RU2682876C1 - Inactivated emulsion vaccine for o-type aphthous fever - Google Patents
Inactivated emulsion vaccine for o-type aphthous fever Download PDFInfo
- Publication number
- RU2682876C1 RU2682876C1 RU2017144458A RU2017144458A RU2682876C1 RU 2682876 C1 RU2682876 C1 RU 2682876C1 RU 2017144458 A RU2017144458 A RU 2017144458A RU 2017144458 A RU2017144458 A RU 2017144458A RU 2682876 C1 RU2682876 C1 RU 2682876C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- strain
- primorsky
- vaccine
- foot
- mouth disease
- Prior art date
Links
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 93
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 title claims abstract description 29
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 title abstract description 4
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims abstract description 60
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 claims abstract description 37
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims abstract description 33
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 29
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 23
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 230000036541 health Effects 0.000 claims abstract description 6
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 4
- 241000709664 Picornaviridae Species 0.000 claims abstract description 3
- 241000894007 species Species 0.000 claims abstract description 3
- 241000710198 Foot-and-mouth disease virus Species 0.000 claims description 78
- 208000007212 Foot-and-Mouth Disease Diseases 0.000 claims description 36
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims description 35
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 claims description 30
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 30
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 17
- 241000710194 Foot-and-mouth disease virus - type O Species 0.000 claims description 12
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims description 10
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims description 9
- 239000013543 active substance Substances 0.000 claims description 8
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims description 5
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 abstract description 4
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 20
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 20
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 20
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 17
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 12
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 11
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000047 product Substances 0.000 description 6
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 6
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 6
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 6
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 5
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 5
- 238000000034 method Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 5
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 5
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 230000000680 avirulence Effects 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- 230000004727 humoral immunity Effects 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 4
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 4
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 4
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 3
- 101710197658 Capsid protein VP1 Proteins 0.000 description 3
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 101710118046 RNA-directed RNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 101710108545 Viral protein 1 Proteins 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000010835 comparative analysis Methods 0.000 description 3
- 231100000676 disease causative agent Toxicity 0.000 description 3
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 3
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 3
- -1 polyhexamethylene guanidine hydrochloride Polymers 0.000 description 3
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L sodium thiosulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=S AKHNMLFCWUSKQB-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 235000019345 sodium thiosulphate Nutrition 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001573881 Corolla Species 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699673 Mesocricetus auratus Species 0.000 description 2
- 101150024766 VP1 gene Proteins 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 238000009739 binding Methods 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 239000000084 colloidal system Substances 0.000 description 2
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 238000003205 genotyping method Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000004062 sedimentation Methods 0.000 description 2
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 2
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 102000004506 Blood Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010017384 Blood Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241001250090 Capra ibex Species 0.000 description 1
- 241001481710 Cerambycidae Species 0.000 description 1
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000004407 Lactalbumin Human genes 0.000 description 1
- 108090000942 Lactalbumin Proteins 0.000 description 1
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 108060004795 Methyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 101710093543 Probable non-specific lipid-transfer protein Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 241001493546 Suina Species 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010000269 abscess Diseases 0.000 description 1
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 230000027645 antigenic variation Effects 0.000 description 1
- 208000002399 aphthous stomatitis Diseases 0.000 description 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 1
- 238000002306 biochemical method Methods 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 230000036760 body temperature Effects 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 239000013553 cell monolayer Substances 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000005189 flocculation Methods 0.000 description 1
- 230000016615 flocculation Effects 0.000 description 1
- 235000021393 food security Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 230000003067 hemagglutinative effect Effects 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000003771 laboratory diagnosis Methods 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N methanone Chemical compound O=[14CH2] WSFSSNUMVMOOMR-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- 244000005706 microflora Species 0.000 description 1
- 238000007479 molecular analysis Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000704 physical effect Effects 0.000 description 1
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000011886 postmortem examination Methods 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 210000004777 protein coat Anatomy 0.000 description 1
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000000601 reactogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 description 1
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 210000000605 viral structure Anatomy 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/12—Viral antigens
- A61K39/125—Picornaviridae, e.g. calicivirus
- A61K39/135—Foot- and mouth-disease virus
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Description
Ящур по классификации ФАО/МЭБ относится к группе «трансграничных инфекций», имеющих большую экономическую значимость для торговли и продовольственной безопасности всех стран. Вирус ящура может легко распространяться и приобретать размах эпизоотий. В Российской Федерации разработана система мер борьбы и профилактики ящура, предусматривающая предупреждение занесения вируса в страну, систематическую вакцинацию крупного и мелкого рогатого скота в буферной зоне и проведение мониторинга иммунного статуса привитых животных. Для иммунизации животных должна применяться вакцина, изготовленная из вируса гомологичного полевым изолятам [1].Foot and mouth disease according to the FAO / OIE classification belongs to the group of “cross-border infections” that are of great economic importance for trade and food security in all countries. The foot and mouth disease virus can spread easily and become epizootic. In the Russian Federation, a system of measures for the control and prevention of foot and mouth disease has been developed, which provides for the prevention of virus entry into the country, systematic vaccination of cattle and small cattle in the buffer zone and monitoring of the immune status of vaccinated animals. For immunization of animals, a vaccine made from a virus homologous to field isolates should be used [1].
В 2014 году в Забайкальском и Приморском крае Российской Федерации, а также в сопредельных странах были зарегистрированы вспышки ящура типа О. Нуклеотидное секвенирование полевых изолятов вируса, выделенных в Забайкальском крае, позволило отнести его к генетической линии PanAsia топотипа ME-SA [2]. Вирус этой же линии циркулировал в 2014 году в Монголии.In 2014, outbreaks of foot and mouth disease type O were recorded in the Transbaikal and Primorsky Territories of the Russian Federation, as well as in neighboring countries. The nucleotide sequencing of the field isolates of the virus isolated in the Transbaikal Territory made it possible to attribute it to the PanAsia genetic line of the ME-SA type [2]. The virus of the same line circulated in 2014 in Mongolia.
Вспышка ящура в Приморском крае вызвана изолятом вируса, который принадлежит генетической линии Муа-98 топотипа SEA и имеет высокую степень нуклеотидного родства (96,87%) с изолятом, выделенным в 2014 году в Южной Корее [2].An outbreak of foot and mouth disease in the Primorsky Territory is caused by an isolate of the virus, which belongs to the Mua 98 line of the SEA type and has a high nucleotide affinity (96.87%) with an isolate isolated in 2014 in South Korea [2].
Профилактическая эффективность вакцин, определяемая по эпидемиологическим показателям, устанавливается в группах привитых животных при угрозе возникновения и распространения болезни. Вакцины должны обеспечивать создание массовой невосприимчивости и препятствовать распространению эпизоотических штаммов вируса ящура.Vaccine prophylactic efficacy, determined by epidemiological indicators, is established in groups of vaccinated animals with a threat of the onset and spread of the disease. Vaccines should ensure the creation of mass immunity and prevent the spread of epizootic strains of foot and mouth disease virus.
Для успешного проведения профилактической групповой иммунизации необходима информация об антигеном соответствии вакцинных штаммов и эпизоотических изолятов, циркулирующих в зоне профилактической вакцинации. При возникновении вспышек заболевания именно путем определения нуклеотидного и антигенного соответствия полевого изолята производственному штамму можно наиболее оперативно определить подходящий штамм для производства вакцин, применяемых в зонах риска [3].Successful prophylactic group immunization requires information on the antigen compliance of vaccine strains and epizootic isolates circulating in the prophylactic vaccination zone. In case of outbreaks of the disease, it is by determining the nucleotide and antigenic compliance of the field isolate with the production strain that the most suitable strain can be most quickly determined for the production of vaccines used in risk areas [3].
Технология изготовления противоящурной вакцины из инактивированного вируса начинается с подбора производственных штаммов на основе эпизоотологического анализа динамики ящура в стране и сопредельных государствах. При создании препаратов для специфической профилактики ящура используют требуемые типы вируса, подбирают штаммы с богатым набором антигенных вариаций внутри типа и с выраженной перекрестной иммуногенностью. Штамм, имеющий широкий спектр иммуногенности и удовлетворяющий требованиям региона, выбирают с помощью его исследования в реакции перекрестной защиты или чаще в реакции перекрестной нейтрализации. Как правило, в качестве производственного штамма используется популяция вируса, которая в совокупности с системой и условиями промышленного культивирования обеспечивает гарантированное и высокое накопление 146S и 75S компонентов вируса и получение иммуногенной вакцины.The manufacturing technology of FMD vaccine from an inactivated virus begins with the selection of production strains based on an epizootological analysis of the dynamics of foot and mouth disease in the country and neighboring countries. When creating drugs for specific prophylaxis of foot and mouth disease, the required virus types are used, strains are selected with a rich set of antigenic variations within the type and with pronounced cross immunogenicity. A strain having a wide range of immunogenicity and satisfying the requirements of the region is selected with the help of its study in the cross-protection reaction or more often in the cross-neutralization reaction. As a rule, a virus population is used as a production strain, which, together with the system and conditions of industrial cultivation, ensures a guaranteed and high accumulation of 146S and 75S virus components and the production of an immunogenic vaccine.
Кроме того, производственному штамму предъявляются высокие требования по стабильности вируса в процессе очистки от тканевых компонентов и концентрирования, а также по сохранению вируса во время инактивации и длительного хранения [4].In addition, the production strain has high demands on the stability of the virus during cleaning from tissue components and concentration, as well as on the preservation of the virus during inactivation and long-term storage [4].
Важной особенностью возбудителя ящура является антигенная изменчивость штаммов в пределах одного серотипа, возникающая в различные временные промежутки, на разных территориях, и зависящая от видового состава восприимчивого поголовья животных, его иммунного статуса и множества других факторов.An important feature of the causative agent of foot and mouth disease is the antigenic variability of strains within the same serotype, occurring at different time intervals, in different territories, and depending on the species composition of the susceptible livestock of animals, its immune status and many other factors.
