TW201036949A - Treatment of dyskinesia related disorders - Google Patents

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201036949 六、發明說明： 【發明所屬之技術領域】 本發明之數個方面係關於治療帕金森氏症（Parkins〇n,s disease)、同時保持低運動困難誘發特徵的方法及逆轉運動 困難之方法，#包含投予治療有效量之本文所揭示之化合 物。本發明另外係關於此等化合物用於製備供治療以上者 或其他運動失調（諸如亨廷頓氏舞蹈病（Huntington chorea))之醫藥品的用途及此等化合物之醫藥組成物。

L尤刖技術J 使用多巴胺替代劑對症治療帕金森氏症（pD )勿庸置 疑=功提高患者之生活品質。已使用多年且仍為治療pD 之最高準則的L-D0PA可緩解以運動減緩（運動徐緩）、強 直及/或震顫為特徵的PD運動症狀。顯然，L_D〇pA充當前 =’其生物代謝成多巴胺（DA)eDA又活化腦中之多巴胺 文體，該等多巴胺受體分成兩類：m及D2受體。〇ι受體 可分為〇!及〇5受體，而D2受體可八為n 又篮Γ刀為Da、D3及d4受體。 然而’多巴胺補充療法具有偈限性，尤其在長期治療之後。 對!劑量有反應的持續週期多年來逐漸縮短，且患者 對藥物之反應週期因一李列 , '糸列m作用之出現而變得複雜。 副作用可表現為運動困難 、土— 勒田難’其可見於患者進行多巴胺

補充療法時或甚至當患者中A 中止/口療時。運動困難為異常不 自主運動失调。異常運動 臂M. ir 現為舞蹈病（可影響面部、 ’、腿或軀幹之不自主、快 迷不規則、痙攣性運動）、顫 3 201036949 搐（類似於舞蹈病但性質更劇烈且有力的不自主運動）、緊 張不全（持續肌肉收縮，其通常產生扭動及反覆性運動或 異常姿態或姿勢）及/或趾（指）徐動症（反覆性不自主、 緩慢、彎曲、扭曲運動，尤其手部嚴重）。 罹患PD之患者可能在「服藥」期（此期間併發運動困 難）與「停藥」期（此期間該等患者呈現嚴重帕金森氏症） 之間周而復始。因此，該等患者可能會罹患重度失能，但 L-DOPA在整個病程中仍為有效的抗帕金森氏症藥劑 (Obeso 等人，2〇〇〇, 55, S13_23)。多巴胺促效劑 (諸如溪麥角環肽（br〇m〇criptine )、麥角乙脲（）、 普拉克索（pramipexole)、羅匹尼洛（r〇pinir〇le)及培高利 特（pergolide))的有效性不如l-DOPA，尤其在中度至重 度PD中。然而，其副作用特徵不同於l_d〇pa。值得注意 的是’雖然DA促效劑引起的運動困難比l-DOPA小，但此 對於患有運動困難之PD患者的價值有限，因為該等患者多 數患有中度至重度PD，因此其需要l-DOPA之功效。 運動困難及基底神經節功能障礙所引起之其他運動失 調具有較大的社會經濟重要性。已進行諸多嘗試來開發預 防及/或治療運動困難之藥劑，但此等嘗試遇到有限之成 功。因此’需要提供治療運動困難之新穎藥劑。 大鼠中帕金森氏症候群（parkinsonism )之6-經基多巴 胺（6-OHDA)損害模型為在臨床前層面研究pD及評估新 淨頁治療方案提供寶貴工真（Schwarting及Huston, Prog. 1996, 50, 275-33 1 )。使用最廣泛之 6-OHDA 範例 201036949 之一為評估多巴胺激導性黑質紋狀體路徑不連續退化的大 鼠的旋轉行為（Ungerstedt 及 Aburthnott，及以· 1970, 24，485 )。在此模型中，將6-0HDA單侧輸注於黑質紋狀體 路徑、紋狀體或内側前腦束（MFB )中，從而在多巴胺激 導性黑質紋狀體系統之間引起功能失調。投予直接刺激多 巴胺受體之藥物（諸如多巴胺代謝前驅物L-D0PA及多巴胺 促效劑變嗎啡驗（apomorphine ))產生遠離輸注6-0HDA之 體側的旋轉行為。 〇 除與運動有關缺陷外，可使用6-OHD A模型重現pd之 其他特徵。已在紋狀體中或MFB中注射6-OHDA且用 L-DOPA長期處理之大鼠中觀察到敏感化旋轉行為以及異 常不自主運動（AIM)之產生，從而為研究L_D〇PA誘發之 運動困難提供另一動物模型（Lundblad等人，“r. j 2002, 15，120-132)。在此模型之長期處理期間， L-DOPA (而非溴麥角環肽）誘發AIM之逐漸產生。基於此 等觀察結果’已認為用6-OHDA損害之大鼠展現與帕金森 氏症運動困難具有基本功能類似性之運動缺陷，且可用於 評估治療潛力以提供對運動困難之治療。 在鑑別治療運動困難及其他有關運動失調的新穎療法 的嘗試中’本申請者已意外發現強D1/D2促效劑 (4aR，l〇aR)小正丙基{^^，^…-八氫-苯并⑷啥啉 _6,7_二醇[本文中稱作化合物10] ; (6aR，l〇aR)-7-正丙基 6’63’7’8,9’1〇，1(^，11_人氫_1，3_二氧雜_7_氮雜_環戊二烯并 [a]蒽[本文中稱作化合物n];及（4aR i〇aR)小正丙基 5 201036949 稱作化合物12]在單側6_0HDA損害大鼠中具有有利特徵。 其誘發的運動困難比L_D0PA及變嗎啡鹼小，且減少 L-DOPA誘發之運動固難比D2促效劑（例如普拉克索）= 有效。因此，化合物10、n * 12潛在地成為具有類似 L-DOPA之功效及有利特徵（不僅在誘發運動困難方面，而 且可作為逆轉運動困難之藥物）的第一 pD藥物。 因此，預期以上所鑑別之化合物可用於治療運動困難 及其他有關之運動失調（諸如亨廷頓氏舞蹈病）。此外，本 發明涵蓋使用相應外消旋反式混合物，本發明另外提供治 〇 療帕金森氏症、同時運動困難誘發特徵低的方法，其包含 投予治療有效量之此化合物。在一個方面，治療帕金森氏 症與L-DOPA治療同樣有m卜提供逆轉運動困難或治療 帕金森氏症之方法，其包含投予此化合物及其醫藥組成物。 【發明内容】 本發明之一個方面係關於（4aR，1〇aR)1_正丙基 〇 _1’2,3’4’4&，5，10，1(^-八氫_苯并[§]喹琳_6,7_二醇或其醫藥學 上可接受之鹽的用途，其係用於製備供治療帕金森氏症、 同時保持低運動困難誘發特徵的醫藥品。 另一個方面係關於外消旋反式，丨_正丙基 -1’2,3,4,4&，5，1〇，1〇&-八氫_苯并[§]〇|；琳_6,7-二醇的用途，其 係用於製備供治療帕金森氏症、同時保持低運動困難誘發 特徵的醫藥品。 6 201036949 本發明之一個不同的方面係關於GaRjOaR)]·正丙基 -l’2’M，4a，5，l〇，l〇ai氫_笨并[g]喹啉-6,7二酵或其醫藥學 上可接文之鹽的用途，其係用於製備供治療帕金森氏症之 醫藥品。 另一個方面係關於外消旋反式-1-正丙基 -1’2’3,4,4&，5，1〇，1(^_八氫_苯并[§]喹啉_6,7_二醇的用途，其 係用於製備供治療帕金森氏症之醫藥品。 本發明之一個不同的方面係關於正丙基 _1’2’3,4,4&，5，1〇，1〇1八氫_苯并[§]喹啉_6,7_二醇或其醫藥學 上可接受之鹽的用途，其係用於製備供逆轉運動困難之醫 藥品。 另一個方面係關於外消旋反式-1-正丙基 _1，2,3,4,4&，5，1〇，1〇1八氫_苯并[§]喹啉_6,7_二醇的用途，其 係用於製備供逆轉運動困難之醫藥品。 另一個方面係關於包含（hRjOaR)]正丙基 _1，2,3,4,43,5，10，10&-八氫-苯并匕]喹啉-6,7-二醇或其醫藥學 上可接受之鹽的醫藥組成物，其係用於治療帕金森氏症、 同時保持低運動困難誘發特徵。 本發明之數個不同的方面係關於包含外消旋反式_丨正 丙基-1，2,3,4,43,5，1〇，1〇&-八氫-苯并[吕]噎琳_6,7-二醇之醫藥 組成物，其用於製備供治療帕金森氏症、同時保持低運動 困難誘發特徵的醫藥品。 另一個方面係關於一種治療帕金森氏症、同時保持低 運動困難誘發特徵的方法，其包含投予治療有效量之 7 201036949 (4&尺，1〇311)-1-正丙基-1，2,3,4,43,5，10，1〇3-八氫-苯并[层]0|_琳 -6,7-二醇或其醫藥學上可接受之鹽。 一個不同的方面係關於一種治療帕金森氏症、同時保 持低運動困難誘發特徵的方法，其包含投予治療有效量之 外消旋反式-1-正丙基_1，2,3,4,43,5，1〇，1〇^八氫_苯并[幻喹 琳-6,7-二醇。 另一個方面係關於一種逆轉運動困難的方法，其包含 投予治療有效量之（4aR，i〇aRH_正丙基 l’2’3’4’4a’5’10，i〇a_八氫_苯并[g]喹啉-6 7-二醇或其醫藥學 上可接受之鹽。 另個方面係關於一種逆轉運動困難的方法，其包含 投予治療有效量之外消旋反式小正丙基 -1，2,3,4,4以，10，10^八氫_苯并出喹琳_67_二醇或其醫藥學 上可接受之鹽。 本發明之_ , —個方面係關於（6aR，l〇aR)-7-正丙基 -6,6a，7,8,9，10，i〇a n _ ,1-八虱-1，3-二氧雜_7·氮雜-環戊二烯并 [a]蒽或其醫藥學上 ^ 了接又之鹽的用途，其係用於製備供治 療帕金森氏症、同昧仅杖把 呀1示得低運動困難誘發特徵的醫藥品。 本發明之一個尤η & ^ 同的方面係關於（6aR,l〇aR)-7-正丙基 -6,6a，7,8,9，l〇，l〇a I] ' 备 ^ Γ 1 ^ m -， '虱_1,3_二氧雜_7_氮雜-環戊二烯并 [a]蒽或其醫樂學上 姑秘 接又之鹽的用途，其係用於製備供逆 轉運動困難之醫藥品。 < 包含（6aR，10aR)-7-正丙基 ，3-二氧雜-7-氮雜-環戊二烯并 另一個方面係關於 _6,6&，7,8’9，10，1(^，11-八氫_1 201036949 [a]惠或其醫藥學上可接受之鹽的醫藥組成物，其用於治療 帕金森氏症、同時保持低運動困難誘發特徵。 本發明之數個不同的方面係關於包含（6aR，10aR)-7-正 丙基6如，7,8,9,1〇，1〇&，11_八氣_1，3_二氧雜_7_氮雜_環戍二 稀并U]蒽或其醫藥學上可接受之鹽的醫藥組成物，其用於 製備供…療怕金森氏症、同時保持低運動困難誘發特徵的 醫藥品。 3個方面係關於一種治療帕金森氏症、同時保持低 運動困難誘發特徵的方法，其包含投予治療有效量之 (6认，1叫7·正丙基'…，^。，心…八氫^二氧雜 -7-氮雜-環戊二烯并[a]蒽或其醫藥學上可接受之鹽。 另一個方面係關於一種逆轉運動困難之方法，其包含 技予治療有效量之（6aR，1〇aR)7正丙基 U]蒽或其醫藥學上可接受之鹽。 〇 本發明之一個方面係關於（4aR，l〇aR)_l_正丙基 _WMa’5’7’M’10’l〇a-十氫-1H_苯并[g]喧琳_6_嗣或其醫 藥學上可接受之鹽的用途，其係用於製備供治療帕金森氏 症、同時保持低運動困難誘發特徵的醫藥品。 本發明之一個不同的方面係關於（4化，1〇&尺）-丨_正丙基 —’，^。"^^(^(^-十氫-丨仏苯并⑷喹啉冬酮或其醫 樂學上可接受之鹽的用途，其係用於製備供治療帕金 症之醫藥品。 另一個方面係關於（4aR，1〇aRH正丙基 9 201036949

