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PT1786785E - Compostos amino-heteroarilo enantiomericamente puros como inibidores da proteína quinase - Google Patents

Compostos amino-heteroarilo enantiomericamente puros como inibidores da proteína quinase Download PDF

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PT1786785E
PT1786785E PT05779735T PT05779735T PT1786785E PT 1786785 E PT1786785 E PT 1786785E PT 05779735 T PT05779735 T PT 05779735T PT 05779735 T PT05779735 T PT 05779735T PT 1786785 E PT1786785 E PT 1786785E
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phenyl
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PT05779735T
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Jingrong J Cui
Lei Jia
Lee A Funk
Pei-Pei Kung
Jerry J Meng
Mitchell D Nambu
Mason A Pairish
Shen-Hong
M B Tran-Dube
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Pfizer
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Publication date
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Description

1
DESCRIÇÃO "COMPOSTOS AMINO-HETEROARILO ΕΝΑΝΤΙOMERICAMENTE PUROS COMO INIBIDORES DA PROTEÍNA QUINASE"
Campo da invenção A invenção refere-se geralmente a compostos químicos e métodos novos. Mais particularmente, a invenção proporciona compostos de amino-heteroarilo enantiomericamente puros, particularmente aminopiridinas e aminopirazinas, tendo actividade proteica da tirosina quinase, e métodos de síntese e utilização de tais compostos. Os compostos preferidos são inibidores do c-Met úteis para o tratamento de crescimento celular anómalo, tal como cancros.
Antecedentes da invenção A tirosina quinase receptora (RTK) do receptor do factor de crescimento dos hepatócitos (HGF) (c-MET ou HGFR) demonstrou estar, em muitos cancros, envolvida na oncogénese, progressão do tumor com motilidade celular melhorada e invasão, assim como metástase (ver, por exemplo, Ma, P.C., Maulik, G., Christensen, J. e Salgia, R. (2003b). Câncer Metastasis Rev, 22, 309-25; Maulik, G.,
Shrikhande, A., Kijima, T., Ma, P.C., Morrison, P.T. e
Salgia, R. (2002b). Cytokine Growth Factor Rev, 13, 41 - 59) . O c-MET (HGFR) pode ser activado através sobreexpressão ou mutações em vários cancros humanos, incluindo cancro do pumão de pequenas células (SCLC) (Ma, 2 P.C., Kijima, T., Maulik, G., Fox, E.A., Sattler, M., Griffin, J.D., Johnson, B.E. e Salgia, R. (2003a). Câncer Res, 63, 6272-6281) . O c-MET é uma tirosina quinase receptora que é codificada pelo proto-oncogene Met e transduz os efeitos biológicos do factor de crescimento dos hepatócitos (HGF), que é também referido como factor de dispersão (SF) . Jiang et al., Crit. Rev. Oncol. Hematol. 29:209-248 (1999). O c-MET e o HGF são expressos em numerosos tecidos, embora a sua expressão esteja normalmente confinada predominantemente a células de origem epitelial e mesenquimal, respectivamente. O c-MET e o HGF são necessários para o desenvolvimento normal dos mamíferos e revelaram ser importantes na migração celular, na proliferação e sobrevivência celular, diferenciação morfogénica e organização de estruturas tubulares tridimensionais (por exemplo, células tubulares renais, formação de glândulas, etc.). Além dos seus efeitos sobre as células epiteliais, o HGF/SF foi descrito como sendo um factor angiogénico e a sinalização do c-MET nas células endoteliais pode induzir muitas das respostas celulares necessárias à angiogénese (proliferação, motilidade, invasão). O receptor c-MET revelou possuir expressão num conjunto de cancros humanos. O c-Met e o seu ligando, HGF, revelaram também ser co-expressos a níveis elevados numa variedade de cancros humanos (particularmente sarcomas). Contudo, devido ao facto de o receptor e o ligando serem normalmente expressos por diferentes tipos de células, a sinalização do c-MET é mais vulgarmente regulada por interacções tumor-estroma (tumor-hospedeiro). Além disso, foram observadas 3 amplificação, mutação e recombinação do gene c-MET num subconjunto de cancros humanos. As famílias com mutações de linhas germinativas que activam a quinase do c-Met são propensas a múltiplos tumores renais, assim como tumores noutros tecidos. Numerosos estudos correlacionaram a expressão de c-MET e/ou HGF/SF com o estado de progressão da doença de diferentes tipos de cancro (incluindo cancros do pulmão, cólon, mama, próstata, fígado, pâncreas, cérebro, rim, ovários, estômago, pele e osso). Além disso, a sobreexpressão de c-MET ou HGF demonstrou estar correlacionada com um prognóstico e evolução desfavoráveis da doença num conjunto dos principais cancros humanos incluindo do pulmão, fígado, gástrico e da mama. 0 c-MET foi também implicado directamente em cancros sem um regime de tratamento bem sucedido, tais como cancro pancreático, glioma e carcinoma hepatocelular.
Exemplos de inibidores de c-MET (HGFR) , da sua síntese e utilização, podem ser encontrados no pedido de patente norte-americana com o número de série 10/786,610, intitulada "Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors" [Compostos de amino-heteroaril como inibidores da proteína quinase], apresentado em 26 de Fevereiro de 2004 e correspondente pedido de patente internacional PCT/US2004/005495 com o mesmo título, apresentado em 26 de Fevereiro de 2004, cujas divulgações são incluídas na íntegra por referência.
Seria desejável dispor de novos inibidores de c-MET (HGFR) e métodos de utilização de tais inibidores para o tratamento de crescimento celular anómalo, tal como o cancro. 4
Resumo
Numa concretização, a invenção proporciona um composto enantiomericamente puro da fórmula 1
em que: Y, R1 e R2 são tal como definido na reivindicação 1. ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou solvato do mesmo.
Num outro aspecto particular desta concretização, Y é N.
Num outro aspecto particular desta concretização, Y é CR12.
Num outro aspecto particular desta concretização, Y é CR12 e R12 é H.
Num outro aspecto particular desta concretização, e em combinação com qualquer outro aspecto particular não inconsistente, R1 é um grupo furano, tiofeno, pirrol, pirrolina, pirrolidina, dioxolano, oxazol, tiazol, imidazol, imidazolina, imidazolidina, pirazol, pirazolina, pirazolidina, isoxazol, isotiazol, oxadiazol, triazol, 5 tiadiazol, pirano, piridina, piperidina, dioxano, morfolina, ditiano, tiomorfolina, piridazina, pirimidina, pirazina, piperazina, triazina, tritiano ou fenilo, sendo cada hidrogénio em R1 opcionalmente substituído por um ou mais grupos R3.
Num outro aspecto particular desta concretização, e em combinação com qualquer outro aspecto particular não inconsistente. R1 é um grupo heteroarilo de anel fundido, sendo cada hidrogénio em R1 opcionalmente substituído por um ou mais grupos R3.
Num outro aspecto particular desta concretização, e em combinação com qualquer outro aspecto particular não inconsistente, R1 é hidrogénio.
Num outro aspecto particular desta concretização, e em combinação com qualquer outro aspecto particular não inconsistente, R1 é um halogénio.
Noutra forma de concretização, a invenção proporciona um composto enantiomericamente puro de fórmula la
em que: Y é CH; um grupo furano, tiofeno, pirrol, pirrolina, pirrolidina. dioxolano. oxazol, tiazol, imidazol, 6 imidazolina, imidazolidina, pirazol, pirazolina, pirazolidina, isoxazol, isotiazol oxadiazol, triazol, tiadiazol, pirano, piridina, piperidina, dioxano, morfolina, ditiano, tiomorfolina, piridazina, pirimidina, pirazina, piperazina, triazina, tritiano, azitidina ou fenilo; sendo cada hidrogénio em R1 opcionalmente substituído por R3; cada R3 é independentemente halogénio, alquilo C1-12, alcenilo ¢2-12, alcinilo ¢2-12, cicloalquilo C3-12, arilo Ce-12, heteroaliacíclico de 3-12 membros, heteroarilo de 5-12 membros, -S(0)mR4, -S02NR4R5, -S(O)20R4, -N02, -NR4R5, (CR6R7) n0R4, -CN, -C (0) R4, -0C (0) R4, -O (CR6R7) nR4, -NR4C(0)R5, - (CR6R7)nC (0) OR4, - (CR6R7)nOR4, - (CR5R7) nC (0) NR4R5, (CR5R7) nNCR4R5, -C (=NR6)NR4R5, -NR4C (0) NR5R6, -NR4S (O) PR5 ou -C(0)NR4R5, sendo cada hidrogénio em R3 opcionalmente substituído por R8 e os grupos R3 nos átomos adjacentes podem combinar-se para formar um grupo arilo C5-12, heteroarilo de 5-12 membros, cicloalquilo C3-i2 ou heteroalicíclico de 3-12 membros; cada R4, R5, R6 e R7 é independentemente hidrogénio, halogénio, alquilo ¢1-12, alcenilo C2-i2, alcinilo ¢2-12, cicloalquilo ¢3-12, arilo ¢8-12, heteroalicíclico de 3-12 membros, heteroarilo de 5-12 membros; ou quaisquer dois de R4, R5, R6 e R7 ligados ao mesmo azoto e podem, juntamente com o azoto ao qual estão ligados, ser combinados para formar um grupo heteroalicíclico de 3 a 12 membros ou heteroarilo de 5-12 membros contendo opcionalmente 1 a 3 heteroátomos adicionais, seleccionados entre N, 0 e S; ou quaisquer dois de R4, R5, R6 e R7 ligados ao mesmo átomo de carbono podem ser combinados para formar um grupo cicloalquilo ¢3-12, arilo ¢6-12, heteroalicíclico de 3-12 7 membros ou heteroarilo de 5-12 membros; sendo cada hidrogénio em R4, R5, R6 e R7 opcionalmente substituído por R8; cada R8 é independentemente halogénio, alquilo C1-12, alcenilo C2-12, alcinilo C2-12, cicloalquilo C3-12, arilo C6-i2, heteroalicíclico de 3-12 membros, heteroarilo de 5-12 membros, -NH2, -CN, -OH, -O-alquilo C1-12, -0- (CH2) nCicloalquilo C3-12, -. 0- (CH2) narilo C6-12, -0- (CH2) n (heteroalicíclico de 3-12 membros) ou -0-(CH2) n (heteroarilo de 5-12 membros); sendo cada hidrogénio em R6 opcionalmente substituído por R11; cada R11 é independentemente halogénio, alquilo Ci_i2, alcoxi Ci_i2, cicloalquilo C3-12, arilo Ce-i2r heteroalicíclico de 3-12 membros, heteroarilo de 5-12 membros, -O-alquilo C1-12, -0-(CH2) nCicloalquilo C3-i2, -0-(CH2) narilo C6-i2, -0- (CH2) n (heteroalicíclico de 3-12 membros), -0- (CH2)n(heteroarilo de 5-12 membros) ou -CN, sendo cada hidrogénio em Rll opcionalmente substituído por halogénio, -OH, -CN, alquilo C1-12, que pode ser parcialmente ou totalmente halogenado, -O-alquilo Ci_i2 que pode ser parcialmente ou totalmente halogenado, -C0, -S0 ou -S02; cada R13 é independentemente halogénio, alquilo C1-12, alcenilo C2-i2, alcinilo C2-i2, cicloalquilo C3-12, arilo C6-12, heteroalicíclico de 3-12 membros, heteroarilo de 5-12 membros, -S(0)mR4, -S02NR4R5, -S(0)2OR4, -N02, -NR4R5, (CR6R7) n0R4, -CN, -C (0) R4, -0C (0) R4, -0 (CR6R7) nR4, -NR4C(0)R5, - (CR6R7)nC (O) OR4, - (CR6R7) n0R4, - (CR6R7) nC (O) NR4R5, (CR6R7)nNCR4R5, -C (=NR6)NR4R5, -NR4C (O) NR5R6, -NR4S(0)pR5, - C (0) NR4R5, - (CR6R7) n (heteroalicíclico de 3-12 membros), -(CR6R7) n (cicloalquilo C3-12) , - (CR6R7) n (arilo C6-i2), (CR6R7) n (heteroarilo de 5-12 membros), - (CR8R7)nC (0)NR4R5, ou - (CR6R7) nC (0) R4, podendo os grupos R13 em átomos adjacentes combinar-se para formar um grupo arilo Ce-i2r heteroarilo de 5-12 membros, cicloalquilo C3-12 ou heteroalicíclico de 3-12 membros, sendo cada hidrogénio em R13 opcionalmente substituído por R3; cada m é independentemente 0, 1 ou 2; cada n é independentemente 0, 1, 2, 3 ou 4; cada p é independentemente 1 ou 2; ou um sal farmaceuticamente aceitável, hidrato ou solvato do mesmo.
Noutra forma de concretização, a invenção proporciona um composto enantiomericamente puro seleccionado a partir do grupo composto por 5-Bromo-3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazina-2-ilamina; 5-iodo-3-[(R)1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridina-2-ilamina; 5- bromo-3-[1(R)-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridina-2-ilamina; ácido 4-{5-Amino-6-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazina-2-il}-benzóico; (4-{5-Amino-6-[ (R)-1 -(2, 6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazina-2-il}-fenil)-piperazina-l-il-metanona; $$$ 4-(4-{5-Amino-6-[(R)-1-(2,6- dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazina-2-il}-benzoil)-piperazina-l-carboxilato de terc-butilo 3—[(IR)—1—(2,6— dicloro-3-fluor- ophenyl)etoxi]-5-[4-(piperazina-l-il carbonil)fenil] piridina-2-amina; 4-{6-amino-5-[(IR)-1- (2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridina-3-il}-N-[2-(dimetilamino)etil]-N-metilbenzamida; (4-{6-amino-5-[(1R)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridina-3-iljfenil)metanol; 4-{6-amino-5-[(IR)-1-(2,6-dicloro-3- fluorofenil)etoxi]piridina-3-il}-N-[3- 9 (dimetilamino)propil]-N-metilbenzamida; terbutil 4-(4-(6-amino-5-[(IR)-1-(2,6-dicloro-3 fluorofenil)etoxi]piridina- 3- il}benzoil)piperazina-l-carboxilato; 3—[(R)—1—(2,6— Dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-5-[1-(1-metil-piperidina-4-il)-lH-pirazol-4-il]-piridina-3-il-amina; 1-(4-(4-(6-Amino-5-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridina-3- il}-pirazol-l-il)-piperidina-l-il]-2-hidroxietanona; 3- [(R)-1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(1-piperidina- 4- il-lH-pirazol-4-il)-piridina-2-il-amina; 3-[(R)-1-(2,6-
Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(l-piperidina-4-il-lH-pirazol-4-il)-piridina-2-il-amina; 3-[(R)-1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(l-piperidina-4-il-lH-pirazol-4-il)-pirazina-2-il-amina; 3—[(R)—1 -(2,6-Dicloro-3-fluoro- fenil)-etoxi]-5-(lH-pirazol-4-il)-pirazina-2-il-amina; 1-[4-(4-(5-Amino-6-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazina-2-il}-pirazol-l-il)-piperidina-l-il]-2-hidroxietanona; 3-[(R)-1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)- etoxi]-5-[l-(1-metil-piperidina-4-il)-lH-pirazol-4-il]-pirazina-2-il-amina; 1-(4-(4-(5-Amino-6-[(R)—1—(2,6— dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazina-2-il}-pirazol-l- il)-piperidina-l-il]-2-dimetilamino-etanona; 3-[(R)-1-(2-Cloro-3,6-difluoro-fenil)-etoxi]-5-(l-piperidina-4-il-lH-pirazol-4-il)-piridina-2-il-amina; ou um sal farmaceuticamente aceitável, solvato ou hidrato do mesmo.
Noutra forma de concretização, a invenção fornece uma composição farmacêutica compreendendo qualquer dos compostos da invenção e um veículo farmaceuticamente aceitável. Em baixo são descritos exemplos de tais composições.
Os compostos preferidos da invenção incluem os que possuem actividade inibitória do c-MET como definido por um 10 ou mais dos valores de CI50, Ki ou inibição percentual (%I) . Qualquer técnico especializado na arte pode prontamente determinar se um composto possui tal actividade mediante a execução da análise apropriada, sendo apresentadas descrições de tais análises na secção de Exemplos deste documento. Numa concretização, os compostos especialmente preferidos possuem um Ki de c-MET inferior a 5 |JM ou inferior a 2 μΜ, a 1 μΜ, a 500 nM, a 200 nM ou a 100 nM. Noutra forma de concretização, os compostos especialmente preferidos possuem uma inibição de c-MET a 1 μΜ de pelo menos 10%, ou pelo menos 20% ou pelo menos 30% ou pelo menos 40% ou pelo menos 50% ou pelo menos 60% ou pelo menos 70% ou pelo menos 80% ou pelo menos 90%. Os métodos de medição da actividade de c-MET/HGFR são descritos nos Exemplos incluídos neste documento.
Noutra forma de concretização, a invenção proporciona um composto de fórmula 1 ou la para o tratamento de crescimento celular anómalo num mamífero. Noutra forma de concretização, a invenção proporciona o uso de tal composto no fabrico de um medicamento para o tratamento do crescimento celular anómalo num mamífero.
Numa concretização específica de qualquer dos métodos inventivos descritos neste documento, o crescimento celular anómalo corresponde a cancro, incluindo, entre outros, cancro do pulmão, cancro dos ossos, cancro pancreático, cancro da pele, cancro da cabeça ou do pescoço, melanoma cutâneo ou intra-ocular, cancro do útero, cancro do ovário, cancro rectal, cancro da região anal, cancro do estômago, cancro do cólon, cancro da mama, cancro do útero, carcinoma 11 das trompas de Falópio, carcinoma do endométrio, carcinoma do cérvix, carcinoma da vagina, carcinoma da vulva, Doença de Hodgkin, cancro do esófago, cancro do intestino delgado, cancro do sistema endócrino, cancro da glândula tiróide, cancro da glândula paratiróide, cancro das glândulas adrenais, sarcoma do tecido conjuntivo, cancro da uretra, cancro do pénis, cancro da próstata, leucemia crónica ou aguda, linfomas linfocíticos, cancro da bexiga, cancro do rim ou uretra, carcinoma das células renais, carcinoma da pélvis renal, neoplasmas do sistema nervoso central (SNC), linfoma primário do SNC, tumores do eixo espinal, glioma do tronco cerebral, adenoma da pituitária ou a combinação de um ou mais dos cancros anteriores. Noutra forma de concretização do método referido, o dito crescimento celular anómalo corresponde a uma doença proliferativa benigna, incluindo, entre outros, psoriase, hipertrofia benigna da próstata ou re-estenose.
Em modos de realização específicos adicionais da invenção descritos neste documento, os compostos da invenção são administrados em combinação com uma quantidade de uma ou mais substâncias seleccionadas a partir de agentes antitumor, agentes anti-angiogénese, inibidores da transdução de sinal e agentes antiproliferativos, cujas quantidades são também eficazes no tratamento do referido crescimento celular anómalo. Estas substâncias incluem as que são apresentadas nas Publicações PCT N°. WO 00/38715, WO 00/38716, WO 00/38717, WO 00/38718, WO 00/38719, WO 00/38730, WO 00/38665, WO 00/37107 e WO 00/38786, cujas divulgações são incluídas na íntegra por referência.
Exemplos de agentes antitumor incluem inibidores mitóticos, por exemplo derivados alcaloides de vinca tais 12 como vinblastina, vinorrelbina, vindesina e vincristina; colchinas alocolchina, halicondrina, éter N-benxoiltrimetil-metílico do ácido colchicínico, dolastatina 10, maitansina, rizoxina, taxanos tais como taxol (paclitaxel), docetaxel (Taxotere), 2'-N-[3-(dimetilamino)propil]glutaramato (derivado do taxol), tiocolchicina, tritilcisteina, teniposido, metotrexato, azatioprina, fluorouracil, citocina arabinosideo, 2'2' — difluorodeoxicitidina (gemcitabina), adriamicina e mitamicina. Agentes alquilantes, por exemplo cis-platina, carboplatina, oxiplatina, iproplatina, éster etílico de de N-acetil-DL-sarcosil-L leucina (Asatey ou Asalex), ácido 1,4-ciclohexadieno-l,4-dicarbâmico, 2,5 -bis(1-azirdinil)-3,8-dioxo-, éster dietílico (diaziquona), 1,4-bis (metanossulfoniloxi)butano (bissulfano ou leucossulfano) clorozotocina, clomesona, cianomorfolinodoxorubicina, ciclodisona, dianidroglactitol, fluorodopan, hepsulfam, mitomicina C, hicantone mitomicina C, mitozolamida, dicloridrato de 1-(2-cloroetil)-4-(3-cloropropil)-piperazina, piperazinediona, pipobroman, porfiromicina, mostarda de espiro-hidantoína, teroxirona, tetraplatina, tiotepa, trietilenemelamina, mostarda de nitrouracilo, cloridrato de bis(3-mesiloxipropil)amina, mitomicina, agentes nitrosureicos tais como a cicloexil-cloroetilnitrosoureia, metilciclohexil-cloroetilnitrosoureia, 1-(2-cloroetil)-3-(2,6-dioxo-3-piperidil)-1-nitrosoureia, bis(2-cloroetil)nitrosoureia, procarbazina, dacarbazina, compostos relacionados com mustarda de azoto, tais como mecloretamina, ciclofosfamida, ifosamida, melfalano, clorambucil, fosfato sódico de estramustina, estreptozoína e temozolamida. Antimetabolitos 13 de DNA, por exemplo 5-fluorouracil, citosina arabinosídeo, hidroxiureia, 2-[(3-hidroxi-2-pirinodinil)metileno]- hidrazinacarbotioamida, desoxifluorouridina, 5-hidroxi-2-formilpiridina tiosemicarbazona, alfa-2'-desoxi-6- tioguanosina, glicinato de afidicolina, 5- azadesoxicitidina, beta-tioguanina desoxiribósido, ciclocitidina, guanazol, inosina glicodialdeído, macbecina II, pirazolimidazol, cladribina, pentostatina, tioguanina, mercaptopurina, bleomicina, 2-clorodesoxiadenosina, inibidores da síntese de timidilato tais como raltitrexed e pemetrexed dissódico, clofarabina, floxuridina e fludarabina. Antimetabolitos de ? 20NA/RNA, por exemplo, L-alanosina, 5-azacitidina, acivicina, aminopterina e derivados destes, tais como o ácido N-[2-cloro-5-[[(2,4-diamino-5-metil-6-quinazolinil)metil]amino]benzoil]-L-aspártico, ácido N-[4-[[(2,4-diamino-5-etil-6- quinazolinil)metil]amino]benzoil]-L-aspártico, ácido N-[2-cloro-4-[[(2,4-diaminopteridinil)metil]amino]benzoil]-L-aspártico, antifol de Baker solúvel, dicloroalil-lawsona, brequinar, ftoraf, diidro-5-azacitidina, metotrexato, sal tetrassódico do ácido N-(fosfonoacetil)-L-aspártico, ??pirazofurano, trimetrexato, plicamicina, actinomicina D, criptoficina e análogos, tais como a criptoficina-52 ou, por exemplo, um dos antimetabolitos preferidos apresentados no pedido de Patente Europeia n° 239362, tal como o ácido N-(5-[N-(3,4-diidro-2-metil-4-oxoquinazolina-6-ilmetil)-N-metilamino]-2-tenoíl)-L-glutâmico; inibidores do factor de crescimento; inibidores do ciclo celular; antibióticos intercalantes, por exemplo a adriamicina e bleomicina; proteínas, por exemplo interferon; e anti-hormonas, por exemplo anti-estrogénios como o Nolvadex™ (tamoxifen) ou, 14 por exemplo anti-andrógenos como o Casodex™ (4'-ciano-3-(4-fluorofenilsulfonil)-2-hidroxi-2-metil-3'- (trifluorometil)propionanilida). Estes tratamentos conjuntos podem ser atingidos por meio de dosagem simultânea, sequencial ou separada dos componentes individuais do tratamento.
Os agentes anti-angiogénese incluem inibidores da MMP-2 (metaloproteinase matriz 2) , inibidores da MMP-9 (metaloproteinase matriz 9) e inibidores da COX-11 (ciclo-oxigenase II) inibidores. Exemplos de inibidores úteis da COX-II incluem CELEBREX™ (alecoxib), valdecoxib e rofecoxib. Exemplos de inibidores úteis da metaloproteinase matriz são descritos na WO 96/33172 (publicada em 24 de Outubro de 1996) , na WO 96/27583 (publicada em 7 de Março de 1996), Pedido de Patente Europeia n° 97304971.1 (apresentado em 8 de Julho de 1997), Pedido de Patente Europeia n° 99308617.2 (apresentado em 29 de Outubro de 1999), WO 98/07697 (publicada em 26 de Fevereiro de 1998) . WO 98/03516 (publicada em 29 de Janeiro de 1998), WO 98/34918 (publicada em 13 de Agosto de 1998), WO 98/34915 (publicada em 13 de Agosto de 1998), WO 98/33768 (publicada em 6 de Agosto de 1998) , WO 98/30566 (publicada em 16 de Julho de 1998), Publicação da Patente Europeia 606,046 (publicada em 13 de Julho de 1994), Publicação da Patente Europeia 931,788 (publicada em 28 de Julho de 1999), WO 90/05719 (publicada em 31 de Maio de 1990) , WO 99/52910 (publicada em 21 de Outubro de 1999), WO 99/52889 (publicada em 21 de Outubro de 1999), WO 99/29667 (publicada em 17 de Junho de 1999), Pedido de Patente Internacional PCT n° PCT/IB98/01113 (publicado em 21 de Julho de 1998), Pedido de Patente Europeia n° 99302232.1 15 (apresentado em 25 de Março de 1999) , Pedido de patente na Grã-Bretanha número 9912961.1 (apresentado em 3 de Junho de 1999), Pedido Provisório de Patente Norte-americana n° 60/148,464 (apresentado em 12 de Agosto de 1999), Patente Norte-americana 5,863,949 (publicada em 26 de Janeiro de 1999), Patente Norte-americana 5,861,510 (publicada em 19 de Janeiro de 1999) e Publicação da Patente Europeia 780,386 (publicada em 25 de Junho de 1997), as quais são incorporadas na íntegra por referência neste documento. Os inibidores preferenciais MMP-2 e MMP-9 são os que possuem pouca ou nenhuma actividade inibidora da MMP-1. São mais preferidos os que inibem selectivamente a MMP-2 e/ou MMP-9 relativamente a outras metaloproteinases da matriz (isto é MMP-1, MMP-3, MMP-4, MMP-5, MMP-6, MMP-7, MMP-8, MMP-10, MMP-11, MMP-12 e MMP-13).
Exemplos de inibidores de MMP incluem AG-3340, RO 32-3555, RS13-0830 e os compostos seguintes: Ácido 3—[[4—(4— fluoro-fenoxi)-benzenossulfonil]-(1-hidroxicarbamoí1-ciclopentil)-amino]-propiónico; ácido 3-exo-3-[4-(4-fluoro-fenoxi)-benzenossulfonilamino]-8-oxa-biciclo[3.2.1]octano-3-carboxílico hidroxiamida; ácido (2R, 3R) 1-[4-(2-cloro-4-fluoro-benziloxi)-benzenossulfonil]-3-hidroxi-3-metil-piperidina-2-carboxílico hidroxiamida; ácido 4—[4— (4 — fluoro-fenoxi)-benzenossulfonilamino]-tetra-hidro-pirano-4-carboxílico hidroxiamida; ácido 3-[[4-(4-fluoro-fenoxi)-benzenossulfonil]-(1-hidroxicarbamoí1-ciclobutil)-amino]-propiónico; ácido 4-[4-(4-cloro-fenoxi)- benzenossulfonilamino]-tetra-hidro-pirano-4-carboxílico hidroxiamida; ácido 3-[4-(4-cloro-fenoxi)- benzenossulfonilamino]-tetra-hidro-pirano-3-carboxílico hidroxiamida; ácido (2R, 3R) 1 -[4-(4-fluoro-2-metil- 16 benziloxi)-benzenossulfonil]-3-hidroxi-3-metil-piperidina- 2- carboxílico hidroxiamida; ácido 3-[[4-(4-fluoro-fenoxi)- benzenossulfonil]-(1-hidroxicarbamoíl-l-metil-etil)-amino]-propiónico; ácido 3-[[4-(4-fluoro-fenoxi)- benzenossulfonil]-(4-hidroxicarbamoíl-tetra-hidro-pirano-4-il)-amino]-propiónico; ácido 3-exo-3-[4-(4-cloro-fenoxi)-benzenossulfonilamino]-8-oxa-biciclo[3.2.1]octano-3-carboxilico hidroxiamida; ácido 3-endo-3-[4-(4-fluoro-fenoxi)-benzenossulfonilamino]-8-oxa-biciclo[3.2.1]octano- 3- carboxílico hidroxiamida; ácido 3-[4-(4-fluoro-fenoxi)-benzenossulfonilamino]-tetra-hidro-furano-3-carboxilico hidroxiamida; e sais farmaceuticamente aceitáveis, solvatos e hidratos dos mesmos.
Exemplos de inibidores da transdução de sinal incluem agentes que podem inibir respostas de EGFR (epidermal growth factor receptor - receptor do factor de crescimento epidérmico), tais como anticorpos EGFR, anticorpos EGF e moléculas que são inibidores de EGFR; inibidores de VEGF (vascular endothelial growth factor - factor de crescimento endotelial vascular); e inibidores do receptor erbB2, tais como moléculas orgânicas ou anticorpos que se ligam ao receptor erbB2, por exemplo HERCEPTIN™ (Genentech, Inc. of South San Francisco, Califórnia, EUA).
Os inibidores de EGFR estão descritos, por exemplo, na WO 95/19970 (publicada em 27 de Julho de 1995), WO 98/14451 (publicada em 9 de Abril de 1998), WO 98/02434 (publicada em 22 de Janeiro de 1998) e Patente Norte-americana 5, 747,498 (publicada em 5 de Maio de 1998). Os agentes de inibição EGFR incluem, entre outros, anticorpos monoclonais C225 e anti-EGFR 22Mab (ImClone Systems Incorporated of New York, Nova Iorque, EUA), os compostos ZD-1839 17 (AstraZeneca), BIBX-1382 (Boehringer Ingelheim), MDX-447 (Medarex Inc. of Annandale, Nova Jérsia, EUA) e OLX-103 (Merck & Co. of Whitehouse Station, Nova Jérsia, EUA), VRCTC-310 (Ventech Research) e toxina de fusão EGF (Seragen Inc. of Hopkinton, Massachusetts).
Inibidores de VEGF, por exemplo SU-5416 e SU-6668 (Sugen Inc. de São Francisco Sul, Califórnia, EUA), podem também ser combinados ou administrados concomitantemente com a composição. Os inibidores de VEGF são descritos, por exemplo, na WO 99/24440 (publicada em 20 de Maio de 1999) , Pedido de Patente Internacional PCT PCT/IB99/00797 (apresentado em 3 de Maio de 1999), WO 95/21613 (publicada em 17 de Agosto de 1995) , WO 99/61422 (publicada em 2 de Dezembro de 1999), Patente Norte-americana 5,834,504 (publicada em 10 de Novembro de 1998), WO 98/50356 (publicada em 12 de Novembro de 1998), Patente Norte-americana 5,883,113 (publicada em 16 de Março de 1999), Patente Norte-americana 5,886,020 (publicada em 23 de Março de 1999), Patente Norte-americana 5,792,783 (publicada em 11 de Agosto de 1998). WO 99/10349 (publicada em 4 de Março de 1999), WO 97/32856 (publicada em 12 de Setembro de 1997), WO 97/22596 (publicada em 26 de Junho de 1997), WO 98/54093 (publicada em 3 de Dezembro de 1998), WO 98/02438 (publicada em 22 de Janeiro de 1998) , WO 99/16755 (publicada em 8 de Abril de 1999) e WO 98/02437 (publicada em 22 de Janeiro de 1998), que são todas incluídas na íntegra por referência neste documento. Outros exemplos de alguns inibidores específicos de VEGF são IM862 (Cytran Inc. de Kirkland, Washington, EUA); anticorpo monoclonal anti-VEGF bevacizumab (Genentech, Inc. de South San Francisco, Califórnia, EUA) e angiozima, uma ribozima 18 sintética da Ribozyme (Boulder, Colorado, EUA) e Chiron (Emeryville, Califórnia, EUA).
Os inibidores do receptor ErbB2, tal como GW-282974 (Glaxo Wellcome plc) e os anticorpos monoclonais AR-209 (Aronex Pharmaceuticals Inc. of The Woodlands, Texas, EUA) e 2B-1 (Chiron), podem ser administrados em combinação com a composição. Estes inibidores do erbB2 incluem os descritos na WO 98/02434 (publicada em 22 de Janeiro de 1998), WO 99/35146 (publicada em 15 de Julho de 1999), WO 99/35132 (publicada em 15 de Julho de 1999), WO 98/02437 (publicada em 22 de Janeiro de 1998), WO 97/13760 (publicada em 17 de Abril de 1997), WO 95/19970 (publicada em 27 de Julho de 1995), Patente Norte-americana 5,587,458 (publicada em 24 de Dezembro de 1996) e Patente Norte-americana 5,877,305 (publicada em 2 de Março de 1999), que são todas incluídas na íntegra por referência neste documento. Os inibidores do receptor ErbB2 úteis na presente invenção são também descritos no Pedido Provisório de Patente Norte-americana n° 60/117.341, apresentado em 27 de Janeiro de 1999, e no Pedido Provisório de Patente Norte-americana n° 60/117.346, apresentado em 27 de Janeiro de 1999.
Outros agentes antiproliferativos que podem ser utilizados incluem inibidores da transferase da proteína enzimática farnesil e inibidores da tirosina quinase receptora PDGFr, incluindo os compostos apresentados e reivindicados nos seguintes Pedidos de Patentes Norte-americanas: 09/221946 (apresentado em 28 de Dezembro de 1998); 09/454058 (apresentado em 2 de Dezembro de 1999); 09/501163 (apresentado em 9 de Fevereiro de 2000) ; 09/539930 (apresentado em 31 de Março de 2000); 09/202796 19 (apresentado em 22 de Maio de 1997); 09/384339 (apresentado em 26 de Agosto de 1999); e 09/383755 (apresentado em 6 de Agosto de 1999) ; e os compostos apresentados e reivindicados nos seguintes Pedidos Provisórios de Patente Norte-americana; 60/168207 (apresentado em 30 de Novembro de 1999); 60/170119 (apresentado em 10 de Dezembro de 1999) ; 60/177718 (apresentado em 21 de Janeiro de 2000); 60/168217 (apresentado em 30 de Novembro de 1999) e 60/200834 (apresentado em 1 de Maio de 2000) . Os pedidos de patente e os pedidos provisórios de patente anteriores são incluídos na íntegra por referência neste documento.
As composições da invenção podem também ser usadas com outros agentes úteis no tratamento de crescimento celular anómalo ou cancro, incluindo, entre outros, agentes capazes de melhorar as respostas imunes antitumor, tais como os anticorpos CTLA4 (antigénio 4 do linfócito citotóxico) e outros agentes capazes de bloquear o CTLA4; e agentes antiproliferativos, tais como outros inibidores da transferase da proteína farnesil. Os anticorpos CTLA4 específicos que podem ser utilizados na presente invenção incluem os descritos no Pedido Provisório de Patente Norte-americana 60/113.647 (apresentado em 23 de Dezembro de 1998) que é incorporado na íntegra neste documento por referência.
Definições
Excepto em caso de indicação em contrário, os termos seguintes utilizados na especificação e reivindicações têm os significados discutidos abaixo: As variáveis definidas nesta secção, tais como R, X, n e semelhantes, servem 20 apenas de referência nesta secção, e podem não ter o mesmo significado que o utilizado fora desta secção de definições. Além disso, muitos dos grupos aqui definidos podem ser opcionalmente substituídos. A listagem nesta secção de definições de substituintes típicos é exemplar e não se pretende que a mesma limite os substituintes definidos nesta especificação e reivindicações. "Alquilo" refere-se a um radical hicrocarboneto alifático saturado que inclui uma grupos de cadeia linear e de cadeia ramificada de 1 a 20 átomos de carbono, preferencialmente de 1 a 12 átomos de carbono, ainda preferencialmente de 1 a 8 átomos de carbono, ou 1 a 6 átomos de carbono, ou 1 a 4 átomos de carbono "Alquilo de cadeia curta" refere-se especificamente ao grupo alquilo com 1 a 4 átomos de carbono. Exemplos de grupos alquilo incluem metilo, etilo, propilo, 2-propilo, n-butilo, isobutilo, tert-butilo, pentilo e semelhantes. O alquilo poderá ser substituído ou não substituído. Os grupos de substituintes típicos incluem: cicloalquilo, arilo, heteroarilo, heteroalicíclico, hidroxi, alcoxi, ariloxi, mercapto, alquitio, ariltio, ciano, halo, carbonilo, tiocarbonilo, O-carbamilo, O-tiocarbamilo, N-tiocarbamilo, C-amido, N-amido, C-carboxi, O-carboxi, nitro, sililo, amino e -NRXRy, em que Rx e Ry são independentemente seleccionados do grupo que consiste de hidrogénio, alquilo, cicloalquilo, arilo, carbonilo, acetil, sulfonil, trifluorometanosulfonil e combinados, um anel heteroalicíclico de seis membros. "cicloalquilo" designa um anel monocíclico, só carbono, de 3 a 8 membros, um grupo anel bicíclico fundido só carbono, de 5 membros/6 membros ou 6 membros/6 membros ou 21 um anel fundido multicíclico (um sistema em anel "fundido" significa que cada anel no sistema partilha um par de átomos de carbono adjacentes no sistema) em que um ou vários dos anéis podem conter uma ou várias ligações duplas mas nenhum dos anéis tem um sistema de electrões pi completamente conjugado. Exemplo, sem constituir limitação, dos grupos cicloalquilo são ciclopropano, ciclobutano, ciclopentano, ciclopenteno, ciclo-hexano, ciclo-hexadieno, adamantano, ciclo-heptano, ciclo-heptatrieno e semelhantes. 0 grupo cicloalquilo pode ser substituído ou não substituído. Grupos típicos de substituentes incluem alquilo, arilo, heteroarilo, heteroalicíclico, hidroxi, alcoxi, ariloxi, mercapto, alciltio, ariltio, ciano, halo, carbonilo, tiocarbonilo, C-carboxi, O-carboxi, O-carbamilo, N-carbamilo, C- amido, N-amido, nitro, amino e -NRXRy, com Rx e Ry como acima definido. Exemplos ilustrativos de cicloalquilo são derivados de, mas sem constituir limitação, do que segue:
00 cx> o. 0. oco 7_ίθ "Alcenilo" refere-se a um grupo alquilo, tal como presentemente definido, constituído por pelo menos dois átomos de carbono e pelo menos uma ligação dupla carbono- 22 carbono. Exemplos representativos incluem, mas sem constituir limitação, etenilo, 1-propenilo, 2-propenilo, , 2-, ou 3-butenilo e semelhantes. "Alcenilo" refere-se a um grupo alquilo, tal como presentemente definido, constituído por pelo menos dois átomos de carbono e pelo menos uma ligação tripla carbono-carbono. Exemplos representativos incluem, mas sem constituir limitação, etenilo, 1-propinilo, 2-propinilo, , ou 3-butinilo e semelhantes. "Arilo" refere-se a todos os grupos monocíclicos, só carbono, ou anel policíclico fundido de 6 a 12 átomos de carbono que tenham um sistema de electrões pi completamente conjugado. Exemplos, sem constituir limitação, de grupos arilo são fenilo, naftalenilo e antracenilo. 0 grupo arilo pode ser substituído ou não substituído. Grupos típicos de substituentes incluem halo, tri-halometrilo, alquilo, hidroxi, alcoxi, ariloxi, mercapto, alcitio, ciano, nitro, carbonilo, tiocarbonilo, C-carboxi, O-carboxi, O-carbamilo, N-carbamilo, O-tiocarbamilo, C- amido, N-amido, sulfinil, sulfonil, amino e -NRXRy, com Rx e Ry como acima definido. "Heteroarilo" refere-se a um grupo monocíclico ou anel fundido de 5 a 12 átomos no anel, contendo um, dois, três ou quatro heteroátomos do anel, seleccionados de entre N, O ou S, sendo os restantes átomos do anel C e, ainda, com um sistema de electrões pi completamente conjugado. Exemplos, sem constituir limitação, de grupos heteroarilo não substituídos são os pirróis, furano, tiofeno, imidazole, oxazole, tiazole, pirazole, piridina, pirimidina, guinolina, isoquinolina, purina e carbazole. 0 grupo heteroarilo pode ser substituído ou não substituído. Grupos 23 típicos de substituentes incluem alquilo, cicloalquilo, halo, tri-halometrilo, hidroxi, alkoxi, ariloxi, mercapto, alquitio, ariltio, ciano, nitro, carbonilo, tiocarbonilo, sulfonamida, C-carboxi, O-carboxi, sulfinil, sulfonil, 0-carbamilo, N-carbamilo, O-tiocarbamilo, C- amido, N-amido, amino e -NRXRy, com Rx e Ry como acima definido.
