Cromatografía noticias técnicas del laboratorio 1/2003, P.

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Cromatografía en Fase Reversa: El gel de sílice es lo más importante

El gel de sílice es aún el número uno (tailing) o fenómenos de adsorción nas de C18, un blindaje deficiente de parado con una fase de C18 exenta
Pese a que mientras tanto están a irreversibles con las notorias repercu- los silanoles residuales y/o a una con- de metal y blindada correctamente. El
disposición para la cromatografía en siones negativas en el poder separa- taminación metálica del gel de sílice heterociclo N de cafeína y la base p-
fase reversa materiales inorgánicos y dor y la reproducibilidad. Tales cen- de base. Para los constituyentes de etilanilina ostentan en el primer ejem-
orgánicos alternativos o portadores tros polares pueden originarse debi- muestra fáciles de polarizar (ácidos, plo un tailing acentuado, lo cual evita
polímeros, la supremacía del gel de do a funciones libres de silanol y tam- bases) se prestan, en la cromatogra- en el caso de la cafeína, una separa-
sílice sigue siendo incontestada. La bién a iones metálicos. Hay varias es- fía, solamente fases de una ocupación ción nítida de la línea de base con res-
alta resistencia a la presión de las trategias para enfrentar este proble- suficientemente densa, de una prepa- pecto al 4-metoxifenol vecino. Los
partículas, la modificación fácil de la ma. Por ejemplo, contándose con los ración cuidadosa subsiguiente de la dos compuestos efectúan la elución,
superficie y la disponibilidad de di- respectivos valores pH, es posible dis- superficie y de alta pureza. Las figu- en cambio, sin deformación de pico
versos tamaños de partícula y diá- frazar constituyentes polares de la ras 1 y 2 demuestran el perfil de elu- en la columna de NUCLEODUR®
metros de poro son las ventajas prin- muestra mediante los apropiados for- ción de moléculas de diferente polari- 100-5 C18 ec. La columna de NU-
cipales de este material portador co- madores de parejas de iones (reacti- dad en una fase convencional, com- CLEODUR® tiene, debido a su ma-
rriente. Sin embargo, las fases de gel vos PIC), los que se añaden al eluyen-
de sílice convencionales cuentan te, simulando de este modo una neu- Fig. 1: Fase C18 convencional,
también con sus puntos débiles. En tralidad de carga. Pero, en ello es des- de superficie acabada, 250 x
particular, cuando se trata de cro- ventajoso el hecho de que los reacti- 4 mm. Condiciones: Me-
matografiar compuestos ionizables vos de parejas de iones puedan com- OH:H2O, 49:51 (v/v); 40°C;
(p. ej. bases). binarse también en la superficie de la 1 ml/min; 1 µl de volumen de
fase estacionaria, lo cual puede resul- inyección, UV 254 nm
Adsorción/Peaktailing tar en alteraciones de la selectividad. muestra: 1. Cafeína, 2. p-Me-
Las interacciones entre las sustancias La actividad polar de la superficie de toxifenol, 3. o-Metoxifenol, 4.
analíticas y los centros polares en la gel de sílice puede deberse, entre p-Etilanilina, 5. Propiofenona,
superficie del gel de sílice causan irre- otras cosas, también a una densidad 6. Éster etílico del ácido ben-
gularidades en la simetría de los picos de ocupación insuficiente con cade- zoico, 7. Toluol

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Anote el 92
Cromatografía noticias técnicas del laboratorio 1/2003, P. 24

