Nothing Special   »   [go: up one dir, main page]

SK173099A3 - Vaccine compositions comprising the helicobacter pylori flge polypeptide - Google Patents

Vaccine compositions comprising the helicobacter pylori flge polypeptide Download PDF

Info

Publication number
SK173099A3
SK173099A3 SK1730-99A SK173099A SK173099A3 SK 173099 A3 SK173099 A3 SK 173099A3 SK 173099 A SK173099 A SK 173099A SK 173099 A3 SK173099 A3 SK 173099A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
polypeptide
gly
ala
ser
flge
Prior art date
Application number
SK1730-99A
Other languages
Slovak (sk)
Inventor
Thomas Berglindh
Bjorn Mellgard
Original Assignee
Astra Ab
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Astra Ab filed Critical Astra Ab
Publication of SK173099A3 publication Critical patent/SK173099A3/en

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/205Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Campylobacter (G)
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04Antibacterial agents
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02Immunomodulators
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02Immunomodulators
    • A61P37/04Immunostimulants
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911Bacteria
    • G01N33/56922Campylobacter
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • GPHYSICS
    • G01MEASURING; TESTING
    • G01NINVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/195Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria
    • G01N2333/205Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from bacteria from Campylobacter (G)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

The present invention relates to polypeptides and vaccine compositions for inducing a protective immune response to Helicobacter pylori infection. The invention furthermore relates to the use of Helicobacter pylori polypeptides in the manufacture of compositions for the treatment or prophylaxis of Helicobacter pylori infection.

Description

Kompozície očkovacej látky obsahujúce FlgE polypeptid Helicobacter pyloríVaccine compositions comprising a FlgE polypeptide of Helicobacter pylori

Oblasť technikyTechnical field

Predložený vynález sa týka polypeptidov a kompozícií očkovacej látky na vyvolanie ochrannej imunitnej odozvy voči infekcii Helicobacter pylón. Vynález sa ďalej týka použitia polypeptidov Helicobacter pylorí na prípravu kompozícií na liečenie alebo profýlaxiu infekcie Helicobacter pylorí.The present invention relates to polypeptides and vaccine compositions for inducing a protective immune response against Helicobacter pylon infection. The invention further relates to the use of Helicobacter pylori polypeptides for the preparation of compositions for the treatment or prophylaxis of Helicobacter pylori infection.

Doterajší stav technikyBACKGROUND OF THE INVENTION

Helicobacter pyloríHelicobacter pylori

Gram-negatívna baktéria Helicobacter pylorí (H. pylorí) je významným ľudským patogénom, ktorý je príčinou niektorých gastroduodenálnych ochorení. Kolonizácia epitelu žalúdka baktériami vedie k aktívnemu zápalu a progresívnej chronickej gastritíde, so značne zvýšeným rizikom progresie kpeptickému vredovému ochoreniu. Dlhodobý zápal sliznice žalúdka je vo veľmi úzkom vzájomnom vzťahu so signifikantne zvýšeným rizikom rakoviny žalúdka.The Gram-negative bacterium Helicobacter pylori (H. pylori) is an important human pathogen that is responsible for some gastroduodenal diseases. Colonization of the stomach epithelium by bacteria leads to active inflammation and progressive chronic gastritis, with a significantly increased risk of progression to peptic ulcer disease. Long-term gastric mucosal inflammation is in a very close correlation with a significantly increased risk of gastric cancer.

Pri kolonizácii sliznice žalúdka H. pylorí sa uplatňuje celý rad virulentných faktorov. Takéto virulentné faktory zahrňujú adhezíny (zrasty), ktorými sa baktéria spája so sliznicou a/alebo sa viaže k epiteliálnym bunkám; močoviny, ktoré pomáhajú neutralizovať kyslé prostredie; a proteolytické enzýmy, ktoré robia sliznicu tekutejšou. Okrem toho H. pylorí je veľmi pohyblivá, steká v sliznici a dolu do vnútra. Ukázalo sa, že pohyblivosť je základným virulentným faktorom, pretože H. pylorí nedokázala infikovať sliznicu pri experimentálnych modeloch, ktoré uskutočnili Eaton a kol. (Infection & Immunity 64(7), 2455-2448 1996).A number of virulent factors are involved in the colonization of the gastric mucosa of H. pylori. Such virulent factors include adhesins (adhesions) by which the bacterium attaches to the mucosa and / or binds to epithelial cells; ureas that help neutralize the acidic environment; and proteolytic enzymes that make the mucosa more fluid. In addition, H. pylori is very mobile, running down the mucosa and down into the interior. Mobility has been shown to be an essential virulence factor because H. pylori has failed to infect the mucosa in experimental models performed by Eaton et al. (Infection & Immunity 64 (7), 2455-2448 1996).

Pre toto jestvuje veľa možných príčin, najpochopiteľnejšou z nich je neschopnosť stekať dolu a dosiahnuť bunky sliznice a neschopnosť vyhnúť sa škodlivým činidlám v žalúdku.There are many possible causes for this, the most understandable of which is the inability to flow down and reach the mucosal cells and the inability to avoid harmful agents in the stomach.

Napriek silnej zdanlivej imunitnej odozve hostiteľa na H. pylorí, pri produkcii ako lokálnych (mukozálnych) tak i systémových protilátok, patogén zotrváva v sliznici žalúdka bežne počas života pacienta. Dôvodom tohto je pravdepodobne to, že spontánne vyvolané imunitné odozvy sú neadekvátne alebo zamerané vočiDespite a strong apparent host immune response to H. pylori, producing both local (mucosal) and systemic antibodies, the pathogen persists in the gastric mucosa normally during the life of the patient. The reason for this is probably that spontaneously induced immune responses are inadequate or directed against

-2nesprávnym epitopom antigénov. Alternatívne môže byť imunitná odozva nesprávneho druhu, pretože imunitný systém môže pokladať H. pylori za symbiotickú (ako je znázornené zo vzájomného pomeru životnosť hostiteľa/baktérie).- incorrect epitope of antigens. Alternatively, the immune response may be of the wrong species since the immune system may consider H. pylori to be symbiotic (as shown by the host / bacterial life ratio).

Aby sme pochopili patogenézu a imunológiu infekcií H. pylori, má veľký význam definovať antigénnu štruktúru tejto baktérie. Predovšetkým, jestvuje tu potreba charakterizácie vystaveného povrchu, spojeného povrchu ako aj vylúčených proteínov, ktoré, ako sa preukázalo, predstavujú pri mnohých bakteriálnych patogénoch hlavný virulentné faktory, a ktoré môžu byť užitočné pri diagnóze H. pylori a pri príprave očkovacích kompozícií. Ak sú takéto proteíny okrem toho, že sú povrchovo pripojené, tiež základnými pre prežitie a/alebo kolonizáciu, ich využiteľnosť ako cieľ pre očkovacou látkou sprostredkované imunoterapeutické ciele sa zvyšuje.In order to understand the pathogenesis and immunology of H. pylori infections, it is of great importance to define the antigenic structure of this bacterium. In particular, there is a need for characterization of the exposed surface, the bonded surface as well as the secreted proteins, which have been shown to be major virulent factors in many bacterial pathogens and which may be useful in diagnosing H. pylori and in preparing vaccine compositions. When such proteins, in addition to being surface-linked, are also essential for survival and / or colonization, their utility as a target for vaccine-mediated immunotherapeutic targets increases.

Pri strese alebo v ohrození sa bunka H. pylori transformuje z bacilárnej formy na kokoidnú formu. V kokoidnej forme je bunka H. pylori menej citlivá voči antibiotikám a ďalším antibakteriálnym činidlám. Podrobné výskumy naznačujú, že H. pylori sa môže prenášať medzi jednotlivcami v tejto forme, pravdepodobne vodou alebo priamym kontaktom (orálno-orálne, fekálno-orálne). Účinná kompozícia očkovacej látky by teda mala vyvolať imunitnú odozvu voči obom formám H. pylori, kokoidnej a bacilárnej. Pretože systémová imunita hrá pravdepodobne iba obmedzenú úlohu pri ochrane pred infekciami sliznice, je tiež dôležité, aby kompozícia očkovacej látky zvyšovala ochranný imunitný mechanizmus lokálne v žalúdku.In stress or at risk, a H. pylori cell is transformed from a bacillary form to a cocoid form. In a cocoid form, the H. pylori cell is less sensitive to antibiotics and other antibacterial agents. Detailed research suggests that H. pylori may be transmitted between individuals in this form, probably by water or direct contact (oral-oral, faecal-oral). Thus, an effective vaccine composition should elicit an immune response against both forms of H. pylori, cocoid and bacillary. Since systemic immunity is likely to play only a limited role in protecting against mucosal infections, it is also important that the vaccine composition enhances the protective immune mechanism locally in the stomach.

Flagelámy hook proteínFlagellam hook protein

Ukázalo sa, že Flagelárne hook z H. pylori pozostávajú z FlgE podjednotiek 78kDa (O'Toole a kol., Molecular Microbiology, 14(4), 691 - 703, 1994). Úlohou Flagelámeho hook je spojiť Flagela so submembránovým Flagelárnym hook pohybom. Časť hook vytláčaná mimo membránu je krátka, približne 60 nanometrov (v porovnaní ku približne 10 mikrometrom pre Flagela). Podobne ako Flagela H. pylori, hook je pravdepodobne pokrytý poťahom (Geis a kol., (1993), J. Med. Microbiol. 38(5), 371 - 377).H. pylori flagellar hooks have been shown to consist of the 78kDa FlgE subunits (O'Toole et al., Molecular Microbiology, 14 (4), 691-703, 1994). The task of Flagelame hook is to connect Flagela with submembrane Flagellar hook movement. The portion of the extruded hook is short, about 60 nanometers (compared to about 10 micrometers for Flagela). Like Flagela H. pylori, the hook is probably covered with a coating (Geis et al., (1993), J. Med. Microbiol. 38 (5), 371-377).

-3Aminokyselinová sekvencia FlgE polypeptidu má signifikantnú podobnosť s ďalšími známymi hook proteínmi, vrátane limitovanej homológie k ďalším druhom Helicobacter, ako je mustelae (O'Toole a kol., uvedené vyššie). Polyklonálne protilátky vyvolané proti FlgE polypetidu vykázali skríženú reaktivitu voči Flagelámym proteínom A a B, čo pravdepodobne indikuje existenciu spoločných epitopov. Produkcia FlgE paralyzuje H. pylón, výsledkom čoho je aflageláma nepohyblivá baktéria, kde sa FlgE polypetid produkoval, ale mohol sa znova zachytiť v cytoplazme.The -3 amino acid sequence of the FlgE polypeptide has significant similarity to other known hook proteins, including limited homology to other Helicobacter species such as mustelae (O'Toole et al., Supra). Polyclonal antibodies raised against FlgE polypetide showed cross-reactivity to Flagela proteins A and B, probably indicating the existence of common epitopes. FlgE production paralyzes H. pylon, resulting in an aflagelama immobilized bacterium where FlgE polypeptide was produced but could be recaptured in the cytoplasm.

Prehľad obrázkov na výkresochBRIEF DESCRIPTION OF THE DRAWINGS

Obrázok 1Figure 1

Vplyv terapeutickej imunizácie myší infikovaných H. pylorí (n = 9-10/skupinu) s FlgE polypeptidom. Výsledky sú uvedené ako stredná ±SEM počtu H. pylorí spojených s antrum (=A), telieskom (=B) alebo celkovo (A+B) (=C). Skratky: CFU, jednotky tvoriace kolóniu (počet baktérií); nešrafované stĺpce = DOC+CT, fosfátom pufrovaný fyziologický roztok s 0,5 % deoxycholátu sa podával spolu s toxínom cholery 10 pg/myš; šrafované stĺpce = FlgE+CT, myši dostávali 100 pg FlgE a 10pg toxínu cholery. Pokles CFU bol signifikantný vantrume a vypočítal sa pre celý žalúdok.Effect of therapeutic immunization of H. pylori-infected mice (n = 9-10 / group) with FlgE polypeptide. Results are presented as mean ± SEM of the number of H. pylori associated with anthra (= A), body (= B) or total (A + B) (= C). Abbreviations: CFU, colony forming units (number of bacteria); unhatched bars = DOC + CT, phosphate buffered saline with 0.5% deoxycholate was co-administered with cholera toxin 10 µg / mouse; shaded bars = FlgE + CT, mice received 100 µg FlgE and 10 µg cholera toxin. The decrease in CFU was a significant vantrume and was calculated for the entire stomach.

**p<0,01; *p<0,05 (Wilcoxon-Mann-Whittneyov klasifikačný test znakov)** p <0.01; * p <0.05 (Wilcoxon-Mann-Whittney character classification test)

Obrázok 2Figure 2

Sérum IgG z myší merané pomocou ELISA metodiky: odozvy na infekciu a na imunizáciu s FlgE. Hodnoty boli vyjadrené ako priemerné titre ±SEM, n = 9 až 10/skupinu. ELISA pokrytá s kmeňom H. pylorí 244; ako príznak infekcie H. pylorí sa v sére zvierat ošetrených s DOC + CT (=A, kontrola/244) dali zistiť špecifické protilátky. Následná imunizácia s FlgE + toxínom cholery (=B, FlgE/244) túto reaktivitu zvyšovala štvornásobne (**p<0,01; (Wicoxon-Mann-Whittneyov klasifikačný test znakov). C = FlgE špecifické. Špecifické FlgE sa zvyšovalo u zvierat, ktoré dostávali FlgE + CT, avšak nedalo sa stanoviť pre kontrolné zvieratá.IgG serum from mice measured by ELISA methodology: response to infection and immunization with FlgE. Values were expressed as mean titers ± SEM, n = 9-10 / group. ELISA coated with H. pylori 244; specific antibodies could be detected as a symptom of H. pylori infection in the sera of animals treated with DOC + CT (= A, control / 244). Subsequent immunization with FlgE + cholera toxin (= B, FlgE / 244) increased this reactivity fourfold (** p <0.01; (Wicoxon-Mann-Whittney character test). C = FlgE specific. Specific FlgE increased in animals that received FlgE + CT but could not be determined for control animals.

-4Podstata vynálezu4. Summary of the Invention

Cieľom tohto vynálezu je poskytnúť antigénny polypetid H. pylori, ktorý sa môže použiť na vyvolanie ochrannej imunitnej odozvy voči H. pylori a na diagnostikovanie infekcie H. pylori. Tento cieľ sa dosiahol pomocou rekombinantného klonovania génu H. pylori, ktorý kóduje dobre uchovaný základný polypeptid. Sekvencia nukleových kyselín tohto génu je podobná sekvencií génu FlgE, ako publikovali O'Toole a kol., Molecular Microbiology, 14(4), 691 - 703, 1994. Ako základný proteín motility je gén FlgE exprimovaný všetkými kmeňmi H. pylori.It is an object of the present invention to provide an antigenic H. pylori polypeptide that can be used to elicit a protective immune response against H. pylori and to diagnose H. pylori infection. This goal was achieved by recombinant cloning of the H. pylori gene, which encodes a well conserved parent polypeptide. The nucleic acid sequence of this gene is similar to that of the FlgE gene as reported by O'Toole et al., Molecular Microbiology, 14 (4), 691-703, 1994. As a basic motility protein, the FlgE gene is expressed by all H. pylori strains.

