TR201815768T4 - T hücre bağlayıcılar olarak bispesifik IgG antikorları. - Google Patents
T hücre bağlayıcılar olarak bispesifik IgG antikorları. Download PDFInfo
- Publication number
- TR201815768T4 TR201815768T4 TR2018/15768T TR201815768T TR201815768T4 TR 201815768 T4 TR201815768 T4 TR 201815768T4 TR 2018/15768 T TR2018/15768 T TR 2018/15768T TR 201815768 T TR201815768 T TR 201815768T TR 201815768 T4 TR201815768 T4 TR 201815768T4
- Authority
- TR
- Turkey
- Prior art keywords
- cells
- bispecific
- cell
- sequence
- igg
- Prior art date
Links
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 title description 125
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 title description 5
- 102100026094 C-type lectin domain family 12 member A Human genes 0.000 claims abstract description 91
- 101000912622 Homo sapiens C-type lectin domain family 12 member A Proteins 0.000 claims abstract description 87
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 89
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 24
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 18
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 claims description 16
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 16
- 230000035772 mutation Effects 0.000 claims description 16
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims description 16
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 15
- 230000003993 interaction Effects 0.000 claims description 14
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 14
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 claims description 8
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 8
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 7
- 101100112922 Candida albicans CDR3 gene Proteins 0.000 claims description 6
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 claims description 6
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 claims description 6
- 102100035361 Cerebellar degeneration-related protein 2 Human genes 0.000 claims description 5
- 101000737796 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related protein 2 Proteins 0.000 claims description 5
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 claims description 4
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 4
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 claims description 4
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 4
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 101000737793 Homo sapiens Cerebellar degeneration-related antigen 1 Proteins 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 abstract description 24
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 abstract description 24
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 abstract description 18
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 177
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 85
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 71
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 60
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 60
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 60
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 47
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 39
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 23
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 21
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 21
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 19
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 19
- 230000030279 gene silencing Effects 0.000 description 19
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 18
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 18
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 17
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 16
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 16
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 16
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 16
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 15
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 15
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 15
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 description 13
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 description 13
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 13
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 13
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 13
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 12
- 102100036011 T-cell surface glycoprotein CD4 Human genes 0.000 description 12
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 12
- 230000034994 death Effects 0.000 description 11
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 10
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 10
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 10
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 9
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 9
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 8
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 8
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 8
- 230000002147 killing effect Effects 0.000 description 8
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- -1 coatings Substances 0.000 description 7
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 7
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 7
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 7
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 7
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 7
- 230000004044 response Effects 0.000 description 7
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 7
- 101001057504 Homo sapiens Interferon-stimulated gene 20 kDa protein Proteins 0.000 description 6
- 101001055144 Homo sapiens Interleukin-2 receptor subunit alpha Proteins 0.000 description 6
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 6
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 6
- 102100026878 Interleukin-2 receptor subunit alpha Human genes 0.000 description 6
- 210000000662 T-lymphocyte subset Anatomy 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 6
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 5
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 5
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 5
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 5
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 5
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 5
- 238000004132 cross linking Methods 0.000 description 5
- 238000004163 cytometry Methods 0.000 description 5
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 5
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 5
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 5
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 5
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 5
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 5
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- 102100036301 C-C chemokine receptor type 7 Human genes 0.000 description 4
- 101710188619 C-type lectin domain family 12 member A Proteins 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 4
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 4
- 101000716065 Homo sapiens C-C chemokine receptor type 7 Proteins 0.000 description 4
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 4
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 238000007792 addition Methods 0.000 description 4
- 230000000981 bystander Effects 0.000 description 4
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 4
- 206010052015 cytokine release syndrome Diseases 0.000 description 4
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 4
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 4
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 4
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 2',7'-difluorofluorescein Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(F)C(=O)C=C2OC2=CC(O)=C(F)C=C21 VGIRNWJSIRVFRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 3
- 210000001266 CD8-positive T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 102100025137 Early activation antigen CD69 Human genes 0.000 description 3
- 238000012413 Fluorescence activated cell sorting analysis Methods 0.000 description 3
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 3
- 102100026122 High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Human genes 0.000 description 3
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 3
- 101000934374 Homo sapiens Early activation antigen CD69 Proteins 0.000 description 3
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 3
- 101000913074 Homo sapiens High affinity immunoglobulin gamma Fc receptor I Proteins 0.000 description 3
- 101001091242 Homo sapiens Immunoglobulin kappa joining 1 Proteins 0.000 description 3
- 101001138089 Homo sapiens Immunoglobulin kappa variable 1-39 Proteins 0.000 description 3
- 101000917858 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-A Proteins 0.000 description 3
- 101000917839 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Proteins 0.000 description 3
- 101000946889 Homo sapiens Monocyte differentiation antigen CD14 Proteins 0.000 description 3
- 102100026120 IgG receptor FcRn large subunit p51 Human genes 0.000 description 3
- 101710177940 IgG receptor FcRn large subunit p51 Proteins 0.000 description 3
- 102100034892 Immunoglobulin kappa joining 1 Human genes 0.000 description 3
- 102100020910 Immunoglobulin kappa variable 1-39 Human genes 0.000 description 3
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 3
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 3
- 102100029185 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor III-B Human genes 0.000 description 3
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 3
- 230000010799 Receptor Interactions Effects 0.000 description 3
- 208000007660 Residual Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 3
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 3
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 3
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 3
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000005734 heterodimerization reaction Methods 0.000 description 3
- 230000005934 immune activation Effects 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 3
- 230000002101 lytic effect Effects 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 6-carboxyfluorescein Chemical compound C12=CC=C(O)C=C2OC2=CC(O)=CC=C2C11OC(=O)C2=CC=C(C(=O)O)C=C21 BZTDTCNHAFUJOG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100031585 ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Human genes 0.000 description 2
- BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M Formate Chemical compound [O-]C=O BDAGIHXWWSANSR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 101000777636 Homo sapiens ADP-ribosyl cyclase/cyclic ADP-ribose hydrolase 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000917826 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Proteins 0.000 description 2
- 101000917824 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-b Proteins 0.000 description 2
- 101000934338 Homo sapiens Myeloid cell surface antigen CD33 Proteins 0.000 description 2
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 2
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 102100029204 Low affinity immunoglobulin gamma Fc region receptor II-a Human genes 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 102100035877 Monocyte differentiation antigen CD14 Human genes 0.000 description 2
- 102100025243 Myeloid cell surface antigen CD33 Human genes 0.000 description 2
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 2
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 2
- 230000009471 action Effects 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000020411 cell activation Effects 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 230000000875 corresponding effect Effects 0.000 description 2
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 2
- 210000003162 effector t lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 2
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 230000006870 function Effects 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- PQNFLJBBNBOBRQ-UHFFFAOYSA-N indane Chemical compound C1=CC=C2CCCC2=C1 PQNFLJBBNBOBRQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 2
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 2
- 108010026228 mRNA guanylyltransferase Proteins 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 239000011325 microbead Substances 0.000 description 2
- 210000000066 myeloid cell Anatomy 0.000 description 2
- 108010068617 neonatal Fc receptor Proteins 0.000 description 2
- 230000003448 neutrophilic effect Effects 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 210000005105 peripheral blood lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 210000000225 synapse Anatomy 0.000 description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 description 2
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 1
- NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 1-methylethyl 11-methoxy-3,7,11-trimethyl-2,4-dodecadienoate Chemical compound COC(C)(C)CCCC(C)CC=CC(C)=CC(=O)OC(C)C NFGXHKASABOEEW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 2-amino-4,6-dichloropyrimidine-5-carbaldehyde Chemical group NC1=NC(Cl)=C(C=O)C(Cl)=N1 GOJUJUVQIVIZAV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 3,3',5,5'-tetramethylbenzidine Chemical compound CC1=C(N)C(C)=CC(C=2C=C(C)C(N)=C(C)C=2)=C1 UAIUNKRWKOVEES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 7-Cyan-hept-2t-en-4,6-diinsaeure Natural products C1=2C(O)=C3C(=O)C=4C(OC)=CC=CC=4C(=O)C3=C(O)C=2CC(O)(C(C)=O)CC1OC1CC(N)C(O)C(C)O1 STQGQHZAVUOBTE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000006678 Abdominal Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 208000003950 B-cell lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000025321 B-lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 235000018906 Bauhinia malabarica Nutrition 0.000 description 1
- 244000300022 Bauhinia malabarica Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 101150066577 CD14 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100030886 Complement receptor type 1 Human genes 0.000 description 1
- UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N Cytarabine Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 UHDGCWIWMRVCDJ-CCXZUQQUSA-N 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102100029722 Ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1 Human genes 0.000 description 1
- OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N Ethane Chemical compound CC OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100020715 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Human genes 0.000 description 1
- 101710162577 Fms-related tyrosine kinase 3 ligand protein Proteins 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 1
- 208000021519 Hodgkin lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000727061 Homo sapiens Complement receptor type 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001012447 Homo sapiens Ectonucleoside triphosphate diphosphohydrolase 1 Proteins 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101001008874 Homo sapiens Mast/stem cell growth factor receptor Kit Proteins 0.000 description 1
- 101001094700 Homo sapiens POU domain, class 5, transcription factor 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000713275 Homo sapiens Solute carrier family 22 member 3 Proteins 0.000 description 1
- 101000716102 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD4 Proteins 0.000 description 1
- 101000946843 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 102100037850 Interferon gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 108090001090 Lectins Proteins 0.000 description 1
- 102000004856 Lectins Human genes 0.000 description 1
- 108060001084 Luciferase Proteins 0.000 description 1
- 239000005089 Luciferase Substances 0.000 description 1
- 102100027754 Mast/stem cell growth factor receptor Kit Human genes 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102100035423 POU domain, class 5, transcription factor 1 Human genes 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 238000011579 SCID mouse model Methods 0.000 description 1
- 102100034922 T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain Human genes 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 1
- 239000003070 absorption delaying agent Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000009833 antibody interaction Effects 0.000 description 1
- 238000009175 antibody therapy Methods 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003429 antifungal agent Substances 0.000 description 1
- 229910052788 barium Inorganic materials 0.000 description 1
- DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N barium atom Chemical compound [Ba] DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000029918 bioluminescence Effects 0.000 description 1
- 238000005415 bioluminescence Methods 0.000 description 1
- 229960000074 biopharmaceutical Drugs 0.000 description 1
- 210000003969 blast cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 230000022534 cell killing Effects 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011260 co-administration Methods 0.000 description 1
- 238000003501 co-culture Methods 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000002301 combined effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 230000002596 correlated effect Effects 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 229960000684 cytarabine Drugs 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 1
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 1
- 238000007405 data analysis Methods 0.000 description 1
- STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N daunorubicin Chemical compound O([C@H]1C[C@@](O)(CC=2C(O)=C3C(=O)C=4C=CC=C(C=4C(=O)C3=C(O)C=21)OC)C(C)=O)[C@H]1C[C@H](N)[C@H](O)[C@H](C)O1 STQGQHZAVUOBTE-VGBVRHCVSA-N 0.000 description 1
- 229960000975 daunorubicin Drugs 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000000375 direct analysis in real time Methods 0.000 description 1
- 239000002612 dispersion medium Substances 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 238000012063 dual-affinity re-targeting Methods 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000000925 erythroid effect Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000007306 functionalization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 230000002489 hematologic effect Effects 0.000 description 1
- 102000046699 human CD14 Human genes 0.000 description 1
- 150000002466 imines Chemical class 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 1
- 238000011368 intensive chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000021995 interleukin-8 production Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 239000007951 isotonicity adjuster Substances 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 239000002523 lectin Substances 0.000 description 1
- 230000000503 lectinlike effect Effects 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 231100000682 maximum tolerated dose Toxicity 0.000 description 1
- 210000003593 megakaryocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000010197 meta-analysis Methods 0.000 description 1
- 239000002547 new drug Substances 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000035515 penetration Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000003285 pharmacodynamic effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 230000004492 positive regulation of T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 208000017426 precursor B-cell acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 1
- 238000004393 prognosis Methods 0.000 description 1
- 230000000770 proinflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000011002 quantification Methods 0.000 description 1
- 210000003370 receptor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013595 supernatant sample Substances 0.000 description 1
- 238000002626 targeted therapy Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001052 transient effect Effects 0.000 description 1
- 238000011277 treatment modality Methods 0.000 description 1
- QSLPNSWXUQHVLP-FIBGUPNXSA-N trideuterio($l^{1}-sulfanyl)methane Chemical group [2H]C([2H])([2H])[S] QSLPNSWXUQHVLP-FIBGUPNXSA-N 0.000 description 1
- 231100000402 unacceptable toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 1
- 238000010200 validation analysis Methods 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2851—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the lectin superfamily, e.g. CD23, CD72
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3061—Blood cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
- C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/526—CH3 domain
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
- C07K2317/53—Hinge
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/55—Fab or Fab'
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/569—Single domain, e.g. dAb, sdAb, VHH, VNAR or nanobody®
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/71—Decreased effector function due to an Fc-modification
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Hematology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
Abstract
Mevcut buluş, insan IgG bispesifik antikorları sağlar, burada antikorun bir kolu immün efektör hücreler üzerinde bir epitopu bağlarken diğer kol, CLEC12A'yı veya bunun fonksiyonel bir eşdeğerini hedef alır. Bu antikorların MDS, CML veya AML gibi malignitelere karşı farmasötik kullanımları da sağlanır.
Description
TARIFNAME
T HÜCRE BAGLAYICILAR OLARAK BISPESIFIK IGG ANTIKORLARI
TEKNIK SAHA
Bulus, antikor mühendisligi alani ile ilgilidir. Özellikle bu, anormal hücreleri
içeren hastaliklarin tedavisine yönelik terapötik (insan) antikorlar alani ile
ilgilidir. Daha belirgin olarak bu, tümörlerin tedavisi için bispesifik antikorlar ile
BULUSUN ALT YAPISI
Laboratuvarlarda bispesifik antikorlar, immün efektör hücrelerin tümör
hücrelerine yeniden hedeflenmesi için yaygin sekilde kullanilmistir. Bu durumda
bir baglanma alani, bir tümör iliskili antijene (TAA) ve örnegin T hücreleri
üzerindeki CD3 gibi efektör hücreler üzerinde bir tetikleme molekülüne karsi
ve bir tümör hücresi ile iliskili antijeni hedef alan birinci bispesifik antikorlar
kemirgen yapilidir ve hibrit hibridomalar kullanilarak üretilmistir (Liu et al. 1985
Eur.J.lmm. 17:105). Bu hibrit hibridomalarda Ig agir ve hafif zincirlerin tekrar
siralanmasi, agir ve hafif zincir yanlis eslemesinden ortaya çikan monospesifik ve
fonksiyonel olmayan bispesifik antikorlarin çok daha genis bir havuzu içerisinde
bispesifik fonksiyonel antikor moleküllerinin üretimi ile sonuçlanmistir. Bunlarin
ikili spesifikligi nedeniyle bu fonksiyonel bispesifik antikorlar, ilgili antijeni
gösteren tümör hücrelerin parçalanmasi ile sonuçlanan sitotoksik fonksiyonu
tetiklemek ve hücreleri hedef almak üzere mürin ve insan sitotoksik T lenfositlere
(CTL) baglanabilmistir. Ancak poliklonal dinlenen indan T hücreleri ile tümör
hücre parçalanmasinin CD3XTAA bispesifik IgG aracili indüksiyonu, es-
stimülasyonun eklenen ekzojenöz IL-2 veya anti-CD28 mAb ile saglanmamasi
01574-P-0003
durumunda gerçeklestirilememistir. Bu, sadece IL-27nin es-uygulanmasi üzerine
dinlenen insan T lenfositleri ile CD19 pozitif REH B-ALL tümör hücre hattinin
parçalanmasini indükleyebilen hibrit siçan lgG2b/fare IgGl CD3XCD19
vd., benzer bir siçan IgG2b/fare IgG2a CD3xEpcam inolekülü kullanarak, Epcam-
pozitif tümör hücrelerinin bispesifik IgG-indüklü parçalanmasinin, ekzojenöz lL2
ilavesi olmaksizin hem periferik kan mononükleer hücrelerini (PBMC) hem de
tümör hücreleri içeren karisik hücre kültürlerinde gerçeklestirilemedigini
pozitif yardiinci hücreler ile etkilesimi yoluyla bu etkiye neden oldugunu
belirtmislerdir. Özellikle güçlü aktivasyon potansiyeli, diger belirtilen
kombinasyonlarin (örnegin, fare lgG2a/fare lgGl veya siçan lgG2b/fare lgGl)
aksine Fcy reseptör-pozitif yardimci hücreleri sadece baglamayan ayni zamanda
bunlari aktive eden hibrit alt sinif kombinasyonu fare IgG2a/siçan IgG2b ile
iliskilendirilmistir. Ayrica katumaksomab olarak bilinen, triomAb CD3XEpcam
bispesifik antikor olarak adlandirilan bu antikor, klinik olarak gelistirilmistir ve
epitel kökenli abdominal tümörlerin geçici tedavisi için Avrupaida tescillenmistir.
Bispesifik antikor belirgin sekilde klinik etkinlik gösterirken bunun kemirgen
yapisi, tekrarli dozlama üzerinde anti-ürün immün yanitlarini indükler ve bu
nedenle bu formatin yaygin uygulamasini Önler.
Alternatif CD3XTAA formatlarinin, hibrit kemirgen triomAb formati ile iliskili
immünoj enisite problemlerini ve üretim sorunlarini çözdügü kesfedilmistir. Bu tür
formatlar genellikle tam uzunlukta insan lgG moleküllerinden sapan
immünoglobülin benzeri moleküllerdir ve dünya çaginda ag
macrogenics.com/Platforms-DART.html adresinde Macrogenics tarafindan
gelistirilen Çift-Atiniteli Yeniden-Hedefleme (DARTTM) molekülleri, Micromet.
Bispesifik T Hücre Baglayici (BiTE®) molekülleri, Abbott tarafindan gelistirilen
Ikili Degisken Domenli -immünoglobülin (DVD-IgTM) molekülleri ve dünya
01574-P-0003
çaginda ag affimed.com/tandab-recruit adresinde Affimed tarafindan gelistirilen
TandAb® RECRUIT molekülleri gibi molekülleri içerir. Bu formatlarin biri için
bir CD3XCD19 diabodi kullanilarak CD19-pozitif tümör hücrelerini parçalamak
üzere periferik kan lenfositlerinin basarili yeniden hedeflenmesinin, bu noktada
anti-CD3 antikor arti insan IL-2 kullanilarak, periferik kan T lenfositlerinin ön
aktivasyonunu gerektirdigi gösterilmistir (Kipriyanov et al. 1998 [nt.J.Can.
Blood 95:2098) gibi diger formatlar, dinlenen T hücrelerinin ön aktivasyonunu
gerektirmez ve oldukça etkili bir sekilde in vitro antijen pozitif tümör hücre
TAAilari hedefleyen BiTE®°lerin kullanildigi ek çalismalar, BiTE® formatinin
güçlü etkinliginin, antijen boyutu ile ve özellikle TAA üzerinde epitopun tümör
hücre membranina mesafesi ile iliskili oldugunu ortaya çikarmistir (Bluemel et al.
etkili olusumu, ayrica küçük boyutlu BiTE® formatina baglandigi düsünülen
potansiyellerine yönelik yapisal temeli olusturmak üzere açiklanan (Offner et al.
gösterilmistir. Boyutun önemli olmasi halinde bu, intakt lgG gibi daha büyük
moleküllerin etkili sitolitik sinapslari olusturmak üzere çok büyük oldugunu
belirtir. CD3xCDl9 BiTE®, blinatuinomab, refraktör Hodgkin olmayan lenfoma
ve akut lenfatik lösemi hastalarinda dikkate deger klinik etkinlik göstermistir
seviyelerde oldukça etkili tümör hücre parçalanmasi göstermesine ragmen bu
bispesifik formatin hastalara uygulanmasi, önemli zorluklar ile iliskilidir. Bunlarin
küçük boyutu nedeniyle BiTE®,ler, dolasimdan hizli sekilde temizlenmistir ve
hastalarin dozlanmasi bu nedenle sürekli infüzyon gerektirir. Dozlama rejimi, 2
aydan daha uzun bir sürede oldugunda bu tedavi, hastalarin yasam kalitesi
üzerinde önemli bir etkiye sahip olur.
Dolayisiyla immünojenik olmaksizin ve sadece sinirli yan etkiler ile sürekli
infüzyona yönelik gereksinim olmaksizin intravenöz uygulama üzerine uzun
01574-P-0003
dolasimi saglayan yarilanma ömrünü kombine eden anormal hücrelerin ortadan
kaldirilinasinda IgG moleküllerini baglayan etkili tam uzunlukta bispesifik T
hücreye yönelik bir ihtiyaç hala mevcuttur.
SEKILLERIN KISA AÇIKLAMASI
SEKIL l: CLEC12A ve ilgili diziler.
SEKIL 2: Çesitli antikorlar ile T-hücre aktivasyonu: monoklonal iki
degerlikli CD3 IgG, bispesifik CD3XCLEC12 IgG, bispesifik CD3xizotip
kontrol IgG, monoklonal iki degerlikli CLEC12A IgG, monoklonal iki
SEKIL 3: CD3XCLEC12A bispesifik IgG ve kontrol antikorlari ile HL60
hücrelerinin spesifik parçalanmasi.
