Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

NO315903B1 - Immunokonjugater, fremgangsmåte for fremstilling derav, farmasöytiske preparater, samt anvendelse av immunokonjugatene for fremstilling avlegemidler mot tumorer - Google Patents

Immunokonjugater, fremgangsmåte for fremstilling derav, farmasöytiske preparater, samt anvendelse av immunokonjugatene for fremstilling avlegemidler mot tumorer Download PDF

Info

Publication number
NO315903B1
NO315903B1 NO19944980A NO944980A NO315903B1 NO 315903 B1 NO315903 B1 NO 315903B1 NO 19944980 A NO19944980 A NO 19944980A NO 944980 A NO944980 A NO 944980A NO 315903 B1 NO315903 B1 NO 315903B1
Authority
NO
Norway
Prior art keywords
antibody
mab
cells
immunoconjugates
tumor
Prior art date
Application number
NO19944980A
Other languages
English (en)
Other versions
NO944980D0 (no
NO944980L (no
Inventor
Ilka Von Hoegen
Uwe Hofmann
Carlota-Silvia Jaeggle
Wolfgang Strittmatter
Joerg Stadlmueller
Siegfried Matzku
Original Assignee
Merck Patent Gmbh
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merck Patent Gmbh filed Critical Merck Patent Gmbh
Publication of NO944980D0 publication Critical patent/NO944980D0/no
Publication of NO944980L publication Critical patent/NO944980L/no
Publication of NO315903B1 publication Critical patent/NO315903B1/no

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/525—Tumour necrosis factor [TNF]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5406—IL-4
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/5418—IL-7
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • C07K14/54—Interleukins [IL]
    • C07K14/55—IL-2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2319/00—Fusion polypeptide
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2799/00—Uses of viruses
    • C12N2799/02—Uses of viruses as vector
    • C12N2799/021—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid
    • C12N2799/028—Uses of viruses as vector for the expression of a heterologous nucleic acid where the vector is derived from a herpesvirus

