KR20220131528A - 다중특이적 항-클라우딘-18.2 작제물 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
본 출원은 클라우딘-18.2(예컨대 다양한 항-클라우딘-18.2 Х 항-PD-L1 이특이적 항체)에 결합하는 다중특이적 작제물, 다중특이적 작제물 또는 이의 일부를 인코딩하는 핵산, 핵산을 포함하는 벡터, 벡터를 함유하는 숙주 세포, 다중특이적 작제물의 제조 방법, 임의의 다중특이적 작제물을 포함하는 약학 조성물, 및 다중특이적 작제물 또는 조성물을 사용하는 방법을 제공한다.
Description
ASCII 텍스트 파일로의 서열 목록의 제출
서열 목록의 컴퓨터 판독가능한 형태(CRF)인 ASCII 텍스트 파일(파일명: 759892000540SEQLIST.TXT, 기록 날짜 2020년 1월 17일, 크기:149 KB)로 제출한 내용은 그 전체가 본 명세서에 참조로 포함된다.
기술분야
본 출원은 클라우딘-18 동형단백질 2(CLDN18.2)에 결합하는 다중특이적 분자(예를 들어, 항-CLDN18.2/ 항-PD-L1 이특이적(bispecific) 항체), 이의 제조 방법, 및 질병 또는 병태를 치료하는 것을 포함하는 이의 용도에 관한 것이다.
클라우딘(Claudins)은 상피 및 내피에서 발현되고, 밀착 접합 투과성을 결정하는 세포사이의(paracellular) 장벽 및 공극을 형성하는 밀착 접합 막 단백질의 패밀리이다. 클라우딘 18 단백질의 스플라이스 변이인, 클라우딘 18 동형단백질 2(CLDN18.2)는 단명성의(short-lived) 분화된 위 상피 세포 상에서 발현되는 위 계통의 항원이다. CLDN18.2의 발현은 통상적으로 다른 건강한 인간 조직에서는 검출가능하지 않다. 그러나, CLDN18.2는 위식도(gastroesophageal) 및 췌장(pancreatic) 암을 포함하는 다양한 인간 암에서 상당한 수준으로 정상위치가 아닌 곳에서(ectopically) 발현된다(Sahin et al. (2008) Clin Cancer Res, 14(23): 7624-34). CLDN18.2는 또한 위암의 전이에서 자주 검출된다.
본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허, 특허 출원 및 공개된 특허 출원의 개시내용은 이에 의해 그 전체가 본 명세서에 참조로 포함된다.
본 출원은 a) 클라우딘-18 동형단백질 2("CLDN18.2")에 특이적으로 결합하는 제1 항체 모이어티; 및 b) PD-L1에 특이적으로 결합하는 제2 항체 모이어티를 포함하는 다중특이적 작제물(constructs)을 제공한다. 일부 구현예에서, 제1 항체 모이어티는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 전장 항체(full-length antibody)를 포함한다.
상기 설명된 다중특이적 작제물 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 제2 항체 모이어티는 PD-L1에 결합하는 단일-도메인 항체를 포함한다.
상기 설명된 다중특이적 작제물 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 제2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 중쇄에 융합된다. 일부 구현예에서, 제2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 중쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 제2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 중쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 제2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 경쇄에 융합된다. 일부 구현예에서, 제2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 경쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 제2 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 제2 항체 모이어티는 링커를 통해 전장 항체에 융합된다. 일부 구현예에서, 링커는 펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커는 약 4 내지 약 20개의 아미노산의 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, 링커는 절단가능한 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 절단불가능한 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 IgG의 경첩 영역(tlie hinge region)으로부터 유래한 변형된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 GS 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~80으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~77로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는다.
상기 설명된 다중특이적 작제물 중 어느 하나의 일부 구현예에서, CLDN18.2는 인간 CLDN18.2이다. 일부 구현예에서, 제1 항체 모이어티는, a) 서열번호 7에 제시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 내에 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3; 및 b) 서열번호 8에 제시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL) 내에 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 항체 모이어티는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서 a) VH는, i) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, ii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하고; b) VL은, i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, VH는 서열번호 7의 아미노산 서열, 또는 서열번호 7에 대해 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이를 포함하고/하거나; VL은 서열번호 8의 아미노산 서열, 또는 서열번호 8에 대해 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이를 포함한다.
상기 설명된 다중특이적 작제물 중 어느 하나의 일부 구현예에서, PD-L1은 인간 PD-L1이다. 일부 구현예에서, 제2 항체 모이어티는 서열번호 22~24 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 단일 단량체성 가변 항체 도메인 내에 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 sdAb-CDR1, sdAb-CDR2, 및 sdAb-CDR3을 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 항체 모이어티는, a) 서열번호 15 또는 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1; b) 서열번호 16, 18 또는 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2; 및 c) 서열번호 17, 또는 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함한다. 일부 구현예에서, 단일 도메인 항체는, a) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; b) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; 또는 c) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 단일 도메인 항체는 서열번호 22~24 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 서열번호 22~24 중 어느 하나에 대해 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이를 포함한다.
상기 설명된 다중특이적 작제물 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 1) 전장 항체는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서 a) VH는, i) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, ii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하고; b) VL은, i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하고; 2) 제2 항체 모이어티는 a) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; b) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; 또는 c) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함하며; 여기서 제2 항체 모이어티는, 선택적으로 약 4 내지 약 20개의 아미노산의 길이를 갖는 펩티드 링커를 통해, 전장 항체 모이어티에 융합된다. 일부 구현예에서, 1) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되거나; 2) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되거나; 3) 제2 항체 모이어티는 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되거나; 4) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 78의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되거나; 5) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 79의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되거나; 6) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 80의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되거나; 7) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 78의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나; 8) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 79의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나; 9) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 80의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나; 10) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나; 11) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나; 12) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 N-말단에 융합되거나; 13) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 N-말단에 융합되거나; 14) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 78의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 N-말단에 융합되거나; 15) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 79의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 N-말단에 융합되거나; 16) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 78의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 N-말단에 융합되거나; 17) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 79의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 N-말단에 융합되거나; 18) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 73의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나; 19) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 74의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나; 20) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 75의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나; 21) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 76의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나; 또는 22) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 77의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다.
상기 설명된 다중특이적 작제물 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 제2 항체 모이어티와 융합된 전장 항체의 2개의 중쇄 각각은 서열번호 28~36 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 서열번호 28~36 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 전장 항체의 2개의 경쇄 각각은 서열번호 10의 아미노산 서열, 또는 서열번호 10의 아미노산 서열과 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 변이를 포함한다.
상기 설명된 다중특이적 작제물 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 제2 항체 모이어티와 융합된 전장 항체의 2개의 경쇄 각각은 서열번호 37~49 중 어느 하나의 아미노산 서열 또는 서열번호 37~49 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 전장 항체의 2개의 중쇄 각각은 서열번호 9의 아미노산 서열, 또는 서열번호 9의 아미노산 서열과 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 변이를 포함한다.
상기 설명된 다중특이적 작제물 중 어느 하나의 일부 구현예에서, a) 제2 항체 모이어티와 융합된 전장 항체의 2개의 중쇄 각각은 서열번호 28~36 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 2개의 경쇄 각각은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 b) 제2 항체 모이어티와 융합된 전장 항체의 2개의 경쇄 각각은 서열번호 37~49 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 2개의 중쇄 각각은 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함한다.
상기 설명된 다중특이적 작제물 중 어느 하나의 일부 구현예에서, 작제물은 이특이적 항체이다.
본 출원은 또한 다중특이적 작제물 중 어느 하나의 작제물, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
본 출원은 또한 상기 설명된 다중특이적 작제물 중 임의의 것을 인코딩하는 핵산을 제공한다.
본 출원은 또한 서열번호 50~71로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는 핵산을 제공한다.
본 출원은 또한 상기 설명된 핵산 중 임의의 것을 포함하는 벡터를 제공한다.
본 출원은 또한 상기 핵산 중 임의의 것, 또는 상기 벡터 중 임의의 것을 포함하는 숙주 세포를 제공한다.
본 출원은 또한 a) 상기 설명된 숙주 세포 중 임의의 것을 다중특이적 작제물을 발현하기에 효과적인 조건 하에서 배양하는 단계; 및 b) 숙주 세포로부터 발현된 작제물을 수득하는 단계를 포함하는 다중특이적 작제물 중 임의의 것을 생성하는 방법을 제공한다.
본 출원은 상기 설명된 다중특이적 작제물 중 임의의 것, 또는 상기 설명된 약학 조성물 중 임의의 것의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서의 질병 또는 병태의 치료 방법을 제공한다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태는 암이다. 일부 구현예에서, 암은 위암이다. 일부 구현예에서, 개체는 클라우딘-18(CLDN18) 이상(aberration)을 갖는다. 일부 구현예에서, 본 방법은 제2 제제를 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 제제는 Her-2에 결합한다. 일부 구현예에서, 작제물 또는 약학 조성물은 개체에게 비경구적으로 투여된다. 일부 구현예에서, 개체는 인간이다.
본 출원은 상기 설명된 약학 조성물 및 질병 또는 병태를 치료하기 위한 지침서(instruction)를 포함하는 키트를 제공한다.
도 1은 인간 PD-L1을 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 2는 인간 CLDN18.2를 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 3은 인간 PD-L1을 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 4는 인간 PD-L1을 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 5는 인간 CLDN18.2를 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 6은 인간 CLDN18.2를 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 7은 인간 PD-L1을 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 8은 인간 CLDN18.2를 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 9는 인간 CLDN18.1을 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 10은 인간 CLDN18.1을 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 11은 인간 CLDN18.1을 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 12는 실시예 2에 예시된 다양한 이특이적 항체의 PD-1/PD-L1 차단 분석(blockage assay)의 결과를 보여준다.
도 13은 실시예 2에 예시된 다양한 이특이적 항체의 CDC 분석의 결과를 보여준다.
도 14는 실시예 2에 예시된 다양한 이특이적 항체 유도된 ADCC 분석의 결과를 보여준다.
도 15는 실시예 2에 예시된 다양한 이특이적 항체 유도된 ADCC 분석의 결과를 보여준다.
도 16은 실시예 2에 예시된 다양한 이특이적 항체 유도된 CDC 분석의 결과를 보여준다.
도 17은 실시예 2에 예시된 다양한 이특이적 항체의 PD-1/PD-L1 차단 분석의 결과를 보여준다.
도 18은 실시예 2에 예시된 다양한 이특이적 항체 유도된 ADCC 분석의 결과를 보여준다.
도 2는 인간 CLDN18.2를 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 3은 인간 PD-L1을 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 4는 인간 PD-L1을 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 5는 인간 CLDN18.2를 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 6은 인간 CLDN18.2를 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 7은 인간 PD-L1을 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 8은 인간 CLDN18.2를 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 9는 인간 CLDN18.1을 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 10은 인간 CLDN18.1을 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 11은 인간 CLDN18.1을 발현하는 CHO-K1 세포에 대한 다양한 이특이적 항체의 결합 친화도를 보여준다.
도 12는 실시예 2에 예시된 다양한 이특이적 항체의 PD-1/PD-L1 차단 분석(blockage assay)의 결과를 보여준다.
도 13은 실시예 2에 예시된 다양한 이특이적 항체의 CDC 분석의 결과를 보여준다.
도 14는 실시예 2에 예시된 다양한 이특이적 항체 유도된 ADCC 분석의 결과를 보여준다.
도 15는 실시예 2에 예시된 다양한 이특이적 항체 유도된 ADCC 분석의 결과를 보여준다.
도 16은 실시예 2에 예시된 다양한 이특이적 항체 유도된 CDC 분석의 결과를 보여준다.
도 17은 실시예 2에 예시된 다양한 이특이적 항체의 PD-1/PD-L1 차단 분석의 결과를 보여준다.
도 18은 실시예 2에 예시된 다양한 이특이적 항체 유도된 ADCC 분석의 결과를 보여준다.
본 출원은 CLDN18.2 및 PD-L1 모두에 결합하는 다중특이적 작제물을 제공한다. 일부 구현예에서, 다중특이적 작제물은 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 항-CLDN18.2 항체 모이어티를 포함하는 이특이적 항체이며, 여기서 a) VH는, i) 서열번호 1의 아미노산을 포함하는 HC-CDR1, ii) 서열번호 2의 아미노산을 포함하는 HC-CDR2, 및 iii) 서열번호 3의 아미노산을 포함하는 HC-CDR3을 포함하고; b) VL은, i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 전장 항체이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 작제물은 PD-L1에 특이적으로 결합하는 단일 도메인 항체를 포함하는 항-PD-L1 항체 모이어티를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 항-CLDN18.2 전장 항체의 1개 또는 2개 모두의 중쇄 및/또는 경쇄와 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 항-CLDN18.2 전장 항체의 1개 또는 2개 모두의 중쇄 및/또는 경쇄의 N-말단 및/또는 C-말단에, 선택적으로 링커(예컨대 72~80의 아미노산 서열을 포함하는 링커)를 통해 융합된다.
본 출원은 다양한 참조 항체(예를 들어, 항-CLDN18.2 단일클론 항체 IMAB362)에 비해 더 강력한 CDC 및 ADCC 효과와 같은 유리한 기술적 효과를 나타내는, CLDN18.2 및 PD-L1 모두에 결합하는 다중특이적 작제물(예컨대 실시예에 예시된 다양한 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)을 제공한다. 예를 들어, 예시적인 이특이적 항체, CLDN18L-E-PDL1a 및 PDL1a-E-CLDN18L은 항-CLDN18.2 유도된 CDC 분석에서 참조 항체(reference antibody) IMAB362에 의해 나타나는 EC50보다 훨씬 더 낮은 EC50을 나타낸다.
또한, 본 명세서에 설명된 클라우딘-18에 결합하는 다중특이적 분자(예컨대 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)를 포함하는 조성물, 키트 및 제조품, 및 이의 제조 방법이 제공된다.
I. 정의
용어 "항체"는 이의 가장 넓은 의미로 사용되며, 원하는 항원-결합 활성을 나타내는 한, 단일클론 항체, 다클론 항체, 다중특이적 항체(예를 들어, 이특이적 항체), 전장 항체 및 이의 항원-결합 단편을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 항체 구조물을 포괄한다. 용어 "항체 모이어티"는 전장 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 지칭한다.
전장 항체(full-length antibody)는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함한다. 경쇄 및 중쇄의 가변 영역은 항원 결합을 담당한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 "VH" 및 "VL"로 지칭할 수 있다. 2개의 사슬 모두의 가변 영역은 일반적으로 상보성 결정 영역(CDR)이라고 지칭되는 3개의 고도로 가변성인 루프(LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3을 포함하는 경쇄(LC) CDR, HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3을 포함하는 중쇄(HC) CDR)를 함유한다. 본 명세서에 개시된 항체 및 항원-결합 단편에 대한 CDR 바운더리는 Kabat, Chothia, 또는 Al-Lazikani의 규정에 의해 정의되거나 확인될 수 있다(Al-Lazikani 1997; Chothia 1985; Chothia 1987; Chothia 1989; Kabat 1987; Kabat 1991). 중쇄 또는 경쇄의 3개의 CDR은 프레임워크 영역(FR)으로도 알려진 측면 스트레치 사이에 삽입되며, 이는 CDR보다 더 고도로 보존되고 초가변성 루프를 지원하는 스캐폴드(scaffold)를 형성한다. 중쇄 및 경쇄의 불변 영역은 항원 결합에 연관되지 않지만, 다양한 이펙터(effector) 기능을 나타낸다. 항체는 중쇄의 불변 영역의 아미노산 서열을 기반으로 클래스에 할당된다. 항체의 5개의 주요 클래스 또는 아이소타입은 IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM이며, 이는 각각 α, δ, ε, γ, 및 μ 중쇄의 존재를 특징으로 한다. 주요 항체 클래스 중 몇 가지는 lgG1(γ1 중쇄), lgG2(γ2 중쇄), lgG3(γ3 중쇄), lgG4(γ4 중쇄), lgA1(α1 중쇄), 또는 lgA2(α2 중쇄)와 같은 하위클래스로 나뉜다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "항원-결합 단편"은 예를 들어, 디아바디(diabody), Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, 이황화 안정화된 Fv 단편(dsFv), (dsFv)2, 이특이적 dsFv(dsFv-dsFv'), 이황화 안정화된 디아바디(ds 디아바디), 단일-사슬 Fv(scFv), scFv 이량체(2가 디아바디), 하나 이상의 CDR을 포함하는 항체의 일부로부터 형성된 다중특이적 항체, 단일 도메인 항체(예를 들어, 낙타화(camelized) 단일 도메인 항체), 나노바디, 도메인 항체, 2가 도메인 항체, 또는 항원에는 결합하지만 완전한 항체 구조를 포함하지 않는 임의의 다른 항체 단편을 포함하는 항체 단편을 지칭한다. 항원-결합 단편은 모 항체 또는 모 항체 단편(예를 들어, 모 scFv)에 결합하는 동일한 항원에 결합할 수 있다. 일부 구현예에서, 항원-결합 단편은 하나 이상의 상이한 인간 항체로부터의 프레임워크 영역에 이식된 특정 인간 항체로부터의 하나 이상의 CDR을 포함할 수 있다.
"단일-사슬 Fv"는 또한 "sFv" 또는 "scFv"로 약기되며, 단일 폴리펩티드 사슬에 연결된 VH 및 VL 항체 도메인을 포함하는 항체 단편이다. 일부 구현예에서, scFv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합에 바람직한 구조를 형성하는 것을 가능하게 하는 VH 내지 VL 도메인 사이의 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. scFv에 대한 검토는 문헌[Plueckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)] 참조.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 용어 "CDR" 또는 "상보성 결정 영역"(complementarity determining region)은 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드 모두의 가변 영역 내에서 발견되는 비연속적인 항원 조합 부위를 의미하고자 한다. 이러한 특정 영역은 문헌[Kabat et al., J. Biol. Chem. 252:6609-6616 (1977); Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, "Sequences of proteins of immunological interest" (1991); Chothia et al., J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Al-Lazikani B. et al., J. Mol. Biol., 273: 927-948 (1997); MacCallum et al., J. Mol. Biol. 262:732-745 (1996); Abhinandan and Martin, Mol. Immunol., 45: 3832-3839 (2008); Lefranc M.P. et al., Dev. Comp. Immunol., 27: 55-77 (2003); 및 Honegger and Plueckthun, J. Mol. Biol., 309:657-670 (2001)]에 설명되어 있으며, 여기서 정의는 서로에 대해 비교할 때 아미노산 잔기의 중첩 또는 하위세트를 포함한다. 그럼에도 불구하고 항체 또는 이식된 항체 또는 이의 변이의 CDR을 지칭하는 정의의 적용은 본 명세서에 정의되고 사용된 바와 같은 용어의 범위 내에 있는 것으로 의도된다. 상기 언급된 참조들 각각에 의해 정의된 바와 같은 CDR을 포함하는 아미노산 잔기는 비교로서 아래 표 1에 제시되어 있다. CDR 예측 알고리즘 및 인터페이스는 예를 들어 문헌[Abhinandan and Martin, Mol. Immunol., 45: 3832-3839 (2008); Ehrenmann F. et al., Nucleic Acids Res., 38: D301-D307 (2010); 및 Adolf-Bryfogle J. et al., Nucleic Acids Res., 43: D432-D438 (2015)]을 포함하여 당업계에 알려져 있다. 본 문단에 언급된 참조의 내용은 본 출원에서의 사용 및 본 명세서의 하나 이상의 청구범위에서의 가능한 포함을 위해, 그 전체가 본 명세서에 참조로 포함된다.
| Kabat 1 | Chothia 2 | MacCallum 3 | IMGT 4 | AHo 5 | |
| VH CDR1 | 31-35 | 26-32 | 30-35 | 27-38 | 25-40 |
| VH CDR2 | 50-65 | 53-55 | 47-58 | 56-65 | 58-77 |
| VH CDR3 | 95-102 | 96-101 | 93-101 | 105-117 | 109-137 |
| VL CDR1 | 24-34 | 26-32 | 30-36 | 27-38 | 25-40 |
| VL CDR2 | 50-56 | 50-52 | 46-55 | 56-65 | 58-77 |
| VL CDR3 | 89-97 | 91-96 | 89-96 | 105-117 | 109-137 |
1잔기 번호매김은 문헌[Kabat et al., 상동]의 명명법을 따름
2잔기 번호매김은 문헌[Chothia et al., 상동]의 명명법을 따름
3잔기 번호매김은 문헌[MacCallum et al., 상동]의 명명법을 따름
4잔기 번호매김은 문헌[Lefranc et al., 상동]의 명명법을 따름
5잔기 번호매김은 문헌[Honegger and Plueckthun, 상동]의 명명법을 따름
표현 "Kabat에서와 같은 가변 도메인 잔기-번호매김" 또는 "Kabat에서와 같은 아미노산-위치 번호매김" 및 이의 변형은 문헌[Kabat et al., 상동]에서 항체의 편집물 중 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 대해 사용된 번호매김 시스템을 지칭한다. 이러한 번호매김 시스템을 사용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 초가변성 영역(HVR: hypervariable region)의 단축 또는 그 안으로의 삽입에 상응하는 더 적거나 추가적인 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 후에 단일 아미노산 삽입물(Kabat에 따른 잔기 52a) 및 중쇄 FR 잔기 82 후에 삽입된 잔기(예를 들어, Kabat에 따른 잔기들 82a, 82b, 및 82c 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 Kabat 번호매김은, 소정의 항체에 대해 "표준" Kabat 번호매김된 서열을 갖는 항체 서열의 상동성 영역에서의 배열에 의해 결정될 수 있다.
본 명세서에서 달리 나타내지 않는 한, 면역글로불린 중쇄에서의 잔기의 번호매김은, 약간의 변형이 있는 문헌[Kabat et al., 상동]에서와 같은 EU 인덱스의 번호매김이다. 간략하게는, 본 발명자들은 중쇄 CDR1 전에 초가변성 루프 내에 5개 초과의 잔기를 부가하였다. "Kabat에서와 같은 EU 인덱스"는 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 번호매김을 지칭한다.
"프레임워크" 또는 "FR" 잔기는 본 명세서에 정의된 바와 같은 CDR 잔기 이외의 그러한 가변 도메인 잔기이다.
비-인간(예를 들어, 설치류) 항체의 "인간화" 형태는 비-인간 항체로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체(chimeric antibodies)이다. 대부분의 경우, 인간화 항체는 인간 면역글로불린(수령자 항체)이며, 여기서 수령자의 초가변성 영역(HVR)으로부터의 잔기는, 원하는 항체 특이성, 친화성 및 능력을 갖는, 비-인간 종(공여자 항체), 예컨대 마우스, 쥐, 토끼 또는 비-인간 영장류의 초가변성 영역으로부터의 잔기들에 의해 대체된다. 일부 경우들에서, 인간 면역글로불린의 프레임워크 영역(FR) 잔기는 상응하는 비-인간 잔기에 의해 대체된다. 나아가, 인간화 항체는 수령자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 성능을 더 개선하기 위해 만들어진다. 일반적으로, 인간화된 항체는 적어도 하나 및 통상적으로 2개의 가변 도메인의 실질적으로 전부를 포함할 것이며, 여기서 초가변성 루프의 전부 또는 실질적으로 전부는 비-인간 면역글로불린의 루프에 상응하며, FR의 전부 또는 실질적으로 전부는 인간 면역글로불린 서열의 FR이다. 인간화 항체는 또한 선택적으로 면역글로불린, 통상적으로 인간 면역글로불린의 불변 영역(Fc)의 적어도 일부를 포함할 것이다. 추가의 상세 내용에 대해서는, 문헌[Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); and Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)] 참조.
"인간 항체"는 인간에 의해 생산된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 보유하고/하거나 본 명세서에 개시된 바와 같은 인간 항체 제조 기술 중 임의의 것을 사용하여 제조된 항체이다. 인간 항체의 이러한 정의는 비-인간 항원 결합 잔기를 포함하는 인간화 항체는 구체적으로 배제한다. 인간 항체는 파지-디스플레이 라이브러리를 포함하는 당업계에 알려진 다양한 기술을 사용하여 생성될 수 있다. 문헌[Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227:381 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581 (1991)]. 또한, 문헌[Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, p. 77 (1985); Boerner et al., J. Immunol., 147(1):86-95 (1991)]에 설명된 방법이 인간 단일클론 항체의 제조에 사용가능하다. 또한 문헌[van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol., 5: 368-74 (2001)] 참조. 인간 항체는 항원 공격에 대한 반응으로 이러한 항체들을 생성하도록 변형되었지만, 그의 내인성 유전자좌(endogenous loci)는 불활성화된(disabled) 유전자이식 동물, 예를 들어 면역화된 제노마우스에 항원을 투여함으로써 제조될 수 있다(예를 들어, XENOMOUSE?? 기술에 대한 미국 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584 참조). 또한, 예를 들어, 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체에 관한 문헌[Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)] 참조.
본 명세서에서 확인된 폴리펩티드 및 항체 서열에 대한 "아미노산 서열 동일성 백분율(%)" 또는 "상동성"은, 서열 동일성의 일부로서 임의의 보존적 치환을 고려하여 서열을 배열한 후, 비교되는 폴리펩티드 내의 아미노산 잔기와 동일한 후보 서열 내의 아미노산 잔기의 백분율로 정의된다. 아미노산 서열 동일성 백분율을 결정하기 위한 배열은 당업계의 기술 내의 다양한 방법, 예를 들어 BLAST, BLAST-2, ALIGN, Megalign(DNASTAR), 또는 MUSCLE 소프트웨어와 같은 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 달성될 수 있다. 당업자는 비교되는 서열의 전장에 걸쳐 최대 배열을 달성하는 데 필요한 임의의 알고리즘을 포함하여, 배열을 측정하기 위한 적절한 파라미터를 결정할 수 있다. 그러나 본 명세서에서의 목적을 위해, % 아미노산 서열 동일성 값은 서열 비교 컴퓨터 프로그램 MUSCLE을 사용하여 생성된다(Edgar, R.C., Nucleic Acids Research 32(5):1792-1797, 2004; Edgar, R.C., BMC Bioinformatics 5(1):113, 2004).
"상동성"(Homologous)은 2개의 폴리펩티드 사이 또는 2개의 핵산 분자 사이의 서열 유사성 또는 서열 동일성을 지칭한다. 2개의 비교되는 서열 모두에서의 위치가 동일한 염기 또는 아미노산 단량체 서브유닛에 의해 점유되는 경우, 예를 들어 2개의 DNA 분자 각각에서의 위치가 아데닌에 의해 점유되는 경우, 분자는 그 위치에서 상동성이다. 두 서열 사이의 상동성 백분율은 두 서열이 공유하는 일치하거나 상동인 위치의 수를 비교되는 위치의 수로 나눈 값에 100을 곱한 함수이다. 예를 들어, 2개의 서열의 위치 중 10개 중 6개가 일치하거나 상동인 경우, 그 2개의 서열은 60% 상동성이다. 예로서, DNA 서열 ATTGCC 및 TATGGC는 50% 상동성을 공유한다. 일반적으로, 2개의 서열이 최대의 상동성을 제공하도록 배열된 때 비교가 이루어진다.
용어 "불변 도메인"(constant domain)은 항원-결합 부위를 함유하는 가변 도메인인 면역글로불린의 다른 부분에 비해 더 보존된 아미노산 서열을 갖는 면역글로불린 분자의 일부를 지칭한다. 불변 도메인은 중쇄의 CH1, CH2 및 CH3 도메인(총칭하여, CH) 및 경쇄의 CHL(또는 CL) 도메인을 함유한다.
임의의 포유동물 종으로부터의 항체(면역글로불린)의 "경쇄"는, 불변 도메인의 아미노산 서열을 기준으로, 카파("
") 및 람다("
")로 지칭되는 2개의 명확히 구별되는 형태 중 하나로 할당될 수 있다.
"CH1 도메인"("H1" 도메인의 "C1"으로도 지칭됨)은 일반적으로 약 아미노산 118에서 약 아미노산 215까지 확장된다(EU 번호매김 시스템).
"경첩 영역"(Hinge region)은 일반적으로 인간 IgG1의 Glu216 내지 Pro230에 상응하는 IgG 내의 영역으로 정의된다(Burton, Molec. Immunol.22:161-206 (1985)). 다른 IgG 아이소타입의 경첩 영역은, 중쇄간 S-S 결합을 형성하는 첫 번째 및 마지막 시스테인 잔기를 동일한 위치에 배치함으로써 IgG1 서열과 함께 배열될 수 있다.
인간 IgG Fc 영역의 "CH2 도메인"("C2" 도메인으로도 지칭됨)은 일반적으로 약 아미노산 231에서 약 아미노산 340까지 확장된다. CH2 도메인은 또 다른 도메인과 밀접하게 페어링되지 않는다는 점에서 독특하다. 오히려, 2개의 N-연결된 분지형 탄수화물 사슬이 온전한 천연 IgG 분자의 2개의 CH2 도메인들 사이에 삽입된다. 탄수화물은 도메인-도메인 페어링을 위한 대체물을 제공하고, CH2 도메인을 안정화하는 데 도움이 될 수 있다고 추측되었다. 문헌[Burton, Molec Immunol. 22:161-206 (1985)].
"CH3 도메인"("C2" 도메인으로도 지칭됨)은 Fc 영역에서 CH2 도메인에 대한 C-말단 잔기의 신장부(즉, 약 아미노산 잔기 341에서 항체 서열의 C-말단으로, 통상적으로 IgG의 아미노산 잔기 446 또는 447에서)를 포함한다.
본 명세서에서 용어 "Fc 영역" 또는 "단편 결정화 가능 영역"은 천연-서열 Fc 영역 및 변이 Fc 영역을 포함하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는 데 사용된다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 다양할 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 일반적으로 위치 Cys226에서의 아미노산 잔기로부터, 또는 Pro230으로부터, 이의 카르복실 말단까지 신장되는 것으로 정의된다. Fc 영역의 C-말단 리신(EU 번호매김 시스템에 따른 잔기 447)은 예를 들어 항체의 생성 또는 정제 동안, 또는 항체의 중쇄를 인코딩하는 핵산 서열을 재조합적으로 조작함으로써 제거될 수 있다. 따라서, 온전한 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 개체군, K447 잔기가 제거되지 않은 항체 개체군, 및 K447 잔기가 있거나 없는 항체의 혼합물을 갖는 항체 개체군을 포함할 수 있다. 본 명세서에 설명된 항체에 사용하기에 적합한 천연-서열 Fc 영역은 인간 IgG1, IgG2(IgG2A, IgG2B), IgG3 및 IgG4을 포함한다.
"Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 설명한다. 바람직한 FcR은 천연 서열 인간 FcR이다. 나아가, 바람직한 FcR은 IgG 항체(감마 수용체)에 결합하고 이들 수용체의 대립유전자 변이 및 대안적으로 스플라이스된 형태를 포함하는 FcγRI, FcγRII, 및 FcγRIII 하위클래스의 수용체를 포함하는 FcR이며, FcγRII 수용체는 FcγRIIA("활성화 수용체") 및 FcγRIIB("억제 수용체")를 포함하며, 이는 주로 세포질 도메인이 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 세포질 도메인에 면역수용체 티로신계 활성화 모티프 (ITAM)를 함유한다. 억제 수용체 FcγRIIB는 세포질 도메인에 면역수용체 티로신계 억제 모티프(ITIM)를 함유한다(M. Daeron, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)). FcR는 문헌[Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9: 457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4: 25-34 (1994); 및 de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126: 330-41 (1995)]에서 검토된다. 미래에 확인될 것들을 포함하는 기타 다른 FcR은 본 명세서에서 용어 "FcR"로 포괄된다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "에피토프"는 항체 또는 항체 모이어티가 결합하는 항원 상의 원자 또는 아미노산의 특정 기를 지칭한다. 2개의 항체 또는 항체 모이어티는 항원에 대해 경쟁적인 결합을 나타내는 경우 항원 내에서 동일한 에피토프에 결합할 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 제1 항체 또는 이의 단편은 제1 항체 또는 이의 단편이 이의 단편의 제2 항체의 표적 항원 결합을 동일 몰 농도의 제1 항체 또는 이의 단편의 존재 하에 적어도 약 50%(예컨대 적어도 약 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 중 어느 하나) 억제하는 경우 표적 항원에 대한 결합에 대해 제2 항체 또는 그의 단편과 "경쟁한다"고 하며, 그 역도 마찬가지이다. 교차-경쟁을 기반으로 하는 항체를 "비닝(binning)"하기 위한 고 처리량 공정은 PCT 공개 번호 WO 03/48731에 설명되어 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "특이적으로 결합한다", "특이적으로 인식하는", 및 "~에 특이적이다"라는 용어는 표적과 항체 또는 항체 모이어티 사이의 결합과 같은 측정가능하고 재현가능한 상호작용을 지칭하며, 이는 생물학적 분자를 포함하는 분자들의 이종성 개체군의 존재 하에 표적의 존재를 결정한다. 예를 들어, (에피토프일 수 있는) 표적을 특이적으로 인식하는 항체 또는 항체 모이어티는 다른 표적들에 대한 결합보다 더 큰 친화성, 항원항체결합력, 더 쉽게 및/또는 더 긴 지속시간으로 이 표적에 결합하는 항체 또는 항체 모이어티이다. 일부 구현예에서, 관련되지 않은 표적에 대한 항체의 결합 정도는, 예를 들어 방사성면역검정(RIA: radioimmunoassay)에 의해 측정될 때 표적에 대한 항체의 결합의 약 10% 미만이다. 일부 구현예에서, 표적에 특이적으로 결합하는 항체는 ≤10-5 M, ≤10-6 M, ≤10-7 M, ≤10-8 M, ≤10-9 M,≤10-10 M, ≤10-11 M, 또는 ≤10-12 M의 해리 상수(KD)를 갖는다. 일부 구현예에서, 항체는 상이한 종의 단백질 중에서 보존되는 단백질 상의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 일부 구현예에서, 특이적 결합은 배타적 결합을 포함할 수 있지만, 이를 필요로 하지는 않는다. 항체 또는 항원-결합 도메인의 결합 특이성은 당업계에 알려진 방법에 의해 실험적으로 결정될 수 있다. 그러한 방법에는 웨스턴 블롯, ELISA-, RIA-, ECL-, IRMA-, EIA-, BIACORETM -시험 및 펩티드 스캔이 포함되지만 이에 제한되지 않는다.
"분리된" 항체(또는 작제물)는 그의 생산 환경(예를 들어, 천연 또는 재조합)의 성분으로부터 확인, 분리, 및/또는 회수된 것이다. 바람직하게는, 분리된 폴리펩티드는 이의 생산 환경으로부터의 다른 모든 성분과 결합되지 않는다.
본 명세서에 설명된 작제물, 항체, 또는 그의 항원-결합 단편을 인코딩하는 "분리된"(isolated) 핵산 분자는 보통 그것이 생성되는 환경에서 일반적으로 결합되는 적어도 하나의 오염 핵산 분자로부터 확인 및 분리된 핵산 분자이다. 바람직하게는, 분리된 핵산은 생성 환경과 관련된 모든 성분과의 결합이 없다. 본 명세서에 설명된 폴리펩티드 및 항체를 인코딩하는 분리된 핵산 분자는 자연에서 발견되는 형태 또는 세팅 이외의 다른 형태이다. 따라서 분리된 핵산 분자는 세포에 천연으로 존재하는 본 명세서에 설명된 폴리펩티드 및 항체를 인코딩하는 핵산과 구별된다. 분리된 핵산은 보통 핵산 분자를 함유하는 세포에 함유된 핵산 분자를 포함하지만, 핵산 분자는 염색체 외 또는 그의 천연 염색체 위치와 상이한 염색체 위치에 존재한다.
핵산은 또 다른 핵산 서열과 기능적 관계에 놓일 때, "작동가능하게 연결된다". 예를 들어, 전서열 또는 분비 리더에 대한 DNA는 폴리펩티드의 분비에 참여하는 전단백질로서 발현되는 경우 폴리펩티드에 대한 DNA에 작동가능하게 연결되거나; 프로모터 또는 인핸서는 서열의 전사에 영향을 미치는 경우 코딩 서열에 작동가능하게 연결되거나; 또는 리보솜 결합 부위는 번역을 용이하게 하도록 위치하는 경우 코딩 서열에 작동가능하게 연결된다. 일반적으로, "작동가능하게 연결된"은 연결되는 DNA 서열이 인접하고, 분비성 리더의 경우 인접하고 판독 프레임 내에 있음을 의미한다. 그러나, 인핸서는 인접하지 않아도 된다. 연결은 편리한 제한 위치에서의 결찰함으로써 수행된다. 그러한 부위가 존재하지 않는 경우, 합성 올리고뉴클레오티드 어댑터 또는 링커가 통상의 관행에 따라 사용된다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "벡터"는 그가 연결되는 또 다른 핵산을 증식시킬 수 있는 핵산 분자를 지칭한다. 이 용어는 자가복제 핵산 구조로서의 벡터뿐만 아니라 그가 도입되는 숙주 세포의 유전체 내에 포함된 벡터를 포함한다. 특정 벡터는 작동가능하게 연결된 핵산의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 "발현 벡터"로서 본 명세서에서 지칭된다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "형질감염된" 또는 "형질전환된" 또는 "형질도입된"은 외인성 핵산이 숙주 세포 내로 전달되거나 도입되는 과정을 지칭한다. "형질감염된" 또는 "형질전환된" 또는 "형질도입된" 세포는 외인성 핵산으로 형질감염, 형질전환 또는 형질도입된 세포이다. 세포는 1차 대상 세포 및 이의 자손을 포함한다.
용어 "숙주 세포", "숙주 세포주," 및 "숙주 세포 배양물"은 상호교환가능하게 사용되며, 그러한 세포의 자손을 포함하는 외인성 핵산이 도입된 세포를 지칭한다. 숙주 세포는 "형질전환체" 및 "형질전환된 세포"를 포함하며, 이는 계대 수에 관계없이 1차 형질전환된 세포 및 이로부터 유래한 자손을 포함한다. 자손은 핵산 함량이 모 세포와 완전히 동일하지 않을 수 있으며, 돌연변이를 함유할 수 있다. 원래 형질전환된 세포에서 스크리닝되거나 선택된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 자손이 본 명세서에 포함된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "치료" 또는 "치료하는"은 임상 결과를 포함하여, 유익하거나 원하는 결과를 수득하기 위한 접근법이다. 본 출원의 목적을 위해, 유익하거나 원하는 임상 결과는, 질병으로 인한 하나 이상의 증상의 완화, 질병의 정도의 감소, 질병의 안정화(예를 들어, 질병의 악화 예방 또는 지연), 질병의 전파(예를 들어, 전이)의 예방 또는 지연, 질병의 재발 예방 또는 지연, 질병의 진행의 지연 또는 둔화, 질병 상태의 개선, 질병의 (부분 또는 완전한) 관해(remission)의 제공, 질병을 치료하는 데 필요한 하나 이상의 다른 약물의 용량 감소, 질병의 진행의 지연, 삶의 질 상승 또는 개선, 체중 증가의 상승 및/또는 생존 연장 중 하나 이상을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 또한, "치료"에는 암의 병리학적 결과(예를 들어 종양 부피)의 감소가 포함된다. 본 출원의 방법은 이러한 치료의 양태 중 어느 하나 이상을 고려한다.
암의 맥락에서, 용어 "치료하는"은, 암 세포의 성장 억제, 암 세포의 복제 억제, 전체 종양 부담의 감소, 및 질병과 연관된 하나 이상의 증상의 완화 중 임의의 것 또는 전부를 포함한다.
용어 "억제" 또는 "억제하다"는 임의의 표현형 특징의 감소 또는 중지 또는 그 특징의 발생률, 정도 또는 가능성의 감소 또는 중지를 지칭한다. "감소하다" 또는 "억제하다"는 참조와 비교하여 활성, 기능 및/또는 양을 줄이거나, 감소시키거나, 또는 저지하는 것이다. 특정 구현예에서, "감소하다" 또는 "억제하다"는 20% 이상의 전체적인 감소를 일으키는 능력을 의미한다. 또 다른 구현예에서, "감소하다" 또는 "억제하다"는 50% 이상의 전체적인 감소를 일으키는 능력을 의미한다. 또 다른 구현예에서, "감소하다" 또는 "억제하다"는 75%, 85%, 90%, 95%, 또는 그 초과의 전체적인 감소를 일으키는 능력을 의미한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "참조"는 비교 목적을 위해 사용되는 임의의 샘플, 표준 또는 수준을 지칭한다. 참조는 건강한 샘플 및/또는 질병이 없는 샘플로부터 수득될 수 있다. 일부 예에서, 참조는 처리되지 않은 샘플로부터 수득될 수 있다. 일부 예에서, 참조는 질병에 걸리지 않았거나 치료되지 않은 개체의 샘플로부터 수득된다. 일부 예에서, 참조는 개체 또는 환자가 아닌 한 명 이상의 건강한 개체로부터 수득된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "질병의 발달을 지연하는"은 질병의 발달(예컨대 암)을 지연, 방해, 둔화, 지체, 안정화, 억제 및/또는 연기하는 것을 의미한다. 이러한 지연은 질병 이력 및/또는 치료를 받는 개체에 따라 시간 길이가 다양할 수 있다. 당업자에게 명백한 바와 같이, 충분하거나 상당한 지연은 사실상 개체가 질병을 발병하지 않는다는 점에서 예방을 포함할 수 있다. 예를 들어, 전이의 발달과 같은 말기 암이 지연될 수 있다.
본 명세서에 사용된 바와 같은 "예방하는"은 질병에 걸리기 쉽지만 아직 질병으로 진단되지 않은 개체에서 질병의 발생 또는 재발과 관련하여 예방을 제공하는 것을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 기능 또는 활성을 "억제한다"는 관심 상태 또는 파라미터를 제외하고는 동일한 다른 조건과 비교할 때, 또는 대안적으로 또 다른 조건과 비교할 때 기능 또는 활성을 감소시키는 것이다. 예를 들어, 종양 성장을 억제하는 항체는, 항체가 없을 때의 종양의 성장 속도와 비교하여, 종양의 성장 속도를 감소시킨다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "~에 기초한"이라는 표현은, 본 명세서에 설명된 바와 같은 개체의 특징을 평가, 결정 또는 측정(및 바람직하게는 치료를 받기에 적합한 개체를 선택)하는 것을 포함한다. 클라우딘-18 이상(aberration) 상태가 본 명세서에 설명된 바와 같은 치료 방법의 선택, 평가, 측정 또는 결정을 위한 "근거로서 사용되는" 경우, 치료 전 및/또는 치료 동안에 결정된 클라우딘-18 이상, 및 수득된 상태(CLDN18.2의 존재, 부재, 발현 수준, 활성 수준 및/또는 인산화 수준을 포함함)는 임상의가 다음 중 임의의 것을 평가하는 데 사용된다: (a) 개체가 처음에 치료(들)를 받기에 가능성이 있거나 가능할 것으로 예상되는 적합성; (b) 개체가 처음에 치료(들)를 받기에 가능성이 있거나 가능할 것으로 예상되는 부적합성; (c) 치료에 대한 반응성; (d) 개체가 치료(들)를 계속해서 받기에 가능성이 있거나 가능할 것으로 예상되는 적합성; (e) 개체가 치료(들)를 계속해서 받기에 가능성이 있거나 가능할 것으로 예상되는 부적합성; (f) 용량 조정; 또는 (g) 임상적 이익의 가능성 예측.
용어 "대상체", "개체" 및 "환자"는 인간, 소, 말, 고양이, 개, 설치류, 또는 영장류를 포함하지만 이에 제한되지 않는 포유동물을 지칭하기 위해 본 명세서에서 상호교환가능하게 사용된다. 일부 구현예에서, 개체는 인간이다.
제제의 "유효량"은 원하는 치료 결과를 달성하기 위해 필요한 용량 및 기간 동안 효과적인 양을 지칭한다. 특정 용량은, 선택된 특정 제제, 이후 따라야 할 투여 계획(regimen), 다른 화합물과 조합하여 투여되는지의 여부, 투여 타이밍, 영상화될 조직, 및 그가 운반되는 신체 전달 시스템 중 하나 이상에 따라 달라질 수 있다.
본 출원의 물질/분자, 작용제 또는 길항제의 "치료 유효량"은 개체의 질병 상태, 연령, 성별, 및 체중, 및 물질/분자, 작용제 또는 길항제가 개체에서 원하는 반응을 끌어내는 능력과 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 치료 유효량은 또한 물질/분자, 작용제 또는 길항제의 임의의 독성 또는 유해한 효과가 치료적으로 유익한 효과보다 더 큰 양이다. 치료 유효량은 1회 이상의 투여로 전달될 수 있다.
용어 "약학 제형" 및 "약학 조성물"은 활성 성분(들)의 생물학적 활성이 유효하도록 허용하는 형태이며, 제형이 투여될 개체에게 허용가능하지 않을 정도로 독성이 있는 추가의 성분들을 함유하지 않는 제형을 지칭한다. 그러한 제형은 멸균성일 수 있다.
"약학적으로 허용가능한 담체"는 개체에게 투여하기 위한 "약학 조성물"을 함께 포함하는 치료제와 함께 사용하기 위한 당업계에서 통상적인 무독성 고체, 반고체, 또는 액체 충전제, 희석제, 캡슐화 재료, 제형 보조제, 또는 담체를 지칭한다. 약학적으로 허용가능한 담체는 사용된 투여량 및 농도에서 수령자에게 무독성이며, 제형의 다른 성분들과 상용성이다. 약학적으로 허용가능한 담체는 사용되는 제형에 적합하다.
"멸균"(sterile) 제형은 무균이거나 살아있는 미생물 및 이의 포자가 본질적으로 없다.
하나 이상의 추가의 치료제와 "조합하여" 투여하는 것은 동시에(동시발생적으로) 및 임의의 순서로 연속적 투여 또는 순차적 투여를 포함한다.
용어 "동시발생적으로(concurrently)"는, 투여의 적어도 일부가 시간상 중복되거나 하나의 치료제의 투여가 다른 치료제의 투여에 비해 짧은 기간 내에 속하는 2종 이상의 치료제의 투여를 지칭하기 위해 본 명세서에 사용된다. 예를 들어, 2종 이상의 치료제는 약 60분 이하, 예컨대 약 30, 15, 10, 5, 또는 1분 중 임의의 것 이하의 시간 간격으로 투여된다.
용어 "순차적으로"는 하나 이상의 다른 제제(들)의 투여를 중단한 후 하나 이상의 제제(들)의 투여가 계속되는, 2종 이상의 치료제의 투여를 지칭하는 것으로 여기 사용된다. 예를 들어, 2종 이상의 치료제의 투여는 약 15분 초과, 예컨대 약 20, 30, 40, 50, 또는 60분, 1일, 2일, 3일, 1주, 2주, 또는 1개월, 또는 그 초과의 시간 간격으로 투여된다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "~와 함께"는 또 다른 치료 양식에 추가하여 하나의 치료 양식의 투여를 지칭한다. 이와 같이, "~와 함께"는 개체에게 또 다른 치료 양식을 투여하기 전, 동안 또는 후에, 하나의 치료 양식을 투여하는 것을 지칭한다.
용어 "패키지 삽입물"은 치료 생성물의 상업적 패키지에 관례적으로 포함된 지침서를 지칭하는 데 사용되며, 이는 그러한 치료제의 사용에 관한 적응증, 사용법, 투여량, 투여, 병용 요법, 금기, 및/또는 경고에 대한 정보를 포함한다.
"제조품"은, 적어도 하나의 시약, 예를 들어 질병 또는 장애(예를 들어, 암) 치료용 의약, 또는 본 명세서에 설명된 바이오마커를 특이적으로 검출하기 위한 프로브를 포함하는 임의의 제조물(예를 들어, 패키지 또는 용기) 또는 키트이다. 특정 구현예에서, 제조물 또는 키트는 본 명세서에 설명된 방법을 수행하기 위한 유닛으로서 홍보, 유통 또는 판매된다.
본 명세서에 설명된 응용의 구현예는, 구현예들로 "이루어지는" 및/또는 "본질적으로 이루어지는" 것을 포함하는 것으로 이해된다.
본 명세서에서 "약" 값 또는 파라미터에 대한 언급은 그 값 또는 파라미터 자체에 대한 변형을 포함(및 설명)한다. 예를 들어, "약 X"를 지칭하는 설명은 "X"에 대한 설명을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, 값 또는 파라미터가 "아닌(not)"에 대한 언급은 일반적으로 값 또는 파라미터 "이외의(other than)"를 의미하고 설명한다. 예를 들어, 방법이 유형 X의 암을 치료하는 데 사용되지 않는다는 것은 그 방법이 X 이외의 유형의 암을 치료하는 데 사용됨을 의미한다.
본 명세서에 사용된 용어 "약 X~Y"는 "약 X 내지 약 Y"와 동일한 의미를 갖는다.
본 명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 바와 같이, 단수 형태("a", "또는", 및 "the")는 명확히 달리 지시하지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다.
II. 다중특이적 작제물
본 출원은 CLDN18.2 및 PD-L1 모두에 결합하는 다중특이적 작제물을 제공한다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 설명된 다중특이적 작제물은 항-CLDN18.2 항체 모이어티 및 항-PD-L1 항체 모이어티를 포함하는 이특이적 항체이다. 항-CLDN18.2 항체 모이어티 및 항-PD-L1 항체 모이어티는 본 명세서에 설명된 것들 중 임의의 것일 수 있다.
일부 구현예에서, CLDN18.2(예를 들어, 인간 CLDN18.2)에 특이적으로 결합하는 전장 항체를 포함하는 항-CLDN18.2 항체 모이어티 및 PD-L1(예를 들어, 인간 PD-L1)에 결합하는 단일 도메인 항체를 포함하는 항-PD-L1 항체 모이어티를 포함하는 다중특이적 작제물(예를 들어, 이특이적 항체)이 제공되며, 여기서 단일 도메인 항체는 전장 항체의 1개 또는 2개 모두의 중쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, CLDN18.2에 특이적으로 결합하는 전장 항체를 포함하는 항-CLDN18.2 항체 모이어티 및 PD-L1에 결합하는 단일 도메인 항체를 포함하는 항-PD-L1 항체 모이어티를 포함하는 다중특이적 작제물(예를 들어, 이특이적 항체)이 제공되며, 여기서 단일 도메인 항체는 전장 항체의 1개 또는 2개 모두의 중쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, CLDN18.2에 특이적으로 결합하는 전장 항체를 포함하는 항-CLDN18.2 항체 모이어티 및 PD-L1에 결합하는 단일 도메인 항체를 포함하는 항-PD-L1 항체 모이어티를 포함하는 다중특이적 작제물(예를 들어, 이특이적 항체)이 제공되며, 여기서 단일 도메인 항체는 전장 항체의 1개 또는 2개 모두의 경쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, CLDN18.2에 특이적으로 결합하는 전장 항체를 포함하는 항-CLDN18.2 항체 모이어티 및 PD-L1에 결합하는 단일 도메인 항체를 포함하는 항-PD-L1 항체 모이어티를 포함하는 다중특이적 작제물(예를 들어, 이특이적 항체)이 제공되며, 여기서 단일 도메인 항체 전장 항체의 1개 또는 2개 모두의 경쇄의 C-말단에 융합된다.
일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티 및 항-PD-L1 항체 모이어티를 포함하는 다중특이적 작제물(예를 들어, 이특이적 항체)이 제공되며, 여기서 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 CLDN18.2에의 결합에 대해 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 항체 모이어티와 경쟁하며, 여기서 a) VH는, i) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, ii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하고; b) VL은, i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 PD-L1에의 결합에 대해, a) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; b) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1. 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; 또는 c) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)와 경쟁한다. 일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 전장 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 경쇄(예를 들어, 1개 또는 2개의 경쇄의 N- 및/또는 C-말단)에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 중쇄(예를 들어, 1개 또는 2개의 중쇄의 N- 및/또는 C-말단)에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 링커를 통해 전장 항체에 융합된다. 일부 구현예에서, 링커는 펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 약 4 내지 약 20개의 아미노산의 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~80으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~77로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CLDN18.2(예를 들어, 인간 CLDN18.2)에 특이적으로 결합하는 항-CLDN18.2 항체 모이어티 및 PD-L1(예를 들어, 인간 PD-L1)에 특이적으로 결합하는 항-PD-L1 항체 모이어티를 포함하는 다중특이적 작제물(예를 들어, 이특이적 항체)이 제공되며, 여기서 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 전장 항체를 포함하며, 여기서 a) VH는, i) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, ii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하고; b) VL은, i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며; 여기서 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 경쇄에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 경쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 링커를 통해 전장 항체에 융합된다. 일부 구현예에서, 링커는 펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 약 4 내지 약 20개의 아미노산의 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~80으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~77로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CLDN18.2(예를 들어, 인간 CLDN18.2)에 특이적으로 결합하는 항-CLDN18.2 항체 모이어티 및 PD-L1(예를 들어, 인간 PD-L1)에 특이적으로 결합하는 항-PD-L1 항체 모이어티를 포함하는 다중특이적 작제물(예를 들어, 이특이적 항체)이 제공되며, 여기서 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 전장 항체를 포함하며, 여기서 a) VH는, i) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, ii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하고; b) VL은, i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며; 여기서 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 중쇄에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 중쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 링커를 통해 전장 항체에 융합된다. 일부 구현예에서, 링커는 펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 약 4 내지 약 20개의 아미노산의 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~80으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~77을 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 단일 도메인 항체를 포함한다.
일부 구현예에서, CLDN18.2(예를 들어, 인간 CLDN18.2)에 특이적으로 결합하는 항-CLDN18.2 항체 모이어티 및 PD-L1(예를 들어, 인간 PD-L1)에 특이적으로 결합하는 항-PD-L1 항체 모이어티를 포함하는 다중특이적 작제물(예를 들어, 이특이적 항체)이 제공되며, 여기서 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 전장 항체를 포함하며, 여기서 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 중쇄에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 중쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 경쇄에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 경쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 링커를 통해 전장 항체에 융합된다. 일부 구현예에서, 링커는 펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 약 4 내지 약 20개의 아미노산의 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~80으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~77로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CLDN18.2(예를 들어, 인간 CLDN18.2)에 특이적으로 결합하는 항-CLDN18.2 항체 모이어티 및 PD-L1(예를 들어, 인간 PD-L1)에 특이적으로 결합하는 항-PD-L1 항체 모이어티를 포함하는 다중특이적 작제물(예를 들어, 이특이적 항체)이 제공되며, 여기서 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 전장 항체를 포함하며, 여기서 항-PD-L1 항체 모이어티는, 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하는 단일 도메인 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 중쇄에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 중쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 경쇄에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 경쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 링커를 통해 전장 항체에 융합된다. 일부 구현예에서, 링커는 펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 약 4 내지 약 20개의 아미노산의 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~80으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~77로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, CLDN18.2(예를 들어, 인간 CLDN18.2)에 특이적으로 결합하는 항-CLDN18.2 항체 모이어티 및 PD-L1(예를 들어, 인간 PD-L1)에 특이적으로 결합하는 항-PD-L1 항체 모이어티를 포함하는 다중특이적 작제물(예를 들어, 이특이적 항체)이 제공되며, 여기서 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 전장 항체를 포함하며, 여기서 항-PD-L1 항체 모이어티는, 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하는 단일 도메인 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 중쇄에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 중쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 경쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 링커를 통해 전장 항체에 융합된다. 일부 구현예에서, 링커는 펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 약 4 내지 약 20개의 아미노산의 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~80으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~77로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티 및 항-PD-L1 항체 모이어티를 포함하는 다중특이적 작제물(예를 들어, 이특이적 항체)이 제공되며, 여기서 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서 a) VH는, i) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, ii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하고; b) VL은, i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며; 여기서 항-PD-L1 항체 모이어티는 a) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이; b) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이; 또는 c) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 중쇄에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 중쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 경쇄에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 경쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 링커를 통해 전장 항체에 융합된다. 일부 구현예에서, 링커는 펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 약 4 내지 약 20개의 아미노산의 길이를 갖는다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~80으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~77로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 전장 항체를 포함하는 항-CLDN18.2 항체 모이어티를 포함하는 다중특이적 작제물(예를 들어, 이특이적 항체)이 제공되며, 여기서 항체는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서 a) VH는, i) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, ii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하고, b) VL은, i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 a) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; b) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; 또는 c) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 항-CLDN18.2 전장 항체 모이어티에, 선택적으로 약 4 내지 약 20개의 아미노산의 길이를 갖는 펩티드 링커를 통해, 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해, 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72를 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 78의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 79의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 80의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 78의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 79의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 80의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 78의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 79의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 78의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 79의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 73의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 74의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 75의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 76의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 77의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다.
일부 구현예에서, 상기 설명된 아미노산 치환은 본 출원의 표 2에 나타낸 "예시적인 치환"으로 제한된다. 일부 구현예에서, 아미노산 치환은 본 출원의 표 2에 나타낸 "선호되는 치환"으로 제한된다.
항-CLDN18.2 항체 모이어티
본 출원에 설명된 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 클라우딘-18 동형단백질 2("CLDN18.2")에 특이적으로 결합하는 임의의 항체 모이어티를 포함한다.
클라우딘 18.2(CLDN18.2)
클라우딘은 상피 및 내피에서 발현되는 밀착 접합 막 단백질의 한 패밀리이며, 세포사이의 장벽 및 밀착 접합 투과성을 결정하는 공극을 형성한다. 용어 "클라우딘 18" 또는 "CLDN18"은 바람직하게는 인간 CLDN 18을 지칭하며, CLDN 18의 CLDN 18.1 및 CLDN 18.2와 같은 임의의 스플라이스 변이를 포함한다. CLDN 18.1 및 CLDN18.2는 제1 막관통(TM: transmembrane) 영역 및 루프 1을 포함하는 N-말단 부분에서 상이하지만, C-말단의 일차 단백질 서열은 동일하다.
클라우딘 18 단백질의 스플라이스 변이인, 클라우딘 18 동형단백질 2(CLDN18.2)는 단명성의 분화된 위 상피 세포 상에서 발현되는 위 계통의 항원이다. CLDN18.2의 발현은 통상적으로 다른 건강한 인간 조직에서는 검출되지 않는다. 그러나, CLDN18.2는, 위식도 및 췌장 암을 포함하는, 다양한 인간 암에서 상당한 수준으로 정상위치가 아닌 곳에서 발현된다(Sahin et al. (2008) Clin Cancer Res, 14(23): 7624-34). CLDN18.2는 또한 위암의 전이에서 자주 검출된다.
일부 구현예에서, CLDN18.2는 인간 CLDN18.2이다.
일부 구현예에서, CLDN18.2는 서열번호 99에 제시된 아미노산 서열 또는 이의 변이를 포함한다.
예시적인 항-CLDN18.2 항체 모이어티
일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 CLDN18.2에의 결합에 대해 a) 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 항체 모이어티와 경쟁하며, 여기서 a) VH는, i) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, ii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하고; b) VL은, i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는, a) 서열번호 7에 제시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 내에서 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3, 또는 서열번호 7에 제시된 서열에 대해 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의 것을 포함함)의 서열 동일성을 갖는 이의 변이, 및 b) 서열번호 8에 제시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL) 내에서 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3, 또는 서열번호 8에 제시된 서열에 대해 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의 것을 포함함)의 서열 동일성을 갖는 이의 변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서 a) VH는, i) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, ii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 HC-CDR에서 총 약, 5, 4, 3, 2, 또는 1개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하고; b) VL은, i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 LC-CDR에서 총 약, 5, 4, 3, 2, 또는 1개 이하의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서 a) VH는, i) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 또는 HC-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, ii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 또는 HC-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 HC-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하고; b) VL은, i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 또는 LC-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 또는 LC-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 LC-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서 a) VH는, i) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, ii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하고; b) VL은, i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서 VH는 서열번호 7의 아미노산 서열, 또는 서열번호 7에 대해 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의 것을 포함함)의 서열 동일성을 갖는 이의 변이를 포함하고/하거나; VL은 서열번호 8의 아미노산 서열, 또는 서열번호 8에 대해 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의 것을 포함함)의 서열 동일성을 갖는 이의 변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 전장 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 전장 항체는 IgG, IgA, IgD, IgE, IgM, 및 이의 조합 및 하이브리드로부터의 Fc 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 Fc 단편을 갖는다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, 이의 조합 및 하이브리드로부터의 Fc 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 IgG1 또는 IgG4 Fc 단편이다.
일부 구현예에서, Fc 단편은 야생형과 비교하여, 감소된 FcγR 결합 친화성을 갖는다. 일부 구현예에서, 전장 항체는 IgG4 아이소타입을 갖고, S228P 돌연변이 및/또는 L235E 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 서열번호 97에 제시된 아미노산 서열을 포함한다.
