其他状况或疾病的本发明的化合物或盐组合的示例性药物和/或激素包括，而不限于，抗雄激素例如氟他胺和尼鲁米特；CYP17抑制剂例如阿比特龙；促黄体生成激素-释放激素激动剂例如亮丙瑞林、戈舍瑞林和布舍瑞林；防止肾上腺制造雄激素的药物诸如酮康唑和氨鲁米特；以及雌激素。常用于化学治疗的其他合适的且示例性的癌症药物包括，而不限于，环磷酰胺、甲氨喋呤、5-氟尿嘧啶(5-FU)、多柔比星、卡铂、卡莫司汀、苯丁酸氮芥、顺铂、环磷酰胺、达卡巴嗪、异环磷酰胺、氮芥、美法仑、丙卡巴肼、博来霉素、多柔比星、伊达比星、米托蒽醌、氯脱氧腺苷、阿糖胞苷、氟达拉滨、6-巯基嘌呤、甲氨蝶呤、6-硫鸟嘌呤、喷司他丁、依托泊苷、吉西他滨、类固醇霜剂、皮质类固醇、强的松和地塞米松。

本公开的化合物或盐可以在如由治疗医师确定的任何时间被施用至患者。例如，本公开的化合物或盐可以被施用，用于治疗处在癌症的II-IV阶段的一个或更多个期间的患者。

尽管本文已经示出和描述了本发明的优选实施方案，但对于本领域技术人员明显的是，这些实施方案仅以实例的方式提供。在不背离本发明的情况下，本领域技术人员将会想到许多变更、变化和替代方案。应当理解，在本发明的实践中可以采用本文所述的本发明的实施方案的多种备选方案。以下权利要求意在限定本发明的范围，从而涵盖在这些权利要求范围内的方法和结构及其等同物。

实施例

实施例1：雄激素受体减量调节剂的总体合成方法

在本研究中，合成了如图9(用于C-17改性的系列)、图10(C-16改性的系列)和图11(C-3改性的系列)中概述的二十六个新颖的化合物。

按照以下顺序由关键中间体3β-乙酰氧基-17-氯-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(13)制备新的17-杂芳基取代的化合物(16-22)：17-杂芳基-16-甲酰中间体→16-脱甲酰化的中间体→3-脱乙酰化的最终产物(在图9中未示出)，该顺序与图9中概述的化合物5的合成路线相似。所有化合物的合成中的关键中间体13按照可商购的3β-乙酰氧基雄甾-5-烯-17-酮(12)与磷酰氯(POCl₃)和二甲基甲酰胺(DMF)的维尔斯迈尔-哈克反应来制备。

为了合成3β-乙酰氧基-16-甲酰基-17-1H-杂芳化合物(14、17a、18a、19a、20a和22a)，对应的杂芳化合物各自在约80℃下在DMF中在K₂CO₃的存在下用13处理以生成接近定量收率的期望中间体(中间体的结构未示出，除14之外)。然而，由于吲哚的弱碱性，我们按照相同的程序改为使用吲哚-3-甲醛来合成17-吲哚-3-甲醛(16a)中间体，具有优异的收率。尝试使6-氯嘌呤与13在DMF中在K₂CO₃的存在下缩合，获得非常低收率的可分离的N⁹/N⁷异构体(如通过TLC指示的～6/4的比率)因此，使用N⁹-嘌呤烷基化程序，其中13与6-氯嘌呤在50℃下在THF中在四丁基氟化铵(TBAF)的存在下反应，生成优异收率的期望中间体(21a)。TLC分析表明，N⁷-嘌呤烷基化几乎是可忽略的并且在乙醇中重结晶之后容易地纯化N⁹-嘌呤。在该阶段分离16-甲酰基衍生物(6-甲氧基-BzIm19a1和5-甲氧基-BzIm19a2)的位置异构体并且它们的结构基于相关的5-和6-甲氧基苄基化合物的报道的芳族质子共振来确定。

在所有阶段对分离化合物18的5(6)-腈-苯并咪唑中间体的位置异构体的各种尝试是不成功的。合成18a和20a所需的5(6)-腈-苯并咪唑和2,3-二氨基萘以3,4-二氨基苄腈和苯并[f]苯并咪唑为起始原料分别通过与甲酸回流来合成。16-甲酰基中间体(14、17a–21a；仅示出14的结构)各自在回流的苄腈中用10％钯活性碳(Pd/C)平稳地脱甲酰化，分别生成对应的高收率的脱甲酰化的化合物15、17b、18b、19b、20b和21b(结构未示出，除15之外)。相似地，17-吲哚-3-甲醛中间体(16a)的两个甲酰基基团用如上所述的10％Pd/C脱甲酰化，以良好的收率生成16b。22a的脱甲酰化通过与容易地可得的三(三苯基膦)氯化铑(I)在甲苯中回流来实现，生成低收率的22b。意外地，5-甲氧基-16-甲酰基衍生物19a2使用两种方法都不经历脱甲酰化。用10％甲醇-KOH使15、16b-22b水解分别生成高收率的目标化合物5、16、17、18、19、20、21和22。

C-16取代的化合物如图10中所示的以14为起始原料来合成。中间体亚胺23、26和29通过使异戊胺、苯胺和3,4-二甲氧基苯胺分别与14在分子筛的存在下在乙醇中回流来合成。随后在冰冷的甲醇中用硼氢化钠(NaBH₄)还原这些亚胺，分别生成3-乙酰氧基-16-烷基胺中间体24、27和30。在使化合物24、27和30中的3β-乙酰氧基基团水解之后，分别得到优异收率的期望的16-取代的化合物25、28和31。

C-3改性的化合物如图13中描绘的来合成。Δ⁴-3-氧基化合物(32)通过使用N-甲基哌啶酮和异丙醇铝经由5的改性的奥本瑙尔氧化来合成。在二氯甲烷(DCM)中用戴斯-马丁高碘烷(Dess-Martinperiodinane)氧化5提供了70％收率的Δ⁵-3-氧基化合物33。5的甲磺酰基衍生物(34)和甲苯磺酰基衍生物(35)通过分别与甲磺酰氯和甲苯磺酰氯反应而容易地合成。C-3肟衍生物(羟肟(hydroxime)：36，苯基肟：37，甲基肟：38和苄基肟：39)通过在醋酸钠的存在下使用乙醇/甲醇溶剂混合物使酮(32)与相应地取代的盐酸羟胺回流来获得。所有肟中，仅生物活性肟被进一步纯化以通过联合纯化法(柱层析、制备TLC和重结晶)分离E-和Z-几何异构体。MeLi与32的C-3酮基的加成提供了两种非对映的(3α-和3β)的醇(40)，这两种醇由于适度的生物活性而无法分离。

5的酯衍生物(41-46)通过如以下描述的两种不同方法由5来合成。5的吡啶羧酸酯(41、42和43)和1,3-苯基二乙酸的羧酸酯(44)使用混合酸酐法经由与相应的酸酐(吡啶羧酸/1,3-苯基二乙酸和2-甲基-6-硝基苯甲酸)在4-二甲基氨基吡啶(DMAP)和三乙胺(TEA)的存在下缩合来制备，具有不同的收率(39-90％)。酯45(收率72％)和46(收率28％)通过使1,2,3,6-四氢邻苯二甲酸酐和二乙醇酸酐分别与5在DMAP的存在下在吡啶中回流来合成。最后，氨基甲酸酯(咪唑：47，2-甲基咪唑；48和1,2,4-三唑：49)通过使5分别与1,1-羰基双(2-甲基咪唑)(CDI)和羰基二三唑(CDT)在乙腈和DMC溶剂混合物中反应以中至高收率(67-80％)来合成。描述的化合物的特征严格地在于物理和光谱(IR、¹H和¹³CNMR、以及HRMS)分析(详细参见实施例8)。然后，大部分新颖的化合物经历体外生物活性研究，如在以下部分中详细描述的。

实施例2：化合物对雄激素受体的转录激活的生物效应

在合成化合物之后，使用荧光素酶报告测定确定新颖的化合物是否也影响AR转录激活(扫描测定)。具体地，利用用probasin荧光素酶报告构建体ARR2-luc和Renilla荧光素酶报告载体pRL-null双转染的LNCaP细胞的荧光素酶实验被使用。

LNCaP细胞购自美国模式培养物保藏所-ATCC(Rockville,MD,USA)。将细胞保持在ATCC推荐的具有10％牛胎儿血清(FBS)(AtlantaBiologicals,Lawrenceville,GA,USA)和1％青霉素/链霉素(invitrogen)的培养基中。细胞在37℃下在增湿的培养箱(5％CO₂，95％空气)中的T75或T150组织培养瓶中生长为单层。CWR22rv1细胞为来自费城的托马斯杰斐逊大学的玛利亚内瓦莱尼博士的礼物。

对于转录激活荧光素酶测定而言，在实验开始前3天将LNCaP细胞转移至无类固醇的培养基并且以1x10⁵/孔放置在无类固醇的培养基中。细胞用ARR2-Luc和Renilla荧光素酶报告载体pRL-null双转染。在37℃下的24-h温育期之后，使细胞在含有5％的炭剥离的胎儿牛血清的新制的无酚红RPMI1640中温育并且用10nmol/L二氢睾酮、乙醇载体和/或选择的化合物处理三份。在18-h处理期之后，细胞用冰冷的DulbeccoPBS洗涤细胞两次并且根据制造商的方案使用双荧光素酶试剂盒(Promega)来测定。细胞用100μL的荧光素酶裂解缓冲液来裂解，收集在微型离心分离机管中，并且通过离心形成小球。将上清液(20μL等分部分)转移至不透明的96孔多孔板的对应的孔。将荧光素酶测定试剂加至每一个孔，并且在Victor1420扫描多孔分光光度计(Wallac,Inc.)中测量荧光素酶反应期间产生的光。测量之后，添加终止和Glo试剂(Promega)以猝灭萤火虫荧光素酶信号并且引发Renilla荧光素酶发光。Renilla荧光素酶发光也在Victor1420中测量。结果呈现为与Renilla的荧光素酶发光归一化的倍数诱导(foldinduction)(即，处理的细胞的相对荧光素酶活性除以对照的相对荧光素酶活性)。

荧光素酶表达在10nMDHT处理24小时之后提高大约100倍。评估新颖的化合物(10μM)影响DHT介导的AR转录的能力。图4示出了我们最有效的化合物的效果。这些化合物能够大体上抑制DHT介导的转录，抑制率范围为从～65％-100％。

实施例3：雄激素受体结合测定

除AR减量调节之外，化合物5通过抑制雄激素结合来降低雄激素作用并且随后降低AR介导的转录活性。如图5A中所示，用合成配体甲雌三烯醇酮(R1881)的全细胞竞争性结合测定用于评估新颖的化合物与5以及FDA批准的抗雄激素比卡鲁胺(2)和恩杂鲁胺(6)以及阿比特龙醇(3b)相比的AR结合亲和力。

雄激素受体竞争性结合测定用合成的雄激素甲雌三烯醇酮[³H]R1881进行。24孔多孔盘中的孔用聚-l-赖氨酸(0.05mg/ml)涂覆持续30分钟，用无菌的蒸馏水冲洗，并且干燥2小时。为了确定结合至LNCaP的[³H]R1881的动力学，将AR细胞放置在无类固醇的培养基中的24孔多孔盘中(2-3x10⁵个细胞/孔)并且允许粘附。第2天，在存在或不存在用于确定非特异性结合的200倍过量的冷DHT和用于使孕酮和糖皮质激素受体饱和的1μM丙炎松的情况下，将培养基替换为补充有0.1％BSA且含有[³H]R1881(0.01-10nM)的无血清、无类固醇的RPMI。在37℃下的2小时温育期之后，细胞用冰冷的DPBS洗涤细胞两次并且溶解在含有0.5％SDS和20％甘油的DPBS中。除去提取物并且在闪烁计数器中计数细胞相关的放射性。使用GraphpadPrism软件(GraphPadSoftware,Inc,SanDiego,CA)通过非线性回归分析数据，包括K_d和B_max确定。当需要使AR在两种细胞系中几乎饱和的[³H]R1881的浓度被确定时(5.0nM)，测试化合物(1nM-10μM)置换来自受体的[³H]R1881(5.0nM)的能力如上所述地来确定。每种化合物的IC₅₀用GraphpadPrism软件(GraphPadSoftware,Inc,SanDiego,CA)通过非线性回归来确定。

