TW201800069A - 傷口中微生物感染檢測方法 - Google Patents

Abstract

本公開提供了微生物感染指示劑裝置，包括具有指示劑的敷料、可以自由地放置在傷口位置或敷料處的獨立的指示劑插入物或盤狀物，以及其用於在檢測到指示感染的被分析物或生物標誌物後向使用者顯示可見的或可檢測的信號如顏色變化的應用。

Description

傷口中微生物感染檢測方法

本文描述的實施方案一般地涉及傷口癒合，並且尤其涉及用於傷口的檢測和處理的組合物、設備和方法。

在哺乳動物中，皮膚損傷引發一連串有組織的複雜的細胞的和生物化學的事件，其導致癒合的傷口。傷口癒合是複雜的動態過程，其導致解剖連續性和功能的重建：理想地癒合的傷口是已經回到正常的解剖結構、功能和外觀的傷口。典型的傷口經由以下四個時期組成的模型癒合——“滲出性”階段、增殖階段、修復階段和上皮成熟(Hatz等,傷口癒合和傷口管理 (Wound Healing and Wound Management ), Springer-Verlag, Munich, 1994)或者止血、發炎、增殖和重塑階段(Nwomeh等,Clin. Plast. Surg . 1998, 25, 341)。發炎階段對於傷口癒合過程來說是特別重要的，其中，在傷口位置處的生物化學反應幫助癒合，但是也由於過量蛋白酶的產生造成組織損壞。

傷口的感染導致更慢的或者停止的癒合過程。例如，傷口中的病原體可以產生毒素(例如，梭菌屬(Clostridium )物質)，生成有害的代謝物像是提升pH的氨(例如，變形桿菌屬(Proteus )物質)，啟動或產生組織細胞溶解酶像是蛋白酶，或者促進組織侵入，從而引起傷口的尺寸或嚴重性的增加。在最壞的情況下，病原體可以離開傷口並且造成膿毒症。

為了保持制止傷口的慢性，在臨床和獸醫環境中使用了多種評估技術和/或工具。目前評估感染的傷口的方法主要基於對多種與傷口有關的參數進行化驗。例如，可以視覺評估傷口，可以採取長度和深度測量，可以在可行的情況下使用數位照相術以追蹤可見的傷口病況和尺寸(Krasner等,同上 )。在臨床實踐中，對感染的診斷是基於測量二次參數，如氣味、局部疼痛的存在、發熱、腫大、分泌物和充血。許多這些臨床指標，如炎症和分泌物，對傷口中的感染的預測價值低。在其他情況下，在傷口位置處的病原體群落的數量和種類可以使用實驗室和/或臨床診斷程序來確定。在醫院實驗室中，傷口的拭取及隨後的微生物測試是用於確認細菌移殖和鑒定與感染有關的種類的選項，因此允許正確抗菌過程的處方。然而，此過程是耗費大量的時間和人力。感染診斷中的延遲可能延遲抗生素的給藥，並且可能增加發展膿毒症的風險。

與現有臨床診斷相關的最大的缺點之一是與感染的發作和檢測的時機相關的滯後。例如，使用拭取程序對感染的陽性鑒定經常取決於在傷口位點處的微生物達到“臨界量”，所以不能進行早期檢測，直到達到可檢測的水準為止。而且，拭子可能被周圍組織的菌群污染，從而使診斷程序複雜化。其他缺點包括，例如，取樣誤差、拭子的運輸中的延遲、化驗程序中的誤差、和/或報告中的誤差。參見，Bowler等的回顧，Clin Microbiol Rev. 14(2): 244–269, 2001。

因此，對於能夠早期診斷臨床感染的診斷試劑和方法，優選允許在感染的臨床症狀顯現之前的臨床診斷的診斷試劑和方法，存在著迫切但卻未解決的需要。對於會在臨床症狀顯現之前輔助預測傷口的臨床感染的組合物和方法，也存在著需要。這樣的預測輔助物會允許在傷口惡化並且需要手術或其他激烈的干預以防止進一步感染之前用合適的處理(例如，抗微生物處理)進行早期干預。此外，如果臨床醫生可以對傷口感染儘早作出回應，則也可以用最小的抗生素用量處理感染。這會減少對住院的需要，並且會減少二次感染(例如作為接觸其他患病受試者的結果)的風險。

本文公開的技術提供了檢測感染的和/或慢性的傷口的組合物和方法。公開的技術通過以下方式改進了現有的化驗：增加了感染的傷口的檢測的靈敏性、精確性和特異性；提供了定性和定量測量的能力；以及增加了原位即時檢測感染的傷口的速度。本文描述的化驗和方法部分基於使用檢測在感染的或慢性的傷口中存在的生物標誌物和/或探針的特異性試劑。檢測過程可以包括使用對在感染的傷口中存在但在非感染的或非慢性的傷口中不存在的標誌物來說特異的試劑並且檢測步驟可以包括對在探針受標誌物作用時生成的一個或多個信號的定性或定量測量。在其中檢測方法包括對在傷口中存在的酶的檢測的實施方案中，探針包含針對該酶特異的改性酶底物，其生成可以任選地被放大的信號。這大大地提高了檢測的效率和特異性。此外，可以使用多種檢測探針，每種特異地針對一種或多種目標，例如，對傷口來說特異的酶。這大大有助於使診斷化驗的效率和精確度兩者最大化，同時使假陽性(例如，由於非特異性相互作用和/或靶冗餘(target redundancy)導致)的發生最小化。此外，本文公開的實驗結果證實，基於其的新型探針和化驗能夠檢測和表徵各種類型的傷口。最後，本文公開的技術的試劑可以與治療分子如抗生素、抗真菌劑等一起使用，以監測和評價慢性的傷口的處理和管理。

本文的實施方案部分地基於以下發現：免疫系統的細胞，包括通過其生成的酶，可以充當傷口的早期診斷的標誌物。這些細胞，例如嗜中性粒細胞，被補充在傷口位置處以對抗感染，通過吞噬細菌(和或其他病原體)和/或將它們用酶中和來對抗。一些酶是針對蛋白(例如，彈性蛋白酶、組織蛋白酶G)特異的，其他是針對細胞壁組分(例如，溶菌酶)以及其他間接蛋白變性(例如，NADPH氧化酶, 黃嘌呤氧化酶, 髓過氧化物酶(MPO)和其他過氧化物酶)特異的。這些細胞，例如嗜中性粒細胞，通常僅是短壽命的，並且當它們在感染的區域中溶解時，它們釋放它們的溶酶體，包括酶，所述酶可以隨後被檢測到以提供傷口狀態的可靠測量。

因此，本文所述的多種實施方案利用對酶標誌物的檢測，酶標誌物是在感興趣的生物樣品例如傷口組織中存在骨髓細胞並且尤其是嗜中性粒細胞的指示。在傷口液中這種酶的增加的水準或活性因此對應於提高的細菌挑戰和有利於入侵的細菌的被擾亂的宿主/細菌平衡的表現。

本文提供的是用於檢測傷口或樣品中的感染的傷口敷料、裝置和方法。一個實施方案是一種傷口敷料，所述傷口敷料包含傷口接觸層；包含一個或多個測試區域的試劑層，其中所述試劑層與所述傷口接觸層流體連通；和覆蓋所述試劑層的外層。在一些實施方案中，所述傷口接觸層包含凝膠形成聚合物。在進一步的實施方案中，所述一個或多個測試區域中的每一個包含一個或多個以下各項中的每一項：回流阱、試劑墊、過濾墊、指示劑阱、和吸收劑區，其中一個或多個觀察視窗定位在所述試劑墊或所述指示劑阱上方。在進一步的實施方案中，所述試劑墊與所述過濾墊流體連通；所述過濾墊與所述指示劑阱流體連通；並且所述指示劑阱與所述吸收劑區流體連通。

在其他實施方案中，所述一個或多個測試區域包含一個或多個選自由以下各項組成的組的試劑：酶反應性指示劑、作為過氧化物的來源的試劑、產生有色的產物的酶、pH指示劑、蛋白回應試劑、和水分檢測試劑。酶反應性指示劑包括蛋白質-指示劑共軛物，其被印刷、噴塗或以其他方式沉積在所述試劑墊之中或之上。在一些實施方案中，蛋白質-指示劑共軛物具有式(I)的結構：A-B，其中A是有助於使酶反應性區域結合到所述試劑墊的錨區域或部分，並且B是所述酶反應性區域。

在一些實施方案中，所述酶反應性區域包含肽和/或指示劑區域。在進一步的實施方案中，傷口敷料包含指示劑區域，所述指示劑區域在已經被樣品中的靶酶裂解之後，被選自由以下各項的輔助酶進一步轉化成有色物質：脂肪酶、酯酶、己糖胺酶、過氧化物酶、氧化酶、半乳糖苷酶、糖苷酶、葡糖苷酶、和漆酶、或其中兩項以上的組合。在一些實施方案中，所述酶反應性指示劑與彈性蛋白酶、溶菌酶、組織蛋白酶G、髓過氧化物酶、或它們的任意組合相互作用。在進一步的實施方案中，所述酶反應性指示劑包含在酶不穩定性或酶反應性區域與一種或多種酶的相互作用後能夠產生可見的顏色或可檢測的電子變化的部分，其中所述部分選自由以下各項組成的組：過氧化物酶底物、芳基胺、胺基苯酚、中性染料、帶電染料、奈米粒子、膠體金粒子、或它們的類似物。所述錨區域可以共價地、非共價地或離子地連接到所述試劑墊。在一些實施方案中，產生可見的顏色的pH敏感性試劑包含溴百里酚藍、苯酚紅、溴酚紅、氯酚紅、百里酚藍、溴甲酚綠、溴甲酚紫；硝嗪黃；或其他磺酞染料。

在一些實施方案中，所述傷口敷料也包含一個或多個貫穿除了所述外層之外所述傷口敷料的所有層的芯吸縫線(wicking stitching)或芯吸簇絨(wicking tufting)的線，其中所述芯吸縫線或芯吸簇絨提供在所述試劑層與所述傷口接觸層之間的流體連通。可濕的且展現毛細作用的纖維可以用於芯吸縫線或芯吸簇絨，以形成樣品或傷口與試劑之間的流體連通。在一些實施方案中，芯吸纖維是實心的或空心的。芯吸纖維的實例包括但不限於，棉、嫘縈、黏膠纖維、羊毛、絲、聚酯、聚醯胺、CMC、和聚丙烯。

在進一步的實施方案中，傷口敷料包含一個或多個測試區域，所述一個或多個測試區域包含與試劑墊流體連通的回濾阱(leach-back trap)和一個或多個僅在所述回濾阱處穿過一個或多個測試區域的芯吸縫線或芯吸簇絨的線。在一些實施方案中，在所述傷口接觸層和所述試劑層之間加入泡沫層。可以在所述傷口接觸層中或在所述泡沫層和所述傷口接觸層中加入一個或多個穿孔。在進一步的實施方案中，所述一個或多個測試區域中的每一個還包含與所述試劑墊流體連通的回濾阱和一個或多個與所述回濾阱對齊的穿孔。

在一些實施方案中，測試區域包含多通道測試區域，其中在所述多通道測試區域中的每一個通道被一個或多個不可滲透的隔離體或邊界與相鄰的通道隔開。這樣的多通道測試區域可以包含1至10個測試區域，優選3、4或5個測試區域，其中測試區域被設置成直線或放射狀配置。多通道測試區域的陣列可以被組合，以覆蓋更寬的傷口或傷口敷料的面積。在進一步的實施方案中，傷口敷料的所述外層包含一個或多個允許來自所述試劑層的信號可視化的視窗，其中所述信號是顏色變化。

這樣的傷口敷料或裝置提供了一種檢測在哺乳動物的傷口中的一種或多種酶的水準的方法，所述方法包括：將所述哺乳動物的傷口與所述傷口敷料接觸；觀察在所述試劑層中的一種或多種信號，其中所述信號是顏色變化；以及將所述信號與參照物或對照物比較，以確定所述酶的水準。在另一個實施方案中，傷口敷料可以用於檢測哺乳動物的傷口中的一種或多種酶的存在和/或pH，包括將所述哺乳動物的傷口與所述傷口敷料接觸以及觀察在所述試劑層中的一種或多種信號，其中所述信號是顏色變化。在另一個實施方案中，傷口敷料可以用於處理哺乳動物的傷口中的感染或用於確定何時這樣的處理是必須的，包括將傷口與本文所述的傷口敷料接觸，觀察在所述試劑層中的一種或多種信號，其中所述信號是顏色變化並且指示感染的存在，以及對所述哺乳動物執行醫學處理。

在一些實施方案中，一種用於檢測在傷口中的感染的裝置包含：傷口接觸層、反應層，所述反應層包含一種或多種可以指示一種或多種與感染相關聯的被分析物的存在的試劑，其中所述試劑被固定至固相並且在報導物區中產生可檢測的信號，在所述反應層的頂部上的覆蓋物，其中所述覆蓋物包含一個或多個視窗或空白區，以允許所述可檢測的信號如顏色變化的可視化，以及在所述傷口接觸層與所述反應層之間的流體連通。試劑包含與一種或多種選自由以下各項組成的組的酶相互作用的酶反應性指示劑：溶菌酶、MPO、組織蛋白酶G、彈性蛋白酶、過氧化氫酶、脂肪酶、酯酶、和它們的任意組合，至少一種用於pH或pH變化的指示劑，其中所述指示劑可以被印刷、噴塗或沉積在固相或支撐材料上，包括紙、黏膠纖維、再生纖維素、玻璃纖維、或類似的材料。在進一步的實施方案中，酶反應性指示劑包含在酶不穩定性或酶反應性區域與一種或多種酶的相互作用後能夠產生可見的顏色或可檢測的電子變化的部分，其中所述部分選自由以下各項組成的組：過氧化物酶底物、芳基胺、胺基苯酚、中性染料、帶電染料、奈米粒子、膠體金粒子、和它們的類似物。在進一步的實施方案中，裝置包含吸收劑材料的芯吸縫線或芯吸簇絨，以形成在所述傷口接觸層和所述反應層之間的流體連通。

一種作為獨立的實體被提供並且可以被放置到任何敷料或繃帶系統中的用於檢測與酶相關聯的感染的裝置，所述裝置包含與複數試劑小室流體連通的樣品入口，其中複數試劑小室包含用於樣品遞送和/或pH變化的指示劑(它們可以是同一種)、和一種或多種用於包括以下各項的感染的生物標誌物的指示劑：溶菌酶、MPO、組織蛋白酶G、彈性蛋白酶、過氧化氫酶、脂肪酶、酯酶、和它們的任意組合。流體連通包含至少一個指示劑通道、徑道或、狹長道(arm)，如一至十個指示劑通道，或一、二、三、四、五、六、七、八、九、或十個分開的指示劑通道，其中所述指示劑被印刷、噴塗或沉積在載體材料或固相上的反應區或區域中，並且被設置成放射狀配置以形成盤狀物，並且其中反應區或區域被不可滲透的隔離體或徑道隔開。載體材料可以包含非織物材料。在一些實施方案中，所述盤狀物包含被印刷、噴塗或沉積於在底表面上具有阱材料和底物材料的所述盤狀物的頂表面上的試劑，其中所述底物可以被樣品中的一種或多種酶消化以釋放一種或多種向阱遷移的產物。在進一步的實施方案中，一種或多種產物是有色的或產生能夠在所述盤狀物的所述頂表面上被可視化的顏色變化。

在附加的實施方案中，一種用於檢測傷口中的感染的診斷盤狀物包含：反應層，所述反應層包含一種或多種與指示感染的酶相互作用的試劑，其中所述試劑被固定至固相；每種試劑被噴塗、印刷或沉積在被不可滲透的隔離體隔開的試劑區中；每一個徑道包含報導物區，其中可以觀察顏色變化；和覆蓋物，所述覆蓋物包含用於將在被報導區中的顏色變化可視化的視窗。診斷盤狀物可以還包含至少一種回應於pH變化產生顏色變化的試劑。在所述診斷盤狀物中的多個徑道(其中每一個徑道含有不同的指示劑/試劑)可以以直線或放射狀配置設置在允許樣品或傷口接觸材料和在所述反應層中的所述試劑之間的流體連通的切口通路(cut access)、穿孔或芯吸材料周圍。試劑包括如上所述的指示劑，即，與溶菌酶、MPO、組織蛋白酶G、彈性蛋白酶、過氧化氫酶、脂肪酶、或酯酶相互作用的試劑。在一些實施方案中，所述診斷盤狀物包含選自由以下各項組成的組的固相材料：紙、黏膠纖維、再生纖維素、玻璃纖維、和類似的材料。在進一步的實施方案中，盤狀物連接到在傷口敷料中的非織物載體，其中此種連接的手段包括但不限於，連續黏合劑、環或環形黏合劑、用UV印刷的邊界接合、以及用聚乙烯組分或所述非織物載體接合。

在進一步的實施方案中，本文所述的試劑可以用於形成一種用於檢測在傷口中的感染的橫流或量桿裝置(dipstick device)，所述裝置包括一個或多個被設置成直線配置的試劑盤狀物，其中每一個試劑盤狀物浸透有與酶相互作用產生顏色變化或類似的可檢測的信號的試劑，其中所述盤狀物中的一個基於pH產生顏色變化，並且其中所述盤狀物被固定至固相，所述固相包含紙、黏膠纖維、再生纖維素、玻璃纖維、或類似的材料。試劑包括在溶菌酶、MPO、組織蛋白酶G、彈性蛋白酶、過氧化氫酶、脂肪酶、或酯酶的存在下產生顏色信號的酶反應性指示劑。在一個實施方案中，各盤狀物被不可滲透的邊界或徑道隔開。

在進一步的實施方案中，一種用於檢測在傷口或樣品中的感染的獨立的裝置包含外殼，所述外殼包含：用於收集所述樣品的採樣部件；與反應室流體連通的樣品準備室，其中所述樣品準備室接收所述樣品；所述反應室包含一個或多個含有與在所述樣品中的一種或多種酶相互作用以指示所述樣品的感染的存在和/或pH的試劑的反應小室；和用於將可檢測的信號可視化的視窗或空白區。其中所述信號是顏色變化或電子輸出。一種或多種試劑與選自由以下各項組成的組的酶相互作用產生可檢測的信號，其中所述信號是顏色變化：溶菌酶、MPO、組織蛋白酶G、彈性蛋白酶、過氧化氫酶、脂肪酶、和酯酶。一種或多種試劑回應於pH變化、鹼性pH或酸性pH產生顏色變化。在進一步的實施方案中，所述試劑在主要是液體的介質中進行反應，其中可以以用於所述反應小室中的片劑形式提供所述試劑。在一些實施方案中，試劑可以被印刷、噴塗或沉積於在支撐材料上的分開的試劑區中，以形成用在所述反應室中的試驗盤(panel)，如測試條。支撐材料包括紙、黏膠纖維、再生纖維素、和玻璃纖維。試劑區可以沿著塑膠或紙載體條排成一條線，所述載體條能夠在反應室中吸收樣品，允許樣品與在反應室中的試劑相互作用。在一些實施方案中，所述採樣部件包含拭子裝置，或鉤或針裝置，其適於在不擾亂敷料的情況下，從傷口敷料移除採樣線，以對傷口液採樣。

在進一步的實施方案中，一種用於檢測在樣品中的感染的套組包含：用於收集所述樣品的採樣部件；測試裝置，所述測試裝置包含外殼，所述外殼圍繞管以限定位於所述外殼中之用於接收所述採樣部件的開口，所述外殼包含：容納液體稀釋劑的稀釋劑室；與所述管或樣品液體連通的反應槽，所述反應槽容納一種或多種試劑，所述試劑與一種或多種被分析物相互作用而產生顏色變化或類似的可檢測的信號；觀察視窗或報導物區，其中可以觀察所述顏色變化或類似的可檢測的信號；和其中所述液體稀釋劑從所述採樣部件流動到所述反應槽中，以將所述樣品與在所述反應槽中的所述試劑混合。試劑包含一種或多種酶反應性指示劑和/或pH指示劑，如上所述。樣品可以從傷口、傷口敷料、或手術部位獲得。在一些實施方案中，採樣部件是拭子裝置或鉤或針裝置。可以以在接觸液體稀釋劑和樣品後溶解的片劑形式提供試劑。試劑也可以沉積於在測試條上的分開的區中，以形成可以被應用在反應槽中的試驗盤。

在另一個實施方案中，以用在反應槽中的液體形式提供試劑。反應槽的數量基於待分析的被分析物的數量，範圍從一至十，包括響應於pH或以下酶中的一種的存在產生可檢測的信號的指示劑：溶菌酶、MPO、組織蛋白酶G、彈性蛋白酶、過氧化氫酶、脂肪酶、和酯酶。反應槽可以以多種配置設置，包括直線或放射狀配置。

在另一個實施方案中，公開了一種傷口敷料，所述傷口敷料包含傷口接觸層；包含一個或多個測試區域的試劑層，其中所述試劑層與所述傷口接觸層流體連通；和覆蓋所述試劑層的外層。

在另一個實施方案中，公開了一種傷口敷料，其中所述一個或多個測試區域中的每一個包含一個或多個以下各項中的每一項：回流阱、試劑墊、過濾墊、指示劑阱、和吸收劑區，並且其中一個或多個觀察視窗定位在所述試劑墊或所述指示劑阱上方。

在另一個實施方案中，公開了一種檢測在哺乳動物的傷口中的一種或多種酶的水準的方法，所述方法包括：將所述哺乳動物的傷口與傷口敷料接觸；觀察在所述試劑層中的一種或多種信號，其中所述信號是顏色變化、螢光信號、發光信號、或電性變化；以及將所述信號與參照物或對照物比較，以確定所述酶的水準。

在另一個實施方案中，公開了一種檢測在哺乳動物的傷口中一種或多種酶的存在的方法，所述方法包括：將所述哺乳動物的傷口與傷口敷料接觸；以及，觀察在所述試劑層中的一種或多種信號，其中所述信號是顏色變化、螢光信號、發光信號、或電性變化。

在另一個實施方案中，公開了一種檢測在哺乳動物的傷口中的感染的方法，所述方法包括：將所述傷口與傷口敷料接觸；以及，觀察在所述試劑層中的一種或多種信號，其中所述信號是顏色變化、螢光信號、發光信號、或電性變化。

在另一個實施方案中，公開了一種用於檢測在傷口中的感染的裝置，所述裝置包含：傷口接觸層；反應層，所述反應層包含一種或多種可以指示一種或多種與感染相關聯的被分析物的存在的試劑，其中所述試劑被固定至固相並且在報導物區中產生可檢測的信號；在所述反應層的頂部上的覆蓋物，其中所述覆蓋物包含一個或多個視窗或空白區，以允許所述可檢測的信號的可視化；以及，在所述傷口接觸層與所述反應層之間的流體連通。

