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WO2016124565A1 - Substituierte pyrazolo[1,5-a]pyridin-3-carboxamide und ihre verwendung - Google Patents

Substituierte pyrazolo[1,5-a]pyridin-3-carboxamide und ihre verwendung Download PDF

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Publication number
WO2016124565A1
WO2016124565A1 PCT/EP2016/052126 EP2016052126W WO2016124565A1 WO 2016124565 A1 WO2016124565 A1 WO 2016124565A1 EP 2016052126 W EP2016052126 W EP 2016052126W WO 2016124565 A1 WO2016124565 A1 WO 2016124565A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
salts
solvates
formula
compound
methyl
Prior art date
Application number
PCT/EP2016/052126
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
Alexandros Vakalopoulos
Damian Brockschnieder
Frank Wunder
Johannes-Peter Stasch
Tobias Marquardt
Lisa Dietz
Min Jian Volkhart LI
Original Assignee
Bayer Pharma Aktiengesellschaft
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
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Priority to CA2975639A priority patent/CA2975639A1/en
Priority to JP2017541348A priority patent/JP2018505885A/ja
Priority to US15/548,158 priority patent/US10214526B2/en
Priority to EP16702426.4A priority patent/EP3286185A1/de
Publication of WO2016124565A1 publication Critical patent/WO2016124565A1/de

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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
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    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
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    • A61P15/10—Drugs for genital or sexual disorders; Contraceptives for impotence
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    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
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    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
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    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives

Definitions

  • the present application relates to novel substituted pyrazolo [1, 5-a] pyridine-3-carboxamides, processes for their preparation, their use alone or in combinations for the treatment and / or prophylaxis of diseases and their use for the preparation of medicaments for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular for the treatment and / or prophylaxis of cardiovascular diseases.
  • cGMP cyclic guanosine monophosphate
  • NO nitric oxide
  • GTT guanosine triphosphate
  • the soluble guanylate cyclases consist of two subunits and most likely contain one heme per heterodimer that is part of the regulatory center. This is central to the activation mechanism. NO can bind to the iron atom of the heme and thus significantly increase the activity of the enzyme. On the other hand, heme-free preparations can not be stimulated by NO. Also, carbon monoxide (CO) is able to bind to the central iron atom of the heme, with stimulation by CO being significantly less than by NO.
  • CO carbon monoxide
  • guanylate cyclase plays a crucial role in various physiological processes, in particular in the relaxation and proliferation of smooth muscle cells, platelet aggregation and adhesion, neuronal signal transmission and in diseases which are based on a failure of the above operations.
  • the NO / 'cGMP system may be suppressed, which may, for example, lead to hypertension, platelet activation, increased cell proliferation, endothelial dysfunction, atherosclerosis, angina pectoris, heart failure, myocardial infarction, thrombosis, stroke and sexual dysfunction.
  • a NO-independent treatment option for such diseases which is aimed at influencing the cGMP signaling pathway in organisms, is a promising approach on account of the expected high efficiency and low side effects.
  • the object of the present invention was to provide novel substances which act as stimulators of soluble guanylate cyclase, and as such are suitable for the treatment and / or prophylaxis of diseases and have an equal or improved therapeutic profile over the compounds known from the prior art, such as in terms of their in vivo properties, such as their pharmacokinetic and pharmacodynamic behavior, their solubility and / or their metabolism profile and / or their dose-response relationship.
  • the present invention relates to compounds of the general formula (I)
  • R a is a group of the formula
  • R ' is methyl or Cylcopropyl, and their / V-oxides, salts, solvates, salts of ⁇ -oxides and solvates of N-oxides and salts.
  • Compounds according to the invention are the compounds of the formula (I) and their salts, solvates and solvates of the salts comprising the compounds of the formulas below and their salts, solvates and solvates of the salts encompassed by formula (I) and those of formula (I) , hereinafter referred to as exemplary embodiments compounds and their salts, solvates and solvates of the salts, as far as the compounds of formula (I), the following compounds are not already salts, solvates and solvates of the salts.
  • Salts used in the context of the present invention are physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention. Also included are salts which are not suitable for pharmaceutical applications themselves, but can be used, for example, for the isolation or purification of the compounds according to the invention.
  • Physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention include acid addition salts of mineral acids, carboxylic acids and sulfonic acids, for example salts of hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid, phosphoric acid, methanesulfonic acid, ethanesulfonic acid, toluenesulfonic acid, benzene benzene sulfonic acid, naphthalenedisulfonic acid, formic acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, propionic acid,
  • Lactic acid tartaric acid, malic acid, citric acid, fumaric acid, maleic acid and benzoic acid.
  • Physiologically acceptable salts of the compounds according to the invention also include salts of customary bases, such as, by way of example and by way of preference, alkali metal salts (eg sodium and potassium salts), alkaline earth salts (eg calcium and magnesium salts) and ammonium salts derived from ammonia or organic amines having 1 to 16 C atoms, such as, by way of example and by way of preference, ethylamine, diethylamine, triethylamine, ethyldiisopropylamine, monoethanolamine, diethanolamine, triethanolamine, dicyclohexylamine, dimethylaminoethanol, procaine, dibenzylamine, N-methylmorpholine, arginine, lysine, ethylenediamine and N-methylpiperidine.
  • customary bases such as, by way of example and by way of preference, alkali metal salts (eg sodium and potassium salts), alkaline earth salts (eg calcium and magnesium salts
  • Solvates in the context of the invention are those forms of the compounds according to the invention which form a complex in the solid or liquid state by coordination with solvent molecules. Hydrates are a special form of solvates that coordinate with water. As solvates, hydrates are preferred in the context of the present invention.
  • the compounds of the invention may exist in different stereoisomeric forms depending on their structure, i. in the form of configurational isomers or optionally also as conformational isomers (enantiomers and / or diastereomers, including those in atrop isomers).
  • the present invention therefore includes the enantiomers and diastereomers and their respective mixtures. From such mixtures of enantiomers and / or diastereomers, the stereoisomerically uniform components can be isolated in a known manner; Preferably, chromatographic methods are used for this, in particular HPLC chromatography on achiral or chiral phase.
  • the present invention encompasses all tautomeric forms.
  • the present invention also includes all suitable isotopic variants of the compounds of the invention.
  • An isotopic variant of a compound according to the invention is understood to mean a compound in which at least one atom within the compound according to the invention is exchanged for another atom of the same atomic number but with a different atomic mass than the atomic mass that usually or predominantly occurs in nature.
  • isotopes which can be incorporated into a compound of the invention are those of hydrogen, carbon, nitrogen, oxygen, phosphorus, sulfur, fluorine, chlorine, bromine and iodine, such as H (deuterium), ⁇ (tritium), 13 C, 14 C, 15 N, 17 O, ls O, 32 P, 33 P, 33 S, 34 S, 35 S, 36 S, 18 F, 36 Cl, 82 Br, 123 1, 124 I, 129 I and 131 I.
  • isotopic variants of a compound of the invention such as, in particular, those in which one or more radioactive isotopes are incorporated, may be useful, for example, to study the mechanism of action or distribution of drug in the body; due to the comparatively easy manufacturing and detectability are suitable for this particular compounds labeled with ⁇ - or 14 C isotopes.
  • incorporation of isotopes such as deuterium may result in certain therapeutic benefits as a result of greater metabolic stability of the compound, such as prolonging the body's half-life or reducing the required dose of action;
  • Such modifications of the compounds of the invention may therefore optionally also constitute a preferred embodiment of the present invention.
  • Isotopic variants of the compounds according to the invention can be prepared by the processes known to the person skilled in the art, for example by the methods described below and the instructions reproduced in the exemplary embodiments, by using appropriate isotopic modifications of the respective reagents and / or starting compounds.
  • the present invention also includes prodrugs of the compounds of the invention.
  • prodrugs refers to compounds which themselves may be biologically active or inactive, but are converted during their residence time in the body to compounds of the invention (for example metabolically or hydrolytically). Unless otherwise specified, in the context of the present invention, the substituents have the following meaning:
  • treatment includes inhibiting, delaying, arresting, alleviating, attenuating, restraining, reducing, suppressing, restraining or curing a disease, a disease, a disease, an injury or a medical condition , the unfolding, the course or progression of such conditions and / or the symptoms of such conditions.
  • therapy is understood to be synonymous with the term "treatment”.
  • prevention means the avoidance or reduction of the risk, a disease, a disease, a disease, an injury or a health disorder, a development or a Progression of such conditions and / or to get, experience, suffer or have the symptoms of such conditions.
  • the treatment or the prevention of a disease, a disease, a disease, an injury or a health disorder can be partial or complete.
  • R is methyl, and their TV oxides, salts, solvates, salts of ⁇ -oxides and solvates of the TV oxides and salts.
  • the compound having the systematic name corresponds N- [2-amino-2-methyl (4,4,4-2 H3) butyl] -7 - [(2,6-difluorobenzyl) oxy] - 2,5-dimethylpyrazolo [l, 5-a] pyridinecarboxamide (enantiomer A) and the structural formula
  • connection with the systematic name is preferably
  • the invention further provides a process for the preparation of the compounds of the formula (I) according to the invention which comprises reacting a compound of the formula (II)
  • T 1 is (Ci-O-alkyl or benzyl
  • R ' is an amino-protecting group, such as, for example, tert-butoxycarbonyl, benzyloxycarbonyl or benzyl, then cleaving off any protective groups present and the resulting compounds of the formula ( I) optionally with the corresponding (i) solvents and / or (ii) acids or bases in their solvates, salts and / or solvates of the salts.
  • R ' is an amino-protecting group, such as, for example, tert-butoxycarbonyl, benzyloxycarbonyl or benzyl
  • Inert solvents for process steps (III) + (TV) - (I) are, for example, ethers such as diethyl ether, dioxane, tetrahydrofuran, glycol dimethyl ether or diethylene glycol dimethyl ether, hydrocarbons such as benzene, toluene, xylene, hexane, cyclohexane or petroleum fractions, halogenated hydrocarbons such as dichloromethane , trichloromethane, tetrachloromethane, 1, 2-dichloroethane, trichlorethylene or chlorobenzene, or other solvents such as acetone, ethyl acetate, acetonitrile, pyridine, dimethyl sulfoxide, A ⁇ V-dimethylformamide, NN-dimethylacetamide, iV, A r -Dimethylpropylenharnstoff (DMPU) or N - Methylpyr
  • Suitable condensing agents for the amide formation in the process steps (III) + (IV) -> (I) are, for example, carbodiimides such as NN-diethyl, NN'-dipropyl, ⁇ ⁇ , V'-diisopropyl, NN-dicyclo - hexylcarbodiimide (DCC) or N- (3-dimemylaminopropyl) -A'-ethylcarboximide hydrochloride (EDC), phosgene derivatives such as 7V, iV'-carbonyldiimidazole (CDI), 1,2-oxazolium compounds such as 2-ethyl-5 - phenyl-1, 2-oxazolium-3-sulphate or 2-feri-butyl-5-methyl-isoxazolium perchlorate, acylamino compounds such as 2-ethoxy-1-ethoxycarbonyl-1, 2-dihydroquinoline, or iso
  • TBTU is used in conjunction with methylmoholin, HA ' T ' U in conjunction with A T , A-diisopropylethylamine or 1-chloro-TVV 1-trimethylprop-1-ene-1-amine.
  • the condensations (III) + (IV) -> (I) and is generally carried out in a temperature range from -20 ° C to + 100 ° C, preferably at 0 ° C to + 60 ° C.
  • the reaction can be carried out at normal, elevated or reduced pressure (for example from 0.5 to 5 bar). Generally, one works at normal pressure.
  • carboxylic acid of the formula (III) can also first be converted into the corresponding carboxylic acid chloride and this then reacted directly or in a separate reaction with an amine of the formula (IV) to give the compounds according to the invention.
  • the formation of carboxylic acid chlorides from carboxylic acids is carried out by the methods known in the art, for example by treatment with thionyl chloride, sulfuryl chloride or oxalyl chloride in the presence of a suitable base, for example in the presence of pyridine, and optionally with the addition of dimethylformamide, optionally in a suitable inert solvent.
  • the hydrolysis of the ester group T 1 of the compounds of formula (II) is carried out by conventional methods by treating the esters in inert solvents with acids or bases, wherein in the latter the initially formed salts are converted by treatment with acid into the free carboxylic acids ,
  • the ester cleavage is preferably carried out with acids.
  • the ester cleavage is preferably carried out by hydrogenolysis with palladium on activated carbon or Raney nickel.
  • Suitable inert solvents for this reaction are water or the organic solvents customary for ester cleavage.
  • alcohols such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n- Butanol or tert-butanol
  • ethers such as diethyl ether, tetrahydrofuran, 2-methyltetrahydrofuran, dioxane or glycol dimethyl ether, or other solvents such as acetone, dichloromethane, dimethylformamide or dimethyl sulfoxide. It is likewise possible to use mixtures of the solvents mentioned.
  • the usual inorganic bases are suitable. These include preferably alkali metal or alkaline earth metal hydroxides such as sodium, lithium, potassium or barium hydroxide, or alkali or Erdalkalic arbonate such as sodium, potassium or calcium carbonate. Particularly preferred are sodium or lithium hydroxide.
  • Suitable acids for the ester cleavage are generally sulfuric acid, hydrochloric acid, hydrobromic acid, phosphoric acid, acetic acid, trifluoroacetic acid, toluenesulfonic acid, methanesulfonic acid or trifluoromethanesulfonic acid or mixtures thereof, optionally with the addition of water.
  • Hydrogen chloride or trifluoroacetic acid are preferred in the case of the tert-butyl esters and hydrochloric acid in the case of the methyl esters.
  • the ester cleavage is generally carried out in a temperature range from 0 ° C to + 100 ° C, preferably at + 0 ° C to + 50 ° C.
  • the reactions mentioned can be carried out at normal, elevated or reduced pressure (for example from 0.5 to 5 bar). In general, one works at normal pressure.
  • amino protective group is preferably tert. Butoxycarbonyl (Boc) or benzyloxycarbonyl (Z).
  • a protective group for a hydroxy or carboxyl function tert-butyl or benzyl is preferably used.
  • the cleavage of these protecting groups is carried out by conventional methods, preferably by reaction with a strong acid such as hydrogen chloride, hydrogen bromide or trifluoroacetic acid in an inert solvent such as dioxane, diethyl ether, dichloromethane or acetic acid; optionally, the cleavage can also be carried out without an additional inert solvent.
  • benzyl and benzyloxycarbonyl as a protective group, these can also be removed by hydrogenolysis in the presence of a palladium catalyst.
  • the cleavage of the protective groups mentioned can optionally be carried out simultaneously in a one-pot reaction or in separate reaction steps.
  • X 1 is a suitable leaving group, in particular chlorine, bromine, iodine, mesylate, triflate or tosylate,
  • T 1 is (C 1 -C 4 ) -alkyl or benzyl, from which the benzyl group is split off from the latter according to the methods known to the person skilled in the art and the resulting compound (XIII)
  • T 1 is (C 1 -C 4 ) -alkyl or benzyl, in an inert solvent under Mitsunobu conditions with a compound of the formula (XIV)
  • Inert solvents for process step (V) + (VT) -> (VII) are, for example, ethers, such as diethyl ether, dioxane, tetrahydrofuran, dimethoxymethane, glycol dimethyl ether or diethylene glycol dimethyl ether or other solvents, such as acetone, methyl ethyl ketone, ethyl acetate, acetonitrile, N , N-O-methylformamide, iV, iV-dimethylacetamide, dimethyl sulfoxide, A ⁇ A ⁇ -Dimethylpropylenharnstoff (DMPU), N-methylpyrrolidone (NMP). It is likewise possible to use mixtures of the solvents mentioned. Preferably, dimethoxyethane is used.
  • Suitable bases for process step (V) + (VI) -> (VII) are the customary inorganic or organic bases. These preferably include alkali metal hydroxides such as lithium, sodium or potassium hydroxide, alkali metal or alkaline earth metal carbonates such as lithium, sodium, potassium, calcium or cesium carbonate, optionally with the addition of an alkali metal iodide such as sodium iodide or potassium iodide, alkali alcoholates such as sodium or potassium methoxide, sodium or potassium ethoxide or sodium or potassium tert-butoxide, alkali metal hydrides such as sodium or potassium hydride, amides such as sodium amide, lithium or potassium bis (trimethylsilyl) amide or lithium diisopropylamide, or organic amines such as triethylamine, A'-methylmorpholine, iV-methylpiperidine, 7V, V-diisopropylethylamine, pyridine, 4- (iV, iV
  • the reaction is generally carried out in a temperature range from 0 ° C to + 120 ° C, preferably at + 20 ° C to + 80 ° C, optionally in a microwave.
  • the reaction may be carried out at normal, elevated or reduced pressure (e.g., from 0.5 to 5 bar).
  • Inert solvents for process step (VII) - (VIII) are, for example, dichloromethane, 1,2-dichloroethane or other solvents such as acetone, methyl ethyl ketone, ethyl acetate, acetonitrile, IV, IV-dimethylformamide, V, V-dimethylacetamide, dimethyl sulfoxide, 7V, A r '-dimethylpropyleneurea (DMPU), ⁇ -methylpyrrolidone (NMP). It is likewise possible to use mixtures of the solvents mentioned. Preferably, dichloromethane is used.
  • the reaction is generally carried out in a temperature range from 0 ° C to + 120 ° C, preferably at + 20 ° C to + 80 ° C.
  • the reaction may be carried out at normal, elevated or reduced pressure (e.g., from 0.5 to 5 bar).
  • Inert solvents for ring closure to the imidazo [1,2-a] pyrazine backbone (VIII) + (IX) -> (II) are the common organic solvents. These preferably include alcohols such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, n-pentanol or tert-butanol, or ethers such as diethyl ether, tetrahydrofuran, 2-methyltetrahydrofuran, dioxane or glycol dimethyl ether, or other solvents such as acetone, dichloromethane , 1, 2-dichloroethane, acetonitrile, dimethylformamide or dimethyl sulfoxide.
  • alcohols such as methanol, ethanol, n-propanol, isopropanol, n-butanol, n-pentanol or tert-butanol
  • ethers
  • the ring closure is generally carried out in a temperature range from + 50 ° C to + 150 ° C, preferably at + 50 ° C to + 100 ° C, optionally in a microwave.
  • the ring closure (VIII) + (IX) -> (II) is optionally carried out in the presence of water-withdrawing reaction additives, for example in the presence of molecular sieve (3 ⁇ or 4 ⁇ pore size) or by means of water.
  • the reaction (VIII) + (IX) ⁇ (II) is carried out using an excess of the reagent of
  • Formula (VIII) for example with 1 to 20 equivalents of the reagent (VIII), optionally with the addition of bases (such as sodium bicarbonate) wherein the addition of this reagent can be carried out once or in several portions.
  • bases such as sodium bicarbonate
  • the cleavage of the benzyl group in the reaction step (XII) -> (XIII) is carried out according to customary, from the S chutzgrupp enchemi e known methods, preferably by hydrogenolysis in the presence of a palladium catalyst, such as palladium on activated carbon, in an inert solvent, such as Ethanol or ethyl acetate [see also eg T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Croups in Organic Synthesis, Wiley, New York, 1999].
  • a palladium catalyst such as palladium on activated carbon
  • an inert solvent such as Ethanol or ethyl acetate
  • Mitsunobu condensations (XIII) + (XIV) (II) are carried out in the presence of an activating reagent, e.g. Diethyl (E) -diazene-1,2-dicarboxylate (DOAD) or diisopropyl (E) -diazene-1,2-dicarboxylate (DIAD) and a phosphine reagent, e.g. Triphenylphosphine or tributylphosphine, in an inert solvent, e.g. TH F, dichloromethane, toluene or DMF, at a temperature between 0 ° C and the boiling point of the solvent used.
  • an activating reagent e.g. Diethyl (E) -diazene-1,2-dicarboxylate (DOAD) or diisopropyl (E) -diazene-1,2-dicarboxylate (DIAD)
  • the compounds according to the invention have valuable pharmacological properties and can be used for the prevention and treatment of diseases in humans and animals.
  • the compounds according to the invention open up a further treatment alternative and thus represent an enrichment of pharmacy.
  • the compounds of the invention act as potent stimulators of soluble guanylate cyclase, have valuable pharmacological properties, and have an improved therapeutic profile, such as in their in vivo properties and / or their pharmacokinetic behavior and / or metabolic profile. It is therefore suitable for the treatment and / or prophylaxis of diseases in humans and animals.
  • the compounds according to the invention cause vascular relaxation and inhibition of platelet aggregation and lead to a reduction in blood pressure and to an increase in the coronary blood flow. These effects are mediated by a direct stimulation of soluble guanylate cyclase and an intracellular cGMP increase.
  • the compound of the invention enhances the action of cGMP level enhancing substances such as endothelium-derived relaxing factor (EDRF), NO donors, protophoryrin IX. Arachidonic acid or phenylhydrazine derivatives.
  • EDRF endothelium-derived relaxing factor
  • NO donors NO donors
  • protophoryrin IX protophoryrin IX.
  • Arachidonic acid or phenylhydrazine derivatives Arachidonic acid or phenylhydrazine derivatives.
  • the compounds according to the invention are suitable for the treatment and / or prophylaxis of cardiovascular, pulmonary, thromboembolic and fibrotic disorders.
  • the compounds according to the invention can therefore be used in medicaments for the treatment and / or prophylaxis of cardiovascular diseases such as hypertension, resistant hypertension, acute and chronic heart failure, coronary heart disease, stable and unstable angina pectoris, peripheral and cardiac vascular diseases, arrhythmias, arrhythmias Atria and ventricles as well as conduction disorders such as atrio-ventricular blockades grade l-ll l (AB block l-ll l).
  • cardiovascular diseases such as hypertension, resistant hypertension, acute and chronic heart failure, coronary heart disease, stable and unstable angina pectoris, peripheral and cardiac vascular diseases, arrhythmias, arrhythmias Atria and ventricles as well as conduction disorders such as atrio-ventricular blockades grade l-ll l (AB block l-ll l).
  • thromboembolic disorders and ischaemias such as myocardial ischemia, myocardial infarction, stroke, cardiac hypertrophy, transitory and ischemic attacks, preeclam
  • cardiac failure includes both acute and chronic manifestations of cardiac insufficiency, as well as more specific or related forms of disease such as acute decompensated heart failure, right heart failure, left heart failure, global insufficiency, ischemic cardiomyopathy, dilated cardiomyopathy, hypertrophic cardiomyopathy, idiopathic cardiomyopathy, congenital heart defects.
  • Cardiac insufficiency in valvular heart failure mitral valve stenosis, mitral valve insufficiency, aortic valve stenosis, aortic valve insufficiency, tricuspid stenosis, tricuspid insufficiency, pulmonary valve stenosis, pulmonary valve insufficiency, combined valvular heart failure, myocarditis, chronic myocarditis, acute myocarditis, viral myocarditis, diabetic cardiac insufficiency, alcoholic cardiomyopathy cardiac storage disorders, diastolic heart failure as well as systolic heart failure and acute phases worsening of the heart failure.
  • the compound according to the invention may also be used for the treatment and / or prophylaxis of arteriosclerosis, lipid metabolism disorders, hypolipoproteinemias, dyslipidemias, hypertriglycerides, hyperlipidemias, hypercholesterolemias, abetelipoproteinaemia, sitosterolemia, xanthomatosis, Tangier's disease, obesity, obesity and of combined hyperlipidemia and the metabolic syndrome.
  • the compounds of the invention may be used for the treatment and / or prophylaxis of primary and secondary Raynaud's phenomenon, microcirculatory disorders, claudication, peripheral and autonomic neuropathies, diabetic microangiopathies, diabetic retinopathy, diabetic ulcers on the extremities, gangrenous, CREST syndrome, erythematosis, onychomycosis , rheumatic diseases and to promote wound healing.
  • the compounds according to the invention are suitable for the treatment of urological diseases such as, for example, benign prostate syndrome (BPS), benign prostatic hyperplasia (BPH), benign prostatic hyperplasia (BPH), bladder emptying disorder (BOO), lower urinary tract syndromes (LUTS, including Feiine's urological syndrome (UUS), diseases of the urogenital system including neurogenic over active bladder (OAB) and (IC), incontinence (UI) such as mixed, urge, stress, or overflow incontinence (MUI, UUI, SUI, OUI), pelvic pain, benign and malignant diseases of the organs of the male and female urogenital system.
  • BPS benign prostate syndrome
  • BPH benign prostatic hyperplasia
  • BPH benign prostatic hyperplasia
  • BOO bladder emptying disorder
  • LUTS lower urinary tract syndromes
  • LUTS lower urinary tract syndromes
  • UUS neurogenic over active bladder
  • UI incontinence
  • MUI UUI, SUI, OUI
  • kidney diseases in particular of acute and chronic renal insufficiency, as well as of acute and chronic renal failure.
  • renal insufficiency encompasses both acute and chronic manifestations of renal insufficiency, as well as underlying or related renal diseases such as renal hypoperfusion, intradialytic hypotension, obstructive uropathy, glomerulopathies, glomerulonephritis, acute glomerulonephritis, glomerulosclerosis, tumulto-interstitial disorders, nephropathic disorders such as primary and congenital kidney disease, nephritis, immunological kidney diseases such as renal transplant rejection, immune-compromised kidney disease, nephropathy induced by toxic substances, contrast-induced nephropathy, diabetic and nondiabetic nephropathy, pyelonephritis, renal cysts, nephrosclerosis
  • the compounds according to the invention are also suitable for the treatment and / or prophylaxis of asthmatic diseases, pulmonary arterial hypertension (PAH) and other forms of pulmonary hypertension (PH), comprising left heart disease, HIV, sickle cell anemia, thromboembria (CTEPH), Sarcoidosis, COPD or pulmonary fibrosis-associated pulmonary hypertension, chronic obstructive pulmonary disease (COPD), acute respiratory tract syndrome (ARDS), acute lung injury (ALI), alpha-1-antitrypsin deficiency (AATD), pulmonary fibrosis, pulmonary emphysema (eg Cigarette smoke-induced pulmonary emphysema) and cystic fibrosis (CF).
