RU2010104615A - Способ диагностики плоскоклеточного рака легкого и набор для его осуществления - Google Patents

Abstract

1. Способ диагностики плоскоклеточного рака легкого, включающий следующие стадии: ! а) получение исходной пары образцов ткани от пациента, где один из образцов получен из предположительно пораженной раком ткани, а второй получен из прилегающей гистологически нормальной ткани («условной нормы»); ! б) выделение и очистка препаратов РНК из исходной пары образцов; ! в) синтез одноцепочечной или двуцепочечной кДНК на матрице РНК с использованием олигонуклеотидных праймеров; ! г) проведение количественной реакции амплификации фрагмента гена CALL с использованием кДНК, полученной на стадии в), в качестве матрицы, и пары геноспецифичных олигонуклеотидных праймеров; ! д) сравнение количества амплифицированного фрагмента ДНК CALL для образца, полученного из предположительно пораженной раком ткани, с количеством амплифицированного фрагмента ДНК для образца, полученного из нормальной ткани, где указанные количества амплифицированного фрагмента ДНК отражают изменение содержания мРНК гена CALL, причем уменьшение содержания мРНК гена CALL служит диагностическим признаком плоскоклеточного рака легкого. ! 2. Способ по п.1, в котором последовательность праймеров и зонда представлена SEQ ID NO:1, 2 и 3. ! 3. Набор праймеров и зонда для осуществления полимеразной цепной реакции для количественной оценки содержания мРНК гена CALL, имеющих последовательность SEQ ID NO:1, 2 и 3. ! 4. Способ по п.1, в котором на стадии г) количественная реакция амплификации фрагмента гена CALL представляет собой ПЦР в режиме реального времени. ! 5. Способ по п.1, в котором на стадии д) в качестве контрольного гена для тканей легкого используют ген GAPDH, кодирующий белок глицер

Claims (6)

1. Способ диагностики плоскоклеточного рака легкого, включающий следующие стадии:

а) получение исходной пары образцов ткани от пациента, где один из образцов получен из предположительно пораженной раком ткани, а второй получен из прилегающей гистологически нормальной ткани («условной нормы»);

б) выделение и очистка препаратов РНК из исходной пары образцов;

в) синтез одноцепочечной или двуцепочечной кДНК на матрице РНК с использованием олигонуклеотидных праймеров;

г) проведение количественной реакции амплификации фрагмента гена CALL с использованием кДНК, полученной на стадии в), в качестве матрицы, и пары геноспецифичных олигонуклеотидных праймеров;

д) сравнение количества амплифицированного фрагмента ДНК CALL для образца, полученного из предположительно пораженной раком ткани, с количеством амплифицированного фрагмента ДНК для образца, полученного из нормальной ткани, где указанные количества амплифицированного фрагмента ДНК отражают изменение содержания мРНК гена CALL, причем уменьшение содержания мРНК гена CALL служит диагностическим признаком плоскоклеточного рака легкого.

2. Способ по п.1, в котором последовательность праймеров и зонда представлена SEQ ID NO:1, 2 и 3.

3. Набор праймеров и зонда для осуществления полимеразной цепной реакции для количественной оценки содержания мРНК гена CALL, имеющих последовательность SEQ ID NO:1, 2 и 3.

4. Способ по п.1, в котором на стадии г) количественная реакция амплификации фрагмента гена CALL представляет собой ПЦР в режиме реального времени.

5. Способ по п.1, в котором на стадии д) в качестве контрольного гена для тканей легкого используют ген GAPDH, кодирующий белок глицеральдегид-3-фосфат-дегидрогеназу.

6. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве дополнительных образцов сравнения использовали ткани легкого от доноров, не имеющих онкологических заболеваний.