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Foreliggende oppfinnelse vedrører nye immunokonjugater som består av et tumorassosiert, målsøkende element, som er et monoklonalt antistoff eller et fragment derav, som gjenkjenner et molekyl som fortrinnsvis uttrykkes på humantumorceller, slik som humanepidermvekstfaktorreseptoren (EGFR), og et biologisk aktivt cytokin som er fusjonert til det målsøk-ende element. Oppfinnelsen vedrører også en fremgangsmåte for fremstilling av immunokonjugatene, samt farmasøytiske preparater som omfatter immunokonjugatene og anvendelse av immunokonjugatene for fremstilling av legemidler rettet mot tumorer ved å avlevere det biologisk aktive cytokin til en bestemt målcelle eller et bestemt målvev. De nye immunokonjugatene kan således anvendes i tumorterapi.
Oppfinnelsens bakgrunn
Det har blitt brukt mange forskjellige terapeutiske konsepter for behandling av kreftpasienter. I de siste årene har kliniske forsøk blitt utført med monoklonale antistoffer som gjenkjenner spesifikt eller fortrinnsvis celleoverflate-molekyler uttrykt på maligne celler. Målet ved denne fremgangsmåten er induksjon av antistoffavhengig cellulær cytotoksisitet (ADCC) eller komplementmediert cytotoksisitet (CDC) for å fjerne tumorceller. En annen fremgangsmåte er den cytokinmedierte aktivering av en immunrespons. Den cytokin-induserte antitumoraktivitet kan medieres ved hjelp av: 1) en direkte cytotoksisk/cytostatisk effekt av cytokinet på tumorvekst, 2) ikke-spesifikke tumor-antigenmekanismer, slik som LAK-aktivitet eller monocytt-/makrofag mediert cytotoksisitet, og 3) spesifikke tumor-antigenimmunresponser mediert ved hjelp av CD4- og CD8-positive T-celler. I denne situasjonen er det blitt observert en systemisk immunitet mot tumoren i dyremodeller.
Systemisk applikasjon av cytokiner, slik som IL-2 eller TNFa, vanskeliggjøres imidlertid av deres toksisitet (Rubin, Cancer Invest. 11:460-472, 1990; Balkwill, Nature 361:206-207, 1993). For å sikre en tilstrekkelig cytokinkonsentrasjon på tumorstedet må det administreres ganske høye doser, og den maksimalt tolererbare dose er under den dosen som er påkrevd for virkningsfullhet. De negative effekter av cytokiner er derfor hovedsakelig en følge av den systemiske applikasjon, men deres kliniske relevans i tumorterapi er uom-tvistet. I dyremodeller er det blitt demonstrert at in situ-tilstedeværelse av cytokinet enten ved intratumoral injeksjon eller ved sekresjon av transfekterte tumorceller, kan føre til tumorregresjon (Hock et al., PNAS 90:2774-2778, 1993; Colombo et al., Cancer Res. 52:4853-4857, 1992; McBride et al., Cancer Res. 52:3931-3937, 1992; Tepper et al., Science 257:548-551, 1992; Mullen et al., Cancer Res. 52:6020-6024, 1992; Blanken-stein et al., J. Exp. Med. 173:1047-1052, 1991; Gansbacher et al., J. Exp. Med. 172:1217-1224, 1990). I disse systemene svekker ikke cytokinet tumorproliferasjon, men er i stand til å aktivere en hurtig og sterk antitumorreaksjon. Den fysiske kombinasjon av et effektormolekyl og et målsøkende element utgjør derfor et middel for å redusere den perifere tilstede-værelse og øke den intratumorale tilgjengelighet av den biologisk aktive ligand. Dessuten kan enkeltstående tumorceller eller mikrometastaser også målsøkes ved hjelp av disse mole-kylene .
Den biologisk aktive ligand for en antistoffrettet målsøking bør indusere ødeleggelsen av målcellen, enten direkte eller gjennom å skape et miljø som er dødelig for målcellen. Den biologisk aktive ligand kan være et slikt cytokin som IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-10, IL-13, IFN-er, TNFa eller CSF-er. Disse cytokinene er blitt påvist å utløse antitumoreffekter, enten direkte eller ved å aktivere verts-forsvarsmekanismer (Mire-Sluis, TIBTECH 11:74-77, 1993; Colombo et al., Cancer Res. 52:4853-4857, 1992; Thomas & Balkwill, Pharmac. Ther. 52:307-330, 1991).
For eksempel anses IL-2 å være den sentrale mediator for immunresponsen. IL-2 er blitt påvist å stimulere proli-ferasjonen av T-celler og NK-celler, og å indusere lymfokin-aktiverte dreperceller (LAK). TumorinfUtrerende T-lymfocytter prolifererer som svar på IL-2. Dessuten øker IL-2 cytotoksisiteten til T-celler og monocytter. I tillegg induserer IL-2 en cytokinkaskade utskilt av T-celler, NK-celler og monocytter, som forsterker immunresponsen ytterligere.
TNFa har funnet en bred anvendelse innen tumorterapi, hovedsakelig på grunn av dens direkte cytotoksisitet for visse tumorceller og induksjonen av hemoragiregresjon av tumorer. I tillegg forsterker TNFa immunresponsen; den er en kostimulant for T-celleproliferasjon, den induserer ekspresjon av anti-gener av MHC-klasse I og -klasse II, og TNFa-, IFN- og IL-l-utskillelse av makrofager. IL-4 ble først beskrevet som en T-cellevekstfaktor. Ved ytterligere undersøkelser ble IL-4 påvist å stimulere antigenspesifikke, cytotoksiske T-celler og virke spesifikt på T-cellelignende LAK-celler og ikke på NK-cellelignende LAK-celler. IL-4 inhiberer veksten av human-melanomceller og forøker deres ekspresjon i klasse I og II. Induksjonen av makrofagmedierte antitumoreffekter ved hjelp av IL-4 er fortsatt omtvistet.
IL-7 er en vekstfaktor for pre-B-celler samt for humane, perifere CD4- og CD8-positive T-celler. IL-7 øker
direkte cytotoksisiteten av den CD8-positive T-celleunderpopu-lasjon. I tillegg induserer IL-7 produksjonen av IL-1, IL-6 og TNFa ved hjelp av perifere monocytter. In vitro kan den tumor-drepende aktivitet av monocytter/makrofager stimuleres ved
hjelp av IL-7, muligens mediert av cytokiner, slik som TNFa.
Epidermvekstfaktor (EGF) er et polypeptidhormon som er mitogent for epiderm- og epitelceller. Når EGF reagerer med sensitive celler, binder den seg til membranreseptorer (EGFR). EGFR er et transmembranglykoprotein på ca. 170 kD, og er et genprodukt av c-erb-B-proto-onkogenet.
Det murine, monoklonale antistoff MAb 425 ble frembrakt mot den humane A431-karsinomcellelinje (ATCC CRL 1555) og funnet å binde seg til en polypeptidepitop på det utvendige området av EGFR. Det ble funnet å inhibere bindingen av EGF og mediere tumorcytotoksisitet in vitro og undertrykke tumorcellevekst av epidermale og kolorektale karsinomavledede cellelinjer in vitro (Rodeck et al., 1987, Cancer Res. 47, 3692). Humaniserte og kimære versjoner av MAb 425 er kjent fra WO 92/15683.
Antistoff-cytokinimmunokonjugater i forskjellige kombinasjoner for den styrte avledning av aktive proteiner er blitt beskrevet tidligere. IL-2 ble kombinert med det humane karsinomspesifikke antistoff L6 (Fell et al., 1991, J. Immunol. 146:2446-2452, EP-OS-0439095) eller med et anti- gangliosid-GD2-antistoff (Gillies et al., 1992, PNAS 89:1428-1432, WO 92/08495). Immunokonjugater bestående av et anti-dansylantistoff og IGF1 er blitt frembrakt for den styrte av-levering av hormoner (Shin&Morrison, 1990, PNAS 87:5322-5326, WO 91/14438) .
Det var således et formål ved oppfinnelsen å skape antistoffer eller fragmenter derav som omfatter (1) en epitop rettet mot et EGFR-antigen på overflaten av en tumorcelle, og (2) en biologisk aktiv ligand med et stort potensial for induksjon av cytotoksisitet, og derfor forsterke antitumor-effekten in situ.
Oppsummering av oppfinnelsen
Oppfinnelsen vedrører immunokonjugater som kombinerer en del av et monoklonalt antistoff, i det minste det antigen-gjenkjennende setet, eller et fullstendig monoklonalt antistoff med et biologisk aktivt cytokin. Konstruksjonene som koder for disse immunokonjugatene, frembringes med metoder med rekombinant DNA-teknikk. Immunokonjugatene inneholder det variable området i antistoffets tunge kjede og CHl-domenet i det konstante området (antistoff-CHl-konjugat), eller CH1- og CH2-domenet i det konstante området (antistoff-CH2-konjugat), eller CH1-, CH2- og CH3-domenet i det konstante området (antistoff -CH3- konj ugat) fusjonert til det biologisk aktive cytokin. Ved tilsetning av den passende lette kjede kan det frembringes immunokonjugater som målsøker antigenbærende celler og avleverer et aktivt cytokin til et spesifikt sete på legemet (fig. la-c) .
Ved hjelp av immunokonjugatene ifølge oppfinnelsen kan tumorer, slik som melanom, gliom og karsinom, påvises og behandles med hell.
Det er således et formål ved foreliggende oppfinnelse å tilveiebringe et immunokonjugat som har en cytotoksisk kapasitet til å lysere tumorceller spesifikt, kjennetegnet ved at det omfatter det murine, humaniserte eller kimære monoklonale antistoff MAb 425 eller et fragment derav, og et biologisk aktivt cytokin TNFa eller IL-2 som er fusjonert til antistoffet eller antistoff-fragmentet, og - hvor antistoffet består hovedsakelig av det variable område i antistofftungkjeden, CH1-, CH2- og CH3-domenene i det konstante område og den passende lettkjede (antiststoff-CH3-konjugat), eller - hvor antistoff-fragmentet består hovedsakelig av det variable område i antistofftungkjeden, CH1- og CH2-domenene i det konstante område og den passende lettkjede (antistoff-CH2-konjugat), eller - hvor antistoff-fragmentet består hovedsakelig av det variable område i antistofftungkjeden, CHl-domenet i det konstante område og den passende lettkjede (antistoff-CH1-konjugat).
Ved en foretrukket utførelsesform av oppfinnelsen velges immunokonjugatet fra gruppen MAb 425-CHl-TNFa, MAb 425-CH2-TNFa, MAb 425-CH3-TNFa, MAb 425-CH1-IL-2, MAb 425-CH2-IL-2 og MAb 425-CH3-IL-2.
Dessuten er det et formål ved oppfinnelsen å tilveiebringe en fremgangsmåte for fremstilling av et immunokonjugat som definert ovenfor og i kravene, ved hjelp av en vertsorga-nisme ved å smelte sammen DNA-sekvensene som koder for antistoffet eller antistoffragmentet og den biologisk aktive ligand med hverandre, plassere den resulterende konstruksjon i en ekspresjonsvektor som transformeres inn i vertsorganismen, dyrke vertscellene i en næringsoppløsning og uttrykke fusjonsproteinet .
Ved en foretrukket utførelsesform ifølge oppfinnelsen anvendes en teknikk hvor DNA-sekvensene som koder for antistoffet eller antistoffragmentene og den biologisk aktive ligand fusjoneres på en enkelttrådet DNA ved hjelp av et oligonukleotid som er komplementært til den ønskede fusjons-DNA-sekvens.
Dessuten er det et formål ved oppfinnelsen å tilveiebringe et farmasøytisk preparat som omfatter minst ett immunokonjugat som definert ovenfor og i kravene, og en fysiologisk akseptabel bærer.
Endelig er et formål ved oppfinnelsen anvendelsen av immunokonjugatene som definert ovenfor og i kravene, til fremstilling av et legemiddel rettet mot tumorer.
Det ble funnet at spesielt i tilfellet med antistoff-CH2- og antistoff-CH3-konjugatene, slik som f.eks. MAb 425-CH2-TNFa og MAb425-CH3-TNFa, var induksjonen cellulær cyto toksisitet bedre sammenlignet med ukoblet TNFa. Dette skyldes sannsynligvis kombinasjonen med hensyn til bindingsegenskapene og induksjonen av ADCC ved hjelp av de konstante områdene i det monoklonale antistoff og cytokinaktivitetene.
Antistoff-CH1-konjugatene ifølge denne oppfinnelsen er fordelaktige med hensyn til den lille molekylstørrelse og muligheten for ekspresjon i prokaryoter. Den lille størrelsen vil dessuten lette (tumor)vevspenetrasjon.
Immunokonjugatene ifølge oppfinnelsen oppviser i tillegg god bindings- og proliferasjonsegenskaper sammenlignet med det monoklonale antistoff, fortrinnsvis MAb 425 som så-dant, eller fragmenter derav.
Materiale og metoder
Monoklonalt antistoff
MAb 425 er et murint, monoklonalt IgGl-antistoff frembrakt mot den humane A431-karsinomcellelinje (ATCC CRL 1555). MAb 425 binder seg til en polypeptidepitop på det utvendige domenet av human-EGF-reseptoren og konkurrerer med binding til EGF. MAb 425 ble funnet å mediere tumorcytotoksisitet in vitro og undertrykke tumorcellevekst av epidermoid-og kolorektalkarsinomavledede cellelinjer in vitro (Rodeck et al., 1987, Cancer Res. 47:3692). Humaniserte og kimære versjoner av MAb 425 er blitt beskrevet i WO 92/15683.
Cytokiner
Cytokinkodende cDNA-er ble innkjøpt fra British Bio-technology Limited (Herrmann Biermann GMBH, Bad Nauheim FRG: ■human IL-2 BBG30, human TNFa BBG18). De kommersielt tilgjengelige cDNA-er mangler signalsekvensen som er nødvendig for pro-teinutskillelse. Cytokinkodende cDNA-er kan frembringes fra mRNA isolert fra cytokinproduserende celler.
Vektorer
pUC19 er en del av en serie beslektede E. coli-plasmidkloningsvektorer med høyt kopiantall og inneholder deler av pBR322 og Ml3mpl9. pUC19 inneholder den induserbare bakterielle lac-promoteroperator, etterfulgt av et multippel-kloningssete (Yanisch-Perron et al., Gene 33:103-109, 1985). pUC-vektorer er kommersielt tilgjengelige (f.eks. New England
Biolabs.). Fagemidvektorene pBluescript KS/SK+ og KS/SK- er avledet fra pUC19. Vektorene er kommersielt tilgjengelige (Stratagene).
Den eukaryote ekspresjonsvektor pHCMV (Gillies et al., 1983, Cell 33:717) inneholder replikasjonsopprinnelsen til apevirus 40 (SV40) og promoter- og forsterkerområdet til humancytomegaloviruset. Promoter-/forsterkerområdet er etterfulgt av et multikloningssete (mcs) for innføring av gener som skal uttrykkes. I denne vektoren ble den kimære form av det variable MAb 425-tungkjedeområdet og ASacII-cyl-området fusjonert med effektormolekylet i enden av henholdsvis CH1-, CH2-eller CH3-domenet for å frembringe et MAb 425-tungkjede-fusjonsprotein. Fusjons-Ig-kjeden kan settes inn i immunokonjugatet ved å kombinere den med den passende lette kjede for å danne et enverdig antigenbindende område som så kan forbindes, slik at det fås et toverdig immunokonjugat som er spesifikt for målantigenet (figur 1). Tung- og lettkjedekonstruksjonene kan plasseres i de samme eller separate vektorer.
Den prokaryote ekspresjonsvektor er basert på pSWl-vektoren (Ward et al., Nature 341:544-546, 1989), som er et derivat av pUCl9-vektoren. pSWl inneholder en sekvens som koder for lederpeptidet i det bakterielle pelB-gen fra Erwinia carotovora (Lei et al., J. Bact. 169:4379-4383, 1987). Fremmed-DNA-er kan innføres i ramme bak pelB-ledersekvensen for å styre proteinekspresjon inn i periplasmaet.
Kort beskrivelse av figurene og tabellene
Tabell I: PCR-primere brukt for frembringelsen av MAb 425-cytokinfusjonsproteinet (eukaryot ekspresjon).
<*>reversprimer som hybridiserer til Strata gene pBluescriptvektorene SK+/- og KS+/-
(kommersielt tilgjengelige);
<**>denne primeren hybridiserer til Cgl-konstantområdet som omfatter det unike SacII-setet;
Tabell II : PCR-primere brukt til frembringelsen av MAb 425-cytokinfusjonsproteiner (prokaryot ekspresjon).
Figur 1: Modell for antistoff-cytokinimmunokonjugater.
C = cytokin; VH = variabelt tungkjedeområde; VL = variabelt lettkjedeområde; CH = tungkjede med konstant område; CL = lettkjede med konstant område. (a) antistoff-CHl-konjugat, (b) antistoff-CH2-konjugat, antistoff-CH3-konjugat.
Figur 2: Binding av immunokonjugater til EGF-R i en EGF-R
spesifikk ELISA.
Supernatanter av ubestandig transfekterte C0S-7-celler ble testet med hensyn på immunokonjugat innhold. Vertikal akse: % absorbans ved 490 nm; horisontal akse: fortynning av supernatant Uog2) .
MAb 425-CHl-TNFå (igjenfylte sirkler), MAb 425 CH2-TNFa (igjenfylte firkanter), MAb 425-CH3-TNFa (igjenfylte trekanter), MAb 425-kontroll (igjenfylt rombe), MAb 425-kontroll (omsnudd, igjenfylt trekant), nyformet MAb 425F(ab')2(renset protein) (igjenfylt sekskant).
Figur 3A: IL-2-aktivitet av MAb 425-CHl-IL-2-immunokonju gat uttrykt i COS-7-celler.
CTLL-2-celler ble brukt som indikatorcellelinje. Proliferativ aktivitet av seriefortynnet COS-supernatant inneholdende MAb 425-CH1-IL-2 er vist i venstre felt (igjenfylte sirkler). COS-supernatant inneholdende MAb 425-kontroll ble brukt som kontroll (åpne sirkler). Proliferativ respons av CTLL.2-celler etter aktivering med rekombinant, kommersielt IL-2-protein eller uten IL-2 (KO) er angitt i det høyre felt.
Figur 3B: IL-2-aktivitet av MAb 425-CH1-IL-2-immunokonjugat uttrykt i E. coli.
CTLL-2-celler ble brukt som indikatorcellelinje. Proliferativ aktivitet av seriefortynnet MAb 425-CH1-IL-2 uttrykt i E. coli og affinitets renset over en idiotypisk anti-MAb 425-kolonne er vist i venstre felt (igjenfylte trekanter). COS-supernatant inneholdende MAb 425-CH1-IL-2 ble brukt som kontroll (lukkede sirkler). Dia lysebuffer (lukkede firkanter). For å sikre at bufferen ikke påvirker IL-2-aktivitet ble dia lysebuffer titrert i nærvær av en konstant konsentrasjon av IL-2 (1 U/ml) (omsnudde, igjen fylte trekanter). Proliferativ respons av CTLL.2-celler etter aktivering med rekombinant, kommersielt iL-2-protein eller uten IL-2 (KO) er angitt i høyre felt.
Figur 3C: Induksjon av TIL-proliferasjon med MAb 425-CH1-IL-2-immunokonjugat.
Melanomtumorinfiltrerende lymfocytter ble dyrket uten (KO) eller i nærvær av seriefortynnede COS-supernatanter inneholdende 425-CH1-IL-2-immuno konjugat (venstre felt). Proliferativ respons av TlL-er etter aktivering med rekombinant, kommer siell IL-2 er vist i det høyre felt.