SEKIL 4: CD3XCLEC12A bispesifik lgG ve kontrol antikorlari (E:T
oranlari) ile HL60 hücrelerinin spesifik parçalanmasi.
SEKIL 5: Çesitli CLEC12A kollari & sabit CD3 kolundan olusan birkaç
CD3XCLEC12A bispesifik lgG molekülü ve kontrol antikorlari ile HL60
hücrelerinin spesifik parçalanmasi.
SEKIL 6: Fc susturma (DMîIkili mutant; TM: üçlü mutant; WTîdogal
sus. sifir FC susturma) ile kombinasyon halinde CD3XCLEC12A
bispesifik lgG ile HL60 hücrelerinin spesifik parçalanmasi.
SEKIL 7: Fc susturmasi, FcRn baglanmasini etkilemez.
SEKIL 8: T hücre proliferasyonunun CD3XCLEC12A bsAb hedef spesifik
indüksiyonu.
SEKIL 9: Saglikli donörlere kiyasla AML hastalarinin CD8+ T hücre
kompartimani.
SEKIL 10: Spesifik CD3XCLEC12A DM-Fc, AML hasta T hücreleri ile T
hücre aktivasyonu ve HL60 tümör hücre parçalanmasini indüklemistir.
SEKIL ll: Otolog AML hasta T hücreleri ile AML blastlarinin spesifik
parçalanmasi.
SEKIL 12: Hasta T hücreleri ile spesifik monosit parçalanmasi.
01574-P-0003
SEKIL 13: FC susturinasi, seyirci hücre sitokin salimini önemli ölçüde
ortadan kaldirir.
SEKIL l4A: HPB-ALL hücreleri üzerinde anti-CD3 antikorlarini boyayan
SEKIL l4B: Plaka bagli IgG. CF SE ile etiketlenmis T hücreleri, FACS ile
. günde okuma
FIG 152HL60 sitotoksisite analizi
FIG 16: HL60 hücreleri üzerinde anti-CLEC12A antikorlarini boyayan
SEKIL 17: HL60 sitotoksisite analizi
FIG 18: FACS analizi
FIG 19: HL60 sitotoksisite analizi
FIG 20: CD3-spesifik ve CLECIZA-spesifik Fab kollarinin VH dizileri.
012 ortak hafif zincirin VL dizisi. CDR dizileri koyu ve alti çizilidir.
BULUSUN KISA AÇIKLAMASI
Mevcut bulus, AML tedavisi için bir tam insan IgG bispesifik tam uzunlukta
antikor ile ilgilidir. Bir antikor kolu, immün efektör hücreler üzerinde bir epitopu
baglarken, CD3, diger kol, %90-95 de novo ve durumu kötüye giden AML
hastalarinda ifade edilen bir miyeloid hücre spesifik yüzey hedefi olan
CLEClZAiyi hedef alir. CLEC12A, AML lösemik kök hücrelerinde ifade edilir
ancak normal hematopoetik hücrelerde ifade edilmez. CD33iün aksine CLECIZA,
eritroid prekürsörler veya megakaryositlerde ifade edilmez bu nedenle mevcut
bulusa ait CD3xCLEC12A bispesifik IgGl antikor, platelet veya kirmizi kan
hücre deplesyonunu indüklememelidir. Kemik iligi hücre kolonileri ile deneyler,
normal kemik iliginde CLEC12A+ hücrelerinin deplesyonununa palteletlere ve
kirmizi kan hücrelerine yol açan miyeloid soylarini etkilemedigini göstermistir.
Tercih edilen bir düzenlemede mevcut bulusa göre bir CD3XCLEC12A bispesifik
baglanmasindan ortaya çikan spesifik olmayan immün aktivasyonunu azaltmak
01574-P-0003
amaciyla modifiye edilmis bir FC bölgesi içerir. Önceki teknikteki triomAb
bispesifik antikora yönelik açiklanan verilere dayanarak bir tamamen insan IgGl
formatinin bir CD3XTAA bispesif'ik lgG”sinin T hücrelerin ön aktivasyonuna
yönelik gereksinim olmaksizin dinlenen periferik kan lenfositlerinde litik anti-
tümör aktivitesini indükleyebildigi oldukça süphelidir. Ek olarak BiTE®
formatina yönelik mevcut veriler, tam uzunlukta bir IgG molekülünün tümör
hücreleri ile efektör hücreleri arasinda etkili sitolitik sinapslar olusturmak için çok
büyük oldugunu belirtmistir. Sasirtici bir sekilde tam olarak insan bir
CD3XCLEC12A bispesifik tam uzunlukta IgG1`in in vitro CLEC12A-pozitif
HL60 AML tümör hücrelerinin oldukça etkili T hücre aracili parçalanmasmi
indükleyebildigini gösterilmistir. Aslinda etkili parçalamaya, T hücrelerinin
önceki aktivasyonuna gerek olmaksizin PBMC”den saflastirilan dinlenen T
lenfositler ile aracilik edilmistir. Ek olarak bu litik aktivitenin, analiz ortam içeren
insan serumunda gerçeklestirildiginde bu litik aktivitenin asiri insan lgG”si
varligindan etkilenmesi nedeniyle HL60 hücrelerinde bulunan FcyR ile
etkilesimlere zorunlu olarak bagli olmadigi gösterilmistir. Bu, T hücrelerinin ön
aktivasyonuna yönelik gereksinim veya aktif FcyR etkilesimlerine yönelik
gereksinim olmaksizin bir tam uzunlukta insan IgGl bispesifik T hücre baglayici
antikorun etkili tümör hücre parçalamasi uyguladigi ilk zamandir. Etkili
parçalanma, BiTE® molekülleri ile karsilastirildiginda nispeten büyük boyutlu
reseptör etkilesimlerini daha fazla azaltmak üzere CD3XCLEC12A bispesifik
tümör hücresi parçalanmasi ile sonuçlanmistir. Bir bispesifik insan IgGl T hücre
baglayici antikor, bir insan IgG1°in daha az immünojenik olmasi ve dolayisiyla
tekrar edilen terapi için uygulanabilmesi nedeniyle hibrit altsinif kombinasyonu
fare IgGZa/siçan IgGZb”den faydalanan mevcut IgG7ye göre avantajlara sahiptir.
Ek olarak bir tam uzunlukta bispesifik insan IgGl T hücre baglayici antikor, tam
uzunlukta insan IgG1”in dolasimdan hizli bir sekilde temizlenmemesi ve
hastalarin dozlanmasinin bu nedenle hastalar için daha faydali olan, sürekli
01574-P-0003
infüzyon gerektirmemesi nedeniyle DARTTM, TandAb® veya BiTE® gibi
iinmünoglobülin/benzeri moleküllere göre avantajlara sahiptir.
DÜZENLEMELER
Bulus, istemlere göre bir bispesifik IgG antikor saglar, burada söz konusu
bispesifik lgG antikor CLEC12A°yi spesifik olarak taniyan bir kol ve
CLEC12A°yi ifade eden anormal bir hücreye bu tür hücreleri temin edebilen,
iinmün efektör hücreler üzerindeki bir antijeni, CD3, spesifik olarak taniyan ikinci
bir kol içerir.
Burada kullanildigi üzere “CLEC12A3yi spesifik olarak tanir” terimi, söz konusu
kolun CLEC12A°nin söz konusu antikor çevresinde bulundugu durumda
CLEC12A°yi spesifik olarak tanima kapasitene sahip oldugu anlamina gelir.
Benzer sekilde “immün efektör hücreler üzerindeki antijeni spesifik olarak tanir”
terimi, söz konusu kolun, söz konusu antijenin söz konusu antikor çevresinde
bulundugunda söz konusu antijeni spesifik olarak tanima kapasitesine sahip
oldugu anlainina gelir. Bir antikor araciligiyla bu tür antijeni tanima islemine tipik
olarak antikorun tamamlayici bölgeleri ve antikorlarin rastgele, spesifik olamayan
yapismasina karsilik olarak bu iki yapinin kesinlik (bir kilit ve anahtara benzer bir
etkilesim) ile birlikte baglanmasina olanak taniyan hem antijen hem de antikor
kolonun spesifik üç boyutlu yapisi aracilik eder. Bir antikor bir antijenin bir
epitopunu tipik olarak tanidiginda ve bu tür bir epitop da diger bilesiklerde
bulundugunda “CLEC12A'yi spesifik olarak taniyan” ve “immün efektör hücreler
üzerindeki bir antijeni spesifik olarak taniyan” mevcut bulusa göre antikorla r da
bu tür bilesiklerin ayni türde epitop içermesi halinde diger bilesikleri taniyabilir.
Bu nedenle “CLEC12A7y1 spesifik olarak tanir”, “immün efektör hücreler
üzerindeki bir antijeni spesifik olarak tanir” ve “CD39ü spesifik olarak tanir”
terimleri, ayni (türde) epitopu içeren diger bilesiklere antikorlarin baglanmasini
hariç tutar. Bunun yerine çapraz reaktiviteye olanak taninir. Mevcut bulusa göre
bir antikor tipik olarak CLEClZAiyi ve immün efektör hücreler üzerindeki bir
01574-P-0003
antijeni, CD3, asagida daha detayli sekilde açiklandigi üzere en az 1x10-5 Milik
bir baglanma afinitesi ile baglayabilir.
Burada kullanildigi üzere “antikor” terimi, bir antijen üzerinde bir epitopu
baglayan bir veya daha fazla domen içeren, proteinlerin immünoglobülin sinifina
ait olan bir proteinli molekülü ifade eder, burada bu tür domenler degisken bir
antikor bölgesinden türetilir veya bunun ile dizi homolojisini paylasir. Terapötik
kullanima yönelik antikorlar tercihen tedavi edilecek öznenin dogal antikorlarina
mümkün oldugunca yakindir (örnegin insan özneler için insan antikorlar). Antikor
baglanmasi, spesifiklik ve afinite terimleri bakimindan ifade edilir. Spesifiklik,
antijen veya epitopunun baglanma doineni ile spesifik olarak baglandigini belirler.
Afinite, belirli bir antijen veya epitopa baglanma mukavemetine yönelik bir
ölçüdür. Spesifik baglanma veya “spesifik olarak tanima”, en az 1x10-5 M, daha
çok tercihen lxlO-7 M, daha çok tercihen 1x10-9Miden daha yüksek atiniteler ile
baglanma olarak tanimlanir. Tipik olarak terapötik uygulamalara yönelik
antikorlar, lxlO-lO Miye kadar veya hatta daha yükse afinitelere sahiptir. Mevcut
bulusa ait antikorlar tipik olarak insan lgG alt sinifinin bispesifik tam uzunlukta
antikorlaridir. Tercihen mevcut bulusa ait antikorlar, insan IgGl alt sinifina
sahiptir.
Mevcut bulusa göre 'tam uzunlukta lgG', bir intakt IgG3nin tüm fonksiyonlarina
zorunlu olarak sahip olmayan, esas olarak tam bir IgG içeren sekilde tanimlanir.
Süpheye mahal vermemek adina bir tam uzunlukta lgG, iki agir ve iki hafif zincir
içerir. her bir zincir, sabit (C) ve degisken (V) bölgeleri içerir, bunlar CHl, CHZ,
CH3, VH ve CL, VL olarak gösterilen domenler halinde parçalanabilir. Bir lgG
antikoru, Fab kisminda bulunan degisken bölge domenleri vasitasiyla antijene
baglanir ve baglanma isleminden sonra çogunlukla Fc kismi ile olmak üzere sabit
domenler yoluyla immün sisteminin hücreleri ve molekülleri ile etkilesim
kurabilir. 'Degisken bölge domeni', 'degisken bölge`, 'degisken domen', 'VH/VL
çifti', 'VH/VL', 'Fab kismi', 'Fab kolu', 'Fab' veya 'kol' terimleri burada
degistirilebilir bir biçimde kullanilir. Mevcut bulusa göre tam uzunlukta
01574-P-0003
antikorlar, istenen karakteristikleri saglayan mutasyonlarin mevcut olabildigi IgG
moleküllerini kapsar. Bu tür mutasyonlar, bölgelerin herhangi birinin büyük
kismina ait delesyonlar olmamalidir. Ancak bir veya birkaç amino asit kalintisinin
dilindigi IgG molekülleri, ortaya çikan IgG molekülünün baglanma
karakteristikleri esas olarak degistirilmeksizin` "tam uzunlukta IgG" terimi
içerisinde bulunur. Örnegin bu tür IgG molekülleri, tercihen CDR bölgeleri
disinda 1 ile 10 arasinda amino asit kalintisinin bir veya daha fazla delesyonuna
sahip olabilir, burada silinen amino asitler 1gG°nin baglanma spesifikligi için
önemli degildir.
Tam uzunlukta IgG antikorlari, bunlarin uygun yarilanma ömrü ve
iinmünoj enisite nedenlerinden dolayi tamamen otolog (insan) moleküllerine yakin
olarak kalma gereksiniminden dolayi tercih edilir. Bulusa göre bispesifik lgG
antikorlari kullanilir. Tercih edilen bir düzenlemede bispesifik tam uzunlukta
dayanarak tercih edilir. Insanlarda herhangi bir immünojenisiteyi önlemek
amaciyla bulusa göre bispesifik IgG antikorun bir insan IgGl olmasi tercih edilir.
kolon ikinci bir antijene baglandigi anlamina gelir, burada söz konusu birinci ve
ikinci antijen ayni degildir. Mevcut bulusa göre söz konusu birinci ve ikinci
antijen aslinda iki farkli hücre tüiünde konumlanan iki farkli moleküldür.
ifade eder. Endojenöz immün hücrelerin kuvvetlendirilmesi ve aktive edilmesi ile
sitotoksisiteye aracilik eden bispesifik antikorlar, sonraki-jenerasyon antikor
terapötiklerinin yeni gelistirilen bir sinifidir. Bu, bir molekülde hedef hücreler
(diger bir ifadeyle tümör hücreleri) ve efektör hücreler (diger bir ifadeyle T
hücreleri, NK hücreleri ve makrofajlar) için antijen baglanma spesifikliklerinin
01574-P-0003
antikorlar saglanir burada bir kol, normal (tümör) hücreleri üzerinde CLEC12A
antijenine baglanirken ikinci kol, immün efektör hücreler üzerindeki bir antijene
baglanir.
Burada kullanildigi üzere 'CLEC12A' terimi, CD34 negatif veya CD34 düsük
ifade eden lösemik kök hücreler (yan popülasyon) dahil akut miyeloid lösemide
(AML) lösemik blast hücreleri ve lösemik kök hücreleri üzerinde ifade edilen bir
antijen olan, ayrica C-tip lektin benzeri molekül-1 (CLL-l) olarak bilinen C-tip
lektin doinen familya 12 üyesi A°ya refere eder (A.B. Bakker et al. Cancer Res
özellikle periferik kan ve kemik iligindeki miyeloid hücreler, diger bir ifadeyle
granülositler, monositler ve dendritik hücre prekürsörlerin ile kisitlanir. Daha
önemli sekilde CLEC12A, hematopoietik kök hücreler üzerinde bulunmaz. Bu
ifade profili, CLEC12A°yi AML”de özellikle uygun bir hedef haline getirir.
CLEC12A için alternatif` isimler dendritik hücre iliskili C-tip 1ektin-2 (DCAL-2),
miyeloid inhibe edici C-tip lektin-benzeri reseptör (MICL) ve öldürücü hücre
lektin-benzeri reseptör alt familya L, üye 1 (KLRLI) içerir (Zhang W. et al.
CLEC12A”nin tam uzunlukta formu, çogu diger izoformda bulunmayan 10 amino
asidin ek bir hücre içi gerilmesi dahil 275 amino asit kalintisi içerir ve tam
anlamiyla iniyeloid ifade profilini (yüzey ifadesi ve mRNA seviyesi) gösterir.
Burada kullanildigi üzere 'anormal hücreler' terimi, tümör hücrelerini, daha
spesifik olarak miyelodisplastik sendromlara (MDS) ve neden olan hücreler gibi
Ön-lösemik hücreler ve akut miyeloid lösemi (AML) tümör hücreleri veya kronik
01574-P-0003
miyeloid lösemi (CML) hücreleri gibi lösemik hücreler dahil hematolojik kökenli
tüinör hücrelerini içerir.
Burada kullanildigi üzere 'immün efektör hücre' veya 'efektör hücre' terimi, bir
hedef hücrenin yasayabilirligini etkilemek üzere aktive edilebilen memeli immün
sistemindeki hücrelerin dogal repertuvari içerisindeki bir hücreye refere eder.
Immün efektör hücreler, dogal öldürücü (NK) hücreler, sitotoksik T hücreler dahil
T hücreler veya B hücreler gibi lenfoid soylu hücreleri içerir ancak ayrica
miyeloid soylu hücreler monositler veya makrofajlar, dendritik hücreler ve
nötrofilik granülositler gibi immün efektör hücreler olarak kabul edilebilir. Bu
nedenle söz konusu efektör hücre tercihen bir NK hücresi, bir T hücresi, bir B
hücresi, bir monosit, bir makrofaj, bir dendritik hücre veya bir nötrofilik
granülosittir. Bulusa göre efektör hücrelerin anormal hücrelere temini, iinmün
efektör hücrelerin anormal hedef hücrelere yakin çevreye getirildigi anlamina
gelir, böylece efektör hücreler bunlara temin edilen anormal hücreleri direkt
olarak öldürebilir veya bunlarin ölümünü dolayli sekilde baslatabilir. Spesifik
olmayan etkilesimleri önlemek amaciyla bulusa ait bispesifik antikorlarin,
vücuttaki diger hücrelere kiyasla bu immün efektör hücreler tarafindan en azindan
asiri ifade edilen immün efektör hücreler üzerindeki antijenleri spesifik olarak
tanimasi tercih edilir. Immün efektör hücreler üzerinde bulunan hedef antijenler
CD3 içerir. Tercihen immün efektör hücreler üzerindeki antijen, T hücreleri
üzerinde ifade edilen CD3”tür. Bir immün efektör hücre üzerindeki en çok tercih
edilen antijen CD3S zinciridir. Bu antijenin, T hücrelerin anormal hücrelere
temininde oldukça etkili oldugu gösterilmistir. Bu nedenle mevcut bulusa göre bir
bispesifik IgG antikor tercihen CD3e°ü spesifik olarak taniyan bir kolu içerir.
Dolayisiyla bulus, istemlere göre bir bispesifik tam uzunlukta IgG antikor saglar,
burada söz konusu bispesifik antikor, CLEC12A”yi spesifik olarak taniyan bir kol
ve CLEClZA”yi ifade eden anormal bir hücreye bu tür hücreleri temin edebilen,
immün efektör hücreler üzerindeki bir CD3 antijenini spesifik olarak taniyan
ikinci bir kol içerir, burada söz konusu immün efektör hücreler T hücrelerini
01574-P-0003
içerir. Bulus, bulusa göre bir bispesifik IgG antikor saglar burada söz konusu
immün efektör hücreler üzerindeki söz konusu antijen CD3”tür, tercihen insan
CD3e`tür.
Bulus, istemlere göre bir bispesifik lgG antikor saglar burada her iki kol ortak bir
hafif Zincir içerir. Bulusa göre 'ortak hafif zincir' terimi, antikorun baglanma
spesifikligini muhafaza ederken ayni olabilen veya bazi amino asit dizi
farkliliklarina sahip olan hafif zincirlere refere eder. Örnegin burada kullanildigi
üzere ortak hafif zincirler tanimi kapsaminda örnegin konservatif amino asit
degisiklikleri, agir zincir ile eslestirildiginde baglanma spesifikligine katkida
bulunmayan veya sadece kismen katkida bulunan bölgelerdeki amino asit
degisiklikleri ve benzerinin uygulanmasi ve test edilmesi yoluyla ayni olmayan
ancak yine de fonksiyonel olarak esdeger olan hafif Zincirlerin hazirlanmasi ve
bulunmasi mümkündür. 'Yeniden düzenlenen' teriminin eklenmesi ile veya bu
olmaksizin `ortak hafif zincir', 'ortak VL', 'tek hafif zincir', 'tek VL' terimleri,
burada degistirilebilir sekilde kullanilir. Mevcut bulus, ortak hafif zincir olarak
fonksiyonel antijen baglanma domenleri ile antikorlari olusturmak üzere farkli
agir zincirler ile kombine olabilen bir insan hafif zinciri kullanir
Tercihen ortak hafif zincir, bir germ hatti dizisidir. `Tercih edilen bir germ hatti
dizisi, insan repertuvarinda siklikla kullanilan bir hafif zincir degisken bölgedir ve
birçok farkli VH bölgeleri ile eslesmek üzere üstün kabiliyete sahiptir ve iyi
termodinamik stabilite, verim ve çözünürlüge sahiptir. En çok tercih edilen bir
germ hatti hafif zinciri, 012, tercihen yeniden düzenlenen germ hatti insan kappa
hafif zincir IgVicl-39*Ol/IGJK1*01 (imgtorg dünya çapinda agda IMGT
veritabanina göre terminoloji) veya bir parçasi veya fonksiyonel bir türevidir.