  • PAH pulmonary arterial hypertension
  • CTEPH thromboembria
  • COPD chronic obstructive pulmonary disease
  • ARDS acute respiratory tract syndrome
  • ALI acute lung injury
  • AATD alpha-1-antitrypsin deficiency
  • the compounds described in the present invention are also agents for controlling central nervous system diseases characterized by disorders of the NO / cGMP system.
  • they are suitable for improving the perception, concentration performance, learning performance or memory performance after cognitive disorders such as occur in situations / diseases / syndromes such as mild cognitive impairment, age-associated learning and memory disorders, age-associated memory loss, vascular dementia, cranial brain -Trauma, stroke, post-stroke dementia, post-traumatic traumatic brain injury, generalized concentration disorder, concen- tration disorder in children with learning and memory problems, Alzheimer's disease, dementia with Lewy Corpuscles, dementia with degeneration of the frontal lobes including Pick's syndrome, Parkinson's disease, progressive nuclear palsy, dementia with corticobasal degeneration, amyolateral sclerosis (ALS), Huntington's disease, demyelination, multiple sclerosis, thalamic degeneration, Creutzfeld- Jacob - Dementia, HIV-Domen /, schizophrenia with dementia or Korsakoff's psychos
  • the compounds according to the invention are also suitable for regulating cerebral blood flow and are effective agents for combating migraine. They are also suitable for the prophylaxis and control of the consequences of cerebral infarct events (Apoplexia cerebri) such as stroke, cerebral ischaemias and the pediatric brain. Traumas. Likewise, the compounds according to the invention can be used to combat pain and tinnitus.
  • the compounds according to the invention have anti-inflammatory action and can therefore be used as anti-inflammatory agents for the treatment and / or prophylaxis of sepsis (SIRS), multiple organ failure (MODS, MOF), inflammatory diseases of the kidney, chronic intestinal inflammation (IBD, Crohn's Disease, UC ), Pancreatitis, peritonitis, rheumatoid diseases, inflammatory skin diseases and inflammatory ocular diseases.
  • SIRS sepsis
  • MODS multiple organ failure
  • IBD chronic intestinal inflammation
  • Crohn's Disease UC
  • Pancreatitis peritonitis
  • rheumatoid diseases inflammatory skin diseases and inflammatory ocular diseases.
  • the compounds of the invention can also be used for the treatment and / or prophylaxis of autoimmune diseases.
  • the compounds according to the invention are suitable for the treatment and / or prophylaxis of fibrotic disorders of the internal organs such as, for example, the lung, the heart, the kidney, the bone marrow and in particular the liver, as well as dermatological fibroses and fibrotic disorders of the eye.
  • fibrotic disorders includes in particular the following terms: liver fibrosis, cirrhosis of the liver, pulmonary fibrosis, endomyocardial fibrosis, nephropathy, glomerulonephritis, interstitial renal fibrosis, fibrotic damage as a consequence of diabetes, bone marrow fibrosis and similar fibrotic diseases, scleroderma, morphea, keloids, hyperlipidemia. scarring (also after surgical procedures), nevi, diabetic retinopathy, proliferative vitroretinopathy and connective tissue disorders (eg sarcoidosis).
  • the compounds of the invention are useful for controlling postoperative scarring, e.g. as a result of glaucoma surgery.
  • the compounds according to the invention can likewise be used cosmetically for aging and keratinizing skin.
  • the compounds according to the invention are suitable for the treatment and / or prophylaxis of hepatitis, neoplasm, osteoporosis, glaucoma and gastroparesis.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds of the invention for the treatment and / or prophylaxis of heart failure, angina pectoris, hypertension, pulmonary hypertension, ischaemia, vascular disease, renal insufficiency, thromboembolic diseases, fibrotic diseases, atherosclerosis, dementia and erectile dysfunction.
  • the present invention furthermore relates to the compounds according to the invention for use in a method for the treatment and / or prophylaxis of cardiac insufficiency, angina pectoris, hypertension, pulmonary hypertension, ischaemias, vascular diseases, renal insufficiency, thromboembolic disorders, fibrotic disorders and arteriosclerosis.
  • Another object of the present invention is the use of the compounds according to the invention for the production of a medicament for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the afore-mentioned diseases.
  • the present invention further relates to the use of the compounds according to the invention for the manufacture of a medicament for the treatment and / or prophylaxis of cardiac insufficiency, angina pectoris, hypertension, pulmonary hypertension, ischaemias, vascular diseases, renal insufficiency, thromboembolic disorders, fibrotic disorders, arteriosclerosis, dementia and erectile dysfunction.
  • Another object of the present invention is a method for the treatment and / or prophylaxis of diseases, in particular the aforementioned diseases, using an effective amount of at least one of the compounds of the invention.
  • the present invention further provides a method for the treatment and / or prophylaxis of cardiac insufficiency, angina pectoris, hypertension, pulmonary hypertension, ischaemias, vascular diseases, renal insufficiency, thromboembolic disorders, fibrotic diseases and atherosclerosis, using an effective amount of at least one of the compounds according to the invention ,
  • the compounds according to the invention can be used alone or as needed in combination with other active substances.
  • Another object of the present invention are pharmaceutical compositions containing at least one of the compounds of the invention and one or more other active ingredients, in particular for the treatment and / or prophylaxis of the aforementioned diseases.
  • suitable combination active ingredients may be mentioned by way of example and preferably:
  • organic nitrates and NO donors such as sodium nitroprusside, nitroglycerin, isosorbitan mononitrate, isosorbide dinitrate, molsidomine or SIN-1, and inhaled NO;
  • cGMP cyclic guanosine monophosphate
  • PDE phosphodiesterases
  • Antithrombotic agents by way of example and preferably from the group of thrombocyte aggregation inhibitors, anticoagulants or profibrinolytic substances;
  • Antihypertensive agents by way of example and preferably from the group of calcium antagonists, angiotensin all-antagonists, ACE inhibitors, endothelin antagonists, ren inhibitors, alpha-receptor blockers, beta-receptor blockers, mineralocorticoid receptor antagonists and diuretics; and / or fat metabolism-altering agents, by way of example and preferably from the group of thyroid receptor agonists, cholesterol synthesis inhibitors such as by way of example and preferably HMG-CoA reductase or squalene synthesis inhibitors, the AC AT inhibitors, CETP inhibitors, MTP Inhibitors, PPAR-alpha, PPAR-gamma and / or PPAR-delta agonists, cholesterol absorption inhibitors, lipase inhibitors, polymeric bile acid adsorbers, bile acid reabsorption hemimers and lipoprotein (a) antagonists.
  • angiotensin all-antagonists by way of example and
  • Antithrombotic agents are preferably understood as meaning compounds from the group of thrombocyte aggregation inhibitors, anticoagulants or profibrinolytic substances.
  • the compounds according to the invention are administered in combination with a platelet aggregation inhibitor such as, by way of example and by way of preference, aspirin, clopidogrel, ticlopidine or dipyridamole.
  • a platelet aggregation inhibitor such as, by way of example and by way of preference, aspirin, clopidogrel, ticlopidine or dipyridamole.
  • the compounds according to the invention are administered in combination with a thrombin inhibitor, such as, by way of example and by way of preference, ximelagatran, dabigatran, melagatran, bivalirudin or Clexane.
  • a thrombin inhibitor such as, by way of example and by way of preference, ximelagatran, dabigatran, melagatran, bivalirudin or Clexane.
  • the compounds according to the invention are administered in combination with a GPIIb / IIIa antagonist, such as, by way of example and by way of preference, tirofiban or abciximab.
  • a GPIIb / IIIa antagonist such as, by way of example and by way of preference, tirofiban or abciximab.
  • the compounds according to the invention are used in combination with a factor Xa inhibitor, such as by way of example and preferably rivaroxaban (BAY 59-7939), edoxaban (DU-176b), apixaban, otamixaban, fidexaban, razaxaban, fondaparinux, idraparinux , PMD-3112, YM-150, KFA-1982, EMD-503982, MCM-17, MLN-1021, DX 9065a, DPC 906, JTV 803, SSR-126512 or SSR-12X428.
  • the compounds according to the invention are administered in
  • the compounds according to the invention are administered in combination with a vitamin K antagonist, such as by way of example and preferably coumarin.
  • a vitamin K antagonist such as by way of example and preferably coumarin.
  • the antihypertensive agents are preferably compounds from the group of calcium antagonists, angiotensin AII antagonists, ACE inhibitors, endothelin antagonists, renin inhibitors, alpha-receptor blockers, beta-receptor blockers, mineralocorticoid receptor antagonists and diuretics.
  • the compounds according to the invention are administered in combination with a calcium antagonist, such as, by way of example and by way of preference, nifedipine, amlodipine, verapamil or diltiazem.
  • a calcium antagonist such as, by way of example and by way of preference, nifedipine, amlodipine, verapamil or diltiazem.
  • the compounds according to the invention are administered in combination with an alpha-1-receptor blocker, such as by way of example and preferably prazosin.
  • the compounds according to the invention are used in combination with a beta-receptor blocker, such as by way of example and preferably propranolol, atenolol, timolol, pindolol, alprenolol, oxprenolol, penbutolol, bupranolol, metipranolol, nadolol, mepindolol, carazalol, sotalol , Metoprolol, betaxolol, celiprolol, bisoprolol, carteolol, esmolol, labetalol, carvedilol, adaprolol, landiolol, nebivolol, epanolol or bucindolol.
  • a beta-receptor blocker such as by way of example and preferably propranolol, atenolol, timolo
  • the compounds according to the invention are used in combination with an angiotensin all antagonist, such as by way of example and preferably losartan, candesartan, valsartan, telmisartan, embursartan, irbesartan, olmesartan, eprosartan or azilsartan or a dual angiotensin AII antagonist / NEP Inhibitor such as and preferably LCZ696 (valsartan / 'sacubitril).
  • an angiotensin all antagonist such as by way of example and preferably losartan, candesartan, valsartan, telmisartan, embursartan, irbesartan, olmesartan, eprosartan or azilsartan or a dual angiotensin AII antagonist / NEP Inhibitor such as and preferably LCZ696 (valsartan / 'sacubitril).
  • the compounds according to the invention are administered in combination with an ACE inhibitor, such as by way of example and preferably enalapril, captopril, lisinopril, ramipril, delapril, fosinopril, quinopril, perindopril or trandopril.
  • an ACE inhibitor such as by way of example and preferably enalapril, captopril, lisinopril, ramipril, delapril, fosinopril, quinopril, perindopril or trandopril.
  • the compounds according to the invention are administered in combination with an endothelin antagonist, such as, by way of example and by way of preference, bosentan, darusantan, ambrisentan or sitaxsentan.
  • an endothelin antagonist such as, by way of example and by way of preference, bosentan, darusantan, ambrisentan or sitaxsentan.
  • the compounds according to the invention are administered in combination with a renin inhibitor, such as by way of example and preferably aliskiren, SPP-600 or SPP-800.
  • the compounds according to the invention are administered in combination with a mineralocorticoid receptor antagonist, such as by way of example and preferably spironolactone or eplerenone.
  • a mineralocorticoid receptor antagonist such as by way of example and preferably spironolactone or eplerenone.
  • the compounds of the present invention are used in combination with a sulfide endiuretic such as furosemide, torasemide, bumetanide and piretanide with potassium sparing diuretics such as amiloride and triamterene with aldosterone antagonists such as spironolactone, potassium canrenoate and eplerenone and thiazide diuretics , such as hydrochlorothiazide, chlorthalidone, xipamide, and indapamide.
  • a sulfide endiuretic such as furosemide, torasemide, bumetanide and piretanide
  • potassium sparing diuretics such as amiloride and triamterene with aldosterone antagonists such as spironolactone, potassium canrenoate and eplerenone and thiazide diuretics , such as hydrochlorothiazide, chlorthalidone, xipamide, and ind
  • the lipid metabolizing agents are preferably compounds from the group of CETP inhibitors, thyroid receptor agonists, cholesterol synthesis inhibitors such as HMG-CoA- Reductase or squalene synthesis inhibitors, ACAT inhibitors, MTP inhibitors, PPAR-alpha, PPAR-gamma and / or PPAR-delta agonists, cholesterol absorption inhibitors, polymeric bile acid lectors, bile acid reabsorption inhibitors, Lipase inhibitors and the lipoprotein (a) antagonists understood.
  • the compounds according to the invention are administered in combination with a CETP inhibitor, by way of example and with preference dalcetrapib, BAY 60-5521, anacetrapib or CETP vaccine (CETi-1).
  • the compounds of the invention are administered in combination with a thyroid receptor agonist such as, by way of example and by way of preference, D-thyroxine, 3,5,3'-triiodothyronine (T3), CGS 23425 or axitirome (CGS 26214).
  • a thyroid receptor agonist such as, by way of example and by way of preference, D-thyroxine, 3,5,3'-triiodothyronine (T3), CGS 23425 or axitirome (CGS 26214).
  • the compounds according to the invention are administered in combination with an HMG-CoA reductase inhibitor from the class of statins, such as by way of example and preferably lovastatin, simvastatin, pravastatin, fluvastatin, atorvastatin, rosuvastatin or pitavastatin.
  • statins such as by way of example and preferably lovastatin, simvastatin, pravastatin, fluvastatin, atorvastatin, rosuvastatin or pitavastatin.
  • the compounds according to the invention are administered in combination with a squalene synthesis inhibitor, such as, by way of example and by way of preference, BMS-188494 or TAK-475.
  • the compounds according to the invention are administered in combination with an AC AT inhibitor, such as by way of example and preferably avasimibe, melinamide, pactimibe, eflucimibe or SMP-797.
  • an AC AT inhibitor such as by way of example and preferably avasimibe, melinamide, pactimibe, eflucimibe or SMP-797.
  • the compounds according to the invention are administered in combination with an MTP inhibitor such as, for example and preferably, implitapide, BMS-201038, R-103757 or JTT-130.
  • an MTP inhibitor such as, for example and preferably, implitapide, BMS-201038, R-103757 or JTT-130.
  • the compounds according to the invention are administered in combination with a PPAR-gamma agonist, such as, by way of example and by way of preference, pioglitazone or rosiglitazone.
  • a PPAR-gamma agonist such as, by way of example and by way of preference, pioglitazone or rosiglitazone.
  • the compounds according to the invention are administered in combination with a PPAR-delta agonist, such as by way of example and preferably GW 501516 or BAY 68-5042.
  • a PPAR-delta agonist such as by way of example and preferably GW 501516 or BAY 68-5042.
  • the compounds according to the invention are administered in combination with a cholesterol absorption inhibitor, such as, for example and preferably, ezetimibe, tiqueside or pamaqueside.
  • the compounds according to the invention are administered in combination with a lipase inhibitor, such as, for example and preferably, orlistat.
  • the compounds according to the invention are administered in combination with a polymeric bile adsorbent such as, by way of example and by way of preference, cholestyramine, colestipol, colesolvam, cholesta gel or colestimide.
  • a polymeric bile adsorbent such as, by way of example and by way of preference, cholestyramine, colestipol, colesolvam, cholesta gel or colestimide.
  • AS BT IBAT
  • the compounds according to the invention are administered in combination with a lipoprotein (a) antagonist, such as, by way of example and by way of preference, gemcabene calcium (CI-1027) or nicotinic acid.
  • a lipoprotein (a) antagonist such as, by way of example and by way of preference, gemcabene calcium (CI-1027) or nicotinic acid.
  • compositions containing at least one compound of the invention are pharmaceutical compositions containing at least one compound of the invention, usually together with one or more inert, non-toxic, pharmaceutically suitable excipients, and their use for the purposes mentioned above.
  • the compounds according to the invention can act systemically and / or locally. For this purpose, they may be applied in a suitable manner, e.g. oral, parenteral, pulmonary, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctival, otic or as an implant or stent.
  • the compounds according to the invention can be administered in suitable administration forms.
  • the compounds of the invention rapidly and / or modified donating application forms containing the compounds of the invention in crystalline and / or amorphized and / or dissolved form, such.
  • Tablets non-coated or coated tablets, for example with enteric or delayed-release or insoluble coatings, which control the release of the compound according to the invention
  • tablets or films / wafers rapidly breaking down in the oral cavity, films / lyophilisates, capsules ( hard or soft gelatin capsules, for example), dragees, granules, pellets, powders, emulsions, suspensions, aerosols or solutions.
  • Parenteral administration may be carried out bypassing a ⁇ ⁇ (eg intravenously, intraarterially, intracardially, intraspinal or intralumbar) or with involvement of a resorption (eg intramuscular, subcutaneous, intracutaneous, percutaneous or intraperitoneal).
  • suitable application forms include injection and infusion preparations in the form of solutions, suspensions, emulsions, lyophilisates or sterile powders.
  • inhalation drug including powder inhalers, Nebulizer
  • nasal drops solutions or sprays
  • lingual, sublingual or buccal tablets to be applied films / wafers or capsules
  • suppositories lingual, sublingual or buccal tablets to be applied
  • films / wafers or capsules films / wafers or capsules
  • suppositories ear or eye preparations
  • vaginal capsules aqueous suspensions (lotions, shake mixtures), lipophilic suspensions, ointments, creams, transdermal therapeutic systems (eg plasters), milk, pastes, foams, powdered powders, implants or stents.
  • transdermal therapeutic systems eg plasters
  • the compounds according to the invention can be converted into the stated administration forms. This can be done in a conventional manner by mixing with inert, non-toxic, pharmaceutically suitable excipients.
  • excipients for example microcrystalline cellulose, lactose, mannitol
  • solvents for example liquid polyethylene glycols
  • emulsifiers and dispersants or wetting agents for example sodium dodecyl sulfate, polyoxysorbitanoleate
  • binders for example polyvinylpyrrolidone
  • synthetic and natural polymers for example albumin
  • stabilizers for example, antioxidants such as ascorbic acid
  • dyes eg, inorganic pigments such as iron oxides
  • the dosage is about 0.001 to 2 mg / kg, preferably about 0.001 to 1 mg / kg of body weight.
  • Ii has N - [(dimethylamino) (3H- [1,2,3] - ⁇ -iazolo [4,5-b] pyridin-3-yloxy) methylene] -N-methylmethanaminium hexafluorophosphate
  • Instrument MS Waters (Micromass) QM; Instrument HPLC: Agilent 1100 series; Column: Agient ZORBAX Extend-C18 3.0x50mm 3.5-micron; Eluent A: 1 l of water + 0.01 mol of ammonium carbonate, eluent B: 1 l of acetonitrile; Gradient: 0.0 min 98% A 0.2 min 98% A -> 3.0 min 5% A - 4.5 min 5% A; Oven: 40 ° C; Flow: 1.75 ml / min; UV detection: 210 nm.
  • Instrument MS Waters
  • instrument HPLC Waters (column Waters X-Bridge C18, 18 mm x 50 mm, 5 ⁇ , eluent A: water + 0.05% triethylamine, eluent B: acetonitrile (ULC) + 0.05% triethylamine, with gradient; Flow: 40 ml / min; UV detection: DAD: 210-400 nm). respectively.:
  • Instrument Thermo Fisher-Scientific DSQ; chemical ionization; Reactant gas IL; Source temperature: 200 ° C; Ionization energy 70eV.
  • Instrument MS Waters (Micromass) Quattro Micro
  • Instrument HPLC Agilent 1100 series
  • Eluent A 1 l of water + 0.01 mol of ammonium carbonate
  • eluent B 1 l of acetonitrile
  • Gradient 0.0 min 100% A 2.75 min 5% A 4.5 min 5% A
  • Oven 40 ° C
  • Flow 1.25 ml / min
  • UV detection 210 nm.
  • the compounds according to the invention can be in salt form, for example as trifluoroacetate, formate or ammonium salt, if the compounds according to the invention contain sufficiently basic or acidic functionalities.
  • a salt can be converted into the corresponding free base or acid by various methods known to those skilled in the art.
  • the trifluoroacetate, formate or ammonium salts can be converted into the salt-free form by shaking out an organic solution or suspension with saturated, aqueous sodium bicarbonate solution.
  • amidines may be present as free compounds or proportionally (depending on the preparation in the presence of acetic acid) as acetate salts or acetate solvates.
  • the secondary amides according to the invention can be present as rotational isomers / isomer mixtures, in particular in NMR investigations.
  • Purity indications generally refer to speaking peak integrations in the LC / MS chromatogram, but may also have been determined using the 'H-NMR spectrum. If no purity is specified, it is usually a 100% purity according to automatic peak integration in the LC / MS chromatogram or purity was not explicitly determined.
  • multiplicities of proton signals in H-NMR spectra represent the respective observed signal shape and do not take into account higher-order signal phenomena.
  • the indication of the chemical shift refers to the center of the relevant signal.
  • an interval is specified.
  • Solvent or water concealed signals were either tentatively assigned or are not listed. Strongly broadened signals - e.g. caused by rapid rotation of moieties or due to exchanging protons - have also been tentatively assigned (often referred to as broad multiplet or broad singlet) or are not listed.
  • the crude product was purified by Biotage Isolera (100 g silica gel cartridge, cyclohexane / ethyl acetate gradient, 0% after 10% Essigklareethyles- ter). 3.51 g of the title compound (61% of theory) were obtained.
  • the water-moist 0- (2-Mesitylenesulfonyl) hydroxylamine was dissolved in 12 mL of dichloromethane, dried with magnesium sulfate, filtered, and the filtrate was added directly to a solution of 1.03 g (4.39 mmol, 1.0 eq.) Of 2 - [(2,6-difluorobenzyl) oxy] -4-methylpyridine from Example 1A in 2 ml of dichloromethane. The mixture was stirred at RT overnight. Then diethyl ether was added dropwise, the resulting precipitate was filtered off, washed with diethyl ether and dried. 1.3 g of the title compound were isolated (59% of theory, purity 90%).
  • Enantiomer B 0.99 g (> 99% ee)
  • the target compound can be prepared by deprotection of 1 - ⁇ [tert-butyl (dimethyl) silyl] oxy ⁇ -2 - [2 - (difluoromethyl) -2H-tetrazol-5-yl] propan-2-amine (preparable analogously to Intermediate 300 in WO2014 / 084312 from racemic starting material) with tetrabutylammonium fluoride (TBAF) in THF at room temperature by methods known from the literature.
  • TBAF tetrabutylammonium fluoride
  • the reaction solution was filtered by means of Millipore filter, washed with ethanol and the filtrate evaporated.
  • the residue was admixed with acetonitrile, water and TFA and purified by preparative HPLC (RP18 column, mobile phase: acetonitrile / water gradient with addition of 0.1% TFA).
  • the product fractions were combined and concentrated.
  • the residue was then taken up in dichloromethane and a little methanol and washed twice with saturated aqueous sodium bicarbonate solution.
  • the aqueous phase was extracted twice with dichloromethane.
  • the combined organic phases were dried over sodium sulfate, filtered and concentrated.
  • the reaction solution was filtered by means of Millipore filter, washed with ethanol and the filtrate evaporated.
  • the reaction solution was filtered by means of Millipore filter, washed with ethanol and the filtrate evaporated.
  • the residue was admixed with acetonitrile, water and TFA and purified by preparative HPLC (RP18 column, mobile phase: acetonitrile / water gradient with the addition of 0.1% TFA).
  • the product fractions were combined and concentrated.
  • the residue was then taken up in dichloromethane and a little methanol and washed twice with saturated, aqueous sodium bicarbonate solution.
  • the aqueous phase was extracted twice with dichloromethane.
  • the combined organic phases were dried over sodium sulfate, filtered and concentrated. 58 mg of the target compound (62% of theory) were obtained.
  • Soluble guanylyl cyclase converts GTP to cGMP and pyrophosphate (PPi) upon stimulation.
  • PPi is detected by the method described in WO 2008/061626.
  • the signal generated in the test increases as the reaction progresses and serves as a measure of the sGC enzyme activity.
  • the enzyme can be characterized in a known manner, e.g. in terms of turnover rate, stimulability or Michaelis constant.
  • 29 ⁇ M enzyme solution (0-10 nM soluble guanylyl cyclase (prepared according to Hönicka et al., Journal of Molecular Medicine 77 (1999) 14-23), in 50 mM TEA, 2 mM magnesium chloride, 0.1% BSA (Fraction V), 0.005% Brij 35, pH 7.5) are introduced into the microplate and added to 1 ⁇ l of the stimulator solution (0-10 ⁇ M 3-morpholinosydnonimine, SIN-1, Merck in DMSO). It was incubated at RT for 10 min.
  • the enzyme reaction was started by addition of 20 ⁇ M substrate solution (1.25 mM guanosine 5'-triphosphate (Sigma) in 50 mM TEA, 2 mM magnesium chloride, 0.1% BSA (fraction V), 0.005% Brij 35, pH 7.5) and measured continuously luminometrically.
  • substrate solution (1.25 mM guanosine 5'-triphosphate (Sigma) in 50 mM TEA, 2 mM magnesium chloride, 0.1% BSA (fraction V), 0.005% Brij 35, pH 7.5
  • B-2 Effect on recombinant Giianvlatcvclase Keporterzcllline
  • the cellular activity of the compounds of the invention is measured on a recombinant guanylate cyclase reporter cell line as described in F. Wunder et al., Anal. Biochem. 339, 104-112 (2005).
  • MEC minimum effective concentration
  • aorta is harvested, detached from adherent tissue, divided into 1.5 mm wide rings and placed individually under bias in 5 ml organ baths with 37 ° C warm, carbogen-fumed Krebs-Henseleit solution of the following composition (in each case mM): Sodium chloride: 119; Potassium chloride: 4.8; Calcium chloride dihydrate: 1; Magnesium sulfate heptahydrate: 1.4; Potassium dihydrogen phosphate: 1.2; Sodium hydrogencarbonate: 25; Glucose: 10.
  • the force of contraction is detected with Statham UC2 cells, amplified and digitized via A / D converters (DAS-1802 HC, Keithley Instruments Munich) and registered in parallel on chart recorders.