-2,M,4a,5,7,8,95l〇5l〇a_+ A_1H 藥學上可接受具面 之醫藥品。1的用途，其係用於製備供逆轉運動困難 面係關於包含（4aR,l〇aR)_i_正丙A —2’3’4’乜’5’7’8,9，1〇，1〇^十氫_111_苯并[§]喹啉_6_酮或其醫 樂子上可接爻之鹽的醫藥組成物’其用於治療帕金森氏 症、同時保持低運動困難誘發特徵。 森氏 本發月之數個不同的方面係關於包含（4aR，10aR)-i_j£

^ 1：-2,3,4,4a,5,7,8,9,10,l〇a-+ [g]^^.6.^ ^ 其醫樂學上可接受之鹽的醫藥組成物，其用於製備供治療 帕金森氏症、同時保持低運動困難誘發特徵的醫藥品。 另個方面係關於一種治療帕金森氏症、同時保持低 運動困難誘發特徵的方法，#包含投予治療有效量之 (4aR,l〇aR)-l-iL ,¾ 1.-2,3,4,4a,5,7,8,9,10,1 0a--j- [g]喹啉-6-酮或其醫藥學上可接受之鹽。

另個方面係關於一種逆轉運動困難之方法，其包含 技予治療有效量之（4aR,i〇aR)-i-正丙基 _2’M’4a’5’7’8’9，l〇，1〇a_十氫_m苯并[g]喹啉_6酮或其醫 藥學上可接受之鹽。 【實施方式】 本發明之化合物含有兩個手性中心（下式中用*表示） 10 201036949

本發明之化合物可以兩種不同非對映異構形式（順式 及反式異構體）存在，該兩種形式均可以兩種對映異構形 式存在。本發明僅關於反式外消旋體及（4aR，10aR)-對映異 構體。

正丙基-1，2,3,4,48,5，10，1(^-八氫-苯并[8]喹啉-6,7-二醇（本 文中稱作「化合物10」）可在6-OHDA損害之大鼠中逆轉 由L-DOPA/苄絲肼（benserazide)及變嗎啡驗誘發之運動 困難。相應反式外消旋體亦屬於本發明之範疇内。 另外，本發明之化合物含有兩個手性中心（下式中用* 表示）

本發明之化合物可以兩種不同非對映異構形式（順式 11 201036949 及反式異構體）存在，該兩種形式均可以兩種對映異構形 式存在。本發明僅關於反式外消旋體及（6aR,l〇aR)-對映異 構體。

如上所說明，本發明係依據以下發現：（6aR，1〇aR)_7_ 正丙基-6,63,7,8,9，10，1(^，11-八氫_1，3_二氧雜_7_氮雜_環戊 二烯并[a]葱（本文中稱作「化合物u」）可在6_〇hda損 害之大鼠中逆轉由LDOPA/节絲肼及變嗎啡㈣發之_ 困難。

-〜 上、，JLUdKj-i正丙 J -2,3,4,4a,5,7,8,9,l〇,10a-i- ^ 稱作化合物⑴在單側6_〇HDA損害之大鼠中具有有利* 徵。其誘發的運動困難比L_D〇PA及變嗎哪驗小，且減^ L-DOPA誘發之運動困難比D2促效劑（例如普拉克幻； 有效。 本發明詳細說明於下文中 舉本發明可實施之所有不同方 有特徵。 ，但此說明並不意欲詳細列 式或可添加至本發明中之所 12 201036949 定義 如本文所用之「運動困難（dyskinesia)」係指以異常 不自主運動為特徵的病此等異常不自主運動與稱似 底神經節之縣域之失調_。運動困難可為「L_D〇p“

發之運動困難」’丨由帕金森氏症（最常見基底神經節疾 :)治療所引起且為帕金森氏症治療之併發症。運動困難 在身體上可以兩種形式表現：舞蹈病及緊張不全。舞蹈病 由自身體之一部分流至另一部分的不自主、連續、無目的、 ，然、快速、短暫、不持續且不規則運動組成。緊張不全 ‘引起扭動及反覆性運動或異f姿態之持續肌肉收縮。 「治療」係指在身體上（例如穩定可覺察之症狀）、 在生理學_L (例如穩定身體參數）或在身體上與生理學上 抑制疾病或病纟’且抑制患者可能無法覺察之至少一種身 體，數ifcb外，「治療」係指延緩患者之疾病或病症或至 二其症狀的發作，|中該患者可能暴露於或易患疾病或病 症’儘管其尚末經歷或呈現該疾病或病症之症狀。 、士「治療有效量」係指化合物投予患者以治療疾病或病 症4足以對疾病或病症達成此治療的量。「治療有效量」 視以下因素而變：化合物、疾病或病症及其嚴重程度及待 治療患者之年齡及體重。 如本文所用之「同時保持低運動困難特徵」—詞係指 已經由連續多巴胺激導性刺激治療之患者中所見之運二 難特徵。涉及連續多巴胺激導性刺激之療法描述於 及 Olanow，灯 2004, 2〇〇4, 62, S56 S63 ;及 Hhry 13 201036949 等人，/owma/ 少 2004, 251, 1 1，1370-1374 中。 如本文所用之強D1/D2促效劑（4aR，l〇aR)小正丙基 -1，2,3,4,4&，5，10，1(^-八氫-苯并(^]唾琳_6,7-二醇稱作化合物 10 ° 如本文所用之（6aR，l〇aR)_7-正丙基 -6,6a,7,8,9，10,10a，l 1-八氫- i，3-二氧雜-7 -氮雜-環戊二稀并 [a]蒽稱作化合物11。 如本文所用之（4aR，10aR)-l-正丙基 -2,3’4,43,5,7,8,9，10，10&-十氫-111-苯并|^]噎琳_6-酮在本文 中稱作化合物12。 化合物10、11或12可如下用於治療運動困難：作為 單一療法（亦即單獨使用化合物）；作為組成物之佐劑以 預防由組成物所致之運動困難副作用（例如作為為治療帕 金森氏症患者所給予之L-DOPA或變嗎啡鹼的佐劑）；或 者該化合物可與亦減少運動困難之其他療法（例如類鸦片 受體拮抗劑、α 2-腎上腺素受體拮抗劑、類大麻酚cbi拮 抗劑、NMDA $體拮抗劑、膽驗激導性受體结抗劑、組織 胺H3《體促效劑及f白球/視丘下肖損害/深度腦刺激 (globus pallidus/subthalamic nucleus lesion/deep brain stimulation))組合給予。 本發明另外係關於同日夺、分別或依序用藥以治療帕金 森氏症、㈣減少L姻PA❹巴胺促效劑誘發之運動困 難’包含投予治療有效量之化合物1〇、^ & 12或其 學上之鹽。 、 、 201036949 在〃體實例中，運動困難與基底神經節相關性運動 失調相關❶ 在另一具體實例中，運動困難與帕金森氏症相關。 八體實例係關於與特發性帕金森氏症或腦炎後帕金 森氏症候群相關之運動困難。 在一具體實例中’運動困難與帕金森氏症之停藥期肌 緊張不全相關。 在一各別具體實例中，運動困難作為治療帕金森氏症 1 ’ 之治療劑的副作用產生。 在另一具體實例中，運動困難與多巴胺補充療法相 關。在一具體實例中，多巴胺補充治療劑選自由以下者所 組成之群組：羅替戈汀（rotigotine)、羅匹尼洛、普拉克 索、卡麥角林（cabergoline )、溴麥角環肽、麥角乙脲、培 高利特、L-D0PA及變嗎啡鹼。 在一具體實例中，運動困難由反覆投予L_D〇pA建立。 ^ 如上所說明，本發明提供一種包含化合物1〇、^或12 或其醫藥學上可接受之鹽的醫藥組成物，其用於製備供治 療帕金森氏症、同時保持低運動困難誘發特徵的醫藥品； 及包含外消旋反式-1-正丙基-1,2,3,4,43,5，1〇,1〇1八氫_苯并 [g]喹啉-6,7-二醇之醫藥組成物，其用於製備供治療帕金森 氏症、同時保持低運動困難誘發特徵的醫藥品。 在一具體實例中’醫藥組成物另外包含MAO-B抑制劑。 在一具體實例中，MAO-B抑制劑為司力勁（selegine )。 在一各別具體實例中’ MAO-B抑制劑為雷沙吉林 15 201036949 (rasagiline )。 在另一具體實例中，本發明係關於一種醫藥組成物， 其包含治療有效量之化合物11或12或其醫藥學上可 接受之酸加成鹽及一或多種醫藥學上可接受之載劑、稀釋 劑及賦形劑。 在本發明之一特定具體實例中，哺乳動物為人類個體。 化合物10、11或12之治療有效量（以自由驗形式之 上述化合物10、11或12之曰劑量計算）宜在0.01毫克/日 與125毫克/曰之間，更宜在〇·〇5毫克/日與100毫克/曰之 間，例如較佳在〇 · 1毫克/曰與5 0毫克/日之間。 在一特定具體實例中，化合物10、11或12之曰劑量 在1·〇毫克/曰與10毫克/曰之間。 在另一具體實例中’化合物10、11或12之日劑量小 於約1.0毫克/曰。 在一各別具體實例中，化合物1〇、11或12之日劑量 為約0.1 0毫克/曰。 在另一具體實例中’本發明提供一種口服調配物，其 包含0.001 mg至125 mg之化合物1〇、11或12。 在另一具體實例中，本發明提供一種口服調配物，其 包含0.001 mg至0.100 mg之化合物1〇、11或12。 在另一具體實例中’本發明提供一種口服調配物，其 包含0.01 mg至1 _〇 mg之化合物1〇、或12。 在另一具體實例中，本發明提供一種口服調配物，其 包含0_10mg至10mg之化合物1〇、η或12。 16 201036949 醫藥學上可接受之鹽 化合物10、11或12與多種有機酸及無機酸形成醫藥 學上可接觉之酸加成鹽。此等鹽亦為本發明之一部分。化 合物10、11或12之醫藥學上可接受之酸加成鹽由此項技 術中所熟知之醫藥學上可接受之酸形成。此等鹽包括 «/ομγμ/ o/Pkrmace她·εα/ 1977, 66, 2 19 中所列之 醫藥學上可接受之鹽且為熟習此項技術者已知。用於形成 〇 此等鹽之典型無機酸包括鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硝酸、 硫酸、磷酸、低磷酸、偏磷酸、焦磷酸及其類似無機酸。 亦可使用衍生自以下有機酸之鹽：諸如脂族單羧酸及二羧 酸、經苯基取代之烷酸、羥基烷酸及羥基烷二酸、芳族酸、 脂族及芳族磺酸。因此此等醫藥學上可接受之鹽包括氣化 物、溴化物、碘化物、硝酸鹽、乙酸鹽、苯基乙酸鹽、三 氟乙酸鹽、丙稀酸鹽、抗壞血酸鹽、苯甲酸鹽、氯笨甲酸 鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯曱酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、 甲基苯曱酸鹽、鄰乙醯氧基苯曱酸鹽、異丁酸鹽、笨基丁 酸鹽、羥基丁酸鹽、丁炔_l，4-二綾酸鹽、己炔二羧 酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、肉桂酸鹽、檸檬酸鹽、甲酸鹽、 反丁烯二酸鹽、乙醇酸鹽、庚酸鹽、馬尿酸鹽、乳酸瞄、 蘋果酸鹽、順丁烯二酸鹽、羥基順丁烯二酸鹽、丙二酸鹽、 杏仁酸鹽、甲磺酸鹽、菸鹼酸鹽、異菸鹼酸鹽、草酸魄、 鄰苯二甲酸鹽、對苯二曱酸鹽、丙炔酸鹽、丙酸鹽、苯其 丙酸鹽、水楊酸鹽、癸二酸鹽、丁二酸鹽、辛二 — 17 201036949 磺酸鹽、對溴苯磺酸鹽、氯苯磺酸鹽、乙基磺酸鹽、2-羥基 乙基碩酸鹽、甲基磺酸鹽、萘-丨_磺酸鹽、萘_2_磺酸鹽、萘 -1，5-碩酸鹽、對甲苯磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、酒石酸鹽及 其類似鹽。 醫藥組成物 製備固體醫藥組成物之方法在此項技術中亦已熟知。 因此疑劑可藉由將活性成份與—般佐劑、填充劑及稀釋劑 混合且混合物隨後在適宜製錠機中壓製來製備。佐劑、填 充劑及稀釋劑之實例包含微晶纖維素、玉米殿粉、馬龄薯 澱粉、乳糖、甘露糖醇、山梨糖醇、滑石、硬脂酸鎂、明 膠、乳糖、樹膠及其類似物。亦可使用任何其他佐劑或添 加劑（諸如著色劑、芳錢、防腐劑#)，限制條件為其 與活性成份相容。 个货％疋錠劑調叫仍1秸田直接壓製化合物 10、11或12與習知佐劑或稀釋劑之混合物來製備。或者 :使用化合物10、w12(視情況與習知佐劑或稀釋劑混 δ)的濕顆粒或熔融顆粒壓製錠劑。 点：合物10、11或12之注射溶液可如下製備：將活性 :伤及可能添加劑溶解於一部分注射溶 液至所需體積，將溶液滅菌且填充於適= 諸如張力劑:=此;氧技:ΓΓ任何適合添 m 抗氧化劑、增溶劑等。 18 201036949 實驗部分

