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WO2005087240A1 - 家畜・家禽用下痢抑制剤 - Google Patents

家畜・家禽用下痢抑制剤 Download PDF

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WO2005087240A1
WO2005087240A1 PCT/JP2005/004572 JP2005004572W WO2005087240A1 WO 2005087240 A1 WO2005087240 A1 WO 2005087240A1 JP 2005004572 W JP2005004572 W JP 2005004572W WO 2005087240 A1 WO2005087240 A1 WO 2005087240A1
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WO
WIPO (PCT)
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diarrhea
poultry
livestock
days
escherichia coli
Prior art date
Application number
PCT/JP2005/004572
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English (en)
French (fr)
Inventor
Kazunari Ushida
Takamitsu Tsukahara
Wakoto Bukawa
Tatsuhiko Kan
Takumi Watanabe
Noritaka Matsubara
Original Assignee
Combi Co.
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Publication date
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    • A61K35/744Lactic acid bacteria, e.g. enterococci, pediococci, lactococci, streptococci or leuconostocs
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/12Antidiarrhoeals

Definitions

  • the present invention relates to a bacterial infection that is prevalent in livestock 'poultry, comprising a dead cell of the lactic acid bacterium Enterococcus faecalis EC-12 (FE RM ABP-10284) or a processed product thereof, or
  • the present invention relates to an agent for suppressing diarrhea due to intestinal hypersensitivity and a method for suppressing diarrhea particularly administered to pigs.
  • infection prevention agents such as Candida (see, for example, JP-A-05-97689), and immunostimulants (eg, special agents) Kaihei 8-99887 and JP-A-11-92389) are known.
  • a method for producing an lactic acid bacterium having an immunostimulatory effect for example, specially cultivating Enterococcus faecalis EC-12 (FERM ABP-10284) in a medium containing corn steep liquor and casein hydrolyzate) JP 2004-41099 A
  • immunoregulators mainly composed of dead cells of Enterococcus fucalis AD101 strain for example, see JP-A-2001-48796
  • Enterococcus faecalis EC-12 (FERM ABP-10284) is very good against diarrhea in livestock It is known to have an inhibitory effect! / I did not hesitate.
  • Diarrhea originally means an increase in water in feces, and osmotic diarrhea is considered from the mechanism of diarrhea.
  • Osmotic diarrhea is diarrhea caused by increased infiltration pressure in the intestinal tract due to substances that are not absorbed by the intestinal tract.
  • Secretory diarrhea is a type of diarrhea that occurs when bacterial toxins, hormones, chemical substances, etc., promote the secretion of water and electrolytes in the intestine. Among them, those caused by bacteria cause diarrhea due to bacterial toxins without causing mucosal damage (for example, certain types of E. coli) and those that cause bacteria to enter the cell and damage the mucosa (for example, Salmonella) There are two types. Fatty diarrhea based on impaired absorption of fat and bile acids is another type of secretory diarrhea.
  • inflammatory bowel disease also increases the permeability of the intestinal wall and causes diarrhea.
  • Abnormal intestinal transit time is due to a decrease in bacterial growth due to blind snare syndrome such as intestinal stenosis and diverticulum.
  • blind snare syndrome such as intestinal stenosis and diverticulum.
  • those caused by hypersensitivity are irritable bowel syndrome and hyperthyroidism, which causes diarrhea by increasing bowel movement.
  • indigestible diarrhea may occur in weanling piglets and sows.
  • Growing pig feed contains about 40-80% cereal grains, and starch is digested and absorbed in the small intestine of the pig, but if a large amount of food enters the small intestine at one time, In piglets before and after the weaning period and lactating mother pigs, secretion of digestive enzymes and gastric acid is insufficient, so starch cannot be completely digested and absorbed in the small intestine, and the starch may enter the large intestine. is there.
  • porcine colibacillosis is roughly classified into E. coli diarrhea, Escherichia coli enterotoxemia, and Escherichia coli sepsis, depending on the causative mechanism. Diarrhea and sepsis occur frequently in the neonatal period, and diarrhea is mainly caused by infection with protozoan protozoa belonging to a specific serotype. Enterotoxemia occurs during the weaning period (4-12 weeks of age), and the causative organism is enterotoxemia Escherichia coli.
  • ETEEC Escherichia coli
  • Toxemia occurs when ETEEC colonizes the small intestine and the resulting toxin is absorbed, causing damage to the target tissue.
  • Edema disease (ED) is typical of Escherichia coli enterotoxemia, the causative organism belongs to a specific serotype and falls into the category of Vero toxin-producing Escherichia coli (VTEC).
  • Edema disease (ED) often occurs sporadically but sometimes causes small outbreaks. It rarely occurs in 2-3 or 3 week old suckling pigs or adult pigs. Adult pigs have a more chronic course than weaning pigs. The characteristic of the outbreak is that the number of pigs etc.
  • the problem of the present invention is that it effectively exerts an anti-diarrheal effect without using antibiotics or synthetic antibacterial agents that have been used for infectious diseases of livestock and poultry as in the past. It is to provide a safe diarrhea inhibitor and a method for suppressing sexual pathogenic infectious diseases that can be prevented and treated.
  • the inventors of the present invention focused on diarrhea that affects piglets before and after the weaning period with a high probability during the breeding period of such pigs, and as a result of earnest research on their prevention and treatment, specific lactobacilli It was found that administration of enterococcus fecaris EC-12 (FERM ABP-10284) dead cells or treatments thereof significantly reduced diarrhea and edema disease in piglets, and the present invention was completed.
  • the present invention relates to (1) a livestock / poultry characterized by containing, as an active ingredient, dead cells of Enterococcus faecalis EC-1 2 (FERM ABP-10284) or a processed product thereof.
  • the diarrhea inhibitor of poultry and (5) the pathogenic bacteria are microorganisms belonging to the genus Clostridium And (6) diarrhea factor, which is described in (1) or (2) above.
  • the present invention provides (9) a composition containing a dead cell of Enterococcus faecalis EC-12 (F ERM ABP-10284) or a processed product thereof as an active ingredient.
  • Diarrhea factor potency characterized in that it is caused by pathogenic bacteria, and the method for suppressing diarrhea in livestock-poultry described in (9) above,
  • (11) A method for suppressing diarrhea in livestock and poultry characterized by oral administration to livestock and poultry as described in (10) above, wherein the pathogenic bacterium is Escherichia coli; 12) Escherichia coli causes edema disease or enterotoxemia
  • the method for suppressing diarrhea in poultry as described in (11) above characterized in that it is E.
  • the diarrhea suppressant of livestock 'poultry of the present invention is not particularly limited as long as it is a composition containing a dead cell of lactic acid bacteria Enterococcus' Fucaris EC-12 (FERM ABP-10284) or a processed product thereof as an active ingredient.