항-PD-L1 항체 모이어티
본 출원에 설명된 항-PD-L1 항체 모이어티는 PD-L1에 특이적으로 결합하는 임의의 항체 모이어티를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 전장 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 전장 항체는 IgG, IgA, IgD, IgE, IgM, 및 이의 조합 및 하이브리드로부터의 Fc 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 Fc 단편을 갖는다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, 이의 조합 및 하이브리드로부터의 Fc 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 IgG1 또는 IgG4 Fc 단편이다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 야생형과 비교하여, 감소된 FcγR 결합 친화성을 갖는다. 일부 구현예에서, 전장 항체는 IgG4 아이소타입을 갖고, S228P 돌연변이 및/또는 L235E 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 PD-L1에 결합하는 단일-도메인 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, PD-L1은 인간 PD-L1이다.
예시적인 항-PD-L1 항체 모이어티
일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 PD-L1에의 결합에 대해 a) 서열번호 15 또는 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1; b) 서열번호 16, 18 또는 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2; 및 c) 서열번호 17 또는 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함하는 항체 모이어티와 경쟁한다. 일부 구현예에서, 단일 도메인 항체는, a) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; b) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; 또는 c) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는, 서열번호 22~24 중 임의의 것에 제시된 아미노산 서열을 갖는 단일 단량체성 가변 항체 도메인 내에 각각 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, sdAb-CDR2, 및 sdAb-CDR3, 또는 서열번호 22~24 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열에 대해 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의 것을 포함함)의 서열 동일성을 갖는 이의 변이를 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는, a) 서열번호 15 또는 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이; b) 서열번호 16, 18 또는 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이; 및 c) 서열번호 17 또는 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는, a) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이; b) 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이; 및 c) 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는, a) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이; b) 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이; 및 c) 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는, a) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 sdAb-CDR1에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이; b) 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 sdAb-CDR2에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이; 및 c) 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 sdAb-CDR3에서 약 3개 이하(예컨대 약 1, 2, 3개 중 임의의 것)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는, a) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; b) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; 또는 c) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 서열번호 22~24 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 서열번호 22~24 중 어느 하나에 제시된 서열에 대해 적어도 약 80%(예를 들어, 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 임의의 것을 포함함)의 서열 동일성을 갖는 이의 변이를 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함한다.
작제물 내 항체 모이어티(예를 들어, 항-CLDN18.2 또는 항-PD-L1 항체 모이어티)
본 명세서에 설명된 항체 모이어티(예컨대 항-CLDN18.2 항체 모이어티 또는 항-PD-L1 항체 모이어티)는 하기 설명되는 특징들 중 어느 하나 이상을 가질 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 모이어티는 Fc 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 모이어티는 scFv를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 모이어티는 Fc 단편에 융합된 scFv를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체 모이어티는 펩티드 링커를 통해 Fc 단편에 융합된 scFv를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 인간 IgG1 Fc 단편이다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 클리어런스를 증가시키거나 반감기를 감소시키는 하나 이상의 돌연변이를 포함한다.
일부 구현예에서, Fc 단편은 경첩 영역(Cys226에서 시작함), IgG CH2 도메인 및 CH3 도메인을 포함하는 면역글로불린 IgG 중쇄 불변 영역을 포함한다. 본 명세서에 사용된 바와 같은 용어 "경첩 영역" 또는 "경첩 서열"은 링커와 CH2 도메인 사이에 위치한 아미노산 서열을 지칭한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질은 경첩 영역을 포함하는 Fc 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 융합 단백질의 Fc 단편은 경첩 영역에서 시작하여 IgG 중쇄의 C-말단까지 연장된다. 일부 구현예에서, 융합 단백질은 경첩 영역을 포함하지 않는 Fc 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 모이어티는 IgG, IgA, IgD, IgE, IgM, 이의 조합 및 하이브리드로부터의 Fc 단편으로 이루어진 군으로부터 선택된 Fc 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 인간 IgG로부터 유래한다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 인간 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, 또는 조합 또는 하이브리드 IgG의 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 IgG1 Fc 단편이다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 IgG1의 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 IgG4 Fc 단편이다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 IgG4의 CH2 및 CH3 도메인을 포함한다. IgG4 Fc는 IgG1 Fc보다 적은 이펙터 활성을 나타내는 것으로 알려져 있으며, 따라서 일부 응용에 바람직할 수 있다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 마우스 면역글로불린으로부터 유래한다.
일부 구현예에서, IgG CH2 도메인은 Ala231에서 시작한다. 일부 구현예에서, CH3 도메인은 Gly341에서 시작한다. 인간 IgG의 C-말단 Lys 잔기는 선택적으로 없을 수 있음이 이해된다. 또한 Fc의 원하는 구조 및/또는 안정성에 영향을 미치지 않으면서 Fc 영역의 보존적 아미노산 치환이 본 발명의 범위 내에서 고려된다는 것이 이해된다.
항체 모이어티의 Fc 단편에서 동일하지 않은 폴리펩티드의 이형이합체화는 놉-인투-홀(knob-into-hole) 기술에 의한 이형이합체화를 이에 제한됨이 없이 포함하는, 당업계에 알려진 방법에 의해 촉진될 수 있다. 놉-인투-홀 기술의 구조 및 조립 방법은, 예를 들어 본 명세서에 그 전체가 참조로 포함된 US5,821,333, US7,642,228, US 201 1/0287009 및 PCT/US2012/059810에서 찾을 수 있다. 이 기술은 하나의 Fc의 CH3 도메인 내에서 작은 아미노산 잔기를 큰 잔기로 대체하여 "놉"(또는 돌기)를 도입하고, 다른 Fc의 CH3 도메인 내에서 하나 이상의 큰 아미노산 잔기를 더 작은 잔기로 대체하여 "홀"(또는 공동)을 도입하는 것에 의해 개발되었다. 일부 구현예에서, 융합 단백질 내 Fc 단편의 하나의 사슬은 놉을 포함하고, Fc 단편의 제2 사슬은 홀을 포함한다.
놉의 형성에 바람직한 잔기는 일반적으로 천연 발생 아미노산 잔기이며, 바람직하게는 아르기닌(R), 페닐알라닌(F), 티로신(Y) 및 트립토판(W)으로부터 선택된다. 트립토판 및 티로신이 가장 바람직하다. 일 구현예에서, 놉 형성을 위한 원래의 잔기는 알라닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 글리신, 세린, 트레오닌 또는 발린과 같은 작은 측쇄 부피를 갖는다. 놉을 형성하기 위한 CH3 도메인에서의 예시적인 아미노산 치환은 T366W, T366Y 또는 F405W 치환을 이에 제한됨이 없이 포함한다.
홀의 형성에 바람직한 잔기는 일반적으로 천연 발생 아미노산 잔기이며, 바람직하게는 알라닌(A), 세린(S), 트레오닌(T) 및 발린(V)으로부터 선택된다. 일 구현예에서, 홀의 형성을 위한 원래의 잔기는 티로신, 아르기닌, 페닐알라닌 또는 트립토판과 같은 큰 측쇄 부피를 갖는다. 홀을 생성하기 위한 CH3 도메인에서의 예시적인 아미노산 치환은 제한 없이, T366S, L368A, F405A, Y407A, Y407T 및 Y407V 치환을 포함한다. 특정 구현예에서, 놉은 T366W 치환을 포함하고, 홀은 T366S/L368A/Y407V 치환을 포함한다. 이형이합체화를 촉진하는 당업계에 알려진 Fc 영역에 대한 다른 변형이 또한 본 출원에 의해 고려되고 포함된다.
본 명세서에 설명된 임의의 변이(Fc 변이, 이펙터 기능 변이, 글리코실화 변이, 시스테인 조작된 변이) 또는 이의 조합을 포함하는 기타 항체 모이어티 변이가 고려된다.
a) 항체 친화성
항체 모이어티의 결합 특이성은 당업계에 알려진 방법에 의해 실험적으로 결정될 수 있다. 그러한 방법은 웨스턴 블롯, ELISA-, RIA-, ECL-, IRMA-, EIA-, BIACORETM -시험 및 펩티드 스캔을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
일부 구현예에서, 항체 모이어티와 표적 항원(예를 들어, CLDN18.2 또는 PD-L1) 사이의 결합의 KD는 약 10-7 M 내지 약 10-12 M, 약 10-7 M 내지 약 10-8 M, 약 10-8 M 내지 약 10-9 M, 약 10-9 M 내지 약 10-10 M, 약 10-10 M 내지 약 10-11 M, 약 10-11 M 내지 약 10-12 M, 약 10-7 M 내지 약 10-12 M, 약 10-8 M 내지 약 10-12 M, 약 10-9 M 내지 약 10-12 M, 약 10-10 M 내지 약 10-12 M, 약 10-7 M 내지 약 10-11 M, 약 10-8 M 내지 약 10-11 M, 약 10-9 M 내지 약 10-11 M, 약 10-7 M 내지 약 10-10 M, 약 10-8 M 내지 약 10-10 M, 또는 약 10-7 M 내지 약 10-9 M이다. 일부 구현예에서, 항체 모이어티와 표적 항원(예를 들어, CLDN18.2 또는 PD-L1) 사이의 결합의 KD는 약 10-7 M, 10-8 M, 10-9 M, 10-10 M, 10-11 M, 또는 10-12 M 중 어느 하나보다 더 강하다. 일부 구현예에서, 표적 항원(예를 들어, CLDN18.2 또는 PD-L1)은 인간 항원이다.
일부 구현예에서, 항체 모이어티와 표적 항원(예를 들어, CLDN18.2 또는 PD-L1) 사이의 결합의 Kon은 약 103 M-1s-1 내지 약 108 M-1s-1, 약 103 M-1s-1 내지 약 104 M-1s-1, 약 104 M-1s-1 내지 약 105 M-1s-1, 약 105 M-1s-1 내지 약 106 M-1s-1, 약 106 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 또는 약 107 M-1s-1 내지 약 108 M-1s-1이다. 일부 구현예에서, 항체 모이어티와 표적 항원(예를 들어, CLDN18.2 또는 PD-L1) 사이의 결합의 Kon은 약 103 M-1s-1 내지 약 105 M-1s-1, 약 104 M-1s-1 내지 약 106 M-1s-1, 약 105 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 약 106 M-1s-1 내지 약 108 M-1s-1, 약 104 M-1s-1 내지 약 107 M-1s-1, 또는 약 105 M-1s-1 내지 약 108 M-1s-1이다. 일부 구현예에서, 항체 모이어티와 표적 항원(예를 들어, CLDN18.2 또는 PD-L1) 사이의 결합의 Kon은 약 103 M-1s-1, 104 M-1s-1, 105 M-1s-1, 106 M-1s-1, 107 M-1s-1 또는 108 M-1s-1 중 어느 하나 이하이다. 일부 구현예에서, 표적 항원(예를 들어, CLDN18.2 또는 PD-L1)은 인간 항원이다.
일부 구현예에서, 항체 모이어티와 표적 항원(예를 들어, CLDN18.2 또는 PD-L1) 사이의 결합의 Koff는 약 1 s-1 내지 약 10-6 s-1, 약 1 s-1 내지 약 10-2 s-1, 약 10-2 s-1 내지 약 10-3 s-1, 약 10-3 s-1 내지 약 10-4 s-1, 약 10-4 s-1 내지 약 10-5 s-1, 약 10-5 s-1 내지 약 10-6 s-1, 약 1 s-1 내지 약 10-5 s-1, 약 10-2 s-1 내지 약 10-6 s-1, 약 10-3 s-1 내지 약 10-6 s-1, 약 10-4 s-1 내지 약 10-6 s-1, 약 10-2 s-1 내지 약 10-5 s-1, 또는 약 10-3 s-1 내지 약 10-5 s-1이다. 일부 구현예에서, 항체 모이어티와 표적 항원(예를 들어, CLDN18.2 또는 PD-L1) 사이의 결합의 Koff는 적어도 약 1 s-1, 10-2 s-1, 10-3 s-1, 10-4 s-1, 10-5 s-1 또는 10-6 s-1 중 어느 하나이다. 일부 구현예에서, 표적 항원(예를 들어, CLDN18.2 또는 PD-L1)은 인간 항원이다.
b) 키메라 또는 인간화 항체
일부 구현예에서, 항체 모이어티는 키메라 항체이다. 특정 키메라 항체는 예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567; 및 문헌[Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)]에 기재되어 있다. 일부 구현예에서, 키메라 항체는 비-인간 가변 영역(예를 들어, 마우스로부터 유래된 가변 영역) 및 인간 불변 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 키메라 항체는 클래스 또는 하위클래스가 모 항체로부터 변경된 "클래스 전환된(class switched)" 항체이다. 키메라 항체는 이의 항원-결합 단편을 포함한다.
일부 구현예에서, 키메라 항체는 인간화 항체이다. 통상적으로, 비-인간 항체는 모 비-인간 항체의 특이성 및 친화성은 유지하면서 인간에 대한 면역원성을 감소시키도록 인간화된다. 일반적으로, 인간화 항체는 HVR, 예를 들어 CDR(또는 이의 일부)이 비-인간 항체로부터 유래하며, FR(또는 그의 일부)이 인간 항체 서열로부터 유래하는 하나 이상의 가변 도메인을 포함한다. 인간화 항체는 선택적으로 인간 불변 영역의 적어도 일부를 또한 포함할 것이다. 일부 구현예에서, 인간화 항체의 일부 FR 잔기는 예를 들어, 항체 특이성 또는 친화성을 회복 또는 개선하기 위해, 비-인간 항체(예를 들어, HVR 잔기가 유래된 항체)로부터의 상응하는 잔기로 치환된다.
인간화 항체 및 이를 제조하는 방법은 예를 들어, 문헌[Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)]에서 검토되고, 나아가 예를 들어 문헌[Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); Queen et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 86:10029-10033 (1989); 미국 특허 번호 5,821,337, 7,527,791, 6,982,321, 및 7,087,409; Kashmiri et al., Methods 36:25-34 (2005)(SDR(a-CDR) 그래프팅을 설명함); Padlan, Mol. Immunol. 28:489-498 (1991)("재생(resurfacing)"을 설명함); Dall'Acqua et al., Methods 36:43-60 (2005)("FR 셔플링"을 설명함); 및 Osbourn et al., Methods 36:61-68 (2005) 및 Klimka et al., Br. J. Cancer, 83:252-260 (2000)(FR 셔플링에 대한 "가이드된 선택" 접근법을 설명함)]에 설명되어 있다.
인간화에 사용될 수 있는 인간 프레임워크 영역은, "최적화(best-fit)" 방법을 사용하여 선택된 프레임워크 영역(예를 들어, 문헌[Sims et al. J. Immunol. 151:2296 (1993)] 참조); 경쇄 또는 중쇄 가변 영역의 특정 하위군의 인간 항체의 공통 서열로부터 유래한 프레임워크 영역(예를 들어, 문헌[Carter et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:4285 (1992); 및 Presta et al. J. Immunol., 151:2623 (1993)] 참조); 인간의 성숙(체세포 돌연변이된) 프레임워크 영역 또는 인간 생식세포계열 프레임워크 영역(예를 들어, 문헌[Almagro and Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008) 참조); 및 스크리닝 FR 라이브러리로부터 유래한 프레임워크 영역(예를 들어, 문헌[Baca et al., J. Biol. Chem. 272:10678-10684 (1997) 및 Rosok et al., J. Biol. Chem. 271:22611-22618 (1996)] 참조)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
c) 인간 항체
일부 구현예에서, 항체 모이어티는 인간 항체(인간 도메인 항체, 또는 인간 DAb로도 알려짐)이다. 인간 항체는 당업계에 알려진 다양한 기술을 사용하여 생성될 수 있다. 인간 항체는 일반적으로 문헌[van Dijk and van de Winkel, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74 (2001), Lonberg, Curr. Opin. Immunol. 20:450-459 (2008), 및 Chen, Mol. Immunol. 47(4):912-21 (2010)]에 설명되어 있다. 완전한 인간 단일-도메인 항체(또는 DAb)를 생산할 수 있는 유전자이식 마우스 또는 쥐는 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, US20090307787A1, 미국 특허 번호 8,754,287, US20150289489A1, US20100122358A1, 및 WO 2004049794 참조.
인간 항체(예를 들어, 인간 DAb)는 항원 공격에 대한 반응으로 온전한 인간 항체 또는 인간 가변 영역을 갖는 온전한 항체를 생산하도록 변형된 유전자이식 동물에게 면역원을 투여함으로써 제조될 수 있다. 이러한 동물은 내인성 면역글로불린 유전자좌를 대체하거나, 염색체 외에 존재하거나 동물의 염색체 내로 무작위로 통합된 인간 면역글로불린 유전자좌의 전부 또는 일부를 통상적으로 함유한다. 이러한 유전자이식 마우스에서 내인성 면역글로불린 유전자좌는 일반적으로 불활성화되었다. 유전자이식 동물로부터 인간 항체를 수득하는 방법의 검토는 문헌[Lonberg, Nat. Biotech. 23:1117-1125 (2005)]을 참조한다. 또한 예를 들어, XENOMOUSE?? 기술을 설명하는 미국 특허 번호 6,075,181 및 6,150,584; HuMab® 기술을 설명하는 미국 특허 번호 5,770,429; K-M MOUSE® 기술을 설명하는 미국 특허 번호 7,041,870, 및 VelociMouse® 기술을 설명하는 미국 특허 출원 공개 번호 US 2007/0061900을 참조한다. 이러한 동물에 의해 생성된 온전한 항체로부터의 인간 가변 영역은 예를 들어 상이한 인간 불변 영역과 조합함으로써 추가로 변형될 수 있다.
인간 항체(예를 들어, 인간 DAb)는 또한 하이브리도마 기반 방법에 의해 제조될 수 있다. 인간 단일클론 항체의 생산을 위한 인간 골수종 및 마우스-인간 이종성골수종 세포주가 설명되어 있다(예를 들어, 문헌[Kozbor J. Immunol., 133: 3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987); 및 Boerner et al., J. Immunol., 147: 86 (1991)] 참조). 인간 B-세포 하이브리도마 기술을 통해 생성된 인간 항체는 또한 문헌[Li et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 103:3557-3562 (2006)]에 설명되어 있다. 추가의 방법은 예를 들어, 문헌[미국 특허 번호 7,189,826(하이브리도마 세포주로부터 단일클론 인간 IgM 항체의 생산을 설명함) 및 문헌[Ni, Xiandai Mianyixue, 26(4):265-268 (2006)(인간-인간 하이브리도마를 설명함)]에 설명된 것들을 포함한다. 인간 하이브리도마 기술(트리오마(Trioma) 기술)은 또한 문헌[Vollmers and Brandlein, Histology and Histopathology, 20(3):927-937 (2005) 및 Vollmers and Brandlein, Methods and Findings in Experimental and Clinical Pharmacology, 27(3):185-91 (2005)]에 설명되어 있다.
인간 항체(예를 들어, 인간 DAb)는 또한 인간-유래 파지 디스플레이 라이브러리로부터 선택된 Fv 클론 가변 도메인 서열을 분리함으로써 생성될 수 있다. 이어서 이러한 가변 도메인 서열은 원하는 인간 불변 도메인과 조합될 수 있다. 항체 라이브러리로부터 인간 항체를 선택하는 기술은 아래에 설명되어 있다.
d) 라이브러리-유래 항체
항체 모이어티는 원하는 활성 또는 활성들을 갖는 항체에 대한 조합 라이브러리를 스크리닝함으로써 분리될 수 있다. 예를 들어, 파지 디스플레이 라이브러리를 생성하고, 원하는 결합 특징을 갖는 항체들에 대해 이러한 라이브러리를 스크리닝하기 위한 다양한 방법이 당업계에 알려져 있다. 이러한 방법들은 예를 들어, 문헌[Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, 2001)에서 검토되고,나아가 예를 들어, 문헌[McCafferty et al., Nature 348:552-554; Clackson et al., Nature 352: 624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597 (1992); Marks and Bradbury, in Methods in Molecular Biology 248:161-175 (Lo, ed., Human Press, Totowa, NJ, 2003); Sidhu et al., J. Mol. Biol. 338(2): 299-310 (2004); Lee et al., J. Mol. Biol. 340(5): 1073-1093 (2004); Fellouse, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 101(34): 12467-12472 (2004); 및 Lee et al., J. Immunol. Methods 284(1-2): 119-132(2004)에 설명되어 있다. 단일-도메인 항체 라이브러리를 구성하는 방법은 예를 들어, 미국 특허 번호 7371849에 설명되어 있다.
특정 파지 디스플레이 방법에서, VH 및 VL 유전자의 레퍼토리는 중합효소 연쇄 반응(PCR)에 의해 개별적으로 클로닝되고 파지 라이브러리에서 랜덤으로 재조합되며, 이는 문헌[Winter et al., Ann. Rev. Immunol., 12: 433-455 (1994)]에 설명된 바와 같이 항원-결합 파지에 대해 스크리닝될 수 있다. 파지는 통상적으로 항체 단편을 scFv 단편으로 또는 Fab 단편으로 표시한다. 면역화된 공급원의 라이브러리는 하이브리도마를 구성할 필요 없이 면역원에 대한 고 친화성 항체를 제공한다. 대안적으로, 나이브(naive) 레퍼토리가 문헌[Griffiths et al., EMBO J, 12: 725-734 (1993)]에 설명된 바와 같이 임의의 면역화 없이 광범위한 비-자기 및 또한 자기 항원에 대한 단일 항체 공급원을 제공하도록 (예를 들어 인간으로부터) 클로닝될 수 있다. 마지막으로, 나이브 라이브러리는 또한 문헌[Hoogenboom and Winter, J. Mol. Biol., 227: 381-388 (1992)]에 설명된 바와 같이, 줄기 세포로부터 재배열되지 않은 V-유전자 절편을 클로닝하고, 랜덤 서열을 함유하는 PCR 프라이머를 사용하여 고도로 가변성인 CDR3 영역을 인코딩하고 시험관 내 재배열을 달성함으로써 합성적으로 제조될 수 있다. 인간 항체 파지 라이브러리를 설명하는 특허 공개는 예를 들어 미국 특허 번호 5,750,373, 및 미국 특허 공개 번호 2005/0079574, 2005/0119455, 2005/0266000, 2007/0117126, 2007/0160598, 2007/0237764, 2007/0292936, 및 2009/0002360을 포함한다.
인간 항체 라이브러리로부터 분리된 항체 또는 항체 단편은 본 명세서에서 인간 항체 또는 인간 항체 단편으로 간주된다.
e) 치환, 삽입, 결실 및 변이
일부 구현예에서, 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 항체 변이가 제공된다. 치환 돌연변이유발에 대한 관심 부위는 HVR(또는 CDR) 및 FR을 포함한다. 보존적 치환은 "선호되는 치환"이라는 제목으로 표 2에 나타나 있다. 더 실질적인 변경은 "예시적인 치환"이라는 제목으로 표 2에 제공되어 있으며, 이는 아미노산 측쇄 클래스를 참조하여 하기에 추가로 설명된다. 아미노산 치환을 관심 항체에 도입하고 원하는 활성, 예를 들어 유지/개선된 항원 결합, 감소된 면역원성, 또는 개선된 ADCC 또는 CDC에 대해 생성물을 스크리닝할 수 있다.
| 원래 잔기 | 예시적인 치환 | 선호되는 치환 |
| Ala (A) | Val; Leu; Ile | Val |
| Arg (R) | Lys; Gln; Asn | Lys |
| Asn (N) | Gln; His; Asp, Lys; Arg | Gln |
| Asp (D) | Glu; Asn | Glu |
| Cys (C) | Ser; Ala | Ser |
| Gln (Q) | Asn; Glu | Asn |
| Glu (E) | Asp; Gln | Asp |
| Gly (G) | Ala | Ala |
| His (H) | Asn; Gln; Lys; Arg | Arg |
| Ile (I) | Leu; Val; Met; Ala; Phe; Norleucine | Leu |
| Leu (L) | Norleucine; Ile; Val; Met; Ala; Phe | Ile |
| Lys (K) | Arg; Gln; Asn | Arg |
| Met (M) | Leu; Phe; Ile | Leu |
| Phe (F) | Trp; Leu; Val; Ile; Ala; Tyr | Tyr |
| Pro (P) | Ala | Ala |
| Ser (S) | Thr | Thr |
| Thr (T) | Val; Ser | Ser |
| Trp (W) | Tyr; Phe | Tyr |
| Tyr (Y) | Trp; Phe; Thr; Ser | Phe |
| Val (V) | Ile; Leu; Met; Phe; Ala; 노르류신 | Leu |
아미노산은 일반적인 측쇄 특성에 따라 그룹화될 수 있다: (1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) 산성: Asp, Glu; (4) 염기성: His, Lys, Arg; (5) 사슬 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; 및 (6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
비보존성 치환은 이러한 클래스 중 하나의 구성원을 또 다른 클래스로 교환하는 것을 수반할 것이다.
치환 변이의 하나의 유형은 모 항체(예를 들어, 인간화 또는 인간 항체)의 하나 이상의 초가변성 영역 잔기를 치환하는 것을 포함한다. 일반적으로, 추가의 연구를 위해 선택된 결과의 변이(들)는 모 항체에 비해 특정 생물학적 특성(예를 들어, 증가된 친화성, 감소된 면역원성)에서 변형(예를 들어, 개선)을 갖고/갖거나 모 항체의 특정 생물학적 특성을 실질적으로 유지할 것이다. 예시적인 치환 변이는 친화성 성숙 항체이며, 이는 예를 들어 본 명세서에 설명된 바와 같은 파지 디스플레이 기반 친화성 성숙 기술을 사용하여 편리하게 생성될 수 있다. 간략하게는, 하나 이상의 HVR 잔기가 돌연변이되고, 변이 항체가 파지 상에 표시되고 특정 생물학적 활성(예를 들어, 결합 친화성)에 대해 스크리닝된다.
예를 들어 항체 친화성을 개선하기 위해 HVR에서 변경(예를 들어, 치환)이 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 HVR "핫스팟", 즉 체세포 성숙 과정 동안 높은 빈도로 돌연변이를 겪는 코돈에 의해 암호화된 잔기(예를 들어, 문헌[Chowdhury, Methods Mol. Biol. 207:179-196 (2008)] 참조), 및/또는 SDR(a-CDR)에서 만들어질 수 있으며, 생성된 변이 VH 또는 VL은 결합 친화성에 대해 시험된다. 2차 라이브러리를 구성하고 재선택하는 것에 의한 친화성 성숙이 예를 들어 문헌[Hoogenboom et al. in Methods in Molecular Biology 178:1-37 (O'Brien et al., ed., Human Press, Totowa, NJ, (2001))]에 설명되어 있다. 친화성 성숙의 일부 구현예에서, 다양성은 임의의 다양한 방법(예를 들어, 오류가 발생하기 쉬운 PCR, 사슬 셔플링(chain shuffling) 또는 올리고뉴클레오티드-유도된(directed) 돌연변이유발)에 의해 성숙을 위해 선택된 가변 유전자 내로 도입된다. 이어서 2차 라이브러리가 생성된다. 이어서 라이브러리는 원하는 친화성을 갖는 임의의 항체 변이를 확인하기 위해 스크리닝된다. 다양성을 도입하는 또 다른 방법은 여러 HVR 잔기(예를 들어, 한 번에 4~6개 잔기)를 랜덤화하는 HVR-유도 접근법을 포함한다. 항원 결합에 관여하는 HVR 잔기는 예를 들어 알라닌 스캐닝 돌연변이유발 또는 모델링을 사용하여 구체적으로 확인될 수 있다. 특히 CDR-H3 및 CDR-L3이 종종 표적화된다.
일부 구현예에서, 그러한 변경이 항원에 결합하는 항체의 능력을 실질적으로 감소시키지 않는 한, 치환, 삽입, 또는 결실이 하나 이상의 HVR 내에서 발생할 수 있다. 예를 들어, 결합 친화성을 실질적으로 감소시키지 않는 보존적 변경(예를 들어, 여기 제공된 바와 같은 보존적 치환)이 HVR에 이루어질 수 있다. 이러한 변경은 HVR "핫스팟" 또는 CDR의 외부에서 이루어질 수 있다. 상기 제공된 변이 VH 서열의 일부 구현예에서, 각각의 HVR은 변경되지 않거나, 또는 1, 2 또는 3개 이하의 아미노산 치환을 함유한다.
돌연변이유발을 위해 표적화될 수 있는 항체의 잔기 또는 영역을 확인하는 데 유용한 방법은 문헌[Cunningham and Wells (1989) Science, 244:1081-1085]에 설명된 바와 같이 "알라닌 스캐닝 돌연변이유발"로 지칭된다. 이 방법에서, 표적 잔기의 잔기 또는 기(예를 들어, Arg, Asp, His, Lys, 및 Glu와 같은 하전된 잔기)를 확인하고, 중성 또는 음으로 하전된 아미노산(예를 들어, 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 대체하여, 항체와 항원의 상호작용이 영향을 받는지 여부를 결정한다. 추가의 치환은 초기 치환에 대한 기능적 민감성을 증명하는 아미노산 위치에 도입될 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 항체와 항원 사이의 접촉점을 확인하기 위한 항원-항체 복합체의 결정 구조. 이러한 접촉 잔기 및 인접 잔기는 치환을 위한 후보로서 표적화되거나 제거될 수 있다. 변이는 원하는 특성을 함유하는지의 여부를 결정하기 위해 스크리닝될 수 있다.
아미노산 서열 삽입물은 하나의 잔기에서 100개 이상의 잔기를 함유하는 폴리펩티드에 달하는 길이 범위의 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합물뿐만 아니라, 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열내 삽입물을 포함한다. 말단 삽입물의 예는 N-말단 메티오닐 잔기를 갖는 항체를 포함한다. 항체 분자의 기타 삽입 변이는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 효소(예를 들어, ADEPT) 또는 폴리펩티드에 대한 항체의 N- 또는 C-말단에 대한 융합을 포함한다.
f) 글리코실화 변이
일부 구현예에서, 항체 모이어티는 작제물이 글리코실화되는 정도를 증가 또는 감소시키도록 변경된다. 항체에 대한 글리코실화 부위의 추가 또는 결실은, 하나 이상의 글리코실화 부위가 생성되거나 제거되도록 아미노산 서열을 변경함으로써 편리하게 달성될 수 있다.
항체 모이어티가 Fc 영역을 포함하는 경우, 그에 부착된 탄수화물은 변경될 수 있다. 포유동물 세포에 의해 생산된 천연 항체는 일반적으로 Fc 영역의 CH2 도메인의 Asn297에 N-연결에 의해 부착되는 분지형 바이안테나리 올리고당을 통상적으로 포함한다. 예를 들어, 문헌[Wright et al. TIBTECH 15:26-32 (1997)] 참조. 올리고당은 다양한 탄수화물, 예를 들어 만노스, N-아세틸 글루코사민(GlcNAc), 갈락토스, 및 시알산뿐만 아니라, 및 바이안테나리 올리고당 구조의 "줄기"에서 GlcNAc에 부착된 푸코스(fucose)를 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 특정 개선된 특성을 갖는 항체 변이를 생성하기 위해 항체 모이어티 내의 올리고당의 변형이 이루어질 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 모이어티는 Fc 영역에 (직접적으로 또는 간접적으로) 부착된 푸코스가 없는 탄수화물 구조를 갖는다. 예를 들어, 이러한 항체에서 푸코스의 양은 1% 내지 80%, 1% 내지 65%, 5% 내지 65% 또는 20% 내지 40%일 수 있다. 푸코스의 양은, 예를 들어 WO 2008/077546에 설명된 바와 같이 MALDI-TOF 질량 분석기에 의해 측정될 때, Asn 297에 부착된 모든 당구조(예를 들어, 복합체, 하이브리드 및 고 만노스 구조)의 합에 대한 Asn297에서 당 사슬 내의 푸코스의 평균 양을 계산함으로써 결정된다. Asn297은 Fc 영역(Fc 영역 잔기의 EU 번호매김)에서 약 297 위치에 위치한 아스파라긴 잔기를 지칭하지만; Asn297은 또한 항체에서의 경미한 서열 변이로 인해 위치 297의 상류 또는 하류에서 약 ± 3개의 아미노산, 즉 위치 294 내지 300 사이에 위치할 수 있다. 그러한 푸코실화 변이는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 공개 번호 US 2003/0157108(Presta, L.); US 2004/0093621(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd) 참조. "탈푸코실화된" 또는 "푸코스-결핍" 항체 변이와 관련된 간행물의 예는, US 2003/0157108; WO 2000/61739; WO 2001/29246; US 2003/0115614; US 2002/0164328; US 2004/0093621; US 2004/0132140; US 2004/0110704; US 2004/0110282; US 2004/0109865; WO 2003/085119; WO 2003/084570; WO 2005/035586; WO 2005/035778; WO2005/053742; WO2002/031140; Okazaki et al. J. Mol. Biol. 336:1239-1249 (2004); Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004)를 포함한다. 탈푸코실화된 항체를 생산할 수 있는 세포주의 예는 단백질 푸코실화가 결핍된 Lec13 CHO 세포(Ripka et al. Arch. Biochem. Biophys. 249:533-545 (1986); 미국 특허 출원 번호 US 2003/0157108 A1, Presta, L; 및 WO 2004/056312 A1, Adams et al., 특히 실시예 11), 및 녹아웃 세포주, 예컨대 알파-1,6-푸코실전달효소 유전자, FUT8, 녹아웃 CHO 세포(예를 들어, 문헌[Yamane-Ohnuki et al. Biotech. Bioeng. 87: 614 (2004); Kanda, Y. et al., Biotechnol. Bioeng., 94(4):680-688 (2006); 및 WO2003/085107] 참조)를 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 모이어티는 예를 들어 항체의 Fc 영역에 부착된 바이안테나리 올리고당이 GlcNAc에 의해 이등분된, 이등분된 올리고당을 갖는다. 이러한 항체 변이는 감소된 푸코실화 및/또는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 이러한 항체 변이의 예는 예를 들어 WO 2003/011878(Jean-Mairet et al.); 미국 특허 번호 6,602,684(Umana et al.); 및 US 2005/0123546(Umana et al.)에 설명되어 있다. Fc 영역에 부착된 올리고당 내에 적어도 하나의 갈락토스 잔기를 갖는 항체 변이가 또한 제공된다. 이러한 항체 변이는 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 그러한 항체 변이는 예를 들어, WO 1997/30087(Patel et al.); WO 1998/58964(Raju, S.); 및 WO 1999/22764(Raju, S.)에 설명되어 있다.
g) Fc 영역 변이
일부 구현예에서, 하나 이상의 아미노산 변형은 항체 모이어티의 Fc 영역 내로 도입되어, Fc 영역 변이를 생성할 수 있다. Fc 영역 변이는 하나 이상의 아미노산 위치에서 아미노산 변형(예를 들어, 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열(예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, Fc 단편은 모든 이펙터 기능이 아닌 일부를 가지며, 이는 생체 내 항체 모이어티의 반감기가 중요하지만 특정 이펙터 기능(예컨대 보체 및 ADCC)이 불필요하거나 유해한 응용에 바람직한 후보가 되게 한다. 시험관 내 및/또는 생체 내 세포독성 분석은 CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/고갈을 확인하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들어, Fc 수용체(FcR) 결합 분석은, 항체에 FcγR 결합이 결여(따라서 ADCC 활성이 결여될 가능성이 있음)되어 있지만, FcRn 결합 능력은 유지하는지 확인하기 위해 수행될 수 있다. ADCC를 매개하기 위한 1차 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII을 발현한다. 조혈 세포 상에서의 FcR 발현은 문헌[Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)]의 p.464 상에서 표 2에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위한 시험관 내 분석의 비제한적인 예가 미국 특허 번호 5,500,362(예를 들어, 문헌[Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986)] 참조) 및 Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985); 5,821,337(문헌[Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)] 참조)에 설명되어 있다. 대안적으로, 비-방사능성 분석 방법이 사용될 수 있다(예를 들어, 유세포 분석을 위한 ACTI?? 비-방사능성 세포독성 분석(CellTechnology, Inc., Mountain View, CA); 및 CytoTox 96® 비방사능성 세포독성 분석(Promega, Madison, WI)). 이러한 분석에 유용한 이펙터 세포는 말초혈액 단핵구 세포(PBMC: peripheral blood mononuclear cells) 및 자연 살해(NK) 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 추가적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은 생체 내, 예를 들어 문헌[Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)]에 개시된 것과 같은 동물 모델에서 평가될 수 있다. 항체가 C1q에 결합될 수 없고, 이에 따라 CDC 활성이 결여되어 있음을 확인하기 위해 C1q 결합 분석이 또한 수행될 수 있다. 예를 들어, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402의 C1q 및 C3c 결합 ELISA 참조. 보체 활성화를 분석하기 위해, CDC 분석을 수행할 수 있다(예를 들어, 문헌[Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M.S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); 및 Cragg, M.S. 및 M.J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004) 참조]). FcRn 결합 및 생체 내 청소율/반감기 결정은 또한 당업계에 알려진 방법을 사용하여 수행할 수 있다(예를 들어, 문헌[Petkova, S.B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)] 참조).
감소된 이펙터 기능을 갖는 항체는 하나 이상의 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 하나 이상이 치환된 것을 포함한다(미국 특허 번호 6,737,056). 이러한 Fc 돌연변이는 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 2개 이상에서 치환된 Fc 돌연변이를 포함하며, 이는 잔기 265 및 297이 알라닌으로 치환된 소위 "DANA" Fc 돌연변이를 포함한다(미국 특허 번호 7,332,581).
FcR에 대해 결합이 개선되거나 감소된 특정 항체 변이가 설명되어 있다(예를 들어, 미국 특허 번호 6,737,056; WO 2004/056312, 및 문헌[Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)] 참조).
일부 구현예에서, Fc 단편은 IgG1 Fc 단편이다. 일부 구현예에서, IgG1 Fc 단편은 L234A 돌연변이 및/또는 L235A 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 IgG2 또는 IgG4 Fc 단편이다. 일부 구현예에서, Fc 단편은 S228P, F234A, 및/또는 L235A 돌연변이를 포함하는 IgG4 Fc 단편이다.
일부 구현예에서, 항체 모이어티는 ADCC를 개선하는 하나 이상의 아미노산 치환, 예를 들어 Fc 영역의 위치 298, 333, 및/또는 334(잔기의 EU 번호매김)에서의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 예를 들어, 미국 특허 번호 6,194,551, WO 99/51642, 및 문헌[Idusogie et al. J. Immunol. 164: 4178-4184 (2000)]에 설명된 바와 같이, 변경된(즉, 개선되거나 감소된) C1q 결합 및/또는 보체 의존성 세포독성(CDC: Complement Dependent Cytotoxicity)을 생성하는 변경이 Fc 영역에서 이루어진다.
일부 구현예에서, 반감기를 변경하고/하거나 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대한 결합을 변화시키는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하는 변이 Fc 영역을 포함하는 항체 모이어티 변이. 반감기가 증가하고 모체 IgG를 태아로 전달하는 역할을 하는 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대한 결합이 개선된 항체(Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 및 Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994))는 US2005/0014934A1(Hinton et al.)에 설명되어 있다. 이러한 항체는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 변경시키는 하나 이상의 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 이러한 Fc 변이는 Fc 영역 잔기 중 하나 이상에서의 치환, 예를 들어 Fc 영역 잔기 434(미국 특허 번호 7,371,826)의 치환을 갖는 것들을 포함한다(미국 특허 번호 7,371,826).
또한 Fc 영역 변이의 다른 예에 관한 문헌[Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988)]; 미국 특허 번호 5,648,260; 미국 특허 번호 5,624,821; 및 WO 94/29351 참조.
h) 시스테인 조작된 항체 변이
일부 구현예에서, 항체의 하나 이상의 잔기가 시스테인 잔기로 치환된 시스테인 조작된 항체 모이어티, 예를 들어 "티오MAb"를 생성하는 것이 바람직할 수 있다. 특정 구현예에서, 치환된 잔기는 항체의 접근가능한 부위에서 발생한다. 이러한 잔기들을 시스테인으로 치환함으로써, 반응성 티올 기는 항체의 접근가능한 부위에 위치되고, 본 명세서에서 추가로 설명된 바와 같이 면역컨쥬게이트를 생성하기 위해 항체를 약물 모이어티 또는 링커-약물 모이어티와 같은 다른 모이어티에 대해 컨쥬게이션하는 데 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 다음 잔기 중 어느 하나 이상이 시스테인으로 치환될 수 있다: 중쇄의 A118(EU 번호매김); 및 중쇄 Fc 영역의 S400(EU 번호매김). 시스테인 조작된 항체 모이어티는 예를 들어, 미국 특허 번호 7,521,541에 설명된 바와 같이 생성될 수 있다
i) 항체 유도체
일부 구현예에서, 본 명세서에 설명된 항체 모이어티는 당업계에 알려져 있고, 용이하게 입수가능한 추가의 비단백질성 모이어티를 포함하도록 추가로 변형될 수 있다. 항체의 유도체화에 적합한 모이어티는 수용성 중합체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 수용성 중합체의 비제한적인 예는 폴리에틸렌 글리콜(PEG), 에틸렌 글리콜/프로필렌 글리콜의 공중합체, 카르복시메틸셀룰로스, 덱스트란, 폴리비닐 알코올, 폴리비닐 피롤리돈, 폴리-1,3-디옥솔란, 폴리-1,3,6-트리옥산, 에틸렌/말레산 무수물 공중합체, 폴리아미노산(동종중합체 또는 랜덤 공중합체), 및 덱스트란 또는 폴리(n-비닐피롤리돈)폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜 동종중합체, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸렌화 폴리올(예를 들어, 글리세롤), 폴리비닐 알코올, 및 이들의 혼합물을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 폴리에틸렌 글리콜 프로피온알데히드는 물에 대한 안정성으로 인하여 제조상 이점을 가질 수 있다. 중합체는 임의의 분자량일 수 있으며, 분지형 또는 비분지형일 수 있다. 항체에 부착된 중합체의 수는 다양할 수 있으며, 하나 초과의 중합체가 부착되는 경우, 동일하거나 상이한 분자일 수 있다. 일반적으로, 유도체화에 사용되는 중합체의 수 및/또는 유형은 개선하려는 항체의 특정 특성 또는 기능, 항체 유도체가 정의된 조건에서 진단에 사용될 것인지 여부 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 고려사항들에 기초하여 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 항체 모이어티는 하나 이상의 생물학적 활성 단백질, 폴리펩티드 또는 그의 단편을 포함하도록 추가로 변형될 수 있다. 본 명세서에 상호교환적으로 사용되는 바와 같은 "생물활성" 또는 "생물학적 활성"은 신체에서 특정 기능을 수행하는 생물학적 활성을 나타내는 것을 의미한다. 예를 들어, 이는 단백질, DNA 등과 같은 특정 생체분자와의 조합하여, 이어서 이러한 생체분자의 활성을 촉진 또는 억제하는 것을 의미할 수 있다. 일부 구현예에서, 생물활성 단백질 또는 이의 단편은 질병 또는 병태의 예방 또는 치료를 위한 활성 약물 물질로서 환자에게 투여되는 단백질 및 폴리펩티드뿐만 아니라, 진단 시험 또는 시험관 분석에 사용되는 효소와 같이 진단 목적에 사용되는 단백질 및 폴리펩티드, 및 백신과 같은 질병을 예방하기 위해 환자에게 투여되는 단백질 및 폴리펩티드를 포함한다.
다중특이적 작제물의 형태
본 명세서에 설명된 다중특이적 작제물은 작제물이 CLDN18.2 및 PD-L1 모두에 결합하는 기능을 유지하는 한 임의의 형태를 가질 수 있다.
일부 구현예에서, CLDN18.2 항체 모이어티는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 전장 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 중쇄에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 중쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 중쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 경쇄에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 경쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다.
일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체의 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 전장 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 중쇄에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 중쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 중쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 경쇄에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 경쇄의 N-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 경쇄의 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 scFv 항체와 같은 scFv 항체이다.
일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티 및 항-CLDN18.2 항체 모이어티 모두는 전장 항체를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티 또는 항-CLDN18.2 항체 모이어티 어느 것도 전장 항체를 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 단일 도메인 항체 또는 단일 사슬 단편 가변(scFv) 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 단일 도메인 항체 또는 단일 사슬 단편 가변(scFv) 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는, 본 명세서에 설명된 임의의 것과 같은 단일 도메인 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티 및 항-CLDN18.2는 본 명세서에 설명된 링커를 통해 함께 융합된다.
링커
일부 구현예에서, 본 명세서에 설명된 다중특이적 작제물은 2개의 모이어티(예를 들어, 상기 설명된 항-CLDN18.2 항체 모이어티 및 항-PD-L1 항체 모이어티) 사이에 하나 이상의 링커를 포함한다. 이특이적 항체에 사용된 링커(들)의 길이, 가요성(flexibility) 정도 및/또는 기타 특성은 하나 이상의 특정 항원 또는 에피토프에 대한 친화성, 특이성 또는 항원항체결합성을 포함하지만 이에 제한되지 않는 특성에 대해 일부 영향을 미칠 수 있다. 예를 들어, 2개의 인접 도메인이 서로 입체적으로 간섭하지 않는 것을 보장하도록 더 긴 링커가 선택될 수 있다. 일부 구현예에서, 링커(예컨대, 펩티드 링커)는, 인접 도메인이 서로에 대해 자유롭게 이동하도록 가요성 잔기(예컨대 글리신 및 세린)를 포함한다. 예를 들어, 글리신-세린 더블릿은 적합한 펩티드 링커일 수 있다. 일부 구현예에서, 링커는 비-펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 절단불가능한 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 절단가능한 링커이다.
다른 링커 고려사항에는 용해도, 친유성, 친수성, 소수성, 안정성(다소 안정적이며 계획된 분해), 강성, 가요성, 면역원성, 항체 결합 조정, 마이셀 또는 리포좀 내로 포함되는 능력 등과 같은 생성된 화합물의 물리적 및 약동학적 특성에 대한 영향이 포함된다.
일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 전장 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티(예컨대, 단일 도메인 항체)는 링커를 통해 전장 항체에 융합된다.
일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 전장 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 링커를 통해 전장 항체에 융합된다.
일부 구현예에서, 링커는 하기에 설명되는 바와 같은 펩티드 링커이다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커는 약 1 내지 약 50개, 약 2 내지 약 40개, 약 3 내지 약 30개, 또는 약 4 내지 약 20개의 아미노산의 길이를 갖는다.
일부 구현예에서, 링커는 절단가능한 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 절단불가능한 링커이다.
일부 구현예에서, 링커는 GS 링커이다.
일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~80 및 90~96 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~80 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~77 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다.
펩티드 링커
펩티드 링커는 천연 발생 서열, 또는 천연 발생 서열이 아닌 서열을 가질 수 있다. 예를 들어, 중쇄 단독 항체의 경첩 영역으로부터 유래한 서열이 링커로서 사용될 수 있다. 예를 들어, WO1996/34103 참조.
펩티드 링커는 임의의 적합한 길이일 수 있다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커는 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 50, 75, 100개 또는 그 초과 중 임의의 것의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커는 단지 약 100, 75, 50, 40, 35, 30, 25, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5개 또는 그 미만 중 임의의 것의 아미노산 길이이다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커의 길이는 약 1개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 약 1개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 1개 아미노산 내지 30개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 15개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 25개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 30개 아미노산 길이, 약 30개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 50개 아미노산 내지 약 100개 아미노산, 또는 약 1개 아미노산 내지 약 100개 아미노산 중 임의의 것이다.
이러한 펩티드 링커의 본질적인 기술 특징은, 상기 펩티드 링커가 임의의 중합 활성을 포함하지 않는다는 것이다. 이차 구조의 촉진의 부재를 포함하는 펩티드 링커의 특성은 당업계에 알려져 있으며, 예를 들어, 문헌[Dall'Acqua et al. (Biochem. (1998) 37, 9266-9273), Cheadle et al. (Mol Immunol (1992) 29, 21-30) and Raag and Whitlow (FASEB (1995) 9(1), 73-80)]에 설명되어 있다. "펩티드 링커"의 맥락에서 특히 바람직한 아미노산은 Gly이다. 나아가, 임의의 이차 구조를 또한 촉진하지 않는 펩티드 링커가 바람직하다. 서로에 대한 도메인의 연결은 예를 들어 유전자 조작에 의해 제공될 수 있다. 융합 및 작동가능하게 연결된 이특이적 단일 사슬 작제물을 제조하고 이를 포유동물 세포 또는 세균에서 발현하는 방법이 당업계에 잘 알려져 있다(예를 들어, WO 99/54440, 문헌[Ausubel, Current Protocols in Molecular Biology, Green Publishing Associates and Wiley Interscience, N. Y. 1989 and 1994 or Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y., 2001]).
펩티드 링커는 안정적인 링커일 수 있으며, 이는 프로테아제에 의해, 특히 기질 금속프로테아제(MMP)에 의해 절단가능하지 않다.
링커는 또한 가요성 링커일 수 있다. 예시적인 가요성 링커는 글리신 중합체(G)n(서열번호 93), 글리신-세린 중합체(예를 들어, (GS)n(서열번호 94), (GSGGS)n(서열번호 95), (GGGGS)n(서열번호 90), 및 (GGGS)n(서열번호 96, 여기서 n은 적어도 1의 정수임)을 포함함), 글리신-알라닌 중합체, 알라닌-세린 중합체, 및 당업계에 알려진 기타 가요성 링커를 포함한다. 글리신 및 글리신-세린 중합체는 상대적으로 구조화되지 않으며, 따라서 성분 사이에 중성 테더(tether)로서의 역할을 할 수 있다. 글리신은 심지어 알라닌보다 상당히 더 많은 파이-프사이 공간에 접근하고, 더 긴 측쇄를 갖는 잔기보다 훨씬 덜 제한된다(Scheraga, Rev. Computational Chem. 11 173-142 (1992)). 링커가 가요성 링커 부분뿐만 아니라 원하는 항체 융합 단백질 구조를 제공하기 위해 덜 가요성인 구조를 부여하는 하나 이상의 부분을 포함할 수 있도록, 항원 융합 단백질의 설계가 전부 또는 부분적으로 가요성인 링커를 포함할 수 있음을 당업자는 인식할 것이다. 일부 구현예에서, 링커는 GS 링커이다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 78~80으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 펩티드 링커는 인간 IgG1의 경첩 영역과 같은 IgG의 경첩 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커는 IgG의 경첩 영역, 예컨대 인간 IgG1의 경첩 영역으로부터 유래한 변형된 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 서열번호 72~77로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는다.
일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티 및 항-PD-L1 항체 모이어티는 항-CLDN18.2 및 항-PD-L1 항원 결합 도메인이, CLDN18.2 및 PD-L1에 대한 결합을 허용하도록 하는 방식으로 접히는 것을 가능하게 하기에 충분한 길이의 링커에 의해 함께 연결된다. 예시적인 링커는 예를 들어, 서열번호 72~80에 제시된 서열 중 임의의 것을 포함한다. 일부 구현예에서, 링커는 (GGGGS)n(서열번호 90)의 아미노산 서열을 갖고, 여기서 n은 1 내지 8의 정수이며, 예를 들어 (GGGGS)3(서열번호 79; 이하에서 "(G4S)3" 또는 "GS3"로 지칭됨), 또는 (GGGGS)6(서열번호 91; 이하에서 "(G4S)6" 또는 "GS6"로 지칭됨)이다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커는 (GSTSGSGKPGSGEGS)n(서열번호 92)의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 n은 1 내지 3의 정수이다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커는 ERKSSVESPPSP(서열번호 74)의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 펩티드 링커는 ESKYGPPSPPSP(서열번호 76)의 아미노산 서열을 포함한다.
비-펩티드 링커
2개의 모이어티의 커플링은, 두 성분 모두가 예를 들어 항-CLDN18.2 및 항-PD-L1에 각각 결합하는 각각의 활성을 유지하는 한 2개의 분자에 결합할 임의의 화학 반응에 의해 달성될 수 있다. 이 연결은 예를 들어 공유 결합, 친화성 결합, 인터칼레이션, 배위 결합 및 착화의 많은 화학 메커니즘을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 결합은 공유 결합이다. 공유 결합은 존재하는 측쇄의 직접 중합에 의해 또는 외부 가교 분자의 혼입에 의해 달성될 수 있다. 많은 2가 또는 다가 연결 작용제가 본 맥락에서 단백질 분자를 커플링하는 데 유용할 수 있다. 예를 들어, 대표적인 커플링제는 티오에스테르, 카보디이미드, 석신이미드 에스테르, 디이소시아네이트, 글루타르알데히드, 디아조벤젠 및 헥사메틸렌 디아민과 같은 유기 화합물을 포함할 수 있다. 이 목록은 당업계에 알려진 다양한 클래스의 커플링제의 전부를 나타내려는 것이 아니라, 보다 더 일반적인 커플링제의 예시이다(문헌[Killen and Lindstrom, Jour. Immun. 133:1335-2549 (1984); Jansen et al., Immunological Reviews 62:185-216 (1982); 및 Vitetta et al., Science 238:1098 (1987)] 참조).
본 출원에 적용될 수 있는 링커는 문헌에 설명되어 있다(예를 들어, MBS(M-말레이미도벤조일-N-히드록시석신이미드에스테르)의 사용을 설명하는 문헌[Ramakrishnan, S. et al., Cancer Res. 44:201-208 (1984)] 참조). 일부 구현예에서, 본 명세서에 사용되는 비-펩티드 링커는, (i) EDC(1-에틸-3-(3-디메틸아미노-프로필) 카보디이미드 하이드로클로라이드; (ii) SMPT(4-석신이미딜옥시카르보닐-알파-메틸-알파-(2-피리딜-디티오)-톨루엔(Pierce Chem. Co., Cat. #21558G); (iii) SPDP(석신이미딜-6 [3-(2-피리딜디티오) 프로피온아미도] 헥사노에이트(Pierce Chem. Co., Cat #21651G); (iv) 설포-LC-SPDP(설포석신이미딜 6 [3-(2-피리딜디티오)-프로피안아미드] 헥사노에이트(Pierce Chem. Co. Cat. #2165-G); 및 (v) EDC에 컨쥬게이트된 설포-NHS(N-히드록시설포-석신이미드: Pierce Chem. Co., Cat. #24510)를 포함한다.
상기 설명된 링커는 상이한 속성을 갖는 성분을 함유하며, 따라서 상이한 물리-화학적 특성을 갖는 이특이적 항체를 유도할 수 있다. 예를 들어, 알킬 카르복실레이트의 설포-NHS 에스테르는 방향족 카르복실레이트의 설포-NHS 에스테르보다 더 안정하다. NHS-에스테르 함유 링커는 설포-NHS 에스테르보다 덜 용해된다. 나아가, 링커 SMPT는 입체장애된 이황화 결합을 함유하며, 안정성이 증가된 항체 융합 단백질을 형성할 수 있다. 이황화 연결이 시험관 내에서 절단되어 이용가능한 항체 융합 단백질이 더 적게 만들기 때문에, 이황화 연결은 일반적으로 다른 결합보다 덜 안정적이다. 특히 설포-NHS는 카보디이미드 커플링의 안정성을 향상시킬 수 있다. 설포-NHS와 함께 사용되는 경우, 카보디이미드 커플링(예컨대 EDC)은 카보디이미드 커플링 반응 단독보다 가수분해에 더 저항성인 에스테르를 형성한다.
핵산
본 명세서에 설명된 다중특이적 작제물 또는 다양한 항체 모이어티를 인코딩하는 핵산 분자가 또한 고려된다. 일부 구현예에서, 다중특이적 작제물 또는 다양한 항체 모이어티의 하나 이상의 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산(또는 핵산의 세트)가 제공된다. 일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체) 또는 그 안의 폴리펩티드 부분을 인코딩하는 핵산(또는 핵산의 세트)가 제공된다.
본 명세서에 설명된 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체), 다중특이적 작제물의 폴리펩티드 성분을 인코딩하는 분리된 핵산, 또는 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)의 폴리펩티드 성분을 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 분리된 숙주 세포가 본 명세서에서 또한 고려된다.
본 출원은 또한 이러한 핵산 서열에 대한 변이를 포함한다. 예를 들어, 변이는 적어도 온건하게 엄격한 혼성화 조건 하에서, 본 명세서에 설명된 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체) 또는 다양한 항체 모이어티를 인코딩하는 핵산 서열에 혼성화하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
본 출원은 또한 본 출원의 핵산이 삽입되는 벡터를 제공한다.
본 발명의 핵산은 또한 표준 유전자 전달 프로토콜을 사용하는 핵산 면역화 및 유전자 요법에 사용될 수 있다. 유전자 전달 방법은 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, 그 전체가 본 명세서에 참조로 포함된, 미국 특허 번호 5,399,346, 5,580,859, 5,589,466 참조. 일부 구현예에서, 본 발명은 유전자 요법 벡터를 제공한다.
핵산은 다수의 유형의 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 예를 들어, 핵산은 플라스미드, 파지미드(phagemid), 파지 유도체, 동물 바이러스, 및 코스미드를 포함하지만 이에 제한되지 않는 벡터 내로 클로닝될 수 있다. 특히 관심 있는 벡터에는 발현 벡터, 복제 벡터, 프로브 생성 벡터, 및 시퀀싱 벡터가 포함된다.
나아가, 발현 벡터는 바이러스 벡터의 형태로 세포에 제공될 수 있다. 바이러스 벡터 기술은 당업계에 잘 알려져 있으며, 예를 들어 문헌[Sambrook et al. (2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York)], 및 기타 바이러스학 및 분자 생물학 매뉴얼에 설명되어 있다. 벡터로서 유용한 바이러스는 레트로바이러스, 아데노바이러스, 아데노-연관 바이러스, 헤르페스 바이러스, 및 렌티바이러스를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일반적으로, 적합한 벡터는 적어도 하나의 유기물에서 기능하는 복제의 기원, 프로모터 서열, 편리한 제한 엔도뉴클레아제 부위, 및 하나 이상의 선택가능한 마커를 포함한다(예를 들어, WO 01/96584; WO 01/29058; 및 미국 특허 번호 6,326,193 참조).
III. 제조 방법
일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, CLDN18.2 및 PD-L1 모두에 결합하는 다중특이적 작제물), 및 폴리뉴클레오티드, 핵산 작제물, 벡터, 숙주 세포, 또는 다중특이적 작제물의 제조 동안 생산되는 배양 배지와 같은 조성물을 제조하는 방법이 제공된다. 본 명세서에 설명된 다중특이적 작제물 또는 조성물은 아래에 일반적으로 설명되고 실시예에서 더 구체적으로 설명되는 바와 같은 다수의 공정에 의해 제조될 수 있다.
항체 발현 및 생성
본 명세서에 설명된 항체 모이어티(항-CLDN18.2 단일클론 항체, 항-PD-L1 단일 도메인 항체, 또는 이특이적 항체를 포함함)는 아래 및 실시예에서 설명된 것을 포함하는, 당업계에 알려진 임의의 방법을 사용하여 제조될 수 있다.
단일클론 항체
단일클론 항체는 실질적으로 균질한 항체의 개체군으로부터 수득되며, 즉 개체군을 포함하는 개별 항체는 가능한 천연 발생 돌연변이 및/또는 소량으로 존재할 수 있는 번역후 변형(예를 들어, 이성질체화, 아미드화)을 제외하고는 동일하다. 따라서, 수식어 "단일클론"은 항체의 특성이 개별 항체의 혼합물이 아님을 나타낸다. 예를 들어, 단일클론 항체는 문헌[Kohler et al., Nature, 256:495 (1975)]에 의해 처음으로 설명된 하이브리도마 방법을 사용하여 제조될 수 있거나, 재조합 DNA 방법(미국 특허 번호 4,816,567)에 의해 제조될 수 있다. 하이브리도마 방법에서, 마우스 또는 햄스터 또는 라마와 같은 기타 적절한 숙주 동물은 면역화에 사용되는 단백질에 특이적으로 결합할 항체를 생산 또는 생산할 수 있는 림프구를 유도하기 위해 본 명세서에서 상기 설명된 바와 같이 면역화된다. 대안적으로, 림프구는 시험관 내에서 면역화될 수 있다. 이어서 림프구는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적합한 융합제를 사용하여 골수종 세포와 융합되어 하이브리도마 세포를 형성한다(Goding, 단일클론 항체: Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)). 또한 낙타의 면역화에 대한 실시예 1 참조.
면역화제는 통상적으로 항원성 단백질 또는 이의 융합 변이를 포함할 것이다. 일반적으로, 인간 기원의 세포가 바람직한 경우 말초 혈액 림프구("PBL")가 사용되거나, 비-인간 포유동물 공급원이 바람직한 경우 비장 세포 또는 림프절 세포가 사용된다. 이어서 림프구는 폴리에틸렌 글리콜과 같은 적합한 융합제를 사용하여 불멸화된 세포주와 융합되어 하이브리도마 세포를 형성한다(Goding, Monoclonal Antibodies: Principles and Practice, Academic Press (1986), pp. 59-103).
