RU2825899C1 - Live cultural dry vaccine against porcine reproductive-respiratory syndrome and method for preparing vaccine - Google Patents
Live cultural dry vaccine against porcine reproductive-respiratory syndrome and method for preparing vaccine Download PDFInfo
- Publication number
- RU2825899C1 RU2825899C1 RU2024100648A RU2024100648A RU2825899C1 RU 2825899 C1 RU2825899 C1 RU 2825899C1 RU 2024100648 A RU2024100648 A RU 2024100648A RU 2024100648 A RU2024100648 A RU 2024100648A RU 2825899 C1 RU2825899 C1 RU 2825899C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- respiratory syndrome
- vaccine
- porcine reproductive
- virus
- live
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 112
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 title abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 4
- 208000005342 Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Diseases 0.000 claims abstract description 80
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 43
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims abstract description 16
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 claims abstract description 12
- 241000282560 Macaca mulatta Species 0.000 claims abstract description 3
- 241001135989 Porcine reproductive and respiratory syndrome virus Species 0.000 claims description 33
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 19
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 16
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 11
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 11
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 11
- 238000011160 research Methods 0.000 claims description 8
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 7
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 6
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 4
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 4
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 4
- 244000309703 Betaarterivirus suid 1 Species 0.000 claims description 2
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 claims description 2
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 claims description 2
- 244000037640 animal pathogen Species 0.000 claims description 2
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 claims description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 claims description 2
- 241000894007 species Species 0.000 claims 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 57
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 abstract description 19
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 abstract description 18
- 230000036039 immunity Effects 0.000 abstract description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 25
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 22
- 239000000463 material Substances 0.000 description 18
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 15
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 14
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 12
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 12
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 11
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 10
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 10
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 9
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- 208000001726 Classical Swine Fever Diseases 0.000 description 7
- 241000204045 Mycoplasma hyopneumoniae Species 0.000 description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 7
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 7
- 241000867607 Chlorocebus sabaeus Species 0.000 description 6
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 6
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 6
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 208000009305 pseudorabies Diseases 0.000 description 6
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 5
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 5
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 5
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 241001430197 Mollicutes Species 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 4
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 4
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 4
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 4
- 241000710777 Classical swine fever virus Species 0.000 description 3
- 206010069767 H1N1 influenza Diseases 0.000 description 3
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 3
- 208000009620 Orthomyxoviridae Infections Diseases 0.000 description 3
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 3
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 3
- 235000021052 average daily weight gain Nutrition 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 3
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 208000002254 stillbirth Diseases 0.000 description 3
- 231100000537 stillbirth Toxicity 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 201000010740 swine influenza Diseases 0.000 description 3
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 3
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 3
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 3
- 101000621943 Acholeplasma phage L2 Probable integrase/recombinase Proteins 0.000 description 2
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 101000618348 Allochromatium vinosum (strain ATCC 17899 / DSM 180 / NBRC 103801 / NCIMB 10441 / D) Uncharacterized protein Alvin_0065 Proteins 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Chemical compound OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000781117 Autographa californica nuclear polyhedrosis virus Uncharacterized 12.4 kDa protein in CTL-LEF2 intergenic region Proteins 0.000 description 2
- 101000708323 Azospirillum brasilense Uncharacterized 28.8 kDa protein in nifR3-like 5'region Proteins 0.000 description 2
- 101000770311 Azotobacter chroococcum mcd 1 Uncharacterized 19.8 kDa protein in nifW 5'region Proteins 0.000 description 2
- 101000748761 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized MFS-type transporter YcxA Proteins 0.000 description 2
- 101000765620 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YlxP Proteins 0.000 description 2
- 101000916134 Bacillus subtilis (strain 168) Uncharacterized protein YqxJ Proteins 0.000 description 2
- 101000754349 Bordetella pertussis (strain Tohama I / ATCC BAA-589 / NCTC 13251) UPF0065 protein BP0148 Proteins 0.000 description 2
- 101000827633 Caldicellulosiruptor sp. (strain Rt8B.4) Uncharacterized 23.9 kDa protein in xynA 3'region Proteins 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000947628 Claviceps purpurea Uncharacterized 11.8 kDa protein Proteins 0.000 description 2
- 101000686796 Clostridium perfringens Replication protein Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000788129 Escherichia coli Uncharacterized protein in sul1 3'region Proteins 0.000 description 2
- 101000788370 Escherichia phage P2 Uncharacterized 12.9 kDa protein in GpA 3'region Proteins 0.000 description 2
- 101000787096 Geobacillus stearothermophilus Uncharacterized protein in gldA 3'region Proteins 0.000 description 2
- 101000976889 Haemophilus phage HP1 (strain HP1c1) Uncharacterized 19.2 kDa protein in cox-rep intergenic region Proteins 0.000 description 2
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 2
- 101000827627 Klebsiella pneumoniae Putative low molecular weight protein-tyrosine-phosphatase Proteins 0.000 description 2
- 101001130841 Middle East respiratory syndrome-related coronavirus (isolate United Kingdom/H123990006/2012) Non-structural protein ORF5 Proteins 0.000 description 2
- 101000904262 Mus musculus G patch domain and ankyrin repeat-containing protein 1 Proteins 0.000 description 2
- 208000008071 Parvoviridae Infections Diseases 0.000 description 2
- 206010057343 Parvovirus infection Diseases 0.000 description 2
- 241000702619 Porcine parvovirus Species 0.000 description 2
- 101000974028 Rhizobium leguminosarum bv. viciae (strain 3841) Putative cystathionine beta-lyase Proteins 0.000 description 2
- 101000756519 Rhodobacter capsulatus (strain ATCC BAA-309 / NBRC 16581 / SB1003) Uncharacterized protein RCAP_rcc00048 Proteins 0.000 description 2
- 101000948219 Rhodococcus erythropolis Uncharacterized 11.5 kDa protein in thcD 3'region Proteins 0.000 description 2
- 101000936711 Streptococcus gordonii Accessory secretory protein Asp4 Proteins 0.000 description 2
- 101000929863 Streptomyces cinnamonensis Monensin polyketide synthase putative ketoacyl reductase Proteins 0.000 description 2
- 101000788468 Streptomyces coelicolor Uncharacterized protein in mprR 3'region Proteins 0.000 description 2
- 101000845085 Streptomyces violaceoruber Granaticin polyketide synthase putative ketoacyl reductase 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000711771 Thiocystis violacea Uncharacterized 76.5 kDa protein in phbC 3'region Proteins 0.000 description 2
- 101000711318 Vibrio alginolyticus Uncharacterized 11.6 kDa protein in scrR 3'region Proteins 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000010241 blood sampling Methods 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 2
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 description 2
- 235000006694 eating habits Nutrition 0.000 description 2
- 238000009313 farming Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 2
- 230000005965 immune activity Effects 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 2
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 238000011287 therapeutic dose Methods 0.000 description 2
- HRANPRDGABOKNQ-ORGXEYTDSA-N (1r,3r,3as,3br,7ar,8as,8bs,8cs,10as)-1-acetyl-5-chloro-3-hydroxy-8b,10a-dimethyl-7-oxo-1,2,3,3a,3b,7,7a,8,8a,8b,8c,9,10,10a-tetradecahydrocyclopenta[a]cyclopropa[g]phenanthren-1-yl acetate Chemical compound C1=C(Cl)C2=CC(=O)[C@@H]3C[C@@H]3[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1[C@H](O)C[C@@](C(C)=O)(OC(=O)C)[C@@]1(C)CC2 HRANPRDGABOKNQ-ORGXEYTDSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001292006 Arteriviridae Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 101150001779 ORF1a gene Proteins 0.000 description 1
- 101150062176 ORF5 gene Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- 208000005107 Premature Birth Diseases 0.000 description 1
- 101710188092 Protein ORF5a Proteins 0.000 description 1
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000725681 Swine influenza virus Species 0.000 description 1
- 101000714195 Varicella-zoster virus (strain Dumas) Tegument protein UL51 homolog Proteins 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 238000004500 asepsis Methods 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 235000021393 food security Nutrition 0.000 description 1
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 1
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 244000144993 groups of animals Species 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000008676 import Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000009027 insemination Effects 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000011364 negative regulation of type I interferon production Effects 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 1
- 239000007793 ph indicator Substances 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 230000004962 physiological condition Effects 0.000 description 1
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 1
- 238000005057 refrigeration Methods 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 208000000995 spontaneous abortion Diseases 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008174 sterile solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 1
- 238000004861 thermometry Methods 0.000 description 1
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M thioglycolate(1-) Chemical compound [O-]C(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 1
Images
Abstract
Description
Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии, а именно к производству и применению биологических препаратов для специфической профилактики репродуктивно-респираторного синдрома свиней.The invention relates to the field of veterinary virology and biotechnology, namely to the production and use of biological preparations for the specific prevention of reproductive and respiratory syndrome in pigs.
Проблема репродуктивно-респираторного синдрома свиней (РРСС) остается актуальной в большинстве стран мира с развитым свиноводством, являясь эндемичным заболеванием, охватившим практически все страны, включая Россию, США, Китай, страны Западной Европы, приносящее большие экономические потери [1]. Ущерб от заболевания складывается из потерь животных, вызванных нарушением репродуктивной функции, характеризующейся поздними абортами, преждевременными родами, прохолостами свиноматок, рождением мёртвых, мумифицированных, нежизнеспособных поросят, гибелью новорожденных и заболеваемостью поросят отъёмышей и свиней. В результате, свиноводческие хозяйства недополучают поросят, привесов, а также несут затраты на ветеринарно-санитарные и оздопровительные мероприятия.The problem of porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) remains relevant in most countries of the world with developed pig farming, being an endemic disease that has affected almost all countries, including Russia, the USA, China, Western European countries, causing large economic losses [1]. The damage from the disease consists of animal losses caused by reproductive dysfunction, characterized by late abortions, premature births, sow miscarriages, stillbirths, mummified, non-viable piglets, death of newborns and morbidity of weaned piglets and sows. As a result, pig farms do not receive enough piglets, weight gain, and also bear the costs of veterinary and sanitary and health measures.
В России впервые клиническое проявление РРСС установлено в 1990 году, а официально заболевание регистрируется с 1993 года [2, 3, 4].In Russia, the clinical manifestation of PRRS was first established in 1990, and the disease has been officially registered since 1993 [2, 3, 4].
Анализ проводимых в отношении РРСС мероприятий в мире показывает, что они сводятся, как к профилактической вакцинации животных, которая с каждым годом охватывает все большее поголовье свиней, так и контролю за передвижением животных, как внутри страны, так и за ее пределами, а также постоянным проведением диагностических исследований в популяции свиней.An analysis of the measures taken in relation to PRRS in the world shows that they come down to both preventive vaccination of animals, which every year covers an increasing number of pigs, and control over the movement of animals, both within the country and abroad, as well as constant diagnostic research in the pig population.
Вакцинопрофилактика РРСС с использованием живых и инактивированных вакцин до сих пор остается ведущим и основным звеном в профилактике этого заболевания, как в нашей стране, так и за рубежом. Доказано, что применение вакцин против РРСС снижает частоту клинического проявления болезни, особенно репродуктивной формы заболевания, и позволяет повысить продуктивность откормочного поголовья за счет увеличения привесов и сокращения сроков откорма.Vaccine prevention of PRRS using live and inactivated vaccines still remains the leading and main link in the prevention of this disease, both in our country and abroad. It has been proven that the use of vaccines against PRRS reduces the frequency of clinical manifestations of the disease, especially the reproductive form of the disease, and allows increasing the productivity of fattening livestock by increasing weight gain and reducing fattening periods.