Yeniden düzenlenen germ hatti insan kappa hafif zincir IgVKl-39*01/IGJK1*01,
açiklama boyunca degistirilebilir sekilde kullanilir. Açik bir sekilde teknikte
uzman kisiler, ayni olmayan amino asit dizisinin hafif zincirinin fonksiyonel
esdegerlerine refere eder. Söz konusu hafif zincirin birçok varyanti mevcuttur
01574-P-0003
burada fonksiyonel baglanma bölgelerinin olusumunu maddesel açidan
etkilemeyen mutasyonlar (delesyonlar, sübstitüsyonlar, eklemeler), bulunur.
Özellikle tercih edilen bir düzenlemede bulusa göre bir bispesifik lgG antikor
saglanir burada CLEC12A°yi spesifik olarak taniyan kol, SGYTFTSY ile ayni
olan bir diziden olusan bir agir zincir CDR] dizisi ve IINPSGGS ile ayni olan bir
diziden olusan bir agir zincir CDR2 dizisi ve GTTGDWFD ile ayni olan bir
diziden olusan bir agir zincir CDR3 dizisini içerir. Bahsedilen CDR dizileri,
Örneklerde gösterildigi üzere iyi CLEC12A baglanma özelliklerine sahip olan Fab
kolu 43273nin CDR dizileridir. Fab kolu 4327Snin agir zincir dizisi, bu nedenle
CLEC12A-spesifik antikor 4327°ye ait VH Sekil 207de gösterilir. Tercih edilen
bir düzenlemede bulusa göre bir bispesifik IgG antikor, antikor 4327,ye ait bu VH
ile ayni olan degisken bir agir zincir (VH) dizisini içerir. Ayrica bu nedenle bulusa
göre bir bispesifik lgG antikor saglanir, burada CLECI2A°yi spesifik olarak
taniyan kol,
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEW
MGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCA
KGTTGDWFDYWGQGTLV TVS dizisi ile ayni olan bir diziden olusan bir VH
dizisini içerir. Örneklerde gösterildigi üzere CD3”ü taniyan bir Fab kolonun bir
VH dizisi ile birlikte (ve bir ortak hafif zincir ile birlikte), yukarida bahsedilen Vl-I
hücrelerinin T hücre aracili parçalanmasini indüklemek için inükemmel kabiliyete
sahiptir.
Ayrica tercih edilen bir düzenlemede bulusa göre bir bispesifik IgG antikor
saglanir, burada CLEC12Aiyi spesifik olarak taniyan kol, SGYTFTSY ile ayni
olan bir diziden olusan bir agir zincir CDR] dizisi ve IINPSGGS ile ayni olan bir
diziden olusan bir agir zincir CDR2 dizisi ve GNYGDEFDY ile ayni olan bir
diziden olusan bir agir zincir CDR3 dizisini içerir. Bahsedilen CDR dizileri,
Örneklerde gösterildigi üzere iyi CLEC12A baglanma özelliklerine sahip olan
antikor 4331°in VH bölgesinin CDR dizileridir. Fab kolu 4331°e ait VH dizisi
01574-P-0003
ayrica Sekil 207de gösterilir. Tercih edilen bir düzenlemede bulusa göre bir
bispesifik IgG antikor, Fab kolu 433l”e ait bu VH ile ayni olan bir VH dizisi
içerir. Ayrica bu nedenle bulusa göre bir bispesitîk lgG antikor saglanir, burada
CLEC12A°yi spesifik olarak taniyan kol
EVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQGLEW
MGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSEDTAVYYCA
RGNYGDEFDYWGQGTLV TVSS ile ayni olan bir diziden olusan bir VH
dizisini içerir. Örneklerde gösterildigi üzere CD3°ü taniyan bir Fab kolonun bir
VH dizisi ile birlikte (ve bir ortak hafif zincir ile birlikte) Fab kolu 4331°e ait VH
hücrelerinin T hücre aracili parçalanmasini indüklemek için mükemmel kabiliyete
sahiptir.
Ayrica tercih edilen bir düzenlemede bulusa göre bir bispesifik lgG antikor
saglanir burada ikinci kol, CD3°ü spesifik olarak tanir ve SYGMH dizisinden
olusan bir agir zincir CDR] dizisi ve IIWYSGSKKNYADSVKG dizisinden
olusan agir zincir CDR2 dizisi ve GTGYNWF DP dizisinden olusan bir agir zincir
CDR3 dizisi içerir. Tercihen söz konusu CD3-spesifik kol,
QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFTFRSYGMHWVRQAPGKGLEWV
AIIWYSGSKKNYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCA
RGTGYNWFDPWGQGTLV TVSS dizisinden olusan bir VH dizisini içerir.
Bahsedilen CDR dizileri ve VH dizileri, antikor 3896 dizileridir. Bu diziler ayrica
Sekil 20”de gösterilir. Bu CD3-spesifik CDR dizileri ve Fab kolu 38965ya ait VH
edilir, bunun nedeni bu dizilerin CLEClZA-pozitif AML tümör hücrelerine es
zamanli olarak yeterli baglanmaya olanak tanirken CD3 ifade eden immün
hücreler için optimal bir afinite ile bispesifik antikoru saglamasidir. Teoriye bagli
kalinmak istenmeksizin bir bispesifik antikorun genel etkisinin, antijen 1 için bir
kolun atinitesi ve antijen 2 için diger kolun afinitesinin kombine etkisi ile
belirlendigi düsünülür. CLEC12A ve immün efektör hücreler üzerindeki bir
antijen, CD3, için bir spesifîklige sahip mevcut bulusa ait bir antikor için CD3-
01574-P-0003
pozitif immün hücrelere ve CLEC12A-ifade eden tümör hücrelerine baglanmanin
optimize edilmis zamanlamasi, CLEC12A-pozitit` tümör hücrelerinin T hücre
aracili parçalanmasini etkili bir sekilde indüklemek amaciyla tercih edilir. Bir
CLECIZA/CD3 bispesitîk antikorun atiniteleri arasindaki dengenin son derece
önemli oldugu varsayiminda bulunulur. CLEC12A için çok düsük bir afiniteye
karsi CD3 için önemli ölçüde yüksek bir atinitenin (diger bir ifadeyle, CD3 için
çok yüksek bir atinite), antikorlarin CD3 ifade eden T hücrelerini esas olarak
bagladigi bir durum ile sonuçlanacagi düsünülür. Bu tür 'bispesifik antikor-yüklü'
T-hücreleri, bunlarin CD3”lerini içsellestirebilir veya bunlar bir CLEC12A-pozitif
tümör hücresi ile karsilasmadan önce dolasimdan ayrilarak dokulari isgal edebilir.
Bu, bispesifik antikorun terapötik etkisini azaltir.
Daha elverisli bir hareket modunda CLEClZA-pozitif tümör hücreleri ilk olarak
bulusa göre bir veya daha fazla bispesitik antikor ile baglanir, bundan sonra T
hücreleri bispesifik antikorun serbest CD3 kolu tarafindan etkilenir ve daha sonra
T hücresi aktivasyonu gerçeklesir. Alternatif olarak CD3 pozitif T hücreleri ve
CLEClZA-pozitif tümör hücreleri, bispesifik antikor ile esas olarak es zamanli
sekilde baglanir. Bu nedenle hem CLEC12A için hem de immün efektör hücreler
üzerindeki bir antijen, CD3, için afiniteler tercihen dogru denge elde edilecek
sekilde, diger bir ifadeyle ortaya çikan bispesifik antikorlar CLEC12A ve CD35ü
esas olarak es zamanli olarak baglayacak sekilde veya bispesifik antikorlar,
CLECIZA-pozitif tümör hücrelerini yeterli bir ölçüde baglamak üzere bir egiliine
sahip olacak sekilde seçilir veya modüle edilir, bundan sonra T hücre aktivasyonu
gerçeklesir ve tümör hücreleri parçalanir. Mevcut bulusa göre CD3 ve CLEC12A
için baglanma afiniteleri arasindaki bu tür mükemmel denge tercihen Fab kolu
sahip bir VH”nin Fab kollari ait
CDR dizilerine (veya bütün VH dizisine) sahip bir VH ile kombine edilerek
gerçeklestirilir. Bu tür ortaya çikan bispesitik antikorlar, CD3 ve CLEC12A için
baglanma atiniteleri arasinda uygun bir denge gösterir, böylece T hücreleri ve
CLEC12A-pozitif AML tümör hücreleri etkili bir sekilde bir araya getirilir ve
01574-P-0003
CLEC12A-pozitif AML tümör hücrelerinin T hücre aracili parçalanmasi optimal
olarak indüklenir.
Burada açiklandigi üzere istemlere göre bir bispesifik lgG antikor saglanir burada
her iki kol, bir ortak hafif zincir degisken domeni içerir. Özellikle tercih edilen
ortak hafif zincir, ayrica 012 olarak adlandirilan insan yeniden düzenlenmis kappa
dizisi Sekil 20”de gösterilir. CDR dizileri, koyu ve alti çizilidir. Bu nedenle en
azindan 012`nin CDR dizilerini içeren bir ortak hafif zincir içeren bulusa göre bir
bispesifik antikor saglanir. Bulusun bir açisi bu nedenle bulusa göre bir bispesifik
olan bir diziden olusan bir hafif zincir CDRl dizisi ve AASSLQS ile ayni olan bir
diziden olusan bir hafif zincir CDR2 dizisi ve QQSYSTPPT ile ayni olan bir
diziden olusan bir hafif zincir CDR3 dizisini içerir. Bulusa göre bir bispesifik lgG
antikor, 012 VL zinciri ile ayni olan bir VL dizisini içerir. Ayrica bu nedenle
bulusa göre bir bispesifik IgG antikor saglanir, burada birinci ve ikinci kollar,
asagidaki ile ayni olan bir diziden olusan bir VL dizisini içerir
Tanim yoluyla bulusa göre bir bispesifik tam uzunlukta IgG antikor, iki farkli
antijen baglanma alanina sahiptir ancak IgGinin Fc bölgesi ayrica bir PC reseptörü
için üçüncü bir baglanma alani içerir. Bir hücrenin hem bir PC reseptörü hem de
bispesifik antikorun hedeflerinden birini tasimasi halinde FC reseptörü ve söz
konusu hedefin söz konusu hücre yüzeyi içinde çapraz baglanmasi meydana
gelebilir, bu istenmeyen etkilere yol açabilir. Tercih edilen bir düzenlemede bulus,
bulusa göre bir bispesifik tam uzunlukta IgG antikor saglar burada söz konusu
bispesifik IgG antikor, mutasyona ugramis alt mentese ve/veya CH2 domenlerine
sahiptir, böylece söz konusu bispesifik lgG antikorun Fc gamma (F cv) reseptörleri
ile etkilesimi önemli ölçüde azaltilir. Burada kullanildigi üzere “böylece söz
01574-P-0003
konusu bispesitik lgG antikorun FC gamma reseptörleri ile etkilesimi önemli
ölçüde azaltilir” terimi, bu tür FC gamma reseptörlerinin söz konusu antikor
çevresinde bulunmasi halinde söz konusu bispesitîk lgG antikorun Fe gamma
antikorlari ile etkilesime girme kabiliyetinin azaltildigi anlamina gelir. Dolayisiyla
bulusa göre bir antikor bölgesi, tercihen antikorun alt mentese ve/veya CH2
domeni mutasyona ugratilir (tipik olarak bunu kodlayan mutasyona ugramis bir
nükleik asit dizisinin ifade edilmesi ile) böylelikle bir PC reseptörü ile etkilesime
girme kabiliyeti azaltilir. Fc reseptörü ile etkilesimin esas olarak ortadan
kaldirilmasi tercih edilir. Fcy reseptörlerine baglanmaya dahil edilen insan
sadece spesifik reseptörlere baglanmayi gelistiren veya es zamanli olarak bir
reseptör türüne baglanmayi gelistiren ve diger türe baglanmayi azaltan kalintilara
ek olarak birkaç kalintinin, bir veya daha fazla reseptöre baglanmayi ortadan
konusu mutasyona ugramis alt mentese ve/veya CH2 domenleri, amino asit
pozisyonlari 235 ve/veya 236°da (Kabat°a göre numaralandirma) en az bir
sübstitüsyon içerir. Tercihen her iki amino asit pozisyonu 235 ve 236 sübstitüe
edilir. Örneklerde bu alanlardaki sübstitüsyonlarin tümör hücreleri üzerinde
bulunan FC reseptör ile bispesifik antikor arasindaki etkilesimi esas olarak
önleyebildigi gösterilir. Özellikle sübstitüsyonlar L235G ve/veya G236R”nin bu
amaç için oldukça uygun oldugu gösterilir. Söz konusu mutasyona ugramis CH2
ve/veya alt mentese domenlerinin sübstitüsyon L235G ve/veya G236R7yi içerdigi,
bulusa göre bir bispesifik lgG antikor bu nedenle burada saglanir. Tercihen hem
L235G hem de G236R sübstitüe edilir. Alternatif olarak teknikte uzman bir kisi,
mutasyonlarini uygulayabilir (Oganesyan et al. Biol. Crystall. 2008(D64)700).
Tercihen bu üç sübstitüsyon bu alternatifte uygulanir.
US usule uygun basvuru No. 13/866,747 ve PCT basvuru
01574-P-0003
tek bir hücreden bispesifik antikorlarin üretilmesine yönelik yöntemler ve yollar
açiklanir, böylelikle monospesifik antikorlarin olusumuna göre bispesifik
antikorlarin olusumunu uygun gören yollar saglanir. Bu yöntemler ayrica mevcut
bulusta uygun sekilde kullanilabilir. Dolayisiyla bulus, tek bir hücreden bulusa
göre bir bispesifik tam uzunlukta lgG antikorun üretilmesine yönelik istemlere bir
yöntem saglar. Söz konusu birinci ve ikinci nükleik asit molekülleri, ayni vektörü
veya gen dagitim aracinin parçasi olabilir ve konakçi hücre genomunun ayni
alaninda entegre edilebilir. Alternatif olarak söz konusu birinci ve ikinci nükleik
asit inolekülleri söz konusu hücreye ayri olarak saglanir.
Tercih edilen bir düzenleme, tek bir hücreden bulusa göre bir tam uzunlukta
bispesifik IgG antikorun üretilmesine yönelik bir yöntem saglar, burada söz
konusu bispesifik lgG antikor, bir arayüzü olusturabilen iki CH3 doinenini içerir,
söz konusu yöntem asagidakilerin saglanmasini içerir:
- a) CLEC12A°yi spesifik olarak taniyan ve bir 1”inci CH3 domenini içeren
söz konusu IgG agir zinciri kodlayan bir birinci nükleik asit dizisine ve b)
immün efektör hücreler üzerindeki bir antijeni, CD3, spesifik olarak
taniyan ve 27inci bir CH3 domenini içeren ikinci bir nükleik asit dizisine
sahip bir hücre, burada söz konusu nükleik asit dizileri, söz konusu lsinci
ve 2”nci domenlerin tercihen eslestirilmesine yönelik yollar ile saglanir,
söz konusu yöntem ayrica söz konusu hücrenin kültürleninesi ve söz
konusu iki nükleik asit dizisinin ifadesine olanak taninmasi ve söz konusu
bispesifik IgG antikorun kültürden hasat edilmesi adimini içerir. söz
konusu hücre ayrica istemlere bir ortak hafif zinciri kodlayan üçüncü bir
nükleik asit dizisine sahiptir. Tercih edilen bir ortak hafif zincir, yukarida
açiklandigi üzere 012, tercihen yeniden düzenlenmis germ hatti insan
kappa hafif zincir IgVK1-39*01/IGJK1*01°dir. Esas olarak sadece
bispesifik tam uzunlukta lgG moleküllerini üretmek üzere tercih edilen
mutasyonlar, birinci CH3 domeninde amino asit sübstitüsyonlari L351K
ve T3661( (Kabafa göre numaralandirma) ve ikinci CH3 domeninde
01574-P-0003
amino asit sübstitüsyonlari L351D ve L368E veya tam tersidir. Ayrica bu
nedenle bir bispesifik IgGl antikorun saglanmasina yönelik bir yöntem
saglanir, burada söz konusu birinci CH3 domeni, amino asit
sübstitüsyonlari L351K ve T366K (Kabatia göre numaralandirma) içerir
ve burada söz konusu ikinci Ch3 domeni, amino asit sübstitüsyonlari
L351D ve L368E içerir, söz konusu yöntem ayrica söz konusu hücrenin
kültürlenmesi ve söz konusu nükleik asit dizilerinin ifadesine olanak
taninmasi ve söz konusu bispesifik antikorun kültürden hasat edilmesi
adimini içerir. Ayrica bir bispesifik IgG] antikorun üretilmesine yönelik
bulusa göre bir yöntemdir, burada söz konusu birinci CH3 domeni, amino
asit sübstitüsyonlari L351D ve L368E (KabaFa göre numaralandirma)
içerir ve burada söz konusu ikinci CH3 domeni, amino asit
sübstitüsyonlari L351K ve T3661( içerir, söz konusu yöntem ayrica söz
konusu hücrenin kültürlenmesi ve söz konusu nükleik asit dizilerinin
ifadesine olanak taninmasi ve söz konusu bispesifik antikorun kültürden
hasat edilmesi adimini içerir. Bu yöntemler ile üretilen antikorlar ayrica
mevcut bulusun parçasidir.
Bulus ayrica bulusa göre bir bispesifik IgG antikor ve farmasötik olarak kabul
edilebilir bir tasiyici içeren farmasötik bir bilesim saglar. Burada kullanildigi
üzere bu tür'farmasötik olarak kabul edilebilir tasiyici' herhangi bir veya tüm
solventleri, tuzlari, dispersiyon ortami, kaplamalar, antibakteriyel ve antifungal
ajanlar, izotonik ve absorpsiyon geciktirici ajanlar ve fizyolojik olarak uyumlu
olan benzeri unsurlari içerir. Uygulama yoluna bagli olarak (örnegin intravenöz,
subkütanöz, intra-artiküler ve benzeri) aktif bilesik, bilesigi asitlerin hareketinden
ve bilesigi inaktif hale getirebilen diger dogal kosullardan korumak üzere bir
materyal ile kaplanabilir.
Bulusa göre antikorlar ve farmasötik bilesimler, miyeloid kökenli ön-lösemik
hastaliklar ve çesitli lösemilerin ve ayrica B hücreli lenfomalarin tedavisinde
kullanim bulur. Bulusa göre tedavi edilebilen hastaliklar, miyeloid lösemiler veya
01574-P-0003
ön-lösemik hastaliklar örnegin AML, MDS ve CML ve Hodgkin lenfoma ve çogu
Hodgkin olmayan lenfomalari içerir. Dolayisiyla bulus,` miyelodisplastik sendrom
(MDS), kronik miyeloid lösemi (CML) veya tercihen akut miyeloid lösemi
(AML) tedavisinde bir farmasötik olarak kullanima yönelik bulusa göre bir
bispesifik tam uzunlukta IgG antikor saglar. Ayrica bulusa göre bir bispesifik IgG
antikorun miyelodisplastik sendrom (MDS)` kronik miyeloid lösemi (CML) veya
tercihen akut miyeloid lösemi (AML) tedavisi veya önlenmesi için bir ilacin
hazirlanmasina kullanimi tasarlanir.
Bir hastaya uygulanacak bulusa göre antikorun miktari tipik olarak terapötik
pencerededir, yani miktar bir esik kabul edilemez ölçüde yan etkilere yol açan bir
esik degeri asmazken terapötik bir etkinin elde edilmesi için yeterli bir miktarinin
kullanilmasi ifade edilir. Istenen bir terapötik etkinin elde edilmesi için gereken
antikor miktari ne kadar düsük olursa terapötik pencere tipik olarak o kadar büyük
olacaktir. Bu nedenle düsük dozajda yeterli terapötik etkileri sunan bulusa göre bir
antikor tercih edilir.
Yaklasik olarak her yil 30.000 hastaya, Avrupa ve Birlesik Devletlerde akut
miyeloid lösemi (AML) teshisi koyuluyor. Bu hastalarin çogunlugu 60 yaslarinda
veya daha yaslidir. Daha yaslilar, AMLideki sonucun major negatif
belirleyicisidir ve yogun sekilde tedavi edilen daha yasli AML hastalarinin uzun
süreli sag kalimi (5 yil) yaklasik olarak %103dur. Kemoterapinin baslamasi
üzerinde remisyon gerçeklestirilen hemen hemen tüin hastalarda hastalik
ilerlemesi, 3 yil içinde gözlenir. Mevcut remisyon sonrasi tedavi, AMLili daha
yasli hastalarda bulunmasi halinde sinirli deger göstermistir. Bu nedenle rezidüel
dirençli löseminin önemli bir yükü kalir ve ilaç dirençli lösemik hücrelerin sag
kalan alt popülasyonu hizli bir sekilde nüksetme olusturur. Tamamen farkli etki
modlari olan yeni ilaç türlerinin, tam remisyonu indüklemek ve sürdürmek üzere
çalismalarda bu kemoterapiye yanit vermeyen AML tümör hücrelerini hedef
almasi gerekir. Tam remisyon (CR), oldukça yasli AML hastalarinin %50°sinden
fazlasinda ve daha genç hastalarda %80 civarinda yogun birkaç kemoterapi
01574-P-0003
kombinasyonu ile geçeklestirilebilir, yanittaki veya sap kalimdaki ilerlemeler
önemli arastirilmasi gereken bir sorun olarak kalmistir. AML”li daha yasli
hastalarda 60 randomize klinik denemenin (15.10 hasta) yeni yayinlanan bir ag
meta analizinde düzenlenen arastirma asamasindaki indüksiyon rejimlerinin çogu,
daunorubisin ve sitarabin ile klasik 3+7 indüksiyon rejimine kiyasla benzer veya
hatta daha kötü etkinlik profillerine sahiptir. Bu standart AML tedavisi, yüksek
hastalik orani ve hatta ölüm orani ile iliskilidir. CR`de hastalarin çogunlugu,
kemoterapi sonrasi geri kalan lösemik kök hücreler nedeniyle kötüye gider.