불멸화 세포주는 일반적으로 형질전환된 포유동물 세포, 특히 설치류, 소 및 인간 기원의 골수종 세포이다. 일반적으로, 쥐 또는 마우스 골수종 세포주가 사용된다. 이렇게 제조된 하이브리도마 세포는 바람직하게는 융합되지 않은 모 골수종 세포의 성장 또는 생존을 억제하는 하나 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지 내에 시딩 및 성장된다. 예를 들어, 모 골수종 세포에 하이포크산틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제(HGPRT 또는 HPRT)가 없는 경우, 하이브리도마용 배양 배지는 통상적으로 HGPRT-결핍 세포의 성장을 방해하는 물질인 하이포크산틴, 아미놉테린, 및 티미딘(HAT 배지)을 포함할 것이다.
바람직한 불멸화 골수종 세포는 효율적으로 융합하고, 선택된 항체-생산 세포에 의한 안정적인 고 수준의 항체 생산을 지원하며, HAT 배지와 같은 배지에 대해 민감한 세포이다. 이들 중, 미국 캘리포니아주 샌 디에고 소재의 Salk Institute Cell Distribution Center로부터 입수가능한 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양, 및 미국 버지니아주 머내서스 소재의 American Type Culture Collection으로부터 입수가능한 SP-2 세포(및 이의 유도체, 예를 들어, X63-Ag8-653)로부터 유래한 것과 같은 뮤린 골수종 주가 바람직하다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주가 또한 인간 단일클론 항체의 생성을 위해 설명되어 있다(Kozbor, J. Immunol., 133:3001 (1984); Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)).
하이브리도마 세포가 성장하는 배양 배지는 항원에 대항하는 단일클론 항체의 생성을 위해 분석된다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 생성된 단일클론 항체의 결합 특이성은 면역침전법에 의해 또는 방사성면역검정(RIA) 또는 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA)과 같은 시험관 내 결합 분석에 의해 결정된다.
하이브리도마 세포가 배양되는 배양 배지는 원하는 항원에 대항하는 단일클론 항체의 존재에 대해 분석될 수 있다. 바람직하게는, 단일클론 항체의 결합 친화성 및 특이성은 면역침전법에 의해 또는 방사성면역검정(RIA) 또는 효소-결합 면역흡착 검정(ELISA)과 같은 시험관 내 결합 분석에 의해 결정될 수 있다. 이러한 기술 및 분석은 당업계에 알려져 있다. 예를 들어, 결합 친화성은 문헌[Munson et al., Anal. Biochem., 107:220 (1980)]의 Scatchard 분석에 의해 결정될 수 있다.
하이브리도마 세포가 원하는 특이성, 친화성, 및/또는 활성의 항체를 생성하는 것으로 확인된 후, 클론은 희석 절차를 제한함으로써 서브클로닝되고, 표준 방법에 의해 성장할 수 있다(Goding, 상동). 이러한 목적에 적합한 배양 배지는, 예를 들어 D-MEM 또는 RPMI-1640 배지를 포함한다. 추가적으로, 하이브리도마 세포는 포유동물에서 종양으로서 생체 내에서 성장할 수 있다.
서브클론들에 의해 분비된 단일클론 항체는, 예를 들어, 단백질 A-세파로스, 히드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석, 또는 친화성 크로마토그래피와 같은 통상의 면역글로불린 정제 절차에 의해 배양 배지, 복수액(ascites fluid), 또는 혈청으로부터 적절하게 분리된다.
단일클론 항체는 또한 미국 특허 번호 4,816,567에 설명된 것 및 상기 설명된 바와 같은 재조합 DNA 방법에 의해 제조될 수 있다. 단일클론 항체를 인코딩하는 DNA는 통상적인 절차를 사용하여(예를 들어, 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용함으로써) 쉽게 분리되고 시퀀싱된다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 바람직한 공급원으로서의 역할을 한다. DNA는 일단 분리되면, 발현 벡터 내로 배치될 수 있고, 이어서 이 벡터는 그러한 재조합 숙주 세포 내에서 단일클론 항체를 합성하기 위해, 대장균 세포, 원숭이 COS 세포, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, 또는 다르게는 면역글로불린 단백질을 생산하지 않는 골수종 세포와 같은 숙주 세포 내로 형질감염될 수 있다. 항체를 인코딩하는 DNA의 세균 내 재조합 발현에 대한 검토 논문은 문헌[Skerra et al., Curr. Opinion in Immunol., 5:256-262 (1993) 및 Plueckthun, Immunol. Revs. 130:151-188 (1992)]을 포함한다.
추가의 구현예에서, 항체는 문헌[McCafferty et al., Nature, 348:552-554 (1990)]에 설명된 기술들을 사용하여 생성된 항체 파지 라이브러리로부터 분리될 수 있다. 문헌[Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) 및 Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991)]은 각각 파지 라이브러리를 사용한 뮤린 및 인간 항체 분리를 설명한다. 후속 간행물은 사슬 셔플링에 의한 고 친화성(nM 범위) 인간 항체의 생성(Marks et al., Bio/Technology, 10:779-783 (1992))뿐만 아니라, 매우 큰 파지 라이브러리를 작제하기 위한 전략으로서 조합 감염 및 생체 내 재조합(Waterhouse et al., Nucl. Acids Res., 21:2265-2266 (1993))을 설명한다. 따라서, 이러한 기술은 단일클론 항체의 분리를 위한 전통적인 단일클론 항체 하이브리도마 기술에 대한 실행가능한 대안이다.
DNA는 또한 예를 들어 상동성 뮤린 서열을 대신하여 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 대한 코딩 서열을 치환함으로써(미국 특허 번호 4,816,567; 문헌[Morrison, et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 81:6851 (1984)]), 또는 면역글로불린 코딩 서열에 비-면역글로불린 폴리펩티드에 대한 코딩 서열의 전부 또는 부분을 공유 결합시킴으로써 변형될 수 있다. 통상적으로, 이러한 비-면역글로불린 폴리펩티드는 항체의 불변 도메인으로 치환되거나, 또는 이들은 항원에 대해 특이성을 갖는 하나의 항원-결합 부위 및 상이한 항원에 대해 특이성을 갖는 또 다른 항원-결합 부위를 포함하는 키메라 2가 항체를 생성하도록 항체의 하나의 항원-조합 부위의 가변 도메인으로 치환된다.
본 명세서에 설명된 단일클론 항체는 1가일 수 있으며, 이의 제조는 당업계에 잘 알려져 있다. 예를 들어, 하나의 방법은 면역글로불린 경쇄 및 변형된 중쇄의 재조합 발현을 포함한다. 중쇄는 중쇄 가교결합을 방지하기 위해 일반적으로 Fc 영역 내의 임의의 지점에서 절단된다. 대안적으로, 관련 시스테인 잔기는 또 다른 아미노산 잔기로 치환될 수 있거나 가교를 방지하기 위해 결실된다. 시험관 내 방법은 또한 1가 항체를 제조하기에 적합하다. 이의 단편, 특히 Fab 단편을 생성하기 위한 항체의 분해는 당업계에 알려진 통상적인 기술을 사용하여 달성될 수 있다.
키메라 또는 하이브리드 항체는 또한 가교제를 포함하는 것들을 포함하는, 합성 단백질 화학에 알려진 방법을 사용하여 시험관 내에서 제조될 수 있다. 예를 들어, 면역독소는 이황화-교환 반응을 사용하거나 티오에테르 결합을 형성함으로써 작제될 수 있다. 이러한 목적에 적합한 시약의 예는 이미노티올레이트 및 메틸-4-메르캅토부티르이미데이트를 포함한다.
이특이적 항체
본 명세서에 설명된 이특이적 항체를 제조하는 방법이 또한 본 명세서에 제공된다. 이특이적 항체는 당업계에 알려진 임의의 방법을 사용하여 또는 본 명세서에 설명된 바와 같이(실시예 1에서와 같이) 제조될 수 있다.
본 출원의 이특이적 항체를 제조하는 방법은 WO 2008119353(Genmab), WO 2011131746(Genmab)에 설명된 것, 및 문헌[van der Neut- Kolfschoten et al. (Science. 2007 Sep 14;317(5844): 1554-7)]에 의해 보고된 것을 포함한다. 이특이적 항체를 제조하는 데 유용한 기타 플랫폼의 예는 BiTE(Micromet), DART(MacroGenics), Fcab 및 Mab2(F-star), Fc-조작된 IgGl(Xencor) 또는 DuoBody(Fab 아암 교환에 기반함, Genmab, 본 출원, 아래에 설명됨)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
하이브리드 하이브리도마 및 화학 접합 방법과 같은 전통적 방법(Marvin and Zhu (2005) Acta Pharmacol Sin 26: 649)이 또한 사용될 수 있다. 숙주 세포에서 두 성분(예컨대 표 3에 예시된 바와 같은 폴리펩티드)의 공동 발현은 원하는 이특이적 항체에 더하여 가능한 항체 생성물의 혼합물을 유도하며, 이어서 이는 예를 들어 친화성 크로마토그래피 또는 유사한 방법에 의해 분리될 수 있다.
항체 모이어티를 인코딩하는 핵산 분자
일부 구현예에서, 본 명세서에 설명된 다중특이적 작제물 또는 항체 모이어티 중 어느 하나를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 설명된 바와 같은 방법 중 어느 하나를 사용하여 제조된 폴리뉴클레오티드가 제공된다. 일부 구현예에서, 핵산 분자는 항체 모이어티(예를 들어, 항-CLDN18.2 항체 모이어티)의 중쇄 또는 경쇄를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 일부 구현예에서, 핵산 분자는 항체 모이어티(예를 들어, 항-CLDN18.2 항체 모이어티)의 중쇄를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 및 경쇄를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드 모두를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 핵산 분자는 중쇄를 인코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드를 포함하고, 제2 핵산 분자는 경쇄를 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드를 포함한다.
일부 구현예에서, 중쇄 및 경쇄는 하나의 핵산 분자로부터, 또는 2개의 별개의 핵산 분자로부터, 2개의 별개의 폴리펩티드로서 발현된다. 일부 구현예에서, 단일 폴리뉴클레오티드는 함께 연결된 중쇄 및 경쇄 모두를 포함하는 단일 폴리펩티드를 인코딩한다.
일부 구현예에서, 항체 모이어티(예를 들어, 항-CLDN18.2 항체 모이어티)의 중쇄 또는 경쇄를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는, 번역되는 경우 중쇄 또는 경쇄 사슬의 N 말단에 위치하는 리더 서열을 인코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 상기 논의된 바와 같이, 리더 서열은 천연 중쇄 또는 경쇄 리더 서열일 수 있거나, 또 다른 이종성 리더 서열일 수 있다.
일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 DNA이다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 RNA이다. 일부 구현예에서, RNA는 mRNA이다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 서열번호 50~71 중 어느 하나의 핵산 서열에 대해 적어도 약 80%(예컨대, 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 어느 하나)의 서열 동일성을 갖는 핵산 서열을 포함한다.
핵산 분자는 당업계에서 통상적인 재조합 DNA 기술을 사용하여 작제될 수 있다. 일부 구현예에서, 핵산 분자는 선택된 숙주 세포 내에서의 발현에 적합한 발현 벡터이다.
핵산 작제물
일부 구현예에서, 본 명세서에 설명된 폴리뉴클레오티드 중 어느 하나를 포함하는 핵산 작제물이 제공된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 설명된 임의의 방법을 사용하여 제조된 핵산 작제물이 제공된다.
일부 구현예에서, 핵산 작제물은 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결된 프로모터를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 폴리뉴클레오티드는 유전자에 상응하며, 여기서 프로모터는 유전자에 대한 야생형 프로모터이다.
벡터
일부 구현예에서, 본 명세서에 설명된 항체 모이어티 또는 다중특이적 작제물 중 임의의 것을 인코딩하는 임의의 폴리뉴클레오티드 또는 본 명세서에 설명된 핵산 작제물을 포함하는 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 설명된 임의의 방법을 사용하여 제조된 벡터가 제공된다. 본 명세서에 설명된 항체 모이어티 또는 다중특이적 작제물(예컨대 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체) 중 임의의 것을 인코딩하는 폴리뉴클레오티드를 포함하는 벡터가 또한 제공된다. 이러한 벡터는 DNA 벡터, 파지 벡터, 바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 벡터는 a) PD-L1에 결합하는 단일 사슬 중쇄와 융합된 항-CLDN18.2 전장 항체의 중쇄 또는 경쇄를 인코딩하는 제1 폴리뉴클레오티드 서열, 및 b) 제1 뉴클레오티드와 페어링되는 항-CLDN18.2 전장 항체의 경쇄 또는 중쇄를 인코딩하는 제2 폴리뉴클레오티드 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 벡터 및 제2 벡터는 유사한 양(예컨대 유사한 몰량 또는 유사한 질량)으로 숙주 세포 내로 형질감염된다. 일부 구현예에서, 5:1 내지 1:5의 몰비 또는 질량비의 제1 벡터와 제2 벡터가 숙주 세포 내로 형질감염된다. 일부 구현예에서, 중쇄를 인코딩하는 벡터 및 경쇄를 인코딩하는 벡터에 대해 1:1 내지 1:5 질량비가 사용된다. 일부 구현예에서, 중쇄를 인코딩하는 벡터 및 경쇄를 인코딩하는 벡터에 대해 1:2의 질량비가 사용된다.
일부 구현예에서, CHO 또는 CHO-유래된 세포(예를 들어, CHO-3E7 세포), 또는 NSO 세포에서의 폴리펩티드의 발현에 최적화된 벡터가 선택된다. 예시적인 그러한 벡터는 예를 들어 문헌[Running Deer et al., Biotechnol. Prog. 20:880-889 (2004)]에 설명되어 있다.
숙주 세포
일부 구현예에서, 본 명세서에 설명된 임의의 폴리펩티드, 핵산 작제물 및/또는 벡터를 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 설명된 임의의 방법을 사용하여 제조된 숙주 세포가 제공된다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 발효 조건 하에서 본 명세서에 설명된 항체 모이어티 또는 다중특이적 작제물 중 임의의 것을 생성할 수 있다.
일부 구현예에서, 본 명세서에 설명된 항체 모이어티 및 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)은 박테리아 세포와 같은 원핵 세포에서; 또는 진균류 세포(예컨대 효모), 식물 세포, 곤충 세포, 및 포유동물 세포와 같은 진핵 세포에서 발현될 수 있다. 이러한 발현은 예를 들어 당업계에 알려진 절차에 따라 수행될 수 있다. 폴리펩티드를 발현하는 데 사용될 수 있는 예시적인 진핵 세포는 COS 7 세포를 포함하는 COS 세포; 293-6E 세포를 포함하는 293 세포; CHO-S, CHO-3E7, DG44, Lec13 CHO 세포, 및 FUT8 CHO 세포를 포함하는 CHO 세포; PER.C6® 세포(Crucell); 및 NSO 세포를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 설명된 항체 모이어티 및 다중특이적 작제물은 효모에서 발현될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 공개 번호 US 2006/0270045 A1 참조. 일부 구현예에서, 특정 진핵 숙주 세포는 항체 모이어티의 중쇄 및/또는 경쇄에 대한 원하는 번역후 변형을 만드는 능력에 기초하여 선택된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, CHO 세포는 293 세포에서 생성된 동일한 폴리펩티드보다 더 높은 수준의 시알산화를 갖는 폴리펩티드를 생성한다.
원하는 숙주 세포 내로 하나 이상의 핵산을 도입하는 것은 인산칼슘 형질감염, DEAE-덱스트란 매개 형질감염, 양이온 지질-매개 형질감염, 전기천공, 형질도입, 감염 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 방법에 의해 달성될 수 있다. 비제한적인 예시적인 방법은 예를 들어, 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001)]에 설명되어 있다. 핵산은 임의의 적합한 방법에 따라 원하는 숙주 세포 내로 일시적으로 또는 안정적으로 형질감염될 수 있다.
본 발명은 또한 본 명세서에 설명된 폴리뉴클레오티드 또는 벡터 중 임의의 것을 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 일부 구현예에서, 본 발명은 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 이종 DNA를 과발현할 수 있는 임의의 숙주 세포는, 관심 있는 항체, 폴리펩티드 또는 단백질을 인코딩하는 유전자를 분리하는 목적을 위해 사용될 수 있다. 포유동물 숙주 세포의 비제한적인 예는 COS, HeLa, 및 CHO 세포를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 또한 PCT 공개 번호 WO 87/04462 참조. 적합한 비-포유동물 숙주 세포는 원핵생물(예컨대 대장균 또는 B. 서브틸리스(subtillis)) 및 효모(예컨대, S. 세레비시아(cerevisae), S. 폼베(pombe); 또는 K. 락티스(lactis))를 포함한다.
일부 구현예에서, 항체 모이어티는 무세포 시스템 내에서 생성된다. 비제한적인 예시적인 무세포 시스템은 예를 들어, 문헌[Sitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009); Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004); Endo et al., Biotechnol. Adv. 21: 695-713 (2003)]에 설명되어 있다.
배양 배지
일부 구현예에서, 본 명세서에 설명된 임의의 항체 모이어티, 폴리뉴클레오티드, 다중특이적 작제물, 핵산 작제물, 벡터 및/또는 숙주 세포를 포함하는 배양 배지가 제공된다. 일부 구현예에서, 본 명세서에 설명된 임의의 방법을 사용하여 제조된 배양 배지가 제공된다.
일부 구현예에서, 배지는 하이포크산틴, 아미놉테린 및/또는 티미딘(예를 들어, HAT 배지)을 포함한다. 일부 구현예에서, 배지는 혈청을 포함하지 않는다. 일부 구현예에서, 배지는 혈청을 포함한다. 일부 구현예에서, 배지는 D-MEM 또는 RPMI-1640 배지이다.
항체 모이어티의 정제
다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)은 임의의 적합한 방법에 의해 정제될 수 있다. 이러한 방법은 친화성 매트릭스 또는 소수성 상호작용 크로마토그래피의 사용을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 적합한 친화성 리간드는 ROR1 ECD, 및 항체 불변 영역에 결합하는 리간드를 포함한다. 예를 들어, 단백질 A, 단백질 G, 단백질 A/G, 또는 항체 친화성 컬럼은, 불변 영역을 결합하는 데, 그리고 Fc 단편을 포함하는 다중특이적 작제물을 정제하는 데 사용될 수 있다. 소수성 상호작용 크로마토그래피, 예를 들어 부틸 또는 페닐 컬럼은 또한 항체와 같은 일부 폴리펩티드를 정제하는 데 적합할 수 있다. 이온 교환 크로마토그래피(예를 들어, 음이온 교환 크로마토그래피 및/또는 양이온 교환 크로마토그래피)는 또한 항체와 같은 일부 폴리펩티드를 정제하는 데 적합할 수 있다. 혼합 모드의 크로마토그래피(예를 들어, 역상/음이온 교환, 역상/양이온 교환, 친수성 상호작용/음이온 교환, 친수성 상호작용/양이온 교환 등)가 또한 항체와 같은 일부 폴리펩티드를 정제하는 데 적합할 수 있다. 폴리펩티드를 정제하는 많은 방법이 당업계에 알려져 있다.
V. 치료 방법
개체에서 질병 또는 병태를 치료하는 방법이 또한 본 명세서에 제공된다. 본 방법은 본 명세서에 설명된 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)을 개체(예를 들어, 인간과 같은 포유동물)에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, a) CLDN18.2에 결합하는 항체 모이어티 및 b) PD-L1에 결합하는 항체 모이어티를 포함하는 유효량의 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 질병 또는 병태(예를 들어, 위암)를 치료하는 방법이 제공된다. 일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 전장 항체이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 단일 도메인 항체이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 항-CLDN18.2 전장 항체의 1개 또는 2개 모두의 중쇄의 N-말단 및/또는 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 항-CLDN18.2 전장 항체의 1개 또는 2개 모두의 경쇄의 N-말단 및/또는 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 CLDN18.2에 대한 결합에 대해, a) 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 항체 모이어티와 경쟁하며, 여기서 a) VH는, i) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, ii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하고; b) VL은, i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함한다. 일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 a) 서열번호 7에 제시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 내에서 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3; 및 b) 서열번호 8에 제시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL) 내에서 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3을 포함한다.
일부 구현예에서, a) 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 CLDN18.2에 결합하는 항체 모이어티; 및 b) PD-L1에 결합하는 항체 모이어티를 포함하는 유효량의 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서 질병 또는 병태(예를 들어, 위암)을 치료하는 방법이 제공되며, 여기서 Kabat 번호매김에 따라, a) VH는, i) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 3, 2, 1개)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, ii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 3, 2, 1개)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 3, 2, 1개)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함하고; b) VL은, i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 3, 2, 1개)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 3, 2, 1개)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 3, 2, 1개)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 치환은 본 출원의 표 2에 나타낸 "예시적인 치환"으로 제한된다. 일부 구현예에서, 아미노산 치환은 본 출원의 표 2에 나타낸 "선호되는 치환"으로 제한된다. 일부 구현예에서, 항-CLDN18.2 항체 모이어티는 전장 항체이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 단일 도메인 항체이다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 항-CLDN18.2 전장 항체의 1개 또는 2개 모두의 중쇄의 N-말단 및/또는 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 항-CLDN18.2 전장 항체의 1개 또는 2개 모두의 경쇄의 경쇄의 N-말단 및/또는 C-말단에 융합된다. 일부 구현예에서, VH는 서열번호 7의 아미노산 서열, 또는 서열번호 7에 대해 적어도 약 80%(예컨대 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 어느 하나)의 서열 동일성을 갖는 이의 변이를 포함하고/하거나; VL은 서열번호 8의 아미노산 서열, 또는 서열번호 8에 대해 적어도 약 80%(예컨대 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 어느 하나)의 서열 동일성을 갖는 이의 변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 PD-L1에 결합하는 데 대해 하기를 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함하는 항체 모이어티와 경쟁한다: a) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; b) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; 또는 c) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3.
일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는, 서열번호 22~24 중 임의의 것에 제시된 아미노산 서열을 갖는 단일 단량체성 가변 항체 도메인 내에 각각 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, sdAb-CDR2, 및 sdAb-CDR3을 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함한다. 일부 구현예에서, 항-PD-L1 항체 모이어티는 a) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 3, 2, 1개)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 3, 2, 1개)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 3, 2, 1개)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이; b) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 3, 2, 1개)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 3, 2, 1개)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 3, 2, 1개)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이; 또는 c) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 3, 2, 1개)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 3, 2, 1개)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3, 또는 약 3개 이하(예컨대 약 3, 2, 1개)의 아미노산 치환을 포함하는 이의 변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 아미노산 치환은 본 출원의 표 2에 나타낸 "예시적인 치환"으로 제한된다. 일부 구현예에서, 아미노산 치환은 본 출원의 표 2에 나타낸 "선호되는 치환"으로 제한된다. 일부 구현예에서, 단일 도메인 항체는 서열번호 22~24 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 서열번호 22~24 중 어느 하나에 대해 적어도 약 80%(예컨대 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 중 어느 하나)의 서열 동일성을 갖는 이의 변이를 포함한다
일부 구현예에서, 개체는 포유동물(예를 들어, 인간, 비-인간 영장류, 쥐, 마우스, 소, 말, 돼지, 양, 염소, 개, 고양이 등)이다. 일부 구현예에서, 개체는 인간이다. 일부 구현예에서, 개체는 임상 환자, 임상 시험 지원자, 실험 동물 등이다. 일부 구현예에서, 개체는 약 60세 미만(예를 들어 약 50, 40, 30, 25, 20, 15, 또는 10세 중 임의의 것 미만을 포함함)이다. 일부 구현예에서, 개체는 약 60세 초과(예를 들어 약 70, 80, 90, 또는 100세 중 임의의 것 초과를 포함함)이다. 일부 구현예에서, 개체는 본 명세서에 설명된 질병 또는 장애 중 하나 이상(예컨대 암, 자가면역 질병 또는 이식)으로 진단되거나 이에 유전적으로 취약하다. 일부 구현예에서, 개체는 본 명세서에 설명된 하나 이상의 질병 또는 장애와 관련된 하나 이상의 위험 요소를 갖는다.
일부 구현예에서, 개체는 치료의 개시 전에 클라우딘-18 이상을 갖는다. 일부 구현예에서, 클라우딘-18 이상은 CLDN18에서의 유전적 변이를 포함한다. 일부 구현예에서, CLDN18에서의 이상은 결실, 프레임시프트, 삽입, 인델, 미스센스 돌연변이, 넌센스 돌연변이, 점 돌연변이, 침묵 돌연변이, 스플라이스 부위 돌연변이, 스플라이스 변이, 및 전좌를 포함하지만 이에 제한되지 않는 CLDN18에서의 돌연변이를 포함한다. 일부 구현예에서, 클라우딘-18 이상은 CLDN18의 카피 수 변이를 포함한다.
일부 구현예에서, 클라우딘-18 이상은 클라우딘-18 동형단백질 2(CLDN18.2)의 이상 발현 수준을 포함한다. 일부 구현예에서, 클라우딘-18 이상은 CLDN18.2의 이상 활성 수준 또는 인산화 수준을 포함한다.
"치료의 개시 전 또는 개시 시" 결정된 클라우딘-18 이상은, 개체가 본 명세서에 설명된 치료 양식의 제1 투여를 받기 전 또는 받을 때에 결정된 클라우딘-18 이상이다. "클라우딘-18 이상"은 CLDN18에서의 유전자 이상, CLDN18.2의 이상 발현 수준 및/또는 이상 활성 수준을 지칭한다. CLDN18에서의 유전적 이상은 대조군 또는 참조, 예컨대 참조 서열(예컨대 핵산 서열 또는 단백질 서열)과 비교하여 결정된다. 이상 발현 또는 활성 수준은 CLDN18.2의 활성 수준 또는 발현 수준이 참조 활성 수준 또는 참조 활성 범위의 중앙값을 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 200%, 500% 또는 그 초과 중 임의의 것만큼 초과하는 것과 같이, 참조 활성 수준 또는 범위를 초과하는 수준으로 증가하는 것을 지칭한다. 일부 구현예에서, 참조 활성 수준은 표준화된 시험에서의 임상적으로 허용된 정상 활성, 또는 클라우딘-18 이상이 없는 건강한 개체(또는 개체로부터 분리된 조직 또는 세포)에서의 활성 수준이다.
일부 구현예에서, 개체는 개체에서 클라우딘-18 이상의 상태를 기반으로 치료를 위해 선택된다.
일부 구현예에서, 본 방법은 개체에서 클라우딘-18 이상을 평가하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 본 방법은 개체에서 클라우딘-18 이상의 상태에 기초하여 치료를 위해 개체를 식별하거나 선택하는 단계를 추가로 포함한다.
질병 또는 병태
본 명세서에 설명된 다중특이적 작제물은 임의의 질병 또는 병태를 치료하기 위해 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태는 암이다.
일부 구현예에서, 다중특이적 작제물은 암을 치료하기 위한 방법에 사용된다. 본 명세서에 설명된 방법 중 임의의 것을 사용하여 치료될 수 있는 암은 혈관화되지 않은 종양, 또는 아직 실질적으로 혈관화되지 않은 종양뿐만 아니라, 혈관화된 종양을 포함한다. 본 출원에 설명된 바와 같은 다중특이적 작제물로 치료되는 암의 유형은 암종, 아세포종, 육종, 양성 및 악성 종양, 및 악성 암, 예를 들어 육종, 암종 및 흑색종을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 성인 종양/암 및 소아 종양/암도 포함된다. 일부 구현예에서, 암은 고형 종양이다.
일부 구현예에서, 암은 위암이다. 일부 구현예에서, 암은 위식도 접합부(GEJ) 암이다. 일부 구현예에서, 위암은 EBV(즉, 엡스타인-바(Epstein-Barr) 바이러스) 하위유형이다. 일부 구현예에서, 위암은 MSI(즉, 미세위성 불안정성) 하위유형이다. 일부 구현예에서, 위암은 GS(즉, 유전체적으로 안정한) 하위유형이다. 일부 구현예에서, 위암은 CIN(즉, 염색체 불안정성) 하위유형이다. 문헌[Sohn et al. Clin Cancer Res.: 10.1158/1078-0432.CCR-16-2211)] 참조. 일부 구현예에서, 위암은 미만성 위암이다. 일부 구현예에서, 위암은 장 위암이다.
일부 구현예에서, 암은 췌장암이다.
일부 구현예에서, 암은 Her2-양성 암이다. 일부 구현예에서, 암은 Her2-음성 암이다.
다양한 구현예에서, 암은 초기 단계 암, 비-전이성 암, 원발성 암, 진행성 암, 국소 진행성 암, 전이성 암, 관해 상태의 암, 재발성 암, 보조제 세팅에서의 암, 신보조제 세팅에서의 암, 또는 요법에 대해 실질적으로 난치성인 암이다.
다중특이적 작제물의 투여량 및 투여 방법
개체에게 투여되는, 본 명세서에 설명된 바와 같은 질병 또는 장애를 치료하기 위해 사용되는 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)의 용량은 특정 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체), 투여의 방식, 및 치료되는 질병 또는 병태의 유형에 따라 다양할 수 있다. 일부 구현예에서, 질병 또는 병태의 유형은 암이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)의 유효량은 객관적 반응(예컨대 부분적인 반응 또는 완전한 반응)을 생성하기에 효과적인 양이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)의 유효량은 개체에서 완전한 반응을 생성하기에 효과적인 양이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)의 유효량은 개체에서 부분적인 반응을 생성하기에 효과적인 양이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)의 유효량은, 다중특이적 작제물로 치료된 개체들의 개체군 중 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 64%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 또는 90% 중 임의의 것 초과의 전체 반응률을 생성하기에 충분한 양이다. 본 명세서에 설명된 방법의 치료에 대한 개체의 반응은 예를 들어 RECIST 수준에 기초하여 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)의 유효량은 개체의 무진행 생존을 연장하기에 충분한 양이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)의 유효량은 개체의 전체 생존을 연장하기에 충분한 양이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)의 유효량은, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)로 치료된 개체들의 개체군 중 약 50%, 60%, 70% 또는 77% 중 임의의 것 초과의 임상적 이익을 생성하기에 충분한 양이다.
일부 구현예에서, 단독으로 또는 제2, 제3 및/또는 제4의 제제와 조합된, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)의 유효량은, 치료 전의 동일한 대상체에서의 상응하는 종양 크기, 암세포의 수, 또는 종양 성장 속도와 비교하여, 또는 치료를 받지 않은(예를 들어, 위약 치료를 받음) 다른 대상체에서의 상응하는 활성과 비교하여 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 100% 중 임의의 것만큼, 종양의 크기를 감소시키거나, 암세포의 수를 감소시키거나, 또는 종양의 성장 속도를 감소시키기에 충분한 양이다. 정제된 효소를 사용한 시험관 내 분석, 세포 기반 분석, 동물 모델, 또는 인간 시험과 같은 표준 방법을 사용하여 이러한 효과의 크기를 측정할 수 있다.
