Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

SU875663A1 - Штаммы е.coLI ВНИИГенетика VL 334 @ N6 и ВНИИГенетика VL 334 @ N7-продуценты L-треонина и способ их получени - Google Patents

Штаммы е.coLI ВНИИГенетика VL 334 @ N6 и ВНИИГенетика VL 334 @ N7-продуценты L-треонина и способ их получени Download PDF

Info

Publication number
SU875663A1
SU875663A1 SU782639616A SU2639616A SU875663A1 SU 875663 A1 SU875663 A1 SU 875663A1 SU 782639616 A SU782639616 A SU 782639616A SU 2639616 A SU2639616 A SU 2639616A SU 875663 A1 SU875663 A1 SU 875663A1
Authority
SU
USSR - Soviet Union
Prior art keywords
threonine
strain
growth
coli
plasmid
Prior art date
Application number
SU782639616A
Other languages
English (en)
Inventor
В.Г. Дебабов
Ю.И. Козлов
Н.И. Жданова
Е.М. Хургес
Н.К. Янковский
М.Н. Розинов
Б.А. Ребентиш
Р.С. Шакулов
В.А. Лившиц
М.М. Гусятинер
С.В. Машко
В.Н. Мошенцева
Л.Ф. Козырева
Р.А. Арсатянц
Original Assignee
Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=20774854&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=SU875663(A1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов filed Critical Всесоюзный научно-исследовательский институт генетики и селекции промышленных микроорганизмов
Priority to SU782639616A priority Critical patent/SU875663A1/ru
Priority to HU79VE904A priority patent/HU190999B/hu
Priority to US06/052,744 priority patent/US4278765A/en
Application granted granted Critical
Publication of SU875663A1 publication Critical patent/SU875663A1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
    • C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/82—Subcellular parts of microorganisms