Необходимо отметить, что преимущество живых вакцин состоит в том, что специфические антитела вырабатываются быстрее (на 7-10 сутки) в достаточном количестве, тем самым вакцину можно использовать в неблагополучном хозяйстве для купирования вспышки. Кроме того, такие вакцины являются более экономичными в производстве, а также, для их хранения и транспортировки требуется относительно мало места в холодильных установках. В связи с этим, разработка и совершенствование эффективности применяемых средств специфической профилактики РРСС является актуальной задачей для развития отечественного свиноводства.It should be noted that the advantage of live vaccines is that specific antibodies are produced faster (on the 7-10th day) in sufficient quantities, so the vaccine can be used in a disadvantaged farm to stop an outbreak. In addition, such vaccines are more economical to produce, and their storage and transportation require relatively little space in refrigeration units. In this regard, the development and improvement of the effectiveness of the applied means of specific prevention of PRRS is an urgent task for the development of domestic pig farming.
В материалах зарубежных и отечественных источниках представлено много штаммов вируса РРСС, используемых при производстве живых вакцин. Некоторые штаммы были выделены в 90-х годах, находятся в международных коллекциях микроорганизмов. И не доступны для отечественных производителей вакцин. Много вакцин состоят из штаммов американской генетической линии [5, 6, 7, 8].The materials of foreign and domestic sources present many strains of the PRRS virus used in the production of live vaccines. Some strains were isolated in the 90s and are in international collections of microorganisms. And are not available to domestic vaccine manufacturers. Many vaccines consist of strains of the American genetic line [5, 6, 7, 8].
Известна вакцина содержащая штаммы вируса РРСС, которые депонированы под регистрационными номерами ЕСАСС 04102703, ЕСАСС 04102702 и ЕСАСС 04102704 [9].A vaccine containing PRRS virus strains is known, which are deposited under registration numbers ECACC 04102703, ECACC 04102702 and ECACC 04102704 [9].
Известна вакцина против РРСС из штамма «PRRS-1SBC», где в качестве стабилизатора при лиофилизации используют смесь сахарозы, пептона, желатозы и трис-НCl буфера [10].A vaccine against PRRS from the strain “PRRS-1SBC” is known, where a mixture of sucrose, peptone, gelatose and Tris-HCl buffer is used as a stabilizer during lyophilization [10].
Помимо вышеупомянутой вакцины в мире разработаны и существуют препараты живых вакцин, такие как Юнистрейн® РРСС, производства США [11], Порцилис® PRRS [12] производства Нидерланды и Репроцик® РРСС EU [13] производства Германия, однако штаммовый состав этих вакцин имеет неопределенное происхождение, работы по клиническим испытаниям, биостатистика проведены для генетических линий свинопоголовья стран-разработчиков, и в значительной степени отличается от штаммов, циркулирующих на территории РФ. Немаловажным моментом является и цена импортных препаратов, в настоящий момент многие вакцины, не доступны к приобретению. Вакцина против РРСС живая культуральная сухая изготавливается из актуального, эпизоотически значимого для РФ, штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней первого субгенотипа, и обладает более чем в 10 раз более низкой себестоимостью.In addition to the above-mentioned vaccine, live vaccines such as Unistrain® PRRS, manufactured in the USA [11], Porcilis® PRRS [12] manufactured in the Netherlands and Reprocik® PRRS EU [13] manufactured in Germany have been developed and are available in the world. However, the strain composition of these vaccines is of uncertain origin, clinical trials and biostatistics were conducted for genetic lines of pig populations in the developing countries, and differ significantly from the strains circulating in the territory of the Russian Federation. An important point is the price of imported drugs; many vaccines are currently unavailable for purchase. The live, dry culture vaccine against PRRS is made from the Borz strain of the first subgenotype of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus, which is epizootically significant for the Russian Federation, and has a cost price that is more than 10 times lower.
ФГБУ «ВНИИЗЖ» имеет большой опыт в разработке живых вакцин, и в т.ч. против репродуктивно-респираторного синдрома свиней. Так в 2004 году была разработана вирусвакцина РРСС (сухая культуральная против репродуктивно-респираторного синдрома свиней), которая изготавливается из штамма БД вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней 2 американского типа вируса.The Federal State Budgetary Institution "VNIIZG" has extensive experience in developing live vaccines, including against porcine reproductive and respiratory syndrome. Thus, in 2004, the PRRS virus vaccine (dry culture against porcine reproductive and respiratory syndrome) was developed, which is made from the BD strain of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus of the 2 American type.
Общим недостатком известных вакцин против РРСС является их относительно низкая противоэпизоотическая эффективность для Российской Федерации, обусловленная тем, что штаммы вируса РРСС, используемые для их изготовления, обладают антигенными и иммунобиологическими отличиями по сравнению с аналогичными характеристиками эпизоотических изолятов вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, выделенных на территории РФ.A common drawback of known vaccines against PRRS is their relatively low anti-epizootic effectiveness for the Russian Federation, due to the fact that the PRRS virus strains used for their production have antigenic and immunobiological differences compared to similar characteristics of epizootic isolates of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus isolated in the territory of the Russian Federation.
В связи с этим проблема создания вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой, обладающей высокой иммуногенной активностью и безвредностью, продолжает оставаться актуальной и является основным направлением текущих исследований.In this regard, the problem of creating a live culture dry vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome, which has high immunogenic activity and is harmless, continues to be relevant and is the main focus of current research.
В задачу создания настоящего изобретения входила разработка вакцины против РРСС живой культуральной сухой, создающей напряженный иммунитет в короткие сроки у привитых животных против циркулирующего на территории России эпизоотического вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней паневропейского подтипа.The objective of creating the present invention was to develop a live, dry culture vaccine against PRRS, which creates intense immunity in a short time in vaccinated animals against the epizootic virus of reproductive and respiratory syndrome of pigs of the pan-European subtype circulating in Russia.
Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала отечественных вакцин против РРСС живых культуральных сухих, обладающих антигенной, иммуногенной активностью и безвредностью, создающих напряженный иммунитет у привитых животных против циркулирующего на территории РФ эпизоотического вируса РРСС, кроме того имеющих непревзойденное значение для импортозамещения, а также обеспечения биологической и пищевой безопасности РФ.The technical result of using the proposed invention consists in expanding the arsenal of domestic vaccines against PRRS, live, dry cultures, possessing antigenic, immunogenic activity and harmlessness, creating intense immunity in vaccinated animals against the epizootic PRRS virus circulating in the territory of the Russian Federation, in addition, having unrivaled significance for import substitution, as well as ensuring biological and food security of the Russian Federation.
Указанный технический результат достигнут созданием вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой и способ изготовления вакцины, охарактеризованной следующей совокупностью признаков, отраженных ниже.The specified technical result is achieved by creating a live, dry culture vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome and a method for producing the vaccine, characterized by the following set of features, reflected below.
Разработанная вакцина в 1,0 см3 препарата содержит следующие основные компоненты: - активное вещество в виде аттенуированного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, репродуцированного в чувствительной биологической системе, с биологической активностью, не менее 105,75 lgТЦД50/см3, в количестве 75,0-80,0 мас.%, - целевая добавка, в качестве защитной среды, содержащая 50%-ный раствор сахарозы, 10%-ный раствор желатина и 20%-ный раствор ГЛА в соотношении 1,3:0,5:2,0 соответственно, в количестве 25,0-20,0 мас.%; в объемном соотношении и в количествах, обеспечивающих протективную иммунную активность антигена в организме животных после введения им целевого препарата.The developed vaccine in 1.0 cm3 of the preparation contains the following main components: - an active substance in the form of attenuated and purified antigen material from the porcine reproductive and respiratory syndrome virus strain "Borz" homologous to the causative agent of the infection, reproduced in a sensitive biological system, with a biological activity of at least 10 5.75 lgTCID 50 / cm3 , in an amount of 75.0-80.0 wt.%, - a target additive, as a protective medium, containing a 50% sucrose solution, 10% gelatin solution and 20% GLA solution in a ratio of 1.3: 0.5: 2.0, respectively, in an amount of 25.0-20.0 wt.%; in a volume ratio and in quantities that ensure the protective immune activity of the antigen in the body of animals after administration of the target preparation.
Штамм «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, полученный путем серийного пассирования на перевиваемых культурах клеток не свиного происхождения депонирован во Всероссийской государственной коллекции экзотических типов вируса ящура и других патогенов животных (ГКШМ) ФГБУ «ВНИИЗЖ» под регистрационным номером № 460-деп/23-10 ГКШМ ФГБУ «ВНИИЗЖ».The Borz strain of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus, obtained by serial passaging on continuous cell cultures of non-porcine origin, is deposited in the All-Russian State Collection of Exotic Types of Foot-and-Mouth Disease Virus and Other Animal Pathogens (GKShM) of the All-Russian Research Institute of Animal Health under registration number No. 460-dep/23-10 GKShM of the All-Russian Research Institute of Animal Health.
Для получения вируса, обладающего оптимальными биотехнологическими свойствами, использовали перевиваемую культуру клеток MARK-145 (почка зеленой мартышки).To obtain a virus with optimal biotechnological properties, a transplantable cell culture of MARK-145 (green monkey kidney) was used.
Для изготовления вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой в качестве чувствительной биологической системы используют перевиваемую культуру клеток MARK-145 (почка зеленой мартышки).To produce a live culture dry vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome, a transplantable cell culture MARK-145 (green monkey kidney) is used as a sensitive biological system.
В качестве активного вещества используют вирусную суспензию лиофилизированного аттенуированного штамма «Борз» вируса РРСС с титром инфекционной активности не менее 105,75 lg ТЦД50/см3. Для заражения культуры клеток MARK-145 используют вирус с титром инфекционной активности не менее 105,75 lg ТЦД50/см3 в дозе 7 мл/матрас (клинский). Внесенную вирусную суспензию экспонируют на монослое культуры клеток MARK-145 в термостате в течение часа при (37±0,5)°С. Культивирование вируса проводят в течение 3-4 суток при указанной температуре. При поражении вирусом площади монослоя не менее 80% (округление и появление светопреломляющего эффекта) проводят сбор вируса.The active substance is a viral suspension of the lyophilized attenuated Borz strain of PRRS virus with an infectious activity titer of at least 10 5.75 lg TCID 50 /cm 3 . To infect the MARK-145 cell culture, a virus with an infectious activity titer of at least 10 5.75 lg TCID 50 /cm 3 is used at a dose of 7 ml/mattress (Klinsky). The introduced viral suspension is exposed to a monolayer of MARK-145 cell culture in a thermostat for an hour at (37±0.5) °C. The virus is cultivated for 3-4 days at the specified temperature. If the monolayer area is affected by the virus by at least 80% (rounding and the appearance of a refractive effect), the virus is collected.
Для изготовления вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой используют антигенный материал из аттенуированного штамма «Борз» вируса РРСС, полученного в перевиваемой культуре клеток MARK-145 (почка зеленой мартышки) с титром инфекционной активности не менее 105,75 lg ТЦД50/см3. Вакцину против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живую культуральную сухую получают путем смешивания антигенного материала из аттенуированного штамма «Борз» вируса РРСС и целевой добавки в соотношении, мас.%, 75,0:25,0÷80,0:20,0 соответственно. В качестве целевой добавки используют растворы сахарозы, желатозы и гидролизата лактальбумина.To produce a live dry culture vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome, the antigen material from the attenuated Borz strain of the PRRS virus is used, obtained in a continuous cell culture of MARK-145 (green monkey kidney) with an infectious activity titer of at least 10 5.75 lg TCID 50 /cm 3 . The live dry culture vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome is obtained by mixing the antigen material from the attenuated Borz strain of the PRRS virus and the target additive in a ratio of 75.0:25.0÷80.0:20.0, respectively, by weight. Solutions of sucrose, gelatose and lactalbumin hydrolysate are used as the target additive.