  • a composition containing a dead cell of lactic acid bacterium Enterococcus fuecharis EC-12 (FERM ABP-10284) or a processed product thereof as an active ingredient As a method for suppressing diarrhea in livestock and poultry according to the present invention, a composition containing a dead cell of lactic acid bacterium Enterococcus fuecharis EC-12 (FERM ABP-10284) or a processed product thereof as an active ingredient,
  • the method for oral administration to livestock and poultry is not particularly limited, and the infection control agent and composition can be used as they are or in any form such as a preparation.
  • the mycological properties of Enterococcus fecalis EC-12 used in the present invention are shown in (Table 1).
  • the culture method of Enterococcus faecalis EC-12 is not particularly limited, including the conventionally known culture methods of lactic acid bacteria, but using a culture medium for growing lactic acid bacteria, the culture pH is adjusted to near neutral at 37 ° C.
  • Enterococcus' Fucaris EC-12 is an independent administrative agency, National Institute of Advanced Industrial Science and Technology. May 25 “FERM ABP— 10284 ”, the 16S rDNA of Enterococcus faecalis EC-12 is registered as“ AB15482 ”with the National Institute of Genetics.
  • Enterococcus faecalis EC-12 is a cell of a lactic acid bacterium cultured and collected by a conventional method as a powerful cell that needs to be used as a dead cell or a treated product thereof. Wash and spin-dry, repeat washing and dehydration as necessary, then suspend in distilled water, physiological saline, etc., and heat this suspension, for example, at 80-115 ° C for 30 minutes to 3 seconds. Examples include dead cell suspension obtained by drying and dried product thereof, or dead cell suspension obtained by irradiating the dead cell suspension with gamma rays or neutrons and dried product thereof. Can be.
  • the drying means for the dead cell suspension is not particularly limited as long as it is a known drying means, and examples thereof include spray drying and freeze drying.
  • enzyme treatment, surfactant treatment, and grinding / pulverization treatment can be performed before and after sterilization treatment by heating or the like, or before and after drying treatment. Included in the dead cells of the invention or processed products thereof.
  • the diarrhea inhibitor or composition When used as a preparation, addition of a carrier such as starch, lactose or soy protein, an excipient, a binder, a disintegrant, a lubricant, a stabilizer, a suspension, etc. It can be formulated into powders, tablets, granules, capsules, liquids and the like by a known method. Powerful formulations can be administered as is, but can also be fed in feeds.
  • a carrier such as starch, lactose or soy protein, an excipient, a binder, a disintegrant, a lubricant, a stabilizer, a suspension, etc.
  • a carrier such as starch, lactose or soy protein, an excipient, a binder, a disintegrant, a lubricant, a stabilizer, a suspension, etc. It can be formulated into powders, tablets, granules, capsules, liquids and the like by a known method. Powerful
  • examples of livestock and poultry subject to diarrhea suppression include livestock such as cattle, pigs, horses, sheep and goats, and poultry such as chickens, duck and ostriches. Can be applied to livestock and poultry of any age and age, including the suckling season. Therefore, oral administration to nursing mother pigs and piglets before and after the weaning period is preferable from the viewpoint of controlling infection of edema disease.
  • diarrhea in pigs occurs most often in weaned piglets and suckling pigs. The cause of this is the breeding environment factors such as the structure of the breeding shed and the weaning house, Seasonal factors that reduce the immunity of piglets, such as during the rainy season when E.
  • coli is likely to occur, during hot summers and during cold winters, and due to poor weaning methods, lactation factors, malnutrition, etc. It is thought that breeding factors and genetic factors are involved in a complicated manner. Its main symptoms are characterized by eyelid edema (swelling red), marked mesenteric lymph node swelling, diarrhea, and neurological symptoms.
  • the diarrhea suppressant of the present invention is useful for prevention of diarrhea that is not only treated for diarrhea, and is administered to domestic animals and poultry at the time when diarrhea symptoms develop.
  • suitable examples include when the resistance is reduced, when diarrhea is prevalent in the surroundings, during pregnancy, lactation, and feeding period of livestock.
  • suitable diarrhea include diarrhea caused by pathogenic bacteria, parasite protozoa and intestinal hypersensitivity diarrhea.
  • pathogenic bacteria include Escherichia coli, especially Escherichia coli that causes edema disease and enterotoxic blood.
  • microorganisms belonging to the genus Clostridium such as Clostridium perfringens can be specifically exemplified.
  • the dose and frequency of administration of the composition for inhibiting diarrhea of the present invention and the method for inhibiting diarrhea of the present invention are appropriately determined according to the type of livestock 'poultry, body weight, diarrhea symptoms, recovery status, etc.
  • 0.1 to 200 mgZ days, preferably 20 to 10 OmgZ days per kilogram of body weight is used for normal weaning as Enterococcus faecalis EC-12 dead cells or processed products thereof. It is preferable to mix and administer to subsequent feed.
  • the administration period varies depending on the health condition and environment of the piglet, but it is suitable to be from 21 days to 42 days, more preferably from 5 days to about 70 days.
  • Enterococcus' Fucaris EC-12 (FERM ABP-10284) in Rogosa medium 37.
  • C Inoculate 0.1 ( ⁇ )% of the pre-cultured liquid cultured for 24 hours in a liquid medium containing 4% yeast extract, 3% polypeptone, and 10% lactose, and adjust the pH to 6.8-7.0 using a pH stat.
  • Neutralization culture was performed at 37 ° C for 22-24 hours while adjusting with caustic soda solution.
  • the cells were separated and collected with a continuous centrifuge, diluted with water to the original liquid volume, and again separated and collected with a continuous centrifuge. This operation was repeated a total of 4 times to wash the cells. Next, the washed cells were suspended in an appropriate amount of water, sterilized at 100 ° C. for 30 minutes, and then dried using a spray dryer to prepare a heat-treated cell powder.
  • Example 2
  • Example 1 The dry dead cells obtained in Example 1 (hereinafter referred to as “EC-12” t) were prepared in advance by diluting 10 times with flour and containing 0.05% EC-12. In this way, the feed added to the basic feed SDS No. 1 (made by Nippon Compound Feed Co., Ltd., which does not contain antibacterial agents and viable bacteria agents) was used. As the control feed, 0.5% marketed flour was added to the basic feed. As test animals, 31 pigs (4 abdomen) with diarrhea that were bred in pig farms where diarrhea frequently occurs during the suckling and weaning periods (LWD ternary crossbred pigs) Targeted.
  • the suckling pigs were 18-24 days old, were bred with mother pigs in a delivery stall, and fed only breast milk.
  • the EC-12 group was weaned 4 or 8 days after the start of the study, and the untreated control group was weaned 2 days after the start of the study. It was noted that the drug was not administered to mother pigs and test piglets since delivery.
  • feces were collected from all the test pigs using a tube, and the positive rate of pathogenic factors was qualitatively determined.
  • 21 pigs (3 stomachs) of the test pigs were fed the EC-12-added diet, and the remaining 10 pigs (1 stomach) were fed the EC-12-free diet (control) for 14 days.
  • feces were collected from all heads on day 7 after the start of administration, and then administration was continued for 7 days, and the course was observed. Specifically, we examined the identification of the causative agent, the average clinical score, and body weight measurement.