在配備有大氣壓光電離之PE Sciex API 150EX儀器及 Shimadzu LC-8A/SLC-10A LC 系統上得到分析型 LC/MS 數 據。藉由對UV ( 254 nm )跡線及ELSD跡線求積分來測定 純度。MS儀器來自Peskier ( API )，其配備有APPI源且 以正離子模式運行。UV跡線（室溫）中之滯留時間以分鐘 表示。溶劑A由含有0.05% TFA之水製成，而溶劑B由含 有0.03 5% TFA及5%水之乙腈製成。已使用數種不同方法： Ο 方法 25: API 15 0EX 及 Shimadzu LC10AD/SLC-10A LC 系統。管柱：dC -1 8 4.6x30 mm，3 //m( Atlantis, Waters)。 管柱溫度：40°C。梯度：逆相離子配對。流速：3.3 mL/min。 注射體積：15 μ L。梯度：含有2% B之A經2.4分鐘至 100% B，再經0.4分鐘至含有2% B之A。總操作時間：2.8 分鐘。 方法 14 : API 150EX 及 Shimadzu LC8/SLC-10A LC 系 統。管柱：C -1 8 4.6x30 mm，3.5 // m ( Symmetry, Waters )。 〇 管柱溫度：室溫。梯度：逆相離子配對。流速：2 mL/min。 注射體積：10 // L。梯度：含有10% B之A經4分鐘至100% B，再經1分鐘至含有10% B之A。總操作時間：5分鐘。 如下執行X射線晶體結構測定。使用Cry〇stream氮氣 冷卻器系統將化合物之晶體冷卻至120 K。數據收集於具有 CCD面積靈敏偵測器之Siemens SMART Platform繞射儀 上。藉由直接法解出結構且藉由全矩陣最小平方法、針對 所有數據之F2進行修正。結構中之氫原子可見於電子密度 19 201036949 差異圖中。對非氫原子進行各向異性修正。使用跨騎模型 (riding model )(其中 Ο-Η=0·84，C-H=0.99-1.00， Ν-Η=0.92-0.93 A)使所有氫原子處於計算位置處。對於所 有氫原子，使熱參數固定[對於所連接原子，U(H)= 1.2 U]。 Flack X-參數在0.0(1 )-0.05(1)範圍内，表明絕對結構正確。 用於數據收集、數據簡化及吸收之程式為SMART、SAINT 及 SADABS [參看「SMART and SAINT, Area Detector Control and Integration Software」，5.054 版，Bruker Analytical X-Ray Instruments 公司，Madison, USA (1998)， Sheldrick 「SADABS，Program for Empirical Correction of Area Detector Data」，2_03 版，University of G0ttingen， Germany (2001)]。使用程式 SHELXTL [參看 Sheldrick 「SHELXTL, Structure Determination Programs」，6.12 版， Bruker Analytical X-Ray Instruments 公司，Madison, USA (2001)]解出結構且用於分子圖解。 合成本發明之化合物（化合物10及11 ) 以化合物1(其合成描述於文獻中，如Taber等人，·/· dm. CAem. Soc·, 124(42)，12416 (2002)所述製備）作為起始物， 可如本文所述以八個步驟製備化合物8。此物質可如本文所 述藉由手性SFC拆分，得到化合物9及對映異構體-9。Boc 保護基裂解之後，可使用還原胺基化在氮原子上引入正丙 基。所得被遮蔽之兒茶酚胺可在標準條件下藉由48% HBr 處理或藉由與BBr3反應而脫除保護基，得到化合物1〇及對 20 201036949 映異構體-10。可應用10與CH2ClBr或相關試劑在鹼存在 下之進一步反應得到本發明之化合物（化合物11)。

合成化合物10及對映異構體-10。 7-碘-1，2,6_三甲氧基-萘（化合物2)。

在氬氣下且在-78°C下向經攪拌之化合物1 ( 26.2 g ;如 Taber 等人，J. CTzem. Soc.，124(42), 12416 (2002)所述 製備）於無水THF ( 200 mL )中之溶液中緩慢添加第二丁 21 201036949 基裡（1.2M，含於環己燒中，H〇mL)。在_78。〇下搜拌溶 液3小時。經10分鐘添加碘（3〇 5 g)於無水thf ( 50 mL) 中之溶液。隨後在-78t下再攪拌所得混合物1〇分鐘。藉由 添加飽和 NH4C1 ( 100 mL ) ' 水（240 mL )及 Et2〇 ( 240 mL ) 中止反應混合物之反應。用1 〇〇/〇亞硫酸鈉水溶液（丨〇〇 ) 洗滌有機層，脫水（NajO4 )且在真空中濃縮。藉由蒸餾 出未反應之起始物質純化粗物質。藉由石夕膠層析（Et〇Ac/ 庚烷）進一步純化殘餘物，得到不純固體物質，藉由自 EtOAc/庚烷沈澱純化，得到丨丨·46 g化合物2。 (£72)-3-(3,7,8-三甲氧基-萘_2_基丙烯腈（化合物3)。 .ΟΜθ 化合物2 化合物3 向微波反應器小瓶中的化合物2 (3.41 g)於無水乙腈 (10.7mL)中之懸浮液中添加丙烯腈（119 mL)、pd(〇Ac)2 (73mg)及三乙胺（1.48mL)。將小瓶密封，且在ι45^2 下在微波照射下加熱混合物40分鐘。將此程序再進行兩次 (總共使用10.23 g化合物5 )。合併粗反應混合物且濾除 催化劑，且在真空中濃縮濾液。使殘餘物分配於Et2〇 ( 3〇〇 mL)與2 M HC1 ( 150 mL)之間。用鹽水（1〇〇 mL)洗務 有機層，脫水（NajO4)且在真空中濃縮。藉由矽膠層析 (EtOAc/庚烷）純化粗物質（7.34 g)，得到5 23 g呈烯烴 異構體混合物形式之化合物3。 22 201036949 3-(3，7,8-二甲氧基·萘-2-基）-丙腈（化合物4)。