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diciones idénticas a las de la fig. 1. máticos y escalado fácil. Todas las colum-
nas CHROMABOND® Flash pueden pe-
yor densidad de ocupación, una hidrofobia consi- dirse, no sólo con la gama de productos
derablemente más acentuada, lo que se documen- estándar de sílica no modificada y la fase
ta a través de los factores de capacidad más altos exclusión de humedad gracias al cierre herméti-
C18 ec, sino también con la gama com- co de los cartuchos. A veces es necesario pro-
relativos al éster etílico del ácido benzoico y al to- pleta de sorbentes CHROMABOND® o
luol. bar muchas combinaciones de solventes y sor-
con NUCLEODUR® esférico. El progra- bentes diferentes para desarrollar un método
¿Porqué estorban los iones metálicos? ma de productos incluye atractivos cartuchos de cromatografía flah selectivo y reproducible.
Los iones metálicos en, o encima de geles de sílice CHROMABOND® Flash para sistemas automá- La cromatografía en capa fina ha probado ser
entran en interacciones ácidos de Lewis/bases con ticos de las siguientes compañías: Jones Chro- muy útil para desarrollar rápidamente nuevos
los átomos de oxígeno de grupos de silanol libres matography/IST™, ISCO™, Biotage™, Gil- métodos. Es por ello que para la optimización
en la superficie, lo cual tiene como consecuencia su son™. La extraordinaria selección de sistemas de separaciones sobre sílica, alúmina, C18, CN,
desprotonización y la formación de cargas. Esto se de columna, sorbentes y fases estacionarias da NH2, diol o poliamida ofrece los mismos sor-
evidencia, en especial con respecto a compuestos una enorme flexibilidad para el desarrollo de bentes en placas TLC. Las capas sobre las placas
fáciles de ionizar, en forma del peaktailing no de- procesos. Entre las ventajas cuentan la amplia TLC son de las misma sílica básica usada en los
seado y de desplazamientos de los tiempos de re- selección de diferentes sorbentes siempre en cartuchos CHROMABOND® Flash. Este es un
tención. Además, pueden surgir interacciones di- stock, la excelente calidad del material de relle- requisito previo para transferir separaciones
rectas entre metales y constituyentes de la mues- no, alto rendimiento, reproducibilidad, separa- por TLC a columnas flash de forma reproduci-
tra en forma de la quelación. Por consiguiente, re- ciones bien definidas gracias a la estrecha distri- ble, ya que los parámetros químicos de la sílica
viste importancia especial ya la calidad del gel de sí- bución del tamaño de las partículas, una contra- son idénticos en ambos sistemas.
lice de base para generar una nueva fase de gel de presión constante garantizada por la elimina-
sílice. El grado de contaminación con iones alcali- ción rigurosa de finas partículas de polvo du-
rante la fabricación, muy alta reproducibilidad Macherey-Nagel, Alemania
nos, alcalinotérreos o también de metales de tran-
sición, tanto en el interior de la estructura de geles de lote a lote, estabilidad de almacenamiento y Anote el 59
de sílice como en la superficie, depende en medida
decisiva del procedimiento de síntesis [1]. Aunque
es posible expulsar por lavado o remover de la es-
tructura del gel de sílice [2] una parte de los iones mo material de 100 Å, con tamaños de partícula de
extraños, por medio del tratamiento posterior con Al < 5 ppm Ti < 1 ppm
Fe < 5 ppm Zr < 1 ppm 3, 5, 10, 12, 16, 20, 30 y 50 µm.
ácido, son preferibles métodos que desde un prin-
cipio suministran geles de sílice de un contenido de Na < 5 ppm As < 0.5 ppm Conclusión
iones metálicos mínimo. En la tabla1 están relacio- Ca < 10 ppm Hg < 0.05 ppm Ya en el momento de la selección del gel de sílice
nados los contenidos metálicos, determinados por de base se encauza la calidad de la posterior co-
Tab. 1: Contenido en iones residuales del NUCLEO-
vía de la espectrometría de absorción atómica, del lumna de fraccionamiento HPLC. El contenido de
DUR” 100-5
NUCLEODUR® esférico, sin modificación, con iones metálicos y la homogeneidad de la superfi-
100 angstrom de tamaño de poro y 5 µm de diá- Geometría superficial y forma de partículas cie de las partículas son parámetros esenciales que
metro medio de las partículas. Además, los focos pueden influenciar decisivamente en el resultado
Además de la alta pureza del gel de sílice de base es
metálicos en la superficie repercuten desfavorable- de la modificación. El NUCLEODUR® C18 ec ha
premisa para la ocupación uniforme durante el pro-
mente en las reacciones formadoras de derivados sido sintetizado en base a un gel de sílice purísimo,
ceso de modificación la superficie más homogénea
con silanos de alquilo, de manera que pueden ori- idealmente esférico, siendo, gracias a su baja acti-
posible de las partículas. Al fin y al cabo, hay que as-
ginarse trastornos en la ocupación de la superficie. vidad de silanol, una fase de aplicación universal
pirar a obtener una simetría esférica que no tenga
que es apropiada en particular para la HPLC de
crecimientos epitaxiales ni otros defectos de plani-
compuestos críticos e ionizables.
cidad visto que durante el proceso de relleno sub-
siguiente éstos podrían quebrarse, siendo la conse- Bibliografía
cuencia rellenos columnares deficientes. La figura 3 [1] Stella, C.; Rudaz, S.; Veuthey, J.-L.; Tchapla, A.
muestra la superficie lisa homogénea de una partí- Chromatographia 2001, 53, supl., 113 (revista).
cula NUCLEODUR® totalmente esférica en la ima- [2] Nawrocki, J.; Moir, D.L.;Szczepaniak, W. Ch-
gen tomada por un microscopio electrónico de ba- romatographia 1989, 28, 143.
rrido. Con materiales de este tipo se pueden con- [3] K. Möller, J. Pfeiffer, H. Riering, M. Sieber y D.
seguir paquetes columnares de alta densidad y de Rieger, ponencia con carteles Eastern Analytical
bajos valores h (= gran cantidad de platos teóricos). Symposium 2001, Atlantic City (NY).
La estabilidad mecánica extraordinaria del gel de sí-
Autores
lice NUCLEODUR® recomienda este material de
relleno también para aplicaciones en la HPLC pre- Dr. Dirk Rieger, Dr. Jens Pfeiffer
parativa, dado que no se observaron caídas de pre- MACHEREY-NAGEL GmbH & Co. KG
sión notables durante los ciclos de relleno [3]. El Neumann-Neander-Str. 6-8
Fig. 3: Imagen de una partícula de NUCLEODUR to- NUCLEODUR® se puede adquirir tanto sin modi- D-52355 Düren
mada con microscopio electrónico de barrido. ficación como con formación de derivados C18, co- Anote el 303