Biologia

Antes de poder tener en la mano un preparado definitivo para colocar en el
microscopio óptico debo realizar los siguientes pasos de la TECNICA

HISTOLOGICA:
1. Fijación
2. Deshidratación,
aclaramiento e
Inclusión
3. Sección y montaje
4. Tinción y
confección de un
preparado
definitivo
Poder resolutivo y límite de resolución:
El poder resolutivo es la capacidad que tiene un microscopio (o el ojo humano,

etc.) de percibir por separado dos puntos pequeños, adyacentes y cercanos. Vale
decir, es la capacidad para percibir detalles. El poder resolutivo aumenta a medida
que disminuye la distancia que separa dichos puntos. Es decir, si dos puntos
distan 1cm uno del otro y yo los veo como un solo punto borroso (aparte de
necesitar urgente un oculista) tendré menor poder resolutivo que alguien que los
distingue por separado o que distingue perfectamente puntos que distan de 0,5cm
entre si.
Si definimos ahora límite de resolución como la distancia mínima que debe

existir entre dos puntos para que sean distinguidos por separado,
comprenderemos fácilmente la relación inversa que se establece entre poder
resolutivo y límite de resolución: cuanto menor sea la distancia que debe separar a
dos puntos para que se distingan por separado, mayor será el poder resolutivo
necesario para observarlos.
El poder resolutivo del microscopio no guarda relación alguna con el aumento

del mismo. Depende principalmente de la apertura numérica de la lente y de la
longitud de onda de la luz utilizada. Sin abocarnos demasiado a definir "apertura
numérica" podemos decir que es un valor determinado, entre otras cosas, por el
diámetro de la lente
Partes del microscopio óptico y sus funciones
Tubo, cremallera de enfoque y tornillo macrométrico.

Oculares intercambiables de diferentes aumentos.
Tornillos macro y micrométrico.
Objetivos desmontados.
Diafragma - Condensador.
Platina y base.
Revólver.
1 * Ocular: lente situado cerca del ojo del observador. Capta y amplía la imagen formada
en los objetivos.
2 * Objetivo: lente situado en el revólver. Amplía la imagen, es un elemento vital que

permite ver a través de los oculares.
3 * Condensador: lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.
4 * Diafragma: regula la cantidad de luz que llega al condensador.
5 * Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

6 * Tubo: es la cámara oscura que porta el ocular y los objetivos. Puede estar unida al
brazo mediante una cremallera para permitir el enfoque.
7 * Revólver: Es el sistema que porta los objetivos de diferentes aumentos, y que rota para
poder utilizar uno u otro, alineándolos con el ocular.
8 * Tornillos macro y micrométrico: Son tornillos de enfoque, mueven la platina o el

tubo hacia arriba y hacia abajo. El macrométrico permite desplazamientos amplios para un
enfoque inicial y el micrométrico desplazamientos muy cortos, para el enfoque más preciso.
Pueden llevar incorporado un mando de bloqueo que fija la platina o el tubo a una
determinada altura.
9 *Platina: Es una plataforma horizontal con un orificio central, sobre el que se coloca la
preparación, que permite el paso de los rayos procedentes de la fuente de iluminación
situada por debajo. Dos pinzas sirven para retener el portaobjetos sobre la platina y un
sistema de cremallera que permite mover la preparación. Puede estar fija o unida al brazo
por una cremallera para permitir el enfoque.
10 *Brazo: Es la estructura que sujeta el tubo, la platina y los tornillos de enfoque

asociados al tubo o a la platina. La unión con la base puede ser articulada o fija.
11 * Base o pie: Es la parte inferior del microscopio que permite que éste se mantenga de
pie.
Sistema de iluminación
La fuente de luz (1), con la ayuda de una lente (o sistema) (2), llamada colector, se
representa en el plano del diafragma iris de abertura (5) del condensador (6). Este diagrama
se instala en el plano focal anterior del condensador (6) y puede variar su abertura
numérica. El diagrama iris (3) dispuesto junto al colector (2) es el diafragma de campo. La
variación del diámetro del diafragma de campo permite obtener su imagen igual al campo
visual lineal del microscopio. La abertura numérica del condensador (6) supera,
generalmente la de la abertura del objetivo microscópico: es la iluminación que permite ver
mejor lo que queremos observar como las células o las membranas celulares entre otros
Microscopio óptico compuesto

Artículo principal: Microscopio compuesto
Un microscopio compuesto es un microscopio óptico con más de un lente. Se utilizan

especialmente para examinar objetos transparentes, o cortados en láminas tan finas que se
transparentan.
Principales elementos de un microscopio básico