Считается, что преимущественно замены аминокислотных последовательностей имеют место в полипептидах вирусных белков, составляющих капсид вириона. Возникающие генетические и антигенные изменения могут выражаться как в незначительных отличиях между штаммами, улавливаемых только с помощью тонких методов молекулярного анализа, так и в появлении совершенно отличающихся штаммов, требующих использования новых средств специфической профилактики болезни, ими индуцируемой [1, 5].It is believed that mainly amino acid sequence substitutions occur in the polypeptides of the viral proteins that make up the virion capsid. The resulting genetic and antigenic changes can be expressed both in insignificant differences between the strains, captured only with the help of subtle methods of molecular analysis, and in the appearance of completely different strains requiring the use of new means of specific prophylaxis of the disease induced by them [1, 5].
Сдвиги антигенного спектра, соответствующие обновлению структуры нового полевого изолята, могут варьировать от незначительных, детектируемых моноклональными антителами, до существенных, регистрируемых с помощью традиционных поликлональных иммуноглобулинов. Существенные изменения антигенных характеристик природного изолята с большой вероятностью вызывают ослабление специфического иммунитета, индуцированного негомологичным антигеном.Shifts in the antigenic spectrum, corresponding to the renewal of the structure of the new field isolate, can vary from insignificant, detected by monoclonal antibodies, to significant, recorded using traditional polyclonal immunoglobulins. Significant changes in the antigenic characteristics of the natural isolate are very likely to weaken specific immunity induced by a non-homologous antigen.
В результате возникает необходимость создания новых средств диагностики и специфической иммунопрофилактики.As a result, there is a need to create new diagnostic tools and specific immunoprophylaxis.
Известны штаммы вируса ящура типа О, использовавшиеся в качестве производственных на территории России в течение последних 50 лет. Среди них выделяют штамм O1 №1618 Чечено-Ингушский/66, выделенный в 1966 году, а также штамм O1 №194, выделенный в 1957 году в Волгоградской области. Указанные штаммы использовали для получения диагностикумов и противоящурных вакцин, применявшихся в различных регионах страны, в настоящее время их поддерживают в Коллекции штаммов микроорганизмов Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный центр охраны здоровья животных».Known strains of foot and mouth disease virus type O, used as production in Russia over the past 50 years. Among them, strain O 1 No. 1618 Chechen-Ingush / 66, isolated in 1966, and strain O 1 No. 194, isolated in 1957 in the Volgograd Region, are isolated. These strains were used to obtain diagnosticum and FMD vaccines used in various regions of the country; they are currently supported in the Collection of microorganism strains of the Federal State Budgetary Institution “Federal Center for Animal Health”.
Известен штамм О 1736/Абхазия/2000 вируса ящура, выделенный от КРС в Гальском районе Абхазии, который применяется для изготовления диагностических и вакцинных препаратов.The known strain O 1736 / Abkhazia / 2000 of foot and mouth disease virus isolated from cattle in the Gali district of Abkhazia, which is used for the manufacture of diagnostic and vaccine preparations.
Известен штамм О 1964/Монголия/2004, обнаруженный у КРС в феврале 2004 года в Восточно-Гобийском аймаке Монголии, который используется для производства диагностических и вакцинных препаратов [6].The known strain O 1964 / Mongolia / 2004, discovered in cattle in February 2004 in the East Gobi aimak of Mongolia, which is used for the production of diagnostic and vaccine preparations [6].
Также известен штамм О №1734/Приморский/2000, выделенный 13 апреля 2000 года от свиней в ОПХ «Степное» села Элитное Уссурийского района Приморского края [7].Also known is strain O No. 1734 / Primorsky / 2000, isolated on April 13, 2000 from pigs in the OPP “Stepnoye” in the village of Elite, Ussuriysky District, Primorsky Krai [7].
Проведен сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей штамма О №1734/Приморский/2000, показавший, что данный вирус принадлежит к генетической линии PanAsia типа О. Паназиатский вирус вызвал пандемию ящура в 1999-2000 годах в большинстве стран Азии, в том числе в Японии, Корее, Вьетнаме, Монголии, а также Армении и Грузии. Опустошительная эпизоотия ящура в Великобритании в 2001 году также была вызвана паназиатским вирусом. Исследуемый вирус имеет наиболее высокий уровень гомологии (98,74%) с изолятами О Вьетнам/99 и О Тайвань/99. Установлено, что изолят О №1734/Приморский/2000 отличается от всех выделенных ранее изолятов, в том числе и от штаммов O1 №194 и O1 №1618, используемых для изготовления средств диагностики и специфической профилактики.A comparative analysis of the nucleotide sequences of strain O No. 1734 / Primorsky / 2000 was performed, which showed that this virus belongs to the PanAsia type O line. The pan-Asian virus caused a pandemic of foot and mouth disease in 1999-2000 in most countries in Asia, including Japan, Korea, Vietnam, Mongolia, as well as Armenia and Georgia. The devastating epidemic of foot and mouth disease in the UK in 2001 was also caused by a pan-Asian virus. The studied virus has the highest homology level (98.74%) with isolates O Vietnam / 99 and O Taiwan / 99. It was found that isolate O No. 1734 / Primorsky / 2000 differs from all previously isolated isolates, including strains O 1 No. 194 and O 1 No. 1618 used for the manufacture of diagnostic tools and specific prophylaxis.
Производственный штамм О №1734/Приморский/2000 вируса ящура применяется в Российской Федерации в качестве производственного при создании средств диагностики и специфической профилактики, используемых на всей территории России и в странах-членах СНГ.The production strain O No. 1734 / Primorsky / 2000 of the foot and mouth disease virus is used in the Russian Federation as an industrial strain when creating diagnostic and specific prophylaxis tools used throughout Russia and the CIS countries.
Известна вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа О, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма О №1734/Приморский/2000, полученного в чувствительной биологической системе, и целевые добавки в виде адъюванта в эффективном соотношении.A known vaccine is an inactivated emulsion against foot and mouth disease type O, containing the active substance in the form of avirulent and purified antigenic material from strain O, No. 1734 / Primorsky / 2000 homologous to the pathogen, obtained in a sensitive biological system, and target additives in the form of an adjuvant in an effective ratio.
Для инактивации вируса используют аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ). При изготовлении эмульсионной вакцины в качестве адъювантов служат Montanide ISA-70 и Montanide ISA-206, а сорбированной - гидроокись алюминия (ГОА).For inactivation of the virus, aminoethylethyleneimine (AEEI) is used. In the manufacture of emulsion vaccines, Montanide ISA-70 and Montanide ISA-206 are used as adjuvants, and aluminum hydroxide (GOA) is used as adsorbed vaccine.
Очистку вируссодержащей суспензии от балластных примесей проводят с применением полигексаметиленгуанидин гидрохлорида.Purification of the virus-containing suspension from ballast impurities is carried out using polyhexamethylene guanidine hydrochloride.
Известен штамм О №2102/Забайкальский/2010, выделенный в июле 2010 года от больной свиньи в поселке Абагайтуй Забайкальского района Забайкальского края (экспертиза №2102). Данный штамм относится к генетической линии SEA.The known strain About No. 2102 / Zabaykalsky / 2010, isolated in July 2010 from a sick pig in the village of Abagaytay, Zabaykalsky district of the Transbaikal Territory (examination No. 2102). This strain belongs to the genetic line of SEA.
Наиболее близкой предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа О, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма О №2102/Забайкальский/2010, полученного в чувствительной биологической системе, и целевые добавки в виде адъювантов в соотношении, мкг/см3:The closest to the invention according to the set of essential features is an inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease type O containing the active substance in the form of avirulent and purified antigenic material from strain O No. 2102 / Zabaykalsky / 2010 obtained in a sensitive biological system homologous to the pathogen and targeted additives in in the form of adjuvants, μg / cm 3 :
В качестве чувствительной биологической системы для репродукции вируса ящура используют перевиваемую суспензионную клеточную линию ВНК-21/2-17, в качестве поддерживающей среды - раствор Эрла без внесения сыворотки с добавлением ферментативных гидролизатов мышц сухого (ФГМС), гидролизатов белков крови сухого (ГБКС) и антибиотиков при pH среды 7,4-7,6.The VNK-21 / 2-17 transplantable suspension cell line is used as a sensitive biological system for the reproduction of foot and mouth disease virus, and Earl solution without serum supplemented with enzymatic dry muscle hydrolysates (FSMS), dry blood protein hydrolysates (GBKS) is used as a supporting medium. antibiotics at a pH of 7.4-7.6.
Для очистки вируссодержащей суспензии от балластных примесей применяют полигексаметиленгуанидин (ПГМГ). Инактивацию антигена проводят с использованием АЭЭИ, для последующей нейтрализации которого в суспензию добавляют тиосульфат натрия.Polyhexamethylene guanidine (PHMG) is used to purify the virus-containing suspension from ballast impurities. Inactivation of the antigen is carried out using AEEI, for the subsequent neutralization of which sodium thiosulfate is added to the suspension.
Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма О №2102/Забайкальский/2010 представляет собой суспензию, состоящую преимущественно из 146S и 75S иммуногенных компонентов вируса ящура.Avirulent and purified antigenic material from strain O No. 2102 / Zabaykalsky / 2010 is a suspension consisting mainly of 146S and 75S immunogenic components of foot and mouth disease virus.
В 2014 году появился вирусный изолят, послуживший источником для получения штамма О №2212/Приморский/2014, выделен в мае 2014 года от больной свиньи в ООО «Мерси Трейд» с. Прохоры Спасского района Приморского края (экспертиза №2212). Производственный штамм О №2212/Приморский/2014 вируса ящура типа O получен путем последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток.In 2014, a viral isolate appeared, which served as a source for obtaining strain O No. 2212 / Primorsky / 2014, isolated in May 2014 from a sick pig at Mercy Trade LLC s. Prokhori Spassky district of Primorsky Territory (examination No. 2212). Production strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 of type O FMD virus was obtained by successive passages on sensitive hetero- and homologous cell cultures.