Prekvapujúco sa zistilo, že FlgE polypetid H. pylori, napriek skutočnosti, že len malá časť hook proteínu jestvuje mimo baktérie a že je pravdepodobne pokrytý poťahom, môže slúžiť ako terapeutický antigén pri modele myší infikovaných H. pylori, ak sa podáva spolu s pomocnou látkou toxínom cholery. Nižšie uvedené experimentálne údaje teda indikujú, že FlgE polypetid H. pylori, ak sa použije ako orálny imunogén, pôsobí ako stimulátor imunitnej odozvy, ktorý vedie k signifikantnému zníženiu kolonizácie H. pylori u myší, ktoré boli infikované s H. pylori jeden mesiac pred imunizáciou.Surprisingly, it has been found that FlgE H. pylori polypeptide, despite the fact that only a small portion of the hook protein exists outside the bacteria and that it is likely to be coated, may serve as a therapeutic antigen in a model of H. pylori-infected mice when co-administered with an adjuvant. cholera toxin. Thus, the experimental data below indicates that FlgE polypeptide of H. pylori, when used as an oral immunogen, acts as an immune response stimulator leading to a significant reduction in H. pylori colonization in mice infected with H. pylori one month prior to immunization. .

Tieto výsledky silne podporujú použitie FlgE polypeptidu H. pylori v orálnych prípravkoch očkovacej látky na použitie pri liečení alebo prevencii infekcií H. pylori u človeka. Samotný FlgE proteín bude využiteľný ako pri stanovení infekcií H. pylori tak aj pri výrobe kompozícií očkovacej látky, ktoré, ak sa podajú vo vhodných farmaceutických prípravkoch, budú vyvolávať ochrannú alebo terapeutickú imunitnú odozvu voči takýmto infekciám.These results strongly support the use of the H. pylori FlgE polypeptide in oral vaccine formulations for use in treating or preventing H. pylori infections in humans. FlgE protein itself will be useful in both H. pylori infections as well as in the manufacture of vaccine compositions which, when administered in suitable pharmaceutical formulations, will produce a protective or therapeutic immune response to such infections.

Preto vynález ďalej poskytuje FlgE polypetid Helicobacter pylori na použitie na vyvolanie ochrannej imunitnej odozvy voči infekciám. Termín “FlgE polypetid Helicobacter pylori je mienený ako polypetid, ktorý opísali O'Toole a kol. v Molecular Microbiology, 14(4), 691 - 703, 1994, a ktorý je kódovaný pomocou génu, ktorého nukleotidová sekvencia je uvedená ako SEQ ID NO. 1, alebo sa môže získať z National Center for Biotechnology Information (Accession number (prírastkové číslo) U09549) alebo v podstate podobná modifikovaná forma uvedeného polypeptidu, ktorá si zachováva funkčnú ekvivalentnú antigenicitu.Therefore, the invention further provides a Helgobacter pylori FlgE polypeptide for use in eliciting a protective immune response against infections. The term "FlgE polypeptide Helicobacter pylori" is intended to be the polypeptide described by O'Toole et al. in Molecular Microbiology, 14 (4), 691-703, 1994, and which is encoded by a gene whose nucleotide sequence is shown as SEQ ID NO. 1, or may be obtained from the National Center for Biotechnology Information (Accession Number U09549) or a substantially similar modified form of said polypeptide that retains functional equivalent antigenicity.

-5Pod termínom ochranná imunitná odozvy” je potrebné rozumieť imunitnú odozvu, ktorá robí kompozíciu vhodnou na terapeutické a/alebo profylaktické účely.-5 "Protective immune response" means an immune response that makes the composition suitable for therapeutic and / or prophylactic purposes.

Pod termínom “funkčná ekvivalentná antigenicita” treba chápať ako schopnosť vyvolať systémovú a mukozálnu imunitnú odozvu, pričom sa znižuje počet buniek H. pylori spojených so sliznicou žalúdka. Odborníci skúsení v odbore budú schopní identifikovať modifikované formy FlgE polypeptidu, ktorý si zachováva funkčnú ekvivalentnú antigenicitu, s použitím známych postupov, ako je zobrazenie epitopov s protilátkami vyvolanými in vivo.By "functional equivalent antigenicity" is meant the ability to elicit a systemic and mucosal immune response, reducing the number of H. pylori cells associated with the gastric mucosa. Those of skill in the art will be able to identify modified forms of FlgE polypeptide that retain functional equivalent antigenicity, using known procedures, such as imaging epitopes with antibodies elicited in vivo.

Vo výhodnom spôsobe uskutočnenia vynálezu FlgE polypeptid Heiicobacter pylori na použitie na vyvolanie ochrannej imunitnej odozvy voči infekcii Heiicobacter pylori, má v podstate aminokyselinovú sekvenciu uvedenú ako SEQ ID NO. 2 v zozname sekvencií, alebo jej modifikovanú formu, ktorá sa zachováva funkčnú ekvivalentnú antigenicitu.In a preferred embodiment of the invention, the Heiicobacter pylori FlgE polypeptide for use in eliciting a protective immune response against Heiicobacter pylori infection, has substantially the amino acid sequence shown as SEQ ID NO. 2 of the Sequence Listing, or a modified form thereof that retains functional equivalent antigenicity.

Preto je treba chápať, že definícia FlgE polypeptidu Heiicobacter pylori nie je prísne obmedzená na polypeptid, s aminokyselinovou sekvenclou, ktorý je identický s SEQ ID č. 2 v zozname sekvencií. Vynález skôr zahrňuje polypeptidy, ktoré nesú modifikácie, ako sú substitúcie, malé vyradenia, vloženia alebo inverzie, pričom tieto polypeptidy napriek tomu majú v podstate biologickú aktivitu FlgE polypeptidu Heiicobacter pylori a zachováva sa funkčná ekvivalentná antigenicita. Do definície FlgE polypetidu Heiicobacter pylori sú preto zahrnuté polypeptidy, aminokyselinová sekvencia ktorých je najmenej na 90 % homologických, výhodne najmenej na 95 % homologických, s aminokyselinovou sekvenciou uvedenou ako SEQ ID No 2, v zozname sekvencií.Therefore, it is to be understood that the definition of the FlgE polypeptide of Heiicobacter pylori is not strictly limited to a polypeptide having an amino acid sequence that is identical to SEQ ID NO. 2 in the sequence list. Rather, the invention encompasses polypeptides that carry modifications, such as substitutions, small knockouts, insertions, or inversions, but which nevertheless have substantially the biological activity of the Heiicobacter pylori FlgE polypeptide and retain functional equivalent antigenicity. Therefore, polypeptides having an amino acid sequence of at least 90% homology, preferably at least 95% homology, with the amino acid sequence shown as SEQ ID No 2 in the Sequence Listing are included in the definition of Hegicobacter pylori FlgE polypeptide.

Vynález sa ďalej poskytuje kompozíciu očkovacej látky na vyvolanie ochrannej imunitnej odozvy voči infekcii Heiicobacter pylori, ktorá obsahuje imunogénne účinné množstvo FlgE polypetidu Heiicobacter pylori, ako je definovaný vyššie, prípadne spolu s farmaceutický prijateľným nosičom alebo riedidlom.The invention further provides a vaccine composition for eliciting a protective immune response against a Heiicobacter pylori infection comprising an immunogenically effective amount of a Heiicobacter pylori FlgE polypeptide as defined above, optionally together with a pharmaceutically acceptable carrier or diluent.

V uvedenom kontexte termín “imunologický účinné množstvo treba chápať ako množstvo, ktoré vyvolá signiflkantnú ochrannú odozvu Heiicobacter pylori, ktorá vykorení infekciu H. pylori u infikovaných cicavcov alebo zabráni infekcii u náchylných cicavcov. Typicky bude imunologický účinné množstvo obsahovaťIn the present context, the term "immunologically effective amount" is understood to be an amount that elicits a significant protective response of Heiicobacter pylori that eradicates H. pylori infection in infected mammals or prevents infection in susceptible mammals. Typically, the immunologically effective amount will comprise

-6približne 1 gg až 1000 mg, výhodne približne 10 pg až 100 mg, antigénu H. pylori na orálne podávanie alebo približne menej ako 100 pg na parenterálne podávanie.About 1 gg to 1000 mg, preferably about 10 µg to 100 mg, of H. pylori antigen for oral administration or about less than 100 µg for parenteral administration.

Kompozícia očkovacej látky obsahuje prípadne okrem farmaceutický prijateľného nosiča alebo riedidla jeden alebo viac ďalších farmaceutický účinných antigénov na profylaktické alebo terapeutické použitie. Fyziologicky prijateľné nosiče a riedidlá sú pre odborníkov v odbore dobre známe a zahrňujú napríklad fosfátom pufrovaný fyziologický roztok (PBS) alebo, v prípade orálnych očkovacích látok, prípravky na báze HCO3- alebo entericky poťahované práškové prípravky.The vaccine composition optionally comprises, in addition to a pharmaceutically acceptable carrier or diluent, one or more other pharmaceutically effective antigens for prophylactic or therapeutic use. Physiologically acceptable carriers and diluents are well known to those skilled in the art and include, for example, phosphate buffered saline (PBS) or, in the case of oral vaccines, HCO3- or enteric-coated powder formulations.

Kompozícia očkovacej látky môže prípadne obsahovať alebo sa môže podávať spolu s inhibítormi sekrécie, výhodne inhibítormi protónovej pumpy (PPI), napríklad omeprazolom. Očkovacia látka sa potom môže formulovať do známych systémov dodávania, ako sú lipozómy, ISCOM, kochley, a podobne (pozri napríklad Rabinovich a kol., (1994), Science 265, 1401 až 1404) alebo sa pripojiť alebo začleniť do mikrosfér polyméru odbúrateľnej alebo neodbúrateľnej povahy. Antigény môžu byť spojené so živými oslabenými baktériami, vírusmi alebo fágmi alebo s usmrtenými vektormi rovnakého druhu. Antigény môžu byť chemicky alebo geneticky pripojené k proteínom nosiča inertného alebo pomocného typu (napríklad podjednotka cholery B). Ďalej sa vynález týka kompozície očkovacej látky podľa vyššie uvedeného, ktorá okrem toho obsahuje pomocnú látku, ako je toxín cholery. Takéto farmaceutický prijateľné formy toxínu cholery sú známe z doterajšieho stavu techniky, napríklad z Rappuoli a kol., (1995), Int. Árch. Allergy & Immunol. 108(4), 327 až 333; a Dickinson a kol., (1995), Infection and Immunity 63(5), 1617 až 1623.The vaccine composition may optionally contain or be administered together with secretion inhibitors, preferably proton pump inhibitors (PPIs), for example omeprazole. The vaccine may then be formulated in known delivery systems such as liposomes, ISCOM, cochley, and the like (see, for example, Rabinovich et al., (1994), Science 265, 1401-1404) or attached or incorporated into the microspheres of a degradable or polymer. non-degradable nature. Antigens may be associated with live attenuated bacteria, viruses or phages, or with killed vectors of the same species. The antigens may be chemically or genetically linked to carrier or inert type carrier proteins (e.g., cholera B subunit). Furthermore, the invention relates to a vaccine composition according to the above, which additionally comprises an adjuvant such as cholera toxin. Such pharmaceutically acceptable forms of cholera toxin are known in the art, for example, from Rappuoli et al., (1995) Int. Arch. Allergy & Immunol. 108 (4), 327-333; and Dickinson et al., (1995) Infection and Immunity 63 (5), 1617-1623.

Kompozícia očkovacej látky podľa vynálezu sa môže použiť ako na terapeutické tak i na profylaktické účely. Vynález teda zahrňuje kompozíciu očkovacej látky, ako je definovaná vyššie, na použitie ako liečivo alebo profylaktickú očkovaciu látku pre cicavca, vrátane človeka, ktorý je infikovaný Helicobacter pylori. V tomto kontexte termín “profylaktický účel” znamená vyvolanie imunitnej odozvy, ktorá zabráni budúcej infekcii s Helicobacter pylori, zatiaľ čo termín “terapeutický účel” znamená vyvolanie imunitnej odozvy, ktorá môže vykoreniť jestvujúce infekcie Helicobacter pylori.The vaccine composition of the invention can be used for both therapeutic and prophylactic purposes. Thus, the invention encompasses a vaccine composition as defined above for use as a medicament or prophylactic vaccine for a mammal, including a human, who is infected with Helicobacter pylori. In this context, the term "prophylactic purpose" means inducing an immune response that will prevent future infection with Helicobacter pylori, while the term "therapeutic purpose" means inducing an immune response that may eradicate existing Helicobacter pylori infections.

-7Kompozícia očkovacej látky podľa vynálezu sa výhodne podáva cez sliznicu cicavca, napríklad cez bukáinu, nasálnu, tonzilárnu, žalúdočnú alebo intestinálnu (tenké a hrubé črevo), rektálnu a vaginálnu sliznicu. Mukozálna očkovacia látka sa môže podávať spolu s pomocnými látkami vhodnými na tento účel. Očkovacia látka sa môže podávať tiež orálne alebo parenterálne, subkutánnou, intrakutánnou alebo intramuskulárnou cestou, prípadne spolu s vhodnými pomocnými látkami. Kompozícia očkovacej látky sa môže prípadne podávať spolu s vhodnou pomocnou látkou. Kompozícia účinnej látky sa môže prípadne podávať spolu s antimikrobiálnym terapeutickým činidlom.The vaccine composition of the invention is preferably administered through the mammalian mucosa, for example, through the buccal, nasal, tonsillar, stomach or intestinal (small and large intestine), rectal and vaginal mucosa. The mucosal vaccine may be administered together with excipients suitable for this purpose. The vaccine can also be administered orally or parenterally, subcutaneously, intracutaneously or intramuscularly, optionally together with suitable excipients. The vaccine composition may optionally be administered together with a suitable excipient. Optionally, the active ingredient composition may be co-administered with an antimicrobial therapeutic agent.

Vynález sa ďalej týka použitia FlgE polypeptidu Helicobacter pylorí, ako je definovaný vyššie, na prípravu (i) kompozície na liečenie, profylaxiu alebo diagnostikovanie infekcie Helicobacter pylón;The invention further relates to the use of a Helgobacter pylori FlgE polypeptide as defined above for the preparation of (i) a composition for the treatment, prophylaxis or diagnosis of a Helicobacter pylon infection;

(ii) očkovacej látky na použitie pri vyvolaní ochrannej imunitnej odozvy proti Helicobacter pylón; a (iii) diagnostického kitu na diagnostikovanie infekcie Helicobacter pylorí.(ii) a vaccine for use in eliciting a protective immune response against Helicobacter pylon; and (iii) a diagnostic kit for diagnosing Helicobacter pylori infection.

Okrem toho vynález ešte poskytuje spôsob in vitro diagnostikovania infekcie Helicobacter pylorí, ktorý zahrňuje najmenej jeden krok, pričom FlgE polypetid Helicobacter pylorí, definovaný vyššie, sa prípadne použije značený alebo spojený s pevným podkladom. Uvedený spôsob by mohol napríklad zahrňovať kroky (a) uvedenie do kontaktu uvedeného FlgE polypeptidu Helicobacter pylorí , prípadne viazaného k pevnému podkladu, s telesnou kvapalinou odobranou cicavcovi; a (b) detegovaním protilátok z uvedenej telesnej kvapaliny naviazaním na uvedený FlgE polypeptid. Výhodnými spôsobmi detekcie protilátok sú spôsoby ELISA (Enzýme linked imunoabsorbed assay, enzýmom viazané imunoabsorbčné skúšky), ktoré sú dobre známe z doterajšieho stavu techniky.In addition, the invention still provides a method for in vitro diagnosing Helicobacter pylori infection, which comprises at least one step, wherein the Helicobacter pylori FlgE polypeptide as defined above is optionally used labeled or associated with a solid support. For example, said method could comprise the steps of (a) contacting said Helicobacter pylori FlgE polypeptide, optionally bound to a solid support, with a body fluid removed from the mammal; and (b) detecting antibodies from said body fluid by binding to said FlgE polypeptide. Preferred methods for detecting antibodies are ELISA (Enzyme-linked immunoabsorbed assay) methods, which are well known in the art.