將化合物 3( 5.23 g)溶解於 CHC13( 15 mL)及 99% EtOH (100 mL)中。添加 10% Pd/C(0.8 g)，且使用帕爾（parr) 震盪器在3巴（bar)之氫氣壓力下使溶液氫化45分鐘。濾 除催化劑，且使濾液通過小矽膠塞（溶離劑：99% Et〇H )。 呈白色固體狀之化合物4產量：4.91g。 [3-(3,7,8-三甲氧基_1，4·二氫-萘_2_基）_丙基卜胺基甲酸第三 丁酯（化合物5 )。

將化合物4 ( 5.0 g)溶解於99% EtOH ( 150 mL)中且 在氮氣氛圍下加熱混合物至回流。經3小時添加小塊狀之 金屬鈉（5 g)。使混合物再回流2小時，隨後在室溫下攪 拌2日。隨後再次加熱至回流，且再添加金屬鈉（3.68 g )， 且使混合物回流隔夜。於冰/水浴上冷卻之後，藉由添加固 體氣化銨（20 g )及水（25 mL )中止反應。過濾所得混合 物且在真空中濃縮濾液。使殘餘物分配於乙醚（5〇 mL )與 水（50 mL)之間。用37% HC1中和水層且用乙醚（2x50 mL) 萃取。用鹽水（50 mL )洗滌經合併之有機萃取物，脫水 (MgSCU )且在真空中濃縮’得到油狀物。將此物質溶解於 THF( 50 mL)中且在室溫下用 BoC2〇( 2.34 g)及 Et3N( 1.78 23 201036949 mL)處理。六日之後，在真空中移除揮發物且藉由矽膠層 析（EtOAc/庚烷）純化殘餘物》由此提供不純化合物5 ( ^ g) ° 外消旋6,7-二曱氧基-2,3,4,4a，5，10-六氫苯并[g]喧琳鹽酸 鹽（化合物6)。

將化合物5( 1.52 g，來自前一步驟）溶解於Me〇H(2〇 mL· )中。添加370/〇 HC1 ( 3.5 mL ) ’且使混合物回流4小 時。在真空中移除揮發物’使用曱苯共沸移除水。由此提 供呈黃色油狀之不純化合物6 ( 〇. 8 9 g )。 外消旋反式-6,7-二甲氧基-3,4,4a，5，l〇，l〇a-六氫_2H-苯并[g] 喹啉-1-甲酸第三丁酯（化合物8)。

(外请旋*) (外a旋《) 將化合物6 ( 0.89 g)溶解於MeOH ( 10 mL)中且添加 NaCNBH3 ( 0.19 g)。在室溫下攪拌反應物隔夜。在冰/水 浴上冷卻粗混合物’隨後用含有2 M HC1之Et20 ( 1 mL ) 中止反應。使混合物分配於Et2〇 ( 50 mL )、水（50 mL ) 及2 M NaOH( 10 mL)之間。用乙醚（3x50 mL)萃取水層。 將經合併之有機層脫水（MgS〇4 )且在真空中濃縮，得到不 24 201036949 純自由胺（化合物7 )。將此物質溶解於thF ( 25 mL )中 且在室溫下用Boc20 ( 〇·68 g)及Et3N ( 0.86 mL)處理1 小時。在真空中濃縮粗混合物，且藉由矽膠層析（Et〇Ac/ 庚娱·）純化殘餘物’得到1.18 g略微不純之外消旋化合物8。 SFC分離外消旋反式_6,7_二甲氧基_3,4,4a，5，1〇，1〇a六氫 -2H-苯并[g]喹啉-1-甲酸第三丁酯之對映異構體（化合物9 及對映異構體-9)。

在配備有 Chiralcel OD 21.2x250 mm 管柱之 Berger SFC multigram II儀器上使用手性SFc將化合物8 ( 19.7 g) 拆分為其對映異構體。溶劑系統：C〇2/EtOH ( 85:1 5 )，方 法：恒定梯度，流速為50 mL/min。藉由UV 230 nm偵測執 行溶離份收集。快速溶離的對映異構體（4aR，10aR對映異 〇 構體；化合物9 ) : 9.0 g白色固體。緩慢溶離的對映異構 體（4aS，10aS對映異構體；化合物對映異構體: 8.丨g 白色固體。 (4aS，10aS)-6,7-二甲氧基 _1，2,3,4,43,5，10，1〇3-八氫_苯并[8】 喹啉鹽酸鹽（化合物對映異構體_9，）。

化合物對缺異讒 (4SJ0S對映異構鳗） 化合物對缺異構«>9* (4S.10S對映異構«) 25 201036949 將化合物對映異構體·9( 〇·52 溶解於Me〇H( 15 mL) 中’且在室溫下用含有5 M HC1之Et20 ( 7·5 mL )處理2 小時。在真空中濃縮混合物且在真空中乾燥固體，得到呈 白色固體狀之化合物對映異構體A'Lc/ms (方法14): 室溫，1.31分鐘。 (4aR,10aR)-l-丙基·12,3,4,43,5,10,10a-八氫-苯并[g】喹啉 -6,7-二醇氫溴酸鹽（化合物1〇)。

將化合物9 ( 0.5 g)溶解於99% EtOH ( 5 mL)中且在 至溫下用含有2MHC1之EhO ( 4 mL )處理隔夜。在真空 中濃縮粗混合物，且使殘餘物分配於EtOAc與10% NaOH 水溶液（5 mL)之間。用EtOAc萃取水層，且用鹽水洗蘇 經合併之有機層’脫水（MgS04)，在真空中濃縮。將殘餘 物溶解於99% EtOH ( 5 mL )中且在室溫下用丙醛（0.52 mL) 、NaCNBH3 ( 0.45 g)及 AcOH ( 3 滴）處理隔夜。使 粗混合物分配於NaHCΟ3飽和水溶液（12.5 mL )、水（12.5 mL)及EtOAc ( 2x25 mL)之間。用鹽水洗滌經合併之有機 層，脫水（MgSCU )，且在真空中濃縮。藉由矽膠層析 (MeOH/EtOAc)純化殘餘物。在150°C下在微波條件下用 48% HBr ( 3 mL )處理所得中間物1小時，隨後將粗混合物 在4°C下儲存隔夜。藉由過濾分離沈澱物且在真空中脫水。 26 201036949 化合物10之產量：103 mg’呈固體狀。lC/ms(方法25): 室溫，0.77分鐘。 (488，1〇38)-1-丙基_1，2,3,4,43,5，1〇，1〇3-八氫_苯并[8】啥琳 _6,7·二醇氩溴睃鹽（化合物對映異構體_1〇)。

OH 化合物對映異構«-10 (4aS，10aS對映異構艘）

OMe 化合物姆睐異搆«-3» (4aS,10aS财映異構»)

HO

以化合物對映異構體-9，（ 〇.5 g ;藉由分配於Et〇ac與 10% NaOH水溶液之間、隨後進行還原胺基化步驟來釋放鹽 酸鹽）作為起始物’按照針對化合物所述之程序進行。 化合物對映異構體-10之產量：70 mg，呈固體狀。lc/ms (方法25):室溫，0.70分鐘。將少量化合物對映異構體 -1 〇樣品溶解於MeOH中且使其在室溫下緩慢結晶2個月 收集所形成之白色晶體且進行X射線分析（參看圖丨）。藉 由X射線結晶法測定化合物對映異構體_1()之絕對構型，9 而可明確判定化合物9及10及因此其衍生物之立體化興= 型。 予稱 (6aR，l〇aR)_7_正丙基 _6 63,7,8,9，1〇，1〇311_八氫13一 雜氮雜-環戊二烯并[a】蒽鹽酸鹽（化合物u

, 化合物10 化合物11 UafUOaR對缺異構踵）（6aR,1〇aR對映異構«) 在氬氣氛圍下加熱化合物l〇(7 8〇g) 、C^c〇 18.6 27 201036949 g)、CH2BrCl ( 2.2 mL)及 DMF ( 180 mL)至 1〇〇。〇歷時 1

小時。將粗反應混合物添加至分液漏斗中且用冰/水（3 〇 〇 mL)稀釋。用Et20 ( 3x300 mL)萃取所得混合物。用鹽水 洗滌經合併之有機層，脫水（MgS〇4 )，且在真空中濃縮。 藉由矽膠層析（EtOAc/MeOH )純化殘餘物，得到淺紅色固 體’將其溶解於MeOH( 25 mL )中且藉由添加含有2M HC1 之Et20 ( 20 mL )及Et20 ( 1〇〇 mL )以鹽酸鹽形式沈澱。 藉由過遽分離所沈殿之產物且在真空中乾燥。化合物之 產量：5.1 g。LC/MS (方法 111 ):室溫，〇 70 分鐘。ELSD 100%。UV 97.0%。MH+ : 274.0。 (4aR，10aR)-正-1-丙基-2,3,4,4a，5,7,8,9，10，10a-十氩-1H-苯 并[gl喹啉-6-酮（化合物12) 合成化合物12可如歐洲專利第127441 1號所述製備， 該專利之内容以引用的方式併入本文中。在以上鑑別之專 利中’化合物12稱作（-)-GMC6650。 實驗部分 實施例1:化合物11及12在活體内投予之後轉化為化合物 10之含兒茶酚活性代謝物。

化合物10 ίί'性代謝物

發現活性代謝物（亦即化合物丨〇 )在試管内充當D i 28 201036949 受體與D2受體之強促效劑。如下文更詳細論述，由活體内 實驗產生之數據表明此活性代謝物具有優於其他多巴胺促 效劑的特徵，且與L_D〇PA/變嗎啡鹼治療所見之功效相當。 實施例2 :化合物之藥理學測試 Di cAMP檢定 如下里測化合物刺激或抑制，穩定表現人類重組D1受體 之CHO細胞中Dl受體介導之camp形成之能力。在實驗之 Ο 前3日，將細胞以每孔1 1 000個細胞之濃度接種於96孔板 中。在實驗當日，用經預熱G緩衝液（含有lmM MgCi2、 0·9 mM CaCl2、1 mM IBMX (3_ 異丁基 q•曱基黃嘌呤）之 PBS :(磷酸鹽緩衝鹽水））洗滌細胞一次，且檢定開始時添 加100以L之30 nM A68930與於G緩衝液中稀釋之測試化 合物的混合物（拮抗作用）或於G緩衝液中稀釋之測試化 合物（促效作用）。 在37C下培育細胞20分鐘’且藉由添加1〇〇 eLS緩 〇 衝液（0.1 MHC1及〇.1 mMCaCl2)中止反應，且將培養板 置於4 C下1小時。添加68 μ L N緩衝液（0.15 M NaOH 及60 mM NaOAc)且震盪培養板ι〇分鐘。將6〇以L反應 物轉移至含有40 /zL 60 mM乙酸鈉（pH 6.2)之cAMP FlaShPlateS(DUP〇ntNEN)中，且添加 loo 以 LIC 混合物 (50 mM 乙酸鈉（pH 6.2)、〇 1%疊氮化鈉、12 mM CaCi2、 l〇/〇BSA (牛血清白蛋白）及 0.15 μ(Μ/ιηί125Ι(ϊΑΜρ)。 在4 C下培育18小時之後，將培養板洗滌一次且在WalUc 29 201036949

