Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

WO2016056773A2 - L-글루타민을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 l-글루타민 생산방법 - Google Patents

L-글루타민을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 l-글루타민 생산방법 Download PDF

Info

Publication number
WO2016056773A2
WO2016056773A2 PCT/KR2015/009909 KR2015009909W WO2016056773A2 WO 2016056773 A2 WO2016056773 A2 WO 2016056773A2 KR 2015009909 W KR2015009909 W KR 2015009909W WO 2016056773 A2 WO2016056773 A2 WO 2016056773A2
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
glutamine
corynebacterium glutamicum
producing
medium
mutant
Prior art date
Application number
PCT/KR2015/009909
Other languages
English (en)
French (fr)
Other versions
WO2016056773A3 (ko
Inventor
이진남
백승희
성진석
송태호
우하동
이경창
장재우
Original Assignee
씨제이제일제당 (주)
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 씨제이제일제당 (주) filed Critical 씨제이제일제당 (주)
Priority to MYPI2017000437A priority Critical patent/MY182673A/en
Priority to EP15848984.9A priority patent/EP3205714B1/en
Priority to AU2015328946A priority patent/AU2015328946B2/en
Priority to JP2017517032A priority patent/JP6483253B2/ja
Priority to RU2017109400A priority patent/RU2665830C1/ru
Priority to CA2963926A priority patent/CA2963926C/en
Priority to CN201580055019.9A priority patent/CN107208038A/zh
Priority to US15/515,744 priority patent/US10023888B2/en
Priority to ES15848984T priority patent/ES2817933T3/es
Publication of WO2016056773A2 publication Critical patent/WO2016056773A2/ko
Publication of WO2016056773A3 publication Critical patent/WO2016056773A3/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/24—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
    • C07K14/245—Escherichia (G)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/14—Glutamic acid; Glutamine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/15—Corynebacterium
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/8215—Microorganisms
    • Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
    • Y10S435/843—Corynebacterium

