I.

OBJETIVOS
 Cuantificar la cantidad de nitrógeno total.
 Cuantificar la cantidad de proteína bruta.

II. FUNDAMENTO TEÓRICO

2.1. DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE NITRÓGENO TOTAL

(MÉTODO KJELDAHL)

La determinación de la proteína en una muestra es basada en la

determinación de nitrógeno. Generalmente es realizada por el proceso de
digestión Kjeldahl (autor del método: Johan Kjeldahl). Este método determina
el contenido de nitrógeno orgánico, o sea, el nitrógeno proveniente de otras
fuentes además de la proteína, tales como: nucleicos, alcaloides, lípidos y
carbohidratos nitrogenados. Como estos otros componentes generalmente
están presentes en cantidades menores, el método Kjeldahl es un método
químico útil en la determinación de proteína.
Durante el proceso de descomposición ocurre la deshidratación y
carbonización de la materia orgánica combinada con la oxidación de carbono
a dióxido de carbono. El nitrógeno orgánico es transformado a amoniaco que
se retiene en la disolución como sulfato de amonio. La velocidad del proceso
puede ser incrementarse adicionando sales que abaten la temperatura de
descomposición (sulfato de potasio) o por la adición de oxidantes (peróxido
de hidrógeno, tetracloruro, persulfatos o ácido crómico) y por la adición de un
catalizador.
(Nollet, 1996).

El método de Kjeldahl consta de las siguientes etapas:

a. DIGESTIÓN.

Este método se basa en la combustión en húmedo de la muestra por ebullición

con ácido sulfúrico concentrado. En la mezcla de digestión se incluye un
catalizador para acelerar la reacción, tal como sulfato de cobre.

La materia orgánica se oxida a CO2 y H2O, mientras que la parte de ácido se

reduce a SO2

𝐶𝐴𝑇𝐴𝐿𝐼𝑍𝐴𝐷𝑂𝑅
𝑀𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 + 𝐻2 𝑆𝑂4 → 𝐶𝑂2 + 2𝑆𝑂2 + 𝐻2 𝑂 + 𝑁𝐻3
El nitrógeno transformado en NH3 se combina con la parte restante del ácido
sulfúrico para formar el sulfato de amonio

𝑁𝐻3 + 𝐻2 𝑆𝑂4 → 𝑆𝑂4 (𝑁𝐻4 ) 2

Finalmente queda

𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 + 𝐻2 𝑆𝑂4 → 𝐶𝑂2 + 𝑆𝑂4 (𝑁𝐻4 ) 2 + 𝑆𝑂2

b. DESTILACIÓN.

Mediante esta operación el nitrógeno que está en forma de sulfato de amonio,

se ataca con un álcali fuerte que es la soda caustica (NaOH) para liberar el
amoniaco y después de la condensación lograda con la parte del refrigerante, el
hidrato de amonio se recibe en un vaso precipitado.

𝑆𝑂4 (𝑁𝐻4 ) 2 + 2𝑁𝑎𝑂𝐻 → 2𝑁𝐻3 + 𝑁𝑎2 𝑆𝑂4 + 2𝐻2 𝑂

El vaso de precipitado contiene: ácido bórico, con los siguientes indicadores
(Tashiro) de pH rojo de metilo y verde de bromo cresol, formándose borato de
amonio en el vaso.

𝑁𝐻3 + 𝐻3 𝐵𝑂3 → 𝑁𝐻4 𝐻2 𝐵𝑂3

c. TITULACIÓN.

Se hace con ácido sulfúrico o clorhídrico de normalidad conocida, el ácido

clorhídrico reacciona con el borato de amonio. En el punto final ya no hay borato
de amonio y un pequeño exceso de ácido clorhídrico provocará un cambio de pH
y por consiguiente el viraje de la mezcla (verde a rosado)

(𝑁𝐻4 )𝐻2 𝐵𝑂3 + 𝐻𝐶𝑙 → 𝑁𝐻4 𝐶𝑙 + 𝐻3 𝐵𝑂3

La muestra recibida en el vaso con la solución de ácido bórico valorar con ácido
clorhídrico 0.05N y tomar nota del gasto de HCl obtenido.