Содержание антигенного материала и целевой добавки в прививной дозе вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой в соотношении, мас.%, 75,0:25,0÷80,0:20,0 является оптимальным, так как обеспечивает оптимальную протективную иммунную активность антигена в организме иммунизированного животного после введения им целевого препарата.The content of antigen material and target additive in the vaccinal dose of the live culture dry vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome in the ratio, wt.%, 75.0:25.0÷80.0:20.0 is optimal, since it ensures optimal protective immune activity of the antigen in the body of the immunized animal after administration of the target drug.
Полученную вакцину фасуют во флаконы по 2,0 см3, замораживают при температуре минус 50°С и подвергают лиофильному высушиванию.The resulting vaccine is packaged in 2.0 cm3 vials, frozen at minus 50°C and lyophilized.
Вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая сухая, расфасованная во флаконы, представляет собой однородную пористую массу цилиндрической формы светло-желтого цвета, растворяющуюся в течение 1-1,5 минут в физиологическом (изотоническом) растворе.The vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome, live dry, packaged in vials, is a homogeneous porous mass of cylindrical shape, light yellow in color, dissolving within 1-1.5 minutes in a physiological (isotonic) solution.
Полученный препарат подвергают контролю на стерильность, специфичность и иммунобиологическую активность в соответствии с показателями, установленными стандартом организации-изготовителя.The resulting drug is subjected to control for sterility, specificity and immunobiological activity in accordance with the indicators established by the standard of the manufacturing organization.
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые испрашивается правовая охрана:The proposed invention includes the following set of essential features that ensure the achievement of a technical result in all cases for which legal protection is sought:
1. Вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая.1. Vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome, live, dry culture.
2. Активное вещество в виде антигенного материала из аттенуированного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней в эффективном количестве.2. Active substance in the form of antigenic material from the attenuated Borz strain of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus in an effective amount.
3. Целевая добавка.3. Targeted supplement.
Существенным отличительным признаком предлагаемой вакцины является то, что в качестве активного вещества она содержит антигенный материал из аттенуированного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, обладающего высокой антигенной и иммуногенной активностью, в эффективном количестве.An essential distinguishing feature of the proposed vaccine is that it contains, as an active substance, antigenic material from the attenuated Borz strain of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus, which has high antigenic and immunogenic activity, in an effective amount.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:The proposed invention is also characterized by other distinctive features expressing specific forms of implementation or special conditions of its use:
1. Антигенный материал из аттенуированного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, репродуцированного в чувствительной биологической системе.1. Antigenic material from the attenuated Borz strain of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus, reproduced in a sensitive biological system.
2. Антигенный материал из аттенуированного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, репродуцированного в чувствительной биологической системе культуру клеток MARK-145 (почка зеленой мартышки).2. Antigenic material from the attenuated Borz strain of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus, reproduced in a sensitive biological system, the MARK-145 cell culture (green monkey kidney).
3. Антигенный материал из аттенуированного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, репродуцированного в чувствительной биологической системе культуру клеток MARK-145 с инфекционной активностью не менее 105,75 lg ТЦД50/см3.3. Antigenic material from the attenuated Borz strain of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus, reproduced in a sensitive biological system, the MARK-145 cell culture, with an infectious activity of at least 10 5.75 lg TCID 50 /cm 3 .
4. Антигенный материал из аттенуированного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, репродуцированного в чувствительной биологической системе перевиваемой культуры клеток MARK-145 (почка зеленой мартышки) с инфекционной активностью не менее 105,75 lg ТЦД50/см3, в количестве 75,0 80,0 мас.%.4. Antigenic material from the attenuated Borz strain of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus, reproduced in a sensitive biological system of the transplantable cell culture MARK-145 (green monkey kidney) with an infectious activity of at least 10 5.75 lg TCID 50 /cm 3 , in an amount of 75.0-80.0 wt.%.
5. Из целевых добавок защитная среда.5. From target additives protective environment.
6. Защитная среда в количестве 20,0 25,0 мас.%.6. Protective environment in the amount of 20.0-25.0 wt.%.
7. Антигенный материал из аттенуированного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, репродуцированного в перевиваемой культуре клеток MARK-145 (почка зеленой мартышки) с инфекционной активностью не менее 105,75 lg ТЦД50/см3, и защитная среда в соотношении, мас.%7. Antigenic material from the attenuated Borz strain of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus, reproduced in a transplantable cell culture MARK-145 (green monkey kidney) with an infectious activity of at least 10 5.75 lg TCID 50 /cm 3 , and a protective medium in a ratio of, wt.%
Предлагаемое изобретение расширяет арсенал вакцин против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живых культуральных сухих, обладающих высокой антигенной и иммуногенной активностью и обеспечивающих эффективную защиту восприимчивых животных от эпизоотического возбудителя репродуктивно-респираторного синдрома свиней, циркулирующего на территории России.The proposed invention expands the arsenal of vaccines against reproductive and respiratory syndrome of pigs, live, dry culture vaccines, which have high antigenic and immunogenic activity and provide effective protection of susceptible animals from the epizootic pathogen of reproductive and respiratory syndrome of pigs, circulating in the territory of Russia.
Достижение технического результата от использования предлагаемой вакцины объясняется тем, что в качестве активного вещества она содержит аттенуированный штамм «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней. Штамм «Борз» обладает высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью.The achievement of the technical result from the use of the proposed vaccine is explained by the fact that it contains the attenuated strain "Borz" of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus as an active substance. The strain "Borz" has high biological, antigenic and immunogenic activity.
Экспериментально подтверждена возможность его использования в составе вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней. Штамм «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней обеспечивает получение эффективной вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней, создающей защиту восприимчивых животных от возбудителя репродуктивно-респираторного синдрома свиней, циркулирующего на территории России.The possibility of its use in the vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome has been experimentally confirmed. The Borz strain of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus ensures the production of an effective vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome, which creates protection for susceptible animals from the porcine reproductive and respiratory syndrome pathogen circulating in Russia.
Сущность изобретения пояснена на графических материалах, на которых представлено:The essence of the invention is explained in graphic materials, which show:
Фиг.1 - Графическое изображение местоположения вакцинного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней по белку ORF7;Fig. 1 - Graphic representation of the location of the vaccine strain "Borz" of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus by the ORF7 protein;
Фиг.2 - Графическое изображение местоположения вакцинного штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней по белку ORF5.Fig. 2 - Graphic representation of the location of the vaccine strain "Borz" of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus by the ORF5 protein.
Штамм «Борз» вируса РРСС характеризуется следующими признаками и свойствами:The Borz strain of PRRS virus is characterized by the following features and properties:
Морфологические свойстваMorphological properties
Данный штамм относится к семейству Arteriviridae, роду Betaarterivirus, виду Betaarterivirus suid 1, тип 1, подтип 1. RNA-геномный, обладает морфологическими признаками, характерными для вируса РРСС.This strain belongs to the Arteriviridae family, the Betaarterivirus genus, the Betaarterivirus suid 1 species, type 1, subtype 1. RNA-genomic, has morphological features characteristic of the PRRS virus.
Вирионы вируса РРСС представляют сферические или аморфные частицы диаметром от 45 до 100 нм с ядром, заполняющим 3/4 вириона диаметром 25-35 нм. Длина генома РРСС составляет приблизительно 15000 нуклеотидов, которые кодируют как структурные, так и неструктурные белки. Неструктурные белки кодируются двумя открытыми рамками считывания (ORF)- ORF1a и ORF1b, которые расположены на конце 5`генома. Неструктурные белки были идентифицированы как основные белки, ответственные за ингибирование иммунного ответа, в частности за ингибирование выработки интерферона I типа. Структурные белки кодируются открытыми рамками считывания 2-7 на конце 3`вируса. На данный момент известно восемь структурных белков, пять из которых являются гликопротеинами: GP2, E, GP3, GP4, GP5 белок ORF5a, белки М и N. Вирусный нуклеокапсид образует N-белок. Структурные белки GP2, GP3, GP4, GP5 и М вызывают выработку нейтрализующих антител.PRRSV virions are spherical or amorphous particles with a diameter of 45 to 100 nm with a core filling 3/4 of the virion with a diameter of 25-35 nm. The PRRSV genome length is approximately 15,000 nucleotides, which encode both structural and nonstructural proteins. Nonstructural proteins are encoded by two open reading frames (ORFs) - ORF1a and ORF1b, which are located at the 5` end of the genome. Nonstructural proteins have been identified as the main proteins responsible for inhibition of the immune response, in particular for inhibition of type I interferon production. Structural proteins are encoded by open reading frames 2-7 at the 3` end of the virus. Currently, eight structural proteins are known, five of which are glycoproteins: GP2, E, GP3, GP4, GP5 protein ORF5a, proteins M and N. The viral nucleocapsid forms the N protein. Structural proteins GP2, GP3, GP4, GP5 and M cause the production of neutralizing antibodies.
Антигенные свойстваAntigenic properties
Штамм «Борз» вируса РРСС стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не обладает гемагглютинирующими свойствами. При вакцинации вирус индуцирует образование специфических антител, выявляемых в иммуноферментном анализе (ИФА) или реакции нейтрализации (РН).The Borz strain of PRRS virus is stably neutralized by homologous antiserum. The virus does not have hemagglutinating properties. When vaccinated, the virus induces the formation of specific antibodies detected in an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) or a neutralization reaction (NR).
Хемо и генотаксономическая характеристикаChemo and geno taxonomic characteristics
Оригинальность штамма подтверждена нуклеотидным секвенированием генов N (ОРС7) и GP5 (ОРС5) (фиг. 1 и фиг. 2). Идентификацию и специфичность штамма определяют методами полимеразной цепной реакции (ПЦР) и нуклеотидного секвенирования.The originality of the strain was confirmed by nucleotide sequencing of the N (ORC7) and GP5 (ORC5) genes (Fig. 1 and Fig. 2). Identification and specificity of the strain were determined by polymerase chain reaction (PCR) and nucleotide sequencing.
Нуклеотидное секвенирование гена ОРС5 подтвердило, что штамм «Борз» относится к европейскому генотипу вируса РРСС. Сравнение выведенных из нуклеотидных последовательностей ОРС5 аминокислотных последовательностей белка G5 показало, что штамм «Борз» отличается от штамма Lelystad по двум аминокислотным остаткам (а.о.). Двадцатый а.о. у штамма «КПР-96» представлен фенилаланином, а у штамма Lelystad лейцином, в 37 позиции белка G5 у штаммов «КПР-96» и Lelystad находятся аспаргин и аспаргиновая кислота, соответственно.Nucleotide sequencing of the ORF5 gene confirmed that the Borz strain belongs to the European genotype of the PRRS virus. Comparison of the amino acid sequences of the G5 protein deduced from the ORF5 nucleotide sequences showed that the Borz strain differs from the Lelystad strain by two amino acid residues (aa). The twentieth aa in the KPR-96 strain is represented by phenylalanine, and in the Lelystad strain by leucine, in position 37 of the G5 protein in the KPR-96 and Lelystad strains there are asparagine and aspartic acid, respectively.
Физические свойстваPhysical properties
Масса вириона от 49х103 Da до 55х103 Da. Плавучая плотность в градиенте хлористого цезия 1,18-1,2 г/мл.Virion mass from 49x10 3 Da to 55x10 3 Da. Buoyant density in a cesium chloride gradient is 1.18-1.2 g/ml.