在另一個實施方案中，公開了一種傷口敷料，其中試劑墊與過濾墊流體連通；過濾墊與指示劑阱流體連通；並且指示劑阱與吸收劑區流體連通。

在另一個實施方案中，公開了一種用於檢測傷口中的感染的診斷盤狀物，所述診斷盤狀物包含：反應層，所述反應層包含一種或多種與指示感染的靶酶相互作用的試劑，其中所述試劑被固定至固相；每種試劑被噴塗、印刷或沉積在試劑區中，所述試劑區在被不可滲透的隔離體與相鄰徑道隔開的徑道中；每一個徑道包含報導物區，其中觀察顏色、顏色變化、或其他可檢測的信號；和覆蓋物，所述覆蓋物包含用於將在所述報導物區中的所述信號可視化的視窗。

在另一個實施方案中，公開了一種用於檢測在傷口中的感染的橫流或量桿裝置，所述裝置包括：一個或多個被設置成直線配置的試劑盤狀物，其中每一個試劑盤狀物浸透有與酶相互作用產生顏色變化的試劑和/或是pH敏感的試劑，包含溴百里酚藍、苯酚紅、溴酚紅、氯酚紅、百里酚藍、溴甲酚綠、溴甲酚紫；硝嗪黃；或其他磺酞染料，並且其中所述盤狀物被固定至固相。

在另一個實施方案中，公開了一種用於檢測在傷口或樣品中的感染的裝置，所述裝置包含外殼，其中所述外殼包含：用於收集所述樣品的採樣部件；與反應室流體連通的樣品準備室，其中所述樣品準備室接收所述樣品；所述反應室包含一個或多個含有與在所述樣品中的一種或多種酶相互作用以指示所述樣品的感染的存在和/或pH的試劑的反應小室；和用於將可檢測的信號可視化的視窗或空白區。其中所述信號是顏色變化。

在另一個實施方案中，公開了用於檢測在樣品中的感染的套組，所述套組包含：用於收集所述樣品的採樣部件；測試裝置，所述測試裝置包含外殼，所述外殼圍繞管以限定位於所述外殼中之用於接收所述採樣部件的開口，所述外殼包含：容納液體稀釋劑的稀釋劑室；與所述管液體連通的反應槽，其中所述反應槽容納一種或多種試劑，所述試劑與一種或多種被分析物相互作用而產生顏色變化或可檢測的信號；觀察視窗或報導物區，其中可以觀察所述顏色變化或可檢測的信號；和其中所述液體稀釋劑從所述採樣部件流動到所述反應槽中，以將所述樣品與在所述反應槽中的所述試劑混合。

應理解，由以下詳細描述，主題技術的其他實施方案和配置對本領域技術人員來說將是顯而易見的，在詳細描述中，作為實例或說明，顯示和描述了主題技術的多種配置。正如將認識到的，主題技術能夠是其他的和不同的配置，並且它的一些細節能夠在多個其他方面修改，全都不脫離主題技術的範圍。因此，附圖和詳細描述實質上是說明性的且不應視為限制性的。 〔通過引用結合〕

在此說明書中提到的所有公開物、專利和專利申請通過引用結合在此，正如具體地和單獨地指出將每一個單獨的出版物、專利或專利申請通過引用結合一般。

在下文中將更完整地描述公開的技術的各種方面。不過，這些方面可以以許多不同形式實現並且不應被解釋為受限於本文所陳述的實施方案；相反，提供這些實施方案是使得本公開更徹底和完整，並且將向本領域技術人員完全傳達它的範圍。

在本公開中，參考了各種專利、專利申請和公開物。這些專利、專利申請和公開物的公開內容通過引用全部併入在此公開中，目的是更完整地描述截至本公開日期所公知的現有技術。在引用的專利、專利申請和公開物與本公開之間存在不一致的情況下，以本公開為準。

本文提供的是檢測傷口中的感染的手段。在一些實施方案中，這些是能夠在這樣的感染以其他方式明顯顯現出之前檢測在一種或多種體液中的感染的傷口敷料。在一些實施方案中，傷口敷料與傷口滲出物或傷口液反應，以通過敷料中可見的或可以其他方式檢測的變化檢測傷口中的感染。在一些實施方案中，傷口滲出物或傷口液被傷口敷料抽吸上到試劑層，用於在不需要移除敷料的情況下評估可能的感染。在一些實施方案中，傷口滲出物或傷口液與試劑層反應，以使顏色或其他可見的或可觀察的標識物出現。在一些實施方案中，顏色與在傷口或體液中常見的那些顏色可以容易地區別。在一些實施方案中，在傷口滲出物或傷口液和傷口敷料的試劑層之間的反應在環境溫度並且在一段短得足以允許及時回應的時間內發生，所述回應如決定在清理傷口和檢查測試結果之後進行敷料更換，和/或進行殺菌劑或局部或全身抗生素給藥。在一些實施方案中，顏色或其他可見的或可觀察的標誌物和/或顏色或可見的或可觀察的標誌物的位置指示一個或多個需要更密切注意和/或抗菌的傷口區。在一些實施方案中，顏色變化功能包埋在敷料的僅僅可見的敷料變化的部分中。在進一步的實施方案中，使顏色變化或其他可見的或可觀察的標誌物發生的試劑層是單獨的裝置、盤狀物或插入物，能夠在手術或傷口部位與任何傷口敷料一起應用，或本身作為量桿型的裝置。在進一步的實施方案中，在“拭子樣品製備裝置”或傷口液插入其中的獨立裝置中施用指示劑試劑。在一些實施方案中，將指示劑試劑直接印刷在支撐材料，如傷口敷料中的各個層上。

在本文公開的一些實施方案中，傷口敷料包含傷口接觸層；包含一個或多個測試區域或指示劑試劑的試劑層；和覆蓋所述試劑層的外層。傷口敷料可以包含一個或多個測試區域，其進一步包含以下各項中的一項或多項：回流阱、試劑墊、過濾墊、指示劑阱、和吸收劑區，其中觀察視窗定位在所述試劑墊或所述指示劑阱上方，並且所述試劑墊與所述過濾墊流體連通；所述過濾墊與所述指示劑阱流體連通；並且所述指示劑阱與所述吸收劑區流體連通。

在一些實施方案中，測試區域包含一個或多個選自由以下各項組成的組的組分：酶反應性指示劑、作為過氧化物的來源的試劑、能夠轉化顏色反應的酶、pH指示劑、蛋白回應試劑、和水分檢測試劑。酶反應性指示劑可以包含蛋白質-指示劑共軛物。

在一些實施方案中，蛋白質-指示劑共軛物沉積在所述試劑墊之中或之上。在一些實施方案中，蛋白質-指示劑共軛物具有式(I)的結構：A-B，其中：A是用於連接到測試區域的錨區域；並且B是酶反應性區域。在進一步的實施方案中，酶反應性區域包含肽或指示劑區域。錨區域可以共價地或非共價地連接到試劑墊。

在進一步的實施方案中，傷口敷料包含一個或多個貫穿除了所述外層之外所述傷口敷料的所有層的芯吸縫線或芯吸簇絨的線。一個或多個測試區域還包含與試劑墊流體連通的回濾阱，一個或多個僅在所述回濾阱處穿過一個或多個測試區域中每一個的芯吸縫線或芯吸簇絨的線。在進一步的實施方案中，傷口敷料包含在所述傷口接觸層和所述試劑層之間的泡沫層。在一些實施方案中，傷口敷料還包含一個或多個在所述傷口接觸層中的穿孔。

在一些實施方案中，其中所含的酶不穩定性或酶反應性區域可以與靶酶相互作用，所述靶酶包括彈性蛋白酶、溶菌酶、組織蛋白酶G、和髓過氧化物酶。在進一步的實施方案中，酶不穩定性或酶反應性區域包含能夠在酶不穩定性或酶反應性區域與一種或多種靶酶的相互作用後能夠產生可見的顏色或可檢測的電性變化的部分，該部分選自過氧化物酶底物、芳基胺、胺基苯酚、吲哚酚、中性染料、帶電染料、奈米粒子、和膠體金粒子、及它們的類似物。在一些實施方案中，在靶酶將指示劑從底物裂解之後，它進一步被選自以下各項的輔助酶反應：脂肪酶、酯酶、己糖胺酶、過氧化物酶、氧化酶、糖苷酶、葡糖苷酸酶、葡糖苷酶、和漆酶、或它們中的項或多項的組合。

反應區域的應用可以包括用於與酶相關聯的感染的檢測的裝置，在如紙、黏膠纖維、再生纖維素、玻璃纖維、相同或類似材料的混合物的固相上，或沿著塑膠或紙載體條排成一直線。

在一些實施方案中，用於與特定酶相關聯的感染的檢測的試劑或指示劑插入物或盤狀物可以作為獨立的實體被提供並且被放置在任何敷料系統中，敷料系統包含樣品入口、朝向含有試劑的不同區的擴散通道、用於樣品遞送的指示劑和或pH的指示劑(其可以是同一種)、和一種或多種用於選自以下各項的以下標誌物的指示劑：溶菌酶、MPO、組織蛋白酶G、彈性蛋白酶、過氧化氫酶、脂肪酶、酯酶。

在一些實施方案中，酶不穩定區域對於蛋白酶是不穩定的，並且聚合物結合域(binding domain)選自纖維素結合域或者為疏水結合域。

在一些實施方案中，酶不穩定區域對於組織蛋白酶或彈性蛋白酶是不穩定的。

在一些實施方案中，化學實體選自小分子實體、改性低聚物、和改性聚合物。

另一方面，本文提供了一種用於在傷口中的感染的檢測的化學實體，所述化學實體包含指示劑區域，所述指示劑區域包含顯示出可見的顏色變化的pH敏感部分。

在一些實施方案中，化學實體還包含錨區域，其中錨區域能夠將化學實體結合到支撐材料。

在一些實施方案中，pH敏感部分在鹼性pH顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH敏感部分在中性pH顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH敏感部分在酸性pH顯示可見的顏色變化。

在一些情況下，傷口的pH可以影響傷口癒合的許多因素，如血管再生、蛋白酶活性、氧釋放、和細菌毒性。慢性的不癒合傷口可能具有提高的鹼性環境。當傷口朝癒合發展時，傷口的pH移動到中性並隨後變成酸性。檢測傷口的pH可以提供評估傷口的病況(例如，感染或無感染)的方法並輔助確定傷口對處理的回應。

因此，在公開的技術的一些方面，用於在傷口中的感染的檢測的化學實體包含指示劑區域，指示劑區域包含顯示可見的顏色變化的pH敏感部分。在一些實施方案中，化學實體還包含錨區域，其中錨區域能夠將化學實體結合到支撐材料。在一些實施方案中，pH敏感部分在鹼性pH顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH敏感部分在pH＝7.2～9.5顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH敏感部分在pH＝7.2～9.0顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH敏感部分在pH＝7.2～8.5顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH敏感部分在pH＝7.2～8.0顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH敏感部分在pH＝7.5～8.5顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH敏感部分在pH＝7.5～9.0顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH敏感部分在pH＝8.0～9.0顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH敏感部分在pH＝7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、或9.5、或它們的增量處顯示可見的顏色變化。

在一些實施方案中，pH敏感部分在中性pH顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH敏感部分在pH＝6.9、7.0、或7.1、或它們的增量處顯示可見的顏色變化。

在一些實施方案中，pH敏感部分在酸性pH顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH敏感部分在pH＝4.5～6.8顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH敏感部分在pH＝4.5～6.5顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH敏感部分在pH＝5.0～6.8顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH敏感部分在pH＝5.4～6.8顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH敏感部分在pH＝5.4～6.5顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH敏感部分在pH＝4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8,或6.9、或它們的增量處顯示可見的顏色變化。

在一些實施方案中，pH敏感部分是溴百里酚藍、苯酚紅、溴酚紅、氯酚紅、百里酚藍、溴甲酚綠、溴甲酚紫；硝嗪黃；或其他磺酞染料。

其他實施方案包括印刷在敷料或固體支撐材料上的試劑、具有以各種陣列排列的指示劑盤狀物的量桿裝置、以及具有將體液或傷口液的樣品轉移到獨立的診斷裝置的分開的樣品準備室的裝置，所述診斷裝置在反應室中使用試劑丸劑、溶液或盤狀物，用於檢測與微生物檢測相關聯的生物標誌物。在進一步的實施方案中，將指示劑試劑印刷、噴塗或覆蓋在支撐材料如敷料、傷口敷料、繃帶、濾紙和測試條上。

一般地，當病原體遇到人體內部時，細胞通過先天感受器系統(innate receptor system)對損傷、毒素或對細菌細胞壁作出反應。所有這些識別情況都導致先天免疫細胞的募集。這些細胞被病原體如細菌刺激，以啟動通常存在於多形核白細胞(PMN)中的並且在性質上主要是酶性的殺菌系統。細胞吞噬細菌並用水解蛋白的酶(例如，蛋白酶、彈性蛋白酶、組織蛋白酶G)和水解細胞壁的酶(溶菌酶)、或介導蛋白變性的酶(NADPH氧化酶、黃嘌呤氧化酶、髓過氧化物酶(MPO))將其溶解。這些PMN一般僅是短壽命的，且自身會在感染區溶解。當它們溶解時，它們釋放它們的溶酶體的內容物，包括酶。

因此，這些酶是用於骨髓細胞且尤其是PMN的存在的生物標誌物。因此，在傷口液中這些酶的上升的水準對應於提高的細菌挑戰和沒有正在被先天防衛充分解決的細菌挑戰。這些酶水準與臨床感染的關聯已經使用臨床試驗途徑(Blokhuis-Arkes等, 2015)被驗證了。

此外，傷口的pH可以影響傷口癒合的許多因素，如血管再生、蛋白酶活性、氧釋放、和細菌毒性。慢性的不癒合傷口和感染的或處於感染風險中的那些傷口通常具有提高的鹼性環境。當傷口朝癒合發展時，傷口的pH移動到中性並隨後變成酸性。檢測傷口的pH可以提供評估傷口的病況(例如，感染或無感染)的方法並輔助確定傷口對處理的回應。

典型的橫流裝置利用了橫向的液體流動將給定樣品運輸到試驗構思。橫流試驗的益處包括快速得到結果、長期穩定性和低製造成本。這些特徵使得橫流實驗適合於多種應用，包括藥物尿檢，尤其是在醫院和醫務室中進行快速重點照護檢驗(point of care testing)是一種優勢。可以將測試條直接浸泡在以液體形式取得的樣品中。樣品行進過整個橫流條帶並且結合到可用的抗體，以引起可以在條帶上被可視地檢測的反應。然而，將此技術用於除了尿液或血液之外的樣品是有問題的。

針對傷口中感染的標誌物的早期檢測的優點是，可以在感染變得確定和感染的其他跡象變得明顯之前開始對感染的處理，所述跡象例如來自傷口的分泌物、發紅、疼痛和令人不快的氣味。在針對傷口液中標誌物的測試中的困難在於，傷口液的一致性和量差異巨大。例如，它可能是不足的而且是黏稠的，使得橫流試驗的使用困難。

因此，希望能有具有用於收集和測試取自傷口的流體樣品的單一的套組，其容易操作並且不受來自傷口的滲出物的類型或量的限制。本文描述的獨立的裝置套組的一個實施方案在一種套組中減輕了上述問題，所述套組包含採樣部件和測試裝置，其中測試裝置不依賴於橫流條帶將樣品通過裝置移動和完成診斷。

傷口敷料

在一些實施方案中，傷口敷料包含傷口接觸層；試劑層，所述試劑層包含一個或多個測試區域；和覆蓋所述試劑層的外層。在一些實施方案中，所述傷口敷料還包含在所述傷口接觸層和所述試劑層之間的保護減震層(例如泡沫或非織層)。在一些實施方案中，所述傷口敷料還包含一個或多個貫穿除了所述外層之外所述傷口敷料的所有層的芯吸縫線或芯吸簇絨的線。在一些實施方案中，所述傷口敷料還包含通過所述傷口接觸層、所述保護減震層或兩者的組合的穿孔。在一些實施方案中，這樣的穿孔允許傷口液從傷口轉移到所述試劑層。

傷口接觸層

在使用中，傷口敷料的傷口接觸層吸收傷口滲出物和/或傷口液。在一些實施方案中，所述傷口接觸層包含凝膠形成聚合物或水纖維(hydrofiber)。凝膠形成聚合物包括但不限於，纖維素、羧甲基纖維素(CMC)、羧基乙基纖維素、氧化纖維素(或其衍生物)、纖維素磺酸乙酯(cellulose ethyl sulfonate)、其他化學改性纖維素、果膠、藻酸鹽、殼聚糖、改性殼聚糖、透明質酸、多糖、或源自樹膠(gum-derived)的聚合物、或它們的任意組合。在一些實施方案中，傷口接觸層可以包含聚乙烯基吡咯烷酮、聚乙烯醇、聚乙烯醚、聚氨酯、聚丙烯酸酯、聚丙烯醯胺、膠原、明膠或它們的混合物。在一些實施方案中，傷口接觸層包含凝膠形成聚合物的纖維。在一些實施方案中，傷口接觸層包含凝膠形成(gel-forming)纖維的非織層。

在一些實施方案中，所述傷口接觸層還包含非凝膠形成聚合物。在一些實施方案中，傷口接觸層包含纖維素(例如，Lyocell)、改性纖維素(例如，黏膠纖維或嫘縈)、聚酯、絲、羊毛、尼龍、聚丙烯、Elastane或它們的混合物。

在一個實施方案中，傷口接觸層的厚度為0.1至10 mm，在一個優選的實施方案中其為0.1至5 mm且在再更優選的實施方案中其為0.3至3.5 mm。

保護減震層

在一些實施方案中，保護減震層提供對傷口的機械保護，並且通過充當用於蒸發的大表面積來幫助處理過量的滲出物。在一些實施方案中，保護減震層也可以充當接受流體流出試劑層或裝置的材料，並且可以通過試劑層或裝置抽吸或引導流體來增加功能性。合適的材料包括泡沫、(非膠凝的)纖維絨頭織物、(非膠凝的)非織物織物、以及設計的立體織物結構，如皺摺。設計的立體織物結構的實例示於圖 1 。優選地，用於保護減震層的材料具有機械減震性質，其不受與傷口滲出物接觸的影響或最小的影響。在一些實施方案中，保護減震層包含塑膠，所述塑膠是基於烯烴或烯烴衍生聚合物，如聚乙烯、聚丙烯、尼龍、聚氨酯、聚苯乙烯和聚氯乙烯。在一些實施方案中，這些材料可以還包含如表面活性劑或吸收劑的試劑，以改善它們的可濕性。

在一些實施方案中，親水聚氨酯泡沫厚度為2.5 mm(+/- 0.5 mm)，具有90 kg/m³ 至150 kg/m³ 的密度，≥12 g/g的吸收性。

芯吸縫線和 / 或芯吸簇絨

在一些實施方案中，從傷口接觸層到試劑層傷口液向試劑層的轉移藉由纖維絨簇(tuft)予以優化。在一些實施方案中，來自傷口接觸層的凝膠形成聚合物可以用作流體從傷口向試劑層的輸送機制。在一些實施方案中，凝膠形成聚合物的與在敷料的交替的層中的材料相比，增加的親水性允許提高到試劑層的芯吸作用。

在一些實施方案中，可以使用紗線提高流體從傷口接觸層到試劑層的毛細作用。這可以通過使用敷料的一個或多個層的縫線完成或使用穿過一個或多個敷料層的紗線的簇絨完成。

在一些實施方案中，芯吸縫線和/或芯吸簇絨選自各種可濕的且展現毛細作用的纖維。這樣的纖維包括但不限於，棉、嫘縈、黏膠纖維、羊毛、絲、聚酯、聚醯胺、和CMC纖維，實心的和中空的纖維。在一些實施方案中，芯吸縫線包含棉、聚酯、聚醯胺、聚丙烯、或它們的組合。在一些實施方案中，使用增加的股數或複絲紗線、增加的紗線線密度、和/或減少的纖維線密度可以增強紗線的毛細作用。在一些實施方案中，芯吸縫線包含棉。在一些實施方案中，芯吸縫線包含聚酯。在一些實施方案中，芯吸縫線包含聚醯胺。在一些實施方案中，芯吸簇絨包含CMC纖維。在一些實施方案中，芯吸跨過敷料層的所有區發生。在一些實施方案中，芯吸集中在直接位於試劑層下方或鄰近試劑層，以提供集中的、增強的與試劑層的芯吸作用和/或反應。

在一些實施方案中，使用親水紗線的通過水纖維和/或泡沫層的紗線的縫線提供芯吸能力。傷口液可以被紗線以更直接的路線芯吸到印刷的底物或反應層。紗線線密度的增加允許芯吸時間和/或所需流體量減少得更多。

在一些實施方案中，對傷口敷料中的水纖維-泡沫層壓體的針刺造成在敷料的泡沫側上的水纖維的絨簇。針刺的各種參數包括穿孔密度和穿透深度，如穿透1～10 mm的10～100個穿孔/cm² ，穿透2～9 mm的20～90個穿孔/cm² ，穿透3～8 mm的30～80個穿孔/cm² ，穿透4～8 mm的40～80個穿孔/cm² ，穿透5～8 mm的50～80個穿孔/cm² ，穿透6～8 mm的60～80個穿孔/cm² ，穿透6 mm的70個穿孔/cm² 。通過泡沫造成水纖維的通道，造成流體的豎直芯吸。水纖維絨簇使得流體和酶轉移能夠更快。用於簇絨的針的類型包括製氈的(冠狀(crown))、製氈的(規則的)、和叉形的。在一些實施方案中，使用製氈針允許通過泡沫層造成膠凝纖維絨簇，而不造成對泡沫或膠凝纖維的有害影響。穿透深度可以是1 mm、2 mm、3 mm、4 mm、5 mm、6 mm、7 mm、8 mm、9 mm、10 mm、11 mm或12 mm，或至少 6 mm、或小於 7 mm、小於 8 mm、小於 9 mm或小於 10 mm。優選地，穿透深度為6 mm，這使得在70 p/cm² 穿孔密度時豎直芯吸時間能夠減少18%。當穿孔密度增加時，在泡沫層上造成更多的水纖維絨簇。在6 mm的穿透深度處，在所有穿孔密度都看到增強的流體轉移。