Основной существенный недостаток известных вакцин, в том числе и вакцины-прототипа, состоит в их недостаточной иммуногенной активности, что объясняется невысокой степенью защиты восприимчивых животных от эпизоотических изолятов вируса ящура типа О, циркулирующего в странах Центральной и Юго-Восточной Азии, Дальнего Востока.The main significant drawback of known vaccines, including the prototype vaccine, is their insufficient immunogenic activity, which is explained by the low degree of protection of susceptible animals from epizootic isolates of FMD virus type O circulating in the countries of Central and Southeast Asia and the Far East.
Для решения этой проблемы было создано настоящее изобретение, в которое входила разработка вакцины противоящурной инактивированной эмульсионной, создающей эффективную защиту восприимчивых животных против полевых изолятов вируса ящура типа О, распространенных на территории Центральной и Юго-Восточной Азии, Дальнего Востока.To solve this problem, the present invention was created, which included the development of a vaccine against FMD inactivated emulsion, which creates effective protection of susceptible animals against field isolates of FMD virus type O, common in Central and Southeast Asia, the Far East.
Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала вакцин инактивированных эмульсионных против ящура типа О.The technical result from the use of the invention is to expand the arsenal of inactivated emulsion vaccines against foot and mouth disease type O.
Указанный технический результат достигнут созданием вакцины инактивированной эмульсионной против ящура типа О, охарактеризованной следующей совокупностью признаков.The specified technical result was achieved by creating an inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease type O, characterized by the following set of features.
Разработанная вакцина в 1 см3 препарата содержит следующие компоненты: активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма О №2212/Приморский/2014 вируса ящура, репродуцированного предпочтительно в перевиваемой суспензионной клеточной линии ВНК-21/2-17, в количестве не менее 3,0 мкг и масляные адъюванты Montanide ISA-70 или Montanide ISA-206 предпочтительно в количестве 600000,0-700000,0 или 500000,0-575000,0 мкг, соответственно.The developed vaccine in 1 cm 3 of the preparation contains the following components: the active substance in the form of avirulent and purified antigenic material from a foot and mouth disease virus homologous to the pathogen infection strain O No. 2212 / Primorsky / 2014, preferably reproduced in the transplantable suspension cell line VNK-21 / 2-17, in an amount of not less than 3.0 μg and oil adjuvants Montanide ISA-70 or Montanide ISA-206, preferably in an amount of 600000.0-700000.0 or 500000.0-575000.0 μg, respectively.
Штамм О №2212/Приморский/2014 вируса ящура типа О депонирован 29 мая 2015 года в Коллекцию штаммов микроорганизмов Федерального государственного бюджетного учреждения «Федеральный центр охраны здоровья животных» (ФГБУ «ВНИИЗЖ»), под регистрационным номером (ссылкой): штамм ВЯ О №2212/Приморский/2014 (производственный).Strain O No. 2212 / Primorsky / 2014, type O foot-and-mouth disease virus was deposited on May 29, 2015 into the Collection of microorganism strains of the Federal State Budgetary Institution “Federal Center for Animal Health” (FSBI “ARRIAH”), under the registration number (link): strain VYA O No. 2212 / Seaside / 2014 (production).
Штамм адаптирован к первично-трипсинизированным клеткам свиной почки и перевиваемым клеточным линиям из почки новорожденного сирийского хомячка (ВНК-21/2-17), почки свиньи (IB-RS-2) и почки сибирского горного козерога (ПСГК-30).The strain is adapted to primary trypsinized pork kidney cells and transplantable cell lines from the kidney of a newborn Syrian hamster (VNK-21 / 2-17), pig's kidney (IB-RS-2) and Siberian mountain capricorn kidney (PSGK-30).
Для изготовления вакцины в качестве чувствительной биологической системы используют предпочтительно перевиваемую суспензионную культуру клеток ВНК-21/2-17, а в качестве поддерживающей среды - раствор Эрла без внесения сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при pH среды 7,4-7,6. Инактивацию вируса проводят с использованием АЭЭИ с концентрацией 0,025-0,050% от объема вируссодержащей суспензии. По окончании процесса АЭЭИ нейтрализуют внесением в суспензию тиосульфата натрия [8]. Инактивированный антиген очищают от балластных примесей с помощью ПГМГ, который вносят в суспензию до концентрации 0,005-0,007% от общего объема [9].For the manufacture of the vaccine, a preferably transplantable suspension culture of VNK-21 / 2-17 cells is used as a sensitive biological system, and Earl's solution without serum supplemented with FGMS, GBKS and antibiotics at a pH of 7.4-7.6 is used as a supporting medium. . Inactivation of the virus is carried out using AEEI with a concentration of 0.025-0.050% of the volume of the virus-containing suspension. At the end of the process, AEEI is neutralized by adding sodium thiosulfate to the suspension [8]. The inactivated antigen is purified from ballast impurities using PHMG, which is added to the suspension to a concentration of 0.005-0.007% of the total volume [9].
Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма О №2212/Приморский/2014 представляет собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенные компоненты вируса ящура.Avirulent and purified antigenic material from strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 is a suspension containing predominantly 146S immunogenic components of foot and mouth disease virus.
Качественное и количественное содержание вирусного сырья в продукте оценивают в реакции связывания комплемента (РСК) [10].The qualitative and quantitative content of viral raw materials in the product is evaluated in the complement binding reaction (CSC) [10].
Для приготовления вакцины используют вирусный материал, содержащий в 1 см3 не менее 0,5 мкг 146S иммуногенных компонентов вируса ящура.To prepare the vaccine, viral material is used that contains at least 0.5 μg of 146S immunogenic components of foot and mouth disease virus in 1 cm 3 .
Необходимую концентрацию 146S иммуногенных компонентов в вакцинном препарате обеспечивают благодаря концентрированию антигена методом проточной ультрафильтрации.The required concentration of 146S immunogenic components in the vaccine preparation is ensured by concentration of the antigen by flow ultrafiltration.
Эмульсионную вакцину получают путем диспергирования на коллоидных мельницах концентрата ящурного антигена и масляного адъюванта в соотношении 4:6 и 1:1 по массе, соответственно. Для усиления иммунного ответа используют масляный адъювант производства фирмы «Seppic» марок Montanide ISA-70 или Montanide ISA-206.An emulsion vaccine is obtained by dispersing in colloid mills a concentrate of foot-and-mouth disease antigen and oil adjuvant in a ratio of 4: 6 and 1: 1 by weight, respectively. To enhance the immune response, an oil adjuvant manufactured by Seppic Montanide ISA-70 or Montanide ISA-206 is used.
Полученная вакцина представляет собой молокоподобную жидкость, не растворимую в воде.The resulting vaccine is a milk-like liquid, insoluble in water.
Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые спрашивается правовая охрана.The present invention includes the following set of essential features that provide a technical result in all cases for which legal protection is requested.
1. Вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа О.1. Inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease type O.
2. Активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма О №2212/Приморский/2014 вируса ящура в эффективном количестве.2. The active substance in the form of avirulent and purified antigenic material from a foot-and-mouth disease virus homologous to the pathogen of strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 in an effective amount.
3. Целевые добавки.3. Targeted supplements.
Существенные отличительные признаки предлагаемой вакцины заключаются в том, что в качестве активного вещества она содержит авирулентный очищенный антигенный материал из штамма О №2212/Приморский/2014 в эффективном количестве.The significant distinguishing features of the proposed vaccine are that as an active substance it contains avirulent purified antigenic material from strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 in an effective amount.
Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования:The present invention is also characterized by other distinctive features expressing specific forms of execution or special conditions for its use:
1. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма О №2212/Приморский/2014 вируса ящура типа О, полученный предпочтительно в суспензионной перевиваемой культуре клеток BHK-21/2-17 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенные компоненты вируса ящура в эффективном количестве.1. Avirulent and purified antigenic material from strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 of foot and mouth disease virus type O, obtained preferably in suspension transplantable cell culture BHK-21 / 2-17 and representing a suspension containing predominantly 146S immunogenic components of foot and mouth disease virus in an effective amount .
2. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма О №2212/Приморский/2014 вируса ящура типа О, полученный предпочтительно в суспензионной перевиваемой культуре клеток BHK-21/2-17 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S иммуногенные компоненты вируса ящура в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см3.2. Avirulent and purified antigenic material from strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 of type O foot and mouth disease virus, obtained preferably in suspension transplantable cell culture BHK-21 / 2-17 and representing a suspension containing predominantly 146S immunogenic components of foot and mouth disease virus less than 3.0 mcg in 1 cm 3 .
3. В качестве целевой добавки вакцина содержит масляный адъювант.3. As a targeted supplement, the vaccine contains an oil adjuvant.
4. В качестве масляного адъюванта вакцина содержит адъювант Montanide ISA-70.4. The vaccine contains Montanide ISA-70 adjuvant as an oil adjuvant.
5. Вакцина содержит масляный адъювант Montanide ISA-70 в количестве 600000,0-700000,0 мкг в 1 см3 готового препарата.5. The vaccine contains Montanide ISA-70 oil adjuvant in an amount of 600,000.0-700000.0 μg in 1 cm 3 of the finished product.
6. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма О №2212/Приморский/2014 вируса ящура, полученного предпочтительно в суспензионной перевиваемой культуре клеток BHK-21/2-17 и масляный адъювант Montanide ISA-70 в количестве, мкг/см3 готового препарата:6. Avirulent and purified antigenic material from strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 of foot and mouth disease virus, obtained preferably in suspension transplantable cell culture BHK-21 / 2-17 and Montanide ISA-70 oil adjuvant in the amount, μg / cm 3 of the finished preparation:
7. В качестве масляного адъюванта вакцина содержит адъювант Montanide ISA-206.7. The vaccine contains Montanide ISA-206 adjuvant as an oil adjuvant.
8. Вакцина содержит масляный адъювант Montanide ISA-206 в количестве 500000,0-575000,0 мкг в 1 см3 готового препарата.8. The vaccine contains Montanide ISA-206 oil adjuvant in an amount of 500,000.0-575000.0 μg in 1 cm 3 of the finished product.
9. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма О №2212/Приморский/2014 вируса ящура, полученного предпочтительно в суспензионной перевиваемой культуре клеток BHK-21/2-17 и масляный адъювант Montanide ISA-206 в количестве, мкг/см3 готового препарата:9. Avirulent and purified antigenic material from strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 of foot-and-mouth disease virus, obtained preferably in suspension transplantable cell culture BHK-21 / 2-17 and oil adjuvant Montanide ISA-206 in the amount, μg / cm 3 of the finished product:
Предлагаемая вакцина обладает высокой иммуногенной активностью и обеспечивает надежную защиту против вируса ящура типа О, циркулирующего в странах Центральной и Юго-Восточной Азии, Дальнего Востока.The proposed vaccine has high immunogenic activity and provides reliable protection against FMD virus type O circulating in the countries of Central and Southeast Asia, the Far East.
Достижение технического результата от использования изобретения достигается тем, что в состав предлагаемой противоящурной вакцины в качестве активного вещества введен антигенный материал из штамма О №2212/Приморский/2014, обладающий высокой иммуногенной активностью, создающий эффективную защиту восприимчивых животных против вируса ящура серотипа О, вызывающего в последние годы вспышки заболевания в странах Центральной и Юго-Восточной Азии, Дальнего Востока.The achievement of the technical result from the use of the invention is achieved by the fact that antigenic material from strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 is introduced as an active substance in the composition of the proposed FMD vaccine, which has high immunogenic activity, which effectively protects susceptible animals against foot and mouth disease virus serotype O, which causes recent years of the disease outbreak in the countries of Central and Southeast Asia, the Far East.
Сущность изобретения пояснена на графическом изображении. Представлена дендрограмма, отражающая филогенетические взаимоотношения штамма вируса ящура О №2212/Приморский/2014 с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса ящура серологического типа О. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена VP1.The invention is illustrated in the graphic image. A dendrogram is presented that reflects the phylogenetic relationships of a foot-and-mouth disease strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 with epizootic and vaccine strains of foot-and-mouth disease virus of serological type O. The dendrogram is based on a comparison of the complete nucleotide sequences of the VP1 gene.
Сущность изобретения пояснена следующим перечнем последовательностей:The invention is illustrated by the following list of sequences:
SEQ ID NO:1 представляет последовательность нуклеотидов гена белка VP1 штамма О №2212/Приморский/2014 вируса ящура типа О;SEQ ID NO: 1 represents the nucleotide sequence of the VP1 protein gene of strain O No. 2212 / Primorsky / 2014, type O foot and mouth disease virus;
SEQ ID NO:2 представляет последовательность аминокислот гена белка VP1 штамма О №2212/Приморский/2014 вируса ящура типа О.SEQ ID NO: 2 represents the amino acid sequence of the VP1 protein gene of strain O No. 2212 / Primorsky / 2014, type O foot and mouth disease virus
Штамм О №2212/Приморский/2014 вируса ящура характеризуется следующими признаками и свойствами.Strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 of the foot and mouth disease virus is characterized by the following features and properties.
Морфологические признакиMorphological features
Штамм О №2212/Приморский/2014 вируса ящура типа О относится к семейству Picornaviridae, роду Aphtovirus, серотипу О и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона икосаэдрическая, размер 23-25 нм. Вирион состоит из молекулы РНК, заключенной в белковую оболочку. Белковая оболочка состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.Strain O No. 2212 / Primorsky / 2014, type O foot-and-mouth disease virus belongs to the family Picornaviridae, genus Aphtovirus, serotype O and has morphological characteristics characteristic of the causative agent of foot and mouth disease: the form of the virion is icosahedral, size 23-25 nm. Virion consists of an RNA molecule enclosed in a protein coat. The protein shell consists of 32 capsomeres arranged in cubic symmetry.
Антигенные свойстваAntigenic properties
По своим антигенным свойствам штамм О №2212/Приморский/2014 вируса ящура относится к серотипу О. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности (ГА-активности). У переболевших животных в сыворотке крови образуются антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции микронейтрализации (РМН). При иммунизации КРС вакциной из инактивированного вируса индуцирует образование специфических антител, выявляемых в ИФА и РМН.According to its antigenic properties, strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 of the foot and mouth disease virus belongs to the O serotype. The virus is stably neutralized by a homologous antiserum. The virus does not show hemagglutinating activity (GA activity). In sick animals, antibodies are formed in the blood serum that are detected in an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) and microneutralization reaction (RMN). When cattle are immunized with a vaccine from an inactivated virus, it induces the formation of specific antibodies detected in ELISA and RMN.
При гипериммунизации морских свинок концентрированный антиген из инактивированного штамма типа О №2212/Приморский/2014 вируса ящура индуцирует образование вирусспецифических антител, выявляемых в РСК в разведении 1:20.During hyperimmunization of guinea pigs, the concentrated antigen from an inactivated type O strain No. 2212 / Primorsky / 2014 of the FMD virus induces the formation of virus-specific antibodies detected in CSC at a 1:20 dilution.
Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура гена VP1 штамма О №2212/Приморский/2014 вируса ящура и выведена первичная структура белка VP1. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм О №2212/Приморский/2014 принадлежит к топотипу Юго-Восточная Азия (SEA) генетической линии Муа-98 вируса ящура серологического типа О.Using the method of nucleotide sequencing, the primary structure of the VP1 gene of strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 of the FMD virus was determined and the primary structure of the VP1 protein was derived. A comparative analysis of the nucleotide sequences showed that strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 belongs to the topotype Southeast Asia (SEA) of the genetic line Mua-98 of the FMD virus of serological type O.
Антигенное родство штамма О №2212/Приморский/2014 с производственными штаммами вируса ящура O1 Manisa, О №1734/Приморский/2000, О PanAsia2, О/Тайвань 3/97, О №2102/Забайкальский/2010 и О №2147/Приморский/2012 изучено в РМН.Antigenic relationship of strain O No. 2212 / Seaside / 2014 with production strains of foot and mouth disease virus O 1 Manisa, O No. 1734 / Primorsky / 2000, O PanAsia2, O / Taiwan 3/97, O No. 2102 / Zabaykalsky / 2010 and O No. 2147 / Primorsky / 2012 studied in RMN.
Результаты исследований в РМН представлены в таблице 1. Антигенное соответствие (r1) составило для O1 Manisa - 0,45, О №1734/Приморский/2000 - 0,08, О PanAsia2 - 0,08, О №2102/Забайкальский/2010 - 0,18 и О №2147/Приморский/2012 - 0,38, О/Тайвань 3/97 - 0,09. При значении r1>0,3 полевой изолят и производственный штамм являются близкородственными, и вакцина из производственного штамма будет защищать от эпизоотического вируса, при значении r1<0,3 полевой изолят отличается от производственного [11]. Следовательно штамм вируса ящура О №2212/Приморский/2014 не имеет выраженного антигенного родства с большинством производственных штаммов вируса ящура, используемых в ФГБУ «ВНИИЗЖ».The results of the studies in the RMN are presented in table 1. Antigenic compliance (r 1 ) amounted to 0.45 for O 1 Manisa, O No. 1734 / Primorsky / 2000 - 0.08, O PanAsia2 - 0.08, O No. 2102 / Zabaykalsky / 2010 - 0.18 and O No. 2147 / Primorsky / 2012 - 0.38, O / Taiwan 3/97 - 0.09. With a value of r 1 > 0.3, the field isolate and the production strain are closely related, and the vaccine from the production strain will protect against epizootic virus, with a value of r 1 <0.3 the field isolate differs from the production [11]. Therefore, the strain of foot and mouth disease virus No. 2212 / Primorsky / 2014 does not have a pronounced antigenic relationship with most production strains of foot and mouth disease virus used in FSBI ARRIAH.
Биотехнологические характеристикиBiotechnological characteristics
Штамм О №2212/Приморский/2014 репродуцируется в монослойной культуре клеток почки свиньи (СП), перевиваемых культурах клеток почки сибирского горного козерога (ПСГК-30), почки сирийского хомячка (BHK-21) и почки свиньи (IB-RS-2). В течение 18-24 часов инкубирования урожай вируса в указанных культурах клеток достигает значений от 5,0 до 7,5 lg ТЦД50/см3. При высокой множественности заражения (1-10 ТЦД/клетка) вызывает ЦПД через 5 часов. Сохраняет исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах на протяжении 3 пассажей (срок наблюдения).Strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 is reproduced in a monolayer culture of pig kidney cells (SP), transplanted cultures of kidney cells of the Siberian mountain ibex (PSGK-30), Syrian hamster kidney (BHK-21) and pig kidney (IB-RS-2) . Within 18-24 hours of incubation, the virus harvest in these cell cultures reaches values from 5.0 to 7.5 lg TCD 50 / cm 3 . With a high multiplicity of infection (1-10 TCD / cell), it causes CPD after 5 hours. It retains its original characteristics when passaged in cell cultures for 3 passages (observation period).
Гено- и хемотаксономическая характеристикиGeno and chemotaxonomic characteristics
Штамм О №2212/Приморский/2014 вируса ящура типа О является РНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 7×106Д.Strain O No. 2212 / Seaside / 2014, foot and mouth disease virus type O is an RNA-containing virus with a molecular weight of 7 × 10 6 D.
Нуклеиновая кислота представлена одноцепочной линейной молекулой молекулярной массой 2,8×106Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP1, VP2, VP3 и VP4. Липопротеидная оболочка отсутствует.Nucleic acid is a single-chain linear molecule with a molecular weight of 2.8 × 10 6 D. The virion has a protein shell consisting of four basic proteins VP 1 , VP 2 , VP 3 and VP 4 . The lipoprotein membrane is absent.
Основным антигенным белком является VP1. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирионная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Из 8 неструктурных полипептидов, накапливающихся в инфицированных клетках, один (VP66a) является РНК-зависимой РНК-полимеразой, участвующей в репликации РНК новых вирионов.The main antigenic protein is VP 1 . The virion contains approximately 31.5% RNA and 68.5% protein. Virionic RNA is infectious and is involved in the formation of precursor proteins in infected cells. The precursors, in turn, are cleaved to form more stable structural and non-structural virus polypeptides. Of the 8 non-structural polypeptides that accumulate in infected cells, one (VP 66a ) is an RNA-dependent RNA polymerase involved in RNA replication of new virions.