Устойчивость к внешним факторамResistance to external factors
Штамм «Борз» вируса РРСС чувствителен к детергентам и органическим растворителям, таким как эфир, хлороформ, формальдегид, а также к ультрафиолетовому облучению и гамма-облучению. Наиболее стабилен при pH 6,8-7,4. При 60°С инактивируется через 10 минут. Низкие температуры его консервируют, в замороженном виде вирус сохраняется несколько лет.The Borz strain of PRRS virus is sensitive to detergents and organic solvents such as ether, chloroform, formaldehyde, as well as ultraviolet and gamma radiation. It is most stable at pH 6.8-7.4. At 60°C it is inactivated after 10 minutes. Low temperatures preserve it; in frozen form the virus is preserved for several years.
Дополнительные признаки и свойства:Additional features and properties:
Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.Reactogenicity - does not have reactogenic properties.
Патогенность - апатогенен для свиней.Pathogenicity - apathogenic for pigs.
Вирулентность - авирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.Virulence - avirulent for naturally susceptible animals upon contact, aerosol and parenteral infection.
Биотехнологические характеристикиBiotechnological characteristics
Штамм «Борз» вируса РРСС репродуцируется в перевиваемой культуре клеток: MARK-145 - (культура клеток почки макаки-резус).The Borz strain of PRRS virus is reproduced in a continuous cell culture: MARK-145 - (rhesus macaque kidney cell culture).
Штамм «Борз» обладает следующими биологическими свойствами: размножается с цитопатическим эффектом; безопасен для свиней; не реверсибелен (6 последовательных пассажей вакцинного вируса на без молозивных поросятах); не вызывает персистенции у привитых свиней и не определяется в крови через 7-10 дней после вакцинации; через 14 дней после иммунизации создает напряженный иммунитет, свободен от контаминации вирусами, бактериями, грибами и микоплазмами; длительно хранится в сухом и нативном виде при температуре минус (50,0±1,0)°C.The Borz strain has the following biological properties: multiplies with a cytopathic effect; is safe for pigs; is not reversible (6 consecutive passages of the vaccine virus on colostrum-free piglets); does not cause persistence in vaccinated pigs and is not detected in the blood 7-10 days after vaccination; 14 days after immunization creates intense immunity, is free from contamination by viruses, bacteria, fungi and mycoplasmas; is stored for a long time in dry and native form at a temperature of minus (50.0 ± 1.0) ° C.
По мнению заявителя, предлагаемая вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая, изготовленная из штамма «Борз», соответствует условиям патентоспособности «новизна» и «изобретательский уровень».According to the applicant, the proposed live culture dry vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome, made from the Borz strain, meets the patentability conditions of “novelty” and “inventive step”.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его исследования, которые не ограничивают объем изобретения.The essence of the proposed invention is explained by examples of its research, which do not limit the scope of the invention.
Пример 1. Получение вируссодержащей суспензии/антигена из штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней.Example 1. Obtaining a virus-containing suspension/antigen from the Borz strain of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus.
Репродукцию вируса РРСС штамма «Борз» проводили на монослойной перевиваемой линии клеток MARC-145. Культуру клеток выращивали на соответствующих питательных средах с добавлением сыворотки КРС до 10%. Перед внесением вируса клеточный монослой однократно промывали раствором Хенкса. Монослой инфицировали вирусом в дозе 0,01-0,1 ТЦД50 на клетку. Адсорбцию вируса проводили при (37,0±0,5)°С в течение часа. После этого в сосуды с инфицированным монослоем вносили среду Игла с добавлением фетальной сыворотки КРС в конечной концентрации до 5%, рН-7,2-7,4. Культивирование вируса проводили при (37,0±0,5)°С в течение 96-144 часов. Размножение вируса в культуре клеток определяли по характерному ЦПД. Флаконы, в которых наблюдали ЦПД с поражением 80% клеточного монослоя замораживали при минус (20,0±1,0)°С. Вирусную суспензию получали двукратным замораживанием-оттаиванием инфицированного монослоя, с последующим освобождением от клеточного дейтрита путем центрифугирования при 1500-2000 об/мин в течение 30 минут при температуре (6±2)°С. Полученный вируссодержащий материал/антиген использовали для приготовления вакцинных образцов.Reproduction of PRRS virus strain "Borz" was carried out on a monolayer continuous cell line MARC-145. The cell culture was grown on appropriate nutrient media with the addition of bovine serum up to 10%. Before adding the virus, the cell monolayer was washed once with Hank's solution. The monolayer was infected with the virus at a dose of 0.01-0.1 TCID 50 per cell. Virus adsorption was carried out at (37.0 ± 0.5) ° C for an hour. After that, Eagle's medium with the addition of fetal bovine serum at a final concentration of up to 5%, pH 7.2-7.4, was added to the vessels with the infected monolayer. Virus cultivation was carried out at (37.0 ± 0.5) ° C for 96-144 hours. Virus replication in the cell culture was determined by the characteristic CPE. Vials in which CPE with 80% cell monolayer damage was observed were frozen at minus (20.0±1.0)°C. Viral suspension was obtained by double freezing and thawing of the infected monolayer, followed by release from cellular detritus by centrifugation at 1500-2000 rpm for 30 minutes at a temperature of (6±2)°C. The resulting virus-containing material/antigen was used to prepare vaccine samples.
Биологические свойства вирусного сырья штамма «Борз», полученного на перевиваемой линии клеток MARC-145 оценивали по следующим показателям:The biological properties of the viral raw material of the Borz strain, obtained on the transplantable cell line MARC-145, were assessed according to the following indicators:
- отсутствие бактериальной и грибковой контаминации (ГОСТ 28085);- absence of bacterial and fungal contamination (GOST 28085);
- специфичность и отсутствие вирусной контаминации (ГФ XIV, том II, с. 2007-3008 (ОФС.1.7.2.0031.15);- specificity and absence of viral contamination (SP XIV, vol. II, pp. 2007-3008 (OPC.1.7.2.0031.15);
- инфекционная активность;- infectious activity;
Для определения отсутствия бактериальной и грибковой контаминации вирусной суспензии из штамма «Борз» использовали питательные среды Сабуро, мясопептонный бульон (МПБ), мясопептонный агар (МПА) и среду Китта-Тароцци. Все используемые бактериальные среды были проверены на ростовые свойства согласно ГОСТ 28085-89. Для испытания из трех флаконов (отдельно из каждого) с культуральным вирусом отбирали по 1 см3 вируссодержащего материала в 4 пробирки с тиогликолевой средой.To determine the absence of bacterial and fungal contamination of the viral suspension from the Borz strain, Sabouraud nutrient media, meat-peptone broth (MPB), meat-peptone agar (MPA) and Kitt-Tarozzi medium were used. All bacterial media used were tested for growth properties according to GOST 28085-89. For testing, 1 cm3 of virus-containing material was taken from three vials (separately from each) with the culture virus into 4 test tubes with thioglycollate medium.
Пробирки инкубировали при разных температурных режимах. По две пробирки с содержимым из каждого флакона выдерживали в термостате при температуре (37,0±0,5)°C, одну при (30,0±0,5)°C, одну при (22,0±0,5)°C. Через 7 суток из 3 пробирок, инкубируемых при (37,0±0,5)°C, делали пересев на следующие бактериальные среды: агар и жидкую среду Сабуро, МПБ и МПА, среду Китта-Тароцци и сахарный бульон. В среду Китта-Тароцци вносили по 1 см3, а в остальные по 0,5 см3 исследуемого материала и выдерживали в течение 7 суток при температуре (37,0±0,5)°C, со средой Сабуро при температуре (22,0±0,5)°C.The tubes were incubated at different temperature conditions. Two tubes with the contents of each bottle were kept in a thermostat at a temperature of (37.0±0.5)°C, one at (30.0±0.5)°C, one at (22.0±0.5)°C. After 7 days, the three tubes incubated at (37.0±0.5)°C were subcultured onto the following bacterial media: agar and liquid Sabouraud medium, MPB and MPA, Kitta-Tarozzi medium and sugar broth. 1 cm3 of the test material was added to Kitta-Tarozzi medium, and 0.5 cm3 to the others and kept for 7 days at a temperature of (37.0±0.5)°C, with Sabouraud medium at a temperature of (22.0±0.5)°C.
Все пробирки подвергались ежедневному визуальному контролю в течение 14 суток. На всех средах с высевами и пересевами роста бактериальной и грибковой микрофлоры не наблюдалось.All test tubes were visually inspected daily for 14 days. No bacterial or fungal microflora growth was observed on any media with inoculations or subcultures.
Контроль контаминации микоплазмами проводили в соответствии с требованиями ГФ XIV, том II, с. 2007-3008 (ОФС.1.7.2.0031.15). Вирусную культуральную суспензию замораживали при температуре минус 20°С и после размораживания центрифугировали 10 мин при 200 g (500 об/мин). Надосадочную жидкость в объеме по 1,0 см3 вносили в 2 пробирки с полужидкой средой Кагана (объем полужидкой среды Кагана в пробирке 10,0 см3) и инкубировали в течение 7 сут при температуре (37,0±0,5)°С. По окончании срока инкубации проводили второй пассаж на таком же количестве пробирок с полужидкой средой и в двух чашках Петри с твердой средой Кагана (толщина твердой среды 0,5-0,7 см). Количество пассажей должно быть не менее двух. Рост микоплазм на жидких и твердых питательных средах отсутствовал.Mycoplasma contamination control was performed in accordance with the requirements of the State Pharmacopoeia XIV, Vol. II, p. 2007-3008 (OFS.1.7.2.0031.15). The viral culture suspension was frozen at minus 20°C and, after defrosting, centrifuged for 10 min at 200 g (500 rpm). The supernatant in a volume of 1.0 cm3 was added to 2 test tubes with semi-liquid Kagan medium (the volume of semi-liquid Kagan medium in a test tube was 10.0 cm3 ) and incubated for 7 days at a temperature of (37.0±0.5)°C. At the end of the incubation period, the second passage was performed in the same number of test tubes with semi-liquid medium and in two Petri dishes with solid Kagan medium (thickness of the solid medium was 0.5-0.7 cm). The number of passages should be at least two. There was no growth of mycoplasmas on liquid and solid nutrient media.
Определение отсутствия вирусной контаминации проводили путем исследования вирусной суспензии методом ПЦР на наличие генома вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, и отсутствие посторонних геномов вирусов:The absence of viral contamination was determined by examining the viral suspension using the PCR method for the presence of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus genome and the absence of foreign viral genomes:
- болезни Ауески (БА);- Aujeszky's disease (AD);
- парвовирусной инфекции свиней (ПВИС);- porcine parvovirus infection (PPVI);
- классической чумы свиней (КЧС);- classical swine fever (CSF);
- гриппа свиней (ВГС);- swine influenza (HCV);
- M. hyopneumoniae.- M. hyopneumoniae .
В результате проведенных исследований в пробах вирусной суспензии обнаружен только геном вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней, соответствующий штамму «Борз». Геномы вирусов БА, ПВИС, КЧС, ВГС, а также возбудителя M. hyopneumoniae не обнаружены.As a result of the conducted studies, only the genome of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus corresponding to the Borz strain was detected in the samples of the viral suspension. The genomes of the BA, PVIS, CSF, HCV viruses, as well as the pathogen M. hyopneumoniae, were not detected.