具有最大的置换[³H]R1881的能力的化合物是5和6，分别具有670nM和915nM的IC₅₀值。化合物2稍弱，具有1.4μM的IC₅₀。我们不计算3b的IC₅₀值，是因为AR结合曲线的浅的陡度，指示3b与多于一个受体群的相互作用的现象。最近的研究也提到与3b不同的AR结合特性⁴⁹。有趣地，使用LNCaP细胞的AR结合测定示出，6不像使用用野生型AR¹⁰转染的LNCaP细胞的测定的以前报道的那样有效并且没有明显不同于比卡鲁胺(2)的结合亲和力。新的化合物在测试的浓度下在抑制雄激素结合方面不像5那样有效(图5B)。例如，化合物36示出了在10μM下所有测试的新化合物的[³H]R1881结合的最强抑制率(～40％)。在30μM，36将[³H]R1881结合抑制为～80％，同时43抑制为～53％。最有效的AR拮抗剂47，不强力地竞争AR结合部位，在30μM浓度下表现出仅20％的置换。本文相关地陈述的是，其他研究者最近已经报道了小分子雄激素受体减量调节剂和弱地结合至AR的抗雄激素的发现。

实施例4：对AR减量调节、转录和抗增殖活性的效果

为了探索AR减量调节效果，LNCaP细胞用感兴趣的化合物(5、6、16-20、25、28、32、34、36、38、39、42、43、47-49)中每一种处理24h，随后蛋白印迹分析。如在图6A-C中所示，大部分新的化合物显著地引起LNCaP细胞中的AR减量调节，化合物47是最有效的并且证明在15μM下的活性比化合物5大8倍。化合物5和47抑制AR表达的能力通过免疫细胞化学分析被进一步证明(图6D)。

对于免疫细胞化学分析：将LNCaP细胞放置于8室容器组织培养基处理的载玻片(0.025X10⁶个细胞/孔)中，持续12h并且然后用5uM的VN/124-1或VNPT55处理48h。细胞用PBS洗涤两次并且固定在3.7％甲醛中10min并且在若干次洗涤之后用PBS中的0.25％triton渗透化另外的5min。细胞用PBS中的0.5％NP40与5％BSA封闭并且与PBS中的2.5％BSA中抗AR(1:600稀释；细胞信号传送)温育过夜。细胞与以1:1000(细胞信号传送)的次级抗体AlexaFluor488-缀合物抗兔IgG(H+L)温育1h并且核对染5min(以1:5000的DAPI)。所有图像使用NikonTE2000显微镜来拍照。

如在图6D中所示，以模拟蛋白印迹分析数据的方式(见上)，使LNCaP细胞暴露至5μM的化合物5和47持续48h导致细胞核中的AR水平明显降低。这些数据与针对环格列酮(一类新颖的AR消融剂)的类似物所报道的数据相似。

由于AR剪接变体在驱动CRPC前进时缺少配体结合域(截短的AR)的潜在意义，因此确定了化合物对AR-3(也称为AR-V7)的减量调节的效果。如在图6E中所示，Galeterone(5)和一些我们的新的化合物31、32、36和47引起CWR22rv1前列腺癌细胞系中的全长和截短的AR的明显的减量调节。有趣地，AR-3对化合物比该细胞系中的全长AR更易感。与此相反，MDV3100不影响AR的全长变体形式或者剪接变体形式的表达水平。大量的天然产物和相关的类似物已经示出为使一些人类前列腺癌细胞系中的全长AR和截短的AR二者降解。然而，除姜黄素类似物：具有优异的类药性的ASC-J9之外，这些化合物的大部分是差的候选药物，是因为中度效力和/或毒性性质。如果适当地开发，本公开中提供的独特的AR消耗剂可以比专性地结合至AR的特定区域以引起AR的失活的试剂更有效抵抗CRPC。

为了确定AR减量调节或AR转录减活(AR失活)是否有助于抗增殖活性，LNCaP细胞用15μM的选择的活性化合物(5、36、32、47和48,)处理24小时，并且进行细胞活力、AR转录(荧光素酶)测定和AR蛋白印迹分析。如在图7中所示，AR的减量调节和AR介导的转录的抑制在细胞生长抑制之前发生，这表明化合物诱导的AR失活有助于它们的抗增殖活性。这些化合物还诱导LNCaP细胞和CWR22rvl细胞中的明显的PARP断裂，这表明它们诱导凋亡的能力。

实施例5：CYP17抑制研究

一些化合物针对它们抑制CYP17酶的能力来评价。人CYP17A1(CYP171dH)的截短的版本在大肠杆菌中表达，并且然后纯化至均一。化合物的IC₅₀值依据剂量-反应曲线来确定并且列在表1中。

表1：选择的用于抑制CYP17的化合物的IC₅₀值

^aIC₅₀值是抑制了50％的CYP酶活性的抑制剂浓度，各自两份。IC₅₀值各自依据剂量-反应曲线来确定。

阿比特龙醇(3b，最近批准的用于前列腺癌治疗的CYP17抑制剂)、galaterone和3β-羟基-17-(1H-咪唑-1-基)雄甾-5,16-二烯(VN/85-1，结构未示出，据相信是最有效的CYP17抑制剂)的IC₅₀值也在用于比较(用作阳性对照)的相同测定系统中被确定。如预计的，具有在高微摩尔范围(93.7μM–258μM)内的IC₅₀值的这些新的化合物(16、36、47和48)是CYP17的弱抑制剂，提高了有效的甾类CYP17抑制剂的之前确立的结构性需求，包括不允许在C-3处的大体积部分和适当地放置的C-17杂环杂原子。如预计的，确立好的CYP17抑制剂表现出对具有在纳摩尔范围内的IC₅₀值的酶的精准抑制(表1)。

实施例6：抗增殖(抗癌)活性和雄激素受体减量调节活性：结构活性关系(SAR)

鉴于由化合物5和新的类似物诱导的AR降解的程度可能与它们抑制前列腺癌细胞(LNCaP)的增殖的能力相关的假设，这两种活性使用蛋白印迹分析和MTT测定来评估。

为了蛋白印迹分析，培养LNCaP或CWR22vl前列腺癌细胞。然后，细胞用指定的化合物处理，并且全细胞裂解物使用RIPA裂解缓冲液(SigmaAldrich)以及蛋白酶和磷酸酶抑制剂(SigmaAldrich)来制备。所有抗体都订购自CellSignalingTechnology。蛋白质含量使用Bradford测定(Bio-Rad,Hercules,CA,USA)来确定。蛋白质经历SDS-PAGE并且转移至硝酸纤维素膜上。然后，膜在室温下用次级抗体(CellSignalingTechnology)温育1小时。带通过化学发光(Millipore)显现。蛋白质表达被归一化为β-肌动蛋白，并且使用ImageJ或ImageQuant5.0(MolecularDynamics,Sunnyvale,CA,USA)进行光密度测定。CWR22Rv1细胞用于剪接变体AR-3的内源水平。蛋白质水平用相应的抗体来分析；全长AR和β-肌动蛋白抗体购自CellSignaling，剪接变体AR-3的抗体特异性获得自巴尔的摩的马里兰大学医学院的YunQiu博士。

为了MTT比色测定，将细胞以5x10³个细胞/孔的密度接种在96孔板(CorningCostar)中。然后，允许细胞允许粘附至板持续24小时并且用溶解于95％EtOH中的各种浓度的化合物处理。将细胞处理7天，在第四天时更换测试化合物和培养基。在第7天，更新培养基并且将MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基-2H-溴化四氮唑)(Sigma,StLouis,MO,USA)溶液(0.5mgMTT/ml培养基)添加至培养基，使得MTT:培养基的比是1:10。细胞用MTT温育2小时。然后，将培养基抽出并且添加DMSO以使紫色MTT-甲蜡产物溶解。562nm处的吸光度通过分光光度仪(BiotekInc.)来测量。

C-17改性：合成吲哚16并且测试以评估在C17位的降低的极性的效果，这归因于BzIm环的N-3的缺乏。出乎意料地，化合物引起AR的向上调节(图6A)并且与先导化合物5(GI₅₀＝3.35μM)相比完全失去了抗癌活性(GI₅₀>100μM，表2)。

表2：C-17改性的化合物的GI₅₀值

^aGI₅₀由从至少三次独立实验汇总的、SEM<10％的剂量-反应曲线来确定(使用GraphPadPrism通过非线性回归分析)，并且表示需要抑制50％的细胞生长的化合物浓度。

通过用6-氯嘌呤(21)取代来增大C-17杂环的氮的数目，引起抗增殖活性的4倍降低(GI₅₀＝13.48μM)。引入氰基基团(18)表现出有效的抗增殖活性(GI₅₀＝2.81μM)，但AR减量调节(ARD)活性降低。通过取代5,6位上的甲基基团(17)在BzIm环上引入脂肪族疏水性导致抗增殖活性(GI₅₀＝42.72μM)和ARD活性的大量损失，然而取代BzIm环的第6位的单甲氧基基团(19)未表现出ARDA或抗癌活性的调节(GI₅₀＝4.26μM)。通过用萘并[2,3-d]咪唑环(20)替代BzIm提高芳族亲水性引起了ARDA和抗癌活性的明显损失(GI₅₀＝19.10μM)。取代2-氯BzIm(22)引起抗增殖活性的3倍损失。C17改性的分子中没有一个优于我们的先导化合物5，并且这清楚地表明，先导化合物5的的C17位处的BzIm环对于ARDA和抗增殖活性是重要的并且是最佳的。

C-16改性：连接脂肪族疏水基团(异戊基：25)；芳族的(苄基：28；二甲氧基苄基：31)以提高C16位的体积，导致ARD和抗癌活性的明显损失(分别地，GI₅₀＝18.31、22.13且>100μM；表3)。

表3：C-16改性的化合物的GI₅₀值

^aGI₅₀由从使用LNCaP细胞的至少三次独立实验汇总的、SEM<10％的剂量-反应曲线来确定(使用GraphPadPrism通过非线性回归分析)，并且表示需要抑制50％的细胞生长的化合物浓度。

C-3改性：试图更好地理解化合物5和32的ARD/抗增殖活性中由OH和O起的作用，并且试图可能实现与AR配体结合域中的Arg的提高的相互作用，设计、合成并且测试了一些C-3改性的类似物。首先，5的氧化或32的还原烷基化分别生成了3-氧-Δ⁵化合物33和3-羟基-3-甲基化合物40，导致抗增殖活性的明显损失(～5倍)(表4)。

表4：C-3改性的化合物的GI₅₀值

^b由于在乙醇中不溶而未测试出。

化合物5转化成甲磺酰基衍生物(34)和甲苯磺酰基(35)衍生物也生成了具有中等抗增殖活性的化合物，分别具有42.13μM和47.18μM的GI₅₀值。相反，在C-3处引入肟部分产生与化合物5和32相比具有相似或更好的活性的化合物(E/Z肟混合物)。因此，简单的肟(36)以及相关的甲基类似物(38)和苄基类似物(39)分别表现出1.91μM、3.38μM和5.57μM的GI₅₀值。苯基肟(37)的生物活性由于它在乙醇或DMSO中的有限溶解度而无法评估。考虑到肟36的E/Z混合物的有前景的且优越的活性以及纯的E和Z具有不同的抗增殖活性的可能性，令人惊异地，36E和36Z异构体表现出相似的效力，分别具有2.03μM和1.95μM的GI₅₀值。

