Pract 22 Tincion Sudan

Universidad Veracruzana
Facultad de Qumica Farmacutica Biolgica

Laboratorio de Hematologa
Prctica No. 22. TINCIN DE SUDN NEGRO B

1. Fundamento
La tincin de Sudn Negro B o simplemente tincin de Sudn, es un
colorante que tie diversos lpidos celulares. Las clulas hematopoyticas
contienen finamente dispersos lpidos en el citoplasma as como complejos de
lpidos o como lipoprotenas, que se encuentran en la membrana celular y en la
membrana de mitocondria as como de otros organelos. Estos lpidos no son
identificables en los frotis teidos con Wright. Sin embargo, cuando los lpidos
contenidos en clulas que se encuentran en la sangre o en la mdula sea son
teidos con la solucin que contiene Sudan Negro B, este colorante lipofilico deja
el solvente porque el colorante es ms soluble en los lpidos que en el solvente,
provocando as la tincin correspondiente. En la examinacin microscpica, el
pigmento concentrado produce un color negro para aquellas reacciones positivas.
El Sudn Negro B es un colorante de la serie diazica que tie diversos,
lpidos, incluyendo grasas neutras, esteroles
y en particular fosfolpidos. Los
vapores de formaldehdo (fijador) fijan las grasas y fosfolpidos, los que al

contactar con el colorante toman un color negro-azul que contrasta con el
colorante de Wright en la contratincin. Los lpidos teidos se encuentran en los
grnulos primarios y secundarios de los neutrfilos, as como en los grnulos
lisosomicos de los monocitos.
2. Resolucin preguntas gua
1.- Qu utilidad tiene esta reaccin citoqumica?
La tincin de Sudn Negro B es til para diferenciar una leucemia mieloide
aguda de una leucemia linfoide aguda.
2.- De qu depende que las clulas sean positivas o negativas a esta reaccin?
Cortazar Murillo Elvis M., Vzquez Garca Vania G., Zrate Hernndez Carlos.
Las clulas positivas se tien con esta prueba debido a que contienen
granulos ya sean primarios o secundarios en el citoplasma, estos granulos
constan de una membrana lpidica que es teida por el colorante, las clulas
leucocitarias que contienen granulos se denominan granulocitos; si las clulas no
contienen estos granulos no se apreciara la tincin en la regin del citoplasma,
por lo que la reaccin sera negativa.
3.- Cules de los blastos son positivos y cuales son negativos a esta reaccin?
Los blastos que son positivos son los que pertenecen a la lnea mieloide
(mieloblastos), que pueden ser mieloblastos de neutrfilos, eosinofilos o basfilos.
Tambin los blastos de los monocitos se tien ligeramente con el Sudan Negro B.
Los linfoblastos son negativos para esta tincin, ya que no contienen granulos.
3. Material, reactivos y equipo
Material:
Material necesario para la extraccin de sangre.

Portaobjetos.
Puente de tincin.
Pipetas Pasteur con bulbo de hule.
Cmara de fijacin.
Reactivos:
Formaldehdo al 37 %.
Solucin de Sudn Negro B. Se disuelven 300 mg de Sudn Negro B en
100 ml de etanol al 96 %.
Solucin tamponada. Se mezclan 16 g de fenol con 30 ml de alcohol etlico
absoluto y se aaden a una solucin de 0.3 g de Na 2HPO4 . H2O en 100 ml
de agua destilada.
Solucin colorante. Mezclar 60 ml de solucin Sudn Negro B con 40 ml de
solucin tamponada. Filtrar.

Etanol 70 %.
Colorante de Wright.
Solucin buffer de fosfatos para tincin de Wright.
Equipo:
Microscopio.
4. Tcnica
1.- Hacer un frotis sanguneo en la forma acostumbrada.
2.- Fijar con vapores de formaldehdo en la cmara de fijacin durante 10 min.
Lavar y secar al aire.
3.- Teir durante 60 min. con la solucin colorante.
4.- Lavar con etanol al 70 % durante 2 o 3 min. Lavar y secar al aire.
5.- Contrateir con colorante de Wright.
6.- Observar con objetivo de inmersin, clasificando las clulas como Sudn Negro
B positivas o negativas. Las clulas Sudn Negro B presentan una coloracin
negra en su citoplasma.
5. Observaciones
La muestra utilizada fue donada por el Instituto Estatal de Cancerologa, provino
de un paciente diagnosticado con leucemia mieloide aguda. En el laboratorio cada
equipo realiz una determinacin de las reacciones citoqumicas debido a que no
se contaba con mucha muestra.
Durante la tincin con el colorante se homogeniz con una boquilla, con el fin de
incorporar el colorante en todo el frotis sanguneo.
En la observacin microscpica (100 X) del frotis sanguneo se encontraron
clulas que presentaban una coloracin negra intensa en el citoplasma (figura ).
Figura . Observacin microscpica de frotis sanguneo con tincin de Sudan Negro