  • the positive rate of hemolytic Escherichia coli was 0% (0 Z cases) at 0 days after the start of the test in the untreated control group, and 90% (9 Z cases) at 7 days after the start of the test.
  • the results of Wilcoxon's signed rank sum test showed a significant difference between day 0 and day 7 after the start of the study.
  • the results of Fisher's exact calculation performed at each observation point showed a significant difference between the untreated control group and the EC-12 treated group 7 days after the start of the study.
  • the positive rate in the untreated control group was 10% (1/10 cases) at 0 days after the start of the study and 0% (0/10 cases) at 7 days after the start of the study.
  • the EC-12 group 57% (13Z21 cases) at 0 days after the start of the study and 0% (0/21 cases) at 7 days after the start of the study.
  • the Wilcoxon signed rank sum test showed a significant difference between day 0 and day 7 after the start of the test.
  • the results of Fisher's exact calculation performed at each observation point showed a significant difference between the untreated control group and the EC-12 treated group at 0 days after the start of the test.
  • the mean fecal property score was 1.8 after the start of the study 1.8, 1 day after the start of the study 1.4, 0. 2 days after the start of the study 9, and 9. 4 days after the start of the test 1. 2, 1. 7 days after the start of the test 1. 9, 9 days after the start of the test 1. 4, 4 days after the start of the test 1. 1. 1 to 14 after the start of the test
  • the total score for the day (during EC-12 administration) was 8.9.
  • the mean vital score was 0.0 in the untreated control group from 0 to 10 days after the start of the study and 0.2 on the 14th day after the start of the study. In the EC-12 group, all vitality scores during the study period were 0.0. Significant differences were observed by the Mann-Whit test on the 14th day after the start of the study.
  • the average hair score was 0 in the untreated control group at 0 days after the start of the study, 0, from 1 to 7 days after the start of the study, 0, 10 days after the start of the study, 4 and 0, 14 days after the start of the study. It was 7.
  • EC The total score during the 12 investment period was 1.1. In the EC-12 group, all hair scores during the study period were 0.0. In the results of the Mann-Whit test performed at each observation point, a significant difference was observed on the 10th and 14th days after the start of the test, and a comparison was also made in the total score during the EC-12 administration period. .
  • the mean appetite score was 0.0 in the untreated control group from 0 to 10 days after the start of the study and 0.1 at 14 days after the start of the study. In the EC-12 group, all appetite scores during the study period were 0.0. The Mann-Whit test on the 14th day after the start of the test showed no significant difference.
  • the mean overall clinical score was 1. 9 days after the start of the study in the untreated control group 1. 9, 1 day after the start of the study 1. 4, 4 days after the start of the test 0.9, after the start of the test 1. 0, after the start of the test 1. 4 days after the start of the test 1. 2, 7 days after the start of the test 1. 9, after the start of the test 10
  • the daily score was 1.8, and 14 days after the start of the study was 2.1.
  • the total score during the EC-12 administration period was 10.3. In the EC-12 group, 0 after the start of the study
  • Body weight was measured on days 0, 7 and 14 after the start of administration. The changes in body weight measurement results and weight gain during the test period are shown in (Table 4).
  • the average body weight was 5.2 kg at 0 days after the start of the test, 5.9 kg at 7 days after the start of the test, and 6.8 kg at 14 days after the start of the test.
  • the dose was 5.3 kg at 0 days after the start of the study, 6.3 kg at 7 days after the start of the study, and 6.6 kg at 14 days after the start of the study.
  • the t-test results showed no significant difference at any time.
  • the average body weight gain during the study period was 0.7 kg in the untreated control group from 0 to 7 days after the start of the test, 0.9 kg from 7 to 14 days after the start of the test, and from 0 to 14 days after the start of the test. 1.
  • the stool characteristics were also significantly improved in the daily force after the start of EC-12 administration, and this tendency was observed until the end of the study.
  • recurrence of diarrhea was observed in one pig chamber (weaning 8 days after the start of the study) on which EC-12 was administered, but no serious recurrence was observed in the other two pig chambers. I got it.
  • Other clinical scores in the untreated control group were found to be reduced in vitality due to continued diarrhea, loss of hair, and loss of appetite, but in the EC-12 treated group, the strength was not observed throughout the study period.
  • the test farm is an integrated farm that manages 400 sows. All-in-all-outs are being implemented at Windles Pighouse.
  • EC-12 was mixed with the feed between the start of feeding and 7 days after weaning and was administered to piglets aged 33 days from 5 days of age. Other conditions were the same as in Example 2.
  • the incidence of diarrhea decreased from the week after June 22, 2002, when treatment began, and deaths from diarrhea also fell to less than half.
  • the country sign indicates the age of the dead piglet shown on the vertical axis on the right side of the figure.
  • the age of death is about 35 days to 45 days old. It was found that the administration is preferably started from about 35 days to an age before 45 days of age.
  • FIG. 1 is a graph showing the number of deaths of diarrhea by week (from May 2002 to July of the same year) from the start of administration of EC-IS dead cells.
  • FIG. 2 A graph showing the number of deaths of diarrhea by week (from May 2002 to November of the same year) including the start of administration of EC-12 dead cells and the change in dose.
  • FIG. 3 is a graph showing the number of deaths from post-weaning diarrhea by week comparing 2002 and 2003.

