TW202132342A

TW202132342A - T細胞活性的調節劑

Info

Publication number: TW202132342A
Application number: TW109138814A
Authority: TW
Inventors: 運濤宋; 周海平; 建輝周; 怡丁; 秉慧司; 徐萌; 田娟; 廖川; 李闖; 張苗苗
Original assignee: 大陸商北京軒義醫藥科技有限公司
Priority date: 2019-11-26
Filing date: 2020-11-06
Publication date: 2021-09-01
Also published as: WO2021108109A1

Abstract

本發明提供了T細胞活性的調節劑、其製備方法和應用方法。在一些實施方案中，本文提供的調節劑包含新型PD-L1抗體。在其他實施方案中，本文提供的調節劑包含多功能多肽，所述多功能多肽包含CD80多肽的胞外結合結構域、疾病相關抗原結合結構域和Fc結構域。本發明還提供了包含此類調節劑的藥物組合物和用於治療癌症、感染性疾病和炎性疾病的方法。

Description

T細胞活性的調節劑

[相關申請的交叉引用]

本發明要求享有於2019年11月26日提交的美國臨時申請第62/940,805號的優先權權益，該臨時申請的內容通過引用全部結合於此以用於所有目的。 [電子提交的文字檔的说明]

本文以電子方式提交的文字檔的內容以引用的方式整體併入本文：序列表的電腦可讀形式副本（檔案名：CSPL_012_01TW_SeqList_ST25.txt，記錄日期：2020年11月3日，檔大小177千位元組）。

本發明係關於一種T細胞活性的調節劑、其製備方法、包含其的藥物組合物和其應用。

通過提供對某些刺激的適應性反應，T細胞淋巴細胞在細胞介導的免疫中起關鍵作用。T細胞活化依賴於至少兩種訊號傳導途徑的活化，一種是抗原特異性的，而另一種是抗原非特異性的。T細胞的抗原特異性活化由與特異性T細胞抗原受體相互作用的抗原遞呈細胞上的肽/主要組織相容性複合物介導。諸如CD80（B7-1）的B7相關分子在抗原遞呈細胞上與CD28和/或CTLA-4在T細胞上的結合提供了對於最佳免疫反應所必需的重要的抗原非特異性共刺激訊號。用CD80配體裝備患病細胞可以提供抗原非特異性共刺激訊號，這可以增強T細胞活化，類似於抗原遞呈細胞，由此將患病細胞變成抗原遞呈樣細胞。本領域需要獲得這種T細胞增強作用以及其他功能的組合物和方法，並在本文中描述。

本發明提供了T細胞活性的調節劑、其製備方法和應用方法。在一些實施方案中，本文提供的調節劑包含能夠阻斷PD-1/PD-L1相互作用、允許T細胞增殖和功能的新型PD-L1抗體。在其他實施方案中，本文提供的調節劑包含多功能多肽，所述多功能多肽包含CD80多肽的胞外結合結構域、疾病相關抗原結合結構域和Fc結構域，所述多功能多肽除其他功能外還能夠用CD80配體武裝患病細胞。本發明還提供包含此類調節劑的藥物組合物和用於治療癌症、感染性疾病和炎性疾病的方法。

在一個方面，本文提供多功能多肽，其包含：CD80胞外結構域；疾病相關抗原結合結構域；和Fc結構域。在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A所示的任何一種形式。在一些實施方案中，所述多功能多肽包含癌症相關抗原結合結構域、感染性疾病相關抗原結合結構域或炎性疾病相關抗原結合結構域。在一些實施方案中，疾病相關抗原結合結構域是PD-L1結合結構域。在其他實施方案中，疾病相關抗原結合結構域是Claudin 18.2結合結構域。

在相關方面，本文提供了包含本發明的多功能多肽的藥物組合物。本文還提供了編碼本發明的多功能多肽的多核苷酸；包含所述多核苷酸的載體；以及表達所述載體的細胞。

在另一方面，本文提供PD-L1抗體，其包含表1的CDR-L1、表2的CDR-L2、表3的CDR-L3、表4的CDR-H1、表5的CDR-H2和/或表6的CDR-H3的氨基酸序列。在一些實施方案中，抗體是抗原結合片段。在一些實施方案中，抗體是全長抗體。

在相關方面，本文提供了包含本發明的PD-L1抗體的藥物組合物。本文還提供了編碼本文提供的任一個PD-L1抗體的的多核苷酸，包含此類多核苷酸的載體和表達此類載體的細胞。

在另一方面，本文提供了包含本發明的PD-L1抗體的任何多功能多肽的試劑盒和製品。

在另一方面，本文提供了治療疾病或病症的方法，包含向其有需要的受試者施用治療有效量的本文提供的任一種PD-L1抗體、多功能多肽或藥物組合物。所述疾病或病症可選自癌症、感染性疾病或炎性疾病。

所有出版物、專利和專利申請，包括其中的任何圖式和附錄出於所有目的通過引用整體併入本文，其程度如同每個單獨的出版物、專利或專利申請、圖式或附錄被具體地和單獨地指示為出於所有目的通過引用整體併入本文。

雖然本文描述了本發明的各種實施方案，但是對於本領域的技術人員顯而易見的是，這些實施方案僅以示例的方式提供。在不脫離本發明的情況下，對在此描述的實施方案的各種修改和改變以及變化和替換對於本領域的技術人員將是顯而易見的。應當理解，在實踐本發明時可採用本文所述實施方案的各種替代方案。還應當理解，本發明的每個實施方案可以任選地與本文所述的與該實施方案一致的任何一個或多個其他實施方案組合。

在元素以清單形式（例如，以馬庫什組的形式）呈現的情況下，應理解，還公開了元素的每個可能的子組，並且可從列表或組移除任何一個或多個元素。

還應當理解，除非清楚地相反指示，否則在本文所描述或要求保護的包括多於一個動作的任何方法中，所述方法的動作的順序不一定限於所述方法的動作被列舉的順序，而是本發明涵蓋如此限制該順序的實施方案。

還應當理解，通常，在說明書或申請專利範圍中的實施方案被稱為包含一個或多個特徵的情況下，本發明還涵蓋由這樣的特徵組成或基本上由這樣的特徵組成的實施方案。

還應當理解，本發明的任何實施方案，例如，在先前技術中發現的任何實施方案，可以從申請專利範圍中明確地排除，而不管具體排除是否在說明書中列舉。

本文所包括的標題是為了參考並説明定位某些部分。標題不旨在限制在標題下的部分中描述的實施方案和概念的範圍，並且那些實施方案和概念可以在整個公開的其他部分中具有適用性。 [I.定義]

儘管以下術語被認為是本領域的普通技術人員所充分理解的，但是闡述以下定義是為了便於解釋本發明的主題。除非另外定義，否則本文使用的所有術語、符號和其他技術和科學術語或用辭旨在具有與所要求保護的主題所屬領域的普通技術人員通常所理解的相同的含義。在一些情況下，為了清楚和/或為了易於參考，在本文中定義具有通常理解的含義的術語，並且在本文中包括這樣的定義不應解釋為表示與本領域中通常理解的基本上不同。

本說明書中使用的術語定義如下，除非在特定情況下另外限制。如在說明書和所附申請專利範圍中所使用的，單數形式“一（a/an）”和“該”包括複數指示物，除非上下文另有明確規定。除非另外定義，否則本文使用的所有技術和科學術語、首字母縮略詞和縮寫詞具有與本發明所屬領域的普通技術人員通常理解的相同的含義。除非另外指出，否則化學和生物化學名稱的縮寫和符號是根據IUPAC-IUB命名法。除非另外指明，否則所有數值範圍包括定義該範圍的值以及其間的所有整數值。

術語“有效量”或“治療有效量”是指本發明的治療劑的量和/或濃度，其在離體（通過與來自患者的細胞接觸）或在體內（通過向患者施用）單獨（即作為單一療法）或與另外的治療劑組合施用時，例如，通過改善或消除疾病的症狀和/或病因，使疾病進展產生統計學上顯著的降低。有效量可以是緩解、減輕或緩解與疾病或病症相關的至少一種症狀或生物回應或作用，防止疾病或病症進展或改善患者的身體機能的量。在細胞療法的情況下，有效量是通過過繼性細胞療法向患者施用的有效劑量或細胞數目。在一些實施方案中，患者是哺乳動物，例如非人靈長類或人患者。

術語“個體”、“受試者”、“宿主”和“患者”在本文可互換使用，並且是指欲對其進行診斷、治療（treatment）或治療（therapy）的任何哺乳動物受試者。哺乳動物包括，例如，人，非人靈長類，齧齒類（例如，大鼠；小鼠），兔類動物（例如，兔子），有蹄類動物（例如，牛、綿羊、豬、馬、山羊等）等。

如本文在免疫反應（例如哺乳動物免疫反應）的上下文中使用的術語“調節（modulating/modulate）”是指由於施用本發明的多肽或抗體而發生的現有或潛在免疫反應的任何改變，諸如增加或減少。因此，其是指與在不施用時發生或存在的免疫反應相比，免疫反應的改變，諸如增加或減少。這樣的調節包括免疫細胞的免疫活性的度或程度的任何誘導、啟動、抑制或改變。免疫細胞包括B細胞、T細胞、NK（天然殺傷）細胞、NK T細胞、專職性抗原遞呈細胞（APC）、非專職性抗原遞呈細胞和炎性細胞（嗜中性粒細胞、巨噬細胞、嗜酸性粒細胞和嗜鹼性粒細胞）。調節包括給予現有免疫反應、發展中的免疫反應、潛在的免疫反應或誘導、調節、影響或反應免疫反應的能力的任何變化。調節包括作為免疫反應的一部分的免疫細胞中基因、蛋白和/或其他分子的表達和/或功能的任何改變。調節免疫反應或調節免疫活性包括例如以下：消除、缺失或隔離免疫細胞；誘導或產生能夠調節其他細胞（諸如自身反應性淋巴細胞，抗原遞呈細胞或炎性細胞）的功能能力的免疫細胞；在免疫細胞中誘導無反應狀態（即，無反應性）；增強或抑制免疫細胞的活性或功能，包括但不限於改變由這些細胞表達的蛋白質的模式。實施例包括某些類型分子（諸如細胞因子、趨化因子、生長因子、轉錄因子、激酶、共刺激分子）或其他細胞表面受體或這些調節事件的任何組合的產生和/或分泌改變。

本文可互換使用的術語“多核苷酸”和“核酸”是指任何長度的核苷酸（核糖核苷酸或去氧核糖核苷酸）的聚合形式。因此，該術語包括但不限於單鏈、雙鏈或多鏈DNA或RNA，基因組DNA，cDNA，DNA-RNA雜合體，或包含嘌呤和嘧啶鹼基或其他天然的、化學或生物化學修飾的、非天然的或衍生的核苷酸鹼基的聚合物。除非特別限定，該術語包括含有天然核苷酸的已知類似物的核酸，該核酸與天然核苷酸具有相似的結合特性，並以與天然存在的核苷酸相似的方式代謝。除非另外指明，否則特定核酸序列還隱含涵蓋其保守修飾的變體（例如，簡並密碼子取代）和互補核苷酸序列以及明確指明的序列（“參考序列”）。具體地，可以通過產生其中一個或多個選擇的（或全部）密碼子的第三位置被混合鹼基和/或去氧肌苷殘基取代的序列來實現簡並密碼子取代。術語核酸或多核苷酸包括由基因編碼的cDNA或mRNA。

術語“肽”、“多肽”和“蛋白質”在本文中可互換使用，並且是指任何長度的氨基酸的聚合形式，其可以包括編碼的和未編碼的氨基酸，化學或生化修飾的或衍生的氨基酸，以及具有修飾的肽骨架的多肽。該術語包括多肽的翻譯後修飾，例如糖基化、乙醯化、唾液酸化、磷酸化等。該術語還包括其中包括一種或多種氨基酸類似物或非規範或非天然氨基酸的分子，其可以合成或使用已知的蛋白質工程技術重組表達。另外，蛋白質可被衍生化。

多核苷酸或多肽與另一多核苷酸或多肽具有一定百分比的序列同一性，這意味著在比對時，在比較兩個序列時，鹼基或氨基酸的百分比是相同的，並且處於相同的相對位置。可以以許多不同的方式確定序列同一性。為了確定序列同一性，可以使用各種方便的方法和電腦程式（例如BLAST、T-COFFEE、MUSCLE、MAFFT等）對序列進行比對，所述方法和電腦程式可在包括ncbi.nlm.nili.gov/BLAST、ebi.ac.uk/Tools/msa/tcoffee/、ebi.ac.uk/Tools/msa/muscle/、mafft.cbrc.jp/alignment/software/的網站上獲得。參見，例如，Altschul et al.(1990), J. Mol.Bioi.215:403-10.

“T細胞”包括表達CD3的所有類型的免疫細胞，包括輔助T細胞（例如CD4+細胞）、細胞毒性T細胞（CD8+細胞）、T調節細胞（Treg）和NK-T細胞。

本文所用的術語“治療（treatment/treating）”等通常是指獲得所需的藥理學和/或生理學效果。就完全或部分預防疾病或其症狀而言，該效果可以是預防性的，和/或對於疾病的部分或完全治癒和/或歸因於該疾病的副作用，該效果可以是治療性的。

如本文所用的“治療”涵蓋哺乳動物中的疾病或症狀的任何治療，並且包括：（a）預防疾病或症狀在可能傾向於獲得該疾病或症狀但尚未被診斷為患有該疾病或症狀的受試者中發生；（b）抑制疾病或症狀，即，阻止其發展；或（c）減輕疾病，即致使疾病消退。治療劑可以在疾病或損傷發作之前、期間或之後施用。治療進行中的疾病的，其中治療穩定或減少患者的不期望的臨床症狀，是特別令人感興趣的。這種治療最好在受影響組織中的功能完全喪失之前進行。該受試者治療最好在該疾病的症狀階段期間施用，並且在一些情況下在該疾病的症狀階段之後施用。“治療（Treating/treatment）”或“療法（therapy）”還意指急性或慢性疾病或病症中症狀的嚴重程度降低，或例如在復發或緩解性自身免疫性疾病過程的情況下復發率降低，或在自身免疫性疾病的炎性方面的情況下炎症降低。如本文在癌症的上下文中使用的，術語癌症的“治療”或“抑制（inhibit/inhibiting/inhibition）”是指以下至少一項：腫瘤生長速率的統計學上的顯著降低，腫瘤生長的停止，通過規範標準（諸如但不限於實體瘤反應評估標準（RECIST））測量的腫瘤大小、品質、代謝活性或腫瘤體積的減少，或無進展生存期（PFS）或總體生存期（OS）的統計學上的顯著增加。如在本發明的上下文中使用的疾病或病症的“預防（preventing/prevention）”或“預防（prophylaxis）”是指單獨或與另一種化合物組合施用本發明的免疫調節多肽或工程化細胞，防止疾病或病症或疾病或病症的一些或全部症狀的發生或發作，或降低疾病或病症發作的可能性。

關於變體CD80使用的術語“變體”（也是“突變體”、“突變的”或“修飾的”）是指CD80，諸如通過人為干預產生的哺乳動物（例如，人或鼠）CD80，或者是天然存在的。變體CD80是相對於未修飾的或野生型CD80具有改變的氨基酸序列的多肽。變體CD80是一種多肽，該多肽與野生型CD80同種型序列的差異在於一個或多個氨基酸取代、缺失、添加或其組合。變體CD80可包含至少一個親和力修飾的結構域，其中一個或多個氨基酸差異發生在IgSF結構域（例如IgC結構域和/或IgV結構域）中。變體CD80可以含有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30或更多個氨基酸差異，諸如氨基酸取代。變體CD80多肽通常顯示與野生型或未修飾的CD80胞外結構域（SEQ ID NO：34）至少50%、60%、70%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或更多的序列同一性。非天然存在的氨基酸以及天然存在的氨基酸包括在取代或添加的範圍內。變體CD80不限於任何特定的製備方法，包括例如從頭化學合成、從頭重組DNA技術或其組合。本發明的變體CD80特異性地結合哺乳動物物種的CD28、PD-L1或CTLA-4中的至少一種或多種。在一些實施方案中，與野生型CD80蛋白相比，改變的氨基酸序列導致與CD28、PD-L1或CTLA-4的結合親和力或活動性改變（即增加或降低）。結合親和力或活動性的增加或降低可以使用熟知的結合測定，諸如流式細胞術測定。Larsen et al., American Journal of Transplantation, Vol 5: 443-453 (2005).還參見Linsley et al., Immunity, 1: 7930801 (1994)或ELISA。變體CD80對CD28、PD-L1或CTLA-4的結合親和力或活動性增加至比野生型CD80對照值高至少5%的值，並且在一些實施方案中，比野生型CD80對照值高至少10%、15%、20%、30%、40%、50%、100%。CD80對CD28、PD-L1或CTLA-4的結合親和力或活動性的降低至不大於野生型CD80對照值的95%，並且在一些實施方案中不大於野生型CD80對照值的80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、10%、5%或沒有可檢測的結合親和力或活動性。變體CD80在一級氨基酸序列中通過氨基酸殘基的取代、添加或缺失而改變。在變體CD80的上下文中的術語“變體”不應被解釋為對產生變體CD80的任何特定起始組合物或方法施加任何條件。變體CD80可以例如從野生型哺乳動物CD80序列信息開始產生，然後在矽片中模擬以結合CD28、PD-L1或CTLA-4，並重組或化學合成以產生本發明的變體CD80。在另一個實施方案中，變體CD80可以通過野生型CD80的定點誘變產生。因此，變體CD80表示組合物並且不一定是通過任何給定方法生產的產物。可以使用多種技術，包括重組方法、化學合成或其組合。