Cálculos para determinar el porcentaje de nitrógeno y proteína

𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻𝐶𝑙 × 𝑛𝑜𝑟𝑚𝑎𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑 × 𝑚𝑒𝑞. 𝑑𝑒𝑙 𝑁2

%𝑁2 = × 100
𝑔(𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎)

%𝑃𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 𝑏𝑟𝑢𝑡𝑎 = %𝑁2 × 𝐹𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟

(Pearson, 1993)
 TABLA 1. COMPOSICIÓN DE PROTEÍNA EN 100 g DE ALIMENTOS

ALIMENTO PROTEÍNAS (g)

AVENA 13,70

MAICENA 0.26

(FUENTE: TABLA PERUANAS DE COMPOSICIÓN DE ALIMENTOS, 2009)

TABLA 2. FACTORES DE CONVERSIÓN DE NITRÓGENO PROTEÍNA

PARA ALGUNOS ALIMENTOS.

ALIMENTO FACTOR

AVENA 6.25

MAICENA 6.25

III. MATERIALES Y METÓDOS

3.1. MATERIALES Y EQUIPO

 Balanza analítica.
 Balón de kjeldahl de 250 mL.
 Calefactor eléctrico. Para efectuar la digestión.
 Equipo de destilación.
 Ácido sulfúrico (d: 1.84) exento de nitrógeno.
 Sulfato de cobre.
 Sulfato de sodio anhidro.
 Mortero.

IV. RESULTADOS

MUESTRA PESO DE GASTO NORMALIDAD %N FACTOR PROTEÍNA NORMA O

MUESTRA HCl DE HCl (%) BIBLIOGRAFÍA
(g) (mL)
Avena 0.2110 4mL 0.1 2.654 6.25 16.59 13.70
envasada
Maicena 0.2024 0.5 mL 0.1 0.346 6.25 2.16 0.26
 V. DISCUSIONES

 según la tabla peruanas de composición de alimentos la cantidad de

proteína en la avena envasada es de 13.70 g, lo cual comparando con
el resultado experimental en la muestra de la avena es de 16.59 g; por
lo que haciendo una comparación existe una diferencia de 2.89 g; esta
diferencia se debe a varios factores tales como: Error en la preparación
de los reactivos, titulación inadecuada, o cabe la posibilidad de que la
muestra haya sido adulterada.

 Así mismo según la tabla peruanas de composición de alimentos la

cantidad de proteína en la maicena es de 0.26 g, lo cual comparando
con el resultado experimental en la muestra de la maicena es de 2.16
g; por lo que haciendo una comparación existe una diferencia de 1.9
g; esta diferencia se debe a varios factores tales como: Error en la
preparación de los reactivos, titulación inadecuada.

VI. CONCLUSIONES

 La cantidad de nitrógeno total experimental de la avena envasada es de

2.654 %.
 La cantidad de nitrógeno total experimental de la maicena es de 0.346 %.
 La cantidad de proteína bruta total experimental de la avena envasada es
de 16.59 %.
 La cantidad de proteína bruta total experimental de la maicena es de 2.16
%.
VII. CUESTIONARIO
7.1. Defina proteína bruta
Proteína bruta (cruda) es un término que mide el nitrógeno total de un alimento.
El contenido de nitrógeno en las proteínas es de 16%, por lo tanto para convertir
nitrógeno total a su equivalente en proteína bruta se multiplica el por ciento de
nitrógeno en el alimento por el factor 6.25

7.2. Qué es nitrógeno total

El nitrógeno total es el contenido de nitrógeno en un sistema biológico se

califica de nitrógeno total y al utilizar este dato para calcular el porcentaje de
proteína del sistema
 7.3. Qué es nitrógeno proteico
El nitrógeno proteico es la diferencia con el contenido de nitrógeno total que
permite establecer el contenido de nitrógeno proteico.

7.4. A qué se refiere cuando se dice nitrógeno no proteico

Se refiere al nitrógeno que no es propio de la proteína, es decir que son

elementos que provienen de péptidos, aminoácidos libres y compuestos
nitrogenados de naturaleza no proteica (generalmente en menor
proporción)

7.5. Cuando se hace uso del TCA en la cuantificación de la proteína

Se hace uso para la precipitación de proteínas, esto con el fin de separar

la parte proteica de la no proteica, para liego titular con ácido clorhídrico
para determinar el porcentaje de nitrógeno no proteico