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Abstract

 従来のように家畜・家禽の感染症に使用されてきた抗生物質や合成抗菌剤を使用することなく、効果的に下痢抑制剤効果を奏し、また、抗生物質耐性の病原性感染病に対しも予防および治療が可能となる、安全な下痢抑制剤及び抑制方法を提供するものである。エンテロコッカス・フェカリス(Enterococcus faecalis)EC−12(FERM ABP−10284)の加熱処理死菌体又はその処理物を有効成分として含有する家畜・家禽の下痢抑制剤を、家畜・家禽に経口投与、特に授乳期の母豚及び離乳期前後の子豚に経口投与する。

Description

明 細 書
家畜 ·家禽用下痢抑制剤
技術分野
[0001] 本発明は、乳酸菌ェンテロコッカス'フエカリス(Enterococcus faecalis) EC— 12 (FE RM ABP - 10284)の死菌体又はその処理物を有効成分とする、家畜'家禽に蔓 延する細菌感染、或いは腸過敏性による下痢抑制剤及び特に豚に投与する下痢抑 制方法に関する。
背景技術
[0002] 従来、乳酸菌を含む家畜の治療薬として、家畜の成長促進ある 、は下痢の予防治 療薬に、生菌であるラクトバチルス ·ァシドフィラスおよびストレプトコッカス ·フエカリス を含有してなる家畜用薬剤が知られている(例えば、特開昭 51— 106725号公報参 照)。また、豚、牛等の家畜の下痢や軟便症状を回復させると共に、毛づゃを良くし て順調な発育を得ることができるようにするために、ビフィズス菌等の生菌剤 lgに対し 、塩ィ匕ナトリウム 2— 12g、塩ィ匕カリウム 1一 10g、重炭酸ナトリウム 2— 18g、ブドウ糖 1 0— 80g、グリシン 5— 30gの割合で含有させる家畜用混合飼料 (例えば、特開平 3— 61452号公報参照)や、ビフィズス菌、乳酸菌、又は酵母の菌体処理物を含有する 犬特有の感染症の予防 ·治療用ドッグフードが知られている(例えば、特開 2001— 3 09753号公報参照)。
[0003] さらに、乳酸菌であるェンテロコッカス属に属する菌体又はその処理物の利用とし て、カンジダ菌等の感染防御剤(例えば、特開平 05— 97689号参照)や、免疫賦活 剤(例えば、特開平 8— 99887号公報、特開平 11— 92389号公報参照)が知られて いる。また、ェンテロコッカス'フエカリス EC— 12 (FERM ABP— 10284)を、コーン スティープリカ一とカゼインの加水分解物とを含有する培地を用いて培養する免疫賦 活効果を有する乳酸菌の製造法 (例えば、特開 2004 - 41099号公報参照)や、ェン テロコッカス 'フ カリス AD101菌株の死菌体を主成分とする免疫調整剤(例えば、 特開 2001— 48796号公報参照)も知られている。しかしながら、ェンテロコッカス'フ ェカリス EC—12 (FERM ABP— 10284)が家畜 '家禽の下痢に対してきわめて優れ た抑制作用を有することは知られて!/ヽなかった。
発明の開示
発明が解決しょうとする課題
[0004] 下痢とは、元来糞便中の水分の増加を意味し、下痢の発生機序から浸透圧性下痢
(osmotic diarrhea)、分泌、'性下痢 (secretory diarrhea)、通過時間の異常による下痢 の 3つに大別される。浸透圧性下痢は腸管力 吸収されない物質によって腸管内浸 透圧が高まり起こる下痢である。分泌性下痢は、細菌毒素、ホルモン、化学物質など が腸管において水分や電解質の分泌を促進して起こる下痢でその種類は多い。そ の中で細菌によるものは粘膜損傷を伴わず細菌毒素により下痢を起す型 (例えば、 ある種の大腸菌)と細菌が細胞内に侵入し粘膜を傷害して下痢を起す型 (たとえば、 サルモネラ菌)の 2種類がある。脂肪や胆汁酸の吸収障害に基づく脂肪性下痢ゃ胆 汁酸性下痢も分泌性下痢の 1つである。そのほか炎症性腸疾患でも腸管壁の透過 性が亢進して下痢を起す。腸通過時間異常のうち、その低下によるものは腸狭窄、 憩室など盲係蹄症候群で細菌の異常増殖をおこすことによる。一方、亢進によるもの は過敏性腸症候群や甲状腺機能亢進症で、腸運動を亢進することにより下痢を起こ す。
[0005] 豚において、その飼育中、離乳期子豚や母豚で消化不良性下痢を起す場合があ る。育成豚の飼料にトウモロコシを主原料とした穀類が約 40— 80%含まれており、豚 の小腸で澱粉は消化 '吸収されるが、一時に大量の食物が小腸に入ってきた場合や 、離乳期前後の子豚、授乳している母豚では消化酵素や胃酸の分泌が不十分であ るため、小腸では澱粉を完全に消化 ·吸収できず、その澱粉が大腸に入ってくる場合 がある。大腸内の乳酸菌の一種であるストレプトコッカス属の中には、素早くその澱粉 を分解し、乳酸をどんどん生産し、それ自体増殖するものもあるので、大腸内は急に 乳酸が増える。その結果、急激な pHの低下を起こし、他菌の死滅或いは弱体化が 起こり、異常な大腸フローラになる。このとき、下痢が起こり、下痢便中からは乳酸と、 乳酸と同様の性質を持つコハク酸が大量に検出される。このように、大腸フローラが 様々な原因で異常になった時に、しばしば下痢が起こる。さらに、乳酸の大量蓄積は 、大腸組織にも悪影響を及ぼして、大腸組織が損傷を受けて大腸が薄くなるだけで なぐ結果として病原菌の大腸への侵入を受けやすくなるという二次被害を被る可能 性が出てくる。したがって、大腸菌、クロストリディウム(Clostrdium perfringens) , Brychispira hyodysentenae.Lowsonia intracellans、 salmonella sp.ゝロタウイノレス、コク シジゥムなど下痢を引き起こす病原性細菌、病原性ウィルス、病原性原虫に感染さ れやすい。
ところで、豚の大腸菌症は、原因菌ゃ発病機序により大腸菌性下痢、大腸菌性腸 管毒血症及び大腸菌性敗血症に大別される。下痢、敗血症は新生期に多発し、下 痢は特定の血清型に属する毒素原生大腸菌の感染が主因である。腸管毒血症は離 乳期(4一 12週齢)に発生し、原因菌は腸管毒血症大腸菌 Enterotoxemic