在進一步描述本發明之前，應理解，本發明不限於所描述的特定實施例，因為其當然可變化。還應當理解的是，本文使用的術語僅用於描述特定實施方案的目的，並且不意圖是限制性的，因為本發明的範圍將僅由所附申請專利範圍限制。

在提供值的範圍的情況下，應理解，除非上下文另外明確規定，否則在所述範圍的上限與下限之間的每個中間值到下限單位的十分之一和在所述範圍內的任何其他陳述值或中間值涵蓋在本發明內。這些較小範圍的上限和下限可以獨立地包括在較小範圍內，並且也涵蓋在本發明內容內，服從在所述範圍內的任何具體排除的限制。其中所述範圍包括所述限制中的一者或兩者，排除那些所包括的限制中的一者或兩者的範圍也包括在本發明中。

除非另外定義，否則本文使用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬領域的普通技術人員通常理解的相同的含義。儘管與本文所述的那些類似或等同的任何方法和材料也可用於本發明的實踐或測試，但現在描述優選的方法和材料。本文提及的所有出版物通過引用併入本文以公開和描述與出版物所引用的方法和/或材料相關的方法和/或材料。

如本文和所附申請專利範圍中所使用的，單數形式“一（a/an）”和“該”包括複數指示物，除非上下文另有明確規定。因此，例如，提及“多聚體多肽”包括多個這樣的多聚體多肽，並且提及“調節結構域”包括提及本領域技術人員已知的一個或多個調節結構域及其等同物，等等。還應當注意，申請專利範圍可以被撰寫為排除任何可選要素。同樣地，該陳述旨在作為與申請專利範圍要素的敘述結合使用諸如“唯一”，“僅”等排他性術語的先行基礎，或使用“負”限制。

應理解，為清楚起見，在分開的實施方案的上下文中描述的本發明的某些特徵也可在單個實施方案中組合提供。相反，為簡潔起見在單個實施方案的上下文中描述的本發明的各種特徵也可單獨提供或以任何合適的子組合提供。與本發明相關的實施方案的所有組合都被本發明具體地涵蓋並且在本文中公開，就像每個和每個組合被單獨和明確地公開一樣。此外，各種實施方案及其要素的所有子組合也被本發明具體地涵蓋並且在本文中公開，就像每個這樣的子組合在本文中單獨地和明確地公開一樣。

提供本文討論的出版物僅僅是為了它們在本申請的申請日之前的公開內容。本文中的任何內容均不應解釋為承認本發明由於先前的公開而無權早於該公開。此外，所提供的公佈日期可能與實際公佈日期不同，這可能需要獨立確認。 [II.PD-L1抗體]

本文提供了PD-L1抗體。這些抗體可用於多種治療和診斷方法。PD-L1抗體可單獨使用，或與其他藥劑組合使用以治療以異常PD-L1表達或活性為特徵的疾病或病症，包括但不限於癌症、感染性疾病和炎性疾病。

在一些實施方案中，PD-L1抗體序列作為本發明的多功能多肽的一部分被包括，其中多功能多肽包含CD80胞外結構域（例如野生型CD80胞外結構域，例如SEQ ID NO：34，或其變體），疾病相關抗原結合結構域；和Fc結構域。在本文中，PD-L1抗體可互換地稱為PD-L1抗原結合結構域，或簡稱為PD-L1結合結構域。

如本文所用，術語“抗體”包括全長抗體；抗體片段（包括但不限於Fab、Fab′、F(ab’)2、Fv、雙抗體、scFv、scFv-Fcs、單結構域抗體、單鏈抗體、單重鏈抗體和單輕鏈抗體），條件是它們表現出期望的生物活性（例如表位結合）；單株抗體；多株抗體；單特異性抗體；多特異性抗體（例如，雙特異性抗體）；人源化抗體；嵌合抗體；共價修飾的抗體和抗體綴合物（例如抗體-藥物綴合物或綴合至可檢測標記物的抗體）。

抗體可以衍生自任何物種。在示例性實施方案中，抗體是人抗體。在其他實施方案中，抗體是小鼠抗體。

本發明的全長PD-L1抗體可具有人Fc，即IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。

本發明的全長PD-L1抗體可以具有小鼠Fc，即IgG1、IgG2a、IgG2b或IgG3。

關於“PD-L1”可以涉及任何物種的PD-L1蛋白，並且具體地涉及人PD-L1，並且更具體地涉及包含以下表示的SEQ ID NO：1的氨基酸序列的蛋白。

人PD-L1（PD1L1_人：UniProKB – Q9NZQ7） MRIFAVFIFM TYWHLLNAFT VTVPKDLYVV EYGSNMTIEC KFPVEKQLDL AALIVYWEME DKNIIQFVHG EEDLKVQHSS YRQRARLLKD QLSLGNAALQ ITDVKLQDAG VYRCMISYGG ADYKRITVKV NAPYNKINQR ILVVDPVTSE HELTCQAEGY PKAEVIWTSS DHQVLSGKTT TTNSKREEKL FNVTSTLRIN TTTNEIFYCT FRRLDPEENH TAELVIPELP LAHPPNERTH LVILGAILLC LGVALTFIFR LRKGRMMDVK KCGIQDTNSK KQSDTHLEET （SEQ ID NO：1）

表1提供了本發明的PD-L1抗體的示例性CDR-L1序列。 [表1]

CDR-L1

SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）

SQEIHNSLNWY （SEQ ID NO：54）

表2提供了本發明的PD-L1抗體的示例性CDR-L2序列。 [表2]

CDR-L2

LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）

LIYSASFLYTGI （SEQ ID NO：4）

表3提供了本發明的PD-L1抗體的示例性CDR-L3序列。 [表3]

CDR-L3

QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）

QQRSNWPATF （SEQ ID NO：6）

表4提供了本發明的PD-L1抗體的示例性CDR-H1序列。 [表4]

CDR-H1

SDAWIH （SEQ ID NO：7）

SDSWIH （SEQ ID NO：8）

ADSWIH （SEQ ID NO：9）

SSYAIS （SEQ ID NO：10）

ADAWIH （SEQ ID NO：53）

SEAWIH （SEQ ID NO：55）

表5提供了本發明的PD-L1抗體的示例性CDR-H2序列。 [表5]

CDR-H2

VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）

VAWISPYGGITFYADTV （SEQ ID NO：12）

表6提供了本發明的PD-L1抗體的示例性CDR-H3序列。 [表6]

CDR-H3

TKGQLGA （SEQ ID NO：13）

RRHWPTT （SEQ ID NO：14）

RRDNIGA （SEQ ID NO：15）

RIKLGTVSSV （SEQ ID NO：16）

RIKLASVTTV （SEQ ID NO：17）

RRHWPGG （SEQ ID NO：56）

在一些實施方案中，本文提供了PD-L1抗體，其包含表1的CDR-L1、表2的CDR-L2、表3的CDR-L3、表4的CDR-H1、表5的CDR-H2和/或表6的CDR-H3的氨基酸序列。

表7提供了本發明的十一種PD-L1抗體的輕鏈CDR序列。在一些實施方案中，本文提供了PD-L1抗體，其包含輕鏈的氨基酸序列，所述輕鏈包含表7中所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3組合中的任一個的序列。 [表7]

	CDR-L1	CDR-L2	CDR-L3
輕鏈 1	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）
輕鏈 2	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）
輕鏈 3	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）
輕鏈 4	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）
輕鏈 5	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）
輕鏈 6	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYSASFLYTGI （SEQ ID NO：4）	QQRSNWPATF （SEQ ID NO：6）
輕鏈 7	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYSASFLYTGI （SEQ ID NO：4）	QQRSNWPATF （SEQ ID NO：6）
輕鏈 8	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYSASFLYTGI （SEQ ID NO：4）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）
輕鏈 9	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQRSNWPATF （SEQ ID NO：6）
輕鏈 10	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）
輕鏈 11	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYSASFLYTGI （SEQ ID NO：4）	QQRSNWPATF （SEQ ID NO：6）
輕鏈 12	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）
輕鏈 13	SQEIHNSLNWY （SEQ ID NO：54）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）
輕鏈 14	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）
輕鏈 15	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）
輕鏈 16	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）

表8提供了本發明的十一種PD-L1抗體的重鏈CDR序列。

在一些實施方案中，本文提供了PD-L1抗體，其包含重鏈的氨基酸序列，所述重鏈包含表8中所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3組合中的任一個的序列。 [表8]

	CDR-H1	CDR-H2	CDR-H3
重鏈 1	SDAWIH （SEQ ID NO：7）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	TKGQLGA （SEQ ID NO：13）
重鏈 2	SDSWIH （SEQ ID NO：8）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	TKGQLGA （SEQ ID NO：13）
重鏈 3	ADSWIH （SEQ ID NO：9）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	TKGQLGA （SEQ ID NO：13）
重鏈 4	SSYAIS （SEQ ID NO：10）	VAWISPYGGITFYADTV （SEQ ID NO：12）	RRHWPTT （SEQ ID NO：14）
重鏈 5	SSYAIS （SEQ ID NO：10）	VAWISPYGGITFYADTV （SEQ ID NO：12）	RRDNIGA （SEQ ID NO：15）
重鏈 6	SDAWIH （SEQ ID NO：7）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	RRHWPTT （SEQ ID NO：14）
重鏈 7	SSYAIS （SEQ ID NO：10）	VAWISPYGGITFYADTV （SEQ ID NO：12）	TKGQLGA （SEQ ID NO：13）
重鏈 8	SDAWIH （SEQ ID NO：7）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	RIKLGTVSSV （SEQ ID NO：16）
重鏈 9	SSYAIS （SEQ ID NO：10）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	RIKLASVTTV （SEQ ID NO：17）
重鏈 10	SSYAIS （SEQ ID NO：10）	VAWISPYGGITFYADTV （SEQ ID NO：12）	RIKLGTVSSV （SEQ ID NO：16）
重鏈 11	SDAWIH （SEQ ID NO：7）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	RIKLASVTTV （SEQ ID NO：17）
重鏈 12	ADAWIH （SEQ ID NO：53）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	TKGQLGA （SEQ ID NO：13）
重鏈 13	ADAWIH （SEQ ID NO：53）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	TKGQLGA （SEQ ID NO：13）
重鏈 14	SEAWIH （SEQ ID NO：55）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	TKGQLGA （SEQ ID NO：13）
重鏈 15	SDSWIH （SEQ ID NO：8）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	RRHWPGG （SEQ ID NO：56）
重鏈 16	SDSWIH （SEQ ID NO：8）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	RRDNIGA （SEQ ID NO：15）

表9提供了本發明的十一種PD-L1抗體的重鏈和輕鏈CDR序列。

在一些實施方案中，本文提供了PD-L1抗體，其包含表9中所示的CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3組合中的任一個的氨基酸序列。 [表9]

		CDR-L1	CDR-L2	CDR-L3	CDR-H1	CDR-H2	CDR-H3
Seq1	PD-2	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）	SDAWIH （SEQ ID NO：7）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	TKGQLGA （SEQ ID NO：13）
Seq2	PD-10	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）	SDSWIH （SEQ ID NO：8）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	TKGQLGA （SEQ ID NO：13）
Seq3	PD-4	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）	ADSWIH （SEQ ID NO：9）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	TKGQLGA （SEQ ID NO：13）
Seq4	PD-11	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）	SSYAIS （SEQ ID NO：10）	VAWISPYGGITFYADTV （SEQ ID NO：12）	RRHWPTT （SEQ ID NO：14）
Seq5	PD-12	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）	SSYAIS （SEQ ID NO：10）	VAWISPYGGITFYADTV （SEQ ID NO：12）	RRDNIGA （SEQ ID NO：15）
Seq6	PD-13	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYSASFLYTGI （SEQ ID NO：4）	QQRSNWPATF （SEQ ID NO：6）	SDAWIH （SEQ ID NO：7）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	RRHWPTT （SEQ ID NO：14）
Seq7	PD-14	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYSASFLYTGI （SEQ ID NO：4）	QQRSNWPATF （SEQ ID NO：6）	SSYAIS （SEQ ID NO：10）	VAWISPYGGITFYADTV （SEQ ID NO：12）	TKGQLGA （SEQ ID NO：13）
Seq8	PD-15	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYSASFLYTGI （SEQ ID NO：4）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）	SDAWIH （SEQ ID NO：7）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	RIKLGTVSSV （SEQ ID NO：16）
Seq9	PD-16	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQRSNWPATF （SEQ ID NO：6）	SSYAIS （SEQ ID NO：10）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	RIKLASVTTV （SEQ ID NO：17）
Seq10	PD-17	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）	SSYAIS （SEQ ID NO：10）	VAWISPYGGITFYADTV （SEQ ID NO：12）	RIKLGTVSSV （SEQ ID NO：16）
Seq11	PD-18	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYSASFLYTGI （SEQ ID NO：4）	QQRSNWPATF （SEQ ID NO：6）	SDAWIH （SEQ ID NO：7）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	RIKLASVTTV （SEQ ID NO：17）
Seq12	PD-3	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）	ADAWIH （SEQ ID NO：53）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	TKGQLGA （SEQ ID NO：13）
Seq13	PD-5	SQEIHNSLNWY （SEQ ID NO：54）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）	ADAWIH （SEQ ID NO：53）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	TKGQLGA （SEQ ID NO：13）
Seq14	PD-6	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）	SEAWIH （SEQ ID NO：55）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	TKGQLGA （SEQ ID NO：13）
Seq15	PD-7	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）	SDSWIH （SEQ ID NO：8）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	RRHWPGG （SEQ ID NO：56）
Seq16	PD-8	SQNIHNSLNWY （SEQ ID NO：2）	LIYGASSLESGV （SEQ ID NO：3）	QQERRVPWTF （SEQ ID NO：5）	SDSWIH （SEQ ID NO：8）	VGWISPYGGSTYYSDSI （SEQ ID NO：11）	RRDNIGA （SEQ ID NO：15）

表10提供了本發明的PD-L1抗體的示例性輕鏈可變結構域（VL）的序列（示例性CDR序列在下面加底線）。 [表10]

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIHNSLNWY QQKPGKAPKLLIYGASSLESGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQERRVPWTF GQGTKVEIK（SEQ ID NO：18）

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIHNSLNWY QQKPGKAPKLLIYSASFLYTGI PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRSNWPATF GQGTKVEIK（SEQ ID NO：19）

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIHNSLNWY QQKPGKAPKLLIYSASFLYTGI PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQERRVPWTF GQGTKVEIK（SEQ ID NO：20）

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQNIHNSLNWY QQKPGKAPKLLIYGASSLESGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQRSNWPATF GQGTKVEIK （SEQ ID NO：21）

DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQEIHNSLNWY QQKPGKAPKLLIYGASSLESGV PSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQERRVPWTF GQGTKVEIK（SEQ ID NO：57）

表11提供了本發明的PD-L1抗體的示例性重鏈可變結構域（VH）的序列。 [表11]

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDAWIH WVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYSDSI KGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATKGQLGA FDYWGQGTLVTVSS （SEQ ID NO：23）

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIH WVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYSDSI KGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATKGQLGA FDYWGQGTLVTVSS （SEQ ID NO：24）

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFADSWIH WVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYSDSI KGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATKGQLGA FDYWGQGTLVTVSS （SEQ ID NO：25）

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAIS WVRQAPGKGLEWVAWISPYGGITFYADTV KGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPTT FDYWGQGTLVTVSS（SEQ ID NO：26）