Predložený vynález v ďalšom poskytuje diagnostický kit na detegovanie infekcie Helicobacter pylorí u cicavca, vrátane človeka, obsahujúci zložky, ktoré umožňujú uskutočnenie spôsobu diagnostikovania in vitro, ako je opísané vyššie. Uvedený diagnostický kit môže obsahovať napríklad: (a) FlgE polypeptid Helicobacter pylorí;The present invention further provides a diagnostic kit for detecting a Helicobacter pylori infection in a mammal, including a human, comprising components that enable the method of in vitro diagnosis as described above to be performed. Said diagnostic kit may comprise, for example: (a) a Helicobacter pylori FlgE polypeptide;

-8a (b) reagenty na detegovanie protilátok viažúcich sa k uvedenému FlgE polypeptidu. Uvedenými reagentami na detegovanie protilátok by mohol byť napríklad enzýmom značený anti-imunoglobulín a chromogénny substrát pre uvedený enzým.(B) reagents for detecting antibodies binding to said FlgE polypeptide. Said antibody detection reagents could be, for example, an enzyme-labeled anti-immunoglobulin and a chromogenic substrate for said enzyme.

Ešte ďalej sa vynález týka poskytnutia spôsobu vyvolania u cicavca, vrátane človeka, ochrannej Imunitnej odozvy proti infekcii Helicobacter pylón, pričom uvedený spôsob zahrňuje krok podávania uvedenému cicavcovi imunologický účinné množstvo FlgE polypeptidu Helicobacter pylori ako je definovaný vyššie, alebo alternatívne podávanie uvedenému cicavcovi imunologický účinné množstvo kompozície očkovacej látky, definovanej vyššie.Still further, the invention provides a method of inducing in a mammal, including a human, a protective immune response against Helicobacter pylon infection, said method comprising the step of administering to said mammal an immunologically effective amount of a Helicobacter pylori FlgE polypeptide as defined above or alternatively administering to said mammal an immunologically effective amount. the vaccine composition as defined above.

Experimentálne metódyExperimental methods

V celom tomto opise termín “štandardný protokol” a “štandardný postup” použité v kontexte metód génového inžinierstva, treba chápať ako protokoly a postupy nájdené v štandardnom laboratórnom manuále, ako je: Current Protocols in Molecular Biology, Ed. F. Ausubel a kol., John Woley and Sons, Inc. 1994, alebo Sambrook, J., Fritsch, E. F. a Maniatis, T., Molecular Cloning: A laboratory manual, 2nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY 1989. Príprava rekombinantného FlgE polypeptidu Helicobacter pyloriThroughout this specification, the terms "standard protocol" and "standard procedure" used in the context of genetic engineering methods are to be understood as protocols and procedures found in a standard laboratory manual such as: Current Protocols in Molecular Biology, Ed. F. Ausubel et al., John Woley and Sons, Inc. 1994, or Sambrook, J., Fritsch, EF, and Maniatis, T., Molecular Cloning: A laboratory manual, 2 nd Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY 1989. Preparation of Recombinant Helicobacter pylori FlgE Polypeptide

DNA sekvenčná informáciaDNA sequence information

Sekvečná informácia pre gén kódovaný pre FlgE polypeptid sa získala od National Center for Biotechnology Information (Accession number (prírastkové číslo) U09549; SEQ ID No: 1).Sequence information for the gene encoded by the FlgE polypeptide was obtained from the National Center for Biotechnology Information (Accession number U09549; SEQ ID No: 1).

PCR amplifikácia a klonovanie DNA sekvencií obsahujúcich ORF pre membrány a vylúčené proteíny z J99 kmeňa Helicobacter pylori.PCR amplification and cloning of DNA sequences containing ORFs for membranes and secreted proteins from the J99 strain Helicobacter pylori.

Sekvencie sa klonovali zJ99 kmeňa H. pylori amplifikačným klonovaním s použitím polymerázovej reťazovej reakcie (PCR). Navrhli a získali sa syntetické oligonukleotidové priméry (pozri nižšie) špecifické pre 5'a 3'-konce otvorených čítacích rámcov (GibcoBRL Life Technologies, Gaithersburg, MD, USA). Pôvodné priméry (špecifické pre 5'-konce sekvencie) pre FlgE sa navrhli tak, aby zahrňovaliThe sequences were cloned from the J99 strain of H. pylori by amplification cloning using a polymerase chain reaction (PCR). Synthetic oligonucleotide primers (see below) specific for the 5 'and 3' ends of the open reading frames (GibcoBRL Life Technologies, Gaithersburg, MD) were designed and obtained. The original primers (specific for the 5'-ends of the sequence) for FlgE were designed to include

-9Ncol klonované miesto na extrémnom 5'-konci, pričom reverzné priméry zahrňovali EcoRI miesto na extrémnom 5'-konci, aby sa umožnilo klonovanie každej sekvencie H. pylori do čítacieho rámca vektora pET-28b. Inzerty klonované do NcolEcoR\ miest vektora pET-28b sa fúzovali na vektor sekvencie DNA kódujúci prídavných 20 karboxy-terminálnych amino, vrátane šesť histidínových zvyškov (na extrémnom C-konci).The 99 NcoI cloned site at the extreme 5'-end, wherein the reverse primers included an EcoRI site at the extreme 5'-end to allow cloning of each H. pylori sequence into the reading frame of the pET-28b vector. The inserts cloned into the NcoEcoR1 sites of the pET-28b vector were fused to a DNA sequence vector encoding additional 20 carboxy-terminal amino acids, including six histidine residues (at the extreme C-terminus).

Pôvodný primér (SEQ ID NO: 3)Original primer (SEQ ID NO: 3)

5'-TAT ACC ATG GTG CTT AGG TCT TTA T-3'5 'TAT ACC ATG GTG CTT AGG TCT TTA T-3'

Reverzný primér (SEQ ID NO: 4)Reverse primer (SEQ ID NO: 4)

5'-GCG AAT TCA ATT GCT TAA GAT TCA A-3'5 '-GCG AAT TCA ATT GCT TAA GAT TCA A-3'

Genómová DNA pripravená z kmeňa J99 Helicobacter pylori sa použila ako zdroj matrice DNA na PCR amplifikačné reakcie (Current Protocols in Molecular Biology, Ed. F. Ausubel a kol., John Wiley and Sons, Inc. 1994). Na amplifikovanie DNA sekvencie obsahujúcej ORF H. pylori, sa genómová DNA (50 ng) zaviedla do reakčnej fľaštičky, obsahujúcej 2 mM MgCI2, 1 μΜ syntetických oligonukleotidových primérov (pôvodné a reverzné priméry) komplementárna k a lemujúca definovanú ORF H. pylori, 0,2 mM každého deoxynukleotidového trifosfátu dATP, dGTP, dCTP, dTTP a 2,5 jednotiek tepelne stabilizovanej DNA polymerázy (Amplitaq, Roche Molecular Systems, Inc. Branchburg, NJ, USA) v konečnom objeme 100 μΙ. Použili sa nasledovné cyklické podmienky na získanie amplifikovaných DNA produktov pre každý použitý ORF, s použitím Perkin Elmer Cetus/GeneAmp PCR systému 9600 termálneho cyklu:Genomic DNA prepared from Helicobacter pylori J99 strain was used as a source of DNA matrix for PCR amplification reactions (Current Protocols in Molecular Biology, Ed. F. Ausubel et al., John Wiley and Sons, Inc. 1994). To amplify the DNA sequence containing the H. pylori ORF, genomic DNA (50 ng) was introduced into a reaction vial containing 2 mM MgCl2, 1 μΜ of synthetic oligonucleotide primers (parent and reverse primers) complementary to the defined H. pylori ORF, 0.2 mM of each deoxynucleotide triphosphate dATP, dGTP, dCTP, dTTP and 2.5 units of heat stabilized DNA polymerase (Amplitaq, Roche Molecular Systems, Inc., Branchburg, NJ, USA) in a final volume of 100 μΙ. The following cyclic conditions were used to obtain amplified DNA products for each ORF used, using a Perkin Elmer Cetus / GeneAmp 9600 thermal cycle PCR system:

Denaturácia pri +94 °C počas 2 min;Denaturation at +94 ° C for 2 min;

cykly pri +94 “C počas 15 sek., +30 °C počas 15 sek. a +72 eC počas 1,5 min.;cycles at +94 ° C for 15 sec., +30 ° C for 15 sec. and +72 e C for 1.5 min;

cyklov pri +94 °C počas 15 sek., +58 °C počas 15 sek. a +72 °C počas 1,5 min.; Reakcie sa ukončili pri +72 eC počas 6 minút.cycles at +94 ° C for 15 sec., +58 ° C for 15 sec. and + 72 ° C for 1.5 min; Reactions were concluded at + 72 e C for 6 minutes.

Po ukončení termálnych cyklických reakcií sa každá vzorka amplifikovanej DNA sa premyla a prečistila s použitím Qiaquick Spin PCR kitu na prečistenie (Qiagen, Gaithersburg, MD, USA). Amplifikované DNA vzorky sa podrobili digesciiAfter thermal cycling reactions were completed, each amplified DNA sample was washed and purified using a Qiaquick Spin PCR purification kit (Qiagen, Gaithersburg, MD, USA). The amplified DNA samples were digested

-10s reštrikčnými endonukleázami Nde\ a EcoRI s použitím štandardných postupov. Vzorky DNA sa potom podrobili elektroforéze na 1,0 % NuSeive (FMC BioProducts, Rockland, ME, USA) agarózovom géle. DNA sa vizualizovala expozíciou etídiumbromidu a ožiareniu UV dlhými vlnami. DNA obsiahnutá v podieloch izolovaných zagarózového gélu sa prečistila s použitím Bio 101 GeneClean Kit protokolu (Bio 101 Vista, CA, USA).-10 with Nde I and Eco RI restriction endonucleases using standard procedures. DNA samples were then subjected to agarose gel electrophoresis on a 1.0% NuSeive (FMC BioProducts, Rockland, ME, USA). DNA was visualized by exposure to ethidium bromide and UV long wave irradiation. DNA contained in aliquots of isolated zagarose gel was purified using the Bio 101 GeneClean Kit protocol (Bio 101 Vista, CA, USA).

Klonovanie DNA sekvencií H. pylori do pET-28b prokaryotického expresívneho vektora pET-28b vektor sa pripravil na klonovanie digesciou s Λ/col a EcoRI podľa štandardných postupov. Po digescii sa DNA inzerty klonovali podľa štandardných postupov do pôvodne digerovaného pET-28b expresívneho vektora. Produkty ligačnej reakcie sa potom použili na transformovanie BL21 kmeňa E. coli, ako je opísané ďalej.Cloning of H. pylori DNA sequences into pET-28b prokaryotic expression vector pET-28b vector was prepared for cloning by digestion with s / col and EcoRI according to standard procedures. After digestion, the DNA inserts were cloned according to standard procedures into the originally digested pET-28b expression vector. The ligation reaction products were then used to transform the BL21 strain of E. coli as described below.

Transformácia vhodnej baktérie s rekombinantnými plazmidmiTransformation of a suitable bacterium with recombinant plasmids

Vhodné baktérie E. coli kmeňa BL21 alebo E. coli kmeňa BL21(DE3) sa transformovali s rekombinantnými pET expresívnymi plazmidmi, ktoré nesú klonované sekvencie H. pylori podľa štandardných postupov. Stručne 1 μΙ ligačnej reakčnej zmesi sa zmiešalo s 50 μΙ elektrokompetentných buniek a podrobilo sa impulzu s vysokým napätím, po ktorom sa vzorky inkubovali v 0,45 ml SOC média (0,5 % extrakt kvasiniek, 2,0 % tryptónu, 10 mM NaCI, 2,5 mM KCI, 10 mM MgCI2, 10 mM MgSO4 a 20 mM glukózy) pri teplote +37 °C za trepania počas jednej hodiny. Vzorky sa potom naniesli na LB agarové platne obsahujúce 25 μg/ml kanamynsulfátu na a nechali sa rásť cez noc. Transformované kolónie BL21 sa potom zozbierali a analyzovali sa na vyhodnotenie kolovaných inzertov opísaných nižšie.Appropriate E. coli strain BL21 or E. coli strain BL21 (DE3) was transformed with recombinant pET expression plasmids carrying cloned H. pylori sequences according to standard procedures. Briefly, 1 μΙ of the ligation reaction mixture was mixed with 50 μΙ of electrocompetent cells and subjected to a high voltage pulse, after which the samples were incubated in 0.45 ml SOC medium (0.5% yeast extract, 2.0% tryptone, 10 mM NaCl). , 2.5 mM KCl, 10 mM MgCl 2 , 10 mM MgSO 4, and 20 mM glucose) at + 37 ° C with shaking for one hour. Samples were then plated on LB agar plates containing 25 µg / ml kanamynsulfate on and allowed to grow overnight. Transformed BL21 colonies were then harvested and analyzed for evaluation of the rounded inserts described below.

Identifikácia rekombinantných pET expresívnych plazmidov nesúcich sekvencie H. pyloriIdentification of recombinant pET expression plasmids carrying H. pylori sequences

Jednotlivé BL21 klony transformované s rekombinantnými pET-28b génmi H. pylori sa analyzovali pomocou PCR amplifikácie klonovaných inzertov s použitím pôvodných a reverzných primérov, špecificky pre každú sekvenciu H. pylori , ktoréIndividual BL21 clones transformed with recombinant H. pylori pET-28b genes were analyzed by PCR amplification of the cloned inserts using the original and reverse primers, specifically for each H. pylori sequence that

-11sa použili v pôvodných PCR amplifikačných klonovacích reakciách. Následná amplifikácia verifikovala integráciu sekvencií H. pylón v expresívnom vektore podľa štandardných postupov.Were used in the original PCR amplification cloning reactions. Subsequent amplification verified the integration of H. pylon sequences in the expression vector according to standard procedures.

Izolácia a príprava plazmidu DNA z BL21 transformantovIsolation and preparation of plasmid DNA from BL21 transformants

Jednotlivé klony rekombinantných pET-28b vektorov, ktoré nesú vhodne klonované ORF H. pylorí sa zozbierali a inkubovali sa cez noc v 5 ml LB bujónu plus 25 pg/ml kanamycínsulfátu. Nasledujúci deň sa plazmid DNA izoloval a prečistil s použitím Qiagen plazmidového čistiaceho protokolu (Qiagen Inc., Chatsworth, CA, USA).Individual clones of recombinant pET-28b vectors carrying appropriately cloned H. pylori ORFs were harvested and incubated overnight in 5 ml LB broth plus 25 µg / ml kanamycin sulfate. The following day, plasmid DNA was isolated and purified using a Qiagen plasmid purification protocol (Qiagen Inc., Chatsworth, CA, USA).

