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TW201609804A - 抗α－突觸核蛋白抗體及使用方法 - Google Patents

抗α－突觸核蛋白抗體及使用方法 Download PDF

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TW201609804A
TW201609804A TW103140321A TW103140321A TW201609804A TW 201609804 A TW201609804 A TW 201609804A TW 103140321 A TW103140321 A TW 103140321A TW 103140321 A TW103140321 A TW 103140321A TW 201609804 A TW201609804 A TW 201609804A
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antibody
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human
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synuclein
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TW103140321A
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克勞斯 卡路扎
歐勒夫 曼迪格
湯瑪士 克雷姆
馬克斯 布李茲吉
塞爾維亞 修伯
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赫孚孟拉羅股份公司
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Publication date
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Abstract

本發明提供抗人類α-突觸核蛋白抗體及其使用方法。

Description

抗α-突觸核蛋白抗體及使用方法
本發明係關於抗人類α-突觸核蛋白抗體及其使用方法。
帕金森氏病(Parkinson's disease)之特徵為黑質紋狀體系統之多巴胺(DA)神經元漸進損失及存在路易體(LB)及路易神經突(LN)，主要由絲狀α-突觸核蛋白聚集體構成之蛋白質神經元內包涵體。α-突觸核蛋白為在腦中在控制多巴胺激導性神經元功能方面發揮中心作用且被認為與PD病理生理學極其相關之蛋白質。實際上，除α-突觸核蛋白為LB之主要蛋白質組分之外，遺傳研究顯示α-突觸核蛋白基因之某些點突變及倍增產生PD之家族形式。大量證據指示在多巴胺激導性突觸下之α-突觸核蛋白病理學可成為PD大腦之神經元細胞功能障礙及退化開始之基礎(Bellucci,A.等人，Brain Res.1432(2012)95-113)。
為α-突觸核蛋白之沈積物之路易體為帕金森氏病(PD)之病理學跡象(Goedert,M.,Nat.Rev.Neurosci 2(2001)492-501)。Braak等人(Neurobiology of aging 24(2003)197-211)報導了與偶發性PD相關之腦病理學之分級。
α-突觸核蛋白原纖維聚集體為路易體及路易神經突之主要組分。最近科學工作表明α-突觸核蛋白之前纖維寡聚物可為帕金森氏病進展中之關鍵促成因素(Luk,K.C.等人，Science 338(2012)949-953；Auluck,P.K.等人，Science 295(2002)865-868；Bodner,R.A.等人， Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103(2006)4246-4251；Bucciantini,M.等人，J.Biol.Chem.279(2004)31374-31382；El-Agnaf,O.M.等人，FASEB J.20(2006)419-425；Kayed,R.等人，Science 300(2003)486-489；Lashuel,H.A.等人，J.Mol.Biol.322(2002)1089-1102；Masliah,E.等人，Science 287(2000)1265-1269)。
Chai,Y-J.等人報導分泌寡聚形式之α-突觸核蛋白影響膜運輸之多個步驟(FEBS Lett.587(2013)452-459)。Chang,C.等人(Neurosci.Lett.548(2013)190-195)報導由α-突觸核蛋白(PD中之神經退化之重要介體)誘導之BV-2細胞之外來體。Feng,R.L.等人報導α-突觸核蛋白介導膜傳導中之變化(α-突觸核蛋白寡聚物在細胞脆弱性中之潛在作用)(Eur.J.Neurosci.32(2010)10-17)。Lee,H-J.報導自噬失敗促進α-突觸核蛋白之胞外分泌及細胞間轉移(Exp.Mol.Med.45(2013)e22)。Schulz-Schaeffer,W.J.(Acta Neuropathol.120(2010)131-143)報導路易體癡呆、帕金森氏病及帕金森氏病癡呆中之α-突觸核蛋白聚集之突觸病理學。
人腦中之絕大部分α-突觸核蛋白經N端乙醯化(Kellie,J.F.等人，Sci.Rep.4(2014)5797)且此N端乙醯化抑制α-突觸核蛋白聚集(Bartels,T.等人，PLoS One 9(2014)e103727)。
已報導重組α-突觸核蛋白之不同寡聚形式：A型寡聚物(細胞毒性，對Ca2+流入有影響)，C型寡聚物(聚集接種物種)，與脂質混合之原纖維(催化細胞內聚集體之聚集)，三脯胺酸(TP)突變A30P/A56P/A76P(主要形成毒性寡聚物)(參見例如Danzer,K.M.等人，J.Neurosci.27(2007)9220-9232；Danzer,K.M.等人J.Neurochem.111(2009)192-203；Luk,C.K.等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 106(2009)20051-20056；Desplates,P.等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA 106(2009)13010-13015；Karpinar,D.P.等人，EMBO J.28(2009)3256-3268； Lee,H-J.等人，J.Biol.Chem.285(2010)9262-9272；Hansen,C.等人，J.Clin.Invest.121(2011)715-725)。
Luk,K.C.等人(Science 338(2012)949-953)報導病理性α-突觸核蛋白傳輸引發非轉殖基因小鼠之類帕金森神經退化。由α-突觸核蛋白寡聚物誘導之接種為α-突觸核蛋白病理學之擴散提供證據且Danzer,K.M.等人(J.Neurochem.111(2009)192-203；Mol.Neurodegen.7(2012)42)報導α突觸核蛋白寡聚物之外來體細胞間傳輸。Braidy等人報導活體外初級人類胎兒腸神經元中之α-突觸核蛋白傳輸及粒線體毒性(Neurotox.Res.(2013)epub on October 5,2013)。Desplats,P.等人報導經由α-突觸核蛋白之神經元至神經元傳輸之包涵體形成及神經元細胞死亡(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 106(2009)13010-13015)。Lee等人(J.Biol.Chem.285(2010)9262-9272)報導α-突觸核蛋白自神經元向星形神經膠質之直接轉移導致突觸核蛋白病中之發炎反應。Lee,S-J.等人報導α-突觸核蛋白聚集體之細胞間傳輸(Meth.Mol.Biol.849(2012)347-359；Nat.Rev.Neurol.6(2010)702-706)。藉由α-突觸核蛋白聚集種子之可能傳輸之α-突觸核蛋白病理學進展之可能最強證據來自某些PD患者之大腦之死後分析，該等患者呈現11-16年前移植至其大腦之胎兒神經元中之路易病理學(Li,J-Y.等人，Nat.Med.14(2008)501-503)。
聚集之α-突觸核蛋白介導活體內多巴胺激導性神經毒性(Periquet,M.等人，J.Neurosci.27(2007)3338-3346)。Pieri,L.等人報導原纖維α-突觸核蛋白及亨廷頓蛋白(huntingtin)外顯子1集合體對細胞有毒(Biophys.J.102(2012)2894-2905)。Van Rooijen等人報導藉由寡聚α-突觸核蛋白之膜滲透：搜尋機制(PLoS One 5(2010)e14292)。
最近，Wagner等人在細胞分析中及α-突觸核蛋白轉殖基因小鼠模型中展示小分子Anle138b充當保護性α-突觸核蛋白寡聚物調節劑，其 可適用於帕金森氏病之疾病改善療法(Wagner,J等人，Acta Neuropathol.125(2013)795-813)。Lynch,S.M.等人報導抗α-突觸核蛋白之非澱粉狀蛋白組分之scFv胞內抗體減少細胞內聚集及毒性(J.Mol.Biol.377(2008)136-147)。El-Agnaf,O.M.等人(FASEB J.(2004))報導設計α-突觸核蛋白聚集及毒性之抑制劑作為帕金森氏病及相關病症之新穎治療的策略。Emadi,S.等人報導藉由人類單鏈抗體片段及抗寡聚α-突觸核蛋白之人類單鏈抗體片段之分離抑制α-突觸核蛋白之聚集，該分離抑制聚集且防止α-突觸核蛋白誘導之毒性(Biochem.43(2004)2871-2878；J.Mol.Biol.368(2007)1132-1144)。Smith等人報導靜脈內免疫球蛋白對α-突觸核蛋白聚集及神經毒性之影響(Int.Immunopharmacol.14(2012)550-557)。Vekrelis,K.及Stefanis,L.(Expert.Opin.Ther.Targets 16(2012)421-432)報導靶向細胞內及細胞外α-突觸核蛋白作為帕金森氏病及其他突觸核蛋白病之治療策略。
在主動(Masliah,E.等人，Neuron 46(2005)857-868)及被動(Masliah,E.等人，PLoS One 6(2011)e19338)免疫接種範例中展示各別轉殖基因小鼠之腦突觸核蛋白病之抗體輔助清除。Bae,E-J.等人(J.Neurosci.32(2012)13454-13469)報導藉由特異性抗體結合細胞外α-突觸核蛋白防止細胞間聚集傳輸。
WO 2011/020133中報導使用α-突觸核蛋白抗原決定基之擬抗原決定基治療路易體疾病。在WO 2007/011907中報導了α-突觸核蛋白抗體及其相關方法。Joshi等人(MABS 4(2012)686-693)報導融合至帶高電荷之蛋白酶體再靶向序列增加不同抗突觸核蛋白胞內抗體之可溶細胞質表現及功效。Emadi等人(J.Mol.Biol.368(2007)1132-1144)報導抑制聚集且防止α-突觸核蛋白誘導之毒性之抗寡聚α-突觸核蛋白的人類單鏈抗體片段之分離。Emadi等人(J.Biol.Chem.284(2009)11048-11058)報導α-突觸核蛋白之形態不同寡聚形式之偵測。Zhou等人(Mol. Ther.10(2004)1023-1031)報導人類單鏈Fv胞內抗體阻斷過度表現α-突觸核蛋白之異常細胞影響。Nasstrom等人(PLoS One 6(2011)e27230)報導抗α-突觸核蛋白之抗體減少活細胞中之寡聚。WO 2011/104696中報導基原纖維結合抗體及其在帕金森氏病、路易體癡呆及其他α-突觸核蛋白病之治療及診斷方法中之用途。Barkhordarian等人(Prot.Eng.Des.Select.19(2006)497-502)報導使用原子力顯微法及噬菌體呈現技術分離針對特定蛋白質形態之重組抗體。Kvam等人(PLoS One 4(2009)e5727)報導活細胞中之原纖維聚麩醯胺酸蛋白之構形靶向增加聚集及細胞毒性。
本發明提供抗人類α-突觸核蛋白抗體及其使用方法。
如本文所報導之一個態樣為特異性結合至人類α-突觸核蛋白之抗體，其中人類α-突觸核蛋白具有游離N端甲硫胺酸殘基。
術語「游離N端甲硫胺酸殘基」表示多肽之甲硫胺酸殘基，其位於多肽之N端處且除與醯胺鍵結合至多肽之其餘部分以外，其未經修飾。在一個實施例中該游離N端甲硫胺酸殘基為未經修飾之甲硫胺酸殘基。在一個實施例中該游離N端甲硫胺酸殘基具有游離胺基。人類α-突觸核蛋白之胺基酸序列為SEQ ID NO：40。
在一個實施例中，抗體特異性結合至人類及小鼠α-突觸核蛋白，其中人類及小鼠α-突觸核蛋白具有游離N端甲硫胺酸殘基。
在一個實施例中α-突觸核蛋白為單體α-突觸核蛋白。
在一個實施例中α-突觸核蛋白為單體及寡聚α-突觸核蛋白。
在一個實施例中，抗體與在重鏈中包含SEQ ID NO：15至17之HVR及在輕鏈中包含SEQ ID NO：18至20之HVR之抗體結合至相同的抗原決定基或重疊抗原決定基。
在一個實施例中，抗體與在重鏈中包含SEQ ID NO：21、22及17 之HVR及在輕鏈中包含SEQ ID NO：23至25之HVR之抗體結合至相同的抗原決定基或重疊抗原決定基。
在一個實施例中，抗體與包含SEQ ID NO：26之重鏈可變域及SEQ ID NO：27之輕鏈可變域之抗體結合至相同的抗原決定基或重疊抗原決定基。
在一個實施例中抗體在重鏈中包含SEQ ID NO：15至17之HVR且在輕鏈中包含SEQ ID NO：18至20之HVR。
在一個實施例中抗體在重鏈中包含SEQ ID NO：21、22及17之HVR且在輕鏈中包含SEQ ID NO：23至25之HVR。
在一個實施例中已藉由將包含SEQ ID NO：26之重鏈可變域及SEQ ID NO：27之輕鏈可變域之抗體人類化來獲得抗體。
在一個實施例中，抗體為人類化抗體且在重鏈可變域中包含SEQ ID NO：15至17之HVR且在輕鏈可變域中包含SEQ ID NO：18至20之HVR，其中在各HVR中，0至3個胺基酸殘基已發生改變。
在一個實施例中，抗體為人類化抗體且在重鏈可變域中包含SEQ ID NO：21、22及17之HVR且在輕鏈可變域中包含SEQ ID NO：23至25之HVR，其中在各HVR中，0至3個胺基酸殘基已發生改變。
在一個實施例中，抗體為人類化抗體且重鏈可變域衍生自SEQ ID NO：26之重鏈可變域且輕鏈可變域衍生自SEQ ID NO：27之輕鏈可變域。
如本文所報導之一個態樣為與在重鏈中包含SEQ ID NO：15至17之HVR及在輕鏈中包含SEQ ID NO：18至20之HVR之抗體結合至相同的抗原決定基或重疊抗原決定基之抗體。
如本文所報導之一個態樣為包含SEQ ID NO：26之重鏈可變域及SEQ ID NO：27之輕鏈可變域之抗體結合至相同或重疊的抗原決定基之抗體。
如本文所報導之一個態樣為在重鏈中包含SEQ ID NO：15至17之HVR且在輕鏈中包含SEQ ID NO：18至20之HVR之抗體。
如本文所報導之一個態樣為在重鏈中包含SEQ ID NO：21、22及17之HVR且在輕鏈中包含SEQ ID NO：23至25之HVR之抗體。
如本文所報導之一個態樣為已自包含SEQ ID NO：26之重鏈可變域及SEQ ID NO：27之輕鏈可變域之抗體獲得之變異抗體。
在一個實施例中變異抗體為已藉由將包含SEQ ID NO：26之重鏈可變域及SEQ ID NO：27之輕鏈可變域之抗體人類化獲得之人類化抗體。
如本文所報導之一個態樣為在重鏈可變域中包含SEQ ID NO：15至17之HVR且在輕鏈可變域中包含SEQ ID NO：18至20之HVR之人類化抗體，其中在各HVR中，0至3個胺基酸殘基已發生改變。
如本文所報導之一個態樣為在重鏈可變域中包含SEQ ID NO：21、22及17之HVR且在輕鏈可變域中包含SEQ ID NO：23至25之HVR之人類化抗體，其中在各HVR中，0至3個胺基酸殘基已發生改變。
如本文所報導之一個態樣為重鏈可變域衍生自SEQ ID NO：26之重鏈可變域且輕鏈可變域衍生自SEQ ID NO：27之輕鏈可變域之人類化抗體。
在所有先前態樣之一個實施例中，抗體結合至血腦障壁穿梭模組。
在一個實施例中，血腦障壁穿梭模組為特異性結合至LRP1、LRP8、人類轉鐵蛋白受體或類人類胰島素生長因子受體之抗體或抗體片段。
在所有先前態樣之一個實施例中，抗體為單株抗體。
在所有先前態樣之一個實施例中，抗體為人類化抗體或嵌合抗體。
在所有先前態樣之一個實施例中，抗體為a)人類子類IgG1之全長抗體，或b)人類子類IgG4之全長抗體，或c)具有突變L234A、L235A及P329G之人類子類IgG1之全長抗體，d)具有突變S228P、L235E及P329G之人類子類IgG4之全長抗體，e)在兩條重鏈中均具有突變L234A、L235A及P329G且在一條重鏈中具有突變T366W及S354C及在各別另一重鏈中具有突變T366S、L368A、Y407V及Y349C之人類子類IgG1之全長抗體，f)在兩條重鏈中均具有突變S228P、L235E及P329G且在一條重鏈中具有突變T366W及S354C及在各別另一重鏈中具有突變T366S、L368A、Y407V及Y349C之人類子類IgG4之全長抗體。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19及SEQ ID NO： 20之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24及SEQ ID NO：25之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)該可變域為SEQ ID NO：26之非人類(兔)可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或 不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域為SEQ ID NO：27之非人類(兔)可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19及SEQ ID NO：20之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於 a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24及SEQ ID NO：25之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)該可變域為SEQ ID NO：26之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中 i)該可變域為SEQ ID NO：27之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含第一抗體重鏈，該第一抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C或胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，b)該抗體包含第二抗體重鏈，該第二抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，則該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C；或若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366W及S354C，則該恆定區包含胺基酸變化 T366S、L368A、Y407V及Y349C，c)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19及SEQ ID NO：20之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含第一抗體重鏈，該第一抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C或胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，b)該抗體包含第二抗體重鏈，該第二抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或 不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，則該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C；或若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366W及S354C，則該恆定區包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，c)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24及SEQ ID NO：25之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含第一抗體重鏈，該第一抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)該可變域為SEQ ID NO：26之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C或胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，b)該抗體包含第二抗體重鏈，該第二抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)該可變域為SEQ ID NO：26之兔可變域之人類化形式， ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，則該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C；或若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366W及S354C，則該恆定區包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，c)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域為SEQ ID NO：27之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區。
在一個實施例中，特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之抗體片段包含為SEQ ID NO：56之重鏈可變域之人類化形式的重鏈可變域及為SEQ ID NO：57之輕鏈可變域之人類化形式的輕鏈可變域。
在所有先前態樣之一個實施例中，抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性，及/或iv)特異性結合至具有游離N端甲硫胺酸殘基之α-突觸核蛋白且不特異性結合至具有經修飾之N端甲硫胺酸殘基之α-突觸核蛋白。
如本文所報導之一個態樣為特異性結合至人類α-突觸核蛋白之抗體，其中該抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細 胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
在所有態樣及實施例之一個實施例中，人類神經元細胞為四環素控制之v-myc過度表現人類中腦衍生細胞株。在所有態樣及實施例之一個實施例中，人類神經元細胞為隆德(Lund)人類中腦(LUHMES)細胞。
在一個實施例中，卡斯蛋白酶活性為卡斯蛋白酶3及/或卡斯蛋白酶7活性。
在一個實施例中，抗體用於治療突觸核蛋白病。
在一個實施例中，抗體用於治療帕金森氏病。
在一個實施例中，抗體為效應功能靜默。在一個實施例中，抗體不具有效應功能。
在一個實施例中，抗體特異性結合至由胺基酸序列GKNEEGAPQEG(SEQ ID NO：01)組成之肽。
在一個實施例中，抗體對單體人類α-突觸核蛋白之結合親和力小於10-09M且大於10-07M。
在一個實施例中，抗體特異性結合至單體及寡聚人類α-突觸核蛋白。
在一個實施例中，抗體在重鏈可變域中包含SEQ ID NO：02至04之HVR且在輕鏈可變域中包含SEQ ID NO：05至07之HVR。
在一個實施例中，抗體在重鏈可變域中包含SEQ ID NO：08、09及04之HVR且在輕鏈可變域中包含SEQ ID NO：10至12之HVR。
在一個實施例中，抗體包含由SEQ ID NO：13組成之重鏈可變域 及由SEQ ID NO：14組成之輕鏈可變域。
在一個實施例中，已藉由將包含由SEQ ID NO：13組成之重鏈可變域及由SEQ ID NO：14組成之輕鏈可變域之抗體人類化來獲得抗體。
在一個實施例中，抗體為人類化抗體且在重鏈可變域中包含SEQ ID NO：02至04之HVR且在輕鏈可變域中包含SEQ ID NO：05至07之HVR，其中在各HVR中，多至3個胺基酸殘基可發生改變。
在一個實施例中，抗體為人類化抗體且在重鏈可變域中包含SEQ ID NO：08、09及04之HVR且在輕鏈可變域中包含SEQ ID NO：10至12之HVR，其中在各HVR中，多至3個胺基酸殘基可發生改變。
在一個實施例中，抗體為人類化抗體且重鏈可變域衍生自由SEQ ID NO：13組成之重鏈可變域且輕鏈可變域衍生自由SEQ ID NO：14組成之輕鏈可變域。
在一個實施例中，抗體與在重鏈中包含SEQ ID NO：15至17之HVR及在輕鏈中包含SEQ ID NO：18至20之HVR之抗體結合至相同的抗原決定基。
在一個實施例中，抗體與在重鏈中包含SEQ ID NO：21、22及17之HVR及在輕鏈中包含SEQ ID NO：23至25之HVR之抗體結合至相同的抗原決定基。
在一個實施例中，抗體包含由SEQ ID NO：26組成之重鏈可變域及由SEQ ID NO：27組成之輕鏈可變域。
在一個實施例中，已藉由將包含由SEQ ID NO：26組成之重鏈可變域及由SEQ ID NO：27組成之輕鏈可變域之抗體人類化來獲得抗體。
在一個實施例中，抗體為人類化抗體且在重鏈可變域中包含SEQ ID NO：15至17之HVR且在輕鏈可變域中包含SEQ ID NO：18至20之 HVR，其中在各HVR中，多至3個胺基酸殘基可發生改變。
在一個實施例中，抗體為人類化抗體且在重鏈可變域中包含SEQ ID NO：21、22及17之HVR且在輕鏈可變域中包含SEQ ID NO：23至25之HVR，其中在各HVR中，多至3個胺基酸殘基可發生改變。
在一個實施例中，抗體為人類化抗體且重鏈可變域衍生自由SEQ ID NO：26組成之重鏈可變域且輕鏈可變域衍生自由SEQ ID NO：27組成之輕鏈可變域。
在一個實施例中，抗體與在重鏈中包含SEQ ID NO：28至30之HVR及在輕鏈中包含SEQ ID NO：31至33之HVR之抗體結合至相同的抗原決定基。
在一個實施例中，抗體與在重鏈中包含SEQ ID NO：28、34及30之HVR及在輕鏈中包含SEQ ID NO：35至37之HVR之抗體結合至相同的抗原決定基。
在一個實施例中，抗體包含由SEQ ID NO：38組成之重鏈可變域及由SEQ ID NO：39組成之輕鏈可變域。
在一個實施例中，已藉由將包含由SEQ ID NO：38組成之重鏈可變域及由SEQ ID NO：39組成之輕鏈可變域之抗體人類化來獲得抗體。
在一個實施例中，抗體為人類化抗體且在重鏈可變域中包含SEQ ID NO：28至30之HVR且在輕鏈可變域中包含SEQ ID NO：31至33之HVR，其中在各HVR中，多至3個胺基酸殘基可發生改變。
在一個實施例中，抗體為人類化抗體且在重鏈可變域中包含SEQ ID NO：28、34及30之HVR且在輕鏈可變域中包含SEQ ID NO：35至37之HVR，其中在各HVR中，多至3個胺基酸殘基可發生改變。
在一個實施例中，抗體為人類化抗體且重鏈可變域衍生自由SEQ ID NO：38組成之重鏈可變域且輕鏈可變域衍生自由SEQ ID NO：39組 成之輕鏈可變域。
在一個實施例中，抗體特異性結合至原纖維人類α-突觸核蛋白且不結合至非原纖維人類α-突觸核蛋白。
在一個實施例中，抗體結合至血腦障壁穿梭模組。
在一個實施例中，血腦障壁穿梭模組為特異性結合至LRP1、LRP8、人類轉鐵蛋白受體或類人類胰島素生長因子受體之抗體或抗體片段。
在一個實施例中，抗體為單株抗體。
在一個實施例中，抗體為人類化抗體或嵌合抗體。
在一個實施例中，抗體為抗體片段，其結合至人類α-突觸核蛋白且i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
在一個實施例中，抗體為a)人類子類IgG1之全長抗體，或b)人類子類IgG4之全長抗體，或c)具有突變L234A、L235A及P329G之人類子類IgG1之全長抗體，d)具有突變S228P、L235E及P329G之人類子類IgG4之全長抗體，e)在兩條重鏈中均具有突變L234A、L235A及P329G且在一條重鏈中具有突變T366W及S354C及在各別另一重鏈中具有突變 T366S、L368A、Y407V及Y349C之人類子類IgG1之全長抗體，f)在兩條重鏈中均具有突變S228P、L235E及P329G且在一條重鏈中具有突變T366W及S354C及在各別另一重鏈中具有突變T366S、L368A、Y407V及Y349C之人類子類IgG4之全長抗體。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)可變域包含SEQ ID NO：02、SEQ ID NO：03及SEQ ID NO：04之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)可變域包含SEQ ID NO：05、SEQ ID NO：06及SEQ ID NO：07之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及c)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或 iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)可變域包含SEQ ID NO：08、SEQ ID NO：09及SEQ ID NO：04之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)可變域包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11及SEQ ID NO：12之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及c)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)可變域為SEQ ID NO：13之非人類(兔)可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)可變域為SEQ ID NO：14之非人類(兔)可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及c)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基 發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19及SEQ ID NO：20之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及c)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或 不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24及SEQ ID NO：25之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及c)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)該可變域為SEQ ID NO：26之非人類(兔)可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆 定域，其中i)該可變域為SEQ ID NO：27之非人類(兔)可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及c)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)可變域包含SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29及SEQ ID NO：30之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)可變域包含SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32及SEQ ID NO：33之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基 發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及c)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)可變域包含SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：34及SEQ ID NO：30之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)可變域包含SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36及SEQ ID NO：37之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區， 及c)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)可變域為SEQ ID NO：38之非人類(兔)可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)可變域為SEQ ID NO：39之非人類(兔)可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及c)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或 iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)可變域包含SEQ ID NO：02、SEQ ID NO：03及SEQ ID NO：04之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)可變域包含SEQ ID NO：05、SEQ ID NO：06及SEQ ID NO：07之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及c)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活 性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)可變域包含SEQ ID NO：08、SEQ ID NO：09及SEQ ID NO：04之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)可變域包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11及SEQ ID NO：12之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及c)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)可變域為SEQ ID NO：13之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)可變域為SEQ ID NO：14之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及c)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中 i)該可變域包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19及SEQ ID NO：20之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及c)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22及SEQ ID NO： 17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24及SEQ ID NO：25之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及c)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)該可變域為SEQ ID NO：26之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或 不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域為SEQ ID NO：27之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及c)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)可變域包含SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29及SEQ ID NO：30之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆 定域，其中i)可變域包含SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32及SEQ ID NO：33之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及c)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)可變域包含SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：34及SEQ ID NO：30之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中 i)可變域包含SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36及SEQ ID NO：37之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及c)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)可變域為SEQ ID NO：38之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)可變域為SEQ ID NO：39之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及 c)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含第一抗體重鏈，該第一抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)可變域包含SEQ ID NO：02、SEQ ID NO：03及SEQ ID NO：04之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C或胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，b)該抗體包含第二抗體重鏈，該第二抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)可變域包含SEQ ID NO：02、SEQ ID NO：03及SEQ ID NO：04之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或 不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，則該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C；或若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366W及S354C，則該恆定區包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，c)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)可變域包含SEQ ID NO：05、SEQ ID NO：06及SEQ ID NO：07之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及d)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含第一抗體重鏈，該第一抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)可變域包含SEQ ID NO：08、SEQ ID NO：09及SEQ ID NO： 04之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C或胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，b)該抗體包含第二抗體重鏈，該第二抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)可變域包含SEQ ID NO：08、SEQ ID NO：09及SEQ ID NO：04之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，則該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C；或若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366W及S354C，則該恆定區包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，c)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)可變域包含SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11及SEQ ID NO：12之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及 d)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含第一抗體重鏈，該第一抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)可變域為SEQ ID NO：13之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C或胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，b)該抗體包含第二抗體重鏈，該第二抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)可變域為SEQ ID NO：13之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，則該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C；或若該第一 抗體重鏈包含胺基酸變化T366W及S354C，則該恆定區包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，c)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)可變域為SEQ ID NO：14之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及d)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含第一抗體重鏈，該第一抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C或胺基酸變化 T366S、L368A、Y407V及Y349C，b)該抗體包含第二抗體重鏈，該第二抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，則該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C；或若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366W及S354C，則該恆定區包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，c)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19及SEQ ID NO：20之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及d)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活 性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含第一抗體重鏈，該第一抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C或胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，b)該抗體包含第二抗體重鏈，該第二抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，則該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C；或若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366W及S354C，則該恆定區包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C， c)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24及SEQ ID NO：25之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及d)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含第一抗體重鏈，該第一抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)該可變域為SEQ ID NO：26之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C或胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，b)該抗體包含第二抗體重鏈，該第二抗體重鏈在N端至C端方 向上包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)該可變域為SEQ ID NO：26之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，則該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C；或若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366W及S354C，則該恆定區包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，c)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域為SEQ ID NO：27之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及d)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含第一抗體重鏈，該第一抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中 i)可變域包含SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29及SEQ ID NO：30之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C或胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，b)該抗體包含第二抗體重鏈，該第二抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)可變域包含SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：29及SEQ ID NO：30之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，則該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C；或若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366W及S354C，則該恆定區包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，c)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)可變域包含SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：32及SEQ ID NO：33之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區， 及d)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含第一抗體重鏈，該第一抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)可變域包含SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：34及SEQ ID NO：30之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C或胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，b)該抗體包含第二抗體重鏈，該第二抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)可變域包含SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：34及SEQ ID NO：30之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變， ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，則該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C；或若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366W及S354C，則該恆定區包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，c)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)可變域包含SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：36及SEQ ID NO：37之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及d)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含第一抗體重鏈，該第一抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中 i)可變域為SEQ ID NO：38之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C或胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，b)該抗體包含第二抗體重鏈，該第二抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)可變域為SEQ ID NO：38之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，則該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C；或若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366W及S354C，則該恆定區包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，c)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)可變域為SEQ ID NO：39之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區，及d)抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或 iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
在一個實施例中，抗體片段包含為SEQ ID NO：56之重鏈可變域之人類化形式的重鏈可變域及為SEQ ID NO：57之輕鏈可變域之人類化形式的輕鏈可變域。
如本文所報導之一個態樣為編碼如本文所報導之抗體之經分離核酸。
如本文所報導之一個態樣為包含如本文所報導之核酸之宿主細胞。
如本文所報導之一個態樣為產生抗體之方法，其包含培養如本文所報導之宿主細胞以產生抗體之步驟。
在一個實施例中，方法進一步包含自細胞或培養基回收抗體之步驟。
如本文所報導之一個態樣為醫藥調配物，其包含如本文所報導之抗體及醫藥學上可接受之載劑。
在一個實施例中，醫藥調配物進一步包含另一治療劑。
如本文所報導之一個態樣為如本文所報導之抗體用作藥物。
如本文所報導之一個態樣為如本文所報導之抗體用於治療突觸核蛋白病。
如本文所報導之一個態樣為如本文所報導之抗體用於治療帕金森氏病。
如本文所報導之一個態樣為如本文所報導之抗體用於抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性。
如本文所報導之一個態樣為如本文所報導之抗體用於抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸。
如本文所報導之一個態樣為如本文所報導之抗體用於降低神經 元細胞或神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為如本文所報導之抗體在製造藥物中之用途。
在一個實施例中，藥物用於治療帕金森氏病。
一個實施例中，藥物用於抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性。
在一個實施例中，藥物用於抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸。
在一個實施例中，藥物用於降低神經元細胞或神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
如本文所報導之一個態樣為治療患有帕金森氏病之個體之方法，其包含向個別投與有效量之如本文所報導之抗體。
如本文所報導之一個態樣為抑制個體之人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性的方法，其包含向個體投與有效量之如本文所報導之抗體以抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性。
如本文所報導之一個態樣為抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在個體之神經元及神經膠質細胞之間的細胞間傳輸之方法，其包含向個體投與有效量之如本文所報導之抗體以抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性。
如本文所報導之一個態樣為如本文所報導之抗人類α突觸核蛋白抗體在抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性中的用途。
如本文所報導之一個態樣為如本文所報導之抗人類α突觸核蛋白抗體在抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸中之用途。
如本文所報導之一個態樣為如本文所報導之抗人類α突觸核蛋白抗體在降低神經元細胞或神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性中的用途。
如本文所報導之抗體可用於治療帕金森病。在不受此理論束縛之情況下，抗體抑制有毒寡聚α-突觸核蛋白之擴散或抑制神經元及神經膠質細胞吸收有毒寡聚α-突觸核蛋白或減少神經炎症。
藉由如本文所報導之抗體，可影響突觸核蛋白病及神經病理學之進展之抑制/減少。
如本文所報導之抗體可用於防止患帕金森氏病或甚至用於停止帕金森氏病之進展。
在一個實施例中，如本文所報導之抗體i)結合至α-突觸核蛋白轉殖基因小鼠及帕金森氏病患者之大腦切片上之α-突觸核蛋白；及/或標記LUHMES細胞中之α-突觸核蛋白。
如本文所報導之抗體可用於治療突觸核蛋白病。一些突觸核蛋白病為腦鐵積聚神經退化1型(NBIA1)、單純性自主神經衰竭、唐氏症候群(Down's syndrome)、關島型綜合征(complex of Guam)及數種路易體病症，諸如泛發性路易體疾病(DLBD)、阿茲海默氏病之路易體變異體(LBVAD)、某些形式之高歇氏病(Gaucher's Disease)及帕金森氏病癡呆(PDD)。
如本文所報導之一個態樣為特異性結合至人類α-突觸核蛋白中之SEQ ID NO：01之胺基酸序列之抗體。
如本文所報導之一個態樣為與包含SEQ ID NO：13之重鏈可變域及SEQ ID NO：14之輕鏈可變域之抗體結合至相同的抗原決定基之抗體。
如本文所報導之一個態樣為與包含SEQ ID NO：26之重鏈可變域及SEQ ID NO：27之輕鏈可變域之抗體結合至相同的抗原決定基之抗 體。
如本文所報導之一個態樣為與包含SEQ ID NO：38之重鏈可變域及SEQ ID NO：39之輕鏈可變域之抗體結合至相同的抗原決定基之抗體。
圖1：抗α-突觸核蛋白抗體0017之濃度依賴性結合特異性；色帶：1)原纖維α-突觸核蛋白製劑，2)三脯胺酸突變α-突觸核蛋白寡聚物，3)A型α-突觸核蛋白寡聚物，4)C型α-突觸核蛋白寡聚物。
圖2：抗α-突觸核蛋白抗體0018之濃度依賴性結合特異性；色帶：1)原纖維α-突觸核蛋白製劑，2)三脯胺酸突變α-突觸核蛋白寡聚物，3)A型α-突觸核蛋白寡聚物，4)C型α-突觸核蛋白寡聚物。
圖3：抗α-突觸核蛋白抗體0081之濃度依賴性結合特異性；色帶：1)原纖維α-突觸核蛋白製劑，2)三脯胺酸突變α-突觸核蛋白寡聚物，3)A型α-突觸核蛋白寡聚物，4)C型α-突觸核蛋白寡聚物。
圖4：α-突觸核蛋白[A30P]轉殖基因小鼠之腦幹中之α-突觸核蛋白染色；新鮮冷凍10μm矢狀腦切片；40×放大率；所有影像在相同照明條件下；箭頭指示類路易神經突包涵體。
圖5：帕金森氏病患者(A)、同時罹患帕金森氏病之阿茲海默氏病患者(B)及進行性核上麻痹(PSP，滔蛋白病變(tauopathy))(C)之人腦皮質中之抗體0017及0018之染色；箭：類路易體包涵體；箭頭：類路易神經突包涵體。
圖6：在將特定mAb(2×60mg/kg抗體或PBS，5d)大量周邊注射至15月大α-突觸核蛋白突變A30P轉殖基因小鼠中之後α-突觸核蛋白突變A30P轉殖基因小鼠中之腦α-突觸核蛋白病理學之標記；用抗鼠IgG1抗體AF555結合物或用各別抗α-突觸核蛋白抗體及抗鼠IgG1抗體AF555結合物將新鮮冷凍20μm矢狀腦切片染色；腦幹區40×放大率； 所有影像在類似照明下；箭：類路易體包涵體；箭頭：類路易神經突包涵體。
圖7：來自SHSY5Y細胞之重組α-突觸核蛋白之條件培養基對LUHMES細胞之細胞毒性；(A)抗體0017；(B)抗體0018；(C)抗體12F4(參考)。
圖8：用來自重組α-突觸核蛋白表現之SHSY5Y細胞之條件培養基處理LUHMES細胞；用a)對照培養基=LUHMES細胞之分化培養基及b)條件培養基=6天後自重組α-突觸核蛋白表現之SHSY5Y細胞收集之LUHMES分化培養基處理新塗LUHMES細胞3天。
圖9：抗體0017及0018能夠使來自細胞外培養基之α-突觸核蛋白寡聚物免疫耗盡且藉此此等抗體降低α-突觸核蛋白寡聚物之毒性。
圖10：如根據實例11測定之熔化轉變(空心圓，40℃-最高值)及對應擬合(實線)之原始資料。
圖11：在大量周邊注射抗α突觸核蛋白抗體-血腦障壁穿梭模組結合物之後標記α-突觸核蛋白突變A30P轉殖基因小鼠中之腦α-突觸核蛋白病理學、脈管及實質。
圖12：帕金森氏病患者腦切片之免疫組織化學分析冷凍切片之共焦顯微法分析(對於所有影像設置相同)：(A)抗體0017，(B)抗體0018，(C)12F4參考抗體。
圖13：抗體0018之CelluSpotsTM抗原決定基定位。
圖14：單體(N端游離(1)及N端His標記之(2))及二聚(3)α-突觸核蛋白與抗體0018之結合。所示結果為5種濃度之滴定。
1：單體，游離N端，4.2mg/mL，從未解凍；2：單體，His標記之N端，4.8mg/mL；3：二聚體，游離N端，1.6mg/mL。
I.定義
出於本文之目的，「接受體人類構架」為包含衍生自如以下所定義之人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之輕鏈可變域(VL)構架或重鏈可變域(VH)構架之胺基酸序列的構架。「衍生自」人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之接受體人類構架可包含人類免疫球蛋白構架或人類共同構架之相同胺基酸序列，或其可含有胺基酸序列變化。在一些實施例中，胺基酸變化之數目為10個或10個以下、9個或9個以下、8個或8個以下、7個或7個以下、6個或6個以下、5個或5個以下、4個或4個以下、3個或3個以下、或2個或2個以下。在一些實施例中，VL接受體人類構架序列與VL人類免疫球蛋白構架序列或人類共同構架在序列上一致。
「親和力」係指分子(例如抗體)之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間的非共價相互作用之總和之強度。除非另外指示，否則如本文所使用之「結合親和力」係指反映結合對(例如抗體與抗原)成員之間的1：1相互作用之固有結合親和力。分子X對其搭配物Y之親和力一般可由解離常數(Kd)表示。可藉由此項技術中已知之常用方法(包括本文所述之方法)量測親和力。量測結合親和力之特定說明性及例示性實施例描述於下文中。
「親和力成熟」抗體係指相較於在一或多個高變區(HVR)中不具有一或多個變化之親本抗體，在一或多個高變區中具有一或多個變化之抗體，此等變化使抗體對抗原之親和力得到改良。
術語「抗人類α-突觸核蛋白抗體」及「結合至人類α-突觸核蛋白之抗體」係指能夠以足夠親和力結合人類α-突觸核蛋白以使得抗體在靶向人類α-突觸核蛋白中適用作診斷劑及/或治療劑之抗體。在一個實施例中，抗人類α-突觸核蛋白抗體與無關非人類α-突觸核蛋白蛋白質之結合程度小於抗體與人類α-突觸核蛋白之結合之約10%，如例如 藉由放射免疫分析(RIA)所量測。
術語「抗體」在本文中以最廣泛意義使用且涵蓋各種抗體結構，包括(但不限於)單株抗體、多株抗體、多特異性抗體(例如雙特異性抗體)及抗體片段，只要其等展示所需抗原結合活性。
「抗體片段」係指不同於完整抗體之分子，其包含結合完整抗體所結合之抗原的該完整抗體之部分。抗體片段之實例包括(但不限於)Fv、Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；雙功能抗體；線抗體；單鏈抗體分子(例如scFv)；及由抗體片段形成之多特異性抗體。
與參考抗體「結合至相同的抗原決定基之抗體」係指抗體與參考抗體與抗原上相同之殘基具有結合相互作用。可使用表面電漿子共振及突變抗原或抗體-抗原複合物之X射線結構分析測定結合相互作用。
術語「嵌合」抗體係指重鏈及/或輕鏈之一部分衍生自特定來源或物種，而重鏈及/或輕鏈之其餘部分衍生自不同來源或物種之抗體。
抗體之「類別」係指其重鏈所具有之恆定域或恆定區之類型。存在5個主要抗體類別：IgA、IgD、IgE、IgG及IgM，且此等類別中之數個類別可進一步分成子類(同型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1及IgA2。對應於不同類別之免疫球蛋白之重鏈恆定域分別稱作α、δ、ε、γ及μ。
「效應功能」係指隨抗體類別變化可歸因於抗體之Fc區之彼等生物活性。抗體效應功能之實例包括：C1q結合及補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導之細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)之下調；及B細胞活化。
藥劑(例如醫藥調配物)之「有效量」係指在必需劑量下且持續必需時間有效達成所需治療或防治結果之量。
本文中之術語「Fc區」用於定義含有至少一部分恆定區之免疫球蛋白重鏈之C端區。該術語包括天然序列Fc區及變異Fc區。在一個實施例中，人類IgG重鏈Fc區自Cys226或自Pro230延伸至重鏈之羧基端。然而，Fc區之C端離胺酸(Lys447)及有時C端離胺酸-甘胺酸二肽(Gly446Lys447)可能存在或可能不存在。除非本文另外規定，否則Fc區或恆定區中之胺基酸殘基之編號係根據EU編號系統，亦稱為EU索引，如Kabat等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版，Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991),NIH出版物91-3242中所述。
「構架」或「FR」係指除高變區(HVR)殘基之外的可變域殘基。可變域之FR一般由4個FR域：FR1、FR2、FR3及FR4組成。因此，HVR及FR序列一般按以下順序出現在VH(或VL)中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。
術語「全長抗體」、「完整抗體」及「完全抗體」在本文中可互換使用來指代結構實質上類似於天然抗體結構或具有含有如本文所定義之Fc區之重鏈的抗體。
術語「宿主細胞」、「宿主細胞株」及「宿主細胞培養物」可互換使用且係指已引入外源核酸之細胞，包括該等細胞之子代。宿主細胞包括「轉型體」及「轉型細胞」，其包括初級轉型細胞及自其衍生之子代(不考慮繼代次數)。子代之核酸含量與母細胞可能不完全相同，但可能含有突變。本文包括具有與針對在原始轉型細胞中篩選或選擇相同之功能或生物活性的突變型子代。
「人類共同構架」為代表所選人類免疫球蛋白VL或VH構架序列中最常出現之胺基酸殘基之構架。一般而言，人類免疫球蛋白VL或VH序列係選自可變域序列之亞群。一般而言，序列亞群為如Kabat,E.A.等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版， Bethesda MD(1991),NIH出版物91-3242，第1-3卷中之亞群。在一個實施例中，對於VL，亞群為如Kabat等人，前述中之亞群κI。在一實施例中，對於VH，亞群為如Kabat等人，前述中之亞群III。
「人類化」抗體係指包含來自非人類HVR之胺基酸殘基及來自人類FR之胺基酸殘基之嵌合抗體。在某些實施例中，人類化抗體將包含至少一個且通常兩個可變域之實質上全部可變域，其中全部或實質上全部HVR(例如CDR)皆對應於非人類抗體之HVR，且全部或實質上全部FR皆對應於人類抗體之FR。人類化抗體視情況可包含衍生自人類抗體之抗體恆定區之至少一部分。「人類化形式」之抗體(例如非人類抗體)係指已進行人類化之抗體。
如本文所用之術語「高變區」或「HVR」係指抗體可變域中作為序列高變(「互補決定區」或「CDR」)及/或形成結構上定義為環(「高變環」)及/或含有抗原接觸殘基(「抗原接觸點」)之各區域。一般而言，抗體包含六個HVR；三個在VH中(H1，H2、H3)，且三個在VL中(L1、L2，L3)。
本文中之HVR包括(a)出現在胺基酸殘基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)及96-101(H3)處之高變環(Chothia,C.及Lesk,A.M.,J.Mol.Biol.196(1987)901-917)；(b)出現在胺基酸殘基24-34(L1)、50-56(L2)、89-97(L3)、31-35b(H1)、50-65(H2)及95-102(H3)處之CDR(Kabat,E.A.等人，Sequences of Proteins of Immunological Interest，第5版Public Health Service,National Institutes of Health,Bethesda,MD(1991),NIH出版物91-3242)；(c)出現在胺基酸殘基27c-36(L1)、46-55(L2)、89-96(L3)、30-35b(H1)、47-58(H2)及93-101(H3)處之抗原接觸點(MacCallum等人 J.Mol.Biol.262：732-745(1996))；及(d)(a)、(b)及/或(c)之組合，包括HVR胺基酸殘基46-56(L2)、47-56(L2)、48-56(L2)、49-56(L2)、26-35(H1)、26-35b(H1)、49-65(H2)、93-102(H3)及94-102(H3)。
除非另外指示，否則在本文中可變域中之HVR殘基及其他殘基(例如FR殘基)係根據Kabat等人，前述進行編號。
「免疫結合物」為結合至一或多個異源分子(諸如血腦障壁穿梭模組)之抗體。
「個體(individual或subject)」為哺乳動物。哺乳動物包括(但不限於)家養動物(例如母牛、綿羊、貓、狗及馬)、靈長類動物(例如人類及非人類靈長類動物，諸如猴)、兔及嚙齒動物(例如小鼠及大鼠)。在某些實施例中，個體為人類。
「分離」抗體為與自然環境之組分分離之抗體。在一些實施例中，抗體係純化至大於95%或99%純度，如由例如電泳(例如SDS-PAGE、等電聚焦(IEF)、毛細管電泳)或層析(例如離子交換或逆相HPLC)所測定。關於評估抗體純度之方法之綜述，參見例如，Flatman,S.等人，J.Chromatogr.B 848(2007)79-87。
「分離」核酸係指已與其天然環境之組分分離之核酸分子。分離核酸包括如下核酸分子：該核酸分子含於通常含有該核酸分子之細胞中，但該核酸分子存在於染色體外或不同於其天然染色體位置之染色體位置上。
「編碼抗人類α-突觸核蛋白抗體之分離核酸」係指編碼抗體重鏈及輕鏈(或其片段)之一或多個核酸分子，包括單一載體或單獨載體中之此類核酸分子及存在於宿主細胞中之一或多個位置處之此類核酸分子。
如本文所用之術語「單株抗體」係指自實質上均質抗體之群體 獲得之抗體，亦即除可能變異抗體(例如含有天然產生之突變或在產生單株抗體製劑期間出現之變異抗體，此等變異體通常以較小量存在)之外，構成該群體之個別抗體相同及/或結合相同抗原決定基。與通常包括針對不同決定子(抗原決定基)之不同抗體之多株抗體製劑相反，單株抗體製劑之各單株抗體係針對抗原上之單個決定子。因此，修飾語「單株」指示抗體自實質上均質之抗體群體獲得之特性，且不應解釋為需要藉由任何特定方法來產生該抗體。舉例而言，根據本發明使用之單株抗體可藉由多種技術製備，該等技術包括(但不限於)融合瘤法、重組DNA法、噬菌體呈現法及利用含有所有或部分人類免疫球蛋白基因座之轉殖基因動物的方法，該等方法及製備單株抗體之其他例示性方法在本文中描述。
「天然抗體」係指具有不同結構之天然產生之免疫球蛋白分子。舉例而言，天然IgG抗體為約150,000道爾頓之雜四聚醣蛋白，由經二硫鍵鍵結之兩條相同輕鏈及兩條相同重鏈構成。自N端至C端，各重鏈具有可變區(VH)，亦稱為可變重域或重鏈可變域，繼而為3個恆定域(CH1、CH2及CH3)。類似地，自N端至C端，各輕鏈具有可變區(VL)，亦稱為可變輕域或輕鏈可變域，繼而為恆定輕(CL)域。抗體輕鏈可基於其恆定域之胺基酸序列歸為兩種類型中之一種，稱為κ及λ。
術語「藥品說明書」用於指通常包括於治療性產品之商業包裝中之說明書，其含有關於與使用該等治療性產品有關之適應症、用法、劑量、投與、組合療法、禁忌及/或警告之資訊。
相對於參考多肽序列之「胺基酸序列一致性百分比(%)」定義為在比對參考多肽序列與候選序列且必要時引入間隙以達成最大序列一致性百分比之後，且在不將任何保守性取代視為序列一致性之部分之情況下，候選序列中與參考多肽序列中之胺基酸殘基一致的胺基酸殘 基之百分率。可以此項技術內之多種方式，例如使用公開可得之電腦軟體，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟體，達成比對以測定胺基酸序列一致性百分比。熟習此項技術者可確定適於比對序列之參數，包括在所比較序列之全長內達成最大比對所需之任何演算法。然而，出於本文之目的，使用序列比較電腦程式ALIGN-2來產生胺基酸序列一致性%值。ALIGN-2序列比較電腦程式係由Genentech,Inc.創作且原始碼已與使用說明書一起在美國版權局(U.S.Copyright Office,Washington D.C.,20559)存檔，其中其以美國版權登記號TXU510087登記。ALIGN-2程式可自Genentech,Inc.South San Francisco,California公開獲得，或可由原始碼編譯。ALIGN-2程式應經編譯以供在UNIX操作系統(包括數位UNIX V4.0D)上使用。所有序列比較參數均由ALIGN-2程式設定且不變。
在採用ALIGN-2進行胺基酸序列比較之情況下，如下計算既定胺基酸序列A對於、與、或相對於既定胺基酸序列B之胺基酸序列一致性%(或者可稱為既定胺基酸序列A具有或包含某一對於、與、或相對於既定胺基酸序列B之胺基酸序列一致性%)：100×分數X/Y
其中X為在A與B之程式比對中由序列比對程式ALIGN-2評為一致匹配的胺基酸殘基數目，且其中Y為B中之胺基酸殘基總數。應瞭解，當胺基酸序列A之長度不等於胺基酸序列B之長度時，A與B之胺基酸序列一致性%將不等於B與A之胺基酸序列一致性%。除非另外具體說明，否則本文所用之所有胺基酸序列一致性%值均使用ALIGN-2電腦程式如前一段中所述獲得。
術語「醫藥調配物」係指呈某種形式以允許所含活性成分之生物活性有效且不含對該調配物所投與之個體有不可接受之毒性之其他組分的製劑。
「醫藥學上可接受之載劑」係指醫藥調配物中除活性成分以外之對個體無毒之成分。醫藥學上可接受之載劑包括(但不限於)緩衝液、賦形劑、穩定劑或防腐劑。
如本文所用之術語「人類α-突觸核蛋白」係指天然人類α-突觸核蛋白(UniProt P37840)。該術語包涵「全長」、未經處理之人類α-突觸核蛋白以及由在細胞中處理產生之任何形式之人類α-突觸核蛋白。該術語亦包涵天然產生之人類α-突觸核蛋白變異體，例如，突變體，剪接變異體或對偶基因變異體。人類α-突觸核蛋白之胺基酸序列顯示於SEQ ID NO：40中。
如本文所用之「治療(treatment)」(及其語法變體，諸如「治療(treat)」或「治療(treating)」)係指試圖改變所治療之個體之自然病程之臨床介入，且可進行以用於預防或在臨床病理學病程中進行。所需治療作用包括(但不限於)預防疾病出現或復發、減輕症狀、減輕疾病之任何直接或間接病理結果、預防轉移、降低疾病進展率、改善或減輕疾病病況，及緩解或改善預後。在一些實施例中，本發明抗體用於延遲疾病產生或減緩疾病進展。
