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WO2015020212A1 - 癌の治療及び／又は予防用医薬組成物 - Google Patents

癌の治療及び／又は予防用医薬組成物 Download PDF

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WO2015020212A1
WO2015020212A1 PCT/JP2014/071094 JP2014071094W WO2015020212A1 WO 2015020212 A1 WO2015020212 A1 WO 2015020212A1 JP 2014071094 W JP2014071094 W JP 2014071094W WO 2015020212 A1 WO2015020212 A1 WO 2015020212A1
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WO
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antibody
seq
variable region
cancer
amino acid
Prior art date
Application number
PCT/JP2014/071094
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English (en)
French (fr)
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文義 岡野
孝則 齋藤
佳孝 南田
井戸　隆喜
Original Assignee
東レ株式会社
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Publication date
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Priority to JP2014548217A priority patent/JP6447130B2/ja
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Priority to PL14834828T priority patent/PL3031826T3/pl
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    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]

Definitions

  • the present invention relates to a novel pharmaceutical use of an antibody against CAPRIN-1 or a fragment thereof as a therapeutic and / or prophylactic agent for cancer.
  • Cancer is a disease that occupies the top cause of all deaths, and the current treatment is a combination of radiation therapy and chemotherapy, mainly surgery. Despite the recent development of new surgical methods and the discovery of new anti-cancer drugs, the therapeutic results of cancer have not improved much except for some cancers. In recent years, advances in molecular biology and cancer immunology have identified antibodies that react specifically with cancer, cancer antigens that are recognized by cytotoxic T cells, genes that encode cancer antigens, etc. There is a growing expectation for specific cancer treatments targeting cancer antigens.
  • Cytoplasma-activation and association-associated protein 1 (CAPRIN-1) is expressed when quiescent normal cells are activated or undergo cell division, and forms intracellular stress granules with RNA in the cells. It was known as an intracellular protein known to be involved in the control of transport and translation, but it was found to be specifically expressed on the surface of cancer cells, and is a target for antibody drugs for cancer treatment (Patent Documents 1 to 19).
  • An object of the present invention is to produce an antibody having antitumor activity superior to conventional antibodies targeting CAPRIN-1 that is specifically expressed on the surface of cancer cells, and as an agent for treating and / or preventing cancer. Is to provide a use.
  • the present invention has the following features.
  • an antibody comprising a heavy chain variable region comprising SEQ ID NOs: 1, 2, and 3 and a light chain variable region comprising SEQ ID NOs: 4, 5, and 6, and having immunological reactivity with a CAPRIN-1 protein
  • the present invention provides a pharmaceutical composition for treating and / or preventing cancer, comprising a fragment thereof as an active ingredient.
  • the cancer is breast cancer, renal cancer, pancreatic cancer, colon cancer, lung cancer, brain cancer, stomach cancer, uterine cancer, ovarian cancer, prostate cancer, bladder cancer, esophageal cancer, leukemia, lymphoma, liver cancer, gallbladder cancer.
  • the antibody is a human antibody, a humanized antibody, a chimeric antibody, a single chain antibody, or a multispecific antibody (eg, bispecific antibody).
  • the antibody against CAPRIN-1 according to the present invention damages cancer cells. Therefore, the antibody against CAPRIN-1 according to the present invention is useful for the treatment and prevention of cancer.
  • the antibody against CAPRIN-1 may be a monoclonal antibody or a polyclonal antibody, but is preferably a monoclonal antibody and may be any kind of antibody as long as it can exhibit antitumor activity, for example, Recombinant antibodies (eg, synthetic antibodies, multispecific antibodies (eg, bispecific antibodies), humanized antibodies, chimeric antibodies, single chain antibodies (scFv), etc.), human antibodies, antibody fragments thereof (eg, Fab, F (ab ′) 2 , Fv, etc.). These antibodies and fragments thereof can also be prepared by methods known to those skilled in the art. Moreover, when a test subject is a human, in order to avoid or suppress rejection, it is desirable that it is a human antibody or a humanized antibody.
  • Recombinant antibodies eg, synthetic antibodies, multispecific antibodies (eg, bispecific antibodies), humanized antibodies, chimeric antibodies, single chain antibodies (scFv), etc.
  • human antibodies antibody fragments thereof (eg, Fab, F (ab
  • Specifically binds to CAPRIN-1 protein means that it specifically binds to CAPRIN-1 protein and does not substantially bind to other proteins.
  • the subject who is the target of treatment and / or prevention of cancer in the present invention is a mammal such as a human, a pet animal, livestock, a sporting animal, etc., and a preferred subject is a human.
  • the protein or fragment thereof used as a sensitizing antigen for obtaining an antibody against CAPRIN-1 according to the present invention is a human, dog, cat, cow, horse, mouse, rat, chicken, or other animal species derived from it. Not limited to. However, it is preferable to select in consideration of compatibility with the parent cell used for cell fusion. In general, a protein derived from a mammal is preferable, and a protein derived from a human is particularly preferable. For example, when CAPRIN-1 is human CAPRIN-1, human CAPRIN-1 protein, a partial peptide thereof, cells expressing human CAPRIN-1 and the like can be used.
  • GenBank GenBank
  • FASTA Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402, 1997.
  • a nucleic acid or protein having a sequence identity of 5% to 100% becomes the target CAPRIN-1 (when the amino acid sequences of SEQ ID NO: 17 and SEQ ID NO: 19 are compared, the amino acid residues after position 690 are different.
  • % sequence identity means that when two sequences are aligned (aligned) with the maximum similarity (or coincidence) with or without gaps, amino acids ( Or the percentage of the same amino acid (or base) relative to the total number of bases (including the number of gaps).
  • the CAPRIN-1 protein fragment has a length less than the total length of the protein from the amino acid length of the epitope (antigenic determinant), which is the smallest unit recognized by the antibody.
  • An epitope refers to a polypeptide fragment having antigenicity or immunogenicity in a mammal, preferably a human, and its minimum unit consists of about 7 to 12 amino acids, for example, 8 to 11 amino acids.
  • polypeptide fragments containing human CAPRIN-1 protein and its partial peptides are synthesized according to chemical synthesis methods such as Fmoc method (fluorenylmethyloxycarbonyl method) and tBoc method (t-butyloxycarbonyl method), for example.
  • Fmoc method fluorenylmethyloxycarbonyl method
  • tBoc method t-butyloxycarbonyl method
  • the polynucleotide encoding the above-mentioned polypeptide can be easily prepared by a known genetic engineering technique or a conventional method using a commercially available nucleic acid synthesizer.
  • DNA containing the base sequence of the human CAPRIN-1 gene is prepared by performing PCR using a pair of primers designed to amplify the base sequence using human chromosomal DNA or cDNA library as a template. can do.
  • PCR reaction conditions can be set as appropriate. For example, using a heat-resistant DNA polymerase (eg, Taq polymerase, Pfu polymerase, etc.) and a Mg 2+ -containing PCR buffer at 94 ° C. for 30 seconds (denaturation), at 55 ° C.
  • a heat-resistant DNA polymerase eg, Taq polymerase, Pfu polymerase, etc.
  • Mg 2+ -containing PCR buffer at 94 ° C. for 30 seconds (denaturation), at 55 ° C.
  • a reaction process consisting of 30 seconds to 1 minute (annealing) and 2 minutes (elongation) at 72 ° C. is defined as one cycle.
  • the conditions include a reaction for 7 minutes at 72 ° C. after 30 cycles. It is not limited to this.
  • the PCR method, conditions, etc. see, for example, Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology, 3rd edition, A compendium of Methods from Current Protocols in Molecular Biology (1995 & 1995). Has been.
  • the cDNA library is preferably prepared from cells, organs or tissues expressing the CAPRIN-1 protein.
  • Examples of such cells and tissues include testis, leukemia, breast cancer, lymphoma, brain tumor, lung cancer, pancreatic cancer, colon cancer, kidney cancer, stomach cancer, uterine cancer, ovarian cancer, prostate cancer, bladder cancer, esophageal cancer, Derived from a cancer or tumor such as sarcoma, mastocytoma, liver cancer, gallbladder cancer, melanoma, adrenocortical cancer, Ewing tumor, Hodgkin lymphoma, mesothelioma, multiple myeloma, testicular cancer, thyroid cancer or head and neck cancer A cell or tissue.
  • a cancer or tumor such as sarcoma, mastocytoma, liver cancer, gallbladder cancer, melanoma, adrenocortical cancer, Ewing tumor, Hodgkin lymphoma, mesothelioma, multiple myeloma, testicular cancer, thyroid cancer or head and neck cancer A cell or tissue.
  • the host cell into which the expression vector is introduced may be any cell as long as it can express the polypeptide.
  • prokaryotic cells include Escherichia coli
  • examples of eukaryotic cells include monkey kidney cells COS1.
  • Mammalian cells such as Chinese hamster ovary cell CHO, human fetal kidney cell line HEK293, mouse embryonic skin cell line NIH3T3, budding yeast, yeast cells such as fission yeast, silkworm cells, Xenopus egg cells, etc. It is not limited.
  • an expression vector having an origin, a promoter, a ribosome binding site, a multicloning site, a terminator, a drug resistance gene, an auxotrophic complementary gene, etc. that can be replicated in the prokaryotic cell is used.
  • Examples of the expression vector for E. coli include pUC, pBluescript II, pET expression system, pGEX expression system and the like.
  • an expression vector for a eukaryotic cell having a promoter, a splicing region, a poly (A) addition site and the like is used as an expression vector.
  • expression vectors include pKA1, pCDM8, pSVK3, pMSG, pSVL, pBK-CMV, pBK-RSV, EBV vector, pRS, pcDNA3, pYES2, and the like.
  • pIND / V5-His pFLAG-CMV-2, pEGFP-N1, pEGFP-C1, etc.
  • a His tag for example, (His) 6 to (His) 10
  • FLAG tag myc
  • the polypeptide can be expressed as a fusion protein to which various tags such as a tag, HA tag, and GFP are added.
  • the introduction of the expression vector into the host cell may be carried out using a well-known method such as electroporation, calcium phosphate method, liposome method, DEAE dextran method, microinjection, virus infection, lipofection, binding to a cell membrane-permeable peptide.
  • the target polypeptide from the host cell can be performed by combining known separation operations. For example, treatment with denaturing agents and surfactants such as urea, ultrasonic treatment, enzyme digestion, salting out and solvent fractional precipitation, dialysis, centrifugation, ultrafiltration, gel filtration, SDS-PAGE, isoelectric focusing , Ion exchange chromatography, hydrophobic chromatography, affinity chromatography, reverse phase chromatography and the like, but are not limited thereto.
  • denaturing agents and surfactants such as urea, ultrasonic treatment, enzyme digestion, salting out and solvent fractional precipitation, dialysis, centrifugation, ultrafiltration, gel filtration, SDS-PAGE, isoelectric focusing , Ion exchange chromatography, hydrophobic chromatography, affinity chromatography, reverse phase chromatography and the like, but are not limited thereto.
  • the antigen prepared as described above can be used as a sensitizing antigen as described later.
  • Antibodies are usually heteromultimeric glycoproteins containing at least two heavy chains and two light chains. Apart from IgM, immunoglobulins are approximately 150 kDa heterotetrameric glycoproteins composed of two identical light (L) chains and two identical heavy (H) chains. Typically, each light chain is linked to a heavy chain by one disulfide covalent bond, but the number of disulfide bonds varies between the heavy chains of different immunoglobulin isotypes. Each heavy and light chain also has an intrachain disulfide bond. Each heavy chain has at one end a variable domain (VH region) followed by several constant regions. Each light chain has a variable domain (VL region) and one constant region at the opposite end.
  • VH region variable domain
  • VL region variable domain
  • the constant region of the light chain is aligned with the first constant region of the heavy chain, and the light chain variable domain is aligned with the variable domain of the heavy chain.
  • the variable domain of an antibody confers binding specificity on the antibody, with certain regions exhibiting certain variability, termed complementarity determining regions (CDRs).
  • CDRs complementarity determining regions
  • a portion that is relatively stored in the variable area is called a framework area (FR).
  • the complete heavy and light chain variable domains have a structure in which three complementarity-determining regions are linked by four framework regions, ie, FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, and FR4 in order from the N-terminus. Consists of a connected structure.
  • CDRH1, CDRH2, and CDRH3 are called CDRH1, CDRH2, and CDRH3 in order from the N terminus in the heavy chain, and similarly CDRL1, CDRL2, and CDRL3 in the light chain.
  • CDRH3 is most important for the binding specificity of the antibody to the antigen.
  • the CDRs of each chain are held together in a state closer to the framework region, and contribute to the formation of an antigen binding site of the antibody together with the complementarity determining region derived from the other chain.
  • the constant region does not contribute directly to the binding of the antibody to the antigen, but is involved in a variety of effector functions such as participation in antibody-dependent cellular cytotoxicity (ADCC), phagocytosis via binding to Fc ⁇ receptors ( ADCP), half-life / clearance rate via neonatal Fc receptor (FcRn), complement dependent cytotoxicity (CDC) via the C1q component of the complement cascade.
  • ADCC antibody-dependent cellular cytotoxicity
  • ADCP phagocytosis via binding to Fc ⁇ receptors
  • FcRn half-life / clearance rate via neonatal Fc receptor
  • CDC complement dependent cytotoxicity
  • the anti-CAPRIN-1 antibody in the present invention means an antibody having immunological reactivity with the full length of a CAPRIN-1 protein or a fragment thereof.
  • immunological reactivity means the property that an antibody binds to CAPRIN-1 antigen (full length of CAPRIN-1 protein or a partial polypeptide thereof) in vivo.
  • the function of damaging (eg, killing, suppressing, or regressing) tumor cells through such binding of the antibody of the present invention to CAPRIN-1 is exhibited.
  • the antibody of the present invention binds to a CAPRIN-1 protein and is used for tumors such as breast cancer, renal cancer, pancreatic cancer, colon cancer (for example, colon cancer), lung cancer, brain tumor, stomach cancer, uterine cancer, ovarian cancer, prostate cancer, Bladder cancer, esophageal cancer, leukemia, lymphoma, liver cancer, gallbladder cancer, sarcoma, mastocytoma, melanoma, adrenal cortex cancer, Ewing tumor, Hodgkin lymphoma, mesothelioma, multiple myeloma, testicular cancer, thyroid cancer or head and neck Can damage the cancer of the head.
  • tumors such as breast cancer, renal cancer, pancreatic cancer, colon cancer (for example, colon cancer), lung cancer, brain tumor, stomach cancer, uterine cancer, ovarian cancer, prostate cancer, Bladder cancer, esophageal cancer, leukemia, lymphoma, liver cancer, gallbladder cancer, sarcoma,
  • the antibody of the present invention is not particularly limited as long as it is preferably a monoclonal antibody, a synthetic antibody, a multispecific antibody (eg, diabody, triabody, etc.), a human antibody, a humanized antibody, a chimeric antibody, a single chain antibody, Antibody fragments (eg, Fab, F (ab ′) 2 , Fv) and the like are included.
  • the antibody may be any class of immunoglobulin molecule, such as IgG, IgE, IgM, IgA, IgD, and IgY, or any subclass such as IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, IgA2, and the like.
  • the antibody may be further modified by deglycosylation, acetylation, formylation, amidation, phosphorylation, PEGylation, or the like.
  • a breast cancer cell line SK-BR-3 expressing CAPRIN-1 is administered to a mouse for immunization, the spleen is extracted from the mouse, the cells are separated, and the cells are fused with mouse myeloma cells. From the obtained fused cells (hybridomas), a clone producing an antibody having a cancer cell growth inhibitory action is selected.
  • the antibody of the present invention can be prepared by isolating a monoclonal antibody-producing hybridoma having cancer cell growth inhibitory activity, culturing the hybridoma, and purifying the antibody from the culture supernatant by a general affinity purification method. is there.
  • a hybridoma producing a monoclonal antibody can also be produced, for example, as follows.
  • a sensitizing antigen is injected into a mammal intraperitoneally or subcutaneously.
  • the sensitizing antigen is diluted to an appropriate amount with PBS (Phosphate-Buffered Saline), physiological saline, or the like, and then mixed with an appropriate amount of an ordinary adjuvant, for example, Freund's complete adjuvant, if necessary, and emulsified.
  • an appropriate carrier can be used during immunization with the sensitizing antigen.
  • immune cells are collected from the mammal and subjected to cell fusion. Can be mentioned.
  • Mammalian myeloma cells are used as the other parent cell to be fused with the immune cells.
  • the myeloma cells include various known cell lines such as P3U1 (P3-X63Ag8U1), P3 (P3x63Ag8.653) (J. Immunol. (1979) 123, 1548-1550), P3x63Ag8U. 1 (Current Topics in Microbiology and Immunology (1978) 81, 1-7), NS-1 (Kohler. G. and Milstein, C. Eur. J. Immunol. (1976) 6, 511-511) (Margulies.
  • the cell fusion between the immune cells and myeloma cells is basically performed by a known method, for example, the method of Kohler and Milstein (Kohler, G. and Milstein, C. Methods Enzymol. (1981) 73, 3-46). It can carry out according to etc.
  • the cell fusion is performed, for example, in a normal nutrient culture medium in the presence of a cell fusion promoter.
  • a cell fusion promoter for example, polyethylene glycol (PEG), Sendai virus (HVJ) or the like is used, and an auxiliary agent such as dimethyl sulfoxide can be added and used to increase the fusion efficiency as desired.
  • the usage ratio of immune cells and myeloma cells can be arbitrarily set.
  • As the culture solution used for the cell fusion for example, RPMI1640 culture solution suitable for growth of the myeloma cell line, MEM culture solution, and other normal culture solutions used for this kind of cell culture can be used. Serum replacement fluid such as fetal calf serum (FCS) can be used in combination.
  • FCS fetal calf serum
  • a predetermined amount of the immune cells and myeloma cells are mixed well in the culture medium, and a PEG solution (for example, an average molecular weight of about 1000 to 6000) preliminarily heated to about 37 ° C. is usually 30 to 60%.
  • the target hybridoma is formed by adding and mixing at a concentration of (w / v). Subsequently, it is preferable to remove cell fusion agents and the like which are undesirable for the growth of hybridomas by repeatedly adding an appropriate culture medium and centrifuging to remove the supernatant.
  • the hybridoma thus obtained is selected by culturing in a normal selective culture solution, for example, a HAT culture solution (a culture solution containing hypoxanthine, aminopterin and thymidine). Culturing with the HAT culture solution is continued for a sufficient time (usually several days to several weeks) for cells other than the target hybridoma (non-fusion cells) to die. Subsequently, the usual limiting dilution method is performed, and the hybridoma producing the target antibody is screened and single-cloned.
  • a normal selective culture solution for example, a HAT culture solution (a culture solution containing hypoxanthine, aminopterin and thymidine). Culturing with the HAT culture solution is continued for a sufficient time (usually several days to several weeks) for cells other than the target hybridoma (non-fusion cells) to die. Subsequently, the usual limiting dilution method is performed, and the hybridoma producing the target antibody is screened
  • human lymphocytes such as human lymphocytes infected with EB virus are sensitized in vitro with proteins, protein-expressing cells or lysates thereof. It is also possible to obtain a hybridoma that produces a human antibody having a desired activity (for example, cell growth inhibitory activity) by fusing the lymphocytes with a myeloma cell having permanent mitotic activity derived from human, for example, U266 (registration number TIB196). it can.
  • a desired activity for example, cell growth inhibitory activity
  • the hybridoma producing the monoclonal antibody thus produced can be subcultured in a normal culture solution and can be stored for a long time in liquid nitrogen.
  • a desired antigen or a cell that expresses the desired antigen is used as a sensitizing antigen, and this is immunized according to a normal immunization method, and the resulting immune cell is fused with a known parent cell by a normal cell fusion method. It can be prepared by screening monoclonal antibody-producing cells (hybridoma) by a normal screening method.
  • the antigen can be prepared, for example, according to a method using animal cells (Special Table 2007-530068), a method using baculovirus (for example, International Publication No. WO 98/46777).
  • immunization may be performed by binding to an immunogenic macromolecule such as albumin.
  • the antigen may be immunized by administration with an adjuvant.
  • the antibody of the present invention can also be obtained as a recombinant antibody produced by cloning the antibody gene from a hybridoma, incorporating it into an appropriate vector, introducing it into a host, and using a gene recombination technique.
  • a gene recombination technique for example, Carl, AK Borrebaeck, James, W. Larrick, THERAPEUTIC MONOCLONAL ANTIBODIES, Published in the United KingdomISBL by 19M
  • V region antibody variable region
  • cDNA of an antibody variable region (V region) is synthesized from hybridoma mRNA using reverse transcriptase. If DNA encoding the V region of the target antibody is obtained, it is ligated with DNA encoding the desired antibody constant region (C region) and incorporated into an expression vector.
  • DNA encoding the V region of the antibody may be incorporated into an expression vector containing DNA of the antibody C region. It is incorporated into an expression vector so as to be expressed under the control of an expression control region such as an enhancer or promoter.
  • host cells can be transformed with this expression vector to express the antibody.
  • the anti-CAPRIN-1 antibody of the present invention is preferably a monoclonal antibody, and examples of the monoclonal antibody include human monoclonal antibodies, non-human animal monoclonal antibodies (eg, mouse monoclonal antibodies, rat monoclonal antibodies, rabbits). Monoclonal antibodies, chicken monoclonal antibodies, etc.), chimeric monoclonal antibodies, and the like. Monoclonal antibodies are cultured hybridomas obtained by fusion of spleen cells and myeloma cells from non-human mammals (eg, mice, human antibody-producing mice, chickens, rabbits, etc.) immunized with the CAPRIN-1 protein or fragments thereof. Can be made.
  • non-human mammals eg, mice, human antibody-producing mice, chickens, rabbits, etc.
  • a chimeric antibody is an antibody produced by combining sequences derived from different animals, for example, an antibody comprising a mouse antibody heavy chain, light chain variable region and human antibody heavy chain, light chain constant region, and the like.
  • a chimeric antibody can be prepared using a known method. For example, a DNA encoding an antibody V region and a DNA encoding a human antibody C region are ligated, incorporated into an expression vector, and introduced into a host. It is obtained by producing.
  • a plurality of humanized monoclonal antibodies and human-rabbit chimeric monoclonal antibodies were produced, and a strong antitumor effect was confirmed.
  • These monoclonal antibodies are all represented by the CDR1 represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 1, the CDR2 represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 2, and the amino acid sequence of SEQ ID NO: 3 in the heavy chain variable region (VH region).
  • CDR3 comprising CDR3, CDR1 represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 4, CDR2 represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 5 and CDR3 represented by the amino acid sequence of SEQ ID NO: 6 in the light chain variable region (VL region) Including.
  • These monoclonal antibodies are respectively humanized antibody # 0 comprising a VH region having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a VL region having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11, a VH region having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 11.
  • Humanized antibody # 1 consisting of VL region having amino acid sequence
  • humanized antibody # 2 consisting of VH region having amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 and VL region having amino acid sequence of SEQ ID NO: 12, amino acid sequence of SEQ ID NO: 8
  • a humanized antibody # 3 comprising a VH region having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13 and a humanized antibody # 4 comprising a VH region having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a VL region having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12
  • Humanized antibody # 5 humanized antibody # 6 consisting of a VH region having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and a VL region having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, VH region having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 15
  • Humanized antibody # 7 consisting of VL region having amino acid sequence
  • humanized antibody # 8 consisting of VH region having amino acid sequence of SEQ ID NO: 9 and VL region having amino acid sequence of SEQ ID NO: 15, amino acid sequence of SEQ ID NO: 10
  • a humanized antibody # 9 comprising a VH region having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14 and a humanized antibody # 10 comprising a VH region having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10 and a VL region having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15
  • a human comprising a VH region having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20 and a VL region having the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21 Including the rabbit
  • a humanized antibody is a modified antibody also called a reshaped human antibody.
  • Humanized antibodies are constructed by transplanting the complementarity determining regions of antibodies derived from immunized animals into the complementarity determining regions of human antibodies. The general gene recombination technique is also known.
  • a DNA sequence designed to link the complementarity determining region of a mouse antibody, rabbit antibody or chicken antibody and the framework region of a human antibody is prepared so as to have a portion overlapping the terminal portion. It is synthesized by PCR method from several oligonucleotides. The obtained DNA is obtained by ligating with the DNA encoding the human antibody constant region, then incorporating it into an expression vector, introducing it into a host and producing it (European Patent Application Publication No. EP239400, International Publication No. WO96). No. 02576).
  • a region in which the complementarity determining region forms a favorable antigen binding site is selected.
  • the amino acid of the framework region in the variable region of the antibody may be substituted so that the complementarity determining region of the reshaped human antibody forms an appropriate antigen binding site (Sato K. et al., Cancer Research). 1993, 53: 851-856). Moreover, you may substitute by the framework area
  • variable region e.g, FR
  • constant region amino acids in the variable region or constant region may be substituted with other amino acids.
  • the amino acid substitution is one or more, for example, less than 15, less than 10, 8 or less, 7 or less, 6 or less, 5 or less, 4 or less, 3 or less, or 2 or less amino acids, preferably 1 to 9 amino acids.
  • the substituted antibody should be functionally equivalent to the unsubstituted antibody.
  • “functionally equivalent” means that the antibody of interest has the same biological or biochemical activity as the antibody of the present invention, specifically, a function of damaging a tumor, and when applied to humans. It means not to cause rejection. Examples of such activity include cell growth inhibitory activity or binding activity.
  • a conservative amino acid substitution is a substitution between amino acids having similar properties such as charge, side chain, polarity, and aromaticity.
  • Amino acids with similar properties include, for example, basic amino acids (arginine, lysine, histidine), acidic amino acids (aspartic acid, glutamic acid), uncharged polar amino acids (glycine, asparagine, glutamine, serine, threonine, cysteine, tyrosine), nonpolar It can be classified into sex amino acids (leucine, isoleucine, alanine, valine, proline, phenylalanine, tryptophan, methionine), branched chain amino acids (leucine, valine, isoleucine), aromatic amino acids (phenylalanine, tyrosine, tryptophan, histidine) and the like.
  • modified antibody examples include antibodies bound to various molecules such as polyethylene glycol (PEG).
  • PEG polyethylene glycol
  • the substance to be bound is not limited. In order to obtain such a modified antibody, it can be obtained by chemically modifying the obtained antibody. These methods are already established in this field.
  • an antibody that recognizes a CAPRIN-1 protein or a CAPRIN-1 fragment polypeptide containing the same can be obtained by methods known to those skilled in the art.
  • the epitope of the CAPRIN-1 protein recognized by the anti-CAPRIN-1 antibody is determined by an ordinary method (for example, epitope mapping or the method for identifying an epitope described below), and a polymorph having an amino acid sequence contained in the epitope It can be obtained by a method of producing an antibody using a peptide as an immunogen, a method of determining an epitope of an antibody produced by a usual method, and selecting an antibody having the same epitope as the anti-CAPRIN-1 antibody.
  • the antibody of the present invention is an antibody having immunological reactivity with CAPRIN-1, an antibody that specifically recognizes CAPRIN-1, or an antibody that specifically binds to CAPRIN-1, and has cytotoxic activity against cancer Or an antibody exhibiting tumor growth inhibitory action.
  • the antibody is preferably an antibody having a structure such that little or no rejection is avoided in the subject animal to which it is administered. Examples of such antibodies include human antibodies, humanized antibodies, chimeric antibodies (eg, human-rabbit chimeric antibodies), single-chain antibodies, bispecific antibodies and the like when the target animal is human.
  • These antibodies have a heavy chain and light chain variable region derived from a human antibody or a heavy chain and light chain variable region derived from a complementarity determining region derived from a non-human animal antibody (CDR1, CDR2 and CDR3). It consists of framework regions derived from human antibodies (FR1, FR2, FR3 and FR4), or the variable regions of heavy and light chains are derived from non-human animal antibodies, and heavy and light chains A recombinant antibody in which the constant region of the chain is derived from a human antibody. Preferred antibodies are the previous two antibodies.
  • DNA encoding a monoclonal antibody against human CAPRIN-1 (for example, human monoclonal antibody, mouse monoclonal antibody, rat monoclonal antibody, rabbit monoclonal antibody, chicken monoclonal antibody, etc.) is cloned from antibody-producing cells such as hybridomas and used as a template.
  • DNAs encoding the light chain variable region and heavy chain variable region of the antibody were prepared by RT-PCR method, etc., for example, Kabat EU numbering system (Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological, 5th Ed. Public. National Institute of Health, Bethesd , Md. (1991)), the sequence of each variable region, the sequence of each CDR1, CDR2, CDR3, or the sequence of each FR1, FR2, FR3, FR4 can be determined based on light chain and heavy chain .
  • DNA encoding each of these variable regions or DNA encoding each complementarity-determining region is converted into a gene recombination technique (Sambrook et al., Molecular Cloning A Laboratory Manual, Cold Spring Laboratory Press (1989)) or a DNA synthesizer. It is produced using.
  • the human monoclonal antibody-producing hybridoma is prepared by immunizing a human antibody-producing animal (eg, mouse) with human CAPRIN-1, and then fusing spleen cells excised from the immunized animal with myeloma cells. Can do.
  • DNA encoding the variable region and constant region of the light chain or heavy chain derived from a human antibody is prepared as necessary using a gene recombination technique or a DNA synthesizer.
  • the CDR coding sequence in the DNA encoding the light chain or heavy chain variable region derived from the human antibody is assigned to the corresponding non-human animal (eg, mouse, rat, rabbit, chicken). Etc.) by substituting the CDR coding sequence of the derived antibody, a DNA encoding the humanized antibody can be prepared.
  • the variable regions are human FR1, mouse CDR1, human FR2, mouse CDR2, human FR3, mouse from the N-terminal side. It is composed of CDR4 and human FR4 in this order.
  • a chimeric antibody the DNA encoding the variable region of the light chain or heavy chain of an antibody derived from a non-human animal (eg, mouse, rat, rabbit, chicken, etc.) is respectively added to the light chain or heavy chain derived from a human antibody.
  • a DNA encoding a chimeric antibody can be prepared by ligating with a DNA encoding the constant region of the chain.
  • this antibody is an antibody in which a heavy chain variable region and a light chain variable region are linearly linked via a linker, DNA encoding the heavy chain variable region, DNA encoding the linker And a DNA encoding a light chain variable region can be combined to produce a DNA encoding a single chain antibody.
  • each of the heavy chain variable region and the light chain variable region is derived from a human antibody, or only the complementarity determining region is derived from an animal other than human (eg, mouse, rat, rabbit, chicken, etc.). It is derived from a human antibody substituted by the complementarity determining region of the antibody.
  • the linker is composed of 12 to 19 amino acids, and examples thereof include 15 amino acids (G 4 S) 3 (G.-B. Kim et al., Protein Engineering Design and Selection 2007, 20 (9): 425-432). It is done.