Expresia rekombinantnej sekvencie H. pylón v E. coliExpression of the recombinant H. pylon sequence in E. coli

Vektor pET sa môže množiť v ktoromkoľvek K-12 kmeni E. coli, napríklad HMS174, HB101, JM109, DH5a, a podobne, pre účely klonovania alebo prípravy plazmidu. Hostitelia pre expresiu zahrňujú kmene E. coli obsahujúce chromozomálnu kópiu génu pre T7 RNA polymerázu. Týmito hostiteľmi sú lyzogény bakteriofágu DE3, lambda derivát, ktorý nesie lacl gén, lacUV5 promótor a gén pre T7 RNA polymerázu. T7 RNA polymeráza sa vyvolá pridaním izopropyl-p-Dtiogalaktozidu (IPTG) a T7 RNA polymeráza transkribuje akýkoľvek cieľový plazmid, ako je pET-28b, nesúci svoj významný gén. Kmene použité v našom laboratóriu zahrňujú: BL21(DE3), (Studier, F. W., Rosenberg, A.H., Dunn, J. J. a Dubendorff, J. W. (1990), Methods Enzymol. 185, 60 -89).The pET vector can be propagated in any K-12 strain of E. coli, for example HMS174, HB101, JM109, DH5α, and the like, for cloning or plasmid preparation purposes. Expression hosts include E. coli strains containing a chromosomal copy of the T7 RNA polymerase gene. These hosts are the bacteriophage DE3 lysogens, a lambda derivative that carries the lacI gene, the lacUV5 promoter, and the T7 RNA polymerase gene. T7 RNA polymerase is induced by the addition of isopropyl-β-Dtiogalactoside (IPTG) and T7 RNA polymerase transcribes any target plasmid, such as pET-28b, carrying its significant gene. Strains used in our laboratory include: BL21 (DE3), (Studier, F.W., Rosenberg, A.H., Dunn, J.J., and Dubendorff, J.W. (1990), Methods Enzymol. 185, 60-89).

Na expresiu rekombinantných sekvencií H. pylorí sa použilo 50 ng plazmidu DNA, izolovaného ako je opísané vyššie, na transformovanie príslušnej BL21(DE3) baktérie, ako je opísané vyššie (ktorú poskytol Novagen ako súčasť kitu pET expresívneho systému). Transformované bunky sa kultivovali v SOC médiu počas jednej hodiny a kultúry sa potom naniesli na LB platne obsahujúce 25 pg/ml kanamycínsulfátu. Nasledujúci deň sa bakteriálne kolónie spojili a nechali sa rásť v LB médiu obsahujúcom kanamycínsulfát (25 pg/ml) do optickej hustoty pri 600 nm 0,5 až 1,0 O.D. jednotiek, pričom v tomto bode sa ku kultúre pridal počas 3 hodín 1mM IPTG na vyvolanie expresie H. pylorí rekombinantných DNA konštrukcií.For the expression of recombinant H. pylori sequences, 50 ng of plasmid DNA, isolated as described above, was used to transform the respective BL21 (DE3) bacterium as described above (provided by Novagen as part of the pET expression system kit). The transformed cells were cultured in SOC medium for one hour and the cultures were then plated on LB plates containing 25 µg / ml kanamycin sulfate. The following day, the bacterial colonies were pooled and grown in LB medium containing kanamycin sulfate (25 µg / ml) to an optical density at 600 nm of 0.5 to 1.0 O.D. units, at which point 1 mM IPTG was added to the culture for 3 hours to induce the expression of H. pylori recombinant DNA constructs.

-12Po vyvolaní expresie génu sIPTG sa baktérie granulovali centrifúgovaním v Sorval RC-3B centrifúge pri 3500 x g počas 15 minút pri teplote 4 “C. Granule sa resuspendovali v 50 ml chladného 10 mM Tris-HCI, pH 8,0, 0,1 M NaCI a 0,1 mM EDTA (STE pufer). Bunky sa potom centrifúgovali pri 2000 x g počas 20 minút pri teplote +4 °C. Vlhké granule sa odvážili a zmrazili pri teplote -80 °C, až kým boli pripravené na prečistenie proteínu.After inducing expression of the sIPTG gene, the bacteria were granulated by centrifugation in a Sorval RC-3B centrifuge at 3500 x g for 15 minutes at 4 ° C. The granules were resuspended in 50 ml cold 10 mM Tris-HCl, pH 8.0, 0.1 M NaCl and 0.1 mM EDTA (STE buffer). The cells were then centrifuged at 2000 x g for 20 minutes at + 4 ° C. The wet granules were weighed and frozen at -80 ° C until ready for protein purification.

Analytické metódyAnalytical methods

Koncentrácie prečistených proteínových prípravkov sa kvantifikovali spektrofotometricky s použitím koeficientov absorbancie vypočítaných z obsahu aminokyseliny (Perkins, S. J., 1986 Eur. J. Biochem, 157,169 - 180). Koncentrácie proteínu sa tiež merali pomocou metódy, ktorú opísal Bradford, M. M. (1976) Anál. Biochem. 72, 248 - 254 a Lowry, O. H., Rosebrough, N., Farr, A. L. & Randall, R. J. (1951), s použitím albumínu hovädzieho séra ako štandardu.Concentrations of purified protein preparations were quantified spectrophotometrically using absorbance coefficients calculated from the amino acid content (Perkins, S.J., 1986 Eur. J. Biochem, 157, 169-180). Protein concentrations were also measured using the method described by Bradford, M. M. (1976) Anal. Biochem. 72, 248-254 and Lowry, O.H., Rosebrough, N., Farr, A.L. & Randall, R.J. (1951), using bovine serum albumin as a standard.

Gély dodecylsulfát sodný-polyakrylamid (SDS-PAGE) (gradient akrylamidu 12 % alebo 4 až 25 %) sa získali od BioRad (Hercules, CA, USA) a zafarbili sa s použitím Coomasie Brilliant Blue. Markéry molekulovej hmotnosti obsahujúce skeletálny svalový myozín králika (200 kDa), E. coli β-galaktozidázu (116 kDa), svalovú fosforylázu B králika (97,4 kDa), albumín hovädzieho séra (66,2 kDa), ovalbumín (45 kDa), hovädziu uhličitú anhydrázu (31 kDa), inhibítor trypsínu sóje (21,5 kDa), lyzozým vaječného bielka (14,4 kDa) a hovädzí aprotinín (6,5 kDa).Sodium dodecylsulfate-polyacrylamide (SDS-PAGE) gels (acrylamide gradient of 12% or 4 to 25%) were obtained from BioRad (Hercules, CA, USA) and stained using Coomasie Brilliant Blue. Molecular weight markers containing rabbit skeletal muscle myosin (200 kDa), E. coli β-galactosidase (116 kDa), rabbit muscle phosphorylase B (97.4 kDa), bovine serum albumin (66.2 kDa), ovalbumin (45 kDa) , bovine carbon anhydrase (31 kDa), soybean trypsin inhibitor (21.5 kDa), egg white lysozyme (14.4 kDa) and bovine aprotinin (6.5 kDa).

Prečistenie FlgE z implikovaných teliesokPurification of FlgE from implied bodies

Nasledujúce kroky sa uskutočnili pri teplote +4 °C. Granule buniek sa resuspendovali v lýznom pufre s 10 % glycerolu, 200 pg/ml lyzozómu, 5 mM EDTA, mM PMSF a 0,1 % β-merkaptoetanolu. Po pasáži cez rozrušovač buniek sa výsledný homogenizát spracoval s 0,2 % DOC, miešal sa počas 10 minút, potom sa centrifúgoval (10,000 x g 30 min). Granule sa najskôr premyli s lýznym pufrom obsahujúcim 10 % glycerolu, 10 mM EDTA, 1 % Triton X-100,1 mM PMSF a 0,1 % β-merkaptoetanolu, potom s lýznym pufrom obsahujúcim 1 M močoviny, 1 mM PMSF a 0,1 % β-merkaptoetanolu. Výsledné biele granule primárne pozostávaliThe following steps were performed at +4 ° C. The cell granules were resuspended in lysis buffer with 10% glycerol, 200 µg / ml lysosome, 5 mM EDTA, mM PMSF and 0.1% β-mercaptoethanol. After passage through the cell disrupter, the resulting homogenate was treated with 0.2% DOC, stirred for 10 minutes, then centrifuged (10,000 x g for 30 minutes). The granules were first washed with lysis buffer containing 10% glycerol, 10 mM EDTA, 1% Triton X-100.1 mM PMSF and 0.1% β-mercaptoethanol, then with lysis buffer containing 1 M urea, 1 mM PMSF and 0, 1% β-mercaptoethanol. The resulting white granules consisted primarily

-13z implikovaných teliesok, ktoré neobsahovali rozrušené bunky a membranózne materiály.-13 from implied bodies that did not contain disrupted cells and membranous materials.

Nasledujúce kroky sa uskutočnili pri laboratórnej teplote, implikované telieska sa rozpustili v 20 ml 8 M močoviny v lýznom roztoku s 1 mM PMSF a 0,1 % βmerkaptoetanolu a inkubovali sa pri laboratórnej teplote počas jednej hodiny. Látky, ktoré sa nerozpustili sa odstránili centrifúgovaním (100,00 x g počas 30 min). Číry supernatant sa odfiltroval a naniesol na Ni2+-NTA agarózovú kolónu, ktorá sa ekvilibrovala s 8 M močoviny v lýznom pufre. Kolóna sa premyla s 250 ml (50 vrstvových objemov) lýzneho pufra obsahujúceho 8 M močoviny, 1 mM PMSF a 0,1 % β-merkaptoetanolu a vyvíjala sa s postupnými krokmi lýzneho roztoku obsahujúceho 8 mM močoviny, 1 mM PMSF, 0,1 % β-merkaptoetanolu a 20, 100, 200 a 500 mM imidazolu. Frakcie sa monitorovali pomocou absorbancie pri OD280 nm a piky frakcií sa analyzovali s SDS-PAGE. Dva pásy sa vizualizovali vyfarbením s použitím Coomassie Brilliant Blue, hlavný pás Mr=78 kDa a minoritný pás Mr=60 kDa. Čistota rekombinantnej FlgE (78 kDa) sa vyhodnotila vyššia ako 90 %. Tak ako pri prečistení rozpustných proteínov, frakcie obsahujúce rekombinantný proteín sa eluovali pri 100 mM midazolu.The following steps were performed at room temperature, the implied bodies were dissolved in 20 ml of 8 M urea in lysis solution with 1 mM PMSF and 0.1% β-mercaptoethanol and incubated at room temperature for one hour. Substances that did not dissolve were removed by centrifugation (100.00 xg for 30 min). The clear supernatant was filtered off and loaded onto a Ni 2+ -NTA agarose column which was equilibrated with 8 M urea in lysis buffer. The column was washed with 250 ml (50 bed volumes) lysis buffer containing 8 M urea, 1 mM PMSF and 0.1% β-mercaptoethanol and developed with stepwise lysis solution containing 8 mM urea, 1 mM PMSF, 0.1% β-mercaptoethanol and 20, 100, 200 and 500 mM imidazole. Fractions were monitored by absorbance at OD 280 nm and fractions peaks were analyzed by SDS-PAGE. Two bands were visualized by staining using Coomassie Brilliant Blue, the main band Mr = 78 kDa and the minor band Mr = 60 kDa. The purity of recombinant FlgE (78 kDa) was evaluated to be greater than 90%. As with the purification of soluble proteins, the fractions containing the recombinant protein were eluted at 100 mM midazole.

Močovina sa pomaly odstránila z FlgE polypeptidu dialýzou oproti TBS obsahujúcom 0,5 % DOC s nasledovným postupným znížením močoviny: 6 M, 4 M, 3 M, 2 M, 1 M, 0,5 M a potom 0 M. Každý krok dialýzy sa uskutočňoval počas najmenej 4 hodín pri laboratórnej teplote.Urea was slowly removed from FlgE polypeptide by dialysis versus TBS containing 0.5% DOC with the following gradual decrease in urea: 6 M, 4 M, 3 M, 2 M, 1 M, 0.5 M and then 0 M. Each dialysis step was performed for at least 4 hours at room temperature.

Po dialýze sa vzorky zahustili tlakovou filtráciou s použitím Amicon miešaných buniek. Koncentrácie proteínu sa potom stanovili pomocou postupov Perkinsa, Bradforda a Lowryho.After dialysis, samples were concentrated by pressure filtration using Amicon stirred cells. Protein concentrations were then determined using Perkins, Bradford and Lowry procedures.

Príklady uskutočnenia vynálezuDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

Príklad 1Example 1

Terapeutická imunizáciaTherapeutic immunization

1. Materiál a metódy1. Material and methods

- ΜΙ. 1. Zvieratá- ΜΙ. 1. Animals

Samice SPF BALB/c myší sa získali od Bomholt Breeding centre (Dánsko).Female SPF BALB / c mice were obtained from the Bomholt Breeding Center (Denmark).

Udržiavali sa v bežných makrokolónových klietkach s voľným podávaním vody a potravy. Pri dodaní boli zvieratá vo veku 4 až 6 týždňov.They were kept in conventional macrocolumn cages with free water and food. At delivery, the animals were 4-6 weeks of age.

1.2. Infikovanie1.2. infection

Po minimálne jednom týždni aklimatizácie sa zvieratá nainfikovali s typom 2 kmeňa H. pylori (kmeň 244, pôvodne izolovaný od ulceratívneho pacienta). Tento kmeň sa už predtým preukázal ako dobrý kolonizátor v žalúdku myší. Baktérie z kmeňa udržiavané pri teplote -70 °C sa nechali rásť cez noc v Brucela bujóne doplnenom s 10 % fetálneho teľacieho séra, pri teplote +37 °C v mikroaerofilnej atmosfére (10 % CO2, 5 % O2). Zvieratám sa podala orálna dávka omeprazolu (400 pmol/kg) a po 3 až 5 hodinách orálna inokulácia H. pylori (približne 10'7 až 10 8 CFU/zviera). Infekcia sa skúmala na kontrolných zvieratách 2 až 3 týždne po inokulácii.After at least one week of acclimatization, the animals were infected with type 2 strain H. pylori (strain 244, originally isolated from an ulcerative patient). This strain has previously been shown to be a good colonizer in the stomach of mice. Bacteria from the strain maintained at -70 ° C were grown overnight in Brucel broth supplemented with 10% fetal calf serum, at + 37 ° C in a microaerophilic atmosphere (10% CO 2, 5% O 2). The animals were given an oral dose of omeprazole (400 pmol / kg) and after 3-5 hours an oral inoculation of H. pylori (approximately 10 7 to 10 8 CFU / animal). Infection was examined in control animals 2 to 3 weeks after inoculation.

1.3. Imúnizácia1.3 Immunizations

Jeden mesiac po infekcii sa dve skupiny myší (10 myší/skupina) imunizovali štyrikrát v priebehu 34-dňového obdobia (deň 1, 15, 25 a 35). Prečistený rekombinantný FlgE rozpustený v PBS plus 0,5 % deoxycholátu (DOC) sa podával v dávke 100 mikrogramov/myš.One month after infection, two groups of mice (10 mice / group) were immunized four times over a 34-day period (days 1, 15, 25 and 35). Purified recombinant FlgE dissolved in PBS plus 0.5% deoxycholate (DOC) was administered at a dose of 100 micrograms / mouse.

Ako pomocná látka sa zvieratám v oboch kontrolných skupinách ako aj FlgE skupine podávalo 10 pg/myš toxínu cholery (CT) s každou imunizáciou. Omeprazol (400 μηιοΙ/kg) sa podával orálne všetkým zvieratám 3 až 5 hodín pred imunizáciou ako spôsob ochrany antigénov pred kyslou degradáciou. Zvieratá sa utratili 1 až 2 týždne po poslednej imunízácii.As an adjuvant, animals in both control groups and FlgE group were given 10 µg / mouse cholera toxin (CT) with each immunization. Omeprazole (400 μηιοΙ / kg) was administered orally to all animals 3 to 5 hours prior to immunization as a way to protect antigens from acid degradation. Animals were sacrificed 1-2 weeks after the last immunization.