根据基于已知的酯的抗癌药物例如多西他赛、卡巴他赛以及临床开发中的酯例如贝韦立马及相关类似物，合成了化合物5的三种吡啶羧酸酯衍生物，包括41-43。这些化合物中，异烟酰基衍生物43表现出与5相似的抗增殖活性(GI₅₀＝2.57μM)。另外，在这里，化合物41和42的生物活性由于它们在乙醇或DMSO中的有限溶解度而无法评估。用羧酸末端连接至亲脂性酯侧链的相关类似物(44-46)表现出比化合物5差～2.5倍的效力。最后，进行C-3氨基甲酸酯的评价，因为：1)具有氨基甲酸酯部分的药物例如广泛应用的驱肠虫药阿苯达唑、芬苯达唑和甲苯咪唑的优越性；2)降低化合物5的亲脂性、也应当提高溶解度和可能的生理学相关性的附加特征。测试的三种杂芳基氨基甲酸酯中，具有0.87μM的GI₅₀值的咪唑基氨基甲酸酯47示出为最高活性，为优于化合物5的～4倍。如在氨基甲酸酯48中引入2¹-甲基引起相对于47的活性的6倍降低，相似于在用如化合物4所示的1,2,4-三唑替代咪唑部分之后的活性的～8倍降低。

实施例7：对接研究

如在上面的设计策略部分中陈述的，对接研究是基于担负对AR的配体的亲和力的确立好的分子的决定因素。三种化合物(5、36和47)各自与AR的活性部位对接。R1881(9)作为阳性对照被包括。我们发现，对接的9示出与结合至AR的9的公布的晶体结构中的定向和相互作用相似的定向和相互作用(数据未示出)。如在图3中清楚地描绘的，当化合物5被模拟在AR-LBD结合部位中时，5制造对Arg752和Phe764重要的H键相互作用，并且甾类支架示出与周围氨基酸的疏水性相互作用，该疏水性相互作用相似于9与AR-LBD的相互作用。5的BzIm基团的两个氮原子未示出与Asn705和Thr877的清楚的相互作用，不同于通过17β羟基基团发生的9与Asn705和Thr877的相互作用。观察到的5与AR的中等结合亲和力(IC₅₀＝680nM对DHT的IC₅₀＝4nM)可能由于5的BzIm基团和活性部位中的其他周围氨基酸残基之间的轻微但有利的疏水/亲水相互作用。

用羰基咪唑替代5的C-3-羟基基团生成47，似乎示出了与hARLBD的关键氨基酸残基的更好的相互作用(图8A)。氨基甲酸酯基团的羰基直接与Gln711相互作用并且经由一个H₂O分子间接与其他氨基酸(Met745和Arg752)相互作用。咪唑环上的电子云也与Arg752相互作用。相似于与5所看到的相互作用，47的BzIm基团的两个氮原子未示出与Asn705和Thr877的清楚的相互作用。3-肟化合物36与hAR的LBD的对接似乎示出了不同类型的相互作用，其中肟的氧原子和氮原子示出分别与Arg752和Phe764的氢键(图8B)。对比与化合物5和47所看到的相互作用，C-17BzIm部分的N-3示出与Thr877的氢键。将呈现的是，氢键结合官能团和这些化合物的类固醇核的空间排列最适于与hARLBD形成必需的氢键和疏水性相互作用。出乎意料地，尽管在这些对接分析中通过这些化合物示出了明显的氢键结合网络，但是没有观察到至AR的明显的实验性结合，除了我们的先导化合物5示出了相对于内源性AR配体的中等结合。

实施例8：雄激素受体减量调节剂的一般合成程序和化学表征

材料和方法：

熔点(mp)用Fischer-Johns熔点设备确定并且不校正。使用VarianInova500MHz分光仪或Bruker400MHz分光仪，用Me₄Si作为内标以500MHz或400MHz记录CDCl₃或DMSO-d₆中的质子核磁共振(¹HNMR)光谱。使用Bruker400MHz或500MHz分光仪，记录CDCl₃中的¹³CNMR光谱。高分辨率质谱(HRMS)由弗吉尼亚州诺福克市奥多明尼昂大学科学院主要仪器组的设备主管苏珊A.哈彻女士通过阳性离子ESI模式在Bruker12TeslaAPEX-QeFTICR-MS上确定。表雄甾酮醋酸酯以及所有其他化学品、试剂都购自Sigma–Aldrich。合成生物实验中所使用的二氢睾酮(DHT)。所有化合物冷藏保存(0–8℃)。硅胶板(MerckF254)用于薄层色谱法，而快速柱层析(FCC)在硅胶(230-400目，)上进行。制备TLC在硅胶GF(Analtec500微米)板上进行。石油醚指的是轻质石油，沸点40-60℃。

3β-乙酰氧基-17-氯-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(13)：该化合物由如前所述的3β-乙酰氧基雄甾-5-烯-17-酮(表雄甾酮醋酸酯，12)来制备，提供如报道的光谱数据和分析数据。

一般方法A：3β-乙酰氧基-17-(1H-杂芳基-1-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(14、16a-18a、19a1、19a2、20a和22a)的合成：装配有磁力搅拌棒和冷凝器的25mLRB烧瓶装载有3β-乙酰氧基-17-氯-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(13，0.38g，1mmol)、相应的杂芳基(3mmol)和K₂CO₃(0.41g，3mmol)，在干燥的DMF(～7.5mL)中在Ar气下在80℃下搅拌并且通过TLC监测。在冷却至室温之后，将反应混合物倾倒至冰冷的水(50mL)中并且过滤生成的沉淀物，用水洗涤并且干燥，以得到粗产物。通过FCC的纯化[石油醚/EtOAc/TEA(6:4:0.3)]得到了期望的纯化合物。合成以上列出的中间体化合物(使用反应物、试剂和溶剂比)，通过使用该方法来分离并且纯化，除非另有陈述。

3β-乙酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(14)：化合物14通过按照一般方法A使13(2.5g，6.65mmol)与苯并咪唑(2.35g，19.9mmol)在K₂CO₃(2.76g，19.9mmol)的存在下在干燥的DMF中在80℃下反应1.5h来制备。FCC纯化之后提供了具有与我们之前报道的相同的光谱数据和分析数据的纯的14。

3β-乙酰氧基-17-(3-甲酰-1H-吲哚-1-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(16a)：化合物16a通过按照一般方法A使13(1g，2.66mmol)与吲哚-3-甲醛(0.5g,3.44mmol)在K₂CO₃(0.5g，3.62mmol)的存在下在干燥的DMF(15mL)中在80℃下反应8h来制备。通过FCC的纯化[石油醚/EtOAc(7:3)]得到了1.1g(85％)的纯的16a：熔点206-208℃；IR(纯的)2935,2852,1729,1665,1635,1453,1374,1239,1032,783cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.01(s,3H,18-CH₃),1.09(s,3H,19-CH₃),2.06(s,3H,3β-OCOCH₃),4.65(dt,J＝12.2,6.5Hz,1H,3α-H),5.46(br,1H,6-H),7.29(s,1H,2'-H),7.39(m,2H,芳族-H),7.80(d,J＝14.9Hz,1H,芳族-H),8.36(m,1H,芳族-H),9.58(br,1H,16-CHO)和10.15(s,1H,吲哚-CHO)。

3β-乙酰氧基-17-(5,6-二甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(17a)：化合物17a通过按照一般方法A使13(0.5g，1.33mmol)与5,6-二甲基苯并咪唑(0.54g，4.0mmol)在K₂CO₃(0.55g，4.0mmol)的存在下在干燥的DMF(10mL)中在80℃下反应5h来制备。通过FCC的纯化得到了0.46g(70.7％)的纯的17a：熔点174-175℃；IR(纯的)2941,2852,1727,1672,1622,1463,1487,1365,1236,1029,897,843,717,657cm^-1；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ1.06(s,3H,18-CH₃),1.16(br.s,3H,19-CH₃),2.03(s,3H,3β-OCOCH₃),2.35(s,3H,芳族-CH₃)2.38(s,3H,芳族-CH₃),4.64(m,1H,3α-H),5.44(br,1H,6-H),7.02(br.s,1H,芳族-H),7.59(s,1H,芳族-H),7.87(s,1H,2'-H)和9.60(s,1H,16-CHO)。

3β-乙酰氧基-17-(5(6)-腈-1H-苯并咪唑-1-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(18a)：化合物18a通过按照一般方法A使13(0.5g，1.33mmol)与5(6)-腈苯并咪唑(0.38g，2.65mmol)在K₂CO₃(0.55g，4.0mmol)的存在下在干燥的DMF(10mL)中在80℃下反应5h来制备。通过短柱的纯化[石油醚/EtOAc/TEA(6:4:0.1)]得到了0.28g(43.5％)的纯的18a：熔点146-147℃；IR(纯的)2935,2226,1726,1673,1470,12381032,906,728cm^-1；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ1.07(s,3H,18-CH₃),1.19(br.s,3H,19-CH₃),2.04(s,3H,3β-OCOCH₃),4.62(dt,J＝10.1,5.3Hz,1H,3α-H),5.44(br,1H,6-H),7.61-7.96(m,3H,芳族-H),8.21(s,1H,2'-H)和9.52(s,1H,16-CHO)。

3β-乙酰氧基-17-(6-甲氧基-1H-苯并咪唑-1-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(19a1)和3β-乙酰氧基-17-(5-甲氧基-1H-苯并咪唑-1-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(19a2)：化合物19a1和19a2通过按照一般方法A使13(0.5g，1.33mmol)与5(6)-甲氧基苯并咪唑(0.59g，4.0mmol)在K₂CO₃(0.55g，4.0mmol)的存在下在干燥的DMF(10mL)中在80℃下反应3h来制备。通过FCC的纯化[石油醚/EtOAc/TEA(7.5:2:0.5)]得到了第一较小极性的6-甲氧基衍生物(19a1)0.15g(24％)：熔点242-245℃；IR(纯的)2935,1721,1673,1502,1440,1249,1220,1032,805,759cm^-1；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ1.07(s,3H,18-CH₃),1.18(br.s,3H,19-CH₃),2.03(s,3H,3β-OCOCH₃),3.82(s,3H,-OCH₃),4.62(dt,J＝11.2,6.6Hz,1H,3α-H),5.44(t,1H,J＝1.84Hz,6-H),6.70(m,1H,芳族-H)6.95(m,1H,芳族-H),7.70(m,1H,芳族-H),7.87(s,1H,2'-H)和9.61(s,1H,16-CHO)。随后是较大极性的5-甲氧基衍生物(19a2)0.13g(20％)：熔点228-231℃；IR(纯的)2936,2852,1722,1673,1481,1341,1245,1031,897,800,739cm^-1；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ1.06(s,3H,18-CH₃),1.16(br.s,3H,19-CH₃),2.04(s,3H,3β-OCOCH₃),3.88(s,3H,-OCH₃),4.63(m,1H,3α-H),5.44(d,J＝5.6Hz,1H,6-H),6.98(m,1H,芳族-H)7.29(m,1H,芳族-H),7.30(m,1H,芳族-H),7.92(s,1H,2'-H)和9.61(s,1H,16-CHO)。还收集到19a1和19a2的约0.11g的混合物(总收率是61％)。

3β-乙酰氧基-17-(1H-苯并[f]苯并咪唑-1-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(20a)：化合物20a通过按照一般方法A使13(0.38g，1mmol)与1H-苯并[f]苯并咪唑(0.2g，1.2mmol)在K₂CO₃(0.207g，1.5mmol)的存在下在干燥的DMF(3mL)中在80℃下反应2h来制备。通过FCC的纯化[石油醚/EtOAc/TEA(6:4:0.3)]得到了0.37g(72％)的纯的20a：熔点158-160℃；IR(CHCl₃)3691,3024,2951,2359,1725,1670,1604,1491,1452,1375,1253,1032,897,852,818,700,657,618,576,565,550,529,511,476cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.05(s,6H,18和19-CH₃),2.04(s,3H,3α-OCH₃),4.62(m,1H,3β-H),5.44(br,s,6-H)7.46(br.s,2H,芳族-H),7.94(s,2H,芳族-H),8.04(m,1H,芳族-H),8.15(s,1H,芳族-H)8.33(s,1H,2'-H)和9.71(s,1H,16-CHO)。