  • this antibody is an antibody that can specifically bind to two different epitopes, eg, DNA encoding heavy chain variable region A, light chain variable region B , DNA encoding heavy chain variable region B, and DNA encoding light chain variable region A are joined in this order (however, DNA encoding light chain variable region B and heavy chain variable region B are combined).
  • the DNA that encodes the bispecific antibody can be prepared by binding to the DNA encoding through the DNA encoding the linker as described above.
  • each of the heavy chain variable region and the light chain variable region is derived from a human antibody, or only the complementarity determining region is derived from an animal other than human (eg, mouse, rat, rabbit, chicken, etc.). It is derived from a human antibody substituted by the complementarity determining region of the antibody.
  • Recombinant DNA prepared as described above is incorporated into one or more appropriate vectors, introduced into host cells (eg, mammalian cells, yeast cells, insect cells, etc.), and (co) expressed
  • host cells eg, mammalian cells, yeast cells, insect cells, etc.
  • a recombinant antibody can be prepared (PJ Delves., ANTIBODY PRODUCTION ESSENTIAL TECHNIQUES., 1997 WILEY, P. Shepherd and C. Dean. SNT. W. Gododing., Monoclonal Antibodies: principals and practices., 1993 Academic PRESS).
  • Examples of the antibody of the present invention produced by the above method include a heavy chain variable region comprising SEQ ID NOs: 1, 2 and 3 and a light chain variable region comprising SEQ ID NOs: 4, 5 and 6 obtained in Examples described later.
  • the humanized antibody, chimeric antibody, single chain antibody or bispecific antibody of the present invention is, for example, the following antibodies (i) to (xiv).
  • variable region of the heavy chain includes the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1, 2, and 3 and the amino acid sequence of the framework region derived from a human antibody or a substitution thereof
  • variable region of the light chain includes SEQ ID NOs: 4, 5 And an amino acid sequence of 6 and a framework region amino acid sequence derived from a human antibody or a substitution thereof.
  • variable region of the heavy chain includes the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1, 2, and 3 and the amino acid sequence of the framework region derived from a human antibody or a substitution thereof, and the constant region of the heavy chain is an amino acid derived from a human antibody
  • the light chain variable region includes the amino acid sequence of SEQ ID NOs: 4, 5 and 6 and the amino acid sequence of the framework region derived from a human antibody or a substitution thereof, and the constant region of the light chain is a human antibody.
  • An antibody comprising an amino acid sequence derived therefrom.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8
  • the constant region of the heavy chain comprises the amino acid sequence derived from a human antibody
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15.
  • An antibody comprising a light chain constant region comprising an amino acid sequence derived from a human antibody.
  • variable region of the heavy chain includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10
  • constant region of the heavy chain includes the amino acid sequence derived from a human antibody
  • variable region of the light chain includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15.
  • An antibody comprising a light chain constant region comprising an amino acid sequence derived from a human antibody.
  • variable region of the heavy chain includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7
  • constant region of the heavy chain includes the amino acid sequence derived from a human antibody
  • variable region of the light chain includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15.
  • An antibody comprising a light chain constant region comprising an amino acid sequence derived from a human antibody.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8
  • the constant region of the heavy chain comprises the amino acid sequence derived from a human antibody
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13.
  • An antibody comprising a light chain constant region comprising an amino acid sequence derived from a human antibody.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7
  • constant region of the heavy chain comprises the amino acid sequence derived from a human antibody
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12.
  • An antibody comprising a light chain constant region comprising an amino acid sequence derived from a human antibody.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8
  • the constant region of the heavy chain comprises the amino acid sequence derived from a human antibody
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12.
  • An antibody comprising a light chain constant region comprising an amino acid sequence derived from a human antibody.
  • variable region of the heavy chain includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7
  • constant region of the heavy chain includes the amino acid sequence derived from a human antibody
  • variable region of the light chain includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13.
  • An antibody comprising a light chain constant region comprising an amino acid sequence derived from a human antibody.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10
  • constant region of the heavy chain comprises the amino acid sequence derived from a human antibody
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14.
  • An antibody comprising a light chain constant region comprising an amino acid sequence derived from a human antibody.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8
  • the constant region of the heavy chain comprises the amino acid sequence derived from a human antibody
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11.
  • An antibody comprising a light chain constant region comprising an amino acid sequence derived from a human antibody.
  • variable region of the heavy chain includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7
  • constant region of the heavy chain includes the amino acid sequence derived from a human antibody
  • variable region of the light chain includes the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11.
  • An antibody comprising a light chain constant region comprising an amino acid sequence derived from a human antibody.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9
  • constant region of the heavy chain comprises the amino acid sequence derived from a human antibody
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15.
  • An antibody comprising a light chain constant region comprising an amino acid sequence derived from a human antibody.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20
  • the constant region of the heavy chain comprises the amino acid sequence derived from a human antibody
  • the variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21
  • An antibody comprising a light chain constant region comprising an amino acid sequence derived from a human antibody.
  • sequences of the human antibody heavy chain and light chain constant regions and variable region framework regions are available from, for example, NCBI (US: GenBank, UniGene, etc.).
  • NCBI GenBank, UniGene, etc.
  • sequences such as registration numbers X64132, X64134 can be referred to.
  • the above antibody preferably has cytotoxic activity, and can thereby exert an antitumor effect (or antitumor activity).
  • the complementarity determining region sequence, the framework region sequence and / or the constant region sequence of each antibody has one or several There may be amino acid substitutions, deletions or additions.
  • the term “several” means preferably 1 to 9.
  • the affinity constant Ka (k on / k off ) of the antibody of the invention for the CAPRIN-1 protein or fragment thereof is preferably at least 5 ⁇ 10 8 M ⁇ 1 , at least 10 9 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10. 9 M ⁇ 1 , at least 10 10 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10 10 M ⁇ 1 , at least 10 11 M ⁇ 1 , at least 5 ⁇ 10 11 M ⁇ 1 , at least 10 12 M ⁇ 1 , at least 10 13 M ⁇ 1 Or at least 10 14 M ⁇ 1 .
  • ADCC effector cell antibody-dependent cytotoxicity
  • the antibody from which fucose bound to N-acetylglucosamine in the N-glycoside-linked sugar chain bound to the heavy chain constant region is removed may be used alone or fucose is bound thereto. It may be a composition with the antibody in question. In the antibody composition, an antibody from which fucose has been removed is preferably the main component.
  • Antibodies in which one or several amino acids in the heavy chain constant region are substituted include, for example, International Publication No. WO2004 / 063511, International Publication No. WO2011 / 120135, US Pat. No. 8,388,955, International Publication No. WO2011 / 005481, US Pat. No. 6,737,056. And International Publication No. WO2005 / 066351.
  • An antibody from which fucose added to N-acetylglucosamine in an N-glycoside-linked sugar chain in the heavy chain constant region is removed or a production cell thereof is disclosed in, for example, US Pat. No. 6,602,684, European Patent 191244, and US Pat. No. 7,579,170. It can produce with reference to.
  • the antibody of the present invention can be conjugated with an antitumor agent.
  • the bond between the antibody and the antitumor agent is a group reactive with an amino group, carboxyl group, hydroxy group, thiol group, etc. (for example, succinate imidyl group, formyl group, 2-pyridyldithio group, maleimidyl group, alkoxycarbonyl group). , A hydroxy group, etc.).
  • antitumor agents include the following antitumor agents known in the literature, such as paclitaxel, doxorubicin, daunorubicin, cyclophosphamide, methotrexate, 5-fluorouracil, thiotepa, busulfan, improsulfan, piperosulfan, benzodopa (benzodopa) ), Carbocone, methredopa, uredopa, uretopa, altreamine, triethylenemelamine, triethylenephosphoramide, triethylenethiophosphoramide, trimethylolothramine , Camptothecin, bryostatin, calistatin ( allystatin), cryptophycin 1, cryptophycin 8, dolastatin, duocarmycin, eleuterbin, panclastatin, sarcodictin, spongestatin, chlorambucil, chloronaphazine, cholophosphamide, estram Ifosfamide, mechlore
  • a method for evaluating whether it exhibits antitumor activity is, for example, a mouse-derived anti-CAPRIN-1 antibody, which binds to a mouse antibody.
  • the anti-tumor effect against human cancer cells can be evaluated in vitro by reacting the next antibody with a drug at the same time. For example, it can be evaluated using anti-human IgG antibody antibody (Hum-ZAP (Advanced Targeting Systems)), which is a second immunotoxin to which saporin is bound.
  • a higher therapeutic effect can be obtained by co-administering the antibody of the present invention and an antitumor agent.
  • This technique can be applied to cancer patients expressing CAPRIN-1 either before or after surgery. In particular, after surgery, cancer recurrence and longer survival can be obtained for cancers expressing CAPRIN-1, which have been treated with an antitumor agent alone.
  • the antitumor agent used for the combined administration with the antibody of the present invention for example, can be used.
  • the antitumor agent can be used.
  • cyclophosphamide, paclitaxel, doxetaxel and vinorelbine are preferably used.
  • the antibodies of the present invention include 211 At, 131 I, 125 I, 90 Y, 186 Re, 188 Re, 153 SM, 212 Bi, 32 P, 175 Lu, 176 Lu, 89 Sr, which are well known in the literature. It is also possible to combine radioisotopes such as 64 Cu and 111 In (Hideo Sagi, YAKUGAKU ZASSHI 128 (3) 323-332 8 (2008), Jpn). It is desirable that the radioisotope is effective for tumor treatment and diagnosis. Such a radioisotope is also included in the antitumor agent in the present invention.
  • the anti-tumor effect on CAPRIN-1-expressing cancer cells by the anti-CAPRIN-1 antibody used in the present invention is considered to occur by the following mechanism, etc .: Effector cell antibody-dependent cytotoxicity of the aforementioned CAPRIN-1-expressing cells (ADCC) and antibody-dependent cellular phagocytosis (ADCP) of CAPRIN-1-expressing cells.
  • ADCC CAPRIN-1-expressing cells
  • ADCP antibody-dependent cellular phagocytosis
  • the activity of the anti-CAPRIN-1 antibody used in the present invention is evaluated in vitro by the above ADCC activity or ADCP activity against cancer cells expressing CAPRIN-1, as specifically shown in the Examples below. It can be evaluated by measuring.
  • the anti-CAPRIN-1 antibody used in the present invention binds to the CAPRIN-1 protein on cancer cells and exhibits an antitumor action due to the above activity and the like, and is thus considered useful for the treatment or prevention of cancer. That is, the present invention provides a pharmaceutical composition for treating and / or preventing cancer comprising an anti-CAPRIN-1 antibody as an active ingredient.
  • the anti-CAPRIN-1 antibody is used for the purpose of administering it to the human body (antibody treatment), it is preferable to use a human antibody or a humanized antibody in order to reduce immunogenicity.
  • the antibody of the present invention has a high binding affinity with the CAPRIN-1 protein, it can be expected to have a stronger antitumor effect and can be applied as a pharmaceutical composition for the purpose of cancer treatment and / or prevention. become.
  • the antibody of the present invention has a binding constant (affinity constant) Ka (k on / k off ) of preferably at least 5 ⁇ 10 8 M ⁇ 1 , at least 10 9 M ⁇ as high binding affinity.
  • ⁇ Binding to antigen-expressing cells The ability of an antibody to bind to CAPRIN-1 can be identified using binding assays such as those described in the Examples, eg, ELISA, Western blot, immunofluorescence and flow cytometry analysis. .
  • Antibodies that recognize CAPRIN-1 can be used in immunohistochemistry in a manner well known to those skilled in the art. For example, tissue obtained from a patient during surgery or tissue obtained from an animal carrying a xenograft tissue inoculated with a cell line expressing CAPRIN-1 either naturally or after transfection is fixed with paraformaldehyde or acetone. Frozen sections obtained in this manner or paraffin-embedded tissue sections fixed with paraformaldehyde can be used to test for reactivity with CAPRIN-1.
  • an antibody reactive to CAPRIN-1 can be stained by various methods. For example, it can be visualized by reacting horseradish peroxidase-conjugated goat anti-mouse antibody, goat anti-rabbit antibody or goat anti-chicken antibody.
  • the target of the pharmaceutical composition for the treatment and / or prevention of cancer of the present invention is not particularly limited as long as it is a cancer (cell) expressing the CAPRIN-1 gene.
  • tumor and cancer refer to malignant neoplasms and are used interchangeably.
  • the cancer targeted in the present invention may be any cancer as long as it expresses the CAPRIN-1 protein on the cell membrane surface.
  • the cancer is, for example, breast cancer, complex breast cancer, malignant mixed breast tumor, intraductal papillary adenocarcinoma, lung adenocarcinoma, squamous cell carcinoma, small cell carcinoma, large cell carcinoma, neuroepithelium Glioma, glioblastoma, neuroblastoma, ventricular ependymoma, neuronal tumor, fetal neuroectodermal tumor, schwannoma, neurofibroma, meningioma, chronic type Lymphocytic leukemia, gastrointestinal lymphoma, gastrointestinal lymphoma, small to medium cell lymphoma, cecal cancer, ascending colon cancer, descending colon cancer, transverse colon cancer, sigmoid colon cancer, rectal cancer, ovarian epithelial cancer, embryo Cell tumor, stromal cell tumor, pancreatic duct cancer, invasive pancreatic duct cancer, adenocarcinoma of pancreatic cancer, acinar cell carcinoma
  • preferred subjects (patients) to be targeted are mammals, for example, mammals including primates, pet animals, livestock, sport animals, etc., and humans, dogs and cats are particularly preferable.
  • the antibody used in the present invention when used as a pharmaceutical composition, it can be formulated by methods known to those skilled in the art. For example, it can be used parenterally in the form of a sterile solution with water or other pharmaceutically acceptable liquid, or an injection of suspension.
  • a pharmacologically acceptable carrier or medium specifically, sterile water or physiological saline, vegetable oil, emulsifier, suspension agent, surfactant, stabilizer, flavoring agent, excipient, vehicle, preservative
  • a pharmaceutical preparation by combining with a binder or the like as appropriate and mixing in a unit dosage form generally required for pharmaceutical practice. The amount of active ingredient in these preparations is such that an appropriate dose within the indicated range can be obtained.
  • a sterile composition for injection can be formulated in accordance with normal pharmaceutical practice using a vehicle such as distilled water for injection.
  • Aqueous solutions for injection include, for example, isotonic solutions containing physiological saline, glucose and other adjuvants such as D-sorbitol, D-mannose, D-mannitol and sodium chloride.
  • isotonic solutions containing physiological saline, glucose and other adjuvants such as D-sorbitol, D-mannose, D-mannitol and sodium chloride.
  • alcohols specifically ethanol, polyalcohols such as propylene glycol, polyethylene glycol, nonionic surfactants such as polysorbate 80 (TM), HCO-60 may be used in combination.
  • oily liquid examples include sesame oil and soybean oil, which may be used in combination with benzyl benzoate or benzyl alcohol as a solubilizing agent.
  • oily liquid examples include sesame oil and soybean oil, which may be used in combination with benzyl benzoate or benzyl alcohol as a solubilizing agent.
  • blend with buffer for example, phosphate buffer, sodium acetate buffer, soothing agent, for example, procaine hydrochloride, stabilizer, for example, benzyl alcohol, phenol, antioxidant.
  • buffer for example, phosphate buffer, sodium acetate buffer
  • soothing agent for example, procaine hydrochloride
  • stabilizer for example, benzyl alcohol, phenol, antioxidant.
  • the prepared injection solution is usually filled into a suitable ampoule.
  • Administration is oral or parenteral, preferably parenteral administration. Specific examples include injection, nasal administration, pulmonary administration, and transdermal administration. As an example of the injection form, it can be administered systemically or locally by, for example, intravenous injection, intramuscular injection, intraperitoneal injection, subcutaneous injection, or the like.
  • the administration method can be appropriately selected depending on the age, weight, sex, symptoms, etc. of the patient.
  • the dosage of the pharmaceutical composition containing the antibody or the polynucleotide encoding the antibody can be selected, for example, in the range of 0.0001 mg to 1000 mg per kg body weight. Alternatively, for example, the dose can be selected in the range of 0.001 to 100,000 mg / body per patient, but is not necessarily limited to these values.
  • the dose and administration method vary depending on the patient's weight, age, sex, symptom, etc., but can be appropriately selected by those skilled in the art.
  • Cancer preferably breast cancer, kidney cancer, pancreatic cancer, colon cancer, lung cancer, brain tumor, stomach cancer, uterine cancer, ovarian cancer, prostate, by administering to a subject the above pharmaceutical composition comprising the antibody of the present invention or a fragment thereof Cancer, bladder cancer, esophageal cancer, leukemia, lymphoma, liver cancer, gallbladder cancer, sarcoma, mastocytoma, melanoma, adrenocortical cancer, Ewing tumor, Hodgkin lymphoma, mesothelioma, multiple myeloma, testicular cancer, thyroid cancer Or head and neck cancer can be treated and / or prevented.
  • a method for treating and / or preventing cancer comprising administering the pharmaceutical composition of the present invention to a subject in combination with an antitumor agent or a pharmaceutical composition containing an antitumor agent as exemplified above.
  • the antibody or fragment thereof of the present invention and the antitumor agent can be administered to a subject simultaneously or separately.
  • any pharmaceutical composition may be earlier or later, and the administration interval, dosage, administration route and frequency of administration can be appropriately selected by a specialist.
  • a pharmaceutical composition in the form of a pharmaceutical preparation obtained by mixing the antibody of the present invention or a fragment thereof and an antitumor agent in a pharmacologically acceptable carrier (or medium) and preparing a formulation is also included.
  • a pharmaceutical composition in the form of a pharmaceutical preparation obtained by mixing the antibody of the present invention or a fragment thereof and an antitumor agent in a pharmacologically acceptable carrier (or medium) and preparing a formulation is also included.
  • a pharmaceutical compositions and dosage forms containing an antitumor agent the formulation, formulation, administration route, dose, cancer, etc. for the pharmaceutical composition and dosage form containing the antibody of the present invention The explanation can be applied.
  • the present invention provides a pharmaceutical combination for the treatment and / or prevention of cancer comprising the pharmaceutical composition of the present invention and a pharmaceutical composition comprising an antitumor agent as exemplified above, and administering the same
  • a method for treating and / or preventing cancer is also provided.
  • the present invention also provides a pharmaceutical composition for treating and / or preventing cancer comprising the antibody of the present invention or a fragment thereof and an antitumor agent together with a pharmacologically acceptable carrier.
  • the present invention further provides DNA encoding the antibody of the present invention, DNA encoding the heavy chain or light chain of the antibody, or DNA encoding the variable region of the heavy chain or light chain of the antibody.
  • DNA is, for example, in the case of antibody (a), a DNA encoding a heavy chain variable region comprising a base sequence encoding the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 1, 2 and 3, and the amino acid sequences of SEQ ID NOs: 4, 5 and 6 DNA encoding a light chain variable region containing a nucleotide sequence encoding
  • sequences encoding the other regions of the antibody are the other regions.
  • the sequence may be derived from an antibody.
  • other antibodies include antibodies derived from organisms other than humans, but those derived from humans are preferable from the viewpoint of reducing side effects. That is, in the above DNA, the regions encoding the heavy chain and light chain framework regions and the constant regions preferably include a base sequence encoding a corresponding amino acid sequence derived from a human antibody.
  • DNA encoding the antibody of the present invention is, for example, a DNA encoding a heavy chain variable region comprising a base sequence encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8, and a region encoding the light chain variable region is SEQ ID NO:
  • DNA containing a nucleotide sequence encoding 15 amino acid sequences is the base sequence of SEQ ID NO: 23.
  • An example of the base sequence encoding the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15 is the base sequence of SEQ ID NO: 30.
  • the region encoding each heavy chain and light chain constant region includes a base sequence encoding a corresponding amino acid sequence derived from a human antibody.
  • the DNA of these antibodies can be obtained, for example, by the above method or the following method.
  • total RNA is prepared from a hybridoma related to the antibody of the present invention using a commercially available RNA extraction kit, and cDNA is synthesized by reverse transcriptase using a random primer or the like.
  • the cDNA encoding the antibody is amplified by a PCR method using oligonucleotides having conserved sequences as primers.
  • the sequence encoding the constant region can be obtained by amplifying a known sequence by the PCR method.
  • the base sequence of DNA can be determined by a conventional method by incorporating it into a sequencing plasmid or phage.
  • the present invention further provides the polypeptides and DNAs described in the following (i) to (xv) related to the antibodies (i) to (xiv).
  • a polypeptide comprising the amino acid sequences of SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 15 and a DNA encoding the polypeptide, for example, a DNA comprising the nucleotide sequences of SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 30.
  • a polypeptide comprising the amino acid sequences of SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 15 and a DNA encoding the polypeptide, for example, a DNA comprising the nucleotide sequences of SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 30.
  • V a polypeptide comprising the amino acid sequences of SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 15 and a DNA encoding the polypeptide, for example, a DNA comprising the nucleotide sequences of SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 30.
  • a polypeptide comprising the amino acid sequences of SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 13 and a DNA encoding the polypeptide, for example, a DNA comprising the nucleotide sequences of SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 28.
  • a polypeptide comprising the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 12 and a DNA encoding the polypeptide, for example, a DNA comprising the nucleotide sequence of SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 27.
  • a polypeptide comprising the amino acid sequences of SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 12 and a DNA encoding the polypeptide, for example, a DNA comprising the nucleotide sequences of SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 27.
  • a polypeptide comprising the amino acid sequences of SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 13 and a DNA encoding the polypeptide, for example, a DNA comprising the nucleotide sequences of SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 28.
  • (X) a polypeptide comprising the amino acid sequences of SEQ ID NO: 10 and SEQ ID NO: 14 and a DNA encoding the polypeptide, for example, a DNA comprising the nucleotide sequences of SEQ ID NO: 25 and SEQ ID NO: 29.
  • a polypeptide comprising the amino acid sequences of SEQ ID NO: 8 and SEQ ID NO: 11 and a DNA encoding the polypeptide, for example, a DNA comprising the nucleotide sequences of SEQ ID NO: 23 and SEQ ID NO: 26.
  • Xii a polypeptide comprising the amino acid sequences of SEQ ID NO: 7 and SEQ ID NO: 11 and a DNA encoding the polypeptide, for example, a DNA comprising the nucleotide sequences of SEQ ID NO: 22 and SEQ ID NO: 26.
  • polypeptide comprising the amino acid sequences of SEQ ID NO: 9 and SEQ ID NO: 15 and a DNA encoding the polypeptide, for example, a DNA comprising the nucleotide sequences of SEQ ID NO: 24 and SEQ ID NO: 30.
  • a polypeptide comprising the amino acid sequences of SEQ ID NO: 20 and SEQ ID NO: 21 and a DNA encoding the polypeptide, for example, a DNA comprising the nucleotide sequences of SEQ ID NO: 31 and SEQ ID NO: 32.
  • polypeptides and DNA can be prepared using genetic recombination techniques as described above.
  • a heavy chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 1, 2, and 3 and a light chain variable region comprising the complementarity determining regions of SEQ ID NOs: 4, 5, and 6, and a CAPRIN-1 protein
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 12.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 13.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 10
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 14.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 8
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 7
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 11.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 9
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 15.
  • variable region of the heavy chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 20
  • variable region of the light chain comprises the amino acid sequence of SEQ ID NO: 21.
  • a pharmaceutical composition for the treatment and / or prevention of cancer comprising:
  • the cancer is breast cancer, renal cancer, pancreatic cancer, colon cancer, lung cancer, brain tumor, stomach cancer, uterine cancer, ovarian cancer, prostate cancer, bladder cancer, esophageal cancer, leukemia, lymphoma, liver cancer, gallbladder cancer, sarcoma,
  • the pharmaceutical composition according to (20) which is mastocytoma, melanoma, adrenocortical cancer, Ewing tumor, Hodgkin lymphoma, mesothelioma, multiple myeloma, testicular cancer, thyroid cancer, or head and neck cancer.
  • a combined pharmaceutical for treatment and / or prevention of cancer comprising the pharmaceutical composition according to (20) or (21) and a pharmaceutical composition containing an antitumor agent.
  • the antibody or fragment thereof according to any one of (1) to (16), the antibody according to (17), the composition of the antibody according to (18), or the antibody according to (20) or (21) A method for treating and / or preventing cancer, comprising administering to a subject a pharmaceutical composition or the combination pharmaceutical according to (22).
  • Example 1 Production of Anti-CAPRIN-1 Monoclonal Antibody Using Rabbit 300 ⁇ g of human CAPRIN-1 protein prepared in Example 3 of WO2010 / 016526 was mixed with an equal volume of Freund's complete adjuvant, and this was per rabbit. An antigen solution was used. In the second and subsequent immunizations, those mixed with incomplete adjuvant with Frein were used. Immunization was completed by administering the antigen solution into the abdominal cavity of a 12-week-old rabbit 8 times every 2-3 weeks. Lymphocytes were obtained from each spleen removed 4 days after the last immunization, mixed with rabbit myeloma cells 240E-W2 at a ratio of 1: 2, and then RPMI containing 10% FBS heated to 37 ° C.
  • RPMI medium HAT selective medium
  • Hybridomas were selected using the reactivity of the antibody produced by the prepared hybridomas to the CAPRIN-1 protein as an index.
  • 100 ⁇ L of CAPRIN-1 protein solution 1 ⁇ g / mL was added per well of a 96-well plate, and the plate was allowed to stand at 4 ° C. for 18 hours.
  • 400 ⁇ L of 0.5% Bovine Serum Albumin (BSA) solution was added per well and allowed to stand at room temperature for 3 hours.
  • BSA Bovine Serum Albumin
  • hybridomas were added to the plate so that the number was 0.5 per well of the 96-well plate and cultured. One week later, hybridomas forming a single colony in the well were observed. The cells in these wells were further cultured, and hybridomas were selected using the reactivity of antibodies produced by the cloned hybridomas with the CAPRIN-1 protein as an index. As a result of evaluating the reactivity of each antibody to the CAPRIN-1 protein by the same operation as described above, a plurality of hybridoma strains producing a rabbit monoclonal antibody reactive to the CAPRIN-1 protein were obtained.
  • the resulting rabbit anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody has the heavy chain variable region shown in SEQ ID NO: 20 and CDRs 1 to 3 in the heavy chain variable region from the amino acid sequences of SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, and SEQ ID NO: 3, respectively.
  • the light chain variable region shown in SEQ ID NO: 21 and CDRs 1 to 3 in the light chain variable region consist of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, and SEQ ID NO: 6, respectively.
  • Microcentrifuge tube 1.5mL volume collected Kakugan cells to 10 6, respectively, were added the culture supernatant of hybridomas producing rabbit anti caprin-1 monoclonal antibody obtained above a (100 [mu] L) to each tube, The reaction was carried out at 4 ° C. for 1 hour. After washing with 0.5% FBS-PBS ( ⁇ ), a FITC-labeled goat anti-rabbit IgG (H + L) antibody (Jackson ImmunoResearch) diluted 50-fold with 0.5% FBS-PBS ( ⁇ ) was added. It left still at 4 degreeC for 60 minutes.
  • the cells After washing with 0.5% FBS-PBS ( ⁇ ), the cells were suspended in 0.5% FBS-PBS ( ⁇ ) containing Propium iodide at a final concentration of 0.2 ⁇ g / mL, and FACSCalibur TM or FACSVerse TM ( The fluorescence intensity was measured by Becton Dickinson and Company.
  • a negative control a negative control sample was prepared by performing the same operation as described above using a hybridoma culture medium. As a result, the fluorescence intensity when using the culture supernatant of the hybridoma producing the rabbit anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody is stronger than that when using the negative control in all the cancer cells used in the above evaluation. It was. From the above results, it was confirmed that the rabbit anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody reacts with CAPRIN-1 on the surface of the cancer cell membrane of human cancer cells.
  • Example 2 Production of human-rabbit chimeric anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody For expressing the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by SEQ ID NO: 20 of the rabbit anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody identified in Example 1
  • the gene and the gene for expressing the light chain variable region represented by SEQ ID NO: 21 are inserted into the mammalian cell expression vector into which the heavy chain constant region of human IgG1 is inserted and the light chain constant region of human IgG1, respectively. And inserted into a mammalian cell expression vector.
  • the prepared two recombinant expression vectors were introduced into mammalian cells according to a conventional method to obtain a culture supernatant containing a human-rabbit chimeric anti-CAPRIN-1 antibody (human-rabbit chimeric antibody).
  • the culture supernatant containing the chimerized antibody thus obtained was purified using Hitrap Protein A Sepharose FF (manufactured by GE Healthcare) according to a conventional method, and replaced with PBS (-), and a 0.22 ⁇ m filter (manufactured by Millipore). What was filtered with was prepared.
  • Example 3 Production of Humanized Anti-CAPRIN-1 Monoclonal Antibody
  • CDR1-3 in the heavy chain variable region and CDR1 in the light chain variable region of the rabbit anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody identified in Example 1 were used.
  • the heavy chain variable region represented by SEQ ID NO: 7 consisting of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, and SEQ ID NO: 3, respectively, based on the amino acid sequence and base sequence information of 3
  • the nucleotide sequence was designed so as to express the amino acid sequence, and this was inserted into a mammalian cell expression vector into which the heavy chain constant region of human IgG1 was inserted.
  • the CDRs 1 to 3 of the light chain variable region are expressed so that the amino acid sequence of the light chain variable region represented by SEQ ID NO: 11 consisting of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 6 can be expressed.
  • the sequence was designed and inserted into a mammalian cell expression vector into which the light chain constant region of human IgG1 was inserted.
  • the above two recombinant expression vectors are introduced into mammalian cells according to a conventional method, and humanized antibody # consisting of the heavy chain full-length amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 7 and the light chain full-length amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 11 A culture supernatant containing 0 was obtained.
  • the heavy chain variable region CDRs 1 to 3 are respectively represented by SEQ ID NO: 8, consisting of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 3, and SEQ ID NO: 11.
  • SEQ ID NO: 8 consisting of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 3, and SEQ ID NO: 11.
  • a culture supernatant containing humanized antibody # 1 consisting of the amino acid sequence of the light chain variable region shown was obtained.
  • the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by SEQ ID NO: 8 and the light chain variable region CDRs 1 to 3 are the light chains represented by SEQ ID NO: 12 consisting of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 6, respectively.
  • Humanized antibody # 2 consisting of the full-length amino acid sequence.
  • amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by SEQ ID NO: 8 and the light chain variable region CDRs 1 to 3 are each represented by SEQ ID NO: 13 consisting of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 6, respectively.
  • Humanized antibody # 3 consisting of the full-length amino acid sequence.
  • Humanized antibody # 4 consisting of the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by SEQ ID NO: 7 and the light chain full-length amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 12.
  • Humanized antibody # 5 consisting of the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by SEQ ID NO: 7 and the light chain full-length amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 13.
  • the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by SEQ ID NO: 7 and the light chain variable region CDRs 1 to 3 are the light chains represented by SEQ ID NO: 15 comprising the amino acid sequences of SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 6, respectively.