Физические свойстваPhysical properties
Масса вириона составляет 8,4×10-18 г. Коэффициент седиментации 146S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность 1,45 г/см3.The virion mass is 8.4 × 10 −18 g. A sedimentation coefficient of 146S in the sucrose gradient. The floating density of 1.45 g / cm 3 .
Устойчивость к внешним факторамResistance to external factors
Штамм О №2212/Приморский/2014 устойчив к эфиру, хлороформу, фреону, ацетону и другим органическим растворителям и детергентам. Наиболее стабилен при pH 7,2-7,6. Сдвиги pH как в кислую, так и в щелочную сторону ведут к инактивации вируса. Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, γ-облучению, высоким температурам.Strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 is resistant to ether, chloroform, freon, acetone and other organic solvents and detergents. Most stable at pH 7.2-7.6. PH shifts to both the acidic and alkaline sides lead to inactivation of the virus. It is sensitive to formaldehyde, UV radiation, γ-radiation, high temperatures.
Дополнительные признаки и свойстваAdditional features and properties
Иммуногенная активность - иммуногенен в составе инактивированной вакцины.Immunogenic activity - immunogen in the composition of an inactivated vaccine.
Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.Reactogenicity - does not possess reactogenic properties.
Патогенность - патогенен для парнокопытных животных, новорожденных мышат, морских свинок.Pathogenicity - pathogenic for artiodactyl animals, newborn mice, guinea pigs.
Вирулентность - вирулентен для естественно-восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.Virulence - virulence for naturally susceptible animals with contact, aerosol and parenteral infection.
Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 5 пассажей (срок наблюдения).Stability - retains the original biological properties when passaged in sensitive biological systems for 5 passages (observation period).
Исходя из полученных данных, можно утверждать, что штамм О №2212/Приморский/2014 по антигенному и иммунологическому спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным вариантом вируса ящура типа О, обладает более высокой протективной и иммуногенной активностью.Based on the data obtained, it can be argued that strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 in terms of antigenic and immunological spectra is an original, taxonomically new, previously unknown variant of foot and mouth disease virus type O, has a higher protective and immunogenic activity.
Для снижения эпизоотической опасности ящура типа О и предотвращения возникновения новых очагов болезни важна своевременная вакцинопрофилактика, что требует разработки высокоиммуногенной вакцины.To reduce the epizootic danger of foot and mouth disease type O and to prevent the emergence of new foci of the disease, timely vaccination is important, which requires the development of a highly immunogenic vaccine.
Получена высокоиммуногенная инактивированная эмульсионная вакцина против ящура типа О из штамма О №2212/Приморский/2014.Received highly immunogenic inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease type O from strain O No. 2212 / Primorsky / 2014.
Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.The essence of the invention is illustrated by examples of its use, which do not limit the scope of the invention.
Пример 1. Получение и исследование биологических свойств штамма О №2212/Приморский/2014 вируса ящура.Example 1. Obtaining and researching the biological properties of strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 of foot and mouth disease virus.
Штамм О №2212/Приморский/2014 вируса ящура типа О был изолирован из полевого материала, поступившего в ФГБУ «ВНИИЗЖ» в виде эпителия афт от свиней, подозреваемых в заболевании ящуром, при проведении лабораторной диагностики этого заболевания и дифференциации его от других везикулярных болезней. С целью проведения изоляции вируса использован комплекс биологических, вирусологических и биохимических методов.Strain O No. 2212 / Primorsky / 2014, type O foot-and-mouth disease virus was isolated from field material received at the Federal State Budget Scientific Institution ARRIAH as an epithelium of aphthae from pigs suspected of having foot-and-mouth disease during laboratory diagnosis of this disease and its differentiation from other vesicular diseases. In order to isolate the virus, a complex of biological, virological and biochemical methods was used.
Биологические и вирусологические методы включали выделение вируса в культуре первично-трипсинизированных клеток СП, перевиваемых линиях клеток ПСГК-30, IB-RS-2 с последующей адаптацией в течение 3 последовательных пассажей. Для постановки биопробы в первичных и перевиваемых культурах клеток их выращивали на соответствующих питательных средах, в стационарных условиях во флаконах с площадью поверхности 25 см2, отмывали от ростовой среды и заражали 10% суспензией афтозного материала (множественность заражения составляла 1-10 ТЦД50/клетка), приготовленной в растворе Хенкса с 0,5% гидролизата лактальбумина (ГЛА) и антибиотиками по стандартной рецептуре. Для удаления микрофлоры и балластных клеточных компонентов суспензию обрабатывали 10% хлороформа. После инкубации при температуре 37°C в течение 0,5 часа во флаконы вносили по 5 см3 поддерживающей среды и инкубировали при температуре 37°C до появления ЦПД вируса, характеризующегося округлением клеток, дегенерацией и отделением клеток от стекла, повышение оптической плотности суспензии. После развития ЦПД флаконы подвергали процессу замораживания-оттаивания, очистке клеточной взвеси хлороформом и центрифугированию при 3000 об/мин (1200 g) в течение 0,25 ч. Полученный вируссодержащий материал использовали для последующих пассажей и исследования в РСК для детекции вирусного антигена, при этом использовали коммерческие типоспецифические сыворотки, хранящихся в музее штаммов ФГБУ «ВНИИЗЖ». Возбудитель ящура считали адаптированным к: культурам клеток, если в течение 18-24 часов клеточный монослой деструктировал под влиянием вируса на 90-100%.Biological and virological methods included the isolation of the virus in a culture of primary trypsinized SP cells, transplanted PSGK-30, IB-RS-2 cell lines, followed by adaptation for 3 consecutive passages. For staging biological samples in primary and transplantable cell cultures, they were grown on appropriate nutrient media, under stationary conditions in bottles with a surface area of 25 cm 2 , washed from the growth medium and infected with a 10% suspension of aphthous material (the multiplicity of infection was 1-10 TCD 50 / cell ) prepared in a Hanks solution with 0.5% lactalbumin hydrolyzate (GLA) and antibiotics according to a standard formulation. To remove microflora and ballast cell components, the suspension was treated with 10% chloroform. After incubation at a temperature of 37 ° C for 0.5 hours, 5 cm 3 of the supporting medium was added to the vials and incubated at 37 ° C until a virus CPD appeared, characterized by cell rounding, degeneration and separation of cells from glass, and an increase in the optical density of the suspension. After the development of the CPD, the bottles were subjected to freezing-thawing, purification of the cell suspension with chloroform and centrifugation at 3000 rpm (1200 g) for 0.25 hours. The obtained virus-containing material was used for subsequent passages and studies in the CSC for the detection of viral antigen, while used commercial type-specific sera stored in the Museum of strains of FSBI "ARRIAH". The causative agent of foot and mouth disease was considered adapted to: cell cultures, if within 18-24 hours the cell monolayer was destroyed by 90-100% under the influence of the virus.
Вирус, адаптированный к культуре клеток IB-RS-2 использовали для получения антигена для РСК.The virus adapted to the IB-RS-2 cell culture was used to produce antigen for CSC.
Вирус, адаптированный к культуре клеток ПСГК-30, был использован для заражения суспензии клеток ВНК-21/2-17 с целью получения антигена для изготовления экспериментальной серии вакцины, а также для гипериммунизации морских свинок.The virus adapted to the PSGK-30 cell culture was used to infect the VNK-21 / 2-17 cell suspension in order to obtain antigen for the manufacture of an experimental vaccine series, as well as for hyperimmunization of guinea pigs.
Результаты исследований представлены в таблице 2, данные которой свидетельствуют о высокой адаптационной активности штамма О №2212/Приморский/2014 вируса ящура типа О к использованным клеточным культурам.The research results are presented in table 2, the data of which indicate a high adaptive activity of strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 of type O foot and mouth disease virus to the used cell cultures.
Пример 2. Сравнительный анализ биологических свойств штамма О №2212/Приморский/2014 с производственными штамма вируса ящура типа О.Example 2. A comparative analysis of the biological properties of strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 with production of a strain of foot and mouth disease virus type O.
При изучении свойств штамма О №2212/Приморский/2014 вируса ящура выявлены значительные преимущества в сравнении с другими используемыми производственными штаммами.When studying the properties of strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 of the foot and mouth disease virus, significant advantages were revealed in comparison with other used industrial strains.
В таблицах 3 и 4 приведены результаты культивирования штаммов О №2212/Приморский/2014 и О №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура типа О, из которых следует:Tables 3 and 4 show the results of the cultivation of strains O No. 2212 / Primorsky / 2014 and O No. 2102 / Transbaikal / 2010 of FMD virus type O, from which it follows:
1) штаммы О №2212/Приморский/2014 и О; №2102/Забайкальский/2010 имеют разное время репродукции - 10,30±0,35 и 12,40±0,45 часов, соответственно;1) strains O No. 2212 / Primorsky / 2014 and O; No. 2102 / Zabaykalsky / 2010 have different reproduction times - 10.30 ± 0.35 and 12.40 ± 0.45 hours, respectively;
2) накопление иммуногенных компонентов при культивировании вируса ящура О №2212/Приморский/2014 выше, чем у штамма О №2102/Забайкальский/2010. Концентрация 146S иммуногенного компонента при культивации вируса ящура О №2212/Приморский/2014 и О №2102/Забайкальский/2010 составила 2,28±0,16 и 1,88±0,10 мкг/см3, соответственно.2) the accumulation of immunogenic components during the cultivation of foot and mouth disease virus No. 2212 / Primorsky / 2014 is higher than that of strain O No. 2102 / Zabaykalsky / 2010. The concentration of 146S immunogenic component during the cultivation of foot-and-mouth disease virus No. 2212 / Primorsky / 2014 and No. 2102 / Zabaykalsky / 2010 was 2.28 ± 0.16 and 1.88 ± 0.10 μg / cm 3 , respectively.