TriLux計數器中計數。此檢定證明化合物ι〇可充當A促 效劑。 D2 cAMP檢定 如下量測化合物刺激或抑制用人類〇2受體轉染之CH〇 細胞中D2受體介導之抑制cAMP形成之能力。在實驗之前 3日，將細胞以每孔8000個細胞之濃度接種於96孔板中。 在實驗當曰’用經預熱之G緩衝液（含有1 MgCl2、〇 9 mM CaCl2、1 mM IBMX之PBS )洗滌細胞一次，且檢定開 始時添加100 y 1之1 μ Μ喹吡羅（quinpir〇le)、1〇 Μ弗斯可林（forskolin)與含於G緩衝液中之測試化合物 之混合物（拮抗作用）或1 ο β Μ弗斯可林與含於G緩衝 液中之測試化合物之混合物（促效作用）。 在37°C下培育細胞20分鐘，且藉由添加1〇〇以1 s緩 衝液（0.1 M HC1及0.1 mM CaCl2)中止反應，且將培養板 置於4°C下1小時。添加68 " L N緩衝液（〇·ΐ5 M NaOH 及60mM乙酸鈉）且將培養板震盪分鐘。將6〇 反 應物轉移至含有40 β L 60 mM NaOAc ( pH 6.2 )之cAMP FlashPlates(DuPontNEN)中，且添加100 "LIC 混合物 (50 mM NaOAc ( pH 6·2 )、0.1%疊氮化鈉、12 mM CaCl2、 1%BSA 及 0.15 " Ci/mL 125I-cAMP )。在 4〇C 下培育 18 小 時之後’將培養板洗滌一次且在Wallac TriLux計數器中計 數。此檢定證明化合物10可充當〇2促效劑。 30 201036949 D5檢定 多巴胺在轉染hDs之CH0-Gal6細胞中以濃度依賴性 方式刺激細胞内Ca2+釋放。使細胞負載fiuoro_4 ( —種約指 示染料）1小時。藉由FLIPR (螢光成像板讀取器）監測鈣 反應（螢光變化）2.5分鐘。對各數據點雙重複孔之峰值反 應（EC”）取平均值且相對於藥物濃度繪圖（多巴胺參看圖 2 )。此檢定證明化合物1 〇可充當D5促效劑。 〇 6-OHDA大鼠模型 多巴胺促效劑可對D1受體、D2受體或兩者具有活性。 可使用單側6-OHDA損害之大鼠的旋轉反應評定化合物刺 激兩種受體類型及誘發旋轉之能力（Ungerstedt及 Arbuthnott，及认，1970, 24, 485 ; Setler 等人，五丄 1978，50(4)，419 ;及 Ungerstedt 等人， 「Advances in Dopamine Research」 （Kohsaka 編）， Pergamon Press，1982，Oxford,第 219 頁）。6-OHDA (6- ❹ 羥基多巴胺）為神經生物學家用於選擇性殺滅實驗動物腦 内注射位點處的多巴胺激導性神經元的神經毒素。在 6-OHDA模型中，藉由向位於黑質前之内侧前腦束中注射 6-OHDA來破壞位於腦一側（單侧）之黑質紋狀體多巴胺細 胞。此單側注射與多巴胺促效劑（諸如變嗎啡鹼）刺激組 合將誘發旋轉行為，因為腦僅一側受刺激。實驗由測定所 述化合物誘發旋轉之最低有效劑量（MED )組成。MED測 定之後，執行第二實驗以測定化合物克服奈莫必利 31 201036949 (Nemonapride )阻斷之MED ( MED奈莫必利）。奈莫必利為 阻斷D2受體之D2拮抗劑’因此任何觀察到之旋轉應取決 於對D1受體之活性。最後，已知MED奈莫必利之後，使用 MED奈其必利劑量進行第三實驗且觀察單獨〇 1拮抗劑（SCH 23390 )、單獨D2拮抗劑（奈莫必利）之作用，及最後觀 察SCH 23 3 90與奈莫必利組合處理之作用。此第三實驗證 實該化合物對兩種受體之活性，因為單獨任一拮抗劑僅能 部分抑制由測試化合物誘發之旋轉反應，而組合處理完全 阻斷大鼠之所有旋轉[Arnt及Hyttel，P叮 1985, 85(3)，346;及 Sonsalla 等人，/· 以以， 1988，247(1)，180]。使用變嗎啡鹼作為驗證D1/D2混合促 效劑原理的化合物來驗證此模型。 在此模型中，化合物10具有「變嗎啡鹼」樣特徵，其 中D1/D2比率為約2-4，相比之下，對於變嗎啡鹼，比率為 約3。此外，觀察到該化合物之持續作用時間為約18小時， 其顯著高於L-DOPA/變嗎啡鹼之持續作用時間。對於D2促 效劑（例如普拉克索及羅替戈汀）未能觀察到D1組份。 優勢模型 變嗎啡鹼及L-DOPA能夠逆轉嚴重缺乏多巴胺之小鼠 模型之運動缺陷。變嗎啡鹼與L-DOPA均能刺激D1及D2 多巴胺又體。普拉克索（_種D2受體促效劑）在該模型中 無效。 如下執行該等實驗：使用預先用Μρτρ (2χ15 ， 32 201036949 皮下）處理且具有穩定損害之小鼠，而用媒劑處理的小鼠 充當正常對照組。MPTP ( 1-甲基-4-笨基-1，2,3,6-四氫吡啶） 為藉由殺滅腦黑質中之某些神經元引起永久帕金森氏症症 狀之神經毒素。使用其研究猴及小鼠之疾病。在實驗當日， 用AMPT ( 250 mg/kg，皮下）處理小鼠，且隨後放回其飼 養籠中1.5小時，之後將其置於運動單元中之個別籠中。 ΑΜΡΤ( α -甲基-對酪胺酸）為短暫降低腦兒茶紛胺活性（在 此情況下尤其多巴胺含量）之藥物。ΑΜΡΤ注射之後三小 〇 時’用化合物1〇嘗試拯救運動缺陷，且再歷時1.5小時記 錄活性。拯救處理之後收集的前30分鐘數據因操作及注射 使動物緊張而被「污染」，如媒劑對照組中含量增加所證 實，因此使用最後1小時記錄之數據分析數據。測試各種 多巴胺激導性化合物逆轉此模型所產生之運動缺陷之能 力。L-DOPA/苄絲肼與變嗎啡鹼均以劑量依賴性方式恢復小 鼠之運動。苄絲肼為不能穿過血腦障壁之D〇pa脫叛酶抑 制劑；其用於防止L-DOPA在腦外部代謝為多巴胺。相比 之下，D2促效劑（普拉克索及溴麥角環肽）未能恢復小鼠 之運動。 使用此模型評估化合物10是否與L_D〇pA及變嗎啡鹼 同樣優於D2促效劑。對化合物10進行劑量反應實驗，且 存在劑量依賴性逆轉嚴重缺乏内源多巴胺所誘發之運動不 足缺陷的趨勢。執行的最後實驗係直接比較此模型中變嗎 啡驗、普拉克索及化合物10之作用，且證實化合物能 夠恢復用MPTP處理的小鼠之運動且優於普拉克索。 33 201036949 用未處理的6-OHDA大鼠誘發運動困難模型 使用二十隻單側6-OHDA損害之雄性史泊格多利 (Sprague Dawley )大鼠測試化合物1〇 (皮下投予；n=7 ; 組1 )相較於L-DOPA/苄絲肼（6 mg/kg/15 mg/kg，皮下； n=7，組2 )及變嗎啡鹼（！ mg/kg，皮下；n=6 :組3 )誘發 之運動困難。苄絲肼為不能穿過血腦障壁之D〇pa脫羧酶 抑制劑；其用於防止L-DOPA在腦外部代謝為多巴胺。 6-OHDA手術之後三週，測試由2·5 mg/kg安非他命 (amphetamine)誘發之動物的旋轉反應，安非他命誘發同 側回轉（安非他命經由未損害側之完整神經元增加腦中多 巴胺含量，與動物對主要作用於腦損害側之直接促效劑（諸 如L DOPA及變嗎啡驗）之反應相比，其引起動物沿相反 方向紋轉）。此研究中所包括之所有動物均滿足6〇分鐘内 超過350個旋轉之標準。隨後將大鼠隨機分配至三個處理 組，針對動物對安非他命之旋轉反應對比該等處理組。 在實際運動困難實驗期間，大鼠每曰一次接受測試化 合物皮下庄射，且在注射之後觀察3小時。在3小時期間， 使用先前所述之異常不自主運動量表（Abn〇rmai