  • Humanized antibody # 6 consisting of the full-length amino acid sequence.
  • Humanized antibody # 7 consisting of the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by SEQ ID NO: 8 and the light chain full-length amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15.
  • the heavy chain variable region CDRs 1 to 3 are respectively represented by SEQ ID NO: 9, consisting of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2 and SEQ ID NO: 3, and the light chain variable region represented by SEQ ID NO: 15.
  • Humanized antibody # 8 consisting of the full-length amino acid sequence.
  • the heavy chain variable region CDRs 1-3 are represented by SEQ ID NO: 10, each consisting of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, and SEQ ID NO: 3, and the light chain variable region CDRs 1-3 Humanized antibody # 9 consisting of the light chain full-length amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 14 consisting of the amino acid sequences of SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5 and SEQ ID NO: 6, respectively.
  • Humanized antibody # 10 consisting of the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by SEQ ID NO: 10 and the light chain full-length amino acid sequence represented by SEQ ID NO: 15.
  • the obtained culture supernatant containing humanized antibodies # 0 to # 10 was purified using Hitrap Protein A Sepharose FF (manufactured by GE Healthcare) according to a conventional method, and replaced with PBS ( ⁇ ) to obtain a 0.22 ⁇ m filter. What was filtered by (Millipore) was prepared.
  • Example 4 Antigen specificity of human-rabbit chimeric antibody and humanized antibodies # 0 to # 10 and reactivity to cancer cells
  • human-rabbit chimeric antibody prepared in Example 2 and prepared in Example 3 The specific reactivity of the humanized antibodies # 0 to # 10 to the CAPRIN-1 protein was confirmed by ELISA according to a conventional method. Specifically, 100 ⁇ L of a PBS solution containing 5 ⁇ g / mL CAPRIN-1 protein was added in advance per well of a 96-well plate, and allowed to stand at 4 ° C. for 18 hours.
  • a blocking solution composed of a PBS solution containing 5% skim milk was added per well, and the mixture was allowed to stand at room temperature for 3 hours.
  • each solution containing the human-rabbit chimeric antibody and humanized antibodies # 0 to # 10 prepared to 1 ⁇ g / mL with PBS containing 0.2% skim milk was added.
  • 50 ⁇ L per well was added to each well and allowed to stand at room temperature for 1 hour.
  • a negative control a well to which a human IgG antibody that was confirmed not to react with the CAPRIN-1 protein was added at the same antibody concentration and a well to which no antibody was added were prepared simultaneously.
  • human-rabbit chimeric antibody and humanized antibody # 0 to # 10 are collected in a 1.5 mL microcentrifuge tube, and the final concentration of human-rabbit chimeric antibody and humanized antibody # 0 to # 10 is 50 ⁇ g / mL. Thus, it added to each tube and made it react at 4 degreeC for 1 hour.
  • An Alexa488-labeled goat anti-human IgG (H + L) antibody (manufactured by Life Technologies) washed twice with 0.5% FBS-PBS ( ⁇ ) and diluted 100-fold with 0.5% FBS-PBS ( ⁇ ) The mixture was added and allowed to stand at 4 ° C. for 60 minutes.
  • the cells were suspended in 0.5% FBS-PBS ( ⁇ ) containing Propium iodide at a final concentration of 0.2 ⁇ g / mL, and FACSCalibur TM or FACSVerse TM (The fluorescence intensity was measured by Becton Dickinson and Company.
  • FACSCalibur TM or FACSVerse TM The fluorescence intensity was measured by Becton Dickinson and Company.
  • a negative control one prepared by performing the same operation as described above using a hybridoma culture medium was used.
  • the fluorescence intensity of the human-rabbit chimeric antibody and the humanized antibodies # 0 to # 10 was stronger than the fluorescence intensity when the negative control was used in all the cancer cells used in the above evaluation. From the above results, it was confirmed that the human-rabbit chimeric antibody and humanized antibodies # 0 to # 10 react with the CAPRIN-1 protein expressed on the surface of the human cancer cell membrane.
  • Example 5 Anti-tumor activity of human-rabbit chimeric antibody and humanized antibodies # 0 to # 10 against various human cancer cells
  • human-rabbit chimeric antibody prepared in Example 2 and human prepared in Example 3 The anti-tumor effect of conjugated antibodies # 0 to # 10 on various human cancer cells was evaluated by ADCC activity.
  • anti-CAPRIN-1 antibodies were used as comparative antibodies for human-rabbit chimeric antibodies and humanized antibodies # 0 to # 10.
  • Comparative antibody 1 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 26 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 27, and the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 28 and SEQ ID NO: 29, which are antibodies described in WO2010 / 016526
  • Comparative antibody 2 having a light chain variable region
  • comparative antibody 3 having a heavy chain variable region of SEQ ID NO: 30 and a light chain variable region of SEQ ID NO: 31, heavy chain variable region of SEQ ID NO: 32 and light chain variable region of SEQ ID NO: 33
  • a comparative antibody 4 having a heavy chain variable region of SEQ ID NO: 34 and a light chain variable region of SEQ ID NO: 35, a comparative antibody having a heavy chain variable region of SEQ ID NO: 36 and a light chain variable region of SEQ ID NO: 37 6.
  • Comparative antibody 7 having a heavy chain variable region of SEQ ID NO: 38 and a light chain variable region of SEQ ID NO: 39
  • Comparative antibody 8 having a heavy chain variable region of SEQ ID NO: 40 and a light chain variable region of SEQ ID NO: 41
  • SEQ ID NO: 42 's Comparative antibody 9 having a chain variable region and a light chain variable region of SEQ ID NO: 43
  • Comparative antibody 10 having a heavy chain variable region of SEQ ID NO: 44 and a light chain variable region of SEQ ID NO: 45, and a heavy chain variable region of SEQ ID NO: 46
  • Comparative antibody 11 having the light chain variable region of SEQ ID NO: 47.
  • Comparative antibody 12 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 43 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 47, and the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 43 and SEQ ID NO: 53 of the antibody described in WO2011 / 096517 Comparative antibody 13 with light chain variable region.
  • Comparative antibody 14 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 43 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 47, and the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 51 and SEQ ID NO: 55, which are antibodies described in WO2011 / 096528
  • Comparative antibody 15 having a light chain variable region
  • comparative antibody 16 having a heavy chain variable region of SEQ ID NO: 59 and a light chain variable region of SEQ ID NO: 63, heavy chain variable region of SEQ ID NO: 76 and light chain variable region of SEQ ID NO: 80
  • Comparative antibody 17 having a heavy chain variable region of SEQ ID NO: 84 and a light chain variable region of SEQ ID NO: 88, Comparative antibody having a heavy chain variable region of SEQ ID NO: 92 and a light chain variable region of SEQ ID NO: 96 19.
  • Comparative antibody 20 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 42 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 46 in the antibody described in WO2011 / 096519.
  • Comparative antibody 21 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 43 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 51, and the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 47 and SEQ ID NO: 51 of the antibody described in WO2011 / 096533
  • Comparative antibody 22 having a light chain variable region
  • Comparative antibody 23 having a heavy chain variable region of SEQ ID NO: 63 and a light chain variable region of SEQ ID NO: 67.
  • Comparative antibody 24 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 43 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 47, the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 43, and SEQ ID NO: 51, which are antibodies described in WO2011 / 096534 Comparative antibody 25 having a light chain variable region, comparative antibody 26 having a heavy chain variable region of SEQ ID NO: 63 and a light chain variable region of SEQ ID NO: 67.
  • Comparative antibody 27 which is an antibody described in WO2013 / 018894 and has the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 9 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 13, and the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 19 and SEQ ID NO: 23
  • Comparative antibody 28 having a light chain variable region
  • comparative antibody 29 having a heavy chain variable region of SEQ ID NO: 9 and a light chain variable region of SEQ ID NO: 53, heavy chain variable region of SEQ ID NO: 58 and light chain variable region of SEQ ID NO: 62
  • a comparative antibody 30 having a heavy chain variable region of SEQ ID NO: 63 and a light chain variable region of SEQ ID NO: 65, a comparative antibody having a heavy chain variable region of SEQ ID NO: 69 and a light chain variable region of SEQ ID NO: 73 32.
  • Comparative antibody 33 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 77 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 81.
  • Comparative antibody 34 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 8 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 12 in the antibody described in WO2013 / 018892.
  • Comparative antibody 35 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 8 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 12 in the antibody described in WO2013 / 018891.
  • Comparative antibody 36 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 8 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 12 in the antibody described in WO2013 / 018889.
  • Comparative antibody 37 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 8 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 12 described in WO2010 / 018883.
  • Comparative antibody 38 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 6 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 7 described in WO2013 / 125636.
  • Comparative antibody 39 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 52 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 54, which is an antibody described in WO2013 / 125654.
  • Comparative antibody 40 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 21 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 23 in the same document.
  • Comparative antibody 41 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 25 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 23 in the same document.
  • Comparative antibody 42 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 16 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 18 in the same document.
  • Comparative antibody 43 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 29 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 33 in the same document.
  • Comparative antibody 44 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 39 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 43 in the same document.
  • a comparative antibody 45 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 49 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 43 in the same document.
  • Comparative antibody 46 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 11 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 15 described in WO2013 / 125630.
  • Comparative antibody 47 which is an antibody described in WO2013 / 125640 and has a heavy chain variable region of SEQ ID NO: 11 and a light chain variable region of SEQ ID NO: 15 in the same document.
  • Comparative antibody 48 having the heavy chain variable region of SEQ ID NO: 21 and the light chain variable region of SEQ ID NO: 25 in the same document.
  • the above-described antibodies (Comparative antibodies 1 to 48) were prepared by expressing a gene for expressing the amino acid sequence of the heavy chain variable region and a gene for expressing the light chain variable region, respectively, in the heavy chain constant of human IgG1.
  • Mammalian cell expression vector pcDNA4 / myc-His (Life Technologies) with inserted region and mammalian cell expression vector pcDNA3.1 / myc-His (Life Technologies) with inserted light chain constant region of human IgG1
  • the human chimeric or humanized antibody obtained by introducing the two recombinant expression vectors thus prepared into mammalian cells according to a conventional method is purified using Hitrap Protein A Sepharose FF (manufactured by GE Healthcare), Replace with PBS (-) to 0.22 Used was filtered with m filter (Millipore).
  • a well to which an isotype control antibody was added a well to which no antibody was added, and an antibody that reacts with the CAPRIN-1 protein but does not react with the surface of human cancer cells expressing CAPRIN-1.
  • Added wells were prepared. Each antibody was added to a V-bottom 96-well plate at a final concentration of 5 ⁇ g / mL.
  • human NK cells separated from human peripheral blood mononuclear cells by a conventional method were used.
  • Human peripheral blood mononuclear cells are separated using a specific gravity separation solution Histopaque (Sigma Aldrich) for separation of peripheral blood mononuclear cells, and labeled with a FITC fluorescent dye (anti-human CD3 antibody, anti-human CD20 antibody, React with anti-human CD19 antibody, anti-human CD11c antibody, anti-HLA-DR antibody (Farmingen) and use cell sorter (FACS Vantage SE (Becton Dickinson and Company)), do not stain with the above antibody, NK A cell population containing cells or a human NK cell separation kit (Milteny) was used.
  • a V-bottom 96-well plate to which the above antibodies were added was prepared by adding 0.4 to 2.0 ⁇ 10 5 human NK cells per well.
  • Target cells are breast cancer cells (BT-474, MDA-MB-361), colon cancer cells (HT-29), lung cancer cells (QG56), stomach cancer cells (NCI-N87), uterine cancer cells (HEC-1-A). ), Prostate cancer cells (22Rv1), pancreatic cancer cells (Panc 10.5), liver cancer cells (Hep3B), ovarian cancer cells (SKOV3), renal cancer cells (Caki-2), brain tumor cells (U-87MG), bladder Cancer cells (T24, HT-1376), esophageal cancer cells (OE33), leukemia cells (OCI-AML5), lymphoma cells (Ramos), gallbladder cancer cells (TGBC14TKB), fibrosarcoma cells (HT-1080), melanoma cells ( G-361), adrenocortical carcinoma (A-673), Ewing tumor (RD-ES), Hodgkin lymphoma (RPMI1666), mesothelioma (NCI-H24) 2), multiple mye
  • each of the culture supernatant containing the chromium 51 culture supernatant in the culture supernatant released from the damaged cancer cells was collected, and the well bottom was coated with an individual scintillator.
  • 96 manufactured by Perkin Elmer
  • the amount of chromium 51 in the culture supernatant released from the damaged cancer cells was measured, and anti-tumor effect on cancer cells by anti-CAPRIN-1 antibody was calculated.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 showed an antitumor effect of 54% or more against breast cancer cells (BT-474), and humanized antibody # 3, human Humanized antibody # 4, humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 exhibit 50% or more activity, humanized antibody # 9, humanized antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, human The antibody # 8 showed an activity of 46% or more, whereas the comparative antibodies 1 to 48 were all 25% or less, and the negative control group was 10% or less.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 antibody showed an antitumor effect of 52% or more
  • humanized antibody # 3, humanized antibody Antibody # 4, humanized antibody # 2, and humanized antibody # 5 show 45% or more activity
  • humanized Antibody # 8 showed an activity of 40% or more
  • Comparative antibodies 1 to 48 were all 25% or less, and the negative control group was 6% or less.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 showed an antitumor effect of 43% or more, and humanized antibody # 3, humanized antibody # 6 4.
  • Humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 exhibit an activity of 40% or more.
  • Humanized antibody # 9, humanized antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, humanized antibody # 8 showed an activity of 35% or more, whereas Comparative antibodies 1 to 48 were all 20% or less, and the negative control group was 3% or less.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 showed an antitumor effect of 46% or more
  • humanized antibody # 3 humanized antibody # 4
  • human Humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 exhibit 42% or more of activity
  • humanized antibody # 9 humanized antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, and humanized antibody # 8 have 38 %
  • the comparative antibodies 1 to 48 were all 22% or less, and the negative control groups were all 10% or less.
  • humanized antibody # 7 humanized antibody # 10
  • humanized antibody # 6 showed an antitumor effect of 45% or more.
  • Humanized antibody # 3 and humanized antibody # 4 The humanized antibody # 2 and the humanized antibody # 5 exhibit an activity of 38% or more.
  • the antibody # 9, the humanized antibody # 1, the humanized antibody # 0, the human-rabbit chimeric antibody, and the humanized antibody # 8 have 34 activities.
  • the comparative antibodies 1 to 48 were all 15% or less, while the negative control group was 8% or less.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 showed an antitumor effect of 52% or more
  • humanized antibody # 3, humanized antibody Antibody # 4, humanized antibody # 2, and humanized antibody # 5 show 45% or more activity
  • humanized Antibody # 8 showed an activity of 40% or more
  • Comparative antibodies 1 to 48 were all 20% or less, and all negative control groups were 5% or less.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 show an antitumor effect of 49% or more
  • humanized antibody # 3, antibody # 4, humanized Antibody # 2 and humanized antibody # 5 exhibit 45% or more activity
  • humanized antibody # 9, humanized antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, and humanized antibody # 8 have 38%
  • the comparative antibodies 1 to 48 were all 20% or less
  • the negative control groups were all 12% or less.
  • pancreatic cancer cells Panc 10.5
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 exhibit an anti-tumor effect of 35% or more
  • Humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 show activity of 30% or more
  • humanized antibody # 8 showed an activity of 24% or more
  • Comparative antibodies 1 to 48 were all 10% or less, and the negative control group was 2% or less.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 show an antitumor effect of 28% or more
  • humanized antibody # 3 humanized antibody # 4
  • Humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 exhibit activity of 25% or more.
  • Humanized antibody # 9, humanized antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, and humanized antibody # 8 are While the activity of 21% or more was shown, the comparative antibodies 1 to 48 were all 12% or less, and the negative control groups were all 5% or less.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 show an anti-tumor effect of 35% or more
  • humanized antibody # 3 humanized antibody # 4
  • Humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 exhibit an activity of 31% or more
  • Humanized antibody # 9 humanized antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, and humanized antibody # 8 are While the activity of 27% or more was shown, the comparative antibodies 1 to 48 were all 15% or less, and the negative control groups were all 5% or less.
  • humanized antibody # 7 humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 showed an antitumor effect of 37% or more, and humanized antibody # 3, humanized antibody # 6 4.
  • Humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 show activity of 33% or more, humanized antibody # 9, humanized antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, humanized antibody # 8 showed an activity of 26% or more, whereas the comparative antibodies 1 to 48 were all 15% or less, and the negative control group was 5% or less.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 showed an antitumor effect of 36% or more, and humanized antibody # 3 and humanized antibody # 4.
  • the humanized antibody # 2 and the humanized antibody # 5 exhibit an activity of 29% or more.
  • the humanized antibody # 9, the humanized antibody # 1, the humanized antibody # 0, the human-rabbit chimeric antibody, the humanized antibody # 8 was 24% or more, whereas Comparative antibodies 1 to 48 were all 10% or less, and all negative control groups were 6% or less.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 show an antitumor effect of 36% or more
  • humanized antibody # 3 humanized antibody # 4
  • Humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 exhibit 33% or more activity.
  • Humanized antibody # 9 humanized antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, and humanized antibody # 8 are While the activity of 30% or more was shown, the comparative antibodies 1 to 48 were all 15% or less, and the negative control group was 6% or less.
  • humanized antibody # 7 humanized antibody # 10
  • humanized antibody # 6 showed an anti-tumor effect of 45% or more
  • humanized antibody # 3 humanized antibody # 6 4.
  • Humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 exhibit an activity of 40% or more.
  • Humanized antibody # 9, humanized antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, humanized antibody # 8 showed an activity of 28% or more, whereas Comparative antibodies 1 to 48 were all 20% or less, and the negative control group was 7% or less.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 show antitumor effects of 35% or more
  • humanized antibody # 3 humanized antibody # 4
  • Humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 exhibit 33% or more activity.
  • Humanized antibody # 9 humanized antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, and humanized antibody # 8 are While the activity of 30% or more was shown, the comparative antibodies 1 to 48 were all 15% or less, and the negative control group was 6% or less.
  • humanized antibody # 7 humanized antibody # 10
  • humanized antibody # 6 showed an anti-tumor effect of 20% or more.
  • Humanized antibody # 3 and humanized antibody # 4 Humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 exhibit an activity of 18% or more.
  • Humanized antibody # 9, humanized antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, humanized antibody # 8 Showed 15% or more of activity, whereas Comparative antibodies 1 to 48 were all 10% or less, and the negative control group was 6% or less.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 show an antitumor effect of 20% or more
  • humanized antibody # 3 humanized antibody # 4
  • human Humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 exhibit 18% or more activity
  • antibody # 9, antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, and humanized antibody # 8 exhibit 15% or more activity
  • the comparative antibodies 1 to 48 were all 10% or less, and the negative control group was 6% or less.
  • Humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 show anti-tumor effects of 35% or more against gallbladder cancer cells (TGBC14TKB), humanized antibody # 3, humanized antibody # 4, human Humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 exhibit activity of 30% or more.
  • Humanized antibody # 9, humanized antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, and humanized antibody # 8 have 25 % Of the comparative antibodies 1 to 48 were all 15% or less, and all the negative control groups were 6% or less.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 showed an anti-tumor effect of 30% or more
  • humanized antibody # 3 antibody # 4
  • Humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 exhibit activity of 25% or more.
  • Humanized antibody # 9, humanized antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, and humanized antibody # 8 are While the activity of 20% or more was shown, the comparative antibodies 1 to 48 were all 10% or less, and the negative control group was 6% or less.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 showed an antitumor effect of 25% or more
  • humanized antibody # 3 humanized antibody # 4
  • Humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 exhibit 21% or more activity.
  • Humanized antibody # 9, humanized antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, and humanized antibody # 8 are While the activity of 15% or more was shown, the comparative antibodies 1 to 48 were all 8% or less, and the negative control group was 6% or less.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 show an antitumor effect of 50% or more
  • humanized antibody # 3, humanized antibody # 4, humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 show 46% or more activity
  • humanized antibody # 8 showed an activity of 40% or more
  • Comparative antibodies 1 to 48 were all 20% or less, and the negative control group was 8% or less.
  • humanized antibody # 7 humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 showed an antitumor effect of 48% or more, and humanized antibody # 3, humanized antibody # 6 4.
  • Humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 exhibit an activity of 40% or more.
  • Humanized antibody # 9, humanized antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, humanized antibody # 8 showed an activity of 31% or more, whereas Comparative antibodies 1 to 48 were all 15% or less, and the negative control group was 6% or less.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 showed an antitumor effect of 40% or more
  • humanized antibody # 3 humanized antibody # 4
  • Humanized antibody # 2 show activity of 36% or more
  • Humanized antibody # 9 humanized antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, and humanized antibody # 8 are While the activity of 30% or more was shown, the comparative antibodies 1 to 48 were all 20% or less, and the negative control group was 5% or less.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 exhibit an antitumor effect of 35% or more
  • humanized antibody # 3, humanized antibody # 4, humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 show 39% or more activity
  • humanized antibody While # 8 showed an activity of 31% or more
  • the comparative antibodies 1 to 48 were all 10% or less
  • the negative control group was 5% or less.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 show an anti-tumor effect of 35% or more
  • humanized antibody # 3, humanized antibody Antibody # 4, Antibody # 2, and Humanized antibody # 5 show 30% or more activity.
  • Humanized antibody # 9, antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, and humanized antibody # 8 are While the activity of 27% or more was shown, the comparative antibodies 1 to 48 were all 10% or less, and the negative control group was 6% or less.
  • humanized antibody # 7 humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 showed an antitumor effect of 37% or more, and humanized antibody # 3 and humanized antibody # 6 4.
  • Humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 show activity of 30% or more, humanized antibody # 9, humanized antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, humanized antibody # 8 showed an activity of 25% or more, whereas Comparative antibodies 1 to 48 were all 11% or less, and the negative control group was 5% or less.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 showed an antitumor effect of 42% or more, humanized antibody # 3, humanized antibody # 4, Humanized antibody # 2 and humanized antibody # 5 exhibit activity of 35% or more.
  • Humanized antibody # 9, humanized antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, and humanized antibody # 8 are While the activity of 30% or more was shown, the comparative antibodies 1 to 48 were all 15% or less, and the negative control groups were all 5% or less.
  • humanized antibody # 7, humanized antibody # 10, and humanized antibody # 6 show an anti-tumor effect of 50% or more
  • humanized antibody # 3 humanized antibody # 4.
  • Humanized antibody # 4 show an activity of 40% or more.
  • Humanized antibody # 9, humanized antibody # 1, humanized antibody # 0, human-rabbit chimeric antibody, and antibody # 8 are While the activity of 35% or more was shown, the comparative antibodies 1 to 48 were all 20% or less, and the negative control group was 8% or less.
  • humanized antibodies # 0 to # 10 and human-rabbit chimeric antibodies are found in breast cancer, kidney cancer, pancreatic cancer, colon cancer, lung cancer, brain tumor, stomach cancer, uterine cancer, ovarian cancer, prostate cancer, bladder cancer, Compared to esophageal cancer, leukemia, lymphoma, liver cancer, gallbladder cancer, sarcoma, melanoma, adrenocortical cancer, Ewing tumor, Hodgkin lymphoma, mesothelioma, multiple myeloma, testicular cancer, thyroid cancer or head and neck cancer It was revealed that the antitumor effect was significantly stronger than that of the antibody.
  • Humanized antibodies # 0 to # 10 and human-rabbit chimeric antibodies are WO2010 / 016526, WO2011 / 096517, WO2011 / 096528, WO2011 / 096519, WO2011 / 096533, WO2011 / 096534, WO2011 / 096535, WO2013 / 018886, WO2013 / 018894, WO2013 / 018882, WO2013 / 018881, WO2013 / 018889, WO2013 / 018883, WO2013 / 125636, WO2013 / 125654, WO2013 / 125630, WO2013 / 125640, WO2013 / 147169, WO2013 / 147176 Than the antibody against CAPRIN-1 , Pancreatic cancer, colon cancer, lung cancer, brain cancer, stomach cancer, uterine cancer, ovarian cancer, prostate cancer, bladder cancer, esophageal cancer, leukemia, lymphoma, liver cancer, gallbladder cancer,
  • the antitumor effect was determined by mixing the antibody against CAPRIN-1, effector cells, and target cells into which chromium 51 had been incorporated and culturing for 4 hours, and measuring the amount of chromium 51 released into the medium after the culture. It is the result which showed the cytotoxic activity with respect to the cancer cell line computed by the formula * .
  • Cytotoxic activity (%) (Amount of chromium 51 released from target cells when adding antibody against CAPRIN-1 and effector cells ⁇ Amount of spontaneous release of chromium 51 from target cells) ⁇ (1N hydrochloric acid added Chromium 51 release from target cells-chromium 51 spontaneous release from target cells) x 100.
  • Example 6-1 Preparation of humanized anti-CAPRIN-1 monoclonal antibody in which amino acids in the heavy chain constant region are substituted Humanized antibodies # 0, # 2, # 3, # 4, # 5 obtained in Example 3 , # 6, # 7, # 8, # 9, # 10, an anti-CAPRIN-1 antibody having the heavy chain constant region of SEQ ID NO: 33 in which a part of amino acids in the heavy chain constant region is substituted (hereinafter referred to as the modified I Type anti-CAPRIN-1 antibody).
  • a DNA encoding a heavy chain amino acid sequence having the heavy chain constant region and the heavy chain variable region represented by SEQ ID NO: 7 was synthesized and inserted into a mammalian cell expression vector according to a conventional method.
  • a DNA encoding the light chain variable region amino acid represented by SEQ ID NO: 11 was prepared by inserting it into a mammalian cell expression vector into which a gene encoding the light chain constant region of human IgG1 was inserted.
  • the prepared two recombinant expression vectors were introduced into mammalian cells according to a conventional method to obtain a culture supernatant of humanized antibody # 0 modified type I anti-CAPRIN-1 antibody # 0.
  • humanized antibodies # 1, # 2, # 3, # 4, # 5, # 6, # 7, # 8, # 9, and # 10 described in Example 3 were also modified in the same manner as described above. Culture supernatants containing anti-CAPRIN-1 antibodies # 1, # 2, # 3, # 4, # 5, # 6, # 7, # 8, # 9, and # 10 were obtained.
  • Each culture supernatant containing the modified type I anti-CAPRIN-1 antibodies # 0 to # 10 thus obtained was purified using Hitrap Protein A Sepharose FF (manufactured by GE Healthcare) according to a conventional method, and replaced with PBS ( ⁇ ). And filtered through a 0.22 ⁇ m filter (Millipore).
  • An anti-CAPRIN-1 antibody (hereinafter referred to as a modified type II anti-CAPRIN-1 antibody) having the heavy chain constant region shown in SEQ ID NO: 34 in which some amino acids were substituted was prepared.
  • a DNA encoding a heavy chain amino acid sequence having the heavy chain constant region and the heavy chain variable region represented by SEQ ID NO: 7 was synthesized and inserted into a mammalian cell expression vector according to a conventional method.
  • a DNA encoding the light chain variable region amino acid represented by SEQ ID NO: 11 prepared above and inserted into a mammalian cell expression vector into which a gene encoding the light chain constant region of human IgG1 has been inserted Got ready.
  • These two recombinant expression vectors were introduced into mammalian cells according to a conventional method to obtain a culture supernatant of modified type II anti-CAPRIN-1 antibody # 0.
  • humanized antibodies # 1, # 2, # 3, # 4, # 5, # 6, # 7, # 8, # 9, and # 10 described in Example 3 were modified in the same manner as described above. Culture supernatants containing anti-CAPRIN-1 antibodies # 1, # 2, # 3, # 4, # 5, # 6, # 7, # 8, # 9, and # 10 were obtained.
  • Each culture supernatant containing the obtained modified type II anti-CAPRIN-1 antibodies # 0 to # 10 was purified using Hitrap Protein A Sepharose FF (manufactured by GE Healthcare) according to a conventional method, and replaced with PBS ( ⁇ ). And filtered through a 0.22 ⁇ m filter (Millipore).
  • Example 6-2 Production of an anti-CAPRIN-1 antibody having a sugar chain in which fucose is not bound to N-acetylglucosamine at the reducing end of the sugar chain among all N-glycoside-linked sugar chains bound to the heavy chain constant region
  • Anti-CAPRIN-1 antibody having a sugar chain in which fucose is not bound to N-acetylglucosamine at the reducing end of the sugar chain among all N-glycoside-linked sugar chains to be bound (hereinafter referred to as modified type III anti-CAPRIN-1 antibody) ) was obtained by the following method.
  • GDP-6-deoxy-D-lyxo-4-hexulose reductase is an enzyme that does not catalyze the reaction of converting GDP-6-deoxy-D-lyxo-4-hexulose to GDP-L-fucose according to a conventional method.
  • a mammalian cell expression vector containing a neomycin resistance gene into which a gene was incorporated was introduced into a mammalian cell line CHO cell using a gene introduction reagent FreeStyle TM MAX Reagent (Life technologies). The CHO cells into which the above gene was introduced were cultured in a culture medium containing G-418 to prepare a stable pool of CHO cells expressing RMD.
  • the gene encoding the amino acid of the variable region is divided into a mammalian cell expression vector into which the heavy chain constant region of human IgG1 is inserted and a mammalian cell expression vector into which the light chain constant region of human IgG1 is inserted, respectively, according to conventional methods.
  • the culture supernatant containing the modified type III anti-CAPRIN-1 antibody # 0 was obtained.
  • the obtained culture supernatants containing the modified type III anti-CAPRIN-1 antibodies # 0 to # 10 were purified using Hitrap Protein A Sepharose FF (manufactured by GE Healthcare) according to a conventional method, and replaced with PBS ( ⁇ ).
  • An antibody composition containing a modified type III anti-CAPRIN-1 antibody # 0 was obtained by filtering a 0.22 ⁇ m filter (Millipore).
  • purified antibodies containing modified type III anti-CAPRIN-1 antibodies # 1 to # 10 were obtained.
  • Anti-CAPRIN having a sugar chain in which fucose is not bound to N-acetylglucosamine at the reducing end of the sugar chain among all N-glycoside-linked sugar chains bound to the heavy chain constant region contained in these purified antibody compositions -1 antibody ratio was evaluated by LabChip (registered trademark) GXII (PerkinElmer), all of which were 80% or more.
  • the RMD-CHO cell encodes the gene encoding the amino acid sequence of the heavy chain variable region represented by SEQ ID NO: 7 and the amino acid of the light chain variable region represented by SEQ ID NO: 11.
  • a mammalian cell expression vector containing a hygromycin resistance gene into which a heavy chain constant region of human IgG1 is inserted and a mammalian cell expression vector containing a hygromycin resistance gene into which a light chain constant region of human IgG1 is inserted
  • Each of the above-described cells introduced in accordance with a conventional method was cultured in a culture solution containing hygromycin B to prepare a stable pool expressing the modified type III anti-CAPRIN-1 antibody # 0.