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

иокислоты) и коинтибитору (определенной аминокислоте) 4.
Во всех перечисленных случа х мутантные штаммы, способные продуцировать, аминокислоты, получают за счет однократного или последовательного индуцировани  мутаций в генетической структуре (геноме) исходного штамма, не выдел юш,его аминокислоту . До насто щего времени неизвестны штаммы, у которых возрастание продукции аминокислоты достигаетс  за счет увеличени  дозы генов, необходимых дл  ее биосинтеза, или в результате введени  в клетку чужеродного генетического материала .
Некоторые практические аспекты применени  методов генетической инженерии нашли свое отражение в известном способе получени  штаммов Pseudomona§, обеспечивающих деградацию комплекса ортанических веществ (углеводородов нефти) 5. В этой работе гибридные молекулы были получены in vivo путем внутриклеточной рекомбинации.
Однако методы получени  штаммов продуцентов аминокислот с использованием приемов генетической инженерии до насто щего времени не разработаны.
В качестве прототипа выбран метод получени  штамма Е. соИ ВНИИгенетика 14MG--442, полученного под действием нитрозогуанидина из штамма Е. соИ К12 и отобранного по признаку устойчивости к аналогу треонина р-оксинорвалину и способности продуцировать L-треонин) 6.
Рассматриваемый в качестве прототипа метод предусматривает мутагенную обработку клеток исходного штамма и отбор нужных мутантов, т. е. способных к продукции аминокислоты, на среде со структурньш аналогом аминокислоты, ингибирующим рост немутадтных клеток.
Такой метод позвол ет получить продуцирующий аминокислоту штамм, не нуждающийс  в дополнительных ростовых факторах (например аминокислотах, витаминах и т. д.). Данный признак был определ ющим при выборе прототипа.
Однако основным недостатком такого метода остаетс  сравнительно низка  продуктивность полученных штаммов-продуцентов р да аминокислот, в-частности продуцентов- L-треокина.
Целью изобретени   вл етс  увеличение выхода L-треонина.
Дл  достижени  указанной цели получены два штамма-штамм Е. соИ ВНИИгенетика VL334py № 6 и ВНИИгенетика VL334py № 7 - продуценты L-треонина со следующими характеристиками.
Характеристика штамма Е. соИ ВНИИгенетика VL334py № 7.
ШтаммЕ. coliВНИИгенетика
VL334py № 7, продуцирующий L-треонин, хранитс  в Центральном музее промьгшленных микроорганизмов института «ВНИИгенетика и имеет регистрационный номер ЦМПМ В-1684.
Морфологи . Грамотрицательные слабоподвижные тонкие палочки с закругленными концами, размером 1,5-2 мкм в, длину.
Культурально-физиологические признаки .
М со-пептонный агар. Через 24 ч роста при 37°С образует колонии диаметром 2- 3 мм, круглые, слегка выпуклые с гладкими кра ми, структура однородна , прозрачные на свет, консистенци  пастообразна , легко- эмульгируютс .
Агаризованна  минимальна  среда (Адамса) с глюкозой (0,2%) и минер альным азотом. Через двое суток роста при 37°С образует колонии диаметром 1,5- 2 мм серовато-белые, круглые с ровными кра ми, слегка выпуклые, внутренн   структура однородна .
Рост в м -со-пептоннюм бульоне - после 24 ч роста при 37°С сильное равномерное помутнение, небольшой осадок, запах характерный .
Рост в жидкой минимальной ср-еде Адамса - через одни сутки роста при 37°С с аэрацией сильное равномерное помутнение, запах отсутствует.
Рост по уколу в м со-пептонном агаре - хороший по всему уколу.
Желатину не разжижает.
На молоке хороший рост с коагул цией молока.
Индол образует.
Рост на различных углеводах, хорошо растет на глюкозе, лактозе, маннозе, галактозе , ксилозе, фруктозе, глицероле и маннитоле с образоваплсм кислоты и газа.
Потребность в факторах роста. Частична  потребность в изолейцине. Врем  генерации на глюкозо-минеральной среде (Адамса) с изолейцином 60 мин, на среде без изолейцина 270 мин.
Устойчивость к антибиотикам. Устойчив к пенициллину.
Штамм не пат.огенен.
Содержание плазмиды. В логарифмической стадии роста клетки содержат около 17 копий плазмидьг рУ № 7 (мол. вес. 5,7 мегадальтон), обеспечивающей устойчивость штамма к пенициллину и несущей гены треонинового оперона.
Характеристика штамма Е. coli ВНИИгенетика VL334py № 6.
ШтаммЕ. соИВНИИгенетика
VL334py № 6, продуцирующий 1-теронин, хранитс  в Центральном музее промышленных микроорганизмов института «ВНИИгенетика и имеет регистрационный номер В-1649.
Морфологи . ГрамотрИцательные слабоподвижные тонкие палочки с закругленными концами, размером 1,5-2,0 мкм в длину .
Культурально-физиологические признаки .
М со-пептонный агар. Через 24 ч роста при 37°С образует колонии диаметром 2- 3 мм, круглые, слегка выпуклые с гладкими кра ми, структура однородна , прозрачные на свет, консистеици  настообразна , легко эмульгируютс .
Агаризованна  минимальна  среда (Адамса) с глюкозой (0,2%) и минеральным азотом. Через двое суток роста нри 37°С абр азует колонии, диаметром 1,5- 2 мм серовато-белые, круглые с ровными кра ми, слегка выпуклые, внутренн   структура однородна .
Рост в м со-п-ептонном бульоне - после 24 ч росте при 37°С сильное равномерное помутнение, небольшОй осадок, запах характерный .
Рост Б жидкой минимальной среде Адамса с необходимыми добав.ками - через одни сутки роста при 37°С с аэрацией сильное равномерное помутнение, запах отсутствует .
Рост по уколу В м со-пептонном агаре - хороший ПО всему уколу.
Желатину не разжижает.
На молоке хороший рост с коагул цией молока. .
Индол образует.
Рост на различных углеводах: хорошо р астет на глюкозе, лактозе, маннозе, галактозе , фруктозе, глицероле и маннитоле с образованием кислоты и газа.
Потребность в факторах роста. Частична  потребность в изолейциие. Врем  генерации на глюкозо-минеральной среде (Адамса) с изолейцином 60 мин, на среде без изолейцина 270 мин.
Устойчивость к антибиотикам. Устойчив к пенициллину и тетрациклину.
Штамм не патогенен.
Содержание плазмы. В логарифмической стадии роста клетки содержат около 10 копий плазмиды рУ № 6 (мол. вес 11,2 мегадальтон ), обеспечивающей устойчивость штамма к пенициллину и тетрациклину и несущей гены треонинового оперона.
Дл  достижени  поставленной цели в качестве фпагмента ДНК используют ДНК хромосомы донорного микроорганизма, содержащие гены, контролирующие синтез L-треонина и имеющие мутацию, нарушающую негативную регул цию синтеза данной аминокислоты, а в качестве реципиентного штамма используют шта1мм, имеющий мутацию, частично блокирующую смежный этап метаболизма указанной аминокислоты .
Кооме того, объединение фрагмента ДНК хромосомы донорного штамма Е. соИ осуществл ют плазмидой PBR 322, имеющей молекул рный вес 2,8 мегадальтон in vivo.
Кроме того, используют фр агмент ДНК хромосомы донорного щтамма Е. соИ, содержащий гены треонинового оперона, у которого в результате мута-ции ферментпродукт гена thr А устойчив к ингибированию треонином.
Кроме того, в качестве реципиентного щтамма используют штамм Е. соИ ВНИИгенетика VL 334, имеющий двойную ауксотрофность по треонину и изолейцииу.
Кроме того, трансформацию реципиентного щтамма Е. соИ ВНИИгенетика VL 334 провод т гибридной плазмидой рУ № 6, имеющей молекул рный вес 11,2 мегадальтон , состо щей из двух молекул плазмиды рВ R 322 с молекул рным весом 5,6 мегада-льтон и содержащей функционирующие гены треонинового оперона фрагмента ДНК хромосомы донорного штамма Е. соИ.
Кроме того, трансформацию реципиентного щтамма Е. соИ ВНИИгенетика VL 334 провод т гибридной плазмидой рУ № 7, имеющей молекул рный вес 5,7 мегадальтон, состо щей из плазмиды
рВ R 322 с молекул рным весом 2,8 мегадальтон и содержащей функционирующие гены треонинового оперона фрагмента ДНК хромосомы донорного штамма Е. соИ.
Пример 1. Конструирование щтамма Е. соИ ВНИИгенетика VL 334 рУ № 6.
В качестве донорного щтамма используют штамм ВНИИгенетика MG-442. Штамм обладает устойчивостью к аналогу треонина (р-оксинорвалину) и несет мутацию в гене thr А, нарушающую аллостерпческос ингибирование треонином активности гомосериндегидрогеназы - ключевого фермента биосинтеза треонина.
В качестве векторной плазмиды используют плазмиду pBR 322 3. Эта плазмида содержит репликон ColEl, имеет мол. вес. 2,8 мегадальтон, детерминирует устойчивость клеток к ампициллину и тетрациклину . Карта расщеплени  плазмиды pBR322 специфическими эндонуклеазами приведена на фиг. 1.
Хромосомную ДНК Е. соИ ВНИИгенетика MG-442 и плазмидную ДНК выдел ют,
как описано ранее 6. Дл  конструировани  гибридных плазмид ДНК из донорного щтамма ВНИИгенетика MG-442 и плазмиды pBR 322 обрабатывают эндонуклеазой. Дл  этого составл ют инкубационную пробу , объемом 100 мкл. котора  содержит 60 мМ Na С1; 10 мМ трисНС рН 7,4; 7 мМ MgCb; 10 мМ 2-меркаптоэтанола; 2 мкг pBR 322; 2 мкг Е. соИ 442; 10 единиц эндонуклеазы Hind 1П. Обработку эндонуклеазной провод т в течение 1 ч ПРИ 37°С, затем Пробу прогревают 10 мин. при дл  инактивации эндонуклеазы . В пробу добавл ют 10 мМ дитиотриэтола; 66 мкМ АТФ; 200 г/мл бычьего сывороточного альбумина; 0,01 единиц
полинуклеотидлигазы и инкубируют в течение 24 ч при 6°С.