  • DAS-1802 HC A / D converters
  • phenylephrine is added cumulatively to the bath in increasing concentration.
  • the substance to be examined is added in each subsequent course in increasing dosages and the height of the contraction is compared with the height of the contraction achieved in the last predistortion. This is used to calculate the concentration required to reduce the level of the control value by 50% (IC50 value).
  • the standard application volume is 5 ⁇ , the DMSO content in the bath solution corresponds to 0.1%.
  • a commercially available telemetry system from DATA SCIENCES INTERNATIONAL DSI, USA is used for the blood pressure measurement on awake rats described below.
  • the system consists of 3 main components: Implantable Transmitters (Physiotel® Telemetry Transmitter)
  • Data acquisition computer are connected.
  • the telemetry system allows a continuous recording of blood pressure heart rate and body movement on awake animals in their habitual habitat. animal material
  • the experimental animals are housed individually in macroion cages type 3 after end implantation. You have free access to standard food and water.
  • the TAI 1 PA - C40 telemetry transmitters are surgically implanted into the experimental animals under aseptic conditions at least 14 days before the first trial.
  • the animals so instrumented are repeatedly used after healing of the wound and ingrowth of the implant.
  • the fasting animals are narcoticized with pentobabital (Nembutal, Sanofi: 50 mg / kg ip) and shaved and disinfected on the ventral side.
  • pentobabital Nembutal, Sanofi: 50 mg / kg ip
  • the system's liquid-filled measuring catheter above the bifurcation is inserted cranially into the descending aorta and secured with tissue adhesive (VetBonD TM, 3M).
  • the transmitter housing is fixed intraperitoneally to the abdominal wall musculature and the wound is closed in layers.
  • an antibiotic is administered for infection prophylaxis (Tardomyocel COMP Bayer lml / kg sc)
  • a solvent-treated group of animals is used as a control.
  • Experimental procedure The existing telemetry measuring device is configured for 24 animals. Each trial is registered under a trial number (VYear month day).
  • the instrumented rats living in the plant each have their own receiving antenna (1010 receivers, DSI).
  • the implanted transmitters can be activated externally via a built-in magnetic switch. They will be put on the air during the trial run.
  • the emitted signals can be recorded online by a data acquisition system (Dataquest TM A.R.T. for Windows, DSI) and processed accordingly. The storage of the data takes place in each case in a folder opened for this purpose which carries the test number.
  • SBP Systolic blood pressure
  • DBP Diastolic blood pressure
  • MAP Heart rate
  • HR Heart rate
  • ACT Activity
  • the collected individual data are sorted with the analysis software (DATAQUEST TM A.RT. TM ANALYSIS).
  • the blank value is assumed here 2 hours before application, so that the selected data record covers the period from 7:00 am on the day of the experiment to 9:00 am on the following day.
  • the data is smoothed over a presettable time by averaging (15 minutes average) and transferred as a text file to a disk.
  • the presorted and compressed measured values are transferred to Excel templates and displayed in tabular form.
  • the storage of the collected data is done per experiment day in a separate folder that bears the test number. Results and test reports are sorted in folders and sorted by paper.
  • the pharmacokinetic parameters of the compounds according to the invention are determined in male CD-1 mice, male Wistar rats and female beagle dogs.
  • Intravenous administration is in mice and rats using a species-specific plasma / DMSO formulation and in dogs using a water / PEG400 / ethanol formulation.
  • Oral administration of the solute by gavage is performed in all species based on a water / PEG400 / ethanol formulation. Rats are placed in the right external jugular vein for ease of blood sampling prior to drug administration. The operation is carried out at least one day before the experiment under isoflurane anesthesia and with the administration of an analgesic (atropine / 'rimadyl (3/1) 0.1 mL sc).
  • an analgesic atropine / 'rimadyl (3/1) 0.1 mL sc.
  • the blood collection (usually more than 10 times) takes place in a time window, which includes terminal times of at least 24 to a maximum of 72 hours after substance administration.
  • the blood is passed into hepatized tubes when removed. So then the blood plasma is recovered by centrifugation and optionally stored at -20 ° C until further processing.
  • An internal standard is added to the samples of the compounds according to the invention, calibration samples and qualifiers (this may also be a chemically unrelated substance), followed by protein precipitation by means of acetonitrile in excess.
  • the mixture is centrifuged at 1000 g.
  • the supernatant is measured by LC-MS / MS using C18 reversed-phase columns and variable eluent mixtures.
  • the quantification of the substances is based on the peak heights or areas of extracted ion chromatograms of specific selected ion monitoring experiments.
  • the pharmacokinetic parameters such as AUC, Cmax, ti / 2 (terminal half-life), F (bioavailability), MRI (Mean Residence Time) and CL (clearance) are calculated from the plasma concentration-time profiles determined using a validated pharmacokinetic calculation program.
  • the blood / plasma distribution of the substance must be determined in order to adjust the pharmacokinetic parameters accordingly.
  • a defined amount of substance is incubated in heparinized whole blood of the corresponding species for 20 min in a tumble roll mixer. After centrifugation at 1000 g, the concentration in the plasma is measured (by means of LC-MS / MS, see above) and determined by quotient formation of the CBiut / Cpiasma value.
  • CYP cytochrome P450
  • the compounds according to the invention were incubated at a concentration of about 0.1-10 ⁇ .
  • Stock solutions of the compounds according to the invention having a concentration of 0.01-1 mM in acetonitrile were prepared and then pipetted into the incubation batch with a 1: 100 dilution.
  • the liver microsomes and recombinant enzymes were incubated in 50 mM potassium phosphate buffer pH 7.4 with and without NADPH-generating system consisting of 1 mM NA DP ' , 10 mM glucose-6-phosphate and 1 unit glucose-6-phosphate dehydrogenase at 37 ° C , Primary hepatocytes were also incubated in suspension in Williams E medium also at 37 ° C.
  • the incubation mixtures were stopped with acetonitrile (final concentration about 30%) and the protein was centrifuged off at about 15,000 ⁇ g.
  • the samples thus stopped were either analyzed directly or stored at -20 ° C until analysis.
  • the analysis is carried out by means of high performance liquid chromatography with ultraviolet and mass spectrometric detection (HPLC-UV-MS / MS).
  • HPLC-UV-MS / MS ultraviolet and mass spectrometric detection
  • the supernatants of the incubation samples are chromatographed with suitable C 18-reversed-phase columns and variable eluent mixtures of acetonitrile and 10% M aqueous ammonium formate solution or 0.05% formic acid.
  • the UV chromatograms in combination with mass spectrometry data serve to identify, structure elucidate and quantitatively estimate the metabolites, and quantitative metabolic decrease of the compound of the invention in the incubation approaches.
  • the permeability of a test substance was determined using the Caco-2 cell line, an established in vitro model for permeability predictions at the gastrointestinal barrier (Artursson, P. and Karlsson, J. (1991) Correlation between oral drug absorption in humans and apparent drug permeability coefficients in human intestinal epithelial (Caco-2) cells, Biochem., Biophys. 175 (3), 880-885).
  • the Caco-2 cells (ACC No. 169, DSMZ, German Collection of Microorganisms and Cell Cultures, Braun schweig, Germany) were seeded in 24-well plates with use and cultured for 14 to 16 days.
  • test substance was dissolved in DMSO and diluted to the final test concentration with transport buffer (Hanks Buffered Salt Solution, Gibco / Invitrogen, with 19.9 nM glucose and 9.8 mM HEPES).
  • transport buffer Hanks Buffered Salt Solution, Gibco / Invitrogen, with 19.9 nM glucose and 9.8 mM HEPES.
  • P app AB the solution containing the test substance was added to the apical side of the Caco-2 cell monolayer and transport buffer to the basolateral side.
  • P app BA the solution containing the test substance was applied to the basolateral side of the Caco-2 cell monolayer and transport buffer to the apical side.
  • hERG human ether-a-go-go related gene
  • the functional hERG assay used here is based on a recombinant HEK293 cell line stably expressing the KCNH2 (HERG) gene (Zhou et al., 1998). These cells are used by the "whole-cell voltage-clamp" technique (Hamill et al., 1981) was studied in an automated system (Patchliner TM, Nanion, Kunststoff, D), which controls the membrane voltage and measures the hERG potassium current at room temperature.
  • the PatchControlHT TM software (Nanion) controls patching system, data acquisition and data analysis. The voltage is controlled by 2 EPC-10 quadro amplifiers under the control of the PatchMasterPro TM software (both: HEKA Elektronik, Lambrecht, D).
  • NPC-16 medium resistance chips ( ⁇ 2 ⁇ , Nanion) serve as a planar substrate for the voltage-clamp experiments.
  • NPC-16 chips are filled with intra- and extracellular solution (see Himmel, 2007) as well as with cell suspension.
  • the cell membrane After formation of a giga-ohm seal and production of the whole cell mode (including several automated quality control steps), the cell membrane is clamped to the holding potential - 80 mV.
  • the following voltage clamp protocol changes the command voltage to +20 mV (duration 1000 ms), -120 mV (duration 500 ms), and back to holding potential -80 mV; this is repeated every 12 seconds.
  • the test substance solution is pipetted in ascending concentrations (for example 0.1, 1 and 10 ⁇ / L) (exposure for about 5-6 minutes per concentration), followed by several wash-out steps.
  • the amplitude of the inward "Taü" current generated by a potential change from +20 mV to -120 mV serves to quantify the hERG potassium current and is represented as a function of time (IgorPro TM software).
  • the current amplitude at the end of different time periods e.g., test substance stabilization phase, first / second / third test substance concentration

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Abstract

Die vorliegende Anmeldung betrifft neue substituierte Pyrazolo[1,5-a]pyridin-3-carboxamide, Verfahren zu ihrer Herstellung, ihre Verwendung allein oder in Kombinationen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere zur Behandlung und/oder Prophylaxe von kardiovaskulären Erkrankungen.

Description

Substituierte Pyrazoloil,5-a]pvridin-3-carboxamide und ihre Verwendung
Die vorliegende Anmeldung betrifft neue substituierte Pyrazolo[ 1 ,5 -a]pyridin-3 -carboxamide, Verfahren zu ihrer Herstellung, ihre Verwendung allein oder in Kombinationen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten sowie ihre Verwendung zur Herstellung von Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten, insbesondere zur Behandlung und/oder Prophylaxe von kardiovaskulären Erkrankungen.
Eines der wichtigsten zellulären Übertragungssysteme in Säugerzellen ist das cyclische Guanosin- monophosphat (cGMP). Zusammen mit Stickstoffmonoxid (NO), das aus dem Endothel freigesetzt wird und hormonelle und mechanische Signale überträgt, bildet es das NO/cGMP-System. Die Guanylatcycla- sen katalysieren die Biosynthese von cGMP aus Guanosintriphosphat (GTT). Die bisher bekannten Vertreter dieser Familie lassen sich sowohl nach strukturellen Merkmalen als auch nach der Art der Liganden in zwei Gruppen aufteilen: Die partikulären, durch natriuretische Peptide stimulierbaren Guanylatcyclasen und die löslichen, durch NO stimulierbaren Guanylatcyclasen. Die löslichen Guanylatcyclasen bestehen aus zwei Untereinheiten und enthalten höchstwahrscheinlich ein Häm pro Heterodimer, das ein Teil des regulatorischen Zentrums ist. Dieses hat eine zentrale Bedeutung für den Aktivierungsmechanismus. NO kann an das Eisenatom des Häms binden und so die Aktivität des Enzyms deutlich erhöhen. Hämfreie Präparationen lassen sich hingegen nicht durch NO stimulieren. Auch Kohlenmonoxid (CO) ist in der Lage, an das Eisen-Zentralatom des Häms zu binden, wobei die Stimulierung durch CO deutlich geringer ist als die durch NO. Durch die Bildung von cGMP und der daraus resultierenden Regulation von Phosphodiesterasen, lonen- kanälen und Proteinkinasen spielt die Guanylatcyclase eine entscheidende Rolle bei unterschiedlichen physiologischen Prozessen, insbesondere bei der Relaxation und Proliferation glatter Muskelzellen, der Plättchenaggregation und -adhäsion, der neuronalen Signalübertragung sowie bei Erkrankungen, welche auf einer Störung der vorstehend genannten Vorgänge beruhen. Unter pathophysiologischen Bedingungen kann das NO/'cGMP- System supprimiert sein, was zum Beispiel zu Bluthochdruck, einer Plättchenaktivie- rung, einer vermehrten Zellproliferation, endothelialer Dysfunktion, Atherosklerose, Angina pectoris, Herzinsuffizienz, Myokardinfarkt, Thrombosen, Schlaganfall und sexueller Dysfunktion führen kann.
Eine auf die Beeinflussung des cGMP- Signalweges in Organismen abzielende NO-unabhängige Behandlungsmöglichkeit für derartige Erkrankungen ist aufgrund der zu erwartenden hohen Effizienz und gerin- gen Nebenwirkungen ein vielversprechender Ansatz.
Zur therapeutischen Stimulation der löslichen Guanylatcyclase wurden bisher ausschließlich Verbindungen wie organische Nitrate verwendet, deren Wirkung auf NO beruht. Dieses wird durch iokonversion gebildet und aktiviert die lösliche Guanylatcyclase durch Angriff am Eisen-Zentralatom des Häms. Neben den Nebenwirkungen gehört die Toleranzentwicklung zu den entscheidenden Nachteilen dieser Behandlungsweise.
In den letzten Jahren wurden einige Substanzen beschrieben, die die lösliche Guanylatcyclase direkt, d.h. ohne vorherige Freisetzung von NO stimulieren, wie beispielsweise 3 -(5'-Hydroxymethyl-2'-furyl)- 1 - benzylindazol [YC-1 ; Wu et al., Blood 84 (1994), 4226; Mülsch et al., Brit. J. Pharmacol. 120 (1997), 681], Fettsäuren [Goldberg et al., ./ Biol. Chem. 252 (1977), 1279], Diphenyliodonium-hexafluorphosphat [Pettibone et al., Eur. J. Pharmacol. 116 (1985), 307], Isoliquiritigenin [Yu et al., Brit. J. Pharmacol. 114 (1995), 1587] sowie verschiedene substituierte Pyrazol-Derivate (WO 98/16223).
Unter anderem in WO 2012/072512-A1 und WO 2010/117787 sind verschiedene Pyrazolo[l,5-a]pyridin- Derivate beschrieben, die zur Behandlung von Erkrankungen verwendet werden können.
Aufgabe der vorliegenden Erfindung war die Bereitstellung neuer Substanzen, die als Stimulatoren der löslichen Guanylatcyclase wirken, und als solche zur Behandlung und oder Prophylaxe von Krankheiten geeignet sind und ein gleiches oder verbessertes therapeutisches Profil gegenüber den aus dem Stand der Technik bekannten Verbindungen aufweisen, wie beispielsweise hinsichtlich ihrer in-vivo Eigenschaften, wie beispielsweise ihrem pharmakokinetischem und pharm akodynamischem Verhalten, ihrer Löshchkeit und/oder ihres Metabolismus-Profils und/oder ihrer Dosis- Wirkungsbeziehung.
Die vorliegende Erfindung betrifft rbindungen der allgemeinen Formel (I)
Figure imgf000003_0001
in welcher
Rä für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000004_0001
steht, wobei
* für die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom steht,
R' für Methyl oder Cylcopropyl steht, sowie ihre /V-Oxide, Salze, Solvate, Salze der Λ-Oxide und Solvate der N-Oxide und Salze.
Erfmdungsgemäß e Verbindungen sind die Verbindungen der Formel (I) und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, die von Formel (I) umfassten Verbindungen der nachfolgend genannten Formeln und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze sowie die von Formel (I) umfassten, nachfolgend als Ausführungs- beispiele genannten Verbindungen und deren Salze, Solvate und Solvate der Salze, soweit es sich bei den von Formel (I) umfassten, nachfolgend genannten Verbindungen nicht bereits um Salze, Solvate und Solvate der Salze handelt.
Als Salze sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen bevorzugt. Umfasst sind auch Salze, die für pharmazeutische Anwendungen selbst nicht geeignet sind, jedoch beispielsweise für die Isolierung oder Reinigung der erfindungsgemäß en Verbindungen verwendet werden können.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen Säureadditions salze von Mineralsäuren, Carbonsäuren und Sulfonsäuren, z.B. Salze der Chlorwasserstoffsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Methansulfonsäure, Ethansulfonsäure, Toluolsulfonsäure, Ben- zolsulfonsäure, Naphthalindisulfonsäure, Ameisensäure, Essigsäure, Trifluoressigsäure, Propionsäure,
Milchsäure, Weinsäure, Äpfelsäure, Zitronensäure, Fumarsäure, Maleinsäure und Benzoesäure.
Physiologisch unbedenkliche Salze der erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen auch Salze üblicher Basen, wie beispielhaft und vorzugsweise Alkalimetallsalze (z.B. Natrium- und Kalium salze), Erdalkali- salze (z.B. Calcium- und Magnesium salze) und Ammoniumsalze, abgeleitet von Ammoniak oder organischen Aminen mit 1 bis 16 C -Atomen, wie beispielhaft und vorzugsweise Ethylamin, Diethylamin, Triethylamin, Ethyldiisopropylamin, Monoethanolamin, Diethanolamin, Triethanolamin, Dicyclohexyla- min, Dimethylaminoethanol, Prokain, Dibenzylamin, N-Methylmorpholin, Arginin, Lysin, Ethylendiamin und N-Methylpiperidin. Als Solvate werden im Rahmen der Erfindung solche Formen der erfindungsgemäßen Verbindungen bezeichnet, welche in festem oder flüssigem Zustand durch Koordination mit Lösungsmittelmolekülen einen Komplex bilden. Hydrate sind eine spezielle Form der Solvate, bei denen die Koordination mit Wasser erfolgt. Als Solvate sind im Rahmen der vorliegenden Erfindung Hydrate bevorzugt.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in Abhängigkeit von ihrer Struktur in unterschiedlichen stereoisomeren Formen existieren, d.h. in Gestalt von Konfigurationsisomeren oder gegebenenfalls auch als Konformationsisomere (Enantiomere und/oder Diastereomere, einschließlich solcher bei Atrop- isomeren). Die vorliegende Erfindung umfasst deshalb die Enantiomere und Diastereomere und ihre jeweiligen Mischungen. Aus solchen Mischungen von Enantiomeren und/ oder Diastereomeren lassen sich die stereoisomer einheitlichen Bestandteile in bekannter Weise isolieren; vorzugsweise werden hierfür chromatographische Verfahren verwendet, insbesondere die HPLC-Chromatographie an achiraler bzw. chiraler Phase.
Sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen in tautomeren Formen vorkommen können, umfasst die vorliegende Erfindung sämtliche tautomere Formen.
Die vorliegende Erfindung umfasst auch alle geeigneten isotopischen Varianten der erfindungsgemäßen Verbindungen. Unter einer isotopischen Variante einer erfindungsgemäßen Verbindung wird hierbei eine Verbindung verstanden, in welcher mindestens ein Atom innerhalb der erfindungsgemäßen Verbindung gegen ein anderes Atom der gleichen Ordnungszahl, jedoch mit einer anderen Atommasse als der gewöhnlich oder überwiegend in der Natur vorkommenden Atommasse ausgetauscht ist. Beispiele für Isotope, die in eine erfindungsgemäße Verbindung inkorporiert werden können, sind solche von Wasserstoff, Kohlen- stoff, Stickstoff, Sauerstoff, Phosphor, Schwefel, Fluor, Chlor, Brom und lod, wie H (Deuterium), Ή (Tritium), 13C, 14C, 15N, 170, lsO, 32P, 33P, 33S, 34S, 35S, 36S, 18F, 36C1, 82Br, 1231, 124I, 129I und 131I. Bestimmte isotopische Varianten einer erfindungsgemäßen Verbindung, wie insbesondere solche, bei denen ein oder mehrere radioaktive Isotope inkorporiert sind, können von Nutzen sein beispielsweise für die Untersuchung des Wirkmechanismus oder der Wirkstoff- Verteilung im Körper; aufgrund der vergleichsweise leichten Herstell- und Detektierbarkeit sind hierfür insbesondere mit Ή- oder 14C-Isotopen markierte Verbindungen geeignet. Darüber hinaus kann der Einbau von Isotopen, wie beispielsweise von Deuterium, zu bestimmten therapeutischen Vorteilen als Folge einer größeren metabolischen Stabilität der Verbindung führen, wie beispielsweise eine Verlängerung der Halbwertszeit im Körper oder eine Reduktion der erfor- derlichen Wirkdosis; solche Modifikationen der erfindungsgemäßen Verbindungen können daher gegebenenfalls auch eine bevorzugte Ausführungsform der vorliegenden Erfindung darstellen. Isotopische Varianten der erfindungsgemäßen Verbindungen können nach den dem Fachmann bekannten Verfahren hergestellt werden, so beispielsweise nach den weiter unten beschriebenen Methoden und den bei den Ausfüh- rungsbeispielen wiedergegebenen Vorschriften, indem entsprechende isotopische Modifikationen der je- weiligen Reagentien und/oder Ausgangsverbindungen eingesetzt werden.
Außerdem umfasst die vorliegende Erfindung auch Prodrugs der erfindungsgemäßen Verbindungen. Der Begriff "Prodrugs" bezeichnet hierbei Verbindungen, welche selbst biologisch aktiv oder inaktiv sein können, jedoch während ihrer Verweilzeit im Körper zu erfindungsgemäßen Verbindungen umgesetzt werden (beispielsweise metabolisch oder hydrolytisch). Im Rahmen der vorliegenden Erfindung haben die Substituenten, soweit nicht anders spezifiziert, die folgende Bedeutung:
In den Formeln der Gruppe, für die R1 stehen kann, steht der Endpunkt der Linie, an dem ein Zeichen * steht, nicht für ein Kohlenstoffatom beziehungsweise eine CIL -Gruppe, sondern ist Bestandteil der Bindung zu dem jeweils bezeichneten Atom, an das R1 gebunden sind. Im Sinne der vorliegenden Erfindung umfasst der Begriff "Behandlung" oder "behandeln" ein Hemmen, Verzögern, Aufhalten, Lindern, Abschwächen, Einschränken, Verringern, Unterdrücken, Zurückdrängen oder Heilen einer Krankheit, eines Leidens, einer Erkrankung, einer Verletzung oder einer gesundheitlichen Störung, der Entfaltung, des Verlaufs oder des Fortschreitens solcher Zustände und/oder der Symptome solcher Zustände. Der Begriff„Therapie" wird hierbei als synonym mit dem Begriff„Behand- lung" verstanden.
Die Begriffe„Prävention",„Prophylaxe" oder„Vorbeugung" werden im Rahmen der vorliegenden Erfindung synonym verwendet und bezeichnen das Vermeiden oder Vermindern des Risikos, eine Krankheit, ein Leiden, eine Erkrankung, eine Verletzung oder eine gesundheitliche Störung, eine Entfaltung oder ein Fortschreiten solcher Zustände und/oder die Symptome solcher Zustände zu bekommen, zu erfahren, zu erleiden oder zu haben.
Die Behandlung oder die Prävention einer Krankheit, eines Leidens, einer Erkrankung, einer Verletzung oder einer gesundheitlichen Störung können teilweise oder vollständig erfolgen.
Bevorzugt im Rahmen der vorliegenden Erfindung sind Verbindungen der Formel (I), in welcher eine Gruppe der Fora
Figure imgf000007_0001
steht, wobei
* für die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom steht,
R; für Methyl steht, sowie ihre TV-Oxide, Salze, Solvate, Salze der Λ-Oxide und Solvate der TV-Oxide und Salze.
Bevorzugt ist im Rahmen der vorliegenden Erfindung dieVerbindung mit dem systematischen Namen e«/- 7-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-N-[(25)-l-hydroxy-2-(5-methyl-l,3,4-thiadiazol-2-yl)propan-2-yl]-2,5- dimethylpyrazolo[ 1 ,5 -a]pyridin-3 -carboxamid und der Strukturformel
Figure imgf000007_0002
sowie ihre Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze. Bevorzugt ist im Rahmen der vorliegenden Erfindung dieVerbindung mit dem systematischen Namen rac- 7-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-N- {2-[2-(difluormethyl)-2H-tetrazol-5-yl]-l-hydroxypropan-2-yl}-2,5- dimethylpyrazolo[ 1 ,5 -a]pyridin-3 -carboxamid und der Strukturformel
Figure imgf000008_0001
sowie ihre Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
Bevorzugt ist im Rahmen der vorliegenden Erfindung dieVerbindung mit dem systematischen Namen ent- N-[2-Amino-2-methyl(4,4,4-2H3)butyl]-7-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,5-dimethylpyrazolo-[l,5-a]pyridm^ carboxamid (Enantiomer A) und der Strukturformel
Figure imgf000008_0002
sowie ihre Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
Bevorzugt ist im Rahmen der vorliegenden Erfindung dieVerbindung mit dem systematischen Namen ent-
N-[2-Amino-2-methyl-4-(trimethylsilyl)butyl]-7-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,5-dimethyl-pyrazolo[i,5- a]pyridin-3 -carboxamid (Enantiomer A) und der Strukturformel
Figure imgf000009_0001
sowie ihre Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
Bevorzugt ist im Rahmen der vorliegenden Erfindung dieVerbindung mit dem systematischen Namen ent- N-[2-Amino-2-methyl-4-(trimethylsilyl)butyl]-7-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,5-dimethyl-pyrazolo[l,5- a]pyridin-3-carboxamid (Enantiomer B) und der Strukturformel
Figure imgf000009_0002
sowie ihre Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
Die als bevorzugt genannten Restedefinitionen gelten sowohl für die Verbindungen der Formel (I) als auch in entsprechender Weise für alle Zwischenprodukte.