  • Example 6-3 Of all N-glycoside-linked sugar chains in which amino acids in the heavy chain constant region are substituted and bound to the heavy chain constant region, fucose is bound to N-acetylglucosamine at the sugar chain reducing end. Next, the humanized antibodies # 0, # 1, # 2, # 3, # 4, # 5, # 6, # 7, # 8 described in Example 3 were prepared.
  • an anti-CAPRIN-1 antibody (hereinafter referred to as a modified IV anti-CAPRIN-1 antibody) having a sugar chain in which fucose is not bound to N-acetylglucosamine at the sugar chain reducing end was prepared.
  • RMD RMD-CHO cell that constantly expresses GDP-6-deoxy-D-lyxo-4-hexulose reductase
  • the modified humanized antibodies # 1, # 2, # 3, # 4, # 5, # 6, # 7, # 8, # 9, and # 10 described in Example 3 were modified in the same manner as described above.
  • Culture supernatants containing anti-CAPRIN-1 antibodies # 1, # 2, # 3, # 4, # 5, # 6, # 7, # 8, # 9, and # 10 were obtained.
  • Each culture supernatant containing the modified IV anti-CAPRIN-1 antibodies # 0 to # 10 thus obtained was purified using Hitrap Protein A Sepharose FF (manufactured by GE Healthcare) according to a conventional method, and replaced with PBS ( ⁇ ).
  • the antibody composition containing the modified IV anti-CAPRIN-1 antibody # 0 was obtained by filtration through a 0.22 ⁇ m filter (Millipore).
  • a mammalian cell expression vector containing a mycin resistance gene and a DNA encoding the light chain variable region amino acid represented by SEQ ID NO: 11 were synthesized, and the gene encoding the light chain constant region amino acid of human IgG1 was inserted.
  • the cells into which a mammalian cell expression vector containing a hygromycin resistance gene was introduced were cultured in a culture medium containing hygromycin B to prepare a stable pool that expresses the modified IV anti-CAPRIN-1 antibody # 0. From this stable pool, cells that constantly and stably express modified IV anti-CAPRIN-1 antibody # 0 were prepared by the limiting dilution method. Furthermore, the modified humanized antibodies # 1, # 2, # 3, # 4, # 5, # 6, # 7, # 8, # 9, and # 10 described in Example 3 were modified in the same manner as described above. Cells that constantly and stably express anti-CAPRIN-1 antibodies # 1, # 2, # 3, # 4, # 5, # 6, # 7, # 8, # 9, and # 10 were prepared.
  • Example 7 Antigen Specificity and Reactivity to Cancer Cells of Modified Anti-CAPRIN-1 Antibody Modified Type I Anti-CAPRIN-1 Antibodies # 0 to # 10 Prepared in Examples 6-1 to 3, Modified Type II Anti Each antibody composition containing CAPRIN-1 antibody # 0 to # 10, modified type III anti-CAPRIN-1 antibody # 0 to # 10 and each antibody composition comprising modified type IV CAPRIN-1 antibody # 0 to # 10 ( The specific reactivity of CAPRIN-1 protein (hereinafter referred to as a modified anti-CAPRIN-1 antibody) was confirmed by the same method as in Example 4.
  • a modified anti-CAPRIN-1 antibody The specific reactivity of CAPRIN-1 protein (hereinafter referred to as a modified anti-CAPRIN-1 antibody) was confirmed by the same method as in Example 4.
  • the absorbance value of the well added with the human IgG antibody that was confirmed not to react with the CAPRIN-1 protein used as a negative control was as low as that of the well not added with the antibody.
  • the absorbance values of the wells to which the respective modified anti-CAPRIN-1 antibodies were added were all equally high. Further, all the modified anti-CAPRIN-1 antibodies showed only an absorbance value equivalent to that of the negative control in the wells where the CAPRIN-1 protein was not solid-phased. From this result, it was confirmed that all the modified anti-CAPRIN-1 antibodies specifically react with the CAPRIN-1 protein.
  • each modified anti-CAPRIN-1 antibody was stronger than that in the case of using the negative control in all cancer cells used for evaluation. From the above results, it was confirmed that all the modified anti-CAPRIN-1 antibodies specifically react with the CAPRIN-1 protein on the surface of the human cancer cell membrane.
  • Example 8 Antitumor activity of modified anti-CAPRIN-1 antibody against various human cancer cells Modified anti-CAPRIN-1 antibody (modified I anti-CAPRIN-1 antibody # 0 prepared in Examples 6-1 to 6-3) -# 10, each of the antibody compositions containing the modified type II anti-CAPRIN-1 antibody # 0- # 10, the modified type III anti-CAPRIN-1 antibody # 0- # 10, and the modified type IV anti-CAPRIN-1 antibody # 0- # The antitumor effect of each antibody composition containing 10) on various human cancer cells was evaluated by ADCC activity in the same manner as in Example 5.
  • a well to which an isotype control antibody was added a well to which no antibody was added, and a CAPRIN-1 protein that reacted to a human cancer cell surface expressing CAPRIN-1 but not reactive were added.
  • Wells were prepared.
  • humanized antibodies # 0 to # 10 which are anti-CAPRIN-1 antibodies before modification, were used. Each antibody was added to a V-bottom 96-well plate at a final concentration of 0.01-1 ⁇ g / mL.
  • Target cells are breast cancer cells (BT-474, MDA-MB-361), colon cancer cells (HT-29), lung cancer cells (QG56), stomach cancer cells (NCI-N87), uterine cancer cells (HEC-1-A). ), Prostate cancer cells (22Rv1), pancreatic cancer cells (Panc 10.5), liver cancer cells (Hep3B), ovarian cancer cells (SKOV3), renal cancer cells (Caki-2), brain tumor cells (U-87MG), bladder Cancer cells (T24, HT-1376), esophageal cancer cells (OE33), leukemia cells (OCI-AML5), lymphoma cells (Ramos), gallbladder cancer cells (TGBC14TKB), fibrosarcoma cells (HT-1080), melanoma cells ( G-361), adrenocortical carcinoma cells (A-673), Ewing tumor cells (RD-ES), Hodgkin lymphoma cells (RPMI1666), mesothelioma cells NCI-H2452), multiple
  • human NK cells separated from human peripheral blood mononuclear cells by a conventional method were used as the effector cells.
  • a V-bottom 96-well plate reacted with each antibody and target cell added thereto was prepared by adding 0.4 to 2.0 ⁇ 10 5 human NK cells per well at 37 ° C., 5% , Reacted for 4 hours under the condition of CO 2 .
  • 50 ⁇ L of each culture supernatant containing chromium 51 released from the damaged cancer cells was collected, and the culture supernatant released from the damaged cancer cells in the same manner as in Example 5 was collected.
  • the amount of chromium 51 in the serum was measured, and the antitumor effect of the anti-CAPRIN-1 antibody on cancer cells was calculated.
  • modified type I anti-CAPRIN-1 antibodies # 0 to # 10 and modified type II anti-CAPRIN-1 antibodies # 0 to # 10 which are modified anti-CAPRIN-1 antibodies, against breast cancer cells (BT-474).
  • Each antibody composition containing the modified type III anti-CAPRIN-1 antibody # 0 to # 10 and each antibody composition containing the modified type IV anti-CAPRIN-1 antibody # 0 to # 10 are stronger than the negative control. Tumor effect was shown.
  • the anti-tumor effect same as the anti-tumor effect exhibited by each of the antibodies (humanized antibodies # 0 to # 10) before being modified as a comparative antibody has the modified anti-CAPRIN-1 antibodies # 0 to # 10 and modified type II
  • the antibody concentration at which each antibody composition containing the anti-CAPRIN-1 antibody # 0 to # 10 and the modified type III anti-CAPRIN-1 antibody # 0 to # 10 shows is approximately 13 compared to the concentration of each antibody before the modification. The concentration was ⁇ 20 times.
  • each antibody composition containing the modified IV anti-CAPRIN-1 antibodies # 0 to # 10 obtains the same antitumor effect as the antibody before modification, it is about 150 compared with the concentration of each antibody before modification.
  • each antibody composition comprising ⁇ # 10 and the modified IV anti-CAPRIN-1 antibodies # 0 to # 10 was improved compared to each antibody before modification.
  • each antibody composition containing the modified IV anti-CAPRIN-1 antibodies # 0 to # 10 comprises modified I anti-CAPRIN-1 antibodies # 0 to # 10 and modified II anti-CAPRIN-1 antibodies # 0 to # 10. It was also found that a stronger antitumor effect can be obtained as compared with each antibody composition containing the modified type III anti-CAPRIN-1 antibodies # 0 to # 10.
  • breast cancer cells MDA-MB-361
  • colon cancer cells HT-29
  • lung cancer cells QG56
  • gastric cancer cells NCI-N87
  • uterine cancer cells HEC-1-A
  • Prostate cancer cells 22Rv1
  • pancreatic cancer cells Pancreatic cancer cells
  • liver cancer cells Hep3B
  • ovarian cancer cells SKOV3
  • renal cancer cells Caki-2
  • brain tumor cells U-87MG
  • bladder cancer cells T24, HT-1376
  • esophageal cancer cells OE33
  • leukemia cells OCI-AML5
  • lymphoma cells Ramos
  • gallbladder cancer cells TGBC14TKB
  • fibrosarcoma cells HT-1080
  • melanoma cells G- 361)
  • adrenocortical carcinoma cells A-673
  • Ewing tumor cells RD-ES
  • Hodgkin lymphoma cells RPMI1666)
  • mesothelioma cells N I-H2452
  • the antibody of the present invention is useful for the treatment and / or prevention of cancer.

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Abstract

　ＣＡＰＲＩＮ－１を標的とした、従来の抗体よりも抗腫瘍活性の優れた抗体、並びにその癌の治療及び／又は予防剤としての用途の提供。　本発明は、癌細胞の表面に特異的に発現するＣＡＰＲＩＮ－１ポリペプチドを標的とした抗体、並びに、癌の治療及び／又は予防剤として抗体の用途を提供する。配列番号１、２及び３の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号４、５及び６の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント、並びに、この抗体又はフラグメントを有効成分として含む癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物を提供する。

Description

癌の治療及び／又は予防用医薬組成物
　本発明は、ＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体又はそのフラグメントの、癌の治療及び／又は予防剤等としての新規な医薬用途に関する。
　癌は全死亡原因の第一位を占める疾患であり、現在行われている治療は手術療法を主体に放射線療法と化学療法を組み合わせたものである。近年の新しい手術法の開発や新たな抗癌剤の発見にも関わらず、一部の癌を除いて、癌の治療成績はあまり向上していないのが現状である。近年、分子生物学や癌免疫学の進歩によって、癌に特異的に反応する抗体類、細胞障害性Ｔ細胞により認識される癌抗原類、癌抗原をコードする遺伝子類等が同定されており、癌抗原類をターゲットにした特異的癌治療法への期待が高まっている。
　Ｃｙｔｏｐｌａｓｍｉｃ－ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ－ａｓｓｏｃｉａｔｅｅｄ　ｐｒｏｔｅｉｎ　１（ＣＡＰＲＩＮ－１）は、休止期の正常細胞が活性化や細胞分裂を起こす際に発現し、また細胞内でＲＮＡと細胞内ストレス顆粒を形成してｍＲＮＡの輸送、翻訳の制御に関与することなどが知られている細胞内タンパク質として知られていたが、癌細胞の表面に特異的に発現することが見出され、癌治療のための抗体医薬のターゲットとして研究が進められている（特許文献１～１９）。
ＷＯ２０１０／０１６５２６ ＷＯ２０１１／０９６５１７ ＷＯ２０１１／０９６５２８ ＷＯ２０１１／０９６５１９ ＷＯ２０１１／０９６５３３ ＷＯ２０１１／０９６５３４ ＷＯ２０１１／０９６５３５ ＷＯ２０１３／０１８８８６ ＷＯ２０１３／０１８８９４ ＷＯ２０１３／０１８８９２ ＷＯ２０１３／０１８８９１ ＷＯ２０１３／０１８８８９ ＷＯ２０１３／０１８８８３ ＷＯ２０１３／１２５６３６ ＷＯ２０１３／１２５６５４ ＷＯ２０１３／１２５６３０ ＷＯ２０１３／１２５６４０ ＷＯ２０１３／１４７１６９ ＷＯ２０１３／１４７１７６
　本発明の目的は、癌細胞の表面に特異的に発現するＣＡＰＲＩＮ－１を標的とした、従来の抗体よりも抗腫瘍活性の優れた抗体を作出し、癌の治療及び／又は予防剤としての用途を提供することである。
　本発明は、以下の特徴を有する。
　本発明では、配列番号１、２及び３を含む重鎖可変領域と配列番号４、５及び６を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメントを有効成分として含むことを特徴とする、癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物を提供する。
　その実施形態において、上記癌は、乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、白血病、リンパ腫、肝臓癌、胆嚢癌、肉腫、肥満細胞腫、メラノーマ、副腎皮質癌、ユーイング腫瘍、ホジキンリンパ腫、中皮腫、多発性骨髄腫、睾丸癌、甲状腺癌、又は頭頸部癌である。
　別な実施形態において、上記抗体は、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖型抗体又は多重特異的抗体（例えば二重特異的抗体）である。
　本明細書は、本願の優先権の基礎である日本国特許出願2013-166164号の明細書及び／又は図面に記載される内容を包含する。
　本発明に係るＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体は、癌細胞を障害する。したがって、本発明に係るＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体は癌の治療や予防に有用である。
　本発明で用いられるＣＡＰＲＩＮ－１のポリペプチドに対する抗体の抗腫瘍活性は、後述するように、生体外で、該ポリペプチドを発現する腫瘍細胞に対して免疫細胞を介した細胞障害活性を示すか否かを調べることによって、あるいは、生体内で担癌動物に対する腫瘍増殖の抑制を調べることによって評価することができる。
　本発明に係る上記のＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体は、モノクローナル抗体又はポリクローナル抗体であってよいが、好ましくはモノクローナル抗体であり、抗腫瘍活性を発揮しうる限りいかなる種類の抗体であってもよく、例えば、組換え抗体（例えば、合成抗体、多重特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体（ｓｃＦｖ）等）、ヒト抗体、それらの抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ等）を含む。これらの抗体及びそのフラグメントはまた、当業者に公知の方法により調製することが可能である。また、被験者がヒトである場合には、拒絶反応を回避又は抑制するためにヒト抗体又はヒト化抗体であることが望ましい。
　「ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と特異的に結合する」とは、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に特異的に結合し、それ以外のタンパク質と実質的に結合しないことを意味する。
　また、本発明における癌の治療及び／又は予防の対象である被験者は、ヒト、ペット動物、家畜類、競技用動物等の哺乳動物であり、好ましい被験者は、ヒトである。
　以下に、本発明に関する抗原の作製、抗体の作製、ならびに医薬組成物について説明する。
　＜抗体作製用抗原の作製＞
　本発明に係るＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体を取得するための感作抗原として使用されるタンパク質又はその断片は、ヒト、イヌ、ネコ、ウシ、ウマ、マウス、ラット、ニワトリ等、その由来となる動物種に制限されない。しかし細胞融合に使用する親細胞との適合性を考慮して選択することが好ましい。一般的には、哺乳動物由来のタンパク質が好ましく、特にヒト由来のタンパク質が好ましい。例えば、ＣＡＰＲＩＮ－１がヒトＣＡＰＲＩＮ－１の場合、ヒトＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質やその部分ペプチド、ヒトＣＡＰＲＩＮ－１を発現する細胞等を用いることができる。
　ヒトＣＡＰＲＩＮ－１及びそのホモログの塩基配列及びアミノ酸配列は、例えば、ＧｅｎＢａｎｋ（米国ＮＣＢＩ）にアクセスし、ＢＬＡＳＴ、ＦＡＳＴＡ等のアルゴリズム（Ｋａｒｌｉｎ　ａｎｄ　Ａｌｔｓｃｈｕｌ，　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ，　９０：５８７３－５８７７，１９９３；　Ａｌｔｓｃｈｕｌ　ｅｔ　ａｌ．，　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．　２５：３３８９－３４０２，　１９９７）を利用することによって入手することができる。
　本発明では、ヒトＣＡＰＲＩＮ－１の塩基配列（配列番号１６又は１８）又はアミノ酸配列（配列番号１７又は１９）を基準とした場合、これらのＯＲＦ又は成熟部分の塩基配列又はアミノ酸配列と７０％～１００％、好ましくは８０％～１００％、より好ましくは９０％～１００％、さらに好ましくは９５％～１００％、例えば、９７％～１００％、９８％～１００％、９９％～１００％又は９９．５％～１００％の配列同一性を有する配列からなる核酸又はタンパク質がターゲットのＣＡＰＲＩＮ－１になる（配列番号１７と配列番号１９のアミノ酸配列を比較すると、６９０位以降のアミノ酸残基が相違する。）。ここで、「％配列同一性」は、２つの配列を、ギャップを導入して又はギャップを導入しないで、最大の類似度（又は一致度）となるようにアラインメント（整列）したとき、アミノ酸（又は塩基）の総数（ギャップの数を含む）に対する同一アミノ酸（又は塩基）のパーセンテージ（％）を意味する。
　ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の断片は、抗体が認識する最小単位であるエピトープ（抗原決定基）のアミノ酸長から、該タンパク質の全長未満の長さを有する。エピトープは、哺乳動物、好ましくはヒトにおいて、抗原性又は免疫原性を有するポリペプチド断片を指し、その最小単位は、約７～１２アミノ酸、例えば、８～１１アミノ酸からなる。
　上記した、ヒトＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質やその部分ペプチドを含むポリペプチド断片は、例えば、Ｆｍｏｃ法（フルオレニルメチルオキシカルボニル法）、ｔＢｏｃ法（ｔ―ブチルオキシカルボニル法）等の化学合成法に従って合成することができる（日本生化学会編、生化学実験講座１、タンパク質の化学ＩＶ、化学修飾とペプチド合成、東京化学同人（日本）、１９８１年）。また、各種の市販のペプチド合成機を利用して常法により合成することもできる。また、公知の遺伝子工学的手法（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　第２版，　Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　（１９８９），　Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ、Ａｕｓｕｂｅｌら，　Ｓｈｏｒｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，　第３版，　Ａ　ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ　ｏｆ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　（１９９５），　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ等）を用いて、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを調製し、該ポリヌクレオチドを発現ベクターに組み込んで宿主細胞に導入し、該宿主細胞中でポリペプチドを生産させることにより、目的とするヒトＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質やそのポリペプチド断片を得ることができる。
　上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドは、公知の遺伝子工学的手法や市販の核酸合成機を用いた常法により、容易に調製することができる。例えば、ヒトＣＡＰＲＩＮ－１遺伝子の塩基配列を含むＤＮＡは、ヒト染色体ＤＮＡ又はｃＤＮＡライブラリーを鋳型として使用し、該塩基配列を増幅できるように設計した一対のプライマーを用いてＰＣＲを行うことにより調製することができる。ＰＣＲの反応条件は適宜設定することができ、例えば、耐熱性ＤＮＡポリメラーゼ（例えば、Ｔａｑポリメラーゼ、Ｐｆｕポリメラーゼ等）及びＭｇ２＋含有ＰＣＲバッファーを用いて、９４℃で３０秒間（変性）、５５℃で３０秒～１分間（アニーリング）、７２℃で２分間（伸長）からなる反応行程を１サイクルとして、例えば、３０サイクル行った後、７２℃で７分間反応させる条件等を挙げることができるが、これに限定されない。ＰＣＲの手法、条件等については、例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら，　Ｓｈｏｒｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，　第３版，　Ａ　ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ　ｏｆ　Ｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｒｏｍ　Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　（１９９５），　Ｊｏｈｎ　Ｗｉｌｅｙ　＆　Ｓｏｎｓ（特に第１５章）に記載されている。
　また、ＣＡＰＲＩＮ－１遺伝子の塩基配列及びＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質のアミノ酸配列情報に基づいて、適当なプローブやプライマーを調製し、それを用いてヒト等のｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることにより、所望のＤＮＡを単離することができる。ｃＤＮＡライブラリーは、ＣＡＰＲＩＮ－１のタンパク質を発現している細胞、器官又は組織から作製することが好ましい。そのような細胞や組織の例は、精巣の他、白血病、乳癌、リンパ腫、脳腫瘍、肺癌、膵臓癌、大腸癌、腎癌、胃癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、肉腫、肥満細胞腫、肝臓癌、胆嚢癌、メラノーマ、副腎皮質癌、ユーイング腫瘍、ホジキンリンパ腫、中皮腫、多発性骨髄腫、睾丸癌、甲状腺癌又は頭頸部癌等の癌又は腫瘍に由来する細胞又は組織である。上記したプローブ又はプライマーの調製、ｃＤＮＡライブラリーの構築、ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング、並びに目的遺伝子のクローニング等の操作は当業者に既知であり、例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら，　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ，　第２版，　Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ　ｉｎ　Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｂｉｏｌｏｇｙ　（１９８９）、Ａｕｓｂｅｌら（上記）等に記載された方法に準じて行うことができる。このようにして得られたＤＮＡから、ヒトＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質やその部分ペプチドをコードするＤＮＡを得ることができる。
　発現ベクターを導入する上記宿主細胞としては、上記ポリペプチドを発現可能な細胞であればいかなるものであってもよく、原核細胞の例としては大腸菌等、真核細胞の例としてはサル腎臓細胞ＣＯＳ１、チャイニーズハムスター卵巣細胞ＣＨＯ等の哺乳動物細胞、ヒト胎児腎臓細胞株ＨＥＫ２９３、マウス胎仔皮膚細胞株ＮＩＨ３Ｔ３、出芽酵母、分裂酵母等の酵母細胞、カイコ細胞、アフリカツメガエル卵細胞等が挙げられるが、これらに限定されない。
　宿主細胞として原核細胞を用いる場合、発現ベクターとしては、原核細胞中で複製可能なオリジン、プロモーター、リボソーム結合部位、マルチクローニングサイト、ターミネーター、薬剤耐性遺伝子、栄養要求性相補遺伝子等を有する発現ベクターを用いる。大腸菌用発現ベクターとしては、ｐＵＣ系、ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔＩＩ、ｐＥＴ発現システム、ｐＧＥＸ発現システム等が例示できる。上記ポリペプチドをコードするＤＮＡをこのような発現ベクターに組み込み、該ベクターで原核宿主細胞を形質転換したのち、得られた形質転換体を培養すれば、前記ＤＮＡがコードしているポリペプチドを原核宿主細胞中で発現させることができる。この際、該ポリペプチドを、他のタンパク質との融合タンパク質として発現させることもできる。
　宿主細胞として真核細胞を用いる場合、発現ベクターとしては、プロモーター、スプライシング領域、ポリ（Ａ）付加部位等を有する真核細胞用発現ベクターを用いる。そのような発現ベクターとしては、ｐＫＡ１、ｐＣＤＭ８、ｐＳＶＫ３、ｐＭＳＧ、ｐＳＶＬ、ｐＢＫ－ＣＭＶ、ｐＢＫ－ＲＳＶ、ＥＢＶベクター、ｐＲＳ、ｐｃＤＮＡ３、ｐＹＥＳ２等が例示できる。上記と同様に、上記ポリペプチドをコードするＤＮＡをこのような発現ベクターに組み込み、該ベクターで真核宿主細胞を形質転換したのち、得られた形質転換体を培養すれば、前記ＤＮＡがコードしているポリペプチドを真核宿主細胞中で発現させることができる。発現ベクターとしてｐＩＮＤ／Ｖ５－Ｈｉｓ、ｐＦＬＡＧ－ＣＭＶ－２、ｐＥＧＦＰ－Ｎ１、ｐＥＧＦＰ－Ｃ１等を用いた場合には、Ｈｉｓタグ（例えば、（Ｈｉｓ）６～（Ｈｉｓ）１０）、ＦＬＡＧタグ、ｍｙｃタグ、ＨＡタグ、ＧＦＰ等各種タグを付加した融合タンパク質として、上記ポリペプチドを発現させることができる。
　発現ベクターの宿主細胞への導入は、電気穿孔法、リン酸カルシウム法、リポソーム法、ＤＥＡＥデキストラン法、マイクロインジェクション、ウイルス感染、リポフェクション、細胞膜透過性ペプチドとの結合等の周知の方法を用いることができる。
　宿主細胞から目的のポリペプチドを単離精製するためには、公知の分離操作を組み合わせて行うことができる。例えば、尿素等の変性剤や界面活性剤による処理、超音波処理、酵素消化、塩析や溶媒分別沈殿法、透析、遠心分離、限外ろ過、ゲルろ過、ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、等電点電気泳動、イオン交換クロマトグラフィー、疎水クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィー等が挙げられるが、これらに限定されない。
　本発明に係る抗体を作製するため、以上のようにして作製した抗原を後述の通り感作抗原として用いることができる。
　＜抗体の構造＞
