LT4078B

LT4078B - Therapeutic peptide derivatives

Info

Publication number: LT4078B
Application number: LT96-025A
Authority: LT
Inventors: Sun Hyuk Kim; Zhengxin Dong; John E Taylor; Sylviane Moreau; Susan Riley Keyes
Original assignee: Biomeasure Inc
Priority date: 1993-08-09
Filing date: 1996-03-06
Publication date: 1996-12-27
Also published as: JP2005015488A; ES2309131T3; PL180612B1; DK1288224T3; DE69435105D1; ATE284413T1; WO1995004752A1; DK0788509T3; DK1288223T3; PL312989A1; CN1055700C; DE69432758D1; GEP20002146B; CN1133047A; ATE399177T1; EP1288224A1; JP3618750B2; HU9600281D0; SG75092A1; AU7481994A

Description

Šiame išradime kalbama apie terapijoje naudojamus peptidus.

Jau anksčiau buvo bandoma prailginti biologiškai veiklių peptidų veikimą. Pavyzdžiui, kad pailgėtų peptidų veikimo laikas, juos modifikuodavo chemiškai, sintezės metu įvesdami cukraus dalis [Sandoz, WO 88/02756; Sandoz, WO 89/09786; DE 3910667 Al, EPO 0 374 089 A2 (1990); ir Breipohl, US patentas Nr. 4.861.755 (1989)]. Stengiantis padidinti peptido gyvavimo laiką, taip pat buvo įvedami katijoniniai inkarai [EPO 0 363 589 A2 (1990)] ir lipidinės dalys [Whittaker, WO 91/09837; Jung, US patentas Nr. 4.837.303 (1989)].

Apskritai, pagal mūsų išradimą yra gaunami biologiškai veiklių peptidų dariniai, turintys vieną arba daugiau pakaitalų, atskirai prijungtų prie aminogrupės N-terminaliniame gale arba prie šoninės grandinės peptidinėje dalyje. Taip modidikuoti dariniai pasižymi stipresniu ir ilgesniu biologiniu veikimu nei atitinkami nemodifikuoti peptidai.

Peptidų dariniai yra patrauklūs tuo, kad jie nebrangūs, pasižymi aukšto laipsnio biologiniu suderinamumu, neturi žalingo pašalinio poveikio ir yra suderinami su įvairiais terapinio gydymo būdais. Daugelis darinių, kurių peptindinę dalį sudaro somatostatinas, ypač sustiprina poveikį ir atrankumą lyginant su nemodifikuotu somatostatinu.

Vienu požiūriu, išradimas yra susijęs su peptidų dariniu, turinčiu biologiškai veiklią peptidinę dalį ir prie jos prijungtą mažiausia vieną pakaitalą pakaitalas pasirenkamas iš grupės, sudarytos iš I, II ir III junginio, kur I junginys yra apibūdinamas formule

kurioje:

R_o yra O, S arba NR₅, kur R₅ yra H arba (Cį-Cgjalkilas;

kiekvienas iš Rį ir R₂, nepriklausomai, yra H, (CH₂ )_mOR₆ arba CH(OR₇)CH₂OR₈, kur R₆ yra H arba (C₂-C₇)acilas, ir kiekvienas iš R₇ ir R₈, nepriklausomai, yra H, (C₂-C₇)acilas arba C(R₉)(R₁₀), kur kiekvienas iš R₉ ir R₁₀, nepriklausomai, yra H arba (C_rC₆)alkilas; arba bet kuris iš Rį ir R₂ yra =CHCH₂ORį _b kur kiekviename iš R, ir R₂, nepriklausomai, R_n yra H arba (C₂-C₇)acilas ir m yra natūrinis skaičius nuo 1 iki 5 imtinai; ir vienas iš R₃ arba R₄ yra (CH₂ )_nR_I2 arba (CH₂ )_nCH(OH)R₁₂, kuriuose R₁₂ yra CO, CH₂ arba SO₂, ir n yra natūrinis skaičius nuo 1 iki 5 imtinai; ir likęs R₃ arba R₄ yra H, (CĮ-C₆)hidroksialkilas arba (C₂-C₇)acilas; ir

II junginys yra apibūdinamas formule

R,3-O-(JH₂

R_[4-O-CH₂-(j-(CH₂)_m-R₁₆-R₁₇-(CH₂)_n-R₁₈,

R₁₅-O-CH₂ kurioje:

bet kuris iš R₁₃, R₁₄ ir R₁₅, nepriklausomai, yra H arba (C₂-C₂₄)acilas;

R₁₆ yra NH arba jo nėra;

R₁₇ yra CO, O arba jo nėra;

R, ₈ yra CO, CH₂, SO₂ arba jo nėra; ir m yra natūrinis skaičius nuo 1 iki 5 imtinai; ir n yra natūrinis skaičius nuo 0 iki 5 imtinai; ir

III junginys yra apibūdinamas formule (CH₂)_m

R-19 ' R-20 ' R-21 ‘ ^-22 R-23 ' ^24 ' (CH₂)_p - R₂5 ’ (CH₂)_q - R₂₆, (CH₂)_n kurioje:

R, ₉ yra H, NH₂, aromatinė funkcinė grupė, OH, (CĮ-C₆)hidroksialkilas, H(R₂₇)(R₂₈), SO₃H arba jo nėra, kur bet kuris iš R₂₇ ir R₂₈, nepriklausomai, yra H arba (C_rC₆)alkilas;

R₂₀ yra O arba jo nėra;

R₂₁ yra (CĮ-C₆)alkilas arba j o nėra;

R₂₂ yra N, CH, O arba C;

-R₂₃- yra (CĮ-C₆)alkilas arba jo nėra;

R₂₄ yra N, CH arba C;

R₂₅ yraNH, O arba jo nėra;

R₂₆ yra SO₂, CO, CH₂ arba jo nėra; m yra natūrinis skaičius nuo 0 iki 5 imtinai; n yra natūrinis skaičius nuo 0 iki 5 imtinai; p yra natūrinis skaičius nuo 0 iki 5 imtinai; ir q yra natūrinis skaičius nuo 0 iki 5 imtinai.

I, II ir III junginiuose peptidinė dalis yra prijungta prie pakaitalo CO-N, CH₂-N arba SO₂-N jungtimis, būtent tarp pakaitalo ir minėtosios peptidinės dalies azoto atomo N-terminaliniame gale arba šoninės grandinės.

Pagal geresnius išradimo atvejus -R₂₃- yra (C_rC₆)alkilas; R₂₂ yra N, C arba CH; ir R₂₄yra C. Pasirenkant kitaip, R₂₂ yra O; o R₁₉, R₂₀, R₂₁ ir -R₂₃- nėra; bei m ir n suma yra 3, 4 arba 5.

Pagal kitus geresnius išradimo atvejus pakaitalas yra junginys I; šiuo atveju geriau, kai R₁₂ yra CH₂ arba SO₂. Pasirenkant kitaip, pakaitalu gali būti junginys II, ir tuo atveju geriau, kai R₁₈ yra CH₂ arba SO₂; R₁₃, R₁₄ ir R₁₅ yra H; ir R₁₇ nėra. Pagal ypatingai gerus atvejus pakaitalas yra (HOCH₂)₃C-NH-(CH)₂-SO₂ arba (HOCH₂)₃C-CH₂.

Pagal dar kitus išradimo atvejus pakaitalas yra junginys III; ir šiuo atveju geriau, kai -R₂₃- nėra, ir bent vienas iš R₂₂ ir R₂₄ yra N. Pasirenkant kitaip, R₂₂ ir R₂₄ gali būti N.

Pagal kitus atvejus pakaitalu yra vienas iš šių junginių:

/-\

HO(CH₂)₂ - n N - (CH₂)CO ir

HO(CH₂)₂ - N N - (CH₂)₂SO₂ -.

Geriau, kai peptidinė dalis yra pasirenkama iš grupės, kurią sudaro somatostatinas, bombezinas, kalcitoninas, su kalcitonino genu susijęs peptidas (CGRP), amilinas, paratiroidinis hormonas (PTH), gastriną atpalaiduojantis peptidas (GRP), melanocitą stimuliuojantis hormonas (MSH), adrenokortikotropinis hormonas (ACTH), su paratiroidu susietas peptidas (PTHrP), geltonkūnio susidarymo hormoną atpalaiduojantis hormonas (LHRH), augimo hormoną atpalaiduojantis faktorius (GHRF), augimo hormoną atpalaiduojantis peptidas (GHRP), cholecistokininas (CCK), gliukagonas, bradikininas, gliukagono tipo peptidas (GLP), gastrinas, enkefalinas, neuromedinai, endotelinas, medžiaga

P, neuropeptidas Y (NPY), peptidas YY (PYY), vazoaktyvus žarnyno peptidas (VIP), guanilinas, hipofizės adenilatciklazę aktyvuojantis polipeptidas (PACAP), beta-ląstelių tropinas, adrenomedulinas ir jų dariniai, fragmentai bei analogai.

Geriau, kai peptidinė dalis yra somatostatinas arba jo darinys, fragmentas arba analogas. Geriausia, jei somatostatino analogas yra vienas iš šių junginių: H-D-Phe-c[CysTyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂, H-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH₂ ir HD-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH₂. Pasirenkant kitaip, peptidine dalimi gali būti bombezinas arba jo darinys, fragmentas arba analogas.

Pagal dar kitus išradimo atvejus peptidų darinys yra vienas iš šių junginių:

/-\

H0(CH₂) 2 - N N - (CH₂)CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂ ir /-\

HO(CH₂) 2 - N N - (CH₂)₂SO₂-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂.

\_/

Kitu požiūriu, pagal išradimą yra gaunamas dimerinis peptidų darinys, turintis dvi biologiškai veiklias peptidines dalis, ir bent vieną pakaitalą, prijungtą prie kiekvienos peptidinės dalies. Pakaitalas yra pasirenkamas iš grupės, susidedančios iš IV ir V junginių, kur IV junginio bendroji sandara yra tapati I junginio sandarai, o V junginio bendroji sandara tapati III junginio sandarai. Kiekviena dimero peptide dalis yra prijungta prie pakaitalų CO-N, CH₂-N arba SO₂-N jungtimi tarp pakaitalo ir azoto atomo N-terminaliniame gale arba vienos iš peptidės dalies šoninių grandinių.