3β-乙酰氧基-17-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(21a)：13(2.43g，6.46mmol)、6-氯嘌呤(0.5g，3.23mmol)和TBAF(1.69g，6.46)在干燥的THF(40mL)中的混合物在50℃下在Ar下搅拌48h。在冷却至室温之后，浓缩反应混合物并且倾倒至冰冷的水(250mL)中，并且过滤生成的沉淀物过滤，用水洗涤并干燥，以得到粗产物。通过FCC[DCM/甲醇(9.7:0.3)]纯化并且然后用热的乙醇重结晶以得到0.82g(51.3％)的纯的21a：熔点140-142℃；IR(纯的)2943,2853,1729,1672,1584,1556,1435,1236,1032,939,cm-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.07(s,3H,18-CH₃),1.09(s,3H,19-CH₃),2.04(s,3H,3β-OCOCH₃),4.61(m,1H,3α-H),5.43(br,1H,6-H),8.20(s,1H,2'-H),8.79(s,1H,芳族-H)和9.53(s,1H,16-CHO)。

3β-乙酰氧基-17-(2-氯-1H-苯并咪唑-1-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(22a)：化合物22a通过按照一般方法A使13(0.5g，1.33mmol)与2-氯苯并咪唑(0.6g，4.0mmol)在K₂CO₃(0.55g，4.0mmol)的存在下在干燥的DMF(10mL)中在80℃下反应50h来制备。在冷却至室温之后，将反应混合物倾倒至冰冷的水(250mL)中并且生成的乳液用DCM萃取，干燥有机层并且蒸发。通过FCC的纯化[石油醚/EtOAc(8:2)]得到了0.27g(41.1％)的纯的22a：熔点203℃；IR(纯的)2936,1731,1679,1448,1244,1033,734cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.06(s,3H,18-CH₃),1.16(s,3H,19-CH₃),2.04(s,3H,3β-OCOCH₃),4.62(m,1H,3α-H),5.43(br,1H,6-H),7.17(d,1H,J＝7.9Hz,芳族-H),7.34(m,2H,芳族-H),7.74(d,1H,J＝7.4Hz,芳族-H)和9.37(s,1H,16-CHO)。

一般方法B：3β-乙酰氧基-17-(1H-杂芳基-1-基)-雄甾-5,16-二烯(15、16b-21b)的合成：使3β-乙酰氧基-17-(1H-杂芳基-1-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(14、17a-21a)在干燥的苄腈(10mL)中的溶液在Ar下在10％Pd/C(50％的反应物的重量)的存在下回流并且通过TLC监测。在冷却至室温之后，催化剂通过穿过Celite垫过滤而除去。蒸发滤液，并且使用石油醚/EtOAc/TEA(7.5:3:0.5)溶剂体系，在硅胶上通过FCC纯化残余物。合成以上列出的中间体化合物(使用反应物、试剂和溶剂比)，通过使用该方法分离并且纯化，除非另有陈述。

3β-乙酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(15)：化合物15通过在用10％Pd/C(1.0g)的情况下使14(2.04g，4.45mmol)在干燥的苄腈(10mL)中回流5h来制备。随后，FCC纯化提供了具有与我们之前报道的相同的光谱数据和分析数据的纯的15。

3β-乙酰氧基-17-(1H-吲哚-1-基)-雄甾-5,16-二烯(16b)：化合物16b通过按照一般方法B制备在用10％Pd/C(0.085g)的情况下使16a(0.17g，0.36mmol)在干燥的苄腈(3mL)中回流24h，然后添加约0.030g的Pd/C和溶剂(1mL)并且再回流12h来制备。通过FCC的纯化得到了0.12g(77.5％)的纯的16b：熔点182-185℃；IR(纯的)2936,2854,1727,1631,1455,1368,1249,1030,721,cm^-1；¹HNMR(400MHz,DMSO-d₆)δ0.95(s,3H,18-CH₃),1.03(s,3H,19-CH₃),1.99(s,3H,3β-OCOCH₃),4.47(m,1H,3α-H),5.42(br,1H,6-H),5.88(s,1H,16-H),6.57(m,1H,3'-H),7.05(m,1H,2'-H),7.15(m,1H,芳族-H),7.37(d,J＝3.2Hz,1H,芳族-H),7.50(d,J＝8.0Hz,1H,芳族-H)和7.57(d,J＝7.7Hz,1H,芳族-H)。

3β-乙酰氧基-17-(5,6-二甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(17b)：化合物17b通过按照一般方法B在用10％Pd/C(0.075g)的情况下使17a(0.15g，0.308mmol)在干燥的苄腈(2mL)中回流7h来制备。通过FCC的纯化得到了0.12g(84.8％)的纯的17b：熔点159-162℃；IR(纯的)2926,2852,1729,1626,1491,1462,1369,1236,1030,846,cm^-1；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ1.03(s,3H,18-CH₃),1.09(s,3H,19-CH₃),2.06(s,3H,3β-OCOCH₃),2.40(s,6H,2X芳族-CH₃),4.64(m,1H,3α-H),5.45(br,1H,6-H),5.96(s,1H,16-H),7.26(s,1H,芳族-H),7.58(s,1H,芳族-H)和7.87(s,1H,2'-H)。

3β-乙酰氧基-17-(5(6)-腈-1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(18b)：化合物18b通过按照一般方法B在用10％Pd/C(0.075g)的情况下使18a(0.15g，0.31mmol)在干燥的苄腈(2mL)中回流24h来制备。通过FCC的纯化得到了0.09g(63.5％)的纯的18b：熔点204-206℃；IR(纯的)2939,2222,1731,1487,1247,1030,822,cm^-1；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ1.07(s,3H,18-CH₃),1.18(s,3H,19-CH₃),2.04(s,3H,3β-OCOCH₃),4.62(m,1H,3α-H),5.44(m,1H,6-H),6.03(m,1H,16-H),7.54-8.15(m,4H,芳族-H)。

3β-乙酰氧基-17-(6-甲氧基-1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(19b)：化合物19b通过按照一般方法B在用10％Pd/C(0.075g)的情况下使19a1(0.15g，0.307mmol)在干燥的苄腈(2mL)中回流72h，然后添加约0.030g的Pd/C并且再回流12h来制备。通过FCC的纯化得到了0.05g(35％)的纯的粘性化合物19b：IR(纯的)2940,1713,1496,1363,1237,1216,1030,816,cm^-1；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ1.01(s,3H,18-CH₃),1.07(s,3H,19-CH₃),2.04(s,3H,3β-OCOCH₃),3.88(s,3H,-OCH₃),4.63(m,1H,3α-H),5.44(s,1H,6-H),5.96(br,1H,16-H),6.92(m,2H,芳族-H),7.69(d,1H,J＝8.7Hz,芳族-H)和7.85(s,1H,2'-H)。

3β-乙酰氧基-17-(1H-苯并[f]苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(20b)：化合物20b通过按照一般方法B在用10％Pd/C(0.1g)的情况下使20a(0.2g，4.45mmol)在干燥的苄腈(4mL)中回流5h来制备。通过FCC的纯化得到了0.14g(73.8％)的纯的20b：熔点144-146℃；IR(CHCl₃)3687,2947,2854,2358,2340,1725,1633,1609,1557,1489,1454,1373,1291,1253,1195,1136,1031,985,910,839,735,665,590,544,533,513,502,488cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.08(s,3H,18-CH₃),1.10(s,3H,19-CH₃),2.01(s,3H,3β-OCH₃),4.62(m,1H,3α-H),5.45(br,s,6-H),6.11(s,1H,16-H),7.42(m,2H,芳族-H),7.92(m,2H,芳族-H),8.04(m,1H,芳族-H),8.15(s,1H,芳族-H)和8.29(s,1H,2'-H)。

3β-乙酰氧基-17-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-雄甾-5,16-二烯(21b)：化合物21b通过按照一般方法B在用10％Pd/C(0.4g，即，等重量的21a)的情况下使21a(0.4g，0.81mmol)在干燥的苄腈(7.5mL)中回流4h来制备。冷却至室温，催化剂通过穿过Celite垫过滤来除去。蒸发滤液，并且带至下一个步骤，而不用纯化。

3β-乙酰氧基-17-(2-氯-1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(22b)。使3β-乙酰氧基-17-(2-氯苯并咪唑-1-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(22a)(0.15g，0.304mmol)在干燥的甲苯(3mL)中的溶液在三(三苯基膦)氯化铑(I)(0.29g，0.311mmol)的存在下回流60h。在冷却至室温之后，催化剂通过穿过Celite垫过滤来除去。蒸发滤液，并且通过FCC[石油醚/EtOAc(8:2)]来纯化残余物，以得到0.04g(28％)的纯的22b：熔点161-165℃；IR(纯的)2926,2853,1629,1403,1462,1369,1233,1035,847cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.05(d,6H,18和19-CH₃),2.04(s,3H,3β-OCOCH₃),4.62(m,1H,3α-H),5.44(m,1H,6-H),6.06(s,1H,16-H),7.33(m,1H,芳族-H),7.52(m,1H,芳族-H)和7.68(m,2H,芳族-H)。

一般方法C：3β-羟基-17-(1H-杂芳-1-基)-雄甾-5,16-二烯(5、16-22)和3β-羟基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-16-((烷基/芳基氨基)甲基)-雄甾-5,16-二烯(25、28和31)：在惰性的Ar气氛下将醋酸酯(15、16b-22b、24、27、30)(1g)溶解于甲醇(15mL)中，并且得到的溶液用10％甲醇的KOH(5mL)处理。使混合物在室温下搅拌，通过TLC监测。将反应混合物在真空下浓缩，添加冰水(100mL)，并且过滤生成的白色沉淀物，用水洗涤并且干燥。在短硅胶柱上进行用石油醚/EtOAc(6:4)洗脱的FCC以获得纯的目标化合物。合成以上列出的最终化合物(使用反应物、试剂和溶剂比)，通过使用该方法分离并且纯化，除非另有陈述。

3β-羟基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(5)²⁴：化合物5通过按照一般方法C用10％甲醇的KOH(5mL)处理15(1g，3.02mmol)在甲醇(15mL)中的醋酸酯溶液1.5h来制备。在短柱上通过FCC的纯化提供了具有与我们之前报道的相同的光谱数据和分析数据的纯的5。

3β-羟基-17-(1H-吲哚-1-基)-雄甾-5,16-二烯(16)：化合物16通过稍微修改的一般方法C来制备。16b(0.09g，0.2mmol)在甲醇(1.5mL)中的醋酸酯溶液与10％甲醇的KOH(1mL)一起回流3h。在短柱上通过FCC的纯化得到了纯的16(0.076g，98.7％)，熔点142-145℃；IR(纯的)3305,2931,2836,1625,1455,1327,1225,10598,1042,740cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.00(s,3H,18-CH₃),1.06(s,3H,19-CH₃),3.54(m,1H,3α-H),5.41(br,1H,6-H),5.85(s,1H,16-H),6.55(m,1H,3'-H),7.11(m,1H,2'-H),7.19(dd,J＝8.4,5.7Hz,2H,芳族-H),7.51(d,1H,J＝8.3Hz,芳族-H)和7.60(d,1H,J＝7.8Hz,芳族-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ149.6,141.2,137.2,128.4,126.9,122.0,121.7,120.6,119.6,111.3,102.4,71.7,55.9,50.6,47.3,42.0,37.2,36.8,35.1,31.6,30.2,20.8,19.4,16.0；HRMS计算值410.2454(C₂₇H₃₃ON.Na⁺)，发现值410.2460。