　抗体（免疫グロブリン）は通常少なくとも２本の重鎖及び２本の軽鎖を含むヘテロ多量体糖タンパク質である。ＩｇＭは別として、免疫グロブリンは、２本の同一の軽（Ｌ）鎖及び２本の同一の重（Ｈ）鎖で構成される約１５０ｋＤａのヘテロ四量体糖タンパク質である。典型的には、それぞれの軽鎖は１つのジスルフィド共有結合により重鎖に連結されているが、種々の免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間でジスルフィド結合の数は変動する。それぞれの重鎖及び軽鎖は鎖内ジスルフィド結合も有する。それぞれの重鎖は一方の端に可変ドメイン（ＶＨ領域）を有し、それにいくつかの定常領域が続く。それぞれの軽鎖は可変ドメイン（ＶＬ領域）を有し、その反対の端に１つの定常領域を有する。軽鎖の定常領域は重鎖の最初の定常領域と整列しており、かつ軽鎖可変ドメインは重鎖の可変ドメインと整列している。抗体の可変ドメインは、特定の領域が相補性決定領域（ＣＤＲ）と呼ばれる特定の可変性を示して抗体に結合特異性を付与する。可変領域において相対的に保存されている部分は、フレームワーク領域（ｆｒａｍｅｗｏｒｋ　ｒｅｇｉｏｎ；ＦＲ）と呼ばれている。完全な重鎖及び軽鎖の可変ドメインは、３つの相補性決定領域が４つのフレームワーク領域で連結された構造、すなわち、Ｎ末から順にＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３、及びＦＲ４が連結した構造からなる。３つの相補性決定領域は重鎖ではそのＮ末から順にＣＤＲＨ１，ＣＤＲＨ２，ＣＤＲＨ３、同様に軽鎖ではＣＤＲＬ１，ＣＤＲＬ２，ＣＤＲＬ３と呼ばれている。抗体の抗原への結合特異性には、ＣＤＲＨ３が最も重要である。また、各鎖のＣＤＲはフレームワーク領域によって近接した状態で一緒に保持され、他方の鎖由来の相補性決定領域と共に抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。定常領域は抗体が抗原に結合することに直接寄与しないが、種々のエフェクター機能、例えば、抗体依存性細胞性細胞障害活性（ＡＤＣＣ）への関与、Ｆｃγ受容体への結合を介した食作用（ＡＤＣＰ）、新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）を介した半減期／クリアランス速度、補体カスケードのＣ１ｑ構成要素を介した補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）を示す。
　＜抗体の作製＞
　本発明における抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体とは、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の全長又はその断片と免疫学的反応性を有する抗体を意味する。
　ここで、「免疫学的反応性」とは、生体内で抗体とＣＡＰＲＩＮ－１抗原（ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質の全長又はその部分ポリペプチド）とが結合する特性を意味する。本発明の抗体のＣＡＰＲＩＮ－１へのこのような結合を介して腫瘍細胞を障害（例えば、死滅、抑制又は退縮）する機能が発揮される。本発明の抗体は、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と結合して腫瘍、例えば、乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌（例えば、結腸癌）、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、白血病、リンパ腫、肝臓癌、胆嚢癌、肉腫、肥満細胞腫、メラノーマ、副腎皮質癌、ユーイング腫瘍、ホジキンリンパ腫、中皮腫、多発性骨髄腫、睾丸癌、甲状腺癌又は頭頸部癌等を障害することができる。
　本発明の抗体は、好適にはモノクローナル抗体であれば特に限定されず、合成抗体、多重特異性抗体（例えばダイアボディ、トリアボディ等）、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体、抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ）等を含む。また、抗体は、免疫グロブリン分子の任意のクラス、例えば、ＩｇＧ，ＩｇＥ，ＩｇＭ，ＩｇＡ，ＩｇＤ及びＩｇＹ、又は任意のサブクラス、例えば、ＩｇＧ１，ＩｇＧ２，ＩｇＧ３，ＩｇＧ４，ＩｇＡ１，ＩｇＡ２等である。
　抗体はさらに、グリコシル化の他に、脱グリコシル化、アセチル化、ホルミル化、アミド化、リン酸化、又はペグ（ＰＥＧ）化等によって修飾されていてもよい。
　以下に、種々のモノクローナル抗体の作製例を示す。
　例えば、ＣＡＰＲＩＮ－１を発現する乳癌細胞株ＳＫ－ＢＲ－３等をマウスに投与して免疫し、同マウスより脾臓を抽出し、細胞を分離の上、該細胞とマウスミエローマ細胞とを融合させ、得られた融合細胞（ハイブリドーマ）の中から、癌細胞増殖抑制作用を持つ抗体を産生するクローンを選択する。癌細胞増殖抑制作用を持つモノクローナル抗体産生ハイブリドーマを単離し、当該ハイブリドーマを培養し、培養上清から一般的なアフィニティ精製法により抗体を精製することで、本発明の抗体を調製することが可能である。
　モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、例えば、以下のようにしても作製することができる。まず、公知の方法に従って、感作抗原を動物に免疫する。一般的方法として、感作抗原を哺乳動物の腹腔内又は皮下に注射することにより行われる。具体的には、感作抗原をＰＢＳ（Ｐｈｏｓｐｈａｔｅ－Ｂｕｆｆｅｒｅｄ　Ｓａｌｉｎｅ）や生理食塩水等で適当量に希釈、懸濁したものに所望により通常のアジュバント、例えば、フロイント完全アジュバントを適量混合し、乳化後、哺乳動物に４～２１日毎に数回投与する。また、感作抗原免疫時に適当な担体を使用することもできる。
　このように哺乳動物を免疫し、血清中に所望の抗体レベルが上昇するのを確認した後に、哺乳動物から免疫細胞を採取し、細胞融合に付すが、好ましい免疫細胞としては、特に脾細胞が挙げられる。
　前記免疫細胞と融合される他方の親細胞として、哺乳動物のミエローマ細胞を用いる。このミエローマ細胞としては、公知の種々の細胞株、例えば、Ｐ３Ｕ１（Ｐ３－Ｘ６３Ａｇ８Ｕ１）、Ｐ３（Ｐ３ｘ６３Ａｇ８．６５３）（Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　（１９７９）１２３，　１５４８－１５５０）、Ｐ３ｘ６３Ａｇ８Ｕ．１（Ｃｕｒｒｅｎｔ　Ｔｏｐｉｃｓ　ｉｎ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ　（１９７８）８１，　１－７）、ＮＳ－１（Ｋｏｈｌｅｒ．　Ｇ．　ａｎｄ　Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，　Ｃ．　Ｅｕｒ．　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　（１９７６）６，　５１１－５１９）、ＭＰＣ－１１（Ｍａｒｇｕｌｉｅｓ．　Ｄ．Ｈ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃｅｌｌ　（１９７６）８，　４０５－４１５）、ＳＰ２／０（Ｓｈｕｌｍａｎ，　Ｍ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｎａｔｕｒｅ　（１９７８）２７６，　２６９－２７０）、ＦＯ（ｄｅＳｔ．　Ｇｒｏｔｈ，　Ｓ．Ｆ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｊ．　Ｉｍｍｕｎｏｌ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　（１９８０）３５，　１－２１）、Ｓ１９４（Ｔｒｏｗｂｒｉｄｇｅ，　Ｉ．Ｓ．　Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．　（１９７８）１４８，　３１３－３２３）、Ｒ２１０（Ｇａｌｆｒｅ，　Ｇ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｎａｔｕｒｅ　（１９７９）２７７，　１３１－１３３）、２４０Ｅ－１、２４０Ｅ－Ｗ並びに２４０Ｅ－Ｗ２等が好適に使用される。
　前記免疫細胞とミエローマ細胞との細胞融合は、基本的には公知の方法、例えば、ケーラーとミルステインの方法（Ｋｏｈｌｅｒ，　Ｇ．　ａｎｄ　Ｍｉｌｓｔｅｉｎ，　Ｃ．　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ．　（１９８１）７３，　３－４６）等に準じて行うことができる。
　より具体的には、前記細胞融合は、例えば、細胞融合促進剤の存在下に通常の栄養培養液中で実施される。融合促進剤としては、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、センダイウイルス（ＨＶＪ）等が使用され、更に所望により融合効率を高めるためにジメチルスルホキシド等の補助剤を添加使用することもできる。
　免疫細胞とミエローマ細胞との使用割合は任意に設定することができる。前記細胞融合に用いる培養液としては、例えば、前記ミエローマ細胞株の増殖に好適なＲＰＭＩ１６４０培養液、ＭＥＭ培養液、その他、この種の細胞培養に用いられる通常の培養液が使用可能であり、さらに、牛胎児血清（ＦＣＳ）等の血清補液を併用することもできる。
　細胞融合では、前記免疫細胞とミエローマ細胞との所定量を前記培養液中でよく混合し、予め３７℃程度に加温したＰＥＧ溶液（例えば、平均分子量１０００～６０００程度）を通常３０～６０％（ｗ／ｖ）の濃度で添加し、混合することによって目的とするハイブリドーマを形成する。続いて、適当な培養液を逐次添加し、遠心して上清を除去する操作を繰り返すことによりハイブリドーマの生育に好ましくない細胞融合剤等を除去することが好ましい。
　このようにして得られたハイブリドーマは、通常の選択培養液、例えば、ＨＡＴ培養液（ヒポキサンチン、アミノプテリン及びチミジンを含む培養液）で培養することにより選択される。上記ＨＡＴ培養液での培養は、目的とするハイブリドーマ以外の細胞（非融合細胞）が死滅するのに十分な時間（通常、数日～数週間）継続する。ついで、通常の限界希釈法を実施し、目的とする抗体を産生するハイブリドーマのスクリーニング及び単一クローニングを行う。
　また、ヒト以外の動物に抗原を免疫して上記ハイブリドーマを得る他に、ヒトリンパ球、例えば、ＥＢウイルスに感染したヒトリンパ球をｉｎ　ｖｉｔｒｏでタンパク質、タンパク質発現細胞又はその溶解物で感作し、感作リンパ球をヒト由来の永久分裂能を有するミエローマ細胞、例えば、Ｕ２６６（登録番号ＴＩＢ１９６）と融合させ、所望の活性（例えば、細胞増殖抑制活性）を有するヒト抗体を産生するハイブリドーマを得ることもできる。
　このようにして作製されるモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、通常の培養液中で継代培養することが可能であり、また、液体窒素中で長期保存することが可能である。
　すなわち、所望の抗原や所望の抗原を発現する細胞を感作抗原として使用して、これを通常の免疫方法に従って免疫し、得られる免疫細胞を通常の細胞融合法によって公知の親細胞と融合させ、通常のスクリーニング法により、モノクローナルな抗体産生細胞（ハイブリドーマ）をスクリーニングすることによって作製できる。
　抗原の調製は、例えば、動物細胞を用いた方法（特表２００７－５３００６８）やバキュロウイルスを用いた方法（例えば、国際公開第ＷＯ９８／４６７７７号等）等に準じて行うことができる。抗原の免疫原性が低い場合には、アルブミン等の免疫原性を有する巨大分子と結合させ、免疫を行えばよい。抗原はアジュバントとともに投与して免疫してもよい。
　本発明の抗体は、さらにまた、その抗体遺伝子をハイブリドーマからクローニングし、適当なベクターに組み込んで、これを宿主に導入し、遺伝子組換え技術を用いて産生させた遺伝子組換え型抗体としても得ることができる（例えば、Ｃａｒｌ，　Ａ．Ｋ．　Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ，　Ｊａｍｅｓ，　Ｗ．　Ｌａｒｒｉｃｋ，　ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣ　ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ　ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ，　Ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ　ｉｎ　ｔｈｅ　Ｕｎｉｔｅｄ　Ｋｉｎｇｄｏｍ　ｂｙ　ＭＡＣＭＩＬＬＡＮ　ＰＵＢＬＩＳＨＥＲＳ　ＬＴＤ，　１９９０参照）。具体的には、ハイブリドーマのｍＲＮＡから逆転写酵素を用いて抗体の可変領域（Ｖ領域）のｃＤＮＡを合成する。目的とする抗体のＶ領域をコードするＤＮＡが得られれば、これを所望の抗体定常領域（Ｃ領域）をコードするＤＮＡと連結し、これを発現ベクターへ組み込む。又は、抗体のＶ領域をコードするＤＮＡを、抗体Ｃ領域のＤＮＡを含む発現ベクターへ組み込んでもよい。発現制御領域、例えば、エンハンサー、プロモーターの制御のもとで発現するよう発現ベクターに組み込む。次に、この発現ベクターにより宿主細胞を形質転換し、抗体を発現させることができる。
　本発明の抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体は、好適にはモノクローナル抗体であることを特徴とするが、モノクローナル抗体には、ヒトモノクローナル抗体、非ヒト動物モノクローナル抗体（例えば、マウスモノクローナル抗体、ラットモノクローナル抗体、ウサギモノクローナル抗体、ニワトリモノクローナル抗体等）、キメラモノクローナル抗体等が含まれる。モノクローナル抗体は、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質又はその断片で免疫した非ヒト哺乳動物（例えば、マウス、ヒト抗体産生マウス、ニワトリ、ウサギ等）からの脾細胞とミエローマ細胞との融合によって得られたハイブリドーマを培養することによって作製されうる。キメラ抗体は、異なる動物由来の配列を組み合わせて作製される抗体であり、例えば、マウス抗体の重鎖、軽鎖の可変領域とヒト抗体の重鎖、軽鎖の定常領域からなる抗体等である。キメラ抗体の作製は公知の方法を用いて行うことができ、例えば、抗体Ｖ領域をコードするＤＮＡとヒト抗体Ｃ領域をコードするＤＮＡとを連結し、これを発現ベクターに組み込んで宿主に導入し産生させることにより得られる。
　なお、後述の実施例では、複数のヒト化モノクローナル抗体及びヒト－ウサギキメラモノクローナル抗体が作製され、強い抗腫瘍効果が確認された。これらモノクローナル抗体は、いずれも重鎖可変領域（ＶＨ領域）に配列番号１のアミノ酸配列で表されるＣＤＲ１、配列番号２のアミノ酸配列で表されるＣＤＲ２及び配列番号３のアミノ酸配列で表されるＣＤＲ３を含み、軽鎖可変領域（ＶＬ領域）に、配列番号４のアミノ酸配列で表されるＣＤＲ１、配列番号５のアミノ酸配列で表されるＣＤＲ２及び配列番号６のアミノ酸配列で表されるＣＤＲ３を含む。これらモノクローナル抗体はそれぞれ、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨ領域と配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＬ領域から成るヒト化抗体＃０、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＨ領域と配列番号１１のアミノ酸配列を有するＶＬ領域から成るヒト化抗体＃１、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＨ領域と配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＬ領域から成るヒト化抗体＃２、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＨ領域と配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＬ領域から成るヒト化抗体＃３、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨ領域と配列番号１２のアミノ酸配列を有するＶＬ領域から成るヒト化抗体＃４、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨ領域と配列番号１３のアミノ酸配列を有するＶＬ領域から成るヒト化抗体＃５、配列番号７のアミノ酸配列を有するＶＨ領域と配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ領域から成るヒト化抗体＃６、配列番号８のアミノ酸配列を有するＶＨ領域と配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ領域から成るヒト化抗体＃７、配列番号９のアミノ酸配列を有するＶＨ領域と配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ領域から成るヒト化抗体＃８、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨ領域と配列番号１４のアミノ酸配列を有するＶＬ領域から成るヒト化抗体＃９、配列番号１０のアミノ酸配列を有するＶＨ領域と配列番号１５のアミノ酸配列を有するＶＬ領域から成るヒト化抗体＃１０、及び配列番号２０のアミノ酸配列を有するＶＨ領域と配列番号２１のアミノ酸配列を有するＶＬ領域から成るヒト－ウサギキメラ抗体を含む。
　ヒト化抗体は、再構成（ｒｅｓｈａｐｅｄ）ヒト抗体とも称される改変抗体である。ヒト化抗体は、免疫動物由来の抗体の相補性決定領域を、ヒト抗体の相補性決定領域へ移植することによって構築される。その一般的な遺伝子組換え手法も知られている。
　具体的には、例えば、マウス抗体、ウサギ抗体やニワトリ抗体の相補性決定領域とヒト抗体のフレームワーク領域を連結するように設計したＤＮＡ配列を、末端部にオーバーラップする部分を有するように作製した数個のオリゴヌクレオチドからＰＣＲ法により合成する。得られたＤＮＡを、ヒト抗体定常領域をコードするＤＮＡと連結し、次いで発現ベクターに組み込んで、これを宿主に導入し産生させることにより得られる（欧州特許出願公開第ＥＰ２３９４００号、国際公開第ＷＯ９６／０２５７６号参照）。相補性決定領域を介して連結されるヒト抗体のフレームワーク領域は、相補性決定領域が良好な抗原結合部位を形成するものが選択される。必要に応じ、再構成ヒト抗体の相補性決定領域が適切な抗原結合部位を形成するように抗体の可変領域におけるフレームワーク領域のアミノ酸を置換してもよい（Ｓａｔｏ　Ｋ．　ｅｔ　ａｌ．，　Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ　１９９３，　５３：　８５１－８５６）。また、様々なヒト抗体由来のフレームワーク領域に置換してもよい（国際公開第ＷＯ９９／５１７４３号参照）。
　キメラ抗体やヒト化抗体を作製する際には、可変領域（例えば、ＦＲ）や定常領域中のアミノ酸を他のアミノ酸で置換等してもよい。
　アミノ酸の置換は、１もしくは複数個、例えば、１５未満、１０未満、８以下、７以下、６以下、５以下、４以下、３以下、又は２以下のアミノ酸、好ましくは１～９アミノ酸の置換であり、置換抗体は、未置換抗体と機能的に同等であるべきである。
　ここで「機能的に同等」とは、対象となる抗体が本発明の抗体と同様の生物学的あるいは生化学的活性、具体的には腫瘍を障害する機能を有すること、ヒトへの適用時に拒絶反応を本質的に起こさないことなどを指す。このような活性としては、例えば、細胞増殖抑制活性、あるいは結合活性を例示することができる。
　あるポリペプチドと機能的に同等なポリペプチドを調製するための、当業者によく知られた方法としては、ポリペプチドに変異を導入してアミノ酸置換する方法が知られている。例えば、当業者であれば、部位特異的変異誘発法（Ｈａｓｈｉｍｏｔｏ－Ｇｏｔｏｈ，　Ｔ．　ｅｔ　ａｌ．，　（１９９５）　Ｇｅｎｅ　１５２，　２７１－２７５、Ｚｏｌｌｅｒ，　ＭＪ．，　ａｎｄ　Ｓｍｉｔｈ，　Ｍ．　（１９８３）　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ．　１００，　４６８－５００、Ｋｒａｍｅｒ，　Ｗ．　ｅｔ　ａｌ．，　（１９８４）　Ｎｕｃｌｅｉｃ　Ａｃｉｄｓ　Ｒｅｓ．　１２，　９４４１－９４５６、Ｋｒａｍｅｒ，　Ｗ．　ａｎｄ　Ｆｒｉｔｚ，　ＨＪ．，　（１９８７）　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ．　１５４，　３５０－３６７、Ｋｕｎｋｅｌ，　ＴＡ．，　（１９８５）　Ｐｒｏｃ．　Ｎａｔｌ．　Ａｃａｄ．　Ｓｃｉ．　ＵＳＡ．　８２，　４８８－４９２、Ｋｕｎｋｅｌ　（１９８８）　Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｅｎｚｙｍｏｌ．　８５，　２７６３－２７６６）等を用いて、本発明の抗体に適宜アミノ酸置換を導入することにより、該抗体と機能的に同等な抗体を調製することができる。
　アミノ酸置換を導入する場合、置換は、保存的アミノ酸置換が望ましい。保存的アミノ酸置換とは、電荷、側鎖、極性、芳香族性等の性質の類似するアミノ酸間の置換である。性質の類似したアミノ酸は、例えば、塩基性アミノ酸（アルギニン、リジン、ヒスチジン）、酸性アミノ酸（アスパラギン酸、グルタミン酸）、無電荷極性アミノ酸（グリシン、アスパラギン、グルタミン、セリン、トレオニン、システイン、チロシン）、無極性アミノ酸（ロイシン、イソロイシン、アラニン、バリン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニン）、分枝鎖アミノ酸（ロイシン、バリン、イソロイシン）、芳香族アミノ酸（フェニルアラニン、チロシン、トリプトファン、ヒスチジン）等に分類しうる。
　抗体修飾物としては、例えば、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）等の各種分子と結合した抗体を挙げることができる。本発明の抗体修飾物においては、結合される物質は限定されない。このような抗体修飾物を得るには、得られた抗体に化学的な修飾を施すことによって得ることができる。これらの方法はこの分野において既に確立されている。
　ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質又はそれを含むＣＡＰＲＩＮ－１断片ポリペプチドを認識する抗体は、当業者に公知の方法により得ることが可能である。例えば、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体が認識するＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質のエピトープを通常の方法（例えば、エピトープマッピングや後述にあるエピトープの同定の方法等）により決定し、該エピトープに含まれるアミノ酸配列を有するポリペプチドを免疫原として抗体を作製する方法や、通常の方法で作製された抗体のエピトープを決定し、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体とエピトープが同じ抗体を選択する方法等により得ることができる。
　本発明の抗体は、ＣＡＰＲＩＮ－１と免疫学的反応性を有する抗体、ＣＡＰＲＩＮ－１を特異的に認識する抗体、又はＣＡＰＲＩＮ－１と特異的に結合する抗体であって、癌に対する細胞障害活性、又は腫瘍増殖抑制作用を示す抗体である。該抗体は、それを投与する対象動物において拒絶反応がほとんど又は全く回避されるような構造をもつ抗体であることが好ましい。そのような抗体としては、例えば、対象動物がヒトである場合、ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体（例えば、ヒト－ウサギキメラ抗体）、単鎖抗体、二重特異性抗体等が挙げられる。これらの抗体は、重鎖及び軽鎖の可変領域がヒト抗体由来のものであるか、重鎖及び軽鎖の可変領域が非ヒト動物抗体由来の相補性決定領域（ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３）とヒト抗体由来のフレームワーク領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３及びＦＲ４）からなるものであるか、又は、重鎖及び軽鎖の可変領域が非ヒト動物抗体由来のものであり、かつ、重鎖及び軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のものである組換え型抗体である。好ましい抗体は、前２つの抗体である。
　これらの組換え型抗体は、次のようにして作製することができる。ハイブリドーマ等の抗体産生細胞からヒトＣＡＰＲＩＮ－１に対するモノクローナル抗体（例えば、ヒトモノクローナル抗体、マウスモノクローナル抗体、ラットモノクローナル抗体、ウサギモノクローナル抗体、ニワトリモノクローナル抗体等）をコードするＤＮＡをクローニングし、これを鋳型にして該抗体の軽鎖可変領域及び重鎖可変領域をコードするＤＮＡをＲＴ－ＰＣＲ法等により作製し、例えば、Ｋａｂａｔ　ＥＵ　ｎｕｍｂｅｒｉｎｇ　ｓｙｓｔｅｍ（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　Ｐｒｏｔｅｉｎｓ　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ　Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，　５ｔｈＥｄ．　Ｐｕｂｌｉｃ　Ｈｅａｌｔｈ　Ｓｅｒｖｉｃｅ，　Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｈｅａｌｔｈ，　Ｂｅｔｈｅｓｄａ，　Ｍｄ．　（１９９１））に基づいて軽鎖及び重鎖の、各可変領域の配列、又は各ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３の配列、又は各ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３、ＦＲ４の配列を決定することができる。
　さらに、これらの各可変領域をコードするＤＮＡ又は各相補性決定領域をコードするＤＮＡを、遺伝子組換え技術（Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｃｌｏｎｉｎｇ　Ａ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｍａｎｕａｌ，　Ｃｏｌｄ　Ｓｐｒｉｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ　Ｐｒｅｓｓ　（１９８９））又はＤＮＡ合成機を用いて作製する。ここで、上記ヒトモノクローナル抗体産生ハイブリドーマは、ヒト抗体産生動物（例えば、マウス）にヒトＣＡＰＲＩＮ－１を免疫したのち、該免疫動物から切除した脾細胞とミエローマ細胞とを融合させることによって作製することができる。これとは別に、必要に応じて、遺伝子組換え技術又はＤＮＡ合成機を用いてヒト抗体由来の軽鎖又は重鎖の可変領域及び定常領域をコードするＤＮＡを作製する。
　ヒト化抗体の場合には、ヒト抗体由来の軽鎖又は重鎖の可変領域をコードするＤＮＡ中のＣＤＲコーディング配列を、それらに対応する、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ニワトリ等）由来の抗体のＣＤＲコーディング配列と置換することによって、ヒト化抗体をコードするＤＮＡを作製することができる。例えば、ヒト抗体由来のＣＤＲコーディング配列をマウス抗体由来のＣＤＲコーディング配列と置換したヒト化抗体の場合、可変領域は、Ｎ末側からヒトＦＲ１、マウスＣＤＲ１、ヒトＦＲ２、マウスＣＤＲ２、ヒトＦＲ３、マウスＣＤＲ４、及びヒトＦＲ４の順で構成される。
　キメラ抗体の場合には、ヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ニワトリ等）由来の抗体の軽鎖又は重鎖の可変領域をコードするＤＮＡをそれぞれ、ヒト抗体由来の軽鎖又は重鎖の定常領域をコードするＤＮＡと連結することによって、キメラ抗体をコードするＤＮＡを作製することができる。
　単鎖抗体の場合には、この抗体は重鎖可変領域と軽鎖可変領域とをリンカーを介して直線状に連結された抗体であり、重鎖可変領域をコードするＤＮＡ、リンカーをコードするＤＮＡ、及び軽鎖可変領域をコードするＤＮＡを結合することによって単鎖抗体をコードするＤＮＡを作製することができる。ここで、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域はいずれも、ヒト抗体由来のものであるか、あるいは、相補性決定領域のみヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ニワトリ等）由来の抗体の相補性決定領域によって置換されたヒト抗体由来のものである。また、リンカーは、１２～１９アミノ酸からなり、例えば、１５アミノ酸の（Ｇ４Ｓ）３（Ｇ．　-Ｂ．　Ｋｉｍら，Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ　Ｄｅｓｉｇｎ　ａｎｄ　Ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ　２００７，　２０（９）：　４２５－４３２）が挙げられる。
　二重特異性抗体（例えば、ｄｉａｂｏｄｙ）の場合には、この抗体は２つの異なるエピトープと特異的に結合可能な抗体であり、例えば、重鎖可変領域ＡをコードするＤＮＡ、軽鎖可変領域ＢをコードするＤＮＡ、重鎖可変領域ＢをコードするＤＮＡ、及び軽鎖可変領域ＡをコードするＤＮＡをこの順序で結合する（ただし、軽鎖可変領域ＢをコードするＤＮＡと重鎖可変領域ＢをコードするＤＮＡとは上記のようなリンカーをコードするＤＮＡを介して結合される。）ことによって二重特異性抗体をコードするＤＮＡを作製することができる。ここで、重鎖可変領域及び軽鎖可変領域はいずれも、ヒト抗体由来のものであるか、あるいは、相補性決定領域のみヒト以外の動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ニワトリ等）由来の抗体の相補性決定領域によって置換されたヒト抗体由来のものである。
　上記のようにして作製された組換えＤＮＡを、１つ又は複数の適当なベクターに組み込み、これを宿主細胞（例えば、哺乳動物細胞、酵母細胞、昆虫細胞等）に導入し、（共）発現させることによって組換え型抗体を作製することができる（Ｐ．Ｊ．　Ｄｅｌｖｅｓ．，　ＡＮＴＩＢＯＤＹ　ＰＲＯＤＵＣＴＩＯＮ　ＥＳＳＥＮＴＩＡＬ　ＴＥＣＨＮＩＱＵＥＳ．，　１９９７　ＷＩＬＥＹ、Ｐ．　Ｓｈｅｐｈｅｒｄ　ａｎｄ　Ｃ．　Ｄｅａｎ．，　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ．，　２０００　ＯＸＦＯＲＤ　ＵＮＩＶＥＲＳＩＴＹ　ＰＲＥＳＳ；　Ｊ．Ｗ．　Ｇｏｄｉｎｇ．，　Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：　ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ　ａｎｄ　ｐｒａｃｔｉｃｅ．，　１９９３　ＡＣＡＤＥＭＩＣ　ＰＲＥＳＳ）。
　上記方法によって作製される本発明の抗体としては、例えば、後述の実施例で取得された配列番号１、２及び３を含む重鎖可変領域と配列番号４、５及び６を含む軽鎖可変領域とを含む以下の抗体（ａ）～（ｌ）が挙げられる。
　（ａ）配列番号８の重鎖可変領域及び配列番号１５の軽鎖可変領域で構成される抗体
　（ｂ）配列番号１０の重鎖可変領域及び配列番号１５の軽鎖可変領域で構成される抗体
　（ｃ）配列番号７の重鎖可変領域及び配列番号１５の軽鎖可変領域で構成される抗体
　（ｄ）配列番号８の重鎖可変領域及び配列番号１３の軽鎖可変領域で構成される抗体
　（ｅ）配列番号７の重鎖可変領域及び配列番号１２の軽鎖可変領域で構成される抗体
　（ｆ）配列番号８の重鎖可変領域及び配列番号１２の軽鎖可変領域で構成される抗体
　（ｇ）配列番号７の重鎖可変領域及び配列番号１３の軽鎖可変領域で構成される抗体
　（ｈ）配列番号１０の重鎖可変領域及び配列番号１４の軽鎖可変領域で構成される抗体
　（ｉ）配列番号８の重鎖可変領域及び配列番号１１の軽鎖可変領域で構成される抗体
　（ｊ）配列番号７の重鎖可変領域及び配列番号１１の軽鎖可変領域で構成される抗体
　（ｋ）配列番号９の重鎖可変領域及び配列番号１５の軽鎖可変領域で構成される抗体
　（ｌ）配列番号２０の重鎖可変領域及び配列番号２１の軽鎖可変領域で構成される抗体
　ここで、配列番号１、２及び３に示すアミノ酸配列はそれぞれ、ウサギ抗体の重鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３であり、配列番号４、５及び６に示すアミノ酸配列はそれぞれ、ウサギ抗体の軽鎖可変領域のＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３である。
　また、本発明のヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体又は二重特異性抗体は、例えば以下の抗体（ｉ）～（ｘｉｖ）である。
　（ｉ）重鎖の可変領域が配列番号１、２及び３のアミノ酸配列及びヒト抗体由来のフレームワーク領域のアミノ酸配列もしくはその置換体を含み、並びに、軽鎖の可変領域が配列番号４、５及び６のアミノ酸配列及びヒト抗体由来のフレームワーク領域のアミノ酸配列もしくはその置換体を含む抗体。
　（ｉｉ）重鎖の可変領域が配列番号１、２及び３のアミノ酸配列及びヒト抗体由来のフレームワーク領域のアミノ酸配列もしくはその置換体を含み、かつ、重鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含み、並びに、軽鎖の可変領域が配列番号４、５及び６のアミノ酸配列及びヒト抗体由来のフレームワーク領域のアミノ酸配列もしくはその置換体を含み、かつ、軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含んでなる抗体。
　（ｉｉｉ）重鎖の可変領域が配列番号８のアミノ酸配列を含み、かつ、重鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含み、並びに、軽鎖の可変領域が配列番号１５のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含んでなる抗体。
　（ｉｖ）重鎖の可変領域が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、かつ、重鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含み、並びに、軽鎖の可変領域が配列番号１５のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含んでなる抗体。
　（ｖ）重鎖の可変領域が配列番号７のアミノ酸配列を含み、かつ、重鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含み、並びに、軽鎖の可変領域が配列番号１５のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含んでなる抗体。
　（ｖｉ）重鎖の可変領域が配列番号８のアミノ酸配列を含み、かつ、重鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含み、並びに、軽鎖の可変領域が配列番号１３のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含んでなる抗体。
　（ｖｉｉ）重鎖の可変領域が配列番号７のアミノ酸配列を含み、かつ、重鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含み、並びに、軽鎖の可変領域が配列番号１２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含んでなる抗体。
　（ｖｉｉｉ）重鎖の可変領域が配列番号８のアミノ酸配列を含み、かつ、重鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含み、並びに、軽鎖の可変領域が配列番号１２のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含んでなる抗体。
　（ｉｘ）重鎖の可変領域が配列番号７のアミノ酸配列を含み、かつ、重鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含み、並びに、軽鎖の可変領域が配列番号１３のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含んでなる抗体。
　（ｘ）重鎖の可変領域が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、かつ、重鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含み、並びに、軽鎖の可変領域が配列番号１４のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含んでなる抗体。
　（ｘｉ）重鎖の可変領域が配列番号８のアミノ酸配列を含み、かつ、重鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含み、並びに、軽鎖の可変領域が配列番号１１のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含んでなる抗体。
　（ｘｉｉ）重鎖の可変領域が配列番号７のアミノ酸配列を含み、かつ、重鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含み、並びに、軽鎖の可変領域が配列番号１１のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含んでなる抗体。
　（ｘｉｉｉ）重鎖の可変領域が配列番号９のアミノ酸配列を含み、かつ、重鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含み、並びに、軽鎖の可変領域が配列番号１５のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含んでなる抗体。
　（ｘｉｖ）重鎖の可変領域が配列番号２０のアミノ酸配列を含み、かつ、重鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含み、並びに、軽鎖の可変領域が配列番号２１のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の定常領域がヒト抗体由来のアミノ酸配列を含んでなる抗体。
　なお、ヒト抗体重鎖及び軽鎖の定常領域及び可変領域のフレームワーク領域の配列は、例えば、ＮＣＢＩ（米国：ＧｅｎＢａｎｋ、ＵｎｉＧｅｎｅ等）から入手可能であり、例えば、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域については登録番号Ｊ００２２８、ヒトＩｇＧ２重鎖定常領域については登録番号Ｊ００２３０、ヒトＩｇＧ３重鎖定常領域については登録番号Ｘ０３６０４、ヒトＩｇＧ４重鎖定常領域については登録番号Ｋ０１３１６、ヒト軽鎖κ定常領域については登録番号Ｖ００５５７、Ｘ６４１３５、Ｘ６４１３３等、ヒト軽鎖λ定常領域については登録番号Ｘ６４１３２、Ｘ６４１３４等の配列を参照することができる。
　上記抗体は、好ましくは、細胞障害活性を有しており、これによって抗腫瘍効果（あるいは抗腫瘍活性）を発揮することができる。
　さらに上記抗体は、ＣＡＰＲＩＮ－１を特異的に認識するという特異性を有する限り、各抗体の相補性決定領域の配列、フレームワーク領域の配列及び／又は定常領域の配列において、１もしくは数個のアミノ酸の置換、欠失又は付加があってもよい。ここで数個とは、好ましくは１～９個を意味する。
　本発明の抗体の、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質又はその断片に対する親和定数Ｋａ（ｋｏｎ／ｋｏｆｆ）は、好ましくは、少なくとも少なくとも５×１０８Ｍ－１、少なくとも１０９Ｍ－１、少なくとも５×１０９Ｍ－１、少なくとも１０１０Ｍ－１、少なくとも５×１０１０Ｍ－１、少なくとも１０１１Ｍ－１、少なくとも５×１０１１Ｍ－１、少なくとも１０１２Ｍ－１、少なくとも１０１３Ｍ－１、あるいは少なくとも１０１４Ｍ－１である。
　本発明の抗体によるＣＡＰＲＩＮ－１発現癌細胞に対する抗腫瘍効果の機序の１つとして、ＣＡＰＲＩＮ－１発現細胞のエフェクター細胞抗体依存的細胞障害性（ＡＤＣＣ）がある。本発明の抗体の重鎖定常領域のアミノ酸を１もしくは数個置換する、あるいは、重鎖定常領域に結合するＮ－グリコシド結合糖鎖中のＮ－アセチルグルコサミンに結合しているフコースを除去することによって、本発明の抗体のＡＤＣＣによる抗腫瘍活性を増強することができる。さらに、上記重鎖定常領域のアミノ酸置換及びフコース除去を組み合わせることによって、本発明の抗体のＡＤＣＣによる抗腫瘍活性をさらに増強させることができる。
