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    Reacción en Cadena de La Polimerasa (PCR)

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    VALERIA MORALES RUIZ
    La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica que amplifica millones de veces una secuencia específica de ADN a través de varios ciclos que incluyen la desnaturalización de las cadenas de ADN, la hibridación de primers y la extensión de las cadenas por la enzima ADN polimerasa. La PCR requiere ADN, la enzima Taq polimerasa, dNTPs, magnesio, buffer y agua. Los productos de amplificación son analizados mediante electroforesis en geles de agarosa.

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    Reacción en Cadena de La Polimerasa (PCR)

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    VALERIA MORALES RUIZ
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    La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica que amplifica millones de veces una secuencia específica de ADN a través de varios ciclos que incluyen la desnaturalización de las cadenas de ADN, la hibridación de primers y la extensión de las cadenas por la enzima ADN polimerasa. La PCR requiere ADN, la enzima Taq polimerasa, dNTPs, magnesio, buffer y agua. Los productos de amplificación son analizados mediante electroforesis en geles de agarosa.

    Descripción original:

    Título original

    PCR

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    La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica que amplifica millones de veces una secuencia específica de ADN a través de varios ciclos que incluyen la desnaturalización de las cadenas de ADN, la hibridación de primers y la extensión de las cadenas por la enzima ADN polimerasa. La PCR requiere ADN, la enzima Taq polimerasa, dNTPs, magnesio, buffer y agua. Los productos de amplificación son analizados mediante electroforesis en geles de agarosa.

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    Reacción en Cadena de La Polimerasa (PCR)

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    VALERIA MORALES RUIZ
    La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica que amplifica millones de veces una secuencia específica de ADN a través de varios ciclos que incluyen la desnaturalización de las cadenas de ADN, la hibridación de primers y la extensión de las cadenas por la enzima ADN polimerasa. La PCR requiere ADN, la enzima Taq polimerasa, dNTPs, magnesio, buffer y agua. Los productos de amplificación son analizados mediante electroforesis en geles de agarosa.

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    Reacción en cadena

    de la polimerasa
    (pcr)
    EQUIPO 2
    E D G A R A R M E N T A , S E B A S T I Á N M U R I L L O ,
    JAZIEL ORTEGA, LEONARDO QUEZADA,
    RAFAEL URUETA, GIOVANNA VEGA
    Que es la pcr?
    La reacción en cadena de la polimerasa es una
    reacción enzimática in vitro que amplifica
    millones de veces una secuencia específica de
    ADN durante varios ciclos repetidos en los que la
    secuencia blanco es copiada fielmente. Para ello,
    la reacción aprovecha la actividad de la enzima
    ADN polimerasa que tiene la capacidad de
    sintetizar naturalmente el ADN en las células.
    CÓMO FUNCIONA LA REACCIÓN

    CADA CICLO DE LA PCR SE LLEVA A CABO EN


    TRES ETAPAS PRINCIPALES:
    DESNATURALIZACIÓN, HIBRIDACIÓN Y
    EXTENSIÓN.
    DESNATURALIZACION
    En esta etapa, las cadenas de ADN son calentadas y separadas a
    una temperatura de 95 °C durante 20-30 segundos; el tiempo
    depende de la secuencia del templado, es decir, si la cantidad de
    G-C es alta, será necesario más tiempo para romper sus uniones
    debido a que el apareamiento de estas bases está formado por
    tres enlaces, uno más que las bases de A-T. Además, depende de
    la velocidad en la que el termociclador aumenta la temperatura,
    esto varía de acuerdo al modelo del equipo. Al final de esta etapa
    tendremos las cadenas separadas que servirán como templado
    para el siguiente paso.
    HIBRIDACIÓN
    En esta etapa, los primers se alinean al extremo 3’ del
    templado previamente separado e hibridan con su
    secuencia complementaria. Para que se forme el
    complejo templado-primers, es importante que la
    temperatura de hibridación o temperatura melting (Tm)
    sea la óptima; ésta generalmente oscila entre 50-60 °C.