Diagrama simple de la óptica de un microscopio.
Los microscopios de este tipo suelen ser más complejos, con varias lentes en el objetivo
como en el ocular. El objetivo de estas lentes es el de reducir la aberración cromática y la
aberración esférica. En los microscopios modernos el espejo se sustituye por una lámpara
que ofrece una iluminación estable y controlable.
Los microscopios compuestos se utilizan para estudiar especímenes delgados, puesto que su
profundidad de campo es muy limitada. Por lo general, se utilizan para examinar cultivos,
preparaciones trituradas o una lámina muy fina del material que sea. Normalmente depende
de la luz que atraviese la muestra desde abajo y usualmente son necesarias técnicas
especiales para aumentar el contraste de la imagen.
La resolución de los microscopios ópticos está restringida por un fenómeno llamado

difracción que, dependiendo de la apertura numérica (AN o ) del sistema óptico y la
longitud de onda de la luz utilizada ( ), establece un límite definido ( ) a la resolución
óptica. Suponiendo que las aberraciones ópticas fueran despreciables, la resolución sería:
Normalmente, se supone una de 550 nm, correspondiente a la luz verde. Si el medio es el

aire, la práctica máxima es de 0,95, y en el caso de aceite de hasta 1,5.
Ello implica que incluso el mejor microscopio óptico está limitado a una resolución de unos
0,2 micrómetros.
 Microscopios electrónicos: La potencia amplificadora de un microscopio óptico está

bastante limitada en comparación con la del microscopio electrónico, que utiliza electrones
para iluminar un objeto, pudiendo mostrar estructuras mucho más pequeñas.
  Los principios básicos de los microscopios electrónicos son similares a los

microscopios ópticos, las diferencias están dadas en la fuente de luz (electrones ) y en el
tipo de lente, ya que los electrónicos emplean lentes electromagnéticas. La gran diferencia
de los dos tipos de microscopios es la potencia que tiene cada cual, ya que el microscopio
óptico es capaz de aumentar unas 2000 veces y una resolución de 0,2 micrones ( 0,0001
mm. ) mientras que el electrónico aumenta hasta un 1000000 de veces con una resolución
de 0.1 nanómetros ( 0,0000001 mm.).
  Todos los microscopios electrónicos cuentan con varios elemento básicos. Disponen
de un cañón de electrones que emite los electrones que chocan contra la muestra, creando
una imagen aumentado. Se utilizan lentes electromagnéticas para crear campos que dirigen
y enfocan el haz de electrones, junto con un sistema de vacío al interior del microscopio,
para que las moléculas de aire no desvíen los electrones.
  Existen dos tipos básicos de microscopios electrónicos:
 
Microscopio electrónico de transmisión (TEM) : se utiliza para ver secciones o

cortes de tejidos, dirige un haz de electrones hacia el objeto que se desea aumentar;
una parte de los electrones rebotan o son absorbidos por el objeto y otros lo
atraviesan formando una imagen aumentada de la muestra. Para utilizar un TEM
debe cortarse la muestra en capas finas con un grosor entre 50 a 200 nanómetros.
Dicha muestra se coloca en una redecilla que se untroduce en el tubo con una pieza
alagargada que se introduce por un lateral

 Para el funcionamiento de este microscopio se utiliza un haz de electrones, obtenido
desde una lámpara especial de tungsteno. El tubo tiene vacío en su interior, para
impedir que nada dificulte el paso de los electrones. Un fallo en este vacío ocasiona
la aparición de cuerpos extraños en el visor. Luego de ser enfocados por las lentes
electromagnéticas, los electrones inciden sobre la muestra, formando la imagen que
se obtiene en blanco y negro, la cual puede proyectarse sobre una pantalla especial o
película fotográfica. El TEM examina partes grandes de la muestra.

 Éste microscopio obtiene imágenes en dos dimensiones, que luego pueden ser
plasmadas en fotografías si interesa. Éste es el tipo de microscopio electrónico más
utilizado en investigación, ya que obtiene muy buenos resultados y tiene gran
potencia.


 TEM
o Microscopio electrónico de barrido (SEM): Este permite la observación

de superficies sin la necesidad de realizar cortes microscópicos, explorando
la superficie de la imagen punto por punto. Su funcionamiento se basa en
recorrer la muestra con un haz muy concentrado de electrones, de forma
parecida al barrido de un haz de electrones por la pantalla de una televisión.
o
o Los electrones del haz pueden dispersarse de la muestra o provocar la
aparición de electrones secundarios, ambos son recogidos y contados por un
dispositivo electrónico situado a los lados de la muestra. Cada punto leído de
la muestra corresponde a un píxel en un monitor de televisión. Cuanto
mayor sea el numero de electrones contados por el dispositivo, mayor será el
brillo del píxel en la pantalla. Como consecuencia del barrido electrónico se
genera una imagen con apariencia tridimensional, que permite estimar
parámetros celulares como tamaño y forma, dándole ventajas en este sentido
sobre el TEM. Las desventajas del SEM es su menor capacidad de aumento
ya que sólo puede a unas 100000 veces y también tiene una resolución 1000
veces menor que el TEM. Eso y que sólo permite ver el exterior de la
muestra.
o
o También se han desarrollado otro tipo de microscopio electrónico:
microscopio electrónico de barrido y transmisión el cual combina los
elementos de un SEM y un TEM, pudiendo mostrar los átomos individuales
de un objeto. Es bastante moderno y relativamente raro, pero también vimos
uno en el centro.
o
o Otros tipos son:
o
 Microscopio sonda de barrido
 Microscopio de túnel de barrido
 Microscopio de fuerza atómica
SEM
Preparación de muestras
Tanto en el microscopio óptico como en el microscopio electrónico de