3β-羟基-17-(5,6-二甲基-1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(17)：化合物17通过按照一般方法C通过用10％甲醇的KOH(1mL)处理17b(0.1g，0.22mmol)在甲醇(2mL)中的醋酸酯溶液3h来制备。在短柱上通过FCC的纯化提供了纯的17(0.05g，55％)，熔点194-196℃；IR(纯的)3262,2925,2896,2848,1628,1493,1481,1371,1058,834,cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.02(s,3H,18-CH₃),1.06(s,3H,19-CH₃),2.38(s,6H,2x芳族-CH₃),3.55(m,1H,3α-H),5.41(m,1H,6-H),5.95(t,J＝2.6Hz,16-H),7.25(s,1H,芳族-H),7.57(s,1H,芳族-H)和7.87(s,1H,2'-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ147.3,141.3,132.7,131.6,123.4,121.1,119.9,111.3,71.6,55.9,50.5,47.2,42.3,37.2,34.9,31.6,30.37,20.6,19.3,16.0；HRMS计算值439.2719(C₂₈H₃₆ON₂.Na⁺)，发现值439.2726。

3β-羟基-17-(5(6)-腈-1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(18)：化合物18按照一般方法C通过用10％甲醇的KOH(1mL)处理18b(0.075g，0.165mmol)在甲醇(1.5mL)中的的醋酸酯溶液2h来制备。在短柱上通过FCC的纯化提供了纯的18(0.055g，80.8％)，熔点192-193℃；IR(纯的)3409,3285,2928,2226,1654,1614,1469,1229,1059,801,cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.01(d,3H,18-CH₃),1.06(d,3H,19-CH₃),3.55(tdq,J＝9.0,4.7,2.6Hz,1H,3α-H),5.40(dp,J＝4.8,1.7Hz,6-H),6.02(m,1H,16-H),7.52–8.15(m,4H,芳族-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ146.7,144.8,141.5,127.0,126.4,125.5,121.5,119.8,116.4,112.4,106.8,106.1,71.7,56.1,50.6,47.5,42.4,37.3,36.9,34.9,31.7,30.6,20.8,19.5,16.2,15.0；HRMS计算值414.2539(C₂₇H₃₁ON₃.H⁺)，发现值414.2532。

3β-羟基-17-(6-甲氧基-1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(19)：化合物19按照一般方法C通过用10％甲醇的KOH(1mL)处理19b(0.05g，0.11mmol)在甲醇(1mL)中的醋酸酯溶液3h来制备。在短柱上通过FCC的纯化提供了纯的19(0.03g，55％)，熔点169-179℃；IR(纯的)3339,2933,1614,1501,1450,1283,1068,906,813,728cm^-1；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ1.01(s,3H,18-CH₃),1.06(s,3H,19-CH₃),3.58(m,1H,3α-H),3.86(s,3H,-OCH₃),5.41(t,1H,J＝2.42Hz,6-H),5.95(t,1H,J＝1.48Hz,16-H),6.92(m,2H,芳族-H),7.67(m,1H,芳族-H)和7.58(s,1H,2'-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ157.32,147.6,141.5,137.9,135.4,124.0,121.2,120.7,111.6,95.2,71.7,56.2,50.7,47.5,42.5,37.4,35.1,31.8,30.6,20.9,19.5,16.2；HRMS计算值441.2512(C₂₇H₃₄O₂N₂.Na⁺)，发现值441.2507。

3β-羟基-17-(1H-苯并[f]苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(20)：化合物20按照一般方法C通过用10％甲醇的KOH(1mL)处理20b(0.1g，0.32mmol)在甲醇(5mL)中的醋酸酯溶液3h来制备。通过从EtOAc/甲醇的重结晶的纯化得到了纯的20(0.075g，74％)，熔点150-152℃；IR(CHCl₃)2934,2339,1609,1490,1453,1291,1040,837,808,705,663,608,578,550,517cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.09(s,6H,18和19-CH₃),3.57(m,1H,3α-H),5.44(br,s,6-H),6.13(s,1H,16-H),7.44(m,2H,芳族-H),7.94(m,2H,芳族-H),8.03(m,1H,芳族-H),8.18(s,1H,芳族-H)和8.31(s,1H,2'-H)。HRMS计算值461.2563(C₃₀H₃₄N₂O.Na+)，发现值461.2570。

3β-羟基-17-(6-氯-9H-嘌呤-9-基)-雄甾-5,16-二烯(21)：化合物21按照一般方法C通过用10％甲醇的KOH(1mL)处理21b(0.04g，0.085mmol)在甲醇(1mL)中的醋酸酯溶液3h来制备。在短柱上通过FCC的纯化[DCM/甲醇/TEA(9.7:0.3:0.05)]获得了纯的21(0.03g，82.6％)，熔点272-274℃；IR(纯的)3385,2928,2604,2498,1664,1516,1433,1346,1040,805,cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.12(s,3H,18-CH₃),1.23(s,3H,19-CH₃),3.50(m,1H,3α-H),5.41(br,1H,6-H),5.59(s,1H,16-H),8.11(s,1H,2'-H),8.40(s,1H,芳族-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ164.1,153.4,141.6,139.4,121.9,120.8,71.2,56.3,53.1,50.1,47.0,46.0,36.9,31.2,19.5,15.0,11.7,8.9,8.8；HRMS计算值871.3952(C₂₄H₂₉ClON₄)₂.Na⁺，发现值871.3972。

3β-羟基-17-(2-氯-1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(22)：化合物22按照一般方法C通过用10％甲醇的KOH(1mL)处理22b(0.03g，0.064mmol)在甲醇(0.75mL)中的醋酸酯溶液3h来制备。在短柱上通过FCC的纯化[石油醚/EtOAc(7:3)]获得了纯的22(0.025g，91.6％)，熔点83-86℃；IR(纯的)3346,2929,1449,1267,1121,1071,1040,742cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.05(br,6H,18和19-CH₃),3.54(m,1H,3α-H),5.41(br,1H,6-H),6.04(m,1H,16-H),7.25(m,1H,芳族-H),7.31(m,1H,芳族-H)和7.68(m,2H,芳族-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ141.5,133.2,129.9,123.3,121.2,111.5,71.9,55.9,50.8,42.5,38.9,37.3,37.0,34.0,31.8,30.6,24.0,23.2,20.73,19.5,17.3,16.4；HRMS计算值445.2017(C₂₈H₃₆ON₂.Na⁺)，发现值445.2020。

一般方法D：3β-乙酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-16-((烷基/芳基亚氨基)甲基)-雄甾-5,16-二烯(23、26和29)的合成：标题化合物通过在Ar下使3β-乙酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-16-甲酰雄甾-5,16-二烯(14)(1当量的溶)液、相应的伯胺(2当量)、分子筛(～25％的14的重量)和乙醇回流3-12h来制备。过滤反应混合物，在真空下浓缩，用水搅拌残余物并且过滤获得的粗产物。在硅胶柱上通过FCC的纯化[石油醚/EtOAc(1:1)]，得到了期望的纯化合物。合成以上列出的化合物(使用反应物、试剂和溶剂比)，通过使用该方法分离并且纯化，除非另有陈述。

3β-乙酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-16-((EZ)-(异戊基亚氨基)甲基)-雄甾-5,16-二烯(23)：化合物23通过按照一般方法D使14(0.4g，0.87mmol)、异戊胺(0.15g，1.7mmol)、分子筛(0.2g)在乙醇(5mL)中回流3小时来制备。接下来，通过FCC的纯化得到了0.41g(89％)的23：熔点，在135℃烧结，在145℃熔化；IR(纯的)2934,2851,1726,1676,1640,1490,1453,1247,1219,1032,744cm^-1；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ0.87(d,6H,脂肪族-CH₃),1.07(s,3H,18-CH₃),1.16(s,3H,19-CH₃),2.06(s,3H,3β-OCOCH₃),4.64(m,1H,3α-H),5.46(br.s,1H,6-H),7.30(s,1H,亚胺-CH),7.34(m,2H,芳族-H),7.72(s,1H,芳族-H),7.87(s,1H,芳族-H)和7.94(s,1H,2'-H)。

一般方法E：3β-乙酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-16-((烷基/芳基氨基)甲基)-雄甾-5,16-二烯(24、27和30)的合成：向16-烯胺(23/26/30)(1摩尔当量)在甲醇中的冰冷溶液，历时30分钟，分三部分添加NaBH₄(0.5摩尔当量)。反应继续持续1.5-5h，然后用乙酸中和，蒸发，残余物用水处理并且过滤。将粗产物带至下一个步骤，而不用纯化。

3β-乙酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-16-((异戊基氨基)甲基)-雄甾-5,16-二烯(24)：化合物24通过按照一般方法E使23(0.1g，0.2mmol)在甲醇(1.5mL)中与NaBH₄(0.0035g，0.09mmol)反应1.5h来制备。将粗产物24(0.09g，89％)带至下一个步骤，而不用纯化。

3β-羟基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-16-((异戊基氨基)甲基)-雄甾-5,16-二烯(25)：化合物25通过按照一般方法C10％甲醇的KOH(0.75mL)处理粗制的醋酸酯24(0.08g，0.15mmol)的甲醇溶液(1mL)3h来制备。接下来，通过穿过短二氧化硅床的纯化[DCM/乙醇(9.5:0.5)]以得到25(0.065g，88％)，熔点111-113℃；IR(纯的)3281,2927,2850,1487,1454,1374,1224,1061,1007,765,cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ0.81(d,6H,脂肪族-CH₃),1.04(s,6H,18,19-CH₃),3.55(m,1H,3α-H),5.41(br,1H,6-H),7.19-7.43(m,3H,芳族-H),7.75-7.82(m,1H,芳族-H)和8.1(s,1H,2'-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ142.8,140.0,134.8,123.4,122.4,120.2,110.8,71.5,55.9,50.7,48.9,42.3,38.9,36.8,34.6,,32.4,31.6,30.3,26.0,22.6,20.5,19.3,16.0,15.8；HRMS计算值510.3454(C₃₂H₄₅ON₃.Na⁺)，发现值510.34509。

3β-乙酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-16-((EZ)-(苯基亚氨基)甲基)-雄甾-5,16-二烯(26)：化合物26通过按照一般方法D使14(0.15g，0.33mmol)、苯胺(0.06g，0.65mmol)、分子筛(0.04g)在乙醇(2mL)中回流3h来制备。通过穿过二氧化硅床的纯化得到了0.15g(85.9％)的26：熔点，在85-90℃烧结,在125℃熔化；IR(纯的)2973,2932,2822,1727,1635,1589,1486,1453,1239,1219,1029,764cm^-1；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ1.10(s,3H,18-CH₃)1.23(s,3H,19-CH₃),2.06(s,3H,3β-OCOCH₃),4.65(m,1H,3α-H),5.49(br,1H,6-H),6.96(m,2H,芳族-H)7.17(m,1H,芳族-H)7.26(s,1H,亚胺-CH),7.35(m,4H,芳族-H),7.87(m,1H,芳族-H),7.94(m,1H,芳族-H)和7.99(s,1H,2'-H)。

3β-乙酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-16-((苯基氨基)甲基)-雄甾-5,16-二烯(27)：化合物27通过按照一般方法E使26(0.1g，0.19mmol)在甲醇(1.5mL)中与NaBH₄(0.0035g，0.09mmol)反应1.5h来制备。将粗产物27带至下一个步骤，而不用纯化。

3β-羟基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-16-((苯基氨基)甲基)-雄甾-5,16-二烯(28)：化合物28通过按照一般方法C用10％甲醇的KOH(0.75mL)处理粗制的醋酸酯27的甲醇溶液(1mL)3h来制备。接下来，通过穿过短二氧化硅床的纯化[DCM/乙醇(9.5:0.5)]得到了28(0.08g，86％)，熔点130-132℃；IR(纯的)3329,2928,2852,1602,1418,1375,1217,1058,1007,833,cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.03(s,3H,18-CH₃),1.04(s,3H,19-CH₃),3.54(m,1H,3α-H),3.65(br.s,2H,-CH₂),5.38(t,1H,J＝2.62Hz,6-H),6.40(t,2H,J＝8.8Hz,芳族-H),6.69(d,1H,J＝7.3Hz,芳族-H),7.08(m,2H,芳族-H),7.20-7.33(m,3H,芳族-H),7.74-7.84(m,1H,芳族-H)和7.79(s,1H,2'-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ147.6,141.3,138.7,123.7,122.5,129.9,120.4,118.0,113.0,110.8,71.6,54.7,50.6,48.0,42.2,36.8,34.4,32.4,31.1,30.3,20.5,19.3,15.8。HRMS计算值516.2985(C₃₃H₃₉ON₃.Na⁺)，发现值516.2981。