Um heteroaril farmaceuticamente aceitável terá que ser suficientemente estável para ser adicionado a um composto da invenção, formulado numa composição farmacêutica e subsequentemente administrado a um doente que precise do mesmo.
Exemplos de grupos monocíclicos típicos de heterolatil incluem, mas sem constituir limitação: H ú Ô ó Λ 11 H 0 Pirrol (pirrolilo) Fu rano Tiofeno Pirazol (pirazolilo) Imidazol (furanilo) (tiofenilo) (imidazolilo) Φ 0 «-N ú Ò H u Isoxazol (isoxazolilo) Oxazol (oxazolilo) Isotiazol (isotiazolilo) Tiazolilo (tiazolilo) 1,2,3-tríazol (1,2,3-triazolil) 1,3,4-triazol (1,3,4-triazolil) l-oxa-2,3-diazol l-oxa-2,4-diazol (l-oxa-2,3-diazolilo) (l-oxa-2,4-diazolilo) l-oxa-2,5-diazol (l-oxa-2,5-diazolilo)
Λ N-N ySN /SNij N N—^ N N%J1 l-oxa-3,4-diazol l-tia-2,3-diazol l-tia-2,4-d iazol l-tia-2,5-d iazol (l-oxa-3,4-diazolilo) (l-tia-2,3-diazolilo) (l-tia-2,4-diazolilo) (l-tia-2,5-diazolilo)
Λ N-N
u O u O l-tia-3,4-diazol Tetrazol (tetratolilo) Piridina (piridinilo) (l-tia-3,4-diazolilo)
Piridazina (piridazinilo)
Pirimidina (pirimidinilo) .N.
O
Pirazina (pirazinilo)
Exemplos de grupos de heteroarilo de anel fundido incluem, mas sem constituir limitação: ~N H Indazol (indazolilo)
CO CO CQ CO O
Indol (indolilo) Benzimidazol (benzimidazolilo)
Benzofurano Benzotifeno (benzofuranilo) (benzotiofenilo)
σ> co U P* LJ
CO to
Be nzotr iazol Pirrolo[2,3b]piridina Pirrolo[2,3c]piridina Pirrolo|3,2-c]piridina (benzotriazolilo) (p±rrolo[2,3-b]piridinilo) (pirrolo[2,3-cpiridinilo) (pirrolo[3,2-c]piridinilo) 25
Η
H
Pirrolo|3,2-b]piridina (pirrolo[3,2-b]piridinilo) imidazo|4,5-b]piridina (imidazo[4,5-b]piridinilo) imidazo|4,5-cpiridina (imidazo[4,5-c]piridinilo) pirazolo|4,3-d]piridina (pirazolo[4,3-d]piridinilo)
l pirazolo|4,3-c]piridina pirazol o[3,4-c]piridina pirazolo[3,4-b]pirid ina Isoindol (pirazolo[4,3-c]piridinilo) (pirazolo[3,4-c]piridinilo) (pirazolo[3,4-b]piridinilo) , . (isoindolilo) CG- co
Indazol (indazolilo Purina (purinilo) Indolizina (indolininilo lmidazo|l,2-a]piridina (lmidazo[ 1,2- lmidazo|l,5-a]piridina (Imidazo[1,5- a]plrldlnllo) a]piridinil)
pirrolo[ l,2-b]piridazina (pirrolo[l,2-b]piridazinilo) pirazolo[l,5-a]piridina (pirazolo[l,5-a]piridinilo) lmidazo|l,2-c]pirimidina (Imidazo[1,2-c]pirimidinilo)
Quinolina (quinolinilo) isoquinolina (isoquinolinilo)
Cinolina (cinolinilo
Quinazolina (azaquinazolino)
Quinoxalina (quinoxalinilo)
Ftalazina (ftalazinilo) 1,6-naftiridina (1,6-naftiridinilo) 1,7-nafti rid ina (1,7-naftiridinilo) 26
1,8-nafti ridina (1,8-naftiridinilo)
1,5-nafti ridina (1,5-naftiridinilo)
2,6-naftiridina (2,6-naftiridinilo)
2,7-nafti ridina (2,7-naftiridinilo)
Pirido[3,2-b]pirimidina (pirido[3,2-b]pirimidinilo)
Pirido[4,3-d]pirimidina (pirido[4,3-d] p irim id in i lo)
Pirido[3,4-d]pirimidina (pirido[3,4-d] p irim idi ni lo)
Pirido[2,3-d]pirimidina (pirido[2,3-d] pi ri m idi ni lo)
Pirido[2,3-d]pirazina (pirido[2,3-d] p irazi ni lo)
Pirido[3,4-b]pirazina (pirido[3,4-b] p irazi ni lo)
Pirazino[2,3-b]pirazina (pirazino[2,3-b] pirazinilo) P irim ido[5,4-d] pi ri m idi na (pirimido[5,4-d]pirimidinilo)
Pirim ido[4,5-d] p irim id ina (pirimido[4,5-d] p irim idi ni lo) "Heteroalicíclico" ou "heterociclo" designa um grupo monocíclico ou anel fundido, tendo no (s) anel(éis) 3 a 12 átomos do anel, onde um ou dois átomos de anel são heteroátomos, seleccionados de entre N, 0, ou S(0)n (em que n é 0,1 ou 2), sendo C os restantes átomos do anel. Os anéis podem igualmente ter uma ou mais ligações duplas. No entanto, os anéis não têm um sistema de electrões pi completamente conjugados. Exemplos de grupos heteroaliciclicos saturados adequados incluem, mas sem constituir limitação: 27
0 s ΖΛ ZA H N ΖΛ a o d ò 0xiran° Tiarano Aziridina Oxetano Tiatano (tiatanilo) Azetidina Tetra-hidrofurano (tetra· (oxiranilo) (tiaranilo) (aziridinilo) (oxetanilo) (azetidinilo) hidrofuranilo) ò H Õ 0 0 Tetra-hidrotiofeno (tetr. a‘ Pirrolidina Tetra ι-hidropirano (tetra- Tetr, a-hidrotiopirano (tetra- hidrotiofenilo) (pirrolidii jUq) hidropiranilo) hidrotiopiranilo) H 0 0 0 H 0 0 Piperidina 1,4-dioxano (1,4- 1 L,4-oxatiano (1,4- Morfolina (morfolinilo) 1,4-ditiano (1,4- (piperidinilo) dioxanilo) c Dxatianilo) ditianilo) H H H ú N H 0 0 O 0 Piperazina (piperazinilo) 1,4-azatiano (1,4- Oxepano tiepano Azepano azatianilo) (oxepanilo) (tiepanilo) (azepanilo) 0 0 0 '—N LJ 0 1,4-dioxepano (1,4- 1,4-oxatiepano (1,< 4- 1,4 Π -oxaazepano (1,4- 1,4-ditiepano dioxepanilo) oxatiepanilo) oxaazepanilo) (1,4-ditiepanilo) 0 '—N H H 0 '—N H 1,4-tieazepano 1,4-diazepano (1,4-tie azepanilo) (1,4-diazepanilo) 28
Exemplos de grupos heteroalicíclicos parcialmente não saturados adequados incluem, mas sem constituir limitação: 28
3,4-di-hidro-2H-pirano 5,6-di-hidro-2H-pirano 2H-pirano (3,4-di-hidro-2H-piranilo) (5,6-di-hidro-2H-piranilo) (2H-piranilo)
1,2,3,4-tetra-hidropiridina (1,2,3,4-tetra-hidropiridinilo) 1,2,5,6-tetra-hidropiridina (1,2,5,6-tetra-hidropiridinilo) 0 grupo heterociclo é opcionalmente substituído por um ou dois substituintes, seleccionados independentemente de entre halo, alquilo de cadeia curta, alquilo de cadeia curta por carboxi, hidroxiéster ou mono ou dialquilamino. "Hidroxi" designa um grupo -OH. "Alcoxi" designa tanto um grupo -O-(alquilo) como um grupo -0-(cicloalquilo não substituído). Exemplos representativos incluem, sem constituir limitação, por exemplo, metoxi, etoxi, propoxi, butoxi, ciclopropiloxi, ciclobutiloxi, ciclopentiloxi, ciclohexiloxi e semelhantes. "Haloalcoxi" designa um grupo -0- (haloalquilo) Exemplos representativos incluem, mas sem constituir limitação, trifluor-ometoxi, tribromometoxi e semelhantes. "ariloxi" designa tanto um grupo -0-arilo como um grupo -O-heteroarilo, tal como presentemente definido. Exemplos 29 representativos incluem, sem ficar limitados a, fenoxi, piridiniloxi, furaniloxi, thieniloxi, pirimidiniloxi, piraziniloxi e semelhantes e derivados dos mesmos. "Mercapto" designa um grupo -SH. "Alquiltio" designa tanto um grupo -S-(alquilo) como um grupo -0-(cicloalquilo não substituído). Exemplos representativos incluem, sem constituir limitação, metiltio, etiltio, propiltio, butiltio, ciclopropiltio, ciclobutiltio, ciclopentiltio, ciclo-hexiltio e semelhantes. "Ariltio" designa tanto um grupo -S-arilo como um grupo -S-heteroarilo, tal como presentemente definido. Exemplos representativos incluem, mas sem constituir limitações, feniltio, piridiniltio, furaniltio, tientiltio, pirimidiniltio e semelhantes e derivados dos mesmos. "Acilo" ou "carbonilo" designa um grupo -C(0)-R", em que R" é seleccionado do grupo constituído por hidrogénio, alquilo, tri-halometilo, cicloalquilo não substituído, arilo opcionalmente substituído por um ou vários, de preferência um, dois ou três substituintes seleccionados do grupo constituído por alquilo de cadeia curta não substituído, tri-halometilo, alcoxi de cadeia curta, halo e grupos -NRXRY, heteroarilo (ligado através de um carbono em anel), opcionalmente substituído por um ou mais, de preferência um, dois ou três substituintes seleccionados do grupo constituído por alquilo de cadeia curta, tri-haloalquilo, alcoxi de cadeia curta, halo e grupos —NRXRY e heteroalicíclico (ligado através de um carbono em anel), opcionalmente substituído por um ou mais, de preferência um, dois ou três substituintes seleccionados do grupo 30 constituído por alquilo de cadeia curta, tri-haloalquilo, alcoxi de cadeia curta, halo e grupos -NRXRY. Grupos acilo representativos incluem, sem constituir limitação, acetilo, trifluoroacetilo, benzoílo e semelhantes. "Aldeído" designa um grupo acilo em que R" é hidrogénio. "Tioacilo" ou "tiocarbonilo" designa um grupo -C(S)-R", sendo R" tal como presentemente definido.
Um grupo "tioacilo" designa um grupo -C(S)-R", sendo R" tal como presentemente definido.Um grupo "C-carboxi" designa um grupo -C(O)-0R", sendo R" tal como presentemente definido.
Um grupo "O-carboxi" designa um grupo -0C(0)R", sendo R" tal como presentemente definido. "Éster" designa um grupo -C(O)-0R", sendo R° tal como presentemente definido, com a excepção de que R" não pode ser hidrogénio.
Grupo "acetilo" designa um grupo -C(0)CH3.
Grupo "halogénio" designa flúor, cloro, bromo ou iodo, de preferência flúor ou cloro.
Grupo "tri-halometilo" designa um grupo metilo que contém três substituintes de halogénio, tal como o grupo trifluorometilo. "Ciano" designa um grupo -C=N.
Um grupo "sulfinil" designa um grupo -S(0)R em que, para além de ser como presentemente descrito, R" pode igualmente ser um grupo hidroxi. 31
Um grupo "sulfonil" designa um grupo -S (0) 2R" em que, para além de ser como presentemente descrito, R" pode igualmente ser um grupo hidroxi. "S-sulfonamido" designa um grupo -S(0)2NRXRY, sendo Rx e RY tal como presentemente definido. "N-sulfonamido" designa um grupo -NRXS(0)2RYr sendo Rx e RY tal como presentemente definido.
Grupo "O-carbamilo" designa um grupo -0C(0)NRxRY, sendo Rx e RY tal como presentemente definido. "N-carbamilo" designa um grupo -Rx0C(0)NRY, sendo R18 e R19 tal como presentemente definido.
Grupo "O-tiocarbamilo" designa um grupo -0C(S)NRxRY, sendo Rx e RY tal como presentemente definido. "N-tiocarbamilo" designa um grupo -RY0C(S)NRx, sendo RY e Rx tal como presentemente definido. "Amino" designa um grupo NRXRY, em que Rx eRY são ambos hidrogénio.
Grupo "Camido" designa um grupo -C(0)NRxRY, sendo Rx e RY tal como presentemente definido. "N-amido" designa um grupo -RxC(0)NRY, sendo Rx e RY tal como presentemente definido. "nitro" designa um grupo -NO2. "Haloalquilo" significa um alquilo, preferencialmente um alquilo de cadeia curta, que é substituído por um ou vários ou diferentes átomos de halogénio, por exemplo, -CH2C1, —CF3, -CH2CF3, -CH2CCI3 e semelhantes. "Hidoxialquilo" significa um alquilo, preferencialmente alquilo de cadeia curta que é substituído por um, dois ou 32 três grupos hidroxi; por exemplo, hidroximetil, 1 ou 2-hidroxietil, 1,2-, 1,3-dihidroxipropil e semelhantes. "Aralquilo" significa alquilo, preferencialmente alquilo infeior, que é substituído com um grupo arilo tal como acima descrito; por exemplo, -CH2fenilo, - (CH2) 2fenilo, - (CH2) 3fenilo, CH3CH (CH3) CH2fenilo e semelhantes e derivados do mesmo. "Heteroalquilo" significa alquilo, preferencialmente alquilo de cadeia curta, que é substituído por um grupo heteroarilo; por exemplo, -CH2piridinilo, -(CH2) 2pirimidinilo, - (CH2) 3imidazolilo e semelhantes e derivados do mesmo. "Monoalquilamino" significa um radical -NHR, em que R é um alquilo ou um grupo cicloalquilo não substituído; por exemplo, metilamino, (1-metiletil)amino, ciclo-hexilamino e semelhantes. "Dialquilamino" significa um radical -NRR, em que R é, independentemente um alquilo ou um grupo cicloalquilo não substituído; dimetilamino, dietilamino, (1-metiletil)-etilamino, ciclo-hexilmetilamino, ciclopentilmetilamino e semelhantes. "Opcional" ou "opcionalmente" significa que o evento ou circunstância subsequente descrito pode ocorrer, mas não tem de ocorrer, e que a descrição inclui situações em que o evento ou circunstância ocorre e situações em que o evento e circunstância não ocorre. Por exemplo, "grupo heterociclo opcionalmente substituído por um grupo alquilo" significa que o alquilo pode mas não tem de estar presente e que a descrição inclui situações em que o grupo heterociclo é substituído por um grupo alquil e situações 33 em que o grupo heterociclo não é substituído por um grupo alquilo.
Uma "composição farmacêutica" designa uma mistura de um ou mais dos compostos aqui descritos, ou sais fisiologicamente/farmaceuticamente aceitáveis, solvatos, hidratos ou pró-fármacos derivados dos mesmos, com outros componentes químicos, tais como veículos ou excipientes fisiologicamente/farmaceuticamente aceitáveis. 0 propósito de uma composição farmacêutica é facilitar a administração de um composto para um organismo.
Tal como presentemente utilizado, um "condutor fisiologicamente/farmaceuticamente aceitável" designa um veículo ou diluente que não causa irritação significante num organismo e não anula a actividade biológica e características do composto administrado.
Um "excipiente farmaceuticamente aceitável" designa uma substância inerte adicionada a uma composição farmacêutica para facilitar ainda mais a administração de um composto. Exemplos, sem limitações, de excipientes incluem carbonato de cálcio, fosfato de cálcio, vários açúcares e tipos de amido, derivados da celulose, gelatina, óleos vegetais e glicóis de polietileno.
Tal como presentemente utilizado o termo "sal farmaceuticamente aceitável" refere-se aos sais que retêm a eficácia biológica e propriedades do composto aparentado. Estes sais incluem:
Sais de adição ácida, que podem ser obtidos por reacção da base livre do composto progenitor com ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido nitrico, ácido fosfórico, ácido sulfúrico e ácido 34 perclórico e semelhantes, ou com ácidos orgânicos tais como áido acético, ácido oxálico, ácido málico (D) ou (L), ácido maleico, ácido metanossulfónico, ácido etanosulfónico, ácido p-toluenossulfónico, ácido salicílico, ácido tartárico, ácido cítrico, ácido sucinico ou ácido malónico e semelhantes; ou (2) sais formados quando um protão ácido presente no composto aparentado ou é substituído por um ião metálico, por exemplo, um ião de metal alcalino, um ião alcalino-terroso ou um ião de alumínio ou quando é coordenado com uma base orgânica, tal como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N-metilglucamina e semelhantes. "PK" designa quinase tirosina da proteína do receptor (RTKs), quinase tirosina "celular" ou não receptoras e quinase treonina-serina (STKs). "Modulação" ou "modular" designa a alteração da actividade catalítica de RTKs, CTKs e STKs. Em particular, Modular designa a activação da actividade catalítica de RTKs, CTKs e STKs, preferencialmente a activação ou inbição da actividade catalítica de RTKs, CTKs e STKs, dependendo da concentração dos compostos ou sal aos quais se expõe RTK, CTK e STK, ou, ainda preferencialmente, a inibição da actividade catalítica de RTKs, CTKs e STKs. "Actividade catalítica" designa o grau de fosforilação de tirosina sob influência, directa ou indirecta, de RTKs e/ou CTKs ou a fosforilação de serina e treonina sob a influência, directa ou indirecta, de STKs. "Contactar" designa juntar um composto desta invenção e um alvo PK de tal forma que o composto pode ser afectar a 35 actividade catalítica do PK, seja directamente, isto é, ao interagir com a própria quinase, seja indirectamente, ao interagir com outra molécula em que a actividade catalítica da quinase é dependente. Este "contacto" pode ser obtido "in vitro", isto é, num tubo de teste, num prato petri ou semelhante. Num tubo de teste, o contacto pode envolver apenas um compost e um PK de interesse ou pode envolver as células totais. As células podem ser mantidas ou desenvolvidas em pratos de cultura de células e contactadas por um composto nesse ambiente. Neste contexto, a capacidade de um composto particular afectar uma disfunção relacionada com o PK, isto é, o IC50 do composto abaixo definido, pode ser determinado antes de se obter a utilização dos compostos in vivo com organismos vivos mais complexos. Relativamente às células fora do organismo, existem múltiplos métodos, bem conhecidos pelos especialistas na técnica, para se colocar os Pks em contacto com os compostos, inclundo, mas sem constituir limitações, micro-injecção celular directa e inúmeras técnicas de veículos transmembranos. "In vitro" designa os procedimentos efectuados num ambiente artificial tais como, por exemplo, sem constituir limitações, num tubo de teste ou meio de cultura. "in vivo" designa os procedimentos efectuados dentro de um organismo vivo, tais como, sem constituir limitações, um rato, ratazana ou coelho. "Disfunção relacionada com PK", "disfunção gerada por PK", e "actividade PK anormal" designam uma condição caracterizada por uma actividade catalítica de PK inapropriada, isto é, fraca ou, mais comummente, em 36 excesso, em que o PK em causa pode ser um RTK, um CTK ou um STK. Actividade catalítica inapropriada pode surgir como resultado de: (1) Expressão de PK nas células as quais normalmente não expressam Pks, (2) expressão aumentada de PK que origina uma proliferação indesejada, diferenciação e/ou crescimento das células; ou (3) expressão diminuída de PK que dá lugar a diminuições reduzidas na proliferação das células, diferenciação 2/ou crescimento. A actividade excessiva de um PK designa ou ampliação do gene codificador de um PK particular ou produção de um nível de actividade de PK que se pode correlacionar com uma disfunção da proliferação, diferenciação e/ou crescimento de uma célula (isto é, à medida que o nível do PK aumenta, a severidade de um ou mais dos sintomas da disfunção celular aumenta). A actividade reduzida é, obviamente, o contrário, em que a severidade de um ou mais sintomas de uma disfunção celular aumenta à medida que o nível da actividade do PK diminui. "Tratar", "tratando" ou "Tratamento" designa um método para aliviar ou anular uma disfunção celular mediada por PK e/ou os sintomas à mesma associados. No que respeita particularmente ao cancro, estes termos significam simplesmente que a esperança de vida de um indivíduo afectado com um cancro irá aumentar ou que um ou mais dos sintomas da doença irão diminuir. "Organismo" designa qualquer entidade viva que inclua, pelo menos, uma célula. Um organismo vivo pode ser tão simples quanto, por exemplo, uma célula eucariótica única ou tão complexo como um mamífero, incluindo um ser humano. "Quantidade terapeuticamente eficaz" designa a quantidade do composto a ser administrado, o qual será 37 aliviará de certa forma um ou mais dos sintomas da doença a ser tratada. Relativamente ao tratamento do cancro, uma quantidade terapeuticamente eficaz designa a quantidade que tem, pelo menos, um dos seguintes efeitos: reduzir o tamanho do tumor; certa forma,
Inibir (isto preferencialmente) as é, retardar de metástases do tumor; inibir, de certa forma (isto forma, preferencialmente parar o cre é, retardar, de scimento do tumor certa e; aliviar, de certa forma (ou, preferencialmente, eliminar) um ou mais sintomas associados ao cancro. "Monitorizar" significa observar ou detector o efeito de contacto de um composto com uma célula expressora de um determinado PK. 0 efeito observado ou detectado pode ser uma mudança no fenotipo da célula, na actividade catalítica de um PK ou uma mudança na interacção de um PK com um parceiro de ligação natural. As técnicas para observar ou detector tais efeitos são bens conhecidas na técnica. 0 efeito é seleccionado a partir de uma mudança ou ausência de mudança num fenotipo da célula, mudança ou ausência de mudança na actividade catalítica da proteíno-quinase referida ou uma mudança ou ausência de mudança na interacção da proteíno-quinase referida com um parceiro de ligação natural num aspecto final da presente invenção. "Fenotipo da célula" designa a aparência exterior de uma célula ou tecido ou a função biológica da célula ou tecido.
Exemplos, célula são o sem qualquer limitação, de um fenotipo de tamanho da célula, crescimento da célula, 38 proliferação da célula, sobrevivência da célula, apoptose e absorção e utilização de nutrientes. Estas caracteristicas fenotipicas são avaliadas por meio de técnicas bem conhecidas na técnica. "Parceiro de ligação natural" designa um polipetídeo que se liga a um determinado PK numa célula. Os parceiros de ligação natural podem desempenhar um papel muito importante na propagação de um sinal num processo de transdução de sinal mediado por um PK. Uma mudança na interacção de um parceiro de ligação natural com o PK pode manifestar o mesmo como uma concentração aumentada ou reduzida do complexo PK/parceiro de ligação natural e, consequentemente, numa mudança observável na capacidade do PK mediar a transdução de sinal.
Tal como presentemente utilizado, os termos "puro opticamente", "enantiómero puro", e "enantiómero opticamente puro" significam uma composição que inclui um enantiómerode um composto e é substancialmente livre do enantiómero oposto do composto. Um composto opticamente puro inclui mais do que 80% em peso de um enantiómero do composto e menos do que 20% em peso do enantiómero oposto do composto, preferencialmente, mais do que 90% em peso de um enantiómero do composto e menos d que 10% em peso do enantiómero oposto do composto, ainda preferencialmente mais do que 95% em peso do composto de um enantiómero do composto e menos do que 5% do por peso do enantiómero oposto do composto e, ainda preferencialmente mais do que 97% em peso do enantiómero do composto e menos do que 3% em peso do enantiómero oposto do composto.
Descrição pormenorizada 39
Esquemas gerais para sintetizar os compostos da invenção podem ser encontrados na secção Exemplos aqui presente.
Alguns dos procedimentos gerais são apresentados com referência à síntese de compostos em que a fracção 1-(2,6 dicloro-3-fluorofenil)-etoxil é o (R)isómero puro, e muitos são apresentados com referência a compostos em que a fracção referida é uma mistura racémica.
Deverá compreender-se que os procedimentos aqui presentes podem ser utilizados para produzir compostos racémicos ou isómeros (R) enantiomericamente puros ao se escolher o respectivo material de partida racémico puro ou enatiomericamente puro.
Os procedimentos aqui apresentados podem ser utilizados para produzir uma vasta variedade de compostos enantiomericamente puros através da selecção de materiais de partida enantiomericamete puros apropriados. Para além dos compostos aqui apresentados, a invenção apresenta igualmente compostos enantiomericamete puros que correspondem aos compostos 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxilo-piridin-2-ilamina e 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxilo]-pirazin-2-ilamina apresentados no Pedido de Patente E.U Série N°. 10/786,610 (PCT/US2004/005495); no Pedido de Patente E.U Série N° a ser atribuído, caso número PC 32546, requerido a 26 de Agosto de 2004 e entitulado, "Pyrazolo-Substituted Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors"; e no pedido de Patente série N° a ser atribuído, caso número PC 32548, requerido a 26.de Agosto de 2004 e entitulado, "Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors". As divulgações destes documentos são aqui incluídas na íntegra por referência.
Salvo indicação contrária, todas as referências aqui presentes relativas aos compostos da invenção incluem 40 referências a sais, solvatos, hidratos e complexos dos mesmos, solvatos e hidratos de sais dos mesmos, incluindo polimorfos, estereoisómeros e versões marcadas isotopicamente dos mesmos.
Sais farmaceuticamente aceitáveis incluem adição de ácido e sais base (incluindo dissais). Adição adequada de sais de adição é formada por ácidos que formam sais não tóxicos. Exemplos incluem sais de acetato, aspartato, benzoato, besilato, bicarbonato/carbonato, bissulfato/sulfato, borato, camsilato, citrato, edisilato, esilato, formato, fumarato, gluceptato, gluconato, glucuronato, hexafluorofosfato, hibenzato, hidroclorido/clorido, hidrobromido/bromido, hidroiodeto/ iodeto, isetionato, lactato, malato, maleato, malonato, mesilato, metilsulfato, naftilato, 2-napsilato, nicotinato, nitrato, orotato, oxalato, palmitato, pamoato, fosfate/hidrogenofosfato/fosfato de dihidrogénio , sacarato, estearato, sucinato, tartrato, tosilato e de trifluoracetato.
Adição adequada de sais de adição é formada por ácidos que formam sais não tóxicos. Exemplos incluem sais de alumínio, arginina, benzatina, cálcio, colina, dietilamina, diolamina, glicina, lisina, magnésio, meglumina, olamina, potássio, sócio, trometamina e zinco.
Para uma revisão sobre os sais adequados, ver "Handbook of Pharmeceutical Salts" Properties, Selection and Use" (Manual de Sais Farmacêuticos: Propriedades, Selecção e Utilização) por Stahl e Wermuth (Wiley-VHC, Weinheim, Alemanha, 2002), cuja descrição é presentemente incorporada na íntegra como referência. 41
Um sal farmaceuticamente aceitável dos compostos da invenção pode ser rapidamente preparado ao se misturarem as soluções do composto e o ácido ou base desejada, conforme apropriado. 0 sal pode precipitar-se a partir da solução e ser recolhido por meio de filtração ou pode ser recuperado por meio de evaporação do solvente. 0 grau de ionização no sal pode variar de completamente ionizado a quase ionizado.
Os compostos da invenção podem existir tanto em formas não solvato como em formas -solvato. 0 termo "solvato" é presentemente utilizado para descrever um complexo molecular que compreende o composto da invenção e uma ou mais moléculas solventes farmaceuticamente aceitáveis, por exemplo, etanol. 0 termo "hidrato" é empregue quando o solvente é água. Solvatos farmaceuticamente aceitáveis, de acordo com a invenção, incluem hidratos e solvatos em que o solvente de cristalização pode ser substituído isotopicamente, por exemplo, D20, D6-acetona, D6-DMSO. São também incluídos no âmbito desta invenção complexos tais como clatratos, complexos de inclusão de fármaco-hospedeiro, em que, como contraste aos solvatos abaixo mencionados, o medicamento e hospedeiro estão presentes em quantidades estoquiométricas e não estoquiométricas. São também incluídos na presente invenção complexos do medicamento que contém dois ou mais componentes orgânicos e/ou inorgânicos os quais podem estar presentes em quantidades estoquiométricas ou não estoquiométricas. Os complexos daí resultantes podem ser ionizados, parcialmente ionizados ou não ionizados. Para revisão destes complexos, ver J Pharm Sei, 64 (8), 1269-1288 por Haleblian (Agosto 1975) , cuja descrição é presentemente incorporada na íntegra como referência. 42
Também no âmbito da presente invenção, são incluídos os polimorfos, pró-fármacos e isómeros (incluindo isómeros ópticos, geométricos e tautoméricos) dos compostos desta invenção.
Derivados dos compostos da invenção que possam ter pouca ou nenhuma actividade farmacológica, mas que podem, quando administrados a um doente, ser convertidos em compostos da invenção, por exemplo por meio de clivagem hidrolítica. Estes derivados são referidos como "pró-fármacos". Informação adicional sobre a utilização de pró-fármacos pode ser encontrada em 'Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14, ACS Symposium Series (T Higuchi e W Stella) e 'Bioreversible Carriers in Drug Design', Pergamon Press, 1987 (ed. E B Roche, American Pharmaceutical Association), cuja descrição é presentemente incorporada na íntegra como referência.
Pró-fármacos, de acordo com a invenção, podem, por exemplo, ser produzidos ao se substituir as funcionalidades apropriadas presentes nos compostos da invenção em determinadas fracções conhecidas pelos especialistas na técnica como "pró-fracções", tal como descrito, por exemplo, em "Design of Prodrugs" por H Bundgaard (Elsevier, 1985), cuja descrição é presentemente incorporada na íntegra como referência.
Alguns exemplos de pró-fármacos, de acordo com a invenção, incluem:
Onde o composto contém uma funcionalidade ácida carboxílica (-COOH), um éster do mesmo, por exemplo, substitui-se o hidrogénio por (Ci-Cs) alquil. 43
Onde o composto contém uma funcionalidade álcool (-0H) , um éster do mesmo, por exemplo, substitui-se o hidrogénio por (Ci_Os) alcanoiloximetil. (iii) onde o composto contém uma funcionalidade amino primária ou secundária (-NH2 ou NHR onde R Φ H) , um éster do mesmo, por exemplo, substitui-se um ou ambos os hidrogénos co (C1-C10) alcanoil.
Outros exemplos de grupos de substituição, de acordo com os exemplos acima e exemplos de outros tipos de pró-fármacos podem ser encontrados nas referências acima mencionadas.
Finalmente, alguns compostos da invenção podem, eles próprios, actuar como pró-fármacos de outros compostos presentes nesta invenção.
Compostos da invenção que contêm um ou mais átomos de carbono assimétricos podem existir como dois ou mais estereoisómeros. Onde um composto da invenção contém um grupo alcelino ou alcenileno, são possíveis isómeros císltrans (ou Z/E) geométricos. Onde o composto contém, por exemplo, um grupo ceto ou oxima ou uma fracção aromática, pode ocorrer um isomerismo tautomérico ("tautomerismo"). Um composto único pode apresentar mais do que um tipo de isomerismo.
Ainda no âmbito da presente invenção, podemos encontrar todos os estereoisómeros, isómeros geométricos e formas tautoméricas dos compostos da invenção, incluindo compostos que exibem mais do que um tipo de isomerismo e misturas de um ou mais do mesmo. Igualmente incluídos nesta invenção estão os ácidos de adição ou sais de base, em que o contraião é opticamente activo, por exemplo, D-lactato ou 44 L-lisina ou racémico, por exemplo, DL-tartarato ou DL-arginina.
Isómeros cisltrans podem ser separados por meio de técnicas convencionais bem conhecidas pelos especialistas na técnica, por exemplo, cromotagrafia, e cristalização fraccional. Técnicas convencionais para a preparação/isolamento de enantiómeros individuais incluem sintese quiral a partir de um precursor opticamente puro apropriado ou de uma resolução do racemato (ou o racemato de um sal ou derivado) utilizando, por exemplo, uma cromatografia liquida de alta pressão de quiral(HPLC).
Alternativamente, o racemato (ou um precursor racémico) pode ser reagido com um composto activo opticamente apropriado, por exemplo, um álccol ou, no caso em que o composto contém uma fracção ácida ou básica, um ácido ou base tal como o ácido tartárico ou 1-feniletilamina. A mistura diastereomérica dai resultante pode ser separada por meio de cromatografia e/ou cristalização fraccional e uma ou ambas as diastereoméricas convertidas no(s) enantiómero(s) puro(s) correspondente(s) através de meios bem conhecidos pelos especialistas na técncia.
Os compostos quiral da invenção (e precursores quiral dos mesmos) podem ser obtidos em forma enantiomericamente enriquecida utilizando cromatografia, normalmente HPLC, numa resina assimétrica com uma fase móvel que consiste de um hidrocarboneto, normalmente heptano ou hexano, que contém entre 0 a 50% de isopropanol, normalmente entre 2 a 20% e entre 0 a 5% de uma alquilamina, normalmente 0.1% 45 dietilamina. Concentração de eluído permite o enriquecimento da mistura.
Conglomerados estereoisoméricos podem ser separados por técnicas convencionais conhecidas dos especialistas na técnica, ver, por exemplo, "Stereochemistry of Organic Compounds" por E L Eliel (Wiley, Nova Iorque, 1994), cuja descrição é presentemente incorporada na integra como referência. A presente invenção inclui igualmente compostos da invenção marcados isotopicamente, em que um ou mais átomos são substituídos por um átomo com o mesmo número atómico, mas com uma massa atómica ou número de massa diferente da massa atómica ou número de massa normalmente encontrada na natureza. Exemplos de isótopos apropriados para inclusão nos compostos da invenção incluem isótopo de hidrogénio. tal como 2H e 3H, carbono, tal como iaC, 13C e 14C, cloro, tal como 36CI, flúor, tal como co iodo, tal como 1231 e 1251, nitrogénio, tal como 13n e 15N, oxigénio, tal como 150, 170 e 180, fósforo, tal como 32P, enxofre, tal como 35S.
Alguns compostos da invenção marcados isotopicamente, por exemplo, aqueles que incorporam um isótopo radioactivo, são úteis nos fármacos e/ou estudos de distribuição do tecido substrato. Os isótopos radioactivos trítio, 3H e carboeto-14,14C, são particularmente úteis para este efeito com vista a facilitar a sua incorporação e meio fácil de detecção.
Adicionalmente, a substituição com isótopos mais pesados, tal como deutério, isto é 2H, pode proporcionar certas vantagens terapêuticas resultantes da maior estabilidade metabólica, por exemplo maior tempo de 46 semivida in vivo ou requisitos de dosagem reduzidos e, portanto, pode ser preferida em algumas circunstâncias.
Substituição com isótopos emissores de positrões, tais como nC, 18F, 150 e 13N, pode ser útil em estudos da Tomografia por Emissão de Positrões (PET) para examinar a ocupação do receptor de substrato.
Os compostos da invenção isotopicamente marcados podem normalmente ser preparados por técnicas convencionais conhecidas dos especialistas na técnica ou por processos análogos aos aqui descritos, utilizando um reagente isotopicamente marcado no lugar do reagente não marcado ou empregue de outra forma.
Solvatos farmaceuticamente aceitáveis, de acordo com a invenção, incluem aqueles em que o solvente da cristalização pode ser substituído isotopicamente, por exemplo, D20, D6-acetona, D6-DMSO.
Compostos da invenção destinados a utilização farmacêutica podem ser administrados como produtos cristalinos ou amorfos, ou misturas dos mesmos. Estes podem ser obtidos, por exemplo, como tampões sólidos, ou películas através de métodos tais como a precipitação, cristalização, refrigeração e secagem, secagem por pulverização ou secagem por evaporação. A secagem por microondas ou radiofrequência pode ser utilizada para este efeito. Os compostos podem ser administrados isoladamente ou em combinação com um ou mais compostos da invenção, ou em combinação com um ou mais outros fármacos (ou como qualquer combinação dos mesmos). Normalmente, estes são administrados como uma formulação em associação com um ou mais excipientes farmaceuticamente aceitáveis. 0 termo 47 "excipiente" é aqui utilizado para descrever qualquer ingrediente que não o(s) composto(s) da invenção. A escolha do excipiente irá, em grande medida, depender de factores tais como o modo particular de administração, o efeito do excipiente na solubilidade e estabilidade e natureza da forma da dosagem.
Composições farmaceuticamente aceitáveis para o transporte de compostos da invenção e métodos para a sua preparação serão rapidamente evidentes para os especialistas na técnica. As composições e métodos para a preparação destas composições podem ser encontrados, por exemplo, em 'Remington's Pharmaceutical Sciences', 19a Edição(Mack Publishing Company, 1995), cuja descrição é presentemente incorporada na integra como referência.
Administração Oral
Os compostos da presente invenção pode ser administrados oralmente. A administração oral pode incluir deglutição, de forma a que o composto entre no tracto gastrointestinal, ou pode ser utilizada administração bucal ou sublingual, em que o composto entra directamente na corrente sanguínea através da boca.As formulações apropriadas para administração oral incluem formulações sólidas tais como comprimidos, cápsulas que contêm partículas, líquidos ou pós, losangos (incluindo as que contêm líquido), pastilhas, multi e nano-partículas, géis, solução sólida, lipossoma, películas (incluindo muco-adesivos), óvulos, pulverização e formulações liquidas.
As formulações líquidas incluem suspensões, soluções, xaropes e elixires. Estas formulações podem ser utilizadas como cargas em cápsulas moles ou rijas e normalmente 48 incluem um veículo, por exemplo, água, etanol, glicol de polietileno, glicol de propileno, metilcelulose ou um óleo adequado, e um ou mais agentes emulsificantes e/ou agentes de suspensão. As formulações líquidas podem igualmente ser preparadas por meio da reconstituição de um sólido, por exemplo, uma saqueta.
Os compostos da presente invenção podem igualmente ser utilizados em formas de dosagem de dissolução rápida, desintegração rápida, tal como as descritas em Opinion in Therapeutic Patents, 11 (6), 981 -986 por Liang and Chen (2001),cuja descrição é presentemente incorporada na íntegra como referência.
No que respeita a formas de dosagem em comprimidos, o fármaco pode ser constituída entre 1 %p a 80 %p da forma da dosagem, mais tipicamente entre 5 %p a 60 %p da forma da dosagem. Para além do fármaco, os comprimidos contêm normalmente um desintegrante. Exemplos de desintegrantes incluem include amido glicolato de sódio, carboximetil celulose de sódio, carboximetil celulose de cálcio, croscarmelose de sódio, crospovidona, polivinilpirrolidona, metilcelulose, celulose microcristalina, hidroxipropilmetilcelulose substituída por alquilo de cadeia curta, amido, amido pré-gelatinizado e alginato de sódio. Normalmente, o desintegrante irá incluir entre 1 wt% a 25 %p, preferencialmente entre 5 %p a 20 %p da forma de dosagem.
Os aglutinantes são normalmente utilizados para permitir qualidades coesas à formulação do comprimido. Os aglutinantes apropriados incluem celulose microcristalina, gelatina, açúcares, glicol de polietileno, gomas naturais e 49 sintéticas, polivinilpirrolidona, amido pré-gelatinizado, hidroxipropil celulose e hidroxipropil metil celulose . Os comprimidos podem igualmente incluir diluentes, tais como lactose, (monohidrato, monohidrato de secagem por pulverização, anidro e semelhantes), manitol, xilitol, dextrose, sucrose, sorbitol, celulose microcristalina, amido e dihidrato de fosfato de cálcio dibásico.
Os comprimidos podem também opcionalmente incluir agentes actives de superficie, tais como laurilsulfato e polisorbato 80, e deslizantes tais como dióxido de silicone e talco. Quando presentes, os agentes activos de superficie apresentam-se tipicamente em quantidades entre 0.2 wt% a 5 wt% do comprimido e os deslizantes tipicamente entre 0.2 wt% a 1 wt% do comprimido.
Os comprimidos contêm normalmente lubrificantes, tais como estearato de magnésio, estearato de cálcio, estereato de zinco, fumarato de sódio estearilo e misturas de estereato de magnésio com laurilsulfato de sódio. Os lubrificantes estão normalmente presentes em quantidades entre 0.25 wt% a 10 wt%, preferencialmente entre 0.5 wt% a 3 wt% do comprimido.
Outros ingredientes convencionais incluem anti-oxidantes, corantes, agentes aromáticos, conservantes e agentes que mascaram o sabor.