Involuntary M〇Vement Scale，aims )( Lundbiad 等人，· J 120,（2002))、針對運動困難之存在、每 20分鐘觀察各動物i分鐘。大鼠連續14日接受藥物，且在 第1日、帛2日、第3日、第4日、第5日、第8日、第 10曰及f 12日評分。雙因子重複量數an〇va揭示存在顯 34 201036949 者治療效應、時間效應及治療與時間相互作用（在所有情 況下，ρ<0·00丨）。使用霍姆-斯達克法（H〇lm-Sidak meth〇d) 之事後比較表明，與用L-D0PA或變嗎钟鹼處理之動物（約 70分）比較，用化合物1G處理之動物具有顯著較少之運動 困難（約30分）。L-DOPA處理組與變嗎啡驗處理組之間 無差異。此實驗之後，所有大鼠在帛15日至第19日均皮 下注射化合物ίο’以測定實施例z影響變嗎啡鹼及l_d〇pa 組中所見之嚴重運動困難之程度。在實驗第19日執行運動 〇困難評分（對於化合物10相應4 5日）。數據顯示l_dqpa 及變嗎啡鹼所誘發之運動困難被部分逆轉至大約化合物ι〇 所誘發之運動困難之程度（與處理12日之後所觀察到之約 30分相比，其並未引起組丨之運動困難增加）。 運動困難大鼠模型 各別運動困難研究係針對用普拉克索或化合物1〇逆轉 L-DOPA誘發之運動困難。簡言之，用L_D〇pA/苄絲肼（〜15 mg/kg ’皮下）處理18隻動物歷時7曰。在第1日、第3 曰及第5日觀察動物，且對AIM評分。隨後使用第5日評 刀將動物分成二個組，各組有6隻動物。組1繼續進行每 曰L-DOPA處理。組2用化合物10 (皮下投予）處理。組 3用普拉克索（0.16 mg/kg，皮下）處理。每曰處理持續1〇 日，且在第1日、第5日、第9日及第10日對運動困難之 程度評分。雙因子變異數重複量數分析表明，與普拉克索 組及L-DOPA/苄絲肼組相比，用化合物處理之動物具有 35 201036949 難。與L-DOPA/苄絲肼組相比，普拉克 之運動困難。因此，化合物10在逆轉 顯著較少之運動困 索組具有顯著較少 L-DOPA誘發之運動因雜士工β丄 動困難方面具有優於普拉克索之優良特 徵。 在用ΜΡΤΡ處理普通絨猿中之抗帕金森氏症作用 使用6隻用ΜΡΤΡ處理的絨猿（連續長達$日每日 mg/kg (溶料無自G.9%生理食鹽水溶液中））進行實驗。 所有動物已預先用L_D0PA ( 12.5 mg/kg，經口；外加卡比 夕巴（carbidopa) 12.5 mg/kg，經口）每曰投予至高達3〇 曰而處理以誘發運動在研究之前，所有個體均展現 穩定之運動缺陷，包括基底運動活性明顯降低、不良運動 協調、異常及/或強直姿態、降低之敏捷性及敲頭運動（⑹ checking movement)。投予多潘立酮（D〇mperid〇ne)，6〇 分鐘之後投予任何測試化合物。多潘立_為抑㈣心及唱 吐之抗乡巴胺激導性t #;。使用測試籠評定運動活性，該 等測試蘢包含置於籠巾關鍵位置之δ個光電開關（包含8 個紅外光束），且中斷-個光束記錄為_次計數。隨後對 每個時間段光束計數之總數與時程的關係作圖或以總活性 之曲線下面積（AUC)呈現每個時間段光束計數之總數。 運動失能由對處理不知情之受過訓練的觀察者評定。 L-DOPA(12_5 mg/kg，經口）提高運動活性且逆轉運 動失能，如先前所述（Smith等人，Mov. 2QQ2> 17(5)> 887)。選用於此挑戰之劑量為此藥物之劑量反應曲線的最 36 201036949 Λ 高值。化合物10 (皮下給予）以劑量相關方式提高運動活 性及逆轉運動失能’傾向於產生大於L-DOPA( 12.5 mg/kg， 經口）的反應。與L-DOPA比較，兩種測試化合物逆轉運 動失能均延長且與L-DOPA同樣有效。與L-DOPA比較， 化合物10逆轉運動失能延長且與L-DOPA同樣有效。 實施例3 :化合物11之藥理學測試 Di cAMP檢定 C) 如下量測化合物刺激或抑制穩定表現人類重組D!受體 之CHO細胞中Di受體介導之CAMP形成之能力。在實驗之 前3日，將細胞以每孔！ 1000個細胞之濃度接種於96孔板 中。在實驗當曰，用經預熱G緩衝液（含有1 mM MgCl2、 0.9 mM CaCl2、1 mM IBMX (3-異丁基-1-甲基黃嘌呤）之 PB S (填酸鹽緩衝鹽水））洗務細胞一次，且檢定開始時添 加100 μ L之30 nM A68930與於G缓衝液中稀釋之測試化 合物的混合物（拮抗作用）或於G緩衝液中稀釋之測試化 ◎ 合物（促效作用）。 在37C下培育細胞20分鐘’且精由添加1〇〇从ls緩 衝液（0.1 M HC1及0.1 mM CaCl2)中止反應，且將培養板 置於4°C下1小時。添加68 /z L N緩衝液（〇·ΐ5 μ NaOH 及60mMNa〇Ac)且震盪培養板10分鐘。將6〇 ^反應 物轉移至含有40 aL 60 mM乙酸鈉（pH 6.2)之cAMP FlashPlates ( DuPont NEN)中，且添加 100 β L 1C 混合 物（50 mM 乙酸鈉（pH 6 2)、〇.1%疊氮化鈉、12 mM Ca(：l2、 37 201036949 ⑼腿（牛血清白蛋白）及G15心尬〜猜）。 在4C下i。月18小時之後，將培養板洗務一次且在而⑹

TnLux。十數器中叶數。此檢定發現活性代謝物或化合物1〇 為D1促效劑。 D2 cAMP檢定 如下量測化δ物刺激或抑制用人類d2受體轉染之 細胞中D2受體介導之抑CAMP形纟之能力。在實驗之前 3日，將細胞以每孔8000個細胞之濃度接種於96孔板中。 在實驗當日，用經預熱之G緩衝液（含有lmM Mgci2、〇 9 mMCaCh' 1 mMIBMX之PBS)洗滌細胞一次，且檢定開 始時添加100 "1之丨喹吡羅、1〇 弗斯可林及 含於G緩衝液中之測試化合物之混合物（拮抗作用）或i〇 "Μ弗斯可林及含於G緩衝液中之測試化合物之混合物（促 效作用）。 在37C下培育細胞20分鐘’且藉由添加1〇〇 “is缓 衝液（〇·1 M HC1及0.1 mM CaCl2)中止反應，且將培養板 置於4°C下1小時。添加68 /z L N緩衝液（0.15 M NaOH 及60mM乙酸鈉）且將培養板震盪ι〇分鐘。將6〇 yL反 應物轉移至含有40 μ L 60 mM NaOAc ( pH 6.2 )之cAMP FlashPlates ( DuPont NEN )中，且添加 100 # L IC 混合物 (50 mM NaOAc( pH 6.2)、0.1%疊氮化鈉、12 mM CaCh、 1% BSA 及 0.15 " Ci/mL 125I-cAMP)。在 4°C 下培育 18 小 時之後，將培養板洗滌一次且在Wallac TriLux計數器中計 38 201036949 數。此檢定發現活性代謝物或化合物為D2促效劑。 D5檢定 多巴胺在轉染hD5之CHO-Gal6細胞中以濃度依賴性 方式刺激細胞内Ca2+釋放。使細胞負載flu〇r〇_4 ( —種鈣指 示染料）1小時。藉由FLIPR (螢光成像板讀取器）監測鈣 反應（螢光變化）2.5分鐘。對各數據點雙重複孔之峰值反 應（ECw )取平均值且相對於藥物濃度繪圖。此檢定發現活 Ο 性代謝物或化合物10為D5促效劑。 6-OHDA大鼠模型 多巴胺促效劑可對D1受體、D2受體或兩者具有活性。 可使用單側6-OHDA損害之大鼠的旋轉反應評定化合物刺 激兩種受體類型及誘發旋轉之能力（Ungerstedt及 Arbuthnott，以，485 (1970) ; Setler 等人，五«/· P/zarwaco/.，419 (1978);及 Ungerstedt 等人

Or. ’

Advances in Dopamine Research」 （Kohsaka 編），

Pergamon Press, 1982, Oxford,第 219 頁）。6-OHDA ( 6- 羥基多巴胺）為神經生物學家用於選擇性殺滅實驗動物腦 内注射位點處的多巴胺激導性神經元的神經毒素。在 6-OHDA模型中，藉由向位於黑質前之内側前腦束中注射 ό-OHDA來破壞位於腦一側（單側）之黑質紋狀體多巴胺細 胞。此單側注射與多巴胺促效劑（諸如變嗎啡鹼）刺激組 合將誘發旋轉行為，因為腦僅一側受刺激。實驗由測定所 39 201036949 述化合物誘發旋轉之最低有效劑量（MED )組成。MED測 定之後’執行第二實驗以測定化合物克服奈莫必利阻斷之 MED ( MED奈料利）。奈莫必利為阻斷受體之D2拮抗劑， 因此任何觀察到之旋轉應取決於對D1受體之活性。最後， MED *其必利已知之後’使用MED * * *利劑量進行第三實驗且 觀察單獨D1拮抗劑（SCH 23390 )、單獨D2拮抗劑（奈 莫必利）之作用，及最後觀察SCH 23390與奈莫必利組合 處理之作用。此第三實驗證實該化合物對兩種受體之活 性’因為單獨任一拮抗劑僅能部分抑制由測試化合物誘發 之旋轉反應，而組合處理完全阻斷大鼠之所有旋轉（Arnt 及 Hyttel; 則co/og;;, S5⑺，346 (1985);及