Weiterer Gegenstand der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung der erfindungsgemäßen Verbindungen der Formel (I) dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung der Formel (II)
Figure imgf000010_0001
in welcher R~ die oben angegebene Bedeutung hat und
T1 für (Ci-O-Alkyl oder Benzyl steht,
in einem inerten Lösungsmittel in Gegenwart einer geeigneten Base oder Säure zu einer Carbonsäure der Formel (III)
Figure imgf000010_0002
in welcher R2 die oben angegebene Bedeutung hat,
umsetzt und diese in der Folge in einem inerten Lösungsmittel unter Amidkupplungsbedingungen mit einem Amin der Formel (IV- A), (IV-B), (IV-C) oder (IV-D)
Figure imgf000011_0001
(IV-A) (IV-B)
Figure imgf000011_0002
(rv-c) (IV-D), in welchem R' für eine Amino-Schutzgruppe, wie beispielsweise tert.-Butoxycarbonyl, Benzyloxycar- bonyl oder Benzyl steht, umsetzt, anschliessend gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen abspaltet, und die resultierenden Verbindungen der Formel (I) gegebenenfalls mit den entsprechenden (i) Lösungsmitteln und/oder (ii) Säuren oder Basen in ihre Solvate, Salze und/oder Solvate der Salze überführt.
Das beschriebene Herstellverfahren kann durch das folgende Syntheseschema (Schema 1) beispielhaft verdeutlicht werden:
Figure imgf000012_0002
[(a) Natriumhydroxid, 1,4-Dioxan, 90°C; (b) HATU, Ν,Ν-Diisopropylethylamin, DMF, Raumtemperatur; (c) Wasserstoff, 10%iges Palladium auf Aktivkohle, TFA, Ethanol].
Die Verbindungen der Formeln (IV- A), (rV-B), (rV-C) und ( IV-D) sind kommerziell erhältlich, literaturbekannt oder können in Analogie zu literaturbekannten Verfahren hergestellt werden.
Inerte Lösungsmittel für die Verfahrensschritte (III) + (TV)— (I) sind beispielsweise Ether wie Diethyl- ether, Dioxan, T etrahydrofuran, Glykoldimethylether oder Diethylenglykoldimethylether, Kohlenwasserstoffe wie Benzol, Toluol, Xylol, Hexan, Cyclohexan oder Erdölfraktionen, Halogenkohlenwasserstoffe wie Dichlormethan, Trichlormethan, Tetrachlormethan, 1 ,2-Dichlorethan, Trichlorethylen oder Chlorbenzol, oder andere Lösungsmittel wie Aceton, Essigsäureethylester, Acetonitril, Pyridin, Dimethylsulfoxid, A^V-Dimethylformamid, NN-Dimethylacetamid, iV,Ar-Dimethylpropylenharnstoff (DMPU) oder N- Methylpyrrolidon (NMP). Ebenso ist es möglich, Gemische der genannten Lösungsmittel zu verwenden. Bevorzugt sind Dichlormethan, T etrahydrofuran, Dimethylformamid oder Gemische dieser Lösungsmittel.
Als Kondensationsmittel für die Amidbildung in den Verfahrenss chritte (III) + (IV)— > (I) und eignen sich beispielsweise Carbodiimide wie NN-Diethyl-, NN'-Dipropyl-, ΛΓ, V'-Diisopropyl- , NN-Dicyclo- hexylcarbodiimid (DCC) oder N-(3 -Dimemylaminopropy^-A^'-ethylcarb xiiimid-Hydrochlorid (EDC), Phosgen-Derivate wie 7V,iV'-Carbonyldiimidazol (CDI), 1 ,2-Oxazoliumverbindungen wie 2-Ethyl-5- phenyl- 1 ,2-oxazolium-3 -sulfat oder 2-feri.-Butyl-5-methyl-isoxazolium-perchlorat, Acylamino- verbindungen wie 2-Ethoxy- 1 -ethoxycarbonyl- 1 ,2-dihydrochinolin, oder Isobutylchlorformiat, Propan- phosphonsäureanhydrid (T3P), l-Chlor-iV, V,2-trimethylpropl-en-l-amin, Cyanophosphonsäurediethyl- ester, Bis-(2-oxo-3 -oxazolidinyl)-phosphorylchlorid, Benzotriazol- 1 -yloxy-tris(dimethylamino)phospho- nium-hexafluorphosphat, Benzotriazol- 1 -yloxy-tris(pyrrolidino)phosphonium-hexafluorphosphat (Py- BOP), 0-(Benzotriazol- 1 -y^-A^A^A^TV'-tetramethyluronium-tetrafluorborat (TBTU), 0-(Benzotriazol- 1 - yl)-N,N,N', TV'-tetramethyluronium-hexafluorphosphat (HBTU), 2-(2-Oxo- 1 -(2Ä)-pyridyl)- 1 , 1 ,3,3-tetra- methyluronium-tetrafluorborat (TPTU), 0-(7-Azabenzotriazol- 1 -yl)-N,N,N', Ar,-tetramethyluronium-hexa- fluorphosphat (HATU) oder 0-( l//-6-Chlorbenzotriazol- 1 -yl)-l , 1 ,3 ,3 -tetramethyluronium-tetrafluorborat (TCTU), gegebenenfalls in Kombination mit weiteren Hilfsstoffen wie 1 -Hydroxybenzotriazol (HOBt) oder iV-Hydroxysuccinimid (HOSu), sowie als Basen Alkalic arbonate, z.B. Natrium- oder Kaliumcarbonat oder -hydrogencarbonat, oder organische Basen wie Trialkylamine, z.B. Triethylamin, _V-Methyl- morpholin, 7V-Methy!piperidin oder A^V-Diisopropylethylamin. Bevorzugt wird TBTU in Verbindung mit -Methylmo holin, HA'T'U in Verbindung mit AT,A-Diisopropylethylamin oder l-Chlor-TV^V^- trimethylprop- 1 -en- 1 amin verwendet.
Die Kondensationen (III) + (IV)— > (I) und wird im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von -20°C bis +100°C, bevorzugt bei 0°C bis +60°C durchgeführt. Die Umsetzung kann bei normalem, erhöhtem o- der bei erniedrigtem Druck erfolgen (z.B. von 0.5 bis 5 bar). Im Allgemeinen arbeitet man bei Normaldruck.
Alternativ kann die Carbonsäure der Formel (III) auch zunächst in das entsprechende Carbonsäurechlorid überführt werden und dieses dann direkt oder in einer separaten Umsetzung mit einem Amin der Formel (IV) zu den erfindungsgemäßen Verbindungen umgesetzt werden. Die Bildung von Carbonsäurechloriden aus Carbonsäuren erfolgt nach den dem Fachmann bekannten Methoden, beispielsweise durch Behandlung mit Thionylchlorid, Sulfurylchlorid oder Oxalylchlorid in Gegenwart einer geeigneten Base, beispielsweise in Gegenwart von Pyridin, sowie optional unter Zusatz von Dimethylformamid, optional in einem geeigneten inerten Lösemittel.
Die Hydrolyse der Ester-Gruppe T1 der Verbindungen der Formel (II) erfolgt nach üblichen Methoden, indem man die Ester in inerten Lösungsmitteln mit Säuren oder Basen behandelt, wobei bei letzterem die zunächst entstehenden Salze durch Behandeln mit Säure in die freien Carbonsäuren überführt werden. Im Falle der tert.-Butylester erfolgt die Esterspaltung bevorzugt mit Säuren. Im Falle der Benzylester erfolgt die Esterspaltung bevorzugt hydrogenolytisch mit Palladium auf Aktivkohle oder Raney-Nickel. Als inerte Lösungsmittel eignen sich für diese Reaktion Wasser oder die für eine Esterspaltung üblichen organischen Lösungsmittel. Hierzu gehören bevorzugt Alkohole wie Methanol, Ethanol, n-Propanol, Isopropanol, n- Butanol oder tert.-Butanol, oder Etiler wie Diethylether, Tetrahydrofuran, 2-Methyltetrahydrofuran, Dio- xan oder Glykoldimethylether, oder andere Lösungsmittel wie Aceton, Dichlormethan, Dimethylformamid oder Dimethylsulfoxid. Ebenso ist es möglich, Gemische der genannten Lösungsmittel einzusetzen. Im Falle einer basischen Ester-Hydrolyse werden bevorzugt Gemische von Wasser mit Dioxan, Tetrahydro- furan, Methanol und/oder Ethanol eingesetzt.
Als Basen für die Ester-Hydrolyse sind die üblichen anorganischen Basen geeignet. Hierzu gehören bevorzugt Alkali- oder Erdalkalihydroxide wie beispielsweise Natrium-, Lithium-, Kalium- oder Bariumhydroxid, oder Alkali- oder Erdalkalic arbonate wie Natrium-, Kalium- oder Calciumcarbonat. Besonders bevorzugt sind Natrium- oder Lithiumhydroxid. Als Säuren eignen sich für die Esterspaltung im Allgemeinen Schwefelsäure, Chlorwasserstoff/' Salzsäure, Bromwasserstoff'Bromwasserstoffsäure, Phosphorsäure, Essigsäure, Trifluoressigsäure, Tolu- olsulfonsäure, Methansulfonsäure oder Trifluormethansulfonsäure oder deren Gemische gegebenenfalls unter Zusatz von Wasser. Bevorzugt sind Chlorwasserstoff oder Trifluoressigsäure im Falle der tert.- Butylester und Salzsäure im Falle der Methylester. Die Esterspaltung erfolgt im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von 0°C bis +100°C, bevorzugt bei +0°C bis +50°C.
Die genannten Umsetzungen können bei normalem, erhöhtem oder bei erniedrigtem Druck durchgeführt werden (z.B. von 0.5 bis 5 bar). Im Allgemeinen arbeitet man jeweils bei Normaldruck.
Als Amino- Schutzgruppe wird bevorzugt tert. -Butoxycarbonyl (Boc) oder Benzyloxycarbonyl (Z) ver- wendet. Als Schutzgruppe für eine Hydroxy- oder Carboxyl-Funktion wird vorzugsweise tert.-Butyl oder Benzyl eingesetzt. Die Abspaltung dieser Schutzgruppen wird nach üblichen Methoden, vorzugsweise durch Reaktion mit einer starken Säure wie Chlorwasserstoff, Bromwasserstoff oder Trifluoressigsäure in einem inerten Lösungsmittel wie Dioxan, Diethylether, Dichlormethan oder Essigsäure durchgeführt; gegebenenfalls kann die Abspaltung auch ohne ein zusätzliches inertes Lösungsmittel erfolgen. Im Falle von Benzyl und Benzyloxycarbonyl als Schutzgruppe können diese auch durch Hydrogenolyse in Gegenwart eines Palladium-Katalysators entfernt werden. Die Abspaltung der genannten Schutzgruppen kann gegebenenfalls simultan in einer Eintopf-Reaktion oder in separaten Reaktionschritten vorgenommen werden.
Die Verbindungen der Formel (II) sind literaturbekannt oder können hergestellt werden, indem
[A] eine Verbindung der Formel (V)
Figure imgf000014_0001
in einem inerten Lösungsmittel in Gegenwart einer eeigneten Base mit einer Verbindung der Formel (VI)
Figure imgf000015_0001
in welcher
X1 für eine geeignete Abgangsgruppe, insbesondere Chlor, Brom, lod, Mesylat, Triflat oder Tosylat, steht,
zu einer Verbindung der Formel (VII)
Figure imgf000015_0002
umgesetzt wird, diese dann mit 0-(2-Mesitylenesulfonyl)hydroxylamin (MSH) in eine Verbindung (VIII)
Figure imgf000015_0003
überführt wird, und diese anschliessend in einem inerten Lösungsmittel mit einer Verbindung der Formel (IX)
Figure imgf000015_0004
in welcher T1 und R" die oben angegebenen Bedeutungen haben, umgesetzt wird,
oder
[B] eine Verbindung der Formel (X)
Figure imgf000016_0001
mit 0-(2-Mesitylenesulfonyl)hydroxylamin (MSH) in eine Verbindung (XI)
Figure imgf000016_0002
überfuhrt wird,
diese anschliessend in einem inerten Lösungsmittel mit einer Verbindung der Formel (ΓΧ)
Figure imgf000016_0003
in welcher T1 und R2 die oben angegebenen Bedeutung haben, zu einer Verbindung (XII) umgesetzt wird,
Figure imgf000017_0001
in welcher R: die oben angegebene Bedeutung hat und
T1 für (Ci-C4)-Alkyl oder Benzyl steht, von dieser im Folgenden nach den dem Fachmann bekannten Methoden die Benzylgrappe abspaltet und die resultierende Verbindung (XIII)
Figure imgf000017_0002
in welcher R die oben angegebene Bedeutung hat und
T1 für (Ci-C4)-Alkyl oder Benzyl steht, in einem inerten Lösungsmittel unter Mitsunobu-Bedingungen mit einer Verbindung der Formel (XIV)
Figure imgf000017_0003
umgesetzt wird.
Die beschriebenen Verfahren werden durch die nachfolgenden Schemata (Schema 2 und Schema 3) beispielhaft verdeutlicht: Schema 2:
Figure imgf000018_0001
[(a) Ag2CC , THF, Rückfluss; (b) 0-(2-mesitylenesulfonyl)hydroxylamin (MSH), Dichlormethan, Raumtemperatur; (c) K2CO3, DMF, Raumtemperatur]. Schema 3:
Figure imgf000018_0002
[(a) 0-(2-mesitylenesulfonyl)hydroxylamin (MSH), Dichlormethan, Raumtemperatur; (b) K2CO3, DMF, Raumtemperatur, (c) Cyclohexen, Pd/C, Ethanol, Rückfluss; (d) Triphenylphosphin, Diisopropyl-(E)- diazen- 1 ,2-dicarboxylat ( Di AD), THF, Raumtemperatur] . Inerte Lösungsmittel für den Verfahr ensschritt (V) + (VT)— > (VII) sind beispielsweise Ether wie Diethyl- ether, Dioxan, Tetrahydrofuran, Dimethoxymethan, Glykoldimethylether oder Diethylenglykoldimethyl- ether oder andere Lösungsmittel wie Aceton, Methylethylketon, Essigsäureethylester, Acetonitril, N,N-Oi- methylformamid, iV,iV-Dimethylacetamid, Dimethylsulfoxid, A^A^-Dimethylpropylenharnstoff (DMPU), N-Methylpyrrolidon (NMP). Ebenso ist es möglich, Gemische der genannten Lösungsmittel einzusetzen. Bevorzugt wird Dimethoxyethan verwendet.
Als Basen für den Verfahrensschritt (V) + (VI)— » (VII) eignen sich die üblichen anorganischen oder organischen Basen. Hierzu gehören bevorzugt Alkalihydroxide wie beispielsweise Lithium-, Natrium- oder Kaliumhydroxid, Alkali- oder Erdalkalicarbonate wie Lithium-, Natrium-, Kalium-, Calcium- oder Cäsi- umcarbonat gegebenenfalls unter Zusatz eines Alkaliiodids wie beispielsweise Natriumiodid oder Kaliumiodid, Alkali- Alkoholate wie Natrium- oder Kaliummethanolat, Natrium- oder Kaliumethanolat oder Natrium- oder Kalium-tert.-butylat, Alkalihydride wie Natrium- oder Kaliumhydrid, Amide wie Natrium amid, Lithium- oder Kalium-bis(trimethylsilyl)amid oder Lithiumdiisopropylamid, oder organische Amine wie Triethylamin, A'-Methylmorpholin, iV-Methylpiperidin, 7V, V-Diisopropylethylamin, Pyridin, 4- (iV,iV-Dimethylamino)-pyridin (DMAP), l,5-Diazabicyclo[4.3.0]non-5-en (DBN), 1,8- Diazabicyclo[5.4.0]undec-7-en (DBU) oder l,4-Diazabicyclo[2.2.2]octan (DABCO®). Bevorzugt wird Natrium- oder Kalium -tert. -butylat verwendet.
Die Reaktion erfolgt im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von 0°C bis +120°C, bevorzugt bei +20°C bis +80°C, gegebenenfalls in einer Mikrowelle. Die Umsetzung kann bei normalem, erhöhtem oder bei erniedrigtem Druck durchgeführt werden (z.B. von 0.5 bis 5 bar).
Inerte Lösungsmittel für den Verfahrensschritt (VII)— (VIII) sind beispielsweise Dichlormethan, 1,2- Dichlorethan oder andere Lösungsmittel wie Aceton, Methylethylketon, Essigsäureethylester, Acetonitril, iV,iV-Dimethylformamid, V, V-Dimethylacetamid, Dimethylsulfoxid, 7V,Ar'-Dimethylpropylenharnstoff (DMPU), Λ-Methylpyrrolidon (NMP). Ebenso ist es möglich, Gemische der genannten Lösungsmittel ein- zusetzen. Bevorzugt wird Dichlormethan verwendet.
Die Reaktion erfolgt im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von 0°C bis +120°C, bevorzugt bei +20°C bis +80°C. Die Umsetzung kann bei normalem, erhöhtem oder bei erniedrigtem Druck durchgeführt werden (z.B. von 0.5 bis 5 bar).
Inerte Lösungsmittel für den Ringschluss zum Imidazo[ 1 ,2-a]pyrazin-Grundgerüst (VIII) + (IX)— > (II) sind die üblichen organischen Lösungsmittel. Hierzu gehören bevorzugt Alkohole wie Methanol, Ethanol, n-Propanol, Isopropanol, n-Butanol, n-Pentanol oder tert.-Butanol, oder Ether wie Diethylether, Tetrahydrofuran, 2-Methyltetrahydrofuran, Dioxan oder Glykoldimethylether, oder andere Lösungsmittel wie Aceton, Dichlormethan, 1 ,2-Dichlorethan, Acetonitril, Dimethylformamid oder Dimethylsulfoxid. Ebenso ist es möglich, Gemische der genannten Lösungsmittel einzusetzen. Bevorzugt wird Ethanol verwendet. Der Ringschluss erfolgt im Allgemeinen in einem Temperaturbereich von +50°C bis +150°C, bevorzugt bei +50°C bis +100°C, gegebenenfalls in einer Mikrowelle.
Der Ringschluss (VIII) + (IX)— > (II) erfolgt optional in Gegenwart wasserziehender Reaktionszusätze, beispielsweise in Gegenwart von Molekular sieb (3Ä oder 4Ä Porengröße) oder mittels Wasserabscheider. Die Umsetzung (VIII) + (IX) ► (II) erfolgt unter Verwendung eines Überschusses des Reagenzes der
Formel (VIII), beispielsweise mit 1 bis 20 Äquivalenten des Reagenzes (VIII), gegebenenfalls unter Zusatz von Basen (wie z.B. Natriumhydrogencarbonat) wobei die Zugabe dieses Reagenzes einmalig oder in mehreren Portionen erfolgen kann.
Die Abspaltung der Benzylgruppe im Reaktionsschritt (XII)— > (XIII) erfolgt hierbei nach üblichen, aus der S chutzgrupp enchemi e bekannten Methoden, vorzugsweise durch Hydrogenolyse in Gegenwart von eines Palladiumkatalysators, wie beispielsweise Palladium auf Aktivkohle, in einem inerten Lösungsmittel, wie beispielsweise Ethanol oder Essigsäureethylester [siehe auch z.B. T.W. Greene und P.G.M. Wuts, Protective Croups in Organic Synthesis, Wiley, New York, 1999].
Die Mitsunobu-Kondensationen (XIII) + (XIV) (II) erfolgt in Gegenwart eines Aktivierungsreagenzes, z.B. Diethyl-(E)-diazen- 1 ,2-dicarboxylat ( DO AD) oder Diisopropyl-(E)-diazen- 1 ,2-dicarboxylat ( DI AD), sowie eines Phosphinreagenzes, z.B. Triphenylphosphin oder Tributylphosphin, in einem inerten Lösemittel, z.B. TH F, Dichlomiethan, Toluol oder DMF, bei einer Temperatur zwischen 0 °C und dem Siedepunkt des verwendeten Lösemittels.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen besitzen wertvolle pharmakologische Eigenschaften und können zur Vorbeugung und Behandlung von Erkrankungen bei Menschen und Tieren verwendet werden. Die erfindungsgemäßen Verbindungen eröffnen eine weitere Behandlungsalternative und stellen somit eine Bereicherung der Pharmazie dar.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen wirken als potente Stimulatoren der löslichen Guanylatcyclase, besitzen wertvolle pharmakologische Eigenschaften, und weist ein verbessertes therapeutisches Profil auf, wie beispielsweise hinsichtlich ihrer in-vivo Eigenschaften und/oder ihres pharmakokinetischen Verhaltens und/oder metabolischen Profils. Sie eignet sich daher zur Behandlung und/ oder Prophylaxe von Erkrankungen bei Menschen und Tieren.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen bewirken eine Gefäßrelaxation und eine Hemmung der Thrombozytenaggregation und führen zu einer Blutdrucksenkung sowie zu einer Steigerung des koronaren Blut- flusses. Diese Wirkungen sind über eine direkte Stimulation der löslichen Guanylatcyclase und einen intrazellulären cGMP -Anstieg vermittelt. Außerdem verstärkt die erfindungsgemäße Verbindung die Wirkung von Substanzen, die den cGMP-Spiegel steigern, wie beispielsweise EDRF (endothelium-derived relaxing factor), NO-Donatoren, Protopo hyrin IX. Arachidonsäure oder Phenylhydrazin-Derivate. Die erfindungsgemäßen Verbindungen eignen sich zur Behandlung und/oder Prophylaxe von kardiovaskulären, pulmonalen, thrombo embolischen und fibrotischen Erkrankungen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können daher in Arzneimitteln zur Behandlung und/oder Prophylaxe von kardiovaskulären Erkrankungen wie beispielsweise Bluthochdruck (Hypertonie), resistente Hypertonie, akute und chronische Herzinsuffizienz, koronare Herzerkrankung, stabile und instabile Angina pectoris, periphere und kardiale Gefäß erkrankungen, Arrhythmien, Rhythmusstörungen der Vorhöfe und der Kammern sowie Überleitungsstörungen wie beispielsweise atrio-ventrikuläre Blockaden Grad l-ll l (AB-Block l-ll l ). supraventrikuläre Tachyarrhythmie, Vorhofflimmern, Vorhofflattern, Kammerflimmern, Kammerflattern, ventrikuläre Tachyarrhytmie, Torsade de pointes-Tachykardie, Extrasystolen des Vorhoffs und des Ventrikels, AV-junktionale Extrasystolen, Sick-Sinus Syndrom, Synkopen, AV-Knoten- Reentrytachykardie, Wolff-Parkinson-White-Syndrom, von akutem Koronarsyndrom (ACS), autoimmune Herzerkrankungen (Perikarditis, Endokarditis, Valvolitis, Aortitis, Kardiomyopathien) , Schock wie kardi- ogenem Schock, septischem Schock und anaphylaktischem Schock, Aneurysmen, Boxerkardiomyopathie (premature ventricular contraction (PVC)), zur Behandlung und/oder Prophylaxe von thrombo embolischen Erkrankungen und Ischämien wie myokardiale Ischämie, Myokardinfarkt, Hirnschlag, Herzhypertrophie, transistorischen und ischämischen Attacken, Präeklampsie, entzündliche kardiovaskuläre Erkrankungen, Spasmen der Koronararterien und peripherer Arterien, Ödembildung wie beispielsweise pulmonales Ödem, Hirnödem, renales Ödem oder Herzinsuffizienz -bedingtes Ödem, peripheren Durchblutungsstörungen, Reperfusionsschäden, arterielle und venöse Thrombosen, Mikroalbuminurie , Herzmuskelschwäche, endotheliale Dysfunktion, zur Verhinderung von Restenosen wie nach Thrombolysefherapien, percutan-transluminalen Angioplastien (PTA), transluminalen Koronarangioplastien (PTCA), Herztransplantationen und Bypass-Operationen, sowie mikro- und makrovaskuläre Schädigungen (Vasculitis), erhöhte Spiegel von Fibrinogen und von LDL geringer Dichte sowie erhöhte Konzentrationen von Plasmi- nogenaktivator- Inhibitor 1 (PAI-1), sowie zur Behandlung und/oder Prophylaxe von erektiler Dysfunktion und weiblicher sexueller Dysfunktion eingesetzt werden.
Im Sinne der vorliegenden Erfindung umfasst der Begriff Herzinsuffizienz sowohl akute als auch chronische Erscheinungsformen der Herzinsuffizienz, wie auch spezifischere oder verwandte Krankheitsformen wie akut dekompensierte Herzinsuffizienz, Rechtsherzinsuffizienz, Linksherzinsuffizienz, Globalinsuffizienz, ischämische Kardiomyopathie, dilatative Kardiomyopathie, hypertrophe Kardiomyopathie, idiopathische Kardiomyopathie, angeborene Herzfehler, Herzinsuffizienz bei Herzklappenfehlern, Mitralklap- penstenose, Mitralklapp eninsuffizienz, Aortenklappenstenose, Aortenklappeninsuffizienz, Trikuspidalste- nose, Trikuspidalinsuffizienz, Pulmonalklappen Stenose, Pulmonalklappeninsuffizienz, kombinierte Herzklappenfehler, Herzmuskel entzündung (Myokarditis), chronische Myokarditis, akute Myokarditis, virale Myokarditis, diabetische Herzinsuffizienz, alkoholtoxische Kardiomyopathie, kardiale Speichererkrankungen, diastolische Herzinsuffizienz sowie systolische Herzinsuffizienz und akute Phasen der Verschlechterung einer bestehenden chronischen Herzinsuffizienz (worsening heart failure). Darüber hinaus kann die erfindungsgemäße Verbindung auch zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Arteriosklerose, Lipidstoffwechselstörungen, Hypolipoproteinämi en, Dyslipidämien, Hypertriglyceridä- mien, Hyperlipidämien, Hypercholesterolämien, Abetelipoproteinämie, Sitosterolämie, Xanthomatose, Tangier Krankheit, Fettsucht (Adipositas), Fettleibigkeit (Obesitas) und von kombinierten Hyperlipidä- mien sowie des Metabolischen Syndroms eingesetzt werden.