Figur 4: MAb 425-TNFa-immunokonjugatcytotoksisitet på
WEHI 164-celler.
TNFa-sensitiv, murin fibrosarkomcellelinje
WEHI 164 ble dyrket i 48 timer i nærvær av seriefortynnede COS-supernatanter (venstre felt) inneholdende 425-CH1-TNFa-immunokonjugat (igjen fylte firkanter) eller 425-CH2-TNFa-immunokonju gat (igjenfylte trekanter) eller MAb 425-Fab-kontroll (igjenfylte sirkler). Vekstinhibering av indikatorceller indusert ved hjelp av kommer-siell, rekombinant, human TNFa er gjengitt i det høyre felt.
Figur 5: MAb 425-TNFa-immunokonjugatmediert tumorcytolyse med PBMC.
Ikke-aktivert, human lymfocytt fra perifert blod (PBMC) ble brukt som effektorceller og samdyrket med allogene EGF-R-positive<sl>Cr-merkede C8161-målceller ved et forhold mellom effektor og mål på 30:1. Prosent spesifikk lyse er gitt etter
18 timers samdyrking uten eller i nærvær av
seriefortynnet COS-supernatant inneholdende MAb 425-CH3-TNFa-immunokonjugat (skraverte bokser). Rekombinant TNFa (Genzyme) ble uttrykt som en 36 kDa dimer i E. coli (prikkede bokser).
Nærmere beskrivelse av oppfinnelsen
Generelt
Andre mikroorganismer, cellelinjer, plasmider, pro-moterer, resistensmarkører, replikasjonsopprinnelser, restrik-sjonsseter eller andre fragmenter av vektorer som er nevnt i søknaden, er kommersielt tilgjengelige eller generelt tilgjengelige på annen måte. Forutsatt at det ikke er antydet noe annet, anvendes de bare som eksempler og er ikke av avgjørende betydning i henhold til oppfinnelsen, og kan erstattes av henholdsvis andre egnede redskaper og biologiske materialer.
Teknikkene som er av avgjørende betydning ifølge oppfinnelsen, er beskrevet nærmere nedenunder. Andre teknikker som ikke er beskrevet i detalj, tilsvarer kjente standard-metoder som er velkjente for fagfolk innen teknikken, eller er beskrevet nærmere i de anførte referanser og patentsøknader og i standardlitteratur (f.eks. "Antibodies, A Laboratory Manual", Harlow, Låne, Cold Spring Harbor, 1988).
Ekspresjon av fusjonsproteiner i eukaryote celler Konstruksjon av de eukaryote ekspresjonsvektorene for Fab 425-cytokinfusj onsproteinekspresj on
Fusjon av MAb 425 og cytokiner ved hjelp av "loop-out"-teknikk:
Generering av TNFa- konstruksjoner
Sac 11/Xbal- fragmentet fra ASacII - cyl -klonen ble inn-føyd i Bluescript SK+ inneholdende de cytokinkodende sekvenser, slik som TNFa-cDNA. TNFa-cDNA ble innført mellom Smal- og EcoRI-setet. Den resulterende konstruksjon ble fremstilt som enkelttrådet DNA ved tilsetning av den passende hjelperfag. CH2- eller CH3-domenet ble fusjonert i ramme til 5'-enden av den TNFa-kodende sekvens. 01igonukleotidene
5' CGAAGATGATCTGACCAT TTTGGCTTTGGAGATGGT 3<*>
TNFa I cgl-CH2-domenene
5' CGAAGATGATCTGACCAT TTTACCCGGAGACAGGGA 3'
TNFa I cg 1-CH3-domenene
er homologe til 3'-enden av henholdsvis CH2-domenet og CH3-domenet, og 5'-enden av den TNFa-kodende sekvens. De enkelt-trådede DNA-sekvenser holdes sammen ved hjelp av oligonukleo-tidet, og de uønskede sekvenser imellom fjernes fra konstruksjonen. 01igonukleotidene har den motsatte orientering, etter-som den øvre tråd ble frembrakt som enkelttrådet DNA.
DNA ble fylt opp til dobbel ttrådet form ved hjelp av sekvenasepolymerase. Dette enzymet er ikke tilbøyelig til å gi feil, slik som Amplitaq DNA-polymerase, og derfor ble bare
DNA-sekvensen i sammenknytningen mellom isolerte kloner be-
j stemt. De klonene som hadde den korrekte sekvens, ble kombinert med sekvensene som er nødvendige for å frembringe et komplett MAb 425-fusjonsprotein, og klonet inn i pHCMV-vektoren for ekspresjon i eukaryote celler.
s Fusjon av MAb 425- cytokiner ved hjelp av PCR- teknikk
Amplitaq DNA-polymerase er tilbøyelig til å gi feil, og for å sikre at det ikke ble inkorporert noen feil ble sekvensene til segmentene amplifisert ved hjelp av PCR-teknikk
bestemt. Primere anvendt i disse forsøk er oppsummert i tabell io I.
Generering av CH1- fusjonsproteiner
pUH5-plasmidet inneholder sekvensene for tungkjede-Fab 425-fragment for prokaryot ekspresjon med den N-terminale )5pelB-ledersekvens avledet fra Erwinia carotovora (Lei et al.,
J. Bact. 169:4379-4383, 1987) for å sikre proteinsekresjon. Hindlll/Notl-fragmentet ble klonet på nytt inn i Bluescript KS+-vektoren. IL-2 og TNFa inneholder allerede 5'-NcoI- og 3'-BamHI-restriksjonssetene. Alle cytokiner ble klonet som
40NcoI/BamHI-fragmenter bak CHl-domenet. I disse konstruksjonene var cytokinsekvensene ikke i ramme. Derfor ble det innført en adapter (5<1>TCGACAAGAAAG3') mellom Sali- og Ncol-restriksjonssetene. I de resulterende konstruksjoner uttrykkes den tunge kjeden og cytokinet som et fusjonsprotein med en ytterligere aminosyre (Ala) innført ved hjelp av adaptersekvensen. Dralll-/BamHI-fragmentene ble klonet inn i pHCMV-ekspresjonsvektoren inneholdende den komplette MAb 425-tungkjede-cDNA-klon. I denne konstruksjonen ble pelB-ledersekvensen byttet ut med ledersekvensen i MAb 425-tungkjede-cDNA.
Generering av CH2- og CH3- fusjonsproteiner
ASacII-cyl-DNA ble amplifisert ved hjelp av PCR-teknikk i to separate reaksjoner under anvendelse av CH2-3'-endeprimere som overlapper, i ramme, med 5'-enden av det tilsvarende cytokin, slik som IL-2. IL-2-cDNA-klonen ble også amplifisert ved hjelp av PCR. I 3'-enden ble unikt Noti- og Sall-setet inkorporert i IL-2-konstruksjonen for å lette sub-kloning inn i SK+-vektoren og deretter inn i pHCMV-ekspresjonsvektoren. Fusjonen av IL-2-PCR-produktet med det komplette ASacII-cyl-området ble gjort ved hjelp av PCR-rekombi-nering. Det resulterende BamHl/NotI-ASacII-cyl-CH2-IL-2-fragment ble subklonet inn i SK+ inneholdende det variable tungkjedeområdet fra MAb 425. Denne fremgangsmåten frembrakte det komplette MAb 425-CH2-IL-2-fusjonsgenet. Det komplette MAb 425-CH3-IL-2-fusjonsgen ble frembrakt på tilsvarende måte med det unntak at ASacII-cyl ble amplifisert fra det unike SacII-sete som 5'-enden. SacII/Pstl-fragmentet fra MAb 425-CH2-IL-2 i SK+ inneholdende CH2-IL-fusjonen ble så byttet ut med SacII/Pstl-fragmentet inneholdende CH3-IL-2-fusjonen. De komplette MAb 425-fusjonsgenene ble så klonet inn i pHCMV-vektoren for ekspresjon i eukaryote celler.
Ekspresjon av immunokonjugater
Innføring av vektorkonstruksjoner for ekspresjon av et enverdig immunokonjugat som omfatter bare CH1-domenet, eller toverdige immunokonjugater som omfatter CH2- og CH2 pluss CH3-domenene, i vertsceller kan oppnås ved elektropora-sjon, DEAE-dekstran, kalsiumfosfat, lipofektin eller proto-plastfusjon. Hvilken som helst vertscelletype kan anvendes, forutsatt at de rekombinante DNA-sekvensene som koder for immunokonjugatet og den passende lettkjede transkriberes på korrekt måte inn i mRNA i den celletypen. Vertsceller kan være musemyelomceller som ikke produserer immunglobulin, slik som Sp2/0-AG14 (ATCC CRL 1581), P3X63Ag8.653 {ATCC CRL 1580), eller hamsterceller, slik som CHO-K1 (ATCC CCL 61), eller CHO/dhFr- (ATCC CRL 9096), eller BHK-21 (ATCC CCL 10). For transient ekspresjon kan COS-1 (ATCC CRL 1650) eller COS-7 (ATCC CRL 1651) anvendes.
Transient ekspresjon av immunokonjugater
Ekspresjonsvektoren pHCMV inneholder replikasjonsopprinnelsen for apevirus 40 (SV40). Cellelinjen COS-7 er et derivat av apecellelinjen CV-1, som er blitt transformert med et opprinnelsesdefekt SV40-virus. Plasmider som inneholder SV40-replikasjonsopprinnelsesstedet, vil derfor amplifiseres og produksjonen av immunokonjugater vil forbedres. Supernatanter ble innhøstet 72 timer senere og testet med hensyn på EGF-reseptorbinding og cytokinkonsentrasjon.
Permanent ekspresjon av immunokonjugater
Vektorer som inneholder rekombinante konstruksjoner for ekspresjonen av immunokonjugater, innføres i passende
vertsceller. Tung- og lettkjedekonstruksjonene kan plasseres i den samme eller separat vektor; i det sistnevnte tilfellet kan begge vektorene bære den identiske seleksjonsmarkør, slik som neomycin-resistens eller dhFr, eller to forskjellige selek-sjonsmarkører for å selektere med hensyn på tilstedeværelsen av begge vektorene. Seleksjon for dhFr-markøren kan bare ut-føres i dhFr-negative cellelinjer, slik som CHO/dhFr-. Kloner analyseres med hensyn på ekspresjon av immunokonjugater ved hjelp av EGF-reseptorspesifikke ELISA. Utvalgte kloner renses så videre ved hjelp av kloning med begrensende fortynning.
Konstruksjon av de prokaryote ekspresjonsvektorer for MAb 425-CH1- cytokinfusj onsproteinekspresj on
DNA-sekvensene som koder for MAb 425-lettkjeden og Fd-fragmentet i tungkjeden, er blitt innført i det multiple kloningssete i pSWl-vektoren. Den fullt ferdige lettkjede-kodende sekvens og den fullt ferdige tungkjedekodende sekvens kommer etter lederpeptidet i det bakterielle pelB-gen. Den tungkjedekodende sekvens inneholder et 3<1->Ncol-sete. De cytokinkodende cDNA-er ble modifisert ved hjelp av PCR for å inn-føre restriksjonssetene Ncol (5'-ende) og Noti (3'-ende). Cytokingenene ble fusjonert i ramme direkte til CHl-domenet i tungkjeden. Primere anvendt i disse forsøkene er oppsummert i tabell II.
IO
Disse vektorene muliggjør en effektiv ekspresjon av funksjonelle Fab-cytokinfusjonsproteiner i E. coli. Lettkjede-og tungkjedecytokinfusjonsproteinet befinner seg på en di-cistronisk mRNA plassert under kontroll av den induserbare lac-promoter (Skerra og Pluckthun, Science 242:1038-104, 1988). Ekspresjon av Fab-fusjonsproteinet kan derfor induseres i overensstemmelse med kravene til dyrkningsbetingelser. Translasjonen av begge proteiner fra den dicistroniske mRNA favoriserer syntese av like mengder Fd-IL-2-fusjonsprotein og lettkjede, hvorved sjansene for korrekt sammensetning i funk-sjonerende Fab-fusjonsproteiner økes. De to polypeptidene utskilles i periplasmaet i E. coli, hvor folding, dannelse av disulfidbindinger og sammensetning til funksjonelt Fab 425-CH1-fusjonsprotein finner sted. Under langvarig dyrkning av bakterier utskilles proteinene i dyrkningsmediet.
Ekspresjon av MAb 425- CH1- IL- 2- fusjonsprotein i E . coli og rensing
E. coli-stammer egnet for proteinekspresjon ble transformert med ekspresjonsplasmidene. Celler ble dyrket inn-til OD58o0,5 og indusert med IPTG (1 mM) . Celler ble dyrket over natten, og supernatanter og celler ble innhøstet. Super-natanten ble tilført en anti-MAb 425-antiidiotypisk kolonne. Kolonnen ble vasket med fosfatbufret 0,5 M NaCl, og bundne proteiner ble eluert med 100 mM glysin, 0,5 M NaCl, pH 2,5. Eluatet ble umiddelbart nøytralisert med tris, 2,5 M, pH 8. MAb 425-CHl-IL-2-inneholdende fraksjoner ble slått sammen, konsentrert og dialysert mot PBS.
Bindingsegenskaper for MAb 425- immunokonjugater
Bindingsegenskapene til MAb 425-immunokonjugatene ble bestemt ved hjelp av EGF-reseptorspesifikk ELISA. I korte trekk ble mikrotiterplater belagt over natten ved 4 °C med renset EGF-reseptor og vasket for å fjerne ubundet protein. Platene ble inkubert med fusjonsproteinholdige supernatanter eller supernatanter inneholdende ukonjugert MAb eller Fab-fragmenter eller proteinene i renset form. Plater ble vasket og inkubert med geite-anti-human-IgG og IgM (tung- og lett kjede) konjugert til peroksidase. Substrat ble tilsatt, og mengden av bundet EGF-reseptorspesifikt protein ble bestemt ved måling ved 450 nm (figur 2). Cytokinkonsentrasjonen ble bestemt ved hjelp av kommersielt tilgjengelige ELISA-er som er spesifikke for vertscytokin i henhold til produsentens instruksjoner (data ikke vist).
Proliferasjon av leukocytter
Tumorspesifikke effektorceller
Mononukleære leukocytter fra perifert blod og tumori-nfiltrerende lymfocytter (TIL-er) isolert fra melanompasienter ble samdyrket med bestrålte (30 Gy) autologe tumorceller i medium (RPMI 1640, 1 % penicillin/streptomycin, 1 % glutamin, 20 mM Hepes, 50 mm (3-merkaptoetanol, 10 % kalvefosterserum, 20 U/ml IL-2). Celler som ga respons, ble ukentlig stimulert med autologe tumorceller.
Bestemmelse av proliferasjon
Den cytokinmedierte proliferasjon kan bestemmes ved: a) Passende indikatorcellelinjer. I tilfellet med IL-2 kan den IL-2-avhengige musecelle-linje CTLL-2 (ATCC TIB 241) (figur 3A) eller andre IL-2-avhengige cellelinjer anvendes. b) TumorinfUtrerende lymfocytter ekspandert in vitro (figur 3B).
Nyfremstilte leukocytter fra humant, perifert blod fra friske blodgivere eller melanompasienter eller TIL-er isolert fra melanompasienter ble propagert in vitro (se ovenfor) . For analysering av fusjonsproteinene ble lymfocyttene dyrket i 96-brønners, flatbunnede mikrotiterplater ved en tetthet på 1 x IO<5>celler pr. brønn i et sluttvolum på 200 [ il. Celler ble inkubert med fusjonsproteinholdige supernatanter eller supernatanter inneholdende ukonjugert MAb eller supernatanter inneholdende ukonjugerte cytokiner eller proteinene i renset form. Etter 72 timer ble cellene pulset med 0,5/xCi<3>H-tymidin. Inkorporering av radioaktivitet ble bestemt etter inkubasjon over natten ved hjelp av væskescintillasjons-P-pla-tetelling. Resultatene er uttrykt som gjennomsnittlig cpm.
Bestemmelse av cytotoksisitet av MAb 425- TNFa- immunokonjugater Bestemmelse av TNFg- mediert cytotoksisitet
TNFa ble beskrevet å være direkte cytotoksisk for visse celler, inkludert mange forskjellige tumorceller. Det direkte cytotoksiske potensialet for TNFa kan bestemmes med L92 9 murine fibroblaster (ATCC CCL 1) eller WEHI 164 (ATCC CRL 1751) eller andre TNFa-sensitive cellelinjer som beskrevet (Flick Sc Gifford, 1984, J. Immunol. Meth. 68:167). I figur 4 er det cytotoksiske potensialet til MAb 425-CHl-TNFa og MAb 425-CH2-TNFa demonstrert på WEHI 164-celler som indikatorcellelinje.
Bestemmelse av TNFa- indusert cytotoksisitet
EGF-reseptorpositive cellelinjer, slik som den sterkt invasive og spontant metastatiske, EGF-reseptorpositive celle-linje C8161 (Welch et al., 1991, Int. J. Cancer 47:227, og referanser som der er angitt), kan anvendes som målceller for cytolyse ved hjelp av allogene, tumorinfUtrerende lymfocytter eller nyisolerte lymfocytter fra humant, perifert blod fra melanompasienter eller friske givere. DyrkningsbetingeIser for tumorceller og TIL-er er blitt beskrevet tidligere (Shimizu et al., 1991, Cancer Res. 51:6153).
Cytotoksisitetsanalyser in vitro ble utført under anvendelse av<sl>Cr-merkede tumormålceller. Målceller ble merket med<51>Cr (100/iCi/10<7>celler) i 1 time, etterfulgt av tre vasketrinn for å fjerne overskudd av<51>Cr. 2 x IO<3>målceller pr. brønn ble saminkubert med effektorceller i 96-brønners mikrotiterplater i nærvær av fusjonsproteinholdige supernatanter eller supernatanter inneholdende ukonjugert MAb eller supernatanter inneholdende ukonjugerte cytokiner (kontroller) eller proteinene i renset form. Supernatantene eller rensede proteiner ble seriefortynnet i dyrkningsmedium og analysert in triplo. Platene ble inkubert i 4 timer ved 37 °C i 10 % C02-atmosfære. Cellene ble så fjernet ved sentrifugering, og radioaktivitet i supernatantene ble bestemt i en y-teller. Prosent spesifikk<51>Cr-frigjørelse ble beregnet i henhold til formelen:
Terapeutisk, anvendelse av immunokonj ugatene
Immunokonjugatene ifølge oppfinnelsen kan administreres til humanpasienter for terapi. Det er derfor et formål ved oppfinnelsen å tilveiebringe et farmasøytisk preparat som omfatter som aktiv bestanddel minst ett fusjonsprotein definert ovenfor og i kravene, sammen med én eller flere farmasøytisk akseptable bærere, eksipienser eller fortynningsmidler for det.
Vanligvis vil immunokonjugatene ifølge denne oppfinnelsen bli injisert intravenøst eller parenteralt. Generelt er doseringsområdene for administreringen av immunokonjugatene tilstrekkelig store til å gi den ønskede tumorundertrykkende og tumorlyserende effekt. Doseringen vil avhenge av alder, tilstand, kjønn og omfang av sykdommen hos pasienten, og kan variere fra 0,1 mg/kg til 200 mg/kg, fortrinnsvis fra 0,1 mg/ kg til 100 mg/kg/dose i én eller flere doseadministreringer daglig, i én eller flere dager.
Preparater for parenteral administrering omfatter
sterile, vandige eller ikke-vandige oppløsninger, suspensjoner og emulsjoner. Eksempler på ikke-vandige oppløsningsmidler er propylenglykol, polyetylenglykol vegetabilske oljer, slik som olivenoljer, og injiserbare, organiske estere, slik som etyl-oleat, og andre oppløsningsmidler som er kjent innen teknikken, og som er egnet for disse formål. Immunokonjugatene iføl-ge denne oppfinnelsen kan anvendes i et preparat som omfatter en fysiologisk akseptabel bærer. Eksempler på slike egnede bærere er saltoppløsning, PBS, Ringers oppløsning eller laktert Ringers oppløsning. Preserveringsmidler og andre additiver, slik som antibiotika, antioksidanter og chelateringsmidler, kan også være til stede i de farmasøytiske preparater.
De farmasøytiske preparater ifølge foreliggende oppfinnelse er egnet for behandling av alle typer tumorer, inkludert melanomer, gliomer og karsinomer, samt blodtumorer og faste tumorer.