Definitions

  • the present invention relates to a microorganism producing L-glutamine and a method of producing L-glutamine using the same.
  • L-glutamine is an amino acid widely used in medicines, cosmetics, health foods, etc., and has mainly produced L-glutamine by using microorganisms resistant to or susceptible to compounds.
  • microorganisms resistant to or susceptible to compounds for example, sulfaguanidine resistant strains (Japanese Patent Laid-Open No. 1978-17675), Azaserine resistant microorganisms (Japanese Patent Laid-Open No. 1980-148094), penicillin sensitive microorganisms (Japanese Patent Laid-Open No. 1992-088994), tyrosine- Glutamic acid (tyr-glu) resistant strains (Japanese Patent Laid-Open No. 1990-186994) and the like have been used.
  • the inventors of the present invention while conducting research to develop strains with improved production capacity of L-glutamine, obtained mutant strains resistant to high concentrations of L-glutamine, and the mutant strains obtained therefrom have high yields of L-glutamine.
  • the present invention was completed by confirming to produce.
  • Another object of the present invention to provide a method for producing L- glutamine using the Corynebacterium glutamicum mutant.
  • Corynebacterium glutamicum (Corynebacterium glutamicum) resistant to L- glutamine, and provides a Corynebacterium glutamicum mutant producing L- glutamine.
  • L-glutamine is a kind of amino acid constituting the protein, which is a monoamide of glutamic acid, and refers to an L-amino acid having a chemical formula of H2NCO-CH2CH2CH (NH2) COOH.
  • the term "resistance to L-glutamine” refers to a property in which microorganisms are viable in the presence of high concentrations of L-glutamine, or that the activity of producing L-glutamine is maintained or increased.
  • the mutant strain may be Corynebacterium glutamicum KCCM 11553P or Corynebacterium glutamicum KCCM11554P.
  • the mutant strain may be resistant to high concentrations of L-glutamine.
  • the mutant strain may specifically be resistant to L-glutamine concentrations of 5 g / L to 30 g / L, more specifically 15 g / L to 30 g / L, even more specifically 20 g / L to 25 g / L.
  • the mutant strain may survive for at least 6 days in a minimal medium containing L-glutamine at a concentration of 15 to 25 (g / L).
  • the mutant strain contains L-glutamine at a concentration of 15 to 25 (g / L), 0.1% of glucose at pH 7.0, 0.04% of magnesium sulfate (MgSO 4 ⁇ 7H 2 O), and potassium phosphate (KH 2 PO). 4 )
  • MgSO 4 ⁇ 7H 2 O magnesium sulfate
  • KH 2 PO potassium phosphate
  • microorganism producing L-glutamine refers to a microorganism naturally having L-glutamine production capacity or a microorganism to which glutamine production capacity is imparted to a mother strain having no production capacity of L-glutamine.
  • Corynebacterium glutamicum mutant with improved production capacity of L-glutamine of the present invention may be a desired mutant by mutating the parent strain.
  • Mutagenesis of microorganisms can be carried out by a variety of means well known in the art, and can use either a physical or chemical mutagenesis.
  • suitable chemical mutagens for the present invention include N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine (NTG), diepoxybutane, ethylmethane But may include, but are not limited to, sulfonates, mustard compounds, hydrazines and nitrous acid.
  • NTG N-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine
  • diepoxybutane diepoxybutane
  • ethylmethane But may include, but are not limited to, sulfonates, mustard compounds, hydrazines and nitrous acid.
  • physical mutagenesis factors may include, but are not limited to, ultraviolet and
  • the conventional glutamine-producing strain Corynebacterium glutamicum KFCC 10680 (Corynebacterium glutamicum KFCC 10680, Republic of Korea Patent No. 10-0048440) Can be used as a parent strain.
  • the parent strain Corynebacterium glutamicum KFCC 10680 was treated with NTG to perform random mutations, and then cultured in a medium to which L-glutamine was added, thereby comparatively selecting L-glutamine production capacity between strains.
  • Two mutant strains resistant to glutamine were obtained and named Gln096 (KCCM 11553P) and Gln265 (KCCM 11554P). It was confirmed that the Corynebacterium glutamicum Gln096 and Gln265 have a high yield of L- glutamine production capacity improved to about 10% relative to the parent strain.
  • it provides a method for producing L- glutamine comprising the step of culturing the Corynebacterium glutamicum mutant in the medium.
  • the Corynebacterium glutamicum mutant strain is as described above.
  • the culture can be made according to the appropriate medium and culture conditions known in the art. Those skilled in the art can also easily adjust the medium and culture conditions.
  • the medium may be a liquid medium, but is not limited thereto.
  • the culture method may include, but is not limited to, batch culture, continuous culture, fed-batch culture, or combination culture thereof.
  • the medium must meet the requirements of the particular strain in an appropriate manner and can be appropriately modified by those skilled in the art.
  • Culture media for Corynebacteria strains may be referred to, but are not limited to, the Manual of Methods for General Bacteriology. American Society for Bacteriology.Washington D.C., USA, 1981.
  • the medium may include various carbon sources, nitrogen sources, and trace element components.
  • Carbon sources that may be used include, but are not limited to, sugars and carbohydrates such as glucose, sucrose, lactose, fructose, maltose, starch, cellulose, oils and fats such as soybean oil, sunflower oil, castor oil, coconut oil, palmitic acid, stearic acid, Fatty acids such as linoleic acid, alcohols such as glycerol, ethanol, and organic acids such as acetic acid. These materials may be used individually or as a mixture, but are not limited thereto.
  • sugars and carbohydrates such as glucose, sucrose, lactose, fructose, maltose, starch, cellulose, oils and fats such as soybean oil, sunflower oil, castor oil, coconut oil, palmitic acid, stearic acid, Fatty acids such as linoleic acid, alcohols such as glycerol, ethanol, and organic acids such as acetic acid.
  • sugars and carbohydrates such as glucose, sucrose, lactose, fructose,
