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Extraccion de Adn de Higado de Bovino
Extraccion de Adn de Higado de Bovino
Extraccion de Adn de Higado de Bovino
Departamento de Biología
Biología Molecular
1. INTRODUCCIÓN
Los ácidos nucleicos son las macromoléculas de información primaria de la célula. Hay dos
clases de ácidos nucleicos, ácido desoxirribonucleico o DNA y ácido ribonucleico o RNA.
Estas moléculas especifican las secuencias de aminoácidos de todas las proteínas, incluyendo
las enzimas. Por lo tanto el repertorio de enzimas y proteínas estructurales determinan los
potenciales bioquímicos y fisiológicos.
Para extraer, caracterizar y cuantificar varias clases de RNA y DNA se han desarrollado
muchas metodologías. Los ácidos nucleicos a menudo se identifican mediante su espectro de
absorción específico. Un espectro de absorción es una curva que muestra cuanta luz absorbe
una sustancia a diferentes longitudes de onda. Los ácidos nucleicos absorben intensamente en
el intervalo de luz UV, como resultado de los dobles enlaces conjugados en las purinas y
pirimidinas. En esta práctica se ex tr a e ADN de hígado bovino y se comprueba por
determinación espectrofotométrica.
1
2. OBJETIVOS
3. CONSULTAS PRELIMINARES
4. MATERIALES
2
5. REACTIVOS
REACTIVOS* CANTIDAD
Amortiguador de citrato salino 1X (SSC) 300 ml
Solución de NaCl 2.6 M frio 300ml
Etanol 95% (frío) 300 ml
Etanol 70 % 50ml
6. EQUIPOS
EQUIPOS* CANTIDAD
Licuadora pre-enfriada 1
Centrífuga Sigma 3-30KS 1
Balanza analítica 2
Vortex 2
7. PROCEDIMIENTO
Preparación de soluciones
Citrato salino (dilución 1/10 de SSC): Disuelva 0,078 g de NaCl y 0.294 g de citrato de sodio
para un volumen final de 1litro de agua.
Amortiguador de citrato salino (SSC) (20X): Es común preparar este amortiguador como una
solución patrón (stock) 20X, para diluirse antes de usarse a 2X, 1X o 0.1X. Para preparar una
solución patrón 20X, disuelva 175 g de NaCl y 88 g de citrato de sodio en 900 ml de agua.
Ajuste el pH a 7.0 con HCl 1N y complete a un volumen final de 1 litro.
Para uso como SSC 1X, diluya una parte de la solución patrón 20X con 19 partes de agua
destilada. Para SSC 2X, diluya 1 parte de la solución patrón 20X con 9 partes de agua.
BIBLIOGRAFIA
ADAMS, R.L.P., et al. 1986. The Biochemistry of the Nuclei Acids, 10th ed. Chapman and
Hall,London.
BRITTEN,R.J. and D.E. KOHNE. 1968. Repeated sequences in DNA. Science 161: 529-540
HANAWALT, P.C. 1994. Transcription-coupled repair and human disease. Science 266: 1957-
1958.
SEGEL, I.H. 1976. Biochemical calculations, 2nd ed., pp. 324-346. John Wiley, New York.
SLAYTER, E.M. 1970. Optical Methods in Biology, pp. 528-551. John Wiley.