Sonsalla 等人，义 ，以7⑺，18〇, (1988))。使用變嗎啡鹼作為驗證D1/D2混合促效劑原理之 化合物驗證此模型。 在此模型中’活性代謝物或化合物1 〇及化合物^ ^具 有「變嗎啡鹼」樣特徵，其中D1/D2比率為約2，相比之下， 對於變嗎啡鹼，比率為約3 ^此外，觀察到該化合物之持續 作用時間為約1 8小時，其顯著高於L-DOPA/變嗎啡鹼之持 續作用時間。對於D2促效劑（例如普拉克索及羅替戈汀） 未能觀察.到D 1組份。 優勢棋型 變嗎啡鹼及L-DOPA能夠逆轉嚴重缺乏多巴胺之小氡 模型之運動缺陷。變嗎啡驗與L_D〇PA均能刺激di及 201036949 多巴胺受體。普拉克索（一種D2樣受體促效劑）在該模型 中無效。 如下執行該等實驗：使用預先用MPTP ( 2x15 mg/kg， 皮下）處理且具有穩定損害之小鼠，而用媒劑處理的小鼠 充當正常對照組。MPTP( 1-甲基-4-苯基-1，2,3,6-四氫吡啶） 為藉由殺滅腦黑質中之某些神經元引起永久帕金森氏症症 狀之神經毒素。使用其研究猴及小鼠之疾病。在實驗當日， 用AMPT ( 25 0 mg/kg ’皮下）處理小鼠，且隨後放回其飼 〇 養籠中1.5小時’之後將其置於運動單元中之個別籠中。 AMPT( α -甲基-對酪胺酸）為短暫降低腦兒茶紛胺活性（在 此情況下尤其多巴胺含量）之藥物β ΑΜΡΤ注射之後三小 時’用活性代謝物或化合物10嘗試拯救運動缺陷，且再歷 時1_5小時記錄活性。拯救處理之後收集的前3〇分鐘數據 因操作及注射使動物緊張而被「污染」，如媒劑對照組中 含量增加所證實，因此使用最後1小時記錄之數據分析數 據。測試各種多巴胺激導性化合物逆轉此模型中所產生之 運動缺Pa之at·力。L-DOPA/苄絲肼與變嗎啡驗均以劑量依賴 性方式恢復小鼠之運動。苄絲肼為不能穿過血腦障壁之 DOPA脫羧酶抑制劑；其用於防止L_D〇pA在腦外部代謝為 多巴胺。相比之下，D2促效劑（普拉克索及溴麥角環肽） 未能恢復小鼠之運動。 使用此模型評估活性代謝物或化合物1〇是否與 L-DOPA及變嗎啡鹼同樣優於D2促效劑。對化合物ι〇進行 劑量反應實驗，且存在劑量依賴性逆轉嚴重缺乏内源多巴 201036949 胺所誘發之運動不足缺陷的趨勢。執行直接比較變嗎啡 驗、普拉克索及化合物ίο之作用的最後實驗。證實化合物 10能夠恢復用MPTP處理的小鼠之運動且優於普拉克:。 運動困難大鼠模型 使用文獻（Limdblad等人，五仏j ⑽b 叫中報導之大鼠運動困難模型檢查活性代謝物相較二 L-DOPA/节絲肼對在「帕金森氏症」大鼠中評定為異常不自 主運動（AIM)之運動困難的作用。 研究設計 研究期間’動物每曰-次在t=_2〇分鐘，〇·ΐ8〇分 受L-DOPA/节絲肼（6 mg/kg及15 mg/kg，皮下）或:接 謝物（化合物10 )(組B )。針對運動困難對動物進":戈 分。第1日-第14日：給予所有動物L_D〇pA/节絲耕（:砰 或活性代謝物（化合物10)(組B ) 。 A) 在第1曰、第3曰、第5日、第8日及第& (舰）（Lundblad 等人，細· —，2002’ 15 記錄運動困難對動物進行評分。第15曰·第％曰’： 讀評分、藉由使用&前所述之異常不自纟運動，據 f ΔΤ\Λ<：、( Τ.ηηίΙΚΙ 〇 Α 姑. 重表 120) 藥物（如組B)替代WPW輯處理組八動物。宽式 曰、第16曰、第17曰、第19曰、第22曰、第μ U 26日：根據MM評分對動物進行評分。 第 用測試 42 201036949 逆轉 l-dopa 在 6_ohd 處理八曰之後…： 運動困難 保持恆定直至第12曰 物之運動困難為10-12分，其 之運動困難（2-4分）了之下’組B動物具有顯著較少 變化。組A動物自㈠LY之運動困難程度在研究期間未 之後，其運動困難好逐^絲肼轉變為給予測試藥物 之程度。因此，與L:〇PU至針對另一、組動物所觀察到 ❹ 相比，化合物11誘發顯著較少 之運動困難且能夠減少L挪PA誘發之運動困難。 在用MPTP處理的普通絨猿中之抗帕金森氏症作用 使用6隻用MPTP處理的絨猿（連續長達5日每日20 mg/kg (溶解於無菌〇,9%生理食鹽水溶液中））進行實驗。 所有動物已預先用L_DOPA(12.5mg/kg，經口 ；外加卡比 多巴12.5mg/kg，經口）每曰投予至高達30曰而處理以誘 發運動困難。在研究之前，所有個體均展現穩定之運動缺 陷，包括基底運動活性明顯降低、不良運動協調、異常及/ 或強直姿態、降低之敏捷性及敲頭運動。投予多潘立酮， 60分鐘之後投予任何測試化合物。多潘立酮為抑制噁心及 σ區吐之抗多巴胺激導性藥物。使用測試籠評定運動活性， 該等測試籠包含置於籠中關鍵位置之8個光電開關（包含8 個紅外光束）’且中斷一個光束記錄為一次計數。隨後對每 個時間段光束計數之總數與時程的關係作圖或以總活性之 曲線下面積（AUC )呈現每個時間段光束計數之總數。由 對處理不知情之受過訓竦的觀察者評定運動失能。 43 201036949 L-DOPA ( 12.5 mg/kg，經口）提高運動活性且逆轉運 動失能，如先前所述（Smith 等人，Mov. 2002，17(5)， 887 )。選用於此挑戰之劑量為此藥物之劑量反應曲線的最 高值。化合物11 (經口給予）以及化合物1 〇 (皮下給予） 以劑量相關方式提高運動活性及逆轉運動失能，傾向於產

生大於 L-DOPA ( 12.5 mg/kg，經口）之反應。與 l-DOPA 比較，兩種測試化合物逆轉運動失能均延長且與L-DOPA 同樣有效。 試管内肝細胞檢定 自In Vitro Technologies公司，BA，USA購得低溫保存 的混合雄性大鼠肝細胞（史泊格多利）及來自1 〇位供體（男 性及女性）的混合人類肝細胞。將細胞在37〇c下於水浴中 解凍，進行活細胞計數且於總共1〇〇 μ L具有5 mM Hepes 緩衝液之杜貝科氏改良伊格爾培養基（Duibecco's modified Eagle medium )(高葡萄糖）中接種於96孔板中，對於大 鼠及人類肝細胞’各孔每毫升分別含有25〇 〇〇〇及5〇〇 〇〇〇 個細胞。15分鐘預培育之後開始培育，且對於大鼠肝細胞 在〇、5、15、30及60分鐘之時間點中止培育，且對於人 類肝細胞在0、30、60、90及120分鐘之時間點中止培育。 藉由添加等體積之含10% 1 M HC1之冰冷乙腈中止培育。 離心之後’將20 AL上清液注射於hplc管柱Atlantis dC18

3 // m，内徑 i5〇X2_i mm ( Waters, ΜA，USA)上。移動相 具有以下組成：A : 5〇/0乙腈、95¾ H20、3.7 ml/1 25% NH 44 201036949 /合牧、1.8 mL/L甲酸。移動相b : ι〇〇〇/0乙腈及〇」〇/〇甲酸。 /肢速為0.3 mi/min。操作梯度為〇%至75% b ( 5分鐘至2〇 刀鉍）’且使用 Q_T〇Fmicro 質譜儀（Waters，MA，USA) 分析溶離液。產物/代謝物之形成係藉由精確質譜量測及與 產生一致滯留時間之合成標準物對比來證實。此檢定證明 化合物11代謝為化合物。 實施例4 :化合物12之藥理學測試 〇 Di CAMP 檢定 如下量測化合物刺激或抑制穩定表現人類重組Di受體 之CHO細胞中D!受體介導之CAMP形成之能力。在實驗之 前3日，將細胞以每孔u 〇〇〇個細胞之濃度接種於96孔板 中。在實驗當曰’用經預熱G緩衝液（含有lmM MgCl2、 0_9 mM CaCl2、1 mM IBMX ( 3-異丁基-1-甲基黃嘌呤）之 PBS (磷酸鹽緩衝鹽水））洗滌細胞一次，且檢定開始時添 加100 /z L之30 nM A68930與於G緩衝液中稀釋之測試化 〇 合物的混合物（拮抗作用）或於G緩衝液中稀釋之測試化 合物（促效作用）。 在37C下培育細胞20分鐘’且藉由添加1〇〇 緩

衝液（0.1 M HC1及0.1 CaCl2)中止反應，且將培養板 置於4°C下1小時。添加68 # L N緩衝液（0.15 M Na()H 及60 mM NaOAc)且震盪培養板10分鐘。將60 v L反應 物轉移至含有40 "L 60 mM乙酸鈉（pH 6.2)之cAMp

FlashPlates( DuPont NEN)中，且添加 1〇〇 从 LIC 混合物 45 201036949 (50 mM 乙酸納（PH 6·2)、0.1%疊氛化納、12 福 CaCl2、 1%BSA(牛血清白蛋白）及 G.15 /zCi/mL125I.eAMP)。 在4 C下培月18小時之後’將培養板洗蘇一次且在WaUac TriLux计數器中計數。此檢定發現活性代謝物（亦即化合 物10 )為D1促效劑。 D2 cAMP檢定 如下量測化合物刺激或抑制用人類D2受體轉染之cH〇 細胞中D2受體介導之抑制cAMp形成之能力。在實驗之前 3曰，將細胞以每孔8000個細胞之濃度接種於“孔板中。 在實驗當日，用經預熱之G緩衝液（含有imMMgChU mM CaCl2、1 mM IBMX之PBS)洗滌細胞一次，且檢定開 始時添加100 V 1之丨喹吡羅、1〇 弗斯可林與 含於G緩衝液中之測試化合物之混合物（拮抗作用）或1〇 // Μ弗斯可林與含於G緩衝液中之測試化合物的混合物（促 效作用）。 在37C下培育細胞20分鐘，且藉由添加1〇〇私is緩 衝液（0.1 M HC1及0.1 mM CaCl2)中止反應，且將培養板 置於4°C下1小時。添加68 /z L N緩衝液（〇·ΐ5 M NaOH 及60 mM乙酸鈉）且將培養板震盪ι〇分鐘。將6〇 反 應物轉移至含有 40 // L 60 mM NaOAc ( pH 6.2 )之 cAMp

FlashPlates ( DuPont NEN)中’且添加 loo " l 1C 混合物 (50 mM NaOAc( pH 6.2)、0.1%疊氮化鈉、12 mM CaCl2、 1% BSA 及 0.15 " Ci/mL 125I-cAMP)。在 4°C 下培育 18 小 46 201036949 時之後，將培養板洗滌一次且在Wallac TriLux計數器中計 數。此檢定發現活性代謝物（亦即化合物1〇)為仏促效劑。 d5檢定 户巴細在轉染hD5之CHO-Gal6細胞中以濃度依賴性 方式刺激細胞内Ca2+釋放。使細胞負載flu〇r〇_4 (一種鈣指 示染料）1小時。藉由FLIPR (螢光成像板讀取器）監測鈣 反應（螢光變化）2.5分鐘。對各數據點雙重複孔之峰值反 〇 應（EC5〇)取平均值且相對於藥物濃度作圖（多巴胺參看圖 1)。此檢定發現活性代謝物（亦即化合物10)為d5促效 劑。 6-OHDA大鼠模型 多巴胺促效劑可對D1受體、D2受體或兩者具有活性。 可使用單側6-OHDA損害之大鼠的旋轉反應評定化合物刺 激兩種受體類型及誘發旋轉之能力（Ungerstedt及 〇