Os comprimidos, a titulo de exemplo, contêm até aproximadamente 80 wt% do fármaco, entre cerca de 10 wt% a 90 wt% do aglutinante, entre cerca de 0 wt% e 85 wt% do diluente, entre cerca de 2 wt% a 10 wt% do desintegrante e entre cerca de 0.25 wt% a 10 wt% do lubrificante. 50
As misturas para comprimidos podem ser comprimidas directamente ou por meio de um rolo para formar comprimidos. As amálgamas para comprimidos ou porções da mistura podem alternativamente ser granuladas em húmido ou seco ou por fusão; aglutinadas por fusão ou extrudidas antes da prensagem. A formulação final pode incluir uma ou mais camadas e pode ser revestida ou não revestida, ou encapsulada. A formulação de comprimidos é discutida em detalhe em "Formas de Dosagem Farmacêutica" Tablets, Vol. 1", by H. Lieberman and L. Lachman, Mareei Dekker, N.Y., N.Y., 1980 (ISBN 0-8247-6918-X), cuja descrição é presentemente incorporada na integra como referência.
As formulações sólidas para administração oral podem ser formuladas para serem libertadas imediatamente e/ou modificadas. As formulações de libertação modificada incluem libertação retardada, sustentada, pulsada, controlada, alvo e programada.
As formulações de libertação modificada apropriadas são descritas na Patente E.U. N° 6.106.864. Detalhes sobre outras tecnologias de libertação apropriadas, tais como dispersões de alta energai e partículas osmóticas e revestidas podem ser encontradas em Verma e tal., Pharmaceutical Technology On-line (Tecnologia Farmacêutica Online), 25(2), 1-14 (2001). A utilização de pastilhas elásticas para se obter uma libertação controlada é descrita em WO oo/35298. A divulgação destas referências são incorporadas no presente documento por referência.
Administração parentérica 51
Os compostos da invenção podem também ser administrados directamente na corrente sanguínea, nos músculos ou num órgão interno. Os meios adequados para a administração parentérica incluem o meio intravenoso, intra-arterial, intraperitoneal, intratecal, intraventricular, intra-uretral, intra-esternal, intracraniano, intramuscular e subcutâneo. Os dispositivos adequados para a administração parentérica incluem injectores de agulha (incluindo micro agulha), injectores sem agulha e técnicas de perfusão.
As formulações parentéricas são normalmente soluções aquosas que podem conter excipientes como sais, hidratos de carbono e agentes tampão (de preferência com um pH de 3 a 9) , mas, para algumas aplicações, podem ser mais adequadamente formulados como solução estéril não aquosa ou numa forma seca a utilizar em conjunto com um veículo adequado, tal como água isenta de pirogénio estéril. A preparação de formulações parentéricas sob condições estéreis, por exemplo por liofilização, pode ser prontamente conseguida com técnicas farmacêuticas modelo, bem conhecidas dos especialistas na matéria. A solubilidade dos compostos da invenção utilizada na preparação de soluções parentéricas pode ser aumentada pela utilização de técnicas de formulação adequadas, como a incorporação de agentes intensificadores da solubilidade.
As formulações para administração parentérica podem ser formuladas para uma libertação imediata e/ou modificada. As formulações para libertação modificada incluem libertação programada e com alvos, atrasada, sustentada, pulsada e controlada. Assim, os compostos da invenção podem ser formulados como um líquido ortixotrópico, sólido ou semi- 52 sólido para administração como depósito implantado, proporcionando libertação modificada do composto activo. Entre os exemplos dessas formulações stents cobertos com o medicamento e microesferas PGLA.
Administração tópica
Os compostos da invenção podem também ser administrados topicamente na pele ou mucosa, ou seja, por via dérmica ou transdérmica. Normalmente, as formulações para este fim incluem géis, hidrogéis, loções, soluções, cremes, pomadas, pós para polvilhar, pensos, espumas, peliculas, pensos dérmicos, bolachas, implantes, esponjas, fibras, ligaduras e microemulsões. Podem também ser utilizados lipossomas. Normalmente, os condutores incluem álcool, água, óleo mineral, petrolato liquido, petrolato branco, glicerina, polietilenoglicol e propileno glicol. Podem ser incorporados intensificadores de penetração: consulte, por exemplo, J Pharm Sei, 88 (10). 955-958 por Finnin and Morgan (Outubro de 1999) . Outros meios de administração tópica incluem libertação por electroporação, iontoforese, fonoforese, sonoforese e injecção com micro agulhas ou sem agulhas (por ex. Powderject™, Bioject™, etc.). As divulgações destas referências são presentemente incluídas integralmente como referência.
As formulações para administração tópica podem ser formuladas para uma libertação imediata e/ou modificada. As formulações para libertação modificada incluem libertação programada e com alvos, atrasada, sustentada, pulsada e controlada.
Administração intranasal/ por inalação 53
Os compostos da invenção também podem ser administrados por via intranasal ou por inalação, normalmente em forma de pó seco (quer sozinho, como mistura, por exemplo, numa mistura seca com lactose, ou como partícula de componente misturada, por exemplo, misturado com fosfolípidos, tais como fosfatidilcolina) de um inalador de pó seco, ou como pulverizador aerossol a partir de um recipiente pressurizado, bomba, vaporizador, atomizador (de preferência um atomizador que utilize electro-hidrodinâmica para produzir uma fine névoa fina), ou nebulizador, com ou sem utilização de um propulsor adequado, tal como 1,1,1,2-tetrafluoroetano ou 1,1,1,2,3,3,3- heptafluoropropano. Para utilização intranasal, o pó pode incluir um agente bioadesivo, por exemplo quitosano ou ciclo-dextrina. 0 recipiente pressurizado, bomba, vaporizador, atomizador ou nebulizador contém uma solução ou suspensão do(s) composto(s) da invenção, incluindo, por exemplo, etanol, etanol aquoso ou um agente alternativo adequado para dispersar, solubilizar ou alargar a libertação do princípio activo, propulsor(es) como solvente e um surfactante, tal como sorbitano trioleato, ácido oleico ou um ácido oligoláctico.
Antes da utilização na formulação de pó seco ou suspensão, o produto de medicamento é micronizado até uma dimensão adequada para libertação por inalação (normalmente menos de 5 micrones) . Tal pode ser conseguido através de qualquer método adequado de moagem, tal como moagem por jacto em espiral, moagem por jacto de leito fluidizado, processamento de fluido supercritico para formação de nanopartícuias, homogeneização por alta pressão ou secagem por pulverização. 54
As cápsulas (por ex. de gelatina ou HPMC), blisteres e cartuchos destinados a um inalador ou insuflador podem ser formulados contendo uma mistura em pó do composto da invenção e uma base em pó adequada, tal como lactose ou amido e um modificador do desempenho, como leucina, manitol ou estearato de magnésio. A lactose pode ser anidra ou ter a forma de monohidrato, de preferência este último. Outros excipientes adequados incluem dextran, glucose, maltose, sorbitol, xilitol, frutose, sucrose e trealose.
Uma formulação adequada da solução para utilização num atomizador utilizando electrohidrodinâmica para produzir uma névoa fina pode conter de 1 μg a 20mg do composto da invenção por actuação, e o volume da actuação pode variar de 1 μΐ a ΙΟΟμΐ,. Uma formulação atípica inclui um composto da invenção, propileno glicol, água esterilizada, etanol e cloreto de sódio. Em vez de propileno glicol podem ser utilizados solventes alternativos, como glicerol e polietileno glicol.
Podem ser acrescentados sabores adequados, como mentol e levomentol, ou adoçantes, como sacarina ou sódio de sacarina, às formulações da invenção destinada a administração intranasal / por inalação.
As formulações para administração intranasal/por inalação podem ser formuladas para uma libertação imediata e/ou modificada, utilizando, por exemplo, poli(L-ácido lático-co-ácido glicólico) (PGLA). As formulações para libertação modificada incluem libertação programada e com alvos, atrasada, sustentada, pulsada e controlada. 55
No caso de aerossóis e inaladores de pó seco, a unidade de dosagem é determinada por uma válvula que liberta uma quantidade exacta. As unidades segundo a invenção são normalmente dispostas para administrar uma dose exacta ou "puff" contendo uma quantidade pretendida do composto da invenção. A dose diária geral pode ser administrada numa dose única ou, mais normalmente, em doses divididas ao longo do dia.
Administração rectal/intravaginal
Os compostos da invenção podem ser administrados por via rectal ou vaginal, por exemplo na forma de um supositório, pessário ou clister. A manteiga de cacau é uma base tradicional para supositórios, mas podem ser utilizadas várias alternativas conforme seja adequado.
As formulações para administração rectal/vaginal podem ser formuladas para uma libertação imediata e/ou modificada. As formulações para libertação modificada incluem libertação programada e com alvos, atrasada, sustentada, pulsada e controlada.
Administração ocular
Os compostos da invenção podem também ser administrados directamente no olho ou ouvido, normalmente em forma de gotas de uma suspensão micronizada ou solução em soro isotónico, estéril e com o pH ajustado. Outras formulações adequadas para administração ocular e aural incluem pomadas, implantes biodegradáveis (por ex. esponjas de gel absorvente, colagénio) e não-biodegradáveis (por ex. silicone), bolachas, lentes e sistemas de partículas ou vesiculares, tais como niosomas ou lipossomas. Pode ser incorporado um polímero tal como ácido poliacrílico 56 reticulado, álcool polivinílico, ácido hialurónico, um polímero de celulose, por exemplo hidroxi-propilmetilcelulose, hidroxietilcelulose ou metilcelulose, ou um polímero heteropolissacarídeo, por exemplo goma gelana, juntamente com um conservante, tal como cloreto de benzalcónio. Estas formulações podem também ser libertadas por iontoforese.
As formulações para administração ocular/aural podem ser formuladas para uma libertação imediata e/ou modificada. As formulações para libertação modificada incluem libertação programada ou com alvos, atrasada, sustentada, pulsada e controlada.
Outras tecnologias
Os compostos da invenção podem ser combinados com entidades macromoleculares solúveis, tais como ciclodextrina e derivados adequados, ou polímeros com polietilenoglicol, para melhorar a solubilidade, taxa de dissolução, máscara do sabor, biodisponibilidade e/ou estabilidade para utilização em qualquer dos modos de administração mencionados.
Os complexos de medicamentos de ciclodextrina, por exemplo, são por norma úteis para a maior parte das formas de dosagem e vias de administração. Podem ser utilizados complexos de inclusão e de não inclusão. Como alternativa à complexação directa com o medicamento, a ciclodextrina pode ser utilizada como aditivo auxiliar, ou seja, como condutor, diluente ou solubilizante. Para este fim são utilizados normalmente ciclodextrinas alfa, beta e gama, cujos exemplos se podem encontrar nas publicações PCT n.° 57 WO 91/11172. WO 94/02518 e WO 98/55148, cuja divulgação é aqui incluída integralmente por referência.
Dosagem A quantidade do composto activo administrado irá depender do sujeito em tratamento, a gravidade da doença ou do estado, a velocidade de administração, a disposição do composto e a opinião do médico responsável. No entanto, uma dosagem eficaz situa-se normalmente entre cerca de 0,001 a 100 mg por kg de peso corporal diariamente, de preferência cerca de 0,01 a cerca de 35 mg/kg/dia, em doses únicas ou divididas. Para um ser humano de 70 kg, iria perfazer cerca de 0,07 a cerca de 7000 mg/dia, de preferência cerca de 0,7 a cerca de 2500 mg/dia. Nalguns casos, os níveis de dosagem abaixo do limite inferior do intervalo anteriormente mencionado podem ser mais do que adequados, enquanto que, noutros casos, poderão ser utilizadas doses superiores sem causar efeitos secundários prejudiciais, sendo essas doses superiores sejam normalmente divididas em várias pequenas doses para administração ao longo do dia.
Kit de componentes
Por muito que seja preferível administrar uma combinação de compostos activos, por exemplo, para tratar uma doença ou condição em particular, está no âmbito da presente invenção que duas ou mais composições farmacêuticas, em que pelo menos uma contenha um composto de acordo com a invenção, possam ser convenientemente associadas em forma de um kit adequado para co-administração das composições. Assim, o kit da invenção inclui duas ou mais composições farmacêuticas separadas, pelo menos uma das quais contém um composto da invenção, e 58 meios para reter separadamente as ditas composições, tais como um recipiente, frasco dividido ou embalagem de folha metálica dividida. Um exemplo de um kit assim é o familiar blister utilizado para a embalagem de comprimidos, cápsulas e outros que tais. 0 kit da invenção é particularmente adequado para a administração de diferentes formas de dosagem, por exemplo, oral e parentérica, para administração das composições separadas em intervalos de dosagem diferentes, ou para titular as composições separadas umas contra as outras. Para ajudar na aceitação, o kit inclui normalmente instruções de administração e pode ser fornecido com um auxiliar de memória.
Exemplos
Nos exemplos seguintes , "Et" significa etilo, "Ac" significa acetilo, "Me" significa metilo, "Ms" significa metanossulfonilo (CH3SO2) , "ipr" significa isopropilo, "HATU" significa hexafluorofosfato de 2-(7-aza-1H-benzotriazole-l-il)-1,1,3,3-tetrametilurónio, "F" significa fenili, "Boc" significa terc-butoxicarbonilo, "EtOAc" significa acetato de etilo, "HOAc" significa ácido acético, "NEt3M ou "Et 3N" significa trietilamina, "TF" significa tetra-hidrofurano, "DIC" significa diisopropilcarbodiimida, "HOBt" significa hidroxibenzotriazole, "MeOH" significa metanol, "i-ProAc" significa acetato de isopropilo, "KOAc" significa acetato de potássio, "DMSO" significa dimetilsulfóxido, "AcCI™" significa cloreto de acetilo, "CDCI3" significa clorofórmio deuterado, "MTBE" significa éter metil t-butílico, "DMF" significa dimetilformamida. 59 "AC2O" significa anidrido acético, "Me3SOI" significa iodeto de trimetilsulfoxónio, "DMAP" significa 4-dimetilaminopiridina, "dppf" significa difenilfosfino ferroceno, "DME" significa éter dimetilico de etilenoglicol, HOBT significa 1-hidroxibenzotriazol, EDC significa l-etil-3-(3-dimetilaminopropil)-carbodiimida.
Os exemplos seguinte destinam-se a ilustrar a presente invenção. Subentende-se, contudo, que a invenção não está limitada às condições especificas ou pormenores descritos nestes exemplos.
Os reagentes podem ser sintetizados como demosntrado ou estão disponíveis junto de fontes comerciais (por exemplo, Aldrich, Milwaukee, Wl; Acros, Morris Plains, NJ; Biosynth International, Naperville, It; Frontier Scientific, Logan, UT; TCI America, Portland, OR; Combi-Blocks, San Diego, CA; Matrix Scientific, Columbia, SC; Acros, Morris Plains, NJ; Alfa Aesar, Ward Hill, MA; Apollo Scientific, RU; etc.) ou podem ser sintetizados por meio de procedimentos conhecidos na técnica. A síntese de vários reagentes específicos encontra-se na patente norte-americana N°. 10/786,610. Intitulada "Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors", depositada em 26 de Fevereiro de 2004, e pedido de patente internacional correspondente PCT/US2004/005495 do mesmo título, depositada a 26 de Fevereiro de 2004. Outros reagentes podem ser sintetizados por adaptação dos procedimentos inclusos e um perito na especialidade pode facilmente adaptar estes procedimentos de modo a produzir os compostos desejados. Além disso, estas referências contêm procedimentos gerais e exemplos específicos para a 60 preparação de um grnade número de compostos de heteroarilo e um perito na especialidade pode facilmente adaptar estes procedimentos e exemplos à preparação dos compostos da presente invenção. As revelações destas referências são integralmente incluídas por referência. Quando se designa um procedimento de síntese geral ou de exemplo, um perito na especialidade pode facilmente determinar os reagentes apropriados, quando não estiverem indicados, extrapolando dos procedimentos gerais ou de exemplo. Alguns dos procedimentos gerais são indicados como exemplos para a preparação de compostos específicos. Um perito na especialidade pode facilmente adaptar estes procedimentos à síntese de outros compostos. Subentende-se que os grupos R apresentados nos procedimentos gerais devem ser genéricos e não limitadores e não correspondem às definições dos grupos R em qualquer outra parte do presente documento. Cada um destes grupos R representa uma ou múltiplas fracções químicas que podem ser iguais ou diferentes de outras fracções químicas, também representadas pelo mesno símbolo R. Um perito na especialidade pode facilmente avaliar a gama de grupos R adequados nas sínteses de exemplo. Além disso, a representação de uma posição não substituída nas estruturas representadas ou referidas nos procedimentos gerais é por conveniência e não exclui substituição como descrita noutra parte deste documento. Para grupos específicos que podem estar presentes, seja como grupos R nos procedimentos gerais ou como substituintes opcionais não apresentados, consulte as descrições no restante do documento, incluindo as reivindicações, resumo e descrição detalhada. 61 São apresentados alguns dos procedimentos gerais com referência à sintese de compostos em que a fracção 1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxilo é o isómero (R) puro e outros são apresentados com referência aos compostos em que a fracção mencionada é uma mistura racémica. Subentende-se que os presentes procedimentos podem ser utilizados para produzir compostos racémicos ou isómeros (R) enantiomericamente puros, seleccionando o material de partida puro do ponto de vista racémico ou enantiomérico.
Os procedimentos apresentados podem ser utilizados para produzir uma vasta variedade de compostos enantiomericamente puros por meio de selecção do material de partida enantiomericamente puro apropriado. Para além dos compostos apresentados, a presente invenção apresenta também compostos enantiomericamente puros correspondendo aos compostos 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fe-nil)-etoxi]-piridin-2-ilamina e 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-ilamina apresentados no pedido de patente norte-americana n° de série 10/786,610 (PCT/US2004/005495) ; pedido de patente E.U. n° de série por atribuir, número do processo PC 32546, depositado em 26 de Agosto de 2004 e intitulado, "Pyrazolo-Substituted Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors"; e o pedido de patente E.U. n° de série por atribuir, número do processo PC 32548, depositado em 26 de Agosto de 2004 e intitulado, "Aminoheteroaryl Compounds as Protein Kinase Inhibitors". As revelações destes documentos são integralmente incluídas por referência.
Selecção de Materiais de Partida 62 5-bromo-3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxil-piridin-2-ilamina (racemato): 62 Br
F 1. 2,6-dicloro-3-fluoroacetofenona (15 g, 0,072 mol) foi agitado em THF (150 mL, 0,5M) a 0°C, utilizando um banho de gelo durante 10 min. Adicionou-se lentamente hidreto de litio-aluminio (2,75 g, 0,072mol). A suspensão foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A reacção foi deixada arrefecer em banho de gelo e foi adicionada água gota a gota, seguido da adição de NaOH a 15% (3 mL) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min. Adicionou-se NaOH a 15% (9 mL) , MgS04 e a mistura foi filtrada para remover os sólidos. Os sólidos foram lavados com THF (50 mL) e o filtrado foi concentrado para se obter 1- (2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etanol (14,8 gm, 95% rendimento) sob a forma de um óleo amarelo. XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,45 (d, 3H) , 5,42 (m, 2H) , 7,32 (m, 1H), 7,42 (m, 1H), 2. A uma solução agitada de trifenil fosfina (8,2 g, 0,03 mol) e DEAD (13,65 mL de uma solução a 40% em tolueno) em THF (200 mL) a 0o C foi adicionada uma solução de 1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etanol (4,55 g, 0,021 mol) e 3-hidroxi-nitropiridina (3,35 g, 0,023 mol) em THF (200 mL) . A solução resultante laranja vivo foi agitada em atmosfera de azoto à temperatura ambiente durante 4 horas, 63 altura em que todos os materiais de partida tinham sido consumidos. 0 solvente foi removido e o material em bruto foi carregado a seco em gel de sílica e eluído com acetato de etilo-hexanos (20:80) para render 3-(2,6-dicloro-3-fluoro-benziloxi)-2-nitro-piridina (6,21 g, 0,021 mol, 98%) sob a forma de um sólido rosa. XH NMR(CDCl3, 300 MHz) δ 1,8-1,85 (d, 3H), 6,0-6,15 (q, 1H), 7,0-7,1 (t, 1H), 7,2-7,21 (d, 1H), 7,25-7,5 (m, 2H), 8,0-8,05 (d, 1H), 3. A uma mistura agitada de AcOH (650 mL) e EtOH (500 mL) suspendeu-se 3-(2,6-dicloro-3-fluoro-benziloxi)-2-nitro-piridina (9,43 g, 0,028 mol) e lascas de ferro (15,7 g, 0,28 mol). A reacção foi aquecida lentamente sob refluxo e deixada agitar durante 1 hora. A reacção foi arrefecida à temperatura ambiente, depois adicionou-se éter dietílico (500 mL) e água (500 mL) . A solução foi cuidadosamente neutralizada com a adição de carbonato de sódio. Os extractos orgânicos combinados foram lavados com NaHC03 saturado (2 x 100 mL)m H2O (2 x 100 mL) e salmoura (1 x 100 mL) , depois foram secos (Na2S04) , filtrados e concentrados até à secura sob vácuo para render 3-(2,6-dicloro-3-fluoro-benziloxi) -piridin-2-ilamina (9,04 g, 0,027 mol, 99%) como um sólido rosa claro. NMR (CDC13, 300 MHz) 0 1,8-1,85 (d, 3H), 4,9-5,2 (brs, 2H), 6,7-6,84 (q, 1H), 7,0-7,1 (m, 1H), 7,2-7,3 (m, 1H) , 7,6-7,7 (m, 1H),
4. Uma solução de 3-(2,6-dicloro-3-fluoro-benziloxi)-piridin-2-ilamina (9,07 g, 0,03 mol) em acetonitrilo foi arrefecida a 0 o C num banho de gelo. A esta solução adicionou-se N-bromosuccinimida (NBS) (5,33 g, 0,03 mol) por porções. A reacção foi agitada a 0 o C durante 15 minutos. A reacção foi concentrada à secura sob vácuo. O 64
óleo escuro resultante foi dissolvido em EtOAc (500 mL) e purificado por cromatografia em gel de sílica. Os solventes foram então removidos sob vácuo para render 5-bromo-3-(2,6-dicloro-3-fluoro-benziloxi)-piridin-2-ilamina (5,8 g, 0,015 mol, 51%) sob a forma de um sólido cristalino branco. XH NMR (CDC13, 30 0 MHz) 0 1, 85-1,95 (d, 3H) , 4,7-5,0 (brs, 2H), 5,9-6,01 (q, 1H), 6,8-6,95 (d, 1H), 7,01-7,2 (t, 1H) , 7,4-7,45 (m, 1H), 7,8-7,85 (d, 1H), 5-iodo-3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina (racemato):
A uma solução de 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]piridin-2-ilamina (10,0 g, 33,2 mmol) em acetonitrilo (600 mL) e ácido acético (120 mL) foi adicionada N-iodosuccinimida (11,2 g, 49,8 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas e a reacção foi interrompida com solução de NazSzOs. Após a evaporação, o resíduo foi dividido por acetato de etilo e água. A camada orgânica foi lavada com solução de NaOH 2N, salmoura e seca sobre NazSCh. O produto bruto foi purificado em coluna de gel de sílica para se obter 5-iodo-3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina. (7.1 g, 50% rendimento) . MS m/z 427 [M+l] , JH NMR (400 MHz, DMSO-D6) □ ppm 1,74 (d, J= 6,57 Hz, 3 H) 5,91 - 5,99 (m, 3 H) 6,82 (d. 65 J=1,2 6 Hz, 1 H) 7,46 (t, J=8,72 Hz, 1 H) 7,56 (dd, J=8,97,4,93 Hz, 1 H) 7,62 (d, J= 1,52 Hz, 1 H), 5-bromo-3-[1-(2 6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxil- piridin-2-ilamina (racemato):
Br
1. 1. 2,6-dicloro-3-fluoroacetofenona (15 g, 0,072 mol) foi agitado em THF (150 ml, 0,5M) a 0°C, utilizando um banho de gelo durante 10 min. Adicionou-se lentamente hidreto de litio-aluminio (Aldrich, 2,75 g, 0,072 mol). A suspensão foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas. A reacção foi deixada arrefecer em banho de gelo e foi adicionada água gota a gota, seguido da adição de NaOH a 15% (3 ml). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min. Adicionou-se NaOH a 15% (9 mL) , MgS04 e a mistura foi filtrada para remover os sólidos. Os sólidos foram lavados com THF (50 mL) e o filtrado foi concentrado para se obter 1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etanol (14,8 gm, 95% rendimento) sob a forma de um óleo amarelo. JH NMR (400 MHz, DMSO-de) δΐ,45 (d, 3H) , 5,42 (m, 2H) , 7,32 (m, 1H) , 7,42 (m, 1H), 2. 5-bromo-3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-ilamina foi preparado segundo o procedimento 2 seguinte a partir de 1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etanol e 3,5-dibromo-pirazin-2-ilamina. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 66 δ 1,74 (d, 3Η), 6,40 (m, 1 Η), 6,52 (br s, 2H), 7,30 (m, 1 Η), 7,48 (m, 1 Η), 7,56 (s, 1 Η); MS m/z 382 (M+ 1),
Materiais De Partida Enantiomericamente Puros PLE é uma enzima produzida pela Roche e comercializada pela Biocatalytics Inc. sob a forma de uma preparação de esterase em bruto a partir de fígado de porco, vulgarmente conhecida como PLE-AS (adquirida junto da Biocatalytics como ICR-123, vendida como suspensão de sulfato de amónio). A enzima encontra-se classificada no registo CAS como "hidrolase de éster carboxílico, n° CAS 9016-18-6". O número de classificação da enzima correspondente é EC 3.1.1.1. A enzima é conhecida pode ter ampla especificidade do substrato no sentido da hidrólise de uma ampla gama de ésteres. A actividade lipase é determinada utilizando um método baseado na hidrólise de butirato de etilo num titulador de pH. 1 LU (unidade de lipase) é porção de enzima que liberta 1 pmol de ácido butírico titulável 50 por minuto a 22° C, pH 8,2. A preparação descrita (PLE-AS como suspensão) é normalmente expedida como um liquido opaco castanho-verde, com actividade declarada > 45 LU/mg (teor proteico cerca de 40 mg/mL). (IS)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etanol (IS)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etanol, apresentado como composto (S-l) nos esquemas seguintes, foi preparado por um combinação de hidrólise enzimática de acetato 1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etilo, esterificação e hidrólise química com inversão de acordo com o esquema B. O cetato 1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etilo (composto A2) foi preparado segundo o esquema A. 67
Esquema A Cl 0 i I Q OH j [ 0 Ϊ Cl 1 1 íll0 — íiT CHj Vs. F 1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etanol (Al): Foi
adicionado boro-hidreto de sódio (90 mg, 2,4 mmol) a uma solução de 2',6'-dicloro-3'-fluoro-acetofenona (Aldrich, refa catálogo 52,294-5) (207 mg, 1 mmol) em 2 mL de CH3OH anidro. A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora, depois foi evaporada para se obter um resíduo oleoso incolor. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (eluição com 0-*Ί0% EtOAc em hexanos) para se obter o composto Al sob a forma de um óleo incolor. (180 mg; 0,88 mmol; 86,5% rendimento); MS (APC1) (M-H)” 208; XH NMR (400 MHz, clorofórmio-D) δ ppm 1,64 (d, J= 6,82
Hz, 3 H) 3,02 (d, J=9,85 Hz, 1 H) 6,97 - 7,07 (m, 1 H) 7,19 - 7,33 (m, 1 H) ,
Acetato 1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etilo (A2):
Adicionaram-se sequencialmente anidrido acético (1,42 mL, 15 mmol) e piridina (1,7 mL, 21 mmol) a uma solução de composto Al (2,2 g, 10,5 mmol) em 20 mL de CH2C12. A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 12h, depois foi evaporada para se obter um resíduo oleoso amarelado. O resíduo foi purificado por 68 cromatografia flash (eluição com 7->9% EtOAc em hexanos) para se obter o composto A2 sob a forma de um óleo incolor (2,26 g; 9,0 mmol; 85,6% rendimento) . 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-D) δ ppm 1,88 (d, J=6,82 Hz, 3 H) 2,31 (s, 3 H) 6,62 (q, J=6,62 Hz, 1 H) 7,25 (t, J=6,46 Hz, 1 H) 7,49 (dd, J=8, 84, 5, 05 Hz, 1 H) ,
Esquema B
Num balão de 50 mL com camisa, equipado com um eléctrodo pH, um agitador suspenso e uma via de adição de base (1M NaOH) adicionou-se 12 mL de tampão de fosfato potássio 100 mM a pH 7,0 e 0,13 mL de suspensão de PLE-AS. Então adicionou-se o composto A2 (0,13 g, 0,5 mmol, 1,00 eq) gota a gota e a mistura resultante foi agitada à 69 temperatura ambiente durante 20 h, mantendo-se o pH da reacção constante a 7,0 com NaOH 1 M. Tanto a conversão como ee da reacção foram supervisionados por RP-HPLC e parados após o consumo de 50% do material de partida (aproximadamente 17 horas nestas condições). A mistura foi depois extraída três vezes com 10 mL de acetato de etilo para recuperar tanto o éster como o álcool como uma mistura de R-l e S2.
Adicionou-se cloreto de metanossulfonilo (0,06 mL, 0,6 mmol) a uma solução de uma mistura de R-l e S-2 (0,48 mmol) em 4 mL de piridina em atmosfera de azoto. A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durante 3 horas, depois foi evaporada para se obter um óleo. Foi adicionada água (20 ml) à mistura e depois foi adicionado EtOAc (20 mL x 2) para extrair a solução aquosa. As camadas orgânicas foram combinadas, secas, filtradas e evaporadas para se obter uma mistura de R-3 e S-2. A mistura foi utilizada na etapa seguinte sem ser sujeita purificação adicional. XH NMR (400 MHz, clorofórmio-D) δ ppm 1,66 (d, J=7, 1 Hz, 3 H) 1,84 (d, J=7,1 Hz, 3 H) 2,09 (s, 3 H) 2,92 (s, 3 H) 6,39 (q, J=7,0 Hz, 1 H) 6,46 (q, J=6,6 Hz, 1 H) 6,98 - 7,07 (m, 1 H) 7,07-7,17 (m, 1 H) 7,23 - 7,30 (m, 1 H) 7,34 (dd, J=8,8, 4,80 Hz, 1 H),
Adicionou-se acetato de potássio (0,027 g, 0,28 mmol) a uma mistura de R-3 e 3-2 (0,48 mmol) em 4 mL de DMF em atmosfera de azoto. A mistura reaccional foi aquecida a 100 °C durante 12 h. Foi adicionada água (20 ml) à mistura reaccional e foi adicionado EtOAc (20 mL x 2) para extrair a solução aquosa. A camada orgânica combinada foi seca, filtrada e evaporada para se obter um óleo de S-2 (72 mg,
61% rendimento em duas etapas) . Quiralidade ee: 97,6%, XH 70 NMR (400 MHz, clorofórmio-D) δ ppm 1,66 (d, J=7,l Hz, 3 H) 2,09 (s, 3 H) 8,39 (q, J=8,8 Hz, 1 H) 7,02 (t, J= 8,5 Hz, 1 H) 7,22 - 7,30 (m, 1H),
Adicionou-se metóxido de sódio (19 mmol; 0,5 M em metanol) lentamente ao composto S-2 (4,64 g, 18,8 mmol) em atmosfera de azoto a 0o C. A mistura resultante foi agitada durante 4 horas à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado e foi adicionado H20 (100 mL) . A mistura reaccional arrefecida foi neutralizada com solução tampão de acetato de sódio-ácido acético a pH 7. Foi adicionado acetato de etilo (100 mL x 2) para extrair a solução aquosa. As camadas orgânicas combinadas foram secas (Na2S04) , filtradas e o solvente foi evaporado para se obter um sólido branco (4,36 g, 94,9% rendimento); SFC-MS: 97%ee. XH NMR (400 MHz, clorof órmio-D) δ ppm 1,65 (d, J=6,6Hz,3H)5,58(q, J=6,9Hz, 1 H) 8,96-7,10(m, 1 H) 7,22- 7,36 (m, 1 H), 3-[(IR)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxil-2-nitropiridina
Foi adicionado ferro (385 mg) a uma solução agitada de 3-[(IR)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxil-2-nitropiridina
71 3-hidroxi-2-nitropiridina (175 mg, 1,21 mmol) e trifenilfosfina (440 mg, 1,85 mmol) foram adicionados sequencialmente a uma solução agitada de (IS)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etanol (229,8 mg, 1,1 mmol) em THF (10 mL) em atmosfera de azoto. A mistura reaccional foi mantida à temperatura ambiente durante 1 hora, depois foi adicionado azo-dicarboxilato diisopropilico (0,34 mL, 1,65 mmol) a 0 °C. A mistura foi agitada durante mais 12 h. A mistura reaccional foi evaporada sob vácuo para dar um óleo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (eluição com 20->-25% EtOAc em hexanos) para se obter o composto em epígrafe sob a forma de um sólido branco (321,5 mg; 0,97 mmol; 88,3% rendimento); MS (ARCI) (M+H)+ 331; SFC-MS: 99,5%ee, NMR (400 MHz, clorofórmio-D) δ ppm 1,85 (d, J=6,6 Hz, 3 H) 6,10 (q, J=6,6 Hz, 1 H) 7,04-7,13 (m, 1 H) 7,21 (dd, J= 8,5, 1,14 Hz, 1 H) 7,30 (dd, J=9,0, 4,9 Hz, 1 H) 7,37 (dd, J=8,8, 4,6 Hz, 1 H) 8,04 (dd, J=4,8, 1,3 Hz, 1 H) , 3-[(IR)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxilpiridina-2-amina
Foi adicionado ferro (385 mg) a uma solução agitada de 3-[(IR)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxil-2-nitropiridina (321 mg, 0,97 mmol) numa mistura de EtOH (2 mL) e HC1 2M (0,2 mL) a 0° C.- A mistura reaccional foi aquecida a 85° C 72 durante 2 h. Adicionou-se Celite (0,5 g) à mistura reaccional arrefecida. Esta mistura foi filtrada por um leito de Celite e evaporada para se obter o composto em epígrafe sob a forma de um óleo escuro. MS (APCI) (M+H) + 301. 5-bromo-3-[1(R)-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina:
Br
O isómero R enantiomericamente puro foi preparado como anteriormente descrito para o racemato, mas utilizando os materiais de partida enantioméricamente puros anteriormente descritos. XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 1,74 (d, 3H) , 6,40 (m, 1H) , 6,52 (br s, 2H), 7,30 (m, 1H), 7,48 (m, 1H), 7,56 (s, 1H); MS m/z 382 (M+l), 5-iodo-3-[(R)1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina: 73
Ácido periódico (60 mg, 0,24 mmol) , iodo (130 mg, 0,5 mmol) e ácido sulfúrico (0,03 mL) foram adicionados sequencialmente a uma solução agitada de 3-[(IR)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxilpiridina-2-amina (0,97 mmol) em mistura de ácido acético (3 mL) e H20 (0,5 mL). A mistura reaccional foi aquecida a 80° C durante 5 h. A mistura reaccional arrefecida foi temperada com Na2S03 (80 mg) e tornada básica com Na2C03 saturado (2 x 100 mL) a pH 7. Adicionou-se CH3CI2 (2 x 50 mL) para extrair a solução aquosa. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4, depois foram filtradas e concentradas sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (eluição com 35->40% EtOAc em hexanos) para se obter o composto em epígrafe sob a forma de um óleo amarelo (254 mg; 0,6 mmol; 61,6% rendimento), MS (APCI) (M+H)+ 426. XH NMR (400 MHz, clorofórmio-D) δ ppm 1,81 (d, J= 6,8 Hz, 3 H) 4,86 (s, 2 H) 5,98 (q, J= 6,57 Hz, 1 H) 6,96 (d, J=l,5 Hz, 1 H) 7,08 (dd, J= 9,0, 8,0 Hz, 1H) 7,31 (dd, J=8,8, 4,8 Hz, 1 H) 7,78 (d, J=1,8 Hz, 1 H), 5-bromo-3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina: 74 Br
0 composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento 2 a partir de (lS)-l-(2,6-dicloro-3- fluorofenil)etanol. XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,53(s, 1H), 7,48(m, 1H), 7,39(t, 1H), 6,48 (s, 2H), 6,41 (q, 1H), 1,74(d, 3H) ; LCMS: 381 [M+l c-Met Ki: 0,796 μΜ,
Esquema geral I para a síntese de 5-aril-3-(benziloxi substituído)-piridina-2-ilamina (6) :
Procedimento geral I para a síntese de 5-bromo-3-(benziloxi substituído)-piridina-2-ilamina (5): (Aldrich, 1,0 1. Preparação de 3-(benziloxi substituído)-2-nitropiridina (3) : A uma solução agitada de Cs2C03 (1,0 equivalente molar)) em DMF (0,2 M) em atmosfera de N2 contendo 3-hidroxi-4-nitro-piridina 75 equivalente molar) adiciona-se brometo de benzilo substituído (1,0 equivalente molar). A mistura é agitada durane 6 h à temperatura ambiente. A reacção é depois diluída com EtOAc e dividida por H2O. A camada aquosa foi depois extraída duas vezes com EtOAc. As camadas orgânicas são depois combinadas, lavadas com H2O e salmoura, secas sobre Na2S04, filtradas e concentradas à secura sob vácuo para render 3-(benziloxi substituído)-2-nitropiridina (3) sob a forma de um sólido. 2. Preparação de 3-(benziloxi substituído)-piridin-2-ilamina (4) : A uma mistura agitada de AcOH e Et OH (1,3:1) suspendeu-se 3-(benziloxi substituído)-2-nitropiridina (1,0 equivalente molar, 1M) e lascas de ferro (1,0 equivalente molar). A reacção foi aquecida lentamente sob refluxo e deixada agitar durante 1 hora. A reacção é arrefecida à temperatura ambiente, depois é filtrada através de um chumaço de celite. O filtrado resultante é neutralizado com NH4OH conc. e depois é extraído cp, EtOAc pro três vezes. Os extractos orgânicos combinados são lavados com NaHC03, H2O e salmoura, secos sobre Na2S04, filtrados e concentrados à secura sob vácuo para render 3-(benziloxi substituído)-piridin-2-ilamina (4) sob a forma de um sólido.
3. Preparação de 5-bromo-3-(benziloxi substituído)-piridin-2-ilamina (5): Uma solução em agitação de 3-(benziloxi substituído)-piridin-2-ilamina (4) (1,0 equivalente molar) em acetonitrilo foi arrefecida a 0o C num banho de gelo. A esta solução adicionou-se N-bromosuccinimida (Aldrich, 1,0 equivalente molar) por porções. A reacção é agitada a 0o C durante 15 minutos. A reacção é concentrada à secura sob vácuo. O óleo escuro resultante é dissolvido em EtOAc e dividido por H2O. A 76 camada orgânica é depois lavada com NaHCC>3 saturado por duas vezes e uma vez com salmoura. E adicionado carbono activado à camada orgânica e aquece-se sob refluxo. A solução é depois arrefecida à temperatura ambiente e é filtrada através de um chumaço de celite. A camada orgânica é então concentrada à secura sob vácuo até atingir um terço do volume original. Os sólidos são então filtrados para se obter 5-bromo-3-(benziloxi substituído)-piridin-2-ilamina (5) sob a forma de um sólido.
Esquema geral II para a síntese de 5-aril-3-(benziloxi substituído)-pirazina-2-ilamina
Esquema geral 2 para a síntese de 5-bromo-3-(benziloxi substituído)-pirazina-2-ilamina N , Br^fN NHj
A uma solução arrefecida em gelo de álcool benzílico substituído (1,0 equivalente molar) e tetra-hidrofurano anidro (0,14 M) adicionou-se hidreto de sódio (1,0 equivalente molar) lentamente em atmosfera de azoto. Após agitação durante 30 minutos adicionou-se 3,5-dibromopirazin-2-ilamina (1,0 equivalente molar) em tetra- 77 hidrofurano por um funil de adição, gota a gota, a uma velocidade rápida. Uma vez completa a adição, o banho de gelo foi removido e a reacção foi sujeita a refluxo em azoto e controlada por HLPC defase inversa. Passadas 18 h, o HPLC revelou que a maioria da 3,5-dibromopirazin-2-ilamina tinha sido consumida e a reacção foi deixada arrefecer à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi concentrada, diluida com acetato de etilo e lavada com salmoura. A camada orgânica foi seca sobre sulfato de magnésio anidro e concentrada sob vácuo. 0 produto bruto foi purificado sobre gel de sílica eluíndo com 1:1 de acetato de etilo/diclorometano para se obter 5-bromo-3-(benziloxi substituído)-piridin-2-ilamina sob a forma de um sólido branco com 60 a 90% de rendimento.
Procedimento geral 3 para a síntese de 5-aril-3-(benziloxi substituído)-piridin-2-ilamina e 5-aril-3-(benziloxi substituído)-pirazin-2-ilamina.