Ayrica doz yogunlastirma, kabul edilemez toksisite nedeniyle sinirlidir. Tercihen
daha az toksisite ile yeni tedavi modellerine yönelik acil bir ihtiyaç, özellikle
AML”li oldukça yasli hastalarda ortaya çikar.
Kemoterapiye yanit vermeyen AML tedavisi, hastanin immün sisteminden ve
AMLT tümör hücrelerinden alinan T hücrelerinin bir bispesitîk antikor
kullanilarak baglanmasi ile gerçeklestirebilmistir. Bu sekilde hastanin immün
sistemi güçlendirilir ve AML tümör hücrelerine saldirmak ve bunlari yok etmek
üzere yeniden hedef alinir. Mevcut bulus, AML tümör hücre parçalanmasini etkili
bir sekilde indükleyen CD3xCLEC12A bispesifik IgG antikorlari saglar.
CD3XCLEC12A bispesifik antikorlar dolayisiyla AML hastalarinin prognozunu
gelistirmek amaciyla lösemik kök hücrelerini spesifik olarak yok eden daha az
yan etkisi olan hedeflenmis bir terapidir. CLEC12A”nin lösemik kök hücreler
(LSC) üzerinde ifade edilmesi ve normal hematopoietik kök hücreler üzerinde
ifade edilmemesi nedeniyle bu antijene yönelik terapi (in vitro gösterildigi gibi),
normal kök hücreyi ayirirken LSC”yi yok edecektir. Minimal Rezidüel Hastalik
(MRD) durumlarinda büyük olasilikla en büyük etkiye sahip olacaktir. Beklenen
sonuç, MRD'nin ortadan kaldirilmasi nedeniyle kötüye gitme yüzdesinin
düsmesidir. Bu nedenle bu yeni tedavi modelinin AML hastasina yönelik etki,
daha iyi bir yasam kalitesi ile iliskili bir sonuç iyilesmesi ile sonuçlanan daha
düsük bir kötüye gitme yüzdesi ile daha az toksik bir tedavi olacaktir. Bu tam
uzunlukta IgG bispesifik antikorlar, kötüye giden AML hastalarinda klinik olarak
degerlendirilir. Klinik etkinlik, amaçlanan yanit kriteri olarak kemik iliginde
01574-P-0003
AML blast azalmasi kullanilarak analiz edilir. AML için etkili bir bispesifik IgG,
mevcut durumda kullanilabilir herhangi bir tedavinin bulunmadigi büyük bir hasta
segmenti için yeni terapötik bir seçecek saglar. Saglam remisyonlar elde etmek
üzere bir yolun saglanmasina ek olarak bu tedavi seçenegi ayrica remisyon
boyunca uygulandiginda AML için küratif bir potansiyele sahiptir.
ÖRNEKLER
Örnek 1: Bir aday CD3xCLEC12 bispesifik lgG1”in üretimi ve fonksiyonel
karakterizasyonu
Bir iinmün efektör hücrenin bir bispesifik tam uzunlukta IgG ile anormal bir
hücreye hedeflenmesi konseptini dogrulamak üzere bir aday CD3XCLEC12A
bispesifik lgGl üretilmistir, buna yönelik olarak CD3 ve CLEC12A Fab kollari
daha önceden açiklanan antikorlardan türetilmistir. CD3 Fab kolonda
15C3°ten VH bölgesi kullanilmistir ve bu VH, '3056' olarak refere edilir.
antikorlardan biri, scFv SC02-3573den VH bölgesi kullanilmistir (buradan sonra
olarak bu VH, '3116' olarak refere edilir). CD3 koluna (3056) ait VH`nin
nükleotid ve amino asit dizileri ve ayrica aday 3056x3116 olarak refere edilen, bu
aday molekülün CLEC12A koluna (3116) ait VHinin nükleotid ve amino asit
dizileri, Sekil 20ide saglanir. Ortak VL”nin (huVK1-39; 012) nükleotid ve amino
asit dizileri de Sekil 203de saglanir.
Ilgili VH bölgeleri, yeniden düzenlenmis insan IGKVl-39/IGKJ 1 (huVKl-39)
hafif zincir ile birlikte bispesifik IgGl üretimine yönelik teknikte bilinen
kullanilarak ifade vektörlerine klonlanmistir. huVK1-39°un daha önceden birden
fazla agir zincir ile eslesebildigi gösterilmistir, böylelikle çesitli spesifikliklere
01574-P-0003
sahip antikorlar meydana getirilmistir, bu durum bispesifik moleküllerin üretimini
hücreleri üzerinde CD3s°e baglanmasi, akis sitometrisi ile gösterilmistir, bu
teknikte bilinen standart prosedürlere göre gerçeklestirilmistir (Tablo 1). Hücre-
ifade edilen CD38°e baglanma, CD3ö/e veya CD3y/e ile transfekte edilen CHO
hücresi kullanilarak dogrulanmistir. Aday 3056x3116 bispesifik IgGliin
CLEC12A°ya baglanma, ilgisiz bir IgGl izotip kontrol mAb`nin kontrol olarak
alinmasinin yani sira bir CLEC12A ifade yapisi ile transfekte edilen CHO
hücreleri; CD3 monospesifik antikor (3056x3056) ve CLECIZA monospesifîk
antikor (31 16x31 16) kullanilarak belirlenmistir.
Tablo 1: Akis sitometrisi ile hücre-ifade edilen CD3 ve CLEC12A'ya baglanma
lgC HPB-ALL hücreleri' (TLECllA- transfekte edilmis CHO
hücrmri'
(IDSXCLECIZA
lzotip kontrolü ' 4 'L` )
CD3ö/e ve CLECIZASnin hücre disi domeni için aday 3056x3116 bispesifik
Kisaca saflastirilmis rekombinant antijenler, serbest amin kimyasi kullanilarak bir
CMS sensör çipi yüzeyine kovalent olarak baglanir: antijenler bir kAc
tamponunda IOng/mliye seyreltilir ve NHS/EDC ile aktive edilen bir yüzeye
01574-P-0003
baglanir (üreticinin talimatlarina göre). Bispesifik antikorlarda bulunan Fab
kollarinin atinitelerini belirlemek üzere bunlar, Hepes tamponlu salin (HBS)
(`30ul/dakika) bir akis hizinda (yeniden baglanmayi önlemek üzere) CMS sensor
çipinin antijen-bagli yüzeyi üzerinden akar. Akis hücresi (FCl), bir kontrol
(baryum) yüzeyi olarak kullanilir ve bu yüzeyden ortaya çikan yanitlar (sensör
gram), diger akis hücrelerinde (FC) ölçülen yanitlardan çikartilir. F C2 ve F C3, üç
yüzeyin tümünde tek bir kinetik çalismada her iki Fab kolonun afinitelerini
ölçebilmek üzere bispesifik antikorun tanidigi iki farkli antijen için kullanilir.
Antikor konsantrasyonu, bir antijen-bagli yüzey üzerinden aktiginda önemli
ölçüde degismediginden bispesifik antikorlarin on-oranlari (konsantrasyona bagli)
bunlarin tanidigi iki farkli antijen üzerinde es zainanli olarak ölçülür. Farkli
bispesilik proteinlerin birlesme ve ayrisma fazlarmin sensörgrami bu sekilde elde
edilir. BIA degerlendirme yazilimi ve bir 1:] etkilesim modelini (tek degerlikli
etkilesim için) kullanildigi egri uydurma kullanilarak Fab kollarinin afiniteleri
belirlenir. bispesifik proteinin sensör çipinin antij en-kapli yüzeyine baglanmasinin
tehlikeli oldugu durumda 8diger bir ifadeyle oldukça az protein baglandiginda
düsük yanitlar ve/veya oldukça hizli off-oranlari ile sonuçlanma) deney ayari ters
çevrilir: bispesifik antikor serbest amin kimyasi kullanilarak sensör çipi yüzeyine
kovalent olarak baglanir ve rekombinant saflastirilmis antijen, bu antij ene yönelik
Fab kolunun afinitesini ölçmek üzere yüksek (30ul/dakika) bir akis hizinda yüzey
üzerinden akar.
test edilmistir. Öncelikle T-hücre uyarici kapasite, saglikli donör dinlenen T-
hücreleri ile arastirilmistir. Kisaca periferik kan, sürekli bilgilendirme yapildiktan
sonra saglikli donörlerden elde edilmistir. T-hücreler, periferik kan mononükleer
hücreleri (PBMC) zenginlestirmek üzere standart yogunluklu gradyan izolasyonu
ile akabinde manyetik boncuklarin kullanildigi negatif seçim (pan T-hücre kiti,
Miltenyi Biotec, cat.no.130-091-155) ile izole edilmistir. Bu saflastirma stratejisi
kullanilarak T-hücreleri. ön-aktivasyon olasiligini sinirlandirmak üzere
01574-P-0003
daha sonra iki gün 10:] olan bir efektörzhedef hücre oraninda %10 fötal bovin
serumu (FBS) veya %10 normal insan serumu (HS) içinde lösemi türevli HL60
hücre hattindan alinan hücreler ile inkübe edilmistir. Sonuçlar, CD4-pozitif veya
CBS-pozitif T-hücre popülasyonu içerisinde CD69-pozitif veya CD25-pozitif
hücrelerin yüzdesi olarak ifade edilmistir.
Hem iki degerlikli CD3 IgG hem de CD3XCLEC12A bispesifik IgG, CD4-pozitif
ve CBS-pozitif T-hücreleri üzerinde T-hücre aktivasyon markörleri CD69 ve
CD25”in yukari regülasyonunu etkili bir sekilde inkübe etmistir (SEKIL 2). HL60
hücreleri üzerindeki Fc reseptörlerini bloke etmeyen FBS varliginda (Liesveld et
molekülü CD3Xizotip kontrol lgG”nin T-hücre aktivasyonunu indükledigi
gösterilmistir. Bu etki, CD3Xizotip kontrol IgG”nin tek degerlikli Cd3 baglanmasi
ile gözlenen T-hücre aktivasyonunun Fc çapraz baglanmaya bagli oldugu
bispesifik IgG ile indüklenen T-hücre aktivasyonu, CD69 ve CD253i yukari regüle
etme potansiyelinin büyük ölçüde HS varliginda muhafaza edilmesi (SEKIL 2)
nedeniyle sadece kismen FC-etkilesimlerine baglidir. Bu, tek degerlikli CD3
baglanmasinin intrinsik potansiyelinin, baglanma molekülü diger Fab kolu ile
baglanmayi takiben HL60 hedef hücreleri üzerindeki CLEC12A antijenine
köprülendiginde T-hücrelerini aktive etmek için yeterli oldugunu göstermistir.
ölçüsünün hedef hücre parçalanmasini indüklemek üzere yeterli olup olmadigini
arastirmak üzere bu analizdeki HL60 hücreleri, karboksifloresin diasetat
suksimidil ester (CFSE) ile etiketlenmistir ve çesitli efektörzhedef hücre
oranlarinda T-hüoreleri ile birlikte kültürlenmistir. Bir, iki veya üç gün sonra sag
kalan CFSE-pozitif HL60 hücrelerinin miktari akis sitometrisi ile belirlenmistir.
01574-P-0003
Sonuçlar, PBS ile iliskili spesifik parçalanma yüzdesi olarak ifadesi olarak ifade
edilmistir.
Beklenildigi üzere CD3 monospesifik iki degerlikli IgG, HL60 hücrelerinin
dinlenen T-hücre aracili öldürülmesini indüklemistir (SEKIL 3). Sasirtici bir
sekilde CD3XCLEC12A bispesifik tek degerlikli IgG ve kontrol CD3Xizotip
kontrol ayrica HL60 hücrelerinin dinlenen T-hücre aracili öldürülmesini
indüklemistir. Analiz, asiri insan lgG yoklugunda gerçeklestirildiginde, diger bir
ifadeyle HL60 hedef hücreleri üzerindeki Fc reseptörleri bloke edilmediginde
(FBS kosulu; SEKIL 3) bu etkiler, en baskin durumdadir. Sasirtici durumda asiri
insan IgG (%10 HS kosulu) varliginda dahi CD3XCLEC12A bispesiiîk IgG,
HL60 parçalanmasinin indüklenmesinin Fcy reseptör etkilesimlerine bagli
olmadigini gösteren HL60 hücrelerinin öldürülmesinde oldukça etkilidir. 3. günde
ayrica CD3Xizotip kontrol ile indüklenen HL60 parçalanmasi, büyük olasilikla
uzamis inkübasyon periyotlari üzerine tam olmayan Fc-gamma reseptör blokaji
nedeniyle gözenmistir. HL60 hedef` hücre öldürme, farkli efektörzhedef hücre
oranlari ile degiskenlik göstermistir (SEKIL 4).
Sonuç olarak bu örnek, bir CD3XCLEC12A bispesifik molekülünün, T-hücre
aracili tümör hücre parçalanmasinin güçlü bir indükleyicisi oldugu gösterir ve
anormal hücrelerin etkili öldürülmesine yönelik T hücre baglantisina bir
CD3XCLEC12A tam uzunlukta lgGl bispesifik antikorun aracilik edebildigi
hipotezini dogrular. Sasirtici bir sekilde CD3XCLEC12A bispesifik lgG ile
indüklenen aktivite, Fcy reseptör etkilesimlerine bagli degildir. Nihai klinik bir
adaya ulasmak amaciyla CD3XCLEC12A bispesifik tam uzunlukta IgG panelini
genisletmek üzere CD3 Fab kollari ve CLEC12A Fab kollari panelleri üretilir.
CD3 ve CLEC12A Fab kollarinin spesifikligi ve fonksiyonelliginin validasyonu,
gelen ilgili Fab kullanilarak diger kolun sabitlenmesi ile yapilir.
01574-P-0003
Örnek 2: CD3xCLEC12 bsAb için CD3 Fab kollarinin üretimi ve
karakterizasyonu
Örnek 1, CD3XCLEC12A bispesifik moleküllerinin, T-hücre aracili tümör hücresi
parçalanmasinin güçlü indükleyicileri olabildigini göstermistir. Bu nedenle bu tür
bispesifik moleküllerinin daha genis panellerini üretmek üzere CD3
baglayicilarinin ayri panellerinin yani sira CLEC12A baglayicilari üretilmistir.
CD3 baglayicilannin bir panelinin üretimi için CD3e-spesifik VH bölgeleri, çesitli
formatlarda CD3:: ile bir insan agir zincir (HC) mini lokusu için ve huVK1-39
adjuvan ile veya bu olniaksizin teknik bilindigi üzere bir tasiyici moleküle (insan
lgG-Fc veya bir His-tag gibi) birlesik sekilde kaynastirilabilen izole CD3ö/s veya
CD3'y/c, (2) CD3ö/c veya CD3y/s`ü ifade eden hücreler veya (3) CD3ö/z: veya
CD3'y/3°ü kodlayan DNA yapisi veya bu stratejilerin bir kombinasyonu. ELISA
ve/veya akis sitometrisi ile belirlendigi üzere yeterli bir antijen-spesifik titre
gösteren immünize farelerden, F ab faz kütüphanelerinin üretildigi dalaklar
ve/veya lenf dügümleri hasat edilmistir. Alternatif olarak VH bölge dizileri, derin
dizileme ile dalak ve lenf dügüm materyalinden direkt olarak türetilir (birlikte
beklemede olan US provizyonel basvuru 61/ 539,1 16).
Antijen-spesifik Fab kollari, huVK1-39 hafif zincirinin VL bölgesini ve insan VH
bölgelerinin bir koleksiyonunu içeren sentetik faj gösterim kütüphanelerinden
veya immünize farelerden gelen faj kütüphanelerinden seçilir. Sentetik
kütüphanelerin üretimi için, randomize CDR3 primerleri, De Kruif et al. 1995, J
kütüphanelerden gelen bakteriyofailar, bir tasiyici moleküle (yukari bakiniz)
baglanabilen izole edilmis CD3ö/s proteinine veya HPB-ALL gibi CD3s,ü ifade
eden hücrelere veya CD3ö/s veya CD3'y/eii ifade etmek üzere transfekte edilen
hücrelere baglanma veya bu stratejilerin bir kombinasyonuna yönelik birçok
rauntta seçilir. Baglanmayan fajlar, uzaklastirilir ve baglanma fajlari, bir asidik
01574-P-0003
tampon ile veya seçilen Fab repertuvarini istenen bir spesifiklige yönlendirmek
üzere spesifik bir epitopa karsi antikorlar ile, örnegin sinomolgus CD3a°e çapraz
reaktif olan antikorlar ile ayristirilir. Bu fajlar daha sonra faj içeren bakteri için
seçim basinci altinda büyütülen kompetan bakterilere transfekte edilir. Sag kalan
birkaç bakteri kolonisinin toplanmasindan sonra fajlar kurtarilir ve sonraki seçim
raunduna sunulur.
Seçim tamamlandiktan sonra geri kalan fajlar, akis sitometrisi ile hücre-ifade
edilen antijene ve ELISA ile izole edilmis antijene baglanma için taranir.
Baglanma için pozitif bir kontrol olarak ölçüt CD3 antikorlari, örnegin OKT-3
gibi teknikte gösterilen sekilde kullanilir. Antijen ifade eden hücrelere spesifik
baglanma gösteren esas olarak tüm fajlardan alinan nükleotid materyali, VH
bölgelerini çogaltmak üzere koloni PCR ve VH bölge dizisini belirlemek üzere
dizi PCR°sine sunulur. Ortaya çikan diziler, bunlarin HCDR3”lerinin
benzersizligine dayanarak kümelenir. (Sinirli) somatik hiper mutasyonun
meydana gelebildigi immünize farelerden türetilen diziler için VH dizileri ayrica
benzersiz bir VDJ olasiligina dayanarak gruplandirilir (diger bir ifadeyle farkli
kümelerdeki HCDR37ün, <2 amino asit farkliligi içermesi halinde bunlar ayni
kümenin parçasi olarak düsünülür ve birlikte gruplandirilir). Her bir kümeden
küme basina bir veya birkaç VH bölgesi, huVicl-39 hafif zincir ile baglantili
olarak bir IgG monospesifik iki degerlikli format halinde ifade için vektörlere
klonlama için seçilir. Izole edilen antijen veya hücre-ifade eden antijene spesifik
baglanmaya yönelik VH bölgeleri dogrulanir ve daha sonra bir CD3XCLEC12A
bispesifik formatinda ifade için vektörlere klonlanir. Bunlar daha sonra, terapötik
potansiyeli olan bir aday seçmek üzere karakterize edilir (bakiniz asagidaki
örnekler).
01574-P-0003
Örnek 3: CD3xCLEC12 bsAb için CLEC12 Fab kollarinin üretimi ve
karakterizasyonu
CD3XCLEC12A bispesifik moleküllerinin, T-hücre aracili tümör hücre
parçalanmasini indüklemek üzere potansiyele sahi oldugu Örnek 1`de gösterildigi
üzere daha sonra bu tür bispesifik moleküllerin daha genis panellerinin
belirlenmesi istenmistir. Örnek 2`de açiklandigi üzere CD3 baglayicilarinin
paneline ek olarak ayrica bir CLEC12A baglayici paneli üretilmistir.
Kisaca CLEC12A-spesifik Fab kollari, yeniden düzenlenen insan IGKVl-
39/IGKJl VL bölgesini ve insan VH bölgelerinin bir koleksiyonunu içeren Fab
sentetik faj gösterim kütüphanelerinden seçilmistir (De Kruif et al. Biotechnol
baglanma için iki rauntta seçilmistir. Bu, bir yüzeye kaplanan bir His-tag (Sino
ila 275) hücre disi domeni ile inkübasyon yoluyla yapilmistir. Baglanmayan fajlar
uzaklastirilmistir, baglanan fajlar kimyasal olarak ayristirilmistir ve faj içeren
bakteriler için seçim basinci altinda büyütülen bakterileri enfekte etmek üzere
kullanilmistir. Sag kalan birkaç bakteri kolonisinin toplanmasindan sonra fajlar
kurtarilir ve sonraki seçim ve yayilma raunduna sunulur.