Arbuthnott; 485 (1970) ; Setler 等人，❿r. 乂 尸/zar則c〇/.，50⑷，419 (1978);及 Ungerstedt 等人， Advances in Dopamine Research」 （Kohsaka 編）, Pergamon Press，1982, Oxford，第 219 頁）。6-OHDA ( 6- 經基多巴胺）為神經生物學家用於選擇性殺滅實驗動物腦 内注射位點處的多巴胺激導性神經元的神經毒素。在 6-OHDA模型中，藉由向位於黑質前之内側前腦束中注射 6-OHDA來破壞位於腦一侧（單側）之黑質紋狀體多巴胺細 47 201036949 胞。此單側注射與多巴胺促效劑（諸如變嗎啡鹼）刺激組 合將誘發旋轉行為’因為腦僅一側受刺激。實驗由測定所 述化合物誘發旋轉之最低有效劑量（MED )組成。MED測 定之後’進行第二實驗以測定化合物克服奈莫必利阻斷之 MED (MED 。奈莫必利為阻斷〇2受體之D2拮抗劑， 因此任何觀察到之旋轉應取決於對D1受體之活性。最後， MED奈* *利已知之後，使用MED奈莫必利劑量進行第三實驗且 觀察單獨D1拮抗劑（SCH 23390 )、單獨拮抗劑（奈 莫必利）之作用，及最後觀察SCH 23390與奈莫必利組合 處理之作用。此第三實驗證實該化合物對兩種受體之活 性，因為單獨任一拮抗劑僅能部分抑制由測試化合物誘發 之旋轉反應，而組合處理完全阻斷大鼠之所有旋轉[Arnt及

Hyttel，1985, 85(3)，346 ;及 Sonsalla 等人，乂 PWm則/ 办p. r/zer·，1988 247⑴，18〇]。使用變 嗎啡鹼作為驗證D1/D2混合促效劑之原理的化合物來驗證 此模型。 ° 在此模型中，化合物10及12具有「變嗎啡鹼」樣特 徵，其中D1/D2比率為約2_4,相比之下，對於變嗎啡驗， 比率為約3。此外，觀察到該化合物之持續作用時間為約 18小時，其顯著高於L_DOPA/變嗎啡鹼之持續作用時間。 對於D2促效劑（例如普拉克索及羅替戈汀）未能觀察到 D1組份。 ' 優勢模型 48 201036949 螓 變嗎啡鹼及L-DOPA能夠逆轉嚴重缺乏多巴胺之小鼠 模型之運動缺陷。變嗎啡鹼與L-DOPA均刺激D1及受 體。普拉克索（一種D2受體促效劑）在該模型中無效。 如下執行該等實驗：使用預先用Μρτρ ( 2χ15 mg/kg， 皮下）處理且具有穩定損害之小鼠，而用媒劑處理的小鼠 充當正常對照組。MPTP( i•曱基_4_苯基^^卜四氫吡啶） 為藉由殺滅腦黑質中之某些神經元引起永久帕金森氏症症 狀之神經毋素。使用其研究猴及小鼠之疾病。在實驗當曰， ◎.用AMPT ( 250 mg/kg，皮下）處理小鼠，且隨後放回其飼 養籠中1.5小時，之後將其置於運動單元中之個別籠中。 AMPT( 甲基-對酪胺酸）為短暫降低腦兒茶酚胺活性（在 此情況下尤其多巴胺含量）之藥物。ΑΜΡΤ注射之後三小 時，用化合物10嘗試拯救運動缺陷，且再歷時15小時記 錄活性。拯救處理之後收集的前30分鐘數據因操作及注射 使動物緊張而被「污染」，如媒劑對照組中含量增加所證 實，因此使用最後1小時記錄之數據分析數據。測試各種 t) 多巴胺激導性化合物逆轉此模型中所產生之運動缺陷之能 力。L-DOPA/苄絲肼與變嗎。朴驗均以劑量依賴性方式恢復小 鼠之運動。~絲肼為不能穿過血腦障壁之D〇pa脫叛酶抑 制劑；其用於防止L-DOPA在腦外部代謝為多巴胺。相比 之下，D2促效劑（普拉克索及溴麥角環肽）未能恢復小鼠 之運動。 使用此模型評估化合物10是否與L_D〇PA及變嗎啡鹼 同樣優於D 2促效劑。對化合物1 〇進行劑量反應實驗，且 49 201036949 存在劑量依賴性读+ u > 嚴重缺乏内源多巴胺所策發夕.軍南_ 足缺陷的趨勢。執行直接比較變嗎啡驗、普拉 ： =?的最後實驗。證實化合物1"咖復用二; 處理的小乳之運動且優於普拉克索。 運動困難大鼠模型 使用文獻（Lundblad等人，細㈣/.，2G02, 15! 120)中報導之大鼠運動困難模型檢查化合& ^相較於 L-DOPA/f絲肼對在「帕金森氏症」大鼠中評定為異常不自 主運動（AIM)之運動困難的作用。 研究設計 研九期間，動物母日一次在t=_2〇分鐘，〇 _ j 分鐘接 受L-DOPA/节絲肼（6mg/kg& 15 mg/kg，皮下）或化合物 12 (組B)。針對運動困難對動物進行評分。第1日-第μ 日：給予所有動物L-DOPA/节絲肼（組Α)或化合物12(組 Β)。 在第1曰、第3曰、第5曰、第8曰及第12曰，根據 AIM sf·分、藉由使用先前所述之異常不自主運動量表 (AIMS)記錄運動困難對動物進行評分。第μ日-第26日： 用化合物12(如組B )替代L-DOPA/苄絲肼處理組a動物。 弟15曰、第16曰、第17曰、第19曰、第22曰、第24 曰及第26日··根據AIM評分對動物進行評分。 50 201036949 鱗 結果 處理八日之後’組A動物之運動困難為70-80分，其 保持匣疋直至第15曰。相比之下組B動物具有顯著較少 之運動困難（1〇_25分）。紐u .宏& 刀J組B之運動困難程度在研究期間 未變化。組A動物自給予L_D〇PA/节絲肼轉變為給予化合 物12 1〇日之後，其運動困難程度逐漸降至30-35分。因此， 與L - D Ο P A相比，化会妨j ί 1 3 物12誘發顯者較少之運動困難且能 ❹ Ο 夠減少L-DOPA誘發之運動困難。 在用MPTP處理的普通絨猿中之抗帕金森氏症作用 使用6隻用MPTP處理的絨猿（連續長達5日每日2〇 mg/kg (溶解於無菌〇.9%生理食鹽水溶液中））進行實驗。 所有動物已預先帛L_DOPA(12.5mg/kg，經口；夕卜加卡比 多巴12.5mg/kg，經口）每日投予至高達3〇曰而處理以誘 發運動困難。在研究之前，所有個體均展現穩定之運動缺 陷’包括基底運動活性明顯降低、不良運動協調、異常及/ 或強直姿態、純之敏捷性及敲頭運動。投予多潘立酮， 6〇分鐘之後投予任何測試化合物。使用測試籠評定運動活 性，該等測試籠包含置於籠中關鍵位置之8個光電_ (包 含8個紅外光束）’ j_中斷一個光束記錄為—次計數。隨 後對每個時間段光束計數之總數與時程的關係作圖或以總 活性之曲線下面積（AUC)呈現每個時間段光束計數之總 數。由對處理不知情之受過訓練的觀察者評定運動失能。 L-DOPA(12.5 mg/kg’經口）提高運動活性且逆轉運 51 201036949 動失能，如先刖所述（Smith 等人，Mov. 2002，17(5)， 8 8 7 )。選用於此挑戰之劑量為此藥物之劑量反應曲線的最 1¾值。化合物1 2 (經口給予）以及化合物1 〇 (經口給予） 以劑量相關方式提高運動活性及逆轉運動失能，傾向於產

生大於 L-DOPA ( 12.5 mg/kg，經口）之反應》與 L-DOPA 比較，兩種測試化合物逆轉運動失能均延長且與L-DOPA 同樣有效。 【圖式簡單說明】 圖1 :對映異構化合物10之晶體結構。絕對構型係藉 由「重」溴原子之反常散射測定。 圖2:多巴胺在轉染11〇5之CHO_Ga16細胞中以濃度依 賴性方式刺激細胞内Ca2+釋放的劑量-反應曲線。 【主要元件符號說明】 無 52

Claims (1)

1. 201036949 * 七、申請專利範圍： 1. — 以4aK，i(JaRH-正丙基-1，2,3,4,43,5，10，1(^八氨_ 苯并[g]喹啉-6,7-二醇或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其 係用於製備供治療帕金森氏症（parki_n,s仏咖）、同時 保持低運動困難誘發特徵的醫藥品。 2·-種⑽⑽叫·正丙基_12,3,4,4&，51〇秦八氯 苯并⑷啥啉-6,7-二醇或其醫藥學上可接受之鹽的用途，其 係用於製備供逆轉運動困難的醫藥品。 、

   3.-種（6aR，10aR)_7·正丙基 十3-二氧雜-7-氮雜-環戊二烯并[a]葱或其醫藥學上可接受 之鹽的用it ’其係用於製備供治療帕金森氏症、同時= 低運動困難誘發特徵的醫藥品。 4. ，一氧雜-7-氮雜-環戊二烯并[a]蒽或其醫藥學上可接受 之鹽的用途，其係用於製備供逆轉運動困難的醫藥品。 氫 種（4aR，1〇aR)小正丙基-2,3,4,4a，5’7,8,9，HU〇a- + 田本开[g]0_6•酮或其醫藥學上可接受之鹽的用途， 發特製備供治療帕金森氏症、同時保持低運動困難誘 發特徵的醫藥品。 心勒困難涿 種 HalUOaR)-；^正丙基 _2,3,4,4a,5 7,8，m 其係用㈣^藥學上可接受之鹽的用途， 、/、用於製備供逆轉運動困難的醫藥品。 7.如中請專利範圍第4 6項中任—項之用途，其中該 困難與基底神經節相關性運動失調相關。 53 201036949 8. 如申請專利範圍第7項之用途，其中該運動困難與帕 金森氏症相關。 9. 如申請專利範圍第8項之用途，其中該運動困難與特 發性帕金森氏症或腦炎後帕金森氏症候群（parkinsonism ) 相關。 10·如申請專利範圍第9項之用途，其中該運動困難與 帕金森氏症之停藥期緊張不全相關。 11. 如申請專利範圍第10項之用途，其中該運動困難作 為治療帕金森氏症之治療劑的副作用產生。 12. 如申請專利範圍第11項之用途，其中該運動困難與 多巴胺補充療法相關。 13. 如申請專利範圍第12項之用途，其中該多巴胺補充 治療劑選自由以下者所組成之群組：羅替戈汀 (rotigotine )、羅匹尼洛（ropinirole )、普拉克索 (pramipexole )、卡麥角林（cabergoline )、溴麥角環肽 (bromocriptine )、麥角乙腺（lisuride )、培高利特 (pergolide )、L_DOPA 及變嗎 D非驗（apomorphine )。 14. 如申請專利範圍第13項之用途，其中該運動困難由 反覆投予L-DOPA建立。 八、圖式： (如次頁） 54