　また、本発明における重鎖定常領域に結合するＮ－グリコシド結合糖鎖中のＮ－アセチルグルコサミンに結合しているフコースを除去した抗体は、それ単独であってもよいし、また、フコースが結合している抗体との組成物であってもよい。当該抗体の組成物においては、フコースを除去した抗体が主成分であることが好ましい。
　重鎖定常領域のアミノ酸を１もしくは数個置換された抗体は、例えば国際公開第ＷＯ２００４／０６３３５１号、国際公開第ＷＯ２０１１／１２０１３５号、米国特許８３８８９５５号、国際公開第ＷＯ２０１１／００５４８１号、米国特許６７３７０５６号、国際公開第ＷＯ２００５／０６３３５１号を参照して作製することができる。重鎖定常領域中のＮ－グリコシド結合糖鎖中のＮ－アセチルグルコサミンに付加しているフコースが除去された抗体又はその産生細胞は、例えば米国特許６６０２６８４号、欧州特許１９１４２４４号、米国特許７５７９１７０号を参照して作製することができる。重鎖定常領域に結合するＮ－グリコシド結合糖鎖中のＮ－アセチルグルコサミンに結合しているフコースを除去した抗体とフコースが結合している抗体の組成物又はその産生細胞は、例えば米国特許８６４２２９２号を参照して作製することができる。
　本発明の抗体は、抗腫瘍剤とコンジュゲートすることができる。抗体と抗腫瘍剤との結合は、アミノ基、カルボキシル基、ヒドロキシ基、チオール基等と反応性の基（例えば、コハク酸イミジル基、ホルミル基、２－ピリジルジチオ基、マレイイミジル基、アルコキシカルボニル基、ヒドロキシ基等）をもつスペーサーを介して行うことができる。
　抗腫瘍剤の例は、文献等で公知の下記の抗腫瘍剤、すなわち、パクリタキセル、ドキソルビシン、ダウノルビシン、シクロホスファミド、メトトレキサート、５－フルオロウラシル、チオテパ、ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファン、ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）、ウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）、アルトレートアミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド（ｔｒｉｅｔｈｉｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）、トリメチローロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）、ブラタシン、ブラタシノン、カンプトセシン、ブリオスタチン、カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）、クリプトフィシン１、クリプトフィシン８、ドラスタチン、ズオカルマイシン、エレウテロビン、パンクラチスタチン、サルコジクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）、スポンジスタチン、クロランブシル、クロロナファジン（ｃｈｌｏＲＮＡｐｈａｚｉｎｅ）、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミンオキシドヒドロクロリド、メルファラン、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ウラシルマスタード、カルムスチン、クロロゾトシン（ｃｈｌｏｒｏｚｏｔｏｃｉｎ）、フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、ダイネマイシン、クロドロネート、エスペラマイシン、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン、ダクチノマイシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｂｉｃｉｎ）、６－ジアゾ－５－オキソ－Ｌ－ノルロイシン、アドリアマイシン（ａｄｒｉａｍｙｃｉｎ）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マーセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシンＣ、マイコフェノール酸（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃ　ａｃｉｄ）、ノガラマイシン（ｎｏｇａｌａｍｙｃｉｎ）、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎｓ）、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメクス、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）、ゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）、デノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）、トリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）、フルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、６－メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、アンシタビン、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、６－アザウリジン（ａｚａｕｒｉｄｉｎｅ）、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン（ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、フロキシウリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）；アンドロゲン類、例えば、カルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン（ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン、フロリン酸（ｆｒｏｌｉｎｉｃ　ａｃｉｄ）、アセグラトン、アルドホスファミドグリコシド、アミノレブリン酸、エニルウラシル、アムサクリン（ａｍｓａｃｒｉｎｅ）、ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）、ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）、エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）、デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）、デメコルシン（ｄｅｍｅｃｏｌｃｉｎｅ）、ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）、エルフォルニチン　（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）、酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ）、エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）、エトグルシド（ｅｔｏｇｌｕｃｉｄ）、レンチナン、ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｍｉｎｅ）、メイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）、アンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｅ）、ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）、ミトキサントロン、モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）、ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）、ペントスタチン、フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）、ピラルビシン、ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ　ａｃｉｄ）、２－エチルヒドラジド、プロカルバジン、ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）、リゾキシン、シゾフィラン、スピロゲルマニウム（ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ）、テニュアゾン酸（ｔｅｎｕａｚｏｎｉｃ　ａｃｉｄ）、トリアジコン（ｔｒｉａｚｉｑｕｏｎｅ）、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎｅ）Ａ、アングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ）、ウレタン、ビンデシン、ダカーバジン、マンノムスチン（ｍａｎｎｏｍｕｓｔｉｎｅ）、ミトブロニトール、ミトラクトール（ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）、ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）、ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）、ドキセタキセル、クロランブシル、ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、６－チオグアニン、メルカプトプリン、シスプラチン、オキサリプラチン、カルボプラチン、ビンブラスチン、エトポシド、イホスファミド、マイトキサントロン、ビンクリスチン、ビノレルビン、ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）、テニポシド、エダトレキセート（ｅｄａｔｒｅｘａｔｅ）、ダウノマイシン、アミノプテリン、キセローダ（ｘｅｌｏｄａ）、イバンドロナート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）、イリノテカン、トポイソメラーゼインヒビター、ジフルオロメチロールニチン（ＤＭＦＯ）、レチノイン酸、カペシタビン（ｃａｐｅｃｉｔａｂｉｎｅ）、並びにそれらの薬学的に許容可能な塩又は誘導体を包含する。
　抗体が、抗腫瘍剤とコンジュゲートした抗体である場合に、抗腫瘍活性を発揮するかどうかを評価する方法としては、例えば、マウス由来の抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体ならば、マウス抗体に結合する二次抗体に薬物が付いたものを同時に反応させて、ヒト癌細胞に対する抗腫瘍効果を生体外で評価することができる。例えば、サポリン（Ｓａｐｏｒｉｎ）が結合されたセカンドイムノトキシンである抗ヒトＩｇＧ抗体 （Ｈｕｍ－ＺＡＰ（Ａｄｖａｎｃｅｄ　Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ　Ｓｙｓｔｅｍｓ））を用いて評価ができる。
　また、本発明の抗体と、抗腫瘍剤を併用投与することで、より高い治療効果を得ることができる。本手法は、ＣＡＰＲＩＮ－１が発現している癌患者に対して、外科的手術前後どちらにおいても適応できる。特に手術後に、従来抗腫瘍剤単独で処置されていたＣＡＰＲＩＮ－１が発現している癌に対して、より高い癌再発防止や生存期間の延長が得られる。
　本発明の抗体との併用投与に用いられる抗腫瘍剤には、例えば、前記抗腫瘍剤を利用することができる。特にシクロホスファミド、パクリタキセル、ドキセタキセル、ビノレルビンが好ましく用いられる。
　あるいは、本発明の抗体には、文献等で公知の、２１１Ａｔ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３ＳＭ、２１２Ｂｉ、３２Ｐ、１７５Ｌｕ、１７６Ｌｕ、８９Ｓｒ、６４Ｃｕ、１１１Ｉｎ等の放射性同位体を結合することも可能である（Ｈｉｄｅｏ　Ｓａｊｉ，　ＹＡＫＵＧＡＫＵ　ＺＡＳＳＨＩ　１２８（３）　３２３－３３２　８（２００８），　Ｊｐｎ）。放射性同位体は、腫瘍の治療や診断のために有効なものが望ましい。このような放射性同位体も、本発明における抗腫瘍剤に含まれる。
　＜抗腫瘍効果＞
　本発明で用いられる抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体によるＣＡＰＲＩＮ－１発現癌細胞に対する抗腫瘍効果は、以下の機序等により起こると考えられる：前述のＣＡＰＲＩＮ－１発現細胞のエフェクター細胞抗体依存的細胞障害性（ＡＤＣＣ）、及びＣＡＰＲＩＮ－１発現細胞の抗体依存的細胞貪食性（ＡＤＣＰ）。ただし、この機序により本発明の範囲を限定することは意図しない。
　したがって、本発明で用いられる抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体の活性評価は、以下実施例に具体的に示されるように、生体外で、ＣＡＰＲＩＮ－１を発現する癌細胞に対して上記ＡＤＣＣ活性又はＡＤＣＰ活性を測定することで評価することができる。
　本発明で用いられる抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体は、癌細胞上のＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と結合し、上記活性等によって、抗腫瘍作用を示すことから、癌の治療あるいは予防に有用であると考えられる。すなわち本発明は、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体を有効成分とする、癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物を提供する。抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体を人体に投与する目的（抗体治療）で使用する場合には、免疫原性を低下させるため、ヒト抗体やヒト化抗体にすることが好ましい。
　なお、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と癌細胞表面上のＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質との結合親和性が高い程、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体による、より強い抗腫瘍活性が得られる。したがって、本発明の抗体は、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と高い結合親和性を有するため、より強い抗腫瘍効果が期待でき、癌の治療及び／又は予防を目的とした医薬組成物として適応することが可能になる。本発明の抗体は、高い結合親和性として、前述したように、結合定数（親和定数）Ｋａ（ｋｏｎ／ｋｏｆｆ）が、好ましくは、少なくとも５×１０８Ｍ－１、少なくとも１０９Ｍ－１、少なくとも５×１０９Ｍ－１、少なくとも１０１０Ｍ－１、少なくとも５×１０１０Ｍ－１、少なくとも１０１１Ｍ－１、少なくとも５×１０１１Ｍ－１、少なくとも１０１２Ｍ－１、少なくとも１０１３Ｍ－１、あるいは、少なくとも１０１４Ｍ－１を有することが好ましい。
　＜抗原発現細胞への結合＞
　抗体がＣＡＰＲＩＮ－１に結合する能力は、実施例で述べられるような、例えば、ＥＬＩＳＡ法、ウエスタンブロット法、免疫蛍光及びフローサイトメトリー分析等を用いた結合アッセイを利用して特定することができる。
　＜免疫組織化学染色＞
　ＣＡＰＲＩＮ－１を認識する抗体は、当業者に周知の方法での免疫組織化学において用いることができる。例えば、外科手術の間に患者から得た組織や、自然に又はトランスフェクション後にＣＡＰＲＩＮ－１を発現する細胞系を接種した異種移植組織を担持する動物から得た組織を、パラホルムアルデヒド又はアセトン固定して得られた凍結切片、又はパラホルムアルデヒドで固定したパラフィン包埋した組織切片を使用して、ＣＡＰＲＩＮ－１との反応性に関して試験することができる。
　免疫組織化学染色のため、ＣＡＰＲＩＮ－１に対して反応性のある抗体を、様々な方法で染色させることができる。例えば、ホースラディッシュペルオキシダーゼ複合ヤギ抗マウス抗体、ヤギ抗ウサギ抗体やヤギ抗ニワトリ抗体を反応させることにより、可視化することができる。
　＜医薬組成物、及び癌の治療及び／又は予防方法＞
　本発明の癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物の標的は、ＣＡＰＲＩＮ－１遺伝子を発現する癌（細胞）であれば特に限定されない。
　本明細書で使用される「腫瘍」及び「癌」という用語は、悪性新生物を意味し、互換的に使用される。
　本発明において対象となる癌としては、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質を細胞膜表面上に発現している癌であればいかなる癌でもよい。好ましくは、前述の乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、白血病、リンパ腫、肝臓癌、胆嚢癌、肉腫、肥満細胞腫、メラノーマ、副腎皮質癌、ユーイング腫瘍、ホジキンリンパ腫、中皮腫、多発性骨髄腫、睾丸癌、甲状腺癌又は頭頸部癌である。
　上記癌は、より具体的には、例えば、乳腺癌、複合型乳腺癌、乳腺悪性混合腫瘍、乳管内乳頭状腺癌、肺腺癌、扁平上皮癌、小細胞癌、大細胞癌、神経上皮組織性腫瘍である神経膠腫、膠芽腫、神経芽腫、脳室上衣腫、神経細胞性腫瘍、胎児型の神経外胚葉性腫瘍、神経鞘腫、神経線維腫、髄膜腫、慢性型リンパ球性白血病、消化管型リンパ腫、消化器型リンパ腫、小～中細胞型リンパ腫、盲腸癌、上行結腸癌、下行結腸癌、横行結腸癌、Ｓ状結腸癌、直腸癌、卵巣上皮癌、胚細胞腫瘍、間質細胞腫瘍、膵管癌、浸潤性膵管癌、膵臓癌の腺癌、腺房細胞癌、腺扁平上皮癌、巨細胞腫、膵管内乳頭粘液性腫瘍、粘液性嚢胞腺癌、膵芽腫、膵頭細胞腫、Ｆｒａｎｔｓ腫瘍、漿液性嚢胞腺癌、固体乳頭状癌、ガストリノーマ、グルカゴノーマ、インスリノーマ、多発性内分泌腺腫症１（Ｗｅｒｍｅｒ症候群）、非機能性島細胞腫、ソマトスタチノーマ、ＶＩＰ産生腫瘍、子宮頸癌、子宮体癌、線維肉腫、骨・関節肉種、ユーイング肉腫、ウィルムス腫瘍、肝芽腫、軟部肉腫、急性白血病、慢性白血病、脊髄腫瘍、軟部悪性腫瘍、奇形腫群腫瘍、頭頸部癌には下咽頭癌、中咽頭癌、舌癌、上咽頭癌、口腔癌、口唇癌、副鼻腔癌、喉頭癌等を包含するが、これらに限定されない。
　また、対象となる好ましい被験者（患者）は、哺乳動物であり、例えば、霊長類、ペット動物、家畜類、競技用動物等を含む哺乳動物であり、特にヒト、イヌ及びネコが好ましい。
　本発明で用いられる抗体を医薬組成物として用いる場合には、当業者に公知の方法で製剤化することが可能である。例えば、水もしくはそれ以外の薬学的に許容し得る液との無菌性溶液、又は懸濁液剤の注射剤の形で非経口的に使用できる。例えば、薬理学上許容される担体又は媒体、具体的には、滅菌水や生理食塩水、植物油、乳化剤、懸濁剤、界面活性剤、安定剤、香味剤、賦形剤、ベヒクル、防腐剤、結合剤等と適宜組み合わせて、一般に認められた製薬実施に要求される単位用量形態で混和することによって製剤化することが考えられる。これら製剤における有効成分量は指示された範囲の適当な用量が得られるようにするものである。
　注射のための無菌組成物は注射用蒸留水のようなベヒクルを用いて通常の製剤実施に従って処方することができる。
　注射用の水溶液としては、例えば、生理食塩水、ブドウ糖やその他の補助薬を含む等張液、例えば、Ｄ－ソルビトール、Ｄ－マンノース、Ｄ－マンニトール、塩化ナトリウムが挙げられ、適当な溶解補助剤、例えば、アルコール、具体的にはエタノール、ポリアルコール、例えば、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、非イオン性界面活性剤、例えば、ポリソルベート８０（ＴＭ）、ＨＣＯ－６０と併用してもよい。
　油性液としてはゴマ油、大豆油があげられ、溶解補助剤として安息香酸ベンジル、ベンジルアルコールと併用してもよい。また、緩衝剤、例えば、リン酸塩緩衝液、酢酸ナトリウム緩衝液、無痛化剤、例えば、塩酸プロカイン、安定剤、例えば、ベンジルアルコール、フェノール、酸化防止剤と配合してもよい。調製された注射液は通常、適当なアンプルに充填させる。
　投与は、経口又は非経口であり、好ましくは非経口投与であり、具体的には、注射剤型、経鼻投与剤型、経肺投与剤型、経皮投与型等が挙げられる。注射剤型の例としては、例えば、静脈内注射、筋肉内注射、腹腔内注射、皮下注射等により全身又は局部的に投与することができる。
　また、患者の年齢、体重、性別、症状等により適宜投与方法を選択することができる。抗体又は抗体をコードするポリヌクレオチドを含有する医薬組成物の投与量としては、例えば、一回につき体重１ｋｇあたり０．０００１ｍｇから１０００ｍｇの範囲で選ぶことが可能である。あるいは、例えば、患者あたり０．００１～１０００００ｍｇ／ｂｏｄｙの範囲で投与量を選ぶことができるが、これらの数値に必ずしも制限されるものではない。投与量、投与方法は、患者の体重、年齢、性別、症状等により変動するが、当業者であれば適宜選択することが可能である。
　本発明の抗体又はそのフラグメントを含む上記の医薬組成物を被験者に投与することによって癌、好ましくは、乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、白血病、リンパ腫、肝臓癌、胆嚢癌、肉腫、肥満細胞腫、メラノーマ、副腎皮質癌、ユーイング腫瘍、ホジキンリンパ腫、中皮腫、多発性骨髄腫、睾丸癌、甲状腺癌、又は頭頸部癌を治療及び／又は予防することができる。
　さらに、本発明の医薬組成物を、上で例示したような抗腫瘍剤又は抗腫瘍剤を含む医薬組成物と組み合わせて、被験者に併用投与することを含む、癌の治療及び／又は予防方法も本発明に包含される。本発明の抗体又はそのフラグメントと抗腫瘍剤は、同時に、又は、別々に被験者に投与されうる。別々に投与する場合には、いずれの医薬組成物が先であっても又は後であってもよく、それらの投与間隔、投与量、投与経路及び投与回数は、専門医によって適宜選択されうる。同時に投与する場合、例えば、本発明の抗体又はそのフラグメントと抗腫瘍剤を、薬理学上許容される担体（又は媒体）中で混合し製剤化して得られる医薬剤型の医薬組成物も包含されるものとする。また、抗腫瘍剤を含有する上記医薬組成物及び剤型のいずれに対しても、本発明の抗体を含有する医薬組成物及び剤型についての処方、製剤化、投与経路、用量、癌等の説明を適用しうる。
　したがって、本発明は、本発明の医薬組成物と、上で例示したような抗腫瘍剤を含む医薬組成物とを含む、癌の治療及び／又は予防のための組み合わせ医薬品及びそれを投与することを含む、癌の治療及び／又は予防方法も提供する。また、本発明は、本発明の抗体又はそのフラグメントと抗腫瘍剤とを、薬理学上許容される担体とともに含む、癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物も提供する。
　＜ポリペプチド及びＤＮＡ＞
　本発明はさらに、本発明の上記抗体をコードするＤＮＡ、あるいは、上記抗体の重鎖又は軽鎖をコードするＤＮＡ、あるいは、上記抗体の重鎖又は軽鎖の可変領域をコードするＤＮＡも提供する。そのようなＤＮＡは、例えば抗体（ａ）の場合、配列番号１、２及び３のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む重鎖可変領域をコードするＤＮＡ、配列番号４、５及び６のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ、などを含む。
　これらの配列のＤＮＡによってコードされる相補性決定領域は、抗体の特異性を決定する領域であるため、抗体のそれ以外の領域（すなわち、定常領域及びフレームワーク領域）をコードする配列は他の抗体由来の配列であってもよい。ここで他の抗体とはヒト以外の生物由来の抗体も含むが、副作用低減の観点からはヒト由来のものが好ましい。すなわち、上記のＤＮＡでは、重鎖及び軽鎖の各フレームワーク領域及び各定常領域をコードする領域がヒト抗体由来の対応アミノ酸配列をコードする塩基配列を含むことが好ましい。
　さらに、本発明の抗体をコードするＤＮＡの別の例は、例えば配列番号８のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含む重鎖可変領域をコードするＤＮＡ、軽鎖可変領域をコードする領域が配列番号１５のアミノ酸配列をコードする塩基配列を含むＤＮＡなどである。ここで、配列番号８のアミノ酸配列をコードする塩基配列の例は、配列番号２３の塩基配列である。また、配列番号１５のアミノ酸配列をコードする塩基配列の例は、配列番号３０の塩基配列である。これらのＤＮＡでも、重鎖及び軽鎖の各定常領域をコードする領域がヒト抗体由来の対応アミノ酸配列をコードする塩基配列を含むことが好ましい。
　これら抗体のＤＮＡは、例えば上記の方法又は以下の方法で得ることができる。まず、本発明の抗体に関わるハイブリドーマから、市販のＲＮＡ抽出キットを用いて全ＲＮＡを調製し、ランダムプライマー等を用いて逆転写酵素によりｃＤＮＡを合成する。次いで既知のマウス抗体重鎖遺伝子及び軽鎖遺伝子の各可変領域において、それぞれ保存されている配列のオリゴヌクレオチドをプライマーに用いたＰＣＲ法によって、抗体をコードするｃＤＮＡを増幅させる。定常領域をコードする配列については、既知の配列をＰＣＲ法で増幅することによってえることができる。ＤＮＡの塩基配列は、配列決定用プラスミド又はファージに組み込むなどして、常法により決定することができる。
　本発明はさらに、上記抗体（ｉ）～（ｘｉｖ）に関わる以下の（ｉ）～（ｘｖ）に記載のポリペプチド及びＤＮＡも提供する。
　（ｉ）配列番号１、２及び３に示すアミノ酸配列からなる群から選択される、重鎖ＣＤＲポリペプチド、及び該ポリペプチドをコードするＤＮＡ。
　（ｉｉ）配列番号４、５及び６に示すアミノ酸配列から選択される、軽鎖ＣＤＲポリペプチド、及び該ポリペプチドをコードするＤＮＡ。
　（ｉｉｉ）配列番号８及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むポリペプチド並びに該ポリペプチドをコードするＤＮＡ、例えば配列番号２３及び配列番号３０の塩基配列を含むＤＮＡ。
　（ｉｖ）配列番号１０及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むポリペプチド並びに該ポリペプチドをコードするＤＮＡ、例えば配列番号２５及び配列番号３０の塩基配列を含むＤＮＡ。
　（ｖ）配列番号７及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むポリペプチド並びに該ポリペプチドをコードするＤＮＡ、例えば配列番号２２及び配列番号３０の塩基配列を含むＤＮＡ。
　（ｖｉ）配列番号８及び配列番号１３のアミノ酸配列を含むポリペプチド並びに該ポリペプチドをコードするＤＮＡ、例えば配列番号２３及び配列番号２８の塩基配列を含むＤＮＡ。
　（ｖｉｉ）配列番号７及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むポリペプチド並びに該ポリペプチドをコードするＤＮＡ、例えば配列番号２２及び配列番号２７の塩基配列を含むＤＮＡ。
　（ｖｉｉｉ）配列番号８及び配列番号１２のアミノ酸配列を含むポリペプチド並びに該ポリペプチドをコードするＤＮＡ、例えば配列番号２３及び配列番号２７の塩基配列を含むＤＮＡ。
　（ｉｘ）配列番号７及び配列番号１３のアミノ酸配列を含むポリペプチド並びに該ポリペプチドをコードするＤＮＡ、例えば配列番号２２及び配列番号２８の塩基配列を含むＤＮＡ。
　（ｘ）配列番号１０及び配列番号１４のアミノ酸配列を含むポリペプチド並びに該ポリペプチドをコードするＤＮＡ、例えば配列番号２５及び配列番号２９の塩基配列を含むＤＮＡ。
　（ｘｉ）配列番号８及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むポリペプチド並びに該ポリペプチドをコードするＤＮＡ、例えば配列番号２３及び配列番号２６の塩基配列を含むＤＮＡ。
　（ｘｉｉ）配列番号７及び配列番号１１のアミノ酸配列を含むポリペプチド並びに該ポリペプチドをコードするＤＮＡ、例えば配列番号２２及び配列番号２６の塩基配列を含むＤＮＡ。
　（ｘｉｉｉ）配列番号９及び配列番号１５のアミノ酸配列を含むポリペプチド並びに該ポリペプチドをコードするＤＮＡ、例えば配列番号２４及び配列番号３０の塩基配列を含むＤＮＡ。
　（ｘｉｖ）配列番号２０及び配列番号２１のアミノ酸配列を含むポリペプチド並びに該ポリペプチドをコードするＤＮＡ、例えば配列番号３１及び配列番号３２の塩基配列を含むＤＮＡ。
　（ｘｖ）前記（ｉ）～（ｘｉｖ）に記載のポリペプチドにおいて重鎖定常領域に１もしくは複数個のアミノ酸置換を含むポリペプチド又はそのフラグメント、並びに該ポリペプチド又はそのフラグメントをコードするＤＮＡ。
　これらのポリペプチド及びＤＮＡは、上記の通り、遺伝子組み換え技術を用いて作製することができる。
　＜本発明の要約＞
　上で説明した本発明を以下に要約する。
　（１）配列番号１、２及び３の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号４、５及び６の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。
　（２）重鎖の可変領域が配列番号８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の可変領域が配列番号１５のアミノ酸配列を含んでなる（１）に記載の抗体又はそのフラグメント。
　（３）重鎖の可変領域が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の可変領域が配列番号１５のアミノ酸配列を含んでなる（１）に記載の抗体又はそのフラグメント。
　（４）重鎖の可変領域が配列番号７のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の可変領域が配列番号１５のアミノ酸配列を含んでなる（１）に記載の抗体又はそのフラグメント。
　（５）重鎖の可変領域が配列番号８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の可変領域が配列番号１３のアミノ酸配列を含んでなる（１）に記載の抗体又はそのフラグメント。
　（６）重鎖の可変領域が配列番号７のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の可変領域が配列番号１２のアミノ酸配列を含んでなる（１）に記載の抗体又はそのフラグメント。
　（７）重鎖の可変領域が配列番号８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の可変領域が配列番号１２のアミノ酸配列を含んでなる（１）に記載の抗体又はそのフラグメント。
　（８）重鎖の可変領域が配列番号７のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の可変領域が配列番号１３のアミノ酸配列を含んでなる（１）に記載の抗体又はそのフラグメント。
　（９）重鎖の可変領域が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の可変領域が配列番号１４のアミノ酸配列を含んでなる（１）に記載の抗体又はそのフラグメント。
　（１０）重鎖の可変領域が配列番号８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の可変領域が配列番号１１のアミノ酸配列を含んでなる（１）に記載の抗体又はそのフラグメント。
　（１１）重鎖の可変領域が配列番号７のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の可変領域が配列番号１１のアミノ酸配列を含んでなる（１）に記載の抗体又はそのフラグメント。
　（１２）重鎖の可変領域が配列番号９のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の可変領域が配列番号１５のアミノ酸配列を含んでなる（１）に記載の抗体又はそのフラグメント。
　（１３）重鎖の可変領域が配列番号２０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖の可変領域が配列番号２１のアミノ酸配列を含んでなる（１）に記載の抗体又はそのフラグメント。
　（１４）ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体又は多重特異性抗体である、（１）～（１３）に記載の抗体又はそのフラグメント。
　（１５）抗腫瘍剤がコンジュゲートされた（１）～（１３）に記載の抗体又はそのフラグメント。
　（１６）前記抗体の重鎖定常領域に１もしくは複数個のアミノ酸置換を含む、（１）～（１５）に記載の抗体。
　（１７）前記抗体が、重鎖定常領域に結合するＮ－グリコシド結合糖鎖の糖鎖還元末端のＮ－アセチルグルコサミンに結合したフコースを除去した抗体である、（１）～（１６）に記載の抗体。
　（１８）前記抗体の組成物であって、（１７）に記載の抗体及び重鎖定常領域に結合するＮ－グリコシド結合糖鎖の糖鎖還元末端のＮ－アセチルグルコサミンにフコースが結合した（１）～（１６）に記載の抗体を含む、抗体の組成物。
　（１９）（１７）に記載の抗体又は（１８）に記載の抗体の組成物を産生する細胞。
　（２０）（１）～（１５）のいずれかに記載の抗体又はそのフラグメント、（１６）又は（１７）に記載の抗体、あるいは（１８）に記載の抗体の組成物を有効成分として含むことを特徴とする、癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物。
　（２１）前記癌が乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、白血病、リンパ腫、肝臓癌、胆嚢癌、肉腫、肥満細胞腫、メラノーマ、副腎皮質癌、ユーイング腫瘍、ホジキンリンパ腫、中皮腫、多発性骨髄腫、睾丸癌、甲状腺癌又は頭頸部癌である、（２０）に記載の医薬組成物。
　（２２）（２０）又は（２１）に記載の医薬組成物と、抗腫瘍剤を含む医薬組成物とを含んでなる、癌の治療及び／又は予防のための組み合わせ医薬品。
　（２３）（１）～（１６）に記載の抗体又はそのフラグメントをコードするＤＮＡ。
　（２４）（１）～（１６）のいずれかに記載の抗体又はそのフラグメント、（１７）に記載の抗体、（１８）に記載の抗体の組成物、（２０）又は（２１）に記載の医薬組成物、あるいは（２２）に記載の組み合わせ医薬品を、被験者に投与することを含む、癌の治療及び／又は予防方法。
　以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明するが、本発明の範囲はこれらの具体例によって制限されないものとする。
　実施例１：ウサギを用いた抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体の作製
　ＷＯ２０１０／０１６５２６の実施例３で調製したヒトＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質３００μｇを等量のフロイントの完全アジュバントと混合し、これをウサギ１羽当たりの抗原溶液とした。２回目以降の免疫にはフロインとの不完全アジュバントと混合したものを使用した。抗原溶液を１２週齢のウサギの腹腔内に投与後、２～３週間毎に８回投与を行って免疫を完了した。最後の免疫から４日後に摘出したそれぞれの脾臓からリンパ球を得、ウサギのミエローマ細胞２４０Ｅ－Ｗ２と１：２の比率にて混和し、そこに３７℃に加温した１０％　ＦＢＳを含むＲＰＭＩ培地２００μＬとＰＥＧ１５００を８００μＬを混和して調製したＰＥＧ溶液を加えて、５分間静置して細胞融合を行った。遠心して上清を除去後、ＨＡＴ溶液を２％当量加えた１０％のＦＢＳを含むＲＰＭＩ培地（ＨＡＴ選択培地）３００ｍＬで細胞を懸濁し、９６穴プレートの１ウェル当たり１００μＬずつ、プレート８０枚に播種した。７日間、３７℃、５％　ＣＯ２の条件で培養することで、脾臓細胞とウサギミエローマ細胞が融合したハイブリドーマを得た。
　作製したハイブリドーマが産生する抗体のＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に対する反応性を指標にハイブリドーマを選抜した。ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質溶液１μｇ／ｍＬを９６穴プレート１ウェル当たりに１００μＬ添加し、４℃にて１８時間静置した。各ウェルをＰＢＳ－Ｔで３回洗浄後、０．５％　Ｂｏｖｉｎｅ　Ｓｅｒｕｍ　Ａｌｂｕｍｉｎ（ＢＳＡ）溶液を１ウェル当たり４００μＬ添加して室温にて３時間静置した。溶液を除いて、１ウェル当たり４００μＬのＰＢＳ－Ｔでウェルを３回洗浄後、上記で得られたハイブリドーマの各培養上清を１ウェル当たり１００μＬ添加し、室温にて２時間静置した。ＰＢＳ－Ｔで各ウェルを３回洗浄した後、ＰＢＳで５０００倍に希釈したＨＲＰ標識抗ウサギ抗体を１ウェル当たり１００μＬ添加して室温にて１時間静置した。ＰＢＳ－Ｔでウェルを３回洗浄した後、ＴＭＢ基質溶液を１ウェル当たり１００μＬ添加して１５～３０分間静置して発色反応を行った。発色後、１規定硫酸を１ウェル当たり１００μＬ添加して反応を停止させ、吸光度計を用いて４５０ｎｍと５９５ｎｍの吸光度値を測定した。その結果、吸光度値が高かった抗体を産生するハイブリドーマを複数個選抜した。
　選抜したハイブリドーマを９６穴プレート１ウェル当たりに０．５個となるようにプレートに添加し培養した。１週間後、ウェル中に単一のコロニーを形成しているハイブリドーマが観察された。それらウェルの細胞をさらに培養して、クローニングされたハイブリドーマが産生する抗体のＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に対する反応性を指標にハイブリドーマを選抜した。上記と同様の操作によって各抗体のＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に対する反応性評価を実施した結果、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に反応性を示すウサギモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ株を複数個得た。
　次にそれらＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に反応性を示すウサギモノクローナル抗体からＣＡＰＲＩＮ－１が発現するヒト癌細胞表面に反応性を示すものを選抜した。具体的には、２×１０５個のヒト肺癌細胞株ＱＧ５６及びヒト乳癌細胞ＢＴ－４７４（ＡＴＣＣから入手）をそれぞれ１．５ｍＬ容のミクロ遠心チューブにて遠心分離し、これに上記各ハイブリドーマの培養上清１００μＬを添加し、氷上で１時間静置した。ＰＢＳで洗浄した後、０．５％のＦＢＳを含むＰＢＳ（－）（０．５％　ＦＢＳ－ＰＢＳ（－））で１００倍希釈したＦＩＴＣ標識抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体あるいはＡｌｅｘａ４８８標識抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）を添加し、氷上で１時間静置した。０．５％　ＦＢＳ－ＰＢＳ（－）で洗浄後、細胞を０．２μｇ／ｍＬのＰｒｏｐｉｄｉｕｍ　ｉｏｄｉｄｅと０．５％　ＦＢＳ－ＰＢＳ（－）に細胞を懸濁して、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒＴＭあるいはＦＡＣＳＶｅｒｓｅＴＭ（ベクトン・ディッキンソンアンドカンパニー）で蛍光強度を測定した。一方、上記と同様の操作を、ハイブリドーマ培養用培地を用いて行い、陰性コントロールのサンプルとした。その結果、陰性コントロールに比べて蛍光強度が強い、すなわち、ＣＡＰＲＩＮ－１が発現している癌細胞ＱＧ５６ならびにＢＴ－４７４の細胞表面に強く反応するウサギ抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体１個を選抜した。