Claims (7)

1. Immunokonjugat som har en cytotoksisk kapasitet til å lysere tumorceller spesifikt, karakterisert vedat det omfatter det murine, humaniserte eller kimære monoklonale antistoff MAb 425 eller et fragment derav, og et biologisk aktivt cytokin TNFa eller IL-2 som er fusjonert til antistoffet eller antistoff-fragmentet, og - hvor antistoffet består hovedsakelig av det variable område i antistofftungkjeden, CH1-, CH2- og CH3-domenene i det konstante område og den passende lettkjede (antiststoff-CH3-konjugat), eller - hvor antistoff-fragmentet består hovedsakelig av det variable område i antistofftungkjeden, CH1- og CH2-domenene i det konstante område og den passende lettkjede (antistoff-CH2-konjugat), eller - hvor antistoff-fragmentet består hovedsakelig av det variable område i antistofftungkjeden, CH1-domenet i det konstante område og den passende lettkjede (antistoff-CH1-konjugat).
2. Fremgangsmåte for fremstilling av et immunokonjugat ifølge krav 1, karakterisert vedat DNA-sekvensene som koder for antistoffet eller antistoffragmentet og den biologisk aktive ligand fusjoneres med hverandre, den resulterende konstruksjon plasseres i en ekspresjonsvektor som transformeres inn i vertsorganismen, vertscellene dyrkes i en næringsoppløsning, og fusjonsproteinet uttrykkes.
3. Fremgangsmåte ifølge krav 2,karakterisert vedat DNA-sekvensene som koder for antistoffet eller antistoffragmentene og den biologisk aktive ligand fusjoneres på et enkelttrådet DNA ved hjelp av et oligonukleotid som er komplementært til den ønskede fusjons-DNA-sekvens.
4. Fremgangsmåte ifølge krav 2 eller 3,karakterisert vedat antistoff-CHl-konju-gater uttrykkes i en E. coli-vert.
5. Fremgangsmåte ifølge krav 2 eller 3,karakterisert vedat antistoff-CH2- eller antistoff-CH3-konjugater uttrykkes i en eukaryot vert.
6. Farmasøytisk preparat, karakterisert vedat det omfatter minst ett av immunokonjugatene ifølge krav 1 og en fysiologisk akseptabel bærer.
7. Anvendelse av et immunokonjugat ifølge krav 1 for fremstilling av et legemiddel rettet mot tumorer.
NO19944980A 1993-12-24 1994-12-22 Immunokonjugater, fremgangsmåte for fremstilling derav, farmasöytiske preparater, samt anvendelse av immunokonjugatene for fremstilling avlegemidler mot tumorer NO315903B1 (no)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP93120865 1993-12-24