Определение инфекционной активности проводили методом титрования, в культуре клеток MARK-145, в трех повторностях. Для этого готовили десятикратное разведение вируса с 10-1 по 10-7 на питательной среде Игла с добавлением фетальной сыворотки до 5%. Каждое из разведений вируса вносили по 1 см³ в 4 пенициллиновых флакона с монослоем клеток (предварительно отмытых средой Хенкса), начиная с наибольшего. Инфицированные и контрольные культуры клеток инкубировали при температуре (37,0±0,5)°С. Цитопатическое действие вируса учитывали ежедневно, окончательный учет результатов проводили через 144 ч. Титр вируса рассчитывали по методу Спирмена-Кербера. Результаты титрования считали достоверными при сохранении монослоя в контроле. Производственная серия антигена из штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней считается пригодной для изготовления вакцины, если она соответствует следующим требованиям: титр инфекционной активности после репродукции в монослое клеток не менее 5,75 lg ТЦД50/мл и отсутствие контаминации.Determination of infectious activity was carried out by titration method, in MARK-145 cell culture, in three replicates. For this purpose, a tenfold dilution of the virus was prepared with 10-1by 10-7on the Eagle nutrient medium with the addition of fetal serum up to 5%. Each of the virus dilutions was added by 1 cm³ to 4 penicillin vials with a cell monolayer (previously washed with Hanks' medium), starting with the largest. Infected and control cell cultures were incubated at a temperature of (37.0±0.5)°C. The cytopathic effect of the virus was taken into account daily, the final accounting of the results was carried out after 144 hours. The virus titer was calculated using the Spearman-Kerber method. The titration results were considered reliable if the monolayer was preserved in the control. The production batch of the antigen from the Borz strain of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus is considered suitable for the manufacture of a vaccine if it meets the following requirements: the titer of infectious activity after reproduction in a cell monolayer is not less than 5.75 lg TCD50/ml and absence of contamination.
Пример 2. Изготовление экспериментальной серии вакцины на основе штамма «Борз» вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухойExample 2. Production of an experimental series of vaccine based on the Borz strain of the porcine reproductive and respiratory syndrome virus, live culture dry
Для лиофилизации вирусную суспензию/антиген из штамма «Борз», полученную по примеру 1 стабилизировали, используя защитную среду в соотношении 75% вируссодержащего материала и 25% стабилизатора, расфасовали по 4,0 см3 во флаконы соответствующей вместимости, замораживали при динамике минимум 24 ч при температуре минус 60°С и сублимационно высушивали 48 ч при режимах глубокого вакуума: сушка без подогрева первые 3 ч, режим с нагревом 29 ч и досушивание с подогревом 12-16 ч при температуре 24-27°С.For lyophilization, the viral suspension/antigen from the Borz strain obtained according to Example 1 was stabilized using a protective medium in a ratio of 75% virus-containing material and 25% stabilizer, packaged in 4.0 cm3 vials of the appropriate capacity, frozen dynamically for at least 24 hours at a temperature of minus 60°C, and freeze-dried for 48 hours under deep vacuum conditions: drying without heating for the first 3 hours, a mode with heating for 29 hours, and final drying with heating for 12-16 hours at a temperature of 24-27°C.
Экспериментальные серии вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой хранили при температуре (6±2)°С и использовали при дальнейшей работе.Experimental series of the live culture dry vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome were stored at a temperature of (6±2)°C and used in further work.
Пример 3. Изучение стабильности свойств вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свинейExample 3. Study of the stability of the properties of a vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome живой культуральной сухойlive culture dry
Проводили изучение вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой (полученной в примере 2) по следующим показателям:A study was conducted of the live culture dry vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome (obtained in example 2) according to the following parameters:
- внешний вид;- appearance;
- отсутствие бактериальной и грибковой контаминации (ГОСТ 28085);- absence of bacterial and fungal contamination (GOST 28085);
- специфичность и отсутствие вирусной контаминации (ГФ XIV, том II, с. 2007-3008 (ОФС.1.7.2.0031.15);- specificity and absence of viral contamination (SP XIV, vol. II, pp. 2007-3008 (OPC.1.7.2.0031.15);
- инфекционная активность;- infectious activity;
- безвредность и ареактогенность;- harmlessness and non-reactogenicity;
- антигенная активность и длительность иммунитета.- antigenic activity and duration of immunity.
При осмотре внешнего вида вакцина имеет вид сухой однородной пористой массы светло-бежевого цвета. Примесей в препарате не обнаружено. Флаконы герметично укупорены, сколов и трещин нет.When examining the external appearance , the vaccine looks like a dry, homogeneous, porous mass of light beige color. No impurities were found in the preparation. The vials are hermetically sealed, there are no chips or cracks.
Определение отсутствия бактериальной и грибковой контаминации проводили как описано в пример 1. Для этого содержимое 3 флаконов вакцины, полученных в примере 2, растворяли внесением в каждый флакон стерильного физиологического (изотонического) раствора по 4,0 см3 до исходного объема и объединяли в общую пробу. Во всех посевах на питательные среды исследуемых проб экспериментальной серии вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой рост бактериальной и грибной микрофлоры отсутствует. Determination of the absence of bacterial and fungal contamination was carried out as described in Example 1. For this, the contents of 3 vials of the vaccine obtained in Example 2 were dissolved by adding 4.0 cm3 of sterile physiological (isotonic) solution to each vial to reach the initial volume and combined into a common sample. In all inoculations on nutrient media of the studied samples of the experimental series of the vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome, live culture dry growth of bacterial and fungal microflora was absent.
Контроль контаминации микоплазмами проводили в соответствии с требованиями ГФ XIV, том II, с. 2007-3008 (ОФС.1.7.2.0031.15), как описано в примере 1. Рост микоплазм на жидких и твердых средах отсутствовал. Control of contamination with mycoplasmas was carried out in accordance with the requirements of the State Pharmacopoeia XIV, Volume II, pp. 2007-3008 (OPS.1.7.2.0031.15), as described in Example 1. There was no growth of mycoplasmas on liquid and solid media.
Определение специфичности проводили путем определения специфических антител к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней через 21 день после однократной вакцинации поросят экспериментальной вакциной против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой, полученной в пример 2, согласно проекту инструкции по применению на поросятах-сосунах и супоросных свиноматках, и отсутствием специфических антител к возбудителям: The determination of specificity was carried out by determining specific antibodies to the porcine reproductive and respiratory syndrome virus 21 days after a single vaccination of piglets with an experimental live dry culture vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome, obtained in example 2, according to the draft instructions for use on suckling piglets and pregnant sows, and the absence of specific antibodies to pathogens:
- болезни Ауески (БА);- Aujeszky's disease (AD);
- парвовирусной инфекции свиней (ПВИС);- porcine parvovirus infection (PPVI);
- классической чумы свиней (КЧС);- classical swine fever (CSF);
- гриппа свиней (ВГС);- swine influenza (HCV);
- M. hyopneumoniae.- M. hyopneumoniae .
Полученные сыворотки крови исследовали методом ИФА и РТГА на наличие специфических антител против возбудителей:The obtained blood serums were examined by ELISA and RTGA for the presence of specific antibodies against pathogens:
- вируса КЧС с использованием коммерческого набора «Classical Swine Fever Virus (CSFV) Antibody Test Kit» (IDEXX), значение s/p<40 специфические антитела отсутствуют, значение s/p>50 наличие специфических антител;- CSFV virus using the commercial kit “Classical Swine Fever Virus (CSFV) Antibody Test Kit” (IDEXX), s/p value <40 specific antibodies are absent, s/p value >50 presence of specific antibodies;
- вируса РРСС с использованием коммерческого набора «Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Antibody Test Kit» (IDEXX), значение s/p<0,4 специфические антитела отсутствуют, значение s/p≥0,4 наличие специфических антител;- PRRS virus using the commercial Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Antibody Test Kit (IDEXX), s/p value<0.4 - no specific antibodies, s/p value≥0.4 - presence of specific antibodies;
- вируса ПВИС с использованием коммерческого «Набора для серодиагностики ПВИС в РТГА» производства ФГБУ «ВНИИЗЖ», значение ≥1:256 наличие специфических антител, менее 1:256 отсутствие специфических антител;- PVIS virus using the commercial “PVIS serodiagnosis kit in RTGA” manufactured by the Federal State Budgetary Institution “All-Russian Research Institute of Animal Health”, value ≥1:256 presence of specific antibodies, less than 1:256 absence of specific antibodies;
- вируса болезни Ауески с использованием коммерческого набора «HerdChek PPV gB Antibody Test Kit» (IDEXX), значение s/p<100 специфические антитела отсутствуют, значение s/p>100 наличие специфических антител;- Aujeszky's disease virus using the commercial HerdChek PPV gB Antibody Test Kit (IDEXX), s/p value<100 specific antibodies are absent, s/p value>100 presence of specific antibodies;
- ВГС с использованием коммерческих наборов ИФА HerdChek Swine Influenza H1N1 Antibody Test Kits (IDEXX Laboratories, USA) на наличие антител к вирусу гриппа свиней подтипов H1N1), значение s/p<0,4 специфические антитела отсутствуют, значение s/p≥0,4 наличие специфических антител;- HCV using commercial HerdChek Swine Influenza H1N1 Antibody Test Kits (IDEXX Laboratories, USA) for the presence of antibodies to the swine influenza virus of subtypes H1N1), the s/p value <0.4 indicates the absence of specific antibodies, the s/p value ≥0.4 indicates the presence of specific antibodies;
- M. hyopneumoniae с использованием набора фирмы Chekit, значение s/p>30 наличие специфических антител, s/p ≤ 30 отсутствие специфических антител.- M. hyopneumoniae using the Chekit kit, s/p>30 indicates the presence of specific antibodies, s/p ≤ 30 indicates the absence of specific antibodies.
В результате проведенных исследований, в пробах сывороток крови, полученных через 21 сутки после вакцинации, выявлены только специфические антитела к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней. Специфические антитела к вирусам БА, ПВИС, КЧС, ВГС а также возбудителя M. hyopneumoniae не обнаружены. Результаты испытаний представлены в таблице 1.As a result of the conducted studies, only specific antibodies to the porcine reproductive and respiratory syndrome virus were detected in blood serum samples obtained 21 days after vaccination. Specific antibodies to the BA, PVIS, CSF, HCV viruses and the pathogen M. hyopneumoniae were not detected. The test results are presented in Table 1.
Влияние параметра рН растворителя на инфекционную активность вакцины. Инфекционную активность образцов вакцины, полученной в примере 2, определяли методом титрования в культуре клеток MARC-145, где содержимое флаконов растворяли внесением в каждый флакон физиологического раствора с параметрами рН 6,0-6.4; 6,5-6,8; 7,0-7,5 и 7,6-8,0. Титрование исследуемых проб проводилось в трех повторностях по стандартной методике, титр вируса рассчитывали по методу Спирмена-Кербера в модификации Ашмарина-Воробъева [14]. Effect of the pH parameter of the solvent on the infectious activity of the vaccine. The infectious activity of the vaccine samples obtained in Example 2 was determined by titration in a MARC-145 cell culture, where the contents of the vials were dissolved by adding a physiological solution with pH parameters of 6.0-6.4; 6.5-6.8; 7.0-7.5 and 7.6-8.0 to each vial. Titration of the studied samples was carried out in three replicates using the standard method, the virus titer was calculated using the Spearman-Kerber method as modified by Ashmarin-Vorobyev [14].
Вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая - растворенная в физиологическом растворе с параметром рН 5,5-6,5 имела инфекционную активность 5,1 lg ТЦД50/см3. С параметром рН 6,5-6,9 имела инфекционную активность 5,4-5,25 lg ТЦД50/см3. Вакцина, растворенная в физиологическом растворе с параметром рН 7,0-7,4 имела инфекционную активность 5,8 lg ТЦД50/см3. Данные по влиянию рН разбавителя на инфекционную активность вакцины представлены в таблица 2.The live culture dry vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome - dissolved in a physiological solution with a pH of 5.5-6.5 had an infectious activity of 5.1 lg TCID 50 /cm 3 . With a pH of 6.5-6.9 it had an infectious activity of 5.4-5.25 lg TCID 50 /cm 3 . The vaccine dissolved in a physiological solution with a pH of 7.0-7.4 had an infectious activity of 5.8 lg TCID 50 /cm 3 . Data on the effect of diluent pH on the infectious activity of the vaccine are presented in Table 2.