術語「可變區」或「可變域」係指抗體重鏈或輕鏈中參與抗體結合至抗原之域。天然抗體之重鏈及輕鏈之可變域(分別為VH及VL)一般具有類似結構，其中各域包含四個保守構架區(FR)及三個高變區(HVR)。(參見例如Kindt,T.J.等人Kuby Immunology，第6版，W.H.Freeman and Co.,N.Y.(2007)，第91頁)單一VH或VL域可足以賦予抗原結合特異性。此外，結合特定抗原之抗體可使用來自結合抗原之抗體的VH或VL域分別篩選互補VL或VH域之庫來分離。參見例如Portolano,S.等人，J.Immunol.150(1993)880-887；Clackson,T.等人，Nature 352(1991)624-628)。
如本文所用之術語「載體」係指一種核酸分子，其能夠傳播其 所連接之另一核酸。該術語包括呈自我複製型核酸結構形式之載體以及併入其所引入之宿主細胞之基因組中的載體。某些載體能夠引導其可操作地連接之核酸之表現。該等載體在本文中稱為「表現載體」。
II.組合物及方法
在一個態樣中，本發明部分基於如本文所報導之抗體可用於降低/消除大腦神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之毒性之發現。在某些態樣中，提供結合至人類α-突觸核蛋白之抗體。本發明抗體適用於例如突觸核蛋白病及神經病，尤其帕金森氏病及同時罹患帕金森氏病之阿茲海默氏病之診斷或治療。
A.例示性抗人類α-突觸核蛋白抗體
藉由應用故意免疫接種方法及目的性選擇具有特異性結合特性之抗體獲得如本文所報導之抗體。
首先用重組α-突觸核蛋白之各種集合體及聚集體之混合物對兔進行免疫接種。經分離B細胞純系藉由ELISA表徵且選擇最佳結合劑。在下一步驟中，抗體藉由使用肽陣列方法之抗原決定基定位及藉由例如使用西方墨點測定其對單體及寡聚重組α-突觸核蛋白之選擇性表徵。亦測定抗體與人類神經元細胞中之重組α-突觸核蛋白及生理α-突觸核蛋白及與人類α-突觸核蛋白轉殖基因小鼠及帕金森病患者之腦切片中之病理α-突觸核蛋白之結合。基於先前概述之資料，選擇候選物且測定在周邊注射之後與病理α-突觸核蛋白之大量活體內結合。其後選擇最高效結合劑。藉由所選最高效結合劑，將測定Thy1-(A30P)aSYN轉殖基因小鼠中之α-突觸核蛋白病理學之清除及/或α-突觸核蛋白病理學之進展之停止。
一種較佳抗體為抗體0017。此抗體具有廣泛α-突觸核蛋白特異性結合概況，亦即此抗體結合至單體及聚集(寡聚)人類α-突觸核蛋白。在圖1中，顯示抗體0017對單體及多種聚集形式之人類α-突觸核蛋白 之濃度依賴性結合。抗體0017為具有藉由如先前概述之程序選擇之兔抗體233之可變域及鼠恆定區之嵌合抗體。
另一較佳抗體為抗體0018。此抗體具有α-突觸核蛋白聚集依賴性結合概況，亦即此抗體結合至單體、二聚及寡聚人類α-突觸核蛋白，藉此若例如藉由乙醯化或生物素化修飾N端甲硫胺酸殘基，則與單體人類及小鼠α-突觸核蛋白之結合減少或不存在。在圖2中，顯示抗體0018對不同聚集形式之人類α-突觸核蛋白之濃度依賴性結合。在0.5μg/ml抗體濃度以下寡聚物結合特徵變得明顯。抗體0018為具有藉由如先前概述之程序選擇之兔抗體064之可變域及鼠恆定區之嵌合抗體。
在使用N端修飾肽測定抗體0018在人類α-突觸核蛋白上之結合位點時，結合不可偵測。因此，藉助於與α-突觸核蛋白(1-140)、β-突觸核蛋白(60-134)、γ-突觸核蛋白(60-127)及N-乙醯化α-突觸核蛋白肽(1-15)之序列相對應之重疊固定肽片段(長度：15個胺基酸，偏移：1個胺基酸)庫且使用基於ELISA之偵測方法(參見實例14及圖13)進行抗體0018之抗原決定基分析。
已發現抗體0018結合至肽陣列上呈現之短(長度為15個胺基酸)單體α-突觸核蛋白肽。抗體0018識別在α-突觸核蛋白之最N端處之抗原決定基。N端胺基酸甲硫胺酸(M，MET)對結合至關重要，因為將其移除(或阻斷)將完全消除抗體0018結合。另外當N端甲硫胺酸胺基酸殘基藉由N-乙醯化封端時，不能觀測到結合。此由表面電漿子共振分析確認(參見圖14)。
另一較佳抗體為抗體0081。抗α突觸核蛋白抗體0081顯示使人聯想到抗體0018之劑量依賴性反應性模式，其對於墨點上所有形式之α-突觸核蛋白之免疫反應性降低相等(圖3)。
在圖4中，顯示在α-突觸核蛋白突變A30P轉殖基因小鼠之矢狀腦 切片中抗體0017及0018及參考抗體12F4之不同染色行為。
在圖5中，顯示在帕金森氏病患者(A)、同時罹患帕金森氏病之阿茲海默氏病患者(B)及進行性核上麻痹(C)之人腦皮質中抗體0017及0018之不同染色行為。抗體0017之應用導致彌漫性實質以及路易體及路易神經突染色。抗體0018顯示較弱實質染色且主要將路易體及路易神經突染色。因此，對於帕金森氏病患者之腦切片中之α-突觸核蛋白聚集體，抗體0017及0018顯示不同染色模式。
在圖6中，顯示在大量周邊注射特異性mAb之後α-突觸核蛋白突變A30P轉殖基因小鼠中腦α-突觸核蛋白病理學之標記。將抗α突觸核蛋白抗體(2×60mg/kg，5d)或PBS應用於15月大α-突觸核蛋白突變A30P轉殖基因小鼠。用抗鼠IgG1抗體AF555結合物或用各別抗α-突觸核蛋白抗體及抗鼠IgG1抗體AF555結合物將新鮮冷凍20μm矢狀腦切片染色。
由圖7可見抗體0017及0018能夠使來自細胞外培養基之α-突觸核蛋白寡聚物免疫耗盡且藉此此等抗體降低α-突觸核蛋白寡聚物之毒性。
在一個態樣中，本發明提供結合至人類α-突觸核蛋白之經分離抗體。在某些實施例中，抗人類α-突觸核蛋白抗體：‧結合至具有胺基酸序列SEQ ID NO：01之肽且結合至單體α-突觸核蛋白但不結合至原纖維α-突觸核蛋白，或結合至與具有SEQ ID NO：26及27或SEQ ID NO：38及39之一對可變域之抗體相同的抗原決定基且結合至原纖維α-突觸核蛋白但不結合至單體α-突觸核蛋白，‧抑制神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之毒性，‧抑制α-突觸核蛋白聚集體之細胞間傳輸，‧降低α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性(例如在LUHMES細 胞中)。
在一個態樣中，本發明提供一種包含至少一個或兩個或三個或四個或五個或六個選自以下之HVR之抗人類α-突觸核蛋白抗體：(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：02；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：03；(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：04；(d)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：05；(e)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：06；及(f)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：07。
在一個態樣中，本發明提供一種包含至少一個或兩個或三個或四個或五個或六個選自以下之HVR之抗人類α-突觸核蛋白抗體：(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：08；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：09；(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：04；(d)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：10；(e)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：11；及(f)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：12。
在一個態樣中，本發明提供一種包含至少一個或兩個或三個或四個或五個或六個選自以下之HVR之抗人類α-突觸核蛋白抗體：(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：15；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：16；(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：17；(d)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：18；(e)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：19；及(f) HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：20。
在一個態樣中，本發明提供一種包含至少一個或兩個或三個或四個或五個或六個選自以下之HVR之抗人類α-突觸核蛋白抗體：(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：21；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：22；(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：17；(d)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：23；(e)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：24；及(f)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：25。
在一個態樣中，本發明提供一種包含至少一個或兩個或三個或四個或五個或六個選自以下之HVR之抗人類α-突觸核蛋白抗體：(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：28；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：29；(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：30；(d)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：31；(e)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：32；及(f)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：33。
在一個態樣中，本發明提供一種包含至少一個或兩個或三個或四個或五個或六個選自以下之HVR之抗人類α-突觸核蛋白抗體：(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：28；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：34；(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：30；(d)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：35；(e)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：36；及(f) HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：37。
在一個態樣中，本發明提供一種包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列之抗體：i)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：02；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：03；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：04；或ii)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：08；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：09；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：04，或iii)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：15；(b)HVR- H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：16；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：17，或iv)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：21；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：22；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：17，或v)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：28；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：29；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：30，或vi)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：28；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：34；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：30。
在一個實施例中，抗體包含i)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：02；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：03；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：04；或ii)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：08；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：09；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：04，或iii)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：15；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：16；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：17，或iv)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：21；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：22；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：17，或v)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：28；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：29；及(c)HVR-H3，其包含胺基 酸序列SEQ ID NO：30，或vi)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：28；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：34；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：30。
在另一實施例中，抗體進一步包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列：i)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：05；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：06；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：07；或ii)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：10；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：11；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：12，或iii)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：18；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：19；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：20，或iv)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：23；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：24；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：25，或v)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：31；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：32；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：33，或vi)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：35；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：36；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：37。
在另一實施例中，抗體包含i)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：05；(b)HVR- L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：06；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：07；或ii)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：10；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：11；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：12，或iii)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：18；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：19；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：20，或iv)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：23；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：24；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：25，或v)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：31；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：32；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：33，或vi)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：35；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：36；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：37。
在一個態樣中，本發明提供一種包含以下之抗體i)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：02；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：03；(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：04；(d)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：05；(e)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：06；及(f)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：07，或ii)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：08；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：09；(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：04；(d)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO： 10；(e)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：11；及(f)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：12，或iii)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：15；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：16；(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：17；(d)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：18；(e)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：19；及(f) HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：20，或iv)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：21；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：22；(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：17；(d)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：23；(e)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：24；及(f)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：25，或v)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：28；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：29；(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：30；(d)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：31；(e)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：32；及(f) HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：33，或vi)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：28；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：34；(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：30；(d)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：35；(e)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：36；及(f)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：37。
在任何以上實施例中，抗-α突觸核蛋白抗體經人類化。在一個實施例中，抗人類α-突觸核蛋白抗體包含如任何以上實施例中之HVR且進一步包含接受體人類構架，例如人類免疫球蛋白構架或人類共同構架。
在另一實施例中，VH或VL含有相對於參考序列之取代(例如保守取代)、插入或缺失，但包含該序列之抗人類α-突觸核蛋白抗體保留結合至人類α-突觸核蛋白之能力。
在某些實施例中，總共1至3個胺基酸之如先前在本文中所述之HVR序列已經取代、插入及/或缺失。
在另一態樣中，本發明提供一種與本文中所提供之抗人類α-突觸核蛋白抗體結合至相同的抗原決定基之抗體。
舉例而言，在某些實施例中，提供與包含以下之抗人類α-突觸核蛋白抗體結合至相同的抗原決定基之抗體a)VH序列SEQ ID NO：13及VL序列SEQ ID NO：14，或b)VH序列SEQ ID NO：26及VL序列SEQ ID NO：27，或c)VH序列SEQ ID NO：38及VL序列SEQ ID NO：39。
在某些實施例中，提供與由SEQ ID NO：40之胺基酸101-111組成之人類α-突觸核蛋白片段內之抗原決定基結合的抗體。
在某些實施例中，提供與由SEQ ID NO：40之胺基酸1-15組成之人類α-突觸核蛋白片段內的游離N端抗原決定基(游離N端甲硫胺酸殘基)結合之抗體。
在一個實施例中，提供結合至具有游離N端甲硫胺酸殘基之人類α-突觸核蛋白且結合至人類α-突觸核蛋白之殘基1至15及188至195內之構形抗原決定基之抗體。
在本發明之另一態樣中，根據任何以上實施例之抗人類α-突觸核蛋白抗體為單株抗體，包括嵌合、人類化或人類抗體。在一個實施例中，抗人類α-突觸核蛋白抗體為抗體片段，例如，Fv、Fab、Fab'、scFv、雙功能抗體或F(ab')2片段。在另一實施例中，抗體為全長抗體，例如，完整IgG1或IgG 4抗體或如本文中所定義之其他抗體類別或同型。
在另一態樣中，根據任何以上實施例之抗人類α-突觸核蛋白抗體可單獨或以組合形式併入如以下部分1-7中所描述之特徵中之任一個：
1.抗體親和力
在某些實施例中，本文中所提供之抗體之解離常數(Kd)100nM、10nM、1nM或介於1nM與100nM之間(例如10-7M或10-7M以下，例如10-7M至10-9M)。
在一個實施例中，藉由放射性標記抗原結合分析(RIA)量測Kd。在一個實施例中，相關抗體之用Fab型式及其抗原進行RIA。舉例而言，藉由在未經標記抗原滴定系列存在下使Fab與最小濃度之經(125I)標記之抗原平衡，隨後用經抗Fab抗體塗佈之培養板捕獲結合抗原來量測Fab對抗原之溶液結合親和力(參見例如Chen,Y.等人，J.Mol.Biol.293(1999)865-881)。為了確立分析條件，將MICROTITER®多孔培養板(Thermo Scientific)用50mM碳酸鈉(pH 9.6)中之5μg/ml捕獲抗-Fab抗體(Cappel Labs)塗佈隔夜，且隨後在室溫(約23℃)下用含2%(w/v)牛血清白蛋白之PBS阻斷2至5小時。在無吸附劑培養板(Nunc #269620)中，將100pM或26pM[125I]抗原與相關Fab之連續稀釋液混合(例如與抗VEGF抗體Fab-12之評估一致，Presta,L.G.等人，Cancer Res.57(1997)4593-4599)。隨後培育相關Fab隔夜；然而，培育可持續較長時間(例如約65小時)以確保達到平衡。此後，在室溫下將混合物轉移至捕捉培養板以用於培育(例如1小時)。隨後移除溶液且用含0.1%聚山梨醇酯20(TWEEN-20®)之PBS將培養板洗滌8次。當培養板乾燥時，添加150微升/孔之閃爍體(MICROSCINT-20TM；Packard)，且在TOPCOUNT TM γ計數器(Packard)上對培養板計數10分鐘。選擇提供小於或等於20%最大結合之各Fab的濃度用於競爭性結合分析。
根據另一實施例，使用BIACORE®表面電漿子共振分析量測Kd。 舉例而言，使用BIACORE®-2000或BIACORE®-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)，在25℃下用固定抗原CM5晶片以約10反應單位(RU)進行分析。在一個實施例中，根據供應商之說明書，用N-乙基-N'-(3-二甲胺基丙基)-碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)及N-羥基丁二醯亞胺(NHS)來活化羧基甲基化葡聚糖生物感測器晶片(CM5,BIACORE,Inc.)。用10mM乙酸鈉(pH 4.8)將抗原稀釋至5μg/ml(約0.2μM)，隨後以5微升/分鐘之流動速率注射，以獲得約10個反應單位(RU)之偶合蛋白。在注射抗原之後，注射1M乙醇胺以阻斷未反應基團。關於動力學量測，在25℃下以約25μl/min之流動速率注射含0.05%聚山梨醇酯20(TWEEN-20TM)界面活性劑之PBS(PBST)中之Fab兩倍連續稀釋液(0.78nM至500nM)。使用簡單一對一朗繆爾結合模型(one-to-one Langmuir binding model)(BIACORE®評估軟體3.2版)，藉由同時擬合締合及解離感測器圖譜來計算締合速率(kon)及解離速率(koff)。以koff/kon比率來計算平衡解離常數(Kd)(參見例如Chen,Y.等人，J.Mol.Biol.293(1999)865-881)。藉由以上表面電漿共振分析，若締合速率超過106M-1 S-1，則可藉由使用螢光淬滅技術測定締合速率，該技術量測在25℃下、在遞增濃度之抗原存在下含20nM抗-抗原抗體(Fab形式)之PBS(pH 7.2)之螢光發射強度的增加或減少(激發=295nm；發射=340nm，16nm帶通)，如在光譜儀(諸如配備停流之分光亮度計(Aviv Instruments)或具有攪拌比色管之8000系列SLM-AMINCO TM分光亮度計(ThermoSpectronic))中所量測
2.抗體片段
在某些實施例中，本文中所提供之抗體為抗體片段。抗體片段包括(但不限於)Fab、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2、Fv及scFv片段，及下文描述之其他片段。關於某些抗體片段之綜述，參見Hudson,P.J.等人，Nat.Med.9(2003)129-134。關於scFv片段之綜述，參見例如 Plueckthun,A.；The Pharmacology of Monoclonal Antibodies，第113卷，Rosenburg and Moore(編)，Springer-Verlag,New York(1994)，第269-315頁；亦參見WO 93/16185；US 5,571,894及US 5,587,458。關於包含救助受體結合抗原決定基殘基且活體內半衰期增加之Fab及F(ab')2片段之論述，參見US 5,869,046。
雙功能抗體為可為二價或雙特異性之具有兩個抗原結合位點之抗體片段。參見例如EP 0404097；WO 1993/01161；Hudson,P.J.等人，Nat.Med.9(2003)129-134；及Holliger,P.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90(1993)6444-6448。三功能抗體及四功能抗體亦描述於P.J.等人，Nat.Med.9(20039 129-134)中。
單域抗體為包含抗體之全部或部分重鏈可變域或全部或部分輕鏈可變域之抗體片段。在某些實施例中，單域抗體為人類單域抗體(Domantis,Inc.,Waltham,MA；參見例如US 6,248,516)。
抗體片段可藉由各種技術製得，包括(但不限於)完整抗體之蛋白水解消化以及由重組宿主細胞(例如大腸桿菌(E.coli)或噬菌體)產生，如本文所述。
3.嵌合及人類化抗體
在某些實施例中，本文中所提供之抗體為嵌合抗體。某些嵌合抗體描述於例如US 4,816,567；及Morrison,S.L.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81(1984)6851-6855)中。在一個實例中，嵌合抗體包含非人類可變區(例如衍生自小鼠、大鼠、倉鼠、兔或非人類靈長類動物(諸如猴)之可變區)及人類恆定區。在另一實例中，嵌合抗體為「類別轉換」抗體，其中類別或子類已自親本抗體之類別或子類改變。嵌合抗體包括其抗原結合片段。
在某些實施例中，嵌合抗體為人類化抗體。通常，將非人類抗體人類化以降低對人類之免疫原性，同時保留親本非人類抗體之特異 性及親和力。一般而言，人類化抗體包含一或多個可變域，其中HVR(例如CDR)(或其部分)衍生自非人類抗體，且FR(或其部分)衍生自人類抗體序列。人類化抗體視情況亦將包含人類恆定區之至少一部分。在一些實施例中，人類化抗體中之一些FR殘基經來自非人類抗體(例如HVR殘基所衍生之抗體)之相應殘基取代例如以恢復或改良抗體特異性或親和力。
人類化抗體及製造其之方法綜述於例如Almagro,J.C.及Fransson,J.,Front.Biosci.13(2008)1619-1633中，且進一步描述於例如Riechmann,I.等人，Nature 332(1988)323-329；Queen,C.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 86(1989)10029-10033；US 5,821,337、US 7,527,791、US 6,982,321及US 7,087,409；Kashmiri,S.V.等人，Methods 36(2005)25-34(描述特異性測定區(SDR)移植)；Padlan,E.A.,Mol.Immunol.28(1991)489-498(描述「表面再塑」)；Dall'Acqua,W.F.等人，Methods 36(2005)43-60(描述「FR改組」)；及Osbourn,J.等人，Methods 36(2005)61-68及Klimka,A.等人，Br.J.Cancer 83(2000)252-260(描述FR改組之「導引選擇」方法)中。
可用於人類化之人類構架區包括(但不限於)：使用「最佳擬合」方法選擇之構架區(參見例如Sims,M.J.等人，J.Immunol.151(1993)2296-2308)；衍生自具有輕鏈或重鏈可變區之特定亞群之人類抗體共有序列的構架區(參見例如Carter,P.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89(1992)4285-4289；及Presta,L.G.等人，J.Immunol.151(1993)2623-2632)；人類成熟(體細胞突變)構架區或人類生殖系構架區(參見例如Almagro,J.C.及Fransson,J.,Front.Biosci.13(2008)1619-1633)；及衍生自篩選FR庫之構架區(參見例如Baca,M.等人，J.Biol.Chem.272(1997)10678-10684及Rosok,M.J.等人，J.Biol.Chem.271(19969 22611-22618)。
4.人類抗體
在某些實施例中，本文提供之抗體為人類抗體。可使用此項技術中已知之各種技術產生人類抗體。人類抗體一般描述於van Dijk,M.A.及van de Winkel,J.G.,Curr.Opin.Pharmacol.5(2001)368-374及Lonberg,N.,Curr.Opin.Immunol.20(2008)450-459中。
人類抗體可藉由向轉殖基因動物投與免疫原來製備，該轉殖基因動物已經修飾以回應於抗原攻擊而產生完整人類抗體或具有人類可變區之完整抗體。該等動物通常含有置換內源性免疫球蛋白基因座或存在於染色體外或隨機整合至動物染色體中之全部或部分人類免疫球蛋白基因座。在該等轉殖基因小鼠中，內源性免疫球蛋白基因座通常不活化。關於自轉殖基因動物獲得人類抗體之方法之綜述，參見Lonberg,N.,Nat.Biotech.23(2005)1117-1125。亦參見例如描述XENOMOUSETM技術之US 6,075,181及US 6,150,584；描述HUMAB®技術之US 5,770,429；描述K-M MOUSE®技術之US 7,041,870及描述VELOCIMOUSE®技術之US 2007/0061900。來自由此等動物產生之完整抗體之人類可變區可例如藉由與不同人類恆定區組合來進一步修飾。
