UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA

CURSO: LABORATORIO BIOQUIMICA-pregrado biología

GRUPO: JUEVES
TIROSINASA II y III
Estudiante(s): Juan Manuel Díaz Escobar, Karen Lizeth Cardona Hurtado

1. Con los resultados consignados en la siguiente tabla, haga los gráficos

correspondientes de absorbancia vs tiempo

(s/Tubo A1 A2 A3
1 ml 1.5 ml 2.0

0 0 0 0

15 0,02 0,033 0,105

30 0,052 0,111 0,222

45 0,09 0,33 0,445

60 0,11 0,44 0,556

75 0,13 0,46 0,645

90 0,15 0,47 0,720

105 0,18 0,48 0,750

120 0,191 0,481 0,780

135 0,201 0,482 0,81

150 0,22 0,483 0,820

165 0,222 0,483 0,830

180 0,223 0,483 0,833

2. Calculen las pendientes de los gráficos anteriores, considere este valor como la Vi
para cada concentración del sustrato [S].

Absorbancia vs Tiempo
1,2
y = 0,0196x + 0,0005 y = 0,0395x + 0,0876 y = 0,0696x + 0,0911
1

0,8
Absorbancia

0,6

0,4

0,2

0
0 15 30 45 60 75 90 105 120 135 150 165 180
Tiempo (s)

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

Lineal (Tubo 1) Lineal (Tubo 1) Lineal (Tubo 2)

Calcule la concentración del sustrato final como indica la guía y tabule los datos
correspondientes en la siguiente tabla

Para hallar [S]f se utiliza la siguiente ecuación:

𝑣1 ∗ [𝑆]𝑖
[𝑆]𝑓 =
𝑣2

Donde v1 es el volumen adicionado de L-metildopa para cada tubo, [S]i es la

concentración inicial de L-metildopa, que como dice la guía es 0.03M, y v2 es el
volumen final de cada tubo, que es 5ml ya que cada tubo fue completado hasta este
volumen con buffer pH: 7.2

tubo [S]f Vi 1/[S] 1/Vi Vi/[S] [S]/Vi

1 0.006 0,0012 166.667 833.333 0.200 5

2 0.009 0,0027 111.111 370.370 0.300 3.333

3 0.012 0,0044 583.333 227.273 0.367 2.727

3. Haga cada una de las siguientes gráficas: Vi vs [S] ,1/Vi vs 1/ [S], Vi vs Vi/[S] y [S]/Vi
vs [S]f y de estas determine los valores de KM y Vmax.
 Vi vs [S]
0,005
0,0045
0,004
0,0035
0,003
0,0025
Vi

0,002
0,0015
0,001
y = 0,0016x - 0,0004
0,0005
0
0.006 0.009 0.012
[S]

Vi Lineal (Vi)

Partiendo de la ecuación de Michaelis-Menten:

𝑉𝑚𝑎𝑥 ∗ [𝑆]
𝑉𝑖 =
𝐾𝑚 + [𝑆]

Y teniendo en cuenta la relación numérica:

𝑉𝑚𝑎𝑥
𝑉𝑖 = 2
y 𝐾𝑚 = [𝑆]

𝑉𝑚𝑎𝑥 será tomado como 0.0045, entonces para hallar 𝐾𝑚 :

0.0045
𝑉𝑖 = = 0.002
2

Para 0,002 la concentración es de 0.008 M. La cual sería entonces el valor de KM

 1/Vi vs 1/[S]
900.000
800.000
y = -303030x + 1E+06
700.000
600.000
500.000
1/Vi

400.000
300.000
200.000
100.000
0
166.667 111.111 583.333
1/[S]

Serie 1 Lineal (Serie 1)