Пример 3. Получение инактивированного антигена и исследование влияния инактивации и очистки антигенного материала с помощью АЭЭИ и ПГМГ на иммуногенные (146S и 75S) компоненты вируса ящура штаммов О №2212/Приморский/2014 и О №2102/Забайкальский/2010.Example 3. Obtaining an inactivated antigen and studying the effect of inactivation and purification of antigenic material using AEI and PHMG on the immunogenic (146S and 75S) components of foot and mouth disease virus of strains No. 2212 / Primorsky / 2014 and No. 2102 / Zabaykalsky / 2010.
Инактивированную эмульсионную вакцину против ящура типа О готовят из штамма О №2212/Приморский/2014 вируса ящура, выращенного в суспензионной перевиваемой клеточной линии ВНК-21/2-17. В качестве поддерживающей среды используют раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при pH среды 7,4-7,6. Культуру клеток заражают вирусом из расчета 0,005-0,200 ТЦД50/клетка.An inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease type O is prepared from strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 of foot and mouth disease virus grown in a suspension transplantable cell line BHK-21 / 2-17. As a supporting medium, an Earle solution without serum is used with the addition of FGMS, GBKS and antibiotics at a pH of 7.4-7.6. The cell culture is infected with a virus at the rate of 0.005-0.200 TCD 50 / cell.
Культивирование вируса проводят при температуре 36-37°C. Через 6-7 часов инкубирования определяют концентрацию живых и мертвых клеток при окраске трипановым синим. Если количество живых клеток составляет 15-20%, то экспозицию с вирусом продолжают еще 2-3 часа. При достижении количества мертвых клеток до 90-95% репродукцию вируса ящура прекращают, а полученную суспензию контролируют на стерильность и оценку содержания 146S и 75S компонентов. Содержание 146S+75S компонентов в суспензии должно составлять не менее 0,5 мкг/см3. Сразу по окончании цикла репродукции вируса, не прекращая термостатирования, в вируссодержащую суспензию добавляют 15-20%-ный раствор АЭЭИ, подкисленный ледяной уксусной кислотой до pH 8,0-8,5. Конечная концентрация АЭЭИ в вируссодержащей суспензии должна быть равной 0,025-0,050%. Инактивацию инфекционности вируса проводят в течение 12-24 часов при температуре 36-37°C и pH 7,2-7,6 с перемешиванием через 5-6 часов в течение 3-5 минут. Остаток аминоэтилэтиленимина нейтрализуют добавлением тиосульфата натрия. С целью флокуляции балластных примесей и инактивации возможных контаминантов в теплую суспензию вносят 10%-ный раствор ПГМГ до концентрации 0,005-0,007%. Флокулированные балластные примеси подвергают седиментации с последующей декантацией.The cultivation of the virus is carried out at a temperature of 36-37 ° C. After 6-7 hours of incubation, the concentration of living and dead cells is determined by trypan blue staining. If the number of living cells is 15-20%, then exposure to the virus continues for another 2-3 hours. When the number of dead cells reaches 90-95%, the reproduction of foot and mouth disease virus is stopped, and the suspension obtained is monitored for sterility and the content of 146S and 75S components is estimated. The content of 146S + 75S components in the suspension should be at least 0.5 μg / cm 3 . Immediately after the end of the virus reproduction cycle, without stopping thermostating, a 15–20% AEEI solution, acidified with glacial acetic acid to pH 8.0–8.5, is added to the virus-containing suspension. The final concentration of AEEI in the virus-containing suspension should be equal to 0.025-0.050%. Inactivation of the infectiousness of the virus is carried out for 12-24 hours at a temperature of 36-37 ° C and a pH of 7.2-7.6 with stirring after 5-6 hours for 3-5 minutes. The aminoethylethyleneimine residue is neutralized by the addition of sodium thiosulfate. For the purpose of flocculation of ballast impurities and inactivation of possible contaminants, a 10% solution of PHMG is added to a warm suspension to a concentration of 0.005-0.007%. Flocculated ballast impurities are subjected to sedimentation followed by decantation.
Результаты исследований по изучению влияния инактивации и очистки антигенного материала с помощью АЭЭИ и ПГМГ на иммуногенные (146S и 75S) компоненты штаммов О №2212/Приморский/2014 и О №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура отражены в таблице 5.The results of studies on the effect of inactivation and purification of antigenic material using AEI and PHMG on the immunogenic (146S and 75S) components of strains O No. 2212 / Primorsky / 2014 and O No. 2102 / Zabaykalsky / 2010 of foot-and-mouth disease virus are shown in Table 5.
Данные таблицы 5 свидетельствуют о том, что иммуногенные компоненты штамма О №2212/Приморский/2014 вируса ящура не уступают в устойчивости к инактивации и очистке в условиях производства штамму О №2102/Забайкальский/2010. Особенно важным является тот факт, что в процессе инактивации и очистки вируса штамма О №2212/Приморский/2014 не обнаружено изменений концентрации 146S компонентов.The data in table 5 indicate that the immunogenic components of strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 of the foot and mouth disease virus are not inferior in resistance to inactivation and purification under the conditions of production of strain O No. 2102 / Zabaykalsky / 2010. Especially important is the fact that during the inactivation and purification of the virus of strain O No. 2212 / Primorsky / 2014, no changes in the concentration of 146S components were detected.
Пример 4. Концентрирование антигена вируса ящура штамма О №2212/Приморский/2014 и масляного адъюванта для получения вакцины.Example 4. Concentration of antigen of foot and mouth disease virus strain No. 2212 / Primorsky / 2014 and oil adjuvant to obtain a vaccine.
Полученный антиген контролируют на авирулентность и стерильность, содержание вирусспецифического белка и 146S компонентов вируса ящура. Необходимую концентрацию 146S компонентов в 1 см3 достигают с помощью ультрафильтрации. Для этих целей антиген концентрируют методом проточной ультрафильтрацией под давлением 1,5 атм. Адъювант Montanide ISA-70 стерилизуют в биореакторе при температуре 120°C и давлении 1,1 атм. в течение 40-60 минут. Для фильтрационной стерилизации адъюванта Montanide ISA-206 используют фильтр с диаметром пор 0,20 μm.The resulting antigen is monitored for avirulence and sterility, the content of virus-specific protein and 146S components of foot and mouth disease virus. The required concentration of 146S components in 1 cm 3 is achieved by ultrafiltration. For these purposes, the antigen is concentrated by flow ultrafiltration under a pressure of 1.5 atm. Montanide ISA-70 adjuvant is sterilized in a bioreactor at a temperature of 120 ° C and a pressure of 1.1 atm. within 40-60 minutes. For filtration sterilization of the Montanide ISA-206 adjuvant, a filter with a pore diameter of 0.20 μm is used.
Полученную вакцину расфасовывают в стеклянные или пластиковые флаконы и проводят контроль стерильности продукции в соответствии с ГОСТ 28085-89.The resulting vaccine is packaged in glass or plastic bottles and sterilized products are monitored in accordance with GOST 28085-89.
Пример 5. Процесс диспергирования антигена и адъюванта для получения инактивированную эмульсионную против ящура из производственного штамма О №2212/Приморский/2014.Example 5. The process of dispersing the antigen and adjuvant to obtain inactivated emulsion against foot and mouth disease from production strain O No. 2212 / Primorsky / 2014.
Инактивированную эмульсионную вакцину против ящура типа О получают путем диспергирования на коллоидных мельницах концентрата антигена и масляного адъюванта в соотношении 4:6 и 1:1, соответственно. В качестве масляных адъювантов применяют продукты марок Montanide ISA-70 или Montanide ISA-206 производства фирмы «Seppic» (Франция).An inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease type O is obtained by dispersing antigen concentrate and oil adjuvant in colloid mills in a ratio of 4: 6 and 1: 1, respectively. As oil adjuvants, products of the brands Montanide ISA-70 or Montanide ISA-206 manufactured by Seppic (France) are used.
При изготовлении эмульсионной вакцины на основе Montanide ISA-206 адъювант и антиген подогревают до температуры 25-30°C и на коллоидных мельницах проводят диспергирование антигена и адъюванта в соотношении 1:1.In the manufacture of an emulsion vaccine based on Montanide ISA-206, the adjuvant and antigen are heated to a temperature of 25-30 ° C, and antigen and adjuvant are dispersed in colloidal mills in a ratio of 1: 1.
Эмульсионную вакцину на основе Montanide ISA-70 изготавливают при температуре адъюванта и антигена 18-25°C. После этого на коллоидных мельницах осуществляют диспергирование антигена и адъюванта в соотношении 4:6.The emulsion vaccine based on Montanide ISA-70 is made at a temperature of adjuvant and antigen of 18-25 ° C. After that, colloidal mills carry out the dispersion of antigen and adjuvant in a ratio of 4: 6.
В результате получают вакцину инактивированную эмульсионную против ящура из производственного штамма О №2212/Приморский/2014. Оптимальный компонентный состав полученной вакцины представлен в таблице 6 и 7.The result is an inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease from production strain O No. 2212 / Primorsky / 2014. The optimal component composition of the obtained vaccine are presented in table 6 and 7.
Вакцина легко рассасывается в месте введения, не вызывает абсцессов, общей реакции в виде повышения температуры. Обладает выраженной иммуногенной активностью для свиней в прививной дозе 2 см3 через 21 день после введения. В 1 см3 должно содержаться не менее 3 мкг 146 S компонентов вируса ящура.The vaccine easily resolves at the injection site, does not cause abscesses, a general reaction in the form of fever. It has a pronounced immunogenic activity for pigs at a vaccination dose of 2 cm 3 21 days after administration. In 1 cm 3 must contain at least 3 μg of 146 S components of the foot and mouth disease virus.
Пример 6. Оценка авирулентности и безвредности инактивированную эмульсионную против ящура из производственного штамма О №2212/Приморский/2014.Example 6. Assessment of avirulence and harmlessness inactivated emulsion against foot and mouth disease from production strain O No. 2212 / Primorsky / 2014.