Полинуклеотидлигазу выдел ют по методу Ричардсона. Полученную смесь гибридных молекз л используют дл  трансформа .ции Е. соИ СбОО (leu thr). Трансформанты высевают на чашки с минимальной средой Адамса, содержащей ампициллин в концентрации 200 мкг/мл. После инкубации в течение 48 ч при 37°С с этих чашек отбирают клоны траисформантов, устойчивые к ампициллину и способные расти без треонина. Из одного произвольно выбранного клона выдел ют плазмидную ДНК.
Выделенную гибридную плазмидную ДНК, в- дальнейшем именуемую рУ № 6, исследуют с помощью электронно-микроскопических и электрофоретических методов- . На основании этих результатов строитс  карта расщеплени  плазмиды рУ № 6 специфическими эндонуклеазами (см. фиг. 2).
Гибридна  плазмида рУ № 6 имеет молекз л рный вес 11,2 мегадальтон и состоит из двух молекул плазмиды pBR 322 (мол. вес 5,6 мегадальтон и фрагмента хромосомы (мол. вес 5,6 мегадальтон) донорного мутантного штамма MG-442, содержащего все три функционирующих гена треонинового оперона,- у которого в результате мутации продукт гена thr А устойчив к ингибированию треонином , и также содерл ащего балластный генетический материал.
Две молекулы плазм ды nBR 322 в составе гибридной плазмиды рУ № 6 осуществл ют автономную репликацию плазмиды рУ № 6 в клетке и обеспечивают устойчивость клеток к пенициллину и тетрациклину .
В логарифмической стадии роста клетки мотут содержать 10 копий гибридной плазмиды .
Карта расщеплени  гибридной плазмиды рУ № 6 специфическими эндонуклеазами приведена на фиг. 2.
Дл  того, чтобы определить, какие гены треонинового оперона содержатс  и функционируют на плазмиде рУ № 6, эту плазмиду ИСПОЛЬЗУЮТ дл  трансформации в щтаммы Е. соИ с мутаци ми по различным генам треонинового оперона: GTI4 Cthr А) VL 361 (thr В) и VL334 (thr С). В двух последних щтаммах мутации thr В и thr С из щтаммов G Т25 и G Т28, соответственно, были объединены с мутацией ilv с помощью трандукции.
Трансформантьг высевают на минимальную среду, содержащую ампициллин. Все устойчивые к ампициллину трансформацты щтаммов GT14, VL361 и VL 334.способны расти на среде без треЪнина. Результаты позвол ют заключить, что плазмида рУ№6
содержит, все три фуи1кционирующих гена треонинового оперона: thr А, thr В, thr С.
Дл  получени  штамма-продуцента
треонина нлазмида рУ 6 используетс 
дл  трансформации в реципиентиый
шта.мм VL 334, несущий М)тации в генах
thr С и thr А.
Характеристика реципиентного штамма ВНИИгенетика VL 334.
Штамм ВНИИгенетика VL334  вл етс  производным шта.мма ВНИИгеиетика - MG-442, получен трансдукцией фагом Р1 в этот штамм мутации thr С из щтамма G Т28.
Морфологи . Грамотрицательные слабо подвижные тожкие иа,лочки с закругленными концами, размером 1,5-2,0 мм в длину .
Культурально-физиологические призиаМ со-пептонцьгй агар. Через 24 ч роста при 37°С Обравует колонии диаметром 2- 3 мм, круглые, слегка выпуклые с гладкими кра ми, структура однородна , прозрачные Hai свет, консистенци  пастообразна , легко эмульгируетс .
Агар.изованна  и минимальна  среда (Адамса) с глюкозой (0,2%) и минер-альным азотом. Через двое суток ро,ста при
37°С образует колонии диаметром 1,5-
2.0 мм серовато-белые, круглые с ровными
кра ми, слегка выпуклые, внутренн  
структура ол-нородна .
Рост в м со-пептонном бульоне. После
24 ч роста при 37°С сильное равномерное иом5 тнение, небольщой осадок, запах характерный .
Рост в жидкой минимальной среде Аламса с нео бходимыми добавками. Через
одни сутки роста при 37°С с аэрацией сильное равномерное помутнение., запах отсутствует.
Рост по уколу в м со-пептонном агаре ХОРОШИЙ по всему Зколу.
Желатину не разжижает.
На молоке хорошда рост с коаг)л цией мОЛОка..
Индол образует. Рост на различных углеводах: хорощо
растет на глюкозе, лактозе, маннозе, галактоэе , ксилозе, фруктозе, глицироле н маинитоле с образованнем кислоты и газа. Потребность в факторах роста. Нуждаетс  дл  роста в треонине и изолейцине
(20 .мкг/мл). Потребность в треонине св зана с мутацией thrClOlO, иа-рушающей синтез треонина:, а потребность в изолейцине - с мутацией ilv А 442, блокирующей цервую реакцию на пути преврашени 
треонина; в изолейцин. Фермент треониндезаминаза , поврежденный мутацией ilv А 442, сохран ет остаточную активность (менее 1% от исходного уровн ). Поэтому при повыщении внутриклеточной конщентр ацкк треонир  происходит частична 
компенсаци  мутации ilv А 442, т. е. клетки приобретатот способность к росту в отсутствие изолейцина в среде.
Мутаци  thr С необходима дл  отбора трансформаторов, получивших гибридную плазмиду. Эти трансфор.маторы должны быть устойчивы к1 ампициллину и расти на среде без треонина. Мутаци  активирует выражение треонинового оперона, так как блокирует синтез изолейцина, участвующего в репрессии треонинового ошероHai . Кроме того, она частично блокирует превращений треонина в п редшественник изолейцина-а-кетомас-д ную кислоту. Рецилиект  вл етс  ауксотрофом по треоницу W изолейцину, однако расчет иа соеле без изолейцина при высокой концентрации треонина.
Трансформанты, получившие плазмиду пУ № 6, отбирают на среде, содержащей 200 MKir/мл: ампи,цилдина, но без твеонина. Клетки одного произвольно -выбранного клоиа трансфо|рмантов вьшащи;вают на бульоие Хоттингера с ампициллином и из них выдел ют илазмидную ДНК и сравнивают ее физико-химические параметры (мол. вес, ра.спределение участков расшеплени  специфическими эндонуклеазам.и) с параметрами плазмиды рУ № 6, установленными ранее (см. фиг. 2). Совпадение указанных свойств свидетельствует о том, что клетки выбранного клона содержат гглазмилу рУ № 6, и плазмида стабильно существует в них в указанных услови х культирлрозани . Полученный штамм в л .лънейшел1 именуют ВНИИген .етика VL334py № 6.
Полученный штамм УСТОЙЧИВ к ампициллину и тетрациклину и способен расти на среде без треонина и изолейцина. СпосОбность расти без изолейцина сВЯза1на с высоким уровнем синтеза треонина в этих клетках. Генотип реципиентного штамма (мутаци  ily А) обусловливает, тем самым , селективное преимущество клеткам, содержащим плазадиду рУ № 6.
Пример- 2. Конструирование штамма Е. соИ ВНИИгенетика-VL 334 рУ № 7.
Фрагмент ДНК Е. соИ в соста ве плазм .иды РУ № 6 больше размера треонинового оперона. Удавление балластного генетического материала может увеличить жиэнеспособность ба.ктерий и оказать ноложительное действие на стабильность плазмиды. В св зи с этим плазмиду рУ № 6 обрабатывают специфическими эндонуклеазами Hind П1 и Ват Hi. Инкубационна  Проба, объемом 100 мкл, имеет тот же состав, ЧТО и В примере 1, но кроме того, содержит б единиц эндонуклеазы Ват Hi. После ина ктивации ферментов прогреванием при 65°С в течение 10 мин смесь обрабатывают полинуклеотидлигазой (оример 1),
Полученна  смесь гибридных молекул используетс  дл  трансформации штамма Е. соИ СбОО. Отбор клонов и выделение плазмидной ДНК производ т как в примере I. Выделенна  гибридна  плазмида, в лальне 1шеМ именуема  рУ № 7, имеет МОЛ. 55ес ,4 мег-адальтон. Карта расщеплени  этой плазмиды специфическими эндонуклеазами приведена- на рис. 3. Трансформаци  рУ Л9 7 в мутантные щтаммы Е. coll показывает, что эта плазм-ида имеет все три гена треониноваго оперона: thr А, thr В и thr С.
Хара чтеристика плазмиды рУ N° 7. 15 Гибридна  плазм.ила рУ ЛЬ 7 имеет МОлекул пный вес 5,7 мегадальтон и состоит из пл:а.змиды рВ R 322 (молекул рный вес 2,8 метадальтон) и фрагмента хромосомы (молекул рный вес 2,9 мегадальтон) му0 тантного донорного штамма MG 442, содержащего все три функционирующих гена треонинового оперона, у которого в результате мутащии продукт гена thr А устойчив к иигибирова1НИЮ треонино-м. 5
Плазмида пВ R 322 в составе гибридной плазмилы рУ .NO 7 представлена фрагментом ДНК, способным осуществл ть автономную репликацию гибридной плазмиды 0 и обеспечивать устойчивость клеток к пенициллину .
В логарифмической стадии роста клетки могут содержать 17 копий гибридной плазмиды .
5 Карта ра.сщеплени  гибридной плазмиды рУ № 7 специфическими эндонуклеазами приведена на фиг. 3.
После трансформации рУ № 7 в реципиентный штамм VL 334 (пример 1) отбирают клоН, в л а-льнейшем именуемый ВНИИгенетика VL 334 рУ 7, устойчивый к а.Мпициллину и способный расти на среде без изолейцина и треонина.
Пример 3. Получение L-треонина с но5 мощью Е. СОИ, несущих гибридные плазмиды .
Штаммы, полученные по способу, описанному в примерах 1,2 и перечисленные в таблице, засевают петлей с кос ка ага0 ризованной среды Адамса, содержащей 0,5 мг/мл калиевой соли бензилпенициллина , в конические колбы, емкОСтью 250 мл, содержащие по 30 мл лодкой среды Адамса (глюкоза 1 %, тиамин 100 мкг/л). 5 После посева колбы устанавливают на круговую качалку (200 об/мин) и инкубируют в течение 18 ч цри 37°С. Выращенный та.ким способом посевной материал используют в количестве 1 мл д.л  засева 0 предварительно простерилизованной ниже описанным методом ферментационной среды , разлитой ио 15 мл в конические колбы , емкостью 250 мл.