Seçim tamamlandiktan sonra geri kalan fajlar, akis sitometrisi ile tümör hatti
HL60 üzerinde ifade edilen CLEC12A°ya baglanma için taranmistir. Baglanma
için pozitif bir kontrol olarak CD3 ölçüt antikorlari kullanilmistir. CLEC12A
ifade eden hücrelere spesifik baglanma gösteren esas olarak tüm fajlardan alinan
nükleotid materyali, VH bölgelerini çogaltmak üzere koloni PCR ve VH bölge
dizisini belirlemek üzere dizi PCR”sine sunulmustur. Ortaya çikan diziler,
bunlarin HCDR3”lerinin benzersizligina dayanarak kümelenmistir. Her bir
benzersiz HCDR3 kümesinden Vl-l bölgeleri, yeniden düzenlenen insan lGKVl-
39/IGKJ1 LC ile baglantili olarak IgG monospesifik veya bispesifik formatlarda
ifade için vektörlere klonlanmistir.
01574-P-0003
Benzersiz bir HCDR3 dizisi ile seçilen üç CLEC12A baglanma molekülü,
asagidaki karakteristiklere sahip IgG formatinda istenen profili göstermistir
(Tablo 2 ve veriler gösterilmemistir):
CLEC12A°nin izole edilmis hücre disi domenine spesifik baglanma.
Bir tümör hücre hatti üzerinde ifade edilen CLEC12A`ya spesifik baglanma.
Insan PBMC üzerinde miyeloid soya spesifik ifade deseninin dogrulanmasi.
Tablo 2: CLEC12A Fab kollarinin karakterizasyonu
uzunlugu baglanma'ya hucrelere baglanmau ölçütü ile
epitop için
rekabet***
4331 0 [328 1 mo Evet
sonuçlar` optik yogunluk olarak verilmistir (arkaplan sinyal izotip kontrolü: 0.127).
sonuçlar. ortalama floresan yogunlugu olarak verilmistir (arkaplan sinyal izotip kontrolü: 116).
m 20 pglml'de ölçüt IgG'ye karsi. Fab formati ile ELISA'da test edilmistir.
Örnek 4: CDSXCLECIZ bsAb için fonksiyonel CLEC12 Fab kolomin
seçilmesi
Örnek 3”te açiklandigi üzere seçilen CLEC12A Fab kollari daha sonra sabit bir
kol olarak yeni bir CD3 Fab kolu ile bispesifik lgG formatinda ifade edilmistir.
01574-P-0003
ayrica huVK1-39 hafif zinciri kullanilir. Bu CD3-spesifik VH aday 3896“ya ait
nükleotid ve amino asit dizileri Sekil 20`de gösterilir. Dolayisiyla çesitli bispesifik
CD3XCLEC12A molekülleri, ayni tüm 3896 anti-CD3 koluna sahip ancak
CLEC12A kolunda farklilasan (CLEC12A ölçüt kolu veya aday CLEC12A Fab
CD3XCLEC12A bispesifik molekülleri daha sonra Örnek 1`de açiklanan sekilde
bir hedef hücre parçalama analizinde fonksiyonel açidan test edilmistir. Sonuçlari
izotip kontrol ile iliskili spesifik parçalanma yüzdesi olarak ifade edilmistir. Tüm
aday CLEC12A Fab kollari, CLEC12A ölçüt Fab kolu kullanildiginda buna
benzer veya bundan daha iyi olan kinetikler ile bispesifik formatta HL60 hedef
hücrelerin doza bagimli spesifik parçalanmasini göstermistir (SEKIL 5).
Ayrica, 1 log daha yüksek konsantrasyonlar ayni ölçüde spesifik parçalanma için
gerekli olmasina ragmen CD3Xizotip kontrol bsAb, bir doza bagimli hedef hücre
parçalanmasi göstermistir. HS ilavesi yoluyla asiri insan IgG varliginda ragmen
bu tek degerlikli CD3 lgGanin öldürme aktivitesi, büyük olasilikla Fc aracili
çapraz baglama ile hala görünürdür. Örnek 77den belirgin olacagi üzere bu hedef
spesifik olmayan parçalanma aslinda, CH2 mühendisligi ile Fc reseptör
etkilesiminin susturulmasi vasitasiyla tamamen ortadan kaldirilabilir.
Örnek 5: AML T hücreleri ve/veya AML tümör hücreleri kullanilarak
CD3XCLEC12 ürün adaylarinin etkinligi
Örnekler 1 ve 4, saglikli donör dinlenen T hücrelerinin aracilik ettigi HL60 hedef
hücre parçalanmasinin indüklenmesinde CD3 Fab kolu 3056 veya 3896
ölçüt Fab kolu 3116 kullanilarak CD3XCLEC12A bispesifik IgG potansiyelini
göstermistir. Mevcut örnekte, bir CD3XCLEC12A bispesifik ilacin terapötik
uygulamasi için primer belirtilerden biri olan, AML°1i hastalardan türetilen T
hücrelerin bir CD3XCLEC12A bispesifik tam uzunlukta IgG ile uyarilma
01574-P-0003
üzerinde tümör hedeflerini öldürmek üzere uyarilip uyarilamadigi arastirilmistir.
Daha sonra hasta türevli T hücrelerin, bir CD3XCLEC12A bispesifik tam
uzunlukta IgG ile uyarilma üzerinde otolog AML tümör hücre blastlarini öldürüp
öldüremedigi belirlenir.
T-hücreler, Örnek 1`de açiklanan prosedürlere göre AML hastalarinin periferik
kanindan izole edilir. Saflastirilmis hasta türevli T hücreleri daha sonra CFSE-
etiketli HL60 hücreleri ile inkübe edilir ve Örnek 1°de açiklanan sekilde hücre
parçalanmasi için izlenir.
Ek olarak T-hücre aracili hedef hücre parçalanmasinin analizi, ayni hastadan izole
edilen AML tümör blastlari ile gerçeklestirilir (Norde et al. Blood 2009
(113)2312). Izole edilen blastlar daha sonra CFSE ile etiketlenir ve Norde Vd.`de
açiklanan sitokin karisimi varliginda ve CD3XCLEC12A bispesifik IgG veya
kontroller varliginda otolog hasta-türevli T hücreleri ile birlikte kültürlenir. Hedef
hücre parçalanmasi, Örnek 1”de açiklanan sekilde izlenir.
Örnek 6: CD3XCLEC12A bispesifik IgG ile temastan sonra T hücreleri ile
sitokin salimi
T-hücre uyarici biyolojikaller kullanilarak T hücrelerinin asiri uyarilmasi, sitokin
salim sendromuna yol açabilmesinden dolayi ciddi bir risktir (Suntharalingam et
indüklenen T-hücre uyarilma ölçüsünü arastirmak üzere T-hücre sitokinlerinin
indüksiyonu, T-hücrelerinin ve F0 reseptör ifade eden hedef hücrelerin bir es
kültüründe çalisilmistir.
Kisaca saglikli donör dinlenen T hücreleri, Örnek lide açiklandigi üzere aday
veya kontrol IgG varliginda
HL60 hedef hücreleri ile birlikte kültürlenmistir. Iki gün sonra üst faz numune
01574-P-0003
olarak alinmistir ve Sitokin üretim seviyeleri, insan Sitokin Human IO-Plex Panel
(Invitrogen, cat.n0.LI-IC0001) kullanilarak teknikte bilinen sekilde bir Luminex
analizinde belirlenmistir. Bu panel, on majör Thl ve Th2 sitokinini kaplar.
Beklenildigi üzere nionospesif'ik iki degerlikli IgG, güçlü IFNy, TNFOL ve IL-2
üretimini indüklemistir (Tablo 3), bunun esas olarak Sitokin salim sendromunu
tahrik ettigi düsünülür. Ek olarak IL-4, IL-6, IL-8 ve IL-10 üretimi, CD3 lgG ile
inkübasyon yoluyla arttirilmistir. Bunun aksine CD3XCLEC12A bispesifik lgG
sadece IL-8 üretimi CD3 IgG ile benzer bir seviyeye kadar indüklemistir; diger
sitokinler, bispesifik lgG tarafindan önemli ölçüde indüklenmemistir. GM-CSF,
herhangi bir durumda tespit sinirinin altindadir.
Tablo 3: T hücreleri ile antikor iiidükl'i'i stokin salimi
Sitokin CD3 lgG CDJXCLECIZA lgG CD3Xizotip kontrolü
Sonuçlar, pg/ml iki donör ± standart sapma cinsinden ortalama sitokin
Burada gösterilen veriler, CD3 IgG ile gözlemlenen pro-inflamatuvar
sitokinkilerin potansiyel olarak zararli miktarlarini salgilamak üzere T-hücrelerini
tetiklemeksizin hedef hücre parçalanmasini yogun sekilde indüklediginden
01574-P-0003
(Örnekler 1 ve 4) farkli CD3XCLEC12A bispesifik IgG molekülleri için uygun
terapötik bir profil sunar.
Örnek 7: CD3XCLEC12A bsAbinin in vitro etkinligi üzerindeki Fc susturma
Örnek 4`te gösterilen CD3Xiz0tip kontrol bsAb ile doza bagimli hedef hücre
parçalanmasinin, HL60 hedef hücreleri üzerinde Fc reseptörleri ile bsAb Fc
parçasinin etkilesiini nedeniyle oldugu belirtilmistir. Bu tür spesifik olinayan
hücre parçalanmasi in vi'vo meydana gelebildiginden hedef hücreleri üzerinde
veya NK hücreleri gibi seyirci hücreler üzerinde Fc reseptörleri ile etkilesim
yoluyla CHZ/alt mentese bölgesinin mühendisligi, bsAb”nin Fc-aracili
aktivitesinin susmasini indüklemek üzere kullanilmistir.
Bunun için iki Fc mutasyon stratejisi, bir 235G 236R ikili mutasyon (DM; DM-
incelenmistir. Bir DM-Fc veya bir TM-Fc ile CD3XCLEC12A bsAbs
(3056x3116), üretilmistir ve dogal sus PC ile bsAb olarak ayni yogunlukta akis
sitometrisi ile CLEC12A ifade eden hücrelere baglanmak üzere dogrulanmistir
(veriler gösterilmemistir). Daha sonra bu bsAb”ler ve CD3Xizotip kontrol
bsAb°nin dogal sus, DM-Fc ve TM-Fc versiyonlari, HL60 hedef hücre
parçalanma analizinde test edilmistir (bakiniz Örnekler 1 ve 4). Sonuçlar, izotip
kontrolü ile iliskili spesifik parçalanma yüzdesi olarak ifade edilmistir.
DM ile veya TM ile FC susturina islemi, CD3XCLEC12A bsAb ile indüklenen
HL60 hücre spesifik parçalanmasinin ölçüsü üzerinde sifir veya sadece çok az bir
etkiye sahiptir (SEKIL 6). Ancak CD3Xizotip kontrol bsAb için HL60 hücre
parçalanmasini indüklemek üzere potansiyel, TM ile veya hatta ayrica DM ile
önemli ölçüde azaltilmistir.
01574-P-0003
Bu, CHZ/alt mentese mühendisligi ile Fc susturma isleminin ayrica efektör
hücreleri etkili bir sekilde ve spesifik olarak kuvvetlendiren bir bispesifik
CD3XCLEC12A IgGl formati olusturularak anormal hücrelerin hedefe spesifik
ölmesine katkida bulunur ve normal Fcy reseptör ifade eden yardimci hücrelerin
aracilik ettigi potansiyel spesifik olmayan immün aktivasyonunu azaltir.
Örnek 8: Fc susturma isleminin FcRn, CD16, CD32, CD64 ve Clq'ya
baglanma üzerinde etkisi
veya bir TM-Fc ile insan FcRnZye baglanmasi, Bio-Layer Interferometre (BLI,
Octet QK, FortéBio) araciligiyla belirlenmistir. Kisaca saflastirilmis
CD3XCLEC12A WT Fc lgGl, DM-Fc [gG] veya TM-Fc IgGl, oda sicakliginda
içeren 0.1 M fosfat
tampon/%0.002Tween20 içinde 50 ug/ml°lik bir konsantrasyonda Protein L
biosensors°e (FortéBio, Cat no 18-5085) yakalanmistir. Daha sonra çözünür insan
FcRn (Sino Biological Inc, CT009-H08H, oda sicakliginda FcRn-Binding
tamponunda 1 ug/ml7lik konsantrasyonda eklenmistir. Octet QK analiz
yaziliminin kullanildigi veri analizi, ProtL sensörüne lgG baglanmasina yönelik
normallesme üzerine CD3XCLEC12A bsAbinin DM veya TM susturulmus PC ile
insan FcRn`ye baglanmasinin dogal sus Fc-kuyrugu olan (SEKIL 7)
CD3XCLEC12A bsAb ile karsilastirilabilir oldugunu ve dolayisiyla Fc susturma
isleminin FcRn baglanmasini etkilemedigini göstermistir.
Susturulmus FC ile CD3XCLEC12A bsAb°nin CD16, CD32 ve CD64°ya
baglanmasi, Bio-Layer Interferometre (BLI, Octet QK, FortéBio) ile
belirlenmistir. Kisaca protokol: saflastirilmis CD3XCLEC12A WT Fc IgGl, DM-
Pc IgGl veya TM-Fc IgGl, oda sicakliginda 1x Kinetics Tamponu (FortéBio 18-
5032) içinde 50 ug/mFlik bir konsantrasyonda Protein L biosensors”e (FortéBio,
Cat no 18-5085) yakalanmistir. Daha sonrasinda rekombinant CD16 (Sino
01574-P-0003
CD64 (Sino Biological Inc, 10256-H08H) protein, oda sicakliginda Kinetics
Tamponunda (FortéBio 18-5032) 1.0 ug/mldik konsantrasyonda eklenir. FCR
reseptörlerinin bsAbaye baglanmasi, Octet QK analiz yazilimi kullanilarak analiz
edilmistir.
CD3XCLEC12A bsAb°nin susturulmus FC ile insan C lq”ya baglanmasi,
yakalama ELISA araciligiyla belirlenmistir. Bu amaçla sailastirilmis
CD3XCLEC12A WT Fc IgGl, DM-Fc lgGl veya TM-Fc IgGl, 4C`de Nunc-
ug/ml°lik bir konsantrasyon araliginda kaplanir. Daha sonrasinda insan Clq
(Quidel, A 2.0 tig/mFde eklenir.
Kompleks daha sonra koyun-anti-insan Clq poliklonal lgG (Meridian, K90020C)
ve tavsan-anti-koyun HRP konjuge poliklonal lgG (Southern Biotech, 6150-05)
kullanilarak görsellestirilir. Daha sonra TMB substrati (BD 51-2606KC/51-
2607KC) kullanilarak baglanma gelistirilir ve OD450, bir Mikro plaka okuyucu
(Multiskan EX, Thermo Electron Corporation) kullanilarak miktari belirlenir.
Örnek 9: CD3xCLEC12A bispesitîk IgG,nin in vivo etkinliginin
degerlendirilmesi
Lusiferaz ifade eden HL60 hücrelerinin (HL60(-Luc) hücreleri) kullanildigi
hayvan ksenogreft çalismalari, CD3XCLEC12A bispesifik lgGl kullanilarak in
vitro bulgulari dogrulamak ve genisletmek üzere gerçeklestirilir. Daha spesifik
olarak bu çalismalar, Faz 1 klinik degerlendirme için baslangiç dozunun
ayarlanmasinda göz önüne alinacak, etkili dozlarda sabit durum plazma
konsantrasyonlarini belirlemek üzere gerçeklestirilir. Bu amaçla NOD/SCID
fareleri (veya karsilastirilabilir immün-hasar görmüs fareler), enjeksiyon üzerine
iki hafta içerisinde hayvanlarin çogunda subkütanöz HL60 tümörlerinin olusmasi
ile sonuçlanan bir miktar yasayabilir HL60(-Luc) hücreleri ile subkütanöz olarak
enjekte edilir. HL60(Luc) inokülasyonu ile paralel olarak veya baslangiçtaki
tümör alimi üzerine 5x10E6 veya lxlOE7 insan PBMC uygulanir.
01574-P-0003
CD3XCLEC12A bispesitik IgG veya kontrol monospesifik veya kontrol bispesifik
seviyesinde intravenöz olarak uygulanir. Tümör boyutlari, baslangiçtaki
HL60(Luc) inokülasyondan 1 hafta sonra skorlanmistir. Her bir gruptan tümör
boyutlarinin aritmetik ortalamasi (tümör hacimleri olarak veya toplam
biyolüminesans olarak gösterilmistir) zamana karsi isaretlenmistir.
Örnek 10: Bir faz la/lb çalismasinda bir bispesifik tam uzunlukta lgGl
antikor CD3XCLEC12A,nin kullanimi
Nihai lider CD3XCLEC12A bispesilik tam uzunlukta IgGl adayi, GMP dereceli
materyali üretmek üzere kullanilir ve AML hastalarinda klinik olarak
degerlendirilir. Öncelikle ürün adayinin forma] klinik olmayan bir güvenlik
analizi, öncelikle insan çalismalarinda güvenli bir baslangiç dozunu belirlemek
üzere gerçeklestirilir. Buradan sonra bir açik-etiket, çok-merkezli doz arttirma
Fazi la/b denemesi, i.v. uygulama üzerine CD3XCLEC12A bispesifik lgG°nin
güvenlik ve tolere edilebilirligini kesfetmek üzere, nükseden ve/veya refraktör
AML7de ve yogun tedavi için uygun olmayan hastalarda gerçeklestirilir. Ikinci]
son noktalar, farmakokinetik ve farmakodinamik karakterizasyon ve preliminer
etkinlik analizi içerir. Tüm yanit oranlari, kemik iliginde AML blast azalmasinin
degerlendirilmesi ile degerlendirilir. Faz Iaida maksimum tolere edilen doz
(MTD), tekli/çoklu doz arttirma üzerine degerlendirilir. Geçici PK analizinden
sonra çalismanin Faz lb parçasi, MTDide bir doz uzatma kohortunu gerektirir
veya dozlama sikliginin daha fazla arastirilmasini gerektirir.
Örnek 11: CD3XCLEC12A bsAb7nin T hücre proliferasyonunu indükleme
kapasitesi
AML°li hastalarda T hücre sayisi, tanida AML blastlarinin miktari ile
karsilastirildiginda düsüktür. T hücrelerinin, artan bir T hücre sayisi ile
sonuçlanan aktivasyon üzerine proliferasyon geçirdigi iyi bilinir. Ek olarak örnek
01574-P-0003
1”de bir CD3XCLEC12A bsAb”nin T hücrelerini aktive edebildigi ve T-hücre
aracili tümör hücre parçalanmasini indükleme potansiyeline sahip oldugu
gösterilmistir. CD3XCLEC12A bsAb ile tedavi edilen AML hastalarinin, T hücre
proliferasyonunun yüksek sayida efektör T hücre ile sonuçlanmasi nedeniyle
CD3XCLEC12A bispesifik molekül aracili T hücre aktivasyonu üzerine T hücre
alt kümelerinin genislemesinden faydalandigi var sayilmistir. CD3XCLEC12A
bsAb`nin in vitro T hücre proliferasyonunu indükledigini göstermek üzere
dinlenen T hücreleri saflastirilmistir, karboksifloresin diasetat suksimidil ester
(CFSE) ile etiketlenmistir ve CD3XCLEC12A bsAb veya kontrol Abs varliginda
otolog CLEC12A+ monositleri ile birlikte kültürlenmistir. Spesifik olmayan Fc
gamma aktivasyonu olmaksizin CD3XCLEC12A indüklü T hücre
proliferasyonunu spesifik olarak arastirmak üzere Örnekler 7 ve 8`de açiklandigi
üzere DM-Fc kuyrugu olan CD3XCLECl2A bsAb kullanilmistir. Kontroller
olarak bir CD3xizotip kontrol WT-Fc bsAb, bir CD3xizotip kontrol DM-Fc bsAb,
WT-Fc ile bir monoklonal CD3 ve ilgisiz bir izotip kontrol (IgG with WT-FC)
dahil edilmistir. Saglikli donör periferik kandan alinan monositler ve T hücreler,
periferik kan mononükleer hücreleri (PBMC) zenginlestirmek üzere standart
yogunluklu gradyan izolasyonu ile akabinde CD14 mikro boncuklar (insan CD14
mikro boncuklar, Miltenyi Biotec, cat.no. 130-050-201) kullanilarak monositlere
yönelik bir Cd14 pozitif seçim ve diger lökositlere karsi manyetik boncuklar
kullanilarak dokunulmamis T hücrelerinin negatif bir seçimi (pan T-hücre
izolasyon kiti, Miltenyi Biotec, cat.no. 130-096-535) ile izole edilmistir. Pan T-
hücre izolasyon kiti, T hücrelerinin ön-aktivasyon olasiligini önleyerek dinlenen
(dokunulmamis) T hücrelerinin (diger bir ifadeyle antikorlar ile boyanmamis)
izolasyonuna olanak tanir.