B contrateido con Wright, objetivo 100 x. Se observan dos blastos positivos para
la tincin de Sudn Negro B. Ntese la coloracin negra del citoplasma.
6. Resultados
Paciente: Paciente con Leucemia Mieloblstica Aguda.
Sexo: Sin definir.
Edad: Sin definir.
Localidad: Xalapa, Ver.
Fecha de recepcin de la muestra: 3 de Octubre de 2014.
Realizacin del examen: 3 de Octubre de 2014.
Prueba
Resultado
Blastos Leucocitarios
Valor de referencia
Sin presencia de blastos.
Tincin de Sudn Negro
B.
B Positivos.
B Positivo: Granulocitos,
monocitos.
Realiz: Elvis Marian Cortazar Murillo, Vania Gabriela Vzquez Garca, Carlos
Zrate Hernndez.
Responsable: M.A.C. Elea Vallejo Sol.
7. Conclusiones
7.1. Elvis Marian Cortazar Murillo
Para diferenciar las leucemias linfoides agudas de las mieloides es de gran
utilidad la tincin de Sudn Negro B, cuya caracterstica es teir de negro al
citoplasma y hacer ms efectiva la diferenciacin. La muestra era de un paciente
con leucemia mieloblstica por lo que se encontraron blastos en ella, se pudo
observar bien la morfologa del blasto apreciando los grnulos de ste,
descartando que sea una leucemia linfoblstica pues sta carece de grnulos.
7.2. Vania Gabriela Vzquez Garca
A la muestra de sangre del paciente se le realiz la tincin de Sudn Negro
B puesto que como tiene leucemia mieloblstica aguda se espera encontrar
blastos leucocitarios siendo un xito este hallazgo. Esta prueba es importante para
poder diferenciar qu tipo de clulas estn siendo afectadas en una, si bien este
hallazgo fue fcil porque se conoca de la patologa de la persona sera necesario
educar ms al ojo para poder diferenciar perfectamente ambas.
7.3. Carlos Zrate Hernndez
La tincin de Sudn Negro B realizada fue positiva para blastos de tipo
mieloide debido a que el paciente tiene leucemia mieloblstica aguda, en este
caso supimos que se trataba de este tipo de blasto debido al conocimiento de la
muestra, sin embargo en la prctica profesional se debe tener un gran
conocimiento para diferenciar distintas clulas. Las reacciones citoqumicas son
muy importantes ya que permiten identificar algn trastorno que involucre una
determinada lnea celular.
8. Bibliografa
-
Kawthalkar M. Shirish. 2012. Essentials of Hematology. 2nd. edition.

JAYPEE. USA.
Mckenzie S.B. 2000. Hematologia Clnica. 2. edicin. Editorial Manual
Moderno. Mxico D.F.

Rodak F. Bernadette. 2005. Hematologa: fundamentos y aplicaciones
clnicas. 2. edicin. Editorial Mdica Panamericana. Buenos Aires,
Argentina.
Turgeon Mary Louise. 2005. Clinical Hematology: Theory and Procedures.
4th. edition. Lippincott Williams & Wilkins. USA.

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y en particular fosfolpidos. Los

vapores de formaldehdo (fijador) fijan las grasas y fosfolpidos, los que al

Material necesario para la extraccin de sangre.

solucin tamponada. Filtrar.

Solucin buffer de fosfatos para tincin de Wright.

Figura . Observacin microscpica de frotis sanguneo con tincin de Sudan Negro

Tincin de Sudn Negro

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Tincin de Sudn Negro

Kawthalkar M. Shirish. 2012. Essentials of Hematology. 2nd. edition.

Mckenzie S.B. 2000. Hematologia Clnica. 2. edicin. Editorial Manual

Moderno. Mxico D.F.

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