Claims (6)

  1. Ферментационные среды имеют следующи и состав, г/Л: Тиамин 0,0001 0,0001 0,0001 Фепментационные спеды стерилизуют в  чтоклаве .прИ избыточном давлении 0,5 а.мт в течение 15 мин. Мел стерилизуют отдельно- и внос т в среду после степилизации . После добавлени  мела среда имеет пН 6,8-7,2. Колбы, содепжащие указанкне соеды, после посева кх-лътупами указанных в та блкпе штаммов устанавливают wa. КПУГОВУЮ качалку С9ПП обмин) и инкубипуют 48 ч ппи 37°С. 95% клеток иосле сЬепментации сохран ют способность оастч без треонина и изолейцина и устойчивы к ампициллину, что свидетельствует о наличии плазмид в клетках данных штаммов. Количество треонина, образованного шт ммами. показанов таблице. ПрИ получении L-тпеонина в фепментер е посевной материал штаммаУЬ334 пУ № 6, по.лученный, как Описано в примере 3, В ко.пичестве 25 мл внос т е лабора торный ферментер марки Biflo С230, куда предва.рИтельно помеща.ют 250 мл ферментационной среды. 1. Режим ферментации следующий: температура 37°С, количество поступающего в аПпарат воздуха 1.1 (по ротаметру), скорость мешалки 900 Об/мик. Через- 28 ч. после начала ферментации приступают к полаче подпитки, представл ющей собой дес тикратный концентрат ферментационной среды 1, из состава которой исключен ме . Подпитку производ т с помощью перистальтического насоса со скоростью 1.5 мл/ч. Через 51 ч после начала ферментации в среде на-каплива.етс  треонин в количестве 20 г/л 95% клеток после ферментации содержат плавмиду рУ № 6. L-треонин выдел ют из кулътуральной жидкости известными методами. Как видно из данных таблицы наиболее высокий уровень образовани  аминокислоты имеет место у штаммов, содержащих т-ибпитную плазмиду. Использование этого Me orrai позвол ет по.ЯУЧИть штаммы Е. coli ВНИИ-енетик  VL 334 ру № 6 и ВНИИгенетика VL 334 ру № 7, способные накапливать до 20 г/л треонина пои культивировании на минеральной среде с глюкозой, тиаминам. Полученные штаммы обладают высокими технологическими показател ми - они превосход т по продуктивности все известные в мире штаммы и не требуют сложных или ДОРОГИХ питательных сред. Формула изобретени  - I. Штаммы Е. coli ВНИИгенетика VL 334 рУ № 6 и ВНИИгенетика VL 334р У № 7 продуценты L-треонина хран тс  в центральном музее ПРОМЫТО денных микроорганизмов института «ВНИИгенетика и имеют пегистрациоиные номера В-1649 и В-1в84. МОРФОЛОГИЯ. Грамотрицательные слабополвижные тонкие лалочки с закругленными концами, размером 1,5-2,0 мм в длину . Культурально-физиологические призна.ки . М со-пептонный a raip. Через 24 ч роста при 37°С образует колонии диаметром 2- 3 мм, круглые, слегка выпуклые с гладкимн кра ми, структура однородна , прозрачные на свет, ковсистен1ци  пастообразна , легко эмульгируютс . Агапизованна  и минимальна  среда; (Адамса) с глюкозой (0,2%) и минеральным азотом. Через двое суток роста при 37°С образует колонии диаметром 1,5- 2 мм, серовато-белые, круглые с ровными кра. ми, слегка выпуклые, внутренн   структура однородна . Рост в м со-пептонном бульоне - после 24 ч роста при 37°С сильное равномерное помутнение, небольшой осадок, запах характерный . Рост в жидкой минимальной среде Адамса с необходимыми добавками - через одни сутки роста при 37°С -с аэрацией сильное равномерное помутнение, запах отсутствует. Рост по уколу в м со-пептонном агаре- хороший по всему уколу. Желатину не разжижает. На молоке хороший рост с коагул цией молока;. Индол образует. Рост на различных углеводах: хорошо растет па глюкозе, лактазе, маннозе, галактозе , ксилозе, фруктозе, глицероле и маннитоле с образованием кислоты и газа. Потребность в факторах роста. Частичпа  потребность в изолейцине. Врем  генерации на глюкозо-минеральной среде Адамса с изолейцином 60 мин, на среде без изслейцина 270 мин. Устойчивость к антибиотикам. Устойчив к пенициллину и тетрациклину. Штамм не патогенен. Содержание нлазмиды. Дл  штамма Е. соИ ВНИИгенетика VL 334 фУ №.б в логарифмической стадии роста клетки содержат около 10 копий плазмиды рУ № 6 (мол. вес. 11,2 мегадальтон), обеспечивающей устойчивость штамма к пенициллину и тетрациклину и несущей гены треонииового оперона. Дл  щтамма Е. соИ ВНИИгенетика VL 334 рУ № 7 в логарифмической стадии роста клетки содержат около 17 копий плавмиды рУ № 7 (мол. вес 5,7 мегадальтон), обеспечивающей устойчивость штамма к пенициллину и несущей гены треонинового оперона. 2.Способ получени  штаммов Е. соИ продуцентов L-треонина по п. 1, включающий объединение фрагмента ДНК хромосомы донорного микроорганизма с векторной молекулой ДНК, предпочтительно с плазмидой, и трансформацию полученной гибридной молекулой ДНК реципиентного микроорганизма, отличающийс  тем, что, с целью увеличени  выхода L-треонина, в качестве фрагмента ДНК используют ДНК хромосомы донориого микроорганизма, содержащие гены, контролирующие синтез L-треонина и имеющие мутацию, нарушающую негативную регул цию синтеза данной аминокислоты, а в качест1ве реципиентного щтамма используют штамм, имеюший мутацию, частично блокирующую смежный этап метаболизма указанной аминокислоты. 3.Способ па п. 2, отличающийс  тем, что объединение фрагмента ДНКхромосомьБ донорного щтамма Е. соИ осуществл ют с плазмидой pBR 322, имеющей молекул рный вес 2,8 мегадальтон. 4.Способ ПО п. 2, отличающийс  тем, что используют фрагмент ДНК хромосомы донорного щтамма Е. соИ, содержащий гены треовинового оперона, у которого в результате мутации фермент875 5 10 15 20 25 2Q 35 40 45 3 продукт гена thr А, устойчив к ингибированию треонином. 5.Способ по пш 1-4, отличающийс  тем, что в качестве реципиентного щтамма используют щтамм Е. соИ ВНИИгенетика VL 334, имеющий двойную ауксотрофность по треонину и изолейцину. 6.Способ по П1П. 1-5, отличающийс   тем, что трансформацию реципиентного штамма Е. соИ ВНИИгенетика VL 334 провод т гибридной плазмидой рУ № 6, имеющей молекул рный вес 11,2 мегадальтон , состо щей из двух молекул плазмиды pBR 322 с молекул рным весом 5,6 мегаДальтон и содержащей функционирующие гены треониновОГо Оперона фрагмента ДНК хромосомы донорного щтамма Е. соИ . 7.Способ по пп. 1-5, отличающийс   тем, что трансформацию реципиентного штамма Е. со-И ВНИИгенетика VL 334 провод т гибридной плазмидой рУ № 7, имеющей молекул рный вес 5,7 мегадальтон , состо щей из плазмиды p-BR 322 с молекул рным весом 2,8 мегадальтон и содержащий функционирующие гены треонинового Оперона фрагмента ДНК хромосомы донорного штамма Е. соИ. Источники информации, прин тые во внимание лри экспертизе 1.Патент США 3002889, кл. 195-28.30, 1969.
  2. 2.Патент Великобритании 1258380, кл. С 6F, 1969.
  3. 3.Патент Франции 1579835, С 12D, 3/06, 1972.
  4. 4.Патент США 3756916, кл. 195-78.96, 1974.
  5. 5. Патент США 3923603, кл. 195-103,5, 1975.
  6. 6. Гус тинер М. М., Жданова Н. И. и Лившиц В. А. Исследование фракции гена ге1 А в выражении аминокислотных оперонов. Сообщение П. Вли ние аминного состо ни  гена ге1 А на сверхсинтез треонина мутантов Е. coli К-12, устойчивых к р-оксинорвалину . ж. Генетика, 14, № 6, 1978, с. 957.
    Фиг. /
    Hind a/
    Bam HI Sal 6-1
    Sam HI
SU782639616A 1978-06-30 1978-06-30 Штаммы е.coLI ВНИИГенетика VL 334 @ N6 и ВНИИГенетика VL 334 @ N7-продуценты L-треонина и способ их получени SU875663A1 (ru)