7.6. Resolver los siguientes ejercicios

A. Se realizó la determinación de nitrógeno total en 1,0 g de muestra
habiéndose gastado en la titulación del amoníaco liberado; 5,6 ml de
HCl 0,1 N. Luego se realizó una segunda determinación en 1,0 g de
muestra, pero habiendo precipitado previamente, con ácido tricloro
acético (TCA), en la fracción de proteína, se gastaron 1,3 ml de HCl
0,2 N calcular los porcentajes de Use el factor de proteína 6,38
Solución
a) Nitrógeno total
𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻𝐶𝑙 × 𝑛𝑜𝑟𝑚𝑎𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑 × 𝑚𝑒𝑞. 𝑑𝑒𝑙𝑁2
%𝑁2 = × 100
𝑔 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
5.6 × 0.1 × 0.014
%𝑁2 = × 100
1𝑔
%𝑁2 = 0.78%

b) Nitrógeno no proteico
1.3 × 0.1 × 0.014
%𝑁2 = × 100
1𝑔
%𝑁2 = 0.18
c) Nitrógeno proteico
𝑛𝑖𝑡𝑟𝑜𝑔𝑒𝑛𝑜 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑐𝑜(%) = % 𝑛𝑖𝑡𝑟𝑜𝑔𝑒𝑛𝑜 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 − % 𝑑𝑒 𝑛𝑖𝑡𝑟𝑜𝑔𝑒𝑛𝑜 𝑛𝑜 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑐𝑜

% 𝑛𝑖𝑡𝑟𝑜𝑔𝑒𝑛𝑜 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑐𝑜 = 0.78 − 0.18 = 0.60%

d) % de proteína cruda
% 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 𝑐𝑟𝑢𝑑𝑎 = 0.78 × 6.38 = 4.96%
 e) % proteína
% 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 = 0.60 × 6.38 = 3.83%

B. Se analizaron 15 g de muestra para determinar el contenido de

proteína cruda por el método de Kjeldahl, gastándose 25 ml de H2SO4
0,2 M para titular el NH3 liberado. Calcular:

a) El contenido de nitrógeno total

𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝐻𝐶𝑙 × 𝑛𝑜𝑟𝑚𝑎𝑙𝑖𝑑𝑎𝑑 × 𝑚𝑒𝑞. 𝑑𝑒𝑙𝑁2

%𝑁2 = × 100
𝑔 𝑑𝑒 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
Trasformamos la molaridad ha normalidad
𝑁 =𝑀×𝜃
𝑁 = 0.2 × 2
𝑁 = 0.4
25 × 0.4 × 0.014
%𝑁2 = × 100
15
%𝑁2 = 0.93%
b) El porcentaje de proteína cruda
%𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 = 0.93 × 6.25
%𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 = 5.83%
C. Se pesó de una cápsula porcelana vacía fue 40,5602 g, la cápsula
más la muestra peso 50,6872 g y después de desecar a 100 °C por
cinco horas, se obtuvo los siguientes valores
Primera pesada = 48,2594 g

Segunda pesada = 48,2584 g

Tercera pesada = 48,2582 g

De la muestra seca se tomó el 50% y se determinó el contenido de proteína

cruda por el método de Kjeldahl. El NH3 destilado se recogió en 50 ml de
H2SO4 0,05 M y se tituló el exceso de ácido con 25 ml de NaOH 0,1 N.

Calcular el porcentaje de proteína cruda en base húmeda. Use el factor 6,25.

Solución

Hallamos la humedad

𝑔 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎
% 𝑑𝑒 ℎ𝑢𝑚𝑒𝑑𝑎𝑑 = × 100
𝑔 𝑑𝑒 𝑎𝑙𝑖𝑚𝑒𝑛𝑡𝑜

2.4288
% 𝑑𝑒 ℎ𝑢𝑚𝑒𝑑𝑎𝑑 = × 100
10.127
% 𝑑𝑒 ℎ𝑢𝑚𝑒𝑑𝑎𝑑 = 23.98%
 Hallamos % de materia seca

% 𝑚. 𝑠 = 100 − 23.98 = 76.02%

𝑔𝑑𝑒 𝑎𝑙𝑖𝑚𝑒𝑛𝑡𝑜 = 10.127

𝑔 𝑎𝑔𝑢𝑎 = 2.4228𝑔

𝑔 𝑚. 𝑠 = 7,698𝑔

Hallamos el porcentaje de nitrógeno

25 × 0.1 × 0.014
%𝑁2 = × 100
3.849
%𝑁2 = 0.909%

Porcentaje de proteína

%𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 = %𝑁2 × 6,25

%𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 = 5.68%

Hallamos gramos de proteína

5.68
𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 𝑒𝑛 𝑚. 𝑠 = × 7.698
100

𝑔 𝑑𝑒 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 = 0.437

Hallamos el porcentaje de proteína en alimento húmedo

𝑔 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎
𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎% = × 100
𝑔 𝑎𝑙𝑖𝑚𝑒𝑛𝑡𝑜

0.437
𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎% = × 100
10.127
𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎% = 4.315%
 D. Para determinar el contenido de proteína cruda de una muestra de
pan desecado parcialmente (10% de humedad) se pesaron 2 g de
muestra y se gastaron 21,1 ml de HCl 0,1 n en la titulación de nh3
destilado. ¿qué volumen de ácido habría gastado si se pesa la misma
cantidad de muestra pero con un contenido de humedad de 35%?