  • Nitrogen sources that may be used may include peptone, yeast extract, gravy, malt extract, corn steep liquor, soybean wheat and urea or inorganic compounds such as ammonium sulfate, ammonium chloride, ammonium phosphate, ammonium carbonate and ammonium nitrate. Nitrogen sources can also be used individually or as a mixture, but are not limited thereto. Sources of phosphorus that may be used may include, but are not limited to, potassium dihydrogen phosphate or dipotassium hydrogen phosphate or the corresponding sodium-containing salts. In addition, the culture medium may contain a metal salt such as magnesium sulfate or iron sulfate required for growth, but is not limited thereto.
  • essential growth substances such as amino acids and vitamins may be included.
  • suitable precursors to the culture medium can be used.
  • the medium or individual components may be added batchwise or continuously in a suitable manner to the culture medium during the culturing process, but is not limited thereto.
  • compounds such as ammonium hydroxide, potassium hydroxide, ammonia, phosphoric acid and sulfuric acid can be added to the microbial culture in a suitable manner to adjust the pH of the culture.
  • anti-foaming agents such as fatty acid polyglycol esters can be used during the culture to suppress bubble generation.
  • oxygen or an oxygen-containing gas eg, air
  • the temperature of the culture may be usually 20 °C to 45 °C, for example 25 °C to 40 °C. The incubation period can last until the desired amount of quinoline acid is obtained, for example 10 to 160 hours.
  • the culturing may be to culture in a medium containing a high concentration of L- glutamine, for example, 15 to 25 g / L, or 20 to 25 g / L L- glutamine concentration.
  • L-glutamine production method of the present invention may comprise the step of recovering L- glutamine from the cultured microorganism or medium.
  • the method for recovering L-glutamine from the microorganism or the medium may collect or recover L-glutamine produced from the medium using a suitable method known in the art depending on the culture method. For example, centrifugation, filtration, anion exchange chromatography, crystallization and HPLC can be used, but are not limited to these examples.
  • Corynebacterium glutamicum mutant of the present invention can produce L-glutamine even in a medium containing high concentration of L-glutamine.
  • L-glutamine can be produced with high efficiency and high yield to enable industrial production.
  • the parent strain Corynebacterium glutamicum KFCC 10680 ( Corynebacterium glutamicum KFCC 10680, Republic of Korea Patent Registration No. 10-0048440) was activated the activation medium (Beef extract 1%, Polypeptone 1% , 0.5% sodium chloride (NaCl), yeast extract 0.5%, and agar (Agar) 2%, pH 7.2: "Activation medium” has the same composition) (% indicates w / v%, Activated strains obtained by incubating for 16 hours in the same manner for all% of the examples below), sterilized for 15 minutes at 121 °C (5.0% glucose, 1% bactopeptone, sodium chloride (NaCl) ) 0.25% yeast extract 1%, biotin 3 ⁇ g / L, and urea 0.4%, pH 7.0: "Species medium” has the same composition) for 14 hours.
  • the activation medium Beef extract 1%, Polypeptone 1% , 0.5% sodium chloride (
  • the NTG treated cells were centrifuged at 8000 rpm for 5 minutes to remove the supernatant, followed by the addition of 100 mM phosphate buffer and resuspended, followed by centrifugation to remove the supernatant. .
  • 5 ml of seed medium was added to the NTG-treated strain pellet and resuspended, and this was resuspended in a minimum medium (0.1% glucose, 0.04% magnesium sulfate (MgSO 4 ⁇ 7H 2 O), and potassium potassium phosphate (KH 2 PO).
  • washed NTG-treated strains were plated on a minimal medium-containing plate to which L-glutamine (final concentration 15 g / L) was added, and cultured at 30 ° C. for 6 days to select L-glutamine resistance by selecting viable cell colonies. Mutant strains were selected.
  • Selected resistant mutants were glutamine producing medium (glucose 4.0%, ammonium chloride (NH 4 Cl) 3.0%, soy protein acid hydrolyzate 0.3%, calcium carbonate (CaCO 3 ) 5%, calcium chloride (CaCl 2 ) 0.1%, magnesium sulfate (MgSO 4 .7H 2 O) 0.05%, potassium monophosphate (KH 2 PO 4 ) 0.15%, potassium diphosphate (K 2 HPO 4 ) 0.15%, urea (0.3%), thiamine (Thiamine-HCl) 2mg / L, Biotin 5 ⁇ g / L, Ferrous Sulfate (FeSO 4 ⁇ 7H 2 O) 20mg / L, Manganese Sulfate (MnSO 4 ⁇ H 2 O) 20mg / L, and Zinc Sulfate (ZnSO 4 ⁇ 7H 2 O) 12 mg / L, pH 6.8: The following "glutamine production medium” has the same composition.) One loop
  • the selected strains were named Corynebacterium glutamicum Gln096 and Gln265, and these were deposited with the Korea Microorganism Conservation Center on July 3, 2014 and were assigned accession numbers KCCM11553P and KCCM11554P, respectively.
  • the parent strain was low in the degree of growth at the L- glutamine concentration of 15 g / L and can not grow at the L- glutamine concentration of 20 g / L or more, while the strain strain Corynebacterium Glutamicum Gln096 (KCCM11553P) and Gln265 (KCCM11554P) are still highly grown at L-glutamine concentrations of 15 g / L and can be grown at L-glutamine concentrations above 20 g / L, so that the mutants have high levels of L-glutamine. It was confirmed that it has a resistance to.
  • Fermentation medium glucose 10%, ammonium chloride (NH 4 Cl) 4.5%, soy protein acid hydrolyzate 0.5%, calcium carbonate (CaCO 3 ) 5%, calcium chloride (CaCl 2 ) 0.1%, magnesium sulfate ( MgSO 4 7H 2 O) 0.05%, Potassium phosphate (KH 2 PO 4 ) 0.15%, Potassium phosphate (K 2 HPO 4 ) 0.15%, Urea 0.3%, Thiamine (HCl) 2mg / L, Biotin 5 ⁇ g / L, Ferrous Sulfate (FeSO 4 ⁇ 7H 2 O) 20 mg / L, Manganese Sulfate (MnSO 4 ⁇ H 2 O) 20 mg / L, and Zinc Sulfate (ZnSO 4 ⁇ 7H 2 O) 12 mg / L, pH 6.8: The following “fermentation medium” has the same composition.) Dispense 20 ml into a 250 ml shaking Erl
  • the parent strain Corynebacterium glutamicum KFCC10680 produced L-glutamine at a concentration of 12.6 g / L, but the variant strain Corynebacterium glutamicum Gln096 was 13.8 g. L-glutamine was produced at a concentration of / L, and it was confirmed that L-glutamine productivity was increased by about 9.5% or more compared with the parent strain.
  • the mutant strain Corynebacterium glutamicum Gln265 produced L-glutamine at a concentration of 14.1 g / L, it was confirmed that the L- glutamine productivity increased by about 11% or more compared with the parent strain.