CFSE-etiketli saflastirilmis dinlenen T hücreleri daha sonra yedi gün 521 olan bir
efektörzhedef hücre oraninda %10 normal insan serumu (HS) ile ortamda
saflastirilmis monositler ve bsAb°ler ile inkübe edilmistir. 7. günde T hücre
proliferasyonuna yönelik okunan deger olarak CFSE sinyalinin azalmasi, akis
01574-P-0003
sitometrisi ile ölçülmüstür. Sonuçlar, histogramlarda CD3+, CD3+CD4+ veya
CD3+CD8+ T hücreleri basina CFSE sinyali olarak ifade edilmistir.
Pozitif kontrol CD3 WT-Fc Ab, T hücre proliferasyonunu indüklerken izotip
kontrol lgG With WT-Fc, T hücre proliferasyonunu indüklememistir (Sekil 8).
Beklenildigi üzere CD3xizotip kontrol WT-Fc, T hücre proliferasyonunu
indüklememistir ancak iki degerlikli monospesifik anti-CD3 IgG kontrol ile
karsilastirildiginda düsük bir ölçüde indüklemistir. Bunun aksine CD3xizotip
kontrol DM-Fc bsAb, bunun susturulmus Fc-kuyrugu nedeniyle T hücre
proliferasyonunu indüklememistir. CD3xCLEC12A DM-Fc bsAb ayrica
CLEC12A antijeni ile CD3°ün spesifik olarak baglanmasi ile aracilik edilen
istenen T hücre proliferasyonunu indüklemistir.
Bu, bir CD3XCLEC12A bsAb,nin sadece daha önce gösterildigi üzere T hücre
aracili tümör parçalanmasinin spesifik indüksiyonunu hedeflemedigini ayni
zamanda artan sayida T hücresi ile sonuçlanarak spesifik T hücre
proliferasyonunu güçlü sekilde indükleyebildigini gösterir. Ek olarak bu ayrica
CHZ/alt mentese mühendisligi ile Fc susturma isleminin sadece anormal
hücrelerinin hedef-spesifik ölümüne degil ayni zamanda CD3XCLEC12A DM-Fc
bsAb IgG ile T hücre proliferasyonunun hedef-spesifik indüksiyonuna katkida
bulundugunu gösterir.
Örnek 12: AML hastalarindan TEMRA alt kümesinin CD3XCLEC12A indüklü
genislemesinin degerlendirilmesi
T hücre proliferasyonunun aktivasyonu, CD3xCLEC12 DM-Fc bsAb için
gösterildiginde CD3XCLEC12A DM-Fc bsAbanin AML hastalarinda CD8+
sitotoksik T hücre kompartimaninin proliferasyonunu indükleyip
indüklemediginin arastirilmasi istenmistir. CD8+ sitotoksik T hücreleri, tümör
regresyonuna aracilik eden ana efektörler olarak bilinmektedir (Sluijter et al.,
01574-P-0003
merkezi bellek (TCM, CCR7+CD45RA-), efektör bellek (TEM, CCR7-CD45RA-)
ve CD45RA+ efektör bellek (TEMRA, CCR7-CD45RA+) hücreleri. Çalismalar,
naif ve bellek CD8+ T-hücre alt kümelerinin TCR uyarilmasina yanit olarak
prolifere olmak ve farklilasmak için farkli kapasitelere sahip oldugunu gösterir
(Geginat et al., 2003).
Öncelikle klinik remisyonda AML hastalarinin periferik kanindaki CD8+
kompartimani, saglikli donörlere kiyasla analiz edilmistir. Bu amaçla PBMC”ler,
akis sitometrisi araciligiyla CD8+ T hücre alt kümelerini analiz etmek üzere
CCR7, CD3, CD4, CDS, CD45RA ve CD45RO antikorlari ile boyanmistir.
Sonuçlar, toplam CD8+ T hücre kompartimaninda bir alt küme yüzdesi olarak
ifade edilmistir.
Daha önce açiklanana analog olarak naif CD8+ T hüre alt kümesinin, saglikli
bireylerden alinan naif CD8+ T hücre alt kümesine kiyasla AML hastalarindan
alinan kanda azaltilirken TEMRA kompartimani (CCR7-CD45RA+), saglikli
donörlere kiyasla AML hastalarinda arttirilmistir (Sekil 9).
Daha sonra deneyler, AML hastasi T hücre kompartimaninin hedefe spesifik T
hücre proliferasyonunu çalismak üzere gerçeklestirilir. Daha spesifik olarak bu
deneyler, CD3XCLEC12A DM-Fc bsAbinin AML hastalarinin naif CD8+ T
hücrelerine göre AML hastalarinin efektör T hücre alt kümelerinin (TEM ve
TEMRA) T hücre proliferasyonunu ve disa büyümesini arttirip artiramadigini
belirlemek üzere gerçeklestirilir.
Bu amaçla klinik remisyonda AML hastalarindan alinan dinlenen T hücreleri,
örnek 11'e göre saflastirilmistir. Gün = 07da CD8+ T hücre alt kümelerinin
bilesimi, PBMC With CCR7, CD3, CD4, CD8, CD45RA ve CD45RO
antikorlarinin boyanmasi ile, akabinde akis sitometri analizi ile analiz edilir. Ek
olarak dinlenen T hücreleri, CFSE ile etiketlenir veya etiketlenmez (örnek 11°de
açiklandigi üzere CFSE etiketleme) ve 7 gün kontrol veya test antikorlari ile 511
01574-P-0003
olan bir E:T oraninda HL60 lösemi hücreleri ile birlikte kültürlenir. CFSE etiketli
T hücreleri, T hücre proliferasyoriuriun miktarinin belirlenmesi için kullanilirken
etiketlenmemis T hücreleri, prolifere edilen T hücre alt kümelerinin yüzdesini
belirlemek üzere kullanilmistir. CFSE-etiketli ve etiketlenmemis T hücreleri, l
ug/ml°de WT-Fc ile PBS, izotip kontrol WT-Fc Ab, CD3XCLEC12A DM-Fc
bsAb, CD3xizotip kontrol DM-Fc bsAb ve CD3 monoklonal Ab ile inkübe edilir.
7 gün sonra CFSE etiketli T hücre, CD3, CD4 ve CD8 antikorlari ile boyanir ve
mutlak T hücre sayisini ve hücre bölünmesi sayisini belirlemek üzere FACS
analizine tabi tutulurken etiketlenmemis CFSE T hücreleri, akis sitometrisi
araciligiyla prolifere edilen CD8+ T hücre alt kümelerinin bilesimini belirlemek
üzere CCR7, CD3, CD4, CD8, CD45RA ve CD45RO antikorlari ile boyanir. T
hücre proliferasyonu, histogramlarda T hücre alt kümesi basina CFSE sinyali
olarak ifade edilir ve dört CD8+ T hücre alt kümesinin boyutu, toplam CD8+ T
hücre kompartimani içerisindeki yüzde olarak ifade edilir.
Örnek 13: CD3XCLEC12A bsAb1nin AML hasta T hücre aracili tümör hücre
parçalanmasini indükleme etkinligi.
Örnek l”de bir CD3XCLEC12A bsAbinin saglikli donörlerden alinan dinlenen T
hücreleri ile CLEC12A-pozitif HL60 hücrelerinin Öldürülmesini indükleyebildigi
gösterilmistir. Daha sonra CD3XCLEC12A bsAbinin AML hastasi T hücrelerinin
hedef-spesifik aktivasyonunu indükleme kapasitesi ve HL60 hücrelerinin AML
hastasi T hücre aracili ölmesini indükleme kapasitesi arastirilmistir.
T hücreleri, örnek 11°de açiklandigi üzere pan T-hücre izolasyon kiti kullanilarak
klinik remisyonda AML hastalarinin (AML FAB siniflandirma AML-Ml/MZ, M4
veya M5) donuk periferik kanindan izole edilmistir. SaIlastirilmis AML hasta
türevli dinlenen T hücreleri daha sonra PBS, izotip kontrol WT-Fc Ab,
CD3XCLEC12A DM-Fc, CD3xizotip DM-Fc varliginda iki gün 5:] olan bir
efektörzhedef hücre oraninda %10 normal HS ve pozitif kontrol CD3 WT-Fc Ab
(tüm antikorlar 1 ug/ml”lik konsantrasyondadir) ile desteklenen CSFE etiketli
01574-P-0003
HL60 hücreleri ile inkübe edilmistir. Iki günlük birlikte kültür isleminden sonra T
hücre aktivasyonu, CD3, CD4 ve CD25 için akis sitometri analizi ile
belirlenmistir. Bu sonuçlar, CD4+ T hücreleri basina CD25+ hücrelerinin yüzdesi
olarak ifade edilmistir. Ek olarak CFSE-pozitif HL60 hücrelerin miktari akis
sitometrisi ile belirlenmistir. Sonuçlar, IgG`ye göre spesifik parçalanma yüzdesi
olarak ifade edilmistir.
Bu veriler, saglikli donör ve CD3xCLEC12A DM-Fc bsAb aracili AML hastasi T
hücrelerinin antijene spesifik aktivasyonunun karsilastirilabilir oldugunu gösterir
(Sekil 10A). Beklenildigi üzere CD3xizotip kontrol DM-Fc bsAb, ne saglikli
donörün T hücre aktivasyonuna ne de AML hasta türevli T hücrelerini
indüklememistir. AML hastasi türevli T hücreleri (%68 HL60 hücre
parçalanmasi) araciligiyla HL60 hücrelerinin CD3XCLEC12A DM-Fc bsAb
aracili parçalanmasinin, saglikli donör T hücrelerinki (%69 HL60 hücre
parçalanmasi, Sekil IOB) ile karsilastirilabildigi gösterilmistir. Beklenildigi üzere
CD3xizotip kontrol DM-Fc bsAb, ne AML hastasi T hücreleri ile ne de saglik
donör T hücreleri ile HL60 hücrelerinin ölmesini indüklememistir. Dolayisiyla
CD3XCLEC12A bispesifik molekül, bu T hücrelerinin AML hasta türevli olup
olmadigi veya saglikli donörlerden alinip alinmadigina bakilmaksizin T hücre
aracili tümör hücre parçalanmasinin güçlü bir indükleyicisidir.
CD3XCLEC12A bsAb”nin AML hasta T hücreleri ile HL60 tümör hücrelerinin
güçlü parçalanmasini indükleme kapasitesine sahip oldugu gösterildiginde daha
sonra CD3xCLECl2A bsAbanin AML T hücrelerinin spesifik aktivasyonunu
hedef alma kapasitesi degerlendirilmistir. Ek olarak CD3xCLEC12A bsAb°nin
AML türevli otolog T hücreleri ile primer CLECIZA-pozitif AML blastlarinin
parçalanmasini indükleme kapasitesi belirlenmistir. Öncelikle, akis sitometri
analizi ile belirlendigi üzere >%70 primer AML blasti içeren tani numunelerinde
AML hastalarindan alinan donuk depolanan kemik iligi tavlanmistir, daha önce
açiklandigi üzere %10 PCS, lOOng/ml GM-CSF, lOOng/ml G-CSF, SOng/ml IL-3,
25ng/m1 SCF ve 20ng/m1 Flt3L ile desteklenen IMDM ortaminda bir geve (O/N)
01574-P-0003
kültürlenmistir (Norde et al., 2009). O/N kültür isleminden sonra primer AML
blastlari, akis sitometrisi araciligiyla CLECIZA, CD3, CD4, CD8, CD14, CD19,
CD33, CD34, CD38, CD45 ve CDll7 yüzey ifadesi için fenotiplenmistir ve
CFSE ile etiketlenmistir. Hasta klinik remisyon elde ettiginde toplanan, dinlenen
otolog hasta türevli T hücreleri, örnek ll`de açiklandigi üzere pan T-hücre
izolasyon kiti kullanilarak periferik kandan izole edilmistir. Daha sonrasinda
AML blastlari, iki gün %10 HS olan ortamda 521 olan bir E:T oraninda dinlenen
otolog T hücreleri ile birlikte kültürlenmistir. Test edilen kosullar PBS, izotip
kontrol Ab WT-Fc, CD3xCLEC12A DM-Fc, CD3Xizotip kontrol DM-Fc ve
pozitif kontrol CD3 WT-Fc Ab (tüm antikorlar 1 ug/mlsdedir) içermistir. Iki
günlük birlikte kültürleme isleminden sonra T hücre aktivasyonu, CD3, CD4,
CD8 ve CD25 için akis sitometri analizi ile belirlenmistir. Bu sonuçlar, CD4+
veya CD8+ AML T hücreleri basina CD25+ hücrelerinin yüzdesi olarak ifade
edilmistir. AML blast parçalanmasi, akis sitometrisi araciligiyla sag kalan
CFSEJr/CD45'ÖW ikili pozitif AML blastlarinin miktarinin belirlenmesi ile
belirlenmistir. Sonuçlar, lgG°ye göre spesifik blast parçalanmasinin yüzdesi
olarak ifade edilmistir.
Bu veriler, CD3XCLEC12A DM-Fc bsAb”nin monoklonal CD3 WT-Fc pozitif
kontrol Ab ile karsilastirilabilen AML T hücrelerinin AML blast hedef spesifik
aktivasyonunu indükleme kapasitesine sahip oldugunu gösterir (Sekil llA/B). Ek
olarak bu veriler, AML hastasi türevli T hücreleri ile otolog AML blastlarinin
ölmesini indükleyen CD3xCLEC12A bsAb”nin monoklonal CD3 WT-Fc pozitif
kontrol Ab ile indüklenen ölüm kadar güçlü oldugu gösterir (Sekil llC).
Beklenildigi üzere CD3xizotip kontrol DM-Fc Ab ile sifir veya minör AML blast
ölümü indüklenmistir, bu, CD3xCLEC12A bsAbsnin aracilik ettigi gözlenen
AML blast ölümünün esas larak T hücrelerinin antijene spesifik aktivasyonunun
ve CLEC12A+ AML tümör hücrelerinin spesifik parçalanmasinin sonucu oldugu
gösterir. Genel olarak bu çalisma, CD3XCLEC12A bsAb*nin AML hastasi T
hücreleri ile CLEC12A pozitif tümör hücrelerinin ölümünü etkili bir sekilde
indükleyebildigini gösterir.
01574-P-0003
Örnek 14: Spesifik olmayan sitokin salimi üzerinde F c-susturma etkisi
Örnekler 7 ve 8°de CHZ/alt mentese mühendisligi (DM-Fe) araciligiyla Fc
susturmasi olan CDBXCLEClZA bsAb IgGl formatinin Fcgamma reseptörleri için
düsük afinite ile sonuçlandigi ve lösemi türevli HL60 hücre hattinin spesifik
olmayan Fc reseptör aracili sitotoksisitesini ortadan kaldirdigi gösterilmistir. Daha
sonra DM-Fc susturmasi ile bsAb IgGl formatinin, NK hücreleri gibi F 0 reseptör-
pozitif seyirci hücrelerin varliginda spesifik olmayan Fc reseptör aracili
sitotoksisiteyi ortadan kaldirip kaldirmadigi arastirilmistir. Bu çalismada otolog
saglikli donör türevli dinlenen T hücreleri, NK hücreleri gibi diger Fc reseptör
pozitif seyirci dogal efektör hücrelerin varliginda CLECIZA-pozitif monositlere
karsi yeniden yönlendirilmistir. Bu airiaçla PBMC, yogunluk gradyan
santrifüjasyon yoluyla saglikli donörlerden alinan heparinize periferik kandan
izole edilmistir ve l*10^6 hücre/ml olan bir yogunlukta plakalanmistir. PBMC,
WT-Fc ile PBS, izotip kontrol Ab, CD3XCLEC12A WT-Fc bsAb,
CD3XCLEC12A DM-Fc bsAb, CD3Xizotip kontrol WT-Fc bsAb, CD3Xizotip
kontrol DM-Fc bsAb veya CD3 monoklonal Ab varliginda %10 FBSlli ortamda
iki gün kültürlenmistir. Iki günlük kültürden sonra sag kalan monositlerin miktari,
CDl4 ifadesine bagli olarak akis sitometrisi ile belirlenmistir. Sonuçlar, lgG ile
iliskili spesifik parçalanma yüzdesi olarak ifade edilmistir.
CD3XCLEC12A bispesifik antikor için sadece DM-Fc bölgesinin varligi ile FC
susturma isleininin monositlerin parçalanmasi üzerinde minör bir etkiye sahip
oldugu gösterilmistir (Sekil 12). Bunun aksine CD3xizotip kontrol bsAb için,
DM-Fc bölgesinin varligi ile Fc susturma islemi monositlerin spesifik olmayan
parçalanmasini önemli ölçüde azaltmistir. Dolayisiyla CD3xCLEC12A bsAb7deki
Fc susturma isleminin hedefe spesifik öldürmeye ayrica katkida bulundugu
sonucuna varilir: CD3xCLEC12A DM-Fc bsAb, T hücrelerinin spesifik olarak
kuvvetlendirir ve normal Fcy reseptörü ifade eden yardimci hücrelerin aracilik
ettigi spesifik olmayan immün aktivasyonunu azaltir.
01574-P-0003
Daha sonra CD3xCLEC12A bsAb”deki DM mutasyonu yoluyla FC susturma
isleminin, yardimci hücreler araciligiyla meydana gelen antikor terapileri ile
yaygin klinik bir durum olan, sitokin salim sendromu (CRS) ile iliskili oldugu
bilinen, sitokinlerin Fc reseptör aracili salimini ortadan kaldirip kaldirmadigi
sorgulanmistir. Bu amaçla Sekil 13°te açiklanan monosit öldürme analizinin üst
fazlarindaki sitokin profili, üreticinin talimatlarina göre Luminex platform
(Invitrogen, LHCOOOI) için sitokin insan lO-plex paneli kullanilarak analiz
edilmistir. Asagidaki insan sitokinlerinin profili, 2. gün üst fazindan ölçülmüstür:
GM-CSF, IFN-y, IL-l ß, IL-2, IL-4, IL-S, IL-6, IL-8, IL-10 ve TNF-oi. Gösterilen
sonuçlar, pg/ml cinsinden ölçülen sitokin konsantrasyonuna sahiptir. GM-CSF,
gösterilmemistir).
Veriler, CD3xCLEC12A ve CD3xizotip kontrol bsAb°nin, WT-Fc kuyrugu ile her
ikisinin lL-lß, lL-6, TNF-a, IL-lO, IL-2 ve lFN-y salimini indükledigini gösterir
(Sekil 13). Ancak lL-8 için bir istisna olmakla birlikte, DM-Fc kuyrugunu
tasidiginda CD3xCLEC12A ve CD3xizotip kontrol bsAb”de bu sitokinlerin sifir
veya sadece oldukça düsük seviyeleri bulunmustur. Monositler ana IL-8 kaynagi
oldugundan yüksek lL-8 seviyelerinin parçalanmis monositlerden salgilandigi
varsayilir ve spesifik FCR aracili bir salimin sonucu degildir. bsAb IgG
formatindaki DM mutasyonlari ile Pc susturma isleminin, CRS ile iliskili lL-lb,
lL-6, TNF-OL, IL-2 ve IF N-y sitokinlerin Fc reseptör aracili salimini önemli ölçüde
ortadan kaldirdigi sonucuna varilir. Genel olarak bu veriler, CHZ/alt mentese
bölgesindeki DM mutasyonu ile Fc susturma isleminin, normal Fcy reseptör ifade
eden yardimci hücrelerin aracilik ettigi potansiyel spesifik olmayan iminün
aktivasyonunun ve inflamatuvar sitokinlerin iliskili salimini azaltilarak
CD3xCLEC12A DM-bsAb araciligiyla efektör hücrelerin spesifik kuvvetlenmedi
ve etkinliginin arttirilmasina katkida bulundugunu gösterir.
01574-P-0003
Tam uzunlukta iki degerlikli monoklonal anti-CD3 lgG olarak aday 3896”nin
membran bagli CD3°e baglanmasi, CD3 ifade eden HPB-ALL hücreleri
kullanilarak FACS analizi araciligiyla tam uzunlukta iki degerlikli monoklonal
anti-CD3 [gG olarak aday 3056 ile karsilastirilmistir. Ilgisiz bir insan IgGl, bir
izotip kontrol IgG olarak çalismistir. Akis sitometrisi, teknikte bilinen standart
prosedürlere göre gerçeklestirilmistir. Sekil 14A`da gösterildigi üzere 3896 CD3
lgG, 3056 CD3 IgGade oldugu gibi HPB-ALL hücreleri üzerinde CD3”e doza
bagimli sekilde baglanmistir.