1 1
Según la linealización de Linewever-Burk, es la intersección con el eje Y, y −
𝑉𝑚𝑎𝑥 𝐾𝑚

es la intersección con el eje X. Por lo tanto y basándose en la ecuación obtenida a partir

de dos puntos. obtenemos qué:
𝑦 = −1.455 ∗ 𝑥 + 1075.758

Cuando x=0
𝑦 = −117.86 ∗ 0 + 332.14
𝑦 = 1075.758

Cuando y = 0
−1075.758
𝑥=
−1.455

𝑥 = 739.353
Por lo tanto:
1
𝑉𝑚𝑎𝑥
= 1075.758, 𝑉𝑚𝑎𝑥 = 0.001

1
− = 739.353 , 𝐾𝑚 = −0.001
𝐾𝑚
 Vi vs Vi/[S]
0,005
0,0045
0,004
0,0035
0,003
0,0025
Vi

0,002
0,0015
0,001
y = 0,0016x - 0,0004
0,0005
0
0.200 0.300 0.367
Vi/[S]

Serie 1 Lineal (Serie 1)

Según la linealización de Eadie-Hofstee se tiene que, 𝑉𝑚𝑎𝑥 es la intersección con el eje

𝑉
Y, y 𝐾𝑚𝑎𝑥 la intersección con el eje X,
𝑚

Obteniendo la ecuación de la recta:

𝑦 = 0.019 ∗ 𝑥 − 0.003

Cuando x=0
𝑦 = 0.019 ∗ 0 − 0.003

𝑦 = −0.003

Cuando y = 0
0.003
𝑥=
0.019

𝑥 = 0.158
Por lo tanto:

𝑉𝑚𝑎𝑥 = −0.003

𝑉𝑚𝑎𝑥 −0.003
𝐾𝑚
= 𝐾𝑚
= 0.158, despejando, 𝐾𝑚 = -0.019
 [S]/Vi vs [S]
4000
3500
3000
2500
[S]/Vi

2000
1500
1000
y = 1361x - 700,33
500
0
0.006 0.009 0.012
[S]

Serie 1 Lineal (Serie 1)

𝐾𝑚
Según la linealización de Hanes-Woolf se tiene que, 𝑉 es la intersección con el eje Y,
𝑚𝑎𝑥

y −𝐾𝑚 es la intersección con el eje X.

Obteniendo la ecuación de la recta:

𝑦 = 473.542 ∗ 𝑥 + 2.159

Cuando x=0

𝑦 = 473.542 ∗ 0 + 2.159

𝑦 = 2.159

Cuando y = 0
−2.159
𝑥=
473.542

𝑥 = −0.005
Por lo tanto:
𝐾𝑚 = 0.005

𝐾𝑚 0.005
𝑉𝑚𝑎𝑥
= 𝑉𝑚𝑎𝑥
= 2.159 , despejando, 𝑉𝑚𝑎𝑥 = 0.002
4. Compare los valores obtenidos por los distintos métodos y determine cuál es el
menos apropiado en términos de la dificultad para hallar los valores, luego compare
los resultados de los métodos para ver si son congruentes. Compárelos teniendo en
cuenta el método menos apropiado y sin tenerlo en cuenta.

Comparando los valores obtenidos para cada gráfica, y obteniendo los valores de Vmax
y Km es notorio como por el primer método la dificultad de hallar las variables es bastante
reducida, pues solo basta de observación y la ecuación de la recta para hallar los valores,
sin embargo, para los otros 3 métodos se dificulta un poco más ya que hay pasos
adicionales donde se debe despejar el valor, entre ellos la dificultad más alta para hallar
las variables se encuentra en lo últimos 2 métodos. Haciendo la comparación entre los
valores obtenidos es posible observar que difieren entre ellos sin embargo es rescatable
que entre métodos el primero y el segundo son los que más similitud tienen, el tercer
método arroja los resultados más desfasados comparado con los demás.