Dar kitu požiūriu, išradime kalbama apie ligos, pavyzdžiui, vėžio, gydymo būdą; būdas apima čia aprašytų peptidų darinių skyrimą pacientui terapinėmis dozėmis. Geriau, kai gydymui vartojama peptidinė dalis yra somatostatinas.

Išradime vartojama sąvoka “biologiškai veiklus” reiškia natūralų, rekombinantinį ir sintetinį peptidą, pasižymintį fiziologiniu arba terapiniu aktyvumu. Apskritai, ši sąvoka jungia visus biologiškai veiklius peptidų darinius, fragmentus ir analogus, kurie pasižymi kiekybiškai panašiu arba priešingu veikimu, lyginant su nemodifikuotų peptidų poveikiu.

Prie aprašymo pridedamoje figūroje yra pavaizduotas ląstelių AR42J dviejų augimo kreivių, esant skirtingiems somatostatino dariniams, grafikas.

Peptidų dariniai

Apskritai, išradimo peptidų dariniai susideda iš dviejų komponentų: 1) biologiškai veiklaus peptido; ir 2) bent vieno pakaitalo, turinčio I, II ir III junginių sandarą. Peptidų dariniuose, gaunamuose pagal išradimą, yra junginių, kurie aprašyti toliau.

R₃O O-(CH₂)_nCH(OH)Ri2-NH-P’

P’-NH-Ri₂CH(OH)(CH₂)n-O OR4

R3O O-(CH₂)_nRi₂-NH-P’

P’-NH-R₁₂(CH₂)_n-O OR4, kuriuose R_o, R|, R₂, R3, R4, Ri₂ ir n yra apibrėžti aukščiau, ir NH-P’ yra biologiškai veikli peptido dalis. Šiuose atvejuose NH grupė yra N-terminaliniame gale arba šoninėje peptido grandinėje, ir P’ yra likusi peptido dalis.

II junginio dariniai

R.3 - O - ch₂

I

R₁₄ - O - CH₂ - C - (CH₂)_m - R₁₆ - R₁₇ - (CH₂)_n - R₁₈ - NH-P’

I

Ri5-O-CH₂ kuriuose R₁₃, R_M, R_I5, R_Į6, R_]7, R₁₈, m, n ir NH - P’ yra apibrėžti aukščiau.

III junginio dariniai (CH₂)_m

R19 - R₂q - R21 - R22 R23 - R24 - R25 · (CH₂)_p - R₂₆ - NH - P’ (CH₂)_n kuriuose R₁₉, R₂₀, R₂i, R₂₂, R₂₃, R24, R25, R26, ^m, n, p ir NH-P’ yra apibrėžti aukščiau.

Papildomai aukščiau pateiktiems, pagal išradimą gaunami junginiai yra peptidų dariniai, kurie turi du arba daugiau pakaitalų, prijungtų vienoje peptidinėje dalyje. Šie išradimo atvejai apima biologiškai veiklių peptidų darinius, turinčius daugiau nei vieną laisvą amino grupę, pvz., lizino liekaną.

Pagal išradimą taip pat yra gaunami dimeriniai peptidų dariniai, sudaryti iš dviejų peptidinių dalių, prijungtų prie vieno pakaitalo, pvz., du bradikinino analogai, prijungti prie V junginio pakaitalo.

Išradimo peptidų dariniai yra biologiškai veiklių peptidų dariniai, pasirenkami iš grupės, kurią sudaro: somatostatinas, bombezinas, kalcitoninas, su kalcitonino genu susietas peptidas (CGRP), amilinas, paratiroidinis hormonas (PTH), gastriną atpalaiduojantis peptidas (GRP), melanocitą stimuliuojantis hormonas (MSH), adrenokortikotropininis hormonas (ACTH), su paratiroidu susietas peptidas (PTHrP), geltonkūnio susidarymo hormoną atpalaiduojantis hormonas (LHRH), augimo hormoną atpalaiduojantis faktorius (GRF), augimo hormoną atpalaiduojantis peptidas (GHRP), cholecistokininas (CCK), gliukagonas, bradikininas, gliukagono tipo peptidas (GLP), gastrinas, enkefalinas, neuromedinai, endotelinas, medžiaga P, neuropeptidas Y (NPY), peptidas YY (PYY), vazoaktyvus žarnyno peptidas (VIP), guanilinas, hipofizės adenilatciklazę aktyvuojantis polipeptidas (PACAP), beta-ląstelių tropinas, adrenomedulinas ir bet kurio jų dariniai, fragmentai bei analogai.

Ypač geri išradimo atvejai yra tie, kai peptidinę dalį sudaro somatostatinas arba jo darinys, fragmentas arba analogas. Somatostatino analogai, kurie gali būti panaudojami pagal šį išradimą, jungia, nors jais ir neapsiriboja, žemiau išvardintus junginius:

H - D - β - Nal - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - NH₂,

H - D - Phe - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - β -Nal - NH₂,

H - D - Phe - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Thr - Cys - β -Nal - NH₂,

H - D - β - Nal - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - NH₂,

H - D - Phe - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Thr - Pen - Thr - NH₂,

H - D - Phe - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Pen - Thr - NH₂,

H - D - Phe - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Thr - Pen - Thr,

H - D - Phe - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Pen - Thr,

H - Gly - Pen - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr,

H - Phe - Pen - Tyr - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr,

H - Phe - Pen - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Pen - Thr,

H - D - Phe - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - olis,

H - D - Phe - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - NH₂,

H - D - Trp - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Cys - Thr - NH₂,

H - D - Trp - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - NH₂,

H - D - Phe - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Cys - Thr - NH₂,

H - D - Phe - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Cys - Trp - NH₂,

H - D - Phe - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Cys - Thr - NH₂,

Ac - D - Phe - Lys*- Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Asp - Thr - NH₂,

Ac - hArg(Et)₂ - Gly - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - NH₂,

Ac - D - hArg(Et)₂ - Gly - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - NH₂,

Ac - D - hArg(Bu) - Gly - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - NH₂,

Ac - D - hArg(Et)₂ - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - NH₂,

Ac - L - hArg(Et)₂ - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - NH₂,

Ac - D - hArg(CH₂CF₃)₂ - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - NH₂,

Ac - D - hArg(CH₂CF₃)₂ - Gly - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - NH₂,

Ac - D - hArg(CH₂CF₃)₂ - Gly - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Phe - NH₂,

Ac - D - hArg(CH₂CF₃)₂ - Gly - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - NHEt,

Ac - L - hArg(CH₂CF₃)₂ - Gly - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - NH₂,

Ac - D - hArg(CH₂CF₃)₂ - Gly - Cys - Phe - D - Trp - Lys(Me) - Thr - Cys - Thr - NH₂,

Ac - D - hArg(CH₂CF₃)₂ - Gly - Cys - Phe - D - Trp - Lys(Me) - Thr - Cys - Thr NHEt,

Ac - hArg(CH3, heksil) - Gly - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - NH₂,

H - hArg(heksil₂) - Gly - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - NH₂,

Ac - D - hArg(Et)₂ - Gly - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - NHEt,

Ac - D - hArg(Et)₂ - Gly - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Phe - NH₂,

Propionil - D - hArg(Et)₂ - Gly - Cys - Phe - D - Trp - Lys(iPr) - Thr - Cys - Thr NH₂,

Ac - D - β - Nal - Gly - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Gly - hArg(Et)₂ - NH₂,

Ac - D - Lys(iPr) - Gly - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - NH₂,

Ac - D - hArg(CH₂CF₃)₂ - D - hArg(CH₂CF₃)₂ Gly - Cys - Phe - D - Trp - Lys Thr - Cys - Thr - NH₂,

Ac - D - hArg(CH₂CF₃)₂ - D - hArg(CH₂CF₃)₂ Gly - Cys - Phe - D - Trp - Lys Thr - Cys - Phe - NH₂,

Ac - D - hArg(Et)₂ - D - hArg(Et)₂ Gly - Cys - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Cys Thr - NH₂,

Ac - Cys -Lys - Asn - 4 - C1 - Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe - Thr - Ser D - Cys - NH₂,

Bmp - Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Cys - Thr - NH₂,

Bmp - Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Cys - Phe - NH₂,

Bmp - Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Cys - p - C1 - Phe - NH₂,

Bmp - Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Cys - β - Nal - NH₂,

H - D - β - Nal - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Cys - Thr - NH₂,

H - D - Phe - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Abu - Cys - Thr - NH₂,

H - D - Phe - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Abu - Cys - β - Nal - NH₂,

H - pentafluor - D - Phe - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Cys - Thr - NH₂,

Ac - D - β - Nal - Cys - pentafluor - Phe - D - Trp - Lys - Vai - Cys - Thr - NH₂, g

H - D - β - Nal - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Cys - β - Nal - NH₂,

H - D - Phe - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Cys - β - Nal - NH₂,

H - D - β - Nal - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Abu - Cys - Thr - NH₂,

H - D - p - C1 - Phe - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Abu - Cys - Thr - NH₂, Ac - D - p - C1 - Phe - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Abu - Cys - Thr - NH₂, H - D - Phe - Cys - β - Nal - D - Trp - Lys - Vai - Cys - Thr - NH₂,

