La validation de nettoyage

La validation de nettoyage
Introduction
Les industries principalement concernées sont les
industries pharmaceutiques, les biotechnologies car elles
doivent être capables de prouver scientifiquement que
l’environnement de production est suffisamment propre,
pour que les lots produits ne soient pas contaminés par
les lots précédents:Évitant ainsi les contaminations
croisées.
La validation de nettoyage, c’est l’ensemble des
procédures et de la documentation des tests qui
prouvent que les procédures de nettoyage en place sont
conformes au taux d’acceptabilité fixé.
2
La validation de nettoyage
Introduction
La FDA précise: « A la fin, la procédure de validation de
nettoyage est LA PREUVE SCIENTIFIQUE, qui montre
que le système de nettoyage produit des résultats
constants, et que ce résultat atteignent, de manière
constante, les exigences requises.

Ainsi, il faudra principalement chercher 2 choses:

1. Les résidus provenant des fabrications précédentes
2. Les résidus provenant des produits nettoyants

3
 L’échantillonnage:
pourquoi?Quoi? Où?Quand?
La première étape de la validation de nettoyage :

1. Contaminer une surface.

2. Nettoyer cette surface conformément aux procédures de
nettoyage.
3. Prélever un échantillon à l’aide d’un swab par exemple.
4. Déterminer la taux de recouvrement de ce dernier.
5. Analyser les résultats des différents prélèvements, pour
fixer le taux d’acceptabilité et valider ou non les
procédures de nettoyage.
 L’échantillonnage:
pourquoi?Quoi? Où?Quand?
L’échantillonnage va permettre de vérifier la présence de:
- De Particules ( visibles ou non)
- De microbes
- De résidus de produits des productions précédentes
Et – des résidus de produits utilisés pour le nettoyage.

Ainsi, il faudra réaliser ces tests à plusieurs moments clés:

- Avant et après tout switch de production
- Après tout accident ( renversement de produits par exemple)
- Et de manière aléatoire pour contrôle régulier.

5
 L’échantillonnage:
pourquoi?Quoi? Où?Quand?
Où prélever?
- Sur les surfaces irrégulières
- Les endroits difficiles à atteindre
(potentiel de zone de rétention).
- Les surfaces poreuses ou/et humides
- Les surfaces chaudes ou chauffés en production.

De quelle taille doit être la surface à échantillonner?

Il est conseillé quand cela est possible de réaliser un cache de
Dimensions 5 x 5 cm, ou environ 25cm², quelque soit la méthode
utilisée: contact avec gélose, tissus ou swabs. 6
 L’échantillonnage:
pourquoi?Quoi? Où?Quand?
Quels sont les limites acceptables recommandés?
Les organismes normatifs préconisent les limites suivantes:
- Surfaces extérieures des équipements: inférieur à 5cfu /25cm²
- Murs et plafonds de la salle blanche: inférieur à 10cfu / 25cm²
- Sols de la salles blanche: inférieur à 20cfu / 25m².
Mais surtout aucun résidu visible sur les surfaces après nettoyage.
Ceci est également le pré requis indispensables avant tout phase
d’échantillonnage.
Si ce n’est pas le cas, il faut nettoyer à nouveau nettoyer avant de
passer à la validation.

7
 L’échantillonnage:
Comment?
Une fois le nettoyage réalisé correctement afin de ne plus voir à l’œil nu
de résidus, et déterminer l’espace à échantillonner, il faut utiliser la
bonne méthode.
Les principales sont:
- Les boîtes de contact gélosées pour test microbio
- L’échantillonnage à l’aide de swabs ou de tissus
- Les solutions de rinçage

Nous étudierons particulièrement la méthode de SWABBING.

8
 L’échantillonnage:
Comment?Quel swab?
Avant d’effectuer un prélèvement avec un swab, il s’agit de bien choisir
son type de swab:
- Minimal background: il s’agit du bruit de fond qui peut être généré
par le swab il faut donc que le swab choisi contienne le moins
possible de contaminants susceptibles de masquer les résultats,
particulièrement ceux qui sont très bas.
- High recovery rate: c’est le taux de recouvrement du swab, il doit
être capable de récupérer, d’absorber le maximum de contaminants
dans ces fibres.
- Low particule generation:le swab doit être le plus propre possible
afin de ne pas générer de particules, venant ainsi recontaminer les
surfaces échantillonnées.

9
 L’échantillonnage:
Comment?Quel swab?
Material Background Recovery Particles
Quartz wool low high high
Hydroentangled polyester low low
Woven cotton high
Polyurethane foam high
Glass fiber with binder low low
Nonwoven polyester/cellulose high
Laundered double-knit polyester low high low
Polypropylene/cellulose high
composite
Jenkins, K. M., Vanderwielin, A. J., Armstrong, J. A., Leonard, L. M., Murphy, G. P., and Piros,
N. A., "Application of Total Organic Carbon Analysis to Cleaning Validation," PDA Journal of
Pharmaceutical Science & Technology, Vol. 50, No. 1, 1996, pp. 6-15
10
 L’échantillonnage:
Comment?Quel swab?
Wiper material
Cleanroon laundered Polyester
Nonwoven polypropylene cellulose
Woven cotton
Polyurethane foam

0 0.2 0.4 0.6 0.8 1

Residue released (grams/m2)

11
 L’échantillonnage:
Comment?Quel swab?
TOC Test Results - Swabs

160
140
140
120
TOC (ppb/swab)

100
80 70
60
40
15
20
0
Standard Swab Cleaned Swab TOC Swab

12
 L’échantillonnage:
Quels gestes faire?
Étapes par Étapes
Le plus important, quelque soit la méthode, est que celle-ci soit toujours identique,
reproductible et constante: même gestes, même force, en générale il s’agit même
de la même Personne.