　次に、上記で得たウサギ抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体について、ＷＯ２０１０／０１６５２６の実施例５に記載の方法に沿って、可変領域をコードする遺伝子の増幅断片を取得し、遺伝子配列並びにそのアミノ酸配列を解析した。具体的にはウサギ抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマからｍＲＮＡを抽出し、ウサギ可変領域配列に特異的なプライマーを使用したＲＴ－ＰＣＲ法により、本抗体の重鎖可変（ＶＨ）領域及び軽鎖可変（ＶＬ）領域の遺伝子を取得した。それら遺伝子をクローニングベクターに挿入し、常法に従ってそれぞれの塩基配列を決定した。
　その結果得られたウサギ抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体は、配列番号２０に示す重鎖可変領域及び重鎖可変領域中のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号１、配列番号２、配列番号３のアミノ酸配列からなり、配列番号２１に示す軽鎖可変領域及び軽鎖可変領域中のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号４、配列番号５、配列番号６のアミノ酸配列からなることが確認された。
　次に取得したウサギ抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体の各種ヒト癌細胞への反応性を確認した。ＣＡＰＲＩＮ－１の遺伝子の発現が確認されているヒト癌細胞である、乳癌細胞（ＢＴ－４７４、ＭＤＡ－ＭＢ－３６１）、大腸癌細胞（ＨＴ－２９）、肺癌細胞（ＱＧ５６）、胃癌細胞（ＮＣＩ－Ｎ８７）、子宮癌細胞（ＨＥＣ－１－Ａ）、前立腺癌細胞（２２Ｒｖ１）、膵臓癌細胞（Ｐａｎｃ１０．５）、肝臓癌細胞（Ｈｅｐ３Ｂ）、卵巣癌細胞（ＳＫＯＶ３）、腎癌細胞（Ｃａｋｉ－２）、脳腫瘍細胞（Ｕ－８７ＭＧ）、膀胱癌細胞（Ｔ２４、ＨＴ－１３７６）、食道癌細胞（ＯＥ３３）、白血病細胞（ＯＣＩ－ＡＭＬ５）、リンパ腫細胞（Ｒａｍｏｓ）、胆嚢癌細胞（ＴＧＢＣ１４ＴＫＢ）、線維肉腫細胞（ＨＴ－１０８０）、メラノーマ細胞（Ｇ－３６１）、副腎皮質癌細胞（Ａ－６７３）、ユーイング腫瘍細胞（ＲＤ－ＥＳ）、ホジキンリンパ腫細胞（ＲＰＭＩ１６６６）、中皮腫細胞（ＮＣＩ－Ｈ２４５２）、多発性骨髄腫細胞（ＩＭ－９）、睾丸癌細胞（ＮＴ／Ｄ１）、甲状腺癌細胞（ＴＴ）又は頭頸部癌細胞（ＦａＤｕ）に、取得した上記抗体を反応させ、フローサイトメトリー法で蛍光強度を評価した。１．５ｍＬ容のミクロ遠心チューブに各癌細胞をそれぞれ１０６個に集め、上記で得たウサギ抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの培養上清（１００μＬ）をそれぞれのチューブに添加し、４℃で１時間反応させた。０．５％　ＦＢＳ－ＰＢＳ（－）で洗浄した後、０．５％　ＦＢＳ－ＰＢＳ（－）で５０倍に希釈したＦＩＴＣ標識ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ　ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ社製）を添加し、４℃で６０分間静置した。０．５％　ＦＢＳ－ＰＢＳ（－）で洗浄後、最終濃度が０．２μｇ／ｍＬのＰｒｏｐｉｄｉｕｍ　ｉｏｄｉｄｅを含む０．５％　ＦＢＳ－ＰＢＳ（－）に細胞を懸濁して、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒＴＭあるいはＦＡＣＳＶｅｒｓｅＴＭ（ベクトン・ディッキンソンアンドカンパニー）で蛍光強度を測定した。一方、陰性コントロールとして、ハイブリドーマ培養用培地を用いて上記と同様の操作を行って調製したものを、陰性コントロールのサンプルとした。その結果、上記評価に用いた全ての癌細胞で、ウサギ抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマの培養上清を用いた場合の蛍光強度は、陰性コントロールを用いた場合の蛍光強度よりも強かった。以上の結果から、ウサギ抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体は、ヒト癌細胞の癌細胞膜表面のＣＡＰＲＩＮ－１に反応することが確認された。
　実施例２：ヒト－ウサギキメラ抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体の作製
　実施例１で確認されたウサギ抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体の配列番号２０で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列を発現させるための遺伝子と、配列番号２１で表される軽鎖可変領域を発現させるための遺伝子とを、それぞれヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域が挿入された哺乳類細胞発現用ベクターとヒトＩｇＧ１の軽鎖定常領域が挿入された哺乳類細胞発現用ベクターに挿入した。作製した２つの組み換え発現ベクターを常法に従って哺乳類細胞に導入してヒト－ウサギキメラ抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体（ヒト－ウサギキメラ抗体）を含む培養上清を得た。得られたキメラ化抗体を含む培養上清を常法に従ってＨｉｔｒａｐ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ　ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ（ＧＥヘルスケア社製）を用いて精製し、ＰＢＳ（－）に置換して０．２２μｍのフィルター（ミリポア社製）で濾過したものを調製した。
　実施例３：ヒト化抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体の作製
　次に、実施例１で確認されたウサギ抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体の重鎖可変領域中のＣＤＲ１～３ならびに軽鎖可変領域中のＣＤＲ１～３のアミノ酸配列と塩基配列の情報を基に、重鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号１、配列番号２及び配列番号３のアミノ酸配列からなる配列番号７で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列を発現できるように塩基配列を設計し、これをヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域が挿入された哺乳類細胞発現用ベクターに挿入した。同様にして、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列からなる配列番号１１で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列を発現できるように塩基配列を設計し、これをヒトＩｇＧ１の軽鎖定常領域が挿入された哺乳類細胞発現用ベクターに挿入した。上記２つの組換え発現ベクターを常法に従って哺乳類細胞に導入して、配列番号７で表される重鎖全長アミノ酸配列と配列番号１１で表される軽鎖全長アミノ酸配列とからなるヒト化抗体＃０を含む培養上清を得た。
　同様にして、重鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号１、配列番号２及び配列番号３のアミノ酸配列からなる配列番号８で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１１で表される軽鎖可変領域のアミノ酸配列とからなるヒト化抗体＃１を含む培養上清を得た。
　さらに同様にして、以下のヒト化抗体＃２～１０を含む培養上清を得た。
　配列番号８で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列からなる配列番号１２で表される軽鎖全長アミノ酸配列とからなるヒト化抗体＃２。
　配列番号８で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列からなる配列番号１３で表される軽鎖全長アミノ酸配列とからなるヒト化抗体＃３。
　配列番号７で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１２で表される軽鎖全長アミノ酸配列とからなるヒト化抗体＃４。
　配列番号７で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１３で表される軽鎖全長アミノ酸配列とからなるヒト化抗体＃５。
　配列番号７で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列からなる配列番号１５で表される軽鎖全長アミノ酸配列とからなるヒト化抗体＃６。
　配列番号８で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１５で表される軽鎖全長アミノ酸配列とからなるヒト化抗体＃７。
　重鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号１、配列番号２及び配列番号３のアミノ酸配列からなる配列番号９で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１５で表される軽鎖全長アミノ酸配列とからなるヒト化抗体＃８。
　重鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号１、配列番号２及び配列番号３のアミノ酸配列からなる配列番号１０で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、軽鎖可変領域のＣＤＲ１～３がそれぞれ配列番号４、配列番号５及び配列番号６のアミノ酸配列からなる配列番号１４で表される軽鎖全長アミノ酸配列とからなるヒト化抗体＃９。
　配列番号１０で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列と、配列番号１５で表される軽鎖全長アミノ酸配列とからなるヒト化抗体＃１０。
　得られたヒト化抗体＃０～＃１０を含む培養上清を常法に従ってＨｉｔｒａｐ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ　ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ（ＧＥヘルスケア社製）を用いて精製し、ＰＢＳ（－）に置換して０．２２μｍのフィルター（ミリポア社製）で濾過したものを調製した。
　実施例４：ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃０～＃１０の抗原特異性と癌細胞への反応性
　次に、実施例２で調製したヒト－ウサギキメラ抗体と、実施例３で調製したヒト化抗体＃０～＃１０のＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質への特異的反応性を常法に従い、ＥＬＩＳＡ法で確認した。具体的には、あらかじめ５μｇ／ｍＬのＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質を含むＰＢＳ溶液を９６穴プレート１ウェル当たりに１００μＬ添加し、４℃にて１８時間静置した。各ウェルをＰＢＳ－Ｔで洗浄後、５％のスキムミルクを含むＰＢＳ溶液からなるブロッキング溶液を１ウェル当たり４００μＬ添加して室温にて３時間静置した。溶液を除いて、ＰＢＳ－Ｔでウェルを洗浄後、０．２％のスキムミルクを含むＰＢＳで１μｇ／ｍＬに調製したヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃０～＃１０を含むそれぞれの溶液を１ウェル当たり５０μＬずつ各ウェルに添加し、室温にて１時間静置した。陰性コントロールとして、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に反応しないことが確認されているヒトＩｇＧ抗体を同様の抗体濃度で添加したウェル、ならびに抗体を添加しないウェルを同時に用意した。ＰＢＳ－Ｔで各ウェルを３回洗浄した後、０．２％のスキムミルクを含むＰＢＳで３０００倍に希釈したＨＲＰ標識抗ヒトＩｇＧ抗体を１ウェル当たり５０μＬ添加して室温にて１時間静置した。ＰＢＳ－Ｔでウェルを３回洗浄した後、ＴＭＢ基質溶液（Ｔｈｅｒｍｏ社製）を１ウェル当たり１００μＬ添加して１～３０分間静置して発色反応を行った。発色後、１規定硫酸を１ウェル当たり１００μＬ添加して反応を停止させ、吸光度計を用いて４５０ｎｍと６３０ｎｍの吸光度値を測定した。また、同時にＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質を固相していないウェル（非固相ウェル）も用意して、同様に各抗体を添加して測定を行った。その結果、陰性コントロールとして用いたＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に反応しないことが確認されているヒトＩｇＧ抗体を添加したウェルの吸光度値は、抗体を添加していないウェルと同等に低値であったのに対して、ヒト－ウサギキメラ抗体及びヒト化抗体＃０～＃１０をそれぞれ添加したウェルの吸光度値は同等に高い値を示した。また、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質を固相していないウェルに対してヒト－ウサギキメラ抗体及びヒト化抗体＃０～＃１０は陰性コントロールと同等の吸光度値しか示さなかった。この結果から、ヒト－ウサギキメラ抗体及びヒト化抗体＃０～＃１０はＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に特異的に反応することが確認された。
　次に、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に特異的に反応するヒト－ウサギキメラ抗体及びヒト化抗体＃０～＃１０の各種ヒト癌細胞ならびにマウス癌細胞への反応性を確認した。ＣＡＰＲＩＮ－１の遺伝子の発現が確認されているヒト癌細胞である、乳癌細胞（ＢＴ－４７４、ＭＤＡ－ＭＢ－３６１）、大腸癌細胞（ＨＴ－２９）、肺癌細胞（ＱＧ５６）、胃癌細胞（ＮＣＩ－Ｎ８７）、子宮癌細胞（ＨＥＣ－１－Ａ）、前立腺癌細胞（２２Ｒｖ１）、膵臓癌細胞（Ｐａｎｃ１０．５）、肝臓癌細胞（Ｈｅｐ３Ｂ）、卵巣癌細胞（ＳＫＯＶ３）、腎癌細胞（Ｃａｋｉ－２）、脳腫瘍細胞（Ｕ－８７ＭＧ）、膀胱癌細胞（Ｔ２４、ＨＴ－１３７６）、食道癌細胞（ＯＥ３３）、白血病細胞（ＯＣＩ－ＡＭＬ５）、リンパ腫細胞（Ｒａｍｏｓ）、胆嚢癌細胞（ＴＧＢＣ１４ＴＫＢ）、線維肉腫細胞（ＨＴ－１０８０）、メラノーマ細胞（Ｇ－３６１）、副腎皮質癌細胞（Ａ－６７３）、ユーイング腫瘍細胞（ＲＤ－ＥＳ）、ホジキンリンパ腫細胞（ＲＰＭＩ１６６６）、中皮腫細胞（ＮＣＩ－Ｈ２４５２）、多発性骨髄腫細胞（ＩＭ－９）、睾丸癌細胞（ＮＴ／Ｄ１）、甲状腺癌細胞（ＴＴ）又は頭頸部癌細胞（ＦａＤｕ）に、精製されたヒト－ウサギキメラ抗体及びヒト化抗体＃０～＃１０をそれぞれ反応させ、フローサイトメトリー法で蛍光強度を評価した。具体的には、１．５ｍＬ容のミクロ遠心チューブに各癌細胞をそれぞれ５×１０５個ずつ集め、ヒト－ウサギキメラ抗体及びヒト化抗体＃０～＃１０を最終濃度が５０μｇ／ｍＬとなるように、それぞれのチューブに添加し、４℃で１時間反応させた。０．５％　ＦＢＳ－ＰＢＳ（－）で２回洗浄して、０．５％　ＦＢＳ－ＰＢＳ（－）で１００倍に希釈したＡｌｅｘａ４８８標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ（Ｈ＋Ｌ）抗体（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）を添加して４℃で６０分間静置した。０．５％　ＦＢＳ－ＰＢＳ（－）で洗浄後、最終濃度が０．２μｇ／ｍＬのＰｒｏｐｉｄｉｕｍ　ｉｏｄｉｄｅを含む０．５％　ＦＢＳ－ＰＢＳ（－）に細胞を懸濁して、ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒＴＭあるいはＦＡＣＳＶｅｒｓｅＴＭ（ベクトン・ディッキンソンアンドカンパニー）で蛍光強度を測定した。一方、陰性コントロールとして、ハイブリドーマ培養用培地を用いて上記と同様の操作を行って調製したものを用いた。その結果、上記評価に用いた全ての癌細胞で、ヒト－ウサギキメラ抗体及びヒト化抗体＃０～＃１０の蛍光強度は、陰性コントロールを用いた場合の蛍光強度よりも強かった。以上の結果から、ヒト－ウサギキメラ抗体及びヒト化抗体＃０～＃１０は、ヒト癌細胞膜表面上に発現しているＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に反応することが確認された。
　実施例５：ヒト－ウサギキメラ抗体ならびにヒト化抗体＃０～＃１０の各種ヒト癌細胞に対する抗腫瘍活性
　次に、実施例２で調製したヒト－ウサギキメラ抗体と、実施例３で調製したヒト化抗体＃０～＃１０の各種ヒト癌細胞に対する抗腫瘍効果をＡＤＣＣ活性で評価した。
　ヒト－ウサギキメラ抗体及びヒト化抗体＃０～＃１０に対する比較抗体として、以下の抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体を用いた。
　ＷＯ２０１０／０１６５２６に記載される抗体であり同文献中の配列番号２６の重鎖可変領域と配列番号２７の軽鎖可変領域を有する比較抗体１、配列番号２８の重鎖可変領域と配列番号２９の軽鎖可変領域を有する比較抗体２、配列番号３０の重鎖可変領域と配列番号３１の軽鎖可変領域を有する比較抗体３、配列番号３２の重鎖可変領域と配列番号３３の軽鎖可変領域を有する比較抗体４、配列番号３４の重鎖可変領域と配列番号３５の軽鎖可変領域を有する比較抗体５、配列番号３６の重鎖可変領域と配列番号３７の軽鎖可変領域を有する比較抗体６、配列番号３８の重鎖可変領域と配列番号３９の軽鎖可変領域を有する比較抗体７、配列番号４０の重鎖可変領域と配列番号４１の軽鎖可変領域を有する比較抗体８、配列番号４２の重鎖可変領域と配列番号４３の軽鎖可変領域を有する比較抗体９、配列番号４４の重鎖可変領域と配列番号４５の軽鎖可変領域を有する比較抗体１０、配列番号４６の重鎖可変領域と配列番号４７の軽鎖可変領域を有する比較抗体１１。
　ＷＯ２０１１／０９６５１７に記載される抗体であり同文献中の配列番号４３の重鎖可変領域と配列番号４７の軽鎖可変領域を有する比較抗体１２、配列番号４３の重鎖可変領域と配列番号５３の軽鎖可変領域を有する比較抗体１３。
　ＷＯ２０１１／０９６５２８に記載される抗体であり同文献中の配列番号４３の重鎖可変領域と配列番号４７の軽鎖可変領域を有する比較抗体１４、配列番号５１の重鎖可変領域と配列番号５５の軽鎖可変領域を有する比較抗体１５、配列番号５９の重鎖可変領域と配列番号６３の軽鎖可変領域を有する比較抗体１６、配列番号７６の重鎖可変領域と配列番号８０の軽鎖可変領域を有する比較抗体１７、配列番号８４の重鎖可変領域と配列番号８８の軽鎖可変領域を有する比較抗体１８、配列番号９２の重鎖可変領域と配列番号９６の軽鎖可変領域を有する比較抗体１９。
　ＷＯ２０１１／０９６５１９に記載される抗体であり同文献中の配列番号４２の重鎖可変領域と配列番号４６の軽鎖可変領域を有する比較抗体２０。
　ＷＯ２０１１／０９６５３３に記載される抗体であり同文献中の配列番号４３の重鎖可変領域と配列番号５１の軽鎖可変領域を有する比較抗体２１、配列番号４７の重鎖可変領域と配列番号５１の軽鎖可変領域を有する比較抗体２２、配列番号６３の重鎖可変領域と配列番号６７の軽鎖可変領域を有する比較抗体２３。
　ＷＯ２０１１／０９６５３４に記載される抗体であり同文献中の配列番号４３の重鎖可変領域と配列番号４７の軽鎖可変領域を有する比較抗体２４、配列番号４３の重鎖可変領域と配列番号５１の軽鎖可変領域を有する比較抗体２５、配列番号６３の重鎖可変領域と配列番号６７の軽鎖可変領域を有する比較抗体２６。
　ＷＯ２０１３／０１８８９４に記載される抗体であり同文献中の配列番号９の重鎖可変領域と配列番号１３の軽鎖可変領域を有する比較抗体２７、配列番号１９の重鎖可変領域と配列番号２３の軽鎖可変領域を有する比較抗体２８、配列番号９の重鎖可変領域と配列番号５３の軽鎖可変領域を有する比較抗体２９、配列番号５８の重鎖可変領域と配列番号６２の軽鎖可変領域を有する比較抗体３０、配列番号６３の重鎖可変領域と配列番号６５の軽鎖可変領域を有する比較抗体３１、配列番号６９の重鎖可変領域と配列番号７３の軽鎖可変領域を有する比較抗体３２、配列番号７７の重鎖可変領域と配列番号８１の軽鎖可変領域を有する比較抗体３３。
　ＷＯ２０１３／０１８８９２に記載される抗体であり同文献中の配列番号８の重鎖可変領域と配列番号１２の軽鎖可変領域を有する比較抗体３４。
　ＷＯ２０１３／０１８８９１に記載される抗体であり同文献中の配列番号８の重鎖可変領域と配列番号１２の軽鎖可変領域を有する比較抗体３５。
　ＷＯ２０１３／０１８８８９に記載される抗体であり同文献中の配列番号８の重鎖可変領域と配列番号１２の軽鎖可変領域を有する比較抗体３６。
　ＷＯ２０１０／０１８８８３に記載される抗体であり同文献中の配列番号８の重鎖可変領域と配列番号１２の軽鎖可変領域を有する比較抗体３７。
　ＷＯ２０１３／１２５６３６に記載される抗体であり同文献中の配列番号６の重鎖可変領域と配列番号７の軽鎖可変領域を有する比較抗体３８。
　ＷＯ２０１３／１２５６５４に記載される抗体であり同文献中の配列番号５２の重鎖可変領域と配列番号５４の軽鎖可変領域を有する比較抗体３９。同文献中の配列番号２１の重鎖可変領域と配列番号２３の軽鎖可変領域を有する比較抗体４０。同文献中の配列番号２５の重鎖可変領域と配列番号２３の軽鎖可変領域を有する比較抗体４１。同文献中の配列番号１６の重鎖可変領域と配列番号１８の軽鎖可変領域を有する比較抗体４２。同文献中の配列番号２９の重鎖可変領域と配列番号３３の軽鎖可変領域を有する比較抗体４３。同文献中の配列番号３９の重鎖可変領域と配列番号４３の軽鎖可変領域を有する比較抗体４４。同文献中の配列番号４９の重鎖可変領域と配列番号４３の軽鎖可変領域を有する比較抗体４５。
　ＷＯ２０１３／１２５６３０に記載される抗体であり同文献中の配列番号１１の重鎖可変領域と配列番号１５の軽鎖可変領域を有する比較抗体４６。
　ＷＯ２０１３／１２５６４０に記載される抗体であり同文献中の配列番号１１の重鎖可変領域と配列番号１５の軽鎖可変領域を有する比較抗体４７。同文献中の配列番号２１の重鎖可変領域と配列番号２５の軽鎖可変領域を有する比較抗体４８。
　なお、比較した上記抗体（比較抗体１～４８）は、重鎖可変領域のアミノ酸配列を発現させるための遺伝子と、軽鎖可変領域を発現させるための遺伝子とを、それぞれヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域が挿入された哺乳類細胞発現用ベクターｐｃＤＮＡ４／ｍｙｃ－Ｈｉｓ（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）とヒトＩｇＧ１の軽鎖定常領域が挿入された哺乳類細胞発現用ベクターｐｃＤＮＡ３．１／ｍｙｃ－Ｈｉｓ（Ｌｉｆｅ　Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製）に挿入し、作製した２つの組み換え発現ベクターを常法に従って哺乳類細胞に導入して得たヒトキメラ化もしくはヒト化された抗体をＨｉｔｒａｐ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ　ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ（ＧＥヘルスケア社製）を用いて精製し、ＰＢＳ（－）に置換して０．２２μｍのフィルター（ミリポア社製）で濾過したものを用いた。
　また、陰性コントロールとして、アイソタイプコントロール抗体を添加したウェル、抗体を添加していないウェル及びＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質には反応するが、ＣＡＰＲＩＮ－１が発現するヒト癌細胞表面に反応性を示さない抗体を添加したウェルを用意した。各抗体は、最終濃度が５μｇ／ｍＬとなるようにＶ底９６穴プレートに添加した。
　エフェクター細胞は、ヒト末梢血単核球細胞から常法を用いて分離したヒトＮＫ細胞を用いた。末梢血単核球細胞分離用の比重分離液Ｈｉｓｔｏｐａｑｕｅ（シグマアルドリッチ社）を用いてヒト末梢血単核球を分離し、ＦＩＴＣ蛍光色素で標識された抗体（抗ヒトＣＤ３抗体、抗ヒトＣＤ２０抗体、抗ヒトＣＤ１９抗体、抗ヒトＣＤ１１ｃ抗体、抗ＨＬＡ－ＤＲ抗体（ファーミンジェン社））で反応させてセルソーター（ＦＡＣＳ　Ｖａｎｔａｇｅ　ＳＥ（ベクトン・ディッキンソンアンドカンパニー））を用いて、上記抗体で染まらない、ＮＫ細胞を含んだ細胞集団を分離したもの、又はヒトＮＫ細胞分離キット（ミルテニー社製）を用いて分離したものを用いた。上記各抗体を添加したＶ底９６穴プレートにヒトＮＫ細胞を、１穴あたり０．４～２．０×１０５個添加したものを準備した。
　標的細胞は、乳癌細胞（ＢＴ－４７４、ＭＤＡ－ＭＢ－３６１）、大腸癌細胞（ＨＴ－２９）、肺癌細胞（ＱＧ５６）、胃癌細胞（ＮＣＩ－Ｎ８７）、子宮癌細胞（ＨＥＣ－１－Ａ）、前立腺癌細胞（２２Ｒｖ１）、膵臓癌細胞（Ｐａｎｃ１０．５）、肝臓癌細胞（Ｈｅｐ３Ｂ）、卵巣癌細胞（ＳＫＯＶ３）、腎癌細胞（Ｃａｋｉ－２）、脳腫瘍細胞（Ｕ－８７ＭＧ）、膀胱癌細胞（Ｔ２４、ＨＴ－１３７６）、食道癌細胞（ＯＥ３３）、白血病細胞（ＯＣＩ－ＡＭＬ５）、リンパ腫細胞（Ｒａｍｏｓ）、胆嚢癌細胞（ＴＧＢＣ１４ＴＫＢ）、線維肉腫細胞（ＨＴ－１０８０）、メラノーマ細胞（Ｇ－３６１）、副腎皮質癌（Ａ－６７３）、ユーイング腫瘍（ＲＤ－ＥＳ）、ホジキンリンパ腫（ＲＰＭＩ１６６６）、中皮腫（ＮＣＩ－Ｈ２４５２）、多発性骨髄腫（ＩＭ－９）、睾丸癌（ＮＴ／Ｄ１）、甲状腺癌（ＴＴ）又は頭頸部癌（ＦａＤｕ）を用いた。１０６個の上記ヒト癌細胞株をそれぞれ５０ｍＬ容の遠心チューブに集め、１００μＣｉのクロミウム５１（パーキンエルマー社製）を加え３７℃で１時間インキュベートした。その後１０％のＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地で３回洗浄し、前記でエフェクター細胞ならびに各抗体を添加した９６穴Ｖ底プレートに、１穴あたり２×１０３個ずつ添加して、３７℃、５％　ＣＯ２の条件下で４時間反応させた。反応後、障害を受けた癌細胞から放出される培養上清中のクロミウム５１培養上清を含んだ培養上清を各ウェル５０μＬずつ回収して、ウェル底面に個体シンチレータがコーティングされた、ＬｕｍａＰｌａｔｅ－９６（パーキンエルマー社製）に添加し、乾燥させて、障害を受けた癌細胞から放出される培養上清中のクロミウム５１の量を測定し、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体による癌細胞に対する抗腫瘍効果を算出した。
　その結果、乳癌細胞（ＢＴ－４７４）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６抗体は５４％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は５０％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は４６％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て２５％以下であり、陰性コントロール群はいずれも１０％以下であった。
　乳癌細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－３６１）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６抗体は５２％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は４５％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は４０％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て２５％以下であり、陰性コントロール群はいずれも６％以下であった。
　大腸癌細胞（ＨＴ－２９）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は４３％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は４０％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は３５％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て２０％以下であり、陰性コントロール群はいずれも３％以下であった。
　肺癌細胞（ＱＧ５６）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は４６％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は４２％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は３８％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て２２％以下であり、陰性コントロール群は、いずれも１０％以下であった。
　胃癌細胞（ＮＣＩ－Ｎ８７）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は４５％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は３８％以上の活性を示し、抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は３４％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て１５％以下であり、陰性コントロール群はいずれも８％以下であった。
　子宮癌細胞（ＨＥＣ－１－Ａ）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は５２％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は４５％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は４０％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て２０％以下であり、陰性コントロール群はいずれも５％以下であった。
　前立腺癌細胞（２２Ｒｖ１）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は４９％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は４５％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は３８％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て２０％以下であり、陰性コントロール群はいずれも１２％以下であった。
　膵臓癌細胞（Ｐａｎｃ１０．５）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は３５％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は３０％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は２４％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て１０％以下であり、陰性コントロール群はいずれも２％以下であった。
　肝臓癌細胞（Ｈｅｐ３Ｂ）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は２８％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は２５％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は２１％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て１２％以下であり、陰性コントロール群はいずれも５％以下であった。
　卵巣癌細胞（ＳＫＯＶ３）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は３５％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は３１％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は２７％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て１５％以下であり、陰性コントロール群はいずれも５％以下であった。
　腎癌細胞（Ｃａｋｉ－２）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は３７％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は３３％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は、２６％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て１５％以下であり、陰性コントロール群はいずれも５％以下であった。
　脳腫瘍細胞（Ｕ－８７ＭＧ）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は３６％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は２９％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は２４％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て１０％以下であり、陰性コントロール群はいずれも６％以下であった。
　膀胱癌細胞（Ｔ２４）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は３６％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は３３％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は３０％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て１５％以下であり、陰性コントロール群はいずれも６％以下であった。
　膀胱癌細胞（ＨＴ－１３７６）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は４５％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は４０％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は２８％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て２０％以下であり、陰性コントロール群はいずれも７％以下であった。
　食道癌細胞（ＯＥ３３）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は３５％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は３３％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は３０％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て１５％以下であり、陰性コントロール群はいずれも６％以下であった。
　白血病細胞（ＯＣＩ－ＡＭＬ５）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は２０％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は１８％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は１５％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て１０％以下であり、陰性コントロール群はいずれも６％以下であった。
　リンパ腫細胞（Ｒａｍｏｓ）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は２０％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は１８％以上の活性を示し、抗体＃９、抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は１５％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て１０％以下であり、陰性コントロール群はいずれも６％以下であった。
　胆嚢癌細胞（ＴＧＢＣ１４ＴＫＢ）に対してヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は３５％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は３０％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は２５％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て１５％以下であり、陰性コントロール群はいずれも６％以下であった。
　線維肉腫細胞（ＨＴ－１０８０）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は３０％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は２５％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は２０％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て１０％以下であり、陰性コントロール群はいずれも６％以下であった。
　メラノーマ（Ｇ－３６１）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は２５％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は２１％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は１５％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て８％以下であり、陰性コントロール群はいずれも６％以下であった。