Priority Applications (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU782639616A SU875663A1 (ru) 1978-06-30 1978-06-30 Штаммы е.coLI ВНИИГенетика VL 334 @ N6 и ВНИИГенетика VL 334 @ N7-продуценты L-треонина и способ их получени
HU79VE904A HU190999B (en) 1978-06-30 1979-06-28 Process for preparing l-treonint producing strains
US06/052,744 US4278765A (en) 1978-06-30 1979-06-28 Method for preparing strains which produce aminoacids

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SU782639616A SU875663A1 (ru) 1978-06-30 1978-06-30 Штаммы е.coLI ВНИИГенетика VL 334 @ N6 и ВНИИГенетика VL 334 @ N7-продуценты L-треонина и способ их получени

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SU875663A1 true SU875663A1 (ru) 1982-09-15

Family

ID=20774854

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SU782639616A SU875663A1 (ru) 1978-06-30 1978-06-30 Штаммы е.coLI ВНИИГенетика VL 334 @ N6 и ВНИИГенетика VL 334 @ N7-продуценты L-треонина и способ их получени

Country Status (3)

Country Link
US (1) US4278765A (ru)
HU (1) HU190999B (ru)
SU (1) SU875663A1 (ru)

Families Citing this family (153)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS55131397A (en) * 1979-04-02 1980-10-13 Ajinomoto Co Inc Preparation of l-threonine by fermentation
JPS561890A (en) * 1979-06-15 1981-01-10 Ajinomoto Co Inc Preparation of l-phenylalanine by fermentation
JPS565099A (en) * 1979-06-25 1981-01-20 Ajinomoto Co Inc Production of l-histidine through fermentation process and microorganism used therefor
JPS5618596A (en) * 1979-07-23 1981-02-21 Ajinomoto Co Inc Production of l-lysine through fermentation process
US4393135A (en) * 1979-12-10 1983-07-12 Ajinomoto Company Incorporated Method for producing L-glutamic acid by fermentation
JPS5685289A (en) * 1979-12-13 1981-07-11 Ajinomoto Co Inc Preparation of l-valine by fermentation
JPS56160997A (en) * 1980-05-16 1981-12-11 Ajinomoto Co Inc Preparation of l-lysine by fermenaition method
GB2076853B (en) 1980-04-17 1983-12-21 Ajinomoto Kk L-glutamic acid producing microorganisms
US4508827A (en) * 1980-05-08 1985-04-02 Microlife Technics, Inc. Molecular cloning vectors for use in gram-negative bacteria
US4508823A (en) * 1980-05-08 1985-04-02 Microlife Technics, Inc. Gene splicing method and products produced therefrom
JPS575693A (en) 1980-06-13 1982-01-12 Ajinomoto Co Inc Production of l-arginine through fermentation process
DE3128411A1 (de) * 1980-07-18 1983-09-15 Unisearch Ltd., 2033 Kensington, New South Wales Kulturstamm-mutante von esccherichia coli sowie verfahren zur herstellung von phenylalanin
JPS58893A (ja) * 1981-06-25 1983-01-06 Ajinomoto Co Inc 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法
US5236831A (en) * 1981-12-29 1993-08-17 Kiowa Hakko Kogyo Co., Ltd. Amino acid synthesis in corynebacteria using E. coli genes
US4594323A (en) * 1982-09-22 1986-06-10 The Regents Of The University Of California Hybrid DNA conferring osmotic tolerance
US4535060A (en) * 1983-01-05 1985-08-13 Calgene, Inc. Inhibition resistant 5-enolpyruvyl-3-phosphoshikimate synthetase, production and use
JPS59183688A (ja) * 1983-03-31 1984-10-18 Tanabe Seiyaku Co Ltd Ｌ−アスパラギン酸の製法
DE3319242A1 (de) * 1983-05-27 1984-11-29 Battelle-Institut E.V., 6000 Frankfurt Verfahren und plasmid zur steuerung der expression von klonierten genen
JPS59232088A (ja) * 1983-06-15 1984-12-26 Tanabe Seiyaku Co Ltd Ｌ−アスパラギン酸の製法
US4839286A (en) * 1983-10-07 1989-06-13 Biotechnica International, Inc. Method of biosynthesis and cells therefor
US4831125A (en) * 1985-07-01 1989-05-16 E. I. Du Pont De Nemours And Company DNA probe for corynebacterium kutscheri
EP0245497A4 (en) * 1985-11-12 1989-06-27 American Biogenetics Corp BIOGENETIC CASSETTE.
US6649379B1 (en) 1987-06-12 2003-11-18 Massachusetts Institute Of Technology Method and deregulated enzyme for threonine production
WO1988009819A2 (en) * 1987-06-12 1988-12-15 Massachusetts Institute Of Technology C. glutamicum threonine biosynthetic pathway
DK188889A (da) * 1988-04-20 1989-10-23 Bioteknika International Fremgangsmaade til fremstilling af threonin og andre homoserinderivater samt celle som kan gennemfoere methioninudnyttelsesvejen og kan udtrykke s-adenosylmethioninhydrolase
JPH03501682A (ja) * 1988-10-25 1991-04-18 味の素株式会社 Ｌ‐トレオニン生産者としてのエシェリキア・コリｂｋｉｉｍ　ｂ‐３９９６菌株
DE3844959B4 (de) * 1988-10-25 2006-04-27 Ajinomoto Co., Inc. Stamm der Bakterien Escherichia coli BKIIM B-3996, Produzent von L-Threonin
US5976843A (en) * 1992-04-22 1999-11-02 Ajinomoto Co., Inc. Bacterial strain of Escherichia coli BKIIM B-3996 as the producer of L-threonine
US5534421A (en) * 1991-05-30 1996-07-09 Ajinomoto Co., Inc. Production of isoleucine by escherichia coli having isoleucine auxotrophy and no negative feedback inhibition of isoleucine production
DE69219775T3 (de) * 1992-10-14 2004-08-05 Ajinomoto Co., Inc. Neuartiges L-threoninproduzierendes Mikrobakterium und eine Herstellungsmethode für L-Threonin
JPH07155184A (ja) 1993-12-08 1995-06-20 Ajinomoto Co Inc 発酵法によるｌ−リジンの製造法
US5998178A (en) * 1994-05-30 1999-12-07 Ajinomoto Co., Ltd. L-isoleucine-producing bacterium and method for preparing L-isoleucine through fermentation
US20060040364A1 (en) * 1998-10-13 2006-02-23 Livshits Vitaly A DNA coding for a protein which imparts L-homoserine resistance to Escherichia coli bacterium, and a method for producing L-amino acids
RU2144564C1 (ru) 1998-10-13 2000-01-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" ФРАГМЕНТ ДНК rhtB, КОДИРУЮЩИЙ СИНТЕЗ БЕЛКА RhtB, ПРИДАЮЩЕГО УСТОЙЧИВОСТЬ К L-ГОМОСЕРИНУ БАКТЕРИЯМ ESCHERICHIA COLI, И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ
DE102005020537A1 (de) * 2005-05-03 2006-11-09 Degussa Ag Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
DE19907567B4 (de) 1999-02-22 2007-08-09 Forschungszentrum Jülich GmbH Verfahren zur mikrobiellen Herstellung von L-Valin
RU2207376C2 (ru) * 1999-10-14 2003-06-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Способ получения l-аминокислоты методом ферментации, штамм бактерии escherichia coli - продуцент l-аминокислоты (варианты)
RU2207371C2 (ru) * 2000-09-26 2003-06-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Способ получения l-аминокислот семейства l-глутаминовой кислоты, штамм бактерии escherichia coli - продуцент l-аминокислоты (варианты)
EP1330526B1 (en) * 2000-11-04 2010-04-21 Evonik Degussa GmbH Process for the fermentative preparation of l-amino acids using strains of the enterobacteriaceae family
US20030017554A1 (en) * 2000-11-15 2003-01-23 Mechthild Rieping Process for the fermentative preparation of L-amino acids using strains of the enterobacteriaceae family
EP1239041B1 (en) * 2001-02-13 2006-04-19 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing L-amino acid using bacteria belonging to the genus Escherichia
DE10112102A1 (de) * 2001-03-14 2002-09-19 Degussa Verfahren zur fermentativen Herstellung von D-Pantothensäure und/oder deren Salzen
US6623944B2 (en) 2001-03-14 2003-09-23 Degussa Ag Process for preparation of D-pantothenic acid and/or salts thereof
US7052883B2 (en) * 2001-04-03 2006-05-30 Degussa Ag Process for the production of L-amino acids using strains of the family Enterobacteriaceae that contain an attenuated fruR gene
DE10116518A1 (de) * 2001-04-03 2002-10-17 Degussa Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
US20030059903A1 (en) * 2001-04-03 2003-03-27 Degussa Ag Process for the production of L-amino acids using strains of the family enterobacteriaceae that contain an attenuated aceA gene