1. Délimiter un cadre de prélèvement. Le plus simple: 5 x 5cm.

2. Humidifier le swab : Attention ne pas le tremper!!, avec de l’eau purifié le plus souvent
ou des solvants préalablement étudiés pour la compatibilité avec les éléments à
rechercher.
3. Passer le swab sur la surface délimitée de manière identique, la plus recommandée est
la suivante:
- Avec le 1er swab: 10 bandes horizontales qui se superposent, tourner le swab pour
changer de côté, puis faire 10 bandes verticales qui se superposent. Puis déposer le
swab dans une fiole.
- avec un 2nd swab: faire 10 bandes en diagonale qui se superposent, tourner le swab
pour changer de côté, puis faire 10 autres bandes en diagonale qui se superposent
toujours, en partant cette fois du coin opposé. Puis déposer le 2nd swab dans la même
fiole. 13
L’échantillonnage:
Quels gestes faire?
Étapes par Étapes

14
Le Swabbing Guide
 L’Analyse:
Quelles Méthodes?
Il existe de très nombreuses méthodes d’analyse
mais les plus répandues sont:

- Analyse physico-chimique :
Résistivité/conductivité, pH, Acide/base, Spectrométrie, Chromatographie Couche Mince
CCM, High Performance Liquid Chromatographie HPLC, Chromatographie phase
gazeuse CPG, Carbone Organique Total TOC,…

- Analyse microbiologique :
Gélose (boîte de pétri), Filtration sur membrane, test LAL,…

- Analyses particulaires :
A l’aide d’une source laser à infra-rouge et par l’intermédiaire d’une pompe et d’une
sonde: recherche du nombre, de la taille des particules et leur nature.
 L’Analyse:
Quelles Méthodes?
- Gélose / Boîte de Pétri :
La boîte va être directement apposé sur la surface à échantillonner, puis mis en culture,
et enfin un comptage visuelle sera réalisé pour déterminer le nombre CFU.

- TOC : TOTAL ORGANIC CARBON :

Le but est de rechercher des particules de carbone, présent dans tout chose (produits et
agents de nettoyage) et prouvant donc ainsi le présence de résidus en plus ou moins
forte concentration:
Principale méthode: Par conduction électrique, l’eau contaminé par l’échantillon prélevé,
va voir sa conductivité plus ou moins modifiée. Cette méthode est une méthode non
spécifique mais très répandue car simple et économique. Cette méthode est plutôt
quantitative.

- HPLC : HIGH PERFORMANCE LIQUID CHROMATOGRAPHY :

Le but de cette méthode est de rechercher des résidus préalables identifiés, c’est une
méthode très spécifique, plutôt qualitative.
La principale méthode est la chromatographie ionique, qui sépare les ions (les cations et
les anions) en fonction du temps passé dans la colonne de rétention.
17
 L’Analyse:
Comment analyser les résidus des
agents nettoyants?
Dans le cadre de l’HPLC, il est assez facile de déterminer le principe actif composant le
produit fabriqué par l’industriel, pouvant être considéré comme un contaminant potentiel.
Mais, en ce qui concerne les agents nettoyant il y a des théories différentes:
Option 1:Analyser le principal produit actif de l’agent nettoyant.
Option 2:Analyser le produit total comme contaminants.

Beaucoup d’analyste préfèrent l’option 1, car la démarche est la même que pour la
détermination des résidus de produit fabriqué. Mais cette méthode est compliqué par le
fait qu’un agent nettoyant est justement efficace dû à la combinaison de ces différents
principes actifs.

Finalement, il s’avère souvent que considérer l’agent nettoyant dans son intégralité
comme un contaminant, en utilisant souvent la méthode TOC, permet de faciliter la
démarche, et de ne pas décortiquer l’interaction des différents agents composant le
nettoyant.
La FDA tranche le problème en précisant que les détergents de font pas partie du
process de production et que si ces derniers ne sont pas facilement éliminés des surfaces
par le rinçage, l’industriel soit en changer.
18
 Le Reporting:
La validation des procédés de nettoyage est une obligation réglementaire européenne:
 BPF annexe 15 (07/01): 1° texte réglementaire européen traitant de la validation de
nettoyage.
 Guide to inspection of validation of cleaning process (FDA 1993)
 PIC : Principes de qualification et validation dans l’industrie pharmaceutique
(Convention pour la reconnaissance mutuelle des inspections de production de produits
pharmaceutiques (01/96).

Il est ainsi impératif que les procédures de nettoyage soient validés, et consignés dans
des rapports de tests, précisant:
- Les objectifs à atteindre: Pourquoi valider?
- QUI est responsable de réaliser les prélèvements, comment, où, quand, quoi chercher?
- les taux d’acceptabilité,
- Les résultats des test.
- les moments prévus de revalidation
et surtout les conclusions: le processus de nettoyage est bon ou à refaire?
19
 Résumé de ce qu’il faut retenir :

- La validation de nettoyage est une obligation légale et indispensable.

- Pour que les tests soient corrects, il faut qu’ils soient reproductibles à l’identique,
constant, et donc réalisé en général par la même personne sur un run.
- il faut bien délimiter les zones d’échantillonnage de manière préalable
- il faut utiliser les bonnes techniques
- il faut choisir le bon swab, avec une tête en polyester.
- le swab doit être humide et non trempé
- porter des gants pour réaliser l’échantillonnage.
- il faut des fioles très propres < à 10ppb
-Il faut des reportings complets donnant une conclusion claire pour valider, modifier ou
re-rédiger les procédures de nettoyage.

20