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAIS WVRQAPGKGLEWVAWISPYGGITFYADTV KGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRDNIGA FDYWGQGTLVTVSS （SEQ ID NO：27）

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDAWIH WVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYSDSI KGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPTT FDYWGQGTLVTVSS （SEQ ID NO：28）

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAIS WVRQAPGKGLEWVAWISPYGGITFYADTV KGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATKGQLGA FDYWGQGTLVTVSS （SEQ ID NO：29）

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDAWIH WVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYSDSI KGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVSSV FDYWGQGTLVTVSS （SEQ ID NO：30）

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAIS WVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYSDSI KGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLASVTTV FDYWGQGTLVTVSS （SEQ ID NO：31）

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYAIS WVRQAPGKGLEWVAWISPYGGITFYADTV KGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVSSV FDYWGQGTLVTVSS （SEQ ID NO：32）

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDAWIH WVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYSDSI KGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLASVTTV FDYWGQGTLVTVSS （SEQ ID NO：33）

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFADAWIH WVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYSDSI KGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATKGQLGA FDYWGQGTLVTVSS （SEQ ID NO：58）

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSEAWIH WVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYSDSI KGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCATKGQLGA FDYWGQGTLVTVSS （SEQ ID NO：59）

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIH WVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYSDSI KGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGG FDYWGQGTLVTVSS （SEQ ID NO：60）

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIH WVRQAPGKGLEWVGWISPYGGSTYYSDSI KGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRDNIGA FDYWGQGTLVTVSS （SEQ ID NO：61）

在一些實施方案中，本文提供了包含VL結構域的PD-L1抗體，所述VL結構域包含SEQ ID NO：18-21和SEQ ID NO：57中任一個所示的氨基酸序列或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列。

在一些實施方案中，本文提供了包含VH結構域的PD-L1抗體，所述VH結構域包含SEQ ID NO：23-33中任一個所示的氨基酸序列，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列。

在一些實施方案中，本文提供了包含VL結構域和VH結構域的PD-L1抗體，所述VL結構域包含SEQ ID NO：18-21和SEQ ID NO：57中任一個所示的氨基酸序列，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%同一性的序列，所述VH結構域包含SEQ ID NO：23-33中任一個所示的氨基酸序列，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列。

在一些實施方案中，本文提供了PD-L1抗體，其包含： (a).VL結構域，其包含SEQ ID NO：18，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列；和/或VL結構域，其包含SEQ ID NO：23，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列； (b).VL結構域，其包含SEQ ID NO：18，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列；和/或VL結構域，其包含SEQ ID NO：24，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列； (c).VL結構域，其包含SEQ ID NO：18，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列；和/或VL結構域，其包含SEQ ID NO：25，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列； (d).包含SEQ ID NO：18的VL結構域；和/或VL結構域，其包含SEQ ID NO：26，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列； (e).VL結構域，其包含SEQ ID NO：18，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列；和/或VL結構域，其包含SEQ ID NO：27，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列； (f).VL結構域，其包含SEQ ID NO：19，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列；和/或VL結構域，其包含SEQ ID NO：28，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列； (g).VL結構域，其包含SEQ ID NO：19，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列；和/或VL結構域，其包含SEQ ID NO：29，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列； (h).VL結構域，其包含SEQ ID NO：20，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列；和/或VL結構域，其包含SEQ ID NO：30，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列； (i).VL結構域，其包含SEQ ID NO：21，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列；和/或VL結構域，其包含SEQ ID NO：31，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列； (j).VL結構域，其包含SEQ ID NO：57，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列；和/或VL結構域，其包含SEQ ID NO：32，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列； (k).VL結構域，其包含SEQ ID NO：18，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列；和/或VL結構域，其包含SEQ ID NO：33，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列； (l).VL結構域，其包含SEQ ID NO：18，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列；和/或VL結構域，其包含SEQ ID NO：58，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列； (m).VL結構域，其包含SEQ ID NO：57，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列；和/或VL結構域，其包含SEQ ID NO：58，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列； (n).VL結構域，其包含SEQ ID NO：18，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列；和/或VL結構域，其包含SEQ ID NO：59，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列； (o).VL結構域，其包含SEQ ID NO：18，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列；和/或VL結構域，其包含SEQ ID NO：60，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列； (p).VL結構域，其包含SEQ ID NO：18，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列；和/或VL結構域，其包含SEQ ID NO：61，或包含與其至少80%、至少85%、至少90%、至少95%或至少99%同一性的序列；

本文還提供了編碼本文提供的PD-L1抗體的任一個的多核苷酸，包含此類多核苷酸的載體和表達此類載體的細胞。

本文還提供了藥物組合物，其包含本文提供的任何一種PD-L1抗體，任選地具有藥學上可接受的賦形劑。

本文還提供了治療有需要的受試者的疾病或病症的方法，包含向受試者施用本發明的任何一種PD-L1抗體或包含此類抗體的藥物組合物。所述疾病或病症可以是癌症、感染性疾病或炎性疾病。 [III.多功能多肽]

本文提供了包含以下組分的多功能多肽，其組分在本文獨立地更詳細地描述。 (a).CD80胞外結構域； (b).疾病相關抗原結合結構域；和 (c).Fc結構域（指Fc二聚體）。

這些組分連接在一起形成多功能多肽。如在此更詳細描述的，並且參考圖1A中的示例性形式，組分可以以各種順序連接。在一些實施方案中，組分通過使用接頭連接，在其他實施方案中，組分融合在一起。技術人員將理解多肽組分的形式化方式。

本文還提供了編碼本發明的多功能多肽的多核苷酸；包含所述多核苷酸的載體；以及表達所述載體的細胞。

可以例如通過糖基化、唾液酸化、乙醯化、磷酸化等修飾本發明的多功能多肽。因此，在示例性實施方案中，多功能多肽的唾液酸含量可以變化-在這樣的實施方案中，CD80胞外結構域、疾病相關抗原結合結構域和Fc結構域中的任何一個或多個可以被唾液酸化。

本文還提供了藥物組合物，其包含本發明的多特異性多肽，任選地具有藥學上可接受的賦形劑。 [A.CD80胞外結構域]

本發明的多功能多肽包含CD80胞外結構域，其中CD80胞外結構域包含與SEQ ID NO：34具有至少80%、85%、90%、95%或100%氨基酸序列同一性的氨基酸序列，CD80的人胞外結構域（底線氨基酸殘基是在本發明的CD80胞外結構域變體中可以被替代的示例性殘基）。

人CD80（UniProtKB – P33681） VIHVTKEVKE VATLSCGHNV SVEELAQTRI YWQKEKKMVL TMMSGDMNIW PEYKNRTIFD ITNNLSIVIL ALRPSDEGTY ECVVLKYEKD AFKREHLAEV TLSVKADFPT PSISDFEIPT SNIRRIICST S GGFPEPHL S WLENGEELNA INTTVS QDPE TELYAV SSKL DFNMTTNHSF MCLIKYGHLR VNQTFNWNTT KQEHFPDN（SEQ ID NO: 34）

小鼠CD80 VDEQLSKSVK DKVLLPCRYN SPHEDESEDR IYWQKHDKVV LSVIAGKLKV WPEYKNRTLY DNTTYSLIIL GLVLSDRGTY SCVVQKKERG TYEVKHLALV KLSIKADFST PNITESGNPS ADTKRITCFA SGGFPKPRFS WLENGRELPG INTTISQDPE SELYTISSQL DFNTTRNHTI KCLIKYGDAH VSEDFTWEKP PEDPPDSKN (SEQ ID NO: 37)

在一些實施方案中，CD80胞外結構域在SEQ ID NO：34的位置130、131、139、155、156、165或166或SEQ ID NO：37中的相應位置具有一個或多個氨基酸取代修飾。

在一些實施方案中，CD80胞外結構域在SEQ ID NO：34的位置130具有至少一個取代修飾，並且在SEQ ID NO：34的位置130的氨基酸取代修飾是T130A。

在一些實施方案中，CD80胞外結構域在SEQ ID NO：34的位置131處具有至少一個取代修飾，並且在SEQ ID NO：34的位置131處的氨基酸取代修飾是S131A、S131V、S131I、S131F、S131R、S131E、S131D或S131Q。

在一些實施方案中，CD80胞外結構域在SEQ ID NO：34的位置139具有至少一個取代修飾，並且在SEQ ID NO：34的位置139的氨基酸取代修飾是L139V。

在一些實施方案中，CD80胞外結構域在SEQ ID NO：34的位置155具有至少一個取代修飾，並且在SEQ ID NO：34的位置155的氨基酸取代修飾是V155A、V155I或V155T。

在一些實施例中，CD80胞外結構域在SEQ ID NO：34的位置156處具有至少一個取代修飾。

在一些實施方案中，CD80胞外結構域在SEQ ID NO：34的位置165處具有至少一個取代修飾，並且在SEQ ID NO：34的位置165處的氨基酸取代修飾是A165S、A165V、A165I、A165F、A165R、A165E、A165D或A165Q。

在一些實施方案中，CD80胞外結構域在SEQ ID NO：34的位置166具有至少一個取代修飾，並且在SEQ ID NO：34的位置166的氨基酸取代修飾是V166A、V166L或V166T。

在一些實施方案中，CD80胞外結構域被唾液酸化。 [B. 疾病相關抗原結合結構域]

本發明的多功能多肽包含結合疾病相關抗原的疾病相關抗原結合結構域。在一些實施方案中，不受任何理論或機制的約束，此類疾病相關抗原結合結構域能夠通過經典抗原-抗體結合相互作用來與患病細胞上的疾病相關抗原結合。不受任何理論或機制的約束，這可允許多功能多肽經由疾病相關抗原結合結構域與患病細胞的結合而使表達疾病相關抗原（例如癌症特異性抗原）的患病細胞武裝具有CD80胞外結構域（CD80配體）。現在裝備有CD80配體的患病細胞可用於結合T細胞，在其上賦予共刺激訊號。CD80配體可用於結合T細胞（T淋巴細胞或T調節性細胞）上的任何一種或多種其關聯結合配偶體，CD28、PD-L1或CTLA-4。在其他實施方案中，疾病相關抗原可以是可溶性抗原。

因此，疾病相關抗原可以是在諸如癌症、感染性疾病或炎性疾病的疾病中上調或過表達的任何抗原。在一些實施方案中，所述多功能多肽包含癌症相關抗原結合結構域。在一些實施方案中，所述多功能多肽包含感染性疾病相關抗原結合結構域。在一些實施方案中，所述多功能多肽包含炎性疾病相關抗原結合結構域。在一些實施方案中，疾病相關抗原結合結構域是PD-L1結合結構域。在其他實施方案中，疾病相關抗原結合結構域是Claudin 18.2結合結構域。

在一些實施方案中，疾病相關抗原結合結構域是PD-L1結合結構域。

在一些實施方案中，PD-L1結合結構域包含： (d).表1的CDR-L1、表2的CDR-L2、表3的CDR-L3、表4的CDR-H1、表5的CDR-H2和/或表6的CDR-H3的氨基酸序列； (e).輕鏈的氨基酸序列，其包含表7中所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3組合中的任一個的序列； (f).重鏈的氨基酸序列，其包含表8中所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3組合中的任一個的序列； (g).表9中所示的CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3組合中的任一個的氨基酸序列； (h).VL結構域，其包含SEQ ID NO：18-21和SEQ ID NO：57中任一個所示的氨基酸序列或包含與其至少80%同一性的序列； (i).VH結構域，其包含SEQ ID NO：23-33和SEQ ID NO：58-61中任一個所示的氨基酸序列或包含與其至少80%同一性的序列；或 (j).VL結構域和VH結構域，所述VL結構域包含SEQ ID NO：18-21和SEQ ID NO：57中任一個所示的氨基酸序列，或包含與其至少80%同一性的序列，所述VH結構域包含SEQ ID NO：23-33和SEQ ID NO：58-61中任一個所示的氨基酸序列，或包含與其至少80%同一性的序列。

在一些實施方案中，PD-L1結合結構域包含阿特朱單抗（Atezolizumab）、Avelumab或Durvalumab的抗原結合序列。

Atezolizumab輕鏈： DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIK（SEQ ID NO：35） Atezolizumab重鏈： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS（SEQ ID NO：36）

Avelumab輕鏈： QSALTQPASVSGSPGQSITISCTGTSSDVGGYNYVSWYQQHPGKAPKLMIYDVSNRPSGVSNRFSGSKSGNTASLTISGLQAEDEADYYCSSYTSSSTRVFGTGTKVTVL（SEQ ID NO：38） Avelumab重鏈： EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYIMMWVRQAPGKGLEWVSSIYPSGGITFYADTVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARIKLGTVTTVDYWGQGTLVTVSS（SEQ ID NO：39）

Durvalumab輕鏈： EIVLTQSPGTLSLSPGERATLSCRASQRVSSSYLAWYQQKPGQAPRLLIYDASSRATGIPDRFSGSGSGTDFTLTISRLEPEDFAVYYCQQYGSLPWTFGQGTKVEIK （SEQ ID NO：40） Durvalumab重鏈： EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSRYWMSWVRQAPGKGLEWVANIKQDGSEKYYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCAREGGWFGELAFDYWGQGTLVTVSS（SEQ ID NO：41）

在一些實施方案中，疾病相關抗原結合結構域是Claudin-18.2結合結構域。

在一些實施方案中，Claudin-18.2結合結構域的序列來自WO 2019/174617，其公開內容通過引用整體併入本文。

在一些實施方案中，Claudin-18.2結合結構域的序列來自EP1997832，其公開內容通過引用整體併入本文。

在一些實施方案中，Claudin-18.2結合結構域的序列來自EP3483182，其公開內容通過引用整體併入本文。

在一些實施方案中，Claudin-18.2結合結構域的序列來自WO2019173420，其公開內容通過引用整體併入本文。

在此列出了本發明的示例性非限制性Claudin-18.2結合結構域（和對其有貢獻的序列）。對於下面列出的每個VH和VL，CDR用粗體和底線表示。因此，本發明的Claudin-18.2結合結構域可以包含以下列出的CDR鏈中的任何一個或多個。

CLDN 18.2 Ab1: 10-K12-A（小鼠Ab） VL： DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLT WYQQKPGQPPKLLIYWASTRES GVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAIYYCQNDYFYPLT FGAGTKLELK（SEQ ID NO：42） VH： EVQLVESGGGLVKPGGSRKLSCAASGFTFSDYGMF WVRQAPEKGLEWVGYISSGSSNIYYADTVKG RFTISRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCARIARGNAMDY WGQGTSVTVSS （SEQ ID NO：43） CLDN 18.2 Ab3: 1-M-5A（小鼠Ab） VL： DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLT WYQQKPGQPPKLLIYWASTRES GVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNNYFYPFT FGSGTKLEIK （SEQ ID NO：44） VH： EVQLVESGGALVKSGGSLRLSCAASGFTFSNNAMS WIRQTPEKRLEWVATIIIGGTYTYYPDSVKG RFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAFYYCARQVYGNSFAY WGQGTLVSVSA （SEQ ID NO：45） CLDN 18.2 Ab12: 7-G17-A（小鼠Ab） VL： DIVMTQSPSSLTVTPGEKVTMSCKSSQSLFNSGNQRNYLA WYQQKPGQPPKLLIYWASTRES GVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYFYPLT FGAGTKLELK （SEQ ID NO：46） VH： EVQLVESGGGLVKPGGSRKLSCAVSGFTFSDYGMY WVRQAPEKGLEWVAYISSGSSTIYYADTVKG RFTMSRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCARIARGNAMDY WGQGTSVTVSS （SEQ ID NO：47）

HuCLDN18.2-v.24（人源化Ab） VL： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSGNQKN YLTWYQQKPGQPPKLLIYWAS TRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNNYIYPFT FGQGTKVEIK （SEQ ID NO：48） VH： EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNYA MSWIRQAPGKGLEWVSTIIIGGTYT YYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQVYGNSFAY WGQGTLVTVSS （SEQ ID NO：49） HuCLDN18.2-v.19（人源化Ab） VL： DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSGNQKN YLTWYQQKPGQPPKLLIYWAS TRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNNYIYPFT FGQGTKVEIK （SEQ ID NO：48） VH： EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNYA MSWIRQAPGKGLEWVSTIIIGGIYT YYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQVYGNSFAY WGQGTLVTVSS （SEQ ID NO：50）

Zolbetuximab VL： DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYSYPFTFGSGTKLEIK （SEQ ID NO：51） VH： QVQLQQPGAELVRPGASVKLSCKASGYTFTSYWINWVKQRPGQGLEWIGNIYPSDSYTNYNQKFKDKATLTVDKSSSTAYMQLSSPTSEDSAVYYCTRSWRGNSFDYWGQGTTLTVSS （SEQ ID NO：52）