US20030054503A1 (en) * 2001-04-03 2003-03-20 Degussa Ag Process for the production of L-amino acids using strains of the family enterobacteriaceae that contain an attenuated dgsA gene
US7320882B2 (en) 2001-07-06 2008-01-22 Degussa Ag Process for L-amino acid production using enterobacteriaceae strain with enhanced ptsG expression
DE60224536T2 (de) * 2001-07-06 2009-01-08 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur herstellung von l-aminosäuren unter verwendung von stämmen aus der familie der enterobacteriaceae
ATE386121T1 (de) * 2001-07-18 2008-03-15 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur herstellung von l-threonin durch enterobakteriaceae-stämmen mit verstärkter exprimierung des phoe-gens
WO2003008616A2 (en) * 2001-07-18 2003-01-30 Degussa Ag PROCESS FOR THE PREPARATION OF L-AMINO ACIDS USING STRAINS OF THE ENTEROBACTERIACEAE FAMILY WHICH CONTAIN AN ATTENUATED aceK GENE
MXPA04004874A (es) 2001-11-23 2004-09-03 Ajinomoto Kk Procedimiento para producir l-aminoacido utilizando escherichia.
DE10157721A1 (de) * 2001-11-24 2003-06-05 Degussa Verfahren zur fermentativen Herstellung von nicht aromatischen L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
EP1483393A1 (en) * 2002-03-13 2004-12-08 Degussa AG Process for the preparation of l-amino acids using strains of the family enterobacteriaceae
DE60327182D1 (de) * 2002-03-13 2009-05-28 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur herstellung von l-aminosäuren unter verwendung von stämmen der familie enterobacteriaceae
DE10210960A1 (de) 2002-03-13 2003-09-25 Degussa Verfahren zur fermentativen Hestellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
WO2003076637A1 (en) * 2002-03-13 2003-09-18 Degussa Ag Process for the preparation of l-amino acids using strains of the family enterobacteriaceae
WO2003076629A2 (en) * 2002-03-13 2003-09-18 Degussa Ag Process for the preparation of l-amino acids using strains of the enterobacteriaceae family
DE60321891D1 (de) * 2002-03-13 2008-08-14 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur herstellung von l-threonin unter verwendung von stämmen der enterobacteriaceae familie
US20050032178A1 (en) * 2002-07-10 2005-02-10 Degussa Ag Process for the fermentative preparation of L-amino acids using strains of the enterobacteriaceae family
DE10231115A1 (de) * 2002-07-10 2004-01-22 Degussa Ag Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterbacteriaceae
DE10303571A1 (de) 2003-01-30 2004-08-12 Degussa Ag Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
DE10314618A1 (de) * 2003-04-01 2004-10-14 Degussa Ag Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
KR100498971B1 (ko) * 2003-04-04 2005-07-04 씨제이 주식회사 염색체 내 ｔｄｃＢＣ 및 ｐｃｋＡ 유전자가 불활성화된 미생물 및 이를 이용하여 Ｌ-쓰레오닌을 제조하는 방법
DE10316109A1 (de) * 2003-04-09 2004-10-21 Degussa Ag Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
WO2005007862A2 (en) * 2003-07-08 2005-01-27 Novus Internation, Inc Methionine recovery processes
WO2005007841A1 (ja) * 2003-07-16 2005-01-27 Ajinomoto Co., Inc. 変異型セリンアセチルトランスフェラーゼ及びｌ−システインの製造法
RU2276687C2 (ru) * 2003-07-16 2006-05-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" Бактерия, принадлежащая к роду escherichia, - продуцент l-гистидина и способ получения l-гистидина
DE102004029639A1 (de) * 2003-08-12 2005-03-24 Degussa Ag Verfahren zur Herstellung von L-Threonin
RU2276688C2 (ru) * 2003-08-29 2006-05-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" БАКТЕРИЯ, ПРИНАДЛЕЖАЩАЯ К РОДУ Escherichia,- ПРОДУЦЕНТ L-ГИСТИДИНА И СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ГИСТИДИНА
US20050176033A1 (en) * 2003-11-10 2005-08-11 Klyachko Elena V. Mutant phosphoribosylpyrophosphate synthetase and method for producing L-histidine
JP4380305B2 (ja) * 2003-11-21 2009-12-09 味の素株式会社 発酵法によるｌ−アミノ酸の製造法
DE10361192A1 (de) * 2003-12-24 2005-07-28 Degussa Ag Verfahren zur fermentativen Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
DE102004003410A1 (de) * 2004-01-23 2005-08-25 Degussa Ag Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
DE102004005836A1 (de) * 2004-02-06 2005-09-15 Degussa Ag Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
US20050181488A1 (en) * 2004-02-12 2005-08-18 Akhverdian Valery Z. Method for producing L-threonine using bacteria belonging to the genus Escherichia
DE102004037572A1 (de) * 2004-08-03 2006-02-23 Degussa Ag Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
US7915018B2 (en) * 2004-10-22 2011-03-29 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing L-amino acids using bacteria of the Enterobacteriaceae family
US20070212764A1 (en) * 2005-01-19 2007-09-13 Ptitsyn Leonid R Method for producing l-amino acids using bacterium of the enterobacteriaceae family
DE102005018835A1 (de) 2005-04-22 2006-11-02 Degussa Ag Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung verbesserter Stämme der Familie Enterobacteriaceae
DE102005019040A1 (de) 2005-04-23 2006-10-26 Degussa Ag Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung verbesserter Stämme der Familie Enterobacteriaceae
DE102005020538A1 (de) * 2005-05-03 2006-11-23 Degussa Ag Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
JP4910315B2 (ja) * 2005-06-20 2012-04-04 セイコーエプソン株式会社 表示装置および発光装置
US20070004014A1 (en) * 2005-06-29 2007-01-04 Yuichiro Tsuji Method for producing l-threonine
WO2007086546A1 (en) * 2006-01-26 2007-08-02 Ajinomoto Co., Inc. A method for producing an l-amino acid using a bacterium of enterobacteriaceae family with attenuated expression of the aldh gene
JP2009118740A (ja) 2006-03-03 2009-06-04 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
EP2186881B1 (en) 2006-03-23 2014-04-23 Ajinomoto Co., Inc. A method for producing an L-amino acid using bacterium of the Enterobacteriaceae family with attenuated expression of a gene coding for small RNA
EP2007873B1 (en) 2006-04-18 2015-11-18 Ajinomoto Co., Inc. A METHOD FOR PRODUCING AN L-AMINO ACID USING A BACTERIUM OF THE ENTEROBACTERIACEAE FAMILY WITH ATTENUATED EXPRESSION OF THE sfmACDFH-fimZ CLUSTER OR THE fimZ GENE
JP2009165355A (ja) 2006-04-28 2009-07-30 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸を生産する微生物及びｌ−アミノ酸の製造法
RU2337961C2 (ru) * 2006-07-04 2008-11-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-ТРЕОНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Escherichia, В КОТОРОЙ ИНАКТИВИРОВАН ОПЕРОН rspAB
EP1710317A3 (en) 2006-07-13 2007-02-21 Degussa AG Method for producing L-threonine and L-homoserine
DE102006041168A1 (de) 2006-09-01 2008-03-06 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
RU2355763C2 (ru) 2006-09-13 2009-05-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) Мутантная ацетолактатсинтаза и способ продукции разветвленных l-аминокислот
RU2006143864A (ru) 2006-12-12 2008-06-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНОВ cynT, cynS, cynX, ИЛИ cynR, ИЛИ ИХ КОМБИНАЦИИ
KR101730837B1 (ko) 2007-01-22 2017-04-27 아지노모토 가부시키가이샤 Ｌ-아미노산을 생산하는 미생물 및 ｌ-아미노산의 제조법
JP2010110217A (ja) 2007-02-22 2010-05-20 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸生産菌及びｌ−アミノ酸の製造法
DE102007051024A1 (de) 2007-03-05 2008-09-11 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
EP1975241A1 (de) 2007-03-29 2008-10-01 Evonik Degussa GmbH Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
DE102007044134A1 (de) 2007-09-15 2009-03-19 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
RU2396336C2 (ru) * 2007-09-27 2010-08-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ, ПРИНАДЛЕЖАЩЕЙ К РОДУ Escherichia
DE102007052270A1 (de) 2007-11-02 2009-05-07 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