3β-乙酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-16-((EZ)-((3,4-二甲氧基苯基)亚氨基)甲基)-雄甾-5,16-二烯(29)：化合物29通过按照一般方法D使14(0.3g，0.65mmol)、3,4-二甲氧基苯胺(0.2g，1.3mmol)、分子筛(0.075g)在乙醇(2mL)中回流过夜来制备。通过FCC的纯化[石油醚/EtOAc(1:1)]得到了0.29g(74.5％)29：熔点，在115℃烧结,在130℃熔化；IR(纯的)2937,2904,2852,1729,1586,1509,1451,1372,1233,1125,1026,765cm^-1；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ1.10(s,3H,18-CH₃)1.23(s,3H,19-CH₃),2.06(s,3H,3β-OCOCH₃),3.84(m,6H,2XOCH₃),4.64(m,1H,3α-H),5.48(br.s,1H,6-H),6.56(m,2H,芳族-H)6.73(m,1H,芳族-H)7.36(m,3H,芳族-2H和亚胺-CH),7.88(m,1H,芳族-H),7.95(m,1H,芳族-H)和8.00(s,1H,2¹-H)。

3β-乙酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-16-((3,4-二甲氧基苯基)亚胺)甲基)-雄甾-5,16-二烯(30)：化合物30通过按照一般合成方法E使29(0.15g，0.25mmol)在甲醇(2.5mL)中与NaBH₄(0.05g，0.126mmol)反应5h来制备。将粗产物30带至下一个步骤，而不用纯化。

3β-羟基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-16-((3,4-二甲氧基苯基)氨基)甲基)-雄甾-5,16-二烯(31)：化合物31通过按照方法C用10％甲醇的KOH(0.75mL)处理粗制的醋酸酯30的甲醇溶液(2mL)来制备。随后，通过FCC纯化[DCM/乙醇(9.7:0.3)]以得到31(0.11g，79.6％)，熔点，在120℃烧结，在135℃熔化；IR(纯的)3351,2929,2852,1612,1514,1454,1229,1136,1025,765,cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.03(s,3H,18-CH₃),1.09(s,3H,19-CH₃),3.53(m,1H,3α-H),3.61(br,2H,N-CH₂),3.74-3.77(s,6H,2XOCH₃),5.37(br,1H,6-H),5.95(br,1H,芳族-1”-H),6.04(d,J＝2.6Hz,1H,芳族-5”-H),6.64(br,1H,芳族-6”-H),7.21-7.31(m,3H,芳族-H),7.74-7.83(m,1H,芳族-H)和7.79(s,1H,2'-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ149.9,142.2,138.8,123.7,122.5,120.9,112.9,110.3,103.8,99.4,71.5,56.6,55.7,50.6,48.3,42.8,4.1,34.7,32.2,31.1,30.0,20.5,19.3,15.8。HRMS计算值576.3196(C₃₅H₄₃O₃N₃.Na⁺)，发现值576.3188。

17-(1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-4,16-二烯-3-酮(32)：该化合物由如之前描述的5制备，提供如报道的光谱数据和分析数据。²⁴¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ199.4,170.5,147.2,143.5,141.1,134.7,124.3,124.3,123.5,122.6,122.5,111.3,54.3,54.2,47.4,38.9,35.9,35.8,34.1,33.8,32.8,31.4,30.4,17.5,17.3,16.3。

17-(1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯-3-酮(33)：向5(0.05g，0.13mmol)在干燥的DCM(3mL)中的冰冷溶液添加戴斯-马丁高碘烷(0.11g，0.26mmol)并且使混合物在冰冷温度下搅拌5h。然后，将其用乙醚稀释并且用饱和的含水的NaHCO₃/Na₂S₂O₃(1:3)的混合物淬火。有机层用盐水洗涤并且用Na₂SO₄干燥，然后，在真空下蒸发溶剂并且通过FCC[DCM/乙醇/TEA(30:1:0.05)]纯化粗产物，以得到标题化合物33(0.035g，70％)：熔点170-172℃；IR(纯的)2941,1711,1491,1451,1226,751cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.05(s,3H,18-CH₃),1.24(s,3H,19-CH₃),5.41(t,1H,J＝2.5Hz,6-H),5.99(br,1H,16-H),7.30(m,2H,芳族-H),7.49(d,J＝6.9Hz,1H,芳族-H),7.81(m,1H,芳族-H)和7.96(s,1H,2'-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ209.9,147.3,143.5,139.2,134.8,124.3,123.5,122.8,122.6,122.0,120.5,111.3,56.0,49.9,49.7,47.5,37.74,37.4,37.0,31.3,31.1,30.4,19.3,19.2,16.8,16.2。HRMS计算值409.2250(C₂₆H₃₀ON₂.Na⁺)，发现值409.2258。

3β-甲磺酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(34)：向5(0.4g，1.03mmol)在吡啶(5ml)中的冰冷溶液添加甲磺酰氯(0.68g，6mmol)的。反应混合物在0℃下搅拌5h，然后，室温持续8h并且用75ml冰-水混合物淬火。使生成的黄色固体过滤、洗涤、干燥，并且通过FCC[DCM/乙醇(1.5％)]纯化粗产物，以得到标题化合物34(0.4g，83％)，熔点177-179℃(文献¹⁵149-150℃)；IR(纯的)2944,1486,1452,1326,1170,938,765cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.03(s,3H,18-CH₃),1.09(s,3H,19-CH₃),3.03(s,3H,甲磺酰基-H),4.56(m,1H,3α-H),5.49(br,1H,6-H),6.0(m,1H,16-H),7.30(m,2H,芳族-H),7.49(m,1H,芳族-H),7.82(m,1H,芳族-H)和7.97(s,1H,2'-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ147.1,143.3,141.6,139.1,134.6,123.4,120.2,81.6,55.7,50.3,47.2,39.2,36.8,34.8,31.1,28.9,20.6,19.1,16.0。HRMS计算值955.4472(C₂₆H₃₀ON₂)₂Na⁺，发现值955.4468。

3β-甲苯磺酰氧基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(35)：向5(0.1g，0.26mmol)在吡啶(3ml)中的冷(0℃)溶液添加将甲苯磺酰氯(0.06g，0.31mmol)。反应混合物在0℃下搅拌5h，然后，室温持续3h并且用30ml冰-水混合物淬火。使生成的黄色固体过滤、洗涤、干燥并且通过FCC[DCM/乙醇(1.0％)]纯化粗产物。将生成的粘性固体溶解于1.5ml的EtOAc中，并且随着搅拌缓慢添加约10ml的石油醚，使生成的浑浊溶液在室温下搅拌30min，以得到标题化合物35的自由流动的固体(0.115g，84.5％)，熔点139-141℃；IR(纯的)2948,2850,1490,1451,1329,1171,917,740cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ0.99(s,3H,18-CH₃),1.01(s,3H,19-CH₃),2.44(s,3H,4”-CH₃),4.35(m,1H,3α-H),5.37(m,1H,6-H),5.97(m,1H,16-H),7.25-7.34(m,3H,芳族-H),7.35-7.37(m,2H,2”,6”-Hs),7.48(m,1H,芳族-H),7.79(m,3H,芳族-H和3”,5”-H)和7.95(s,1H,2'-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ147.0,144.5,141.6,139.3,134.6,129.8,127.6,123.5,122.5,120.6,111.1,82.1,55.7,50.3,47.2,38.9,36.8,34.8,30.3,28.5,21.7,20.57,19.1。HRMS计算值565.2495(C₃₃H₃₈O3N₂S.Na⁺)，发现值565.2506。

一般方法F：3-(取代的-肟基)-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-4,16-二烯(36-39)：向酮32(1摩尔当量)在乙醇-甲醇(2:1)的溶剂混合物中的回流溶液添加醋酸钠(9.4摩尔当量)、相应的取代的羟胺盐酸盐(10.5摩尔当量)在蒸馏水(10摩尔当量)中的溶液。回流持续2-3h，然后浓缩，用水处理残余物并且过滤粗产物。使用5％乙醇的DCM在二氧化硅上的纯化FCC得到了纯的肟。

3-((EZ)-羟肟基)-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-4,16-二烯(36)：化合物36通过按照一般方法F来制备。向32(0.08g，0.194mmol)在乙醇-甲醇(2mL)中的回流溶液添加醋酸钠(0.15g，1.83mmol)、羟胺.HCl(0.07g，2.04mmol)在0.75ml蒸馏水中的溶液。回流持续2h，并且随后通过FCC的纯化得到了纯的化合物(EZ异构体的混合物)36(0.06g，77％)：熔点，在145℃烧结，在155-160℃熔化；IR(纯的)3181,2929,2853,1609,1453,1226,847cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.02(s,3H,18-CH₃),1.11-1.15(s,3H,19-CH₃),(s,1H,4-H)的5.81和6.52(对于E和Z异构体分别为～57％和33％),5.95(br,1H,16-H),7.30(m,2H,芳族-H),7.47(m,1H,芳族-H),7.81(m,1H,芳族-H)和7.95(s,1H,2'-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ158.64,156.6,154.5,147.0,142.9,134.5,124.3,122.6,117.8,111.2,55.3,54.2,47.3,38.1,34.6,32.8,30.3,24.6,20.9,18.7,17.9,16.1。HRMS计算值424.2359(C₂₆H₃₁ON₃.Na⁺)，发现值424.2363。

36的E和Z异构体的分离：首先，EZ混合物使用石油醚和EtOAc(1:1)混合物通过FCC来纯化。这对单独异构体提供了较好的纯度，各自在彼此中具有微小的污染。主要产物36E通过用热的EtOAc重结晶来进一步纯化，这产生纯的单一异构体36E：熔点218-221℃；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)ppm1.02(s,3H,18-CH₃),1.11(s,3H,19-CH₃),5.85(s,1H,4-H),5.98(s,1H,16-H),7.28-7.36(m,2H,芳族-H),7.44-7.55(m,1H,芳族-H),7.79-7.88(m,1H,芳族-H),7.97(s,1H,2'-H),9.04(br.s.,1H,-OH)；¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)ppm156.7,154.4,147.1,143.1,141.6,134.5,124.1,123.5,122.5,120.2,117.9,111.1,55.3,54.0,47.3,38.1,34.8,34.6,34.2,32.2,31.5,30.2,21.1,18.7,17.6,16.1。其中，36Z使用石油醚、EtOAc(1:1)作为溶剂体系通过制备TLC来进一步纯化：熔点158-162℃；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)ppm1.02(s,3H,18-CH₃),1.15(s,3H,19-CH₃),5.97(brs.,1H,16-H),6.53(s,1H,4-H),7.27-7.34(m,2H,芳族-H),7.44-7.52(m,1H,芳族-H),7.76-7.87(m,1H,芳族-H),7.7(s,1H,2'-H),8.87(br.s.,1H,-OH)；¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)ppm158.5,147.0,143.1,141.6,134.5,124.2,123.5,122.6,120.2,117.7,111.1,55.2,54.2,47.3,39.0,38.1,36.1,34.8,34.2,32.8,31.8,30.2,24.7,20.9,17.9,16.1。