Daha senra 3896 CD3 IgG”nin T-hücre proliferasyonunu indükleme kabiliyeti,
mürin OKT3 CD3 antikor, 3056 CD3 lgG ve izotip kontrol lgG ile direkt
karsilastirma ile test edilmistir. Kisaca antikorlar seri olarak seyreltilmistir ve 96-
gözlü plakalarda immobilize edilmistir. Bagli olinayan IgGinin uzaklastirilmasi
üzerine CFSE-etiketli T hücreleri eklenmistir ve 37°C°de inkübe edilmistir. 5.
günde indüklenen T hücre proliferasyon seviyesi, akis sitometrisi ile analiz
edilmistir. Sonuçlar, CFSE ifade seviyesindeki en az iki katlik bir azalmayi
gösteren canli T hücrelerinin yüzdesi olarak ifade edilir ve sekil 14B3de gösterilir.
lgG ve mürin OKT3”e kiyasla T hücre proliferasyonunun indüklenmesinden daha
az güçlü oldugu gösterilmistir. Bu veriler, 3056 CD3 lgG ile karsilastirildiginda
3896 ile indüklendigi üzere T hücre proliferasyonunun azalmis seviyesinin, akis
sitometrisi ile analiz edildigi üzere düsük CD3 baglanma kapasitesini yansittigini
belirtir. Baglanmadaki bu fark, CD3 ve CLECIZA için baglanma afiniteleri
arasinda uygun bir denge gösteren bir bispesifik antikor ile sonuçlanarak, istenen
bir afiniteye sahip bir kolun seçilmesine olanak tanir, böylece T hücreleri ve
CLEC12A-pozitif AML tümör hücreleri etkili bir sekilde bir araya getirilir ve
CLECIZA-pozitif AML tümör hücrelerinin T hücre aracili parçalanmasi optimal
olarak indüklenir.
01574-P-0003
Bir CD3XCLEC12A bispesiiik antikor formatta 3056 anti-CD3 kola karsi yeni
3896 anti-CD3 kolonun potansiyelini test etmek üzere örnek 4”ün (aday
sitotoksisite analizinde direkt olarak karsilastirilmistir. Sonuçlar, sekil 15ite
benzer potansiyele sahip oldugu gözlenmistir. Bu nedenle CLEC12A Fab kolu
ayni iken, her iki bispesifik antikorun sadece bunlarin CD3 Fab kollarinda
farklilasmasi nedeniyle 3896 CD3 Fab kolonun fonksiyonelliginin,
CD3XCLEC12A bispesifik Ab°de 3056 CD3 Fab kolununki ile benzer oldugu
sonucuna varilir. Düsük konsantrasyonlarda aday 3896x31169nin aday
3056x3116”dan daha iyi oldugu not edilir. Bu, burada daha önce açiklandigi üzere
daha genis terapötik bir pencere saglamasi nedeniyle uygundur.
Örnek 31te CLEC12A-spesifik Fab kollarinin bir paneli, faj gösterim
kütüphanelerinden seçilmistir. Tüm CLEC12A baglanma molekülleri, huVk1-39
hafif zincirini içerir. Üç CLEC12A baglanma molekülü seçilmistir: Fab 3918,
ait VH'nin ve ortak VL°nin (IGKV1-39; 012) nükleotid ve amino asit dizileri
Sekil 20`de gösterilir.
Tam uzunlukta CLEC12A antikorlari, HL60 hücreleri ile ifade edilen
CLEC12A”ya baglanma için test edilmistir.
bagli CLEC12A”ya baglanmasi, CLEC12A ifade eden HL60 hücreleri
kullanilarak FACS analizi araciligiyla CLEC12A Ölçütü antikor (3116) ile
01574-P-0003
karsilastirilmistir. Ilgisiz bir insan IgGl, bir izotip kontrol IgG olarak çalismistir.
Akis sitometrisi, teknikte bilinen standart prosedürlere göre gerçeklestirilmistir.
benzer bir sekilde CLEC12A5ya baglanmistir. Diger iki antikor, 3918 CLEC12A
bagimli iyi bir baglanma göstermistir. Bunlarin CLEC12A`ya baglanmasi,
CLEC12A ölçütü antikor ile karsilastirildiginda bir sekilde düsük görünmüstür.
bispesitik moleküllerin fonksiyonel olup olinadigi test edilmistir.
için teknikte bilinen yöntemler kullanilarak ifade vektörlerine klonlanmistir.
Bu bispesifikler, daha önce açiklanan HL60 sitotoksisite analizinde fonksiyonellik
için test edilmistir. Iki saglikli donörden (HDI ve HD2) alinan dinlenen T
hücreleri, %10 HS varliginda 48 saat veya 5:1 olan bir E:T oraninda çesitli
bispesifik antikor konsantrasyonlari varliginda CFSE etiketli HL60 hücreleri ile
birlikte kültürlenmistir. Sag kalan CFSE-pozitif HL60 hücreleri, 2. günde akis
sitometrisi ile miktari belirlenmistir. Sekil 17°deki sonuçlar, spesifik parçalanma
yüzdesi olarak ifade edilir. Donör 1°den alinan T hücreleri (HD1; Sekil 17 üst
panel) ve donör 2>den alinan T hücreleri (HDR2; sekilde 17 alt panel) ile iki ayri
deney için tüm bispesifiklerin, yüksek konsantrasyonda inkübe edildiginde
3896XCLEC12A ölçüt bispesifik kadar güçlü oldugu gösterilmistir.
01574-P-0003
Özellikle bispesifik antikorlarin düsük konsantrasyonlarinda 3896x4327 ve
oldugu gözlenmistir. Bu nedenle CD3 Fab kolu ayni iken bu bispesitik
antikorlarin sadece bunlarin CLEC12A Fab kolunda farklilasmasi nedeniyle 4327
ve 4331 CLECl2A Fab kolunun fonksiyonelliginin, CLEClZA ölçütü Fab koluna
kiyasla daha güçlü oldugu sonucuna varilabilir. Teoriye bagli kalinmak
baglanma afinitesindeki bir farki yansitabilir veya CD3 ifade eden T hücreleri ile
tümör hücrelerinin daha etkili bir çapraz baglanma islemine olanak taniyan farkli
bir CLEC12A epitopunu hedef alabilirler.
Örnek 2”de CLECl2A ölçütü antikorun Fab parçalarina karsi Fab formati olarak
bir epitopa baglanma için rekabet ettigi gösterilmistir. Ancak bununla birlikte
4327 CLECIZA Fab, bu analizde baglanma için CLEC12A ölçütü IgG ile rekabet
etmemistir (Tablo 2).
Bu deneyde 4327 CLEClZA lgG°ye ait tam uzunlukta lgG”nin CLECl2A ölçütü
antikor ile CLEC12A°ya baglanma için rekabet edip etmedigi test edilmistir.
Kisaca HL60 hücreleri, 20 dakika buz üzerinde 50 ug/mlide primer antikor ile
önceden inkübe edilmistir. Daha sonrasinda Oregon Green (OG)-etiketli
(Invitrogen, cat.no. A10476) ikinci antikor, l ug/ml°de hücreler arti birinci
antikora (OG-etiketli IgG -45 tig/ml ilavesinden sonra birinci antikor
konsantrasyonu) eklenmistir. 20 dakika sonra hücreler yikanmistir ve FACS ile
analiz edilmistir.
lgG”nin CLEC12A7ya baglanma için rekabet ettigi sonucuna varilmistir. Bu, her
01574-P-0003
iki IgG°nin CLECIZA antijeni üzerinde yakindan iliskili bir epitopa baglandigini
veya bunlarin, sterik engel nedeniyle her iki IgG”nin es zamanli baglanmasina
olanak tanimayan farkli epitoplara baglandigini belirtir.
CLEC12A”ya yeterli baglayicilar ve bir CD3xCLEC12A bispesifik formatinda T
hücre aracili ölümün güçlü indükleyicileri oldugu gösterilmistir. Bu zamana kadar
bispesifik antikorlar, immünoglobülin agir zincir heterodimerizasyonun
gerçeklestirilmesine yönelik bilinen yöntemler kullanilarak elde edilmistir
(Gunasekaran et al.).
Birlikte bekleinede olan US ve PCT basvurularda (US usule uygun basvuru NO:
hücreden bispesifik antikorlarin üretilmesine yönelik yöntemler ve yollar
açiklanmistir, böylelikle monospesifik antikorlarin olusumuna göre bispesifik
antikorlarin olusumun tercih eden yollar saglanir. Bu yöntemler ayrica uygun
sekilde mevcut bulusta kullanilabilir. Spesifik olarak, esas olarak sadece
bispesifik tam uzunlukta IgG moleküllerini üretmek üzere tercih edilen
mutasyonlar birinci CH3 domenindeki (the 'KK-varyant' agir zincir) amino asit
sübstitüsyonlari L351K ve T366K ve ikinci CH3 domenindeki ('DE-varyant' agir
zincir) amino asit sübstitüsyonlari L351D ve L368E veya tam tersidir. DE-varyant
ve KK-varyantin tercihen heterodimerleri ('DEKK' bispesiiik moleküller olarak
adlandirilir) olusturmak üzere eslestigi birlikte beklemede olan US 13/866,747 ve
agir zincirlerin (DEDE homodimerler) veya KK-varyant agir zincirlerin (KKKK
homodimerler) homodimerizasyonu, ayni agir zincirler arasinda CH3-CH3 ara
yüzündeki yüklü kalintilar arasindaki güçlü repulsiyon nedeniyle güçlü meydana
01574-P-0003
CD3XCLEC12A bispesifik moleküllerin, heterodimerizasyon (Gunasekaran) veya
DEKK mutasyonlari için bilinen mutasyonlardan etkilenmedigini göstermek üzere
DE-Varyant ve KK- varyant agir Zincirler, CD3XCLEC12A bispesifiklerin
olusturulmasina yönelik farkli agir zincirlerin heterodimerizasyonunu tahrik
etmek üzere kullanilmistir. Ek olarak CH2 / alt mentese ikili mutasyonlar (L23SG
ve G236R; DM), bu DE- ve KK-Varyant agir zincirlere eklenmistir. Bu ortaya
çikan bispesifik moleküllerin F c kuyrugu, 'DM DEKK' olarak refere edilir.
+ DM agir zincir içeren ifade vektörlerine klonlanirken 3056 CD3 antikorun VH
bölgesi, KK-varyant + DM agir zincir (US usule uygun basvuru NO: 13/866,747
düzenlenmis insan lGKVl-39/lGKJl (huVKl-39) hafif zincir ile birlikte bu ifade
vektörleri, konakçi hücre bispesifik antikorlari ifade edecek ve üretecek sekilde
bir konakçi hücreye saglanmistir. Ortaya çikan 3056x3116 DM DEKK,
sonrasinda daha önceden açiklandigi üzere HL60 sitotoksisite analizinde
potansiyel için test edilmistir. Sonuçlar sekil 19”da gösterilir: tüm varyantlarin ala
etkili tümör hücresi parçalama kapasitesinde oldugu gösterilmistir ve dolayisiyla
DM ve DEKK mutasyonlarinin, tümör hücre parçalanmasini indükleme kapasitesi
sürdürülürken CD3XCLEC12A bispesifik antikorun FC bölgesine eklenebildigi
sonucuna varilmistir.
REFERANSLAR
Blueinel et al. 2010 Cancer lmmunol. lmmunother. 59:] 197
01574-P-0003
Kipriyanov et al. 1998 Int.J.Can. 77:763
Lanzavecchia et al. 1987, Eur.J.lmm. 17:105
Oganesyan et al. Biol. Crystall. 2008(D64)700
Claims (1)
- ISTEMLER . Bir bispesitik insan lgG tam uzunlukta antikordur, burada söz konusu bispesifik lgG antikor, CLEClZA'yi spesifik olarak taniyan bir kol ve CD3”ü spesifik olarak taniyan ikinci bir kol içerir ve burada CLEC12A°yi spesifik olarak taniyan kol, QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTSYYMHWVRQAPGQ GLEWMGIINPSGGSTSYAQKFQGRVTMTRDTSTSTVYMELSSLRSE DTAVYYCAKGTTGDWFDYWGQGT LVTVSS ile ayni olan bir diziden olusan bir degisken agir zincir dizisi; veya ile ayni olan bir diziden olusan bir degisken agir zincir dizisi içerir, ve burada her iki kol, asagidaki ile ayni olan bir diziden olusan bir degisken hafif zincir dizisi içeren ortak bir haIif zincir içerir . Istem 1`e göre bispesiIik IgG antikordur, burada söz konusu antikor . Istemler 1-2”den herhangi birine göre bispesifik IgG antikordur, burada söz konusu bispesiIik antikor bir insan IgG1°dir. . Istemler 1-3°ten herhangi birine göre bispesifik IgG antikordur, burada CD3*ü spesifik olarak taniyan ikinci kol, SYGMH dizisinden olusan bir agir zincir CDRl dizisini ve llWYSGSKKN YADSVKG dizisinden olusan bir agir zincir CDR2 dizisini ve GTGYNWFDP dizisinden olusan bir agir zincir CDR3 dizisini içerir. . Istem 4`e göre bispesif'ik lgG antikordur, burada CD3°ü spesifik olarak taniyan ikinci kol, asagidaki diziden olusan bir degisken agir zincir dizisi lstemler 1-5iten herhangi birine göre bispesifik lgG antikordur, burada söz konusu bispesifik IgG antikor, söz konusu bispesifik IgG antikorun Fcy reseptörleri ile etkilesimi önemli ölçüde azaltilacak sekilde mutasyona ugramis CH2 ve/veya alt mentese doinenlerine sahiptir. Istem 6"ya göre bispesitik lgG antikordur, burada söz konusu mutasyona ugramis CH2 ve/veya alt mentese domenleri, amino asit pozisyonu 235 ve/veya 236”da (Kabat7a göre numaralandirma) en az bir sübstitüsyon . Istem 6 veya 7”ye göre bispesifik IgG antikordur, burada söz konusu mutasyona ugramis CH2 ve/Veya alt mentese domenleri, sübstitüsyon Istemler 1-8”den herhangi birine göre bir bispesifik IgG antikorun üretilmesine yönelik bir yöntemdir, burada söz konusu bispesifik lgG antikor, bir arayüzü olusturabilen iki CH3 domeni içerir, söz konusu yöntem asagidakilerin saglanmasini içerir: - a) CLEClZASyi spesifik olarak taniyan ve bir 1. CH3 domenini içeren söz konusu IgG agir zinciri kodlayan bir birinci nükleik asit dizisi ve b) CD3”ü spesifik olarak taniyan ve 2. bir CH3 domenini içeren söz konusu lgG agir zinciri kodlayan ikinci bir nükleik asit dizisine sahip bir hücre, burada söz konusu hücre, söz konusu ortak hafif zinciri kodlayan üçüncü bir nükleik asit dizisine sahiptir ve burada söz konusu nükleik asit dizileri, söz konusu 1. ve 2. CH3 domenlerinin tercihli eslesmesine yönelik mutasyonlar ile saglanir, söz konusu yöntem ayrica söz konusu hücrenin kültürlenmesi ve söz konusu nükleik asit dizilerinin ifadesine olanak taninmasi ve söz konusu bispesifik IgG antikorun kültürden hasat edilmesi adimini içerir. 10.Bir bispesifik lgGl antikorun üretilmesine yönelik istem 9”a göre bir yöntemdir, burada söz konusu birinci CH3 domeni amino asit sübstitüsyonlari L351K ve T366K°yi (Kabafa göre numaralandirma) içerir ve burada söz konusu ikinci CH3 domeni, amino asit sübstitüsyonlari L351D ve L368Esyi içerir, söz konusu yöntem ayrica söz konusu hücrenin kültürlenmesi ve söz konusu nükleik asit dizislerinin ifadesine olanak taninmasi ve söz konusu bispesitik antikorun kültürden 11.Bir farmasötik bilesimdir, istemler l-8iden herhangi birine göre bir bispesifik IgG antikor ve farmasötik olarak kabul edilebilir bir tasiyici 12.Istemler l-8”den herhangi birine göre bir bispesifik IgG antikordur, miyelodisplastik sendrom (MDS), kronik miyeloid lösemi (CML) veya tercihen akut miyeloid lösemi (AML) tedavisinde bir farmasötik olarak kullanima yöneliktir.