在一些實施方案中，疾病相關抗原結合結構域不是PD-L1結合結構域。

在一些實施方案中，疾病相關抗原結合結構域不是Claudin-18.2結合結構域。 [C. Fc結構域]

注意本發明的多功能多肽的Fc結構域是Fc二聚體。

在一些實施方案中，Fc結構域是人的。在一些實施方案中，Fc結構域是人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc結構域。

在一些實施方案中，Fc結構域來自小鼠。在一些實施方案中，Fc結構域是小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b或IgG3 Fc結構域。

在一些實施方案中，Fc結構域是野生型人IgG1 Fc結構域。在一些實施方案中，Fc結構域是突變的人IgG1 Fc結構域。在一些實施方案中，突變人IgGl Fc結構域包含降低的效應子功能。在一些實施方案中，突變人IgGl Fc結構域包含杵臼（knob-in-hole）突變。在一些實施方案中，突變人IgGl Fc結構域包含降低的效應子功能和杵臼突變。

在杵臼突變的情況下，可通過在兩個Fc單體結構域中引入不同但相容的取代，諸如杵臼殘基對，圖1A中所繪的任何形式的兩個Fc單體結構域的異二聚化都可以進行（例如美國專利No. 5,731,168）。

在一些實施方案中，Fc結構域被糖基化、乙醯化、唾液酸化和/或磷酸化。

在一些實施方案中，Fc結構域包含SEQ ID NO：100至111中任一個的氨基酸序列。SEQ ID NO：112提供了包含人CD80胞外結構域+人IgGl Fc的示例性序列。SEQ ID NO：136提供了包含小鼠CD80胞外結構域+小鼠IgG2a Fc的示例性序列。

人IgGl Fc（IGHG1_人: UniProKB – P01857） DKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSRDE LTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK（SEQ ID NO：100）人IgG2 Fc（IGHG2_人：UniProKB – P01859） VECPPCP APPVAGPSVF LFPPKPKDTL MISRTPEVTC VVVDVSHEDP EVQFNWYVDG VEVHNAKTKP REEQFNSTFR VVSVLTVVHQ DWLNGKEYKC KVSNKGLPAP IEKTISKTKG QPREPQVYTL PPSREEMTKN QVSLTCLVKG FYPSDISVEW ESNGQPENNY KTTPPMLDSD GSFFLYSKLT VDKSRWQQGN VFSCSVMHEA LHNHYTQKSL SLSPGK （SEQ ID NO：101）

人IgG3 Fc（IGHG3_人：UniProKB – P01860） DTPPPCPRCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVQFKWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTF RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKTK GQPREPQVYT LPPSREEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESSGQPENN YNTTPPMLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NIFSCSVMHE ALHNRFTQKS LSLSPGK （SEQ ID NO：102）

人 IgG4 Fc (IGHG4_人: UniProKB – P01861) KYGPPCPSCP APEFLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSLGK （SEQ ID NO：103）

小鼠IgG1 Fc（IGHG1_小鼠, Ig γ-1鏈C區，分泌自UniProKB – P01868） KPCICT VPEVSSVFIF PPKPKDVLTI TLTPKVTCVV VDISKDDPEV QFSWFVDDVE VHTAQTQPRE EQFNSTFRSV SELPIMHQDW LNGKEFKCRV NSAAFPAPIE KTISKTKGRP KAPQVYTIPP PKEQMAKDKV SLTCMITDFF PEDITVEWQW NGQPAENYKN TQPIMNTNGS YFVYSKLNVQ KSNWEAGNTF TCSVLHEGLH NHHTEKSLSH SPGK （SEQ ID NO：104）

小鼠IgG2a Fc（GCAA_小鼠, Ig γ-2A鏈 C區, A等位基因： UniProKB – P01863） GPTIKPCPPC KCPAPNLLGG PSVFIFPPKI KDVLMISLSP IVTCVVVDVS EDDPDVQISW FVNNVEVHTA QTQTHREDYN STLRVVSALP IQHQDWMSGK EFKCKVNNKD LPAPIERTIS KPKGSVRAPQ VYVLPPPEEE MTKKQVTLTC MVTDFMPEDI YVEWTNNGKT ELNYKNTEPV LDSDGSYFMY SKLRVEKKNW VERNSYSCSV VHEGLHNHHT TKSFSRTPGK （SEQ ID NO：105）

P01867小鼠IgG2b Fc（IGG2B_小鼠，Igγ-2B鏈C區：UniProKB – P01867） STINPCPP CKECHKCPAP NLEGGPSVFI FPPNIKDVLM ISLTPKVTCV VVDVSEDDPD VQISWFVNNV EVHTAQTQTH REDYNSTIRV VSTLPIQHQD WMSGKEFKCK VNNKDLPSPI ERTISKIKGL VRAPQVYILP PPAEQLSRKD VSLTCLVVGF NPGDISVEWT SNGHTEENYK DTAPVLDSDG SYFIYSKLNM KTSKWEKTDS FSCNVRHEGL KNYYLKKTIS RSPGLDLDDI CAEAKDGELD GLWTTITIFI SLFLLSVCYS ASVTLFKVKW IFSSVVELKQ KISPDYRNMI GQGA（SEQ ID NO：106）

小鼠IgG3 Fc（IGHG3_小鼠，Igγ-3鏈C區：UniProKB – P03987） STPPGSS CPPGNILGGP SVFIFPPKPK DALMISLTPK VTCVVVDVSE DDPDVHVSWF VDNKEVHTAW TQPREAQYNS TFRVVSALPI QHQDWMRGKE FKCKVNNKAL PAPIERTISK PKGRAQTPQV YTIPPPREQM SKKKVSLTCL VTNFFSEAIS VEWERNGELE QDYKNTPPIL DSDGTYFLYS KLTVDTDSWL QGEIFTCSVV HEALHNHHTQ KNLSRSPELE LNETCAEAQD GELDGLWTTI TIFISLFLLS VCYSASVTLF KVKWIFSSVV QVKQTAIPDY RNMIGQGA（SEQ ID NO：107）

hFc N297A DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK （SEQ ID NO：108） hFc 杵 N297A DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYASTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLWCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK （SEQ ID NO：109） hIgG1Fc 臼 ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK （SEQ ID NO：110） hIgG1Hc 臼 N297G ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYGSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK （SEQ ID NO：111）

人CD80+人IgGl Fc VIHVTKEVKE VATLSCGHNV SVEELAQTRI YWQKEKKMVL TMMSGDMNIW PEYKNRTIFD ITNNLSIVIL ALRPSDEGTY ECVVLKYEKD AFKREHLAEV TLSVKADFPT PSISDFEIPT SNIRRIICST SGGFPEPHLS WLENGEELNA INTTVSQDPE TELYAVSSKL DFNMTTNHSF MCLIKYGHLR VNQTFNWNTT KQEHFPDNGS DKTHTCPPCP APELLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSHED PEVKFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQYNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKALPA PIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSRDELTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSKL TVDKSRWQQG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSPGK （SEQ ID NO：112）

小鼠CD80+小鼠IgG2a Fc VDEQLSKSVKDKVLLPCRYNSPHEDESEDRIYWQKHDKVVLSVIAGKLKVWPEYKNRTLYDNTTYSLIILGLVLSDRGTYSCVVQKKERGTYEVKHLALVKLSIKADFSTPNITESGNPSADTKRITCFASGGFPKPRFSWLENGRELPGINTTISQDPESELYTISSQLDFNTTRNHTIKCLIKYGDAHVSEDFTWEKPPEDPPDSKNEPRGPTIKPCPPCKCPAPNLLGGPSVFIFPPKIKDVLMISLSPIVTCVVVDVSEDDPDVQISWFVNNVEVHTAQTQTHREDYNSTLRVVSALPIQHQDWMSGKEFKCKVNNKDLPAPIERTISKPKGSVRAPQVYVLPPPEEEMTKKQVTLTCMVTDFMPEDIYVEWTNNGKTELNYKNTEPVLDSDGSYFMYSKLRVEKKNWVERNSYSCSVVHEGLHNHHTTKSFSRTPGK （SEQ ID NO：136） [D. 結構特徵]

多功能多肽可以包含圖1A中提供的結構形式中的任一種。

在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式A的結構。在一些實施方案中，多功能多肽不包含形式A的結構。在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式A的結構，並且疾病相關抗原結合結構域對PD-L1或Claudin-18.2是特異性的。

在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式B的結構。在一些實施方案中，多功能多肽不包含形式B的結構。在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式B的結構，並且疾病相關抗原結合結構域對PD-L1或Claudin-18.2是特異性的。

在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式C的結構。在一些實施方案中，多功能多肽不包含形式C的結構。在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式C的結構，並且疾病相關抗原結合結構域對PD-L1或Claudin-18.2是特異性的。

在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式D的結構。在一些實施方案中，多功能多肽不包含形式D的結構。在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式D的結構，並且疾病相關抗原結合結構域對PD-L1或Claudin-18.2是特異性的。

在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式E的結構。在一些實施方案中，多功能多肽不包含形式E的結構。在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式E的結構，並且疾病相關抗原結合結構域對PD-L1或Claudin-18.2是特異性的。

在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式E的結構。在一些實施方案中，多功能多肽不包含形式F的結構。在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式F的結構，並且疾病相關抗原結合結構域對PD-L1或Claudin-18.2是特異性的。

在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式G的結構。在一些實施方案中，多功能多肽不包含形式G的結構。在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式G的結構，並且疾病相關抗原結合結構域對PD-L1或Claudin-18.2是特異性的。

在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式H的結構。在一些實施方案中，多功能多肽不包含形式H的結構。在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式H的結構，並且疾病相關抗原結合結構域對PD-L1或Claudin-18.2是特異性的。

在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式I的結構。在一些實施方案中，多功能多肽不包含形式I的結構。在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式I的結構，並且疾病相關抗原結合結構域對PD-L1或Claudin-18.2是特異性的。在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式I的結構，並且疾病相關抗原結合結構域對PD-L1或Claudin-18.2不是特異性的。

在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式J的結構。在一些實施方案中，多功能多肽不包含形式J的結構。在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式J的結構，並且疾病相關抗原結合結構域對PD-L1或Claudin-18.2是特異性的。

在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式A-J的結構中的任一種，並且疾病相關抗原結合結構域對PD-L1不是特異性的。在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式A-J的結構中的任一種，並且疾病相關抗原結合結構域對Claudin 18.2不是特異性的。在一些實施方案中，多功能多肽包含圖1A的形式A-J的結構中的任一種，並且疾病相關抗原結合結構域對Her2不是特異性的。

在一些實施方式中，多功能多肽的CD80胞外結構域是單體。

在一些實施方案中，多功能多肽包含CD80胞外結構域的兩個單體。

在一些實施方案中，多功能多肽包含CD80胞外結構域的四個單體。

在一些實施方案中，多功能多肽包含作為單鏈二聚體的CD80胞外結構域。

在一些實施方案中，多功能多肽包含CD80胞外結構域的兩個單鏈二聚體。

在一些實施方案中，多功能多肽包含連接至Fc結構域的N末端的CD80胞外結構域。

在一些實施方案中，多功能多肽包含CD80胞外結構域，CD80胞外結構域附著於疾病相關抗原結合結構域的N末端，並且其中疾病相關抗原結合結構域附著於Fc結構域的N末端。

在一些實施方案中，多功能多肽包含連接至Fc結構域的C末端的CD80胞外結構域。

在一些實施方案中，多功能多肽包含疾病相關抗原結合結構域，所述疾病相關抗原結合結構域包含scFv。

在一些實施方案中，多功能多肽包含疾病相關抗原結合結構域，所述疾病相關抗原結合結構域包含Fab或Fab'片段。

在一些實施方案中，多功能多肽包含疾病相關抗原結合結構域，所述疾病相關抗原結合結構域包含F(ab’)₂ 片段。

在一些實施方案中，多功能多肽包含疾病相關抗原結合結構域，所述疾病相關抗原結合結構域包含Fv片段。

在一些實施方案中，多功能多肽包含疾病相關抗原結合結構域，所述疾病相關抗原結合結構域包含Fab'片段或Fv片段。

在一些實施方案中，多功能多肽包含疾病相關抗原結合結構域，所述疾病相關抗原結合結構域附著於Fc結構域的N末端。

在一些實施方案中，多功能多肽包含兩個彼此偶聯的疾病相關抗原結合結構域，例如其中一個疾病相關抗原結合結構域包含Fab或Fab'片段，並且一個抗原結合結構域包含Fv片段。在一些實施方案中，多功能多肽包含Fv片段疾病相關抗原結合結構域，所述Fv片段疾病相關抗原結合結構域附著於Fab或Fab'疾病相關抗原結合結構域的N末端，所述Fab或Fab'疾病相關抗原結合結構域附著於Fc結構域的N末端。

在一些實施方案中，多功能多肽包含與CD80胞外結構域的N末端連接的疾病相關抗原結合結構域，所述CD80胞外結構域與Fc結構域的N末端連接。

在一些實施方案中，多功能多肽包含疾病相關抗原結合結構域，所述疾病相關抗原結合結構域附著於Fc結構域的C末端。 [E. 示例性多功能多肽]

僅舉例而言，本文提供了本發明的多功能多肽的非限制性示例性序列。

在一些實施方案中，所述多功能多肽包含SEQ ID NO：113-135中任一個的氨基酸序列。如本文所述，以下序列僅是示例性的，並且絕不意味著限制其他可能的變化。下面的一些序列使用括弧由結構域表示。

hCD80-接頭-hIgG1 Fc杵 N297A（形式A） [VIHVTKEVKEVATLSCGHNVSVEELAQTRIYWQKEKKMVLTMMSGDMNIWPEYKNRTIFDITNNLSIVILALRPSDEGTYECVVLKYEKDAFKREHLAEVTLSVKADFPTPSISDFEIPTSNIRRIICSTSGGFPEPHLSWLENGEELNAINTTVSQDPETELYAVSSKLDFNMTTNHSFMCLIKYGHLRVNQTFNWNTTKQEHFPDN][GS][DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYA STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLW CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK]（SEQ ID NO：113）

抗-PD-L1 Hc（Atezo）hFc 臼 N297A（形式A，B） EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYA STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLS CA VKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLV SKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK（SEQ ID NO：114）

抗-PD-L1 Lc（Atezolizumab）（形式A，B，F） DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC （SEQ ID NO：115）

sc-hCD80二聚體hFc 杵 N297A（hCD80-接頭-hCD80-hIgG1 Fc）（形式B，D） [VIHVTKEVKEVATLSCGHNVSVEELAQTRIYWQKEKKMVLTMMSGDMNIWPEYKNRTIFDITNNLSIVILALRPSDEGTYECVVLKYEKDAFKREHLAEVTLSVKADFPTPSISDFEIPTSNIRRIICSTSGGFPEPHLSWLENGEELNAINTTVSQDPETELYAVSSKLDFNMTTNHSFMCLIKYGHLRVNQTFNWNTTKQEHFPDN][GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS][VIHVTKEVKEVATLSCGHNVSVEELAQTRIYWQKEKKMVLTMMSGDMNIWPEYKNRTIFDITNNLSIVILALRPSDEGTYECVVLKYEKDAFKREHLAEVTLSVKADFPTPSISDFEIPTSNIRRIICSTSGGFPEPHLSWLENGEELNAINTTVSQDPETELYAVSSKLDFNMTTNHSFMCLIKYGHLRVNQTFNWNTTKQEHFPDN][DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYA STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLW CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK]（SEQ ID NO：116）