Publications (3)

Publication Number Publication Date
NO944980D0 NO944980D0 (no) 1994-12-22
NO944980L NO944980L (no) 1995-06-26
NO315903B1 true NO315903B1 (no) 2003-11-10

Family

ID=8213530

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
NO19944980A NO315903B1 (no) 1993-12-24 1994-12-22 Immunokonjugater, fremgangsmåte for fremstilling derav, farmasöytiske preparater, samt anvendelse av immunokonjugatene for fremstilling avlegemidler mot tumorer

Country Status (19)

Country Link
US (1) US6979726B1 (no)
EP (1) EP0659439B1 (no)
JP (2) JPH07223968A (no)
KR (1) KR950016781A (no)
AT (1) ATE207366T1 (no)
AU (1) AU688817B2 (no)
CA (1) CA2138928C (no)
CZ (1) CZ289099B6 (no)
DE (1) DE69428764T2 (no)
DK (1) DK0659439T3 (no)
ES (1) ES2166368T3 (no)
HU (1) HU219680B (no)
NO (1) NO315903B1 (no)
PL (1) PL178793B1 (no)
PT (1) PT659439E (no)
RU (1) RU2129018C1 (no)
SK (1) SK283494B6 (no)
UA (1) UA41888C2 (no)
ZA (1) ZA9410282B (no)