在一些實施方案中，使用親水紗線的穿過水纖維和/或泡沫層的紗線縫線提供芯吸能力。針腳(stitch)可以是約1 mm、約2 mm、約3 mm、約4 mm、約5 mm、約6 mm、約7 mm、約8 mm、約9 mm、約10 mm、約11 mm、約12 mm、約13 mm、約14 mm、約15 mm、至少約5 mm、小於約6 mm、小於約7 mm、小於約8 mm、小於約9 mm或小於約10 mm。傷口液可以被紗線以更直接的路線芯吸到印刷的底物或反應層。紗線線密度的增加允許芯吸時間和/或所需流體量減少得更多。短的針腳(小於3.5 mm)不減少穿過泡沫層的芯吸所需的芯吸時間/體積。針腳可以是5 mm，以允許芯吸時間減少約45%。在一些實施方案中，針對兩種類型的紗線(高芯吸聚酯(連續絲)和標準聚酯線)的縫線，測試了組合厚度為4.3 mm的水纖維-泡沫層疊材料。測試了三個針腳長度，包括2.5 mm、3.5 mm、和5.0 mm。結合的針腳增強了流體轉移，同時增加的針腳長度減少了豎直芯吸時間。

穿孔

在一些實施方案中，敷料的各種層(如凝膠形成傷口接觸層和泡沫)的芯吸作用，在其具有出廠多孔率(factory porosity)且未進一步處理時是足夠的。在其他實施方案中，可以通過細緻的針刺以造成具有毛細作用的通道來增強芯吸作用。在一些實施方案中，針刺可以在敷料層的所有區發生，以提供一般增強的毛細作用。在一些實施方案中，針刺集中在直接位於到試劑層的共同入口下方或鄰近到試劑層的共同入口，以提供集中的、增強的毛細作用。在一些實施方案中，穿孔存在於敷料的所有層。在進一步的實施方案中，穿孔存在於傷口接觸層和試劑層之間的一個或多個層中。在一些實施方案中，可以通過增加針刺的穿孔密度以在每單位面積產生更高的穿孔數，來增加毛細作用。

穿孔允許通過水纖維和/或泡沫層到印刷的底物層的直接的流體轉移。孔越大，可以轉移的流體越多，減少了流體與印刷的底物層相互作用所需的芯吸時間/體積。然而，如果孔過大，可能影響敷料的流體處理能力。膠凝纖維水合後會膨脹，且可能阻礙凝膠織物的穿孔通道。可以使用皮下注射針形成穿孔。在更高的密度時，可以將豎直芯吸時間減少約28%。在一些實施方案中，豎直芯吸時間減少約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約45%或約50%。

反應或試劑層

在一些實施方案中，傷口接觸層或支撐它的層含有對傷口滲出物反應以指示潛在的感染的材料，或反應層。反應層可以包含一種或多種染料和/或支撐這些反應必須的試劑。在一個實施方案中，這些染料包含共軛到具有強離子官能、強對比顏色或形成顏色的能力的染料(如吲哚酚/靛藍)的胺基酸、肽、蛋白。在一個優選的實施方案中，敷料包含一個在敷料內的層，該層印刷有固定的捕集材料，所述染料結合到該捕集材料。此層任選地在敷料的外側部分或在敷料內的各個層處，使得它可以在沒有敷料變化的情況下或在敷料變化時被觀察到。

在另一個優選的實施方案中，反應層包含MPO底物、葡萄糖氧化酶和能量源，如葡萄糖或澱粉，和γ-澱粉酶。在另一個實施方案中，敷料含有粒子，所述粒子包含殼聚糖或衍生物，其在通過溶菌酶水解時釋放染料。這些染料可以是高度帶電的或以其他方式官能化的，以允許它們在信號解釋的位置處的積累。在另一個實施方案中，反應層包含化合物，如對 - 胺基苯酚、ABTS(2,2inophenol、ABTS(strate.在一些實施方案中，酸)二銨鹽)、3,3’-二胺基聯苯胺、3,4 二胺基苯甲酸、DCPIP、N,N -二甲基-對 - 苯二胺、鄰 - 聯茴香胺、對 - 苯二胺、4-氯-1-萘酚、鄰 - 苯二胺N -(4-胺基丁基)-N -乙基異魯米諾、3-胺基-9-乙基咔唑、4-胺基苯二甲醯肼、5-胺基水楊酸、2,2’-連氮基-雙(3-乙苯并噻唑啉-6-磺酸)、吲哚酚、靛藍、Fast Blue RR、4-氯-7-硝基苯并呋咱。在一些實施方案中，反應層包含芳基胺。在一些實施方案中，反應層包含胺基苯酚。在一些實施方案中，反應層包含胺基苯酚和胺基苯酚醚。在一些實施方案中，反應層包含吲哚酚。在一些實施方案中，反應層包含中性染料。在一些實施方案中，反應層包含帶電染料，例如，選自以下各項的染料：雷馬唑(remazole)亮藍、甲苯胺藍、活性黑5、雷馬唑(remazol)亮藍、活性紫5、和活性橙16、或其水解或氨解衍生物、甲苯胺藍、活性黑5、或其水解或氨解衍生物；活性紫5、或其水解或氨解衍生物；活性橙16、或其水解或氨解衍生物；二氯三嗪系反應性染料如活性藍4、活性紅120、活性藍2、活性綠19和活性棕10。在一些實施方案中，二氯三嗪系反應性染料顯示黑色。

在特別的實施方案中，反應層包含化合物，如含有磺醯基乙基-硫酸氫鹽-反應性-基團的反應性染料。在一些實施方案中，反應性染料是活性黑5、雷馬唑亮藍、活性紫5或活性橙16。在一些實施方案中，反應性染料是活性黑5。在一些實施方案中，反應性染料是雷馬唑亮藍。在一些實施方案中，反應性染料是活性紫5。在一些實施方案中，反應性染料是活性橙16。在一些實施方案中，反應性染料是活性黑5、雷馬唑亮藍、或活性紫5。在一些實施方案中，反應性染料是活性黑5或雷馬唑亮藍。

在一些實施方案中，反應層包含奈米粒子。在一些實施方案中，反應層包含膠體金粒子。在一些實施方案中，反應層包含帶電染料、吲哚衍生物、或魯米諾衍生物。特別地，反應層包含含有磺醯基乙基-硫酸氫鹽-反應性-基團的染料，例如，活性黑5、雷馬唑亮藍、活性紫5或活性橙16、或它們的組合；或含有二氯三嗪反應性基團的染料，例如，活性藍4、活性紅120、活性藍2、活性綠19和活性棕10、或它們的組合。

圖 3 顯示了包含指示劑單元或測試區域的反應小室的兩個實施方案。在圖 3 中的(A)中，使用芯吸纖維的縫線(21)幫助將傷口液或體液從傷口抽吸至試劑墊(22)，隨後通過測試區域(23和24)，並抽吸至吸收劑或蒸發區(25)。在圖 3 中的(B)中，設置有穿孔或切口通路(27)，如在試劑墊(22)中，以允許傷口液從傷口經由毛細作用流向試劑墊。試劑墊(22)可以包含與傷口中的微生物生物標誌物反應的試劑，如底物，與傷口液中以下物質反應：MPO(29)、彈性蛋白酶(30)、和溶菌酶(31)。在一些實施方案中，一個或多個測試區域可以包含磺酸過濾墊(23)和四級胺阱(24)。在一些實施方案中，一個或多個測試區域包含回濾阱(28)和胺回流阱或篩檢程序(29)。一些實施方案含有pH指示劑(32)和蛋白指示劑(33)，它們允許使用者檢測由傷口液中的微生物生物標誌物與試劑墊(22)中的試劑之間的反應導致的可見的信號。吸收劑或蒸發區(25)幫助從試劑墊(22)抽吸流體。在一個優選的實施方案中，不可滲透的隔離體(26)保持相鄰的測試區域分開。

在一些實施方案中，指示劑阱捕獲傷口液和選自由以下各項組成的組的一種或多種組分之間的反應產物：酶反應性指示劑、作為過氧化物的來源的試劑、能夠轉換顏色反應的酶、pH指示劑、和水分檢測試劑。在一些實施方案中，指示劑阱包含針對反應產物的帶正電的或帶負電的阱。在一些實施方案中，帶正電的阱包含四級胺聚合物、二級胺和三級胺的混合物、其他含胺聚合物、或它們的組合。在一些實施方案中，帶正電的阱包含聚DADMAC，或它們的類似物。在一些實施方案中，帶負電的阱包含含有羧基、硫酸根、磺酸根或其他酸性化學基團的聚合物或試劑。在一些實施方案中，帶負電的阱包含磺酸苯乙烯酯。在一些實施方案中，指示劑阱包含通過傷口液滲出的總蛋白指示劑，以指示測試區域的總體流動和容量。在一些實施方案中，對照物區域含有針對普遍存在的酶如酯酶或碳酸酐酶的底物，或針對普遍存在的代謝物像是乳酸酯、葡萄糖、氨或脂質的指示劑。在一些實施方案中，一個或多個測試區域包含磺酸過濾墊和四級胺阱。在一些實施方案中，一個或多個測試區域包含回濾阱、磺酸過濾墊和四級胺阱。在一些實施方案中，一個或多個測試區域的每一個用於評價一種或多種被分析物和一種或多種陽性或陰性對照指示劑的存在。在進一步的實施方案中，一種或多種被分析物與酶活性相關聯。在一些實施方案中，酶選自由以下各項組成的組中的一種或多種：彈性蛋白酶、溶菌酶、組織蛋白酶G、髓過氧化物酶、和白細胞過氧化物酶。在一些實施方案中，酶是彈性蛋白酶。在一些實施方案中，酶是溶菌酶。在一些實施方案中，酶是組織蛋白酶G。在一些實施方案中，酶是髓過氧化物酶。在一些實施方案中，酶是白細胞過氧化物酶。

在一些實施方案中，傷口敷料包含試劑層，試劑層包含一個或多個測試區域。在一些實施方案中，試劑層包含支撐材料。在一些實施方案中，支撐材料包含能夠被傷口液濕潤並且顯示毛細作用的織物或非織物材料。在一個優選的實施方案中，毛細作用在材料的平面中是均勻的。在一個優選的實施方案中，試驗區域以圓形排列，使得當施用液體時擴散發生在徑向上。支撐材料包括但不限於，紙、纖維素、纖維素衍生物、黏膠纖維、聚醯胺、聚酯、聚丙烯酸酯、和其他可用作纖維的類似聚合物、和它們的任意組合。在一些實施方案中，支撐材料是纖維素系的，如精製的紙，或含有黏合的纖維素纖維的非織物材料。在一些實施方案中，支撐材料是聚醯胺。在一些實施方案中，支撐材料是聚酯。在一些實施方案中，支撐材料是聚丙烯酸酯。在一些實施方案中，固體支撐體的功能是黏著底物並且提供被分析物酶可以進入並與檢測器相互作用的區域。在一些實施方案中，纖維素含量輔助酶底物的黏著，並且顯著的纖維素或纖維素類似物含量是優選的。

在一些實施方案中，一個或多個測試區域的每一個印刷在支撐材料之上或之中。在一些實施方案中，一個或多個測試區域的每一個包含用於傷口液的入口，用於傷口液與試劑反應的區(例如，試劑墊)、觀察一種或多種反應的每種產物的區、和用於積累過量傷口液的區(例如，吸收劑區)，過量傷口液隨後從足夠大的區蒸發，從而不由於積累的溶質而堵塞。在一些實施方案中，蒸發區幫助驅動更多傷口液的穿透。

圖 4 顯示指示劑在各種反應小室中的移動的多個實施方案。當在圖 4 的(A)的實施方案中測試區域暴露至傷口液時，傷口液從試劑墊(22)流到吸收劑或蒸發區(25)，如圖 4(A) 中的右面板中所示。圖 4 的(B)的實施方案顯示一種反應小室的實施方案，其中指示劑以徑向設置排列，並且其中流體在遇到試劑墊時從中心向外流動。圖 4 的(C)的實施方案圖示了如何可以使用多個反應小室覆蓋較寬的面積，帶有防止回流的阱回濾(41)。在一些實施方案中，試劑墊(22)的每一個試劑小室或徑道可以是不同的報導物或顏色系統，如溴百里酚藍、苯酚紅、溴酚紅、氯酚紅、百里酚藍、溴甲酚綠、溴甲酚紫；硝嗪黃；或其他磺酞染料。在傷口液的存在下，在一個實施方案中，試劑與傷口液中的被分析物相互作用，並且朝吸收劑或蒸發區(25)遷移或擴散。

在一些實施方案中，使用試劑需要捕集反應產物，並且為此，一個或多個測試區域的每一個包含試劑墊或試劑小室(22)、過濾墊(23)、指示劑阱(24)和吸收劑/蒸發區(25)。在包含顏色變化試劑的實施方案中，一個或多個測試區域的每一個包含也在觀察視窗下的試劑墊，以及吸收劑/蒸發區。在一些更進一步的實施方案中，一個或多個測試區域的每一個包含回濾阱，其是含有將試劑吸收並且防止它們回流到下方的敷料的吸收劑的阱區域。在一些實施方案中，外層覆蓋試劑層，以調節傷口液的蒸發，外層含有一個或多個視窗以將下面的來自一個或多個測試區域的指示劑阱和/或試劑墊可視化。

在一些實施方案中，一個或多個測試區域中的每一個檢測至少一種生物標誌物。在一些實施方案中，一個或多個測試區域中的每一個包含一個或多個不可滲透的隔離體，其中一個或多個測試區域的每一個檢測多於一種生物標誌物。在一些實施方案中，一個或多個不可滲透的隔離體是疏水的非滲透材料的印刷條帶。在一些實施方案中，一個或多個不可滲透的隔離體以平行的徑道排列。在一些實施方案中，一個或多個不可滲透的隔離體以徑向圖案排列。在一些實施方案中，一個或多個測試區域中的每一個檢測二種生物標誌物。在一些實施方案中，一個或多個測試區域中的每一個檢測三種生物標誌物。在一些實施方案中，一個或多個測試區域中的每一個檢測四種生物標誌物。在一些實施方案中，一個或多個測試區域中的每一個檢測五種生物標誌物。在一些實施方案中，一個或多個測試區域中的每一個檢測六種生物標誌物。在一些實施方案中，一個或多個測試區域中的每一個檢測七種生物標誌物。在一些實施方案中，一個或多個測試區域中的每一個檢測八種生物標誌物。在一些實施方案中，一個或多個測試區域中的每一個檢測九種生物標誌物。在一些實施方案中，一個或多個測試區域中的每一個檢測十種生物標誌物。在一些實施方案中，一個或多個測試區域中的每一個檢測一種或多種生物標誌物。

圖 5 顯示指示劑的徑向排列或徑向指示劑編排(patch)。如圖 5 的(A)中所示，測試區域或試劑可以以圓形或徑向取向排列。指示劑包括試劑(22)、四級胺阱(24)、和吸收劑或蒸發區(25)。在指示劑的中間的孔或切口通路(27)幫助將流體從傷口抽吸到指示劑中。流體通常將從通路(27)向外流動到蒸發區(25)。當試劑(22)暴露至傷口液並且對微生物生物標誌物作出反應時，所得的產物遷移到胺阱(24)，允許被使用者檢測。指示劑也可以具有不可滲透的隔離體或徑道(26)。如在圖 5 的(B)中所示，對於徑向指示劑編排，提供了頂視圖或“上方”視圖和底視圖或“下方”視圖。在一個實施方案中，底物可以被印刷成點，以允許更多的印刷自由。在兩側都設有具有黏合劑的水分不可滲透膜以允許徑向指示劑編排連接到泡沫或其他支撐材料。在一些實施方案中，每一個反應小室或徑道(45～48)可以是不同的報導物或顏色系統，允許在一個指示劑編排上分析多種被分析物。

在一些實施方案中，一個或多個測試區域的每一個包含選自由以下各項組成的組的一種或多種組分：酶反應性指示劑、作為過氧化物的來源的試劑、能夠轉化顏色反應的酶、pH指示劑、總蛋白檢測試劑、和水分檢測試劑。在一些實施方案中，作為過氧化物的來源的試劑選自過氧酸、過碳酸鈉、和生成過氧化物的氧化酶，如葡萄糖氧化酶或乳酸氧化酶。在一些實施方案中，能夠輔助顏色反應的轉化的酶選自過氧化物酶和漆酶。在一些實施方案中，一種或多種組分固定在一個或多個測試區域內。在一些實施方案中，通過傷口液使一種或多種組分在一個或多個測試區域內活動化。在一些實施方案中，一種或多種組分由於與傷口液的相互作用結合到一個或多個測試區域。在進一步的實施方案中，一個或多個測試區域的每一個還包含由緩衝劑、黏合劑和溶解度增強劑組成的組中的一項或多項。在一些實施方案中，一種或多種緩衝劑、黏合劑和/或溶解度增強劑改善了印刷或穩定性。

在一些實施方案中，一個或多個測試區域的每一個包含酶反應性指示劑，進一步包含酶不穩定性或酶反應性部分、將反應性指示劑保持就位的固定化部分、和在反應性指示劑與靶酶的相互作用後能夠產生可見的變化的部分。在一些實施方案中，每一個部分與其他明顯不同。在一些實施方案中，一個部分部分地或整體地結合另一個部分。在一些實施方案中，試劑墊包含一種或多種酶反應性指示劑。

在一些實施方案中，酶反應性指示劑是蛋白質-指示劑共軛物，如包含蛋白和染料材料兩者的蛋白酶底物。在一個優選的實施方案中，蛋白質-指示劑共軛物是具有到固相的結合官能(如與蛋白酶識別位點共軛的纖維素結合域)的蛋白，和在蛋白分解後釋放的染料。

在一些實施方案中，pH指示劑在鹼性pH顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH指示劑在pH＝7.2～9.5顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH指示劑在pH＝7.2～9.0顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH指示劑在pH＝7.2～8.5顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH指示劑在pH＝7.2～8.0顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH指示劑在pH＝7.5～8.5顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH指示劑在pH＝7.5～9.0顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH指示劑在pH＝8.0～9.0顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH指示劑在pH＝7.2、7.3、7.4、7.5、7.6、7.7、7.8、7.9、8.0、8.1、8.2、8.3、8.4、8.5、8.6、8.7、8.8、8.9、9.0、9.1、9.2、9.3、9.4、或9.5、或它們的增量處顯示可見的顏色變化。

在一些實施方案中，pH指示劑在中性pH顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH指示劑在pH＝6.9、7.0、或7.1、或它們的增量處顯示可見的顏色變化。

在一些實施方案中，pH指示劑在酸性pH顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH指示劑在pH＝4.5～6.8顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH指示劑在pH＝4.5～6.5顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH指示劑在pH＝5.0～6.8顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH指示劑在pH＝5.4～6.8顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH指示劑在pH＝5.4～6.5顯示可見的顏色變化。在一些實施方案中，pH指示劑在pH＝4.5、4.6、4.7、4.8、4.9、5.0、5.1、5.2、5.3、5.4、5.5、5.6、5.7、5.8、5.9、6.0、6.1、6.2、6.3、6.4、6.5、6.6、6.7、6.8、或6.9、或它們的增量處顯示可見的顏色變化。

在一些實施方案中，pH指示劑是硝嗪黃、溴甲酚紫或溴百里酚藍或它們的類似物。

在一些實施方案中，過濾墊移除傷口液的不必要的組分，如纖維蛋白原、白蛋白或球蛋白、以及細胞組分或非細胞碎屑，即，敷料組分、藥物、代謝物、微生物、微生物碎屑、微生物代謝物等。在一些實施方案中，回濾阱防止在試劑墊或試劑小室中的試劑回流進入在測試區域中的用於傷口液的入口。在一些實施方案中，過濾墊和/或回濾阱包含四級胺聚合物、二級胺和三級胺的混合物、其他含胺聚合物、或它們的組合。在一些實施方案中，過濾墊和/或回濾阱包含四級胺聚合物。在一些實施方案中，過濾墊和/或回濾阱包含二級胺和三級胺的混合物。在一些實施方案中，四級胺聚合物是聚二烯丙基二甲基氯化銨(聚DADMAC或聚DDA)。在一些實施方案中，二級胺和三級胺的混合物是聚乙烯亞胺(PEI)。在一些實施方案中，過濾墊和/或回濾阱通過用雙官能化試劑交聯被保持就位，雙官能化試劑如表氯醇、二縮水甘油基醚、二-環氧化物或芳基疊氮異硫氰酸酯。在一些實施方案中，這樣的試劑當與反應性含胺聚合物混合時連接不同的聚合物鏈並且將更長的聚DADMAC鏈捕集在基體內。在一些實施方案中，阱包含使用自由基引發劑如二苯甲酮原位聚合的丙烯酸膽鹼酯衍生物。在一些實施方案中，過濾墊和/或回濾阱包含含有羧基、硫酸根、磺酸根或其他酸性化學基團的聚合物或試劑。在一些實施方案中，過濾墊和/或回濾阱包含磺酸苯乙烯酯。

在一些實施方案中，指示劑阱捕獲傷口液和選自由以下各項組成的組的一種或多種組分之間的反應產物：酶反應性指示劑、作為過氧化物的來源的試劑、能夠轉換顏色反應的酶、pH指示劑、和水分檢測試劑。在一些實施方案中，指示劑阱包含針對反應產物的帶正電的或帶負電的阱。在一些實施方案中，帶正電的阱包含四級胺聚合物、二級胺和三級胺的混合物、其他含胺聚合物、或它們的組合。在一些實施方案中，帶正電的阱包含聚DADMAC、或它們的類似物。在一些實施方案中，帶負電的阱包含含有羧基、硫酸根、磺酸根或其他酸性化學基團的聚合物或試劑。在一些實施方案中，帶負電的阱包含磺酸苯乙烯酯。在一些實施方案中，磺酸苯乙烯酯在水中被稀釋到0.02至0.8%，並以此形式被印刷到支撐材料。在其他的實施方案中，磺酸苯乙烯酯被稀釋到約0.01%至2.0%、約0.01%至1.5%、約0.01%至1%、約0.05%至1%、約0.1%至1%或約0.5%至1%之間

在一些實施方案中，指示劑阱包含通過傷口液滲出的總蛋白指示劑，以指示測試區域的總體流動和容量。此區域與水分指示劑不同。在一個實施方案中，藍色聚磺酸酯染料如Evans或Trypan藍弱結合到三級胺阱。在蛋白到達時，染料被置換並且作為蛋白複合物被重新捕集在四級胺阱上。在另一個實施方案中，Coomassie Blue G250弱結合到磺酸苯乙烯酯區域並且被蛋白置換，以被重新捕集在四級胺阱上。從磺酸環境到增加效果的胺環境，染料經歷柔和的顏色變化。在另一個實施方案中，用四級胺阱的Ponceau S複合物重新印刷可視化區域，使得它是紅色，指示無功能。阱向藍色形式的轉變指示蛋白洗脫進程。