Escherichia coli (ETEEC)と総称される。毒血症は ETEECの小腸内定着とその結果 産生された毒素が吸収され、標的組織に障害を引き起こすことにより発病する。浮腫 病 Edema disease (ED)は大腸菌性腸管毒血症の典型であり、原因菌は特定の血清 型に属し、 Vero毒素産生性大腸菌 (VTEC)の範疇に入る。浮腫病 (ED)は散発的に 発生することが多いが、時には小規模な集団発生を起こす。まれに 2— 3週齢の哺乳 豚、あるいは成豚にも発生する。成豚は離乳豚よりも慢性の経過をとる。発生の特徴 は、豚群の中の数等が突発的に発病し、短期間 (4一 15日間)で終息することである 力 同一農場で再発を繰り返すこともある。発病率は、 10— 40%である力 死亡率は 50— 90%と高い。発生は 1つの血清型菌の感染によることが多いが、時には複数の 菌型による感染もある。浮腫病 (ED)原因菌の血清型 (0139、 0141)は各国とも共 通している。実験的には 0139の 105個を 3日間経口投与する事で発症する。通常、 伝播は糞便、ェロゾール、汚染飼料などを介して起こり、農場の汚染は長期に及ぶこ とが知られている(「臨床と微生物」 Vol.23, 843-849, 1996)。
[0006] 本発明の課題は、従来のように家畜 ·家禽の感染症に使用されてきた抗生物質や 合成抗菌剤を使用することなぐ効果的に下痢抑制剤効果を奏し、また、抗生物質耐 性の病原性感染病に対しも予防および治療が可能となる、安全な下痢抑制剤及び 抑制方法を提供することにある。
課題を解決するための手段
[0007] 家畜のうちでも特に食肉として、近年需要性が高い豚において、哺乳期、離乳期前 後の子豚、或いは授乳期の母豚では、下痢を伴う病原性の大腸菌により浮腫病に罹 る。この疾病は離乳後の子豚にみられることが多ぐ発生農場では子豚の 10— 40% が発病するといわれている。
[0008] 本発明者らは、このような豚の飼育期間において、離乳期前後の子豚に高い確率 で罹患する下痢に着目し、その予防及び治療について鋭意研究の結果、特定の乳 酸菌ェンテロコッカス.フエカリス EC— 12 (FERM ABP— 10284)の死菌体又はそ の処理物を投与すると、大幅に子豚の下痢、浮腫病が減少することを見い出し、本 発明を完成するに至った。
[0009] すなわち本発明は、(1)ェンテロコッカス'フエカリス(Enterococcus faecalis) EC— 1 2 (FERM ABP - 10284)の死菌体又はその処理物を有効成分として含有すること を特徴とする家畜 ·家禽の下痢抑制剤や、(2)下痢因子が病原性細菌によるもので あることを特徴とする上記(1)記載の家畜 ·家禽の下痢抑制剤や、 (3)病原性細菌が 、大腸菌(Escherichia coli)であることを特徴とする上記(1)又は(2)記載の家畜-家 禽の下痢抑制剤や、(4)大腸菌が、浮腫病を引き起こす大腸菌、又は腸管毒血症性 大腸菌(Enterotoxemic Escherichia coli)であることを特徴とする上記(3)記載の家畜 •家禽の下痢抑制剤や、(5)病原性細菌が、クロストリディウム (Clostridium)属に属す る微生物であることを特徴とする上記(1)又は(2)記載の家畜 ·家禽の下痢抑制剤や 、(6)下痢因子が、コクシジゥム原虫であることを特徴とする上記(1)記載の家畜-家 禽の下痢抑制剤や、(7)下痢が、腸過敏性下痢であることを特徴とする上記(1)記載 の家畜 ·家禽の下痢抑制剤や、(8)死菌体が、加熱処理死菌体であることを特徴とす る上記(1)一(7)のいずれかに記載の家畜 ·家禽の下痢抑制剤に関する。
[0010] また本発明は、 (9)ェンテロコッカス ·フエカリス(Enterococcus faecalis) EC— 12 (F ERM ABP - 10284)の死菌体又はその処理物を有効成分として含有する組成物 を、家畜'家禽に経口投与することを特徴とする家畜'家禽の下痢抑制方法や、 (10) 下痢因子力 病原性細菌によるものであることを特徴とする上記(9)記載の家畜-家 禽の下痢抑制方法や、(11)病原性細菌が、大腸菌(Escherichia coli)であることを特 徴とする上記(10)記載の家畜 ·家禽に経口投与することを特徴とする家畜 ·家禽の 下痢抑制方法や、(12)大腸菌が、浮腫病を引き起こす大腸菌、又は腸管毒血症性 大腸菌(Enterotoxemic Escherichia coli)であることを特徴とする上記(11)記載の家 畜 '家禽の下痢抑制方法や、(13)死菌体が、加熱処理死菌体であることを特徴とす る上記(9)一(12)のいずれかに記載の家畜 ·家禽の下痢抑制方法や、(14)授乳期 の母豚及び離乳期前後の子豚に経口投与することを特徴とする上記(9)一(13)の V、ずれかに記載の家畜 ·家禽の下痢抑制方法に関する。
発明の効果
[0011] 本発明のェンテロコッカス'フエカリス EC— 12 (FERM ABP— 10284)の死菌体又 はその処理物を有効成分として含有する家畜 ·家禽の下痢抑制剤を経口的に投与 すると、家畜'家禽、特に豚の下痢を抑制し、下痢による死亡率が著しく低下し、従来 のように家畜'家禽の感染症に使用されてきた抗生物質や合成抗菌剤を使用するこ となぐ効果的に下痢抑制剤効果を奏するうえに、抗生物質耐性の病原性感染病に 対しも予防および治療が可能となる。
発明を実施するための最良の形態
[0012] 本発明の家畜'家禽の下痢抑制剤としては、乳酸菌ェンテロコッカス'フエカリス EC — 12 (FERM ABP— 10284)の死菌体又はその処理物を有効成分として含有する 組成物であれば特に制限されず、また、本発明の家畜 ·家禽の下痢抑制方法として は、乳酸菌ェンテロコッカス'フエカリス EC— 12 (FERM ABP— 10284)の死菌体又 はその処理物を有効成分として含有する組成物を、家畜 ·家禽に経口投与する方法 であれば特に制限されず、上記感染防除剤や組成物は、そのままあるいは製剤など あらゆる形態で使用することができる。
[0013] 本発明にお 、て用いられるェンテロコッカス ·フエカリス EC— 12の菌学的性質を(表 1)に示す。このェンテロコッカス'フエカリス EC— 12の培養方法としては、従来公知の 乳酸菌の培養方法も含め特に制限されるものではないが、乳酸菌生育用培地を用 い、 37°Cで培養 pHを中性付近に維持しながら 5— 120時間、好ましくは、 16— 28時 間培養し、生菌数約 107— 101G/ml、好ましくは約 108— 101G/mlの培養液を得る 方法を例示することができる。また、ェンテロコッカス'フエカリス EC-12は、独立行政 法人産業技術総合研究所 特許生物寄託センター 305 - 8566 日本国茨城県 つくば巿東 1丁目 1番地 1 中央第 6)にお!/、て 2005年 2月 25日に「FERM ABP— 10284」としても寄託されており、ェンテロコッカス ·フエカリス EC— 12の 16SrDNAは 、国立遺伝研究所に「AB15482」として登録されて 、る。
[表 1]
Figure imgf000007_0001