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

본 발명은 고농도의 L-글루타민에 대해 내성을 가지는 코리네박테리움 글루타미쿰 (Corynebacterium glutamicum) 변이주 및 이를 이용한 L-글루타민 생산방법에 관한 것이다.

Description

L-글루타민을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 L-글루타민 생산방법
본 발명은 L-글루타민을 생산하는 미생물 및 이를 이용하여 L-글루타민을 생산하는 방법에 관한 것이다.
L-글루타민은 의약품, 화장품, 건강식품 등에 널리 쓰이는 아미노산으로, 주로 화합물에 대한 내성 또는 민감성 미생물을 이용하여 L-글루타민을 생산하여 왔다. 예를 들면, 설파구아니딘(Sulfaguanidine) 내성 균주 (일본특허공보 1978-17675), 아자세린(Azaserine) 내성 미생물 (일본특허공개 1980-148094), 페니실린 감수성 미생물 (일본특허공개 1992-088994), 타이로신-글루탐산 (tyr-glu) 내성주 (일본특허공개 1990-186994) 등이 이용되어 왔다.
이러한 배경 하에, 본 발명자들은 L-글루타민의 생산능이 향상된 균주를 개발하기 위해 연구를 수행하던 중, 고농도 L-글루타민에 대한 내성을 가지는 변이주를 획득하고, 이로부터 얻어진 변이주가 높은 수율로 L-글루타민을 생산하는 것을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.
본 발명의 목적은 L-글루타민을 생산하는, 향상된 L-글루타민 생산용 코리네박테리움 글루타미컴 (Corynebacterium glutamicum) 변이주를 제공하는 것이다.
본 발명의 다른 목적은 상기 코리네박테리움 글루타미컴 (Corynebacterium glutamicum) 변이주를 이용하여 L-글루타민을 생산하는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 일 양태에서, L-글루타민에 대해 내성을 갖는 코리네박테리움 글루타미쿰 (Corynebacterium glutamicum)으로서, L-글루타민을 생산하는 코리네박테리움 글루타미쿰 변이주를 제공한다.
본 발명에서 용어 "L-글루타민"은 단백질을 구성하는 아미노산의 일종으로, 글루탐산의 모노아미드이며, H2NCO－CH2CH2CH(NH2)COOH의 화학식을 갖는 L-아미노산을 의미한다.
본 발명에서 용어 "L-글루타민에 대한 내성"은 고농도의 L-글루타민이 존재하는 환경에서 미생물이 생육가능하거나, 또는 L-글루타민을 생산하는 활성이 유지 또는 증가되는 특성을 의미한다.
세포 내에서 일정 농도 이상의 L-글루타민이 축적되면 글루타민에 의해 글루타민 합성효소(Gultamine Synthetase)의 활성이 저해되거나 억제되는 피드백 저해를 유발하여 L-글루타민 생합성이 저해될 수 있다. 따라서, L-글루타민에 대해 내성을 갖는 균주는 L-글루타민에 의한 피드백이 해제됨으로 인해 고농도의 L-글루타민을 포함하는 조건에서도 L-글루타민을 생성할 수 있다.
상기 변이주는 코리네박테리움 글루타미쿰 KCCM 11553P 또는 코리네박테리움 글루타미쿰 KCCM11554P일 수 있다.
상기 변이주는 고농도의 L-글루타민에 대해 내성을 가질 수 있다. 상기 변이주는 구체적으로 5g/L 내지 30g/L, 더욱 구체적으로는 15g/L 내지 30g/L, 보다 더욱 구체적으로는 20g/L 내지 25g/L의 L-글루타민 농도에 대해 내성을 가질 수 있다.
상기 변이주는 15 내지 25 농도(g/L)의 L-글루타민을 함유하는 최소배지에서 6일 이상 생존할 수 있다. 구체적으로 상기 변이주는 15 내지 25 농도(g/L)의 L-글루타민을 함유하는, pH 7.0의 포도당 0.1%, 황산마그네슘(MgSO4·7H2O) 0.04%, 인산제1칼륨(KH2PO4) 0.1%, 티아민(Thiamine·HCl) 0.0001%, 비오틴(Biotin) 200μg/L, 및 한천(Agar) 함유 최소 배지에서 30℃에서 배양하는 경우, 6일 이상 생존할 수 있다.
본 발명에서 사용되는 용어 "L-글루타민을 생산하는 미생물"이란, 자연적으로 L-글루타민 생산능을 가지고 있는 미생물 또는 L-글루타민의 생산능이 없는 모균주에 글루타민의 생산능이 부여된 미생물을 의미한다.
본 발명의 L-글루타민의 생산능이 향상된 코리네박테리움 글루타미쿰 변이주는 모균주를 돌연변이시켜 원하는 변이주일 수 있다. 미생물의 돌연변이 유발은 해당 분야에서 널리 알려진 다양한 수단에 의해 수행될 수 있으며, 물리적 혹은 화학적 돌연변이 발생 둘 중의 하나의 방법을 사용할 수 있다. 예를 들어, 본 발명에 적합한 화학적 돌연변이 유발 요인으로 N-메틸-N'-니트로-N-니트로소구아니딘 (N-Methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine, NTG), 디에폭시부탄, 에틸메탄 설폰에이트, 머스타드 화합물, 히드라진 및 아질산을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 또한, 물리적 돌연변이 유발 요인은 자외선 및 감마 방사선을 포함할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
상세하게는, 본 발명의 L-글루타민의 생산능이 향상된 변이주를 제작하기 위해, 종래의 글루타민 생산 균주인 코리네박테리움 글루타미쿰 KFCC 10680 (Corynebacterium glutamicum KFCC 10680, 대한민국 등록특허 제10-0048440호)를 모균주로 사용할 수 있다. 상기 모균주 코리네박테리움 글루타미쿰 KFCC 10680에 NTG를 처리하여 무작위 돌연변이를 수행한 후, L-글루타민이 첨가된 배지에 배양하여, 균주 간의 L-글루타민 생산능력을 비교 선별함으로 인해, L-글루타민에 내성을 가지는 변이주 2종을 획득하였고, 이들을 Gln096 (KCCM 11553P) 및 Gln265 (KCCM 11554P)로 명명하였다. 상기 코리네박테리움 글루타미쿰 Gln096 및 Gln265가 모균주 대비 약 10% 수준으로 향상된 고 수율의 L-글루타민 생산능을 각각 가지는 것을 확인하였다.
본 발명의 다른 양태에서, 상기 코리네박테리움 글루타미쿰 변이주를 배지에서 배양하는 단계를 포함하는 L-글루타민 생산방법을 제공한다.
상기 코리네박테리움 글루타미쿰 변이주에 대해서는 상기한 바와 같다.