在系統中流體到達的指示劑的一個實施方案中，Brilliant Black或類似的暗四磺酸酯(dark tetra sulfonate)被印刷到試劑墊中，作為沒有任何聚合物複合的自由試劑。作為水溶性物質，它容易被傷口液活動化並且遷移到視窗，在那裡它被四級胺阱貪婪地捕集。高的聚磺化增加了對胺的親和力並且拒絕進一步被蛋白洗脫。在高分泌的情況下，染料從阱的最終移除也可以用於指示裝置的損耗或更換它的必要。

在一些實施方案中，一個或多個測試區域包含磺酸過濾墊和四級胺阱。在一些實施方案中，一個或多個測試區域包含回濾阱、磺酸過濾墊和四級胺阱。

在一些實施方案中，一個或多個測試區域的每一個用於評價一種或多種被分析物和一種或多種陽性或陰性對照指示劑的存在。在一些實施方案中，一種或多種被分析物與酶活性相關聯。在一些實施方案中，酶選自由以下各項組成的組中的一種或多種：彈性蛋白酶、溶菌酶、組織蛋白酶G、髓過氧化物酶、和白細胞過氧化物酶。在一些實施方案中，酶是彈性蛋白酶。在一些實施方案中，酶是溶菌酶。在一些實施方案中，酶是組織蛋白酶G。在一些實施方案中，酶是髓過氧化物酶。在一些實施方案中，酶是白細胞過氧化物酶。

在一些實施方案中，來自一個或多個測試區域的陽性結果(例如，對感染的指示)是以可見的變化的形式。在一些實施方案中，可見的變化是顏色。在一些實施方案中，顏色選自暗藍、暗綠、和黑。對本領域技術人員來說清楚的是，顏色變化的信號效果取決於周圍環境和對於來自傷口本身的干擾色的實際考慮。因此，紅色是對指示問題或對指示停止或未準備好的可用信號，但是它容易與和傷口液相關聯的顏色混淆。因此，不太可能從傷口顯現的顏色提供潛在較少的誤差源。在一些實施方案中，可見的變化是螢光的、發光的或通過物理手段作為媒介的，所述物理手段如電學、折射、氣體析出或聚合物狀態變化。一些螢光系統具有它們需要光源和可能需要變暗的房間或室用於觀察的缺點，然而，其他螢光系統不具有這樣的缺點。常規的顏色是在正常處理條件下可見的。考慮到顏色可能被流體如血液稀釋或覆蓋，還有一種實施方案，是使用雙重指示劑，其中將螢光指示劑與常規顏色指示劑混合。因此，如果區域被血液覆蓋，可以任選地用不可見光查詢結果，以確定信號是否存在。

外層

在一些實施方案中，外層包含不容易被傷口液穿透的聚合物。這樣的聚合物包括但不限於，聚烯烴、聚丙烯、聚乙烯、聚氨酯、聚醯胺、乙烯-乙烯醇(EVOH)、丙烯腈(PAN)、聚氯乙烯(PVC)、聚偏二氯乙烯(PVDC)、聚丙烯酸酯(例如，二丙烯酸(1-甲基-1,2-乙二基)雙[氧(甲基-2,1-乙二基)酯)或其他類似的疏水不可滲透的聚合物，在一些實施方案中，它們通過印刷、噴塗或薄膜吹塑作為膜被鋪設。在一些實施方案中，外層可透過水氣。在一些實施方案中，外層防止在特定區(例如，在觀察指示感染的可見變化的地方)的水分流失並且促進在其他特定區(例如，在過量傷口液積累的地方)的水分流失。

在一些實施方案中，反應層受到兩層保護：頂層和底層。底層通常具有一個允許流體樣品流入的開口。頂層通常防止樣品的過早蒸發，並且可以迫使它通過裝置遷移到蒸發區。頂層也可以含有一個或多個允許觀察或檢測試劑的響應的視窗。

裝置

在其他的實施方案中，本文公開的內容提供了一種裝置，其包含採樣部件和測試裝置，包含：

(a) 圍繞管的外殼，以限定位於所述外殼中之用於接收所述採樣部件的開口，所述外殼還具有安置在其中的：

(b) 密封的稀釋劑室，其連接到所述管，並且容納液體稀釋劑，液體稀釋劑用於將樣品從採樣端移除以形成液體試驗樣品；

(c) 與所述管液體連通的反應槽，所述反應槽容納能夠指示在試驗液體中被分析物的存在的試劑；和

(d) 強迫機制，其能夠將所述稀釋劑通過裝置移動，從室，經過採樣端，並進入反應槽中。

在一些實施方案中，通過驅動稀釋劑經過樣品並進入反應槽中，來操作該裝置，並且通過將稀釋劑流動經過樣品，製備試驗溶液。優選地，不需先將樣品與稀釋劑混合以製備試驗溶液並且隨後將該溶液經由橫流條帶移動到反應槽。稀釋劑移動經過樣品並到達反應槽意味著套組可以以最小數量的步驟被使用，例如，取得樣品，將採樣部件插入外殼中並啟動移動或驅動機制。此程序使使用者錯誤最小化並且因此使假陰性結果或誤診最小化。

在一些實施方案中，在一步或多步過程中迫使稀釋劑通過裝置。例如，在一步過程中，迫使稀釋劑通過裝置，這造成受迫進入反應槽的試驗液體。在多步過程，如兩步過程中，可以首先迫使稀釋劑通過裝置到達混合室，在那裡製備試驗液體。隨後可以在進一步的步驟中迫使該液體從混合室到反應槽。

在另一個實施方案中，為了樣品的分析，將樣品混合和置入的手段可以在分開的步驟中完成。在一個實施方案中，首先將樣品拭子插入到容納流體容器中，並隨後將同軸的柱塞推動到拭子上，以使稀釋的樣品射出到分析裝置中。在一個優選的實施方案中，通過使用如戈爾特斯(Goretex)膜移除氣體，該膜是氣體滲透和蒸氣滲透的，但液體水不可滲透。所述膜可以用於將剛剛注射的樣品除氣，以及將其中進行化驗的流體室排氣兩者。

在一個實施方案中，優選地，將稀釋的樣品通過微通道均等地分配到每個分析室。無論如何，當從室出來的每個出口含有Goretex膜時，反壓確保了每個室僅被填充一次。在更優選的實施方案中，液體樣品從組裝體的損失被在最後出口和裝置外部之間的吸收劑所阻止。

在其他的實施方案中，本文的公開內容提供了一種用於檢測在樣品中的被分析物或生物標誌物或靶的套組，所述套組包含：

(i) 採樣部件，其包含用於收集樣品的採樣端，和

(ii) 測試裝置，其包含外殼，所述外殼圍繞管以限定位於所述外殼中之用於接收所述採樣部件的開口，所述外殼還具有安置在其中的：密封的稀釋劑室，其連接到所述管，並且容納液體稀釋劑，液體稀釋劑用於將樣品從採樣端移除以形成試驗液體；與所述管液體連通的反應槽，所述反應槽容納能夠指示在試驗液體中被分析物的存在的試劑；和強迫機制，其能夠將所述稀釋劑通過裝置移動，從室，經過採樣端，並進入反應槽中。

密封的稀釋劑室可以含有指定體積的稀釋劑，使得預期體積的試驗溶液到達反應槽或多個反應槽。此外，在稀釋劑室和反應槽之間的通路優選在反應槽端部排氣，使得捕集的空氣不影響試驗溶液的流動通過裝置或阻止試驗溶液到達反應槽或阻止試驗液體恰當地填充反應槽。

外殼優選具有兩個能夠相對於彼此移動同時保持相互連接的部件。移動部件的行為可以提供強迫機制，稀釋劑通過該強迫機制移動通過裝置。稀釋劑可以通過稀釋劑室的壓縮被驅動通過裝置，所述壓縮迫使稀釋劑通過採樣端並到達反應槽或多個反應槽，排空壓縮室。稀釋劑室的壓縮可以在將外殼的部件相對於彼此移動時發生，如通過將一個部件滑動經過另一個。備選地，可以再將稀釋劑抽吸通過裝置，例如，通過將外殼的部件相對於彼此移動。

採樣部件優選包含手柄和採樣端，手柄優選包含與外殼中的開口接合的密封件，以當採樣部件完全插入管中時將管密封。密封件防止樣品和稀釋劑從裝置漏出，減少了來自傷口液的交叉污染的機會。優選地，密封件和管接合，以將採樣部件鎖定在裝置中，並且防止採樣部件在被使用後脫離。這進一步減少了來自採樣部件的交叉污染的機會。採樣部件優選啟動稀釋劑從稀釋劑室的釋放。

外殼可以包含鎖定機制，其在驅動機制已被啟動後將外殼鎖定就位並且防止裝置的重複使用。以此方式，立即顯然的是，裝置已經使用過了並且不能再次被使用。這使得來自例如在運送中已經錯誤地啟動了的裝置的錯誤結果或來自再次使用其試劑已經耗盡的裝置的錯誤結果最小化。

優選地，採樣部件在裝置中的插入釋放在稀釋劑室上的密封件。優選地，密封件是球閥或可以是薄膜或膜密封件或鴨嘴閥或其他本領域已知的止回閥，其在採樣部件被插入裝置中時被啟動。採樣部件優選地爆破、刺破或置換稀釋劑室上的密封件。

優選地，管與採樣部件的採樣端為相同或相似的尺寸，使得採樣端插入到管中的動作使得它沿著管壁被破碎，幫助樣品當稀釋劑從稀釋劑室被釋放並進一步被沖洗通過裝置後在稀釋劑中的分散。可以沿著管的整個長度或其僅僅一部分沖洗稀釋劑。當將從稀釋劑室驅動稀釋劑時，匹配管的採樣端的剪裁也迫使稀釋劑被沖洗通過尖端。優選地，管在其口部處較寬，以幫助插入。

優選地，稀釋劑室成形為像是波紋管(bellow)，以輔助室的壓縮，備選地，室可以是類似於在注射器中存在的柱塞和管的組合，或者樣品製備裝置，或者可以是由使用者用手壓縮的充氣的撓性小袋，或當密封件釋放時收縮的氣囊。

使用的方法

一方面，本文提供了使用本文所述的傷口敷料診斷和指示對於慢性傷口的處理的需要的方法。

在一些實施方案中，本文公開的方法和裝置檢測來自體液的生物標誌物或靶。在一些實施方案中，體液是血液、血漿、血清、腦脊髓液、唾液、尿或傷口滲出物。在優選的實施方案中，體液是傷口滲出物。

另一方面，本文提供了使用本文所述的傷口敷料診斷慢性傷口的方法。

另一方面，本文提供了使用本文所述的傷口敷料指示對於慢性傷口的處理的需要的方法。

另一方面，本文提供了使用本文所述的傷口敷料指示對於急性傷口的手術處理的需要的方法。

另一方面，本文提供了使用本文所述的傷口敷料檢測傷口中的感染的生物標誌物的方法。

另一方面，本文提供了使用本文所述的傷口敷料檢測傷口中感染的pH和/或生物標誌物的存在的方法。在一些實施方案中，感染的生物標誌物是白細胞酶。在一些實施方案中，傷口中的鹼性pH指示傷口中的感染。

另一方面，本文提供了使用本文所述的傷口敷料檢測傷口中的蛋白酶活性的方法。

另一方面，本文提供了監測傷口或手術部位的病況和它的癒合過程或狀況的方法。

實施例

實施例 1: 傷口敷料

合併了裝置的傷口敷料的構造的一個實例示於圖 2 中。在此實施例中的傷口接觸層是市售為“AQUACEL”的羧甲基纖維素，並且AQUACEL由聚氨酯泡沫支持。在裝置的感染指示區中的是在試劑層下的不可滲透區。連接到此區的是材料如聚酯線、甲基纖維素纖維、或類似的芯吸的、親水的、毛細的或類似的材料、或毛細通道。此流體連接使傷口滲出物或滲出液與試劑層接觸，在那裡它可以與指示劑試劑反應並使指示劑試劑活動化成為可見的產物，所述可見的產物是原位可見的或者被捕集在從敷料外側可見的視窗中。此實施例也說明了AQUACEL的使用。

在傷口敷料的一個實施方案中，顯示的是圖 2 中的橫截面。在該傷口敷料中，傷口接觸層(4)包含市售為AQUACEL的羧甲基纖維素。在圖 2 中，傷口接觸層(4)由聚氨酯泡沫(3)支持。在敷料的感染指示區中的是在試劑層(2)下且在聚氨酯泡沫(3)上的不可滲透區。因此，在此實施方案中，感染指示區設置在試劑層(2)和聚氨酯泡沫(3)之間。連接至感染指示區的是流體連接(1)部件，如材料如聚酯線、甲基纖維素纖維、或類似的芯吸的、親水的、毛細的或類似的材料、或毛細通道(1)。此流體連接部件(1)使傷口液與試劑層(2)接觸，在那裡它可以與指示劑試劑反應並使指示劑試劑活動化成為可見的產物，所述可見的產物是原位可見的或者被捕集在從敷料外側可見的視窗(6)中，如在圖 2 的(C)中所示的傷口敷料的頂視圖中所示的。如上文解釋的，圖 2 的視圖(A)和(B)顯示了傷口敷料(7)的側視圖。圖 2 的視圖(B)顯示了傷口液(5)的流動，從在底部的傷口接觸層(4)，經由毛細通道(1)向上，毛細通道可以通過使用芯吸纖維的縫線形成。傷口液與可以含有視窗(6)的試劑層(2)中的試劑反應，允許使用者觀察由傷口液與傷口敷料中的試劑之間的反應導致的信號。圖 2 的視圖(C)顯示傷口敷料(7)的頂視圖，其中在試劑層(2)的頂部上的不透明膜含有視窗或空白區(6)，其允許觀察與試劑和被分析物的相互作用相關聯的指示劑或變化。在一些實施方案中，可見的信號可以是指示傷口中的微生物感染的顏色變化。

實施例 2: 印刷有圖案化的反應性墨水以報導 MPO 活性的敷料材料。

敷料傷口接觸層具有上表面和下表面，其中下表面是傷口接觸層。試劑可以被噴塗或印刷在傷口敷料材料上。這樣的敷料的一個實施方案示於圖 6 中，其中(A)描繪傷口敷料材料的表面的視圖，並且圖示了傷口接觸材料的上側面；(B)表示噴塗有澱粉酶、澱粉和葡萄糖氧化酶的傷口材料；並且(C)表示印刷在噴塗區的中央的底物。

在備選的實施方案中，向上表面印刷多個層，如三個層，以報導MPO活性。在一個實施方案中，第一層是底物，其印刷在傷口敷料材料的上表面上，如以在乙醇/庚烷中30 mg/mL的濃度，使用0.8 mm的線寬和1 µL/cm的印刷密度。備選地，將Fast Blue底物印刷為多個圓的格子，每個圓直徑為3 mm(圖 6 )。在一個實施方案中，下一層是在羥丙基纖維素上的γ-澱粉酶和葡萄糖氧化酶的溶液的噴塗塗敷。材料可以在水緩衝溶液中被噴塗，使得每cm² 沉積大約3 µg的葡萄糖氧化酶，並行地，作為共軛物施用0.5 µg/cm² 的γ澱粉酶。在乾燥後，澱粉懸浮物可以以150 µg/cm² 的密度被噴塗。在印刷後，傷口接觸層優選結合到上保護層。可以在上保護層的上側面上印刷相同的印刷形式。當暴露至含有酶的人造傷口液時，格子隨時間經過變得藍色化。

實施例 3: 印刷有圖案化的反應性墨水以報導彈性蛋白酶活性的吸收劑材料。

在此實施例中，敷料具有吸收劑和保護層，保護層具有上表面和下表面，其中下表面與傷口接觸層接觸。向上表面上以1 cm格子間距印刷格子圖案。在一個實施方案中，如圖 8 中所示，用庚烷/丁醇中的AAPV-吲哚酚酯30 mg/mL的溶液，使用1 mm的線寬和1.3 µL/cm的印刷密度，進行印刷。圖 7 圖示了MPO和彈性蛋白酶底物的原位顏色發展的實施方案。

實施例 4: 多生物標誌物裝置插入物

可視化方法優選是直接印刷在報導物區的視窗中的固定的酶底物的顏色變化，或是由物質的疏水性和與載體材料的非共價化學相互作用造成的底物的固定化的顯現。在下文所述的本實施例中測試了塗敷的底物的量和可能的用於顏色改善的浸漬混合物。

報導物區和顏色信號的優化：從載體材料沖製出圓(直徑5 mm)，載體材料在這種情況下是濾紙。將圓用不同的緩衝劑混合物浸漬(見具體的試劑：人造傷口液2 %牛血清白蛋白在磷酸鹽緩衝的鹽水中，含有氯化鉀、脲pH 7.2)。參見圖 8 ，關於底物在水溶液中隨後有乾燥步驟的實例。在乾燥後，將不同量的底物(通常在有機溶液中)移液在試驗圓上。

如下測試對傷口液的反應性：將具有或不具有酶的10 µL試驗液體(緩衝劑或人造傷口液2 %白蛋白)移液在乾燥的試劑盤狀物上。將盤狀物在開放的空氣中或封閉的系統中溫育。在溫育後的各時間視覺評價顏色發展。所有觀察在室溫下，以模擬預期在敷料外的條件。

在對兩種可視化方法優化後，以實驗室規模製備原型，以測試不同酶底物的相互作用/它們的顏色發展。如在圖 7 和 9 中所示，設計和組裝原型。

在圖 7 和 9 顯示了不同指示劑的原位顏色發展的實施方案。圖 9 顯示了構建了具有用於溶菌酶、彈性蛋白酶和MPO檢測、pH指示劑和液體對照物的報導物區的原型。在(A)中的左邊部分上顯示了診斷材料。在(A)中的右邊部分上顯示了報導物區的放大。(B)顯示了在液體(人造傷口液0.5 %白蛋白，1 U/mL彈性蛋白酶，10 µg/mL MPO，30000 U/mL溶菌酶)施用之後的診斷區。實驗經2 h完成，流速為前10 min為100 µL/分鐘，隨後為10 µL/分鐘。以n=10重複實驗。

圖 10 、11 和12 中示出了診斷插入物或盤狀物的實施方案。圖 10(A) 顯示了診斷插入物的頂視圖，包含報導物區(60)、反應區(61)、和蒸發區(62)。圖 10(B) 顯示底層，包含不可滲透的塑膠膜的層，是白色的或透明的，直徑為約40 mm。中央的孔允許液體運輸並且具有約4 mm的直徑。底層以相同的形狀的黏合劑覆蓋，以用於準確固定在敷料上。圖 10 顯示了包含黏合層(C)和反應層(D)的反應材料的實施方案，其中每條狹長道具有不同的底物/指示劑和/或pH系統。圖 10(E) 顯示了覆蓋物，其包含不可滲透的白色塑膠箔，直徑為20 mm。外環可以具有25 mm的內徑和31 mm的外徑。頂層可以覆蓋有黏合劑，以用於準確固定在反應材料上。

組裝的完整的診斷插入物的頂視圖。見圖 10(A) 。報導物區被設計為一個視窗，其被近乎白色的層圍繞，以得到對顏色信號的最大對比度。在此實施方案中，由五條徑向狹長道，每條狹長道含有不同的報導物和顏色系統。在一個實施方案中三條是用於酶的且兩條是用於對照物的。

蒸發區確保通過診斷材料的連續液體運輸，對於報導物區中的酶反應和顏色發展來說是必需的。

作為液體阻隔物的底層在敷料和診斷材料之間。液體將優選僅通過在層中央的孔穿過，這導致向反應材料(診斷材料)的狹長道中的定向的徑向分配。

診斷材料被設計為具有四條或五條徑向“狹長道”，取決於想要包括的酶底物和對照物的數量。反應材料用醫用黏合劑固定在底層上。備選地，代替黏合劑，反應狹長道印刷或塗布有較不可滲透的底層(一種材料可以達成兩種目的)。

在一些實施方案中，裝置插入物包含至少一條狹長道或少於十條狹長道。狹長道的數量可以取決於樣品中待確定的被分析物的數量和一種或多種對照物(如果可用)。在進一步的實施方案中，裝置插入物包含一、二、三、四、五、六、七、八、九、或十條狹長道。

在組裝檢測材料前，按照上述優化的條件，用浸漬混合物和底物準備反應材料。

如在圖 10(E) 中所示，覆蓋物具有若干功能。首先，通過優選防止過早乾燥以優選地保持反應區域潮濕。流體應當穿過反應區，進入報導物區，在那裡有允許看到顏色變化的透明視窗。第二功能是，優選地避免液體流的停止以及覆蓋化學區，使得著色的試劑在它們被運輸到視窗之前不被看到。覆蓋物是水不可滲透的，並且包括用於信號可視化的視窗。

檢測材料優選用醫用黏合劑固定到水纖維敷料的泡沫支援層。

第一可視化方法的優化(積累和捕集)建立以下條件：

捕集混合物：1.5 µL的體積/10 mm² ，增稠劑甲基纖維素(Methocel A4C)最大1.25 %。在室溫乾燥至少1 h。

雷馬唑亮藍(Remazol Brilliant Blue)的運輸(圖 13 )和在含有胺基阱(三份)的阱覆蓋的報導物區中的可視化，試驗液體是人造傷口液2 % 白蛋白。此可視化方法用於溶菌酶-底物(由QZY獲得的結果)；在酶裂解之後釋放的和捕集的染料：雷馬唑亮藍)，和液體對照物(染料:Brilliant Black BN)。

圖 13 顯示了在將反應區(C)暴露至人造傷口液後報導物區(D)中的染料的可視化。流體流動的方向是從反應區(C)到報導區(D)，還包含胺基阱。實驗進行三次。

第二可視化方法(原位顏色變化)的優化導致用於MPO-底物、彈性蛋白酶底物和pH指示劑的清楚地著色的信號。

MPO-底物：在此實施例中的MPO底物是Fast Blue衍生物。底物在50°C乙醇中是可溶的。在將1.5 µL的飽和溶液在報導物區移液後，隨後乾燥步驟(20 min, 室溫)之後，底物不能被人造傷口液2 %白蛋白活動化。稍微米黃色的MPO底物通過MPO在發展下轉變成在報導物區中的深藍到黑色。因為MPO反應是H₂ O₂ 依賴性的，在反應區中印刷基於葡萄糖/葡萄糖氧化酶的H₂ O₂ 生成系統。