Außerdem können die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von primärem und sekundärem Raynaud-Phänomen, von Mikrozirkulationsstörungen, Claudicatio, peripheren und autonomen Neuropathien, diabetischen Mikroangiopathien, diabetischer Retinopathie, diabetischen Geschwüren an den Extremitäten, Gangren, CREST-Syndrom, Erythematose, Onychomykose, rheumati- sehen Erkrankungen sowie zur Förderung der Wundheilung verwendet werden.
Weiterhin eignen sich die erfindungsgemäß en Verbindungen zur Behandlung urologischer Erkrankungen wie beispielsweise benignes Prostata- Syndrom (BPS), benigne Prostata- Hyperplasie (BPH), benigne Prostata Vergrösserung ( BPH), Blasenentleerungsstörung (BOO), untere Harnwegssyndrome (LUTS, einschließlich Feiines Urologisches Syndrom (FUS)), Erkrankungen des Urogenital - Systems einschliesslich neurogene über aktive Blase (OAB) und (IC), Inkontinenz (UI) wie beispielsweise Misch-, Drang-, Stress-, oder Üb erlauf- Inkontinenz (MUI, UUI, SUI, OUI), Beckenschmerzen, benigne und maligne Erkrankungen der Organe des männlichen und weiblichen Urogenital- Systems.
Weiterhin eignen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Nierenerkrankungen, insbesondere von aktuer und chronischer Niereninsuffizienz, sowie von akutem und chronischem Nierenversagen. Im Sinne der vorliegenden Erfindung umfasst der Begriff Niereninsuffizienz sowohl akute als auch chronische Erscheinungsformen der Niereninsuffizienz, wie auch zugrundeliegende oder verwandte Nierenerkrankungen wie renale Hypoperfusion, intradialytische Hypotonie, obstruktive Uropathie, Glomerulopathien, Glomerulonephritis, akute Glomerulonephritis, Glomerulosklerose, tu- bulointerstitielle Erkrankungen, nephropathische Erkrankungen wie primäre und angeborene Nierener- krankung, Nierenentzündung, immunologische Nierenerkrankungen wie Nierentransplantatabstoßung, Immunkompl ex-induzierte Nierenerkrankungen, durch toxische Substanzen induzierte Nephropathie, Kontrastmittel-induzierte Nephropathie, diabetische und nicht-diabetische Nephropathie, Pyelonephritis, Nierenzysten, Nephrosklerose, hypertensive Nephrosklerose und nephrotisches Syndrom, welche diagnostisch beispielsweise durch abnorm verminderte Kreatinin- und/oder Wasser- Ausscheidung, abnorm erhöh- te Blutkonzentrationen von Harnstoff, Stickstoff, Kalium und/oder Kreatinin, veränderte Aktivität von Nierenenzymen wie z.B. Glutamylsynthetase, veränderte Urinosmolarität oder Urinmenge, erhöhte Mikroalbuminurie, Makroalbuminurie, Läsionen an Glomerula und Arteriolen, tubuläre Dilatation, Hy- perphosphatämie und/oder die Notwendigkeit zur Dialyse charakterisiert werden können. Die vorliegende Erfindung umfasst auch die Verwendung der erfindungsgemäß en Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Folgeerscheinungen einer Niereninsuffizienz, wie beispielsweise Lungenödem, Herz- Insuffizienz, Urämie, Anämie, Elektrolytstörungen (z.B. Hyperkalämie, Hyponaträmie) und Störungen im Knochen- und Kohlenhydrat-Metabolismus.
Weiterhin eignen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen auch zur Behandlung und/oder Prophylaxe von asthmatischen Erkrankungen, pulmonaler arterieller Hypertonie (PAH) und anderen Formen der pul- monalen Hypertonie (PH), umfassend mit Linksherzerkrankung, HIV, Sichelzellanämie, Thromboembo- lien (CTEPH), Sarkoidose, COPD oder Lungenfibrose assoziierte pulmonale Hypertonie, der chronischobstruktive Lungenerkrankung (COPD), des akuten Atemwegssyndrom (ARDS), der akuten Lungenschädigung (ALI), der alpha- 1 -Antitrypsin-Defizienz (AATD), der Lungenfibrose, des Lungenemphysem (z.B. durch Zigarettenrauch induziertes Lungenemphysem) und der zystischen Fibrose (CF). Die in der vorliegenden Erfindung beschriebenen Verbindungen stellen auch Wirkstoffe zur Bekämpfung von Krankheiten im Zentralnervensystem dar, die durch Störungen des NO/cGMP-Systems gekennzeichnet sind. Insbesondere sind sie geeignet zur Verbesserung der Wahrnehmung, Konzentrationsleistung, Lernleistung oder Gedächtnisleistung nach kognitiven Störungen, wie sie insbesondere bei Situationen/Krankheiten/ Syndromen auftreten wie "Mild cognitive impairment", altersassoziierten Lern- und Gedächtnisstörungen, altersassoziierten Gedächtnisverlusten, vaskulärer Demenz, Schädel-Hirn-Trauma, Schlaganfall, Demenz, die nach Schlaganfällen auftritt ("post stroke dementia"), post-traumatischem Schädel-Hirn- Trauma, allgemeinen Konzentrationsstörungen, Konz entrations Störungen bei Kindern mit Lern- und Gedächtnisproblemen, Alzheimer'scher Krankheit, Demenz mit Lewy-Körperchen, Demenz mit Degeneration der Frontallappen einschliesslich des Pick's-Syndroms, Parkinson'scher Krankheit, progres- siver nuclear palsy, Demenz mit corticobasaler Degeneration, Amyolateralsklerose (ALS), Hunting- ton'scher Krankheit, Demyelinisation, Multipler Sklerose, Thalamischer Degeneration, Creutzfeld- Jacob- Demenz, HIV- Domen/, Schizophrenie mit Demenz oder Korsakoff-Psychose. Sie eignen sich auch zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen des Zentralnervensystems wie Angst-, Spannungsund Depressionszuständen, zentral-nervös bedingten S exualdysfunktionen und Schlafstörungen sowie zur Regulierung krankhafter Störungen der Nahrungs-, Genuss- und Suchtmittelaufnahme.
Weiterhin eignen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen auch zur Regulation der cerebralen Durchblutung und stellen wirkungsvolle Mittel zur Bekämpfung von Migräne dar. Auch eignen sie sich zur Prophylaxe und Bekämpfung der Folgen cerebraler Infarktgeschehen (Apoplexia cerebri) wie Schlaganfall, cerebraler Ischämien und des S chädel-Hirn-Traumas . Ebenso können die erfindungsgemäßen Verbindun- gen zur Bekämpfung von Schmerzzuständen und Tinnitus eingesetzt werden.
Zudem besitzen die erfindungsgemäß en Verbindungen antiinflammatorische Wirkung und können daher als entzündungshemmende Mittel zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Sepsis (SIRS), multiplem Organversagen (MODS, MOF), entzündlichen Erkrankungen der Niere, chronischen Darmentzündungen (IBD, Crohn 's Disease, UC), Pankreatitis, Peritonitis, rheumatoiden Erkrankungen, entzündlichen Haut- erkrankungen sowie entzündlichen Augenerkrankungen eingesetzt werden. Desweiteren können die erfindungsgemäßen Verbindungen ebenfalls zur Behandlung und/ oder Prophylaxe von Autoimmunerkrankungen eingesetzt werden.
Weiterhin sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe fibrotischer Erkrankungen der inneren Organe, wie beispielsweise der Lunge, des Herzens, der Niere, des Knochen- marks und insbesondere der Leber, sowie dermatologischer Fibrosen und fibrotischer Erkrankungen des Auges, geeignet. Im Sinne der vorliegenden Erfindungen umfasst der Begriff fibrotischer Erkrankungen insbesondere die folgenden Begriffe Leberfibrose, Leberzirrhose, Lungenfibrose, Endomyocardfibrose, Nephropathie, Glomerulonephritis, interstitielle Nierenfibrose, fibrotische Schäden in Folge von Diabetes, Knochenmarksfibrose und ähnliche fibrotische Erkrankungen, Sklerodermie, Morphaea, Keloide, hyper- trophe Narbenbildung (auch nach chirurgischen Eingriffen), Naevi, diabetische Retinopathie, proliferative Vitroretinopathie und Erkrankungen des Bindegewebes (z.B. Sarkoidose).
Weiterhin eignen sich die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Bekämpfung postoperativer Narbenbildung, z.B. in Folge von Glaukom-Operationen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können ebenfalls kosmetisch bei alternder und verhornender Haut eingesetzt werden.
Außerdem sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/ oder Prophylaxe von Hepatitis, Neoplasma, Osteoporose, Glaukom und Gastroparese geeignet.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Er- krankungen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäßen Verbindungen zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Herzinsuffizienz, Angina pectoris, Hypertonie, pulmonaler Hypertonie, Ischämien, Gefäß erkrankungen, Niereninsuffizienz, thrombo embolischen Erkrankungen, fibrotischen Erkrankungen, Arteriosklerose, Demenzerkrankungen und erektiler Dysfunktion. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind die erfindungsgemäßen Verbindungen zur Verwendung in einem Verfahren zur Behandlung und/' oder Prophylaxe von Herzinsuffizienz, Angina pectoris, Hypertonie, pulmonaler Hypertonie, Ischämien, Gefäß erkrankungen, Ni ereninsuffizienz, thrombo- embolischen Erkrankungen, fibrotischen Erkrankungen und Arteriosklerose.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäß en Ver- bindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist die Verwendung der erfindungsgemäß en Verbindungen zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Herzinsuffizienz, Angina pectoris, Hypertonie, pulmonaler Hypertonie, Ischämien, Gefäß erkrankungen, Niereninsuffizienz, thromboembolischen Erkrankungen, fibrotischen Erkrankungen, Arteriosklerose, Demenzerkrankungen und erektiler Dysfunktion.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Erkrankungen, insbesondere der zuvor genannten Erkrankungen, unter Verwendung einer wirksamen Menge von mindestens einer der erfindungsgemäßen Verbindungen.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Herzinsuffizienz, Angina pectoris, Hypertonie, pulmonaler Hypertonie, Ischämien, Gefäßerkrankungen, Niereninsuffizienz, thromboembolischen Erkrankungen, fibrotischen Erkrankungen und Arteriosklerose, unter Verwendung einer wirksamen Menge von mindestens einer der erfindungsgemäßen Verbindungen.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können allein oder bei Bedarf in Kombination mit anderen Wirk- Stoffen eingesetzt werden. Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, enthaltend mindestens eine der erfindungsgemäßen Verbindungen und einen oder mehrere weitere Wirkstoffe, insbesondere zur Behandlung und/oder Prophylaxe der zuvor genannten Erkrankungen. Als geeignete Kombinationswirkstoffe seien beispielhaft und vorzugsweise genannt:
• organische Nitrate und NO-Donatoren, wie beispielsweise Natriumnitroprussid, Nitroglycerin, Isosor- bidmononitrat, Isosorbiddinitrat, Molsidomin oder SIN-1, sowie inhalatives NO;
• Verbindungen, die den Abbau von cyclischem Guanosinmonophosphat (cGMP) inhibieren, wie beispielsweise Inhibitoren der Phosphodiesterasen (PDE) 1, 2 und/oder 5, insbesondere PDE 5 -Inhibitoren wie Sildenafil, Vardenafil und Tadalafil;
• antithrombotisch wirkende Mittel, beispielhaft und vorzugsweise aus der Gruppe der Thrombo- zytenaggregationshemmer, der Antikoagulantien oder der profibrinolytischen Substanzen;
• den Blutdruck senkende Wirkstoffe, beispielhaft und vorzugsweise aus der Gruppe der Calcium- Antagonisten, Angiotensin All- Antagonisten, ACE-Hemmer, Endothelin- Antagonisten, Ren inInhibitoren, alpha-Rezeptoren-Blocker, beta-Rezeptoren-Blocker, Mineralocorticoid-Rezeptor- Antagonisten sowie der Diuretika; und/oder · den Fettstoffwechsel verändernde Wirkstoffe, beispielhaft und vorzugsweise aus der Gruppe der Thy- roidrezeptor-Agonisten, Cholesterinsynthese-Inhibitoren wie beispielhaft und vorzugsweise HMG- CoA-Reduktase- oder Squalensynthese-Inhibitoren, der AC AT -Inhibitoren, CETP-Inhibitoren, MTP- Inhibitoren, PPAR-alpha-, PPAR-gamma- und/oder PPAR-delta-Agonisten, Cholesterin- Absorptions- hemmer, Lipase-Inhibitoren, polymeren Gallens äureadsorber, Gallensäure-Reabsorptionshenimer und Lipoprotein(a) -Antagonisten.
Unter antithrombotisch wirkenden Mittel werden vorzugsweise Verbindungen aus der Gruppe der Throm- bozytenaggregationshemmer, der Antikoagulantien oder der profibrinolytischen Substanzen verstanden.
Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem Thrombozytenaggregationshemmer, wie beispielhaft und vorzugsweise Aspirin, Clopidogrel, Ticlopidin oder Dipyridamol, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem Thrombin- Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Ximelagatran, Dabigat- ran, Melagatran, Bivalirudin oder Clexane, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem GPIIb/IIIa- Antagonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Tirofiban oder Abci- ximab, verabreicht. Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem Faktor Xa-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Rivaroxaban (BAY 59- 7939), Edoxaban (DU- 176b), Apixaban, Otamixaban, Fidexaban, Razaxaban, Fondaparinux, Idraparinux, PMD-3112, YM-150, KFA-1982, EMD-503982, MCM-17, MLN-1021, DX 9065a, DPC 906, JTV 803, SSR-126512 oder SSR- 12X428, verabreicht. Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit Heparin oder einem low molecular weight (LMW)-Heparin-Derivat verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem Vitamin K- Antagonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Coumarin, verabreicht. Unter den Blutdruck senkenden Mitteln werden vorzugsweise Verbindungen aus der Gruppe der Calcium- Antagonisten, Angiotensin AII-Antagonisten, ACE-Hemmer, Endothelin- Antagonisten, Renin- Inhibitoren, alpha-Rezeptoren-Blocker, beta-Rezeptoren-Blocker, Mineralocorticoid-Rezeptor- Antagonisten sowie der Diuretika verstanden.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem C alcium- Antagonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Nifedipin, Amlodipin, Verapamil oder Diltiazem, verabreicht. Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem alpha- 1 -Rezeptoren-Blocker, wie beispielhaft und vorzugsweise Prazosin, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem beta-Rezeptoren-Blocker, wie beispielhaft und vorzugsweise Propranolol, Atenolol, Timolol, Pindolol, Alprenolol, Oxprenolol, Penbutolol, Bupranolol, Metipranolol, Nadolol, Mepindolol, Carazalol, Sotalol, Metoprolol, Betaxolol, Celiprolol, Bisoprolol, Carteolol, Esmolol, Labetalol, Carvedilol, Adaprolol, Landiolol, Nebivolol, Epanolol oder Bucindolol, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem Angiotensin All -Antagonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Losartan, Candesartan, Valsartan, Telmisartan, Embursartan, Irbesartan, Olmesartan, Eprosartan oder Azilsartan oder einem dualen Angiotensin AII-Antagonisten/NEP-Inhibitor, wie beispielsweise und vorzugsweise LCZ696 (Valsartan/'Sacubitril), verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem ACE-Hemmer, wie beispielhaft und vorzugsweise Enalapril, Captopril, Lisinopril, Ramipril, Delapril, Fosinopril, Quinopril, Perindopril oder Trandopril, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem Endothelin- Antagonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Bosentan, Darusen- tan, Ambrisentan oder Sitaxsentan, verabreicht. Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem Renin- Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Aliskiren, SPP-600 oder SPP- 800, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem Mineralocorticoid-Rezeptor- Antagonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Spironolacton oder Eplerenon, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem S chleif endiuretikum, wie beispielsweise Furosemid, Torasemid, Bumetanid und Piretanid, mit kaliumsparenden Diuretika wie beispielsweise Amilorid und Triamteren, mit Aldosteronantagonisten, wie beispielsweise Spironolacton, Kaliumcanrenoat und Eplerenon sowie Thiaziddiuretika, wie beispielsweise Hydro chlorothiazid, Chlorthalidon, Xipamid, und Indapamid, verabreicht.
Unter den Fettstoffwechsel verändernden Mitteln werden vorzugsweise Verbindungen aus der Gruppe der CETP-Inhibitoren, Thyroidrezeptor-Agonisten, Cholesterinsynthese-Inhibitoren wie HMG-CoA- Reduktase- oder Squalensynthese-Inhibitoren, der AC AT -Inhibitoren, MTP-Inhibitoren, PPAR-alpha-, PPAR-gamma- und/oder PPAR-delta-Agonisten, Cholesterin- Absorptionshemmer, polymeren Gallens äu- readsorber, Gallensäure-Reab Sorptionshemmer, Lipase-Inhibitoren sowie der Lipoprotein(a)-Antagonisten verstanden. Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem CETP-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Dalcetrapib, BAY 60-5521, Anacetrapib oder CETP-vaccine (CETi-1), verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem Thyroidrezeptor-Agonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise D-Thyroxin, 3,5,3'-Triiodothyronin (T3), CGS 23425 oder Axitirome (CGS 26214), verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem HMG-CoA-Reduktase-Inhibitor aus der Klasse der Statine, wie beispielhaft und vorzugsweise Lovastatin, Simvastatin, Pravastatin, Fluvastatin, Atorvastatin, Rosuvastatin oder Pitavasta- tin, verabreicht. Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem Squalensynthese-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise BMS-188494 oder TAK-475, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem AC AT -Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Avasimibe, Melinamide, Pactimibe, Eflucimibe oder SMP-797, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem MTP-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Implitapide, BMS-201038, R- 103757 oder JTT-130, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem PPAR-gamma-Agonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Pioglitazone oder Rosiglitazone, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem PPAR-delta-Agonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise GW 501516 oder BAY 68-5042, verabreicht. Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem Cholesterin- Abso tionshemm er, wie beispielhaft und vorzugsweise Ezetimibe, Tiqueside oder Pamaqueside, verabreicht. Bei einer bevorzugten Ausfuhrungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem Lipase-Inhibitor, wie beispielhaft und vorzugsweise Orlistat, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem polymeren Gallens äureadsorb er, wie beispielhaft und vorzugsweise Cholestyra- min, Colestipol, Colesolvam, CholestaGel oder Colestimid, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem Gallens äure-Reabsorptionshemmer, wie beispielhaft und vorzugsweise AS BT (= IBAT)-Inhibitoren wie z.B. AZD-7806, S-8921, ΛΚ-105, BARI- 1741 , SC -435 oder SC-635, verabreicht.
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung werden die erfindungsgemäß en Verbindungen in Kombination mit einem Lipoprotein(a)-Antagonisten, wie beispielhaft und vorzugsweise Gemcabene calcium (CI-1027) oder Nicotinsäure, verabreicht.
Weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind Arzneimittel, die mindestens eine erfindungsgemäße Verbindung, üblicherweise zusammen mit einem oder mehreren inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen enthalten, sowie deren Verwendung zu den zuvor genannten Zwecken. Die erfindungsgemäßen Verbindungen können systemisch und/oder lokal wirken. Zu diesem Zweck können sie auf geeignete Weise appliziert werden, wie z.B. oral, parenteral, pulmonal, nasal, sublingual, lingual, buccal, rectal, dermal, transdermal, conjunctival, otisch oder als Implantat bzw. Stent.
Für diese Applikationswege können die erfindungsgemäßen Verbindungen in geeigneten Applikationsformen verabreicht werden. Für die orale Applikation eignen sich nach dem Stand der Technik funktionierende, die erfindungsgemäßen Verbindungen schnell und/oder modifiziert abgebende Applikationsformen, die die erfindungsgemäßen Verbindungen in kristalliner und/oder amorphisierter und/oder gelöster Form enthalten, wie z.B. Tabletten (nicht -überzogene oder überzogene Tabletten, beispielsweise mit magensaftresistenten oder sich verzögert auflösenden oder unlöslichen Überzügen, die die Freisetzung der erfmdungsgemäßen Verbin- dung kontrollieren), in der Mundhöhle schnell zerfallende Tabletten oder Filme/Oblaten, Fil- me/Lyophylisate, Kapseln (beispielsweise Hart- oder Weichgelatinekapseln), Dragees, Granulate, Pellets, Pulver, Emulsionen, Suspensionen, Aerosole oder Lösungen.
Die parenterale Applikation kann unter Umgehung eines Κεβθ ΐίοηββοηπΐΐεβ geschehen (z.B. intravenös, intraarteriell, intrakardial, intraspinal oder intralumbal) oder unter Einschaltung einer Resorption (z.B. in- tramuskulär, subcutan, intracutan, percutan oder intraperitoneal). Für die parenterale Applikation eignen sich als Applikationsformen u.a. Injektions- und Infusionszubereitungen in Form von Lösungen, Suspensionen, Emulsionen, Lyophilisaten oder sterilen Pulvern. Für die sonstigen Applikationswege eignen sich z.B. Inhalations arzneiformen (u.a. Pulverinhalatoren, Ne- bulizer), Nasentropfen, -lösungen oder -sprays, lingual, sublingual oder buccal zu applizierende Tabletten, Filme/Oblaten oder Kapseln, Suppositorien, Ohren- oder Augenpräparationen, Vaginalkapseln, wäßrige Suspensionen (Lotionen, Schüttelmixturen) , lipophile Suspensionen, Salben, Cremes, transdermale thera- peutische Systeme (z.B. Pflaster), Milch, Pasten, Schäume, Streupuder, Implantate oder Stents.
Bevorzugt sind die orale oder parenterale Applikation, insbesondere die orale Applikation.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen können in die angeführten Applikationsformen überführt werden. Dies kann in an sich bekannter Weise durch Mischen mit inerten, nichttoxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen geschehen. Zu diesen Hilfsstoffen zählen u.a. Trägerstoffe (beispielsweise mikrokristalline Cellulose, Lactose, Mannitol), Lösungsmittel (z.B. flüssige Polyethylenglycole), Emulgatoren und Disper- gier- oder Netzmittel (beispielsweise Natriumdodecylsulfat, Polyoxysorbitanoleat), Bindemittel (beispielsweise Polyvinylpyrrolidon), synthetische und natürliche Polymere (beispielsweise Albumin), Stabilisatoren (z.B. Antioxidantien wie beispielsweise Ascorbinsäure), Farbstoffe (z.B. anorganische Pigmente wie beispielsweise Eisenoxide) und Geschmacks- und/oder Geruchskorrigentien. Im Allgemeinen hat es sich als vorteilhaft erwiesen, bei parenteraler Applikation Mengen von etwa 0.001 bis 1 mg/kg, vorzugsweise etwa 0.01 bis 0.5 mg/kg Körpergewicht zur Erzielung wirksamer Ergebnisse zu verabreichen. Bei oraler Applikation beträgt die Dosierung etwa 0.001 bis 2 mg/kg, vorzugsweise etwa 0.001 bis 1 mg/kg Körpergewicht.
Trotzdem kann es gegebenenfalls erforderlich sein, von den genannten Mengen abzuweichen, und zwar in Abhängigkeit von Körpergewicht, Applikationsweg, individuellem Verhalten gegenüber dem Wirkstoff, Art der Zubereitung und Zeitpunkt bzw. Intervall, zu welchem die Applikation erfolgt. So kann es in einigen Fällen ausreichend sein, mit weniger als der vorgenannten Mindestmenge auszukommen, während in anderen Fällen die genannte obere Grenze überschritten werden muss. Im Falle der Applikation größerer Mengen kann es empfehlenswert sein, diese in mehreren Einzelgaben über den Tag zu verteilen. Die nachfolgenden Ausführungsbeispiele erläutern die Erfindung.
Die Prozentangaben in den folgenden Tests und Beispielen sind, sofern nicht anders angegeben, Gewichtsprozente; Teile sind Gewichtsteile. Lösungsmittelverhältnisse, Verdünnungsverhältnisse und Konzentrationsangaben von flüssig/ flüssig-Lösungen beziehen sich jeweils auf das Volumen. Beispiele
Abkürzungen:
abs. absolut (= getrocknet)
aq. wässrige Lösung
ber. berechnet
Boc tert-Butyloxycarbonyl
br. Verbreitertes Signal (NMR Kupplungsmuster)
CA S-Nr. Chemical Abstracts Service Nummer
Cbz Benzyloxycarbonyl
δ Verschiebung im NMR Spektrum (Angabe in ppm) d Dublett (NMR-Kupplungsmuster)
DC Dünnschichtchromatographie
DCI direkte chemische Ionisation (bei MS)
DMAP 4-NN-Dimethylaminopyridin
DMF Dimethylformamid
DMSO Dimethylsulfoxid
EDCI A-[3-(Dimethylamino)propyl]-N'-ethylcarbodiimid d. Th. der Theorie (bei Ausbeute)
ent enantiomerenrein
eq. Äquivalent(e)
ESI Elektrospray-Ionisation (bei MS)
Et Ethyl
gef. gefunden
h Stunde(n)
HAT Ii N-[(Dimethylamino)(3H-[l,2,3]ü-iazolo[4,5-b]-pyridin-3- yloxy)methylen]-N-methylmethanaminiumhexafluorophosphat
HOBT 1 H-Benzotriazol- 1 -ol
HPLC Hochdruck-, Hochleistungsflüssigchromatographie
HRMS hochaufgelöste Massenspektrometrie
I D Innendurchmesser
konz. konzentriert
LC-MS Flüssigchromatographie-gekoppelte Massenspektrometrie LiHMDS Lithiumhexamethyldisilazid
m Multiplett
Me Methyl
min Minute(n) MS Massen spektrometrie
NMR Kernresonanzspektrometrie
PDA Photodiodenarraydetektoi"
Pd2dbas Tris-(dibenzylidenaceton)-dipalladium
Ph Phenyl
q Quartett (NMR Kupplungsmuster)
quint. Quintett (NMR Kupplungsmuster)
rac racemisch
rel relative Stereochemie
Ri Retentionsfaktor (bei Dünnschichtchromatographie)
RT Raumtemperatur
Rt Retentionszeit (bei HPLC)
s Singulett (NMR Kupplungsmuster)
t Triplett (NMR Kupplungsmuster)
THF Tetrahydrofuran
TBTU (Benzotriazol- 1 -yloxy)bisdimethyl aminomethyliumfluoroborat
UPLC -MS Ultradruck-Flüssigchromatographiegekoppelte Massenspektrometrie
UV Ultraviolett-Spektrometrie
v/v Volumen zu Volumen- Verhältnis (einer Lösung)
Xantphos 4,5-Bis(diphenylphosphino)-9,9-dimethylxanthene
XPHOS Dicyclohexyl-(2',4',6'-triisopropylbiphenyl-2-yl)-phosphin
LC-MS- und U I. ("-Methoden: Methode 1 (LC-MS):
Instrument: Micromass Quattro Premier mit Waters UPLC Acquity; Säule: Thermo Hypersil GOLD 1.9 μ 50 x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: ! I Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A -> 0.1 min 90% A ♦ 1 .5 min 10% A -> 2.2 min 10% A Ofen: 50°C; Fluss: 0.33 ml/min; UV-Detektion: 210 nm
Methode 2 (LC-MS):
Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Säule: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 50 x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A -> 1.2 min 5% A 2.0 min 5% A Ofen: 50°C; Fluss: 0.40 ml min; UV-Detektion: 210 - 400 nm. Methode 3 (LC-MS):
Instrument: Micromass Quattro Premier mit Waters UPLC Acquity; Säule: Thermo Hypersil GOLD 1.9 μ 50 x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.5 ml 50%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 97% A -> 0.5 min 97% A -> 3.2 min 5% A -> 4.0 min 5% A Ofen: 50°C; Fluss: 0.3 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 4 (präparative HPLC):
Chromatorex C18 10μ 250x20 mm Gradient: A= Wasser + 0,5% Ameisensäure, B = Acetonitril, 0min = 5% B, 3min = 5% B vorspülen ohne Substanz, dann Injektion, 5 min = 5% B, 25min = 30% B, 38min = 30% B, 38.1 min = 95% B, 43.00 min = 95% B, 43.01 min= 5% B, 48.0min = 5% B; Flussrate 20 ml/min, Wellenlänge 210 nm.