Applications Claiming Priority (2)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
US201261706543P | 2012-09-27 | 2012-09-27 | |
US201361834915P | 2013-06-14 | 2013-06-14 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
TR201815768T4 true TR201815768T4 (tr) | 2018-11-21 |
Family
ID=49382559
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
TR2018/15768T TR201815768T4 (tr) | 2012-09-27 | 2013-09-27 | T hücre bağlayıcılar olarak bispesifik IgG antikorları. |
Country Status (27)
Country | Link |
---|---|
US (2) | US10358492B2 (tr) |
EP (2) | EP3470431A1 (tr) |
JP (2) | JP6471095B2 (tr) |
KR (1) | KR102390177B1 (tr) |
CN (2) | CN110066338B (tr) |
AU (2) | AU2013324527B9 (tr) |
BR (1) | BR112015006824A2 (tr) |
CA (1) | CA2889681C (tr) |
CY (1) | CY1120976T1 (tr) |
DK (1) | DK2900694T3 (tr) |
EA (1) | EA201590640A1 (tr) |
ES (1) | ES2692951T3 (tr) |
HK (1) | HK1211966A1 (tr) |
HR (1) | HRP20181717T1 (tr) |
HU (1) | HUE042040T2 (tr) |
IL (1) | IL237945B (tr) |
LT (1) | LT2900694T (tr) |
MX (1) | MX2015003885A (tr) |
NZ (1) | NZ630563A (tr) |
PL (1) | PL2900694T3 (tr) |
PT (1) | PT2900694T (tr) |
RS (1) | RS57910B1 (tr) |
SG (2) | SG11201502451QA (tr) |
SI (1) | SI2900694T1 (tr) |
TR (1) | TR201815768T4 (tr) |
WO (1) | WO2014051433A1 (tr) |
ZA (1) | ZA201502835B (tr) |
Families Citing this family (73)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
USRE47770E1 (en) | 2002-07-18 | 2019-12-17 | Merus N.V. | Recombinant production of mixtures of antibodies |
EP1523496B1 (en) | 2002-07-18 | 2011-06-29 | Merus B.V. | Recombinant production of mixtures of antibodies |
EP3050963B1 (en) | 2005-03-31 | 2019-09-18 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Process for production of polypeptide by regulation of assembly |
CA2647846C (en) | 2006-03-31 | 2016-06-21 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Methods for controlling blood pharmacokinetics of antibodies |
PE20081216A1 (es) | 2006-09-01 | 2008-09-04 | Therapeutic Human Polyclonals Inc | Expresion mejorada de la inmunoglobulina humana o humanizada en animales transgenicos no humanos |
BRPI0817294A2 (pt) | 2007-09-26 | 2015-03-17 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Método de modificação do ponto isoelétrico de anticorpo via substituição de aminoácido em cdr. |
SG190726A1 (en) | 2010-11-30 | 2013-07-31 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Cytotoxicity-inducing therapeutic agent |
JP6393255B2 (ja) | 2012-04-20 | 2018-09-19 | メルス ナムローゼ フェンノートシャップ | ヘテロ二量体のIgG様分子を生産する方法、ヘテロ二量体のIgG様分子、ヘテロ二量体の抗体、組み換え宿主細胞、医薬組成物、宿主細胞を作成する方法、および培養物 |
TR201815768T4 (tr) * | 2012-09-27 | 2018-11-21 | Merus Nv | T hücre bağlayıcılar olarak bispesifik IgG antikorları. |
TWI682941B (zh) | 2013-02-01 | 2020-01-21 | 美商再生元醫藥公司 | 含嵌合恆定區之抗體 |
WO2014153164A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-25 | The California Institute For Biomedical Research | Targeting agent antibody conjugates and uses thereof |
CA2907429A1 (en) * | 2013-07-04 | 2015-01-08 | Rheinisch-Westfaelische Technische Hochschule Aachen | A new fusion protein to target and treat acute myloid leukemia cells |
BR112016006197B1 (pt) | 2013-09-27 | 2023-04-11 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Método para produzir um anticorpo biespecífico de polipeptídeos |
EP3786186A1 (en) | 2014-02-28 | 2021-03-03 | Merus N.V. | Antibodies that bind egfr and erbb3 |
HUE052506T2 (hu) | 2014-02-28 | 2021-05-28 | Merus Nv | Antitest, amely megköti az ERBB-2-t és az ERBB-3-at |
TWI754319B (zh) | 2014-03-19 | 2022-02-01 | 美商再生元醫藥公司 | 用於腫瘤治療之方法及抗體組成物 |
CA2955465A1 (en) | 2014-07-21 | 2016-01-28 | Novartis Ag | Treatment of cancer using a cll-1 chimeric antigen receptor |
EP3693391B1 (en) | 2014-09-12 | 2024-08-21 | Genentech, Inc. | Anti-cll-1 antibodies and immunoconjugates |
MA40764A (fr) | 2014-09-26 | 2017-08-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité |
RS60739B1 (sr) | 2014-11-17 | 2020-09-30 | Regeneron Pharma | Postupci za lečenje tumora upotrebom cd3xcd20 bispecifičnog antitela |
PL3221357T3 (pl) * | 2014-11-20 | 2020-11-02 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Wspólne łańcuchy lekkie i sposoby zastosowania |
DK3789402T3 (da) | 2014-11-20 | 2022-09-19 | Hoffmann La Roche | Kombinationsbehandling med T-celleaktiverende bispecifikke antigenbindende molekyler og PD-1-aksebindende antagonister |
WO2016130898A2 (en) * | 2015-02-13 | 2016-08-18 | Sorrento Therapeutics, Inc. | Antibody therapeutics that bind ctla4 |
KR102625835B1 (ko) * | 2015-03-04 | 2024-01-17 | 주식회사유한양행 | Cd47에 결합하는 항체 치료제 |
AU2016242866B2 (en) | 2015-03-30 | 2021-06-03 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Heavy chain constant regions with reduced binding to FC gamma receptors |
JP7082484B2 (ja) | 2015-04-01 | 2022-06-08 | 中外製薬株式会社 | ポリペプチド異種多量体の製造方法 |
WO2016205200A1 (en) * | 2015-06-16 | 2016-12-22 | Genentech, Inc. | Anti-cll-1 antibodies and methods of use |
ES2693596T3 (es) * | 2015-07-10 | 2018-12-12 | Merus N.V. | Anticuerpo que se une a CD3 humano |
CN108290951B (zh) * | 2015-09-23 | 2022-04-01 | 瑞泽恩制药公司 | 优化抗cd3双特异性抗体和其用途 |
DK3365373T3 (da) | 2015-10-23 | 2021-04-06 | Merus Nv | Bindingsmolekyler, der hæmmer cancervækst |
CN108347906A (zh) * | 2015-10-29 | 2018-07-31 | 豪夫迈·罗氏有限公司 | 具有共同轻链的转基因兔 |
WO2017125897A1 (en) | 2016-01-21 | 2017-07-27 | Novartis Ag | Multispecific molecules targeting cll-1 |
RU2746754C2 (ru) | 2016-03-14 | 2021-04-20 | Чугаи Сейяку Кабусики Кайся | Индуцирующее повреждение клеток терапевтическое лекарственное средство, предназначенное для противораковой терапии |
EP3464365A1 (en) * | 2016-06-01 | 2019-04-10 | Xencor, Inc. | Bispecific antibodies that bind cd123 and cd3 |
WO2018057915A1 (en) | 2016-09-23 | 2018-03-29 | The Regents Of The University Of Michigan | Engineered lymphocytes |
JP2020506971A (ja) | 2017-02-08 | 2020-03-05 | ドラゴンフライ セラピューティクス, インコーポレイテッド | ナチュラルキラー細胞の活性化のための多重特異性結合タンパク質およびがんを処置するためのその治療的使用 |
WO2018152518A1 (en) * | 2017-02-20 | 2018-08-23 | Adimab, Llc | Proteins binding her2, nkg2d and cd16 |
US20200231700A1 (en) * | 2017-02-20 | 2020-07-23 | Dragonfly Therapeutics, Inc. | Proteins binding gd2, nkg2d and cd16 |
SG11201908971RA (en) | 2017-03-31 | 2019-10-30 | Merus Nv | Erbb-2 and erbb3 binding bispecific antibodies for use in the treatment f cells that have an nrg1 fusion gene |
WO2018217947A1 (en) * | 2017-05-23 | 2018-11-29 | Dragonfly Therapeutics, Inc. | A protein binding nkg2d, cd16 and a tumor-associated antigen |
MX2019013995A (es) * | 2017-05-23 | 2020-07-29 | Dragonfly Therapeutics Inc | Una proteína que se une a nkg2d, cd16 y un antígeno asociado a un tumor. |
AU2018297061B2 (en) * | 2017-07-06 | 2021-05-06 | Merus N.V. | Antibodies that modulate a biological activity expressed by a cell |
EP3649155A1 (en) * | 2017-07-06 | 2020-05-13 | Merus N.V. | Bispecific anti pd1-anti tim3 antibodies |
SG11202000014UA (en) * | 2017-07-06 | 2020-01-30 | Merus Nv | Binding molecules that modulate a biological activity expressed by a cell |
SG11202001050PA (en) | 2017-08-09 | 2020-03-30 | Merus Nv | Antibodies that bind egfr and cmet |
JP2020534269A (ja) * | 2017-09-14 | 2020-11-26 | ドラゴンフライ セラピューティクス, インコーポレイテッド | Nkg2d、cd16、およびc型レクチン様分子−1(cll−1)に結合するタンパク質 |
US20200317783A1 (en) | 2017-10-06 | 2020-10-08 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Bispecific antibody |
US11161911B2 (en) | 2017-10-23 | 2021-11-02 | Go Therapeutics, Inc. | Anti-glyco-MUC1 antibodies and their uses |
WO2019108065A1 (en) | 2017-12-01 | 2019-06-06 | Merus N.V. | Use of bispecific antibody and il-15 for combination therapy |
PE20220278A1 (es) | 2018-02-08 | 2022-02-25 | Dragonfly Therapeutics Inc | Dominios variables de anticuerpos que se dirigen al receptor nkg2d |
TWI849895B (zh) * | 2018-02-09 | 2024-07-21 | 日商小野藥品工業股份有限公司 | 雙特異性抗體 |
JP2021519610A (ja) | 2018-03-30 | 2021-08-12 | メルス ナムローゼ フェンノートシャップ | 多価抗体 |
BR112020025048A2 (pt) | 2018-06-13 | 2021-04-06 | Novartis Ag | Receptores de antígeno quimérico de bcma e usos dos mesmos |
CA3102821A1 (en) * | 2018-06-22 | 2019-12-26 | Cugene Inc. | Novel interleukin-15 (1l-15) fusion proteins and uses thereof |
WO2020047389A1 (en) | 2018-08-31 | 2020-03-05 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Dosing strategy that mitigates cytokine release syndrome for cd3/c20 bispecific antibodies |
CA3114707A1 (en) * | 2018-10-19 | 2020-04-23 | Regents Of The University Of Minnesota | Nk engager molecules and methods of use thereof |
WO2020086328A1 (en) * | 2018-10-25 | 2020-04-30 | The Medical College Of Wisconsin, Inc. | Targeting clptm1l for treatment and prevention of cancer |
CN114344461A (zh) * | 2018-12-20 | 2022-04-15 | 美勒斯公司 | 用于治疗疾病的CLEC12AxCD3双特异性抗体和方法 |
MA54643A (fr) | 2018-12-31 | 2021-11-10 | Merus Nv | Multimères multivalents tronqués |
TW202039578A (zh) | 2019-03-29 | 2020-11-01 | 荷蘭商美勒斯公司 | Cd3結合分子 |
TW202102544A (zh) | 2019-04-04 | 2021-01-16 | 日商小野藥品工業股份有限公司 | 雙特異性抗體 |
SG11202111731WA (en) | 2019-05-04 | 2021-11-29 | Inhibrx Inc | Clec12a-binding polypeptides and uses thereof |
TWI845231B (zh) | 2019-07-05 | 2024-06-11 | 日商小野藥品工業股份有限公司 | 以pd-1/cd3雙特異性蛋白質所進行之血液性癌症治療 |
CA3149309A1 (en) | 2019-07-30 | 2021-02-04 | Ono Pharmaceutical Co., Ltd. | Bispecific antibody |
EP4011918A4 (en) | 2019-08-08 | 2023-08-23 | ONO Pharmaceutical Co., Ltd. | DUAL SPECIFIC PROTEIN |
KR20220083760A (ko) * | 2019-10-17 | 2022-06-20 | 리젠츠 오브 더 유니버시티 오브 미네소타 | Clec12a 항체 단편 서열 및 방법 |
EP4081306A1 (en) | 2019-12-24 | 2022-11-02 | Merus N.V. | Tgf-beta-rii binding proteins |
JP2023524997A (ja) * | 2020-05-06 | 2023-06-14 | ドラゴンフライ セラピューティクス, インコーポレイテッド | Clec12aを標的とする抗体及びその使用 |
CN116547302A (zh) | 2020-08-05 | 2023-08-04 | 蜻蜓疗法股份有限公司 | 靶向egfr的抗体及其用途 |
MX2023011710A (es) * | 2021-04-26 | 2023-10-12 | Millennium Pharm Inc | Anticuerpos miembro a de la familia 12 del dominio de lectina de tipo c (anti-clec12a) y usos de los mismos. |
WO2023002390A1 (en) * | 2021-07-20 | 2023-01-26 | Abl Bio Inc. | Anti-cll-1 antibodies and uses thereof |
US20230220106A1 (en) | 2021-12-08 | 2023-07-13 | Dragonfly Therapeutics, Inc. | Antibodies targeting 5t4 and uses thereof |
GB202214132D0 (en) * | 2022-09-27 | 2022-11-09 | Coding Bio Ltd | CLL1 binding molecules |
Family Cites Families (60)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
GB8308235D0 (en) | 1983-03-25 | 1983-05-05 | Celltech Ltd | Polypeptides |
US4816567A (en) | 1983-04-08 | 1989-03-28 | Genentech, Inc. | Recombinant immunoglobin preparations |
US4801687A (en) | 1986-10-27 | 1989-01-31 | Bioprobe International, Inc. | Monoclonal antibody purification process using protein A |
FI884924A (fi) | 1987-10-28 | 1989-04-29 | Oncogen | Humanimmuglobulin som producerats med hybrid-dna-teknik. |
US5151504A (en) | 1989-11-17 | 1992-09-29 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Method for purification of monoclonal antibodies |
GB9022543D0 (en) | 1990-10-17 | 1990-11-28 | Wellcome Found | Antibody production |
CA2111858A1 (en) | 1991-07-15 | 1993-02-04 | James S. Crowe | Production of antibodies |
US5457035A (en) | 1993-07-23 | 1995-10-10 | Immunex Corporation | Cytokine which is a ligand for OX40 |
US5731168A (en) | 1995-03-01 | 1998-03-24 | Genentech, Inc. | Method for making heteromultimeric polypeptides |
US20020062010A1 (en) | 1997-05-02 | 2002-05-23 | Genentech, Inc. | Method for making multispecific antibodies having heteromultimeric and common components |
JP4213224B2 (ja) * | 1997-05-02 | 2009-01-21 | ジェネンテック,インコーポレーテッド | ヘテロマルチマー及び共通成分を有する多重特異性抗体の製造方法 |
DK2163640T3 (da) | 1999-04-15 | 2012-03-05 | Crucell Holland Bv | Rekombinant proteinproduktion i en human celle indeholdende mindst ét E1-protein af adenovirus |
DK1808488T3 (da) | 2001-07-04 | 2010-10-18 | Chromagenics Bv | DNA-sekvenser med anti-repressoraktivitet |
EP1510943A4 (en) | 2002-05-31 | 2007-05-09 | Celestar Lexico Sciences Inc | INTERACTION PREDICTION DEVICE |
EP1523496B1 (en) * | 2002-07-18 | 2011-06-29 | Merus B.V. | Recombinant production of mixtures of antibodies |
EP1578947A4 (en) * | 2002-12-02 | 2006-12-06 | Abgenix Inc | ANTIBODIES AGAINST A2 PHOSPHOLIPASE AND USES |
NZ541458A (en) | 2003-01-07 | 2006-04-28 | Symphogen As | Method for manufacturing recombinant polyclonal proteins |
US20100069614A1 (en) * | 2008-06-27 | 2010-03-18 | Merus B.V. | Antibody producing non-human mammals |
EP1636265A2 (en) * | 2003-06-25 | 2006-03-22 | Crucell Holland B.V. | Binding molecules for the treatment of myeloid cell malignancies |
KR101266716B1 (ko) * | 2004-06-03 | 2013-05-31 | 노비뮨 에스 에이 | 항-cd3 항체 및 그의 사용 방법 |
UA94211C2 (ru) * | 2004-06-03 | 2011-04-26 | Новиммюн С.А. | Выделенное полностью человеческое моноклональное cd3 антитело |
SE527196C2 (sv) | 2004-07-08 | 2006-01-17 | Chemel Ab | SIRE genomflödesdetektor |
EP1789446A2 (en) | 2004-09-02 | 2007-05-30 | Genentech, Inc. | Heteromultimeric molecules |
US20060171929A1 (en) * | 2005-01-31 | 2006-08-03 | The University Of Washington | Regulation of dendritic cell functions by the DCAL-2 receptor |
WO2006105338A2 (en) | 2005-03-31 | 2006-10-05 | Xencor, Inc. | Fc VARIANTS WITH OPTIMIZED PROPERTIES |
JP2008537941A (ja) * | 2005-03-31 | 2008-10-02 | ゼンコー・インコーポレイテッド | 最適化特性を有するFc変異体 |
EP3050963B1 (en) | 2005-03-31 | 2019-09-18 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Process for production of polypeptide by regulation of assembly |
GB2429517B (en) | 2005-07-15 | 2010-10-06 | Viridian Concepts Ltd | Solar collector devices |
SG174779A1 (en) | 2005-09-12 | 2011-10-28 | Novimmune Sa | Anti-cd3 antibody formulations |
US20070198410A1 (en) | 2005-10-18 | 2007-08-23 | Labgold Marc R | Credit fraud prevention systems and methods |
SI1999154T1 (sl) | 2006-03-24 | 2013-01-31 | Merck Patent Gmbh | Heterodimerne, z genskim inĺ˝eniringom spremenjene proteinske domene |
EP2035456A1 (en) | 2006-06-22 | 2009-03-18 | Novo Nordisk A/S | Production of bispecific antibodies |
WO2008027236A2 (en) | 2006-08-30 | 2008-03-06 | Genentech, Inc. | Multispecific antibodies |
US8290739B2 (en) | 2006-10-20 | 2012-10-16 | Amfit, Inc. | Method for determining relative mobility of regions of an object |
EP2139924B1 (en) | 2007-03-29 | 2016-07-06 | Genmab A/S | Bispecific antibodies and methods for production thereof |
CA2695374A1 (en) | 2007-08-15 | 2009-02-19 | Amunix, Inc. | Compositions and methods for modifying properties of biologically active polypeptides |
WO2009051974A1 (en) * | 2007-10-17 | 2009-04-23 | Nuvelo, Inc. | Antibodes to cll-1 |
US9266967B2 (en) | 2007-12-21 | 2016-02-23 | Hoffmann-La Roche, Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
US8242247B2 (en) | 2007-12-21 | 2012-08-14 | Hoffmann-La Roche Inc. | Bivalent, bispecific antibodies |
US20090162359A1 (en) | 2007-12-21 | 2009-06-25 | Christian Klein | Bivalent, bispecific antibodies |
MX350962B (es) | 2008-01-07 | 2017-09-27 | Amgen Inc | Metodo para fabricar moleculas heterodimericas de fragmentos cristalizables de anticuerpo, utilizando efectos electrostaticos de direccion. |
EP2245571B1 (en) | 2008-02-05 | 2019-04-10 | Zymeworks Inc. | Methods for determining correlated residues in a protein or other biopolymer using molecular dynamics |
PT3456190T (pt) | 2008-06-27 | 2022-02-15 | Merus Nv | Animal murino transgénico produtor de anticorpo |
SG172977A1 (en) | 2009-01-26 | 2011-08-29 | Genmab As | Methods for producing mixtures of antibodies |
TW201544123A (zh) | 2009-03-20 | 2015-12-01 | Genentech Inc | 抗-her抗體 |
ES2708124T3 (es) | 2009-04-27 | 2019-04-08 | Oncomed Pharm Inc | Procedimiento para preparar moléculas heteromultiméricas |
SI2975051T1 (sl) * | 2009-06-26 | 2021-08-31 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Zlahka izolirana bispecifična protitelesa z nativnim imunoglobulinskim formatom |
WO2011028952A1 (en) * | 2009-09-02 | 2011-03-10 | Xencor, Inc. | Compositions and methods for simultaneous bivalent and monovalent co-engagement of antigens |
PL2501817T5 (pl) | 2010-02-08 | 2021-08-16 | Regeneron Pharmaceuticals, Inc. | Mysz o wspólnym łańcuchu lekkim |
US9527926B2 (en) | 2010-05-14 | 2016-12-27 | Rinat Neuroscience Corp. | Heterodimeric proteins and methods for producing and purifying them |
WO2012020096A1 (en) * | 2010-08-13 | 2012-02-16 | Medimmune Limited | Monomeric polypeptides comprising variant fc regions and methods of use |
JP5997154B2 (ja) | 2010-08-16 | 2016-09-28 | ノビミューン エスアー | 多重特異性多価抗体の生成方法 |
CA2815266C (en) | 2010-11-05 | 2023-09-05 | Zymeworks Inc. | Stable heterodimeric antibody design with mutations in the fc domain |
SG10201602371VA (en) | 2011-03-25 | 2016-04-28 | Glenmark Pharmaceuticals Sa | Hetero-dimeric immunoglobulins |
CA2791109C (en) | 2011-09-26 | 2021-02-16 | Merus B.V. | Generation of binding molecules |
JP6393255B2 (ja) | 2012-04-20 | 2018-09-19 | メルス ナムローゼ フェンノートシャップ | ヘテロ二量体のIgG様分子を生産する方法、ヘテロ二量体のIgG様分子、ヘテロ二量体の抗体、組み換え宿主細胞、医薬組成物、宿主細胞を作成する方法、および培養物 |
TR201815768T4 (tr) * | 2012-09-27 | 2018-11-21 | Merus Nv | T hücre bağlayıcılar olarak bispesifik IgG antikorları. |
HUE052506T2 (hu) | 2014-02-28 | 2021-05-28 | Merus Nv | Antitest, amely megköti az ERBB-2-t és az ERBB-3-at |
EP3786186A1 (en) | 2014-02-28 | 2021-03-03 | Merus N.V. | Antibodies that bind egfr and erbb3 |
ES2693596T3 (es) | 2015-07-10 | 2018-12-12 | Merus N.V. | Anticuerpo que se une a CD3 humano |
-
2013
- 2013-09-27 TR TR2018/15768T patent/TR201815768T4/tr unknown
- 2013-09-27 CN CN201811462337.9A patent/CN110066338B/zh active Active
- 2013-09-27 RS RS20181217A patent/RS57910B1/sr unknown
- 2013-09-27 NZ NZ630563A patent/NZ630563A/en unknown
- 2013-09-27 SI SI201331229T patent/SI2900694T1/sl unknown
- 2013-09-27 DK DK13777349.5T patent/DK2900694T3/en active
- 2013-09-27 CA CA2889681A patent/CA2889681C/en active Active
- 2013-09-27 AU AU2013324527A patent/AU2013324527B9/en active Active
- 2013-09-27 BR BR112015006824A patent/BR112015006824A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2013-09-27 PL PL13777349T patent/PL2900694T3/pl unknown
- 2013-09-27 SG SG11201502451QA patent/SG11201502451QA/en unknown
- 2013-09-27 SG SG10201705787VA patent/SG10201705787VA/en unknown
- 2013-09-27 JP JP2015534421A patent/JP6471095B2/ja active Active
- 2013-09-27 EP EP18192737.7A patent/EP3470431A1/en active Pending
- 2013-09-27 HU HUE13777349A patent/HUE042040T2/hu unknown
- 2013-09-27 ES ES13777349.5T patent/ES2692951T3/es active Active
- 2013-09-27 MX MX2015003885A patent/MX2015003885A/es unknown
- 2013-09-27 LT LTEP13777349.5T patent/LT2900694T/lt unknown
- 2013-09-27 CN CN201380061615.9A patent/CN105051066B/zh active Active
- 2013-09-27 EA EA201590640A patent/EA201590640A1/ru unknown
- 2013-09-27 KR KR1020157010993A patent/KR102390177B1/ko active IP Right Grant
- 2013-09-27 US US14/040,023 patent/US10358492B2/en active Active
- 2013-09-27 PT PT13777349T patent/PT2900694T/pt unknown
- 2013-09-27 WO PCT/NL2013/050693 patent/WO2014051433A1/en active Application Filing
- 2013-09-27 EP EP13777349.5A patent/EP2900694B1/en active Active
-
2015
- 2015-03-25 IL IL237945A patent/IL237945B/en unknown
- 2015-04-24 ZA ZA2015/02835A patent/ZA201502835B/en unknown
-
2016
- 2016-01-05 HK HK16100035.9A patent/HK1211966A1/xx unknown
-
2018
- 2018-06-12 AU AU2018204173A patent/AU2018204173B2/en active Active
- 2018-10-19 HR HRP20181717TT patent/HRP20181717T1/hr unknown
- 2018-10-25 CY CY20181101099T patent/CY1120976T1/el unknown
- 2018-11-01 JP JP2018206388A patent/JP2019068803A/ja active Pending
-
2019
- 2019-04-19 US US16/389,356 patent/US12060418B2/en active Active
Also Published As
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
AU2018204173B2 (en) | Bispecific IgG antibodies as T cell engagers | |
EP3035965B1 (en) | Bi-specific monovalent diabodies that are capable of binding cd123 and cd3, and uses therof | |
JP2022546905A (ja) | 抗tnfr2抗体およびその使用 | |
US20200062858A1 (en) | Trispecific antigen binding proteins | |
WO2022161425A1 (zh) | 抗tnfr2人源化抗体及其用途 | |
JP2024144441A (ja) | CLEC12AxCD3二重特異性抗体及び疾患の治療方法 | |
EA040393B1 (ru) | БИСПЕЦИФИЧЕСКИЕ АНТИТЕЛА КЛАССА IgG В КАЧЕСТВЕ РЕКРУТЕРОВ Т-КЛЕТОК | |
WO2023161530A1 (en) | HUMANIZED CD1a TARGETING MOIETY FOR THE TREATMENT OF CD1A-POSITIVE CANCER | |
TW202207977A (zh) | 包含t細胞重導向治療劑及vla-4黏附路徑抑制劑之組成物 | |
JP2022525261A (ja) | ビスタ結合抗体およびその使用 | |
Engelberts | CD20 as target for immunotherapy |