人類抗體亦可藉由基於融合瘤之方法製得。已描述用於產生人類單株抗體之人類骨髓瘤及小鼠-人類雜骨髓瘤細胞株。(參見例如Kozbor,D.,J.Immunol.133(1984)3001-3005；Brodeur,B.R.等人，Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications,Marcel Dekker,Inc.,New York(1987)，第51-63頁；及Boerner,P.等人，J.Immunol.147(1991)86-95)經由人類B細胞融合瘤技術產生之人類抗體亦描述於Li,J.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 103(2006)3557-3562中。額外方法包括描述於例如US 7,189,826(描述自融合瘤細胞株產生單株人類IgM抗體)及Ni,J.,Xiandai Mianyixue 26(2006)265- 268(描述人類-人類融合瘤)中之彼等方法。人類融合瘤技術(三源雜交瘤技術)亦描述於Vollmers,H.P.及Brandlein,S.,Histology and Histopathology 20(2005)927-937及Vollmers,H.P.及Brandlein,S.,Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology 27(2005)185-191中。
人類抗體亦可藉由分離自人類衍生噬菌體呈現庫選擇之Fv純系可變域序列產生。該等可變域序列可隨後與所需人類恆定域組合。下文描述自抗體庫選擇人類抗體之技術。
5.庫衍生之抗體
本發明抗體可藉由篩選組合庫中具有所需活性之抗體來分離。舉例而言，此項技術中已知用於產生噬菌體呈現庫及篩選該等庫中具有所需結合特徵之抗體之多種方法。該等方法綜述於例如Hoogenboom,H.R.等人，Methods in Molecular Biology 178(2001)1-37中，且進一步描述於例如McCafferty,J.等人，Nature 348(1990)552-554；Clackson,T.等人，Nature 352(1991)624-628；Marks,J.D.等人，J.Mol.Biol.222(1992)581-597；Marks,J.D.及Bradbury,A.,Methods in Molecular Biology 248(2003)161-175；Sidhu,S.S.等人，J.Mol.Biol.338(2004)299-310；Lee,C.V.等人，J.Mol.Biol.340(2004)1073-1093；Fellouse,F.A.,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 101(2004)12467-12472；及Lee,C.V.等人，J.Immunol.Methods 284(2004)119-132中。
在某些噬菌體呈現方法中，VH及VL基因之譜系藉由聚合酶鏈反應(PCR)單獨選殖且在噬菌體庫中隨機重組，其可隨後如Winter,G.等人，Ann.Rev.Immunol.12(1994)433-455中所述篩選抗原結合噬菌體。噬菌體通常以單鏈Fv(scFv)片段或Fab片段形式呈現抗體片段。來自免疫接種來源之庫提供抗免疫原之高親和力抗體而無需構築融合 瘤。或者，可選殖(例如自人類)原始譜系以提供抗各種非自體抗原以及自體抗原之抗體之單一來源而無需任何免疫接種，如Griffiths,A.D.等人，EMBO J.12(1993)725-734所述。最後，亦可藉由自幹細胞選殖未重排之V基因區段且使用含有隨機序列之PCR引子編碼高可變CDR3區且完成活體外重排來合成製造原始庫，如Hoogenboom,H.R.及Winter,G.,J.Mol.Biol.227(1992)381-388所述。描述人類抗體噬菌體庫之專利公開案包括例如：US 5,750,373及US 2005/0079574、US 2005/0119455、US 2005/0266000、US 2007/0117126、US 2007/0160598、US 2007/0237764、US 2007/0292936及US 2009/0002360。
自人類抗體庫分離之抗體或抗體片段在本文中視為人類抗體或人類抗體片段。
6.多特異性抗體
在某些實施例中，本文中所提供之抗體為多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體為對至少兩個不同位點具有結合特異性之單株抗體。在某些實施例中，結合特異性中之一者針對人類α-突觸核蛋白且另一者針對任何其他抗原。在某些實施例中，雙特異性抗體可結合至人類α-突觸核蛋白之兩個不同抗原決定基。雙特異性抗體亦可用於將細胞毒性劑定位至表現人類α-突觸核蛋白之細胞。雙特異性抗體可製備成全長抗體或抗體片段。
用於製造多特異性抗體之技術包括(但不限於)重組共表現具有不同特異性之兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對(參見Milstein,C.及Cuello,A.C.,Nature 305(1983)537-540,WO 93/08829，及Traunecker,A.等人，EMBO J.10(1991)3655-3659)及「杵-臼孔中(knob-in-hole)」工程改造(參見例如US 5,731,168)。多特異性抗體亦可藉由以下來製造：製造抗體Fc-雜二聚分子之工程改造靜電轉向效應(WO 2009/089004)；交聯兩種或兩種以上抗體或片段(參見例如US 4,676,980及Brennan,M.等人，Science 229(1985)81-83)；使用白胺酸拉鏈產生雙特異性抗體(參見例如Kostelny,S.A.等人，J.Immunol.148(1992)1547-1553)；使用製造雙特異性抗體片段之「雙功能抗體」技術(參見例如Holliger,P.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90(1993)6444-6448)；及使用單鏈Fv(sFv)二聚體(參見例如Gruber,M等人，J.Immunol.152(1994)5368-5374)；及如例如Tutt,A.等人J.Immunol.147(1991)60-69中所述製備三特異性抗體。
本文中亦包括具有三個或三個以上功能性抗原結合位點之工程改造抗體，包括「章魚抗體」(參見例如US 2006/0025576)。
本文中之抗體或片段亦包含「雙效Fab」或「DAF」，其包含結合至人類α-突觸核蛋白以及另一不同抗原之抗原結合位點(參見例如US 2008/0069820)。
本文中之抗體或片段亦包含描述於以下中之多特異性抗體：WO 2009/080251、WO 2009/080252、WO 2009/080253、WO 2009/080254、WO 2010/112193、WO 2010/115589、WO 2010/136172、WO 2010/145792及WO 2010/145793。
7.抗體變異體
在某些實施例中，涵蓋本文中所提供之抗體之胺基酸序列變異體。舉例而言，可需要改良抗體之結合親和力及/或其他生物學特性。抗體之胺基酸序列變異體可藉由將適當修飾引入編碼該抗體之核苷酸序列中或藉由肽合成製備。該等修飾包括例如在抗體之胺基酸序列內進行殘基之缺失及/或插入及/或取代。可進行缺失、插入及取代之任何組合以獲得最終構築體，其限制條件為最終構築體具有所需特徵，例如抗原結合。
a)取代、插入及缺失變異體
在某些實施例中，提供具有一或多個胺基酸取代之抗體變異 體。用於進行取代突變誘發之相關位點包括HVR及FR。保守性取代顯示於表1中之標題「較佳取代」下。更實質性變化提供於表1中之標題「例示性取代」下且如下文關於胺基酸側鏈類別進一步描述。可將胺基酸取代引入相關抗體中且篩選具有所需活性(例如保留/改良之抗原結合、降低之免疫原性或改良之ADCC或CDC)之產物。
胺基酸可根據共有側鏈特性進行分組：(1)疏水性：正白胺酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)鹼性：His、Lys、Arg；(5)影響鏈定向之殘基：Gly、Pro；(6)芳族：Trp、Tyr、Phe。
非保守性取代將需要將此等類別中之一者之成員換成另一類別。
一種類型之取代變異體涉及取代親本抗體(例如人化抗體或人類抗體)之一或多個高變區殘基。一般而言，選用於進一步研究之所得變異體相對於親本抗體將在某些生物特性方面具有改進(例如改良)(例如增加之親和力、降低之免疫原性)及/或將實質上保留親本抗體之某些生物特性。一種例示性取代變異體為親和力成熟抗體，其可例如使用基於噬菌體呈現之親和力成熟技術(諸如本文所述之技術)方便地產生。簡言之，使一或多個HVR殘基突變且在噬菌體上呈現變異抗體並篩選具有特定生物活性(例如結合親和力)之變異抗體。
可在HVR中進行改變(例如取代)例如以改良抗體親和力。可在HVR「熱點」(亦即由在體細胞成熟過程期間經歷高頻率突變之密碼子編碼之殘基(參見例如Chowdhury,P.S.,Methods Mol.Biol.207(2008)179-196)，及/或接觸抗原之殘基)中用待測試結合親和力之所得變異VH或VL進行該等更改。藉由構築及自二級庫再選擇之親和力成熟已描述於例如Hoogenboom,H.R.等人Methods in Molecular Biology 178(2002)1-37中。在親和力成熟之一些實施例中，藉由多種方法(例如易錯PCR、鏈改組或寡核苷酸引導之突變誘發)中之任一種將多樣性引入經選擇用於成熟之可變基因中。隨後產生二級庫。隨後篩選庫以鑑別具有所需親和力之任何抗體變異體。引入多樣性之另一方法涉及HVR引導方法，其中使若干HVR殘基(例如一次4-6個殘基)隨機化。參與抗原結合之HVR殘基可例如使用丙胺酸掃描突變誘發或模型化來特定鑑別。尤其通常靶向CDR-H3及CDR-L3。
在某些實施例中，取代、插入或缺失可發生在一或多個HVR內，只要該等改變不實質上降低抗體結合抗原之能力即可。舉例而言，可在HVR中進行不實質上降低結合親和力之保守性改變(例如如 本文中所提供之保守性取代)。此類更改可例如在HVR中接觸抗原之殘基之外。在以上提供之變異VH及VL序列之某些實施例中，各HVR未改變或含有不超過一個、兩個或三個胺基酸取代。
一種適用於鑑別可靶向用於突變誘發之抗體之殘基或區的方法稱為「丙胺酸掃描突變誘發」，如由Cunningham,B.C.and Wells,J.A.,Science 244(1989)1081-1085所描述。在此方法中，鑑別出一個殘基或一組標靶殘基(例如帶電荷殘基，諸如arg、asp、his、lys及glu)且將其置換為中性或帶負電荷胺基酸(例如丙胺酸或聚丙胺酸)以確定抗體與抗原之相互作用是否受到影響。可在對初始取代展示功能敏感性之胺基酸位置引入其他取代。或者或另外，使用抗原-抗體複合物之晶體結構來鑑別抗體與抗原之間的接觸點。該等接觸殘基及鄰近殘基可作為取代候選物之標靶或排除在取代候選物之外。可篩選變異體以確定其是否含有所需特性。
胺基酸序列插入包括長度為一個殘基至含有一百個或一百個以上殘基之多肽之胺基及/或羧基末端融合，以及具有單個或多個胺基酸殘基之序列內插入。末端插入之實例包括具有N端甲硫胺醯基殘基之抗體。抗體分子之其他插入變異體包括抗體之N端或C端與酶(例如，對於ADEPT而言)或增加抗體之血清半衰期之多肽的融合體。
b)糖基化變異體
在某些實施例中，改變本文中所提供之抗體以增加或減少抗體糖基化之程度。在抗體上添加糖基化位點或使抗體缺失糖基化位點可藉由改變胺基酸序列以便產生或移除一或多個糖基化位點來方便地達成。
在抗體包含Fc區之情況下，可改變附著於其上之碳水化合物。由哺乳動物細胞產生之天然抗體通常包含分支鏈雙觸角寡醣，其通常藉由N鍵連接至Fc區之CH2域的Asn297(參見例如Wright,A.and Morrison,S.L.,TIBTECH 15(1997)26-32)。寡醣可包括各種碳水化合物，例如甘露糖、N-乙醯基葡糖胺(GlcNAc)、半乳糖及唾液酸，以及連接至雙觸角寡醣結構之「主幹」中之GlcNAc的岩藻糖。在一些實施例中，可對本發明抗體中之寡醣進行修飾以形成具有某些改良特性之抗體變異體。
在一個實施例中，提供具有缺乏與Fc區連接(直接或間接)之岩藻糖之碳水化合物結構的抗體變異體。舉例而言，該抗體中岩藻糖之量可為1%至80%、1%至65%、5%至65%或20%至40%。如例如WO 2008/077546中所述，藉由相對於與Asn 297連接之所有醣結構(例如複合、雜交及高甘露糖結構)之總和計算Asn297處糖鏈內岩藻糖之平均量來測定岩藻糖之量，如藉由MALDI-TOF質譜所量測。Asn297係指位於Fc區中之大約位置297(Fc區殘基之Eu編號)處之天冬醯胺殘基；然而，由於抗體中之微小序列變化，Asn297亦可位於位置297上游或下游約±3個胺基酸處，亦即位於位置294與位置300之間。該等岩藻糖基化變異體可具有改良之ADCC功能。參見例如US 2003/0157108；US 2004/0093621。關於「去岩藻糖基化」或「缺乏岩藻糖」抗體變異體之公開案之實例包括：US 2003/0157108；WO 2000/61739；WO 2001/29246；US 2003/0115614；US 2002/0164328；US 2004/0093621；US 2004/0132140；US 2004/0110704；US 2004/0110282；US 2004/0109865；WO 2003/085119；WO 2003/084570；WO 2005/035586；WO 2005/035778；WO 2005/053742；WO 2002/031140；Okazaki,A.等人，J.Mol.Biol.336(2004)1239-1249；Yamane-Ohnuki,N.等人，Biotech.Bioeng.87(2004)614-622。能夠產生去岩藻糖基化抗體之細胞株之實例包括缺乏蛋白質岩藻糖基化之Lec13 CHO細胞(Ripka,J.等人，Arch.Biochem.Biophys.249(1986)533-545；US 2003/0157108；及WO 2004/056312，尤其在實例11處)，及基因剔除細胞株，諸如α-1,6-岩 藻糖基轉移酶基因、FUT8、基因剔除CHO細胞(參見例如Yamane-Ohnuki,N.等人，Biotech.Bioeng.87(2004)614-622；Kanda,Y.等人，Biotechnol.Bioeng.94(2006)680-688；及WO 2003/085107)。
進一步提供具有平分寡醣之抗體變異體，例如，其中與抗體Fc區連接之雙觸角寡醣由GlcNAc平分。該等抗體變異體可具有減少之岩藻糖基化及/或改良之ADCC功能。該等抗體變異體之實例描述於例如WO 2003/011878；US 6,602,684；及US 2005/0123546中。亦提供寡醣中之至少一個半乳糖殘基與Fc區連接之抗體變異體。該等抗體變異體可具有改良之CDC功能。該等抗體變異體描述於例如WO 1997/30087；WO 1998/58964；及WO 1999/22764中。
c)Fc區變異體
在某些實施例中，可將一或多個胺基酸修飾引入本文中所提供之抗體之Fc區中，藉此產生Fc區變異體。Fc區變異體可包含在一或多個胺基酸位置包含胺基酸修飾(例如取代)之人類Fc區序列(例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 Fc區)。
在某些實施例中，本發明涵蓋具有一些而非所有效應功能之抗體變異體，此使得該抗體成為合乎應用需要之候選物，在該等應用中，活體內抗體半衰期較重要，而某些效應功能(諸如補體及ADCC)為不必要或不利的。可進行活體外及/或活體內細胞毒性分析以確認CDC及/或ADCC活性之降低/耗盡。舉例而言，可進行Fc受體(FcR)結合分析，以確保抗體缺乏FcγR結合能力(從而可能缺乏ADCC活性)，但保留FcRn結合能力。用於介導ADCC之初級細胞NK細胞僅表現FcγRIII，而單核細胞表現FcγRI、FcγRII及FcγRIII。FcR在造血細胞上之表現概括於Ravetch,J.V.及Kinet,J.P.,Annu.Rev.Immunol.9(1991)457-492之第464頁之表3中。評估相關分子之ADCC活性之活體外分析之非限制性實例描述於US 5,500,362(參見例如Hellstrom,I.等 人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83(1986)7059-7063；及Hellstrom,I.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82(1985)1499-1502)；US 5,821,337(參見Bruggemann,M.等人，J.Exp.Med.166(1987)1351-1361)中。或者，可使用非放射性分析方法(參見例如流動式細胞測量術之ACTITM非放射性細胞毒性分析(CellTechnology,Inc.Mountain View,CA)；及CytoTox 96®非放射性細胞毒性分析(Promega,Madison,WI)。適用於該等分析之效應細胞包括周圍血液單核細胞(PBMC)及自然殺手(NK)細胞。或者，或另外，可在活體內，例如，在諸如Clynes,R.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 95(1998)652-656中所揭示之動物模型中評估相關分子之ADCC活性。亦可進行C1q結合分析以確認抗體不能結合C1q且因此缺乏CDC活性。參見例如WO 2006/029879及WO 2005/100402中之C1q及C3c結合ELISA。為評估補體活化，可進行CDC分析(參見例如Gazzano-Santoro,H.等人，J.Immunol.Methods 202(1996)163-171；Cragg,M.S.等人，Blood 101(2003)1045-1052；及Cragg,M.S.及M.J.Glennie,Blood 103(2004)2738-2743)。亦可使用此項技術中已知之方法(參見例如Petkova,S.B.等人，Int.Immunol.18(2006：1759-1769)進行FcRn結合及活體內消除率/半衰期測定。
效應功能降低之抗體包括Fc區殘基238、265、269、270、297、327及329中之一或多者經取代之彼等抗體(US 6,737,056)。該等Fc突變體包括在胺基酸位置265、269、270、297及327中之兩者或兩者以上處具有取代之Fc突變體，包括殘基265及297取代為丙胺酸之所謂「DANA」Fc突變體(US 7,332,581)。
已描述與FcR之結合得到改良或減弱之某些抗體變異體。(參見例如US 6,737,056；WO 2004/056312，及Shields,R.L.等人，J.Biol.Chem.276(2001)6591-6604)
在某些實施例中，抗體變異體包含具有改良ADCC之一或多個胺 基酸取代，例如Fc區之位置298、333及/或334(殘基之EU編號)處之取代之Fc區。
在一些實施例中，在Fc區中進行更改，致使C1q結合及/或補體依賴性細胞毒性(CDC)更改(亦即改良或減弱)，例如如US 6,194,551，WO 99/51642，及Idusogie,E.E.等人，J.Immunol.164(2000)4178-4184中所述。
半衰期增加且與負責將母體IgG轉移至胎兒之新生兒Fc受體(FcRn)(Guyer,R.L.等人，J.Immunol.117(1976)587-593，及Kim,J.K.等人，J.Immunol.24(1994)2429-2434)之結合改良之抗體描述於US 2005/0014934中。彼等抗體包含具有一或多個改良Fc區與FcRn之結合之取代的Fc區。該等Fc變異體包括在以下Fc區殘基中之一或多者處具有取代之彼等變異體：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434，例如Fc區殘基434之取代(US 7,371,826)。
關於Fc區變異體之其他實例，亦參見Duncan,A.R.及Winter,G.,Nature 322(1988)738-740；US 5,648,260；US 5,624,821；及WO 94/29351。
d)半胱胺酸工程改造抗體變異體
在某些實施例中，可能需要產生半胱胺酸工程改造抗體，例如「硫基MAb」，其中抗體之一或多個殘基經半胱胺酸殘基取代。在特定實施例中，經取代之殘基存在於在抗體之可達位點處。藉由用半胱胺酸取代彼等殘基，反應性硫醇基藉此定位於抗體之可達位點且可用於使抗體與其他部分(諸如藥物部分或連接子-藥物部分)結合以產生如本文中進一步描述之免疫結合物。在某些實施例中，以下殘基中之任何一或多者可經半胱胺酸取代：輕鏈之V205(Kabat編號)；重鏈之A118(EU編號)；及重鏈Fc區之S400(EU編號)。可如例如US 7,521,541中所述產生半胱胺酸工程改造抗體。
e)抗體衍生物
在某些實施例中，可將本文中所提供之抗體進一步修飾以含有此項技術中已知且可易於獲得之額外非蛋白質部分。適用於抗體衍生化之部分包括(但不限於)水溶性聚合物。水溶性聚合物之非限制性實例包括(但不限於)聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯啶酮、聚-1,3-二氧雜環戊烷、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/順丁烯二酸酐共聚物、聚胺基酸(均聚物或無規共聚物)及葡聚糖或聚(n-乙烯吡咯啶酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚氧化丙烯/氧化乙烯共聚物、聚氧乙烯多元醇(例如甘油)、聚乙烯醇及其混合物。聚乙二醇丙醛由於其於水中之穩定性而可於製造時具有優點。聚合物可具有任何分子量，且可為分支鏈或未分支鏈。與抗體連接之聚合物之數目可變化，且若連接一個以上聚合物，則聚合物可為相同或不同分子。一般而言，用於衍生作用之聚合物之數目及/或類型可基於包括(但不限於)待改良抗體之特殊特性或功能，抗體衍生物是否將用於指定條件下之療法等考慮來確定。
在另一實施例中，提供抗體與可藉由暴露於輻射選擇性地加熱之非蛋白質部分之結合物。在一個實施例中，非蛋白質部分為碳奈米管(Kam,N.W.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 102(2005)11600-11605)。輻射可具有任何波長，且包括(但不限於)不損害一般細胞但將非蛋白質部分加熱至殺死抗體-非蛋白質部分近側之細胞之溫度的波長。
f)與血腦障壁穿梭模組之融合
單株抗體具有治療神經或中樞神經系統(CNS)疾病之巨大治療潛能，但其向腦中之通路受血腦障壁(BBB)制約。過去研究顯示在血流中循環之極小百分比(大約0.1%)之IgG通過BBB進入CNS中 (Felgenhauer,K.,Klin.Wschr.52(1974)1158-1164)，其中抗體之CNS濃度可不足以允許穩固作用。
在某些實施例中，可將本文中所提供之抗體進一步修飾以含有此項技術中已知且可易於獲得之一或多種血腦障壁穿梭模組。
一或多種血腦障壁穿梭模組可稠合至輕鏈或重鏈之任何端。在一個較佳實施例中，血腦障壁穿梭模組稠合至重鏈之C端。
重鏈之C端可為以胺基酸殘基PGK結束之完整C端。重鏈之C端可為縮短C端，其中已移除一個或兩個C端胺基酸殘基。在一個較佳實施例中，重鏈之C端為結束PG之縮短C端。
一或多種血腦障壁穿梭模組可直接或經由連接子肽稠合至各別抗體鏈。在一個較佳實施例中，連接子肽具有胺基酸序列GGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：41)。
血腦障壁穿梭模組可為抗體scFv片段。在一個實施例中，血腦障壁穿梭模組為以N端至C端順序包含輕鏈可變域-輕鏈恆定域-連接子肽-重鏈可變域-重鏈恆定域1之scFv。
在一個較佳實施例中，血腦障壁穿梭模組為具有(G4S)6連接子肽或其人類化變異體之抗轉鐵蛋白受體之抗體8D3之scFv片段。
術語其人類化變異體表示已藉由在人類構架上移植鼠8D3抗體之CDR視情況引入彼此獨立地在構架區(FR)及/或高變區(HVR)中之每一者中之一個至三個突變體獲得之分子。
在一個態樣中，本發明提供一種抗人類α-突觸核蛋白抗體融合多肽，其包含抗人類α-突觸核蛋白抗體，兩個肽連接子及兩個與血腦障壁受體結合之單價結合實體，其中連接子將抗人類α-突觸核蛋白抗體偶合至與血腦障壁受體結合之單價結合實體。
在一個態樣中，本發明提供一種抗人類α-突觸核蛋白抗體融合多肽，其包含抗人類α-突觸核蛋白抗體，肽連接子及一個與血腦障壁受 體結合之單價結合實體，其中連接子將抗人類α-突觸核蛋白抗體偶合至與血腦障壁受體結合之單價結合實體。
在一個實施例中，與血腦障壁受體結合之單價結合實體選自由蛋白質、多肽及肽組成之群。
在一個實施例中，與血腦障壁受體結合之單價結合實體包含選自由血腦障壁受體配位體、scFv、Fv、scFab、VHH，在一個較佳實施例中，選自scFv或scFab組成之群之分子。
在一個實施例中，血腦障壁受體選自由以下組成之群：轉鐵蛋白受體、胰島素受體、類胰島素生長因子受體、低密度脂蛋白受體相關之蛋白質8、低密度脂蛋白受體相關之蛋白質1及類肝素結合表皮生長因子之生長因子。在一個較佳實施例中，血腦障壁受體為轉鐵蛋白受體。
在一個實施例中，與血腦障壁受體結合之單價結合實體包含針對轉鐵蛋白受體之一個scFab或一個scFv，更特定為識別包含於胺基酸序列SEQ ID NO：52、53及54內之轉鐵蛋白受體中之抗原決定基的scFab或scFv。
在一個實施例中，與血腦障壁受體結合之單價結合實體藉由連接子偶合至抗人類α-突觸核蛋白抗體之重鏈之C端末端。
在一個實施例中，肽連接子為長度為至少15個胺基酸，更佳地長度為18至25個胺基酸之胺基酸序列。
在一個實施例中，抗人類α-突觸核蛋白抗體為全長抗體，在一個較佳實施例中，其為全長IgG。術語全長抗體表示由兩個抗體輕鏈多肽及兩個抗體重鏈多肽組成之抗體，其中在兩個抗體重鏈多肽中，C端離胺酸殘基(K)可存在或不存在。
在一個較佳實施例中，抗人類α-突觸核蛋白抗體融合多肽包含全長IgG抗人類α-突觸核蛋白抗體作為腦效應實體，序列 GGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：41)之連接子及一個scFab作為與作為血腦受體之人類轉鐵蛋白受體結合的單價結合實體，其中scFab藉由連接子偶合至全長抗人類α-突觸核蛋白抗體之一條重鏈(Fc部分之)之C端末端，且其中scFab識別包含於胺基酸序列SEQ ID NO：52、53及54內之人類轉鐵蛋白受體中之抗原決定基。
在一個較佳實施例中，抗人類α-突觸核蛋白抗體融合多肽包含全長IgG抗人類α-突觸核蛋白抗體作為腦效應實體，序列GGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：41)之連接子及一個scFv作為與作為血腦受體之人類轉鐵蛋白受體結合的單價結合實體，其中scFab藉由連接子偶合至全長抗人類α-突觸核蛋白抗體之一條重鏈(Fc部分之)之C端末端，且其中scFab識別包含於胺基酸序列SEQ ID NO：52、53及54內之人類轉鐵蛋白受體中之抗原決定基。
在一個實施例中，抗人類α-突觸核蛋白抗體之第一重鏈包含第一二聚合模組且抗體之第二重鏈包含允許兩條重鏈雜二聚之第二二聚合模組。
在一個實施例中，抗人類α-突觸核蛋白抗體之第一重鏈之第一二聚合模組為杵重鏈且抗人類α-突觸核蛋白抗體之第二重鏈之二聚合模組為臼重鏈(根據杵-臼中策略)。
如本文所報導之抗人類α-突觸核蛋白抗體融合多肽可用作藥物，特定言之，其可用於治療諸如帕金森氏病之神經病症。
如本文所報導之抗人類α-突觸核蛋白抗體融合多肽可用於穿過血腦障壁輸送抗人類α-突觸核蛋白抗體(腦效應實體)。
在一個實施例中，在其Fc區之C端末端偶合至scFab作為與人類轉鐵蛋白受體結合之單價結合實體之抗人類α-突觸核蛋白抗體之重鏈在N端至C端方向上具有以下結構：‧IgG重鏈， ‧將IgG重鏈之Fc區之C端末端偶合至scFab之VL域之N端末端的肽連接子，在一個較佳實施例中，肽連接子具有胺基酸序列GGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：41)，‧scFab之可變輕鏈域(VL)及C-κ輕鏈域，‧將scFab之C-κ輕鏈域之C端末端偶合至scFab之VH域之N端末端的肽連接子，在一個較佳實施例中，肽連接子具有胺基酸序列(G4S)6GG(SEQ ID NO：55)，‧scFab抗體之可變重鏈域(VH)及IgG CH1重鏈域。
在一個實施例中，在其Fc區之C端末端偶合至scFv作為與人類轉鐵蛋白受體結合之單價結合實體之抗人類α-突觸核蛋白抗體之重鏈在N端至C端方向上具有以下結構：‧IgG重鏈，‧將IgG重鏈之Fc部分之C端末端偶合至scFv抗體片段之VL域之N端末端的肽連接子，在一個較佳實施例中，肽連接子為具有胺基酸序列GGSGGGGSGGGGSGGGGS(SEQ ID NO：41)之肽，‧可變輕鏈域(VL)，‧將可變輕鏈域之C端末端偶合至scFv之VH域之N端末端的肽連接子，在一個較佳實施例中，肽連接子為具有胺基酸序列(G4S)6GG(SEQ ID NO：55)之肽，‧scFv抗體片段之可變重鏈域(VH)。
在第二態樣中，本發明提供一種穿過血腦障壁輸送腦效應實體之融合多肽，其包含CH2-CH3 Ig實體，肽連接子及一個針對血腦障壁受體之scFab或scFv，其中scFab或scFv藉由肽連接子偶合至CH2-CH3 Ig實體之C端末端。
在一個實施例中，針對血腦障壁受體之血腦障壁穿梭模組/scFab或scFv衍生自人類化抗轉鐵蛋白受體之抗體8D3(參見例如Boado, R.J.,等人，Biotechnol.Bioeng.102(2009)1251-1258)。鼠重鏈可變域具有胺基酸序列 (SEQ ID NO：56)。
鼠輕鏈可變域(變異體1)具有胺基酸序列 (SEQ ID NO：57)，且鼠輕鏈可變域(變異體2)具有胺基酸序列 (SEQ ID NO：58)。
一個血腦障壁穿梭模組
在一個態樣中，抗人類α突觸核蛋白抗體融合多肽精確包含一個血腦障壁穿梭模組，其中血腦障壁穿梭模組包含鼠抗人類轉鐵蛋白受體之抗體8D3之人類化可變域，藉此包含鼠抗人類轉鐵蛋白受體之抗體8D3之人類化可變域的血腦障壁穿梭模組穿過血腦障壁輸送抗人類α-突觸核蛋白抗體。抗人類轉鐵蛋白受體之抗體8D3之可變域具有胺基酸序列SEQ ID NO：56及57。
一個或兩個血腦障壁穿梭模組
在一個態樣中，抗人類α突觸核蛋白抗體融合多肽包含一個或兩個血腦障壁穿梭模組，其中血腦障壁穿梭模組衍生自以低親和力結合至血腦障壁受體(BBB-R)之抗體，藉此衍生自以低親和力結合至血腦障壁受體之抗體的血腦障壁穿梭模組穿過血腦障壁輸送抗人類α-突觸核蛋白抗體。
在另一態樣中，BBB-R選自由以下組成之群：轉鐵蛋白受體(TfR)、胰島素受體、類胰島素生長因子受體(IGF受體)、低密度脂蛋白受體相關之蛋白質8(LRP8)、低密度脂蛋白受體相關之蛋白質1(LRP1)及類肝素結合表皮生長因子之生長因子(HB-EGF)。在另一該態樣中，BBB-R為人類BBB-R。在一個該態樣中，BBB-R為TfR。在另一該態樣中，BBB-R為TfR且抗體不抑制TfR活性。在另一該態樣中，BBB-R為TfR且抗體不抑制TfR與轉鐵蛋白之結合。
在另一態樣中，抗體不損害BBB-R與其天然配位體中之一或多種之結合。在另一該態樣中，抗體以不抑制人類轉鐵蛋白受體(hTfR)與人類轉鐵蛋白之結合之方式特異性結合至hTfR。
在另一態樣中，抗BBB-R抗體針對BBB-R之IC50為約1nM至約100μM。在另一該態樣中，IC50為約5nM至約100μM。在另一該態樣中，IC50為約50nM至約100μM。在另一該態樣中，IC50為約100nM至約100μM。在另一態樣中，抗體對BBB-R之親和力為約5nM至約10μM。在另一該態樣中，當偶合至抗人類α-突觸核蛋白抗體時，抗體對BBB-R之親和力為約30nM至約1μM。在另一該態樣中，當偶合至抗人類α-突觸核蛋白抗體時，抗體對BBB-R之親和力為約50nM至約1μM。在一個態樣中，使用史卡查(scatchard)分析量測抗BBB-R抗體或抗人類α-突觸核蛋白抗體融合多肽對BBB-R之親和力。在另一態樣中，使用BIACORE分析量測抗BBB-R抗體或抗人類α-突觸核蛋白抗體融合多肽對BBB-R之親和力。在另一態樣中，使用競爭ELISA量測抗BBB-R抗體或抗人類α-突觸核蛋白抗體融合多肽對BBB-R之親和力。
含有抗體融合多肽之血腦障壁穿梭之用途
在另一實施例中，本文中提供一種增加CNS暴露至抗人類α突觸核蛋白抗體之方法，其中將抗人類α突觸核蛋白抗體偶合至以低親和 力結合至BBB-R之抗體或抗體片段，進而增加CNS暴露至抗人類α突觸核蛋白抗體。在另一態樣中，相對於與對BBB-R不具有降低親和力之典型抗體偶合之抗人類α突觸核蛋白抗體的CNS暴露量測CNS暴露於抗人類α突觸核蛋白抗體之增加。在另一態樣中，以CNS中發現之抗人類α突觸核蛋白抗體之量相對於投與之後血清中發現之量之比的形式量測CNS暴露於抗人類α突觸核蛋白抗體之增加。在另一該態樣中，CNS暴露增加使得比大於0.1%。在另一態樣中，相對於在不存在偶合抗BBB-R抗體之情況下抗人類α突觸核蛋白抗體之CNS暴露量測CNS暴露於抗人類α突觸核蛋白抗體之增加。在另一態樣中，藉由成像量測CNS暴露於抗人類α突觸核蛋白抗體之增加。在另一態樣中，藉由間接讀取結果(諸如一或多種生理症狀之改變)量測CNS暴露於抗人類α突觸核蛋白抗體之增加。
一種增加向個體投與之抗人類α突觸核蛋白抗體之CNS中之滯留的方法，其中將抗人類α突觸核蛋白抗體偶合至以低親和力結合至BBB-R之抗體或抗體片段，以使得增加抗人類α突觸核蛋白抗體之CNS中之滯留。
在另一實施例中，本發明提供一種使在個體之CNS中有效之抗人類α突觸核蛋白抗體之藥物動力學及/或藥效學最佳化之方法，其中將抗人類α突觸核蛋白抗體偶合至以低親和力結合至BBB-R之抗體或抗體片段，藉此選擇抗體或抗體片段以使得在偶合至抗人類α突觸核蛋白抗體之後其對BBB-R之親和力產生穿過BBB結合至抗人類α突觸核蛋白抗體之抗體或抗體片段之適量輸送，此使CNS中抗人類α突觸核蛋白抗體之藥物動力學及/或藥效學最佳化。
在另一實施例中，本發明提供一種治療哺乳動物之神經病症之方法，其包含用結合BBB-R且偶合至抗人類α突觸核蛋白抗體之抗體或抗體片段治療哺乳動物，其中已選擇對BBB-R具有低親和力之抗體 且藉此改良抗體及偶合抗人類α突觸核蛋白抗體之CNS吸收。在一個實施例中，治療使得病症症狀減輕或消除。在另一態樣中，治療使得神經病症改善。
在所有先前態樣之一個實施例中，抗BBB-R抗體針對BBB-R之IC50為約1nM至約100μM。在另一該實施例中，IC50為約5nM至約100μM。在另一該實施例中，IC50為約50nM至約100μM。在另一該實施例中，IC50為約100nM至約100μM。在另一實施例中，抗體對BBB-R之親和力為約5nM至約10μM。在另一實施例中，當偶合至抗人類α-突觸核蛋白抗體時，抗體對BBB-R之親和力為約30nM至約1μM。在另一實施例中，當偶合至抗人類α-突觸核蛋白抗體時，抗體對BBB-R之親和力為約50nM至約1μM。在一個實施例中，使用史卡查分析量測抗BBB-R抗體或抗人類α-突觸核蛋白抗體融合多肽對BBB-R之親和力。在另一實施例中，使用BIACORE分析量測抗BBB-R抗體或抗人類α-突觸核蛋白抗體融合多肽對BBB-R之親和力。在另一實施例中，使用競爭ELISA量測抗BBB-R抗體或抗人類α-突觸核蛋白抗體融合多肽對BBB-R之親和力。
在另一實施例中，標記抗人類α突觸核蛋白抗體融合多肽。在另一實施例中，抗BBB-R抗體或片段不損害BBB-R與其天然配位體中之一或多種之結合。在另一實施例中，抗BBB-R抗體以不抑制hTfR與人類轉鐵蛋白之結合之方式特異性地結合至hTfR。在另一實施例中，向哺乳動物投與抗人類α突觸核蛋白抗體融合多肽。在另一實施例中，哺乳動物為人類。在另一實施例中，哺乳動物患有神經病症。在另一實施例中，神經病症選自由以下組成之群：阿茲海默氏病(AD)、中風、癡呆、肌肉萎縮症(MD)、多發性硬化症(MS)、肌萎縮性側索硬化(ALS)、囊腫性纖維化、天使症候群(Angelman's syndrome)、利德爾症候群(Liddle syndrome)、帕金森氏病、皮克氏病(Pick's disease)、 柏哲德氏病(Paget's disease)、癌症及創傷性腦損傷。
B.重組方法及組合物
可使用例如如US 4,816,567中所描述之重組方法及組合物產生抗體。在一個實施例中，提供編碼本文所述之抗人類α-突觸核蛋白抗體之經分離核酸。該核酸可編碼包含VL之胺基酸序列及/或包含抗體之VH之胺基酸序列(例如抗體之輕鏈及/或重鏈)。在另一實施例中，提供包含該核酸之一或多種載體(例如表現載體)。在另一實施例中，提供包含該核酸之宿主細胞。在一個該實施例中，宿主細胞包含(例如已用以下轉型)：(1)包含編碼包含抗體VL之胺基酸序列及包含抗體VH之胺基酸序列之核酸的載體，或(2)包含編碼包含抗體VL之胺基酸序列之核酸的第一載體，及包含編碼包含抗體VH之胺基酸序列之核酸的第二載體。在一個實施例中，宿主細胞為真核細胞，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴細胞(例如Y0、NS0、Sp20細胞)。在一個實施例中，提供一種製造抗人類α-突觸核蛋白抗體之方法，其中該方法包含在適於表現抗體之條件下培養如以上所提供之包含編碼抗體之核酸的宿主細胞且視情況自宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收抗體。
關於抗人類α-突觸核蛋白抗體之重組產生，將例如如上所述之編碼抗體之核酸分離且插入一或多個載體中以用於在宿主細胞中進一步選殖及/或表現。該核酸可易於使用習知程序(例如藉由使用能夠與編碼抗體之重鏈及輕鏈之基因特異性結合之寡核苷酸探針)分離及定序。
適於選殖或表現抗體編碼載體之宿主細胞包括本文所述之原核或真核細胞。舉例而言，抗體可在細菌中產生，特定言之在不需要糖基化及Fc效應功能時。關於抗體片段及多肽在細菌中之表現，參見例如US 5,648,237、US 5,789,199及US 5,840,523。(亦參見Charlton,K.A.,Methods in Molecular Biology，第248卷，Lo,B.K.C.(編)， Humana Press,Totowa,NJ(2003)，第245-254頁，其描述抗體片段在大腸桿菌中之表現)在表現之後，抗體可自細菌細胞糊狀物分離於可溶部分中在且可進一步經純化。
除原核生物外，諸如絲狀真菌或酵母之真核微生物為適於抗體編碼載體之選殖或表現宿主，包括糖基化路徑已經「人類化」，使得產生具有部分或完全人類糖基化型態之抗體之真菌及酵母菌株。參見Gerngross,T.U.,Nat.Biotech.22(2004)1409-1414；及Li,H.等人，Nat.Biotech.24(2006)210-215。
適於表現糖基化抗體之宿主細胞亦可衍生自多細胞有機體(無脊椎動物及脊椎動物)。無脊椎動物細胞之實例包括植物及昆蟲細胞。已鑑別出眾多可與昆蟲細胞聯合使用，特定言之用於轉染草地黏蟲(Spodoptera frugiperda)細胞之桿狀病毒株。
植物細胞培養物亦可用作宿主。參見例如US 5,959,177、US 6,040,498、US 6,420,548、US 7,125,978及US 6,417,429(描述在轉殖基因植物中產生抗體之PLANTIBODIESTM技術)。