일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)의 유효량은 독성학적 효과(즉, 임상적으로 허용가능한 독성 수준을 초과하는 효과)를 유도하는 수준 미만의 양이거나, 조성물이 개체에게 투여될 때 잠재적인 부작용이 조절되거나 용인될 수 있는 수준이다.
일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)의 유효량은 동일한 투여 계획을 따르는 조성물의 최대 허용 용량(MTD)에 가까운 양이다. 일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)의 유효량은 MTD의 약 80%, 90%, 95%, 또는 98% 중 임의의 것 초과이다.
일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)의 유효량은 치료를 받지 않은 개체와 비교하여 질병 또는 병태의 진행을 늦추거나 억제하는 양(예를 들어, 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 50%)이다.
일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)의 유효량은, 치료를 받지 않은 개체와 비교하여 상태(예를 들어, 이식)의 부작용(자가면역 반응)을 (예를 들어, 적어도 약 5%, 10%, 15%, 20%, 30%, 40%, 또는 50%) 감소시키는 양이다.
상기 양태들 중 임의의 것의 일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)의 유효량은, 총 체중의 약 0.001 ㎍/kg 내지 약 100 mg/kg, 예를 들어, 약 0.005 ㎍/kg 내지 약 50 mg/kg, 약 0.01 ㎍/kg 내지 약 10 mg/kg, 또는 약 0.01 ㎍/kg 내지 약 1 mg/kg의 범위이다.
일부 구현예에서, 치료는 다중특이적 작제물 중 어느 하나의 1회 초과 투여(예컨대 다중특이적 작제물의 약 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10회 투여)를 포함한다. 일부 구현예에서, 약 1주 내에 2회 투여가 수행된다. 일부 구현예에서, 제1 투여의 완료 후에, 적어도 약 1, 2, 3, 4, 5, 6, 또는 7일차에 제2 투여가 수행된다.
다중특이적 작제물은 예를 들어, 정맥내, 동맥내, 복강내, 폐내, 경구, 흡입, 방광내, 근육내, 기관내, 피하, 안내, 척수강내, 경점막 및 경피를 포함하는 다양한 경로를 통해 개체(예컨대 인간)에게 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 다중특이적 작제물은 개체에게 투여되는 동안 약학 조성물 내에 포함된다. 일부 구현예에서, 조성물의 지속적인 연속 방출 제형이 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 조성물은 정맥내 투여된다. 일부 구현예에서, 조성물은 복강내 투여된다. 일부 구현예에서, 조성물은 근육내 투여된다. 일부 구현예에서, 조성물은 피하 투여된다. 일부 구현예에서, 조성물은 경구 투여된다.
병용 요법
본 출원은 또한 다중특이적 작제물 중 어느 하나를 질병 또는 병태(예컨대 암)을 치료하기 위해 개체에게 투여하는 방법을 제공하며, 상기 방법은 제2 제제 또는 요법을 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 제제 또는 요법은 질병 또는 병태를 치료하기 위한 표준 또는 일반적으로 사용되는 제제 또는 요법이다. 일부 구현예에서, 제2 제제 또는 요법은 화학요법제를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 제제 또는 요법은 수술을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 제제 또는 요법은 방사선 요법을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 제제 또는 요법은 면역요법을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 제제 또는 요법은 호르몬 요법을 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 제제 또는 요법은 티로신 키나제 억제제를 포함한다. 일부 구현예에서, 제2 제제는 Her2(예를 들어, 항-Her2 항체)를 표적화한다.
일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)은 제2 제제 또는 요법과 동시에 투여된다. 일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)은 제2 제제 또는 요법과 동시발생적으로 투여된다. 일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)은 제2 제제 또는 요법과 순차적으로 투여된다. 일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)은 제 2 제제 또는 요법과 동일한 단위 투여량 형태로 투여된다. 일부 구현예에서, 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)은 제2 제제 또는 요법과 상이한 단위 투여량으로 투여된다.
VI. 조성물, 키트 및 제조품
본 명세서에 설명된 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체) 중 어느 하나를 포함하는 조성물(예컨대 제제), 다중특이적 작제물 또는 이의 일부 중 임의의 것을 인코딩하는 핵산, 다중특이적 작제물 중 하나를 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 핵산 또는 벡터를 포함하는 숙주 세포가 또한 본 명세서에서 제공된다.
본 명세서에 설명된 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체)의 적합한 제형은, 원하는 순도를 갖는 다중특이적 작제물을 선택적인 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제와 혼합함으로써(Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)) 동결건조된 제형 또는 수용액의 형태로 수득될 수 있다. 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용된 투여량 및 농도에서 수령자에게 무독성이다. 피하 투여에 적합한 동결건조된 제형은 WO97/04801에 설명되어 있다. 이러한 동결건조된 제형은 고 단백질 농도로 적합한 희석액으로 재구성될 수 있고, 재구성된 제형은 본 명세서에서 영상화, 진단 또는 치료될 개체에게 피하 투여될 수 있다.
생체 내 투여에 사용되는 제형은 멸균되어야 한다. 이는 예를 들어 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 쉽게 달성될 수 있다.
본 명세서에 설명된 다중특이적 작제물(예를 들어, 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체) 중 어느 하나를 포함하는 키트가 또한 제공된다. 키트는 본 명세서에 설명된 치료 방법 중 임의의 것에 유용할 수 있다. 일부 구현예에서, 키트는 클라우딘-18 이상(예를 들어, 항-CLDN18.2 항체)를 평가하기 위한 제제를 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 키트는 다중특이적 작제물을 개체에게 전달할 수 있는 장치를 추가로 포함한다. 비경구 전달과 같은 응용을 위한 한 유형의 장치는, 조성물을 대상체의 체내로 주입하기 위해 사용되는 시린지이다. 흡입 장치가 또한 특정 응용을 위해 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, 키트는 질병 또는 병태, 예를 들어 암, 감염 질병, 자가면역 질병 또는 이식을 치료하기 위한 치료제를 추가로 포함한다.
본 출원의 키트는 적합한 포장 내에 있다. 적합한 포장은 이에 제한되지는 않지만, 바이알, 병, 단지, 가요성 포장(예를 들어 밀봉된 마일라(Mylar) 또는 플라스틱 백) 등을 포함한다. 키트는 선택적으로 완충제 및 해설 정보와 같은 추가적인 구성요소를 제공할 수 있다.
따라서 본 출원은 또한 제조품을 제공한다. 제조품은 용기, 및 용기 상의 또는 용기와 결합된 라벨 또는 포장 삽입물을 포함할 수 있다. 적합한 용기는 바이알(예컨대 밀봉된 바이알), 병, 단지, 가요성 포장 등을 포함한다. 일반적으로 용기는 조성물을 담고, 멸균 접근 포트를 가질 수 있다(예를 들어, 용기는 정맥 용액 백 또는 피하주사 바늘에 의해 뚫릴 수 있는 마개를 갖는 바이알일 수 있음).
본 발명의 범위 및 사상 내에서 여러 구현예들이 가능하다는 것을 당업자는 인식할 것이다. 본 발명은 하기 비제한적인 실시예를 참조하여 이제 더 상세하게 설명될 것이다. 하기 실시예들은 본 발명을 추가로 예시하지만, 물론 어떤 방식으로든 그 범위를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
예시적인 구현예
구현예 1. a) 클라우딘-18 동형단백질 2("CLDN18.2")에 특이적으로 결합하는 제1 항체 모이어티; 및 b) PD-L1에 특이적으로 결합하는 제2 항체 모이어티를 포함하는 다중특이적 작제물.
구현예 2. 제1 구현예에 있어서, 제1 항체 모이어티는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 전장 항체를 포함하는, 다중특이적 작제물.
구현예 3. 구현예 1 또는 구현예 2에 있어서, 제2 항체 모이어티는 PD-L1에 결합하는 단일-도메인 항체를 포함하는, 다중특이적 작제물.
구현예 4. 구현예 2 또는 구현예 3에 있어서, 제2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 중쇄에 융합되는, 다중특이적 작제물.
구현예 5. 구현예 4에 있어서, 제2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 중쇄의 N-말단에 융합되는, 다중특이적 작제물.
구현예 6. 구현예 4에 있어서, 제2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되는, 다중특이적 작제물.
구현예 7. 구현예 2 또는 구현예 3에 있어서, 제2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 경쇄에 융합되는, 다중특이적 작제물.
구현예 8. 구현예 7에 있어서, 제2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 경쇄의 N-말단에 융합되는, 다중특이적 작제물.
구현예 9. 구현예 7에 있어서, 제2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되는, 다중특이적 작제물.
구현예 10. 구현예 2 내지 구현예 9 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체 모이어티는 링커를 통해 전장 항체에 융합되는, 다중특이적 작제물.
구현예 11. 구현예 10에 있어서, 링커는 펩티드 링커인, 다중특이적 작제물.
구현예 12. 구현예 11에 있어서, 펩티드 링커는 약 4 내지 약 20개의 아미노산의 길이를 갖는, 다중특이적 작제물.
구현예 13. 구현예 10 내지 구현예 12 중 어느 하나에 있어서, 링커는 절단가능한 링커인, 다중특이적 작제물.
구현예 14. 구현예 10 내지 구현예 12 중 어느 하나에 있어서, 링커는 절단불가능한 링커인, 다중특이적 작제물.
구현예 15. 구현예 10 내지 구현예 12 중 어느 하나에 있어서, 링커는 GS 링커인, 다중특이적 작제물.
구현예 16. 구현예 10 내지 구현예 12 중 어느 하나에 있어서, 링커는 IgG의 경첩 영역으로부터 유래한 변형된 서열을 포함하는, 다중특이적 작제물.
구현예 17. 구현예 10 내지 구현예 16 중 어느 하나에 있어서, 링커는 서열번호 72~80으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는, 다중특이적 작제물.
구현예 18. 구현예 17에 있어서, 링커는 서열번호 72~77로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는, 다중특이적 작제물.
구현예 19. 구현예 1 내지 구현예 18 중 어느 하나에 있어서, CLDN18.2는 인간 CLDN18.2인, 다중특이적 작제물.
구현예 20. 구현예 1 내지 구현예 19 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체 모이어티는,
a) 서열번호 7에 제시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 내에 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3; 및
b) 서열번호 8에 제시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL) 내에 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3
을 포함하는, 다중특이적 작제물.
구현예 21. 구현예 1 내지 구현예 20 중 어느 하나에 있어서, 제1 항체 모이어티는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서
a) VH는,
i) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1,
ii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및
iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3,
을 포함하고,
b) VL은,
i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1,
ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및
iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3
을 포함하는, 다중특이적 작제물.
구현예 22. 구현예 20 또는 구현예 21에 있어서, VH는 서열번호 7의 아미노산 서열, 또는 서열번호 7에 대해 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이를 포함하고/하거나; VL은 서열번호 8의 아미노산 서열, 또는 서열번호 8에 대해 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이를 포함하는, 다중특이적 작제물.
구현예 23. 구현예 1 내지 구현예 22 중 어느 하나에 있어서, PD-L1은 인간 PD-L1인, 다중특이적 작제물.
구현예 24. 구현예 1 내지 구현예 23 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체 모이어티는 서열번호 22~24 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 단일 단량체성 가변 항체 도메인 내에 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 sdAb-CDR1, sdAb-CDR2, 및 sdAb-CDR3을 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함하는, 다중특이적 작제물.
구현예 25. 구현예 1 내지 구현예 24 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체 모이어티는, a) 서열번호 15 또는 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1; b) 서열번호 16, 18 또는 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2; 및 c) 서열번호 17, 또는 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함하는, 다중특이적 작제물.
구현예 26. 구현예 25에 있어서, 단일 도메인 항체는, a) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; b) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; 또는 c) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3
을 포함하는, 다중특이적 작제물.
구현예 27. 구현예 24 내지 구현예 26 중 어느 하나에 있어서, 단일 도메인 항체는 서열번호 22~24 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 서열번호 22~24 중 어느 하나에 대해 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이를 포함하는, 다중특이적 작제물.
구현예 28. 구현예 2 내지 구현예 27 중 어느 하나에 있어서,
1) 전장 항체는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서 a) VH는, i) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, ii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하고; b) VL은, i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하고;
2) 제2 항체 모이어티는 a) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; b) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; 또는 c) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3
을 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함하며,
여기서 제2 항체 모이어티는, 선택적으로 약 4 내지 약 20개의 아미노산의 길이를 갖는 펩티드 링커를 통해, 전장 항체 모이어티에 융합되는, 다중특이적 작제물.
구현예 29. 구현예 28에 있어서,
1) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되거나;
2) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되거나;
3) 제2 항체 모이어티는 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되거나;
4) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 78의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되거나;
5) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 79의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되거나;
6) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 80의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되거나;
7) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 78의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나;
8) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 79의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나;
9) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 80의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나;
10) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나;
11) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나;
12) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 N-말단에 융합되거나;
13) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 N-말단에 융합되거나;
14) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 78의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 N-말단에 융합되거나;
15) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 79의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 N-말단에 융합되거나;
16) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 78의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 N-말단에 융합되거나;
17) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 79의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 N-말단에 융합되거나;
18) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 73의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나;
19) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 74의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나;
20) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 75의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나;
21) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 76의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나; 또는
22) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 77의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되는,
다중특이적 작제물.
구현예 30. 구현예 4 내지 구현예 6 및 구현예 10 내지 구현예 29 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체 모이어티와 융합된 전장 항체의 2개의 중쇄 각각은 서열번호 28~36 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 서열번호 28~36 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 변이를 포함하는, 다중특이적 작제물.
구현예 31. 구현예 30항에 있어서, 전장 항체의 2개의 경쇄 각각은 서열번호 10의 아미노산 서열, 또는 서열번호 10의 아미노산 서열과 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 변이를 포함하는, 다중특이적 작제물.
구현예 32. 구현예 7 내지 구현예 29 중 어느 하나에 있어서, 제2 항체 모이어티와 융합된 전장 항체의 2개의 경쇄 각각은 서열번호 37~49 중 어느 하나의 아미노산 서열 또는 서열번호 37~49 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 변이를 포함하는, 다중특이적 작제물.
구현예 33. 구현예 32에 있어서, 전장 항체의 2개의 중쇄 각각은 서열번호 9의 아미노산 서열, 또는 서열번호 9의 아미노산 서열과 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 변이를 포함하는, 다중특이적 작제물.
구현예 34. 구현예 30 내지 구현예 33 중 어느 하나에 있어서,
a) 제2 항체 모이어티와 융합된 전장 항체의 2개의 중쇄 각각은 서열번호 28~36 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 2개의 경쇄 각각은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 b) 제2 항체 모이어티와 융합된 전장 항체의 2개의 경쇄 각각은 서열번호 37~49 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산을 포함하고, 2개의 중쇄 각각은 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는, 다중특이적 작제물.
구현예 35. 구현예 1 내지 구현예 34 중 어느 하나에 있어서, 작제물은 이특이적 항체인, 다중특이적 작제물.
구현예 36. 구현예 1 내지 구현예 35 중 어느 하나의 작제물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
구현예 37. 구현예 1 내지 구현예 35 중 어느 하나의 작제물을 인코딩하는 핵산.
구현예 38. 서열번호 50~71로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는, 핵산.
구현예 39. 구현예 37 또는 구현예 38의 핵산을 포함하는 벡터.
구현예 40. 구현예 37 또는 구현예 38의 핵산, 또는 구현예 39의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
구현예 41. 다중특이적 작제물의 생성 방법으로서, a) 구현예 40의 숙주 세포를 다중특이적 작제물을 발현하기에 효과적인 조건 하에서 배양하는 단계; 및 b) 숙주 세포로부터 발현된 작제물을 수득하는 단계를 포함하는 구현예 1 내지 구현예 35 중 어느 하나의 다중특이적 작제물의 생성 방법.
구현예 42. 구현예 1 내지 구현예 35 중 어느 하나의 다중특이적 작제물, 또는 구현예 36항의 약학 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서의 질병 또는 병태의 치료 방법.
구현예 43. 구현예 42에 있어서, 질병 또는 병태는 암인, 방법.
구현예 44. 구현예 43에 있어서, 암은 위암인, 방법.
구현예 45. 구현예 42 내지 구현예 44 중 어느 하나에 있어서, 개체는 클라우딘-18 이상을 갖는, 방법.
구현예 46. 구현예 42 내지 구현예 46 중 어느 하나에 있어서, 본 방법이 제2 제제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
구현예 47. 구현예 46에 있어서, 제2 제제는 Her-2에 결합하는, 방법.
구현예 48. 구현예 42 내지 구현예 47 중 어느 하나에 있어서, 작제물 또는 약학 조성물은 개체에게 비경구적으로 투여되는, 방법.
구현예 49. 구현예 42 내지 구현예 48 중 어느 하나에 있어서, 개체는 인간인, 방법.
구현예 50. 구현예 36의 약학 조성물 및 질병 또는 병태를 치료하기 위한 지침서를 포함하는 키트.
실시예
하기 실시예는 순전히 본 출원을 예시하기 위한 것이며, 따라서 본 출원을 어떤 방식으로든 제한하는 것으로 간주되어서는 안 된다. 하기 실시예 및 상세한 설명은 예시로서 제공되며, 제한으로서 제공되는 것은 아니다.
실시예 1. 항-CLDN18.2/항-PD-L1 이특이적 항체의 작제 및 발현.
CLDN18.2 단일클론 항체(mAb) 및 PD-L1 단일 도메인 항체(sdAb)를 사용하여 일련의 CLDN18.2/PD-L1 이특이적 항체를 설계하였다. PD-L1 sdAb를 CLDN18.2 mAb의 경쇄/중쇄에 각각 융합시켰다. PD-L1 sdAb는 여러 종류의 융합용 링커를 통해 CLDN18.2 mAb의 중쇄 또는 경쇄의 N-말단 또는 C-말단에 융합되었다. 각각의 작제물은 하나의 융합 폴리펩티드 사슬 및 하나의 천연 폴리펩티드 사슬로 구성되었으며, 각각의 폴리펩티드 서열을 발현하는 DNA 서열은 EcoRI 및 HindIII 제한 부위 사이에서 pTT5 벡터 내로 삽입되었다. 각각의 플라스미드는 또한 성장 배지 내로 분비된 단백질에 대한 분비 신호 서열도 포함하였다. 부위 돌연변이(S228P 및 L235E)를 갖는 IgG4 Fc 부분의 N-말단에 융합된 PD-L1 sdAb를 시험관 내 생물검정을 위한 대조군으로 사용하였다. 다양한 작제물을 발현하는 플라스미드를 하기 표 3에 나타내었다.
| 단백질 | 성분 | 플라스미드 |
| 항-CLDN18.2 mAb | H0 | pTT5-CLDN18H |
| L0 | pTT5-CLDN18L | |
| CLDN18H-E-pdl1a | H1 | pTT5-CLDN18H-E-pdl1a |
| L0 | pTT5-CLDN18L | |
| CLDN18H-E-pdl1b | H2 | pTT5-CLDN18H-E-pdl1b |
| L0 | pTT5-CLDN18L | |
| CLDN18H-E-pdl1c | H3 | pTT5-CLDN18H-E-pdl1c |
| L0 | pTT5-CLDN18L | |
| CLDN18H-G15-pdl1a | H4 | pTT5-CLDN18H-G15-pdl1a |
| L0 | pTT5-CLDN18L | |
| CLDN18H-G12-pdl1a | H5 | pTT5-CLDN18H-G12-pdl1a |
| L0 | pTT5-CLDN18L | |
| CLDN18H-G9-pdl1a | H6 | pTT5-CLDN18H-G9-pdl1a |
| L0 | pTT5-CLDN18L | |
| CLDN18L-G15-pdl1a | L1 | pTT5-CLDN18L-G15-pdl1a |
| H0 | pTT5-CLDN18H | |
| CLDN18L-G12-pdl1a | L2 | pTT5-CLDN18L-G12-pdl1a |
| H0 | pTT5-CLDN18H | |
| CLDN18L-G9-pdl1a | L3 | pTT5-CLDN18L-G9-pdl1a |
| H0 | pTT5-CLDN18H | |
| CLDN18L-E-pdl1a | L4 | pTT5-CLDN18L-E-pdl1a |
| H0 | pTT5-CLDN18H | |
| CLDN18L-E-pdl1b | L5 | pTT5-CLDN18L-E-pdl1b |
| H0 | pTT5-CLDN18H | |
| pdl1a-E-CLDN18H | H7 | pTT5-pdl1a-E-CLDN18H |
| L0 | pTT5-CLDN18L | |
| pdl1a-E-CLDN18L | L6 | pTT5-pdl1a-E-CLDN18L |
| H0 | pTT5-CLDN18H | |
| pdl1a-G15-CLDN18H | H8 | pTT5-pdl1a-G15-CLDN18H |
| L0 | pTT5-CLDN18L | |
| pdl1a-G12-CLDN18H | H9 | pTT5-pdl1a-G12-CLDN18H |
| L0 | pTT5-CLDN18L | |
| pdl1a-G15-CLDN18L | L7 | pTT5-pdl1a-G15-CLDN18L |
| H0 | pTT5-CLDN18H | |
| pdl1a-G12-CLDN18L | L8 | pTT5-pdl1a-G12-CLDN18L |
| H0 | pTT5-CLDN18H | |
| CLDN18L-Ea-pdl1a | L9 | pTT5-CLDN18L-Ea-pdl1a |
| H0 | pTT5-CLDN18H | |
| CLDN18L-E2-pdl1a | L10 | pTT5-CLDN18L-E2-pdl1a |
| H0 | pTT5-CLDN18H | |
| CLDN18L-E2a-pdl1a | L11 | pTT5-CLDN18L-E2a-pdl1a |
| H0 | pTT5-CLDN18H | |
| CLDN18L-E4-pdl1a | L12 | pTT5-CLDN18L-E4-pdl1a |
| H0 | pTT5-CLDN18H | |
| CLDN18L-E4a-pdl1a | L13 | pTT5-CLDN18L-E4a-pdl1a |
| H0 | pTT5-CLDN18H |
발현 플라스미드로 형질감염된 CHO-3E7 세포를 37 ℃ 100 rpm에서 6일 동안 배양하였다. 원심분리에 의해 상청액 분획을 수집하고, 단백질 A 컬럼을 통해 다양한 작제물을 정제하였다.
PDL1a, PDL1b 및 PDL1c을 포함하는 PD-L1 sdAb를 이특이적 항체 작제에 사용하였다. 표 3에 나타낸 바와 같이, CLDN18.2 mAb는 H0으로 지칭되는 중쇄 및 L0으로 지칭되는 경쇄로 이루어진다. 일련의 이특이적 항체는, 링커(E-링커: EPKSSDKTHTSPPSP(서열번호 72), Ea-링커: EPKSSDKGHGGPPGP(서열번호 73), E2-링커: ERKSSVESPPSP(서열번호 74), E2a-링커: ERKSGVEGPPGP(서열번호 75), E4-링커: ESKYGPPSPPSP(서열번호 76), E4a-링커: ESKYGPPGPPGP(서열번호 77), G15-링커: (G4S)3(서열번호 78), G12-링커: GGGGSGGGGSGS(서열번호 79), 또는 G9-링커: GGGGSGGGS(서열번호 80))를 사용하여 상이한 PD-L1 sdAb를 각각 CLDN18.2 mAb에 융합시킴으로써 설계되었다. PDL1a sdAb는 E-링커에 의해 H0 중쇄의 C-말단에 융합되어 H1으로 지칭되는 새로운 폴리펩티드를 생성하였다. 동일한 방식으로, H2 및 H3으로 지칭되는 새로운 폴리펩티드가 각각 PDL1b 및 PDL1c sdAb를 사용하여 생성되었다. PDL1a sdAb는 G15/G12/G9-링커에 의해 H0의 중쇄 또는 L0의 경쇄의 C-말단에 연결되어, 각각 H4, H5, H6, L1, L2 및 L3으로 지칭되는 6개의 새로운 폴리펩티드를 생성하였다. PDL1a 및 PDL1b의 2개의 sdAb는 E-링커에 의해 L0의 경쇄의 C-말단에 융합되어 L4 및 L5로 지칭되는 2개의 새로운 폴리펩티드를 생성하였다. PDL1a sdAb는 E-링커에 의해 H0의 중쇄 또는 L0의 경쇄의 N-말단에 융합되어 H7 및 L6으로 지칭되는 2개의 새로운 폴리펩티드를 유도하였다. 한편, PDL1a sdAb는 G15/G12-링커에 의해 H0의 중쇄 또는 L0의 경쇄의 N-말단에 융합되어 각각 H8, H9, L7 및 L8로 지칭되는 새로운 폴리펩티드를 생성하였다. 추가적으로, PDL1a sdAb는 Ea/E2/E2a/E4/E4a-링커에 의해 L0의 경쇄의 C-말단에 융합되어 각각 L9, L10, L11, L12 및 L13으로 지칭되는 새로운 폴리펩티드를 유도하였다.
상기 예시된 바와 같이, CLDN18H-E-pdl1a, CLDN18H-E-pdl1b, CLDN18H-E-pdl1c, CLDN18H-G15-pdl1a, CLDN18H-G12-pdl1a, CLDN18H-G9-pdl1a, pdl1a-E-CLDN18H, pdl1a-G15-CLDN18H, 및 pdl1a-G12-CLDN18H, CLDN18L-G15-pdl1a, CLDN18L-G12-pdl1a, CLDN18L-G9-pdl1a, CLDN18L-E-pdl1a, CLDN18L-E-pdl1b, pdl1a-E-CLDN18L, pdl1a-G15-CLDN18L, pdl1a-G12-CLDN18L, CLDN18L-Ea-pdl1a, CLDN18L-E2-pdl1a, CLDN18L-E2a-pdl1a, CLDN18L-E4-pdl1a 및 CLDN18L-E4a-pdl1a가 생성되었다.
sdAb-Fc 융합 단백질은 sdAb를 IgG4PE로 지칭되는 부위 돌연변이(S228P 및 L235E)를 갖는 인간 IgG4 Fc 부분의 N-말단에 연결함으로써 작제되어, sdAb-PDL1a-IgG4PE, sdAb-PDL1b-IgG4PE 및 sdAb-PDL1c-IgG4PE로 지칭되는 새로운 Fc 융합 단백질을 생성하였다.
실시예 2. 이특이적 항체의 특성화
A. FACS 결합 분석
CHO-K1 세포 상에서 발현된 CLDN18.2 또는 PD-L1 상에서의 이특이적 항체의 결합 패턴을, 300 nM의 농도에서 시작하여, 3Х 연속 희석액 중 항체와 함께 플롯팅하였다. 항체-항원 결합 곡선은 기하 평균 값으로 생성되었다. 원시 데이터는 EC50을 분석하기 위해 4개의 파라미터, 최적 값 프로그램이 있는 GraphPad Prism v6.02 소프트웨어로 플롯팅하였다.
PD-L1 결합의 경우, 대부분의 이특이적 작제물은 sdAb-PDL1a-IgG4PE, sdAb-PDL1b-IgG4PE 및 sdAb-PDL1c-IgG4PE의 대조군과 비교하여 PD-L1 항원에 대해 유사한 친화성을 나타내었다(도 1, 3, 4 및 7 참조).
CLDN18.2 결합의 경우, CLDN18.2 mAb의 중쇄/경쇄의 C-말단에 융합된 PD-L1 sdAb는 CLDN18.2 결합에 영향을 미치지 않았다. 도 2, 5 및 6 참조. 이러한 종류의 모든 이특이적 작제물(CLDN18H-E-PDL1a, CLDN18H-E-PDL1b, CLDN18H-E-PDL1c, CLDN18H-G9-PDL1a, CLDN18L-E-PDL1a를 포함함)은 모 항-CLDN18.2 mAb와 비교하여 CLDN18.2 항원에 대해 유사하거나 더 높은 친화성을 갖는다. PD-L1 sdAb가 항-CLDN18.2 mAb의 중쇄/경쇄의 N-말단에 융합된 경우, 최종 작제물은 항-CLDN18.2 mAbp와 비교하여 CLDN18.2 항원에 대해 상대적으로 더 낮은 친화성을 갖는다. 도 2, 5, 6 및 8 참조.
CLDN18.1 결합의 경우, 항-CLDN18.2 mAb와 이특이적 항체 어느 것도 CLDN18.1 과발현된 세포에 결합하지 않는다. 도 9, 10 및 11 참조.
B. 시험관 내 생물검정
CLDN18.2 및 PD-L1 표적 반응을 PD-1/PD-L1 차단 생물검정 및 항-CLDN18.2 항체 매개 ADCC 및 CDC에 의해 별도로 수행하였다.
1) PD-1/PD-L1 차단 생물검정
Promega로부터의 PD-1/PD-L1 차단 생물검정 시스템을 사용하여 PD-1/PD-L1 상호작용을 차단하도록 설계된 항체 및 다른 생물학적제제의 효능 및 안정성을 측정하였다. 이 검정은 2개의 유전자 조작된 세포주로 구성된다: 인간 PD-1 및 NFAT 반응 요소(NFAT-RE)에 의해 구동된 루시퍼라제 리포터를 발현하는 Jurkat T 세포인 PD-1 이펙터 세포, 및 인간 PD-L1 및 항원-독립적 방식으로 동족 TCR을 활성화하도록 설계된 조작된 세포 표면 단백질을 발현하는 CHO-K1 세포인 PD-L1 aAPC/CHO-K1 세포. 2개의 세포 유형이 공동 배양될 때, PD-1/PD-L1 상호작용은 TCR 신호화 및 NFAT-RE-매개 발광을 억제한다. PD-1/PD-L1 상호작용을 차단하는 항-PD-1 또는 항-PD-L1 항체의 첨가는 억제 신호를 방출하고, TCR 활성화 및 NFAT-RE-매개 발광을 유도한다.
Tecentriq 바이오시밀러를 참조 항체로서 사용하였다. 모든 이특이적 항체는, sdAb-Fc 대조군과 비교하여 유사한 PD-L1 차단 활성을 나타냈지만, 참조 항체 Tecentriq 바이오시밀러보다 더 낮은 활성을 나타냈다.