SOLUCIÓN:

𝒎𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂 𝒅𝒆𝒔𝒆𝒄𝒂𝒅𝒐 𝒑𝒂𝒓𝒄𝒊𝒂𝒍 (𝒉 = 𝟏𝟎%) = 𝟐 𝒈 → 𝑽 = 𝟐𝟏. 𝟏 𝒎𝒍 𝑯𝑪𝒍 𝟎. 𝟏𝑵

↓
𝒈 𝒂𝒈𝒖𝒂 = 𝟐 ∗ 𝟎. 𝟏𝟎 = 𝟎. 𝟐𝟎 𝒈
↓
𝒈 𝒎𝒂𝒕𝒆𝒓𝒊𝒂 𝒔𝒆𝒄𝒂 = 𝟐 ∗ 𝟎. 𝟗𝟎 = 𝟏. 𝟖 𝒈

Calculando el porcentaje de nitrógeno total.

𝑮 ∗ 𝑵 ∗ 𝒎𝒆𝒒. 𝑵𝟐
% 𝑵𝟐 𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 = ∗ 𝟏𝟎𝟎
𝒈(𝒎𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂)
21.1 ∗ 0.1 ∗ 0.014
% 𝑁2 = ∗ 100
2
% 𝑁2 = 1.48 %

Calculando el porcentaje de proteína cruda.

% 𝒑𝒓𝒐𝒕𝒆𝒊𝒏𝒂 𝒄𝒓𝒖𝒅𝒂 = % 𝑵𝟐 𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 ∗ 𝒇𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓

% 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 𝑐𝑟𝑢𝑑𝑎 = 1.48% ∗ 6.25

% 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 𝑐𝑟𝑢𝑑𝑎 = 9.25%

Calculando los gramos de proteína en materia seca.

𝒈 𝒑𝒓𝒐𝒕𝒆𝒊𝒏𝒂 = 𝑿𝒑 ∗ 𝒑𝒆𝒔𝒐 𝒅𝒆 𝒎𝒂𝒕𝒆𝒓𝒊𝒂 𝒔𝒆𝒄𝒂

9.25
𝑔 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 = ∗ 1.8
100
𝑔 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 = 0.1665 𝑔

La muestra con 35% de humedad.

𝒎𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂 (𝒉 = 𝟑𝟓%) = 𝟐 𝒈 → 𝑽 =¿ ? 𝒎𝒍 𝑯𝑪𝒍 𝟎. 𝟏𝑵
↓
𝒈 𝒂𝒈𝒖𝒂 = 2 ∗ 0.35 = 0.70 𝑔
↓
g 𝒎𝒂𝒕𝒆𝒓𝒊𝒂 𝒔𝒆𝒄𝒂 = 2 ∗ 0.65 = 1.30 𝑔

La materia seca en una muestra es constante, se tiene:

 𝒈 𝒑𝒓𝒐𝒕𝒆𝒊𝒏𝒂 = % 𝒑𝒓𝒐𝒕𝒆𝒊𝒏𝒂 𝒆𝒏 𝒎. 𝒔 ∗ 𝒈 𝒅𝒆 𝒎𝒂𝒕𝒆𝒓𝒊𝒂 𝒔𝒆𝒄𝒂
0.1665 = % 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 𝑒𝑛 𝑚. 𝑠 ∗ 1.30
% 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 𝑒𝑛 𝑚. 𝑠 = 0.128 ∗ 100
% 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒𝑖𝑛𝑎 𝑒𝑛 𝑚. 𝑠 = 12.8%
Calculando el porcentaje de nitrógeno total.

% 𝑃𝑅𝑂𝑇𝐸𝐼𝑁𝐴 𝐶𝑅𝑈𝐷𝐴 = % 𝑁2 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 ∗ 𝑓𝑎𝑐𝑡𝑜𝑟

12.8% = % 𝑁2 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 ∗ 6.25

% 𝑁2 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 = 2.05%

Finalmente calculando el volumen de gasto.