Безвредность вакцины, полученной в примере 2, проверялась на лабораторных животных, а реактогенность на поросятах. The safety of the vaccine obtained in Example 2 was tested on laboratory animals, and its reactogenicity on piglets.
Для определения безвредности на лабораторных животных белые мыши рандомно были разделены на 2 группы (опытная и контрольная) по 10 голов в каждой. Первой группе белых мышей препарат вакцину вводили в объеме 0,5 см3, содержащей в дозе 4,0 lg ТЦД50. Для проведения исследований вакцину растворяли в стерильном растворе натрия хлорида 0,9% изотоническом. Для этого шприцом в 3 флакона с вакциной вносили 4,0 см3 растворителя. Тщательно перемешивали путем пропускания раствора несколько раз через шприц. После полного растворения препарата, полученный концентрированный раствор переносили в стерильную емкость, куда соблюдая правила асептики, был внесен растворитель из расчета 21,0 см3 на 1 флакон вакцины (50 прививных по 0,5 см3 доз во флаконе).To determine the safety of laboratory animals, white mice were randomly divided into 2 groups (experimental and control) with 10 animals in each. The first group of white mice was administered the vaccine in a volume of 0.5 cm 3 containing 4.0 lg TCD 50 at a dose. For the studies, the vaccine was dissolved in a sterile solution of 0.9% isotonic sodium chloride. For this, 4.0 cm 3 of solvent was added with a syringe to 3 vials with the vaccine. The solution was thoroughly mixed by passing it through the syringe several times. After the drug was completely dissolved, the resulting concentrated solution was transferred to a sterile container, where, observing aseptic rules, the solvent was added at a rate of 21.0 cm 3 per 1 vial of the vaccine (50 vaccination doses of 0.5 cm 3 per vial).
Приготовленный препарат вводили белым мышам подкожно в область спины. Период наблюдений за белыми мышами составлял 10 суток. Вакцину считали безвредной, если в течение срока наблюдения все лабораторные животные оставались живы и клинически здоровыми. По истечении срока наблюдения в месте подкожного введения вакцины локальные изменения отсутствовали, все мыши опытной группы остались живы. Вторая группа белых мышей не подвергалась испытаниям и использовалась в качестве контроля.The prepared preparation was administered to white mice subcutaneously in the back area. The observation period for white mice was 10 days. The vaccine was considered harmless if all laboratory animals remained alive and clinically healthy during the observation period. Upon expiration of the observation period, there were no local changes at the site of subcutaneous administration of the vaccine, all mice in the experimental group remained alive. The second group of white mice was not tested and was used as a control.
Реактогенность изучали на поросятах, которых рандомно разделили на 2 группы (опытная и контрольная), по 5 голов в каждой. Поросятам опытной группы препарат- вакцину вводили в объеме 2,0 см3, содержащей в дозе 4,0 lg ТЦД50. Для проведения исследований вакцину растворяли, для этого шприцом в 3 флакона с вакциной вносили 4,0 см3 растворителя. Тщательно перемешивали путем пропускания раствора несколько раз через шприц. После полного растворения препарата, полученный концентрированный раствор переносили в стерильную емкость, куда соблюдая правила асептики, был внесен растворитель из расчета 96,0 см3 на 1 флакон вакцины (50 прививных доз во флаконе). Приготовленный препарат вводили поросятам внутримышечно в области верхней трети шеи однократно. Наблюдение за животными продолжили в течение 14 суток после введения вакцины. Контрольная группа свиней, взятая в опыт, не подвергалась испытаниям, использовалась в качестве сравнения.Reactogenicity was studied on piglets, which were randomly divided into 2 groups (experimental and control), 5 animals in each. The piglets of the experimental group were administered the vaccine preparation in a volume of 2.0 cm3 , containing 4.0 lg TCID 50 at a dose. For the studies, the vaccine was dissolved by adding 4.0 cm3 of solvent with a syringe into 3 vials with the vaccine. The solution was thoroughly mixed by passing the solution through the syringe several times. After complete dissolution of the preparation, the resulting concentrated solution was transferred to a sterile container, where, observing the rules of asepsis, the solvent was added at a rate of 96.0 cm3 per 1 vial of the vaccine (50 vaccination doses in a vial). The prepared preparation was administered to the piglets intramuscularly in the upper third of the neck once. Observation of the animals was continued for 14 days after the administration of the vaccine. The control group of pigs taken into the experiment was not subjected to testing and was used as a comparison.
Ежедневный осмотр показал, что все поросята, которых использовали в опытных и контрольной группах оставались клинически здоровыми и живыми в течение всего срока наблюдения. Угнетения, изменения пищевых привычек и клинических отклонений не наблюдали. По истечению 14-ти суток поросята опытной группы подвергалась вскрытию, которое показало отсутствие каких-либо патологоанатомических изменений в месте введения вакцины.Daily inspection showed that all piglets used in the experimental and control groups remained clinically healthy and alive throughout the observation period. No depression, changes in eating habits or clinical deviations were observed. After 14 days, the piglets in the experimental group were autopsied, which showed the absence of any pathological changes at the site of vaccine administration.
Вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая безвредная для лабораторных животных и ареактогенна для естественно-восприимчивых животных свиней.Vaccines against reproductive and respiratory syndrome of pigs, live, cultured, dry, harmless for laboratory animals and areactogenic for naturally susceptible pigs.
Для определения длительности иммунитета после применения вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой использовали 14 свиней: 9 голов поросят и 2 головы ремонтных свиноматок (опытная группа) и 3 головы поросят (контрольная группа).To determine the duration of immunity after the use of a live dry culture vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome, 14 pigs were used: 9 piglets and 2 replacement sows (experimental group) and 3 piglets (control group).
Поросят и ремонтных свинок прививали однократно в область верхней трети шеи, в прививном объеме 2 см3, согласно проекту инструкции по применению.Piglets and gilts were vaccinated once in the area of the upper third of the neck, in a vaccinating volume of 2 cm3 , according to the draft instructions for use.
Для проведения исследований вакцину растворяли в стерильном растворе натрия хлорида 0,9% изотоническом.For the studies, the vaccine was dissolved in a sterile 0.9% isotonic sodium chloride solution.
Пробы сыворотки крови от животных отбирали до вакцинации и через каждые 30 дней после (в течении 6 месяцев окончание эксперимента). Все пробы сывороток крови были исследованы с применением набора «Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Antibody Test Kit» (IDEXX), в котором значение s/p<0,4 специфические антитела отсутствуют, значение s/p≥0,4 отмечается наличие специфических антител.Blood serum samples were collected from animals before vaccination and every 30 days thereafter (for 6 months until the end of the experiment). All blood serum samples were tested using the Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Antibody Test Kit (IDEXX), in which the s/p value <0.4 indicates the absence of specific antibodies, and the s/p value ≥0.4 indicates the presence of specific antibodies.
Все животные до вакцинации были серонегативны к вирусу РРСС. Специфические антитела к вирусу РРСС выявили через 1 мес. после иммунизации у 100% поросят и ремонтных свиноматок, среднее значение s/p по группе составляло - 0,63. Положительная динамика накопления специфических антител к вирусу РРСС наблюдалась до 4-го месяца, в котором среднее значение s/p составляло 0,7 по группе. На пятый месяц после вакцинации, у 100% животных из опытной группы, специфические титры антител к вирусу РРСС имели положительные значения s/p, и в среднем составили 0,4 (минимальное пороговое значение). К шестому месяцу после вакцинации, только у 45 % животных из опытных групп, специфические антитела выявляли в значимых значениях s/p, которые в среднем по группе составляло 0,39.All animals were seronegative to PRRS virus before vaccination. Specific antibodies to PRRS virus were detected 1 month after immunization in 100% of piglets and replacement sows, the average s/p value in the group was - 0.63. Positive dynamics of accumulation of specific antibodies to PRRS virus was observed until the 4th month, when the average s/p value was 0.7 in the group. In the fifth month after vaccination, in 100% of animals from the experimental group, specific titers of antibodies to PRRS virus had positive s/p values, and on average amounted to 0.4 (minimum threshold value). By the sixth month after vaccination, only in 45% of animals from the experimental groups, specific antibodies were detected in significant s/p values, which on average in the group was 0.39.
Таким образом, в ходе проведенных исследований экспериментально было доказано, что однократная иммунизация вакциной против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой поросят и ремонтных свиноматок, вызывает формирование иммунитета, который сохраняется не менее 4 месяцев. В то же время, необходимо отметить, что у контрольной группы животных, находившихся в одном боксе с опытной группой на всем протяжении отбора проб крови, для исследования на наличие специфических антител к вирусу РРСС, результаты ИФА были отрицательными. Результаты опыта по изучению длительности иммунитета после однократной вакцинации представлены в таблице 3.Thus, in the course of the conducted studies it was experimentally proven that a single immunization with the vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome of live cultured dry piglets and replacement sows causes the formation of immunity, which lasts for at least 4 months. At the same time, it should be noted that in the control group of animals, which were in the same box with the experimental group throughout the entire period of blood sampling, for the study of the presence of specific antibodies to the PRRS virus, the ELISA results were negative. The results of the experiment on studying the duration of immunity after a single vaccination are presented in Table 3.
Пример 4. Определение антигенной активности вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой на поросятах, полученных от вакцинированных свиноматок.Example 4. Determination of the antigenic activity of a live, dry culture vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome on piglets obtained from vaccinated sows.
В исследовании использовали 3 свиноматок первого триместра супоросности, серонегативных к вирусу РРСС, которых вакцинировали вакциной, полученной в примере 2 в первом триместре супоросности в прививном объеме 2 см3 внутримышечно в верхнюю треть шеи. Для проведения исследований вакцину растворяли в стерильном растворе натрия хлорида 0,9% изотоническом. Отбор проб сыворотки крови у свиноматок проводили до вакцинации, через 14 и 21 день после вакцинации. Кровь отбирали из хвостовой вены.The study involved 3 PRRSV seronegative first trimester sows vaccinated with the vaccine obtained in Example 2 in the first trimester of gestation in a 2 cm3 inoculation volume intramuscularly into the upper third of the neck. For the study, the vaccine was dissolved in sterile 0.9% isotonic sodium chloride solution. Blood serum samples were collected from the sows before vaccination and 14 and 21 days after vaccination. Blood was collected from the tail vein.
Свиноматки опоросились на 113-114 день после осеменения. От которых был получен приплод 10, 12 и 13 поросят, соответственно. Все свиноматки принесли живых здоровых, без патологий поросят. Результаты изучения антигенной активности вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой в ИФА на супоросных свиноматках, вакцинированных в первом триместре представлены в таблице 4.The sows farrowed on the 113-114 day after insemination. From which the litter of 10, 12 and 13 piglets was obtained, respectively. All sows gave birth to live healthy piglets without pathologies. The results of the study of the antigenic activity of the vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome live culture dry in ELISA on pregnant sows vaccinated in the first trimester are presented in Table 4.
