Reacción en Cadena de La Polimerasa

REACCIÓN EN
CADENA DE LA
POLIMERASA
PCR
Genezareth Aceves - Oscar Marín - Melanie Moz
BIOLOGÍA MOLECULAR
CONTENIDO
¿Qué es?
¿Para qué se utiliza la PCR?
¿Como se lleva a cabo?
Pasos de la PCR
Taq polimerasa y cebadores
Electroforesis
¿QUÉ ES?
La reacción en cadena de la
polimerasa (PCR) es una técnica de
laboratorio que permite la
producción (amplificación) rápida de
millones a miles de millones de un
segmento específico de ADN, que
se podrá estudiar a mayor detalle.
https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Reaccion-en-cadena-de-la-polimerasa
La PCR fue desarrollada en 1986 por el Dr. Kary Mullis,
en los laboratorios de CETUR Corporation, en Estados
Unidos( valedor del premio Nobel en 1993). La idea se
fundamentó en la necesidad de obtener un gran
número de copias de fragmentos específicos de ADN
de manera rápida y económica.
"Esta técnica se basa en una replicación exponencial in vitro de

una molécula de ADN genómico (ADNg) o ADN
complementario (ADNc), mediante ciclos repetitivos, que
constan de tres temperaturas."
La longitud del producto amplificado la
delimitan los iniciadores, también
llamados primers u oligonucleótidos, de
cuyo diseño adecuado depende el éxito
de la PCR.
La síntesis de la cadena sigue la dirección

5’-3’, ya que requiere de un nucleótido con
el extremo 3’ libre que proporcione el grupo
OH para la adición del siguiente nucleótido,
con lo que se forma el enlace fosfodiéster.
El ADN producido por la PCR puede utilizarse
¿PARA QUÉ SE en variados procedimientos de laboratorio.
La PCR es valiosa en varias técnicas de
UTILIZA LA laboratorio y clínicas, incluida la identificación
de la huella genética, la detección de bacterias
PCR? o virus, y el diagnóstico de trastornos

genéticos.
https://www.genome.gov/es/about-genomics/fact-sheets/Reaccion-en-cadena-de-la-polimerasaa
¿COMO SE LLEVA A CABO?
Para que se lleve a cabo la PCR se
requiere una cadena de ADNg o
ADNc que sirva de molde, una
enzima ADNpolimerasa, cofactores
necesarios para la actividad correcta
de la ADN polimerasa,
desoxinucleótidos (dNTP) para la
síntesis del producto de PCR y
oligonucleótidos o primers.
ADN MOLDE: ADN genómico (ADNg) o
ADN complementario (ADNc)
ADN POLIMERASA: Taq ADN polimerasa
Iniciadores: sentido y antisentido.
Desoxinucleótidos: (dNTP: dATP, dCTP,
dGTP, dTTP).
Cofactores (MgCl2)
Los ingredientes clave para una
reacción de PCR son Taq polimerasa,
cebadores, ADN molde y nucleótidos.
Los ingredientes se colocan en un
tubo, junto con los cofactores que
necesite la enzima, y se someten a
ciclos repetidos de calentamiento y
enfriamiento que permiten la síntesis
del ADN. El proceso es dirigido por
una máquina llamada termociclador,
que está programada para cambiar la
temperatura de la reacción cada pocos
minutos para hacer posible la
desnaturalización y síntesis del ADN.
PASOS DE LA PCR
DESNATURALIZACIÓN
TEMPLADO (55 - 65C°) EXTENSIÓN (72°C)
(96°C)
La reacción se calienta
La reacción se enfría para
bastante para separar, o La temperatura de la
que los cebadores puedan
desnaturalizar, las reacción se eleva para que
unirse a sus secuencias
cadenas de ADN. Esto la Taq polimerasa extienda
complementarias en el
proporciona los moldes de los cebadores y sintetice
molde de ADN de cadena
cadena sencilla para el así nuevas cadenas de ADN.
sencilla.
siguiente paso.
https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and-regulation/biotechnology/a/polymerase-chain-reaction-pcr
TAQ PCR requiere de una enzima ADN polimerasa que produzca
nuevas cadenas de ADN mediante el uso de las cadenas
POLIMERASA existentes como molde. La ADN polimerasa que normalmente
se utiliza en la PCR se llama Taqpolimerasa, por la bacteria
Y CEBADORES tolerante al calor de la que se aisló (Thermus aquaticus).
La Taq polimerasa solo puede hacer ADN si hay un cebador,

una corta secuencia de nucleótidos que proporciona un punto
de partida para la síntesis de ADN. En una reacción de PCR, la
región de ADN que será copiada, o amplificada, se determina
por los cebadores que los investigadores elijan.
Los cebadores para PCR son pedazos cortos de ADN de
cadena sencilla, generalmente de unos 20 nucleótidos de
longitud. En cada reacción de PCR se utilizan dos cebadores.
https://es.khanacademy.org/science/ap-biology/gene-expression-and-
regulation/biotechnology/a/polymerase-chain-reaction-pcr
USO DE LA ELECTROFORESIS EN GEL PARA
VISUALIZAR LOS RESULTADOS DE UNA PCR
La electroforesis en gel es una técnica en la que una corriente eléctrica
impulsa fragmentos de ADN a través de una matriz de gel y los fragmentos
de ADN se separan según su tamaño. Típicamente se incluye un estándar, o
marcador de peso molecular, para que pueda determinarse el tamaño de los
fragmentos en la muestra de PCR.
ELECTROFORESIS EN GEL

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"Esta técnica se basa en una replicación exponencial in vitro de

La síntesis de la cadena sigue la dirección

PCR? o virus, y el diagnóstico de trastornos

Y CEBADORES tolerante al calor de la que se aisló (Thermus aquaticus).

La Taq polimerasa solo puede hacer ADN si hay un cebador,

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