𝑮 ∗ 𝑵 ∗ 𝒎𝒆𝒒. 𝑵𝟐
% 𝑵𝟐 𝒕𝒐𝒕𝒂𝒍 = ∗ 𝟏𝟎𝟎
𝒈(𝒎𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂)
𝑋 ∗ 0.1 ∗ 0.014
2.05% = ∗ 100
2
𝑋 = 29.3 𝑚𝑙

E. Se desea gastar entre 20 – 25 ml de h2so4 0,05 m en la titulación del

nh3 obtenido de un kjendahl. ¿qué cantidad de dicha muestra habría
que pesar sabiendo que la muestra tiene un contenido de proteína
del 2 %? Use factor 6,25.

% 𝒑𝒓𝒐𝒕𝒆í𝒏𝒂 = %𝑵𝟐 ∗ 𝒇𝒂𝒄𝒕𝒐𝒓

𝐺 ∗ 𝑁 ∗ 𝑚𝑒𝑞. 𝑁2
2% = ∗ 100 ∗ 6.25
𝑔(𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎)
22.5 ∗ 2 ∗ 0.05 ∗ 0.014 ∗ 100
2% = ∗ 6.25
𝑔𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎

𝑔 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 = 9.84𝑔

F. Después de desecar un determinado peso de muestra, esta se redujo

a 13,50 g y luego de desgrasado a 11,25 g. Sabiendo que la humedad
de la muestra era 10 %, se le pide calcular:

a) El % de grasa.

𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 (ℎ = 10%) → 𝑋𝑔

(𝑔)𝑚𝑎𝑡𝑒𝑟𝑖𝑎 𝑠𝑒𝑐𝑎 = 0.90 ∗ 13.50g

𝑿 = 𝟏𝟓. 𝟎𝟎 𝒈

𝒎𝒂𝒔𝒂 𝒅𝒆 𝒍𝒂 𝒈𝒓𝒂𝒔𝒂 = 𝟏𝟑. 𝟓𝟎 𝒈 − 𝟏𝟏. 𝟐𝟓 𝒈 = 𝟐. 𝟐𝟓 𝒈

 𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔 𝒅𝒆 𝒈𝒓𝒂𝒔𝒂
% 𝒈𝒓𝒂𝒔𝒂 = ∗ 𝟏𝟎𝟎
𝒈𝒓𝒂𝒎𝒐𝒔 𝒅𝒆 𝒎𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂

2.25 𝑔
% 𝑔𝑟𝑎𝑠𝑎 = ∗ 100
15.00 𝑔

% 𝑔𝑟𝑎𝑠𝑎 = 15%

Porcentaje de proteína en muestra seca y desgrasada

𝟏
g de muestra =𝟓 (𝟏𝟏. 𝟐𝟓) = 𝟐. 𝟐𝟓𝒈

𝑮𝑵𝒎𝒆𝒒
%𝑵 = × 𝟏𝟎𝟎
𝒈 𝒎𝒖𝒆𝒔𝒕𝒓𝒂

𝟖. 𝟓 ∗ 𝟎. 𝟒 ∗ 𝟎. 𝟎𝟏𝟒
%𝑵 = × 𝟏𝟎𝟎 = 𝟐. 𝟏𝟏𝟓𝟔
𝟐. 𝟐𝟓

% de proteína = 2.1156* 6.25 = 13.22% (porcentaje de proteína en muestra seca desgrasada)

 Haciendo el balance:

Peso 1 Xg=15g (muestra original)

Agua = 1.5 g

Peso 2 Xg=13.5g (muestra desecada)

Peso 3 Xg=11.25g (muestra desgrasada)

Proteína = 13.22% = g de proteína = 0.1322*11.25

En muestra desgrasada = 1.48725g (en 11.25g)

Otros= 9.76275 g

Entonces el porcentaje de proteína en base a la muestra original será:

𝟏. 𝟒𝟖𝟕𝟐𝟓
%𝒑𝒓𝒐𝒆𝒊𝒏𝒂 = × 𝟏𝟎𝟎 = 𝟗. 𝟗𝟐%
𝟏𝟓
G. BIBLIOGRAFÍA

 NOLLET, Leo M. L.; Handbook of food analysis; M. Dekker, New York

1996.
 PEARSON, D. 1986. Técnicas de laboratorio en el análisis de
alimentos. Ed. Acribia- Zaragoza- España.
 Tablas peruanas de composición de alimentos, Editado por el instituto
Nacional de Nutrición, LIMA- 2009.