5. Con los resultados consignados en la siguiente tabla, complete los valores en la tabla

tubo [S]f Vi (sin Vi (con

inhibidor) inhibidor)

1 0,06 0,98 0,85

2 0,19 1,32 1,07

3 0,25 1,76 1,37

tubo 1/[S] 1/Vi (sin 1/Vi (con

inhibidor) inhibidor)

1 16.67 1.02 1.18

2 5.26 0.76 0.93

3 4 0.57 0.73

tubo Vi/[S] (sin Vi/[S] (con [S]/Vi (sin [S]/Vi (con

inhibidor) inhibidor) inhibidor) inhibidor)

1 16.33 14.17 0.06 0.07

2 6.95 5.63 0.14 0.18

3 7.04 5.48 0.14 0.18

6. Haga cada una de las siguientes gráficas: Vi vs [S] ,1/Vi vs 1/ [S], Vi vs Vi/[S] y [S]/Vi
vs [S]f y de estas determine los valores de Km y Vmax.

Vi vs [S]f
2
1,8
1,6
1,4
Vi

1,2
1
0,8
0,6
0,4
y = 0,39x + 0,5733 y = 0,26x + 0,5767
0,2
0
0,06 0,19 0,25
[S]f

vi sin inhibidor vi con inhibidor

Lineal (vi sin inhibidor) Lineal (vi con inhibidor)

Partiendo de la ecuación de Michaelis-Menten:

𝑉𝑚𝑎𝑥 ∗ [𝑆]
𝑉𝑖 =
𝐾𝑚 + [𝑆]

Y teniendo en cuenta la relación numérica:

𝑉𝑚𝑎𝑥
𝑉𝑖 = y 𝐾𝑚 = [𝑆]
2

SIN INHIBIDOR:
𝑉𝑚𝑎𝑥 será tomado como 1.8, entonces para hallar 𝐾𝑚 :

1.8
𝑉𝑖 = = 0.9
2

Para 0,9 la concentración es de 0,04 M. La cual sería entonces el valor de KM

CON INHIBIDOR:
𝑉𝑚𝑎𝑥 será tomado como 1.4, entonces para hallar 𝐾𝑚 :

1.4
𝑉𝑖 = = 0.7
2

Para 0,7 la concentración es de 0,004 M. La cual sería entonces el valor de KM

 1/Vi vs 1/[S]
1,4

1,2

0,8
1/Vi

0,6

0,4
y = -0,225x + 1,2333 y = -0,225x + 1,3967
0,2

0
16,67 5,26 4
1/[S]

1/Vi sin inhibidor 1/Vi con inhibidor

Lineal (1/Vi sin inhibidor) Lineal (1/Vi con inhibidor)

1 1
Según la linealización de Linewever-Burk, es la intersección con el eje Y, y −
𝑉𝑚𝑎𝑥 𝐾𝑚

es la intersección con el eje X. Por lo tanto y basándose en la ecuación obtenida a partir

de dos puntos. obtenemos qué:
SIN INHIBIDOR:
𝑦 = −0.036 ∗ 𝑥 + 0.428

Cuando x=0
𝑦 = −0.036 ∗ 0 + 0.428
𝑦 = 0.428

Cuando y = 0
−0.428
𝑥=
−0.036

𝑥 = 11.889
Por lo tanto:
1
𝑉𝑚𝑎𝑥
= 0.428, despejando, 𝑉𝑚𝑎𝑥 = 2.336

1
− 𝐾 =11.889, 𝐾𝑚 = −0.084
𝑚

CON INHIBIDOR:
𝑦 = −0.036 ∗ 𝑥 + 0.588

Cuando x=0
𝑦 = 0.036 ∗ 0 + 0.588
𝑦 = 0.588

Cuando y = 0
 −0.588
𝑥=
−0.036

𝑥 = 16.333
Por lo tanto:
1
𝑉𝑚𝑎𝑥
= 0.588, despejando, 𝑉𝑚𝑎𝑥 = 1.701

1
− 𝐾 =16.333, 𝐾𝑚 = −0.061
𝑚

Vi vs Vi/[S]
2
1,8
1,6
1,4
1,2
1
Vi

0,8
0,6
y = -0,39x + 2,1333 y = -0,26x + 1,6167
0,4
0,2
0
7.04 6.95 16,33
Vi/[S]