3-((EZ)-O-苯基肟)-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-4,16-二烯(37)：化合物37通过按照一般方法F来制备。向32(0.05g，0.13mmol)在乙醇-甲醇(2mL)中的回流溶液添加醋酸钠(0.1g，1.22mmol)、苯氧基胺.HCl(0.2g，1.35mmol)在0.5ml蒸馏水中的溶液。回流持续2h，并且随后通过FCC的纯化得到了化合物(EZ异构体的混合物)37(0.04g，64％)：熔点96-98℃；IR(纯的)2935,2854,1627,1590,1487,1216,897cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.05(s,3H,18-CH₃),1.16-1.20(s,3H,19-CH₃),6.00(s,1H,4-H和16-H),6.00和6.67(E和Z异构体分别为～55％和45％)(s,1H,4-H),7.01(m,1H,芳族-H),7.22(m,2H,芳族-H),7.32(m,4H,芳族-H),7.52(m,1H,芳族-H),7.83(m,1H,芳族-H)和7.97(s,1H,2'-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ160.6,159.5,158.0,156.0,147.1,129.2,124.2,123.5,121.7,120.2,117.4,114.7,111.2,55.3,55.0,47.3,38.2,36.0,34.1,32.4,30.2,24.6,21.0,20.0,17.6,16.1。HRMS计算值500.2672(C₃₂H₃₅ON₃.Na⁺)，发现值500.2677。

3-((EZ)-O-甲基肟)-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-4,16-二烯(38)：化合物38通过按照一般方法F来制备。向32(0.075g，0.194mmol)在乙醇-甲醇(2mL)中的回流溶液添加醋酸钠(0.15g，1.83mmol)、甲氧胺.HCl(0.17g，2.04mmol)在0.75ml蒸馏水中的溶液。回流持续3h，并且随后通过FCC的纯化得到了化合物(EZ异构体的混合物)38(0.072g，89％)：熔点94-96℃；IR(纯的)2935,2854,1628,1489,1452,1226,1050,743cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.04(s,3H,18-CH₃),1.11(s,3H,19-CH₃),3.89(s,3H,OCH₃),5.83和6.44(E和Z异构体分别为～69％和31％)(s,1H,4-H),6.03(m,1H,16-H),7.35(m,2H,芳族-H),7.53(m,1H,芳族-H),7.87(m,1H,芳族-H)和8.06(s,1H,2'-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ158.7,156.0,154.5,153.1,146.7,125.2,124.0,123.3,119.6,117.7,111.2,61.6,55.3,54.2,47.3,38.0,34.2,32.2,31.5,30.3,24.7,21.0,19.2,17.6,16.1。HRMS计算值438.2515(C₂₇H₃₃ON₃.Na⁺)，发现值438.2520。

3-((EZ)-(O-苯基甲基)肟)-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-4,16-二烯(39)：化合物39通过按照一般方法F来制备。向32(0.075g，0.194mmol)在乙醇-甲醇(2mL)中的回流溶液添加醋酸钠(0.15g，1.83mmol)、苄氧胺.HCl(0.33g，2.04mmol)在0.75ml整流水中的溶液。回流持续3h，并且随后通过FCC的纯化得到了在储存时凝固的化合物(EZ异构体的混合物)39(0.092g，96％)：熔点，在66-68℃烧结，在77-79℃熔化；IR(纯的)2935,2854,1627,1609,1489,1452,1225,1015,864cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.03(s,3H,18-CH₃),1.10(s,3H,19-CH₃),5.10(s,2H,OCH₂),5.83和6.52(E和Z异构体分别为～69％和31％)(s,1H,4-H),5.97(s,1H,16-H),7.25(br,3H,芳族-H),7.37(m,4H,芳族-H),7.48(m,1H,芳族-H),7.82(m,1H,芳族-H)和7.95(s,1H,2'-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ156.4,154.6,153.5,147.0,138.1,127.9,122.8,120.0,117.8,111.3,55.4,54.0,47.3,38.0,34.6,32.2,30.3,24.7,21.0,19.6,17.9,16.1。HRMS计算值514.2828(C₃₃H₃₇ON₃.Na⁺)，发现值514.2834。

3-甲基-3-羟基-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-4,16-二烯(40)：在-60℃下，向酮(32)(0.1g，0.26mmol)在干燥的THF(3mL)中的溶液添加MeLi(1.6M乙醚溶液，0.41mL，0.60mmol)，并且使得到的混合物在0℃下搅拌1h，然后室温持续3h。反应用饱和的含水的NH₄Cl淬火并且用EtOAc萃取。有机层用盐水洗涤并且用Na₂SO₄干燥，并且在真空下除去溶剂。残余物通过短FCC纯化[石油醚,EtOAc,TEA(60:40:0.5)]以提供产物40(0.05g，48％)；熔点95-97℃；IR(纯的)3329,2827,2853,1489,1453,1376,1292,1226,1133,918,741cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.00(s,3H,18-CH₃),1.07(s,3H,19-CH₃),1.27(s,3H,C3-CH₃),5.25(t,J＝1.6Hz,1H,6-H),5.96(t,1H,J＝1.52Hz,16-H),7.29(m,2H,芳族-H),7.49(m,1H,芳族-H),7.82(dd,J＝7.0,2.6Hz,1H,芳族-H)和7.95(s,1H,2'-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ145.3,127.6,124.4,123.6,122.7,120.4,111.4,70.1,55.7,54.8,37.8,35.6,35.3,34.7,32.5,30.4,28.5,21.1,18.8,16.3。HRMS计算值425.2563(C₂₇H₃₄ON₂.Na⁺)，发现值425.2570。

一般方法G：用于合成芳族/杂芳族的酯(41-44)的混合酸酐法：将2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(0.39mmol)添加至吡啶羧酸(0.386mmol)和DMAP(0.29mmol)在THF(1ml)中的溶液，并且使得到的混合物在室温下静置5min。将5(0.193mmol)在THF(1ml)中的溶液与上述试剂混合物混合并且然后与TEA(0.1ml)混合。允许该反应混合物在室温下静置2h。在微量的TEA(0.06％)的存在下，使反应混合物在二氧化硅上吸收并且使用DCM中的2％乙醇通过FCC纯化。按与上述方法相似的方式合成甲基吡啶基(picolinoyl)、烟酰基、异烟酰基和1,3-苯基二乙酸酯衍生物。TLC和¹HNMR和HRMS分析揭示出，缺少衍生自2-甲基-6-硝基苯甲酸酐的其他酯的存在。

3β-(吡啶-2-羧酸酯)-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(41)：化合物41通过按照一般方法G使用2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(0.13g，0.39mmol)、吡啶甲酸(0.05g，0.39mmol)、4-DMAP(0.04g，0.29mmol)、THF(1ml)、5(0.075g，0.19mmol)、THF(1ml)和TEA(0.1ml)来制备。FCC得到了纯的41(0.09g，90％)：熔点243-44℃；IR(纯的)2942,2852,1729,1496,1286,1227,1139,754cm^-1；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ1.03(s,3H,18-CH₃),1.12(s,3H,19-CH₃),4.99(m,1H,3α-H),5.49(t,1H,J＝1.98Hz,6-H),5.99(t,1H,J＝1.42Hz,16-H),7.32(m,2H,芳族-H),7.46-7.50(m,2H,甲基吡啶基-5-H和芳族-H),7.80-7.84(m,1H,芳族-H)和(1H,甲基吡啶基-4-H),7.96(s,1H,2'-H),8.15(br,1H,甲基吡啶基-3-H),8.79(m,1H,甲基吡啶基-6-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ164.9,150.1,148.7,143.4,141.8,140.2,137.2,134.7,127.0,125.4,124.4,123.6,122.7,120.3,111.4,75.6,56.0,50.6,47.4,38.2,37.2,35.0,31.3,30.5,27.8,20.82,19.5,17.0。HRMS计算值516.2621(C₃₂H₃₅O₂N₃.Na⁺)，发现值516.2614。

3β-(吡啶-3-羧酸酯)-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(42)：化合物42通过按照一般方法G使用2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(0.13g，0.39mmol)、烟酸(0.05g，0.39mmol)、4-DMAP(0.035g，0.29mmol)、THF(1ml)、5(0.075g，0.19mmol)、THF(1ml)和TEA(0.1ml)来制备。FCC得到了纯的42(0.85g，89％)：熔点206-207℃；IR(纯的)3435,2942,2851,1710,1496,1285,1120,cm^-1；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ1.03(s,3H,18-CH₃),1.13(s,3H,19-CH₃),4.93(m,1H,3α-H),5.49(br,1H,6-H),5.99(t,1H,J＝1.46Hz,16-H),7.32(m,2H,芳族-H),7.41(m,1H,烟酰基-5-H),7.50(m,1H,芳族-H),7.83(m,1H,芳族-H),7.98(s,1H,2'-H),8.33(m,1H,烟酰基-4-H),8.79(m,1H,烟酰基-6-H),9.23(br.s,1H,烟酰基-2-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ164.9,153.5,151.1,147.3,141.8,140.0,137.3,126.8,124.4,123.6,122.7,120.4,111.4,75.2,55.0,50.6,47.4,38.3,37.1,35.0,31.3,30.5,20.8,19.5,16.2。HRMS计算值516.2621(C₃₂H₃₅O₂N₃.Na⁺)，发现值516.2617。

3β-(吡啶-4-羧酸酯)-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(43)：化合物43通过按照一般方法G使用2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(0.13g，0.39mmol)、异烟酸(0.05g，0.39mmol)、4-DMAP(0.035g，0.29mmol)、THF(1ml)、5(0.075g，0.19mmol)、THF(1ml)和TEA(0.1ml)来制备。FCC得到了纯的43(0.064g，67％)：熔点184-85℃；IR(纯的)2944,2953,1719,1489,1282,1124,745cm^-1；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ1.03(s,3H,18-CH₃),1.13(s,3H,19-CH₃),4.90(m,1H,3α-H),5.49(br,1H,6-H),5.99(s,1H,16-H),7.30(m,2H,芳族-H),7.49(m,1H,芳族-H),7.81(m,1H,芳族-H),7.85(m,2H,异烟酰基-3,5-Hs),7.96(s,1H,2'-H)和8.78(m,2H,异烟酰基-2,6-Hs)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ164.7,150.8,147.4,143.5,141.8,139.9,138.1,134.8,124.3,123.6,122.7,120.4,111.3,75.6,56.0,50.6,47.4,38.2,37.0,35.0,31.3,30.5,27.9,19.5,16.2。HRMS计算值516.2621(C₃₂H₃₅O₂N₃.Na⁺)，发现值516.2615。

3β-(3-(氧羰基)苯乙酸-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(44)：化合物41通过按照一般方法G来制备，向1,3-苯基二乙酸(0.1g，0.51mmol)和DMAP(0.05g，0.39mmol)在THF(2ml)中的溶液添加2-甲基-6-硝基苯甲酸酐(0.18g，0.51mmol)、5(0.1g，0.26mmol)、THF(1ml)和TEA(0.15ml)。FCC得到了纯的44(0.055g，39.81％)：熔点222-23℃；IR(纯的)2944,1734,1610,1454,1337,1204,1165,1003749cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ0.99(s,3H,18-CH₃),1.05(s,3H,19-CH₃),3.59(s,2H,CH₂-Hs),3.64(s,2H,CH₂-Hs),4.63(m,1H,3α-H),5.40(br,1H,6-H),5.98(m,1H,16-H),7.18-7.23(m,3H,芳族-H),7.27-7.31(m,3H,芳族-H),7.47(m,1H,芳族-H),7.81(m,1H,芳族-H)8.01(s,1H,2'-H)；¹³CNMR(400MHz,CDCl₃)δ171.2,147.1,141.8,140.3,135.0,134.6,130.5,128.9,128.0,125.0,123.9,122.16,120.0,111.5,74.4,56.0,50.5,47.4,45.6,41.8,38.2,37.0,37.0,31.3,30.5,27.82,20.8,19.4,16.1,8.7。HRMS计算值587.2880(C₃₆H₄₀O₄N₂.Na⁺)，发现值587.2876。