2) CDC 분석
이특이적 항체에 대해 CDC 분석을 수행하였다. 표적 세포주인 인간 Claudin18.2를 과발현하는 CHO-K1을 배양 및 수확하고, 96-웰 플레이트에 특정 세포 밀도로 시딩하였다. 이에 따라 항체 샘플을 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 37℃/5% CO2에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 이어서 정제된 정상 인간 혈청을 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 4시간 동안 추가로 인큐베이션하였다. 플레이트를 인큐베이터에서 꺼내고, 상청액을 수집하여, Cell Titer-Glo® 검정 키트(카탈로그 번호 G7570, Promega)로 분석하였다. 세포 생존율 분석을 위해 PheraStar(BMG Labtech)에 의해 발광 데이터를 캡처하였다. CDC 분석 결과를 표적 세포 용해 백분율 대 후보 항체 농도의 관점에서 플롯팅하였다.
이특이적 항체 유도된 CDC 분석을 위해, IMAB362 바이오시밀러를 참조 항체로서 사용하였다. 도 13에 나타낸 바와 같이, CLDN18L-E-pdl1a가 가장 높은 활성을 나타내었다. 한편, 이는 또한 모 항-CLDN18.2 mAb와 유사한 CDC 활성을 나타내었다. 또한, CLDN18L-E-pdl1a 및 pdl1a-E-CLDN18L은 참조 항체 IMAB362보다 더 높은 CDC 활성을 나타내었다. 도 16에 나타낸 바와 같이, CLDN18L-E4-pdl1a가 가장 높은 활성을 나타내었다. 한편, 항-CLDN18.2 mAb의 중쇄의 C-말단에 융합된 PD-L1 sdAb를 갖는 CLDN18H-G15-pdl1a, CLDN18H-G9-pdl1a 및 CLDN18H-E-pdl1a는 모 mAb 및 다른 이특이적 항체보다 더 낮은 활성을 나타내었다.
3) ADCC 분석
항체-의존성 세포성 세포독성(ADCC)에 대한 이특이적 항체의 효과를 비교하였다. ADCC 분석 결과를, 표적 세포 용해 백분율 대 이특이적 항체 농도의 관점에서 플롯팅하였다. 분석 절차를 위해, 표적 세포주인, 인간 Claudin18.2를 과발현하는 CHO-K1을 배양 및 수확하고, 96-웰 플레이트에 특정 세포 밀도로 시딩하였다. IMAB362(졸베툭시맙 Zolbetuximab)의 동일한 아미노산 서열로 자체 합성된 양성 대조군 또는 이특이적 항체 샘플을 플레이트에 첨가하고, 플레이트를 37℃/5% CO2 에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 신선하게 분리된 인간 PBMC(말초혈액 단핵 세포: Peripheral Blood Mononuclear Cells)를 이펙터 세포로서 사용하고, 플레이트에 첨가하고, 동일한 조건에서 6시간 동안 인큐베이션하였다. 분석 플레이트를 꺼내고, 짧게 원심분리하였다. 상청액을 수집하여, 제조자 지침서(Roche)에 따라, LDH 활성 분석을 위한 새로운 플레이트로 옮겼다. 흡광도 데이터를 FlexStation 3에 의해 캡처하고 GraphPad Prism 6.0에 의해 분석하였다.
이특이적 항체 유도된 ADCC 분석을 위해, IMAB362 바이오시밀러를 참조 항체로서 사용하였다. 도 14, 15 및 18에 나타낸 바와 같이, CLDN18L-E-pdl1a, pdl1a-E-CLDN18L, pdl1a-G15-CLDN18H, CLDN18L-G15-pdl1a, CLDN18L-E4-pdl1a 및 모 항-CLDN18.2 mAb는 참조 항체 IMAB362보다 더 높은 활성을 나타내었다. 한편, 이러한 이특이적 항체는 모 항-CLDN18.2 mAb와 비교하여 유사한 활성을 나타내었다.
| 서열번호 | 설명 | 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열(CDR 서열은 밑줄 및 굵게 표시됨) |
| 예시적인 항-CLDN18.2 항체 모이어티 | ||
| 1 | VH-CDR1 | GFSLTTYGVH |
| 2 | VH-CDR2 | VIWAGGSTNYNSALMS |
| 3 | VH-CDR3 | AAYYGNGLDY |
| 4 | VL-CDR1 | KSSQTLLNSGNQKNYLT |
| 5 | VL-CDR2 | WASTGES |
| 6 | VL-CDR3 | QNAYFYPFT |
| 7 | VH | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS GFSLTTYGVH WVRQAPGKGLEWVA VIWAGGSTNYNSALMS RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR AAYYGNGLDY WGQGTMVTVSS |
| 8 | VL | DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISC KSSQTLLNSGNQKNYLT WYLQKPGQSPQLLIY WASTGES GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC QNAYFYPFT FGGGTKVEIK |
| 9 | 항-CLDN18.2 mAb의 중쇄의 아미노산 서열(H0) | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAAS GFSLTTYGVH WVRQAPGKGLEWVA VIWAGGSTNYNSALMS RFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAR AAYYGNGLDY WGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
| 10 | 항-CLDN18.2 mAb의 경쇄의 아미노산 서열(L0) | DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISC KSSQTLLNSGNQKNYLT WYLQKPGQSPQLLIY WASTGES GVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYC QNAYFYPFT FGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC |
| 11 | 항-CLDN18.2 mAb의 중쇄의 DNA 서열 | caagtgcagctggtggaaagcggaggaggagtggtgcagcccggcagatctctgcggctgtcttgtgctgcttctggcttctccctgaccacctacggcgtccactgggtccggcaggcccctggcaagggcctcgagtgggtggccgtgatctgggctggcggctctaccaactacaactccgccctgatgtcccggttcaccatctccagagataattccaagaacaccctgtacctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacagctgtgtactactgcgccagagctgcctactatggcaacggcctggactactggggccagggcaccatggtgaccgtgtccagcgcttccaccaagggccccagcgtgttccctctggccccttcttccaagagcacctccggcggcaccgccgctctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcttggaactccggcgccctgacatctggagtgcacaccttccctgctgtgctgcagtcctctggcctgtactccctgtcctccgtggtgaccgtgccttctagctctctgggcacccagacctacatctgcaacgtgaaccacaagccttccaacaccaaggtggacaagaaagtggaacccaagtcctgcgacaagacccacacctgtcctccttgccctgcccctgagctgctgggcggcccctctgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggatacactgatgatcagcagaacccctgaggtgacctgtgtggtcgtggacgtgtcccacgaggaccctgaagtgaagttcaactggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgctaagaccaagcctcgggaggagcagtacaattccacctacagagtggtctctgtactgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgcctgctcctatcgagaagaccatctccaaggccaagggccagcctagagaacctcaggtgtacaccctgcctccttctcgggacgagctgaccaagaaccaggtgtccctgacctgcctggtgaaaggcttctacccctctgacatcgctgtggaatgggagtctaacggccagcctgagaacaactacaagaccacacctccagtcctggactccgatggatctttcttcctgtactccaagctgaccgtggacaagagcagatggcagcagggcaatgtgttctcctgctccgtgatgcacgaggccctgcataaccactacacccagaagtctctgtccctgtctcccggcaaa |
| 12 | 항-CLDN18.2 mAb의 경쇄의 DNA 서열 | gacatcgtgatgacccagtctcctctgtctctgcctgtgacccctggcgaacctgcttccatctcctgcaagtcctctcagaccctgctgaactccggcaaccagaagaactacctgacctggtatctgcagaaacccggccagagcccacaactcctgatctactgggcctctaccggcgagtccggcgtgcctgatagattctccggcagcggctctggcaccgacttcacactgaagatcagccgggtcgaggccgaggacgtgggcgtgtactactgtcagaacgcctacttctacccctttaccttcggcggaggtacaaaggtggaaatcaagagaaccgtggccgcccctagcgtgttcatctttcctccctctgacgagcagctgaaatctggcaccgcttccgtggtctgcctgctgaacaacttctaccccagagaggctaaggtgcagtggaaagtggacaacgccctgcagtctggcaactcccaagaaagcgtgaccgagcaggactccaaggactctacatacagcctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgattacgagaagcacaaggtctacgcttgtgaagtgacccaccagggactgtcctcccctgtgaccaagtctttcaatcggggcgagtgc |
| 예시적인 분비 신호 펩티드 | ||
| 13 | 분비 신호 펩티드의 아미노산 서열 | MGWSCIILFLVATATGVHS |
| 14 | 분비 신호 펩티드의 DNA 서열 | atgggctggtcctgcatcatcctgttcctggtggctaccgccaccggcgtgcactcc |
| 예시적인 항-PDL1 sdAb | ||
| 15 | CDR1 (PDL1a sdAb & PDL1b sdAb) | GRTFVTYGMG |
| 16 | CDR2 (PDL1a sdAb) | AISWSGSMTSYGDSVKG |
| 17 | CDR3 (PDL1a sdAb & PDL1b sdAb) | ALGAVVYTTREPYTY |
| 18 | CDR2 (PDL1b sdAb) | AISWSGSSTSYGDSVKG |
| 19 | CDR1 (PDL1c sdAb) | GRTFITYAIG |
| 20 | CDR2 (PDL1c sdAb) | AISWSGSMTSYADSVKG |
| 21 | CDR3 (PDL1c sdAb) | HRGAIAPIAQSVYTN |
| 22 | PDL1a sdAb의 아미노산 서열 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GRTFVTYGMG WFRQAPGKGREFVS AISWSGSMTSYGDSVKG RFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAA ALGAVVYTTREPYTY WGQGTLVTVSS |
| 23 | PDL1b sdAb의 아미노산 서열 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GRTFVTYGMG WFRQAPGKGREFVS AISWSGSSTSYGDSVKG RFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAA ALGAVVYTTREPYTY WGQGTLVTVSS |
| 24 | PDL1c sdAb의 아미노산 서열 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAAS GRTFITYAIG WFRQAPGKGREFVS AISWSGSMTSYADSVKG RFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAA HRGAIAPIAQSVYTN WGQGTLVTVSS |
| 25 | PDL1a sdAb의 DNA 서열 | gaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctct |
| 26 | PDL1b sdAb의 DNA 서열 | gaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccagcacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctct |
| 27 | PDL1c sdAb의 DNA 서열 | gaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtgcagcctggcggctctctgagactgtcctgcgccgcttctggccggaccttcatcacctacgccatcggctggttcagacaggcccctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctctatgaccagctacgccgactctgtgaagggcagattcaccatctcccgggataacgccaagaacaccctgtacctgcagatgaattccctgagacctgaggacacagctgtgtattactgcgccgctcaccggggcgccatcgctcccatcgctcagagcgtgtacaccaactggggccagggaaccctggtcaccgtgtccagc |
| 예시적인 이특이적 항체 | ||
| 28 | H1의 아미노산 서열 | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSLTTYGVHWVRQAPGKGLEWVAVIWAGGSTNYNSALMSRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAAYYGNGLDYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKEPKSSDKTHTSPPSPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSS |
| 29 | H2의 아미노산 서열 | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSLTTYGVHWVRQAPGKGLEWVAVIWAGGSTNYNSALMSRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAAYYGNGLDYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKEPKSSDKTHTSPPSPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSSTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSS |
| 30 | H3의 아미노산 서열 | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSLTTYGVHWVRQAPGKGLEWVAVIWAGGSTNYNSALMSRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAAYYGNGLDYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKEPKSSDKTHTSPPSPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFITYAIGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAHRGAIAPIAQSVYTNWGQGTLVTVSS |
| 31 | H4의 아미노산 서열 | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSLTTYGVHWVRQAPGKGLEWVAVIWAGGSTNYNSALMSRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAAYYGNGLDYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSS |
| 32 | H5의 아미노산 서열 | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSLTTYGVHWVRQAPGKGLEWVAVIWAGGSTNYNSALMSRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAAYYGNGLDYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGGSGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSS |
| 33 | H6의 아미노산 서열 | QVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSLTTYGVHWVRQAPGKGLEWVAVIWAGGSTNYNSALMSRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAAYYGNGLDYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGKGGGGSGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSS |
| 34 | H7의 아미노산 서열 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTSPPSPQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSLTTYGVHWVRQAPGKGLEWVAVIWAGGSTNYNSALMSRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAAYYGNGLDYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
| 35 | H8의 아미노산 서열 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSLTTYGVHWVRQAPGKGLEWVAVIWAGGSTNYNSALMSRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAAYYGNGLDYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
| 36 | H9의 아미노산 서열 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGSQVQLVESGGGVVQPGRSLRLSCAASGFSLTTYGVHWVRQAPGKGLEWVAVIWAGGSTNYNSALMSRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAAYYGNGLDYWGQGTMVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK |
| 37 | L1의 아미노산 서열 | DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQTLLNSGNQKNYLTWYLQKPGQSPQLLIYWASTGESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQNAYFYPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSGGGGSGGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSS |
| 38 | L2의 아미노산 서열 | DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQTLLNSGNQKNYLTWYLQKPGQSPQLLIYWASTGESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQNAYFYPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSGGGGSGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSS |
| 39 | L3의 아미노산 서열 | DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQTLLNSGNQKNYLTWYLQKPGQSPQLLIYWASTGESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQNAYFYPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECGGGGSGGGSEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSS |
| 40 | L4의 아미노산 서열 | DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQTLLNSGNQKNYLTWYLQKPGQSPQLLIYWASTGESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQNAYFYPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEPKSSDKTHTSPPSPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSS |
| 41 | L5의 아미노산 서열 | DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQTLLNSGNQKNYLTWYLQKPGQSPQLLIYWASTGESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQNAYFYPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEPKSSDKTHTSPPSPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSSTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSS |
| 42 | L6의 아미노산 서열 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSSEPKSSDKTHTSPPSPDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQTLLNSGNQKNYLTWYLQKPGQSPQLLIYWASTGESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQNAYFYPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC |
| 43 | L7의 아미노산 서열 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGGGGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQTLLNSGNQKNYLTWYLQKPGQSPQLLIYWASTGESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQNAYFYPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC |
| 44 | L8의 아미노산 서열 | EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSSGGGGSGGGGSGSDIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQTLLNSGNQKNYLTWYLQKPGQSPQLLIYWASTGESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQNAYFYPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC |
| 45 | L9의 아미노산 서열 | DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQTLLNSGNQKNYLTWYLQKPGQSPQLLIYWASTGESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQNAYFYPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECEPKSSDKGHGGPPGPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSS |
| 46 | L10의 아미노산 서열 | DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQTLLNSGNQKNYLTWYLQKPGQSPQLLIYWASTGESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQNAYFYPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECERKSSVESPPSPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSS |
| 47 | L11의 아미노산 서열 | DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQTLLNSGNQKNYLTWYLQKPGQSPQLLIYWASTGESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQNAYFYPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECERKSGVEGPPGPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSS |
| 48 | L12의 아미노산 서열 | DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQTLLNSGNQKNYLTWYLQKPGQSPQLLIYWASTGESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQNAYFYPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPSPPSPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSS |
| 49 | L13의 아미노산 서열 | DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCKSSQTLLNSGNQKNYLTWYLQKPGQSPQLLIYWASTGESGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCQNAYFYPFTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGECESKYGPPGPPGPEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGRTFVTYGMGWFRQAPGKGREFVSAISWSGSMTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRPEDTAVYYCAAALGAVVYTTREPYTYWGQGTLVTVSS |
| 50 | H1의 DNA 서열 | caagtgcagctggtggaaagcggaggaggagtggtgcagcccggcagatctctgcggctgtcttgtgctgcttctggcttctccctgaccacctacggcgtccactgggtccggcaggcccctggcaagggcctcgagtgggtggccgtgatctgggctggcggctctaccaactacaactccgccctgatgtcccggttcaccatctccagagataattccaagaacaccctgtacctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacagctgtgtactactgcgccagagctgcctactatggcaacggcctggactactggggccagggcaccatggtgaccgtgtccagcgcttccaccaagggccccagcgtgttccctctggccccttcttccaagagcacctccggcggcaccgccgctctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcttggaactccggcgccctgacatctggagtgcacaccttccctgctgtgctgcagtcctctggcctgtactccctgtcctccgtggtgaccgtgccttctagctctctgggcacccagacctacatctgcaacgtgaaccacaagccttccaacaccaaggtggacaagaaagtggaacccaagtcctgcgacaagacccacacctgtcctccttgccctgcccctgagctgctgggcggcccctctgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggatacactgatgatcagcagaacccctgaggtgacctgtgtggtcgtggacgtgtcccacgaggaccctgaagtgaagttcaactggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgctaagaccaagcctcgggaggagcagtacaattccacctacagagtggtctctgtactgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgcctgctcctatcgagaagaccatctccaaggccaagggccagcctagagaacctcaggtgtacaccctgcctccttctcgggacgagctgaccaagaaccaggtgtccctgacctgcctggtgaaaggcttctacccctctgacatcgctgtggaatgggagtctaacggccagcctgagaacaactacaagaccacacctccagtcctggactccgatggatctttcttcctgtactccaagctgaccgtggacaagagcagatggcagcagggcaatgtgttctcctgctccgtgatgcacgaggccctgcataaccactacacccagaagtctctgtccctgtctcccggcaaagaacctaagtctagcgacaaaactcataccagcccccctagtccagaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctct |
| 51 | H2의 DNA 서열 | caagtgcagctggtggaaagcggaggaggagtggtgcagcccggcagatctctgcggctgtcttgtgctgcttctggcttctccctgaccacctacggcgtccactgggtccggcaggcccctggcaagggcctcgagtgggtggccgtgatctgggctggcggctctaccaactacaactccgccctgatgtcccggttcaccatctccagagataattccaagaacaccctgtacctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacagctgtgtactactgcgccagagctgcctactatggcaacggcctggactactggggccagggcaccatggtgaccgtgtccagcgcttccaccaagggccccagcgtgttccctctggccccttcttccaagagcacctccggcggcaccgccgctctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcttggaactccggcgccctgacatctggagtgcacaccttccctgctgtgctgcagtcctctggcctgtactccctgtcctccgtggtgaccgtgccttctagctctctgggcacccagacctacatctgcaacgtgaaccacaagccttccaacaccaaggtggacaagaaagtggaacccaagtcctgcgacaagacccacacctgtcctccttgccctgcccctgagctgctgggcggcccctctgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggatacactgatgatcagcagaacccctgaggtgacctgtgtggtcgtggacgtgtcccacgaggaccctgaagtgaagttcaactggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgctaagaccaagcctcgggaggagcagtacaattccacctacagagtggtctctgtactgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgcctgctcctatcgagaagaccatctccaaggccaagggccagcctagagaacctcaggtgtacaccctgcctccttctcgggacgagctgaccaagaaccaggtgtccctgacctgcctggtgaaaggcttctacccctctgacatcgctgtggaatgggagtctaacggccagcctgagaacaactacaagaccacacctccagtcctggactccgatggatctttcttcctgtactccaagctgaccgtggacaagagcagatggcagcagggcaatgtgttctcctgctccgtgatgcacgaggccctgcataaccactacacccagaagtctctgtccctgtctcccggcaaagaacctaagtctagcgacaaaactcataccagcccccctagtccagaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccagcacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctct |
| 52 | H3의 DNA 서열 | caagtgcagctggtggaaagcggaggaggagtggtgcagcccggcagatctctgcggctgtcttgtgctgcttctggcttctccctgaccacctacggcgtccactgggtccggcaggcccctggcaagggcctcgagtgggtggccgtgatctgggctggcggctctaccaactacaactccgccctgatgtcccggttcaccatctccagagataattccaagaacaccctgtacctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacagctgtgtactactgcgccagagctgcctactatggcaacggcctggactactggggccagggcaccatggtgaccgtgtccagcgcttccaccaagggccccagcgtgttccctctggccccttcttccaagagcacctccggcggcaccgccgctctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcttggaactccggcgccctgacatctggagtgcacaccttccctgctgtgctgcagtcctctggcctgtactccctgtcctccgtggtgaccgtgccttctagctctctgggcacccagacctacatctgcaacgtgaaccacaagccttccaacaccaaggtggacaagaaagtggaacccaagtcctgcgacaagacccacacctgtcctccttgccctgcccctgagctgctgggcggcccctctgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggatacactgatgatcagcagaacccctgaggtgacctgtgtggtcgtggacgtgtcccacgaggaccctgaagtgaagttcaactggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgctaagaccaagcctcgggaggagcagtacaattccacctacagagtggtctctgtactgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgcctgctcctatcgagaagaccatctccaaggccaagggccagcctagagaacctcaggtgtacaccctgcctccttctcgggacgagctgaccaagaaccaggtgtccctgacctgcctggtgaaaggcttctacccctctgacatcgctgtggaatgggagtctaacggccagcctgagaacaactacaagaccacacctccagtcctggactccgatggatctttcttcctgtactccaagctgaccgtggacaagagcagatggcagcagggcaatgtgttctcctgctccgtgatgcacgaggccctgcataaccactacacccagaagtctctgtccctgtctcccggcaaagaacctaagtctagcgacaaaactcataccagcccccctagtccagaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtgcagcctggcggctctctgagactgtcctgcgccgcttctggccggaccttcatcacctacgccatcggctggttcagacaggcccctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctctatgaccagctacgccgactctgtgaagggcagattcaccatctcccgggataacgccaagaacaccctgtacctgcagatgaattccctgagacctgaggacacagctgtgtattactgcgccgctcaccggggcgccatcgctcccatcgctcagagcgtgtacaccaactggggccagggaaccctggtcaccgtgtccagc |
| 53 | H4의 DNA 서열 | caagtgcagctggtggaaagcggaggaggagtggtgcagcccggcagatctctgcggctgtcttgtgctgcttctggcttctccctgaccacctacggcgtccactgggtccggcaggcccctggcaagggcctcgagtgggtggccgtgatctgggctggcggctctaccaactacaactccgccctgatgtcccggttcaccatctccagagataattccaagaacaccctgtacctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacagctgtgtactactgcgccagagctgcctactatggcaacggcctggactactggggccagggcaccatggtgaccgtgtccagcgcttccaccaagggccccagcgtgttccctctggccccttcttccaagagcacctccggcggcaccgccgctctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcttggaactccggcgccctgacatctggagtgcacaccttccctgctgtgctgcagtcctctggcctgtactccctgtcctccgtggtgaccgtgccttctagctctctgggcacccagacctacatctgcaacgtgaaccacaagccttccaacaccaaggtggacaagaaagtggaacccaagtcctgcgacaagacccacacctgtcctccttgccctgcccctgagctgctgggcggcccctctgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggatacactgatgatcagcagaacccctgaggtgacctgtgtggtcgtggacgtgtcccacgaggaccctgaagtgaagttcaactggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgctaagaccaagcctcgggaggagcagtacaattccacctacagagtggtctctgtactgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgcctgctcctatcgagaagaccatctccaaggccaagggccagcctagagaacctcaggtgtacaccctgcctccttctcgggacgagctgaccaagaaccaggtgtccctgacctgcctggtgaaaggcttctacccctctgacatcgctgtggaatgggagtctaacggccagcctgagaacaactacaagaccacacctccagtcctggactccgatggatctttcttcctgtactccaagctgaccgtggacaagagcagatggcagcagggcaatgtgttctcctgctccgtgatgcacgaggccctgcataaccactacacccagaagtctctgtccctgtctcccggcaaaggtggaggcggtagtggaggcggtggttcaggcggaggcggatctgaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctct |
| 54 | H5의 DNA 서열 | caagtgcagctggtggaaagcggaggaggagtggtgcagcccggcagatctctgcggctgtcttgtgctgcttctggcttctccctgaccacctacggcgtccactgggtccggcaggcccctggcaagggcctcgagtgggtggccgtgatctgggctggcggctctaccaactacaactccgccctgatgtcccggttcaccatctccagagataattccaagaacaccctgtacctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacagctgtgtactactgcgccagagctgcctactatggcaacggcctggactactggggccagggcaccatggtgaccgtgtccagcgcttccaccaagggccccagcgtgttccctctggccccttcttccaagagcacctccggcggcaccgccgctctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcttggaactccggcgccctgacatctggagtgcacaccttccctgctgtgctgcagtcctctggcctgtactccctgtcctccgtggtgaccgtgccttctagctctctgggcacccagacctacatctgcaacgtgaaccacaagccttccaacaccaaggtggacaagaaagtggaacccaagtcctgcgacaagacccacacctgtcctccttgccctgcccctgagctgctgggcggcccctctgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggatacactgatgatcagcagaacccctgaggtgacctgtgtggtcgtggacgtgtcccacgaggaccctgaagtgaagttcaactggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgctaagaccaagcctcgggaggagcagtacaattccacctacagagtggtctctgtactgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgcctgctcctatcgagaagaccatctccaaggccaagggccagcctagagaacctcaggtgtacaccctgcctccttctcgggacgagctgaccaagaaccaggtgtccctgacctgcctggtgaaaggcttctacccctctgacatcgctgtggaatgggagtctaacggccagcctgagaacaactacaagaccacacctccagtcctggactccgatggatctttcttcctgtactccaagctgaccgtggacaagagcagatggcagcagggcaatgtgttctcctgctccgtgatgcacgaggccctgcataaccactacacccagaagtctctgtccctgtctcccggcaaaggtggaggcggtagtggaggcggtggttcaggatctgaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctct |
| 55 | H6의 DNA 서열 | caagtgcagctggtggaaagcggaggaggagtggtgcagcccggcagatctctgcggctgtcttgtgctgcttctggcttctccctgaccacctacggcgtccactgggtccggcaggcccctggcaagggcctcgagtgggtggccgtgatctgggctggcggctctaccaactacaactccgccctgatgtcccggttcaccatctccagagataattccaagaacaccctgtacctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacagctgtgtactactgcgccagagctgcctactatggcaacggcctggactactggggccagggcaccatggtgaccgtgtccagcgcttccaccaagggccccagcgtgttccctctggccccttcttccaagagcacctccggcggcaccgccgctctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcttggaactccggcgccctgacatctggagtgcacaccttccctgctgtgctgcagtcctctggcctgtactccctgtcctccgtggtgaccgtgccttctagctctctgggcacccagacctacatctgcaacgtgaaccacaagccttccaacaccaaggtggacaagaaagtggaacccaagtcctgcgacaagacccacacctgtcctccttgccctgcccctgagctgctgggcggcccctctgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggatacactgatgatcagcagaacccctgaggtgacctgtgtggtcgtggacgtgtcccacgaggaccctgaagtgaagttcaactggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgctaagaccaagcctcgggaggagcagtacaattccacctacagagtggtctctgtactgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgcctgctcctatcgagaagaccatctccaaggccaagggccagcctagagaacctcaggtgtacaccctgcctccttctcgggacgagctgaccaagaaccaggtgtccctgacctgcctggtgaaaggcttctacccctctgacatcgctgtggaatgggagtctaacggccagcctgagaacaactacaagaccacacctccagtcctggactccgatggatctttcttcctgtactccaagctgaccgtggacaagagcagatggcagcagggcaatgtgttctcctgctccgtgatgcacgaggccctgcataaccactacacccagaagtctctgtccctgtctcccggcaaaggtggaggcggtagtggaggcggttcagaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctct |
| 56 | H7의 DNA 서열 | gaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctctgaacctaagtctagcgacaaaactcataccagcccccctagtccacaagtgcagctggtggaaagcggaggaggagtggtgcagcccggcagatctctgcggctgtcttgtgctgcttctggcttctccctgaccacctacggcgtccactgggtccggcaggcccctggcaagggcctcgagtgggtggccgtgatctgggctggcggctctaccaactacaactccgccctgatgtcccggttcaccatctccagagataattccaagaacaccctgtacctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacagctgtgtactactgcgccagagctgcctactatggcaacggcctggactactggggccagggcaccatggtgaccgtgtccagcgcttccaccaagggccccagcgtgttccctctggccccttcttccaagagcacctccggcggcaccgccgctctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcttggaactccggcgccctgacatctggagtgcacaccttccctgctgtgctgcagtcctctggcctgtactccctgtcctccgtggtgaccgtgccttctagctctctgggcacccagacctacatctgcaacgtgaaccacaagccttccaacaccaaggtggacaagaaagtggaacccaagtcctgcgacaagacccacacctgtcctccttgccctgcccctgagctgctgggcggcccctctgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggatacactgatgatcagcagaacccctgaggtgacctgtgtggtcgtggacgtgtcccacgaggaccctgaagtgaagttcaactggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgctaagaccaagcctcgggaggagcagtacaattccacctacagagtggtctctgtactgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgcctgctcctatcgagaagaccatctccaaggccaagggccagcctagagaacctcaggtgtacaccctgcctccttctcgggacgagctgaccaagaaccaggtgtccctgacctgcctggtgaaaggcttctacccctctgacatcgctgtggaatgggagtctaacggccagcctgagaacaactacaagaccacacctccagtcctggactccgatggatctttcttcctgtactccaagctgaccgtggacaagagcagatggcagcagggcaatgtgttctcctgctccgtgatgcacgaggccctgcataaccactacacccagaagtctctgtccctgtctcccggcaaa |