脊椎動物細胞亦可用作宿主。舉例而言，適於在懸浮液中生長之哺乳動物細胞株可為適用的。適用哺乳動物宿主細胞株之其他實例為經SV40(COS-7)轉型之猴腎CV1株；人類胚腎株(如例如在Graham,F.L.等人，J.Gen Virol.36(1977)59-74中所述之293或293細胞)；幼倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠塞特利氏細胞(mouse sertoli cell)(如例如在Mather,J.P.,Biol.Reprod.23(1980)243-252中所述之TM4細胞)；猴腎細胞(CV1)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；人類子宮頸癌細胞(HELA)；大腎細胞(MDCK；布法羅大鼠肝細胞(buffalo rat liver cell)(BRL 3A)；人類肺細胞(W138)；人類肝細胞(Hep G2)；小鼠乳腺腫瘤(MMT 060562)；如例如在Mather,J.P.等人，Annals N.Y.Acad.Sci.383(1982)44-68中所述之TRI細胞；MRC 5細胞；及FS4細胞。其他適用 哺乳動物宿主細胞株包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包括DHFR- CHO細胞(Urlaub,G.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77(1980)4216-4220)；及骨髓瘤細胞株，諸如Y0、NS0及Sp2/0。關於適用於抗體產生之某些哺乳動物宿主細胞株之綜述，參見例如Yazaki,P.及Wu,A.M.,Methods in Molecular Biology，第248卷，Lo,B.K.C.(編)，Humana Press,Totowa,NJ(2004)，第255-268頁。
C.分析
可藉由此項技術中已知之各種分析對本文中所提供之抗人類α-突觸核蛋白抗體進行針對其物理/化學特性及/或生物活性之鑑別、篩選或表徵。
1.結合分析及其他分析
在一個態樣中，例如藉由已知方法(諸如ELISA、alphaLISA、西方墨點、抗體或逆相陣列等)測試本發明抗體之抗原結合活性。
在例示性ELISA或alphaLISA分析中，溶液(細胞上清液、細胞或組織溶解物、體液等)中之α-突觸核蛋白由以下抗體結合：捕捉抗體，其特異性結合至α-突觸核蛋白上之第一抗原決定基或某一構形之α-突觸核蛋白；及偶合至偵測實體之偵測抗體，其特異性結合至α-突觸核蛋白之第二抗原決定基或構形。讀取結果基於偵測實體(化學發光、螢光、能量轉移誘導之發光等)。在一些情況下，可在同一分析中使用同一抗體作為捕捉及偵測抗體以偵測α-突觸核蛋白之聚集形式(參見例如Tokuda,T.等人，Neurology 75(2010)1766-1772)。
就抗體陣列而言，將抗體點樣至玻璃或硝化纖維素晶片上。將載玻片封閉且用含有α-突觸核蛋白之溶液培育，洗滌以移除未結合抗體且用螢光標記之對應二級抗體偵測結合抗體。藉由螢光幻燈片掃描器量測螢光信號。類似地對於逆相陣列，將重組α-突觸核蛋白、細胞上清液、細胞或組織溶解物、體液等點樣至玻璃或硝化纖維素晶片 上。將載玻片封閉且用針對α-突觸核蛋白上之特異性抗原決定基之抗體培育個別陣列。洗去未結合抗體且用螢光標記之對應二級抗體偵測結合抗體。藉由螢光幻燈片掃描器量測螢光信號(Dernick,G.等人，J.Lipid Res.52(2011)2323-2331)。
在西方墨點之實例中，在SDS PAGE或天然凝膠條件中藉由分子量分離聚集重組α-突觸核蛋白或衍生自細胞上清液、細胞或組織溶解物、體液等之α-突觸核蛋白且將其吸至硝化纖維素或PVDF膜上。在封閉之後，用對α-突觸核蛋白之胺基酸序列或構形具有特異性之抗體培育膜。其後洗滌膜以移除未結合抗體。藉由偶合至達成化學發光或螢光或其他偵測方式之偵測實體之對應二級抗體偵測結合抗體。對α-突觸核蛋白之胺基酸序列具有特異性之抗體將結合至呈各種聚集形式且因此具有各種分子量之α-突觸核蛋白，只要抗原決定基未因聚集而遮蔽即可。另一方面，構形特異性抗體將僅偵測僅在特定分子量下顯露條帶之α-突觸核蛋白之某些聚集形式(參見例如Towbin,H.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 76(1979)4350-4353；Burnette,W.N.,Anal.Biochem.112(1981)195-203)。
在另一態樣中，可使用競爭分析以鑑別與抗體0017、抗體0018或抗體0081競爭結合至人類α-突觸核蛋白之抗體。在某些實施例中，該種競爭抗體結合至由如本文中所報導之抗體(諸如抗體0017、抗體0018及抗體0081)所結合者相同之抗原決定基(例如線性或構形抗原決定基)。用於定位抗體所結合之抗原決定基之詳細例示性方法提供於Morris,G.E.(編)，Epitope Mapping Protocols,Methods in Molecular Biology，第66卷，Humana Press,Totowa,NJ(1996)中。
在例示性競爭分析中，在包含結合至人類α-突觸核蛋白之第一標記抗體(例如抗體0017、抗體0018或抗體0081)及測試與第一抗體競爭結合至人類α-突觸核蛋白之能力之第二未標記抗體的溶液中培育固定 人類α-突觸核蛋白。作為對照，在包含第一標記抗體但無第二未標記抗體之溶液中培育固定人類α-突觸核蛋白。在允許第一抗體結合至人類α-突觸核蛋白之條件下培育之後，移除過量未結合抗體，且量測與固定人類α-突觸核蛋白相關之標記量。若測試樣品中與固定人類α-突觸核蛋白相關之標記量相對於對照樣品實質上減少，則指示第二抗體與第一抗體競爭結合至人類α-突觸核蛋白(參見例如Harlow,E.及Lane,D.,Antibodies：A Laboratory Manual，第14章，Cold Spring Harbor Laboratory,Cold Spring Harbor,NY(1988))。
2.活性分析
在一個態樣中，提供鑑別具有生物活性之抗人類α-突觸核蛋白抗體之分析。生物活性可包括例如防止/降低/抑制α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或防止/降低/抑制寡聚人類α-突觸核蛋白之細胞間傳輸，及/或降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。亦提供在活體內及/或活體外具有該生物活性之抗體。
在某些實施例中，測試本發明抗體之該生物活性。
可藉由添加含有導致受體神經元細胞細胞死亡之分泌性α-突觸核蛋白之條件培養基來評估保護性生物活性。可藉由添加如本文中所述之保護性抗體使此毒性逆轉。分泌性α-突觸核蛋白之毒性先前已確定(Emmanouilidou,E.等人，J.Neurosci.,30(2010)6838-6851)。
D.用於診斷及偵測之方法及組合物
在某些實施例中，本文中所提供之任何抗人類α-突觸核蛋白抗體適用於偵測生物樣品中人類α-突觸核蛋白之存在。如本文所用之術語「偵測」涵蓋定量或定性偵測。在某些實施例中，生物樣品包含細胞或組織，諸如腦組織。
在一個實施例中，提供用於診斷或偵測方法之抗人類α-突觸核蛋白抗體。在另一態樣中，提供一種偵測生物樣品中人類α-突觸核蛋白 之存在之方法。在某些實施例中，該方法包含在允許抗人類α-突觸核蛋白抗體結合至人類α-突觸核蛋白之條件下使生物樣品與如本文中所述之抗人類α-突觸核蛋白抗體接觸，且偵測是否在抗人類α-突觸核蛋白抗體與人類α-突觸核蛋白之間形成複合物。該方法可為活體外或活體內方法。在一個實施例中，抗人類α-突觸核蛋白抗體用於選擇符合抗人類α-突觸核蛋白抗體療法之個體，例如其中人類α-突觸核蛋白為選擇患者之生物標記。
可使用本發明抗體診斷之例示性病症包括腦鐵積聚神經退化1型(NBIA1)、單純性自主神經衰竭、唐氏症候群、關島型綜合征及數種路易體病症，諸如泛發性路易體疾病(DLBD)、阿茲海默氏病之路易體變異體(LBVAD)、某些形式之高歇氏病及帕金森氏病癡呆(PDD)。
在某些實施例中，提供經標記之抗人類α-突觸核蛋白抗體。標記包括(但不限於)直接偵測之標記或部分(諸如螢光、發色、電子緻密、化學發光及放射性標記)，以及例如經由酶促反應或分子相互作用間接偵測之部分(諸如酶或配位體)。例示性標記包括(但不限於)放射性同位素32P、14C、125I、3H及131I；螢光團，諸如稀土螯合物或螢光素及其衍生物、若丹明及其衍生物、丹醯基、傘酮；螢光素酶，例如螢火蟲螢光素酶及細菌螢光素酶(US 4,737,456)；螢光素；2,3-二氫酞嗪二酮；辣根過氧化酶(HRP)；鹼性磷酸酶；β-半乳糖苷酶；葡糖澱粉酶；溶菌酶；醣氧化酶，例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶及葡萄糖-6-磷酸去氫酶；雜環氧化酶，諸如尿酸酶及黃嘌呤氧化酶，其與使用過氧化氫氧化染料前驅體之酶(諸如HRP、乳過氧化酶或微過氧化酶)偶合；生物素/抗生物素蛋白；自旋標記；噬菌體標記；穩定自由基及其類似標記。
E.醫藥調配物
如本文所述之抗人類α-突觸核蛋白抗體之醫藥調配物係藉由將具 有所需純度之該抗體與一或多種視情況選用之醫藥學上可接受之載劑混合(Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol,A.(編)(1980))，以凍乾調配物或水溶液形式來製備。醫藥學上可接受之載劑在所使用之劑量及濃度下一般對接受者無毒，且包括(但不限於)：緩衝液，諸如磷酸鹽、檸檬酸鹽及其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸及甲硫胺酸；防腐劑(諸如十八烷基二甲基苯甲基氯化銨；氯化六羥季銨；氯化苯甲烴銨；苄索氯銨；苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷基酯，諸如對羥苯甲酸甲酯或對羥苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；及間甲酚)；低分子量(小於約10個殘基)多肽；蛋白質，諸如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，諸如聚(乙烯吡咯啶酮)；胺基酸，諸如甘胺酸、麩醯胺酸、天冬醯胺、組胺酸、精胺酸或離胺酸；單醣、雙糖及其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，諸如EDTA；糖類，諸如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽相對離子，諸如鈉；金屬錯合物(例如Zn-蛋白質錯合物)；及/或非離子型界面活性劑，諸如聚乙二醇(PEG)。本文中之例示性醫藥學上可接受之載劑進一步包括間質性藥物分散劑，諸如可溶性中性活性玻尿酸酶醣蛋白(sHASEGP)，例如人類可溶性PH-20玻尿酸酶醣蛋白，諸如rhuPH20(HYLENEX®,Baxter International,Inc.)。某些例示性sHASEGP(包括rhuPH20)及使用方法描述於US 2005/0260186及US 2006/0104968中。在一個態樣中，sHASEGP與一或多種額外葡萄糖胺聚糖酶(諸如軟骨素酶)組合。
例示性凍乾抗體調配物描述於US 6,267,958中。水性抗體調配物包括描述於US 6,171,586及WO 2006/044908中之彼等調配物，描述於WO 2006/044908中之調配物包括組胺酸-乙酸鹽緩衝液。
本文之調配物亦可含有一種以上為所治療之特定適應症所必需之活性成分，較佳為具有不會對彼此產生不利影響之補充性活性的活 性成分。舉例而言，可能需要進一步提供[[可能與抗人類α-突觸核蛋白抗體組合之清單藥物]]。該等活性成分適合以有效達成預定目的之量組合存在。
可例如藉由凝聚技術或藉由界面聚合將活性成包覆於所製備之微囊中，例如羥甲基纖維素或明膠微囊及聚-(甲基丙烯酸甲酯)微囊分別包覆於膠狀藥物傳遞系統(例如脂質體、白蛋白微球體、微乳液、奈米粒子及奈米囊劑)中或於巨乳液中。該等技術揭示於Remington's Pharmaceutical Sciences，第16版，Osol,A.(編)(1980)中。
可製備持續釋放製劑。持續釋放製劑之適合實例包括含有抗體之固體疏水聚合物之半滲透性基質，該等基質呈成形物品(例如薄膜或微囊)之形式。
將用於活體內投與之調配物一般無菌。無菌性可易於例如藉由經由無菌過濾膜過濾來達成。
F.治療方法及組合物
本文中所提供之任何抗人類α-突觸核蛋白抗體可用於治療方法。
在一個態樣中，提供用作藥物之抗人類α-突觸核蛋白抗體。在其他態樣中，提供用於治療帕金森氏病之抗人類α-突觸核蛋白抗體。在某些實施例中，提供用於治療方法之抗人類α-突觸核蛋白抗體。在某些實施例中，本發明提供用於治療患有帕金森氏病之個體之方法的抗人類α-突觸核蛋白抗體，該方法包含向個體投與有效量之抗人類α-突觸核蛋白抗體。在一個該實施例中，該方法進一步包含向個體投與有效量之至少一種例如如下所述之額外治療劑。在其他實施例中，本發明提供用於抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性或抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸或降低α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性之抗人類α-突觸核蛋白抗體。在某些實施例中，本發明提供用於抑制人類神經元 及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性或抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸或降低個體中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性之方法的抗人類α-突觸核蛋白抗體，該方法包含向個體投與有效量之抗人類α-突觸核蛋白抗體以抑制人類神經元與神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性或抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸或降低α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。根據任何以上實施例之「個體」較佳為人類。
在另一態樣中，本發明提供抗人類α-突觸核蛋白抗體在製造或製備藥物中之用途。在一個實施例中，藥物用於治療帕金森氏病。在另一實施例中，藥物用於治療帕金森氏病之方法，該方法包含向患有帕金森氏病之個體投與有效量之藥物。在一個該實施例中，該方法進一步包含向個體投與有效量之至少一種例如如下所述之額外治療劑。在另一實施例中，藥物用於抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性或抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸或降低α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。在另一實施例中，藥物用於抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性或抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸或降低個體中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性之方法，該方法包含向個體投與有效量之藥物以抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性或抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸或降低α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。根據任何以上實施例之「個體」可為人類。
在另一態樣中，本發明提供一種治療帕金森氏病之方法。在一個實施例中，該方法包含向患有該帕金森氏病之個體投與有效量之抗 人類α-突觸核蛋白抗體。在一個該實施例中，該方法進一步包含向個體投與有效量之至少一種如下所述之額外治療劑。根據任何以上實施例之「個體」可為人類。
在另一態樣中，本發明提供一種抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性或抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸或降低個體中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性之方法。在一個實施例中，該方法包含向個體投與有效量之抗人類α-突觸核蛋白抗體以抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性或抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸或降低α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。在一個實施例中，「個體」為人類。
在另一態樣中，本發明提供包含本文中所提供之任何抗人類α-突觸核蛋白抗體例如用於任何以上治療方法之醫藥調配物。在一個實施例中，醫藥調配物包含本文中所提供之任何抗人類α-突觸核蛋白抗體及醫藥學上可接受之載劑。在另一實施例中，醫藥調配物包含本文中所提供之任何抗人類α-突觸核蛋白抗體及至少一種例如如下所述之額外治療劑。
本發明抗體可單獨或與其他藥劑組合用於療法中。舉例而言，本發明抗體可與至少一種額外治療劑共同投與。
上述該等組合療法涵蓋組合投與(其中兩種或兩種以上治療劑包括在相同或單獨調配物中)及單獨投與，在此情況下，本發明抗體之投與可在投與額外治療劑之前、同時及/或之後進行。在一個實施例中，抗人類α-突觸核蛋白抗體之投與及另一治療劑之投與彼此相隔約一個月；或相隔約一週、兩週或三週；或相隔約一天、兩天、三天、四天、五天或六天進行。
本發明抗體(及任何額外治療劑)可藉由任何適合方式投與，包括 非經腸、肺內及鼻內投與，且必要時對於局部治療，包括病灶內投與。非經腸輸液包括肌肉內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下投與。部分視投與之短期或長期性而定，可藉由任何適當途徑(例如藉由注射，諸如靜脈內或皮下注射)給藥。本文中涵蓋各種給藥時程，包括(但不限於)單次投與或經各個時間點多次投與、快速投與及脈衝式輸注。
本發明抗體可與良好醫療實務一致之方式調配、給藥及投與。在此背景下考慮之因素包括所治療之特定病症、所治療之特定哺乳動物、個別患者之臨床病況、病症之病因、藥劑之傳遞位點、投與方法、投與時程及從業醫生已知之其他因素。抗體無需但視情況可與一或多種當前用於預防或治療所述病症之藥劑一起調配。該等其他藥劑之有效量視存在於調配物中之抗體之量、病症或治療之類型及以上所論述之其他因素而定。該等藥劑通常以相同劑量且利用本文中所述之投與途徑使用，或以本文中所述劑量之約1%至99%使用，或以任意劑量且憑經驗/臨床上確定為適當之任何途徑使用。
為預防或治療疾病，本發明抗體之適當劑量(當單獨或與一或多種其他額外治療劑組合使用時)將視待治療疾病之類型、抗體類型、疾病之嚴重度及病程、投與抗體以供達成預防或治療目的、先前療法、患者之臨床病史及對抗體之反應以及主治醫師之判斷而定。抗體適於一次性或經一系列治療投與至患者。無論例如藉由一或多次單獨投與，或藉由連續輸注，視疾病類型及嚴重程度而定，抗體投與至患者之初始候選劑量為約1μg/kg至15mg/kg(例如，0.5mg/kg-10mg/kg)。一種典型日劑量可在約1μg/kg至100mg/kg或100mg/kg以上之範圍內，此視上文所提及之因素而定。對於歷經數天或更長時間之重複投與，視病況而定治療一般將持續至疾病症狀之所需抑制發生為止。抗體之一種例示性劑量在約0.05mg/kg至約10mg/kg之範圍內。 因此，可向患者投與約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg(或其任何組合)之一或多個劑量。該等劑量可間歇地投與，例如，每週或每三週(例如，以使得患者接受約二至約二十或例如約六種劑量的抗體)。可投與初始較高起始劑量，隨後可投與一或多種較低劑量。然而，其他給藥方案可為適用的。此療法之進程易於藉由習知技術及分析監控。
應瞭解，代替或除抗人類α-突觸核蛋白抗體以外，可使用本發明免疫結合物進行任何以上調配或治療方法。
III.製品
在本發明之另一態樣中，提供一種含有適用於治療、預防及/或診斷上述病症之物質之製品。製品包含容器及容器上或容器隨附之標籤或藥品說明書。適合容器包括例如瓶子、小瓶、注射器、IV溶液袋等。容器可由諸如玻璃或塑膠之多種材料形成。容器容納單獨組合物或與有效治療、預防及/或診斷病況之另一組合物組合之組合物，且可具有無菌接取口(例如容器可為具有可由皮下注射針刺穿之塞子的靜脈內溶液袋或小瓶)。組合物中之至少一種活性劑為本發明抗體。標籤或藥品說明書指示組合物用於治療所選病況。此外，製品可包含(a)內含組合物之第一容器，其中該組合物包含本發明抗體；及(b)內含組合物之第二容器，其中該組合物包含另一細胞毒性劑或治療劑。本發明之此實施例中之製品可進一步包含指示組合物可用於治療特定病況之藥品說明書。或者或另外，該製品可進一步包含第二(或第三)容器，其包含醫藥學上可接受之緩衝液，諸如注射用抑菌水(BWFI)、磷酸鹽緩衝鹽水、林格氏溶液(Ringer's solution)及右旋糖溶液。其可進一步包括就商業及使用者觀點而言所需之其他物質，包括其他緩衝液、稀釋劑、過濾器、針及注射器。
應瞭解，代替或除抗人類α-突觸核蛋白抗體以外，任何以上製品 可包括本發明免疫結合物。
IV.特定實施例
1.一種特異性結合至人類α-突觸核蛋白之抗體，其中該抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低LUHMES細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
2.如第1項之抗體，其中該卡斯蛋白酶活性為卡斯蛋白酶3及/或卡斯蛋白酶7活性。
3.如第1項至第2項中任一項之抗體，其中該抗體用於治療突觸核蛋白病。
4.如第3項之抗體，其中該抗體用於治療帕金森氏病。
5.如第1項至第4項中任一項之抗體，其中該抗體特異性結合至由胺基酸序列GKNEEGAPQEG(SEQ ID NO：01)組成之肽。
6.如第1項至第5項中任一項之抗體，其中該抗體對單體人類α-突觸核蛋白之結合親和力小於10E-09M且大於10E-07M。
7.如第1項至第6項中任一項之抗體，其中該抗體特異性結合至單體及寡聚人類α-突觸核蛋白且不結合至原纖維人類α-突觸核蛋白。
8.如第1項至第7項中任一項之抗體，其中該抗體在重鏈可變域中包含SEQ ID NO：02至04之HVR且在輕鏈可變域中包含SEQ ID NO：05至07之HVR。
9.如第1項至第7項中任一項之抗體，其中該抗體在重鏈可變域中包含SEQ ID NO：08、09及04之HVR且在輕鏈可變域中包含SEQ ID NO：10至12之HVR。
10.如第8項至第9項中任一項之抗體，其中該抗體包含由SEQ ID NO：13組成之重鏈可變域及由SEQ ID NO：14組成之輕鏈可變域。
11.如第1項至第10項中任一項之抗體，其中該抗體已藉由將包含由SEQ ID NO：13組成之重鏈可變域及由SEQ ID NO：14組成之輕鏈可變域之抗體人類化獲得。
12.如第1項至第7項中任一項之抗體，其中該抗體為人類化抗體且在該重鏈可變域中包含該等SEQ ID NO：02至04之HVR且在該輕鏈可變域中包含該等SEQ ID NO：05至07之HVR，其中在各HVR中，多至3個胺基酸殘基可發生改變。
13.如第1項至第7項中任一項之抗體，其中該抗體為人類化抗體且在該重鏈可變域中包含該等SEQ ID NO：08、09及04之HVR且在該輕鏈可變域中包含該等SEQ ID NO：10至12之HVR，其中在各HVR中，多至3個胺基酸殘基可發生改變。
14.如第1項至第7項及第12項至第13項中任一項之抗體，其中該抗體為人類化抗體且該重鏈可變域為由SEQ ID NO：13組成之重鏈可變域之人類化形式(自其衍生)且該輕鏈可變域為由SEQ ID NO：14組成之輕鏈可變域之人類化形式(自其衍生)。
15.如第1項至第4項中任一項之抗體，其中該抗體與在重鏈中包含SEQ ID NO：15至17之HVR且在輕鏈中包含SEQ ID NO：18至20之HVR之抗體結合至相同的抗原決定基。
16.如第1項至第4項中任一項之抗體，其中該抗體與在重鏈中包含SEQ ID NO：21、22及17之HVR且在輕鏈中包含SEQ ID NO：23至25之HVR之抗體結合至相同的抗原決定基。
17.如第15項及第16項中任一項之抗體，其中該抗體包含由SEQ ID NO：26組成之重鏈可變域及由SEQ ID NO：27組成之輕鏈可變域。
18.如第1項至第4項中任一項之抗體，其中該抗體已藉由將包含 由SEQ ID NO：26組成之重鏈可變域及由SEQ ID NO：27組成之輕鏈可變域之抗體人類化獲得。
19.如第1項至第4項中任一項之抗體，其中該抗體為人類化抗體且在該重鏈可變域中包含該等SEQ ID NO：15至17之HVR且在該輕鏈可變域中包含該等SEQ ID NO：18至20之HVR，其中在各HVR中，多至3個胺基酸殘基可發生改變。
20.如第1項至第4項中任一項之抗體，其中該抗體為人類化抗體且在該重鏈可變域中包含該等SEQ ID NO：21、22及17之HVR且在該輕鏈可變域中包含該等SEQ ID NO：23至25之HVR，其中在各HVR中，多至3個胺基酸殘基可發生改變。
21.如第1項至第4項及第19項至第20項中任一項之抗體，其中該抗體為人類化抗體且該重鏈可變域為由SEQ ID NO：26組成之重鏈可變域之人類化形式(自其衍生)且該輕鏈可變域為由SEQ ID NO：27組成之輕鏈可變域之人類化形式(自其衍生)。
22.如第1項至第4項中任一項之抗體，其中該抗體與在重鏈中包含SEQ ID NO：28至30之HVR且在輕鏈中包含SEQ ID NO：31至33之HVR之抗體結合至相同的抗原決定基。
23.如第1項至第4項中任一項之抗體，其中該抗體與在重鏈中包含SEQ ID NO：28、34及30之HVR且在輕鏈中包含SEQ ID NO：35至37之HVR之抗體結合至相同的抗原決定基。
24.如第22項至第23項中任一項之抗體，其中該抗體包含由SEQ ID NO：38組成之重鏈可變域及由SEQ ID NO：39組成之輕鏈可變域。
25.如第1項至第4項中任一項之抗體，其中該抗體已藉由將包含由SEQ ID NO：38組成之重鏈可變域及由SEQ ID NO：39組成之輕鏈可變域之抗體人類化獲得。
26.如第1項至第4項中任一項之抗體，其中該抗體為人類化抗體 且在該重鏈可變域中包含該等SEQ ID NO：28至30之HVR且在該輕鏈可變域中包含該等SEQ ID NO：31至33之HVR，其中在各HVR中，多至3個胺基酸殘基可發生改變。
27.如第1項至第4項中任一項之抗體，其中該抗體為人類化抗體且在該重鏈可變域中包含該等SEQ ID NO：28、34及30之HVR且在該輕鏈可變域中包含該等SEQ ID NO：35至37之HVR，其中在各HVR中，多至3個胺基酸殘基可發生改變。
28.如第1項至第4項及第26項至第27項中任一項之抗體，其中該抗體為人類化抗體且該重鏈可變域為由SEQ ID NO：38組成之重鏈可變域之人類化形式(自其衍生)且該輕鏈可變域為由SEQ ID NO：39組成之輕鏈可變域之人類化形式(自其衍生)。
29.如第1項至第4項及第15項至第28項中任一項之抗體，其中該抗體特異性結合至原纖維人類α-突觸核蛋白且不結合至非原纖維人類α-突觸核蛋白。
30.如第1項至第29項中任一項之抗體，其中該抗體結合至血腦障壁穿梭模組。
31.如第30項之抗體，其中該血腦障壁穿梭模組為特異性結合至LRP1、LRP8、人類轉鐵蛋白受體或類人類胰島素生長因子受體之抗體或抗體片段。
32.如第1項至第31項中任一項之抗體，其中該抗體為單株抗體。
33.如第1項至第32項中任一項之抗體，其中該抗體為人類化抗體或嵌合抗體。
34.如第1項至第33項中任一項之抗體，其中該抗體為結合至人類α-突觸核蛋白之抗體片段且i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細 胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低LUHMES細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
35.如第1項至第34項中任一項之抗體，其中該抗體為a)人類子類IgG1之全長抗體，或b)人類子類IgG4之全長抗體，或c)具有突變L234A、L235A及P329G之人類子類IgG1之全長抗體，d)具有突變S228P、L235E及P329G之人類子類IgG4之全長抗體，e)在兩條重鏈中均具有突變L234A、L235A及P329G且在一條重鏈中具有突變T366W及S354C及在各別另一重鏈中具有突變T366S、L368A、Y407V及Y349C之人類子類IgG1之全長抗體，f)在兩條重鏈中均具有突變S228P及P329G且在一條重鏈中具有突變T366W及S354C及在各別另一重鏈中具有突變T366S、L368A、Y407V及Y349C之人類子類IgG4之全長抗體。
36.一種經分離核酸，其編碼如第1項至第35項中任一項之抗體。
37.一種宿主細胞，其包含如第36項之核酸。
38.一種產生抗體之方法，其包含培養如第37項之宿主細胞以產生該抗體之步驟。
39.如第38項之方法，其中該方法進一步包含自該細胞或培養基回收該抗體之步驟。
40.一種醫藥調配物，其包含如第1項至第35項中任一項之抗體 及醫藥學上可接受之載劑。
41.如第40項之醫藥調配物，其中其進一步包含另一治療劑。
42.如第1項至第35項中任一項之抗體，其用作藥物。
43.如第1項至第35項中任一項之抗體，其用於治療突觸核蛋白病。
44.如第1項至第35項中任一項之抗體，其用於治療帕金森氏病。
45.如第1項至第35項中任一項之抗體，其用於抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性。
46.如第1項至第35項中任一項之抗體，其用於抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸。
47.如第1項至第35項中任一項之抗體，其用於降低神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
48.一種如第1項至第35項中任一項之抗體之用途，其用於製造藥物。
49.如第48項之用途，其中該藥物用於治療帕金森氏病。
50.如第48項之用途，其中該藥物用於抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性。
51.如第48項之用途，其中該藥物用於抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸。
52.如第48項之用途，其中該藥物用於降低神經元細胞或神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性。
53.一種治療患有帕金森氏病之個體之方法，其包含向該個體投與有效量之如第1項至第35項中任一項之抗體。
54.一種抑制個體之人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性的方法，其包含向該個體投與有效量之如第1項至 第35項中任一項之抗體以抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性。
55.一種抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在個體之神經元及神經膠質細胞之間的細胞間傳輸之方法，其包含向該個體投與有效量之如第1項至第35項中任一項之抗體以抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性。
56.一種如第1項至第35項中任一項之抗人類α突觸核蛋白抗體在抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性中的用途。
57.一種如第1項至第35項中任一項之抗人類α突觸核蛋白抗體在抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸中之用途。
58.一種如第1項至第35項中任一項之抗人類α突觸核蛋白抗體在抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性中之用途。
59.一種抗體，其特異性結合至人類α-突觸核蛋白且包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VH HVR序列之抗體：i)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：02；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：03；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：04；或ii)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：08；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：09；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：04，或iii)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：15；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：16；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：17，或 iv)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：21；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：22；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：17，或v)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：28；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：29；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：30，或vi)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：28；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：34；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：30。
60.一種抗體，其特異性結合至人類α-突觸核蛋白且包含以下作為VH HVR序列i)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：02；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：03；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：04；或ii)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：08；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：09；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：04，或iii)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：15；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：16；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：17，或iv)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：21；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：22；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：17，或v)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：28；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：29；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：30，或 vi)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：28；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：34；及(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：30。
61.如第59項至第60項中任一項之抗體，其中其進一步包含至少一個、至少兩個或所有三個選自以下之VL HVR序列i)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：05；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：06；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：07；或ii)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：10；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：11；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：12，或iii)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：18；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：19；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：20，或iv)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：23；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：24；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：25，或v)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：31；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：32；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：33，或vi)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：35；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：36；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：37。