抗-PD-L1 Hc（Atezolizumab）hFc N297A-接頭-hCD80 C-末端融合（形式F） [EVQLVESGGALVKPGGSLKLSCAASGFTFSNYAMSWIRQTPEKRLEWVATIIIGGTYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTALYYCARQVYGNSFAYWGQGTLVTVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYA STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK][GGGGSGGGGSGGGGS][VIHVTKEVKEVATLSCGHNVSVEELAQTRIYWQKEKKMVLTMMSGDMNIWPEYKNRTIFDITNNLSIVILALRPSDEGTYECVVLKYEKDAFKREHLAEVTLSVKADFPTPSISDFEIPTSNIRRIICSTSGGFPEPHLSWLENGEELNAINTTVSQDPETELYAVSSKLDFNMTTNHSFMCLIKYGHLRVNQTFNWNTTKQEHFPDN]（SEQ ID NO：117）

hCD80-接頭-抗-PD-L1 Hc（Atezolizumab）hFc N297A N-末端融合（形式H） [VIHVTKEVKEVATLSCGHNVSVEELAQTRIYWQKEKKMVLTMMSGDMNIWPEYKNRTIFDITNNLSIVILALRPSDEGTYECVVLKYEKDAFKREHLAEVTLSVKADFPTPSISDFEIPTSNIRRIICSTSGGFPEPHLSWLENGEELNAINTTVSQDPETELYAVSSKLDFNMTTNHSFMCLIKYGHLRVNQTFNWNTTKQEHFPDN][GSGG][EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYA STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK] （SEQ ID NO：118）

hCD80-接頭-抗-PD-L1（Atezolizumab）Lc N-末端融合（形式H） [VIHVTKEVKEVATLSCGHNVSVEELAQTRIYWQKEKKMVLTMMSGDMNIWPEYKNRTIFDITNNLSIVILALRPSDEGTYECVVLKYEKDAFKREHLAEVTLSVKADFPTPSISDFEIPTSNIRRIICSTSGGFPEPHLSWLENGEELNAINTTVSQDPETELYAVSSKLDFNMTTNHSFMCLIKYGHLRVNQTFNWNTTKQEHFPDN][GSGG][DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC] （SEQ ID NO：119）

schCD80二聚體/抗-PD-L1（Atezolizumab）Lc N-末端融合（hCD80-接頭-hCD80-接頭-抗-PD-L1 LC）（形式I） [VIHVTKEVKEVATLSCGHNVSVEELAQTRIYWQKEKKMVLTMMSGDMNIWPEYKNRTIFDITNNLSIVILALRPSDEGTYECVVLKYEKDAFKREHLAEVTLSVKADFPTPSISDFEIPTSNIRRIICSTSGGFPEPHLSWLENGEELNAINTTVSQDPETELYAVSSKLDFNMTTNHSFMCLIKYGHLRVNQTFNWNTTKQEHFPDN][GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS][VIHVTKEVKEVATLSCGHNVSVEELAQTRIYWQKEKKMVLTMMSGDMNIWPEYKNRTIFDITNNLSIVILALRPSDEGTYECVVLKYEKDAFKREHLAEVTLSVKADFPTPSISDFEIPTSNIRRIICSTSGGFPEPHLSWLENGEELNAINTTVSQDPETELYAVSSKLDFNMTTNHSFMCLIKYGHLRVNQTFNWNTTKQEHFPDN][GSGG][DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC] （SEQ ID NO：120）

抗-PD-L1 Hc（Atezolizumab）hFcN 297A（形式I） EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYA STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK （SEQ ID NO：121）

CLDN18.2 Ab12 HC-接頭-hCD80 C-末端融合（形式F） [EVQLVESGGGLVKPGGSRKLSCAVSGFTFSDYGMYWVRQAPEKGLEWVAYISSGSSTIYYADTVKGRFTMSRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCARIARGNAMDYWGQGTSVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK][GGGGSGGGGSGGGGSVIH][VTKEVKEVATLSCGHNVSVEELAQTRIYWQKEKKMVLTMMSGDMNIWPEYKNRTIFDITNNLSIVILALRPSDEGTYECVVLKYEKDAFKREHLAEVTLSVKADFPTPSISDFEIPTSNIRRIICSTSGGFPEPHLSWLENGEELNAINTTVSQDPETELYAVSSKLDFNMTTNHSFMCLIKYGHLRVNQTFNWNTTKQEHFPDN] （SEQ ID NO：122）

Ab12VL （形式 F） DIVMTQSPSSLTVTPGEKVTMSCKSSQSLFNSGNQRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYFYPLTFGAGTKLELKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC （SEQ ID NO：123）

HuCLDN18.2 Ab.v.24 HC-接頭-hCD80 C-末端融合（形式F） [EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWIRQAPGKGLEWVSTIIIGGTYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQVYGNSFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK][GGGGSGGGGSGGGGS][VIHVTKEVKEVATLSCGHNVSVEELAQTRIYWQKEKKMVLTMMSGDMNIWPEYKNRTIFDITNNLSIVILALRPSDEGTYECVVLKYEKDAFKREHLAEVTLSVKADFPTPSISDFEIPTSNIRRIICSTSGGFPEPHLSWLENGEELNAINTTVSQDPETELYAVSSKLDFNMTTNHSFMCLIKYGHLRVNQTFNWNTTKQEHFPDN]（SEQ ID NO：124）

HuCLDN18.2 Ab.v.24 Lc（形式F） DIVMTQSPDSLTVSLGERATISCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFSLTISSLQAEDVAVYYCQNNYIYPFTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC （SEQ ID NO：125）

抗-CLDN 18.2 Ab1 scFv（抗-CLDN 18.2 Ab1 VH-接頭-抗-CLDN 18.2 Ab1 VL-接頭-hIgG1 Fc臼）（形式J） [EVQLVESGGGLVKPGGSRKLSCAASGFTFSDYGMFWVRQAPEKGLEWVGYISSGSSNIYYADTVKGRFTISRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCARIARGNAMDYWGQGTSVTVSS][GGGGSGGGGSGGGGS][DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAIYYCQNDYFYPLTFGAGTKLELK][GS][DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREP)QVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK] （SEQ ID NO：126）

抗-CLDN 18.2 Ab12 scFv（抗-CLDN 18.2 Ab12 VH-接頭-抗-CLDN 18.2 Ab12 VL-接頭-hIgG1 Fc臼）（形式J） [EVQLVESGGGLVKPGGSRKLSCAVSGFTFSDYGMYWVRQAPEKGLEWVAYISSGSSTIYYADTVKGRFTMSRDNAKNTLFLQMTSLRSEDTAMYYCARIARGNAMDYWGQGTSVTVSS] [GGGGSGGGGSGGGGS][DIVMTQSPSSLTVTPGEKVTMSCKSSQSLFNSGNQRNYLAWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNDYFYPLTFGAGTKLELK][GS][DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK]（SEQ ID NO：127）

hCD80-接頭-hIgG1 Fc杵（形式A，J） [VIHVTKEVKEVATLSCGHNVSVEELAQTRIYWQKEKKMVLTMMSGDMNIWPEYKNRTIFDITNNLSIVILALRPSDEGTYECVVLKYEKDAFKREHLAEVTLSVKADFPTPSISDFEIPTSNIRRIICSTSGGFPEPHLSWLENGEELNAINTTVSQDPETELYAVSSKLDFNMTTNHSFMCLIKYGHLRVNQTFNWNTTKQEHFPDN][GS][DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLW CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK] （SEQ ID NO：128）

DVD形成抗-PD-L1 Lc（Atezo）（抗-PD-L1 VL-接頭-抗-PD-L1 HC）（形式D） [DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIK][GGGGSGG][DIQMTQSPSSLSASVGDRVTITCRASQDVSTAVAWYQQKPGKAPKLLIYSASFLYSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQYLYHPATFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGE] （SEQ ID NO：129）

DVD形成抗-PD-L1 Hc（Atezo）臼N297A（抗-PD-L1 VH-接頭-抗-PD-L1 HC）（形式D） [EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSS][GGGGSGG][EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSDSWIHWVRQAPGKGLEWVAWISPYGGSTYYADSVKGRFTISADTSKNTAYLQMNSLRAEDTAVYYCARRHWPGGFDYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK] （SEQ ID NO：130）

抗-CLDN 18.2 Ab3 Hc hFc臼（形式A，B） EVQLVESGGALVKSGGSLRLSCAASGFTFSNNAMSWIRQTPEKRLEWVATIIIGGTYTYY PDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMSSLRSEDTAFYYCARQVYGNSFAYWGQGTLVSVSAASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK （SEQ ID NO：131）

抗-CLDN 18.2 Ab3 Lc（形式A，B） DIVMTQSPSSLTVTAGEKVTMSCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVQAEDLAVYYCQNNYFYPFTFGSGTKLEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC （SEQ ID NO：132）

HuCLDN 18.2-v.24 Hc hFc臼（形式A，B） EVQLVESGGGLVKPGGSLRLSCAASGFTFSNYAMSWIRQAPGKGLEWVSTIIIGGTYTYYPDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARQVYGNSFAYWGQGTLVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLSCAVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLVSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK（SEQ ID NO：133）

HuCLDN 18.2-v.24 Lc （形式A，B） DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSLLNSGNQKNYLTWYQQKPGQPPKLLIYWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQNNYIYPFTFGQGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC （SEQ ID NO：134）

sc-hCD80二聚體hFc 杵（hCD80-接頭-hCD80-hIgG1 Fc）（形式B，D） [VIHVTKEVKEVATLSCGHNVSVEELAQTRIYWQKEKKMVLTMMSGDMNIWPEYKNRTIFDITNNLSIVILALRPSDEGTYECVVLKYEKDAFKREHLAEVTLSVKADFPTPSISDFEIPTSNIRRIICSTSGGFPEPHLSWLENGEELNAINTTVSQDPETELYAVSSKLDFNMTTNHSFMCLIKYGHLRVNQTFNWNTTKQEHFPDN][GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS][VIHVTKEVKEVATLSCGHNVSVEELAQTRIYWQKEKKMVLTMMSGDMNIWPEYKNRTIFDITNNLSIVILALRPSDEGTYECVVLKYEKDAFKREHLAEVTLSVKADFPTPSISDFEIPTSNIRRIICSTSGGFPEPHLSWLENGEELNAINTTVSQDPETELYAVSSKLDFNMTTNHSFMCLIKYGHLRVNQTFNWNTTKQEHFPDN][DKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYN STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLW CLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK] （SEQ ID NO：135） [IV.治療方法]

本發明的PD-L1抗體和多功能多肽，以及包含本發明的PD-L1抗體和多功能多肽的藥物組合物，可用於療法以治療疾病或病症或延遲疾病或病症的進展。

因此，本文提供了治療疾病或病症的方法，包括向有需要的受試者施用治療有效量的本文提供的PD-L1抗體、多功能多肽或藥物組合物中的任一種。所述疾病或病症可選自癌症、感染性疾病或炎性疾病。所述癌症可包括液體瘤或實體瘤。所述疾病或病症可能與疾病相關抗原的異常活性有關。例如，所述疾病或病症可與異常PD-L1活性或異常Claudin 18.2活性相關。

本發明的任何PD-L1抗體、多功能多肽或藥物組合物的施用可以通過靜脈內、肌內、皮下、局部、口服、透皮、腹膜內、眶內、通過植入、通過吸入、鞘內、心室內或鼻內進行。可以施用治療有效量以治療疾病或病症，並且可以基於待治療的疾病或病症的類型、治療劑的類型、疾病或病症的嚴重程度和進程、受試者的臨床狀況、受試者的臨床病史和對治療的反應以及主治醫師的判斷來確定合適的劑量。在一個示例性實施方案中，本文提供的PD-L1抗體、多功能多肽或藥物組合物中的任一種經靜脈內施用。

對於本發明的PD-L1抗體、多功能多肽或藥物組合物的體內施用，正常劑量可以從約1 ng/kg直至約1000 mg/kg受試者體重或更多而每天變化，這取決於施用途徑。對於幾天或更長時間的重複施用，取決於待治療的疾病或病症的嚴重程度，可以持續治療直至實現期望的症狀抑制。劑量方案可能是有用的，這取決於醫師希望達到的藥代動力學衰退的模式。治療的進展可以通過常規技術監測。

本發明的PD-L1抗體、多功能多肽或藥物組合物可以作為與另一種藥劑的組合療法的一部分施用。 [V. 試劑盒和製品]

本發明提供了包含本發明的PD-L1抗體、多功能多肽和藥物組合物的試劑盒。

在一些實施方案中，試劑盒可以含有藥學上可接受的賦形劑，使用說明手冊及其任何組合。在一些實施方案中，試劑盒包含本文所述的任何一種或多種治療組合物，以及一種或多種藥學上可接受的賦形劑。

本發明還提供了包含本文所述的PD-L1抗體、多功能多肽、藥物組合物和試劑盒中的任一種或多種的製品。製品的實例包括小瓶（例如密封小瓶）。 [實施例]

提出以下實施例以便向本領域的普通技術人員提供如何製造和使用本發明的完整公開和描述，並且不旨在限制發明人認為是其發明的範圍，也不旨在表示以下實驗是所進行的全部或唯一的實驗。 [實施例1-階段顯示和PD-L1抗體篩選]

修飾的pHEN1載體用於製備完全合成的ScFv（單鏈抗體片段）噬菌體文庫。通過對PD-L1（胞外結構域）-His蛋白的五輪淘選獲得抗體庫（根據J. Mol.Biol.(2004) 338, 299–310 ，有一些修改）。選擇前17個陽性克隆進行測序。序列列於表1-11中。 [實施例2-人PD-L1（胞外結構域）-His 的ELISA結合測定]

利用人IgG4保守區序列將scFv轉化為全長抗體。將不同抗體的基因克隆到Expi-CHO細胞（ThermoFisher公司）中，經AKTA Explorer蛋白純化系統純化。用來自Biological公司的1μg/ml的重組PD-L1（胞外結構域）-His（Cat.No. 10084-H08H）塗板，在4℃下過夜。第二天，用200μl/孔洗滌緩衝液（0.05%Tween-20的PBS溶液，pH7.4）洗板3次。然後將測定板用200μl封閉緩衝液（2%BSA的洗滌緩衝液）在37℃下封閉1小時，再用洗滌緩衝液洗滌3次。加入不同抗體的系列稀釋液。在37℃培養1小時後，將板洗滌3次，向各孔中加入HRP山羊抗-人IgG-Fc二抗，並在37℃培養1小時。然後洗板，顯影並在450 nm和630 nm讀取。通過GraphPad軟體計算EC₅₀ 。表12提供了表9中列出的抗體的EC₅₀ 。在這些抗體中，PD-2、PD-3、PD-4、PD-15、PD-16和PD-18具有比Atezolizumab更好的結合親和力。

[表12]

樣品		EC₅₀ （μg/ml）
Atezolizumab		0.02948
PD-2	Seq1	0.01238
PD-3	Seq12	0.004125
PD-4	Seq3	0.008057
PD-5	Seq13	32.27
PD-6	Seq14	29.46
PD-7	Seq15	47.273
PD-8	Seq16	26.773
PD-10	Seq2	131.473
PD-11	Seq4	24.982
PD-12	Seq5	6.941
PD-13	Seq6	12.545
PD-14	Seq7	64.490
PD-15	Seq8	0.01337
PD-16	Seq9	0.0233
PD-17	Seq10	9.583
PD-18	Seq11	0.002257

[實施例3-通過FACS對PD-L1抗體結合親和力的測定]

將過表達人PD-L1的Flp-in 293細胞在提供有10%FBS的DMEM培養基中於37℃，5%CO₂ 條件下培養。收穫細胞，用PBS洗滌3次。用4%PFA固定20分鐘後，沉澱細胞並用PBS洗滌以確保沒有PFA殘留。將細胞重懸於含3%BSA的PBS中並在4℃下培養過夜。將不同抗體在含3%BSA的PBS中的十一點稀釋系列加入到不同孔中。在4℃培養2小時後，沉澱細胞並再次用PBS洗滌。在4℃下將螢光標記的二抗加入孔中持續1小時。除去二抗後，用PBS洗滌細胞兩次，並通過流式細胞儀測量平均螢光強度（MFI）。通過GraphPad軟體計算EC₅₀ ，如圖20所示。選擇PD-2、PD-3、PD-4、PD-15和PD-18用於進一步分析。 [實施例4-通過FACS PD-L1抗體競爭性抑制PD-1與過表達PD-L1的Flp-in 293細胞表面的結合 ]

將過表達人PD-L1的Flp-in 293細胞在提供有10%FBS的DMEM培養基中37℃，5%CO₂ 的條件下培養。如實施例3所述收穫細胞，洗滌，固定並重懸。在含3%BSA的PBS中在4℃下封閉過夜後，向孔中加入在含3%BSA的PBS中的10 μg/ml人生物素標記的PD-1（Sino Biological公司）。在4℃培養2小時後，沉澱細胞並再次通過PBS洗滌。將不同PD-L1抗體在含3%BSA的PBS中的十一點稀釋系列加入到不同孔中。沉澱細胞並用PBS洗滌，並在4℃下將螢光標記的抗生蛋白鏈菌素加入孔中1小時。除去游離螢光標記的抗生蛋白鏈菌素後，用PBS洗滌細胞兩次，並通過流式細胞儀測量平均螢光強度（MFI）。結果在圖21中顯示。 [實施例5-hCD80-Fc/抗-PD-L1和hCD80/抗-CLDN18.2多功能多肽的基因合成、表達構建和表達/純化]

hCD80-Fc/抗-PD-L1和hCD80/抗-CLDN18.2多功能多肽表達盒在圖1A和圖2中描繪。抗-PD-L1和抗-CLDN18.2是指本發明的PD-L1和Claudin18.2抗原結合結構域。表達盒通過從頭基因合成產生，並被克隆到pcDNA3.4表達載體（Thermo Fisher Scientific）中。