Skupina 1: 300 μΙ PBS s 0,5 % DOC obsahujúceho 10 gg CTGroup 1: 300 μΙ PBS with 0.5% DOC containing 10 gg CT

Skupina 2: 300 μΙ PBS s 0,5 % DOC obsahujúceho 100 μg FlgE a 10 μg CT.Group 2: 300 μΙ PBS with 0.5% DOC containing 100 μg FlgE and 10 μg CT.

1.4. Analýza infekcie1.4. Analysis of infection

-15Myši sa utratili pomocou CO2 a zlomenia šije. Brucho a hrudná dutina sa otvorili a krv sa odobrala punkciou zo srdca. Následne sa žalúdok odstránil. Po rozrezaní žalúdka pozdĺž najväčšieho zakrivenia, sa žalúdok premyl fyziologickým roztokom a potom sa rozrezal na dve rovnaké časti. Oblasť 25 mm2 sliznice zantrumu a z korpusu sa zoškrabali oddelene s použitím chirurgického skalpela. Zoškrabaná sliznica sa suspendovala vBrucela bujóne, zriedila sa a naniesla na Blood Skirrowove platničky. Platničky sa inkubovali pri mikroaerofilných podmienkach počas 3 až 5 dní a počítal sa počet kolónií. Identita H. pylón sa vyhodnotila pomocou močoviny a testu s katalázou a priamou mikroskopiou alebo Gram vyfarbením.-15Mice were sacrificed using CO 2 and neck breakage. The abdomen and thoracic cavity were opened and blood was collected by puncture from the heart. Subsequently, the stomach was removed. After cutting the stomach along the greatest curvature, the stomach was washed with saline and then cut into two equal parts. The 25 mm 2 area of the mucosa of the zantrum and the corpus were scraped separately using a surgical scalpel. The scraped mucosa was suspended in Brucel broth, diluted and plated on Blood Skirrow plates. The plates were incubated under microaerophilic conditions for 3-5 days and the number of colonies counted. The identity of H. pylon was evaluated by urea and a catalase and direct microscopy or Gram stain assay.

1.5. Meranie protilátok1.5. Measurement of antibodies

Protilátky v sére sa odobrali z krvi. Pred centifúgovaním sa krv zriedila rovnakým množstvom PBS. Sérum sa udržiavalo pri teplote -20 °C až do analýzy. Protilátky v sére sa merali s použitím ELISA, pričom platničky boli potiahnuté buď rozdrobenými frakciami kmeňa 244 H. pylón alebo s FlgE a následne sa pridali rozličné zriedenia séra. ELISA sa vyvíjala s alkalickou fosfatázou značenými myšími anti-lg-protilátkami. Anti-lg protilátky boli typu reťazca anti-ťažký/anti-ľahký, ktorý by mal detegovať všetky typy protilátok.Serum antibodies were collected from blood. Prior to centrifugation, blood was diluted with an equal amount of PBS. The serum was maintained at -20 ° C until analysis. Serum antibodies were measured using ELISA, wherein the plates were coated with either fragmented H. pylon strain or FlgE, and various serum dilutions were then added. ELISA was developed with alkaline phosphatase labeled mouse anti-Ig antibodies. Anti-Ig antibodies were of the anti-heavy / anti-light chain type, which should detect all types of antibodies.

2. Výsledky2. Results

2.1. Terapeutická imunizácia: vplyv na CFU2.1. Therapeutic immunization: effect on CFU

Zvieratá v tejto štúdii boli infikované kmeňom 244 H. pylori jeden mesiac pred imunizáciou. Myši v skupinách po desať sa potom imunizovali buď s toxínom cholery (CT) alebo CT spolu s rekombinantným FlgE polypeptídom. Štyri týždne po poslednej imunizácii sa zvieratá utratili a stanovila sa CFU (Obrázok 1). Zvieratá ošetrené so samotným CT boli vysoko infikované, ako v korpuse tak i v antrume. Zvieratá aktívne imunizované s rekombinantným FlgE polypeptidom a CT vykazovali signifikantné zníženie CFU hodnôt v antrume a v žalúdku, v porovnaní so zvieratami imunizovanými s CT (p<0,01 a p<0,05; Wilcoxon-Mann-Whittneyov klasifikačný test znakov).Animals in this study were infected with strain H. H. pylori one month before immunization. Mice in groups of ten were then immunized with either cholera toxin (CT) or CT together with the recombinant FlgE polypeptide. Four weeks after the last immunization, animals were sacrificed and CFU was determined (Figure 1). Animals treated with CT alone were highly infected in both the corpus and the antrum. The animals actively immunized with the recombinant FlgE polypeptide and CT showed a significant decrease in CFU values in the antrum and stomach compared to animals immunized with CT (p <0.01 and p <0.05; Wilcoxon-Mann-Whittney character classification test).

2.2. Terapeutická imunizácia: vplyv na tvorbu protilátok a sekréciu2.2 Therapeutic immunization: effect on antibody production and secretion

-16Ako príznak infekcie H. pylorí sa môžu v sére nájsť špecifické protilátky (kontrola/244). U zvierat, ktoré dostávali FlgE + CT sa titer voči kmeňu 244 (ako membránové proteíny) zvýšil štvornásobne (p<0.01). Len u zvierat, ktoré dostávaliAs a symptom of H. pylori infection, specific antibodies can be found in the serum (control / 244). In animals receiving FlgE + CT, titer to strain 244 (as membrane proteins) increased fourfold (p <0.01). Only in the animals they received

FlgE + CT sa dal namerať špecifický IgG titer voči FlgE (Obrázok 2).FlgE + CT could be measured for specific IgG titer to FlgE (Figure 2).

FlgE špecifická IgG sa zvýšila u zvierat, ktoré dostávali FlgE + CT, avšak nedala sa detegovať pri kontrolných zvieratách.FlgE specific IgG was increased in animals receiving FlgE + CT but could not be detected in control animals.

Uvedené výsledky ukazujú, že rekombinantný FlgE polypeptid H. pylón je vysoko imunogénny, ak sa podáva orálne, spolu s toxínom cholery ako pomocnou látkou, merané ako zvýšenie systémových FlgE špecifických Ig protilátok. Imunizácia s FlgE mala tiež za následok signifikantné zvýšenie ig titrov voči rozdrobenej frakcii H. pylón. Okrem toho sa zistilo dramatické zníženie počtu H. pylorí kolonizujúcich sliznicu žalúdka infikovaných myší po imunizácii s FlgE spolu s toxínom cholery.The results show that the recombinant H. pylon FlgE polypeptide is highly immunogenic when administered orally, together with cholera toxin as an adjuvant, measured as an increase in systemic FlgE specific Ig antibodies. Immunization with FlgE also resulted in a significant increase in ig titers relative to the fragmented H. pylon fraction. In addition, a dramatic decrease in the number of H. pylori colonizing the mucosa of the stomach of infected mice was found after immunization with FlgE together with cholera toxin.

-17Zoznam sekvencií (1) Všeobecné informácie (i) Prihlasovateľ (A) Meno: Astra AB (B) Ulica: Västra Mälarehamnen 9 (C) Mesto: Sôdertälje (E) Štát: Švédsko (F) Kód pošty (ZIP): S-151 85 (G) Telefón: +46 8 553 260 00 (H) Telefax: +46 8 553 288 20 (i) Názov vynálezu: Kompozície očkovacej látky obsahujúce FlgE polypeptid Helicobacter pylori (ii) Počet sekvencií: 4 (iii) Počítačom čitateľná forma:-17 Sequence Listing (1) General (i) Applicant (A) Name: Astra AB (B) Street: Västra Mälarehamnen 9 (C) City: Södertälje (E) Country: Sweden (F) Post Code (ZIP): S- 151 85 (G) Telephone: +46 8 553 260 00 (H) Fax: +46 8 553 288 20 (i) Title of the invention: Vaccine compositions containing the Helicobacter pylori FlgE polypeptide (ii) Number of sequences: 4 (iii) Computer readable form:

(A) Typ média: Floppy disk (B) Počítač: IBM PC kompatibilný (C) Operačný systém: PC-DOS/MS-DOS (D) Software: Patentln Reease #1.0, verzia #1,30 (EPO) (2) Informácie pre SEQ ID NO: 1:(A) Media Type: Floppy Disk (B) Computer: IBM PC Compatible (C) Operating System: PC-DOS / MS-DOS (D) Software: Patentln Reease # 1.0, Version # 1.30 (EPO) (2) Information for SEQ ID NO: 1:

(i) Charakteristiky sekvencie:(i) Sequence characteristics:

(A) Dĺžka: 2550 základných párov (B) Typ: nukleová kyselina (C) Reťazec: dvojitý (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: cDNA (vi) Pôvodný zdroj:(A) Length: 2550 base pairs (B) Type: nucleic acid (C) String: double (D) Topology: linear (ii) Molecule type: cDNA (vi) Original source:

(A) Organizmus: Helicobacter pylori (ix) Charakteristika:(A) Organism: Helicobacter pylori (ix) Characteristics:

(A) Názov/kľúč: CDS (B) Lokalizácia: 321..2477 (D) Ďalšie informácie: /produkt = “FlgE Flagelámy hook proteín (x) Publikačné informácie:(A) Name / Key: CDS (B) Localization: 321..2477 (D) Other Information: / Product = “FlgE Flagellam Hook Protein (x) Editorial Information:

-18(A) Autori: O'Toole, Paul W., Kostrzynska, Magdaléna, Trust, Trevor J.-18 (A) Authors: O'Toole, Paul W., Kostrzynska, Magdalena, Trust, Trevor J.

(B) Názov: Non-motile mutants of Helicobacter pylón and Helicobacter mustelae defective in flagellar hook production (C) Časopis: Mol. Microbiology (D) Ročník: 14 (E) Číslo: 4 (F) Strany: 691 - 703 (G) Dátum: 1994 (xi) Popis sekvencie: SEQ ID NO:1:(B) Title: Non-motile mutants of Helicobacter pylon and Helicobacter mustelae defective in flagellar hook production (C) Magazine: Mol. Microbiology (D) Volume: 14 (E) Number: 4 (F) Pages: 691 - 703 (G) Date: 1994 (xi) Description of Sequence: SEQ ID NO: 1:

AACAAAGCGA TAACTCCTTT GTCTTATTAG CGACACAATT TAACCCATTG ACTTTAAATC GCGCTTCAGC cgaagagatt caagatcatg aatgcgcgat tttgcactaa AGCGAGTTÄG attcttaäat ttgagcgata acctttaaaa AGCGTAATTA AGGGGTGGTG ttacaaaaccAACAAAGCGA TAACTCCTTT GTCTTATTAG CGACACAATT TAACCCATTG ACTTTAAATC GCGCTTCAGC cgaagagatt caagatcatg aatgcgcgat tttgcactaa AGCGAGTTÄG attcttaäat ttgagcgata

19CCCTATCCCC TTATGAATTT19CCCTATCCCC TTATGAATTT

CÄATCATTCT AAAAAGCTATCÄATCATTCT AAAAAGCTAT

CTTTAAATTA AAGGATAACCCTTTAAATTA AAGGATAACC

GACCGATCTT TTTGATTAAC AAAACTTTAA AATCCGCAATGACCGATCTT TTTGATTAAC AAAACTTTAA AATCCGCAAT

TTAGGAACAA CTTTTGCTTT ATTTTGCATA GATTGAATTTTTAGGAACAA CTTTTGCTTT ATTTTGCATA GATTGAATTT

ATG CTT AGG TCT TTA TGG TCT GGT GTC AAT Met Leu Arg Ser Leu Tro Ser Gly Val AsnATG CTT AGG TCT TTA TGG TCT GGT GTC AAT Met Leu Arg Ser Leu Tro Ser Gly Val Asn

1010

GGG GGG ATG ATG CAA CAA GCC GCC CAC CAC CAA CAA ATC ATC GCT GCT TTG TTG GAT GAT ATT ATT GAG GAG AGT AGT AAC AAC AAT AAT ATT ATT Gly Gly Met Met Gin gin Ala Ala His 15 His 15 Gin gin íle Ile Ala Ala Leu Leu Aso 20 Aso 20 íle Ile Glu Glu Ser Ser Asn same time Asn 25 same time 25 íle Ile GCG GCG AAC AAC GTG GTG AAT AAT ACC ACC ACT ACT GGT GGT TTT TTT AAG AAG TAT TAT TCT TCT AGG AGG GCT GCT TCT TCT TTT TTT GTG GTG Ala Ala Asn same time Val wall Asn 30 same time 30 Thr Thr Thr Thr Gly Gly Phe Phe Lys 35 Lys 35 Tyr Tyr Ser Ser Arg Arg Ala Ala Ser 40 Ser 40 Phe Phe Val wall GAT GAT ATG ATG CTT CTT TCT TCT CAA CAA GTC GTC AAA AAA CTC CTC ATC ATC GCT GCT ACC ACC GCA GCA CCC CCC TAT TAT AAA AAA AAC AAC Asp Asp Met Met Leu 45 Leu 45 Ser Ser Gin gin Val wall Lys Lys Leu 50 Leu 50 íle Ile Ala Ala Thr !· Thr ! · Ala Ala Pro 55 for 55 Tyr Tyr Lys Lys Asn same time GGG GGG TTA TTA GCA GCA GGG GGG CAG CAG AAT AAT GAT GAT TTT TTT TCT TCT GTG GTG GGG GGG CTT CTT GGG GGG GTA GTA GC-C GC-C GTG GTG Gly Gly Leu 60 Leu 60 Ala Ala Gly Gly Gin gin Asn same time Aso 65 Aso 65 Phe Phe Ser Ser Val wall Gly Gly Leu 70 Leu 70 Gly Gly Val wall Gly Gly Val wall GAT GAT GCG GCG ACG ACG ACT ACT AAA AAA ATC ATC TTT TTT TCA TCA CAA CAA GGC GGC AAT AAT ATC ATC CAA CAA AAC AAC ACA ACA GAT GAT Aso 75 Aso 75 Ala Ala Thr Thr Thr Thr Lys Lys íle 30 Ile 30 Phe Phe Ser Ser Gin gin Gly Gly Asn 85 same time 85 íle Ile Gin gin Asn same time Thr Thr Aso 90 Aso 90 GTC GTC AAA AAA ACC ACC GAT GAT CTA CTA GCG GCG ATT ATT CAA CAA GGC GGC GAT GAT GGC GGC TTT TTT TTT TTT ATC ATC ATT ATT AAC AAC Val wall Lys Lys Thr Thr Asp Asp Leu 95 Leu 95 Ala Ala íle Ile Gin gin Gly Aso 10Ô Gly Aso 10Ô Gly Gly Phe Phe Phe Phe íle Ile íle 105 Ile 105 Asn same time CCT CCT GAT GAT AGG AGG GGG GGG ATC ATC ACG ACG CGC CGC AAT AAT TTC TTC ACT ACT AGA AGA GAT GAT GGG GGG GAG GAG TTC TTC CTT CTT Pro for Asp Asp Arg Gly 110 Arg Gly íle Ile Thr Thr Arg Arg Asn same time Phe 115 Phe 115 Thr Thr Arg Arg Asp Asp Gly Gly Glu 120 Glu 120 Phe Phe Leu Leu fflipip fflipip GAC GAC TCG TCG CAA CAA GGG GGG AGT AGT TTG TTG GTT GTT ACC ACC ACC ACC GGC GGC GGG GGG CTT CTT GTG GTG GTG GTG CAA CAA Phe Phe Asp Asp Ser 125 Ser 125 Gin gin Gly Gly Ser Ser Leu Leu Val 130 wall 130 Thr Thr Thr Thr Gly Gly Gly Gly Leu 135 Leu 135 Val wall Val wall Gin gin GGG GGG TGG TGG GTG GTG AGA AGA AAT AAT GGG GGG AGC AGC GAT GAT ACC ACC GGC GGC AAT AAT AAA AAA GGG GGG AGC AGC GAT GAT ACA ACA Gly Gly Trp 140 Trp 140 Val wall Arg Arg Asn same time Gly Gly Ser 145 Ser 145 Asp Asp Thr Thr Gly Gly Asn same time Lys 150 Lys 150 Gly Gly Ser Ser Asp Asp Thr Thr GAC GAC GCT GCT TTA TTA AAA AAA GTG GTG GAT GAT AAC AAC ACC ACC GGT GGT CCT CCT TTA TTA GAA GAA AAC AAC ATT ATT AGG AGG ATT ATT Asp 155 Asp 155 Ala Ala Leu Leu Lys Lys Val wall Asp 160 Asp 160 Asn same time Thr Thr Gly Gly Pro for Leu 165 Leu 165 Glu Glu Asn same time íle Ile Arg Arg íle 170 Ile 170 GAT GAT CCT CCT GGA GGA ATG ATG GTG GTG ATG ATG CCA CCA GCC GCC AGA AGA GCG GCG AGT AGT AAC AAC CGC CGC ATT ATT TCT TCT ATG ATG Asp Asp Pro for Gly Gly Met Met Val 175 wall 175 Met Met Pro for Ala Ala Arg Arg Ala 180 Ala 180 Ser Ser Asn same time Arg Arg íle Ile Ser 185 Ser 185 Met Met AGG AGG GCG GCG AAT AAT TTA TTA AAC AAC GCT GCT GGA GGA AGG AGG CAT CAT GCC GCC GAT GAT CAA CAA ACA ACA GCG GCG GCG GCG ATA ATA Arg Arg Ala Ala Asn same time Leu 190 Leu 190 Asn same time Ala Ala Gly Gly Arg Arg His 195 His 195 Ala Ala Asp Asp Gin gin Thr Thr Ala 200 Ala 200 Ala Ala íle Ile TTC TTC GCT GCT TTG TTG GAT GAT TCT TCT TCA TCA GCC GCC AAA AAA ACC ACC CCT CCT TCA TCA GAT GAT GGC GGC ATT ATT AAT AAT CCG CCG Phe Phe Ala Ala Leu 205 Leu 205 Asp Asp Ser Ser Ser Ser Ala Ala Lys 210 Lys 210 Thr Thr Pro for Ser Ser Asp Asp Gly 215 Gly 215 Zle ill Asn same time Pro for GTG GTG TAT TAT GAT GAT TCA TCA GGC GGC ACG ACG AAT AAT CTT CTT GCT GCT CAA CAA GTC GTC GCC GCC GAA GAA GAC GAC ATG ATG GGA GGA Val wall Tyr Tyr Asp Asp Ser Ser Gly Gly Thr Thr Asn same time Leu Leu Ala Ala Gin gin Val wall Ala Ala Glu Glu Asp Asp Met Met Gly Gly