Families Citing this family (176)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CU22545A1 (es) * 1994-11-18 1999-03-31 Centro Inmunologia Molecular Obtención de un anticuerpo quimérico y humanizado contra el receptor del factor de crecimiento epidérmico para uso diagnóstico y terapéutico
WO1998011241A1 (en) * 1996-09-16 1998-03-19 Merck Patent Gmbh Oligocistronic expression system for the production of heteromeric proteins
DK1189641T5 (da) 1999-06-25 2011-04-11 Genentech Inc Humaniserede ANTI-ErbB2-antistoffer og behandling med ANTI-ErbB2-antistoffer
RU2338751C2 (ru) 2002-07-15 2008-11-20 Дженентек, Инк. СПОСОБЫ ИДЕНТИФИКАЦИИ ОПУХОЛЕЙ, ВОСПРИИМЧИВЫХ К ЛЕЧЕНИЮ АНТИТЕЛАМИ ПРОТИВ ErbB2
KR101192496B1 (ko) 2003-11-06 2012-10-18 시애틀 지네틱스, 인크. 리간드에 접합될 수 있는 모노메틸발린 화합물
WO2005063820A2 (en) 2003-12-30 2005-07-14 Merck Patent Gmbh Il-7 fusion proteins
WO2005070020A2 (en) 2004-01-23 2005-08-04 The Regents Of The University Of Colorado Gefitinib sensitivity-related gene expression and products and methods related thereto
EP1737489B1 (en) 2004-04-08 2012-01-11 David B Agus ErbB2 antagonists for tumor pain therapy
US20080090233A1 (en) 2004-05-27 2008-04-17 The Regents Of The University Of Colorado Methods for Prediction of Clinical Outcome to Epidermal Growth Factor Receptor Inhibitors by Cancer Patients
NZ551180A (en) 2004-06-01 2009-10-30 Genentech Inc Antibody drug conjugates and methods
RU2412947C2 (ru) 2004-09-23 2011-02-27 Дженентек, Инк. Антитела, сконструированные на основе цистеинов, и их конъюгаты
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
TWI441646B (zh) 2005-01-21 2014-06-21 Genentech Inc 帕妥珠單抗(pertuzumab)用於製備治療人類病患癌症之藥物的用途
BRPI0606542A8 (pt) 2005-02-23 2018-03-20 Genentech Inc métodos para aumentar o tempo de progressão de uma doença (ttp)
AR053272A1 (es) 2005-05-11 2007-04-25 Hoffmann La Roche Determinacion de responsivos a la quimioterapia
DK2270050T3 (da) 2005-12-30 2013-08-12 Merck Patent Gmbh Anti-CD19-antistoffer med nedsat immunogenicitet
AU2006332138B2 (en) 2005-12-30 2012-03-22 Merck Patent Gmbh Interleukin-12p40 variants with improved stability
EP2030984B1 (en) * 2006-06-16 2011-05-11 Onco Therapy Science, Inc. Sparc-derived cancer rejection antigen peptide and pharmaceutical comprising the same
JP2010503407A (ja) 2006-09-12 2010-02-04 ジェネンテック・インコーポレーテッド 癌の診断及び治療のための方法及び組成物
KR20150039212A (ko) 2007-03-02 2015-04-09 제넨테크, 인크. 낮은 ｈｅｒ３ 발현을 기초로 한 ｈｅｒ 이량체화 억제제에 대한 반응 예측
WO2008154249A2 (en) 2007-06-08 2008-12-18 Genentech, Inc. Gene expression markers of tumor resistance to her2 inhibitor treatment
TWI472339B (zh) 2008-01-30 2015-02-11 Genentech Inc 包含結合至ｈｅｒ２結構域ii之抗體及其酸性變異體的組合物
PE20120539A1 (es) 2009-03-20 2012-05-12 Genentech Inc Anticuerpos anti-her biespecifico
US9345661B2 (en) 2009-07-31 2016-05-24 Genentech, Inc. Subcutaneous anti-HER2 antibody formulations and uses thereof
KR101588598B1 (ko) * 2009-08-17 2016-01-29 로슈 글리카트 아게 표적화된 면역접합체
US10584181B2 (en) 2009-12-04 2020-03-10 Genentech, Inc. Methods of making and using multispecific antibody panels and antibody analog panels
MX2012008049A (es) 2010-01-12 2012-08-01 Hoffmann La Roche Compuestos heterociclicos triciclicos, composiciones y metodos de uso de los mismos,.
WO2011103242A1 (en) 2010-02-18 2011-08-25 Genentech, Inc. Neuregulin antagonists and use thereof in treating cancer
WO2011112935A2 (en) * 2010-03-12 2011-09-15 The Regents Of The University Of California Antibody fusion proteins with disrupted heparin-binding activity
BR112012023382A2 (pt) 2010-03-17 2018-05-15 F Hoffmann La Roche Ag T compostos, composições e métodos de uso de imidazopiridina.
CN103038643A (zh) 2010-04-16 2013-04-10 基因泰克公司 作为pi3k/akt激酶途径抑制剂效能的预测性生物标记的foxo3a
WO2011146568A1 (en) 2010-05-19 2011-11-24 Genentech, Inc. Predicting response to a her inhibitor
CN103221825A (zh) 2010-08-31 2013-07-24 基因泰克公司 生物标志物和治疗方法
AR082974A1 (es) 2010-09-15 2013-01-23 Hoffmann La Roche Derivados de azabenzotiazol, composiciones farmaceuticas que los contienen, metodo para prepararlos y uso de los mismos para tratar enfermedades inflamatorias
AR083495A1 (es) 2010-10-22 2013-02-27 Esbatech Alcon Biomed Res Unit Anticuerpos estables y solubles
US8790649B2 (en) 2010-10-29 2014-07-29 Immunogen, Inc. EGFR-binding molecules and immunoconjugates thereof
BR112013010569A2 (pt) 2010-10-29 2017-07-04 Immunogen Inc moléculas de ligação de egfr não antagonísticas e imunoconjugados das mesma
US9309322B2 (en) 2010-11-12 2016-04-12 Scott & White Healthcare (Swh) Antibodies to tumor endothelial marker 8
BR112013011520A2 (pt) 2010-11-19 2019-09-24 Hoffmann La Roche pirazolo piridinas e pirazolo piridinas e seu uso como inibidores de tyk2
WO2012085176A1 (en) 2010-12-23 2012-06-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Tricyclic pyrazinone compounds, compositions and methods of use thereof as janus kinase inhibitors
WO2013007765A1 (en) 2011-07-13 2013-01-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Fused tricyclic compounds for use as inhibitors of janus kinases
WO2013007768A1 (en) 2011-07-13 2013-01-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Tricyclic heterocyclic compounds, compositions and methods of use thereof as jak inhibitors
EP2742040B1 (en) 2011-08-12 2016-04-06 F.Hoffmann-La Roche Ag Indazole compounds, compositions and methods of use
RU2014109093A (ru) 2011-08-17 2015-09-27 Дженентек, Инк. Антитела против нейрегулина и их применение
EP2758397A1 (en) 2011-09-20 2014-07-30 F.Hoffmann-La Roche Ag Imidazopyridine compounds, compositions and methods of use
JP2014533954A (ja) 2011-11-21 2014-12-18 イミュノジェン， インコーポレイテッド Ｅｇｆｒ抗体細胞傷害性薬物複合体による、ｅｇｆｒ療法に耐性である腫瘍の治療方法
BR112014012979A2 (pt) 2011-11-30 2020-10-20 Genentech, Inc. mutações erbb3 em câncer
AU2013240261A1 (en) 2012-03-27 2014-09-18 Genentech, Inc. Diagnosis and treatments relating to HER3 inhibitors
JP2016509045A (ja) 2013-02-22 2016-03-24 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト がんを治療し、薬剤耐性を防止する方法
KR20150123250A (ko) 2013-03-06 2015-11-03 제넨테크, 인크. 암 약물 내성의 치료 및 예방 방법
RU2015143517A (ru) 2013-03-13 2017-04-19 Дженентек, Инк. Пиразолсодержащие соединения и их применения
AU2014239903A1 (en) 2013-03-14 2015-09-17 Genentech, Inc. Combinations of a MEK inhibitor compound with an HER3/EGFR inhibitor compound and methods of use
CA2905070A1 (en) 2013-03-14 2014-09-25 Genentech, Inc. Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance
TR201905313T4 (tr) * 2013-03-15 2019-05-21 Abbvie Deutschland Anti-EGFR antikoru ilaç konjugat formülasyonları.
WO2014144850A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Genentech, Inc. Methods of treating cancer and preventing cancer drug resistance
CN104250302B (zh) * 2013-06-26 2017-11-14 上海君实生物医药科技股份有限公司 抗pd‑1抗体及其应用
CA2922925A1 (en) 2013-09-05 2015-03-12 Genentech, Inc. Antiproliferative compounds
WO2015049325A1 (en) 2013-10-03 2015-04-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Therapeutic inhibitors of cdk8 and uses thereof
EP3057615B1 (en) 2013-10-18 2021-02-24 F.Hoffmann-La Roche Ag Anti-rspo antibodies and methods of use
KR102447878B1 (ko) 2013-12-17 2022-09-26 제넨테크, 인크. Pd-1 축 결합 길항제 및 탁산을 이용한 암 치료 방법
CA2934028A1 (en) 2013-12-17 2015-06-25 Genentech, Inc. Combination therapy comprising ox40 binding agonists and pd-1 axis binding antagonists
KR20160137599A (ko) 2014-03-24 2016-11-30 제넨테크, 인크. C-met 길항제로의 암 치료 및 이것과 hgf 발현과의 상관관계
HUE046767T2 (hu) 2014-03-31 2020-03-30 Hoffmann La Roche Anti-OX40 antitestek és alkalmazási eljárások
KR20160146747A (ko) 2014-03-31 2016-12-21 제넨테크, 인크. 항혈관신생제 및 ox40 결합 효능제를 포함하는 조합 요법
AU2015239069B2 (en) * 2014-04-03 2020-02-20 Cellectis CD33 specific Chimeric Antigen Receptors for cancer immunotherapy
JP6814730B2 (ja) 2014-09-05 2021-01-20 ジェネンテック， インコーポレイテッド 治療用化合物およびその使用
WO2016044694A1 (en) 2014-09-19 2016-03-24 Genentech, Inc. Use of cbp/ep300 and bet inhibitors for treatment of cancer
WO2016057924A1 (en) 2014-10-10 2016-04-14 Genentech, Inc. Pyrrolidine amide compounds as histone demethylase inhibitors
EP3215637B1 (en) 2014-11-03 2019-07-03 F. Hoffmann-La Roche AG Methods and biomarkers for predicting efficacy and valuation of an ox40 agonist treatment
US20160161485A1 (en) 2014-11-03 2016-06-09 Genentech, Inc. Assays for detecting t cell immune subsets and methods of use thereof
KR20170072343A (ko) 2014-11-06 2017-06-26 제넨테크, 인크. Ox40 결합 효능제 및 tigit 억제제를 포함하는 병용 요법
JP6639497B2 (ja) 2014-11-10 2020-02-05 ジェネンテック， インコーポレイテッド ブロモドメインインヒビターおよびその使用
MA40940A (fr) 2014-11-10 2017-09-19 Constellation Pharmaceuticals Inc Pyrrolopyridines substituées utilisées en tant qu'inhibiteurs de bromodomaines
MA40943A (fr) 2014-11-10 2017-09-19 Constellation Pharmaceuticals Inc Pyrrolopyridines substituées utilisées en tant qu'inhibiteurs de bromodomaines
CN106999583A (zh) 2014-11-17 2017-08-01 豪夫迈·罗氏有限公司 包含ox40结合激动剂和pd‑1轴结合拮抗剂的组合疗法
CN107531690B (zh) 2014-11-27 2020-11-06 基因泰克公司 用作CBP和/或EP300抑制剂的4,5,6,7-四氢-1H-吡唑并[4,3-c]吡啶-3-胺化合物
JP6864953B2 (ja) 2014-12-09 2021-04-28 アンスティチュ ナショナル ドゥ ラ サンテ エ ドゥ ラ ルシェルシュ メディカル Ａｘｌに対するヒトモノクローナル抗体
JP2018508183A (ja) 2014-12-23 2018-03-29 ジェネンテック， インコーポレイテッド 化学療法耐性癌を治療及び診断する組成物及び方法
CN107208138A (zh) 2014-12-30 2017-09-26 豪夫迈·罗氏有限公司 用于癌症预后和治疗的方法和组合物
WO2016112298A1 (en) 2015-01-09 2016-07-14 Genentech, Inc. Pyridazinone derivatives and their use in the treatment of cancer
EP3242875B1 (en) 2015-01-09 2022-02-23 Genentech, Inc. 4,5-dihydroimidazole derivatives and their use as histone demethylase (kdm2b) inhibitors
CN107406414B (zh) 2015-01-09 2022-04-19 基因泰克公司 作为用于治疗癌症的组蛋白脱甲基酶kdm2b的抑制剂的(哌啶-3-基)(萘-2-基)甲酮衍生物
EP3244923A4 (en) 2015-01-12 2018-09-05 Children's Medical Center Corporation Pro-inflammatory and adjuvant functions of toll-like receptor 4 antagonists
WO2016123391A1 (en) 2015-01-29 2016-08-04 Genentech, Inc. Therapeutic compounds and uses thereof
CN107438593B (zh) 2015-01-30 2020-10-30 基因泰克公司 治疗化合物及其用途
RU2746021C2 (ru) * 2015-02-18 2021-04-06 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Иммуноконъюгаты для специфической индукции цитотоксичности т-клеток против клеток-мишеней
MA41598A (fr) 2015-02-25 2018-01-02 Constellation Pharmaceuticals Inc Composés thérapeutiques de pyridazine et leurs utilisations
WO2016135041A1 (en) 2015-02-26 2016-09-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Fusion proteins and antibodies comprising thereof for promoting apoptosis
CA2981183A1 (en) 2015-04-07 2016-10-13 Greg Lazar Antigen binding complex having agonistic activity and methods of use
SI3294770T2 (sl) 2015-05-12 2024-06-28 F. Hoffmann-La Roche Ag Terapevtski in diagnostični postopki za raka
IL294138A (en) 2015-05-29 2022-08-01 Genentech Inc Therapeutic and diagnostic methods for cancer
EP3303399A1 (en) 2015-06-08 2018-04-11 H. Hoffnabb-La Roche Ag Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies
US20170000885A1 (en) 2015-06-08 2017-01-05 Genentech, Inc. Methods of treating cancer using anti-ox40 antibodies and pd-1 axis binding antagonists
WO2016205320A1 (en) 2015-06-17 2016-12-22 Genentech, Inc. Methods of treating locally advanced or metastatic breast cancers using pd-1 axis binding antagonists and taxanes
US10208056B2 (en) 2015-08-26 2019-02-19 Fundación Del Sector Público Estatal Centro Nacional De Investigaciones Oncológicas Carlos III (F.S.P. CNIO) Condensed tricyclic compounds as protein kinase inhibitors
WO2017053748A2 (en) 2015-09-25 2017-03-30 Genentech, Inc. Anti-tigit antibodies and methods of use
HRP20220227T1 (hr) 2015-12-16 2022-04-29 Genentech, Inc. Postupak priprave tricikličnih spojeva inhibitora p13k i postupci upotrebe navedenih spojeva u liječenju raka
KR20180097615A (ko) 2016-01-08 2018-08-31 에프. 호프만-라 로슈 아게 Pd-1 축 결합 길항물질 및 항-cea/항-cd3 이중특이성 항체를 사용하는 cea-양성 암의 치료 방법
KR20180119632A (ko) 2016-02-29 2018-11-02 제넨테크, 인크. 암에 대한 치료 및 진단 방법
EP3443004A1 (en) 2016-04-14 2019-02-20 H. Hoffnabb-La Roche Ag Anti-rspo3 antibodies and methods of use
KR20190003958A (ko) 2016-04-15 2019-01-10 제넨테크, 인크. 암의 치료 및 모니터링 방법
CN109154027A (zh) 2016-04-15 2019-01-04 豪夫迈·罗氏有限公司 用于监测和治疗癌症的方法
JP2019518426A (ja) 2016-04-15 2019-07-04 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんの診断及び治療方法
US20190151346A1 (en) 2016-05-10 2019-05-23 INSERM (Institute National de la Santé et de la Recherche Médicale) Combinations therapies for the treatment of cancer
MA45146A (fr) 2016-05-24 2021-03-24 Constellation Pharmaceuticals Inc Dérivés de pyrazolopyridine pour le traitement du cancer
JP7160688B2 (ja) 2016-05-24 2022-10-25 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｃｂｐ／ｅｐ３００の複素環式インヒビターおよびがんの処置におけるそれらの使用
EP3469099A1 (en) 2016-06-08 2019-04-17 F. Hoffmann-La Roche AG Diagnostic and therapeutic methods for cancer
WO2018027204A1 (en) 2016-08-05 2018-02-08 Genentech, Inc. Multivalent and multiepitopic anitibodies having agonistic activity and methods of use
CN109476748B (zh) 2016-08-08 2023-05-23 豪夫迈·罗氏有限公司 用于癌症的治疗和诊断方法
TWI775781B (zh) 2016-10-06 2022-09-01 美商建南德克公司 癌症之治療性及診斷性方法
WO2018081648A2 (en) 2016-10-29 2018-05-03 Genentech, Inc. Anti-mic antibidies and methods of use
ES2953595T3 (es) 2017-03-01 2023-11-14 Hoffmann La Roche Procedimientos diagnósticos y terapéuticos para el cáncer
JP2020511988A (ja) * 2017-03-31 2020-04-23 ザ ボード オブ トラスティーズ オブ ザ レランド スタンフォード ジュニア ユニバーシティー シンセカイン組成物及び使用方法
WO2018189220A1 (en) 2017-04-13 2018-10-18 F. Hoffmann-La Roche Ag An interleukin-2 immunoconjugate, a cd40 agonist, and optionally a pd-1 axis binding antagonist for use in methods of treating cancer
MX2020000604A (es) 2017-07-21 2020-09-10 Genentech Inc Métodos terapéuticos y de diagnóstico para el cáncer.
JP2020530297A (ja) 2017-08-11 2020-10-22 ジェネンテック， インコーポレイテッド 抗ｃｄ８抗体及びその使用
AU2018329925A1 (en) 2017-09-08 2020-03-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Diagnostic and therapeutic methods for cancer
WO2019084395A1 (en) 2017-10-27 2019-05-02 University Of Virginia Patent Foundation COMPOUNDS AND METHODS FOR REGULATING, LIMITING OR INHIBITING AVIL EXPRESSION
AU2018359967A1 (en) 2017-11-06 2020-04-23 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for cancer
CN111836831A (zh) 2018-02-26 2020-10-27 豪夫迈·罗氏有限公司 用于抗tigit拮抗剂抗体和抗pd-l1拮抗剂抗体治疗的给药
AU2019275404A1 (en) 2018-05-21 2020-12-03 Bruker Spatial Biology, Inc. Molecular gene signatures and methods of using same
WO2019246557A1 (en) 2018-06-23 2019-12-26 Genentech, Inc. Methods of treating lung cancer with a pd-1 axis binding antagonist, a platinum agent, and a topoisomerase ii inhibitor
CN112839644A (zh) 2018-07-18 2021-05-25 豪夫迈·罗氏有限公司 用pd-1轴结合拮抗剂、抗代谢物和铂剂治疗肺癌的方法
JP7535500B2 (ja) 2018-09-03 2024-08-16 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト Ｔｅａｄモジュレーターとして有用なカルボキサミドおよびスルホンアミド誘導体
CA3111401A1 (en) 2018-09-19 2020-03-26 Genentech, Inc. Therapeutic and diagnostic methods for bladder cancer
MX2021003213A (es) 2018-09-21 2021-05-12 Genentech Inc Metodos de diagnostico para cancer de mama triple negativo.
AU2019361983A1 (en) 2018-10-18 2021-05-20 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for sarcomatoid kidney cancer
US20220098262A1 (en) * 2018-12-13 2022-03-31 Bang DING ANTIBODY-TUMOR NECROSIS FACTOR alpha FUSION PROTEIN AND ITS PREPARATION AND APPLICATIONS
JP2022519649A (ja) 2019-02-08 2022-03-24 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんの診断および治療方法
KR20210133237A (ko) 2019-02-27 2021-11-05 제넨테크, 인크. 항-tigit 및 항-cd20 또는 항-cd38 항체로 치료를 위한 투약
CN113677994A (zh) 2019-02-27 2021-11-19 外延轴治疗股份有限公司 用于评估t细胞功能和预测对疗法的应答的方法和药剂
WO2020223233A1 (en) 2019-04-30 2020-11-05 Genentech, Inc. Prognostic and therapeutic methods for colorectal cancer
WO2020226986A2 (en) 2019-05-03 2020-11-12 Genentech, Inc. Methods of treating cancer with an anti-pd-l1 antibody
CN112300279A (zh) 2019-07-26 2021-02-02 上海复宏汉霖生物技术股份有限公司 针对抗cd73抗体和变体的方法和组合物
JP2022547483A (ja) 2019-09-04 2022-11-14 ジェネンテック， インコーポレイテッド Ｃｄ８結合性作用剤およびその使用
WO2021062085A1 (en) 2019-09-27 2021-04-01 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
JP2023511472A (ja) 2019-10-29 2023-03-20 エフ・ホフマン－ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト がんの治療のための二官能性化合物
JP2022553803A (ja) 2019-11-06 2022-12-26 ジェネンテック， インコーポレイテッド 血液がんの処置のための診断方法及び治療方法
WO2021097110A1 (en) 2019-11-13 2021-05-20 Genentech, Inc. Therapeutic compounds and methods of use
CA3163950A1 (en) 2019-12-13 2021-06-17 Genentech, Inc. Anti-ly6g6d antibodies and methods of use
EP4076667A1 (en) 2019-12-20 2022-10-26 Erasca, Inc. Tricyclic pyridones and pyrimidones
WO2021194481A1 (en) 2020-03-24 2021-09-30 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-tigit and anti-pd-l1 antagonist antibodies
WO2021177980A1 (en) 2020-03-06 2021-09-10 Genentech, Inc. Combination therapy for cancer comprising pd-1 axis binding antagonist and il6 antagonist
JP2023520515A (ja) 2020-04-03 2023-05-17 ジェネンテック， インコーポレイテッド がんに対する治療方法及び診断方法
WO2021222167A1 (en) 2020-04-28 2021-11-04 Genentech, Inc. Methods and compositions for non-small cell lung cancer immunotherapy
EP3915576A1 (en) 2020-05-28 2021-12-01 Fundació Privada Institut d'Investigació Oncològica de Vall-Hebron Chimeric antigen receptors specific for p95her2 and uses thereof
KR20230025691A (ko) 2020-06-16 2023-02-22 제넨테크, 인크. 삼중 음성 유방암을 치료하기 위한 방법과 조성물
EP4168118A1 (en) 2020-06-18 2023-04-26 Genentech, Inc. Treatment with anti-tigit antibodies and pd-1 axis binding antagonists
US20230235408A1 (en) 2020-06-30 2023-07-27 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Methods for predicting the risk of recurrence and/or death of patients suffering from a solid cancer after preoperative adjuvant therapies
CN115843335A (zh) 2020-06-30 2023-03-24 国家医疗保健研究所 用于预测患有实体癌的患者在术前辅助治疗和根治性手术后复发和/或死亡风险的方法
EP3939999A1 (en) 2020-07-14 2022-01-19 Fundación del Sector Público Estatal Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas Carlos III (F.S.P. CNIO) Interleukin 11 receptor alpha subunit (il11ra) neutralizing antibodies and uses thereof
US11787775B2 (en) 2020-07-24 2023-10-17 Genentech, Inc. Therapeutic compounds and methods of use
EP4189121A1 (en) 2020-08-03 2023-06-07 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for lymphoma
WO2022036146A1 (en) 2020-08-12 2022-02-17 Genentech, Inc. Diagnostic and therapeutic methods for cancer
CA3193952A1 (en) 2020-10-05 2022-04-14 Bernard Martin Fine Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
US20230107642A1 (en) 2020-12-18 2023-04-06 Erasca, Inc. Tricyclic pyridones and pyrimidones
AU2022221124A1 (en) 2021-02-12 2023-08-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydroazepine derivatives for the treatment of cancer
KR20240026948A (ko) 2021-05-25 2024-02-29 에라스카, 아이엔씨. 황 함유 헤테로방향족 트리사이클릭 kras 억제제
WO2022266206A1 (en) 2021-06-16 2022-12-22 Erasca, Inc. Kras inhibitor conjugates
TW202321261A (zh) 2021-08-10 2023-06-01 美商伊瑞斯卡公司 選擇性ｋｒａｓ抑制劑
TW202340212A (zh) 2021-11-24 2023-10-16 美商建南德克公司 治療性化合物及其使用方法
WO2023097195A1 (en) 2021-11-24 2023-06-01 Genentech, Inc. Therapeutic indazole compounds and methods of use in the treatment of cancer
EP4253418A1 (en) 2022-03-29 2023-10-04 Fundació Privada Institut d'Investigació Oncològica de Vall-Hebron Immune cells expressing chimeric antigen receptors and bispecific antibodies and uses thereof
IL315770A (en) 2022-04-01 2024-11-01 Genentech Inc Dosage for treatment with bispecific anti-FCRH5/anti-CD3 antibodies
WO2023219613A1 (en) 2022-05-11 2023-11-16 Genentech, Inc. Dosing for treatment with anti-fcrh5/anti-cd3 bispecific antibodies
WO2023240058A2 (en) 2022-06-07 2023-12-14 Genentech, Inc. Prognostic and therapeutic methods for cancer
TW202417042A (zh) 2022-07-13 2024-05-01 美商建南德克公司 用抗ｆｃｒｈ５／抗ｃｄ３雙特異性抗體進行治療之給藥
TW202413433A (zh) 2022-07-19 2024-04-01 美商建南德克公司 用抗ｆｃｒｈ５／抗ｃｄ３雙特異性抗體進行治療之給藥
TW202417001A (zh) 2022-08-11 2024-05-01 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 雙環四氫吖呯衍生物
WO2024033457A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives
WO2024033389A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives
WO2024033388A1 (en) 2022-08-11 2024-02-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Bicyclic tetrahydrothiazepine derivatives
WO2024085242A2 (en) 2022-10-21 2024-04-25 Kawasaki Institute Of Industrial Promotion Non-fouling or super stealth vesicle
TW202426505A (zh) 2022-10-25 2024-07-01 美商建南德克公司 癌症之治療及診斷方法
EP4406973A1 (en) 2023-01-27 2024-07-31 Fundació Privada Institut de Recerca de la SIDA-Caixa Antibodies and uses thereof for the treatment of infections caused by enveloped viruses
WO2024173842A1 (en) 2023-02-17 2024-08-22 Erasca, Inc. Kras inhibitors