Vi sin inhibidor Vi con inhibidor

Lineal (Vi sin inhibidor) Lineal (Vi con inhibidor)

Según la linealización de Eadie-Hofstee se tiene que, 𝑉𝑚𝑎𝑥 es la intersección con el eje

𝑉
Y, y 𝐾𝑚𝑎𝑥 la intersección con el eje X,
𝑚

Obteniendo la ecuación de la recta:

SIN INHIBIDOR:

𝑦 = −0.084 ∗ 𝑥 + 2.351

Cuando x=0
𝑦 = −0.084 ∗ 0 + 2.351

𝑦 = 2.351

Cuando y = 0
2.351
𝑥=
−0.084

𝑥 = −27.988
Por lo tanto:

𝑉𝑚𝑎𝑥 = 2.351
𝑉𝑚𝑎𝑥 2.351
𝐾𝑚
= 𝐾𝑚
= −27.988, despejando, 𝐾𝑚 = -0.084

CON INHIBIDOR:

𝑦 = −0.056 ∗ 𝑥 + 1.764

Cuando x=0
𝑦 = −0.056 ∗ 0 + 1.764

𝑦 = 1.764

Cuando y = 0
1.764
𝑥=
−0.056

𝑥 = −31.500
Por lo tanto:

𝑉𝑚𝑎𝑥 = 1.764

𝑉𝑚𝑎𝑥 1.764
𝐾𝑚
= 𝐾𝑚
= −31.500, despejando, 𝐾𝑚 = -0.056

[S]/Vi vs [S]
0,25

0,2

0,15
[S]/Vi

0,1

0,05
y = 0,04x + 0,0333 y = 0,055x + 0,0333
0
0,06 0,19 0,25
[S]

[S]/Vi sin inhibidor [S]/Vi con inhibidor

Lineal ([S]/Vi sin inhibidor ) Lineal ([S]/Vi con inhibidor )

𝐾𝑚
Según la linealización de Hanes-Woolf se tiene que, 𝑉 es la intersección con el eje Y,
𝑚𝑎𝑥

y −𝐾𝑚 es la intersección con el eje X.

Obteniendo la ecuación de la recta:

SIN INHIBIDOR:
𝑦 = 0.421 ∗ 𝑥 + 0.035

Cuando x=0

𝑦 = 0.421 ∗ 0 + 0.035

𝑦 = 0.035

Cuando y = 0
−0.035
𝑥=
0.421

𝑥 = −0.083
Por lo tanto:
𝐾𝑚 = 0.083

𝐾𝑚 0.083
= = 0.035 , despejando, 𝑉𝑚𝑎𝑥 = 2.371
𝑉𝑚𝑎𝑥 𝑉𝑚𝑎𝑥

CON INHIBIDOR:
𝑦 = 0.579 ∗ 𝑥 + 0.035

Cuando x=0

𝑦 = 0.579 ∗ 0 + 0.035

𝑦 = 0.035

Cuando y = 0
−0.035
𝑥=
0.579

𝑥 = −0.060
Por lo tanto:
𝐾𝑚 = 0.060

𝐾𝑚 0.060
𝑉𝑚𝑎𝑥
= 𝑉𝑚𝑎𝑥
= 0.035 , despejando, 𝑉𝑚𝑎𝑥 = 1.714
7. Compare los valores obtenidos por ambos métodos con los obtenidos en ausencia de
inhibidor y determine el tipo de inhibidor.
A través del análisis de los resultados de ambos cálculos, con y sin inhibidor, es posible
dar las siguientes conclusiones: es notable que el inhibidor agregado es a competitivo,
esto se deduce porque al agregar inhibidor el Km y el Vmax disminuyen, cinética
característica de este tipo de inhibidor y es observada en el análisis de cada método.