ViCHorN
PdlPPhaJjdj DME/NajCOyHjO 80°C Ácido aril borónico
Uma mistura de 5-bromo-3-(benziloxi substituído)-piridin-2-ilamina e 5-bromo-3-(benziloxi substituído)-pirazin-2-ilamina (1,0 equivalente molar), ácido aril borónico ou éster (1,2 equivalente molar), cloreto de bis(trifenilfosfina) paládio II (0,03 equivalente molar) e carbonato de sódio (3,0 equivalente molar) em éter 78 dimetílico de etilenoglicol e água (10:0,5, 0,03 M) é desgaseifiçada e carregada com azoto por três vezes e depois é tratada sob refluxo em azoto de um dia para o outro. A reacção é arerfecida à temperatura ambiente e diluída com acetato de etilo. A mistura é lavada com água, salmoura, seca sobre N2SO4 e purificada numa coluna de gel de sílica para se obter 5-aril-3-(benziloxi substituído)-piridin-2-ilamina ou 5-aril-3-(benziloxi substituído)-pirazin-2-ilamina.
Procedimento geral 2 para a síntese de 5-bromo-3-(benziloxi substituído)-pirazin-2-ilamina.
Procedimento geral 4 para a reacção de amidação de síntese de ácido 6-amino-5-(benziloxi substituído)-piridin-3—i1]-benzóico:
A uma solução de ácido 6-amino-5-(benziloxi substituído)-piridin-3-il]-benzóico )1,0 equivalente molar), hidrato de 1-hidroxi-benzotriazole (HOBT, 1,2 equivalente molar) e cloridrato de 1—(3— dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (EDC, 1,2 equivalente molar) em DMF (0,2 M) adiciona-se amina (1,2 equivalente molar). A solução de reacção é agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, depois é diluída com EtOAc e dividida por H20. A camada orgânica é separada e a camada aquosa é extraída com EtOAc. As camadas 79 orgânicas são combinadas, lavadas com NaHC03 saturado e concentradas à secura sob vácuo. 0 material é purificado por cromatograf ia em coluna (gel de sílica, 99:1 a 95:5 CH2CI2/CH3OH). As fracções contendo produto são concentradas sob vácuo para render o produto amida.
Procedimento geral 5 para a preparaçãode 3-(benziloxi substituído)-5-(3-dialquilaminometil-lH-indol-5-il)-piridin-2-ilamina:
A uma solução de benzotriazole (1,0 equivalente molar) em diclorometano (0,2 M) adiciona-se amina (1,0 equivalente molar). A reacção é agitada durante 5 minutos à temperatura ambiente, após o que se adiciona formaldeído (37 % em peso, 1,0 equivalente molar) e a reacção é tapada e agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Assim que TLC (acetato de etilo 10 %:diclorometano) revela o consumo do benzotriazole de partida, a reacção é seca com sulfato de magnésio anidro (10 g), filtrada e concentrada sob vácuo. O produto bruto é purificado em coluna de gel de sílica eluído com 1:1 80 acetato de etilo:diclorometano para render o produto desejado sob a forma de um sólido branco. A uma solução de intermediário aminometilbenzotriazole (1,0 equivalente molar) em diclorometano (0,43 M) adiciona-se cloreto de alumínio (2,0 equivalente molar) seguido de 3-(2,6-dicloro-benziloxi)-5-(lH-indol-5-il)-piridin-2-ilamina (1,1 equivalente molar). A reacção é tapada e aquecida com agitação a 40° C durante 3 a 4 h. A mistura reaccional é depois afastada do calor e deixada arrefecer à temperatura ambiente. A mistura reaccional é diluída com hidróxido de sódio (0,2 M) e clorofórmio, tapada de novo e vigorosamente agitada à temperatura ambiente para dissolver o resíduo no frasco. O clorofórmio é extraído da solução aquosa, seco sobre sulfato de sódio anidro e concentrado sob vácuo. O produto bruto é purificado em coluna de gel de sílica eluído primeiro com 1:1 acetato de etilo:diclorometano para eluir as impurezas menos polares e depois eluindo o produto com 90:9:1, clorofórmio:metanol:hidróxido de amónio. (Rendimento 10-67%) .
Procedimento geral 6 para a síntese de 3-(benziloxi substituído)-5-fenil-piridin-2-ilamina utilizando 3—(3— metoxi-benziloxi)-5-fenil-piridin-2-ilamina: 81
A uma solução de 3-benziloxi-5-fenil-piridin-2-ilamina (exemplo 1-87, 3,27g, 11,8 mmol) em metanol (30 mL) foi adicionado Pd(OH)2 (2,5g, 2,37 mmol). A mistura foi desgaseifiçada e carregada com hidrogénio três vezes e depois agitada em balão de hidrogénio durante 5 h. A reacção foi filtrada através de um chumaço de Celite, lavada com metanol e condensada. Após secagem em alto vácuo obteve-se 2-amino-5-fenil-piridin-3-ol (2,04g, 93% rendimento). MS m/z 187 [M+l]. A uma solução de 2-amino-5-fenil-piridin-3-ol (2,04 g, 10,95 mmol) em THF (anidro, 30 mL) adicionou-se NaH (1,31 g, 32,85 mmol) lentamente. A mistura foi agitada em azoto durante 20 minutos e depois adicionou-se cloreto de tritilo (3,66 g, 13,14 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para outro em azoto. O solvente foi evaporado e o resíduo foi dissolvido em diclorometano, lavado com água e seco em Na2S04. Após filtração e condensação, o produto bruto foi purificado em coluna de gel de sílica, eluindo com EtOAc-hexano (1:10) para 5-fenil-2-(tritil-amino)-piridin-3-ol (1,09 g, 23% rendimento). MS m/z 427 [M+l]. 82 A uma solução de 5-fenil-2-(tritil-amino)-piridin-3-ol (100 mg, 0,24 mmol) em THF (3 mL) adicionou-se CS2CO3 (79 mg, 0,24 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 20 minutos e depois adicionou-se brometo de 3-metoxibenzil (0,037 mL, 0,26 mmol). A reacção foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, diluída com diclorometano (5 mL) e filtrada para remover os sais. Os solventes foram evaporados e o resíduo foi dissolvido em ácido trifluoroacético 10% em diclorometano(2 mL) . A reacção foi agitada durante 2 horas e evaporada. O resíduo foi dissolvido em diclorometano, lavado com NaHCCb sat. e seco em Na2SC>4. Após filtração e concentração, o produto bruto foi purificado em coluna de gel de sílica, eluindo com metanoldiclorometano (gradiente entre 3% e 15%) para proporcionar 3-(3-metoxi-benziloxi)-5-fenil-piridin-2-ilamina sob a forma de um sólido branco (43,5 mg, 60% rendimento).
Procedimento geral 7 para a síntese de 3-(benziloxi substituído)-5-aril-piridin-2-ilamina utilizando 5-[4-(2-morfolin-4-il-etoxi)-fenil]-3-(3-metoxi-benziloxi)-piridin-2-ilamina:
83 A uma solução de 2-amino-5-[4-(2-morfolin-4-il-etoxi)-fenil]-piridin-3-ol (preparada segundo os procedimentos para 2-amino-5-fenil-piridin-3-ol no exemplo 1-88 do pedido de patente norte-americano n° de série 10/786,610 (PCT/US2004/005495) (45,5 mg, 0,14 mmol) em DMF (3 mL) a 0o C adicionou-se NaH (60% em óleo) (5,6 mg, 0,14 mmol) e a mistura foi agitada a 0o C durante 20 min. Depois adicionou-se l-bromometil-3-nitro-benzeno e a mistura foi agitada a 0o C duranet 1 h e à temperatura ambiente durante 2 h. Foi adicionado HC1 aquoso 1 N frio (0,1 mL) e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O residuo foi purificado com cromatografia em gel de silica (CH2C12: MeOH: NH4OH = 100:3:0.3) 5-[4-(2-morfolin-4-il- etoxi)-fenil]-3-(3-nitro-benziloxi)-piridin-2-ilamina osb a forma de um sólido amarelo (44 mg, 68%).
Procedimento geral 8 para a síntese de {4-[6-Amino-5-(substituted-benziloxi)-piridin-3-il]-fenil}-[(2R)-2-pirrolidin-l-ilmetil-pirrolidin-l-il]-metanona utilizando {4-[6-amino-5-(4-fluoro-2-trifluorometil-benziloxi) -piridin-3-il]-fenil}-[(2R)-2-pirrolidin-l-ilmetil-pirrolidin-l-il]-metanona: 84
ácido 6-amino-5-benziloxi-nicotínico foi preparado segundo o procedimento 3 de a partir de 3-benziloxi-5-bromo-piridin-ilamina e ácido 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-benzóico. MS m/z 321 [M+l].
[4-(6-amino-5-benziloxi-piridin-3-il)-fenil]-[(2R)-2-pirrolidin-l-ilmetil-pirrolidin-l-il]-metanona foi preparado segundo o procedimento 4, utilizando ácido 6-amino-5-benziloxi-nicotínico e (2R)-pirrolidin-l-ilmetil-pirrolidina (preparado no exemplo 1-39 do pedido de patente norte-americana N°. 10/786,610 (PCT/US2004/005495)). MS m/z 457 [M+l]. A uma solução de [4-(6-amino-5-benziloxi-piridin-3-il)-fenil]-[(2R)-pirrolidin-l-ilmetil-pirrolidin-l-il]-metanona (2,28 g, 5,00 mmol) em metanol (25 mL) foi adicionado Pd/C 10% (100 mg). A mistura foi desgaseifiçada e carregada com hidrogénio três vezes e depois agitada em balão de hidrogénio de um dia para o outro. A reacção foi filtrada através de um chumaço de Celite, lavada com metanol e 85 condensada. Após secagem sob alto vácuo obteve-se [4 — (6— amino-5-hidroxi-piridin-il)-[(2 R)-2-pirrolidin-l-ilmetil-pirrolidin-l-il]-metanona (1,74 g, 95%). ΧΗ NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,79 (s, 1H) , 7,54 (m, 3H) , 7,46 (m, 2H) , 7,14 (s, 1H), 5,68 (s, 2H), 4,22 (m, 1H), 3,45 (m, 2H), 2,66 (m, 1H) , 2,52 (m, 4H) , 1,96 (m, 2H) , 1,84 (m, 3H) , 1,64 (m, 4H) ; MS mlz 367 (M+l), A uma solução agitada de [4-(6-amino-5-hidroxi-piridin-3-il)-fenil]-[(2R)-pirrolidin-l-ilmetil-pirrolidin-l-il] -metanona (100 mg, 0,27 mmol) em DMF anidro (15 mL ( sob atmosfera de N2 contendo, a 0o C, adicionou-se hidreto de sódio (dispersão 60% em óleo mineral, 11 mg, 0,49mmol). A mistura foi deixada agitar a 0o C durante 30 min. Adicionou-se 1-(bromometil)-4-fluoro-2- (trifluorometil)benzeno (0,046 mL, 0,27 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A reacção é depois diluída com EtOAc e dividida por H20. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (2 x 25 mL) . As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com H20 (1 x 15 mL) , salmoura (1 x 15 mL) , secas sobre MgS04, filtradas, concentradas e purificadas numa coluna de gel de sílica para render {4-[6-amino-5-(4-fluoro-2-trifluorometil-benziloxi)-piridin-3-il]-fenil}-[(2R)-2-pirrolidin-l-ilmetil-pirrolidin-l-il]-metanona sob a forma de cristais brancos.
Procedimento geral 9 para a síntese de ácido 2-dialquilamino-etanesulfónico [6-amino-5-(benziloxi- substituído)-piridin-3-il]-fenil-amida utilizando ácido 2-dietilamino-etanesulfónico {4-[6-amino-5-(2-cloro-3,6- difluoro-benziloxi)-piridin- 3—i1]-fenil}-amida. 86
CHjdj 9 HN-^ - ó 9 M" Xpc Ò Λ I Á
Pd(PPhJ,Clj OMBNajCOj/HjO ecxc_.
A uma solução de 4-(4,4,5,5-Tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenilamina (5 g, 22,8 mmol) em diclorometano (120 mL) adicionou-se N-metil morfolina (7,5 mL, 68,4 mmol). Esta mistura foi arredecida a 0o C em atmosfera de azoto. Adicionou-se depois cloreto de 2-cloroetanossukfonilo (2,5 mL, 23,9 mmol) em diclorometano (60 mL) gota a gota com agitação. Assim que a adição ficou completa, agitou-se o balão a 0o C durante lhe depois à temperatura ambiente, constantemente controlada pro TLC (1:1 acetato de etilo:hexanos) e coloração com ni-hidrina. Ao fim de 4 h de agitação restava ainda ésetr borónico de partida e adicionou-se mais 0,2 equivalentes (0,5 mL) de cloreto de 2-cloroetanossulfonilo em diclorometano (25 mL) gota a gota à temperatura ambiente. Passada lho éster borónico tinha sido consumido, como se mostra com TLC e o volume de reacção total foi reduzido para metade por evaporação rotativa. Os conteúdos foram diluídos com acetato de etilo (200 mL) , lavados com salmoura a 50% (2 x 100 mL) , secos sobre sulfato de sódio anidro e concentrados 87 sob vácuo. 0 produto bruto foi purificado com gel de sílica (120 g) e eluição com acetato de etilo 10%, diclorometano para render ácido etenossulfónico [4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-amida sob a forma de um sólido branco (6,2 g, 20,2 mmol, 89% rendimento). 1H NMR (CDCls, 300 MHz) , δ 7,76 (d, J = 8,4, 2H) , 7,12 (d, J = 8,45, 2H) 6,65 (s, 1H), 6,55 (dd, J = 9,77, 6,7, 1H) , 6,31 (d, J = 16,54, 1H), 5,96 (d, J = 9,8, 1H), 1,33 (s, 12H), A uma solução de ácido etenossulfónico [4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-amida (0,500 g, 1,6 mmol) em metanol (5 mL) adicionou-se dietilamina (0,707 g, 4,0 mmol) em metanol (5 mL) e a reacção foi agitada à temperatura ambiente e controlada por TLC (1:1 acetato de etilo:hexanos). Passadas 2 h, a reacção foi concentrada sob vácuo e o resíduo foi dividido por acetato de etilo (50 mL) e água (50 mL) . O acetato de etilo foi depois lavado com salmoura 50% (1 x 50 mL) , seco sobre sulfato de sódio anidro, filtrado e concentrado sob vácuo. O produto bruto foi purificado utilizando uma coluna de gel de sílica de 10 g pré-carregada, eluindo com 1:1 acetato de etilo:diclorometano para render ácido 2-dietilamino-etanossulfónico [4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-amida sob a forma de um sólido branco (0,346 g, 0,90 mmol, 56% ). ΧΗ NMR (CDC13, 300 MHz) δ 7,78 (d, J = 6,65, 2H) 7,15 (d, J = 6,66, 2H) , 3,20 (m, 2H) , 3,0 (m, 2H), 2,55 (q, J = 7,15, 7,16 4H), 1,34 (s, 12H), 1,05 (t, J = 7,19, 6H), ácido 2-dietilamino-etanossulfónico {4-[6-amino-5-(2-cloro-3,6-difluoro-benziloxi)-piridin-3-il]-fenil}-amida foi preparado segundo o procedimento de acoplagem 3 de Suzuki a partir de 5-bromo-3-(2-cloro-3,6-difluoro- 2-dietilamino- ácido benziloxi)-piridin-2-ilamina e etanossulfónico [4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2 — i1)-fenil]-amida preparado na parte 2 sob a forma de um sólido brancom com 60% de rendimento.
Procedimento geral 10: 1: 4-(4,4,5,5-tetrametil 1,3,2 dioxaborolan-2-il) anilina (3 g, 0,013 mol) foi dissolvido em diclorometano (350 mL) ao qual foi adicionado piridina (1,02 g, 0,013 mol mol) e cloroformiato de 4-nitrofenilo. A reacção foi agitada durante 13 h, mostrando a análise TLC o consumo de todos os materiais de partida. A solução foi lavada com NaHC03 saturado (3x50 mL), água (3x50 mL) e salmoura (3 x50 mL) . A camada orgânica foi seca sobre Na2SC>4 e o solvente foi removido para render um sólido cristalino branco 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)- f enil ]carbamato de fenilo , 4,45 g, 91%. ΧΗ NMR (CDC13 300 MHz) δ 1,4 (s, 12H), 7,1 (brs. 1H), 7,3 (d, 2H) , 7,5 (d. 2H) , 7,8 (d, 2H) , 8,3 (d, 2H) ,
Cl F
O Jl R HN N
-/-V 89 2 : 4-(4,4,5,5-Tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-carbamato de fenil (500 mg, 1,3 mmol) foi dissolvido em diclorometano anidro (0,5 mL) e trietilamina (0,187 mL, 1,3 mmol). A esta solução agitada adicionou-se 1-metilpiperazina (ou qualquer outra amina) (0,144 mL, 1,3 mmol). A solução ficou instantaneamente amarela e uma análise tic revelou o consumo de todo o material de partida. A reacção foi lavada com água (3 x 500 mL) , bicarbonato de sódio saturado (2 x 200 mL) e seca antes da remoção dos solventes sob vácuo. Os ésteres borónicos foram utilizados sem purificação. 3. A uma mistura de 2,1 mL de DME e 2,8 mL de Na2C03 2n adicionou-se 100 mg do suporte de brometo, 1 equivalente do ácido borónico e 5 % em mol de Pd(PPh3)4. A reacção foi agitada e aquecida a 80° C de um dia para outro num frasco 2 dram. A mistura em bruto foi filtrada através de celite e foi extraída com EtOAc (2 x 100 mL). Os extractos combinados foram lavados com NaHC03 (1 x 100 mL) , seguido de água (1 x 100 mL) e salmoura saturada (1 x 100 mL) . A mistura reaccional resultante foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi dissolvido em hexano e purificado por cromatografia em coluna-
Procedimento geral 11: 90
1. A uma solução de 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]piridin-2-ilamina (10,0 g, 33,2 mmol) em acetonitrilo (600 mL) e ácido acético (120 mL) foi adicionada N-iodosuccinimida (11,2 g, 49,8 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas e a reacção foi interrompida com solução de Na2S20s. Após a evaporação, o resíduo foi dividido por acetato de etilo e água. A camada orgânica foi lavada com solução de NaOH 2N, salmoura e seca sobre Na2SC>4. O produto bruto foi purificado em coluna de gel de sílica para se obter 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil )-etoxi]-5-iodo-piridin-2-ilamina (7,1 g, 50% rendimento). MS m/z 427 [M+l]. 2. A uma solução de 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-iodo-piridin-2-ilamina (7,1 g, 16,6 mmol) em prop-2-inil-carbamato de terc-butilo (3,1 g, 20,0 mmol) em THF (60 mL) e Et3N (60 mL) adicionou-se Cul (63 mg, 0,3 mmol) e Pd(PPh3) 4 (384 mg, 0,3 mmol) . A mistura foi agitada em azoto e controlada por TLC até a reacção estar completa. A mistura foi extraída com EtOAc e lavada com água. O produto 91 bruto foi purificado em coluna de gel de sílica eluindo com 20-40% de EtOAc em hexanos para se obter (3-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-prop-2-inil)-carbamato de terc butilo (2,2 g, 29% rendimento). 3. A solução de (3-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro- fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-prop-2-inil)-carbamato de terc butilo em 25% de TFA em diclorometano foi agitada durante 2 h, depois lavada em NaOH 2N, duas vezes com água, salmoura, seca sobre Na2SC>4. Depois da filtração e evaporação obteve-se 5-(3-amino-prop-l-inil)-3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro- cenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina com 93 % de rendimento. 4. Adicionou-se piridina (1 eq) a uma solução de 5—(3— amino-prop-l-inil)-3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina (0,282 mmol, 1 eq) e cloroformato de 4-nitrofenilo (1 eq) em diclorometano anidro (10 mL). A reacção foi agitada durante 4 h em azoto e depois adicionaram-se a amina seleccionada (1 eq) e trietilamina (1 eq). A mistura foi sujeita a refluxo durate 5 minutos e arrefecida à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi lavada com água. A camada orgânica foi evaporada e purificada em coluna de gel de sílica, eluindo com 0-20% de metanol em diclorometano em colunas de sílica pré-carregadas. Os rendimentos finais variaram entre 24% e 71%.
Procedimento geral 12: 92
1: Adicionou-se cloreto de cloroacetilo (153 mg, 1,4 mmol) a uma solução de 5-(3-amino-prop-l-inil)-3-[1-(2, 6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina (preparado no procedimento 11) (400 mg, 1,1 mmol) em diclorometano (17 mL) . A reacção foi agitada à temperatura ambiente com controlo por TLC da conclusão da reacção. Uma vez completa, o solvente foi evaporado para se obter o produto bruto. 2: Adicionou-se a amina individual (5 eq) a uma solução de N-(3-{6-Amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-prop-2-inil)-2-cloroacetamida (1 eq) em acetonitrilo (5 eq) . A mistura foi sujeita a refluxo em azoto de um dia para o outro. Após evaporação do solvente, o resíduo foi purificado em coluna de gel de sílica, eluindo com 1-10% de metanol em diclorometano para proporcionar o produto com rendimentos entre 47% e 97%.
Procedimento geral 13: 93
A uma solução agitada de 2-amino-3-benziloxipiridina (42,0 g, 0,21 mol) em CH3CN (600 mL) a 0o C adicionou-se N-bromosuccinimida (37,1 g, 0,21 mol) ao longo de 30 minutos. A mistura foi agitada durante 5 h, após o que a reacção foi diluída com EtOAc (900 mL) e dividida com H20 (900 mL) . A camada orgânica foi lavada com salmoura e seca (Na2S04), filtrada e concentrada à secura sob vácuo para render 3-benziloxi-5-bromo-piridina-2-ilamina (31,0 g, 0,11 mol, 53%). NMR (CDC13, 300 MHz) δ 4,63-4,78 (brs, 2H), 5,04 (s, 2H) , 7,07 (d, ΧΗ, J, 1,8 Hz), 7,33-7,42 (m, 5H) , 7,73 (d, ΧΗ, J, 1, 8 Hz) , A uma mistura agitada de 3-benziloxi-5-bromo-piridina-2-ilamina (31,0 g, 0,11 mol) numa mistura de DME (600 mL) e H20 (600 mL) adicionou-se ácido 4-carboximetilborónico (29,9 g, 0,11 mol), Pd(PPh3)4 (6,4 g, 5,55 mmol) e Na2C03 (82,0 g, 0,78 mol). A reacção foi aquecida lentamente sob refluxo e deixada agitar durante 3 hora. A reacção foi arrefecida à temperatura ambiente, depois foi diluída com CH2C12 (1,5 L) e dividida com H20 (700 mL) . A camada orgânica foi lavada com NaHC03 (700 mL) saturado, seca 94 (Na2SC>4) , filtrada e concentrada sob vácuo. 0 material em bruto foi purificado por cromatograf ia em coluna (gel de sílica, 1:1 a 4:1 EtOAc:hexanos) e as fracções contendo o produto foram combinadas e concentradas sob vácuo para render 4-(6-amin-5-benziloxi-piridin-3-il)-benzoato de metilo (29,4 g, 0,086 mol, 79%). XH NMR (CDC13, 300 MHz) δ 3,92 (s, 3H) , 4,82-4,94 (brs, 2H), 5,15 (s, 2H) , 7,22 (d ΧΗ, J, 1 ,8 Hz) , 7,33-7, 42 (m, 5H), 7,54 (d, 2H, J, 8,6) 7,98 (d, XH, J, 1,8 Hz) , 8,0 6(d, 2H, J, 8,6 Hz), A uma solução agitada de 4-(6-amino-5-benziloxi-piridin-3-il)benzoato de metilo (10,0 g, 0,03 mol) em Et0H:H20 (95:5, 600 mL) foi adicionado Pd/C (15,9 g, 0,015 mol) (a reacção foi desgaseificada sob vácuo). A solução foi deixada agitar em atmosfera de H2 durante 22 h. A solução foi filtrada através de celite húmida e a celite foi lavada com EtOH. O filtrado foi concentrado sob vácuo para render 4-(6-amino-5-benziloxi-piridin-3-il)benzoato de metilo (2,3 g, 9,3 mmol, 31%). XH NMR (MeOD, 300 MHz) δ 3,90 (s, 3H), 7,21 (d, XH, J, 1,9 Hz), 7,62 (d, 2H, J, 8,5 Hz), 7,76 (d, XH, J, 1,9 Hz), 8,04(d, 2H, J, 8,5 Hz), A uma solução agitada de 4-(6-amino-5-benziloxi-piridin-3-il)benzoato de metilo (2,3 g, 9,3 mmol) em CH2C12 (180 mL) foi adicionado N,N-diisopropiletilamina (3,2 mL, 0,019 mol), cloreto de 4-metil-benzenossulfonilo (2,66 g, 0,014 mol) e PS-DMAO (quantidade catalítica). A reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 6 horas e depois foi filtrada para remover a resina. A resina foi lavada com CH2C12 (3 x 20 mL) e as fracções combinadas foram lavadas com ácido cítrico a 10% (100 mL) , NaCl saturado (100 mL) ,
seca (Na2SC>4) e filtrada e concentrada sob vácuo. O 95 material em bruto resultante foi purificado por cromatografia em coluna (gel de sílica, 100% CH2C12 a 95:5 CH2Cl2:MeOH) e as fracções contendo o produto desejado foram combinadas e concentradas sob vácuo para render 4— [6— amino— 5-(tolueno-4-sulfoniloxi)-piridin-3-il]-benzoato de metilo (3,3 g, 8,2 mmol, 88%). XH NMR (CDC13, 300 MHz) δ 2,47 (s, 3H), 3,93 (s, 3H), 4,81-4,88 (brs, 2H), 7,36-7,44 (m, 5H), 7,81 (d, 2H, J, 8,3 Hz), 8,05 (d, 2H, J, 8,4 Hz), 8,19-8,27 (brs, 1H) , A uma solução agitada de 1-(3 —fluoro-2-trifluorometil-fenil)-etanol (2,0 g, 9,6 mmol) em DMF anidro (500 mL) a 0o C, em atmosfera de N2 adicionou-se NaH (0,38 g, 9,6 mmol). A reacção foi deixada agitar durante 0,5 horas. Um solução de 4- [ 6-amino-5- (tolueno-4-sulfoniloxi)-piridin-3-il] -benzoato de metilo (3,8 g, 9,6 mmol) em DMF anidro (30 mL) adicionou-se à mistura reaccional, a qual foi deixada regressar à temperatura ambiente lentamente e foi agitada durante 21 h a esta temperatura. A reacção é depois diluída com EtOAc (500 mL) e H20 (100 mL) . A camada orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (1 x 200 mL) . As camadas orgânicas foram combinadas e lavadas com salmoura (1 x 100 mL) , secas com Na2S04 e concentradas à secura sob vácuo. A mistura em bruto foi purificada por cromatografia em coluna (gel de sílica, 40:60 a 70:30 EtOAc:hexanos) e as fracções contendo o produto foram combinadas e concentradas sob vácuo para render 4-{6-amino-5-[1- (3-fluoro-2-trifluorometilfenil)-etoxil-piridin-3-il)-benzoato de metilo (1,4 g, 3,2 mmol, 34%) . NMR (CDC13, 300 MHz) 5 1,73 (d, 3H, J, 6,2 Hz), 3,91 (s, 3H), 4,87-4,64 (brs, 2H) , 5,81 (q, 1H, J, 6,1, 6,3 Hz), 6,92 (d, JH, J, 96 1,8 Hz), 7,38 (d, 2H, J, 8,5 Hz), 7,46-7,66 (m, 3H) , 7,93 (d, JH, J, 1,8 Hz), 8,02 (d, 2H, J, 8,5 Hz), A uma solução agitada de 4-{6-amino-5-[1-(3-fluoro-2-trifluorometilfenil)-etoxil-piridin-3-il)-benzoato de metilo (1,4 g, 3,2 mmol) em IPA quente (72 mL) adicionou-se H20 (38 mL) contendol LiOH (0,68 g, 16,2 mmol) . A reacção foi aquecida sob refluxo durante 3,5 horas. A reacção foi neutralizada e diluída com EtOAc (200 mL) e extraída depois do arrefecimento. A camada orgânica foi lavada com salmoura (50 mL) , seca sobre Na2S04 e concentrada sob vácuo para render 4-{6-amino-5-[1-(3-fluoro-2-trifluorometilfenil)-etoxi]-piridin-3-il)-benzoato de metilo (1,2 g, 2,8 mmol, 88%). XH NMR (MeOD, 300 MHz) 5 1,75 (d, 3H, J, 6,2 Hz), 4,88-4,93 (m, 1H), 7,01 (d, XH, J, 1,8 Hz), 7,39 (d, 2H 8,3 Hz), 7,52-7,67 (m, 3H) , 7, 80 (d, 2H, J, 1,8 Hz) , (d, 2H, J, 8,3 Hz),
Preparação de compostos de amida: Uma solução agitada de 4-{6-amino-5-[1- (3-fluoro-2-trifluorometilfenil)-etoxil-piridin-3-il)-benzoato de metilo (50 mg, 0,12 mmol), EDC (27,0 mg, 0,13 mmol) e HOSt (18,0 mg, 0,13 mmol) em DMF (2 mL) foi adicionada a um frasco dois dram contendo NHR1R2(0,12 mmol). A reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas. A reacção é depois diluída com CH2C12 (3 mL) e dividida por H20. A camada orgânica foi separada, lavada com NaCl saturado (1x2 mL) e NaHCC>3 saturado (1x2 mL) . A camada orgânica foi concentrada à secura sob vácuo. O material foi purificado por cromatografia em coluna (gel de sílica, 99:1 a 95:5 CH2Cl2/MeOH). As fracções contendo produto são concentradas sob vácuo para render o produto amida. 97
Procedimento geral 14:
1: A uma mistura de cloridrato de 1 — (2— cloroetil)pirrolidina (200 mg, 1,18 mmol) e 4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-fenil]-fenil]-lH-pirazole (229 mg, 1,19 mmol) em DMF (6 mL) adicionou-se CS2CO3. A mistura foi agitada durante à temperatura ambiente de um dia para o outro. Foi depois adicionada água (10 mL) à mistura. O produto foi extraído com EtOAc (3 x 10 mL) . Os extractos combinados foram depois lavados com salmoura (5x10 mL) para remover o DMF, depois secos sobre Na2S04 e concentrados (142 mg, 41 % de rendimento). 2: A uma mistura de 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-iodo-piridin-2-ilamina (200 mg, 0,468 mmol) em éster pinacol-borónico (1,2 eq) , Na2C03 (149 mg, 1,41 mmol) em água (1,25 mL) e dimetiletilglicol (3,75 mL, 0,1 M) adicionou-se Pd(PPh3) 2CI2(63 mg, 0,020 mmol) num reactor de microondas. O sistema foi desgaseifiçado e carregado com azoto. A mistura foi agitada a 160° C num aparelho de microondas, durante 15 minutos. A mistura foi deixada arrefecer à temperatura ambiente, seguido da adição de água (10 mL). O produto foi extraído com EtOAc (3 x 20 mL), seco 98 sobre Na2S04 e concentrado. 0 produto bruto foi purificado por HPLC de faser inversa, com TFA 0,1 % em água e acetonitrilo.
Procedimento geral 15:
1: A uma solução de 3H-oxazolo[4,5-b]piridin-2-ona (13,6 g, 100 mmol) em acetonitrilo (600 mL) e ácido acético (120 mL) foi adicionada N-bromossuccinimida (21,4 g, 120 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 4 horas e a reacção foi interrompida com solução de Na2S20s. Após a evaporação, o resíduo foi dividido por acetato de etilo e água. A camada orgânica foi lavada com solução de NaOH 2N, salmoura e seca sobre Na2S04. O produto bruto foi purificado em coluna de gel de sílica para produzir 6-bromo-3H-oxazolo[4,5-b]piridin-2-ona (11,5 g, 55% rendimento). 2: 6-bromo-3H-oxazolo[4,5-b]piridin-2-ona (21,5 g, 100 mmol) foi suspenso em solução de NaOH (2N, 250 mL, 500 mmol) . A mistura foi sujeita a refluxo de um dia para o outro e obteve-se uma solução transparente. Depois do arrefecimento à temperatura ambiente, a solução de reacção foi neutralizada a pH -7. Houve libertação de um lote de C02 e observou-se também precipitação. O produto foi filtrado, lavado com água e seco sob alto vácuo para se obter 2-amino-5-bromo-piridin-3-ol sob a forma de um sólido esbranquiçado (17,8 g, 98% rendimento). 99 3: A uma solução de 2-amino-5-bromo-piridin-3-ol (358 mg, 1,89 mmol) em DMF (8 mL) adicionou-se CS2C03 (620 mg, 1,89 mmol). A mistura foi agitada durante 1 hora à temperatura ambiente em azoto. Adicionou-se à mistura reaccional composto de bromo (0,9 eq) em DMF (5 mL) lentamente. A solução de reacção foi agitada em azoto durante cinco h e depois foi dividida por água e acetato de etilo. A camada orgânica foi lavada com salmoura por três vezes e seca sobre MgSC>4. O produto bruto foi purificado em coluna de gel de sílica, eluindo com hexano-acetato de etilo (4:1) para produzir o produto com rendimento 70%-80%.
Procedimento geral 16 utilizando exemplo 1-488 do pedido de patente norte-americana No. 10/786,610 (PCT/US2004/005495) :
A uma solução de 3-benriloxi-5-bromo-piridin-2-ilamina (1 g, 3,58 mmol) em dimetilsulfóxido (7 mL) adicionou-se sequencialmente bis (pinacolato)diborane (1,0 g, 3,94 mmol), acetato de potássio (1,05 g, 10,7 mmol) [1,1'-bis(difenil-fosfino)ferrocine]dicloropaládio (II), complexo com diclorometano (1:1) (146 mg, 0,18 mmol). A mistura foi depois aquecida a 80 °C durante 16 h e depois foi deixada arrefecer à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi diluída com acetato de etilo (50 mL) e filtrada. O filtrado foi lavado com água (2 x 50 mL) e seco sobre sulfato de 100 magnésio. Concentração sob vácuo rendeu o boronato em bruto sob a forma de um sólido acstanho (1,13 g, 97%) . :Η NMR (CDC13) δ 1,32 (s, 12 H) , 5,08 (s, 2H) , 5,44 (brs, 2H) , 7,33-7,42 (m, 6H), 8,03 (s, 1H),
Um reactor de 18 mL foi carregado com 3-benziloxi-5-(4,4,5, 5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridin-2-ilamina (161 mg, 0,49 mmol) , dimetoxietano (3 mL) e 2-bromopiridina (117 mg, 0,74 mmol). A esta solução adicionou-se complexo de [1,1'- bis(difenilfosfino)ferrocine]dicloropaládio (II), com diclorometano (1:1) (20 mg, 0,05 mmol) e uma solução 2M de carbonato de césio em água (0,75 mL, 1,5 mmol). O reactor foi depois aquecido a 80 °C durante 66 h com atmosfera de azoto e depois foi arrefecido à temperatura ambiente. A mistura reaccional foi dividida por acetato de etilo (5 mL) e água (5 mL).«. A camada orgânica foi lavada com mais água (5 ml) e diluída com dimetilformamida (5 ml) . O ácido sulfónico ligado a polímero (0,5 g, 2,1 mmol) foi adicionado à solução orgânica e a mistura resultante foi suavemente durante 2 h. A resina foi filtrada e lavada com dimetilformamida, metanol e cloreto de metileno (3 x 5 mL para cada solvente). Depois deixa-se o polímero reagir com amónia 2M em metanol durante 1 h. A ersina foi filtrada e lavada com mais amónia 2M em metanol 82 x 5 mL) e os filtrados combinados foram concentrados sob vácuo. A purificação do produto bruto por cromatografia flash em coluna rendeu 52,2 mg do produto sob a forma de um sólido amarelo acastanhado.
Procedimento geral 17: 101
A solução de 3- (2-Cloro-3,6-difluoro-benziloxi)-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridin-2-ilamina (procedimento 16) (10,0 g, 24,3 mmol) em álcool t- butílico (50 mL) adicionou-se anidrido boc (5,83 g, 26,7 mmol) e a reacção foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Adicionou-se mais anidrido boc (2,25 g, 10,3 mmol) e a reacção foi agitada de um dia para o outro de novo. O material foi concentrado até restar um óleo preto viscoso, que foi utilizado assim mesmo. O éster borónico em bruto (24,3 mmol teórico) em THF (150 mL) foi adicionado a uma solução de bicarbonato de sódio (16,3 g, 194 mmol) em água (150 mL) e acetona (23 mL). A mistura foi arrefecida a 2° C e oxona (13,5 g, 21,9 mmol) foi lentamente adicionada, mantendo a temperatura abaixo de 8o C. Uma vez completa a adição, a reacção foi agitada por 5 minutos, depois interrompida com bissulfito de sódio (14,2 g) em água (28 mL). Adicionou-se acetato de etilo (200 mL) e as camadas foram separadas. A camada aquosa foi neutralizada com HC1 6N e extraída com acetato de etilo (2 x 200 mL) . As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (250 mL) e salmoura (250 mL), secas (Na2SOr) e concentradas até formar um óleo preto em bruto. 102
Cromatografia em gel de sílica (acetato de etilo/hexano) produziu o produto sob a forma de uma espuma castaha clara (4,78 g, 49, 0 %) · NMR (CDC13) δ 1,48 (s. 9H), 1,74 (d. 3H), 5,75 (q. 1H) , 6, 61 (d, 1H) , 76 ,89 (dt. 1H), 6,94-7,04 (m, 2H), 7,26(d, 1H), 8,19 (bs, 1H), MS m/z 401 (M+H)+, A carbonato de césio em frasco 2 dram adicionou-se [3-(2-cloro-3,6-difluoro-benziloxi)-5-hidroxi-piridin-2-il]-carbamato de terc-butilo (100 mg, 0,25 mmol) em DMF anidro (1 mL) seguido de brometo de benzilo (89,2 μΐ, 0,75 mmol). O frasco foi tapado e agitado a 90° C de um dia para o outro. A reacção foi filtrada através de um tubo de 5 mL Chem-Elut pré-humedecido com água (3,5 mL) e eluída com 1:1 de acetato de etilo:cloreto de metileno. Após concentração parcial adicionou-se HC1 4N em dioxano (1-2 mL) e a solução foi concentrada. Cromatografia de fase inversa (água:acetonitrilo, 0,05% TFA) seguida de liofilização, produziu o produto desejado sob a forma de um sólido amorfo branco (25,3 mg, 20,0 %) e o produto da adição bis sob a forma de um sólido amorfo tan (35,2 mg, 23,7 %).
Procedimento geral 18:
Adiciona-se boro-hidreto de sódio (1,5 equivalente molar) à solução de cetona (3,89 mmol) em 10 mL de etanol 103 sob atmosfera de azoto. A mistura resultante foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura é depois colocada em banho de gelo e arrefecida com HC1 aquoso diluído. O etanol é evaporado e adiciona-se EtOAc para extrair a solução aquosa. A camada EtOAc é seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso, composto A5. O resíduo é resíduo sem proceder a mais purificação. 3-Hidroxi-2-nitropiridina (1,1 equivalente molar) e trifenilfosfina (1,5 equivalente molar) são adicionados a uma solução do composto A5 (1,1 mmol) em 10 mL de THF. A mistura reaccional é depois colocada em banho de gelo e adiciona-se diisopropil azodicarboxilato (1,5 equivalente molar) . O banho de gelo é removido e a mistura é agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. O solvente é evaporado para produzir um resíduo oleoso amarelo. O resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo EtOAc em hexanos) para produzir o composto AI.
Adiciona-se HC1 2M (0,2 mL) à solução do composto AI (0,97 mmol) em 2 mL de etanol. A mistura é depois colocada em banho de gelo e adiciona-se lentamente pó de Fe (365 mg). A mistura foi aquecida a 85 °C durante lhe arrefecida à temperatura ambiente. Adicionou-se celite (0,5 g) para agitar e a mistura resultante é filtrada através de um leito de celite e enxaguado com etanol. O filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso acstanho, composto A2. O resíduo é resíduo sem proceder a mais purificação. Ácido periódico (0,25 equivalente molar), iodo (0,5 equivalente molar), H20 (0,5 mL) e ácido sulfúrico 104 concentrado (0,03 mL) são adicionados a uma solução de composto A2 em 3 mL de ácido acético. A mistura reaccional foi aquecida a 85° C durante 5 h. A mistura reaccional é depois arrefecida em banho de gelo e tornada básica com Na2C03 aq. Saturado a um pH igual a 3-4. Foi adicionado acetato de etilo à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2SC>4. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso. O resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo EtOAc em hexanos) para produzir o produto desejado, composto A3.