優化的條件導致圖 7 中所示的結果。試驗圓含有1.5 µL如上所述的MPO底物、10 µg 葡萄糖和1 µL的在水中的0.1 % 葡萄糖氧化酶(1 µg)。在將試驗圓乾燥後，塗敷5 µL 試驗液體(人造傷口液2 % 白蛋白，pH 7，不具有/具有MPO)。圖 7 的照片取自2 min溫育時間後。

彈性蛋白酶底物：彈性蛋白酶底物由AAPV保護的Fmoc構成，酶識別基序(胺基酸序列AAPV)酯化成吲哚酚部分。它在有機溶劑中可溶，但是在水性溶液中完全不可溶。在酶裂解後，吲哚酚被釋放並且立即被氧化成固定的藍色靛藍染料(圖 8 )，在報導物區中可見。

優化的條件導致圖 7 中所示的結果。在第一步驟中，試驗圓被浸漬混合物(0.25 %(w/w)諾乃洗滌劑(Nonidet)，2 %(w/w)癸醇在0.05 M硼酸鹽緩衝劑中pH 8)浸漬。為此，將兩相溶液混合，直至形成乳白色的分散液。將此分散液轉移到玻璃容器中。將試驗圓在浸漬混合物中洗滌1～2 min。隨後將濾紙放在玻璃板上並在54°C乾燥1～2 h。

在接下去的步驟中，將彈性蛋白酶-底物(10 mg/mL在丙酮中)以2.5 µL步驟在圓上移液2次，直至施用每個試驗圓(20 mm² )有50 µg的最終量(圖 7) 。在室溫乾燥後，通過加入10 µL 試驗液體(人造傷口液2 %白蛋白，pH 7，具有/不具有彈性蛋白酶)進行彈性蛋白酶化驗。在室溫溫育15 min後，觀察並記錄顏色發展。

pH指示劑是溴百里酚藍在殼聚糖中的製備物，含有戊二醛。將混合物移液在報導物區中，在乾燥後導致暗黃色和固定的指示劑系統。在30分鐘的液體流動(人造傷口液2 %白蛋白)中，顏色從稍微綠色(pH 7)變化到暗綠色(pH 8)。見圖 14 針對pH指示劑的一個實例。

在以不同的pH值用大約300 µL人造傷口液2 %白蛋白運行後，源自固定化的溴百里酚藍的pH指示劑。pH指示劑以1.5 µL/10 mm² 的量在三個0.5 µL的移液步驟中施用。

在原型中的報導物區的生產和功能性。在用於溶菌酶檢測和液體對照物的診斷材料的狹長道的報導物區中，印刷1.5 µL的捕集混合物。在用於彈性蛋白酶和MPO檢測以及用於pH指示劑的報導物區中，塗敷底物(圖 7 、 9 )。

圖 9 示出具有用於溶菌酶、彈性蛋白酶和MPO檢測、pH指示劑和液體對照物的報導物區的原型。在左邊示出了診斷材料，在右邊是報導物區的放大。圖 9(A) 顯示在使用液體之前的具有報導物區的原型的實例。

圖 9 顯示了在液體施用之後的診斷區(陰性對照，人造傷口液0.5 %白蛋白沒有酶)。圖 9(C) 示出了在液體施用之後的診斷區(人造傷口液 0.5 %白蛋白，1 U/mL彈性蛋白酶，10 µg/mL MPO，30000 U/mL溶菌酶)。實驗經2 h完成，流速為前10 min為100 µL/分鐘，隨後為10 µL/分鐘。以n=10重複實驗。

圖 9 示出具有用於溶菌酶、彈性蛋白酶和MPO檢測、pH指示劑和液體對照物的報導物區的原型。在左邊示出了診斷材料，在右邊是報導物區的放大。用於液體流動對照物的顏色信號是可見的，所以據信通過捕集和積累進行的可視化方法起效。反應的順序通常是MPO，隨後彈性蛋白酶，隨後溶菌酶。pH指示劑的顏色變化以及MPO和彈性蛋白酶底物的顏色發展在報導物區是可見的。對這些反應建立原位顏色變化，並且證實功能性。

可以以許多形式製造插入物，包括徑向設計(圖 10-12 )、直線設計和單點途徑。這些以層和圖案形成的方式變化。通常目的是使得插入物盡可能小並且不堵塞。

一個減少堵塞的手段是減少膜層的面積。在圖 10 ～ 12 中所示的實施方案中，僅有的堵塞層是徑道本身。在此版本中，圓底層僅被黏合劑所取代。圓底層的優點在於傾向於支撐更寬的被採樣到裝置中的敷料面積。減少的底層的優點是允許更多蒸氣轉移。

實施例 4: 溶菌酶響應測試條

在檢測溶菌酶活性的手段的一個實施方案中，像濾紙的芯吸物質的條帶印刷有染色的肽聚糖(圖 15 (D), a)和阱材料(用交聯的PEI固定的四級胺)(圖 15 (D), b)兩者。將傷口液施用到基底並且允許將載體芯吸上到點C，在那裡它蒸發。溶菌酶如果存在，將染色的肽聚糖降解並且將陰離子碎片運輸到阱(圖 15 (D), b)，在那裡它們形成線。

在圖 15 中，溶菌酶測試條(50)包含Whatman篩檢程序1001/85，其被切成0.5 cm x 4 cm的片，具有固定區(51)、蒸發區(52)、3%交聯、胺基阱(53)、底物區(54)、和用於從傷口芯吸流體的縫線區(21)。側視圖(B)示出傷口敷料包含測試條(50)、基底層(55)、和縫線(21)。頂視圖(C)示出黏合到傷口敷料(56)的測試條(50)。

染色的肽聚糖向溶菌酶響應測試條中的整合(圖 15 )。在一些實施方案中，溶菌酶測試條包含Whatman篩檢程序1001/85，其被切成0.5 cm x 4 cm的片。將2 µL的四級胺捕集溶液移液到纖維素篩檢程序上，在條帶的上端之下1.5 cm。將在240 µL之0.5% PEG6000在H₂ O中的溶液中的2 µL的含有4 mg染色肽聚糖的底物製劑移液到條帶的下端上方1 cm。將改性的條帶在90°C溫育30分鐘。測試條準備好被使用。備選地，可以將其他染色的溶菌酶底物(例如染色的殼聚糖衍生物)合併到測試系統中。在一些實施方案中，測試條包含底物點、四級胺基阱、和纖維素基體。

在一些實施方案中，溶菌酶回應測試條整合到敷料中用於早期階段傷口感染的線上檢測。

從敷料的底側到測試條的液體運輸系統經由通過敷料的層和第一水不可滲透的黏合層縫線的聚丙烯紗進行。儘管縫線有助於該過程，但它並非必要並且在沒有縫線的情況下能獲得相同的結果，儘管慢得多。測試條包埋在兩個水不可滲透的黏合層之間。在條帶的上區域中包括蒸發區。檢測單元在區域‘a’釋放偶聯的染料，其隨後被捕集在測試條的區‘b’中，並且給出關於溶菌酶活性的清楚的可見信號。

用於測試條的材料選擇：不同的基於纖維素的材料可以用作用於測試條的固體基體。可以備選地使用含有限定的纖維素的量的非織物。溶菌酶測試條的示意性表示。將檢測系統附著在敷料上(圖 15) 。基底層含有向檢測單元液體轉移系統。組合的基底層和檢測單元的上部視圖。

實施例 5: 指示劑反應

圖 16 示出了指示劑反應的實例，包括具有至少兩個被裂解位點(X)連接的域A和B或A和C的底物，所述裂解位點被傷口液中的酶如彈性蛋白酶(E或E2)所識別。在一些實施方案中，肽聚糖錨(S)連接到酶底物，在底物上的裂解位點(X)可以被傷口液中的酶處理之前，需要通過溶菌酶(E1)將肽聚糖錨(S)消化或破壞。反應的產物(P)是有色的，產生可被使用者檢測的顏色變化。在實施例I中，在暴露到傷口液中的彈性蛋白酶(E)後，底物在裂解位點X裂解，釋放MPO底物(B)，其可以與傷口液中的MPO反應，並且底物(B)被氧化，以形成有色的產物(P)。在實施例II中，溶菌酶(E1)破壞肽聚糖錨(S)，以暴露裂解位點(X)。在暴露到傷口液中的彈性蛋白酶(E2)後，彈性蛋白酶在裂解位元點(X)將底物裂解並釋放吲哚(C)，其可以在氧的存在下轉變成靛藍，產生顏色變化。在實施例III中，可以使用MPO底物(B)代替吲哚(C)，以產生有色的產物(P)。

實施例 6: 指示劑盤狀物

圖 10 ～ 12 示出指示劑插入物或盤狀物的示意圖。圖 10(A) 示出診斷插入物的頂視圖，包含報導物區(60)、反應區(61)、和蒸發區(62)。圖 10(B) 示出底層，包含不可滲透的塑膠膜的層，優選白色的或透明的，直徑為約40 mm。中央的孔允許液體運輸並且具有約4 mm的直徑。底層以相同形狀的黏合劑覆蓋，以用於準確固定在敷料上。圖 10 示出反應材料，包含黏合層(C)和反應層(D)，其中每條狹長道可以是不同的底物和/或pH系統，並且其中在每個層中的狹長道重疊以允許準確固定。指示劑盤狀物可以具有任何數量的指示劑狹長道，如4或5條如在圖 10 中在徑向上排列的指示劑的狹長道。在一些實施方案中，指示劑盤狀物包含1至10條狹長道，或優選4或5條狹長道。圖 10(E) 示出了覆蓋物，其優選包含不可滲透的白色塑膠箔，直徑為20 mm。外環可以具有25 mm的內徑和31 mm的外徑。頂層可以覆蓋有黏合劑，以用於準確固定在反應材料上。

在圖 11 中示出的實施方案中，(A)示出底層，包含兩面的且疏水的膜(65)，直徑為40 mm。在中央切的孔具有約5～6 mm的直徑。標記(66)示出在非織物或紙上的疏水徑道，是整片的或切出的，位於黏合劑膜上。標記(67)示出印刷在非織物或紙上的阱，其黏合到具有回流阱(68)的底層。在(B)中，反應層包含狹長道，每個可以具有不同的指示劑和顏色系統，如在(70)中所示。可以印刷、噴塗或覆膜蒸發覆蓋物(71)。標記(72)示出固定到敷料的指示劑盤狀物，其中外部敷料具有用於觀察指示劑變化的視窗(顯示為虛線)。

在如圖 12 中所示的指示劑盤狀物的另一個實施方案中，底層(A)優選包含白色的或透明的不可滲透的塑膠膜(73)，直徑為40 mm。包含4 mm的直徑的在底層中央的孔允許傷口液運輸。底層可以覆蓋有與反應材料(77)相同形狀的黏合劑(73)，以用於準確固定在傷口敷料上，兩側具黏性及疏水性。反應層(77)位於在底部的黏合層(73)的頂上。反應層的每個狹長道可以是從中心為13 mm或15 mm的長度，且約5 mm寬。在盤狀物的中心的切口通路可以也包含回流阱(75)，以確保流體從中心向外流動到在插入物周緣的蒸發區。標記(74)示出在非織物或紙上的疏水徑道，整片的或切出的，位於黏合劑上。標記(76)示出印刷在中心有回流阱(75)的非織物或紙上的阱。在一些實施方案中，反應材料(77)包含亮黑印刷、pH指示劑、MPO底物、彈性蛋白酶-肽-吲哚酚、和溶菌酶-肽聚糖指示劑、和它們的任意組合，在指示劑盤狀物的狹長道上。這樣的底物可以被印刷在反應材料或固體支撐材料上。蒸發覆蓋物可以作為膜被印刷、噴塗或覆蓋在(78)上，示出為(78)中的灰色框。反應材料可以被透明或半透明膜覆蓋，具有視窗(79，虛線框)，以允許檢測反應。

在一些實施方案中，如在圖 10(E) 中所示的覆蓋物包含直徑為20 mm的不可滲透的白色塑膠膜的中央覆蓋物，內徑為25 mm且外徑為31 mm的外環，以及頂層覆蓋有相同形狀的黏合劑，以用於準確固定在反應材料上。

如在圖 10(A) 中所示，一個實施方案包含外徑為31 mm的不可滲透的白色塑膠箔，直徑為25 mm的內診斷圓(60，報導物區)，和在使用底物覆蓋物的實施方案中直徑為20 mm的底物覆蓋物(61)。蒸發區(62)位於指示劑插入物的周緣。小的蒸發區，如2x5 mm，對於7天使用期來說可能是太小的，但是對於較少的使用期，如一天使用期，是足夠的。可以在診斷區(60)或視窗報導物區檢測從反應導致的可見的信號(圖 11 或圖 12 )。這樣的報導物區可以被近乎白色的層圍繞，以得到對顏色信號的最大對比度。

在另一個實施方案中，可以在固相上進行診斷反應，在固相中液體樣品擴散在被吸收到固相上的染料附近。樣品中攜帶的酶可以通過在固相材料的孔中接觸轉換染料。變化作為顏色變化是可見的。由於使用中的低體積和染料的高濃度，顏色變化可以是靈敏的指示劑。

在一個優選的實施方案中，指示劑盤狀物是通過以下方式製造的：用試劑浸漬濾紙，並隨後沖製盤狀物，隨後將它們黏合到載體上以形成“條(stick)”，具有塗布到其上的反應性染料。可以使此條與樣品接觸並觀察顏色變化。

在更優選的實施方案中，多於一種指示劑盤狀物類型放置到條載體上，使得可以在一個試驗中檢測多種酶或參數。可以被確定的參數包括pH、溶菌酶、彈性蛋白酶、組織蛋白酶G、MPO、過氧化氫酶和脂肪酶。這樣的條應當也含有陽性對照物，以指示適當的樣品濕潤，和或樣品施用，所述施用除了濕潤之外也包括蛋白的存在。

在一個優選的實施方案中，指示劑盤狀物在薄的“條”上排成一條線，並且使用拭子、紗布，或者通過將條壓入到樣品(例如用過的敷料)之中或之上，將樣品順序施用至它們。

在另一個實施方案中，指示劑盤狀物一個接一個對齊在寬的支撐體上，並且在一側切割它們的邊界，使得條可以被用切成的邊緣壓到樣品源(即用過的敷料或稀釋的傷口液，或清潔拭子或紗布的邊緣)，使得液體被取到在寬條的正面的盤狀物的每一個中(“叉形”形式)。

在另一個優選的實施方案，指示劑盤狀物放置在載體盒的內部，使得可以將樣品拭子插入到盒中，並隨後通過將盒關閉被密封在內部。在關閉後，可以移動樣品拭子，並且在過程中，依次接觸每個樣品盤狀物，以適當地將它們濕潤，使得產生的反應可以通過適當地安放在每個指示劑盤狀物上方的視窗被觀察到。這樣的排列可以保護拭子，用於以後的微生物檢查，並且簡化在敷料更換處或期間對材料的處理。

指示劑盤狀物優選用能夠顏色變化的試劑製備。這樣的試劑可以選自化合物，如對 - 胺基苯酚、ABTS(2,2inophenol、ABTS(strate. 在一些實施方案中，酸)二銨鹽)、3,3’-二胺基聯苯胺、3,4 二胺基苯甲酸、DCPIP、N,N -二甲基-對 - 苯二胺、鄰 - 聯茴香胺、對 - 苯二胺、4-氯-1-萘酚、鄰 - 苯二胺N -(4-胺基丁基)-N -乙基異魯米諾、3-胺基-9-乙基咔唑、4-胺基苯二甲醯肼、5-胺基水楊酸、2,2’-連氮基-雙(3-乙苯并噻唑啉-6-磺酸)、吲哚酚、靛藍、Fast BlueRR(Fast Blue RR)、4-氯-7-硝基苯并呋咱。在一些實施方案中，反應層包含芳基胺。在一些實施方案中，反應層包含胺基苯酚。在一些實施方案中，反應層包含胺基苯酚和胺基苯酚醚。在一些實施方案中，反應層包含吲哚酚。在一些實施方案中，反應層包含中性染料。在一些實施方案中，反應層包含帶電染料，例如，選自以下各項的染料：雷馬唑亮藍、甲苯胺藍、活性黑5、雷馬唑亮藍、活性紫5、和活性橙16、或其水解或氨解衍生物、甲苯胺藍、活性黑5、或其水解或氨解衍生物；活性紫5、或其水解或氨解衍生物；活性橙16、或其水解或氨解衍生物；二氯三嗪系反應性染料如活性藍4、活性紅120、活性藍2、活性綠19和活性棕10。在一些實施方案中，二氯三嗪系反應性染料顯示黑色。在特別的實施方案中，反應層包含化合物，如含有磺醯基乙基-硫酸氫鹽-反應性-基團的反應性染料。在一些實施方案中，反應性染料是活性黑5、雷馬唑亮藍、活性紫5或活性橙16、特別是活性黑5。在一些實施方案中，反應性染料是雷馬唑亮藍、活性紫5、活性橙16、活性黑5、或雷馬唑亮藍。特別地，反應層包含含有磺醯基乙基-硫酸氫鹽-反應性-基團的染料，例如，活性黑5、雷馬唑亮藍、活性紫5或活性橙16、或它們的組合；或含有二氯三嗪反應性基團的染料，例如，活性藍4、活性紅120、活性藍2、活性綠19和活性棕10、或它們的組合。

在其他實施方案中，指示劑盤狀物優選用能夠物理變化的試劑製備，例如，奈米粒子、膠體金粒子或魯米諾衍生物。

在一個優選的實施方案中，使用Fast Blue的類似物或二-胺基苯酚作為顏色生成劑檢測MPO；使用源自肽的指示劑檢測彈性蛋白酶，指示劑包括萘酚(napthol)苯酚、吲哚酚或硝基-苯酚；使用共軛到染料或顏色生成劑的寡糖或含有帶電染料的低聚糖粒子檢測溶菌酶，尤其是所述低聚糖可以選自肽聚糖或殼聚糖衍生物。純粹作為代表性實例，可以通過使結合到底物的活性黑5、雷馬唑亮藍、活性紫5或活性橙16、活性藍4、活性紅120、活性藍2、活性綠19和活性棕10、或它們的組合可視化來檢測溶菌酶，所述底物如殼聚糖、N-乙醯基殼聚糖；寡-β-D-1,4-葡糖胺；乙醯基-D-吡喃葡糖苷；N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)；葡糖胺二聚物(GlcNAc)₂ ；乙醯基-殼聚糖；殼二糖八乙酸酯；包含結構(GlcNAc)_n 的殼糖低聚物(chitooligomer)，其中n=4、5或6；低聚殼糖(chitooligosaccharide)；2-乙醯胺-2-去氧-D-吡喃葡糖苷；2-去氧-3,4,6-三-O-乙醯基-D-吡喃葡糖苷；或它們的組合。可以通過使用包含核序列丙胺酸-丙胺酸-脯胺酸-纈胺酸(AAPV)的肽底物檢測蛋白酶如人嗜中性粒細胞彈性蛋白酶或HNE，所述肽底物共軛到前述染料中的一種或多種。

在另一個實施方案中，對用於檢測這些被分析物的試劑進行裂解，以得到被捕集在固定部分上的化合物。

實施例 7. 指示劑敷料在傷口治療的環境中的用途。

含有如上所述的指示劑盤狀物的敷料以以下方式製備：其中將印刷好的盤狀物插入敷料的吸收活性(absorbative)的外層和外部膜或薄膜之間，使得反應過的區是可見的。將敷料施用至傷口，如果它是慢性的傷口或手術的傷口，使得傷口中的分泌的位置(更深的位置，縫線處)位於盤的中央的下面或盡可能靠近盤的中央。參見圖 17 。在使用敷料之後，敷料將開始吸收分泌物。在一個實施方案中，對傷口狀態的第一次觀察可以在“流動對照物”變成了藍色之後進行。這是以下事實的指示：充足的液體已經進入敷料，以使試劑墊飽和。如果，在此階段時，生物標誌物指示劑中的一種或多種已經反應了，這會是以下事實的指示：在敷料更換時，在傷口中存在一定程度的炎症或潛在的感染。一種生物標誌物反應(在有或沒有pH高於中性的指示的情況下)很可能足以證明在下一次更換時的詳細的傷口衛生步驟。兩種生物標誌物回應(在有或沒有pH高於中性的指示的情況下)很可能是一種指示：在理想情況下，傷口要立即被重新敷料並且開始著手抗微生物。三種生物標誌物回應(在有或沒有pH的情況下)很可能是一種指示：在理想情況下，應立即更換敷料，並且應當開始抗微生物衛生、傷口敷料和實驗室微生物學。

在廣義上，指示劑可以在敷料更換之後立即、在1～2天後和在2～5天後回應。由於流動的動態，意在使試劑在暴露至酶活性的閾值(例如0.5 U/mL彈性蛋白酶)的2～6h內回應，然而，長期暴露到低酶水準，即5天，也可以最終造成信號。因此，使用者可以將低水準的活性與急性跡象區分開，區別在於報導物區非常緩慢地積累信號，即在3或4天時非常模糊並且僅在4或5天後稍微發展多些。這會是應該進行密切觀察和衛生但不一定是急性感染的傷口的指示。伴隨特定患者的經驗也會告知治療學家。如果在多次敷料更換後顯示相同的圖案，這會是暗示著穩定的狀態，但是反應程度的任何變化應當被當作傷口狀態潛在變化的指示。

相反，其中強信號突然出現的狀況是發生急性感染的潛在指示。如果指示劑可以在1～2小時內變化，一旦越過閾值，暗示著任何突然的發展反映了傷口的目前的狀況。

在將多個感染指示劑盤狀物放在傷口敷料中的情況下，反應的那些盤狀物的位置是傷口潛在問題出現的位置的指示。因此，在5天後沒有清楚的信號會是在該期間沒有越過閾值的指示，並且目前的療法可能是合適的。緩慢發展的弱信號可以指示衛生可以改進。逐漸在5天後顯現的中等信號可以是感染正在發展的第一跡象，並且應當導致更精心的療法。在5天內發展的強信號會是相應地更加顯著的“需要改進療法”(例如通過開始使用含銀敷料)的指示。清晰信號的快速出現，反過來，是值得立即注意的急性問題的指示。

如在圖 4(C) 中所示，在用於在一定面積上檢測微生物感染的一些實施方案中，可以將多個反應小室施用至傷口敷料。可以使用胺回流阱或篩檢程序或回濾阱(41)隔開測試區域。