H - D - Phe - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Cys - Thr - NH₂, ciklo (Pro - Phe - D - Trp - N - Me - Lys - Thr - Phe), ciklo (Pro - Phe - D - Trp - N - Me - Lys - Thr - Phe), ciklo (Pro - Phe - D - Trp - Lys - Thr - N - Me - Phe), ciklo (N - Me - Ala - Tyr - D - Trp - Lys - Thr - Phe), ciklo (Pro - Tyr - D - Trp - Lys - Thr - Phe), ciklo (Pro - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe), ciklo (Pro - Phe - L - Trp - Lys - Thr - Phe), ciklo (Pro - Phe - D - Trp(F) - Lys - Thr - Phe), ciklo (Pro - Phe - Trp(F) - Lys - Thr - Phe), ciklo (Pro - Phe - D - Trp - Lys - Ser - Phe), ciklo (Pro - Phe - D - Trp - Lys - Thr - p - C1 - Phe), ciklo (D - Ala - N - Me - D - Phe - D - Thr - D - Lys - Trp - D - Phe), ciklo (D - Ala - N - Me - D - Phe - D - Vai - Lys - D - Trp - D - Phe), ciklo (D - Ala - N - Me - D - Phe - D - Thr - Lys - D - Trp - D - Phe), ciklo (D - Abu - N - Me - D - Phe - D - Vai - Lys - D - Trp - D - Tyr), ciklo (N - Me - Ala - Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Phe), ciklo (Pro - Tyr - D - Trp - 4 - Amphe - Thr - Phe), ciklo (Pro - Phe - D - Trp - 4 - Amphe - Thr - Phe), ciklo (N - Me - Ala - Tyr - D - Trp - 4 - Amphe - Thr - Phe), ciklo (Asn - Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe - Gaba), ciklo (Asn - Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe - Gaba - Gaba), ciklo (Asn - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe), ciklo (Asn - Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe - NH(CH₂)₄CO), ciklo (Asn - Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe - β - Ala), ciklo (Asn - Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe - D - Glu) - OH, ciklo (Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe), ciklo (Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe - Gly), ciklo (Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe - Gaba), ciklo (Asn - Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe - Gly), ciklo (Asn - Phe - Phe - D - Trp(F) - Lys - Thr - Phe - Gaba), ciklo (Asn - Phe - Phe - D - Trp(NO₂) - Lys - Thr - Phe - Gaba), ciklo (Asn - Phe - Phe - Trp(Br) - Lys - Thr - Phe - Gaba), ciklo (Asn - Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe(I) - Gaba), ciklo (Asn - Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Tyr(But) - Gaba), ciklo (Bmp - Lys - Asn - Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe - Thr - Pro - Cys) - OH, ciklo (Bmp - Lys - Asn - Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe - Thr - Pro - Cys) - OH, ciklo (Bmp - Lys - Asn - Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe - Thr - Tpo - Cys) - OH, ciklo (Bmp - Lys - Asn - Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe - Thr - MeLeu Cys) - OH, ciklo (Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe - Phe - Gaba), ciklo (Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe -D - Phe - Gaba), ciklo (Phe - Phe - D - Trp(5F) - Lys - Thr - Phe - Phe - Gaba), ciklo (Asn - Phe - Phe - D - Trp - Lys(Ac) - Thr - Phe - NH - (CH₂)₃-CO), ciklo (Lys - Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe - Gaba), ciklo (Lys - Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe - Gaba), ir ciklo (Orn - Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe - Gaba), * * kur Lys reiškia amidinį tiltelį tarp Lys ir Asp.

Aukščiau išvardinti peptidų junginiai yra aprašyti žemiau pateikiamame literatūros sąraše, kuriame kiekvienas jų turi atitinkamą nuorodą:

EP paraiška Nr. P5 164 EU; Van Binst G. et ai. Peptide Research 5:8 (1992); Horvath A. et ai. Tezės, “Somatostatino analogų, pasižyminčių priešaugliniu aktyvumu, konformacijos”, 22-asis Europos peptidų simpoziumas, Rugsėjo 13-19, 1992, Interlaken,

Šveicarija; PCT paraiška WO 91/09056 (1991); EP paraiška 0 363 589 A2 (1990); EP paraiška 0 203 031 A2 (1986); US patentai Nr.

4.904.642; 4.871.717; 4.853.371; 4.725.577; 4.684.620; 4.650.787; 4.603.120; 4.585.755; 4.522.813; 4.486.415; 4.485.101; 4.435.385; 4.395.403; 4.369.179; 4.360.516; 4.358.439; 4.328.214; 4.316.890; 4.310.518; 4.291.022; 4.238.481; 4.235.886; 4.224.190; 4.211.693;

4.190.648; 4.146.612 ir 4.133.782.

Aukščiau išvardintuose somatostatino analoguose kiekvieno aminorūgšties likučio struktūrinė formulė yra NH-C(R)H-CO-, kurioje R reiškia šoninę grandinę; brūkšneliai tarp aminorūgščių grupių atitinka peptidinę jungtį, jungiančią aminorūgštis. Jei aminorūgštis yra optiškai aktyvi, tai laikoma, kad ji L-tipo simetrijos; specialiai pažymima, jei esama D-tipo simetrijos. Kai peptidas turi du Cys likučius, tuomet tarp dviejų dalių susidaro disulfidiniai tilteliai. Beje, pastaroji jungtis nėra parodyta aukščiau išvardintuose likučiuose.

Dar kitų geresnių išradimo somatostatino analogų struktūrinė formulė yra:

Ai - A₂ - A₃ - D - Trp - Lys - A₆ - A₇ - A₈ -R₃ kurioje A, yra β-Nal D- arba L-izomeras, Trp, β-piridil - Ala, Phe, pakeistas Phe, arba ji pašalinta; kiekviena iš A₂ ir A₇ grupių, nepriklausomai, yra Cys, Asp arba Lys. Šios dalys viena su kita yra kovalentiškai surištos disulfidiniais arba amidiniais tilteliais. Be to, A₃ yra βNal, Phe, arba o-, m-, arba p-pakeistas X-Phe, kur X yra halogenas, OH, NH₂, NO₂arba C|.₃alkilas; A₆ yra Vai, Thr, Ser, Ala, Phe, β-Nal, Abu, Ile, Nle arba Nva; ir A₈ yra Phe, Thr, Tyr, Trp, Ser, β-Nal, alkoholio grupė, arba ji pašalinta; kiekvienas iš Rį ir R₂, nepriklausomai, yra H, žemesnysis acilas arba žemesnysis alkilas; ir R₃ yra OH, NH₂ arba pašalintas. Geriau, kai viena iš A₂ ir A₇ grupių yra Cys, kita taip pat yra Cys; kai A₈ yra aaminoalkoholis, R₃ pašalintas; ir kai nei A₂, nei A₇ nėra Cys, A₂ skiriasi nuo A₇.

Šiuo atveju ypatingai geri yra sekantys somatostatino analogai:

Me - D - Phe - Cys - Tyr - Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Cys - Thr - NH₂,

H - D - Nal - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Nal - NH₂, H - D - Nal - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - NH₂, H - D - Phe - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Abu - Cys - Thr - NH₂,

H - D - Phe - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Nal - NH₂, ir

H - D - Phe - Cys - Tyr - D - Trp - Lys - Thr - Cys - Thr - olis.

Kitais atvejais išradimo linijiniai somatostatino analogai apibūdinami tokia struktūrine formule:

R,

A¹ - A² - A³ - D - Trp - Lys - A⁶ - A⁷ - A⁸ -R₃,

R₂ kurioje

A¹ yra Ala D- arba L-izomeras, Leu, Ile, Vai, Nle, Thr, Ser, β-Nal, β-piridil-Ala, Trp, Phe, 2,4-dichlor-Phe, pentafluor-Phe, p-X-Phe arba o-X-Phe, kur X yra CH₃, Cl, Br, F, OH, OCH₃ arba NO₂;

A² yra Ala, Leu, Ile, Vai, Nle, Phe, β-Nal, piridil-Ala, Trp, 2,4-dichlor-Phe, pentafluorPhe, o-X-Phe arba p-X-Phe, kur X yra CH₃, Cl, Br, F, OH, OCH₃ arba NO₂;

T

A yra piridil-Ala, Trp, Phe, β-Nal, 2,4-dichlor-Phe, pentafluor-Phe, o-X-Phe, arba pX-Phe, kur X yra CH₃, Cl, Br, F, OH, OCH₃ arba NO₂;

A⁶ yra Vai, Ala, Leu, Ile, Nle, Thr, Abu arba Ser;

A⁷ yra Ala, Leu, Ile, Vai, Nle, Phe, β-Nal, piridil-Ala, Trp, 2,4-dichlor-Phe, pentafluorPhe, o-X-Phe arba p-X-Phe, kur X yra CH₃, Cl, Br, F, OH, OCH₃ arba NO₂;

A⁸ yra Ala D- arba L-izomeras, Leu, Ile, Vai, Nle, Thr, Ser, Phe, β-Nal, piridil-Ala, Trp, 2,4-dichlor-Phe, pentafluor-Phe, p-X-Phe arba o-X-Phe, kur X yra CH₃, Cl, Br, F, OH, OCH3 arbaNO₂, arba jų alkoholis; ir kiekvienas iš R] ir R₂, nepriklausomai, yra H, žemesnysis acilas arba žemesnysis 1 8 2 alkilas; ir R₃ yra OH, NH₂ arba pašalintas. Geriau, kai bent viena iš A ir A ir viena iš A ir A grupių tikrai yra aromatinė aminorugštis; ir kai A yra alkoholis, R₃ yra pašalintas. Be to, A , A , A ir A negali visos būti aromatinėmis aminorūgštimis. Ypatingai geri šiuo požiūriu išradimo analogai yra:

H - D - Phe - p - chlor - Phe - Tyr - D - Trp - Lys - Thr - Phe - Thr - NH₂,

H - D - Phe - p - NO₂ - Phe - Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Thr - Phe - Thr - NH₂,

H - D - Nal - p - chlor - Phe - Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Phe - Thr - NH₂,

H - D - Phe - Phe - Phe - D - Trp - Lys - Thr - Phe - Thr - NH₂,

H - D - Phe - Phe - Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Phe - Thr - NH₂,

H - D - Phe - p - chlor - Phe - Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Phe - Thr - NH₂, ir

H - D - Phe - Ala - Tyr - D - Trp - Lys - Vai - Ala - D - β - Nal - NH₂.