Procedimento geral 19:
Éster borónico ou ácido borónico (1,3 equivalente molar) é adicionado a uma solução de composto A3 (0,47 mmol) em 5 mL de DME. A mistura foi purgada com azoto várias vezes e adicionou-se diclorobis(trifenilfosfino) paládium (II) (0,05 equivalente molar). É adicionado carbonato de sódio (3 equivalente molar) em 1 mL de H20 à mistura reaccional e a solução resultante é aquecida a 85° C durante 12 h. Adiciona-se água à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso castanho escuro. O resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo 105 CH3OH, CH2C12, EtOAc e hexanos) para produzir o produto desejado, composto A4.
Procedimento geral 20:
O composto A6 foi preparado recorrendo ao procedimento geral 19. Pentafluoreto O-(7-azabenzotriazol-l-il)- N,N,N',N'-tetrametil-urónio fósforo (HATU) (1,1 equivalente molar), diisopropiletilamina (5 equivalente molar) e amina (1,3 equivalente molar) são adicionados a uma solução do composto A6 (0,17 mmol) em 3 mL de DMF sob atmosfera de azoto. A mistura é deixada agitar durante 12 horas à temperatura ambiente. Adiciona-se NaHCC>3 à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso castanho. O resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo EtOAc e hexanos) para produzir o produto de amida desejado, composto A7, sob a forma de um óleo amarelo.
Procedimento geral 21: 106
Adiciona-se ácido (16 equivalente molar) ao composto A7 (0,13 mmol) à temperatura ambiente. A solução resultante é agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura reaccional é evaporação e o resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo CH3OH, EtOAc e CH2C12) para produzir o produto de amida desejado, composto A8, sob a forma de um sólido branco.
Procedimento geral 22:
A9 A10 A11 O composto A9 foi preparado recorrendo ao procedimento geral 19. Dicarbonado de di-tec-butilo (3 equivalente molar) e 4-(dimetilamino)piridina (0,14 equivalente molar) são adicionados a uma solução do composto A9 (3 mmol) em 20 mL de DMF. A mistura resultante foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. Adiciona-se água à mistura 107 reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso castanho-amarelado. 0 resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo 25-*-30 % EtOAc em hexanos) para produzir o produto desejado, composto AIO, sob a forma de um óleo amarelado (87,8% rendimento). Borbulha-se ozono através da solução do composto AIO em 50 mL de CH2CI2 a -78° C e adiciona-se sulfureto de dimetilo para interromper a reacção. Adiciona-se cloreto de sódio saturado à mistura reaccional e adiciona-se EtOAc para extrair a solução aquosa. A camada combinada de EtOAc é seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso amarelo. O resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo 35->40% EtOAc em hexanos) para produzir o produto desejado, composto All, sob a forma de um óleo amarelado (58,4% rendimento).
Procedimento geral 23: Aminação redutiva
108
Sal cloridrato de amina (1,2 equivalente molar), acetato de sódio (2 equivalente molar para o sal cloridrato de amina) são adicionados a uma solução do composto All (0,45 mmol) em 4 mL de CH3OH, em atmosfera de azoto. Adiciona-se um crivo molecular (0,5 g) à mistura reaccional e então adiciona-se cianoboro-hidreto de sódio (2 equivalente molar). A mistura resultante é agitada durante 12 horas à temperatura ambiente, em atmosfera de azoto. A mistura reaccional é filtrada através de um leito de celite e o filtrado é evaporado e purificado por cromatografia em gel de silica (eluição CH3OH, EtOAc e CH2CI2) para produzir o produto desejado, composto A12 sob a forma de um óleo (52,6% rendimento). Adiciona-se ácido (16 equivalente molar) ao composto A12 (0,17 mmol) à temperatura ambiente. A solução resultante é agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura reaccional é evaporada e o resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo CH3OH, EtOAc e CH2C12) para produzir o produto desejado, composto A13.
Procedimento geral 24:
Λ11 A14 A15 109 O-fenildiaminas (1,2 equivalente molar) e bisulfito de sódio (2,1 equivalente molar) são adicionados a uma solução do composto All (0,41 mmol) em 5 mL de DMA. A solução resultante é aquecida a 110° C durante 12 h. Adiciona-se água à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso castanho amarelado. O resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo EtOAc em hexanos) para produzir o produto desejado, composto A14. Adiciona-se ácido (16 equivalente molar) ao composto A14 (0,16 mmol) à temperatura ambiente. A solução resultante é agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. A mistura reaccional é evaporada e o resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo CH3OH, EtOAc e CH2CI2) para produzir o produto desejado, composto A15.
Procedimento geral 25:
Α1Θ 110
Dicarbonado de di-terc-butilo (3 equivalente molar) e 4-(dimetilamino)piridina (0,14 equivalente molar) são adicionados a uma solução do composto A3b (2 mmol) em 10 mL de DMF. A mistura resultante foi agitada durante 12 horas à temperatura ambiente. Adiciona-se água à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso castanho amarelado (composto al6) . O resíduo é resíduo sem proceder a mais purificação.
Bis(pinacolato)diboro (1,2 equivalente molar) e acetato de potássio (3,4 equivalente molar) são adicionados a uma solução do composto al6 em 4 mL de DMSO. A mistura foi purgada com azoto várias vezes e adicionou-se diclorobis(trifenilfosfino) paládium (II) (0,05 equivalente molar). A solução resultante é aquecida a 80° C durante 12 h. Adiciona-se água à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso castanho-escuro. O resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo 30 % EtOAc em hexanos) para produzir o produto desejado, composto AI7 (76% rendimento). Adiciona-se HC1 (5 equivalente molar) a uma solução do composto A17 (0,43 mmol) em 4 mL de CH2C12. A mistura resultante é aquecida a 50° C durante 12 h. Adiciona-se NaHC03 saturado à mistura reaccional para neutralizar a reacção. Foi adicionado EtOAc para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é 111 evaporado para produzir o produto desejado (composto A18) sob a forma de um sólido amarelo (75% rendimento).
Procedimento geral 26:
AI 7 Aid AZO
Adiciona-se composto A17 (1,3 equivalente molar) a uma solução de haleto de arilo (0,36 mmol) em 3 mL de DME. A mistura foi purgada com azoto várias vezes e adicionou-se diclorobis(trifenilfosfino) paládium (II) (0,05 equivalente molar). É adicionado carbonato de sódio (3 equivalente molar) em 0,8 mL de H20 à mistura reaccional e a solução resultante é aquecida a 85° C durante 12 h. Adiciona-se água à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso castanho-escuro. O resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo com EtOAc em hexanos) para produzir o produto desejado, composto A19 (74,4% rendimento). Adiciona-se HC1 (5 equivalente molar) a uma solução do composto AI9 (0,26 mmol) em 10 mL de álcool isopropílico. A mistura resultante é aquecida a 50° C durante 12 h. O solvente é evaporado para produzir o produto desejado, composto A20. 112
Procedimento geral 27:
Adiciona-se composto A18 (1,3 equivalente molar) a uma solução de haleto de arilo (0,21 mmol) em 3 mL de DME. A mistura foi purgada com azoto várias vezes e adicionou-se diclorobis(trifenilfosfino) paládium (II) (0,05 equivalente molar). É adicionado carbonato de sódio (3 equivalente molar) em 0,6 mL de H2O à mistura reaccional e a solução resultante é aquecida a 85° C durante 12 h. Adiciona-se água à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso castanho-escuro. O resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo CH3OH, CH2C12, EtOAc e hexanos) para produzir o produto desejado, composto A21.
Procedimento geral 28: 113 113
A17 A22 X = I 8r, Cl η. ,Ν-R;
Amina (1,5 equivalente molar) e K2CO3 (1,5 equivalente molar) são adicionados a uma solução de haleto de 4-halobenzilo (1,0 equivalente molar) em 2 mL de tolueno. A mistura resultante é submetida a microondas com um SmithSynthesizer (150° C, 1 h) . Adiciona-se água à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso, composto A23. O resíduo é utilizado no procedimento 11 sem mais purificação para sintetizar o composto A22.
Procedimento geral 29:
X b I. Br. Cl, A24 114
Amina (1,2 equivalente molar) e diisopropilamina (5 equivalente molar) são adicionados a uma solução de cloreto de 4-bromobenzenossulfonilo (0,77 mmol) em 5 mL de CHCI3 em atmosfera de azoto. A mistura resultante foi aqitada durante 4 horas à temperatura ambiente. Adiciona-se água à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2SC>4 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir o produto desejado, composto A25. O resíduo é utilizado no procedimento 11 sem mais purificação para sintetizar o composto A24.
Procedimento geral 30:
Éster borónico ou ácido borónico (1,2 equivalente molar) é adicionado a uma solução de l-cloro-4-iodobenzeno (0,84 mmol) em 10 mL de (DME) em atmosfera de azoto. A mistura foi purgada com azoto várias vezes e adicionou-se diclorobis(trifenilfosfino) paládium (II) (0,05 equivalente molar). É adicionado carbonato de sódio (3 equivalente molar) em 1,8 mL de H20 à mistura reaccional e a solução resultante é aquecida a 85° C durante 12 h. Adiciona-se água à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e 115 o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso castanho-escuro. 0 resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo CH3OH, CH2CI2, EtOAc e hexanos) para produzir o produto desejado, composto A27. 0 composto A27 é utilizado no procedimento 11 para sintetizar o composto A2 6.
Procedimento geral 31 para separação quiral dos racematos: A amostra racémica é purificada utilizando cromatografia preparativa com fluido supercrítico SFC-MS. Condições de purificação exemplares: coluna-Chiralpak AD-H, 250x21 mm, 5 mícrones, 100A coluna (Coluna #:ADHOCJ-C1003); temperatura da coluna 35° C; fase móvel 35% metanol (com 0,1% isopropilamina)-modificado CO2; caudal preparativo 52 mL/min; pressão isobárica a 120 bar.
Procedimento geral 32: Utilizando (4-{6-amino-5-[1-(3-trifluorometil-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-fenil)-(3,5-dimetil-piperazin-l-il)-metanona
A uma mistura de 4-[4-(6-amino-5-hidroxi-piridin-3-il)-benzoí1]-2,β-dimetil-piperazina-l-carboxilato de terc-butilo (100 mg, 0,23 mmol) e 1-(1-bromo-etil)-3- 116 trif luorometil-benzeno (64 mg, 0,25 mmol) em DMF (2 ml) adicionou-se NaH (12 mg, 0,47 mmol) a 0° C. A mistura foi agitada de um dia para o outro. LCMS revelou que a reacção estava completa, removeram-se DMF e água. Adicionou-se RFA (2 mL) ao resíduo e agitou-se à temperatura ambiente durante 3 h. Removeu-se o TFA, seguido da adição de metanol. O resíduo foi purificado por HPLC prep. Para produzir (4 — { 6-amino-5-[1-(3-trifluorometil-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-fenil)-(3,5-dimetil-piperazin-l-il)-metanona (30 mg, rendimento 25,7%).
Procedimento geral 33: Utilizando (4-{6-amino-5-[1-(2-trifluorometil-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-fenil)-(3,5-dimetil-piperazin-l-il)-metanona
H,C o r' N -“-Ol-Bu Ο^,Ν A uma mistura de 4-[4-(6-amino-5-hidroxi-piridin-3-il)-benzoí1]-2,6-dimetil-piperazina-l-carboxilato de terc-butilo (50 mg, 0,12mmol) e 1-(1-bromo-etil)-2-trifluorometil-benzeno (32 mg, 0,12 mmol) em DMF (2 ml) adicionou-se CS2C03 2 M (0,18 mL 0,35 mmol) seguido de água (0,5 mL) , a mistura foi agitada de um dia para o outro e depois aquecida a 70° C, durante 8 h, LCMS revelou que a reacção estava completa. Removeram-se DMF e água. Adicionou-se TFA (2 mL) ao resíduo e agitou-se à temperatura ambiente durante 3 h. Removeu-se o TFA, seguido 117 da adição de metanol. 0 resíduo foi purificado por HPLC prep. para produzir (4-{6-amino-5-[1-(2-trifluorometil-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-fenil)-(3,5-dimetil-piperazin-l_il)-metanona (20 mg, rendimento 34,2%).
Procedimento geral 34: Utilizando (4—{6-amino-5-(2-metil-benziloxi]-piridin-3-il]-fenil}-(3,5-dimetil-piperazin-l-il)-metanona
in ftftu A uma mistura de (2R,6S)4-[4-(6-amino-5-hidroxi-piridin-3-il)-benzoíl]-2,6-dimetil-piperazina-l-carboxilato de terc-butilo (100 mg, 0,23 mmol) e 1-bromometil)-2-metil-benzeno (47 mg, 0,25 mmol) em DMF (2 ml) adicionou-se CS2CO3 2M (0,35 mL, 0,7 mmol) seguido de água (0,5 mL) . A mistura foi agitada durante à temperatura ambiente de um dia para o outro. LCMS revelou que a reacção estava completa, removeu-se o DMF, seguido de adição de HC1 4N em dioxano (2 mL) e a reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. Removeram-se os componente voláteis, seguido da adição de metanol. Esta solução foi purificada por HPLC prep. para produzir {4-[6-amino-5-(2-metil-benziloxi]-piridin-3-il}-fenil)-(3,5-dimetil-piperazin-l-il)-metanona (47 mg, rendimento 46,6%).
Procedimento geral 35: utilizando(6-amino-3-aza- biciclo[3.1.0]hex-3-il)-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dictoro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-fenil)-metanona-f}- 118 118
ι
1) Pd(dppf)2Cl{ CS2CO3 DME 2) HCMdioxano A uma mistura de [3-(4-iodo-benzoil)-3-aza- biciclo[3.1.0]hex-6-il]-carbamato de terc-butilo (100 mg, 0,234 mmol) e 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridin-2-ilamina (100 mg, 0,234 mmol) em DME (2 mL) adicionou-se Pd (dppf) 2CI2. CH2CI2 (10 mg, 0,012mmol) e CS2CO3 (351 mg, 0,702 mmol). Borbulhou-se a mistura com azoto durante 10 min, depois submeteu-se a microondas a 150° C durante 30 min. LCMS verificou que a reacção estava completa. A mistura reaccional em bruto foi diluída com acetato de etilo seguido de lavagens com água e salmoura. A solução foi seca sobre MgSCu. A purificação com HPLC prep produziu um sólido. O sólido foi agitado com HC1 4N/dioxano (3 mL) durante 3 h à temperatura ambiente. A remoção dos compostos voláteis conduziram a um resíduo que foi purificado por HPLC-prep para produzir (6-amino-3-aza-biciclo[3.1.0]hex-3-il)-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dictoro-3-fluoro-fenil)-etoxi] -piridin-3-il}-fenil)-metanona (30 mg, rendimento 26%).
Procedimento geral 36: Utilizando 5—[1— (2,6 6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-6'-(2-morfolin-4-il-etoxi)-[3.3']bipiridinil-6-ilamina 119
Adicionou-se a uma mistura de 6'-amino-5'-[l-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenii)-etoxi]-[3,3’]bipiridinil-6-ol (78 mg, 0,20 mmol) de trifenilfosfina (63 mg, 0,24 mmol) e 2-morfolin-4-il-etanol (o,026, 0,22 mmol) DEAD (0,034 mL, 0,22 mmol). Após agitação de um dia para o outro adicionou-se mais PPh3 (63 mg, 0,24 mmol) e mais DEAD (0,034 mL, 0,22 mmol) . Passadas algumas horas, adicionou-se mais álcool (0,026 mL, 0,22 mmol). Passadas mais algumas horas, adicionou-se mais PPh3 (63 mg, 0,24 mmol) e mais DEAD (0,034 mL, 0,22 mmol) . Após agitação de um dia para o outro, a mistura foi dividida pro diclorometano e salmoura semi-saturada. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com diclorometano. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2S04 e concentradas por evaporação rotativa. O resíduo foi purificado em cromatografia em gel de sílica utilizando eluição gradiente de diclorometano, metanol para produzir 5-[1-(2,6 -6- dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-61 -(2-morfolin-4-il-etoxi)-[3,31]bipiridinil-6-ilamina (53 mg, 53%).
Procedimento geral 37: utilizando exemplo 1-650 do pedido de patente norte-americana No. 10/786,610 (PCT/US2004/005495) 120
3-(2,6-Dicloro-3-fluoro-benziloxi)-5-tiazol-2-il-piridin-2-ilamina: Num tubo de microondas equipado com uma vareta agitadora adicionou-se material de partida iodo-piridilo (300 mg, 0,702 mmol), tetrakis(trifenilfosfina) paládio (O) (40 mg, 5 % mol) e tetra-hidrofurano (anidro, 6 mL). O frasco foi tapado e purgado com azoto durante 5 minutos. Adicionou-se brometo de 2-tiazolilzinco (0,5 M em THD, 1,4 mmol, 2,8 mL) com uma seringa. O frasco foi aquecido a 120° C no microondas durante 10 minutos. TLC (1:1 acetato de etilo:cloreto de metileno) revelou uma grande quantidade de material de partida restante. Adicionou-se mais brometo de 2-tiazolilzinco (0,5 M en THF, 500 pL) e o frasco foi aquecido a 120° C no microondas durante 20 minutos. TLC (1:1 acetato de etilo:cloreto de
metileno) revelou uma grande quantidade de material de partida restante. Adicionou-se mais brometo de 2- tiazolilzinco (0,5 M en THF, 500 pL) e o frasco f oi aquecido a 120° C no microondas durante 60 minutos. TLC (1:1 acetato de etilo:cloreto de metileno) revelou uma grande quantidade de material de partida restante, mas tinha-se tornado muito confuso. O conteúdo do frasco foi vertido em solução de NH4C1 (10 mL) sat. e esta solução foi extraída com acetato de etilo ( 2 x 30 mL) . As camadas de acetato de etilo combinadas foram secas sobre Na2S04, depois foram filtradas e concentradas sob vácuo. O produto 121 bruto foi carregado numa coluna de gel de sílica de 10 g pré-carregada e utilizou-se 1:1 acetato de etilo:cloreto de metileno para eluir o produto desejado. (40 mg, 15%).
Procedimento geral 38: utilizando exemplo 1-652 do pedido de patente norte-americana No. 10/786,610 (PCT/US2004/005495)
3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(1-metil-lH-imidazol-2-il)-piridin-2-ilamina: Dissolveu-se N-metil-imidazole (92 mg, 1,1 mmol) em tetra-hidrofurano (anidro, 4 mL) num balão de fundo curvo de 50 mL. O balão foi arrefecido com um banho de gelo seco/acetona em atmosfera de azoto. Adicionou-se N-butil-lítio (2,5 M, 562 pL, 1,4 mmol) com seringa em porções de 100 pL durante 5 minutos. A reacção foi agitada a -70° C durante 30 minutos. Adicionou-se cloreto de zinco sólido (anidro, 383 mg, 2,8 mmol) e a reacção foi agitada durante 15 minutos. Removeu-se o banho de gelo e deixou-se aquecer a reacção à temperatura ambiente. Assim que a totalidade do cloreto de zinco estava em cloreto e a reacção à temperatura ambiente, adicionou-se suporte de iodo (400 mg, 0,936 mmol) em tetra-hidrofurano (anidro, 4 mL), seguido de tetrakis (trifenilfosfina) paládio (II) (O) (108 mg, 10 % mol) e a reacção foi aquecida sob refluxo. A reacção foi controlada por LC/MS até estar consumida a totalidade do suporte de iodo de partida. A reacção foi deixada arrefecer e depois foi 122 diluída com solução de NH4C1 sat. (20 mL) . A solução foi extraída com acetato de etilo (2 x 50 mL) . As camadas de acetato de etilo combinadas foram secas sobre Na2SC>4, depois foram filtradas e concentradas sob vácuo. O produto bruto foi carregado numa coluna de gel de sílica de 10 g pré-carregada e utilizou-se 10% metanol: acetato de etilo foi utilizado para eluir o produto desejado (25 mg, 7%).
Procedimento geral 39: utilizando exemplo 1-657 do pedido de patente norte-americana No. 10/786,610 (PCT/US2004/005495)
ch3 . . 1 NH Ω °xr-9 Η,Ν^Ν
MeNHj M0OH
NH 0 HjN^N
Em 6-Amino-5-[1-(2,8-dlcloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-nicotinonitrilo (400 mg, 1,23 mmol) em 70 mL de metanol seco a 0o C borbulhou-se HC1 gasoso durante 3 minutos. Agitado de um dia para o outro a 3° C. Removidos os componentes voláteis e lavados os sólidos com éter dietílico para render o imidato quantitativamente. A 200 mg do imidato em 4 mL de metanol a 0° C adicionaram-se metilamina 2N em THF (837 pL). Deixar agitar em ARC durante cerca de 1 h, depois deixar aquecer à ta de um dia para o outro. Os componentes voláteis foram removidos e o resíduo foi cromatografado com 10-20% metanol/diclorometano para produzir 70 mg de produto.
Procedimento geral 40: 123
1. Ácido 6-nitro-5-hidroxinicotínico (B2): A uma solução de ácido de 5-hidroxinicotínico (Bl) (7,0 g, 50 mmol) em H2S04 concentrado, adicionou-se 9 mL de HN03 fumegante (90%) (9 mL) A mistura reaccional foi agitada entre 55-60° C em tubo selado durante 4 dias. A mistura foi então vertida em gelo e o pH foi ajustado a 3 com NaOH a 50%. Adicionou-se MgS04 para saturar a mistura aquosa, que foi então extraída com álcool isopropílico (4 x 45 mL) . Após a remoção de álcool isopropílico sob pressão reduzida, obteve-se 5,93 g (64% rendimento) de B2 sob a forma de um sólido amarelo. MS (APCI), (M+H)+ 185. 1HNMR (DMSO-d6) δ 8,01 (d, JH, Ar-H), 8,41 (d, ΧΗ, Ar-H). 2 . 2,6-diclorobenzil-6-nitro-5-[(2,6-diclorobenzil)oxi]nicotinato (B3) : Ácido 6-nitro-5-hidroxinicotínico (B2) (3,4 g, 18,5 mmol) brometo de 2,8-diclorobenzilo (8,88 g, 37 mmol), DIPEA (5,5 g, 42,5 mmol) foram dissolvidos em DMF (25 mL) num balão de fundo curvo de 250 mL e a reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 4,5 h e depois foi concentrada sob pressão reduzida. A mistura resultante foi vertida em gelo e filtrada. O sólido recolhido fio seco sob pressão reduzida 124 para produzir 4,25 g (46% rendimento) de 83. MS (APCI) (M+H) + 503. 1HNMR (DMSO-d8) δ 5,47 (s, 2H, ArCH20) , 5,71 (s, 2H, ArCH20) , 7,24-7,43 (m, 6H, Ar-H) , 8,26 (d, 1H, Ar-H) , 8,66(d, 1H, Ar-H), 3 . 2,6-diclorobenzil-6-amino-5-[(2,6- diclorobenzil)oxi]nicotinato (B4): Uma mistura de ,6-diclorobenzil-6-nitro-5-[(2,6-diclorobenzil)oxi]nicotinato (B3) (5,5 g, 10,96 mmol), pó de ferro (0,92 g, 16,43 mmol), ácido acético glacial (20 mL) e metanol (17 mL) foi agitada a 85° C durante três h. A mistura reaccional foi concentrada quase à secura e adicionou-se hidróxido de amónio (30%) para neutralizar a mistura. Adicionou-se uma quantidade mínima de DM para dissolver a mistura reaccional, a qual foi purificada em cromatografia flash em coluna (eluente : EtOAc-EtOH, 9:1) para produzir 4,5 g (87%) de B4 sob a forma de um sólido amarelo. MS (APCI) (M+H)+ 473. 4. Ácido 6-amino-5-[(2,6-diclorobenzil)oxi]nicotinico (B5): Uma mistura de 2,6-diclorobenzil-6-amino-5-[(2,6- diclorobenzil)oxi]nicotinato (B4) (3,5 g, 7,4 mmol), hidróxido de lítio (0,41 g, 17 mmol), água (22 mL) e metanol (30 mL) foi agitada e sujeita a refluxo a 85° C durante 5 h. A mistura foi concentrada à secura sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi dissolvido em água, extraído com uma mistura de Et20/hexano (1:1, 4 x 25 mL) , neutralizado com HC1 IN para formar um precipitado branco, o qual foi filtrado e seco sob pressão reduzida para produzir 1,83 gramas (79%) de B5 sob a forma de um sólido branco. MS (APCI) (M+H)+ 313, 1HNMR (DMSO-d8) δ 5,26 (s, 125 2H, ArCH20) , 6, 37 (s, 2H, NH2), 7,43-7,48 (t, 1H, Ar-H), 7, 54 (s, 2H, Ar-H), 7,58 (s, 1H, Ar-H), 8,18 (s, 1H, Ar-H), A uma série de 400 μ de solução 0,2 M de diferentes aminas em DMF, numa placa de 96 poços, adicionaram-se 400 pL (02 M em DMF) de ácido 4-[6-amino-5-(2,8-dicloro-3-fluoro-benziloxi)-piridin-3-il]-benzóico, 80 pL de trietilamina (1M em DMF) e 160 pL de HATU (0,5 M em DMF) e as reacções foram agitadas a 70° C durante 2 h. O solvente foi removido com aparelho SPeedVac e as misturas reaccionais em bruto foram redissolvidas em DMSO e transferidas utilizando um manipulador liquido para uma placa de 96 poços parap roduzir a concentração teórica final de -10 mM. As reacções foram analisadas e procedeu-se à identificação positiva do produto com LC/MS. A solução de águas mães foi diluída a 50 nM e analisada para determinar a percentagem de inibição de c-MET a 50 nM.
Procedimento geral 41:
A um conjunto de 400 pL de solução 0,2 M de diferentes aminas em DMF, numa placa de 96 poços, adicionaram-se 400 pL (0,2 M em DMF) de ácido 6-amino-5-[ (2,6-diclorobenzil)oxi]nicotínico, 80 pL de trietilamina (1M em DMF) e 160 pL de HATU (0,5 M em DMF) e as reacções foram
126 agitadas a 70° C durante 2 h. O solvente foi removido com aparelho SPeedVac e as misturas reaccionais em bruto foram redissolvidas em DMSO e transferidas utilizando um manipulador líquido para uma placa de 98 poços 1 mL para produzir a concentração teórica final de -10 mM. As reacções foram analisadas e procedeu-se à identificação positiva do produto com LC/MS. A solução de águas mães foi diluída até 1 μΜ e analisada
Procedimento geral 42 utilizando 2-{4-(6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il} -pirazol-1-il)-(3-dimetilamino-propil)-isobutiramida
127 A uma solução de 4-(4,4,5,5-Tetrametil- [1,3, 2] dioxaborolan-2-il)-lH-pirazole (5 g, 25,77 mmol) e 2-bromo-2-metil-propionato de metilo (12,6 g, 27,06 mmol) em DMF (85 mL) adicionou-se CS2CO3 (12,6 g, 38,65 mmol). A mistura reaccional foi aquecida a 90 °C em banho de óleo, de um dia para o outro. A mistura reaccional foi arrefecida até à temperatura ambiente e dividida por água e acetato de etilo. A solução de acetato de etilo combinada foi lavada com água cinco vezes, seca sobre Na2SC>4 e concentrada para produzir o produto 2-metil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-pirazol-1-il]propiionato de metilo (4,776 g, 63% rendimento). A uma solução de 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-iodo-piridin-2-ilamina (6,363 g, 14,901 mmol) e 2-metil-2-[4-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-pirazol-l-il]propiionato de metilo (4,6 g, 15,64 mmol) em DME (27 mL) adicionou-se uma solução de CsF (6,79 g, 44,7 mmol) e em água (9,3 mL). A mistura reaccional foi desgaseifiçada 3 vezes com n2. Adicionou-se Pd(dppf)CH2CI2 e a mistura reaccional foi desgaseifiçada 3 vezes com N2. A reacção foi aquecida a 120° C em microondas (adicionou-se posteriormente mais Pd a intervalos de 30 minutos até a reacção estar completa). Adicionou-se água e a reacção foi extraída com EtOAc, seca sobre Na2SC>4 e concentrada para render 2-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)- etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-l-il)-2-metil-propionato de metilo. O produto bruto foi purificado por cromatografia em coluna de gel de sílica com um gradiente de 25%-50% de EtOAc/hexanos para se obter 2-(4-{ 6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-l-il)- 128 2- metil-propionato de metilo (1,46 g, 21 % rendimento) com um R, 0,11 (50% EtOAc/hexanos). A uma solução do metiléster (2,92 g, 6,25 mmol) em MeOH (31 mL) adicionou-se uma solução de LiOH (450 mg, 18,76 mmol) em água (6,25 mL). A reacção foi aquecida a 60° C até LCMS revelar uma hidrólise completa (cerca de 45 minutos). O MeOH foi removido sob vácuo e adicionou-se MeOH (2,5 mL) e água (1 mL) . O pH foi ajustado a 5 com HC1 IN, tendo o produto precipitado. O produto ácido 2-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1-il)-2-metilpropiónico foi obtido após filtração (2,825 g quant. ) . A uma solução de ácido 2-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro- 3- fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-l-il)-2- metilpropiónico (1,00 g, 2,20 mmol) em DMF (5,5 mL) adicionou-se HOBT (300 mg, 2,20 mmol), EDC (633 mg, 3,30 mmol) e N/N-dimetil-propane-1,3-diamine (225 mg, 2,20 mmol) . A reacção foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. A reacção foi depois purificada por HPLC prep C-18 de fase inversa, eluindo com acetonitrilo/água com ácido acético a 0,1% para render 2-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]- piridin-3-il}-pirazol-l-il)N-(3-dimetilamino-propil)-isobutiramida (170 mg, 14% rendimento).
Procedimento geral 43 utilizando 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(3-metil-pirazol-l-il)-piridin-2-ilamina 129
A uma solução agitada de 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-iodo-piridin-2-ilamina (100 mg, 023 mg) em 3-metil-lH-pirazol (59 mg, 0,70 mmol) em DMSO(l mL foi adicionado K3P04 101 mg, 0,47 mmol), dodecano (0,015 mL, 0,05 mmol), ciclo-hexanodiamina (0,009 mL, 0,07 mmol) e dodecano (0,015 mL, 0,05 mmol), ciclo-hexilamina (0,009 mL, 0,07 mmol) e iodeto de cobre (Cul) (14 mg, 0,07 mmol) . A solução foi borbulhada com azoto durante 5 minutos, depois foi irradiada com microondas a 150° C, durante 2 horas, LCMS verificou se a reacção estava completa, a mistura foi purificada por HPLC prep para deixar 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(3-metil-pirazol-l-il)piridin-2-ilamina (30 mg), 34,2% rendimento
Procedimento geral 44
23 25 130 2,5-dibromopiridina (1 eq. molar) foi dissolvido em tolueno anidro (0,085 M) e arrefecido a -78° C. Adicionou-se lentamente n-BuLi (1,2 eq. molar) durante 5 minutos e depois deixou-se agitar a mistura resultante a -18° C. Passadas 2 h, adicionou-se R.,COR2 (1,3 eq molar) e manteve-se a solução a -18° C. Após 1 h, adicionou-se NH4C1 aquoso saturado e aqueceu-se a solução à temperatura ambiente. O produto foi extraído com EtOAc (3x) e os extractos orgânicos foram combinados, secos (Na2S04) , concentrados e purificados por cromatografia em coluna (EtOAc 10%/hexanos - EtOAc 100%) para produzir o produto bruto. Foi aplicado directamentete no Procedimento geral 27 para produzir 25.
Procedimento geral 45
A uma solução de 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]piridin-2-ilamina (1,8 g, 6,04 mmol), cianeto de zinco 98% (2,07 g, 12,07 mmol) e 1,1'-bis(difenilfosfino)-ferroceno, 97% (0,4 g, 0,712 mmol) em DMF (48 mL) adicionou-se complexo de [1,1'-bis(difenilfosfino)-ferroceno]dicloropaládio (II) com diclorometano (1:1) (0,25 g, 0,30 mmol). A mistura reaccional foi aquecida a 150° C de um dia para o outro em atmosfera de azoto. A reacção foi diluída com EtOAc (50 mL) , lavada com 4:1:4 NH4CI saturado/28% NH4OH/H2O (2 x 28 mL) , seca sobre Na2S04. A mistura em bruto foi purificada em coluna de gel de sílica, eluindo com um gradiente linear de 25%-50% (EtOAc/hexanos) 131 para proporcionar 2-[1-(2-amino-piridin-3-iloxi)-etil]-3-cloro-4-dimetilamino-benzonitrilo sob a forma de um sólido amarelo (37% rendimento) e 2-[1-(2-amino-piridin-3-iloxi)-etil]-4-dimetilamino-isoftalonitrilo.-
Procedimento geral 46
O
0rv-^Ol-BU
Sr^NH _K0H> K?C°3 Bf-AN^Y01^
Bu4NBr N=^ O
DCM A mistura de 4-bromo-imidazole (995 mg, 6,77 mmol), hidróxido de potássio (380 mg, 6,77 mmol), carbonato de potássio (936 mg, 6,77 mmol) e brometo de tetra-n-butil-amónio (109 mg, 0,339 mmol) em diclorometano (7 mL) adicionou-se bromoacetato de terc-butilo (0,50 mL, 3,4 mmol) . Após agitação de um dia para o outro a reacção foi filtrada. O filtrado foi seco sobre sulfato de sódio, filtrado e depois concentrado por evaporação rotativa. O residuo foi purificado em cromatografia em gel de silica utilizando eluição gradiente de diclorometano, acetato de etilo para produzir (4-bromo-imidazol-l-il)acetato de terc-butilo (696 mg, 79%).
Procedimento geral 47 132
Uma solução 4 M de ácido clorídrico em dioxano (0,22 mL, 0,89 mmol) foi adicionada a uma solução de (4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-imidazol-l-il-acetato de terc butilo (86 mg, 0,18 mmol) em diclorometano (2 mL). Após agitação durante dois dias, a reacção foi concentrada por evaporação rotativa e o resíduo foi dissolvido numa quantidade mínima de metanol. Esta solução foi adicionada gota a gota a éter e a mistura resultante foi deixada repousar de um dia para o outro. A mistura foi filtrada e o precipitado foi lavado com éter e seco ao ar para produzir ácido (4-{6-amino-5-[l-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-imidazol-l-il-acético (83 mg, 93%).
Procedimento geral 48
Adicionou-se isoxazol (0,64 mL, 10 mmol) a uma solução de N-iodosiccinimida (2,3 g, 10 mmol) em ácido trifluoroacético
133
Uma mistura de 4-bromo-imidazole (217 mg, 1,48 mmol) e carbonato de césio (875 mg, 2,69 mmol) em dimetilformamida (5 mL) foi agitada durante 30 minutos. Cloridrato do 4—(2— cloroetil)-morfolina (250 mg, 1,34 mmol) foi adicionado e a mistura foi aquecida a 50° C. Após aquecimento de um dia para o outro a reacção foi concentrada por evaporação rotativa. O resíduo foi suspenso numa mistura de diclorometano e metanol e filtrado. O filtrado foi concentrado por evaporação rotativa. O resíduo foi purificado em cromatografia em gel de sílica utilizando eluição gradiente de diclorometano, metanol para produzir 4-[2-(4-bromo-imidazol-l-il)etil]-morfolina (148 mg, 42%).
Procedimento geral 49 N-0
NIS
TFA
Adicionou-se isoxazol (0,64 mL, 10 mmol) a uma solução de N-iodosiccinimida (2,3 g, 10 mmol) em ácido trifluoroacético (20 mL) . Após agitação de um dia para o outro, adicionaram-se água (50 mL) , hexanos (50 mL) e bissulfureto de sódio à reacção. As fases foram separadas e a fase orgânica foi seca sobre Na2SC>4, filtrada e concentrada por evaporação rotativa para produzir 4-iodo-isoxazol (218 mg, 11%).
Procedimento geral 50 134
Adicionou-se ácido trifluoroacético (5 mL) a uma solução de 6'-bromo-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-[3,3'] bipiridinil-6-il-bis-(tert-butoxicarbonil)-amina (1,3 g, 2,0 mmol) em diclorometano (15 mL). Passaadas 3 horas, adicionaram-se porções iguais de água e bicarbonato de sódio aquoso saturado. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraida com diclorometano. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4 e concentradas por evaporação rotativa para produzir 6'-bromo-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-[3,3']bipiridinil-6-ilamina (968 mg, 106%).
Colocou-se num tubo 6'-bromo-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-[3,3']bipiridinil-6-ilamina (92 mg, 0,20 mmol) e 4-pirrolidin-l-il-piperidina (0,62 g, 4,0 mmol) e N-metilpirrolidinona (0,8 mL). O tubo foi selado e a mistura foi aquecida a 80 °C de um dia para o outro. A temperatura aumentou até 100° C durante 5,5 horas e terminou o aquecimento. A reacção foi dividida por acetato de etilo e água. As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraida com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre MgS04 e concentradas por evaporação rotativa. O resíduo foi purificado em 135 cromatografia em gel de sílica utilizando eluição gradiente de diclorometano, metanol, hidróxido de amónio para produzir 5"-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-4- pirrolidin-l-il-3,4,5,6-tetrahidro-2H-[1,2';5',3"]terpiridin-6"-ilamina (53 mg, 50%).
Procedimento geral 51
Adicionou-se hidreto de sódio (56 mg, 2,3 mmol) a uma adicionou-se de piperidin-4-ol (214 mg, 2,11 mmol) em DMSO (8 mL) . Após agitação durante 30 minutos, adicionou-se 2,5-dibromopiridina. Após agitação durante 24 horas, adicionou-se hidreto de sódio (56 mg, 2,3 mmol). Após agitação durante mais 24 horas, a reacção foi dividida por acetato de etilo e água. As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre MgSC>4 e concentradas por evaporação rotativa. O resíduo foi purificado em cromatografia em gel de sílica utilizando eluição gradiente de diclorometano, metanol, hidróxido de amónio para produzir 5-bromo-2-(piperidin-4-iloxi)-piridina (316 mg, 58%) .
Procedimento geral 52 136 Br
Br
DIPEA NMP
Br
Colocou-se num tubo 2,5-dibromopiridina (0,24 g, 1,0 mmol) e 4-amino-piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (0,22 g, 1,1 mmol) diisopropiletilamina (0,19 mL, 1,1 mmol) e N-metilpirrolidinona (1,8 mL). O tubo foi selado e a mistura foi aquecida a 80 °C de um dia para o outro. A temperatura aumentou até 120° C e manteve-se o aquecimento de um dia para o outro. A reacção foi dividida por acetato de etilo e água. As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre MgS04 e concentradas por evaporação rotativa. O resíduo foi purificado em cromatografia em gel de sílica utilizando eluição gradiente de acetato de etilo e haxanos para produzir 4-(5-bromo-piridin-2-ilamino)-piperidin-l-acetato de terc-butilo (36 mg, 10%).
Procedimento geral 53
F CH, ''O
137 4-(4 —{6-amino-5—[1-(2,6-dicloro-3-etoxi-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-benzoil)-piperazina-l-carboxilato de terc-butilo A 4 mL de DMSO adicionou-se 0,124 ml de etanol seguido de 32 mg de NaH. Após agitação durante 30 minutos adicionaram-se 250 mg de 250 mg de 4-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-etoxi-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-benzoil)-piperazina-l-carboxilato de terc-butilo e a reacção foi aquecida a 40° C. Passadas três horas, a reacção foi arrefecida e vertida em água para precipitar. Após neutralização a pH 6, isolaram-se 200 mg de um sólido castanho-amarelado, 77%.