상기 배양은 당업계에 알려진 적절한 배지와 배양조건에 따라 이루어질 수 있다. 또한 통상의 기술자라면 배지 및 배양 조건을 용이하게 조정하여 사용할 수 있다. 구체적으로, 상기 배지는 액체 배지일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 배양 방법은 예를 들면, 회분식 배양 (batch culture), 연속식 배양 (continuous culture), 유가식 배양 (fed-batch culture) 또는 이들의 조합 배양을 포함할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다.
상기 배지는 적절한 방식으로 특정 균주의 요건을 충족해야 하며, 통상의 기술자에 의해 적절하게 변형될 수 있다. 코리네박테리아 균주에 대한 배양 배지는 공지된 문헌 (Manual of Methods for General Bacteriology. American Society for Bacteriology. Washington D.C., USA, 1981)을 참조할 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 또한 배지에 다양한 탄소원, 질소원 및 미량원소 성분을 포함할 수 있다. 사용될 수 있는 탄소원으로는 글루코스, 수크로스, 락토스, 프락토스, 말토스, 전분, 셀룰로스와 같은 당 및 탄수화물, 대두유, 해바라기유, 피마자유, 코코넛유 등과 같은 오일 및 지방, 팔미트산, 스테아린산, 리놀레산과 같은 지방산, 글리세롤, 에탄올과 같은 알코올, 아세트산과 같은 유기산이 포함된다. 이들 물질은 개별적으로 또는 혼합물로서 사용될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 사용될 수 있는 질소원으로는 펩톤, 효모 추출물, 육즙, 맥아 추출물, 옥수수 침지액, 대두밀 및 요소 또는 무기 화합물, 예를 들면 황산 암모늄, 염화암모늄, 인산암모늄, 탄산암모늄 및 질산암모늄이 포함될 수 있다. 질소원 또한 개별적으로 또는 혼합물로서 사용할 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 사용될 수 있는 인의 공급원으로는 인산이수소칼륨 또는 인산수소이칼륨 또는 상응하는 나트륨-함유 염이 포함될 수 있으며, 이에 한정되는 것은 아니다. 또한, 배양 배지는 성장에 필요한 황산마그네슘 또는 황산철과 같은 금속염을 함유할 수 있으며, 이에 한정되는 것은 아니다. 그 외에, 아미노산 및 비타민과 같은 필수 성장 물질이 포함될 수 있다. 또한 배양 배지에 적절한 전구체들이 사용될 수 있다. 상기 배지 또는 개별 성분은 배양과정에서 배양액에 적절한 방식에 의해 회분식으로 또는 연속식으로 첨가될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 배양 중에 수산화암모늄, 수산화칼륨, 암모니아, 인산 및 황산과 같은 화합물을 미생물 배양액에 적절한 방식으로 첨가하여 배양액의 pH를 조정할 수 있다. 또한, 배양 중에 지방산 폴리글리콜 에스테르와 같은 소포제를 사용하여 기포 생성을 억제할 수 있다. 추가적으로, 배양액의 호기 상태를 유지하기 위하여, 배양액 내로 산소 또는 산소-함유 기체 (예, 공기)를 주입할 수 있다. 배양액의 온도는 통상 20℃ 내지 45℃, 예를 들면 25℃ 내지 40℃일 수 있다. 배양기간은 원하는 퀴놀린산의 생성량이 얻어질 때까지 지속될 수 있으며, 예를 들면 10 내지 160 시간일 수 있다.
상기 배양은 고농도의 L-글루타민, 예를 들면, 15 내지 25 g/L, 또는 20 내지 25 g/L의 L-글루타민 농도를 함유하는 배지 중에서 배양하는 것일 수 있다.
본 발명의 L-글루타민 생산방법은, 배양한 미생물 또는 배지로부터 L-글루타민을 회수하는 단계를 포함할 수 있다. 상기 미생물 또는 배지로부터 L-글루타민을 회수하는 방법은 배양방법에 따라 당해 분야에 공지된 적합한 방법을 이용하여 배지로부터 생산된 L-글루타민을 수집 또는 회수할 수 있다. 예를 들면 원심분리, 여과, 음이온 교환 크로마토그래피, 결정화 및 HPLC 등이 사용될 수 있으나, 이들 예에 한정되지 않는다.
본 발명에서의 코리네박테리움 글루타미쿰 변이주를 이용하면 L-글루타민이 고농도로 포함된 배지에서도 L-글루타민을 생산할 수 있다. 따라서, 산업적 생산이 가능하도록 고효율 및 고수율로 L-글루타민을 생산할 수 있다.
이하 본 발명을 실시예에 의해 보다 상세하게 설명한다. 그러나 이들 실시예는 본 발명을 예시적으로 설명하기 위한 것으로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것은 아니다.
실시예 1: L-글루타민 생산용 변이주 선별
L-글루타민의 생산능이 향상된 미생물 변이주를 얻기 위해 하기와 같은 방법을 사용하여 미생물의 변이를 유도하였다.
구체적으로, 모균주인 코리네박테리움 글루타미쿰 KFCC 10680 (Corynebacterium glutamicum KFCC 10680, 대한민국 특허등록 번호 제10-0048440호)을 활성화 배지 (육즙(Beef extract) 1%, 폴리펩톤(Polypeptone) 1%, 소듐클로라이드(NaCl) 0.5%, 효모엑기스(Yeast extract) 0.5%, 및 한천(Agar) 2%, pH 7.2: 이하 “활성화 배지”는 동일한 조성을 갖는다.)(% 는 w/v%를 가리킴, 이하 실시예의 모든 %에 대하여 동일함.)에서 16시간 동안 배양하여 얻은 활성화된 균주를, 121℃에서 15분간 멸균한 종배지 (포도당 5.0%, 박토펩톤(Bacto peptone) 1%, 소듐클로라이드(NaCl) 0.25% 효모엑기스(Yeast extract) 1%, 비오틴(Biotin) 3 μg/L, 및 요소(Urea) 0.4%, pH 7.0: 이하 “종 배지”는 동일한 조성을 갖는다.)에서 14시간 동안 배양하였다. 배양액 5ml을 시험관 중에 취하고 8000 rpm에서 5분 동안 원심분리하여 상등액을 제거한 다음, 100mM 시트레이트 완충용액(citrate buffer)를 첨가하고 재부유시킨 다음 동일하게 원심분리하여 상등액을 제거함으로써 세포를 세척하였다. 시험관 중의 세포 펠렛에 5ml 100mM 시트레이트 완충용액(citrate buffer)를 첨가하여 재부유시키고, 여기에 NTG (N-Methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidine) 를 최종농도 200mg/L가 되게 첨가한 다음 20분 동안 실온에서 방치하였다. 이 후, NTG로 처리된 세포를 8000 rpm에서 5분 동안 원심분리하여 상등액을 제거한 다음 100mM 인산 완충용액(phosphate buffer)를 첨가하고 재부유시킨 다음 동일하게 원심분리하여 상등액을 제거함으로써 세포를 세척하였다. 다음으로, 얻어진 NTG가 처리된 균주 펠렛에 종배지 5ml를 첨가하여 재부유시키고, 이를 최소배지 (포도당 0.1%, 황산마그네슘(MgSO4·7H2O) 0.04%, 인산제1칼륨(KH2PO4) 0.1%, 티아민(Thiamine·HCl) 0.0001%, 비오틴(Biotin) 200μg/L, 및 한천(Agar)(1.5%), pH 7.0: 이하 “최소 배지”는 동일한 조성을 갖는다.) 함유 플레이트에 도말하고 30℃에서 6일간 배양한 후, 생존 세포를 OD600 값으로 측정하였다. 세포 수를 측정한 결과, 세포 사멸율은 85%였다.