Dar kituose geresniuose atvejuose peptidinę dalį sudaro bombezinas arba jo darinys, fragmentas arba analogas. Bombezino analogai, kuriuos pagal šį išradimą galima naudoti, neribojant ir kitų panaudojimo, yra neuromedinas C, neuromedinas B, litorinas bei gastriną atpalaiduojantis peptidas (GRP), turintys šią aminorūgščių seką:

H - Ala - Pro - Vai - Ser - Vai - Gly - Gly - Gly -Thr - Vai - Leu - Ala - Lys - MetTyr - Pro - Arg - Gly - Asn - His - Trp - Ala - Vai - Gly - His - Leu - Met - NH₂.

Kiti bombezino analogai, kuriuos galima būtų panaudoti pagal šį išradimą, yra aprašyti literatūroje; ši medžiaga yra pateikta žemiau išvardintose nuorodose:

Coy et ai., Peptides. Proceedings of the Eleventh Amer. Peptide Symposium, Ed. by Rivier et ai. ESCOM, pp. 65-67 (1990); Wang et ai., J. Biol. Chem. 265:15695 (1990); Mahmoud et ai., Cancer Researh 51:1798 (1991); Wang et ak, Biochemistry 29:616 (1990); Heimbrook et ak, “Synthetic Peptides: Approaches to Biological Problems (Sintetiniai peptidai: įvadas į biologines problemas)”, UCLA Symposium on Mok and Cell. Biol. New Series, 86, ed. Tam & Kaiser; Martinez et ak, J. Med. Chem. 28:1874 (1985); Gargosky et ak, Biochem. J. 247:427 (1987); Dubreuil et ak, Drug Design and Delivery, 2:49, Harwood Academic Publishers, GB (1987); Heikkila et ak, J. Biol. Chem. 262:16456 (1987); Caranikas et ak, J. Med. Chem. 25:1313 (1982); Saeed et ak, Peptides 10:597 (1989); Rosell et ak, Trends in Pharmacological Sciences 3:211 (1982); Lundberg et ak, Proc. Nat. Aca. Sci. 80:1120 (1983); Engberg et ak, Nature 293:222 (1984); Mizrahi et ak, Euro. J. Pharma. 82:101 (1982); Leander et ak, Nature 294:467 (1981); Woll et ak, Biochem. Biophys. Res. Comm. 155:359 (1988); Rivier et ak, Biochem. 17:1766 (1978); Cuttitta et ak, Cancer Surveys 4:707 (1985); Aumelas et ak, Int. J. Peptide Res. 30:596 (1987); Szepeshazi et ak, Cancer Research 51:5980 (1991); Jensen et ak Trends Pharmacol. Sci. 12:13 (1991); JAV patentų Nr.Nr. 5.028.692; 4.943.561; 4.207.311; 5.068.222; 5.081.107; 5.084.555; EP paraiškų Nr.Nr. 0 315 367 A2 (1989); 0 434 979 Al (1991); 0 468 497 A2 (1992); 0 313 158 A2 (1989); 0 339 193 Al (1989); PCT paraiškų Nr.Nr. WO 90/01037 (1990); 90/02545 (1992); ir GB paraiška 1 231 051 A (1990).

Išradimo peptidai gali būti gaunami farmacijai tinkamu druskų pavidalu. Geresnių druskų pavyzdžiai yra tie, kurie gaunami panaudojant tinkamas terapijai organines rūgštis, kaip antai, acto, pieno, maleino, citrinos, obuolių, askorbino, gintaro, benzoinės, salicilo, metansulfoninę, toluensulforūgštį, arba palmitino, o taip pat polimerines rūgštis, pvz., tanino rūgštį arba karboksimetilceliuliozę, neorganinių rūgščių, kaip antai, vandenilio halogenidų, tame tarpe vandenilio chlorido, sieros ir fosforo rūgščių, druskas.

Junginių sintezė

Šiame skyriuje aprašoma I, II, ir III junginių sintezė.

Aprašant junginių sintezę, išradime yra naudojamos tokios santrumpos:

Nal:	naftilalaninas (1 arba 2),
Abu:	α-aminobutano rūgštis,
D:	dešiniojo sukimo kampo,
L:	kairiojo sukimo kampo,
HOAC:	acto rūgštis,
BOP:	benzotriazol-l-iloksitris(dimetilamin)fosfonio heksafluorfosfatas,
BOC:	tretbutyloksikarbonilas,
DCC:	dicikloheksilkarbodiimidas,
EDC:	l-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimidas,
DEPC:	dietilcianofosfonatas,
DMF:	dimetilformamidas,
CH₂C1₂:	dichlormetanas,
MeOH:	metanolis,
EtOH:	etanolis,
DIEA:	N,N-diizopropiletilaminas,
HOBT:	1 -hidroksibenzotriazolis,
HBTU:	O-benzoptriazol-l-il,N,N,N’,N’- tetrametiluronio heksafluorfo sfatas,
THF:	tetrahidrofuranas,

TFA: trifluoracto rūgštis.

Pradinės ir tarpinės medžiagos I, II, ir III junginių sintezei yra gaunamos prekybos tinkle. Jei kurių pradinių medžiagų nėra, jos gali būti nesunkiai pagaminamos, taikant gerai žinomas ir literatūroje aprašytas metodikas. Pavyzdžiui, su askorbino rūgštimi susijusių darinių cheminius duomenis galima rasti šiuose leidiniuose: J. Chem. Soc., Perkin Trans. 1:1220 (1974); Carbohyd. Res., 67:127 (1978); Yakugaku Zasshi, 86:376 (1966); JAV patente Nr. 4.552.888; J. Med. Chem., 31:793 (1988); ten pat 34:2152 (1991) ir 35:1618 (1992), kurie yra įtraukti į pateiktųjų nuorodų sąrašą. Panašiai, tris-darinių cheminius duomenis galima rasti leidiniuose: Arch. Biochem. Biophy. 96:653 (1962), Biochem., 5:467 (1966), kurie taip pat yra įtraukti į pateiktųjų nuorodų sąrašą.

Peptidų darinių sintezė

Bendrai kalbant, I, II ir III junginių prijungimas prie atitinkamos laisvos aminogrupės apsaugą turinčioje aminorūgštyje arba peptido gali būti atliktas, taikant gerai žinomus peptidų (pvz., DCC, DCC-HOBT, DIC-HOBT PPA, EDC-HOBT, DEPT, BOP, HBTU) sintezės būdus, kai naudojama bazė (pvz., DIEA) inertiniame tirpiklyje (pvz., DMF, THF arba CH₂C1₂etilacetatas arba jų derinys). Apsaugos pašalinimą nuo saugomų grupių taip pat galima atlikti gerai žinomų metodikų pagalba (pvz., grupės pašalinimas pridedant rūgšties arba bazės, TFA, dioksano-HCl, amonio, NaOMe, piperidino). Daugelyje atvejų reakcijos temperatūra turėtų būti nuo -30°C iki kambario.

Apskritai, pirmajame sintezės etape yra vykdoma reakcija tarp epoksido ir laisvosios aminogrupės, esančios apsaugotoje aminorūgštyje arba peptide; komplekso sudarymas ir apsaugos pašalinimas gali būti atliekamas gerai žinomų metodikų pagalba, aprašytų, pavyzdžiui, McManus et ai., Synth. Communications 3:177 (1973) straipsnyje, kurio turinys čia įtraukiamas, jį cituojant. Tęsiant sintezę, tarpinių junginių ir produktų gryninimas atliekamas įprastais metodais, kaip antai, chromatografijos ir aukštos skiriamosios gebos skystinės chromatografijos (HPLC). Junginiai identifikuojami taikant įprastas metodikas, kaip antai, branduolių magnetinio rezonanso, aminorūgščių analizės ir masių spektrometrijos.

Toliau pateiktais pavyzdžiais iliustruojami išradimo junginių gavimo būdai.

pavyzdys. Somatostatino darinių sintezė

Pagal išradimą buvo sintezuojamas šis somatostatino darinys, čia taip pat turintis

HO O-(CH₂)₃CO-D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH₂.

1.1 pavyzdys. 3-0-(T>enziloksikarbonilmetil)-2,5,6-triacetilaskorbino rūgštis

Acetanhidridas (6 ml) sulašinamas į 3-0-(benziloksikarbonilmetil)-askorbino rūgšties (2,2 g) ištirpintos piridine (30 ml), tirpalą; po to mišinys maišomas per naktį kambario temperatūroje. Išgarinus piridiną sumažintame slėgyje, susidaro nuosėdos, kurios paskirstommos tarp etilacetato ir 1N HC1. Etilacetato sluoksnis plaunamas 1N HCl, po to vandeniu. Išdžiovinus (MgSO₄), etilacetatas išgarinamas sumažintame slėgyje; dar likę piridino ir acetanhidrido pėdsakai pašalinami daug kartų garinant kartu su toluenu. Išdžiovinus vakuume, gaunamos klampaus gelio pavidalo 3-0-(benziloksikarbonilmetil)-2,5,6triacetilaskorbino rūgšties nuosėdos (2,4 g). Plonasluoksnės chromatografijos (TLC) parametrai - silikagelis: CHCl₃/acetonas [9:1], Rf=0,52).

1.2 pavyzdys. 3-0-(karboksimetil)-2,5,6-triacetilaskorbino rūgštis į 3-0-(benziloksikarbonilmetil)-2,5,6-triacetilaskorbino rūgšties (2,4 g), ištirpintos etanolyje (30 ml), tirpalą pridedama Pd-C (100 mg) suspensija vandenyje (2 ml) ir gautoji suspensija kratoma šešias valandas deguonies atmosferoje (17 psi). Katalizatorius pašalinamas filtruojant pro celito sluoksnį. Nugarinus filtratą sumažintame slėgyje yra gaunama 3-0(karboksimetil)-2,5,6-triacetilaskorbino rūgštis. TLC - silikagelis: CHCl₃/MeOH/HOAc [9:1:0,1], Rf=0,2.