transmisión, la formación de una imagen con un contraste perceptible exige
que diferentes partes de la célula difieran en su transparencia al haz de
iluminación, ya sean rayos de luz o electrones. Las partes de la muestra que
permiten el paso de la luz o los electrones, aparecen brillantes, mientras que
las partes que bloquean el paso del haz de iluminación aparecen oscuras. En
el microscopio electrónico de barrido, las áreas que aparecen claras son
aquellas que desvían los electrones a la imagen; las partes que aparecen
oscuras son aquellas que no están bien iluminadas por el haz electrónico o
que desvían los electrones fuera del detector.
Para crear suficiente contraste cuando se usa el microscopio óptico, las

células deben ser tratadas con colorantes u otras sustancias que se adhieran
diferencialmente a lugares específicos, o reaccionan con ellos, produciendo
regiones de opacidad diferente. Para el microscopio electrónico los
especímenes se tratan generalmente con compuestos de metales pesados.
Después que un espécimen ha sido teñido, todo el colorante que no se haya

adherido a estructuras específicas debe ser lavado. Sin embargo, las células
son bastante frágiles y cualquier tratamiento enérgico desharía su estructura.
Para resolver este problema, los espécimen biológicos, generalmente se
“fijan” antes de teñirlos. Este procedimiento implica un tratamiento con
compuestos que amarran las estructuras a su lugar, habitualmente con la
formación de enlaces covalentes adicionales entre las moléculas .
Los especímenes para el microscopio electrónico también deben

deshidratarse, ya sea por métodos químicos, o por métodos de congelación-
desecación parecidos a los que se usan para hacer el café deshidratado. Este
paso es necesario debido a las propiedades de los electrones que forman el
haz de iluminación. Si atraviesan una cámara que contiene moléculas
gaseosas, los electrones son desviados por las moléculas y no pueden
enfocarse en un haz. Así que, como ya dije, todo el aire debe ser evacuado
del interior de la cámara interna de un microscopio electrónico, creándose un
vacío. Si las muestras no deshidratan primero, las moléculas de agua que se
evaporan y penetran en la cámara, destruirán el vacío y el haz de electrones
enfocado. Los procedimientos requeridos para preparar la mayoría de las
muestras para el microscopio óptico o para el electrónico, habitualmente
producen la muerte de las células constituyentes.
Para el SEM, la muestra debe estar recubierta de un metal tal que oro para
permitir la refracción de los electrones.

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microscopio óptico debo realizar los siguientes pasos de la TECNICA

Poder resolutivo y límite de resolución:

El poder resolutivo es la capacidad que tiene un microscopio (o el ojo humano,

Si definimos ahora límite de resolución como la distancia mínima que debe

El poder resolutivo del microscopio no guarda relación alguna con el aumento

Partes del microscopio óptico y sus funciones

Tubo, cremallera de enfoque y tornillo macrométrico.

Tornillos macro y micrométrico.

2 * Objetivo: lente situado en el revólver. Amplía la imagen, es un elemento vital que

3 * Condensador: lente que concentra los rayos luminosos sobre la preparación.

4 * Diafragma: regula la cantidad de luz que llega al condensador.

5 * Foco: dirige los rayos luminosos hacia el condensador.

8 * Tornillos macro y micrométrico: Son tornillos de enfoque, mueven la platina o el

10 *Brazo: Es la estructura que sujeta el tubo, la platina y los tornillos de enfoque

Microscopio óptico compuesto

Un microscopio compuesto es un microscopio óptico con más de un lente. Se utilizan

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Normalmente, se supone una de 550 nm, correspondiente a la luz verde. Si el medio es el

 Microscopios electrónicos: La potencia amplificadora de un microscopio óptico está

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Microscopio electrónico de transmisión (TEM) : se utiliza para ver secciones o

o Microscopio electrónico de barrido (SEM): Este permite la observación

 Microscopio sonda de barrido

 Microscopio de túnel de barrido

 Microscopio de fuerza atómica

Tanto en el microscopio óptico como en el microscopio electrónico de

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