所得pcDNA3.4表達載體，其含有編碼圖1A和圖2中描繪的hCD80-Fc/抗-PD-L1（形式A）（SEQ ID NO： 113、114和115）的多核苷酸，sc-hCD80二聚體-Fc/抗-PD-L1（形式B）（SEQ ID NO： 116、114和115），sc-hCD80二聚體-Fc/抗-PD-L1（DVD）（形式D）（SEQ ID NO： 116、129和130），抗-PD-L1-hCD80（形式F）（SEQ ID NO： 115和117），hCD80-抗-PD-L1（形式H）（SEQ ID NO： 118和119），以及sc-hCD80二聚體-抗-PD-L1（LC）（形式I）（SEQ ID NO： 120和121）和hCD80/抗-CLDN18.2（形式A）（SEQ ID NO： 128、131和132）（SEQ ID NO： 128、133和134），sc-hCD80二聚體-Fc/抗-CLDN18.2（形式B）（SEQ ID NO： 135、131和132）（SEQ ID NO： 135、133和134），抗-CLDN18.2-hCD80（形式F）（SEQ ID NO：122和123）（SEQ ID NO： 124和125），和hCD80-Fc/抗-CLDN18.2 scFv-Fc（形式J）（SEQ ID NO： 128和126）（SEQ ID NO： 128和127），使用ExpiFectamine 293轉染試劑（Thermo Fisher Scientific）轉染到Expi293F細胞中。轉染20小時後將ExpiFectamine 293轉染增強劑1和增強劑2加入孔中。於37°C、在提供有5% CO₂ 的75%濕度的潮濕培養箱中培養培養物。轉染後6天收穫轉染的培養物。利用GE Healthcare的蛋白A HP自旋捕獲（Protein A HP SpinTrap）柱，將上清液與樹脂在室溫下培養4分鐘，純化出所有的多功能多肽。用pH7.2的磷酸鈉緩衝液洗滌柱，並用pH3.0的100 mM甘氨酸-HCl洗脫。洗脫液用pH9.0的1.0 M Tris-HCl中和。純化的蛋白質在pH7.2的PBS緩衝液中透析，並通過0.2μm膜無菌過濾。

多功能多肽的SDS-PAGE分析總結在圖3-10中。圖3顯示了sc-hCD80二聚體-Fc/抗-PD-L1（形式B）（SEQ ID NO： 116、114和115）和hCD80-Fc/抗-PD-L1（形式A）（SEQ ID NO： 113、114和115）多功能多肽的SDS-PAGE分析。圖4顯示了sc-hCD80二聚體-Fc/抗-CLDN18.2 Ab 3（形式B）（SEQ ID NO： 135、131和132）和sc-hCD80二聚體-Fc/HuCLDN 18.2-v.24（形式B）（SEQ ID NO： 135、133和134）多功能多肽的SDS-PAGE分析。圖5顯示了hCD80-Fc/抗-CLDN 18.2 Ab3（形式A）（SEQ ID NO： 128、131和132）和hCD80-Fc/HuCLDN 18.2-v.24（形式A）（SEQ ID NO： 128、133和134）多功能多肽的SDS-PAGE分析。圖6顯示了hCD80-Fc/抗-CLDN 18.2 Ab1 scFv-Fc（形式J）（SEQ ID NO： 128和126）和hCD80-Fc/抗-CLDN 18.2 Ab12 scFv-Fc（形式J）（SEQ ID NO： 128和127）多功能多肽的SDS-PAGE分析。圖7顯示了抗-CLDN 18.2 Ab12-hCD80 形式F（SEQ ID NO：122 和123）和HuCLDN18.2-v.24-hCD80（形式F）（SEQ ID NO： 124和125）多功能多肽的SDS-PAGE分析。圖8顯示了抗-PD-L1-hCD80（形式F）（SEQ ID NO： 115和117）多功能多肽的SDS-PAGE分析。圖9顯示了sc-hCD80二聚體-Fc/抗-PD-L1（DVD）（形式D）（SEQ ID NO： 116、129和130）多功能多肽的SDS-PAGE分析。圖10顯示hCD80-抗-PD-L1（形式H）（SEQ ID NO： 118和119）和sc-hCD80二聚體-抗-PD-L1（LC）（形式I）（SEQ ID NO： 120和121）多功能多肽的SDS-PAGE分析。

所有的多功能多肽被純化至接近90%的純度。 [實施例6-通過ELISA測定含有多功能多肽的hCD80-Fc/抗-PD-L1對PD-L1和CTLA-4的結合親和力 ]

為了通過ELISA測試結合親和力，首先用1 μg/mL人CTLA-4（來自Sino Biological的重組His標籤）包被ELISA板，在4℃過夜。第二天，除去人CTLA-4溶液，將板用1% BSA在室溫封閉1小時。除去1% BSA溶液後，將板用PBST（含有0.05% Tween-20的磷酸鹽緩衝鹽水）洗滌三次。以100μL/孔加入用於該結合測定的純化的hCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽（形式A）（SEQ ID NO： 113、114和115）的樣品，一式兩份，以4μg/mL的濃度開始以1:3連續稀釋，並在室溫下攪拌培養2小時。用PBST洗滌3次後，加入二抗，100μL/孔1:10,000稀釋的HRP-抗-hIgG，並在室溫下攪拌培養1小時。將板用PBST洗滌三次，並加入100μL/孔的TMB底物。將板培養直至顯色。加入終止溶液以終止反應。在OD₄₅₀ 處讀板。

對於人PD-L1重組蛋白進行類似的ELISA實驗，除了用2μg/mL重組人PD-L1蛋白（來自Sino Biological的重組His標記）包被板，並以20μg/mL開始稀釋hCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽（形式A）（SEQ ID NO： 113、114和115）。與CTLA-4或PD-L1結合的hCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽（形式A）（SEQ ID NO： 113、114和115）的EC₅₀ 值通過與每個板上的CD80-Fc的EC₅₀ 比較來確定。EC₅₀ （μg/mL）是在結合測定中產生半數最大響應的蛋白質的濃度或值。

通過ELISA的結合親和力測定的結果在圖11中示出。圖11是ELISA，其顯示了與hCD80-Fc融合蛋白相比，hCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽（形式A）（SEQ ID NO： 113、114和115）對重組蛋白CTLA-4或PD-L1的結合親和力。與CD80-Fc多肽和抗-PD-L1抗體結合相同靶標的EC₅₀ 分別為4.6 μg/mL和0.004 μg/mL相比，hCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽結合重組PD-L1多肽的EC₅₀ 為0.09 μg/mL。與結合相同靶標的CD80-Fc多肽的EC₅₀ 為0.035 μg/mL相比，hCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽（形式A）（SEQ ID NO： 113、114和115）結合重組CTLA-4多肽的EC₅₀ 為0.93 μg/mL。 [實施例7-通過FACS測定含有多功能多肽的hCD80/抗-PD-L1和hCD80/抗-CLDN18.2的結合親和力] [通過FACS的細胞表面結合測定]

hCD80-Fc/抗-PD-L1（形式A）（SEQ ID NO： 113、114和115），sc-hCD80二聚體-Fc/抗-PD-L1（形式B）（SEQ ID NO： 116、114和115），sc-hCD80二聚體-Fc/抗-PD-L1（DVD）（形式D）（SEQ ID NO： 116、129和130），抗-PD-L1-hCD80（形式F）（SEQ ID NO： 115和117），hCD80-抗-PD-L1（形式H）（SEQ ID NO： 118和119），和sc-hCD80二聚體-抗-PD-L1（LC）（形式I）（SEQ ID NO： 120和121），和抗-CLDN18.2-hCD80 （形式F）（SEQ ID NO： 122和123）（SEQ ID NO： 124和125），和hCD80-Fc/抗-CLDN18.2 scFv-Fc（形式J）（SEQ ID NO： 128和126）（SEQ ID NO： 128和127）對過表達CD28、CTLA-4和PD-L1的Flp-in 293細胞（Flp-in 293 CD28、Flp-in 293 CTLA 4和Flp-in 293 PD-L1細胞）的結合親和力（EC₅₀ ）通過FACS測定。FACS結合測定如下進行：將Flp-in 293 CD28、Flp-in 293 CTLA-4和Flp-in 293 PD-L1細胞用含有多功能多肽的系列稀釋的hCD80/抗-PD-L1和hCD80/抗-CLDN18.2在冰上染色1小時，（i）對於過表達CD28和PD-L1的任一Flp-in 293細胞，濃度為100 μg/ml、30 μg/ml、10 μg/ml、3 μg/ml、1 μg/ml、0.3 μg/ml、0.1 μg/ml和0.03 μg/ml，和（ii），對於過表達CTLA-4的Flp-in 293細胞，濃度為3 μg/ml、1 μg/ml、0.3 μg/ml、0.1 μg/ml、0.03 μg/ml、0.01 μg/ml、0.003 μg/ml和0.001 μg/ml。用染色緩衝液（PBS+2%胎牛血清）洗滌細胞以除去游離的多功能多肽，然後用AlexFluor 488-綴合的抗人IgG抗體在冰上染色30分鐘。洗滌細胞並通過FACS分析。

抗-CLDN18.2-hCD80（形式F）（SEQ ID NO： 122和123）（SEQ ID NO： 124和125）和hCD80-Fc /抗-CLDN18.2 scFv-Fc（形式J）（SEQ ID NO： 128和126）（SEQ ID NO： 128和127）多功能多肽對過表達CLDN18.2的HEK293細胞和內源表達CLDN18.2的KATO III細胞的的結合親和力（EC₅₀ ）通過FACS測定。FACS結合測定如下進行：將細胞用含有多功能多肽的系列稀釋的hCD80/抗-CLDN 18.2在冰上染色1小時，濃度為10 μg/ml、3 μg/ml、1 μg/ml、0.3 μg/ml、0.1 μg/ml、0.03 μg/ml、0.01 μg/ml、和0.003 μg/ml。用染色緩衝液（PBS+2%胎牛血清）洗滌細胞以除去游離的多功能多肽，然後用AlexFluor 488-綴合的抗人IgG抗體在冰上染色30分鐘。洗滌細胞並通過FACS分析。

通過FACS的細胞表面結合親和力測定的結果以及每種測試的多功能多肽的最高MFI（平均螢光強度）值和EC₅₀ （μg/ml）值在圖12-16中示出。EC₅₀ （μg/ml）是在結合測定中產生半數最大響應的蛋白質的濃度或值。

圖12通過FACS顯示了，含有多功能多肽的hCD80/抗-PD-L1（形式A）（SEQ ID NO： 113、114和115）對過表達CD28、CTLA-4或PD-L1的Flp-in 293細胞表面的結合親和力。hCD80-Fc/抗-PD-L1（形式A）（SEQ ID NO： 113、114和115）多功能多肽和hCD80-Fc顯示對Flp-in 293 CD28細胞的相似結合親和力。與hCD80-Fc多肽與相同細胞結合的EC₅₀ 為0.02μg/mL相比，hCD80-Fc/抗-PD-L1（形式A）（SEQ ID NO： 113、114和115）多功能多肽與Flp-in 293 CTLA 4細胞結合的EC₅₀ 為0.6μg/mL。hCD80-Fc/抗-PD-L1（形式A）（SEQ ID NO： 113、114和115）多功能多肽和抗-PD-L1抗體顯示對Flp-in 293 PD-L1細胞的相似結合親和力。

圖13顯示通過FACS含有多功能多肽的sc-hCD80二聚體-Fc/抗-PD-L1（形式B）（SEQ ID NO：116、114和115）對過表達CD28、CTLA-4或PD-L1的Flp-in 293細胞表面的結合親和力。與結合相同細胞的hCD80-Fc多肽的EC₅₀ 為18 μg/mL相比，sc-hCD80二聚體-Fc/抗-PD-L1（形式B）（SEQ ID NO：116、114和115）多功能多肽結合Flp-in 293 CD28細胞的EC₅₀ 為53.2 μg/mL。與hCD80-Fc多肽與相同細胞結合的EC₅₀ 為0.02 μg/mL相比，sc-hCD80二聚體-Fc/抗-PD-L1（形式B）（SEQ ID NO：116、114和115）多功能多肽與Flp-in 293 CTLA4細胞結合的EC₅₀ 為0.53 μg/mL。與結合相同細胞的hCD80-Fc多肽的EC₅₀ 為0.5 μg/mL相比，sc-hCD80二聚體-Fc/抗-PD-L1（形式B）（SEQ ID NO：116、114和115）多功能多肽結合Flp-in 293 PD-L1細胞的EC₅₀ 為3.0 μg/mL。

圖14A-C顯示了含多功能多肽的sc-hCD80二聚體-Fc/抗-PD-L1（DVD）（形式D）（SEQ ID NO： 116、129和130）、抗-PD-L1-hCD80（形式F）（SEQ ID NO： 115和117）、hCD80-抗-PD-L1（形式H）（SEQ ID NO： 118和119）以及sc-hCD80二聚體-抗-PD-L1（LC）（形式I）（SEQ ID NO：120和121）對過表達CD28、CTLA-4或PD-L1的Flp-in293細胞表面的結合親和力。

圖14A顯示了與hCD80-Fc多肽與相同細胞結合的EC₅₀ 為11.0 μg/mL相比，sc-hCD80二聚體-Fc/抗-PD-L1（DVD）（形式D）（SEQ ID NO： 116、129和130）、抗-PD-L1-hCD80（形式F）（SEQ ID NO： 115和117）、hCD80-抗-PD-L1（形式H）（SEQ ID NO： 118和119）和sc-hCD80二聚體-抗-PD-L1（LC）（形式I）（SEQ ID NO： 120和121）多功能多肽與Flp-in 293 CD28細胞結合的EC₅₀ 分別為528.7 μg/mL、457.2 μg/mL、8.3 μg/mL和19.3 μg/mL。

圖14B顯示了與hCD80-Fc多肽與相同細胞結合的EC₅₀ 為0.02 μg/mL相比，sc-hCD80二聚體-Fc/抗-PD-L1（DVD）（形式D）（SEQ ID NO： 116、129和130）、抗-PD-L1-hCD80（形式F）（SEQ ID NO： 115和117）、hCD80-抗-PD-L1（形式H）（SEQ ID NO：118和119）和sc-hCD80二聚體-抗-PD-L1（LC）（形式I）（SEQ ID NO： 120和121）多功能多肽與Flp-in 293 CTLA 4細胞結合的EC₅₀ 分別為0.25 μg/mL、3.34 μg/mL、0.07 μg/mL和0.23 μg/m。

圖14C顯示了與抗-PD-L1的那些與相同細胞結合的EC₅₀ 為0.6 μg/mL相比，sc-hCD80二聚體-Fc/抗-PD-L1（DVD）（形式D）（SEQ ID NO： 116、129和130）、抗-PD-L1-hCD80（形式F）（SEQ ID NO： 115和117）、hCD80-抗-PD-L1（形式H）（SEQ ID NO： 118和119）和sc-hCD80二聚體-抗-PD-L1（LC）（形式I）（SEQ ID NO： 120和121）多功能多肽與Flp-in 293 PD-L1細胞結合的EC₅₀ 分別為1.3 μg/mL、2.3 μg/mL、1.6 μg/mL和1.4 μg/m。

圖15A-B通過FACS顯示了抗-CLDN18.2-hCD80（形式F）（SEQ ID NO： 122和123）（SEQ ID NO： 124和125）和hCD80-Fc/抗-CLDN18.2 scFv-Fc（形式J）（SEQ ID NO： 128和126）（SEQ ID NO： 128和127）多功能多肽與過表達CLDN 18.2的HEK 293細胞表面或內源性表達CLDN18.2的KATO III細胞表面的結合親和力。與抗-CLDN 18.2抗體相比，含多功能多肽的CD80/抗-CLDN18.2的EC₅₀ 是抗-CLDN 18.2抗體的四到八倍。