3β-(6-(环己-3-烯羧酸)羧酸酯)-17-(1H-1-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(45)：使5(0.1g，0.26mmol)、DMAP(0.035g，0.28mmol)、1,2,3,6-四氢邻苯二甲酸酐(0.13g，0.85mmol)和吡啶(3mL)的混合物回流3小时。冷却至室温并且用水淬火。沉淀物用EtOAc萃取，用Na₂SO₄干燥，蒸发，并且残余物通过FCC纯化[石油醚/EtOAc/TEA(9.5:0.3:0.2)]以得到0.1g(71.9％)的纯的化合物45：熔点178-179℃；IR(纯的)2931,1724,1453,1225,1195和743cm^-1；¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ0.99-1.04(m,6H,18-CH₃和19-CH₃),4.64(m,1H,3α-H),5.40(br,1H,6-H),5.69(m,2H,己基-4,己基-5,Hs),5.96(s,1H,16-H),7.30(m,2H,芳族-H),7.50(d,1H,芳族-H),7.84(1H,m,芳族-H)8.05(s,1H,2'-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ177.3,173.5,1401.0,126.0,125.3,124.8,123.8,123.0,121.9,120.0,111.4,73.8,55.9,50.5,47.4,45.4,40.7,38.2,37.1,34.9,31.3,30.5,27.7,26.4,19.4,16.2,8.8。HRMS计算值563.2880(C₃₄H₄₀N₂O₄.Na⁺)，发现值563.2879。

3β-(氧羰基-(甲氧基)乙酸)-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(46)：使5(0.1g，0.26mmol)、DMAP(0.035g，0.28mmol)、二甘醇酐(0.1g，0.85mmol)和吡啶(3mL)的混合物回流3小时。冷却至室温并且用水淬火。沉淀物用EtOAc萃取，用Na₂SO₄干燥，蒸发，并且残余物通过FCC纯化[石油醚/EtOAc/TEA(9.5:0.3:0.2)]以得到0.05g(28.6％)的纯的化合物46：熔点214-215℃；IR(纯的)2934,1722,1456,1225,1147和745cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.01(s,3H,18-CH₃),1.07(s,3H,19-CH₃),4.25(s,2H,CH₂),4.26(s,2H,CH₂),4.74(m,1H,3α-H),5.45(br,1H,6-H),6.00(m,1H,16-H),7.32(m,2H,芳族-H),7.49(m,1H,芳族-H),7.82(m,1H,芳族-H),8.06(s,1H,2'芳族-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)；δ172.9,169.9,147.0,141.7,140.0,134.4,125.4,124.2,123.4,119.7,111.6,75.0,69.1,68.8,56.0,50.5,47.4,38.2,37.0,34.9,31.3,31.1,30.5,27.8,20.8,19.4,16.2。HRMS计算值527.2516(C₃₀H₃₆N₂O₅.Na⁺)，发现值527.2516。

3β-(1H-咪唑-羧酸酯)-17-(1H-1-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(47)：使5(0.15g，0.38mmol)、CDI(0.125g，0.77mmol)在无水乙腈(2mL)和DCM(1mL)中的溶液在室温下搅拌2h。然后蒸发溶剂，用水处理残余物，并且用DCM萃取。在蒸发溶剂时得到的粗制白色产物在微量的TEA(0.06％)的存在下使用DCM中的1.7％甲醇通过FCC来纯化，以得到47(0.135g，72％)：熔点194-96℃；IR(纯的)2965,2923,2839,1754,1488,1452,1392,1292,834,773cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.03(s,3H,18-CH₃),1.12(s,3H,19-CH₃),4.85(m,1H,3α-H),5.51(br,1H,6-H),5.99(s,1H,16-H),7.07(s,1H,4”-H),7.30(m,2H,芳族-H),7.43(s,1H,芳族-H),7.49(m,1H,5”-H)7.81(m,1H,芳族-H),7.96(s,1H,2'-H)和8.13(s,1H,2”-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ148.1,147.1,143.3,141.3,139.1,137.1,134.6,130.6,124.1,123.1,120.2,117.1,111.1,78.4,55.7,50.6,47.2,37.9,36.8,34.8,31.1,30.3,27.6,20.6,19.3,16.0。HRMS计算值505.2573(C₃₀H₃₄O₂N₄.Na⁺)，发现值505.2577。

3β-(2-甲基-1H-咪唑-1-羧酸酯)-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(48)：使5(0.075g，0.193mmol)、1,1-羰基双(2-甲基咪唑)(0.05g，0.214mmol)在无水乙腈(1.5mL)和DCM(0.75mL)中的溶液回流过夜。蒸发溶剂，用水处理残余物，并且用DCM萃取。在蒸发溶剂是得到的粗制白色产物在微量的TEA(0.06％)的存在下使用DCM中的4％乙醇通过FCC来纯化。产物用石油醚磨碎以得到48(0.065g，67％)：熔点186-187℃；IR(纯的)2935,2855,1749,1452,1394,1291,1146,983cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.03(s,3H,18-CH₃),1.12(s,3H,19-CH₃),2.64(s,3H,2”-CH₃),4.80(m,1H,3α-H),5.51(m,1H,6-H),5.99(m,1H,16-H),6.84(s,1H,5”-H),7.29(m,2H,芳族-H),7.35(s,1H,芳族-H),7.48(m,H,芳族-H)7.81(m,1H,4”-H)和7.96(s,1H,2'-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ149.0,147.9,147.1,143.3,141.6,139.2,134.6,127.8,123.4,122.5,120.2,118.1,111.1,78.0,55.7,50.3,47.2,38.0,36.8,34.8,31.1,30.3,27.7,20.6,19.3,16.9,16.0。HRMS计算值519.2730(C₃₁H₃₆O₂N₄.Na⁺)，发现值519.2730。

3β-(1H-1,2,4-三唑-1-羧酸酯)-17-(1H-苯并咪唑-1-基)-雄甾-5,16-二烯(49)：使5(0.15g，0.386mmol)、CDT(0.19g,1.16mmol)在无水乙腈(3mL)和DCM(1.5mL)中的溶液回流3h。蒸发溶剂，用水处理残余物，并且用DCM萃取。在蒸发溶剂是得到的粗制白色产物在微量的TEA(0.06％)的存在下使用DCM中的4％乙醇通过FCC来纯化。产物用石油醚磨碎以得到49(0.15g，80％)：熔点205-206℃；IR(纯的)2950,2855,1776,1489,1375,1289,978,750cm^-1；¹HNMR(500MHz,CDCl₃)δ1.03(s,3H,18-CH₃),1.12(s,3H,19-CH₃),4.96(m,1H,3α-H),5.52(m,1H,6-H),5.99(s,1H,16-H),7.30(m,2H,芳族-H),7.50(t,1H,J＝3.8Hz,芳族-H),7.81(m,H,芳族-H),7.96(s,1H,2'-H),8.07(s,1H,5”-H)和8.83(s,1H,3”-H)；¹³CNMR(500MHz,CDCl₃)δ153.8,147.3,145.8,143,5,141.8,139.2,134.7,124.3,123.6,122.7,120.4,111.3,80.0,55.9,50.5,47.4,37.9,37.0,35.0,31.3,30.5,27.6,20.8,19.4,16.2。HRMS计算值506.2526(C₂₉H₃₃O₂N₅.Na⁺)，发现值506.2525。

Claims

1.一种式I的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R₁和R₂中的每一个独立地是氢、烷氧基或CN；

R₃是氢或卤素；并且

其中，R₁、R₂、R₃中的至少一个不是氢。

2.如权利要求1所述的化合物或药学上可接受的盐，其中R₁或R₂是CN。

3.如权利要求1所述的化合物或药学上可接受的盐，其中R₁是烷氧基。

4.如权利要求1所述的化合物或药学上可接受的盐，其中R₃是卤素。

5.一种式II的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R₄是-CNHR₁₀或-C＝NR₁₀；

R₁₀是烷基或芳基，任选地被一个或更多个R₁₁取代基取代；并且

R₁₁是卤素、烷氧基或CN。

6.如权利要求5所述的化合物或药学上可接受的盐，其中R₄是-CNHR₁₀。

7.如权利要求5所述的化合物或药学上可接受的盐，其中R₄是-C＝NR₁₀。

8.如权利要求5所述的化合物或药学上可接受的盐，其中R₁₀是烷基。

9.如权利要求5所述的化合物或药学上可接受的盐，其中R₁₀是芳基。

10.如权利要求9所述的化合物或药学上可接受的盐，其中R₁₀是被一个或更多个烷氧基基团取代的芳基。

11.一种式III的化合物：

或其药学上可接受的盐，其中：

R₅是杂芳基、芳烷基、环烯基、烷氧基烷基，任选地被一个或更多个R₁₂取代基取代；

R₁₂是-(CH₂)_n-CO₂H，其中n是0、1、2或3；并且

条件是R₅不是咪唑。

12.如权利要求11所述的化合物或药学上可接受的盐，其中R₅是杂芳基。

13.如权利要求12所述的化合物或药学上可接受的盐，其中R₅是吡啶基。

14.如权利要求13所述的化合物或药学上可接受的盐，其中R₅是3-吡啶基。

15.如权利要求12所述的化合物或药学上可接受的盐，其中R₅是三唑。

16.如权利要求11所述的化合物或药学上可接受的盐，其中R₅是芳烷基。

17.如权利要求11所述的化合物或药学上可接受的盐，其中R₅是环烯基。

18.如权利要求11所述的化合物或药学上可接受的盐，其中R₅是烷氧基烷基。

19.如权利要求11所述的化合物或药学上可接受的盐，其中R₁₂是-CO₂H或-CH₂CO₂H。

20.一种药物组合物，包含一种或更多种权利要求1-19中任一项所述的化合物或药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。

21.一种治疗需要其的受试者的癌症、疾病或状况的方法，所述方法包括：向所述受试者施用有效量的权利要求1-20中任一项所述的化合物、药学上可接受的盐或组合物。

22.如权利要求21所述的方法，还包括向所述受试者施用有效量的抗雄激素、CYP17抑制剂、促黄体生成激素-释放激素激动剂、用于防止雄激素产生的药物、雌激素或化学治疗药物。

23.如权利要求21所述的方法，其中所述化合物、所述药学上可接受的盐或所述组合物与激素治疗、化学治疗、放射治疗、免疫治疗或外科手术联合地施用。

24.如权利要求21所述的方法，其中所述癌症、所述疾病或所述状况选自前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、泌尿生殖器癌或前列腺增生。

25.一种用于抑制需要其的受试者的雄激素受体活性的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1-20中任一项所述的化合物、药学上可接受的盐或组合物。

26.一种用于抑制细胞中的雄激素受体活性的方法，所述方法包括使所述细胞与有效量的权利要求1-20中任一项所述的化合物、药学上可接受的盐或组合物接触，从而抑制所述细胞中的雄激素受体活性。

27.一种用于合成式I的化合物或药学上可接受的盐的方法，所述方法包括以下步骤：

b.使所述式Ia的化合物脱甲酰化且水解；

其中X是卤素；R₁和R₂中的每一个独立地是氢、烷氧基或CN；R₃能够是氢或卤素；并且其中R₁、R₂、R₃中的至少一个不是氢。

28.如权利要求27所述的方法，其中所述式Ia的化合物用Pd催化剂脱甲酰化。

29.一种用于合成式II的化合物或药学上可接受的盐的方法，所述方法包括以下步骤：

b.还原所述式IIa的化合物；

其中R₁₀是烷基或芳基，任选地被一个或更多个R₁₁取代基取代；并且R₁₁是卤素、烷氧基或CN。

30.如权利要求29所述的方法，其中所述式IIa的化合物被NaBH₄还原。

31.一种用于合成式III的化合物或药学上可接受的盐的方法，所述方法包括：

允许式C的化合物与酰化剂R₅C(O)Y在对合成式III的化合物有效的条件下反应；其中R₅是杂芳基、芳烷基、环烯基、烷氧基烷基，任选地被一个或更多个R₁₂取代基取代；并且R₁₂是-(CH₂)_n-CO₂H，其中n是0、1、2或3，条件是R₅不是咪唑。

32.如权利要求31所述的方法，其中所述酰化剂R₅C(O)Y是活性酯。

33.如权利要求31所述的方法，其中Y是-OC(O)R₅。

34.如权利要求31所述的方法，其中Y是R₅。