1.3 pavyzdys. 5,6-0-izopropilidenaskorbino rūgštis

Acetilchlorido (0,67 ml) pridedama į greitai maišomą askorbino rūgšties (8,0 g), ištirpintos acetone (80 ml), tirpalą ir gautas mišinys maišomas kambario temperatūroje per naktį. Surinkus nuosėdas filtruojant, praplovus etilacetatu ir išdžiovinus sumažintame slėgyje yra gaunama 8,29 g bespalvės kietos medžiagos pavidalo 5,6-0-izopropilidenaskorbino rūgšties. TLC - silikagelis: CHCl₃/MeOH/HOAC [3:1:0,1], Rf=0,54.

1.4 pavyzdys. 3-0-(etoksikarbonilpropil)-5,6-izopropilidenaskorbino rūgštis

5,6-izopropilidenaskorbino rūgšties (2,0 g), ištirpintos 10 ml DMF, tirpalo sulašinama į NaH (0,44 g 50% mineralinės alyvos NaH dispersija, praplauta kelis kartus heksanu), ištirpinto 5 ml DMF, suspensiją. Pasibaigus dujų išsiskyrimui sulašinama 1,43 ml etil-4brombutirato, ištirpinto 5 ml DMF tirpalo, ir mišinys maišomas kambario temperatūroje per naktį. Tirpiklis išgarinamas sumažintame slėgyje ir gautos nuosėdos chromatografuojamos silikagelyje (55 g), naudojant CHCl₃/MeOH (19:1) eliuentą. Atskyrus atitinkamas frakcijas ir pašalinus tirpiklius gaunamos klampios nuosėdos, turinčios 3-0-(etoksikarbonilpropil)-5,6izopropilidenaskorbino rūgšties (1,1 g)·

1.5 pavyzdys. 3-0-(karboksipropil)-5,6-izopropilidenaskorbino rūgštis

Į 3-0-(etoksikarbonilpropil)-5,6-izopropilidenaskorbino rūgšties (1,02 g), ištirpintos 15 ml EtOH, tirpalą pridedama 4,6 ml 2N NaOH. Po valandos didesnioji etanolio dalis yra pašalinama sumažintame slėgyje, nuosėdos praskiedžiamos vandeniu (10 ml) ir parūgštinamos praskiestu HCl (pH 3) tirpalu. Tuomet tirpalas prisotinamas NaCl ir kelis kartus ekstrahuojamas etilacetatu; gauti ekstraktai džiovinami, naudojant MgSO₄. Išgarinus tirpiklį sumažintame slėgyje gaunamos klampios nuosėdos, turinčios 3-0-(karboksipropil)-5,6izopropilidenaskorbino rūgšties (0,84 g). TLC - silikagelis: CHCl₃/MeOH/HOAC [5:1:0,1], Rf=0,55.

1.6 pavyzdys. D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp- LysfBOCj-Val-Cysl-Thr-NH?

Ditretbutildikarbonato (0,36 g), ištirpinto 10 ml DMF tirpalo, sulašinama į D-Nalc[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH₂ acetato (2 g, BIM-23014), ištirpinto 45 ml DMF, tirpalą. Išlaikius dvi valandas kambario temperatūroje, sumažintame slėgyje yra pašalinamas tirpiklis ir gaunamos nuosėdos, kurios chromatografuojamos silikagelyje (150 g), naudojant CHCl₃/MeOH (9:1) eliuentą. Atskyrus atitinkamas frakcijas ir pašalinus tirpiklius gaunamos nuosėdos, turinčios D-NaI-c[Cys-Tyr-D-Trp- Lys(BOC)-Val-Cys]-Thr-NH₂ (1,45 g). TLC silikagelis: CHCf/MeOH [3:1], Rf=0,52.

1.7 pavyzdys.

HO O-(CH_:),CO-D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lvs(BOC)-Val-Cysl-Thr-NH₂

0,2 ml diizopropiletilamino pridedama į D-Nal-ciklo-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys(BOC)-ValCys]-Thr-NH₂ (300 mg), 3-0-(karboksipropil)-5,6-izopropilidenaskorbino rūgšties (56 mg) ir HBTU (113 mg), ištirpintų 5 ml DMF, tirpalą. Mišinys maišomas kambario temperatūroje per naktį, po to sumažintame slėgyje pašalinamas tirpiklis. Nuosėdos paskirstommos tarp etilacetato/MeOH mišinio ir sočiojo vandeninio NaCl tirpalo, etilacetato sluoksnis plaunamas sočiuoju vandeniniu NaCl tirpalu, sočiuoju vandeniniu NaHCO₃ tirpalu ir tuomet išdžiovinamos (MgSO₄). Tirpiklis išgarinamas sumažintame slėgyje ir nuosėdos apdorojamos preparatyvinės TLC būdu, naudojant išskiriančiuoju tirpikliu CHCl₃/MeOH (8:1) mišinį. Atitinkama UV spinduliams jautri zona atskiriama ir ekstrahuojama naudojant CHCl₃/MeOH. Sumažintame slėgyje pašalinus tirpiklį yra gaunamas skyrelio pavadinime minimas produktas (0,20 g). TLC - silikagelis: CHCl₃/MeOH [5:1], Rf=0,54.

1.8 pavyzdys. BOC grupės pašalinimas

Askorbino rūgšties darinys, turintis D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys(BOC)-Val-Cys]-ThrNH₂ (95 mg) ir parodytas aukščiau, yra veikiamas 45 min. kambario temperatūroje 25% TFA, ištirpintos CHC1₃, tirpalu. Pašalinus lakiąsias medžiagas sumažintame slėgyje yra gaunamos sausos nuosėdos, kurios gryninamos, naudojant Vydac C_l8 HPLC ir CHCN/0,1 % vandeninį TFA tirpalą. Galutinė išeiga - 90 mg (FAB-MS (m/e) 1341).

1.9 pavyzdys. Kiti atvejai

Panašiai gali būti sintezuojami šie somatostatino dariniai:

BIM-23135

O

OH

HO

O-CH₂-CO-D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH₂,

BIM-23181

OH

HO

O

OH

O

O-CH,-CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂

OH,

BIM-23183

pavyzdys. BIM-23107 sintezė

Pagal išradimą yra sintezuojamas žemiau parodytas somatostatino darinys, taip pat vadinamas BIM-23107:

(AcO-CH₂)₃-C-NH-CO-(CH₂)₂-CO-D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH₂.

2.1 pavyzdys. (AcO-CH₂)₃-C-NH-CO-(CH₂)₂-CO-D-NaI-crCys-Tyr-D-TrpLys(BOC)-Val-Cys1-Thr-NH₂

0,03 ml DIEA pridedama į ledo vonioje atšaldytą 2-N-(sukcinil)amin-2(acetoksimetil)-l,3-propandioldiacetato (83 mg) ir HBTU (92 mg), ištirpintų 2 ml DMF, tirpalą. Mišinys maišomas 0-5°C temperatūroje 30 min., po to į jį pridedamas D-Nal-c[CysTyr-D-Trp-Lys(BOC)-Val-Cys]-Thr-NH₂ (100 mg), ištirpinto 2 ml DMF, tirpalas, turintis 0,03 ml DIEA. Gautas mišinys iš pradžių maišomas 0-5°C temperatūroje vieną valandą, po to - kambario temperatūroje per naktį. Tirpiklį pašalinus sumažintame slėgyje yra gaunamos sausos nuosėdos, kurios paskirstommos tarp etilacetato ir sočiojo vandeninio NaCl tirpalo, EtOAc sluoksnis plaunamas vandeniniu 5% NaHCO₃ tirpalu ir galiausiai - sočiuoju vandeniniu NaCl tirpalu; ir gautas tirpalas išdžiovinamas (MgSO₄). Išgarinus tirpiklį sumažintame slėgyje yra gaunamos nuosėdos, turinčios (AcO-CH₂)₃-C-NH-CO-(CH₂)₂-COD-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys(BOC)-Val-Cys]-Thr-NH₂ (0,14 mg). TLC - silikagelis: CHCl₃/MeOH/HOAc [4:1:0,l], Rf=0,82.

2.2 pavyzdys. BOC grupės pašalinimas mg aukščiau gauto junginio yra veikiama 45 min. kambario temperatūroje 50% TFA, ištirpinto CHC1₃, tirpalu; sumažintame slėgyje pašalinus lakiąsias medžiagas, susidaro nuosėdos. Likę TFA pėdsakai šalinami kelis kartus garinant kartu su etanoliu, nuosėdos ištrinamos su eteriu, po to džiovinamos ir gaunama 30 mg produkto. TLC - silikagelis: CHCl₃/MeOH/HOAc [3:1:1], Rf-0,24.

2.3 pavyzdys. Kiti atvejai

Panašiai gali būti sintezuojami šie somatostatino dariniai:

BIM-23158 (HO-CH₂)₃-C-NH-CO-(CH₂)₂-CO-D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]-Thr-NH₂,

BIM-23167 (HO-CH₂)₃-C-NH-CO-(CH₂)₂-CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH₂,

BIM-23173 (HO-CH₂)₃-C-NH-CO-(CH₂)₂-CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂,

BIM-23179 (HO-CH₂)₃-C-NH-CH₂-CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH₂,

BIM-23182 (HO-CH₂)₃-C-NH-CH₂-CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂.

pavyzdys. BIM-23201 sintezė

Pagal išradimą yra sintezuojamas žemiau parodytas somatostatino darinys, taip pat vadinamas BIM-23201:

(HO-CH₂)₃-C-CH₂-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH₂.