Для определения авирулентности вакцины на свиньях отобранную пробу вакцины вводили внутрикожно по 0,1 см3 в две точки венчика на каждой конечности. Вакцина была авирулентной - свиньи в течение 10 суток наблюдения остались клинически здоровыми, и при патологоанатомическом исследовании не было обнаружено изменений, характерных для ящура.To determine the virulence of the vaccine in pigs, the selected vaccine sample was injected intracutaneously at 0.1 cm 3 at two points of the corolla on each limb. The vaccine was avirulent - the pigs remained clinically healthy during the 10 days of observation, and no pathological changes were found during the post-mortem examination.
Контроль безвредности вакцины на свиньях проводили путем внутримышечного введения вакцины в область верхней трети шеи в дозе 6 см3. Срок наблюдения составлял 10 суток. Следует отметить, что после инокуляции температура тела животного может повышаться до 41°C и удерживаться на протяжении 1-3 суток.The safety of the vaccine in pigs was monitored by intramuscular injection of the vaccine into the upper third of the neck at a dose of 6 cm 3 . The observation period was 10 days. It should be noted that after inoculation, the body temperature of the animal can increase to 41 ° C and hold for 1-3 days.
По результатам исследований вакцина была безвредной, все животные в период наблюдения оставались клинически здоровыми, при патологоанатомическом анализе некроза тканей на месте введения вакцины не обнаружено.According to the research results, the vaccine was harmless, all animals remained clinically healthy during the observation period, and no pathological anatomical analysis of tissue necrosis was detected at the injection site.
Пример 7. Оценка гуморального иммунитета у свиней при использовании противоящурных вакцин из штамма О №2102/Забайкальский/2010 и О №2212/Приморский/2014.Example 7. Evaluation of humoral immunity in pigs when using FMD vaccines from strain O No. 2102 / Zabaykalsky / 2010 and O No. 2212 / Primorsky / 2014.
Изучен гуморальный иммунитет у свиней, привитых инактивированной эмульсионной вакциной из штамма О №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура, против гетерологичного штамма О №2212/Приморский/2014 вируса ящура. Уровень гуморального иммунитета оценивали против вакцинного штамма О №2102/Забайкальский/2010 и против производственного штамма О №2212/Приморский/2014.The humoral immunity of pigs vaccinated with an inactivated emulsion vaccine from foot and mouth disease strain No. 2102 / Zabaykalsky / 2010 against the heterologous strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 of foot and mouth disease was studied. The level of humoral immunity was evaluated against the vaccine strain O No. 2102 / Zabaykalsky / 2010 and against the production strain O No. 2212 / Primorsky / 2014.
Проведены испытания эмульсионной вакцины Против ящура типа О, изготовленной так, как описано в примерах 3 и 4, и содержащей, мкг в 2 см3:Tests of the emulsion vaccine Against foot and mouth disease type O, made as described in examples 3 and 4, and containing, mcg in 2 cm 3 :
авирулентный и очищенный антигенный материал из штаммаavirulent and purified antigenic material from the strain
О №2102/Забайкальский/2010 вируса ящура типа О 6,5About No. 2102 / Transbaikal / 2010, foot and mouth disease virus type O 6.5
масляный адъювант Montanide ISA-206 1200000,0.Montanide Oil Adjuvant ISA-206 1,200,000.0.
Испытание провели на 10 головах свиней. Эмульсионную вакцину вводили внутримышечно в дозе 2,0 см3. Результаты исследований представлены в таблице 8, из данных которой видно, что эмульсионная вакцина стимулировала у свиней выработку вируснейтрализующих антител (ВНА) против гомологичного штамма О №2102/Забайкальский/2010 в количестве 5,90±0,58 log2. Против гетерологичного штамма О №2212/Приморский/2014 титр ВНА был меньше и составлял 3,55±0,52 log2. Разница в титрах вируснейтрализующих антител является существенной и достоверной. Из этого следует, что вакцина, изготовленная из производственного штамма О №2102/Забайкальский/2010 не создает гуморальный иммунитет для защиты животных от заражения гетерологичным вирусом ящура О №2212/Приморский/2014. По рекомендациям МЭБ (OIE) титр вируснейтрализующих антител должен составлять не менее 5,00 log2 [11].The test was carried out on 10 heads of pigs. The emulsion vaccine was administered intramuscularly at a dose of 2.0 cm 3 . The research results are presented in table 8, from the data of which it can be seen that the emulsion vaccine stimulated the production of virus-neutralizing antibodies (VNA) in pigs against homologous strain O No. 2102 / Zabaykalsky / 2010 in the amount of 5.90 ± 0.58 log 2 . Against the heterologous strain O No. 2212 / Primorsky / 2014, the BHA titer was less and amounted to 3.55 ± 0.52 log 2 . The difference in the titers of neutralizing antibodies is significant and significant. It follows that the vaccine made from the production strain O No. 2102 / Zabaykalsky / 2010 does not create humoral immunity to protect animals from infection with the heterologous foot and mouth disease virus No. 2212 / Primorsky / 2014. According to the recommendations of the OIE (OIE), the titer of neutralizing antibodies should be at least 5.00 log 2 [11].
Пример 8. Тестирование инактивированной эмульсионной противоящурной вакцины из штамма О №2212/Приморский/2014 на авирулентность, безвредность и иммуногенную активность.Example 8. Testing inactivated emulsion FMD vaccine from strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 for avirulence, safety and immunogenic activity.
Проведены испытания эмульсионной вакцины против ящура типа О, изготовленной так, как описано в примерах 3 и 4, и содержащей, мкг в 2 см3:Tested emulsion vaccine against foot and mouth disease type O, made as described in examples 3 and 4, and containing, mcg in 2 cm 3 :
авирулентный и очищенныйavirulent and purified
антигенный материал из штаммаstrain antigenic material
О №2212/Приморский/2014 вируса ящура типа О 6,2About No. 2212 / Seaside / 2014, foot and mouth disease virus type O 6.2
масляный адъювант Montanide ISA-206 1120000,0.Montanide Oil Adjuvant ISA-206 1120,000.0.
Авирулентность и безвредность полученной вакцины проверяли при тестировании на 5 головах свиней. Препарат вводили внутрикожно по 0,1 см3 в две точки венчика на каждой конечности, а затем внутримышечно в дозе 6,0 см3. Наблюдение за клиническим состоянием животных вели в течение 10 суток. На протяжении всего срока наблюдения развития клинических признаков ящура у животных не было выявлено, что подтверждает авирулентность и безвредность вводимой вакцины.The virulence and safety of the obtained vaccine was tested by testing on 5 heads of pigs. The drug was injected intracutaneously at 0.1 cm 3 at two points of the corolla on each limb, and then intramuscularly at a dose of 6.0 cm 3 . Observation of the clinical condition of the animals was carried out for 10 days. Throughout the entire observation period, the development of clinical signs of foot and mouth disease in animals was not detected, which confirms the virulence and harmlessness of the administered vaccine.
По окончании контроля на авирулентность и безвредность вакцину проверили на иммуногенную активность вакцины для свиней. Испытание провели на 15 головах подсвинков. Результаты оценки иммуногенности разработанной вакцины представлены в таблице 9. Иммунизирующая доза (ИмД50) препарата составляла 0,03 см3, т.е. в прививной дозе вакцины содержалось больше 50 PD50.At the end of the control for avirulence and safety, the vaccine was tested for immunogenic activity of the vaccine for pigs. The test was conducted on 15 heads of gilts. The results of the immunogenicity assessment of the developed vaccine are presented in table 9. The immunizing dose (ImD 50 ) of the drug was 0.03 cm 3 , i.e. the vaccine dose contained more than 50 PD 50 .
По рекомендациям МЭБ (OIE) вакцина против ящура должна содержать не менее 6 PD50 в прививном объеме для КРС [1]. Следовательно, изготовленная инактивированная эмульсионная вакцина из штамма О №2212/Приморский/2014 вируса ящура проявляет высокую иммуногенную активность.According to the recommendations of the OIE (OIE), the vaccine against foot and mouth disease should contain at least 6 PD 50 in the vaccine volume for cattle [1]. Therefore, the manufactured inactivated emulsion vaccine from strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 of the foot and mouth disease virus exhibits high immunogenic activity.
Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о том, что вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа О, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии; подтверждена возможность осуществления представленного; вакцина, изготовленная из штамма О №2212/Приморский/2014 в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой иммуногенной активностью и способна обеспечить эффективную защиту восприимчивых животных против эпизоотического штамма вируса ящура типа О, циркулирующего в странах Центральной и Юго-Восточной Азии, Дальнего Востока.Thus, the above information indicates that the inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease type O, embodying the invention, is intended for use in agriculture, namely in veterinary virology and biotechnology; confirmed the possibility of implementing the presented; the vaccine made from strain O No. 2212 / Primorsky / 2014 in accordance with the invention has high immunogenic activity and is able to provide effective protection of susceptible animals against the epizootic strain of FMD virus type O circulating in Central and Southeast Asia and the Far East.
Источники информации, принятые во внимание при составлении описания изобретения к заявке на выдачу патента РФ на изобретение «Вакцина эмульсионная инактивированная против ящура типа О»:Sources of information taken into account when drawing up the description of the invention to the application for the grant of a patent of the Russian Federation for the invention "Inactivated emulsion vaccine against foot and mouth disease type O":
1. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals - 24th Ed. -, Paris, 2016-Vol. 1, Chapter 2.1.5. - P. 166-169.1. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals - 24th Ed. -, Paris, 2016-Vol. 1, Chapter 2.1.5. - P. 166-169.
2. Официальный сайт Пербрайт - URL: http://www.wrlfmd.org/fmd_genotyping/fmd_genotyping.htm (дата обращения 02.06.2017 г.).2. The official website of Pervbright - URL: http://www.wrlfmd.org/fmd_genotyping/fmd_genotyping.htm (accessed June 2, 2017).