EP2060636A1 (de) 2007-11-14 2009-05-20 Evonik Degussa GmbH Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
BRPI0906795A2 (pt) 2008-01-23 2015-08-18 Ajinomoto Kk Método para produzir um l-aminoácido
RU2008105793A (ru) 2008-02-19 2009-08-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Способ конструирования оперонов, содержащих трансляционно сопряженные гены, бактерия, содержащая такой оперон, способ продукции полезного метаболита и способ мониторинга экспрессии гена
EP2098597A1 (de) 2008-03-04 2009-09-09 Evonik Degussa GmbH Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
DE102008002309A1 (de) 2008-06-09 2009-12-10 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
DE102008044768A1 (de) 2008-08-28 2010-03-04 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur Herstellung von organisch-chemischen Verbindungen unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
WO2010027022A1 (ja) 2008-09-05 2010-03-11 味の素株式会社 Ｌ－アミノ酸生産菌及びｌ－アミノ酸の製造法
BRPI0918299B1 (pt) 2008-09-08 2018-08-14 Ajinomoto Co., Inc. Método para produzir um l-aminoácido
RU2008148283A (ru) * 2008-12-09 2010-06-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА artI
WO2010084995A2 (en) 2009-01-23 2010-07-29 Ajinomoto Co.,Inc. A method for producing an l-amino acid
EP2267145A1 (de) 2009-06-24 2010-12-29 Evonik Degussa GmbH Verfahren zur Herstellung von L-Aminosäuren unter Verwendung von verbesserten Stämmen der Familie Enterobacteriaceae
DE102009030342A1 (de) 2009-06-25 2010-12-30 Evonik Degussa Gmbh Verfahren zur fermentativen Herstellung von organisch chemischen Verbindungen
JPWO2011013707A1 (ja) 2009-07-29 2013-01-10 味の素株式会社 Ｌ−アミノ酸の製造法
RU2009136544A (ru) 2009-10-05 2011-04-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Способ получения l-цистеина с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae
RU2460793C2 (ru) 2010-01-15 2012-09-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) Способ получения l-аминокислот с использованием бактерий семейства enterobacteriaceae
RU2010101135A (ru) 2010-01-15 2011-07-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Бактерия семейства enterobacteriaceae - продуцент l-аспартата или метаболитов, производных l-аспартата, и способ получения l-аспартата или метаболитов, производных l-аспартата
JP2013074795A (ja) 2010-02-08 2013-04-25 Ajinomoto Co Inc 変異型ｒｐｓＡ遺伝子及びＬ−アミノ酸の製造法
RU2471868C2 (ru) 2010-02-18 2013-01-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) Мутантная аденилатциклаза, днк, кодирующая ее, бактерия семейства enterobacteriaceae, содержащая указанную днк, и способ получения l-аминокислот
RU2010122646A (ru) 2010-06-03 2011-12-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) (RU) Способ получения l-аминокислоты с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae, в которой ослаблена экспрессия генов, кодирующих транспортер лизина/аргинина/орнитина
RU2471870C2 (ru) 2010-06-03 2013-01-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА И L-ЦИТРУЛЛИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА pepA
RU2501858C2 (ru) 2010-07-21 2013-12-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТЫ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae
RU2482188C2 (ru) 2010-07-21 2013-05-20 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт "Аджиномото-Генетика" (ЗАО АГРИ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИЙ РОДА Escherichia, В КОТОРОЙ ИНАКТИВИРОВАН ОПЕРОН astCADBE
JP2014036576A (ja) 2010-12-10 2014-02-27 Ajinomoto Co Inc Ｌ−アミノ酸の製造法
RU2496867C2 (ru) 2011-04-25 2013-10-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") Способ получения l-аминокислоты семейства глутамата с использованием коринеформной бактерии
RU2011134436A (ru) 2011-08-18 2013-10-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") Способ получения l-аминокислоты с использованием бактерии семейства enterobacteriaceae, обладающей повышенной экспрессией генов каскада образования флагелл и клеточной подвижности
CN102351723A (zh) * 2011-08-30 2012-02-15 无锡荣丰生物工程有限公司 苏氨酸三效内循环连续蒸发结晶工艺
RU2012112651A (ru) 2012-04-02 2013-10-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") САМОИНДУЦИРУЕМАЯ ЭКСПРЕССИОННАЯ СИСТЕМА И ЕЕ ПРИМЕНЕНИЕ ДЛЯ ПОЛУЧЕНИЯ ПОЛЕЗНЫХ МЕТАБОЛИТОВ С ПОМОЩЬЮ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae
RU2550269C2 (ru) 2012-08-17 2015-05-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АРГИНИНА С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, СОДЕРЖАЩЕЙ N-АЦЕТИЛОРНИТИНДЕАЦЕТИЛАЗУ С НАРУШЕННОЙ АКТИВНОСТЬЮ
EP2762571A1 (de) 2013-01-30 2014-08-06 Evonik Industries AG Mikroorganismus und Verfahren zur fermentativen Herstellung von Aminosäuren
RU2013118637A (ru) 2013-04-23 2014-10-27 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, В КОТОРОЙ РАЗРЕГУЛИРОВАН ГЕН yjjK
JP2016165225A (ja) 2013-07-09 2016-09-15 味の素株式会社 有用物質の製造方法
RU2013140115A (ru) 2013-08-30 2015-03-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ НАРУШЕНА ЭКСПРЕССИЯ КЛАСТЕРА ГЕНОВ znuACB
RU2013144250A (ru) 2013-10-02 2015-04-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ ОСЛАБЛЕНА ЭКСПРЕССИЯ ГЕНА, КОДИРУЮЩЕГО ФОСФАТНЫЙ ТРАНСПОРТЕР
WO2015060314A1 (ja) 2013-10-21 2015-04-30 味の素株式会社 Ｌ－アミノ酸の製造法
RU2013147882A (ru) 2013-10-28 2015-05-10 Закрытое акционерное общество "Научно-исследовательский институт Аджиномото-Генетика" (ЗАО "АГРИ") СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИЙ СЕМЕЙСТВА Enterobacteriaceae, В КОТОРОЙ НАРУШЕН ПУТЬ ДЕГРАДАЦИИ ПУТРЕСЦИНА
RU2014105547A (ru) 2014-02-14 2015-08-20 Адзиномото Ко., Инк. СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ L-АМИНОКИСЛОТ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ БАКТЕРИИ СЕМЕЙСТВА ENTEROBACTERIACEAE, ИМЕЮЩЕЙ СВЕРХЭКСПРЕССИРУЕМЫЙ ГЕН yajL
RU2015114955A (ru) 2015-04-22 2016-11-10 Аджиномото Ко., Инк. Способ получения L-изолейцина с использованием бактерии семейства Enterobacteriaceae, в которой сверхэкспрессирован ген cycA
RU2015120052A (ru) 2015-05-28 2016-12-20 Аджиномото Ко., Инк. Способ получения L-аминокислоты с использованием бактерии семейства Enterobacteriaceae, в которой ослаблена экспрессия гена gshA
CN109121422B (zh) 2016-02-25 2021-12-21 味之素株式会社 使用过表达编码铁输出蛋白基因的肠杆菌科的细菌生产l-氨基酸的方法
JP7066977B2 (ja) 2017-04-03 2022-05-16 味の素株式会社 Ｌ－アミノ酸の製造法
JP7226449B2 (ja) 2017-12-26 2023-02-21 味の素株式会社 発酵によるグリシンの製造方法
JP2021521897A (ja) 2018-05-04 2021-08-30 味の素株式会社 パントエア属細菌を用いたｌ−メチオニンの製造方法
EP3608409A1 (en) 2018-08-09 2020-02-12 Evonik Operations GmbH Process for preparing l amino acids using improved strains of the enterobacteriaceae family
US11053526B2 (en) 2018-08-09 2021-07-06 Evonik Operations Gmbh Process for preparing L amino acids using improved strains of the enterobacteriaceae family
EP3856918A1 (en) 2018-09-28 2021-08-04 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing l-methionine using a bacterium
WO2020071538A1 (en) 2018-10-05 2020-04-09 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing target substance by bacterial fermentation
WO2020138178A1 (en) 2018-12-27 2020-07-02 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing basic l-amino acids or salts thereof by fermentation of an enterobacteriaceae bacterium
BR112021014194A2 (pt) 2019-02-22 2021-12-28 Ajinomoto Kk Método para a produção de um l-aminoácido
WO2020204179A1 (en) 2019-04-05 2020-10-08 Ajinomoto Co., Inc. Method of producing l-amino acids
JP2022550349A (ja) 2019-09-25 2022-12-01 味の素株式会社 細菌の発酵による２－メチル酪酸の製造方法
JP2022550084A (ja) 2019-09-25 2022-11-30 味の素株式会社 細菌の発酵によるｌ－アミノ酸の製造方法
US20240117393A1 (en) 2022-09-30 2024-04-11 Ajinomoto Co., Inc. Method for producing l-amino acid