Procedimento geral 54 OMe
(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-hidroxi-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-fenil)-piperazin-l-il-metanona: A 140 mg de (4-[4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-(2,4,6-trimetoxi-benziloxi)-fenil]-etoxi}-piridin-3-il)-benzoil]piperazina-1-)-carboxilato de terc butilo (do procedimento geral 53) adicionou-se 1 mL de TFA, a solução tornou-se avermelhada imediatametne seguido da adição de 100 pL de trietilsilano 3 segundo depois. A solução tornou-se amarela. Após agitação durante quatro horas, adicionaram-se 5 mL de tolueno e o solvente foi removido sob vácuo Cromatografia com MeOH 10%/CH2C12 a 0,5% até NH4OH/9,5 até MeOH 9%/CH2Cl2 90 % conduziu a 65 mg de um sólido branco, 62 % rendimento. 138
Procedimento geral 55
«1» 2-(4-bromo-2-metoxifenoxi)etanol (8a): Adicionou-se carbonato de potássio (1,4 g, 10 mmol) a uma solução de carbonato de etileno (1,8 g, 20 mmol) e 4-bromo-2-metoxifenol (1,05 g, 5 mmol) em 5 mL de tolueno em atmosfera inerte. A reacção foi aquecida a 115 °C durante 12 h. Adicionaram-se água (50 mL) e acetato de etilo (2 x 100 mL) à mistura reaccional para agitação. As camadas orgânicas foram combinadas, secas, filtradas e evaporadas para se obter um resíduo oleoso amarelo. O resíduo foi purificado por cromatograf ia flash (eluição com 40->-45%
EtOAc em hexanos) para se obter o composto 8a sob a forma de um óleo castanho-amarelado claro (1 g; 4,13 mmol; 82,6% rendimento): MS (APCI) (M+H)+ 248. ΧΗ NMR (400 MHz, clorofórmio-D) δ ppm 2,83 (t, J= 6,3 Hz, 1 H) 3,84 (s, 3H) 3,89 - 4,01 (m, 2 H) 4,03 - 4,13 (m, 2 H) 6,78 (d, J=8,3
Hz, 1H) 6,99 (d, 1 H) 7,02 (d, 1 H) , 139 4-bromo-l-(2-cloroetoxi)-2-metoxibenzeno (8b): Cloreto de tionilo (0,3 mL) foi adicionado à solução do composto 1 em 1 mL de piridina em banho de gelo. A reacção foi agitada em banho de gelo durante 10 minutos, depois foi aquecida a 100° C duranet 2 h. A reacção é arrefecida à temperatura ambiente e neutralizada HC1 diluído (1M). Adicionou-se CH2CI2 (2 x 100 mL) para extrair a solução aquosa. As camadas orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4, depois foram concentradas sob vácuo. O resíduo foi purificado por cromatograf ia flash (eluição com 10-»Ί5%
EtOAc em hexanos) para se obter o composto 8b sob a forma de um óleo incolor (485 mg; 1,84 mmol; 50,3% rendimento). MS (APCI) (M+H)+ 264.½ NMR (400 MHz, clorofórmio-D) δ ppm 3,81 (t, J= 6,2 Hz, 2H) 3,85 (s, 3 H) 4,23 (t, J= 6,2 Hz, 2 H) 6,78 (d, J= 8,6 Hz, 1 H),
Composto 9: Os compostos da fórmula 9 podem ser formados segundo o seguinte procedimento de exemplo: Adiciona-se composto A18 (1,3 equivalente molar) a uma solução de haleto de arilo (0,51 mmol) em 7 mL de DME. A mistura foi purgada com azoto várias vezes e adicionou-se diclorobis(trifenilfosfino) paládium (II) (0,05 equivalente molar). É adicionado carbonato de sódio (3 equivalente molar) em 1,5 mL de H20 à mistura reaccional e a solução resultante é aquecida a 85 0 C durante 12 h. Adiciona-se água (20 mL) à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc (50 mL x 2) para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso castanho-escuro. O resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo 140 CH3OH, CH2CI2, EtOAc e hexanos) para produzir o produto desejado, composto 9.
Composto 10: Os compostos da fórmula 10 podem ser formados segundo o seguinte procedimento de exemplo: Adiciona-se amina (7 equivalente molar) a uma solução do composto 9 (0,17 mmol) em 3 mL de 2-metoxietanol. A solução resultante é aquecida a 85° C durante 12 h. Adiciona-se água (20 mL) à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc (50 mL x 2) para extrair à solução aquosa. A camada EtOAc é seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso castanho-claro. O resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo CH3OH, CH2CI2, EtOAc e hexanos) para produzir o produto desejado, composto 10.
Procedimento geral 56
13
Composto 14: Os compostos da fórmula 14 podem ser formados segundo o seguinte procedimento de exemplo: Adiciona-se hexametildisilazida de lítio (1,2 equivalente molar, 1M em THF) a uma solução de álcool (1 mmol) em 2 mL de THF. A mistura foi agitada à temperatura ambiente em atmosfera de azoto durante 30 minutos e depois adicionou-se 5-bromo-2-cloropirimidinea (1 equivalente molar). A solução 141 resultante é aquecida a 75 ° C durante 12 h. Adiciona-se água (20 mL) à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc (50 mL x 2) para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso. O resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo EtOAc em hexanos) para produzir o produto desejado, composto 14.
Composto 11: Adiciona-se composto A18 (1,3 equivalente molar) a uma solução de 5-bromo-2-cloropirimidina ou composto 14 (1 mmol) em 24 mL de DME. A mistura foi purgada com azoto várias vezes e adicionou-se diclorobis(trifenilfosfino) paládium (II) (0,05 equivalente molar). É adicionado carbonato de sódio (3 equivalente molar) em 3 mL de H20 à mistura reaccional e a solução resultante é aquecida a 85° C durante 12 h. Adiciona-se água (50 mL) à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc (100 mL x 2) para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso castanho-escuro. O resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo 40->-55% EtOAc em hexanos) para produzir o composto 11.
Compostos 12: Adiciona-se amina (2 equivalente molar) a uma solução do composto 11 em 3 mL de n-butanol. A mistura reaccional é irradiada com microondas a 120° C durante 30 min. A mistura resultante é vertida numa mistura de H20 e EtOAc (100 mL; v:v 1:1). A camada orgânica é seca, filtrada e evaporada para produzir um resíduo oleoso castanho-claro. O resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica 142 (eluindo CH3OH, CH2C12, EtOAc e hexanos) para produzir o produto desejado, composto 12.
Composto 13: Adiciona-se ácido (16 equivalente molar) ao composto 12 (0,14 mmol) à temperatura ambiente. A solução resultante é agitada durante 12 horas à temperatura ambiente ou é aquecida a 60° C durante 12 h. A mistura reaccional é evaporada e o resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo CH3OH, EtOAc e CH2C12) para produzir o produto de amida desejado, composto 13, sob a forma de um sólido branco a amarelado.
Procedimento geral 57
Compostos 15: Hidreto de sódio (1,3 equivalente molar) e RX (1,1 equivalente molar) foram adicionados a uma solução de 2-amino-bromopiridina (0,84 mmol) em 3 mL de DMF. A mistura reaccional é irradiada com microondas a 100° C durante 20 min. A mistura resultante é vertida numa mistura de H20 e EtOAc (100 mL; v:v 1:1). A camada orgânica é seca, filtrada e evaporada para produzir um resíduo oleoso castanho-claro. O resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo CH3OH, CH2CI2, EtOAc e hexanos) para produzir o produto desejado, composto 15. 143
Composto 16: Adiciona-se composto A18 (1,3 equivalente molar) a uma solução de composto 15 (0,25 mmol) em 5 mL de DME. A mistura foi purgada com azoto várias vezes e adicionou-se diclorobis(trifenilfosfino) paládium (II) (0,05 equivalente molar). É adicionado carbonato de sódio (3 equivalente molar) em 0,8 mL de H20 à mistura reaccional e a solução resultante é aquecida a 85° C durante 12 h. Adiciona-se água (50 mL) à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc (100 mL x 2) para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso castanho-escuro. O resíduo é purificado em cromatografia flash (eluindo CH3OH, CH2C12, EtOAc e hexanos) para produzir o produto desejado, composto 16.
Composto 17: Adiciona-se ácido (16 equivalente molar) ao composto 16 (0,114 mmol) à temperatura ambiente. A solução resultante é agitada durante 12 horas à temperatura ambiente ou é aquecida a 60° C durante 12 h. A mistura reaccional é evaporada e o resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo CH3OH, EtOAc e CH2C12) para produzir o produto de amida desejado, composto 17, sob a forma de um sólido branco a amarelado.
Procedimento geral 58 144
Acido 1-(t-butoxicarbonil)azetidina-3-carboxílico (1-1)(AXL016917, 1000 mg, 4,97 mmol) foi dissolvido em MeOH (5 mL)/Tolueno (20 mL) e depois arrefecido a 0o C. TMSCHNN (trimetilsilildiazometano) (7,45 mmol) foi depois adicionado gota a gota ao longo de 15 minutos, observando-se formação de bolhas. A cor começou a ficar transparente e a tornar-se lentamente amarela. A solução foi agitada durante 10 minutos a 0° C e depois foi aquecida à temperatura ambiente durante 30 minutos. A solução foi depois concentrada e bombeada para remover tolueno, para render 1,055 g de 1-t-butil 3-metil azetidina-1,3-dicarboxilato (1-2), que foi aplicado directamente na fase seguinte sem ser sujeito a purificação (99% de rendimento bruto). l-terc-butilo-3-metil azetidina-1,3-dicarboxilato (1.055 mg, 4,90 mmol) foi dissolvido em THF (17 mL) e 145 depois foi arrefecido a 0 °C. MeOH (0,397 mL, 9,80 mmol) e LiBH4 (14,7 mmol) foram adicionados sequencialmente. A reacção foi aquecida à temperatura ambiente durante 3 h. Depois adicionaram-se tartarato de potássio e sódio aquoso a 10% tetra-hidratado (sal de Rochelle) e EtOAc (30 mL) e a solução foi agitada à temperatura ambiente durante 30 minutos. A camada orgânica foi separada e depois seca (Na2SC>4) e concentrada para produzir 674 mg de t-butilo 3-(hidroximetil)azetidina-l-carboxilato (1-3) sob a forma de um produto bruto (óleo transparente). O produto foi utilizado na etapa seguinte sem ser sujeito a purificação. t-butilo 3-(hidroximetil)azetidina-l-carboxilato (674 mg, 3,60 mmol) foi dissolvido em CH2CI2 (13 mL, 0,25 M) e depois EtsN (1,0 mL, 7,20 mmol), DMAP (44 mg, 0,360 mmol) e foram adicionados sequencialmente cloreto de metanossulfonilo (0,31 mL, 3,96 mmol) a 0o , sendo a adição de MsCl feita lentamente. A reacção foi aquecida à ta no espaço de 1 h. Passadas 15 h, adicionou-se NaHC03 aquoso saturado (50 mL) e depois o produto foi extraido com CH2C12 (2 x 50 mL) e os extractos orgânicos combinados foram lavados com salmoura (50 mL), secos (Na2S04), concentrados e purificados por cromatografia flash (Biotage Horizon -10% EtOAc/hexanos -100% EtOAc) para produzir 962 mg de (1-4) sob a forma de um óleo (quantitativo).
Combinou-se NaH (95 %, 96 mg, 3,99 mmol) em DMF (10 mL) em N2 à ta. Adicionou-se depois 4-bromopirazol (533 mg, 3,63 mmol) e a mistura foi agitada à ta. Passados 30 minutos adicionou-se (1-4) e a solução foi aquecida a 95° C. Após 2 h, adicionou-se NH4C1 aquoso saturado (50 mL) e depois EtOAc (50 mL). O extracto orgânico foi seco (Na2S04> e concentrado e depois foi passado através de um chumaço 146 curto de gel de sílica com EtOAc 50%/hexanos para render 846 mg de (1-5) em bruto, que foi aplicado directamente na etapa seguinte (74% de rendimento bruto). (1-5) (846 mg, 2,68 mmol) , (1-6) (815 mg, 3,21 mmol) , [1,1'-bis(difenilfosfino)-ferroceno)dicloropaládio (108 mg, 0,133 mmol) e KOAc (893 mg, 9,10 mmol) foram combinados em DMSO (10 mL, purgado com N2 durante 10 minutos) e depois a solução foi aquecida a 80° C. Após 16 h, a solução foi filtrada através de celite e depois adicionou-se H20 (50 mL) e EtOAc (50 mL) . A fase orgânica foi extraída e seca (Na2S04), concentrada e depois passada através de um tampão de sílica com EtOAc 50%/hexano. O solvente foi concentrado para produzir 1,22 g de (1-7) em bruto, utilizado directamente na etapa seguinte. O éster borónico (1-7) (4.144 mg, 11,4 mmol), (1-8) (2.890 mg, 7,60 mmol), diclorobis(trifenilfosfina) paládio (II) (534 mg, 0,760 mmol), DME (40 mL, desgaseif içado durante 30 minutos com N2) e Na2C03 IN (40 mL, desgaseifiçado durante 30 minutos com N2) doram combinados e aquecidos a 80° C. Passadas 16 h, a reacção foi arrefecida à ta e foi adicionado EtOAc (80 mL) . A solução foi filtrada através de celite e depois foi adicionada água (80 mL) . A camada orgânica foi separada, seca (Na2S04) e concentrada. O produto foi purificado por cromatografia flash para produzir 1.486 mg de (1-9) sob a forma de um sólido (36 %).
Preparou-se 1 grama de resina permutadora de iões DOWEX 50WX2-400 lavando com H20 (500 mL), 1:1 H20/ MeOH, MeOH (5X 250 mL) , CH2C12 (500 mL) e hexanos (500 mL) . A resina DOWEX foi então seca em estufa de vácuo a 40° C durante 1 dia. 147
Dissolveu-se (1-9) em MeOH e adicionou-se DOWEX (588 mg, 1,096 mmol) . A solução foi agitada à ta durante 2 h. A solução foi então filtrada e a resina foi lavada com MeOH (3 x 200 mL) e o liquido da lavagem foi eliminado. A resina foi então diluída com 3,5 M de NH3/MeOH e recolhida. A solução foi concentrada para produzir 374 mg de (1-10) sob a forma de um sólido de tipo goma (78%) .
Os compostos da fórmula 1 podem ser formados segundo os seguintes procedimentos de exemplo. 1 equivalente molar de (1-10) foi dissolvido em DMF ou CH2C12 e depois adicionou-se bas (3 equivalente molar) e/ou reagente de acoplagem (1,5 equivalente molar). Á solução adicionou-se X_R (1,1 equivalente molar), em que X é, por exemplo, Cl, Br, I, OMs, COCI, CO, COOH, etileno ou carbonato e R é um grupo desejado, tal como os apresentados nos exemplos apresentados ou grupos semelhantes. A solução resultante é agitada à ta durante 4 h. São adicionados H20 e EtOAc e a fase orgânica é extraída, seca (Na2S04> e concentrada. O produto bruto pode ser purificado por HPLC preparativa ou outros métodos bem conhecidos na técnica parap roduzir o produto (1-11).
Procedimento geral 59
148 OH
OH ò ϋ(52%)
(Boc)jO/EljN
HCI
EtOH OH " EljN/DMAP Boc CHjClj 11(52»)
MeSO£l
OMS 6 ρ*“
'i&X ui (85*) N BocnWÍ NH* 2ã
pdflDfpphjhcv NaiCOj/DME/8í°C
.R 3-Azetidinol (2-2): A mistura reaccional de sal HCI de N-benz-hidrilazetidin-3-ol (2,76 g, 10,0 mmol) com hidróxido de paládio, 20% de Pd (base seca) em C (400 mg) em 50 de MeOH foi hidrogenada a 55 psi durante 48 h. A mistura reaccional foi filtrada através de um chumaço de Celite foi bem lavado com Na2SC>4. O filtrado foi evaporado sob vácuo em banho de água à temperatura ambiente. O resíduo foi tratado com éter (3 x 30 mL) e o solvente foi decantado. O sólido foi seco ao ar para se obter 571 mg sal HCI do produto (2-2) sob a forma de um sólido branco (52% rendimento). ΧΗ NMR (400 MHz, DMSO-D6) δ ppm 3,33 (s, 1 H) 149 3,63 - 3,80 (m, 2 Η) 3,93 - 4,09 (m, 2 Η) 4,40 - 4,58 (m, 1 Η) 6,18 (d, J= 6,32 Hz, 1 H) . 3-hidroxi-azetidina-l-carboxilato de terc butilo (3-3): A uma solução agitada fria (0o C) de composto (2-2) (570 mg, 5,20 mmol) em 10 mL de EtOH adicionou-se Et3N (1,8 mL, 13,0 mmol) e di-terc-butildicarbonato (1,702 g, 7,38 mmol). A mistura resultante de solução transparente foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reaccional foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi difidido em porções por EtOAc (200 mL) e solução de ácido cítrico 0,5 N (30 mL; salmoura (30 mL) . A camada orgânica foi seca (Na2S04) , depois foi concentrada sob vácuo para se obter 899 mg (2-3) sob a forma de um óleo transparente (52%). XH NMR (400 MHz, clorofórmio-D) δ ppm 1,42 (s, 9 H) 3,78 (dd, J=9, 47, 4,42 Hz, 2 H) 4,13 (dd, J=9,35, 6,57 Hz, 2 H) 4,49 - 4,63 (m, 1 H) . 3-metanossulfoniloxi-azetidina-l-carboxilato de terc butilo (2-4): A uma solução do composto (2-3) (466 mg, 2,69 mmol) com Et3 (0,75 mL, 5,38 mmol) e 4-(dimetilamino)-piridina (33 mg, 0,2 69 mmol) em 10 mL de CH2CI2 a 0 o C adicionou-se cloreto de metanossulfonilo (0,25 mL, 3,23 mmol). A mistura resultante de solução castanha foi agitada a 0o C até à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reaccional foi temperada com NaHC03, depois foi dividida pro CH2C12 (200 ml) e solução de NaHC03 saturada. A camada orgânica foi seca (Na2S04>, filtrada através de chumaço de gel de sílica eluída com hexano. EtOAc/l:l; o filtrado foi concentrado sob vácuo para produzir 614 mg (2-4) sob a forma de um óleo amarelo (91% rendimento) . NMR (400 MHz, clorofórmio-D) δ ppm 1,43 (s, 9 H) 3,05 (s, 3 H) 150 4,08 (dd, J=10,36, 4,29 Hz, 2 H) 4,26 (dd, J=10,36, 6,82
Hz, 2 H) 5,11 -5,26 (m, 1 H). 1-(3-azetidina-l-carboxilato de terc butilo)-4-bromoprazole (2-6): Um tubo de 5 mL carregado com composto (2-4) (304 mg, 1,21 mmol); 4-bromopirazole (2-5, 178 mg, 1,21 mmol) e NaH 60% em óleo mineral (73 mg, 1,82 mmol) com 2 mL de DMF. A mistura resultante foi sujeita a microondas a 110° C durante 30 minutos. A mistura reaccional foi dividida por EtOAc (200 mL) e solução de NaHCCb saturado (2 x 50 mL) , salmoura (50 mL) . A camada orgânica foi seca (Na2SC>4) , depois foi concentrada sob vácuo para se obter 360 mg (2-6) sob a forma de um óleo amarelo (98%) . XH NMR (400 MHz, DMSO-D6) δ ppm 1,36- 1,43 (m, 9 H) 4,08 (s, 2 H) 4,18 - 4,31 (m, 2 H) 5,12 - 5,22 (m, 1 H) 7,67 (s, 1 H) 8, 14 (s, 1 H) .
terc-butilo 3-[4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3-dioxoborolan-2-il)-lH-pirazol-l-il]azefidina-l-carboxilato (2-8): A mistura reaccional do composto (2-6) (225 mg, 0,74 mmol) e bis (pinacolato) diboro (2-7, 227 mg, 0,89 mmol) com KOAc (247 mg, 2,52 mmol) em 3 mL de DMSO foi purgado com N2 durante 15 minutos, depois adicionou-se PdCl2(dppf)2CH2C12 (30 mg, 2,52 mmol). A mistura resultante foi agitada a 80° C em N2 de um dia para o outro. Depois de arrefecer à temperatura ambiente, a mistura foi filtrada através de um chumaço de Celite foi bem lavada com EtOAc. O filtrado foi extraído com H20 (2 x 50 mL) , salmoura (50 mL) . A camada orgânica foi seca (Na2S04) e concentrada sob vácuo. O resíduo foi filtrado através de chumaço de gel de sílica eluído com hexano:EtOAc/3:2. O filtrado foi concentrado sob vácuo para produzir 250 mg (2-8) sob a forma de um óleo transparente (91% rendimento). 2Η NMR (400 MHz, 151 clorofórmio-D) δ ppm 1,18-1,27 (m, 9 H) 1,28 - 1,34 (m, 6 H) 1,41 -1,49 (m, 6 H) 4,22 - 4,33 (m, 2 H) 4,36 (t, J=8,59 Hz, 2 H) 4,98 - 5,13 (m, 1 H) 7,83 (s, 2 H). 3-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-piridin-3-il}-lH-pirazol-l-il)azetidina-l-carboxilato de terc-butilo (2-10) A mistura reaccional do composto (2-6) (459 mg, 1,31 mmol) e 3-[1-(2,6-dicloro-3- fluorofenil)etoxi]-5-iodopiridin-2-amina (2-9) (374 mg, 0,88 mmol) em 13 mL de éter dimetilico de etilenoglicol anidro (DME) purgado com N2 durante 15 minutos, depois adicionou-se Pd(II) (PPh3)2Cl2 (46 mg, 0,07 mmol) e prossegiu-se a purga durante mais 15 minutos. Juntou-se mais solução Na2C03 1,0 N (3,9 mL; 3,9 mmol) após a purga com N2 durante 15 minutos. A mistura resultante foi agitada a 85° C em N2 de um dia para o outro. A mistura reaccional foi filtrada através de um chumaço de Celite foi bem lavado com Na2SC>4. O filtrado foi concentrado sob vácuo. O resíduo foi dividido por EtOAc (200 mL) e solução de NaHC03 saturado (2 x 50 mL) , salmoura (50 mL) . A camada orgânica foi seca (Na2S04) e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado com o sistema Biotage (25 M, 100 % CH2C12 a 90 % CH2C12 com 10% MeOH) para recolher a fracção desejada para produzir 421 mg de (2-10) sob a forma de uma gordura castanha (92% rendimento). 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-D) δ ppm 1, 17 -1,26 (m, 9 H) 1,80 - 1 ,87 (m, 3 H) 4, 04 - 4,18 (m ., 2 H) 4 ,20 - 4,33 (m, 2 H) 4, 34 - 4 ,41 (m, , 1 H) 4, 79 (s. 2 H) 5, 02 (d, J= = 7, 58 Hz, 1 H) 7, 04 (t, J= 8, 46 Hz, , 1 H) 7, 33 - 7,4 1 (m, 1H) 7,44 - 7, 52 (m , 1 H) 7,53 - - 7 , 58 (m, 1 H) 7, 59 - 7,65 (m, 1 H) 7 ,72 - 7, 78 (m, 1 H) ; LCMS calc. C24H26C12FN5C>3 (M+H) 523, encontrado 523. 152 5-(1-azetidin-3-il-lH-pirazol-4-il)-3-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi] iridin-2-amina (2-11): Uma mistura reaccional do composto (2-10) (421 mg, 0,81 mmol) com HC1 4,0 M em dioxano (2,0 mL; 8,1 mmol) em 5 mL de CH2CI2 foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura reaccional foi concentrada sob vácuo. O resíduo foi tratado com EtOAc. O sólido precipitado foi separado por filtração e bem lavado com EtOAc, hexano, depois foi seco sob vácuo para produzir 275 mg de (2-11) sob a forma de um sólido de cor de areia do sal HC1 (81 % rendimento). 1H NMR (400 MHz, DMSO-De) 8 ppm 1,79 - 1,89 (m, 3 H) 3,56 (s, 1 H) 4,35 (s, 4 H) 5,40 (s, 1 H) 6,23 (d, J= 6,57 Hz, 2 H) 7,09 (s, 1 H) 7,40 - 7,54 (m, 1 H) 7,59 (dd, J=8,84, 5,05 Hz, 1 H) 7,73 -7,83 (m, 1 H) 7,86 (s, 1 H) 8,12 (s, 1 H) 9,20 (s, 1 H) . LCMS calc. C19H18CI2FN5O (M+H) 423, encontrado 423.
Os compostos da fórmula 2-12 podem ser preparados segundo o seguinte procedimento de exemplo: A mistura reaccional do composto (2-11) (1,0 eq.) com Et3N (2,0 eq.) em 2,0 mL de DMF à temperatura ambiente adiciona-se brometo de alquilo (1,1 eq.) . A mistura resultante foi agitada em N2 à temperatura ambiente, de um dia para o outro. A mistura reaccional foi dividida por EtOAc (200 mL) e solução de NaHC03 saturado (2 x 50 mL), salmoura (50 mL). A camada orgânica foi seca (Na2S04> e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado pelo sistema Dionex (5% a 95% MeCN:H20 p tampão 0,1% HOAc) para recolher a fracção desejada, para produzir (2-12).
Em alternativa, os compostos da fórmula 2-12 podem ser preparados segundo o seguinte procedimento de exemplo: A uma mistura reaccional de alquilamina (1,0 eq.) com iPr2EtN (diisopropiletilamina) (3,0 eq.) em 2,0 mL de DMF adiciona- 153 se HATU (1,5 eq.). Após agitação durante 30 minutos, adicionou-se o composto (2-11) (1,0 eq.) . A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reaccional foi dividida por EtOAc (200 mL) e solução de NaHC03 saturado (2 x 50 mL), salmoura (50 mL) . A camada orgânica foi seca (Na2SC>4) e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado pelo sistema Dionex (5% a 95% MeCN:H20 p 0,1% HOAc) para recolher o produto desejado, para produzir (2-12).
Procedimento geral 60:
OH N— II J k^NBoc o'B'o H(89%)
terc-butilo l-oxa-6-azaspiro[2.5]octano-6-carboxilato (3-2): Uma solução de metileno de dimetilsulfoxónio foi preparada em N2 a partir de dispersão NaH 60% em óleo mineral (440 mg, 11,0 mmol) e iodeto de trimetilsulfoxónio (2,421 g; 11,0 mmol) em 5 ml de DMSO anidro. Outra solução de l-Boc-4-oxo-l-piperidincarboxilato (3-1, 1,993 g; 10,0 154 mmol) em 5 mL de DMSO foi adicionada gota a gota. A mistura resultante foi agitada a 55° C durante 6 horas. A mistura reaccional arrefecida foi vertida em H20 gelada e extraída com EtOAc (2 x 200 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com H20 (50 mL) , salmoura (50 mL) e depois secas (Na2S04) concentradas sob vácuo para render 1,4791 g de (3-2) sob a forma de um sólido amarelo (69% rendimento). XH NMR (400 MHz, clorofórmio-D) δ ppm 1,37 - 1,52 (m, 11 H) 1,71 - 1,84 (m, 2 H) 2,63-2,72 (m, 2 H) 3,35 - 3,49 (m, 2 H) 3,62 - 3,78 (m, 2 H). terc-butilo 4-hidroxi-4-{[4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il)-lH-pirazol-l-il]metil}piperidina-l-carboxilato (3-4): Uma mistura reaccional do composto (3-2) (214 mg; 1,0 mmol) e 4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il)-lH-pirazol (3-3.194 mg; 1,0 mmol) com dispersão de NaH 60% em óleo mineral (60 mg, 1,5 mmol) em 3 mL de DMF foi agitada a 90° C durante 3 horas. A mistura reaccional foi dividida por EtOAc (200 mL) e solução de NaHC03 saturado (2 x 50 mL) , salmoura (50 mL) . A camada orgânica foi seca (Na2S04), depois foi concentrada sob vácuo para se obter 361 mg (3-4) sob a forma de uma gordura amarela (89% rendimento). 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-D) δ ppm 1,21 - 1,34 (m, 12 H) 1,39 - 1,50 (m, 9 H) 1,56 - 1,78 (m, 4 H) 3,14 (s, 2 H) 3,72 - 3,91 (m, J=32,34 Hz, 2 H)
4,05 (s, 2 H) 7,65 (s, 1 H) 7,80 (s, 1 H) 8,00 (s, H). LCMS calc. C20H34BN3O5 (M+H) 408, encontrado 408. Pureza HPLC 85%. 4-[(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-piridin-3-il}-lH-pirazol-l-il)metil]4-hidroxipiperidina-l-carboxilato de terc-butilo (3-6): Uma mistura reaccional do composto (3-4) (361 mg, 0,89 mmol) e 3-[1-(2,6-dicloro-3- 155 fluorofenil)etoxi]-5-iodopiridin-2-amina (3-5) (378 mg, 0,89 mmol) em 9,0 mL de éter dimetílico de etilenoglicol anidro (DME) foi purgada com N2 durante 15 minutos, depois adicionou-se Pd(II) (PPh3)2Cl2 (32 mg, 0,05 mmol) e prossegiu-se a purga durante mais 15 minutos. Juntou-se mais solução Na2CC>3 1,0 N (3,9 mL; 3,9 mmol) após a purga com N2 durante 15 minutos. A mistura resultante foi agitada a 85° C em N2 de um dia para o outro. A mistura reaccional foi filtrada através de um chumaço de Celite foi bem lavado com Na2SC>4. O filtrado foi concentrado sob vácuo. O resíduo foi dividido por EtOAc (200 mL) e solução de NaHC03 saturado (2 x 50 mL) , salmoura (50 mL) . A camada orgânica foi seca (Na2SC>4) e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado pelo sistema Dionex (25% a 95% MeCN:H20 p tampão 0,1% HOAc) para recolher a fracção desejada, para produzir 147 mg (3-6) sob a forma de um sólido branco (28% de rendimento) . XH NMR (400 MHz, DMSO-D6) δ ppm 1,34 - 1,39 (m, 9 H) 1,70 - 1,77 ( m, 2 H) 1,79 (d. J= 6,57 Hz, 3 H) co 0 (d, J=12, 63 Hz, 2 H) 3,62 (s, H) 4 ,03 (s, 2 H) 4,79 (s, 1 H) 5,66 (s, 2 H) 6,08 (d, J= 6,82 Hz, 1 H) 6,86 (d, J=l, 52 Hz, 1 H) 7,44 (t , J=8,72 Hz, 1 H) 7,51 - 7,58 (m, 2 H) 7 ,58 - 7,65 (m, 2 H) 7,73 (d, J= 1,52 Hz, 1 H) 7,78 (s, 1 H) . LCMS calc. C27H32C12FN504 (M+H) 581, encontrado 581.
Pureza HPLC 87%. 4-[(4 — {6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-piridin-3-il}-lH-pirazol-l-il)metil]piperidin-4-ol(3-7);
Uma mistura reaccional do composto (3-6) (145 mg, 0,25
mmol) com HC1 4,0 M em dioxano (2,0 mL; 8,1 mmol) em 5 mL de CH2C12 foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. A mistura reaccional foi concentrada sob vácuo. O 156 resíduo foi purificado pelo sistema Dionex (5% a 95% MeCN:H20 p tampão 0,1% HOAc) para recolher a fracção desejada, para produzir 76 mg (3-7) sob a forma de uma gordura amarela (63% de rendimento). 1H NMR (400 MHz, DMSO- d6: ) δ ppm 1 ,41 -1,55 (m, , 2 H) 1,59 -1, 71 (m, 2 H) 1, 81 (d, j= 6, 57 Hz, 3 H) 2,88 - 3,00 (m, 2 H) 3, 02 - 3, 14 (m , 2 H) 4, 08 (s , 2 H) 5,17 (s, 2 H) 6, 14 - 6, 27 (m, J= 6 ,57 Hz , 1 H) 7, 05 (s, 1 H) 7,40 - 7,49 (m, J= 8,72, 8,72 Hz r 1 H ) 7 ,51 - 7,60 (m, J=! 9,09, 4,80 Hz, 1 H) 7 , 63 (s, 1 H) 7 ,76 (s , 1 H) 7, 91 (s, 1 H) 8,51 (s, 1 H) 8, 81 (s, 1 H) . LCMS ca lc. C22H24CI2FN5O2 (M+H) 481, encontrado 481. Pureza HPLC 98%.
Anal. (C22H24CI2FN5O2x2.2HOAcx2.3H2O) C, Η, N.
Procedimento geral 61: •o"\ ch3
4-2
O
Br Q P~/-B-í\rÇ // Λ 0-CH3 4 3 (74%)
PdfdppfhChjClj KOAc/DMSO/BOt ο'βόΎί\ çi CH- N isih2
Pd(n)fpph3>2ay Na2CCtyDMEtt5°C (1) MeSOjCl EljN/DMAP CHjCI2 (2) NaH/DMF/ 90°C 4-4 <98%)
4^(91%) 4^7 (92%)
RRNH
HATU/EI3N DMF
157 4-8 2-[(4-bromo-lH-pirazol-l- il)metil]ciclopropanocarboxilato de etilo (4-3): A uma solução de reacção 2-(hidroximetil)ciclopropanocarboxilato de etilo (4-1) (577 mg; 4,0 mmol) com Et3 (1,1 mL, 8,0 mmol) e DMAP (49 mg, 0,4 mmol) em 12 mL de CH2CI2 a 0o C adicionou-se cloreto de metanossulfonilo (0,4 mL, 4,8 mmol). A mistura resultante de suspensão castanha foi agitada a 0o C até à temperatura ambiente, em N2, de um dia para o outro. A mistura reaccional foi temperada com NaHCCb, depois foi dividida pro CH2CI2 (200 ml) e solução de NaHCCb saturada; salmoura (50 mL). A camada orgânica foi seca (Na2S04), filtrada através de chumaço de gel de sílica eluída com hexano:EtOAc/1:1. O filtrado foi concentrado sob vácuo para produzir 880 mg de 2-
{[(metilsulfonil)oxi]metil]ciclopropanocarboxilato de etilo sob a forma de um óleo amarelo (99% rendimento) . 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-D) δ ppm 0,91 -1,02 (m, 1 H) 1,26 (q, J=6,99 Hz, 3 H) 1,29 - 1,36 (m, 1 H) 1,63 - 1,74 (m, 1 H) 1,79 - 1,92 (m, 1 H) 3,02 (s, 3 H) 3,99 - 4,24 (m, 4 H).
Formou-se uma mistura reaccional de 2-{[(metilsulfonil)oxi]metil]ciclopropanocarboxilato de etilo (880 mg, 4,0 mmol); 4-bromopirazole (42, 588 mg, 4,0 mmol) e NaH 60% em óleo mineral (240 mg, 6,0 mmol) com 3,0 mL de DMF. A mistura resultante foi agitada a 90° C em N2 durante 4 horas. A mistura reaccional foi dividida por EtOAc (200 mL) e solução de NaHCCb saturado (2 x 50 mL), salmoura (50 mL) . A camada orgânica foi seca (Na2SC>4) , depois foi concentrada sob vácuo para se obter 812 mg (4-3) sob a forma de um óleo amarelo (74%). XH NMR (400 MHz, 158 clorofórmio-D) δ ppm 0,85 (dd, J=7,96, 3,16 Hz, 1 H) 0,88 - 0,98 (m, 1 H) 1,18-1,29 (m, 3 H) 1,56 -1,71 (m, 1 H) 1,79 -1,94 (m, 1 H) 3, 96 - 4, 08 (m, 2 H) 4,07 - 4,17 (m, 2 H) 7,45 (d, J= 3,79 Hz, 2 H). LCMS calc. CioHi3BrN202 (M+H) 274, encontrado 274. Pureza HPLC 95%. 2-{[4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3-dioxoborolan-2-il)-1H-pirazol-l-il]metil]ciclopropanocarboxilato (4-4): A mistura reaccional do composto (4-3) (812 mg, 2,97 mmol) e bis (pinacolato) diboro (906 mg, 3,57mmol) com KOAc (991 mg, 10,10 mmol) em 10,0 mL de DMSO foi purgada com N2 durante 15 minutos, depois adicionou-se PdCl2 (dppf) 2CH2C12 (122 mg, 0,15 mmol) . A mistura resultante foi agitada a 80° C em N2 de um dia para o outro. Depois de arrefecer à temperatura ambiente, a mistura foi filtrada através de um chumaço de Celite foi bem lavada com EtOAc. O filtrado foi extraído com H20 (2 x 50 mL) , salmoura (50 mL) . A camada orgânica foi seca (Na2SC>4) e concentrada sob vácuo. O resíduo foi filtrado através de chumaço de gel de sílica eluído com hexano:EtOAc/3:1. O filtrado foi concentrado sob vácuo para produzir 945 mg (44) sob a forma de um óleo transparente (98% rendimento) . JH NMR (400 MHz, clorof órmio-D) δ ppm 0,85 (dd, J=7,83, 3,03 Hz, 1 H) 0,90 - 0,96 (m, 1 H) 1,20 -1,24 (m, 3 H) 1,29 - 1,34 (m, 12 H) 1,62 - 1,71 (m, 1 H) 1,84 - 1,97 (m, 1 H) 3,96 - 4,07 (m, 1 H) 4,06 - 4,14 (m, 2 H) 4,15 - 4,23 (m, J=14,27, 6, 44 Hz, 1 H) 7,73 (s, 1 H) 7,77 (s, 1 H). 2-[(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-piridin-3-il}-lH-pirazol-l-il)metil]ciclopropanocarboxilato (4-6): A mistura reaccional do composto (4-4) (643 mg, 2,01 159 mmol) e 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]-5- iodopiridin-2-amina (4-5) (572 mg, 1,34 mmol) em 20,0 mL de éter dimetílico de etilenoglicol anidro (DME) purgado com N2 durante 15 minutos, depois adicionou-se Pd(II)(PPh3)2CÍ2 (71 mg, 0,1 mmol) e prossegiu-se a purga durante mais 15 minutos. Juntou-se mais solução Na2CC>3 1,0 N (6,0 mL; 6,0 mmol) após a purga com N2 durante 15 minutos. A mistura resultante foi agitada a 85° C em N2 de um dia para o outro. A mistura reaccional foi filtrada através de um chumaço de Celite foi bem lavado com Na2SC>4. O filtrado foi concentrado sob vácuo. O resíduo foi dividido por EtOAc (200 mL) e solução de NaHC03 saturado (2 x 50 mL), salmoura (50 mL) . A camada orgânica foi seca (Na2SC>4) e concentrada sob vácuo. O resíduo foi purificado com o sistema Biotage (25 M, 100 % CH2CI2 100% a 90 % CH2C12:10% MeOH) para recolher a fracção desejada para produzir 600 mg de (4-6) sob a forma de uma gordura castanha (91% rendimento) . 'ή NMR (400 MHz, DMSO-D6) δ ppm 0,96 - 1,10 (m, 2 H) 1,15 (t, J=7,07 Hz, 2 H) 1,74 (s, 3 H) 1,79 (d, J=6,57 Hz, 3 H) 3,95 - T—1 (m, 4 H) 5, 66 (s, 2 H) 6,08 (d, J= 6,57 Hz, 1 H) 6, 88 (s, 1 H) 7,43 (t, J= 8, 72 Hz, 1 H) 7,49 - 7,62 (m, 2 H) 7,73 (s, 1 H) 7,88 (s f 1 H) . LCMS calc. C23H23CI2FN4O3 (M+H) 494, encontrado 494. Pureza HPLC 95%. Ácido 2-[(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-piridin-3-il}-lH-pirazol-1- il) metil]ciclopropanocarboxílico (4-7): A uma solução de reacção do composto (4-6) (377 mg, 0,76 mmol) em 5,0 mL de
MeOH à temperatura ambiente em N2 adicionou-se outra solução de NaOH 2,0 N (2) (1,5 mL, 3,04 mmol). A mistura resultante foi agitada a 80° C durante 3 horas. A mistura reaccional foi concentrada sob vácuo para remover a maior 160
parte de MeOH e acidificada com HC1 2M a pH 4,0. A mistura foi extraída co CH2C12 (2 x 200 mL) , as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura (50 mL) e depois secas (Na2SC>4) concentradas sob vácuo para render 324 mg de (4-7) sob a forma de um sólido amarelo (92% rendimento). XH NMR (400 MHz, DMSO-D6) δ ppm 0, 92 - 1,04 (m, 2 H) 1, 57 - 1,72 (m, 2 H) 1,76 - 1, 90 (m, 3 H) 3, 98 - 4, 18 (m, 2 H) 6, 46 (s, 2 H) 6,89 - 7,02 (m, 1 H) 7,29 - 7, 52 (m, 2 H) 7,52 - 7, 63 (m, 2 H) 7,73 (d, J= 1, 52 Hz, 1 H) 7 ,94 (s, 1 H) 12,19 (s, 1 H) . LCMS calc. C21H19CI2FN4O3 (M-H) 463, encontrado 463. Pureza HPLC 87%.. vííí-j Conformato:Espanoi(Espana, | ..........................................................::::::: internacional) 2-[(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-piridin-3-il}-lH-pirazol-l-il)metil]-N- metilciclopropanocarboxamida (4-8) (R = Me, R' = H) A uma ||:||:| Con formato: Espanoi (Espana, j internacional) | mistura reaccional (4-7) (1,0 eq.) com iPr2EtN (2,0 eq.) em 1.0 mL de DMF adiciona-se HATU (1,5 eq.).. Após agitação {con lormato: Espanol (Espana, ϊ • • • • • • • • • internacional) $ durante 30 minutos, adicionou-se alquilamina (1,1 eq.). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura reaccional foi dividida por
EtOAc (200 mL) e solução de NaIICOsaturado (2 x 50 mL) , ........................ salmoura (50 mL) . A camada orgânica foi seca (Na2S04) e concentrada sob vácuo. A amostra estava isenta de bases por divisão por EtOAc (200 mL) e solução de NaIICO saturado (2 x 50 mL) , salmoura (50 mL) . A camada orgânica foi seca (Na2S04) e concentrada sob vácuo. O resíduo foi tratado com 1.0 mL de H20 e liuofilizado para render (4-8).