Family Cites Families (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5470571A (en) * 1988-01-27 1995-11-28 The Wistar Institute Method of treating human EGF receptor-expressing gliomas using radiolabeled EGF receptor-specific MAB 425
ZA902949B (en) * 1989-05-05 1992-02-26 Res Dev Foundation A novel antibody delivery system for biological response modifiers
WO1991003489A1 (en) * 1989-09-08 1991-03-21 The Johns Hopkins University Structural alterations of the egf receptor gene in human gliomas
US5314995A (en) * 1990-01-22 1994-05-24 Oncogen Therapeutic interleukin-2-antibody based fusion proteins
AU660297B2 (en) * 1990-11-09 1995-06-22 Stephen D. Gillies Cytokine immunoconjugates
DK0531472T3 (da) * 1991-03-06 2003-12-01 Merck Patent Gmbh Humaniserede monoklonale antistoffer
CA2112473A1 (en) * 1991-07-05 1993-01-21 Patricia A. Bacha Epidermal growth factor receptor targeted molecules for treatment of inflammatory arthritis
ES2144440T3 (es) * 1992-08-18 2000-06-16 Centro Inmunologia Molecular Anticuerpos monoclonales que reconocen el receptor del factor de crecimiento epidermico, celulas y metodos para su produccion y compuestos que los contienen.
DK139193D0 (da) 1993-09-24 1993-12-13 Hartmann As Brdr Rektangulaer aegbakke
CZ292061B6 (cs) * 1994-03-17 2003-07-16 Merck Patent Gmbh Jednořetězcové fragmenty protilátek a protilátky proti receptoru epidermálního růstového faktoru, způsob jejich přípravy a farmaceutický prostředek, který je obsahuje