[0015] 本発明においては、ェンテロコッカス'フエカリス EC— 12は、死菌体又はその処理 物として用いる必要がある力 力かる死菌体としては、常法により培養、集菌した乳酸 菌の菌体を洗浄し、遠心脱水し、必要に応じて洗浄'脱水を繰り返した後、蒸留水、 生理食塩水等に懸濁し、この懸濁液を、例えば 80— 115°Cで 30分一 3秒間加熱す ることにより得られる死菌体懸濁液やその乾燥物、又は前記死菌体懸濁液にガンマ 線或いは中性子線を照射することにより得られる死菌体懸濁液やその乾燥物を挙げ ることができる。該死菌体懸濁液の乾燥手段としては公知の乾燥手段であれば特に 制限されないが、噴霧乾燥、凍結乾燥等を例示することができる。場合によっては、 加熱等による殺菌処理の前後、あるいは、乾燥処理の前後に、酵素処理、界面活性 剤処理、磨砕 '粉砕処理を行うこともでき、これらの処理〖こより得られるものも、本発明 の死菌体又はその処理物に含まれる。
[0016] 前記の下痢抑制剤や組成物を製剤として用いる場合、デンプン、乳糖、大豆蛋白 等の担体、賦形剤、結合材、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、懸濁剤等の添加剤を配合し て、周知の方法で粉剤、錠剤、顆粒剤、カプセル剤、液剤等に製剤することができる 。力かる製剤はそのまま投与することもできるが、飼料等に混じて給餌させることもで きる。
[0017] 本発明において、下痢抑制の対象となる家畜 ·家禽類としては、牛、豚、馬、羊、ャ ギなどの家畜、鶏、鴨、ダチョウなどの家禽を例示することができ、授乳、哺乳期も含 め、いずれの段階の日齢、年齢の家畜 ·家禽にも適用できる力 特に、豚の飼育にお いては、授乳期の母豚及び離乳期前後の子豚に経口投与することが浮腫病の感染 防除の点で好ましい。豚の下痢は、上記のように、特に離乳後の子豚や哺乳豚に多 く発生するが、その発生原因としては、飼育されている分娩舎や離乳舎の構造等の 飼育環境要因や、大腸菌が発生しやすい梅雨の期間、夏の暑い時や冬の寒い時な ど子豚の免疫力が低下する季節要因や、また、離乳方法が悪く消化不良等による哺 乳要因や、栄養不良等の飼育要因や、遺伝要因などが複雑に関与すると考えられる 。その主なる症状は、眼瞼の浮腫 (赤く腫れる)、著明な腸管膜リンパ節の腫脹、下痢 が特徴であり、神経症状もある。
[0018] 本発明の下痢抑制剤は、下痢の治療ばかりでなぐ下痢の予防にも有用であり、家 畜 ·家禽への投与時期としては、その時期は下痢症状を発症して 、る時に投与する ことは勿論、抵抗力が低下している時や、周囲で下痢が流行している時、家畜'家禽 の妊娠時、授乳時、哺乳期間等を好適に例示することができる。また、下痢としては、 病原性細菌ゃコクシジゥム原虫に起因する下痢や腸過敏性下痢を好適に例示する ことができ、また、上記病原性細菌としては大腸菌、特に浮腫病を引き起こす大腸菌 や腸管毒血症性大腸菌の他、クロストリディウム 'パーフリンゲンス (Clostrdium perfringens)等のクロストリディウム属に属する微生物を具体的に例示することができ る。
[0019] 本発明の下痢抑制剤や本発明の下痢抑制方法における組成物の投与量や投与 回数は、家畜'家禽の種類、体重、下痢の症状、回復状態等に応じて、適宜決定す ることができるが、例えば、子豚に関しては、ェンテロコッカス'フエカリス EC— 12の死 菌体又はその処理物として、体重 lkgあたり 0. 1— 200mgZ日、好ましくは 20— 10 OmgZ日を、通常の離乳後の飼料に混ぜて投与することが好ましい。投与期間は、 子豚の健康状態、環境により異なるが、 21日齢より 42日齢、さらに望ましくは、 5日齢 より約 70日齢までの間が適当である。
[0020] 以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、本発明の技術的範囲はこ れらの例示に限定されるものではない。
実施例 1
[0021] ェンテロコッカス'フエカリス EC— 12 (FERM ABP— 10284)をロゴサ培地で 37。C 、 24時間培養した前培養液を、酵母エキス 4%、ポリペプトン 3%、乳糖 10%を含む 液体培地に 0. 1 (νΖν) %接種し、 pHスタツトを用いて pH6. 8-7. 0に苛性ソーダ 水溶液で調整しながら 37°C、 22— 24時間中和培養を行なった。
[0022] 培養終了後、連続遠心機で菌体を分離、回収した後、水を加えて元の液量まで希 釈して再度連続遠心機で菌体を分離、回収した。この操作を合計 4回繰り返して菌 体を洗浄した。次いで、洗浄した菌体を適量の水に懸濁し、 100°C、 30分間殺菌し た後、スプレードライヤーを用いて菌体を乾燥して加熱処理菌体粉末を調整した。 実施例 2
[0023] [病原因子の特定と臨床スコア]
1.供試飼料,供試動物,飼育方法
実施例 1で得られた乾燥死菌体 (以下、「EC— 12」 t 、う)は予め小麦粉で 10倍希 釈したプレミックスを作製しておき、 EC— 12を 0. 05%含有するように基礎飼料 SDS No. 1 (日本配合飼料株式会社製、抗菌剤及び生菌剤を含まないもの)に添加した ものを用いた。また、対照飼料には、 0. 5%の巿販小麦粉を基礎飼料に添加したも のを用いた。被検動物として、哺乳期及び離乳期に下痢が頻発している養豚場にお いて飼育されている、下痢症状を認めた哺乳豚 (LWD系三元交雑種豚) 31頭 (4腹 分)を対象とした。該哺乳豚は 18— 24日齢で,分娩ストールで母豚とともに飼育され ており,母乳のみを摂食していた。 EC— 12投与群は試験開始後 4又は 8日で,無投 与対照群は試験開始後 2日に離乳されていた。なお、分娩時から母豚及び供試子 豚に薬剤は投与されていな力つた。
[0024] 2.試験の概要
投与前に、供試豚全頭の採糞をスヮブで行い、病原因子の陽性率を定性的に調 查した。次に、供試豚の 21頭(3腹分)に EC— 12添加飼料を、残りの 10頭(1腹分) に EC— 12無添加飼料 (対照)を 14日間給与した。その間、投与開始後 7日目に全頭 スヮブで採糞を行い、その後 7日間投与を継続し、経過を観察した。具体的には、病 原因子の特定と、平均臨床スコアと、体重測定について試験した。
[0025] 3.病原因子の特定
子豚の哺乳期であり、罹患しやすい 1)クロストリジゥム(Clostrdium perfringens)、 2) サルモネラ(Salmonella sp.)、 3)溶血性大腸菌(E.coli)について、投与開始後 0及び 7日に、病原菌の検出を行った。糞便中の病原因子検査結果を (表 2)に示す。なお 、投与開始後 14日の観察時に糞便を採材し、 Brychispira hyodysenteriae (豚赤痢原 因菌)、 Lowsonia intracellaris (増殖性腸炎原因菌)、ロタウィルス、コクシジゥムの検 查を行った力 全例陰性であった。
[0026] [表 2]
一一!