圖16A-C通過FACS顯示了抗-CLDN18.2-hCD80（形式F）（SEQ ID NO： 122和123）（SEQ ID NO： 124和125）和hCD80-Fc/抗-CLDN18.2 scFv-Fc（形式J）（SEQ ID NO： 128和126）（SEQ ID NO： 128和127）多功能多肽與過表達CD28、CTLA-4或PD-L1的Flp-in 293細胞表面的結合親和力。hCD80-Fc/抗-CLDN18.2 Ab ScFv-Fc（形式J）（SEQ ID NO： 128和126）（SEQ ID NO： 128和127）多功能多肽和hCD80-Fc顯示了對Flp-in 293 CD28細胞的相似結合親和力。與hCD80-Fc多肽的那些與相同細胞結合的EC₅₀ 是0.02 μg/mL相比，hCD80-Fc/抗-CLDN18.2 Ab1 ScFv-Fc（形式J）（SEQ ID NO： 128和126）和hCD80-Fc/抗-CLDN18.2 Ab12 ScFv-Fc（形式J）（SEQ ID NO： 128和127）多功能多肽與Flp-in 293 CTLA4細胞結合的EC₅₀ 分別為0.40 μg/mL和0.64 μg/mL。與hCD80-Fc多肽的那些與相同細胞結合的EC₅₀ 是9.3 μg/mL相比，hCD80-Fc/抗-CLDN18.2 Ab1 ScFv-Fc（形式J）（SEQ ID NO： 128和126）和hCD80-Fc/抗-CLDN18.2 Ab12 ScFv-Fc（形式J）（SEQ ID NO： 128和127）多功能多肽與Flp-in 293 PD-L1細胞結合的EC₅₀ 分別為172.4 μg/mL和75.6 μg/mL。抗-CLDN18.2 Ab-hCD80（形式F）（SEQ ID NO： 122和123）（SEQ ID NO： 124和125）多功能多肽顯示喪失與Flp-in 293 CD28細胞的結合活性。與hCD80-Fc多肽的那些與相同細胞結合的EC₅₀ 是0.02 μg/mL相比，抗Anti-CLDN 18.2 Ab12-hCD80（形式F）（SEQ ID NO： 122和123）和HuCLDN18.2-v.24.hCD80（形式F）（SEQ ID NO： 124和125）多功能多肽與Flp-in 293 CTLA4細胞結合的EC₅₀ 分別為2.67 μg/mL和6.56 μg/mL。抗-CLDN 18.2 Ab-hCD80（形式F）（SEQ ID NO： 122 和123）（SEQ ID NO： 124和125）多功能多肽和hCD80-Fc顯示了對Flp-in 293 PD-L1細胞的相似結合親和力。 [實施例8-hCD80-Fc/抗-PD-L1和hCD80-Fc/抗-CLDN18.2多功能多肽在T細胞中的啟動] [hCD80部分在PD-L1或CLDN 18.2表達細胞上的錨定可以在T細胞啟動中提供共刺激活性]

修飾以在IL-2啟動子控制下表達螢光素酶報導基因的Jurkat細胞獲自Promega。IL-2啟動子活性的啟動需要兩個訊號，來自TCR/CD3的訊號1，其在測定中由抗CD3抗體提供，來自CD28共刺激的訊號2，其由各種測試分子提供。抗CD28激動劑抗體CD28.2（BioLegend）用作陽性對照，而培養基用作陰性對照。測試分子是hCD80-Fc、抗-PD-L1（Tercentriq，Genentech）、hCD80-Fc/抗-PD-L1（FormatA）（SEQ ID NO： 113、114和115）。

為了建立測定，將100μL/孔中的50,000 Flp-in 293 PD-L1表達細胞接種在平底不透明96孔板中，在37℃、5%CO₂ 培養箱中培養過夜。在向板上加入其他組分之前，將培養基完全倒出。將Jurkat效應細胞（IL-2報告細胞）與1 μg/mL的抗CD3抗體以2百萬/mL懸浮在含有10%胎牛血清的RPMI-1640中。將每孔五十微升的Jurkat效應細胞轉移到生長HEK-293 PD-L1細胞的板上。在30 μg/mL的培養基中以1:3連續稀釋製備測試分子，並將25 μL/孔的樣品一式兩份轉移到板上。將板在37℃、5%CO₂ 培養箱中培養6 h。為了檢測由測試分子啟動的IL-2啟動子活性，將Bio-Glo™螢光素酶測定底物（Promega）解凍並平衡至室溫。將七十五微升Bio-Glo™螢光素酶測定底物加到測定板的各孔中。簡單地將板混合，並使用光度計發光板讀數器測量螢火蟲發光計數。

進行類似的測定以評價hCD80-Fc/抗-CLDN18.2（形式A）（SEQ ID NO： 128、131和132）（SEQ ID NO： 128、133和134）活性，除了用HEK 293 CLDN18.2表達細胞系代替Flp-in 293 PD-L1表達細胞系。

hCD80-Fc/抗-PD-L1（形式A）（SEQ ID NO： 113、114和115）和hCD80-Fc/抗-CLDN 18.2（形式A）（SEQ ID NO： 128、131和132）（SEQ ID NO： 128、133和134）的資料分別總結在圖17和圖19A-B中。

圖17顯示了包含抗-PD-L1和hCD80部分的多功能多肽與Flp-in 293 PD-L1細胞上的PD-L1的結合提供IL-2啟動子啟動所需的共刺激訊號。在缺乏Flp-in 293 PD-L1細胞的情況下，相同的多功能多肽不啟動IL-2啟動子。

圖19A-B顯示了包含抗-CLDN18.2和hCD80部分的多功能多肽與HEK293-CLDN18.2細胞上的CLDN 18.2的結合提供IL-2啟動子啟動所需的共刺激訊號。在缺乏HEK293-CLDN18.2細胞的情況下，相同的多功能多肽不能啟動IL-2啟動子。缺少hCD80部分的兩種抗-CLDN 18.2抗體在該測定中沒有顯示活性。由於不存在匹配配體，包含抗-PD-L1和hCD80部分的多功能多肽在該測定中是無活性的。 [PD-1/PD-L1檢查點阻斷和CD28共刺激雙重功能]

為了評價hCD80-Fc/抗-PD-L1（形式A）（SEQ ID NO： 113、114和115）分子的雙重功能，PD-1和PD-L1相互作用阻斷以及對抗原遞呈細胞的hCD80和CD28共刺激活性，使用來自Promega的PD-1/PD-L1檢查點阻斷測定系統。在該系統中，效應細胞（NFAT），一種遺傳修飾的Jurkat細胞系）在NFAT啟動子的控制下表達TCR/CD3、PD-L1和CD28和報告基因螢光素酶。人工抗原遞呈細胞系PD-L1 aAPC/CHO-K1在效應細胞上表達PD-L1和TCR/CD3識別的同源抗原。當Jurkat效應細胞（NFAT）與PD-L1 aAPC/CHO-K1細胞混合時，Jurkat效應細胞同時從aAPC/CHO-K1細胞接收TCR/CD3-抗原刺激訊號以及PD-L1阻斷訊號。結果，NFAT啟動子活性通過來自PD-1/PD-L1相互作用的訊號傳導而被抑制。在抗-PD-L1或抗-PD-1阻斷抗體存在下，NFAT啟動子活性未被抑制。此外，在hCD80-Fc/抗-PD-L1（形式A）（SEQ ID NO： 113、114和115）多功能多肽的存在下，它不僅阻斷PD-1/PD-L1訊號傳導，而且提供hCD80/CD28共刺激活性，由此增強從TCR/CD3-抗原相互作用接收的NFAT啟動子活性。 [實施例9-通過ELISA測定含有多功能多肽的mCD80-Fc/抗-PD-L1與CD28、CTLA-4和PD-L1的結合親和力] [通過ELISA進行CD28結合測定]

為了通過ELISA測試對CD28的結合親和力，首先用5 μg/mL來自安捷倫的抗生蛋白鏈菌素-plus（Streptavidin-plus）（目錄號SA26）包被ELISA板，在4℃過夜。第二天，除去抗生蛋白鏈菌素-plus並用PBST洗滌三次。然後將板用2%BSA在37℃封閉1小時。除去2%BSA溶液後，將板用PBST洗滌三次。將來自Acro的生物素化的人CD28，Fc標籤（目錄號CD8-H82F2）或來自SB的生物素化的小鼠CD28，Fc標籤（目錄號50103-M08H）加到每個孔中，並在37℃下培養1小時。以100μL/孔加入純化的mCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽的樣品，一式兩份，連續稀釋，並在37℃培養2小時。用PBST洗滌3次後，加入二抗，100 μL/孔的來自SB的山羊抗小鼠IgG-Fc二抗（HRP）（目錄號SSA006），並在37℃培養1小時。將板用PBST洗滌三次，並加入100μL/孔的TMB底物。將板培養直至顯色。加入終止溶液以終止反應。在OD₄₅₀ 處讀板。通過ELISA對CD28的結合親和力的結果在圖22A-B和圖23A-B中示出。 [通過ELISA進行CTLA4結合測定]

為了通過ELISA測試對CTLA4的結合親和力，首先用1 μg/mL人CTLA4（購自SB，目錄號11159-H08H）或小鼠CTLA-4（購自SB，目錄號50503-M08H）包被ELISA板，在4℃過夜。第二天，將板用PBST洗滌三次。然後將板用2%BSA在37℃封閉1小時。除去2%BSA溶液後，以100μL/孔加入純化的mCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽的樣品，一式兩份，連續稀釋，並在37℃培養1小時。用PBST洗滌3次後，加入二抗，100 μL/孔的來自SB的山羊抗小鼠IgG-Fc二抗（HRP）（目錄號SSA006），並在37℃培養1小時。將板用PBST洗滌三次，並加入100μL/孔的TMB底物。將板培養直至顯色。加入終止溶液以終止反應。在OD₄₅₀ 處讀板。通過ELISA對CTLA4的結合親和力的結果在圖24A-B和圖25A-B中示出。 [通過ELISA進行hPD-L1結合測定]

為了通過ELISA測試對hPD-L1的結合親和力，首先用1 μg/mL人PD-L1（來自SB，目錄號10084-H08H）包被ELISA板，在4℃過夜。第二天，將板用PBST洗滌三次。然後將板用2%BSA在37℃封閉1小時。除去2%BSA溶液後，以100μL/孔加入純化的mCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽的樣品，一式兩份，連續稀釋，並在37℃培養1小時。用PBST洗滌3次後，加入二抗，100 μL/孔的來自SB的山羊抗小鼠IgG-Fc二抗（HRP）（目錄號SSA006），並在37℃培養1小時。將板用PBST洗滌三次，並加入100μL/孔的TMB底物。將板培養直至顯色。加入終止溶液以終止反應。在OD₄₅₀ 處讀板。通過ELISA對hPD-L1的結合親和力的結果在圖26A-B中示出。 [實施例10-通過FACS測定含有多功能多肽mCD80/抗-PD-L1結合親和力] [通過FACS進行細胞表面結合測定]

mCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽對過表達hCD28、mCD28、hCTLA-4、hPD-L1和mPD-L1的Flp-in 293細胞（Flp-in 293-hCD28、Flp-in 293-mCD28、Flp-in 293-hCTLA4、Flp-in 293-hPD-L1和Flp-in 293-mPD-L1細胞）的結合親和力（EC₅₀ ）通過FACS測定。FACS結合測定如下進行：將Flp-in 293細胞洗滌3次，然後用4%PFA固定細胞2分鐘並在室溫下以1000 rpm沉澱5分鐘。用PBS重懸細胞，洗滌3次。然後，將細胞重懸於3%BSA中並在4℃下培養1小時。將系列稀釋的mCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽加入到96孔板中。然後將細胞接種到96孔板中。將板在4℃下培養12小時。用含3%BSA的PBS洗滌板3次。將二抗加入板中並在4℃培養1小時。洗滌細胞並通過FACS分析。通過FACS的結合親和力的結果示於圖27-31中。 [實施例11-mCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽在腫瘤生長抑制小鼠模型中的體內功效評價] [mCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽在腫瘤生長抑制MC-38-人PD-L1小鼠模型中的體內功效評價]

mCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽在同源小鼠模型中抑制腫瘤生長的功效評價如下進行。將1×10⁶ 個MC 38-人-PD-L1細胞懸浮在含有50%基質凝膠的100μL DMEM中。然後將細胞皮下接種到C57BL/6小鼠的右側脅腹。當平均腫瘤體積達到所需平均大小（72mm³ ）時，將小鼠隨機分成不同組。小鼠為在第0天、第3天和第6天按0.15 mg/小鼠的劑量I.P注射不同蛋白質。使用卡尺在兩個維度上每週測量腫瘤體積三次，並且使用以下公式以mm³ 表示體積：V=0.5a× b² ，其中a和b分別是腫瘤的長直徑和短直徑。資料顯示在圖32中。

無。

圖1A顯示了本發明的多功能多肽的各種形式和命名（KIH=具有杵臼（knob-in-hole）突變的Fc）。

圖1B是顯示用抗-PD-L1作為圖1A所示形式的疾病相關抗原結合結構域的示例性構建體的表。在一些實施方案中，疾病相關抗原結合結構域是抗-Claudin 18.2抗原結合結構域，例如抗-CLDN 18.2 Ab或HuCLDN 18.2-v.24。

圖2顯示了本發明的CD80-Fc和疾病相關抗原結合結構域表達構建體（LS=前導序列；CD80=胞外CD80；Fc、Fc-杵、Fc-臼=Fc變體；VL、VH、CH1、CL、scFv=疾病相關抗原結合結構域組分）。

圖3顯示了sc-hCD80二聚體-Fc/抗-PD-L1（形式B）和hCD80-Fc/抗-PD-L1（形式A）多功能多肽的SDS-PAGE分析。

圖4顯示了sc-hCD80二聚體-Fc/抗-CLDN 18.2 Ab3和sc-hCD80二聚體-Fc/HuCLDN 18.2-v.24（形式B）多功能多肽的SDS-PAGE分析。

圖5顯示了hCD80-Fc/抗-CLDN 18.2 Ab3和hCD80-Fc/HuCLDN 18.2-v.24（形式A）多功能多肽的SDS-PAGE分析。

圖6顯示了hCD80-Fc/抗-CLDN 18.2 Ab1 scFv-Fc和hCD80-Fc/抗-CLDN 18.2 Ab12 scFv-Fc（形式J）多功能多肽的SDS-PAGE分析。

圖7顯示了抗-CLDN 18.2 Ab12-hCD80和Hu-CLDN 18.2-v.24-hCD80（形式F）多功能多肽的SDS-PAGE分析。

圖8顯示了抗-PD-L1-hCD80（形式F）多功能多肽的SDS-PAGE分析。

圖9顯示sc-hCD80二聚體-Fc/抗-PD-L1（DVD）（形式D）多功能多肽的SDS-PAGE分析。

圖10顯示了hCD80-抗-PD-L1（形式H）和sc-hCD80二聚體-抗-PD-L1（LC）（形式I）多功能多肽的SDS-PAGE分析。

圖11是ELISA，顯示了與hCD80-Fc融合蛋白相比，hCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽與重組蛋白hCTLA-4或hPD-L1的結合親和力。

圖12通過FACS顯示了 hCD80/抗-PD-L1（形式A）多功能多肽對過表達hCD28、hCTLA-4或hPD-L1的Flp-in 293細胞表面的結合親和力。

圖13通過FACS顯示了 sc-hCD80二聚體-Fc/抗-PD-L1（形式B）多功能多肽對過表達hCD28、hCTLA-4或hPD-L1的Flp-in 293細胞表面的結合親和力。

圖14A-C通過FACS顯示了抗-PD-L1-hCD80（形式F）、sc-hCD80二聚體-Fc/抗-PD-L1（DVD）（形式D）、hCD80-抗-PD-L1（形式H）和sc-hCD80二聚體-抗-PD-L1（LC）（形式I））多功能多肽對過表達hCD28、hCTLA-4或hPD-L1的Flp-in 293細胞表面的結合親和力。

圖15A-B通過FACS顯示了 hCD80-Fc/抗-CLDN 18.2 Ab1 ScFv-Fc（形式J）、hCD80-Fc/抗-CLDN 18.2 Ab12 ScFv-Fc（形式J）、抗-CLDN 18.2 Ab12-hCD80（形式F）和HuCLDN18.2-v.24-hCD80（形式F）多功能多肽對過表達CLDN18.2的HEK 293細胞表面或內源性表達CLDN18.2的KATO III細胞表面的結合親和力。

圖16A-C通過FACS顯示了 hCD80-Fc/抗-CLDN 18.2 Ab1 ScFv-Fc（形式J）、hCD80-Fc/抗-CLDN 18.2 Ab12 ScFv-Fc（形式J）、抗-CLDN 18.2 Ab12-hCD80（形式F）和HuCLDN18.2-v.24-hCD80（形式F）多功能多肽對過表達hCD28、hCTLA-4或hPD-L1的Flp-in 293細胞表面的結合親和力。