Also Published As

Publication number Publication date
US4278765A (en) 1981-07-14
HU190999B (en) 1986-12-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SU875663A1 (ru) Штаммы е.coLI ВНИИГенетика VL 334 @ N6 и ВНИИГенетика VL 334 @ N7-продуценты L-треонина и способ их получени
EP0593792B2 (en) Novel L-threonine-producing microbacteria and a method for the production of L-threonine
US6132999A (en) L-threonine-producing microbacteria and a method for the production of L-threonine
US5705371A (en) Bacterial strain of escherichia coli BKIIM B-3996 as the producer of L-threonine
FI92717B (fi) Bakteerikanta Escherichia coli VKPM (BK M) B-3996 L-treoniinin tuottajana
KR101504485B1 (ko) 제조 규모의 재조합 단백질 제조 방법
KR19990013007A (ko) 형질전환된 대장균 ｓｓ373(ｋｃｔｃ 8818ｐ)과 이를 이용한숙신산의 생산방법
CN112592881B (zh) 用于高效外源蛋白表达和高密度培养的工程枯草芽孢杆菌
JPH0120871B2 (ru)
WO2017197887A1 (zh) 大肠埃希氏菌JLTrp及其在生产L-色氨酸中的应用
JP7473137B2 (ja) シュードザイマ・アンタクティカの新規菌株
CN113699128B (zh) 一种发酵生产尼克酰胺磷酸核糖转移酶的方法
JPH0226955B2 (ru)
CN118086167B (zh) 一种生产l-色氨酸的基因工程菌及其构建方法与应用
CN112625988A (zh) 一种大肠杆菌发酵培养基及发酵培养方法和应用
CN105925633A (zh) 大肠埃希氏菌JLTrp发酵生产L-色氨酸的方法
Berry et al. Effect of growing conditions of recombinant E. coli in carrageenan gel beads upon biomasse production and plasmid stability
US5139938A (en) Production of substances with an acetic acid-producing and assimilating bacterium inhibited by acetic acid
RU2697499C1 (ru) Бактерия вида Escherichia coli - продуцент L-треонина, способ микробиологического синтеза L-треонина с ее использованием.
Sabatie et al. Biotin formation by recombinant strains of Escherichia coli: influence of the host physiology
SU974817A1 (ru) Способ получени L-треонина
RU2728251C1 (ru) Штамм Escherichia coli с инактивированным геном ychE - продуцент L-треонина
KR102202694B1 (ko) ftfL 유전자가 과발현된 메탄올자화균 변이주 및 이를 이용한 PHB 생산방법
JP3239903B2 (ja) エシェリヒア・コリによる新規ｌ−スレオニン生産菌の創成とそれによるｌ−スレオニンの生産方法
Ogden et al. An adjustable expression system for controlling growth rate, plasmid maintenance, and culture dynamics