Через 21 день всех поросят рандомно разделили на три группы по 10 голов в каждой, а также, контрольная группа - 5 голов. Вакцину вводили поросятам, полученным от вакцинированных свиноматок, однократно на 21 день в прививном объеме 2 см3 внутримышечно в верхнюю треть шеи. Отбор проб сыворотки крови от поросят проводили на 10 и 21 сутки жизни до вакцинации, и через 14, 28 и 36 дней после вакцинации. Кровь отбирали из краниальной полой вены. На 10 сутки жизни у всех поросят в ИФА выявляли колостральные антитела к вирусу РРСС в средних по группам значениях s/p от 0,65 до 0,71, которые снижались к 21 дню жизни до 0,26-0,31 соответственно. Через 14, 28 и 36 дней после вакцинации, проявилась положительная динамика в определении специфических антител к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней. В то время как у животных контрольной группы наблюдалась отрицательная динамика выявления специфических антител к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней к концу опыта. Ежедневный осмотр показал, что все поросята, которых использовали в опыте оставались клинически здоровыми и живыми. Какого-либо угнетения, изменения пищевых привычек и клинических отклонений не наблюдали. По результатам исследований сделано заключение, что вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая безвредна и антигенноактивна для поросят, полученных от вакцинированных свиноматок, и подвергшихся иммунизации в возрасте 21 день. Результаты исследования по уровню колострального и вакцинного иммунитета у поросят представлены в таблице 5.After 21 days, all piglets were randomly divided into three groups of 10 piglets each, and a control group of 5 piglets. The vaccine was administered to piglets obtained from vaccinated sows once on day 21 in a vaccinating volume of 2 cm3 intramuscularly in the upper third of the neck. Blood serum samples from piglets were collected on days 10 and 21 of life before vaccination, and 14, 28 and 36 days after vaccination. Blood was collected from the cranial vena cava. On day 10 of life, colostral antibodies to the PRRS virus were detected in all piglets in ELISA in average group s/p values from 0.65 to 0.71, which decreased by day 21 of life to 0.26-0.31, respectively. Positive dynamics in the determination of specific antibodies to the porcine reproductive and respiratory syndrome virus were observed 14, 28 and 36 days after vaccination. While the animals of the control group showed negative dynamics in the detection of specific antibodies to the porcine reproductive and respiratory syndrome virus by the end of the experiment. Daily examination showed that all piglets used in the experiment remained clinically healthy and alive. No depression, changes in eating habits or clinical abnormalities were observed. Based on the results of the studies, it was concluded that the live culture dry porcine reproductive and respiratory syndrome vaccine is harmless and antigenically active for piglets obtained from vaccinated sows and immunized at the age of 21 days. The results of the study on the level of colostral and vaccine immunity in piglets are presented in Table 5.
Пример 5. Изучение эффективности вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой на свинокомплексах.Example 5. Study of the effectiveness of a live, dry culture vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome on pig farms.
Проведены испытания эффективности вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой, полученной в примере 2, на свинокомплексе №1, насчитывающем 35000 голов свиней, в котором наблюдали аборты у свиноматок, сопровождающиеся мертворождением, а также высокий уровень смертности у поросят сосунов. Изучение безвредности и иммуногенности вакцины (предлагаемое изобретение) проводили одновременно.The effectiveness of the live culture dry vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome obtained in Example 2 was tested on pig complex No. 1, numbering 35,000 pigs, where abortions in sows accompanied by stillbirths were observed, as well as a high mortality rate in suckling piglets. The study of the harmlessness and immunogenicity of the vaccine (the proposed invention) was carried out simultaneously.
Для проведения испытания были сформированы сопоставимые по возрасту, упитанности и количеству группы животных, сформированные в 2 основных группы поросят не старше 23-25 суточного возраста контрольная и опытная. Вакцину применяли внутримышечно в область верхней трети шеи животным опытной группы в терапевтической дозе - 2,0 см3 однократно. В течение 14 суток после введения препарата за животными велось клиническое наблюдение, с целью учета отклонений в поведении и состоянии животных. После вакцинации в опытной группе в течение 7 суток проводили термометрию у 25 голов, при этом температура тела у животных была в пределах физиологической нормы от 38,2 до 40,1°С.To conduct the test, groups of animals comparable in age, fatness and quantity were formed, formed into 2 main groups of piglets no older than 23-25 days of age - control and experimental. The vaccine was administered intramuscularly in the upper third of the neck of animals of the experimental group in a therapeutic dose of 2.0 cm3 once. For 14 days after the administration of the drug, the animals were clinically observed in order to record deviations in the behavior and condition of the animals. After vaccination, thermometry was performed in 25 heads of the experimental group for 7 days, while the body temperature of the animals was within the physiological norm from 38.2 to 40.1 ° C.
Результаты изучения эффективности вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой на поросятах группы отъёма, представленные в таблице 6 свидетельствуют о том, что в опытной группе (вакцинированные сектора) за период доращивания количество заболевших, вынужденно убитых и сданных на санитарный брак было меньше, по сравнению с контрольной группой. Среднесуточные привесы в опытной группе были выше в среднем на 8 грамм. Анализ заболеваемости показал, что в опытной группе большую часть заболевших составляли животные с нарушением функций желудочно-кишечного тракта и травмами, в то время как в контрольной группе с респираторными нарушениями.The results of the study of the effectiveness of the live dry culture vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome on piglets of the weaning group, presented in Table 6, indicate that in the experimental group (vaccinated sectors) during the growing period the number of sick animals, forcedly killed and submitted for sanitary rejection was less, compared to the control group. The average daily weight gain in the experimental group was higher by an average of 8 grams. The analysis of morbidity showed that in the experimental group, the majority of sick animals were animals with gastrointestinal tract dysfunction and injuries, while in the control group with respiratory disorders.
Вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая (предлагаемое изобретение) вводился также свиноматкам до 45-50 дней супоросности, в соответствии с прилагаемым проектом инструкции, внутримышечно в область верхней трети шеи в терапевтической дозе - 2,0 см3 однократно. Вакцинация репродуктивного поголовья позволила значительно снизить количество абортов, уровень мертворождений, а также позволило повысить количество и сохранность приплода.The vaccine against reproductive and respiratory syndrome of pigs, live, cultured, dry (the proposed invention) was also administered to sows up to 45-50 days of gestation, in accordance with the attached draft instructions, intramuscularly in the area of the upper third of the neck in a therapeutic dose of 2.0 cm3 once. Vaccination of reproductive livestock made it possible to significantly reduce the number of abortions, the level of stillbirths, and also made it possible to increase the number and safety of offspring.
Эффективность вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая (предлагаемое изобретение) изучена на свинокомплексе №2. Заболевание в основном проявлялось в респираторной форме на подсосных поросятах. Общий уровень заболевших доходил до 80%, а падежа до 25% (табл. 7).The effectiveness of the vaccine against reproductive and respiratory syndrome of pigs, live, cultured, dry (the proposed invention), was studied at pig farm No. 2. The disease mainly manifested itself in the respiratory form in suckling piglets. The overall level of cases reached 80%, and mortality up to 25% (Table 7).
Для проведения испытаний были сформированы опытная и контрольная группы из поросят 1-3 суточного возраста, сопоставимые по возрасту, физиологическому состоянию и количеству. Поросят вакцинировали, начиная с первых дней жизни. В 28-ом дневном возрасте поросята были переведены в группу доращивания, слабые и отстающие в росте/весе животные выбраковывались. Результаты испытания вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая (предлагаемое изобретение) на поросятах в свинокомплексе №2 представлены в таблице 7, из которых видно, что в опытной группе заболеваемость и смертность были ниже чем в контрольной (не вакцинированные поросята). Сохранность за период доращивания также была выше у привитых животных 92,9% против 82,7 % в контрольной группе.To conduct the tests, experimental and control groups were formed from piglets aged 1-3 days, comparable in age, physiological condition and quantity. The piglets were vaccinated starting from the first days of life. At the age of 28 days, the piglets were transferred to the growing group, weak and lagging in growth/weight animals were culled. The results of testing the vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome live culture dry (the proposed invention) on piglets in pig complex No. 2 are presented in Table 7, from which it is evident that in the experimental group the morbidity and mortality were lower than in the control group (non-vaccinated piglets). Survival during the growing period was also higher in vaccinated animals 92.9% versus 82.7% in the control group.
В результате экспериментов подтверждена эффективность вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой из штамма «Борз» (предлагаемое изобретение) для специфической профилактики свиней.As a result of experiments, the effectiveness of the live culture dry vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome from the Borz strain (proposed invention) for specific prophylaxis of pigs was confirmed.
Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемого изобретения следующей совокупности условий:Thus, the above information indicates that the following set of conditions are met when using the proposed invention:
- вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;- a live, dry culture vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome, embodying the proposed invention, is intended for use in agriculture, namely in veterinary virology and biotechnology;
- вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая, изготовленная на основе штамма «Борз» репродуктивно-респираторного синдрома свиней в соответствии с предлагаемым изобретение, расширяет арсенал вакцин против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живых культуральных сухих, обладающих высокой иммуногенной активностью и безвредностью, создающих напряженный иммунитет у привитых животных, против циркулирующего на территории РФ эпизоотического вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней.- a live, dry, cultured vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome, manufactured on the basis of the Borz strain of porcine reproductive and respiratory syndrome in accordance with the proposed invention, expands the arsenal of live, dry, cultured vaccines against porcine reproductive and respiratory syndrome, which have high immunogenic activity and are harmless, creating intense immunity in vaccinated animals against the epizootic virus of porcine reproductive and respiratory syndrome circulating in the territory of the Russian Federation.
Следовательно, предлагаемое изобретение соответствует условию патентоспособности «промышленная применимость».Consequently, the proposed invention meets the patentability requirement of “industrial applicability”.
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение: «Вакцина против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живая культуральная сухая и способ изготовления вакцины»:Sources of information taken into account when drafting the description of the invention for the application for the issuance of a Russian Federation patent for the invention: “Vaccine against reproductive and respiratory syndrome of pigs, live, cultured, dry, and method for producing the vaccine”:
1. Аборты свиноматок невыясненной этиологии в Курской области / А.Л. Семенихин, И.Ф. Вишняков, В.А. Седов [и др.] // Вопр. вет. вирусол., микробиол. и эпизоотол.: матер. науч. конф. ВНИИВВиМ.-Покров,1992.-С.244-246.1. Abortions of sows of unknown etiology in Kursk region / A.L. Semenikhin, I.F. Vishnyakov, V.A. Sedov [et al.] // Vopr. vet. virol., microbiol. i epizootol.: mater. nauch. conf. VNIIVViM.-Pokrov, 1992.-P.244-246.
2. Репродуктивно - респираторный синдром свиней (“синее ухо”) / В.А. Мищенко, В.М. Авилов, В.М. Захаров [и др.] // Ветеринария.-1994.-№9.-С.22-24.2. Reproductive and respiratory syndrome of pigs (“blue ear”) / V.A. Mishchenko, V.M. Avilov, V.M. Zakharov [et al.] // Veterinary Science.-1994.-№9.-P.22-24.
3. Comparative analysis of routes of immunization of a live porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) vaccine in a heterologous virus challenge study/ Kang Ouyang1, Jagadish Hiremath1, Basavaraj Binjawadagi1, [et al] // Veterinary Reseach, 2016, p.47-45.3. Comparative analysis of routes of immunization of a live porcine reproductive and respiratory syndrome virus (PRRSV) vaccine in a heterologous virus challenge study/ Kang Ouyang1, Jagadish Hiremath1, Basavaraj Binjawadagi1, [et al] // Veterinary Reseach, 2016, p. 47-45.
4. Christianson W.T., Joo H.S. Porcine reproductive and respiratory syndrome: A review // Swine Health and Production.-1994.-V2,№2.-P.10-28.4. Christianson W.T., Joo H.S. Porcine reproductive and respiratory syndrome: A review // Swine Health and Production.-1994.-V2, No. 2.-P.10-28.
5. Патент РСТ №93/07898; А 61 к 39/12, G 01 N 33/569, C 12 n 7/00; 29.04.935. Patent PCT No. 93/07898; A 61 k 39/12, G 01 N 33/569, C 12 n 7/00; 29.04.93
6. Патент US546778, С 12 N 7/00, 19.12.95 г.6. Patent US546778, C 12 N 7/00, 12/19/95
7. Патент US5587164: А 61 К 39/00, 39/12, 39/38,39/193; 24.12.96 г.7. Patent US5587164: A 61 K 39/00, 39/12, 39/38,39/193; 12/24/96.