3. Дудников А.И., Борисов В.В., Дудников С.А. Противоящурный иммунитет и практические достижения в области противоящурной защиты // Пробл. зооiнженерii та вет. Медицини: зб. наук. прац. - Харькiв, 2007. - Вип. 15(40). - Ч. 2, - т. 1. - С. 116-120.3. Dudnikov A.I., Borisov V.V., Dudnikov S.A. FMD immunity and practical achievements in the field of FMD // Probl. Zooengineerii that vet. Medicine: ST. sciences. pra - Kharkiv, 2007. - VIP. 15 (40). -
4. Ререр X. Ящур / Перевод с нем. Г.А. Сурковой. Под ред. и с предисл. канд. вет. наук П.В. Малярца. - М.: Колос, 1971. - 432 с.4. Rerer X. Foot and mouth disease / Translation from it. G.A. Surkova. Ed. and with the foreword. Cand. vet. sciences P.V. Painter. - M .: Kolos, 1971. - 432 p.
5. Бурдов А.Н., Дудников А.И., Малярец П.В. и др. Ящур / Под ред. А.Н. Бурдова. - М.: Агропромиздат, 1990. - С. 231-250.5. Burdov A.N., Dudnikov A.I., Malyarets P.V. and other foot and mouth disease / Ed. A.N. Burdova. - M .: Agropromizdat, 1990 .-- S. 231-250.
6. Иммунобиологические свойства эпизоотического штамма вируса ящура типа О №1964/Монголия/2004 / Т.А. Фомина, В.К. Спирин, А.И. Егорова [и др.] // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2005. - Т. 3. - С. 94-104.6. Immunobiological properties of the epizootic strain of foot and mouth disease virus type O No. 1964 / Mongolia / 2004 / T.A. Fomina, V.K. Spirin, A.I. Egorova [et al.] // Proceedings of the Federal Center for Animal Health. - Vladimir, 2005. - T. 3. - S. 94-104.
7. Иммунобиологические свойства эпизоотического штамма вируса ящура типа О №1734 «Приморский-2000» / В.К. Спирин, А.И. Егорова, С.Р. Кременчугская [и др.] // Труды Федерального центра охраны здоровья животных. - Владимир, 2007. - Т. 5. - С. 52-57.7. Immunobiological properties of the epizootic strain of foot and mouth disease virus type O No. 1734 "Primorsky-2000" / V.K. Spirin, A.I. Egorova, S.R. Kremenchug [et al.] // Proceedings of the Federal Center for Animal Health. - Vladimir, 2007.- T. 5. - S. 52-57.
8. Патент РФ №594771, A61K 39/12, 07.07.1993 г.8. RF patent No. 594771, A61K 39/12, 07/07/1993
9. Патент РФ №2054039, C12N 7/02, A61K 39/135, 10.02.1996 г.9. RF patent No. 2054039, C12N 7/02, A61K 39/135, 02/10/1996
10. Методические рекомендации по определению концентрации 146S, 75S, 12S компонентов вакцинных штаммов культурального вируса ящура в реакции связывания комплемента (РСК): утв. зам. директором ФГБУ «ВНИИЗЖ» - Владимир, 2017.10. Guidelines for determining the concentration of 146S, 75S, 12S components of vaccine strains of the culture of foot and mouth disease virus in the complement binding reaction (CSC): approved. deputy Director of FSBI "ARRIAH" - Vladimir, 2017.
11. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals (mammals, birds and beers). - 7th Edition, Paris, 2008. -Vol. 1. - P. 203-207.11. OIE. Manual of diagnostic tests and vaccines for terrestrial animals (mammals, birds and beers). - 7th Edition, Paris, 2008. -Vol. 1. - P. 203-207.
Claims (12)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017144458A RU2682876C1 (en) | 2017-12-18 | 2017-12-18 | Inactivated emulsion vaccine for o-type aphthous fever |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2017144458A RU2682876C1 (en) | 2017-12-18 | 2017-12-18 | Inactivated emulsion vaccine for o-type aphthous fever |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2682876C1 true RU2682876C1 (en) | 2019-03-22 |
Family
ID=65858577
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2017144458A RU2682876C1 (en) | 2017-12-18 | 2017-12-18 | Inactivated emulsion vaccine for o-type aphthous fever |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| RU (1) | RU2682876C1 (en) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2699671C1 (en) * | 2019-05-31 | 2019-09-09 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease of type o inactivated emulsion |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2204599C1 (en) * | 2001-11-01 | 2003-05-20 | Федеральное государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Foot-and-mouth virus strain "primorsky-2000" 1734 of type o1 for diagnostic and vaccine preparation preparing |
| CN102274496A (en) * | 2010-06-12 | 2011-12-14 | 吴晓琰 | O/Asia I type foot and mouth disease virus bivalent genetic engineering polypeptide vaccine, its preparation method and its purpose |
| RU2575801C1 (en) * | 2014-11-18 | 2016-02-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | STRAIN O №2108/ZABAIKALSKY/2010 OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VIRUS Aphtae epizooticae OF TYPE O FOR MANUFACTURING BIOLOGICAL PREPARATIONS FOR DIAGNOSTICS OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VIRUS OF TYPE O |
| RU2593718C1 (en) * | 2015-03-16 | 2016-08-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease types a, o, asia-1 |
| CN107266537A (en) * | 2017-08-01 | 2017-10-20 | 天信和(苏州)生物科技有限公司 | Foot-and-mouth disease antigen 146S concentrating and purifying process |
-
2017
- 2017-12-18 RU RU2017144458A patent/RU2682876C1/en active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2204599C1 (en) * | 2001-11-01 | 2003-05-20 | Федеральное государственное учреждение Всероссийский научно-исследовательский институт защиты животных | Foot-and-mouth virus strain "primorsky-2000" 1734 of type o1 for diagnostic and vaccine preparation preparing |
| CN102274496A (en) * | 2010-06-12 | 2011-12-14 | 吴晓琰 | O/Asia I type foot and mouth disease virus bivalent genetic engineering polypeptide vaccine, its preparation method and its purpose |
| RU2575801C1 (en) * | 2014-11-18 | 2016-02-20 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | STRAIN O №2108/ZABAIKALSKY/2010 OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VIRUS Aphtae epizooticae OF TYPE O FOR MANUFACTURING BIOLOGICAL PREPARATIONS FOR DIAGNOSTICS OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VIRUS OF TYPE O |
| RU2593718C1 (en) * | 2015-03-16 | 2016-08-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease types a, o, asia-1 |
| CN107266537A (en) * | 2017-08-01 | 2017-10-20 | 天信和(苏州)生物科技有限公司 | Foot-and-mouth disease antigen 146S concentrating and purifying process |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2699671C1 (en) * | 2019-05-31 | 2019-09-09 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") | Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease of type o inactivated emulsion |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2593718C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease types a, o, asia-1 | |
| RU2603003C1 (en) | Inactivated sorptive vaccine to fmd types a, o, asia-1 | |
| RU2451745C2 (en) | A 2045/KYRGYZSTAN/ 2007 STRAIN OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VIRUS Aphtae epizooticae TYPE A FOR ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC PERFORMANCE CONTROL OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE VACCINES AND FOR PRODUCTION OF BIOPREPARATIONS FOR DIAGNOSIS AND SPECIFIC PREVENTION OF FOOT-AND-MOUTH DISEASE TYPE A | |
| RU2699671C1 (en) | Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease of type o inactivated emulsion | |
| RU2665849C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease type o | |
| RU2682876C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine for o-type aphthous fever | |
| RU2563522C1 (en) | STRAIN O №2102/Zabaikalsky/2010 FMD VIRUS Aphtae epizooticae OF TYPE O FOR CONTROL OF ANTIGENIC AND IMMUNOGENIC ACTIVITY OF FMD VACCINES AND FOR PRODUCTION OF BIOLOGICAL PRODUCTS FOR DIAGNOSTICS AND SPECIFIC PROPHYLAXIS OF FMD OF TYPE O | |
| RU2143921C1 (en) | Vaccine against foot and mouth of type a and method of its preparing | |
| RU2212895C2 (en) | Vaccine against o-type foot-and-mouth disease and method for its preparing | |
| RU2220744C1 (en) | Vaccine against foot-and-mouth asia-1 type and method for it preparing | |
| RU2242513C1 (en) | Foot and mouth disease virus strain a(georgia)1999/ 1721 type a for preparing diagnostic and vaccine preparations | |
| RU2603255C9 (en) | Strain a №2155/baikal/2013 of murrain virus aphtae epizooticae type a for control of antigenic and immunogenic activity and to produce biopreparations for diagnostics and specific prevention of murrain type a | |
| WO2014167582A2 (en) | Vaccine composition for prophylaxis in ruminants | |
| RU2294760C2 (en) | Sorbed inactivated vaccine against foot-and-mouth disease of type a | |
| RU2563345C1 (en) | Inactivated sorbed vaccine against fmd of type a | |
| RU2297452C2 (en) | Asia-1-type foot-and-mouth disease virus strain for producing of diagnostic and/or vaccine preparations | |
| RU2204599C1 (en) | Foot-and-mouth virus strain "primorsky-2000" 1734 of type o1 for diagnostic and vaccine preparation preparing | |
| CN105451764B (en) | Method for preparing inactivated rotavirus | |
| RU2665850C1 (en) | Inactivated emulsion vaccine against foot-and-mouth disease type a | |
| RU2681815C1 (en) | Inactivated sorptive foot-and-mouth disease type a vaccine | |
| RU2526570C2 (en) | Inactivated sorbent type a foot-and-mouth disease vaccine | |
| RU2658608C1 (en) | Strain o n 2311/zabaikalsky/2016 foot and mouth disease virus type aphtae epizooticae type o for manufacturing of biologics for diagnosis and specific prevention of foot and mouth disease of type o | |
| RU2650768C1 (en) | Strain o no_2212/prymorsky/2014 of aphtae epizooticae foot and mouth disease virus of o type for the control of the antigenic and immunogenic activity of foot-mouth disease vaccines and for the manufacture of biologic drugs for diagnostics and specific prevention of foot and mouth disease of o type | |
| RU2140452C1 (en) | Foot and mouth virus disease type a strain n 1707 "armenia-98" used for preparing diagnostic and vaccine preparations | |
| RU2741639C1 (en) | Vaccine for early protection against foot-and-mouth disease of type asia-1 inactivated emulsion |