　副腎皮質癌細胞（Ａ－６７３）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は５０％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は４６％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は４０％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て２０％以下であり、陰性コントロール群はいずれも８％以下であった。
　ユーイング腫瘍細胞（ＲＤ－ＥＳ）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は４８％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は４０％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は３１％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て１５％以下であり、陰性コントロール群はいずれも６％以下であった。
　ホジキンリンパ腫細胞（ＲＰＭＩ１６６６）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は４０％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は３６％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は３０％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て２０％以下であり、陰性コントロール群はいずれも５％以下であった。
　中皮腫細胞（ＮＣＩ－Ｈ２４５２）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は３５％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は３９％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は３１％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て１０％以下であり、陰性コントロール群はいずれも５％以下であった。
　多発性骨髄腫細胞（ＩＭ－９）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は３５％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、抗体＃２、ヒト化抗体＃５は３０％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は２７％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て１０％以下であり、陰性コントロール群はいずれも６％以下であった。
　睾丸癌細胞（ＮＴ／Ｄ１）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は３７％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は３０％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は２５％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て１１％以下であり、陰性コントロール群はいずれも５％以下であった。
　甲状腺癌細胞（ＴＴ）に対してはヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は４２％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は３５％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、ヒト化抗体＃８は３０％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て１５％以下であり、陰性コントロール群はいずれも５％以下であった。
　頭頸部癌細胞（ＦａＤｕ）に対しては、ヒト化抗体＃７、ヒト化抗体＃１０、ヒト化抗体＃６は５０％以上の抗腫瘍効果を示し、ヒト化抗体＃３、ヒト化抗体＃４、ヒト化抗体＃２、ヒト化抗体＃５は４０％以上の活性を示し、ヒト化抗体＃９、ヒト化抗体＃１、ヒト化抗体＃０、ヒト－ウサギキメラ抗体、抗体＃８は３５％以上の活性を示したのに対して、比較抗体１～４８は全て２０％以下であり、陰性コントロール群はいずれも８％以下であった。
　以上の結果から、ヒト化抗体＃０～＃１０及びヒト－ウサギキメラ抗体は、乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、白血病、リンパ腫、肝臓癌、胆嚢癌、肉腫、メラノーマ、副腎皮質癌、ユーイング腫瘍、ホジキンリンパ腫、中皮腫、多発性骨髄腫、睾丸癌、甲状腺癌又は頭頸部癌に対して、比較抗体より有意に強い抗腫瘍効果を示すことが明らかになった。
　また、ヒト化抗体＃０～＃１０及びヒト－ウサギキメラ抗体は、ＷＯ２０１０／０１６５２６、ＷＯ２０１１／０９６５１７、ＷＯ２０１１／０９６５２８、ＷＯ２０１１／０９６５１９、ＷＯ２０１１／０９６５３３、ＷＯ２０１１／０９６５３４、ＷＯ２０１１／０９６５３５、ＷＯ２０１３／０１８８８６、ＷＯ２０１３／０１８８９４、ＷＯ２０１３／０１８８９２、ＷＯ２０１３／０１８８９１、ＷＯ２０１３／０１８８８９、ＷＯ２０１３／０１８８８３、ＷＯ２０１３／１２５６３６、ＷＯ２０１３／１２５６５４、ＷＯ２０１３／１２５６３０、ＷＯ２０１３／１２５６４０、ＷＯ２０１３／１４７１６９、ＷＯ２０１３／１４７１７６の実施例に記載の全てのＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体よりも、上記記載の乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、白血病、リンパ腫、肝臓癌、胆嚢癌、肉腫、メラノーマ、副腎皮質癌、ユーイング腫瘍、ホジキンリンパ腫、中皮腫、多発性骨髄腫、睾丸癌、甲状腺癌又は頭頸部癌に対して有意に強い抗腫瘍活性を示した。
　なお、抗腫瘍効果は、ＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体、エフェクター細胞及びクロミウム５１を取り込ませた標的細胞を混合して４時間培養し、培養後培地に放出されたクロミウム５１の量を測定して、以下計算式＊により算出した癌細胞株に対する細胞障害活性を示した結果である。
　＊式：細胞障害活性（％）＝（ＣＡＰＲＩＮ－１に対する抗体及びエフェクター細胞を加えた際の標的細胞からのクロミウム５１遊離量－標的細胞からのクロミウム５１自然遊離量）÷（１Ｎ塩酸を加えた標的細胞からのクロミウム５１遊離量－標的細胞からのクロミウム５１自然遊離量）×１００。
　実施例６－１：重鎖定常領域中のアミノ酸が置換されたヒト化抗ＣＡＰＲＩＮ－１モノクローナル抗体の作製
　実施例３で得たヒト化抗体＃０、＃２、＃３、＃４、＃５、＃６、＃７、＃８、＃９、＃１０の重鎖定常領域中の一部アミノ酸が置換された配列番号３３に記載の重鎖定常領域を有する抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体（以下改Ｉ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と記載する）の作製を行った。上記重鎖定常領域と配列番号７で表される重鎖可変領域を有する重鎖アミノ酸配列をコードするＤＮＡを合成し、これを常法に従って哺乳類細胞発現用ベクターに挿入した。また、配列番号１１で表される軽鎖可変領域のアミノ酸をコードするＤＮＡをヒトＩｇＧ１の軽鎖定常領域をコードする遺伝子が挿入された哺乳類細胞発現用ベクターに挿入されたものを準備した。作製した２つの組み換え発現ベクターを常法に従って哺乳類細胞に導入してヒト化抗体＃０の改Ｉ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０の培養上清を得た。さらに実施例３に記載のヒト化抗体＃１、＃２、＃３、＃４、＃５、＃６、＃７、＃８、＃９、＃１０についても上記と同様の方法で改Ｉ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃１、＃２、＃３、＃４、＃５、＃６、＃７、＃８、＃９、＃１０を含む培養上清をそれぞれ得た。得られた改Ｉ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０を含む各培養上清を常法に従ってＨｉｔｒａｐ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ　ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ（ＧＥヘルスケア社製）を用いて精製し、ＰＢＳ（－）に置換して０．２２μｍのフィルター（ミリポア社製）で濾過したものを調製した。
　次に実施例３で得たヒト化抗体＃０、＃１、＃２、＃３、＃４、＃５、＃６、＃７、＃８、＃９、＃１０の重鎖定常領域中の一部アミノ酸が置換された配列番号３４記載の重鎖定常領域を有する抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体（以下改ＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と記載する）の作製を行った。上記重鎖定常領域と配列番号７で表される重鎖可変領域を有する重鎖アミノ酸配列をコードするＤＮＡを合成し、これを常法に従って哺乳類細胞発現用ベクターに挿入した。また、上記で作製した、配列番号１１で表される軽鎖可変領域のアミノ酸をコードするＤＮＡをヒトＩｇＧ１の軽鎖定常領域をコードする遺伝子が挿入された哺乳類細胞発現用ベクターに挿入したものを準備した。これら２つの組み換え発現ベクターを常法に従って哺乳類細胞に導入して改ＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０の培養上清を得た。さらに実施例３に記載のヒト化抗体＃１、＃２、＃３、＃４、＃５、＃６、＃７、＃８、＃９、＃１０についても上記と同様の方法で改ＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃１、＃２、＃３、＃４、＃５、＃６、＃７、＃８、＃９、＃１０を含む培養上清をそれぞれ得た。得られた改ＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０を含む各培養上清を常法に従ってＨｉｔｒａｐ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ　ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ（ＧＥヘルスケア社製）を用いて精製し、ＰＢＳ（－）に置換して０．２２μｍのフィルター（ミリポア社製）で濾過したものを調製した。
　実施例６－２：重鎖定常領域に結合する全Ｎ－グリコシド結合糖鎖のうち、糖鎖還元末端のＮ－アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖を有する抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体の作製
　次に、実施例３で得たヒト化抗体＃０、＃１、＃２、＃３、＃４、＃５、＃６、＃７、＃８、＃９、＃１０の重鎖定常領域に結合する全Ｎ－グリコシド結合糖鎖のうち、糖鎖還元末端のＮ－アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖を有する抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体（以下改ＩＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と記載する）を以下の方法にて得た。常法に従ってＧＤＰ－６－デオキシ－Ｄ－リキソ－４－ヘキスロースをＧＤＰ－Ｌ－フコースへと変換する反応を触媒しない酵素であるＧＤＰ－６－デオキシ－Ｄ－リキソ－４－ヘキスロースレダクターゼ（ＲＭＤ）遺伝子を組み込んだネオマイシン耐性遺伝子を含む哺乳類細胞発現ベクターを遺伝子導入試薬ＦｒｅｅＳｔｙｌｅＴＭ　ＭＡＸ　Ｒｅａｇｅｎｔ（Ｌｉｆｅ　ｔｅｃｈｏｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いて哺乳類細胞株ＣＨＯ細胞に導入した。上記遺伝子を導入したＣＨＯ細胞をＧ－４１８を含んだ培養液で培養してＲＭＤが発現しているＣＨＯ細胞のｓｔａｂｌｅ　ｐｏｏｌを作製した。このｓｔａｂｌｅ　ｐｏｏｌから限外希釈法によってＲＭＤが恒常的に発現しているＣＨＯ細胞を７個クローニングした。クローニングした７個の各ＲＭＤ－ＣＨＯ細胞でのＲＭＤ遺伝子発現量を定量ＰＣＲ法で１週間おきに３回評価し、ＲＭＤ遺伝子が恒常的に安定発現しているＣＨＯ細胞（ＲＭＤ－ＣＨＯ細胞）を選定した。恒常的にＲＭＤを発現する上記ＲＭＤ－ＣＨＯ細胞へ、実施例３と同様に、配列番号７で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列をコードする遺伝子と、配列番号１１で表される軽鎖可変領域のアミノ酸をコードする遺伝子とを、それぞれヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域が挿入された哺乳類細胞発現用ベクターとヒトＩｇＧ１の軽鎖定常領域が挿入された哺乳類細胞発現用ベクターをそれぞれ常法に従って導入して、改ＩＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０を含む培養上清を得た。さらに実施例３に記載のヒト化抗体＃１、＃２、＃３、＃４、＃５、＃６、＃７、＃８、＃９、＃１０についても上記と同様の方法で改ＩＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃１、＃２、＃３、＃４、＃５、＃６、＃７、＃８、＃９、＃１０を含む培養上清をそれぞれ得た。得られた改ＩＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０を含む各培養上清を常法に従ってＨｉｔｒａｐ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ　ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ（ＧＥヘルスケア社製）を用いて精製し、ＰＢＳ（－）に置換して０．２２μｍのフィルター（ミリポア社製）で濾過したものを調製して改ＩＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０を含む抗体組成物を得た。同様にして改ＩＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃１～＃１０を含む抗体精製物を得た。精製されたこれら抗体組成物中に含まれる重鎖定常領域に結合する全Ｎ－グリコシド結合糖鎖のうち、糖鎖還元末端のＮ－アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖を有する抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体の割合をＬａｂＣｈｉｐ（登録商標）ＧＸＩＩ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社）で評価した結果いずれも８０％以上であった。
　上記ＲＭＤ－ＣＨＯ細胞へ、実施例３と同様に、配列番号７で表される重鎖可変領域のアミノ酸配列をコードする遺伝子と、配列番号１１で表される軽鎖可変領域のアミノ酸をコードする遺伝子とを、それぞれヒトＩｇＧ１の重鎖定常領域が挿入されたハイグロマイシン耐性遺伝子を含む哺乳類細胞発現用ベクターとヒトＩｇＧ１の軽鎖定常領域が挿入されたハイグロマイシン耐性遺伝子を含む哺乳類細胞発現用ベクターをそれぞれ常法に従って導入した上記細胞を、ハイグロマイシンＢを含んだ培養液で培養して、改ＩＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０を発現するｓｔａｂｌｅ　ｐｏｏｌを作製した。このｓｔａｂｌｅ　ｐｏｏｌから限外希釈法で改ＩＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０を恒常的に安定発現する細胞を作製した。各細胞が産生する改ＩＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０を含む精製された抗体組成物中に含まれる重鎖定常領域に結合する全Ｎ－グリコシド結合糖鎖のうち、糖鎖還元末端のＮ－アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖を有する抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体の割合をＬａｂＣｈｉｐ（登録商標）ＧＸＩＩ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社）で評価した結果いずれも８０％以上であった。
　実施例６－３：重鎖定常領域中のアミノ酸が置換され、かつ重鎖定常領域に結合する全Ｎ－グリコシド結合糖鎖のうち、糖鎖還元末端のＮ－アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖を有する抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体の作製
　次に、実施例３に記載のヒト化抗体＃０、＃１、＃２、＃３、＃４、＃５、＃６、＃７、＃８、＃９、＃１０の重鎖定常領域中の一部アミノ酸が置換された配列番号３４記載の重鎖定常領域を有し、且つ抗体の重鎖定常領域に結合する全Ｎ－グリコシド結合糖鎖のうち、糖鎖還元末端のＮ－アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖を有する抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体（以下改ＩＶ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と記載する）の作製を行った。実施例６－２で作製した恒常的にＧＤＰ－６－デオキシ－Ｄ－リキソ－４－ヘキスロースレダクターゼ（ＲＭＤ）を発現するＲＭＤ－ＣＨＯ細胞へ、実施例６－１で作製した変異型重鎖定常領域と配列番号７で表されるヒトＩｇＧ１の重鎖可変領域を有する重鎖アミノ酸配列をコードするＤＮＡを合成しこれを常法に従って挿入した哺乳類細胞発現用ベクターと、配列番号１１で表される軽鎖可変領域のアミノ酸をコードするＤＮＡを合成し、ヒトＩｇＧ１の軽鎖定常領域のアミノ酸をコードする遺伝子が挿入された哺乳類細胞発現用ベクターを導入してヒト化抗体＃０の改ＩＶ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０の培養上清を得た。さらに実施例３に記載のヒト化抗体＃１、＃２、＃３、＃４、＃５、＃６、＃７、＃８、＃９、＃１０についても上記と同様の方法で改ＩＶ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃１、＃２、＃３、＃４、＃５、＃６、＃７、＃８、＃９、＃１０を含む培養上清をそれぞれ得た。得られた改ＩＶ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０を含む各培養上清を常法に従ってＨｉｔｒａｐ　Ｐｒｏｔｅｉｎ　Ａ　ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ（ＧＥヘルスケア社製）を用いて精製し、ＰＢＳ（－）に置換して０．２２μｍのフィルター（ミリポア社製）で濾過して改ＩＶ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０を含む抗体組成物を得た。同様にして改ＩＶ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃１～＃１０を含む抗体精製物を得た。精製されたこれら抗体組成物中に含まれる重鎖定常領域に結合する全Ｎ－グリコシド結合糖鎖のうち、糖鎖還元末端のＮ－アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖を有する抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体の割合をＬａｂＣｈｉｐ（登録商標）ＧＸＩＩ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社）で評価した結果いずれも８０％以上であった。
　実施例６－１で作製した変異型重鎖定常領域と配列番号７で表されるヒトＩｇＧ１の重鎖可変領域を有する重鎖アミノ酸配列をコードするＤＮＡを合成しこれを常法に従って挿入したハイグロマイシン耐性遺伝子を含む哺乳類細胞発現用ベクターと、配列番号１１で表される軽鎖可変領域のアミノ酸をコードするＤＮＡを合成し、ヒトＩｇＧ１の軽鎖定常領域のアミノ酸をコードする遺伝子が挿入されたハイグロマイシン耐性遺伝子を含む哺乳類細胞発現用ベクターを導入した上記細胞を、ハイグロマイシンＢを含んだ培養液で培養して、改ＩＶ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０を発現するｓｔａｂｌｅ　ｐｏｏｌを作製した。このｓｔａｂｌｅ　ｐｏｏｌから限外希釈法で改ＩＶ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０を恒常的に安定発現する細胞を作製した。さらに実施例３に記載のヒト化抗体＃１、＃２、＃３、＃４、＃５、＃６、＃７、＃８、＃９、＃１０についても上記と同様の方法で改ＩＶ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃１、＃２、＃３、＃４、＃５、＃６、＃７、＃８、＃９、＃１０を恒常的に安定発現する細胞を作製した。各細胞が産生する改ＩＶ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０を含む精製された抗体組成物中に含まれる重鎖定常領域に結合する全Ｎ－グリコシド結合糖鎖のうち、糖鎖還元末端のＮ－アセチルグルコサミンにフコースが結合していない糖鎖を有する抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体の割合をＬａｂＣｈｉｐ（登録商標）ＧＸＩＩ（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ社）で評価した結果いずれも８０％以上であった。
　実施例７：改変型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体の抗原特異性と癌細胞への反応性
　実施例６－１～３で調製した改Ｉ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０、改ＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０、改ＩＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０を含む各抗体組成物及び改抗ＩＶ型ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０を含む各抗体組成物（以下改変型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体と記載する）のＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質への特異的反応性を実施例４と同様の方法で確認した。その結果、陰性コントロールとして用いたＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に反応しないことが確認されているヒトＩｇＧ抗体を添加したウェルの吸光度値は、抗体を添加していないウェルと同等に低値であったのに対して、各改変型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体をそれぞれ添加したウェルの吸光度値は全て同等に高い値を示した。また、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質を固相していないウェルに対して全ての改変型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体は陰性コントロールと同等の吸光度値しか示さなかった。この結果から、全ての改変型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体はＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に特異的に反応することが確認された。
　次に、各改変型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体の各種ヒト癌細胞への反応性を実施例４と同様の方法で確認した。乳癌細胞（ＢＴ－４７４、ＭＤＡ－ＭＢ－３６１）、大腸癌細胞（ＨＴ－２９）、肺癌細胞（ＱＧ５６）、胃癌細胞（ＮＣＩ－Ｎ８７）、子宮癌細胞（ＨＥＣ－１－Ａ）、前立腺癌細胞（２２Ｒｖ１）、膵臓癌細胞（Ｐａｎｃ１０．５）、肝臓癌細胞（Ｈｅｐ３Ｂ）、卵巣癌細胞（ＳＫＯＶ３）、腎癌細胞（Ｃａｋｉ－２）、脳腫瘍細胞（Ｕ－８７ＭＧ）、膀胱癌細胞（Ｔ２４、ＨＴ－１３７６）、食道癌細胞（ＯＥ３３）、白血病細胞（ＯＣＩ－ＡＭＬ５）、リンパ腫細胞（Ｒａｍｏｓ）、胆嚢癌細胞（ＴＧＢＣ１４ＴＫＢ）、線維肉腫細胞（ＨＴ－１０８０）、メラノーマ細胞（Ｇ－３６１）、副腎皮質癌細胞（Ａ－６７３）、ユーイング腫瘍細胞（ＲＤ－ＥＳ）、ホジキンリンパ腫細胞（ＲＰＭＩ１６６６）、中皮腫細胞（ＮＣＩ－Ｈ２４５２）、多発性骨髄腫細胞（ＩＭ－９）、睾丸癌細胞（ＮＴ／Ｄ１）、甲状腺癌細胞（ＴＴ）、頭頸部癌細胞（ＦａＤｕ）を本評価に用いた。その結果、評価に用いた全ての癌細胞で、各改変型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体の蛍光強度は、陰性コントロールを用いた場合の蛍光強度よりも強かった。以上の結果から、全ての改変型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体は、ヒト癌細胞膜表面上にあるＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質に特異的に反応することが確認された。
　実施例８：改変型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体の各種ヒト癌細胞に対する抗腫瘍活性
　実施例６－１～６－３で調製した改変型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体（改Ｉ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０、改ＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０、改ＩＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０を含む各抗体組成物及び改ＩＶ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０を含む各抗体組成物）の各種ヒト癌細胞に対する抗腫瘍効果を実施例５と同様にＡＤＣＣ活性でそれぞれ評価した。陰性コントロールとして、アイソタイプコントロール抗体を添加したウェル、抗体を添加していないウェル及びＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質には反応するが、ＣＡＰＲＩＮ－１が発現するヒト癌細胞表面に反応性を示さない抗体を添加したウェルを用意した。比較抗体として、改変する前の各抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体であるヒト化抗体＃０～＃１０を用いた。各抗体は、最終濃度が０．０１～１μｇ／ｍＬとなるようにＶ底９６穴プレートに添加した。
　標的細胞は、乳癌細胞（ＢＴ－４７４、ＭＤＡ－ＭＢ－３６１）、大腸癌細胞（ＨＴ－２９）、肺癌細胞（ＱＧ５６）、胃癌細胞（ＮＣＩ－Ｎ８７）、子宮癌細胞（ＨＥＣ－１－Ａ）、前立腺癌細胞（２２Ｒｖ１）、膵臓癌細胞（Ｐａｎｃ１０．５）、肝臓癌細胞（Ｈｅｐ３Ｂ）、卵巣癌細胞（ＳＫＯＶ３）、腎癌細胞（Ｃａｋｉ－２）、脳腫瘍細胞（Ｕ－８７ＭＧ）、膀胱癌細胞（Ｔ２４、ＨＴ－１３７６）、食道癌細胞（ＯＥ３３）、白血病細胞（ＯＣＩ－ＡＭＬ５）、リンパ腫細胞（Ｒａｍｏｓ）、胆嚢癌細胞（ＴＧＢＣ１４ＴＫＢ）、線維肉腫細胞（ＨＴ－１０８０）、メラノーマ細胞（Ｇ－３６１）、副腎皮質癌細胞（Ａ－６７３）、ユーイング腫瘍細胞（ＲＤ－ＥＳ）、ホジキンリンパ腫細胞（ＲＰＭＩ１６６６）、中皮腫細胞（ＮＣＩ－Ｈ２４５２）、多発性骨髄腫細胞（ＩＭ－９）、睾丸癌細胞（ＮＴ／Ｄ１）、甲状腺癌細胞（ＴＴ）、頭頸部癌細胞（ＦａＤｕ）を用いた。１０６個の上記ヒト癌細胞株をそれぞれ５０ｍＬ容の遠心チューブに集め、１００μＣｉのクロミウム５１（パーキンエルマー社製）を加え３７℃で１時間インキュベートした後、１０％のＦＢＳを含むＲＰＭＩ１６４０培地で３回洗浄し、前記各抗体を添加した９６穴Ｖ底プレートに、１穴あたり２×１０３個ずつ添加して反応させた。
　エフェクター細胞は、ヒト末梢血単核球細胞から常法を用いて分離したヒトＮＫ細胞を用いた。上記各抗体、標的細胞を添加して反応させたＶ底９６穴プレートにヒトＮＫ細胞を、１穴あたり０．４～２．０×１０５個添加したものを準備し、３７℃、５％、ＣＯ２の条件下で４時間反応させた。反応後、障害を受けた癌細胞から放出されるクロミウム５１を含んだ培養上清を各ウェル５０μＬずつ回収して、実施例５と同様の方法で障害を受けた癌細胞から放出される培養上清中のクロミウム５１の量を測定し、抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体による癌細胞に対する抗腫瘍効果を算出した。
　その結果、乳癌細胞（ＢＴ－４７４）に対して、改変型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体である改Ｉ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０、改ＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０、改ＩＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０を含む各抗体組成物及び改ＩＶ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０を含む各抗体組成物は、それぞれ陰性コントロールに比べて強い抗腫瘍効果を示した。また、比較抗体とした改変する前の抗体（ヒト化抗体＃０～＃１０）それぞれが示す抗腫瘍効果と同じ抗腫瘍効果を改Ｉ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０、改ＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０ならびに改ＩＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０を含む各抗体組成物が示す際の抗体濃度は、改変する前の各抗体濃度に比べておよそ１３～２０分の１の濃度であった。また、改ＩＶ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０を含む各抗体組成物が改変する前の抗体と同じ抗腫瘍効果を得る場合には、改変する前の各抗体濃度に比べておよそ１５０分の１の濃度であった。以上の結果から改変型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体（改Ｉ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０、改ＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０、改ＩＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０及び改ＩＶ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０を含む各抗体組成物）は、改変する前の各抗体に比べて抗腫瘍活性が向上することが判った。また、改ＩＶ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０を含む各抗体組成物は、改Ｉ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０、改ＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０及び改ＩＩＩ型抗ＣＡＰＲＩＮ－１抗体＃０～＃１０を含む各抗体組成物に比べてより強い抗腫瘍効果が得られることが判った。
　その他、評価に用いた乳癌細胞（ＭＤＡ－ＭＢ－３６１）、大腸癌細胞（ＨＴ－２９）、肺癌細胞（ＱＧ５６）、胃癌細胞（ＮＣＩ－Ｎ８７）、子宮癌細胞（ＨＥＣ－１－Ａ）、前立腺癌細胞（２２Ｒｖ１）、膵臓癌細胞（Ｐａｎｃ１０．５）、肝臓癌細胞（Ｈｅｐ３Ｂ）、卵巣癌細胞（ＳＫＯＶ３）、腎癌細胞（Ｃａｋｉ－２）、脳腫瘍細胞（Ｕ－８７ＭＧ）、膀胱癌細胞（Ｔ２４、ＨＴ－１３７６）、食道癌細胞（ＯＥ３３）、白血病細胞（ＯＣＩ－ＡＭＬ５）、リンパ腫細胞（Ｒａｍｏｓ）、胆嚢癌細胞（ＴＧＢＣ１４ＴＫＢ）、線維肉腫細胞（ＨＴ－１０８０）、メラノーマ細胞（Ｇ－３６１）、副腎皮質癌細胞（Ａ－６７３）、ユーイング腫瘍細胞（ＲＤ－ＥＳ）、ホジキンリンパ腫細胞（ＲＰＭＩ１６６６）、中皮腫細胞（ＮＣＩ－Ｈ２４５２）、多発性骨髄腫細胞（ＩＭ－９）、睾丸癌細胞（ＮＴ／Ｄ１）、甲状腺癌細胞（ＴＴ）、頭頸部癌細胞（ＦａＤｕ）に対しても同様により強い抗腫瘍効果が得られた。
　本発明の抗体は、癌の治療及び／又は予防のため有用である。
　なお、本明細書で引用した全ての刊行物、特許及び特許出願をそのまま参考として本明細書にとり入れるものとする。

Claims (24)

  1. 　配列番号１、２及び３の相補性決定領域を含む重鎖可変領域と配列番号４、５及び６の相補性決定領域を含む軽鎖可変領域とを含み、かつ、ＣＡＰＲＩＮ－１タンパク質と免疫学的反応性を有する抗体又はそのフラグメント。
  2. 　重鎖可変領域が配列番号８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１５のアミノ酸配列を含んでなる請求項１に記載の抗体又はそのフラグメント。
  3. 　重鎖可変領域が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１５のアミノ酸配列を含んでなる請求項１に記載の抗体又はそのフラグメント。
  4. 　重鎖可変領域が配列番号７のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１５のアミノ酸配列を含んでなる請求項１に記載の抗体又はそのフラグメント。
  5. 　重鎖可変領域が配列番号８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１３のアミノ酸配列を含んでなる請求項１に記載の抗体又はそのフラグメント。
  6. 　重鎖可変領域が配列番号７のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１２のアミノ酸配列を含んでなる請求項１に記載の抗体又はそのフラグメント。
  7. 　重鎖可変領域が配列番号８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１２のアミノ酸配列を含んでなる請求項１に記載の抗体又はそのフラグメント。
  8. 　重鎖可変領域が配列番号７のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１３のアミノ酸配列を含んでなる請求項１に記載の抗体又はそのフラグメント。
  9. 　重鎖可変領域が配列番号１０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１４のアミノ酸配列を含んでなる請求項１に記載の抗体又はそのフラグメント。
  10. 　重鎖可変領域が配列番号８のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１１のアミノ酸配列を含んでなる請求項１に記載の抗体又はそのフラグメント。
  11. 　重鎖可変領域が配列番号７のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１１のアミノ酸配列を含んでなる請求項１に記載の抗体又はそのフラグメント。
  12. 　重鎖可変領域が配列番号９のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号１５のアミノ酸配列を含んでなる請求項１に記載の抗体又はそのフラグメント。
  13. 　重鎖可変領域が配列番号２０のアミノ酸配列を含み、かつ、軽鎖可変領域が配列番号２１のアミノ酸配列を含んでなる請求項１に記載の抗体又はそのフラグメント。
  14. 　ヒト抗体、ヒト化抗体、キメラ抗体、単鎖抗体又は多重特異性抗体である、請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体又はそのフラグメント。
  15. 　抗腫瘍剤がコンジュゲートされた請求項１～１３のいずれか１項に記載の抗体又はそのフラグメント。
  16. 　前記抗体の重鎖定常領域に１もしくは複数個のアミノ酸置換を含む、請求項１～１５のいずれか１項に記載の抗体。
  17. 　前記抗体が、重鎖定常領域に結合するＮ－グリコシド結合糖鎖の糖鎖還元末端のＮ－アセチルグルコサミンに結合したフコースを除去した抗体である、請求項１～１６のいずれか１項に記載の抗体。
  18. 　前記抗体の組成物であって、請求項１７に記載の抗体及び重鎖定常領域に結合するＮ－グリコシド結合糖鎖の糖鎖還元末端のＮ－アセチルグルコサミンにフコースが結合した請求項１～１６のいずれかに１項に記載の抗体を含む、抗体の組成物。
  19. 　請求項１７に記載の抗体又は請求項１８に記載の抗体の組成物を産生する細胞。
  20. 　請求項１～１５のいずれか１項に記載の抗体又はそのフラグメント、請求項１６又は１７に記載の抗体、あるいは請求項１８に記載の抗体の組成物を有効成分として含むことを特徴とする、癌の治療及び／又は予防のための医薬組成物。
  21. 　前記癌が乳癌、腎癌、膵臓癌、大腸癌、肺癌、脳腫瘍、胃癌、子宮癌、卵巣癌、前立腺癌、膀胱癌、食道癌、白血病、リンパ腫、肝臓癌、胆嚢癌、肉腫、肥満細胞腫、メラノーマ、副腎皮質癌、ユーイング腫瘍、ホジキンリンパ腫、中皮腫、多発性骨髄腫、睾丸癌、甲状腺癌又は頭頸部癌である、請求項２０に記載の医薬組成物。
  22. 　請求項２０又は２１に記載の医薬組成物と、抗腫瘍剤を含む医薬組成物とを含んでなる、癌の治療及び／又は予防のための組み合わせ医薬品。
  23. 　請求項１～１６のいずれか１項に記載の抗体又はそのフラグメントをコードするＤＮＡ。
  24. 　請求項１～１６のいずれか１項に記載の抗体又はそのフラグメント、請求項１７に記載の抗体、請求項１８に記載の抗体の組成物、請求項２０又は２１に記載の医薬組成物、あるいは請求項２２に記載の組み合わせ医薬品を、被験者に投与することを含む、癌の治療及び／又は予防方法。
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