Methode 5 (präparative HPLC):
Chromatorex C18 10μ 250x20 mm Gradient: A= Wasser + 0. 5% Ameisensäure, B = Acetonitril, 0 min = 5% B, 3min = 5% B vorspülen ohne Substanz, dann Injektion, 5 min = 5% B, 25 min = 50% B, 38 min = 50% B, 38.1 min = 95% B, 43.00 min = 95% B, 43.01min = 5% B, 48.0 min = 5% B; Flussrate 20 ml/min, Wellenlänge 210 nm.
Methode 6 (präparative HPLC):
X ridge Prep. C18 5μ 50x19 mm Gradient: A= Wasser + 0.5% Ammoniumhydroxid, B= Acetonitril, 0min = 5% B, 3 min = 5% B vorspülen ohne Substanz, dann Injektion, 5 min = 5% B, 25 min = 50% B, 38.0 min = 50% B, 38.1 min = 95% B, 43.00 min= 95% B, 43.01min= 5% B, 48.0 min= 5% B; Flussrate 1 ml/min, Wellenlänge 210 nm
Methode 7 (LC-MS):
Instrument MS: Waters (Micromass) QM; Instrument HPLC: Agilent 1100 Serie; Säule : Agient ZORBAX Extend-C18 3.0x50mm 3.5-Micron; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.01 mol Ammoniumcarbonat, Eluent B: 1 1 Acetonitril; Gradient: 0.0 min 98% A 0.2 min 98% A -> 3.0 min 5% A - 4.5 min 5% A ; Ofen: 40°C; Fluss: 1.75 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 8 (LC-MS):
Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Säule: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 30 x 2 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A -> 1.2 min 5% A 2.0 min 5% A Ofen: 50°C; Fluss: 0.60 ml/min; UV-Detektion: 208 - 400 nm.
Methode 9 (präparative HPLC):
Instrument MS: Waters, Instrument HPLC: Waters (Säule Waters X-Bridge C18, 18 mm x 50 mm, 5 μπι, Eluent A: Wasser + 0.05% Triethylamin, Eluent B: Acetonitril (ULC) + 0.05% Triethylamin, mit Gradient; Fluss: 40 ml/min; UV-Detektion: DAD; 210 - 400 nm). bzw.:
Instrument MS: Waters, Instrument HPLC: Waters (Säule Phenomenex Luna 5μ C18(2) 100A, AXIA Tech. 50 x 21.2 mm, Eluent A: Wasser + 0.05% Ameisensäure, Eluent B: Acetonitril (ULC) + 0.05% Ameisensäure, mit Gradient; Fluss: 40 ml/'min; UV-Detektion: DAD; 210 - 400 nm). Methode 10 (LC-MS):
Instrument MS: Waters SQD; Instrument HPLC: Waters UPLC; Saeule: Zorbax SB-Aq (Agilent), 50 mm x 2.1 mm, 1.8 μπι; Eluent A: Wasser + 0.025% Ameisensäure, Eluent B: Acetonitril (ULC) + 0.025% Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 98%A - 0.9 min 25%A - 1.0 min 5%A - 1.4 min 5%A - 1.41 min 98%A - 1.5 min 98%A; Ofen: 40°C; Fluss: 0.600 ml/min; UV-Detektion: DAD; 210 nm. Methode 1 1 (MS):
Instrument: Waters ZQ 2000; Elektrospray-Ionisierung; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure; 25% A, 75% B; Fluss: 0.25 ml/'min.
Methode 12 (PC l-MS):
Instrument: Thermo Fisher-Scientific DSQ; chemische Ionisierung; Reaktantgas IL; Quellentemperatur: 200°C; Ionisierungsenergie 70eV.
Methode 13 (LC-MS):
Instrument MS: Waters (Micromass) Quattro Micro; Instrument HPLC: Agilent 1100 Serie; Säule: YMC- Triart C18 3 μ 50 x 3 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.01 mol Ammoniumc arbonat, Eluent B: 1 1 Acetonitril; Gradient: 0.0 min 100% A 2.75 min 5% A 4.5 min 5% A; Ofen: 40°C; Fluss: 1.25 ml/'min; UV- Detektion: 210 nm.
Methode 14 (GC-MS):
Instrument: Thermo Scientific DSQ II, Thermo Scientific Trace GC Ultra; Säule: Restek RTX-35MS, 15 m x 200 μπι x 0.33 μπι; konstanter Fluss mit Helium: 1.20 ml/'min; Ofen: 60°C; Inlet: 220°C; Gradient: 60°C, 30°C/min -> 300°C (3.33 min halten).
Methode 15 (LC-MS, analytisch): Instrument: Agilent MS Quad 6150; HPLC: Agilent
1290; Säule: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 50 x 2.1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure, Eluent B: 1 1 Acetonitril + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 90% A 0.3 min 90% A -> 1.7 min 5% A -> 3.0 min 5% A Ofen: 50°C; Fluss: 1.20 ml/'min; UV-Detektion: 205 - 305 nm.
Methode 16 (LC-MS, analytisch):
Instrument MS: Waters (Micromass) Quattro Micro; Instrument Waters UPLC Acquity; Säule : Waters BEH C18 1.7 μ 50 x 2.1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.01 mol Ammoniumformiat, Eluent B: 1 1 Aceto- nitril; Gradient: 0.0 min 95% A -> 0.1 min 95% A -> 2.0 min 15% A 2.5 min 15% A-> 2.51 min 10% A -> 3.0 min 10% A; Ofen: 40°C; Fluss: 0.5 ml/min; UV-Detektion: 210 nm.
Methode 17 ( C-MS):
Instrument: Waters ACQUITY SQD UPLC System; Säule: Waters Acquity UPLC HSS T3 1.8 μ 50 x 1 mm; Eluent A: 1 1 Wasser + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure , Eluent Ii: 1 1 Acetonitril + 0.25 ml 99%ige Ameisensäure; Gradient: 0.0 min 95% A -> 6.0 min 5% A -> 7.5 min 5% A Ofen: 50°C; Fluss: 0.35 ml/min; UV-Detektion: 210 - 400 nm.
Weitere Angaben:
Bei Aufreinigungen von erfindungsgemäßen Verbindungen per präparativer HP I nach den oben beschriebenen Methoden, in denen die Elutionsmittel Zusatzstoffe wie beispielsweise Trifluoressigsäure, Ameisensäure oder Ammoniak enthalten, können die erfindungsgemäß en Verbindungen in Salz-Form, beispielsweise als Trifluoracetat, Formiat oder Ammonium-Salz anfallen, sofern die erfindungsgemäßen Verbindungen ausreichend basische bzw. saure Funktionalitäten enthalten. Ein solches Salz kann durch verschiedene dem Fachmann bekannte Methoden in die entsprechende freie Base bzw. Säure überführt werden.
So können die Trifluoracetat-, Formiat- oder Ammonium- S alze durch Ausschütteln einer organischen Lösung oder Suspension mit gesättigter, wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung in die salzfreie Form überführt werden. Des Weiteren können Amidine als freie Verbindungen oder anteilig (abhängig von der Präparation bei Beteiligung von Essigsäure) als Acetat-Salze oder Acetat-Solvate vorliegen.
Wenn bei den im Folgenden beschriebenen Synthese -Intermediaten und Ausführungsbeispielen der Erfindung eine Verbindung in der Form eines Salzes der korrespondierenden Base bzw. Säure aufgeführt ist, so ist die exakte stöchiometrische Zusammensetzung eines solchen Salzes, wie es nach dem jeweiligen Her- stell- und/oder Reinigungsverfahren erhalten wurde, in der Regel nicht bekannt. Sofern nicht genauer spezifiziert, sind daher Namens- und Strukturformel-Zusätze wie beispielsweise "Hydrochlorid", "Trifluoracetat", "Natrium-Salz" bzw. "x HCl", "x CF3COOH", "x Na+" bei solchen Salzen nicht stöchiometrisch zu verstehen, sondern haben allein deskriptiven Charakter bezüglich der enthaltenen salzbildenden Komponenten.
Sinngemäß gleiches gilt für den Fall, dass Synthese-Intermediate oder Ausführungsbeispiele oder Salze hiervon nach den beschriebenen Herstell- und/oder Reinigungsverfahren in Form von Solvaten, wie beispielsweise Hydraten, erhalten wurden, deren stöchiometrische Zusammensetzung (sofern definierter Art) nicht bekannt ist.
Weiterhin können die erfindungsgemäßen sekundären Amide als Rotationsisomere/ Isomerengemische, insbesondere bei NMR-Untersuchungen, vorliegen. Reinheitsangaben beziehen sich in der Regel auf ent- sprechende Peak-Integrationen im LC/MS -Chromatogramm, können aber zusätzlich auch unter Zuhilfenahme des 'H-NMR-Spektrums ermittelt worden sein. Wenn keine Reinheit angegeben ist, handelt es sich in der Regel um eine 100%-Reinheit laut automatischer Peak-Integration im LC/MS-Chromatogramm o- der die Reinheit wurde nicht explizit ermittelt.
Angaben zu Ausbeuten in % d. Th. sind in der Regel reinheitskorrigiert, sofern eine Reinheit <100% angegeben ist. Bei lösungsmittelhaltigen oder verunreinigten Chargen kann die Ausbeute formal ">100%" betragen; in diesen Fällen ist die Ausbeute nicht lösungsmittel- bzw. reinheitskorrigiert.
Alle Angaben in 'H-NMR-Spektren geben die Chemischen Verschiebungen δ in ppm an.
Die in den folgenden Paragraphen angegebenen Multiplizitäten von Protonensignalen in H-NMR- Spektren geben die jeweils beobachtete Signalform wieder und berücksichtigen keine Signalphänomene höherer Ordnung. In der Regel bezieht sich die Angabe zur chemischen Verschiebung auf das Zentrum des betreffenden Signals. Bei breiten Multipletts erfolgt die Angabe eines Intervalls. Durch Lösungsmittel oder Wasser verdeckte Signale wurden entweder tentativ zugeordnet oder sind nicht aufgeführt. Stark verbreiterte Signale - z.B. verursacht durch schnelle Rotation von Molekülteilen oder aufgrund von austauschenden Protonen - wurden ebenfalls tentativ zugeordnet (oft als breites Multiplett oder breites Singulett bezeichnet) oder sind nicht aufgeführt.
Die Methyl-Gruppe des chemischen Systems 2-Methyl-pyrazolo[ 1 ,5-a]pyridin" erscheint in Ή-NMR- Spektren als Singulett (oftmals in DMSO-de und im Bereich von 2.40 - 2.60 ppm) und ist etweder klar als solches erkennbar, ist mit den Lösungsmittelsignalen überlagert oder liegt vollständig unter den Signalen der Lösungsmittel.
Schmelzpunkte und Schmelzbereiche, soweit angegeben, sind nicht korrigiert.
Für alle Reaktanden oder Reagenzien, deren Herstellung im Folgenden nicht explizit beschrieben ist, gilt, dass sie von allgemein zugänglichen Quellen kommerziell bezogen wurden. Für alle übrigen Reaktanden oder Reagenzien, deren Herstellung im Folgenden ebenfalls nicht beschrieben ist und die nicht kommerziell erhältlich waren oder von Quellen bezogen wurden, die nicht allgemein zugänglich sind, ist ein Verweis auf die veröffentlichte Literatur angegeben, in der ihre Herstellung beschrieben ist.
Aiisgangsverbindungen und Intermediate:
Beispiel 1A
2 - [ (2 ,6-Difluorbenzyl)oxy] -4 -methylpyridin
Figure imgf000037_0001
Eine Mischung von 5.00 g (24.2 mmol, 1.0 eq.) 2,6-Dif uorbenzylbromid [CAS -Nr: 85118-00-9] und 3.16 g (29.0 mmol, 1.2 eq.) 2-Hydroxy-4-methylpyridin [CAS-Nr: 13466-41-6] wurden in 50 ml THF gelöst. Die Lösung wurde mit 7.99 g (29.0 mmol, 1.2 eq.) Silbercarbonat versetzt und unter Lichtausschluss über Nacht auf Rückfluss erhitzt. Anschließend wurde die Reaktionsmischung über Kieselgur filtriert, mit Es- sigsäureethylester eluiert und das Filtrat wurde eingeengt. Das Rohprodukt wurde mittels Biotage Isolera (100 g Kieselgelkartusche, Cyclohexan/Essigsäureethylester-Gradient, 0 % nach 10 % Essigsäureethyles- ter) gereinigt. Es wurden 3.51 g der Titelverbindung (61 % d. Th.) erhalten.
IX (Kieselgel, Cyclohexan/Essigsäureethylester 10: 1): F = 0.50
LC-MS (Methode 2): RT = 1.17 min
MS (ESpos): m/z = 236 (M+H)+
S H- MR (400 MHz, DMSO-d6): δ [ppm] = 2.26 (s, 3H), 5.35 (s, 2H), 6.66 (s, 1H), 6.86 (d, 1H), 7.12 - 7.21 (m, 2H), 7.47 - 7.56 (m, 1H), 8.06 (d, 1H).
Beispiel 2A
l-Amino-2-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-4-methylpyridinium-2,4,6-trimethylbenzolsulfonat
Figure imgf000037_0002
Eine Mischung von 3.4 ml (43.9 mmol, 10 eq.) Trifluoressigsäure und 0.33 ml Wasser wurden auf -5°C gekühlt. Bei dieser Temperatur wurden 1.88 g (6.59 mmol, 1 .5 eq.) Ethy 1- ( lE)-N-[(mesityl sulf onyl) oxy- ]ethanimidoat [CAS-Nr: 38202-27-6] portionsweise zugegeben. Nach 1.5 h wurden 30 ml Eiswasser hin- zugefügt, es wurde kurz nachgerührt und das entstandene 0-(2-Mesitylenesulfonyl)hydroxylamin (MSH) wurde durch eine vorher gekühlte Fritte ab filtriert und mit 30 ml Eiswasser gewaschen. Das wasserfeuchte 0-(2-Mesitylenesulfonyl)hydroxylamin wurde in 12 ml Dichlormethan gelöst, mit Magnesiumsulfat getrocknet, filtriert und und das Filtrat wurde direkt zu einer Lösung von 1.03 g (4.39 mmol, 1.0 eq.) 2-[(2,6- Difluorbenzyl)oxy]-4-methylpyridin aus Beispiel 1A in 2 ml Dichlormethan getropft. Die Mischung wurde über Nacht bei RT gerührt. Anschließend wurde Diethylether zugetropft, der anfallende Niederschlag ab filtriert, mit Diethylether gewaschen und getrocknet. Es wurden 1.3 g der Titelverbindung isoliert (59% d. Th, Reinheit 90%).
'H-NMR (400 MHz, DMSO-de): δ [ppm] = 2.17 (s, 3H), 2.46 - 2.57 (s, 3H und s, 6H überlagert mit den Lösungsmittelsignal), 5.64 (s, 2H), 6.74 (s, 2H), 7.23 - 7.48 (m, 4H), 7.60 - 7.70 (m, 1H), 7.86 (br s, 1H), 8.44 (d, 1H). 'isniel 3A
Ethyl-7-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,5-dimethylpyrazolo[ 1 ,5-a]pyridin-3 -carboxylat
Figure imgf000038_0001
1.62 g (3.60 mmol, 1.0 eq.) l-Amino-2-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-4-methylpyridinium-2,4,6- trimethylbenzolsulfonat aus Beispiel 2A wurden in 36 ml DMF gelöst und mit 0.84 ml (7.19 mmol, 2.0 eq.) Ethylbut-2-inoat [CAS-Nr: 4341-76-8] versetzt. Es wurden 0.994 g (7.19 mmol, 2.0 eq.) Kaliumcar- bonat zugegeben und die Mischung wurde 1.5 h bei RT gerührt. Anschließend wurde das Gemisch auf 150 ml Wasser gegossen, kurz ausgerührt, der entstandene Feststoff ab filtriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Es wurden 440 mg der Titelverbindung (45% d. Th., 87%) erhalten.
IX -MS (Methode 2): Rt = 1.22 min
MS (ESpos): m/z = 361 (M+H)+
Beispiel 4A
7-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,5-dimethylpyrazolo[l,5-a]pyridin-3-carbonsäure
Figure imgf000039_0001
Eine Lösung von 0.440 g(1.22 mmol, 1 eq.) Ethyl-7-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,5-dimethyl-pyrazolo[l,5- a]pyridin-3-carboxylat aus Beispiel 3A in 12.7 ml Dioxan wurde mit 4.9 ml (4.88 mmol, 4.0 eq.) 1 N wässriger Natronlauge versetzt und 36 h bei 90°C gerührt. Anschließend wurde das Reaktionsgemisch eingeengt und der entstandene Feststoff ab filtriert. Das Filtrat wurde mit 6 N wässriger Salzsäure angesäuert und kurz ausgerührt. Der entstandene Feststoff wurde ab filtriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Es wurden 248 mg der Titelverbindung (61% d. Th., Reinheit 60%) erhalten, die ohne weitere Reinigung weiter umgesetzt wurde.
IX -MS (Methode 2): Rt = 0.96 min
MS (ESpos): m/z = 333 (M+H)+
Beispiel 5A
rac-2-Amino-2-methyl(4,4,4-2H3)butannitri
Figure imgf000039_0002
2.0 g (26.62 mmol) (4,4,4-2H3)Butan-2-on [CAS Registry Nummer: 53389-26-7] wurden in 22.3 ml 2 N Ammoniak in Methanol vorgelegt und bei Raumtemperatur mit 1.72 g (35.14 mmol) Natriumcyanid sowie 1.88 g (35.14 mmol) Ammoniumchlorid versetzt und 4 Stunden unter Rückfluss gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde abgekühlt, mit 40 ml Diethylether versetzt und der enthaltene Feststoff wurde ab filtriert. Das Lösungsmittel aus dem Filtrat wurde unter Normaldruck abdestilliert. Es wurden 2.75 g der Titelverbindung (51 % d. Th. bei einer Reinheit von ca. 50%) als Rückstand erhalten, der ohne weitere Reinigung in die Folgestufe eingesetzt wurde.
GC-MS (Methode 14): Rt = 1.66 min
MS (ESpos): m/z = 86 (M-CH3)+ Beispiel 6A
rac-Benzyl-[2-cyan(4,4,4-2H3)butan-2- l]carbamat
Figure imgf000040_0001
2.75 g (13.59 mmol bei einer Reinheit von ca. 50%) rac-2-Amino-2-methyl(4,4,4-2H3)butannitril aus Beispiel 5A wurden in 33 ml Tetrahydrofuran/Wasser = 9/1 vorgelegt und mit 5.82 g (42.13 mmol) Kali- umcarbonat versetzt. Bei 0°C wurden langsam 2.32 g (13.59 mmol) Chlorameisens äurebenzylest er zugetropft. Dann ließ man unter Rühren langsam auf Raumtemperatur erwärmen und rührte über Nacht bei Raumtemperatur. Das überstehende Lösungsmittel wurde abdekantiert, der Rückstand zweimal mit je 25 ml T etrahydrofuran verrührt wonach das überstehende Lösungsmittel j eweils abdekantiert wurde. Die vereinigten organischen Phasen wurde eingeengt und das Rohprodukt wurde mittels Kieselgelchromatographie gereinigt (Laufmittel-Gradient: Cyclohexan nach Cyclohexan/Dichlormethan-Gradient 1/1 bis 1/2). Es wurden 2.56 g der Titelverbindung (78 % d. Th.) erhalten.
IX -MS (Methode 2): Rt = 0.89 min
MS (ESpos): m z = 236 (M+H)+
'H-NMR (400 MHz, DMSO-de): δ [ppm] = 1.51 (s, 3H), 1.75 - 1 .91 (m, 2H), 5.08 (s, 2H), 7.28 - 7.42 (m,
5H), 7.96 (br. s, 1H).
Beispiel 7A
e«i-Benzyl-[2-cyan(4,4,4-2H3)butan-2- l]carbamat (Enantiomer A)
Figure imgf000040_0002
2.56 g rac-Benzyl-[2-cyan(4,4,4-2H3)butan-2-yl]carbamat aus Beispiel 6A wurden durch präparative Trennung an der chiralen Phase in die Enantiomere getrennt [Säule: Daicel Chiralcel OJ-H, 5 μπι, 250 x 20 mm, Eluent: 70% iso-Hexan, 30% iso-Propanol, Fluss: 15 ml/min, Temperatur: 47°C, Detektion: 220 um].
Enantiomer A: 1.03 g (>99% ee) R, = 7.11 min [Daicel Chiralcel OJ-H, 250 x 4.6 mm, 5 μπι, Eluent: 70% iso-Hexan, 30% iso-Propanol, Fluss: 1 ml/min, Temperatun 50°C, Detektion: 220 nm].
Bespiel HA
e«/-Benzyl-[2-cyan(4,4,4-2H3)butan-2-yl]carbamat (Enantiomer B)
Figure imgf000041_0001
2.56 g rac-Benzyl-[2-cyan(4,4,4-2H3)butan-2-yl]carbamat aus Beispiel 6A wurden durch präparative Trennung an der chiralen Phase in die Enantiomere getrennt [Säule: Daicel Chiralcel OJ-H, 5 μιη, 250 x 20 mm, Eluent: 70% iso-Hexan, 30% iso-Propanol, Fluss: 15 ml/min, Temperatur: 47°C, Detektion: 220 nm].
Enantiomer B: 0.99 g (>99% ee)
Rj = 8.25 min [Daicel Chiralcel OJ-H, 250 x 4.6 mm, 5 μηι, Eluent: 70% iso-Hexan, 30% iso-Propanol, Fluss: 1 ml/min, Temperatur: 50°C, Detektion: 220 nm].
Beispiel 9A
e«/-Benzyl-[l-amino-2-methyl(4,4,4-2H3)butan-2-yl]carbamat (Enantiomer A)
Figure imgf000041_0002
0.50 g (2.13 mmol) e«i-Benzyl-[2-cyan(4,4,4-2H3)butan-2-yl]carbamat (Enantiomer A) aus Beispiel 7A wurden in 10 ml 7 N Ammoniak-Lösung in Methanol gelöst und unter Argon mit 0.79 g Raney-Nickel (50%ige wässrige Aufschlämmung) versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 3 h im Autoklaven bei 20-30 bar hydriert. Die Reaktionsmischung wurde über Kieselgur abfiltriert, mit Methanol gespült und eingeengt. Es wurden 387 mg (75% d. Th.) der Zielverbindung erhalten, welche ohne weitere Reinigung in die Folgestufe eingesetzt wurde.
LC-MS (Methode 2): Rt = 0.50 min
MS (ESpos): m/z = 240 (M+H)+ Beispiel 10A
e«^Benzyl-[l-amino-2-methyl(4,4,4-2H tan-2-yl]carbamat (Enantiomer B)
Figure imgf000042_0001
0.50 g (2.13 mmol) e«^Benzyl-[2-cyan(4,4,4-~H3)butan-2-yl]carbamat (Enantiomer B) aus Beispiel 8A wurden in 10 ml 7 N Ammoniak-Lösung in Methanol gelöst und unter Argon mit 0.79 g Raney-Nickel (50%ige wässrige Aufschlämmung) versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 3 h im Autoklaven bei 20-30 bar hydriert. Die Reaktionsmischung wurde über Kieselgur abfiltriert, mit Methanol gespült und eingeengt. Es wurden 487 mg (94% d. Th.) der Zielverbindung erhalten, welche ohne weitere Reinigung in die Folgestufe eingesetzt wurde.