| 57 | H8의 DNA 서열 | gaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctctggtggaggcggtagtggaggcggtggttcaggcggaggcggatctcaagtgcagctggtggaaagcggaggaggagtggtgcagcccggcagatctctgcggctgtcttgtgctgcttctggcttctccctgaccacctacggcgtccactgggtccggcaggcccctggcaagggcctcgagtgggtggccgtgatctgggctggcggctctaccaactacaactccgccctgatgtcccggttcaccatctccagagataattccaagaacaccctgtacctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacagctgtgtactactgcgccagagctgcctactatggcaacggcctggactactggggccagggcaccatggtgaccgtgtccagcgcttccaccaagggccccagcgtgttccctctggccccttcttccaagagcacctccggcggcaccgccgctctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcttggaactccggcgccctgacatctggagtgcacaccttccctgctgtgctgcagtcctctggcctgtactccctgtcctccgtggtgaccgtgccttctagctctctgggcacccagacctacatctgcaacgtgaaccacaagccttccaacaccaaggtggacaagaaagtggaacccaagtcctgcgacaagacccacacctgtcctccttgccctgcccctgagctgctgggcggcccctctgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggatacactgatgatcagcagaacccctgaggtgacctgtgtggtcgtggacgtgtcccacgaggaccctgaagtgaagttcaactggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgctaagaccaagcctcgggaggagcagtacaattccacctacagagtggtctctgtactgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgcctgctcctatcgagaagaccatctccaaggccaagggccagcctagagaacctcaggtgtacaccctgcctccttctcgggacgagctgaccaagaaccaggtgtccctgacctgcctggtgaaaggcttctacccctctgacatcgctgtggaatgggagtctaacggccagcctgagaacaactacaagaccacacctccagtcctggactccgatggatctttcttcctgtactccaagctgaccgtggacaagagcagatggcagcagggcaatgtgttctcctgctccgtgatgcacgaggccctgcataaccactacacccagaagtctctgtccctgtctcccggcaaa |
| 58 | H9의 DNA 서열 | gaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctctggtggaggcggtagtggaggcggtggttcaggatctcaagtgcagctggtggaaagcggaggaggagtggtgcagcccggcagatctctgcggctgtcttgtgctgcttctggcttctccctgaccacctacggcgtccactgggtccggcaggcccctggcaagggcctcgagtgggtggccgtgatctgggctggcggctctaccaactacaactccgccctgatgtcccggttcaccatctccagagataattccaagaacaccctgtacctgcagatgaacagcctgagagccgaggacacagctgtgtactactgcgccagagctgcctactatggcaacggcctggactactggggccagggcaccatggtgaccgtgtccagcgcttccaccaagggccccagcgtgttccctctggccccttcttccaagagcacctccggcggcaccgccgctctgggctgcctggtcaaggactacttccccgagcctgtgaccgtgtcttggaactccggcgccctgacatctggagtgcacaccttccctgctgtgctgcagtcctctggcctgtactccctgtcctccgtggtgaccgtgccttctagctctctgggcacccagacctacatctgcaacgtgaaccacaagccttccaacaccaaggtggacaagaaagtggaacccaagtcctgcgacaagacccacacctgtcctccttgccctgcccctgagctgctgggcggcccctctgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggatacactgatgatcagcagaacccctgaggtgacctgtgtggtcgtggacgtgtcccacgaggaccctgaagtgaagttcaactggtacgtggacggcgtggaagtgcacaacgctaagaccaagcctcgggaggagcagtacaattccacctacagagtggtctctgtactgacagtgctgcaccaggattggctgaacggcaaagagtacaagtgcaaggtgtccaacaaggccctgcctgctcctatcgagaagaccatctccaaggccaagggccagcctagagaacctcaggtgtacaccctgcctccttctcgggacgagctgaccaagaaccaggtgtccctgacctgcctggtgaaaggcttctacccctctgacatcgctgtggaatgggagtctaacggccagcctgagaacaactacaagaccacacctccagtcctggactccgatggatctttcttcctgtactccaagctgaccgtggacaagagcagatggcagcagggcaatgtgttctcctgctccgtgatgcacgaggccctgcataaccactacacccagaagtctctgtccctgtctcccggcaaa |
| 59 | L1의 DNA 서열 | gacatcgtgatgacccagtctcctctgtctctgcctgtgacccctggcgaacctgcttccatctcctgcaagtcctctcagaccctgctgaactccggcaaccagaagaactacctgacctggtatctgcagaaacccggccagagcccacaactcctgatctactgggcctctaccggcgagtccggcgtgcctgatagattctccggcagcggctctggcaccgacttcacactgaagatcagccgggtcgaggccgaggacgtgggcgtgtactactgtcagaacgcctacttctacccctttaccttcggcggaggtacaaaggtggaaatcaagagaaccgtggccgcccctagcgtgttcatctttcctccctctgacgagcagctgaaatctggcaccgcttccgtggtctgcctgctgaacaacttctaccccagagaggctaaggtgcagtggaaagtggacaacgccctgcagtctggcaactcccaagaaagcgtgaccgagcaggactccaaggactctacatacagcctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgattacgagaagcacaaggtctacgcttgtgaagtgacccaccagggactgtcctcccctgtgaccaagtctttcaatcggggcgagtgcggtggaggcggtagtggaggcggtggttcaggcggaggcggatctgaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctct |
| 60 | L2의 DNA 서열 | gacatcgtgatgacccagtctcctctgtctctgcctgtgacccctggcgaacctgcttccatctcctgcaagtcctctcagaccctgctgaactccggcaaccagaagaactacctgacctggtatctgcagaaacccggccagagcccacaactcctgatctactgggcctctaccggcgagtccggcgtgcctgatagattctccggcagcggctctggcaccgacttcacactgaagatcagccgggtcgaggccgaggacgtgggcgtgtactactgtcagaacgcctacttctacccctttaccttcggcggaggtacaaaggtggaaatcaagagaaccgtggccgcccctagcgtgttcatctttcctccctctgacgagcagctgaaatctggcaccgcttccgtggtctgcctgctgaacaacttctaccccagagaggctaaggtgcagtggaaagtggacaacgccctgcagtctggcaactcccaagaaagcgtgaccgagcaggactccaaggactctacatacagcctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgattacgagaagcacaaggtctacgcttgtgaagtgacccaccagggactgtcctcccctgtgaccaagtctttcaatcggggcgagtgcggtggaggcggtagtggaggcggtggttcaggatctgaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctct |
| 61 | L3의 DNA 서열 | gacatcgtgatgacccagtctcctctgtctctgcctgtgacccctggcgaacctgcttccatctcctgcaagtcctctcagaccctgctgaactccggcaaccagaagaactacctgacctggtatctgcagaaacccggccagagcccacaactcctgatctactgggcctctaccggcgagtccggcgtgcctgatagattctccggcagcggctctggcaccgacttcacactgaagatcagccgggtcgaggccgaggacgtgggcgtgtactactgtcagaacgcctacttctacccctttaccttcggcggaggtacaaaggtggaaatcaagagaaccgtggccgcccctagcgtgttcatctttcctccctctgacgagcagctgaaatctggcaccgcttccgtggtctgcctgctgaacaacttctaccccagagaggctaaggtgcagtggaaagtggacaacgccctgcagtctggcaactcccaagaaagcgtgaccgagcaggactccaaggactctacatacagcctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgattacgagaagcacaaggtctacgcttgtgaagtgacccaccagggactgtcctcccctgtgaccaagtctttcaatcggggcgagtgcggtggaggcggtagtggaggcggttcagaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctct |
| 62 | L4의 DNA 서열 | gacatcgtgatgacccagtctcctctgtctctgcctgtgacccctggcgaacctgcttccatctcctgcaagtcctctcagaccctgctgaactccggcaaccagaagaactacctgacctggtatctgcagaaacccggccagagcccacaactcctgatctactgggcctctaccggcgagtccggcgtgcctgatagattctccggcagcggctctggcaccgacttcacactgaagatcagccgggtcgaggccgaggacgtgggcgtgtactactgtcagaacgcctacttctacccctttaccttcggcggaggtacaaaggtggaaatcaagagaaccgtggccgcccctagcgtgttcatctttcctccctctgacgagcagctgaaatctggcaccgcttccgtggtctgcctgctgaacaacttctaccccagagaggctaaggtgcagtggaaagtggacaacgccctgcagtctggcaactcccaagaaagcgtgaccgagcaggactccaaggactctacatacagcctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgattacgagaagcacaaggtctacgcttgtgaagtgacccaccagggactgtcctcccctgtgaccaagtctttcaatcggggcgagtgcgaacctaagtctagcgacaaaactcataccagcccccctagtccagaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctct |
| 63 | L5의 DNA 서열 | gacatcgtgatgacccagtctcctctgtctctgcctgtgacccctggcgaacctgcttccatctcctgcaagtcctctcagaccctgctgaactccggcaaccagaagaactacctgacctggtatctgcagaaacccggccagagcccacaactcctgatctactgggcctctaccggcgagtccggcgtgcctgatagattctccggcagcggctctggcaccgacttcacactgaagatcagccgggtcgaggccgaggacgtgggcgtgtactactgtcagaacgcctacttctacccctttaccttcggcggaggtacaaaggtggaaatcaagagaaccgtggccgcccctagcgtgttcatctttcctccctctgacgagcagctgaaatctggcaccgcttccgtggtctgcctgctgaacaacttctaccccagagaggctaaggtgcagtggaaagtggacaacgccctgcagtctggcaactcccaagaaagcgtgaccgagcaggactccaaggactctacatacagcctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgattacgagaagcacaaggtctacgcttgtgaagtgacccaccagggactgtcctcccctgtgaccaagtctttcaatcggggcgagtgcgaacctaagtctagcgacaaaactcataccagcccccctagtccagaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccagcacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctct |
| 64 | L6의 DNA 서열 | gaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctctgaacctaagtctagcgacaaaactcataccagcccccctagtccagacatcgtgatgacccagtctcctctgtctctgcctgtgacccctggcgaacctgcttccatctcctgcaagtcctctcagaccctgctgaactccggcaaccagaagaactacctgacctggtatctgcagaaacccggccagagcccacaactcctgatctactgggcctctaccggcgagtccggcgtgcctgatagattctccggcagcggctctggcaccgacttcacactgaagatcagccgggtcgaggccgaggacgtgggcgtgtactactgtcagaacgcctacttctacccctttaccttcggcggaggtacaaaggtggaaatcaagagaaccgtggccgcccctagcgtgttcatctttcctccctctgacgagcagctgaaatctggcaccgcttccgtggtctgcctgctgaacaacttctaccccagagaggctaaggtgcagtggaaagtggacaacgccctgcagtctggcaactcccaagaaagcgtgaccgagcaggactccaaggactctacatacagcctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgattacgagaagcacaaggtctacgcttgtgaagtgacccaccagggactgtcctcccctgtgaccaagtctttcaatcggggcgagtgc |
| 65 | L7의 DNA 서열 | gaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctctggtggaggcggtagtggaggcggtggttcaggcggaggcggatctgacatcgtgatgacccagtctcctctgtctctgcctgtgacccctggcgaacctgcttccatctcctgcaagtcctctcagaccctgctgaactccggcaaccagaagaactacctgacctggtatctgcagaaacccggccagagcccacaactcctgatctactgggcctctaccggcgagtccggcgtgcctgatagattctccggcagcggctctggcaccgacttcacactgaagatcagccgggtcgaggccgaggacgtgggcgtgtactactgtcagaacgcctacttctacccctttaccttcggcggaggtacaaaggtggaaatcaagagaaccgtggccgcccctagcgtgttcatctttcctccctctgacgagcagctgaaatctggcaccgcttccgtggtctgcctgctgaacaacttctaccccagagaggctaaggtgcagtggaaagtggacaacgccctgcagtctggcaactcccaagaaagcgtgaccgagcaggactccaaggactctacatacagcctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgattacgagaagcacaaggtctacgcttgtgaagtgacccaccagggactgtcctcccctgtgaccaagtctttcaatcggggcgagtgc |
| 66 | L8의 DNA 서열 | gaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctctggtggaggcggtagtggaggcggtggttcaggatctgacatcgtgatgacccagtctcctctgtctctgcctgtgacccctggcgaacctgcttccatctcctgcaagtcctctcagaccctgctgaactccggcaaccagaagaactacctgacctggtatctgcagaaacccggccagagcccacaactcctgatctactgggcctctaccggcgagtccggcgtgcctgatagattctccggcagcggctctggcaccgacttcacactgaagatcagccgggtcgaggccgaggacgtgggcgtgtactactgtcagaacgcctacttctacccctttaccttcggcggaggtacaaaggtggaaatcaagagaaccgtggccgcccctagcgtgttcatctttcctccctctgacgagcagctgaaatctggcaccgcttccgtggtctgcctgctgaacaacttctaccccagagaggctaaggtgcagtggaaagtggacaacgccctgcagtctggcaactcccaagaaagcgtgaccgagcaggactccaaggactctacatacagcctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgattacgagaagcacaaggtctacgcttgtgaagtgacccaccagggactgtcctcccctgtgaccaagtctttcaatcggggcgagtgc |
| 67 | L9의 DNA 서열 | gacatcgtgatgacccagtctcctctgtctctgcctgtgacccctggcgaacctgcttccatctcctgcaagtcctctcagaccctgctgaactccggcaaccagaagaactacctgacctggtatctgcagaaacccggccagagcccacaactcctgatctactgggcctctaccggcgagtccggcgtgcctgatagattctccggcagcggctctggcaccgacttcacactgaagatcagccgggtcgaggccgaggacgtgggcgtgtactactgtcagaacgcctacttctacccctttaccttcggcggaggtacaaaggtggaaatcaagagaaccgtggccgcccctagcgtgttcatctttcctccctctgacgagcagctgaaatctggcaccgcttccgtggtctgcctgctgaacaacttctaccccagagaggctaaggtgcagtggaaagtggacaacgccctgcagtctggcaactcccaagaaagcgtgaccgagcaggactccaaggactctacatacagcctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgattacgagaagcacaaggtctacgcttgtgaagtgacccaccagggactgtcctcccctgtgaccaagtctttcaatcggggcgagtgcgaacctaagtctagcgacaaaggccatggaggtccccctggaccagaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctct |
| 68 | L10의 DNA 서열 | gacatcgtgatgacccagtctcctctgtctctgcctgtgacccctggcgaacctgcttccatctcctgcaagtcctctcagaccctgctgaactccggcaaccagaagaactacctgacctggtatctgcagaaacccggccagagcccacaactcctgatctactgggcctctaccggcgagtccggcgtgcctgatagattctccggcagcggctctggcaccgacttcacactgaagatcagccgggtcgaggccgaggacgtgggcgtgtactactgtcagaacgcctacttctacccctttaccttcggcggaggtacaaaggtggaaatcaagagaaccgtggccgcccctagcgtgttcatctttcctccctctgacgagcagctgaaatctggcaccgcttccgtggtctgcctgctgaacaacttctaccccagagaggctaaggtgcagtggaaagtggacaacgccctgcagtctggcaactcccaagaaagcgtgaccgagcaggactccaaggactctacatacagcctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgattacgagaagcacaaggtctacgcttgtgaagtgacccaccagggactgtcctcccctgtgaccaagtctttcaatcggggcgagtgcgaaaggaagtctagcgtggaatctccacctagtccagaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctct |
| 69 | L11의 DNA 서열 | gacatcgtgatgacccagtctcctctgtctctgcctgtgacccctggcgaacctgcttccatctcctgcaagtcctctcagaccctgctgaactccggcaaccagaagaactacctgacctggtatctgcagaaacccggccagagcccacaactcctgatctactgggcctctaccggcgagtccggcgtgcctgatagattctccggcagcggctctggcaccgacttcacactgaagatcagccgggtcgaggccgaggacgtgggcgtgtactactgtcagaacgcctacttctacccctttaccttcggcggaggtacaaaggtggaaatcaagagaaccgtggccgcccctagcgtgttcatctttcctccctctgacgagcagctgaaatctggcaccgcttccgtggtctgcctgctgaacaacttctaccccagagaggctaaggtgcagtggaaagtggacaacgccctgcagtctggcaactcccaagaaagcgtgaccgagcaggactccaaggactctacatacagcctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgattacgagaagcacaaggtctacgcttgtgaagtgacccaccagggactgtcctcccctgtgaccaagtctttcaatcggggcgagtgcgaaaggaagtctggagtggaaggtccacctggaccagaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctct |
| 70 | L12의 DNA 서열 | gacatcgtgatgacccagtctcctctgtctctgcctgtgacccctggcgaacctgcttccatctcctgcaagtcctctcagaccctgctgaactccggcaaccagaagaactacctgacctggtatctgcagaaacccggccagagcccacaactcctgatctactgggcctctaccggcgagtccggcgtgcctgatagattctccggcagcggctctggcaccgacttcacactgaagatcagccgggtcgaggccgaggacgtgggcgtgtactactgtcagaacgcctacttctacccctttaccttcggcggaggtacaaaggtggaaatcaagagaaccgtggccgcccctagcgtgttcatctttcctccctctgacgagcagctgaaatctggcaccgcttccgtggtctgcctgctgaacaacttctaccccagagaggctaaggtgcagtggaaagtggacaacgccctgcagtctggcaactcccaagaaagcgtgaccgagcaggactccaaggactctacatacagcctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgattacgagaagcacaaggtctacgcttgtgaagtgacccaccagggactgtcctcccctgtgaccaagtctttcaatcggggcgagtgcgaatcgaagtacggacctccatctccacctagtccagaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctct |
| 71 | L13의 DNA 서열 | gacatcgtgatgacccagtctcctctgtctctgcctgtgacccctggcgaacctgcttccatctcctgcaagtcctctcagaccctgctgaactccggcaaccagaagaactacctgacctggtatctgcagaaacccggccagagcccacaactcctgatctactgggcctctaccggcgagtccggcgtgcctgatagattctccggcagcggctctggcaccgacttcacactgaagatcagccgggtcgaggccgaggacgtgggcgtgtactactgtcagaacgcctacttctacccctttaccttcggcggaggtacaaaggtggaaatcaagagaaccgtggccgcccctagcgtgttcatctttcctccctctgacgagcagctgaaatctggcaccgcttccgtggtctgcctgctgaacaacttctaccccagagaggctaaggtgcagtggaaagtggacaacgccctgcagtctggcaactcccaagaaagcgtgaccgagcaggactccaaggactctacatacagcctgtcctccaccctgaccctgtccaaggccgattacgagaagcacaaggtctacgcttgtgaagtgacccaccagggactgtcctcccctgtgaccaagtctttcaatcggggcgagtgcgaatcgaagtacggacctccaggtccacctggaccagaggtgcagctggtggaatccggcggaggcctggtccagcctggcggctctctgcggctgtcctgcgccgcttctggcagaaccttcgtgacctacggcatgggctggttccggcaggctcctggcaagggcagagagttcgtgtccgccatctcctggtccggctccatgacctcttacggcgactctgtgaagggcagattcaccatcagccgggataacgccaagaacacactgtacctgcagatgaactccctgcggcctgaggacaccgccgtgtactactgcgccgctgccctgggcgctgtcgtgtacaccaccagagaaccctatacctactggggacagggcaccctggtgaccgtgtcctct |
| 링커 | ||
| 72 | E-링커의 아미노산 서열 | EPKSSDKTHTSPPSP |
| 73 | Ea-링커의 아미노산 서열 | EPKSSDKGHGGPPGP |
| 74 | E2-링커의 아미노산 서열 | ERKSSVESPPSP |
| 75 | E2a-링커의 아미노산 서열 | ERKSGVEGPPGP |
| 76 | E4-링커의 아미노산 서열 | ESKYGPPSPPSP |
| 77 | E4a-링커의 아미노산 서열 | ESKYGPPGPPGP |
| 78 | G15-링커의 아미노산 서열 | GGGGSGGGGSGGGGS |
| 79 | G12-링커의 아미노산 서열 | GGGGSGGGGSGS |
| 80 | G9-링커의 아미노산 서열 | GGGGSGGGS |
| 81 | E-링커의 DNA 서열 | gaacctaagtctagcgacaaaactcataccagcccccctagtcca |
| 82 | Ea-링커의 DNA 서열 | gaacctaagtctagcgacaaaggccatggaggtccccctggacca |
| 83 | E2-링커의 DNA 서열 | gaaaggaagtctagcgtggaatctccacctagtcca |
| 84 | E2a-링커의 DNA 서열 | gaaaggaagtctggagtggaaggtccacctggacca |
| 85 | E4-링커의 DNA 서열 | gaatcgaagtacggacctccatctccacctagtcca |
| 86 | E4a-링커의 DNA 서열 | gaatcgaagtacggacctccaggtccacctggacca |
| 87 | G15-링커의 DNA 서열 | ggtggaggcggtagtggaggcggtggttcaggcggaggcggatct |
| 88 | G12-링커의 DNA 서열 | ggtggaggcggtagtggaggcggtggttcaggatct |
| 89 | G9-링커의 DNA 서열 | ggtggaggcggtagtggaggcggttca |
| 90 | 예시적인 링커 | (GGGGS)n, n은 1 내지 8임. |
| 91 | 예시적인 링커 | (GGGGS)6 |
| 92 | 예시적인 링커 | (GSTSGSGKPGSGEGS)n, n은 1 내지 3임. |
| 93 | 예시적인 링커 | (G)n |
| 94 | 예시적인 링커 | (GS)n |
| 95 | 예시적인 링커 | (GSGGS)n |
| 96 | 예시적인 링커 | (GGGS)n |
| Fc 단편 서열 | ||
| 97 | 변형된 인간 IgG4 Fc(IgG4PE)의 아미노산 서열 | ESKYGPPCPPCPAPEFEGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK |
| 98 | 변형된 인간 IgG4 Fc(IgG4PE)의 DNA 서열 | gagagcaagtacggaccaccttgcccaccatgtccagctcctgagtttgagggaggaccatccgtgttcctgtttcctccaaagcctaaggacaccctgatgatcagccggacacctgaggtgacctgcgtggtggtggacgtgtctcaggaggatccagaggtgcagttcaactggtacgtggatggcgtggaggtgcacaatgctaagaccaagccaagagaggagcagtttaattccacataccgcgtggtgagcgtgctgaccgtgctgcatcaggattggctgaacggcaaggagtataagtgcaaggtgtccaataagggcctgcccagctctatcgagaagacaatcagcaaggctaagggacagcctagggagccacaggtgtacaccctgcccccttctcaggaggagatgacaaagaaccaggtgtccctgacctgtctggtgaagggcttctatccaagcgacatcgctgtggagtgggagtctaatggccagcccgagaacaattacaagaccacaccacccgtgctggactctgatggctccttctttctgtattctaggctgacagtggataagtcccggtggcaggagggcaacgtgtttagctgctctgtgatgcacgaggccctgcacaatcattatacccagaagtccctgagcctgtctctgggcaag |
| CLDN18.2 | ||
| 99 | 인간 CLDN18.2 | MAVTACQGLGFVVSLIGIAGIIAATCMDQWSTQDLYNNPVTAVFNYQGLWRSCVRESSGFTECRGYFTLLGLPAMLQAVRALMIVGIVLGAIGLLVSIFALKCIRIGSMEDSAKANMTLTSGIMFIVSGLCAIAGVSVFANMLVTNFWMSTANMYTGMGGMVQTVQTRYTFGAALFVGWVAGGLTLIGGVMMCIACRGLAPEETNYKAVSYHASGHSVAYKPGGFKASTGFGSNTKNKKIYDGGARTEDEVQSYPSKHDYV |
Claims (50)
- a) 클라우딘-18 동형단백질 2("CLDN18.2")에 특이적으로 결합하는 제1 항체 모이어티; 및
b) PD-L1에 특이적으로 결합하는 제2 항체 모이어티
를 포함하는 다중특이적 작제물.
- 제1항에 있어서, 제1 항체 모이어티는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 전장 항체를 포함하는, 다중특이적 작제물.
- 제1항 또는 제2항에 있어서, 제2 항체 모이어티는 PD-L1에 결합하는 단일-도메인 항체를 포함하는, 다중특이적 작제물.
- 제2항 또는 제3항에 있어서, 제2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 중쇄에 융합되는, 다중특이적 작제물.
- 제4항에 있어서, 제2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 중쇄의 N-말단에 융합되는, 다중특이적 작제물.
- 제4항에 있어서, 제2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되는, 다중특이적 작제물.
- 제2항 또는 제3항에 있어서, 제2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 경쇄에 융합되는, 다중특이적 작제물.
- 제7항에 있어서, 제2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 경쇄의 N-말단에 융합되는, 다중특이적 작제물.
- 제7항에 있어서, 제2 항체 모이어티는 전장 항체의 1개 또는 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되는, 다중특이적 작제물.
- 제2항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 항체 모이어티는 링커를 통해 전장 항체에 융합되는, 다중특이적 작제물.
- 제10항에 있어서, 링커는 펩티드 링커인, 다중특이적 작제물.
- 제11항에 있어서, 펩티드 링커는 약 4 내지 약 20개의 아미노산의 길이를 갖는, 다중특이적 작제물.
- 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 절단가능한 링커인, 다중특이적 작제물.
- 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 절단불가능한 링커인, 다중특이적 작제물.
- 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 GS 링커인, 다중특이적 작제물.
- 제10항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 IgG의 경첩 영역으로부터 유래한 변형된 서열을 포함하는, 다중특이적 작제물.
- 제10항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 링커는 서열번호 72~80으로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는, 다중특이적 작제물.
- 제17항에 있어서, 링커는 서열번호 72~77로 이루어진 군으로부터 선택된 아미노산 서열을 갖는, 다중특이적 작제물.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, CLDN18.2는 인간 CLDN18.2인, 다중특이적 작제물.
- 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체 모이어티는,
a) 서열번호 7에 제시된 서열을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 내에 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3; 및
b) 서열번호 8에 제시된 서열을 갖는 경쇄 가변 영역(VL) 내에 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3
을 포함하는, 다중특이적 작제물.
- 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체 모이어티는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서,
a) VH는
i) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1,
ii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및
iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3
을 포함하고;
b) VL은
i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1,
ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및
iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3
을 포함하는, 다중특이적 작제물.
- 제20항 또는 제21항에 있어서, VH는 서열번호 7의 아미노산 서열, 또는 서열번호 7에 대해 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이를 포함하고/하거나; VL은 서열번호 8의 아미노산 서열, 또는 서열번호 8에 대해 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이를 포함하는, 다중특이적 작제물.
- 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, PD-L1은 인간 PD-L1인, 다중특이적 작제물.
- 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 항체 모이어티는 서열번호 22~24 중 어느 하나에 제시된 아미노산 서열을 갖는 단일 단량체성 가변 항체 도메인 내에 CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열을 각각 포함하는 sdAb-CDR1, sdAb-CDR2, 및 sdAb-CDR3을 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함하는, 다중특이적 작제물.
- 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 항체 모이어티는
a) 서열번호 15 또는 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1;
b) 서열번호 16, 18 또는 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2; 및
c) 서열번호 17, 또는 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3
을 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함하는, 다중특이적 작제물.
- 제25항에 있어서, 단일 도메인 항체는,
a) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3;
b) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; 또는
c) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3
을 포함하는, 다중특이적 작제물.
- 제24항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 단일 도메인 항체는 서열번호 22~24 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 서열번호 22~24 중 어느 하나에 대해 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 이의 변이를 포함하는, 다중특이적 작제물.
- 제2항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서,
1) 전장 항체는 중쇄 가변 영역(VH) 및 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하며, 여기서
a) VH는, i) 서열번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, ii) 서열번호 2의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 iii) 서열번호 3의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3을 포함하고;
b) VL은, i) 서열번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, ii) 서열번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 iii) 서열번호 6의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하고;
2) 제2 항체 모이어티는,
a) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3;
b) 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3; 또는
c) 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3
을 포함하는 단일 도메인 항체(sdAb)를 포함하며,
여기서 제2 항체 모이어티는, 선택적으로 약 4 내지 약 20개의 아미노산의 길이를 갖는 펩티드 링커를 통해, 전장 항체 모이어티에 융합되는, 다중특이적 작제물.
- 제28항에 있어서,
1) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되거나;
2) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되거나;
3) 제2 항체 모이어티는 서열번호 19의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 20의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 21의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되거나;
4) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 78의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되거나;
5) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 79의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되거나;
6) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 80의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 C-말단에 융합되거나;
7) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 78의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나;
8) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 79의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나;
9) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 80의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나;
10) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나;
11) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 18의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나;
12) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 N-말단에 융합되거나;
13) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 72의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 N-말단에 융합되거나;
14) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 78의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 N-말단에 융합되거나;
15) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 79의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 중쇄의 N-말단에 융합되거나;
16) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 78의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 N-말단에 융합되거나;
17) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 79의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 N-말단에 융합되거나;
18) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 73의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나;
19) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 74의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나;
20) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 75의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나;
21) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 76의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되거나; 또는
22) 제2 항체 모이어티는 서열번호 15의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR1, 서열번호 16의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR2, 및 서열번호 17의 아미노산 서열을 포함하는 sdAb-CDR3을 포함하며, 여기서 제2 항체는 서열번호 77의 서열을 포함하는 링커를 통해 전장 항체의 2개의 경쇄의 C-말단에 융합되는,
다중특이적 작제물.
- 제4항 내지 제6항 및 제10항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 항체 모이어티와 융합된 전장 항체의 2개의 중쇄 각각은 서열번호 28~36 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 서열번호 28~36 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 변이를 포함하는, 다중특이적 작제물.
- 제30항에 있어서, 전장 항체의 2개의 경쇄 각각은 서열번호 10의 아미노산 서열, 또는 서열번호 10의 아미노산 서열과 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 변이를 포함하는, 다중특이적 작제물.
- 제7항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 항체 모이어티와 융합된 전장 항체의 2개의 경쇄 각각은 서열번호 37~49 중 어느 하나의 아미노산 서열, 또는 서열번호 37~49 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 변이를 포함하는, 다중특이적 작제물.
- 제32항에 있어서, 전장 항체의 2개의 중쇄 각각은 서열번호 9의 아미노산 서열, 또는 서열번호 9의 아미노산 서열과 적어도 약 80%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하는 변이를 포함하는, 다중특이적 작제물.
- 제30항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서,
a) 제2 항체 모이어티와 융합된 전장 항체의 2개의 중쇄 각각은 서열번호 28~36 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산 서열을 포함하고, 2개의 경쇄 각각은 서열번호 10의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
b) 제2 항체 모이어티와 융합된 전장 항체의 2개의 경쇄 각각은 서열번호 37~49 중 어느 하나로부터 선택된 아미노산을 포함하고, 2개의 중쇄 각각은 서열번호 9의 아미노산 서열을 포함하는, 다중특이적 작제물.
- 제1항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, 작제물은 이특이적 항체인, 다중특이적 작제물.
- 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 작제물 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
- 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 작제물을 인코딩하는 핵산.
- 서열번호 50~71로 이루어진 군으로부터 선택된 핵산 서열을 포함하는, 핵산.
- 제37항 또는 제38항의 핵산을 포함하는 벡터.
- 제37항 또는 제38항의 핵산, 또는 제39항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
- 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 다중특이적 작제물의 생성 방법으로서,
a) 제40항의 숙주 세포를 다중특이적 작제물을 발현하기에 효과적인 조건 하에서 배양하는 단계; 및
b) 숙주 세포로부터 발현된 작제물을 수득하는 단계
를 포함하는 다중특이적 작제물의 생성 방법.
- 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 다중특이적 작제물, 또는 제36항의 약학 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 개체에서의 질병 또는 병태의 치료 방법.
- 제42항에 있어서, 질병 또는 병태는 암인, 방법.
- 제43항에 있어서, 암은 위암인, 방법.
- 제42항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 개체는 클라우딘-18 이상(aberration)을 갖는, 방법.
- 제42항 내지 제45항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 방법은 제2 제제를 투여하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
- 제46항에 있어서, 제2 제제는 Her-2에 결합하는, 방법.
- 제42항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 작제물 또는 약학 조성물은 개체에게 비경구적으로 투여되는, 방법.
- 제42항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, 개체는 인간인, 방법.
- 제36항의 약학 조성물 및 질병 또는 병태를 치료하기 위한 지침서를 포함하는 키트.
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