實施例 8. 可以用於任何敷料的敷料插入物。

在一些實施方案中，指示劑插入物可以被自由地放置在很可能分泌的位置或放置在傷口敷料或手術敷料的任何地方。

如上所述，診斷盤狀物可以在其製造期間合併到敷料中。這些插入物可以被放置在外部吸收劑和外膜之間並且等距地間隔開，並且在製造期間黏合就位。然而，對於特定的傷口來說，固定的間隔可能不合適。在此實施例中，報導物盤狀物作為獨立的材料製備，其可以被放在任何吸收劑敷料上，在外膜之下。例如，可以將插入物製備為獨立的盤狀物，剪切並密封在消毒的外封套中。使用沒有報導物的敷料(見圖 17 中的標記(92))的治療專家仍可以將這些報導物(90)插入到這樣的敷料中：這些是模組化的，並且需要治療專家由傷口接觸材料、吸收劑和外膜或覆蓋物組裝敷料。報導物盤狀物可以以多種方式實現其功能，包括只要它與傷口液(91)流體接觸，或者是在合適的外部敷料下方。黏合透明外部盤狀物是固定和保持報導物盤狀物的一種手段。類似地，盤狀物本身可以具有黏合劑底覆層。

在診斷插入物的另一個實施方案中，在圖 18 中所示，敷料中的非織層攜帶或含有診斷盤狀物(705)，其中敷料還包含膜覆蓋物層(701)，指示劑的非織物載體(702)、聚氨酯泡沫(703)、和纖維素接觸層(704)。如由圖 18(A) 中的箭頭所說明的，傷口液向上流動到包埋在這樣的敷料中的診斷盤狀物(705)。圖 18(B) 示出了具有包埋的診斷盤狀物的傷口敷料的側視圖，其中在泡沫表面的四級胺塗層(以虛線示出)充當阱，用於防止診斷物質的返回，以及傷口液向上流動到診斷盤狀物。

在傷口敷料中的診斷盤狀物的進一步的實施方案中，如在圖 19(A) 中所示，側視圖(A)示出了用於檢測MPO的實例盤狀物，其中(720)是紙盤狀物，通過浸漬或噴塗用MPO底物浸漬。標記(721)是充當載體的紙或非織物材料。標記(722)示出了黏合層。標記(723)表示含有葡萄糖氧化酶和/或澱粉和澱粉酶如γ澱粉酶的盤狀物。圖 19(D) 示出了傷口液時澱粉活動化成為葡萄糖，其隨後被葡萄糖氧化酶氧化，產生H₂ O₂ 。這由傷口液中的MPO所使用，將底物轉變到可檢測的藍色形式。圖 19(B) 示出了用於檢測溶菌酶的盤狀物的側視圖，其中使用水可滲透黏合層(其也用於將盤狀物黏合到下方的泡沫層)將殼聚糖或肽聚糖的粒子包埋在紙盤狀物中，在其下側。酶活性將粒子溶解，並且釋放染料，染料被捕集並並在頂層中可檢測。在圖 19(B) 中，紙盤狀物(730)是阱浸漬的頂層。在存在傷口液的情況下，如在圖 19(C) 中通過向上的箭頭示出的，紙/非織物盤狀物充當載體(721)，使得傷口液在過程中經由染了色的肽聚糖粒子(731)移動到頂層。標記(722)示出黏合層。標記(732)示出黏合劑環或熱接合，其將盤狀物固定到非織物載體層(721)。圖 19(C) 中的虛線表示在診斷條帶下的泡沫表面上的四級胺塗層，其充當阱，用於防止診斷物質的返回。圖 19(E) 示出了染了色的肽聚糖粒子被傷口液緩慢地溶解，並且釋放的染料隨後被捕獲在阱材料中，同時過濾的傷口液流到側面，如由箭頭所示。在圖 19(E) 中，紙盤狀物在頂層中浸漬有阱材料。

在圖 20 中，描述了按比例放大的盤狀物構造物的製備。在連續過程中，盤狀物從包含密封膜、黏合劑、被頂部覆蓋物片保護的紙或非織物載體的片沖製。

圖 21 示出了紙盤狀物的不同的實施方案。圖 21(A) 示出了在這樣的實施方案中包括的不同的層，即，在頂部上的膜覆蓋物、非織物載體、聚氨酯泡沫、和纖維素接觸層。圖 21(B) 至 21(E) 示出了這樣的具有指示劑盤狀物的分析系統的不同的變型。圖 21(B) 示出了具有連接有診斷盤狀物的指示劑的非織物載體，包括在紙上的pH指示劑、印刷有澱粉、澱粉酶和葡萄糖氧化酶的紙盤狀物、和浸漬阱的紙盤狀物。圖 21(C) 示出了部分印刷的非織物和塗敷的紙盤狀物，包括印刷的阱和UV邊界或阱邊界(910)。圖 21(D) 示出了部分印刷的非織物和指示劑盤狀物的梯度(911)塗敷。通過以不同濃度或用不同pH介體印刷同心的底物的環，形成梯度。完全轉化後，不同的底物濃度導致不同的顏色強度。備選地，在各個環中使用聚合緩衝劑可以調節需要更多活性以產生相同顏色的反應的程度。合適的緩衝劑包括聚碳酸酯和聚磺酸酯。顏色的同心環的數量提供了總體活性的指示，並且因此參照比色圖表有助於評估嚴重程度。圖 21(E) 示出了診斷盤狀物的一個實施方案，具有印刷的指示劑(912)和塗敷在黏合的紙盤狀物上的試劑。在這些實施方案中，非織物起到指示劑的載體的作用。

圖 22 示出了診斷盤狀物(800)可能連接到敷料的不同的方式。例如，圖 22(A) 示出了連續的黏合劑，其允許傷口液穿過黏合劑。圖 22(B) 顯示環或環狀黏合劑，其允許傷口液經由黏合層中央的孔穿透。圖 22(C) 示出了具有UV印刷的邊界的接合。圖 22(D) 示出了用非織物的聚乙烯組分的接合。

實施例 9: 量桿 – 交通信號燈形式。

某些試劑具有對紙或類似固相的足夠的親和性，並且保持用於感興趣的生物標誌物酶的底物。當這些底物展示顏色變化時，可以通過簡單地將含有標誌物的流體與浸漬的紙接觸，觀察酶的活性。毛細現象確保流體向底物的分配。每個浸漬的盤狀物可以分開地被添加到組合的“量桿”，其允許在試驗中使用所有盤狀物(圖 23 )。一種形式是盤狀物的直線陣列，儘管可以容易地改變佈局。

圖 23 示出了針對各種酶或微生物生物標誌物的指示劑插入物或盤狀物(820)，並且可以將對照物以各種組合或排列放置，以形成各種量桿裝置。每個浸漬的盤狀物(820)可以分開地被添加到組合的量桿，其允許在試驗中使用所有盤狀物。一種形式是盤狀物的直線陣列，儘管可以容易地改變佈局。指示劑盤狀物可以被徑道或邊界(821)隔開。

在此實施例中，製備以下盤狀物：

1. 流體對照物：沖製5 mm雙面黏合劑的盤狀物，並且將50 µg的微米化的不褪色的綠粉末放置在中心的黏合劑上。將紙盤狀物同心地放在黏合劑盤狀物上，使得粉末化的染料被紙覆蓋。隨後將所得的盤狀物經由另一側的黏合劑放置在載物條(stick)的第一位置上。

2. pH對照物。將濾紙浸泡在含有如上報導的在乙醇中的溴百里酚藍、殼聚糖和在戊二醛的混合物中。將濾紙在混合物中浸漬，允許滴乾，並隨後在玻璃上在54°C乾燥。隨後沖製5 mm盤狀物，並用黏合劑將盤狀物連接到載體。

3. MPO指示劑。將5 mm紙盤狀物繼續用1.5 µL的如上所述的用於敷料指示劑的MPO fast blue底物浸漬。乾燥後，將一半盤狀物用10 µg的葡萄糖浸漬且另一半盤狀物用在緩衝劑(PBS)中的1 µg的葡萄糖氧化酶浸漬。

4. 彈性蛋白酶指示劑。將濾紙用混合物浸漬(0.25 %(w/w)諾乃洗滌劑，2 %(w/w)癸醇在0.05 M硼酸鹽緩衝劑中pH 8)，並且在54°C乾燥1～2 h。從緩衝劑處理過的紙沖製5 mm 紙盤狀物，並隨後用2.5 µL的如上所述用於敷料指示劑的AAPV吲哚酚底物(10 µg/µL在丙酮中)浸漬2次。

5. 溶菌酶指示劑。將濾紙輕微地用含有3% W/V四級胺阱的阱溶液噴塗(1.5 µL/cm² )，並且允許乾燥，在頂表面有標記。沖製雙側黏合劑的5 mm盤狀物，並且將40 µg的亮黑染色的肽聚糖放置在中心的黏合劑上，並且使其乾燥。將紙盤狀物同心地放在黏合劑盤狀物上，使得PG-染料沉積物被紙覆蓋。隨後將所得的盤狀物經由另一側的黏合劑放置在載物尺的第五位置上。所得的量桿可以具有通過拭子或紗布的手段塗敷到其的樣品。

實施例 10: 量桿 –“ 叉形 ” 形式。

在一個實施方案中，基本上如上個實施例製備量桿，不同之處在於試劑盤狀物朝較厚的載物卡或條的基礎定向。在製備的最後階段修剪試劑盤狀物的末端，使得它們與裝置的底邊緣齊平。這允許它們被壓在待取樣的表面上。隨後樣品擴散進入盤的剪切端以反應。此形式對於像使用過的敷料的採樣表面可能更方便。

實施例 11: 量桿 – 盒形式。

在某些情況下，疑似的感染、或患者之間通過消耗品和他們的拋棄物的污染的風險，需要更安全的系統。在一個實施方案中，當採樣通過拭子完成時，可能需要保留拭子用於後續的細菌學評價。類似地，在敷料更換後保持結果並且將其顯示給同事可能是需要的。在此情況下，需要在沒有污染的情況下保持結果的手段。為此，在一個實施方案中，可以使用可密封的容器或包套來容納多個盤狀物，如6個盤狀物，其中可以放置濕潤的拭子，並隨後關閉，使得它可以將樣品施用到紙盤狀物但是不污染任何其他物件。圖示了一個這樣的設計與其工作原理(圖 23 )。該設計的關鍵元素是：用於濕潤拭子的槽；它的關閉的可密封的形式：在拭子柄周圍的密封環；將拭子推向盤狀物同時使其單向移動的壓力片(pressure fin)；針對盤狀物的視窗；在容器上用於參比顏色的空間，在微生物實驗室中再次打開的可能性。

實施例 12: 手術部位檢測

在另一個實施方案中，敷料意在用於手術傷口的處理，並且含有意在被放置在縫線的線上的明顯的直線區域。這些直線區域含有特別高濃度的報導物染料，使得即使在感染的最早階段，信號也將顯現。在另一個實施方案中，敷料含有可移除的部件，如線、或類似的吸收體，其可以被抽出並測試而不用移除敷料(圖 24 )。以位於手術傷口的邊緣之處或附近的方式放置所述可移除的部件。在另一個實施方案中，手術部位敷料基本上在該直線區域是透明的，允許同時觀察縫線以及報導物染料。在一個優選的實施方案中，透明的區域被可以容易地揭起以檢查傷口的不透明的膜覆蓋。在另一個實施方案中，覆蓋和吸收劑材料含有捕集材料，如聚合陽離子或陰離子，其能夠結合並濃縮釋放出的染料。

例如，在圖 24 中，向用於傷口或在手術部位處的敷料(92)中內裝或加入採樣線(100)。在敷料(92)的一些實施方案中使用AQUACEL(4)。採樣線吸收傷口液或在在手術部位處的流體(D)。可以在不需移除或擾亂敷料的情況下，使用儀器或裝置(101)，如鑷子、鉤子或導線鉤裝置，將線從敷料拉出或提出(E)。隨後可以將線溶解在緩衝劑中，用於診斷裝置(102)中，其使用一種或多種本文所述的指示劑試劑或指示劑盤狀物。

在一些實施方案中，傷口敷料包含內裝的採樣線。在一些實施方案中，採樣線吸收傷口液並且可以在不擾亂傷口敷料的情況下被移除，用於檢測傷口液中的被分析物。

在一些實施方案中，採樣線可以稀釋在緩衝劑中，以將標誌物溶解，用於診斷手術部位或傷口的狀態。

在一些實施方案中，可以使用導線鉤裝置，從傷口敷料移除線。

實施例 13: 敷料插入物的製造

通過在固體載體上依次放置各種材料製造報導物插入物。此載體可以是纖維素、黏膠纖維、聚乙烯、聚醯胺或其他合適的聚合物或這些組分的混合物。

圖 25 示出了可以以片或卷盤製造或印刷指示劑插入物。圖 25 也示出了印刷的順序、徑道的印刷、放下試劑的順序、和試劑的定位，用於將盤狀物印刷成片或卷盤，包含黏合劑或支持膜，如在圖 25(A) 中所示，施用非織物材料，如在圖 25(B) 中所示，以及在非織物材料上印刷試劑和徑道，如在圖 25(C) 中所示。完成的或組裝好的插入物，如在圖 25(D) 中所示，可以被分隔或切開，隨後黏到敷料或類似的支撐材料。

在一個實施方案中，材料以卷盤製備成卷盤形式。首先固體載體印刷有導向徑道，其穿透膜整個厚度。接著，印刷位於聚合物下面且並不穿透它的底膜，這包括在中心的孔，樣品流體通過該孔進入。接著印刷阱材料，在進口位置周圍為半密度(回流阱)，且在用於流動對照物和溶菌酶底物的捕集位置中為全密度。接著將流動對照物墨水塗敷到盤狀物的徑向狹長道的第一位置，通常是在1 %甲基纖維素中的10至50 µg的亮黑。接著，如上所述，將pH報導物印刷在位置2。接著，印刷MPO區，順序伴有如上提到的底物、葡萄糖和葡萄糖氧化酶。接著，在後續印刷中塗敷彈性蛋白酶底物，以達到合適的載入。接著，將溶菌酶底物以試劑水準(區別於阱水準)印刷到位置5。最後，在構件的頂部上印刷膜，但不穿透固體載體。該膜僅僅封閉從中心到報導物視窗端的徑向狹長道。

所得的卷盤含有均勻間隔的報導物區域的連續圖案。這些連續印刷的區域可以被直接卷起，成為夾在吸收劑和外部膜之間的敷料，或者，可以將它們沖製切割並封裝用於分開的用途。

圖 20 示出了製造紙盤狀物的另一個實施方案。圖 20(A) 顯示連續片的側視圖，其包含在頂部的覆蓋物膜、在中間的紙、和在底部的支持膜。可以在覆蓋膜/支援膜和紙層(900)之間塗敷黏合劑/粒子基體(901)。圖 20(B) 顯示了切出的片的頂視圖，所述片被製備用於施用到非織物載體(通過在放置在非織物載體上之前移除盤狀物間材料)。

實施例 14: 用於基於液體的裝置的試劑的製造

在某些實施方案中，想要的是將試劑以如下方式安放在裝置中：使得它們是穩定的，但是容易溶解，用於接觸注入的酶。一種途徑是將試劑在紙的盤狀物上乾燥並且將盤狀物包括在裝置中。

使用被浸漬、噴塗或印刷的連續的紙或類似的材料或織物，或者使用預先切好的浸漬或混合在試劑中並且隨後乾燥的盤狀物，來製備盤狀物。參見圖 20 、 25 。

試劑的密度是每20 mm² ：

MPO底物(烷基-fast blue) 0.6 µg

葡萄糖10 µg，葡萄糖氧化酶1 µg

對於彈性蛋白酶來說，首先用浸漬混合物(0.25 %(w/w)諾乃洗滌劑，2 %(w/w)癸醇在0.05 M硼酸鹽緩衝劑中pH 8)浸漬紙。

其後用對應於2.5 µg/mm² 的彈性蛋白酶底物的溶液噴塗紙。

可以沖製這樣印刷的紙，以得到含有試劑的盤狀物。

隨後可以將這些盤狀物合併到裝置中。

實施例 15: 用於基於液體的裝置的試劑的製造

備選地，可以將試劑壓成水溶性“粒料”，隨後將其包括在裝置的槽中。除了在紙上使用的材料之外，粒料還可以含有一系列材料。

基於液體的診斷裝置使用預先配製的試劑以回應於樣品中的酶活性生成顏色。樣品可以含有所需液體的全部或僅僅一些。當樣品要被稀釋時，裝置優選含有水或適合於稀釋或使樣品均勻的緩衝劑。將所得的混合物分配到槽中，每個槽含有不同的試劑組。試劑是緩衝劑鹽、能量源、底物和相關聯的發色團(如果不是含在底物中的話)的混合物。這些試劑理想地以分離的(discreet)實體像是片劑或可以被放置在槽中的類似物的形式被遞送。在此，我們描述用於針對彈性蛋白酶、溶菌酶、MPO和作為內標的蛋白標準的酶化驗的片劑的製備。片劑在添加傷口液之後溶解，並且釋放化驗組分，以開始導致陽性的顏色變化的酶反應。

如下使用珀金埃爾默(Perkin Elmer)電液壓片劑壓製機來形成片劑：

為每個片劑的加壓時間為大約10 sec。

壓製工具的填充部分的直徑為5 mm

片劑為：20 mg，5 mm直徑，1 mm深

首先施加真空約15 sec。

保持施加的真空，直到移除壓製工具。

將壓製壓力調節到2 t。

表 1 : 用於基於液體的診斷裝置中的片劑試劑的清單

實施例 16: 用於基於液體的化驗的獨立的裝置和套組

使用本文所述的組合物和裝置的用於檢測和測量傷口感染的獨立的裝置和套組。這些裝置和套組優選包含用於收集樣品的採樣部件以及測試裝置。在一些實施方案中，測試裝置包含外殼，所述外殼圍繞管以限定位於所述外殼中之用於接收所述採樣部件的開口，所述外殼具有密封的稀釋劑室，其連接到管的相反端並且容納用於將樣品從採樣端移除以形成試驗液體的液體稀釋劑。管與反應槽液體連通，所述反應槽容納能夠指示被分析物的存在的試劑。驅動機制驅動稀釋劑從室經過採樣端、進入管並最終到達反應槽。

在一些實施方案中，用於檢測在樣品中的被分析物的套組包含：(i)採樣部件，其包含用於收集樣品的採樣端，和(ii)測試裝置，其進一步包含外殼，所述外殼圍繞管以限定位於所述外殼中之用於接收所述採樣部件的開口，所述外殼還具有安置在其中的：密封的稀釋劑室，其連接到所述管，並且容納液體稀釋劑，液體稀釋劑用於將樣品從採樣端移除以形成試驗液體；與所述管液體連通的反應槽，所述反應槽容納能夠指示在試驗液體中被分析物的存在的試劑；和驅動機制，其能夠驅動所述稀釋劑通過裝置，從室，經過採樣端，並進入反應槽中。

套組通過將稀釋劑驅動經過樣品並到反應槽中而運作，通過稀釋劑經過樣品的流動，製成試驗溶液。不是必須首先將樣品與稀釋劑混合以製成試驗溶液並且隨後將溶液經由橫流條帶移動到反應槽。驅動稀釋劑通過樣品並到達反應槽意味著，可以以最小數量的步驟使用套組，例如，取得樣品，將採樣部件插入外殼中，並啟動驅動機制。此簡單程序使得使用者錯誤最小化，並因此使得假陽性結果和誤診最小化。

密封的稀釋劑室可以含有指定體積的稀釋劑，使得預期體積的試驗溶液到達反應槽或多個反應槽。此外，在稀釋劑室和反應槽之間的通路排氣，使得捕集的空氣不影響試驗溶液的流動通過裝置或阻止試驗溶液到達反應槽。

外殼優選具有兩個能夠相對於彼此移動同時保持相互連接的部件。移動部件的行為可以提供強迫機制，稀釋劑通過該驅動機制移動通過裝置。稀釋劑可以通過稀釋劑室的壓縮被驅動通過裝置，所述壓縮迫使稀釋劑通過採樣端並到達反應槽或多個反應槽。稀釋劑室的壓縮可以在將外殼的部件相對於彼此移動時發生，如通過將一個部件滑動經過另一個。

在一些實施方案中，外殼包含鎖定機制，其在驅動機制已被啟動後將外殼鎖定就位並且防止裝置的重複使用。以此方式，立即顯然的是，裝置已經使用過了並且不能再次被使用。這使得來自例如在運送中已經錯誤地啟動了的裝置的錯誤結果或來自再次使用其試劑已經耗盡的裝置的錯誤結果最小化。

在一些實施方案中，採樣部件優選包含手柄和採樣端，手柄優選包含與外殼中的開口接合的密封件，以當採樣部件完全插入管中時將管密封。密封件通常防止樣品和稀釋劑從裝置漏出，減少了來自傷口液的交叉污染的機會。優選地，密封件和管接合，以將採樣部件鎖定在裝置中，並且防止採樣部件在被使用後脫離。這進一步減少了來自採樣部件的交叉污染的機會。

優選地，採樣部件在裝置中的插入釋放在稀釋劑室上的密封件。優選地，密封件是球閥或可以是薄膜或膜密封件或鴨嘴閥或其他本領域已知的止回閥，其在採樣部件被插入裝置中時被啟動。當將採樣部件插入裝置時，它優選地爆破、刺破或置換稀釋劑室上的密封件。

優選地，管與採樣部件的採樣端為相同或相似的尺寸，使得採樣端插入到管中的動作使得它沿著管壁被破碎，幫助樣品當稀釋劑從稀釋劑室被釋放並進一步被沖洗通過裝置後在稀釋劑中的分散。當將從稀釋劑室驅動稀釋劑時，匹配管的採樣端的剪裁也迫使稀釋劑被沖洗通過尖端。優選地，稀釋劑室成形為像是波紋管(bellow)，以輔助室的壓縮。備選地，室可以是類似於在注射器中存在的柱塞和管的組合，或者可以是由使用者用手壓縮的充氣的撓性小袋，或當密封件釋放時收縮的氣囊。

在一些實施方案中，套組包含用於收集樣品的採樣部件以及測試裝置。測試裝置包含外殼，所述外殼圍繞管以限定位於所述外殼中之用於接收所述採樣部件的開口，所述外殼具有密封的稀釋劑室，其連接到管的相反端並且容納用於將樣品從採樣端移除以形成試驗液體的液體稀釋劑。管與反應槽液體連通，所述反應槽容納能夠指示被分析物的存在的試劑。