220 225 230 'CT TTA TAC AAT GAA GAT GGC GAC GCT CTT TTG TTG AAT GAA AAT CAA220 225 230 'CT TTA TAC AAT GAA GAT GG GAT GCT CTT TTG TTG AAT GAA AAT CAA

Ser Ser Leu Leu Tyr Tyr Asn same time Glu Glu Asp Asp Gly Gly Asp Asp Ala Ala . Leu . Leu Leu Leu Leu Leu , Asn , Asn . Glu . Glu . Asn . same time i Gin i Gin 235 235 240 240 245 245 250. 250th GGG GGG ATT ATT TGG TGG GTG GTG AGC AGC TAT TAT AAG AAG AGT AGT CCA CCA AAA AAA ATG ATG GTC GTC : AAA : AAA GAC GAC ATC ATC CTC CTC Gly Gly íle Ile Trp Trp Val wall Ser Ser Tyr Tyr Lys Lys Ser Ser Pro for Lys Lys Met Met Val wall Lys Lys Asp Asp íle Ile Leu Leu 255 255 260 260 265 265 CCT CCT TCT TCT GCA GCA GAA GAA AAC AAC AGC AGC ACG ACG CTT CTT GAA GAA TTG TTG AAT AAT GGC GGC GTT GTT AAG AAG ATT ATT TCT TCT Pro for Ser Ser Ala Ala Glu Glu Asn same time Ser Ser Thr Thr Leu Leu Glu Glu Leu Leu Asn same time Gly Gly Val wall Lys Lys íle Ile Ser Ser 270 270 275 275 280 280 TTC TTC ACA ACA AAC AAC GAT GAT TCA TCA GCG GCG GTG GTG AGC AGC CGG CGG ACT ACT TCA TCA AGC AGC TTA TTA GTG GTG GCG GCG GCT GCT Phe Phe Thr Thr Asn same time Asp Asp Ser Ser Ala Ala Val wall Ser Ser Arg Arg Thr Thr Ser Ser Ser Ser Leu Leu Val wall Ala Ala Ala Ala 285 285 290 290 295 295 AAA AAA AAT AAT GCG GCG ATC ATC AAT AAT GCA GCA .GTC .GTC .AAA .aaa AGC AGC CAA CAA ACA ACA GGC GGC ATT ATT GAA GAA GCT GCT TAT TAT Lys Lys ' Asn 'Asn Ala Ala íle Ile Asn same time Ala Ala Val wall Lys Lys Ser Ser Gin gin Thr Thr Gly Gly íle Ile Glu Glu Ala Ala Tyr Tyr 300 300 305 305 310 310 TTA TTA GAC GAC GGC GGC AAG AAG CAA CAA TTG TTG CGT CGT TTG TTG GAA GAA AAC AAC ACC ACC AAT AAT GAA GAA TTA TTA GAC GAC GGC GGC Leu Leu Asp Asp Gly Gly Lys Lys Gin gin Leu Leu Arg Arg Leu Leu Glu Glu Asn same time Thr Thr Asn same time Glu Glu Leu Leu Asp Asp Gly Gly 315 315 320 320 325 325 330 330 GAT GAT GAA GAA AAG AAG CTT CTT AAA AAA AAC AAC ATT ATT GTA GTA GTT GTT ACT ACT CAA CAA GCC GCC GGA GGA ACC ACC GGA GGA GCG GCG Asp Asp Glu Glu Lys Lys Leu Leu Lys Lys Asn same time íle Ile Val wall Val wall Thr Thr Gin gin Ala Ala Gly Gly Thr Thr Gly Gly Ala Ala 335 335 340 340 345 345 TTC TTC GCT GCT AAC AAC TTT TTT TTA TTA GAC GAC GC-C GC-C GAT GAT AAA AAA GAT GAT GTA GTA ACG ACG GCT GCT TTC TTC AAA AAA TAC TAC Phe Phe Ala Ala Asn same time Phe Phe Leu Leu Asp Asp Gly Asp Gly Asp Lys Lys Aso Aso Val wall Thr Thr Ala Ala Phe Phe Lys Lys Tyr Tyr 350 350 355 355 360 360 AGC AGC TAC TAC ACG ACG CAT CAT TCT TCT ATT ATT AGC AGC CCT CCT AAC AAC GCC GCC AAT AAT AGC AGC GGG GGG CAG CAG TTT TTT AGG AGG Ser Ser Tyr Tyr Thr Thr His His Ser Ser íle Ile Ser Ser Pro for Asn same time Ala Ala Asn same time Ser Ser Gly Gly Gin gin Phe Phe Arg Arg 365 365 370 370 375 375 ACC ACC ACT ACT GAA GAA GAC GAC TTG TTG CGC CGC GCC GCC TTA TTA ATC ATC CAG CAG CAT CAT GAC GAC GCT GCT AAT AAT ATC ATC GTT GTT Thr Thr Thr Thr Glu Glu Asp Asp Leu Leu Arg Arg Ala Ala Leu Leu íle Ile Gin gin His His Asp Asp Ala Ala Asn same time íle Ile Val wall 380 380 385 385 390 390 AAA AAA GAT GAT CCT CCT AGC AGC CTA CTA GCG GCG GAC GAC AAT AAT TAC TAC CAA CAA GAC GAC TCA TCA GCC GCC GCT GCT TCT TCT ATA ATA Lys Lys Asp Asp Pro for Ser Ser Leu Leu Ala Ala Asp Asp Asn same time Tyr Tyr Gin gin Asd asd Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ser Ser íle Ile 395 395 400 400 405 405 410 410 GGA GGA GTT GTT ACA ACA ATC ATC AAC AAC CAA CAA TAC TAC GGC GGC ATG ATG TTT TTT GAA GAA ATC ATC AAC AAC AAT AAT AAA AAA GAC GAC Gly Gly Val wall Thr Thr íle Ile Asn same time Gin gin Tyr Tyr Gly Gly Met Met Phe Phe Glu Glu íle Ile Asn same time Asn same time Lys Lys Asp Asp 415 415 420 420 425 425 AAT AAT AAA AAA AAT AAT GTC GTC ATT ATT AAA AAA GAA GAA AAT AAT CTT CTT AAT AAT ATC ATC TTT TTT GTG GTG AGC AGC GGG GGG TAT TAT Asn same time Lys Lys Asn same time Val wall íle Ile Lys Lys Glu Glu Asn same time Leu Leu Asn same time íle Ile Phe Phe Val wall Ser Ser Gly Gly Tyzr Tyzr 430 430 435 435 440 440 TCT TCT TCA TCA GAC GAC AGC AGC GTA GTA ACG ACG AAC AAC AAT AAT GTT GTT TTG TTG TTT TTT AAA AAA AAT AAT GCG GCG ATG ATG AAA AAA Ser Ser Ser Ser Aso Aso Ser Ser Val wall Thr Thr Asn same time A.sn A.sn Val wall Leu Leu Phe Phe Lys Lys Asn same time Ala Ala Met Met Lys Lys 445 445 450 450 455 455 GGG GGG CTT CTT AAT AAT ACC ACC GCT GCT ψΓ·ΠΊ ψΓ · ΠΊ TTA TTA ATT ATT GAA GAA GGG GGG GGA GGA ľG LG TCA TCA G77 G77 AGC AGC AGT AGT Gly Gly Leu Leu Asn same time Tr.r Tr.r Ala Ala Se.- apply.` Leu Leu íle Ile Glu Glu Giy Gly Gly Gly . a . and Ser Ser A_s. A_S. Ser Ser Ser Ser 460 460 465 465 470 470 AAA AAA TTC TTC ACC ACC CAC CAC GCT GCT ACG ACG CAT CAT GCG GCG ACA ACA AGC AGC ATT ATT GAT GAT GTG GTG ATA ATA GAC GAC Ser Ser Lys Lys Phe Phe Thr Thr His His Ala Ala Thr Thr His His Ala Ala Thr Thr Ser Ser Íle Ile Asp Asp Val wall íle Ile Asp Asp 475 475 480 480 485 485 490 490 AGC AGC TTA TTA GGC GGC ACT ACT AAA AAA CAC CAC GCC GCC ATG ATG CGC CGC ATT ATT GAG GAG TTT TTT TAT TAT AGG AGG AGT AGT GGG GGG Ser Ser Leu Leu Gly Gly Thr Thr Lys Lys His His Ala Ala Met Met Arg Arg Zle ill Glu Glu Phe Phe Tyr Tyr Arg Arg Ser Ser Gly Gly

495 500 505495 500 505

-21GGA GCG GAT TGG AAT TTT AGA GTG ATC GTG CCT GAG CCT GGG GAA TTA Gly Ala Asp Trp Asn Phe Arg Val íle Val Pro Glu Pro Gly Glu Leu-21GGA GAT GAT TGG AAT TTT AGA GTG ATC GTG CCT GAG CCT GGG GAA TTA Gly Ala Asp

510 515 520(+420) 510 515 520

GTA GGG GGG TCA GCG GCT AGG CCT AAT GTG TTT GAA GGA GGC CGT TTG Val Gly Gly Ser Ala Ala Arg Pro Asn Val Phe Glu Gly Gly Arg LeuGTA GGG GGG TCA GCG GCT AGG CCT AAT GTG TTT GAA GGA GGC CGT TTG Val Gly Gly Ser Ala Ala

525 530 535525 530 535

CAC TTC AAT AAT GAC GGA TCG CTT GCA GGC ATG AAC CCG CCT CTT TTG CAC TTC AAT AAT GAC TCG CTT GCA GGC ATG AAC CCG CCT CTT TTG His His Phe Asn Asn Asp Gly Ser Leu Phe Asn Asp Gly Ser Leu Ala Ala Gly Gly Met Met Asn 550 same time 550 Pro Pro Leu For Leu Leu Leu 540 540 545 545 CAA CAA TTT TTT GAC GAC CCT CCT AAA AAA AAT AAT GGT GGT GCT GCT GAT GAT GCC GCC CCC CCC CAA CAA CGC CGC ATC ATC AAT AAT TTA TTA Gin gin Phe Phe Asp Asp Pro for Lys Lys Asn same time Gly Gly Ala Ala Asp Asp Ala Ala Pro for Gin gin Arg Arg íle Ile Asn same time Leu Leu 555 555 560 560 565 565 570 570 GCT GCT TTT TTT GGT GGT TCC TCC TCA TCA GGG GGG AGT AGT TTT TTT GAC GAC GGG GGG CTA CTA ACG ACG AGC AGC GTG GTG GAT GAT AAG AAG Ala Ala Phe Phe Gly Gly Ser Ser Ser Ser Gly Gly Ser Ser Phe Phe Asp Asp Gly Gly Leu Leu Thr Thr Ser Ser Val wall Aso Aso Lys Lys 575 575 580 580 585 585 ATT ATT TCT TCT GAA GAA ACT ACT TAT TAT GCG GCG ATT ATT GAG GAG CAA CAA AAC AAC GGC GGC TAT TAT CAA CAA GCG GCG GGC GGC GAT GAT íle Ile Ser Ser Glu Glu Thr Thr Tyr Tyr Ala Ala íle Ile Glu Glu Gin gin Asn same time Gly Gly Tyr Tyr Gin gin Ala Ala Gly Gly Asp Asp 590 590 595 595 600 600 TTG TTG ATG ATG GAT GAT GTC GTC CGC CGC TTT TTT GAT GAT TCA TCA GAT GAT GGG GGG GTG GTG CTT CTT TTA TTA GGA GGA GCG GCG TTC TTC Leu Leu Met Met Aso Aso Val wall Arg Arg Phe Phe Asp Asp Ser Ser Asp Asp Gly Gly Val wall Leu Leu Leu Leu Gly Gly Ala Ala Phe Phe 605 605 610 610 615 615 AGT AGT AAT AAT GGC GGC AGG AGG ACT ACT TTA TTA GCG GCG CTC CTC GCT GCT CAA CAA GTG GTG GCT GCT TTA TTA GCG GCG AAT AAT TTC TTC Ser Ser Asn same time Gly Gly Arg Arg Thr Thr Leu Leu Ala Ala Leu Leu Ala Ala Gin gin Val wall Ala Ala Leu Leu Ala Ala Asn same time Phe Phe 620 620 625 625 630 630 GCT GCT AAC AAC GAT GAT GCG GCG GGC GGC TTG TTG CAG CAG GCT GCT TTA TTA GGC GGC GGG GGG AAT AAT GTC GTC TTT TTT TCT TCT CAA CAA Ala Ala Asn same time Asp Asp Ala Ala Gly Gly Leu Leu Gin gin Ala Ala Leu Leu Gly Gly Gly Gly Asn same time Val wall Phe Phe Ser Ser Gin gin 635 635 640 640 645 645 650 650 ACC ACC GGA GGA AAC AAC TCA TCA GGG GGG CAA CAA GCC GCC TTA TTA ATC ATC GGT GGT GCG GCG GCT GCT AAT AAT ACG ACG GGG GGG CGT CGT Thr Thr Gly Gly Asn same time Ser Ser Gly Gly Gin gin Ala Ala Leu Leu íle Ile Gly Gly Ala Ala Ala Ala Asn same time Thr Thr Gly Gly Arg Arg 655 655 660 660 665 665 AGG AGG GGT GGT TCA TCA ATT ATT TCA TCA GGA GGA TCT TCT AAA AAA CTG CTG GAG GAG TCT TCT AGT AGT AAT AAT GTG GTG GAT GAT TTG TTG Arg Arg Gly Gly Ser Ser íle Ile Ser Ser Gly Gly Ser Ser Lys Lys Leu Leu Glu Glu Ser Ser Ser Ser Asn same time Val wall Asp Asp Leu Leu 670 670 675 675 680 680 AGC AGC CGG CGG AGT AGT TTA TTA ACG ACG AAT AAT TTG TTG ATT ATT GTG GTG GTT GTT CAA CAA AGG AGG GGC GGC TTT TTT CAA CAA GCA GCA Ser Ser Arg Arg Ser Ser Leu Leu Thr Thr Asn same time Leu Leu íle Ile Val wall Val wall Gin gin Arg Arg Gly Gly Phe Phe Gin gin Ala Ala 685 685 690 690 695 695 AAC AAC TCT TCT AAA AAA GCG GCG GTA GTA ACC ACC ACA ACA TCC TCC GAT GAT CAA CAA ATC ATC CTT CTT AAT AAT ACC ACC CTA CTA TTG TTG Asn same time Ser Ser Lys Lys Ala Ala Val wall Thr Thr Thr Thr Ser Ser Asp Asp Gin gin íle Ile Leu Leu Asn same time Thr Thr Leu Leu Leu Leu 700 700 705 705 710 710