Figure imgf000010_0001
[0027] その結果、溶血性大腸菌陽性率は,無投与対照群では試験開始後 0日で 0% (0 Z10例),試験開始後 7日で 90% (9Z10例)であった。ウィルコクソンの符号付順位 和検定の結果では,試験開始後 0日と 7日の間に有意差が認められた。 EC— 12投 与群では試験開始後 0日で 5% (1Z21例),試験開始後 7日で 0% (0Z21例)であ つた。観察時点毎に実施したフィッシャーの直接確率計算法の結果では,試験開始 後 7日で無投与対照群及び EC— 12投与群間に有意差が認められた。また、クロスト 陽性率は、無投与対照群では試験開始後 0日で 10 % (1/10例),試験開始後 7日で 0% (0/10例)であった。 EC— 12投与群では試 験開始後 0日で 57% (13Z21例),試験開始後 7日で 0% (0/21例)であった。ウイ ルコクソンの符号付順位和検定の結果では,試験開始後 0日と 7日の間に有意差が 認められた。観察時点毎に実施したフィッシャーの直接確率計算法の結果では,試 験開始後 0日で無投与対照群及び EC— 12投与群間に有意差が認められた。なお
,試験期間 ¾1してサルモネラは検出されなかった。
[0028] 4.平均臨床スコア
投与開始後 0, 1, 2, 3, 4, 7, 10及び 14日に、糞便性状観察、活力、被毛、食欲 について観察して記録し、総合臨床スコアを求めた。結果を(表 3)に示す。
[0029] [表 3]
供試 試験開始後日数 投与期間中合計 観察項目 試験群 頭数 0 1 +. 2' 3 4 7 10 . 14 l-14d 糞便性 織与纣照群 10 1.8 1.4 0.9 1.0 1.2 1.9 1.4 1.1 B.9 投与群 21 1.5 0.7 0.5 0.6 0.6 0.5 0.4 0.8 4.0 マンホイットニ検定 Ρ値 0.15 0.02 0.03 0.10 0.M く 0.001 く 0.001 0.2 く Q.001 活力 無投与対照群 10 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0. 0.0 0.0 0.2 0.2
EC- 12投与群 21 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 マンホイットニ検定 P値 N.C. N.C. N. e. N.C. H.C. N.C. N.C. 0.04 0.04 被毛. 無投与対照群 10 0.1 0.0 0.0 0.0 0,0 0.0 0.4 0.7 1.1
EC- 12投与群 21 0,0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 マンホイットニ検定 P値 0.15 N.C. ' N.C. N.C. .C. N.C. 0.002 く 0.001 く 0.001 食欲 無投与対照群 10 0.0 0.0 0.0 0.0 0,0 0,0 0,0 0.1 0.1
EC 12投与群 21 0.0 0.0 0.0 0,0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 マンホイットニ検定 P値 N.C. N.C. N.C. N.C. N.C. N.C. H.C. 0.59 0.59 総合臨床 無投与対照群 10 1.9 1.4 0.9 1.0 1.2 ).9 1.8 2.1 10.3 スコア EC-12投与群 21 1.5 0.7 0.5 0.6 0.6 0.5 0.4 0.9 4.1 マンホイットニ検定 P値 0.09 0.02 0.Q3 0.1 0.04 く 0,001 <0.001 0,008 く 0.001
訂正された用紙 (規則 91) [0030] (1)糞便性状スコア
平均糞便性状スコアは無投与対照群では試験開始後 0日で 1. 8,試験開始後 1日 で 1. 4,試験開始後 2日で 0. 9,試験開始後 3日で 1. 0,試験開始後 4日で 1. 2,試 験開始後 7日で 1. 9,試験開始後 10日で 1. 4,試験開始後 14日で 1. 1であり,試 験開始後 1から 14日(EC-12投与期間中)の合計スコアは 8. 9であった。 EC— 12投 与群では試験開始後 0日で 1. 5,試験開始後 1日で 0. 7,試験開始後 2日で 0. 5, 試験開始後 3及び 4日で 0. 6,試験開始後 7日で 0. 5,試験開始後 10日で 0. 4,試 験開始後 14日で 0. 8であり,試験開始後 1から 14日(EC— 12投与期間中)の合計ス コアは 4. 0であった。観察時点毎に実施したマン'ホイット-検定の結果では,試験 開始後 1, 2, 4, 7及び 10日で有意差が認められ, EC-12投与期間中の合計スコア での比較でも有意差が認められた。
[0031] (2)活力スコア
平均活力スコアは無投与対照群では試験開始後 0から 10日まで 0. 0,試験開始後 14日で 0. 2であった。 EC— 12投与群では試験期間中の活力スコアは全て 0. 0であ つた。試験開始後 14日のマン'ホイット二検定で有意差が認められた。
[0032] (3)被毛スコア
平均被毛スコアは無投与対照群では試験開始後 0日で 0. 1,試験開始後 1から 7 日まで 0. 0,試験開始後 10日で 0. 4,試験開始後 14日で 0. 7であった。 EC— 12投 与期間中の合計スコアは 1. 1であった。 EC— 12投与群では試験期間中の被毛スコ ァは全て 0. 0であった。観察時点毎に実施したマン'ホイット-検定の結果では,試 験開始後 10, 14日で有意差が認められ, EC— 12投与期間中の合計スコアでの比 較でも有意差が認められた。
[0033] (4)食欲スコア
平均食欲スコアは無投与対照群では試験開始後 0から 10日まで 0. 0,試験開始後 14日で 0. 1であった。 EC— 12投与群では試験期間中の食欲スコアは全て 0. 0であ つた。試験開始後 14日のマン'ホイット-検定で有意差は認められな力つた。
[0034] (5)総合臨床スコア
平均総合臨床スコアは無投与対照群では試験開始後 0日で 1. 9,試験開始後 1日 で 1. 4,試験開始後 2日で 0. 9,試験開始後 3日で 1. 0,試験開始後 4日で 1. 2,試 験開始後 7日で 1. 9,試験開始後 10日で 1. 8,試験開始後 14日で 2. 1であり, EC —12投与期間中の合計スコアは 10. 3であった。 EC— 12投与群では試験開始後 0
4贓 *せ l«?f調S ()
日で 1. 5,試験開始後 1日で 0. 7,試験開始後 2日で 0. 5,試験開始後 3及び 4日で 0. 6,試験開始後 7日で 0. 5,試験開始後 10日で 0. 4,試験開始後 14日で 0. 9で あり, EC— 12投与期間中の合計スコアは 4. 1であった。観察時点毎に実施したマン •ホイット-検定の結果では,試験開始後 1, 2, 4, 7, 10及び 14日で有意差が認め られ, EC— 12投与期間中の合計スコアでの比較でも有意差が認められた。
[0035] 5.体重測定
投与開始後 0, 7及び 14日に体重測定を実施した。試験期間中の体重測定結果及 び増体量の推移を (表 4)に示す。
[0036] [表 4]
Figure imgf000013_0001