3.1 pavyzdys. (HO-C^K-C-CIT-D-Phe-crCys-Tvr-D-Trp-Lys-Thr-Cysl-Nal-NFL

Du gramai prasijoto pro 3Λ molekulinį sietą ir NaCNBH₃ (36 mg) pridedama dalimis kas 15 min. į ištirpintų metanolyje (10 ml), kuriame yra 10% acto rūgšties, D-Phe-c[CysTyr(OBt)-D-Trp-Lys(BOC)-Thr(OBt)-Cys]-Nal-NH₂ (250 mg) ir tris(acetoksimetil)acetaldehido (120 mg), gautų oksiduojant triacetilpentaeritritolį piridino dichromatu arba DMSO/oksalilchloridu/trietilaminu, tirpalą. Tuomet mišinys maišomas kambario temperatūroje 30 min. ir šildomas 4 vai. Nufiltravus, nuosėdos paskirstommos tarp etilacetato ir vandens. Etilacetato sluoksnis praplaunamas vandeniu, vandeniniu NaHCO₃tirpalu ir po to išdžiovinamas (MgSO₄). Išgarinus tirpiklį sumažintame slėgyje gaunamos nuosėdos (0,4 g), kurios ištirpinamos metanolyje (5 ml), paveikiamos NaOMe/MeOH tirpalu (pH 10), maišomos 1 vai. ir galiausiai nustatomas tirpalo pH 5-6, pridedant 1 N HC1. Išgarinus tirpiklį, nuosėdos ištirpinamos 90% vandeniniame TFA tirpale (5 ml) ir maišoma 30 min. Lakiosios medžiagos pašalinamos sumažintame slėgyje, o TFA bei vandens pėdsakai garinant kartu su alkoholiu (2 x). Nuosėdos išdžiovinamos, tuomet ištrinamos su eteriu, ir galiausiai gryninamos chromatografiškai (HPLC) panašiose į anksčiau aprašytąsias sąlygose. Taip gaunama 41 mg bespalvės kieto pavidalo medžiagos - (HO-CH₂)₃-C-CH₂-D-Phe-c[CysTyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH₂. MS (m/e) 1262,8.

3.2. pavyzdys. Kiti atvejai

Pagal išradimą yra sintezuojamas žemiau parodytas somatostatino darinys, taip pat vadinamas BIM-23195:

BIM-23195 (HO-CH₂)₃-C-CH₂-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂.

pavyzdys. BIM-23197 sintezė

Pagal išradimą yra sintezuojamas žemiau parodytas somatostatino darinys, taip pat vadinamas BIM-23197:

BIM-23197 /-\

HO-(CFL)_?-N N-(CH₂)₂ SO₂-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂.

\_/

4.1 pavyzdys. 2-brometansulfonilchloridas

Ledo vonioje natrio 2-brometansulfonatas (4,0 g) paveikiamas PC1₅ (11,8 g). Susidarius skystąjai fazei, tirpalas kaitinamas aliejuje 1,5 vai. 90-120°C, po to atvėsinamas iki kambario temperatūros, užpilamas ant 50 g sugrūsto ledo ir maišomas 15min. Mišinys ekstrahuojamas CH₂C1₂ tirpalu (3 x 30 ml), gauti ekstraktai sujungiami ir plaunami vandeniu (2 x), 5% NaHCOj (2 x) ir vėl du kartus vandeniu. Po džiovinimo bevandeniu MgSO₄ ir distiliacijos sumažintame slėgyje gaunamas bespalvis skystis - 2-brometansulfonilchloridas (1,95 g, 42-44 °C/1 mm Hg).

4.2 pavyzdys. Br-fCFLb-SOh-D-Phe-crCys-Tvr-ftBuj-D-Trp-LysfBocj-AbuCysĮ-Thr(tBu)-NH( 1 -ciklopropil-1 -metil)etilas

2- brometansulfonilchlorido (30 mg), ištirpinto DMF (1 ml), tirpalas sulašinamas į HD-Phe-c[Cys-Tyr-(tBu)-D-Trp-Lys(Boc)-Abu-Cys]-Thr(tBu)-(l-ciklopropil-l-metil)etilo (150 mg) ir DIEA (55 mg), ištirpintų DMF (2 ml), tirpalą N? atmosferoje 0°C temperatūroje. Reakcijos tirpalas maišomas 0-5°C temperatūroje 3 vai., po to tirpiklis pašalinamas sumažintame slėgyje. Nuosėdos ištirpinamos etilacetate ir praplaunamos 5% citrinos rūgštimi (2 x), 5% NaHCO₃ (2 x) ir sūrymu (2 x). Tuomet tirpalas džiovinamas bevandeniu MgSO₄, filtruojamas ir kondensuojamas iki sausumo sumažintame slėgyje. Toliau produktas gryninamas trumpoje silikagelio kolonėlėje, naudojant etilacetato eliuentą. Turinčios produkto frakcijos surenkamos sumažintame slėgyje ir taip gaunama 105 mg gelsvos spalvos kieto pavidalo medžiaga -Br-(CH₂)₂-SO₂-D-Phe-c[Cys-Tyr-(tBu)-D-Trp-Lys(Boc)-Abu-Cys]Thr(tBu)-NH(l-ciklopropil-l-metil)etilas. TLC - silikagelis: CHCl₃/MeOH/HOAc [9:1:0,1], Rf=0,36.

4.3 pavyzdys. _

HO-(CH₂)₂-N N-(CH₂)₂-SO₂-D-Phe-crCvs-Tyr(tBu)-D-Trp-Lys(Boc)/ Abu-Cys1-Thr(tBu)-NH(l-ciklopropil-l-metil)etilas

Br-(CH₂)₂-SO₂-D-Phe-c[Cys-Tyr(tBu)-D-Trp-Lys(Boc)-Abu-Cys]-Thr(tBu)-NH(lciklopropil-l-metil)etilo (100 mg) ir 2-hidroksietilpiperazino (55 mg), ištirpintų 2 ml 1propanolio, tirpalas virinamas su grįžtamuoju šaldytuvu N₂ atmosferoje 2,5 vai. Tuomet tirpalas atšaldomas iki kambario temperatūros ir sumažintame slėgyje pašalinamas tirpiklis. Nuosėdos ištirpinamos etilacetate, turinčiame 5% MeOH, ir praplaunamos sūrymu (3 x). Galiausiai, tirpalas išdžiovinamas bevandeniu MgSO₄, filtruojamas ir visiškai išdžiovinamas kondensuojant sumažintame slėgyje. Taip gaunama 110 mg reikiamos kieto pavidalo medžiagos. Šis junginys, daugiau jo negryninant, naudojamas sekančiame etape.

4.4 pavyzdys.

/-\

HO-fCKEL-N N-fCH^j^SO^-D-Phe-crCys-Tvr-D-Trp-Lys-Abu-CysI^{X /} Thr-NH,

110 mg turinčio apsaugą somatostatino darinio, gauto pastarajame etape, ištirpinama 10 ml 90% vandeniniame TFA tirpale ir maišoma kambario temperatūroje N₂ atmosferoje vieną valandą. TFA ir H₂O pašalinami sumažintame slėgyje, ir nuosėdos ištrinamos su šaltu eteriu (3 x 10 ml). Gaunama gelsva kieta medžiaga, kuri toliau gryninama chromatografiškai (preparatyvine atvirkštinės fazės HPLC), naudojant šiuos eliuentus: l)NH₄OAc vandeninį tirpalą, ir 2) HOAc vandeninį tirpalą. Liofilizavus sujungtas frakcijas, turinčias aukščiau nurodytą produktą, gaunama balta kieta medžiaga (18 mg; ESI-MS, ((m+l)/e) 1252,7).

4.5 pavyzdys. Kiti atvejai

Panašiai gali būti sintezuojami šie somatostatino dariniai:

BIM-23190 /-\

HO-(CH₂)₂-N N-(CH₂)-CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂, \_/

BIM-23191 /-\

HO-(CH₂)₂-N N-(CH₂)-CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH₇, \_/

BIM-23196

HO-(CH₂)3C-NH-(CH₂)₂-SO₂-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂,

BIM-23202

Z

HO-(CH₂)₂-O-(CH₂)₂-N

N-(CH₂)-CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]⁷ Thr-NH₂.

pavyzdys. Bombezino darinių sintezė

Panašiai, kaip aprašyta aukščiau, yra sintezuojamas bombezino darinys, taip pat vadinamas BIM-26333:

HO O-CH₂-CH₂-CH₂-CO-D-Phe-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Leu-NH₂.

Kiti išradimo peptidų dariniai gali būti sintezuojami panašiai, naudojant žinomus šioje srityje sintetinius pakaitalus.

Tirtų peptidų mėginių duomenys pavyzdys. Surišimo mėginiai

Siekiant parodyti somatostatino analogų (SRIF) surišimo cheminį giminingumą somatostatino receptoriui, buvo tiriami aukščiau minėti gryninti junginiai. Somatostatino surišimo mėginių atlikimo metu yra matuojamas in vitro [^l25I-Tyr^1]]SRIF-14 surišimo slopinimas žiurkių AR42J kasos membranose. Šio išradimo gryninti somatostatino analogai pasižymėjo dideliu surišimo cheminiu giminingumu minimiems receptoriams (žr. I lent.). Be to, lentelėje pateikta kiekvieno somatostatino darinio molekulinė masė, nustatyta masių spektrometrijos pagalba (MM_[est) ir apskaičiuota pagal molekulinę formulę (MM_apsk).

Panašiai, aukščiau aprašytas grynintas bombezino analogas buvo testuojamas atliekant bombezino surišimo mėginį. Siame mėginyje buvo matuojamas in vitro [¹²⁵I-Tyr^1I]bombezino surišimo slopinimas žiurkių AR42J kasos membranose. Atlikus mėginį nustatyta, kad bombezino analogo cheminis giminingumas GRP receptoriui yra maždaug 21 nM.

pavyzdys. Augimo hormono (GH) slopinimo mėginys

Grupėms iš penkių Sprague Dawley žiurkių patinų (kiekvieno svoris 250-300 g) sušvirkščiama į poodį (5.c.) somatostatino darinio arba fiziologinio tirpalo. Prieš 30 min., iki prasidedant atitinkamam vaistų veikimo periodui, nurodytam II lent. (2, 4, 6 ir 8 vai.), žiurkės anestezuojamos nembutaliu (i.p.; 50 mg/kg). Praėjus 15 min. po nejautros sukėlimo yra atliekama širdies punkcija, paimtuose kraujo bandiniuose nustatomas heparino kiekis ir įvertinamas bazinis GH kiekis. Be to, į poodį (s.c.) (švirkščiama D-Ala²-GRF (10 pg/kg). Po 15 min. paimamas kraujas ir nustatomas sužadinto GH kiekis (matuojama kraujo plazmoje atliekant radioimunomėginį, turintį NIADDKD). Iš bazinio ir sužadinto GH kiekių skirtumo apskaičiuojamas procentinis GH slopinimas.