LC-MS (Methode 2): Rt = 0.53 min
MS (ESpos): m/z = 240 (M+H)+
Beispiel I IA
rac-2-Amino-2-methyl-4-(trimethylsilyl)butannitril
Figure imgf000042_0002
13.0 g (90.10 mmol) 4-(Trimethylsilyl)butan-2-on [käuflich erhältlich oder synthetisierbar nach R. Acerete et al. Journal of Organic Chemistry 2011, 76, 10129-10139] wurden in 25 ml 7 N Ammoniak in Methanol vorgelegt und bei Raumtemperatur mit 5.83 g (118.93 mmol) Natriumcyanid sowie 6.36 g (118.93 mmol) Ammoniumchlorid versetzt und 3 Stunden unter Rückfluss gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde abgekühlt, und der enthaltene Feststoff wurde ab filtriert. Das Filtrat wurde unter ohne weitere Reinigung in die Folgestufe eingesetzt wurde. Beispiel 12 A
rac-Benzyl-[2-cyan-4-(txirnethylsilyl)butan-2-yl]carbamat
Figure imgf000043_0001
Die Rolllösung von rac-2-Amino-2-methyl-4-(trimethylsilyl)butannitril aus Beispiel 11A wurden in 16 ml
Wasser vorgelegt und mit 37.36 g (270.35 mmol) Kaliumc arbonat versetzt. Bei 0°C wurden langsam 23.06 g (135.18 mmol) Chlorameisensäurebenzylester zugetropft. Dann ließ man unter Rühren langsam auf Raumtemperatur erwärmen und rührte über Nacht bei Raumtemperatur. Das Reaktionsgemisch wurde ab filtriert und der Rückstand wurde mehrmals mit Tetrahydroiuran gewaschen. Das Filtrat wurde eingeengt und das Rohprodukt wurde mittels Kieselgelchromatographie gereinigt (Laufmittel: Cyclohe- xan/Essigsäureethylester = 9/1). Es wurden 11.60 g der Titelverbindung (42 % d. Th. über zwei Stufen) erhalten.
IX -MS (Methode 2): R, = 1.23 min
MS (ESpos): m/z = 305 (M+H)+
Ή-NMR (400 MHz, DMSO-de): δ [ppm] = -0.01 (s, 9H), 0.45 - 0.67 (m, 2H), 1.52 (s, 3H), 1.73 - 1.90 (m, 2H), 2.24 - 2.52 (m, 2H), 5.08 (s, 2H), 7.29 - 7.44 (m, 5H), 7.94 (br. s, 1H).
Beispiel I3A
e«/-Benzyl-[2-cyan-4-(trimethylsilyl)butan-2-yl]carbamat (Enantiomer A)
Figure imgf000043_0002
10.0 g rac-Benzyl-[2-cyan-4-(trimethylsilyl)butan-2-yl]carbamat aus Beispiel 12A wurden durch präpara- tive Trennung an der chiralen Phase in die Enantiomere getrennt [Säule: Daicel Chiralpak AY-H. 5 μπι, 250 x 20 mm, Eluent: 15% Ethanol, 85% iso-Hexan, Fluss: 20 ml/min, Temperatur: 30°C, Detektion: 220 nm].
Enantiomer A: 4.19 g (>99% ee) R, = 5.24 min [Daicel Chiralpak AY-H, 250 x 4.6 mm, 5 μπι, Eluent: 10% Ethanol, 90%> iso-Hexan, Fluss: 1 ml/min, Temperatur: 45°C, Detektion: 220 nmj.
Beispiel 14A
e«i-Benzyl-[2-cyan-4-(trimethylsilyl)butan-2-yl]carbamat (Enantiomer B)
Figure imgf000044_0001
10.0 g rac-Benzyl-[2-cyan-4-(trimethylsilyl)butan-2-yl]carbamat aus Beispiel 12A wurden durch präpara- tive Trennung an der chiralen Phase in die Enantiomere getrennt [Säule: Daicel Chiralpak AY-H, 5 μm, 250 x 20 mm, Eluent: 15% Ethanol, 85% iso-Hexan, Fluss: 20 ml/min, Temperatur: 30°C, Detektion: 220 um]. Enantiomer B: 4.24 g (>99% ee)
R, = 6.89 min [Daicel Chiralpak AY-H, 250 x 4.6 mm, 5 μπι, Eluent: 10% Ethanol, 90% iso-Hexan, Fluss: 1 ml/min, Temperatur: 45°C, Detektion: 220 nmj.
Beispiel ISA
e«/-Benzyl-[ l-amino-2-methyl-4-(trimethylsilyl)butan-2-yl] carbamat (Enantiomer A)
Figure imgf000044_0002
2.0 g (6.57 mmol) e«i-Benzyl-[2-cyan-4-(trimethylsilyl)butan-2-yl]carbamat (Enantiomer A) aus Beispiel 13 A wurden in 31 ml 7 N Ammoniak-Lösung in Methanol gelöst und unter Argon mit 2.44 g Raney- Nickel (50%ige wässrige Aufschlämmung) versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 3 h im Autoklaven bei 20-30 bar hydriert. Die Reaktionsmischung wurde über Kieselgur ab filtriert, mit Methanol gespült und eingeengt. Es wurden 1.80 g (87% d. Th.) der Zielverbindung erhalten, welche ohne weitere Reinigung in die Folge stufe eingesetzt wurde.
LC-MS (Methode 16): Rt = 1.66 min MS (ESpos): m/z = 309 (M+H)+
Beispiel 16A
ewi-Benzyl-[ l-amino-2-methyl-4-(trimethylsilyl)butan-2-yl] carbamat (Enantiomer B)
Figure imgf000045_0001
2.0 g (6.57 mmol) e»i-Benzyl-[2-cyan-4-(trimethylsilyl)butan-2-yl]carbamat (Enantiomer B) aus Beispiel 14A wurden in 31 ml 7 N Ammoniak-Lösung in Methanol gelöst und unter Argon mit 2.44 g Raney- Nickel (50% ige wässrige Aufschlämmung) versetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 3 h im Autoklaven bei 20-30 bar hydriert. Die Reaktionsmischung wurde über Kieselgur abfiltriert, mit Methanol gespült und eingeengt. Es wurden 1.72 g (83 %> d. Th.) der Zielverbindung erhalten, welche ohne weitere Reinigung in die Folgestufe eingesetzt wurde.
LC -MS (Methode 2): Rt = 0.78 min
MS (ESpos): m z = 309 (M+H)+
^'ispicl 17A
ent- zyl- { 1 -[( {7-[(2,6-difluorbenzyl)oxy] -2,5 -dimethylpyrazolo[ l,5-a]pyridin-3 -yl}carbonyl)amino] -2- methyl(4,4,4-2H3)butan-2-yl} carbamat (Enantiomer A)
Figure imgf000045_0002
75 mg (0.19 mmol; Reinheit 84%) 7-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,5-dimethylpyrazolo[l,5-a]pyridin-3- carbonsäure aus Beispiel 4A wurden mit 87 mg (0.23 mmol) HA'T'U und 0.1 ml (0.57 mmol) N,N- Diisopropylethylamin in 0.70 ml DMF vorgelegt und 10 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 60 mg (0.25 mmol) e«?-Benzyl-[l-amino-2-methyl(4,4,4-2H3)butan-2-yl]carbamat (Enantiomer A) aus Beispiel 9A zur Reaktionslösung gegeben und über Nacht bei RT gerührt. Es wurden nochmals 23 mg (0.095 mmol) e« -Benzyi-[l-amino-2-methyl(4,4,4-2H3)butan-2-yl]carbamat (Enantiomer A) hinzugegeben und das Gemisch wurde 1 h bei RT gerührt. Anschließend wurde das Gemisch mit 7 ml Wasser versetzt. Der entstandene Niederschlag wurde ab filtriert und im Hochvakuum getrocknet. Es wurden 111 mg der Zielverbindung (80% d. Th.; Reinheit 76%) erhalten.
LC-MS (Methode 2): Rt = 1.17 min
MS (ESpos): m/z = 554 (M+H)+
e«i-Benzyl- { 1 -[( {7-[(2,6-difluorbenzyl)oxy] -2,5 -dimethylpyrazolo[ 1 ,5-a]pyridin-3 -yl}carbonyl)amino] -2- methyl-4-(trimethylsilyl)butan-2-yl}carbamat Trifluoracetat (Enantiomer A)
Figure imgf000046_0001
75 mg (0.19 mmol; Reinheit 84%) 7-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,5-dimethylpyrazolo[l,5-a]pyridin-3- carbonsäure aus Beispiel 4A wurden mit 94 mg (0.25 mmol) HATU und 99 μΐ (0.57 mmol) N,N- Diisopropylethylamin in 0.62 ml DMF vorgelegt und 20 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 78 mg (0.25 mmol) ) e«i-Benzyl-[l-amino-2-methyl-4-(trimethylsilyl)butan-2-yl]carbamat (Enantiomer A) aus Beispiel 15A zur Reaktionslösung gegeben und über Nacht bei RT gerührt. Anschließend wurde das Gemisch mit 7 ml Wasser versetzt. Der entstandene Niederschlag wurde abfiltriert, mit Aceto- nitril und Wasser verdünnt, mit TFA versetzt und mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: Acetonitril Wasser-Gradient unter Zusatz von 0.1%o TFA). Die Produktfraktionen wurden vereinigt, und eingeengt. Es wurden 70 mg der Zielverbindung (50%> d. Th.) erhalten.
LC-MS (Methode 2): Rt = 1.39 min
MS (ESpos): m/z = 623 ( M-TFA+H ) ' Beispiel 19A
ewi-Benzyl- { 1 -[( {7-[(2,6-difluorbenzyl)oxy] -2,5 -dimethylpyrazolo[ 1 ,5-a]pyridin-3 -yl}carbonyl)amino] -2- methyl-4-(trimethylsilyl)butan-2-yl}carbamat (Enantiomer B)
Figure imgf000047_0001
75 mg (0.19 mmol; Reinheit 84%) 7-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,5-dimethylpyrazolo[l,5-a]pyridin-3- carbonsäure aus Beispiel 4A wurden mit 94 mg (0.25 mmol) HATU und 99 μΐ (0.57 mmol) N,N- Diisopropylethylamin in 0.62 ml DMF vorgelegt und 20 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 78 mg (0.25 mmol) e«i-Benzyl-[l-amino-2-methyl-4-(trimethylsilyl)butan-2-yl]carbamat (Enantiomer B) aus Beispiel 16A zur Reaktionslösung gegeben und 2 h bei RT gerührt. Es wurden nochmals 29 mg (0.095 mmol) e«i-Benzyl-[i -amino-2-methyl-4-(trimethylsilyl)butan-2-yl]carbamat (Enantiomer B) hinzugegeben und das Gemisch wurde 1 h bei RT gerührt. Anschließend wurde das Gemisch mit 7 ml Wasser versetzt. Der entstandene Niederschlag wurde ab filtriert und im Hochvakuum getrocknet. Es wurden 134 mg der Zielverbindung (99% d. TL; Reinheit 88%) erhalten.
Li -MS (Methode 2): Rt = 1.39 min
MS (ESpos): m/z = 623 (M+H)+
Beispiel 20A
rac-2-Amino-2-[2-(difluormethyl)-2H-tetrazol-5-yl]propan- 1 -ol
Figure imgf000047_0002
Die Zielverbindung kann durch Entschützung von 1 - { [tert-Butyl(dimethyl) silyl] oxy } -2 - [2 - (difluormethyl)-2H-tetrazol-5-yl]propan-2-amin (herstellbar analog zu Intermediat 300 in WO2014/084312 aus racemischem Ausgangsmaterial) mit Tetrabutylammoniumfluorid (TBAF) in THF bei Raumtemperatur nach literaturbekannten Methoden hergestellt werden. Ansführniigsbeispiele
Beispiel 1
7-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-N-[(2S)-l-hydroxy-2-(^^
dimethylpyrazolo[ 1 ,5-a]pyridin-3 -carboxamid Trifluoracetat
Figure imgf000048_0001
20 mg (0.05 mmol) 7-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,5-dimethylpyrazolo[ l,5-a]pyridin-3-carbonsäure aus Beispiel 4A wurden mit 21 mg (0.06 mmol) HATU und 70 μΐ (0.40 mmol) Ν,Ν-Diisopropylethylamin in 0.2 ml DM F vorgelegt und 10 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 44 mg (0.15 mmol) (25)-2-Amino-2-(5-methyl- 1 ,3 ,4-thiadiazol-2-yl)propan- 1 -ol (herstellbar analog zu Intermediat 307 in WO2014/084312) zur Reaktionslösung gegeben und 2 h bei RT gerührt. Anschließend wurde das Gemisch 20 min bei 40°C und 1.5 h bei 60°C gerührt. Dann wurde mit Acetonitril und Wasser verdünnt, mit TFA versetzt und mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: Acetonitril/W asser- Gradient unter Zusatz von 0.1% TFA). Die Produktfraktionen wurden vereinigt, und eingeengt. Es wurden 10 mg der Zielverbindung (31% d. Th.) erhalten.
IX -MS (Methode 2): Rt = 0.89 min
MS (ESpos): m z = 488 ( M-T A+H )
TI-NMR (400 MHz, DMSO-de): δ = 1.81 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 2.68 (s, 3H), 3.77 - 3.85 (m, 2H), 5.46 (s, 2H), 6.58 (s, 1H), 7.21 - 7.30 (m, 2H), 7.35 (s, 1H), 7.57 - 7.67 (m, 2H), [weiteres Signal unter Lösungsmittelsignal verborgen]. Beispiel 2
rac-7-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-N-{2-[2-(difluormem^
dimethylpyrazolo[ 1 ,5-a]pyridin-3 -carboxamid
Figure imgf000049_0001
40 mg (0.10 mmol) 7-[(2,6-Difluorbenzyl)oxy]-2,5-dimethylpyrazolo[l,5-a]pyridin-3-carbonsäure aus Beispiel 4A wurden mit 40 mg (0.11 mmol) HATU und 88 μΐ (0.51 mmol) Ν,Ν-Diisopropylethylamin in 0.4 ml DMF vorgelegt und 10 min bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurden 21 mg (0.11 mmol) rac-2-Amino-2-[2-(difluormethyl)-2H-tetrazol-5-yl]propan-l-ol Beispiel 20A zur Reaktionslösung gegeben und 6 h bei 60 °C gerührt. Dann wurde mit Acetonitril und Wasser verdünnt, mit TFA versetzt und mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: Acetonitril/Wasser-Gradient unter Zusatz von 0.1% TFA). Die Produktfraktionen wurden vereinigt und eingeengt. Anschließend wurde der Rückstand in Dichlormethan und wenig Methanol aufgenommen und zweimal mit gesättigter, wässriger Natri- umhydrogencarbonatlösung gewaschen. Die wässrige Phase wurde zweimal mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet, filtriert, eingeengt und lyophilisiert. Es wurden 40 mg der Zielverbindung (74% d. Th.; Reinheit 95%) erhalten.
IX -MS (Methode 2): Rt = 0.98 min
MS (ESpos): m/z = 508 (M+H)+
Ή-NMR (400 MHz, DMSO-de): δ = 1.83 (s, 3H), 2.40 (s, 3H), 3.79 - 3.88 (m, 2H), 5.32 (t, 1H), 5.46 (s, 2H), 6.57 (s, 1H), 7.21 - 7.30 (m, 211), 7.31 (s, 1H), 7.57 - 7.67 (m, 2H), 8.56 (t, 1H), [weiteres Signal un- ter Lösungsmittelsignal verborgen].
Beispiel 3
eK/-N-[2-Amino-2-methyl(4,4,4-2H3)butyl]-7-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,5-dimethylpyrazolo[l,5- a] pyridin- 3 - carboxamid (Enantiomer A)
Figure imgf000050_0001
111 mg (0.15 mmol, Reinheit 76%) e«i-Benzyl-{ l-[({7-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,5- dimethylpyrazolo[l,5-a]pyridin-3-yi}carbonyl)amino]-2-methyl(4,4,4-2H3)butan-2-yl}carbamat (Enanti- omer A) aus Beispiel 17A wurden in 4 ml Ethanol gelöst und unter Argon mit 59 μΐ (0.76 mmol) TFA und 5 mg (0.005 mmol) 10%igem Palladium auf Aktivkohle versetzt und 3.5 Stunden bei Normaldruck hydriert. Die Reaktionslösung wurde mittels Milliporfilter filtriert, mit Ethanol gewaschen und das Filtrat einrotiert. Der Rückstand wurde mit Acetonitril, Wasser und TFA versetzt und mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: AcetonitrilAVasser-Gradient unter Zusatz von 0.1% TFA). Die Produktfraktionen wurden vereinigt und eingeengt. Anschließend wurde der Rückstand in Dichlormethan und wenig Methanol aufgenommen und zweimal mit gesättigter, wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung gewaschen. Die wässrige Phase wurde zweimal mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und eingeengt. Der Rückstand wurde nochmals mittels Dickschichtchromatographie gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/2N Ammoniak in Methanol = 15/1). Es wurden 32 mg der Zielverbindung (50% d. Th.) erhalten. LC-MS (Methode 2): Rt = 0.70 min
MS (ESpos): m/z = 420 (M+H)+
TI-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ = 0.96 (s, 3H), 1.27 - 1.38 (m, 2H), 1.48 (br. s, 2H), 2.39 (s, 3H), 3.10 - 3.22 (m, 2H), 5.46 (s, 2H), 6.55 (s, 1H), 7.20 (t, 1H), 7.23 - 7.29 (m, 2H), 7.39 (s, 1H), 7.58 - 7.67 (m, 1H), [weiteres Signal unter Lösungsmittelsignal verborgen]. Beispiel 4
e«/-N-[2-Amino-2-methyl-4-(trimethylsilyl)butyl]-7-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,5-dimethylpyrazolo[l,5- a] pyridin- 3 - carboxamid (Enantiomer A)
Figure imgf000051_0001
70 mg (0.09 mmol) e«/-Benzyl-{ l-[({7-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,5-dimethylpyrazolo[l,5-a]pyridin^ yl}carbonyl)amino]-2-methyl-4-(trimethylsilyl)butan-2-yl}carbamat Trifluoracetat (Enantiomer A) aus Beispiel 18A wurden in 2.5 ml Ethanol gelöst und unter Argon mit 36 μΐ (0.47 mmol) TFA und 3 mg (0.003 mmol) 10%igem Palladium auf Aktivkohle versetzt und 2 Stunden bei Normaldruck hydriert. Die Reaktionslösung wurde mittels Milliporfilter filtriert, mit Ethanol gewaschen und das Filtrat einrotiert. Der Rückstand wurde mittels Di ckschichtchromatographie gereinigt (Laufmittel: Dichlormethan/ 2N Ammoniak in Methanol = 20/1). Anschließend wurde der Rückstand in Dichlormethan und wenig Methanol aufgenommen und zweimal mit gesättigter, wässriger Natriumhydrogencarbonatlösung gewaschen. Die wäss- rige Phase wurde zweimal mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und eingeengt. Es wurden 30 mg der Zielverbindung (65% d. Th.) erhalten.
LC -MS (Methode 2): Rt = 0.87 min
MS (ESpos): m/z = 489 (M+H)+
S H-NMR (500 MHz, DMSO-d6): δ = -0.04 (s, 9H), 0.43 - 0.57 (m, 2H), 0.96 (s, 3H), 1.25 - 1.37 (m, 2H), 1.85 (br. s, 2H), 2.40 (s, 3H), 3.16 - 3.23 (m, 2H), 5.46 (s, 2H), 6.55 (s, 1H), 7.21 (t, 1H), 7.22 - 7.29 (m, 2H), 7.38 (s, 1H), 7.58 - 7.67 (m, 1H), [weiteres Signal unter Lösungsmittelsignal verborgen].
Beisgie!_5
e«^N-[2-Amino-2-methyl-4-(trimethylsilyl)butyl]-7-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,5-dimethylpyrazolo[l,5- a]pyridin-3-carboxamid (Enantiomer B)
Figure imgf000052_0001
134 mg (0.19 mmol; Reinheit 88%) e«i-Benzyl-{ l-[({7-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,5- dimethylpyrazolo[l,5-a]pyridin-3-yl}carbonyl)amino]-2-methyl-4-(ljimethylsilyl)butan-2-yl}carbamat (Enantiomer B) aus Beispiel 19A wurden in 5 ml Ethanol gelöst und unter Argon mit 73 μΐ (0.95 mmol) TFA und 6 mg (0.006 mmol) 10%igem Palladium auf Aktivkohle versetzt und 5 Stunden bei Normaldruck hydriert. Die Reaktionslösung wurde mittels Milliporfilter filtriert, mit Ethanol gewaschen und das Filtrat einrotiert. Der Rückstand wurde mit Acetonitril, Wasser und TFA versetzt und mittels präparativer HPLC gereinigt (RP18 Säule, Laufmittel: Acetonitril/Wasser-Gradient unter Zusatz von 0.1 % TFA). Die Produktfraktionen wurden vereinigt und eingeengt. Anschließend wurde der Rückstand in Dichlormethan und wenig Methanol aufgenommen und zweimal mit gesättigter, wässriger Natriumhydrogencarbonatlö- sung gewaschen. Die wässrige Phase wurde zweimal mit Dichlormethan extrahiert. Die vereinigten organischen Phasen wurden über Natriumsulfat getrocknet, filtriert und eingeengt. Es wurden 58 mg der Zielverbindung (62% d. Th.) erhalten.
LC -MS (Methode 2): R, = 0.84 min
MS (ESpos): m/z = 489 (M+H)+
ΐ-NMR (500 MHz, DMSO-de): δ = -0.04 (s, 9H), 0.43 - 0.57 (m, 2H), 0.96 (s, 3H), 1.25 - 1.37 (m, 2H), 1.42 (br. s, 2H), 2.40 (s, 3H), 3.15 - 3.24 (m, 2H), 5.45 (s, 2H), 6.55 (s, 1H), 7.20 (t, 1H), 7.22 - 7.29 (m, 2H), 7.38 (s, 1H), 7.59 - 7.67 (m, 1H), [weiteres Signal unter Lösungsmittelsignal verborgen]. B. Bewertung der pharmakologischen Wirksamkeit
Es werden die folgenden Abkürzungen verwendet:
ATP Adenosintriphosphat
Brij35 Polyoxy ethyl en(23 ) laurylether
BSA Rinderserumalbumin
OTT Dithiothreitol
TEA Triethanolamin
Die pharmakologische Wirkung der erfindungsgemäß en Verbindungen kann in folgenden Assays ge- zeigt werden:
B-l. Vermessiing von sGC Enzymaktivität mittels PPi Nachweis
Lösliche Guanylylcyclase (sGC) setzt unter Stimulation GTP zu cGMP und Pyrophosphat (PPi) um. PPi wird mit Hilfe des in WO 2008/061626 beschriebenen Verfahrens nachgewiesen. Das im Test entstehende Signal nimmt mit fortschreitender Umsetzung zu und dient als Maß für die sGC-Enzymaktivität. Mit Hilfe einer PPi Referenzkurve kann das Enzym in bekannter Weise charakterisiert werden, z.B. hinsichtlich Umsatzrate, Stimulierbarkeit oder Michaelis Konstante.
Durchführung des Tests
Zur Durchführung des Tests wurden 29 μΕ Enzymlösung (0-10 nM lösliche Guanylylcyclase (hergestellt nach Hönicka et al., Journal of Molecular Medicine 77(1999)14-23), in 50 mM TEA, 2 mM Mag- nesiumchlorid, 0.1 % BSA (FraktionV), 0.005% Brij 35, pH 7.5) in die Mikroplatte vorgelegt und 1 iL der Stimulatorlösung (0-10 μΜ 3-Morpholinosydnonimine, SIN-1, Merck in DMSO) hinzugegeben. Es wurde 10 min bei RT inkubiert. Anschließend wurden 20 μΐ Detektionsmix (1,2 nM Firefly Luciferase {Photinus pyralis Luziferase, Promega), 29 μΜ Dehydro-Luziferin (hergestellt nach Bitler & McElroy, Arch. Biochem. Biophys. 72 (1957) 358), 122 μΜ Luziferin (Promega), 153 uM ATP (Sigma) und 0,4 mM D IT ( Sigma) in 50 mM TEA, 2 mM Magnesiumchlorid, 0.1 % BSA (Fraktion V), 0.005% Brij 35, pH 7,5) zugegeben. Die Enzymreaktion wurde durch Zugabe von 20 μΐ Substratlösung (1.25 mM Gua- nosin-5 ' -triphosphat (Sigma) in 50 mM TEA, 2 mM Magnesiumchlorid, 0.1% BSA (Fraktion V), 0.005% Brij 35, pH 7.5) gestartet und kontinuierlich luminometrisch vermessen. B-2. Wirkung an rekombinanter Giianvlatcvclase-Keporterzclllinie
Die zelluläre Wirkung der erfindungsgemäßen Verbindungen wird an einer rekombinanten Guanylat- cyclase-Reporterzelllinie, wie in F. Wunder et al., Anal. Biochem. 339, 104-112 (2005) beschrieben, bestimmt.
Repräsentative MEC-Werte (MEC = minimal effektive Konzentration) für die erfindungsgemäßen Verbindungen sind in der nachstehenden Tabelle wiedergegeben (zum Teil als Mittelwerte aus Einzelbestimmungen):
Tabelle A;
Figure imgf000054_0002
Figure imgf000054_0001
B-3. Gefäfirelaxierende Wirkung in vitro
Kaninchen werden durch Nacken schlag betäubt und entblutet. Die Aorta wird entnommen, von anhaftendem Gewebe befreit, in 1.5 mm breite Ringe geteilt und einzeln unter einer Vorspannung in 5 ml- Organbäder mit 37°C warmer, Carbogen-begaster Krebs-Henseleit-Lösung folgender Zusammensetzung gebracht (jeweils mM): Natriumchlorid: 119; Kaliumchlorid: 4.8; Calciumchlorid-Dihydrat: 1; Magnesiumsulfat-Heptahydrat: 1.4; Kaliumdihydrogenphosphat: 1.2; Natriumhydrogencarbonat: 25; Glucose: 10. Die Kontraktionskraft wird mit Statham UC2-Zellen erfasst, verstärkt und über A/D- Wandler (DAS- 1802 HC, Keithley Instruments München) digitalisiert sowie parallel auf Linienschreiber registriert. Zur Erzeugung einer Kontraktion wird Phenylephrin dem Bad kumulativ in ansteigender Konzentration zugesetzt. Nach mehreren Kontrollzyklen wird die zu untersuchende Substanz in jedem weiteren Durchgang in jeweils steigender Dosierung zugesetzt und die Höhe der Kontraktion mit der Höhe der im letzten Vordurchgang erreichten Kontraktion verglichen. Daraus wird die Konzentration errechnet, die erforderlich ist, um die Höhe des Kontrollwertes um 50% zu reduzieren (ICso-Wert). Das Standardapplikationsvolumen beträgt 5 μί, der DMSO-Anteil in der Badlösung entspricht 0.1%.
