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Elisa

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E.L.I.S.

A
Enzyme-linked immunosorbent assay

Andrea Figueroa
Alexandra Duarte
Moisés Torres
Antescedentes

 El nombre enzyme-liked immunosorbent assay, luego abreviado como ELISA,


fue acuñado por los investigadores suecos Eva Engall y Peter Perimann, los
cuales describieron el procedimiento, publicado en 1971.
 Las aplicaciones mas interesantes se iniciaron en el campo de la microbiologia
y parasitología.
ELISA

Ensayo de InmunoAbsorción Ligado a Enzimas.


 Se considera ligado a enzima porque una enzima se une químicamente a un
anticuerpo en las dosversiones de la prueba (indirecta y directa)
 El inmunoabsorvente, se refiere al hecho de que los antígenos o anticuerpos
son adsorvidos a un plástico.

ELISA puede investigar la presencia de un antígeno o de un anticuerpo.


ELISA

DEFINICION
 El ELISA se basa e el uso de antígenos o anticuerpos marcados con una
enzima, de forma que los conjugados resultantes tengan actividad tanto
inmunológica como enzimática.
 Al estar uno de los componentes (antígeno o anticuerpo)marcado con una
enzima e insolubilizado sobre un soporte (inmunoadsorbente) la reacción
antígeno anticuerpo quedará inmovilizada y, por tanto, será fácilmente
revelada mediante la adición de un substrato especifico.
 El cual al actuar la enzima, producirá un color observable a simple vista o
cuantificable mediante el uso de un espectrofotómetro o un colorímetro.
ANTIGENOS

 Los antígenos son, por definición,


generadores de anticuerpos.
 Incluyen proteínas, polisacáridos
y varias moléculas pequeñas, que
estimulan la producción de
anticuerpos.
 Los antígenos son, a menudo,
moléculas que se definen como
<no propias> o extrañas, para el
organismo.
 Hay <antígenos propios> que
actúan como etiquetas de
identificación.
ANTICUERPOS

 Son la respuesta del organismo ante la


presencia de un agente infeccioso.
 Los anticuerpos son moléculas proteicas
secretadas por los plasmocitos, y tienen una
altísima afinidad por sus antígenos
correspondientes.
 Anticuerpos se caracterizan por
Ser Defensa natural
Tener Utilidad terapéutica
Tener Utilidad Diagnóstica
Marcador de Infección o expasicion.
Detección de antígenos
 Los anticuerpos utilizados en el método ELISA
son de origen monoclonal o policlonal
ANTICUERPOS CONTROLES
 Anticuerpos Policionales •Se utilizan para asegurar que la
prueba esta funcionando
Heterogéneos correctamente
Reconocen epítopes diferentes
del Ag • Control POSITIVO
Incluyen una sustancia que se sabe
Producidos por numerosos que reaccionara positivamente,
clones deLinfocitos B proporcionando así, un patrón sobre
 Anticuerpos Monoclonales el cual basar los resultados.
Homogéneos • Control NEGATIVO
Especificidad única Incluyen sustancias que no deben
Producidos por un único clon de
Linfocitos B
FUNDAMENTO DEL ELISA

Ag o Ac fijado a una fase solida + Ag o Ac en la muestra + conjugado: Ac unido a


enzima + sustrato
Cambio de color
Elementos del ELISA

 FASE SÓLIDA
 Antígeno o Anticuerpo
 Conjugado: ENZIMA
 SUBSTRATO
FASE SOLIDA
SE PUEDEN UTILIZAR DOS TIPOS DE
SUSTANCIAS soporte Forma Unión
 Las que favorecen la adsorción física (por disponible
fuerzaselectroestáticas) de las moléculas nitrocelulosa Membranas, No
deAgs o Acs:poliestireno, cloruro de laminas covalente
polivinilo, polipropileno, nylon y silicona.
Polivinilo Placas, Covalente
 Las que permiten la fijación covalente de laminas
esos reactivos:acrilamida, celulosa y
isoticianato. Poliestireno Placas, Covalente
laminas,
 Los mejores resultados se obtienen con el perlas
peliestireno y el polvinilo, por su rigidez,
transparencia y propiedades adsortivas. Látex, Laminas, Covalente
nylon, perlas
celulosa

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