II lent. pateikti duomenys apie įvairių grynintų somatostatino analogų poveikio kitimą. D-Phe-c-[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH₂ (BIM-23060) efektyvumas slopinant žiurkių augimo hormoną yra panašus, kaip ir kitų išradimo somatostatino darinių (BIM-23167, BIM23179 ir BIM-23181). Visi dariniai pasižymi netikėtai ilga poveikio, kuris mažėja laikui bėgant, trukme.

Siekiant nustatyti ED₅₀ (t.y. kiekvieno junginio koncentraciją, reikalingą, kad per pasirinktą laiko tarpą augimo hormono atpalaidavimas sumažėtų 50 %), papildomai buvo ištirti somatostatino analogas D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂ ir BIM-23190, BIM-23195 ir BIM-23197. Bandymai buvo atliekami koncentracijų intervale nuo 25 pg/kg iki 0,25 pg/kg. Iš III lent. pateiktų duomenų aišku, kad skirtingais laiko momentais somatostatino dariniai yra žymiai veiklesni už nemodifikuotus peptidus. Tas rodo priklausantį nuo laiko sužadintų augimo hormonų atpalaidavimo slopinimą išradimo junginiais.

pavyzdys. Antiproliferacinis mėginys

Taip pat buvo tiriama aukščiau aprašytų grynintų somatostatino analogų geba slopinti greitai proliferuojančias ląsteles. IV lentelėje pateikti šių peptidų poveikio žiurkių AR42J kasos auglio ląstelių augimui duomenys. Priešingai natūraliam somatostatinui, išradimo dariniai rodo žymų antiproliferacinį aktyvumą. Pažvelgę į figūrą, pridėtą prie išradimo aprašymo, matome, kad tiek BIM-23014 (somatostatino analogas), tiek BIM-23118 (BIM23014 darinys) slopina žiurkių AR42J kasos auglio ląstelių augimą priklausomai nuo koncentracijos, tačiau iš dviejų junginių efektyviau veikia BIM-23118. Abu junginiai, esant toms pačioms koncentracijoms, slopina kasos auglio ląstelių augimą stipriau nei nemodifikuoto somatostatino analogai.

pavyzdys. Timidino sugėrimo mėginys

Šio mėginio pagrindinė kultūra, Swiss 3T3 ląstelės, yra auginama Dulbecco modifikuotoje Eagles terpėje (DMEM), papildytoje 10% apvaisintos karvės serumu, drėgnoje 10% CO₂ ir 90% oro atmosferoje, 37°C temperatūroje. Ląstelės persėjamos į 24-indelių mikroplokšteles; mėginys atliekamas praėjus keturioms dienoms po paskutinio terpės pakeitimo. Kad atliekant mėginį ląstelės tikrai būtų ląstelės ciklo G1/G0 fazėje, beseruminė DMEM terpė naudojama 24 vai. prieš timidino mėginio pradžią po to ląstelės du kartus praplaunamos vienodu 1 ml DMEM terpės (be serumo, 0,5 μΜ) ir [metil-³H]timidino (20 Ci/mmole, New England Nuclear) kiekiu. Buvo tiriamos tokios bombezino darinių koncentracijos: 0,001; 0,01; 0,1; 1; 10 ir 100 nM. Po 28 vai. išlaikymo 37°C temperatūroje [metil-³H]timidino įjungimas rūgštyje netirpiuose indeliuose nustatomas taip. Pirmiausia, ląstelės du kartus praplaunamos ledu, atšaldytu 0,9% NaCl tirpalu (1 ml kiekiais); rūgštyje tirpi radioaktyvumo frakcija pašalinama 5% trichloracto rūgštimi (TCA), išlaikius 30 min. 40°C temperatūroje. Tuomet ląstelės praplaunamos vieną kartą (1 ml) 95% etanolio ir padaromos tirpiomis išlaikius 30 min. 1 ml 0,1 N NaOH tirpale. Taip ištirpinta medžiaga perkeliama į indus, kuriuose yra 10 ml ScintA (Packard), ir skystiniu scintiliaciniu skaitikliu išmatuojamas radioaktyvumas. Šis mėginys parodo bombezino darinių gebą skatinti timidino patekimą į ląsteles. Apskaičiuota efektyvioji koncentracija EC50, lygi 0,48 nM. akivaizdžiai rodo, kad išradimo bombezino dariniai labai stipriai skatina timidino sugėrimą.

Panaudojimo būdai

Išradimo peptidų dariniai gali būti skiriami žinduoliams, ypatingai žmonėms, vartojant juos vienu iš įprastų būdų (pvz., per burną parenteraliai, per odą arba per gleivinę); laipsniško vaistų atpalaidavimo receptūrose, kai naudojami biologiškai skaidomi, biologiškai suderinami polimerai; arba vartojant kaip vadinamuosius pristatymo į vietą vaistus (pvz., priešvėžinių bombezino arba somatostatino darinių į plaučius atveju), kai naudojamos micelės, geliai ir liposomos. Dozės paprastai nesiskiria nuo šiuo metu skiriamų žmonėms peptidų terapijos metu.

Be to, išradimo peptidų darinius galima panaudoti efektyvesniam gydymui ligų, kurios yra jautrios atitinkamų nemodifikuotų peptidų poveikiui. Aukščiau aprašyti somatostatino dariniai ypač tinka gydyti vėžį, akromegaliją kasos uždegimą traumos sukeltą proliferaciją cukraligę, diabetinę retinopatiją, po angioplastijos atsiradusią restenozę, AIDS, nervų uždegimą, artritą bei skrandžio ir virškinamojo trakto sutrikimus, tame tarpe ir viduriavimą.

I lentelė. Somatostatino peptidų darinių iri vitro surišimo cheminis giminingumas ir molekulinė masė (MM).

	MM_test	MM_apsk	IC₅₀, nM
SRIF - 14			0,17
SRIF - 28			0,23
BIM-23107	1340,4	1340,40	0,30
BIM-23118	1313,5	1313,52	0,30
BIM-23135	1426,2	1426,64	2,52
BIM-23158	1299,6	1299,54	0,33
BIM-23167	1347,6	1347,55	0,09
BIM-23173	1235,5	1235,46	0,11
BIM-23179	1305,9	1305,55	0,12
BIM-23181	1435,0	1434,62	0,25
BIM-23182	1193,8	1193,42	0,12
BIM-23183	1323,0	1322,49	0,22
BIM-23190	1202,8	1202,47	0,20
BIM-23191	1314,9	1314,61	0,08
BIM - 23195	1150,8	1150,39	0,08
BIM-23196	1243,7	1243,50	0,09
BIM-23197	1252,7	1252,55	0,29
BIM-23201	1262,8	1262,53	0,14
BIM- 23202	1247,0	1246,53	0,18

II lentelė. Sužadintų augimo hormonų atpalaidavimo slopinimas žiurkėse somatostatino peptidų dariniais

SLOPINIMAS (PROCENTAS NUO KONTROLĖS) 25 ųg/kg

	2 vai.	4 vai.	6 vai.	8 vai.
BIM - 23060	86,39	64,96	47,62	38,15
BIM-23167	92,67	79,54	59,72	50,14
BIM-23179	92,79	63,85	67,78	68,26
BIM-23181	99,24	77,07	60,56	56,12

III lentelė. Sužadintų augimo hormonų atpalaidavimo slopinimas žiurkėse įšvirkštais (5.c.) somatostatino peptidų dariniais.

ED₅₀, ųg/kg

	2 vai.	4 vai.	6 vai.	8 vai.
BIM - 23023	0,48	1,11	2,26	4,32
BIM-23190	0,68	0,57	0,76	1,04
BIM-23195	1,19	3,13	2,08
BIM-23197	1,01	0,59	1,14	1,59

IV lentelė. Antiproliferacinis somatostatino peptidų darinių aktyvumas.

LĄSTELIŲ AUGIMAS (PROCENTAS NUO KONTROLĖS)¹
SRIF - 14	91,3
SRIF - 28	98,0
BIM-23014C	74,1
BIM-23107	67,5
BIM-23109	72,1
BIM-23118	61,0
BIM-23135	62,9
BIM-23167	60,2
BIM-23173	67,9
BIM-23181	69,1
BIM-23182	68,7
BIM-23183	69,1
BIM-23195	69,2
BIM-23197	66,4

Koncentracija 100 nM; AR42J žiurkių kasos auglio ląstelės po 8 dienų.