Procedimento geral 62: 161
A uma solução de 5-bromo-3-[(R)-l-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina (12,83 g, 33,76 mmol) em DMF anidro (100 mL) adicionou-se di-terc-butilo-dicarbonato (21,25 g, 97,35 mmol) e 4-dimetilaminopiridina (0,793 g, 6,49 mmol). A reacção foi agitada à temperatura ambiente durante 18 horas em azoto. À mistura foi adicionada solução de NaHCCb saturada (300 mL) e extraída com EtOAc (3 x 250 mL) . Os extractos orgânicos combinados foram lavados água (5 x 100 mL) , NaHC03 sat. e salmoura, depois foram secos sobre Na2S04. Depois da filtração, evaporação e secagem em alto vácuo obteve-se 5-bromo-3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina 162 protegido com di-boc sob a forma de uma espuma sólida esbranquiçada (19,59 g, 100% rendimento). XH NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ 8.18 (d, 1H) , 7.83 (d, 1H) , 7.59 (dd, 1H) , 7.48 (t, 1H), 6.25 (q, 1H), 1.75 (d, 3H), 1.39 (s, 9H), 1.19 (s, 9H) . A uma solução de 5-bromo-3-[(R)-l-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina protegida com di-boc (19,58 g, 33,76 mmol) em DMSO (68 mL) adicionou-se acetato de potássio (11,26 g, 114,78 mmol) e 4-bis(pinacolato)diboro (10,29 g, 40,51 mmol). A mistura foi desgaseifiçada e carregada com azoto três vezes, depois adicionou-se Pd(dppf)CI2.CH2C12 (1,38 g, 1,69 mmol). A mistura foi desgaseifiçada e carregada com hidrogénio três vezes e depois agitada banho de óleo de 80° C, sob azoto, durante 12 h. A reacção foi arrefecida à temperatura ambiente, diluída com acetato de etilo (100 mL) e filtrada um chumaço de celite, o qual foi lavado com acetato de etilo. A solução de acetato de etilo combinada (700 mL) foi lavada com água (5 x 100 mL) , salmoura e depois foi seca sobre Na2SC>4. Depois da filtração e concentração, o resíduo foi purificado em coluna de gel de sílica, eluindo com
EtOAc/hexano (0%-50%) para se obter 3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridin-2-ilamina protegido com di-boc sob a forma de uma espuma sólida (20, 59 g, 97% rendimento) . 1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 5 8,20 (d, 1H) , 7,70 (d, 1H) , 7,63 (dd, 1H) , 7,47 (t, 1H) , 6,20 (q, 1H) , 1,73 (d, 3H), 1,50-1,13 (m, 30H). A uma solução de 3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridin-2-ilamina protegido com di-boc (20,34 g, 32,42 163 mmol) em CH2C12 (80 mL) adicionou-se uma solução de HC1 seco em dioxano (4N, 40,5, 162 mmol). A solução de reacção foi agitada em banho de óleo a 40° C durante 12 horas em azoto. A mistura reaccional foi arrefecida à temperatura ambiente, diluída com EtOAc (400 mL) , depois foi cuidadosamente mas rapidamente lavada com NaHCCb saturado até a camada de água estar básica (pH>8). A camada orgânica foi lavada com salmoura e seca sobre Na2SC>4. Depois da filtração, evaporação e secagem em alto vácuo obteve-se 3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-5-(4,4,5,5-tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridin-2-ilamina sob a forma de uma espuma sólida esbranquiçada (13,48 g, 97% rendimento). XH NMR (DMSO-d6, 400 MHz) 5 8,01 (d, 1H), 7,27 (dd, 1H) , 7,17 (d, 1H) , 7,03 (t, 1H) , 6,12 (q, 1H) , 5,08 (bs, 2H), 1,81 (d, 3H), 1,30 (s, 6H), 1,28 (s, 6H). A uma solução agitada de 3-[(R)-l-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-5-(4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridin-2-ilamina (4,2711 g, 10,0 mmol) e 4-(4-bromo-pirazol-l-il)-piperidina-lcarboxilato de terc-butilo (ver procedimento 11) (3,9628 g, 12,0 mmol) em DME (40 mL) adicionou-se uma solução de Na2CC>3 (3, 1787 g, 30,0 mmol) e em água (10 mL). A solução foi desgaseifiçada e carregada com azoto três vezes. À solução adicionou-se Pd(PPh3)2Cl2 (351 mg, 0,50 mmol). A solução de reacção foi desgaseifiçada e carregada novamente com azoto três vezes. A solução de reacção foi agitada a 87° C em banho de óleo durante cerca de 16 horas (ou até ao consumo total do éster borano pinacol), arrefecida até à temperatura ambiente e diluída com EtOAc (200 mL). A mistura reaccional foi filtrada através de um chumaço de Celite foi bem lavado com EtOAc. A solução deEtOAc foi lavada com salmoura e seca 164 sobre Na2S04 e concentrada. 0 produto bruto foi purificado em coluna de gel de sílica eluindo com sistema EtOAc/hexanos (0% EtOAc a 100% EtOAc) para se obter 4— (4 — {6-amino-5-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3}-pirazol-l-il)-piperidina-l-carboxilato de terc butilo (3,4167 g, 65% rendimento, pureza -95%) com uma Rf de 0,15 (50% EtOAc/hexanos). MS m/3 550 [M+l]+. A uma solução de 4-(4-{6-amino-5-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-l-il)-piperidina-l-carboxilato de terc butilo (566,7 mg, 1,03 mmol) em metanol (5 mL) ou diclorometano (30 mL) adicionou-se HC1 4N/dioxano (15 mL) . A solução foi agitada durante cerca de 1 hora ou até estar completa a desprotecção. Os solventes foram evaporados e o resíduo foi dissolvido em metanol e purificado em HPLC preparativa C-18 de fase inversa, eluindo com acetonitrilo/água com ácido acético 0,1% entre 5% e 30% com um gradiente linear. Depois da liofilização obteve-se acetato de 3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-5-(l-piperidin-4-il-lH-pirazol-4-il)-piridin-2-ilamina sob a forma de um sólido branco (410mg, 78% rendimento, 100% pureza HPLC, 96, 4 % ee) . XH NMR (DMSO- d6, 400 MHz) δ 7,84 (s, 1H), 7,68 (d, 1H) , 7,50 (dd, 1H) , 7,46 (s, 1H), 7,37 (t, 1H), 6,83 (d, 1H) , 6, 02 <q. 1H) , 5, 57 (bs, 2H) , 4,09 (m, 1H), 2,98 (m, 2H) , 2,53 (m, 2H) ,
1,88 (m, 2H) , 1,82 (s, 3H) , 1,73 (d, 3H) , 1,70 (m, 2H) . MS m/e 450 (M+l)+.
Procedimento geral 63: 165
A uma suspensão de 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-5-(l-piperidin-4-il-lH-pirazol-4-il)-piridin-2-ilamina na forma do sal de HC1 (procedimento 6) (150 mg, 0,288 mmol) em CH2C12 (2 mL) adicionou-se Net3 (0,121 mL, 0,863 mmol) e agitou-se durante 30 minutos à temperatura ambiente. A reacção arrefeceu a 0o C e adicionou-se acetato de clorocarbonilmetilo e e agitou-se durante 1 hora à temperatura ambiente. A reacção foi controlada por LC-MS e uma vez completa a conversão no produto desejado adicionou-se água (2 mL) . A reacção foi extraida com EtOAc (4 x 10 mL) , seca sobre Na2S04 e concentrada para produzir um rendimento quantitativo de acetato de 2-[4-(4 — {6-amino-5-[ 1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-imidazol-l-il)-piperidin-l-il]-2-oxo-etilo (164 mg, quant). A uma solução de acetato de 2-(4-{6-amino-5-[-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-l-il)-1-il]-2-oxo-etilo (164 mg, 0,298 mmol) em MeOH (4 mL) adicionou-se LiOH (7 mg, 0,298 mmol) dissolvido em 1 mL de água. A reacção foi agitada durante 30 minutos à temperatura ambiente, revelando LC-MS a conversão completa em 1-[4-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil) -etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-l-il)-piperidin-l-il]-2 166
hidroxietanona. 0 produto foi purificado em HPLC preparativa Cl 8 de fase inversa, eluindo com acetonitrilo/água, com ácido acético 0,1 % entre 10% e 40%.
Procedimento geral 64:
Um balão de 100 mL com vareta agitadora foi seco em estufa e arrefecido em atmosfera de azoto seco. O balão foi equipado com tampa de borracha de seringa. O balão foi imerso em banho de água gelada, em azoto, e introduziu-se 1,6 mL (1,6 mmol) de solução de borano 1,0 M em THF. Depois introduziu-se 2-(4-{5-amino-6-[1-(2,6-dicloro-3-
fluorofenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-pirazol-l-il)-2-metilpropiónico (procedimento 5) (0,1 g, 0,221 mmol) em THF anidro (1,0 mL). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente em azoto durante 5 horas e adicionou-se HC1 6N (1,1 mL) lentamente e depois introduziu-se H2O (1,1 mL) e MeOH (7,4 mL). A mistura reaccional foi agitada continuamente de um dia para o outro. A maioria dos solventes evaporaram sob vácuo e depois utilizou-se uma solução de NaOH IN para ajustar o pH a 11. Adicionou-se água e a solução foi extraída com EtOAc (3 x 30 mL) e seca sobre Na2SC>4. Após filtração e concentração, o produto foi purificado em HPLC preparativa de fase inversa, eluindo com 167 acetonitrilo/água, com ácido acético 0,1% entre 10% e 60%. Após liofilização da s fracções puras obteve-se acetato de 2-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-l-il)-2-metil-propan-l-ol sob a forma de um sólido branco (21 mg, 22% rendimento).
Procedimento geral 65:
Boc
Br
A uma solução agitada de 4-hidroxi-piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (7,94 g, 39,45 mmol) em CH2CI2 (100 mL), arrefecida a 0o C, foi adicionado lentamente Net3 (5,54 mL, 39,45 mmol) seguido de cloreto de metanossulfonilo (3,06 mL, 39,45 mmol) e DMAP (48 mg, 0,39 mmol). A mistura foi agitada durante à temperatura ambiente de um dia para o outro. Adicionou-se depois à mistura água (30 mL) . A extracção com CH2CI2 (3 x 30 mL) seguida de secagem (Na2SC>4) e remoção do solvente sob vácuo rendeu 4— metanosulfoniloxi-piperidina carboxilato de terc-butilo sob 168 a forma de um sólido branco (11,00 g, >99% rendimento) . NMR (CDC13, 400 MHz) δ 4,89 (m, 1H) , 3,69 (m, 2H), 3,31 (m, 2H) , 3,04 (s, 3H) , 1,95 (m, 2H) , 1,83 (m, 2H) , 1,46 (s, 9H) , A uma solução agitada de 4-bromo-pirazol (10,44 g, 71,03 mmol) em DMF anidro (96 mL) arrefecida a 0o C, adicionou-se lentamente NaH (60% em óleo mineral (3,13 g, 78,133 mmol). A solução foi agitada a 0o C durante 1 hora. 4—metanosulfoniloxi-piperidina carboxilato de terc-butilo (19,82 g, 71,03 mmol) foi adicionado lentamente e a reacção foi aquecida a 100° C de um dia para o outro ou até estar consumido o pirazol segundo NMR. A reacção foi deixada arrefecer à temperatura ambiente, e adicionou-se água (20 mL) seguido de extracção com EtOAc. Os extractos combinados foram lavados com NaCl aquoso saturado (4 x 20 mL) , secos com Na2S04 e concentrados para produzir 4—(4-bromo-pirazol-1 -il)-piperidina carboxilato de terc-butilo sob a forma de um óleo laranja. 0 óleo foi purificado por cromatografia em gel de sílica, eluindo com 10% EtOAc/hexanos a 25% EtOAc/hexanos para proporcionar 4—(4-bromo-pirazol-l-il) -piperidina-l-carboxilato de terc-butilo sob a forma de um sólido branco (10,55 g, 45% rendimento) com Rf=0,4 (25%
EtOAc/hexanos, utilizando iodo como coloração) . XH NMR (CDCI3, 400 MHz) δ 7,46 (s, 1H), 7,43 (s, 1H) , 4,23 (m, 3H) , 2,88 (m, 2H) , 2,10 (m, 2H) , 1,88 (m, 2H) , 1,47 (s, 9H) . A uma solução de 4—(4-bromo-pirazol-l-il)-piperidina-l-carboxilato de terc-butilo (500 mg, 1,515 mmol) em CH2CI2 (3 mL) adicionou-se TFA (3 mL) . A reacção foi agitada à temperatura ambiente até haver indicação da conclusão da reacção por LC-MS. Os solventes foram remoídos sob vácuo e 169 o resíduo foi dissolvido em MeOH (15 mL) . O pH da solução foi ajustado a 9 com resina hidróxido para produzir 4— (4 — bromo-pirazol-l-il)-piperidina. A uma solução de 4—(4-bromo-pirazol-l-il)-piperidina (375 mg, 1,63 mmol) em DMF (3,26 mL) adicionou-se NEt3 (230 pL, 1,63 mmol) e agitou-se durante 5 minutos. Adicionou-se iodeto de metilo (Mel) (1,63 mL, 1M Mel em DMF, preparado de fresco) e a reacção foi agitada de um dia para o outro à temperatura ambiente. Adicionou-se água e a solução foi extraída com EtOAc (4 x 10 mL) . A solução orgânica foi lavada com salmoura e seca com Na2SC>4, concentrada e seca sob vácuo para render 4—(4-bromo-pirazol-l-il)-piperidina (251 mg, 63% rendimento).
Procedimento geral 66:
A uma solução de 3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(lH-pirazol-4-il)-pirazin-2-ilamina (295 mg, 0,80 mmol) em DMF anidro (4 mL) adicionou-se NaH (60%, em óleo mineral, 30,7 mg, 0,80 mmol) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente, em azoto durante 0,5 h, depois introduziu-se 4—metanossulfoniloxi-piperidina-1-carboxilato de terc-butilo (223,5 mg, 0,80 mmol). A mistura reaccional 170 foi aquecida a 90 °C, banho de óleo, durante 0,5 h sob azoto e deixada arrefecer à temperatura ambiente. Foi lentamente adicionada água à mistura, que foi extraida com EtOAc, lavada com salmoura e seca sobre Na2SC>4. O produto bruto foi purificado em coluna de gel de sílica para se obter 4-(4-{5-amino-6-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-pirazol-l-il)-piperidina-l-carboxilato de terc butilo sob a forma de um sólido branco (265 mg, 59% rendimento). A uma solução de 4-(4 — {5-amino-6-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-pirazol-l-il)-piperidina-l-carboxilato de terc butilo (265 mg, 0,48 mmol) em metanol em CH2C12 adicionou-se HC1 4N/dioxano(4 mL) . A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora-. Após evaporação, o resíduo foi dissolvido em metanol (2,5 mL) e foi purificado em HPLC preparativa C-18 de fase inversa, eluindo com acetonitrilo/água, com ácido acético 0,1% com um gradiente linear entre 10% e 40%. Depois da liofilização obteve-se acetato de 3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-5-(l-piperidin-4-il-lH-pirazol-4-il)-piridin-2-ilamina sob a forma de um sólido branco (125 mg, 51% rendimento).
Procedimento geral 67: h3c
171
Pentafluoreto 0-(7-azabenzotriazol-l-il)-N, N, N' , N' - tetrametil-urónio fósforo (HATU) (66 mg, 0,17 mmol) foi adicionado a uma solução de acetato de ácido 2-(4-{6-amino-5-[-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-l-il)propiónico (69 mg, 0,16 mmol) e trietilamina (0,024 ml, 0,17 mmol) e 3-dimetilamino-propilamina (0,022 mL, 0,17 mmol) em 1,6 mL de DMF. Após agitação durante 3 horas, a reacção foi concentrada por evaporação rotativa. O resíduo foi purificado em cromatografia em gel de sílica utilizando eluição gradiente de diclorometano, metanol, hidróxido de amónio para produzir 2-(4-{6-Amino-5-[1-(2, 6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-l il)-N-(3-dimetil- amino-propil)-propionamida.(41 mg, 50%).
Procedimento geral 68: h3c N-0OC ) HO h3c N N-NH V Br □EAD PPh3 THF $ N-N V Br
Foi adicionada dietilazoldicarboxilato (0,48 mL, 3,1 mmol) a uma solução a 0o C de trifenilfosfina (0,80 g, 3,1 mmol) em THF (20 mL) . Após agitação durante 5 minutos, adicionou-se 4-bromo-pirazole (0,30 mg, 2,0 mmol). Passados mais 5 minutos de agitação adicionou-se (2-hidroxietil)- 172 metil-carbamato de terc-butilo (0,45 g, 2,6 mmol). A reacção foi deixada aquecer à temperatura ambiente e foi agitada de um dia para o outro. A reacção foi arrefecida a 0o C e filtrada. O filtrado foi concentrado por evaporação rotativa. O resíduo foi purificado em cromatografia em gel de sílica utilizando eluição gradiente de diclorometano, acetato de etilo para produzir [2-(4-bromo-pirazol-l-il)-etil]-metil-carbamato de terc-butilo (541 mg, 87%).
Procedimento geral 69:
Br
Adicionou-se hidreto de sódio (0,12 g, 4,9 mmol) a uma solução de 4-bromo-4H-pirazol (0,60 g, 4,1 mmol) em DMF (10 mL) . Depois de agitada durante 10 minutos, adicionaou-se uma solução de 2-cloro-propionato de metilo em DMF (4 mL). Após agitação durante mais 4 horas, a reacção foi dividida por acetato de etilo e água. As fases foram separadas e a fase aquosa foi extraída com acetato de etilo. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre MgSC>4 e concentradas por evaporação rotativa. O resíduo foi purificado em cromatografia em gel de sílica utilizando eluição gradiente de acetato de etilo e hexanos para produzir 2-(4-bromo-pirazol-l-il)-propionato de metilo (733 mg, 77%).
Procedimento geral 70: 173
Uma solução LiOH (34 mg, 1,4 mmol) em água (0,4 mL) foi adicionada a uma solução de 2-(4-{6-amino-5-[l-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-imidazol-l-il-propionato de metilo (70 mg, 0,15 mmol) numa mistura de THF (1,5 mL) e MeOH (0,4 mL) . Após agitação de um dia para o outro, a mistura foi dividida pro diclorometano e salmoura semi-saturada. Adicionou-se uma pequena quantidade de etanol e o pH foi ajusjtado a 7 com HC1 1M. As fases foram separadas e a camada aquosa foi extraída com diclorometano. As fases orgânicas combinadas foram secas sobre Na2SC>4, filtradas e concentradas por evaporação rotativa para produzir ácido 2-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-l-il)-propiónico (69 mg, 100%).
Procedimento geral 71: 174
A uma solução agitada de 4-(3-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-l-il)-pirrolidina-2-carboxilato de metilo (105 mg, 0,21 mmol) em THF (5 ml) adicionou-se CH3NH2 2M em THF (1,06 ml, 2,12 mmol), a mistura foi agitada e aquecida a 55° C durante 18 horas, por LC-MS verificou-se se a reacção estava completa, removeu-se o THF, o resíduo foi purificado por HPLC prep para produzir metilemida do ácido 4-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-l-il)-pirrolidina-2-carboxílico (30 mg), rendimento 28,6%.
Procedimento geral 72:
âld 175 X = Br, I L= Br, OMs 4-(4,4,5, 5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol-l-carboxilato de terc-butilo (21-1): Dicarbonado de di-terc-butilo (7,2 equivalente molar) e 4-(dimetilamino)piridina (0,84 equivalente molar) foram adicionados a uma solução 4,4,5,5-tetrametil-lH-pirazol-4-il)-1,3,2-dioxaborolan (6 mmol) em 40 mL de DMF. A mistura reaccional foi agitada à temperatura ambiente durane 12 horas. Adicionou-se água à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc para extrair a solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso castanho amarelado como composto 21-1 (1,32 g; 4,56 mmol; 76%). ^ NMR (400 MHz, clorofórmio-D) δ ppm 1,32 (s, 12 H) 1,63 (s, 9 H) 7,91 (s, 1 H) 8,37 (s, 1 H) . O resíduo foi utilizado na reacção da etapa seguinte sem ser sujeita purificação adicional.
Composto 21-3, apresentado com o exemplo específico de 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-5-(lH-pirazol-4-il)piridin-2-amina (21-3a):
NHj
N-NH
Adicionou-se composto 21-1 (1,0 equivalente molar) a uma solução do composto 21-2a (composto 21-2, com substituintes R para proporcionar 2,6-dicloro-3-fluorofenil) (1,92 mmol) em 20 mL de DME. A mistura foi 176 agitada à temperatura ambiente em atmosfera de azoto durante 30 minutos e depois adicionou-se diclorobis(trifenilfosfino) paládium (II) (0,05 equivalente molar). É adicionado carbonato de sódio (3 equivalente molar) em 4 mL de H20 à mistura reaccional e a solução resultante é aquecida a 85° C durante 12 h. As bases alternativas utilizadas foram CsF e CS2CO3 em com 1 ou 2 equivalentes do éster borónico e à temperatura ambiente (CsF) ou 80° C (todos) Adicionou-se água à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc (150 mL x 2) para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso castanho escuro. O resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo 0->-10 % EtOAc em acetato de etilo) para produzir o produto desejado, composto 21-3a (2,05 g, 53,6% rendimento). ΧΗ NMR (400 MHz, clorofórmio-D) δ ppm 1,60 (s, 1 H) 1,84 (d, J= 6,57 Hz, 3 H) 5,07 (s, 2 H) 6,06 (q, J=6,57 Hz, 1 H) 6,89 (d, J=l,77 Hz, 1 H) 6,96 - 7,06 (m, 1 H) 7,22 - 7,33 (m, 1 H) 7,67 (s, 2 H) 7,80 (d, J=l,52 Hz, 1 H).
Os compostos da fórmula 21-4 podem ser formados segundo os seguintes procedimentos de exemplo. Adiciona-se hidreto de sódio (1,2 equivalente molar) a uma solução de composto 21-3 (0,87 mmol) em 10 mL de DMF. A mistura foi agitada à temperatura ambiente em atmosfera de azoto durante 30 minutos e depois adicionou-se composto 21-6 (1 equivalente molar). A solução resultante é aquecida a 85-90° C durante 12 h. Adiciona-se água (20 mL) à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc (50 mL x 2) 177 para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2SC>4. 0 Na2SC>4 é separado por filtração e o filtrado é evaporado. 0 resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo com EtOAc em hexanos) para produzir o produto desejado, composto 21-4 (20-50% rendimento) .
Procedimento geral 73:
L = Br, Cl, COOH, COCI, OMs, carbonato de etileno, aldeído
Os compostos da fórmula 22-3 podem ser preparados segundo o seguinte procedimento de exemplo: Adiciona-se composto 22-2 (1,2 equivalente molar) a uma solução de composto 22-1 (0,24 mmol) e base (3-5 equivalente molar) e/ou reagente de acoplagem (1 equivalente molar) em 5 mL de DMF. A mistura é agitada em atmosfera de azoto durante 12 h. Adiciona-se água (20 mL) à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc (50 mL x 2) para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado. O resíduo é purificado em cromatografia em gel 178 de sílica (eluindo CH3OH, CH2C12, EtOAc e hexanos) para produzir o produto desejado, composto 22-3.
Procedimento geral 74: 0 procedimento seguinte pode ser utilizado para preparar derivados de piperidina-pirazole-2-aminopiridina.
£2dâ 23-1 b
terc-butilo 4-(4-iodo-lH-pirazol-l-il]piperidina-1 carboxilato (23-la) : 179 adicionou-se NaH (1,2 eq., 0,68 mmol) por porções a uma solução agitada de 4-iodopirazole (0,57 mmol) em DMF (2 L) a 4° C. A mistura resultante foi agitada durante 1 hora a 4° C e adicionou-se então o composto 23-4 (1,1 eq., 0,63 mmol) . A mistura resultante foi aquecida a 100 °C durante 12 h. A reacção é depois interrompida com H20 e extraída com EtOAc por várias vezes. As camadas orgânicas foram combinadas foram secas e filtradas óleo laranja. O resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo 5% EtOAc em pentano) para produzir o composto 23-la sob a forma de um sólido branco (140 g, 66%). 4-[4-(4,4,5, 5-tetrametil-l,3,2-dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol-l-il]piperidina-l-carboxilato terc-butilo (23-lb):
Bis (pinacolato) diboro (1,4 eq., 134 g, 0,52 mol) e acetato de potássio (4 eq., 145 g, 1,48 mol) são adicionados sequencialmente a uma solução do composto 23-la (140 g, 0,37 mol) em 1,5 mL de DMSO. A mistura foi purgada com azoto várias vezes e adicionou-se diclorobis(trifenilfosfino) paládium (II) (0,05 eq., 12,9 g). A mistura resultante foi aquecida a 80° C durante 2 h. A mistura reaccional foi arrefecida à temperatura ambiente e filtrada através de um chumaço de Celite foi bem lavada com EtOAc. 0 filtrado foi lavados com NaCl saturado (500 mL x 2), seco sobre Na2S04, filtrado e concentrado. O resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo 5% EtOAc em hexanos) para produzir o composto 23-lb sob a forma de um sólido branco (55 g, 40%).
Adiciona-se composto 23-2 (1,0 equivalente molar) a uma solução de composto 23-lb (1,3 equivalente molar) em 15 mL de DME. A mistura foi purgada com azoto várias vezes e 180 adicionou-se diclorobis(trifenilfosfino) paládium (II) (0,05 equivalente molar). E adicionado carbonato de sódio (3 equivalente molar) em 4 mL de H2O à mistura reaccional e a solução resultante é aquecida a 85° C durante 12 h. Adiciona-se água (10 mL) à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc (150 mL x 2) para extrair a solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. O Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso castanho escuro. O resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo 75->100 % EtOAc em hexanos) para produzir o composto 23-3a (61 % rendimento).
Cloridrato (19 eq., 12 mmol) foi adicionado a uma solução do composto 23-3a (0,63 mmol em MeOH (4 mL) . A mistura foi agitada durante 12 hora à temperatura ambiente. O solvente foi evaporado e foi adicionado H20 (10 mL) .
Adicionou-se NaHCCMaq) saturado para neutralizar a solução a pH 7. Foi adicionado acetato de etilo (100 mL x 2) para extrair a solução aquosa. A camada orgânica combinada foi seca sobre Na2S04, filtrada e evaporada para se obter o composto 23-5a sob a forma de um resíduo sólido (0,6 mmol, 95% rendimento).
Os compostos da fórmula 23-7 podem ser preparados segundo o seguinte procedimento geral: Adiciona-se composto 23-8 (1,2 equivalente molar) a uma solução de composto 23-
5a (0,24 mmol) e base (3-5 equivalente molar) e/ou reagente de acoplagem (1 equivalente molar) em 5 mL de DMF. A mistura é agitada em atmosfera de azoto durante 12 h. Adiciona-se água (20 mL) à mistura reaccional para interromper a reacção. Foi adicionado EtOAc (50 mL x 2) 181 para extrair à solução aquosa. Camada de EtOAc seca sobre Na2S04. 0 Na2S04 é separado por filtração e o filtrado é evaporado para produzir um resíduo oleoso. 0 resíduo é purificado em cromatografia em gel de sílica (eluindo CH3OH, CH2C12, EtOAc e hexanos) para produzir o produto desejado, composto 23-7a.
Procedimento geral 75:
Os compostos 3-metoxi podem ser preparados a partir dos compostos 3-fluoro correspondentes segundo o procedimento geral seguinte. A 4 mL de DMSO adicionou-se 0,124 mL de etanol seguido de 32 mg de NaH. Após agitação durante 30 minutos, adicionou-se 250 mg de 24-1 e a reacção foi aquecida a 40° C. Passadas três horas, a reacção foi arrefecida e vertida em água para precipitar. Após neutralização a pH 6, o produto 24-2 é isolado.
Procedimento geral 76: 182
A uma solução agitada de 3-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-[1-(2,2-dimetil-[1,3]dioxolan-4-ilmetil)-lH-pirazol-4-il]-piridin-2-ilamina (150 mg, 0,31 mmol) em THF (3 mL) e H20 (2 mL) adicionou-se TFA a 0o C, a mistura foi agitada e aquecida à temperatura ambiente e depois a 50° C durante 5 horas, por LC-MS verificou-se se a reacção estava completa, removeu-se o THF, o resíduo foi purificado por HPLC prep para produzir 3-(4-{6-amino-5-[1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-l-il)-propano-1,2-diol (102 mg), rendimento 74,2%.
Procedimento geral 77: Η o NaH f
Sr + £° ^ 4
Br Br A uma solução agitada de 4-bromo-lH-pirazole em DMF adicionou-se hidreto de sódio à temperatura ambiente. A mistura foi agitada durante 30 minutos, adicionou-se [1,3]dioxolan-2-ona, a mistura foi agitada e aquecida 183 lentamente até à temperatura ambiente. A reacção foi controlada por TLC. Uma vez concluída a reacção, adicionou-se EtOAc, lavou-se NaHCCb saturado, água e salmoura, secou-se sobre Na2SC>4, filtrou-se e concentrou-se. 0 resíduo foi purificado em cromatografia em gel de sílica eluentes EtOAc e DCM 10%) para produzir 2-(4-bromo-pirazol-l-il)-etanol 0,22 g, rendimento 34%. 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-D) δ ppm 7,49 (s, 1 H) 7,46 (s, 1 H) 4,18 - 4,23 (m, 2 H) 3,93 -3, 98 (m, 2 H) 3, 09 (s, 1 H) .
Exemplo 1: 5-bromo-3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro- fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento geral 3. XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,16(s, 1H), 7,84 (d, 2H), 7,77(d, 2H), 7,53(m, 1H), 7,37(t, 1H), 6,64 (s, 2H), 6,53(q, 1H), l,78(d, 3H); LCMS: 422 (M+l]; c-
Met Ki: 0,154 μΜ.
O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento 2 a partir de (IS)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etanol. XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,53(s, 1H), 7,48(m, 1H), 7,39(t, 1H), 6,48 (s, 2H), 6,41 (q, 1H), 1,74(d, 3H); LCMS: 381 [M+l]; c-Met Ki: 0,796 μΜ. 184
Exemplo 2: ácido 4-{5-amino-6-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pyrain-2-il}-benzóico
Exemplo 3: (4-{5-Amino-6-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro- fenil)-etoxi]-pyrain-2-il}-fenil)-piperazin-l-il-metanona
0 composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento geral 4. xh : NMR (400 MHz, DMSO- -d6) δ 8, 11 (s, 1H) , 7,73 (d, , 2H) , 7,53 (m , 1H) , 7,37 (t, 1H) , 7, .31 (d, 2H) , 6, 55 (m, 3H) , 3,51 (br, 2H) , 3,32(br, 2H) , 2, 67 (br, 4H) , 1,77(d, 3H); LCMS: 490 [M+l]; c-Met Ki: 0,027 μΜ. 185
Exemplo 4: 4-(4-{5-amino-6-[(R)-1-(2,6-dicloro-3- fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-benzoil)-piperazina-1-carboxilato de terc-butilo
0 composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento geral 16 seguido de 20. XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 8, 12 (s, 1H) , 7,72(6, 2H) , 7,50(m, 1H) , 7,33(t, 3H) , 6,55 (m, 3H) , 3,51 (br, 2H) , 3,39(m, 3H) , 3,32(br, 3H) , 1,77(d, 3H), 1,40(s, 9H); LCMS: 590 [M+l]; c-Met Ki: 0,335 μΜ.
Exemplo 5: 3-[(IR)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]-5-[4-(piperazin-l-ilcarbonil)fenil]piridina-2-amina 186
0 composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento 20 seguido do 21 como uma mistura racémica com o enantiómero S correspondente do exemplo 119, seguido de separação por cromatografia quiral. O composto em epígrafe foi também preparado como composto enantiomericamente puro, a partir do material de partida quiral. 1H NMR (400 MHz, DMSO- D6) δ ppm 1,83 (d, J=6,57 Hz, 3 H) 3,35 (s, 4 H) 3,69 (s, 4 H) 6,24 (q, J=6,57 Hz, 1 H) 6,91 - 7,08 (m, 2 H) 7,10 (d, J=1,26 Hz, 1 H) 7,46 (t, J=8,72 Hz, 1 H) 7,50 (s, 4 H) 7,58 (dd, J=8,97, 4,93 Hz, 1 H) 7,91 (d, J=l,77 Hz, 1 H) 9,35 (s, 2 H); LCMS: 490 [M+l]; c-Met Ki: 0,01 μΜ.
Exemplo 6: 4-{6-amino-5-[IR(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-piridin-3-il}-N-[2-(dimetilamino)etil]-N-metil-benzamida 187
0 composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento geral 20. XH NMR (400 MHz, DMSO-D6) δ ppm 1,80 (d, J=6,82 Hz, 3 H) 1,97 (s, 3 H ) 2,19 (s, 3 H :) 2, 30 - 2,42 (m, J=l,77 Hz, 2 H) 2,93 (s, 3 H ) 3,22 - 3, 29 (m, 1 H) 3,44 - 3 ,61 (m, 1 H) 5,95 (s, 2 H) 6, 14 (q, J=6, 57 Hz, 1 H) 6, 98 (d, J=1,01 Hz, 1 H) 7,30 - 7, , 39 (m, 2 H) 7 ,40 - 7 ,47 (m, 3 H) 7,51 - 7, 62 (m, 1 H) 7 ,87 (d, N X ["- r- T-1 II •"D 1 H) ; LCMS : 506 [M+l]; c-Met Ki: 0,01 μΜ.
Exemplo 7: (4-{6-amino-5-[(IR)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro- fenil)-etoxi]-piridin-3-il}fenil-metanol
O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento geral 27. 1H NMR (400 MHz, DMSO-D6) δ ppm 1,84 188 (d, J=6,57 Hz , . 3 H) 4,49 (d, J=5,81 Hz, 2 H) 5,20 (t, J=5,81 Hz, 1 H ) 6,25 (q, J= 6,57 Hz , 1 H ) 6, 46 - 6,88 (m, 2 H) 7,04 (d, J= 1,52 Hz, 1 h; ) 7,34 (s, 4 H) 7,46 (t, J= 8,72 Hz, 1 H) 7,59 (dd, J=8,97, 4,93 Hz, 1 H) 7,76 (d, J=1,52
Hz, 1 Η); LCMS: 408 [M+l]; c-Met Ki: 0,051 μΜ.
Exemplo 8: 4-{6-amino-S-[(IR)-1-(2,6-dicloro-3- fluorofenil)-etoxi]-piridin-3-il}-N-[3-(dimetilamino)propil]-N-metilbenzamida
O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento geral 27. NMR (400 MHz, DMSO-D6) δ ppm 1,60 - 1,73 (m, 2 H) 1,80 (d, J=6,57 Hz, 3 H) 1,94 (s, 3 H) 2,13 (s. 3 H) 2,20 - 2,29 (m, 2 H) 2 ,92 (s, 3 H) 3, 36 - 3, 50 (m. 2 H) 5,96 (s, 2 H) 6 ,14 (q, J= 6, 57 Hz , : 1 H) 6, 98 (s , 1 H) 7, 37 (s. 2 H) 7, 40 - 7,51 (m. 3 H) 7, 55 (dd. J=8, 84 , 4,80 Hz, 1 H) 7, 86 (d, J= 1,77 Hz, 1 H) ; LCMS : 520 [M+l ]; c-Met Ki: 0 ,01 μΜ.
Exemplo 9: 4-(4-{6-amino-5-[(IR)-1-(2,6-dicloro-3- fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-ilJbenzoil)piperazina-1-carboxilato de terc-butilo 189
0 composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento geral 20. 1H NMR (400 MHz, clorofórmio-D) δ ppm 1,46 (s, 9 H) 1,86 (d, J=6,82 Hz, 3 H) 3,30 - 3,89 (m, 8 H) 4,90 (s, 2 H) 6,11 (q, J=6,57 Hz, 1 H) 6,98 (d, J=l,52
Hz, 1 H) 7,01 - 7,10 (m, 1 H) 7,30 (dd, J=8,97, 4,93 Hz, 1 H) 7,35 - 7,43 (m, 4 H) 7,88 (d, J=l,77 Hz, 1 H) ; LCMS: 590 [M+l]; c-Met Ki: 0,03 μΜ.
Exemplo 10: 3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)- etoxi]-5-[1-(l-metil-piperidin-4-il)-lH-pirazol-4-il)-piridin-2-ilamina
190 O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento 62, utilizando 3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-5-(4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridin-2-ilamina e 4-(4-bromo-pirazol-l-il)-1-metil-piperidina (preparado de acordo com o procedimento geral 11) . XH NMR (4 00MHz, CDC13) δ 7,65 (s 1H) , 7,55 (s, 1H) , 7,50 (s, 1H), 7,31 (m. 1H) , 7,06 (m, 1H) , 6, 87 (s, 1H) , 6, 08 (m, 1H), 5,50 (bs. 2H) , 4,18 (m 1H) , 3, 11 (m, 2H) , 2,40 (s, 3H), 2,30 (m. 2H) , 2,20 (m, 4H) , 2,07 (s, 3H) , 1,86 (d, J 8 Hz, 3H) ; LCMS: 464 [M+l] c-Met Ki: 0,01 μΜ.
Exemplo 11: 1_[4-(4-{6-amino-5-[(R)-1-(2,6-dicloro-3- fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-l-il)-piperidin-1—i1]-2-hidroxi-etanona
O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento geral 1H), 7,57 (s, 1H), 1H) , 6,86 (s, 1H) , 63. XH NMR (400MHz, 7,47 (s, 1H), 7,31 6,08 (m, 1H), 5,00 CDCI3) δ 7,72 (s (m, 1H), 7, 06 (m (bs, 2H), 4,70 (m 191 1H) , 4,36 (m, 1H), 4,21 (s, 1H) , 3,70 (m, 1H) , 3,18 (m 1H) , 3, 00 (m, 1H), 2 ,223 (m, 2H) , 2, 01 (m, 2H), 1,86 (d, , 8 Hz, 3H) ; LCMS: 508 [M+l ] ; c- -Met Ki: 0, 004 μΜ.
Exemplo 12: 3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)- etoxi]-5-(l-piperidin-4-il-lH-pirazol-4-il)-piridin-2-ilamina
0 composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento 62, utilizando 3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-5-(4,4,5,5-tetrametil- [1,3,2]dioxaborolan-2-il)-piridin-2-ilamina e 4-(4-bromo-pirazol-l-il)-1-ciclopentil-piperidina (preparado de acordo com o procedimento geral 11, utilizando) bromociclopentano como reagente de alquilação. 1H NMR (400MHz, CDC13) δ 7,73 (s, 1H) , 7 LO LO (s, 1H) , 7, 48 (s, 1H), 7,31 (m, 1H), 7, 07 (m, 1H) , 6, 88 (s, 1H) , 6, 08 (m, 1H) , 4,64 (m, 1H) , 2, 04 (m, 2H) , 1,98 (m, 2H) , 1,86 (d, J 8 Hz, 3H) , 1,73 (m, 2H) ; LCMS : 435 [M+l ] ; c-Met Ki : 0,02 μΜ. 192
Exemplo 13: 3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)- etoxi]-5-(l-piperidin-4-il-lH-pirazol-4-il)-piridin-2-ilamina
0 composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento geral 62 1 H NMR (400MHz, CDC1 3) 5 7, 69 (s 1H) , 7,56 (s, 1H) , 7, 50 (s, 1H) , 7,32 (m, 1H) , 7, 07 (m 1H) , 6, 87 (m, 1H) , 6, 07 (m, 1H) , 5,25 (bs, 2H) , 4, 30 (m 1H) , 3,41 (m, 2H) , 2, 96 (m, 2H) , 2,26 (m, 2H) , 2, 12 (m 2H) , 1,86 (d, J 8 Hz, 3H); LCMS: 450 [M+l]; c-Met Ki: 0,003 μΜ.
Exemplo 14: 3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)- etoxi]-5-(l-piperidin-4-il-lH-pirazol-4-il)-piridin-2-ilamina 193
0 composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento geral 66. 1H NMR (400 MHz, DMSO-de) 5 7,86 (s, 1H) , 7,76 (s, 1H) , 7, 63 (m, 2H) , 7,54(m, 1H) , 7,37(t, 1H) , 6,46 (q, 1H), 6,15 (s, 1H), 4,10(m, 1H), 3,01 (m, 2H) , 1,95(m, 2H), l,85(s, 2H) , l,75(d, 3H), l,67(dd, 1H) ; LCMS: 451 [M+l]; c-Met Ki: 0,010 μΜ.
Exemplo 15: 3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)- etoxi]-5-(lH-pirazol-4-il)-pirazin-2-ilamina
O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento 3, utilizando 5-bromo-3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)-etoxi]-pirAZin-2-ilamina e 4-(4,4,5,5- 194 tetrametil-[1,3,2]dioxaborolan-2-il)-pirazol-1-carboxilatode terc-butilo 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 6 12,81 (s, 1H) , 7,79 (s, 1H), 7,48(m, 1H), 7,36(t, 1H) , 6,48 (q, 1H) , 6,12 (s, 2H) , 1,75 (d, 3H) ; LCMS: 368 [M+l ] ; c-Met
Ki: 0,065 μΜ.
