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    Informacion HPLC SEMINARIO

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    JESSI ALEXANDRA CONTRERAS DURAN
    La elución isocrática mantiene una composición constante de la fase móvil, lo que crea separaciones predecibles pero poco sorprendentes. La elución de gradientes mejora la eficiencia y el poder de separación al cambiar la composición de la fase móvil, lo que permite separar múltiples moléculas complejas en un tiempo razonable. El método de gradiente requiere determinar la composición inicial y final del solvente, ajustar el tiempo del gradiente y la forma del gradiente, y regresar a las condiciones iniciales entre m

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    Informacion HPLC SEMINARIO

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    JESSI ALEXANDRA CONTRERAS DURAN
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    La elución isocrática mantiene una composición constante de la fase móvil, lo que crea separaciones predecibles pero poco sorprendentes. La elución de gradientes mejora la eficiencia y el poder de separación al cambiar la composición de la fase móvil, lo que permite separar múltiples moléculas complejas en un tiempo razonable. El método de gradiente requiere determinar la composición inicial y final del solvente, ajustar el tiempo del gradiente y la forma del gradiente, y regresar a las condiciones iniciales entre m

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    La elución isocrática mantiene una composición constante de la fase móvil, lo que crea separaciones predecibles pero poco sorprendentes. La elución de gradientes mejora la eficiencia y el poder de separación al cambiar la composición de la fase móvil, lo que permite separar múltiples moléculas complejas en un tiempo razonable. El método de gradiente requiere determinar la composición inicial y final del solvente, ajustar el tiempo del gradiente y la forma del gradiente, y regresar a las condiciones iniciales entre m

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    La elución isocrática mantiene una composición constante de la fase móvil, lo que crea separaciones predecibles pero poco sorprendentes. La elución de gradientes mejora la eficiencia y el poder de separación al cambiar la composición de la fase móvil, lo que permite separar múltiples moléculas complejas en un tiempo razonable. El método de gradiente requiere determinar la composición inicial y final del solvente, ajustar el tiempo del gradiente y la forma del gradiente, y regresar a las condiciones iniciales entre m

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    Separaciones isocráticas:

    En la elución isocrática, la composición constante significa el estado de


    equilibrio en la columna HPLC y la velocidad real de las moléculas que se
    mueven en la columna es constante. Las interacciones de la fase móvil y fase
    estacionaria también son estables durante la carrera. Esto crea separaciones
    progresivamente poco sorprendentes, independientemente de si el control de
    separación no es extremadamente alto.
     

    Separación de gradientes:
    La elución del gradiente aumenta el poder de separación de la cromatografía
    HPLC sobre todo debido a la espectacular mejora de la eficiencia aparente. El
    método de separación de gradiente se utiliza para la muestra de múltiples
    moléculas complejas, ya que puede que no sea factible separar todas las
    moléculas en la elución isocrática. Esto conduce al problema general de la
    elución en la que ningún conjunto de condiciones es útil para separar todos los
    analitos de una columna HPLC en un período de tiempo razonable mientras
    todavía se consigue la resolución de cada analito. Esto requiere la ejecución de
    elución gradiente. Cada componente de la mezcla de muestra se atribuirá a
    distintas pendientes de retención versus composición orgánica. Al utilizar un
    método de gradiente, debe permitirse que la columna se equilibre a la
    condición inicial de la composición de la fase móvil antes de que se inyecte la
    siguiente muestra y al comienzo de la siguiente carrera de gradiente. La
    decisión de la elución isocrática o de gradiente depende del número de
    moléculas a separar. La separación puede acelerarse o descomponerse en la
    evaluación del gradiente.

    Método de Gradiente de Elución:


    Es un término que se utiliza para describir el proceso mediante el cual se
    cambia la composición de la fase móvil. Pueden efectuarse de dos maneras
    1. A baja presión
    2. A alta presión
    Cuándo se desarrolla un análisis usando el método de gradiente
    se debe tener presente dos objetivos:
     Obtener la mejor resolución de los componentes de la muestra en el
    menor tiempo posible.
     Asegurar alta precisión y exactitud
    Para obtener buenos resultados con el método de gradiente debemos seguir
    cinco pasos fundamentales:
    1. Determinar la composición inicial y final del solvente.
    2. Ajustar el tiempo del gradiente.
    3. Determinar la forma del gradiente (lineal, cóncava o convexa).
    4. Ajustar la velocidad del flujo para mejorar la resolución.
    5. Regresar a las condiciones iniciales la columna.

    Ventajas y desventajas de la elución isocrática en HPLC

    VENTAJAS Y DESVENTAJAS DE LA ELUCION ISOCRATICA EN


    HPLC
    En cromatografía líquida de alto rendimiento, la isocrática y el gradiente son
    métodos de separación muy útiles para la separación de analitos. El modo de
    separación en el que la composición de la fase móvil se mantiene constante
    durante el proceso se llama elución isocrática. Por lo general, se utiliza
    ampliamente en cromatografía de fase inversa. El método isocrático suele
    tener éxito en la separación de moléculas de muestra que no son habituales en
    su afinidad por la fase estacionaria. Muchos cromatógrafos sugieren que
    cuando funcione una elución isocrática, evite utilizar el gradiente.
    Ventajas de la elución isocrática en HPLC:

     No es necesaria ninguna bomba HPLC específica para fluir los


    disolventes/fase móvil.
     La transferencia del método es fácilmente posible.
     No existe necesidad de reequilibrar la composición inicial de la fase
    móvil entre inyecciones consecutivas.
     Es un método rentable en comparación con la elución en gradiente.
     Es una forma sencilla de separación en comparación con la elución en
    gradiente.
    Desventajas de la elución isocrática en HPLC:

     Éste es un método que requiere tiempo.


     La principal desventaja es que los picos de elución retrasados se vuelven
    muy anchos y planos.
     Poca resolución de los picos de elución iniciales.
     Esto separará un número limitado de moléculas.
     Este método no es adecuado para columnas HPLC limpias.
     La selectividad no cambia si cambian las dimensiones de la columna.

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