또한, 상기 세척된 NTG가 처리된 균주를 L-글루타민 (최종농도 15g/L)이 첨가된 최소배지 함유 플레이트에 도말하고, 30℃에서 6일간 배양하여, 생존 세포 콜로니를 선택함으로써 L-글루타민 내성 변이주를 선별하였다. 선별된 내성 변이주들을 글루타민 생산배지 (포도당 4.0%, 염화암모늄(NH4Cl) 3.0%, 대두산가수분해물(Soy Protein acid hydrolyzate) 0.3%, 탄산칼슘(CaCO3) 5%, 염화칼슘(CaCl2) 0.1%, 황산마그네슘(MgSO4·7H2O) 0.05%, 인산제1칼륨(KH2PO4) 0.15%, 인산제2칼륨(K2HPO4) 0.15%, 요소(Urea) 0.3%, 티아민 (Thiamine·HCl) 2mg/L, 비오틴(Biotin) 5μg/L, 황산철(FeSO4·7H2O) 20mg/L, 황산망간(MnSO4·H2O) 20mg/L, 및 황산아연(ZnSO4·7H2O) 12mg/L, pH 6.8: 이하 "글루타민 생산배지"는 동일한 조성을 갖는다.) 25ml를 함유한 진탕용 삼각플라스크에 1루프 접종하고, 30℃에서 200rmp으로 진탕하면서 48시간 동안 각각 배양하였다. 대조군으로서, 모균주를 동일한 조건에서 배양하였다. 이들 중 모균주인 코리네박테리움 글루타미쿰 KFCC-10680 보다 글루타민 생산 수율이 약 10 % 이상 향상된 L-글루타민 내성 변이주 2종을 선별하였다.
상기 선별된 변이주를 코리네박테리움 글루타미쿰 (Corynebacterium glutamicum) Gln096 및 Gln265라 명명하고, 이들을 2014년 7월 3일자로 한국미생물보존센터에 기탁하여 각각 수탁번호 KCCM11553P 및 KCCM11554P를 부여 받았다.
실시예 2: L-글루타민 생산용 변이주의 L-글루타민에 대한 내성 비교
실시예 1에서 선별된 변이주의 L-글루타민에 대한 내성을 비교하기 위해, 모균주 (KFCC 10680), 코리네박테리움 글루타미쿰 Gln096 (KCCM11553P) 및 Gln265 (KCCM11554P)를 각각 L-글루타민의 최종농도가 각각 2.5g/L, 10g/L, 15g/L, 20g/L, 및 25g/L로 첨가된 최소배지 함유 플레이트에 도말하고 30℃에서 6일간 배양하였다.
그 결과, 하기 표 1에서 나타낸 바와 같이, 모균주는 15 g/L의 L-글루타민 농도에서 생육 정도가 낮고 20 g/L 이상의 L-글루타민 농도에서는 생육할 수 없는 반면, 변이주인 코리네박테리움 글루타미쿰 Gln096 (KCCM11553P) 및 Gln265 (KCCM11554P)은 15 g/L의 L-글루타민 농도에서도 여전히 생육 정도가 높으며, 20 g/L 이상의 L-글루타민 농도에서도 생육 가능하여, 변이주들이 고농도의 L-글루타민에 대한 내성을 가짐을 확인할 수 있었다.
표 1 L-글루타민에 대한 내성비교
균주 L-글루타민농도(g/L)
2.5 10 15 20 25
KFCC 10680 +++ +++ + - -
Gln096 +++ +++ +++ ++ +
Gln265 +++ +++ +++ ++ +
+ : 생육 / - : 생육 못함; 30℃에서 6일간 배양
실시예 3: L-글루타민 생산용 변이주의 L-글루타민 생산성 평가
상기 실시예 1에서 얻어진 변이주 코리네박테리움 글루타미쿰 Gln265 (KCCM11554P)과 변이주 코리네박테리움 글루타미쿰 Gln096 (KCCM11553P)의 L-글루타민 생산성을 확인하기 위해 하기와 같은 방법으로 배양하여 L-글루타민을 생산하였다.
발효배지 (포도당 10%, 염화암모늄(NH4Cl) 4.5%, 대두산가수분해물(Soy Protein acid hydrolyzate) 0.5%, 탄산칼슘(CaCO3) 5%, 염화칼슘(CaCl2) 0.1%, 황산마그네슘(MgSO4·7H2O) 0.05%, 인산제1칼륨(KH2PO4) 0.15%, 인산제2칼륨(K2HPO4) 0.15%, 요소(Urea) 0.3%, 티아민 (Thiamine·HCl) 2mg/L, 비오틴(Biotin) 5μg/L, 황산철(FeSO4·7H2O) 20mg/L, 황산망간(MnSO4·H2O) 20mg/L, 및 황산아연(ZnSO4·7H2O) 12mg/L, pH 6.8: 이하 “발효배지”는 동일한 조성을 갖는다.) 20ml을 250ml 진탕용 삼각플라스크에 분주하고 121℃에서 15분간 멸균한 후, 30℃ 활성화 배지에서 16시간 동안 배양하여 활성화된 균주들 (KFCC10680, Gln096, 및 Gln265)을 상기 발효배지에 각각 1루프씩 접종하고 30℃에서 48시간 200rpm으로 교반하면서 배양하였다. 배양 종료 후, 세포를 제거한 배지 상등액 중에 존재하는 L-글루타민을 YSI 7100 Multiparameter Bioanalytical System (YSI Inc.)를 사용하여 측정하였고, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다.
표 2
균주 L-글루타민농도(g/L)
KFCC10680 12.6
Gln096(변이주) 13.8
Gln265(변이주) 14.1
상기 표 2에 나타난 바와 같이, 모균주인 코리네박테리움 글루타미쿰 KFCC10680은 12.6g/L의 농도로 L-글루타민을 생산하였으나, 본 발명에 따른 변이주 코리네박테리움 글루타미쿰 Gln096는 13.8g/L의 농도로 L-글루타민을 생산하여, 모균주에 비해 약 9.5% 이상 L-글루타민 생산성이 증가한 것을 확인하였다. 또한, 변이주 코리네박테리움 글루타미쿰 Gln265는 14.1g/L의 농도로 L-글루타민을 생산하여, 모균주에 비해 약 11% 이상 L-글루타민 생산성이 증가한 것을 확인하였다.
기탁기관명 : 한국미생물보존센터(국외)
수탁번호 : KCCM11553P
수탁일자 : 20140703
기탁기관명 : 한국미생물보존센터(국외)
수탁번호 : KCCM11554P
수탁일자 : 20140703
Figure PCTKR2015009909-appb-I000001
Figure PCTKR2015009909-appb-I000002