Exemplo 16: 1-[4-(4-{5-amino-6-[(R)-1-(2,6-dicloro-3- fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-i1}-pirazol-1-il)-piperidin-1-il]-2-hidroxi-etanona
y_/H
O composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento 62 e 63, utilizando 5-bromo-3-[ (R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina como material de partida. 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 7,91 (s, T-1 7,76 (s, 1H), 7,64 (s, 1H), 7,49(m, τ—1 7,36 (t, τ—1 6,46 (q, 1H), 6,15 (s, 2H) , 4,57(br, T-1 4,40(m, 2H) , 4,12(br, 2H), 3,77(m, 1H), 3,35(m, 2H), 3,43(m, lH),3,16(m, 2H), 1,75(d, 3H); LCMS: 509 [M+l]; c-Met Ki: 0,015 μΜ. 195
Exemplo 17: 3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)- etoxi]-5-[1-(l-metil-piperidin-4-il)-lH-pirazol-4-il)-pirazin-2-ilamina
0 composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento 62, utilizando 5-bromo-3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-ilamina e 4-(4-bromo-pirazol-l-il)-1-metil-piperidina (preparado de acordo com o procedimento geral 11) . 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,88 (s, 1H) , 7,76 (s, 1H) , 7, 64 (s, 1H) , 7,49(m, 1H) , 7,36(t, 1H) , 6,46 (q, 1H) , 6,15(s, 2H) , 4,02(m, 1H) , 2,84(m, 2H) , 2, 19 (s, 3H), 2,00(m, 4H), l,85(m, 3H), l,75(d, 3H); LCMS: 465 [M+l]; c- Met Ki: 0,03 μΜ.
Exemplo 18: 1-[4-(4-{5-amino-6-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-i1}-pirazol-1-il)-piperidin-1-il]-2-diemtilamino-etanona 196
—
0 composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento 63, utilizando 3-[ (R)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil) -etoxi]-5-(l-piperidin-4-il-lH-pirazol-4-il)-pirazin-2-ilamina acoplado a dimetilamino/ácido acético na presença de HOBt/EDC/trietilamina em DMF, como descrito no procedimento 5, utilizando 5-bromo-3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-ilamina como material de partida. XH NMR (400 MHz, DMSO-d6) 5 7,90 (s, 1H), 7,76(s, 1H), 7,65(s, 1H), 7,49 (m, 1H), 7,36(t, 1H), 6,47 (q, 1H) , 6,15(s, 2H), 4,39(m, 1H), 4,16(m, 1H), 3,16(m, 2H), 3,02(m, 1H), 2,75(m, 1H), 2,19(s, 6H) , 2,01 (m, 2H), l,88(s, 1H) , 1,75(d, 3H),; LCMS: 536 [M+l]; c-Met Ki: 0,015 μΜ.
Exemplo 19: 3-[(R)-1-(2-cloro-3,6-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(l-piperidin-4-il-lH-pirazol-4-il)-piridin-2-ilamina 197
0 composto em epígrafe foi preparado de acordo com o procedimento 62, utilizando 5-bromo-3-[(R)-1-(2-cloro-3,6-difluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina como material de partida (de acordo com os métodos de síntese de 5-bromo-3[ 2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]-piridin-2-ilamina a partir de (S)-1-(2-cloro-3,6-difluoro-fenil)-etanol, obtido junto de SynChem, Inc.) . ΧΗ NMR (400MHz, DMSO-de) δ 7,88 (s, 1H) , 7, 70 (s, 1H) , 7,50 (s, 1H) , 7,38 (m, 1H) , 7,25 (m, 1H) , 6, 99 (s, 1H) , 5, 88 (m, 1H) , 5,48 (bs, 2H) , 4,08 (m, 1H) , 2, 96 (m, 2H) , 2,53 (m, 1H) , 2,45 (m, 1H) , 1, 89 (m, 1H) , 1, 80 (m, 4H) , 1, 67 (m, 4H) ; LCMS : 434 [M+l ]; c -Met Ki: 0,09 μΜ.
Exemplos biológicos
Subentende-se que, em qualquer sére de compostos observar-se-á uma gama de actividades biológicas. Nos respectivos aspectos preferidos, a presente invenção refere-se a novos compostos capazes de modular, regular e/ou inibir a actividade da proteína quinase. As seguintes 198 análises podem ser usadas para seleccionar os compostos que demonstram um grau óptimo da actividade desejada.
Procedimentos de análise
As análises in vitro seguintes podem ser utilizadas para determinar o nível de actividade e efeito dos diferentes compostos da presente invenção numa ou em várias PKs. Podem ser concebidas ensaios semelhantes, segundo as mesmas linhas para qualquer PK recorrendo a técnicas bem conhecidas na técnica. Remete-se para a seguinte referência bibliográfica (Technikova-Dobrova Z, Sardanelli AM, Papa S FEBS Lett. 1991 Nov 4; 292: 69-72). 0 procedimento geral é o seguinte: compostos e reagentes do ensaio da quinase são introduzidos em poços de ensaio. 0 ensaio é iniciada adicionando a enzima quinase. Os inibidores da enzima reduzem a actividade medida da enzima.
Em análise espectrofotométrica acoplada continua, a produção dependente do tempo de ADP pela quinase é determinada pela análise da taxa de consumo de NADH por medição da diminuição da absorvância a 340 nm. Como a PK produz ADP, é reconvertido em ATP por reacção com fosfoenol piruvado e piruvato quinase. O piruvato é também produzido nesta reacção. O piruvato é depois convertido em lactato por reacção com lactato desidrogenase, o que simultaneamente converte NADH em NAD. NADH possui uma absorvância mensurável a 340 nm, enquanto NAD não. O protocolo presentemente preferido de execução de experiências espectrofotométricas acopladas continuas para PKs especificas é apresentado seguidamente. No entanto, a adaptação deste protocolo para a determinação da actividade 199 de compostos em comparação contra outroa RTKs, bem como CTKs e STKs, está definitivamente incluída no âmbito dos conhecimentos dos peritos na especialidade.
Análise espectrofotométrica acoplada contínuia de HGFR
Este ensaio analisa a actividade de tirosina quinase de HGFR no peptídeo substrato Met-2, um peptídeo derivado da alça de activação do HGFR.
Materiais e reagentes:
Enzima HGFR da Upstate (Met, activo) Ref cat. 14-526
Peptídeo Met-2 (Alça de Activação HGFR) Ac-ARDMYDKEYYSVHNK (MW = 1960) . Dissolve em 200 mM de HEPES, pH 7,5 em 10 mM de solução mãe. 1 Μ PEP (fosfoenol-piruvato) em 200 mM de HEPES, pH 7,5 100 mM NADH (B-Nicotinamida Adenina Dinucleótido, Forma reduzida) em 200mM de HEPES, pH 7,5 4 M MgCl2 (cloreto de magnésio) em ddH20 1 M DTT (Ditiotreitol) in 200 mM de HEPES, pH 7,5 15 Unidades/mL LDH (desidrogenase láctica) 15 unidades/Ml PK (piruvato quinase) 5M NaCl dissolvido em ddH20
Tween-20 (qualidade proteica) solução 10% 1 M tampão HEPES: Sal de sódio de (N-[2- 2-etanossulfónico]) . hidroxetil]piperazina-N-[ácido 200
Dissolver em ddH20, ajustar pH a 7,5, ajustar voluem a 1 L. Filtro a 0,1 μιη. Água de grau HPLC; Burdick and Jackson #365-4, 1X4 litros (ou equivalente) 100% DMSO (SIGMA)
Costar # 3880 - placas com metade da área de fundo plano preto transparente para determinação do Kj e % de inibição
Costar # 3359 - placas de 96 poços em polipropileno, fundo redondo para diluições seriadas
Costar # 3635 - placas de fundo plano transparentes aos UV para % de inibição
Suportes micro célula Beckman DU-650 w/
Cuvete de microcélulas Beckman 4-posições
Procedimento:
Prep tampão de diluição (DB) para enzima (para 30 mL prep) A concentração final de DB é 2 mM DTT, 25 mM NaCl2, 5 mM MgCl2, 0,01% Tween-20 e 50 mM tampão HEPES, pH 7,5.
Completar 50 mM de HEPES adicionando 1,5 mL de 1 M Hepes em 28,1 mL de ddH20. Adicionar restantes reagentes. Em frasco cónico de 50 mL, adicionar 60 μΐ de 1 M DTT, 150 μΐ 5M NaCl2f 150 pL 1M MgCl2 e 30 pL de 10% Tween-20 para atingir um volume final de 30 mL.
Vortex durante 5 a 10 segundos. 201
Tomar uma aliquota de DB a 1 mL/tubo e marcar tubos "DB HGFR"
Nota: Pode ser preparado e guardado antecipadamente.
Congelar aliquotas por utilizar em tubos de microcentrifugação em congelador a -20° C.
Compostos Prep
Para a placa de diluição do composto, adicionar 4 μΐ de 10 mM de solução mãe na coluna 1 da placa e completar o volume a 100 pL com 100% DMSO.
Definir o método de diluição Precision 2000. Uma concentração final de composto 200 μΜ em 50% DMSO, 100 mM de HEPES (1:2 diluição de série) .
Tampão enzimático acoplado prep: 1. Concentração final na análise:
Reagente (Cone. Solução Cone. final na mãe) análise
1 mM 300 μΜ
2 0 mM
2 mM 300 μΜ
100 mM a. PEP (1 M) b. NADH (100 mM) c. MgCl2 (4 M) d. DTT (1 M) e. ATP (500 mM) f. HEPES 200 mM (pH 7.5) g. Piruvato quinase (PK)
15 unidades/mL
h. desidrogenase láctica 15 unidades/mL (LDH) i. peptídeo Met-2 (10 mM)
0,500 mM
i. HGFR
5 0 nM
Para um tampão de reacção de 10 mL adicionar 10 pL de 1M PEP, 33 μι, de 100 mM NADH, 50 μΐ, de 4M MgCl2, 20 μΐ, de 1 M DTT, 6 μΐ, de 500 mM ATP e 500 μΐ, de peptídeo 10 mM Met-2 em 100 mM tampão HEPES pH 7,5 e vortex/misturar Adicionar enzimas de acoplagem, LDH e OK à mistura reaccional. Misturar por inversão suave. Processamento de amostras ('on formulo internacional) 1. Definições do Espectrofotómetro: μ) : i. comprimento de onda de absorvância 34 0 nm ii. Tempo incubação: 10 min iii. Tempo processamento: 10 min iv. Temperatura: 37 203 2. Adicionar 85 pL de mistura reaccional CE em cada poço da placa de análise. 3. Adicionar 5 pL de composto diluído num poço da placa de análise. 4. Adicionar 5 pL de DMSO 50% para controlo negativo na última coluna da placa de análise. 5. Misturar com pipetador ou agitador orbital multi-canal. 6. Pré-incubar durante cerca de 10 minutos a 37° C. 7. Adicionar 10 pL de 500 nM HGFR em cada poço da placa de análise; a concentração final de HGFR é 50 nM num volume final total de 100 pL. 8. Medir actividade durante 10 minutos a λ = 340 nm e 37° C.
As análises in vitro seguintes podem ser empregues para determinar o nível de actividade e efeito dos diferentes compostos da presente invenção ou um ou vários dos PKs. Podem ser concebidas análises semelhantes, segundo as mesmas linhas para qualquer pK recorrendo a técnicas bem conhecidas na técnica. Várias análises descritas são executadas em formato ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Sandwich Assay) format (Voller, et al., 1980, "Enzyme-Linked Immunosorbent Assay," Manual of Clinicai Immunology, 2a ed.. Rose and Friedman, Am. Soc. Of Microbiology, Washington, D.C., pp. 359-371). O procedimento geral é o seguinte: Um composto é introduzido em células que expressam a quinase de ensaio, seja naturalmente ou por recombinação, por um período de tempo seleccionado, após o qual, se a quinase de ensaio for um 204 receptor, se adiciona um ligando conhecido por activar o receptor. As células são lisadas e o lisado é transferido para os poços de uma placa ELISA previamente coberta com um anticorpo especifico, que reconhece o substrato da reacção de fosforilação enzimática. Os componentes não-substrato do lisado de células são removidos por lavagem e a quantidade de fosforilação no substrato é detectada com um anticorpo que reconhece especificamente a fosfotirosina em comparação com células de controlo que não estiveram em contacto com o composto de ensaio.
Os protocolos presentemente preferidos de execução de experiências ELISA para PKs específicas é apresentado seguidamente. No entanto, a adaptação destes protocolos para a determinação da actividade de compostos em comparação com outros RTKs, bem como CTKs e STKs, está definitivamente incluída no âmbito dos conhecimentos dos peritos na especialidade.
Outras análises aqui descritas medem a quantidade de ADN produzido em resposta à activação de uma quinase de ensaio, que é uma medida geral de uma resposta proliferativa. O procedimento geral para esta análise é o seguinte: Um composto é introduzido em células que expressam a quinase de ensaio, seja naturalmente ou por recombinação, por um periodo de tempo seleccionado, após o qual, se a quinase de ensaio for um receptor, se adiciona um ligando conhecido por activar o receptor. Após incubação pelo menos de um dia para o outro, adiciona-se um reagente de marcação de ADN, tal como 5-bromodeoxiuridina (BrdU) ou H3-timidina. A quantidade de ADN marcado é detectado com um anticorpo anti-BrdU ou medindo a radioactividade e é 205 comparado com células de controlo que não estão em contacto com o composto de ensaio.
Análise de transfosforilação MET
Esta análise é utilizada para medir os níveis de fosfotirosina em substrato poli(ácido glutâmico:tirosina 4:1) como meio de identificação de agonistas/antagonistas da transforforilação met do substrato.
Materiais e reagentes:
Placas ELISA de 96 poços da Corning, refa Catálogo Corning 25805-96.
Poly(glu-tyr), 4:1, Sigma, Cat. No; P 0275.
PBS, refa catálogo Gibco 450-1300EB
50 mM HEPES
Tampão de bloqueio: Dissolver 25 g de albumida de soro de bovino, Refa Cat Sigma A-7888, em 500 mL PBS, filtrar através de um filtro de 4 pm.
Proteína de fusão GST purificada, contendo o domínio Met quinase, SUGEN, Inc.
Tampão TBST DMSO 10% aquoso (MilliQue H20) . 10 mM Adenosina-5'-trif osf ato aquosa (dH20) , Refa cat Sigma A-5394.
Tampão de diluição quinase 2x: Apra 100 mL, misturar 10 mL 1M HEPES a pH 7,5 com 0,4 mL 5% BSA/PBS, 0,2 mL 0,1 M 206 ortovanadato de sódio e 1 mL 5M cloreto de sódio em 88,4 mL dH20. mistura reaccional ΑΤΡ 4X: Para 10 mL, misturar 0,4 mL 1 M cloreto de manganês e 0,02 mL 0,1 Μ ATP em 9,56 mL dH20. mistura controlos negativos 4X: Para 10 mL, misturar 0,4 mL 1 M cloreto de manganês em 9,6 mL dH20.
Placas de polipropileno de fundo em V com 96 poços NUNC, refa catálogo Applied Scientific S-72092 500 mM EDTA.
Tampão de diluição anticorpos: Para 100 mL, misturar 10 mL 5% BSA/PBS, 0,5 mL 5% Leite em pó Carnation® em PBS e 1 mL 0,1 M ortovanadato de sódio em 88,4 mL TBST.
Anticorpo antifosfotirosina policlonal de coelho, SUGEN, Inc.
Anticorpo de cabra anti-coelho conjugado com peroxidase de rábano silvestre, Biosource, Inc.
Solução ABTS: Para 1 L, misturar 19,21 g ácido cítrico, 35,49 g Na2HP04 e 500 mg ABTS com dH20 suficiente para perfazer 1 L. ABTS/H202: Msiturar 15 mL solução ABST com 2 pL H202 cinco minutos antes da utilização. 0,2 M HC1
Procedimento:
Revestimento de placas ELISA com 2 pg Poly(Glu-Tyr) em 100 pL PBS, manter de um dia para o outro a 4o C.
Placa bloqueio com 150 pL de 5% BSA/PBS durante 60 min. 207
Lavar palca duas vezes com PBS, depois uma vez com tampão Hepes 50 mM pH 7,4.
Adicionar 50 pL da quinase diluída a todos os poços, (a quinase purificada é diluída com tampão de diluição de quinase. Concentração final deve ser 10 ng/poço).
Adicionar 25 pL do composto de ensaio (em DMSO 4%) ou apenas DMSO (4% em dH20) para controlo por placa.
Incubar a mistura quinase/composto durante 15 minutos.
Adicionar 25 pL de 40 mM MnCl2 aos poços com controlo negativo.
Adicionar 25 pL de mistura ATP/MnCl2 a todos os restantes poços (excepto o controlo negativo). Incubar durante 5 min.
Adicionar 25 pl de 500 mM EDTA para parar a reacção.
Lavar placa 3 x com TBST.
Adicionar 100 pL de anti-Ptyr policlonal de coelho diluído em 1:10.000 e, tampão de diluição anticorpos em cada poço. Incubar com agitação à temperatura ambiente durante uma hora.
Lavar placa 3 x com TBST.
Diluir anticorpo anti-coelho conjugado com HRP da Biosource 1:6.000 em tampão diluição anticorpos. Adicionar 100 pL por poço e incubar à temperatura ambiente, com agitação, durante uma hora.
Lavar placa 1 x com PBS.
Adicionar 100 pL de solução ABTS/H202 a cada poço. 208
Se necessário, parar a evolução da reacção com a adição de 100 pL de 0,2 M HC1 por poço.
Ler a placa do leitor ELISA Dynatech MR7000 com o filtro de ensaio a 410 nM e o filtro de referência a 630 nM.
ANALISES DE INCORPORAÇÃO BrdU
As análises seguintes utilizam células modificadas para expressar um receptor seleccionado e depois avaliar o efeito de um composto de interesse na actividade da sintese de ADN induzida por ligando, determinando a incorporação de BrdU no ADN. Os materiais, reagentes e procedimento seguintes são gerais para cada uma das análises de incorporação de BrdU seguintes. Notaram-se variações em análises especificas.
Materiais e reagentes gerais: O ligando apropriado.
As células modificadas apropriadas.
Reagente de marcação BrdU: 10 mM em PBS, pH 7,4 (Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, IN).
FxDenat: Solução de fixação (Roche Molecular
Biochemicals, Indianapolis, IN).
Anti-BrdU-POD: Conjugado de anticorpo monoclonar de ratinho com peroxidase (Chemicon, Temecula, CA). 209
Solução substrato TMB: Tetrametilbenzidina (TMB pronta a utilizar, Roche Molecular Biochemicals, Indianapolis, IN) .
Solução de lavagem PBS: IX PBS, pH 7,4.
Albumina, bovino (BSA), fracção V pó (Sigma Chemical Co., USA). Procedimento geral:
As células são semeadas a 8000 células/poço em 10% CS, 2 mM Gin em DMEM, numa placa de 96 poços. As células são incubadas de um dia para o outro a 37° C em 5% C02.
Passadas 24 horas, as células foram lavadas com PBS e depois são colocadas em meio isento de soro (0%CS DMEM com 0,1% BSA) durante 24 horas.
No dia 3, o ligando apropriado e o composto de ensaio são adicionados simultaneamente às células. Os poços do controlo negativo recebem DMEM isento de soro apenas com BSA 0,1 %, as células do controlo positivo recebem o ligando mas não o composto de ensaio. Os compostos de ensaio são preparados em DMEM isento de soro, com ligando numa placa de 96 poços e são diluídos em série para 7 concentrações de ensaio.
Após 18 horas de activação do ligando, adiciona.se o reagente de marcação BrdU diluído (1:100 em DMEM, 0,1% BSA) e as células são incubadas com BrdU (concentração final é 10 μΜ) durante 1,5 horas.
Após incubação com reagente de marcação, o meio é removido por decantação e batendo a placa invertida numa toalha de papel. Adiciona-se a solução FikxDenat (50 210 μΐ/poço) e as placas são incubadas à temperatura ambiente durante 45 minutos num agitador de placas. A solução FixDenat é removida por decantação e batendo a placa invertida numa toalha de papel. Adiciona-se o leite (5% leite desidratado em PBS, 200 μΐ/poço) como solução de bloqueio e a placa é incubada durante 30 minutos à temperatura ambiente num agitador de placas. A solução de bloqueio é removida por decantação e os poços são lavados uma vez com PBS. Adiciona-se solução Anti-BrdU-POD (diluição 1:2005 em PBS, 1% BSA, 50 μΐ/poço) e a placa é incubada durante 90 minutos à temperatura ambiente num agitador de placas. O conjugado de anticorpos é removido por decantação e enxaguamento dos poços 5 vezes com PBS e a placa é seca por inversão e batendo numa toalha de papel.
Adiciona-se a solução substrato TMB (100 μΐ/poço) e as placas são incubadas à temperatura ambiente durante 20 minutos num agitador de placas até a revelação da cor ser suficiente para detecção fotométrica. A absorvância das amostras é medida a 410 nm (em modo "comprimento de onda duplo" com uma leitura do filtro a 490 nm, como comprimento de onda de referência) num leitor de placas ELISA Dynatech.
Análise de incorporação BrdU induzido por HGF
Materiais e reagentes: HGF humano recombinante (refa cat. 249-HG, R&D Systems, Inc. USA). 211 Células BxPC-3 (ATCC CRL-1687).
Os materiais e reagentes restantes iguais aos anteriores: Procedimento:
As células são semeadas a 9000 células/poço em RPMI 10% FBS, numa placa de 96 poços. As células são incubadas de um dia para o outro a 37° C em 5% CO2.
Passadas 24 horas, as células são lavadas com PBS e depois são colocadas em 100 pL de meio isento de soro (RPMI com 0,1% BSA) durante 24 horas.
Ao dia 3, 2 5 pL contendo ligando (preparado a 1 pg/mL em RPMI com 0,1 % de BSA; conc. Final HGF é 200 ng/mL) e são adicionados os compostos de ensaio às células. Os poços do controlo negativo recebem 25 pL de RPMI isento de soro apenas com BSA 0,1 %, as células do controlo positivo recebem o ligando (HGF) mas não o composto de ensaio. Os compostos de ensaio são preparados a 5 vezes a concentração final em RPMI isento de soro, com ligando numa placa de 96 poços e são diluidos em série para 7 concentrações de ensaio. Tipicamente, a concentração final mais elevada do composto de ensaio é 100 pM e são utilizadas diluições de 1:3 (isto é o intervalo da concentração final do composto de ensaio é 0,137 a 100 pM).
Após 18 horas de activação do ligando, adiciona-se 12,5 pL o reagente de marcação BrdU diluído (1:100 em DMEM, 0,1% BSA) a cada poço e as células são incubadas com BrdU (concentração final é 10 pM) durante 1 hora.
Igual ao procedimento geral.
Igual ao procedimento geral. 212 A solução de bloqueio é removida por decantação e os poços são lavados uma vez com PBS. Adiciona-se solução Anti-BrdU-POD (diluição 1:100 em PBS, 1% BSA, 100 μΐ/poço) e a placa é incubada durante 90 minutos à temperatura ambiente num agitador de placas.
Igual ao procedimento geral.
Igual ao procedimento geral.
Igual ao procedimento geral.
Análise de autofosforilação HGFR celular
Foram utilizadas células A549 (ATCC) nesta análise. As células foram semeada no meio de cultura (RPMI + 10 % FBS) em placas de 96 poços e cultivadas de um dia para o outro a 37 °C para ligação. As células foram expostas ao meio de privação (RPMI + 0,05% BSA) . Foram adicionadas diluições dos inibidores às placas e foram incubadas a 37 °C durante 1 hora. As células foram estimuladas por adição de 40 ng/mL de HGF durante 15 minutos. As células foram lavadas uma vez com Na3VC>4 em HBSS e depois foram lisadas. Os lisados foram diluídos com 1 mM Na3VC>4 em HBSS e transferidos para uma placa de 96 poços revestidos com cabra anti-coelho (Pierce), pré-revestida com anticorpo anti-HGFR (Zymed Laboratories) . As placas foram incubadas de um dia para o outro a 4 °C e lavadas com 1% Tween 20 em PBS sete vezes. HRP-PY20 (Santa Cruz) foi diluído e adicionado às placas durante incubação de 30 minutos. As placas foram depois lavadas de novo e adicionou-se substrato de peroxidase TMB (Kirkegaard e Perry) e incubou-se durante 10 minutos. A reacção foi parada com adição de 0,09N H2SO4. As placas foram medidas a OD-450 nm, utilizando um espectrofotómetro. 213
Os valores IC50 foram calculados por adaptação da curva utilizando uma análise de quatro parâmetros.
Os compostos da invenção foram medidos por actividade de inibição HGFR, os dados são apresentados em cada exemplo. Os dados Ki foram obtidos utilizando a análise espectrofotométrica acoplada contínua e os dados IC50 foram obtidos utilizando análise de autofosforilação HGFR celular, ambas anteriormente descritas.
Embora a invenção tenha sido ilustrada por referência a concretizações específicas e preferidas, os peritos na especialidade identificarão a possibilidade de introduzir variações e modificações por meio de experiências de rotina e prática da invenção. Assim, não se pretende que a invenção seja limitada pela descrição apresentada anteriormente, mas sim que seja definida pelas reivindicações anexas e equivalentes.
Todas as referências citadas, incluindo quaisquer documentos de prioridade são incorporados por referência na íntegra. 214
REFERÊNCIAS CITADAS NA DESCRIÇÃO
Esta lista das referências citadas pelo requerente serve apenas para conveniência do leitor. Não faz parte do documento da patente europeia. Apesar da compilação cuidadosa das referências, os erros ou as omissões não podem ser excluídos e o IEP rejeita toda a responsabilidade a este respeito.
Documentos de patente citados na descrição:
us 78661004 A us 2004005495 W wo 0038715 A wo 0038716 A wo 0038717 A wo 0038718 A wo 0038719 A wo 0038730 A wo 0038665 A wo 0037107 A wo 0038786 A EP 239362 A wo 9633172 A wo 9627583 A EP 97304971 A
EP 99308617 A 215
wo 9807697 A wo 9803516 A wo 9834918 A wo 9834915 A wo 9833768 A wo 9830566 A EP 606046 . A EP 931788 . A WO 9005719 A WO 9952910 A WO 9952889 A wo 9929667 A wo 9801113 W EP 99302232 A GB 9912961 A US 60148464 B US 5863949 A US 5861510 A EP 780386 . A WO 9519970 A WO 9814451 A WO 9802434 A US 5747498 A WO 9924440 A 216
wo 9900797 W wo 9521613 A wo 9961422 A us 5834504 A wo 9850356 A us 5883113 A us 5886020 A us 5792783 A wo 9910349 A wo 9732856 A wo 9722596 A wo 9854093 A wo 9802438 A wo 9916755 A wo 9802437 A wo 9935146 A wo 9935132 A wo 9713760 A us 5587458 A us 5877305 A us 6011734 1 B us 6011734 6 B us 0922194 6 B us 0945405 8 B 217
us 09501163 B us 09539930 B us 09202796 B us 09384339 B us 09383755 B us 60168207 B us 60170119 B us 60177718 B us 60168217 B us 60200834 B us 60113647 B U S 786610 . A US 6106864 . A wo 0035298 . A wo 9111172 . A wo 9402518 . A
Ο 9855148 A
Literatura, não relacionada com patentes, citada na descrição: • Ma, P.C. ; Maulik, G. ; Christensen, J. ; Salgia, R. Câncer Metastasis Rev, 2003, vol. 22,309-25 • Maulik, G.; Shrikhande, A.; Kijima, T.; Ma, P.C.; Morrison, P.T.; Salgia, R. Cytokine Growth Factor Rev, 2002, vol. 13, 41-59 218
Ma, P.C.; Kijima, T.; Maulik, G.; Fox, E.A.; Sat- tler, M.; Griffin, J.D.; Johnson, B.E.; Salgia, R. Câncer Res, 2003, vol. 63, 6272-6281
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Lisboa, 14/05/2010

Claims (9)

  1. REIVINDICAÇÕES 1. Composto enantiomericamente puro da fórmula I
    em que: Y é N ou CR12; R1 é seleccionado de entre hidrogénio, halogénio, arilo Ce~i2, heteroarilo de 5 a 12 membros (em que heteroarilo representa furano, tiofeno, pirrolo, pirrolina, pirrolidina, dioxolano, oxazol, tiazol, imidazol, imidazolina, imidazolidina, pirazol, pirazolina, pirazolidina, isoxazol, isotiazol, oxadiazol, triazol, tiadiazol, pirano, piridina, piperidina, dioxano, morfolina, ditiano, tiomorfolina, piridazina, pirimidina, pirazina, piperazina, triazina, tritiano ou azetidina) , cicloalquilo C3-12, heteroalicíclico com 3 a 12 membros, -0 (CR6R7) nR4, -C(0)R4, -C(0)0R4, -CN, -N02, -S (0) mR4, -S02NR4R5, -C(0)NR4R5, -NR4C(0)R5, -C (=NR6)NR4R5, alquilo Ci_6, alcenilo C2_8 e alcinilo C2-s; e cada hidrogénio em R1 é opcionalmente substituído por um ou vários grupos R3; R2 representa hidrogénio; cada R3 é independentemente halogénio, alquilo Ci-22, alcenilo C2_i2, alcinilo C2_22, cicloalquilo C3_i2, arilo Ce-i2, heteroalicíclico de 3 a 12 membros, heteroarilo de 5 a 12 membros, -S(0)mR4, -S02NR4R5, -S(0)20R4, -N02, -NR4R5, - (CR6R7) n0R4, -CN, —C (O) R4, -0C(0)R4, -0 (CR6R7) nR4, -NR4C(0)R5, - (CR6R7) nC (O) OR4, - (CR6R7) n0R4, (CR6R7) nC (0) NR4R5, - (CR6R7)nNCR4R5, -C (=NR6) NR4R5, NR4C (O) NR5R6, -NR4S (0) PR5 ou -C(0)NR4R5, cada hidrogénio em R3 é opcionalmente substituído por R8, e os grupos R3 em átomos adjacentes podem combinar-se para formar um arilo C6-i2, heteroarilo de 5 a 12 membros, cicloalquilo C3-i2 ou grupo heteroalicíclico de 3 a 12 membros; cada R4, R5, R6 e R7 é independentemente hidrogénio, halogénio, alquilo Ci_i2, alcenilo C2-i2, alcinilo C2-i2, cicloalquilo C3-i2, arilo C6-i2, heteroalicíclico de 3 a 12 membros, heteroarilo de 5 a 12 membros ou quaisquer dois de R4, R5, R6 e R7 ligados ao mesmo átomo de azoto podem, juntamente com o azoto ao qual estão ligados, ser combinados para formar um grupo heteroalicíclico de 3 a 12 membros ou heteroarilo de 5 a 12 membros contendo opcionalmente 1 a 3 heteroátomos adicionais, seleccionados entre N, 0 e S; ou quaisquer dois de R4, R5, R6 e R7 ligados ao mesmo átomo de carbono podem ser combinados para formar um grupo cicloalquilo C3_i2, arilo C 6-i2, heteroalicíclico de 3 a 12 membros ou heteroarilo de 5 a 12 membros; sendo cada hidrogénio em R4, R5, R6 e R7 opcionalmente substituído por R8; cada R8 é independentemente halogénio, alquilo Ci-i2, alcenilo C2-i2, alcinilo C2_i2, cicloalquilo C3_i2, arilo C6-12, heteroalicíclico de 3 a 12 membros, heteroarilo de 5 a 12 membros, -NH2, -CN, -OH, -0-alquilo Ci-i2, -0-(CH2) n cicloalquilo C3-12 (heteroalicíclico de 3 a 12 membros) ou -0-(CH2) n (heteroarilo de 5 a 12 membros); e cada hidrogénio em R8 é opcionalmente substituído por R11; cada R11 é independentemente halogénio, alquilo C1-12, alcoxi C1-12, cilcloalquilo C3-12, arilo C6-12 r heteroalicíclico de 3 a 12 membros, heteroarilo de 5 a 12 membros, -O-alquilo C1-12, -0-(CH2)n cicloalquilo C3- 12, -0-(CH2)n arilo C6-12, -0-(CH2) n (heteroalicíclico de 3 a 12 membros), -0- (CH2) n (heteroarilo de 5 a 12 membros) ou -CN, sendo cada hidrogénio em R11 opcionalmente substituído por halogénio, -OH, -CN, alquilo C1-12, que pode ser parcialmente ou totalmente halogenado, -0-alquilo Ci_i2 que pode ser parcialmente ou totalmente halogenado, -C0, -S0 ou -SO2; R12 é hidrogénio; cada m é independentemente 0,1 ou 2; cada n é independentemente 0, 1, 2, 3 ou 4; cada p é independentemente 1 ou 2; ou um sal, hidrato ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.
  2. 2. Composto de acordo com a reivindicação 1 da fórmula la
    F em que: Y é CH h R1 é um grupo furano, tiofeno, pirrolo, pirrolina, pirrolidina, dioxolano, oxazol, tiazol, imidazol, imidazolina, imidazolidina, pirazol, pirazolina, pirazolidina, isoxazol, isotiazol, oxadiazol, triazol, tiadiazol, pirano, piridina, piperidina, dioxano, morfolina, ditiano, tiomorfolina, piridazina, pirimidina, pirazina, piperazina, triazina, tritiano, azitidina ou fenilo; sendo cada hidrogénio em R1 opcionalmente substituído por R3; cada R3 é independentemente halogénio, alquilo C1-12, alcenilo C2-12, alcinilo ¢2-12, cicloaquilo C3-12, arilo C6_i2, heteroalicí clico de 3 a 12 membros, heteroarilo de 5 a 12 membros, -S(0)mR4, -S02NR4R5, -S(0)2OR4, -N02, -NR4R5, - (CR6R7) n0R4, -CN, -C (0) R4, -0C(0)R4, -0 (CR6R7) nR4, -NR4C(0)R5, - (CR6R7) nC (0) OR4, - (CR6R7)nOR4, (CR6R7) nC (0) NR4R5, - (CR6R7)nNCR4R5, -C (=NR6) NR4R5, NR4C (0) NR5R6, -NR4S(0)pR5 ou -C(0)NR4R5, cada hidrogénio em R3 é opcionalmente substituído por R8, e os grupos R3 em átomos adjacentes podem combinar-se para formar um arilo C6-12, heteroarilo de 5 a 12 membros, cicloalquilo C3-12 ou grupo heteroalicíclico de 3 a 12 membros; cada R4, R5, R6 e R7 é independentemente hidrogénio, halogénio, alquilo C1-12, alcenilo C2-12, alcinilo C2-12, cicloalquilo C3-12, arilo C6-12, heteroalicíclico de 3 a 12 membros, heteroarilo de 5 a 12 membros ou quaisquer dois de R4, R5, R6 e R7 ligados ao mesmo átomo de azoto podem, juntamente com o azoto ao qual estão ligados, ser combinados para formar um grupo heteroalicíclico de 3 a 12 membros ou heteroarilo de 5 a 12 membros contendo opcionalmente 1 a 3 heteroátomos adicionais, seleccionados entre N, 0 e S; ou quaisquer dois de R4, R5, R6 e R7 ligados ao mesmo átomo de carbono podem ser combinados para formar um grupo cicloalquilo C3_i2, arilo Ce-12 , heteroaliciclico de 3 a 12 membros ou heteroarilo de 5 a 12 membros; sendo cada hidrogénio opcionalmente substituído em R4, R5, R6 e R7 por R8; cada R8 é independentemente halogénio ou alquilo C1-12, alcenilo C2-12, alcinilo C2-i2, cicloalquilo C3-12, arilo Ce-12, heteroaliciclico de 3 a 12 membros, heteroarilo de 5 a 12 membros, -NH2, -CN, -OH, -O-alquilo Ci_i2, -0-(CH2) ncicloalquilo C3-I2, -0-(CH2)n arilo C6-i2, -0- (CH2) n (heterocíclico de 3 a 12 membros) ou -0-(CH2)n (heteroarilo de 5 a 12 membros) ; e cada hidrogénio em R8 é opcionalmente substituído por R11; cada R11 é independentemente halogénio, alquilo Ci_i2, alcoxi Ci-i2, cicloalquilo 03-12, arilo Ce-12, heteroaliciclico de 3 a 12 membros, heteroarilo de 5 a 12 membros, -O-alquilo C1-12, -0-(CH2)n cicloalquilo C3- 12, -0-(CH2) narilo Ce-12, -0- (CH2) n (heteroaliciclico de 3 a 12 membros), -O-(CH2) n (heteroarilo de 5 a 12 membros) ou -CN, sendo cada hidrogénio em R11 opcionalmente substituído por halogénio, -OH, -CN, alquilo Ci_i2, que pode ser parcialmente ou totalmente halogenado, -0-alquilo Ci-i2 que pode ser parcialmente ou totalmente halogenado, -C0, -S0 ou -S02; cada m é independentemente 0,1 ou 2; cada n é independentemente 0, 1, 2, 3 ou 4; cada p é independentemente 1 ou 2; ou um sal , hidrato ou solvato farmaceuticamente aceitável do mesmo.
  3. 3. Composto enantiomericamente puro seleccionado a partir do grupo composto por 5-Bromo-3-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-ilamina; 5-iodo-3-[(R)1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina; 5-bromo-3-[1(R)-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-2-ilamina; ácido 4-{5-Amino-6-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-benzóico; (4 —{5-Amino-6-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-fenil)-piperazin-l-il-metanona; éster tert-butilico de ácido 4- (4-{5-Amino-6-[(R)-1-(2, 6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-benzoil)-piperazina-l-carboxilico; 3-[(IR)-1-(2,6- dicloro-3-fluorofenil)etoxi]-5-[4-(piperazin-1-ilcarbonil)fenil]piridina-2-amina; 4-{6-amino-5-[(IR)- 1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridin-3-il}-N-[2-(dimetilamino)etil]-N-metilbenzamida; (4-{6-amino-5-[(IR)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridin-3-il}fenil)metanol; 4-{6-amino-5-[(IR)-1-(2,6-dicloro-3-fluorofenil)etoxi]piridin-3-il}-N-[3- (dimetilamino)propil]-N-metilbenzamida; tert-butil 4- (4 —{6-amino-5-[ (IR)-1-(2,6-dicloro-3 fluorofenil)etoxi]piridin-3-il}benzoil)piperazina-1-carboxilato; 3-[(R)-1-(2,6-Dicloro-3-fluorofenil)- etoxi]-5-[1-(l-metil-piperidin-4-il)-lH-pirazol-4-il]-piridin-3-il-amina; 1-[4-(4-{6-Amino-5-[(R)-1-(2,6- dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-piridin-3-il}-pirazol-1-il)-piperidin-l-il]-2-hidroxietanona; 3—[(R)—1—(2,6— Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(l-piperidin-4-il-lH-pirazol-4-il)-piridin-2-il-amina; 3-[(R)-1-(2,6- Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(l-piperidin-4-il-lH-pirazol-4-il)-piridin-2-il-amina; 3-[(R)-1-(2,6- Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(l-piperidin-4-il-lH-pirazol-4-il)-pirazin-2-il-amina; 3-[(R)-1 -(2,6- Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(lH-pirazol-4-il)-pirazin-2-il-amina; 1-[4-(4-{5-Amino-6-[(R)-1-(2,6- dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-pirazol-1-il)-piperidin-l-il]-2-hidroxi-etanona; 3-[(R)-1-(2,6-Dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-[1-(1-metil-piperidin-4 — i1)-lH-pirazol-4-il]-pirazin-2-il-amina; 1-[4-(4-(5-Amino-6-[(R)-1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-pirazin-2-il}-pirazol-l-il)-piperidin-l-il]-2-dimetilamino-etanona; 3-[(R)-1-(2-Cloro-3,6-difluoro-fenil)-etoxi]-5-(l-piperidin-4-il-lH-pirazol-4-il)-piridina-2-il-amina; ou um sal solvato ou hidrato farmaceuticamente aceitável do mesmo.
  4. 4. Composto de acordo com a reivindicação 3 que é 3—[(R)— 1-(2,6-dicloro-3-fluoro-fenil)-etoxi]-5-(l-piperidin-4-il-lH-pirazol-4-il)-piridin-2-ilamina.
  5. 5. Utilização de um composto, sal, hidrato ou solvato de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 para a preparação de um medicamento destinado ao tratamento do crescimento celular anómalo num mamífero.
  6. 6. A utilização da reivindicação 5, em que o crescimento celular anómalo é um cancro.
  7. 7. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 destinado a utilização no tratamento do crescimento celular anómalo num mamífero.
  8. 8. Composto de acordo com a reivindicação 7, em que o crescimento celular anómalo é cancro.
  9. 9. Composição farmacêutica compreendendo um composto, sal, hidrato ou solvato de qualquer uma das reivindicações 1 a 4 e um veiculo farmaceuticamente aceitável. Lisboa, 14/05/2010
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