[0037] その結果、平均体重は,無投与対照群では試験開始後 0日で 5. 2kg、試験開始 後 7日で 5. 9kg、試験開始後 14日で 6. 8kgであった。 EC— 12投与群では試験開 始後 0日で 5. 3kg、試験開始後 7日で 6. 3kg、試験開始後 14日で 6. 6kgであった 。 t検定の結果では,どの時点にも有意差は認められな力つた。また、試験期間中の 平均増体量は,無投与対照群では試験開始後 0— 7日で 0. 7kg,試験開始後 7— 1 4日で 0. 9kg、試験開始後 0— 14日で 1. 6kgであった。 EC— 12投与群では試験開 始後 0— 7日で 1. Okg、試験開始後 7— 14日で 0. 3kg、試験開始後 0— 14日で 1. 3kgであった。 t検定の結果では,試験開始後 0— 7日では EC— 12投与群で,試験 開始後 7— 14日では無投与対照群でそれぞれに対して高値となり,有意差が認めら れた。
[0038] 6.まとめ
EC— 12投与開始後 1日力も便性状は有意に改善され,その傾向は試験終了時ま で認められた。試験開始後 14日では EC— 12を投与している 1豚房 (試験開始後 8日 に離乳)で下痢の再発が散見されたが,他の 2豚房では重篤な再発は認められなか つた。その他の臨床スコアは,無投与対照群では下痢の継続による活力減退,被毛 失沢及び食欲不振などを起こす個体が認められたが, EC— 12投与群では試験期間 を通して観察されな力つた。糞便中の病原因子検査では,試験開始後 7日では無投 与対照群の 10頭中 9頭で溶血性大腸菌が陽性であつたのに対して EC— 12投与群 では全て陰性であった。また, EC— 12投与群で試験開始後 0日に 21頭中 13頭陽性 であったクロストリジゥム(Clostrdium perfringens)は試験開始後 7日には全例陰性に なっていた。以上の結果から, EC— 12を哺乳期子豚に投与することで病原性大腸菌 及びクロストリジゥム(Clostrdium perfringens)による下痢を抑制する可能性が示唆さ れた。また試験期間中 EC— 12投与によると思われる異常は認められず, EC— 12の 豚に対する投与の安全性も確認された。
実施例 3
[0039] [子豚の死亡頭数の減少]
1.試験の概要
試験農場は、母豚 400頭を一貫経営する農場で、分娩舎は解放豚舎で離乳舎は ウィンドレス豚舎で、オールインオールアウトを実施している。 EC— 12を、餌付け開始 時より離乳後 7日までの間に飼料に混ぜて、 5日齢より 33日齢の子豚に投与した。そ の他の条件は実施例 2と同様に行った。体重 lkg当たり lOOmgの EC— 12の投与は 、 2002年 6月 22日より開始し、同年 7月 18日まで行った。 2002年 7月 19日力ら投 与量を半分に減らし、体重 lkg当たり 5mgを同年 8月 2日まで投与した。 2002年 8月 3日力も投与量を元に戻し、体重 lkg当たり lOOmgを同年 9月 27日まで投与した。そ の後、投与量を倍量に増加して、体重 lkg当たり 200mgを 2003年 12月まで投与し た。
[0040] 2.投与効果
図 1に示すように、投与開始の 2002年 6月 22日の翌週より下痢の発生が減少する とともに、下痢による死亡も半数以下となった。また、図 1に示すように、國印は、図欄 外右の縦軸に示す死亡子豚の日齢を表し、この死亡日齢をみると、約 35日一 45日 齢であることから、投与は約 35日一 45日齢以前の日齢から開始することが好ましい ことがわかった。
[0041] その後の 2002年 7月 19日力 投与量を半分に減らし、体重 lkg当たり 50mgを同 年 8月 2日まで 2週間投与をしたところ、図 2に示すように、死亡の増加が見られた。こ れは、分娩舎の環境と離乳舎の環境の影響を受けていることも考えられるが、投与量 を半分に減らしたのが更に死亡数の増加に関係すると思われた。その後 8月 3日力ら 投与量を元に戻し、 9月の最後の週まで、即ち、体重 lkg当たり lOOmgを投与したと ころ、図 2に示すように、死亡頭数が約 1Z2— 1Z3以下となり、一 9月 6日の週では 、死亡頭数はわず力 1頭であった。
[0042] 9月の最後の週より死亡頭数が増加し始めたので、投与量を倍量に増加した。即ち 、体重 lkg当たり 200mgを投与した。その結果、図 2に示すように、徐々に死亡頭数 が減少し、一 11月 8日の週では、死亡頭数が 2頭まで減少した。その後 2週にわたり 、死亡頭数が増加した力 その原因は明らかでなぐ分娩舎の環境にあると思われた 。旧分娩舎は、温度コントロールが悪く外気温と殆ど変わらない状態の建物である。 2 003年の死亡頭数を 2002年の同週の死亡頭数を合わせて図 3に示す。図 3に示す 死亡頭数からみて、明らかに本発明の EC— 12を投与した 2003年の方力 2002年 に比べてその数は少ないことがわかった。
図面の簡単な説明
[図 1]EC— I S死菌体の投与開始よりの週別下痢死亡頭数(2002年 5月〜同年 7月) を示す図である。
[図 2]EC— 12死菌体の投与開始、投与量の変更を含む週別下痢死亡頭数 (2002 年 5月〜同年 11月)を示す図である。
[図 3]2002年と 2003年を比較した週ごとの離乳後下痢死亡頭数を示す図である。
訂正された用紙 (規則 91》

Claims

請求の範囲
[I] ェンテロコッカス'フエカリス(Enterococcus faecalis) EC— 12 (FERM ABP— 10284 )の死菌体又はその処理物を有効成分として含有することを特徴とする家畜 ·家禽の 下痢抑制剤。
[2] 下痢因子が病原性細菌によるものであることを特徴とする請求項 1記載の家畜 ·家禽 の下痢抑制剤。
[3] 病原性細菌が、大腸菌(Escherichia coli)であることを特徴とする請求項 1又は 2記載 の家畜'家禽の下痢抑制剤。
[4] 大腸菌が、浮腫病を引き起こす大腸菌、又は腸管毒血症性大腸菌 (Enterotoxemic
Escherichia coli)であることを特徴とする請求項 3記載の家畜 ·家禽の下痢抑制剤。
[5] 病原性細菌が、クロストリディウム (Clostridium)属に属する微生物であることを特徴と する請求項 1又は 2記載の家畜,家禽の下痢抑制剤。
[6] 下痢因子が、コクシジゥム原虫であることを特徴とする請求項 1記載の家畜'家禽の 下痢抑制剤。
[7] 下痢が、腸過敏性下痢であることを特徴とする請求項 1記載の家畜 ·家禽の下痢抑 制剤。
[8] 死菌体が、加熱処理死菌体であることを特徴とする請求項 1一 7のいずれかに記載 の家畜'家禽の下痢抑制剤。
[9] ェンテロコッカス'フエカリス(Enterococcus faecalis) EC— 12 (FERM ABP— 10284
)の死菌体又はその処理物を有効成分として含有する組成物を、家畜'家禽に経口 投与することを特徴とする家畜 ·家禽の下痢抑制方法。
[10] 下痢因子が、病原性細菌によるものであることを特徴とする請求項 9記載の家畜-家 禽の下痢抑制方法。
[I I] 病原性細菌が、大腸菌(Escherichia coli)であることを特徴とする請求項 10記載の家 畜 ·家禽に経口投与することを特徴とする家畜 ·家禽の下痢抑制方法。
[12] 大腸菌が、浮腫病を引き起こす大腸菌、又は腸管毒血症性大腸菌 (Enterotoxemic Escherichia coli)であることを特徴とする請求項 11記載の家畜 ·家禽の下痢抑制方 法。
[13] 死菌体が、加熱処理死菌体であることを特徴とする請求項 9一 12のいずれかに記載 の家畜 ·家禽の下痢抑制方法。
[14] 授乳期の母豚及び離乳期前後の子豚に経口投与することを特徴とする請求項 9一 1
3の 、ずれかに記載の家畜 ·家禽の下痢抑制方法。
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