驅動機制驅動稀釋劑從室經過採樣端、進入管並最終到達反應槽。

圖 26 示出用於檢測樣品中的被分析物的獨立的裝置套組。採樣部件(2)包含手柄(4)和採樣端(6)，在通過管(10)的一端被插入到外殼中的過程中。採樣部件(2)具有密封手段(12)，在採樣端(6)壓下球閥(14)以打開稀釋劑室(16)的同時，其形成與管(10)的開放端的密封。圖 27 顯示完全插入到外殼中的採樣端，以將部件密封到裝置。圖 28 顯示具有就位的採樣部件的獨立的裝置套組的平面圖，並且顯示三個朝外殼左邊的觀察視窗(20)，其與三個含有能夠指示被分析物的存在的試劑的反應室(18)相符。反應室可以含有能夠檢測來自例如傷口液的不同被分析物的試劑。當從上方觀察時在外殼右邊的視窗是對照物視窗，其指示試驗已經進行。外殼(8)是相互可滑動地連接的兩個主要部分。在圖 29 中，裝置的使用者可以將外殼的下部(24)滑動離開外殼的上部(26)，並且在這樣做期間造成槓桿(28)壓縮稀釋劑室(16)並驅使稀釋劑從室中出來，通過採樣端(6)並向上通過管(10)到達歧管(30)。外殼滑動分開的獨立的裝置套組的平面圖(圖 30 )，這導致視窗(20)和指示試驗已經進行的對照物視窗(22)。在圖 29 中的箭頭(A)指示稀釋劑通過裝置運動，形成試驗溶液。在圖 31 中示出了在獨立的裝置套組中的稀釋劑室、管和反應室，為了清楚移除了外殼。圖 32 示出了試驗溶液向獨立的裝置套組中的各反應室的分配。試驗溶液從中心節點(32)流到各反應室(18)。節點(32)也可以含有止回閥，以防止試驗溶液回流到裝置中並造成交叉污染。

採樣部件包含手柄和採樣端，在通過管的一端被插入到外殼中的過程中。採樣部件具有密封手段，在採樣端壓下球閥以打開稀釋劑室的同時，其形成與管的開放端的密封。採樣端當完全插入到外殼中時將部件密封到裝置，使得將外殼打開，釋放稀釋劑並使得強迫機制運行。

裝置也包含在外殼中的三個觀察視窗，其對應於含有能夠指示被分析物的存在的試劑的三個反應室。反應室可以含有能夠檢測來自例如傷口液的不同被分析物的試劑。一些實施方案包括對照物視窗，其指示試驗已經進行和樣品足夠使試驗可行。

裝置的使用者可以將外殼的下部滑動離開外殼的上部，並且在這樣做期間造成槓桿壓縮稀釋劑室並驅使稀釋劑從室中出來，通過採樣端並向上通過管到達歧管。如果裝置是未啟動的，也就是說如果稀釋劑室上的密封還未被打破，外殼不可能打開。外殼的打開造成觀察視窗位於反應槽上方，並且使得結果能夠被使用者觀察到。這提供了安全手段，因為它確保了裝置的正確操作，以獲得可靠的結果。

在啟動後，試驗溶液從中心節點流到各反應室。在一些實施方案中，節點包含止回閥和篩檢程序，以防止試驗溶液回流到裝置內和反應室之間，這可能造成交叉污染。稀釋劑通過裝置流動的路徑優選在反應室端設置有排氣口。

實施例 17. 具有分開的樣品準備室的裝置

圖 33 顯示具有外殼的診斷拭子裝置。在一個實施方案中，拭子裝置包含可再密封的外殼(80)，還包含定位器和鎖定銷(82)、用於觀察來自位於盤狀物支架(83)的試劑盤狀物的可見的信號的觀察視窗(81)、以及用於放置拭子的槽(85)。圖 33(C) 的側視圖示出了外殼(80)。為了使用，使用者使樣品接觸拭子，將拭子放置在外殼(80)中在槽(85)中，如在(D)中箭頭所示的，繼續拉拭子的柄，使得拭子上的樣品在條帶(86)上滑動，並且將樣品轉移到試劑或指示劑盤狀物(83)。可以通過觀察視窗(81)觀察結果。拭子也可以保留在外殼(80)中，用於以後的分析。

圖 34 示出導線鉤樣品製備裝置(200)的一個實施方案，包括針樣尖端和手柄或柱塞(201)，其中尖端還包含用於在不擾亂敷料的情況下將線從敷料抽出的鉤子，如圖 34(A) 中所示。在將線從敷料抽出後，可以將導線鉤裝置(200)插入到樣品準備室或稀釋劑室(202)中，其含有用於將微生物生物標誌物或傷口液從線溶解或稀釋的稀釋劑，圖 34(B) 和 34(C) 。導線鉤裝置的柱塞(201)可以在樣品準備室(202)中被向下壓，使得針的尖端刺破在樣品準備室(203)底部處的密封，如在圖 34(D) 中所示，從而將樣品溶液釋放到用於分析傷口液或手術部位的裝置中。

圖 35 示出了拭子樣品製備裝置(300)的一個實施方案，其包含具有手柄或柱塞(301)的拭子(302)，可以用於接觸用於測試的樣品。在對體液或傷口液採樣後，將拭子裝置(300)放置在樣品準備室(202)中，其中含有用於將傷口液或體液溶解或稀釋的緩衝劑，如在圖 35(A) 中所見。將拭子裝置在樣品準備室中攪拌或混合，以將流體樣品進一步釋放到樣品準備室中，如在圖 35(B) 中所示。將針的柱塞(301)向下壓，如在圖 35(C) 中所示，以破壞在樣品準備室的底部處的密封(203)，允許樣品流體流動進入含有試劑或指示劑插入物或盤狀物的反應室，用於檢測由拭子取得的樣品中的微生物感染。在如圖 35(D) 中所示的一些實施方案中，使用Goretex膜(204)移除氣體，該膜是氣體滲透和蒸氣滲透的，但液體水不可滲透。所述膜可以用於將剛剛注射的樣品除氣，以及將其中進行化驗的流體室排氣兩者。

圖 36 示出了適配於指示劑測試的樣品準備室。樣品準備室(202)適配於進一步溶解或稀釋用於測試的樣品，並且包含可再密封的頂部(401)和在室(203)底部處的可破壞的密封(402)，在那裡樣品準備室連接到反應室或診斷裝置。當拭子裝置或導線鉤裝置在室中向下陷入或向下壓時，它造成在底部處的密封(402)破壞，將樣品流體釋放至連接到室的診斷裝置中。

在進一步的實施方案中，圖 37 ，診斷裝置(500)或分析系統適配於在一端連接到樣品準備室(202)，在破壞在室連接體處的密封(203)後，允許樣品流體從採樣端(300)流動，這允許樣品流體從樣品準備室(202)流動進入用於分析的反應室(502)。位於反應室(502)後的吸收劑材料(501)幫助將樣品流體從樣品準備室(202)抽吸到反應室(502)中。反應室可以含有如本文所述的試劑、試劑片劑、試劑盤狀物、或指示劑插入物。

至於想要液相試驗，它們可以使用多種手段進行，但最終取決於在低體積的液體(例如100 µL)中可見的信號的形成。方法在人們如何獲得、稀釋和引入樣品的方面是不同的。在此實施例中，我們使用適配的注射器狀的構造引入樣品。樣品可以是拭子、紗布的碎片或來自敷料的污染的線。將拭子(圖 35 )放在柱塞構造中，並隨後柱塞形成手柄，用手柄可以使拭子與樣品準備室中的提取緩衝劑或稀釋劑混合。柱塞隨後通過同時對拭子的柄和室的側面密封來移除流體；在柱塞中的Goretex插入物允許當柱塞下降時移除氣體。當樣品是線或紗布的碎片的情況下，用鉤子代替拭子，然而，當將鉤子的柄放置在柱塞中時，原理是一樣的。

樣品準備室含有緩衝劑，其與拭子/鉤子上的樣品混合。室是以Luer-Lock型的連接體密封的，並且此密封在Luer被放置在插座中時或是當拭子或鉤子被推動通過室的底部時被破壞(圖 35 )。化驗裝置進口包括標準的母Luer，帶有Luer鎖樣的邊緣，以確保良好密封。改動的室不可逆地與母Luer鎖接合，並且在下壓柱塞時，將流體經由流體分配網路(fluid distribution network)無氣體地轉移到裝置中。在裝置中的每個室含有試劑片劑(參見前文關於試劑的實例)。每個室經由聲波接合在室上的Goretex補片排氣。只要室被填充(從下到上)，流體流動優選停止。排出的氣體在到達大氣之前通過篩檢程序。流體的到達溶解了試劑藥丸並允許反應開始。通過與比色圖表對比，確定經過給定的時間的反應的程度。結果主要是二元的，清楚的顏色或不是。與顏色相關聯的標誌物越多，越大的可能有潛在感染。因此，來自未感染的傷口的傷口液不造成顏色變化。來自感染的傷口的那些造成至少一種標誌物改變顏色並且更經常地是在5分鐘內所有三種標誌物改變顏色。

圖 38 示出了診斷裝置或轉移系統的一個實施方案，包含含有緩衝劑如鹽水的室或容器(601)、可再密封的頂部(600)、用於將樣品轉移到樣品準備室或稀釋劑室(601)中的在一端具有氣體出口和鉤子或採樣端的柱塞或類似裝置(602)、和至少一個能夠分析來自室(601)的樣品流體的反應室(606)。為了進行這樣的分析，將在端部含有樣品的柱塞(plunger)或活塞(piston)(602)插入到樣品準備室(601)中，或者將樣品放置在稀釋劑室(601)中，使得可以將樣品在室(601)中的緩衝劑中稀釋或溶解。插入在稀釋劑室(601)中的柱塞(602)的組裝件示於(607)中。

室(601)可以還包含Luer旋鎖(Luer-Lock)或滑鎖(Luer-slip)尖端(605)，用於連接到反應室(604)或分析系統。在將柱塞單元(601，602)連接到反應室(604)後，人們可以向下壓柱塞(602)，以破壞在室(601)的端部處的密封，將樣品流體從樣品準備室釋放到反應室(604)中，其中單獨的反應室(606)可以具有不同的報導物或顏色系統，用於檢測被分析物。柱塞(602)還可以包含膜，其推動水並讓氣體出去，這樣當人們將柱塞壓入到室中時使樣品流體脫氣。可以並行地填充反應室，並且最後一個室含有氣溶膠篩檢程序和到大氣的壓力出口。可以通過膜出口達到壓力平衡、反應室填充和氣溶膠過濾。在一些實施方案中，反應室含有試劑片劑或試劑盤狀物。頂部膜可以使用超聲接合就位。在一些實施方案中，使用放大反應室的視野的透鏡。向反應室或轉移體系(604)的連接包括粗篩檢程序和用於破壞在(605)處的連接上的緩衝劑密封的穿刺器。可以通過夾住在頂部和底部關閉反應室。

可以靈活地組織反應容器的構造。一個實例示於圖 39 中，其示出分析系統(604)的另一個實施方案。反應室(606)可以以徑向方式排列而不是直線排列。扇形或徑向形分析系統(604)適配於與具有用於將樣品溶液驅動到反應槽或室中的柱塞(602)系統的樣品準備室(601)一起使用。這樣的分析系統(604)的不同視圖顯示於(B)中。(608)示出了一系列以徑向排列方式排列的反應室的頂視圖。在一些實施方案中，可以將反應室單元(610)從外殼(609)移除。此可移除的特徵便於使用者重新填充、插入或更換單獨反應室單元(610)內的反應室中的試劑。

在此實施例中，所使用的試劑是水溶性的，並且用作為載體的賦形劑如PEG、麥芽糖和山梨糖醇配製成片劑。用在塊狀混合物中的合適量的緩衝劑鹽配製片劑，以在溶解後得到理想的pH。為了提供過氧化氫，使用過碳酸鈉。作為MPO底物，使用可溶的Fast Blue衍生物，即與琥珀酸酐(anhydrice)的反應產物，備選地，可以使用愈創木酚(guacol)、二胺基苯酚或類似物。對於彈性蛋白酶，使用AAPV硝基苯酚醯胺，備選地，具有重氮鹽增強劑的AAPV-吲哚酚。對於溶菌酶，底物是有標記的肽聚糖粒子，然而，槽在觀察介面處含有帶正電的膜。此膜在槽的一半上衍生，並且在反應的主指示劑中的兩側之間的對比指示反應的程度。

在一些實施方案中，在圖 24 中，向用於傷口或在手術部位處的敷料(92)中內裝或加入採樣線(100)。在敷料(92)的一些實施方案中使用AQUACEL(4)。採樣線吸收傷口液或在在手術部位處的流體(D)。可以在不必須移除或擾亂敷料的情況下，使用儀器(101)，如鑷子、鉤子或導線鉤裝置，如在圖 24 (E)中所示將線從敷料拉出或提出。隨後可以將線溶解在緩衝劑中，用於診斷裝置(102)中，其使用一種或多種本文所述的指示劑試劑或指示劑盤狀物。

在一些實施方案中，傷口敷料包含內裝的採樣線。在一些實施方案中，採樣線吸收傷口液，並且可以在不擾亂傷口敷料的情況下被移除，用於檢測傷口液中的被分析物。

在一些實施方案中，採樣線可以在緩衝劑中稀釋，以溶解標誌物，用於診斷手術部位或傷口的狀態。

在一些實施方案中，可以使用導線鉤裝置，從傷口敷料移除線。

儘管本文已經示出和描述了公開的技術的優選的實施方案，但對本領域技術人員顯然的是，這樣的實施方案僅作為實例提供。對本領域技術人員來說，現在，在不脫離公開的技術的情況下，許多變型、改變和替換將會發生。應當理解，對本文所述的公開的技術的實施方案的各種備選可以用於實踐公開的技術。意圖的是，後附的請求項限定公開的技術的範圍，並且從而覆蓋在這些請求項的範圍內的方法和結構及它們的均等物。

圖2
1‧‧‧部件
2‧‧‧試劑層
3‧‧‧聚氨酯泡沫
4‧‧‧傷口接觸層
5‧‧‧傷口液
6‧‧‧視窗
7‧‧‧傷口敷料
圖3
21‧‧‧縫線
22‧‧‧試劑墊
23‧‧‧測試區域（過濾墊）
24‧‧‧測試區域（胺阱）
25‧‧‧吸收劑或蒸發區
26‧‧‧隔離體
27‧‧‧孔（通路）
28‧‧‧回濾阱
29‧‧‧MPO（篩檢程序）
30‧‧‧彈性蛋白酶
31‧‧‧溶菌酶
32‧‧‧pH指示劑
33‧‧‧蛋白指示劑
圖4
2‧‧‧試劑墊
25‧‧‧吸收劑或蒸發區
41‧‧‧阱回濾
圖5
22‧‧‧試劑
24‧‧‧胺阱
25‧‧‧吸收劑或蒸發
26‧‧‧隔離體或徑道
27‧‧‧通路
45～48‧‧‧徑道
圖10
60‧‧‧報導物區
61‧‧‧反應區
62‧‧‧蒸發區
圖11
65‧‧‧膜
66‧‧‧標記
67‧‧‧標記
68‧‧‧回流阱
70‧‧‧反應層
71‧‧‧覆蓋物
72‧‧‧標記
圖12
73‧‧‧塑膠膜（黏合劑）
74‧‧‧標記
75‧‧‧回流阱
76‧‧‧標記
77‧‧‧反應材料（反應層）
78‧‧‧灰色框
79‧‧‧視窗
圖15
21‧‧‧縫線
50‧‧‧測試條
51‧‧‧固定區
52‧‧‧蒸發區
53‧‧‧胺基阱
54‧‧‧底物區
55‧‧‧基底層
56‧‧‧敷料
圖16
A、B‧‧‧域（底物）
C‧‧‧吲哚
D‧‧‧流體
E1‧‧‧溶菌酶
E，E2‧‧‧彈性蛋白酶
P‧‧‧產物
S‧‧‧錨
X‧‧‧位點
圖17
90‧‧‧報導物
91‧‧‧傷口液
92‧‧‧標記
圖18
701‧‧‧覆蓋物層
702‧‧‧載體
703‧‧‧聚氨酯泡沫
704‧‧‧接觸層
705‧‧‧盤狀物
圖19(A)
720‧‧‧盤狀物
721‧‧‧標記
722‧‧‧標記
723‧‧‧標記
圖19(B)
721‧‧‧載體
722‧‧‧標記
730‧‧‧盤狀物
731‧‧‧粒子
732‧‧‧標記
圖20、圖21
900‧‧‧紙層
910‧‧‧邊界
911‧‧‧梯度
912‧‧‧指示劑
圖22
800‧‧‧盤狀物
圖23
820‧‧‧插入物或盤狀物
821‧‧‧徑道或邊界
圖24
4‧‧‧AQUACEL
92‧‧‧敷料
100‧‧‧採樣線
101‧‧‧儀器或裝置
102‧‧‧診斷裝置
圖26、圖27、圖28、圖29、圖30、圖32
2‧‧‧採樣部件
4‧‧‧手柄
6‧‧‧採樣端
8‧‧‧外殼
10‧‧‧管
12‧‧‧密封手段
14‧‧‧球閥
16‧‧‧稀釋劑室
18‧‧‧反應室
20‧‧‧視窗
22‧‧‧視窗
24‧‧‧下部
26‧‧‧上部
28‧‧‧槓桿
30‧‧‧歧管
32‧‧‧節點
A‧‧‧箭頭
圖33
80‧‧‧外殼
81‧‧‧視窗
82‧‧‧鎖定銷
83‧‧‧支架（盤狀物）
85‧‧‧槽
86‧‧‧條帶
圖34
200‧‧‧裝置
201‧‧‧手柄或柱塞
202‧‧‧樣品準備室或稀釋劑室
203‧‧‧樣品準備室
圖35
202‧‧‧樣品準備室
203‧‧‧密封
204‧‧‧Goretex膜
300‧‧‧裝置
301‧‧‧手柄或柱塞
302‧‧‧拭子
圖36
202‧‧‧樣品準備室
203‧‧‧室
401‧‧‧頂部
402‧‧‧密封
圖37
202‧‧‧樣品準備室
203‧‧‧密封
300‧‧‧採樣端
500‧‧‧診斷裝置
501‧‧‧吸收劑材料
502‧‧‧反應室
圖38
600‧‧‧頂部
601‧‧‧室或容器
602‧‧‧柱塞或活塞
604‧‧‧反應室
605‧‧‧尖端
606‧‧‧反應室
圖39
601‧‧‧室
602‧‧‧柱塞
604‧‧‧分析系統
606‧‧‧反應室
607‧‧‧組裝件
608‧‧‧反應室
609‧‧‧外殼
610‧‧‧反應室單元

為了理解本公開，現在將參照附圖與下文的描述詳細說明本公開的實施方案和實例，用於解釋本公開的原理。

圖1：設計的立體織物結構的實例，如皺摺。 圖2：具有AQUACEL的敷料的實例，顯示了敷料的不同層，和將流體從傷口抽吸到敷料的反應層的縫線。 圖3：反應小室的示意圖，示出了反應小室的不同部件，在(A)中具有縫線(21)，且在(B)中具有切口通路(27)。在一些實施方案中，每個反應小室可以是不同的報導物或染料系統。 圖4：在暴露至液體後，指示劑在反應小室中的移動，其從切口通路和試劑(22)流向吸收劑或蒸發區(25)。隨時間經過，反應產物朝吸收劑或蒸發區擴散並遷移。在(B)中示出了以徑向方式排列的指示劑的移動。在一些實施方案中，每個徑道或反應小室可以是不同的報導物或顏色系統。如在(C)中所示，可以使用多個反應小室。多個反應小室可以以陣列或組合使用，以提供在一定面積上的指示劑功能。可以使用回濾阱以防止回流。 圖5：指示劑可以以圓形或徑向方式排列，以形成指示劑盤狀物(A)。在一些實施方案中，每個徑道或反應小室(45～48)可以是不同的報導物或顏色系統，如溴百里酚藍、苯酚紅、溴酚紅、氯酚紅、百里酚藍、溴甲酚綠、溴甲酚紫；硝嗪黃；或其他磺酞染料。(B)示出了從上方和從下方的徑向指示劑盤狀物的視圖。 圖6：用於MPO檢測的印刷的敷料。在一個實施方案中，將傷口接觸材料與澱粉酶、澱粉和葡萄糖氧化酶一起噴塗或印刷，隨後印刷用於MPO的底物，印刷在各噴塗區的中心。 圖7：示出了在測試條上MPO和彈性蛋白酶底物的原位顏色發展。這些測試條表示用於檢測樣品中MPO和彈性蛋白酶的存在的可視化方法的原型，其中顏色(例如，藍色)強度隨著較高底物濃度而增加。 圖8：底物的實例，包括MPO底物(Fast Blue衍生物)、彈性蛋白酶底物，並且示出了吲哚酚氧化成藍色靛藍。 圖9：徑向排列的不同指示劑的原位顏色發展。(A)和(B)表示用於檢測特定被分析物的指示劑的原型，被分析物包括pH變化、MPO、溶菌酶和彈性蛋白酶。在一個實施方案中，pH變化可以作為從黃色到綠色的顏色變化被報導；MPO作為藍色的顯現被報導；溶菌酶作為粉色或紅色的顯現被報導；彈性蛋白酶作為綠色或藍色的顯現被報導；並且液體對照物作為藍色或紫色的顯現被報導。 圖10：徑向指示劑插入物或盤狀物的示意圖。 圖11：具有用於檢測的視窗的徑向指示劑插入物或盤狀物的示意圖。 圖12：具有用於檢測的視窗的徑向指示劑插入物或盤狀物的另一個實施方案的示意圖。 圖13：雷馬唑亮藍的運輸，示出了在液體運輸後指示劑向報導物區的遷移。 圖14：pH指示劑的實例。在一個實施方案中，隨著pH增加，顏色可以從綠色變到藍色。 圖15：溶菌酶測試條的示意圖。流體流動造成染色的肽聚糖粒子向上移動到阱層。 圖16：指示劑底物和反應的實例。 圖17：自由地置放於敷料中的指示劑盤狀物的實例。 圖18：在敷料中的非織層中的診斷盤狀物的實施方案。 圖19：在敷料中的非織層中的診斷盤狀物的實施方案。 圖20：以片狀製造的診斷盤狀物的實例。 圖21：印刷的和塗敷的紙盤狀物的實施方案。在一些實施方案中，每個盤狀物可以是不同的報導物或顏色系統。 圖22：將診斷盤狀物連接或應用到敷料中的非織層的方法。 圖23：示出了具有以不同陣列和組合排列的指示劑插入物或盤狀物的量桿裝置。在一些實施方案中，每個插入物、盤狀物或徑道可以是不同的報導物或顏色系統。 圖24：在敷料中的採樣線和用途。採樣線可以合併在傷口敷料中或在手術部位處，其中可以在不擾亂敷料的情況下將線拉出，以在診斷裝置中測試手術部位或傷口的微生物感染的存在或病況。 圖25：用於製造指示劑插入物的組裝體。 圖26：獨立的裝置套組的截面。 圖27：插入在獨立的裝置套組的外殼中的採樣端。 圖28：獨立的裝置套組的平面圖。 圖29：獨立的裝置套組的另一視圖。 圖30：具有滑動分開的外殼的獨立的裝置套組的平面圖。 圖31：在獨立的裝置套組中的稀釋劑室、管和反應室。 圖32：在獨立的裝置套組中，試驗溶液到各反應室的分配。 圖33：具有外殼的診斷拭子裝置，其中可以從外殼中的觀察視窗觀察與指示劑盤狀物或插入物的反應。 圖34：線鉤診斷裝置，適合於將採樣線從敷料拉出，用於分析。 圖35：拭子診斷裝置，其中使用拭子獲得用於用診斷裝置測試的樣品，診斷裝置還包含稀釋劑室、氣體出口、和柱塞。 圖36：用於樣品製備的稀釋劑室。稀釋劑室包含稀釋劑，其適於與拭子裝置、線鉤裝置和類似樣品裝置一起使用，包含可再密封的頂部和在底部的密封或膜，其中破壞密封或膜(402)允許樣品與稀釋劑溶液混合，其流出稀釋劑室並進入包含反應室或槽的測試裝置。 圖37：具有採樣室和反應槽的診斷裝置的實施方案。診斷裝置的一個實施方案具有反應室(502)，其適於連接到用於接收來自樣品製備裝置(300)，如拭子裝置，的樣品的採樣室或稀釋劑室(202)。 圖38：診斷裝置或轉移系統的實施方案，其中樣品室或稀釋劑室使用Luer旋鎖連接器連接到反應室，用於測試樣品流體。在一個實施方案中，柱塞(plunger)或活塞(piston)包含氣體出口、用於容納樣品的鉤子、和當將柱塞壓入稀釋劑室中時使氣體出去的膜。 圖39：分析或診斷系統的其他實施方案，其中反應室以徑向排列的方式設置。