B-4. Blutdruckme sun an narkotisierten Ratten Männliche Wistar-Ratten mit einem Körpergewicht von 300 - 350 g werden mit Thiopental (100 mg/kg i.p.) anästhesiert. Nach der Tracheotomie wird in die Femoralarterie ein Katheter zur Blutdruckmessung eingeführt. Die zu prüfenden Substanzen werden als Lösungen entweder oral mittels Schlundsonde oder über die Femoralvene intravenös verabreicht (Stasch et al. Br. .1. Pharmacol. 2002; 135: 344-355). B-5. Radiotelemetrische Blutdruckmessung an wachen, spontan hvpertensiven Ratten
Für die im Folgenden beschriebene Blutdruckmessung an wachen Ratten wird ein im Handel erhältliches Telemetriesystem der Firma DATA SCIENCES INTERNATIONAL DSI, USA eingesetzt.
Das System besteht aus 3 Hauptkomponenten: Implantierbare Sender (Physiotel® Telemetrietransmitter)
Empfänger (Physiotel® Receiver), die über einen Multiplexer (DSI Data Exchange Matrix ) mit einem
Datenakquisitionscomputer verbunden sind.
Die Telemetrieanlage ermöglicht eine kontinuierliche Erfassung von Blutdruck Herzfrequenz und Körperbewegung an wachen Tieren in ihrem gewohnten Lebensraum. Tiermaterial
Die Untersuchungen werden an ausgewachsenen weiblichen spontan hypertensiven Ratten ( SU R Okamoto) mit einem Körpergewicht von >200 g durchgeführt. SHR/NCrl von Okamoto Kyoto School of Medicine, 1963 wurden aus männlichen Wistar Kyoto Ratten mit stark erhöhtem Blutdruck und weiblichen mit leicht erhöhtem Blutdruck gekreuzt und in der F13 an die U.S. National Institutes of Health abgegeben.
Die Versuchstiere werden nach S enderimplantation einzeln in Makroion - Käfigen Typ 3 gehalten. Sie haben freien Zugang zu Standardfutter und Wasser.
Der Tag - Nacht - Rhythmus im Versuchslabor wird per Raumbeleuchtung um 6:00 Uhr morgens und um 19:00 Uhr abends gewechselt. S enderimpl ant ation
Die eingesetzten Telemetriesender TAI 1 PA - C40 werden den Versuchstieren mindestens 14 Tage vor dem ersten Versuchseinsatz unter aseptischen Bedingungen chirurgisch implantiert. Die so instrumentierten Tiere sind nach Abheilen der Wunde und Einwachsen des Implantats wiederholt einsetzbar.
Zur Implantation werden die nüchternen Tiere mit Pentobabital (Nembutal, Sanofi: 50mg/kg i.p. ) nar- kotisiert und an der Bauchseite weiträumig rasiert und desinfiziert. Nach Eröffnung des Bauchraumes entlang der Linea alba wird der flüssigkeitsgefüllte Meßkatheter des Systems oberhalb der Bifurcation nach cranial in die Aorta descendens eingesetzt und mit Gewebekleber (VetBonD TM, 3M) befestigt. Das Sendergehäuse wird intraperitoneal an der Bauchwandmuskulatur fixiert und die Wunde wird schichtweise verschlossen. Postoperativ wird zur Infektionsprophylaxe ein Antibiotikum verabreicht (Tardomyocel COMP Bayer lml/kg s.c.)
Substanzen und Lösungen
Wenn nicht anders beschrieben werden die zu untersuchenden Substanzen jeweils einer Gruppe von Tieren (n = 6) per Schlundsonde oral verabreicht. Entsprechend einem Applikationsvolumen von 5 ml/kg Körpergewicht werden die Testsubstanzen in geeigneten Lösungsmittelgemischen gelöst oder in 0.5% iger Tylose suspendiert.
Eine Lösungsmittel- behandelte Gruppe von Tieren wird als Kontrolle eingesetzt. Versuchsablauf Die vorhandene Telemetrie - Meßeinrichtung ist für 24 Tiere konfiguriert. Jeder Versuch wird unter einer Versuchsnummer registiert (VJahr Monat Tag).
Den in der Anlage lebenden instrumentierten Ratten ist jeweils eine eigene Empfangsantenne zugeordnet (1010 Receiver, DSI ).
Die implantierten Sender sind über einen eingebauten Magnetschalter von außen aktivierbar. Sie werden bei Versuchsvorlauf auf Sendung geschaltet. Die ausgestrahlten Signale können durch ein Datenakquisi- tionssystem (Dataquest TM A.R.T. for WINDOWS, DSI ) online erfasst und entsprechend aufgearbeitet werden. Die Ablage der Daten erfolgt j eweils in einem hierfür eröffneten Ordner der die Versuchsnummer trägt.
Im Standardablauf werden über j e 10 Sekunden Dauer gemessen Systolischer Blutdruck (SBP) Diastolischer Blutdruck (DBP) Arterieller Mitteldruck (MAP) Herzfrequenz (HR) Aktivität (ACT) Die Messwert erfassung wird rechnergesteuert in 5 Minuten Abständen wiederholt. Die als Absolutwert erhobenen Quell daten werden im Diagramm mit dem aktuell gemessenen B arometerdruck (Ambient Pressure Reference Monitor; APR-1 ) korrigiert und in Einzeldaten abgelegt. Weitere technische Details sind der umfangreichen Dokumentation der Herstellerfirma (DSI) zu entnehmen. Wenn nicht anders beschrieben erfolgt die Verabreichung der Prüfsubstanzen am Versuchstag um 9.00 Uhr. Im Anschluss an die Applikation werden die oben beschriebenen Parameter 24 Stunden gemessen.
Auswertung
Nach Versuchsende werden die erhobenen Einzeldaten mit der Analysis- Software (DATAQUEST TM A. R.T. TM ANALYSIS) sortiert. Als Leerwert werden hier 2 Stunden vor Applikation angenommen, so dass der selektierte Datensatz den Zeitraum von 7:00 Uhr am Versuchstag bis 9:00 Uhr am Folgetag umfasst.
Die Daten werden über eine voreinstellbare Zeit durch Mittelwertbestimmung geglättet (15 Minuten Average) und als Textdatei auf einen Datenträger übertragen. Die so vorsortierten und komprimierten Messwerte werden in Excel-Vorlagen übertragen und tabellarisch dargestellt. Die Ablage der erhobenen Daten erfolgt pro Versuchs tag in einem eigenen Ordner, der die Versuchsnummer trägt. Ergebnisse und Versuchsprotokolle werden in Papierform nach Nummern sortiert in Ordnern abgelegt.
Literatur:
Klaus Witte, Kai Hu, Johanna Swiatek, Claudia Müssig, Georg Ertl and Björn Lemmer: Experimental heart failure in rats: effects on cardiovascular circadian rhythms and on myocardial ß-adrenergic signal- ing. Cardiovasc Res 47 (2): 203-405, 2000; Kozo Okamoto: Spontaneous hypertension in rats. Int Rev Exp Pathol 7: 227- 270, 1969; Maarten van den Buuse: Circadian Rhythms of Blood Pressure, Heart Rate, and Locomotor Activity in Spontaneously Hypertensive Rats as Measured With Radio-Telemetry. Physiology & Behavior 55(4): 783-787, 1994.
B-6. Bestimmung pharmakokinetischer Kenngr lk'ii nach intravenöser und oraler Gabe
Die pharmakokinetischen Parameter der erfindungsgemäß en Verbindungen werden in männlichen CD- 1 -Mäusen, männlichen Wistar-Ratten und weiblichen Beagle-Hunden bestimmt. Die intravenöse Gabe erfolgt bei Mäusen und Ratten mittels einer speziesspezifischen Plasma/DMSO-Formulierung und bei Hunden mittels einer Wasser/PEG400/Ethanol-Formulierung. Die orale Gabe der gelösten Substanz mittels Schlundsonde wird in allen Spezies basierend auf einer Was ser/PEG400/Ethanol -Formulierung durchgeführt. Den Ratten wird zur vereinfachten Blutabnahme vor der Substanzgabe ein Silikonkatheter in die rechte Vena jugularis externa gelegt. Die Operation erfolgt mindestens einen Tag vor dem Versuch unter Isofluran-Narkose und unter Gabe eines Analgetikums (Atropin/'Rimadyl (3/1) 0.1 mL s.c). Die Blutabnahme (in der Regel mehr als 10 Zeitpunkte) erfolgt in einem Zeitfenster, welches terminale Zeitpunkte von mindestens 24 bis maximal 72 Stunden nach Substanzgabe beinhaltet. Das Blut wird bei der Entnahme in heparmisierte Röhrchen geleitet. So dann wird mittels Zentrifugation das Blutplasma gewonnen und gegebenenfalls bis zur weiteren Bearbeitung bei -20°C gelagert. Den Proben der erfindungsgemäßen Verbindungen, Kalibrierproben und Qualifier wird ein interner Standard zugesetzt (dies kann auch eine chemisch nicht verwandte Substanz sein) und es folgt eine Proteinfällung mittels Acetonitril im Übers chuss. Nach Zugabe einer Puffer-Lösung, die an die IX - Bedingungen angepasst ist, und folgendem Vortexen wird bei 1000 g zentrifugiert. Der Überstand wird mittels LC-MS/MS unter Verwendung von C18-reversed-phase-Säulen und variablen Eluenten- Gemischen vermessen. Die Quantifizierung der Substanzen erfolgt anhand der Peakhöhen oder -flächen aus extrahierten Ionenchromatogrammen spezifischer selected ion monitoring-Experimente .
Aus den ermittelten Plasmakonzentration-Zeit- Verläufen werden die pharmakokinetischen Kenngrößen wie AUC, Cmax, ti/2 (terminale Halbwertszeit), F (Bioverfügbarkeit), MRT (Mean Residence Time) und CL (Clearance) mittels eines validierten pharmakokinetischen Rechenprogramms berechnet.
Da die Substanzquantifizierung in Plasma durchgeführt wird, muss die Blut/Plasma-Verteilung der Substanz bestimmt werden, um die pharmakokinetischen Parameter entsprechend anpassen zu können. Dazu wird eine definierte Menge Substanz in heparinisiertem Vollblut der entsprechenden Spezies für 20 min im Taumelrollenmischer inkubiert. Nach Zentrifugation bei 1000g wird die Konzentration im Plasma gemessen (mittels LC-MS/MS; s.o.) und durch Quotientenbildung der CBiut/Cpiasma-Wert ermittelt.
B-7. Metabqlismus-Untersuchuiiß
Zur Bestimmung des Metabolismus-Profils der erfindungsgemäßen Verbindungen werden diese mit re- kombinanten humanen Cytochrom P450 (CYP) Enzymen, Lebermikrosomen oder mit primären frischen Hepatozyten verschiedener Tierspezies (z.B. Ratte, Hund) als auch humanen Ursprungs inkubiert, um Informationen über einen möglichst kompletten hepatischen Phase I- und Phase II-Metabolismus sowie über die am Metabolismus beteiligten Enzyme zu erhalten und zu vergleichen.
Die erfindungsgemäß en Verbindungen wurden mit einer Konzentration von etwa 0.1-10 μΜ inkubiert. Da/u wurden Stammlösungen der erfindungsgemäßen Verbindungen mit einer Konzentration von 0.01- 1 mM in Acetonitril hergestellt, und dann mit einer 1 : 100 Verdünnung in den Inkubationsansatz pipettiert. Die Lebermikrosomen und rekombinanten Enzyme wurden in 50 mM Kaliumphosphatpuffer pH 7.4 mit und ohne NADPH-generierendem System, bestehend aus 1 mM NA DP ' , 10 mM Glucose-6- phosphat und 1 Unit Glucose-6-phosphat Dehydrogenase, bei 37°C inkubiert. Primäre Hepatozyten wurden in Suspension in Williams E Medium ebenfalls bei 37°C inkubiert. Nach einer Inkubationszeit von 0 - 4h wurden die Inkubationsansätze mit Acetonitril abgestoppt (Endkonzentration ca. 30%) und das Protein bei ca. 15000 x g abzentrifugiert. Die so abgestoppten Proben wurden entweder direkt analysiert oder bis zur Analyse bei -20°C gelagert. Die Analyse erfolgt mittels Hochleistungsflüssigkeits-Chromatographie mit Ultraviolett- und massen- spektrometrischer Detektion (HPLC-UV-MS/MS). Dazu werden die Überstände der Inkubationsproben mit geeigneten C 18-reversed-phase-Säulen und variablen Eluenten-Gemischen aus Acetonitril und 10 TII M wässriger Ammoniumformiat-Lösung oder 0.05 % Ameisensäure chromatographiert. Die UV- Chromatogramme in Verbindung mit massenspektrometrischen Daten dienen zur Identifizierung, Strukturaufklärung und quantitativen Abschätzung der Metabolite, und der quantitativen metabolischen Abnahme der erfindungsgemäßen Verbindung in den Inkubationsansätzen.
B-8. Caeo-2 Permeabilitäts-Test
Die Permeabilität einer Testsubstanz wurde mit Hilfe der Caco-2 Zelllinie, einem etablierten in vitro Modell für Permeabilitätsvorhersagen an der gastrointestinalen Barriere, bestimmt (Artursson, P. and Karlsson, J. (1991). Correlation between oral drug absorption in humans and apparent drug permeability coefficients in human intestinal epithelial (Caco-2) cells. Biochem. Biophys.175 (3), 880-885). Die Caco-2 Zellen (ACC No. 169, DSMZ, Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen, Braun schweig, Deutschland) wurden in 24-Well Platen mit Einsatz ausgesät und 14 bis 16 Tage kulti- viert. Für die Permeabilitätsstudien wurde die Testsubstanz in DMSO gelöst und mit Transportpuffer (Hanks Buffered Salt Solution, Gibco/Invitrogen, mit 19.9 niM Glukose und 9.8 mM HEPES) auf die finale Testkonzentration verdünnt. Um die Permeabilität von apikal nach basolateral (PappA-B) der Testsubstanz zu bestimmen, wurde die Lösung mit der Testsubstanz auf die apikale Seite des Caco-2 Zellmonolayers gegeben und Transportpuffer auf die basolaterale Seite. Um die Permeabilität von baso- lateral nach apikal (PappB-A) der Testsubstanz zu bestimmen, wurde die Lösung mit der Testsubstanz auf die basolaterale Seite des Caco-2 Zellmonolayers gegeben und Transportpuffer auf die apikale Seite. Zu Beginn des Experiments wurden Proben aus dem jeweiligen Donor-Kompartiment genommen, um die Massenbilanz sicher zu stellen. Nach einer Inkubation von zwei Stunden bei 37° C wurden Proben aus beiden Kompartimenten genommen. Die Proben wurden mittels LC-MS/MS analysiert und die ap- parenten Permeabilitätskoeffizienten (PapP) berechnet. Die Permeabilität von Lucifer Yellow wurde für jeden Zellmonolayer bestimmt, um die Integrität der Zellschicht sicher zu stellen. Die Permeabilität von Atenolol (Marker für niedrige Permeabilität) und Sulfasalazin (Marker für aktive Exkretion) wurde in jedem Testlauf als Qualitätskontrolle mitbestimmt.
B-9. hERG Kaliumstrom Assay
Der sogenannte hERG (human ether-a-go-go related gene) Kaliumstrom trägt wesentlich zur Repolari- sierung des humanen kardialen Aktionspotentials bei (Scheel et al., 2011). Eine Inhibition dieses Stroms durch Pharmaka kann in seltenen Fällen potentiell letale Herzrhythmusstörungen zur Folge haben, und wird deshalb frühzeitig während der Arzneimittel entwi cklung untersucht.
Der hier verwendete funktionelle hERG Assay basiert auf einer recombinanten HEK293 Zell-Linie, die das KCNH2(HERG)-Gen stabil exprimiert (Zhou et al., 1998). Diese Zellen werden mittels der "whole-cell voltage-clamp" Technik (Hamill et al., 1981) in einem automatisierten System (Patchli- ner™; Nanion, München, D) untersucht, welches die Membranspannung kontrolliert und den hERG Kalium- Strom bei Zimmertemperatur misst. Die PatchControlHT™ Software (Nanion) steuert Patchli- ner System, Datenerfassung und Datenanalyse. Die Spannungskontrolle erfolgt durch 2 EPC-10 quadro Verstärker unter Kontrolle der PatchMasterPro™ Software (beide: HEKA Elektronik, Lambrecht, D). NPC-16 Chips mit mittlerem Widerstand (~2 ΜΩ; Nanion) dienen als planares Substrat für die Voltage-Clamp Experimente.
NPC-16 Chips werden mit intra- und extrazellulärer Lösung (vgl. Himmel, 2007) sowie mit Zellsuspension befüllt. Nach Bildung eines Giga-Ohm-Seals und Herstellen des Ganzzell-Modus (einschliess- lieh mehrerer automatisierter Qualitätskontrollschritte) wird die Zellmembran auf das Haltepotential - 80 mV geklemmt. Das nachfolgende Spannungsklemm- Protokoll ändert die Kommandospannung auf +20 mV (Dauer 1000 ms), -120 mV (Dauer 500 ms), und zurück zum Haltepotential -80 mV; dies wird alle 12 s wiederholt. Nach einer initialen Stabilisierungsphase (ca 5-6 Minuten) wird Testsubstanzlösung in aufsteigenden Konzentrationen (z.B. 0.1, 1, und 10 μιηοΙ/L) zupipettiert (Exposition ca 5-6 Minuten pro Konzentration), gefolgt von mehreren Auswaschschritten.
Die Amplitude des einwärtsgerichteten "Taü"-Stroms, der durch eine Potentialänderung von +20 mV auf -120 mV erzeugt wird, dient zur Quantifizierung des hERG Kaliumstroms, und wird als Funktion der Zeit dargestellt (IgorPro™ Software). Die Stromamplitude am Ende verschiedener Zeitabschnitte (z.B. Stabilisierungsphase vor Testsubstanz, erste/zweite/ dritte Konzentration Testsubstanz) dient zur Erstellung einer Konzentrations- Wirkungs-Kurve, aus der die halbmaximale Hemmkonzentration IC50 der Testsubstanz errechnet wird.
Hamill OP, Marty A, Neher E, Sakmann B, Sigworth FI. Improved patch-clamp techniques for high- resolution current recording from cells and cell-free membrane patches. Pfluegers Arch 1981 ; 391 :85-100.
Himmel HM. Suitability of commonly used excipients for electrophysiological in-vitro safety pharma- cology assessment of effects on hERG potassium current and on rabbit Purkinje fiber action Potential. J Pharmacol Toxicol Methods 2007; 56: 145-158.
Scheel O, Himmel I I. Rascher-Eggstein G, Knott T. Introduction of a modular automated voltage- clamp platform and its correlation with manual human ether-a-go-go related gene voltage- clamp data. Assay Drag Dev Technol 2011; 9:600-607.
Zhou ZF, Gong Q, Ye B, Fan Z, Makielski JC, Robertson GA, January CT. Properties of hERG Channels stably expressed in HEK293 cells studied at physiological temperature. Biophys J 1998; 74:230-241.

Claims

Patentansprüche
1. Verbindung der Formel (I)
Figure imgf000061_0001
in welcher
R1 für eine Gruppe der Formel
Figure imgf000061_0002
steht, wobei
* für die Anknüpfstelle an das Stickstoffatom steht,
R für Methyl oder Cylcopropyl steht, sowie ihre iV-Oxide, Salze, Solvate, Salze der A-Oxide und Solvate der A-Oxide und Salze.
2. Verbindung der Formel (I) nach Anspruch 1 , in welcher
Figure imgf000062_0001
steht, wobei
* für die Anknüpfstelle an das Stickstoff atom steht,
R2 für Methyl steht, sowie ihre A'-Oxide, Salze, Solvate, Salze der yV-Oxide und Solvate der N-Oxide und Salze.
Verbindung gemäß Anspruch 1 oder 2 mit dem systematischen Namen eni- Difluorbenzyl)oxy]-N-[(2 )-l-hydroxy-2-(5-methyl-l,
3,
4-thiadiazol-2-yl)propan-2-yl]-2,5- dimethylpyr azolo [1,5- ajpyridin- 3 - carboxamid und der Strukturformel
Figure imgf000062_0002
sowie ihre Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze. Verbindung gemäß Anspruch 1 oder 2 mit dem systematischen Namen rac- Difluorbenzyl)oxy]-N- {2-[2-(difluormethyl)-2H-tetrazol-5-yl] -1 -hydroxypropan-2-yl} -2,5 dimethylpyrazolo[ 1 ,5-a]pyridin-3 -carboxamid und der Strukturformel
Figure imgf000063_0001
sowie ihre Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
5. Verbindung gemäß Anspruch 1 oder 2 mit dem systematischen Namen e»i-N-[2-Amino-2- methyl(4,4,4-2H3)butyl]-7-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,5-dimethylpyrazolo-[l,5-a]pyridin-3- carboxamid (Enantiomer A) und der Strukturformel
Figure imgf000063_0002
sowie ihre Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
6. Verbindung gemäß Anspruch 1 oder 2 mit dem systematischen Namen e«i-N-[2-Amino-2- methyl-4-(trimethylsilyl)butyl]-7-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,5-dimethyl-pyrazolo[l,5-a]pyridin- 3 -carboxamid (Enantiomer A) und der Strukturformel
Figure imgf000064_0001
sowie ihre Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
7. Verbindung gemäß Anspruch 1 oder 2 mit dem systematischen Namen eK/-N-[2-Amino-2- methyl-4-(trimethylsilyl)butyl]-7-[(2,6-difluorbenzyl)oxy]-2,5-dimethyl-pyrazolo[l,5-a]pyridin- 3-carboxamid (Enantiom r B) und der Strukturformel
Figure imgf000064_0002
sowie ihre Salze, ihrer Solvate oder der Solvate ihrer Salze.
8. Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der Formel (I), wie in den Ansprüchen 1 bis 7 definiert, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung der Formel (II)
Figure imgf000065_0001
in welcher R die oben angegebene Bedeutung hat und
T1 für (Ci-C4)-Alkyl oder Benzyl steht,
in einem inerten Lösungsmittel in Gegenwart einer geeigneten Base oder Säure zu einer Carbon- säure der Formel (III)
Figure imgf000065_0002
in welcher R2 die oben angegebene Bedeutung hat,
umsetzt und diese in der Folge in einem inerten Lösungsmittel unter Amidkupplungsbedingungen mit einem Amin der Formel (IV- A), (IV-B), (IV-C) oder (IV-D)
Figure imgf000066_0001
(IV-A) (IV-B)
Figure imgf000066_0002
(IV-C) (IV-D), in welchem R3 für eine Amino- S chutzgruppe , wie beispielsweise tert.-Butoxycarbonyl, Benzy- loxycarbonyl oder Benzyl steht, umsetzt, anschliessend gegebenenfalls vorhandene Schutzgruppen abspaltet, und die resultierenden Verbindungen der Formel (I) gegebenenfalls mit den entsprechenden (i) Lösungsmitteln und/oder (ii) Säuren oder Basen in ihre Solvate, Salze und/oder Solvate der Salze überführt.
9. Verbindung, wie in einem der Ansprüche 1 bis 7 definiert, zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Krankheiten.
10. Verwendung einer Verbindung der Formel (I), wie in den Ansprüchen 1 bis 7 definiert, zur Herstellung eines Arzneimittels zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Herzinsuffizienz, Angina pectoris, Hypertonie, pulmonaler Hypertonie, Ischämien, Gefäßerkrankungen, Niereninsuffizienz, thrombo embolischen Erkrankungen, fibrotischen Erkrankungen, Arteriosklerose, Demenzerkrankungen und erektiler Dysfunktion.
11. Arzneimittel enthaltend eine Verbindung, wie in einem der Ansprüche 1 bis 7 definiert, in Kombination mit einem oder mehreren inerten, nicht-toxischen, pharmazeutisch geeigneten Hilfsstoffen.
12. Arzneimittel enthaltend eine Verbindung, wie in einem der Ansprüche 1 bis 7 definiert, in Kombination mit einem weiteren Wirkstoff ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus organischen Nitraten, NO-Donatoren, cGMP-PDE-Inhibitoren, antithrombotisch wirkenden Mitteln, den Blutdruck senkenden Mitteln sowie den Fettstoffwechsel verändernden Mitteln.
13. Arzneimittel nach Anspruch 11 oder 12 zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Herzinsuffizienz, Angina pectoris, Hypertonie, pulmonaler Hypertonie, Ischämien, Gefäßerkrankungen, Niereninsuffizienz, thromboembolis chen Erkrankungen, fibrotischen Erkrankungen, Arteriosklerose, Demenzerkrankungen und erektiler Dysfunktion.
14. Verfahren zur Behandlung und/oder Prophylaxe von Herzinsuffizienz, Angina pectoris, Hypertonie, pulmonaler Hypertonie, Ischämien, Gefäßerkrankungen, Niereninsuffizienz, thromboembolischen Erkrankungen, Arteriosklerose, Demenzerkrankungen und erektiler Dysfunktion bei Menschen und Tieren unter Verwendung einer wirksamen Menge mindestens einer Verbindung der Formel (I), wie in den Ansprüchen 1 bis 7 definiert, oder eines Arzneimittels, wie in einem der Ansprüche 11 bis 13 definiert.
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