62.如第60項之抗體，其中其進一步包含以下作為VL HVR序列i)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：05；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：06；及(c)HVR-L3，其包含胺基 酸序列SEQ ID NO：07；或ii)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：10；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：11；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：12，或iii)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：18；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：19；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：20，或iv)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：23；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：24；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：25，或v)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：31；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：32；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：33，或vi)(a)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：35；(b)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：36；及(c)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：37。
63.一種抗體，其特異性結合至人類α-突觸核蛋白且包含以下作為HVR序列i)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：02；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：03；(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：04；(d)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：05；(e)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：06；及(f) HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：07，或ii)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：08；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：09；(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：04；(d)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO： 10；(e)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：11；及(f)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：12，或iii)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：15；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：16；(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：17；(d)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：18；(e)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：19；及(f) HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：20，或iv)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：21；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：22；(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：17；(d)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：23；(e)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：24；及(f) HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：25，或v)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：28；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：29；(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：30；(d)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：31；(e)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：32；及(f)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：33，或vi)(a)HVR-H1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：28；(b)HVR-H2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：34；(c)HVR-H3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：30；(d)HVR-L1，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：35；(e)HVR-L2，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：36；及(f)HVR-L3，其包含胺基酸序列SEQ ID NO：37。
64.一種特異性結合至人類α-突觸核蛋白之抗體，其中該人類α-突觸核蛋白具有游離N端甲硫胺酸殘基。
65.如第64項之抗體，其中該等抗體特異性結合至人類及小鼠α-突觸核蛋白，其中該人類及小鼠α-突觸核蛋白具有游離N端甲硫胺酸 殘基。
66.如第64項至第65項中任一項之抗體，其中該α-突觸核蛋白為單體α-突觸核蛋白。
67.如第64項至第65項中任一項之抗體，其中該α-突觸核蛋白為寡聚α-突觸核蛋白。
68.如第64項至第67項中任一項之抗體，其中該α-突觸核蛋白為單體及寡聚α-突觸核蛋白。
69.如第64項至第68項中任一項之抗體，其中該抗體與在重鏈中包含SEQ ID NO：15至17之HVR且在輕鏈中包含SEQ ID NO：18至20之HVR之抗體結合至相同的抗原決定基。
70.如第64項至第69項中任一項之抗體，其中該抗體與在重鏈中包含SEQ ID NO：21、22及17之HVR且在輕鏈中包含SEQ ID NO：23至25之HVR之抗體結合至相同的抗原決定基。
71.如第64項至第70項中任一項之抗體，其中該抗體與包含SEQ ID NO：26之重鏈可變域及SEQ ID NO：27之輕鏈可變域之抗體結合至相同的抗原決定基。
72.如第64項至第68項中任一項之抗體，其中該抗體在重鏈中包含該等SEQ ID NO：15至17之HVR且在輕鏈中包含該等SEQ ID NO：18至20之HVR。
73.如第64項至第68項中任一項之抗體，其中該抗體在重鏈中包含SEQ ID NO：21、22及17之HVR且在輕鏈中包含SEQ ID NO：23至25之HVR。
74.如第64項至第68項中任一項之抗體，其中該抗體已藉由將包含SEQ ID NO：26之重鏈可變域及SEQ ID NO：27之輕鏈可變域之抗體人類化獲得。
75.如第64項至第68項中任一項之抗體，其中該抗體為人類化抗 體且在該重鏈可變域中包含該等SEQ ID NO：15至17之HVR且在該輕鏈可變域中包含該等SEQ ID NO：18至20之HVR，其中在各HVR中，0至3個胺基酸殘基已發生改變。
76.如第64項至第68項中任一項之抗體，其中該抗體為人類化抗體且在該重鏈可變域中包含該等SEQ ID NO：21、22及17之HVR且在該輕鏈可變域中包含該等SEQ ID NO：23至25之HVR，其中在各HVR中，0至3個胺基酸殘基已發生改變。
77.如第64項至第68項中任一項之抗體，其中該抗體為人類化抗體且該重鏈可變域衍生自SEQ ID NO：26之重鏈可變域且該輕鏈可變域衍生自SEQ ID NO：27之輕鏈可變域。
78.一種抗體，其與在重鏈中包含SEQ ID NO：15至17之HVR且在輕鏈中包含SEQ ID NO：18至20之HVR之抗體結合至相同的抗原決定基。
79.一種抗體，其在重鏈中包含SEQ ID NO：15至17之HVR且在輕鏈中包含SEQ ID NO：18至20之HVR。
80.一種抗體，其在重鏈中包含SEQ ID NO：21、22及17之HVR且在輕鏈中包含SEQ ID NO：23至25之HVR。
81.一種(變異體)抗體，其已自包含SEQ ID NO：26之重鏈可變域及SEQ ID NO：27之輕鏈可變域之抗體獲得。
82.如第64項至第68項中任一項之抗體，其中該抗體為已藉由將包含SEQ ID NO：26之重鏈可變域及SEQ ID NO：27之輕鏈可變域之抗體人類化獲得之人類化抗體。
83.一種(人類化)抗體，其在重鏈可變域中包含SEQ ID NO：15至17之HVR且在輕鏈可變域中包含SEQ ID NO：18至20之HVR，其中在各HVR中，0至3個胺基酸殘基已發生改變。
84.一種(人類化)抗體，其在重鏈可變域中包含SEQ ID NO： 21、22及17之HVR且在輕鏈可變域中包含SEQ ID NO：23至25之HVR，其中在各HVR中，0至3個胺基酸殘基已發生改變。
85.一種(人類化)抗體，其中重鏈可變域衍生自SEQ ID NO：26之重鏈可變域且輕鏈可變域衍生自SEQ ID NO：27之輕鏈可變域。
86.如第64項至第85項中任一項之抗體，其中該抗體結合至血腦障壁穿梭模組。
87.如第86項之抗體，其中該血腦障壁穿梭模組為特異性結合至LRP1、LRP8、人類轉鐵蛋白受體或類人類胰島素生長因子受體之抗體或抗體片段。
88.如第64項至第87項中任一項之抗體，其中該抗體為單株抗體。
89.如第64項至第88項中任一項之抗體，其中該抗體為人類化抗體或嵌合抗體。
90.如第64項至第89項中任一項之抗體，其中該抗體為a)人類子類IgG1之全長抗體，或b)人類子類IgG4之全長抗體，或c)具有突變L234A、L235A及P329G之人類子類IgG1之全長抗體，d)具有突變S228P、L235E及P329G之人類子類IgG4之全長抗體，e)在兩條重鏈中均具有突變L234A、L235A及P329G且在一條重鏈中具有突變T366W及S354C及在各別另一重鏈中具有突變T366S、L368A、Y407V及Y349C之人類子類IgG1之全長抗體，或f)在兩條重鏈中均具有突變S228P、L235E及P329G且在一條重鏈中具有突變T366W及S354C及在各別另一重鏈中具有突變T366S、L368A、Y407V及Y349C之人類子類IgG4之全長抗體。
91.一種抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19及SEQ ID NO：20之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區。
92.一種抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中 i)該可變域包含SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24及SEQ ID NO：25之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區。
93.一種抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)該可變域為SEQ ID NO：26之非人類(兔)可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域為SEQ ID NO：27之非人類(兔)可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類K輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區。
94.一種抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及 iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19及SEQ ID NO：20之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區。
95.一種抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24及SEQ ID NO：25之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區。
96.一種抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含兩條抗體重鏈，各重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受 體之scFab或scFv抗體片段，其中i)該可變域為SEQ ID NO：26之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，及iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，b)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域為SEQ ID NO：27之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區。
97.一種抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含第一抗體重鏈，該第一抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C或胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，b)該抗體包含第二抗體重鏈，該第二抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：16及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變， ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，則該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C；或若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366W及S354C，則該恆定區包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，c)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：19及SEQ ID NO：20之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區。
98.一種抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含第一抗體重鏈，該第一抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C或胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，b)該抗體包含第二抗體重鏈，該第二抗體重鏈在N端至C端方 向上包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：22及SEQ ID NO：17之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，則該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C；或若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366W及S354C，則該恆定區包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，c)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域包含SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：24及SEQ ID NO：25之HVR，其中在各HVR中，彼此獨立地，0、1、2或3個胺基酸殘基發生改變，ii)該恆定區為人類K輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區。
99.一種抗人類α-突觸核蛋白抗體，其特徵在於a)該抗體包含第一抗體重鏈，該第一抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域、重鏈恆定區、肽連接子及特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之scFab或scFv抗體片段，其中i)該可變域為SEQ ID NO：26之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C或胺基酸變化 T366S、L368A、Y407V及Y349C，b)該抗體包含第二抗體重鏈，該第二抗體重鏈在N端至C端方向上包含重鏈可變域及重鏈恆定區，其中i)該可變域為SEQ ID NO：26之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類IgG1恆定區，其中C端離胺酸殘基可存在或不存在，iii)該恆定區包含胺基酸變化L234A、L235A及P329G，及iv)若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，則該恆定區包含胺基酸變化T366W及S354C；或若該第一抗體重鏈包含胺基酸變化T366W及S354C，則該恆定區包含胺基酸變化T366S、L368A、Y407V及Y349C，c)該抗體包含兩條抗體輕鏈，各輕鏈包含輕鏈可變域及輕鏈恆定域，其中i)該可變域為SEQ ID NO：27之兔可變域之人類化形式，ii)該恆定區為人類κ輕鏈恆定區或人類λ輕鏈恆定區。
100.如第94項至第99項中任一項之抗體，其中特異性結合至人類轉鐵蛋白受體之該抗體片段包含為SEQ ID NO：56之重鏈可變域之人類化形式的重鏈可變域及為SEQ ID NO：57之輕鏈可變域之人類化形式的輕鏈可變域。
101.如第64項至第100項中任一項之抗體，其中該抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶活性，及/或 iv)特異性結合至具有游離N端甲硫胺酸殘基之α-突觸核蛋白且不特異性結合至具有經修飾之N端甲硫胺酸殘基之α-突觸核蛋白。
V.實例
以下為本發明之方法及組合物之實例。應瞭解，考慮到上文提供之一般說明，可實踐各種其他實施例。
物質及方法 重組DNA技術
使用標準方法以如Sambrook,J.等人，Molecular cloning：A laboratory manual；Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor,New York,1989中所描述操作DNA。根據製造商之說明使用分子生物試劑。
基因及寡核苷酸合成
藉由在Geneart GmbH(Regensburg,Germany)化學合成來製備所需基因區段。將合成基因片段選殖成大腸桿菌質體用於繁殖/擴增。藉由DNA定序檢驗次選殖基因片段之DNA序列。或者，藉由黏接化學合成之寡核苷酸或經由PCR組裝短合成DNA片段。藉由metabion GmbH(Planegg-Martinsried,Germany)製備各別寡核苷酸。
試劑
若未另外規定，則如根據製造商之方案所提供使用所有市售化學品、抗體及套組。
細胞純系
抗體0017=ASYN-233HC_110-IV=aSyn.S019.006A08
抗體0018=ASYN-064HC_110-II=aSyn.S003.006A11
抗體0081=ASYN-235HC_110-IV=aSyn.S019.005A08
抗體0070=抗體0017+血腦障壁穿梭模組
抗體0076=抗體0018+血腦障壁穿梭模組
實例1 製備抗原 材料
蛋白質：-凍乾人類野生型α-突觸核蛋白(100μg、200μg或500μg等分試樣)；
-人類突變型TP α-突觸核蛋白(8.2mg/ml，透析於50mM HEPES/100mM NaCl中)
緩衝液及溶液(在室溫下儲存且免受直接日光暴露)：
-PB原料(5×)：250mM磷酸鹽緩衝液，pH 7.0(0.22μm經過濾)
-EtOH原料：分析用級無水乙醇(EMSURE)(Merck；目錄號1.00989.1000)
-HPLC級水(LiChrosolv,Merck)
- 50mM HEPES/100mM NaCl，pH 7.4(0.22μm經過濾)
- TBS(50mM Tris/100mM NaCl)pH 7.0(0.22μm經過濾)
- BioPORTER蛋白質傳遞試劑(Genlantis，目錄號BP502424)
製備A1寡聚物
關於參考，參見Danzer,K.M.等人，J.Neurosci.27(2007)9220-9232，及Danzer,K.M.等人，J.Neurochem.111(2009)192-203。
將凍乾α-突觸核蛋白溶解於HPLC水中以獲得α-突觸核蛋白中之約70μM溶液(每100μg蛋白質100μl)。使用管浮動裝置在水浴音波處理器中將溶液音波處理30sec。其後添加500μl HPLC級水、200μl 250mM PB(pH 7.0)、200μl分析用無水EtOH。使混合物全速渦旋10sec。然後產生50mM PB pH 7.0/20%乙醇中之100μg/ml α-突觸核蛋白溶液。對於參考樣品，在不存在α-突觸核蛋白之情況下混合相同緩衝液。將溶液在室溫下於章動器上震盪4h。在震盪之後，將溶液在乾冰上冷凍以便立即凍乾。凍乾在室溫下在恆定旋轉下(例如於 Speedvac中)進行隔夜。使凍乾物再懸浮於0.5ml之具有10%乙醇之50mM PB(pH 7.0)中。使乙醇在20-21℃下於具有開蓋之通風櫥中蒸發24h(艾本德恆溫混勻儀(Eppendorf Thermomixer)5436，速度5)。其後封閉開蓋且使震盪在室溫下持續6天。用Vivaspin 500將A1寡聚物濃縮多至1mg/ml(30kD截止)且合併以用於免疫接種。為了長期儲存，使寡聚物保持在-80℃下。藉由SDS-PAGE及EM進行對適當寡聚物形成之品質控制。
製備C1寡聚物
關於參考，參見Danzer,K.M.等人，J.Neurosci.27(2007)9220-9232，及Danzer,K.M.等人，J.Neurochem.111(2009)192-203。
將凍乾α-突觸核蛋白溶解於HPLC級水中以獲得濃度為約70μM之溶液(每100μg蛋白質100μl)。使用管浮動裝置在水浴音波處理器中將溶液音波處理30sec。其後添加500μl HPLC級水、200μl 250mM PB(pH 7.0)、200μl分析用無水乙醇。使混合物全速渦旋10sec。產生100μg/ml α-突觸核蛋白於50mM PB pH 7.0/20%乙醇中之溶液。對於對照樣品，在不存在α-突觸核蛋白之情況下混合相同緩衝液。將溶液在室溫下於章動器上震盪16h(例如隔夜)。用Vivaspin 500將C1寡聚物濃縮多至1mg/ml(30kD截止)且合併以用於免疫接種。為了長期儲存，使寡聚物保持在-80℃下。藉由SDS-PAGE及EM進行對適當寡聚物形成之品質控制。
製備TP突變型α-突觸核蛋白寡聚物
改自Karpinar,D.P.等人，EMBO J.28(2009)3256-3268。
將100μl之8.2mg/ml(約590mM)TP α-突觸核蛋白於50mM HEPES/100mM NaCl(pH 7.4)中之等分試樣用2×5mm微磁攪拌棒在37℃(200rpm)下攪拌6天。藉由SDS-PAGE及EM進行對適當寡聚物形成之品質控制。
α-突觸核蛋白原纖維形成及與BioPORTER混合
改自Luk,K.C.等人，Biochem.46(2007)12522-12526，及Luk,K.C.等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 106(2009)20051-20056。
在不打開真空袋之情況下歷經10-15min使凍乾及真空α-突觸核蛋白等分試樣(自-80℃)恢復至室溫(RT)。同時將軌道管混合器預加熱至37℃。其後打開含有管之袋且若需要，則清除管外部上之水滴。使100μg凍乾之α-突觸核蛋白溶解於100μl TBS(pH 7)中。將管放入軌道管混合器中且在37℃/1000rpm下培育96h。其後使管在室溫下以全速(20,000g)減慢旋轉10分鐘。移除90μl上清液。用90μl之新鮮TBS(假定約1mg/ml濃度)使集結粒再懸浮。藉由SDS-PAGE及EM進行對適當原纖維形成之品質控制。為了長期儲存，使樣品保持在-80℃下。
在免疫接種之前不久，將100μl之1mg/ml充分懸浮原纖維添加至20μl BioPORTER試劑乾膜中且藉由渦旋及水浴音波劇烈混合。在用於免疫接種之前將溶液在室溫下培育10min。
實例2 兔之免疫接種
用α-突觸核蛋白C1寡聚物、α-突觸核蛋白原纖維及α-突觸核蛋白TP突變型寡聚物之混合物(對於第一免疫接種各組分400μg；對於連續免疫接種各組分200μg；製備參見實例1)將三隻新西蘭白兔免疫接種。藉由在第0天皮內施用及在第7、14、35、63及91天交替肌肉內及皮下施用，動物接受用完全弗氏佐劑(complete Freund's adjuvant)乳化之免疫原。在第21、41、69及97天獲取血液(估計總血量之10%)。製備血清，將其用於藉由ELISA之效價測定(參見以下)。分離周邊單核細胞，在B細胞選殖過程中將其用作抗原特異性B細胞之來源(實例3及4)。
測定血清效價
單獨測定免疫原混合物之各組分之效價。將α-突觸核蛋白C1寡聚物、α-突觸核蛋白原纖維或α-突觸核蛋白TP突變型寡聚物於PBS(磷酸鹽緩衝鹽水溶液)中以0.6μg/ml固定於96孔NUNC Maxisorb培養板上，100μl/孔，隨後：用含2% CroteinC之PBS阻斷培養板，200μl/孔；用含0.5% CroteinC之PBS一式兩份連續稀釋液抗血清，100μl/孔；用含0.5% CroteinC之PBS以1：16,000稀釋之HRP結合(辣根過氧化酶結合)之驢抗兔IgG抗體(Jackson Immunoresearch)來偵測，100μl/孔。對於所有步驟，將培養板在37℃下培育一小時。在所有步驟之間，用含0.05% Tween 20之PBS將培養板洗滌三次。藉由添加可溶BM Blue POD基質(Roche Diagnostics GmbH,Mannheim,Germany)，100μl/孔產生信號且藉由添加1M HCl，100μl/孔停止。在450nm下，對照690nm作為參考，讀出吸光度。將效價定義為產生半最大信號之抗血清之稀釋度。
實例3 分離產生抗人類α-突觸核蛋白抗體之B細胞 分離兔周邊血液單核細胞(PBMC)
將三隻兔(描述於實例2中)用作血源。根據製造商之規格，在使用哺乳動物淋巴細胞分離液(lympholyte mammal)(Cedarlane Laboratories,Burlington,Ontario,Canada)密度離心之前，用1× PBS(磷酸鹽緩衝鹽水；PAA，Pasching，Austria)將含有全血之EDTA兩倍稀釋。用1× PBS將PBMC洗滌兩次。
EL-4 B5培養基
RPMI 1640(Pan Biotech,Aidenbach,Germany)補充有10% FCS(Hyclone,Logan,UT,USA)、2mM麩醯胺酸、1%青黴素/鏈黴素溶液(PAA,Pasching,Austria)、2mM丙酮酸鈉、10mM HEPES(PAN Biotech,Aidenbach,Germany)及0.05mM β-巰基乙醇(Gibco,Paisley,Scotland)。
巨噬細胞/單核細胞之耗盡
使用無菌6孔培養板(細胞培養級)使巨噬細胞及單核細胞經由非特異性黏附耗盡。至多用4ml培養基及多至6×106個來自免疫接種兔之PBMC填充各孔且使其在37℃下於培育箱中結合1。將上清液中之細胞(外周血液淋巴細胞(PBL))用於抗原淘選步驟。
塗佈培養板
在4℃下用兩種不同人類α-突觸核蛋白寡聚物(1μg/ml C1寡聚物及1μg/ml TP突變型寡聚物)於碳酸鹽緩衝液(0.1M碳酸氫鈉，34mM碳酸氫二鈉，pH 9.55)中之混合物塗佈無菌細胞培養6孔培養板隔夜。在使用之前將培養板在無菌PBS中洗滌三次。
人類α-突觸核蛋白寡聚物上之B細胞富集
用每4ml培養基多至6×106個PBL接種用人類α-突觸核蛋白寡聚物塗佈之6孔組織培養板且使其在37℃下於培育箱中結合1h。在α-突觸核蛋白寡聚物上之富集步驟之後，藉由用1× PBS將孔仔細洗滌1-2次來移除非黏附細胞。在37℃下於培育箱中藉由胰蛋白酶將剩餘黏性細胞分離10min。用EL-4 B5培養基停止胰蛋白酶作用。將細胞保持在冰上直至免疫螢光染色。
免疫螢光染色及流動式細胞測量術
抗IgG抗體FITC結合物(AbD Serotec,Düsseldorf,Germany)用於單細胞分類。對於表面染色，用含抗IgG抗體FITC結合物之PBS培育來自耗盡及富集步驟之細胞且在4℃在黑暗中培育45min。在染色之後，用冰冷PBS兩倍洗滌PBMC。最後，使PBMC再懸浮於冰冷PBS中且立即經歷FACS分析。在FACS分析之前添加濃度為5μg/ml之碘化丙錠(BD Pharmingen,San Diego,CA,USA)以辨別死細胞及活細胞。
配備有電腦之Becton Dickinson FACSAria及FACSDiva軟體(BD Biosciences,USA)用於單細胞分類。
B細胞培養
藉由與Zubler等人(J.Exp.Med.160(1984)1170-1183)所述類似之方法準備兔B細胞之培養。簡言之，用含有Pansorbin細胞(1：100000)(Calbiochem(Merck),Darmstadt,Deutschland)、5%兔胸腺細胞上清液(批號20100908，內部產生)及γ輻射鼠EL-4-B5胸腺瘤細胞(2.5×104/孔)之200微升/孔EL-4 B5培養基於96孔培養板中在37℃下5% CO2下將單一分類兔B細胞培育7天。移除B細胞培養之上清液以用於篩選。並行地，將剩餘細胞之mRNA立即保存在100μl RLT緩衝液(Qiagen,Hilden,Germany)中且在-80℃下冷凍溶解物。
實例4 測定抗體可變域編碼核酸 V域之PCR擴增及定序
根據製造商之方案使用NucleoSpin 8/96 RNA套組(Macherey&Nagel；目錄號740709.4，740698)製備總RNA。所有步驟均在epMotion 5075液體操作系統(艾本德)上進行。用60μl RNA酶游離水將RNA溶離。使用6μl RNA以根據製造商之說明使用Superscript III First-Strand Synthesis SuperMix(Invitrogen；目錄號18080-400)及寡聚dT-引子藉由逆轉錄酶反應產生cDNA。使用4μl cDNA以用AccuPrime SuperMix(Invitrogen；目錄號12344-040)以50μl之最終體積對於重鏈使用引子rbHCfinal.up(AAGCTTGCCACCATGGAGACTGGGCTGCGCTGGCTTC；SEQ ID NO：42)及rbHCfinal.do(CCATTGGTGAGGGTGCCCGAG；SEQ ID NO：43)，且對於輕鏈使用rbLCfinal.up(AAGCTTGCCACCATGGACAYGAGGGCCCCCACTC；SEQ ID NO：44)及rbLCfinal.do(CAGAGTRCTGCTGAGGTTGTAGGTAC；SEQ ID NO：45)擴增 免疫球蛋白重鏈及輕鏈可變區(VH及VL)。PCR條件如下：在94℃下熱起動5min；在94℃下20s，在70℃下20s，在68℃下45s 35個循環，且在68℃下最終延長7min。
8微升之50μl PCR溶液裝載於48 E-Gel 2%(Invitrogen；目錄號G8008-02)上。根據製造商之方案使用NucleoSpin Extract II套組(Macherey&Nagel；目錄號740609250)清潔陽性PCR反應物且在50μl溶離緩衝液中將其溶離。對於重鏈使用rbHCfinal.up及rbHCfinal.do且對於輕鏈使用rbLCfinal.up及rbLCfinal.do在兩個方向上將12μl之純化PCR產物直接定序。
實例5 將兔抗人類α-突觸核蛋白抗體人類化
可根據標準技術(諸如CDR移植)將兔抗人類α-突觸核蛋白抗體人類化。
實例6 產生重組表現載體 a)使用小鼠IgG1恆定區表現免疫球蛋白重鏈之載體之產生
藉由將編碼各別抗α-突觸核蛋白特異性抗體VH域之DNA片段融合至編碼小鼠IgG1恆定區之序列元件來組裝包含小鼠IgG1恆定區(CH1、鉸鏈、CH2、CH3)及衍生自兔之抗α突觸核蛋白抗體VH域的小鼠IgG1編碼融合基因。
小鼠IgG1恆定區具有以下胺基酸序列： (SEQ ID NO：46)。
表現載體亦包含來自載體pUC18之複寫原點，其允許在大腸桿菌中複寫此質體，及β-內醯胺酶基因，其賦予大腸桿菌中之安比西林抗性。
抗體重鏈之轉錄單元在5'至3'方向上包含以下功能元件：- 包括內含子A之人類巨細胞病毒之即刻早期強化子及啟動子(P-CMV)，- 人類重鏈免疫球蛋白5'未轉譯區(5'UTR)，- 鼠免疫球蛋白重鏈信號序列，- 重鏈可變(VH)域編碼核酸，- 小鼠IgG1恆定區編碼核酸，及- 牛生長激素聚腺苷酸化序列(BGH pA)。
b)使用小鼠Ig-κ恆定區表現免疫球蛋白輕鏈之載體之產生
藉由將編碼各別抗α-突觸核蛋白抗體VL(κ)域之DNA片段融合至編碼小鼠Ig-κ恆定區之序列元件來組裝包含小鼠Ig-κ恆定區(CL-κ)及衍生自兔之抗α突觸核蛋白抗體VL(κ)域之小鼠κ輕鏈編碼融合基因。
小鼠Ig-κ恆定區具有以下胺基酸序列： (SEQ ID NO：47)。
表現載體亦包含來自載體pUC18之複寫原點，其允許在大腸桿菌中複寫此質體，及β-內醯胺酶基因，其賦予大腸桿菌中之安比西林抗性。
抗體κ輕鏈之轉錄單元在5'至3'方向上包含以下功能元件：- 包括內含子A之人類巨細胞病毒之即刻早期強化子及啟動子(P-CMV)， - 人類重鏈免疫球蛋白5'未轉譯區(5'UTR)，- 鼠免疫球蛋白重鏈信號序列，- 輕鏈可變(VL)域編碼核酸，- 小鼠Ig-κ恆定區編碼核酸，及- 牛生長激素聚腺苷酸化序列(BGH pA)。
c)使用小鼠Ig-λ恆定區表現免疫球蛋白輕鏈之載體之產生
藉由將編碼各別抗α-突觸核蛋白抗體VL(λ)域之DNA片段融合至編碼小鼠Ig-λ恆定區之序列元件來組裝包含小鼠Ig-λ恆定區(CL-λ)及衍生自兔之抗α突觸核蛋白抗體VL(λ)域之小鼠λ輕鏈編碼融合基因。
小鼠Ig-λ恆定區具有以下胺基酸序列： (SEQ ID NO：48)。
表現載體亦包含來自載體pUC18之複寫原點，其允許在大腸桿菌中複寫此質體，及β-內醯胺酶基因，其賦予大腸桿菌中之安比西林抗性。
抗體λ輕鏈之轉錄單元在5'至3'方向上包含以下功能元件：- 包括內含子A之人類巨細胞病毒之即刻早期強化子及啟動子(P-CMV)，- 人類重鏈免疫球蛋白5'未轉譯區(5'UTR)，- 鼠免疫球蛋白重鏈信號序列，- 可變輕鏈(VL)域編碼核酸，- 小鼠Ig-λ恆定區編碼核酸，及- 牛生長激素聚腺苷酸化序列(BGH pA)。
d)結合至血腦障壁穿梭模組之表現免疫球蛋白鏈之載體之產生
在編碼IgG重鏈構築體之表現載體之情況下，分子之IgG部分在 基因組組織中，亦即內含子存在於信號肽中、VH及CH1域之間、CH1域及鉸鏈區之間、鉸鏈區及CH2域之間及CH2及CH3域之間。編碼腦穿梭模組之cDNA元件稠合至其(C端/在3'端)。為產生每個完整抗體分子僅帶有一個腦穿梭模組之抗體分子，使用「杵-臼」技術。
臼重鏈包含以下突變：T366W。
杵重鏈包含以下突變：T366S/L368A/Y407V。
視情況可在臼重鏈之殘基354與杵重鏈之殘基349之間引入人工雙硫鍵。另外所需之突變為臼重鏈中之S354C及杵重鏈中之Y349C。