8. Патент US5866401; С 12 N 7/08, 7/01, 7/00, 7/02, 02.02.99 г.8. Patent US5866401; C 12 N 7/08, 7/01, 7/00, 7/02, 02.02.99.
9. Патент РСТ 2007130801, А 61К 39/12, С12N 7/00; 20.07.20069. Patent RCT 2007130801, A 61K 39/12, C12N 7/00; 20.07.2006
10. Патент RU2779552 С1, 08.09.202210. Patent RU2779552 C1, 09/08/2022
11. https://vetfarmgarant.ru/catalog/svinovodstvo/yunistreyn-rrss/11. https://vetfarmgarant.ru/catalog/svinovodstvo/yunistreyn-rrss/
12. https://vetprod.ru/portsilis-prrs - :~:text=%D0%96%D0%B8%D0%B2%D0%B0%D1%8F%20%D0%B2%D0%B0%D0%BA%D1%86%D0%B8%D0%BD%D0%B0%20%D0%B2%20%D1%84%D0%BE%D1%80%D0%BC%D0%B5%20%D0%BB%D0%B8%D0%BE%D1%84%D0%B8%D0%BB%D0%B8%D0%B7%D0%B0%D1%82%D0%B0,%D0%B1%D0%B5%D0%BB%D0%BE%D0%B3%D0%BE%20%D0%B4%D0%BE%20%D1%81%D0%B2%D0%B5%D1%82%D0%BB%D0%BE%2D%D0%B6%D0%B5%D0%BB%D1%82%D0%BE%D0%B3%D0%BE%20%D1%86%D0%B2%D0%B5%D1%82%D0%B0.12. https://vetprod.ru/portsilis-prrs - :~:text=%D0%96%D0%B8%D0%B2%D0%B0%D1%8F%20%D0%B2%D0%B0% D0%BA%D1%86%D0%B8%D0%BD%D0%B0%20%D0%B2%20%D1%84%D0%BE%D1%80%D0%BC%D0%B5%20% D0%BB%D0%B8%D0%BE%D1%84%D0%B8%D0%BB%D0%B8%D0%B7%D0%B0 %D1%82%D0%B0,%D0%B1%D0%B5%D0%BB%D0%BE%D0%B3%D0%BE%20%D0%B4%D0%BE%20%D1%81% D0%B2%D0%B5%D1%82%D0%BB%D0%BE%2D%D0%B6%D0%B5%D0%BB%D1%82%D0%BE%D0%B3%D0%BE% 20%D1%86%D0%B2%D0%B5%D1%82%D0%B0.
13. https://www.boehringer-ingelheim.com/ru/veterinarnykh-preparatov/veterinarnye-preparaty/reprocikrrrss-eu13. https://www.boehringer-ingelheim.com/ru/veterinarnykh-preparatov/veterinarnye-preparaty/reprocikrrrss-eu
14. Ashmarin I.P., Vorob’ev A.A. [Statistical Methods in Microbiological Research]. Leningrad: “Medgiz” [Leningrad divi- sion]; 1962. 180 p.14. Ashmarin I.P., Vorob’ev A.A. [Statistical Methods in Microbiological Research]. Leningrad: “Medgiz” [Leningrad division]; 1962. 180 p.
Таблица 1Table 1
Специфичность и отсутствие вирусной контаминации к возбудителям ПВИС,Specificity and absence of viral contamination to pathogens of PVIS,
болезни Ауески, КЧС, ВГС, M. hyopneumoniae экспериментальной вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой (предлагаемое изобретение) Aujeszky's disease, CSF, HCV, M. hyopneumoniae experimental vaccine against reproductive and respiratory syndrome of pigs live culture dry (proposed invention)
до и через 21 сутки после введения вакцины (*)before and 21 days after the vaccine administration (*)
Примечание: «(-)» - результат отрицательный;Note: "(-)" - the result is negative;
«(+)» - результат положительный"(+)" - the result is positive
*-интерпретация результата*-interpretation of the result
Таблица 2Table 2
Определение инфекционной активности экспериментальных образцов вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой (предлагаемое изобретение) разведенной в 0,9% физиологическом растворе с различными показателям рНDetermination of infectious activity of experimental samples of vaccine against reproductive and respiratory syndrome of pigs live culture dry (proposed invention) diluted in 0.9% physiological solution with different pH values
n=2n=2
ностьness
активность, lg ТЦДactivity, lg TCD
5050
/см/cm
33
результат по группеgroup result
Таблица 3Table 3
Результаты изучения длительности иммунитетаResults of the study of the duration of immunity
после однократного введения вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой (предлагаемое изобретение) after a single administration of the vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome live culture dry (proposed invention)
животныхanimals
животногоanimal
/положит.number of samples studied
/put.
0,1 0.9 ±
0.1
0,1 0.4 ±
0.1
/положит.number of samples studied
/put.
Примечание: значение ИФА: s/p < 0,4 специфические антитела отсутствуют,Note: ELISA value: s/p < 0.4 specific antibodies are absent,
s/p ≥ 0,4 наличие специфических антител;s/p ≥ 0.4 presence of specific antibodies;
Таблица 4Table 4
Антигенная активность вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой (предлагаемое изобретение) на супоросных свиноматках, вакцинированных в первом триместреAntigenic activity of the vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome live culture dry (proposed invention) on pregnant sows vaccinated in the first trimester
свиноматкиsows
Таблица 5Table 5
Результаты исследования колострального и вакцинального иммунитета у поросят, полученных от привитых вакциной (предлагаемое изобретение) свиноматокResults of the study of colostral and vaccine immunity in piglets obtained from sows vaccinated with the vaccine (proposed invention)
п/пp/p
Примечание: Значение ИФА s/p < 0,4 специфические антитела отсутствуют,Note: ELISA s/p value < 0.4 means there are no specific antibodies,
s/p ≥ 0,4 наличие специфических антител;s/p ≥ 0.4 presence of specific antibodies;
* - после отбора крови проведена вакцинация* - vaccination was carried out after blood sampling
Таблица 6Table 6
Результаты эффективности вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой (предлагаемое изобретение) на поросятах группы отъёма на свинокомплексе №1Results of the effectiveness of the vaccine against reproductive and respiratory syndrome of pigs live culture dry (proposed invention) on piglets of the weaning group at pig complex No. 1
Таблица 7Table 7
Результаты эффективности вакцины против репродуктивно-респираторного синдрома свиней живой культуральной сухой (предлагаемое изобретение) на поросятах группы подсоса на свинокомплексе №2Results of the effectiveness of the vaccine against reproductive and respiratory syndrome of pigs live culture dry (proposed invention) on piglets of the suckling group at pig complex No. 2
п/пp/p
Claims (3)
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2825899C1 true RU2825899C1 (en) | 2024-09-02 |
Family
ID=
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012110489A2 (en) * | 2011-02-17 | 2012-08-23 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Novel european prrsv strain |
| RU2019136252A (en) * | 2017-04-13 | 2021-05-13 | Интервет Интернэшнл Б.В. | VACCINES CONTAINING SWINE PATHOGENS FOR ASSOCIATED UNMIXED USE |
| RU2781446C1 (en) * | 2018-12-27 | 2022-10-12 | Байопоа, Инк. | Chimeric porcine reproductive and respiratory syndrome virus and vaccine using said virus |
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012110489A2 (en) * | 2011-02-17 | 2012-08-23 | Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh | Novel european prrsv strain |
| RU2019136252A (en) * | 2017-04-13 | 2021-05-13 | Интервет Интернэшнл Б.В. | VACCINES CONTAINING SWINE PATHOGENS FOR ASSOCIATED UNMIXED USE |
| RU2781446C1 (en) * | 2018-12-27 | 2022-10-12 | Байопоа, Инк. | Chimeric porcine reproductive and respiratory syndrome virus and vaccine using said virus |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ES2962449T3 (en) | Recombinant expression of PCV2b ORF2 protein in insect cells | |
| TW201828982A (en) | Vaccine against porcine small virus and porcine reproductive and respiratory syndrome virus and preparation method thereof | |
| RU2593718C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease types a, o, asia-1 | |
| RU2451745C2 (en) | A 2045/KYRGYZSTAN/ 2007 STRAIN OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VIRUS Aphtae epizooticae TYPE A FOR ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC PERFORMANCE CONTROL OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VACCINES AND FOR PRODUCTION OF BIOPREPARATIONS FOR DIAGNOSIS AND SPECIFIC PREVENTION OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE TYPE A | |
| RU2663004C2 (en) | Stabilised fmdv capsids | |
| RU2825899C1 (en) | Live cultural dry vaccine against porcine reproductive-respiratory syndrome and method for preparing vaccine | |
| RU2665849C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease type o | |
| RU2403061C1 (en) | Inactivated combined vaccine against infectious rhinotracheitis, paraflu-3, respiratory syncytial disease, viral diarrhea and pasteurellosis of cattle | |
| RU2563522C1 (en) | STRAIN O №2102/Zabaikalsky/2010 FMD VIRUS Aphtae epizooticae OF TYPE O FOR CONTROL OF ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC ACTIVITY OF FMD VACCINES AND FOR PRODUCTION OF BIOLOGICAL PRODUCTS FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PROPHYLAXIS OF FMD OF TYPE O | |
| RU2806601C1 (en) | Borz strain of porcine reproductive and respiratory syndrome virus betaarterivirus suid 1 genus arterivirus for production of biological products for specific prevention of porcine reproductive and respiratory syndrome | |
| RU2269361C2 (en) | Associated emulsion inactivated vaccine against porcine reproductive and respiratory syndrome (prrs) and porcine parvovirus infection (ppvi) | |
| RU2399668C1 (en) | Swine transmissible gastroenteritis "t=-96" virus strain used for manufacturing of diagnostic and vaccine preparations | |
| RU2266326C1 (en) | Transmissible gastroenteritis of swine virus strain for production of diagnosis and vaccine preparations | |
| RU2682876C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine for o-type aphthous fever | |
| RU2266327C1 (en) | Transmissible gastroenteritis of swine virus strain for production of diagnosis and vaccine preparations | |
| RU2266328C1 (en) | Transmissible gastroenteritis of swine virus strain for production of diagnosis and vaccine preparations | |
| RU2801949C1 (en) | Classical swine fever virus pestivirus strain "ck" for the manufacture of biological products for the specific prevention of classical swine fever | |
| RU2808703C1 (en) | Labeled subunit vaccine against classical swine fever, method of its preparation and use | |
| RU2316346C2 (en) | Inactivated emulsion vaccine against swine's reproductive-respiratory syndrome | |
| RU2449013C2 (en) | Nadl-arriah virus strain of bovine viral diarrhoea for making biopreparations for diagnosis, specific prevention and treatment of bovine viral diarrhoea | |
| RU2812330C1 (en) | Associated vaccine against panleukopenia, calicivirus and feline viral rhinotracheitis | |
| RU2796988C1 (en) | Rich strain of the canine coronavirus enteritis virus for the manufacture of biological products for the diagnosis and specific prevention of canine coronavirus enteritis | |
| RU2603255C1 (en) | STRAIN A N2155/Baikal/2013 OF MURRAIN VIRUS Aphtae epizooticae TYPE A FOR CONTROL OF ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC ACTIVITY AND TO PRODUCE BIOPREPARATIONS FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PREVENTION OF MURRAIN TYPE A | |
| RU2827230C1 (en) | Associated vaccine against panleukopenia, calicivirus, viral rhinotracheitis and feline rabies | |
| RU2835906C1 (en) | Inactivated cultural sorbed vaccine against foot-and-mouth disease of genotype sat-2/xiv from strain "sat-2/xiv/2023" |