Also Published As

Publication number Publication date
RU94045281A (ru) 1996-11-10
PT659439E (pt) 2002-04-29
CZ330694A3 (en) 1995-10-18
EP0659439A2 (en) 1995-06-28
CZ289099B6 (cs) 2001-11-14
KR950016781A (ko) 1995-07-20
JPH07223968A (ja) 1995-08-22
ZA9410282B (en) 1995-08-29
EP0659439A3 (en) 1996-12-04
RU2129018C1 (ru) 1999-04-20
AU8159394A (en) 1995-06-29
NO944980D0 (no) 1994-12-22
EP0659439B1 (en) 2001-10-24
SK283494B6 (sk) 2003-08-05
CA2138928A1 (en) 1995-06-25
DK0659439T3 (da) 2002-01-14
CA2138928C (en) 2009-02-17
ES2166368T3 (es) 2002-04-16
PL306474A1 (en) 1995-06-26
ATE207366T1 (de) 2001-11-15
HU219680B (hu) 2001-06-28
DE69428764T2 (de) 2002-06-20
DE69428764D1 (de) 2001-11-29
PL178793B1 (pl) 2000-06-30
HU9403784D0 (en) 1995-02-28
US6979726B1 (en) 2005-12-27
HUT70471A (en) 1995-10-30
UA41888C2 (uk) 2001-10-15
JP2006298936A (ja) 2006-11-02
AU688817B2 (en) 1998-03-19
SK156294A3 (en) 1995-07-11
NO944980L (no) 1995-06-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
NO315903B1 (no) Immunokonjugater, fremgangsmåte for fremstilling derav, farmasöytiske preparater, samt anvendelse av immunokonjugatene for fremstilling avlegemidler mot tumorer
EP0706799B1 (en) Immunoconjugates II
Gillies et al. Antibody-IL-12 fusion proteins are effective in SCID mouse models of prostate and colon carcinoma metastases
ES2534085T3 (es) Inmunoconjugados dirigidos
EP0574395B1 (en) Cytokine immunoconjugates
JP3553933B2 (ja) 高められた活性を有する組換シュードモナス外毒素
CN1318450C (zh) 修饰和嵌合的超抗原及其用途
CA3043146C (en) Il2 and tnf mutant immunoconjugates
CA2097416A1 (en) Recombinant immunotoxin composed of a single chain antibody reacting with the human transferrin receptor and diphtheria toxin
WO2020070150A1 (en) Il2 immunoconjugates
Reisfeld et al. Recombinant antibody fusion proteins for cancer immunotherapy
CN117042809A (zh) 抗her2抗体-免疫激动剂缀合物及其应用
Hess Targeted delivery of immunomodulatory proteins: evaluation of novel antibody-chemokine and antibody-cytokine fusion proteins for cancer therapy
Gupta et al. Immunomodulation by interleukin-2 receptor targeted therapy
Gillies Designing immunocytokines: genetically engineered fusion proteins for targeted immune therapy
Gillies Recombinant Protein Drugs 129 ed. by P. Buckel© 2001 Birkhäuser Verlag/Switzerland

Legal Events

Date Code Title Description
MM1K Lapsed by not paying the annual fees