    Si el diseño de los primers es el correcto y la


    temperatura es la adecuada, la estabilidad y
    especifi cidad del complejo será eficiente.
    Extension

    En esta etapa, la Taq polimerasa actúa sobre el


    complejo templado-primers y empieza su
    función catalítica a una velocidad muy rápida;
    agrega dNTP’s complementarios para crear las
    cadenas completas de ADN. La extensión de las
    cadenas es en dirección de la síntesis del ADN, es
    decir, de 5’ a 3’. La temperatura óptima para la
    reacción es de 72 °C, ya que a esa temperatura la
    enzima es funcional. Al fi nal del ciclo, se habrán
    formado los amplicones con un tamaño dictado
    por el número total de pares de bases (pb) que
    deberá ser conocido por el investigador.
    QUE ELEMENTOS
    QUIMICOS SE NECESITAN
    ADN,
    La enzima más usada se llama Taq ADN polimerasa, proviene de una bacteria termófila
    llamada Thermus aquaticus, la cual vive en condiciones de temperatura muy altas, es la más
    ampliamente usada porque se considera una enzima termoestable

    DNTPS, MG +, BUFFER Y H2O.


    primers son secuencias cortas de moléculas de ácidos nucléicos que son utilizados para la hoy en día existen programas
    amplificación de un gen si no se cumplen las condiciones adecuadas los primers se formaran informáticos para diseñar primers con
    dímeros de primers, es decir, de productos inespecíficos. se utilizan 2 «forward» y «reward» alta especificidad, por lo que se evita la
    ambas deben estar diseñadas para que hibriden con el templado y las cadenas de ADN puedan formación de productos inespe- rados.
    ser extendidas por la Taq polimerasa
    los dNTP’s son los ladrillos o bases nitrogenadas con los que la Taq polimerasa construye las
    nuevas cadenas de ADN.
    magnesio es un cofactor enzimático
    Taq polimerasa cataliza la incorporación de nucleótidos en ADN
    El agua es el disolvente en la reacción y se usa en su forma destilada para no degradar los
    acidos nucleicos
    ¿CÓMO SE ANALIZA EL PRODUCTO

    DE AMPLIFICACIÓN?

    Al final de la PCR, para saber si la reacción transcurrió


    eficientemente, los amplicones son visualizados a
    través de una electroforesis en geles de agarosa
    La visualización de los amplicones se lleva a cabo
    tomando una foto digital al gel de agarosa expuesto a
    luz UV, adicionalmente un procesador de imágenes se
    encarga de analizar las bandas observadas.
    APLICACIONES DE
    LA REACCIÓN EN
    CADENA DE LA
    POLIMERASA.
    INDUSTRIA
    MEDICAS ARQUEOLOGICAS ALIMENTARIA
    En medicina su valor diagnóstico es La técnica ha tenido gran impacto en la
    amplio. La detección de bacterias y reconstrucción del material genético fósil. Las pruebas PCR se utilizan
    virus es posible si se utilizan los Se ha podido amplificar material genético para detectar la presencia de
    segmentos iniciadores necesarios. proveniente de momias con más de 2 400 patógenos en los alimentos, lo
    Mediante PCR se puede revelar la años, así como otros restos fósiles de hasta que ayuda a garantizar la
    presencia del HIV­1 en individuos que 7 500 años. El más antiguo de los ADN seguridad alimentaria y a
    no muestran una respuesta analizados por PCR es el correspondiente a prevenir enfermedades
    inmunológica eficiente ante este una termita fósil, embalsamada en ámbar transmitidas por los alimentos.
    agente y que pueden pasar como no que tiene una edad entre 25 y 30 millones
    infectados cuando se utilizan las de años. El estudio de plantas fósiles
    técnicas de inmunodiagnóstico también es posible con esta técnica.
    rutinarias.
    GRACIAS!!

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