在編碼Ig輕鏈構築體之表現載體之情況下，分子之Ig-κ或Ig-λ部分在基因組組織中，亦即內含子存在於信號肽中及VL及域之間。
除包括將表現之所需基因之表現單元/卡匣以外，基本/標準哺乳動物表現質體含有
i)使用具有「臼」突變之人類IgG1恆定區表現含有穿梭模組之免疫球蛋白重鏈之載體的產生
藉由將編碼各別抗α-突觸核蛋白抗體VH域之DNA片段融合至編碼含有「臼」突變之人類IgG1恆定區之序列元件來組裝包含人類IgG1恆定區(CH1、鉸鏈、CH2、CH3)及衍生自兔之抗α突觸核蛋白抗體VH域之人類IgG1編碼融合基因。構築體在基因組組織中，亦即內含子存在於信號肽中、VH及CH1域之間、CH1域及鉸鏈區之間、鉸鏈區及CH2域之間及CH2及CH3域之間。
人類Ig1恆定區具有以下胺基酸序列： (SEQ ID NO：49)。
人類Ig1臼恆定區具有以下胺基酸序列： (SEQ ID NO：50)。
表現載體亦包含來自載體pUC18之複寫原點，其允許在大腸桿菌中複寫此質體，及β-內醯胺酶基因，其賦予大腸桿菌中之安比西林抗性。
臼抗體重鏈之轉錄單元在5'至3'方向上包含以下功能元件：- 人類巨細胞病毒之即刻早期強化子及啟動子(P-CMV)，- 人類重鏈免疫球蛋白5'未轉譯區(5'UTR)，- 鼠免疫球蛋白重鏈信號序列，- 重鏈可變(VH)域編碼核酸，- 具有「臼」突變之人類IgG1恆定區編碼核酸，- 視情況存在之融合至血腦障壁穿梭模組編碼核酸之GS連接子編碼核酸，及- 牛生長激素聚腺苷酸化序列(BGH pA)。
ii)使用具有「杵」突變之人類IgG1恆定區表現含有穿梭模組之免疫球蛋白重鏈之載體的產生
藉由將編碼各別抗α-突觸核蛋白抗體VH域之DNA片段融合至編碼含有「杵」突變之人類IgG1恆定區之序列元件來組裝包含人類IgG1恆定區(CH1、鉸鏈、CH2、CH3)及衍生自兔之抗α突觸核蛋白抗體VH域之人類IgG1編碼融合基因。構築體在基因組組織中，亦即內含 子存在於信號肽中、VH及CH1域之間、CH1域及鉸鏈區之間、鉸鏈區及CH2域之間及CH2及CH3域之間。
人類Ig1杵恆定區具有以下胺基酸序列： (SEQ ID NO：51)。
表現載體亦包含來自載體pUC18之複寫原點，其允許在大腸桿菌中複寫此質體，及β-內醯胺酶基因，其賦予大腸桿菌中之安比西林抗性。
杵抗體重鏈之轉錄單元在5'至3'方向上包含以下功能元件：- 人類巨細胞病毒之即刻早期強化子及啟動子(P-CMV)，- 人類重鏈免疫球蛋白5'未轉譯區(5'UTR)，- 鼠免疫球蛋白重鏈信號序列，- 重鏈可變(VH)域編碼核酸，- 具有「杵」突變之人類IgG1恆定區編碼核酸，- 視情況存在之融合至血腦障壁穿梭模組編碼核酸之GS連接子編碼核酸，及- 牛生長激素聚腺苷酸化序列(BGH pA)。
iii)使用人類Ig-κ恆定區表現免疫球蛋白κ輕鏈之載體之產生
藉由將編碼各別抗α-突觸核蛋白抗體VL(κ)域之DNA片段融合至編碼人類Ig-κ恆定區之序列元件來組裝包含人類Ig-κ恆定區(CL-κ)及衍生自兔之抗α突觸核蛋白抗體VL(κ)域之人類Ig-κ輕鏈編碼融合基因。構築體在基因組組織中，亦即內含子存在於信號肽中及VL(κ)及 CL-κ域之間。
表現載體亦包含來自載體pUC18之複寫原點，其允許在大腸桿菌中複寫此質體，及β-內醯胺酶基因，其賦予大腸桿菌中之安比西林抗性。
抗體κ輕鏈之轉錄單元在5'至3'方向上包含以下功能元件：- 人類巨細胞病毒之即刻早期強化子及啟動子(P-CMV)，- 人類重鏈免疫球蛋白5'未轉譯區(5'UTR)，- 鼠免疫球蛋白重鏈信號序列，- 輕鏈可變(VL)域編碼核酸，- 人類IgG κ恆定區，- 視情況存在之融合至血腦障壁穿梭模組編碼核酸之GS連接子編碼核酸，及- 牛生長激素聚腺苷酸化序列(BGH pA)。
iv)使用人類Ig-λ恆定區表現免疫球蛋白λ輕鏈之載體之產生
藉由將編碼各別抗α-突觸核蛋白抗體VL(λ)域之DNA片段融合至編碼人類Ig-λ恆定區之序列元件來組裝包含人類Ig-λ恆定區(CL-λ)及衍生自兔之抗α突觸核蛋白抗體VL(λ)域之人類Ig-λ輕鏈編碼融合基因。構築體在基因組組織中，亦即內含子存在於信號肽中及VL(λ)及CL-λ域之間。
表現載體亦包含來自載體pUC18之複寫原點，其允許在大腸桿菌中複寫此質體，及β-內醯胺酶基因，其賦予大腸桿菌中之安比西林抗性。
抗體λ輕鏈之轉錄單元在5'至3'方向上包含以下功能元件：- 人類巨細胞病毒之即刻早期強化子及啟動子(P-CMV)，- 人類重鏈免疫球蛋白5'未轉譯區(5'UTR)，- 鼠免疫球蛋白重鏈信號序列， - 輕鏈可變(VL)域編碼核酸，- 人類IgG λ恆定區，- 視情況存在之融合至血腦障壁穿梭模組編碼核酸之GS連接子編碼核酸，及- 牛生長激素聚腺苷酸化序列(BGH pA)。
實例7 重組產生抗人類α-突觸核蛋白抗體
在F17培養基(Invitrogen Corp.)中培養之短暫轉染HEK293細胞(人類胚腎細胞株293衍生)中產生抗體。為了轉染如實例6中所描述之各別載體，使用「293-Free」轉染試劑(Novagen)。自個別表現質體表現抗體及抗體-血腦障壁穿梭融合體。如製造商之說明中所規定進行轉染。在轉染三天至七天之後，收集含有重組抗體之細胞培養上清液。在低溫(例如-80℃)下儲存上清液直至純化。
關於人類免疫球蛋白在例如HEK293細胞中之重組表現之一般資訊提供於：Meissner,P.等人，Biotechnol.Bioeng.75(2001)197-203中。
實例8 將重組抗人類α-突觸核蛋白抗體純化
將含有抗體之培養上清液過濾且藉由兩個層析步驟純化。
使用用PBS(1mM KH2PO4、10mM Na2HPO4、137mM NaCl、2.7mM KCl)，pH 7.4平衡之HiTrap MabSelectSuRe(GE Healthcare)藉由親和性層析法捕捉抗體。藉由用平衡緩衝液洗滌來移除未結合蛋白質，且用25mM檸檬酸鹽緩衝液(pH 3.1)回收抗體，此緊接在用pH 9.0之1M Tris鹼將溶離調節至pH 6.0之後。
在Superdex 200TM(GE Healthcare)上尺寸排外層析用作第二純化步驟。在20mM組胺酸緩衝液，0.14M NaCl，pH 6.0中進行尺寸排外 層析。用配備有Biomax-SK膜(Millipore,Billerica,MA,USA)之Ultrafree-CL離心過濾器單元將含有抗體之溶液濃縮且在-80℃下儲存。
實例9 使用表面電漿子共振使結合特異性表徵
在所有所述方法中應用BIAcore 2000、3000或T200儀器(GE Healthcare,BIAcore,Uppsala,Sweden)。在25℃下進行所有固定步驟及結合分析。分別在5μl min-1或30μl min-1下進行(若未特別提及)固定及結合分析。
a)結合至固定單株抗體之單體α-突觸核蛋白之表徵
緩衝液：固定緩衝液：10mM Hepes、150mM NaCl、0.05%聚山梨醇酯20(P20)(pH 7.5)
捕捉及結合緩衝液：10mM Hepes，pH 7.5，150mM NaCl、3mM EDTA、0.05% P20
純化單體α-突觸核蛋白-hexaHis與捕捉抗體上之固定單株抗體之結合分析 i)山羊抗小鼠免疫球蛋白IgG(捕捉抗體)之固定
在含有10m M Hepes、150m M NaCl、0.05% P20(pH 7.5)之緩衝液中進行山羊抗小鼠IgG(小鼠抗體捕捉套組；目錄號BR-1008-38； GE Healthcare,Uppsala,Sweden)之固定。在第一步中，藉由使感測器表面與0.2MN-乙基-N-二甲基胺基聚碳化二亞胺(EDC)及0.05M N-羥基丁二醯亞胺(NHS)之溶液接觸七次來使CM5感測器晶片表面之羧基轉化成反應性丁二醯亞胺酯。在活化之後，使感測器表面與10mM乙酸鈉緩衝液(pH 5.0)中之30μg/ml山羊抗小鼠IgG接觸3min。使IgG固定至約3000RU(反應單位)之水準。最後，用乙醇胺(1M，pH 8.5，7min)淬滅表面上之過量活化羧基。
ii)捕捉抗α突觸核蛋白抗體
在固定IgG抗體上捕捉單株抗α突觸核蛋白抗體(操作緩衝液中之100nM溶液)直至達至200-250RU之捕獲抗體之量。感測器晶片之一個通道與固定山羊抗小鼠抗體一起用作參考通道。
iii)單體α-突觸核蛋白與N端六組胺酸標籤之結合實驗
在含有10mM Hepes、150mM NaCl、3mM EDTA、0.05% P20(pH 7.5)之緩衝液中進行結合實驗。在捕捉單株抗α突觸核蛋白抗體之表面上將純化單體α突觸核蛋白-hexaHis滴定多至334nM(5點，稀釋因子2)。在純化單體α-突觸核蛋白-hexaHis之各滴定之後，用10mM甘胺酸-HCl溶液(pH 1.7)之短脈衝自晶片移除α-突觸核蛋白與單株抗-α突觸核蛋白抗體之複合物。其後在晶片表面上捕捉新單株抗-α突觸核蛋白抗體。
b)與經由NTA(氮基三乙酸)晶片上之His標籤固定之單體α-突觸核蛋白結合的單株抗α突觸核蛋白抗體之表徵
緩衝液：固定緩衝液：10mM Hepes、150mM NaCl、0.05% P20，pH 7.5
結合緩衝液：10mM Hepes，pH 7.5，150mM NaCl、3mM EDTA、0.05% P20
i)NTA感測器表面上之純化單體α-突觸核蛋白之固定
在含有10mM Hepes、150mM NaCl、0.05% P20(pH 7.5)之操作緩衝液中進行NTA(氮基三乙酸)感測器表面上之單體α-突觸核蛋白-hexaHis(N端)之固定。首先用0.35M EDTA以5μl/min之流速將NTA感測器表面洗滌三次，每次1min。其後，藉由晶片表面與500μM NiCl2在操作緩衝液中之1min接觸使感測器表面裝載有Ni2+離子且用0.2M EDC及0.05M NHS溶液將其另外活化7min。此外，使操作緩衝液(<0.1μg/ml)中之hexaHis標記之α-突觸核蛋白與感測器表面接觸以獲得低密度表面(多至5 RU)，使得能夠進一步偵測單株抗α突觸核蛋白抗體與α-突觸核蛋白之單價結合。最後，用pH 7.5之1M Tris將活性酯之剩餘基團去活化5min。無固定α-突觸核蛋白之流動通道用作參考通道。
ii)單株抗體與固定α-突觸核蛋白之結合分析
在含有10mM Hepes、150mM NaCl、3mM EDTA、0.05% P20(pH 7.5)之緩衝液中進行結合分析。在100nM之單一濃度下分析單株抗α突觸核蛋白抗體之是/否結合反應或在操作緩衝液中將該等抗體滴定多至100nM之濃度(5濃度之單一注射，稀釋因子為2)以估計對單體α-突觸核蛋白之結合動力及親和力。在監控各濃度之各抗α突觸核蛋白抗體之結合曲線之後，用100mM磷酸之兩個短脈衝(2×1min)再生α-突觸核蛋白表面以洗去細胞結合性抗體且使得能夠監控另一抗體結合。
c)與在L1感測器上之DOPC：DOPS脂質體上固定之單體α-突觸核蛋白結合的單株抗α突觸核蛋白抗體之表徵
緩衝液：固定及結合緩衝液：50mM Hepes、150mM NaCl，pH 7.5
i)製備DOPC：DOPS脂質體
使脂質DOPC：DOPS(1,2-二油醯基-sn-甘油-3-磷酸膽鹼：1,2-二油醯基-sn-甘油-3-二氧磷基-L-絲胺酸)於氯仿中之25mg/ml(7：3(w/w))混合物在具有氬氣流之玻璃燒瓶中在真空罩下蒸發以在燒瓶壁上獲得脂質膜。使脂質膜在Hepes緩衝液(50mM Hepes、150mM NaCl，pH 7.5)中水合以獲得5mM緩衝脂質溶液。用微擠壓機(Avanti Polar Lipids,Alabaster,USA)藉由使脂質溶液通過100nm擠壓機-過濾器15次擠壓脂質溶液以獲得脂質體溶液。藉由動態光散射證明脂質體之品質及尺寸。
ii)DOPC：DOPS脂質體上之純化單體α-突觸核蛋白之固定
在含有50mM Hepes、150mM NaCl(pH 7.5)之緩衝液中進行DOPC：DOPS脂質體上之α-突觸核蛋白-hexaHis(N端標籤)之固定。首先用20mM Chaps之溶液將L1感測器表面之所有流動通道洗滌1min以獲得穩定基線。將藉由擠壓獲得之DOPC：DOPS脂質體在操作緩衝液中稀釋5次且在所有流動通道之感測器表面上裝載以獲得約3000 RU之固定水準。在下一步驟中用0.1mg/ml之BSA(牛血清白蛋白)溶液封閉所有流動通道以降低α-突觸核蛋白在感測器表面上/與感測器表面之非特異性結合。用操作緩衝液將α-突觸核蛋白稀釋至5.0μg/ml之濃度且在所選流動通道上固定於脂質體上至低密度(<30 RU)，使得能夠偵測與α-突觸核蛋白結合之單價抗體。具有固定脂質體但無α-突觸核蛋白之流動通道用作參考通道。
iii)單株抗體與DOPC：DOPS脂質體上之固定α-突觸核蛋白之結合分析
在結合分析中，在100nM之單一濃度下分析各抗體之是/否結合反應或在操作緩衝液中在活性及參考通道上將各抗體滴定多至100nM之濃度(5點，稀釋因子為2)以估計對α-突觸核蛋白之結合動力及親和力。在監控抗體結合之後，用20mM Chaps使感測器表面再生1min且用操作緩衝液平衡以用於隨後固定脂質體。
d)與α-突觸核蛋白預成型原纖維(PFF)結合之單株抗-α突觸核蛋白抗體之表徵
緩衝液：固定緩衝液：10mM Hepes、150mM NaCl、0.05% P20，pH 7.5
結合緩衝液：10mM Hepes,pH 7.5,150mM NaCl,3mM EDTA,0.05% P20
i)NTA感測器表面上之α-突觸核蛋白預成型原纖維之固定
在NTA感測器上在含有10mM Hepes、150mM NaCl、0.05% P20(pH 7.5)之操作緩衝液中進行α-突觸核蛋白PFF(以比率1：10含有N端hexaHis標籤標記之α-突觸核蛋白及未標記之α-突觸核蛋白)之His標籤固定。首先用0.35M EDTA以5μl/min之流速將NTA感測器表面洗滌1min。其後，藉由表面與500μM NiCl2溶液在操作緩衝液中之1min接觸使感測器表面裝載有Ni2+離子且用0.2M EDC及0.05M NHS溶液將其另外活化7min。使操作緩衝液中之α-突觸核蛋白PFF之稀釋溶液與感測器表面接觸以在感測器表面上獲得各種原纖維密度(約20 RU、約200 RU及約2000 RU)。用pH 7.5之1M Tris將活性酯之剩餘游離基團去活化5min。未固定α-突觸核蛋白原纖維之一個流動通道用作參考通道。
ii)單株抗體與固定PFF之結合分析
在所有四個平行通道上100nM(5點，稀釋因子為2)之濃度之滴定實驗中監視各抗α-突觸核蛋白抗體之結合。在監控各抗體之結合曲線之後，用100mM磷酸之短脈衝(2×1min)使α-突觸核蛋白PFF表面再生以洗去細胞結合性抗體。
結果：
如本文中所報導亦如與血腦障壁穿梭模組之融合體之不同α-突觸 核蛋白抗體之結合及如上所述如用SPR測定之某些參考抗體之結合顯示於下表中。
-抗體0070為抗體0017與抗轉鐵蛋白受體之抗體8D3之scFv的血腦障壁穿梭融合體；-抗體0076為抗體0018與抗轉鐵蛋白受體之抗體8D3之scFv的血腦障壁穿梭融合體。
實例10 免疫組織化學分析及細胞毒性分析 PD腦切片之免疫組織化學分析
將人類帕金森病患者腦部之冷凍切片(10μm)用抗體0017、抗體0018或抗體0057(鼠Fc)之5.0μg/ml初級IgG染色且用5.0μg/ml兔抗α-突觸核蛋白抗體(細胞信號傳導；目錄號2628S)對比染色。
作為二級抗體，使用Alexa Fluor 488結合山羊抗小鼠IgG抗體(H+L)(Invitrogen，目錄號A11001)及Alexa Fluor 594結合山羊抗兔IgG抗體(H+L)(高交叉吸附，Invitrogen，目錄號A11037)。
使用63×透鏡1.2NA，1.6×變焦，在1.0AU下之針孔使樣本在LEICA共焦顯微鏡(SP5×)上成像。
在497nm(10% WLL)下激發Alexa 488；在505-571nm(98% HyD)下發射。
在590nm(8% WLL)下激發Alexa 594；在596-680nm(92% HyD)下發射。藉由5×線平均將影像平均。
結果參見圖12。
治療抗體之α突觸核蛋白介導毒性保護之人類神經元細胞(LUHMES)功能細胞模型
如以下詳細描述使LUHMES細胞在384孔培養板中分化5天。在接種24h之後，將在LUHMES分化培養基中生長之SHSY5Y細胞之條件細胞培養上清液以1：1稀釋度添加至培養板以誘發外來體介導之α-突觸核蛋白毒性。對照培養物接受LUHMES分化培養基。待測試之抗體連同在10μg/ml之最終濃度下之條件SHSY5Y培養基一起添加。在額外4天之後藉由CellTiterGlo分析(Promega，目錄號REF G7571)測定細胞活力。活力值展示為CPS計數。
細胞培養方法 塗料、培養基及添加劑：
- 聚-L-鳥胺酸：Sigma-Aldrich，目錄號P-3655-100mg
- 纖維結合蛋白(溶液)：Sigma-Aldrich，目錄號F-1141-5mg
- Advanced DMEM/F-12：Gibco/Invitrogen，目錄號12634-010
- N-2：Gibco/Invitrogen，目錄號17502048或PAA F005-004
- L-麩胺醯胺：Sigma-Aldrich，目錄號G7513
- FGF：R&D Systems，目錄號4114-TC(1mg)
- GDNF：R&D Systems，目錄號212-GD(50μg)
- 四環素：Sigma-Aldrich，目錄號T-7660
- cAMP：Sigma-Aldrich，目錄號D0627
LUHMES培養及分化： 塗料(所有培養板及燒瓶必須為Nunclon)：
將塗料溶液填充至培養板及燒瓶中(T75燒瓶：7ml；T175燒瓶：14ml；96孔Platte：每孔50μl，24孔培養板：每孔250μl，12孔培養板：每孔500μl，6孔培養板：每孔1ml)。將培養板及燒瓶在37℃下培育至少3h(或隔夜)。在培育之後，抽吸塗料溶液。將燒瓶用Milli Q水洗滌兩次。在使用之前將培養板及燒瓶在層流台下乾燥。
增殖培養基：
分化培養基：
繼代培養：
在75cm2燒瓶中在增殖培養基中培養之細胞在其達至80%匯合時分裂。首先用10ml PBS將細胞洗滌兩次。隨後添加4ml ATV胰蛋白酶(在此之前使2ml之2×ATV胰蛋白酶儲備溶液與2ml PBS混合)。將細胞在37℃下培育3min。當分離細胞時，添加無添加劑之21ml Advanced DMEM/F12培養基。使細胞懸浮液在50ml Falcon管中在300×g下離心5min。移除上清液且使細胞再懸浮於5ml無添加劑之Advanced DMEM/F12培養基中。在Neubauer腔室中將細胞計數。
對於繼代培養，細胞在2、3或4天之後分裂。若目標為兩天，則 2×106個細胞(分裂1：5)接種於75cm2燒瓶中。對於3天培養，1×106個細胞(分裂1：10)且對於四天培養，500,000個細胞(分裂1：20)足夠。細胞接種於含有10ml增殖培養基之75cm2燒瓶中。
預分化：
LUHMES細胞之預分化在175cm2燒瓶中進行。因此6×106個細胞接種於20ml增殖培養基中。在24h附著及增殖之後，交換培養基。將增殖培養基置換為分化培養基。在額外48h之後，完成預分化。
細胞接種於多孔培養板中。因此抽吸培養基。用10ml PBS將細胞洗滌兩次。其後添加8ml ATV胰蛋白酶(在此之前使4ml之2×ATV胰蛋白酶儲備溶液與4ml PBS混合)。將細胞在37℃下培育3min至5min。添加42ml無添加劑之Advanced DMEM/F12。使細胞懸浮液在50ml Falcon管中在300×g下離心5min。移除上清液且使細胞再懸浮於10ml分化培養基中。在Neubauer腔室中將細胞計數。
分化：
在經塗佈之細胞培養板中進行進一步分化。
用分化培養基稀釋細胞且用適當體積之分化培養基使其接種於細胞培養板中。在額外72h之後完成分化。關於結果參見圖7及圖9。
實例11 熱穩定性
藉由熱偏移分析使用Sypro Orange作為報導螢光團測定單株抗α-突觸核蛋白抗體(2μM)之變性點(熔點，Tm)。
熔化轉變與Boltzmann S形方程式擬合且將半最大信號幅度下之拐點定義為一半抗體變性之熔化溫度Tm(圖10)。測定在60℃與75℃之 間的Tm值。
實例12 抗原決定基定位
在由JPT Peptide Technologies提供之定製PepStarTM肽微陣列上進行抗原決定基定位。肽序列之長度為15個胺基酸殘基且經設計以覆蓋人類α-突觸核蛋白(UniProt寄存編號：P37840)之全部序列。相鄰肽具有11個胺基酸之重疊序列。額外肽包含具有疾病相關α-突觸核蛋白突變(A30P、A53T、E57K)之已知位點之序列及評估對嚙齒動物α-突觸核蛋白之交叉反應性之序列。此外，將充當初級及二級抗體之反應性及特異性之對照的12種肽/蛋白質點樣。蛋白質為如下：牛血清白蛋白、人類IgG、兔IgG、小鼠IgG、人類τ蛋白、人類α-突觸核蛋白、人類β-突觸核蛋白、人類γ-突觸核蛋白、人類IgM、小鼠IgM、二氧磷基-酪胺酸肽、人類α-三脯胺酸突變突觸核蛋白(A30P、A56P、A76P)。
根據製造商之說明進行抗原決定基定位。
實例13 抗α突觸核蛋白抗體-血腦障壁穿梭模組結合物對α-突觸核蛋白病理學之大量活體內標記 研究設計
用三種不同抗α突觸核蛋白抗體-血腦障壁穿梭模組結合物注射三組15月大Thy1-(A30P)α-突觸核蛋白轉殖基因小鼠(Kahle小鼠；每組n=3)及野生型對照(每組n=1)：
-抗體0070->抗體0017-scFab8D3結合物
-抗體0076->抗體0018-scFab8D3結合物
-參考->12F4-scFab8D3結合物
包括一隻轉殖基因小鼠及一隻野生型小鼠作為未注射對照。研究包涵總共14隻小鼠。
腦組織中之結合mAb-腦穿梭之染色/偵測
用AF555標記之抗huIgG抗體在20μm低溫恆溫腦切片(每隻小鼠4個；丙酮固定，用NGS封閉)上偵測腦中之標靶佔有率。進行共染色：血管(抗足糖萼蛋白，AF647)；DAPI。
結果
腦幹實質：在較大神經炎/α-突觸核蛋白積聚結構至與突觸染色類似之彌漫性點狀染色之間變化。
神經炎病理學(=此小鼠模型中之主要病理學特徵)限於腦幹且在小鼠至小鼠之間變化很大。
整個腦以及在非轉殖基因小鼠中：主要點狀染色；與突觸染色類似。
參見圖11。
實例14 CelluSpots TM 合成及抗原決定基定位
藉由使用Intavis CelluSpotsTM技術製備用於抗體0018之抗原決定 基分析之肽陣列。在此方法中，用自動合成器(Intavis MultiPep RS)在合成之後溶解之改質纖維素圓片上合成肽。隨後將保持共價連接至大分子纖維素之個別肽之溶液點樣至經塗佈之顯微鏡載玻片上。利用9-茀基甲氧基羰基(Fmoc)化學物質在胺基改質纖維素圓片上在384-孔合成培養板中逐步進行CelluSpotsTM合成。在各偶合循環中，用DIC/HOBt於DMF中之溶液活化對應胺基酸。在偶合步驟之間，用乙酸酐、二異丙基乙基胺及1-羥基苯并三唑將未反應(亦即游離)胺基封端。在完成合成之後，將纖維素圓片轉移至96孔培養板且用三氟乙酸(TFA)、二氯甲烷、三異丙基矽烷(TIS)及水之混合物處理以用於側鏈去除保護基。在移除裂解溶液之後，用TFA、TFMSA(三氟乙磺酸)、TIS及水之混合物溶解纖維素結合肽，用二異丙醚使其沈澱且使其再懸浮於DMSO中。隨後使用Intavis載玻片點樣機器人將此等肽溶液點樣至Intavis CelluSpotsTM載玻片上。
對於抗原決定基分析，用乙醇且其後用TBS(TRIS-緩衝鹽水溶液；50mM Tris、137mM NaCl、2.7mM KCl，pH 8)洗滌製備之載玻片，隨後用5mL 10×西方阻斷試劑(Roche Diagnostics GmbH,Mannheim,Germany)、TBS中之2.5g蔗糖、0.1% Tween-20在4℃下進行阻斷步驟16小時。在用TBS-T(TBS+0.1% Tween-20)洗滌之後，用抗體0018於包含0.1% Tween-20之TBS中之溶液(1μg/mL)在環境溫度下培育載玻片2小時。在洗滌之後，用結合至辣根過氧化酶(HRP)(TBS-T中1：20000)之抗小鼠或抗兔二級抗體培育載玻片以用於偵測，隨後用DAB(3,3'-二胺基聯苯胺)基質/過氧化物緩衝液(Roche Diagnostics GmbH,Mannheim,Germany)培育。將ELISA陽性SPOT定量且經由分配對應肽序列鑑別抗體結合抗原決定基。
雖然上文已出於清楚理解之目的藉助於說明及實例略為詳細地描述本發明，但不應將該等描述及實例解釋為限制本發明之範疇。本 文中引用之所有專利及科學文獻之揭示內容係以全文引用的方式明確併入本文中。
<110> 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司
<120> 抗α-突觸核蛋白抗體及使用方法
<130> Case P31869
<150> EP13193892.0
<151> 2013-11-21
<160> 58
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類α-突觸核蛋白片段
<400> 1
<210> 2
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 2
<210> 3
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 3
<210> 4
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
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<210> 5
<211> 6
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<213> 人工序列
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<223> CDRL1
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<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
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<210> 7
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 7
<210> 8
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 8
<210> 9
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
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<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> CDRL1
<400> 10
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<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 11
<210> 12
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 12
<210> 13
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈可變域
<400> 13
<210> 14
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈可變域
<400> 14
<210> 15
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 15
<210> 16
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 16
<210> 17
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 17
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<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
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<223> CDRL1
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<211> 6
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<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 19
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<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 20
<210> 21
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 21
<210> 22
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 22
<210> 23
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 23
<210> 24
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 24
<210> 25
<211> 12
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 25
<210> 26
<211> 119
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈可變域
<400> 26
<210> 27
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈可變域
<400> 27
<210> 28
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH1
<400> 28
<210> 29
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 29
<210> 30
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH3
<400> 30
<210> 31
<211> 6
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 31
<210> 32
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 32
<210> 33
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 33
<210> 34
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRH2
<400> 34
<210> 35
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL1
<400> 35
<210> 36
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL2
<400> 36
<210> 37
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> CDRL3
<400> 37
<210> 38
<211> 111
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 重鏈可變域
<400> 38
<210> 39
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 輕鏈可變域
<400> 39
<210> 40
<211> 140
<212> PRT
<213> 智人
<400> 40
<210> 41
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 連接子肽
<400> 41
<210> 42
<211> 37
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> rbHCfinal.up
<400> 42
<210> 43
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> rbHCfinal.do
<400> 43
<210> 44
<211> 34
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> rbLCfinal.up
<400> 44
<210> 45
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> rbLCfinal.do
<400> 45
<210> 46
<211> 324
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 46
<210> 47
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 47
<210> 48
<211> 106
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 48
<210> 49
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人
<400> 49
<210> 50
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類Ig1臼恆定區
<400> 50
<210> 51
<211> 330
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類Ig1杵恆定區
<400> 51
<210> 52
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類轉鐵蛋白受體片段
<400> 52
<210> 53
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類轉鐵蛋白受體片段
<400> 53
<210> 54
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人類轉鐵蛋白受體片段
<400> 54
<210> 55
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 肽連接子
<400> 55
<210> 56
<211> 118
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 56
<210> 57
<211> 107
<212> PRT
<213> 小家鼠
<400> 57
<210> 58
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> SEQ ID NO：57之L104V及L106I變異體
<400> 58

Claims (24)

  1. 一種特異性結合至人類α-突觸核蛋白之抗體，其中該人類α-突觸核蛋白具有游離N端甲硫胺酸殘基。
  2. 如請求項1之抗體，其中該抗體特異性結合至人類及小鼠α-突觸核蛋白，其中該人類及小鼠α-突觸核蛋白具有游離N端甲硫胺酸殘基。
  3. 如請求項1或2之抗體，其中該α-突觸核蛋白為單體及/或寡聚α-突觸核蛋白。
  4. 如請求項1或2之抗體，其中該抗體與在重鏈中包含SEQ ID NO：15至17之HVR且在輕鏈中包含SEQ ID NO：18至20之HVR之抗體結合至相同的抗原決定基。
  5. 如請求項1或2之抗體，其中該抗體與包含SEQ ID NO：26之重鏈可變域及SEQ ID NO：27之輕鏈可變域之抗體結合至相同的抗原決定基。
  6. 如請求項1或2之抗體，其中該抗體在重鏈中包含該等SEQ ID NO：15至17之HVR且在輕鏈中包含該等SEQ ID NO：18至20之HVR。
  7. 如請求項1或2之抗體，其中該抗體已藉由將包含SEQ ID NO：26之重鏈可變域及SEQ ID NO：27之輕鏈可變域之抗體人類化獲得。
  8. 如請求項1或2之抗體，其中該抗體為人類化抗體且在該重鏈可變域中包含該等SEQ ID NO：15至17之HVR且在該輕鏈可變域中包含該等SEQ ID NO：18至20之HVR，其中在各HVR中，0至3個胺基酸殘基已發生改變。
  9. 如請求項1或2之抗體，其中該抗體為人類化抗體且該重鏈可變 域衍生自SEQ ID NO：26之重鏈可變域且該輕鏈可變域衍生自SEQ ID NO：27之輕鏈可變域。
  10. 一種抗體，其與在重鏈中包含SEQ ID NO：15至17之HVR且在輕鏈中包含SEQ ID NO：18至20之HVR之抗體結合至相同的抗原決定基。
  11. 一種抗體，其在重鏈中包含SEQ ID NO：15至17之HVR且在輕鏈中包含SEQ ID NO：18至20之HVR。
  12. 一種抗體，其已自包含SEQ ID NO：26之重鏈可變域及SEQ ID NO：27之輕鏈可變域之抗體獲得。
  13. 一種人類化抗體，其在重鏈可變域中包含SEQ ID NO：15至17之HVR且在輕鏈可變域中包含SEQ ID NO：18至20之HVR，其中在各HVR中，0至3個胺基酸殘基已發生改變。
  14. 一種人類化抗體，其中重鏈可變域衍生自SEQ ID NO：26之重鏈可變域且輕鏈可變域衍生自SEQ ID NO：27之輕鏈可變域。
  15. 如請求項1、2及10至14中任一項之抗體，其中該抗體係共軛至血腦障壁穿梭模組。
  16. 如請求項15之抗體，其中該血腦障壁穿梭模組為特異性結合至LRP1、LRP8、人類轉鐵蛋白受體或類人類胰島素生長因子受體之抗體或抗體片段。
  17. 如請求項1、2及10至14中任一項之抗體，其中該抗體為a)人類子類IgG1之全長抗體，或b)人類子類IgG4之全長抗體，或c)具有突變L234A、L235A及P329G之人類子類IgG1之全長抗體，d)具有突變S228P、L235E及P329G之人類子類IgG4之全長抗體， e)在兩條重鏈中均具有突變L234A、L235A及P329G及在一條重鏈中具有突變T366W及S354C而在各別另一重鏈中具有突變T366S、L368A、Y407V及Y349C之人類子類IgG1之全長抗體，f)在兩條重鏈中均具有突變S228P、L235E及P329G及在一條重鏈中具有突變T366W及S354C而在各別另一重鏈中具有突變T366S、L368A、Y407V及Y349C之人類子類IgG4之全長抗體。