Claims (3)

  1. L-글루타민에 대해 내성을 갖는 코리네박테리움 글루타미쿰 (Corynebacterium glutamicum)으로서, L-글루타민을 생산하는 코리네박테리움 글루타미쿰 변이주 KCCM11553P 또는 KCCM11554P.
  2. 제1항에 있어서, 15 내지 25 농도(g/L)의 L-글루타민을 함유하는, 배양배지에서 6일 이상 생존할 수 있는 상기 코리네박테리움 글루타미쿰 변이주 KCCM11553P 또는 KCCM11554P.
  3. 제1항 또는 제2항의 코리네박테리움 글루타미쿰 변이주를 배양하는 단계, 및 상기 변이주 또는 배지로부터 L-글루타민을 회수하는 단계;를 포함하는 L-글루타민을 생산하는 방법.
PCT/KR2015/009909 2014-10-08 2015-09-22 L-글루타민을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 l-글루타민 생산방법 WO2016056773A2 (ko)

Priority Applications (9)

Application Number Priority Date Filing Date Title
MYPI2017000437A MY182673A (en) 2014-10-08 2015-09-22 Microorganism for producing l-glutamine and method for producing l-glutamine using same
EP15848984.9A EP3205714B1 (en) 2014-10-08 2015-09-22 Microorganism for producing l-glutamine and method for producing l-glutamine using same
AU2015328946A AU2015328946B2 (en) 2014-10-08 2015-09-22 Microorganism for producing L-glutamine and method for producing L-glutamine using same
JP2017517032A JP6483253B2 (ja) 2014-10-08 2015-09-22 Ｌ−グルタミンを生産する微生物、及びそれを利用したｌ−グルタミン生産方法
RU2017109400A RU2665830C1 (ru) 2014-10-08 2015-09-22 Мутантный штамм Corynebacterium glutamicum, продуцирующий L-глутамин (варианты), и способ получения L-глутамина
CA2963926A CA2963926C (en) 2014-10-08 2015-09-22 Microorganism for producing l-glutamine and method for producing l-glutamine using same
CN201580055019.9A CN107208038A (zh) 2014-10-08 2015-09-22 用于产生l‑谷氨酰胺的微生物及使用其产生l‑谷氨酰胺的方法
US15/515,744 US10023888B2 (en) 2014-10-08 2015-09-22 Microorganism for producing L-glutamine and method for producing L-glutamine using same
ES15848984T ES2817933T3 (es) 2014-10-08 2015-09-22 Microorganismo de producción de L-glutamina y procedimiento de producción de L-glutamina utilizando el mismo

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR10-2014-0135959 2014-10-08
KR1020140135959A KR101694850B1 (ko) 2014-10-08 2014-10-08 L-글루타민을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 l-글루타민 생산방법

Publications (2)

Publication Number Publication Date
WO2016056773A2 true WO2016056773A2 (ko) 2016-04-14
WO2016056773A3 WO2016056773A3 (ko) 2017-04-27

Family

ID=55653921

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/KR2015/009909 WO2016056773A2 (ko) 2014-10-08 2015-09-22 L-글루타민을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 l-글루타민 생산방법

Country Status (12)

Country Link
US (1) US10023888B2 (ko)
EP (1) EP3205714B1 (ko)
JP (1) JP6483253B2 (ko)
KR (1) KR101694850B1 (ko)
CN (1) CN107208038A (ko)
AU (1) AU2015328946B2 (ko)
CA (1) CA2963926C (ko)
ES (1) ES2817933T3 (ko)
HU (1) HUE051762T2 (ko)
MY (1) MY182673A (ko)
RU (1) RU2665830C1 (ko)
WO (1) WO2016056773A2 (ko)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU2021384593A1 (en) * 2020-11-20 2023-06-08 Cj Cheiljedang Corporation Microorganism having enhanced l-glutamine producing ability, and l-glutamine producing method using same
CN117512029B (zh) * 2024-01-03 2024-03-29 地奥集团成都药业股份有限公司 一种提升谷氨酰胺产量的培养基、方法及代谢组学分析方法
CN118726206A (zh) * 2024-09-02 2024-10-01 地奥集团成都药业股份有限公司 一种谷氨酸棒杆菌发酵培养基及谷氨酰胺生产方法