圖17顯示了包含抗-PD-L1和hCD80部分的hCD80-Fc/抗-PD-L1（形式A）多功能多肽與抗原表達細胞（例如Flp-in 293 PD-L1細胞）的同時結合提供IL-2啟動子啟動所需的共刺激訊號。

圖18顯示了包含與抗原遞呈細胞和T細胞結合的抗-PD-L1和hCD80部分的hCD80-Fc/抗-PD-L1（形式A）多功能多肽不僅破壞了對NFAT訊號傳導的PD-1/PD-L1阻斷，而且提供了額外的NFAT啟動。阻斷PD-1/PD-L1並提供共刺激誘導更強的NFAT活性。

圖19A-B顯示了包含與抗原表達細胞結合的抗-CLDN 18.2和hCD80的多功能多肽提供IL-2啟動子啟動所需的共刺激訊號。

圖20通過FACS顯示了 hPD-L1抗體對過表達hPD-L1的Flp-in 293細胞表面的結合親和力。

圖21通過FACS顯示了 PD-L1抗體競爭性抑制hPD-1與過表達hPD-L1的Flp-in 293細胞表面的結合。

圖22A-B是ELISA，顯示了與mCD80-Fc融合蛋白相比，mCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽與重組蛋白hCD28的結合親和力。

圖23A-B是ELISA，顯示了與mCD80-Fc融合蛋白相比，mCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽與重組蛋白mCD28的結合親和力。

圖24A-B是ELISA，顯示了與mCD80-Fc融合蛋白相比，mCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽與重組蛋白hCTLA的結合親和力。

圖25A-B是ELISA，顯示了與mCD80-Fc融合蛋白相比，mCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽與重組蛋白mCTLA4的結合親和力。

圖26A-B是ELISA，顯示了與mCD80-Fc融合蛋白相比，mCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽與重組蛋白hPD-L1的結合親和力。

圖27通過FACS顯示了 mCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽對過表達hCD28的Flp-in 293細胞表面的結合親和力。

圖28通過FACS顯示了 mCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽對過表達mCD28的Flp-in 293細胞表面的結合親和力。

圖29通過FACS顯示了 mCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽對過表達hCTLA4的Flp-in 293細胞表面的結合親和力。

圖30通過FACS顯示了 mCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽對過表達hPD-L1的Flp-in 293細胞表面的結合親和力。

圖31通過FACS顯示了 mCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽對過表達mPD-L1的Flp-in 293細胞表面的結合親和力。

圖32顯示mCD80-Fc/抗-PD-L1多功能多肽在MC-38-人-PD-L1模型中的抗腫瘤活性。

Claims

一種PD-L1抗體，其包含表1的CDR-L1、表2的CDR-L2、表3的CDR-L3、表4的CDR-H1、表5的CDR-H2和/或表6的CDR-H3的氨基酸序列。
一種PD-L1抗體，其包含輕鏈的氨基酸序列，所述輕鏈包含表7中所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3組合中的任一個的序列。
一種PD-L1抗體，其包含重鏈的氨基酸序列，所述重鏈包含表8中所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3組合中的任一個的序列。
一種PD-L1抗體，其包含表9中所示的CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3組合中的任一個的氨基酸序列。
一種PD-L1抗體，其包含VL結構域，所述VL結構域包含SEQ ID NO：18-21和SEQ ID NO：57中任一個所示的氨基酸序列或包含與其至少80%同一性的序列。
一種PD-L1抗體，其包含VH結構域，所述VH結構域包含SEQ ID NO：23-33和SEQ ID NO：58-61中任一個所示的氨基酸序列或包含與其至少80%同一性的序列。
一種PD-L1抗體，其包含VL結構域和VH結構域，所述VL結構域包含SEQ ID NO：18-21和SEQ ID NO：57中任一個所示的氨基酸序列或包含與其至少80%同一性的序列，所述VH結構域包含SEQ ID NO：23-33和SEQ ID NO：58-61中任一個所示的氨基酸序列，或包含與其至少80%同一性的序列。
一種PD-L1抗體，其包含： a．VL結構域，其包含SEQ ID NO：18，或包含與其至少80%同一性的序列；和/或VH結構域，其包含SEQ ID NO：23，或包含與其至少80%同一性的序列； b．VL結構域，其包含SEQ ID NO：18，或包含與其至少80%同一性的序列；和/或VH結構域，其包含SEQ ID NO：24，或包含與其至少80%同一性的序列； c．VL結構域，其包含SEQ ID NO：18，或包含與其至少80%同一性的序列；和/或VH結構域，其包含SEQ ID NO：25，或包含與其至少80%同一性的序列； d．VL結構域，其包含SEQ ID NO：18；和/或VH結構域，其包含SEQ ID NO：26，或包含與其至少80%同一性的序列； e．VL結構域，其包含SEQ ID NO：18，或包含與其至少80%同一性的序列；和/或VH結構域，其包含SEQ ID NO：27，或包含與其至少80%同一性的序列； f．VL結構域，其包含SEQ ID NO：19，或包含與其至少80%同一性的序列；和/或VH結構域，其包含SEQ ID NO：28，或包含與其至少80%同一性的序列； g．VL結構域，其包含SEQ ID NO：19，或包含與其至少80%同一性的序列；和/或VH結構域，其包含SEQ ID NO：29，或包含與其至少80%同一性的序列； h．VL結構域，其包含SEQ ID NO：20，或包含與其至少80%同一性的序列；和/或VH結構域，其包含SEQ ID NO：30，或包含與其至少80%同一性的序列； i．VL結構域，其包含SEQ ID NO：21，或包含與其至少80%同一性的序列；和/或VH結構域，其包含SEQ ID NO：31，或包含與其至少80%同一性的序列； j．VL結構域，其包含SEQ ID NO：57，或包含與其至少80%同一性的序列；和/或VH結構域，其包含SEQ ID NO：32，或包含與其至少80%同一性的序列； k．VL結構域，其包含SEQ ID NO：18，或包含與其至少80%同一性的序列；和/或VH結構域，其包含SEQ ID NO：33，或包含與其至少80%同一性的序列； l．VL結構域，其包含SEQ ID NO：18，或包含與其至少80%同一性的序列；和/或VH結構域，其包含SEQ ID NO：58，或包含與其至少80%同一性的序列； m．VL結構域，其包含SEQ ID NO：57，或包含與其至少80%同一性的序列；和/或VH結構域，其包含SEQ ID NO：58，或包含與其至少80%同一性的序列； n．VL結構域，其包含SEQ ID NO：18，或包含與其至少80%同一性的序列；和/或VH結構域，其包含SEQ ID NO：59，或包含與其至少80%同一性的序列； o．VL結構域，其包含SEQ ID NO：18，或包含與其至少80%同一性的序列；和/或VH結構域，其包含SEQ ID NO：60，或包含與其至少80%同一性的序列； p．VL結構域，其包含SEQ ID NO：18，或包含與其至少80%同一性的序列；和/或VH結構域，其包含SEQ ID NO：61，或包含與其至少80%同一性的序列。
如請求項1至8中任一項所述的PD-L1抗體，其中所述抗體是抗原結合片段。
如請求項9所述的抗原結合片段，其中所述片段是Fab、 Fab′、F(ab')2、scFv、Fv、雙抗體或單鏈抗體。
如請求項1至8中任一項所述的PD-L1抗體，其中所述抗體是全長抗體。
如請求項11所述的PD-L1抗體，其中所述Fc是人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4。
如請求項11所述的PD-L1抗體，其中所述Fc是鼠IgGl、IgG2a、IgG2b或IgG3。
如請求項1至11中任一項所述的PD-L1抗體，其中所述抗體是人的。
如請求項1至11中任一項所述的PD-L1抗體，其中所述抗體是人源化的。
如請求項1至11中任一項所述的PD-L1抗體，其中所述抗體是嵌合的。
如請求項1至11中任一項所述的PD-L1抗體，其中所述抗體是單株的。
如請求項1至11中任一項所述的PD-L1抗體，其中所述抗體是綴合的。
一種編碼如請求項1至16所述的抗體中的任一個的多核苷酸。
一種包含如請求項19所述的多核苷酸的載體。
一種表達如請求項20所述的載體的細胞。
一種藥物組合物，其包含如請求項1至18所述的抗體的任一個；和任選的藥學上可接受的賦形劑。
一種多功能多肽，其包含： a．CD80胞外結構域； b．疾病相關抗原結合結構域；和 c．Fc結構域。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述CD80胞外結構域是單體。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述多肽包含所述CD80胞外結構域的兩個單體。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述多肽包含所述CD80胞外結構域的四個單體。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述CD80胞外結構域是單鏈二聚體。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述多肽包含所述CD80胞外結構域的兩個單鏈二聚體。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述CD80胞外結構域附著於所述Fc結構域的N末端。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述CD80胞外結構域附著於所述Fc結構域的C末端。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述CD80胞外結構域附著於所述疾病相關抗原結合結構域的N末端，並且其中所述疾病相關抗原結合結構域附著於所述Fc結構域的N末端。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述疾病相關抗原結合結構域包含scFv。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述疾病相關抗原結合結構域包含Fab或Fab'片段。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述疾病相關抗原結合結構域包含F(ab’)2片段。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述疾病相關抗原結合結構域包含Fv片段。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述疾病相關抗原結合結構域包含Fab'片段和Fv片段。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述疾病相關抗原結合結構域附著於所述Fc結構域的N末端。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述疾病相關抗原結合結構域附著於所述Fc結構域的C末端。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述疾病相關抗原結合結構域附著於所述CD80胞外結合結構域的N末端，所述CD80胞外結合結構域附著於所述Fc結構域的N末端。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述疾病相關抗原結合結構域附著於所述Fc結構域的N末端。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述多功能多肽包含兩個彼此偶聯的所述疾病相關抗原結合結構域。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述疾病相關抗原結合結構域附著於所述CD80胞外結構域的N末端，所述CD80胞外結構域附著於所述Fc結構域的N末端。
如請求項23所述的多功能多肽，其包含圖1A中提供的任一結構形式。
如請求項43所述的多功能多肽，其包含形式A。
如請求項43所述的多功能多肽，其包含形式B。
如請求項43所述的多功能多肽，其包含形式C。
如請求項43所述的多功能多肽，其包含形式D。
如請求項43所述的多功能多肽，其包含形式E。
如請求項43所述的多功能多肽，其包含形式F。
如請求項43所述的多功能多肽，其包含形式G。
如請求項43所述的多功能多肽，其包含形式H。
如請求項43所述的多功能多肽，其包含形式I。
如請求項43所述的多功能多肽，其包含形式J。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述多肽不包含圖1A中的形式A的結構形式。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述多肽不包含圖1A中的形式B的結構形式。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述多肽不包含圖1A中的形式C的結構形式。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述多肽不包含圖1A中的形式D的結構形式。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述多肽不包含圖1A中的形式E的結構形式。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述多肽不包含圖1A中的形式F的結構形式。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述多肽不包含圖1A中的形式G的結構形式。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述多肽不包含圖1A中的形式H的結構形式。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述多肽不包含圖1A中的形式I的結構形式。
如請求項23所述的多功能多肽，其中所述多肽不包含圖1A中的形式J的結構形式。
如請求項23所述的多功能多肽，其包含圖1A中提供的任一結構形式，其中所述抗原結合結構域不是PD-L1。
如請求項23所述的多功能多肽，其包含圖1A中提供的任一結構形式，其中所述抗原結合結構域不是Claudin 18.2。
如請求項23所述的多功能多肽，其包含圖1A中提供的任一結構形式，其中所述抗原結合結構域不是Her2。
如請求項23至66中任一項所述的多功能多肽，其中所述CD80胞外結構域衍生自人CD80。
如請求項23至66中任一項所述的多功能多肽，其中所述CD80胞外結構域包含與SEQ ID NO：34或SEQ ID NO：37具有至少80%、85%、90%、95%或100%氨基酸序列同一性的氨基酸序列。
如請求項67所述的多功能多肽，其中所述CD80胞外結構域在SEQ ID NO：34的位置130、131、139、155、156、165或166或SEQ ID NO：37的相應位置具有一個或多個氨基酸取代修飾。
如請求項69所述的多功能多肽，其中在SEQ ID NO：34的位置131處的氨基酸取代修飾是S131A、S131V、S131I、S131F、S131R、S131E、S131D或S131Q。
如請求項69或70所述的多功能多肽，其中SEQ ID NO：34的位置139處的氨基酸取代修飾是L139V。
如請求項69至71中任一項所述的多功能多肽，其中在SEQ ID NO：34的位置155處的氨基酸取代修飾是V155A、V155I或V155T。
如請求項69至72中任一項所述的多功能多肽，其中SEQ ID NO：34的位置165處的氨基酸取代修飾是A165S、A165V、A165I、A165F、A165R、A165E、A165D或A165Q。
如請求項69至73中任一項所述的多功能多肽，其中在SEQ ID NO：34的位置166處的氨基酸取代修飾是V166A、V166L或V166T。
如請求項23至74中任一項所述的多功能多肽，其中所述疾病相關抗原結合結構域是PD-L1結合結構域。
如請求項75所述的多功能多肽，其中所述PD-L1結合結構域包含： a．表1的CDR-L1、表2的CDR-L2、表3的CDR-L3、表4的CDR-H1、表5的CDR-H2和/或表6的CDR-H3的氨基酸序列； b．輕鏈的氨基酸序列，所述輕鏈包含表7中所示的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3組合中的任一個的序列； c．重鏈的氨基酸序列，所述重鏈包含表8中所示的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3組合中的任一個的序列； d．表9中所示的CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3組合中的任一個的氨基酸序列； e． VL結構域，其包含SEQ ID NO：18-21和SEQ ID NO：57中任一個所示的氨基酸序列或包含與其至少80%同一性的序列； f． VH結構域，其包含SEQ ID NO：23-33中任一個所示的氨基酸序列或包含與其至少80%同一性的序列；或 g． VL結構域和VH結構域，所述VL結構域包含SEQ ID NO：18-21和SEQ ID NO：57中的任一個所示的氨基酸序列或包含與其至少80%同一性的序列，所述VH結構域包含SEQ ID NO：23-33的任一個中所示的氨基酸序列或包含與其至少80%同一性的序列。
如請求項75所述的多功能多肽，其中所述PD-L1結合結構域包含阿特朱單抗（Atezolizumab）、Avelumab或Durvalumab的抗原結合序列。
如請求項23至74中任一項所述的多功能多肽，其中所述疾病相關抗原結合結構域是Claudin-18.2結合結構域。
如請求項23至78中任一項所述的多功能多肽，其中所述Fc結構域是人的。
如請求項79所述的多功能多肽，其中所述Fc結構域是人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 的Fc結構域。
如請求項23至78中任一項所述的多功能多肽，其中所述Fc結構域是小鼠的。
如請求項81所述的多功能多肽，其中所述Fc結構域為小鼠IgG1、IgG2a、IgG2b或IgG3 Fc結構域。
如請求項80所述的多功能多肽，其中所述Fc結構域為野生型人IgG1 Fc結構域。
如請求項80所述的多功能多肽，其中所述Fc結構域是突變人IgGl Fc結構域。
如請求項84所述的多功能多肽，其中所述突變人IgG1 Fc結構域包含降低的效應子功能。
如請求項84所述的多功能多肽，其中所述突變人IgG1 Fc結構域包含杵臼（knob-in-hole）突變。
如請求項86所述的多功能多肽，其中所述突變人IgG1 Fc結構域包含降低的效應子功能和杵臼突變。
如請求項79所述的多功能多肽，其中所述Fc結構域包含SEQ ID NO：100至111中任一項所述的氨基酸序列。
如請求項23所述的多功能多肽，其包含SEQ ID NO：113至135中任一項所述的氨基酸序列。
一種藥物組合物，其包含如請求項23至89所述的多功能多肽中的任一個；和任選的藥學上可接受的賦形劑。
一種多核苷酸，其編碼如請求項23至89所述的多功能多肽中的任一個。
一種包含如請求項91所述的多核苷酸的載體。
一種表達如請求項92所述的載體的細胞。
一種治療疾病或病症的方法，其包含：向其有需要的受試者施用治療有效量的如請求項1至18所述的抗體或請求項22至90所述的多功能多肽和藥物組合物中的任一種。
如請求項94所述的方法，其中所述疾病或病症選自癌症、感染性疾病或炎性疾病。