AAT CTT AAG CAA TAA ACTAAAGGAT TACTCTAATA CAATATAATA GGGGCTAATT Asn Leu Lys Gin *AAT CTT AAG CAA TAA ACTAAAGGAT TACTCTAATA CAATATAATA GGGGCTAATT Asn Leu Lys Gin

715715

TAAAGATTAA GGTTTAGTAT GCATGAATAC TCGTAAAGATTAA GGTTTAGTAT GCATGAATAC TCG

-22(2) Informácie pre SEQ ID NO: 2:(2) Information for SEQ ID NO: 2:

(i) Charakteristiky sekvencie:(i) Sequence characteristics:

(A) Dĺžka: 719 aminokyselín (B) Typ: aminokyselina (C) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: proteín (xi) Popis sekvencie: SEQ ID NO:2:(A) Length: 719 amino acids (B) Type: amino acid (C) Topology: linear (ii) Molecule type: protein (xi) Sequence description: SEQ ID NO: 2:

Met Met Leu Leu Arg Arg Ser Ser Leu Leu Trp Trp Ser Ser Gly Gly Val wall Asn same time Gly Gly Met  Met Gin gin Ala Ala His His Gin gin 1 1 5 5 10 10 15 15 íle Ile Ala Ala Leu Leu Aso Aso íle Ile Glu Glu Ser Ser Asn same time Asn same time íle Ile Ala Ala Asn same time Val wall Asn same time Thr Thr Thr Thr 20 20 25 25 30 30 Gly Gly Phe Phe Lys Lys Tyr Tyr Ser Ser Arg Arg Ala Ala Ser Ser Phe Phe Val wall Asp Asp Met Met Leu Leu Ser Ser Gin gin Val wall 35 35 40 40 45 45 Lys Lys Leu Leu íle Ile Ala Ala Thr Thr Ala Ala Pro for Tyr Tyr Lys Lys Asn same time Gly Gly Leu Leu Ala Ala Gly Gly Gin gin Asn same time 50 50 55 55 60 60 Aso Aso Phe Phe Ser Ser Val wall Gly Gly Leu Leu Gly Gly Val wall Gly Gly Val wall Aso Aso Ala Ala Thr Thr Thr Thr Lys Lys íle Ile 65 65 70 70 75 75 80 80 Phe Phe Ser Ser Gin gin Gly Gly Asn same time íle Ile Gin gin Asn same time Thr Thr Asp Asp Val wall Lys Lys Thr Thr Asp Asp Leu Leu Ala Ala 85 85 90 90 95 95 íle Ile Gin gin Gly Gly Aso Aso Gly Gly Phe Phe Phe Phe íle Ile íle Ile Asn same time ?ro ? ro Asp Asp Arg Arg Gly Gly íle Ile Thr Thr 10Ô 10O 105 105 110 110 Arg Arg Asn same time Phe Phe Thr Thr Arg Arg Asp Asp Gly Gly Glu Glu Phe Phe Leu Leu Phe Phe Asp Asp Ser Ser Gin gin Gly Gly Ser Ser 115 115 120 120 125 125 Leu Leu Val wall Thr Thr Thr Thr Gly Gly Gly Gly Leu Leu Val wall Val wall Gin gin Gly Gly Trp Trp Val wall Arg Arg Asn same time Gly Gly 130 130 135 135 140 140 Ser Ser Asp Asp Thr Thr Gly Gly Asn same time Lys Lys Gly Gly Ser Ser Asp Asp Thr Thr Aso Aso Ala Ala Leu Leu Lys Lys Val wall Asp Asp 145 145 150 150 155 155 160 160 Asn same time Thr Thr Gly Gly Pro for Leu Leu Glu Glu Asn same time íle Ile Arg Arg íle Ile Asp Asp Pro for Gly Gly Met Met Val wall Met Met 165 165 170 170 175 175 Pro for Ala Ala Arg Arg Ala Ala Ser Ser Asn same time Arg Arg íle Ile Ser Ser Met Met Arg Arg Ala Ala Asn same time Leu Leu Asn same time Ala Ala 180 180 185 185 190 190 Gly Gly Arg Arg His His Ala Ala Asp Asp Gin gin Thr Thr Ala Ala Ala Ala íle Ile Phe Phe Ala Ala Leu Leu Asp Asp Ser Ser Ser Ser 195 195 200 200 205 205 Ala Ala Lys Lys Thr Thr Pro for Ser Ser Asp Asp Gly Gly íle Ile Asn same time Pro for Val wall Tyr Tyr Asp Asp Ser Ser Gly Gly Thr Thr 210 210 215 215 220 220 Asn same time Leu Leu Ala Ala Gin gin Val wall Ala Ala Glu Glu Asp Asp Met Met Gly Gly Ser Ser Leu Leu Tyr Tyr Asn same time Glu Glu Asp Asp 225 225 230 230 235 235 240 240 Gly Gly Asp Asp Ala Ala Leu Leu Leu Leu Leu Leu Asn same time Glu Glu Asn same time Gin gin Gly Gly íle Ile Trp Trp Val wall Ser Ser Tyr Tyr 245 245 250 250 255 255 Lys Lys Ser Ser Pro for Lys Lys Met Met Val wall Lys Lys Asp Asp íle Ile Leu Leu Pro for Ser Ser Ala Ala Glu Glu Asn same time Ser Ser 260 260 265 265 270 270 Thr Thr Leu Leu Glu Glu Leu Leu Asn same time Gly Gly Val wall Lys Lys íle Ile Ser Ser Phe Phe Thr Thr A.- A.- •-sp • -sp S-:: WITH-:: Ala Ala 275 275 280 280 2Sl 2SL Val wall Ser Ser Arg Arg Thr Thr Ser Ser Ser Ser Leu Leu Val wall Ala Ala Ala Ala Lys Lys Asn same time Ala Ala íle Ile Asn same time Ala Ala 290 290 295 295 300 300 Val wall Lys Lys Ser Ser Gin gin Thr Thr Gly Gly íle Ile Glu Glu Ala Ala Tyr Tyr Leu Leu Asp Asp Gly Gly Lys Lys Gin gin Leu Leu 305 305 310 310 315 315 320 320 Arg Arg Leu Leu Glu Glu Asn same time Thr Thr Asn same time Glu Glu Leu Leu Asp Asp Gly Gly Asp Asp Glu Glu Lys Lys Leu Leu Lys Lys A.sn A.sn

325 330 335(+420) 325 330 335

íle Ile Val wall Val wall Thr Thr Gin gin Ala Ala Gly Gly Thr Thr Gly Gly Ala Ala Phe Phe Ala Ala Asn same time Phe Phe Leu Leu Asp Asp 340 340 345 345 350 350 Gly Gly Asp Asp Lys Lys Asp Asp Val wall Thr Thr Ala Ala Phe Phe Lys Lys Tyr Tyr Ser Ser Tyr Tyr Thr Thr His His Ser Ser íle Ile 355 355 360 360 3 65 3 65 Ser Ser Pro for Asn same time Ala Ala Asn same time Ser Ser Gly Gly Gin gin Phe Phe Arg Arg Thr Thr Thr Thr Glu Glu Asp Asp Leu Leu Arg Arg 370 370 375 375 380 380 Ala Ala Leu Leu íle Ile Gin gin His His Asp Asp Ala Ala Asn same time íle Ile Val wall Lys Lys ÄSD ASD Pro for Ser Ser Leu Leu Ala Ala 385 385 390 390 395 395 400 400 Asp Asp Asn same time Tyr Tyr Gin gin Aso Aso Ser Ser Ala Ala Ala Ala Ser Ser íle Ile Gly Gly Val wall Thr Thr íle Ile Asn same time Gin gin 405 405 410 410 415 415 Tyr Tyr Gly Gly Met Met Phe Phe Glu Glu íle Ile Asn same time Asn same time Lys Lys Asp Asp Asn same time Lys Lys Asn same time Val wall íle Ile Lys Lys 420 420 425 425 430 430 Glu Glu Asn same time Leu Leu Asn same time .Zle .Zle Phe Phe Val wall Ser Ser Gly Gly Tyr Tyr Ser Ser Ser Ser Aso Aso Ser Ser Val wall Thr Thr 435 435 440 440 445 445 Asn same time Asn same time Val wall Leu Leu Phe Phe Lys Lys Asn same time Ala Ala Met Met Lys Lys Gly Gly Leu Leu Asn same time Thr Thr Ala Ala Ser Ser 450 450 455 455 460 460 Leu Leu íle Ile Glu Glu Gly Gly Gly Gly Ala Ala Ser Ser Ala Ala Ser Ser Ser Ser Ser Ser Lys Lys Phe Phe Thr Thr His His Ala Ala 465 465 470 470 475 475 480 480 Thr Thr His His Ala Ala Th.2ľ Th.2ľ Ser Ser Zle ill Asp Asp Val wall íle Ile Aso Aso Ser Ser Leu Leu Gly Gly Thr Thr Lvs LVS His His 485 485 490 490 495 495 Ala Ala Met Met Arg Arg Zle ill Glu Glu Phe Phe Tyr Tyr Arg Arg Ser Ser Gly Gly Gly Gly Ala Ala Asp Asp Trp Trp A.sn A.sn Phe Phe 500 500 505 505 510 510 Arg Arg Val wall íle Ile Val wall Pro for Glu Glu Pro for Gly Gly Glu Glu Leu Leu Val wall Gly Gly Gly Gly Ser Ser Ala Ala Ala Ala 515 515 520 520 525 525 Arg Arg Pro for Asn same time Val wall Phe Phe Glu Glu Gly Gly Gly Gly Arg Arg Leu Leu His His Phe Phe Asn same time Asn same time Asp Asp Gly Gly 530 530 535 535 540 540 Ser Ser Leu Leu Ala. Ala. Gly Gly Het Het Asn same time Pro for Pro for Leu Leu Leu Leu Gin gin Phe Phe Asp Asp Pro for Lys Lys Asn same time 545 545 550 550 555 555 560 560 Gly Gly Ala Ala Asp Asp Ala Ala Pro for Gin gin Arg Arg íle Ile Asn same time Leu Leu Ala Ala Phe Phe Gly Gly Ser Ser Ser Ser Gly Gly 565 565 570 570 575 575 Ser Ser Phe Phe Asp Asp Gly Gly Leu Leu Thr Thr Ser Ser Val wall Asp Asp Lys Lys íle Ile Ser Ser Glu Glu Thr Thr Tyr Tyr Ala Ala 580 580 585 585 590 590 íle Ile Glu Glu Gin gin Asn same time Gly Gly Tyr Tyr Gin gin Ala Ala Gly Gly Asp Asp Leu Leu Met Met Aso Aso Val wall Arg Arg Phe Phe 595 595 600 600 605 605 Asp Asp Ser Ser Asp Asp Gly Gly Val wall Leu Leu Leu Leu Gly Gly Ala Ala Phe Phe Ser Ser Asn same time Gly Gly Arg Arg Tn« tn ' Leu Leu 610 610 615 615 620 620 Ala Ala Leu Leu Ala Ala Gin gin Val wall Ala Ala Leu Leu Ala Ala Asn same time Phe Phe Ala Ala Asn same time Asp Asp Ala Ala Gly Gly Leu Leu 625 625 630 630 635 635 640 640 Gin gin Ala Ala Leu Leu Gly Gly Gly Gly Asn same time Val wall Phe Phe Ser Ser Gin gin Thr Thr Gly Gly Asn same time Ser Ser Gly Gly Gin gin 645 645 650 650 655 655 Ala Ala Leu Leu íle Ile Gly Gly Ala Ala Ala Ala Asn same time Thr Thr Gly Gly Arg Arg Arg Arg Gly Gly Ser Ser íle Ile Ser Ser Gly Gly 660 660 665 665 670 670

Ser Lys Leu Glu Ser Ser Asn Val Asp Leu Ser Arg Ser Leu Thr AsnSer Lys Leu Glu Ser Ser Asn Val Asp Ser Le Ser Ser Ser Le Thr Asn

-25675 680 685-25675 680 685

Leu íle Val Val Gin Arg Gly ?he Gin Ala Asn Ser Lys Ala Val Th’· 690 695 700Leu il Val Val Gin Arg Gly? He Gin Ala Asn Ser Lys Ala Val Th '· 690 695 700

Thr Ser Asp Gin íle Leu Asn Thr Leu Leu Asn Leu Lys Gin *Thr Ser Asp Gin White Leu Asn Thr Leu Leu Asn Leu Lys Gin *

705 710 715 (2) Informácie pre SEQ ID NO: 3:705 710 715 (2) Information for SEQ ID NO: 3:

(i) Charakteristiky sekvencie:(i) Sequence characteristics:

(A) Dĺžka: 25 základných párov (B) Typ: nukleová kyselina (C) Reťazec: jednoduchý (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: Ďalšie nukleové kyseliny (A) Popis: /dese = PRC primér” (xi) Popis sekvencie: SEQ ID NO:3:(A) Length: 25 base pairs (B) Type: nucleic acid (C) String: single (D) Topology: linear (ii) Molecule type: Other nucleic acids (A) Description: / dese = PRC primer ”(xi) Sequence description: SEQ ID NO: 3:

TATACCATGG TGCTTAGGTC TTTAT (2) Informácie pre SEQ ID NO: 4:TATACCATGG TGCTTAGGTC TTTAT (2) Information for SEQ ID NO: 4:

(i) Charakteristiky sekvencie:(i) Sequence characteristics:

(A) Dĺžka: 25 základných párov (B) Typ: nukleová kyselina (C) Reťazec: jednoduchý (D) Topológia: lineárna (ii) Typ molekuly: Ďalšie nukleové kyseliny (A) Popis: /dese = “PCR primér” (xi) Popis sekvencie: SEQ ID NO:4:(A) Length: 25 base pairs (B) Type: nucleic acid (C) String: single (D) Topology: linear (ii) Molecule type: Other nucleic acids (A) Description: / dese = “PCR primer” (xi ) Sequence Description: SEQ ID NO: 4:

GCGAATTCAA TTGCTTAAGA TTCAAGCGAATTCAA TTGCTTAAGA TTCAA

Claims (28)

PATENTOVÉ NÁROKYPATENT CLAIMS 1. Kompozícia očkovacej látky, vyznačujúca sa tým, že obsahuje FlgE polypeptid Helicobacter pylori alebo jeho modifikovanú formu, ktorá si zachováva funkčnú ekvivalentnú antigenicitu, na vyvolanie ochrannej imunitnej odozvy voči infekcii Helicobacter pylori u cicavca.A vaccine composition comprising a FlgE polypeptide of Helicobacter pylori or a modified form thereof that retains functional equivalent antigenicity, to elicit a protective immune response against Helicobacter pylori infection in a mammal. 2. Kompozícia očkovacej látky podľa nároku 1, vyznačujúca sa tým, že FlgE polypeptid obsahuje v podstate aminokyselinovú sekvenciu znázornenú v SEQ ID NO:2 v zozname sekvencií.The vaccine composition of claim 1, wherein the FlgE polypeptide comprises substantially the amino acid sequence shown in SEQ ID NO: 2 in the Sequence Listing. 3. Kompozícia očkovacej látky podľa nároku 2, vyznačujúca sa tým, že polypeptid obsahuje aminokyselinovú sekvenciu, ktorá je najmenej z 90 % homologická ku SEQ ID NO:2.The vaccine composition of claim 2, wherein the polypeptide comprises an amino acid sequence that is at least 90% homologous to SEQ ID NO: 2. 4. Kompozícia očkovacej látky podľa nároku 2, vyznačujúca sa tým, že polypeptid obsahuje aminokyselinovú sekvenciu, ktorá je najmenej z 95 % homologická ku SEQ ID NO:2.The vaccine composition of claim 2, wherein the polypeptide comprises an amino acid sequence that is at least 95% homologous to SEQ ID NO: 2. 5. Kompozícia očkovacej látky podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúca sa tým, že obsahuje farmaceutický prijateľný nosič alebo riedidlo.The vaccine composition according to any one of the preceding claims, characterized in that it comprises a pharmaceutically acceptable carrier or diluent. 6. Kompozícia očkovacej látky podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúca sa tým, že obsahuje pomocnú látku.Vaccine composition according to any one of the preceding claims, characterized in that it contains an adjuvant. 7. Kompozícia očkovacej látky podľa nároku 6, vyznačujúca sa tým, že pomocnou látkou je farmaceutický prijateľná forma toxínu cholery.The vaccine composition of claim 6, wherein the adjuvant is a pharmaceutically acceptable form of cholera toxin. 8. Kompozícia očkovacej látky podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, ' vyznačujúca sa tým, že obsahuje látku zvolenú z lipozómov, ISCOM, kochley a polymérnych mikrosfér.Vaccine composition according to any one of the preceding claims, characterized in that it comprises a substance selected from liposomes, ISCOMs, cochlea and polymeric microspheres. 9. Kompozícia očkovacej látky podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 7, vyznačujúca sa tým, že obsahuje vektor vybraný zo živých oslabených baktérií, vírusov a fágov.The vaccine composition according to any one of claims 1 to 7, characterized in that it comprises a vector selected from live attenuated bacteria, viruses and phages. -2710. Použitie FlgE polypeptidu Helicobacter pylori, alebo jeho modifikovanej formy, ktorá si zachováva funkčnú ekvivalentnú antigenicitu, na výrobu kompozície na liečenie, profylaxiu alebo diagnostikovanie infekcie Helicobacter pylori u cicavcov.-2710. The use of a FlgE polypeptide of Helicobacter pylori, or a modified form thereof that retains functional equivalent antigenicity, for the manufacture of a composition for the treatment, prophylaxis or diagnosis of a Helicobacter pylori infection in a mammal. 11. Použitie FlgE polypeptidu Helicobacter pylori, alebo jeho modifikovanej formy, ktorá si zachováva funkčnú ekvivalentnú antigenicitu, na výrobu kompozície očkovacej látky na použitie na vyvolanie ochrannej imunitnej odozvy proti Helicobacter pylori u cicavcov.Use of a FlgE polypeptide of Helicobacter pylori, or a modified form thereof, which retains functional equivalent antigenicity, for the manufacture of a vaccine composition for use in eliciting a protective immune response against Helicobacter pylori in a mammal. 12. Použitie podfa nároku 10 alebo 11, pričom FlgE polypeptidom je polypeptid definovaný v ktoromkoľvek z nárokov 2 až 4.The use of claim 10 or 11, wherein the FlgE polypeptide is a polypeptide as defined in any one of claims 2 to 4. 13. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 10 až 12, pričom cicavcom je človek.The use of any one of claims 10 to 12, wherein the mammal is a human. 14. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 10 až 13, pričom kompozícia obsahuje farmaceutický prijateľný nosič alebo riedidlo.Use according to any one of claims 10 to 13, wherein the composition comprises a pharmaceutically acceptable carrier or diluent. 15. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 10 až 14, pričom kompozícia obsahuje pomocnú látku.The use of any one of claims 10 to 14, wherein the composition comprises an excipient. 16. Použitie podľa nároku 15, pričom pomocnou látkou je farmaceutický prijateľná forma toxínu cholery.The use of claim 15, wherein the excipient is a pharmaceutically acceptable form of cholera toxin. 17. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 10 až 16, pričom kompozícia obsahuje látku zvolenú z zvolenú z lipozómov, ISCOM, kochley a polymérnych mikrosfér.The use according to any one of claims 10 to 16, wherein the composition comprises a substance selected from selected from liposomes, ISCOMs, cochlea and polymeric microspheres. 18. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 10 až 16, obsahujúca vektor vybraný zo živých oslabených baktérií, vírusov a fágov.The use of any one of claims 10 to 16, comprising a vector selected from live attenuated bacteria, viruses and phages. 19. Spôsob diagnostikovania infekcie Helicobacter pylori u cicavcov, vyznačujúci sa tým, že , zahrňuje kroky (a) uvedenia do kontaktu FlgE polypeptidu Helicobacter pylori alebo jeho modifikovanej formy, ktorá si zachováva funkčnú ekvivalentnú antigenicitu, s telesnou kvapalinou odobranou od cicavca; a19. A method of diagnosing a Helicobacter pylori infection in a mammal, comprising the steps of (a) contacting a FlgE polypeptide of Helicobacter pylori or a modified form thereof that retains functional equivalent antigenicity with a body fluid collected from the mammal; and -28(b) detegovania protilátok z uvedenej telesnej kvapaliny naviazaním na uvedený FlgE poiypeptid.(B) detecting antibodies from said body fluid by binding to said FlgE polypeptide. 20. Spôsob podľa nároku 19, vyznačujúci sa tým, že FlgE polypeptidom je poiypeptid definovaný v ktoromkoľvek z nárokov 2 až 4.The method of claim 19, wherein the FlgE polypeptide is a polypeptide as defined in any one of claims 2 to 4. 21. Spôsob podľa nároku 19 alebo 20, vyznačujúci sa tým, že FlgE poiypeptid je naviazaný k pevnému podkladu.The method of claim 19 or 20, wherein the FlgE polypeptide is bound to a solid support. 22. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 19 až 21, vyznačujúci sa tým, že cicavcom je človek.The method of any one of claims 19 to 21, wherein the mammal is a human. 23. Diagnostický kit na použitie v spôsobe podľa nároku 19, vyznačujúci sa tým, že kit obsahuje FlgE poiypeptid Helicobacter pylorí alebo jeho modifikovanú formu, ktorá si zachováva funkčnú ekvivalentnú antigenicitu.The diagnostic kit for use in the method of claim 19, wherein the kit comprises a FlgE polypeptide of Helicobacter pylori or a modified form thereof that retains functional equivalent antigenicity. 24. Diagnostický kit podľa nároku 23, vyznačujúci sa tým, že FlgE polypeptidom je poiypeptid definovaný v ktoromkoľvek z nárokov 2 až 4.The diagnostic kit of claim 23, wherein the FlgE polypeptide is a polypeptide as defined in any one of claims 2 to 4. 25. Spôsob vyvolania ochrannej imunitnej odozvy proti infekcii Helicobacter pylorí u cicavcov, vyznačujúci sa tým, že uvedený spôsob zahrňuje krok podávania cicavcovi FlgE polypeptidu Helicobacter pylorí alebo jeho modifikovanej formy, ktorá si zachováva funkčnú ekvivalentnú antigenicitu.25. A method of inducing a protective immune response against Helicobacter pylori infection in a mammal, said method comprising the step of administering to the mammal a FlgE polypeptide of Helicobacter pylori or a modified form thereof that retains functional equivalent antigenicity. 26. Spôsob podľa nároku 25, vyznačujúci sa tým, že FlgE polypeptidom je poiypeptid definovaný v ktoromkoľvek z nárokov 2 až 4.The method of claim 25, wherein the FlgE polypeptide is a polypeptide as defined in any one of claims 2 to 4. 27. Spôsob podľa nároku 25 alebo 26, vyznačujúci sa tým, že cicavcom je človek.The method of claim 25 or 26, wherein the mammal is a human. 28. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 25 až 27, vyznačujúci sa tým, že spôsob je profylaktickým spôsobom.The method of any one of claims 25 to 27, wherein the method is a prophylactic method. 29. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 25 až 27, vyznačujúci sa tým, že spôsob je terapeutickým spôsobom.The method of any one of claims 25 to 27, wherein the method is a therapeutic method.
SK1730-99A 1997-06-12 1998-06-08 Vaccine compositions comprising the helicobacter pylori flge polypeptide SK173099A3 (en)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE9702242A SE9702242D0 (en) 1997-06-12 1997-06-12 Vaccine compositions V
PCT/SE1998/001093 WO1998056816A1 (en) 1997-06-12 1998-06-08 VACCINE COMPOSITIONS COMPRISING THE HELICOBACTER PYLORI FlgE POLYPEPTIDE

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK173099A3 true SK173099A3 (en) 2000-06-12

Family

ID=20407351

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1730-99A SK173099A3 (en) 1997-06-12 1998-06-08 Vaccine compositions comprising the helicobacter pylori flge polypeptide

Country Status (21)

Country Link
EP (1) EP1009764A1 (en)
JP (1) JP2002507118A (en)
KR (1) KR20010013699A (en)
CN (1) CN1259960A (en)
AR (1) AR012896A1 (en)
AU (1) AU8048798A (en)
BR (1) BR9810026A (en)
CA (1) CA2293293A1 (en)
EE (1) EE9900566A (en)
HU (1) HUP0003164A3 (en)
ID (1) ID23052A (en)
IL (1) IL133144A0 (en)
IS (1) IS5288A (en)
NO (1) NO996132L (en)
NZ (1) NZ501427A (en)
PL (1) PL337503A1 (en)
SE (1) SE9702242D0 (en)
SK (1) SK173099A3 (en)
TR (1) TR199903060T2 (en)
WO (1) WO1998056816A1 (en)
ZA (1) ZA984696B (en)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104784687A (en) * 2015-04-27 2015-07-22 苏州大学附属第一医院 Application of flagellar hook protein FlgE of reorganized pseudomonas aeruginosa
CN113425717B (en) * 2021-04-22 2023-06-16 成都欧林生物科技股份有限公司 Medicament for improving efficacy of oral helicobacter pylori vaccine and application thereof
CN116535472B (en) * 2023-05-31 2024-04-30 四川大学华西医院 Helicobacter pylori recombinant protein antigen FlgK and preparation method and application thereof
CN118105473B (en) * 2024-04-30 2024-08-16 成都欧林生物科技股份有限公司 Oral immunogenic composition for preventing or treating Hp infection and application thereof

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5459041A (en) * 1988-02-18 1995-10-17 Enteric Research Laboratories, Inc. Campylobacter pylori antigens and uses thereof for detection of Campylobacter pylori infection
AR003125A1 (en) * 1995-06-01 1998-07-08 Astra Ab BACTERIAL ANTIGENS FOR THE DIAGNOSIS OF INFECTIONS WITH HELICOBACTER PYLORI, A DNA MOLECLE THAT CODES IT, A VECTOR, A HOST CELL, A PROCEDURE FOR PRODUCING THE POLIPEPTIDE, USE OF ELEPIPETICO, AND PROAPILY USE

Also Published As

Publication number Publication date
CN1259960A (en) 2000-07-12
JP2002507118A (en) 2002-03-05
SE9702242D0 (en) 1997-06-12
AU8048798A (en) 1998-12-30
IL133144A0 (en) 2001-03-19
ID23052A (en) 2000-01-20
WO1998056816A1 (en) 1998-12-17
IS5288A (en) 1999-12-08
HUP0003164A2 (en) 2000-12-28
TR199903060T2 (en) 2000-09-21
NZ501427A (en) 2000-09-29
NO996132L (en) 2000-01-28
EE9900566A (en) 2000-06-15
EP1009764A1 (en) 2000-06-21
BR9810026A (en) 2000-09-19
AR012896A1 (en) 2000-11-22
KR20010013699A (en) 2001-02-26
ZA984696B (en) 1999-01-04
CA2293293A1 (en) 1998-12-17
PL337503A1 (en) 2000-08-28
NO996132D0 (en) 1999-12-10
HUP0003164A3 (en) 2001-10-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP3380559B2 (en) Helicobacter pylori antigen and vaccine composition
JP5327873B2 (en) Recombinant Helicobacter pylori oral vaccine and preparation method thereof
US20070110765A1 (en) Helicobacter pylori bacterioferritin
US6468545B1 (en) Treatment and prevention of helicobacter infection
JP3699421B2 (en) Protein from Actinobacillus pleuronumonia
JP2010189411A (en) New product specific to pathogenic strain, use thereof as vaccine and use in immunotherapy
US6762295B2 (en) Protective helicobacter antigens
EP2269625A2 (en) Protective proteins of S. agalactiae, combinations thereof and methods of using the same
JP2005514041A (en) Diagnostic and vaccine for Mycobacterium paratuberculosis infection
SK173099A3 (en) Vaccine compositions comprising the helicobacter pylori flge polypeptide
US20020028210A1 (en) Vaccine composition comprising helicobacter pylori flagellin polypeptide
JP2001523954A (en) 76 kDa, 32 kDa, and 50 kDa Helicobacter polypeptides and corresponding polynucleotide molecules
US20030049265A1 (en) Heliobacter pylori antigen
CZ9904449A3 (en) Vaccine composition containing Helicobacter pylori FlgE polypeptide
MXPA99011528A (en) Vaccine compositions comprising the helicobacter pylori
US20010038844A1 (en) Methods and vaccines for protection against campylobacter infections
WO1998056815A1 (en) VACCINE COMPOSITIONS COMPRISING THE HELICOBACTER PYLORI Pfr POLYPEPTIDE
WO1998056412A1 (en) VACCINE COMPOSITIONS COMPRISING THE HELICOBACTER PYLORI 26kDa POLYPEPTIDE
JP2005535350A (en) Streptococcus uberis protein, nucleic acid sequence encoding said protein and its use in mastitis vaccine
US20050232938A1 (en) Recombinant DNA, plasmid, transformed microorganism and vaccine protein for prevention and therapy of urinary tract infection
WO2007108903A2 (en) Campylobacter vaccines and methods of use
Cripps Characterization of the Gene Encoding
MXPA97009194A (en) Antigens of helicobacter pylori and compositions of vac