  18. 如請求項1、2及10至14中任一項之抗體，其中該抗體i)抑制人類神經元及神經膠質細胞中之α-突觸核蛋白誘導之細胞毒性，及/或ii)抑制寡聚人類α-突觸核蛋白在神經元與神經膠質細胞之間的細胞間傳輸，及/或iii)降低人類神經元細胞中之α-突觸核蛋白誘導之卡斯蛋白酶(caspase)活性，及/或iv)特異性結合至具有游離N端甲硫胺酸殘基之α-突觸核蛋白且不會特異性結合至具有經修飾之N端甲硫胺酸殘基之α-突觸核蛋白。
  19. 一種醫藥調配物，其包含如請求項1至18中任一項之抗體及醫藥學上可接受之載劑。
  20. 如請求項1、2及10至14中任一項之抗體，其用作藥物。
  21. 如請求項1、2及10至14中任一項之抗體，其用於治療突觸核蛋白病。
  22. 如請求項1、2及10至14中任一項之抗體，其用於治療帕金森氏病(Parkinson's disease)。
  23. 一種如請求項1、2及10至14中任一項之抗體之用途，其用於製造藥物。
  24. 如請求項23之用途，其中該藥物用於治療帕金森氏病。
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Families Citing this family (29)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP6590837B2 (ja) * 2014-02-14 2019-10-16 ルール−ウニベルシタット ボーフム 立体構造および二次構造解析のためのバイオセンサー
EP4074730A1 (en) 2015-06-24 2022-10-19 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-transferrin receptor antibodies with tailored affinity
JP6619460B2 (ja) * 2015-06-24 2019-12-11 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ ヒト化抗タウ（ｐＳ４２２）抗体及び使用法
GB201512203D0 (en) * 2015-07-13 2015-08-19 Lundbeck & Co As H Agents,uses and methods
GB2541003A (en) * 2015-08-05 2017-02-08 Kran Life Sciences Llp Neurodegenerative disorders
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
AR106230A1 (es) 2015-10-02 2017-12-27 Hoffmann La Roche Anticuerpos biespecíficos contra el cd20 humano y el receptor de transferrina humano y métodos de uso
MX2018014456A (es) * 2016-06-02 2019-08-12 Medimmune Ltd Anticuerpos contra alfa-sinucleina y sus usos.
BR112018014281A2 (pt) 2016-11-15 2018-12-18 H Lundbeck As agentes, usos e métodos para o tratamento da sinucleinopatia
EP3324186B1 (en) 2016-11-21 2020-09-16 Ruhr-Universität Bochum Method for the preselection of drugs for protein misfolding diseases
US11325968B2 (en) 2016-12-16 2022-05-10 H. Lundbeck A/S Alpha-synuclein antibodies
US10364286B2 (en) 2016-12-22 2019-07-30 H. Lundbeck A/S Monoclonal anti-alpha-synuclein antibodies for preventing tau aggregation
US12049493B2 (en) 2017-01-06 2024-07-30 Abl Bio Inc. Anti-alpha-synuclein antibodies and uses thereof
CN110506057B (zh) 2017-02-17 2023-09-29 百时美施贵宝公司 Alpha突触核蛋白抗体及其应用
IL268660B2 (en) 2017-02-17 2024-03-01 Denali Therapeutics Inc Polypeptides that bind to a transgenic transferrin receptor, polynucleotides encoding them, methods for their preparation and use
WO2018204352A1 (en) * 2017-05-01 2018-11-08 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Monoclonal antibodies against alpha-synuclein fibrils
DE102017010455A1 (de) * 2017-06-13 2018-12-13 Forschungszentrum Jülich GmbH Verfahren zum Nachweis von Aggregaten biotherapeutischer Substanzen in einer Probe
WO2018237338A1 (en) * 2017-06-23 2018-12-27 Denali Therapeutics Inc. ANTI-ALPHA-SYNCUCIN ANTIBODIES AND METHODS OF USE
EP3672635A4 (en) 2017-08-23 2021-05-12 The Trustees of The University of Pennsylvania MONOCLONAL ANTIBODIES AGAINST PATHOLOGICAL ALPHA-SYNUCLEIN, AND METHODS USING THEM
BR112020011875A2 (pt) 2017-12-14 2020-11-24 Abl Bio Inc. anticorpo biespecífico ao a-syn/igf1r e uso do mesmo
GB201720970D0 (en) 2017-12-15 2018-01-31 Ucb Biopharma Sprl Antibodies
GB201720975D0 (en) 2017-12-15 2018-01-31 Ucb Biopharma Sprl Anti-alpha synuclein antibodies
JP2021513560A (ja) * 2018-02-12 2021-05-27 ザ スクリップス リサーチ インスティテュートＴｈｅ Ｓｃｒｉｐｐｓ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ パーキンソン病およびシヌクレイノパチーに関連する方法
AU2019318195A1 (en) * 2018-08-09 2021-03-04 F. Hoffmann-La Roche Ag Determination of parkinson's disease
MX2021004454A (es) * 2018-10-19 2021-07-07 Janssen Vaccines & Prevention Bv Anticuerpos anti-sinucleina.
US11542322B2 (en) 2019-02-13 2023-01-03 Iowa State University Research Foundation, Inc. Nano-theranostics for Parkinson's disease
US20230151117A1 (en) * 2020-04-10 2023-05-18 2Seventy Bio, Inc. Frb antibodies
KR20230005172A (ko) 2020-04-24 2023-01-09 에프. 호프만-라 로슈 아게 설프히드릴 화합물 및 이의 유도체를 사용한 효소 및 경로 조절
CN115667281A (zh) 2020-07-29 2023-01-31 国立大学法人东北大学 用于预防或治疗共核蛋白病的肽

Family Cites Families (118)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4737456A (en) 1985-05-09 1988-04-12 Syntex (U.S.A.) Inc. Reducing interference in ligand-receptor binding assays
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US6548640B1 (en) 1986-03-27 2003-04-15 Btg International Limited Altered antibodies
IL85035A0 (en) 1987-01-08 1988-06-30 Int Genetic Eng Polynucleotide molecule,a chimeric antibody with specificity for human b cell surface antigen,a process for the preparation and methods utilizing the same
EP0307434B2 (en) 1987-03-18 1998-07-29 Scotgen Biopharmaceuticals, Inc. Altered antibodies
AU634186B2 (en) 1988-11-11 1993-02-18 Medical Research Council Single domain ligands, receptors comprising said ligands, methods for their production, and use of said ligands and receptors
DE3920358A1 (de) 1989-06-22 1991-01-17 Behringwerke Ag Bispezifische und oligospezifische, mono- und oligovalente antikoerperkonstrukte, ihre herstellung und verwendung
US5959177A (en) 1989-10-27 1999-09-28 The Scripps Research Institute Transgenic plants expressing assembled secretory antibodies
US6150584A (en) 1990-01-12 2000-11-21 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US6075181A (en) 1990-01-12 2000-06-13 Abgenix, Inc. Human antibodies derived from immunized xenomice
US5770429A (en) 1990-08-29 1998-06-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
DE69129154T2 (de) 1990-12-03 1998-08-20 Genentech, Inc., South San Francisco, Calif. Verfahren zur anreicherung von proteinvarianten mit geänderten bindungseigenschaften
US5571894A (en) 1991-02-05 1996-11-05 Ciba-Geigy Corporation Recombinant antibodies specific for a growth factor receptor
EP0590058B1 (en) 1991-06-14 2003-11-26 Genentech, Inc. HUMANIZED Heregulin ANTIBODy
GB9114948D0 (en) 1991-07-11 1991-08-28 Pfizer Ltd Process for preparing sertraline intermediates
EP0861893A3 (en) 1991-09-19 1999-11-10 Genentech, Inc. High level expression of immunoglobulin polypeptides
US5587458A (en) 1991-10-07 1996-12-24 Aronex Pharmaceuticals, Inc. Anti-erbB-2 antibodies, combinations thereof, and therapeutic and diagnostic uses thereof
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
EP1997894B1 (en) 1992-02-06 2011-03-30 Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. Biosynthetic binding protein for cancer marker
WO1994029351A2 (en) 1993-06-16 1994-12-22 Celltech Limited Antibodies
US5789199A (en) 1994-11-03 1998-08-04 Genentech, Inc. Process for bacterial production of polypeptides
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US5840523A (en) 1995-03-01 1998-11-24 Genetech, Inc. Methods and compositions for secretion of heterologous polypeptides
US5869046A (en) 1995-04-14 1999-02-09 Genentech, Inc. Altered polypeptides with increased half-life
US6267958B1 (en) 1995-07-27 2001-07-31 Genentech, Inc. Protein formulation
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US6171586B1 (en) 1997-06-13 2001-01-09 Genentech, Inc. Antibody formulation
ES2244066T3 (es) 1997-06-24 2005-12-01 Genentech, Inc. Procedimiento y composiciones de glicoproteinas galactosiladas.
US6040498A (en) 1998-08-11 2000-03-21 North Caroline State University Genetically engineered duckweed
DE69840412D1 (de) 1997-10-31 2009-02-12 Genentech Inc Methoden und zusammensetzungen bestehend aus glykoprotein-glykoformen
US6610833B1 (en) 1997-11-24 2003-08-26 The Institute For Human Genetics And Biochemistry Monoclonal human natural antibodies
PT1034298E (pt) 1997-12-05 2012-02-03 Scripps Research Inst Humanização de anticorpo murino
ATE375365T1 (de) 1998-04-02 2007-10-15 Genentech Inc Antikörper varianten und fragmente davon
US6194551B1 (en) 1998-04-02 2001-02-27 Genentech, Inc. Polypeptide variants
DE69942021D1 (de) 1998-04-20 2010-04-01 Glycart Biotechnology Ag Glykosylierungs-engineering von antikörpern zur verbesserung der antikörperabhängigen zellvermittelten zytotoxizität
KR20060067983A (ko) 1999-01-15 2006-06-20 제넨테크, 인크. 효과기 기능이 변화된 폴리펩티드 변이체
US6737056B1 (en) 1999-01-15 2004-05-18 Genentech, Inc. Polypeptide variants with altered effector function
DK2270147T4 (da) 1999-04-09 2020-08-31 Kyowa Kirin Co Ltd Fremgangsmåde til at kontrollere aktiviteten af immunologisk funktionelt molekyle
US7125978B1 (en) 1999-10-04 2006-10-24 Medicago Inc. Promoter for regulating expression of foreign genes
AU782626B2 (en) 1999-10-04 2005-08-18 Medicago Inc. Method for regulating transcription of foreign genes
JP4668498B2 (ja) 1999-10-19 2011-04-13 協和発酵キリン株式会社 ポリペプチドの製造方法
EP1240319A1 (en) 1999-12-15 2002-09-18 Genentech, Inc. Shotgun scanning, a combinatorial method for mapping functional protein epitopes
WO2001077342A1 (en) 2000-04-11 2001-10-18 Genentech, Inc. Multivalent antibodies and uses therefor
EP3263702A1 (en) 2000-10-06 2018-01-03 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Cells producing antibody compositions
US7064191B2 (en) 2000-10-06 2006-06-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Process for purifying antibody
US6946292B2 (en) 2000-10-06 2005-09-20 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells producing antibody compositions with increased antibody dependent cytotoxic activity
US6596541B2 (en) 2000-10-31 2003-07-22 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods of modifying eukaryotic cells
ES2405944T3 (es) 2000-11-30 2013-06-04 Medarex, Inc. Ácidos nucleicos que codifican las secuencias de inmunoglobulina humana reorganizadas a partir de ratones transcromoscómicos transgénicos zadas
KR20100018071A (ko) 2001-08-03 2010-02-16 글리카트 바이오테크놀로지 아게 항체 의존적 세포 독성이 증가된 항체 글리코실화 변이체
EP1443961B1 (en) 2001-10-25 2009-05-06 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
AU2003236015A1 (en) 2002-04-09 2003-10-20 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing antibody composition
CA2481657A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Cells of which genome is modified
CA2481925A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Therapeutic agent for patients having human fc.gamma.riiia
US7749753B2 (en) 2002-04-09 2010-07-06 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd Cells in which activity of the protein involved in transportation of GDP-fucose is reduced or lost
CA2481920A1 (en) 2002-04-09 2003-10-16 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Antibody composition-containing medicament
JPWO2003085119A1 (ja) 2002-04-09 2005-08-11 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物のＦｃγ受容体ＩＩＩａに対する結合活性を高める方法
NZ556507A (en) 2002-06-03 2010-03-26 Genentech Inc Synthetic antibody phage libraries
US7361740B2 (en) 2002-10-15 2008-04-22 Pdl Biopharma, Inc. Alteration of FcRn binding affinities or serum half-lives of antibodies by mutagenesis
US9034337B2 (en) * 2003-10-31 2015-05-19 Prothena Biosciences Limited Treatment and delay of outset of synucleinopathic and amyloidogenic disease
DE60332957D1 (de) 2002-12-16 2010-07-22 Genentech Inc Immunoglobulinvarianten und deren verwendungen
US20050079574A1 (en) 2003-01-16 2005-04-14 Genentech, Inc. Synthetic antibody phage libraries
US7871607B2 (en) 2003-03-05 2011-01-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminoglycanases
US20060104968A1 (en) 2003-03-05 2006-05-18 Halozyme, Inc. Soluble glycosaminoglycanases and methods of preparing and using soluble glycosaminogly ycanases
EP1688439A4 (en) 2003-10-08 2007-12-19 Kyowa Hakko Kogyo Kk HYBRID PROTEIN COMPOSITION
AU2004280065A1 (en) 2003-10-09 2005-04-21 Kyowa Hakko Kirin Co., Ltd. Process for producing antibody composition by using RNA inhibiting the function of alpha1,6-fucosyltransferase
NO346533B1 (no) 2003-11-05 2022-09-26 Roche Glycart Ag Antigenbindingsmolekyler med økt Fc-reseptorbindingsaffinitet og effektorfunksjon.
US7674599B2 (en) * 2003-11-08 2010-03-09 Elan Pharmaceuticals, Inc. Methods of using antibodies to detect alpha-synuclein in fluid samples
JPWO2005053742A1 (ja) 2003-12-04 2007-06-28 協和醗酵工業株式会社 抗体組成物を含有する医薬
RU2386638C2 (ru) 2004-03-31 2010-04-20 Дженентек, Инк. Гуманизированные анти-тфр-бета-антитела
US7785903B2 (en) 2004-04-09 2010-08-31 Genentech, Inc. Variable domain library and uses
NZ549872A (en) 2004-04-13 2009-09-25 Hoffmann La Roche Anti-P-selectin antibodies
ZA200701531B (en) * 2004-08-09 2009-03-25 Elan Pharm Inc Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease
MX2007001679A (es) * 2004-08-09 2007-05-23 Elan Pharm Inc Prevencion y tratamiento de la enfermedad sinucleinopatica y amiloidogenica.
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
AU2005286607B2 (en) 2004-09-23 2011-01-27 Genentech, Inc. Cysteine engineered antibodies and conjugates
JO3000B1 (ar) 2004-10-20 2016-09-05 Genentech Inc مركبات أجسام مضادة .
US20080300204A1 (en) * 2005-07-19 2008-12-04 University Of Rochester Alpha-Synuclein Antibodies and Methods Related Thereto
WO2007021255A1 (en) * 2005-08-09 2007-02-22 Elan Pharmaceuticals, Inc. Antibodies to alpha-synuclein
EP1957531B1 (en) 2005-11-07 2016-04-13 Genentech, Inc. Binding polypeptides with diversified and consensus vh/vl hypervariable sequences
WO2007064919A2 (en) 2005-12-02 2007-06-07 Genentech, Inc. Binding polypeptides with restricted diversity sequences
GB0602992D0 (en) * 2006-02-15 2006-03-29 Morvus Technology Ltd Methods, genes and proteins
MY169492A (en) * 2006-03-23 2019-04-15 Bioarctic Neuroscience Ab Improved protofibril selective antibodies and the use thereof
TW200812616A (en) 2006-05-09 2008-03-16 Genentech Inc Binding polypeptides with optimized scaffolds
HUE029027T2 (en) * 2006-08-07 2017-01-30 Abbvie Biotherapeutics Inc Procedures for Multiple Myeloma Treatment Using HuLuc63 and Bortezomib Combination Therapies
WO2008022349A2 (en) 2006-08-18 2008-02-21 Armagen Technologies, Inc. Agents for blood-brain barrier delivery
WO2008027236A2 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
US20080226635A1 (en) 2006-12-22 2008-09-18 Hans Koll Antibodies against insulin-like growth factor I receptor and uses thereof
PT2436696T (pt) 2007-01-05 2017-08-21 Univ Zuerich Anticorpo anti-beta-amiloide e usos do mesmo
US8147833B2 (en) * 2007-02-23 2012-04-03 Neotope Biosciences Limited Prevention and treatment of synucleinopathic and amyloidogenic disease
JP5558834B2 (ja) * 2007-02-23 2014-07-23 ヤンセン アルツハイマー イミュノセラピー シヌクレイノパチーおよびアミロイド形成疾患（ａｍｙｌｏｉｄｏｇｅｎｉｃｄｉｓｅａｓｅ）の予防および処置
WO2008144591A2 (en) * 2007-05-16 2008-11-27 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Treatment of synucleinopathies
CN100592373C (zh) 2007-05-25 2010-02-24 群康科技(深圳)有限公司 液晶显示面板驱动装置及其驱动方法
US8242247B2 (en) 2007-12-21 2012-08-14 Hoffmann-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US9266967B2 (en) 2007-12-21 2016-02-23 Hoffmann-La Roche, Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US8227577B2 (en) 2007-12-21 2012-07-24 Hoffman-La Roche Inc. Bivalent, bispecific antibodies
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
DK2235064T3 (en) 2008-01-07 2016-01-11 Amgen Inc A process for the preparation of heterodimeric Fc molecules using electrostatic control effects
AT506535B1 (de) * 2008-02-22 2010-04-15 Affiris Forschungs & Entwicklungs Gmbh Vaccine enthaltend alpha-synuclein-mimotope auf basis von peptiden
CA2746778C (en) 2008-12-19 2019-04-23 University Of Zurich Human anti-alpha-synuclein autoantibodies
KR101431318B1 (ko) 2009-04-02 2014-08-20 로슈 글리카트 아게 전장 항체 및 단일쇄 ｆａｂ 단편을 포함하는 다중특이성 항체
EP2417160A1 (en) * 2009-04-07 2012-02-15 Roche Glycart AG Bispecific anti-erbb-1/anti-c-met antibodies
US20100256340A1 (en) 2009-04-07 2010-10-07 Ulrich Brinkmann Trivalent, bispecific antibodies
AU2010252284A1 (en) 2009-05-27 2011-11-17 F. Hoffmann-La Roche Ag Tri- or tetraspecific antibodies
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
US8703132B2 (en) 2009-06-18 2014-04-22 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific, tetravalent antigen binding proteins
AT508638B1 (de) 2009-08-21 2011-08-15 Affiris Ag Verwendung von peptiden und polypeptiden zur behandlung und/oder prävention von synukleinopathien
AU2010315133B2 (en) * 2009-11-04 2015-09-10 Novartis Ag Positively charged species as binding reagents in the separation of protein aggregates from monomers
CN110655573B (zh) 2010-02-26 2023-07-18 生命北极神经科学公司 原细纤维结合抗体及其治疗和诊断帕金森氏症、路易体痴呆和其他α-共核蛋白病的应用
WO2012061789A2 (en) * 2010-11-05 2012-05-10 Brandeis University Tetrameric alpha-synuclein and use thereof
KR102188544B1 (ko) * 2010-11-30 2020-12-08 제넨테크, 인크. 저친화도 혈액-뇌 장벽 수용체 항체 및 그의 용도
CA2828662A1 (en) * 2011-04-20 2012-10-26 Roche Glycart Ag Method and constructs for the ph dependent passage of the blood-brain-barrier
EP2701743A4 (en) * 2011-04-27 2015-08-19 Univ Northwestern SELECTIVE ANTIBODIES FOR TAU PATHOLOGICAL DIMERS AND PRE-FIBRILLARY TAU PATHOLOGICAL OLIGOMERS AND THEIR USE IN THE TREATMENT, DIAGNOSIS AND MONITORING OF TAUOPATHIES
IN2014DN07149A (zh) * 2012-01-27 2015-04-24 Neotope Biosciences Ltd
KR101885044B1 (ko) * 2012-08-29 2018-08-02 에프. 호프만-라 로슈 아게 혈액 뇌 장벽 셔틀
BR112016008993B1 (pt) 2013-10-25 2021-08-31 Nch Corporation Composição probiótica para tratar animais, plantas, ou camas para animais, sistema para administrar uma composição probiótica, e, método para aumentar populações bacterianas benéficas nos tratos gastrointestinais de animais
EP3960768A1 (en) * 2014-01-03 2022-03-02 F. Hoffmann-La Roche AG Bispecific anti-hapten/anti-blood brain barrier receptor antibodies, complexes thereof and their use as blood brain barrier shuttles

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