Claims (92)

1. 一種傷口敷料，所述傷口敷料包含： a) 一傷口接觸層； b) 一試劑層，包含一個或多個測試區域，其中所述試劑層與所述傷口接觸層流體連通；以及 c) 一外層，覆蓋所述試劑層。
2. 如請求項1所述的傷口敷料，其中所述傷口接觸層包含凝膠形成聚合物。
3. 如請求項1所述的傷口敷料，其中所述一個或多個測試區域中的每一個包含一個或多個以下各項中的每一項：回流阱、試劑墊、過濾墊、指示劑阱、和吸收劑區，並且其中一個或多個觀察視窗位於所述試劑墊或所述指示劑阱上方。
4. 如請求項3所述的傷口敷料，其中： a) 所述試劑墊與所述過濾墊流體連通； b) 所述過濾墊與所述指示劑阱流體連通；以及 c) 所述指示劑阱與所述吸收劑區流體連通。
5. 如請求項1所述的傷口敷料，其中所述一個或多個測試區域中的每一個包含一個或多個選自由以下各項組成的組的試劑：酶反應性指示劑、作為過氧化物的來源的試劑、產生有色的產物的酶、pH指示劑、蛋白回應試劑、和水分檢測試劑。
6. 如請求項5所述的傷口敷料，其中酶反應性指示劑是蛋白質-指示劑共軛物。
7. 如請求項6所述的傷口敷料，其中所述蛋白質-指示劑共軛物沉積在所述試劑墊之中或之上。
8. 如請求項6所述的傷口敷料，其中所述蛋白質-指示劑共軛物具有式(I)的結構： A-B 式(I) 其中： A是有助於使酶反應性區域結合至所述試劑墊的一錨區域或部分；並且 B是所述酶反應性區域。
9. 如請求項8所述的傷口敷料，其中所述酶反應性區域包含肽。
10. 如請求項8所述的傷口敷料，其中所述酶反應性區域包含具有一酶-反應指示劑的一指示劑區域。
11. 如請求項8所述的傷口敷料，其中B還包含一指示劑區域。
12. 如請求項11所述的傷口敷料，其中所述指示劑區域在已經被靶酶切割之後，被選自由以下各項組成的組的輔助酶轉化成有色物質：脂肪酶、酯酶、己糖胺酶、過氧化物酶、氧化酶、糖苷酶、葡糖苷酶、漆酶、和其中兩項以上的組合。
13. 如請求項10所述的傷口敷料，其中所述酶反應性指示劑與一種或多種選自由以下各項組成的組的酶相互作用：彈性蛋白酶、溶菌酶、組織蛋白酶G、髓過氧化物酶、和它們的任意組合。
14. 如請求項10所述的傷口敷料，其中所述酶反應性指示劑包含在酶不穩定性或酶反應性區域與一種或多種酶的相互作用後能夠產生可見的顏色或可檢測的電子變化的一部分，其中所述部分選自由以下各項組成的組：過氧化物酶底物、芳基胺、胺基苯酚、中性染料、帶電染料、奈米粒子、膠體金粒子、和它們的類似物。
15. 如請求項8所述的傷口敷料，其中所述錨區域共價地連接到所述試劑墊。
16. 如請求項8所述的傷口敷料，其中所述錨區域非共價地連接到所述試劑墊。
17. 如請求項16所述的傷口敷料，其中所述錨區域離子地連接到所述試劑墊。
18. 如請求項1所述的傷口敷料，所述傷口敷料還包含貫穿除了所述外層之外的所述傷口敷料的所有層的一個或多個芯吸縫線或芯吸簇絨的線，並且其中所述芯吸縫線或芯吸簇絨提供在所述試劑層與所述傷口接觸層之間的流體連通。
19. 如請求項18所述的傷口敷料，其中一個或多個芯吸縫線或芯吸簇絨的線包含可濕的且展現毛細作用的纖維。
20. 如請求項19所述的傷口敷料，其中所述纖維包含棉、嫘縈、黏膠纖維、羊毛、絲、聚酯、聚醯胺、CMC、聚丙烯、或它們的任意組合。
21. 如請求項1所述的傷口敷料，其中一個或多個測試區域包含與試劑墊流體連通的一回濾阱，和一個或多個僅在所述回濾阱處穿過一個或多個測試區域的芯吸縫線或芯吸簇絨的線。
22. 如請求項1所述的傷口敷料，所述傷口敷料還包含在所述傷口接觸層和所述試劑層之間的一泡沫層。
23. 如請求項22所述的傷口敷料，所述傷口敷料還包含一個或多個在所述傷口接觸層中的穿孔。
24. 如請求項22所述的傷口敷料，所述傷口敷料還包含一個或多個在所述泡沫層和所述傷口接觸層中的穿孔。
25. 如請求項21所述的傷口敷料，其中所述一個或多個測試區域中的每一個還包含與所述試劑墊流體連通的一回濾阱，和一個或多個與所述回濾阱對齊的穿孔。
26. 如請求項1所述的傷口敷料，其中所述一個或多個測試區域中的每一個包含一多通道測試區域，其中一個或多個不可滲透的隔離體或邊界將每個通道與相鄰的通道隔開。
27. 如請求項26所述的傷口敷料，所述傷口敷料包含多個測試區域。
28. 如請求項26所述的傷口敷料，其中所述測試區域被設置成直線配置。
29. 如請求項26所述的傷口敷料，其中所述測試區域被設置成放射狀配置。
30. 如請求項1所述的傷口敷料，其中所述外層具有一個或多個允許來自所述試劑層的信號可視化的視窗。
31. 如請求項30所述的傷口敷料，其中所述信號是顏色變化。
32. 如請求項30所述的傷口敷料，其中所述信號是螢光信號、發光信號、或通過物理手段介導的信號，如電性變化。
33. 一種檢測在哺乳動物的傷口中的一種或多種酶的水準的方法，所述方法包括： a) 將所述哺乳動物的傷口與請求項1的傷口敷料接觸； b) 觀察在所述試劑層中的一種或多種信號，其中所述信號是顏色變化、螢光信號、發光信號、或電性變化；以及 c) 將所述信號與參照物或對照物比較，以確定酶的水準。
34. 一種檢測在哺乳動物的傷口中一種或多種酶的存在的方法，所述方法包括： a) 將所述哺乳動物的傷口與請求項1的傷口敷料接觸；以及 b) 觀察在所述試劑層中的一種或多種信號，其中所述信號是顏色變化、螢光信號、發光信號、或電性變化。
35. 一種檢測在哺乳動物的傷口中的感染的方法，所述方法包括： a) 將所述傷口與請求項1的傷口敷料接觸；以及 b) 觀察在所述試劑層中的一種或多種信號，其中所述信號是顏色變化、螢光信號、發光信號、或電性變化。
36. 一種處理在哺乳動物的傷口中的感染的方法，所述方法包括： a) 將所述傷口與請求項1的傷口敷料接觸； b) 觀察在所述試劑層中的一種或多種指示感染的信號，其中所述信號是顏色變化、螢光信號、發光信號、或電性變化；以及 c) 對所述哺乳動物執行醫學處理。
37. 一種用於檢測在傷口中的感染的裝置，所述裝置包含： a) 一傷口接觸層； b) 一反應層，所述反應層包含一種或多種可以指示一種或多種與感染相關聯的被分析物的存在的試劑，其中所述試劑被固定到一固相並且在報導物區中產生可檢測的信號； c) 一覆蓋物，在所述反應層的頂部上，其中所述覆蓋物包含一個或多個視窗或空白區，以允許所述可檢測的信號的可視化；以及 d) 在所述傷口接觸層與所述反應層之間的流體連通。
38. 如請求項37所述的裝置，其中所述試劑包含與一種或多種選自由以下各項組成的組的靶酶相互作用的複數酶反應性區域：溶菌酶、MPO、組織蛋白酶G、彈性蛋白酶、過氧化氫酶、脂肪酶、酯酶、和它們的任意組合。
39. 如請求項37所述的裝置，其中一種或多種試劑在pH變化後、在酸性pH、或在鹼性pH產生可見的顏色，並且其中pH敏感性試劑包含溴百里酚藍、苯酚紅、溴酚紅、氯酚紅、百里酚藍、溴甲酚綠、溴甲酚紫；硝嗪黃；或其他磺酞染料。
40. 如請求項38所述的裝置，其中所述複數酶反應性區域包含能夠在與一種或多種靶酶相互作用後產生可見的顏色或可檢測的電子變化的一部分，其中所述部分是過氧化物酶底物、芳基胺、胺基苯酚、吲哚酚、中性染料、帶電染料、奈米粒子、膠體金粒子、或它們的類似物。
41. 如請求項40所述的裝置，其中所述試劑與靶酶相互作用以產生有色的物質或產生與選自由以下各項組成的組的一輔助酶相互作用的中間體產物：脂肪酶、酯酶、己糖胺酶、過氧化物酶、氧化酶、糖苷酶、葡糖苷酶、和漆酶。
42. 如請求項37所述的裝置，其中所述流體連通包含允許在所述傷口接觸層和所述反應層之間流體連通的一吸收劑材料的芯吸縫線或芯吸簇絨。
43. 如請求項37所述的裝置，其中所述試劑被印刷、噴塗或沉積在所述固相上。
44. 如請求項37所述的裝置，其中所述固相選自由以下各項組成的組：紙、黏膠纖維、再生纖維素、玻璃纖維、和它們的任意組合。
45. 如請求項37所述的裝置，其中所述可檢測的信號是顏色變化、螢光信號、發光信號、或電性變化。
46. 如請求項37所述的裝置，其中所述裝置是一傷口敷料。
47. 一種作為獨立的實體被提供並且可以被放置在任何敷料系統中的用於檢測與酶相關聯的感染的裝置，所述裝置包含一樣品入口，與複數試劑小室流體連通，其中複數試劑小室包含用於樣品遞送和/或pH的指示劑，和一種或多種用於選自由以下各項組成的組的感染的生物標誌物的指示劑：溶菌酶、MPO、組織蛋白酶G、彈性蛋白酶、過氧化氫酶、脂肪酶、和酯酶。
48. 如請求項47所述的裝置，其中所述指示劑包含酶反應性指示劑、作為過氧化物的來源的試劑、產生有色的產物的酶、pH指示劑、蛋白回應試劑、或水分檢測試劑。
49. 如請求項47所述的裝置，其中所述指示劑是酶反應性指示劑或蛋白質-指示劑共軛物。
50. 如請求項47所述的裝置，其中所述蛋白質-指示劑共軛物沉積在所述試劑墊之中或之上。
51. 如請求項47所述的裝置，其中所述蛋白質-指示劑共軛物具有式(I)的結構：A-B，其中A是有助於將酶反應性區域結合到所述試劑墊的一錨區域或部分；B是所述酶反應性區域；並且其中所述酶反應性區域包含肽或指示劑區域。
52. 如請求項51所述的裝置，其中所述指示劑區域與一酶相互作用以產生有色的物質或其中中間體物質與選自由以下各項組成的組的一輔助酶相互作用以產生有色的物質：脂肪酶、酯酶、己糖胺酶、過氧化物酶、氧化酶、糖苷酶、葡糖苷酶、和漆酶。
53. 如請求項47所述的裝置，其中所述流體連通包含一至十個指示劑通道，係被複數不可滲透的徑道、邊界或隔離體隔開，其中每一個指示劑通道包含一不同的試劑或對照物。
54. 如請求項47所述的裝置，其中所述流體連通包含多個分開的指示劑通道，並且其中每一個指示劑通道包含一不同的試劑或對照物。
55. 如請求項47所述的裝置，其中所述試劑以放射狀配置被印刷、噴塗或沉積在一固相上以形成一盤狀物。
56. 如請求項47所述的裝置，其中所述試劑以直線配置被印刷、噴塗或沉積在一固相上以形成一測試條或一量桿型裝置。
57. 如請求項55所述的裝置，其中所述盤狀物包含被印刷、噴塗或沉積於在所述盤狀物的頂表面上的試劑，所述盤狀物的底表面上具有一阱材料和一底物材料，其中所述底物可以被樣品中的一種或多種酶消化以釋放一種或多種向所述阱遷移的產物。
58. 如請求項57所述的裝置，其中一種或多種產物是有色的或通過與一輔助酶相互作用產生顏色變化，並且其中所述顏色變化可以在所述盤狀物的頂表面上被可視化。
59. 一種用於檢測傷口中的感染的診斷盤狀物，所述診斷盤狀物包含： a) 一反應層，所述反應層包含一種或多種與指示感染的一靶酶相互作用的試劑，其中所述試劑被固定至一固相； b) 每種試劑被噴塗、印刷或沉積在一徑道中的一試劑區中，所述徑道通過不可滲透的複數隔離體與相鄰的複數徑道隔開； c) 每一個徑道包含一報導物區，其中顏色、顏色變化、或其他可檢測的信號係被觀察；和 d) 一覆蓋物，所述覆蓋物包含用於將在所述報導物區中的信號可視化的一視窗。
60. 如請求項59所述的診斷盤狀物，其中一種或多種試劑在pH變化後、在酸性pH、或在鹼性pH產生可見的顏色，其中pH敏感性試劑包含溴百里酚藍、苯酚紅、溴酚紅、氯酚紅、百里酚藍、溴甲酚綠、溴甲酚紫；硝嗪黃；或其他磺酞染料。
61. 如請求項59所述的診斷盤狀物，其中多個徑道以直線或放射狀配置設置在允許一傷口接觸區到所述反應層中的所述試劑之間的流體連通的一切口通路、穿孔或芯吸材料周圍。
62. 如請求項59所述的診斷盤狀物，其中一種或多種試劑在與選自由以下各項組成的組的一酶相互作用後產生顏色信號或其他可檢測的信號：溶菌酶、MPO、組織蛋白酶G、彈性蛋白酶、過氧化氫酶、脂肪酶、和酯酶。
63. 如請求項59所述的診斷盤狀物，其中所述試劑包含選自由以下各項組成的組的一部分：過氧化物酶底物、芳基胺、胺基苯酚、吲哚酚、中性染料、帶電染料、奈米粒子、和膠體金粒子、和它們的類似物。
64. 如請求項59所述的診斷盤狀物，其中所述試劑包含產生有色的物質或顏色信號的輔助酶，並且其中所述輔助酶是脂肪酶、酯酶、己糖胺酶、過氧化物酶、氧化酶、糖苷酶、葡糖苷酶、漆酶、或它們中一種或多種的組合。
65. 如請求項59所述的診斷盤狀物，其中所述固相選自由以下各項組成的組：紙、黏膠纖維、再生纖維素、玻璃纖維、和類似的材料。
66. 如請求項59所述的診斷盤狀物，其中存在多個徑道，各所述徑道具有不同的試劑或對照物。
67. 如請求項59所述的診斷盤狀物，其中所述可檢測的信號包含顏色變化、顏色的出現或消失、螢光信號、發光信號、或電性變化或信號。
68. 一種用於檢測在傷口中的感染的橫流或量桿裝置，所述裝置包括：一個或多個被設置成直線配置的試劑盤狀物，其中每一個試劑盤狀物浸透有與酶相互作用產生顏色變化的和/或是pH敏感性的試劑，包含溴百里酚藍、苯酚紅、溴酚紅、氯酚紅、百里酚藍、溴甲酚綠、溴甲酚紫；硝嗪黃；或其他磺酞染料，並且其中所述盤狀物被固定至一固相。
69. 如請求項68所述的裝置，其中所述試劑在與選自由以下各項組成的組的一酶相互作用後產生顏色信號：溶菌酶、MPO、組織蛋白酶G、彈性蛋白酶、過氧化氫酶、脂肪酶、和酯酶。
70. 如請求項68所述的裝置，其中所述固相選自由以下各項組成的組：紙、黏膠纖維、再生纖維素、玻璃纖維、和它們的任意組合。
71. 一種用於檢測在傷口或樣品中的感染的裝置，所述裝置包含一外殼，其中所述外殼包含： a) 一採樣部件，用於收集所述樣品； b) 一樣品準備室，與一反應室流體連通，其中所述樣品準備室接收所述樣品； c) 所述反應室，包含一個或多個反應小室，所述一個或多個反應小室含有與所述樣品中的一種或多種酶相互作用以指示所述樣品的感染的存在和/或pH的試劑；和 d) 一視窗或一空白區，用於將可檢測的信號可視化，其中所述信號是顏色變化。
72. 如請求項71所述的裝置，其中一種或多種試劑在與選自由以下各項組成的組的一酶相互作用後產生顏色信號：溶菌酶、MPO、組織蛋白酶G、彈性蛋白酶、過氧化氫酶、脂肪酶、和酯酶。
73. 如請求項71所述的裝置，其中所述試劑中的一種回應pH變化、鹼性pH或酸性pH而產生顏色變化。
74. 如請求項71所述的裝置，其中所述試劑在主要是液體的介質中進行。
75. 如請求項71所述的裝置，其中所述試劑以用於所述反應小室中的片劑形式予以提供。
76. 如請求項71所述的裝置，其中所述試劑被印刷、噴塗或沉積在一支撐材料上的分開的複數試劑區中以形成用於所述反應室中的一試驗盤。
77. 如請求項71所述的裝置，其中所述支撐材料選自由以下各項組成的組：紙、黏膠纖維、再生纖維素和玻璃纖維，其被設置成沿著載體條排成一條線。
78. 如請求項76所述的裝置，其中所述複數試劑區被設置成沿著能夠在所述反應室中吸收所述樣品的載體條排成一條線。
79. 如請求項71所述的裝置，其中所述採樣部件是一拭子裝置。
80. 如請求項71所述的裝置，其中所述採樣部件是一鉤或針裝置，其適於從一傷口敷料移除線而不弄亂所述傷口敷料。
81. 一種用於檢測在樣品中的感染的套組，所述套組包含： a) 一採樣部件，用於收集所述樣品； b) 一測試裝置，包含一外殼，所述外殼圍繞一管以限定位於所述外殼中之用於接收所述採樣部件的一開口，所述外殼包含： c) 一稀釋劑室，容納液體稀釋劑； d) 一反應槽，與所述管液體連通反應槽，其中所述反應槽容納一種或多種試劑，所述試劑與一種或多種被分析物相互作用而產生顏色變化或可檢測的信號； e) 一觀察視窗或一報導物區，其中可以觀察所述顏色變化或可檢測的信號；和 f) 其中所述液體稀釋劑從所述採樣部件流動到所述反應槽中，以將所述樣品與在所述反應槽中的試劑混合。
82. 如請求項81所述的套組，其中所述試劑包含一種或多種酶反應性指示劑和/或pH指示劑。
83. 如請求項81所述的套組，其中一種或多種試劑在與選自由以下各項組成的組的酶相互作用後產生顏色信號：溶菌酶、MPO、組織蛋白酶G、彈性蛋白酶、過氧化氫酶、脂肪酶、和酯酶。
84. 如請求項81所述的套組，其中所述試劑包含選自由以下各項組成的組的一部分：過氧化物酶底物、芳基胺、胺基苯酚、吲哚酚、中性染料、帶電染料、奈米粒子、膠體金粒子、和它們的類似物。
85. 如請求項81所述的套組，其中所述可檢測的信號包含顏色信號或顏色變化、螢光信號、發光信號、或電信號。
86. 如請求項81所述的套組，其中至少一種試劑回應鹼性pH、酸性pH、或pH變化產生顏色信號，其中pH敏感性試劑是溴百里酚藍、苯酚紅、溴酚紅、氯酚紅、百里酚藍、溴甲酚綠、溴甲酚紫；硝嗪黃；或其他磺酞染料。
87. 如請求項81所述的套組，其中所述樣品從傷口、傷口敷料、或手術部位獲得。
88. 如請求項81所述的套組，其中所述採樣部件是一拭子裝置或一鉤或針裝置。
89. 如請求項81所述的套組，其中所述試劑被沉積在一測試條上的分開的複數區中以形成一試驗盤。
90. 如請求項81所述的套組，其中存在多個反應槽，其中各反應槽包含不同的試劑或對照物。
91. 如請求項90所述的套組，其中所述多個反應槽被設置成直線配置。
92. 請求項90所述的套組，其中所述多個反應槽被設置成放射狀配置。