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5317675B2 (ko) 1972-12-16 1978-06-09
JPS5317675A (en) 1976-08-03 1978-02-17 Tsunetarou Matsuyama Method of processing disposed polyvinyl chloride
JPS55148094A (en) 1979-05-07 1980-11-18 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd Preparation of l-glutamine by fermentation
KR830001259B1 (ko) * 1981-08-12 1983-06-30 서울미원 주식회사 미생물에 의한 l-글루타민의 제조방법
JP2817157B2 (ja) 1989-01-13 1998-10-27 味の素株式会社 発酵法によるｌ‐アミノ酸の製造法
JPH0488994A (ja) 1990-07-30 1992-03-23 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 発酵法によるｌ―グルタミン酸の製造法
CA2380863A1 (en) * 1999-06-25 2001-01-04 Basf Aktiengesellschaft Corynebacterium glutamicum genes encoding proteins involved in membrane synthesis and membrane transport
WO2001000804A2 (en) * 1999-06-25 2001-01-04 Basf Aktiengesellschaft Corynebacterium glutamicum genes encoding stress, resistance and tolerance proteins
DE60133304T2 (de) 2000-11-17 2009-03-05 Cj Cheiljedang Corp. L-glutamine produzierende mikroorganismen und verfahren zur herstellung von l-glutamine unter verwendung derselben
KR20050018797A (ko) 2001-08-06 2005-02-28 데구사 아게 유전자 변형된 코리네박테리움 글루타미쿰 균주에 의한ｌ-리신의 생산
RU2230114C2 (ru) * 2001-11-30 2004-06-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Мутантная глутаминсинтетаза, фрагмент днк, штамм escherichia coli - продуцент l-глутамина и способ получения l-аминокислот
CN100334200C (zh) 2005-06-07 2007-08-29 山东大学 一株可高产谷氨酰胺的谷氨酸棒杆菌
US8067211B2 (en) 2005-12-27 2011-11-29 Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. Method for production of L-glutamine
EP2612915B1 (en) 2006-09-01 2015-04-08 Kyowa Hakko Bio Co., Ltd. Method for production of L-Glutamine
JP5827131B2 (ja) 2010-01-08 2015-12-02 協和発酵バイオ株式会社 Ｌ−グルタミンまたはｌ−グルタミン酸の製造法
KR101048440B1 (ko) 2010-04-29 2011-07-11 금호전기주식회사 Ｌｅｄ모듈 가변 장착형 방열판 및 이를 이용한 조명 장치
KR101001544B1 (ko) 2010-10-26 2010-12-17 최점미 전기 기구용 전기장 및 자기장의 발생을 방지하는 발열선
DK2803722T3 (en) 2012-01-10 2018-01-08 Cj Cheiljedang Corp Corynebacterium microorganisms capable of utilizing xylose, and method for producing L-lysine using the same
KR101481782B1 (ko) * 2012-12-28 2015-01-13 대상 주식회사 Gogat의 불활성화에 의한 아미노산 고생산능 변이 균주

Also Published As

Publication number Publication date
MY182673A (en) 2021-01-29
AU2015328946B2 (en) 2018-10-18
KR101694850B1 (ko) 2017-01-10
CA2963926A1 (en) 2016-04-14
CN107208038A (zh) 2017-09-26
EP3205714A4 (en) 2018-03-07
ES2817933T3 (es) 2021-04-08
RU2665830C1 (ru) 2018-09-04
JP6483253B2 (ja) 2019-03-13
US20170292135A1 (en) 2017-10-12
AU2015328946A1 (en) 2017-05-25
KR20160041624A (ko) 2016-04-18
HUE051762T2 (hu) 2021-03-29
JP2017529858A (ja) 2017-10-12
EP3205714B1 (en) 2020-08-05
WO2016056773A3 (ko) 2017-04-27
EP3205714A2 (en) 2017-08-16
US10023888B2 (en) 2018-07-17
CA2963926C (en) 2018-07-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100838038B1 (ko) Ｌ-라이신 생산능이 향상된 코리네박테리움 속 미생물 및그를 이용한 ｌ-라이신 생산 방법
WO2010114245A2 (ko) 5'-이노신산 생산성이 향상된 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 핵산의 생산방법
US10351859B2 (en) Microorganism producing L-leucine and method for producing L-leucine using the same
WO2014200126A1 (ko) Ｌ-이소루신을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 ｌ-이소루신 제조방법
US8361758B2 (en) Microorganism of Corynebacterium genus having resistance to kanamycin and enhanced L-lysine productivity and method of producing L-lysine using the same
WO2011115439A2 (ko) 5'-크산틸산 및 5'-구아닐산 생산능이 향상된 미생물 및 이를 이용한 5'-크산틸산 또는 5'-구아닐산의 생산방법
WO2016056773A2 (ko) L-글루타민을 생산하는 미생물 및 이를 이용한 l-글루타민 생산방법
EP0745679B1 (en) A method for producing L-isoleucine with a fermentation process and L-homoserine as the sole nitrogen source
KR101851898B1 (ko) Ｌ-류신 생산능을 가지는 미생물 및 이를 이용한 ｌ-류신의 제조방법
WO2017160042A1 (ko) Ｌ-히스티딘을 생산하는 코리네박테리움 글루타미컴 변이주 및 이를 이용한 ｌ-히스티딘의 생산방법
KR102141210B1 (ko) L-트립토판을 생산하는 코리네박테리움 글루타미컴 변이주 및 이를 이용한 l-트립토판의 생산 방법
EP1096023A2 (en) Method for producing uridine-5'- monophosphate by fermentation using mutant strains of coryneform bacteria
WO2015142021A1 (en) Microorganisms having enhanced l-amino acids productivity and process for producing l-amino acids using the same
KR100424847B1 (ko) 5'-이노신산 생산 미생물 및 그 생산방법
KR20070057093A (ko) 카나마이신 내성을 갖고 ｌ-라이신 생산능이 향상된코리네형 미생물 및 그를 이용하여 ｌ-라이신을 생산하는방법
KR20010089946A (ko) 5'-이노신산을 생산하는 미생물 및 그를 이용한5'-이노신산의 제조방법
KR20090076615A (ko) 코리네박테리움속 미생물로부터 분리된 신규한 유전자,이에 의해 형질전환된 이노신을 생산하는 코리네박테리움속미생물 및 이를 이용한 이노신의 생산방법

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 15848984

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A2

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2017517032

Country of ref document: JP

Kind code of ref document: A

WWE Wipo information: entry into national phase

Ref document number: 15515744

Country of ref document: US

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2963926

Country of ref document: CA

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

REEP Request for entry into the european phase

Ref document number: 2015848984

Country of ref document: EP

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2017109400

Country of ref document: RU

Kind code of ref document: A

ENP Entry into the national phase

Ref document number: 2015328946

Country of ref document: AU

Date of ref document: 20150922

Kind code of ref document: A