Claims

IŠRADIMO APIBRĖŽTIS

1. Peptidų darinys, turintis biologiškai veiklią peptidinę dalį ir bent vieną, prijungtą prie minėtos peptidinės dalies, pakaitalą, kuris yra pasirenkamas iš grupės, susidedančios iš junginių I, II ir III, kur

I junginys apibūdinamas formule:

kurioje:

R_o yra O, S arba NR₅, kur R₅ yra H arba (C]-C₆)alkilas;

bet kuris iš Rį ir R₂, nepriklausomai, yra H, (CH₂ )_mOR₆ arba

CH(OR₇)CH₂OR₈, kuriuose R₆ yra H arba (C₂-C₇)acilas, ir bet kuris iš R₇ ir R₈, nepriklausomai, yra H, (C₂-C₇)acilas arba C(R₉)(R₁₀), kur bet kuris iš R₉ ir R₁₀, nepriklausomai, yra H arba (C_rC₆)alkilas;

arba bet kuris iš R₍ ir R₂ yra =CHCH₂OR_{1 b} kur radikaluose R! ir R₂, nepriklausomai, R] į yra H arba (C₂-C₇)acilas, ir m yra natūrinis skaičius nuo 1 iki 5 imtinai; ir vienas iš R₃ arba R₄ yra (CH₂ )_nR₁₂ arba (CH₂ )_nCH(OH)R_]2, kur R₁₂ yra CO, CH_? arba SO₂, ir n yra natūrinis skaičius nuo 1 iki 5 imtinai; ir likęs iš R₃ ir R₄ yra H, (C]-C₆)hidroksialkilas arba (C₂-C₇)acilas; ir

II junginys apibūdinamas formule:

R,₃-O-j3H₂

R, 4*O-CH₂-<p-(CH₂)_m-R₁₆-R₁₇-(CH₂)_n-R] ₈,

R₁₅-O-CH₂ kurioje:

bet kuris iš R_Į3, R₎₄ ir R₁₅, nepriklausomai, yra H arba (C₂-C₂₄)acilas;

R_]6 yra NH arba jo nėra;

R₁₇ yra CO, O arba jo nėra;

R, ₈ yra CO, CH₂, SO₂ arba jo nėra; ir m yra natūrinis skaičius nuo 1 iki 5 imtinai; ir n yra natūrinis skaičius nuo 0 iki 5 imtinai; ir

III junginys yra apibudinamas formule (CH₂)_m

R_]9 - R₂₀ - R-21 R-22 ' Ė-23 ^24 ' (CH₂)_p - R₂₅ - (CH₂)_q - R₂₆, (CH₂)_n kurioje:

R₁₉ yra H, NH₂, aromatinė funkcinė grupė, OH, (C,-C₆)hidroksialkilas,

H(R₂₇)(R₂₈), SO₃H arba jo nėra, kur bet kuris iš R₂₇ ir R₂₈, nepriklausomai, yra H arba (Cį-C₆)alkilas;

R₂₀ yra O arba jo nėra;

R_2I yra (C|-C₆)alkilas arba jo nėra;

R₂₂ yra N, O, C arba CH;

1^23' y^fa (C]-C₆)alkilas arba jo nėra;

R₂₄ yra N, CH arba C;

R₂₅ yra NH, O arba jo nėra;

R₂₆ yra SO₂, CO, CH₂ arba jo nėra; m yra natūrinis skaičius nuo 0 iki 5 imtinai; n yra natūrinis skaičius nuo 0 iki 5 imtinai; p yra natūrinis skaičius nuo 0 iki 5 imtinai; ir q yra natūrinis skaičius nuo 0 iki 5 imtinai;

kuriuose minėta peptidinė dalis yra prisijungusi prie kiekvieno iš minėtų pakaitalų CO - N, CH₂ - N arba SO₂ - N jungtimis tarp minėto pakaitalo ir minėtos peptidinės dalies Nterminalinio azoto atomo arba šoninės grandinės.
2. Peptidų darinys pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad minėtas pakaitalas yra I junginys.
3. Peptidų darinys pagal 2 punktą, besiskiriantis tuo, kad R₁₂ yra CH₂ arba

SO₀
4. Peptidų darinys pagal 1 punktą besiskiriantis tuo, kad minėtas pakaitalas yra II junginys.
5. Peptidų darinys pagal 4 punktą besiskiriantis tuo, kad R_I8 yra CH₂ arba

SOn
6. Peptidų darinys pagal 5 punktą besiskiriantis tuo, kad R₎₃, R₁₄ ir R₁₅ yra H, ir R₁₇ nėra.
7. Peptidų darinys pagal 6 punktą besiskiriantis tuo, kad minėtas pakaitalas yra (HOCH₂)₃C-NH-(CH)₂-SO₂ arba (HOCH₂)₃C-CH₂.
8. Peptidų darinys pagal 1 punktą besiskiriantis tuo, kad minėtas pakaitalas yra III junginys.
9. Peptidų darinys pagal 8 punktą besiskiriantis tuo, kad -R₂₃- yra (C_rC₆)alkilas; R₂₂ yra N, C arba CH; ir R₂₄ yra C.
10. Peptidų darinys pagal 8 punktą besiskiriantis tuo, kad R₂₂ yra O; R₁₉, R₂₀, R₂₁ ir -R₂₃- nėra; bei m ir n suma yra 3, 4 arba 5.
11. Peptidų darinys pagal 8 punktą besiskiriantis tuo, kad -R₂₃- nėra.
12. Peptidų darinys pagal 11 punktą besiskiriantis tuo, kad bent vienas iš R₂₂ir R₂₄ yra N.
13. Peptidų darinys pagal 12 punktą besiskiriantis tuo, kad abu R₂₂ ir R₂₄ yra N.
14. Peptidų darinys pagal 13 punktą, besiskiriantis tuo, kad minėtas pakaitalas yra vienas iš:

/-\

HO(CH₂)₂ - n N - (CH)₂SO₂\_/ ir /-\

HO(CH₂)₂ - n n - ch₂-co-.

\_/
15. Peptidų darinys pagal 1 punktą, besiskiriantis tuo, kad minėta peptidinė dalis yra pasirenkama iš grupės, kurią sudaro somatostatinas, bombezinas, kalcitoninas, su kalcitonino genu susijęs peptidas (CGRP), amilinas, paratiroidinis hormonas (PTH), gastriną atpalaiduojantis peptidas (GRP), melanocitą stimuliuojantis hormonas (MSH), adrenokortikotropinis hormonas (ACTH), su paratiroidu susietas peptidas (PTHrP), geltonkūnio susidarymo hormoną atpalaiduojantis hormonas (LHRH), augimo hormoną atpalaiduojantis faktorius (GHRF), augimo hormoną atpalaiduojantis peptidas (GHRP), cholecistokininas (CCK), gliukagonas, bradikininas, gliukagono tipo peptidas (GLP), gastrinas, enkefalinas, neuromedinai, endotelinas, medžiaga P, neuropeptidas Y (NPY), peptidas YY (PYY), vazoaktyvus žarnyno peptidas (VIP), guanilinas, hipofizės adenilatciklazę aktyvuojantis polipeptidas (PACAP), beta-ląstelių tropinas. adrenomedulinas ir jų dariniai, fragmentai bei analogai.
16. Peptidų darinys pagal 15 punktą, besiskiriantis tuo, kad minėta peptidinė dalis yra somatostatinas arba jo darinys, fragmentas arba analogas.
17. Peptidų darinys pagal 16 punktą, besiskiriantis tuo, kad minėtas somatostatino analogas yra vienas iš: H-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂, HD-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Thr-Cys]-Nal-NH₂ ir H-D-Nal-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys]Thr-NH₂.
18. Peptidų darinys pagal 15 punktą, besiskiriantis tuo, kad minėta peptidinė dalis yra bombezinas arba jo darinys, fragmentas arba analogas.
19. Peptidų darinys pagal 15 punktą, besiskiriantis tuo, kad minėtas peptidų darinys yra vienas iš:

/-\

HO-(CH₂)₂-N N-(CH₂)CO-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂ \_/ ir / Y

HO-(CH₂)₂-N N-(CH₂)₂ SO₂-D-Phe-c[Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys]-Thr-NH₂.

Y_/
20. Dimerinis peptidų darinys, turintis dvi biologiškai veiklias peptidines dalis ir bent vieną, prijungtą prie minėtų peptidinių dalių, pakaitalą, kuriuo yra vienas iš IV ir V junginių, kur

IV junginys apibūdinamas formule:

kurioje:

R_o yra O, S arba NR₅, kur R₅ yra H arba (C_rC₆)alkilas;

bet kuris iš R, ir R₂, nepriklausomai, yra H, (CH₂ )_mOR₆ ^ar^^a

CH(OR₇)CH₂OR₈, kuriuose R₆ yra H arba (C₂-C₇)acilas, ir R₇ ir

R₈, nepriklausomai, yra H, (C₂-C₇)acilas arba C(R₉)(R₁₀), kur bet kuris iš

R₉ ir R₁₀, nepriklausomai, yra H arba (Cį-Cgjalkilas;

arba bet kuris iš R į ir R₂ yra =CHCH₂OR₁,, kur radikaluose R_b ir R₂nepriklausomai, R_t! yra H arba (C₂-C₇)acilas, ir m yra natūrinis skaičius nuo 1 iki 5, imtinai; ir kiekvienas iš R₃ arba R₄, nepriklausomai, yra (CH₂ )_nRi2 arba (CH₂)_nCH(OH)R₁₂, kuriuose R₁₂ yra CO, CH₂ arba SO₂, ir n yra natūrinis skaičius nuo 1 iki 5, imtinai; ir junginys V apibūdinamas formule:

(CH₂)_m

R_Į9 - R₂₀ - R21 - R-22 R-23 ' R-24 ' (^H₂)_p - R25 - (CH₂)_q - R₂₆, (CH₂)_n kurioje:

Rį₉ yra SO₂, CO arba CH₂;

R₂₀ yra O arba jo nėra;

R₂₁ yra (C_rC₆)alkilas arba jo nėra;

R₂₂ yra N, CH, O arba C;

-R₂₃- yra (C]-C₆)alkilas arba jo nėra;

R₂₄ yra N, CH arba C;

R₂₅ yra NH, O arba jo nėra;

R₂₆ yra SO₂, CO, CH₂ arba jo nėra; m yra natūrinis skaičius nuo 0 iki 5 imtinai; n yra natūrinis skaičius nuo 0 iki 5 imtinai; p yra natūrinis skaičius nuo 0 iki 5 imtinai; ir q yra natūrinis skaičius nuo 0 iki 5 imtinai; ir kurio bent viena iš minėtų peptidinių dalių yra prijungta prie kiekvieno iš minėtų pakaitalų CO-N, CH₇-N arba SO_?-N jungtimis tarp minėto pakaitalo ir N-terminalinio azoto atomo arba šoninės grandinės vienoje iš minėtų peptidinių dalių.
21. Dimerinis peptidų darinys pagal 20 punktą besiskiriantis tuo, kad -R₂₃- yra (CĮ-C₆)alkilas, R₂₂ yra N, C arba CH; ir R₂₄ yra C.
22. Dimerinis peptidų darinys pagal 20 punktą, besiskiriantis tuo, kad R₂₂ yra O; R₁₉, R₂₀, R₂₁ ir -R₂₃- nėra; bei m ir n suma yra 3, 4 arba 5.

Somatostatino analogų poveikis AR42J žiurkių kasos auglio ląstelių proliferacijai